JPS6291189A - アミドの微生物学的製造法 - Google Patents
アミドの微生物学的製造法Info
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- JPS6291189A JPS6291189A JP61127176A JP12717686A JPS6291189A JP S6291189 A JPS6291189 A JP S6291189A JP 61127176 A JP61127176 A JP 61127176A JP 12717686 A JP12717686 A JP 12717686A JP S6291189 A JPS6291189 A JP S6291189A
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- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔３−１産業上の利用分野〕
本発明は、アミドの微生物学的製造法に関する。
更に詳しくは、本発明は、ニトリルをロドコッカス（Ｒ
ｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ）属に属する微生物の作用による
水和反応に付し、生成するアミドを分離取得するアミド
の微生物学的製造法に関する。産業上重要なアミドとし
て、たとえばアクリルアミドやメタクリルアミドが知ら
れている。アクリルアミドは、既に高分子凝集剤、紙力
増強剤及び繊維改良剤などに利用されているほか、新た
に、石油三次回収への大きな用途が開けつつある。一方
、メタクリルアミドは、適度な親水、親油性及び優れた
耐熱性、架橋性などの特長を生かして、塗料、接着剤、
光架橋性化合物などに利用されている。本発明の微生物
学的製造法は、これら有用なアミドを効率良く工業的に
製造するのに利用することができる。
ｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ）属に属する微生物の作用による
水和反応に付し、生成するアミドを分離取得するアミド
の微生物学的製造法に関する。産業上重要なアミドとし
て、たとえばアクリルアミドやメタクリルアミドが知ら
れている。アクリルアミドは、既に高分子凝集剤、紙力
増強剤及び繊維改良剤などに利用されているほか、新た
に、石油三次回収への大きな用途が開けつつある。一方
、メタクリルアミドは、適度な親水、親油性及び優れた
耐熱性、架橋性などの特長を生かして、塗料、接着剤、
光架橋性化合物などに利用されている。本発明の微生物
学的製造法は、これら有用なアミドを効率良く工業的に
製造するのに利用することができる。
〔３−２従来の技術〕
アミドの製造法としては、ニトリルを還元状態の銅を触
媒として水和し製造する方法が公知であるが、触媒の再
生が困難である上、生成アミドの分離、精製工程が複雑
であり、更に、新規で工業的に有利な製造方法の開発が
望まれていた。
媒として水和し製造する方法が公知であるが、触媒の再
生が困難である上、生成アミドの分離、精製工程が複雑
であり、更に、新規で工業的に有利な製造方法の開発が
望まれていた。
一方、最近、微生物を用いたニトリルから７ミドの製造
法がいくつか提案されている。たとえばバチルス（Ｂａ
ｃｉｌｌｕｓ）属、バクテリウムーム（Ｂａｃｔｅｒｉ
ｄｉｕｍ）属、ミクロコツカス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕ
ｓ）属、ブレビバクテリウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒ
ｉｕｍ）属を用いる方法（特開昭３ｌ−８６１８６）
、コリネバクテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕ
ｍ）属、ノカルジア（Ｎｏｃａｒｄｉａ）属を用いる方
法（特公昭５６−１７９１８） 、シュードモナス（Ｐ
ｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属を用いる方法（特公昭５９−
３７９５１）等である。
法がいくつか提案されている。たとえばバチルス（Ｂａ
ｃｉｌｌｕｓ）属、バクテリウムーム（Ｂａｃｔｅｒｉ
ｄｉｕｍ）属、ミクロコツカス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕ
ｓ）属、ブレビバクテリウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒ
ｉｕｍ）属を用いる方法（特開昭３ｌ−８６１８６）
、コリネバクテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕ
ｍ）属、ノカルジア（Ｎｏｃａｒｄｉａ）属を用いる方
法（特公昭５６−１７９１８） 、シュードモナス（Ｐ
ｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属を用いる方法（特公昭５９−
３７９５１）等である。
〔３−３発明が解決しようとする問題点〕しかし、バチ
ルス属、ハクテリジューム属、ミクロコツカス属、ブレ
ビバクテリウム属、コリネバクテリウム属、ノカルジア
属及びシュードモナス属等を用いるいずれの従来の方法
も、アミド化反応活性が低く、また、従来法の多くにつ
いて副生ずる有機酸の量も未だ工業的に充分満足される
レベルには到達していない。
ルス属、ハクテリジューム属、ミクロコツカス属、ブレ
ビバクテリウム属、コリネバクテリウム属、ノカルジア
属及びシュードモナス属等を用いるいずれの従来の方法
も、アミド化反応活性が低く、また、従来法の多くにつ
いて副生ずる有機酸の量も未だ工業的に充分満足される
レベルには到達していない。
〔３−４問題点を解決する為の手段〕
本発明者らは、ニトリルを水和し、工業的に充分満足さ
れるアミド化反応活性及び選択性を有する微生物の探索
と培養及び反応条件の研究を鋭意行った結果、ロドコッ
カス属に属する微生物の中にアミド生産能の高い微生物
を発見し、本発明を完成するに到った。即ち、本発明に
よれば、ニトリルを微生物の作用による水和反応に付し
て対応するアミドに変換させ、生成するアミドを反応混
合物から分離するアミドの製造方法において、咳微生物
としてロドコッカス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ）属に属
し、ニトリルを水和する能力を有する微生物を用いるこ
とを特徴とするアミドの微生物学的製造法が提供される
。
れるアミド化反応活性及び選択性を有する微生物の探索
と培養及び反応条件の研究を鋭意行った結果、ロドコッ
カス属に属する微生物の中にアミド生産能の高い微生物
を発見し、本発明を完成するに到った。即ち、本発明に
よれば、ニトリルを微生物の作用による水和反応に付し
て対応するアミドに変換させ、生成するアミドを反応混
合物から分離するアミドの製造方法において、咳微生物
としてロドコッカス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ）属に属
し、ニトリルを水和する能力を有する微生物を用いるこ
とを特徴とするアミドの微生物学的製造法が提供される
。
本発明に用いられる微生物はロドコッカス属に属するア
ミド生産菌であるが、具体的な菌株の例を挙げれば、ロ
ドコッカスｓｐ、 ＡＫ ３２菌株（Ｒ，ｓｐ。
ミド生産菌であるが、具体的な菌株の例を挙げれば、ロ
ドコッカスｓｐ、 ＡＫ ３２菌株（Ｒ，ｓｐ。
ＡＫ ３２） （以下ＡＫ ３２と略称する）及びロド
コフカスｓｐ、へＫ ３３菌株（Ｒ，ｓｐ、 ＡＫ ３
３） （以下ＡＫ ３３と略称する）並びにロドコッカ
ス・エリスロポリスＡＫ ３１３２菌株（Ｒ，ｅｒｙｔ
ｈｒｏｐｏｌｉｓ ＡＫ ３１３２） （以下ＡＫ３１
３２と略称する）がある。ＡＫ ３２． ＡＫ ３３及
びＡＫ３１３２は、それぞれ微工研条寄第１０４６号、
１０４７号及び１０４０号として工業技術院微生物工業
技術研究所に寄託されている。
コフカスｓｐ、へＫ ３３菌株（Ｒ，ｓｐ、 ＡＫ ３
３） （以下ＡＫ ３３と略称する）並びにロドコッカ
ス・エリスロポリスＡＫ ３１３２菌株（Ｒ，ｅｒｙｔ
ｈｒｏｐｏｌｉｓ ＡＫ ３１３２） （以下ＡＫ３１
３２と略称する）がある。ＡＫ ３２． ＡＫ ３３及
びＡＫ３１３２は、それぞれ微工研条寄第１０４６号、
１０４７号及び１０４０号として工業技術院微生物工業
技術研究所に寄託されている。
以下にそれらの菌学的性質及び化学分類学的性質を示す
。
。
以上の菌学的性質並びに化学分類学的性質をバージ−の
細菌付類書（Ｂｅｒｇｙ’ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｆＤｅ
ｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ Ｂａｃｔｅｒ１０ｌｏｇｙ）
第８版（１９７４）及びヂプロカリオーテス（Ｔｈｅ
Ｐｒｏｋａｒｙｏｔｅｓ、 Ａ Ｈａｎｄｂｏｏｋｏｎ
Ｈａｂｉｔａｔｓ、 ｌ５ｏｌａｔ１０ｎ、 ａｎｄ
Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔ１０ｎ ｏｆＢａｃｔｅｒｉ
ａ） （１９８１）に基づいて分類すると、ＡＫ ３２
゜ＡＫ ３３及びＡＫ、３１３２は好気性、ダラム陽性
、運動性の無い桿菌で、初期に長桿菌状であるが菌糸状
を呈さず、ブランチング及びフラグメンテーションを示
し、後に球ないし短桿菌状に断裂する。また、細胞壁ペ
プチドグリカンにはメソ−ジアミノピメリン酸を有し、
Ｎ−アシル基はグリコリルタイプである。菌体脂肪酸分
析では直鎖脂肪酸主体であり、ミコール酸の存在と共に
特徴的に１０−メチル−オクタデカン酸を有する。従っ
て、ＡＫ３２、八Ｋ ３３及び八Ｋ ３１３２はロドコ
ッカス属に属する細菌であると決定した。Ａに３２．
ＡＫ ３３及びＡＫ３１３２は、生育条件及び糖からの
酸の生成などで差異が認められる。これらの微生物は工
業技術院微生物工業技術研究所に下記の番号で寄託され
ている。
細菌付類書（Ｂｅｒｇｙ’ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｆＤｅ
ｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ Ｂａｃｔｅｒ１０ｌｏｇｙ）
第８版（１９７４）及びヂプロカリオーテス（Ｔｈｅ
Ｐｒｏｋａｒｙｏｔｅｓ、 Ａ Ｈａｎｄｂｏｏｋｏｎ
Ｈａｂｉｔａｔｓ、 ｌ５ｏｌａｔ１０ｎ、 ａｎｄ
Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔ１０ｎ ｏｆＢａｃｔｅｒｉ
ａ） （１９８１）に基づいて分類すると、ＡＫ ３２
゜ＡＫ ３３及びＡＫ、３１３２は好気性、ダラム陽性
、運動性の無い桿菌で、初期に長桿菌状であるが菌糸状
を呈さず、ブランチング及びフラグメンテーションを示
し、後に球ないし短桿菌状に断裂する。また、細胞壁ペ
プチドグリカンにはメソ−ジアミノピメリン酸を有し、
Ｎ−アシル基はグリコリルタイプである。菌体脂肪酸分
析では直鎖脂肪酸主体であり、ミコール酸の存在と共に
特徴的に１０−メチル−オクタデカン酸を有する。従っ
て、ＡＫ３２、八Ｋ ３３及び八Ｋ ３１３２はロドコ
ッカス属に属する細菌であると決定した。Ａに３２．
ＡＫ ３３及びＡＫ３１３２は、生育条件及び糖からの
酸の生成などで差異が認められる。これらの微生物は工
業技術院微生物工業技術研究所に下記の番号で寄託され
ている。
菌株 寄託番号 寄託口ＡＫ ３２
微工研条寄第１０４６号 昭和６０年５月２８日（
微工研菌寄第８２６９号） ＡＫ ３３ 撒工研条寄第１０４７号 昭和６０年
５月２８日（徽工研菌寄第８２７０号） ＡＫ ３１３２ 微工研条寄第１０４０号 昭和６１
年５月９日〔理化学研究所微生物系統保存施設 （Ｊａｐａｎ Ｃｏ１１ｅｃｔ１０ｎ ｏｆ Ｍ
ｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ。
微工研条寄第１０４６号 昭和６０年５月２８日（
微工研菌寄第８２６９号） ＡＫ ３３ 撒工研条寄第１０４７号 昭和６０年
５月２８日（徽工研菌寄第８２７０号） ＡＫ ３１３２ 微工研条寄第１０４０号 昭和６１
年５月９日〔理化学研究所微生物系統保存施設 （Ｊａｐａｎ Ｃｏ１１ｅｃｔ１０ｎ ｏｆ Ｍ
ｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ。
ＪＣＭ）にはＲｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ ｅｒｙｔｈｒｏ
ｐｏｌｉｓＪＣＭ ３１３２として保存されている。〕
次に、本発明の一般的実施態様について説明する。本発
明で水和反応に付されるニトリルとしては、たとえば、
アセトニトリル、プロピオニトリル、サクシノニトリル
、アジポニトリルのような脂肪族飽和ニトリル、アクリ
ロニトリル、メククリロニトリルのような脂肪族不飽和
ニトリル、ベンゾニトリル、フタロジニトリルのような
芳香族ニトリル及びニコチノニトリルのような複素環式
ニトリルである。
ｐｏｌｉｓＪＣＭ ３１３２として保存されている。〕
次に、本発明の一般的実施態様について説明する。本発
明で水和反応に付されるニトリルとしては、たとえば、
アセトニトリル、プロピオニトリル、サクシノニトリル
、アジポニトリルのような脂肪族飽和ニトリル、アクリ
ロニトリル、メククリロニトリルのような脂肪族不飽和
ニトリル、ベンゾニトリル、フタロジニトリルのような
芳香族ニトリル及びニコチノニトリルのような複素環式
ニトリルである。
本発明に使用される微生物の培養には、プロピオニトリ
ル、イソブチロニトリル、メタクリロニトリル等のニト
リルを唯一の炭素源、窒素源とする培地を用いるか、も
しくは、グルコース、アルドース等の炭素源、硫酸アン
モニウム、硝酸アンモニウム等の窒素源、酵母エキス、
麦芽エキス、ペプトン、肉エキス等の有機栄養源に、ニ
トリルを炭素源、窒素源として共存させたものに、リン
酸塩、ナトリウム、カリウム、ｉ失、マグネシウム、マ
ンガン、亜鉛等の無機栄養源等を適宜含有した培地を用
いて培養することにより、ニトリルの水和活性を持った
菌体を取得することができる。培地のｐＨは通常５〜９
、好ましくはｐＨ６〜８、温度は通常２０〜３５℃、好
ましくは２７〜３２℃で２〜５日間好気的に培養を行な
う。本発明で「ニトリルを微生物の作用による水和反応
に付して対応するアミドに変換させる」ということは水
和すべきニトリルの存在下に微生物を培養する場合、な
らびに微生物培養後の菌体培養物、そこから採取した菌
体または菌体処理物、たとえば菌体の破砕物、とニトリ
ルとを接触させる場合、のいずれをも包含するものとす
る。また、菌体を固定化して反応に利用する場合をも包
含するものである。
ル、イソブチロニトリル、メタクリロニトリル等のニト
リルを唯一の炭素源、窒素源とする培地を用いるか、も
しくは、グルコース、アルドース等の炭素源、硫酸アン
モニウム、硝酸アンモニウム等の窒素源、酵母エキス、
麦芽エキス、ペプトン、肉エキス等の有機栄養源に、ニ
トリルを炭素源、窒素源として共存させたものに、リン
酸塩、ナトリウム、カリウム、ｉ失、マグネシウム、マ
ンガン、亜鉛等の無機栄養源等を適宜含有した培地を用
いて培養することにより、ニトリルの水和活性を持った
菌体を取得することができる。培地のｐＨは通常５〜９
、好ましくはｐＨ６〜８、温度は通常２０〜３５℃、好
ましくは２７〜３２℃で２〜５日間好気的に培養を行な
う。本発明で「ニトリルを微生物の作用による水和反応
に付して対応するアミドに変換させる」ということは水
和すべきニトリルの存在下に微生物を培養する場合、な
らびに微生物培養後の菌体培養物、そこから採取した菌
体または菌体処理物、たとえば菌体の破砕物、とニトリ
ルとを接触させる場合、のいずれをも包含するものとす
る。また、菌体を固定化して反応に利用する場合をも包
含するものである。
菌体培養物からの菌体の採取は遠心分離法等の公知の方
法で行なうことができ、菌体の破砕はホモジナイザー等
により機械的に行なうか、又は超音波などを用いて行な
うことができる。
法で行なうことができ、菌体の破砕はホモジナイザー等
により機械的に行なうか、又は超音波などを用いて行な
うことができる。
本発明においては、上述のように、菌体培養物をそのま
ま用いることができる。もしくは、それから上述の方法
で分離した菌体及び菌体処理物を水又はリン酸バッファ
ー（たとえばｐ１１７〜９）などの暖街液に懸騙し、こ
れにニトリルを共存させれば、速やかに水和反応が進行
しアミドが生成する。すなわち、通常、該微住物凹体又
は薄体処理物を、たとえば０，１〜５重量％、ニトリル
を、たとえば０．２〜１０重量％重量％合本性懸濁液を
、’ｌＦＡ度をたとえば０〜３０°Ｃ，、ｐ）Ｉをたと
えば５〜１０の条件を用いて、反応時間をたとえば、２
分ないし８時間反応させれば良い。また、反応に際して
基質として用いるニトリルは、一般に生物毒性が強いの
で、反応系内の基質濃度は反応を阻害しない程度の４度
、たとえば２重量％以下、にコントロールしつつ、逐次
添加することにより微生物の失活を抑制することができ
る。又、反応温度を下げることも、微生物寿命を長くす
る上で有効である。
ま用いることができる。もしくは、それから上述の方法
で分離した菌体及び菌体処理物を水又はリン酸バッファ
ー（たとえばｐ１１７〜９）などの暖街液に懸騙し、こ
れにニトリルを共存させれば、速やかに水和反応が進行
しアミドが生成する。すなわち、通常、該微住物凹体又
は薄体処理物を、たとえば０，１〜５重量％、ニトリル
を、たとえば０．２〜１０重量％重量％合本性懸濁液を
、’ｌＦＡ度をたとえば０〜３０°Ｃ，、ｐ）Ｉをたと
えば５〜１０の条件を用いて、反応時間をたとえば、２
分ないし８時間反応させれば良い。また、反応に際して
基質として用いるニトリルは、一般に生物毒性が強いの
で、反応系内の基質濃度は反応を阻害しない程度の４度
、たとえば２重量％以下、にコントロールしつつ、逐次
添加することにより微生物の失活を抑制することができ
る。又、反応温度を下げることも、微生物寿命を長くす
る上で有効である。
かくして、ニトリルは、副生物であるカルボン酸の生成
なしに、はぼ１００％のモル収率でアミドに転換するこ
とができる。こうして得られたアミド生成物は、合目的
な公知の方法に従って精製し、アミド製品が得られる。
なしに、はぼ１００％のモル収率でアミドに転換するこ
とができる。こうして得られたアミド生成物は、合目的
な公知の方法に従って精製し、アミド製品が得られる。
すなわち、たとえば、反応液から、そのままもしくは菌
体をたとえば遠心分離、膜分離等によって除去後、必要
に応じて、活性炭、イオン交換樹脂などによる処理によ
って着色物質、不純物等を除去したのち、膜分離、減圧
？ｈ 縮、晶出、遠心分離などにより、目的のアミド製
品を取得することができる。
体をたとえば遠心分離、膜分離等によって除去後、必要
に応じて、活性炭、イオン交換樹脂などによる処理によ
って着色物質、不純物等を除去したのち、膜分離、減圧
？ｈ 縮、晶出、遠心分離などにより、目的のアミド製
品を取得することができる。
〔３−５発明の効果〕
本発明は、ニトリルの水和活性を有するロドコッカス属
に属する微生物を用いることにより、ニトリルから対応
するアミドを生成せしめるに際し、反応活性が極めて高
く、又、選択性がほぼ１００％で副生物が極めて少ない
、工業的に優れたアミドの製造法を提供する。
に属する微生物を用いることにより、ニトリルから対応
するアミドを生成せしめるに際し、反応活性が極めて高
く、又、選択性がほぼ１００％で副生物が極めて少ない
、工業的に優れたアミドの製造法を提供する。
一般には、反応温度を下げると微生物の寿命が長くなる
が反応速度が低下する。本発明の方法では、反応活性の
極めて高い微生物を用いるため、所定の反応速度を得る
場合、反応温度を下げることができ、結果として微生物
寿命を長く出来、７ミドの製造コストを低げることが出
来る。
が反応速度が低下する。本発明の方法では、反応活性の
極めて高い微生物を用いるため、所定の反応速度を得る
場合、反応温度を下げることができ、結果として微生物
寿命を長く出来、７ミドの製造コストを低げることが出
来る。
〔３−６実施例〕
次に、本発明を実施例により更に詳細に説明するが、本
発明の範囲は実施例に限定されるものではない。
発明の範囲は実施例に限定されるものではない。
実施例１
（１）培養
ＡＫ ３２を、下記の条件で培養した。
１）培地
トリプトン １．７ 重量％ソイペプ
トン ０．３〃 グルコース ０．２５ 〃イソブチロニ
トリル ０．５部 食 塩 ０．５ 〜リン
酸第二カリウム ０．２５ 〃ｐＨ７，３ ２）培養条件 ３０℃／４日間 （２） メタクリロニトリルの水和反応菌体は、得ら
れた培養液から遠心分離により集菌し、生理食塩水にて
洗浄したものを反応に供した。すなわち、乾燥菌体量と
して０．２重量％、メタクリコニトリル２．０重量％、
０．０５ Ｍリン酸バッファー液（ｐＨ７，０） ９７
．８重量％の反応液を調合し、３０℃にて反応を開始し
た。反応開始５分後に、反応液をガスクロマトグラフに
より分析したところ、２．５重量％のメタクリルアミド
を含み、未反応のメタクリロニトリル、メタクリル酸及
びその他の副生物は全く含まれず、反応はほぼ定量的に
進行し完結していた。
トン ０．３〃 グルコース ０．２５ 〃イソブチロニ
トリル ０．５部 食 塩 ０．５ 〜リン
酸第二カリウム ０．２５ 〃ｐＨ７，３ ２）培養条件 ３０℃／４日間 （２） メタクリロニトリルの水和反応菌体は、得ら
れた培養液から遠心分離により集菌し、生理食塩水にて
洗浄したものを反応に供した。すなわち、乾燥菌体量と
して０．２重量％、メタクリコニトリル２．０重量％、
０．０５ Ｍリン酸バッファー液（ｐＨ７，０） ９７
．８重量％の反応液を調合し、３０℃にて反応を開始し
た。反応開始５分後に、反応液をガスクロマトグラフに
より分析したところ、２．５重量％のメタクリルアミド
を含み、未反応のメタクリロニトリル、メタクリル酸及
びその他の副生物は全く含まれず、反応はほぼ定量的に
進行し完結していた。
比較例１
（１１培養
コリ２ハクテリウムスペシース（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔ
ｅｒｉｕｍＳｐ、） Ｎ−７７４株（撒工研菌寄第４４
４６号）を下記の条件で培養した。
ｅｒｉｕｍＳｐ、） Ｎ−７７４株（撒工研菌寄第４４
４６号）を下記の条件で培養した。
ｌ）培地
グルコース １．０ 重量％ペプトン
０．５〃 酵母エキス ０．３〃 麦芽エキス ０．３ 〜ｐＨ７，２ ２）培養条件 ２８℃／３日間 （２） メタクリロニトリルの水和反応得られた培養
液から菌体を分離して水洗し、乾燥菌体３部及び水９７
部の休止菌体分散液を調合し、攪拌下に水酸化カリウム
にてｐＨ８，５にコントロールしつつメタクリロニトリ
ルを１時間当り３部の割合で連続的に滴下し３０°Ｃで
反応させた。
０．５〃 酵母エキス ０．３〃 麦芽エキス ０．３ 〜ｐＨ７，２ ２）培養条件 ２８℃／３日間 （２） メタクリロニトリルの水和反応得られた培養
液から菌体を分離して水洗し、乾燥菌体３部及び水９７
部の休止菌体分散液を調合し、攪拌下に水酸化カリウム
にてｐＨ８，５にコントロールしつつメタクリロニトリ
ルを１時間当り３部の割合で連続的に滴下し３０°Ｃで
反応させた。
４時間反応させた後、メタクリロニトリルの滴下を止め
、さらに３０分攪拌を続は系内のメタクリロニトリルを
殆ど完全に反応させた。反応終了後、遠心分離により菌
体を除去し澄明液を得た。このもののメタクリルアミド
を定量したところ１３．０重量％の含有率であった。メ
タクリルアミドの収率は約９５％であった。
、さらに３０分攪拌を続は系内のメタクリロニトリルを
殆ど完全に反応させた。反応終了後、遠心分離により菌
体を除去し澄明液を得た。このもののメタクリルアミド
を定量したところ１３．０重量％の含有率であった。メ
タクリルアミドの収率は約９５％であった。
実施例２
（１）培養
ＡＫ ３２を下記の条件で培養した。
■）培地
グルコース １．０ 重量％肉エキス
１．０〃 ペプトン １６０ 〃イソブチロニ
トリル ０．２５ 〃食 塩
０．１ 〜リン酸第−カリウム
０．ｌ〃 硫酸マグネシウム ０．０５ 〃硫酸第一鉄
０．００５ 〃硫酸マンガン
０．Ｏ０５〃硫酸アンモニウム ０．１ 硝酸カリウム ０．１〃 ｐＨ７，０ ２）培養条件 ３０℃／３日間 （２）二１−リルの水和反応 菌体は、得られた培養液から実施例１と同様の方法で取
得した。
１．０〃 ペプトン １６０ 〃イソブチロニ
トリル ０．２５ 〃食 塩
０．１ 〜リン酸第−カリウム
０．ｌ〃 硫酸マグネシウム ０．０５ 〃硫酸第一鉄
０．００５ 〃硫酸マンガン
０．Ｏ０５〃硫酸アンモニウム ０．１ 硝酸カリウム ０．１〃 ｐＨ７，０ ２）培養条件 ３０℃／３日間 （２）二１−リルの水和反応 菌体は、得られた培養液から実施例１と同様の方法で取
得した。
反応条件は下記の通りである。
乾燥菌体量 ０．２ 重量％基質のニト
リル ２．０〃 ０．０５Ｍ リン酸バッファー（ｐＨ７，０）９７．８
／／ 反応温度 １０°Ｃ 反応時間 ５分 得られた結果は次表に示す通りであった。
リル ２．０〃 ０．０５Ｍ リン酸バッファー（ｐＨ７，０）９７．８
／／ 反応温度 １０°Ｃ 反応時間 ５分 得られた結果は次表に示す通りであった。
アセトニトリル ０．２９ ０．１０プロピ
オニトリル １．９９ ０．１２７・Ｌ゛、Ｉ
ロニトリル １．９８ ０．０５イソブチロニ
トリル １．２２ ０．１０メタクリロニトリル
０．９５ ０．０２サクシノニトリル １
．５０ ０．１以下アジポニトリル ０．８
４ ０．１以下ヘンゾニトリル Ｏ，！ ０
０．１阪下テレフタロニトリル ０．９６
０．１以下ニコチノニトリル ０．０２ ０
．１以下本１ アミド生成活性 生成アミドモル数／乾燥菌体グラム数・時間Ｈｒ本２
酸副生率 １００Ｘ副成カルボン酸モル数／供試ニトリルモル数 なお、分析は通常ガスクロマトグラフィーを用いたが、
沸点の高いサクシノニトリル、アジポニトリル、ベンゾ
ニトリル、テレフタロニトリル、ニコチノニトリルのア
ミド化生成物は液体クロマトグラフィーにより分析した
。
オニトリル １．９９ ０．１２７・Ｌ゛、Ｉ
ロニトリル １．９８ ０．０５イソブチロニ
トリル １．２２ ０．１０メタクリロニトリル
０．９５ ０．０２サクシノニトリル １
．５０ ０．１以下アジポニトリル ０．８
４ ０．１以下ヘンゾニトリル Ｏ，！ ０
０．１阪下テレフタロニトリル ０．９６
０．１以下ニコチノニトリル ０．０２ ０
．１以下本１ アミド生成活性 生成アミドモル数／乾燥菌体グラム数・時間Ｈｒ本２
酸副生率 １００Ｘ副成カルボン酸モル数／供試ニトリルモル数 なお、分析は通常ガスクロマトグラフィーを用いたが、
沸点の高いサクシノニトリル、アジポニトリル、ベンゾ
ニトリル、テレフタロニトリル、ニコチノニトリルのア
ミド化生成物は液体クロマトグラフィーにより分析した
。
実施例３
（１）培養
ＡＫ ３３を、実施例２と同様な条件で培養した。
（２）アクリロニトリルの水和反応
菌体は、得られた培養液から実施例１と同様の方法で取
得し、乾燥菌体重量として１０ｇを０．０５Ｍリン酸バ
ッファー（ｐＨ７，０） １６に加え、休止菌体分散
液を調製した。この液に、アクリロニトリルを間欠的に
添加してその水和反応を行なった。
得し、乾燥菌体重量として１０ｇを０．０５Ｍリン酸バ
ッファー（ｐＨ７，０） １６に加え、休止菌体分散
液を調製した。この液に、アクリロニトリルを間欠的に
添加してその水和反応を行なった。
すなわち、２０分毎にアクリロニトリル２０ｇずつ添加
し、２〜３°Ｃで反応を行なった。反応混合物中の未反
応のアクリロニトリル及び生成したアクリルアミドの濃
度は、アクリロニトリル添加直前の反応混合物をガスク
ロマトグラフィーで分析して定量した。反応開始後はぼ
直線的に反応混合物中のアクリルアミドの量が増加し、
反応開始後５時間で、４５０ ｇ／７！−バッファーの
アクリルアミドが生産された。反応はまだ進行するよう
であったが、この時点で反応速度がやや低下したので反
応を停止した。アクリルアミド収率はほぼ１００％であ
り、副生物としてのアクリル酸は、添加したアクリロニ
トリルに対し０．１％程度にすぎなかった。
し、２〜３°Ｃで反応を行なった。反応混合物中の未反
応のアクリロニトリル及び生成したアクリルアミドの濃
度は、アクリロニトリル添加直前の反応混合物をガスク
ロマトグラフィーで分析して定量した。反応開始後はぼ
直線的に反応混合物中のアクリルアミドの量が増加し、
反応開始後５時間で、４５０ ｇ／７！−バッファーの
アクリルアミドが生産された。反応はまだ進行するよう
であったが、この時点で反応速度がやや低下したので反
応を停止した。アクリルアミド収率はほぼ１００％であ
り、副生物としてのアクリル酸は、添加したアクリロニ
トリルに対し０．１％程度にすぎなかった。
比較例２
（１１培養
シュウトモナス・クロロラフイス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎ
ａｓＣｈｌｏｒｏｒａｐｈｉｓ）８２３株（徽工研菌寄
第１８７号）を下記の条件で培養した。
ａｓＣｈｌｏｒｏｒａｐｈｉｓ）８２３株（徽工研菌寄
第１８７号）を下記の条件で培養した。
１）培地
デキストリン ０．５ 重量％リン酸第二
カリウム ０．２〃 硫酸マグネシウム ０．０２ 〃イソブチロニ
トリル ０．２〃 食 塩 ０．１〃ｐＨ７，０ ２）培養条件 ２８℃／３日間 （２） アクリロニトリルの水和反応得られた培養液
から菌体を分離して水洗し、乾燥菌体重量として２０
ｇ／（！の濃度となるようにリン酸バッファー（ｐｌ＋
７．０ ）に分散させてなる休止菌体分散液にアクリ
ロニトリルを間欠的に添加してその水和反応を行なった
。反応は０〜４℃で行ない、アクリロニトリル濃度が０
．４ Ｍとなるようにアクリロニトリルを間欠的に添加
した。反応開始後はぼ直線的に反応混合物中のアクリル
アミドの量が増加し、反応開始後７．５時間で４００ｇ
／ｌのアクリルアミドが生成された。反応はまだ十分に
進行するようであったが、この時点で反応液が粘稠とな
ったので反応を停止した。
カリウム ０．２〃 硫酸マグネシウム ０．０２ 〃イソブチロニ
トリル ０．２〃 食 塩 ０．１〃ｐＨ７，０ ２）培養条件 ２８℃／３日間 （２） アクリロニトリルの水和反応得られた培養液
から菌体を分離して水洗し、乾燥菌体重量として２０
ｇ／（！の濃度となるようにリン酸バッファー（ｐｌ＋
７．０ ）に分散させてなる休止菌体分散液にアクリ
ロニトリルを間欠的に添加してその水和反応を行なった
。反応は０〜４℃で行ない、アクリロニトリル濃度が０
．４ Ｍとなるようにアクリロニトリルを間欠的に添加
した。反応開始後はぼ直線的に反応混合物中のアクリル
アミドの量が増加し、反応開始後７．５時間で４００ｇ
／ｌのアクリルアミドが生成された。反応はまだ十分に
進行するようであったが、この時点で反応液が粘稠とな
ったので反応を停止した。
アクリルアミドの収率は約９９％であり、副生物として
のアクリル酸は添加したアクリロニトリルの約０．７％
であった。
のアクリル酸は添加したアクリロニトリルの約０．７％
であった。
実施例４
（１）培養
ＡＫ ３２を、実施例２と同様な条件で培養した。
（２） メククリロニトリルの水和反応菌体は、実施
例３と同様の方法で取得し、乾燥菌体重量として５ｇを
、０．０５Ｍリン酸パンファ−（ｐＨ７，０） １１
２に加え、休止菌体分散液を調製した。この液に、メタ
クリロニトリルを間欠的に添加してその水和反応を行な
った。すなわち１時間毎に、メタクリロニトリルを２０
ｇずつ添加し、２〜３℃で反応を行なった。反応混合物
中の未反応のメタクリロニトリルの濃度は、メタクリロ
ニトリル添加直前の反応混合物をガスクロマトグラティ
ーで分析して定量した。反応開始後５時間経過したあた
りからメタクリルアミドが結晶として析出し始めた。以
後、未反応メタクリロニトリルが若干残存し始めたので
、メタクリロニトリルの添加を２時間毎に２０ｇずつと
改め、２５時間反応を）ｌ［したところ、２４５ｇのメ
タクリルアミド結晶が得られた。この反応液を４℃にて
１６００時間冷蔵保存しておいた後、メタクリロニトリ
ル２０ｇを添加し、２〜３°Ｃで反応を行なったところ
、２時間後には未反応メタクリロニトリルは全く検出さ
れず、はぼ１００％収率でメタクリルアミドに転換して
いた。なお、副生物としてのメタクリル酸は添加したメ
タクリロニトリルの０．１％程度にすぎなかった。
例３と同様の方法で取得し、乾燥菌体重量として５ｇを
、０．０５Ｍリン酸パンファ−（ｐＨ７，０） １１
２に加え、休止菌体分散液を調製した。この液に、メタ
クリロニトリルを間欠的に添加してその水和反応を行な
った。すなわち１時間毎に、メタクリロニトリルを２０
ｇずつ添加し、２〜３℃で反応を行なった。反応混合物
中の未反応のメタクリロニトリルの濃度は、メタクリロ
ニトリル添加直前の反応混合物をガスクロマトグラティ
ーで分析して定量した。反応開始後５時間経過したあた
りからメタクリルアミドが結晶として析出し始めた。以
後、未反応メタクリロニトリルが若干残存し始めたので
、メタクリロニトリルの添加を２時間毎に２０ｇずつと
改め、２５時間反応を）ｌ［したところ、２４５ｇのメ
タクリルアミド結晶が得られた。この反応液を４℃にて
１６００時間冷蔵保存しておいた後、メタクリロニトリ
ル２０ｇを添加し、２〜３°Ｃで反応を行なったところ
、２時間後には未反応メタクリロニトリルは全く検出さ
れず、はぼ１００％収率でメタクリルアミドに転換して
いた。なお、副生物としてのメタクリル酸は添加したメ
タクリロニトリルの０．１％程度にすぎなかった。
実施例５
（１１培養
ＡＫ ３２を、実施例２と同様な条件で培養した。
（２） メタクリロニトリルの水和反応菌体は、実施
例３と同様の方法で取得した後、アルギン酸カルシウム
ゲルを用い固定化菌体を調製した。固定化菌体２５ｇ（
乾燥菌体重量換算０．５ｇ）を、０．５重量％塩化カル
シウム水溶液（ｐＨ７，０） ７５ ｇに加えた休止
固定化菌体分散液に、メタクリロニトリルを間欠的に添
加しその水和反応を行なった。すなわち、１時間毎にメ
タクリロニトリルを２ｇずつ添加し、２〜３°Ｃで反応
を行なった。反応混合物中の未反応のメククリロニトリ
ルの濃度は、メタクリロニトリル添加直前の反応混合物
をガスクロマトグラフィーで分析して定量した。反応開
始後５時間経過したあたりからメタクリルアミドが結晶
として析出し始めた。
例３と同様の方法で取得した後、アルギン酸カルシウム
ゲルを用い固定化菌体を調製した。固定化菌体２５ｇ（
乾燥菌体重量換算０．５ｇ）を、０．５重量％塩化カル
シウム水溶液（ｐＨ７，０） ７５ ｇに加えた休止
固定化菌体分散液に、メタクリロニトリルを間欠的に添
加しその水和反応を行なった。すなわち、１時間毎にメ
タクリロニトリルを２ｇずつ添加し、２〜３°Ｃで反応
を行なった。反応混合物中の未反応のメククリロニトリ
ルの濃度は、メタクリロニトリル添加直前の反応混合物
をガスクロマトグラフィーで分析して定量した。反応開
始後５時間経過したあたりからメタクリルアミドが結晶
として析出し始めた。
以後、未反応メタクリロニトリルが若干残存し始めたの
で、メタクリロニトリルの添加を２時間毎に２ｇずつと
改め、１５時間反応を継続したところ、１０．８ ｇの
メタクリルアミド結晶が得られた。
で、メタクリロニトリルの添加を２時間毎に２ｇずつと
改め、１５時間反応を継続したところ、１０．８ ｇの
メタクリルアミド結晶が得られた。
なお、副生物としてのメタクリル酸は添加したメタクリ
ロニトリルの０．３％程度にすぎなかった。
ロニトリルの０．３％程度にすぎなかった。
実施例６
（１）培養
ＡＫ ３１３２を、下記の条件で培養した。
１）培地
イソブチロニトリル ０．５ 重量％リン酸第
−カリウム ０．１〃 硫酸マグネシウム ０．０５ 〃硫酸第−銖
０．００５１ｒ硫酸マンガン
０．Ｏ０５〃硫酸アンモニウム ０．１〃 硝酸カリウム ０．１〃 ｐＨ７，０ ２）培養条件 ３０℃１５日間 （２） メタクリロニトリルの水和反応圀体は、得ら
れた培養液から実施例１と同様の方法で取得し反応に供
した。すなわち、乾燥菌体量として１．０重量％、メタ
クリコニトリル１．０重量％、０．０５ Ｍリン酸バソ
ファ−ン夜（ｐＨ７，０）９８．０重量％の反応液を調
合し、３０°Ｃにて反応を開始した。反応開始３０分後
に、反応液をガスクロマトグラフィーにより分析したと
ころ、０．１重量％のメタアクリルアミドが生成してい
た以外には、未反応メタクリロニトリルがほぼ定量的に
残存していた。
−カリウム ０．１〃 硫酸マグネシウム ０．０５ 〃硫酸第−銖
０．００５１ｒ硫酸マンガン
０．Ｏ０５〃硫酸アンモニウム ０．１〃 硝酸カリウム ０．１〃 ｐＨ７，０ ２）培養条件 ３０℃１５日間 （２） メタクリロニトリルの水和反応圀体は、得ら
れた培養液から実施例１と同様の方法で取得し反応に供
した。すなわち、乾燥菌体量として１．０重量％、メタ
クリコニトリル１．０重量％、０．０５ Ｍリン酸バソ
ファ−ン夜（ｐＨ７，０）９８．０重量％の反応液を調
合し、３０°Ｃにて反応を開始した。反応開始３０分後
に、反応液をガスクロマトグラフィーにより分析したと
ころ、０．１重量％のメタアクリルアミドが生成してい
た以外には、未反応メタクリロニトリルがほぼ定量的に
残存していた。
実施例７
実施例２に記載した培地２００ｇを２本の５００ｍｊ！
三角フラスコの各々に入れＡＸ ３３をロータリー振盪
器を用いて３０°Ｃ１２２０ｒｐｍで２４時間培養した
。２本のフラスコのうち１本は菌体濃度を測定する為２
４時間で培養を中断し潤度測定を行なった。その結果１
１０５０ｐｐの菌体が増殖していることがわかった。他
のフラスコについてはメタクリロニトリルを１時間に０
．２５ｇずつ添加しながらさらに上記に記載した条件下
で培養を続けた。培養開始から７２時間で培養を止め、
フラスフ中の菌濃度とメタクリルアミドの濃度測定を行
なったところ菌体は５１００ｐｐｍまで増殖しており、
メタクリルアミドはフラスコ内に１１．２ｇＭ積してい
ることがわかった。尚、メタクリルアミド量はガスクロ
マトグラフィーにより定量した。
三角フラスコの各々に入れＡＸ ３３をロータリー振盪
器を用いて３０°Ｃ１２２０ｒｐｍで２４時間培養した
。２本のフラスコのうち１本は菌体濃度を測定する為２
４時間で培養を中断し潤度測定を行なった。その結果１
１０５０ｐｐの菌体が増殖していることがわかった。他
のフラスコについてはメタクリロニトリルを１時間に０
．２５ｇずつ添加しながらさらに上記に記載した条件下
で培養を続けた。培養開始から７２時間で培養を止め、
フラスフ中の菌濃度とメタクリルアミドの濃度測定を行
なったところ菌体は５１００ｐｐｍまで増殖しており、
メタクリルアミドはフラスコ内に１１．２ｇＭ積してい
ることがわかった。尚、メタクリルアミド量はガスクロ
マトグラフィーにより定量した。
またこの時、培養液中にメタクリル酸は検出されなかっ
たがメタクリロニトリルは５００ｐｐｍ残存していた。
たがメタクリロニトリルは５００ｐｐｍ残存していた。
実施例８
（１ン 培養
ＡＫ ３２を、実施例２と同様な条件で培養した。
（２） メタクリロニトリルの水和反応菌体を含む培
養液２０ｇを磁気回転子を入れた５０ｍ６の三角フラス
コに摂取し、さらに４°Ｃに設定したウォーターバスに
入れ、マグネティックスクーラーで攪拌しながら２時間
放置した。次にメタクリロニトリルを１時間に０．４ｇ
ずつ添加していったところ添加開始から８時間を過ぎた
頃よりメタクリルアミドの結晶が析出し始めた。さらに
メタクリロニトリルの添加を継続したところ、１８時間
が過ぎた時点でフラスコ内に析出した結晶の為回転子が
回らなくなったので実験を打ち切った。フラスコ内の全
スラリーを水で希釈し１０００ｇとし、メタクリルアミ
ドの結晶を溶解させてからガスクロマトグラフィーでメ
タクリルアミドの濃度を分析したところ０．９１重量％
であった。またこの時、メタクリロニトリル及びメタク
リル酸は検出されなかった。
養液２０ｇを磁気回転子を入れた５０ｍ６の三角フラス
コに摂取し、さらに４°Ｃに設定したウォーターバスに
入れ、マグネティックスクーラーで攪拌しながら２時間
放置した。次にメタクリロニトリルを１時間に０．４ｇ
ずつ添加していったところ添加開始から８時間を過ぎた
頃よりメタクリルアミドの結晶が析出し始めた。さらに
メタクリロニトリルの添加を継続したところ、１８時間
が過ぎた時点でフラスコ内に析出した結晶の為回転子が
回らなくなったので実験を打ち切った。フラスコ内の全
スラリーを水で希釈し１０００ｇとし、メタクリルアミ
ドの結晶を溶解させてからガスクロマトグラフィーでメ
タクリルアミドの濃度を分析したところ０．９１重量％
であった。またこの時、メタクリロニトリル及びメタク
リル酸は検出されなかった。
実施例９
（１）培養
ＡＫ ３２を、実施例２と同様な方法で培養した。
（２） メタクリロニトリルの水和反応得られた培養
液から遠心分離により集菌し、塩化カリウム水溶液（０
，０５Ｍ、 ｐｌ（７，０）で洗浄した後、再度遠心分
離操作を施した。こうして得られたＡＫ ３２の休止菌
体（含水率８０％）２ｇと０．０５Ｍリン酸バッファー
（ｐＨ８，０） １５ ｇ及び０．１７〜０．１８ｍ
φのガラスピーズ４０ｇをホモジナイザーに仕込み、Ｃ
Ｏ□を吹き込み０〜５°Ｃに冷却しなから１゜５分間ホ
モジナイザー処理をして菌体細胞を破砕した。この破砕
物３ｇを取り出し破砕物９８．０重量％、メタクリコニ
トリル２．０重量％の反応液を調合し、実施例１と同様
に３０℃にてメタクリロニトリルの水和反応を開始した
。
液から遠心分離により集菌し、塩化カリウム水溶液（０
，０５Ｍ、 ｐｌ（７，０）で洗浄した後、再度遠心分
離操作を施した。こうして得られたＡＫ ３２の休止菌
体（含水率８０％）２ｇと０．０５Ｍリン酸バッファー
（ｐＨ８，０） １５ ｇ及び０．１７〜０．１８ｍ
φのガラスピーズ４０ｇをホモジナイザーに仕込み、Ｃ
Ｏ□を吹き込み０〜５°Ｃに冷却しなから１゜５分間ホ
モジナイザー処理をして菌体細胞を破砕した。この破砕
物３ｇを取り出し破砕物９８．０重量％、メタクリコニ
トリル２．０重量％の反応液を調合し、実施例１と同様
に３０℃にてメタクリロニトリルの水和反応を開始した
。
反応開始５分後に反応液を分析したところ、２．５重量
％のメタクリルアミドの性成が認められ、メタクリルア
ミドの収率は約１００％であった。
％のメタクリルアミドの性成が認められ、メタクリルア
ミドの収率は約１００％であった。
Claims (10)
- （１）ニトリルを微生物の作用による水和反応に付して
対応するアミドに変換させ、生成するアミドを反応混合
物から分離するアミドの製造方法において、該微生物と
してロドコッカス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ）属に属し
ニトリルを水和する能力を有する微生物を用いることを
特徴とするアミドの微生物学的製造方法。 - （２）該微生物がロドコッカス・エリスロポリス（Ｒｈ
ｏｄｏｃｏｃｃｕｓ ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｌｉｓ）菌で
あることを特徴とする特許請求の範囲第（１）項に記載
の方法。 - （３）該微生物が、ロドコッカスｓｐ．ＡＫ３２菌株（
微工研条寄第１０４６号）であることを特徴とする特許
請求の範囲第（１）項に記載の方法。 - （４）該微生物が、ロドコッカスｓｐ．ＡＫ３３菌株（
微工研条寄第１０４７号）であることを特徴とする特許
請求の範囲第（１）項に記載の方法。 - （５）該微生物が、ロドコッカス・エリスロポリスＡＫ
３１３２菌株（微工研条寄第１０４０号）であることを
特徴とする特許請求の範囲第（２）項に記載の方法。 - （６）該ニトリルが脂肪族飽和ニトリル、脂肪族不飽和
ニトリル、芳香族ニトリル及び複素環式ニトリルから選
ばれた一種であることを特徴とする特許請求の範囲第（
１）項に記載の方法。 - （７）該脂肪族飽和ニトリルがアセトニトリル、プロピ
オニトリル、サクシノニトリル及びアジポニトリルから
選ばれた一種であることを特徴とする特許請求の範囲第
（６）項に記載の方法。 - （８）該脂肪族不飽和ニトリルがアクリロニトリル又は
メタクリロニトリルであることを特徴とする特許請求の
範囲第（６）項に記載の方法。 - （９）該芳香族ニトリルがベンゾニトリル又はフタロジ
ニトリルであることを特徴とする特許請求の範囲第（６
）項に記載の方法。 - （１０）該複素環式ニトリルがニコチノニトリルである
ことを特徴とする特許請求の範囲第（６）項に記載の方
法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11976185 | 1985-06-04 | ||
| JP60-119761 | 1985-06-04 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6291189A true JPS6291189A (ja) | 1987-04-25 |
| JPH0740948B2 JPH0740948B2 (ja) | 1995-05-10 |
Family
ID=14769519
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61127176A Expired - Fee Related JPH0740948B2 (ja) | 1985-06-04 | 1986-06-03 | アミドの微生物学的製造法 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0204555B1 (ja) |
| JP (1) | JPH0740948B2 (ja) |
| KR (1) | KR870001811B1 (ja) |
| AT (1) | ATE76432T1 (ja) |
| DE (1) | DE3685371D1 (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0704530A2 (en) | 1994-08-04 | 1996-04-03 | Nitto Chemical Industry Co., Ltd. | A kanamycin resistance gene derived from microorganisms of the genus rhodococcus |
| JP2005348674A (ja) * | 2004-06-11 | 2005-12-22 | Mitsubishi Rayon Co Ltd | ロドコッカス属細菌由来トリメトプリム耐性ジヒドロ葉酸還元酵素及びその遺伝子 |
| WO2012157777A1 (ja) * | 2011-05-19 | 2012-11-22 | ダイヤニトリックス株式会社 | アクリルアミド水溶液の製造方法 |
| US9057084B2 (en) | 2011-05-19 | 2015-06-16 | Mitsubishi Rayon Co., Ltd. | Method for producing aqueous acrylamide solution |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5179014A (en) * | 1985-01-08 | 1993-01-12 | Nitto Chemical Industry Co., Ltd. | Process for the preparation of amides using microorganisms |
| JPS61162193A (ja) * | 1985-01-08 | 1986-07-22 | Nitto Chem Ind Co Ltd | 微生物によるアミド類の製造法 |
| MX169933B (es) * | 1987-09-18 | 1993-08-02 | Hideaki Yamada | Procedimiento para la produccion biologica de amidas |
| JP2840253B2 (ja) * | 1988-07-06 | 1998-12-24 | 輝彦 別府 | ニトリルヒドラターゼ活性を有するポリペプチドをコードする遺伝子ｄｎａ、これを含有する形質転換体によるニトリル類からアミド類の製造法 |
| DE69126762T2 (de) * | 1990-11-14 | 1997-10-23 | Nitto Chemical Industry Co Ltd | Biologisches Verfahren zur Herstellung von Alpha-Hydroxyamid und Alpha-Hydroxysäure |
| RU2053300C1 (ru) * | 1993-12-17 | 1996-01-27 | Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов | Штамм бактерий rhodococcus rhodochrous - продуцент нитрилгидратазы |
| DE10042835A1 (de) * | 2000-08-30 | 2002-03-14 | Basf Ag | Verfahren zur enzymatischen Umsetzung von Verbindungen mit mindestens einer Nitrilfunktion und/oder mindestens einer Amidfunktion |
| CN1296487C (zh) * | 2000-12-20 | 2007-01-24 | 大野绿水株式会社 | 利用微生物催化剂生产酰胺化合物的方法 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61162193A (ja) * | 1985-01-08 | 1986-07-22 | Nitto Chem Ind Co Ltd | 微生物によるアミド類の製造法 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2294999A1 (fr) * | 1974-12-18 | 1976-07-16 | Anvar | Procede de preparation d'amides par hydrolyse biologique |
| IT1162484B (it) * | 1978-03-29 | 1987-04-01 | Nitto Chemical Industry Co Ltd | Procedimento pe produrre acrilammide o metacrilammide impiegando microorganismi |
| US4629700A (en) * | 1983-11-30 | 1986-12-16 | Standard Oil Company (Indiana) | Selective conversion of cyano compounds to amides and carboxylic acids |
| CN85107055A (zh) * | 1984-10-01 | 1986-06-10 | 诺沃工业联合股票公司 | 酶促工艺方法 |
| JPS62107792A (ja) * | 1985-11-06 | 1987-05-19 | Res Assoc Util Of Light Oil | 微生物によるメタクリルアミド結晶の製造法 |
-
1986
- 1986-06-03 JP JP61127176A patent/JPH0740948B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1986-06-04 KR KR1019860004450A patent/KR870001811B1/ko not_active IP Right Cessation
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- 1986-06-04 AT AT86304254T patent/ATE76432T1/de not_active IP Right Cessation
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61162193A (ja) * | 1985-01-08 | 1986-07-22 | Nitto Chem Ind Co Ltd | 微生物によるアミド類の製造法 |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0704530A2 (en) | 1994-08-04 | 1996-04-03 | Nitto Chemical Industry Co., Ltd. | A kanamycin resistance gene derived from microorganisms of the genus rhodococcus |
| JP2005348674A (ja) * | 2004-06-11 | 2005-12-22 | Mitsubishi Rayon Co Ltd | ロドコッカス属細菌由来トリメトプリム耐性ジヒドロ葉酸還元酵素及びその遺伝子 |
| WO2012157777A1 (ja) * | 2011-05-19 | 2012-11-22 | ダイヤニトリックス株式会社 | アクリルアミド水溶液の製造方法 |
| US9057084B2 (en) | 2011-05-19 | 2015-06-16 | Mitsubishi Rayon Co., Ltd. | Method for producing aqueous acrylamide solution |
| US9102590B2 (en) | 2011-05-19 | 2015-08-11 | Mitsubishi Rayon Co., Ltd. | Method for producing acrylamide aqueous solution |
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