JPS60188065A - 新規なマルトペンタオース生成酵素およびその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規はマルトペンタオース生成酵素。

その製造方法および該酵素を用いてマルトペンタオース
を製造する方法に関する。

近年、マルトオリゴ糖に関する研究がすすめられている
が、現在工業的に大量生産されているものはマルトース
のみである。マルトース以外にはマルトトリオースが試
薬用として、またマルトペンタオースがアミラーゼ活性
測定用としてそれぞれ少量生産されているにすぎない。

しかし、最近マルトトリオ−スルマルトヘキサオースの
マルトオリゴ糖を特異的に生産する微生物起源のアミラ
ーゼが次々に発見され、澱粉から各種オリゴ糖の生産が
容易に行なえるようになってきた。たとえばマルトペン
タオースに関してはＡｒｃｈ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｂ
ｌｏｐｈｙｓ、、　１５５．２９０　（１９７３）およ
び日本農芸化学会昭和５７年度大会要旨集１７８頁に記
載の酵素が知られている。ところが、これらの酵素は反
応初期からマルトペンタオース以外の各稲穂を生成する
ものであり、マルトペンタオースのみを生成するアミラ
ーゼは未だ知られていない。

本発明者らはマルトペンタオースを効率よく生成し得る
酵素を検索すべく研究を重ねた。その過程でシュードモ
ナス属に総する微生物を培養することにより目的とする
マルトペンタオース合成酵素が得られることを見出し、
本発明を完成するに至った。

本発明は、第１に以下に示す性質を有する新規なマルト
ペンタオース生成酵素に関する。

（１）　本酵素はアミロース、可溶性澱粉、馬鈴蒐澱粉
、せ藷澱粉、米澱粉、タピオカ澱粉、トウモ胃コシ澱粉
、モチトウモロコシ澱粉、サゴＯ粉などに作用してマル
トペンタオースを生成する。

（２）本酵素は４５℃にてｐＥ［６〜７が至適であり、
ｐＩｉ６．５〜９で安定である。

（３）本酵素はｐＨ６，５において至適温度は５０〜５
５℃であり、５５℃以上の温度で１５分間放置すると失
活する。

（４）　本酵素は０．４１１１Ｍパラクロロ安息香酸第
二水銀および１　ｍＭモノヨードアセトアミド溶液中で
阻害を受けるが、阻害率は４０〜５０％である。

（５）本酵素の分子量は７２５００±２５００　（ディ
スクゲル電気泳動法による）である。

（６）本酵素の等電点ｂｓ　ｐＩｉ　６．５　（アンフ
オライン電気泳動法による）である。

第２に本発明は、シュードモナス（Ｐ　ｓ　ｅｕｄｏｍ
ｏｎａ、ｓ　）属に属し、上記の性質を有する新規なマ
ルトペンタオース生成酵素の生産能を有する微生物を培
養し、培養物中に該酵素を蓄積せしめ、これを採取する
ことを特徴とする新規なマルトペンタオース生成酵素の
製造方法である。

さらに、本発明は第３の発明として、澱粉、澱粉の組成
画分および澱粉の分解反応生成物のうちの少なくとも１
種の物質に上記の性質を有する新規なマルトペンタオー
ス生成酵素を作用させることを４￥徴とするマルトペン
タオースの製造方法に関するものである。

本発明の新規なマ／ｌ／）ペンタオース生成Ｉ！ｉば、
は微生物を用（・て生産され、その生産菌としてはシュ
ードモナス屈に属し、上記性質を有する酵素を生産する
能力を有するものであればよく、たとえばシュードモナ
スＫＯ−８９４０がある。本発明に用いる微生物として
は本菌株とその変種、変異株に制限されるものではなく
、上記酵素の生産能を有するものであればよい。ここで
変異手段としては常法のものでよく、たとえばラジオア
イソトープ（ＲＩ　）　、紫外線（Ｕｖ）、ニトロソグ
アニジンなどを用いて行なえばよい。

、以下に、シュードモナスＫＯ−８９４０のＨ１学的１
−１質を記載する。

１、形態的性質 栄養細胞の大きさは０．５〜０．７５μ×１〜３　／１
（０，５μ×２μ）で桿菌であり、胞子は形成しない。

鞭毛は極鞭毛であり、運動性がある。（第１図参照） ダラム染色性は陰性であり、抗酸性はない。

尚、上記の形態は肉エキス１０ｇ、ペプトン１０９、Ｎ
ａ０１５ｆ１．寒天１５ｇ、水１１（ｐＨ７−４）の組
成の培地における生育状態について観察されたものであ
る。

２、各種培地上での生育状態 肉汁寒天平板培養では点状２台状で波状、表面はしわ状
でにぷい光沢があり、半透明、色調はやや赤みのかかっ
た乳白色を示す。

肉汁寒天斜面培養では接種線上に一様に生育し、辺縁は
鋸歯状、隆起は薄く、表面は平滑あるいはしわ状で湿っ
ている。

にぶい光沢があり、半透明で、やや赤味のかかった乳白
色を示す。

肉汁液体培養では混濁し菌膜が生成する。

肉汁ゼラチン穿刺培養゛ではほとんど生育しないため、
ゼラチンの液化は認められない。

リドマスミルク（１０％　ｐＩｉ７）での生育状態は悪
い。

ｐＨはややアルカリ側で凝固は認められない。

３、生理的性質 生育ｐ）Ｉの範囲はｐ１１６〜９であり、ｐ、Ｈ７，５
〜８が最適である。

生育温度の範囲は４５℃以下であり、４０℃付近が最適
である。

硝酸塩を還元し、脱窒反応は陽性であるが、ガスの発生
は認められない。

皿テス）、ＶＩ’反応、ウレアーゼ反応は陰性である。

インドール、硫化水素の生成は認められない。

オキシダーゼ反応、カタラーゼ反応は陽性である。

クエン酸、硝酸塩、アンモニウム塩を利用して生育する
。

デンプンの加水分解は陽性である。

色素は生成しない。

酸素に対する態度は好気性である。

２％食塩で良好に生育するが３％以上では生育しない。

０−Ｆテストは好気性でわずかに生育するが、酸の生成
は認められない。

アラヒノース、キシロース、グルコース、マンノース、
フラクトース、ガラクトース、麦芽糖。

ショＩＪＮ、　乳ＩＪ３．　）レバロース、ソルビット
、マンニット、イノジット、グリセリン、デンプンを含
む培地に生育するが、酸の生成およびガスの発生は認め
られない。

以上の性質より本菌株はシュードモナス属に分類される
。本発明者らは本菌株をシュードモナス・エスピーに、
０−８９４０　（ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ｓｐ、　Ｋ
Ｏ−８９４０）と命名した。本菌株は工業技術院微生物
工業技術研究所に寄託されており、その受託番号はＦＥ
ＩｌｔＭ　Ｐ−７４５６である。

次に、本発明の新規なマルトペンタオース生成Ｗ’！５
を生産するための微生物の培養条件について検討し、た
。まず、基本培地として肉エキス、ポリペプトン、食塩
および炭素源を含むものを用い、炭素源については第１
表に示した各種物質を１％使用した。この培地にシュー
ドモナスＫｏ−８９４０（ＦＥ几Ｍ　Ｐ−７４５６）を
植菌し、４０℃で３日間振と５培養を行なった。このと
きの活性比率（マルトースを１００としたときの値）を
第１表に示す。

表から明らかなように、炭素源としてはマルトースが最
良であり、澱粉の中では米澱粉、甘藷澱粉を用℃・たと
きにかなり高い活性が得られた。また、各種粉アメを用
いたときの活性比率はＤＢが高くなると共に高くなり、
ハイマルトースシロップではマルトースと同程度の活性
が得られた。

２／ ７・′ ／ 第　１　表 グルコース　０．０１　１５ フラクトース　０．０２　２．９ シユクロース　０．０３　４．４ マルトース　０．６８　１００ ハイマルトースシロツプ　０．６７　９８．５アミロー
ス（ＤＰｌｏｏ）　０．２４　３５．３可溶性澱粉　０
．２２　３２．４ 馬鈴蟇澱粉　０．１５　２２．１ 甘藷澱粉　０．３０　４４．１ 米　澱　粉　０．４２　６１．８ タピオカ澱粉　０．１０　１４．７ トウモロコシ澱粉　０．１０　１４．７モチトウモロコ
シ澱粉　０．１５　２２．１小麦澱粉　０　０ サゴ澱粉　０．１４　２０．６ ザイクロデキストリン粉アメ　０．４１６０．３コーン
スチープリカ−０，２３３３，８次に、窒素源について
検討するため、肉エキス０．７％、マルトース１％１食
塩０．３％を含む培地に各種物質１％を添加し、４０℃
で３日間振と５培養を行なった。このときの活性比率（
（ビし酸アンモニウムを１００としたときの値）を第２
表に示す。表から明らかなように、硫酸アンモニウムま
たは硝酸アンモニウムを用いたときに著しく高い活性が
得られた。

第　２　表 ペ　プ　ト　ン　０．６４　１５．８ ポリペプトン　０．３５　８．６ カ　ゼ　イ　ン　０．４８　１１．９ カザミノ酸　０．２１　５．２ ボデトプロテイン　００ 酢酸アンモニウム　００ 硫酸アンモニウム　４．０５　１００ 硝酸アンモニウム　３．４２　８４．４尿　素　００ 無添加　００ さらに、マルトース、硫酸アンモニウムおよび肉エキス
のそれぞれの濃度について検討した結果、最適の培地組
成はマルトース０．８％、硫酸アンモニウム１％および
肉エキス０．８％を含むものであることが判明した。し
たがって、培養に用いる培地としては、上記知見を参考
にして、供試菌株が良好な活性にて目的とする酵素を生
産し荀る組成のものを選定すべきである。

次に、培養日数による活性変化について検討したところ
、第３図に示すような結果が得られた。

図示した如く、培養１日で７０％以上の活性が得られ、
３日目まで徐々に活性は上昇する。しかし、その後は活
性が減少する。したがって、酵素の生産には１〜３日間
の培養が適当であり、通常は３日間培養した後、培養液
中の不溶分等を遠沈除去して得た上澄な粗酵素として用
いればよい。なお、培養条件については目的とする酵素
の生産量が最大となるように選定すべきである。また、
培養液から酵素を採取・精製するには既知の方法を適当
に組合せて行なえばよい。

酵素の精製は各種の方法により行なうことが出来るが、
その１例を示すと、次の通りである。

４℃の低温で、粗酵素液に硫酸アンモニウムを加え、０
．２〜０．５飽和で沈澱する両分を集め、１０　ｍＭリ
ン酸緩衝液（ｐ］ｊ、　７．５　）に浴乃了する。この
酵繁液を同緩衝液に対して一晩透析したものについて以
後の操作を行なう。尚、この硫安塩析での回収率は約８
０％である。次に、Ｄ刀ＡＥ−セルロースカラムクロマ
トグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィーなどにより
精製してディスクゲル電気泳動的に単一バンドを示ず標
品を得ることかできる（第２図）。

このようにして得た精製酵素を用いて本酵素の性質を検
討した。結果を以下に示す。

（１１作用 本酵素を可溶性澱粉に作用させたときの反応経過は第４
図および第５図に示したとおりである。

図から明らかなように、本酵素は反応初ル」にマルトペ
ンタオースを生成し、その後時間の経過と共にマルトー
スとマルトトリオースに氷解される。

したがって、マルトペンタオースを効率的に生産するに
は、本酵素を、たとえばメンプランリアクターのような
容器中で液化澱粉に作用させ、生成糖を限外ｐ過膜を用
いて反応系外に取り出す方法を採用することが望ましい
。

本酵素の作用形式は、マルトオクタオース以下のオリゴ
糖を基質にした場合、次の通りである。

ナオ、　略号ハＧｔ　’　！ルコース、Ｇ、：マルトー
ス。

Ｇ、：マルトトリオース、Ｇ、：マルトヘンタオース、
０８：マルトオクタオースを示す。

Ｇ８’　Ｏ（）　−ｑ　Ｇ５＋　ａ８ Ｇ、：　→Ｇｓ　十Ｇ４ Ｇｏ’００（Ｈアα℃　→（）、　＋　Ｇ。

Ｇｓ’０（）イＸα＠　−＋０Ｍ＋０２Ｇａ　’　８　
→ＧＱ　＋　０２ Ｇ、　、　Ｇ、　：作用しない この作用形式から、ＧｇとＧｓの混合物を生産し、酵母
によりＧＱを消化させてＧ、を製品としたり、またＧ、
と０８の混合物を製品とすることもできる。

このように、重合度が小さい基質を用いた場合、本酵素
はいわゆるＢｘＯ型のアミラーゼとしての作用を示すが
、重合度の大きいデキストリンにはＥｎｄｏ型のアミラ
ーゼとして作用する。したがって、澱粉は本酵素の作用
によって切り残しはなく大部分がＧ、またはＧ、とＧ８
に変換する。この際、プルラナーゼ等の枝切り酵素を共
存させれば、Ｇ、の収率な向上させることができる。

（２）　作用至適ｐｎおよびｐＨ安定性反応液組成を とし、４５℃で１５分間反応させて還元力を測定し、最
高値を１００として表わしたときの結果を第６図に示す
。図から明らかなように、本酵素の至適ｐＨは６〜７で
ある。

また、ｐｕ安定性については、本酵素液１　ｍｌに各種
ｐＨ０１０ｍＭ緩衝液（ｐＨ４〜６：酢酸緩衝液。

ｐＨ６〜８ニリン酸緩衝液、ｐＨ８〜９ニドリス−塩酸
緩衝液、ｐＨ９〜１〇二炭酸ソーダ緩術液）０．１　ｍ
ｌを加え、４５℃で６０分子＃ＩＪ静置シタ後、各０．
１ｍｌずつを採り１００　ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６，
５）　０．４　ａｇおよび２％基質液０．５　ｄを加え
て４５℃にて３００分間反応せ、残存酵素活性を測定し
た。結果を第７図に示す。第７図に示したように、本酵
素はｐＨ６，５〜９．０の範囲で安定である。

（３）　酵素力価の測定法 酵素の活性は、可溶性澱粉（メルク社製１分析用ンを還
元して基質として用い、ソモジー・ネルノン法により還
元力を測定し、４５℃で１分間に１マイクロモル等量の
グルコシド結合を切断する酵素量を］、ＩＵ（国際単位
）とした。

（４）　作用至適温度と温度安定性 反応液組成を とし、各種の温度で１５分間反応させて還元力を測定し
、最高値を１００として表わしたときの結果を第８図に
示す。図から明らかなように、本酵素の作用至適温度は
５０〜５５℃である・またｐＩｉ６．５で各種温度に１
５分間静置した後、４５℃で反応を行ない、残存活性を
測定した。結果を第９図に示す。第９図から明らかなよ
うに、５５℃以上では急激に失活する。

（５）阻害、活性化および安定化 本酵素は帆４ｍＭパラクロロ安息香酸第二水銀および１
　ｍＭモノヨードアセトアミド溶液中では阻害を受ける
が、阻害率は４０〜５０％であり高くはない。

次に、各種金属イオン（１ｍＭ　Ｃ度）の影響は水銀、
亜鉛、銅および銀による阻害率が８０％以上という高い
値を示し、鉄で５０％である。また、カルシウムイオン
は本酵素の耐熱性を５℃高める。

（６）　分子量 ディスクゲル電気泳動法によって得られた本酵素の分子
量は７２５００±２５００である。

（７）　等電点 アンフオライン電気泳動法によってめられた等電点はｐ
Ｈ６，５である。

（８）結晶惜造および元素分析 本酵素については未だ結晶標品が得られていないが、電
気泳動で単一バンドを示す精製標品を得ている。

以上に示した性質を有する本酵素は従来の酵素と全く異
なる作用を示し、マルトペンタオースを大量に生成する
新規な酵素である。本発明者らは、本Ｈｔを１．４−α
−Ｄ−”ルカンマルトペンクオハイドロラーゼと命名し
た。

前述したように、本酵素はアミロース、可溶性澱粉、各
種澱粉に作用してマルトペンタオースを生成する。した
がって、澱粉、＃粉の組成画分および澱粉の分解反応生
成物のうちの少なくとも１種の物質に本酵素を作用させ
ることにより、マルトペンタオースが生成・蓄積する。

反応を行なうにあたり、本酵素の性質を考慮してマルト
ペンタオースの生成量が最大となるような条件を選定す
べきである。ここで澱粉としては、たとえば馬のＷ、ｔ
［Ｌ　）ウモロコシ、モチトウモロコシ、大麦、小麦、
米、タピオカ、サゴなどの任意の原料から得られるもの
を使用することができる。また、澱粉の組成画分として
は、たとえばアミロース。

アミロペクチンなどがあり、澱粉の分解反応生成物とし
ては、たとえば白色デキストリン、黄色デキストリン、
ブリティッシュガムなどの焙焼デキス）　ＩＪン；酸化
澱粉、低粘性変性（酵素、酸２機械高速攪拌等の処理に
よる）澱粉などの化工澱粉；リン酸澱粉、酢酸澱粉など
で代表される澱粉エーテル、澱粉エステルなどの澱粉誘
導体；放射線や中性子線を照射したり高周波処理あるい
は湿熱処理した澱粉などの物理的処理澱粉；α−澱粉な
どを挙げることができる。これらの澱粉力１は単独もし
くは２種以上を組合せて用いる。

反応終了後、加熱して酵素を失活させて反応を停止し、
反応液から常法によってマルトペンタオースを得ること
ができる。

マルトペンタオースは現在、α−アミラーゼ活性測定用
基質として診断薬、試薬などへの用途があり、本酵素が
本発明によって安価に生産されれば、食品をはじめ各種
用途も拓けるものと期待される。マルトペンタオースは
溶解性に優れ、甘味がなく、ボディ感があるので製菓用
材料として有用であり、また消化・吸収性が良いので幼
児、老人、患者用の滋養食としての利用も可能である。

次に、実施例により本発明を説明する。

実施例１ つ二（−ドー’Ｃニー）−ス　ｋＯ−８９４０（ＦＥＲ
Ｎ　ｒ−７４５０）ヲ肉エキス０．８％、硫酸アンモニ
ウム１％、マルトース０．８％の斜面寒天培地に接種し
、４０°Ｃで２日間培養した後、その１白金耳をとり、
同じ組成の液体培地（１００ｍｇ培地１５０　Ｑｄ三角
フラスコ）に移し、４５℃で３日間通気振とう培養を行
なった。

培養終了後、低温で培養物中の菌体および不溶物を遠沈
除去して上澄を得、これを粗酵素とした。

この粗酵素液の活性は３．８　ｒｕＡｎノであった。

実施例２ シヱードモナスＫＯ−８９４０（ＦＥＢＮ　Ｐ−７４５
６）を培養液を少量とり、常法により几１．ＵＶ、ニト
ロソグアニジンで処理した後、平板培養を行ないアミラ
ーゼ活性の高いコロニーをとった。これを肉エキス０．
８％、硫酸アンモニウム１％、マルトース０．８％の培
地で４５℃にて３日間培養し、その後の操作は実施例１
と同様にした。本粗酵素液の活性は８　、Ｏ、ＮＵ／ｍ
ｌであった。

実施例３ 馬鈴薯澱粉を細菌液化型酵素（ＢＬＡ）により液化し、
ヨウ素−澱粉反応が青色で失活処理し、基質濃度１０％
、ｉルトペンタオース生成酵素（実施例２の粗酵素液）
　Ｉ　ＩＵ７９基質、　ｐｕ　６．Ｑ、、　４５℃で６
時間攪拌しながら反応せしめマルトペンタオースを３０
％含む反応液を得た。

実施例４ 実施例３のようにして液化馬鈴薯澱粉液を作り、基質濃
度２０％、マルトペンタオース生成酵素（実施例２の粗
酵素液）　Ｉ　ＮＵ／ｉ基質、ｐｕ６．ｏ。

４５℃で限外ｐ過器〔東洋ｒ紙（株）製、ＵＨＰ−７６
（膜はＵＫ−１０））中で窒素ガスで圧力をかけながら
反応させてマルトペンタオースを８０％以上含む糖液な
得た。収率は１２時間反応で出発基質の６０％であり、
得られた糖液は逆浸透膜で２０％にまで濃縮することが
できた。

実施例５ プルラナーゼをＩ　ＩＵ１５ｐ基質に加えたこと以外は
実施例４と同様に操作し、１２時間の反応でマルトペン
タオースを８０％以上含む糖液な収率６５％で得た。

ブ染色による電子顕微鏡写真、第２図は精製酵素のディ
スクゲル電気泳動写真、第３図は培養日数による活性変
化とｐＨ変化を示すグラフ、第４図はマルトペンタオー
ス虫酸酵素の反応経過（ＩＩＵ／Ｓ基質）を示すグラフ
、第５図は本酵素の反応経の至適温度を示すグラフ、第
９図は本酵素の温度−安定性を示すグラフである。

第１　図 第２図 第３図 ｆ　２　３　４　５ を合着日−新気、 第４図 Ｇ・・も Ｇ２・　も Ｓｔ　Ｏ５１０１５２０３０４５６０９０１２０Ｓｔｇ
ｌ戊′吟ｍ（匍 第５図 ・・・　・ Ｓｔ　Ｏｌ　２５１０３０６０１２０１８０３６０　Ｓ
ｔ及八へ吟困 第８図 ２０　３０　４０　５０　６０　７０ 囁廐（°Ｃ） 第９図 ２０　３０　４０　５０　６０ う訂Ｌ　肩２　とＣ） 第１頁の続き ■Ｉｎｔ、ＣＩ　、’　識別記号 ０発　明　者　原　耕　三 庁内整理番号 横浜市金沢区並木２−６−３−１０４

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、下記の性質を有する新規なマルトペンタオース生成
   酵素。 （１）　本酵素はアミロース、可溶性澱粉、馬鈴薯澱粉
   ・甘藷澱粉、米澱粉、タピオカ澱粉、トウモロコシ澱粉
   、モチトウモロコシ澱粉、サゴ澱粉などに作用してマル
   トペンタオースを生成する。 （２）　本酵素は４５℃にてｐＨ６〜７が至適であり、
   ｐＨ６，５〜９で安定である。 （３）　本酵素はｐＨ６，５において至適温度は５０〜
   ５５℃であり、５５℃以上の温度で１５分間放置すると
   失活する。 （４）　本酵素は０．４式パラクロロ安息香酸第二水銀
   および１　ｍＭモノヨードアセトアミド溶液中で阻害を
   受けるが、阻害率は４０〜５０％である。 （５）本酵素の分子量は７２５００±２５００　（ディ
   スクゲル電気泳動法による）である。 （６）本酵素の等電点ばｐＨ６，５（アンフオライン電
   気泳動法による）である。 ２、シュードモナス属に属し、下記の性質を有すル新Ｉ
   Ａなマルトペンタオース生成酵素の生産能を有する微生
   物を培養し、培養物中に該酵素を蓄私せしめ、これを採
   取することを４Ｗ徴とする新規なマルトペンタオース生
   成酵素の製造方法。 ｆｉｌ　本酵素はアミロース、可溶性澱粉、馬鈴葱澱粉
   、せ藷澱粉、米澱粉、タピオカ澱粉、トウモＯｆｆシ澱
   粉、モチトウモロコシ澱粉、サゴ澱粉などに作用してマ
   ルトペンタオースを生成する。 （２）　本酵素は４５℃にてｐＨ６〜７が至適であり、
   ｐＨ６，５〜９で安定である。 （３）　本酵素はｐＨ６，５において至適温度は５０〜
   ５５℃であり、５５℃以上の温度で１５分間放置すると
   失活する。 （４）　本酵素は０．４ｍＭパラクロロ安息香酸第二水
   銀および１ｍＭモノヨードアセトアミド溶液中で阻害を
   受けるが、阻害率は４０〜５０％である。 （５）　本酵素の分子量は７２５００±２５００　（デ
   ィスクゲル電気泳動法による）である。 （６）　本酵素の等電点はｐＨ６，５（アンフオライン
   電気泳動法による）である。 ３、シュードモナス属に属する新規なマルトペンタオー
   ス生成酵素の生産菌がシュードモナスＫＯ−８９４０（
   ＦＥＢＭ　Ｐ−７４５６）である特許請求の範囲第２項
   記載の製造方法。 ４、シュードモナス属に属する新規なマルトペンタオー
   ス生成酵素の生産菌を、炭素源としてマルトース、マル
   トースを含む水アメ、澱粉および可溶性澱粉のいずれか
   を含む培地に培養する特許請求の範囲第２項記載の製造
   方法。 ５、澱粉、澱粉の組成画分および澱粉の分解反応生成物
   のうちの少なくとも１種の物質に下記の性質を有する新
   規なマルトペンタオース生成酵素な作用させることを／
   Ｆｌｉ徴とするマルトペンタオースの製造方法。 （１１本酵素はアミロース、可溶性澱粉、馬鈴薯澱粉、
   甘藷澱粉、米澱粉、タピオカ澱粉、トウモロコシ澱粉、
   モチトウモロコシａ　粉、　サ”ｔ”Ｑ粉などに作用し
   てマルトペンタオースを生成する。 （２）本酵素は４５℃にてｐＨ６〜７が至適であり、ｐ
   Ｈ６，５〜９で安定である。 （３）　本酵素はｐＨ６，５において至適温度は５０〜
   ５５℃であり、５５°Ｃ以上の温度で１５分間放置する
   と失活する。 （４）　本酵素は０．４嚇ρ（ラクロロ安息香酸第二水
   銀および１　ｍＭモノヨードアセにアミド溶液中で阻害
   を受けるが、阻害率は４０〜５０％である。 （５）本酵素の分子量は７２５００±２５００　（ディ
   スクゲル電気泳動法による）である。 （６）　本酵素の等電点はｐＨ６，ｓ（アンフオライン
   電気泳動法による）である。 ６、澱粉の組成画分がアミロースまたはアミロペクチン
   である特許請求の範囲第５項記載の製造方法。 ７、澱粉の分解反応生成物が化工澱粉である特許請求の
   範囲第５項記載の製造方法。