JPS61115491A - 耐熱性α−アミラ−ゼ及びその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔発明の利用分野〕 本発明は、新規なα−アミラーゼとその、Ｉｉ１′？ｉ
方法に係り、特に殿粉加工及びのり抜きなどにおける殿
粉の液化反応に好適な耐熱性α−アミラーゼとその製造
方法に関する。

〔発明の背景〕

耐熱性酵素は常温用酵素に比べ、加熱やｐＨの変化にも
安定性が高く、酵素利用工業には極めて有用である。従
来のα−アミラーゼは好気性細菌を起源とするものに限
られている（嶋村等：特公昭４６−１２９４６号公報、
　Ｌ、　Ｌ、　Ｃａｍｐｂｅｌｌ　ｅｔ　ａｌ、　　：
　、１゜Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、　２３６．２９５２１
９６１年）。そのうち、バチルス・ズブチリス（Ｂａｃ
ｉｌｌｕｓ　５ｕｂｔｉｌｉｓ　）及びバチルス・リチ
ェニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒ
ｍｉｓ　）を起源とするα−アミラーゼは、すでに工業
生産され、殿粉加工や繊維ののり抜きに使用されている
。これら公知のα−アミラーゼは、いずれも酵素本体の
たん白質だけでは耐熱性を発揮できず、カルシウムイオ
ンの存在下ではじめて耐熱性を示す。通常数ｍＭ〜２０
ｍＭ（服部：特開昭５１−４４６５２号公報、特開昭５
１−４４６９０号公報）、少なくとも１ｍＭ（斉藤：特
開昭４８−３５０８３号公報）のカルシウム濃度を必要
とする。したがって、従来の耐熱性α−アミラーゼは、
１ｍＭ未満、カルシウムがない場合には、第１図の曲線
５゜６にバチルス・リチェニホルミス起源のα−アミ・
ラーゼの１例を示すように耐熱性が著しく低下する（曲
線５．６）、このため、水道水のカルシウム濃度に相当
する１００μＭ以下の極めて希薄な濃度では、反応中に
失活がおこり、高価な酵素をそれだけ消費することにな
るにのため、通常は数ｍＭの塩化カルシウムなどの可溶
性カルシウム塩を添加して反応している６しかし、ぶど
う糖や異性化糖等に代表される殿粉加工の最終製品を得
る場合には、反応後にカルシウムを除去することが必要
となり、イオン交換樹脂を用いる脱塩工程への負荷が著
しく増大する。

〔発明の目的〕

本発明の目的は、絶対嫌気性菌を起源とし、耐熱性にす
ぐれ、かつカルシウム要求性の極めて低い新規なα−ア
ミラーゼとその製造方法を提供することにある。

〔発明の概要〕

本発明者等は、耐熱性にすぐれ、かつカルシウム要求性
の低いα−アミラーゼを得ることを目的に酵素及び酵素
生産用微生物の探索を行った。その結果、クロスツリジ
ウム属に屈する偏性嫌気性細菌（クロスツリジウム属細
菌Ｒ３−０００１゜ｃＬｏｓｔｒｉｄｉｕｍ　ｓｐ　Ｒ
５−０００１，微工研菌寄第７９１８号）が、酵素の特
性、特にカルシウム要求性ならびに作用ｐＨ域が従来の
α−アミラーゼと全く異なる新規な耐熱性α−アミラー
ゼを生成することを見い出し・本発明に至った・本発明
の・−アミラー　　　　　　ｉゼを産生ずるクロスツリ
ジウム属細菌は工業技術院微生物工業技術研究所に寄託
している（受託番号；微工研菌寄第７９１８号（ＦＥＲ
Ｎ　Ｐ−７９１８）　’）である６まず、重両の菌学的
性質の詳細を説明する。

Ａ、形態的性質 （１）栄養細胞の形態 下記の殿粉・ペプトン培地の寒天平板上。

嫌気性雰囲気中、６０℃で２日間培養した場合、栄養細
胞は０．４〜０．８　　Ｘ２〜５μｍの大きさの直状の
桿菌である。３日間以上の培養では、ｈ記の形状の栄養
細胞が単独に存在する他、連鎖するものも生ずる。液体
培養でも同様となる。

殿粉・ペプトン培地の組成 可溶性殿粉　　　　　　　　　　１．５％ペプトン　　
　　　　　　　　０．５％酵母エキス　　　　　　　　
　０゜５％ＫＨ２ＰＯ４０、７％ Ｎａ７１１ＰＯ，０、３５％ Ｍ　、、Ｓ　Ｏ、、・７Ｈ７ｆｌ　　　　　　　　　　
０．００１％寒天　　　　　　　　　　　　　２．０％
チオグリコール酸ナトリウム　　０．１％水道水 ｐＨ６，４ （２）胞子の有無 殿粉・ペプトン培地の寒天平板培養及び液体培養で胞子
の形成が認められる。

Ｂ、培養的特性 （１）コロニーの形態 殿粉・ペプトン培地の寒天平板培養でのコロニーは、中
心部がやや隆起した扁平な円形となり１周縁部は金縁で
ある。色素生成は見られず、表面に光沢を有し乳白色不
透明である。また、粘着性を有する。

（２）肉汁培地の寒天平板培養及び穿刺給養生育して殿
粉・ペプトン培地と同様のコロニーを生ずる。

肉汁寒天培地組成 肉エキス　　　　　　　　　　１．０％ペプトン　　　
　　　　　　　１．０％食塩　　　　　　　　　　　　
　０．２％チオグリコール酸ナトリウム　　０．１％寒
天　　　　　　　　　　　　１．５％蒸留水 ｐ　Ｈ６、０ （３）肉汁培地の穿刺培養 水素と炭酸ガスを含むガスの発生を伴って生育し、この
ため寒天培地が２〜３個所で分断される。

（４）肉汁液体培養 嫌気的雰囲気下でのみ生育し、培養液が自濁する。

肉汁培地の組成 肉エキス　　　　　　　　　　１゜０％ペプトン　　　
　　　　　　　１．０％食塩　　　　　　　　　　　　
　０．２％チオグリコール酸ナトリウム　　Ｏｌｌ　％
蒸留水 ｐＨ６，０ （５）肉汁・ゼラチン培養 生育は認められない。

肉汁・ゼラチン培地の組成 肉エキス　　　　　　　　　　　１．０％ペプトン　　
　　　　　　　　１．０％食塩　　　　　　　　　　　
　　０．２％ゼラチン　　　　　　　　　　１５　　％
チオグリコール酸ナトリウム　　０．１％蒸留水 ｐＨ６，０ （６）リドマスミルク培養 ガス発生を伴い、固く凝固し、酸の生成により赤変する
。

Ｃ１生理的性質 （１）生育の温度範囲 ４０〜６３℃で生育する。３０℃では生育認められず、
６０℃付近で良好。

（２）生育のｐＨ範囲 ｐＨ５〜７゜５．６付近が良好。

（３）酸素に対する態度 偏性嫌気性　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
１゜（４）Ｏ−Ｆテスト（Ｈｕｇｈ　Ｌａ１ｆｓｏｎ変
法）空気雰囲気中゛では生育みられず陰性。流動パラフ
ィン重層による嫌気性条件下では菌が生育し、酸を生成
して培養液が黄色となる。

培地組成 ペプトン　　　　　　　　　　００２％グルコース　　
　　　　　　　　１゜０％食塩　　　　　　　　　　　
　０９５％に、ＩＩＰＯ，０、０３％ チオグリコール酸ナトリウム　　０．１％ブロムクレゾ
ールパープル　　　０．００２％寒天　　　　　　　　
　　　　０．３％蒸留水 ｐＨ６，０ （５）硝酸塩の還元 陰性７ （６）ＶＰテスト 陰性。

（７）ＭＲテスト 陽性、赤変化する。

（８）インドール生成 ペプトン水に生育しないため測定できない。

（９）硫化水素の生成 陰性（にｌｉｇｒｅｒの培地使用において）６（１０）
殿粉の加水分解 陽性、可溶性殿粉だけでなく、馬鈴薯殿粉など粒状殿粉
も分解する。

（１１）クエン酸の利用 陰性（Ｓｉｍｍｏｎｓ培地使用において）。

（１２）アンモニウム塩の利用 ペプトン水に生育しないため測定できない。

（１３）色素の菌体外生成 陰性。

（１４）ウレアーゼ 陰性６ （１５）オキシダーゼ 陰性７ （１６）カタラーゼ 陰性。

（１７）！の資化性 糖の資化性及びダラーム管を用いたガス発生有無の観察
結果を下表に示す。

第　　１　　表 （１８）無機塩培地への生育 生育認められず。

（１９）有機酸の生成 各種培地から生成する有機酸組成を第２表に示す。

第　　２　　表 供試液体培地の組成 炭素源　　　　　　　　　　　１．０％ペプトン　　　
　　　　　　　１．０％食塩　　　　　　　　　　　　
　０．２％チオグリコール酸ナトリウム　　０．１蒸留
水 ｐＨ６，４ これらの結果よりＨｏｌｄｅｍａｎの嫌気性細菌分類マ
ニュアルに基づき、クロスツリジウム属に属する細菌と
同定した。

次に１本発明なる耐熱性α−アミラーゼの酵素的特性に
ついて記す。

尚、α−アミラーゼ活性の測定方法は次のように行った
。

Ｂｌｕｅ　ｖａｌｕｅ法（日本化学会編：実験化学講座
２４巻、生物化学■、Ｐ２７９．丸善書店、１９６９）
による糊精化力を測定した。水沫は、殿粉の分子が加水
分解されるのに伴い、殿粉−より素ｃｏｍｐｌｅｘに基
づく青色の発色量が、分子量の低下に比例して減少する
原理を応用したものである。まず、２ｍｇ　／　ｍ　Ｄ
、の殿粉溶液２　ｍ　Ｄ及び０．１　Ｍ＜えん酸緩衝液
（ｐ　Ｈ４、０）　１　ｍ　Ｑを試験管に取り、６０℃
水浴中で５分間振擾した０次いで、粗酸素液として培養
済液１ｍＭを加え、３０分間反応させた６反応後、反応
液０．４　　ｍＱを採取し、直ちに０．５　Ｍ酢酸溶液
２ｍＱと混合して酵素反応を停止させた。次のその１　
ｍ　Ｑを１０ｍＱの１／３０００　Ｎよう濃溶液中に加
え、６８０ｎｍでの吸光度を分光光度計を用いて測定し
た。一方、酵素液を加えた直後の反応液を採取して同様
に発色させ、吸光度を測定した。なお、殿粉としては重
合度約２０００のアミロースを用いた。

α−アミラーゼ活性は次式により算出した。

α−アミラーゼ活性（単位）＝ （１）作用及び基質特異性 本酵素は、馬鈴しよ、とうもろこし、甘しょ等の殿粉を
加水分解する液体型α−アミラーゼである。

（２）至適ｐＨ 第１図に、従来公知の代表的なα−アミラーゼの作用ｐ
Ｈ曲線を示す。曲線４で示した小笠原等のバチルス・ズ
ブチリス（Ｊ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、旺。

６５、１９７０年）及び曲線６で示した斉藤等のバチル
ス・リチェニホルミス（特開昭４８−３５０８３号公報
）を起源とするα−アミラーゼは、ｐＨ４〜１１に好適
域を有する（最適ｐＨでの活性の８０％を有するｐＨ域
とする）。従来公知の酸性α−アミラーゼのうち、最も
酸性側で活性の高い国中等によるバチルス・リチェニホ
ルミス起源α−アミラーゼ（特開昭５２−１５１９７０
号公報曲線３）では、好適域が３．５〜６．３　にあり
。

ｐＨ２で全く活性を示さない。

これに対し１本発明なるα−アミラーゼＩ（曲線１）な
らびにα−アミラーゼ■　（曲Ｉ！２）の６０℃におけ
る最適ｐＨ域は、いずれも４付近にあり、かつ好適ｐＨ
はそれぞれ２〜５．７　。

２〜６．３　にあって、従来の酸性α−アミラーゼにく
らべ、さらに酸性側でも高い活性を有する。すなわち、
ｐＨ２では、従来の酸性α−アミラーゼが全く活性を示
さないのに対し、本発明のα−アミラーゼはそれぞれ９
５％、８１％の高い活性を示す。

なお、酵素反応は次の反応系を用いた。

酵素液＝０．６〜１．３　μｇ／　ｍ　Ｑ基　質：アミ
ロース１■／　ｍ　（Ａ クエン酸緩衝液：０．０２５Ｍ 上述したように１本発明α−アミラーゼは従来の酸性α
−アミラーゼと作用ｐＨ域を異にすることから、新しい
α−アミラーゼであることは明らかである。

（３）ｐＨ安定性 本発明のα−アミラーゼ！及び■を、ｐＨ２゜４．６．
７の各ｐＨ（０，０２５Ｍクエン酸緩衝液）下で、６０
℃、３０分間インキュベートした０反応液を稀釈してｐ
Ｈを４．０　　に調整し、アミロースを基質として残存
活性を測定した。

その結果両α−アミラーゼは、上記のｐ　Ｈ処理で完全
に活性が保持されていた。したがって、　　　　　　　
１本α−アミラーゼは酸性域でも安定性が高い特徴を有
している。

（４）〒適温度 第２図に示す如く、本発明α−アミラーゼＩ（曲線１１
）及び■（曲線１２）の至適ｐＨ４゜Ｏにおける至適温
度は、いずれも８０℃付近である。好適温度（最適温度
での活性の８０％を有する温度域とする）は６５〜８７
℃である。なお１反応にはくえん酸緩衝液０．０２５Ｍ
を用いた。

（５）熱安定性 本発明α−アミラーゼ■をｐＨ６，０で２０μＭ塩化カ
ルシウムの存在下に６０〜９７℃に加熱処理し、残存活
性を測定した、これをもとに各温度における活性半減期
を求め、その結果を第３図に示す、８０℃及び９０℃に
おける活性半減ｆｇ＋　（基質無添加）はそれぞれ８時
間、０．５　時間であり、熱安定性にすぐれている。

α−アミラーゼ■についても９０℃における活性１斡減
１ｕ１は約０．５　時間と、α−アミラーゼＩＩと同等
の耐熱性を有する。一方、従来のα−アミラーゼの例と
し、バチルス・リチェニホルミスに属するα−アミラー
ゼ生産菌、及びバチルス・ズブチリスに属するα−アミ
ラーゼ生産菌の培養液から調製した部分精製α−アミラ
ーゼ標品を用い、カルシウム濃度２０　ｍ　Ｍにおいて
半減期を実測した。その結果を第３図に付記する０反応
は、くえん酸緩衝液を用いて５両α−アミラーゼの最適
ｐＨである６、０　で行った。

前者の８０℃における半減期は０．６時間、後者の７０
℃における半減期は０．６時間である。

本発明α−アミラーゼの耐熱性（曲線２１）は。

従来公知のサーマス属の耐熱性α−アミラーゼには及ば
ないが、バチルス属のα−アミラーゼ（バチルス・リチ
ェニホルシスＳＰ、を起源とする耐熱性α−アミラーゼ
、曲線２２とくらべ遜色ない。

（６）液熱性に及ぼす金属塩の影響 本発明α−アミラーゼ■の耐熱性に及ぼす金属塩の影響
を第３表に示す。α−アミラーゼ■の水溶液に各種の金
属塩を５　ｍ　Ｍ　′ａ度になる様に添加し、加熱処理
を行って活性を測定した。

そして、加熱処理前に対する加熱処理後の活性、すなわ
ち残存活性を％で表示した。加熱処理及び活性測定は以
下の条件で行った。

加熱処理条件 ｐＨ６゜０ 加熱温度　二８０℃ 保持時間　：３０分 第　　３　　表 活性測定は、試料液を希釈後、以下の条件下で行った６
なお、各金属塩を本添加濃度で添加しても、活性測定に
影響のないことを確認している。

活性測定条件 ｐ　Ｈ４，０（０，０２５ＭクエンＮｌ１ｆ１？Ｊ？液
）活性測定温度＝６０℃ 第１表から明らかに、カルシウムイオンに保護効果が認
められるのに対し、ナトリウム、カリウム及びマグネシ
ウムの各イオンについては、さしたる保護効果は認めら
れない。一方、ニッケル、コバルト、亜鉛及びマンガン
の各イオンは耐熱性を低下させる。また１本α−アミラ
ーゼは０．５　　μＭのＥＤＴＡで耐熱性を失うことも
確認している。

本α−アミラーゼのカルシウム要求濃度は第４図（曲線
３１）に示すように、１００μＭ（４ｐｐｍ）であり、
水道水中のカルシウム濃度で十分安定化される。さらに
本酵素は１μＭ以下のカルシウム濃度においても６５％
の活性を　　　　　　１保持している。また、α−アミ
ラーゼＩもα−アミラーゼ■と同等のカルシウム要求性
を有している。

これに対し、バチルス・リチェニホルミスに属するα−
アミラーゼ生産菌から部分精製したα−アミラーゼは、
第４図の曲線３２に示すように、３０ｍＭのカルシウム
イオンを必要とする。なお、加熱処理は両酵素とも、ｐ
Ｈ６゜８０℃で３０分間加熱し、活性測定は各々の最適
Ｐ　Ｈにて６０℃で行ったわ 一方、バチルス・ズブチリスの耐熱性α−アミラーゼで
は、カルシウム必要濃度は３〜１０ｍＭである（特開昭
５１−４４６９０号公報、特開昭５８−３４１１７号公
報）。

したがって１本発明α−アミラーゼは、従来公知の耐熱
性α−アミラーゼに比べ著しくカルシウム要求性が低い
。

（７）精製方法 実施例において詳述するので、ここでは簡単な説明にと
どめる。

本発明α−アミラーゼ生産菌を、殿粉、ペプトン及び酵
母エキスを含有する液体培地に接種し、嫌気条件下で６
０℃に１〜３日間培養する。

培養液を遠心分離等により菌体及びそれ以外の不溶物質
を除したいわゆる培養炉液を得る。次いで、培養が液を
、モレキュラシーブ膜清適。

イオン交換クロマト、ゲルが過グロマト、塩析等の公知
の方法を適宜利用して、本発明α−アミラーゼを濃縮す
るとともにそれ以外の不純物を除く。

（８）分子量 本発明α−アミラーゼの分子量は未確認であるが、モレ
キュラシーブ膜更過における挙動から、分子量は２０　
、０００以上と推定される。

以上述べたことから明らかなように本発明なる新しい耐
熱性α−アミラーゼは、特に作用ｐＨ並びにカルシウム
要求性において、従来の嫌気性細菌の生産する耐熱性酵
素と著しくことなる。

しかるに、ぶどう糖や異性化糖等を製造するには、まず
原料の殿粉をα−アミラーゼで液化し、そのあとグルコ
アミラーゼで糖化している。

液化の際、原料殿粉を数十％の高濃度に仕込むため、液
のｐＨは酸性を呈する。このため、従来のα−アミラー
ゼを使うには、殿粉液をアルカリで中和してから液化し
ている。液化処理したあと、従来公知のゲルコアミラー
ゼは１作用ｐＨが酸性域にあるため、酸を加えて再度ｐ
Ｈを酸性側にＦ！［Ｌなければならない。

しかして１本発明なる偏性嫌気性細菌を起源とする新し
い耐熱性α−アミラーゼを用！１れば、水道水なみのカ
ルシウムを含む仕込水を用いるのみで、カルシウム剤の
添加も不要となる。さらに、液化、糖化両工程のｐＨ調
整も不要となり、ひいては反応後の脱塩工程への負荷を
大巾に軽減できる。

〔発明の実施例〕

以下、本発明の実施例を示し、さらに詳しく説明する。

実施例１゜ 可溶性殿粉１．５　％、ポリペプトン０．５　％。

酵母エキス０．５　％、りん酸第１カリウム０．７％、
りん酸第２ソーダ０．３５　％、硫酸マグネシウム・り
水和物０．０１　％、チオゲルコール酸ナナトリウム０
１　　％及び水道水を含む液体培地（ｐＨ６，４）４．
５６−を、内容積５Ｑの培養槽３基に１５２−ずつ分注
し、１２０℃で２０分間殺菌する。これに同上培地で嫌
気的に培養した本発明者等により分離せるクロズソリジ
ウム属の菌体懸濁液８０ｇを各摺電に添加した。次いで
。

ガス出口に水封トラップを付し、発酵槽内気相部をアル
ゴンガスで十分置換後、嫌気条件下で培養する。培養液
のｐＨは６．０　に自動調整し、温度も６０℃に自動調
整する。４６時間培養後、培養物を合せ６．００Ｏｒｐ
ｍで遠心分離し、菌体を除去する。この上澄液は４９単
位／ｇの比活性を示した。

次に、上記上澄液３．５蹟をモレキュラシーブ膜（分画
分子量：　２００００　）で清適し、１．５−に濃縮し
た。濃縮液を２分し、０．７５−分を架橋デキストラン
ゲル（分画分子−５ｊ　：　２５００．ファルマシア社
！１１）を充填したカラム（直径ＬＯＯｍｍ、長さ４５
０ｗｎ）にチャージし、モレキュラシーブ液体クロマ］
・グラフィを実施した。そのα−アミラーゼ活性の溶出
パターンを第５図に示す。溶出は脱イオン水で行い、１
００ｍｆｆ１ずつ分画した。図中に示すように、溶出液
量１．２〜２Ｑのフラクションにα−アミラーゼ活性が
みとめられた。上記の液体クロマトグラフィーをのこり
の上澄液についても実施し１両α−アミラーゼフラクシ
ョンを合せたにれを４０ｔｏｒｒの減圧下で凍結乾燥し
。

乾燥粗粉末２．７　ｇを得た６ 木組酵素乾燥標品の比活性は３００００単位／ｇで、上
澄液の比活性に比べ約８００倍に向−ヒした６活性収率
は約６０％である。上清液から粗酵素乾燥標品調製にお
ける比活性、活性収量及び活性回収率の変化を第４表に
示した。

第　　　４　　　表 実施例２゜ 実施例１において調製した粗酵素乾燥標品を、ジエチル
アミノエチル化架橋デキストランゲル（ＤＥＡＥセファ
デックス、ファルマシア社爬）を用いたイオン交換クロ
マト（カラムサイズ：２５φＸ４００ｍｎ）により精製
した。粗酵素乾燥標品２．４　ｇを０．０５Ｍトリス・
塩酸緩衝液（ｐＨ７，５）に溶解した。不溶物を濾過し
て除いた液を、同じ緩衝液で緩衝化したゲルカラムにチ
ャージし、洗滌した１次いで、緩衝液中の塩化ナトリウ
ム濃度を直線勾配（曲線４３）で上昇しつつ展開した。

α−アミラーゼ活性の溶出パターンを第６図に示す、塩
化ナトリウム濃度０．０４　　Ｍと０．０８Ｍでの溶出
位置にα−アミラーゼ活性を右する２つのピークが認め
られ、曲線４１がα−アミラーゼエ９曲線４２がα−ア
ミラーゼ■である。α−アミラーゼ■の活性層は吸着全
活性の約３０％。

α−アミラーゼＨのそれは６０％である。、両フラクシ
ョンを個々に凍結乾燥して得たα−アミラーゼ■及びα
−アミラーゼ■の比活性は、それぞれ３９０単位／■、
８８０単位／■と、粗酵素乾燥標品に比べ、それぞれ１
０倍、２３倍に向上した。

また、培養物の遠心上清液基準の活性回収率は、それぞ
れ１９％、３５％である。

〔発明の効果〕

本発明なる方法により製造せる新しい耐熱性α−アミラ
ーゼを殿粉の加水分解（液化）に用いれば、水道水なみ
のカルシウムを含む仕込水ですみ。

従来行ってきたカルシウムの添加も不要となる。

さらに、殿粉の液化、糖化両工程での中和も不要となり
、その結果１反応後の脱塩工程への負荷を大巾に軽減で
きる。

【図面の簡単な説明】

第１図は１本発明の耐熱性α−アミラーゼ及び従来の耐
熱性α−アミラーゼに関するα−アミラーゼ活性（糊精
化力）に及ぼすｐＨの影響を示す特性図、第２図は、本
発明の耐熱性α−アミラーゼのα−アミラーゼ活性に及
ぼす温度の影響を示す特性図、第３図は、本発明の耐熱
性α−アミラーゼと従来の耐熱性α−アミラーゼの各側
における耐熱性を示す特性図、第４図は１本発明の耐熱
性α−アミラーゼと従来の耐熱性α−アミラーゼの各側
における加熱処理によるα−アミラーゼ活性に対するカ
ルシウム濃度の影響を示す特性図。 第５図は、本発明の耐熱性α−アミラーゼの架橋デキス
トランゲルを用いたモレキュラシーブ液体クロマトグラ
フィのα−アミラーゼ活性溶出パターン図、第６図は、
本発明の耐熱性α−アミラーゼのジエチルアミノエチル
化架橋デキストランゲルを用いたイオン交換液体クロマ
トグラフィによるα−アミラーゼ活性溶出パターン図で
ある。 ’４＋＋￥１１ ｐＨ 寮　ｚｅ ′；ＭＬ　　彦　（°Ｃ） 第　３　旧 ヲ１♂−尺　　（・Ｃ） 馬　４Ｚ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、クロスツリジウム属（ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）に
   属する嫌気性細菌の産生する耐熱性α−アミラーゼ。 ２、作用好適ｐＨが２〜６、最適ｐＨが３〜５、作用至
   適温度が６０〜８５℃にある特許請求の範囲第１項記載
   の耐熱性α−アミラーゼ。 ３、基質無添加で８０℃、３０分間加熱処理した際に、
   ０．１ｍＭ以下のカルシウム塩濃度下で少なくとも７０
   ％以上のα−アミラーゼ活性を保持することを特徴とす
   る特許請求の範囲第２項記載の耐熱性α−アミラーゼ。 ４、基質無添加で８０℃、３０分間加熱処理した際に、
   ０．１ｍＭ〜０．１Ｍのカルシウム塩存在下で１００％
   のα−アミラーゼ活性を保持することを特徴とする特許
   請求の範囲第３項記載の耐熱性α−アミラーゼ。 ５、クロスツリジウム属に属し、特許請求の範囲１〜４
   に記載の特徴を有する新規α−アミラーゼを産生する嫌
   気性細菌を培養し、培養物から新規α−アミラーゼを採
   取することを特徴とする耐熱性α−アミラーゼの製造方
   法。