JPS62201577A - β−アミラ−ゼ酵素 - Google Patents
β−アミラ−ゼ酵素Info
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
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Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は新規なβ−アミラーゼ酵素製品、その調製方法
、該β−アミラーゼ並びに他の酵素を含有する組成物、
並びにハイマルトースシロップの製造におけるβ−アミ
ラーゼ又は該組成物の使用に関する。
、該β−アミラーゼ並びに他の酵素を含有する組成物、
並びにハイマルトースシロップの製造におけるβ−アミ
ラーゼ又は該組成物の使用に関する。
〔従来の技術及び発明が解決しようとする問題点〕β−
アミラーゼは、アミロース、アミロペクチン及び関連グ
ルコースポリマーにおける1、4−α−グルコシド結合
の加水分解を触媒するエキソ作用マルトース産生アミラ
ーゼに対し伝統的に与えられている名称である。マルト
ース単位は、分子が分解するまで、あるいはアミロペク
チンの場合には分枝点に達するまで、段階的に非還元末
端から連続的に分解される。分解されたマルトースは、
βアノマー配置を有し従ってβ−アミラーゼの名称を有
する。
アミラーゼは、アミロース、アミロペクチン及び関連グ
ルコースポリマーにおける1、4−α−グルコシド結合
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ース単位は、分子が分解するまで、あるいはアミロペク
チンの場合には分枝点に達するまで、段階的に非還元末
端から連続的に分解される。分解されたマルトースは、
βアノマー配置を有し従ってβ−アミラーゼの名称を有
する。
β形のマルトースは、水溶液中自然発生的に異性化しα
−もしくはβ−形の混合物となるであろう。アミロペク
チン又は部分分解アミロペクチンとβ−アミラーゼとの
長時間反応により、β−リミットデキシトリンが形成し
、このβ−デキシトリンは、β−アミラーゼにより更に
加水分解を受けにくい物質である。
−もしくはβ−形の混合物となるであろう。アミロペク
チン又は部分分解アミロペクチンとβ−アミラーゼとの
長時間反応により、β−リミットデキシトリンが形成し
、このβ−デキシトリンは、β−アミラーゼにより更に
加水分解を受けにくい物質である。
β−アミラーゼは、製菓、製パン及び醸造工業において
用いるシロップ含有のマルトースを生産する為に用いる
ことが出来る。
用いるシロップ含有のマルトースを生産する為に用いる
ことが出来る。
ハイマルトースシロップの製造において、β−アミラー
ゼは、β−リミットデキシトリン内の1.6−α−グル
コシド結合を加水分解することによる生成物中のマルト
ース含量を増加する為枝切り酵素と共に通常用いられる
。
ゼは、β−リミットデキシトリン内の1.6−α−グル
コシド結合を加水分解することによる生成物中のマルト
ース含量を増加する為枝切り酵素と共に通常用いられる
。
β−アミラーゼは、種々の植物及び微生物から単離され
てきている(W、M、フォーゲルティ及びC,T、ケレ
イ、Progress in IndustrialM
icrobiologV、15巻、112〜115頁、
1979)。
てきている(W、M、フォーゲルティ及びC,T、ケレ
イ、Progress in IndustrialM
icrobiologV、15巻、112〜115頁、
1979)。
これ等のβ−アミラーゼは、最適温度を40℃〜65℃
の範囲内に更に最適p)Iを4.5〜7の範囲内に有す
る。
の範囲内に更に最適p)Iを4.5〜7の範囲内に有す
る。
枝切り酵素は、大抵最適pHを3.5〜6の範囲内に有
し、従って酸性溶液中でより活性である。β−アミラー
ゼを枝切り酵素と組み合わせて用いる場合、選択される
酵素又は連続的に用いられている酵素の各々の最適pH
0間にあるのが通常である。
し、従って酸性溶液中でより活性である。β−アミラー
ゼを枝切り酵素と組み合わせて用いる場合、選択される
酵素又は連続的に用いられている酵素の各々の最適pH
0間にあるのが通常である。
水溶液中の澱粉をβ−アミラーゼにより加水分解するマ
ルトースの製造におけるプロセスにおいて、老化を抑制
しかつ微生物感染を避ける為60℃で又はそれ以上の温
度を用いるのが好都合である。
ルトースの製造におけるプロセスにおいて、老化を抑制
しかつ微生物感染を避ける為60℃で又はそれ以上の温
度を用いるのが好都合である。
植物源β−アミラーゼは更に以下の欠点を有する。即ち
それ等の製造には多量の原料物質並びに抽出及び処理に
対し多大なエネルギーを必要とする。一方微生物源β−
アミラーゼは比較的低コストで大規模スケールで製造さ
れ得る。
それ等の製造には多量の原料物質並びに抽出及び処理に
対し多大なエネルギーを必要とする。一方微生物源β−
アミラーゼは比較的低コストで大規模スケールで製造さ
れ得る。
マルトース酸性アミラーゼが、1984年3月3日に出
願された米国特許出1111591,460に開示され
ており、こ\におけるアミラーゼは60〜65℃の範囲
内の温度で用いるのに十分熱安定性である。しかし、こ
の酵素は最適pHをpH4,5〜5.5に有する。
願された米国特許出1111591,460に開示され
ており、こ\におけるアミラーゼは60〜65℃の範囲
内の温度で用いるのに十分熱安定性である。しかし、こ
の酵素は最適pHをpH4,5〜5.5に有する。
更に、該米国特許出願による酵素は、マルトトリオース
を加水分解し、これはグルコースの生産をもたらす。
を加水分解し、これはグルコースの生産をもたらす。
ハイマルトースシロップにおいて、グルコースの存在は
避けねばならないことであり、更に該マルトース酸性ア
ミラーゼを使用すると、相当のレベルで製造されたグル
コースをその後除去する必要がある。
避けねばならないことであり、更に該マルトース酸性ア
ミラーゼを使用すると、相当のレベルで製造されたグル
コースをその後除去する必要がある。
従って、次に述べる如く有効な微生物源β−アミラーゼ
調製品に対する要求が存在する;即ち該アミラーゼ調製
品は、経済的方法で澱粉を加水分解する為に必要な長期
間に亘って60〜70℃で用いる為に十分に熱安定性で
あり、更に最適条件のもとでβ−アミラーゼ及び枝切り
酵素により澱粉を同時に加水分解する為にpH5以下の
値で十分に安定であり、更にハイマルトースシロップの
製造ニおいては、時としてその後シロップから分離しな
ければならない過剰量のグルコースを生産しないような
ものである。
調製品に対する要求が存在する;即ち該アミラーゼ調製
品は、経済的方法で澱粉を加水分解する為に必要な長期
間に亘って60〜70℃で用いる為に十分に熱安定性で
あり、更に最適条件のもとでβ−アミラーゼ及び枝切り
酵素により澱粉を同時に加水分解する為にpH5以下の
値で十分に安定であり、更にハイマルトースシロップの
製造ニおいては、時としてその後シロップから分離しな
ければならない過剰量のグルコースを生産しないような
ものである。
本発明の目的は、高温安定性、5未満のpHでの最適p
l(値を有し更に最少量のグルコースを生産する新規な
微生物源β−アミラーゼを提供することにある。
l(値を有し更に最少量のグルコースを生産する新規な
微生物源β−アミラーゼを提供することにある。
本発明は、このような特性を有する新規な微生物源細胞
外β−アミラーゼ(21−51β−アミラーゼ)が新規
に単離されたバシラス(Bacillus)菌株NCI
B 11608から生産されるという知見に基づいてい
る。
外β−アミラーゼ(21−51β−アミラーゼ)が新規
に単離されたバシラス(Bacillus)菌株NCI
B 11608から生産されるという知見に基づいてい
る。
本発明並びに以下に述べる記載のよりよき理解の為、添
付の図面を参照され度い: 第1図は温度に対するマルトース酸性酵素の相対活性を
プロットしたものであり、更に第2図はpl+に対する
相対活性をプロットしたものである。
付の図面を参照され度い: 第1図は温度に対するマルトース酸性酵素の相対活性を
プロットしたものであり、更に第2図はpl+に対する
相対活性をプロットしたものである。
第一の面によれば、本発明は、下記の特性を有する新規
な熱安定性β−アミラーゼを含んでなるβ−アミラーゼ
酵素製品を提供する: a) 該β−アミラーゼは、寄託番号NCIB 116
08をもって寄託されたバシラス(Bacillus)
菌株を適当な栄養培地中で培養することによって得るこ
とが出来る。
な熱安定性β−アミラーゼを含んでなるβ−アミラーゼ
酵素製品を提供する: a) 該β−アミラーゼは、寄託番号NCIB 116
08をもって寄託されたバシラス(Bacillus)
菌株を適当な栄養培地中で培養することによって得るこ
とが出来る。
b) 8亥β−アミラーゼは、バシラス(Bacill
us)菌株NCIB 11608から誘導されたβ−ア
ミラーゼの酵素化学的性質を示し、 c) pH4,5でアセテート緩衝液(0,1M)中
30分の反応時間で測定してその最適活性が約70℃で
あり、 d) その最適pHがマキールバイネ(Mcllvai
ne) II衝液中約60℃で測定し30分の反応時間
でpH4〜5の範囲内にある。
us)菌株NCIB 11608から誘導されたβ−ア
ミラーゼの酵素化学的性質を示し、 c) pH4,5でアセテート緩衝液(0,1M)中
30分の反応時間で測定してその最適活性が約70℃で
あり、 d) その最適pHがマキールバイネ(Mcllvai
ne) II衝液中約60℃で測定し30分の反応時間
でpH4〜5の範囲内にある。
第二の面によれば、本発明は上記熱安定性β−アミラー
ゼ酵素製品の製造方法を提供するものであり、この方法
は、上記バシラス■匹u且u菌株NC4B 1160B
又は該酵素生産生のその変異株もしくは突然変異株を炭
素源及び窒素源を含有する適当な栄養培地中で培養し、
所望によりβ−アミラーゼ酵素製品を回収することを含
んでなる。
ゼ酵素製品の製造方法を提供するものであり、この方法
は、上記バシラス■匹u且u菌株NC4B 1160B
又は該酵素生産生のその変異株もしくは突然変異株を炭
素源及び窒素源を含有する適当な栄養培地中で培養し、
所望によりβ−アミラーゼ酵素製品を回収することを含
んでなる。
更に本発明の別の面によれば、本発明は澱粉を水性培地
中新規なβ−アミラーゼ酵素製品で処理し、高純度のマ
ルトースシロップを製造する方法を提供する。
中新規なβ−アミラーゼ酵素製品で処理し、高純度のマ
ルトースシロップを製造する方法を提供する。
試験の結果、新規なβ−アミラーゼ酵素製品はマルトー
ス及びハイマルトースシロップの製造に適していること
が判明した。該製品は、低吸湿性、低粘度、良好な熱安
定性及び軽く、甘すぎない味のマルトースの故に、菓子
等の製造に特に重要である。
ス及びハイマルトースシロップの製造に適していること
が判明した。該製品は、低吸湿性、低粘度、良好な熱安
定性及び軽く、甘すぎない味のマルトースの故に、菓子
等の製造に特に重要である。
マルトースシロップを製造する工業的プロセスは、マル
トース生産酵素及び所望により、アミロペクチンの1,
6−分枝点を分解する酵素、例えばプルラナーゼ又はイ
ソアミラーゼを用いて澱粉を液化し次いで糖化すること
を含んでなる。
トース生産酵素及び所望により、アミロペクチンの1,
6−分枝点を分解する酵素、例えばプルラナーゼ又はイ
ソアミラーゼを用いて澱粉を液化し次いで糖化すること
を含んでなる。
更に別の面において、本発明は、新規なβ−アミラーゼ
製品と少なくとも一種の枝切り酵素との組み合わせから
なる活性酵素組成物を提供する。
製品と少なくとも一種の枝切り酵素との組み合わせから
なる活性酵素組成物を提供する。
他の別の面によれば、本発明は高純度マル)−スシロソ
ブの製造方法を提供するものであり、こ\において澱粉
は本発明の新規な活性酵素組成物で処理される。
ブの製造方法を提供するものであり、こ\において澱粉
は本発明の新規な活性酵素組成物で処理される。
新規酵素組成物を用いることにより、最適pH条件下で
澱粉の上記糖化を行うことが可能であり、これによりマ
ルトースの収率が増加し更に添加される酵素の量を減少
することが出来る。
澱粉の上記糖化を行うことが可能であり、これによりマ
ルトースの収率が増加し更に添加される酵素の量を減少
することが出来る。
21−51β−アミラーゼは、アミロペクチン、グリコ
ーゲン、及びアミロースを加水分解し、β−マルトース
のみを放出する。
ーゲン、及びアミロースを加水分解し、β−マルトース
のみを放出する。
分技多Ii類、例えばアミロペクチン及び部分氷解アミ
ロペクチンから、21−51β−アミラーゼはβ−リミ
ットデキ゛シトリンを生ぜしめ、これはグルコアミラー
ゼ、イソアミラーゼ、プルラナーゼ等により加水分解さ
れ得る。
ロペクチンから、21−51β−アミラーゼはβ−リミ
ットデキ゛シトリンを生ぜしめ、これはグルコアミラー
ゼ、イソアミラーゼ、プルラナーゼ等により加水分解さ
れ得る。
21−51マルトース酸性アミラーゼは、次の点におい
て他のハシラスβ−アミラーゼと異なる;1、該アミラ
ーゼは70℃の緩衝液中で安定であり、 2、該アミラーゼは4.0〜5.0のpH範囲内で安定
である。このことはイソアミラーゼ及びプルラナーゼの
如き枝切り酵素と共に使用出来ることを意味する。
て他のハシラスβ−アミラーゼと異なる;1、該アミラ
ーゼは70℃の緩衝液中で安定であり、 2、該アミラーゼは4.0〜5.0のpH範囲内で安定
である。このことはイソアミラーゼ及びプルラナーゼの
如き枝切り酵素と共に使用出来ることを意味する。
3、 グルコースが最少量で僅かに生産される。
本発明に係るβ−アミラーゼ生産能微生物は、以下の如
く調製された寒天基質上で増殖する為のその能力により
選択されるニ ドリプトン(10g)、アミロペクチン(CPCスノー
フレーク10g)、バタトアーガー(40g )、及び
脱イオン水(1000mj2 )を以下の組成を有する
塩溶液の当世と55℃で無菌的に混合する=(NH4)
zsOa : o、o4TfL量%MgSO417
HzO: 0.1重量%CaC1z : 0.
05重量%KH2PO,70,6ffi景% 塩溶液のpHは、ION硫酸で3.0に調節する。
く調製された寒天基質上で増殖する為のその能力により
選択されるニ ドリプトン(10g)、アミロペクチン(CPCスノー
フレーク10g)、バタトアーガー(40g )、及び
脱イオン水(1000mj2 )を以下の組成を有する
塩溶液の当世と55℃で無菌的に混合する=(NH4)
zsOa : o、o4TfL量%MgSO417
HzO: 0.1重量%CaC1z : 0.
05重量%KH2PO,70,6ffi景% 塩溶液のpHは、ION硫酸で3.0に調節する。
単離した微生物は、1983年3月15日にナショナル
コレクション オブ インダストリイ バクテリア(
NCIB) ()リイリサーチスティション、アバディ
ーン、スコツトランド)に寄託され、寄託番号NGIB
11608が付与されている。1977年ブタペスト
条約のもとて国際寄託当局となったNCIBは、該条約
の規則9及び11に従ってそれぞれ寄託の実施及びそれ
に対する報酬に対する分譲の業務を行う。
コレクション オブ インダストリイ バクテリア(
NCIB) ()リイリサーチスティション、アバディ
ーン、スコツトランド)に寄託され、寄託番号NGIB
11608が付与されている。1977年ブタペスト
条約のもとて国際寄託当局となったNCIBは、該条約
の規則9及び11に従ってそれぞれ寄託の実施及びそれ
に対する報酬に対する分譲の業務を行う。
分類学
形態学
直径0.6〜0.8μmを有する棒状細菌胞子は卵形な
いし円゛筒形であり、中央から末端に存在し更に胞子嚢
の膨潤を引き起こさない。
いし円゛筒形であり、中央から末端に存在し更に胞子嚢
の膨潤を引き起こさない。
生止ヱ反庭
グラム カラー +
嫌気性増殖 −
カタローゼ +
vp反応 −
硝酸塩の還元 十
しシチナーゼ −
3.5%NaC1中での増殖 −澱粉の加水分解
十 カゼインの加水分解 僅かに+ グルコースからの酸の生産 十 アラビノースからの酸の生産 − キシロースからの酸の生産 − マニトールからの酸の生産 十 シトレートの利用 − プロピオナートの利用 −及び50℃での増殖
−。
十 カゼインの加水分解 僅かに+ グルコースからの酸の生産 十 アラビノースからの酸の生産 − キシロースからの酸の生産 − マニトールからの酸の生産 十 シトレートの利用 − プロピオナートの利用 −及び50℃での増殖
−。
バシラスNCl311608は、pusを超える通常用
いられる培地上増殖しない。この細菌に対する最適増殖
条件は、pH4,8〜5.8であり30〜37℃の温度
である。
いられる培地上増殖しない。この細菌に対する最適増殖
条件は、pH4,8〜5.8であり30〜37℃の温度
である。
細菌の増殖の為の最高温度は45℃である。
上記試験において、等量の1%トリプトン及びBA−1
塩を有する標準培地が用いられた。
塩を有する標準培地が用いられた。
BA−1塩は次の組成を含んでなる:
(NH*) zsOa 0.04%Mg5On
・7HzOO,1% CaC1z ・28zOO,05% KH□po40.6% オートクレイプ処理する前にpHを、IONの硫酸で3
.0に調節する。 ′ 予め混合したトリプトン塩基培地のpHは4.8〜5.
2である。
・7HzOO,1% CaC1z ・28zOO,05% KH□po40.6% オートクレイプ処理する前にpHを、IONの硫酸で3
.0に調節する。 ′ 予め混合したトリプトン塩基培地のpHは4.8〜5.
2である。
全ての上記生化学的反応及び増殖試験は、1%の酵母エ
キスを添加しであるいは添加せず該基質上で行った。
キスを添加しであるいは添加せず該基質上で行った。
NGIB 11608の増殖の為の標準増殖培地は0.
5%のアミロペクチンを含有し、酵母エキスは含有して
いない。NCl31160Bの植物細胞は、しばしば気
泡を含有しており、これは接触型顕微鏡において屈折性
の球状として現われ、更にこれは細胞をサフラニン型の
メチレンブルーで僅かに染色した場合着色されない。
5%のアミロペクチンを含有し、酵母エキスは含有して
いない。NCl31160Bの植物細胞は、しばしば気
泡を含有しており、これは接触型顕微鏡において屈折性
の球状として現われ、更にこれは細胞をサフラニン型の
メチレンブルーで僅かに染色した場合着色されない。
形態学的及び生化学的性質は、バシラスメガテリウムμ
迫1土1us m邦立堕二匡り−を特徴づけるその特性
に非常によく似ているが、β−アミラーゼの特性は、B
、メガテリウムB、 me aterium) β−ア
ミラーゼに対しこれまで記載されていたものとははるか
に異なっている。
迫1土1us m邦立堕二匡り−を特徴づけるその特性
に非常によく似ているが、β−アミラーゼの特性は、B
、メガテリウムB、 me aterium) β−ア
ミラーゼに対しこれまで記載されていたものとははるか
に異なっている。
酵素活性の決定
1β−アミラーゼ単位(βU)を、標準条件(温度60
℃、pH4,5及び反応時間30分)のもとで、毎分1
μmolのマルトースに対応する還元糖を生産する酵素
の量と定義する。
℃、pH4,5及び反応時間30分)のもとで、毎分1
μmolのマルトースに対応する還元糖を生産する酵素
の量と定義する。
0.1Mのアセテート緩衝液に溶解した0、5rrlの
2%澱粉を、1m1当り0.5〜2βUを含有する脱イ
オン水に溶解した酵素100μlでインキュベートする
。反応を、0.5Nの水酸化ナトリウム0.3rrlを
添加し30分後停止し、次いで混合物を脱イオン水でl
:10の割合に希釈する。
2%澱粉を、1m1当り0.5〜2βUを含有する脱イ
オン水に溶解した酵素100μlでインキュベートする
。反応を、0.5Nの水酸化ナトリウム0.3rrlを
添加し30分後停止し、次いで混合物を脱イオン水でl
:10の割合に希釈する。
次いで還元糖の量を、ソモギイ法(ソモギイ:J、 B
iol、 Cheap、 153.375〜80頁(1
944))に従って測定する。
iol、 Cheap、 153.375〜80頁(1
944))に従って測定する。
酵素の調製
本発明のβ−アミラーゼ生産能を有するバシラス(Ba
cillus)菌株を、適当な発酵培地中嫌気的条件下
でその培養前に固体基質上で通常増殖させる。
cillus)菌株を、適当な発酵培地中嫌気的条件下
でその培養前に固体基質上で通常増殖させる。
双方の培地は、無機塩の他に炭素及び窒素の同化性源並
びに所望により増殖促進栄養源、例えば酵母エキスを含
有する。発酵は典型的には30℃〜37℃でかつpH5
〜6で行われ、更に好ましくは自動的手段によりはソ゛
一定状態に保たれる。酵素が培地中に排出される。
びに所望により増殖促進栄養源、例えば酵母エキスを含
有する。発酵は典型的には30℃〜37℃でかつpH5
〜6で行われ、更に好ましくは自動的手段によりはソ゛
一定状態に保たれる。酵素が培地中に排出される。
精製した発酵プロスは、例えば濾過法により他の固体と
共に細菌細胞及びそれ等の破片を分離してそれ等を含有
しないものとすることが出来る。
共に細菌細胞及びそれ等の破片を分離してそれ等を含有
しないものとすることが出来る。
酵素を含有する上澄みは、更に例えば濾過法又は遠心分
離により澄明化出来更に必要により、例えば限外濾過法
によりあるいは又減圧上蒸発器内で濃縮し濃縮物を得る
ことが出来これは所望により例えば凍結乾燥法又はスプ
レィ乾燥法により乾燥乾固出来る。
離により澄明化出来更に必要により、例えば限外濾過法
によりあるいは又減圧上蒸発器内で濃縮し濃縮物を得る
ことが出来これは所望により例えば凍結乾燥法又はスプ
レィ乾燥法により乾燥乾固出来る。
酵素の精製
本発明のマルトース産生アミラーゼは、以下の如く連続
的発酵培養プロスから精製出来る=250リットルの培
養プロスを、濾過し次いで濾液を限外濾過し、菌類濾過
し、次いで凍結乾燥する。
的発酵培養プロスから精製出来る=250リットルの培
養プロスを、濾過し次いで濾液を限外濾過し、菌類濾過
し、次いで凍結乾燥する。
粉末を15mMのアセテート緩衝液、pH5,0に溶解
し次いで伝導率が約1mSとなるまで、15mMのアセ
テート緩衝液(ρ)15.0)に対し透析する。次いで
透析物を、同緩衝液で既に平衡化したカチオン交換CM
−セファロースC1−6Bに通用する。アミラーゼをカ
ラムに通過させるが、60%の残存蛋白がイオン交換剤
により保持される。
し次いで伝導率が約1mSとなるまで、15mMのアセ
テート緩衝液(ρ)15.0)に対し透析する。次いで
透析物を、同緩衝液で既に平衡化したカチオン交換CM
−セファロースC1−6Bに通用する。アミラーゼをカ
ラムに通過させるが、60%の残存蛋白がイオン交換剤
により保持される。
カラムからの溶出液のpHを、酢酸で4.0に調節し次
いで引き続き溶出液を、15mMのアセテート緩衝液(
pl+ 4.0 ’)で平衡化したCM−セファロース
C1−6Bカラムに適用する。次いで酵素を、イオン強
度を増加させながら9N4.0のアセテート緩衝液で溶
出させる。溶出液の酵素活性は、対称ピークの蛋白含量
をもたらす。
いで引き続き溶出液を、15mMのアセテート緩衝液(
pl+ 4.0 ’)で平衡化したCM−セファロース
C1−6Bカラムに適用する。次いで酵素を、イオン強
度を増加させながら9N4.0のアセテート緩衝液で溶
出させる。溶出液の酵素活性は、対称ピークの蛋白含量
をもたらす。
酵素化学的性質
本発明のβ−アミラーゼの作用に関するpH及び温度依
存性を、pH及び温度を予め定めた値に調節した反応混
合物を用い上記方法により測定した。
存性を、pH及び温度を予め定めた値に調節した反応混
合物を用い上記方法により測定した。
添付図面を参照され度い。
第1図は、温度に対しプロットした相対活性を示すグラ
フである(基質2%可溶性澱粉、pni、s(0,1M
アセテート)、反応時間30分):第2図はpHに対し
プロットした相対活性を示すグラフである(温度60℃
、基質2%可溶性澱粉、反応時間30分、ミクルヴアイ
ン緩衝液)。
フである(基質2%可溶性澱粉、pni、s(0,1M
アセテート)、反応時間30分):第2図はpHに対し
プロットした相対活性を示すグラフである(温度60℃
、基質2%可溶性澱粉、反応時間30分、ミクルヴアイ
ン緩衝液)。
添付図面から示されるように、21−51β−アミラー
ゼは、pH4,5で約70℃の最適活性を有し更にその
最適pH値は、4.0〜5.0の範囲内にある。
ゼは、pH4,5で約70℃の最適活性を有し更にその
最適pH値は、4.0〜5.0の範囲内にある。
最大活性の60%以上が未だ80℃で見い出される。
〔実施例)
例1
バシラスsp、21 51、寄託番号NCIB 116
08由来のβ−アミラーゼの調製 接種物 21−51培養菌を、次の寒天上で2日間37℃で増殖
させた: 以下の組成(0,04重景%f7)(NH4)zsOa
、0.1重量% ノMgSO44HzO,0,05重
量%のCaC12及び0.6重量%のXll□P04)
からなる塩溶液(塩の溶液のpHはION IIZsO
4で3.0に調整した)の当量と混合した10gのトリ
プトン、10gのアミロペクチン(CPCスノーフレー
ク)、40gのバクトアーガー及び1000 m It
の脱イオン水。
08由来のβ−アミラーゼの調製 接種物 21−51培養菌を、次の寒天上で2日間37℃で増殖
させた: 以下の組成(0,04重景%f7)(NH4)zsOa
、0.1重量% ノMgSO44HzO,0,05重
量%のCaC12及び0.6重量%のXll□P04)
からなる塩溶液(塩の溶液のpHはION IIZsO
4で3.0に調整した)の当量と混合した10gのトリ
プトン、10gのアミロペクチン(CPCスノーフレー
ク)、40gのバクトアーガー及び1000 m It
の脱イオン水。
連続発酵
連続発酵を、次の組成を有する基質を用いて行った:
0.2%のディフコ酵母エキス 0.2%コーンステ
イープリカー 1.0%(NH*) zsOa
0.1%Mg5Oa ・7
H2O0,0375%Ktnpo、、
0.0375%CaC1z ’ 2 )1
g8 0.0375%バクトドリプト
ン 0.4%プルラン
0.5%プルロニック601 0
.08%水で100%に調節し、次いで130℃で30
分間オートクレーブした。
イープリカー 1.0%(NH*) zsOa
0.1%Mg5Oa ・7
H2O0,0375%Ktnpo、、
0.0375%CaC1z ’ 2 )1
g8 0.0375%バクトドリプト
ン 0.4%プルラン
0.5%プルロニック601 0
.08%水で100%に調節し、次いで130℃で30
分間オートクレーブした。
発酵を、1リツトルの処理容量を有するビオフェロ(B
IOFLO) (登録商標)にューブルンスヴイック、
カナダ)発酵器中で行った。
IOFLO) (登録商標)にューブルンスヴイック、
カナダ)発酵器中で行った。
発酵を上記接種物100mjl!を用いて開始し、次い
で24時間後30℃で基質の添加を開始した。
で24時間後30℃で基質の添加を開始した。
p)Iを、3%硫酸を用い5.5±0.2に調節し次い
で温度を30℃±0.2で保持した。
で温度を30℃±0.2で保持した。
通気:0.5リットル/基質1リットル/分希釈速度:
D = 0.090±0.005時間例2 糖化用の基質は、脱イオン水中7DBスプレイ乾燥マル
トデキシトリンを再溶解し次いで約30%DSにするこ
とにより調製した。糖化の実験は、標準のsoomlの
実験用回分式反応器内で行った。
D = 0.090±0.005時間例2 糖化用の基質は、脱イオン水中7DBスプレイ乾燥マル
トデキシトリンを再溶解し次いで約30%DSにするこ
とにより調製した。糖化の実験は、標準のsoomlの
実験用回分式反応器内で行った。
少量の基質を55℃又は60℃に加熱し、pHを初3t
11値5.5に調節し、次いで5βU又は20βU/g
DSを添加した。サンプルを4.24.48.96、及
び168時間後に回収し次いで沸騰水で10分間加熱し
酵素を失活せしめた。冷却後サンプルを濾過し次いで混
合床イオン交喚樹脂(バイオ−ラッド(登録商標) A
G 501X 8 (D))で処理し、HPLC及びゲ
ルクロマトグラフィーによる分析の前に灰粉及び可溶性
窒素を除去した。
11値5.5に調節し、次いで5βU又は20βU/g
DSを添加した。サンプルを4.24.48.96、及
び168時間後に回収し次いで沸騰水で10分間加熱し
酵素を失活せしめた。冷却後サンプルを濾過し次いで混
合床イオン交喚樹脂(バイオ−ラッド(登録商標) A
G 501X 8 (D))で処理し、HPLC及びゲ
ルクロマトグラフィーによる分析の前に灰粉及び可溶性
窒素を除去した。
同じ手順を、本発明に係るβ−アミラーゼ1g、D S
当り5又は20βU及びプルラナーゼ1gDS当り1プ
ルラナ一ゼ単位(PNU)及び1gDS当り100イソ
アミラーゼ単位(IU)の混合物を用いて繰り返した。
当り5又は20βU及びプルラナーゼ1gDS当り1プ
ルラナ一ゼ単位(PNU)及び1gDS当り100イソ
アミラーゼ単位(IU)の混合物を用いて繰り返した。
結果を以下の第1表に示す。
玉±1
糖化温度:60℃
糖化温度:55℃
上記表から、以下の内容が明らかにされる。即ちグルコ
ース(DP、)の僅かな最少量が、本発明のβ−アミラ
ーゼにより生産され、そして該β−アミラーゼと枝切り
酵素例えばプルラナーゼ及びイソアミラーゼを併用して
用いると、ハイマルトース含量(DP、)のシロップが
得られる。
ース(DP、)の僅かな最少量が、本発明のβ−アミラ
ーゼにより生産され、そして該β−アミラーゼと枝切り
酵素例えばプルラナーゼ及びイソアミラーゼを併用して
用いると、ハイマルトース含量(DP、)のシロップが
得られる。
第1図は、本発明のβ−アミラーゼに関し温度に対しプ
ロットした相対活性のグラフであり、第2図は本発明に
係るβ−アミラーゼに関しp)lに対しプロットした相
対活性を示すグラフである。
ロットした相対活性のグラフであり、第2図は本発明に
係るβ−アミラーゼに関しp)lに対しプロットした相
対活性を示すグラフである。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1、バシラス(¥Bacillus¥)菌株NCIB
11608の適当な栄養培地中で培養することによって
得ることのできるβ−アミラーゼ酵素。 2、固体の形態にある特許請求の範囲第1項記載による
アルトース産生アミラーゼ酵素製品。 3、特許請求の範囲第1項記載のβ−アミラーゼ酵素の
製造方法であって、該酵素生産生のバシラス(¥Bac
illus¥)菌株NCIB 11608又は変異株又
は突然変異株を炭素源および窒素源を含有する適当な栄
養培地中で培養し次いで培養ブロスからβ−アミラーゼ
酵素を回収することを特徴とする、前記方法。 4、特許請求の範囲第1項記載のβ−アミラーゼ並びに
1種又はそれ以上の枝切り酵素を含んでなる、酵素組成
物。 5、枝切り酵素がイソアミラーゼ又はプルラナーゼであ
る、特許請求の範囲第4項記載の酵素組成物。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DK0770/86 | 1986-02-19 | ||
DK077086A DK160563C (da) | 1986-02-19 | 1986-02-19 | Beta-amylase, fremgangsmaade til dens fremstilling samt praeparat indeholdende beta-amylasen |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS62201577A true JPS62201577A (ja) | 1987-09-05 |
Family
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Family Applications (1)
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---|---|---|---|
JP62034706A Pending JPS62201577A (ja) | 1986-02-19 | 1987-02-19 | β−アミラ−ゼ酵素 |
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---|---|
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EP (1) | EP0234858B1 (ja) |
JP (1) | JPS62201577A (ja) |
AT (1) | ATE97954T1 (ja) |
CA (1) | CA1304030C (ja) |
DE (1) | DE3788291T2 (ja) |
DK (1) | DK160563C (ja) |
ES (1) | ES2059362T3 (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2020213604A1 (ja) * | 2019-04-15 | 2020-10-22 | 公立大学法人大阪 | 新規βアミラーゼ及びその利用・製造法 |
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US5312739A (en) * | 1992-05-28 | 1994-05-17 | National Science Council | Production of high-maltose syrup and high-protein byproduct from materials that contain starch and protein by enzymatic process |
FI109358B (fi) * | 2001-02-06 | 2002-07-15 | Danisco Sugar Oy | Menetelmä entsyymin uuttamiseksi |
EP1350432A1 (en) | 2002-04-05 | 2003-10-08 | Puratos N.V. | Method and composition for retarding staling of bakery products by adding a thermostable protease |
MXPA05009353A (es) | 2003-03-10 | 2005-11-04 | Genencor Int | Composiciones de grano que contienen isomalto-oligosacaridos pre-bioticos y metodos para la elaboracion y uso de las mismas. |
DK2595488T3 (da) | 2010-07-21 | 2020-02-24 | Novozymes As | Fremgangsmåde til fremstilling af et bagt produkt med antiældningsamylase og peptidase |
MX2011008654A (es) | 2010-08-24 | 2012-02-23 | Corn Products Int Inc | Produccion de isomaltooligosacaridos y usos para los mismos. |
US10918124B2 (en) * | 2011-08-02 | 2021-02-16 | Purdue Research Foundation | Extraction, purification, and processing of phytoglycogen |
MX2014007603A (es) | 2011-12-26 | 2014-09-12 | Dupont Nutrition Biosci Aps | Uso de enzima exoamilasa. |
MX2020004318A (es) | 2017-10-25 | 2020-08-13 | Basf Se | Enzimas beta-amilasa. |
EP3958890A4 (en) | 2019-04-23 | 2023-05-03 | Basf Se | BETA-AMYLASE VARIANTS |
Citations (1)
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JPS602185A (ja) * | 1983-03-25 | 1985-01-08 | ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ | アミラーゼ酵素およびその製法 |
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---|---|---|---|---|
CA973492A (en) * | 1970-10-27 | 1975-08-26 | Jiro Ito | Production of new amylases by cultivation of streptomyces and uses of these new amylases |
US3804718A (en) * | 1971-04-01 | 1974-04-16 | Hayashibara Co | Method of producing beta-amylase by bacterial fermentation |
JPS4867487A (ja) * | 1971-12-17 | 1973-09-14 | ||
US4560651A (en) * | 1981-04-20 | 1985-12-24 | Novo Industri A/S | Debranching enzyme product, preparation and use thereof |
US4647538A (en) * | 1984-09-18 | 1987-03-03 | Michigan Biotechnology Institute | Thermostable beta-amylase |
-
1986
- 1986-02-19 DK DK077086A patent/DK160563C/da not_active IP Right Cessation
-
1987
- 1987-02-17 US US07/015,239 patent/US4970158A/en not_active Expired - Fee Related
- 1987-02-18 DE DE87301408T patent/DE3788291T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1987-02-18 EP EP87301408A patent/EP0234858B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1987-02-18 AT AT87301408T patent/ATE97954T1/de not_active IP Right Cessation
- 1987-02-18 ES ES87301408T patent/ES2059362T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1987-02-19 JP JP62034706A patent/JPS62201577A/ja active Pending
- 1987-02-19 CA CA000530152A patent/CA1304030C/en not_active Expired - Lifetime
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS602185A (ja) * | 1983-03-25 | 1985-01-08 | ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ | アミラーゼ酵素およびその製法 |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2020213604A1 (ja) * | 2019-04-15 | 2020-10-22 | 公立大学法人大阪 | 新規βアミラーゼ及びその利用・製造法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CA1304030C (en) | 1992-06-23 |
EP0234858A2 (en) | 1987-09-02 |
DE3788291D1 (de) | 1994-01-13 |
DK77086A (da) | 1987-08-20 |
ES2059362T3 (es) | 1994-11-16 |
ATE97954T1 (de) | 1993-12-15 |
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DK160563C (da) | 1991-09-02 |
EP0234858A3 (en) | 1988-08-03 |
US4970158A (en) | 1990-11-13 |
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DK160563B (da) | 1991-03-25 |
DE3788291T2 (de) | 1994-03-31 |
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