JPS5816687A - リンホトキシンの製造方法 - Google Patents
リンホトキシンの製造方法Info
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- JPS5816687A JPS5816687A JP56112913A JP11291381A JPS5816687A JP S5816687 A JPS5816687 A JP S5816687A JP 56112913 A JP56112913 A JP 56112913A JP 11291381 A JP11291381 A JP 11291381A JP S5816687 A JPS5816687 A JP S5816687A
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- lymphotoxin
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- human
- animal
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、リンホトキシン製造に際し、培養株化された
ヒト由来の細胞をヒト以外の温血動物体内に直接郡部す
るか、または拡散チャンバー内へ接種して、その温血動
物の体液の供給を受けながら増殖させて得られる細胞に
、生体内または生体外でリンホトキシン誘導剤を作用さ
せてリンホトキシンを生成させ、生成したリンホトキシ
ンを精製分取することを特徴とするリンホトキシンの製
造方法に関する。
ヒト由来の細胞をヒト以外の温血動物体内に直接郡部す
るか、または拡散チャンバー内へ接種して、その温血動
物の体液の供給を受けながら増殖させて得られる細胞に
、生体内または生体外でリンホトキシン誘導剤を作用さ
せてリンホトキシンを生成させ、生成したリンホトキシ
ンを精製分取することを特徴とするリンホトキシンの製
造方法に関する。
リンホトキシンは、青木隆−ほか共著「リンホカイン」
、新免疫学叢書６．１９７９年、医学書院、Ｂｌｏｏｍ
、 Ｂ、Ｒ，＆ Ｇｌａｄｅ、ｐ、Ｒ，共編ｒ ■ｎ
ｖｉｔｒｏ ｍｅｔｈｏａｓｉｎ ｃｅｌｌ ｍｅｄｉ
ａｔｅｄ ｉｒｒｍｕｎｉｔｙ Ｊ Ａｃａｄｅｍｉｃ
Ｐｒｅｓｓ、 ｔ９７１紙などにも記載されているよ
うに、例えば、感作されたリンパ細胞に抗原を作用させ
るか、ミトーゲントシてフィトヘマグルチニン、フンカ
ナバリンＡをはじめとするリンホトキシン誘導剤を細胞
に作用させることによって、その細胞内外に誘導生成す
る蛋白様物質であって、細胞障害機能を持つ物質に与え
られ大名称であり、特に腫瘍細胞に対して細胞障害機能
を持っていることは公知である、リンホトキシンの持つ
このような機能から、リンホトキシンはその発見の当初
より悪性腫瘍治療剤として期待された来た。
、新免疫学叢書６．１９７９年、医学書院、Ｂｌｏｏｍ
、 Ｂ、Ｒ，＆ Ｇｌａｄｅ、ｐ、Ｒ，共編ｒ ■ｎ
ｖｉｔｒｏ ｍｅｔｈｏａｓｉｎ ｃｅｌｌ ｍｅｄｉ
ａｔｅｄ ｉｒｒｍｕｎｉｔｙ Ｊ Ａｃａｄｅｍｉｃ
Ｐｒｅｓｓ、 ｔ９７１紙などにも記載されているよ
うに、例えば、感作されたリンパ細胞に抗原を作用させ
るか、ミトーゲントシてフィトヘマグルチニン、フンカ
ナバリンＡをはじめとするリンホトキシン誘導剤を細胞
に作用させることによって、その細胞内外に誘導生成す
る蛋白様物質であって、細胞障害機能を持つ物質に与え
られ大名称であり、特に腫瘍細胞に対して細胞障害機能
を持っていることは公知である、リンホトキシンの持つ
このような機能から、リンホトキシンはその発見の当初
より悪性腫瘍治療剤として期待された来た。
リンホトキシンは、ヒトをはじめ種々、の動物のリンパ
細胞から調整された来たが、ヒトの治療に供するには、
ヒトの生細胞由来であることが、治療上に生ずる抗原性
などの副作用面において極めて安全であり、優れている
。
細胞から調整された来たが、ヒトの治療に供するには、
ヒトの生細胞由来であることが、治療上に生ずる抗原性
などの副作用面において極めて安全であり、優れている
。
従来から、リンホトキシンの調製に使用されて来たヒト
の生細胞にゆ白血球がある。しかしながら、白血球はヒ
トの新鮮血から分離して調整されるものであり、その保
存が困難であって、大量に安価に供給することは極めて
困難である。このような理由から、ヒトの治療に供し得
るリンホトキシンの製造は、未だ工業的規模で実施され
るまでに至っていない。
の生細胞にゆ白血球がある。しかしながら、白血球はヒ
トの新鮮血から分離して調整されるものであり、その保
存が困難であって、大量に安価に供給することは極めて
困難である。このような理由から、ヒトの治療に供し得
るリンホトキシンの製造は、未だ工業的規模で実施され
るまでに至っていない。
本発明者らは、工業的規模で容易に実施し得るリンホト
キシンの製造方法を検討し、そのリンホトキシンが悪性
腫瘍の治療剤として有用であるか否かを鋭意研究して来
た。
キシンの製造方法を検討し、そのリンホトキシンが悪性
腫瘍の治療剤として有用であるか否かを鋭意研究して来
た。
その結果、培養株化されたヒト由来の細胞を生体外（ｉ
ｎ ｖｉｔｒｏ）の栄養培地に接種し、増殖させるので
はなく、ヒト以外の温血動物体内に移植し、または、拡
散チャンバー内に接種してその動物体から栄養物を含有
する体液の供給を受けつつ増殖させ、得られる細胞に生
体内または生体外でリンホトキシン誘導剤を作用させる
ことによって、リンホトキシンが高活性で誘導生成され
、これを精製分取することによってリンホトキシンが多
量容易に製造し得ることを見いだし、そのリンホトキシ
ンが悪性腫瘍の治療剤として優れていることを確認して
本発明を完成した。
ｎ ｖｉｔｒｏ）の栄養培地に接種し、増殖させるので
はなく、ヒト以外の温血動物体内に移植し、または、拡
散チャンバー内に接種してその動物体から栄養物を含有
する体液の供給を受けつつ増殖させ、得られる細胞に生
体内または生体外でリンホトキシン誘導剤を作用させる
ことによって、リンホトキシンが高活性で誘導生成され
、これを精製分取することによってリンホトキシンが多
量容易に製造し得ることを見いだし、そのリンホトキシ
ンが悪性腫瘍の治療剤として優れていることを確認して
本発明を完成した。
本発明において使用されるリンホトキシンの製造方法は
、生細胞を生体外（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）で増殖させる場
合とは違って、高価な血清などを含む栄養培地が不要ま
たは大幅に節約できるばかりでなく、細胞増殖中の維持
管理も極めて容易であシ、その上誘導生成されるリンホ
トキシン活性が高い特徴を有している。即ち、培養株化
されたヒト由来の細胞をヒト以外の温血動物体内に移植
し、あるいは、その動物の体液の供給を受けることので
きる拡散チャンバー内に収容し、このチャンバーを動物
体内に埋設して通常の飼育をすれば、温血動物体から供
給される栄養物を含有する体液、を利用してその細胞が
容易に増殖しうるのである。更に、生体外（ｉｎ ｖｉ
ｔｒｏ）で増殖させる場合と比較して、この細胞の増殖
が安定していること、その増殖速度が大きいこと、得ら
れる細胞量が多いこと、更には細胞当りのリンホトキシ
ンの収量が著増することも大きな特徴でちる。本発明で
使用する培養株化されたヒト由来の細胞は、ヒト以外の
温血動物体内に移植して容易に増殖し得てしかもリンホ
トキシン産生を有するものであればよく、例えばｒ Ｊ
ｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃ１１ｎｉｃａｌ Ｍｉｃｒｏｂ
ｉｏｌｏｇｙ Ｖｏｌ、 Ｉ Ｊ １１６〜１１７頁（
１９７５）に記載されているＮａｍａ ｌ ｖａ細胞、
■、Ｍｉｙｏｓｈｉ著ｒ Ｎａｔｕｒｅ Ｖｏｌ、
２６７ Ｊ ８４３−８４４頁 （１９７７年）に記載
されているＢＡＬＬ−１細胞、ＴＡＬＬ−１細胞、ＮＡ
ＬＬ−１細胞、ｒＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏ
ｌｏｇｙＶｏｌ、１１３ Ｊ１３３４〜１３４５頁（１
９７４年）記載のＭ−７００２細胞、Ｂ−７１０１細胞
彦どが自由に使用され、本明細書に記載する株化細胞の
みに限定されるものではない。
、生細胞を生体外（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）で増殖させる場
合とは違って、高価な血清などを含む栄養培地が不要ま
たは大幅に節約できるばかりでなく、細胞増殖中の維持
管理も極めて容易であシ、その上誘導生成されるリンホ
トキシン活性が高い特徴を有している。即ち、培養株化
されたヒト由来の細胞をヒト以外の温血動物体内に移植
し、あるいは、その動物の体液の供給を受けることので
きる拡散チャンバー内に収容し、このチャンバーを動物
体内に埋設して通常の飼育をすれば、温血動物体から供
給される栄養物を含有する体液、を利用してその細胞が
容易に増殖しうるのである。更に、生体外（ｉｎ ｖｉ
ｔｒｏ）で増殖させる場合と比較して、この細胞の増殖
が安定していること、その増殖速度が大きいこと、得ら
れる細胞量が多いこと、更には細胞当りのリンホトキシ
ンの収量が著増することも大きな特徴でちる。本発明で
使用する培養株化されたヒト由来の細胞は、ヒト以外の
温血動物体内に移植して容易に増殖し得てしかもリンホ
トキシン産生を有するものであればよく、例えばｒ Ｊ
ｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃ１１ｎｉｃａｌ Ｍｉｃｒｏｂ
ｉｏｌｏｇｙ Ｖｏｌ、 Ｉ Ｊ １１６〜１１７頁（
１９７５）に記載されているＮａｍａ ｌ ｖａ細胞、
■、Ｍｉｙｏｓｈｉ著ｒ Ｎａｔｕｒｅ Ｖｏｌ、
２６７ Ｊ ８４３−８４４頁 （１９７７年）に記載
されているＢＡＬＬ−１細胞、ＴＡＬＬ−１細胞、ＮＡ
ＬＬ−１細胞、ｒＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏ
ｌｏｇｙＶｏｌ、１１３ Ｊ１３３４〜１３４５頁（１
９７４年）記載のＭ−７００２細胞、Ｂ−７１０１細胞
彦どが自由に使用され、本明細書に記載する株化細胞の
みに限定されるものではない。
これらの細胞は、後に述べるリンホトキシンを誘導生成
させるまでの過程で、牟独で又は２種以上を混合して自
由に使用される。必要ならば、これに、例えばヒトの新
鮮血から調整される白血球を使用することもできる。
させるまでの過程で、牟独で又は２種以上を混合して自
由に使用される。必要ならば、これに、例えばヒトの新
鮮血から調整される白血球を使用することもできる。
本発明で使用する温血動物は、ヒト由来の細胞が増殖し
得るものであればよく、例えばニワ） ＩＪ、ハトなど
の鳥類、イヌ、ネコ、サル、ウサギ、ヤギ、ブタ、ウマ
、ウシ、モルモット、ラット、ハムスター、普通マウス
、ヌードマウスなどの哺乳類が使用できる。
得るものであればよく、例えばニワ） ＩＪ、ハトなど
の鳥類、イヌ、ネコ、サル、ウサギ、ヤギ、ブタ、ウマ
、ウシ、モルモット、ラット、ハムスター、普通マウス
、ヌードマウスなどの哺乳類が使用できる。
これらの動物にヒト由来の細胞を移植すると好ましくな
い免疫反応を起すおそれがあるので、その反応をできる
だけ抑えるため、使用する動物はできるだけ幼若な状態
、即ち卵、胚、胎児、または新生期、幼少期のものの方
が好ましい。
い免疫反応を起すおそれがあるので、その反応をできる
だけ抑えるため、使用する動物はできるだけ幼若な状態
、即ち卵、胚、胎児、または新生期、幼少期のものの方
が好ましい。
また、これら動物に例えば２００〜６００レム程度のエ
ックス線若しくはガンマ線を照射するか、または抗血清
若しくは免疫抑制剤などを注射するなどの前処理をほど
こして、免疫反応を弱めて移殖してもよい。
ックス線若しくはガンマ線を照射するか、または抗血清
若しくは免疫抑制剤などを注射するなどの前処理をほど
こして、免疫反応を弱めて移殖してもよい。
使用する動物がヌードマウスの場合には、成長したもの
であっても免疫反応が弱いのτ、これらの前処理を必要
とすることなく、培養株化されたヒト由来の細胞が移殖
でき、急速に増殖できるので特に好都合である。
であっても免疫反応が弱いのτ、これらの前処理を必要
とすることなく、培養株化されたヒト由来の細胞が移殖
でき、急速に増殖できるので特に好都合である。
まだ、培養株化されたヒト由来の細胞を、例えば先づハ
ムスターに移植し増殖させた後、この細胞を更にヌード
マウスに移植するなどのように、ヒト以外の温血動物間
で移植してヒト由来の細胞° の増殖をより安定化
したり、さらにそれらから誘導・生成されるリンホトキ
シン量を増加させることも自由である。
ムスターに移植し増殖させた後、この細胞を更にヌード
マウスに移植するなどのように、ヒト以外の温血動物間
で移植してヒト由来の細胞° の増殖をより安定化
したり、さらにそれらから誘導・生成されるリンホトキ
シン量を増加させることも自由である。
この場合、同種間、同属間は勿論のこと囲網間、同門間
郡部であってもよい。ヒト由来の細胞を移植する動物体
内の部位は、移植した細胞が増殖しうる部位であればよ
く、例えば尿液腔、静脈、腹腔、皮下など自由に選ばれ
る。
郡部であってもよい。ヒト由来の細胞を移植する動物体
内の部位は、移植した細胞が増殖しうる部位であればよ
く、例えば尿液腔、静脈、腹腔、皮下など自由に選ばれ
る。
また、直接動物体内にヒト由来の細胞を移植することな
く、動物細胞の通過を阻止し得る多孔性のｒ過膜、例え
ば孔径的１０−７〜１０−３ｍを有するメンブランフィ
ルタ−１限外沢過膜またはフォローファイバーなどを設
けた公知の各種形状、大きさの拡散チャンバーを動物体
内、例えば腹腔内に埋設して、動物体からの栄養物を含
む体液の供給を受けつつ、そのチャンバー内で前述の培
養株化されたヒト由来の細胞を何れも増殖させることが
できる。
く、動物細胞の通過を阻止し得る多孔性のｒ過膜、例え
ば孔径的１０−７〜１０−３ｍを有するメンブランフィ
ルタ−１限外沢過膜またはフォローファイバーなどを設
けた公知の各種形状、大きさの拡散チャンバーを動物体
内、例えば腹腔内に埋設して、動物体からの栄養物を含
む体液の供給を受けつつ、そのチャンバー内で前述の培
養株化されたヒト由来の細胞を何れも増殖させることが
できる。
また必要に応じて、このチャンバー内の栄養物を含む溶
液を動物体内の体液と接続し、潅流させるようにしたチ
ャンバーを、例えば動物体表に取付け、チャンバー内の
ヒト由来の細胞の増殖状態を透視できるようにすること
も、また、このチャンバ一部分のみを着脱交換できるよ
うにして動物を屠殺せずに寿命一杯細胞を増殖させて、
動物個体当りの細胞生産量を更に高めることもできる。
液を動物体内の体液と接続し、潅流させるようにしたチ
ャンバーを、例えば動物体表に取付け、チャンバー内の
ヒト由来の細胞の増殖状態を透視できるようにすること
も、また、このチャンバ一部分のみを着脱交換できるよ
うにして動物を屠殺せずに寿命一杯細胞を増殖させて、
動物個体当りの細胞生産量を更に高めることもできる。
これらの拡散チャンバーを利用する方法は、ヒト由来の
細胞が動物細胞と直接接触しないので、ヒト由来の細胞
のみが容易に採取できるだけでなく、好ましくない免疫
反応を起す心配も少ないので、免疫反応を抑制する前処
置の必要もなく、各種温血動物を自由に利用できる特徴
を有している。
細胞が動物細胞と直接接触しないので、ヒト由来の細胞
のみが容易に採取できるだけでなく、好ましくない免疫
反応を起す心配も少ないので、免疫反応を抑制する前処
置の必要もなく、各種温血動物を自由に利用できる特徴
を有している。
移植した動物の維持管理は、その動物ρ通常の飼育管理
を続ければよく、移植後といえども特別の取扱いは何ら
必要としないので好都合である。
を続ければよく、移植後といえども特別の取扱いは何ら
必要としないので好都合である。
ヒト由来の細胞を増殖させるだめの期間は通常１〜１０
週の期間で目的を達成することができる。
週の期間で目的を達成することができる。
このようにして得られるヒト由来の細胞数は動物個体当
り約１０’〜１０１２個、まだはそれ以上に達すること
も見出した。
り約１０’〜１０１２個、まだはそれ以上に達すること
も見出した。
換言すれば、本発明で使用するリンホトキシンの製造方
法により増殖させたヒト由来細胞数は、動物個体当シ郡
部した細胞数の約１０２〜１０７倍、またはそれ以上に
も達し、生体外の栄養培地に接種して増殖させる場合の
約１０１〜１０６倍、またはそれ以上にも達して、リン
ホトキシンの製造のために極めて好都合である。
法により増殖させたヒト由来細胞数は、動物個体当シ郡
部した細胞数の約１０２〜１０７倍、またはそれ以上に
も達し、生体外の栄養培地に接種して増殖させる場合の
約１０１〜１０６倍、またはそれ以上にも達して、リン
ホトキシンの製造のために極めて好都合である。
このようにして増殖させたヒト由来の生細胞から、リン
ホトキシンを誘導生成させる方法は自由である。それが
増殖した動物体内のままでリンホトキシン誘導剤を作用
させることもできる。例えば、腹腔内の腹水に浮遊状で
増殖したヒト由来の細胞に、または皮下に生じた腫瘍細
胞に、リンホトキシン誘導剤を直接作用させてリンホト
キシンを誘導生成させ、次いでその腹水または腫瘍から
リンホトキシンを精製分取すればよい。
ホトキシンを誘導生成させる方法は自由である。それが
増殖した動物体内のままでリンホトキシン誘導剤を作用
させることもできる。例えば、腹腔内の腹水に浮遊状で
増殖したヒト由来の細胞に、または皮下に生じた腫瘍細
胞に、リンホトキシン誘導剤を直接作用させてリンホト
キシンを誘導生成させ、次いでその腹水または腫瘍から
リンホトキシンを精製分取すればよい。
また、ヒト由来の増殖細胞を動物体内から取り出し、生
体外でリンホトキシン誘導剤を作用させてリンホトキシ
ンを誘導生成させることもできる。
体外でリンホトキシン誘導剤を作用させてリンホトキシ
ンを誘導生成させることもできる。
例えば、腹水中で増殖したヒト由来の細胞を分取し、ま
たは皮下に生じたヒト由来の細胞を含む腫瘍を摘出、分
散し、得られる細胞を約２０〜４０℃に保った栄養培地
に細胞濃度が約１０５〜１０８／−になるように浮遊さ
せ、これにリンホトキシン誘導剤を作用させることによ
ってリンホトキシンを誘導生成させ、これを精製分取す
ればよい。
たは皮下に生じたヒト由来の細胞を含む腫瘍を摘出、分
散し、得られる細胞を約２０〜４０℃に保った栄養培地
に細胞濃度が約１０５〜１０８／−になるように浮遊さ
せ、これにリンホトキシン誘導剤を作用させることによ
ってリンホトキシンを誘導生成させ、これを精製分取す
ればよい。
更に、ヒト由来の細胞を拡散チャンバー内で増殖させた
場合は、増殖させた細胞をチャンバー内のままで、また
はチャンバーから取り出して、すンホトキシン誘導剤を
作用させ、リンホトキシンを誘導生成させることもでき
る。
場合は、増殖させた細胞をチャンバー内のままで、また
はチャンバーから取り出して、すンホトキシン誘導剤を
作用させ、リンホトキシンを誘導生成させることもでき
る。
また、例えば増殖させたヒト由来の細胞に先づ動物体内
のままでリンホトキシンを誘導生成させた後、次いで同
一動物固体の特定の部位または全体から採取したヒト由
来の細胞に動物体外でリンホトキシンを誘導生成させる
方法、また一度リンホトキシンの誘導生成に使用した細
胞を更に２度以上リンホトキシンの誘導生成に使用する
方法、または動物体内に、埋設、若しくは接続するチャ
ンバーを交換して得られる細胞数を増加させる方法など
によって、使用する動物個体当りのリンホトキシン生成
量を更に高めることも自由である。
のままでリンホトキシンを誘導生成させた後、次いで同
一動物固体の特定の部位または全体から採取したヒト由
来の細胞に動物体外でリンホトキシンを誘導生成させる
方法、また一度リンホトキシンの誘導生成に使用した細
胞を更に２度以上リンホトキシンの誘導生成に使用する
方法、または動物体内に、埋設、若しくは接続するチャ
ンバーを交換して得られる細胞数を増加させる方法など
によって、使用する動物個体当りのリンホトキシン生成
量を更に高めることも自由である。
リンホトキシン誘導剤としては、通常、例えばフィトヘ
マグルチニン、コンカナバリンＡ１ポークウイードミト
ーゲン、リボポリサツカリド、エンドトキシン、多糖類
、細菌などのミトーゲンおよびウィルス、核酸などの一
種若しくは二種以上が用いられる。
マグルチニン、コンカナバリンＡ１ポークウイードミト
ーゲン、リボポリサツカリド、エンドトキシン、多糖類
、細菌などのミトーゲンおよびウィルス、核酸などの一
種若しくは二種以上が用いられる。
また、感作化された細胞にとっては抗原もリンホトキシ
ン誘導剤である。
ン誘導剤である。
このようにして誘導生成されたリンホトキシンは、公知
の精製分離法、例えば、塩析、透析、ｆ過、遠心分離、
濃縮、凍結乾燥などを行うことによって容易に精製分離
し、採取することができる。
の精製分離法、例えば、塩析、透析、ｆ過、遠心分離、
濃縮、凍結乾燥などを行うことによって容易に精製分離
し、採取することができる。
更に高度の精製を必要とする場合には、例えばイオン交
換体への吸着−溶出、ゲルｒ過および等電点分画、電気
泳動などの公知の方法を組合せれば、最高純度のリンホ
トキシンを採取することも可能タカ、フィトヘマグルチ
ニン−セファロースを用いたアフイニテイクロマトグラ
フイーにより、高純度のリンホトキシンを極めて簡便か
つ迅速に製造できるので、非常に好都合である。この場
合、フィトヘマグルチニンはフィトヘマグルチニン−Ｐ
１フィトヘマグルチニン−Ｍ１フィトヘマグルチニン−
Ｅなどどんなフィトヘマグルチニンを用いても良い。
換体への吸着−溶出、ゲルｒ過および等電点分画、電気
泳動などの公知の方法を組合せれば、最高純度のリンホ
トキシンを採取することも可能タカ、フィトヘマグルチ
ニン−セファロースを用いたアフイニテイクロマトグラ
フイーにより、高純度のリンホトキシンを極めて簡便か
つ迅速に製造できるので、非常に好都合である。この場
合、フィトヘマグルチニンはフィトヘマグルチニン−Ｐ
１フィトヘマグルチニン−Ｍ１フィトヘマグルチニン−
Ｅなどどんなフィトヘマグルチニンを用いても良い。
本発明のリンホトキシンは、リンホトキシン感受性疾患
の予防剤、治療剤として用いることができる。リンホト
キシン感受性疾患とは、リンホトキシンによって予防さ
れ、若しくは治療される疾患であり、例えば乳癌、肺癌
、肝癌、膀胱癌、子宮癌、大腸癌、胃癌、白血病、リン
パ腫、皮膚癌などの悪性腫瘍である。さらには、悪性緑
瘍に適用するにあたっては、例えば患者の腫瘍の一部を
取シ、本発明のリンホトキシンと生体外で処理すること
によって腫瘍の免疫原性を高めた後、腫瘍患者の体内に
戻すことによシ、この悪性腫瘍の治療を行うこともでき
る。
の予防剤、治療剤として用いることができる。リンホト
キシン感受性疾患とは、リンホトキシンによって予防さ
れ、若しくは治療される疾患であり、例えば乳癌、肺癌
、肝癌、膀胱癌、子宮癌、大腸癌、胃癌、白血病、リン
パ腫、皮膚癌などの悪性腫瘍である。さらには、悪性緑
瘍に適用するにあたっては、例えば患者の腫瘍の一部を
取シ、本発明のリンホトキシンと生体外で処理すること
によって腫瘍の免疫原性を高めた後、腫瘍患者の体内に
戻すことによシ、この悪性腫瘍の治療を行うこともでき
る。
リンホトキシンは１．その分子量から、７〜９万、ａ５
〜５万、１〜２万の３種、すなわち、α、βおよびｒ−
リンホトキシンが存在することが記載されているＣ Ｃ
ｏｈｅｎら編ｒ １３ｉｏ１ｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｉ
、ｙｍｐｈｏｋｉｎｅｓ ＪＡｃａｄｅｍｉｃ ｐｒｅ
ｓｓ （１９７９年）〕。リンホトキシンの活性は、Ｂ
ｌｏｏｍ、 Ｂ、Ｒ，＆ Ｇｌａｄｅ、 Ｐ、Ｒ，共編
ｒ ｌｎ ｖｉｔｒ。
〜５万、１〜２万の３種、すなわち、α、βおよびｒ−
リンホトキシンが存在することが記載されているＣ Ｃ
ｏｈｅｎら編ｒ １３ｉｏ１ｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｉ
、ｙｍｐｈｏｋｉｎｅｓ ＪＡｃａｄｅｍｉｃ ｐｒｅ
ｓｓ （１９７９年）〕。リンホトキシンの活性は、Ｂ
ｌｏｏｍ、 Ｂ、Ｒ，＆ Ｇｌａｄｅ、 Ｐ、Ｒ，共編
ｒ ｌｎ ｖｉｔｒ。
ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ ｃｅｌｌ −ｍｅｄｉａｔｅｄ
ｉｍｙｎｕｎｉｔｙ Ｊ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅ
ｓｓ（１９７１年）に報告されているマウスＬ細胞を使
用して、一定時間培養後の生残細胞数を測定する公知の
方法を用いた。
ｉｍｙｎｕｎｉｔｙ Ｊ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅ
ｓｓ（１９７１年）に報告されているマウスＬ細胞を使
用して、一定時間培養後の生残細胞数を測定する公知の
方法を用いた。
以下、実験例で有効性、用法、用量を説明する。
実験例Ｌ
ＢＡＬＢ／Ｃ由来ヌードマウスに人乳癌組織片を背部皮
下に移植する。腫瘍体積が約２００ ｗｎ ３の時期か
ら、後に述べる実施例９で得られたα−１β−１ｒ−リ
ンホトキシン混合品（以下、単にリンホトキシンと称す
る。）を４及び４０単位／ Ｋｑ、１日２回に分けて静
注し、１５日ローマウスを殺し、腫瘍重量を測定した。
下に移植する。腫瘍体積が約２００ ｗｎ ３の時期か
ら、後に述べる実施例９で得られたα−１β−１ｒ−リ
ンホトキシン混合品（以下、単にリンホトキシンと称す
る。）を４及び４０単位／ Ｋｑ、１日２回に分けて静
注し、１５日ローマウスを殺し、腫瘍重量を測定した。
その結果を第１表に示した。なお、対照はリンホトキシ
ン無含有生理食塩水を静注した。
ン無含有生理食塩水を静注した。
※ 危険率５チ以下で対照の値に比し、推計学的に有意
差あり。
差あり。
実験例２
体Ｍ２５２前後のＢＤＦ 、雄マウスを１群１０匹とし
、２調角に切断したルイス肺癌を背部皮下に移植した。
、２調角に切断したルイス肺癌を背部皮下に移植した。
移植後８白目から、後に述べる実施例９で得られたリン
ホトキシン、及びｒ−リンホトキシンをそれぞれ４及び
４０単位／に９．１日２回に分けて連日静注し、２１日
ローマウスを殺して腫瘍重量を測定した。その結果を第
２表に示した。なお、対照はリンホトキシン無含有生理
食塩水を静注した。
ホトキシン、及びｒ−リンホトキシンをそれぞれ４及び
４０単位／に９．１日２回に分けて連日静注し、２１日
ローマウスを殺して腫瘍重量を測定した。その結果を第
２表に示した。なお、対照はリンホトキシン無含有生理
食塩水を静注した。
第 ２ 表
※ 危険率５％以下で対照の値に比し、推計学的に有意
差あシ。
差あシ。
以下、本発明のリンホトキシンの製造方法に関する実施
例を示す。
例を示す。
実施例り
成長したヌードマウスの皮下に、培養株化されたＢＡＬ
Ｌ −１細胞を移植した後、通常の方法で３週間飼育し
た。皮下に生じた約１０９の腫瘍を摘出し細切した後、
トリプシン含有の生理食塩水に懸濁して細胞を分散分取
した。この細胞をヒト血清５Ｖ／Ｖチ含有するｐＨ？２
のＥａｇｌｅの最少基本培地で洗浄し８７℃に保った同
じ組成の培地に細胞濃度が約５Ｘ１０６／７！になるよ
う希釈し、これにフィトヘマグルチニンを約２００μｆ
／ｍ／の割合で加えて２日間保ちリンホトキシンを誘導
生成せしめた。これを約４℃、約Ｌｏｏｏｒで遠心分離
し、沈殿物を除去し、得られた上清をｐＨ７２、αＯＩ
Ｍ！Ｊン酸塩緩衝液を含有する生理食塩水で２１時間透
析し０、更に精密ｒ過して得たｒ液を濃縮し、凍結乾燥
してリンホトキシン活性を含有する粉末を得た。得られ
たリンホトキシン活性は、ヌードマウス１匹当り約３６
ＱＯＯＯ単位であった。
Ｌ −１細胞を移植した後、通常の方法で３週間飼育し
た。皮下に生じた約１０９の腫瘍を摘出し細切した後、
トリプシン含有の生理食塩水に懸濁して細胞を分散分取
した。この細胞をヒト血清５Ｖ／Ｖチ含有するｐＨ？２
のＥａｇｌｅの最少基本培地で洗浄し８７℃に保った同
じ組成の培地に細胞濃度が約５Ｘ１０６／７！になるよ
う希釈し、これにフィトヘマグルチニンを約２００μｆ
／ｍ／の割合で加えて２日間保ちリンホトキシンを誘導
生成せしめた。これを約４℃、約Ｌｏｏｏｒで遠心分離
し、沈殿物を除去し、得られた上清をｐＨ７２、αＯＩ
Ｍ！Ｊン酸塩緩衝液を含有する生理食塩水で２１時間透
析し０、更に精密ｒ過して得たｒ液を濃縮し、凍結乾燥
してリンホトキシン活性を含有する粉末を得た。得られ
たリンホトキシン活性は、ヌードマウス１匹当り約３６
ＱＯＯＯ単位であった。
実施例２
成長したヌードマウスの腹腔内に培養株化されたヒト由
来のＢＡＬＬ −１細胞とＴＡＬＬ −１細胞とを移植
後、通常の方法で５週間飼育した。この腹腔内へフィト
へマグルチニン１■を注入し、２４時間後に屠殺して腹
水を得た。これを４℃、Ｊ：ＪＬ０００２で遠心分離し
、得られた上清をｐＨ７２、αＯＩＭＩＪン酸塩緩衝液
を含有する生理食塩水で１５時間透析し、更に精密沢過
して得たＦ液を濃縮してリンホトキシン活性を含有する
溶液を得た。得られたリンホトキシン活性は、ヌードマ
ウス１匹当り約１９ＱＯＯＯ単位であった。
来のＢＡＬＬ −１細胞とＴＡＬＬ −１細胞とを移植
後、通常の方法で５週間飼育した。この腹腔内へフィト
へマグルチニン１■を注入し、２４時間後に屠殺して腹
水を得た。これを４℃、Ｊ：ＪＬ０００２で遠心分離し
、得られた上清をｐＨ７２、αＯＩＭＩＪン酸塩緩衝液
を含有する生理食塩水で１５時間透析し、更に精密沢過
して得たＦ液を濃縮してリンホトキシン活性を含有する
溶液を得た。得られたリンホトキシン活性は、ヌードマ
ウス１匹当り約１９ＱＯＯＯ単位であった。
実施例ａ
新生児のハムスターにウサギから公知の方法で調製した
抗血清を予め注射し、ハムスターの免疫能を弱めた後、
その皮下に培養株化されたヒト由来のＪＢＬ細胞を移植
し、その後通常の方法で４週間飼育した。
抗血清を予め注射し、ハムスターの免疫能を弱めた後、
その皮下に培養株化されたヒト由来のＪＢＬ細胞を移植
し、その後通常の方法で４週間飼育した。
皮下に生じた約８０９の腫瘍を摘出した後、実施例１と
同様の方法で細胞を分散させた。
同様の方法で細胞を分散させた。
この細胞を仔ウシ血清１０Ｖ／Ｖ％を含むｐＨ７４のＲ
ＰＭＩ １６４０培地で洗浄した後、３７℃に保った
同じ組成の培地に細胞濃度が約２Ｘ１０７／ｍ７！にな
るよう希釈した。これにコンカナバリンＡ ５００ｎｆ
／ｄおよびセンダイウィルスＬ０００赤血球凝集価／−
の割合で加え、８日間保ちリンホトキシンを誘導生成さ
せた。
ＰＭＩ １６４０培地で洗浄した後、３７℃に保った
同じ組成の培地に細胞濃度が約２Ｘ１０７／ｍ７！にな
るよう希釈した。これにコンカナバリンＡ ５００ｎｆ
／ｄおよびセンダイウィルスＬ０００赤血球凝集価／−
の割合で加え、８日間保ちリンホトキシンを誘導生成さ
せた。
以後、実施例１と同様に精製し濃縮してリンホトキシン
活性を有する溶液を得た。得られたリンホトキシン活性
は、ハムスタニ１匹当、！ｌ） 約１．９６ＱＯＯＯ単
位であった。
活性を有する溶液を得た。得られたリンホトキシン活性
は、ハムスタニ１匹当、！ｌ） 約１．９６ＱＯＯＯ単
位であった。
実施倒毛
成長した普通マウスに約４００レムのエックス線を予め
照射してマウスの免疫能を弱めた後、そのマウスの皮下
に培養株化されたヒト由来のＴＡＬＬ−１細胞を移植し
、その後通常の方法で３週間飼育した。
照射してマウスの免疫能を弱めた後、そのマウスの皮下
に培養株化されたヒト由来のＴＡＬＬ−１細胞を移植し
、その後通常の方法で３週間飼育した。
皮下に生じた約１０ｇの腫瘍を摘出した後、実施例１と
同様にして細胞を分散させた。
同様にして細胞を分散させた。
この細胞を実施例２と同様に処理してリンホトキシンを
誘導生成させ、以後、実施例２と同様に精製し濃縮して
リンホトキシン活性を有する濃縮液を得た。得られたリ
ンホトキシン活性は、普通マウス１匹当り約３１０，０
００単位であった。
誘導生成させ、以後、実施例２と同様に精製し濃縮して
リンホトキシン活性を有する濃縮液を得た。得られたリ
ンホトキシン活性は、普通マウス１匹当り約３１０，０
００単位であった。
実施例＆
新生児のラットの皮下に培養株化されたヒト由来のＮａ
ｍａｌｖａ細胞を移植した後、通常の方法で４週間飼育
した。
ｍａｌｖａ細胞を移植した後、通常の方法で４週間飼育
した。
皮下に生じた約５０２の腫瘍を摘出した後、実施例１と
陛様にして細胞を分散させた。
陛様にして細胞を分散させた。
次いで、フィトヘマグルチニンの代シに丸山ワクチンを
１−ｋｇ／ｍ１！の割合で加えたことを除いては実施例
１と同様に処理してリンホトキシンを誘導生成させ、更
に実施例１と同様に精製し、凍結乾燥してリンホトキシ
ン活性を有する粉末を得た。得られたリンホトキシン活
性は、ラット１匹当り約４１０．０００単位であった。
１−ｋｇ／ｍ１！の割合で加えたことを除いては実施例
１と同様に処理してリンホトキシンを誘導生成させ、更
に実施例１と同様に精製し、凍結乾燥してリンホトキシ
ン活性を有する粉末を得た。得られたリンホトキシン活
性は、ラット１匹当り約４１０．０００単位であった。
実施例６
培養株化されたＭＯＬＴ −８細胞を、先づハムスター
の皮下に実施例８の方法で移植し、８週間増殖させて得
た細胞を、生後１０日口のヌードマウスの腹腔内に再移
植した。このヌードマウス１匹常の方法で５週間飼育し
た後、腹水を採取し、遠心分離して増殖細胞を得た。こ
の細胞を実施例１の方法で洗浄した後、実施例１と同様
にリンホトキシンを誘導生成させ、次いで実施例２と同
様に精製し濃縮してリンホトキシン活性を有する濃縮液
を得た。得られたリンホトキシン活性は、ヌードマウス
１匹当り約２５ＱＯＯＯ単位であった。
の皮下に実施例８の方法で移植し、８週間増殖させて得
た細胞を、生後１０日口のヌードマウスの腹腔内に再移
植した。このヌードマウス１匹常の方法で５週間飼育し
た後、腹水を採取し、遠心分離して増殖細胞を得た。こ
の細胞を実施例１の方法で洗浄した後、実施例１と同様
にリンホトキシンを誘導生成させ、次いで実施例２と同
様に精製し濃縮してリンホトキシン活性を有する濃縮液
を得た。得られたリンホトキシン活性は、ヌードマウス
１匹当り約２５ＱＯＯＯ単位であった。
実施例７
孔径約０５ミクロンのメンブランフィルタ−を設けた内
容量的１０−のプラスチック製円筒型チャンバー内に、
培養株化されたヒト由来のＪＢＬ細胞を生理食塩水で浮
遊させ、これを成長したラットの腹腔内に埋設し犬。
容量的１０−のプラスチック製円筒型チャンバー内に、
培養株化されたヒト由来のＪＢＬ細胞を生理食塩水で浮
遊させ、これを成長したラットの腹腔内に埋設し犬。
このラットを通常の方法で４週間飼育した後、このチャ
ンバーを取り出した。
ンバーを取り出した。
これによシ得られたヒト由来の細胞濃度は、約５Ｘ１０
９／ｍ／であって、生体外の栄養培地に炭酸ガスインキ
ュベーター中で増殖させる場合の約１０３倍以上にも達
することがわかった。
９／ｍ／であって、生体外の栄養培地に炭酸ガスインキ
ュベーター中で増殖させる場合の約１０３倍以上にも達
することがわかった。
この細胞を実施例１と同様に処理してリンホトキシン活
性を誘導生成させ、精製濃縮し、凍結乾燥してリンホト
キシン活性を有する粉末を得た。
性を誘導生成させ、精製濃縮し、凍結乾燥してリンホト
キシン活性を有する粉末を得た。
得られたリンホトキシン活性は、ラット１匹当り約４２
ＱＯＯＯ単位であった。
ＱＯＯＯ単位であった。
実施例＆
３７℃で５日間保ったニワトリの受精卵に、培養株化さ
れたヒト由来のＮＡＬＬ −１細胞を移植した後、３７
℃で１週間保った。この卵を割卵した後、増殖細胞を採
取し、その細胞に実施例４で得たＴＡＬＬ −１細胞を
５０％添加した後、実施例１と同様に処理してリンホト
キシンを誘導生成サセ、次いで実施例２と同様に精製濃
縮してリンホトキシン活性を有する濃縮液を得た。得ら
れたリンホトキシン活性は、受精卵１０個当シ約１８Ｑ
ＯＯｏ単位であった。
れたヒト由来のＮＡＬＬ −１細胞を移植した後、３７
℃で１週間保った。この卵を割卵した後、増殖細胞を採
取し、その細胞に実施例４で得たＴＡＬＬ −１細胞を
５０％添加した後、実施例１と同様に処理してリンホト
キシンを誘導生成サセ、次いで実施例２と同様に精製濃
縮してリンホトキシン活性を有する濃縮液を得た。得ら
れたリンホトキシン活性は、受精卵１０個当シ約１８Ｑ
ＯＯｏ単位であった。
実施例ａ
実施例１の方法で調整したリンホトキシン粉末をＱ、］
３ｏｄｏｃ７）報告（Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ ｏｎ ｐｒ
ｅｐａｒａｔｉｏｎ 。
３ｏｄｏｃ７）報告（Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ ｏｎ ｐｒ
ｅｐａｒａｔｉｏｎ 。
５ｔａｎｄａｉｒｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｌｉｎｉ
ｃａｌ ｕｓｅ ｏｆ １ｎｔｅｒｆｅｒｏｎ１１ ｔ
ｈ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｍｍｕｎｏｂｉｏ
ｌｏｇｉｃａｌ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ。
ｃａｌ ｕｓｅ ｏｆ １ｎｔｅｒｆｅｒｏｎ１１ ｔ
ｈ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｍｍｕｎｏｂｉｏ
ｌｏｇｉｃａｌ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ。
８ ＆ ９ Ｊｕｎｅ １９７７ 、 Ｚａｇｒｅｂ、
Ｙｕｇｏｓｌａｖｉａ）に準じてイオン交換への吸脱着
、ゲル沢過による分子量分画、 ゛濃縮及び精密
沢過などの手段によシインターフェロンを除去し、さら
に硫安塩析によシ濃縮精製を行ない、その後、ｐＨ７４
，αＯＩＭＩＪン酸塩緩衝液中でフィトヘマグルチニン
−セファロースアフィニティークロマトグラフィーを行
ない、吸着画分を（１１Ｍ Ｎ−アセチル−Ｄ−ガラク
トサミン含有上記緩衝液で溶出させ、得られた画分を上
記緩衝液で透析し、濃縮後、凍結乾燥してリンホトキシ
ン活性を含有する粉末を得た。
Ｙｕｇｏｓｌａｖｉａ）に準じてイオン交換への吸脱着
、ゲル沢過による分子量分画、 ゛濃縮及び精密
沢過などの手段によシインターフェロンを除去し、さら
に硫安塩析によシ濃縮精製を行ない、その後、ｐＨ７４
，αＯＩＭＩＪン酸塩緩衝液中でフィトヘマグルチニン
−セファロースアフィニティークロマトグラフィーを行
ない、吸着画分を（１１Ｍ Ｎ−アセチル−Ｄ−ガラク
トサミン含有上記緩衝液で溶出させ、得られた画分を上
記緩衝液で透析し、濃縮後、凍結乾燥してリンホトキシ
ン活性を含有する粉末を得た。
このようにして得られたリンホトキシンは、比活性ａｏ
、ｏｏｏ単位／ｑであった。
、ｏｏｏ単位／ｑであった。
さらに、ゲルｒ過性によシ分子量分画したととろ、α−
リンホトキシン（分子量７〜９万）、β−リンホトキシ
ン（分子量３５〜５万）およびｒ −リンホトキシン（
分子量１〜２万）の８種類が、活性量比的１ ： １
：、２の割合で分取された。
リンホトキシン（分子量７〜９万）、β−リンホトキシ
ン（分子量３５〜５万）およびｒ −リンホトキシン（
分子量１〜２万）の８種類が、活性量比的１ ： １
：、２の割合で分取された。
手 続 補 正 書
昭冒峠年１０月３日
特許庁長官 島 １）春 樹 殿
Ｌ 事件の表示
昭和５６年特許願第１１２９１８号
２、発明の名称
リンホトキシンの製造方法
ａ 補正をする者
事件との関係 特許出願人
岡山県岡山市下石井１丁目２番３号
株式会社 林原生物化学研究所
・代表者 林 原 健
ＤＩＫマンション新橋 ２１９号
明細書の「発明の詳細な説明」の項
（１） 明細書第５頁末行記載のｒＢ−７１０１細胞
などが自由に使用され、」を、法文のように補正します
。
などが自由に使用され、」を、法文のように補正します
。
ｒＢ−７１０１細胞などのほか、マクロファージ、繊維
芽細胞なども自由に使用され、また、これら細胞のリン
ホトキシン産生能を持つ遺伝子を、例えばポリエチレン
グリコール、センダイライ −ルスなどを利用する細
胞融合の手段や、ＤＮＡリガーゼ、制限酵素（ヌクレア
ーゼ）、ＤＮＡポリメラーゼなどの酵素を利用する遺伝
子組み換えの手段などによって、よシ容易に継代培養し
うる培養株化されたリンパ芽様細胞などに導入し、その
増殖速度を高めたシ、細胞当りのリンホトキシン産生能
を高めたりして使用してもよく、」 （２）明細書第１２頁第５行記載の「、よって容易に精
製分離し、」を「よって、同時に誘導生成されたインタ
ーフェロンなどと容易に精製分離し、」に補正します。
芽細胞なども自由に使用され、また、これら細胞のリン
ホトキシン産生能を持つ遺伝子を、例えばポリエチレン
グリコール、センダイライ −ルスなどを利用する細
胞融合の手段や、ＤＮＡリガーゼ、制限酵素（ヌクレア
ーゼ）、ＤＮＡポリメラーゼなどの酵素を利用する遺伝
子組み換えの手段などによって、よシ容易に継代培養し
うる培養株化されたリンパ芽様細胞などに導入し、その
増殖速度を高めたシ、細胞当りのリンホトキシン産生能
を高めたりして使用してもよく、」 （２）明細書第１２頁第５行記載の「、よって容易に精
製分離し、」を「よって、同時に誘導生成されたインタ
ーフェロンなどと容易に精製分離し、」に補正します。
Claims (2)
- （１） リンホトキシン産生能を有する培養株化され
たヒト由来の細胞をヒト以外の温血動物体内に移植する
か、または拡散チャンバー内へ接種して、その温血動物
の体液の供給を受けながら増殖させて得られる細胞に、
生体内または生体外でリンホトキシン、誘導剤を作用さ
せてリンホトキシンを生成させ、生成するリンホトキシ
ンを精製分取することを特徴とするリンホトキシンの製
造方法。 - （２）精製分取の方法が、フィトヘマグルチニン−セフ
ァロースを用いたアフィニティーカラムクロマトグラフ
ィーによることを特徴とする特許請求の範囲第１項記載
のリンホトキシンの製造方法。
Priority Applications (14)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56112913A JPS5816687A (ja) | 1981-07-21 | 1981-07-21 | リンホトキシンの製造方法 |
| FR8212541A FR2513124B1 (fr) | 1981-07-21 | 1982-07-19 | Production et applications du facteur de lyse des cellules-cibles |
| SE8204382A SE8204382L (sv) | 1981-07-21 | 1982-07-19 | Sett att framstella malcellysfaktor och anvendning derav |
| CH4420/82A CH664974A5 (fr) | 1981-07-21 | 1982-07-20 | Production du facteur de lyse des cellules-cibles. |
| IT48855/82A IT1196549B (it) | 1981-07-21 | 1982-07-20 | Procedimento per la produzione del fattore di lisi cellule bersaglio (tclf),prodotto ottenuto a suo impiego in terapia clinica,in particolare come agente citolitico antitumurale |
| AU86200/82A AU560793B2 (en) | 1981-07-21 | 1982-07-20 | Production of target cell lysis factor |
| KR8203215A KR870001433B1 (ko) | 1981-07-21 | 1982-07-20 | 적상적혈구(的狀赤血球) 붕괴인자의 제조 방법 |
| GB08221100A GB2106117B (en) | 1981-07-21 | 1982-07-21 | Process for producing target cell lysis factor |
| US06/400,487 US4495282A (en) | 1981-07-21 | 1982-07-21 | Process for producing target cell lysis factor and uses therewith |
| DE3249946A DE3249946C2 (de) | 1981-07-21 | 1982-07-21 | hTNF-haltiges therapeutisches Mittel gegen maligne Tumoren und dessen Verwendung |
| ES514210A ES8308923A1 (es) | 1981-07-21 | 1982-07-21 | Un procedimiento para la produccion de tclf. |
| AT0283582A AT387980B (de) | 1981-07-21 | 1982-07-21 | Verfahren zur herstellung eines die aufloesung menschlicher zellen bewirkenden faktors |
| DE3227262A DE3227262C3 (de) | 1981-07-21 | 1982-07-21 | Verfahren zur Herstellung von menschlichem Tumor-Nekrose-Faktor und menschlicher Tumor-Nekrose-Faktor |
| SE9000532A SE9000532L (sv) | 1981-07-21 | 1990-02-14 | Farmaceutisk tclf-komposition |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56112913A JPS5816687A (ja) | 1981-07-21 | 1981-07-21 | リンホトキシンの製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5816687A true JPS5816687A (ja) | 1983-01-31 |
| JPH0214039B2 JPH0214039B2 (ja) | 1990-04-05 |
Family
ID=14598617
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP56112913A Granted JPS5816687A (ja) | 1981-07-21 | 1981-07-21 | リンホトキシンの製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5816687A (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5821621A (ja) * | 1981-07-31 | 1983-02-08 | Hayashibara Biochem Lab Inc | ヒトツモア・ネクロシス・ファクタ−を含有する悪性腫瘍治療剤 |
| JPS5888322A (ja) * | 1981-11-21 | 1983-05-26 | Hayashibara Biochem Lab Inc | 標的細胞障害性因子を含有する悪性腫瘍治療剤とその製造方法 |
| JPS5889195A (ja) * | 1981-11-21 | 1983-05-27 | Hayashibara Biochem Lab Inc | 標的細胞障害性因子の製造方法 |
| JPS62223196A (ja) * | 1981-07-31 | 1987-10-01 | Hayashibara Biochem Lab Inc | 精製されたヒト ツモア・ネクロシス・フアクタ− |
| JPS62236495A (ja) * | 1981-07-31 | 1987-10-16 | Hayashibara Biochem Lab Inc | ヒト ツモア・ネクロシス・フアクタ−の製造方法 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5498307A (en) * | 1978-01-22 | 1979-08-03 | Hayashibara Takeshi | Production of interferon |
-
1981
- 1981-07-21 JP JP56112913A patent/JPS5816687A/ja active Granted
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5498307A (en) * | 1978-01-22 | 1979-08-03 | Hayashibara Takeshi | Production of interferon |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5821621A (ja) * | 1981-07-31 | 1983-02-08 | Hayashibara Biochem Lab Inc | ヒトツモア・ネクロシス・ファクタ−を含有する悪性腫瘍治療剤 |
| JPS6245208B2 (ja) * | 1981-07-31 | 1987-09-25 | Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyusho Kk | |
| JPS62223196A (ja) * | 1981-07-31 | 1987-10-01 | Hayashibara Biochem Lab Inc | 精製されたヒト ツモア・ネクロシス・フアクタ− |
| JPS62236495A (ja) * | 1981-07-31 | 1987-10-16 | Hayashibara Biochem Lab Inc | ヒト ツモア・ネクロシス・フアクタ−の製造方法 |
| JPS5888322A (ja) * | 1981-11-21 | 1983-05-26 | Hayashibara Biochem Lab Inc | 標的細胞障害性因子を含有する悪性腫瘍治療剤とその製造方法 |
| JPS5889195A (ja) * | 1981-11-21 | 1983-05-27 | Hayashibara Biochem Lab Inc | 標的細胞障害性因子の製造方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0214039B2 (ja) | 1990-04-05 |
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