JPS62223196A - 精製されたヒト ツモア・ネクロシス・フアクタ− - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、精製されたヒト　ツモア・ネクロシス・ファ
クター（以下、ｈＴＮＦと略称する。）に関する。

ツモアψネクロシス・ファクター（Ｔｕ■ｏｒ　）Ｉｅ
ｃｒ。

ｓｉｓ　Ｆａｃｔｏｒ、以下、ＴＮＦと略称する。）は
、イー・ニー・カーズウエル（Ｅ、Ａ、Ｃａｒｓｖｅｌ
ｌ）等、「プロシーディングズ・オブ・ザ・ナショナル
・アカデミ−・オブφサイエンシーズ・ニー拳ニス・ニ
ー（Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｈａｔｔ
ｏｎａｌ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　５ｃｉｅｎｃｅｓ、
　ｔｌｓＡ）」、第７２巻、第９号、第３６９９−３６
７０頁（１９７５年）およびイー・ビック（Ｅ、Ｐｉｃ
ｋ）綱、「リンホカインズ（Ｌｙｍｐｈｏｋ　１ｎａｓ
）　Ｊ　、第２巻、第２３５−２７２頁、アカデミツク
拳ブレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ）社発行（１
９８１年）などにも記載されているように、例えば、ウ
サギにｂａｃｉｌｌｉ　Ｃａｌｍｅｔｔｅ−Ｇｕｅｒｔ
ｎ　（ＢＣＧ）、コリネバクテリウム・パルバム（Ｃｏ
ｒｙｎｅｂａｃｔｅｒ　ｉｕ■ｐａｒｖｕｍ）　、エン
ドトキシンなどのＴＮＦＷ導剤を非経口的に投与するこ
とによって、その血清中に誘導産生ずる蛋白性物質であ
って、１４ｅｔｈ　Ａ肉腫出血壊死能を持つ物質に与え
られた名称であり、特に腫瘍細胞に対して細胞障害機能
を持っていることは公知である。

ＴＮＦの持つこのような機能から、ＴＮＦはその発見の
当初より悪性ｍ瘍治療剤として期待されて来た。

ＴＮＦは、ウサギ、ラットなどの動物血清から調製され
、種特異性はないとされているけれども、ヒトの治療に
供するには、本質的にヒトの生細胞由来のｈＴＮＦであ
ることが、治療上に生じる抗原性などの副作用面におい
て極めて安全であり、優れている。

しかしながら、従来、ｈＴＮＦの製造方法は知られてお
らず、その作用効果についても不明である。

まして、ｈＴＮＦかヒト悪性腫瘍の治療に有効であるか
どうかについては全く知られていない。

本発明者は、工業的規模で容易に実施し得るｈＴＮＦの
製造方法を検討し、そのｈＴＮＦが悪性腫瘍の治療剤と
して有用であるか否かを鋭意検討して来た。

その結果、ヒト由来の細胞が高活性のｈＴＮＦを産生じ
得ること、また、精製、採取したｈＴＮＦがヒトの各種
悪性腫瘍に対して比較的少量で細胞障害性活性を示し、
更に、ｈＴＮＦの安全性の高いことなどを見いだし、本
発明を完成した。

本発明のｈＴＮＦは、ｈＴＮＦ産生能を有する細胞を増
殖させて産生せしめ、これを精製し採取したものであれ
ばよく、例えば、ｈＴＮＦ産生能を有するヒト由来の細
胞、または、ヒト由来の細胞のｈＴＮＦ産生能を有する
遺伝子を細胞融合または遺伝子組み換えなどの手段によ
り導入した細胞などを増殖させ、これら細胞から産生さ
れるｈＴＮＦを精製し、採取して製造きれる。

ｈＴＮＦの望ましい製造例を述べれば、ヒト由来の細胞
を、ヒト以外の温血動物体内に移植し、または、拡散チ
ャンバー内に接種してその動物体から栄養物を含有する
体液の供給を受けつつ増殖させ、得られる細胞に生体内
（ｉｎ　ｖｉｖｏ）または生体外（ｉｎ　ｖｉｔｒｏ）
でＴＮＦ誘導剤を作用きせることによって、ｈＴＮＦが
高活性で誘導産生きれ、これを精製し採取することによ
ってｈＴ？ｌＦが多量且つ容易に製造し得る。

このように、ヒト由来の細胞を、ヒト以外の温血動物を
利用し、そめ体液の供給を受けつつ増殖きせる場合には
、生細胞を生体外で増殖きせる場合とは違って、高価な
血清などを含む栄養培地が不要または大幅に節約できる
ばかりでなく、細胞増殖中の維持管理も極めて容易であ
り、その上産生されるｈＴＮＦ活性が高い特徴を有して
いる。即ち、ヒト由来の細胞をヒト以外の温血動物体内
に移植し、あるいは、その動物の体液の供給を受けるこ
とのできる拡散チャンバー内に収容し、このチャンバー
を動物体内に埋設し通常の飼育をすれば、温血動物体か
ら供給される栄養物を含有する体液を利用してその細胞
が容易に増殖し得るのである。更に生体外で増殖きせる
場合と比較して、その細胞の増殖が安定していること、
その増殖速度が大きいこと、得られる細胞量が多いこと
、更には細胞当りのｈＴＮＦ量が著増することも大きな
特徴である。

ヒト由来の細胞としては、容易に増殖し得てしかもｈＴ
ＮＦ産生能を有するものであればよい。例えば、「ジャ
ーナル・オブ・クリニカル・マイクロバイオロジー（Ｊ
ｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃ１１ｎｉｃａｌ　Ｍｉｃｒｏｂ
ｉｏｌｏｇｙ）」、第１巻、第１１６〜１１７頁（１９
７５年）に記載されているナマルバ（Ｎａｍａ　１ｖａ
）細胞、アイ・ミヨシ（１，旧ｙｏｓｈ＋）、「ネーチ
ャー　（Ｎａｔｕｒｅ）　Ｊ　、第２６７巻、第８４３
−８４４頁（１９７７年）に記載されているＢＡＬＬ−
１細胞、ＴＡＬＬ−１細胞、ＨＡＬＬ−１細胞、「ザ・
ジャーナル・オブ・イムノロジー（ＴｈｅＪｏｕｒｎａ
ｌ　ｏｆ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）」、第１１３巻、第
１３３４〜１３４５頁（１９７４年）記載のドア００２
細胞、Ｂ−７１０１細胞などの株化細胞や、また、正常
な単核細胞、顆粒性白血球細胞などを各種ウィルス、薬
剤、放射線などて処理し培養株化させた細胞などが自由
に使用され、また、これら細胞のｈＴＮＦ産生能を持つ
遺伝子を、例えばポリエチレングリコールやセンダイウ
ィルスなどを利用する細胞融合の手段や、ＤＮＡリガー
ゼ、制限酵素（ヌクレアーゼ）　、ＤＮＡポリメラーゼ
などの酵素を利用する遺伝子組み換えの手段などによっ
て、より容易に継代培養し得る培養株イじされたリンパ
芽球様細胞、微生物などに導入し、その増殖速度を高め
たり、細胞当りのｈＴＮＦ産生能を高めたりして使用し
てもよく、杢明細書に記載する細胞のみに限定されるも
のではない。これらの細胞は、後に述べるｈＴＮＦを産
生させるまでの工程で、単独または二種以上を混合して
自由に使用される。必要ならば、これに、例えば、ヒト
の新鮮面から調製される白血球を併用することもできる
。

細胞増殖に使用されるヒト以外の温血動物としては、ヒ
ト由来の細胞が増殖し得るものであればよく、例えば、
ニワトリ、ハトなどの鳥類、イヌ、ネコ、サル、ウサギ
、ヤギ、ブタ、ウマ、ウシ、モルモット、ラット、ハム
スター、普通マウス、ヌードマウスなどの哺乳類が使用
できる。

これらの動物にヒト由来の細胞を移植すると好ましくな
い免疫反応を起こすおそれがあるので、その反応をでき
るだけ抑えるため、使用する動物はできるだけ幼若な状
態、即ち、卵、胚、胎児、または新生期、幼少期のもの
の方が好ましい。

また、これら動物に例えば２００乃至６００レム程度の
エックス線若しくはガンマ線を照射するか、または抗血
清若しくは免疫抑制剤などを注射するなどの前処置をほ
どこして、免疫反応を弱めて移植してもよい。

使用する動物がヌードマウス、ヌードラットなどの免疫
不全動物の場合には、成長したものであっても免疫反応
が弱いので、これらの前処置を必要とすることなく、培
養株化されたヒト由来の細胞が移植でき、急速に増殖す
ることができるので特に好都合である。

また、培養株化されたヒト由来の細胞を例えば先ずハム
スターに移植し増殖させた後、この細胞を更にヌードマ
ウスに移植するなどのように、ヒト以外の温血動物間で
移植してヒト由来の細胞の増殖をより安定化したり、更
にそれらから産生きれるｈＴＮＦ量を増加きせることも
自由である。

この場合、同種間、同層間は勿論のこと、同綱間、同門
間移植であってもよい。ヒト由来の細胞を移植する動物
体内の部位は、移植した細胞が増殖し得る部位であれば
よく、例えば尿液腔、静脈、腹腔、皮下などが自由に選
ばれる。

また、直接動、物体内にヒト由来の細胞を移植すること
なく、動物細胞の通過を阻止し得る多孔性の濾過膜、例
えば孔径的１０−７乃至１０−３ｍを有するメンブラン
フィルタ−１限外濾過膜またはホローファイバーなどを
設けた公知の各種形状、大きざの拡散チャンバーを動物
体内、例えば腹腔内に埋設して、動物体からの栄養物を
含む体液の供給を受けつつ、そのチャンバー内で前述の
培養株化されたヒト由来の細胞を何れも増殖きせること
ができる。

また、必要に応じて、このチャンバー内の栄養物を含む
溶液を動物体内の体液と接続し、潅流させるようにした
チャンバーを、例えば動物体表に収り付け、チャンバー
内のヒト由来の細胞の増殖状態を透視できるようにする
ことも、また、このチャンバ一部分のみを着脱交換でき
るようにして動物を屠殺せずに寿命一杯細胞を増殖させ
て、動物個体当りの細胞生産量を更に高めることもでき
る。

これらの拡散チャンバーを利用する方法は、ヒト由来の
細胞が動物細胞と直接接触しないので、ヒト由来の細胞
のみが容易に採取できるだけでなく、好ましくない免疫
反応を起こす心配も少ないので、免疫反応を抑制する前
処置の心配もなく、各種温血動物を自由に利用できる特
徴を有している。

移植した動物の維持管理は、その動物の通常の飼育管理
を続ければよ（、移植後といえども特別の取扱いは何等
必要としないので好都合である。

ヒト由来の細胞を増殖させるための期間は通常１乃至１
０週の期間で目的を達成することができる。このように
して得られるヒト由来の細胞数は動物個体当り約１０７
乃至１０１２個、またはそれ以上に達することを見出し
た。

換言すれば、このようにして増殖させたヒト由来細胞数
は、動物個体当り移植した細胞数の約１０２乃至１０７
倍、またはそれ以上にも達し、生体外の栄養培地に接種
して増殖させる場合の約１０乃至１０６倍、またはそれ
以上にも達して、ｈＴｌｌＦの製造のために極めて好都
合である。

このようにして増殖させたヒト由来の生細胞からｈＴＮ
Ｆを産生させる方法は自由である。それが増殖した動物
体内のままでＴＮＦ誘導剤を作用きせるごともできる。

例えば、腹腔内の腹水に浮遊状で増殖したヒト由来の細
胞に−または皮下に生じた！１瘍細胞に、ＴＮＦ誘導剤
を直接作用させてｈＴＮＦを誘導産生させ、次いでその
血清、腹水または腫瘍からｈＴＮＦを精製し採取すれば
よい。

また、ヒト由来の増殖細胞を動物個体から取り出し、生
体外でＴＮＦ誘導剤を作用させてｈＴＮＦを誘導産生き
せることもできる。例えば、腹水中で増殖したヒト由来
の細胞を採取し、または皮下に生じたヒト由来の細胞を
含む腫瘍摘出、採取し、得られる細胞を約２０乃至４０
℃に保った栄養培地に細胞濃度が約１０５乃至１０８／
＠ｌになるように浮遊させ、これにＴＮＦ誘導剤を作用
させることによってｈＴＮＦを誘導産生させ、これを精
製し採取すればよいＯ 更に、ヒト由来の細胞を拡散チャンバー内で増殖きせた
場合には、増殖させた細胞をチャンバー内のままで、ま
たはチャンバーから取り出して、ＴＮＦ誘導剤を作用さ
せ、ｈＴＨＦを誘導産生させることもできる。

また、例えば増殖させたヒト由来の細胞に先ず動物体内
のままでｈＴＮＦを産生させた後、次いで同一動物個体
の特定の部位または全体から採取したヒト由来の細胞に
動物体外でｈＴＮＦを誘導産生きせる方法、または一度
ｈＴＮＦの産生に使用した細胞を更に二度以上ｈＴＮＦ
の産生に使用する方法、または動物体内に埋設若しくは
接続するチャンバーを交換して得られる細胞数を増加き
せる方法などによって、使用する動物個体当りのｈＴＮ
Ｆ生成量を更に高めることも自由である。

ＴＮＦ誘導剤としては、通常、例えばＢＣＧ　、コリネ
バクテリウム・バルバム、リボポリサツカリド、エンド
トキシン、多糖類などの一種若しくは二種以上が用いら
れる。一般的には、先ず、ヒト由来の細胞を移植したヒ
ト以外の温血動物に、例えば、ＢＣＧ、コリネバクテリ
ウム・パルバムなどの一種または二種以上を非経口的に
投与し一定期間経過した後、ヒト由来の細胞を採取し、
例えばりボポリサッカリド、エンドトキシン、多糖類な
どの一種または二種以上を生体外で作用させてｈＴＮＦ
を誘導産生させればよい。

このようにして、産生きれたｈＴＮＦは、公知の蛋白性
物質の精製分離法、例えば、塩析、透析、濾過、遠心分
離、濃縮、凍結乾燥などを行なうことによって容易に精
製分離し、採取することができる。更に高度の精製を必
要とする場合には例えばイオン交換体への吸着・溶出、
ゲル濾過および等電点分画、電気泳動、高速液体クロマ
トグラフィー、アフィニティークロマトグラフィーなど
の公知の方法を組み合わせれば、最高純度のｈＴＮＦを
採取することも可能である。

ｈＴＮＦの活性は、イー・ビック（Ｅ、Ｐｉｃｋ）　Ｊ
！　、　　’リンホカインズ（Ｌｙ＋＊ｐｈｏｋｉｎｅ
ｓ）　Ｊ　、第２巻、第２３５−２７２頁、アカデミツ
ク・プレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ）社発行（
１９８１年）に報告されているＬ−９２９細胞を使用し
て、一定時間培養後の生残細胞数を測定する公知の方法
を用いた。

以下、本発明の実施例を述べる。

実施例 生後間もないハムスターの皮下に、５Ｖ−４０ウイルス
で処理し培養株化されたヒト由来の単核細胞を移植し、
通常の方法で１週間飼育した後、ＢＣＧの生細胞を腹腔
内に１０７個注入し、更に２週間飼育した。皮下に生じ
た約１５ｇの腫瘍を摘出し細切した後、トリプシン含有
の生理食塩水に懸濁して細胞を分散分取した。この細胞
をヒト血清５ｖ／Ｊ含有するｐＨ７，２のイーグル（Ｅ
ａｇｌｅ）の最少基本培地で洗浄し３７℃に保った同じ
組成の培地に細胞濃度が約５ｘｌＯ６／ａｌになるよう
に希釈し、これにイー・コリ（Ｅ、ｃｏｌｉ）由来のエ
ンドトキシンを約１０μｇ／ｍｌの割合で加えて１６時
間保ってｈＴＮＦを誘導産生せしめた。これを４℃、約
１，０００Ｘｇで遠心分離し、沈殿物を除去し、得られ
た上清をｐＨ７，２，０，０１Ｍリン酸塩緩衝液を含有
する生理食塩水で２１時間透析し、更に精密濾過して得
た濾液を濃縮し、凍結乾燥してｈＴＮＦ活性を有する粉
末を得た。得られた粉末を１９７７年６月８日、９日に
ザクレブで開催されたインターフェロンの製造、標準化
および臨床用途に関する第１１回国際免疫生物学シンポ
ジウム（Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ　。

ｎ　Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ、　５ｔａｎｄａｒｄｉｚ
ａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｃ１１ｎｉｃａｌ　Ｕｓｅ　ｏｆ
　Ｉｎｔｅｒ、ｆｅｒｏｎ、　１１ｔｈ　Ｉｎｔｅｒｎ
ａｔｉｏｎａｌ　Ｉａｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　
　Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ、　　８　　＆　　９　　Ｊｕｎ
ｅ　　１９７７゜Ｚａｇｒｅｂ、　Ｙｕｇｏｓｌａｖｉ
ａ）でジー・ボド（Ｇ、Ｂｏｄｏ）が報告した方法に準
じてイオン交換体への吸脱着、ゲル濾過による分子量分
画、濃縮および精密濾過などの手段によりインターフェ
ロンを除去し、更に硫安塩析、Ｃａｎ　Ａ−セファロー
スによるアフィニティークロマトグラフィーにより精製
し、Ｍｅｔｈ　Ａ肉腫に出血性壊死能を有し且つ正常細
胞に何等の悪影響も及ぼざないことを特徴とする高純度
ｈＴＮＦを約１．０００，０００単位得た。

このようにして得られたｈＴＮＦは、用いた誘導剤の混
入もなく比活性約３５０．０００単位／＋ｉｇ蛋白質で
あった。

、以下、本発明の精製されたｈＴＮＦの有効性、毒性、
用法および用量について説明する。

実験例　　Ｉ ＢＡＬＢ／ｃ由来ヌードマウスに人乳癌組織片を背部皮
下に移植する。腫瘍体積が約２００ａ＋１の時期から前
述の製造例で得られたｈＴＮＦを１００または１．００
単位／ｋｇずつ毎日−回静注し、１５日目にマウスを殺
し、腫瘍重量を測定した。その結果を第１表に示した。

なお、対照は、ｈＴＮＦ無含有生理食塩水を静注した。

第　　　１　　　表 ＊危険率５鬼以下で対照の値に比し、推計学的に有意差
あり。

実験例　　２ 体重２５ｇ前後ノＢＤＦ＋ｔａマウスｅ１群１０匹とＬ
、２ｍ履角に切断したルイス肺癌を背部皮下に移植した
。移植後８日目から前述の製造例で得られたｈＴＮＦを
１００または１　、０００単位／ｋｇずつ毎日−回静注
し、２１日目にマウスを殺して腫瘍重量を測定した。

その結果を第２表に示した。なお、対照はｈＴＮ　Ｆ無
含有生理食塩水を静注した。

第　　　１　　　表 寧危険率５ｘ以下で対照の値に比し、推計学的に有意差
あり。

実験例　　３　　急性毒性 生後２０日目のマウスを使用して、前述の製造例で得ら
れたｈＴＮＦの急性毒性試験をしたところ、ｈＴＮＦの
毒性は極めて低く、腹腔内に注射した時のしＤ５０は２
００　、０００単位／ｋｇ以上であることが判明した。

以上の結果からも明らかなように、本発明のｈＴＮＦは
、その有効量からも極めて安全であり、各種悪性腫瘍の
治療に有利に用いることができる。

本発明でいう悪性腫瘍とは、ｈＴＮＦによって予防若し
くは治療される疾患であり、例えば、乳癌、肺癌、肝癌
、膀胱癌、子宮癌、胃癌、大腸癌、白血病、リンパ腫、
皮膚癌、神経芽腫などの悪性腫瘍である。

更には、悪性腫瘍に適用するにあたっては、例えば患者
の腫瘍の一部を取り、本発明のｈＴＮＦと生体外で処理
することによって１１瘍の免疫原性を高めた後、腫瘍患
者の体内に戻すことにより、この悪性腫瘍の治療を行な
うこともできる。　　゛本発明のｈＴＮＦの成人１日当
りの用量は１乃至５０．Ｏｏｏ　、　ｏｏｏ単位であり
、好ましくは局所注射および点眼などの局所適用用量は
１乃至１，０００，０００単位、軟膏などの場合１０乃
至ｓ、ｏｏｏ、ｏｏｏ単位、静注および筋注など全身注
射の場合１００乃至ｉｏ、ｏｏｏ、ｏｏｏ単位、経口投
与の場合１００乃至ｓｏ、ｏｏｏ、ｏｏｏ単位であるが
用法あるいは症状に応じて適宜増減することができる。

必要に応じて、任意、慣用の製薬用担体、基剤あるいは
賦形剤とともに慣用の方法で医薬用製剤に調製すること
ができる。

製剤当りの使用量は、その有効量、毒性、安全性などを
考慮すると、ダラム当り１単位以上、望ましくは１０乃
至１，０００，０００，０００単位が好適である。

本発明のｈＴＮＦを有効成分として含有する悪性腫瘍治
療剤は、その目的に応じてその形状を自由に選択できる
。

経口投与剤としてはカプセル剤、錠剤、散剤などの腸溶
性製剤、直腸内投与剤としては直揚坐剤、注射剤として
は、例えば用量に注射用蒸留水に溶解して使用する凍結
乾燥注射剤、その他点屏若しくは点眼、軟膏剤として用
いることもできる。

以下に製剤の参考例を示すが、製剤はこれのみに限定さ
れるものではない。

参考例　　１　　注　射　剤 生理食塩水２００ｍ１に前述の製造例で調製したｈＴＮ
Ｆをｓｏｏ、ｏｏｏ単位溶解し、メンブランフィルタ−
を用いて無菌的に濾過する。濾液を滅菌したガラス容器
に２重ｌずつ充填して凍結乾燥し、これを密栓して、凍
結乾燥粉末製剤とする。

本品は、乳癌、肺癌、肝癌、白血病などの治療に好適で
ある。

参考例　　２　　軟　膏　剤 前述の製造例で調製したｈＴＮＦを常法に従い少量の流
動パラフィンに研和した後、ワセリンを加え２０　、０
００単位／ｇの軟膏剤とした。

本品は、皮膚癌、乳癌、リンパ腫などの治療に好適であ
る。

参考例　　３　　点　眼　剤 蒸留水８００＋ａｌとβ−フェニルエチルアルコール５
ｍｌト先先述製製造で調製Ｌ　タｈＴＮＦ　ｅ　２０，
０００，０００単位とに等張化するよう食塩を加え蒸留
水で１．０００ｍ１とし点眼剤とした。

本品は、網膜芽細胞腫などの治療に好適である。

参考例　　４　　腸溶性錠剤 前述の製造で調製したｈＴＨＦを常法に従って澱粉とマ
ルトースとを混合使用して打錠するに際し、ｈＴＮＦｅ
製品１錠（１００ｗ＋ｇ）当り２００，０００単位にな
るように含有せしめて錠剤を製造し、これにメチルセル
ロースフタレートをコーティングして腸溶性錠剤とした
。

本品は、大腸癌、結腸癌、肝癌などの治療に好適である
。

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. （１）精製されたヒト　ツモア・ネクロシス・ファクタ
   ー。
2. （２）精製されたヒト　ツモア・ネクロシス・ファクタ
   ーが、ヒト　ツモア・ネクロシス・ファクター産生能を
   有する細胞を増殖させて産生せしめたヒト　ツモア・ネ
   クロシス・ファクターを精製し採取したものであること
   を特徴とする特許請求の範囲第（１）項記載の精製され
   たヒト　ツモア・ネクロシス・ファクター。
3. （３）精製されたヒト　ツモア・ネクロシス・ファクタ
   ーが、ヒト由来の細胞を増殖させて得られる細胞にツモ
   ア・ネクロシス・ファクター誘導剤を作用させて産生せ
   しめたヒト　ツモア・ネクロシス・ファクターを精製し
   採取したものであるものであることを特徴とする特許請
   求の範囲第（１）項または第（２）項記載の精製された
   ヒトツモア・ネクロシス・ファクター。
4. （４）比活性が、少なくとも約３５０，０００単位／ｍ
   ｇ蛋白質であることを特徴とする特許請求の範囲第（１
   ）項、第（２）項または第（３）項記載の精製されたヒ
   ト　ツモア・ネクロシス・ファクター。