JPS58146274A - S−アデノシルメチオニン高含有菌体 - Google Patents
S−アデノシルメチオニン高含有菌体Info
- Publication number
- JPS58146274A JPS58146274A JP2889382A JP2889382A JPS58146274A JP S58146274 A JPS58146274 A JP S58146274A JP 2889382 A JP2889382 A JP 2889382A JP 2889382 A JP2889382 A JP 2889382A JP S58146274 A JPS58146274 A JP S58146274A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- sam
- adenosylmethionine
- microbial cell
- cell
- salts
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はS−アデノフルメチオニンを高濃度で含有する
微生物菌体に関し、さらに詳しくは、アデニン関連物質
やニンヒドリン反応陽性物質の含有量が少なく、簡単な
操作で効率よく高純度のS−アデノシルメチオニンを取
得可能な微生物菌体に関する。
微生物菌体に関し、さらに詳しくは、アデニン関連物質
やニンヒドリン反応陽性物質の含有量が少なく、簡単な
操作で効率よく高純度のS−アデノシルメチオニンを取
得可能な微生物菌体に関する。
S−アデノシルメチオニン(以下、S’AMと略称する
)は、従来から脂血症、過度脂血症、動脈硬化症力とに
対する治療効果のある物質とL7て知られており、近時
その大量生産が期待されている。
)は、従来から脂血症、過度脂血症、動脈硬化症力とに
対する治療効果のある物質とL7て知られており、近時
その大量生産が期待されている。
而j−て、かかるSAMの製造に際しては、もっばら微
生物による発酵法が用いられているが(例えばジャーナ
ル・オプ・バイオロジカル・ケミストリー 229.1
0ろ7頁、1957年発行、性分++r< 52−17
118号など)、これらの方法で一徹生物酌体中に蓄積
されるSAM含有が少なく、し7かもSAMとの分離が
困難なアデニン関連物質べ・ニンヒドリン反応陽性物質
を多量含んでいるため、高純度のSAMを簡単な操作で
単離することが困回1−であった またS’ A Mは
きわめて不安定な物質であるため、菌体内にSAMを含
有したit遠隔地に移送することもしばしば行われるが
、このような場合にSAMの含有量が小さいことは経済
性の点で大きな問題となっていた。
生物による発酵法が用いられているが(例えばジャーナ
ル・オプ・バイオロジカル・ケミストリー 229.1
0ろ7頁、1957年発行、性分++r< 52−17
118号など)、これらの方法で一徹生物酌体中に蓄積
されるSAM含有が少なく、し7かもSAMとの分離が
困難なアデニン関連物質べ・ニンヒドリン反応陽性物質
を多量含んでいるため、高純度のSAMを簡単な操作で
単離することが困回1−であった またS’ A Mは
きわめて不安定な物質であるため、菌体内にSAMを含
有したit遠隔地に移送することもしばしば行われるが
、このような場合にSAMの含有量が小さいことは経済
性の点で大きな問題となっていた。
そこで本発明者らは従来技術のかかる点を改良すべく鋭
意検討を進めた結果、菌体中のSAM含量を一定値以上
にすると、菌体中に存在するSAMと分離困難な不純物
の含有率が顕著に低下し、その結果とL〜て高純度のS
AMを高収率かつ経済的に回収可能になることを見い出
し2本発明を完成するに到った。
意検討を進めた結果、菌体中のSAM含量を一定値以上
にすると、菌体中に存在するSAMと分離困難な不純物
の含有率が顕著に低下し、その結果とL〜て高純度のS
AMを高収率かつ経済的に回収可能になることを見い出
し2本発明を完成するに到った。
かくして本発明によれば、菌体内に乾燥菌体基準で10
重量%以上、好寸]、<ば12重量%以上SAMを含有
する微生物菌体が提供される。
重量%以上、好寸]、<ば12重量%以上SAMを含有
する微生物菌体が提供される。
本発明において用いられる微生物はSAM生産能を有し
、かつメチオニン含有液体培地中で菌体内に乾燥菌体基
準でSAMを10重量%以上蓄積17うるものであれは
いずれでもよいが、なかでもサツカロマイセス属に属す
る酵母が好1しく、とくにサツカロマイセス・セレビシ
ェに属する酵母が賞用される。
、かつメチオニン含有液体培地中で菌体内に乾燥菌体基
準でSAMを10重量%以上蓄積17うるものであれは
いずれでもよいが、なかでもサツカロマイセス属に属す
る酵母が好1しく、とくにサツカロマイセス・セレビシ
ェに属する酵母が賞用される。
その具体的な例として、例えばサツカロマイセス・セレ
ビシェIFO2342、サツカロマイセス・セレビシェ
IP’02343、 サツカロマイセス・セレビシェ
IFO2545、サツカロマイセス・セレビシェ I
FO2346,サツカロマイセス・セレビシェ IFO
2347、協会9号醇母などが例示さね、またこれら菌
株の天然及び人工変異菌であっても前記の性質を具備す
るものであれば同様に使用することができる。。
ビシェIFO2342、サツカロマイセス・セレビシェ
IP’02343、 サツカロマイセス・セレビシェ
IFO2545、サツカロマイセス・セレビシェ I
FO2346,サツカロマイセス・セレビシェ IFO
2347、協会9号醇母などが例示さね、またこれら菌
株の天然及び人工変異菌であっても前記の性質を具備す
るものであれば同様に使用することができる。。
本発明の微生物菌体は、か力辷る薇生物の菌体中にSA
Mを乾燥菌体基準で10重量−以上、好捷しくは12重
量−以上官有するものである。
Mを乾燥菌体基準で10重量−以上、好捷しくは12重
量−以上官有するものである。
(5)
かかる微生物菌体の製造法は格別制限されるものではな
いが、通常メチオニン、炭素源、窒素源、無機塩及び有
機微量栄養源を含有する液体培地中で好気的条件下で培
養することによって行われる。
いが、通常メチオニン、炭素源、窒素源、無機塩及び有
機微量栄養源を含有する液体培地中で好気的条件下で培
養することによって行われる。
メチオニンは通常0.297d1以上の割合で冷加され
る。メチオニンの添加方法は一度に全量を添加する方法
1分割して順次添加する方法のいずれでもよいが、メチ
オニンの添加量が多い場合に前者の方法を採用するとS
AMの菌体内蓄積量が低下する傾向を示すので、このよ
うなときには後者の方法を採用するのが適切である。
る。メチオニンの添加方法は一度に全量を添加する方法
1分割して順次添加する方法のいずれでもよいが、メチ
オニンの添加量が多い場合に前者の方法を採用するとS
AMの菌体内蓄積量が低下する傾向を示すので、このよ
うなときには後者の方法を採用するのが適切である。
炭素源トシては、グルコース、シュクロース。
フラクトースなどの糖類:エタノール、グリセリンなど
のアルコール類;更にはこれらを含有する澱粉加水分解
液、糖蜜、大豆ホエー、果汁廃液。
のアルコール類;更にはこれらを含有する澱粉加水分解
液、糖蜜、大豆ホエー、果汁廃液。
魚加工廃液0発酵廃液、パルプ廃液なども使用できる。
また窒素源としては、尿素、コノ・り酸アンモニウム、
クエン酸アンモニウム、乳酸アンモニウムなどが好まし
い。
クエン酸アンモニウム、乳酸アンモニウムなどが好まし
い。
無機塩としては燐酸カリウム、燐酸ナトリウム。
(4)
燐酸カルノウム、燐i% +1ナウムなどの燐酸塩、塩
化カリウムなどのカリウム塩、塩化ナトリウム。
化カリウムなどのカリウム塩、塩化ナトリウム。
炭酸ナトリウムなどのナトリウム塩、硫酸マグネシウム
、塩化マグネシウムなどのマグネシウム塩。
、塩化マグネシウムなどのマグネシウム塩。
硫酸マンガン、塩化マンガンなどのマンカン塩。
硫嘔鉄、地化鉄などの鉄塩、亜鉛塩、銅塩、コバルト塩
などの通常の無機塩が必要に応じて適宜使用することが
できる。有機微量栄養源としてはビタミン、アミノ酸、
これらを含有する酵母エキス。
などの通常の無機塩が必要に応じて適宜使用することが
できる。有機微量栄養源としてはビタミン、アミノ酸、
これらを含有する酵母エキス。
肉エキス、麦芽エキス、コーンステイープリカー。
カザミノ酸、大豆粉、大豆加水分解物6はゾトン。
トリプトン、カゼイン分解液などが必要に応じて使用で
きる。
きる。
培養は好気的条件下で行うのが好1(、く、通常培地の
−を6〜8、好ましくは6.5〜7に制御しつつ、15
°C〜45℃、好1しくは20°C−35℃の範囲で2
日から10日間、培養することにより微生物菌体中にS
AMが生成蓄積される。
−を6〜8、好ましくは6.5〜7に制御しつつ、15
°C〜45℃、好1しくは20°C−35℃の範囲で2
日から10日間、培養することにより微生物菌体中にS
AMが生成蓄積される。
かく[7て得られる微生物菌体からSAMを取得する方
法は格別制限されるものではなく、常法に従って行われ
る。すなわち、菌体を培地から分離17たのち、菌体中
のSAMを抽出(〜、次いで抽出液中のSAMを単離す
ることによって目的物が得うレるが、この際、硫酸塩、
・々ラドルエンスルポン酸塩、スルホサリチル酸塩など
のごとき塩または複塩の形で安定化]−て回収するのが
一般的である。
法は格別制限されるものではなく、常法に従って行われ
る。すなわち、菌体を培地から分離17たのち、菌体中
のSAMを抽出(〜、次いで抽出液中のSAMを単離す
ることによって目的物が得うレるが、この際、硫酸塩、
・々ラドルエンスルポン酸塩、スルホサリチル酸塩など
のごとき塩または複塩の形で安定化]−て回収するのが
一般的である。
かかる本発明によれは、菌体内に高濃度でSAMを含有
するため不安定なSAMの移送に便宜であり、またSA
Mとの分離が面倒な不純物の含有率が小さいため8AM
の精製が容易であり、その結果として高純度のSAMを
効率よく回収することを可能にする。
するため不安定なSAMの移送に便宜であり、またSA
Mとの分離が面倒な不純物の含有率が小さいため8AM
の精製が容易であり、その結果として高純度のSAMを
効率よく回収することを可能にする。
以下に実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明する
。
。
実施例1
グルコ−、x、 5 g/as ボリベプ) :/
0.59/de。
0.59/de。
)G(2po4o、 4 g/dt1に、HPO40,
4&Att、MgSO4−7H,00,029/di、
酵母エキス[12g/dl、 寒天2g/luからなる
寒天斜面培地(pH6,[])に2日間生育させたザツ
カ「コマイ士ス・セレビシェIFO2346の1白金耳
を、シュクロース10g/de。
4&Att、MgSO4−7H,00,029/di、
酵母エキス[12g/dl、 寒天2g/luからなる
寒天斜面培地(pH6,[])に2日間生育させたザツ
カ「コマイ士ス・セレビシェIFO2346の1白金耳
を、シュクロース10g/de。
酵母I キ、x 1 g/de%KH2PO40,4j
j /di、 MgSO4・7 H,OO,o 19
/lt1%L−メチオニン1.Oji/de。
j /di、 MgSO4・7 H,OO,o 19
/lt1%L−メチオニン1.Oji/de。
Zn804’ 7 H2O0゜25Q/d1%Mn50
44〜6H,01,25〜/d1.、からなりp)16
.0に調整、加熱滅菌した培地1[]mA’に植菌し、
28℃で4日間振盪した3、遠心分離にて集菌し、生理
食塩水で洗浄し7た後、菌体を1.5N過塩素酸に懸濁
し、室温で1時間、振盪1.8AMを抽出した。抽出液
をは−パークロマトグラフイー、高速液体クロマトグラ
フィーで分析し、SAM、アデニン(以下、Adと略)
、S−アデノシルホモシスティン(以ドSA■Iと略)
、メチルチオアデノシン(以下、M’T’Aと略)の分
析を行ない、結果を第1表に示した。
44〜6H,01,25〜/d1.、からなりp)16
.0に調整、加熱滅菌した培地1[]mA’に植菌し、
28℃で4日間振盪した3、遠心分離にて集菌し、生理
食塩水で洗浄し7た後、菌体を1.5N過塩素酸に懸濁
し、室温で1時間、振盪1.8AMを抽出した。抽出液
をは−パークロマトグラフイー、高速液体クロマトグラ
フィーで分析し、SAM、アデニン(以下、Adと略)
、S−アデノシルホモシスティン(以ドSA■Iと略)
、メチルチオアデノシン(以下、M’T’Aと略)の分
析を行ない、結果を第1表に示した。
この結果から、明らかなように乾燥菌体当りのSAM含
量が12%以上の場合にはSAMと分離し難い不純物が
少ないことがわかる。
量が12%以上の場合にはSAMと分離し難い不純物が
少ないことがわかる。
実施例2
実施例1と同じ培地で、培養時間、培地pif、培養温
度を変えて、サツカロマイセス・セレビシェIEO23
46を培養し、乾燥菌体当りのSAM含量が異なる菌体
を調整した。この菌体を実施例1と同じ方法で抽出・分
析を行い、結果を第2表に示した。
度を変えて、サツカロマイセス・セレビシェIEO23
46を培養し、乾燥菌体当りのSAM含量が異なる菌体
を調整した。この菌体を実施例1と同じ方法で抽出・分
析を行い、結果を第2表に示した。
第2表
米 SAMの量を100とした時の値で示した。
実施例5
グルコース5g/仏 ボυペプトンo、 597dl。
K1(2PO40,4g/dl、 K2HP0.0.4
97di、 Mg5O,・7H20G、 02 fJ
/lte 、酵母エキス0.2 g/ai、 からな
り、pi(6,0に調整、加熱滅菌した培地10m1V
C第6表に示す各種菌株を1白金耳液棟じ、28°Cに
て24時間振盪培養した。
97di、 Mg5O,・7H20G、 02 fJ
/lte 、酵母エキス0.2 g/ai、 からな
り、pi(6,0に調整、加熱滅菌した培地10m1V
C第6表に示す各種菌株を1白金耳液棟じ、28°Cに
て24時間振盪培養した。
一方、シュクロース1CJjj/di、酵母エキス1L
冷e、KH2F0.0.4.9 /d1!、Mg 80
.・7H200,[31、!97di 。
冷e、KH2F0.0.4.9 /d1!、Mg 80
.・7H200,[31、!97di 。
尿素(別滅菌) 1.5 g/de、 L−メチオ=7
0.7597dl、 CaC1,2H200,02g/
de、 ZnSO47H200,251NI/ dg
、 Fe 804 7H200,25if〆/ di
、 Mn5044〜6 Hto 125 ’i/de
、 Cu804 + sn、o 2119/de。
0.7597dl、 CaC1,2H200,02g/
de、 ZnSO47H200,251NI/ dg
、 Fe 804 7H200,25if〆/ di
、 Mn5044〜6 Hto 125 ’i/de
、 Cu804 + sn、o 2119/de。
HsBo、 2μ9/di、 CoC4・6H200,
2μy/di、 KT1μ9/diからなりpH6,
0に調整(7た培地11を24容発酵槽に入れ、殺菌後
、上記種培養液5mlを接種し〜、28℃で72時間通
気攪拌培養を行なった。培養後、遠心分離にて集菌[〜
、生理食塩水で1回洗浄した菌体を100mJの1.5
N過塩水酸に懸濁し7、室温で1時間振盪しSAMを
抽出l、た。
2μy/di、 KT1μ9/diからなりpH6,
0に調整(7た培地11を24容発酵槽に入れ、殺菌後
、上記種培養液5mlを接種し〜、28℃で72時間通
気攪拌培養を行なった。培養後、遠心分離にて集菌[〜
、生理食塩水で1回洗浄した菌体を100mJの1.5
N過塩水酸に懸濁し7、室温で1時間振盪しSAMを
抽出l、た。
次いで遠心分離にて菌体残渣を除去した後、炭酸水素カ
リウムを加えてpH4,5に調整し、生じた過塩素酸カ
リウムの沈澱を遠心分離にて除去し、SA、Mを含む抽
出液を得た。抽出液中のSA、Mを定量しその結果を乾
燥菌体当りのSAM−iとし7て第3表に示し、た この抽出液をSAM量として0.277になるように弱
酸性陽イオン交換樹脂アンバーライ)IRC−50(H
+型)5[1ml″k i吉めたカラムに3再し8A、
Mを成層させた。カラムに0.005N酢酸を通じて溶
出液の260nmに於ける吸光度が01以下になる捷で
洗浄し、不純物を除去した。 この時に要]〜だ0.2
N酢酸量を第3表に示した。次いでカラムに0. I
N硫酸を通じて溶出液の260 nmに於ける吸光度
が005以下になるまで、SAMを溶出した。 この溶
出液をアンバーライトT11A900樹脂(OH−型)
で処理し、pH3,、、,0勺した鏝、凍結乾燥して、
SAM・硫酸塩を得た。この時の8AMの回収率を第6
表に示した。セルロース薄層クロマトグラフィー、は−
ノξ−クロマトダラフイー、高速液体クロマトグラフィ
ーでSAMの純度を測定し、第6表に示した。
リウムを加えてpH4,5に調整し、生じた過塩素酸カ
リウムの沈澱を遠心分離にて除去し、SA、Mを含む抽
出液を得た。抽出液中のSA、Mを定量しその結果を乾
燥菌体当りのSAM−iとし7て第3表に示し、た この抽出液をSAM量として0.277になるように弱
酸性陽イオン交換樹脂アンバーライ)IRC−50(H
+型)5[1ml″k i吉めたカラムに3再し8A、
Mを成層させた。カラムに0.005N酢酸を通じて溶
出液の260nmに於ける吸光度が01以下になる捷で
洗浄し、不純物を除去した。 この時に要]〜だ0.2
N酢酸量を第3表に示した。次いでカラムに0. I
N硫酸を通じて溶出液の260 nmに於ける吸光度
が005以下になるまで、SAMを溶出した。 この溶
出液をアンバーライトT11A900樹脂(OH−型)
で処理し、pH3,、、,0勺した鏝、凍結乾燥して、
SAM・硫酸塩を得た。この時の8AMの回収率を第6
表に示した。セルロース薄層クロマトグラフィー、は−
ノξ−クロマトダラフイー、高速液体クロマトグラフィ
ーでSAMの純度を測定し、第6表に示した。
(11)
(12)
第3表から明らかなように、本発明例においては不純物
の除去に要する溶出液の祉が少なくてすみ、SAM回収
率、8AMの純度とも極めて良好であることが明らかで
ある。
の除去に要する溶出液の祉が少なくてすみ、SAM回収
率、8AMの純度とも極めて良好であることが明らかで
ある。
代理人 弁理士 戸 1)親 男
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1、 菌体内に乾燥菌体基準で10重量%以上の8−ア
デノシルメチオニンを含有する微生物菌体。 に
Priority Applications (9)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2889382A JPS58146274A (ja) | 1982-02-26 | 1982-02-26 | S−アデノシルメチオニン高含有菌体 |
GB08303031A GB2116172B (en) | 1982-02-25 | 1983-02-03 | Microbial cells containing s-adenosyl methionine in high concentrations and process for production of s adenosyl methionine |
US06/463,990 US4562149A (en) | 1982-02-25 | 1983-02-04 | Yeast culture containing S-adenosyl methionine in high concentrations, and process for production of S-adenosyl methionine |
AR292061A AR230457A1 (es) | 1982-02-25 | 1983-02-08 | Procedimiento para producir s-adenosilmetionina |
BR8300654A BR8300654A (pt) | 1982-02-25 | 1983-02-09 | Celulas microbianas que contem s-adenosil-metionina em altas concentracoes e processo para producao de s-adenosil-metionina |
DE19833304468 DE3304468A1 (de) | 1982-02-25 | 1983-02-09 | Mikroorganismenzellen die s-adenosylmethionin enthalten verfahren zu deren herstellung |
ES519652A ES519652A0 (es) | 1982-02-25 | 1983-02-09 | Un procedimiento para obtener s-adenosil-metionina. |
IT19490/83A IT1193668B (it) | 1982-02-25 | 1983-02-09 | Cellule microbiche contenenti s-adenosil metionina in concentrazione elevata e procedimento per la produzione di s-adenosil metionina |
CH762/83A CH658868A5 (de) | 1982-02-25 | 1983-02-10 | Verfahren zur herstellung von s-adenosyl-methionin. |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2889382A JPS58146274A (ja) | 1982-02-26 | 1982-02-26 | S−アデノシルメチオニン高含有菌体 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS58146274A true JPS58146274A (ja) | 1983-08-31 |
JPH0417627B2 JPH0417627B2 (ja) | 1992-03-26 |
Family
ID=12261069
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2889382A Granted JPS58146274A (ja) | 1982-02-25 | 1982-02-26 | S−アデノシルメチオニン高含有菌体 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS58146274A (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5100786A (en) * | 1987-12-28 | 1992-03-31 | Kanegafuchi Kagaku Kogyo Kabushiki Kaisha | Gene capable of enhancing S-adenosyl-L-methionine accumulation and process for producing S-adenosyl-L-methionine using the same |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS5217118A (en) * | 1975-07-30 | 1977-02-08 | Hitachi Ltd | Fuel supply device of internal combustion engine |
JPS548794A (en) * | 1977-06-17 | 1979-01-23 | Yamasa Shoyu Co Ltd | Preparation of s-adenosyl-l-methionine |
-
1982
- 1982-02-26 JP JP2889382A patent/JPS58146274A/ja active Granted
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS5217118A (en) * | 1975-07-30 | 1977-02-08 | Hitachi Ltd | Fuel supply device of internal combustion engine |
JPS548794A (en) * | 1977-06-17 | 1979-01-23 | Yamasa Shoyu Co Ltd | Preparation of s-adenosyl-l-methionine |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5100786A (en) * | 1987-12-28 | 1992-03-31 | Kanegafuchi Kagaku Kogyo Kabushiki Kaisha | Gene capable of enhancing S-adenosyl-L-methionine accumulation and process for producing S-adenosyl-L-methionine using the same |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPH0417627B2 (ja) | 1992-03-26 |
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