JPS5820195A - キサンタンガムの製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はキサンタンガムの製法に関する。

キサンタンガムはキサントモナス（Ｘａｎｉｈｏ−ｍｏ
ｎａｓ　）属の多くの種によって作り出されるポリサッ
カライドである。このガムは興味あるレオロジー特性全
有し、特に油掘穿及び食物における濃化剤として使用さ
れている。

キサンタンガムの工業的製造は一般的にバッチ・法によ
り行われており、その方法ではキサントモナス（Ｘａｎ
ｔｈｏｍｏｎａｓ　）のポリサッカライド生成株の培養
液が発酵容器中の栄養培地に接種され、数日間以内発酵
させられる。

その後ガムを通常有機溶媒？添加してガムを析出して発
酵培養液から単離している。

このバッチ製造法に代わるものとして連続製造法があり
、この方法では細菌の摂取及び初期生長の後に新たな栄
養培地が発酵容器ｉ’ｎ連続的に添加され、対応する鼻
の発酵培養液が連続的に取り出される。連続キサンタン
ガム製造の利点は特Ｃ二普通の製造においてはコントロ
ールの容易性及び小規模な発酵容器が長年に亘って認識
されている。しがしながら、各種理由により、特に長期
間の生産性の高い発酵を維持することが実際には困難な
ためバッチ製造法がなお支配的である。

キサンタンガム製造の研究の多くは、アメリカ合衆国、
特２ニアメリカ合衆国イリノイ州ペオリアの米国農務省
のＮＲＲＬにおいて行われている。キサントモナス・カ
ンペストリスＮＲＲＬ　　Ｂ−１４５９株についての草
分は的仕事よりペオリアラボラトリー（ＰｅｏｒｉａＬ
ａｂｏｒａｔｏｒｙ　）のＲ，Ｗ、シルマン（Ｓｉｌｍ
ａｎ）及びＰ、ロゴビン（Ｒｏｇｏｖｉｎ　）は連続発
酵が実行可能であることを示している Ｃ　　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　　ａｎｄ　　Ｂｉ
ｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　　＊　１２＋７５（１９７
０）。最近の記事において〔同文献１４巻２３（１９７
２））、彼等は連続発酵性の可能性について更に研究を
報告しており、ｏ、　ｓ　４　、Ｐ／ｈ／ｌｙ−の最大
キサンタン製造速度上報告でしている。この数字は比較
的低く、更Ｃ二得られた発酵培養液は僅かに０．６％の
キサンタンを含有するものであり、僅か８ｏ。

ｃｐの粘度を有するものであった（２７頁の表音）。こ
れより高いキサンタン含量及び高粘度の製品が報告され
ているが、キサンタン製造速度はより低いものである。

更に一般的には、特許その他の文献において記載されて
いるキサンタン製造の多くの連続方法がある。例えば、
米国特許第３，３２８，２６２号及び３，４８５，７１
９号並びに英国特許明細書画１，５１２，５３６号及び
２，００８，１３８号がある。実際Ｃ二は、公知方法の
各々はキサンタンポリサッカライドの性質における多様
性全反映する異った特性全有する生成物を与える。

本発明者等は良好なレオロジー特性４有し、人の消費目
的の食物用途として満足できる生成物を高い生産性をも
って得ることを目的としてキサンタンガムの連続方法に
よる製法を）研究してきた。

本発明によれば、キサントモナス属の細菌のポリサッカ
ライド生成株全連続的に発酵培地中において培養するこ
と（二より、ポリサッカライドキサンタンガムを製造す
る連続方法において、発酵培地が成る種の微量元素をコ
ントロールされた低水準に含有することを特徴とする方
法が提供される。成る種の微量元素を低水準にコントロ
ールして用いることにより、比較的高生産性で得られる
キサンタンガム生成物の純度その他の特性を改良するこ
とが可能であることが見出された。

より具体的には、本発明（−よれば、連続培養のために
低水準の鉄、マンガン、亜鉛、銅、コバルト及びホウ′
素を含有する発酵垣地が用いられる。

一般的に考えて、これらの微量元素の量がキサンタンガ
ム製造を最適化するための可能性のある要因であるとは
これまでのところ見出されていなかった。驚くべきこと
に、これらの元素は連続方法Ｃ１訂□いて重要な役割を
果すように思われる。

シルマン及びロゴビンは、上記に引用した彼らの論文に
おいて微量元素については何も述べていない。同様に、
米国特許第３，４８５，７１９号においては微量元素は
考慮されていない。

米国特許第３，３２８，２６２号には単に「適当な微量
元素は通常使用される」と示されているのみであって、
それらの性質或いは適当な葉については何も記載されて
いない。英国特許第□、５□２，５３６号、よ゛培地。

よ微量元素ヶ全有すべきだと述べられているが、実施例
にはこの点（二ついて詳細が与えられておらず、単に培
地が「亜鉛、銅、コバルト、鉄、マンガン、及びモリブ
デンのような各種貴金属の微量割合」が含有されたと述
べられている（＝過ぎな、い。最後に連続発酵（二つい
て述べている文献においては、英国特許明細書簡２，０
０３，１３８号が実施例１において適当な微量元素混合
物を挙げている。

バッチ製造方法技術においては、英国特許第１，５３１
，９７０号はマンガン及び鉄並びじキレート化カルシウ
ムのコントロールされた量の使用を説明している。マン
ガンの量は約０．７５〜６０　ｐｐｍに設定されておシ
、鉄の量は約０．２５〜２０　ｐｐｍに設定されている
。亜鉛の量については何も述べられていない。実際には
、実施例においてはマンガンが９．７５ｐｐｍで用いら
れ、鉄が約２　ｐｐｍで用いられている。英国特許１，
５３１，９７０号におけるこれらの鍛の使用は油回収に
直接使用するために適した発酵培養液の製造を目的とし
たバッチ法こおける数個の要因のうちの一つである。

その目的は約３ミクロレの粒径を有する不溶性物質を実
質的Ｃ二全有しない培養液を得ることＣ二ある。

これに対して、本発明は、マンガンの量が鉄の量よりも
少ない連続方法である。

好ましくは、本発明の連続方法のための発酵培地は次の
表１（二掲げた量の元素を含有する（′本明細書におい
て”ｐｐｍ″は培地百万容量部当りの元素の重量部であ
る）。

表　　１ 微量元素　　　　　好ましい量　　　　　最も好ましい
楡（ｐｐｍ）　　　　　　　　　（ｐｐｍ）Ｆｅ　　　
　　　　０．１〜１０　　　　　０．５〜５Ｍｎ　　　
　　　　０．０１〜１　　　　　　０．１〜ＩＺｎ　　
　　　　　０．０１〜１　　　　　　０．１〜０．５Ｃ
ｕ　　　　　　０１ｏｏ１〜１　　　　　ｏ、０１〜ｏ
、ＩＣｏ　　　　　　　Ｏ，００１〜１　　　　　０．
０１〜０．１Ｂ　　　　　　　０．０００５〜１　　　
　０．００５〜０．０５より通常は、本発明は鉄ｆ　１
０　ｐｐｍ未満マンガンｋ　１　ｐｐｍ未満で用い、鉄
対マンガンのｐｐｍ比は好ましくは４ｏ：１〜２：１で
ある。

本発明の方法ｃ１使用する発酵培地の調製に当っては、
各種の微量元素が水溶性化合物特に無機塩として、例え
ば鉄に対してはＦ　ｅ　Ｃ１２・７Ｈ２０或いはＦｅＳ
Ｏ４＊　７Ｈ２０、マンガンに対シテはＭｎＣ１，・６
Ｈ２０或いはＭ　ｎ　Ｓ　０４　”　４　Ｈ２０。

亜鉛に対してはＺｎＳＯ４・７Ｈ２０，銅に対してハＣ
ｕＣｌ２・２Ｈ２０或いはＣｕＳＯ４・５Ｈ２０％’　
：１バルト（二対してはＣｏＣｌ２・６Ｈ２０或いはＣ
ｏＳＯ４”７Ｈ２０及びボロンＣユ対してはＨ３ＢＯ３
として添加するのが適当である。

微箪元素金添加する際には、その他の成分内に存在する
量についても然るべき注意を払うことが必要である。例
えば、水道水をイオン交換体を通して作られた脱イオン
水を用いることが非常に好ましい。同様ｊニコントロー
ルされた低水準の微量元素が過度（＝存在しないことを
確認するため（二培地が作られた後で分析することが非
常（＝好ましい。

既に規定した量の微量元素の他Ｃ１発酵培地シま資化性
炭素源及び資化性窒素源をその他の元素例えば１以上の
リン、マグネシウム、カルシウム、カリウ、ム及びイオ
ウと共に含有する。これらの成分は通６常の栄養源を通
常の量で用いて添加することができる。

炭素源は糖その他の：炭水化物或いは複合天然資源でよ
いが、グルコースが好ましく、特（−３０〜７０　ｔ／
ｌの量で用いられる。

窒素はアンモニウム塩或いは硝酸塩として添加すること
ができるが、少なくとも窒素のいくらかは複合天然産生
混合物、例えば酵母エキスから供給されるのが有利であ
る。酵母エキスは比較的少量の０．０５〜０．５ｆ／−
／ｌでも有用に成長要因、ビタミン類、アミノ酸類及び
その他の未同定複合有機化合物（１利用することができ
る。

リン、イオウ及びその他の金属などのその他の元素は水
溶性無機塩類として添加することができる。

連続方法にあつでは、細菌についての成る種の要請が制
限的な要因であるということカモ必然に生ずる。制限的
要因の正体を知ることは必須ではなく、むしろ制限的要
因が未知の場合には通常発酵培地の再配合（１当って拘
束が存在する。好ましくは、制限的要因が公知であり、
窒素或いはイオウであることがよい。

培地はｐＨ６〜８であることが好ましく、通常的ｐＨ７
である。−のコントロールは所望の値を維持するに必要
な酸或いはアルカリ計量して添加することによシ達成さ
れる。

本発明全具体化した連続方法を実施するに当っては、先
ずポリサッカライド生成細菌の接種材料を得ることが必
要である。この様な接種材料の製造方法は文献上詳説さ
れており、本明細書にあたって、それらの情報の詳細を
与える必要はない。好ましくは、細菌はキサントモナス
愉カンペストリス種のものがよく、更にこの細菌は成長
段階の一部として発酵培地に適したものが好ましい。即
ち、生産性の高い株の培養液が逐次段階的ｌ二よシ多量
の培地を用いて生育され、接種材料製造の少なくとも最
終段階はポリサッカライド−生成株におけるのと実質的
に同一の培地を用いる。

発酵培地の接種及び満足できる細胞集合、及び生成物濃
度にまで成長した後で、本発明の方法が新たな培地の添
加及び発酵培地の抜き出しを行うことｌ二よシ操作が開
始される。

稀釈速度は好ましくは、０．０１〜０．１２．ｈ　　。

１ より好ましくは０．０２〜ｏ、ｏｓｈ　　、例えば０６
０４〜０．．０６ｈ　　である。発酵温度は２５〜３５
Ｃが適当であり、例えば２９〜３２ｔｌ’であるが、そ
の他の温度も又使用することができる。

キサントモナス細菌は厳格に好気性であるので、発酵の
際に酸素を供給しなければならない。好ましくは、溶融
酸素圧力を酸素不足を引き起こす水準より高く、且つ酸
゛素置性を起こす水準より低く保つように空気流及び混
合条件全調整するのが好ましい。

発酵容器から取シ出された培地中のポリサッカライドは
、必要に応じて、更に加工することができ、例えば固体
生成物を得るために加工することができる。良好な等級
の材料を得るためには先ず発酵培地を例えば１００〜１
３０Ｃに１〜１５分間、特に１２０〜１２５Ｃに約２分
間加熱し、その後イソプロパツールのような有機溶媒を
添加してキサンタンガムを析出し、これ’ｋＦ別その他
の方法で分離するのがよい。

本発明の方法を採用することにより、高粘度及び高純度
のキサンタンガムを高生産性をもって得ることが可能で
ある。

以下、本発明を実施例により説明するが、これらは本発
明を限定するものではない。実施例及び付随的比較例に
おいて、次の標準的方法が用いられた。

培養物のアリコート（約２０５’）Ｔｈ適当なガラス容
器中に正確Ｃ二秤量する。ポリマー、細胞及び成る種の
塩を２倍容量のイソプロパツールで析出する。析出物を
１０分後に予め秤量されたガラスファイバーフィルター
円盤を通して沢別する。２紙を恒量まで４５Ｃの真空オ
ーブン中で２４時間或いは赤外線ランプ下で乾燥した後
再び秤量して全析出物（ＴＰＭ）測定を行う。定常状態
゛においては、より大きなアリコートが析出した。

ＴＰＭ或いは細胞除去キサンタン（ＣＦＸ）の試料を粉
砕して均一にし、水分、硫酸化灰分、全窒素、ピルビン
酸エステル及びアセチルを分析した。

培養液のレオロジーは、常法により発酵中測定した。は
ぼ０．１ｆ！−の粉砕したポリマーを予め秤量したガラ
ス製容器（キャップを含む）Ｃ二人れた。ポリマーを真
空１，７−に９．！、−ｔリン上で一晩乾燥した。容器
（二乾燥窒素雰囲気下においてキャップをかぶせ再び秤
量した。この乾燥ポリマーから１％溶液を蒸留水中で調
整した。レオロジー（Ｋ及びｎ値）をウェルるープルツ
クフィールド（Ｗｅｌｌｓ−Ｂｒｏｏｋｆｉｅｌｄ）の
「円錐平板」粘度計（ＨＢｒ型）を用いて　２５Ｃで測
定した。

５４０ 稀釈培養液の濁度（１：４０容積稀釈）を濃度として評
価した。

キサンタン含有培養液の適当な混合を容易に行うために
、連続培養装置全設計した。６個の湾曲翼を有する二つ
の羽根車（１３ｃｒｎ直径）ｔ−５１の頂部攪拌ファー
メンタ−に取付けた。これらの羽根車は翼が回転の方向
から傾斜し１０ｃｒｎ離れるように配置した（低部羽根
車は羽根車軸の最低点に配置）。羽根車の直径はファー
メンタ−のガラス本体とほぼ同じ大きさであるので、温
度はガラス本体の内側に取付は温度コントローラーに接
続されたステンレス製のチューブ（６ＩＩｍ外径及び４
　ｍｍ内径）の「（ねり管」を用いてコントロールした
。温度監視探計は基板を通して導入した。

温度は約３０Ｃに維持された。田はファーメンタ一本体
の側腕に取付けられた電極を用いて監視され、２　Ｍ　
ＮａＯＨの自動添加により約７、　ＯＣ維持された。空
気は低部羽根車の直下の基板の中心から導入した。

堰を頂一部板を通して導入し、その長さを約２１の運転
容量を与えるように調整した。連続運転のために、培地
は連続的に添加され、流出的に蛎動ポンプを用いて連続
的に除去した。

ＭＹＧＰ培地（麦芽エキス３ｆ−１’；酵母エキス３Ｐ
１’；グルコース１０Ｐｌ−、バフトン５Ｐｌ’；寒天
２０Ｐｌ−１）中のキサントモナス昏カンペストリス（
Ｘ、　ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ　）ＡＴＣＣ１３９５１（
微生物受託番号　微工研菌寄第４９１４号）の実験室ス
トックの２４時間培養液１００ｄｉ含有する振盪フラス
コを用いて、約２１の攪拌培地に接種を行った。各培地
の組成は表２に示す。

グルコースシロツプデキシーム（Ｄｅｘｙｍｅ）０８１
を選んだのは、微量成分が低い純度のためである。ｐｐ
ｍでこのシロップは次のものを含有するものであった：
Ｚｎ０．０１未満；Ｃｕ０．２未満；　Ｍｎ　０．０４
未満；ＣｏＯ，０８未満。

酵母エキスは特別の塩分の低い酵母エキスであり、ｐｐ
ｍで下記の成分を含むものであった：　Ｚｎ　６０　；
　Ｃｕ　１０　；　Ｍｎ　１５　；　Ｃｏ　５未満；ｅ
１０００ その他の試薬は分析試薬等級のものであった。

２４時間のバッチ生育後、規定した溶媒の連続添加全開
始した。稀釈速度は０．０４ｈ　　’であった。

定常状態のサンプルの採取は、少な（とも３日の生育後
においてのみ一定の測定をもって行われた。サンプル中
のガムは過剰のイソプロピルアルコールを添加して析出
され、１２５Ｃ，２分間の熱処理前（“ＮＨＴ″）或い
は後（“ＨＴ″）において評価された。

発酵条件と生成物の分析結果は表３に与えられている。

実施例１において、発酵できるＴＰＭ及びＥ５４０　ｋ
もたらし、ポリマ一対細胞比は７．６であった。この生
成物は優れたレオロジー特性及び満足できるピルビン酸
エステル含量を有するものであった。

実施例２において、２倍量のマンガン、亜鉛、銅、コバ
ルト及びホウ素、及び１１５量の鉄を用いたところ、Ｅ
！１４０％乾燥細胞重量、及びＴＰＭは優れていた。生
成物は良好なレオロジー特性を有し、ピルビン酸エステ
ル含量及び脱カルボキシル化分析も又高かった。

実施例３については、酵母エキスは媒体中に含まれてい
た。この発酵Ｃ二ついては１．２１１１−１の生産性の
定常状態が得られた。ポリマ一対細胞比は６．９であり
、生成物は高ピルビン酸エステル含量及び脱カルボキシ
ル化分析値を有した。良好なレオロジー特性に加えて熱
処理生成物は２６．８　ｄｌ、　７　”の固有粘度を有
し、これはその他の試料と極めて好ましく比肩し得るも
のであり、高分子量のポリマ一ヶ示すものである。

実施例４については、硫酸塩の含量を少なくして硫酸濃
度を減少した際に細胞数を低下することにより′生成物
純度、特Ｃニポリマ一対細胞比、Ｎ含量、脱カルボキシ
ル化分析が改良されるか否かを試験したｃｒ７５％硫酸
において、これに対応す、るＥＨ１１の低下があり、こ
の方法は確かにイオウ−限界があることを示している。

ＱＯ２は変化せず、ＴＰＭは予想通り減少した。生成物
：細胞比はＴＰＭ対Ｅ、４゜に基づいては同様の溶解酸
素濃度において０．０１２５’／！”　　のイオウ濃度
の培養液と比較して変化がなかった。更に、生成物の窒
素含量或いは脱カルボキシル化分析において、大した変
化は見られなかった。脱カルボキシル化分析値はおそら
（生成物のグルコース汚染により低下したものと思われ
る。

実施例５の結果も同様に勇気付けられる結果を与えるも
のであった。約２７　Ｆ！−１のＴＰＭが得られ、良好
な生産性を示した。

ＱＯ２及びポリマ一対細胞比も高かった。

比較例１は微量元素の高濃度を用いる本発明者等の研究
を特色付けるものである。この種の小規模の発酵は低い
ＴＰＭ、生産性及び転化効率によって特色付けられる。

更Ｉ：生成物のレオロジーは熱処理されなければ貧弱で
あや、このことは生成物の窒素含量及び脱カルボキシル
化分析（二欠陥が生じたので生成物の低純度を反映する
ものであろう。ポリマー：細胞比及び酸素吸収速度のい
ずれも低いものであった。

比較例２については、何等の添加微量元素或いは有機栄
養物補給の不存在下に培養液を生育させたものであるが
、キサンタンの収量が低かった。しかしながら、Ｑ０２
及びポリマ一対細胞比は高く、これらはより低い細胞密
度と一致した。微量元素の欠参尺は細胞の生育を制限し
４、それによりポリマーの生成を制限した。更に、生成
物のピルビン酸エステル含量は通常より低かったが、生
成物のレオロジー及び脱カルボキシル化分析は影響を及
ぼされなかった。

比較例３において同様の培養液にＯ，２ｆ−１’酵母エ
キスを微量元素源として補給したとこ　１ ろ、０．０４９ｈ　　　というよシ高い稀釈速度におい
ても細胞乾燥重量及びポリマー生成量はより通常の水準
にまで戻った。しかしながら、生成物のピルビン酸エス
テル含量は、酵母エキスの不存在下よりも更シー低く、
生成物は脱カルボキシル化分析値が減少した。予想通り
、生成物は亜鉛含量が低かった。この様（二微量元素の
欠昏ムはポリマー生成量、及びピルビン酸含量の減少を
起こし、これは酵母エキスの補給により僅かに部分的に
のみ克服されるにすぎない。

比較例４については、亜鉛が省略された。

ＥＨ１１及び細胞乾燥重量が減少し、そ・の結果ＴＰＭ
が低下したが、ポリマ一対細胞比は余り影響を受けなか
つ友。更にＱＯ２及び生成物のピルビン酸含量が高かっ
た。生成物のレオロジーは満足できるものであり、熱処
理後の脱カルボキシル化は境界線上のものであった。

この様Ｃ二Ｚｎは適当な細胞数を与えるためにのみ必須
であるようである。

実施例６ 本例は実施例５の有望な結果に基づＩ／またより大規模
な発酵である。同一の菌株のＭＹＧＰ培地中での２４時
間培養液１００ｍＺ’に含有する振盪フラスコを用いて
表４に勘定される培地を溶解デキストロース−水和物を
炭素源として共に含有す一、Ｂ　２０　ｇのバッチファ
ーメンタ−に接種した。

表　　４ １０時間の短い静止期の後、培養液は５時間の倍増時間
音もって生育した。４４時間目にＥ５４０は４．１にな
り１０００１のファーメンタ−内に所定の培地３５０Ｊ
Ｔｈ接種するために１８１が使用された。

最初の３５０βの培地は４０？！−デキストロース及び
０．０１５ＰＡ！’のＳを含有し、培養液の良好な成長
を支えるものであった。グルコースシロップを次いで炭
素源としてデキストロースの代りＣ二相い、３０時間目
に頂部の７９０１までの運転容積を開始した時点Ｃ：お
いては、Ｅ５４Ｇ及びＴＰＭはそれぞれ３．５及び１１
．３？／！　　１であった。４８．５時間目（二０．０
４ｈ”の稀釈速度での連続操作が開始された時点ではＥ
　５４０は６．４に到達し、ＴＰＭは２５．６Ｐｌ’で
あった。この時点での残存窒素濃度は殆んど０であった
。次いで培地Ｂが使用されたが、この中には窒素制限を
開始するためにイオウ濃度が０．０１２ｆｌ”に減少さ
れた。

ＴＰＭは発酵の際中一様に３１．９？Ｊ　　　まで上昇
し、ポリマ一対細胞比は９，６であった。

更に、生成物のピルビン酸エステル濃度は絶えず約６％
の高い値にとどまった。これらの多く改良されたデータ
は培養液中の低ＤＯＴと関連付けられた。しかしながら
、酸素−制限を避けるために空気流は１４３４３時間目
　０００１ｒ１ｍ　　　〜１２５０１馴　に増大すると
、４０時間を越えてＤＯＴは３倍（二増大した。この間
ＱＯ□は２５９６減少し、ポリマ一対細胞比は６．５に
減少し、生成物中にピルビン酸エステル濃度の僅かな減
少が生じた。

真の定常状態は４０時間維持することが可能であった。

キサントモナス・カンペストリスのコロニー変異種は運
転中のＭＹＧＰ寒天板への通常のサンプリングにおいて
は見られなかった。

発酵条件及び運転の終了方向への製゛昂分析は表５に示
されている。

表５ 発酵データ 生成物濃度（Ｕｌ　　’）　　　　　　　　　２６．９
細胞数（Ｅ５４Ｇ単位）４．８ 細胞数ＣＰｌ’）　　　　　　３．６ 生産性ｙ−（Ｊｈ）−１１，１３ ４０２ｍ、　ｍｏｌ（ｆＩ−ｃｅｌｌ、　ｈ）−１６，
３ｉｎ　　　　　　　　　　　　　０．１９窒　　素＊
１．３７ ピルビン酸エステル＊６．７ 脱カルボキシｉし化＊４．３５ 硫酸化灰分＊（チ）　　　　　　　　　□０．３水　　
分（％）９．２ ｎ　　　　　　　　　　、１２ ｎ　　　　　　　　　　、５２ ＊　水分補正後 ファーメンタ−から集められた培養液を１２５〜１２６
ｔｌ’、１．７〜１．８分の滞留時間で熱処理を行い、
その後イソプロピルアルコールを用いてスクリュー析出
器内で析出させた。析出後キサンタンガムをプレスし、
ペレット化し、乾燥し粉砕した。

１４、５　ｋＩＩの粉砕物質が得られた。

これは、１４．５０００のフンシスチンシー指数（ｎ＝
０．１）及び１１．６５チの灰分、１．６５チ′の窒素
分、４．２９％の脱カルボキシル化、及び５．３％のピ
ルビン酸エステルの分析結果を与えた。

実施例７及び８ 実施例１及び５の装置及び方法を用いて、振盪フラスコ
培養液（１００ｍ）が接種材料として用いられた。培養
液を２４時間生育させてから表６に示す組成の培地を連
続的に流入させた。

表　　６ １ 微量元素の組成 溶液（１） ＭｎＳＯ４”　４Ｈ２０２２，ＯＳ’ ＺｎＳＯ４・７Ｈ２０２８，４０Ｆ ＣｕＳＯ４７５Ｈ２０５，００５’ Ｃｏｃｏ、　・７Ｈ２０５，６６７ Ｈ３Ｂ０．　　　　　　　　１．２０？溶液（４） ＦｅＳＯｅ７Ｈ２０８９，Ｏｆ クエン酸　　　　　　　５０．０　ｇ−内溶液共に１１
蒸留水中に貯蔵溶液として調製した。

羽根車の速度は４００〜６２５　ｒｅｖ、　ｍ＃Ｉ’に
設定して、１０〜３０チ空気飽和度の溶解酸素圧力（Ｄ
ＱＴ）Ｔｈ得た。空気流は２．０〜２．５１０ｍ５”に
設定した。

熱処理は培養液を蒸留水で１＝１に稀釈して１２５Ｃ１
二おいて２分間行った。

結果を表７に示す。

これらの実施例について、酵母エキスは窒素制限金堂け
ると思われる培養液中において、部分的或いは唯一の窒
素源として使用した。

満足できる発酵の結果が得られた。実施例７で得られた
生成物は窒素仕様には合致したが、脱カルボキシル化仕
様には合致しなかった。

これは恐らく培養液中の残存グルコースの高濃度による
と思われる。熱処理後の粘度はピルビン酸エステル含量
と同様（二満足できるものであった。

アンモニウム及び酵母エキスを窒素−制限された培養液
中で窒素源として組合せて使用した場合にも実施例８Ｃ
二おいて同様な結果が得られた。ピルビン酸エステル含
量は低くなったが使用範囲内のものであった。

手続補正書 昭和５７年　８月１３日 特許庁長官若杉和夫　殿 １、事件の表示昭和５７年　特許願第８５６９４　　号
３、補正をする者 事件との関係　　　　特許出願人 へ硝　　ケルコ　バイオスペシャルティズ　リミテッド
４、代理人 （３）「明細書」 ｆｉ＋　　別紙の通り、委任状及翻訳文名１通を提出致
します。

（２）別紙の通り、出願時提出の願書第４項出願人の欄
の代表者塩を記載した訂正願書１通を提出致します。

（３）　　別紙の通り、明細書１通を提出致します。

上申：出願当初手書せる明細書を提出致しましたが、こ
の度タイプ印書せる明細書と差し替えて頂きたく上申致
します。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、栄養培地中１−おいてキサントモナス（Ｘａｎｔｈ
   ｏｍｏｎａｓ　）属の微生物による資化性炭素源の連続
   好気性発酵によりキサンタンを製造する方法Ｃ：おいて
   、微量元素Ｆｅ、Ｍｎ。 Ｚｎ、　Ｃｕ、　Ｃｏ及びＢ’ｅ下記の如く制限するこ
   とを特徴とする方法： ｐｍ Ｆｅ　　　Ｏ，１〜１０ Ｍｎ　　　０．０１〜Ｉ Ｚｎ　　　０１０１〜　Ｉ Ｃｕ　　　０１００１〜Ｉ Ｃｏ　　　Ｏ，ＯＯ１〜Ｉ Ｂ　　　　Ｏ，０００５〜１ （但し、Ｆｅ　：　Ｍｎ比は４０：１〜２：１である）
   。 ２、微量元素Ｆｅ、　Ｍｎ＋　Ｚｒｂ　Ｃｕ＋　Ｃｏ＋
   及びＢが下記の如く制限される特許請求の範囲第１項記
   載の方法： ｐｍ Ｆｅ　　　Ｏ，５〜５ Ｍｎ　　　０．１〜１ ２０　　　　０．１〜０．５ Ｃｕ　　　０．０１〜０．１ Ｃｏ　　　０．０１〜０．１ Ｂ　　　　Ｏ，００５〜０，０５ ３、栄養培地が脱塩水から調製され、炭素源が炭水化物
   であシ、培地が複合天然混合物由来の窒素を含む特許請
   求の範囲第１項記載の方法。 ４、培地が更にリン、マグネシウム、カルシウム、カリ
   ウム及びイオウの水溶性無機塩を含む特許請求の範囲第
   １項記載の方法。 ５、稀釈速度が０．０１〜Ｏ１１２／　、ｈｒ−である
   特許請求の範囲第１項記載の方法。 ６、稀釈速度が０．０２〜０．０８／　ｈｒ、であり、
   発酵温度が２５〜３５Ｃである特許請求の範囲第５項記
   載の方法。 ７、稀釈速度が０．０４〜０．６／　ｈｒ、であり、発
   酵温度が２５〜３２Ｃである特許請求の範囲第６項記載
   の方法。 ８　更に、キサンタンガムの回収前（二発酵培地全１０
   ０〜１３０Ｃの温度に１〜１５分間加熱する工程を含む
   特許請求の範囲第１項記載の方法。 ９、発酵培地が１２０〜１２５Ｃに２分間加熱される特
   許請求の範囲第８項記載の方法。 １０、微生物がキサントモナス・カンペストリス（Ｘａ
   ｎｔｈｏｍｏｎａｓ　ｍ　ｃａｍｐｅｓｔｒｉ’ｓ　）
   　　である特許請求の範囲第１項記載の方法。 ■　生物がキサントモナス・カンペストリス（Ｘａｎｔ
   ｈｏｍｏｎａｓ　ｃｏｍｐｅｓｔｒｉｓ　）　ＡＴＣＣ
   １３９５１’（微工研菌寄第４９１４号）の同定特性を
   有する特許請求の範囲第１０項記載の方法。