JPS62195295A - 発酵法によるクリプトスポリンの製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は、クリプトスポリンの製造法に関する。

クリプトスポリンは、抗菌活性、抗真菌活性を有する物
質として知られている。従って、本発明は、医薬品など
の分野に利用できる。

従来の技術 従来、クリプトスポリンの製法としてはクリプトスポリ
ンム・ピニコラに属する菌株を利用する方法が知られて
おり、クリプトスポリンの物理化学的性質とともに報告
されている〔ヘルベチ力・キミ力・アクタ（Ｈｅｌｖｅ
ｔｉｃａ　Ｃｈｉｍｉｃａ　Ａｃｔａ）　５６　。

６１９、１９７３年、ハンドブック・オブ・アンチビオ
ティック・コンパウンダ（Ｈａｎｄｂｏｏｋ　ｏｆ　Ａ
ｎｔｉｂｉｏｔｉｃＣｏｍｐｏｕｎｄｓｊｖｏｌ　ＩＩ
Ｉ、２７４頁、１９８０年〕。

発明が解決しようとする問題点 医薬品などに有用な、抗菌活性、抗真菌活性を有するク
リプトスポリンを、工業的に高収率で得る方法が求めら
れている。

問題点を解決するための　段 本発明者はかびの産生ずる抗菌物質について検討の結果
、エキソバシディウム・ハチジョウエンセ（Ｂｘｏｂａ
ｓｉｄｉｕｍ　ｈａｃｈｉｊｏｅｎｓｅ　）が高収率で
クリプトスポリンを生産することを見出し本発明を完成
した。

以下１本発明について詳細に説明する。

本発明はエキソバシディウム属に属し、クリプトスポリ
ン生産能を有する微生物を培地に培養し、培養物中にク
リプトスポリンを蓄積させ、該培養物から蓄積したクリ
プトスポリンを採取することを特徴とする発酵法による
クリプトスポリンの製造法に関する。

使用する微生物としては、エキソバシディウム属に属し
、クリプトスポリン生産倫を有するものであればいかな
るものも使用できる。

好適な菌の例は、エキソバシディウム・ハチジョウエン
セＫＡＣ−１９０８があげられる。

本菌株は昭和６１年　２月２０日付で、工業技術院微生
物工業技術研究所（微工研）にＦＥＲＭＢ　Ｐ　−（４
Ｑ　ｌ　　として寄託しである。

本菌種の菌学的諸性質は日本蘭学会報（Ｔｒａｎｓ。

Ｍｙｃｏｌ、　Ｓｏｃ、Ｊａｐａｎ）２６巻、１６１頁
、　１９８５年に詳しく記載されている。

培養は通常のかびの培養法が一般に用いられる。

培地としては炭素源、窒素源、無機物などを含有°した
ものが用いられる。

炭素源としてはブドウ糖、殿粉、デキス）　ＩＪン、マ
ンノース、フラクトース、シュークロース、糖蜜などが
単独または組み合わせて用いられる。さらに、菌の資化
能によっては炭化水素、アルコール類、グリセリン、有
機酸なども用いられる。無機および有機の窒素源として
は塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニ
ウム、硝酸ナトリウム、尿素など、あるいは天然窒素含
有物、例えばペプトン、肉エキス、酵母エキス、乾燥酵
母、コーン・スチープ・リカー、大豆粉、カザミノ酸な
どが単独または組み合わせて用いられる。そのほか、必
要に応じて食塩、塩化カリウム、炭酸カルシウム、燐酸
第一カリウム、燐酸第二カリウムなどの燐酸塩、アルカ
リ金属塩などの無機塩類を加えるほか、使用菌の生育や
クリプトスポリンの生産を促進する有機物や無機物を適
当に添加することができる。

培養法としては、液体培養法、と（に深部攪拌培養法が
適している。培養は温度２０〜３０℃、好ましくは２５
〜２７℃で、培地のｐＨは炭酸カルシウムを加えるかあ
るいはアンモニア水や炭酸アンモニウム溶液などを添加
して、ｐＨ４〜１０、好ましくは５〜７で行われる。液
体培養で通常１日ないし７日培養を行うと、目的物質が
培養液中に生成蓄積される。培養液中の生成量が最大に
達したときに培養を停止し、菌体を戸別して得られる培
養液中より目的物を精製単離する。

培養Ｆ液からのクリプトスポリンの単離精製には、微生
物代謝生産物を、その培養液から単離するためにふつう
用いられる分離、精製の方法が利用される。

以下本発明の態様を実施例によって説明する。

実施例１ 種菌としてエキソバシディウム・ハチジョウェンセＫＡ
Ｃ−１９０８（ＦＥＲＭ　　ＢＰ−’？’？ｌ　　）を
用いた。該菌株を２１容量の三角フラスコ中のＭｉｌ培
地（シェークロース２０ｇ／Ｉｌ、グルコースｌＯｇ／
１２、コーン・スチープ・リカー１０ｇ／ｌ、ＫＨ２Ｐ
Ｏ４５ｇ／ｌ、Ｍｇ５Ｏ，−７８２００、５ｇ　／　１
の組成を有する培地ｐＨ６，５（殺菌前）３００ｍ’ｌ
に植菌し、２８℃　で４８時間振とう（２２Ｏｒ、ｐ、
ｍ、）培養した。得られた種培養を３０１容量のジャー
ファーメンタ−中の下記組成の発酵培地１５１に、５％
（容量）の割合で植菌し、２５℃で通気攪拌方式（回転
数２５Ｏｒ、　ｐｏｍ、　；通気量１５ｍ？／ｍ１ｎ）
により培養を行った。　発酵培地組成：シェークロース
５０ｇ／ｌ、グルコース２０ｇ／ｌ、コーン・スチープ
・リカー　２０ｇ／ｌ、炭酸カルシウム５ｇ／ｌ、ＫＨ
２Ｏ４５ｇ／ｌ、Ｍｇ５Ｏａ　　・７Ｈ＊０　０．５ｇ
＃、ｐ　Ｈ６，５（殺菌前）にＮａＯＨで調整した。

培地のｐＨはコントロールせずに９３時間培養した結果
、培養液中にクリプトスポリンを標品とし、これに換算
した値で２００■／ｍｌの濃度で抗菌物質が蓄積してい
た。

培養液にインプロパツールを３１添加し攪拌後、菌体お
よび沈殿物を戸別し、ｐ液１５１を得た。

これを非イオン性吸着樹脂：５Ｐ２０７（三菱化成工業
社製）を充てんしたカラムに吸着させ、５０％メタノー
ルで不純物を溶出させた後、メタノールで活性物質を溶
出させた。メタノール溶出画分を濃縮してｐＨを４．５
にＨＣｌで調整し、活性物質を沈殿させた。沈殿を集め
、１０ｍＭの酢〕　酸で洗った後、メタノールに溶解し
、濃縮すると黄色の粗結晶６６０ｍｇが得られた。粗結
晶をクロロホルムに溶解させシリカゲル（ワコーゲルＣ
２００、和光純薬工業社製）を充てんしたカラム（５０
０ｍｌ）に吸着させ、クロロホルム（４００ＩＴｌｌ）
、クロロホルム：メタノール（５０：　１．３００ｍ１
）、クロロホルム：メタノール（２０：１．４００ｍ１
）で溶出を行った。活性物質を含む両分を濃縮し、４℃
に一夜放置すると黄色板状結晶（５’？Ｏｍｇ＞が得ら
れた。この黄色板状結晶は下記の物理化学的性質を示し
クリプトスポリンの標品のものと一致した。

元素分析値：Ｃ：５９．１４％、Ｈ：４．０５％。

Ｎ：０％ ［ＩＶ吸収極大：２８７ｎ…、４０８ｎｍ分　子　量：
２Ｔ６（ＥＩマススペクトル法）分子式：Ｃ＋４８＋＊
Ｏｓ 発明の効果 ゛　　本発明方法によれば、抗菌活性、抗真菌活性を有
するクリプトスポリンを、高収率で得ることができる。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. エキソバシディウム属に属し、クリプトスポリン生産能
   を有する微生物を培地に培養し、培養物中にクリプトス
   ポリンを生成蓄積させ、該培養物から蓄積したクリプト
   スポリンを採取することを特徴とする発酵法によるクリ
   プトスポリンの製造法。