JPH11500404A

JPH11500404A - ポリペプチド、特にタンパク質の可溶化および安定化のための方法および組成物

Info

Publication number: JPH11500404A
Application number: JP1510443A
Authority: JP
Inventors: シンホラ，マニンダー; ルビンフェルド，ジョゼフ; スターン，ウォーレン; ジェイ．ウォン，グレゴリー
Original assignee: カイロンコーポレイション
Priority date: 1988-10-05
Filing date: 1989-09-19
Publication date: 1999-01-12
Anticipated expiration: 2015-12-25
Also published as: CA1328634C; AU620926B2; EP0437478A1; AU4338289A; DK175923B1; ES2020357A6; IE893201L; IE63649B1; US5997856A; DK60691D0; DK60691A; US5730969A; WO1990003784A1; JP3120987B2; EP0437478B1

Abstract

(57)【要約】平成２年１２月１日前の出願であるので、条約に定める要約の翻訳文の提出が義務づけられていないため、要約及び選択図は掲載しない。

Description

【発明の詳細な説明】ポリペプチド、特にタンパク質の可溶化および安定化のための方法および組成物本発明は、選ばれたシクロデキストリン誘導体による、ポリペプチド、特にタンパク質の可溶化および／または安定化方法に関する。ポリペプチド、特にタンパク質と、選ばれたシクロデキストリン誘導体とを含んで成る可溶化および／または安定化された組成物も記載される。シクロデキストリンは環状オリゴ糖である。最も普通のシクロデキストリンは、６個のグルコース残基の環から成るα−シクロデキストリン；７個のグルコース残基の環から成るβ−シクロデキストリン；および８グルコース単位の環から成るγ−シクロデキストリンである。シクロデキストリンの内側の空洞は親油性であり、一方シクロデキストリンの外側は親水性である。この性質の組合せは、特に医薬との関連において、天然のシクロデキストリンの広範な研究を導き、そして多数の包接複合体が報告されている。β−シクロデキストリンは、その空洞サイズのために特に着目されているが、比較的低い水溶性（25℃において約1.8 ％ｗ／ｖ）および付随の腎毒性が製剤分野におけるそれの用途を制限している。天然シクロデキストリンの性質を変更する試みは、ヘプタキス（２，６−ジ− Ｏ−メチル）−β−シクロデキストリン、ヘプタキス（２，３，６−トリ−Ｏ− メチル）−β−シクロデキストリン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン−エピクロロヒドリンポリマー等の開発をもたらした。シクロデキストリンの分かりやすい概説および製剤研究におけるそれらの用途については、Pitha ら、Controlled Drug Delivery,S.D.Bruck編、第Ｉ巻、C RC Press,Boca Raton，Florida,第125-148 頁(1983)を参照のこと。更に最近の概説については、Uekamaら、CRC Critical Reviews in Therapeutic Drug Carri er System ,3(1)巻、１−40(1987)；Uekama, Topics in Pharmaceutical Science s 1987 、D.D.Breimer およびP.Speiser 編、Elsevier Science Publishers B.V. (Biomedical Division)、181-194(1987)；およびPagington,Chemistry in Brita in ,455-458頁（1987年５月）を参照のこと。様々な薬剤とα−，β−もしくはγ−シクロデキストリンまたはそれらの混合物との包接複合体は多数の関係者により記載されており、そして様々な利点がそれらの複合体にありとされている。それらの記載として、次のものを挙げることができる。 1. Tuttleは、包接複合体を形成せしめるための２，６−ジ−Ｏ−メチル−β −シクロデキストリンおよび２，３，６−トリ−Ｏ−メチル−β−シクロデキストリンの使用も記載している。 2. これは包接複合体ではなく、単に物理的混合物である。 3. これは混合物および／または包接複合体である。 4. この発明者らは、バルビツール酸誘導体、メフェナム酸、インドメタシンおよびクロラムフェニコールのシクロデキストリン包接体の既知の溶解性改善についても言及している。 5. この発明者らは、これを「隠蔽」化合物と称している。 6. この発明者らは、クラスレート化合物を形成せしめるのに使われるシクロデキストリン誘導体およびシクロデキストリン含有デンプン分解生成物についても言及している。上記に列挙した特許のうち、Hirai らの米国特許第4,659,696 号のみがタンパク質またはポリペプチドに関すると思われる。しかしながら、Hr ai らの特許の請求項から、包接複合体が形成されないこと、そして発明者が提供するものが親水性の生理学的に活性なポリペプチドとシクロデキストリンとの物理的混合物から本質的に成る医薬組成物であり、前記組成物は剤形の均質混合物であることが明らかであろう。シクロデキストリンは、α−，β−もしくはＴ −シクロデキストリン、またはトリ−Ｏ−メチルシクロデキストリンおよびトリアミノシクロデキストリンにより例示されるシクロデキストリン誘導体であることができ、α−シクロデキストリンが特に好ましい。生理学的に活性なポリペプチドは、甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン、黄体形成ホルモン放出ホルモン、インスリン、ソマトスタチン、成長ホルモン、プロラクチン、副腎皮質刺激ホルモン、メラニン細胞刺激ホルモンまたは多数の他のものであることができる。この組成物は、鼻、膣または直腸用製剤のためにデザインされ、即ち非経口または非注射の投与経路が使われる。 Matsuyama ら、Drug Development and Industrial Pharmacy，13(15)、2687-2 691(1987)は、α−，β−およびγ−シクロデキストリンへの芳香族アミノ酸の結合の熱力学に関して報告している。芳香族アミノ酸を含むヒト血清アルブミンもタンパク質モデルとしてテストした。前記著者らは、シクロデキストリンが酵素加水分解からペプチドを保護し得ることを示唆している。また、1984年６月16 日に公表された積水化学(Sekisui Chemical Co.,Ltd.)の日本国特許公開公報 JP 59 ／104556（84／104556）によれば、β−シクロデキストリンのような環状オリゴ糖が、血液中のタンパク質および酵素の変性を防ぐタンパク質安定化剤において最近使用されている。オクチルフェノキシポリ（エトキシエタノール）およびβ −シクロデキストリンと混合されたヒト血液は、ほとんど変化なく24時間維持された。鎮痛、制吐および麻酔強化活性を有するジベンゾ〔ｂｄ〕ピラン誘導体および塩と２，６−ジ−Ｏ−メチル−β−シクロデキストリンとの包接複合体は、Nogr adi らの米国特許第 4,599,327号に記載されており、それらの複合体についての増加された水溶解性および改善された生物活性が主張されている。そのようなメチル化シクロデキストリンの製薬用途は、Uekama，Pharm.Int.，1985年５月、61 −65により発表されている。Pitha,Journal of Inclusion Phenomena 2、477-48 5(1984)も参照のこと。フロセミドの溶解を改善するためにFenyvesiら、Chem.Pharm.Bull.，32(2)、6 65-669(1984)によりシクロデキストリンポリマーが報告されている。水溶性β- シクロデキストリンエピクロロヒドリンポリマーを使ったフェニトインの溶解および吸収の改良はUekamaら、Internatinal Journal of Pharmaceutics, 23、35 -42(1985)により記載されている。ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン(HPBCDまたはHPCD)およびβ− シクロデキストリンへのプロピレンオキシドの付加によるそれの調製方法は、20 年近く前のGramera らの米国特許第 3,459,731号に記載されている。Gramera らは、エチレンオキシドとβ−シクロデキストリンとの反応によるヒドロキシエチル−β−シクロデキストリンの類似の調製方法も記載している。ずっと最近になって、Pitha と共同研究者らは、このシクロデキストリン誘導体の改良調製方法および種々の薬剤分子の溶解におけるそれの効果を記載している。1986年６月24 日発行のPitha の米国特許第 4,596,795号は、性ホルモン、特にテストステロン、プロゲステロンおよびエストラジオールと、特定のシクロデキストリン、好ましくはヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンおよびポリ−β−シクロデキストリンとの包接複合体を記載している。この複合体は、性ホルモンを舌下または頬経路で全身循環系に好都合に供給することができる。この供給システムの有効性は、「シクロデキストリンの親水性誘導体の高溶解力、ステロイドとそれらとの複合体の非凝集性構造、並びに口組織への低い毒性および刺激性」のためであると思われる。ポリ−γ−シクロデキストリンおよびヒドロキシプロピル− γ−シクロデキストリンを含む他のシクロデキストリンでの成功もまた、Pitha の特許に記載されている。同一および関連の研究に関するPitha ら、J.Pharm.Sc i. ，74(9)、987-990（1985年９月）も参照のこと。Pitha らは、J.Pharm.Sci.の論文において、テストステロン−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン複合体を含有する錠剤の貯蔵安定性およびシクロデキストリン自体に毒性がないこと、並びに溶解性を改善する上でのシクロデキストリン誘導体およびそれらと薬剤との複合体の非晶性質の重要性を記載している。改良され最適化されたヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンの調製および精製は、Pitha ら、International Journal of Pharmaceutics，29、73-82 (1986)により最近記載されている。同じ刊行物において、前記著者らは、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンの濃（40〜50％）水溶液中での32種の薬剤についての増加された水溶解性；アセトアミノフェン、アポモルフィン、ブチル化ヒドロキシトルエン、クロルタリドン、コレカルシフェロール、デキサメタゾン、ジクマロール、ジゴキシン、ジフェニルヒダントイン、エストラジオール、エストリオール、エチニルエストラジオール−３−メチルエーテル、エチステロン、フロセミド、ヒドロフルメチアザイド、インドメタシン、リン酸イプロニアジド、17−メチルテストステロン、ニトログリセリン、ノルエチンドロン、ウアバイン、オクスプレノロール、プロゲステロン、レチナール、レチン酸（全てのトランスおよび塩形）、レチノール、スピロノラクトン、スルピリド、テストステロン、およびテオフィリンの改善された可溶化が記載されている。前者著者らは、これを、ヒトへの性ホルモンの経口投与に効果的であると以前に発見したヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンに関する彼らの初期研究の拡張であると指摘した。Pitha ら、International Journal of Pharmaceutics，29、7 3-82(1986)において報告された彼らの後期研究は、ごく最近、1988年２月23日に発行されたPitha の米国特許第 4,727,064号にも記載された。その特許は、シクロデキストリンと薬剤との非晶質複合体を含有する組成物；薬剤とシクロデキストリン混合物との安定性非晶質複合体の製造方法であって、(1)水溶性であり且つ薬剤と包接複合体を形成することができるシクロデキストリン誘導体の本質的に非晶質の混合物を水に溶解し、そして(2)水性媒質中に親油性薬剤を可溶化して溶液を形成せしめそして可溶化された薬剤／シクロデキストリン複合体を形成せしめることを含んで成る方法をクレームしている。この特許明細書において多数の薬剤を使った研究が報告されているが、タンパク質または他のペプチドを全く包含しない。前記特許明細書は、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンおよびヒドロキシプロピル−γ−シクロデキストリン（後者はプロピレンオキシドとγ−シクロデキストリンとの同様な縮合による）を含む、種々の置換された非晶質シクロデキストリンの調製を記載している。 Uekamaら、CRU Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, ３ (1)、1-40(1987)は、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンを含む種々のシクロデキストリンの特徴を記載している。前記著者らは、薬剤カルモフル、ジアゼパム、ジギトキシン、フルビプロフェン、インドメタシン、イソソルビドジニトレート、フェニトイン、プレドニソロン、プロゲステロンおよびテストステロンについて、15mg／mlのHPBCD の存在下での改善された水溶解性を示すデータを与えている。シクロデキストリンの代謝および毒性の考察において、Ueka maらは、低−中濃度のシクロデキストリン（普通は３−８％ｗ／ｖおよびそれ以上）が溶血を引き起こすこと、そしてメチル化シクロデキストリンが天然のシクロデキストリンよりも高い溶血活性を有することを指摘している。ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンは4.5mMで溶血を開始させると述べられている。前記著者らは、多量のシクロデキストリンの非経口投与を避けるべきであるが、「γ−シクロデキストリンとヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンは、粘膜用に使われる液体製剤と注射剤のための薬剤可溶化に有用であると思われる」と更に指摘している。タンパク質のようなポリペプチドとの使用については言及されていない。 1985年７月４日に国際公開番号 WO 85／02767 のもとに公表されたJASSEN PHA RMACEUTICA N.V．の国際特許出願 PCT／ EP 84／00417 は、水中で不安定であるかまたは控えめにのみ可溶である薬剤とヒドロキシアルキル基および所望により追加のアルキル基を有する部分的にエーテル化されたβ−シクロデキストリン誘導体との包接化合物を含んで成る医薬組成物を記載している。中でも期待されるシクロデキストリン誘導体はヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンおよびヒドロキシエチル−β−シクロデキストリンであり、一方薬剤としては非ステロイド系抗リウマチ剤、ステロイド、強心配糖体並びにベンゾジアゼピン、ベンズイミダゾール、ピペリジン、ピペラジン、イミダゾールおよびトリアゾールの誘導体が挙げられる。好ましい薬剤としては、エトミデート、ケトコナゾール、ツブラゾール、イトラコナゾール、レボカバスチンおよびフルナリジンが挙げられる。該発明の医薬組成物は、種々の薬剤を可溶化するためにシクロデキストリン誘導体の４〜10％溶液を使った、経口、非経口および局所製剤を包含する。10％HPBCD を使ったインドメタシン、ジギトキシン、プロゲステロン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾンおよびジアゼパムの改善された溶解性が示されており、そして７％HPBCD 中のジアゼパムの注射用製剤が特別に記載されている。使用される比較的低いシクロデキストリン濃度が、高いシクロデキストリン濃度で観察される溶血作用を回避するかまたは最小にしたいという願望を反映している。 Carpenter ら、The Journal of Pediatrics, 111 、507-512(1937年10月）は、重いビタミンＡ過剰症を処置するための、水中５％溶液として調製された、２ −ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンの点滴静注液を記載している。点滴注入中、循環しているレチニルエステルが一時的に増加し、一方尿中に排出される全ビタミンＡが点滴注入後増加することが認められた。５％HPBCD の点滴静注液は、おそらくビタミンと複合体形成しそして過剰量の幾らかを体内から除去することにより、ビタミンの生体内レベルを減少させることがわかった。「水溶性β−ヒドロキシシクロデキストリン」中のエストラジオールの脳特異的供給のための特定のジヒドロピリジン究者らにより、Estes らの“Use of a Chemical Redox System for Brain Enhan ced Delivery of Estradiol Decreases Prostate Weight”の箇所にBiological Approaches to the Contorolled Delivery of Drugs ，R.L.Juliano 編、Annals of the New York Ac adomy of Sciences，第507巻、1987、334-336 中に報告されている。 1986年10月15日にＥＰＯ公開第 0197571号のもとに公表されたJANSSEN PHARMA CEUTICA N.V.のヨーロッパ特許出願第86200334.0号は、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、ヒドロキシＣ₁−Ｃ₆アルキル、カルボキシＣ₁−Ｃ₆アルキルもしくはＣ₁−Ｃ₆アルキルオキシカルボニルＣ₁−Ｃ₆アルキルで置換されたγ−シクロデキストリンまたはそれらの混合エーテルであるγ−シクロデキストリンを記載している。中でも名を挙げられた特定の誘導体は、ヒドロキシプロピル−γ−シクロデキストリンとヒドロキシエチル−γ−シクロデキストリンである。そのようなシクロデキストリン誘導体と薬剤を含んで成る組米国特許第 4,764,604号も参照のこと。更に他の誘導化されたシクロデキストリンの包接特徴も文献中に記載されている。α−，β−およびγ−シクロデキストリンのグルコシルおよびマルトシル誘導体である技分れシクロデキストリン並びにそれらと薬剤との包接複合体の研究が最近報告されている。Uekama, Topics in Pharmaceutical Sciences 1987 、D .D.Breimer およびP.Speiser 編、Elsevier Science Publishers B.V.(Biomedic al Division)、181-194（1987）は、増強された薬剤吸収を含む、マルトシルおよびグルコシルシクロデキストリン誘導体の生物薬剤学的性質における効果を記載している。その刊行物において、Uekamaは天然のシクロデキストリンがγ＜α＜βの順で溶血を引き起こすと指摘している。化学的に修飾されたシクロデキストリンの場合、この順序はヒドロキシエチル −β＜マルトシル−β＜ヒドロキシプロピル−β＜β〈メチル−βに変わる。 Koizumi ら、Chem.Pharm.Bull.，35(8)、3413-3418(1987)は、グルコシルシクロデキストリン、即ち６−Ｏ−α−Ｄ−グルコシル−α−ＣＤ（Ｇ₁−α−ＣＤ）、６−Ｏ−α−Ｄ−グルコシル−β−ＣＤ（Ｇ₁−β−ＣＤ）および６Ａ，６^D −ジ−Ｏ−α−Ｄ−グルコシル−β−ＣＤ（２Ｇ₁−β−ＣＤ）と水難溶性薬剤との包接複合体に関して報告している。 Okada ら、Chem.Pharm.Bull.，36(6)、2176-2185(1988)は、マルトシルシクロデキストリン、即ち６−Ｏ−α−マルトシル−α−ＣＤ（Ｇ₂−α−ＣＤ）、６ −Ｏ−α−マルトシル−β−ＣＤ（Ｇ₂−β−ＣＤ）、６−Ｏ−α−マルトシル −γ−ＣＤ（Ｇ₂−γ−ＣＤ）、６−Ｏ−α−マルトトリオシル−α−ＣＤ（Ｇ₃ −α−ＣＤ）、６−Ｏ−α−マルトトリオシル−β−ＣＤ（Ｇ₃−β−ＣＤ）および６−Ｏ−α−マルトトリオシル−γ−ＣＤ（Ｇ₃−γ−ＣＤ）と水難溶性薬剤との包接複合体に関して報告している。 Yamamotoら、International Journal of Pharmaceutics，49、163-171(1989) は、枝分れβ−シクロデキストリン、例えばグルコシル−β−シクロデキストリン、マルトシル−β−シクロデキストリンおよびジ−マルトシル−β−シクロデキストリンの物理化学的性質、並びにそれらの包接性質を記載している。前記著者らは、枝分れβ−シクロデキストリンが水難溶性薬剤のためのより優れた可溶化剤であり、そしてβ−シクロデキストリン自体よりも低い溶血活性を有することを報告しており、彼らはグルコシル− β−シクロデキストリンとマルトシル−β−シクロデキストリンが非経口製剤において特に有用であり得ると提案している。特許文献は、下記に記載するような日本の研究者により実施された枝分れシクロデキストリンに関する多数の最近の研究を反映している。 1988年６月７日に公表された日本国特開昭63−135402(TOKUYAMA SODA KK)は、マルトシル−β−シクロデキストリンと、ジギトキシン、ニフェジピン、フルルビプロフェン、イソソルビドニトレート、フェニトイン、プロゲステロンまたはテストステロンの少なくとも１つとから成る組成物を記載している。該組成物は、改善された水溶解性および減少された赤血球破壊を有し、ヒトに安全であり、そして注射剤、点眼剤、シロップとして、並びに局所および粘膜適用に用いることができる。 1987年12月７日に公表された日本国特開昭62−281855(DAIKIN KOGYO KK)は、マルトシル−β−シクロデキストリンと様々なビタミンおよびホルモン、例えばステロイドホルモン、例えばプレドニソロン、ヒドロコルチゾンおよびエストリオール、との安定な水溶性包接化合物を記載している。こうしてそれらの親油性ビタミンおよびホルモンを水溶液として使用することができる。 1988年２月17日に公表された日本国特開昭63−036793 (NIKKEN CHEM KK)は、ジマルトシル−γ−シクロデキストリンの調製および医薬におけるそれの一般用途を記載している。 1987年５月18日に公表された日本国特開昭62−106901(NIKKEN CHEM K.K)は、ジグルコシル−β−シクロデキストリンの調製および製薬のためのそれの一般用途を記載している。 1986年10月22日に公表された日本国特開昭61−236802(NIKKEN CHEM KK)は、マルトシル−γ−シクロデキストリンの調製および製剤と一緒のそれの一般用途を記載している。 1986年９月１日に公表された日本国特開昭61−197602(NIKKEN CHEM KK)は、マルトシル−β−シクロデキストリンの調製および医学において期待されるそれの用途を記載している。 1986年４月11日に公表された日本国特開昭61−070996(NIKKEN CHEM KK)は、マルトシル−α−シクロデキストリンおよび製薬におけるそれの一般用途を記載している。 1988年２月５日に公表された日本国特開昭63−027440(SANRAKU OCEAN)は、グルコシル化された枝分れシクロデキストリンと共に水不溶性または微溶性薬剤を含有する組成物を記載している。製剤の中で言及されるのはステロイドホルモンである。 1987年７月21日に公表された日本国特開昭62−164701(SHOKUHIN SANGYO BIO) は、ジグルコンル−α−シクロデキストリンの調製および医学におけるそれの一般用途を記載している。 1987年１月９日に公表された日本国特開昭62−003795 (T0KUYAMA SODA KK)は、α−，β−およびγ−シクロデキストリンのグルコースおよび麦芽オリゴ糖（２−４グルコース単位）誘導体の製造並びに製薬のための安定剤としてのそれの用途を記載している。近年、治療または診断または分析用の、ポリペプチド、特にタンパク質を含む製品および潜在製品の数がものすごく増加している。典型的には、タンパク質または他のペプチドは、診断もしくは分析用途における使用または注射のために水溶液において製剤化される。不運にも、ペプチドはしばしば溶解性および／または安定性の問題を有している。例えば、あるタンパク質は水溶性でない。水溶性であっても、タンパク質の分解／変性、二量化および／または重合等により引き起こされる安定性の問題を有するものもあり、それらのいずれもが不活性化をもたらし得る。これは貯蔵寿命をひどく制限し、そしてしばしば低温貯蔵要件および機械的移動における制限を課する。共有結合反応を含むタンパク質／ペプチド不安定性または分解、例えば加水分解、および変性過程の原因は多数ある。変性の場合、タンパク質のコンホメーションまたは三次元構造が破壊され、そしてタンパク質は通常の球状構造からほぐれる。それの天然のコンホメーションに再生するよりもむしろ、疎水性相互作用は分子の凝集塊化または凝集を引き起こし得、または異常なコンホメーションへの再生を引き起こし得る。それらの最終結果のいずれかが生物活性の減少または損失を課する。タンパク質の不安定性の原因の要約については、Wangら、Journal of Parenteral Science and Technology ，Technical Repo rt No.10,“Parenteral Formulations of Proteins and Peptides:Stability an d Stabilizers”、増補42巻、第25号、1988年、pp.S3-S56 を参照のこと。上記で言及したWangらの刊行物は、タンパク質および他のペプチドの非経口製剤を安定化するための種々の賦形剤の技術用途も要約しており、例えば、血清アルブミン、アミノ酸、脂肪酸およびリン脂質、界面活性剤、金属、ポリオール、還元剤、金属キレート化剤、ポリビニルピロリドン、加水分解されたゼラチンおよび硫酸アンモニウムの使用を包含し、凍結条件および凍結乾燥下での変性を防止するかまたは少なくする凍結保護剤として使われる物質、例えば炭水化物、アルコール、ポリビニルピロリドンおよびグルタミン酸の使用を包含する。特定のタンパク質を安定化するために当業者により提案された賦形剤の例は、1984年７月３日に発行されたHayashi らの米国特許第 4,457,916号、KYOWA HAKKO KOGYO CO,LTDのヨーロッパ特許公告第 0123291号およびE.I.DUPONT DE NEMOURS AND CO MPANY'S のヨーロッパ特許公告第0231132号に記載されている。 Hayashi らの特許明細書は、非イオン性界面活性剤、Ｄ−グルコース、Ｄ−ガラクトース、Ｄ−キシロース、Ｄ−グルクロン酸、Ｄ−グルクロン酸の塩、トレハロース、デキストランおよびヒドロキシエチルスターチから選択された少なくとも１種の物質並びにそれらの混合物から選択された安定化剤を添加することにより、腫瘍壊死因子(TNF)を安定化する方法を記載している。ＴＮＦを含有する得られた水溶液または粉末は、活性の低下なしに長期間貯蔵することができ、そして凍結、解凍、凍結乾燥、熱処理等に対して安定であると述べられている。 1984年10月31日に発表されたヨーロッパ特許公報第0123291号は、所望により血清アルブミンの添加および更に安定性を増大せしめるための凍結乾燥を含む、インターフェロンへのアルカリ金属塩または塩化マグネシウムの添加を伴うインターフェロンの安定化方法を記載している。この特許公報は、デキストラン、コンドロイチン硫酸、デンプン、グリコーゲン、インスリン、デキストリンおよびアルギン酸塩から成る群から選択された糖とインターフェロンとを接触させることによりインターフェロンを安定化する方法も記載している。 1987年８月５日に公表されたヨーロッパ特許公告第0231132号は、組換えインターロイキン−２（ＩＬ−２）組成物およびそれの製造方法に関する。従来技術を論ずる際に、このヨーロッパ公告は、それより前のヨーロッパ特許公告第0133 767号を、ヒト白血球から得ることのできるγ−インターフェロンがアルブミンおよび／または糖の添加により安定化され得ることを開示していると言及している。糖としては、単糖、二糖、糖アルコールおよびそれらの混合物、例えばグルコース、マンノース、ガラクトース、フルクトース、スクロース、マルトース、ラクトース、マンニトールおよびキシリトールを挙げることができる。また、ヨーロッパ特許公告第0231132号は、グリセロールを使ったタンパク質（キモトリプシノーゲンおよびリボヌクレアーゼ）の安定化がGekko ら、Biochemistry 20、4677-4 686(1981)により報告されていることを認めている。ヨーロッパ特許公告第 0231 132号自体は、水、組換えインターロイキン−２および好ましくはポリオールを含んで成る組換えヒトＩＬ−２組成物に関する。適当なポリオールは、水混和性または水溶性であると述べられており、例えば、ポリヒドロキシアルコール、単糖および二糖、例えばマンニトール、グリセロール、エチレングリコール、プロピレングリコール、トリメチルグリコール、グルコース、フルクトース、アラビノース、マンノース、マルトースおよびスクロースである。ポリオールはＩＬ− ２の活性を増加させると述べられている。上述のものにもかかわらず、当業界においてタンパク質などのポリペプチドの可溶化および安定化のためのより有効で且つ一般的に適用可能な方法および組成物に対する明白で且つ緊急の要望が残っている。本発明は、β−およびγ−シクロデキストリンのヒドロキシプロピル、ヒドロキシエチル、グルコシル、マルトシルおよびマルトトリオシル誘導体を用いた、ポリペプチド、特にタンパク質の安定化および／または可溶化のための方法および組成物を提供する。或る観点においては、本発明はポリペプチドの可溶化および／または安定化方法であって、前記ポリペプチドを、β−およびγ−シクロデキストリンのヒドロキシプロピル、ヒドロキシエチル、グルコシル、マルトシルおよびマルトトリオシル誘導体から成る群から選択されたシクロデキストリンの可溶化および／または安定化有効量と組み合わせることを含んで成る方法を提供する。好ましくは、前記デキストリンを含んで成る水溶液が使用される。別の観点において、本発明は、ポリペプチドと、可溶化および／または安定化有効量のβ−およびγ−シクロデキストリンのヒドロキシプロピル、ヒドロキシエチル、グルコシル、マルトシルおよびマルトトリオシル誘導体から成る群から選択されたシクロデキストリンとを含んで成る組成物、特に水性組成物を提供する。更に別の観点において、本発明は、ポリペプチドと安定化有効量のβ−およびγ−シクロデキストリンのヒドロキシプロピル、ヒドロキシエチル、グルコシル、マルトシルおよびマルトトリオシル誘導体から成る群から選択されたシクロデキストリンとを含んで成る凍結乾燥組成物を提供する。好ましくは、上述の方法および組成物は、生物学的に有用なタンパク質製剤の改良に向けられる。本発明の目的および利点は、下記の詳細な記載および添付図面から明らかであろう。図１は、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン(HPBCD)の濃度（％ｗ／ｖ）を増加させていった時のインターロイキン−２（ＩＬ−２）試料についての初期光散乱の指標としての蛍光単位のプロットである。図２は、ショ糖増量剤を含むＩＬ−２（１mg／ml）のHPBCD製剤試料についての初期光散乱の指標としての蛍光計単位のプロットである。図３は、未製剤化ＩＬ−２に比較した時のHPBCD と共に製剤化されたＩＬ−２試料の超遠心の結果を表わす棒グラフである。図４は、増加していく濃度のHPBCD を含むＩＬ−２試料の生物活性を表わす片対数プロットである。本発明に従って使用されるポリペプチドは、生物学上または産業上有用である任意のポリペプチドである。本発明の生物学上有用なポリペプチドは、ヒトもしくは動物における病気の診断、治療、緩和、処置もしくは予防において、またはヒトもしくは動物における望ましい肉体もしくは精神の発達および状態の増強において使用することができる任意のポリペプチドである。ヒトおよび／または脊椎動物医学または診断（生体内または生体外）において使用されるポリペブチド、特にタンパク質が特に着目される。産業上有用なポリペプチドは、分析的に使用されるもの、生産に使用されるもの、または化学工業において有用であるものである。アミノ酸は、少なくとも１個のアミノ(−NH₂)基と少なくとも１個のカルボキシル（−COOH）基を有する有機化合物である。オリゴペプチドは、アミノ基と別のアミノ酸のカルボキシル基とを反応させて水１分子を遊離させ、そしてペプチド結合を形成せしめることにより形成されるアミノ酸オリゴマーである。ポリペプチドは、同じやり方で形成されるアミノ酸ポリマーである。一般に、オリゴペプチドは２〜20個のペプチド結合を有し、ポリペプチドはそれより多数のペプチド結合を有する。タンパク質は非常に大きなポリペプチドである。本発明のポリペプチドを構成するアミノ酸は、天然でも合成でもよく、いずれかの非カルボニル炭素原子（例えば、アミノ酸のα− COOH基から数えてα，β，γ，δまたはε炭素）にアミノ基が結合していてもよく、エナンチオマー（例えばＤ−またはＬ−）またはジアステレオマーとして存在してもよく、保護されたカルボキシまたはアミノ基を有してもよく、そして疎水性、親水性、酸性、塩基性または中性である側鎮を有してもよい。合成ポリペプチドは逆向きのペプチド結合を含むことができるが、その場合それらは少なくとも１個のジアミンと１個のジカルボン酸モノマーを含有しなければならない。本発明の方法および組成物に使用されるポリペプチドには、非ペプチド補欠分子群、例えば炭水化物、ヘムおよび脂肪酸が結合している分子が含まれる。該ポリペプチドは、生存している生物または細胞により作られる分子、合成有機化学により作られる分子、および合成的に改変された生物学的生成物である分子を包含する。それらは、天然物質のものと同一のアミノ酸配列を有するか、または部位特異的突然変異誘発のような技術により変更された配列を有することができる。共有結合（一次）構造に加えて、ポリペプチドは、それらの生物学的機能、水溶解性、およびシクロデキストリンと相互作用する能力に影響を及ぼす固有のコンホメーション（二次、三次および四次構造の組合せ）を有することができる。ポリペプチドは多数の生物学的機能を有することができ、それらは酵素；酵素阻害剤；抗体；抗原；電子、酸素、金属イオンまたは小さい有機分子の輸送体；イオノホア；抗生物質；分裂促進因子；ホルモン；成長調節因子；神経伝達物質；細胞表面認識タンパク質；細胞走化性因子；および細胞毒として働くことができる。それらはまた、次のもののレセプター、アゴニスト、アンタゴニストであってもよい：イオノホア、抗生物質、分裂促進因子、ホルモン、神経伝達物質、成長調節因子、細胞表面認識タンパク質、細胞走化性因子および細胞毒。本発明の幾つかの好ましいポリペプチドの用途としては、次のものが挙げられる：免疫処置(ワクチンアジュバントとして)、生体外診断薬（抗原もしくは抗体の非特異的結合を少なくするためまたは溶解性／安定性を高めるため）並びに生体内診断薬および治療薬（治療薬および診断薬ポリペプチドの溶解性／安定性を高めるため）。それらのポリペプチドの好ましい治療標的は、癌、例えば黒色腫、腎細胞癌、骨髄腫、白血病、乳癌、結腸癌、リンパ腫、神経芽腫、星状細胞腫および神経膠腫；自己免疫疾患、例えば真性糖尿病、慢性関節リウマチおよび多発性硬化症；免疫不全症；並びに感染症である。ポリペプチドの中で本発明により期待されるのは、療法上有用なポリペプチド、例えば抗血清、抗毒素および抗体である。抗血清としては、例えば、抗狂犬病、抗ベニン（ブラックウイドウグモ毒液）、Ｂ型肝炎免疫グロブリン、破傷風免疫グロブリン、静内免疫グロブリン、百日咳免疫グロブリンおよび狂犬病免疫グロブリンが挙げられる。抗毒素としては、例えば、ジフテリアおよび破傷風のためのもの；Rh。(D)免疫グロブリン；血清成分、例えば５％正常ヒト血清アルブミン、５％血漿タンパク質画分、20％正常ヒト血清アルブミン、25％正常ヒト血清アルブミン、25％正常ヒト血清アルブミン、第II因子、第VII因子、第VIII因子、第IX因子、第ＸおよびＸa因子、抗トロンビンIII、トランスフェリン、ハプトグロビン、フィブロネクチン、γグロブリン、プロテインＣ、プロテインＳおよびトロンビン；トキソイド、例えぼジフテリアおよび破傷風トキソイド；弱毒化ワクチン〔例えばコレラ、インフルエンザ、髄膜炎、ペスト菌（Yersinia pestis）または悪疫、肺炎、ポリオ、狂犬病、チフスおよびブドウ球菌に対するもの〕および生ワクチン（例えばポリオ、麻疹、風疹およびおたふくかぜに対するもの）；成長因子、ホルモンおよび類似の生物活性ポリペプチド、例えばα−１−抗トリプシン、心房性ナトリウム利尿因子（利尿薬）、カルシトニン、カルモジュリン、コリオゴナドトロピン（αおよびβ）、コロニー刺激因子、副腎皮質刺激ホルモン放出ホルモン、β−エンドルフィン、内皮細胞増殖補足因子、表皮増殖因子、エリトロポイエチン、繊維芽細胞増殖因子、フィブロネクチン、濾胞刺激ホルモン、顆粒球コロニー刺激因子、成長ホルモン（ソマトトロピン）、成長ホルモン放出因子（ソマトリベリン）、インスリン、インスリン様成長因子（ソマトメジン）インターフェロン（典型的にはα，β，γ）、インターロイキン（典型的には１，２，３，４）、ルトロピン、リンホトキシン、マクロファージ由来成長因子、マクロファージ阻止因子、マクロファージ刺激因子、巨核球刺激因子、神経成長因子、膵臓エンドルフィン、副甲状腺ホルモン、血小板由来増殖因子、レラキシン、セクレチン、骨成長因子、スーパーオキシドジスムターゼ、胸腺ホルモン、胸腺因子、チモポイエチン、チロトロピン、組織プラスミノーゲン活性化因子、形質転換増殖因子（αおよびβ）、腫瘍壊死因子、腫瘍血管形成誘導因子、血管作動性腸ポリペプチドおよび傷害血管形成誘導因子；免疫抑制剤、例えばRh。(D )ISGおよびIVGG；血栓崩壊剤、例えばウロキナーゼ、ストレプトキナーゼおよび組織プラスミノーゲン活性化因子；並びに抗原、例えばツタウルシ(Rhus all)、毒ウルシ(phus tox)およびブドウ球菌溶解物が挙げられる。本発明により期待される別のポリペプチドは、特に獣医学用のポリペプチドであり、ワクチン、動物成長因子並びにウシインターフェロンおよびインターロイキン−２を含む。代表的なワクチンとしては、ウシワクチン、例えば炭疸菌、クロストリジウム菌（多種）、パスツレラ菌、レプトスピラ・ポモナ菌(Leptospir a pomona )、ウシの下痢、ブルセラ症、パラインフルエンザ、３−ＲＳウイルス、破傷風、水疱性口内炎およびブドウ球菌に対するもの；イヌワクチン、例えばボルデテラ菌、コロナウイルス、ジステンバー、パルボウイルス、パラインフルエンザおよび狂犬病に対するもの；ウマワクチン、例えば炭疸、脳脊髄炎、インフルエンザ、破傷風、狂犬病および連鎖球菌腺疫に対するワクチン；ネコワクチン、例えば白血病、肺炎−クラミジアおよび狂犬病に対するもの；ヒツジワクチン、例えば炭疸、気腫疸、ブルータング、陽性毒血症、破傷風およびビブリオ症に対するもの；並びにブタワクチン、例えば炭疸、陽性毒血症、赤痢、丹毒、レプトスピラ症、パルボウイルス、偽性狂犬病、破傷風およびロタウイルスに対するものが挙げられる。本発明により期待される更に別のポリペプチドは免疫学における用途を有する。そのようなものとしては、モノクローナル抗体（非接合）、二次抗体（アルカリホスファターゼ接合）、免疫グロブリンスクリーニングおよびイソタイピングキット、プロテインＡ製品およびイムノアッセイ試薬が挙げられる。モノクローナル抗体のうち、診断キット用に承認されるものは、例えばIgE、ペルオキシダーゼ−抗ペルオキシダーゼ接合体、ヒト絨毛性性腺刺激ホルモン、Ｔ細胞、フェリチン接合体、癌胎児性抗原(CEA)、OKT- II、抗−狂犬病、ヒト成長ホルモン、 Total T4、プロラクチン、125 I-IgE、UCG、甲状腺刺激ホルモン、クラミジア、ゲンタマイシンおよび風疹に対するものである。他の有用なモノクローナル抗体としては、例えばヒト細胞表面抗原に対するモノクローナル抗体、マウス細胞表面抗原に対するモノクローナル抗体、補体および血液タンパク質に対するモノクローナル抗体、免疫グロブリン（ヒト）に対するモノクローナル抗体、神経学的抗原に対するモノクローナル抗体、腫瘍マーカーに対するモノクローナル抗体、細胞成分に対するモノクローナル抗体、エプスタイン−バーウイルス抗原に対するモノクローナル抗体、ヒトリンパ球抗原(HLA)タイプに対するモノクローナル抗体、血液学的抗体、白血球抗体、細菌抗原に対する抗体、寄生虫抗原に対する抗体、Ｔ−細胞リンパ栄養ウイルス（HIV-III）抗体および細胞骨格抗体が挙げられる。有用なポリクローナル抗体（非接合）としては、免疫グロブリンに対するアフィニティー精製抗体、植物ウイルスに対する抗体、ヒトイソ酵素に対する抗体、およびクロマトグラフィー精製抗体が挙げられる。有用なアルカリホスファターゼ接合二次抗体は、免疫グロブリンに対するアフィニティー精製抗体、植物ウイルスに対する抗体、ビオチン接合抗体、フルオレセインイソチオシアネート（FITC）接合抗体、金接合抗体、ペルオキシダーゼ接合抗体、ローダミン接合抗体およびヨウ素接合抗体を包含する。ポリペプチドイムノアッセイ試薬は、ＥＩＡ級の酵素、酵素−抗体複合体、免疫学用試薬、標準または対照として用いられるエンザイムリンクドイムノソルベントアッセイ(ELISA) 用試薬、免疫電気泳動(IEP)アッセイ用試薬、標準または対照として使用されるラジオイムノアッセイ(RIA)用試薬、標準または対照として使用される比濁分析用試薬、キットチューブおよびプレートウエル用の核抗原およびコーティング試薬を包含する。本発明により期待される別のポリペプチドは、細胞生物学／生化学において、例えば無血清培養において（細胞培養用試薬および補足物として）、糖タンパク質および炭水化物研究において（エンドグリコシダーゼ、エキソグリコシダーゼ、炭水化物研究用酵素、糖タンパク質のオリゴ糖の分析用酵素）、分子量マーカーとして（例えばゲル浸透クロマトグラフィー用の検量線作成タンパク質、サブユニットタンパク質）、プロテアーゼ（血液研究、タンパク質の配列決定、組織消化および細胞の収得、タンパク質の完全消化並びに固定化プロテアーゼにおいて使われる）、細胞表面認識タンパク質(アデノシンおよび類似体、環状ヌクレオチド、ホスホイノシチド) 、ホスホリパーゼおよび生物発光アッセイ試薬として、有用であるポリペプチドが挙げられる。本発明における使用が期待される更に別のポリペプチドは、分子生物学の分野において特に重要なポリペプチドであり、様々な酵素や試薬を包含する。酵素としては、標識用酵素、修飾用酵素、ヌクレアーゼ、ポリメラーゼ、配列決定用酵素および制限酵素を挙げることができる。試薬としては、阻害剤、抗生物質および様々な他の試薬を挙げることができる。本発明に従って使用される好ましいポリペプチドは成長調節物質を包含する。中でも好ましい成長調節物質は、リンパ組織および骨髄中の血球の成熟および増殖に影響を及ぼす造血因子；一般に真核生物の細胞増殖に影響を及ぼすサイトカイン；およびリンパ球の増殖に影響を及ぼすリンホカインである。成長調節物質またはリンホカインである特定のポリペプチドは、インターロイキン１，２，３および４；α，βおよびγインターフェロン；顆粒球コロニー刺激因子(G-CSF); 顆粒球−マクロファージCSF(GM−CSF); マクロファージCSF(m-CSF);巨核球ＣＳＦ；マルチＣＳＦまたはＩＬ−３（BPA，HCGF，MCGFおよびPSF としても知られている）；エリトロポイエチン；リンホトキシン；腫瘍壊死因子(TNF、またカケクチンとしても知られている)；αおよびβ形質転換増殖因子 (TGF);血小板由来増殖因子(PDGF)；表皮増殖因子(EGF);神経成長因子(NGF);インスリン様因子ＩおよびII(IGF IはソマトメジンＣとも呼ばれる)；成長ホルモン（ＧＨ、ソマトトロピンとも呼ばれる）；並びに成長ホルモン放出因子(GHRF、ソマトリベリンとも呼ばれる)である。Clark ら、“The Human Hematopoietic C olony Stimulating Factors”，Science,1229-1237（1987年６月５日）；Tanigu chi,“Regulation of Cytokine Expression”,Ann.Rev.Imm.，６、439-464(1988 )；およびWatsonら、Molecular Biolory of the Gene,第II巻、第４版、Benjami n/Cummings Publishing(1987)を参照のこと。本発明に使用される他の好ましいポリペプチドは融合タンパク質である。融合タンパク質は、共有結合したタンパク質またはタンパク質の部分である。別の目的を有するタンパク質またはそれの活性断片を結合させ、両方の性質を有する融合分子を提供することができる。一般的に言えば、一方のタンパク質／タンパク質断片が「捜索者(seeker)」であり、そしてもう一方が「行為者(actor)」または「破壊者(destro-yer)」である。そのような融合タンパク質の例は、ＩＬ−２に結合したシュードモナス外毒素、ＩＬ−２に結合したジフテリア毒素、他のタンパク質に結合した前記のいずれかの毒素、または前の段落に記載した好ましいタンパク質間の結合体、またはそれらの部分である。米国特許第 4,545,985; 4, 468,382;および 4,675,382号を参照のこと。この文献は全て、そのまま本明細書中に引用により組み込まれそして参照される。上述のような毒素と結合したＩＬ−２の融合タンパク質はＩＬ−２レセプターを使って細胞を殺すためにデザインされ、そして移植片拒絶を防止することにおいて用途を見出す。他の融合タンパク質は、組み合わされるタンパク質またはそれの部分に依存して、様々な利用性を有する。例えば、サブスタンスＰと毒素は、慢性の痛みを緩和するのに用いることができる融合タンパク質を形成し、一方 α−メラニン細胞刺激ホルモン(MSH)とジフテリア毒素は、黒色腫細胞を殺すためにデザインされた融合タンパク質を形成する。本発明に使用される更に別の好ましいポリペプチドは、突然変異により変更されたタンパク質であるミューテイン(mutein)である。好ましいミューテインは、前の段落に記載した好ましい成長調節物質および融合タンパク質のミューテインであり、そして典型的には、対応する未変更タンパク質と同じ目的を有する。特に好ましいミューテインとしては、米国特許第 4,752,585号および第 4,518,584 号（これは引用によりそのまま本明細書に組み込まれそして参照される）に記載されているＩＬ−２ミューテイン；並びに例えば米国特許第 4,737,462号および第 4,588,585号（これは引用によりそのまま本明細書中に組み込まれそして参照される）に記載されているβ−インターフェロンのミューテインが挙げられる。本発明に用いられるシクロデキストリンは、β−シクロデキストリンのヒドロキシプロピル、ヒドロキシエチル、グルコシル、マルトシルおよびマルトトリオシル誘導体並びにγ −シクロデキストリンの対応する誘導体である。ヒドロキシアルキル群は、１または複数のヒドロキシル基、例えばヒドロキシプロピル（２−ヒドロキシプロピル、３−ヒドロキシプロピル）、ジヒドロキシプロピル等を含むことができる。グルコシル、マルトシルおよびマルトトリオシル誘導体は、１または複数の糖残基、例えばグルコシルまたはジグルコシル、マルトシルまたはジマルトシルを含むことができる。様々なシクロデキストリン誘導体の混合物、例えばマルトシル誘導体とジマルトシル誘導体の混合物も同様に用いることができる。本発明において使用される特定のシクロデキストリンとしては、ヒドロキシプロピル−β− シクロデキストリン(HPCDまたはHPBCD)、ヒドロキシエチル−β−シクロデキストリン(HEBCD)、ヒドロキシプロピル−γ−シクロデキストリン(HPGCD)、ヒドロキシエチル−γ−シクロデキストリン(HEGCD)、ジヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン（2HPBCD）、グルコシル−β−シクロデキストリン(G₁-β- CD またはG₁BCD)、ジグルコシル−β−シクロデキストリン（2G₁-β-CD または2G₁B CD）、マルトシル−β−シクロデキストリン(G₂−β-CD またはG₂BCD)、マルトシル−γ−シクロデキストリン(G₂-γ-CD またはG₂GCD)、マルトトリオシル−β −シクロデキストリン(G₃-β-CD またはG₃BCD)、マルトトリオシル−γ−シクロデキストリン(G₃-γ-CD またはG₃GCD)およびジマルトシル−β−シクロデキストリン（2G₂-β-CD または2G₂BCD）、並びにそれらの混合物、例えばマルトシル− β−シクロデキストリン／ジマルトシル−β−シクロデキストリンが挙げられる。本発明の方法において使用されるヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンは市販されている。あるいは、既知の方法により、特にPitha ら、Internatio nal Journal of Pharmaceutics, 29、73-82(1986)の最適方法を用いることにより、調製することができる。次のものはPitha らの方法を使った典型的手順である。 31ｇの水酸化ナトリウムを 250mlの水に溶かした。次いで 100ｇのβ−シクロデキストリンを添加し、そして溶媒を温めて溶液にした。フラスコを冷却し、50 mlのプロピレンオキシドを添加した。添加中はフラスコにドライアイス／アセトン冷却器を取り付けた。溶液を室温に戻し、そして72時間撹拌した。次いで濃塩酸で溶液を中和し、水で希釈した。溶媒を減圧留去してシロップを残し、このシロップをエタノール中に取り出した。室温で30分間撹拌した後、生成した塩化ナトリウムを濾過により除去した。濾過ケークをエタノールで洗浄し、そして合わせたエタノール層を減圧留去した。残渣を水に溶かし、そして酢酸セルロース(# 7,38mm，4.6ml／cm，分子量カットオフ＝1000、Fisher Scientific)中で透析した。０℃で５時間後、透析チューブから溶液を取り出し、凍結乾燥した。得られた固体をアセトン中に懸濁し、一晩撹拌した。濾過した固体をアセトン中に再懸濁し、24時間撹拌した。濾過により固体を収集し、200mlの水に溶かし、そして凍結乾燥した。75ｇの精製ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンが得られた。ＮＭＲおよび真正試料との比較により、置換度を算出した。アルカリ性水溶液中でのプロピレンオキシドとβ−シクロデキストリンとの縮合によるPitha らのHPBCD の調製方法は、不運にも、特に生成物の精製において、欠点を有する。縮合の完了後、反応混合物を塩酸で中和し、減圧下で水を蒸発させ、そしてシロップ状残渣をエタノール中に溶解し、反応の主な副生成物である塩化ナトリウムを沈澱させる。濾過後、エタノールを減圧蒸発せしめ、残渣を水に溶解し、そして透析して残余の塩化ナトリウムとプロピレンオキシドの重合生成物を除去する。透析中、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンの一部が膜を通過して失われる。次いで透析物を凍結乾燥し、アセトン中で２回撹拌し、そして洗浄して残余の重合生成物を除去する。最後に、再びヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンを凍結乾燥する。二回目の凍結乾燥は、アセトンでの洗浄後の生成物が均質でないために必要である。 Pitha らの方法に伴うそれらの難点を克服するために、HPBCD の合成のための新規方法がフロリダ州ゲインスビリーのフロリダ大学のMaciej Smulkowski により開発された。この新規方法は、イオン交換樹脂（Ｈ⁺）による反応混合物からの水酸化ナトリウムの除去を伴う。結果として、Pitha らの精製の時間のかかる幾つかの段階を回避することができる。更に、Pitha らにより使用された水酸化ナトリウムの量（β−シクロデキストリン１当量に対して７当量）を、シクロデキストリン１分子あたり２当量の水酸化ナトリウムに減らすことができ、そして適当なＮＭＲおよび旋光度を有する生成物を生成することができる。この新規方法によれば、アルカリ溶液中でまずβ−シクロデキストリンをプロピレンオキシドと縮合せしめ、イオン交換カラム（Dowex 50W-X8,H⁺型）上で水酸化ナトリウムを除去し、溶出液をもとの体積の１／２まで減圧蒸発させ、残った溶液を凍結乾燥し、生じた白色固体をアセトンで洗浄し、再び凍結乾燥し、次いで粉砕および篩分けにかける。この方法の可能な変更は次のものを含む：(1) 樹脂の濾過および濾過用漏斗上での洗浄を伴う、反応フラスコ中での中和のためのイオン交換樹脂の使用；(2)シクロデキストリンを溶解するための水酸化カルシウム、マグネシウム、リチウムまたはカリウムの使用；(3)イオン交換樹脂の代わりに、二酸化炭素での反応混合物の飽和または硫酸での中和による、反応後の水酸化物の除去；(4)更に少量の水酸化ナトリウム（１〜２当量）の使用；および(5)二回目の凍結乾燥の削除。次のものは、新規改良方法を使った典型的な手順である。 50ｇのβ−シクロデキストリンを、75mlの水中の3.53ｇの水酸化ナトリウムの溶液に溶かし、そして０℃において29mlのプロピレンオキシドで処理した。反応混合物をその温度でで５時間維持し、次いで室温で42時間維持した。その時間の終了後、反応混合物をDowex 50W-X8カラム（H⁺型）に通し、カラムを水で洗浄し、そして溶出液を 100mlの容量まで減圧蒸発せしめ、次いで凍結乾燥した。生じた白色固体をアセトンで洗浄すると、Pitha らの方法により調製されたHPCDと同じ置換度(4.7)およびＮＭＲを有する51ｇのHPCDが得られた。旋光度もPitha らの生成物のものと同一であった。 7.71ｇの水酸化ナトリウムを使った25ｇのβ−シクロデキストリンの縮合も同様な結果を与えた。新規改良HPBCD 合成における更なる改良は、最後の凍結乾燥前の溶液の精製のために活性炭を使用することである。Dowex 50イオン交換カラムからの水溶液を活性炭で処理すると、HPBCD の損失なしに重合生成物のほとんどが除去され、そして酢酸エチルでの１回のみの洗浄後の濾液はすぐに最後の凍結乾燥にかける用意ができていた。こうして、１回のみの凍結乾燥が必要であった。凍結乾燥の代わりに最終生成物の結晶化も、少なくとも小スケールでは、可能である。この改良新規方法（活性炭を使用）からの生成物は、もとの新規方法およびPi tha らの方法の生成物よりも優れているように見える。第一に、生成物は真白でありそして無色の水溶液を与えるが、初期の生成物の溶液は黄色であった。第二に、生成物は油状でなく、これはより高度に置換された難溶性の油状シクロデキストリンの除去によるかもしれない。 HPBCD は、他の置換度、例えば５または７の置換度において調製することができる。典型的には、上記の手順のHPBCD(ASD7)を製造するために使われる。HPBCD の異性体混合物の質量スペクトルは、置換度７に集中する。このスペクトルは、高速原子衝撃を使って試料を「穏やかに」イオン化することにより得られる。生成したスペクトルは、異性体分布の対称性および形成された異性体の数の広がりの両方において、以前に報告されたもの(Californium-252プラズマ脱着により得られたもの)と同様である。ヒドロキシエチル−β−シクロデキストリン(HEBCD)は、HPBCD と同様にして、上記に詳述した改良方法を使って、ただし上記で使ったプロピレンオキシドの代わりに同等量のエチレンオキシドを用いることにより、調製することができる。２−ヒドロキシプロピル−γ−シクロデキストリン(HPGCD)の合成も同様に、 β−シクロデキストリン出発物質の代わりにγ−シクロデキストリンを用いて、 HPBCD と同じ基本的手順を使用する。しかしながら、γ−シクロデキストリンは β−シクロデキストリンの７個のグルコース残基に比較して８個のグルコース残基を含むため、置換度を下げるためにプロピレンオキシドの使用量を減らすことができる。0.077 モルのγ−シクロデキストリンあたり0.75モルのプロピレンオキシドの使用（８個のＯＨ基を考慮して〜２０％過剰量）が８の置換度を有する HPGCD を与え、一方0.56モルのプロピレンオキシド（当量よりも〜１０％少量）の使用は約７の置換度を与える。ヒドロキシエチル−γ−シクロデキストリン(HEGCD)は、前の段落に記載のHPG CD と同様にして、単にプロピレンオキシドの代わりに当量のエチレンオキシドを使って、調製することができる。本発明に使用されるヒドロキシアルキルシクロデキストリンは、Pitha らにより記載された方法またはそれの変法により調製することができる。それらの方法によって得られるシクロデキストリンは、本質的に非晶質混合物である。シクロデキストリンの非晶質性質の重要性は、Pitha ら、J.Pharm.Sci.，74(9)、987-990(1985年９月)およびPitha の米国特許第 4,727,064号において記載されている。それらの物質の非晶質性質の利点は、高濃度のシクロデキストリンになるほどますます著しくなる。ポリペプチドと一緒の使用のためには、不純物、即ち酸化剤、過酸化物、プロピレンオキシドまたはシクロデキストリンの調製に使用した他の化学物質、を比較的含まないシクロデキストリンを用いることが非常に望ましい。というのは、酸化によってポリペプチドが効果的でなくなり得るからである。好ましくは、不純物のレベルは、100μM過酸化物またはそれの等価物よりも低いであろう。本発明において使用される他のシクロデキストリン、即ちβ−およびγ−シクロデキストリンのグルコシル、マルトシルおよびマルトトリオシル誘導体は、親のシクロデキストリンに比べて非常に水溶性である枝分れシクロデキストリンである。それらの枝分れシクロデキストリンは、親のシクロデキストリンから微生物学的方法により製造することができる。グルコシル−β−シクロデキストリンは、バシラス・オーベンシス(Bacillus ohbensis)のシクロマルトデキストリン −グルカノトランスフェラーゼを用いた大スケールでのβ−シクロデキストリン合成の母液から得ることができる；Koizumi ら、Chem.Pharm.Bull.，35(8),3413 -3418(1987)およびその中に引用された文献を参照のこと。マルトシルおよびマルトトリオシル−β−およびγ−シクロデキストリンは、親のシクロデキストリンとマルトースまたはマルトトリオースとから、シュードモナス菌(Pseudom onas) のイソアミラーゼまたはクレブシエラ・アエロゲネス(Klebsiella aerogen es )のプルラナーゼの逆反応によって調製することができ、一方グルコシル−γ −シクロデキストリンは、マルトシル−γ−シクロデキストリンの酵素的加水分解によって調製することができる；Okada ら、Chem.Pharm.Bull.，36(6),2176-2 185(1988)およびその中に引用された文献を参照のこと。プルラナーゼの存在下でマルトースとβ−シクロデキストリンとを反応させることによるマルトシル− β−シクロデキストリンの調製は、1986年12月18日に公開された日本国特開昭61 −287902および1986年９月１日に公開された日本国特開昭61−197602にも記載されている。マルトシル−β−シクロデキストリンと様々なジマルトシル−β−シクロデキストリンの混合物を便利に使用することができる。1987年５月26日に発行されたKainuma らの米国特許第 4,668,629号も参照のこと。タンパク質などのポリペプチドは、他の薬剤分子に比べて固有の溶解性および安定性問題を提出する。それらはポリペプチドの独特の構造の反映である。タンパク質は、例えば、単一分子中に多数の疎水性領域と親水性領域を有する高分子量の非常に大きな分子である。更に、タンパク質の三次元構造またはコンホメーションは、それらの活性にとって非常に重要であり、そしてタンパク質の環境により容易に有害な影響を受け、好ましくない環境は凝集をもたらし得る。従って、それらの複雑な分子の可溶化および安定化を達成することは困難であり、そして可溶化／安定化を達成することができ且つ活性の顕著な低下を伴わずにそのようなことを行うことができる未試行の物質の能力を容易に推定することはできない。しかしながら、本発明者らは、シクロデキストリンの選択群、即ちβ−および γ−シクロデキストリンのヒドロキシプロピル、ヒドロキシエチル、グルコシル、マルトシルおよびマルトトリオシル誘導体（ヒドロキシプロピルおよびヒドロキシエチル誘導体は好ましくは上述のようにして非晶形において調製される）が、上記に定義したポリペプチド、特にタンパク質を可溶化／安定化させることにおいて使用するのに非常に適する。次の実施例は、本発明に従って達成することができる可溶化／安定化結果を例示する。それらの実施例は、いかなる形態にせよ本発明を限定するつもりはない。実施例１予備試験本発明に包含される代表的なシクロデキストリン、即ちヒドロキシプロピル− β−シクロデキストリン(HPBCD)の、インターロイキン−２（ＩＬ−２）の安定化剤としての使用に関する予備試験は、ＩＬ−２のHPBCD 配合溶液を凍結乾燥し、再構成時に透明溶液を生じることができるかどうかを評価することにより行った。これは、ごく少数の物質が凍結乾燥と再構成後に透明なＩＬ−２溶液を与えるので、ＩＬ−２製剤スクリーニングのための優れた最初の試験であることが判明した。まず、25％および12.5％の最終濃度のHPBCD が１mg／mlのＩＬ−２溶液１ml中に存在するように、ＩＬ−２をHPBCD と配合した。それらを次のようなサイクルを使ってLSL Lyolab凍結乾燥機中で凍結乾燥した：−30℃で18時間の一次乾燥（温度は12°／分の速度で15℃まで上昇する）、次いで15℃で20時間の二次乾燥。全段階50ミクロンの真空下で実施した。凍結乾燥調製物を１mlの注射用蒸留水(W FI)で再構成した。目視検査で、溶液は透明であると認められた。更に、溶液の透明度を評価するための光散乱アッセイにより分析すると、それらは61および66 の光散乱値を与えた。このアッセイは、蛍光計を使って90度の試料から散乱する光(510nm)の量を測定することにより光散乱値を決定する。通常、500以下の値は良好で且つ透明な溶液を表わし、500-1000の範囲の値は限界溶液を表わし、そして＞1000の散乱値は濁った容認できない溶液を表わす。次に、再構成時に透明溶液を与えるのに必要とされる最小HPBCD レベルを決定するために、ある範囲の濃度のHPBCD(0.5−25％ｗ／ｖ)を、バイアルあたり１ml の合計容量においてＩＬ−２（１mg）、１または２％ショ糖および10mMクエン酸緩衝液（賦形剤）と配合した。それらを上記と同様にして凍結乾燥し、そして１ mlのＷＦＩで再構成した。光散乱アッセイを用いて、得られた溶液の透明度を測定した。図１における非常に低い蛍光計数値（30−60）により示されるように、試験した範囲に渡り全ての試料からＩＬ−２の透明溶液が得られた。更に、光散乱分析に使用した試料のウエスタンブロット分析は、ＩＬ−２をHPBCD と共に凍結乾燥しても感知できる程の二量体の増加を全く示さなかった。実施例２更なる光散乱試験全てのＩＬ−２製剤を上記のような普通の方法で凍結乾燥した。凍結乾燥プラッグを水で再構成し、そして次のようにして特徴づけた。実施例１に詳述した実験の後、１mg／mlのＩＬ−２製剤を安定化するのに必要とされる賦形剤の最小レベルを決定する試みにおいて、より低濃度のHPBCD を試験した。また、より均質なプラッグを得るために試料をショ糖で増量した。実施例１と同様にして光散乱値を得た。その結果を図２に与える。図中の曲線１と３は、賦形剤散乱について補正していない製剤試料についての光散乱値を表わし、一方曲線２と４は、賦形剤散乱の補正後のそれらの値（ＩＬ−２を含まない対照製剤についての値を差し引くことにより得られる）を示す。溶液の透明度の減少を示す光散乱値の増加は、製剤中のHPBCD の濃度が0.2％より低くなった時に認められる。分子レベルでは、これはＩＬ−２の１分子あたり20分子のHPBCD の最小値に換算される。下の表１を参照のこと。実施例３超遠心アッセイ超遠心は、高分子量凝集体およびオリゴマーの存在を検出する単純な方法である。超遠心は、70.1 Ti 型ローターを使ってBeckman L8-70 において実施した。５mlの試料製剤を105,000 ×ｇで１時間回転させた。上清の 280nmの吸光度を測定した。次いで前記吸光度を遠心前のものと比較した。HPBCD が配合されたＩＬ −２の再構成試料をこのアッセイにより試験した。実施例２と同様にして試料を調製し、その結果を図３に与える。この図からわかるように、凍結乾燥前の未配合ＩＬ−２は、このアッセイによる上清中にタンパク質の〜93％を含み、ＩＬ− ２が溶液中ではほとんど完全に凝集しないことを示す。0.5または2.0％のHPBCD および１％または２％ショ糖が配合されたＩＬ−２は、未配合のＩＬ−２と同様にふるまった。それらのデータは、 HPBCD 製剤を再構成するとタンパク質が非凝集形で存在することを示している。実施例４生物活性アッセイ 0.05〜25.00 ％のHPBCD を含むＩＬ−２製剤を実施例２に記載のようにして凍結乾燥し、次いで再構成した。ＭＴＴ株を使ったＨＴ−２細胞増殖アッセイにより、ＩＬ−２試料の生物活性を測定した。このアッセイは、Gillisら(1978)によりJournal of Immunology 120 巻、2027-2032 頁において記載されたＩＬ−２アッセイから応用したものである。図４からわかるように、ＩＬ−２はHPBCD と配合した時でも完全な生物活性を保持した。ウエスタンブロットアッセイタンパク質の純度を評価するために、上述のようにして種々の濃度のHPBCD と組み合わせ、凍結乾燥し、そして水で再構成した多数のＩＬ−２製剤において、ウエスタンブロットを行った。試験した試料は、次のようにＩＬ−２のHPBCD 製剤を包含した：１％ショ糖を含む0.05％HPBCD 、１％ショ糖を含む0.1％HPBCD 、１％ショ糖を含む0.2％HPBCD 、１％ショ糖を含む0.5％HPBCD 、１％ショ糖を含む2.0％HPBCD 、１％ショ糖を含む１％β−シクロデキストリン、２％ショ糖を含む0.5％HPBCD 、および２％ショ糖を含む2.0％HPBCD 。未配合ＩＬ−２も試験した。37℃において一週間後、HPBCD およびβ−シクロデキストリン製剤を試験した。未配合ＩＬ−２において観察されるものと同じ位、凍結乾燥および次なる再水和後のHPBCD 製剤においてわずかな量の二量体が存在していた。しかし、上記に示したHPBCD 製剤についての結果は、全て優秀であるとみなされた。未修飾のβ−シクロデキストリンが配合されたＩＬ−２は、凍結乾燥プラッグの再構成後に幾分透明な溶液（散乱数〜3000）を与え、ウエスタンブロットにおいてHPBCD 製剤よりも暗い二量体バンドを示した。実施例５上述したような選ばれたポリペプチド〔ＩＬ−２、腫瘍壊死因子(TNF)、マクロファージコロニー刺激因子(m-CSF)、インスリンおよびヒト成長ホルモン〕とH PBCD とを配合し、そしてその製剤を様々な時間および温度条件下で貯蔵した。各製剤について光散乱値（上述したようにして測定）および外観を記録した。その結果を下表に示す。選択した試料の生物活性を既知の方法により測定した。ＩＬ−２生物活性は上記のようにして測定した。ＴＮＦ活性は、ＴＮＦ感受性マウスＬ−929 繊維芽細胞標的細胞系を用いた試験管内細胞毒性アッセイを使って測定した。このアッセイは、J.M.Ostrove およびG.E.Gifford，Proc.Soc.Exp.Biol.Med. 160:354-358 (1979)並びにM.R.RuffおよびG.E.Gifford，Inf.Immun. 31：380-385(1981)において記載された方法から採用した。m-CSF バイオアッセイは、NSF-60マウスレトロウイルス誘発性骨髄白血病細胞系を使って行った。ＣＳＦアッセイについての関連文献は、Ｊ.Ihle ら、Advances in Oncology，第４巻、95-137頁、G.Klein 編(Raven Press,NY)およびJ.C.Lee ら、J.Immunol. 128 ：2393-2398(1982)である。 HPBCD ／タンパク質製剤についてのデータは、未配合のＩＬ−２、ＴＮＦおよびｍ−ＣＳＦの値と同等であり、このことはHPBCD との配合後それらのタンパク質が十分な生物活性を保持していることを示す。表２に明記したように配合した選択した試料を、タンパク質変性の指標として二量体形成についてもアッセイした。ごく少量での二量体の検出の細部を強化するためにSDS-PAGE ゲルを銀染色した。通常のクーマシーまたはファーストグリーン染色は、そのような低レベルにおける二量体形成を通常示さない。ＩＬ−２では４℃にて12週間後、ＴＮＦでは４℃にて10週間後、そしてヒト成長ホルモンでは４℃にて７週間後、実質的な二量体形成は存在しなかった。ｍ−ＣＳＦは、実験の開始時に示したものと本質的に同じ組成を４℃にて７週間後にも示した。ｍ−ＣＳＦは、溶液中では二量体として存在し、ゆえに二量体として泳動される。従って、それらの結果は、HPBCD との配合後にタンパク質の性質に何ら変化がないことを表わす。インスリンはわずかな二量体形成を示したが、その量は非常に少量であった。実施例６四次微分紫外分光法（４Ｄ−ＵＶ）は、芳香族アミノ酸の環境変化を評価することができ、こうして起こり得るコンホメーション変化を表示する技術である。１mg／mlの未配合ＩＬ−２と比較して、HPBCD と配合したＩＬ−２についてタンパク質の四次微分スペクトルに全く差が認められなかった。 HPBCD 製剤は下記のものを含んだ。本発明に従ったタンパク質とシクロデキストリンの配合は、出発物質として精製タンパク質を使用する別々の作業として実施することができ、またはシクロデキストリンとの配合をタンパク質の精製の中に含めることもできる。例として、選択したペプチドＩＬ−２と選択したシクロデキストリンHPBCDとの配合を下記に記載する。この配合は、精製工程中に実施する。まず、タンパク質出発物質は、しばしばタンパク質精製の最終段階であるゲル濾過プールの生成物中に存在する組換えＩＬ−２である。この時点で、ＩＬ−２と複合体を形成しそして溶液中でそれを安定化するのに適当な量において、濃HP BCD 溶液を添加する。所望であれば、HPBCD とＩＬ−２の濃度を調整し、そして典型的には増量剤を添加する。増量剤は、約0.5〜10重量％、好ましくは１〜５重量％のレベルで溶液中に存在する。好ましい増量剤は、水溶性であり、安定であり、そしてＩＬ−２と反応しないもの、例えばショ糖、ラクトース、トレハロース、マルトース、マンニトール、ソルビトール、デンプン、デンプン水解物、微結晶セルロース、およびアルブミン、例えばヒト血清アルブミンである。増量剤は、凍結乾燥中タンパク質を保護し、より均質な凍結乾燥生成物を与え、そして一回量容器中に入れた時、凍結乾燥生成物を肉眼で容易に見えるようにする。増量剤を添加した後、一回量（即ち投薬あたり約0.01〜２mg、好ましくは0.2 〜1.0mgのＩＬ−２を提供するであろう容量）の溶液を容器中に小分けし、スロット栓で容器に蓋をし、そして常用の凍結乾燥条件および装置を使って、内容物を凍結乾燥する。凍結乾燥した無菌生成物は、(1)組換えＩＬ−２、(2)増量剤（例えばショ糖）、(3)HPBCD および(4)混合物を再構成した時にほぼ生理的pHを提供するであろう少量の緩衝剤、の混合物から成ることができる。組換えＩＬ−２は、典型的には混合物の約0.015 重量％〜3.85重量％、より好ましくは混合物の約0.4％〜2.0％を構成するだろう。HPBCD は、典型的には混合物の約0.2重量％〜10重量％を構成するだろう。凍結乾燥混合物は、常用の非経口用水性注射液、例えば注射用蒸留水、リンガー液、ブドウ糖注射液、ブドウ糖および塩注射液等、または水性HPBCD 溶液をバイアルに注入することにより再構成することができる。バイアルに添加する注入液の量は、筋肉または皮下注射用には典型的には１〜10ml、好ましくは１〜２ml の範囲であるが、静注用にはより多量を用いることができる。再構成した製剤は、ヒトまたは他の哺乳動物へのＩＬ−２療法を提供するためのそれらへの非経口投与に適当である。そのような療法は、様々な免疫調節性の指示、例えばＴ細胞突然変異誘発、ＩＦＮ−γの誘導、細胞性免疫の回復または増強（例えば免疫不全状態の処置）および細胞性抗腫瘍活性の増大に適当である。一般的に言えば、シクロデキストリンとの配合がポリペプチド精製工程の一部として起こる時、シクロデキストリンは、少なくとも0.01％（ｗ／ｖ）のシクロデキストリン（例えば HPBCD)、より好ましくは約0.1％（ｗ／ｖ）〜約60％（ｗ／ｖ）のシクロデキストリン(例えばHPBCD)を含んで成る水溶液として導入されるだろう。最も好ましくは、そしてポリペプチドがＩＬ−２である時は特に、その範囲は約0.2％（ｗ／ｖ）〜約60％（ｗ／ｖ）シクロデキストリンであろう。既に精製されたポリペプチドを本発明に従って配合しようとする時、ポリペプチド（典型的には凍結乾燥したもの）は、選択した濃度の水性シクロデキストリン(例えばHPBCD)溶液と混合することにより、簡単に溶解することができる。水性シクロデキストリン溶液は、通常少なくとも0.01％（ｗ／ｖ）のシクロデキストリン、例えばHPBCD 、より好ましくは約0.1％（ｗ／ｖ）〜約60％（ｗ／ｖ）のシクロデキストリン、例えばHPBCD 、を含んで成る。最も好ましくは、ポリペプチドがＩＬ−２である時特に、範囲は0.2％（ｗ／ｖ）〜約60％（ｗ／ｖ）のシクロデキストリンである。使用するシクロデキストリン（例えばHPBCD ）の量は、選択される特定のポリペプチドにより異なるであろうが、いずれの場合にせよ安定化および／または可溶化有効量であろう。この方法で調製された製剤は、この形態で投与することができ、または凍結乾燥し次いで再構成することができる。凍結乾燥組成物において、シクロデキストリン対ポリペプチドの重量比は通常約１：１〜200 ：１、好ましくは約２：１〜50：１であろう。上記の別法として、既に精製されたポリペプチドが液体形（適当量の水性媒質に既に溶解した形）であってもよく、そして選択したシクロデキストリンを十分な安定化量において乾燥形で添加してもよい。本発明に従って調製した薬剤製剤は、投与のために選択されたポリペプチドの薬理学的性質に依存して、様々な状態を処置するのに用いることができる。好ましくは、本発明に従って調製した非経口用薬剤製剤は、水性媒質中に選択したポリペプチドと可溶化および／または安定化有効量の選択したシクロデキストリンとを含んで成る。好ましくは、該製剤は、有機溶媒を実質上含まず、無菌であり且つ発熱物質不含であり、そして許容される製剤方法に従って、例えばRe mington's Pharmaceutical Science 、第17版、Alfonso R.Gennaro 編、Mack Pub lishing Company,Easton，PA(1985)、1518-1552 に記載のようにして調製される。水性無菌注射液は、酸化防止剤、緩衝剤、抗菌剤、等浸透圧調整剤、および非経口用製剤に許容されるような添加剤を更に含有することができる。様々な一回量および数回量容器、例えば密封したアンプルおよびバイアルは、当業界で周知であるようにして用いることができる。無菌非経口製剤の必須成分、即ち選択したポリペプチド、水および選択したシクロデキストリンは、患者に最終的に投与される溶液が適当量の必須成分を含む限り、様々な形式で提供することができる。例えば、ポリペプチド／シクロデキストリン／水製剤は、すぐ注射できる一回量または数回量容器中に提供することができる。別の例として、内容物を一緒にすると注射適当量の製剤を与えることができるように考案された希釈液（水またはシクロデキストリン／水）とは別の容器に、ポリペプチド／シクロデキストリン／水の濃縮溶液を提供することができる。別の変形として、ポリペプチド、または好ましくはポリペプチド／シクロデキストリンの組合せを凍結乾燥状態で一方の容器中に提供し、そして別の容器は、各内容物を一緒にすると適当量の必須成分を含む製剤を与えることができるように考案された希釈液（もう一方の容器中のシクロデキストリンの量に依存して、水またはシクロデキストリン／水）を含むことができる。いずれの場合にせよ、各容器の内容物は無菌であろう。一般的に言えば、本明細書中に記載の非経口製剤におけるポリペプチドの投与についての療法的用量範囲は、ポリペプチドの非経口投与に特有に使われるものと同じであろう。当然、そのような療法的用量範囲は患者の大きさおよび種、製剤を投与する条件、使用する非経口投与のタイプ等により異なるであろう。所望の量の活性成分を供給するのに必要とされる一定の剤形の分量は、もちろん非経口製剤中のペプチドの濃度に依存するだろう。多くのポリペプチドは注射により投与されるが、或るものは経口投与され得る。それらを本発明に従って選択したシクロデキストリンを用いて安定化し、次いで周知の担体材料を用いて常法により錠剤、カプセル等に製剤化することができる。上記に言及したRemington's Pharmaceutical Sciences を参照のこと。本発明に従って製剤化される生体内使用のための診断薬は、上記に記載の治療薬と同じ方法で調製されるだろう。ただし、一回量剤形が、選択したポリペプチドの治療有効量ではなく診断有効量を含有するだろう。他方、生体外診断は必ずしも医薬上許容される必要はない。従って、生体外診断成分を、例えば、生体内適用には禁じられる抗菌剤または抗真菌剤の添加により、外因性汚染から保護することができる。生体内診断薬中の他の成分、例えば色素原は、医薬製剤中に存在する物質の必要条件を満たす必要はない。本発明を様々な好ましい態様によって記載してきたが、本発明の精神から逸脱することなく様々な改良、置換、削除および変更を行い得ることは当業者にとって明白であろう。従って、本発明の範囲は、次の請求の範囲によってのみ限定される。

【手続補正書】【提出日】１９９６年８月１９日【補正内容】請求の範囲１．ポリペプチドの可溶化および／または安定化方法であって、β−およびγ −シクロデキストリンのヒドロキシプロピル、ヒドロキシエチル、グルコシル、マルトシルおよびマルトトリオシル誘導体から成る群から選択されたシクロデキストリンの可溶化および／または安定化有効量と前記ポリペプチドとを組合わせることを含んで成る方法。２．シクロデキストリンが水溶液中に存在する、請求項１に記載の方法。３．水溶液が少なくとも0.1％（ｗ／ｖ）のシクロデキストリンを含んで成る、請求項２に記載の方法。４．水溶液が0.2％（ｗ／ｖ）〜60％（ｗ／ｖ）のシクロデキストリンを含んで成る、請求項３に記載の方法。５．シクロデキストリンがヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。６．前記ポリペプチドがタンパク質である、請求項２に記載の方法。７．タンパク質がスーパーオキシドジスムターゼ、インスリン、組織プラスミノーゲン活性化因子、エリトロポイエチン及びインターフェロンから成る群から選ばれる、請求項６に記載の方法。８．インターフェロンがβ−インターフェロンである、請求項７に記載の方法。９．タンパク質が成長ホルモン、表皮増殖因子、及びインターロイキンから成る群から選ばれる、請求項６に記載の方法。 10．インターロイキンがIL−２である、請求項９に記載の方法。 11．タンパク質が腫瘍壊死因子、心房性ナトリウム利尿因子、及びコロニー刺激因子から成る群から選ばれる、請求項６に記載の方法。 12．ポリペプチド及びシクロデキストリンを含有する水溶液を凍結乾燥することを含んで成る、請求項２に記載の方法。 13．β−およびγ−シクロデキストリンのヒドロキシプロピル、ヒドロキシエチル、グルコシル、マルトシルおよびマルトトリオシル誘導体から成る群から選択されたシクロデキストリンの可溶化および／または安定化有効量並びにポリペプチドを含んで成る組成物。 14．請求項13に記載の水性組成物。 15．少なくとも0.1％（ｗ／ｖ）のシクロデキストリンを含んで成る、請求項1 4に記載の組成物。 16．0.2％（ｗ／ｖ）〜60％（ｗ／ｖ）のシクロデキストリンを含んで成る、請求項15に記載の組成物。 17．シクロデキストリンがヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンである、請求項14〜16のいずれか１項に記載の組成物。 18．前記ポリペプチドがタンパク質である、請求項14に記載の組成物。 19．タンパク質がスーパーオキシドジスムターゼ、インスリン、組織プラスミノーゲン活性化因子、エリトロポイエチン及びインターフェロンから成る群から選ばれる、請求項18に記載の組成物。 20．インターフェロンがβ−インターフェロンである、請求項19に記載の組成物。 21．タンパク質が成長ホルモン、表皮増殖因子、及びインターロイキンから成る群から選ばれる、請求項18に記載の組成物。 22．インターロイキンがIL−２である、請求項21に記載の組成物。 23．タンパク質が腫瘍壊死因子、心房性ナトリウム利尿因子、及びコロニー刺激因子から成る群から選ばれる、請求項18に記載の組成物。 24．ヒトまたは脊椎動物投与のためのものである、請求項18に記載の組成物。 25．試験管内用途のためのものである、請求項18に記載の組成物。 26．β−及びγ−シクロデキストリンのヒドロキシプロピル、ヒドロキシエチル、グルコシル、マルトシルおよびマルトトリオシル誘導体から成る群から選択されたシクロデキストリンの安定化有効量並びにポリペプチドを含んで成る凍結乾燥組成物。 27．１：１〜 200：１のシクロデキストリン対ポリペプチド重量比を含んで成る、請求項26に記載の組成物。 28．２：１〜50：１のシクロデキストリン対ポリペプチド重量比を含んで成る、請求項27に記載の組成物。 29．シクロデキストリンがヒドロキシ−β−シクロデキストリンである、請求項26〜28のいずれか１項に記載の組成物。 30．ポリペプチドがタンパク質である、請求項26に記載の組成物。 31．タンパク質がスーパーオキシドジスムターゼ、インスリン、組織プラスミノーゲン活性化因子、エリトロポイエチン、及びインターフェロンから成る群から選ばれる、請求項30に記載の組成物。 32．インターフェロンがβ−インターフェロンである、請求項31に記載の組成物。 33．タンパク質が成長ホルモン、表皮増殖因子、及びインターロイキンから成る群から選ばれる、請求項30に記載の組成物。 34．インターロイキンがIL−２である、請求項33に記載の組成物。 35．タンパク質が腫瘍壊死因子、心房性ナトリウム利尿因子、及びコロニー刺激因子から成る群から選ばれる、請求項30に記載の組成物。 36．ヒトまたは脊椎動物投与のためのものである、請求項26に記載の組成物。 37．試験管内用途のためのものである、請求項26に記載の組成物。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＡ６１Ｋ 38/44 Ａ６１Ｋ 37/26 38/46 37/66 47/40 37/24 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＦＲ，ＧＢ，ＩＴ，ＬＵ，ＮＬ，ＳＥ)，ＡＵ，ＤＫ，ＪＰ (72)発明者スターン，ウォーレンアメリカ合衆国，フロリダ 32601，ゲインスビル，ノースウエストナインスプレイス 4921 (72)発明者ウォン，グレゴリージェイ. アメリカ合衆国，イリノイ 60045，レイクフォーレスト，イーストウッドランド 281

Claims

【特許請求の範囲】１．ポリペプチドの可溶化および／または安定化方法であって、β−およびγ −シクロデキストリンのヒドロキシプロピル、ヒドロキシエチル、グルコシル、マルトシルおよびマルトトリオシル誘導体から成る群から選択されたシクロデキストリンの可溶化および／または安定化有効量と前記ポリペプチドとを組合わせることを含んで成る方法。２．前記シクロデキストリンが水溶液中に存在する、請求項１に記載の方法。３．前記水溶液が少なくとも0.1％（ｗ／ｖ）のシクロデキストリンを含んで成る、請求項２に記載の方法。４．前記水溶液が約0.2％（ｗ／ｖ）〜約60％（ｗ／ｖ）のシクロデキストリンを含んで成る、請求項３に記載の方法。５．前記シクロデキストリンがヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンである、請求項１に記載の方法。６．前記ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンが水溶液中に存在する、請求項５に記載の方法。７．前記水溶液が少なくとも0.1％（ｗ／ｖ）のヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンを含んで成る、請求項６に記載の方法。８．前記水溶液が約0.2％（ｗ／ｖ）〜約60％（ｗ／ｖ）のヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンを含んで成る、請求項７に記載の方法。９．前記ポリペプチドがタンパク質である、請求項２に記載の方法。 10．前記タンパク質がスーパーオキシドジスムターゼである、請求項９に記載の方法。 11．前記タンパク質がインスリンである、請求項９に記載の方法。 12．前記タンパク質が組織プラスミノーゲン活性化因子である、請求項９に記載の方法。 13 前記タンパク質がエリトロポイエチンである、請求項９に記載の方法。 14．前記タンパク質がインターフェロンである、請求項９に記載の方法。 15．前記インターフェロンがβ−インターフェロンである請求項14に記載の方法。 16．前記タンパク質が成長ホルモンである、請求項９に記載の方法。 17．前記タンパク質が表皮増殖因子である、請求項９に記載の方法。 18．前記タンパク質がインターロイキンである、請求項９に記載の方法。 19．前記インターロイキンがＩＬ−２である、請求項18に記載の方法。 20．前記タンパク質が腫瘍壊死因子である、請求項９に記載の方法。 21．前記タンパク質が心房性ナトリウム利尿因子である、請求項９に記載の方法。 22．前記タンパク質がコロニー刺激因子である、請求項９に記載の方法。 23。前記ポリペプチドおよび前記シクロデキストリンを含有する水溶液を凍結乾燥することを含んで成る、請求項２に記載の方法。 24．β−およびγ−シクロデキストリンのヒドロキシプロピル、ヒドロキシエチル、グルコシル、マルトシルおよびマルトトリオシル誘導体から成る群から選択されたシクロデキストリンの可溶化および／または安定化有効量並びにポリペプチドを含んで成る組成物。 25．請求項24に記載の水性組成物。 26．少なくとも0.1％（ｗ／ｖ）のシクロデキストリンを含んで成る、請求項2 5に記載の組成物。 27．約0.2％（ｗ／ｖ）〜約60％（ｗ／ｖ）のシクロデキストリンを含んで成る、請求項26に記載の組成物。 28．前記シクロデキストリンがヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンである、請求項25に記載の組成物。 29．少なくとも0.1％（ｗ／ｖ）のヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンを含んで成る、請求項27に記載の組成物。 30．約0.2％（ｗ／ｖ）〜約60％（ｗ／ｖ）のヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンを含んで成る、請求項29に記載の組成物。 31．前記ポリペプチドがタンパク質である、請求項25に記載の組成物。 32．前記タンパク質がスーパーオキシドジスムターゼである、請求項31に記載の組成物。 33．前記タンパク質がインスリンである、請求項31に記載の組成物。 34．前記タンパク質が組織プラスミノーゲン活性化因子である、請求項31に記載の組成物。 35．前記タンパク質がエリトロポイエチンである、請求項31に記載の組成物。 36．前記タンパク質がインターフェロンである、請求項31に記載の組成物。 37．前記インターフェロンがβ−インターフェロンである、請求項36に記載の組成物。 38．前記タンパク質が成長ホルモンである、請求項31に記載の組成物。 39．前記タンパク質が表皮増殖因子である、請求項31に記載の組成物。 40．前記タンパク質がインターロイキンである、請求項31に記載の組成物。 41．前記インターロイキンがＩＬ−２である、請求項40に記載の組成物。 42．前記タンパク質が腫瘍壊死因子である、請求項31に記載の組成物。 43．前記タンパク質が心房性ナトリウム利尿因子である、請求項31に記載の組成物。 44．前記タンパク質がコロニー刺激因子である、請求項31 に記載の組成物。 45．ヒトまたは脊椎動物投与のためのものである、請求項31に記載の組成物。 46．試験管内用途のためのものである、請求項31に記載の組成物。 47．β−およびγ−シクロデキストリンのヒドロキシプロピル、ヒドロキシエチル、グルコシル、マルトシルおよびマルトトリオシル誘導体から成る群から選択されたシクロデキストリンの安定化有効量並びにポリペプチドを含んで成る凍結乾燥組成物。 48．約１：１〜約 200：１のシクロデキストリン対ポリペプチド重量比を含んで成る、請求項47に記載の組成物。 49．約２：１〜約50：１のシクロデキストリン対ポリペプチド重量比を含んで成る、請求項48に記載の組成物。 50．前記シクロデキストリンがヒドロキシ−β−シクロデキストリンである、請求項47に記載の組成物。 51．約１：１〜約 200：１のシクロデキストリン対ポリペプチド重量比を含んで成る、請求項50に記載の組成物。 52．約２：１〜約50：１のシクロデキストリン対ポリペプチド重量比を含んで成る、請求項51に記載の組成物。 53．前記ポリペプチドがタンパク質である、請求項47に記載の組成物。 54．前記タンパク質がスーパーオキシドジスムターゼである、請求項53に記載の組成物。 55．前記タンパク質がインスリンである、請求項53に記載の組成物。 56．前記タンパク質が組織プラスミノーゲン活性化因子である、請求項53に記載の組成物。 57．前記タンパク質がエリトロポイエチンである、請求項53に記載の組成物。 58．前記タンパク質がインターフェロンである、請求項53に記載の組成物。 59．前記インターフェロンがβ−インターフェロンである、請求項58に記載の組成物。 60．前記タンパク質が成長ホルモンである、請求項53に記載の組成物。 61．前記タンパク質が表皮増殖因子である、請求項53に記載の組成物。 62．前記タンパク質がインターロイキンである、請求項53に記載の組成物。 63．前記インターロイキンがＩＬ−２である、請求項62に記載の組成物。 64．前記タンパク質が腫瘍壊死因子である、請求項53に記載の組成物。 65．前記タンパク質が心房性ナトリウム利尿因子である、請求項53に記載の組成物。 66．前記タンパク質がコロニー刺激因子である、請求項53に記載の組成物。 67．ヒトまたは脊椎動物投与のためのものである、請求項47に記載の組成物。 68．試験管内用途のためのものである、請求項47に記載の組成物。