JPH05132486A - 新規化合物チオマリノール - Google Patents

新規化合物チオマリノール

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JPH05132486A
JPH05132486A JP4112934A JP11293492A JPH05132486A JP H05132486 A JPH05132486 A JP H05132486A JP 4112934 A JP4112934 A JP 4112934A JP 11293492 A JP11293492 A JP 11293492A JP H05132486 A JPH05132486 A JP H05132486A
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Abstract

(57)【要約】 【目的】抗菌作用を有するチオマリノ−ルに関する。 【構成】下記の構造式および理化学的性状等を有するチ
オマリノ−ル。 【化３】 １）物質の性状：黄色粉末 ２）融点：84−89 ℃ ３）分子式：Ｃ30Ｈ44Ｎ2 Ｏ9 Ｓ2 ４）分子量： 640 (FAB-MS法により測定） ５）赤外線吸収スペクトル：νmaxcm-1 臭化カリウム(KBr) 錠剤法で測定した赤外線吸収スペク
トルは、次に示す通りである。3394、2930、1649、159
8、1526、1288、1216、1154、1102、1052 【効果】本発明の新規化合物チオマリノ−ルは抗菌作用
を示し、各種細菌に対する抗菌剤として有用である。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は抗菌作用を有する新規化
合物チオマリノ−ル(Thiomarinol) 、その製法およびそ
の生産菌株に関する。
【０００２】
【従来の技術】海水より分離したアルテロモナス (Alte
romonas)属に属する微生物が、例えば抗腫瘍活性を有す
るビスカベリンを生産することが知られている（特開昭
63-27484号）。しかし、ビスカベリンは環状ペプチド化
合物である。
【０００３】水酸基で置換されたテトラヒドロピラン骨
格を母核とした誘導体は数多いが、中でもチオマリノ−
ルに類似した構造を有する化合物としては、例えばシュ
−ドモナス フルオレセンス（Pseudomonas fluorescen
s)が生産するシュ−ドモン酸(Pseudomonic acid)Ａ(J.C
hem.Soc.Perkin Trans.I,294頁(1977 年))、Ｂ(J.Chem.
Soc.Perkin Trans.I,318頁(1977 年))、Ｃ(J.Chem.Soc.
Perkin Trans.I, 2827頁(1982 年))およびＤ(J.Chem.So
c.Perkin Trans.I,2655頁(1983 年))が知られている。
しかし、これらには例えばチオマリノ−ルの特徴である
テトラヒドロピラン骨格とα、β−不飽和カルボニルに
挟まれたメチレンに水酸基が存在しない。なお現在、シ
ュ−ドモン酸Ａの 2 ％軟膏（商品名、「Bactroban」 、
Beecham社）が皮膚感染症治療剤として欧米で実用に供
されている。しかし、これらシュ−ドモン酸の抗菌活性
はチオマリノ−ルより弱い。
【０００４】また、シュ−ドモン酸の末端カルボン酸を
アミドに変換した誘導体も知られている（特開昭52−10
2279号、特開昭54−12375 号、特開昭54−90179 号、特
開昭54−103871号）。しかし、これらの中にはチオマリ
ノ−ルのような強い抗菌力、多くのグラム陰性菌まで含
む広い抗菌スペクトルを有するものはない。むしろ、そ
の活性はシュ−ドモン酸より弱くなる傾向がある。
【０００５】チオマリノ−ルの構造上の特徴のひとつ
に、テトラヒドロピラン骨格とα、β−不飽和カルボニ
ルに挟まれたメチレンに水酸基が存在する。このような
水酸基を有する化合物としては唯一、海洋細菌由来の化
合物が報告されている（Am.Chem.Soc.の 200年会（1990
年 8月 26-31日）の Abstracts of Papers、Part 2、
ORGN.No.139 ）。しかしながら、この化合物の末端のカ
ルボニル基に結合する複素環基は２−ピペリドン−３−
イル基であり、その抗菌活性の詳細は不明である。
【０００６】一方、ホロシン(holothin, Helv.Chim.Act
a,42巻,563頁(1959 年))骨格を母核とした誘導体として
は、例えば放線菌の一種 Streptomyces 属より単離され
たピロシン属抗生物質としてホロマイシン(holomycin,
Helv.Chim.Acta,42 巻,563頁(1959 年))、ピロシン(pyr
rothine, J.Am.Chem.Soc.,77巻, 2861頁(1955 年))、チ
オルチン(thiolutin, Angew.Chem.,66巻,745頁(1954
年))、アウレオスリシン(aureothricin, J.Am.Chem.So
c.,74巻, 6304頁(1952 年))などを挙げることができ
る。また、細菌由来の抗生物質としてゼノルアブジン
（xenorhabdin)Ｉ〜Ｖ(特表昭59−501950号) が単離さ
れている。しかし、これらの化合物にはチオマリノ−ル
ほどの強い抗菌活性は報告されていない。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、海水よ
り分離したアルテロモナス (Alteromonas)属に属するSA
NK 73390株の培養物から、抗菌作用を有する新規化合物
チオマリノ−ルが生産されることを見出して本発明を完
成した。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明のチオマリノ−ル
は下記の構造式を有する。
【０００９】
【化２】
【００１０】本発明のチオマリノ−ルは下記の性状を有
する。 １）物質の性状：黄色粉末 ２）融点：84−89 ℃ ３）分子式：C30 H44 N2 O9 S2 ４）分子量： 640 (FAB-MS法により測定） ５）高分解能質量分析：C30 H45 N2 O9 S2[(M+H)+ FAB
-MS 法により測定］ 実測値 641.2585 計算値 641.2567 ６）元素分析：（％） 実測値 C 55.92、 H 6.82 、 N 4.23 、 S 9.90 計算値 C 56.23、 H 6.92 、 N 4.37 、 S 10.01 。
【００１１】７）赤外線吸収スペクトル：νmaxcm-1 臭化カリウム(KBr) 錠剤法で測定した赤外線吸収スペク
トルは、次に示す通りである。3394、2930、1649、159
8、1526、1288、1216、1154、1102、1052。
【００１２】８）紫外線吸収スペクトル：λmax nm
（ε） メタノールまたはメタノール＋塩酸中で測定した紫外線
吸収スペクトルは、次に示す通りである。387(12、000)
、300(3、500)、214(26、000) メタノール＋水酸化ナトリウム中で測定した紫外線吸収
スペクトルは、次に示す通りである。386(9、600)、306
(3、200)、206(25、000) 。
【００１３】９）比旋光度：［α］D 25 ＝＋4.3 °(C
1.0、メタノ−ル) １０）高速液体クロマトグラフィー： 分離カラム；センシュウパック ODS H-2151 ( カラムサ
イズ、 φ6 ×150 mm、センシュウ科学（株）製 ) 溶媒； 40 % アセトニトリル−水 流速； 1.5 ml ／分 波長； 220-350 nm （フォトダイオ−ドアレイ検出） 保持時間； 5.9 分 。
【００１４】１１） 1Ｈー核磁気共鳴スペクトル：
（δ：ppm） 重ジメチルスルホキシド中、内部基準にテトラメチルシ
ランを使用して測定した核磁気共鳴スペクトル(270 MH
z) は、次に示す通りである。0.91(3H,d,J=6.8Hz)、 0.
95(3H,d,J=5.9Hz)、1.30(6H,m(br.)) 、1.55(5H,m(br.))
、2.03(3H,s)、2.09(3H,m)、2.34(2H,t,J=7.3Hz)、3.3
3(1H,d,J=10.7Hz) 、3.52(2H,m)、3.64(2H,m)、 3.73
(1H,dd) 、4.02(2H,t,J=6.6Hz)、4.18(1H,d(br.),J=7.3
Hz) 、4.30(1H,d,J=4.4Hz)、4.44(1H,d,J=7.8Hz)、4.63
(1H,d,J=3.4Hz)、4.89(1H,d,J=7.3Hz)、5.37(2H,m)、5.
97(1H,s(br.)) 、7.04(1H,s)、9.80(1H,s (br.))、10.6
8(1H,s (br.)) 。
【００１５】１２）13Ｃー核磁気共鳴スペクトル：(
δ：ppm) 重メタノ−ル中、内部基準にテトラメチルシランを使用
して測定した核磁気共鳴スペクトル(68 MHz)は、次に示
す通りである。174.3(s)、170.4(s)、168.6(s)、161.1
(s)、137.9(s)、135.7(d)、135.1(s)、129.8(d)、116.3
(d)、115.8(s)、113.7(d)、 77.6(d)、74.4(d)、 72.1
(d)、 71.8(d)、 66.0(t)、 65.7(d)、 64.9(t)、45.3
(d)、 43.9(d)、 36.6(t)、 33.4(t)、 30.1(t)、 30.0
(t)、29.7(t)、 27.0(t)、 26.7(t)、 20.3(q)、 16.6
(q)、 16.3(q)。
【００１６】１３）溶解性：メタノール、エタノール、
プロパノール、ブタノール等のアルコール類、ジメチル
スルホキシド、ジメチルホルムアミド、クロロホルム、
酢酸エチル、アセトン、エチルエーテルに可溶、ｎ−ヘ
キサン、水に不溶。
【００１７】１４）呈色反応：硫酸、ヨード、過マンガ
ン酸カリウムに陽性。 １５）薄層クロマトグラフィー： Ｒｆ値； 0.57 吸着剤； シリカゲル（メルク社製、Art.5715） 展開溶剤；ジクロロメタン：メタノール ＝ 85 ：15
。
【００１８】本発明の前記一般式（Ｉ）を有するチオマ
リノ−ルはいくつかの不整炭素原子およびいくつかの二
重結合を有する。特にα、β−不飽和カルボニル部分は
異性化される可能性がある。それ故、種々の光学および
幾何異性体が存在する。本発明においては、これらの異
性体がすべて単一の式で示されている。従って、本発明
においては、ラセミ化合物を含むこれらの異性体および
これらの異性体の混合物をもすべて含むものである。立
体特異的合成法が使用される場合、または光学活性化合
物が原料化合物として使用される場合、個々の異性体は
直接的に製造してもよいし、一方、異性体の混合物が製
造されれば個々の異性体は常法により得てもよい。
【００１９】本発明の、チオマリノ−ルを生産する上記
SANK 73390 株は静岡県南伊豆町小稲の海岸で採取した
海水から常法により分離した海洋細菌である。チオマリ
ノ−ルの生産菌である SANK 73390 株の菌学的性状は次
の通りである。
【００２０】１．形態学的性状 マリンアガ−（Difco 社製）上で 23 ℃、 24 時間培養
後の観察では、細胞は直径 0.8−1.0 μm 、長さ2.0−
3.6 μm の桿状であり、単極毛を有し、運動する。胞
子を形成せず、グラム染色は陰性である。
【００２１】２．マリンアガ−培養上での生育状態 23℃で 24 時間培養したコロニ−はいくぶん灰色を帯び
た黄色、不透明で円形、扁平状、全縁である。水溶性の
色素を生成しない。
【００２２】３．生理学的性状 （１）海水の要求性：生育に海水を要求する。 （２）Ｏ−Ｆ（オキシダティブ−ファ−メンタティブ）
テスト［ヒュ−・レイフソン（ Hugh ・Leifson ）法
(J.Bact.,66巻、24-26 頁、(1953年))、人工海水で調
製］：糖を分解しない。 （３）オキシダ−ゼ：＋ （４）カタラ−ゼ：＋ （５）酸素に対する態度：好気的。 （６）硝酸塩の還元：− （７）デンプンの加水分解：＋ （８）寒天の分解：− （９）ゼラチンの液化：＋ （１０）ＤＮａｓｅの産生：＋ （１１）リパ−ゼの産生：＋ （１２）生育温度：4 ℃では微弱に生育し、17−26℃で
は良好な生育を示す。35℃では生育しない。 （１３）栄養要求性：ジャ−ナル・オブ・バクテリオロ
ジ−（Journalof Bacteriology)、 107巻、 268-294頁
(1971年) 記載の基本培地を用いた場合、ビタミンフリ
−のカザミノ酸を要求する。 （１４）炭素化合物の利用性：ジャ−ナル・オブ・バク
テリオロジ−（Journal of Bacteriology)、 107巻、 2
68-294頁 (1971年) 記載の基本培地にビタミンフリ−の
カザミノ酸を 0.1 ％ 濃度添加し、振とう培養を行っ
た場合。 Ｌ−アラビノ−ス：− Ｄ−リボ−ス：− Ｄ−キシロ−ス：− Ｄ−グルコ−ス：＋ Ｄ−ガラクト−ス：− Ｄ−フラクト−ス：− 麦芽糖：＋ ショ糖：− トレハロ−ス：＋ セロビオ−ス：− メリビオ−ス：− マンニト−ル：− ソルビト−ル：− グリセリン：− 酢酸ソ−ダ：＋ プロピオン酸ソ−ダ：＋ 。
【００２３】４．化学分類学的性状 （１）ＤＮＡのＧ＋Ｃ（グアニン＋シトシン含量）：4
3.4 ％（HPLC法） （２）キノン系：ユビキノンＱ−８。
【００２４】以上の菌学的性状を有する SANK 73390 株
はバ−ジ−ズ・マニュアル・オブ・システマティック・
バクテリオロジ−（Bergey's Manual of Systematic Ba
cteriology）、 1 巻（1984年）および最新のインタ−ナ
ショナル・ジャ−ナル・オブ・システマティック・バク
テリオロジ−（International Journal of Systematic
Bacteriology）に記載の種と照合すると、海洋細菌のア
ルテロモナス・サイトレア（Alteromonas citrea）に類
似した菌と推定された。但し、本菌はアルテロモナス・
サイトレア（Alteromonas citrea）の基準株 ATCC 297
19 株との比較培養を行ったところ、本菌のコロニ−の
色調がいくぶん灰色を帯びた黄色であるのに対し、ATCC
29719 株は緑色を帯びた黄色であり、SANK 73390 株
は 4 ℃で生育し、トレハロ−スとプロピオン酸ソ−ダ
を炭素源として利用する点でアルテロモナス・サイトレ
ア（Alteromonas citrea）と異なっている。それ故、本
発明者らは本菌をアルテロモナス属に属する新種である
と確認し、アルテロモナス属・ラバ種（Alteromonas ra
va）と命名し、新菌株をアルテロモナス・ラバ・ SANK
73390 （Alteromonas rava SANK 73390）株と命名し
た。
【００２５】本菌株は、アルテロモナス・ラバ・ SANK
73390 （Alteromonas rava SANK 73390 ）株としてブダ
ペスト条約に従って通商産業省工業技術院微生物工業技
術研究所に国際寄託されている（寄託番号、微工研条寄
第 3381 号 (FERM BP-3381)：原寄託日、1991年 4月30
日）。
【００２６】以上、SANK 73390 株について説明した
が、周知の如くアルテロモナス属の菌類の諸性質は一定
したものではなく、自然的、または人工的な操作（例え
ば、紫外線照射、放射線照射、化学薬品処理等）によ
り、変異を起こし易く、本発明のSANK 73390 株もこの
点は同じである。本発明にいう SANK 73390 株はその
すべての変異株を包含する。また、これらの変異株の中
には、遺伝学的方法、例えば、組み替え、形質導入、形
質転換等により得られたものも包含される。即ち、アル
テロモナス属に属するチオマリノ−ルを生産する、SANK
73390 株、その変異株およびそれらと明確に区別され
ない菌株は、すべて SANK 73390 株に包含されるもので
ある。
【００２７】本発明の新規化合物チオマリノ−ルを得る
ため、これらの微生物の培養は他の発酵生成物を生産す
るために用いられるような培地中で行なわれる。このよ
うな培地中には、微生物が資化出来る炭素源、窒素源お
よび無機塩を含有する。
【００２８】一般に、炭素源としてグルコース、フラク
トース、マルトース、シュークロース、マンニトール、
グリセロール、デキストリン、オート麦、ライ麦、トウ
モロコシデンプン、ジャガイモ、トウモロコシ粉、大豆
粉、綿実油、糖蜜、クエン酸、酒石酸などを単一に、あ
るいは併用して用いる事が出来る。一般には、培地量の
1ー10 重量％で変量する。
【００２９】窒素源としては、一般に蛋白質を含有する
物質を発酵工程に用いる。適当な窒素源としては、大豆
粉、フスマ、落花生粉、綿実粉、カゼイン加水分解物、
ファーマミン、魚粉、コーンスチープリカー、ペプト
ン、肉エキス、イースト、イーストエキス、マルトエキ
ス等の動物系、植物系またはエキス類の窒素源、硝酸ナ
トリウム、硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウム等の無
機窒素源である。窒素源は、単一または併用して培地量
の 0.1-6重量％の範囲で用いる。
【００３０】培地中に取り入れる栄養無機塩は、ナトリ
ウム、アンモニウム、カルシウム、カリウム、マグネシ
ウム、鉄、フォスフェート、サルフェート、クロライ
ド、カーボネート等のイオンを得ることの出来る通常の
塩類である。また、コバルト、マンガン、ストロンチウ
ム等の微量の金属、その他ブロマイド、フルオライド、
ボレ−ト、シリケ−ト等の微量イオンを得る塩も含む。
【００３１】液体培養に際しては、消泡剤としてシリコ
ン油、植物油、界面活性剤等が使用される。
【００３２】アルテロモナス・ラバ（Alteromonas rav
a） SANK 73390 株を培養しチオマリノ−ルを生産する
培地の pH は、5.0ー8.0 に変化させることが出来る。
【００３３】菌の生育温度は 4 ℃ から 32 ℃までで
あるが 17 ℃ から 26 ℃ の範囲が生育良好であり、
更にチオマリノ−ルの生産には、20 ℃ から 26 ℃
が好適である。
【００３４】チオマリノ−ルは、好気的に培養して得ら
れるが通常用いられる好気的培養法、例えば固体培養
法，振とう培養法、通気撹拌培養法等が用いられる。
【００３５】小規模な培養においては、20 ℃ から 2
6 ℃で数日間振とう培養を行うのが良好である。培養は
三角フラスコ中で、１ー２段階の種の発育工程により開
始する。種発育段階の培地は、炭素源および窒素源を併
用出来る。種フラスコは定温インキュベーター中で 23
℃、1 乃至 3 日間振とうするか、または充分に成長す
るまで振とうする。成長した種は第二の種培地、または
生産培地に接種するのに用いる。中間の発育工程を用い
る場合には、本質的に同様の方法で成長させ、生産培地
に接種するためにそれを部分的に用いる。接種したフラ
スコを一定温度で 1 乃至3 日間、または生産量が最大
に達するまで振とうし、インキュベーションが終わった
らフラスコの含有物を遠心分離またはろ過する。
【００３６】大量培養の場合には、撹拌機、通気装置を
付けた適当なタンクで培養するのが好ましい。この方法
によれば、栄養培地をタンクの中で作成出来る。栄養培
地を125 ℃ まで加熱して滅菌し、冷却後、滅菌培地
にあらかじめ成長させてあった種を接種する。培養は 2
0 ℃乃至 26 ℃で通気撹拌して行う。この方法は、多量
の化合物を得るのに適している。
【００３７】培養の経過に伴って生産されるチオマリノ
−ルの量の経時変化は、高速液体クロマトグラフィーを
用いて測定することが出来る。通常は、19 時間から 9
6 時間の培養でチオマリノ−ルの生産量は最高値に達す
る。
【００３８】培養終了後、培養液中の液体部分及び菌体
内に存在するチオマリノ−ルは、菌体、その他の固形部
分を珪藻土をろ過助剤とする、ろ過操作または遠心分離
によって分別し、そのろ液または上清中および菌体中に
存在するチオマリノ−ルを、その物理化学的性状を利用
し抽出精製することにより得られる。例えば、ろ液また
は、上清中に存在するチオマリノ−ルは、中性または酸
性 pH 条件下で水と混和しない有機溶剤、例えば酢酸エ
チル、クロロホルム、塩化エチレン、塩化メチレンなど
の単独または、それらの組み合わせにより抽出精製する
ことができる。あるいは吸着剤として、例えば活性炭ま
たは吸着用樹脂であるアンバーライト XAD−2 、XAD −
4 ( ローム・アンド・ハース社製) 等や、ダイアイオン
HP −10、HP−20、 CHP−20、HP−50( 三菱化成( 株)
製) 等が使用される。チオマリノ−ルを含む液を上記の
ごとき吸着剤の層を通過させて不純物を吸着させて取り
除くか、またはチオマリノ−ルを吸着させた後、メタノ
ール水、アセトン水、ｎ−ブタノール水などを用いて溶
出させることにより得られる。また、菌体内に存在する
チオマリノ−ルは、50-90 ％ 含水アセトンまたは含水
メタノールにより抽出し有機溶剤を除去した後、ろ液と
同様な抽出精製操作を行なうことにより得られる。
【００３９】このようにして得られたチオマリノ−ル
は、更にシリカゲル、マグネシウムーシリカゲル系のフ
ロリジルのような担体を用いた吸着カラムクロマトグラ
フィー、 セファデックス LH −20( ファルマシア社
製) などを用いた分配カラムクロマトグラフィー、およ
び順相、逆相カラムを用いた高速液体クロマトグラフィ
ー等で精製することが出来る。以上の分離、精製の手段
を単独または適宜組み合わせ反復用いることによりチオ
マリノ−ルを分離精製することができる。
【００４０】
【作用】本発明のチオマリノ−ルは、文献未載の新規化
合物であり、動物( 例、ヒト、イヌ、ネコ、ウサギ等)
において、グラム陽性細菌、グラム陰性細菌およびマイ
コプラズマ菌に対し抗菌作用を示すことから、各種細菌
感染症を対照とする抗菌剤として有用である。
【００４１】本発明のチオマリノ−ルを医薬として用い
る場合、常法に従って種々の形態で投与される。その投
与形態としては例えば散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル
剤、シロップ剤などの形態で経口的または注射剤（静脈
内、筋肉内、皮下）、点滴剤、座剤、塗布剤、軟膏剤な
どの形態で非経口的に安全に投与することが出来る。こ
れらの各種製剤は、常法に従って主薬に賦形剤、結合
剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯味矯臭剤、溶解補助
剤、懸濁剤、コ−ティング剤、希釈剤などの医薬の製剤
技術分野において通常使用しうる既知の補助剤を用いて
製剤化することができる。投与量は対象疾患、投与経路
および投与回数などにより異なるが、例えば成人に対し
ては 1 日 20 mg から 2000mg を、症状に応じて 1
回または数回に分けて投与するのが好ましい。
【００４２】
【実施例】次に実施例をあげて本発明を更に具体的に説
明するが、 本発明はこれらに限定されるものではない。 実施例１．チオマリノ−ルのジャ−培養 Ａ）培養 アルテロモナス・ラバ SANK 73390 株を、マリンアガ−
スラント（Marine Agar Slant 、Difco 社製）上で 22
℃で 3 日間培養を行い、それを人工海水 3 ml に懸濁
させ、その 0.1 ml を無菌的に、滅菌した後述の組成の
培地 100mlを含む 500 ml の三角フラスコに接種し、 2
3 ℃ で、 200 rpm (7 cmの回転半径)のロータリー振
とう培養機で 24 時間培養した。その 15 mlを無菌的に
滅菌した同様の組成の培地 15 リットル を含む 30 リットルの
ジャ−ファ−メンタ− 4機に埴菌し、 23 ℃で、通気
（7.5リットル ／分）、攪拌（100 rpm ）下に23 時間培養
した。
【００４３】培地組成 マリンブロス（Difco 社製） 37.4 g 脱イオン水 1000 ml −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− pH 無調整 Ｂ）単離 得られた培養液 60 リットルは、塩酸で pH 3 に調整し、ア
セトン 60 リットル を添加、0.5 時間攪拌しながら抽出し
た。抽出液にろ過助剤としてセライト 545（米国ジョー
ンズ・マンビル・プロジェクト・コーポレーション製）
1.2 Kg を加えてろ過を行った。そのろ液 110 リットル は
酢酸エチル 60 リットル で 1 回、さらに30 リットル で 2
回抽出した。得られた酢酸エチル層を 30 リットル の 5
％重炭酸ナトリウム、30 リットル の飽和食塩水で洗浄し、
さらに無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、減圧下で濃縮
乾固して 14 g の油状物が得られた。
【００４４】得られた油状物をシリカゲル 200 g をメ
チレンクロリドで充填したカラムに、同溶剤に溶解して
吸着させ、次いでメチレンクロリド−酢酸エチル、酢酸
エチル、酢酸エチル−メタノ−ルと順次展開溶媒の極性
を上げて 溶出した。溶出液を 18 ml づつ分画し、酢
酸エチル−メタノ−ルで溶出したチオマリノ−ルを含む
フラクションを集め、減圧下で濃縮乾固して油状物 7 g
が得られた。得られた油状物をダイアイオンHP−20
を水で充填したカラム 600 ml に、50 ％メタノ−ル
400 ml に溶解して吸着させ、次いで 50 ％メタノ−
ルで洗浄し、90％メタノ−ルで溶出した。これを減圧下
で濃縮乾固して黄色粗粉末 1 g が得られた。黄色粗粉
末はさらにセファデックスLH−20 を用いてクロマトを
行い、メチレンクロリド−酢酸エチル−メタノ−ル（ 1
9 ： 19 ：2 ）で展開し、活性のフラクションを集め
て、黄色粉末のチオマリノ−ルが 750 mg 得られた。
【００４５】試験例１．チオマリノ−ルの抗菌作用 一般グラム陽性および陰性細菌に対するチオマリノ−ル
の最小阻止濃度（MIC）は、普通寒天培地（栄研化学
（株）製）を用いた寒天培地希釈法によって測定した。
結果を表１に示す。
【００４６】
【表１】 −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− 被検菌 最小阻止濃度（MIC ）（μg ／ml） −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− スタフィロコッカス アウレウス 209P ≦ 0.01 スタフィロコッカス アウレウス 56R ≦ 0.01 スタフィロコッカス アウレウス 535(MRSA) ≦ 0.01 エンテロコッカス フェカリス 681 0.02 エシェリシア コリ NHIJ 0.8 エシェリシア コリ 609 0.8 サルモネラ エンテリティディス 0.4 クレブシェラ ニューモニエ 806 0.8 クレブシェラ ニューモニエ 846(R) 0.2 エンテロバクタ クロアカエ 963 1.5 セラチア マルセセンス 1184 3.1 プロテウス ブルガリス 1420 0.05 モルガネラ モルガニー 1510 6.2 シュードモナス エルギノーザ 1001 0.2 シュードモナス エルギノーザ N07 0.4 −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− 表１から明かのごとく、チオマリノ−ルは一般グラム陽
性および陰性細菌に対して優れた効果を示した。
【００４７】試験例２．チオマリノ−ルの抗マイコプラ
ズマ菌作用 一般マイコプラズマ菌に対するチオマリノ−ルの最小阻
止濃度（MIC ）は、以下の測定条件下において、寒天平
板希釈法によって測定した。
【００４８】測定条件 接種菌量 105 CFU ／ml を 0.005 ml 接種 測定用培地 マイコプラズマ ボビス、マイコプラズマ
ガリセプチカム：チャノック(Chanock) の培地(P.N.
A.S.,48巻、41-49頁(1962 年) 記載の培地に20% 馬血清
を添加した培地) マイコプラズマ シノビア：フレイ(Frey)の培地(Am.J.
Vet.Res.,29 巻、2163-2171頁(1968 年) 記載の培地に12
% 豚血清を添加した培地) マイコプラズマ ホシノビエ：ムチン PPLO 寒天培地(1
5 %馬血清を添加した培地) 培養条件 37℃、5 日間、微好気培養［BBL ガスパッ
ク(BBL GasPac(商品名、Becton Dickinson Microbiolog
y Systems 社、米国))法］ 結果を表２に示す。
【００４９】
【表２】 −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− 被検菌 最小阻止濃度（MIC ）（μg ／ml） −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− マイコプラズマ ボビス ドネッタ 0.0125 マイコプラズマ ガリセプチカム PG-31 0.05 マイコプラズマ ガリセプチカム S-6 0.10 マイコプラズマ ガリセプチカム K-1 0.05 マイコプラズマ シノビア WVU 1853 ＜ 0.006 マイコプラズマ ホシノビエ S-16 0.025 −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− 表２から明かのごとく、チオマリノ−ルは一般マイコプ
ラズマ菌に対して優れた効果を示した。
【００５０】
【発明の効果】以上から、本発明の新規化合物チオマリ
ノ−ルは抗菌作用を示し、各種細菌に対する抗菌剤とし
て有用である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:01） (72)発明者 小玉 健太郎 茨城県つくば市御幸が丘33 三共株式会社 内 (72)発明者 石井 晃 茨城県つくば市御幸が丘33 三共株式会社 内 (72)発明者 春山 英幸 東京都品川区広町１丁目２番58号 三共株 式会社内

Claims (6)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】下記の構造式を有するチオマリノール。 【化１】
  2. 【請求項２】下記の理化学的性状を有するチオマリノー
    ル。 １）物質の性状：黄色粉末 ２）融点：84−89 ℃ ３）分子式：C30 H44 N2 O9 S2 ４）分子量： 640 (FAB-MS法により測定） ５）高分解能質量分析：C30 H45 N2 O9 S2[(M+H)+ FAB
    -MS 法により測定］ 実測値 641.2585 計算値 641.2567 ６）元素分析：（％） 実測値 C 55.92、 H 6.82 、 N 4.23 、 S 9.90 計算値 C 56.23、 H 6.92 、 N 4.37 、 S 10.01 ７）赤外線吸収スペクトル：νmaxcm-1 臭化カリウム(KBr) 錠剤法で測定した赤外線吸収スペク
    トルは、次に示す通りである。3394、2930、1649、159
    8、1526、1288、1216、1154、1102、1052 ８）紫外線吸収スペクトル：λmax nm（ε） メタノールまたはメタノール＋塩酸中で測定した紫外線
    吸収スペクトルは、次に示す通りである。387(12、000)
    、300(3、500)、214(26、000) メタノール＋水酸化ナトリウム中で測定した紫外線吸収
    スペクトルは、次に示す通りである。386(9、600)、306
    (3、200)、206(25、000) ９）比旋光度：［α］D 25 ＝＋4.3 °(C 1.0、メタノ−
    ル) １０）高速液体クロマトグラフィー： 分離カラム；センシュウパック ODS H-2151 ( カラムサ
    イズ、 φ6 ×150 mm、センシュウ科学（株）製 ) 溶媒； 40 % アセトニトリル−水 流速； 1.5 ml ／分 波長； 220-350 nm （フォトダイオ−ドアレイ検出） 保持時間； 5.9 分 １１） 1Ｈー核磁気共鳴スペクトル：（δ：ppm ） 重ジメチルスルホキシド中、内部基準にテトラメチルシ
    ランを使用して測定した核磁気共鳴スペクトル(270 MH
    z) は、次に示す通りである。0.91(3H,d,J=6.8Hz)、 0.
    95(3H,d,J=5.9Hz)、 1.30(6H,m(br.)) 、1.55(5H,m(b
    r.)) 、2.03(3H,s)、2.09(3H,m)、2.34(2H,t,J=7.3H
    z)、3.33(1H,d,J=10.7Hz) 、3.52(2H,m)、3.64(2H,m)、
    3.73(1H,dd) 、4.02(2H,t,J=6.6Hz)、4.18(1H,d(b
    r.),J=7.3Hz) 、4.30(1H,d,J=4.4Hz)、4.44(1H,d,J=7.8
    Hz)、4.63(1H,d,J=3.4Hz)、4.89(1H,d,J=7.3Hz)、5.37
    (2H,m)、5.97(1H,s(br.)) 、7.04(1H,s)、9.80(1H,s (b
    r.))、10.68(1H,s (br.)) １２）13Ｃー核磁気共鳴スペクトル：( δ：ppm) 重メタノ−ル中、内部基準にテトラメチルシランを使用
    して測定した核磁気共鳴スペクトル(68 MHz)は、次に示
    す通りである。174.3(s)、170.4(s)、168.6(s)、161.1
    (s)、137.9(s)、135.7(d)、135.1(s)、129.8(d)、116.3
    (d)、115.8(s)、113.7(d)、 77.6(d)、74.4(d)、 72.1
    (d)、 71.8(d)、 66.0(t)、 65.7(d)、 64.9(t)、45.3
    (d)、 43.9(d)、 36.6(t)、 33.4(t)、 30.1(t)、 30.0
    (t)、29.7(t)、 27.0(t)、 26.7(t)、 20.3(q)、 16.6
    (q)、 16.3(q) １３）溶解性：メタノール、エタノール、プロパノー
    ル、ブタノール等のアルコール類、ジメチルスルホキシ
    ド、ジメチルホルムアミド、クロロホルム、酢酸エチ
    ル、アセトン、エチルエーテルに可溶、ｎ−ヘキサン、
    水に不溶。 １４）呈色反応：硫酸、ヨード、過マンガン酸カリウム
    に陽性。 １５）薄層クロマトグラフィー： Ｒｆ値； 0.57 吸着剤； シリカゲル（メルク社製、Art.5715） 展開溶剤；ジクロロメタン：メタノール ＝ 85 ：15
  3. 【請求項３】アルテロモナス属に属するチオマリノ−ル
    生産菌を培養し、その培養物よりチオマリノ−ルを採取
    することを特徴とするチオマリノ−ルの製法。
  4. 【請求項４】［請求項３］において、アルテロモナス属
    に属するチオマリノ−ル生産菌がアルテロモナス・ラバ
    ・SANK 73390株である製法。
  5. 【請求項５】トレハロ−スとプロピオン酸ナトリウムを
    炭素源として利用し、灰色を帯びた黄色のコロニ−を作
    るアルテロモナス・ラバ．
  6. 【請求項６】［請求項５］において、アルテロモナス・
    ラバ に属する菌株がアルテロモナス・ラバ・SANK 733
    90株。
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