HU214738B - Eljárás új antibakteriális vegyületek előállítására - Google Patents
Eljárás új antibakteriális vegyületek előállítására Download PDFInfo
- Publication number
- HU214738B HU214738B HU9201526A HU9201526A HU214738B HU 214738 B HU214738 B HU 214738B HU 9201526 A HU9201526 A HU 9201526A HU 9201526 A HU9201526 A HU 9201526A HU 214738 B HU214738 B HU 214738B
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- doublet
- singlet
- triplet
- methanol
- multiplet
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D495/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
- C07D495/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains two hetero rings
- C07D495/04—Ortho-condensed systems
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
- C12P17/185—Heterocyclic compounds containing sulfur atoms as ring hetero atoms in the condensed system
- C12P17/187—Heterocyclic compounds containing sulfur atoms as ring hetero atoms in the condensed system containing two or more directly linked sulfur atoms, e.g. epithiopiperazines
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Food Preservation Except Freezing, Refrigeration, And Drying (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Tires In General (AREA)
- Detergent Compositions (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
A jelen találmány egy új, antibakteriális hatású vegyületrevonatkozik, amely az Alteromonas nemzetségből kapható, és amely apszeudomonasz savakhoz mutat szerkezeti hasonlóságot. ŕ
Description
A jelen találmány új vegyületre vonatkozik, amelyet „tiomarinol”-nak neveztünk el, és amely az I képlettel jellemezhető. A találmány kiterjed a tiomarinol fermentációval való előállítására is, amelyhez az Alteromonas nemzetséghez tartozó mikroorganizmust, különösen az Alteromonas rava species új, SANK 73390 jelű törzsét használjuk, amely maga is új és a találmány tárgyát képezi. A tiomarinol különféle gyógyászati, különösen antibakteriális hatást mutat, és így a találmány e vegyületet tartalmazó gyógyászati készítményeket és a vegyületet alkalmazó gyógyászati és megelőző eljárásokat is magában foglal.
Az Alteromonas nemzetség organizmusai tengervízből különíthetők el, és közülük néhányról már kimutatták, hogy gyógyászatilag hatásos vegyületeket termel. Például a Viscabelin néven ismert vegyületet egy Alteromonas speciesből kapták, és megállapították, hogy daganatellenes hatást fejt ki (Sho 63-27484 számújapán szabadalmi bejelentés).
A tiomarinolhoz hasonló szerkezetű antibiotikumok már ismertek, és ezek három csoportba oszthatók.
Az első csoport a pszeudomonasz savakból áll, amelyeket Pseudomonas speciesekből izoláltak. Ezek közé tartozik a pszeudomonasz sav A, amelyet a Pseudomonas fluorescens termel [a J. Chem. Soc. Perkin Trans. I, 294. (1977) irodalmi helyen ismertetik], a pszeudomonasz sav B [ugyanazon folyóirat, 318. (1977)], a pszeudomonasz sav C [ugyanazon folyóirat, 2827. (1982)] és a pszeudomonasz sav D [ugyanazon folyóirat, 2655. (1983)]. A pszeudomonasz sav A „Bactroban” (Beecham, védjegy) néven, antibakteriális hatású készítményként, 2%-os dermatológiai kenőcs formájában került forgalomba.
Más pszeudomonaszsav-származékokat tengeri baktériumokból kaptak [Am. Chem. Soc. Abstr. Pap., 200 (2), (1990)], de ezek esetében antibakteriális hatást nem említettek.
A találmány szerinti vegyülettel szerkezeti hasonlóságot mutató vegyületek második csoportját a halomicin [Helv. Chim. Acta, 42. 563. (1959)], pirrotin [J. Am. Chem. Soc., 77. 2861. (1955)], tiolutin [Angew. Chem., 66. 745. (1954)], aureotricin [J. Am. Chem. Soc. 74. 6304. (1952)] és más antibiotikumok képezik. Ezeket az antibiotikumokat általában actinomycetesek termelik, és jellemzőjük egy kéntartalmú kromoforcsoport. A xenorhabdin I-V jelű származékok szintén baktériumokból izolált, a halomicinnel rokon anyagok (WO 84/01775).
A fenti két csoportba sorolható származékokkal különféle vizsgálatokat végeztek, de nem tudunk arról, hogy a tiomarinolnak megfelelő molekulaszerkezetű, vagy a tiomarinol tulajdonságaival jellemezhető vegyületről valahol is említést tettek volna.
A harmadik csoport vegyületeit például az 52-102279, 54-12375, 54-90179, 54-103871 és az 54-125672 számon közzétett japán szabadalmi bejelentésekben ismertetik, amelyek olyan, a tiomarinolhoz hasonló szerkezetű pszeudomonaszsav-származékok, amelyekben a terminális karboxicsoport helyén amidcsoport található. Ezek a vegyületek nem fejtenek ki összemérhető és széles spektrumú antibakteriális hatást. Valójában ezen vegyületek az eredeti pszeudomonasz savnál gyengébb antibakteriális hatással rendelkeznek.
A fenti vegyületek egyikét sem izolálták Alteromonas speciesből, és a vegyületek egyike sem azonos a tiomarinollal. Például a tiomarinolra jellemző egyik szerkezeti rész a 6 tagú gyűrű és az alfa,béta-telítetlen karbonilcsoport közötti hidroxicsoport. Ennek megfelelően a tiomarinol egyértelműen különbözik az ismert vegyületektől.
így a jelen találmány az I képletű vegyületre vonatkozik.
A találmány kiterjed a tiomarinol előállítási eljárására is, amely szerint egy, az Alteromonas nemzetséghez tartozó tiomarinolt termelő mikroorganizmust tenyésztünk, és a tenyészetből a tiomarinolt elkülönítjük.
A találmány magában foglalja a tiomarinolt gyógyászatilag elfogadható hordozó- és hígítóanyagokkal együtt tartalmazó gyógyászati készítményeket is.
A találmány tárgyát képezi továbbá a tiomarinol gyógyászatban, különösen bakteriális fertőzések kezelésére vagy megelőzésére való alkalmazása is.
A tiomarinol bakteriális fertőzések kezelésére vagy megelőzésére alkalmas gyógyászati készítmények előállítására való alkalmazása is a találmány körébe tartozik.
A találmány kiterjed továbbá bakteriális fertőzések kezelésére vagy megelőzésére alkalmas eljárásra is, amely abban áll, hogy a tiomarinol hatásos mennyiségét az ilyen fertőzésben szenvedő vagy az ilyen fertőzésre fogékony emlősnek, amely lehet ember is, beadjuk.
A tiomarinol szerkezeti képletében jól látszik, hogy több aszimmetriás szénatomot és néhány kettős kötést tartalmaz. Az izomerizációra különösen a tiomarinol alfa,béta-telítetlen karbonilrészénél van lehetőség. A tiomarinol ezért különböző optikai és geometriai izomerek formájában létezhet. Noha ezeket egyetlen molekulaképlettel szemléltetjük, a jelen találmány magában foglalja mind az egyes, elkülönített izomereket, mind azok elegyeit, beleértve a racemátokat is. Amikor sztereospecifíkusszintézis-módszert vagy optikailag aktív kiindulási anyagokat alkalmazunk, az egyes izomereket közvetlenül előállíthatjuk; másrészt, ha az izomerek elegyét kapjuk termékként, az egyes izomereket a szokásos rezolválási módszerekkel különíthetjük el.
A természetben előforduló tiomarinol standard optikai konfigurációt mutat. így, noha más konfigurációjú tiomarinol is hozzáférhető, a természetes konfigurációjút részesítjük előnyben.
A tiomarinolt úgy állíthatjuk elő, hogy az Alteromonas nemzetség egy tiomarinoltermelő mikroorganizmusát tenyésztjük, és aztán a tenyészetből a tiomarinolt elkülönítjük. A kívánt antibakteriális hatású tiomarinol változatait más Alteromonas speciekkel vagy törzsekkel hasonló módon állíthatjuk elő, vagy a fenti fermentációs eljárással kapott vegyület megfelelő módosításával kaphatjuk meg, vagy közvetlenül kémiai úton is szintetizálhatjuk.
Közelebbről, különösen az új Alteromonas rava species, és még inkább az újonnan izolált Alteromonas rava törzs alkalmazását részesítjük előnyben, amelynek jele
HU 214 738 Β
SANK 73390. A SANK 73390 egy tengeri mikroorganizmus, amelyet Japánban, a Shizuoka Prefektúrában a Koina, Minami-Izu Machi-i tengerparton gyűjtött tengervízből izoláltunk, és 1991. április 30-án a FERM BP-3381 azonosítási szám alatt, a Budapesti Egyezmény előírásai szerint a Deposition Institute, Research Institute of Microbiological Technology, Agency of Industrial Science & Technology deponálási helyen letétbe helyeztünk.
Az Alteromonas rava SANK 73390 jelű törzs taxonómiai jellemzőit az alábbiakban ismertetjük.
1. Morfológiai jellemzők
A SANK 73390 jelű Alteromonas rava törzset °C-on 24 órán át tengeri agaron (Disco) tenyésztettük. Ezt követően mikroszkóp segítségével megfigyeltük, hogy a sejtek pálcika alakúak és átmérőjük 0,8-1,0 mikrométer, hosszuk 2,0-3,6 mikrométer. Ez a törzs Gram-negatív, és egy poláros csiliója van, amely segítségével mozog.
2. Növekedés tengeri agaron
A SANK 73390 törzset 24 órán át 23 °C-on tengeri agaron (Difco) tenyésztettük. A képződő telepek halvány szürkéssárga színűek, átlátszatlanok, kör alakúak, laposak és egyedülállóak. Vízoldható pigment nem képződött.
3. Fiziológiai tulajdonságok
1. Tengervízszükséglet: a SANK 73390 a növekedéshez tengervizet igényel.
2. Oxidatív-fermentációs vizsgálat (Hugh-Leifsonmódszer [J. Bact., 66. 24-26. (1953)], mesterséges tengervízből készült táptalajon): nem hat a szénhidrátokra.
3. Oxidáz: +
4. Kataláz: +
5. Oxigénszükséglet: aerob.
6. Nitrátredukció: 7. Keményítőhidrolízis: +
8. Agar lebontása: 9. Zselatin elfolyósítása: +
10. DNáz-termelés: +
11. Lipáztermelés: +
12. Növekedés különböző hőmérsékleteken:
°C-on: rossz; 17-26 °C-on: jó; 35 °C-on: nincs.
13. Növekedésifaktor-szükséglet: a Journal of Bacteriology 107., 268-294. (1977) irodalmi helyen leírt alaptápközegen a SANK 73390 vitaminmentes kazaminosavat igényel.
14. Szénforrások asszimilációja: a Journal of Bacteriology 107., 268-294. (1977) irodalmi helyen leírt alaptápközegen, amely még 0,1 tömeg/térfogat% vitaminmentes kazaminosavat is tartalmazott, rázott tenyészetben:
Táblázat
| L-Arabinóz: | - | D-Ribóz: | - |
| D-Xilóz: | - | D-Glükóz: | + |
| D-Galaktóz: | - | D-Fruktóz: | - |
| Maltóz: | + | Szacharóz: | - |
| Trehalóz: | + | Cellobióz: | - |
| Melibióz: | - | Mannit: | - |
| Szorbit: | - | Glicerin: | - |
| Nátrium-acetát: | + | Nátrium- propionát: | + |
4. Kemotaxonómiai jelleg
1. A DN S-guanin és -citozin (G+C)mól%-a:
43,4% (HPLC-módszerrel)
2. Kinonrendszer: ubikinon Q-8
A SANK 73390 jelű Alteromonas rava törzset a fenti taxonómiai jellemzői alapján összehasonlítottuk a Bergey’s Manual of Systematic Bacteriology [Vol. 1 (1984)] kézikönyvben és az International Journal of Systematic Bacteriology folyóirat újabb kiadásaiban leírt törzsekkel. Úgy találtuk, hogy a SANK 73390 Alteromonas rava törzs bizonyos hasonlóságokat mutat az Alteromonas citreá-hoz, amely szintén tengerből származó mikroorganizmus. A SANK 73390 és Alteromonas citrea, ATCC 29179 (standard) törzseket párhuzamosan tenyésztettük és összehasonlítottuk.
A SANK 73390 halvány szürkéssárga színéhez hasonlítva az ATCC 29719 telepek zöldessárga színűek voltak. A SANK 73390 az Alteromonas citreá-töl a 4 °C-on mutatott növekedésben és a trehalóz és nátrium-propionát szénforrásként való hasznosításában is különbözött. Következésképpen az Alteromonas rava SANK 73390 törzs az új Alteromonas rava species új törzse, és a legközelebb álló, ATCC 29179 azonosítási számon deponált törzstől lényeges jellemzőkben különbözik.
A fentebb leírt jellemzők a SANK 73390 törzsre nézve tipikusak, azonban jól ismert, hogy az Alteromonas fajok jellemzői változtathatók mind természetesen, mind mesterségesen. A fentebb meghatározott jellemzők a deponált Alteromonas raváA írják le, de nem feltétlenül tipikusak más Alteromonas fajokra vagy Alteromonas rava törzsekre vagy a természetben előforduló változataikra, amelyek képesek tiomarinolt termelni. Ezek a törzsek szintén a találmány körébe tartoznak.
Természetesen a SANK 73390 vagy bármely más, tiomarinolt termelni képes törzs vagy ezek valamely variánsa tenyészthető vagy biotechnológiailag megváltoztatható vagy módosítható úgy, hogy más jellemzőkkel rendelkező organizmus jöjjön létre. Az egyetlen kritérium, hogy a keletkezett organizmus legyen képes a kívánt vegyület termelésére.
Az ilyen változtatások vagy módosítások bármely kívánt módon történhetnek, vagy például a tenyésztési körülmények hatására is végbemehetnek. A törzsek tenyésztéssel is módosíthatók, és úgy választhatók ki, hogy bizonyos tulajdonságokat, például fokozott növekedést vagy alacsonyabb/magasabb hőmérsékleten való növekedést mutassanak.
A biotechnológiai módosítások általában szándékosak, és kiválasztható tulajdonságok, így bakteriosztatikus rezisztencia vagy érzékenység, vagy ezek kombinációja bevezetésére alkalmasak a tisztaság fenntartása
HU 214 738 Β érdekében, vagy a tenyészet, különösen az oltótenyészet tisztításának az időről időre való lehetővé tételére.
Az Alteromonas fajoknál megengedhető bármely más jellemző bevitele génmanipulációval. Például rezisztenciát kódoló plazmidok beépíthetők vagy bármely, a természetben előforduló plazmid eltávolítható. Előnyösek többek között az auxotrófíát kölcsönző plazmidok. A plazmidokat bármely alkalmas forrásból nyerhetjük vagy előállíthatjuk a természetben előforduló Alteromonas plazmid elkülönítésével és egy másik forrásból származó kívánt gén vagy gének beépítésével. A természetes plazmidok is módosíthatók bármely, kívánatosnak ítélt módon.
Annak érdekében, hogy egy megfelelő mikroorganizmus tenyészetéből tiomarinolt kapjunk, a mikroorganizmust alkalmas közegben fermentálni kell. Az ilyen közegek általában a szakterületen jól ismertek, és más fermentációs termékek előállítására gyakran alkalmazottak.
Általában szükséges, hogy a közeg szénforrás, nitrogénforrás és egy vagy több szervetlen só valamilyen kombinációját tartalmazza, amely a szóban forgó mikroorganizmus számára hasznosítható. A minimális követelmény a közeggel szemben, hogy olyan összetevőket tartalmazzon, amelyek lényegesek a mikroorganizmus növekedése szempontjából.
Megfelelő szénforrások többek között a glükóz, fruktóz, maltóz, szacharóz, mannit, glicerin, dextrin, zabliszt, rozs, kukoricakeményítő, burgonya, gabonaliszt, szójaliszt, gyapotmagolaj, szirup, citromsav és borkősav, amelyek közül bármelyik használható egyedül vagy egy vagy több másikkal kombinációban. A jellemző mennyiség a közeg mennyiségére vonatkoztatva körülbelül 1 és 10 tömeg/térfogat% között változik, noha a mennyiség kívánság szerint és az elérni kívánt eredménytől függően is változtatható.
Alkalmas nitrogénforrás bármely olyan anyag, amely például fehérjét tartalmaz. A nitrogénforrás jellemző példái az állatokból és növényekből származó szerves nitrogénforrások, és ezek lehetnek olyan természetes források, mint szójaliszt, korpa, földimogyoróliszt, gyapotmagliszt kivonatai, kazeinhidrolizátum, fermamin, halliszt, kukoricalekvár, pepton, húsextraktum, élesztő, élesztőkivonat, malátakivonat; olyan szervetlen nitrogénforrások, mint a nátrium-nitrát, ammónium-nitrát és ammónium-szulfát. A szénforrásokhoz hasonlóan ezek is alkalmazhatók egyenként vagy kombinációban. A tápközeg mennyiségére vonatkoztatva a nitrogénforrások megfelelő mennyisége általában 0,1 és 6 tömeg/térfogat% között változik.
A szervetlen tápsók közül azok megfelelőek, amelyek nyomelemek mellett a só fő összetevőjét is biztosítják. Előnyösen a sóknak nátrium-, kálium-, ammónium-, kalcium-, magnézium-, vas-, foszfát-, szulfát-, klorid- és karbonátionokat kell szolgáltatniuk. Olyan nyomelemek, mint a kobalt, mangán és stroncium, vagy bromid-, fluorid-, borát- vagy szilikátionokat tartalmazó sók is jelen lehetnek.
Mivel az Alteromonas rava a természetben tengervízben található, ellenkező utalás hiányában a tenyésztésére a tengeri környezetnek megfelelő körülmények ideálisak. így előnyös, ha az Alteromonas tenyésztésére használt bármely közeg a tengerben található nyomionokat is tartalmazza.
Ha a mikroorganizmust folyékony tenyészetben fermentáljuk, előnyösen habzásgátló szert, például szilikonolajat vagy növényi olajat, vagy más megfelelő felületaktív anyagot alkalmazunk.
Előnyös, ha a SANK 73390 Alteromonas rava törzs tápközegének pH-ját, amennyiben tiomarinol termelésére használjuk, 5,0 és 8,0 között tartjuk, noha a pH-val szemben csak az a követelmény, hogy ne akadályozza a mikroorganizmus növekedését vagy károsan, megfordíthatatlanul ne hasson a végtermék minőségére. Előnyös lehet, ha a fermentációt valamely sav vagy lúg feleslegének hozzáadásával állítjuk le.
A SANK 73390 Alteromonas rava törzs általában 4 °C és 32 °C közötti hőmérsékleten nő, és 17 °C és 26 °C között jól nő. Más, ebbe az intervallumba nem eső hőmérsékletek olyan esetben lehetnek alkalmazhatóak, amikor olyan törzset sikerül kifejleszteni, amely alacsonyabb vagy magasabb hőmérsékleten nő. A tiomarinol termelése szempontjából a 20 °C és 26 °C közötti hőmérséklet előnyös.
A tiomarinolt ideálisan aerob fermentációval kapjuk, és bármely aerob tenyésztési mód, így például szilárd, rázott vagy levegőztetett-kevert tenyésztés alkalmazható.
Ha a fermentációt kis mennyiségben végezzük, akkor általában a rázott tenyészet előnyös, amelyet néhány napig 20 °C és 26 °C közötti hőmérsékleten fermentálunk.
A fermentációt egy előnyös módszer szerint, például Erlenmeyer-lombikban, egy vagy két lépésben előállított inokulom készítésével kezdjük. A táptalajban a szénforrást és nitrogénforrást használhatjuk kombinációban. Az oltólombikot egy termosztatáit inkubátorban 23 °C-on 1-3 órán át vagy addig rázzuk, amíg kielégítő növekedést figyelünk meg. A kapott oltótenyészetet aztán a második oltótenyészet vagy termelőtenyészet beoltására használhatjuk. Ha második oltótenyészetet is készítünk, hasonló módon járunk el, és a tenyészet egy részét a termelőközeg beoltására használhatjuk. A beoltott lombikot 1-3 napon át vagy addig rázzuk, amíg maximális termelést kapunk egy alkalmas hőmérsékleten. Amikor az inkubálás teljes, a lombik tartalmát centrifugálással vagy szűréssel összegyűjthetjük.
Ha a tenyésztést nagy mennyiségben végezzük, egy megfelelő levegőztetős-kevert fermentor alkalmazása előnyös lehet. Ebben az eljárásban a táptalajt a fermentorban állíthatjuk elő. 125 °C-on való sterilezés után a közeget lehűtjük és egy előzőleg sterilezett közegen növesztett inokulummal beoltjuk. A tenyésztést 20 °C és 26 °C közötti hőmérsékleten keverés és levegőztetés közben végezzük. Ez az eljárás a vegyület nagy mennyiségben való előállítására alkalmas.
A tenyésztéssel kapott tiomarinol mennyiségét az idő előrehaladtával például nagy teljesítményű folyadékkromatográfiás módszerrel követhetjük. A termelt
HU 214 738 Β tiomarinol mennyisége általában a 19 és 96 óra közötti időtartam után éri el a maximumot.
A megfelelő hosszúságú tenyésztési idő eltelte után a tiomarinolt ismert módszerekkel különíthetjük el és tisztíthatjuk. Például a tény észlében maradó tiomarinolt úgy izolálhatjuk, hogy a szilárd anyagokat például diatómaföld szűrési segédanyag alkalmazásával, szűréssel vagy centrifugálással eltávolítjuk, és aztán a felülúszót extraháljuk, majd a tiomarinolt fizikai-kémiai tulajdonságainak megfelelően tisztítjuk. A szűrletben vagy a felülúszöban levő tiomarinolt például vízzel nem elegyedő szerves oldószerrel, így etil-acetáttal, kloroformmal, etilén-kloriddal, metilén-kloriddal vagy ezek bármilyen elegyével, semleges vagy savas körülmények között extraháljuk és tisztítjuk.
Úgy is eljárhatunk, hogy adszorbensként aktív szenet vagy adszorbens gyantát, például Amberlite XAD-2-t, XAD-4-et (Rohm and Haas) vagy Diaion HP-10-et, ΗΡ-20-at, CHP-20-at vagy ΗΡ-50-et (Mitsubishi Kaséi Corporation) alkalmazunk. A szennyezéseket az adszorpció után úgy távolíthatjuk el, hogy a tiomarinolt tartalmazó folyadékot egy adszorbens rétegen engedjük át; vagy a tiomarinolt az adszorpció után megfelelő eluenssel, például vizes metanollal, vizes acetonnal vagy butanol-víz eleggyel végzett eluálással tisztíthatjuk.
Az intracelluláris tiomarinolt úgy tisztíthatjuk, hogy megfelelő oldószerrel, így 50-90%-os vizes acetonnal vagy vizes metanollal extraháljuk, majd a szerves oldószert eltávolítjuk, és az előzőeken a szűrletre vagy felülúszóra leírt módon extrakciót végzünk.
A kapott tiomarinolt ismert eljárásokkal, például kovasavgélen vagy magnézium-kovasavgélen, például a „Florisil” néven kereskedelmi forgalomban levő adszorbensen adszorpciós oszlopkromatográfiás eljárással; például Sephadex LH-20 (a Pharmacia termékének kereskedelmi neve) adszorbensen megoszlási oszlopkromatográfiás eljárással; vagy nagy teljesítményű folyadékkromatográfiás módszerrel, normál vagy fordított fázisú oszlopot alkalmazva tisztíthatjuk tovább. Az is ismert, hogy ezeket az elkülönítési és tisztítási eljárásokat egyedül vagy bármilyen alkalmas kombinációban és kívánt esetben ismételten végezhetjük, hogy a kívánt végterméket elkülönítsük és tisztítsuk.
Amennyiben a találmány szerinti vegyületet a gyógyászatban kívánjuk felhasználni, adagolása történhet magában vagy a hatóanyag mellett egy vagy több szokásos hígítóanyagot, hordozót, segédanyagot vagy adjuvánst tartalmazó megfelelő gyógyászati készítmény formájában. A készítmény természete nyilvánvalóan az adagolás módjától függ. Orális alkalmazásra a vegyületet előnyösen porrá, granulátummá, tablettákká, kapszulákká vagy szirupokká dolgozzuk fel. Parenterális adagolás céljára előnyösek az injekciók, amelyek intravénás, intramuszkuláris vagy szubkután beadható készítmények lehetnek, vagy a cseppek vagy kúpok.
A készítményeket ismert eljárásokkal, adalékanyagok, például hordozók, kötőanyagok, szétesést elősegítő anyagok, kenőanyagok, stabilizátorok, korrigálóanyagok, oldáskönnyítő szerek, szuszpendálószerek vagy bevonószerek hozzáadásával állítjuk elő. Noha a dózis a beteg tüneteitől és korától, a fertőzés természetétől és súlyosságától és az adagolás útjától és módjától függ, egy felnőtt ember beteg és orális adagolás esetében a jelen találmány szerinti vegyületet általában napi 20 mg és 2000 mg közötti dózisban adjuk be. A vegyület adagolható egyetlen dózisban vagy osztott dózisban, például napi két vagy három alkalommal.
Mivel a tiomarinol Gram-pozitív és Gram-negatív baktériumokkal szemben állatokban (például emberben, kutyában, macskában és nyúlban) antibakteriális hatást fejt ki, kívánatos lehet helyi alkalmazása is, például krém, kenőcs vagy gél alakjában. Az ilyen adagolási formák összetevőivel és elkészítésével kapcsolatban a fentiekhez hasonló meggondolások érvényesek.
A következő példák a tiomarinol előállítását és antibakteriális hatását mutatják be, de a jelen találmányt semmiképpen nem korlátozzák.
1. példa
Tiomarinol fermentálása tartályban
A) Tenyésztés
A SANK 73390 Alteromonas rava törzset 3 napon át 22 °C-on ferde tengeri agaron (Difco terméke) tenyésztettük. A kapott tenyészetet 3 ml mesterséges tengervízben szuszpendáltuk. A szuszpenzióból 0,1 ml-t aszeptikus körülmények között kivettünk, és 100 ml sterilezett táptalajra [37,4 g tengeri táptalaj (Difco terméke) 1 liter deionizált vízben, a pH nincs korrigálva] tartalmazó 500 ml-es Erlenmeyer-lombikba oltottunk.
A lombikot 24 órán át 23 °C-on inkubáltuk rotációs rázógépen rázatva (200 fordulat/perc, kitérés 70 mm). Ezután a négy 30 literes fermentort, amelyek mindegyike 15 liter fenti steril táptalajt tartalmazott, az Erlenmeyer-lombikból aszeptikus körülmények között kivett 15 ml tenyészettel beoltottuk. A fermentorokat 23 órán át 23 °C-on inkubáltuk 100 fordulat/perces keverés és 7,5 liter/perc térfogatú levegő átvezetése mellett.
B) Elkülönítés
A 23 óra eltelte után a fermentorok tartalmát egyesítettük, így 60 liter tenyészlevet kaptunk. A folyadék pH-ját sósav hozzáadásával 3-ra állítottuk, majd 60 liter acetont adtunk az elegyhez, és 30 percig keverés közben extraháltuk. 1,2 kg Celite 545 szűrési segédanyag (a Johns Manville Co.-tól beszerezhető termék védjegye) alkalmazásával az oldatot szűrtük. A kapott 110 liter szűrletet aztán egy alkalommal 60 liter etilacetáttal, két alkalommal 30-30 liter etil-acetáttal extraháltuk. A szerves réteget 30 liter 5 tömeg/térfogat%-os vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, majd 30 liter telített vizes nátrium-klorid-oldattal mostuk, vízmentes nátrium-szulfáton szárítottuk, és csökkentett nyomáson szárazra pároltuk. így 14 g olajos anyagot kaptunk.
A fenti módon kapott olajos anyagot metilén-kloridban oldottuk, és az oldatot 200 g kovasavgélből metilén-kloriddal készült oszlopon adszorbeáltuk. A célvegyületet növekedő polaritású kifejlesztő oldószerrel, így metilén-klorid és etil-acetát elegyével, etil-acetáttal és etil-acetát és metanol elegyével eluáltuk. Az eluá5
HU 214 738 Β tumot 18 ml-es frakciókban gyűjtöttük, és az etil-acetát és metanol elegyével kapott, tiomarinolt tartalmazó frakciókat tartottuk meg.
A fenti frakciókat szárazra pároltuk, így 7 g olajos maradékot kaptunk, amelyet 400 ml 50 térfogat%-os vizes metanolban oldottunk és 600 ml Diaion HP-20 adszorbensből (a Mitsubishi Chem. Ind.-tói beszerezhető termék védjegye) vízzel készült oszlopon adszorbeáltuk. 50 térfogat%-os vizes metanollal való mosás után a célvegyületet 90 térfogat%-os vizes metanollal eluáltuk, és az eluátumot csökkentett nyomáson szárazra pároltuk. így 1 g sárga port kaptunk, amelyet Sephadex LH-20 oszlopon tovább kromatografáltunk, eluálószerként metilén-klorid, etil-acetát és metanol 19:19:2 térfogatarányú elegyét használtuk. Ily módon 750 mg tiomarinolt kaptunk sárga por formájában.
Az elkülönített tiomarinol a következő tulajdonságokkal rendelkezik:
1. Természet és megjelenés: sárga por
2. Olvadáspont: 84-89 °C
3. Molekulaképlet: C30H44N7O9S2
4. Molekulatömeg: 640, FAB-MS-módszerrel meghatározva (Fást Atom Bombardment Mass Spectrometry)
5. Nagy felbontású tömegspektrum:
C30H45N2O9S2 [(M+H)+ FAB-MS-módszerrel): számított: 641,2567 talált: 641,2585
6. Elemanalízis:
számított: C: 56,23%; H: 6,92%; N: 4,37%;
S: 10,01%;
talált: C: 55,92%; H: 6,82%; N: 4,23%;
S: 9,90%.
7. Infravörös abszorpciós spektrum: a spektrum a következő abszorpciós maximumokat (nümax) mutatta (KBr-ban): 3394, 2930, 1649, 1598, 1526, 1288, 1216, 1154, 1102, 1052 cm1.
8. Ultraibolya abszorpciós spektrum:
Metanolban vagy metanol és sósav elegyében a tiomarinol az alábbi abszorpciós spektrumot mutatja [lambdamax nm (epszilon)-ban megadva]:
387 (12,000); 300 (3,500); 214 (26,000); és metanol és nátrium-hidroxid elegyében a tiomarinol az alábbi abszorpciós spektrumot mutatja [lambdamax nm (epszilon)-ban megadva]:
386 (9,600); 306 (3,200); 206 (25,000).
9. Fajlagos forgatás: [a]2J = +4,3° (c=l,0, metanol).
10. Nagy teljesítményű folyadékkromatográfia: Oszlop: Senshu-Pak ODS H-2151
Az oszlop mérete: 6x150 mm, a Senshu Scientific Co. Ltd. terméke
Oldószer: 40 térfogat%-os vizes acetonitril Átfolyási sebesség: 1,5 ml/perc Hullámhossz: 220-350 nm (fotojodidreakcióval követve)
Retenciós idő: 5,9 perc.
11. 'H-mágnesesmagrezonancia-spektrum (delta ppm): A mágnesesmagrezonancia-spektrum 270 MHz-en, hexadeuterált dimetil-szulfoxidban, tetrametil-szilán belső standard alkalmazása mellett felvéve a következő:
0,91 (3H, dublett, J=6,8 Hz);
0,95 (3H, dublett, J=5,9 Hz);
1.30 (6H, széles multiplett);
1,55 (5H, széles multiplett);
2,03 (3H, szingulett);
2,09 (3H, multiplett);
2,34 (2H, triplett, J=7,3 Hz);
3,33 (1H, dublett, J= 10,7 Hz);
3,52 (2H, multiplett);
3,64 (2H, multiplett);
3,73 (1H, dublettek dublettje);
4,02 (2H, triplett, J=6,6 H2);
4,18 (1H, széles dublett, J=7,3 Hz);
4.30 (1H, dublett, J=4,4 Hz);
4,44 (1H, dublett, J=7,8 Hz);
4,63 (1H, dublett, J=3,4 Hz);
4,89 (1H, dublett, J=7,3 Hz);
5,37 (2H, multiplett);
5,97 (1H, széles szingulett);
7,04 (1H, szingulett);
9,80 (1H, széles szingulett);
10, 68 (1H, széles szingulett).
12. 13C mágnesesmagrezonancia-spektrum (delta ppm): a 68 MHz-en, tetradeutrált metanolban, tetrametilszilán belső standard jelenlétében felvett mágnesesmagrezonancia-spektrum a következő:
174.3 (szingulett), 170,4 (szingulett), 168,6 (szingulett),
161.1 (szingulett), 137,9 (szingulett), 135,7 (dublett);
135.1 (szingulett), 129,8 (dublett), 116,3 (dublett),
115,8 (szingulett), 113,7 (dublett), 77,6 (dublett),
74,4 (dublett), 72,1 (dublett), 71,8 (dublett),
66,0 (triplett), 65,7 (dublett), 64,9 (triplett),
45.3 (dublett), 43,9 (dublett), 36,6 (triplett),
33.4 (triplett), 30,1 (triplett), 30,0 (triplett),
29,7 (triplett), 27,0 (triplett), 26,7 (triplett),
20.3 (kvartett), 16,6 (kvartett),
16.3 (kvartett).
13. Oldhatóság
Oldható alkoholokban, így metanolban, etanolban, propanolban és butanolban; és oldható dimetil-szulfoxidban, dimetil-formamidban, kloroformban, etilacetátban, acetonban és dietil-éterben; nem oldódik hexánban és vízben.
14. Színreakciók
Pozitív: kénsav, jód és kálium-permanganát.
15. Vékonyréteg-kromatográfia Rférték: 0,57
Adszorbens: kovasavgél (Merck & Co. Inc., Art. 5715)
Futtatóelegy: metilén-klorid: metanol=85:15 (térfogat)
1. Vizsgálati példa
A tiomarinol antibakteriális hatása
A tiomarinol Gram-pozitív és Gram-negatív baktériumokkal szemben mutatott minimális gátló koncent6
HU 214 738 Β rációját (minimum inhibitory concentration, MIC) agarhígításos módszerrel határoztuk meg, tápagar közeget (Eiken Chemical Co., Ltd. terméke) alkalmazva.
Az eredmények az 1. táblázatban láthatók:
1. táblázat
| A vizsgált baktériumtörzsek | MIC (μ/ml) |
| Staphylococcus aureus 209 P | <0,01 |
| Staphylococcus aureus 56R | <0,01 |
| Staphylococcus aureus 535 (MRSA) | <0,01 |
| Enterococcus faecalis 681 | 0,02 |
| Escherichia coli NHIJ | 0,8 |
| Escherichia coli 609 | 0,8 |
| Salmonella enteritidis | 0,4 |
| Klebsiella pneumoniae 806 | 0,8 |
| Klebsiella pneumoniae 846 (R) | 0,2 |
| Enterobacter cloacae 963 | 1,5 |
| Serratia marcescens 1184 | 3,1 |
| Proteus vulgáris 1420 | 0,05 |
| Morganella morganii 1510 | 6,2 |
| Pseudomonas aeruginosa 1001 | 0,2 |
| Pseudomonas aeruginosa NO7 | 0,4 |
2. Vizsgálati példa
A tiomarinol mikroplazmaellenes hatása
Az 1. vizsgálati példában leírt eljárást követve a tiomarinol hatását különböző mikroplazmafajokkal szemben vizsgáltuk. Az eredmények az alábbi, 2. táblázatban láthatók.
2. táblázat
| Törzs | MIC (gg/ml) |
| Mycoplasma bovis Donetta | 0,0125 |
| Mycoplasma gallisepticum PG-31 | 0,05 |
| Mycoplasma gallisepticum S-6 | 0,10 |
| Mycoplasma gallisepticum K-1 | 0,05 |
| Mycoplasma synoviae WVU1853 | <0,006 |
| Mycoplasma hyosynoviae S -16 | 0,025 |
Inokulum: 0,005 ml 103 CFU/ml
A vizsgálathoz használt táptalajok
M. bovis és M. gallisepticum Chanock táptalaj [a P. N. A. S., 48. 41-49. (1962) irodalmi helyen leírtak szerint készítve és 20% lószérummal kiegészítve]
M. synoviae Frey táptalaj [az Am. J. Vet. Rés., 29. 2163-2171. (1968) irodalmi helyen leírtak szerint készítve és 12% sertésszérummal kiegészítve]
M. hyosynoviae Mucin PPLP* agar táptalaj (15% lószérummal kiegészítve)
Tenyésztési körülmények: 37 °C, 5 nap, enyhén aerob [BBL-gázcsomagmódszer (a Becton Dickinson Microbiology Systems, Cockeysville, MD 2103
USA cégtől származó eldobható CO2-generátorban tenyésztve)] *PPLO (PleuroPneumonia-Áike Organism)
PPLO táptalaj CV nélkül (Difco) 21 g
Mucin bakteriológiai (Difco) 5 g
Desztillált víz 800 ml
Nemes agar (Difco) 12 g
Lószérum 150 ml
25% friss élesztőkivonat 50 ml
Claims (8)
1,55 (5H, széles multiplett);
1.30 (6H, széles multiplett);
1,55 (5H, széles multiplett);
1,30 (6H, széles multiplett);
1. Eljárás a következő tulajdonságokkal rendelkező vegyület előállítására: természet és megjelenés: sárga por; olvadáspont: 84-89 °C; molekulaképlet: C30H44N2O9S2;
FAB-MS-módszerrel meghatározott molekulatömeg:
640 nagy felbontású tömegspektrum a c30h45n2o9s2 [(M+H)+ FAB-MS-módszerrel] képlet alapján: számított: 641,2567, talált: 641,2585;
elemanalízis:
számított: C: 56,23%; H: 6,92%; N: 4,37%;
S: 10,01%;
talált: C: 55,92%; H: 6,82%; N: 4,23%;
S: 9,90%;
infravörös abszorpciós spektrum: (nümax): 3394, 2930,
1649, 1598, 1526, 1288, 1216, 1154, 1102,
1052 cm-' (KBr);
ultraibolya abszorpciós spektrum [lambdamax nm (epszilon)] :
metanolban vagy metanol és sósav elegyében
387 (12,000); 300 (3,500); 214 (26,000) és metanol és nátrium-hidroxid elegyében: 386 (9,600); 306 (3,200); 206 (25,000);
fajlagos forgatóképesség: [a]2D5=+4,3° (c=l,0, metanol);
nagy teljesítményű folyadékkromatográfiás retenciós idő 5,9 perc [a Senshu Scientific Co. Ltd. által gyártott, 6,150 mm méretű Senshu-Pak ODS H-2151 oszlopon, oldószerként 40 térfogat%-os vizes acetonitrilt használva 1,5 mÉperc átfolyási sebességgel és a detektálást 220-350 nm hullámhosszon fotojodidreakcióval követve;
Ή mágnesesrezonancia-spektrum (270 MHz, hexadeuterált dimetil-szulfoxid, tetrametil-szilán belső standard) δ ppm:
0,91 (3H, dublett, J=6,8 Hz);
0,95 (3H, dublett, J=5,9 Hz);
2,34 (2H, triplett, J = 7,3 Hz);
2,09 (3H, multiplett);
2,03 (3H, szingulett);
2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az (I) képletű vegyületet állítjuk elő.
2,34 (2H, triplett, J=7,3 Hz);
2,09 (3H, multiplett);
2,03 (3H, szingulett);
3,73 (1H, dublettek dublettje);
3,64 (2H, multiplett);
3,52 (2H, multiplett);
3,33 (1H, dublett, J=10,7 Hz);
3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy mikroorganizmusként Alteromonas ravá-t használunk.
3,73 (1H, dublettek dublettje);
3,64 (2H, multiplett);
HU 214 738 Β
3,52 (2H, multiplett);
3,33 (1H, dublett, J= 10,7 Hz);
4,89 (1H, dublett, J=7,3 Hz);
4,63 (1H, dublett, J=3,4 Hz);
4,44 (1H, dublett, J=7,8 Hz);
4.30 (1H, dublett, J=4,4 Hz);
4,18 (1H, széles dublett, J=7,3 Hz);
4,02 (2H, triplett, J=6,6 Hz),
4. A 3. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy mikroorganizmusként a FERM BP-3381 azonosítási számú SANK 73390 Alteromonas rava törzset használjuk.
4,89 (1H, dublett, J=7,3 Hz);
4,63 (1H, dublett, J=3,4 Hz);
4,44 (1H, dublett, J=7,8 Hz);
4,30 (1H, dublett, J=4,4 Hz);
4,18 (1H, széles dublett, J=7,3 Hz);
4,02 (2H, triplett, J=6,6 Hz);
5
6. Az 5. igénypont szerinti (I) képletű vegyület.
5,97 (1H, széles szingulett);
5,37 (2H, multiplett);
5. A következő tulajdonságokkal rendelkező vegyület:
természet és megjelenés: sárga por;
olvadáspont: 84-89 °C;
molekulaképlet: ¢30^44^209^21
FAB-MS-módszerrel meghatározott molekulatömeg:
640 nagy felbontású tömegspektrum a C30H45N2O9S2 [(M + H)+ FAB-MS-módszerrel] képlet alapján:
számított: 641,2567, talált: 641,2585;
elemanalízis:
számított: C: 56,23%; H: 6,92%; N: 4,37%;
S: 10,01%;
talált: C: 55,92%; H: 6,82%; N: 4,23%;
S: 9,90%;
infravörös abszorpciós spektrum: (niimax): 3394,2930, 1649, 1598, 1526, 1288, 1216, 1154, 1102, 1052 cm-i(KBr);
ultraibolya abszorpciós spektrum [larnbdamax nm (epszilon)] :
metanolban vagy metanol és sósav elegyében 387 (12,000); 300 (3,500); 214 (26,000) és metanol és nátrium-hidroxid elegyében: 386 (9,600); 306 (3,200); 206 (25,000);
fajlagos forgatóképesség: [a]2D5=+4,3° (c=l,0, metanol);
nagy teljesítményű folyadékkromatográfiás retenciós idő 5,9 perc [a Senshu Scientific Co. Ltd. által gyártott, 6,150 mm méretű Senshu-Pak ODS H-2151 oszlopon, oldószerként 40 térfogat%-os vizes acetonitrilt használva 1,5 ml/perc átfolyási sebességgel és a detektálást 220-350 nm hullámhosszon fotojodidreakcióval követve;
>H mágnesesrezonancia-spektrum (270 MHz, hexadeuterált dimetil-szulfoxid, tetrametil-szilán belső standard) δ ppm:
0,91 (3H, dublett, J=6,8 Hz);
0,95 (3H, dublett J=5,9 Hz);
5,97 (1 H, széles szingulett);
5,37 (2H, multiplett);
7. Készítmény, amely az 5. vagy 6. igénypont szerinti vegyületből és gyógyászatilag elfogadható hordozóból áll.
7,04 (1H, szingulett);
9,80 (1H, széles szingulett);
10,68 (1H, széles szingulett).
13C mágnesesmagrezonancia-spektrum:
(68 MHz, tetradeuterált metanol, tetrametil-szilán belső standard) δ ppm:
174,3 (szingulett), 170,4 (szingulett),
168,6 (szingulett), 161,1 (szingulett),
137,9 (szingulett), 13,5,7 (dublett);
135,1 (szingulett), 139,8 (dublett), 116,3 (dublett),
115,8 (szingulett), 113,7 (dublett), 77,6 (dublett),
74,4 (dublett), 72,1 (dublett), 71,8 (dublett),
66,0 (triplett), 65,7 (dublett), 64,9 (triplett),
HU 214 738 Β
45.3 (dublett), 43,9 (dublett), 36,6 (triplett),
33.4 (triplett), 30,1 (triplett), 30,0 (triplett),
29,7 (triplett), 27,0 (triplett), 26,7 (triplett),
20,3 (kvartett), 16,6 (kvartett), 16,3 (kvartett);
oldható alkoholokban, így metanolban, etanolban, propanolban és butanolban; és oldható dimetil-szulfoxidban, dimetil-formamidban, kloroformban, etilacetátban, acetonban és dietil-éterben; nem oldódik hexánban és vízben;
pozitív színreakciót mutat kénsavval, jóddal és káliumpermanganáttal; és vékonyréteg-kromatográfiás Rrértéke 0,57 a Merck and Co., Inc. 5715 márkanevű adszorbens kovasavgéljén metilén-klorid: metanol=85:15 térfogatarányú elegy ével mint futtatószerrel.
7,04 (1 H, szingulett);
9,80 (1 H, széles szingulett);
10,68 (1 H, széles szingulett).
13C mágnesesmagrezonancia-spektrum:
(68 MHz, tetradeuterált metanol, tetrametil-szilán belső standard) δ ppm:
174.3 (szingulett), 170,4 (szingulett),
168,6 (szingulett), 161,1 (szingulett),
137,9 (szingulett), 135,7 (dublett);
135,1 (szingulett), 139,8 (dublett), 116,3 (dublett),
115,8 (szingulett), 113,7 (dublett), 77,6 (dublett),
74,4 (dublett), 72,1 (dublett), 71,8 (dublett),
66,0 (triplett), 65,7 (dublett), 64,9 (triplett),
45.3 (dublett), 43,9 (dublett), 36,6 (triplett),
33.4 (triplett), 30,1 (triplett), 30,0 (triplett),
29,7 (triplett), 27,0 (triplett), 26,7 (triplett),
20,3 (kvartett), 16,6 (kvartett), 16,3 (kvartett);
oldható alkoholokban, így metanolban, etanolban, propanolban és butanolban; és oldható dimetil-szulfoxidban, dimetil-formamidban, kloroformban, etilacetátban, acetonban és dietil-éterben; nem oldódik hexánban és vízben;
pozitív színreakciót mutat kénsavval, jóddal és káliumpermanganáttal; és vékonyréteg-kromatográfiás Rrértéke 0,57 a Merck and Co., ínc. 5715 márkanevű adszorbens kovasavgéljén metilén-klorid: metanol=85:15 térfogatarányú elegyével mint futtatószemel, azzal jellemezve, hogy egy, az Alteromonas nemzetséghez tartozó, a fenti vegyület termelésére képes mikroorganizmust tenyésztünk, és a fenti vegyületet a tenyészetből elkülönítjük.
8. A 7. igénypont szerinti készítmény, dermatoló10 giai alkalmazásra.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10157591 | 1991-05-07 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HU9201526D0 HU9201526D0 (en) | 1992-07-28 |
| HUT63197A HUT63197A (en) | 1993-07-28 |
| HU214738B true HU214738B (hu) | 2000-03-28 |
Family
ID=14304198
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU9201526A HU214738B (hu) | 1991-05-07 | 1992-05-07 | Eljárás új antibakteriális vegyületek előállítására |
| HU95P/P00547P HU211594A9 (en) | 1991-05-07 | 1995-06-29 | Anti-bacterial compound and pharmaceutical compositions thereof |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU95P/P00547P HU211594A9 (en) | 1991-05-07 | 1995-06-29 | Anti-bacterial compound and pharmaceutical compositions thereof |
Country Status (23)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0512824B1 (hu) |
| JP (1) | JP2766421B2 (hu) |
| KR (1) | KR0139515B1 (hu) |
| CN (1) | CN1043786C (hu) |
| AT (1) | ATE127805T1 (hu) |
| AU (1) | AU646615B2 (hu) |
| CA (1) | CA2068083C (hu) |
| CZ (1) | CZ279780B6 (hu) |
| DE (1) | DE69204734T2 (hu) |
| DK (1) | DK0512824T3 (hu) |
| ES (1) | ES2079797T3 (hu) |
| FI (1) | FI100112B (hu) |
| GR (1) | GR3018161T3 (hu) |
| HK (1) | HK3896A (hu) |
| HU (2) | HU214738B (hu) |
| IE (1) | IE70452B1 (hu) |
| IL (1) | IL101786A (hu) |
| IS (1) | IS1606B (hu) |
| NO (1) | NO300736B1 (hu) |
| NZ (1) | NZ242648A (hu) |
| RU (1) | RU2077534C1 (hu) |
| TW (1) | TW224488B (hu) |
| ZA (1) | ZA923242B (hu) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP3038064B2 (ja) * | 1991-10-07 | 2000-05-08 | 日清製粉株式会社 | インドール誘導体およびこれを有効成分とする抗潰瘍薬 |
| IL107017A (en) * | 1992-09-18 | 1998-01-04 | Sankyo Co | History of thiomarinol, processes for their preparation, and pharmaceutical preparations containing them |
| AU6927094A (en) * | 1993-05-13 | 1994-12-12 | Smithkline Beecham Plc | Deoxythiomarinol derivatives, process and intermediates for their preparation and their use as microbicides and herbicides |
| GB9310485D0 (en) * | 1993-05-21 | 1993-07-07 | Smithkline Beecham Plc | Novel compounds |
| WO1995005384A1 (en) * | 1993-08-13 | 1995-02-23 | Smithkline Beecham Plc | Derivatives of monic acids a and c having antibacterial, antimycoplasmatical, antifungal and herbicidal activity |
| AU4496996A (en) * | 1995-01-31 | 1996-08-21 | Sankyo Company Limited | Pseudomonic acid derivatives |
| WO2000046388A1 (en) * | 1999-02-03 | 2000-08-10 | Biogal Gyogyszergyar Rt. | Process for the isolation of pseudomonic acid a from pseudomonic acid complex-containing culture broth |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB2173499A (en) * | 1985-02-04 | 1986-10-15 | Ici Plc | Fungicidal dithiolopyrrolones |
-
1992
- 1992-05-05 AU AU16033/92A patent/AU646615B2/en not_active Ceased
- 1992-05-05 ZA ZA923242A patent/ZA923242B/xx unknown
- 1992-05-05 IL IL10178692A patent/IL101786A/en not_active IP Right Cessation
- 1992-05-05 IS IS3855A patent/IS1606B/is unknown
- 1992-05-06 JP JP4112934A patent/JP2766421B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1992-05-06 NO NO921783A patent/NO300736B1/no unknown
- 1992-05-06 CA CA002068083A patent/CA2068083C/en not_active Expired - Fee Related
- 1992-05-06 RU SU5052114/04A patent/RU2077534C1/ru not_active IP Right Cessation
- 1992-05-06 FI FI922058A patent/FI100112B/fi not_active IP Right Cessation
- 1992-05-07 AT AT92304105T patent/ATE127805T1/de not_active IP Right Cessation
- 1992-05-07 EP EP92304105A patent/EP0512824B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-05-07 TW TW081103556A patent/TW224488B/zh active
- 1992-05-07 CZ CS921392A patent/CZ279780B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1992-05-07 CN CN92104386A patent/CN1043786C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1992-05-07 HU HU9201526A patent/HU214738B/hu not_active IP Right Cessation
- 1992-05-07 NZ NZ242648A patent/NZ242648A/en unknown
- 1992-05-07 ES ES92304105T patent/ES2079797T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1992-05-07 DE DE69204734T patent/DE69204734T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1992-05-07 KR KR1019920007740A patent/KR0139515B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1992-05-07 DK DK92304105.7T patent/DK0512824T3/da active
- 1992-07-01 IE IE921460A patent/IE70452B1/en not_active IP Right Cessation
-
1995
- 1995-06-29 HU HU95P/P00547P patent/HU211594A9/hu unknown
- 1995-11-22 GR GR950403279T patent/GR3018161T3/el unknown
-
1996
- 1996-01-11 HK HK3896A patent/HK3896A/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| TANAKA et al. | Brasilinolide A, a new macrolide antibiotic produced by Nocardia brasiliensis: producing strain, isolation and biological activity | |
| KR960013432B1 (ko) | 항균제 fr109615 및 이의 제조방법 | |
| US5405762A (en) | Culture of alteromonas and process of using the same to produce an antibacterial compound | |
| FI103055B (fi) | Menetelmä tiomarinolijohdannaisten valmistamiseksi | |
| HU214738B (hu) | Eljárás új antibakteriális vegyületek előállítására | |
| US4954641A (en) | Novel antitumor antibiotic substance and a method for production thereof | |
| EP1369425A1 (en) | Thiopeptide compounds | |
| US4429115A (en) | 3-O-Oleandrosyl-5-O-desosaminyl erythronolide compounds | |
| US5707838A (en) | Antibiotic produced by Pseudomonas sp. and process for the preparation thereof | |
| US5171740A (en) | Coumamidine compounds | |
| RU2089548C1 (ru) | Тиомаринол c и способ его получения | |
| US4950605A (en) | FR-900493 substance, a process for its production and a pharmaceutical composition containing the same | |
| HU194310B (en) | Process for preparing alkali metal, alkali earth metal, ammonium salt and n-deacetylated derivative of novel tan-588 antibiotic | |
| US4816448A (en) | Thermal isomer of difficidin and thermal isomer of oxydifficidin antibacterials | |
| JP3123864B2 (ja) | 新規化合物チオマリノールｃおよびその製造法 | |
| EP0423247B1 (en) | Coumamidine compounds | |
| HU218351B (hu) | WAP-8294A antibiotikumok, eljárás előállításukra, a termelő mikroorganizmus és az antibiotikumokat tartalmazó antibakteriális gyógyszerkészítmények | |
| JPH08208658A (ja) | 新規化合物チオマリノールｄ、ｅおよびｆ | |
| JP2006111594A (ja) | 新規抗生物質ａ−９４９６４ａ |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Lapse of definitive patent protection due to non-payment of fees |