JPH02311423A - ドラスタチン１３及びそのデヒドロ体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、インド洋産の、外皮のよい軟体動物Ｄｏｌａ
ｂｅ目ａ　ａｕｒｉｃｕｌａｒｉａから得られたドラス
タチン１３及びデヒドロドラスフチン１３と命名された
細胞活動停止性の鎖状デプシベプチドに関し、またドラ
スタチン１３を必須の有効成分として含有する医薬製剤
に関し、さらに細胞成長に苦しむ患者の該成長を阻害す
るために該製剤を使用する方法に関するものである。

（従来の技術） ローマの偉人な自然科学者ガイウス・プリニウスＨ世（
プリニー・ザ・エルダー）は西暦約６０年頃の研究にお
いて、インド洋産のトラベラ属のアメフラシについて始
めて記述している。（ローマ人達はウサギの耳と、この
襟足網動物の耳形の触角の類似性の故に、このアブリン
ト科の軟体動物を始めてアメフラシ（ｓｅａ　ｈａｒｅ
、すなわち「海うさぎ」〕と命名した）。しかし、この
インド洋産のトラベラ属動物を近代医学的に考慮したの
はごく最近のことである。ドラスタチン１〜３について
のアメリカ特許４４１４２０５（１９８３年１１月８日
）、ドラスタチンＡ及びＢについてのアメリカ特許４４
８６４１４（１９８４年１２月４日）、及びドラスタチ
ン１０についてのアメリカ特許４８１６４４４（１９８
９年３月２８日）を参照されたし。

これらドラスタチンは、活性のあるり、ａｕｒｉｃｕ−
１ａｒｉａ成分と対応するものと考えられる。１９６９
年のｉ、Ｗａｔ５０ｎ　（ハワイ）の学位論文「ハワイ
産アメフラシ、特にり、　ａｕｒｉｃｕｌａｒｉａ及び
Ａｐｌｙｓｉａｐｕｌｍｏｎｉｃａの中腸腺毒素の薬理
学、化学及び生物学」　（ミシガン州、アン・アーバー
市ユニバシティー・マイクロフィルムＩｎｃ、）を参照
されたし。

Ｄ、　ａｕｒｉｃｕｌａｒｊａのもつ生物学的性質は何
世紀にもわたって追求されたが、このウミアラシのイン
ド洋産のものの抽出物が、アメリカ国立がん研究所（Ｎ
ＣＩ）のネズミのＰ３８８リンパ球白血病（ＰＳ系）に
対して有効（生存期間を１００％以上延長させる）であ
ることが当研究所において判明したのはようや＜　１９
７２年のことである。それ以来、当研究所はドラスタチ
ン１から１０と命名（ただし、該命名はその起源による
ものであって、化学構造上の類似性によるものではない
）された１０種の新規で強力な細胞成長阻害物質及び／
又は抗新生物性のペプチドを単離するのに成功した。

当初はドラスタチン１が最も活性（最小用量）な抗新生
物剤（ｌ１ｇ／ｋｇでＮ（ｊネズミ８１６メラノーマに
対し３３％の治癒率）であった。ドラスタチンの活性の
故に、これらペプチドの単離と構造決定には極めて少量
（１００ｋｇから１　ｍｇ）のウミアラシが必要であっ
た。次いで、別の物質が単離され、ユニークな鎖式ペン
タペプチドであることが判り、ドラスタチン１０と命名
された。このものは、当時では、最も重要なり、ａｕｒ
ｉｃｕｌａｒｉａの抗新生物成分で、最も活性（１用量
）な抗新生物剤であった。例えば、ドラスタチン１０は
、ＮＣＩのヒトのメラノーマ・キセノグラフ（ヌード・
マウス）に対し３．２５−２６μｇ／ｋｇで１７−６７
％の治癒反応を示し、Ｂ１６メラノーマでは１．４４−
１１．１μｇ／ｋｇで４２−１３８の延命率を示し、ｐ
ｓ白血病（ＥＤ５０＝　４．６　ｘ　１０−’ｐｇ　／
ｍｌ　）には１〜４μｇ／ｋｇで６９−１０２％の延命
率を示した。

これに対して、ドラスタチン１５は、ＥＤＳ。　＝０．
００２４μｇ／　ｍｔｌでＮＣＩのＰ３８８リンパ球白
血病（ＰＳ系）（シュミットほか：　Ｅｘｐｅｒｉｅｎ
ｔａ、　１９７Ｂ、３４．６５９−６６０参照）Ｉｌｌ
胞系に対し強度に活性である。

このＰＳ系は、種々のタイプのヒト新生物病に対する活
性の優れた予知物である。（ウエンデッティほか；　Ｌ
ｌｏｙｄｉａ　ｓ　３０．３２１以下（１９６７）及び
そこに引用されている文献を参照されたし。〕（発明が
解決しようとする課題） 本発明は、インド洋産の無外皮の軟体動物であるＤｏｌ
ａｂｅｌｌａ　ａｕｒｉｃｕｌａｒｉａから抽出され「
ドラスタチン１３」と命名された新規かつ有用な細胞制
御物質の発見に関するものである。これと関連のある物
質すなわちジヒドロドラスフチン１３もまた開示されて
いる。これらの物質、その合成物及び無毒の薬学的に許
容される誘導体は、アメリカのＮＣＩで使用され一般的
に承認されているプロトコールで測定したときに、認め
得られかつ確認できる水準の細胞成長阻害活性をもつと
ころの有用な医薬製剤に処方することができる。

従って、本発明の第一の目的は、悪性細胞の生長遅延や
寛解に有用な新規物質を提供することにある。

他の目的は、ヒトに発生するいろいろな新生物病の治療
や管理に容易かつ有利に使用し得るように、水産動物か
ら細胞生長阻害物質を単離する方法を提供することにあ
る。

更に別の目的は、インド洋産の無外皮の軟体動物たるＤ
ｏｌａｂｅｌｌａ　ａｕｒｉｃｕｌａｒｉａから得た特
異的な細胞制御因子、その合成物及び無毒性の薬学的に
活性な誘導体を必須有効成分として含有するところの、
新生物病の治療や管理に有用な薬剤を作る手段や方法を
提供することにある。

（課題を解決するための手段） 以上の、及びこれ以外の本発明の目的は以下の実施例な
どから容易に理解されるであろう。

（原料動物とその分類学） Ｄｏｌａｂｅｌｌａ　ａｕｒｆｃｕｌａｒｉａは、Ｍｏ
１ｌｕｓａ門のＧａ−５ｔｒｏｐｏｄａｙ４のΔｐｌｙ
ｓｉｄａｅ科に属する。Ｈ，エンゲルのｒＺｏｏｌｏｇ
ｉｓｃｈｅ　Ｍｅｄｅｄｅｅｌｉｎｇｅｎ　Ｊ　　（ラ
イデン）２４．１９７−２３９　（１９４５）にはＤｏ
ｌａｂｅｌｌａの標本の多くのカラー図がある。更に、
この文献には、後に到ってり、　ａｕｒｉｃｕｌａｒｉ
ａと同定されるようになった種々のＤｏｌａｂｅｌｌａ
属のリストがある。それらの種名はり、　ａｇａｓｓｉ
ｚｉ、　Ｄ、　ａｎｄｅｒ５０ｎｉｉ　、　Ｄ、ｈａｓ
ｓｅｌｔｉｉ　。

Ｄ、　ｈｅｍｐｒｉｃｈｉｉ　ｓ　Ｄ、　ｎｅｉｒａ、
、　Ｄ、　ｐｅｒｏｎｉｉ、。

Ｄ、　ｒｕｍｐｈｉｉＸｏ、　ｔｅｒｅｍｉｄｉ　％　
Ｄ、　ｔｏｎｇａｎａ。

Ｄ、　ｔｒｕｎｃａｔａ　、、Ｄ、　ｖａｒｉｅｇａｔ
ａ　　及びり、　５ｃａｐｕｌａである。

本発明で使用されるＤｏｌａｂｅｌｌａ属の外観は、オ
リーブグリーン色で、平均長さが１５−２０ｃｍの梨の
ような形をしている。前出１！ｎｇｅｌの文献には、世
界中から採集されたＤｏｌａｂｅｌｌａ属についての詳
しい記述がある。

当初、トラスチン類の単離のために用いたＤｏｌａｂｅ
ｌｌａ属はインド洋のモーリシャス島の東部（南緯２１
度、東経５６度あたり）の海岸の水深４〜５フイートか
ら採取された。このほかフィリピンのネグロス島近辺（
北緯９度、東経１２３度あたり）からのものも用いられ
た。５ケ所の異なる採集地からのＤｏｌａｂｅｌｌａ属
の標本はすべて抗新生物活性を有していた。

（単離と精製） アメフラシ標品から種々のドラスタチン類を単離し精製
するには、例えば溶媒抽出、分配クロマト、シリカゲル
クロマト、クレープ又はイト−の装置を用いての液々分
布、樹脂への吸着及び溶媒からの再結晶のようないろい
ろな方法が用いられる。

（ドラスタチン１３の単離） Ｄ、ａｕｒｉｃｕｌａｒｉａ　　（湿潤重量１，０００
ｋｇ　；　１９８２年採集）のエタノール−２−プロパ
ツール合併抽出液を、一連の溶媒分布ステップにより活
性メチレンクロイド分画に濃縮する。ＰＳバイオアソセ
ーによる勾配溶出法を用いてのカラムクロマト分離（セ
ファデックス上での立体排除及び分配、シリカゲルでの
分配及び吸着、そしてＨＰＬＣ）を行って、純ドラスタ
チン１３を２５．２　ｍｇ　（１０００ｋｇの湿ったア
メフラシから２ｘｌＯ−’％の収率）を得た。

ドラスタチン１３の精製標本は、メチレンクロリド−ヘ
キサンから結晶として得られる。

１０．６ｍｇ（収率：　６　ｘ　１０−１′％）、ｍｐ
２８６−２８９℃；　〔α）ａ＋９４°（Ｃ＝０．０１
　、　ＣＩｌ：＋ＯＨ）：Ｒｆ　Ｏ，５６（９０：１０
：０．８　ＣＨ２Ｃ１ｚ−Ｃｌｈｏｌｌ−ＨｚＯ）　；
質量スペクトルはチャート１を参照のこと；　ＵＶ（Ｃ
ＨｆｆＯＨ）λ、ｍｍｘ　（ｔｏｇｇ）　２２０　（３
，０４）ｆｉｌｌ；及びＩＲ（ＮａＣ１プレート）ニジ
□、３３８４．３３１５．２９６０．２９３０，１７３
３．１６７７．１６５３．１５２９．１２０５．７５０
及び７００ｃｍ相。

詳細な広域（４００ＭＬｚ）　’　Ｈ−及び’　”Ｃ−
ＮＭＲ及び高解像５Ｐ−５ＩＭＳビーク・マッケングの
結果から、ドラスタチンエ３の分子式はＣａ６Ｈｂ３Ｈ
ｔＯ＋ｚである。

’Ｈ−、’Ｈ−ＣＯ５ＨＹ、　’Ｈ，１３Ｃ−ＣＯＳＹ
　　及びＩＨ，ＩＨ−リレーｃｏｓｙ実像の組み合わせ
から、８個の控え目なスピン結合系が示され、そのうち
４個は公知のアミノ酸すなわちスレオニン（Ｔｈｒ）、
Ｎ−メチルフェニルアラニン（ＭｅＰｈｅ）及びバリン
（Ｖａｌ、　２単位）である。スレオニン及び２個のバ
リン単位は酸触媒による加水分解（６ＮＨＣＡ、１１０
°Ｃ１２４時間）生成物のアミノ酸分解からも見出され
た。Ｎ、Ｎ−ジ置換フェニルアラニンとしての５番目及
び６番目の単位のアサインメントは、ＮＭＲの解釈から
判明した。一連の二重及び三重リレー・コヒーレンス・
トランスファー実験（等核リレー）及び感度を高めたヘ
テロ核多重結合相関実験（ＨＭＢＣ）から、後者のＰｈ
ｅ誘導体は、多分Ｐｈｅ−Ｇｌｕジペプチド前駆体（Ｇ
ｌｕ−γ−カルボキシアルデヒド）から誘導された新規
な環状へミアセタール体、即ち３−アミノ−６ヒドロキ
シー２−ピペリドン（Ａｈｐ）であることがわかった。

引続いてのＮＭＲ実験により、第７番目の単位は稀なデ
ヒドロアミノ酸、即ち、α、β−デヒドコー２−アミツ
ブクン酸（ｃｉｓ−Ａｂｕ）　（多分子ｈｒの脱水によ
るもの）で、第８番目は２−ｏ−メチルグリセリン酸（
ＭｅＧ　ｌｃ）　とアサインされた。若干の不明瞭さの
故に、Ａｂｕオレフィンは単に一時的にＺ−配位とアサ
インされた。Ａｂｕ及びＭｅＧｌｃのアサインメントの
ｉ認は）ＩＭＢＧの実験の結果から得られた。ｎＯｅデ
ータを用いてドラスタチン１３の配列を知ろうとする最
初の試みは不成功に終わったが、これは多分析り畳み溶
液配座及びｎｏｅのマグニチュードの小さいことに起因
するものであろう。ユニットの正しい配列はＨＭＢＣを
用い、そして２つの異なった溶媒（第１表参照）におけ
る実験結果を総合することによって得られた。ジクロロ
メタン−ｄ２を溶媒としてドラスタチン１３のいろいろ
なセグメントが確かめられたが、カルボニル領域のシグ
ナルの重複のために、僅か２つのカルボニルのケミカル
シフトが重複しているのみのピリジン−ａＳ中で得たデ
ータを用いる必要があった。

全構造を知る唯一の予測は、１７４．３８ｐｐｍのカル
ボニル基がエステルに対応し、そしてその故にＴｈｒ酵
素に結合しているに違いないということである。得られ
た下記の構造は、後に記載のチャート１に示す配列決定
及びタンデム質量分光測定により確認された。ドラスタ
チン１３の構造は下記の如くでＲＩ＝ＯＨ，１ｈ＝Ｈで
ある。

３ｂ　　３（。

（デヒドロドラスタチン１３０単離） インド洋（東アフリカ）で採取したり、　ａｕｒｉ−ｃ
ｕｌａｒｉａ　１６００ｋｇ　（湿重量）から、少量（
１，７２ｇ）ではあるがＰＳ活性のフラクションを得た
。これを、さらに勾配ＨＰＬＣ（ＲＰ８シリカゲル、１
：ｌメタノール−水−１００％メタノールを移動相とし
て使用）により、ＰＳＳバイオアッセイ分離してドラス
タチン１３を得た。次いで、同一のフラクションからド
ラスタチン１３と共に少量成分としてデヒドロドラスタ
チン１３を得た。

メチレンクロリド−ヘキサンからの結晶（０，７４ｍｇ
、収率は４　ｘ　１０−９χ）は、ｍｐ１２７−１３２
℃、〔α〕。＋３８°（Ｃ・０，０５　、ＣＩ、（１１
１）；　　Ｒｆ　０．６４（前述の溶媒系）　　ｉ　Ｈ
Ｒ５Ｐ−３ＨＭＳ　　（Ｍ　＋Ｈ）　”　８８８゜４４
９２　ｉ　Ｃ４＆１１６□Ｎ、０．、としての計算値は
８８８．４５０Ｂ　。

ＵＶ（ＣＨ３０Ｈ）　　λｗａｘ　（ｌｏｇｇ）　　２
２０　（３，１１）ｎｍ　ｉ　Ｉ　Ｒ（ＮａＣ１！プレ
ート）ニジ、、、　３３８２．３３１１．２９６０．２
９３０、１７３２．１６７８．１６５３．１５３０．１
４６７．１２０２．７５０及び７００ｃｍ　””。

詳細な高領域（４００ＭＨｚ）　’　Ｈ−及び’　”Ｃ
−ＮＭＲ及び高分解能ＳＰ−ＳＩＭＳピーク・マツチン
グの結果から、デヒドロドラスタチン１３に対しＣ４６
Ｈ６□Ｎ７ｏｚ　の分子式が与えられた。デヒドロドラ
スタチン１３の構造アサインのためにＩＨ−１’ｌｌ−
Ｃ０５Ｙ　、　’Ｈ−１”　ｃ−ｃｏｓｙ、及び’１Ｉ
−１’ｌ＋−リレーＣ０５Ｙ　　（パックスほか：　Ｊ
、Ｍａｇｎ、Ｒｅｓ、６２．３０６−３２０　％−１９
８５）実験の組み合わせが用いられた。

ドラスタチン１３の構造が判明した以上、デヒドロドラ
スタチン１３は、ドラスタチン１３のＡｐｈデヒドロ体
であって下記のような構造を有することは、ＮＭＩ？及
びスペクトル研究の組み合わせから明瞭である。これら
２つのデブシペプチドのＩＨ−及び”　Ｃ−ＮＭＲスペ
クトルは、Ａｈｐシグナル及び７．４２　（Ｈ−２）の
Ｖａｌ−２のアミドプロトン（これはデヒドロ化により
１　ｐｐｍ上方ヘシフトする）の点を除いて、はとんど
同一である。後者のシフトはドラスタチン１３における
Ｈ−４と０−１５の間の水素結合をあられす。デヒドロ
ドラスタチンに与えられた構造は次のようである。

ただし、Ｒ１・Ｒ２・Δ１４＋１５である。

３ｂ　　３Ｃ。

次の第１表は、ＣＤ２Ｃ１２溶液中でのドラスタチン１
３の１■−及び”Ｃ−ＮＭＲアサインメント及び若干の
ｎｏｅ　、及びＣＤ２ＣＩ２並びにＣ３ＤＳＮ溶液から
のＨＭＢＣ相関を示す。ただし多重性のよいところはシ
グナルの重複のため決定できなかった。また、ケミカル
シフト値（＃）は相互変換可能である。

」１ 〃”Ｃ（ｍｕｌｔ、）　’Ｈ（ｍｕｌｔｌ、　Ｊ　０１
ｚ）　）　　　　　　　ｎＯｅ　　　　　　　　ＩＩＭ
ＢｃＶａｌｔ　　２　　１７４．３８ ３　　５９、Ｑ５　４．１８　　ｔ、　７．５　　　　
　　　　　　　　　　２．３ａ、　３ｂ、　３＜、５−
３ａ　　　３０．９３　２．０２　ｏｃｔ、　６．８　
　　　　　４　　　　　　　　３．３ｂ、　３ｃ３ｂ　
　　１９．２６　０．９２　ａ、　６．７．３８　　　
　　　　　　　　　　３．３ａ、　３ｃ３ｃ　　　１９
．５９　０．９５　ｄ、　６．９．３１１’　　　　　
　　　　　　　　　３．３ａ、　３ｂ４　　　　　　　
７．４２　　　　　　　　　　　３ａ　　　　　　　　
５．６ＭｅＰｈｅ　　５　　１７１．８６ ６　　６２．３９　５．２８　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　５．６ａ、６ｂ６ａ　　　３４．１４　
　３．８５　ｄｄ、　１４．０．２．８　　　６２．８
１　ｄｄ、　１４．０．１１．５　　６．６ｃ　　　　
　６．６ｂ、　６ｃ６ｂ　　　１３７．９６ ６ｃ　　１２９．７２　７．３５　　　　　　　　　　
　　　　　　　　６ａ、　６ｄ、　６ｅ６ｄ　　１２９
．３１　７．３６　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　６ｂ、６ｃ６ａ　　１２７．５５　７．２６　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　１ｘ１７ｂ　　　３
１．６９　２．８９　ｓ、　３Ｈ−６，８Ｐｈｅ　　　
８　　１７２．４９ ９　　５１．４６　５．０７　ｄｄ、　１１．２．５．
０　　　９ａ、９ｃ、１５　　　８，９ａ、９ｂ、１１
．＋５９ａ　　　３５．２７　２．９３　ｄｄ、　＋４
．６．１１．２　　　９ｃ、　１５　　　　　　Ｂ、　
９．９１１２．０９　ｄｄ、　１４．６．４．８　　　
　　　　　　　　　９．９ｂ９ｂ　　　１３６．２８ ９ｃ　　１２９．５５　６．８４ｄｄ、７．７．２．１
　　　　９．９ａ、１５　　　　９ａ、！ｋ１．９ｃ’
ｋｌ　　　１２８．６９　７．２４　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　９ｂ、曳９ｅ　　１２７．３０　
７．２３　　　　　　　　　　　　　　　　　　　９ｄ
Ｍρ　１１　１７１．１ｌｆｆｉ １２　　４９．５２　４．０５　　　　　　　　　　　
　　　　　　１１１３　　２２．２１　２．２１ｄｑ、
３．０，１４．６　　　１５．１６　　　　　１１，１
２．１４，１５１．６８ １４　　２９．８０　１．８５　ｄｄｄ、　１４．０．
５．０．２．６　　　　　　　　１２１．５９ １５　　７５．８５　５．２２　　　　　　　　　９．
Ｑａ、９ｃ、１２　　１１，１３１５ａ　　　　　　　
３．９８ １６　　　　　７．１２　ｄ、　９．５　　　　　　１
９　　　　　　１２．１７ΔＡｂｕ　　１７　　１６３
．７８ １８　　１２９．５３ １８ａ　　１３４．＋５　６．７６　ｂｒｑ、　７．０
　　　　　　　　　　　　１？、　１８ｂ１８ｂ　　１
３．２４　１．６６ｄ、？、Ｑ、３１１　　　　１９　
　　　　　１７．１８．１８ａ、　２岨１９　　　　　
　７．９９　ｂｒ　ｓ　　　　　　　　１６．２１．２
３．２９　２０霜ｒ　　　２０　　１６９．９４ ２１　　５５．４０　４．９０　ｄ、　１０．４　　　
　　　Ｚｌ！ｂ　　　　　　　否、　２２．２２ｂ、　
２４２２　　７３．９６　５．２４　　　　　　　　　
　３Ｚ２ａ　　２１．０６　１．４１ｄ、６．８．３１
１　　　　２１　　　　’　　　　２１．２２２３　　
　　　　６．７２　ｄ、　１０．４　　　　　　１９．
２６　　　　　　鍬Ｖａｌ、　　２４　　１７２．５６ ２５　　６１．９３　４．０１　　　　　　　　　　　
　　　　　　２４．２５ａ、　２５ｂ２５ａ　　２９．
５９　２．４１　ｏｃｔ、　６．９　　　　　　Ｚ３．
２６　　　　　２４．２５．２５ｂ、　２５ｃ２５ｂ　
　１９．４２　１．１３　ｄ、　６．９．３Ｈ２５，２
５ａ、　２５ｃ２５ｃ　　１９．ＥＩ２　１．１１　ｄ
、　６．９．３Ｈ２５，２５ａ、　２５ｃ２６　　　　
　　７．３Ｂ　　　　　　　　　　２５ａ、　２５ｂ　
　　　　２５．２５ａ、　２７ＶＪｌｅ　　２７　　１
７２．８２ ２８　８３．４３　３．７４　ｔ、　１．８　　　　　
２８ｂ　　　　　　で、２８ｂ２８ａ　　５８．２３　
３．３８ｇ、３）１　　　　　　２８　　　　　　２８
２９　　６３．０９　４．０１ ３．６３　ｄｄｄ、　１２．０．４．７．１．８２９ｂ
　　　　　　　η、２８心　　　　　４．４２　ｔ、　
５．１　　　　　１９．２９　　　　２９本発明の理解
を更に助けるため、実験方法を更に詳細に次に示す。

（一般的方法） クロマトに使用する溶媒は再蒸留する。ゲル透過クロマ
ト及び分配クロマトに用いるセファデックスＬｌ（−２
０（２５−１００μ）はスウェーデン、ウプサラ市のフ
ァルマシア・ファイン・ケミカルズＡＢから入手。ギル
マンＨＭ　ＵＶ−可視ホロクローム検出器に接続するギ
ルマンＦＣ−２００レース・トランク及びＦＣ−８０マ
イクロフラソシヨネーターをクロマト分配実験用に使用
した。シリカゲルを用いてのカラムクロマト処理では、
Ｅ、メルク（ダルムシュタット）から捉法されている７
０−２３０メソシユ又はシリカゲル６０のプレバックカ
ラムを用いた。

バラティシルＭ　９１０１５００ｏｓ−２（ｃ−１８逆
相）カラム（内径９．４ｍｍ　ｘ　５００ｍｍ）　にュ
ージャージー州りリフトンのワットマンＩｎｃ、から入
手できる）をＨＰＬＣに使用した。

分離用の層プレートもまたワットマンから入手でき、ま
たＴＬＣ用のシリカゲルＧＦユニプレートはプラウエア
州ニューアークのアナルテフクＩｎｃ、から入手できる
。ＴＬＣプレートは紫外線照射し、アニスアルデヒド−
酢酸−硫酸スプレー（約１０５℃に１０分間加熱）また
は硫酸セリウム−硫酸（１０分間加熱）で展開する。

アミノ酸分析はベックマンのモデル１２１ユニツトで行
う。紫外スペクトルは、ＨＰ７２２５プロッターを備え
たヒユーレット・パソカード８４５０Ａ　ＵＶ／ＶＩＳ
分光光度計を用いて記録する。

赤外スペツクルはニコレＭＸ−Ｉ　ＦＴ　機器に記録す
る。高分解能ＳＰ−ＳＩＭＳ質量スペクトルはＶ、Ｇ、
アナライザーＭＭ　ＺＡＢ−２Ｆ及びクラトスＭＳ−５
０）リプルアナライザー質量分光器を用いて得る。高分
解能電子衝撃質量スペクトル（ｍ／ｍ　１０．０００）
は、ＣＡＤスペクトルと共にクラトスＭＳ−８０及びＭ
Ｓ−５０機器に記録する。適当な誘導体のガスクロマド
質量分光測定（ＧＣ−ＭＳ）は、Ｊ＆−溶融シリカＤＢ
−５（０，２４３ｍｍ　ｘ　３０ｃｍ）のカラムを用い
て行う。引き続いてのＧＣ−ＭＳは、化学的イオン化Ｃ
ｍ／ｍ　１０００、ＮＨ３試薬）、低分解能（ｍ／ｍ　
１０００＞及び高分解能（ｍ／ｍ　３０００）の電子衝
撃法を用いる。ＮＭＲ実験（ブランカ−５−ｍｍ　’Ｈ
”Ｃ二重変換可能プローブヘッドを用いての種々の溶媒
での）は、ＩＨ−及び’　”Ｃ−ＮＭＲに対しそれぞれ
４００．１３及び１００．６２　ＭＨｚで作動するＡＳ
ＰＥＣＴ　３０００電算機及びパルスプログラマ−と共
にブラソカーＡＭ−４００のナロー・ボア・スペクトロ
メーターを用いて行う。

（原料の採取、抽出及び予備実験） 当初は西部インド洋（モーリシャス島）のアメフラシ（
Ｄ、　ａｕｒｉｃｕｌａｒｉａ）を１９７２年１０月に
採取した。１９７５年３月までに、ＮＣＩのＰ３８８リ
ンパ細胞白血病（ＰＳ系）に対するエタノール抽出物の
確実な活性が確立し、Ｔ／Ｃ２３５（６０（ｌａｇ）か
ら１６７（１７６ｍｇ／ｋｇ）と判明した。その後に採
取したアメフラシについての一連の同様な抽出物も同等
の結果を与えた。ここに述べた実験は、エタノール中に
保存した１９８２年の採取孔（同一地方）について行っ
た。動物（１０００ｋｇ）　とエタノール保存品の総量
は７００ガロンである。

抽出及び溶媒分配の後、大スケールの分取ＨＰＬＣのた
めのメチレンクロリド濃縮物２．７５ｋｇが得られる。

シリカゲル（ダビシル６３３．２００−４００メツシユ
、７：３のヘキサン−酢酸エチル中にスラリーバックさ
れている）を用いて２つのカラムを並列（６”ｘｌｏ’
）にパックする。濃色（濃緑）の濃縮物２．７５ｋｇを
酢酸エチル２ガロンに熔かし、次の溶媒勾配を毎時６０
〜７２リツトル用いてカラムにポンプで送りクロマト処
理する。

フラクション ？名相剤　　　　　　　　　　　　　　　　　　（番号
＞ｍリットル　Ｎｏ、　　　　　ｇ ７０／３０ヘキサン・酢酸エチル　　　　　２００　　
　　１　　　　６４・９６０／４０　　　　　　　　　
　　　　　　１２０　　　２〜８２８２５０・５０　　
　　　　　　　　　　　　　２４０　　　８〜９７８１
０〜１４　　１６０．１ １５〜１６５８ １７〜１８　　７２．２ １００χ　酢酸エチル　　　　　　　　　　１２０　　
　１９〜２１　　　７４．９２２〜２５　　７０．６ ９５１５１０．７酢酸エチル・メタノール・水　１２０
　　　２６〜２８　　１５６．４２９〜３１　　　５０
．５ ８３／１７／１．４酢酸エチル・メタノール・水２４０
　　３２〜３５　　４２．７３６〜３Ｂ　　　５０．３ ３９　　６６．２ ４１〜４５（Ａ）　　１３２ ６７／３３／２５酢酸エチル・メタノール・水　２４０
　　４６〜５０　（Ｂ）　　７２５２〜５５　　２０９
．５ ５０１５０１５酢酸：Ｌ＋ル・／’　夕）−ルー水　　
　　　　５６〜６０５６４５／４５／ＩＣｍ１ｌｌｘ−
ｆ−ルー　メタ／−ルー水　　　　　６１〜６５　　１
００６６〜６９　　３０．５ 各フラクションを溶媒２０リツトルで溶離し、（ＴＬＣ
で）比較できるフラクションを合併する。

（ドラスタチン１３の単離） 分取ＮＰＬＣフラクションのうち、次の二つが２３８８
系に対し優れた活性を示した。すなわち、フラクション
Ａ　（１３２，Ｏｇ　ＰＳ　Ｔ／Ｃ毒性→３０１６５−
７．５ｍｇ／ｋｇ及びＥＤＳ６　＜　１０−９及びフラ
クションＢ（７２，０ｇ　、　ＰＳ　Ｔ／Ｃ毒性−３５
で１４１−８．７　ｍｇ／ｋｇ及びＥＤ、。＜１０−”
）。フラクションを合併し乾燥して１９０．４ｇとする
。主要部分（１５２ｇ）は、次のチャート（その１，２
及び３）に示すように処理する。

分離Ｌヒ」二は辺１） フラクション八（３８ｇ） Ｔ／Ｃ（ｍｇ）、有毒性−１６，５（３０−７，５）２
．４ｇ　　　７．９ｇ　　　　　４．１ｇ　　　　３．
９ｇ　　１．７ｇ　　５．９ｇ　　０．６ｇＥＤＳ。　
　　　３．４ｘｌＯ−’　　２．３ｘｌＯ−１，５０，
２５１，１２，４Ｔ／Ｃ（ｍｇ）　　　　　有毒性　　
　有毒性（２９→３．６）　　（２２→２．７）０．３
９５ｇ　　　　０．７７１ｇ　　　　１．４４ｇ　　　
　　０．３５９ｇ　　　　０．５８０ｇＥＤ５０　　　
１．９ｘｌＯ”　　１．９ｘｌＯ−”　　１．９ｘｌＯ
−”　　　５７　　　　　５６Ｔ／Ｃ（ｍｇ）　　有毒
性−１３８有毒性　　有毒性−１４０有毒性　　　有毒
性（１３−３，２）　　（１１−２，７）　　（１１−
２，７）　　　（９，３−１，１７）　（１７−２，１
）廻Ｐ昭二Σμ≦１） お、８ｍｇ　　１５５．８ｍｇ ドラスタチン１３　　　ドラスタチン１０ゝ　チャート
　その３） フラクションＮ−１（０，３５９ｇ） ５０ｍｇ　　　　４３ｍｇ ＥＤ５０　　　　２．５　ｘ　１０−”　　３．８　ｘ
　１０−”１７．５ｍｇ ＥＤ、。　　　　３．０　ｘ　１０” （９，２ｍｇ） ドラスタチン１３ 廻胆昭二二に部１） フラクションＡ＋８　　（１５２ｇ） １．７８ｇ　　　　６．８７ｇ　　　　１２．５ｇＥＤ
、。　　　　約１０−’　　　１０−”〜ｉｏ−’　　
　ｉｏ−’０．６６ｇ　　　　０．５０ｇ　　　　１．
田ｇ　　　　００７７ｇ　　　、　　１．１０ｇ　　　
　０．４４ｇＥＤｓ。１．５ｘｌｏ−’　　２．７ｘｌ
Ｏ−’　　２．７ｘｌＯ−’　　１．７ｘｌＯ−’　　
２．５ｘｌＯ−３３ｘｌＯ−”Ｔ／Ｃ有毒性−１２０を
毒性　有毒性　　有毒性−１５０有毒性→１３１　１１
９→１１９（５−０，６３）　　（６−０，７５）　　
（６，８−０，８５）　（８，８−ｔ、Ｄ　　　（Ｍ、
Ｄ　　　（６，６−０，８３）５７８．４ｍｇ　　　　
　　　　　６９５．７ｍｇＥＤ５０　　　　　２．１　
ｘ　１０−３．４　ｘ　１０−’分１１ヒ」二餐９五） 合併フラクション　ｊ＋　ｋ（１，２７ｇ）［１Ｄ５０
　　　７．２　ｘ　１０　　２．９　ｘ　１０−’　　
　５．９　ｘ　１０−”ＥＤｓａ　　　　　　　　　１
．５　ｘ　１０−”　　　　　　１．４　ｘ　１０−’
ドラスタチン１３及びデヒドロドラスフチン１３を上述
のようなウミアラシから単離し精製するには種々の方法
がある。

本発明の好ましい実施態様では、フラクション（Ａ十Ｂ
）の３８ｇをセファデックスＬ）Ｉ−２０（１０ｘ１２
０ｃｍ　）カラム上で１：１メチレンクロリド−メタノ
ールでクロマト処理する。同様のフラクションを合併し
たものは、既述の分離チャート（その１）に示すように
、フラクションＣ−３を与える。

インビボで活性なフラクションｐ及びＥを合併しシリカ
ゲルカラムクロマトを用いて、２つの等量（各６．０ｇ
）に分ける。

１−１シリーズは、さらに９９０　：　１０　：　Ｏｌ
−１００：１００：１の酢酸エチル−メタノール−水の
勾配を用いる乾性カラムクロマト処理により活性フラク
ションに、Ｌ及び門とする。同様なＩ−２シリーズもま
た９９：１−１：１勾配のメチレンクロリド−メタノー
ルを用いる乾性カラムクロマト処理により活性フラクシ
ョンＮとする。フラクションに、Ｌ及び門を合併しく２
．６　ｇ）　、９９：　１−１：１メチレンクロリド−
メタノールを用いる乾性カラムシリカゲルクロマト処理
により、処理チャート（その２）に詳述するように、活
性フラクション０〜Ｓ（１，１５ｇ）とする。活性フラ
クションＯ−３を合併し、再び９９：ｌ−４：１メチレ
ンクロリド−メタノールを用いてシリカゲルカラム上で
分離し、ｆｌからｆｌＯの１０フラクシヨンに分離する
。フラクションｆ６　（１５５，８ｍｇ）をさらに９９
：１−１：１酢酸エチル−メタ少−ルを用いるシリカゲ
ル（湿性）カラム上で分離シテ、ｆ６−１のほかに活性
フラクションＶ及び−とする。■と賀のフラクションを
合併しく７．４ｍｇ）、次の３工程により最終的分離を
行う。すなわち、まず９：１：０．８メチレンクロリド
−メタノール−水による分取ＴＬＣ、次いで９　：　１
　：　０．１＃酸エチル−メタノール−水を用いて同様
に処理し、最後に５：５：１ヘキサン−メチレンクロリ
ド−メタノールによるセファデックスＬ）ｌ−２０を用
いて分配クロマトグラフィーを行う、このようにして［
１シリースから５．０ｍｇのドラスタチン１０を得る。

一方、フラクションｆ５（３３，８ｍｇ）　　（その２
）を９９：１−４：１酢酸エチル−メタノール−水（水
ハＯ，１％）を用いて、シリカゲルでクロマト処理しフ
ラクションｆ５−２　（１３ｍｇ　；　ＥＤ５０＝　２
．２　Ｘ　１０−’）を得る。このフラクションをＴＬ
Ｃ分析によりフラクションｆ６−１　（２０，９ｍｇ；
ＥＤ５０＝１．６　　ｘｌｏ−”）　　と合併する。ｆ
５−２とｆ６−１の合併フラクションを、ドラスタチン
ＩＯの分離用のチャート（その５）に示すと同様の３つ
のステップに付し、結晶性のドラスタチン１３　（ＥＤ
５０　＝　１．３　ｘ　１０−”）　６．４　ｍｇを得
る。

その１におけるＩ−２シリースから、さらにドラスタチ
ン１３が得られる。Ｉ−２シリースについて分離を続行
して、フラクションＮ−１（０，３５９ｇ　）を得る。

フラクションＮ〜１を４４５：１ヘキサン−メチレンク
ロリド−メタノールを用いてのセファデックスＬ）ｌ−
２０分配クロマト処理に付し、その３に示すような２つ
のフラクションｆ２及びｆ３を得る。これらを合併しく
９３ｍｇ）　、９９　：　１−４　：１メチレンクロリ
ド−メタノールでシリカゲルカラムクロマト処理して活
性フラクションｆ２（１７，５ｍｇ）を得る。１：１−
９７１メタノール−水を用いる逆相（パーティシル−１
０，０ＤＳ−２）のＨＰＬＣ分離により結晶性のドラス
タチン１３　　（９，２ｍｇ）を得る。

フラクションＡとＢ　（１５２ｇ）の大部分を、上記の
分離チャート　（その１〜３）に示すように、５つの１
：１のメチレンクロリド−メタノールの部分にセファデ
ックスＬＨ−２０のカラム（１０ｘ１２０ｃｍ）でクロ
マト処理する。活性フラクションを合併し、シリカゲル
のカラム（４，５ｘ８０ｃｍ；　１．２ｋｇ）及び段階
勾配のメチレンクロリド−メタノール（４！ｈｌ　、２
３：２．９：１．２２：３．１７：３．４：１．１：１
及び最後に１００χメタノール）を用いて分離して活性
フラクションｂ（６，８７ｇ）を得る。このフラクショ
ンｂを、９９：ｌ−１：１のメチレンクロリド−メタノ
ール勾配を用いてシリカゲル（乾燥品）で再クロマト処
理する。得た活性フラクションｄ＝ｉ　　（４，６ｇ）
Ｇ合併し、９９：１→１：１の酢酸エチル−メタノール
勾配を用いてシリカゲル（乾燥カラム）でクロマト処理
して活性フラクションｊ及びｋ　　（１，２７ｇ）を得
る。両フラクション（ｊ及びｋを合併）を５：５：１ヘ
キサン−メチレンクロリド−メタノール分配系を用いて
セファデックスＬＨ−２０上でクロマト処理してフラク
ションｍをうる。このフラクションｍを９９：１→１：
１のメチレンクロリド−メタノール勾配を用いシリカゲ
ル（サイズＢ、メルク社のプレバンク）上で分離して活
性成分ｏ−１（５８，５ｍｇ）、ｏ−２（２０，６ｍｇ
）及びｏ　（９１、６ｍｇ）　とする。ここでフラクシ
ョンＯは２つの部分で使用する。

フラクションｐ及びｑを、分取ＴＬＣ（９０：１０：１
酢酸エチル−メタノール−水の移動相）を用いて平行的
に精製し、次いで５：５：１ヘキサン・メチレンクロリ
ド−メタノール、５：５：１ヘキサン−酢酸エチル−メ
タノール及び最後は５７５：１ヘキサン−トルエン−メ
タノール溶媒系で逐次セファデックスＬＨ−２０分配を
行う。フラクションｐは８．６ｍｇの、フラクションｑ
は１１．３ｍｇの純ドラスタチン１０を与え、総収量は
２８．７　ｍｇで、メチレンクロリド−メタノールから
無定形で無色の粉末、ｍｐ１０７−１１２℃、となる。

活性フラクションｏ−２（２０，６ｍｇ；ＥＤ５０＝１
．５ｘ　１０−”）を１：１→９：１メタノール−水で
逆相ＨＰＬＣ（ＯＤＳ−２）により分離してドラスタチ
ン１３の結晶９．６ｍｇを得る。

高度に活性なフラクションｌを、９９：１−１：１のメ
チレンクロリド−メタノール勾配を用いてシリカゲル（
サイズＢ１メルク社のプレパック）上で分離して活性フ
ラクションｆ４　（１２，８ｍｇ、　ＥＤ５０＝７．２
ｘｌＯ−’）を分離チャート（その３）に示すように得
る。得られた活性フラクションを１：１→９：１のメタ
ノール−水勾配でＨＰＬＣ（シリカゲルＯＤＳ〜２カラ
ム）を用いて最終的に分離する。以上の方法で、６．２
ｍｇの純ドラスタチン１３を得た。

ドラスタチン１３の構造は該述の如くであり、そのスペ
クトル値とＨＭＢＣの相関関係は第１表に記載の通りで
ある。

ドラスタチンやその合成品及びその薬学的に活性で生理
的に禁避でない誘導体の投与は、例えば急性骨髄性白血
病、急性リンパ性白血病、悪性メラノーマ、肺がん、神
経芽腫、肺の小細胞がん、胸部がん、結腸がん、卵巣が
ん、膀胱がん等のヒトや動物の新生物病の治療に用いら
れる。

投与量は、新生物病のタイプや、年齢、健康状態、体重
のような患者の状態、同時に行われている治療法及び治
療の頻度と比率といった要因に依存する。

例えば、患者の体重１ｋｇ当りの活性成分のｍｇで表し
た量は、静脈注射では０．１から約２０ｍｇ、筋肉内注
射では１から５０ｍｇ、経口投与では約５から１００ｍ
ｇ、経鼻吸入では５から約１００ｍｇ、そしてエアゾル
の場合は５から約１００ｍｇである。

濃度で表すと、局所への用途、例えば経皮、経鼻、経咽
頭、経気管支、経膣、経直腸、又は眼部からの投与では
、本発明組成物中の活性成分は約０．０１から約５０−
八χ、好ましくは、約１から約２０−／―χであり、腸
管外用途では約０．０５から約５０ｗ／ｗχであり、好
ましくは、約５から約２０ｗ／ｗＸである。

本発明の組成物は、好ましくは単位用量形態、例えば活
性成分の適量を含む錠剤、カプセル、ピル、粉末、顆粒
、坐剤、無菌の腸管外用溶液又は懸濁液、経口の溶液又
は懸濁液の形でヒトや動物に投与する。

経口投与のためには、固形又は液状の単位用量形態が製
造される。

粉末剤は、活性成分を適当な細かいサイズに粉砕し希釈
剤と混合することにより極めて容易に得られる。希釈剤
は、例えば乳糖やデンプンのような可食性の炭水化物で
あって良い。好ましくは蔗糖のような甘味剤が賦香油と
同様に用いられる。

カプセル剤は、上述のような粉末をゼラチン製のカプセ
ルに充填して製造する。好ましくは、充填の操作を助け
るために、充填に先立って、タルク、ステアリン酸、マ
グネシウム、ステアリン酸カルシウム等のような滑剤を
粉末に加える。

ゼラチンの軟カプセル荊は、活性成分のスラリーを、植
物油、軽質の液状ペトロラクタム、その他の不活性油や
トリグリセリドと共に機械的カプセル化で製造する。

錠剤は、粉末混合物を準備し、顆粒化又はスラング化し
、滑剤を加えそして圧縮して製造する。

粉末混合物は、活性成分を混合し、希釈剤や基剤例えば
デンプン、乳糖、カオリン、リン酸カルシウムなどと共
に適宜細粉化して製造する。粉末混合物は、結合剤、例
えばコーンシロップ、ゼラチン液、メチルセルロース液
やゴムのりで湿らせ、次いで網目を強制通過させて顆粒
とすることができる。顆粒化する代わりに、粉末混合物
を、例えば錠剤機の中を通し、得られた不完全な形の錠
剤を小片（スラグ）に粉砕してスラグ化することができ
る。スラグには、ステアリン酸、ステアリン塩、タルク
や鉱物油を添加して、錠剤成形用の型に付着するのを防
ぐために潤滑化することができる。潤滑化された混合物
を圧縮して錠剤とする。

好ましくは、錠剤は、シェラツクの封止コーティングや
腸浴コーティング、糖やメチルセルロースのコーティン
グ及びカルナウバろうのポリッシュ・コーティングから
成る保護コーティングを施すことができる。

シロップ、エリキシル、懸濁液のような経口投与のため
の液状の単位用量形態（その−さし分が一定量の活性成
分を含むようにしたもの）とすることもできる。水溶性
の形態は、糖と香料と保存剤とを一緒に水性ベヒクル中
に溶解してシロップとすることによって製造する。エリ
キシルは、水性アルコールベヒクルを適当な甘味剤と香
料と共に用いて製造する。懸濁剤は、アラビアゴムやト
ラガカントやメチルセルロースのような懸濁用剤を用い
、適当なベヒクルと共に不溶性の形で作ることができる
。

腸管外投与のために、活性成分と無菌ベヒクル（水が好
ましい）を用いて液状の単位用量形態を製造する。活性
成分はその形態や濃度に応じて、ベヒクル中に懸濁させ
るか又は溶解させる。溶液を作るには、水溶液の活性成
分を、注射用の水に溶かし、適当なバイアス又はアンプ
ルに封入する前に、無菌口過する。好ましくは、ベヒク
ル中に佐剤、例えば局所麻酔剤、保存剤や緩衝剤を溶解
させる。腸管外用懸濁剤は、活性成分をベヒクル中に溶
解させずに懸濁させ、そして滅菌工程は口過によって完
結しない点を除けば、実質的に上記と同様にして製造さ
れる。腸管外用懸濁剤に関して、活性成分は、無菌ベヒ
クルに懸濁する前に、好ましくはエチレンオキシドと接
触させて滅菌する。好ましくは、界面活性剤又は湿潤剤
を組成物に含有させ、活性成分の分布を均一にする。

経口及び腸管外投与の他に、直腸や膣からのルートも使
用できる。活性成分は、坐剤という手段で投与できる。

融点がほぼ体温であるか又は容易に溶けるベヒクルが用
いられる。例えばカカオ脂や種々のポリエチレングリコ
ール類（カーボワックス）が、高い効果をもつ坐剤用の
ベヒクルとして使用できる。

鼻内滴下のためには、活性成分と適当な医薬ベヒクル（
好ましくはパイロジエンを含まない水）を用いて液状の
単位用量形態を製造する。もし投与法として吸入が選択
されたときは、乾燥粉末が処方し得る。

エアロシンとしての用途のためには、活性成分を気体の
、又は液化した噴射剤（例えば、ジクロロジフルオロメ
タン、二酸化炭素、窒素、プロバン等）、及び必要又は
所望に応じ通常の佐荊（例えば共溶媒や湿潤剤）と共に
、加圧エアロゾル容器中に封入して製造する。

本願明細書において使用する「単位用量形態」という用
語は、ヒトや動物の単位用として適当な物理的に個々の
単位を意味し、ここに各々の単位は、必要な医薬用希釈
剤、担体又はベヒクルと一緒になって所望の治療効果を
生ずるように計算された量の活性成分を含有するもので
ある。本発明の新規な単位用量形態の明細は次の条件に
より指示され直接に保存する。すなわち （ａ）活性成分の特性及び特定の所望の治療効果、及び （ｂ）この明細書に開示しであるように、ヒトにおける
治療用途のための活性成分を配合する技術に本質的な限
界。

これらは、本発明の特徴である。本発明における適当な
単位用量形態の例としては、錠剤、カプセル剤、トロー
チ、坐剤、粉末剤、カシェ剤、茶さじ用剤、大さじ用剤
、滴剤、アンプル剤、バイアル剤、以上のいずれかの複
合形態、その他ここに述べられるような他の形態がある
。

新生物病治療剤として用いられる活性成分は、それ自体
容易に入手できそして既に確立され、ここには再揚掲す
る必要のない方法で製造できるような医薬用材料を用い
ることによって、容易に単位用量形態として作ることが
できる。

（実施例） 本発明の理解を更に助けるために、ただし本発明を限定
する意味ではなく、本発明を一層明瞭に開示するための
実施例を以下に掲げる。

大旌■−上 本発明の実施化のために幾つかの用量形態を製造した。

これは以下に例示される。ここに「活性成分」とはドラ
スタチン１５とその合成品及びその非毒性の薬学的に活
性な該条件を表す。

組成物　Ａ　　（硬ゼラチン　カプセル剤）−カプセル
中に活性成分２０ｍｇを含有する、二軸式硬質ゼラチン
カプセル剤１０００個を、次のタイプと分量の成分から
製造する。

活性成分（微粉化）　　　　　　　２０ｇトウモロコシ
デンプン　　　　　２０ｇタルク　　　　　　　　　　
　　　２０ｇステアリン酸マグネシウム　　　　２ｇエ
ア・マイクロナイザーで微粉化した活性成分を、他の微
粉化成分に加え、完全に混合し、常用に従ってカプセル
に充填する。

ここに得たカプセル剤は、１回１〜２カプセル１日１〜
４回経口投与すれば新生物病の治療に有用である。

上記の方法に準じ、活性成分量を２９ｇの代わりに、５
ｇ、２５ｇ、又は５０ｇを用いることにより、１カプセ
ル中に活性成分をそれぞれ５ｍｇ。

２５ｍｇ、又は５０ｍｇ含有する製剤を製造することが
できる。

組成物Ｂ（軟ゼラヂンカプセル剤） まず最初に、化合物をトウモロコシ油側０．５ｍｌに懸
濁して材料をカプセル化できるようにし、次いで上述の
方法でカプセル化して、■カプセル中に活性成分（エア
・マイクロナイザーで微粉化）２０■を含有する経口投
与用の一鞘式ソフトゼラチンカプセル剤を製造する。

このカプセル剤は１回１〜２カプセルを１日１〜４回経
口投与すれば新生物病（腫瘍）の治療に有用である。

組成物Ｃ（錠剤） １錠中に活性成分２０■を含有する錠剤Ｌ　ＯＯＯ９２
を、次のタイプと分量の成分から製造した。

活性成分（微粉化）２０ｇ 乳　　　糖　　　　　　　　　　　　　　３００ｇトウ
モロコシデンプン　　　　　５０　ｇステアリン酸マグ
ネシウム　　　４ｇ 軽軽質液状ベトシレータム　　　５ｇ エアマイクロナイザーで微粉化した活性成分を他の成分
に加え、完全に混合しスラグ化し、このスラグを１６番
篩を通して力を加えて粉砕し、得られた顆粒を圧縮して
錠剤とし、１錠中に活性成分が２００■含まれるように
なる。

上述の錠剤は１回１〜２錠、１日１〜４回経口投与する
ことによって、新生物病を治療するのに有用である。

上述と同様にして、活性成分２０ｇの代りに２５ｇ又は
１０ｇを用いることにより、１錠中に活性成分を２５■
又は１０ｎ＋ｇ含有する錠剤を製造できる。

組成物Ｄ（経口用懸濁剤） 次のタイプと量の成分を用いて、各条さじ１杯（５ｍｌ
）用量あたり５■の活性成分を含有する水性懸濁液１０
００ａ＋ｇを製造する。

活性成分（微粉化）　　　　　　　　１ｇクエン酸　　
　　　　　　　　　２ｇ 安息加酸　　　　　　　　　　　１ｇ 蔗　　ｔＦ　　　　　　　　　　　　　　７９０　　ｇ
トラガカント　　　　　　　　　　　５ｇレモン油　　
　　　　　　　　　　　２ｇ脱イオン水を加え全量　　
　　１０００　ｍｌクエン酸、安息香酸、蔗糖、トラガ
カント及びレモン油を充分な量の水に分散させ８５０ｍ
１の懸濁液とする。エアマイクロナイザーで微粉化した
活性成分を、それが均一に分布するまでシロップ中で攪
拌し、充分な量の水を加え１０１００Ｏとする。

このようにして製造された組成物は１凹条さじ１杯（１
５ｍｌ）１日３回投与することにより、新生物病を治療
するのに有用である。

組成物Ｅ（非経口用製品） 新生物病治療用活性物９３０■をその１ｍｌ中に含有す
る非経口注射用無菌水性懸濁液を、次のタイプと量の成
分から製造する。

活性成分（微粉化）３０ｇ ポリソルベート８０　　　　　　　　５　　　ｇ　　　
　　−メチルパラベン　　　　　　　　　　２．５ｇプ
ロピルパラベン　　　　　　　　　０．１７　ｇ注射用
水を加え全量　　　　　　１０００　　ｍｌ活性成分比
外のすべての成分を水に溶かし、溶液を濾過して無菌と
し、これにエアマイクロナイザーで微粉化した無菌の活
性成分を添加し、得られる懸濁液を無菌のバイアルに充
填し、バイアルを密閉する。

このようにして得られる組成物は、１回１ｍｌ＜ＩＭ　
）を１日３回用いることにより新生物病の治療に有用で
ある。

組成物Ｆ（経直腸及び経膣坐剤） 次のタイプ量の成分を用い、１個の重１２．５　ｇでか
つ活性成分２０■を含有する坐剤１０００個を製造する
。

活性成分（微粉化）　　　　　　　　　１．５　ｇプロ
ピレングリコール　　　　　　１５０ｇポリエチレング
リコール４０００を加え全量２５００　　ｇ 活性成分をエアマイクロナイザーを用いて微粉化し、プ
ロピレングリコールに添加し、混合物が均一に分散され
るまでコロイドミルを通過させるｑポリエチレングリコ
ールを融かし、プロピレングリコール分散液をゆっくり
と、撹拌しつつ添加する、この懸濁液を、冷却してない
型（４０℃）に注入し、組成物を放冷して固化させ、型
から取り出し、各々の坐剤をホイルで包む。

上述の坐剤は新生物病の治療のために直腸又は膣に挿入
する。

組成物Ｇ（経鼻用懸濁剤） 次のタイプと分量の成分を用いて、１ｍｌあたり２０＋
ｎｇの活性成分を含有する経鼻点滴用の無菌水性懸濁液
１０１００Ｏを製造する。

活性成分（微粉化）　　　　　　　　１．５　　ｇポリ
ソルベート８０　　　　　　　５　　　ｇメチルパラベ
ン　　　　　　　　　２．５ｇプロピルパラベン　　　
　　　　　０．１７　　ｇ脱イオン水を加え全量　　　
　１０００　　　ｍｌ活性成分以外のすべての成分を水
に溶かし、その溶液を濾過して無菌とし、この無菌液に
、エアマイクロナイザーで微粉化した無菌の活性成分を
加え、得た懸濁液を無菌容器へ無菌充填する。

この組成物は０．２〜０．５　ｍｌを１日１〜４回点鼻
することにより新生物病の治療に有用である。

活性成分はまた、非希釈の純品形態で皮膚、経鼻、経咽
喉頭、経気管支又は経口的に局所使用のために存在し得
る。

組成物Ｈ（粉末剤） バルク形態の活性成分５ｇをエアマイクロナイザーを用
いて微粉化し、シエイカータイプの容器に入れる。

上記組成物は１日１〜４回局所に適用することにより新
生物病の治療に有用である。

組成物Ｉ（経口用粉末剤） バルク形態の活性成分１００ｇをエアマイクロナイザー
を用いて微粉化し、各々２０■ずつ分包する。

上述の粉末は、１回１〜２包を１日１〜４回、コツプ一
杯の水に懸濁させて経口投与することにより、新生物病
の治療に有用である。

組成物Ｊ（吸入剤） バルク形態の活性成分１０ｇを、エアマイクロナイザー
を用いて微粉化する。

このものは３０ｍｇを１日１〜４回吸入することによっ
て新生物病の治療に有用である。

組成物Ｋ（硬ゼラチンカプセル剤） ｌカプセル当り２０■の活性成分を含有する、二軸式ハ
ードカプセル剤１００個をつくる。

エアマイクロナイザーを用いて活性成分を微粉化し、こ
れを常法に従ってカプセル充填する。

上述のカプセルは、１回１〜２個、１日１〜４回経口投
与することにより新生物病の治療に有用である。

上述の方法により、活性成分２０■の代りに５ｇ、２５
ｇ又は５０ｇ用いて同様の操作により、夫々ｌカプセル
中に活性成分を５．２５及び５０■含有するカプセル剤
を製造できる。

大旌炭−１ 実施例１に記載の組成物のようにして作ったドラスタチ
ン１３の単位用量形態を、リンパ球白血病Ｐ３８８につ
いてＣａｎｃｅｒ　Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ　Ｒｅｐ
ｏｒｔｓ　−。

第３部、３巻、２号、１９７２年９月、ｐ、９以下に記
載のプロトコール１２００を用いてスクリーニングを行
った。ドラスタチン１３はインヒドロ細胞系でＰ２Ｓ５
の生長を著しく阻害した（ＥＤＳ。−２，４Ｘｌ０−’
μｇ／ｍｇ）。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、次の構造式をもち、ドラスタチン１３と命名された
   細胞生長阻害物質。 ▲数式、化学式、表等があります▼ ただしＲ＿１はＯＨ、Ｒ＿２はＨである。 ２、次の構造式をもち、デヒドロドラスタチン１３と命
   名された細胞生長阻害物質。 ▲数式、化学式、表等があります▼ ただしＲ＿１＝Ｒ＿２＝Δ＾１＾４＾，＾１＾５である
   。 ３、次の構造式をもつ天然の、もしくは合成により得ら
   れる物質、又はその無毒性の薬学的に活性な誘導体の有
   効量と、薬学的に許容される担体とから成る医薬製剤。 ▲数式、化学式、表等があります▼ ただしＲ＿１＝ＯＨ、Ｒ＿２＝Ｈである。 ４、次の構造式をもつ天然の、もしくは合成による物質
   、又はその無毒性で薬学的に活性な誘導体の有効量と、
   薬学的に許容される担体とから成る医薬製剤。 ▲数式、化学式、表等があります▼ ただしＲ＿１＝Ｒ＿２＝Δ＾１＾４＾，＾１＾５である
   。 ５、次の構造式をもつ天然の、もしくは合成による物質
   、又はその無毒性で薬学的に活性な誘導体の有効量が、
   薬学的に許容しうる担体中に含有されたものを、悪性の
   細胞生長をもつ新生物病の患者に投与することから成る
   該患者の治療方法。 ▲数式、化学式、表等があります▼ ただしＲ＿１＝ＯＨ、Ｒ＿２＝Ｈである。 ６、次の構造式をもつ天然の、もしくは合成による物質
   、又はその薬学的に活性で無毒の誘導体の有効量が薬学
   的に許容しうる担体中に含有されたものを、悪性の細胞
   生長をもつ新生物病の患者に投与することから成る該患
   者の治療方法。 ▲数式、化学式、表等があります▼ ただしＲ＿１＝Ｒ＿２＝Δ＾１＾４＾，＾１＾５である
   。 ７、該物質を患者の体重１ｋｇあたり０．１から約２０
   ｍｇの用量レベルで静脈内に投与することから成る第５
   項の方法。 ８、該物質を患者の体重１ｋｇあたり約１ｍｇから約５
   ０ｍｇ用量レベルで皮下に投与することからなる第５項
   の方法。 ９、該物質を愚者の体重１ｋｇあたり約５ｍｇから約１
   ００ｍｇの用量レベルで経口投与することから成る第５
   項の方法。 １０、該新生物病がリンパ球白血病である第５項の方法
   。 １１、少量の、ただし有効な量が患者の体重１ｋｇあた
   り約１ｍｇから約４ｍｇである第１０項の方法。 １２、該物質を患者の体重１ｋｇあたり０．１から約２
   ０ｍｇの用量レベルで静脈内に投与することから成る第
   ６項の方法。 １３、該物質を患者の体重１ｋｇあたり約１ｍｇから約
   ５０ｍｇの用量レベルで皮下に投与することから成る第
   ６項の方法。 １４、該物質を患者の体重１ｋｇあたり約５ｍｇから約
   １００ｍｇの用量レベルで経口投与することから成る第
   ６項の方法。 １５、該新生物病がリンパ球白血病である第６項の方法
   。 １６、少量の、ただし有効な量が患者の体重１ｋｇあた
   り約１ｍｇから約４ｍｇである第１５項の方法。