JPH0150686B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は吸収、さらに詳しくは吸収量を増加す
るエラスターゼ経口投与剤に関する。 エラスターゼは水不溶性硬タンパク質エラスチ
ンに対する分解酵素であり、直接生体に対しては
血清脂質の正常化、血管壁の弾性強化等の作用を
示すことが明らかとなつている。特に動脈硬化症
患者や老人ではエラスターゼの含量が低下してい
ることが知られており、かかる観点から動脈硬化
症および高脂血症の治療剤として近年にわかに注
目を受けるに至つている。 しかしながら、この物質は分子量25900のポリ
ペプタイドであるから、腸管からの吸収がきわめ
て悪く、例えば ¹³¹−エラスターゼ１mgおよび
５mgを生理食塩水に溶かしてラツト腸内に投与し
たとき、その吸収率は血管とリンパ管の両経路に
おける吸収を合わせてもそれぞれ0.15％および
0.05％であつたと報告されている（Biochim.
Biophys.Acta、288（1972）181−189）。 すなわち当該物質の今後における医薬用途の拡
大のためには腸管からの吸収量を増加せしめる手
段の提供が課題として残されているのである。 かかる実情にかんがみ、本発明者は種々検討し
た結果、エラスターゼにシヨ糖脂肪酸エステルを
添加すると吸収量が顕著に増加することを見出
し、本発明を完成するに至つた。 エラスターゼは工業的にはブタ膵臓を原料とし
て抽出され、他の蛋白が共存したまま、あるいは
さらに精製して純エラスターゼとして提供され
る。また、安定化のために多糖類を添加すること
がおこなわれており、例えば可溶性デキストラン
を50％配合して提供されることもある。本発明経
口投与剤に係るエラスターゼはいかなる形態によ
つて提供されたものであつてもよく、最終的に経
口投与剤中に含有される純エラスターゼの量を基
準にして他の配合成分の組成を定めることができ
る。 次に本発明に係るシヨ糖脂肪酸エステルは一般
にシユガーエステルと呼ばれ、純粋なシヨ糖と精
製脂肪酸とのエステル結合により製造される非イ
オン性界面活性剤である。実際に提供されるもの
はシヨ糖モノ脂肪酸エステル（モノエステル）、
シヨ糖ジ脂肪酸エステル（ジエステル）、シヨ糖
トリ脂肪酸エステル（トリエステル）の混合物で
あるが、モノエステルの組成が多い程親水性を増
し、逆にジエステル、トリエステルの組成が多い
程親油性を増す。本発明においては後記効果例に
よつて示されるごとく、モノエステルの組成が多
いシヨ糖脂肪酸エステルを使用する程、吸収を増
加する傾向がある。具体的にはモノエステルの組
成が50％以上では吸収が増加し、望ましくは70％
以上がよい。 シヨ糖脂肪酸エステルにおける脂肪酸の種類に
ついては特に限定すべき条件はない。シヨ糖脂肪
酸エステルとして一般に市販されている製品は炭
素数12〜18の脂肪酸のものであり、具体的にはス
テアリン酸、パルミチン酸、ラウリン酸、オレイ
ン酸のエステルである。本発明においてはこれら
市販品を適宜使用すればよい。例えば、商品名リ
ヨートーシユガーエステルＳ−970、同Ｓ−1170、
同Ｓ−1570、同Ｓ−1670、同Ｐ−1570、同Ｐ−
1670、同SW−1570、同PW−1570、同LWA−
1540、同OWA−1570は本発明に係るシヨ糖脂肪
酸エステルとしての条件を満足するものである。 次にシヨ糖脂肪酸エステルの配合量は純エラス
ターゼ１重量部に対し0.5〜50重量部である。す
なわち当該下限以下では後記効果例によつて示さ
れるごとく吸収増加の効果が弱く、また当該上限
以上では組成物の体積が大きくなり、製剤化困難
となる。 ところで、本発明においては便宜上、純エラス
ターゼとシヨ糖脂肪酸エステルとの配合比を両者
の重量比をもつて規定したが、組成物中のエラス
ターゼ含量は実際はその活性をもつて示されるか
ら、本発明はエラスターゼ活性に対するシヨ糖脂
肪酸エステルの重量比をもつて規定することもで
きる。すなわち、現在純エラスターゼとして入手
されるものは下記の測定法によつて測定した場
合、１mg当り340エラスターゼ活性単位（340EL.
Uと略記される）であるから、本発明経口投与剤
はエラスターゼ340EL.Uに対し0.5〜50mgの割合
をもつてシヨ糖脂肪酸エステルが配合されること
を特徴とするエラスターゼ含有経口投与剤である
と定義することもできる。つまりさらに具体的に
言えば、本発明経口投与剤は当該経口投与剤中の
エラスターゼ含量を下記の測定法よつて測定した
場合、その340EL.U当り0.5〜50mgの割合をもつ
てシヨ糖脂肪酸エステルが配合されることを特徴
とするエラスターゼ含有経口投与剤である。 エラスターゼ活性測定法 エラスターゼ含有物を精秤し、うすめた
Palitzsch緩衝液に溶かし250mlとしエラスターゼ
酵素液とする。基質液４mlにエラスターゼ酵素液
１mlを加え、37゜±0.1℃、振とう回数100回／分
にて30分間インキユベートする。反応停止液５ml
を加え、さらに37゜±0.1℃で10分間振とうした
後、3000〜3500rpmで10分間遠心分離し、上澄液
を試料溶液とする。 別に基質液４ml、反応停止液５mlおよびエラス
ターゼ酵素液１mlをこの順にとり、37゜±0.1℃で
40分間振とうした後、3000〜3500rpmで10分間遠
心分離し、上澄液を空試験液とする。試料溶液お
よび空試験液につき、水を対照として波長275mμ
における吸光度を測定し、その測定値から上記測
定条件下で不溶性エラスチンが分解し、その結果
生成する可溶性エラスチンの１分間当りの生成量
をチロジン量（μg）に換算し、その値をもつて
EL.Uを定める。 なお、うすめたPalitzsch緩衝液とはホウ砂
19.10gを水に溶解して1000mlとした溶液とホウ酸
12.40gおよび塩化ナトリウム2.92gを水に溶解し
て1000mlとした溶液を混合し、PH8.8とし、その
100mlに水100mlを加えたものである。 また基質液はエラスチン（ICNフアーマシユー
チカルス社製）無水物0.30gにうすめたPalitzsch
緩衝液を加えて50mlとしたもので、30分放置後使
用する。反応停止液はドデシル硫酸ナトリウム
1.0gに水を加えて100mlとし、その５mlに0.5M酢
酸、酢酸ナトリウム緩衝液（PH5.3）を加えて100
mlとしたものである。 本発明経口投与剤の具体的剤型は経口投与剤で
あればいづれでもよいが、エラスターゼは胃酸に
不安定であるから、胃液抵抗性を有する剤型であ
ることが望ましく、例えば腸溶性の顆粒剤、腸溶
性の錠剤、腸溶性の顆粒剤を充填した硬カプセル
剤等を選択し、それぞれ所要の賦形剤を用いて常
法により製造すればよい。また本発明経口投与剤
を粉末剤または顆粒剤として用意し、これを腸溶
硬カプセルに充填して腸溶性のカプセル剤とする
こともできる。 以下に記載する効果例をもつて本発明の効果を
説明する。 効果例 １ 試 料 シヨ糖脂肪酸エステルの所定量に蒸留水２mlを
加えよく乳化せしめ、これに用時、純エラスター
ゼ３mg（1020EL.U）および等張化量の食塩を加
えサーモミキサーで混合し、均質な溶液にしてこ
れを試料とした。コントロールには純エラスター
ゼ３mg（1020EL.U）を生理食塩水に溶解したも
のを使用した。なお、検討に使用したシヨ糖脂肪
酸エステルは表１に記載のごとくであり、同表に
は各シヨ糖脂肪酸エステルにおけるエステル組成
および結合脂肪酸の種類と構成比を示した。

【表】 方 法 ウイスター系雄性ラツト（体重280〜340g）を
24時間絶食後、エーテル麻酔下、正中線にそつて
開腹し、十二指腸上部に前記試料を注入し縫合し
た。その後は自由摂水下に放置し、所定時間経過
ごとに頚静脈から採血した。 採血液を遠沈して血清をとり、血清中のエラス
ターゼ濃度を以下に記載する酵素免疫学的測定法
に従つて測定した。 酵素免疫学的測定法 血清50μlに0.45mlの緩衝液ＧとIgG−シリコン
片（IgG0.5μg相当）を加え37℃で４時間インキ
ユベートし、４℃で一夜放置する。１mlの緩衝液
Ｇで１回、さらに緩衝液Ａで２回洗い、0.05mlの
緩衝液Ａと0.1mlのIgG−ガラクトシダーゼ
（1750μ単位）を加え37℃で５時間インキユベー
トする。１mlの緩衝液Ａで２回洗い、新しい試験
管に移し、0.05mlの緩衝液Ａと0.1mlの1.5×
10^-4M4−メチルウンベリフエリルβ−Ｄ−ガラ
クトサイドを加え、37℃で10分間インキユベート
し、2.5mlの0.1Mグリシン−水酸化ナトリウム溶
液（PH10.3）を加えて反応を停止し、励起波長
360nm、螢光波長450nmにおける螢光強度を測定
する。 なお、緩衝液Ｇとは0.3M NaCl、1mM
MgCl₂、0.1％牛血清アルブミン0.1％NaN₃、0.5
％ゼラチンを含む0.01M燐酸緩衝液（PH7.0）で
ある。 また緩衝液Ａとは0.1M NaCl、1mM MgCl₂、
0.1％牛血清アルブミン、0.1％NaN₃を含む0.01M
燐酸緩衝液（PH7.0）である。 結 果 各試料ごとに血清中濃度の時間的変化を示す血
清中濃度曲線を画き、投与後24時間に至るまでの
エラスターゼのAUC（血清中濃度曲線下面積）を
求めた。結果を表２に示す。 なお、同表にはシヨ糖脂肪酸エステルが含有さ
れていない場合におけるAUCを1.0として、それ
との相対比を各試料ごとに記載する。 表２より本発明に係るシヨ糖脂肪酸エステル
は、その組成の50％以上がシヨ糖モノ脂肪酸エス
テルである場合に有効であることが判明する。ま
たその重量配合比は純エラスターゼ１重量部に対
し0.5重量部が下限であり、それ以上で有効とな
ることが判明する。

【表】 示す。
効果例 ２ 試 料 下記のごとくリヨートーシユガーエステルが配
合される処方のものをそれぞれ直接代錠して直径
４mm、重量40mgのミニ錠を製造し、これを試料と
した。なお処方中リヨートーシユガーエステルＰ
−1570は効果例１、試料の項の表１に記載の通り
のものである。 処 方 エラスターゼ（85EL.U／mg） 12 12 リヨートーシユガーエステルＰ−1570 − 40 スプレードライド乳糖 40 40 結晶セルロース 43 43 CMCカルシウム 25 25 数値は処方中の重量比を示す。 方 法 ウイスター系雄性ラツト（体重280〜340g）を
24時間絶食後、エーテル麻酔下正中線にそつて開
腹し、十二指腸内に正確に四等分したミニ錠をエ
ラスターゼ12mg相当分づつガラスロートを通して
挿入し、さらにシリコンチユーブ（内径３mm、外
径５mm、長さ８mm）を腸管腔に挿入して縫合し
た。その後は効果例１の方法の項の記載と同じよ
うにして採血し、血清中エラスターゼ濃度を測定
した。 結 果 血清中濃度曲線を図１に示す。また投与後24時
間に至るまでのエラスターゼAUCを表３に示す。
なお同表にはシヨ糖脂肪酸エステルが含有されて
いない場合におけるAUCを1.0として、それとの
相対比を記載する。

【表】 表中、配合比は純エラスターゼ１重量部に
対する当該シヨ糖脂肪酸エステルの重量部を
示す。
表３より本発明経口投与剤は、それが錠剤であ
る場合においても有効であることが判明する。 効果例 ３ 試 料 水５ml中にエラスターゼ（326EL.U／mg）が
55.2mgおよびリヨートーシユガーエステルＰ−
1570が736.2mg含有される水溶液を検体試料とし
た。また水５ml中にエラスターゼ（326EL.U／
mg）が55.2mg含有される水溶液を対照試料とし
た。 方 法 ビーグル犬４頭を２頭ずつ２群に分け、対照試
料および検体試料につき２回のクロスオーバー法
を実施した。試料投与は、一夜絶食したビーグル
犬を翌朝麻酔下に正中線より開腹し、十二指腸内
に注射筒を用いて試料５mlを注入し、直ちに縫合
しておこなつた。採血は、試料投与前および試料
投与後１時間、２時間、４時間、６時間、８時
間、10時間、12時間、24時間経過後の各時間にお
いておこない、３mlを採血し、約１mlの血清を分
離し、効果例１の方法の項に記載の酵素免疫学的
測定法に従つて血清中エラスターゼ濃度を測定し
た。 結 果 血清中濃度曲線を図２に示す。図中、実線は対
照試料、点線は検体試料についてのものをそれぞ
れ示す。また表４に各種のパラメーター、すなわ
ち、最高血清中濃度に達する時間（Tmax）、最
高血清中濃度（Cmax）および投与後24時間に至
るまでのAUCを示す。なお、同表には対照試料
におけるAUCを1.0として、それとの相対比を記
載する。 図２より各時間における血清中濃度はいずれも
検体試料の方が高い値を与え、さらに表４よりパ
ラメーターのうちTmaxにおいては差はないが、
Cmaxにおいて2.32倍またAUCにおいて2.44倍の
差をもつて検体試料の方が高い値を示すことが判
明する。

【表】 以下に記載する実施例をもつて本発明をさらに
詳細に説明する。 実施例 １ エラスターゼ（85EL.U／mg）100gおよびリヨ
ートーシユガーエステルＰ−1540の400gを軽く
研和して均等な粉末とした。この中にスプレード
ライド乳糖500g、結晶セルロース495g、CMCカ
ルシウム300gを加えて混合した。次にステアリ
ン酸カルシウム5gを80メツシユの篩を通してふ
りかけ均等に混合し、打錠して直径８mm、重量
180mgの錠剤を製造した。この錠剤に下記処方の
溶液をコーテイングスプレーし、重量200mgの腸
溶錠を製造した。 処 方 オイドラジツドＬ ５部 トリアセチン １部 エタノール 94部 実施例 ２ ノンパレル 2.5Kg HPC−Ｌ 0.5Kg エタノール 適 量 エラスターゼ（85EL.U／mg） 0.6Kg リヨートーシユガーエステルＰ−1570 1.5Kg コーンスターチ 2.7Kg HP−55 1.95Kg マイバセツト９−40 0.25Kg エタノール 適 量 ノンパレルを遠心流動コーテイング装置に負荷
し、HPC−Ｌのエタノール溶液をスプレーしな
がら、エラスターゼ、リヨートーシユガーエステ
ルおよびコーンスターチの混合粉末を撒布して造
粒した。造粒した顆粒にマイバセツト９−40およ
びHP−55のエタノール溶液を同装置を使用して
スプレーコーテイングし、腸溶性顆粒を製造し
た。なお、ノンパレルはシヨ糖とコーンスターチ
の混合物、HPC−Ｌはヒドロキシプロピルセル
ロース、HP−55はヒドロキシプロピルメチルセ
ルロースフタレート、マイバセツト９−40はアセ
チルモノグリセライドである。 実施例 ３ 実施例２において得られた腸溶性顆粒を３号硬
カプセルに200mgづつ充填して硬カプセル剤を製
造した。 実施例 ４ エラスターゼ（340EL.U／mg） 0.2Kg DKエステルSS 1.2Kg 白糖末 8.5Kg コーンスターチ 1.8Kg エチルセルロース 0.1Kg ポリエチレングリコール6000 1.0Kg 硬化ヒマシ油 0.2Kg トリクロールエタン 適 量 エラスターゼ、DKエステルSS、白糖末、コー
ンスターチの混合物をエチルセルロースとポリエ
チレングリコール6000のトリクロールエタン溶液
で練合し、0.7mmスクリーンで造粒した。40℃で
乾燥後、硬化ヒマシ油を80メツシユの篩を通して
ふりかけ、均等に混合後、打錠して直径７mm、重
量130mgの錠剤を製造した。この錠剤に実施例１
記載の溶液をコーテイングスプレーし、重量145
mgの腸溶錠を製造した。なお、DKエステルSSは
第一工業製薬株式会社製造のシヨ糖脂肪酸エステ
ルであり、モノエステル含量は95％である。

【図面の簡単な説明】

図１は効果例２の実験に係る血清中濃度曲線を
示すグラフであり、●印線は同効果例、試料の項
に記載のミニ錠において、リヨートーシユガーエ
ステルＰ−1570が含有されている場合のもの、〇
印線は含有されていない場合のものをそれぞれ示
す。図２は効果例３の実験に係る血清中濃度曲線
を示すグラフであり、実線は対照試料、点線は検
体試料についてのものをそれぞれ示す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ エラスターゼ含有経口投与剤において、シヨ
   糖脂肪酸エステルが純エラスターゼ１重量部に対
   し0.5〜50重量部配合されることを特徴とするエ
   ラスターゼ含有経口投与剤。 ２ シヨ糖脂肪酸エステルが、当該組成の50％以
   上をシヨ糖モノ脂肪酸エステルによつて占められ
   ているシヨ糖脂肪酸エステルである特許請求の範
   囲第１項記載のエラスターゼ含有経口投与剤。 ３ シヨ糖脂肪酸エステルが、炭素数12〜18の脂
   肪酸とシヨ糖とのエステルである特許請求の範囲
   第１項または第２項記載のエラスターゼ含有経口
   投与剤。