JP7393328B2 - マイクロ流体を使用した治療的に活性な細胞を調製する方法 - Google Patents
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Description
この出願は、2017年9月1日に出願された米国仮特許出願第62/553,723号の恩典;2017年10月3日に出願された米国仮特許出願第62/567,553号の恩典;2018年2月26日に出願された仮特許出願第62/635,304号の恩典;および2018年4月12日に出願された仮特許出願第62/656,939号の恩典を主張し、加えて、本願は、2017年10月23日に出願されたPCT/US2017/057876の一部継続出願である。これらの先行出願は全て、全体として参照により本明細書に組み入れられている。
この発明は、National Institutes of Healthにより授与された認可番号CA174121および番号HL110574による政府支援でなされた。政府は、本発明において一定の権利を有する。
それの第1の態様において、本発明は、標的細胞集団を遺伝子操作する方法に向けられる。これは、マイクロ流体デバイス上で決定論的横置換(DLD)を実施することにより、標的細胞を粗流体組成物から単離することにより行われる。そのデバイスは、試料注入口から1つまたは複数の流体出口へ延び、かつ第1の壁およびその第1の壁と反対側の第2の壁によって囲まれている、少なくとも1つのチャネルの存在により特徴づけられる。障害物のアレイは、チャネルにおいて、いくつもの行(row)をなして配列され、障害物のそれぞれの次の行が、前の行に対して横方向へシフトしている。その障害物は、粗流体組成物がデバイスの注入口にアプライされ、チャネルを通過する時、標的細胞が、濃縮された産物が収集される1つまたは複数の収集出口へ流れ、混入細胞または粒子は、収集出口から切り離されているもう1つの廃棄物出口へ流れるような様式で配置されている。いったん標的細胞が、デバイスを用いて精製されたならば、それらは、その細胞に所望の表現型を付与するように、例えば、キメラ分子(好ましくは、治療上の価値のある細胞にするタンパク質)を発現するように設計された核酸をトランスフェクションまたは形質導入される。その後、細胞集団は、インビトロ(in vitro)での培養により増殖され得る。培養および増殖された時、所望の表現型を示す組換え的に操作された標的細胞の収率は、DLDに供されていない同一の細胞(特に、Ficoll遠心分離に曝されたが、DLDには曝されなかった細胞)より、好ましくは、少なくとも10%高く、より好ましくは、少なくとも20%、30%、40%、または50%高い。
本発明は、T細胞(特に、ナチュラルキラーT細胞およびメモリーT細胞)を含む粗流体組成物を取得し、マイクロ流体デバイスを用いて、前記組成物にDLDを実施することにより、CAR T細胞を作製する方法を含む。一般的に、T細胞を含む粗流体組成物は、患者の血液に由来し、かつ白血球を含有するアフェレーシスまたは白血球アフェレーシス産物である。
別の態様において、本発明は、癌細胞抗原、または自己免疫疾患もしくは感染性疾患の原因であり、またはそれに寄与する細胞上の抗原を認識するキメラ抗原受容体を発現するように操作されたCAR T細胞を投与することにより、患者を癌、自己免疫疾患、または感染性疾患について処置する方法に向けられる。CAR T細胞は、上記のセクションで論じられた方法を用いて、すなわち、T細胞を含む粗流体組成物(好ましくは、患者から引き出された白血球含有アフェレーシスまたは白血球アフェレーシス産物)を取得し、その後、マイクロ流体デバイスを用いてその組成物にDLDを実施することにより、作製され得る。その後、この様式で回収されたCAR T細胞(好ましくは、ナチュラルキラーT細胞およびメモリーT細胞)は、その細胞をインビトロで成長させることにより、増殖される。最後に、その細胞は、患者に投与され、その患者は、一般的に、そのT細胞が単離された血液を提供した同じ患者であるべきである。
本発明はまた、細胞を迅速に処理するように設計され、かつ一般的に、その細胞が収集される現地で実施することができる、患者由来の細胞を収集および処理するためのプロトコールに向けられる。プロトコールは、上記の標的細胞およびCAR T細胞を調製するための方法の一部分として用いられ得る。これらのプロトコールの一部の態様は、図13および図14に図示され、図12に示されたプロトコールと対比され得る。図示された特定の手順において、全血のアフェレーシスにより取得された組成物が得られ、その後、その組成物におけるT細胞が選択される。この関連における用語「選択される」は、T細胞が、T細胞を特異性(上記で定義されているような)を以て認識する作用物質により結合されることを意味する。その後、DLDを用いて、選択されたT細胞を単離し、これらの細胞を、選ばれた流体培地へ移す。
白血球調製物中の血小板のレベルを減少させることは、CAR T細胞の作製に関して、および他の治療的使用のための白血球の調製の両方において利点を有する。この点で、本発明は、部分的には、DLDがアフェレーシス試料中の血小板の総数を、一般的にフィコール分離を使用する場合(図19-21を参照)、特に血小板凝集を促進しないバッファーを使用する場合(図22-23参照)よりも効果的に減少させるという概念に基づく。T細胞に特異的に結合する磁気ビーズに基づく分離と組み合わせて使用すると、DLDは、かかるビーズを単独またはFicoll遠心分離と組み合わせてのどちらかで使用する場合よりも迅速に増殖できる細胞の調製物をもたらす(図24を参照)。この効果は、部分的に、血小板数の減少、および存在する血小板の数とは無関係の要因による(図24を参照)。さらに、DLD/磁気ビーズ手順を使用して取得される結果はより一貫性があり(図25を参照)、この手順からの増殖されたT細胞は、Ficoll/磁気ビーズアプローチを使用して調製される集団と比較した場合、セントラルメモリー表現型を有するT細胞のパーセンテージが高い(図26を参照)。a)より早いT細胞の増殖およびb)セントラルメモリー細胞のより高いパーセンテージと組み合わされる、DLDからの高い初期の細胞回収率は、治療的に有効なレベルのT細胞がより迅速に患者に利用可能にされることができることを意味する。
DLDの一つの利点は、それが、相対的に大量の材料だけでなく、少量の材料も、ほとんど容量を増加せずに処理するために用いられ得ることである。その手順は、大容量の材料を処理することにおいてだけでなく、遠心分離による白血球の濃縮により小容量である白血球アフェレーシス産物にも用いられ得る。
別の態様において、本発明は、以下の工程を含む、生存細胞を非生存細胞から分離する方法に向けられる:(a)生存細胞および非生存細胞を含む試料を取得する工程であって、前記生存細胞が第1の既定のサイズを有し得、かつ前記非生存細胞が第2の既定サイズを有し得、および前記第1の既定サイズが臨界サイズ以上であり得、かつ前記第2の既定サイズが前記臨界サイズより小さくてもよい、工程;(b)前記試料をデバイスにアプライする工程であって、前記デバイスが、いくつもの行をなして配列された障害物のアレイを含み得、前記行が、お互いに対して横方向へシフトされ得、前記行が、前記臨界サイズ以上の粒子を第1の方向へ、および前記臨界サイズより小さい粒子を第2の方向へ偏向させるように構成され得る、工程;ならびに(c)前記試料を前記デバイスに流す工程であって、前記生存細胞が前記障害物により前記第1の方向に偏向され得、前記非生存細胞が前記第2の方向に偏向され得、それにより、前記生存細胞を前記非生存細胞から分離する、工程。臨界サイズは、第2の既定サイズの約1.1倍であり得、いくつかの実施形態において、生存細胞は、活発に分裂する細胞であり得る。いくつかの実施形態において、デバイスは、徐々により小さい障害物および間隙を有する少なくとも3つのゾーンを含み得る。
本発明はまた、以下により、接着性標的細胞、好ましくは治療上価値のある細胞、例えば、接着性幹細胞を取得する方法を含む:a)接着性標的細胞を含む粗流体組成物を患者から取得する工程、およびb)決定論的横置換(DLD)を実施して、接着性標的細胞が濃縮された組成物を得る工程。このプロセスの間、接着性標的細胞に、DLD分離を促進または補完するように、1つまたは複数の担体を結合させ得る。例えば、担体は、接着性標的細胞と特異性(上記で定義されているような)を以て結合する親和性物質(例えば、抗体、アクチベーター、ハプテン、またはアプタマー)を表面上に有し得、所望の表現型をその細胞に付与するように、例えば、キメラ分子(好ましくは、より高い治療上の価値がある細胞にするタンパク質)を発現するように、設計された核酸をトランスフェクションまたは形質導入され得る。
本発明はまた、上記の手順を用いて、活性化の能力がある細胞を精製する方法を含む。好ましい実施形態において、本発明は、以下により、活性化細胞を複数の他の細胞から分離する方法に向けられる:a)活性化の能力がある細胞および複数の他の細胞を含む粗流体組成物を、DLD分離を促進するように、1つまたは複数の担体と接触させる工程であって、前記担体の1つまたは複数が、細胞アクチベーターを含み、1つまたは複数の担体が、接触により、または接触後、細胞アクチベーターによる活性化の能力がある細胞に少なくとも部分的に会合して、担体会合化細胞を生成し、少なくとも部分的な、前記細胞アクチベーターの前記活性化の能力がある細胞との会合が、前記活性化の能力がある細胞を活性化し、前記担体会合化細胞複合体が、他の細胞に対して増加したサイズを含み、前記担体会合化細胞複合体のサイズが、臨界サイズ以上であり、かつ前記複数の他の細胞における細胞が、前記臨界サイズ未満のサイズを含む、工程;b)前記粗流体組成物をデバイスにアプライする工程であって、前記デバイスが、行をなして配列された障害物のアレイを含み、前記行が、お互いに対して横方向へシフトされ、前記行が、臨界サイズ以上の粒子を第1の方向へ、および臨界サイズ未満の粒子を第2の方向へ偏向させるように構成される、工程;c)前記試料を前記デバイスに流す工程であって、前記担体会合化細胞複合体が前記障害物により前記第1の方向に偏向され、前記複数の他の細胞における細胞が前記第2の方向に偏向され、それにより、前記活性化細胞を前記複数の他の細胞から分離する、工程。その後、分離された担体会合化細胞複合体を含む流体組成物が収集され得る。このプロセスの間、その細胞は、適宜、その細胞に所望の表現型を付与するように、例えば、キメラ分子(好ましくは、より高い治療上の価値がある細胞にするタンパク質)を発現するように、設計された核酸をトランスフェクションまたは形質導入され得る。
別の実施形態において、本発明は、以下を含む、化合物を細胞から除去する方法を含む:(a)細胞および化合物を含む流体組成物を取得する工程であって、前記細胞が、前記化合物の既定サイズより大きい既定サイズを有し、および前記細胞の既定サイズが臨界サイズ以上であり、かつ前記化合物の既定サイズが前記臨界サイズ未満である、工程;(b)前記試料をデバイスにアプライする工程であって、前記デバイスが、いくつもの行をなして配列された障害物のアレイを含み、前記行が、お互いに対して横方向へシフトされ、前記行が、前記臨界サイズ以上の粒子を第1の方向へ、および前記臨界サイズ未満の粒子を第2の方向へ偏向させるように構成される、工程;ならびに(c)前記試料を前記デバイスに流す工程であって、その間、前記細胞が前記障害物により前記第1の方向に偏向され、前記化合物が前記第2の方向に偏向され得、それにより、前記細胞から前記化合物を除去する、工程。いくつかの実施形態において、方法はさらに、工程(c)後に細胞を培養すること、または工程(a)の流体組成物が取得された培養物へ前記細胞をリサイクルすることを含み得る。
本発明はまた、以下を含む、細胞から分泌性産物を連続的に精製する方法を含む:(a)細胞を含む流体組成物(細胞培養組成物であり得る)を取得する工程であって、前記細胞が、前記流体組成物中に懸濁しており(または前記細胞に、DLD分離を促進し、かつ担体-細胞の複合体を形成するように、1つまたは複数の担体を結合させ)、前記細胞が、分泌性産物を前記流体組成物へ分泌し、前記細胞(または前記担体-細胞複合体)が、前記分泌性産物の既定サイズより大きい既定サイズを有し、前記細胞(または前記担体-細胞複合体)の既定サイズが、臨界サイズ以上であり、かつ前記分泌性産物の既定サイズが前記臨界サイズ未満である、工程;(b)前記細胞(または前記担体-細胞複合体)を含む流体組成物を、DLD用デバイスにアプライする工程であって、前記デバイスが、いくつもの行をなして配列された障害物のアレイを含み、前記行が、お互いに対して横方向へシフトされ、前記行が、前記臨界サイズ以上の粒子を第1の方向へ、および前記臨界サイズ未満の粒子を第2の方向へ偏向させるように構成される、工程;ならびに(c)前記細胞または前記担体-細胞複合体を含む流体組成物を前記デバイスに流す工程であって、前記細胞または担体-細胞複合体が前記障害物により前記第1の方向に偏向され、前記分泌性産物が前記第2の方向に偏向され、それにより、前記分泌性産物を前記細胞から分離する、工程;(d)前記分泌性産物を収集する工程であって、それにより、精製されている前記分泌性産物の流体組成物を生じる、工程;(e)分離された細胞または担体-細胞複合体を含む回収された流体組成物を収集する工程;(f)前記細胞(または前記担体-細胞複合体)を前記流体組成物に再びアプライする工程;ならびに工程(a)~(e)を繰り返す工程であって、それにより、分泌性産物を細胞から連続的に精製する、工程。
より広義には、本発明は、任意のサイズに基づいたマイクロ流体分離方法によって調製される標的細胞の集団を操作する方法に向けられる。サイズに基づく細胞の並べ替えの違いは、本明細書中で議論されるバンプアレイを使用した結果、または分離中の流量を制御することによって生成された慣性力の結果、またはマイクロ流体デバイス自体の設計によるものである(全体が参照により本明細書中に組み込まれるUS 9,895,694およびUS 9,610,582を参照)。使用される分離手順は1つだけでも、複数でもよい。たとえば、標的細胞は、1つのマイクロ流体手順を使用して小さな粒子および細胞から、第2の手順を使用して大きな粒子および細胞から分離される。
アフェレーシス:本明細書で用いられる場合、この用語は、患者またはドナー由来の血液がそれの成分、例えば、血漿、白血球、および赤血球へ分離される手順を指す。より具体的な用語は、「血小板アフェレーシス」(血小板の分離を指す)および「白血球アフェレーシス」(白血球の分離を指す)である。この関連において、用語「分離」は、全血と比較して、特定の成分が濃縮されている産物の取得を指し、絶対的純粋が達成されていることを意味しない。
細胞、特に、アフェレーシスまたは白血球アフェレーシスにより調製された組成物における細胞は、流体が、デバイスの1つの端における注入口から反対側の端の出口へ流れるチャネルを含有するマイクロ流体デバイスを用いてDLDを実施することにより単離され得る。サイズに基づいたマイクロ流体分離の基本原理、および細胞を分離するための障害物アレイの設計は、他の所(US 2014/0342375;US 2016/0139012;7,318,902、およびUS 7,150,812参照。それらは、全体として参照により本明細書に組み入れられている)で提供されており、また、下記のセクションで要約されている。
サイズに基づいて細胞を分離する能力があるマイクロ流体デバイスを作製および使用するための一般的な手順は、当技術分野において周知されている。そのようなデバイスには、US 5,837,115;US 7,150,812;US 6,685,841;US 7,318,902;7,472,794;およびUS 7,735,652(それらの全ては、全体として参照により本明細書に組み入れられている)に記載されたものが挙げられる。本発明のためのデバイスの作製および使用に役立ち得るガイダンスを提供する他の参考文献には以下が挙げられる:US 5,427,663;US 7,276,170;US 6,913,697;US 7,988,840;US 8,021,614;US 8,282,799;US8,304,230;US 8,579,117;US 2006/0134599;US 2007/0160503;US 20050282293;US 2006/0121624;US 2005/0266433;US 2007/0026381;US 2007/0026414;US 2007/0026417;US 2007/0026415;US 2007/0026413;US 2007/0099207;US 2007/0196820;US 2007/0059680;US 2007/0059718;US 2007/005916;US 2007/0059774;US 2007/0059781;US 2007/0059719;US 2006/0223178;US 2008/0124721;US 2008/0090239;US 2008/0113358;およびWO2012094642(それらの全ては全体として参照により本明細書に組み入れられている)。デバイスの作製および使用を記載する様々な参考文献のうちで、US 7,150,812は、特に良いガイダンスを提供し、7,735,652は、血液中に見出される細胞を含む試料に実施される分離のためのマイクロ流体デバイス(この点において、US 2007/0160503も参照されたい)に関して、特に興味深い。
CAR T細胞を作製および使用するための方法は、当技術分野において周知されている。手順は、例えば、US 9,629,877;US 9,328,156;US 8,906,682;US 2017/0224789;US 2017/0166866;US 2017/0137515;US 2016/0361360;US 2016/0081314;US 2015/0299317;およびUS 2015/0024482(それぞれ、全体として参照により本明細書に組み入れられている)に記載されている。
本明細書に記載されたDLDデバイスは、細胞、細胞断片、細胞付加体、または核酸を精製するために用いることができる。本明細書で論じられているように、これらのデバイスはまた、目的の細胞集団を複数の他の細胞から分離するために用いることができる。デバイスを用いる血液成分の分離および精製は、例えば、米国特許出願公開第2016/0139012号に見出すことができ、それの教示は、全体として参照により本明細書に組み入れられている。少数の実例となる分離の簡単な議論は下記に提供されている。
一実施形態において、デバイスは、生存細胞を非生存細胞から分離するように設計された手順に用いられる。用語「生存細胞」は、成長の能力があり、活発に分裂しており、再生の能力があるなどの細胞を指す。生存細胞が、非生存細胞より大きいサイズを有する場合、DLDデバイスは、非生存細胞の既定サイズより大きく、かつ生存細胞の既定サイズより小さい臨界サイズを含むように設計することができる。臨界サイズは、非生存細胞の既定サイズの1.1倍大きい(または小さい)などの小規模であり得るが、一般的に、より大きい(またはより小さい)程度が好ましく、例えば、約1.2倍~2倍、好ましくは3~10倍である。
別の実施形態において、DLDデバイスは、接着細胞を分離するための手順に用いることができる。本明細書で用いられる場合、用語「接着細胞」は、表面に接着する能力がある細胞を指す。接着細胞には、細胞培養に用いられる不死化細胞が挙げられ、哺乳類宿主に由来し得る。場合によっては、接着細胞は、精製の前にトリプシン処理され得る。接着細胞の例には、MRC-5細胞;HeLa細胞;Vero細胞;NIH 3T3細胞;L929細胞;Sf21細胞;Sf9細胞;A549細胞;A9細胞;AtT-20細胞;BALB/3T3細胞;BHK-21細胞;BHL-100細胞;BT細胞;Caco-2細胞;Chang細胞;Clone 9細胞;Clone M-3細胞;COS-1細胞;COS-3細胞;COS-7細胞;CRFK細胞;CV-1細胞;D-17細胞;Daudi細胞;GH1細胞;GH3細胞;HaK細胞;HCT-15細胞;HL-60細胞;HT-1080細胞;HT-29細胞;HUVEC細胞;I-10細胞;IM-9細胞;JEG-2細胞;Jensen細胞;Jurkat細胞;K-562細胞;KB細胞;KG-1細胞;L2細胞;LLC-WRC 256細胞;McCoy細胞;MCF7細胞;WI-38細胞;WISH細胞;XC細胞;Y-1細胞; CHO細胞;Raw 264.7;BHK-21細胞;293A、293Tなどを含むHEK 293細胞;HEP G2細胞;BAE-1細胞;SH-SY5Y細胞;ならびに、操作された株および組換え株を含む、それらの任意の誘導体が挙げられる。
DLDデバイスはまた、活性化細胞または活性化の能力がある細胞を、複数の他の細胞から分離するための手順に用いることができる。活性化を受けた細胞は、ラージスケールで成長し得るが、好ましい実施形態において、その細胞は、単一の患者に由来し、DLDが、収集から少なくとも数時間以内に実施される。用語「活性化細胞」または「活性化の能力がある細胞」は、細胞アクチベーターとの会合、インキュベーション、または接触を通して、それぞれ、活性化されている、または活性化され得る細胞を指す。活性化の能力がある細胞の例には、免疫または炎症応答において役割を果たす細胞、例えば、T細胞、B細胞;制御性T細胞、マクロファージ、樹状細胞、顆粒球、自然リンパ球系細胞、巨核球、ナチュラルキラー細胞、栓球、滑膜細胞など;代謝において役割を果たす細胞、例えば、β細胞、肝臓細胞、および膵臓細胞;ならびに誘導性タンパク質発現の能力がある組換え細胞、例えば、DE3溶原化E.コリ(E. coli)細胞、酵母細胞、植物細胞などが挙げられ得る。
DLDはまた、細胞にとって毒性であり得る化合物を除去するように、または細胞を毒性化合物による汚染を含まないようにしておくように設計された精製に用いることができる。例には、抗生物質、凍結保存剤、抗真菌剤、毒性代謝産物、アジ化ナトリウム、金属イオン、金属イオンキレート化剤、内毒素、可塑剤、殺虫剤、およびそれらの組合せが挙げられる。デバイスは、細胞から毒性化合物を除去して、細胞から材料の一貫した生産を保証するために用いることができる。場合によっては、細胞は、対数期細胞であり得る。用語「対数期細胞」は、指数関数的対数成長により特徴づけられる成長の時期における活発に分裂する細胞を指す。対数期において、細胞集団は、時間に対して細胞数の自然対数をプロットすることにより直線が生じるような、一定速度で倍増することができる。
DLD分離はまた、細胞から分泌された材料の精製に用いられ得る。そのような分泌性材料の例には、タンパク質、ペプチド、酵素、抗体、燃料、藻類に由来したものなどのバイオ燃料、ポリマー、単純な有機分子などの小分子、複雑な有機分子、薬物およびプロドラッグ、糖質、ならびにそれらの組合せが挙げられる。分泌性産物には、インスリン、イマチニブ、T細胞、T細胞受容体、Fc融合タンパク質、抗凝固剤、血液因子、骨形成タンパク質、操作されたタンパク質スキャフォールド、酵素、成長因子、ホルモン、インターフェロン、インターロイキン、および血栓溶解剤などの治療上有用なタンパク質が挙げられ得る。
本明細書で論じられたDLD方法により産生された細胞の純度、収率、および生存率は、出発材料の性質、使用される厳密な手順、およびDLDデバイスの特徴を含むいくつかの因子に基づいて変動する。好ましくは、少なくとも60%の精製、収率、および生存率が、得られるべきであり、より高いパーセンテージの、少なくとも70%、80%、または90%がより好ましい。好ましい実施形態において、方法は、全血、アフェレーシス産物、または白血球アフェレーシス産物から白血球を少なくとも70%の純度、収率、および生存率で単離するために用いられ得、より高いパーセンテージ(少なくとも80%、85%、または90%)が好ましい。
いかなる特定の理論にも捕らわれずに、マイクロ流体のいくつかの技術的側面の一般的な議論は、この分野において行われる分離に影響する因子を理解することにおいて助けとなり得る。様々な微細加工ふるいマトリックスが、粒子を分離するために開示されている(Chou, et. al., Proc. Natl. Acad. Sci. 96:13762 (1999); Han, et al., Science 288:1026 (2000); Huang, et al., Nat. Biotechnol. 20:1048 (2002); Turner et al., Phys. Rev. Lett. 88(12):128103 (2002); Huang, et al., Phys. Rev. Lett. 89:178301 (2002); 米国特許第5,427,663号;米国特許第7,150,812号;米国特許第6,881,317号)。バンプアレイ(別名「障害物アレイ」)デバイスが記載されており、それらの基本的な動作は、例えば、米国特許第7,150,812号(全体として参照により本明細書に組み入れられている)に説明されている。バンプアレイは、本質的に、障害物のアレイ(一般的に、周期的に順序づけられたアレイ)を通過する粒子を分離する(segregate)ことにより、動作し、分離は、バルク流体フローの方向から、または印加電場の方向から斜めである「アレイ方向」に従う粒子間で起こる(U.S. 7,150,812)。
いくつかのアレイにおいて、隣接障害物の幾何学的配置は、間隙を定義する障害物の部分が、バルク流体フローの方向に延びる間隙の軸に関して対称であるような配置である。そのような間隙を通る流体フローの速度または容量プロフィールは、間隙に渡って、およそ放物線であり、流体速度および流量は、間隙を定義する各障害物の表面においてゼロであり(すべり流なしの状態を仮定した場合)、間隙の中心点で最大値に達する。プロフィールが放物線である場合、間隙を定義する障害物の1つに隣接する所定の幅の流体層が、間隙を定義するその他の障害物に隣接した同じ幅の流体層と等しい割合の流体流量を含有し、間隙の通過中に「バンピング」される粒子の臨界サイズが、粒子がどの障害物の近くを移動するかに関わらず、等しいことを意味する。
マイクロ流体デバイスにおいてサイズにより分離される物体には、細胞、生体分子、無機ビーズ、および他の物体が挙げられる。分画される典型的なサイズは、100ナノメートルから50マイクロメートルまでの範囲である。しかしながら、より大きい、およびより小さい粒子もまた、分画され得る場合もあり得る。
デザインに依存して、デバイス、またはデバイスの組合せは、試料の約10μlから少なくとも500μlの間、試料の約500μlから約40mLの間、試料の約500μlから約20mLの間、試料の約20mLから約200mLの間、試料の約40mLから約200mLの間、または少なくとも試料の200mLを処理するために用いられ得る。
デバイスは、1つまたは複数の注入口および1つまたは複数の出口を有する1つまたは複数のチャネルを含み得る。注入口は、試料または粗(すなわち、非精製)流体組成物用に、バッファー用に、または試薬を導入するために、用いられ得る。出口は、産物を収集するために用いられ得、または廃棄物用の出口として用いられ得る。チャネルは、幅が約0.5~100mm、長さが約2~200mmであり得るが、異なる幅および長さもまた可能である。深さは、1~1000μmであり得、1個から100個までの範囲、またはそれ以上のチャネルが存在し得る。容量は、数μlから何mlまでもの非常に幅広い範囲に渡って変動し得、デバイスは、障害物の異なる立体配置での複数のゾーン(ステージまたはセクション)を有し得る。
障害物のアレイにおける間隙サイズ(ポスト間または障害物間のエッジからエッジまでの距離)は、約数(例えば、1~500)マイクロメートルから変動し得、または1ミリメートルより大きくてもよい。いくつかの実施形態において、障害物は、1~3000マイクロメートルの直径を有し、様々な形(球形、三角形、涙滴形、菱形、四角形、長方形など)を有し得る。ポストの第1行は、注入口の近くに(例えば、5μm以内に)位置し得、または1mmより遠く離れてあり得る。
デバイスは、複数の積み重ね可能なチップを含み得る。デバイスは、約1~50個のチップを含み得る。場合によっては、デバイスは、直列に、または並列に、または両方で置かれた複数のチップを有し得る。
以下の番号付きの段落は、本願の一部である発明の概念を提示する。これらの概念は、段落例E1~E273の形式で表される。
E1. 以下の工程を含む、標的細胞の集団を操作する方法:
a)標的細胞を粗流体組成物から単離する工程であって、単離手順が、マイクロ流体デバイス上で決定論的横置換(DLD)を実施することを含み、前記デバイスが、
i)試料注入口から1つまたは複数の流体出口へ延びる少なくとも1個のチャネルであって、前記チャネルが第1の壁および前記第1の壁と反対側の第2の壁によって囲まれている、チャネル;
ii)前記チャネルにおいて、いくつもの行(row)をなして配列された障害物のアレイであって、障害物のそれぞれの次の行が、前の行に対して横方向へシフトしており、前記障害物が、前記粗流体組成物が前記デバイスの注入口にアプライされ、前記チャネルを流体的に通過する時、標的細胞が、濃縮された産物が収集される1つまたは複数の収集出口へ流れ、前記標的細胞とは異なるサイズである混入細胞または粒子が、前記収集出口から切り離されている1つまたは複数の廃棄物出口へ流れるような様式で配置されている、障害物のアレイ
を含む、工程;
b)前記収集出口から得られた標的細胞を、所望の表現型を有するように遺伝子操作する工程。
E2. 前記遺伝子操作する工程が、標的細胞をトランスフェクションまたは形質導入することを含み、遺伝子操作された標的細胞が、それらをインビトロで(in vitro)培養することにより増殖される、E1に記載の方法。
E3. 前記所望の表現型を示す標的細胞の収率が、Ficoll遠心分離により単離され、かつDLDに供されていない同一の細胞より少なくとも10%高い、E2に記載の方法。
E4. 前記粗流体組成物が、血液、または血液にアフェレーシスもしくは白血球アフェレーシスを実施することにより取得されている組成物である、E1に記載の方法。
E5. 前記標的細胞が白血球である、E1~4のいずれか一つに記載の方法。
E6. 前記標的細胞が、B細胞、T細胞、NK細胞、単球、または前駆細胞である、E1~4のいずれか一つに記載の方法。
E7. 前記標的細胞が樹状細胞である、E1~4のいずれか一つに記載の方法。
E8. 前記粗流体組成物が患者から取得される、E1~7のいずれか一つに記載の方法。
E9. 前記粗流体組成物における標的細胞が、形質導入またはトランスフェクションされる前に担体と結合していない、E8に記載の方法。
E10. 標的細胞に、DLDを実施する前に、DLD分離を促進または補完するように、1つまたは複数の担体を結合させる、E8に記載の方法。
E11. 標的細胞に、DLDを実施した後で、かつそれらを形質導入またはトランスフェクションする前かまたは後のいずれかで、DLD分離を促進または補完するように、1つまたは複数の担体を結合させる、E9に記載の方法。
E12. 前記1つまたは複数の担体が、前記標的細胞と特異的に結合する親和性物質を表面上に含む、E10またはE11に記載の方法。
E13. 前記物質が、抗体、アクチベーター、ハプテン、またはアプタマーである、E12に記載の方法。
E14. 前記担体の直径が、標的細胞の直径と少なくとも同じ長さである、E10~13のいずれか一つに記載の方法。
E15. 前記担体の全部の直径が、標的細胞の直径の50%以下の長さである、E10~13のいずれか一つに記載の方法。
E16. 前記担体の全部の直径が、標的細胞の直径の少なくとも2倍の長さである、E10~13のいずれか一つに記載の方法。
E17. 前記担体の全部の直径が、標的細胞の直径の25%以下の長さである、E10~13のいずれか一つに記載の方法。
E18. 担体の1つの群が、標的細胞と少なくとも同じ長さの直径を有し、担体の第2の群が、標的細胞の直径の50%以下の長さの直径を有する、E10~13のいずれか一つに記載の方法。
E19. 担体の1つの群が、標的細胞の少なくとも2倍の長さの直径を有し、担体の第2の群が、標的細胞の25%以下の長さの直径を有する、E10~13のいずれか一つに記載の方法。
E20. 前記担体が、コラーゲンまたは多糖でできている、E10~19のいずれか一つに記載の方法。
E21. 前記担体が、ゼラチンまたはアルギン酸塩でできている、E10~20のいずれか一つに記載の方法。
E22. 粗流体組成物が患者から取得され、前記粗流体組成物の取得が完了した時点から、標的細胞に初めて担体を結合させるまで、4時間より長く経過していない、E10~21のいずれか一つに記載の方法。
E23. 粗流体組成物が、患者の血液から引き出されたアフェレーシスまたは白血球アフェレーシス産物であり、アフェレーシスまたは白血球アフェレーシスが完了した時点から標的細胞に初めて担体を結合させるまで、4時間より長く経過していない、E10~21のいずれか一つに記載の方法。
E24. 粗流体組成物が患者から取得され、前記粗流体組成物の取得が完了した時点から、初めて標的細胞がトランスフェクションまたは形質導入される時まで、5時間より長く経過していない、E1~23のいずれか一つに記載の方法。
E25. 粗流体組成物が、患者の血液から引き出されたアフェレーシスまたは白血球アフェレーシス産物であり、アフェレーシスまたは白血球アフェレーシスが完了した時点から、初めて標的細胞がトランスフェクションまたは形質導入される時まで、5時間より長く経過していない、E1~23のいずれか一つに記載の方法。
E26. 初めて標的細胞がトランスフェクションまたは形質導入される時まで、4時間より長く経過していない、E24またはE25に記載の方法。
E27. 以下の工程を含む、キメラ抗原受容体(CAR)T細胞を作製する方法:
a)T細胞を含む粗流体組成物を取得する工程;
b)i)試料注入口から1つまたは複数の流体出口へ延びる少なくとも1個のチャネルであって、前記チャネルが第1の壁および前記第1の壁と反対側の第2の壁によって囲まれている、チャネル;
ii)前記チャネルにおいて、いくつもの行をなして配列された障害物のアレイであって、障害物のそれぞれの次の行が、前の行に対して横方向へシフトしており、前記障害物が、前記粗流体組成物がデバイスの注入口にアプライされ、前記チャネルを流体的に通過する時、前記組成物中のT細胞が、濃縮された産物が収集される1つまたは複数の収集出口へ流れ、前記粗流体組成物中にあり、かつ前記T細胞とは異なるサイズである細胞または粒子が、前記収集出口から切り離されている1つまたは複数の廃棄物出口へ流れるような様式で配置されている、障害物のアレイ
を含むマイクロ流体デバイスを用いて、前記粗流体組成物に決定論的横置換(DLD)を実施する工程;
c)工程b)において取得された濃縮産物中のT細胞を、それらの表面上にキメラ抗原受容体(CAR)を産生するように遺伝子操作する工程。
E28. 前記粗流体組成物が、患者由来の血液から取得されたアフェレーシス産物または白血球アフェレーシス産物であり、前記粗流体組成物が前記デバイスの注入口にアプライされ、前記チャネルを流体的に通過する時、前記組成物中のT細胞が、濃縮された産物が収集される1つまたは複数の収集出口へ流れ、前記粗流体組成物中にあり、かつ異なるサイズである赤血球、血小板、または他の粒子が、前記収集出口から切り離されている1つまたは複数の廃棄物出口へ流れる、E27に記載の方法。
E29. 前記遺伝子操作が、標的細胞をトランスフェクションまたは形質導入することを含み、遺伝子操作された標的細胞が、インビトロで前記細胞を成長させることにより、さらに増殖される、E27またはE28に記載の方法。
E30. 表面上にキメラ受容体を発現するT細胞の収率が、粗流体組成物からFicoll遠心分離により単離され、かつDLDに供されていないT細胞より少なくとも10%高い、E27~29のいずれか一つに記載の方法。
E31. 表面上にキメラ受容体を発現するT細胞の収率が、粗流体組成物からFicoll遠心分離により単離され、かつDLDに供されていないT細胞より少なくとも20%高い、E30に記載の方法。
E32. 表面上にキメラ受容体を発現するT細胞の収率が、粗流体組成物からFicoll遠心分離により単離され、かつDLDに供されていないT細胞より少なくとも50%高い、E30に記載の方法。
E33. 前記CARが、a)抗原結合ドメインを含む細胞外領域;b)膜貫通領域;c)細胞内領域を含み、前記CAR T細胞が、トリガーされた時、CAR T細胞の数または活性を低下させる分子スイッチを前記細胞に提供する1つまたは複数の組換え配列を含んでもよい、E27~32のいずれか一つに記載の方法。
E34. 前記抗原結合ドメインが、モノクローナル抗体の重鎖と軽鎖の両方の抗原結合領域由来の、一本鎖可変断片(scFv)である、E33に記載の方法。
E35. 前記CARが、細胞外領域と膜貫通領域を接続する2~20個のアミノ酸のヒンジ領域を含む、E33またはE34に記載の方法。
E36. 前記膜貫通領域が、CD8またはCD28タンパク質配列を含む、E35に記載の方法。
E37. 前記細胞内領域が、CD3ζ、CD137、またはCD28細胞内ドメインに由来したシグナル伝達ドメインを含む、E33~36のいずれか一つに記載の方法。
E38. 前記T細胞を含む粗流体組成物が、癌、自己免疫疾患、または感染性疾患を有する患者から取得される、E27~37のいずれか一つに記載の方法。
E39. T細胞を含む粗流体組成物を取得した後、前記流体組成物中のT細胞に、DLD分離を促進するように、1つまたは複数の担体を結合させる、E38に記載の方法。
E40. T細胞に、DLDを実施する前に、DLD分離を促進するように、1つまたは複数の担体を結合させる、E39に記載の方法。
E41. T細胞に、DLDを実施した後で、かつそれらが遺伝子操作される前かまたは後のいずれかで、DLD分離を促進するように、1つまたは複数の担体を結合させる、E39に記載の方法。
E42. 前記1つまたは複数の担体が、前記T細胞と特異的に結合する抗体またはアクチベーターを表面上に含む、E39~41のいずれか一つに記載の方法。
E43. 前記担体の全部の直径が、T細胞の直径と少なくとも同じ長さである、E39~42のいずれか一つに記載の方法。
E44. 前記担体の全部の直径が、T細胞の直径の50%以下の長さである、E39~42のいずれか一つに記載の方法。
E45. 前記担体の全部の直径が、T細胞の直径の少なくとも2倍の長さである、E39~42のいずれか一つに記載の方法。
E46. 前記担体の全部の直径が、T細胞の直径の25%以下の長さである、E39~42のいずれか一つに記載の方法。
E47. 担体の1つの群が、T細胞と少なくとも同じ長さの直径を有し、担体の第2の群が、T細胞の直径の50%以下の長さの直径を有する、E39~42のいずれか一つに記載の方法。
E48. 担体の1つの群が、T細胞の少なくとも2倍の長さの直径を有し、担体の第2の群が、T細胞の25%以下の長さの直径を有する、E39~42のいずれか一つに記載の方法。
E49. 前記担体が、コラーゲンまたは多糖でできている、E39~48のいずれか一つに記載の方法。
E50. 前記担体が、ゼラチンまたはアルギン酸塩でできている、E39~49のいずれか一つに記載の方法。
E51. T細胞を含む粗流体組成物の取得が完了した時点から、前記T細胞に担体を結合させるまで、4時間より長く経過していない、E39~50のいずれか一つに記載の方法。
E52. 粗流体組成物が、患者の血液から引き出されたアフェレーシスまたは白血球アフェレーシス産物であり、アフェレーシスまたは白血球アフェレーシスが完了した時点から、標的細胞に担体を結合させるまで、4時間より長く経過していない、E39~50のいずれか一つに記載の方法。
E53. T細胞を含む粗流体組成物の取得が完了した時点から、初めてT細胞がトランスフェクションまたは形質導入される時まで、5時間より長く経過していない、E27~50のいずれか一つに記載の方法。
E54. 粗流体組成物が、患者の血液から引き出されたアフェレーシスまたは白血球アフェレーシス産物であり、アフェレーシスまたは白血球アフェレーシスが完了した時点から、初めてT細胞がトランスフェクションまたは形質導入される時まで、5時間より長く経過していない、E27~50のいずれか一つに記載の方法。
E55. 初めてT細胞がトランスフェクションまたは形質導入される時まで、4時間より長く経過していない、E53またはE54に記載の方法。
E56. CAR T細胞を作製することにおける全工程が、T細胞を含む粗流体組成物が取得される同じ施設で実施され、全工程が、合計4時間以内に完了する、E27~55のいずれか一つに記載の方法。
E57. E27~55のいずれか一つに記載の方法により作製されたCAR T細胞。
E58. 癌、自己免疫疾患、または感染性疾患について患者を処置する方法であって、前記患者由来の癌細胞、自己免疫細胞、または感染細胞上の抗原を認識するキメラ抗原受容体を発現するように操作されたCAR T細胞を前記患者に投与することを含み、前記CAR T細胞が、以下の工程を含むプロセスにより作製されている、方法:
a)T細胞を含む粗流体組成物を患者から取得する工程;
b)i)試料注入口から1つまたは複数の流体出口へ延びる少なくとも1個のチャネルであって、前記チャネルが第1の壁および前記第1の壁と反対側の第2の壁によって囲まれている、チャネル;
ii)前記チャネルにおいて、いくつもの行をなして配列された障害物のアレイであって、障害物のそれぞれの次の行が、前の行に対して横方向へシフトしており、前記障害物が、前記粗流体組成物がデバイスの注入口にアプライされ、前記チャネルを流体的に通過する時、前記組成物中のT細胞が、濃縮された産物が収集される1つまたは複数の収集出口へ流れ、前記粗流体組成物中にあり、かつ前記T細胞とは異なるサイズである細胞または粒子が、前記収集出口から切り離されている1つまたは複数の廃棄物出口へ流れるような様式で配置されている、障害物のアレイ
を含むマイクロ流体デバイスを用いて、前記粗流体組成物に決定論的横置換(DLD)を実施する工程;
c)工程b)において取得された前記T細胞を、それらの表面上にキメラ抗原受容体(CAR)を発現するように遺伝子操作する工程;
d)操作されたT細胞の数を、前記細胞をインビトロで成長させることにより増加させる工程;ならびに
e)前記粗流体組成物が取得された患者へ前記操作されたT細胞を投与する工程。
E59. 前記粗流体組成物が、前記患者由来の血液から取得されたアフェレーシス産物または白血球アフェレーシス産物であり、前記粗流体組成物がデバイスの注入口にアプライされ、前記チャネルを流体的に通過する時、前記組成物中のT細胞が、濃縮された産物が収集される1つまたは複数の収集出口へ流れ、前記粗流体組成物中にあり、かつ異なるサイズである赤血球、血小板、または他の粒子が、前記収集出口から切り離されているもう1つの廃棄物出口へ流れる、E58に記載の方法。
E60. 遺伝子操作が、標的細胞をトランスフェクションまたは形質導入することを含む、E58またはE59に記載の方法。
E61. 表面上にキメラ受容体を発現する細胞の収率が、粗流体組成物からFicoll遠心分離により単離され、かつDLDに供されていないT細胞より少なくとも10%高い、E60に記載の方法。
E62. 表面上にキメラ受容体を発現する標的細胞の収率が、粗流体組成物からFicoll遠心分離により単離され、かつDLDに供されていないT細胞より少なくとも50%高い、E60に記載の方法。
E63. 前記CARが、a)抗原結合ドメインを含む細胞外領域;b)膜貫通領域;およびc)細胞内領域を含み、前記CAR T細胞が、トリガーされた時、CAR T細胞の数または活性を低下させる分子スイッチを前記細胞に提供する1つまたは複数の組換え配列を含んでもよい、E58~62のいずれか一つに記載の方法。
E64. 前記抗原結合ドメインが、モノクローナル抗体の重鎖と軽鎖の両方の抗原結合領域由来の、一本鎖可変断片(scFv)である、E63に記載の方法。
E65. 前記CARが、細胞外領域と膜貫通領域を接続する2~20個のアミノ酸のヒンジ領域を含む、E63またはE64に記載の方法。
E66. 前記膜貫通領域が、CD8またはCD28タンパク質配列を含む、E63~65のいずれか一つに記載の方法。
E67. 前記細胞内領域が、CD3ζ、CD137、またはCD28細胞内ドメインに由来したシグナル伝達ドメインを含む、E63~66のいずれか一つに記載の方法。
E68. 前記患者が白血病を有する、E58~67のいずれか一つに記載の方法。
E69. 前記白血病が急性リンパ芽球性白血病である、E68に記載の方法。
E70. 前記CARが抗原CD19またはCD20を認識する、E68またはE69に記載の方法。
E71. 前記患者が固形腫瘍を有する、E58~67のいずれか一つに記載の方法。
E72. 前記CARが、CD22;RORI;メゾテリン;CD33/IL3Ra;c-Met;PSMA;糖脂質F77;EGFRvIII;GD-2;NY-ESO-l TCR;MAGE A3 TCR;およびそれらの組合せからなる群から選択される抗原を認識する、E71に記載の方法。
E73. T細胞を含む粗流体組成物を取得した後に、前記流体中のT細胞に、DLD分離を促進するように、担体を結合させる、E58~72のいずれか一つに記載の方法。
E74. DLDを実施する前に、T細胞に、DLD分離を促進するように、1つまたは複数の担体を結合させる、E73に記載の方法。
E75. DLDを実施した後で、かつT細胞が、キメラ受容体を発現するように遺伝子操作される前かまたは後のいずれかで、T細胞に、DLD分離を促進するように、1つまたは複数の担体を結合させる、E73に記載の方法。
E76. 前記1つまたは複数の担体が、前記T細胞と特異的に結合する抗体またはアクチベーターを表面上に含む、E73~75のいずれか一つに記載の方法。
E77. 前記担体の全部の直径が、T細胞の直径と少なくとも同じ長さである、E73~76のいずれか一つに記載の方法。
E78. 前記担体の全部の直径が、T細胞の直径の50%以下の長さである、E73~76のいずれか一つに記載の方法。
E79. 前記担体の全部の直径が、T細胞の直径の少なくとも2倍の長さである、E73~76のいずれか一つに記載の方法。
E80. 前記担体の全部の直径が、T細胞の直径の25%以下の長さである、E73~76のいずれか一つに記載の方法。
E81. 担体の1つの群が、T細胞と少なくとも同じ長さの直径を有し、担体の第2の群が、T細胞の直径の50%以下の長さの直径を有する、E80に記載の方法。
E82. 担体の1つの群が、T細胞の少なくとも2倍の長さの直径を有し、担体の第2の群が、T細胞の25%以下の長さの直径を有する、E73~81のいずれか一つに記載の方法。
E83. 前記担体が、コラーゲンまたは多糖でできている、E73~82のいずれか一つに記載の方法。
E84. 前記担体が、ゼラチンまたはアルギン酸塩でできている、E73~83のいずれか一つに記載の方法。
E85. T細胞を含む粗流体組成物の取得が完了した時点から、前記T細胞に担体を結合させるまで、4時間より長く経過していない、E73~84のいずれか一つに記載の方法。
E86. 粗流体組成物が、患者の血液から引き出されたアフェレーシスまたは白血球アフェレーシス産物であり、アフェレーシスまたは白血球アフェレーシスが完了した時点から、標的細胞に担体を結合させるまで、4時間より長く経過していない、E73~84のいずれか一つに記載の方法。
E87. T細胞を含む粗流体組成物の取得が完了した時点から、初めてT細胞がトランスフェクションまたは形質導入される時まで、5時間より長く経過していない、E73~84のいずれか一つに記載の方法。
E88. 粗流体組成物が、患者の血液から引き出されたアフェレーシスまたは白血球アフェレーシス産物であり、アフェレーシスまたは白血球アフェレーシスが完了した時点から、初めてT細胞がトランスフェクションまたは形質導入される時まで、5時間より長く経過していない、E73~84のいずれか一つに記載の方法。
E89. 初めてT細胞がトランスフェクションまたは形質導入される時まで、4時間より長く経過していない、E87または88に記載の方法。
E90. T細胞が、DLDを含まない方法により処理された細胞についてより少なくとも1日早く、患者への投与に利用可能である、E58~89のいずれか一つに記載の方法。
E91. 標的細胞が、DLDを含まない方法により処理された細胞についてより少なくとも3日早く、患者への投与に利用可能である、E58~89のいずれか一つに記載の方法。
E92. a)標的細胞を含む粗流体組成物を患者から取得する工程;
b)マイクロ流体デバイスを用いて、前記標的細胞を含む粗流体組成物に決定論的横置換(DLD)を実施して、標的細胞が濃縮された組成物を得る工程;
を含み、DLDの前かまたは後のいずれかに、標的細胞に、DLD分離を促進するように、1つまたは複数の担体を結合させ、前記標的細胞を含む粗流体組成物の患者からの取得が完了した時点から、前記標的細胞に担体を結合させるまで、5時間より長く経過していない、患者から標的細胞を収集する方法。
E93. 前記1つまたは複数の担体が、前記標的細胞と特異的に結合する抗体またはアクチベーターを表面上に含む、E92に記載の方法。
E94. 前記担体の全部の直径が、標的細胞の直径と少なくとも同じ長さである、E92またはE93に記載の方法。
E95. 前記担体の全部の直径が、標的細胞の直径の50%以下の長さである、E92または93に記載の方法。
E96. 前記担体の全部の直径が、標的細胞の直径の少なくとも2倍の長さである、E92またはE93に記載の方法。
E97. 前記担体の全部の直径が、標的細胞の直径の25%以下の長さである、E92またはE93に記載の方法。
E98. 担体の1つの群が、標的細胞と少なくとも同じ長さの直径を有し、担体の第2の群が、標的細胞の直径の50%以下の長さの直径を有する、E92またはE93に記載の方法。
E99. 担体の1つの群が、T細胞の少なくとも2倍の長さの直径を有し、担体の第2の群が、T細胞の25%以下の長さの直径を有する、E92またはE93に記載の方法。
E100. 前記担体が、コラーゲンまたは多糖でできている、E92~99のいずれか一つに記載の方法。
E101. 前記担体が、ゼラチンまたはアルギン酸塩でできている、E92~100のいずれか一つに記載の方法。
E102. 標的細胞を含む粗流体組成物の取得が完了した時点から、前記標的細胞に担体を結合させるまで、4時間より長く経過していない、E92~101のいずれか一つに記載の方法。
E103. 標的細胞を含む粗流体組成物の取得が完了した時点から、前記標的細胞に担体を結合させるまで、3時間より長く経過していない、E92~101のいずれか一つに記載の方法。
E104. 前記標的細胞を含む粗流体組成物が、患者由来の血液にアフェレーシスまたは白血球アフェレーシスを実施することにより、取得される、E92~103のいずれか一つに記載の方法。
E105. DLDにより標的細胞が濃縮された組成物中の標的細胞が、ウイルスベクターを用いて形質導入される、E92~104のいずれか一つに記載の方法。
E106. 標的細胞が、電気的に、化学的に、またはナノ粒子を用いて、トランスフェクションされる、E105に記載の方法。
E107. 前記マイクロ流体デバイスが
a)試料注入口から1つまたは複数の流体出口へ延びる少なくとも1個のチャネルであって、前記チャネルが第1の壁および前記第1の壁と反対側の第2の壁によって囲まれている、チャネル;
b)前記チャネルにおいて、いくつもの行をなして配列された障害物のアレイであって、障害物のそれぞれの次の行が、前の行に対して横方向へシフトしており、前記障害物が、前記標的細胞を含む粗流体組成物が前記デバイスの注入口にアプライされ、前記チャネルを流体的に通過する時、標的細胞が、濃縮された産物が収集される1つまたは複数の収集出口へ流れ、前記粗流体組成物中にあり、かつ前記標的細胞とは異なるサイズである混入細胞または粒子が、前記収集出口から切り離されている1つまたは複数の廃棄物出口へ流れるような様式で配置されている、障害物のアレイ
を含む、E92~106のいずれか一つに記載の方法。
E108. 前記標的細胞がT細胞である、E92~107のいずれか一つに記載の方法。
E109. 前記T細胞が、ナチュラルキラーT細胞、セントラルメモリーT細胞、ヘルパーT細胞、および制御性T細胞からなる群から選択される、E108に記載の方法。
E110. 前記標的細胞が幹細胞である、E92~107のいずれか一つに記載の方法。
E111. 前記標的細胞が、B細胞、マクロファージ、樹状細胞、または顆粒球である、E92~107のいずれか一つに記載の方法。
E112. 前記標的細胞を含む粗流体組成物が、抗凝固剤として働き、または血小板の活性化を防ぐ1つまたは複数の添加物を含む、E92~111のいずれか一つに記載の方法。
E113. 前記添加物が、チクロピジン、イノシン、プロトカテキュ酸、アセチルサリチル酸、およびチロフィバンからなる群から選択される、E112に記載の方法。
E114. 工程a)およびb)がどちらも、標的細胞を含む粗流体組成物が患者から取得される現地で行われる、E92~113のいずれか一つに記載の方法。
E115. 標的細胞を含む粗流体組成物の患者からの取得が完了した時点から、前記標的細胞に担体を結合させるまで、4時間より長く経過していない、E92~114のいずれか一つに記載の方法。
E116. 粗流体組成物が、患者の血液から引き出されたアフェレーシスまたは白血球アフェレーシス産物であり、アフェレーシスまたは白血球アフェレーシスが完了した時点から、標的細胞に担体を結合させるまで、4時間より長く経過していない、E92~114のいずれか一つに記載の方法。
E117. c)細胞を遺伝子操作し、および/もしくは数を増加させる工程;ならびに/または
d)前記標的細胞が取得された同じ患者を、収集された標的細胞で処置する工程
をさらに含む、E92~116のいずれか一つに記載の方法。
E118. 工程d)後に、前記標的細胞が凍結保存される、E117に記載の方法。
E119. 工程c)において培養される標的細胞が、アクチベーターの存在下で培養されるT細胞である、E117またはE118に記載の方法。
E120. 前記アクチベーターが担体に結合している、E119に記載の方法。
E121. 標的細胞が、DLDを含まない方法により処理された細胞についてより少なくとも1日早く、患者への投与に利用可能である、E58~89のいずれか一つに記載の方法。
E122. 標的細胞が、DLDを含まない方法により処理された細胞についてより少なくとも3日早く、患者への投与に利用可能である、E58~89のいずれか一つに記載の方法。
E123. E92~122のいずれか一つに記載の方法により作製された標的細胞。
E124. E123に記載の標的細胞を前記患者に投与することを含む、疾患または状態について患者を処置する方法。
E125. 以下の工程を含む、接着細胞を複数の他の細胞から分離する方法:
a)複数の他の細胞および接着細胞を含む粗流体組成物を、DLD分離を促進するように結合する1つまたは複数の担体と接触させる工程であって、前記接着細胞が、接触により、または接触後に担体と少なくとも部分的に会合して、担体会合化接着細胞複合体を生成し、前記担体会合化接着細胞複合体が、前記複数の他の細胞における細胞に対して増加したサイズを含み、前記担体会合化接着細胞複合体のサイズが、臨界サイズ以上であり、かつ前記複数の他の細胞における細胞が前記臨界サイズ未満のサイズを含む、工程;
b)前記粗流体組成物をデバイスにアプライする工程であって、前記デバイスが、行をなして配列された障害物のアレイを含み、前記行が、お互いに対して横方向へシフトされ、前記行が、前記臨界サイズ以上の粒子を第1の方向へ、および前記臨界サイズ未満の粒子を第2の方向へ偏向させるように構成される、工程;ならびに
c)前記担体会合化接着細胞複合体を含む前記試料を前記デバイスに流す工程であって、前記担体会合化接着細胞複合体が前記障害物により前記第1の方向に偏向され、かつ前記複数の他の細胞における細胞が前記第2の方向に偏向され、それにより、前記担体会合化接着細胞複合体を前記複数の他の細胞から分離する、工程;
d)分離された担体会合化接着細胞複合体を含む流体組成物を収集する工程。
E126. 前記接着細胞が、前記接着細胞および複数の他の細胞を含む粗流体組成物の一部として患者から収集され、前記粗流体組成物の患者からの取得が完了した時点から、前記接着細胞に初めて担体を結合させるまで、3時間より長く経過していない、E125に記載の方法。
E127. 前記粗流体組成物の患者からの取得が完了した時点から、前記接着細胞に初めて担体を結合させるまで、2時間より長く経過していない、E125に記載の方法。
E128. 前記粗流体組成物の患者からの取得が完了した時点から、前記接着細胞に初めて担体を結合させるまで、1時間より長く経過していない、E125に記載の方法。
E129. 前記粗流体組成物の患者からの取得が完了した時点から、前記接着細胞または前記担体接着細胞複合体が初めて前記デバイスから収集されるまで、4時間より長く経過していない、E125に記載の方法。
E130. 前記粗流体組成物の患者からの取得が完了した時点から、前記接着細胞または前記担体接着細胞複合体が初めて前記デバイスから収集されるまで、4時間より長く経過していない、E125に記載の方法。
E131. 前記担体が、前記接着細胞と特異的に結合する抗体またはアクチベーターを表面上に含む、E125~130のいずれか一つに記載の方法。
E132. 前記担体の直径が、前記接着細胞の直径と少なくとも同じ長さである、E125~131のいずれか一つに記載の方法。
E133. 前記担体の全部の直径が、前記接着細胞の直径の少なくとも2倍の長さである、E125~131のいずれか一つに記載の方法。
E134. 前記担体の全部の直径が、前記接着細胞の直径の少なくとも10倍の長さである、E125~131のいずれか一つに記載の方法。
E135. 前記担体の全部の直径が、10~600μmである、E125~131のいずれか一つに記載の方法。
E136. 前記接着細胞が、MRC-5細胞;HeLa細胞;Vero細胞;NIH 3T3細胞;L929細胞;Sf21細胞;Sf9細胞;A549細胞;A9細胞;AtT-20細胞;BALB/3T3細胞;BHK-21細胞;BHL-100細胞;BT細胞;Caco-2細胞;Chang細胞;Clone 9細胞;Clone M-3細胞;COS-1細胞;COS-3細胞;COS-7細胞;CRFK細胞;CV-1細胞;D-17細胞;Daudi細胞;GH1細胞;GH3細胞;HaK細胞;HCT-15細胞;HL-60細胞;HT-1080細胞;HEK細胞、HT-29細胞;HUVEC細胞;I-10細胞;IM-9細胞;JEG-2細胞;Jensen細胞;Jurkat細胞;K-562細胞;KB細胞;KG-1細胞;L2細胞;LLC-WRC 256細胞;McCoy細胞;MCF7細胞;WI-38細胞;WISH細胞;XC細胞;Y-1細胞;CHO細胞;Raw 264.7細胞;HEP G2細胞;BAE-1細胞;SH-SY5Y細胞、およびそれらの任意の誘導体からなる群から選択される、E125~135のいずれか一つに記載の方法。
E137. 前記接着細胞が幹細胞である、E125~135のいずれか一つに記載の方法。
E138. 以下の工程を含む、活性化細胞を複数の他の細胞から分離する方法:
a)活性化の能力がある細胞および複数の他の細胞を含む粗流体組成物を、1つまたは複数の担体と接触させる工程であって、少なくとも1つの担体が細胞アクチベーターを含み、前記細胞アクチベーターが、接触により、または接触後に、前記細胞アクチベーターによる活性化の能力がある細胞と少なくとも部分的に会合して、担体会合化細胞複合体を生成し、前記細胞アクチベーターによる活性化の能力がある細胞との前記細胞アクチベーターの会合が、前記活性化の能力がある細胞を少なくとも部分的に活性化し、前記担体会合化細胞複合体が、前記複数の他の細胞における細胞に対して増加したサイズを含み、前記担体会合化細胞複合体のサイズが臨界サイズ以上であり、かつ前記複数の他の細胞における細胞が前記臨界サイズ未満のサイズを含む、工程;
b)前記試料をデバイスにアプライする工程であって、前記デバイスが、行をなして配列された障害物のアレイを含み、前記行が、お互いに対して横方向へシフトされ、前記行が、前記臨界サイズ以上の粒子を第1の方向へ、および前記臨界サイズ未満の粒子を第2の方向へ偏向させるように構成される、工程;ならびに
c)前記試料を前記デバイスに流す工程であって、前記担体会合化細胞複合体が前記障害物により前記第1の方向に偏向され、かつ前記複数の他の細胞における細胞が前記第2の方向に偏向され、それにより、前記活性化細胞を前記複数の他の細胞から分離する、工程;
d)分離された担体会合化細胞複合体を含む流体組成物を収集する工程。
E139. 前記活性化の能力がある細胞が、T細胞、B細胞、制御性T細胞、マクロファージ、樹状細胞、顆粒球、自然リンパ球系細胞、巨核球、ナチュラルキラー細胞、栓球、滑膜細胞、β細胞、肝臓細胞、膵臓細胞、DE3溶原化細胞、酵母細胞、植物細胞、および幹細胞からなる群から選択される、E138に記載の方法。
E140. 細胞アクチベーターがタンパク質である、E138またはE139に記載の方法。
E141. 前記タンパク質が抗体である、E140に記載の方法。
E142. 前記タンパク質が、CD3、CD28、抗原、ヘルパーT細胞、受容体、サイトカイン、糖タンパク質、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される、E140に記載の方法。
E143. 前記細胞アクチベーターが、インスリン、IPTG、ラクトース、アロラクトース、脂質、グリコシド、テルペン、ステロイド、アルカロイド、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される、E138に記載の方法。
E144. 前記活性化の能力がある細胞が、前記活性化の能力がある細胞および複数の他の細胞を含む粗流体組成物の一部として患者から収集され、前記粗流体組成物の患者からの取得が完了した時点から、前記活性化の能力がある細胞に担体を結合させるまで、4時間より長く経過していない、E138~143のいずれか一つに記載の方法。
E145. 前記粗流体組成物の患者からの取得が完了した時点から、前記活性化の能力がある細胞に担体を結合させるまで、3時間より長く経過していない、E138~143のいずれか一つに記載の方法。
E146. 前記粗流体組成物の患者からの取得が完了した時点から、前記活性化の能力がある細胞に担体を結合させるまで、2時間より長く経過していない、E138~143のいずれか一つに記載の方法。
E147. 前記粗流体組成物の患者からの取得が完了した時点から、工程c)が完了するまで、4時間より長く経過していない、E138~143のいずれか一つに記載の方法。
E148. 前記粗流体組成物の患者からの取得が完了した時点から、工程c)が完了するまで、3時間より長く経過していない、E138~143のいずれか一つに記載の方法。
E149. 前記担体の全部の直径が、前記活性化の能力がある細胞と少なくとも同じ長さである、E138~148のいずれか一つに記載の方法。
E150. 前記担体の全部の直径が、前記活性化の能力がある細胞の直径の少なくとも2倍の長さである、E138~148のいずれか一つに記載の方法。
E151. 前記担体の全部の直径が、前記活性化の能力がある細胞の直径の少なくとも10倍の長さである、E138~148のいずれか一つに記載の方法。
E152. 前記担体の直径が、10~600μmである、E138~148のいずれか一つに記載の方法。
E153. 以下の工程を含む、細胞から分泌性産物を連続的に精製する方法:
a)細胞を含む流体組成物を取得する工程であって、前記細胞が、前記流体組成物中に懸濁しており、前記細胞が分泌性産物を前記懸濁液へ分泌し、前記細胞が前記分泌性産物の既定サイズより大きい既定サイズを有し、前記細胞の既定サイズが臨界サイズ以上であり、かつ前記分泌性産物の既定サイズが、前記臨界サイズ未満である、工程;
b)前記細胞を含む流体組成物をデバイスにアプライする工程であって、前記デバイスが、行をなして配列された障害物のアレイを含み、前記行が、お互いに対して横方向へシフトされ、前記行が、前記臨界サイズ以上の粒子を第1の方向へ、および前記臨界サイズ未満の粒子を第2の方向へ偏向させるように構成される、工程;
c)前記試料を前記デバイスに流す工程であって、前記細胞が前記障害物により前記第1の方向に偏向され、かつ前記分泌性産物が前記第2の方向に偏向され、それにより、前記分泌性産物を前記細胞から分離する、工程;
d)前記分泌性産物を収集する工程であって、それにより、実質的に純粋である前記分泌性産物の試料を生じる、工程;
e)分離された細胞を含む回収された流体組成物を収集する工程;ならびに
f)分離された細胞を含む回収された流体組成物を、前記デバイスに再アプライし、工程(a)~(e)を繰り返す工程であって、それにより、分泌性産物を細胞から連続的に精製する、工程。
E154. 前記分泌性産物が、タンパク質、抗体、バイオ燃料、ポリマー、小分子、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される、E153に記載の方法。
E155. 前記細胞が、細菌細胞、藻類細胞、哺乳類細胞、および腫瘍細胞からなる群から選択される、E153に記載の方法。
E156. 遠心分離または水簸の非存在下で、試料上で決定論的横置換(DLD)を実施することを含む、アフェレーシス試料中の血小板と白血球の比率を減少させる方法であって、産物が、血小板と白血球の比率がDLDの代わりに遠心分離または水簸を使用して実施される同じ手順で得られる比率よりも少なくとも20%低くで得られる、方法。
E157. 産物が、血小板と白血球の比率が密度勾配遠心分離または向流遠心分離を使用して実施される同じ手順で得られる比率よりも少なくとも20%低くで得られる、E156に記載の方法。
E158. 産物が、血小板と白血球の比率が水簸を使用して実施される同じ手順で得られる比率よりも少なくとも20%低くで得られる、E156に記載の方法。
E159. 産物が、血小板と白血球の比率がDLDの代わりに遠心分離または水簸を使用して得られる比率よりも少なくとも50%低くで得られる、E156に記載の方法。
E160. DLDの前に、アフェレーシス試料に対して実施される分離工程がない、E156~159のいずれか一つに記載の方法。
E161. DLDが、血小板のサイズを変えるインターカレーションを含まず、血小板凝集を促進しないバッファーにおいて実施される、E156~160のいずれか一つに記載の方法。
E162. DLDが、デキストランまたは他の高電荷ポリマーを含まないバッファーにおいて実施される、E156~159のいずれか一つに記載の方法。
E163. 産物中の血小板の総数が、アフェレーシス試料中よりも少なくとも70%低い、E156~162のいずれか一つに記載の方法。
E164. 産物中の血小板の総数が、アフェレーシス試料中よりも少なくとも90%低い、E156~163のいずれか一つに記載の方法。
E165. 試料上でDLD、次にアフィニティー分離工程およびアクチベーターの存在下で培養することによるT細胞の拡張を実施することを含む、アフェレーシス試料からT細胞を精製するための方法であって、得られるT細胞の数が、DLDの代わりにFicoll遠心分離を使用して実施される同じ手順によって産生される数の少なくとも2倍である、方法。
E166. アフィニティー分離工程が、CD3に結合する抗体を含む磁気ビーズまたは粒子の使用を含む、E165に記載の方法。
E167. 培養14日後に得られるT細胞の数が、DLDの代わりにFicoll遠心分離を使用して実施される同じ手順によって産生される数の少なくとも2倍である、E165に記載の方法。
E168. 培養14日後に得られるT細胞の数が、DLDの代わりにFicoll遠心分離を使用して実施される同じ手順によって産生される数の少なくとも4倍である、E165に記載の方法。
E169. DLD産物中の細胞が組換え表現型を発現するようにベクターで形質転換されているとき、所望の表現型を示す細胞の収量は、Ficoll遠心分離により単離され、DLDに付されない同一の細胞よりも少なくとも10%高い、E156~168のいずれか一つに記載の方法。
E170. DLD産物中の細胞が組換え表現型を発現するようにベクターで形質転換されているとき、所望の表現型を示すT細胞の収量は、Ficoll遠心分離により単離され、DLDに付されない同一の細胞よりも少なくとも20%高い、E156~169のいずれか一つに記載の方法。
E171. T細胞の総数に対するDLD産物中のメモリーT細胞の割合が、DLDの代わりにFicoll遠心分離で同じ手順を使用して産生される割合よりも少なくとも10%高い、E163~165のいずれか一つに記載の方法。
E172. 方法が、CAR T細胞療法のためのT細胞を産生するために使用され、患者を処置するために十分な数の細胞を産生するために必要な時間がFicoll遠心分離の代わりにDLDを使用して少なくとも20%減少される、E156~171のいずれか一つに記載の方法。
E173. CAR T細胞を産生するためのプロセスが、細胞が凍結される工程を含まない、E172に記載の方法。
E174. T細胞の処理が、アフェレーシスが実施されるのと同じ部位で実施される、E172またはE173のいずれかに記載の方法。
E175. T細胞が、アフェレーシスが実施されるのと同じ部位で遺伝的に形質転換される、E172~174のいずれか一つに記載の方法。
E176. 1時間未満が、アフェレーシス試料収集が完了される時間からDLDが実施される時間までで経過する、E156~169のいずれか一つに記載の方法。
E177. 遠心分離または水簸の非存在下で、試料上で決定論的横置換(DLD)を実施することを含む、アフェレーシス試料中の白血球に対する血小板の比率を減少させる方法であって、産物が、産物中の血小板の総数がアフェレーシス試料中よりも少なくとも90%低くで得られる、方法。
E178. DLDが、血小板のサイズを変えるインターカレーションを含まず、血小板凝集を促進しないバッファーにおいて実施される、E177に記載の方法。
E179. DLDが、デキストランまたは他の高電荷ポリマーを含まないバッファーにおいて実施される、E177に記載の方法。
E180. 以下の工程を含む、CAR T細胞を操作する方法:
a)アフェレーシスにより患者から試料組成物を取得する工程であって、前記試料組成物がT細胞を含む、工程;
b)存在する血小板の総数を少なくとも70%減少させるように試料組成物上でDLDを実施する工程であって、DLDは、
i)試料注入口から1つまたは複数の流体出口へ延びる少なくとも1個のチャネルであって、前記チャネルが第1の壁および前記第1の壁と反対側の第2の壁によって囲まれている、チャネル;
ii)前記チャネルにおいて、いくつもの行(row)をなして配列された障害物のアレイであって、障害物のそれぞれの次の行が、前の行に対して横方向へシフトしており、前記障害物が、粗流体組成物が前記デバイスの注入口にアプライされ、前記チャネルを流体的に通過する時、組成物中のT細胞が、濃縮産物が収集される1つまたは複数の収集出口へ流れ、血小板およびT細胞より小さい他の物質が、収集出口から切り離されている1つまたは複数の廃棄物出口へ流れる様式で配置されている、障害物のアレイ
を含むマイクロ流体デバイス上で実施される、工程;
c)工程b)において取得された濃縮産物中のT細胞を、それらの表面上にキメラ抗原受容体(CAR)を産生するように遺伝子操作する工程;
d)それらの数を拡張するようにT細胞を培養する工程;
e)患者への投与のための医薬組成物にT細胞を移す工程。
E181. 血小板の少なくとも90%が工程b)において除去される、E180に記載の方法。
E182. 全ての単離工程および濃縮工程がDLDを使用して実施される、E180またはE181のいずれかに記載の方法。
E183. 培養前または培養中に、細胞がT細胞アクチベーターに曝露される、E180~182のいずれか一つに記載の方法。
E184. 工程b)中および工程c)の前に、細胞が、T細胞アクチベーターが存在または添加されている培地に移される、E180~183のいずれか一つに記載の方法。
E185. アクチベーターを含む培地をDLDにより処理し、アクチベーターを細胞から分離し、細胞が、細胞を組み換え的に操作するためのベクターが存在または添加されている培地に移される、E184に記載の方法。
E186. 細胞が、患者への投与のために医薬組成物に移されるまで細胞が凍結されない、E180~185のいずれか一つに記載の方法。
E187. 細胞があらゆる工程で凍結されない、E180~185のいずれか一つに記載の方法。
E188. 細胞がDLD以外の方法によって単離または濃縮される手順と比較して、プロセスが少なくとも1日早く完了する、E180~187のいずれか一つに記載の方法。
E189. 細胞がDLD以外の方法によって単離または濃縮される手順と比較して、プロセスが少なくとも3日早く完了する、E180~187のいずれか一つに記載の方法。
E190. 細胞がDLD以外の方法によって単離または濃縮される手順と比較して、プロセスが少なくとも5日早く完了する、E180~187のいずれか一つに記載の方法。
E191. 細胞がDLD以外の方法によって単離または濃縮される手順と比較して、プロセスが少なくとも10日早く完了する、E180~187のいずれか一つに記載の方法。
E192. 工程d)において、培養14日後に取得されるT細胞の数が、DLDの代わりにFicoll遠心分離を使用して行われる同じ手順によって産生される数よりも少なくとも2倍高い、E180~191のいずれか一つに記載の方法。
E193. 工程d)において、培養14日後に取得されるT細胞の数が、DLDの代わりにFicoll遠心分離を使用して行われる同じ手順によって産生される数よりも少なくとも4倍高い、E180~191のいずれか一つに記載の方法。
E194. 以下の工程を含む、CAR T細胞を調製する方法:
a)アフェレーシスにより患者から細胞を収集する;
b)工程a)で得られた細胞にDLDを実施して、白血球を他の細胞および粒子から分離し、白血球を、それらの増殖をサポートし、T細胞活性化因子を含むかまたは補充した培地に移す;
c)DLDを実施して、工程b)の培地から、その表面にキメラ抗原受容体(CAR)を発現するように組換え操作されたT細胞を分離し、培地に移す;
d)DLDを実施してT細胞を試薬から分離し、増殖培地に移す;
e)細胞を培養して細胞数を増やす;
f)DLDを実施して、増やしたT細胞を患者に投与するための培地に移す。
E195. 細胞が、患者への投与のために医薬組成物に移されるまで凍結されない、E194に記載の方法。
E196. 細胞がいかなる段階においても凍結されていない、E194に記載の方法。
E197. 細胞がDLD以外の方法によって単離または濃縮される手順と比較して、プロセスが少なくとも3日早く完了する、E194~196のいずれか一つに記載の方法。
E198. 細胞がDLD以外の方法によって単離または濃縮される手順と比較して、プロセスが少なくとも5日早く完了する、E194~196のいずれか一つに記載の方法。
E199. 細胞がDLD以外の方法によって単離または濃縮される手順と比較して、プロセスが少なくとも10日早く完了する、E194~196のいずれか一つに記載の方法。
E200. 以下の工程を含む、患者の処置のためのCAR T細胞を調製する方法:
a)アフェレーシスによって患者から細胞を収集すること;
b)工程a)で得られた細胞にDLDを実施して、白血球を他の細胞および粒子から分離し、白血球を、それらの増殖をサポートし、T細胞活性化因子を含むかまたは補充した培地に移す;
c)工程b)の培地からT細胞を、キメラ抗原受容体(CAR)を表面に生成するようにT細胞を遺伝子操作するためのベクターを含む培地に分離する;
d)DLDを実施して、T細胞を試薬から分離し、患者に投与するための培地に移す。
E201. 細胞が、患者への投与のために医薬組成物に移されるまで凍結されない、E200に記載の方法。
E202. 細胞がいかなる段階においても凍結されていない、E200に記載の方法。
E203. 細胞がDLD以外の方法によって単離または濃縮される手順と比較して、プロセスが少なくとも3日早く完了する、E200~202のいずれか一つに記載の方法。
E204. 細胞がDLD以外の方法によって単離または濃縮される手順と比較して、プロセスが少なくとも5日早く完了する、E200~202のいずれか一つに記載の方法。
E205. 細胞がDLD以外の方法によって単離または濃縮される手順と比較して、プロセスが少なくとも10日早く完了する、E200~202のいずれか一つに記載の方法。
E206. 工程b)において、白血球に対する血小板の比が、DLDの代わりに遠心分離またはエルトリエーション(elutriation)を用いて得られる比よりも少なくとも50%低い生成物が得られる、E180~205のいずれか一つに記載の方法。
E207. 所望のCAR T表現型を示すT細胞の収量が、Ficoll遠心分離によって単離され、DLDに供されていない同一の細胞よりも少なくとも10%高い、E180~205のいずれか一つに記載の方法。
E208. 所望のCAR T表現型を示すT細胞の収量が、Ficoll遠心分離によって単離され、DLDに供されていない同一の細胞よりも少なくとも20%高い、E180~205のいずれか一つに記載の方法。
E209. 患者の処置のために十分な数のT細胞を製造するのに必要な時間が、同じ方法がアフェレーシス開始材料から細胞を単離するためにDLDではなくFicoll遠心分離を使用して実施された場合よりも少なくとも5%短い、E180~208のいずれか一つに記載の方法。
E210. 患者の処置のために十分な数のT細胞を製造するのに必要な時間が、同じ方法がアフェレーシス開始材料から細胞を単離するためにDLDではなくFicoll遠心分離を使用して実施された場合よりも少なくとも10%短い、E180~209のいずれか一つに記載の方法。
E211. 前記方法によって調製された細胞が患者に投与される場合に、細胞が、DLDの代わりに遠心分離またはエルトリエーション法を使用してアフェレーシス組成物から処理された細胞よりも少なくとも10%少ない老化を示す、E180~209のいずれか一つに記載の方法。
E212. 前記方法によって調製された細胞が患者に投与される場合に、細胞が、DLDの代わりに遠心分離またはエルトリエーション法を使用してアフェレーシス組成物から処理された細胞よりも増大した効力を示す、E180~209のいずれか一つに記載の方法。
E213. E180~209のいずれか一つに記載の方法によって調製された治療有効量の細胞を前記患者に投与することを含む、疾患または症状について患者を処置する方法。
E214. 前記疾患または症状ががんである、E213に記載の方法。
E215. 以下の工程を含む、治療的に活性な細胞を製造する方法:
a)前記細胞を含む患者から試料組成物を得る;
b)試料に対してDLDを実施して、治療的に活性な細胞が濃縮された組成物を製造する、ここで、DLDは、以下を含むマイクロ流体デバイスで実施される:
i)試料入口から1つまたは複数の流体出口まで延びる少なくとも1つのチャネルであって、第1の壁および第1の壁の反対側の第2の壁によって境界付けられている、チャネル;
ii)チャネル内の列に配置された障害物の配列、後続の各列の障害物は前の列に対して横方向にシフトされ、前記障害物は、粗流体組成物が装置の入口にアプライされ、流体的にチャネルを通過するときに、組成物中の治療的に活性な細胞は、濃縮生成物が収集される1つまたは複数の収集出口に流れ、ここで治療的に活性な細胞よりも小さい細胞および材料は、収集出口から分離されるもう1つの廃棄出口に流れる;
c)任意に、工程b)で得られた濃縮生成物中の治療活性細胞を遺伝子操作する;
d)任意に、治療的に活性な細胞を培養してその数を増やす;
e)治療的に活性な細胞を患者への投与のための医薬組成物に移す。
E216. 治療的に活性な細胞が幹細胞である、E215に記載の方法。
E217. 幹細胞が循環中に見出され、試料組成物がアフェレーシスによって調製される、E216に記載の方法
E218. 血小板の少なくとも70%が工程b)の濃縮生成物から除去される、E217に記載の方法。
E219. 血小板の少なくとも90%が工程b)の濃縮生成物から除去される、E217に記載の方法。
E220. すべての単離工程および濃縮工程がDLDを使用して実施される、E215~219のいずれか一つに記載の方法。
E221. 細胞が、患者への投与のために医薬組成物に移されるまで凍結されない、E215~220のいずれか一つに記載の方法。
E222. 細胞がいかなる段階においても凍結されていない、E215~220のいずれか一つに記載の方法。
E223. 細胞がDLD以外の方法によって単離または濃縮される手順と比較して、プロセスが少なくとも1日早く完了する、E215~222のいずれか一つに記載の方法。
E224. 細胞がDLD以外の方法によって単離または濃縮される手順と比較して、プロセスが少なくとも3日早く完了する、E215~222のいずれか一つに記載の方法。
E225. 細胞がDLD以外の方法によって単離または濃縮される手順と比較して、プロセスが少なくとも5日早く完了する、E215~222のいずれか一つに記載の方法。
E226. 試料組成物から得られる治療的に活性な細胞の収量が、細胞がDLD以外の方法によって単離または濃縮される手順によって得られる場合よりも少なくとも25%高い、E215~222のいずれか一つに記載の方法。
E227. 細胞がDLD以外の方法によって単離または濃縮される手順と比較して、プロセスが少なくとも3日早く完了する、E215~222のいずれか一つに記載の方法。
E228. 細胞がDLD以外の方法によって単離または濃縮される手順と比較して、プロセスが少なくとも5日早く完了する、E215~222のいずれか一つに記載の方法。
E229. 患者の処置のために十分な数の治療的に活性な細胞を製造するのに必要な時間が、同じ方法が試料組成物から細胞を単離するためにDLDではなくFicoll遠心分離を使用して実施された場合よりも少なくとも5%短い、E215~222のいずれか一つに記載の方法。
E230. 患者の処置のために十分な数の治療的に活性な細胞を製造するのに必要な時間が、同じ方法が試料組成物から細胞を単離するためにDLDではなくFicoll遠心分離を使用して実施された場合よりも少なくとも10%短い、E215~222のいずれか一つに記載の方法。
E231. 前記方法によって調製された治療的に活性な細胞が患者に投与される場合に、細胞が、DLDの代わりに遠心分離またはエルトリエーション法を使用してアフェレーシス組成物から処理された細胞よりも少なくとも10%少ない老化を示す、E215~230のいずれか一つに記載の方法。
E232. 前記方法によって調製された治療的に活性な細胞が患者に投与される場合に、細胞が、DLDの代わりに遠心分離またはエルトリエーション法を使用して試料組成物から処理された細胞よりも増大した効力を示す、E215~230のいずれか一つに記載の方法。
E233. E215~230のいずれか一つに記載の方法によって調製された治療有効量の治療的に活性な細胞を前記患者に投与することを含む、疾患または症状について患者を処置する方法。
E234. 前記治療的に活性な細胞が幹細胞であり、前記疾患または症状が遺伝性疾患である、E233に記載の方法。
E235. 標的細胞の集団を操作する方法であって、
a)粗液体組成物から標的細胞を単離すること、ここに単離は、細胞のサイズの相違に基づいて粗液体組成物中の他の細胞から標的細胞を分離する1つまたは複数の手段を用いて、マイクロ流体デバイス上で行われ、該単離プロセスにより標的細胞豊富な組成物が得られるものであり、
b)工程a)から得られた標的細胞を、所望の表現形を有するように遺伝子操作すること
を含み、
標的細胞が遺伝子操作される前に遠心分離されないか、あるいは溶出処理されない、方法。
E236. 該標的細胞が白血球または幹細胞である、E235記載の方法。
E237. 該標的細胞がT細胞である、E235記載の方法。
E238. 該粗液体組成物が患者から得られた血液またはアフェレーシス調製物である、E235~237のいずれか一つに記載の方法。
E239. 標的細胞の単離が、標的細胞に富む組成物がアフェレーシス調製物よりも少なくとも70%少ない血小板の総数を有するような条件下で行われる、E238記載の方法。
E240. 標的細胞に富む組成物中の血小板の総数がアフェレーシス調製物よりも少なくとも90%少ない、E239記載の方法。
E241. 標的細胞に対する血小板の割合が、成分除去製剤よりも少なくとも50%低い、E240記載の方法。
E242. 該標的細胞が、単離後に再簿培養にて拡大されるT細胞である、E238記載の方法。
E243. 培養14日後に得られるT細胞の数が、遠心分離工程を含むプロセスによってT細胞が単離される手順よりも少なくとも2倍多い、E242記載の方法。
E244. 培養14日後に得られるT細胞の数が、遠心分離工程を含むプロセスによってT細胞が単離される手順よりも少なくとも4倍多い、E242記載の方法。
E245. 培養中のT細胞の総数に対するメモリーT細胞のパーセンテージが、遠心分離工程を含むプロセスによってT細胞が単離される手順よりも少なくとも10%高い、E244記載の方法。
E246. 培養中のT細胞の総数に対するメモリーT細胞のパーセンテージが、遠心分離工程を含むプロセスによってT細胞が単離される手順よりも少なくとも20%高い、E244記載の方法。
E247. 標的細胞が富化された組成物中の細胞がベクターにて形質転換されて組換え表現形を示す場合、所望の表現形を示す標的細胞の収量が、遠心分離により単離された同じ細胞よりも少なくとも20%高い、E235~246のいずれか一つに記載の方法。
E248. アフェレーシス試料の収集が完了した時から、マイクロ流体デバイスを用いる分離が行われるまでに1時間以内が経過する、E238~247のいずれか一つに記載の方法。
E249. 患者からのアフェレーシス試料の取得が完了してから標的細胞の単離が完了するまでの経過時間が4時間以内である、E238~247のいずれか一つに記載の方法。
E250. 患者からのアフェレーシス試料の取得が完了してから細胞が遺伝子操作されるまでの経過時間が4時間以内である、E238~247のいずれか一つに記載の方法。
E251. CAR T細胞の調製方法であって、
a)アフェレーシスにより患者から粗液体組成物を得ること、ここに該試料はT細胞を含むものであり、
b)該粗液体組成部物からT細胞を単離すること、ここに該単離は、サイズの相違に基づいてT細胞を粗液体組成物中の血小板および他の細胞から分子する1つ以上の手順を用いて、マイクロ流体デバイス上で行われ、該単離によりT細胞が豊富化され血小板が減少した組成物が得られるものであり、
c)工程a)で得られた標的細胞を遺伝子操作して、それらの表面上にキメラ抗原受容体(CARs)を生成させること、ここに遺伝子操作前のいかなる工程においてもT細胞が遠心分離されないか、あるいは溶出処理されず、
d)遺伝子操作されたT細胞の数を増大させること、
e)工程d)で得られた培養細胞を収集すること
を含む方法。
E252. 工程c)において、患者に投与するための医薬組成物中に移されることによりT細胞が収集される、E251記載の方法。
E253. 収集前に細胞が凍結されない、E251またはE252記載の方法。
E254. 血小板の少なくとも90%が工程b)で除去される、E251~253のいずれか一つに記載の方法。
E255. 培養前または培養中に細胞がT細胞活性化因子または担体に曝露される、E251~254のいずれか一つに記載の方法。
E256. 該活性化剤も該担体も、磁気ビーズにまたは粒子に結合されていない、E255記載の方法。
E257. マイクロ流体デバイスの使用を含まない方法によって細胞が単離または濃縮される手順と比較して、少なくとも1日前にCAR T細胞が患者への投与に利用可能である、E251~256のいずれか一つに記載の方法。
E258. マイクロ流体デバイスの使用を含まない方法によって細胞が単離または濃縮される手順と比較して、少なくとも3日前にCAR T細胞が患者への投与に利用可能である、E251~256のいずれか一つに記載の方法。
E259. 工程d)において、培養14日後に得られるCAR T細胞の数が、Ficoll遠心分離を用いて得られる数よりも少なくとも2倍多い、E251~258のいずれか一つに記載の方法。
E260. 工程d)において、培養14日後に得られるCAR T細胞の数が、Ficoll遠心分離を用いて得られる数よりも少なくとも4倍多い、E251~258のいずれか一つに記載の方法。
E261. T細胞およびCAR T細胞が、患者に投与される前に決して凍結されない、E251~260のいずれか一つに記載の方法。
E262. 患者の処置のためのCAR T細胞を調製する方法であって、
a)アフェレーシスにより患者から粗液体組成物を得ること、ここに該試料はT細胞を含むものであり、
b)該粗液体組成部物からT細胞を単離すること、ここに該単離は、サイズの相違に基づいてT細胞を粗液体組成物中の血小板および他の細胞から分子する1つ以上の手順を用いて、マイクロ流体デバイス上で行われ、該単離によりT細胞が豊富化され血小板が減少した組成物が得られるものであり、
c)工程a)で得られた標的細胞を遺伝子操作して、それらの表面上にキメラ抗原受容体(CARs)を生成させること、ここに遺伝子操作前のいかなる工程においてもT細胞が遠心分離されないか、あるいは溶出処理されず、
d)遺伝子操作されたT細胞の数を増大させること、
e)サイズの相違に基づいてT細胞を試薬から分離する1つ以上の手順を用いて、マイクロ流体デバイス上でT細胞を分離すること
を含む方法。
E263. 細胞が、患者への投与のために医薬組成物中に移されるまで凍結されない、E262記載の方法。
E264. 細胞がいかなる工程においても凍結されない、E262記載の方法。
E265. マイクロ流体デバイスの使用を含まない方法によって細胞が単離または濃縮される手順と比較して、プロセスが少なくとも3日早く完了する、E262~264のいずれか一つに記載の方法。
E266. マイクロ流体デバイスの使用を含まない方法によって細胞が単離または濃縮される手順と比較して、少なくとも1日前にCAR T細胞が患者への投与に利用可能である、E262~265のいずれか一つに記載の方法。
E267. マイクロ流体デバイスの使用を含まない方法によって細胞が単離または濃縮される手順と比較して、少なくとも3日前にCAR T細胞が患者への投与に利用可能である、E262~265のいずれか一つに記載の方法。
E268. 工程b)において、白血球に対する血小板の割合が、遠心分離または溶出処理を用いて得られる割合よりも少なくとも50%低い生成物組成物が得られる、E262~267のいずれか一つに記載の方法。
E269. 患者の処置のための十分な数のCAR T細胞を産生するのに必要な時間が、Ficoll遠心分離により単離された細胞を用いて同じ方法が行われる場合よりも少なくとも5%短い、E262~268のいずれか一つに記載の方法。
E270. 患者の処置のための十分な数のCAR T細胞を産生するのに必要な時間が、アフェレーシス出発材料から細胞を単離するためにFicoll遠心分離を用いて同じ方法が行われる場合よりも少なくとも10%短い、E262~269のいずれか一つに記載の方法。
E271. 該方法によって調製された細胞が患者に投与されるとき、それらの細胞が、遠心分離または溶出処理を用いてアフェレーシス組成物から処理された細胞よりも少なくとも10%少ない老化を示す、E262~270のいずれか一つに記載の方法。
E272. E235~271のいずれか一つに記載の方法によって調製された治療上有効量の細胞を患者に投与することを含む、疾病または症状について患者を処置する方法。
E273. 該疾病または症状ががんである、E272記載の方法。
この研究は、CAR-T細胞製造に欠かせないアフェレーシス試料に焦点を合わせている。ドナーの健康、疾患状態、および過去の化学療法に関連した固有の可変性は全て、白血球アフェレーシス収集の品質、およびおそらく、製造プロトコールにおける様々な工程の効率に影響を及ぼす(Levine, et al., Mol. Therapy: Meth. Clin. Dev. 4:92-101 (2017))。自動化DLD白血球濃縮をストレス試験するために、残留白血球(LRSチャンバー画分)を、血小板アフェレーシス献血から収集し、その血小板アフェレーシスは、一般的に、正常に近い赤血球カウント数、10~20倍のリンパ球および単球を有し、顆粒球をほとんど有しない。それらはまた、正常な末梢血と比較して、約10倍の血小板カウント数を有する。
マイクロチップデザインおよび製作:この研究に用いられるDLDアレイは、単一ゾーンの鏡映型菱形ポストのデザインからなった(D'Silva, J., 「Throughout Microfluidic Capture of Rare Cells from Large Volumes of Blood」; A Dissertation Presented to the Faculty of Princeton University in Candidacy for the Degree of Doctor of Philosophy (2016)参照)。14レーンのDLDデバイスを生じる、チップあたり14個の並列アレイがあった(図1D)。デバイスは、ポスト間の16μmの間隙、および1/42傾斜を有するようにデザインされ、結果として、約4μmの臨界直径を生じた。プラスチックDLDデバイスを、ソフトエンボス加工と呼ばれるプロセスを用いて作製した。まず、プラスチックDLDマイクロチップについてのシリコン(Si)マスターを、標準フォトリソグラフィの深掘り反応性イオンエッチング技術を用いて作製した(Princeton University、PRISM)。その後、シリコンマスター上のフィーチャーを、Siフィーチャーの上にエラストマーを流し込み、硬化させることにより、ソフト弾性鋳型(Edge Embossing、Medford、MA)へ転写した。エラストマーを剥がして、シリコンマスターの再利用可能なネガティブインプリントが生じた。プラスチックブランクシートをエラストマー鋳型の間に置き、その後、圧力と温度の組合せを用いて、そのプラスチックを、ソフトエラストマーネガティブ鋳型のフィーチャー(ウェル)へ押し出し成形して、オリジナルのシリコンマスターのポジティブフィーチャーおよび深さを複製した。その後、そのソフトツールを、プラスチックデバイスから剥がして、マイクロポストのアレイの周りのフローチャネルおよび溝のパターンを有する、深さ約100μmまで表面エンボス加工されたプラスチックの平らな一片を生成した(図1D、挿入図)。マイクロチップの注入口末端および出口末端への流体アクセスのためにポートを作製した。超音波処理によるクリーニング後、デバイスを、感熱性で親水性の接着材(ARFlow Adhesives Research、Glen Rock、PA)で覆った。チップ全体は40×75mm、厚さ1mmであり、クレジットカードのサイズより小さかった。
アフェレーシス産物のDLDマイクロチップおよびFicoll処理
DLDおよびFicoll分離方法を用いて、12人の異なる正常なドナーから得られた12個のLRS試料を処理した。受け取られ、かつ処理されたそれらの12個の試料のうち、11個の試料は、それぞれ、およそ148.7×103個/μLのWBCカウント数および2.52×106個/μLの血小板カウント数の平均値に密集した(図2A、2B)。313.3×103個/μLのWBCカウント数および4.87×106個/μLの血小板カウント数を有する12番目の試料は、散布図において赤色三角形として見ることができる(図2A)。この試料は、処理の時点で、十分凝集しており、急速に20μmプレフィルターを詰まらせ、したがって、DLDに十分には流入しなかった。入力試料の顕微鏡検査により、この試料が、25~50μmのサイズの範囲である血小板-WBC凝集体が充満していることが示され、250μm直径の規模の大きさの多数の凝集体が観察された(図2C、2D)。さらに、WBCカウント数と血小板カウント数の両方は、平均WBCカウント数および平均血小板カウント数より3標準偏差、高かった。四分位方法を用いて、この試料を、軽度の異常値として分類した;異常値についてのGrubbs検定および0.05のαレベルを用いて、この試料をまた、異常値として分類した20。結果として、このドナーを、極めて高いWBCカウント数および血小板カウント数、ならびに凝集が過度にひどく、かつ損傷していることに基づいて、本研究から排除した。
DLDまたはFicoll濃縮後、細胞を、CD3/CD28磁気ビーズを用いて、CD3+細胞あたり3.2個のビーズの目安で、60分間、活性化し、分離し、その後、プレーティングの前にカウントした。フローサイトメーターへのアクセスの制限および産物細胞カウント数における潜在的ビーズ干渉に関する懸念により、本発明者らは、入力物画分と非磁気画分の両方をカウントし、90%の効率での磁気分離(製造会社が報告した効率に基づいた)の仮定を用いて、引き算により磁石に結合したT細胞の数を得ることにより、T細胞カウント数を推定した。正確なT細胞カウント数を、培養へのプレーティング後に、フローサイトメトリにより、およびコールターカウンターによる絶対カウント数×%CD3陽性細胞を用いて、決定した;これらのカウント数は、最初の磁気CD3+細胞デプレションプロセスがたった44%効率であったことを確立した(表2)。これは、CD3+細胞あたり3.2個のビーズという目安に関係する最初の計算が、実際、DLD画分とFicoll画分の両方について平均して2.3個であり(目安とされた数よりT細胞あたり少ないビーズ)、直接的磁石画分においては5:1比(目安とされた数よりT細胞あたり有意に多いビーズ)であることを意味し、DLDアームとFicollアームの両方と比較して、直接的磁石画分に、さらにより高い増殖倍率を生じさせた可能性がある。
原理
以前に、DLD単離および精製に由来するWBCは、健常であり、CD3/CD28抗体による活性化に応答し、それらのTcm(Tセントラルメモリー)表現型に分化することが見いだされている(doi.org/10.1177/2472630317751214にオンライン公開された、Campos-Gonzalez, et al., SLAS, January 23, 2018)。さらに、IL-2の存在下で、Tcm細胞は、Ficollのように、他の方法に由来する細胞にしたがっておよび同様に、拡張および増殖する。
2つの異なる白血球除去システムアフェレーシス(「LRS-アフェレーシス」)試料は、コントロールとして、または2.0mM EDTA中のいずれかでローカルの血液バンクから収集された。全4つの試料を、DLD処理およびFicoll勾配遠心分離という2つの異なる方法で並行して同じように処理した。血液バンクによって提供された元の血小板:WBC比に注釈が付けられ、コールターカウンター測定によって確認された。
DLDを使用して得た白血球は、Ficollを使用して得た白血球よりも一貫して少ない血小板を示した(図19-21参照)。結果はまた、Ficollからの対応物と比較して、DLDに由来するT細胞の明らかに優れた増殖を証明する(図22)。さらに、DLD単離細胞への血小板のバック付加は、血小板を含まないDLD細胞と同じレベルまで拡大する能力が低下した(図22)。これらの結果は、血液産物のDLD処理中のより効率的な血小板減少が、CD3/CD28による活性化およびIL-2による拡大により応答する白血球を生産するという仮説をサポートする。
Claims (28)
- 以下の工程を含む、標的細胞の集団を操作するインビトロ方法:
a)標的細胞を粗流体組成物から単離する工程であって、単離手順が、マイクロ流体デバイス上で決定論的横置換(DLD)を実施することを含み、前記デバイスが、
i)試料注入口から1つまたは複数の流体出口へ延びる少なくとも1個のチャネルであって、前記チャネルが第1の壁および前記第1の壁と反対側の第2の壁によって囲まれている、チャネル;
ii)前記チャネルにおいて、いくつもの行(row)をなして配列された障害物のアレイであって、障害物のそれぞれの次の行が、前の行に対して横方向へシフトしており、前記障害物が、前記粗流体組成物が前記デバイスの注入口にアプライされ、前記チャネルを流体的に通過する時、標的細胞が、濃縮された産物が収集される1つまたは複数の収集出口へ流れ、前記標的細胞とは異なるサイズである混入細胞または粒子が、前記収集出口から切り離されているもう1つの廃棄物出口へ流れるような様式で配置されている、障害物のアレイ
を含む、工程;
b)前記収集出口から得られた標的細胞を、所望の表現型を有するように遺伝子操作する工程;および
c)該標的細胞をそれらの数を増加させるように培養する工程;
ここでセントラルメモリーT細胞である遺伝子操作されかつ増殖させた標的細胞のCD3陽性T細胞のパーセンテージが、Ficoll密度勾配遠心分離または直接的磁石によって同じ粗流体組成物から単離される遺伝子操作されかつ増殖させた細胞集団中のセントラルメモリーT細胞であるCD3陽性T細胞のパーセンテージより高い。 - 以下の工程を含む、標的細胞の集団を操作するインビトロ方法:
a)標的細胞を粗流体組成物から単離する工程であって、単離手順が、マイクロ流体デバイス上で決定論的横置換(DLD)を実施することを含み、前記デバイスが、
i)試料注入口から1つまたは複数の流体出口へ延びる少なくとも1個のチャネルであって、前記チャネルが第1の壁および前記第1の壁と反対側の第2の壁によって囲まれている、チャネル;
ii)前記チャネルにおいて、いくつもの行(row)をなして配列された障害物のアレイであって、障害物のそれぞれの次の行が、前の行に対して横方向へシフトしており、前記障害物が、前記粗流体組成物が前記デバイスの注入口にアプライされ、前記チャネルを流体的に通過する時、標的細胞が、濃縮された産物が収集される1つまたは複数の収集出口へ流れ、前記標的細胞とは異なるサイズである混入細胞または粒子が、前記収集出口から切り離されているもう1つの廃棄物出口へ流れるような様式で配置されている、障害物のアレイ
を含む、工程;
b)前記収集出口から得られた標的細胞を、所望の表現型を有するように遺伝子操作する工程;および
c)該標的細胞をそれらの数を増加させるように培養する工程;
ここで遺伝子操作されかつ増殖させた標的細胞のCD3陽性細胞の48%より多くが、セントラルメモリーT細胞である。 - 以下の工程を含む、標的細胞の集団を操作するインビトロ方法:
a)標的細胞を粗流体組成物から単離する工程であって、単離手順が、マイクロ流体デバイス上で決定論的横置換(DLD)を実施することを含み、前記デバイスが、
i)試料注入口から1つまたは複数の流体出口へ延びる少なくとも1個のチャネルであって、前記チャネルが第1の壁および前記第1の壁と反対側の第2の壁によって囲まれている、チャネル;
ii)前記チャネルにおいて、いくつもの行(row)をなして配列された障害物のアレイであって、障害物のそれぞれの次の行が、前の行に対して横方向へシフトしており、前記障害物が、前記粗流体組成物が前記デバイスの注入口にアプライされ、前記チャネルを流体的に通過する時、標的細胞が、濃縮された産物が収集される1つまたは複数の収集出口へ流れ、前記標的細胞とは異なるサイズである混入細胞または粒子が、前記収集出口から切り離されているもう1つの廃棄物出口へ流れるような様式で配置されている、障害物のアレイ
を含む、工程;
b)前記収集出口から得られた標的細胞を、所望の表現型を有するように遺伝子操作する工程;および
c)該標的細胞をそれらの数を増加させるように培養する工程;
ここでセントラルメモリーT細胞である遺伝子操作されかつ増殖させた標的細胞のCD3陽性T細胞のパーセンテージが、Ficoll密度勾配遠心分離によって同じ粗流体組成物から単離される遺伝子操作されかつ増殖させた細胞集団中のセントラルメモリーT細胞であるCD3陽性T細胞のパーセンテージの2倍高い。 - 以下の工程を含む、標的細胞の集団を操作するインビトロ方法:
a)標的細胞を粗流体組成物から単離する工程であって、単離手順が、マイクロ流体デバイス上で決定論的横置換(DLD)を実施することを含み、前記デバイスが、
i)試料注入口から1つまたは複数の流体出口へ延びる少なくとも1個のチャネルであって、前記チャネルが第1の壁および前記第1の壁と反対側の第2の壁によって囲まれている、チャネル;
ii)前記チャネルにおいて、いくつもの行(row)をなして配列された障害物のアレイであって、障害物のそれぞれの次の行が、前の行に対して横方向へシフトしており、前記障害物が、前記粗流体組成物が前記デバイスの注入口にアプライされ、前記チャネルを流体的に通過する時、標的細胞が、濃縮された産物が収集される1つまたは複数の収集出口へ流れ、前記標的細胞とは異なるサイズである混入細胞または粒子が、前記収集出口から切り離されているもう1つの廃棄物出口へ流れるような様式で配置されている、障害物のアレイ
を含む、工程;
b)前記収集出口から得られた標的細胞を、所望の表現型を有するように遺伝子操作する工程;および
c)該標的細胞をそれらの数を増加させるように培養する工程;
ここでセントラルメモリーT細胞である遺伝子操作されかつ増殖させた標的細胞のCD3陽性T細胞のパーセンテージが、Ficoll密度勾配遠心分離によって同じ粗流体組成から単離される遺伝子操作されかつ増殖させた細胞集団中のセントラルメモリーT細胞であるCD3陽性T細胞のパーセンテージの少なくとも1.5倍高い。 - 前記所望の表現型を示す標的細胞の収率が、Ficoll遠心分離により単離され、かつDLDに供されていない同一の細胞より少なくとも10%高い、請求項1~4のいずれか一項に記載の方法。
- 前記粗流体組成物が、血液、または血液にアフェレーシスもしくは白血球アフェレーシスを実施することにより取得されている組成物である、請求項1~5のいずれか一項に記載の方法。
- 前記標的細胞が白血球である、請求項1~6のいずれか一項に記載の方法。
- 前記標的細胞が、B細胞、T細胞、NK細胞、単球、または前駆細胞を含む、請求項1~6のいずれか一項に記載の方法。
- 前記標的細胞が樹状細胞を含む、請求項1~6のいずれか一項記載の方法。
- 前記粗流体組成物が患者から取得されている、請求項1~9のいずれか一項記載の方法。
- 前記粗流体組成物における標的細胞が、形質導入またはトランスフェクションされる前に担体と結合していない、請求項10に記載の方法。
- 標的細胞に、DLDを実施する前に、DLD分離を促進または補完するように、1つまたは複数の担体を結合させる、請求項10に記載の方法。
- 標的細胞に、DLDを実施した後で、かつそれらを形質導入またはトランスフェクションする前かまたは後のいずれかで、DLD分離を促進または補完するように、1つまたは複数の担体を結合させる、請求項11に記載の方法。
- 前記1つまたは複数の担体が、前記標的細胞と特異的に結合する親和性物質を表面上に含む、請求項12または13に記載の方法。
- 前記物質が、抗体、アクチベーター、ハプテン、またはアプタマーである、請求項14に記載の方法。
- 前記担体の直径が、標的細胞の直径と少なくとも同じ長さである、請求項12~15のいずれか一項に記載の方法。
- 前記担体の全部の直径が、標的細胞の直径の50%以下の長さである、請求項12~15のいずれか一項に記載の方法。
- 前記担体の全部の直径が、標的細胞の直径の少なくとも2倍の長さである、請求項12~15のいずれか一項に記載の方法。
- 前記担体の全部の直径が、標的細胞の直径の25%以下の長さである、請求項12~15のいずれか一項に記載の方法。
- 担体の1つの群が、標的細胞と少なくとも同じ長さの直径を有し、担体の第2の群が、標的細胞の直径の50%以下の長さの直径を有する、請求項12~15のいずれか一項に記載の方法。
- 担体の1つの群が、標的細胞の少なくとも2倍の長さの直径を有し、担体の第2の群が、標的細胞の25%以下の長さの直径を有する、請求項12~15のいずれか一項に記載の方法。
- 前記担体が、コラーゲンまたは多糖でできている、請求項12~21のいずれか一項に記載の方法。
- 前記担体が、ゼラチンまたはアルギン酸塩でできている、請求項12~22のいずれか一項に記載の方法。
- 粗流体組成物が患者から取得され、前記粗流体組成物の取得が完了した時点から、標的細胞に初めて担体を結合させるまで、4時間より長く経過していない、請求項12~23のいずれか一項に記載の方法。
- 粗流体組成物が、患者の血液から引き出されたアフェレーシスまたは白血球アフェレーシス産物であり、アフェレーシスまたは白血球アフェレーシスが完了した時点から標的細胞に初めて担体を結合させるまで、4時間より長く経過していない、請求項12~23のいずれか一項に記載の方法。
- 粗流体組成物が患者から取得され、前記粗流体組成物の取得が完了した時点から、初めて標的細胞がトランスフェクションまたは形質導入される時まで、5時間より長く経過していない、請求項1~25のいずれか一項に記載の方法。
- 粗流体組成物が、患者の血液から引き出されたアフェレーシスまたは白血球アフェレーシス産物であり、アフェレーシスまたは白血球アフェレーシスが完了した時点から、初めて標的細胞がトランスフェクションまたは形質導入される時まで、5時間より長く経過していない、請求項1~25のいずれか一項に記載の方法。
- 初めて標的細胞がトランスフェクションまたは形質導入される時まで、4時間より長く経過していない、請求項26または27に記載の方法。
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CN113814010B (zh) * | 2021-08-30 | 2022-10-11 | 复旦大学 | 多细胞、多组织共培养仿生微流控芯片及其制备方法 |
WO2023114919A1 (en) * | 2021-12-15 | 2023-06-22 | Gpb Scientific, Inc. | Label-free cell isolation |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2014145152A2 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-18 | Gpb Scientific, Llc | On-chip microfluidic processing of particles |
WO2016019393A1 (en) | 2014-08-01 | 2016-02-04 | Gpb Scientific, Llc | Methods and systems for processing particles |
US20160139012A1 (en) | 2013-03-15 | 2016-05-19 | The Trustees Of Princeton University | Methods and devices for high throughput purification |
WO2016136273A1 (ja) | 2015-02-27 | 2016-09-01 | 凸版印刷株式会社 | 細胞を分離する方法、およびそのためのデバイス |
WO2017035262A1 (en) | 2015-08-24 | 2017-03-02 | Gpb Scientific, Llc | Methods and devices for multi-step cell purification and concentration |
Family Cites Families (112)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4675286A (en) | 1985-01-28 | 1987-06-23 | Aspen Diagnostics, Inc. | Fetal cell separation and testing |
US5427663A (en) | 1993-06-08 | 1995-06-27 | British Technology Group Usa Inc. | Microlithographic array for macromolecule and cell fractionation |
US5707799A (en) | 1994-09-30 | 1998-01-13 | Abbott Laboratories | Devices and methods utilizing arrays of structures for analyte capture |
US5662813A (en) | 1994-10-21 | 1997-09-02 | Bioseparations, Inc. | Method for separation of nucleated fetal erythrocytes from maternal blood samples |
CN1153064C (zh) | 1996-04-05 | 2004-06-09 | 约翰斯·霍普金斯大学 | 富集稀少细胞的方法 |
AU731766B2 (en) * | 1997-01-24 | 2001-04-05 | Asahi Kasei Medical Co., Ltd. | Cell separation method |
US5968820A (en) | 1997-02-26 | 1999-10-19 | The Cleveland Clinic Foundation | Method for magnetically separating cells into fractionated flow streams |
US6241894B1 (en) | 1997-10-10 | 2001-06-05 | Systemix | High gradient magnetic device and method for cell separation or purification |
CA2318779C (en) | 1998-01-22 | 2009-08-25 | Luminex Corporation | Microparticles with multiple fluorescent signals |
DE10035433C2 (de) | 2000-07-20 | 2002-07-18 | Tuma Wolfgang | Schonende Hochanreicherung von fetalen Zellen aus pripherem Blut und Verwendung derselben |
JP2004518663A (ja) | 2000-12-18 | 2004-06-24 | トラスティーズ オブ プリンストン ユニバーシティ | 非対称なパルスフィールド電気泳動を使用した巨大分子の分画 |
US6913697B2 (en) | 2001-02-14 | 2005-07-05 | Science & Technology Corporation @ Unm | Nanostructured separation and analysis devices for biological membranes |
US6685841B2 (en) | 2001-02-14 | 2004-02-03 | Gabriel P. Lopez | Nanostructured devices for separation and analysis |
US6881315B2 (en) | 2001-08-03 | 2005-04-19 | Nec Corporation | Fractionating apparatus having colonies of pillars arranged in migration passage at interval and process for fabricating pillars |
US7863012B2 (en) | 2004-02-17 | 2011-01-04 | Veridex, Llc | Analysis of circulating tumor cells, fragments, and debris |
WO2003018757A2 (en) | 2001-08-23 | 2003-03-06 | Immunivest Corporation | Stabilization of cells and biological specimens for analysis |
ATE479490T1 (de) | 2001-10-11 | 2010-09-15 | Aviva Biosciences Corp | Verfahren zum trennen von seltenen zellen von fluidproben |
US7166443B2 (en) | 2001-10-11 | 2007-01-23 | Aviva Biosciences Corporation | Methods, compositions, and automated systems for separating rare cells from fluid samples |
CA2469878C (en) | 2001-12-11 | 2011-06-28 | Netech Inc. | Blood cell separating system |
US7318902B2 (en) | 2002-02-04 | 2008-01-15 | Colorado School Of Mines | Laminar flow-based separations of colloidal and cellular particles |
EP2484751B1 (en) | 2002-04-16 | 2018-11-28 | Princeton University | Method of analysing polynucleotides |
US20040019300A1 (en) | 2002-07-26 | 2004-01-29 | Leonard Leslie Anne | Microfluidic blood sample separations |
US20040043506A1 (en) | 2002-08-30 | 2004-03-04 | Horst Haussecker | Cascaded hydrodynamic focusing in microfluidic channels |
ATE531257T1 (de) | 2002-09-27 | 2011-11-15 | Gen Hospital Corp | Mikrofluidische vorrichtung zur zelltrennung und verwendungen davon |
WO2004037374A2 (en) | 2002-10-23 | 2004-05-06 | The Trustees Of Princeton University | Method for continuous particle separation using obstacle arrays asymmetrically aligned to fields |
MXPA05012080A (es) * | 2003-05-08 | 2006-02-22 | Xcyte Therapies Inc | Generacion y aislamiento de celulas t especificas al antigeno. |
JP2007503597A (ja) | 2003-06-13 | 2007-02-22 | ザ ジェネラル ホスピタル コーポレーション | 血液から赤血球および血小板をサイズに基づいて除去するための微少流体システム |
US7906345B2 (en) | 2003-11-12 | 2011-03-15 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Magnetic nanoparticles, magnetic detector arrays, and methods for their use in detecting biological molecules |
CA2557819A1 (en) | 2004-03-03 | 2005-09-15 | The General Hospital Corporation | Magnetic device for isolation of cells and biomolecules in a microfluidic environment |
US20060121624A1 (en) | 2004-03-03 | 2006-06-08 | Huang Lotien R | Methods and systems for fluid delivery |
EP1765503A2 (en) | 2004-03-03 | 2007-03-28 | The General Hospital Corporation | System for delivering a diluted solution |
JP2008526251A (ja) | 2005-01-18 | 2008-07-24 | バイオセプト インコーポレイティッド | パターン化されたポストを有するマイクロチャネルを用いた細胞分離 |
US20070026414A1 (en) | 2005-07-29 | 2007-02-01 | Martin Fuchs | Devices and methods for enrichment and alteration of circulating tumor cells and other particles |
US20070026418A1 (en) | 2005-07-29 | 2007-02-01 | Martin Fuchs | Devices and methods for enrichment and alteration of circulating tumor cells and other particles |
GB2427468B (en) | 2005-04-05 | 2011-03-02 | Cellpoint Diagnostics | Cell separation device and method for the detection of EpCAM positive cells |
US20070026417A1 (en) | 2005-07-29 | 2007-02-01 | Martin Fuchs | Devices and methods for enrichment and alteration of circulating tumor cells and other particles |
US20070196820A1 (en) | 2005-04-05 | 2007-08-23 | Ravi Kapur | Devices and methods for enrichment and alteration of cells and other particles |
US20070026415A1 (en) | 2005-07-29 | 2007-02-01 | Martin Fuchs | Devices and methods for enrichment and alteration of circulating tumor cells and other particles |
US20060223178A1 (en) | 2005-04-05 | 2006-10-05 | Tom Barber | Devices and methods for magnetic enrichment of cells and other particles |
US20070026413A1 (en) | 2005-07-29 | 2007-02-01 | Mehmet Toner | Devices and methods for enrichment and alteration of circulating tumor cells and other particles |
ATE490462T1 (de) | 2005-04-08 | 2010-12-15 | Medical Discovery Partners Llc | Verfahren zum anreichern von subpopulationen seltener zellen aus dem blut |
US8354075B1 (en) | 2005-04-21 | 2013-01-15 | California Institute Of Technology | Streamline-based microfluidic device |
TWI273484B (en) | 2005-06-15 | 2007-02-11 | Inventec Corp | Method for increasing system performance |
US20070059680A1 (en) | 2005-09-15 | 2007-03-15 | Ravi Kapur | System for cell enrichment |
US20070026416A1 (en) | 2005-07-29 | 2007-02-01 | Martin Fuchs | Devices and methods for enrichment and alteration of circulating tumor cells and other particles |
US8921102B2 (en) | 2005-07-29 | 2014-12-30 | Gpb Scientific, Llc | Devices and methods for enrichment and alteration of circulating tumor cells and other particles |
US7993821B2 (en) | 2005-08-11 | 2011-08-09 | University Of Washington | Methods and apparatus for the isolation and enrichment of circulating tumor cells |
US20070059719A1 (en) | 2005-09-15 | 2007-03-15 | Michael Grisham | Business methods for prenatal Diagnosis |
US20070059774A1 (en) | 2005-09-15 | 2007-03-15 | Michael Grisham | Kits for Prenatal Testing |
US20070059718A1 (en) | 2005-09-15 | 2007-03-15 | Mehmet Toner | Systems and methods for enrichment of analytes |
AU2006292394A1 (en) | 2005-09-15 | 2007-03-29 | Artemis Health, Inc. | Systems and methods for enrichment of analytes |
US20070059716A1 (en) | 2005-09-15 | 2007-03-15 | Ulysses Balis | Methods for detecting fetal abnormality |
US20070059781A1 (en) | 2005-09-15 | 2007-03-15 | Ravi Kapur | System for size based separation and analysis |
US7837944B2 (en) | 2006-05-05 | 2010-11-23 | Wayne State University | Device for separating and concentrating microfluidic particles |
WO2008016414A2 (en) | 2006-06-01 | 2008-02-07 | The Trustees Of Princeton University | Apparatus and method for continuous particle separation |
US20080090239A1 (en) | 2006-06-14 | 2008-04-17 | Daniel Shoemaker | Rare cell analysis using sample splitting and dna tags |
WO2008014516A2 (en) | 2006-07-28 | 2008-01-31 | Living Microsystems, Inc. | Selection of cells using biomarkers |
US7807454B2 (en) | 2006-10-18 | 2010-10-05 | The Regents Of The University Of California | Microfluidic magnetophoretic device and methods for using the same |
US20100233693A1 (en) | 2007-04-16 | 2010-09-16 | On-O-ity, Inc | Methods for diagnosing, prognosing, or theranosing a condition using rare cells |
EP2142279A2 (en) | 2007-04-16 | 2010-01-13 | The General Hospital Corporation d/b/a Massachusetts General Hospital | Systems and methods for particle focusing in microchannels |
US20110213288A1 (en) | 2007-04-23 | 2011-09-01 | The Board Of Regents, The University Of Texas System | Device And Method For Transfecting Cells For Therapeutic Uses |
EP2227334B1 (en) | 2007-12-07 | 2011-10-12 | Miltenyi Biotec GmbH | A centrifuge for separating a sample into at least two components |
EP2229441B1 (en) | 2007-12-12 | 2014-10-01 | The Board of Trustees of The Leland Stanford Junior University | Method and apparatus for magnetic separation of cells |
US8008032B2 (en) | 2008-02-25 | 2011-08-30 | Cellective Dx Corporation | Tagged ligands for enrichment of rare analytes from a mixed sample |
GB0803730D0 (en) | 2008-02-29 | 2008-04-09 | Airbus Uk Ltd | Shock bump array |
FR2931141B1 (fr) | 2008-05-13 | 2011-07-01 | Commissariat Energie Atomique | Systeme microfluidique et procede pour le tri d'amas de cellules et de preference pour leur encapsulation en continu suite a leur tri |
WO2010006174A2 (en) | 2008-07-10 | 2010-01-14 | Reichenbach Steven H | Method and apparatus for sorting particles using asymmetrical particle shifting |
EP2304414B1 (en) | 2008-07-24 | 2017-03-15 | The Trustees of Princeton University | Bump array device having asymmetric gaps for segregation of particles |
JP2012504956A (ja) | 2008-10-10 | 2012-03-01 | セントレ ナショナル デ ラ レシェルシェ サイエンティフィーク−ディーエーイー | 細胞ソート・デバイス |
US9090663B2 (en) | 2009-04-21 | 2015-07-28 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Systems and methods for the capture and separation of microparticles |
WO2010124155A1 (en) | 2009-04-23 | 2010-10-28 | Logos Energy, Inc. | Lateral displacement array for microfiltration |
WO2010129441A2 (en) | 2009-05-04 | 2010-11-11 | Gpb Scientific, Llc | Method for separating stem cells from their more differentiated progeny using microfluidic devices |
US8801922B2 (en) | 2009-06-24 | 2014-08-12 | State Of Oregon Acting By And Through The State Board Of Higher Education On Behalf Of Oregon State University | Dialysis system |
WO2011063416A2 (en) | 2009-11-23 | 2011-05-26 | The General Hospital Corporation | Microfluidic devices for the capture of biological sample components |
KR101443133B1 (ko) | 2009-12-23 | 2014-11-03 | 사이토베라 인코포레이티드 | 입자여과를 위한 시스템 및 방법 |
WO2011119962A2 (en) | 2010-03-26 | 2011-09-29 | The General Hospital Corporation | Microfluidic enrichment of selected cell populations |
WO2012012801A2 (en) | 2010-07-23 | 2012-01-26 | The Johns Hopkins University | Device for capture, enumeration, and profiling of circulating tumor cells |
US9422517B2 (en) | 2010-07-30 | 2016-08-23 | The General Hospital Corporation | Microscale and nanoscale structures for manipulating particles |
US8480978B2 (en) * | 2010-08-12 | 2013-07-09 | University Of Southern California | Microfluidic fluid separator and related methods |
AU2011292239A1 (en) | 2010-08-15 | 2013-03-21 | Gpb Scientific, Llc | Microfluidic cell separation in the assay of blood |
SG10201510092QA (en) | 2010-12-09 | 2016-01-28 | Univ Pennsylvania | Use of chimeric antigen receptor-modified t cells to treat cancer |
CN103889556A (zh) | 2011-01-06 | 2014-06-25 | Gpb科学有限责任公司 | 在引入亲和性和大小两者的微流体芯片上的循环肿瘤细胞捕获 |
EP2760993A4 (en) | 2011-09-30 | 2015-06-03 | Massachusetts Inst Technology | CELL SORTING THROUGH 3D RIVER AND HAIR ROLLING |
US9149806B2 (en) * | 2012-01-10 | 2015-10-06 | Biopico Systems Inc | Microfluidic devices and methods for cell sorting, cell culture and cells based diagnostics and therapeutics |
MX2014010183A (es) | 2012-02-22 | 2015-03-20 | Univ Pennsylvania | Composiciones y metodos para generar una poblacion persistente de celulas t utiles para el tratamiento de cancer. |
WO2013126774A2 (en) * | 2012-02-24 | 2013-08-29 | President And Fellows Of Harvard College | Microfluidic devices for capture of target species |
WO2014004577A1 (en) | 2012-06-25 | 2014-01-03 | The General Hospital Corporation | Sorting particles using high gradient magnetic fields |
US10072078B2 (en) | 2012-10-24 | 2018-09-11 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | M971 chimeric antigen receptors |
WO2014116183A1 (en) | 2013-01-24 | 2014-07-31 | National University Of Singapore | Microdevices for separation of non-spherical particles and applications thereof |
US20150064153A1 (en) | 2013-03-15 | 2015-03-05 | The Trustees Of Princeton University | High efficiency microfluidic purification of stem cells to improve transplants |
US20170209864A1 (en) | 2013-03-15 | 2017-07-27 | Gpb Scientific, Llc | Methods and systems for processing particles |
US20140342375A1 (en) | 2013-03-15 | 2014-11-20 | University Of Maryland | Microfluidic processing of leukocytes for molecular diagnostic testing |
WO2014186469A2 (en) | 2013-05-14 | 2014-11-20 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Human application of engineered chimeric antigen receptor (car) t-cells |
US10527626B2 (en) * | 2013-07-05 | 2020-01-07 | University Of Washington Through Its Center For Commercialization | Methods, compositions and systems for microfluidic assays |
WO2015058206A1 (en) | 2013-10-18 | 2015-04-23 | The General Hosptial Corporation | Microfluidic sorting using high gradient magnetic fields |
SG2013090790A (en) * | 2013-12-04 | 2015-07-30 | Clearbridge Mfluidics Pte Ltd | A microfluidic device |
US10307760B2 (en) | 2014-01-30 | 2019-06-04 | The General Hospital Corporation | Inertio-elastic focusing of particles in microchannels |
JP6661544B2 (ja) * | 2014-04-24 | 2020-03-11 | ミルテニイ バイオテック ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング | 遺伝子改変したt細胞の自動生成法 |
MX370018B (es) * | 2014-04-25 | 2019-11-28 | Bluebird Bio Inc | Metodos mejorados para la elaboracion de terapias celulares adoptivas. |
CN106535925A (zh) | 2014-05-23 | 2017-03-22 | 佛罗里达大学研究基金会有限公司 | 基于car的免疫治疗 |
ES2813437T3 (es) | 2014-07-11 | 2021-03-23 | Celgene Corp | Métodos para mejorar la eficiencia de la transducción vectorial en linfocitos T |
WO2016022433A1 (en) * | 2014-08-07 | 2016-02-11 | The General Hospital Corporation | Stabilization of whole blood samples |
US20160081314A1 (en) | 2014-09-19 | 2016-03-24 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Chimeric Antigen Receptors |
EP3206705A4 (en) | 2014-10-16 | 2018-05-23 | Piramal Enterprises Limited | Stable injectable composition of bivalirudin and process for its preparation |
JP6744302B2 (ja) | 2014-11-03 | 2020-08-19 | ザ ジェネラル ホスピタル コーポレイション | ミクロ流体装置における粒子の分類 |
AU2016274989A1 (en) | 2015-06-12 | 2017-11-02 | Immunomedics, Inc. | Disease therapy with chimeric antigen receptor (car) constructs and t cells (car-t) or nk cells (car-nk) expressing car constructs |
US10976232B2 (en) | 2015-08-24 | 2021-04-13 | Gpb Scientific, Inc. | Methods and devices for multi-step cell purification and concentration |
CN108463547A (zh) * | 2015-10-28 | 2018-08-28 | 生命技术股份公司 | 通过改变细胞表面信号和信号比选择性扩增不同的t细胞亚群 |
WO2018080997A1 (en) | 2016-10-24 | 2018-05-03 | Gpb Scientific, Llc | Deterministic lateral displacement in the preparation of cells and compositions for therapeutic uses |
CN111065399B (zh) | 2017-09-01 | 2023-11-28 | Gpb科学有限公司 | 使用微流体制备治疗活性细胞的方法 |
CA3099717A1 (en) | 2018-05-13 | 2019-11-21 | Gpb Scientific, Llc | Combined purification and concentration by deterministic lateral displacement with recirculation of product |
EP3820612A4 (en) | 2018-07-12 | 2022-05-04 | GPB Scientific, Inc. | MICROFLUID PROCESSES FOR CELL MANUFACTURE |
-
2018
- 2018-08-22 CN CN201880056966.3A patent/CN111065399B/zh active Active
- 2018-08-22 WO PCT/US2018/047426 patent/WO2019046052A1/en unknown
- 2018-08-22 US US16/108,365 patent/US10844353B2/en active Active
- 2018-08-22 EP EP18851908.6A patent/EP3675876A4/en active Pending
- 2018-08-22 CA CA3074495A patent/CA3074495A1/en active Pending
- 2018-08-22 AU AU2018323875A patent/AU2018323875A1/en not_active Abandoned
- 2018-08-22 JP JP2020512450A patent/JP7393328B2/ja active Active
-
2019
- 2019-10-24 US US16/662,033 patent/US10988734B2/en active Active
-
2020
- 2020-09-02 US US17/009,797 patent/US11149251B2/en active Active
-
2021
- 2021-03-04 US US17/192,691 patent/US11306288B2/en active Active
- 2021-09-06 US US17/467,385 patent/US20220041985A1/en active Pending
-
2023
- 2023-07-27 JP JP2023122659A patent/JP2023159105A/ja active Pending
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2014145152A2 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-18 | Gpb Scientific, Llc | On-chip microfluidic processing of particles |
US20160139012A1 (en) | 2013-03-15 | 2016-05-19 | The Trustees Of Princeton University | Methods and devices for high throughput purification |
WO2016019393A1 (en) | 2014-08-01 | 2016-02-04 | Gpb Scientific, Llc | Methods and systems for processing particles |
WO2016136273A1 (ja) | 2015-02-27 | 2016-09-01 | 凸版印刷株式会社 | 細胞を分離する方法、およびそのためのデバイス |
WO2017035262A1 (en) | 2015-08-24 | 2017-03-02 | Gpb Scientific, Llc | Methods and devices for multi-step cell purification and concentration |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2020532298A (ja) | 2020-11-12 |
US11149251B2 (en) | 2021-10-19 |
US20190071639A1 (en) | 2019-03-07 |
US20200399600A1 (en) | 2020-12-24 |
US20210207094A1 (en) | 2021-07-08 |
US20220041985A1 (en) | 2022-02-10 |
CA3074495A1 (en) | 2019-03-07 |
US10988734B2 (en) | 2021-04-27 |
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