JP7328267B2 - Ｈｉｖ感染症の予防または処置のための三重特異性および／または三価結合タンパク質 - Google Patents

Ｈｉｖ感染症の予防または処置のための三重特異性および／または三価結合タンパク質 Download PDF

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Description

関連出願の相互参照
本願は、その全体が参照により本明細書に組み入れられる、２０１５年１０月２５日に出願した米国仮出願第６２／２４６，１１３号、２０１６年２月２４日に出願した欧州特許出願第ＥＰ１６３０５２１１．１号、２０１６年４月１３日に出願した米国仮出願第６２／３２２，０２９号、および２０１６年５月３日に出願した米国仮出願６２／３３１，１６９号の優先権を主張するものである。
本発明は、米国保健福祉省、国立衛生研究所との共同研究開発契約（ＮＩＡＩＤ ＃２０１４－００３８）を履行することで生じたものである。米国政府は、本発明に一定の権利を有する。
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの配列表の提出
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの以下の提出内容は、その全体が参照により本明細書に組み入れられている：コンピュータ可読形式（ＣＲＦ）の配列表（ファイル名：１８３９５２０２７０４１ＳＥＱＬＩＳＴ．ｔｘｔ、記録日：２０１６年１０月１９日、サイズ：１，０６４ＫＢ）。
本開示は、１つまたはそれ以上のＨＩＶ標的タンパク質に特異的に結合する３つの抗原結合部位を形成する４本のポリペプチド鎖を含む三重特異性および／または三価結合タンパク質であって、該結合タンパク質を形成する第１のポリペプチド対は、交差配向を有する二重可変ドメインを有し、該結合タンパク質を形成する第２のポリペプチド対は、単一の可変ドメインを有する、前記結合タンパク質に関する。本開示は、三重特異性および／または三価結合タンパク質を作製する方法、ならびにＨＩＶ／ＡＩＤＳの処置および／または予防のためのそのような結合タンパク質の使用にも関する。
中和抗体でＨＩＶ／ＡＩＤＳを処置する上での課題の１つは、ＨＩＶ－１ウイルスの高い変異率に起因する潜在的ブレイクスルー感染症である。加えて、ＨＩＶ－１感染後の初期数週間におけるウイルス学的事象は、現在利用可能な併用抗レトロウイルス療法（ｃＡＲＴ）では依然として治らない生涯にわたる慢性感染症の発端となる。これは、少なくとも一部は、ｃＡＲＴにもかかわらず存在し続ける潜伏感染細胞を含む、ウイルス保有宿主の早期確立に起因し、したがって、処置が中断されると再発性感染症に至る。幅広さおよび力価が改善された、新たに発見された抗ＨＩＶ－１中和抗体は、ＨＩＶ／ＡＩＤＳ処置および予防のより多くの選択肢を提供することができるが、ブレイクスルー感染症は、依然として当分野の大きな問題である。
一実施形態では、本開示は、１つまたはそれ以上のＨＩＶ標的タンパク質に特異的に結合する３つの抗原結合部位を形成する４本のポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって、
第１のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ２－Ｌ１－ＶＬ１－Ｌ２－ＣＬ ［Ｉ］
により表される構造を含み、
第２のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ１－Ｌ３－ＶＨ２－Ｌ４－ＣＨ１ ［ＩＩ］
により表される構造を含み、
第３のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ３－ＣＨ１ ［ＩＩＩ］
により表される構造を含み、
第４のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ３－ＣＬ ［ＩＶ］
により表される構造を含み、
式中：
ＶＬ１は、第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ２は、第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ３は、第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＨ１は、第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ２は、第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ３は、第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣＬは、免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣＨ１は、免疫グロブリンＣＨ１重鎖定常ドメインであり；
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４は、アミノ酸リンカーであり；
ここで、式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドは、交差軽鎖－重鎖対を形成する、
前記結合タンパク質を提供する。
一部の実施形態では、第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結されたＦｃ領域をさらに含み、該Ｆｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含む。一部の実施形態では、第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結されたＦｃ領域をさらに含み、該Ｆｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含む。一部の実施形態では、第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、該第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、該第１のＦｃ領域は、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３５４および３６６位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗであり；第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、該第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、該第２のＦｃ領域は、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３４９、３６６、３６８、および４０７位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖである。一部の実施形態では、第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、該第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、該第１のＦｃ領域は、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３４９、３６６、３６８、および４０７位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖであり；第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、該第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、該第２のＦｃ領域は、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３５４および３６６位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗである。一部の実施形態では、第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、該第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、該第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを
含み；該第１および第２のＦｃ領域は、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の４２８および４３４位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓである。
一実施形態では、本開示は、１つまたはそれ以上のＨＩＶ標的タンパク質に特異的に結合する３つの抗原結合部位を形成する４本のポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって、
第１のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ２－Ｌ１－ＶＬ１－Ｌ２－ＣＬ ［Ｉ］
により表される構造を含み、
第２のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ１－Ｌ３－ＶＨ２－Ｌ４－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［ＩＩ］
により表される構造を含み、
第３のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ３－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［ＩＩＩ］
により表される構造を含み、
第４のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ３－ＣＬ ［ＩＶ］
により表される構造を含み、
式中：
ＶＬ１は、第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ２は、第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ３は、第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＨ１は、第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ２は、第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ３は、第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣＬは、免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣＨ１は、免疫グロブリンＣＨ１重鎖定常ドメインであり；
ＣＨ２は、免疫グロブリンＣＨ２重鎖定常ドメインであり；
ＣＨ３は、免疫グロブリンＣＨ３重鎖定常ドメインであり；
ヒンジは、ＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメインを接続する免疫グロブリンヒンジ領域であり；
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４は、アミノ酸リンカーであり；
ここで、式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドは、交差軽鎖－重鎖対を形成する、
前記結合タンパク質を提供する。
一部の実施形態では、第２のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインは、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３５４および３６６位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗであり；第３のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインは、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３４９、３６６、３６８、および４０７位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖである。一部の実施形態では、第２のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインは、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３４９、３６６、３６８、および４０７位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖであり；第３のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインは、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３５４および３６６位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗである。一部の実施形態では、第２および第３のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインはどちらも、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の４２８および４３４位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該ア
ミノ酸置換は、Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓである。
一部の実施形態では、１つまたはそれ以上のＨＩＶ標的タンパク質は、糖タンパク質１２０、糖タンパク質４１および糖タンパク質１６０からなる群から選択される。一部の実施形態では、結合タンパク質は、三重特異性であり、単一ＨＩＶ標的タンパク質上の３つの異なるエピトープに特異的に結合することができる。一部の実施形態では、結合タンパク質は、三重特異性であり、第１のＨＩＶ標的タンパク質上の２つの異なるエピトープおよび第２のＨＩＶ標的タンパク質上の１つのエピトープに特異的に結合することができ、前記第１および第２のＨＩＶ標的タンパク質は異なるものである。一部の実施形態では、結合タンパク質は、三重特異性であり、３つの異なる抗原標的に特異的に結合することができる。一部の実施形態では、結合タンパク質は、１つまたはそれ以上のＨＩＶ標的タンパク質の機能を阻害することができる。一部の実施形態では、ＶＬ１は、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含み、該ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号：２６６、２６７、および２６８に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２６９、２７０、および２７１に記載の配列をそれぞれ；配列番号：５００、５０１、および２７４に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２７５、２７６、および２７７に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２８１、２８２、および２８３に記載の配列をそれぞれ；または配列番号：２７８、２７９、および２８０に記載の配列をそれぞれ含む。一部の実施形態では、ＶＬ１は、配列番号：５１２、５１３、５１４、５１５、５１６、５１７、５１８、５１９、５２０、および５２１からなる群から選択される配列を含む軽鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含む。一部の実施形態では、ＶＬ１は、配列番号：５１２、５１３、５１４、５１５、５１６、５１７、５１８、５１９、５２０、および５２１からなる群から選択される配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＶＬ２は、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含み、該ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号：２６６、２６７、および２６８に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２６９、２７０、および２７１に記載の配列をそれぞれ；配列番号：５００、５０１、および２７４に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２７５、２７６、および２７７に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２８１、２８２、および２８３に記載の配列をそれぞれ；または配列番号：２７８、２７９、および２８０に記載の配列をそれぞれ含む。一部の実施形態では、ＶＬ２は、配列番号：５１２、５１３、５１４、５１５、５１６、５１７、５１８、５１９、５２０、および５２１からなる群から選択される配列を含む軽鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含む。一部の実施形態では、ＶＬ２は、配列番号：５１２、５１３、５１４、５１５、５１６、５１７、５１８、５１９、５２０、および５２１からなる群から選択される配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
一部の実施形態では、ＶＬ３は、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含み、該ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号：２６６、２６７、および２６８に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２６９、２７０、および２７１に記載の配列をそれぞれ；配列番号：５００、５０１、および２７４に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２７５、２７６、および２７７に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２８１、２８２、および２８３に記載の配列をそれぞれ；または配列番号：２７８、２７９、および２８０に記載の配列をそれぞれ含む。一部の実施形態では、ＶＬ３は、配列番号：５１２、５１３、５１４、５１５、５１６、５１７、５１８、５１９、５２０、および５２１からなる群から選択される配列を含む軽鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含む。一部の実施形態では、ＶＬ３は、配列番号：５１２、５１３、５１４、５１５、５１６、５１７、５１８、５１９、５２０、および５２１からなる群から選択される配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＶＨ１は、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含み、該ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号：２４８、４９７、および２５０に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２５１、２５２、および２５３に記載の配列をそれぞれ；配列番号：
２５４、２５５、および２５６に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２５４、２５５、および４９８に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２５７、２５８、および２５９に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２６３、２６４、および２６５に記載の配列をそれぞれ；または配列番号：４９９、２６１、および２６２に記載の配列をそれぞれ含む。一部の実施形態では、ＶＨ１は、配列番号：５０２、５０３、５０４、５０５、５０６、５０７、および５０８からなる群から選択される配列を含む重鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含む。一部の実施形態では、ＶＨ１は、配列番号：５０２、５０３、５０４、５０５、５０６、５０７、および５０８からなる群から選択される配列を含む重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＶＨ２は、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含み、該ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号：２４８、４９７、および２５０に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２５１、２５２、および２５３に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２５４、２５５、および２５６に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２５４、２５５、および４９８に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２５７、２５８、および２５９に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２６３、２６４、および２６５に記載の配列をそれぞれ；または配列番号：４９９、２６１、および２６２に記載の配列をそれぞれ含む。一部の実施形態では、ＶＨ２は、配列番号：５０２、５０３、５０４、５０５、５０６、５０７、および５０８からなる群から選択される配列を含む重鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含む。一部の実施形態では、ＶＨ２は、配列番号：５０２、５０３、５０４、５０５、５０６、５０７、および５０８からなる群から選択される配列を含む重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＶＨ３は、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含み、該ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号：２４８、４９７、および２５０に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２５１、２５２、および２５３に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２５４、２５５、および２５６に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２５４、２５５、および４９８に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２５７、２５８、および２５９に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２６３、２６４、および２６５に記載の配列をそれぞれ；または配列番号：４９９、２６１、および２６２に記載の配列をそれぞれ含む。
一部の実施形態では、ＶＨ３は、配列番号：５０２、５０３、５０４、５０５、５０６、５０７、および５０８からなる群から選択される配列を含む重鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含む。一部の実施形態では、ＶＨ３は、配列番号：５０２、５０３、５０４、５０５、５０６、５０７、および５０８からなる群から選択される配列を含む重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＶＬ１は、配列番号：５００の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号：５０１の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号：２７４の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み；ＶＬ２は、配列番号：２７５の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号：２７６の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号：２７７の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み；ＶＬ３は、配列番号：２６６の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号：２６７の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号：２６８の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み；ＶＨ１は、配列番号：２５４の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号：２５５の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号：２５６の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み；ＶＨ２は、配列番号：２５７の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号：２５８の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号：２５９の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み；ＶＨ３は、配列番号：２４８の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号：４９７の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号：２５０の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。一部の実施形態では、ＶＬ１は、配列番号：５１８の軽鎖可変ドメイン配列を含む軽鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含み；ＶＬ２は、配列番号：５１９の軽鎖可変ドメイン配列を含む軽鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含み；ＶＬ３は、配列番号：５１２の軽鎖可変ドメイン配列を含む軽鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含み；ＶＨ１は、配列番号：５０４の重鎖可変ドメイン配列を含む重鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤ
Ｒ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含み；ＶＨ２は、配列番号：５０６の重鎖可変ドメイン配列を含む重鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含み；ＶＨ３は、配列番号：５０２の重鎖可変ドメイン配列を含む重鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含む。一部の実施形態では、ＶＬ１は、配列番号：５１８の配列を含む軽鎖可変ドメインを含み；ＶＬ２は、配列番号：５１９の配列を含む軽鎖可変ドメインを含み；ＶＬ３は、配列番号：５１２の配列を含む軽鎖可変ドメインを含み；ＶＨ１は、配列番号：５０４の配列を含む重鎖可変ドメインを含み；ＶＨ２は、配列番号：５０６の配列を含む重鎖可変ドメインを含み；ＶＨ３は、配列番号：５０２の配列を含む重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＶＬ１は、配列番号：５００の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号：５０１の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号：２７４の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み；ＶＬ２は、配列番号：２７５の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号：２７６の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号：２７７の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み；ＶＬ３は、配列番号：２６９の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号：２７０の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号：２７１の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み；ＶＨ１は、配列番号：２５４の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号：２５５の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号：２５６の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み；ＶＨ２は、配列番号：２５７の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号：２５８の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号：２５９の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み；ＶＨ３は、配列番号：２５１の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号：２５２の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号：２５３の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。
一部の実施形態では、ＶＬ１は、配列番号：５１８の軽鎖可変ドメイン配列を含む軽鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含み；ＶＬ２は、配列番号：５１９の軽鎖可変ドメイン配列を含む軽鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含み；ＶＬ３は、配列番号：５１３の軽鎖可変ドメイン配列を含む軽鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含み；ＶＨ１は、配列番号：５０４の重鎖可変ドメイン配列を含む重鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含み；ＶＨ２は、配列番号：５０６の重鎖可変ドメイン配列を含む重鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含み；ＶＨ３は、配列番号：５０３の重鎖可変ドメイン配列を含む重鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含む。一部の実施形態では、ＶＬ１は、配列番号：５１８の配列を含む軽鎖可変ドメインを含み；ＶＬ２は、配列番号：５１９の配列を含む軽鎖可変ドメインを含み；ＶＬ３は、配列番号：５１３の配列を含む軽鎖可変ドメインを含み；ＶＨ１は、配列番号：５０４の配列を含む重鎖可変ドメインを含み；ＶＨ２は、配列番号：５０６の配列を含む重鎖可変ドメインを含み；ＶＨ３は、配列番号：５０３の配列を含む重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＶＬ１は、配列番号：２７５の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号：２７６の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号：２７７の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み；ＶＬ２は、配列番号：５００の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号：５０１の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号：２７４の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み；ＶＬ３は、配列番号：２６９の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号：２７０の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号：２７１の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み；ＶＨ１は、配列番号：２５７の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号：２５８の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号：２５９の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み；ＶＨ２は、配列番号：２５４の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号：２５５の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号：２５６の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み；ＶＨ３は、配列番号：２５１の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号：２５２の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号：２５３の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。一部の実施形態では、ＶＬ１は、配列番号：５１９の軽鎖可変ドメイン配列を含む軽鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含み；ＶＬ２は、配列番号：５１８の軽鎖可変ドメイン配列を含む軽鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含み；ＶＬ３は、配列番号：５１３の軽鎖可変ドメイン配列を含
む軽鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含み；ＶＨ１は、配列番号：５０６の重鎖可変ドメイン配列を含む重鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含み；ＶＨ２は、配列番号：５０４の重鎖可変ドメイン配列を含む重鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含み；ＶＨ３は、配列番号：５０３の重鎖可変ドメイン配列を含む重鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含む。一部の実施形態では、ＶＬ１は、配列番号：５１９の配列を含む軽鎖可変ドメインを含み；ＶＬ２は、配列番号：５１８の配列を含む軽鎖可変ドメインを含み；ＶＬ３は、配列番号：５１３の配列を含む軽鎖可変ドメインを含み；ＶＨ１は、配列番号：５０６の配列を含む重鎖可変ドメインを含み；ＶＨ２は、配列番号：５０４の配列を含む重鎖可変ドメインを含み；ＶＨ３は、配列番号：５０３の配列を含む重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、またはＬ４のうちの少なくとも１つは、独立して、長さが０アミノ酸である。一部の実施形態では、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、またはＬ４は、各々独立して、長さが少なくとも１アミノ酸である。一部の実施形態では、Ｌ１は、Ａｓｐ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｈｉｓ－Ｔｈｒ（配列番号：５２５）を含む。
一実施形態では、本開示は、３つの抗原結合部位を形成する４本のポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって、
第１のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ２－Ｌ１－ＶＬ１－Ｌ２－ＣＬ ［Ｉ］
により表される構造を含み、
第２のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ１－Ｌ３－ＶＨ２－Ｌ４－ＣＨ１ ［ＩＩ］
により表される構造を含み、
第３のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ３－ＣＨ１ ［ＩＩＩ］
により表される構造を含み、
第４のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ３－ＣＬ ［ＩＶ］
により表される構造を含み、
式中：
ＶＬ１は、第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ２は、第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ３は、第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＨ１は、第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ２は、第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ３は、第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣＬは、免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣＨ１は、免疫グロブリンＣＨ１重鎖定常ドメインであり；
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４は、アミノ酸リンカーであり；
ここで、式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドは、交差軽鎖－重鎖対を形成し；
ここで：
（ａ）ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は、各々独立して、配列番号：２、４、１０、１２、１８、２０、２６、２８、３４、３６、４２、４４、５０、５２、５８、６０、６６、６８、７４、７６、８２、８４、９０、９２、９８、１００、１０６、１０８、１１４、１１６、１２２、１２４、１３０、１３２、１３８、１４０、１４６、１４８、１５４、１５６、１６２、１６４、１７０、１７２、１７８、１８０、１８６、１８８、１９４、１９６、２０２、２０４、２１０、２１２、２１８、２２０、２２６、２２８、２３３、２３５、２４１、２４３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に由来する可変ドメインで
あるか；または
（ｂ）ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は、各々独立して、配列番号：２６６～２８３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む可変ドメインの軽鎖相補性決定領域を含み；
ここで：
（ａ）ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は、各々独立して、配列番号：１、３、９、１１、１７、１０、２５、２７、３３、３５、４１、４３、４９、５１、５７、５９、６５、６７、７３、７５、８１、８３、８９、９１、９７、９９、１０５、１０７、１１３、１１５、１２１、１２３、１２９、１３１、１３７、１３９、１４５、１４７、１５３、１５５、１６１、１６３、１６９、１７１、１７７、１７９、１８５、１８７、１９３、１９５、２０１、２０３、２０９、２１１、２１７、２１９、２２５、２２７、２３２、２３４、２４０、２４２のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に由来する可変ドメインであるか；または
（ｂ）ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は、各々独立して、配列番号：２４８～２６５のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む可変ドメインの重鎖相補性決定領域を含む、
前記結合タンパク質を提供する。
一部の実施形態では、第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結されたＦｃ領域をさらに含み、該Ｆｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含む。一部の実施形態では、第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結されたＦｃ領域をさらに含み、該Ｆｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含む。一部の実施形態では、第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、該第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、該第１のＦｃ領域は、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３５４および３６６位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗであり；第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、該第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、該第２のＦｃ領域は、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３４９、３６６、３６８、および４０７位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖである。一部の実施形態では、第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、該第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、該第１のＦｃ領域は、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３４９、３６６、３６８、および４０７位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖであり；第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、該第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、該第２のＦｃ領域は、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３５４および３６６位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗである。一部の実施形態では、第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、該第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、該第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み；該第１および第２のＦｃ領域は、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の４２８および４３４位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓである。
一実施形態では、本開示は、３つの抗原結合部位を形成する４本のポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって、
第１のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ２－Ｌ１－ＶＬ１－Ｌ２－ＣＬ ［Ｉ］
により表される構造を含み、
第２のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ１－Ｌ３－ＶＨ２－Ｌ４－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［ＩＩ］
により表される構造を含み、
第３のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ３－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［ＩＩＩ］
により表される構造を含み、
第４のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ３－ＣＬ ［ＩＶ］
により表される構造を含み、
式中：
ＶＬ１は、第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ２は、第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ３は、第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＨ１は、第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ２は、第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ３は、第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣＬは、免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣＨ１は、免疫グロブリンＣＨ１重鎖定常ドメインであり；
ＣＨ２は、免疫グロブリンＣＨ２重鎖定常ドメインであり；
ＣＨ３は、免疫グロブリンＣＨ３重鎖定常ドメインであり；
ヒンジは、ＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメインを接続する免疫グロブリンヒンジ領域であり；
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４は、アミノ酸リンカーであり；
ここで、式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドは、交差軽鎖－重鎖対を形成し；
ここで：
（ａ）ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は、各々独立して、配列番号：２、４、１０、１２、１８、２０、２６、２８、３４、３６、４２、４４、５０、５２、５８、６０、６６、６８、７４、７６、８２、８４、９０、９２、９８、１００、１０６、１０８、１１４、１１６、１２２、１２４、１３０、１３２、１３８、１４０、１４６、１４８、１５４、１５６、１６２、１６４、１７０、１７２、１７８、１８０、１８６、１８８、１９４、１９６、２０２、２０４、２１０、２１２、２１８、２２０、２２６、２２８、２３３、２３５、２４１、２４３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に由来する可変ドメインであるか；または
（ｂ）ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は、各々独立して、配列番号：２６６～２８３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む可変ドメインの軽鎖相補性決定領域を含み；
ここで：
（ａ）ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は、各々独立して、配列番号：１、３、９、１１、１７、１０、２５、２７、３３、３５、４１、４３、４９、５１、５７、５９、６５、６７、７３、７５、８１、８３、８９、９１、９７、９９、１０５、１０７、１１３、１１５、１２１、１２３、１２９、１３１、１３７、１３９、１４５、１４７、１５３、１５５、１６１、１６３、１６９、１７１、１７７、１７９、１８５、１８７、１９３、１９５、２０１、２０３、２０９、２１１、２１７、２１９、２２５、２２７、２３２、２３４、２４０、２４２のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に由来する可変ドメインであるか；または
（ｂ）ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は、各々独立して、配列番号：２４８～２６５のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む可変ドメインの重鎖相補性決定領域を含む、
前記結合タンパク質を提供する。
一部の実施形態では、第２のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインは、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３５４および３６６位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗであり；第３のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインは、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３４９、３６６、３６８、および４０７位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖである。一部の実施形態では、第２のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインは、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３４９、３６６、３６８、および４０７位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖであり；第３のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインは、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３５４および３６６位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗである。一部の実施形態では、第２および第３のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインはどちらも、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の４２８および４３４位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓである。
一部の実施形態では、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、またはＬ４のうちの少なくとも１つは、独立して、長さが０アミノ酸である。一部の実施形態では、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、またはＬ４は、各々独立して、長さが少なくとも１アミノ酸である。一部の実施形態では、Ｌ１は、Ａｓｐ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｈｉｓ－Ｔｈｒ（配列番号：５２５）を含む。
一実施形態では、本開示は、３つの異なるＨＩＶ標的タンパク質に特異的に結合する３つの抗原結合部位を形成する４本のポリペプチド鎖を含む三重特異性および／または三価結合タンパク質であって、
第１のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ２－Ｌ１－ＶＬ１－Ｌ２－ＣＬ ［Ｉ］
により表される構造を有し、
第２のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ１－Ｌ３－ＶＨ２－Ｌ４－ＣＨ１ ［ＩＩ］
により表される構造を有し、
第３のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ３－ＣＨ１ ［ＩＩＩ］
により表される構造を有し、
第４のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ３－ＣＬ ［ＩＶ］
により表される構造を有し、
式中：
ＶＬ１は、第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ２は、第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ３は、第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＨ１は、第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ２は、第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ３は、第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣＬは、免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣＨ１は、免疫グロブリンＣＨ１重鎖定常ドメインであり；
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、およびＬ４は、アミノ酸リンカーであり；
ここで、式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドは、交差軽鎖－重鎖対を形成する、
前記三重特異性および／または三価結合タンパク質を提供する。
一実施形態では、本開示は、３つの抗原結合部位を形成する４本のポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって、
第１のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ２－Ｌ１－ＶＬ１－Ｌ２－ＣＬ ［Ｉ］
により表される構造を有し、
第２のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ１－Ｌ３－ＶＨ２－Ｌ４－ＣＨ１ ［ＩＩ］
により表される構造を有し、
第３のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ３－ＣＨ１ ［ＩＩＩ］
により表される構造を有し、
第４のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ３－ＣＬ ［ＩＶ］
により表される構造を有し、
式中：
ＶＬ１は、第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ２は、第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ３は、第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＨ１は、第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ２は、第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ３は、第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣＬは、免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣＨ１は、免疫グロブリンＣＨ１重鎖定常ドメインであり；
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、およびＬ４は、アミノ酸リンカーであり；
ここで、式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドは、交差軽鎖－重鎖対を形成し；
ここで：
（ａ）ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は、各々独立して、配列番号：２、４、１０、１２、１８、２０、２６、２８、３４、３６、４２、４４、５０、５２、５８、６０、６６、６８、７４、７６、８２、８４、９０、９２、９８、１００、１０６、１０８、１１４、１１６、１２２、１２４、１３０、１３２、１３８、１４０、１４６、１４８、１５４、１５６、１６２、１６４、１７０、１７２、１７８、１８０、１８６、１８８、１９４、１９６、２０２、２０４、２１０、２１２、２１８、２２０、２２６、２２８、２３３、２３５、２４１、２４３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に由来する可変ドメインであるか；または
（ｂ）ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は、各々独立して、配列番号：２６６～２８３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む可変ドメインの軽鎖相補性決定領域を含み；
ここで：
（ａ）ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は、各々独立して、配列番号：１、３、９、１１、１７、１０、２５、２７、３３、３５、４１、４３、４９、５１、５７、５９、６５、６７、７３、７５、８１、８３、８９、９１、９７、９９、１０５、１０７、１１３、１１５、１２１、１２３、１２９、１３１、１３７、１３９、１４５、１４７、１５３、１５５、１６１、１６３、１６９、１７１、１７７、１７９、１８５、１８７、１９３、１９５、２０１、２０３、２０９、２１１、２１７、２１９、２２５、２２７、２３２、２３４、２４０、２４２のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に由来する可変ドメインであるか；または
（ｂ）ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は、各々独立して、配列番号：２４８～２６５のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む可変ドメインの重鎖相補性決定領域を含む、
前記結合タンパク質を提供する。
別の実施形態では、本開示は、第１のポリペプチド鎖、第２のポリペプチド鎖、第３のポリペプチド鎖および第４のポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって：
（ａ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｂ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：１２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：１１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：１０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｃ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：２０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：１９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：１７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：１８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｄ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：２８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：２７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：２５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：２６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｅ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：３６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：３５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：３３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：３４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｆ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：４４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：４３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：４１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：４２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一で
あるアミノ酸配列を含む；
（ｇ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：５２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：５２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：５１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：５１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：４９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：５０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：５０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｈ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：６０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：６０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：５９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：５９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：５７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：５７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：５８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：５８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｉ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：６８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：６８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：６７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：６７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：６５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：６５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：６６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：６６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｊ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：７６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：７６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：７５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：７５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：７３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：７３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：７４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：７４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｋ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：８４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：８４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：８３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：８３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：８１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：８１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：８２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：８２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｌ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：９２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：９２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：９１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：９１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：８９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：８９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：９０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：９０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｍ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：１００のアミノ酸配列を含むか、または配
列番号：１００のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：９９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：９９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：９７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：９７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：９８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：９８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｎ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：１０８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１０８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：１０７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１０７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：１０５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１０５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：１０６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１０６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｏ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：１１６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１１６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：１１５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１１５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：１１３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１１３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：１１４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１１４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｐ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：１２４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１２４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：１２３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１２３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：１２１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１２１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：１２２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１２２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｑ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：１３２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１３２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：１３１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１３１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：１２９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１２９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：１３０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１３０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｒ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：１４０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１４０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：１３９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１３９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：１３７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１３７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：１３８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１３８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｓ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：１４８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１４８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：１４７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１４
７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：１４５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１４５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：１４６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１４６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｔ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：１５６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１５６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：１５５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１５５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：１５３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１５３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：１５４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１５４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｕ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：１６４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１６４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：１６３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１６３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：１６１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１６１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：１６２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１６２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｖ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：１７２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１７２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：１７１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１７１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：１６９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１６９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：１７０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１７０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｗ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：１８０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１８０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：１７９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１７９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：１７７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１７７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：１７８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１７８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｘ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：１８８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１８８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：１８７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１８７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：１８５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１８５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：１８６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１８６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｙ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：１９６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１９６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：１９５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１９５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：１９３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１９３のアミノ酸
配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：１９４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１９４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｚ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：２０４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２０４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：２０３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２０３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：２０１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２０１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：２０２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２０２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ａａ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：２１２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２１２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：２１１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２１１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：２０９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２０９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：２１０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２１０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｂｂ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：２２０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２２０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：２１９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２１９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：２１７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２１７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：２１８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２１８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｃｃ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：２２８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２２８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：２２７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２２７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：２２５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２２５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：２２６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２２６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｄｄ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：２３５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２３５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：２３４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２３４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：２３２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２３２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：２３３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２３３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；または
（ｅｅ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：２４３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２４３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：２４２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２４２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：２４０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２４０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：２４１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２４１のアミノ酸配列と少な
くとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、
前記結合タンパク質を提供する。
一実施形態では、本開示は、１つまたはそれ以上のＨＩＶ標的タンパク質および１つまたはそれ以上のＴ細胞標的タンパク質に特異的に結合する３つの抗原結合部位を形成する４本のポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって、
第１のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ２－Ｌ１－ＶＬ１－Ｌ２－ＣＬ ［Ｉ］
により表される構造を含み；
第２のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ１－Ｌ３－ＶＨ２－Ｌ４－ＣＨ１ ［ＩＩ］
により表される構造を含み；
第３のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ３－ＣＨ１ ［ＩＩＩ］
により表される構造を含み；
第４のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ３－ＣＬ ［ＩＶ］
により表される構造を含み；
式中、
ＶＬ１は、第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ２は、第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ３は、第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＨ１は、第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ２は、第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ３は、第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣＬは、免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣＨ１は、免疫グロブリンＣＨ１重鎖定常ドメインであり；
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４は、アミノ酸リンカーであり；
ここで、式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドは、交差軽鎖－重鎖対を形成する、
前記結合タンパク質を提供する。
一部の実施形態では、第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結されたＦｃ領域をさらに含み、該Ｆｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含む。一部の実施形態では、第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結されたＦｃ領域をさらに含み、該Ｆｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含む。一部の実施形態では、第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、該第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、該第１のＦｃ領域は、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３５４および３６６位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗであり；第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、該第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、該第２のＦｃ領域は、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３４９、３６６、３６８、および４０７位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖである。一部の実施形態では、第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、該第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、該第１のＦｃ領域は、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３４９、３６６、３６８、および４０７位に対応する位置にアミノ酸置
換を含み、該アミノ酸置換は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖであり；第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、該第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、該第２のＦｃ領域は、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３５４および３６６位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗである。一部の実施形態では、第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、該第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、該第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み；該第１および第２のＦｃ領域は、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の４２８および４３４位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓである。
一実施形態では、本開示は、１つまたはそれ以上のＨＩＶ標的タンパク質および１つまたはそれ以上のＴ細胞標的タンパク質に特異的に結合する３つの抗原結合部位を形成する４本のポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって、
第１のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ２－Ｌ１－ＶＬ１－Ｌ２－ＣＬ ［Ｉ］
により表される構造を含み；
第２のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ１－Ｌ３－ＶＨ２－Ｌ４－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［ＩＩ］
により表される構造を含み；
第３のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ３－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［ＩＩＩ］
により表される構造を含み；
第４のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ３－ＣＬ ［ＩＶ］
により表される構造を含み；
式中、
ＶＬ１は、第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ２は、第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ３は、第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＨ１は、第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ２は、第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ３は、第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣＬは、免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣＨ１は、免疫グロブリンＣＨ１重鎖定常ドメインであり；
ＣＨ２は、免疫グロブリンＣＨ２重鎖定常ドメインであり；
ＣＨ３は、免疫グロブリンＣＨ３重鎖定常ドメインであり；
ヒンジは、ＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメインを接続する免疫グロブリンヒンジ領域であり；
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４は、アミノ酸リンカーであり；
ここで、式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドは、交差軽鎖－重鎖対を形成する、
前記結合タンパク質を提供する。
一部の実施形態では、第２のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインは、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３５４および３６６位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗであり；第３のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメイ
ンは、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３４９、３６６、３６８、および４０７位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖである。一部の実施形態では、第２のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインは、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３４９、３６６、３６８、および４０７位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖであり；第３のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインは、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３５４および３６６位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗである。一部の実施形態では、第２および第３のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインはどちらも、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の４２８および４３４位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓである。
一部の実施形態では、１つまたはそれ以上のＨＩＶ標的タンパク質は、糖タンパク質１２０、糖タンパク質４１および糖タンパク質１６０からなる群から選択される。一部の実施形態では、１つまたはそれ以上のＴ細胞標的タンパク質は、ＣＤ３またはＣＤ２８である。一部の実施形態では、結合タンパク質は、三重特異性であり、ＨＩＶ標的タンパク質および単一Ｔ細胞標的タンパク質上の２つの異なるエピトープに特異的に結合することができる。一部の実施形態では、結合タンパク質は、三重特異性であり、ＨＩＶ標的タンパク質および２つの異なるＴ細胞標的タンパク質に特異的に結合することができる。一部の実施態様では、結合タンパク質は、三重特異性であり、Ｔ細胞標的タンパク質および単一ＨＩＶ標的タンパク質上の２つの異なるエピトープに特異的に結合することができる。一部の実施形態では、結合タンパク質は、三重特異性であり、Ｔ細胞標的タンパク質および２つの異なるＨＩＶ標的タンパク質に特異的に結合することができる。一部の実施形態では、第１および第２のポリペプチド鎖は、２つのＴ細胞標的タンパク質を特異的に標的にする２つの抗原結合部位を形成し、第３および第４のポリペプチド鎖は、ＨＩＶ標的タンパク質に特異的に結合する抗原結合部位を形成する。一部の実施形態では、ＶＬ１は、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含み、該ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号：２６６、２６７、および２６８に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２６９、２７０、および２７１に記載の配列をそれぞれ；配列番号：５００、５０１、および２７４に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２７５、２７６、および２７７に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２８１、２８２、および２８３に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２７８、２７９、および２８０に記載の配列をそれぞれ；配列番号：４８８、４８９、および４９０に記載の配列をそれぞれ；配列番号：４９１、４９２、および４９３に記載の配列をそれぞれ；または配列番号：４９４、４９５、および４９６に記載の配列をそれぞれ含む。一部の実施形態では、ＶＬ１は、配列番号：５１２、５１３、５１４、５１５、５１６、５１７、５１８、５１９、５２０、５２１、５２２、５２３、および５２４からなる群から選択される配列を含む軽鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含む。一部の実施形態では、ＶＬ１は、配列番号：５１２、５１３、５１４、５１５、５１６、５１７、５１８、５１９、５２０、５２１、５２２、５２３、および５２４からなる群から選択される配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＶＬ２は、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含み、該ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号：２６６、２６７、および２６８に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２６９、２７０、および２７１に記載の配列をそれぞれ；配列番号：５００、５０１、および２７４に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２７５、２７６、および２７７に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２８１、２８２、および２８３に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２７８、２７９、および２８０に記載の配列をそれぞれ；配列番号：４８８、４８９、および４９０に記載の配列をそれぞれ；配列番号：４９１、４９２、および４９３に記載の配列をそれぞれ；または配列番号：４９４、４９５、および４９６に記載の配列をそれぞれ含む。一部の実施形態では、ＶＬ２は、配列番号：５１２、５１３、５１４、５１５、５１６、５１
７、５１８、５１９、５２０、５２１、５２２、５２３、および５２４からなる群から選択される配列を含む軽鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含む。
一部の実施形態では、ＶＬ２は、配列番号：５１２、５１３、５１４、５１５、５１６、５１７、５１８、５１９、５２０、５２１、５２２、５２３、および５２４からなる群から選択される配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＶＬ３は、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含み、該ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号：２６６、２６７、および２６８に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２６９、２７０、および２７１に記載の配列をそれぞれ；配列番号：５００、５０１、および２７４に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２７５、２７６、および２７７に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２８１、２８２、および２８３に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２７８、２７９、および２８０に記載の配列をそれぞれ；配列番号：４８８、４８９、および４９０に記載の配列をそれぞれ；配列番号：４９１、４９２、および４９３に記載の配列をそれぞれ；または配列番号：４９４、４９５、および４９６に記載の配列をそれぞれ含む。一部の実施形態では、ＶＬ３は、配列番号：５１２、５１３、５１４、５１５、５１６、５１７、５１８、５１９、５２０、５２１、５２２、５２３、および５２４からなる群から選択される配列を含む軽鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含む。一部の実施形態では、ＶＬ３は、配列番号：５１２、５１３、５１４、５１５、５１６、５１７、５１８、５１９、５２０、５２１、５２２、５２３、および５２４からなる群から選択される配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＶＨ１は、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含み、該ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号：２４８、４９７、および２５０に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２５１、２５２、および２５３に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２５４、２５５、および２５６に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２５４、２５５、および４９８に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２５７、２５８、および２５９に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２６３、２６４、および２６５に記載の配列をそれぞれ；配列番号：４９９、２６１、および２６２に記載の配列をそれぞれ；配列番号：４７９、４８０、および４８１に記載の配列をそれぞれ；配列番号：４８２、４８３、および４８４に記載の配列をそれぞれ；または配列番号：４８５、４８６、および４８７に記載の配列をそれぞれ含む。一部の実施形態では、ＶＨ１は、配列番号：５０２、５０３、５０４、５０５、５０６、５０７、５０８、５０９、５１０、および５１１からなる群から選択される配列を含む重鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含む。一部の実施形態では、ＶＨ１は、配列番号：５０２、５０３、５０４、５０５、５０６、５０７、５０８、５０９、５１０、および５１１からなる群から選択される配列を含む重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＶＨ２は、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含み、該ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号：２４８、４９７、および２５０に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２５１、２５２、および２５３に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２５４、２５５、および２５６に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２５４、２５５、および４９８に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２５７、２５８、および２５９に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２６３、２６４、および２６５に記載の配列をそれぞれ；配列番号：４９９、２６１、および２６２に記載の配列をそれぞれ；配列番号：４７９、４８０、および４８１に記載の配列をそれぞれ；配列番号：４８２、４８３、および４８４に記載の配列をそれぞれ；または配列番号：４８５、４８６、および４８７に記載の配列をそれぞれ含む。
一部の実施形態では、ＶＨ２は、配列番号：５０２、５０３、５０４、５０５、５０６、５０７、５０８、５０９、５１０、および５１１からなる群から選択される配列を含む重鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含む。一部の実施形態では、ＶＨ２は、配列番号：５０２、５０３、５０４、５０５、５０６、５０７、５０８、５０９、５１０、および５１１からなる群から選択される配列を含む重鎖可変ドメ
インを含む。一部の実施形態では、ＶＨ３は、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含み、該ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号：２４８、４９７、および２５０に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２５１、２５２、および２５３に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２５４、２５５、および２５６に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２５４、２５５、および４９８に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２５７、２５８、および２５９に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２６３、２６４、および２６５に記載の配列をそれぞれ；配列番号：４９９、２６１、および２６２に記載の配列をそれぞれ；配列番号：４７９、４８０、および４８１に記載の配列をそれぞれ；配列番号：４８２、４８３、および４８４に記載の配列をそれぞれ；または配列番号：４８５、４８６、および４８７に記載の配列をそれぞれ含む。一部の実施形態では、ＶＨ３は、配列番号：５０２、５０３、５０４、５０５、５０６、５０７、５０８、５０９、５１０、および５１１からなる群から選択される配列を含む重鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含む。一部の実施形態では、ＶＨ３は、配列番号：５０２、５０３、５０４、５０５、５０６、５０７、５０８、５０９、５１０、および５１１からなる群から選択される配列を含む重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＶＬ１は、配列番号：４８８の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号：４８９の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号：４９０の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み；ＶＬ２は、配列番号：４９４の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号：４９５の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号：４９６の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み；ＶＬ３は、配列番号：２６９の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号：２７０の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号：２７１の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み；ＶＨ１は、配列番号：４７９の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号：４８０の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号：４８１の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み；ＶＨ２は、配列番号：４８５の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号：４８６の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号：４８７の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み；ＶＨ３は、配列番号：２５１の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号：２５２の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号：２５３の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。一部の実施形態では、ＶＬ１は、配列番号：５２２の軽鎖可変ドメイン配列を含む軽鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含み；ＶＬ２は、配列番号：５２４の軽鎖可変ドメイン配列を含む軽鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含み；ＶＬ３は、配列番号：５１３の軽鎖可変ドメイン配列を含む軽鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含み；ＶＨ１は、配列番号：５０９の重鎖可変ドメイン配列を含む重鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含み；ＶＨ２は、配列番号：５１１の重鎖可変ドメイン配列を含む重鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含み；ＶＨ３は、配列番号：５０３の重鎖可変ドメイン配列を含む重鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含む。
一部の実施形態では、ＶＬ１は、配列番号：５２２の配列を含む軽鎖可変ドメインを含み；ＶＬ２は、配列番号：５２４の配列を含む軽鎖可変ドメインを含み；ＶＬ３は、配列番号：５１３の配列を含む軽鎖可変ドメインを含み；ＶＨ１は、配列番号：５０９の配列を含む重鎖可変ドメインを含み；ＶＨ２は、配列番号：５１１の配列を含む重鎖可変ドメインを含み；ＶＨ３は、配列番号：５０３の配列を含む重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＶＬ１は、配列番号：４９４の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号：４９５の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号：４９６の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み；ＶＬ２は、配列番号：４８８の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号：４８９の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号：４９０の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み；ＶＬ３は、配列番号：２６９の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号：２７０の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号：２７１の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み；ＶＨ１は、配列番号：４８５の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号：４８６の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号：４８７の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み；ＶＨ２は、配列番号：４７９の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号：４８０の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号：４８１
の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み；ＶＨ３は、配列番号：２５１の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号：２５２の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号：２５３の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。一部の実施形態では、ＶＬ１は、配列番号：５２４の軽鎖可変ドメイン配列を含む軽鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含み；ＶＬ２は、配列番号：５２２の軽鎖可変ドメイン配列を含む軽鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含み；ＶＬ３は、配列番号：５１３の軽鎖可変ドメイン配列を含む軽鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含み；ＶＨ１は、配列番号：５１１の重鎖可変ドメイン配列を含む重鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含み；ＶＨ２は、配列番号：５０９の重鎖可変ドメイン配列を含む重鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含み；ＶＨ３は、配列番号：５０３の重鎖可変ドメイン配列を含む重鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含む。一部の実施形態では、ＶＬ１は、配列番号：５２４の配列を含む軽鎖可変ドメインを含み；ＶＬ２は、配列番号：５２２の配列を含む軽鎖可変ドメインを含み；ＶＬ３は、配列番号：５１３の配列を含む軽鎖可変ドメインを含み；ＶＨ１は、配列番号：５１１の配列を含む重鎖可変ドメインを含み；ＶＨ２は、配列番号：５０９の配列を含む重鎖可変ドメインを含み；ＶＨ３は、配列番号：５０３の配列を含む重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、またはＬ４のうちの少なくとも１つは、独立して、長さが０アミノ酸である。一部の実施形態では、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、またはＬ４は、各々独立して、長さが少なくとも１アミノ酸である。一部の実施形態では、Ｌ１は、Ｇｌｙ－Ｇｌｎ－Ｐｒｏ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ｐｒｏ（配列番号：配列番号：２９９）である。
一実施形態では、本開示は、３つの抗原結合部位を形成する４本のポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって、
第１のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ２－Ｌ１－ＶＬ１－Ｌ２－ＣＬ ［Ｉ］
により表される構造を含み、
第２のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ１－Ｌ３－ＶＨ２－Ｌ４－ＣＨ１ ［ＩＩ］
により表される構造を含み、
第３のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ３－ＣＨ１ ［ＩＩＩ］
により表される構造を含み、
第４のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ３－ＣＬ ［ＩＶ］
により表される構造を含み、
式中：
ＶＬ１は、第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ２は、第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ３は、第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＨ１は、第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ２は、第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ３は、第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣＬは、免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣＨ１は、免疫グロブリンＣＨ１重鎖定常ドメインであり；
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４は、アミノ酸リンカーであり；
ここで、式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドは、交差軽鎖－重鎖対を形成し；
ここで：
（ａ）ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は、各々独立して、配列番号：３０３、３０５、３
１１、３１３、３１９、３２１、３２７、３２９、３３５、３３７、３４３、３４５、３５１、３５３、３５９、３６１、３６７、３６９、３７５、３７７、３８３、３８５、３９１、３９３、３９９、４０１、４０７、４０９、４１５、４１７、４２３、４２５、４３１、４３３、４３９、４４１、４４７、４４９、４５５、４５７、４６３、４６５、４７１、４７３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に由来する可変ドメインであるか；または
（ｂ）ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は、各々独立して、配列番号：２６６～２７１、２７５～２７７、４８８～４９６のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む可変ドメインの軽鎖相補性決定領域を含み；
ここで：
（ａ）ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は、各々独立して、配列番号：３０２、３０４、３１０、３１２、３１８、３２０、３２６、３２８、３３４、３３６、３４２、３４４、３５０、３５２、３５８、３６０、３６６、３６８、３７４、３７６、３８２、３８４、３９０、３９２、３９８、４００、４０６、４０８、４１４、４１６、４２２、４２４、４３０、４３２、４３８、４４０、４４６、４４８、４５４、４５６、４６２、４６４、４７０、４７２のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に由来する可変ドメインであるか；または
（ｂ）ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は、各々独立して、配列番号：２４８～２５３、２５７～２５９、４７９～４８７のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む可変ドメインの重鎖相補性決定領域を含む、
前記結合タンパク質を提供する。
一部の実施形態では、第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結されたＦｃ領域をさらに含み、該Ｆｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含む。一部の実施形態では、第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結されたＦｃ領域をさらに含み、該Ｆｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含む。一部の実施形態では、第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、該第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、該第１のＦｃ領域は、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３５４および３６６位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗであり；第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、該第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、該第２のＦｃ領域は、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３４９、３６６、３６８、および４０７位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖである。一部の実施形態では、第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、該第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、該第１のＦｃ領域は、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３４９、３６６、３６８、および４０７位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖであり；第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、該第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、該第２のＦｃ領域は、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３５４および３６６位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗである。一部の実施形態では、第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、該第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、該第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを
含み；該第１および第２のＦｃ領域は、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の４２８および４３４位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓである。
一実施形態では、本開示は、３つの抗原結合部位を形成する４本のポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって、
第１のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ２－Ｌ１－ＶＬ１－Ｌ２－ＣＬ ［Ｉ］
により表される構造を含み、
第２のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ１－Ｌ３－ＶＨ２－Ｌ４－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［ＩＩ］
により表される構造を含み、
第３のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ３－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［ＩＩＩ］
により表される構造を含み、
第４のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ３－ＣＬ ［ＩＶ］
により表される構造を含み、
式中：
ＶＬ１は、第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ２は、第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ３は、第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＨ１は、第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ２は、第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ３は、第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣＬは、免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣＨ１は、免疫グロブリンＣＨ１重鎖定常ドメインであり；
ＣＨ２は、免疫グロブリンＣＨ２重鎖定常ドメインであり；
ＣＨ３は、免疫グロブリンＣＨ３重鎖定常ドメインであり；
ヒンジは、ＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメインを接続する免疫グロブリンヒンジ領域であり；
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４は、アミノ酸リンカーであり；
ここで、式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドは、交差軽鎖－重鎖対を形成し；
ここで：
（ａ）ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は、各々独立して、配列番号：３０３、３０５、３１１、３１３、３１９、３２１、３２７、３２９、３３５、３３７、３４３、３４５、３５１、３５３、３５９、３６１、３６７、３６９、３７５、３７７、３８３、３８５、３９１、３９３、３９９、４０１、４０７、４０９、４１５、４１７、４２３、４２５、４３１、４３３、４３９、４４１、４４７、４４９、４５５、４５７、４６３、４６５、４７１、４７３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に由来する可変ドメインであるか；または
（ｂ）ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は、各々独立して、配列番号：２６６～２７１、２７５～２７７、４８８～４９６のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む可変ドメインの軽鎖相補性決定領域を含み；
ここで：
（ａ）ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は、各々独立して、配列番号：３０２、３０４、３１０、３１２、３１８、３２０、３２６、３２８、３３４、３３６、３４２、３４４、３５０、３５２、３５８、３６０、３６６、３６８、３７４、３７６、３８２、３８４、３９０、３９２、３９８、４００、４０６、４０８、４１４、４１６、４２２、４２４、４
３０、４３２、４３８、４４０、４４６、４４８、４５４、４５６、４６２、４６４、４７０、４７２のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に由来する可変ドメインであるか；または
（ｂ）ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は、各々独立して、配列番号：２４８～２５３、２５７～２５９、４７９～４８７のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む可変ドメインの重鎖相補性決定領域を含む、
前記結合タンパク質を提供する。
一部の実施形態では、第２のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインは、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３５４および３６６位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗであり；第３のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインは、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３４９、３６６、３６８、および４０７位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖである。一部の実施形態では、第２のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインは、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３４９、３６６、３６８、および４０７位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖであり；第３のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインは、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３５４および３６６位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗである。一部の実施形態では、第２および第３のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインはどちらも、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の４２８および４３４位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓである。
一部の実施形態では、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、またはＬ４のうちの少なくとも１つは、独立して、長さが０アミノ酸である。一部の実施形態では、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、またはＬ４は、各々独立して、長さが少なくとも１アミノ酸である。一部の実施形態では、Ｌ１は、Ｇｌｙ－Ｇｌｎ－Ｐｒｏ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ｐｒｏ（配列番号：配列番号：２９９）である。
一実施形態では、本開示は、３つの抗原結合部位を形成する４本のポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって、
第１のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ２－Ｌ１－ＶＬ１－Ｌ２－ＣＬ ［Ｉ］
により表される構造を有し、
第２のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ１－Ｌ３－ＶＨ２－Ｌ４－ＣＨ１ ［ＩＩ］
により表される構造を有し、
第３のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ３－ＣＨ１ ［ＩＩＩ］
により表される構造を有し、
第４のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ３－ＣＬ ［ＩＶ］
により表される構造を有し、
式中：
ＶＬ１は、第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ２は、第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ３は、第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＨ１は、第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ２は、第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ３は、第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣＬは、免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣＨ１は、免疫グロブリンＣＨ１重鎖定常ドメインであり；
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、およびＬ４は、アミノ酸リンカーであり；
ここで、式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドは、交差軽鎖－重鎖対を形成し；
ここで：
（ａ）ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は、各々独立して、配列番号：３０３、３０５、３１１、３１３、３１９、３２１、３２７、３２９、３３５、３３７、３４３、３４５、３５１、３５３、３５９、３６１、３６７、３６９、３７５、３７７、３８３、３８５、３９１、３９３、３９９、４０１、４０７、４０９、４１５、４１７、４２３、４２５、４３１、４３３、４３９、４４１、４４７、４４９、４５５、４５７、４６３、４６５、４７１、４７３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に由来する可変ドメインであるか；または
（ｂ）ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は、各々独立して、配列番号：２６６～２７１、２７５～２７７、４８８～４９６のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む可変ドメインの軽鎖相補性決定領域を含み；
ここで：
（ａ）ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は、各々独立して、配列番号：３０２、３０４、３１０、３１２、３１８、３２０、３２６、３２８、３３４、３３６、３４２、３４４、３５０、３５２、３５８、３６０、３６６、３６８、３７４、３７６、３８２、３８４、３９０、３９２、３９８、４００、４０６、４０８、４１４、４１６、４２２、４２４、４３０、４３２、４３８、４４０、４４６、４４８、４５４、４５６、４６２、４６４、４７０、４７２のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に由来する可変ドメインであるか；または
（ｂ）ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は、各々独立して、配列番号：２４８～２５３、２５７～２５９、４７９～４８７のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む可変ドメインの重鎖相補性決定領域を含む、
前記結合タンパク質を提供する。
別の実施形態では、本開示は、第１のポリペプチド鎖、第２のポリペプチド鎖、第３のポリペプチド鎖および第４のポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって、
（ａ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：３０５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３０５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：３０４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３０４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：３０２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３０２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：３０３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３０３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｂ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：３１３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３１３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：３１２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３１２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：３１０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３１０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：３１１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３１１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｃ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：３２１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３２１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：３２０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３２
０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：３１８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３１８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：３１９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３１９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｄ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：３２９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３２９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：３２８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３２８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：３２６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３２６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：３２７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３２７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｅ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：３３７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３３７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：３３６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３３６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：３３４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３３４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：３３５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３３５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｆ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：３４５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３４５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：３４４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３４４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：３４２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３４２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：３４３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３４３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｇ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：３５３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３５３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：３５２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３５２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：３５０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３５０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：３５１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３５１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｈ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：３６１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３６１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：３６０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３６０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：３５８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３５８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：３５９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３５９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｉ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：３６９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３６９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：３６８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３６８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：３６６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３６６のアミノ酸
配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：３６７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３６７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｊ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：３７７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３７７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：３７６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３７６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：３７４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３７４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：３７５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３７５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｋ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：３８５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３８５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：３８４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３８４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：３８２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３８２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：３８３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３８３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｌ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：３９３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３９３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：３９２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３９２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：３９０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３９０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：３９１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３９１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｍ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：４０１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４０１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：４００のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４００のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：３９８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３９８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：３９９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３９９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｎ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：４０９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４０９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：４０８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４０８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：４０６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４０６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：４０７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４０７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｐ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：４１７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４１７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：４１６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４１６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：４１４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４１４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：４１５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４１５のアミノ酸配列と少なく
とも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｑ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：４２５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４２５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：４２４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４２４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：４２２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４２２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：４２３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４２３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｒ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：４３３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４３３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：４３２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４３２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：４３０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４３０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：４３１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４３１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｓ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：４４１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４４１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：４４０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４４０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：４３８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４３８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：４３９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４３９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｔ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：４４９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４４９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：４４８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４４８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：４４６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４４６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：４４７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４４７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｕ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：４５７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４５７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：４５６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４５６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：４５４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４５４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：４５５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４５５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｖ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：４６５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４６５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：４６４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４６４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：４６２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４６２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：４６３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４６３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；または
（ｗ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：４７３のアミノ酸配列を含むか、または配
列番号：４７３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：４７２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４７２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：４７０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４７０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：４７１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４７１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、
前記結合タンパク質を提供する。
一実施形態では、本開示は、上記実施形態のいずれかによる結合タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子を提供する。一実施形態では、本開示は、上記実施形態のいずれかによる核酸分子を含む発現ベクターを提供する。一実施形態では、本開示は、上記実施形態のいずれかによる核酸分子を含む、単離された宿主細胞を提供する。一実施形態では、本開示は、上記実施形態のいずれかによる発現ベクターを含む、単離された宿主細胞を提供する。一部の態様では、単離された宿主細胞は、哺乳動物細胞または昆虫細胞である。一実施形態では、本開示は、上記実施形態のいずれかによる結合タンパク質の第１、第２、第３、および第４のポリペプチド鎖をコードする１つまたはそれ以上のベクターを含むベクター系を提供する。一部の実施形態では、ベクター系は、結合タンパク質の第１のポリペプチド鎖をコードする第１のベクターと、結合タンパク質の第２のポリペプチド鎖をコードする第２のベクターと、結合タンパク質の第３のポリペプチド鎖をコードする第３のベクターと、結合タンパク質の第４のポリペプチド鎖をコードする第４のベクターとを含む。一部の実施形態では、ベクター系は、結合タンパク質の第１および第２のポリペプチド鎖をコードする第１のベクターと、結合タンパク質の第３および第４のポリペプチド鎖をコードする第２のベクターとを含む。一部の実施形態では、１つまたはそれ以上のベクターは、発現ベクターである。一実施形態では、本開示は、上記実施形態のいずれかによるベクター系を含む、単離された宿主細胞を提供する。一部の実施形態では、単離された宿主細胞は、哺乳動物細胞または昆虫細胞である。一実施形態では、本開示は、結合タンパク質を産生する方法であって、ａ）上記実施形態のいずれかによる宿主細胞を、該宿主細胞が該結合タンパク質を発現するような条件下で培養する工程；およびｂ）該結合タンパク質を該宿主細胞から単離する工程を含む前記方法を提供する。
一実施形態では、本開示は、患者におけるＨＩＶ感染症を予防および／または処置する方法であって、上記実施形態のいずれかによる少なくとも１つの結合タンパク質の治療有効量を該患者に投与する工程を含む前記方法を提供する。一部の実施形態では、結合タンパク質は、標準的抗レトロウイルス療法と併用投与される。一部の実施形態では、少なくとも１つの結合タンパク質の投与は、１つまたはそれ以上のＨＩＶビリオンの中和をもたらす。一部の実施形態では、少なくとも１つの結合タンパク質の投与は、患者における１つまたはそれ以上の潜伏および／または慢性ＨＩＶ感染細胞の排除をもたらす。一部の実施形態では、患者はヒトである。
一実施形態では、本開示は、患者におけるＨＩＶ感染症の予防または処置のための、上記実施形態のいずれかによる結合タンパク質を提供する。一部の実施形態では、結合タンパク質は、標準的抗レトロウイルス療法と併用投与される。一部の実施形態では、結合タンパク質は、患者における１つまたはそれ以上のＨＩＶビリオンの中和を引き起こす。一部の実施形態では、結合タンパク質は、患者における１つまたはそれ以上の潜伏および／または慢性ＨＩＶ感染細胞の排除を引き起こす。一部の実施形態では、患者はヒトである。
本発明の特定の実施形態は、ある一定の実施形態および請求項についての下記のより詳
細な説明から明らかになるであろう。
本明細書に記載の様々な実施形態の特性の１つ、一部またはすべてを組み合わせて、本発明の他の実施形態を形成することができることは理解されるはずである。本発明のこれらおよび他の態様が当業者に明らかになるであろう。
図１Ａ～Ｄは、１つまたはそれ以上の抗原上の３つの異なるエピトープに特異的に結合する３つの抗原結合部位を形成する４本のポリペプチド鎖を含む三重特異性結合タンパク質であって、一部の実施形態に従って、第１のポリペプチド対は、２つの抗原結合部位（ＶＨ１－ＶＬ１およびＶＨ２－ＶＬ２を含む）を形成する交差配向を有する二重可変ドメインを有し、第２のポリペプチド対は、単一の抗原結合部位（ＶＨ３－ＶＬ３を含む）を有する、前記三重特異性結合タンパク質の模式図を示す図である。図１Ａは、ノブが第１のポリペプチド対上にある「ノブ・イントゥー・ホール」修飾を含む三重特異性結合タンパク質を示す。図１Ｂは、ノブが第２のポリペプチド対上にある「ノブ・イントゥー・ホール」修飾を含む三重特異性結合タンパク質を示す。図１Ｃは、表１および２に示す結合タンパク質１～３１についての、ポリペプチド鎖上の可変ドメインの配向、およびノブ／ホール配向を示す。「重鎖Ａ」（例えば、本開示の第３のポリペプチド鎖）は、重鎖Ａの可変ドメインを示す。「軽鎖Ａ」（例えば、本開示の第４のポリペプチド鎖）は、軽鎖Ａの可変ドメインを示す。「重鎖Ｂ」（例えば、本開示の第２のポリペプチド鎖）は、重鎖Ｂの可変ドメイン１および可変ドメイン２を示す。「軽鎖Ｂ」（例えば、本開示の第１のポリペプチド鎖）は、軽鎖Ｂの可変ドメイン１および可変ドメイン２を示す。図１Ｄは、表１および２に示す結合タンパク質３２～５３についての、ポリペプチド鎖上の可変ドメインの配向、およびノブ／ホール配向を示す。「重鎖Ａ」（例えば、本開示の第３のポリペプチド鎖）は、重鎖Ａの可変ドメインを示す。「軽鎖Ａ」（例えば、本開示の第４のポリペプチド鎖）は、軽鎖Ａの可変ドメインを示す。「重鎖Ｂ」（例えば、本開示の第２のポリペプチド鎖）は、重鎖Ｂの可変ドメイン１および可変ドメイン２を示す。「軽鎖Ｂ」（例えば、本開示の第１のポリペプチド鎖）は、軽鎖Ｂの可変ドメイン１および可変ドメイン２を示す。 図２Ａ～Ｂは、先ずアフィニティークロマトグラフィーを使用し、次いで分取サイズ排除クロマトグラフィーを使用する、三重特異性結合タンパク質の精製を示す図である。図２Ａは、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィーを使用して精製中の三重特異性結合タンパク質の溶離プロファイルを示す。図２Ｂは、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００サイズ排除クロマトグラフィーによる単量体タンパク質の精製を示す。 図２Ａ～Ｂは、先ずアフィニティークロマトグラフィーを使用し、次いで分取サイズ排除クロマトグラフィーを使用する、三重特異性結合タンパク質の精製を示す図である。図２Ａは、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィーを使用して精製中の三重特異性結合タンパク質の溶離プロファイルを示す。図２Ｂは、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００サイズ排除クロマトグラフィーによる単量体タンパク質の精製を示す。 図３Ａ～Ｂは、先ずアフィニティークロマトグラフィーを使用し、次いで分取サイズ排除クロマトグラフィーを使用する、ＭＰＥＲ Ａｂ、ＣＤ４ＢＳ Ａｂ「ｂ」、およびＶ１／Ｖ２指向性Ａｂ「ａ」親抗体の精製を示す図である。図３Ａは、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィーを使用して精製中の親抗体の溶離プロファイルを示す。図３Ｂは、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００サイズ排除クロマトグラフィーによる単量体タンパク質の精製を示す。 図３Ａ～Ｂは、先ずアフィニティークロマトグラフィーを使用し、次いで分取サイズ排除クロマトグラフィーを使用する、ＭＰＥＲ Ａｂ、ＣＤ４ＢＳ Ａｂ「ｂ」、およびＶ１／Ｖ２指向性Ａｂ「ａ」親抗体の精製を示す図である。図３Ａは、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィーを使用して精製中の親抗体の溶離プロファイルを示す。図３Ｂは、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００サイズ排除クロマトグラフィーによる単量体タンパク質の精製を示す。 図４Ａ～Ｂは、二重特異性および三重特異性結合タンパク質のサイズ排除クロマトグラフィープロファイルを示す図である。図４Ａは、二重特異性結合タンパク質のサイズ排除クロマトグラフィープロファイルを示す。図４Ｂは、三重特異性結合タンパク質のサイズ排除クロマトグラフィープロファイルを示す。 図４Ａ－１の続き。 図４Ａ～Ｂは、二重特異性および三重特異性結合タンパク質のサイズ排除クロマトグラフィープロファイルを示す図である。図４Ａは、二重特異性結合タンパク質のサイズ排除クロマトグラフィープロファイルを示す。図４Ｂは、三重特異性結合タンパク質のサイズ排除クロマトグラフィープロファイルを示す。 図４Ｂ－１の続き。 図５は、標準的なＢｉａｃｏｒｅベースの動態アッセイにより評定したときの、ＨＩＶ ｇｐ４１由来ペプチド（ＭＰＥＲ結合部位）に対する三重特異性結合タンパク質および親ＭＰＥＲ Ａｂ抗体の結合動態についてのＢｉａｃｏｒｅセンソグラムを示す図である。 図５－１の続き。 図６は、標準的なＢｉａｃｏｒｅベースの動態アッセイにより評定したときの、組換えＨＩＶ ｇｐ１２０に対する３つの三重特異性結合タンパク質および親ＣＤ４ＢＳ Ａｂ「ｂ」抗体の結合動態についてのＢｉａｃｏｒｅセンソグラムを示す図である。 図６－１の続き。 図７は、アカゲザルにおける静脈内（ＩＶ）注射後の示されているタンパク質についての薬物動態（ＰＫ）研究の結果を示す図である。 図８Ａ～８Ｂは、一部の実施形態による、三重特異性Ｔ細胞エンゲージャーの模式図を示す図である。結合部位を点線の円により示す。 図９は、ｇｐ１２０のＣＤ３（ＣＤ３ＥはＣＤ３イプシロンタンパク質を表し；ＣＤ３ＤはＣＤ３デルタタンパク質を表す）、ＣＤ２８、および表面再構成安定化コア３（ＲＳＣ３）タンパク質に対する、三重特異性結合タンパク質「結合タンパク質３２」および「ＣＤ３×ＣＤ２８／ＣＤ４ＢＳ Ａｂ「ｂ」」ならびに陰性対照（ヒトＩｇＧ）の結合特性を示す図である。 図１０は、親ＣＤ４ＢＳ ＩｇＧ４抗体、および陰性対照（ｍＡｂなし）と比較して、三重特異性結合タンパク質「結合タンパク質３２」および「ＣＤ３×ＣＤ２８／ＣＤ４ＢＳ Ａｂ「ｂ」」を使用するＣＤ８ Ｔ細胞活性化を示す図である。 図１１は、親ＣＤ４ＢＳ ＩｇＧ４抗体、および陰性対照（ｍＡｂなし）と比較して、三重特異性結合タンパク質「結合タンパク質３２」および「ＣＤ３×ＣＤ２８／ＣＤ４ＢＳ Ａｂ「ｂ」」を使用するＣＤ４ Ｔ細胞活性化を示す図である。 図１２は、親ＣＤ４ＢＳ ＩｇＧ４抗体、および陰性対照（ｍＡｂなし）と比較して、三重特異性結合タンパク質「結合タンパク質３２」および「ＣＤ３×ＣＤ２８／ＣＤ４ＢＳ Ａｂ「ｂ」」によるＴ細胞活性化後のＣＤ３ダウンレギュレーションを示す図である。 図１３Ａ～Ｃは、潜伏感染ＨＩＶ－１＋Ｔ細胞に対する三重特異性結合タンパク質についての蛍光標識細胞分取（ＦＡＣＳ）ベースの細胞傷害性アッセイを示す図である。図１３Ａは、ＣＥＭ－Ｂａｌ細胞とともにインキュベートした三重特異性結合タンパク質についての結果を示す。図１３Ｂは、ＡＣＨ２細胞とともにインキュベートした三重特異性結合タンパク質についての結果を示す。図１３Ｃは、Ｊ１．１細胞とともにインキュベートした三重特異性結合タンパク質についての結果を示す。
本開示は、１つもしくはそれ以上のヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）標的タンパク質および／または１つもしくはそれ以上のＴ細胞受容体標的タンパク質に特異的に結合する３
つの抗原結合部位を形成する４本のポリペプチド鎖を含む三重特異性および／または三価結合タンパク質であって、該結合タンパク質を形成する第１のポリペプチド対は、交差配向を有する二重可変ドメインを有し、該結合タンパク質を形成する第２のポリペプチド対は、単一可変ドメインを有する、前記三重特異性および／または三価結合タンパク質を提供する。
以下の説明は、例示的な方法、パラメータなどを示すものである。しかし、そのような説明は、本開示の範囲の限定として意図されたものではなく、それよりむしろ例示的な実施形態の説明として提供されるものであることを、認識すべきである。
定義
本開示に従って用いられる以下の用語は、別段の指示がない限り、以下の意味を有すると解されるものとする。文脈による別段の要求がない限り、単数形の用語は、複数形を包含するものとし、複数形の用語はその単数形を包含するものとする。
本明細書で使用される「ポリヌクレオチド」という用語は、長さが少なくとも１０ヌクレオチドの１本鎖または２本鎖核酸ポリマーを指す。ある一定の実施形態では、ポリヌクレオチドを含むヌクレオチドは、リボヌクレオチドであってもよく、またはデオキシリボヌクレオチドであってもよく、またはどちらかのタイプのヌクレオチドの修飾形態であってもよい。そのような修飾体には、塩基修飾体、例えば、ブロモウリジン、リボース修飾体、例えば、アラビノシドおよび２’，３’－ジデオキシリボース、ならびにヌクレオチド間結合修飾体、例えば、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロセレノエート、ホスホロジセレノエート、ホスホロアニロチオエート、ホスホロアニラデートおよびホスホロアミデートが含まれる。「ポリヌクレオチド」という用語は、特に、１本鎖および２本鎖形態のＤＮＡを含む。
「単離されたポリヌクレオチド」は、ゲノム、ｃＤＮＡもしくは合成起源の、またはこれらの何らかの組合せの、ポリヌクレオチドであり、該ポリヌクレオチドは：（１）単離されたポリヌクレオチドに天然に見出されるポリヌクレオチドのすべてもしくは一部分と会合していない、（２）それが天然に連結していないポリヌクレオチドに連結している、または（３）より大きい配列の一部として天然に存在しない。
「単離されたポリペプチド」は、次のものである：（１）通常見出される少なくともいくつかの他のポリペプチドがないもの、（２）同じ源からの、例えば、同じ種からの、他のポリペプチドが本質的にないもの、（３）異なる種からの細胞による発現されるもの、（４）それが天然に会合しているポリヌクレオチド、脂質、炭水化物または他の物質の少なくとも約５０パーセントから分離されたもの、（５）「単離されたポリペプチド」が天然に会合しているポリペプチドの部分と（共有結合性相互作用によっても、非共有結合性相互作用によっても）会合していないもの、（６）それが天然に会合していないポリペプチドと（共有結合性または非共有結合性相互作用により）動作可能に会合しているもの、または（７）天然に存在しないもの。そのような単離されたポリペプチドは、合成起源の、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡもしくは他のＲＮＡによりコードされていることもあり、またはこれらの任意の組合せによりコードされていることもある。好ましくは、単離されたポリペプチドには、その使用（治療的使用、診断的使用、予防的使用、研究使用または別様の使用）に干渉することになる、その天然の環境で見出されるポリペプチドまたは他の汚染物質が実質的にない。
天然起源の抗体は、四量体を概して含む。各々のそのような四量体は、２つの同一のポリペプチド鎖対で概して構成されており、各対は、１本の完全長「軽」鎖（約２５ｋＤａの分子量を概して有する）および１本の完全長「重」鎖（約５０～７０ｋＤａの分子量を
概して有する）を有する。本明細書で使用される「重鎖」および「軽鎖」という用語は、標的抗原に対する特異性を付与するために十分な可変ドメイン配列を有する任意の免疫グロブリンポリペプチドを指す。軽鎖および重鎖各々のアミノ末端部分は、抗原認識を概して担当する、アミノ酸約１００～１１０またはそれ以上の可変ドメインを概して含む。各鎖のカルボキシ末端部分は、エフェクター機能を担当する定常ドメインを概して規定する。したがって、天然起源の抗体の場合、完全長重鎖免疫グロブリンポリペプチドは、可変ドメイン（ＶＨ）および３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３）を含み、前記ＶＨドメインは、前記ポリペプチドのアミノ末端にあり、前記ＣＨ３ドメインは、前記ポリペプチドのカルボキシル末端にあり、ならびに完全長軽鎖免疫グロブリンポリペプチドは、可変ドメイン（ＶＬ）および定常ドメイン（ＣＬ）を含み、前記ＶＬドメインは、前記ポリペプチドのアミノ末端にあり、前記ＣＬドメインは、前記ポリペプチドのカルボキシル末端にある。
ヒト軽鎖は、概して、カッパおよびラムダ軽鎖として分類され、ヒト重鎖は、概して、ミュー、デルタ、ガンマ、アルファまたはイプシロンとして分類され、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＥといった抗体のアイソタイプをそれぞれ規定する。ＩｇＧは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４を含むがこれらに限定されない、いくつかのサブクラスを有する。ＩｇＭは、ＩｇＭ１およびＩｇＭ２を含むがこれらに限定されないサブクラスを有する。ＩｇＡは、同様に、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２を含むがこれらに限定されないサブクラスに細分される。完全長軽鎖および重鎖内の可変および定常ドメインは、アミノ酸約１２またはそれ以上の「Ｊ」領域により概して連結されており、重鎖は、アミノ酸がさらに約１０個多い「Ｄ」領域も含む。例えば、あらゆる目的でその全体が参照により組み入れられる、ＦＵＮＤＡＭＥＮＴＡＬ ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ（Ｐａｕｌ，Ｗ．編、Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ、第２版、１９８９）も参照されたい。各軽鎖／重鎖対の可変領域は、概して、抗原結合部位を形成する。天然起源の抗体の可変ドメインは、相補性決定領域またはＣＤＲとも呼ばれる３つの超可変領域により連結された比較的保存されるフレームワーク領域（ＦＲ）の同じ一般構造を概して示す。各対の２本の鎖からのＣＤＲは、概して、フレームワーク領域により整列されており、これにより特異的エピトープへの結合が可能になりうる。アミノ末端からカルボキシル末端に、軽鎖および重鎖両方の可変ドメインは、概して、ドメインＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、およびＦＲ４を含む。
「ＣＤＲセット」という用語は、抗原に結合することができる、単一可変領域内に存在するＣＤＲ３つの１群を指す。これらのＣＤＲの正確な境界は、異なるシステムに従って異なって定義されている。カバット（Ｋａｂａｔら、ＳＥＱＵＥＮＣＥＳ ＯＦ ＰＲＯＴＥＩＮＳ ＯＦ ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＩＣＡＬ ＩＮＴＥＲＥＳＴ（Ｎａｔｉｏｎａｌ
Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．（１９８７）および（１９９１））により記載されたシステムは、抗体の任意の可変領域に適用可能な明確な残基番号付けシステムを提供するばかりでなく、３つのＣＤＲを定義する正確な残基境界も提供する。これらのＣＤＲは、カバットＣＤＲと呼ばれることもある。コチアおよび共同研究者（ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ、１９８７、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１～１７；Ｃｈｏｔｈｉａら、１９８９、Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７７～８３）は、カバットＣＤＲ内のある一定の小部分が、アミノ酸配列レベルで大きい多様性を有するにもかかわらず、ほぼ同一のペプチド主鎖立体構造をとることを見出した。これらの小部分は、Ｌ１、Ｌ２およびＬ３、またはＨ１、Ｈ２およびＨ３（ここで、「Ｌ」および「Ｈ」は、軽鎖および重鎖領域をそれぞれ示す）と称された。これらの領域は、コチアＣＤＲと呼ばれることがあり、カバットＣＤＲと重複する境界を有する。カバットＣＤＲと重複するＣＤＲを定義する他の境界は、Ｐａｄｌａｎ、１９９５、ＦＡＳＥＢ Ｊ．９：１３３～３９；ＭａｃＣａｌｌｕｍ、１９９６、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２（５）：７３２～４５；およびＬｅｆｒａｎｃ、２００３、Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ
．２７：５５～７７により記載されている。さらに他のＣＤＲ境界定義は、本明細書におけるシステムのものに厳格に従わないこともあるが、特定の残基もしくは残基群またはさらにはＣＤＲ全体が抗原結合に有意な影響を与えないという予測または実験的発見にかんがみて短縮または延長されることもあるにせよ、それでもなおカバットＣＤＲと重複することになる。本明細書において使用される方法は、ある一定の実施形態はカバットまたはコチア定義ＣＤＲを使用するとはいえ、これらのシステムのいずれに従って定義されたＣＤＲを用いてもよい。アミノ酸配列を使用する予測ＣＤＲの同定は、例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、第２巻、Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ Ｒ．，Ｄｕｂｅｌ Ｓ．編、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ、Ｂｅｒｌｉｎ、３３～５１頁（２０１０）のＭａｒｔｉｎ，Ａ．Ｃ．「Ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｖａｒｉａｂｌｅ ｄｏｍａｉｎｓ」におけるものなど、当分野において周知である。重鎖および／または軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列を調査して、他の従来の方法により、例えば、配列超可変性領域を決定するための他の重鎖および軽鎖可変領域の公知アミノ酸配列の比較により、ＣＤＲの配列を同定することもできる。番号付けした配列を目視によりアラインメントしてもよく、またはＴｈｏｍｐｓｏｎ、１９９４、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２２：４６７３～８０に記載されているような一連のＣＬＵＳＴＡＬプログラムのものなどの、アラインメントプログラムを利用することによりアラインメントしてもよい。分子モデルを従来通りに利用してフレームワークおよびＣＤＲ領域を正確に描写し、かくて配列ベースのアラインメントを補正する。
本明細書で使用される「Ｆｃ」という用語は、抗体の消化の結果として生じるまたは他の手段により産生される非抗原結合断片の配列を含む分子を、単量体形態であろうと、多量体形態であろうと指し、ヒンジ領域を含有することができる。天然Ｆｃの元々の免疫グロブリン源は、好ましくはヒト起源のものであり、いずれの免疫グロブリンであってもよいが、ＩｇＧ１およびＩｇＧ２が好ましい。Ｆｃ分子は、共有結合性会合（すなわち、ジスルフィド結合）および非共有結合性会合により連結して二量体または多量体形態にすることができる単量体ポリペプチドで構成されている。天然Ｆｃ分子の単量体サブユニット間の分子間ジスルフィド結合の数は、クラス（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、およびＩｇＥ）またはサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＡ１、およびＩｇＧＡ２）に依存して１～４の幅がある。Ｆｃの一例は、ＩｇＧのパパイン消化の結果として生じるジスルフィド結合二量体である。本明細書で使用される「Ｆｃ」という用語は、単量体形態、二量体形態および多量体形態に通有である。
Ｆ（ａｂ）断片は、１本の軽鎖と１本の重鎖のＶＨおよびＣＨ１ドメインとを概して含み、Ｆ（ａｂ）断片のＶＨ－ＣＨ１重鎖部分は、別の重鎖ポリペプチドとジスルフィド結合を形成することができない。本明細書で使用されるＦ（ａｂ）断片は、アミノ酸リンカーによって隔てられている２つの可変ドメインを含有する１本の軽鎖、およびアミノ酸リンカーにより隔てられている２つの可変ドメインと、ＣＨ１ドメインとを含有する１本の重鎖を含むこともある。
Ｆ（ａｂ’）断片は、１本の軽鎖と、より多くの定常領域を（ＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメインの間に）含有する１本の重鎖の部分とを概して含み、したがって、鎖間ジスルフィド結合を２本の重鎖間で形成してＦ（ａｂ’）２分子を形成することができる。
本明細書で使用される「結合タンパク質」という用語は、少なくとも１つの標的抗原と特異的に結合する、非天然起源の（または組換えもしくは工学的操作）分子であって、少なくとも３つの抗原結合部位を形成する４本のポリペプチド鎖を含み、
第１のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ２－Ｌ１－ＶＬ１－Ｌ２－ＣＬ ［Ｉ］
により表される構造を有し、
第２のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ１－Ｌ３－ＶＨ２－Ｌ４－ＣＨ１ ［ＩＩ］
により表される構造を有し、
第３のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ３－ＣＨ１ ［ＩＩＩ］
により表される構造を有し、
第４のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ３－ＣＬ ［ＩＶ］
により表される構造を有し、
式中：
ＶＬ１は、第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ２は、第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ３は、第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＨ１は、第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ２は、第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ３は、第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣＬは、免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣＨ１は、免疫グロブリンＣＨ１重鎖定常ドメインであり；
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４は、アミノ酸リンカーであり；
ここで、式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドは、交差軽鎖－重鎖対を形成する、
前記分子を指す。
「組換え」分子は、組換え手段により製造、発現、作出または単離されたものである。
本開示の一実施形態は、１つ～３つの標的抗原に対する生物学的および免疫学的特異性を有する結合タンパク質を提供する。本開示の別の実施形態は、そのような結合タンパク質を形成するポリペプチド鎖をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子を提供する。本開示の別の実施形態は、そのような結合タンパク質を形成するポリペプチド鎖をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子を含む発現ベクターを提供する。本開示のさらに別の実施形態は、そのような結合タンパク質を発現する（すなわち、そのような結合タンパク質を形成するポリペプチド鎖をコードする核酸分子またはベクターを含む）宿主細胞を提供する。
本明細書で使用される「スワップ可能性」という用語は、結合タンパク質フォーマット内の可変ドメインの可換性であって、折り畳みおよび究極の結合親和性が保持される前記可換性を指す。「完全スワップ可能性」は、結合親和性の保持によって証明されるような結合タンパク質の完全な機能性を維持しながら、式Ｉのポリペプチド鎖または式ＩＩのポリペプチド鎖におけるＶＨ１およびＶＨ２ドメインの順序、したがってＶＬ１およびＶＬ２ドメインの順序をスワップすること（すなわち、順序を逆にすること）ができることを指す。さらに、ＶＨおよびＶＬという呼称は、最終フォーマットの特定のタンパク質鎖上のドメインの位置を単に指すことに留意されたい。例えば、ＶＨ１およびＶＨ２を親抗体におけるＶＬ１およびＶＬ２ドメインから推論し、結合タンパク質のＶＨ１およびＶＨ２位置に配置することができるだろう。同様に、ＶＬ１およびＶＬ２を親抗体におけるＶＨ１およびＶＨ２ドメインから推論し、結合タンパク質のＶH１およびＶH２位置に配置することができるだろう。それ故、ＶＨおよびＶＬという呼称は、現在の位置を指し、親抗体における元の位置を指さない。したがって、ＶＨおよびＶＬドメインは、「スワップ可能」である。
本明細書で使用される「抗原」または「標的抗原」または「抗原標的」という用語は、結合タンパク質が結合できる分子または分子の部分であって、さらに、抗原のエピトープと結合することができる抗体を産生するために動物において使用することができる前記分子または分子の部分を指す。標的抗原は、１つまたはそれ以上のエピトープを有することができる。結合タンパク質により認識される各標的抗原に関して、結合タンパク質は、該標的抗原を認識するインタクト抗体と競合することができる。
本明細書で使用される「ＨＩＶ」という用語は、ヒト免疫不全ウイルスを意味する。本明細書で使用される「ＨＩＶ感染症」という用語は、ＨＩＶ Ｉ、ＨＩＶ ＩＩ、ＨＩＶ
ＩＩＩ（別名ＨＴＬＶ－ＩＩ、ＬＡＶ－１、ＬＡＶ－２）を含むがこれらに限定されない、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）ファミリーのレトロウイルスによる、宿主、特に、ヒト宿主の感染症を一般に包含する。ＨＩＶは、本明細書では、ＨＩＶファミリーの任意の株、型、サブタイプ、クレードおよび変種を指すために使用することができる。したがって、ＨＩＶ感染症を処置することは、任意のＨＩＶファミリーのレトロウイルスの保有者である人または活動性ＡＩＤＳと診断される人の処置、ならびにそのような人のＡＩＤＳ関連状態の処置または予防を包含することになる。
本明細書で使用される「ＡＩＤＳ」という用語は、後天性免疫不全症候群を意味する。ＡＩＤＳは、ＨＩＶにより引き起こされる。
「ＣＤ４ｂｓ」または「ＣＤ４結合部位」という用語は、Ｔヘルパー細胞、単球、マクロファージおよび樹状細胞などの免疫細胞の表面で見出される糖タンパク質であるＣＤ４（表面抗原分類４）の結合部位を指す。
「ＣＤ３」という用語は、表面抗原分類因子３ポリペプチドであり、概してＴ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体の一部であるＴ細胞表面タンパク質である。
「ＣＤ２８」は、表面抗原分類２８ポリペプチドであり、Ｔ細胞活性化および生存のための共刺激シグナルをもたらすＴ細胞表面タンパク質である。
「糖タンパク質１６０」または「ｇｐ１６０タンパク質」という用語は、ＨＩＶのエンベロープ糖タンパク質複合体を指し、ｇｐ１２０およびｇｐ４１サブユニットに分割されるホモ三量体である。
「ＭＰＥＲ」という用語は、ＨＩＶをはじめとするレトロウイルスのエンベロープタンパク質複合体のサブユニットである、糖タンパク質４１（ｇｐ４１）の膜近位外部領域を指す。
「グリカン」という用語は、糖タンパク質、糖脂質またはプロテオグリカンなどの複合糖質の炭水化物部分を指す。本開示結合タンパク質に関して、グリカンは、ＨＩＶ－１エンベロープ糖タンパク質ｇｐ１２０を指す。
「Ｔ細胞エンゲージャー」という用語は、宿主の免疫系、より具体的にはＴ細胞の細胞傷害活性にも指向され、ＨＩＶ標的タンパク質にも指向された結合タンパク質を指す。
「三量体突端部」という用語は、ＨＩＶ－１エンベロープ糖タンパク質ｇｐ１２０の突端部を指す。
「単一特異性結合タンパク質」という用語は、１つの抗原標的と特異的に結合する結合タンパク質を指す。
「一価結合タンパク質」という用語は、１つの抗原結合部位を有する結合タンパク質を指す。
「二重特異性結合タンパク質」という用語は、２つの異なる抗原標的と特異的に結合する結合タンパク質を指す。
「二価結合タンパク質」という用語は、２つの結合部位を有する結合タンパク質を指す。
「三重特異性結合タンパク質」という用語は、３つの異なる抗原標的と特異的に結合する結合タンパク質を指す。
「三価結合タンパク質」という用語は、３つの結合部位を有する結合タンパク質を指す。特定の実施形態では、三価結合タンパク質は、１つの抗原標的と結合することができる。他の実施形態では、三価結合タンパク質は、２つの抗原標的と結合することができる。他の実施形態では、三価結合タンパク質は、３つの抗原標的と結合することができる。
「単離された」結合タンパク質は、その天然環境の成分から同定および分離および／または回収されたものである。その天然の環境の汚染成分は、結合タンパク質についての診断的または治療的使用に干渉することになる物質であり、酵素、ホルモンおよび他のタンパク質様溶質または非タンパク質様溶質を含むことができる。一部の実施形態では、結合タンパク質は：（１）ローリー法により判定して抗体の９５重量％超、最も好ましくは９９重量％超まで、（２）スピニングカップシークエネーターの使用によりＮ末端もしくは内部アミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るのに十分な程度に、または（３）クマシーブルーもしくは好ましくは銀染色剤を使用する還元もしくは非還元条件下でのＳＤＳ－ＰＡＧＥにより均一状態まで、精製されることになる。単離された結合タンパク質は、結合タンパク質の天然環境の少なくとも１成分が存在しないことになるので、組換え細胞内の原位置に結合タンパク質を含む。
本明細書で使用される「実質的に純粋な」または「実質的に精製されている」という用語は、存在する優勢種である（すなわち、分子ベースで、組成物中のいずれの他の個々の種よりも大量に存在する）化合物または種を指す。一部の実施形態では、実質的に精製されている画分は、前記種が、存在するすべての高分子種の（分子ベースで）少なくとも約５０％を含む、組成物である。他の実施形態では、実質的に純粋な組成物は、該組成物中に存在するすべての高分子種の約８０％、８５％、９０％、９５％または９９％より多くを含むことになる。さらに他の実施形態では、前記種は、組成物が単一高分子種から本質的になる、（従来の検出方法により組成物において汚染種を検出することができない）本質的均一状態まで精製される。
本明細書で使用される「中和」結合タンパク質は、それが結合する標的抗原のエフェクター機能を遮断することまたは実質的に低下させることができる分子を指す。この場合に使用される「実質的に低下させる」は、標的抗原のエフェクター機能の少なくとも約６０％、好ましくは少なくとも約７０％、より好ましくは少なくとも約７５％、よりいっそう好ましくは少なくとも約８０％、よりいっそう好ましくは少なくとも約８５％、最も好ましくは少なくとも約９０％低下を意味する。
「エピトープ」という用語は、免疫グロブリンまたはＴ細胞受容体と特異的に結合することができる任意の決定基、好ましくはポリペプチド決定基を含む。ある一定の実施形態では、エピトープ決定基は、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル基またはスルホニル基などの
分子の化学的に活性な表面基を含み、ある一定の実施形態では、特異的三次元構造特性および／または特異的電荷特性を有することができる。エピトープは、抗体または結合タンパク質により結合される、抗原の領域も指す。ある一定の実施形態では、結合タンパク質は、タンパク質および／または高分子の複合混合物中のその標的抗原を優先的に認識する場合、抗原に特異的に結合すると言われる。一部の実施形態では、結合タンパク質は、平衡解離定数が、≦１０－８Ｍである場合、より好ましくは、平衡解離定数が、≦１０－９Ｍである場合、最も好ましくは、解離定数が、＜１０－１０Ｍである場合、抗原に特異的に結合すると言われる。
結合タンパク質の解離定数（ＫＤ）は、例えば表面プラズモン共鳴により、決定することができる。一般に、表面プラズモン共鳴分析は、ＢＩＡｃｏｒｅシステム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ；Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）を使用して表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によりリガンド（バイオセンサーマトリックス上の標的抗原）と分析物（溶解状態の結合タンパク質）とのリアルタイム結合相互作用を測定する。表面プラズモン分析は、分析物（バイオセンサーマトリックス上の結合タンパク質）を固定化し、リガンド（標的抗原）を提示することによって行うこともできる。本明細書で使用される「ＫＤ」という用語は、特定の結合タンパク質と標的抗原との相互作用の解離定数を指す。
本明細書で使用される「特異的に結合する」という用語は、エピトープを含有する抗原と少なくとも約１×１０－６Ｍ、１×１０－７Ｍ、１×１０－８Ｍ、１×１０－９Ｍ、１×１０－１０Ｍ、１×１０－１１Ｍ、１×１０－１２Ｍ、もしくはそれ以上のＫｄで結合すること、および／または非特異的抗原に対するその親和性より少なくとも２倍大きい親和性でエピトープと結合することが、結合タンパク質またはその抗原結合断片にできることを指す。
本明細書で使用される「リンカー」という用語は、軽鎖および重鎖のドメインが折り重なって交差二重可変領域免疫グロブリンになるのに十分な移動性を与えるために、免疫グロブリンドメイン間に挿入される１つまたはそれ以上のアミノ酸残基を指す。リンカーは、配列レベルでは可変ドメイン間または可変ドメインと定常ドメインの間の移行部にそれぞれ挿入される。免疫グロブリンドメインの近似的サイズは十分解明されているので、ドメイン間の移行部を同定することができる。ドメイン移行部の正確な位置は、実験データにより立証されるような、またはモデリング技術もしくは二次構造予測技術により推測できるような、ベータシートまたはアルファヘリックスなどの二次構造エレメントを形成しないペプチドストレッチの位置の特定により、決定することができる。本明細書に記載のリンカーは、軽鎖上のＶＬ２のＣ末端とＶＬ１ドメインのＮ末端の間に位置するものは、Ｌ１と呼ばれ；および軽鎖上のＶＬ１のＣ末端とＣＬドメインのＮ末端の間に位置するものは、Ｌ２と呼ばれる。重鎖リンカーは、ＶＨ１のＣ末端とＶＨ２ドメインのＮ末端の間に位置するものは、Ｌ３として公知であり；およびＶＨ２のＣ末端とＣＨ１ドメインのＮ末端の間に位置するものは、Ｌ４として公知である。
本明細書で使用される「ベクター」という用語は、宿主細胞にコード情報を伝達するために使用される任意の分子（例えば、核酸、プラスミド、またはウイルス）を指す。「ベクター」という用語は、核酸分子であって、該核酸分子が連結されている別の核酸を輸送することができる前記核酸分子を含む。ベクターの１つのタイプは、さらなるＤＮＡセグメントを挿入することができる環状２本鎖ＤＮＡ分子を指す「プラスミド」である。ベクターのもう１つのタイプは、さらなるＤＮＡセグメントをウイルスゲノムに挿入することができるウイルスベクターである。ある一定のベクターは、それらが導入される宿主細胞において自己複製することができる（例えば、細菌複製起点を有する細菌ベクター、およびエピソーム哺乳動物ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター）を宿主細胞への導入時に該宿主細胞のゲノムに組込むことができ、その結果、該ベク
ターは、宿主ゲノムとともに複製される。加えて、ある一定のベクターは、該ベクターが動作可能に連結されている遺伝子の発現を指向することができる。そのようなベクターは、本明細書では「組換え発現ベクター」（または単に「発現ベクター」）と呼ばれる。一般に、組換えＤＮＡ技術において有用な発現ベクターは、プラスミドの形態であることが多い。「プラスミド」という用語と「ベクター」という用語は、プラスミドがベクターの最もよく使用される形態であるので、本明細書では同義で使用されることがある。しかし、本開示は、等価の機能を果たす他の形態の発現ベクター、例えばウイルスベクター（例えば、複製欠損レトロウイルス、アデノウイルス、およびアデノ随伴ウイルス）を含むことを意図したものである。
本明細書で使用される「組換え宿主細胞」（または「宿主細胞」）という句は、組換え発現ベクターが導入された細胞を指す。組換え宿主細胞または宿主細胞は、特定の対象細胞のみならず、そのような細胞の子孫も指すことを意図したものである。変異または環境の影響いずれかのために後の世代においてある一定の改変が起こることがあるため、そのような子孫は、実際には親細胞と同一でないことがあるが、そのような細胞は、本明細書で使用される「宿主細胞」という用語の範囲内になお含まれる。細菌、酵母、バキュロウイルスおよび哺乳動物発現系（ならびにファージディスプレイ発現システム）をはじめとする多種多様な宿主細胞発現系を使用して、結合タンパク質を発現させることができる。適する細菌発現ベクターの一例は、ｐＵＣ１９である。結合タンパク質を組換え発現させるために、宿主細胞は、結合タンパク質のポリペプチド鎖をコードするＤＮＡ断片を担持する１つもしくはそれ以上の組換え発現ベクターを用いて形質転換またはトランスフェクトされ、その結果、ポリペプチド鎖は、宿主細胞において発現され、好ましくは、宿主細胞が培養される培地に分泌され、その培地から結合タンパク質が回収される。
本明細書で使用される「形質転換」という用語は、細胞の遺伝特性の変化を指し、細胞は、新たなＤＮＡを含有するように改変されている場合、形質転換されている。例えば、細胞は、その天然状態から遺伝子改変される場合、形質転換される。形質転換後、形質転換するＤＮＡは、細胞の染色体への物理的組込みにより該細胞のＤＮＡと組み変わることもあり、または複製されることなくエピソームエレメントとして一時的に維持されることもあり、またはプラスミドとして独立して複製することもある。細胞は、ＤＮＡが該細胞の分裂に伴って複製された場合、安定に形質転換されていると見なされる。本明細書で使用される「トランスフェクション」という用語は、細胞による外来または外来性ＤＮＡの取り込みを指し、細胞は、外来性ＤＮＡが細胞膜内に導入されている場合、「トランスフェクト」されている。多数のトランスフェクション技術が当技術分野において周知である。そのような技術を使用して、１つまたはそれ以上の外来性ＤＮＡ分子を適する宿主細胞に導入することができる。
本明細書で使用され、物体に適用される「天然起源の」という用語は、その物体が、天然に見出すことができるものであり、人間により操作されていないことを指す。例えば、生物体（ウイルスを含む）内に存在するポリヌクレオチドまたはポリペプチドであって、天然の源から単離することができ、人間により意図的に修飾されていない前記ポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、天然起源のものである。同様に、本明細書で使用される「非天然起源の」は、天然に見出されない、または構造修飾されている、または人間により合成された物体を指す。
本明細書で使用される、２０種の標準型アミノ酸およびそれらの略号は、慣例的用法に準じる。２０種の標準型アミノ酸の立体異性体（例えば、D－アミノ酸）；非天然アミノ
酸および類似体、例えば、α－，α－二置換アミノ酸、Ｎ－アルキルアミノ酸、乳酸および他のアミノ酸、ならびに他の非標準型アミノ酸も、結合タンパク質のポリペプチド鎖の適する成分であることがある。非標準型アミノ酸の例としては、次のものが挙げられる：
４－ヒドロキシプロリン、γ－カルボキシグルタメート、ε－Ｎ，Ｎ，Ｎ－トリメチルリシン、ε－Ｎ－アセチルリシン、Ｏ－ホスホセリン、Ｎ－アセチルセリン、Ｎ－ホルミルメチオニン、３－メチルヒスチジン、５－ヒドロキシリシン、σ－Ｎ－メチルアルギニン、ならびに他の類似のアミノ酸およびイミノ酸（例えば、４－ヒドロキシプロリン）。本明細書で使用されるポリペプチド表記法では、標準的用法および慣例に従って、左手方向がアミノ末端方向であり、右手方向がカルボキシル末端方向である。
天然起源の残基は、共通の側鎖特性に基づいて次のクラスに分けることができる：
（１）疎水性：Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｒｏ；
（２）極性親水性；Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ；
（３）脂肪族：Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｐｒｏ；
（４）脂肪族疎水性；Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｐｒｏ；
（５）中性親水性；Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（６）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（７）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（８）鎖の配向に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
（９）芳香族：Ｈｉｓ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ；および
（１０）芳香族疎水性：Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ。
保存的アミノ酸置換は、これらのうちの１つのクラスのメンバーと同じクラスの別のメンバーとの交換を含むことができる。非保存的置換は、これらのうちの１つのクラスのメンバーの、別のクラスからのメンバーへの交換を含むことができる。
当業者は、周知の技術を使用して結合タンパク質のポリペプチド鎖の適する変異体を決定することができるであろう。例えば、当業者は、活性にとって重要であると考えられていない領域を標的にすることにより、活性を破壊することなく変化させることができる、ポリペプチド鎖の適する領域を同定することができる。あるいは、当業者は、類似のポリペプチド間で保存される、分子の残基および部分を同定することができる。加えて、生物活性にとってまたは構造にとって重要である可能性がある領域であっても、生物活性を破壊することなく、またはポリペプチド構造に悪影響を与えることなく、保存的アミノ酸置換に付すことができる。
本明細書で使用される「患者」という用語は、ヒトおよび動物対象を含む。
本明細書で使用される「処置」または「処置する」という用語は、治療的処置と予防対策の両方を指す。処置を必要とする者には、障害に罹患している者はもちろん、障害に罹患する傾向がある者、または障害を予防すべき者も含まれる。特定の実施形態では、結合タンパク質は、ＨＩＶに感染したヒト、もしくはＨＩＶ感染症に罹患しやすいヒトを処置するために、またはＨＩＶに感染したヒト対象におけるＨＩＶ感染症を改善するために、使用することができる。結合タンパク質は、ヒト患者におけるＨＩＶを予防するために使用することもできる。
ＨＩＶに感染した処置されるヒトが、例えば、急性原発性感染症候群（これは、無症候性であることもあり、または発熱、倦怠感、下痢および神経症状、例えば頭痛を有するインフルエンザ様疾患を伴うこともある）、無症候性感染症（これは、循環ＣＤ４＋Ｔ細胞の数の漸減を伴う、長い潜伏期間である）、およびＡＩＤＳ（これは、より重度のＡＩＤＳ定義疾患により、および／または有効な免疫機能に対応するレベル未満への循環ＣＤ４細胞の減少により定義される）を含む、ＨＩＶ感染のいくつかの進行期のいずれか１つに
ある対象を含むことは、理解されるはずである。加えて、ＨＩＶ感染症を処置することまたは予防することは、例えば、ＨＩＶ汚染血との接触、輸血、体液の交換、感染者との「危険な」性行為、偶発的針刺し、汚染された器具で入れ墨もしくは鍼治療の施術を受けること、または妊娠、出産中もしくはその直後の母親から乳児へのウイルスの感染による、ＨＩＶへの疑わしい過去の曝露後の、ＨＩＶによる疑わしい感染症を処置することも包含することになる。
本明細書で使用される「医薬組成物」または「治療用組成物」という用語は、患者に適切に投与されたときに所望の治療効果を誘導することができる化合物または組成物を指す。
本明細書で使用される「薬学的に許容される担体」または「生理学的に許容される担体」という用語は、結合タンパク質の送達の遂行または増進に適する１つまたはそれ以上の配合材料を指す。
１つまたはそれ以上の結合タンパク質を含む医薬組成物に関して使用されるときの「有効量」および「治療有効量」という用語は、所望の治療結果を生じさせるのに十分な量または投薬量を指す。より具体的には、治療有効量は、処置される状態に関連する臨床的に定義された病理過程の１つまたはそれ以上を、ある程度の期間、抑制するのに十分な結合タンパク質の量である。有効量は、使用されることになる特定の結合タンパク質に依存して変わることがあり、処置されることになる患者に関する様々な因子および条件、ならびに障害の重症度にも依存する。例えば、結合タンパク質をｉｎ ｖｉｖｏで投与すべきである場合、考慮される因子には、患者の年齢、体重および健康、ならびに前臨床動物研究で得られた用量反応曲線および毒性データなどの因子があるであろう。所与の医薬組成物の有効量または治療有効量の決定は、十分に当業者の能力の範囲内である。
本開示の一実施形態は、薬学的に許容される担体と治療有効量の結合タンパク質とを含む医薬組成物を提供する。
三重特異性および／または三価結合タンパク質
一実施形態では、本開示の結合タンパク質は、１つまたはそれ以上の（例えば、３つの異なる）ＨＩＶ標的タンパク質に特異的に結合する３つの抗原結合部位を形成する４本のポリペプチド鎖を含む三重特異性および／または三価結合タンパク質であって、
第１のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ２－Ｌ１－ＶＬ１－Ｌ２－ＣＬ ［Ｉ］
により表される構造を含み、
第２のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ１－Ｌ３－ＶＨ２－Ｌ４－ＣＨ１ ［ＩＩ］
により表される構造を含み、
第３のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ３－ＣＨ１ ［ＩＩＩ］
により表される構造を含み、
第４のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ３－ＣＬ ［ＩＶ］
により表される構造を含み、
式中：
ＶＬ１は、第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ２は、第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ３は、第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＨ１は、第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ２は、第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ３は、第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣＬは、免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣＨ１は、免疫グロブリンＣＨ１重鎖定常ドメインであり；
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４は、アミノ酸リンカーであり；
ここで、式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドは、交差軽鎖－重鎖対を形成する、
前記三重特異性および／または三価結合タンパク質である。
一実施形態では、本開示の結合タンパク質は、１つまたはそれ以上の（例えば、３つの異なる）ＨＩＶ標的タンパク質に特異的に結合する３つの抗原結合部位を形成する４本のポリペプチド鎖を含む三重特異性および／または三価結合タンパク質であって、
第１のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ２－Ｌ１－ＶＬ１－Ｌ２－ＣＬ ［Ｉ］
により表される構造を含み、
第２のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ１－Ｌ３－ＶＨ２－Ｌ４－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［ＩＩ］
により表される構造を含み、
第３のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ３－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［ＩＩＩ］
により表される構造を含み、
第４のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ３－ＣＬ ［ＩＶ］
により表される構造を含み、
式中：
ＶＬ１は、第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ２は、第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ３は、第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＨ１は、第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ２は、第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ３は、第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣＬは、免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣＨ１は、免疫グロブリンＣＨ１重鎖定常ドメインであり；
ＣＨ２は、免疫グロブリンＣＨ２重鎖定常ドメインであり；
ＣＨ３は、免疫グロブリンＣＨ３重鎖定常ドメインであり；
ヒンジは、ＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメインを接続する免疫グロブリンヒンジ領域であり；
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４は、アミノ酸リンカーであり；
ここで、式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドは、交差軽鎖－重鎖対を形成する、
前記三重特異性および／または三価結合タンパク質である。
一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖および第２のポリペプチド鎖は、２つの別個の抗原結合部位を形成する交差配向を有する。一部の実施形態では、ＶＨ１およびＶＬ１は、結合対を形成し、第１の抗原結合部位を形成する。一部の実施形態では、ＶＨ２およびＶＬ２は、結合対を形成し、第２の抗原結合部位を形成する。一部の実施形態では、第３のポリペプチドおよび第４のポリペプチドは、第３の抗原結合部位を形成する。一部の実施形態では、ＶＨ３およびＶＬ３は、結合対を形成し、第３の抗原結合部位を形成する。
一部の実施形態では、ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は、各々独立して、配列番号：２、４、１０、１２、１８、２０、２６、２８、３４、３６、４２、４４、５０、５２、５８、６０、６６、６８、７４、７６、８２、８４、９０、９２、９８、１００、１０６、１０８、１１４、１１６、１２２、１２４、１３０、１３２、１３８、１４０、１４６、１４８、１５４、１５６、１６２、１６４、１７０、１７２、１７８、１８０、１８６、１８８、１９４、１９６、２０２、２０４、２１０、２１２、２１８、２２０、２２６、２２８、２３３、２３５、２４１、２４３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に由来する可変ドメインであり；ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は、各々独立して、配列番号：１、３、９、１１、１７、１０、２５、２７、３３、３５、４１、４３、４９、５１、５７、５９、６５、６７、７３、７５、８１、８３、８９、９１、９７、９９、１０５、１０７、１１３、１１５、１２１、１２３、１２９、１３１、１３７、１３９、１４５、１４７、１５３、１５５、１６１、１６３、１６９、１７１、１７７、１７９、１８５、１８７、１９３、１９５、２０１、２０３、２０９、２１１、２１７、２１９、２２５、２２７、２３２、２３４、２４０、２４２のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に由来する可変ドメインである。他の実施形態では、ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は、各々独立して、配列番号：２６６～２８３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む可変ドメインの軽鎖相補性決定領域を含み；ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は、各々独立して、配列番号：２４８～２６５のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む可変ドメインの重鎖相補性決定領域を含む。一部の実施形態では、ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は、各々独立して、本明細書に記載の抗体ＣＤ４ＢＳ「ａ」、ＣＤ４ＢＳ「ｂ」、ＭＰＥＲ、ＭＰＥＲ＿１００Ｗ、Ｖ１／Ｖ２指向性「ａ」、Ｖ１／Ｖ２指向性「ｂ」、またはＶ３指向性のものの軽鎖可変ドメイン配列を含む、軽鎖可変ドメインである。一部の実施形態では、ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は、各々独立して、本明細書に記載の抗体ＣＤ４ＢＳ「ａ」、ＣＤ４ＢＳ「ｂ」、ＭＰＥＲ、ＭＰＥＲ＿１００Ｗ、Ｖ１／Ｖ２指向性「ａ」、Ｖ１／Ｖ２指向性「ｂ」、またはＶ３指向性のものの重鎖可変ドメイン配列を含む重鎖可変ドメインである。一部の実施形態では、ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は、各々独立して、本明細書に記載の抗体ＣＤ４ＢＳ「ａ」、ＣＤ４ＢＳ「ｂ」、ＭＰＥＲ、ＭＰＥＲ＿１００Ｗ、Ｖ１／Ｖ２指向性「ａ」、Ｖ１／Ｖ２指向性「ｂ」、またはＶ３指向性のものの軽鎖可変ドメイン配列のＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２およびＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメインである。一部の実施形態では、ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は、各々独立して、本明細書に記載の抗体ＣＤ４ＢＳ「ａ」、ＣＤ４ＢＳ「ｂ」、ＭＰＥＲ、ＭＰＥＲ＿１００Ｗ、Ｖ１／Ｖ２指向性「ａ」、Ｖ１／Ｖ２指向性「ｂ」、またはＶ３指向性のものの重鎖可変ドメイン配列のＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２およびＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメインである。
一部の実施形態では、ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は、各々独立して、配列番号：３０３、３０５、３１１、３１３、３１９、３２１、３２７、３２９、３３５、３３７、３４３、３４５、３５１、３５３、３５９、３６１、３６７、３６９、３７５、３７７、３８３、３８５、３９１、３９３、３９９、４０１、４０７、４０９、４１５、４１７、４２３、４２５、４３１、４３３、４３９、４４１、４４７、４４９、４５５、４５７、４６３、４６５、４７１、４７３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に由来する可変ドメインであり；ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は、各々独立して、配列番号：３０２、３０４、３１０、３１２、３１８、３２０、３２６、３２８、３３４、３３６、３４２、３４４、３５０、３５２、３５８、３６０、３６６、３６８、３７４、３７６、３８２、３８４、３９０、３９２、３９８、４００、４０６、４０８、４１４、４１６、４２２、４２４、４３０、４３２、４３８、４４０、４４６、４４８、４５４、４５６、４６２、４６４、４７０、４７２のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に由来する可変ドメインである。他の実施形態では、ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は、各々独立して、配列番号：２６６～２７１、２７５～２７７、４８８～４９６のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む可変ドメインの軽鎖相補性決定領域を含み；ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は、各々独立して、配列番号：２４８～２５３、２５７～２５９、４７９～４８７のいずれか１つに記載のア
ミノ酸配列を含む可変ドメインの重鎖相補性決定領域を含む。
特定の実施形態では、式Ｉのポリペプチド鎖または式ＩＩのポリペプチド鎖におけるＶＨ１およびＶＨ２ドメインの順序、したがってＶＬ１およびＶＬ２ドメインの順序は、スワップされる（すなわち、順序を逆にする）。
一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号：４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号：１２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：１１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：１０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
他の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号：２０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：１９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：１７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：１８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
他の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号：２８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：２７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：２５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：２６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
他の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号：３６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：３５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：３３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：３４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
他の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号：４４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：４３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：４１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：４２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
他の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号：５２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：５２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：５１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：５１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：４９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：５０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：５０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
他の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号：６０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：６０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：５９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：５９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：５７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：５７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：５８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：５８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号：６８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：６８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：６７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：６７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：６５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：６５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：６６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：６６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
他の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号：７６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：７６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：７５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：７５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：７３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：７３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：７４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：７４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
他の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号：８４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：８４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：８３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：８３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペ
プチド鎖は、配列番号：８１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：８１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：８２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：８２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
他の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号：９２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：９２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：９１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：９１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：８９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：８９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：９０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：９０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
他の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号：１００のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１００のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：９９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：９９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：９７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：９７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：９８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：９８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
他の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号：１０８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１０８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：１０７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１０７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：１０５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１０５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：１０６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１０６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
他の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号：１１６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１１６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：１１５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１１５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：１１３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１１３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：１１４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１１４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
他の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号：１２４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１２４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：１２３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１２３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：１２１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１２１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：１２２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１２２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
他の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号：１３２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１３２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：１３１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１３１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：１２９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１２９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：１３０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１３０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
他の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号：１４０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１４０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：１３９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１３９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：１３７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１３７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：１３８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１３８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
他の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号：１４８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１４８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：１４７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１４７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：１４５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１４５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：１４６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１４６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
他の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号：１５６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１５６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：１５５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１５５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：１５３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１５３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：１５４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１５４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
他の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号：１６４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１６４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：１６３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１６３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：１６１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１６１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：１６２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１６２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
他の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号：１７２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１７２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：１７１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１７１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：１６９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１６
９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：１７０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１７０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
他の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号：１８０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１８０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：１７９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１７９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：１７７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１７７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：１７８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１７８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
他の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号：１８８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１８８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：１８７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１８７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：１８５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１８５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：１８６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１８６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
他の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号：１９６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１９６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：１９５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１９５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：１９３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１９３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：１９４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１９４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
他の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号：２０４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２０４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：２０３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２０３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：２０１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２０１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：２０２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２０２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
他の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号：２１２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２１２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：２１１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２１１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：２０９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２０９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：２１０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２１０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
他の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号：２２０のアミノ酸配列を含む
か、または配列番号：２２０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：２１９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２１９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：２１７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２１７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：２１８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２１８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
他の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号：２２８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２２８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：２２７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２２７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：２２５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２２５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：２２６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２２６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
他の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号：２３５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２３５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：２３４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２３４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：２３２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２３２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：２３３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２３３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
他の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号：２４３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２４３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：２４２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２４２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：２４０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２４０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：２４１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２４１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
別の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号：３０５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３０５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：３０４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３０４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：３０２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３０２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：３０３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３０３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
別の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号：３１３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３１３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：３１２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３１２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：３１０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３１０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチ
ド鎖は、配列番号：３１１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３１１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
別の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号：３２１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３２１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：３２０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３２０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：３１８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３１８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：３１９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３１９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
別の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号：３２９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３２９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：３２８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３２８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：３２６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３２６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：３２７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３２７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
別の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号：３３７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３３７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：３３６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３３６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：３３４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３３４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：３３５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３３５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
別の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号：３４５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３４５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：３４４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３４４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：３４２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３４２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：３４３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３４３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
別の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号：３５３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３５３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：３５２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３５２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：３５０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３５０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：３５１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３５１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
別の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号：３６１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３６１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列
を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：３６０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３６０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：３５８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３５８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：３５９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３５９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
別の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号：３６９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３６９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：３６８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３６８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：３６６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３６６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：３６７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３６７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
別の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号：３７７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３７７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：３７６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３７６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：３７４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３７４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：３７５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３７５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
別の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号：３８５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３８５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：３８４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３８４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：３８２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３８２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：３８３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３８３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
別の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号：３９３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３９３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：３９２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３９２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：３９０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３９０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：３９１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３９１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
別の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号：４０１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４０１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：４００のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４００のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：３９８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３９８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：３９９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３９９のアミノ酸
配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
別の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号：４０９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４０９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：４０８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４０８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：４０６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４０６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：４０７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４０７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
別の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号：４１７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４１７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：４１６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４１６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：４１４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４１４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：４１５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４１５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
別の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号：４２５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４２５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：４２４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４２４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：４２２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４２２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：４２３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４２３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
別の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号：４３３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４３３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：４３２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４３２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：４３０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４３０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：４３１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４３１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
別の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号：４４１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４４１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：４４０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４４０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：４３８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４３８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：４３９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４３９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
別の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号：４４９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４４９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：４４８のアミノ酸配列を含むか、または配
列番号：４４８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：４４６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４４６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：４４７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４４７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
別の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号：４５７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４５７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：４５６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４５６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：４５４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４５４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：４５５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４５５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
別の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号：４６５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４６５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：４６４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４６４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：４６２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４６２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：４６３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４６３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
別の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号：４７３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４７３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号：４７２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４７２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号：４７０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４７０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号：４７１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４７１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
他の実施形態では、本開示の結合タンパク質は、１つまたはそれ以上の（例えば、３つの）ＨＩＶ標的抗原に特異的に結合する３つの抗原結合部位を形成する４本のポリペプチド鎖を含む三重特異性および／または三価結合タンパク質であって、
第１のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ２－Ｌ１－ＶＬ１－Ｌ２－ＣＬ ［Ｉ］
により表される構造を有し、
第２のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ１－Ｌ３－ＶＨ２－Ｌ４－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３（ホール） ［ＩＩ］
により表される構造を有し、
第３のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ３－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３（ノブ） ［ＩＩＩ］
により表される構造を有し、
第４のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ３－ＣＬ ［ＩＶ］
により表される構造を有し、
式中：
ＶＬ１は、第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ２は、第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ３は、第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＨ１は、第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ２は、第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ３は、第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣＬは、免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣＨ１は、免疫グロブリンＣＨ１重鎖定常ドメインであり；
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４は、アミノ酸リンカーであり；
ここで、式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドは、交差軽鎖－重鎖対を形成する、
前記三重特異性および／または三価結合タンパク質である。
他の実施形態では、本開示の結合タンパク質は、１つまたはそれ以上の（例えば、３つの）ＨＩＶ標的抗原に特異的に結合する３つの抗原結合部位を形成する４本のポリペプチド鎖を含む三重特異性および／または三価結合タンパク質であって、
第１のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ２－Ｌ１－ＶＬ１－Ｌ２－ＣＬ ［Ｉ］
により表される構造を有し、
第２のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ１－Ｌ３－ＶＨ２－Ｌ４－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３（ノブ） ［ＩＩ］
により表される構造を有し、
第３のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ３－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３（ホール） ［ＩＩＩ］
により表される構造を有し、
第４のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ３－ＣＬ ［ＩＶ］
により表される構造を有し、
式中：
ＶＬ１は、第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ２は、第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ３は、第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＨ１は、第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ２は、第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ３は、第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣＬは、免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣＨ１は、免疫グロブリンＣＨ１重鎖定常ドメインであり；
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４は、アミノ酸リンカーであり；
ここで、式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドは、交差軽鎖－重鎖対を形成する、
前記三重特異性および／または三価結合タンパク質である。
三重特異性結合タンパク質のさらなる例
一部の実施形態では、ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は、各々独立して、配列番号：５１２、５１３、５１４、５１５、５１６、５１７、５１８、５１９、５２０、および５２１のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む可変ドメインである。一部の実施形態では、ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は、各々独立して、配列番号：５１２、５１３、５１４、５１５、５１６、５１７、５１８、５１９、５２０、および５２１のいずれか１つに記載の配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８
３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む可変ドメインである。
三重特異性結合タンパク質のさらなる例
一部の実施形態では、ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は、各々独立して、配列番号：５０２、５０３、５０４、５０５、５０６、５０７、および５０８のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む可変ドメインである。一部の実施形態では、ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は、各々独立して、配列番号：５０２、５０３、５０４、５０５、５０６、５０７、および５０８のいずれか１つに記載の配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む可変ドメインである。
一部の実施形態では、ＶＬ１、ＶＬ２、およびＶＬ３は、配列番号：５１８、５１９、および５１２に記載のアミノ酸配列をそれぞれ含み、ＶＨ１、ＶＨ２、およびＶＨ３は、配列番号：５０４、５０６、および５０２に記載のアミノ酸配列をそれぞれ含む。一部の実施形態では、ＶＬ１、ＶＬ２、およびＶＬ３は、配列番号：５１８、５１９、および５１３に記載のアミノ酸配列をそれぞれ含み、ＶＨ１、ＶＨ２、およびＶＨ３は、配列番号：５０４、５０６、および５０３に記載のアミノ酸配列をそれぞれ含む。一部の実施形態では、ＶＬ１、ＶＬ２、およびＶＬ３は、配列番号：５１９、５１８、および５１３に記載のアミノ酸配列をそれぞれ含み、ＶＨ１、ＶＨ２、およびＶＨ３は、配列番号：５０６、５０４、および５０３に記載のアミノ酸配列をそれぞれ含む。
一部の実施形態では、ＶＬ１、ＶＬ２、およびＶＬ３は、各々独立して、配列番号：５１２、５１３、５１４、５１５、５１６、５１７、５１８、５１９、５２０、および５２１からなる群から選択される配列を含む軽鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含む可変ドメインである。一部の実施形態では、ＶＨ１、ＶＨ２、およびＶＨ３は、各々独立して、配列番号：５０２、５０３、５０４、５０５、５０６、５０７、および５０８からなる群から選択される配列を含む重鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含む可変ドメインである。一部の実施形態では、ＶＬ１、ＶＬ２、およびＶＬ３は、各々独立して、表Ｃに示す軽鎖可変ドメイン配列を含む軽鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含む可変ドメインである。一部の実施形態では、ＶＨ１、ＶＨ２、およびＶＨ３は、各々独立して、表Ｃに示す重鎖可変ドメイン配列を含む重鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含む可変ドメインである。
一部の実施形態では、ＶＬ１は、配列番号：５１８の配列を含む軽鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含む可変ドメインであり；ＶＬ２は、配列番号：５１９の配列を含む軽鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含む可変ドメインであり；ＶＬ３は、配列番号：５１２の配列を含む軽鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含む可変ドメインであり；ＶＨ１は、配列番号：５０４の配列を含む重鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含む可変ドメインであり；ＶＨ２は、配列番号：５０６の配列を含む重鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含
む可変ドメインであり；ＶＨ３は、配列番号：５０２の配列を含む重鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含む可変ドメインである。一部の実施形態では、ＶＬ１は、配列番号：５１８の配列を含む軽鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含む可変ドメインであり；ＶＬ２は、配列番号：５１９の配列を含む軽鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含む可変ドメインであり；ＶＬ３は、配列番号：５１３の配列を含む軽鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含む可変ドメインであり；ＶＨ１は、配列番号：５０４の配列を含む重鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含む可変ドメインであり；ＶＨ２は、配列番号：５０６の配列を含む重鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含む可変ドメインであり；ＶＨ３は、配列番号：５０３の配列を含む重鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含む可変ドメインである。一部の実施形態では、ＶＬ１は、配列番号：５１９の配列を含む軽鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含む可変ドメインであり；ＶＬ２は、配列番号：５１８の配列を含む軽鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含む可変ドメインであり；ＶＬ３は、配列番号：５１３の配列を含む軽鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含む可変ドメインであり、ＶＨ１は、配列番号：５０６の配列を含む重鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含む可変ドメインであり；ＶＨ２は、配列番号：５０４の配列を含む重鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含む可変ドメインであり；ＶＨ３は、配列番号：５０３の配列を含む重鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含む可変ドメインである。
一部の実施形態では、ＶＬ１、ＶＬ２、およびＶＬ３は、各々独立して、次のものを含む可変ドメインである；（ａ）配列番号：２６６、２６９、２７５、２７８、２８１、および５００からなる群から選択される配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｂ）配列番号：２６７、２７０、２７６、２７９、２８２、および５０１からなる群から選択される配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；ならびに／または（ｃ）配列番号：２６８、２７１、２７４、２７７、２８０、および２８３からなる群から選択される配列を含むＣＤＲ－Ｌ３。一部の実施形態では、ＶＬ１、ＶＬ２、およびＶＬ３は、各々独立して、表Ｂに示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含む可変ドメインである。一部の実施形態では、ＶＬ１、ＶＬ２、およびＶＬ３は、各々独立して、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含む可変ドメインであり、該ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号：２６６、２６７、および２６８に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２６９、２７０、および２７１に記載の配列をそれぞれ；配列番号：５００、５０１、および２７４に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２７５、２７６、および２７７に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２８１、２８２、および２８３に記載の配列をそれぞれ；または配列番号：２７８、２７９、および２８０に記載の配列をそれぞれ含む。
一部の実施形態では、ＶＨ１、ＶＨ２、およびＶＨ３は、各々独立して、次のものを含む可変ドメインである：（ａ）配列番号：２４８、２５１、２５４、２５７、２６３、および４９９からなる群から選択される配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号：２５２、２５５、２５８、２６１、２６４、および４９７からなる群から選択される配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；ならびに／または（ｃ）配列番号：２５０、２５３、２５６、２５９、２６２、２６５、および４９８からなる群から選択される配列を含むＣＤＲ－Ｈ３。一部の実施形態では、ＶＨ１、ＶＨ２、およびＶＨ３は、各々独立して、表Ｂに示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含む可変ドメインである。一部の実施形態では、ＶＨ１、ＶＨ２、およびＶＨ３は、各々独立して、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含む可変ドメインであり、該ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ
－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号：２４８、４９７、および２５１に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２５１、２５２、および２５３に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２５４、２５５、および２５６に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２５４、２５５、および４９８に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２５７、２５８、および２５９に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２６３、２６４、および２６５に記載の配列をそれぞれ；または配列番号：４９９、２６１、および２６２に記載の配列をそれぞれ含む。
一部の実施形態では、ＶＬ１は、配列番号：５００、５０１、および２７４の配列をそれぞれ含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含み；ＶＬ２は、配列番号：２７５、２７６、および２７７の配列をそれぞれ含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含み；ＶＬ３は、配列番号：２６６、２６７、および２６８の配列をそれぞれ含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含み；ＶＨ１は、配列番号：２５４、２５５、および２５６の配列をそれぞれ含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含み；ＶＨ２は、配列番号：２５７、２５８、および２５９の配列をそれぞれ含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含み；ＶＨ３は、配列番号：２４８、４９７、および２５０の配列をそれぞれ含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含む。一部の実施形態では、ＶＬ１は、配列番号：５００、５０１、および２７４の配列をそれぞれ含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含み；ＶＬ２は、配列番号：２７５、２７６、および２７７の配列をそれぞれ含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含み；ＶＬ３は、配列番号：２６９、２７０、および２７１の配列をそれぞれ含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含み；ＶＨ１は、配列番号：２５４、２５５、および２５６の配列をそれぞれ含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含み；ＶＨ２は、配列番号：２５７、２５８、および２５９の配列をそれぞれ含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含み；ＶＨ３は、配列番号：２５１、２５２、および２５３の配列をそれぞれ含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含む。一部の実施形態では、ＶＬ１は、配列番号：２７５、２７６、および２７７の配列をそれぞれ含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含み；ＶＬ２は、配列番号：５００、５０１、および２７４の配列をそれぞれ含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含み；ＶＬ３は、配列番号：２６９、２７０、および２７１の配列をそれぞれ含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含み；ＶＨ１は、配列番号：２５７、２５８、および２５９の配列をそれぞれ含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含み；ＶＨ２は、配列番号：２５４、２５５、および２５６の配列をそれぞれ含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含み；ＶＨ３は、配列番号：２５１、２５２、および２５３の配列をそれぞれ含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含む。
１つまたはそれ以上のＨＩＶ標的タンパク質および１つまたはそれ以上のＴ細胞標的タンパク質を標的にするさらなる三重特異性結合タンパク質
一部の実施形態では、本開示の結合タンパク質は、１つまたはそれ以上の（例えば、１つまたは２つの）ＨＩＶ標的タンパク質および１つまたはそれ以上の（例えば、１つまたは２つの）Ｔ細胞標的タンパク質に特異的に結合する３つの抗原結合部位を形成する４本のポリペプチド鎖であって、
第１のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ２－Ｌ１－ＶＬ１－Ｌ２－ＣＬ ［Ｉ］；
により表される構造を有し；
第２のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ１－Ｌ３－ＶＨ２－Ｌ４－ＣＨ１ ［ＩＩ］；
により表される構造を有し；
第３のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ３－ＣＨ１ ［ＩＩＩ］；
により表される構造を有し；
第４のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ３－ＣＬ ［ＩＶ］；
により表される構造を有し；
式中、
ＶＬ１は、第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ２は、第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ３は、第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＨ１は、第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ２は、第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ３は、第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣＬは、免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣＨ１は、免疫グロブリンＣＨ１重鎖定常ドメインであり；
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、およびＬ４は、アミノ酸リンカーであり；
ここで、式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドは、交差軽鎖－重鎖対を形成する、
前記ポリペプチド鎖を含む。
一部の実施形態では、本開示の結合タンパク質は、１つまたはそれ以上の（例えば、１つまたは２つの）ＨＩＶ標的タンパク質および１つまたはそれ以上の（例えば、１つまたは２つの）Ｔ細胞標的タンパク質に特異的に結合する３つの抗原結合部位を形成する４本のポリペプチド鎖であって、
第１のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ２－Ｌ１－ＶＬ１－Ｌ２－ＣＬ ［Ｉ］；
により表される構造を有し；
第２のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ１－Ｌ３－ＶＨ２－Ｌ４－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［ＩＩ］；
により表される構造を有し；
第３のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ３－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［ＩＩＩ］；
により表される構造を有し；
第４のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ３－ＣＬ ［ＩＶ］；
により表される構造を有し；
式中、
ＶＬ１は、第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ２は、第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ３は、第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＨ１は、第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ２は、第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ３は、第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣＬは、免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣＨ１は、免疫グロブリンＣＨ１重鎖定常ドメインであり；
ＣＨ２は、免疫グロブリンＣＨ２重鎖定常ドメインであり；
ＣＨ３は、免疫グロブリンＣＨ３重鎖定常ドメインであり；
ヒンジは、ＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメインを接続する免疫グロブリンヒンジ領域であり；
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、およびＬ４は、アミノ酸リンカーであり；
ここで、式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドは、交差軽鎖－重鎖対を形成
する、
前記ポリペプチド鎖を含む。
一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖および第２のポリペプチド鎖は、２つの別個の抗原結合部位を形成する交差配向を有する。一部の実施形態では、ＶＨ１およびＶＬ１は、結合対を形成し、第１の抗原結合部位を形成する。一部の実施形態では、ＶＨ２およびＶＬ２は、結合対を形成し、第２の抗原結合部位を形成する。一部の実施形態では、第３のポリペプチドおよび第４のポリペプチドは、第３の抗原結合部位を形成する。一部の実施形態では、ＶＨ３およびＶＬ３は、結合対を形成し、第３の抗原結合部位を形成する。
一部の実施形態では、ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は、各々独立して、配列番号：５１２、５１３、５１４、５１５、５１６、５１７、５１８、５１９、５２０、５２１、５２２、５２３、および５２４のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む可変ドメインである。一部の実施形態では、ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は、各々独立して、配列番号：５１２、５１３、５１４、５１５、５１６、５１７、５１８、５１９、５２０、５２１、５２２、５２３、および５２４のいずれか１つに記載の配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む可変ドメインである。
一部の実施形態では、ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は、各々独立して、配列番号：５０２、５０３、５０４、５０５、５０６、５０７、５０８、５０９、５１０、および５１１のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む可変ドメインである。一部の実施形態では、ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は、各々独立して、配列番号：５０２、５０３、５０４、５０５、５０６、５０７、５０８、５０９、５１０、および５１１のいずれか１つに記載の配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む可変ドメインである。
一部の実施形態では、ＶＬ１、ＶＬ２、およびＶＬ３は、配列番号：５２２、５２４、および５１３に記載のアミノ酸配列をそれぞれ含み、ＶＨ１、ＶＨ２、およびＶＨ３は、配列番号：５０９、５１１、および５０３に記載のアミノ酸配列をそれぞれ含む。一部の実施形態では、ＶＬ１、ＶＬ２、およびＶＬ３は、配列番号：５２４、５２２、および５１３に記載のアミノ酸配列をそれぞれ含み、ＶＨ１、ＶＨ２、およびＶＨ３は、配列番号：５１１、５０９、および５０３に記載のアミノ酸配列をそれぞれ含む。
一部の実施形態では、ＶＬ１、ＶＬ２、およびＶＬ３は、各々独立して、配列番号：５１２、５１３、５１４、５１５、５１６、５１７、５１８、５１９、５２０、５２１、５２２、５２３、および５２４からなる群から選択される配列を含む軽鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含む可変ドメインである。
一部の実施形態では、ＶＨ１、ＶＨ２、およびＶＨ３は、各々独立して、配列番号：５０２、５０３、５０４、５０５、５０６、５０７、５０８、５０９、５１０、および５１
１からなる群から選択される配列を含む重鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含む可変ドメインである。
一部の実施形態では、ＶＬ１は、配列番号：５２２の配列を含む軽鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含む可変ドメインであり；ＶＬ２は、配列番号：５２４の配列を含む軽鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含む可変ドメインであり；ＶＬ３は、配列番号：５１３の配列を含む軽鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含む可変ドメインであり；ＶＨ１は、配列番号：５０９の配列を含む重鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含む可変ドメインであり；ＶＨ２は、配列番号：５１１の配列を含む重鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含む可変ドメインであり；ＶＨ３は、配列番号：５０３の配列を含む重鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含む可変ドメインである。一部の実施形態では、ＶＬ１は、配列番号：５２４の配列を含む軽鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含む可変ドメインであり；ＶＬ２は、配列番号：５２２の配列を含む軽鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含む可変ドメインであり；ＶＬ３は、配列番号：５１３の軽鎖可変ドメイン配列を含む軽鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含む可変ドメインであり；ＶＨ１は、配列番号：５１１の配列を含む重鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含む可変ドメインであり；ＶＨ２は、配列番号：５０９の配列を含む重鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含む可変ドメインであり；ＶＨ３は、配列番号：５０３の配列を含む重鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含む可変ドメインである。
一部の実施形態では、ＶＬ１、ＶＬ２、およびＶＬ３は、各々独立して、次のものを含む可変ドメインである；（ａ）配列番号：２６６、２６９、２７５、２７８、２８１、４８８、４９１、４９４、および５００からなる群から選択される配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｂ）配列番号：２６７、２７０、２７６、２７９、２８２、４８９、４９２、４９５、および５０１からなる群から選択される配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；ならびに（ｃ）配列番号：２６８、２７１、２７４、２７７、２８０、２８３、４９０、４９３、および４９６からなる群から選択される配列を含むＣＤＲ－Ｌ３。一部の実施形態では、ＶＬ１、ＶＬ２、およびＶＬ３は、各々独立して、表Ｂに示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含む可変ドメインである。一部の実施形態では、ＶＬ１、ＶＬ２、およびＶＬ３は、各々独立して、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含む可変ドメインであり、該ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号：２６６、２６７、および２６８に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２６９、２７０、および２７１に記載の配列をそれぞれ；配列番号：５００、５０１、および２７４に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２７５、２７６、および２７７に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２８１、２８２、および２８３に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２７８、２７９、および２８０に記載の配列をそれぞれ；配列番号：４８８、４８９、および４９０に記載の配列をそれぞれ；配列番号：４９１、４９２、および４９３に記載の配列をそれぞれ；または配列番号：４９４、４９５、および４９６に記載の配列をそれぞれ含む。
一部の実施形態では、ＶＨ１、ＶＨ２、およびＶＨ３は、各々独立して、次のものを含む可変ドメインである：（ａ）配列番号：２４８、２５１、２５４、２５７、２６３、４７９、４８２、４８５、および４９９からなる群から選択される配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号：２５２、２５５、２５８、２６１、２６４、４８０、４８３、４８６、および４９７からなる群から選択される配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；ならびに（ｃ）配列番号：２５０、２５３、２５６、２５９、２６２、２６５、４８１、４８４、４８７、お
よび４９８からなる群から選択される配列を含むＣＤＲ－Ｈ３。一部の実施形態では、ＶＨ１、ＶＨ２、およびＶＨ３は、各々独立して、表Ｂに示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含む可変ドメインである。一部の実施形態では、ＶＨ１、ＶＨ２、およびＶＨ３は、各々独立して、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含む可変ドメインであり、該ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号：２４８、４９７、および２５１に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２５１、２５２、および２５３に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２５４、２５５、および２５６に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２５４、２５５、および４９８に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２５７、２５８、および２５９に記載の配列をそれぞれ；配列番号：２６３、２６４、および２６５に記載の配列をそれぞれ；配列番号：４９９、２６１、および２６２に記載の配列をそれぞれ；配列番号：４７９、４８０、および４８１に記載の配列をそれぞれ；配列番号：４８２、４８３、および４８４に記載の配列をそれぞれ；または配列番号：４８５、４８６、および４８７に記載の配列をそれぞれ含む。
一部の実施形態では、ＶＬ１は、配列番号：４８８、４８９、および４９０の配列をそれぞれ含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含み；ＶＬ２は、配列番号：４９４、４９５、および４９６の配列をそれぞれ含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含み；ＶＬ３は、配列番号：２６９、２７０、および２７１の配列をそれぞれ含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含み；ＶＨ１は、配列番号：４７９、４８０、および４８１の配列をそれぞれ含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含み；ＶＨ２は、配列番号：４８５、４８６、および４８７の配列をそれぞれ含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含み；ＶＨ３は、配列番号：２５１、２５２、および２５３の配列をそれぞれ含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含む。一部の実施形態では、ＶＬ１は、配列番号：４９４、４９５、および４９６の配列をそれぞれ含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含み；ＶＬ２は、配列番号：４８８、４８９、および４９０の配列をそれぞれ含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含み；ＶＬ３は、配列番号：２６９、２７０、および２７１の配列をそれぞれ含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含み；ＶＨ１は、配列番号：４８５、４８６、および４８７の配列をそれぞれ含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含み；ＶＨ２は、配列番号：４７９、４８０、および４８１の配列をそれぞれ含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含み；ＶＨ３は、配列番号：２５１、２５２、および２５３の配列をそれぞれ含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含む。
一部の実施形態では、ＶＬ１およびＶＨ１は、本明細書に記載の抗体ＣＤ２８またはＣＤ２８＿２の軽鎖および重鎖可変配列を含む軽鎖および重鎖可変ドメインであり、ＶＬ２およびＶＨ２は、本明細書に記載の抗体ＣＤ３の軽鎖および重鎖可変配列を含む軽鎖および重鎖可変ドメインであり、ならびにＶＬ３およびＶＨ３は、本明細書に記載の抗体ＣＤ４ＢＳ「ａ」、ＣＤ４ＢＳ「ｂ」、ＭＰＥＲ、ＭＰＥＲ＿１００Ｗ、Ｖ１／Ｖ２指向性「ａ」、Ｖ１／Ｖ２指向性「ｂ」、またはＶ３指向性のものの軽鎖および重鎖可変配列を含む軽鎖および重鎖可変ドメインである。一部の実施形態では、ＶＬ１およびＶＨ１は、本明細書に記載の抗体ＣＤ２８またはＣＤ２８＿２の６つのＣＤＲを含む軽鎖および重鎖可変ドメインであり、ＶＬ２およびＶＨ２は、本明細書に記載の抗体ＣＤ３の６つのＣＤＲを含む軽鎖および重鎖可変ドメインであり、ならびにＶＬ３およびＶＨ３は、本明細書に記載の抗体ＣＤ４ＢＳ「ａ」、ＣＤ４ＢＳ「ｂ」、ＭＰＥＲ、ＭＰＥＲ＿１００Ｗ、Ｖ１／Ｖ２指向性「ａ」、Ｖ１／Ｖ２指向性「ｂ」、またはＶ３指向性のものの６つのＣＤＲを含む軽鎖および重鎖可変ドメインである。
一部の実施形態では、ＶＬ１およびＶＨ１は、本明細書に記載の抗体ＣＤ２８またはＣ
Ｄ２８＿２の軽鎖および重鎖可変配列を含む軽鎖および重鎖可変ドメインであり、ＶＬ２およびＶＨ２は、本明細書に記載の抗体ＣＤ４ＢＳ「ａ」、ＣＤ４ＢＳ「ｂ」、ＭＰＥＲ、ＭＰＥＲ＿１００Ｗ、Ｖ１／Ｖ２指向性「ａ」、Ｖ１／Ｖ２指向性「ｂ」、またはＶ３指向性のものの軽鎖および重鎖可変配列を含む軽鎖および重鎖可変ドメインであり、ならびにＶＬ３およびＶＨ３は、本明細書に記載の抗体ＣＤ３の軽鎖および重鎖可変配列を含む軽鎖および重鎖可変ドメインである。一部の実施形態では、ＶＬ１およびＶＨ１は、本明細書に記載の抗体ＣＤ２８またはＣＤ２８＿２の６つのＣＤＲを含む軽鎖および重鎖可変ドメインであり、ＶＬ２およびＶＨ２は、本明細書に記載の抗体ＣＤ４ＢＳ「ａ」、ＣＤ４ＢＳ「ｂ」、ＭＰＥＲ、ＭＰＥＲ＿１００Ｗ、Ｖ１／Ｖ２指向性「ａ」、Ｖ１／Ｖ２指向性「ｂ」、またはＶ３指向性のものの６つのＣＤＲを含む軽鎖および重鎖可変ドメインであり、ならびにＶＬ３およびＶＨ３は、本明細書に記載の抗体ＣＤ３の６つのＣＤＲを含む軽鎖および重鎖可変ドメインである。
一部の実施形態では、ＶＬ１およびＶＨ１は、本明細書に記載の抗体ＣＤ３の軽鎖および重鎖可変配列を含む軽鎖および重鎖可変ドメインであり、ＶＬ２およびＶＨ２は、本明細書に記載の抗体ＣＤ２８またはＣＤ２８＿２の軽鎖および重鎖可変配列を含む軽鎖および重鎖可変ドメインであり、ならびにＶＬ３およびＶＨ３は、本明細書に記載の抗体ＣＤ４ＢＳ「ａ」、ＣＤ４ＢＳ「ｂ」、ＭＰＥＲ、ＭＰＥＲ＿１００Ｗ、Ｖ１／Ｖ２指向性「ａ」、Ｖ１／Ｖ２指向性「ｂ」、またはＶ３指向性のものの軽鎖および重鎖可変配列を含む軽鎖および重鎖可変ドメインである。一部の実施形態では、ＶＬ１およびＶＨ１は、本明細書に記載の抗体ＣＤ３の６つのＣＤＲを含む軽鎖および重鎖可変ドメインであり、ＶＬ２およびＶＨ２は、本明細書に記載の抗体ＣＤ２８またはＣＤ２８＿２の６つのＣＤＲを含む軽鎖および重鎖可変ドメインであり、ならびにＶＬ３およびＶＨ３は、本明細書に記載の抗体ＣＤ４ＢＳ「ａ」、ＣＤ４ＢＳ「ｂ」、ＭＰＥＲ、ＭＰＥＲ＿１００Ｗ、Ｖ１／Ｖ２指向性「ａ」、Ｖ１／Ｖ２指向性「ｂ」、またはＶ３指向性のものの６つのＣＤＲを含む軽鎖および重鎖可変ドメインである。
一部の実施形態では、ＶＬ１およびＶＨ１は、本明細書に記載の抗体ＣＤ３の軽鎖および重鎖可変配列を含む軽鎖および重鎖可変ドメインであり、ＶＬ２およびＶＨ２は、本明細書に記載の抗体ＣＤ４ＢＳ「ａ」、ＣＤ４ＢＳ「ｂ」、ＭＰＥＲ、ＭＰＥＲ＿１００Ｗ、Ｖ１／Ｖ２指向性「ａ」、Ｖ１／Ｖ２指向性「ｂ」、またはＶ３指向性のものの軽鎖および重鎖可変配列を含む軽鎖および重鎖可変ドメインであり、ならびにＶＬ３およびＶＨ３は、本明細書に記載の抗体ＣＤ２８またはＣＤ２８＿２の軽鎖および重鎖可変配列を含む軽鎖および重鎖可変ドメインである。一部の実施形態では、ＶＬ１およびＶＨ１は、本明細書に記載の抗体ＣＤ３の６つのＣＤＲを含む軽鎖および重鎖可変ドメインであり、ＶＬ２およびＶＨ２は、本明細書に記載の抗体ＣＤ４ＢＳ「ａ」、ＣＤ４ＢＳ「ｂ」、ＭＰＥＲ、ＭＰＥＲ＿１００Ｗ、Ｖ１／Ｖ２指向性「ａ」、Ｖ１／Ｖ２指向性「ｂ」、またはＶ３指向性のものの６つのＣＤＲを含む軽鎖および重鎖可変ドメインであり、ならびにＶＬ３およびＶＨ３は、本明細書に記載の抗体ＣＤ２８またはＣＤ２８＿２の６つのＣＤＲを含む軽鎖および重鎖可変ドメインである。
一部の実施形態では、ＶＬ１およびＶＨ１は、本明細書に記載の抗体ＣＤ４ＢＳ「ａ」、ＣＤ４ＢＳ「ｂ」、ＭＰＥＲ、ＭＰＥＲ＿１００Ｗ、Ｖ１／Ｖ２指向性「ａ」、Ｖ１／Ｖ２指向性「ｂ」、またはＶ３指向性のものの軽鎖および重鎖可変配列を含む軽鎖および重鎖可変ドメインであり、ＶＬ２およびＶＨ２は、本明細書に記載の抗体ＣＤ２８またはＣＤ２８＿２の軽鎖および重鎖可変配列を含む軽鎖および重鎖可変ドメインであり、ならびにＶＬ３およびＶＨ３は、本明細書に記載の抗体ＣＤ３の軽鎖および重鎖可変配列を含む軽鎖および重鎖可変ドメインである。一部の実施形態では、ＶＬ１およびＶＨ１は、本明細書に記載の抗体ＣＤ４ＢＳ「ａ」、ＣＤ４ＢＳ「ｂ」、ＭＰＥＲ、ＭＰＥＲ＿１００Ｗ、Ｖ１／Ｖ２指向性「ａ」、Ｖ１／Ｖ２指向性「ｂ」、またはＶ３指向性のものの６つ
のＣＤＲを含む軽鎖および重鎖可変ドメインであり、ＶＬ２およびＶＨ２は、本明細書に記載の抗体ＣＤ２８またはＣＤ２８＿２の６つのＣＤＲを含む軽鎖および重鎖可変ドメインであり、ならびにＶＬ３およびＶＨ３は、本明細書に記載の抗体ＣＤ３の６つのＣＤＲを含む軽鎖および重鎖可変ドメインである。
一部の実施形態では、ＶＬ１およびＶＨ１は、本明細書に記載の抗体ＣＤ４ＢＳ「ａ」、ＣＤ４ＢＳ「ｂ」、ＭＰＥＲ、ＭＰＥＲ＿１００Ｗ、Ｖ１／Ｖ２指向性「ａ」、Ｖ１／Ｖ２指向性「ｂ」、またはＶ３指向性のものの軽鎖および重鎖可変配列を含む軽鎖および重鎖可変ドメインであり、ＶＬ２およびＶＨ２は、本明細書に記載の抗体ＣＤ３の軽鎖および重鎖可変配列を含む軽鎖および重鎖可変ドメインであり、ならびにＶＬ３およびＶＨ３は、本明細書に記載の抗体ＣＤ２８またはＣＤ２８＿２の軽鎖および重鎖可変配列を含む軽鎖および重鎖可変ドメインである。一部の実施形態では、ＶＬ１およびＶＨ１は、本明細書に記載の抗体ＣＤ４ＢＳ「ａ」、ＣＤ４ＢＳ「ｂ」、ＭＰＥＲ、ＭＰＥＲ＿１００Ｗ、Ｖ１／Ｖ２指向性「ａ」、Ｖ１／Ｖ２指向性「ｂ」、またはＶ３指向性のものの６つのＣＤＲを含む軽鎖および重鎖可変ドメインであり、ＶＬ２およびＶＨ２は、本明細書に記載の抗体ＣＤ３またはＣＤ２８＿２の６つのＣＤＲを含む軽鎖および重鎖可変ドメインであり、ならびにＶＬ３およびＶＨ３は、本明細書に記載の抗体ＣＤ２８またはＣＤ２８＿２の６つのＣＤＲを含む軽鎖および重鎖可変ドメインである。
標的タンパク質
一実施形態では、結合タンパク質は、１つまたはそれ以上のＨＩＶ標的タンパク質と特異的に結合する。一部の実施形態では、結合タンパク質は、三重特異性であり、ＨＩＶ－１ ｇｐ４１タンパク質のＭＰＥＲ、ＨＩＶ－１ ｇｐ１２０タンパク質のＣＤ４結合部位、ＨＩＶ－１ ｇｐ１２０タンパク質のＶ３ループ内のグリカン、ＨＩＶ－１ ｇｐ１２０タンパク質またはｇｐ１６０の三量体突端部と特異的に結合する。他の実施形態では、結合タンパク質は、１つまたはそれ以上のＨＩＶ標的タンパク質と、およびＴ細胞受容体複合体を含むＴ細胞上の１つまたはそれ以上の標的タンパク質と、特異的に結合する。これらのＴ細胞エンゲージャー結合タンパク質は、Ｔ細胞を標的細胞に一時的に動員することができ、同時に、Ｔ細胞の細胞溶解活性を活性化することができる。Ｔ細胞エンゲージャー三重特異性抗体は、ＨＩＶ－１保有宿主を活性化するため、および潜伏感染ＨＩＶ－１＋Ｔ細胞を溶解するようにＴ細胞に再指向する／Ｔ細胞を活性化するために、使用することができる。Ｔ細胞上の標的タンパク質の例としては、なかんずくＣＤ３およびＣＤ２８が挙げられるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、２つまたはそれ以上の単一特異性抗体（親抗体）の抗原結合ドメインを１つの抗体に組み合わせることにより、三重特異性結合タンパク質を生成することができる。参照により本開示に組み入れられる、国際公開番号ＷＯ２０１１／０３８２９０ Ａ２、ＷＯ２０１３／０８６５３３ Ａ１、ＷＯ２０１３／０７０７７６ Ａ１、ＷＯ２０１２／１５４３１２ Ａ１、およびＷＯ２０１３／１６３４２７ Ａ１を参照されたい。本開示の結合タンパク質は、例えばヒト、マウスもしくはヒト化抗体を含む、任意のヒトもしくは非ヒト抗体から得られるまたはそれに由来するドメインまたは配列を使用して、製造することができる。
本開示の一部の実施形態では、三価結合タンパク質は、３つの異なる抗原標的に結合することができる。一実施形態では、結合タンパク質は、三重特異性であり、１つの軽鎖－重鎖対は、２つの異なる抗原標的またはエピトープに結合することができ、１つの軽鎖－重鎖対は、１つの抗原標的またはエピトープに結合することができる。別の実施形態では、結合タンパク質は、ｇｐ１２０およびｇｐ４１サブユニットで構成されているＨＩＶエンベロープ糖タンパク質構造上に位置する３つの異なるＨＩＶ抗原標的に結合することができる。他の実施形態では、結合タンパク質は、抗原標的のうちの１つまたはそれ以上についての機能を阻害することができる。
一部の実施形態では、本開示の結合タンパク質は、１つまたはそれ以上のＨＩＶ標的タンパク質に結合する。一部の実施形態では、結合タンパク質は、単一ＨＩＶ標的タンパク質上の３つの異なるエピトープに特異的に結合することができる。一部の実施形態では、結合タンパク質は、第１のＨＩＶ標的タンパク質上の２つの異なるエピトープ、および第２のＨＩＶ標的タンパク質上の１つのエピトープに結合することができる。一部の実施形態では、第１および第２のＨＩＶ標的タンパク質は異なる。一部の実施形態では、結合タンパク質は、３つの異なるＨＩＶ標的タンパク質に特異的に結合することができる。一部の実施形態では、１つまたはそれ以上のＨＩＶ標的タンパク質は、糖タンパク質１２０、糖タンパク質４１および糖タンパク質１６０のうちの１つまたはそれ以上である。
一部の実施形態では、本開示の結合タンパク質は、１つまたはそれ以上のＨＩＶ標的タンパク質および１つまたはそれ以上のＴ細胞標的タンパク質に結合する。一部の実施形態では、結合タンパク質は、１つのＨＩＶ標的タンパク質および単一Ｔ細胞標的タンパク質上の２つの異なるエピトープに特異的に結合することができる。一部の実施形態では、結合タンパク質は、１つのＨＩＶ標的タンパク質および２つの異なるＴ細胞標的タンパク質（例えば、ＣＤ２８およびＣＤ３）に特異的に結合することができる。一部の実施態様では、結合タンパク質は、１つのＴ細胞標的タンパク質および単一ＨＩＶ標的タンパク質上の２つの異なるエピトープに特異的に結合することができる。一部の実施形態では、結合タンパク質は、１つのＴ細胞標的タンパク質および２つの異なるＨＩＶ標的タンパク質に特異的に結合することができる。一部の実施形態では、結合タンパク質の第１および第２のポリペプチド鎖は、２つのＴ細胞標的タンパク質を特異的に標的にする２つの抗原結合部位を形成し、結合タンパク質の第３および第４のポリペプチド鎖は、ＨＩＶ標的タンパク質に特異的に結合する抗原結合部位を形成する。一部の実施形態では、１つまたはそれ以上のＨＩＶ標的タンパク質は、糖タンパク質１２０、糖タンパク質４１および糖タンパク質１６０のうちの１つまたはそれ以上である。一部の実施形態では、１つまたはそれ以上のＴ細胞標的タンパク質は、ＣＤ３およびＣＤ２８のうちの１つまたはそれ以上である。
リンカー
一部の実施形態では、リンカーＬ１、Ｌ２、Ｌ３、およびＬ４は、無アミノ酸（長さ＝０）から約１００アミノ酸長、または１００、５０、４０、３０、２０もしくは１５アミノ酸未満もしくはそれ以下の範囲である。リンカーは、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１アミノ酸長であってもよい。１つの結合タンパク質中のＬ１、Ｌ２、Ｌ３、およびＬ４は、すべてが同じアミノ酸配列を有してもよく、またはすべてが異なるアミノ酸配列を有してもよい。
適するリンカーの例としては、単一グリシン（Ｇｌｙ）残基；ジグリシンペプチド（Ｇｌｙ－Ｇｌｙ）；トリペプチド（Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ）；４つのグリシン残基を有するペプチド（Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ；配列番号：２８５）；５つのグリシン残基を有するペプチド（Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ；配列番号：２８６）；６つのグリシン残基を有するペプチド（Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ；配列番号：２８７）；７つのグリシン残基を有するペプチド（Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ；配列番号：２８８）；８つのグリシン残基を有するペプチド（Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ；配列番号：２８９）が挙げられる。アミノ酸残基の他の組合せ、例えば、ペプチドＧｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号：２９０）、ペプチドＧｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号：２９１）およびペプチドＧｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号：２９２）を使用してもよい。他の適するリンカーとしては、単一Ｓｅｒ、およびＶａｌ残基；ジペプチドＡｒｇ
－Ｔｈｒ、Ｇｌｎ－Ｐｒｏ、Ｓｅｒ－Ｓｅｒ、Ｔｈｒ－Ｌｙｓ、およびＳｅｒ－Ｌｅｕ；Ｔｈｒ－Ｌｙｓ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ（配列番号：２９３）、Ｔｈｒ－Ｖａｌ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ｐｒｏ（配列番号：２９４）、Ｇｌｎ－Ｐｒｏ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ａｌａ（配列番号：２９５）；Ｇｌｎ－Ａｒｇ－Ｉｌｅ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ（配列番号：２９６）；Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｔｈｒ－Ｌｙｓ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ（配列番号：２９７）、Ａｒｇ－Ｔｈｒ－Ｖａｌ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ（配列番号：２９８）、Ｇｌｙ－Ｇｌｎ－Ｐｒｏ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ｐｒｏ（配列番号：２９９）、およびＨｉｓ－Ｉｌｅ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｐｒｏ－Ａｓｎ－Ｌｙｓ（配列番号：３００）が挙げられる。上に列挙した例は、いかなる点でも本開示の範囲を制限することを意図したものではなく、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、トレオニン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン、グリシン、およびプロリンからなる群から選択される無作為に選択されたアミノ酸を含むリンカーは、結合タンパク質において適していることが明らかになった。
リンカー中のアミノ酸残基の正体および配列は、そのリンカーにおいて達成することが必要な二次構造エレメントのタイプによって変わることがある。例えば、グリシン、セリンおよびアラニンは、最大の可動性を有するリンカーにとって最良である。グリシン、プロリン、トレオニンおよびセリンの一部の組合せは、より硬い、より伸長したリンカーが必要である場合に有用である。任意のアミノ酸残基を、所望の特性に依存して必要に応じてより大きいペプチドリンカーを構築するために他のアミノ酸残基と組み合わせて、リンカーと見なすことができる。
一部の実施形態では、Ｌ１の長さは、Ｌ３の長さの少なくとも２倍である。一部の実施形態では、Ｌ２の長さは、Ｌ４の長さの少なくとも２倍である。一部の実施形態では、Ｌ１の長さは、Ｌ３の長さの少なくとも２倍であり、Ｌ２の長さは、Ｌ４の長さの少なくとも２倍である。一部の実施形態では、Ｌ１は、長さが３～１２アミノ酸残基であり、Ｌ２は、長さが３～１４アミノ酸残基であり、Ｌ３は、長さが１～８アミノ酸残基であり、Ｌ４は、長さが１～３アミノ酸残基である。一部の実施形態では、Ｌ１は、長さが５～１０アミノ酸残基であり、Ｌ２は、長さが５～８アミノ酸残基であり、Ｌ３は、長さが１～５アミノ酸残基であり、Ｌ４は、長さが１～２アミノ酸残基である。一部の実施形態では、Ｌ１は、長さが７アミノ酸残基であり、Ｌ２は、長さが５アミノ酸残基であり、Ｌ３は、長さが１アミノ酸残基であり、Ｌ４は、長さが２アミノ酸残基である。
一部の実施形態では、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、および／またはＬ４は、配列Ａｓｐ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｈｉｓ－Ｔｈｒ（配列番号：５２５）を含む。一部の実施形態では、Ｌ１は、配列Ａｓｐ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｈｉｓ－Ｔｈｒ（配列番号：５２５）を含む。一部の実施形態では、Ｌ３は、配列Ａｓｐ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｈｉｓ－Ｔｈｒ（配列番号：５２５）を含む。
一部の実施形態では、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、および／またはＬ４は、配列Ｇｌｙ－Ｇｌｎ－Ｐｒｏ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ｐｒｏ（配列番号：２９９）を含む。一部の実施形態では、Ｌ１は、配列Ｇｌｙ－Ｇｌｎ－Ｐｒｏ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ｐｒｏ（配列番号：２９９）を含む。一部の実施形態では、Ｌ１は、配列Ｇｌｙ－Ｇｌｎ－Ｐｒｏ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ｐｒｏ（配列番号：２９９）を含み、Ｌ２は、配列Ｔｈｒ－Ｌｙｓ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ａｒｇ（配列番号：５２６）を含み、Ｌ３は、配列Ｓｅｒを含み、Ｌ４は、配列Ａｒｇ－Ｔｈｒを含む。一部の実施形態では、Ｌ３は、配列Ｇｌｙ－Ｇｌｎ－Ｐｒｏ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ｐｒｏ（配列番号：２９９）を含む。一部の実施形態では、Ｌ１は、配列Ｓｅｒを含み、Ｌ２は、配列Ａｒｇ－Ｔｈｒを含み、Ｌ３は、配列Ｇｌｙ－Ｇｌｎ－Ｐｒｏ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ｐｒｏ（配列番号：２９９）を含み、Ｌ４は、配列Ｔｈｒ－Ｌｙｓ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ａｒｇ（配列番号：
５２６）を含む。
Ｆｃ領域および定常ドメイン
一部の実施形態では、本開示の結合タンパク質は、ＣＨ１に連結されたＦｃ領域をさらに含む第２のポリペプチド鎖であって、該Ｆｃ領域が免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含む、前記第２のポリペプチド鎖を含む。一部の実施形態では、本開示の結合タンパク質は、ＣＨ１に連結されたＦｃ領域をさらに含む第３のポリペプチド鎖であって、該Ｆｃ領域が免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含む、前記第３のポリペプチド鎖を含む。一部の実施形態では、本開示の結合タンパク質は、ＣＨ１に連結されたＦｃ領域をさらに含む第２のポリペプチド鎖であって、該Ｆｃ領域が免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含む、前記第２のポリペプチド鎖と、ＣＨ１に連結されたＦｃ領域をさらに含む第３のポリペプチド鎖であって、該Ｆｃ領域が免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含む、前記第３のポリペプチド鎖とを含む。
結合タンパク質の収量を向上させるために、一部の実施形態では、例えば国際公開番号ＷＯ９６／０２７０１１、Ｒｉｄｇｗａｙら、１９９６、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．９：６１７～２１；およびＭｅｒｃｈａｎｔら、１９９８、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１６：６７７～８１にいくつかの例とともに詳細に記載されている、「ノブ・イントゥー・ホール」技術により、ＣＨ３ドメインを変化させることができる。具体的には、２つのＣＨ３ドメインの相互作用面を、これら２つのＣＨ３ドメインを含有する両方の重鎖のヘテロ二量体化を増加させるように変化させる。２つのＣＨ３ドメイン（２本の重鎖の２つのＣＨ３ドメイン）の各々が「ノブ」であることができるが、他方は「ホール」である。ジスルフィド架橋の導入は、ヘテロ二量体をさらに安定させ（Ｍｅｒｃｈａｎｔら、１９９８；Ａｔｗｅｌｌら、１９９７、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７０：２６～３５）、収量を増加させる。特定の実施形態では、ノブは、単一可変ドメインを有する第２のポリペプチド対上にある。他の実施形態では、ノブは、交差配向を有する第１のポリペプチド対上にある。さらに他の実施形態では、ＣＨ３ドメインは、ノブ・イン・ホールを含まない。
一部の実施形態では、本開示の結合タンパク質は、第２のポリペプチド鎖上に「ノブ」変異を含み、第３のポリペプチド鎖上に「ホール」変異を含む。一部の実施形態では、本開示の結合タンパク質は、第３のポリペプチド鎖上に「ノブ」変異を含み、第２のポリペプチド鎖上に「ホール」変異を含む。一部の実施形態では、「ノブ」変異は、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３５４および３６６位に対応する位置での置換を含む。一部の実施形態では、アミノ酸置換は、Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗである。一部の実施形態では、「ホール」変異は、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３４９、３６６、３６８、および４０７位に対応する位置での置換を含む。一部の実施形態では、アミノ酸置換は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖである。一部の実施形態では、第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、該第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、該第１のＦｃ領域は、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３５４および３６６位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗであり；第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、該第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、該第２のＦｃ領域は、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３４９、３６６、３６８、および４０７位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖである。一部の実施形態では、第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、該第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２
およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、該第１のＦｃ領域は、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３４９、３６６、３６８、および４０７位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖであり；第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、該第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、該第２のＦｃ領域は、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３５４および３６６位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗである。
一部の実施形態では、本開示の結合タンパク質は、血清半減期を改善するための１つまたはそれ以上の変異を含む（例えば、Ｈｉｎｔｏｎ，Ｐ．Ｒ．ら（２００６）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７６（１）：３４６～５６を参照されたい）。一部の実施形態では、変異は、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の４２８および４３４位に対応する位置での置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓである。一部の実施形態では、結合タンパク質は、ＣＨ１に連結された第１のＦｃ領域をさらに含む第２のポリペプチド鎖であって、該第１のＦｃ領域が免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含む、前記第２のポリペプチド鎖と、ＣＨ１に連結された第２のＦｃ領域をさらに含む第３のポリペプチド鎖であって、該第２のＦｃ領域が免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含む、前記第３のポリペプチド鎖とを含み、前記第１および第２のＦｃ領域は、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の４２８および４３４位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓである。一部の実施形態では、本開示の結合タンパク質は、ノブおよびホール変異と、血清半減期を改善するための１つまたはそれ以上の変異とを含む。
一部の実施形態では、本明細書に記載の三重特異性結合タンパク質のＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、およびＣＬは、結合タンパク質１～５３のＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、およびＣＬ配列のいずれかを含んでもよい。
核酸
標準的組換えＤＮＡ方法を使用して、結合タンパク質を形成するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを構築し、これらのポリヌクレオチドを組換え発現ベクターに組込み、そのようなベクターを宿主細胞に導入する。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、２００１、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ 、第３版）を参照されたい。酵素反応および精製技術を、製造業者の仕様に従って行ってもよく、当技術分野において一般に果たされているように行ってもよく、または本明細書に記載の通りに行ってもよい。特定の定義を提供しない限り、本明細書に記載の分析化学、合成有機化学、医化学および製薬化学に関連して用いられる命名法、ならびにそのような化学の実験手順および技術は、当技術分野において周知の、一般に使用されているものである。同様に、従来の技術を化学合成、化学分析、薬剤調合、製剤化、送達、および患者の処置に使用することができる。
本開示の他の態様は、本明細書に記載の結合タンパク質のいずれかをコードするヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子に関する。一部の実施形態では、単離された核酸は、結合タンパク質をコードする核酸配列の転写を指向するための異種プロモーターに動作可能に連結されている。プロモーターは、核酸の転写を指向する核酸制御配列を指すこともある。第１の核酸配列が第２の核酸配列と機能的関係に置かれている場合、該第１の核酸配列は、該第２の核酸配列に動作可能に連結されている。例えば、プロモーターがコード配列の転写または発現に影響を与える場合、該プロモーターは、結合タンパク質の該
コード配列に動作可能に連結されている。プロモーターの例としては、ウイルス（例えば、ポリオーマウイルス、鶏痘ウイルス、アデノウイルス（例えば、アデノウイルス２）、ウシパピローマウイルス、トリ肉腫ウイルス、サイトメガロウイルス、レトロウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、サルウイルス４０（ＳＶ４０）など）のゲノムから得られるプロモーター、異種真核生物プロモーター類からのプロモーター（例えば、アクチンプロモーター、免疫グロブリンプロモーター、熱ショックプロモーター類からのプロモーターなど）、ＣＡＧ－プロモーター（Ｎｉｗａら、Ｇｅｎｅ １０８（２）：１９３～９、１９９１）、ホスホグリセリン酸キナーゼ（ＰＧＫ）プロモーター、テトラサイクリン誘導性プロモーター（Ｍａｓｕｉら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．３３：ｅ４３、２００５）、ｌａｃ系、ｔｒｐ系、ｔａｃ系、ｔｒｃ系、ファージラムダの主要オペレーターおよびプロモーター領域、３－ホスホグリセリン酸キナーゼのプロモーター、酵母酸性ホスファターゼのプロモーター、および酵母アルファ接合因子のプロモーターを挙げることができるが、これらに限定されない。本開示の結合タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、構成的プロモーターの制御下にあってもよく、誘導性プロモーターの制御下にあってもよく、または本明細書に記載の任意の他の適するプロモーターの制御下にあってもよく、または当業者には容易に分かるであろう他の適するプロモーターの制御下にあってもよい。
一部の実施形態において、単離された核酸は、ベクターに組込まれる。一部の実施形態において、ベクターは、発現ベクターである。発現ベクターは、発現されることになるポリヌクレオチドに動作可能に連結された１つまたはそれ以上の調節配列を含むことができる。「調節配列」という用語は、プロモーター、エンハンサーおよび他の発現制御エレメント（例えば、ポリアデニル化シグナル）を含む。適するエンハンサーの例としては、哺乳動物遺伝子からのエンハンサー配列（例えば、グロビン、エラスターゼ、アルブミン、α－フェトプロテイン、インスリンなど）、および真核細胞ウイルスからのエンハンサー配列（例えば、複製起点の後期側（ｂｐ１００～２７０）のＳＶ４０エンハンサー、サイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、複製起点の後期側のポリオーマエンハンサー、アデノウイルスエンハンサーなど）を挙げることができるが、これらに限定されない。適するベクターの例としては、例えば、プラスミド、コスミド、エピソーム、トランスポゾン、およびウイルスベクター（例えば、アデノウイルス、ワクシニアウイルス、シンドビスウイルス、麻疹、ヘルペスウイルス、レンチウイルス、レトロウイルス、アデノ随伴ウイルスベクターなど）を挙げることができる。発現ベクターは、例えば細菌細胞、酵母細胞、昆虫細胞および哺乳動物細胞などの、宿主細胞へのトランスフェクションに使用することができる。宿主における発現および複製が可能な生物学的な機能を持つウイルスおよびプラスミドＤＮＡベクターは当技術分野において公知であり、目的の任意の細胞へのトランスフェクションに使用することができる。
本開示の他の態様は、本明細書に記載の結合タンパク質のいずれかの第１、第２、第３および第４のポリペプチド鎖をコードする１つまたはそれ以上のベクターを含むベクター系に関する。一部の実施形態では、ベクター系は、結合タンパク質の第１のポリペプチド鎖をコードする第１のベクターと、結合タンパク質の第２のポリペプチド鎖をコードする第２のベクターと、結合タンパク質の第３のポリペプチド鎖をコードする第３のベクターと、結合タンパク質の第４のポリペプチド鎖をコードする第４のベクターとを含む。一部の実施形態では、ベクター系は、結合タンパク質の第１および第２のポリペプチド鎖をコードする第１のベクターと、結合タンパク質の第３および第４のポリペプチド鎖をコードする第２のベクターとを含む。一部の実施形態では、ベクター系は、結合タンパク質の第１および第３のポリペプチド鎖をコードする第１のベクターと、結合タンパク質の第２および第４のポリペプチド鎖をコードする第２のベクターとを含む。一部の実施形態では、ベクター系は、結合タンパク質の第１および第４のポリペプチド鎖をコードする第１のベクターと、結合タンパク質の第２および第３のポリペプチド鎖をコードする第２のベクタ
ーとを含む。一部の実施形態では、ベクター系は、結合タンパク質の第１、第２、第３および第４のポリペプチド鎖をコードする第１のベクターを含む。ベクター系の１つまたはそれ以上のベクターは、本明細書に記載のベクターのいずれであってもよい。一部の実施形態では、１つまたはそれ以上のベクターは、発現ベクターである。
宿主細胞
本開示の他の態様は、本明細書に記載の１つまたはそれ以上の単離されたポリヌクレオチド、ベクターおよび／またはベクター系を含む、宿主細胞（例えば、単離された宿主細胞）に関する。一部の実施形態では、本開示の単離された宿主細胞は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで培養される。一部の実施形態では、宿主細胞は、細菌細胞（例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞）である。一部の実施形態では、宿主細胞は、酵母細胞（例えば、出芽酵母（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）細胞）である。一部の実施形態では、宿主細胞は、昆虫細胞である。昆虫宿主細胞の例としては、例えば、ショウジョウバエ（Ｄｏｒｏｓｏｐｈｉｌａ）細胞（例えば、Ｓ２細胞）、イラクサギンウワバ（Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ ｎｉ）細胞（例えば、Ｈｉｇｈ Ｆｉｖｅ（商標）細胞）、およびツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）細胞（例えば、Ｓｆ２１またはＳｆ９細胞）を挙げることができる。一部の実施形態では、宿主細胞は、哺乳動物細胞である。哺乳動物宿主細胞の例としては、例えば、ヒト胎児由来腎臓細胞（例えば、浮遊培養での増殖のためにサブクローニングされた２９３または２９３細胞）、Ｅｘｐｉ２９３（商標）細胞、ＣＨＯ細胞、ベビーハムスター腎臓細胞（例えば、ＢＨＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ １０）、マウスセルトリ細胞（例えば、ＴＭ４細胞）、サル腎臓細胞（例えば、ＣＶ１ ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７０）、アフリカミドリザル腎臓細胞（例えば、ＶＥＲＯ－７６、ＡＴＣＣ
ＣＲＬ－１５８７）、ヒト子宮頸癌細胞（例えば、ＨＥＬＡ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ２）、イヌ腎臓細胞（例えば、ＭＤＣＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ３４）、バッファローラット肝臓細胞（例えば、ＢＲＬ ３Ａ、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １４４２）、ヒト肺細胞（例えば、Ｗ１３８、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７５）、ヒト肝臓細胞（例えば、Ｈｅｐ Ｇ２、ＨＢ ８０６５））、マウス乳房腫瘍細胞（例えば、ＭＭＴ ０６０５６２、ＡＴＣＣ ＣＣＬ５１）、ＴＲＩ細胞、ＭＲＣ ５細胞、ＦＳ４細胞、ヒト肝細胞癌株（例えば、Ｈｅｐ Ｇ２）、および骨髄腫細胞（例えば、ＮＳ０およびＳｐ２／０細胞）を挙げることができる。
本開示の他の態様は、本明細書に記載の結合タンパク質のいずれかを産生する方法に関する。一部の実施形態では、方法は、ａ）単離された核酸、ベクター、および／またはベクター系（例えば、本明細書に記載の単離された核酸、ベクター、および／またはベクター系のいずれか）を含む宿主細胞（例えば、本明細書に記載の宿主細胞のいずれか）を、該宿主細胞が結合タンパク質を発現する条件下で培養する工程；およびｂ）前記結合タンパク質を前記宿主細胞から単離する工程を含む。タンパク質を発現する条件下で宿主細胞を培養する方法は、当業者に周知である。培養した宿主細胞からタンパク質を単離する方法は、例えば、アフィニティークロマトグラフィー（例えば、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィー、続いてサイズ排除クロマトグラフィーを含む、２工程アフィニティークロマトグラフィー）による方法を含めて、当業者に周知である。
結合タンパク質の使用
結合タンパク質は、１つまたはそれ以上の標的抗原の検出および定量のための競合結合アッセイ、直接的および間接的サンドイッチアッセイならびに免疫沈降アッセイなどの、任意の公知アッセイ方法において用いることができる。結合タンパク質は、用いられるアッセイ法にふさわしい親和性で１つまたはそれ以上の標的抗原に結合することになる。
診断応用のために、ある一定の実施形態では、結合タンパク質を検出可能な部分で標識することができる。検出可能な部分は、検出可能なシグナルを直接または間接的に生じさ
せることができる、いずれのものであってもよい。例えば、検出可能な部分は、放射性同位元素、例えば、３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３５Ｓ、１２５Ｉ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、もしくは６７Ｇａ；蛍光もしくは化学発光化合物、例えば、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、もしくはルシフェリン；または酵素、例えば、アルカリホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ、もしくはホースラディッシュペルオキシダーゼであってもよい。
結合タンパク質は、ｉｎ ｖｉｖｏ撮像にも有用である。検出可能な部分で標識された結合タンパク質を動物に、例えば血流に投与し、その宿主における標識抗体の存在および位置をアッセイすることができる。結合タンパク質は、核磁気共鳴によろうと、Ｘ線検査によろうと、または当技術分野において公知の他の検出手段によろうと、動物において検出することができる任意の部分で、標識することができる。
本開示は、結合タンパク質と生体試料における標的抗原レベルの検出に有用な他の試薬とを含むキットにも関する。そのような試薬としては、検出可能な標識、ブロッキング血清、陽性および陰性対照試料、ならびに検出試薬を挙げることができる。一部の実施形態では、キットは、本明細書に記載の任意の結合タンパク質、ポリヌクレオチド、ベクター、ベクター系および／または宿主細胞を含む、組成物を含む。一部の実施形態では、キットは、容器と、その容器上のまたはその容器に付随するラベルまたは添付文書とを含む。適する容器としては、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、ＩＶ溶液バッグなどが挙げられる。容器は、ガラスまたはプラスチックなどの様々な材料から形成されたものであってよい。容器は、単独である組成物を保持するか、または状態（例えば、ＨＩＶ感染症）の処置、予防および／もしくは診断に有効な別の組成物と組み合わせた組成物を保持し、滅菌取り出し口を有することができる（例えば、容器は、静脈内注射用溶液バッグであってもよく、または皮下注射針によって穴を開けることができるストッパーを有するバイアルであってもよい）。一部の実施形態では、ラベルまたは添付文書は、組成物が、選ばれた状態の予防、診断および／または処置に使用されることを示す。あるいは、または加えて、製造物品またはキットは、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝食塩水、リンゲル溶液およびデキストロース溶液などの薬学的に許容される緩衝液を含む第２の（または第３の）容器をさらに含むことができる。それは、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針およびシリンジをはじめとする、商業的観点および使用者の観点から望ましい他の材料をさらに含むことができる。
結合タンパク質を含む治療用組成物または医薬組成物は、本開示の範囲内である。そのような治療用組成物または医薬組成物は、投与方法との適合性のために選択される薬学的にまたは生理学的に許容される配合剤との混合物で、結合タンパク質または結合タンパク質・薬物複合体の治療有効量を含むことができる。
許容される配合材料は、用いられる投薬量および濃度でレシピエントに対して非毒性である。
医薬組成物は、例えば、該組成物のｐＨ、モル浸透圧濃度、粘度、透明性、色、等張性、匂い、無菌性、安定性、溶解もしくは放出速度、吸収性または浸透性を、修飾する、維持する、または保つための配合材料を含有することができる。適する配合材料としては、アミノ酸（例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、もしくはリシン）、抗菌剤、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸、亜硫酸ナトリウム、もしくは亜硫酸水素ナトリウム）、緩衝剤（例えば、ホウ酸塩、重炭酸塩、Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、クエン酸塩、リン酸塩もしくは他の有機酸）、増量剤（例えば、マンニトールもしくはグリシン）、キレート剤（例えば、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ））、錯化剤（例えば、カフェイン、ポリビニルピロリドン、ベータ－シクロデキストリン、もしくはヒドロキシプロピ
ル－ベータ－シクロデキストリン）、充填剤、単糖類、二糖類、および他の炭水化物（例えば、グルコース、マンノース、もしくはデキストリン）、タンパク質（例えば、血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリン）、着色、着香および希釈剤、乳化剤、親水性ポリマー（例えば、ポリビニルピロリドン）、低分子量ポリペプチド、塩形成対イオン（例えば、ナトリウム）、保存薬（例えば、塩化ベンザルコニウム、安息香酸、サリチル酸、チメロサール、フェネチルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、クロルヘキシジン、ソルビン酸、もしくは過酸化水素）、溶媒（例えば、グリセリン、プロピレングリコール、もしくはポリエチレングリコール）、糖アルコール（例えば、マンニトールもしくはソルビトール）、懸濁剤、界面活性剤もしくは湿潤剤（例えば、プルロニック；ＰＥＧ；ソルビタンエステル；ポリソルベート、例えば、ポリソルベート２０もしくはポリソルベート８０；トリトン；トロメタミン；レシチン；コレステロールもしくはチロキサポール）、安定性向上剤（例えば、スクロースもしくはソルビトール）、浸透圧向上剤（例えば、ハロゲン化アルカリ金属－例えば、塩化ナトリウムもしくはカリウム－もしくはマンニトールソルビトール）、送達ビヒクル、希釈剤、賦形剤ならびに／または補助薬が挙げられるが、これらに限定されない（例えば、あらゆる目的で参照により本明細書に組み入れられている、ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥＳ（第１８版、Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ編、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ １９９０）、およびその後続版を参照されたい）。
最適な医薬組成物は、当業者により、例えば、所期の投与経路、送達フォーマット、および所望の投薬量に依存して決定されることになる。そのような組成物は、結合タンパク質の物理的状態、安定性、ｉｎ ｖｉｖｏ放出速度、およびｉｎ ｖｉｖｏクリアランス速度に影響を与ることができる。
医薬組成物における主要なビヒクルまたは担体は、本来、水性であってもよく、または非水性であってもよい。例えば、注射用の適するビヒクルまたは担体は、非経口投与用の組成物によく見られる他の材料がことによると補充されている、水、生理食塩溶液または人工脳脊髄液であってもよい。中性緩衝食塩水、または血清アルブミンと混合された食塩水は、さらなる例示的ビヒクルである。他の例示的医薬組成物は、約ｐＨ７．０～８．５のＴｒｉｓ緩衝液、または約ｐＨ４．０～５．５の酢酸緩衝液を含み、これは、ソルビトールまたは適する代用品をさらに含むことができる。本開示の一実施形態では、結合タンパク質組成物は、所望の純度を有する選択された組成物を任意選択の配合剤と混合することにより、凍結乾燥ケーキまたは水溶液の形態で保管用に製造することができる。さらに、結合タンパク質は、スクロースなどの適切な賦形剤を使用して凍結乾燥物として製剤化することができる。
本開示の医薬組成物を非経口送達または皮下送達のために選択してもよい。あるいは、組成物を吸入、または経口でのような消化管経由の送達のために選択してもよい。そのような薬学的に許容される組成物の製造は、当技術分野の技能の範囲内である。
配合成分は、投与部位に許容される濃度で存在する。例えば、組成物を生理的ｐＨで、またはそれよりわずかに低いｐＨで、概して約５～約８のｐＨ範囲内で維持するために、緩衝剤が使用される。
非経口投与が企図される場合に使用するための治療用組成物は、薬学的に許容されるビヒクル中の所望の結合タンパク質を含む、発熱物質不含の非経口的に許容される水溶液の形態であることができる。非経口注射に特に適しているビヒクルは滅菌蒸留水であり、結合タンパク質は、該滅菌蒸留水中の滅菌、等張溶液として製剤化され、適切に保存される。さらの別の製法は、生成物の制御または持続放出をもたらし、したがって該生成物をデポー注射により送達することができる物質、例えば、注射用マイクロスフェア、生侵食性
粒子、高分子化合物（例えば、ポリ乳酸もしくはポリグリコール酸）、ビーズまたはリポソームを用いる、所望の分子の製剤化を含むことができる。ヒアルロン酸も使用することができ、これは、循環血中の期間の持続を促進する効果を有することができる。所望の分子の他の適する導入手段としては、埋め込み型薬物送達デバイスが挙げられる。
一実施形態では、医薬組成物を吸入用に製剤化することができる。例えば、結合タンパク質を吸入用のドライパウダーとして製剤化することができる。エアロゾル送達用の噴射剤を用いて、結合タンパク質吸入溶液を製剤化することもできる。さらに別の実施形態では、溶液を噴霧することができる。
ある一定の製剤を経口投与することができることも企図される。本開示の一実施形態では、この様式で投与される結合タンパク質を、錠剤およびカプセルなどの固体剤形の配合に通例使用される担体を用いて、または用いずに、製剤化することができる。例えば、バイオアベイラビリティーが最大となり、全身送達前の分解（ｐｒｅ-ｓｙｓｔｅｍｉｃ
ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ）が最小となる胃腸管内での時点で製剤の活性部分を放出するように、カプセルを設計することができる。結合タンパク質の吸収を助長するためにさらなる物質を含めてもよい。希釈剤、香味料、低融点ワックス、植物油、滑沢剤、縣濁剤、錠剤崩壊剤、および結合剤も用いられることがある。
別の医薬組成物は、錠剤の製造に適している非毒性賦形剤との混合物中の結合タンパク質の有効量を含むことができる。滅菌水または別の適切なビヒクルに錠剤を溶解することにより、溶液を単位用量形態で製造することができる。適する賦形剤としては、不活性希釈剤、例えば、炭酸カルシウム、炭酸もしくは重炭酸ナトリウム、ラクトース、もしくはリン酸カルシウム；または結合剤、例えば、デンプン、ゼラチンもしくはアラビアゴム；または滑沢剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、もしくはタルクが挙げられるが、これらに限定されない。
本開示のさらなる医薬組成物は、持続送達または制御送達処方の結合タンパク質を含む製剤を含めて、当業者には明らかであるであろう。リポソーム担体、生侵食性微粒子または多孔性ビーズおよびデポー注射などの、様々な他の持続送達または制御送達手段を処方する技術も、当業者に公知である。持続放出製剤のさらなる例としては、造形品、例えばフィルムまたはマイクロカプセル、の形態の半透性ポリマーマトリックスが挙げられる。持続放出マトリックスは、ポリエステル、ヒドロゲル、ポリラクチド、Ｌ－グルタミン酸とＬ－グルタミン酸ガンマエチルエステルのコポリマー、ポリ（メタクリル酸２－ヒドロキシエチル）、エチレン酢酸ビニル、またはポリ－Ｄ（－）－３－ヒドロキシ酪酸を含むことができる。持続放出組成物は、リポソームも含むことができ、リポソームは、当技術分野において公知のいくつかの方法のいずれかにより製造することができる。
ｉｎ ｖｉｖｏでの投与に使用されることになる医薬組成物は、概して、無菌でなければならない。これは、滅菌濾過膜による濾過によって果たすことができる。組成物を凍結乾燥させる場合、この方法を使用する滅菌を凍結乾燥および再構成の前に行ってもよく、または後に行ってもよい。非経口投与用の組成物は、凍結乾燥形態で、または溶液中で保管することができる。加えて、非経口組成物は一般に、滅菌取り出し口を有する容器、例えば、静脈内注射用の溶液バッグ、または皮下注射針によって穴を開けることができるストッパーを有するバイアルに入れられる。
医薬組成物を製剤化してしまえば、溶液、懸濁液、ゲル、エマルジョン、固体として、または脱水もしくは凍結乾燥された粉末として、滅菌バイアル内に保管することができる。そのような製剤を、すぐに使用できる形態で保管することができ、または投与前に再構成を必要とする（例えば、凍結乾燥された）形態で保管することもできる。
本開示は、単一用量投与単位を生成するためのキットも包含する。これらのキットは、各々が、乾燥されたタンパク質を有する第１の容器と水性製剤を有する第２の容器の両方を含有することができる。充填済みの１室および多室シリンジ（例えば、液剤用シリンジおよびリオシリンジ（ｌｙｏｓｙｒｉｎｇｅ））を含有するキットも、本開示の範囲内に含まれる。
治療に用いられることになる結合タンパク質医薬組成物の有効量は、例えば、治療の内容および目的に依存することになる。したがって、処置のための適切な投薬レベルが、送達される分子、結合タンパク質が使用されることになる適応症、投与経路、ならびに患者のサイズ（体重、体表、または臓器サイズ）および状態（年齢および総体的な健康）に一部は依存して変わることになることは、当業者には理解されるであろう。したがって、臨床医は、最適な治療効果が得られるように投薬の用量を設定し、投薬経路を変更することができる。
投薬頻度は、使用されることになる製剤中の結合タンパク質の薬物動態パラメータに依存することになる。概して、臨床医は、所望の効果を達成する投薬量に到達するまで組成物を投与することになる。したがって、組成物は、単一用量として投与されることもあり、ある期間にわたって２用量またはそれ以上（これらは、同量の所望の分子を含有してもよく、またはしなくてもよい）として投与されることもあり、または埋め込みデバイスもしくはカテーテルにより持続注入として投与されることもある。適切な投薬量のさらなる精密化は、当業者により常例的に行われ、彼らにより常例的に遂行される職務の範囲内である。適切な投薬量は、適切な用量反応データの使用により確認することができる。
医薬組成物の投与経路は、公知の方法と一致し、例えば、経口的にであるか；静脈内、腹腔内、脳内（実質内）、側脳室内、筋肉内、眼内、動脈内、門脈内もしくは病巣内経路による注射によるか；持続放出システムによるか；または埋め込みデバイスによる。所望される場合、組成物をボーラス注入により投与することができ、または注入によりもしくは埋め込みデバイスにより継続的に投与することができる。
所望の分子が吸着または封入された膜、スポンジまたは他の適切な材料の埋め込みにより、組成物を局所投与することもできる。埋め込みデバイスを使用する場合、デバイスを任意の適する組織もしくは臓器に埋め込むことができ、所望の分子の送達は、拡散によることもあり、時限放出ボーラスによることもあり、または連続投与によることもある。
医薬組成物は、ＨＩＶ感染症を予防および／または処置するために使用することができる。医薬組成物は、単独療法として使用することができ、または標準的抗レトロウイルス療法と併用することができる。
一部の実施形態では、本開示は、患者におけるＨＩＶ感染症を予防および／または処置する方法に関する。一部の実施形態では、方法は、本明細書に記載の少なくとも１つの結合タンパク質の治療有効量を患者に投与する工程を含む。一部の実施形態では、少なくとも１つの結合タンパク質は、抗レトロウイルス療法（例えば、抗ＨＩＶ療法）と併用で投与される。一部の実施形態では、少なくとも１つの結合タンパク質は、抗レトロウイルス療法の前に投与される。一部の実施形態では、少なくとも１つの結合タンパク質は、抗レトロウイルス療法と同時に投与される。一部の実施形態では、少なくとも１つの結合タンパク質は、抗レトロウイルス療法の後に投与される。一部の実施形態では、少なくとも１つの結合タンパク質は、当技術分野において公知の任意の標準的抗レトロウイルス療法と併用投与される。一部の実施形態では、少なくとも１つの結合タンパク質の投与は、１つまたはそれ以上のＨＩＶビリオンの中和をもたらす。一部の実施形態では、少なくとも１
つの結合タンパク質の投与は、患者における１つまたはそれ以上の潜伏および／または慢性ＨＩＶ感染細胞の排除をもたらす。一部の実施形態では、少なくとも１つの結合タンパク質の投与は、１つまたはそれ以上のＨＩＶビリオンの中和をもたらし、患者における１つまたはそれ以上の潜伏および／または慢性ＨＩＶ感染細胞の排除をもたらす。一部の実施形態では、患者はヒトである。
本開示を限定するものではないが、本開示の多数の実施形態を、説明のために下に記載する。
項目１：１つまたはそれ以上のＨＩＶ標的タンパク質に特異的に結合する３つの抗原結合部位を形成する４本のポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって、
第１のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ２－Ｌ１－ＶＬ１－Ｌ２－ＣＬ ［Ｉ］
により表される構造を含み、
第２のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ１－Ｌ３－ＶＨ２－Ｌ４－ＣＨ１ ［ＩＩ］
により表される構造を含み、
第３のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ３－ＣＨ１ ［ＩＩＩ］
により表される構造を含み、
第４のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ３－ＣＬ ［ＩＶ］
により表される構造を含み、
式中：
ＶＬ１は、第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ２は、第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ３は、第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＨ１は、第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ２は、第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ３は、第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣＬは、免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣＨ１は、免疫グロブリンＣＨ１重鎖定常ドメインであり；
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４は、アミノ酸リンカーであり；
ここで、式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドは、交差軽鎖－重鎖対を形成する、前記結合タンパク質。
項目２：１つまたはそれ以上のＨＩＶ標的タンパク質に特異的に結合する３つの抗原結合部位を形成する４本のポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって、
第１のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ２－Ｌ１－ＶＬ１－Ｌ２－ＣＬ ［Ｉ］
により表される構造を含み、
第２のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ１－Ｌ３－ＶＨ２－Ｌ４－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［ＩＩ］
により表される構造を含み、
第３のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ３－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［ＩＩＩ］
により表される構造を含み、
第４のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ３－ＣＬ ［ＩＶ］
により表される構造を含み、
式中：
ＶＬ１は、第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ２は、第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ３は、第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＨ１は、第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ２は、第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ３は、第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣＬは、免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣＨ１は、免疫グロブリンＣＨ１重鎖定常ドメインであり；
ＣＨ２は、免疫グロブリンＣＨ２重鎖定常ドメインであり；
ＣＨ３は、免疫グロブリンＣＨ３重鎖定常ドメインであり；
ヒンジは、ＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメインを接続する免疫グロブリンヒンジ領域であり；
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４は、アミノ酸リンカーであり；
ここで、式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドは、交差軽鎖－重鎖対を形成する、前記結合タンパク質。
項目３：１つまたはそれ以上のＨＩＶ標的タンパク質は、糖タンパク質１２０、糖タンパク質４１および糖タンパク質６０からなる群から選択される、項目１または項目２に記載の結合タンパク質。
項目４：三重特異性であり、単一ＨＩＶ標的タンパク質上の３つの異なるエピトープに特異的に結合することができる、項目１または項目２に記載の結合タンパク質。
項目５：三重特異性であり、第１のＨＩＶ標的タンパク質上の２つの異なるエピトープおよび第２のＨＩＶ標的タンパク質上の１つのエピトープに特異的に結合することができ、該第１および第２のＨＩＶ標的タンパク質は異なるものである、項目１または項目２に記載の結合タンパク質。
項目６：三重特異性であり、３つの異なる抗原標的に特異的に結合することができる、項目１または項目２に記載の結合タンパク質。
項目７：１つまたはそれ以上のＨＩＶ標的タンパク質の機能を阻害することができる、項目１または項目２に記載の結合タンパク質。
項目８：ＶＬ１は、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含み、該ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３は、
配列番号：２６６、２６７、および２６８に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：２６９、２７０、および２７１に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：５００、５０１、および２７４に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：２７５、２７６、および２７７に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：２８１、２８２、および２８３に記載の配列をそれぞれ；または
配列番号：２７８、２７９、および２８０に記載の配列をそれぞれ
含む、項目１～７のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目９：ＶＬ１は、配列番号：５１２、５１３、５１４、５１５、５１６、５１７、５１８、５１９、５２０、および５２１からなる群から選択される配列を含む軽鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含む、項目１～７のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目１０：ＶＬ１は、配列番号：５１２、５１３、５１４、５１５、５１６、５１７、５１８、５１９、５２０、および５２１からなる群から選択される配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、項目１～９のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目１１：ＶＬ２は、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含み、該ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３は、
配列番号：２６６、２６７、および２６８に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：２６９、２７０、および２７１に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：５００、５０１、および２７４に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：２７５、２７６、および２７７に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：２８１、２８２、および２８３に記載の配列をそれぞれ；または
配列番号：２７８、２７９、および２８０に記載の配列をそれぞれ
含む、項目１～１０のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目１２：ＶＬ２は、配列番号：５１２、５１３、５１４、５１５、５１６、５１７、５１８、５１９、５２０、および５２１からなる群から選択される配列を含む軽鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含む、項目１～１０のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目１３：ＶＬ２は、配列番号：５１２、５１３、５１４、５１５、５１６、５１７、５１８、５１９、５２０、および５２１からなる群から選択される配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、項目１～１２のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目１４：ＶＬ３は、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含み、該ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３は、
配列番号：２６６、２６７、および２６８に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：２６９、２７０、および２７１に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：５００、５０１、および２７４に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：２７５、２７６、および２７７に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：２８１、２８２、および２８３に記載の配列をそれぞれ；または
配列番号：２７８、２７９、および２８０に記載の配列をそれぞれ
含む、項目１～１３のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目１５：ＶＬ３は、配列番号：５１２、５１３、５１４、５１５、５１６、５１７、５１８、５１９、５２０、および５２１からなる群から選択される配列を含む軽鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含む、項目１～１３のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目１６：ＶＬ３は、配列番号：５１２、５１３、５１４、５１５、５１６、５１７、５１８、５１９、５２０、および５２１からなる群から選択される配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、項目１～１５のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目１７：ＶＨ１は、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含み、該ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３は、
配列番号：２４８、４９７、および２５０に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：２５１、２５２、および２５３に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：２５４、２５５、および２５６に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：２５４、２５５、および４９８に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：２５７、２５８、および２５９に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：２６３、２６４、および２６５に記載の配列をそれぞれ；または
配列番号：４９９、２６１、および２６２に記載の配列をそれぞれ
含む、項目１～１６のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目１８：ＶＨ１は、配列番号：５０２、５０３、５０４、５０５、５０６、５０７、および５０８からなる群から選択される配列を含む重鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含む、項目１～１６のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目１９：ＶＨ１は、配列番号：５０２、５０３、５０４、５０５、５０６、５０７、および５０８からなる群から選択される配列を含む重鎖可変ドメインを含む、項目１～１８のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目２０：ＶＨ２は、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含み、該ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３は、
配列番号：２４８、４９７、および２５０に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：２５１、２５２、および２５３に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：２５４、２５５、および２５６に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：２５４、２５５、および４９８に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：２５７、２５８、および２５９に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：２６３、２６４、および２６５に記載の配列をそれぞれ；または
配列番号：４９９、２６１、および２６２に記載の配列をそれぞれ
含む、項目１～１９のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目２１：ＶＨ２は、配列番号：５０２、５０３、５０４、５０５、５０６、５０７、および５０８からなる群から選択される配列を含む重鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含む、項目１～１９のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目２２：ＶＨ２は、配列番号：５０２、５０３、５０４、５０５、５０６、５０７、および５０８からなる群から選択される配列を含む重鎖可変ドメインを含む、項目１～２１のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目２３：ＶＨ３は、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含み、該ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３は、
配列番号：２４８、４９７、および２５０に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：２５１、２５２、および２５３に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：２５４、２５５、および２５６に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：２５４、２５５、および４９８に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：２５７、２５８、および２５９に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：２６３、２６４、および２６５に記載の配列をそれぞれ；または
配列番号：４９９、２６１、および２６２に記載の配列をそれぞれ
含む、項目１～２２のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目２４：ＶＨ３は、配列番号：５０２、５０３、５０４、５０５、５０６、５０７、および５０８からなる群から選択される配列を含む重鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含む、項目１～２２のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目２５：ＶＨ３は、配列番号：５０２、５０３、５０４、５０５、５０６、５０７、および５０８からなる群から選択される配列を含む重鎖可変ドメインを含む、項目１～２
４のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目２６：ＶＬ１は、配列番号：５００の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号：５０１の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号：２７４の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み；
ＶＬ２は、配列番号：２７５の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号：２７６の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号：２７７の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み；
ＶＬ３は、配列番号：２６６の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号：２６７の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号：２６８の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み；
ＶＨ１は、配列番号：２５４の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号：２５５の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号：２５６の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み；
ＶＨ２は、配列番号：２５７の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号：２５８の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号：２５９の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み；
ＶＨ３は、配列番号：２４８の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号：４９７の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号：２５０の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、
項目１～２５のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目２７：ＶＬ１は、配列番号：５１８の軽鎖可変ドメイン配列を含む軽鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含み；
ＶＬ２は、配列番号：５１９の軽鎖可変ドメイン配列を含む軽鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含み；
ＶＬ３は、配列番号：５１２の軽鎖可変ドメイン配列を含む軽鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含み；
ＶＨ１は、配列番号：５０４の重鎖可変ドメイン配列を含む重鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含み；
ＶＨ２は、配列番号：５０６の重鎖可変ドメイン配列を含む重鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含み；
ＶＨ３は、配列番号：５０２の重鎖可変ドメイン配列を含む重鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含む、
項目１～２５のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目２８：ＶＬ１は、配列番号：５１８の配列を含む軽鎖可変ドメインを含み；
ＶＬ２は、配列番号：５１９の配列を含む軽鎖可変ドメインを含み；
ＶＬ３は、配列番号：５１２の配列を含む軽鎖可変ドメインを含み；
ＶＨ１は、配列番号：５０４の配列を含む重鎖可変ドメインを含み；
ＶＨ２は、配列番号：５０６の配列を含む重鎖可変ドメインを含み；
ＶＨ３は、配列番号：５０２の配列を含む重鎖可変ドメインを含む、
項目１～２７のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目２９：ＶＬ１は、配列番号：５００の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号：５０１の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号：２７４の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み；
ＶＬ２は、配列番号：２７５の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号：２７６の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号：２７７の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み；
ＶＬ３は、配列番号：２６９の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号：２７０の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号：２７１の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み；
ＶＨ１は、配列番号：２５４の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号：２５５の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号：２５６の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み；
ＶＨ２は、配列番号：２５７の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号：２５８の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号：２５９の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み；
ＶＨ３は、配列番号：２５１の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号：２５２の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号：２５３の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、
項目１～２５のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目３０：ＶＬ１は、配列番号：５１８の軽鎖可変ドメイン配列を含む軽鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含み；
ＶＬ２は、配列番号：５１９の軽鎖可変ドメイン配列を含む軽鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含み；
ＶＬ３は、配列番号：５１３の軽鎖可変ドメイン配列を含む軽鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含み；
ＶＨ１は、配列番号：５０４の重鎖可変ドメイン配列を含む重鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含み；
ＶＨ２は、配列番号：５０６の重鎖可変ドメイン配列を含む重鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含み；
ＶＨ３は、配列番号：５０３の重鎖可変ドメイン配列を含む重鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含む、
項目１～２５のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目３１：ＶＬ１は、配列番号：５１８の配列を含む軽鎖可変ドメインを含み；
ＶＬ２は、配列番号：５１９の配列を含む軽鎖可変ドメインを含み；
ＶＬ３は、配列番号：５１３の配列を含む軽鎖可変ドメインを含み；
ＶＨ１は、配列番号：５０４の配列を含む重鎖可変ドメインを含み；
ＶＨ２は、配列番号：５０６の配列を含む重鎖可変ドメインを含み；
ＶＨ３は、配列番号：５０３の配列を含む重鎖可変ドメインを含む、
項目１～２５および２９～３０のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目３２：ＶＬ１は、配列番号：２７５の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号：２７６の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号：２７７の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み；
ＶＬ２は、配列番号：５００の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号：５０１の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号：２７４の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み；
ＶＬ３は、配列番号：２６９の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号：２７０の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号：２７１の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み；
ＶＨ１は、配列番号：２５７の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号：２５８の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号：２５９の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み；
ＶＨ２は、配列番号：２５４の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号：２５５の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号：２５６の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み；
ＶＨ３は、配列番号：２５１の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号：２５２の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号：２５３の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、
項目１～２５のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目３３：ＶＬ１は、配列番号：５１９の軽鎖可変ドメイン配列を含む軽鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含み；
ＶＬ２は、配列番号：５１８の軽鎖可変ドメイン配列を含む軽鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含み；
ＶＬ３は、配列番号：５１３の軽鎖可変ドメイン配列を含む軽鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含み；
ＶＨ１は、配列番号：５０６の重鎖可変ドメイン配列を含む重鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含み；
ＶＨ２は、配列番号：５０４の重鎖可変ドメイン配列を含む重鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含み；
ＶＨ３は、配列番号：５０３の重鎖可変ドメイン配列を含む重鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含む、
項目１～２５のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目３４：ＶＬ１は、配列番号：５１９の配列を含む軽鎖可変ドメインを含み；
ＶＬ２は、配列番号：５１８の配列を含む軽鎖可変ドメインを含み；
ＶＬ３は、配列番号：５１３の配列を含む軽鎖可変ドメインを含み；
ＶＨ１は、配列番号：５０６の配列を含む重鎖可変ドメインを含み；
ＶＨ２は、配列番号：５０４の配列を含む重鎖可変ドメインを含み；
ＶＨ３は、配列番号：５０３の配列を含む重鎖可変ドメインを含む、
項目１～２５および３２～３３のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目３５：第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結されたＦｃ領域をさらに含み、該Ｆｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含む、項目１に記載の結合タンパク質。
項目３６：第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結されたＦｃ領域をさらに含み、該Ｆｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含む、項目１に記載の結合タンパク質。
項目３７：第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、該第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、該第１のＦｃ領域は、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３５４および３６６位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗであり；
第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、該第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、該第２のＦｃ領域は、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３４９、３６６、３６８、および４０７位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖである、
項目１に記載の結合タンパク質。
項目３８：第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、該第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、該第１のＦｃ領域は、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３４９、３６６、３６８、および４０７位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖであり；
第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、該第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、該第２のＦｃ領域は、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３５４および３６６位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗである、
項目１に記載の結合タンパク質。
項目３９：第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、該第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、
第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、該第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み；
該第１および第２のＦｃ領域は、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の４２８および４３４位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｍ４２８ＬおよびＮ
４３４Ｓである、
項目１、３７，および３８のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目４０：第２のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインは、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３５４および３６６位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗであり；
第３のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインは、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３４９、３６６、３６８、および４０７位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖである、
項目２に記載の結合タンパク質。
項目４１：第２のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインは、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３４９、３６６、３６８、および４０７位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖであり；
第３のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインは、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３５４および３６６位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗである、
項目２に記載の結合タンパク質。
項目４２：第２および第３のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインはどちらも、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の４２８および４３４位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓである、項目２、４０、および４１のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目４３：Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、またはＬ４のうちの少なくとも１つは、独立して、長さが０アミノ酸である、項目１または項目２に記載の結合タンパク質。
項目４４：Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、またはＬ４は、各々独立して、長さが少なくとも１アミノ酸である、項目１または項目２に記載の結合タンパク質。
項目４５：Ｌ１は、Ａｓｐ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｈｉｓ－Ｔｈｒ（配列番号：５２５）を含む、項目１～４４のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目４６：３つの抗原結合部位を形成する４本のポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって、
第１のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ２－Ｌ１－ＶＬ１－Ｌ２－ＣＬ ［Ｉ］
により表される構造を含み、
第２のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ１－Ｌ３－ＶＨ２－Ｌ４－ＣＨ１ ［ＩＩ］
により表される構造を含み、
第３のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ３－ＣＨ１ ［ＩＩＩ］
により表される構造を含み、
第４のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ３－ＣＬ ［ＩＶ］
により表される構造を含み、
式中：
ＶＬ１は、第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ２は、第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ３は、第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＨ１は、第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ２は、第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ３は、第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣＬは、免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣＨ１は、免疫グロブリンＣＨ１重鎖定常ドメインであり；
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４は、アミノ酸リンカーであり；
ここで、式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドは、交差軽鎖－重鎖対を形成し；
ここで：
（ａ）ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は、各々独立して、配列番号：２、４、１０、１２、１８、２０、２６、２８、３４、３６、４２、４４、５０、５２、５８、６０、６６、６８、７４、７６、８２、８４、９０、９２、９８、１００、１０６、１０８、１１４、１１６、１２２、１２４、１３０、１３２、１３８、１４０、１４６、１４８、１５４、１５６、１６２、１６４、１７０、１７２、１７８、１８０、１８６、１８８、１９４、１９６、２０２、２０４、２１０、２１２、２１８、２２０、２２６、２２８、２３３、２３５、２４１、２４３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に由来する可変ドメインであるか；または
（ｂ）ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は、各々独立して、配列番号：２６６～２８３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む可変ドメインの軽鎖相補性決定領域を含み；
ここで：
（ａ）ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は、各々独立して、配列番号：１、３、９、１１、１７、１０、２５、２７、３３、３５、４１、４３、４９、５１、５７、５９、６５、６７、７３、７５、８１、８３、８９、９１、９７、９９、１０５、１０７、１１３、１１５、１２１、１２３、１２９、１３１、１３７、１３９、１４５、１４７、１５３、１５５、１６１、１６３、１６９、１７１、１７７、１７９、１８５、１８７、１９３、１９５、２０１、２０３、２０９、２１１、２１７、２１９、２２５、２２７、２３２、２３４、２４０、２４２のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に由来する可変ドメインであるか；または
（ｂ）ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は、各々独立して、配列番号：２４８～２６５のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む可変ドメインの重鎖相補性決定領域を含む、
前記結合タンパク質。
項目４７：３つの抗原結合部位を形成する４本のポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって、
第１のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ２－Ｌ１－ＶＬ１－Ｌ２－ＣＬ ［Ｉ］
により表される構造を含み、
第２のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ１－Ｌ３－ＶＨ２－Ｌ４－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［ＩＩ］
により表される構造を含み、
第３のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ３－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［ＩＩＩ］
により表される構造を含み、
第４のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ３－ＣＬ ［ＩＶ］
により表される構造を含み、
式中：
ＶＬ１は、第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ２は、第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ３は、第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＨ１は、第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ２は、第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ３は、第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣＬは、免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣＨ１は、免疫グロブリンＣＨ１重鎖定常ドメインであり；
ＣＨ２は、免疫グロブリンＣＨ２重鎖定常ドメインであり；
ＣＨ３は、免疫グロブリンＣＨ３重鎖定常ドメインであり；
ヒンジは、ＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメインを接続する免疫グロブリンヒンジ領域であり；
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４は、アミノ酸リンカーであり；
ここで、式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドは、交差軽鎖－重鎖対を形成し；
ここで：
（ａ）ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は、各々独立して、配列番号：２、４、１０、１２、１８、２０、２６、２８、３４、３６、４２、４４、５０、５２、５８、６０、６６、６８、７４、７６、８２、８４、９０、９２、９８、１００、１０６、１０８、１１４、１１６、１２２、１２４、１３０、１３２、１３８、１４０、１４６、１４８、１５４、１５６、１６２、１６４、１７０、１７２、１７８、１８０、１８６、１８８、１９４、１９６、２０２、２０４、２１０、２１２、２１８、２２０、２２６、２２８、２３３、２３５、２４１、２４３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に由来する可変ドメインであるか；または
（ｂ）ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は、各々独立して、配列番号：２６６～２８３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む可変ドメインの軽鎖相補性決定領域を含み；
ここで：
（ａ）ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は、各々独立して、配列番号：１、３、９、１１、１７、１０、２５、２７、３３、３５、４１、４３、４９、５１、５７、５９、６５、６７、７３、７５、８１、８３、８９、９１、９７、９９、１０５、１０７、１１３、１１５、１２１、１２３、１２９、１３１、１３７、１３９、１４５、１４７、１５３、１５５、１６１、１６３、１６９、１７１、１７７、１７９、１８５、１８７、１９３、１９５、２０１、２０３、２０９、２１１、２１７、２１９、２２５、２２７、２３２、２３４、２４０、２４２のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に由来する可変ドメインであるか；または
（ｂ）ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は、各々独立して、配列番号：２４８～２６５のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む可変ドメインの重鎖相補性決定領域を含む、
前記結合タンパク質。
項目４８：第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結されたＦｃ領域をさらに含み、該Ｆｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含む、項目４６に記載の結合タンパク質。
項目４９：第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結されたＦｃ領域をさらに含み、該Ｆｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含む、項目４６に記載の結合タンパク質。
項目５０：第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、該第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、該第１のＦｃ領域は、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３５４および３６６位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗであり；
第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、該第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、該第２のＦｃ領域は、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３４９、３６６、３６８、および４０７位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖである、
項目４６に記載の結合タンパク質。
項目５１：第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、該第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、該第１のＦｃ領域は、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３４９、３６６、３６８、および４０７位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖであり；
第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、該第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、該第２のＦｃ領域は、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３５４および３６６位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗである、
項目４６に記載の結合タンパク質。
項目５２：第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、該第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、
第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、該第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み；
該第１および第２のＦｃ領域は、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の４２８および４３４位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓである、
項目４６、５０、および５１のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目５３：第２のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインは、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３５４および３６６位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗであり；
第３のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインは、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３４９、３６６、３６８、および４０７位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖである、
項目４７に記載の結合タンパク質。
項目５４：第２のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインは、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３４９、３６６、３６８、および４０７位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖであり；
第３のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインは、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３５４および３６６位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗである、
項目４７に記載の結合タンパク質。
項目５５：第２および第３のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインはどちらも、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の４２８および４３４位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓである、項目４７、５３、および５４のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目５６：Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、またはＬ４のうちの少なくとも１つは、独立して、長さが０アミノ酸である、項目４６または項目４７に記載の結合タンパク質。
項目５７：Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、またはＬ４は、各々独立して、長さが少なくとも１アミノ酸である、項目４６または項目４７に記載の結合タンパク質。
項目５８：Ｌ１は、Ａｓｐ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｈｉｓ－Ｔｈｒ（配列番号：５２５）を含む、項目４６～５７のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目５９：第１のポリペプチド鎖、第２のポリペプチド鎖、第３のポリペプチド鎖および第４のポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって：
（ａ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第２のポリペプチド鎖は、配列番号：３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第３のポリペプチド鎖は、配列番号：１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第４のポリペプチド鎖は、配列番号：２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｂ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：１２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第２のポリペプチド鎖は、配列番号：１１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第３のポリペプチド鎖は、配列番号：９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第４のポリペプチド鎖は、配列番号：１０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｃ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：２０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第２のポリペプチド鎖は、配列番号：１９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第３のポリペプチド鎖は、配列番号：１７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第４のポリペプチド鎖は、配列番号：１８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｄ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：２８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第２のポリペプチド鎖は、配列番号：２７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第３のポリペプチド鎖は、配列番号：２５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第４のポリペプチド鎖は、配列番号：２６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｅ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：３６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第２のポリペプチド鎖は、配列番号：３５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第３のポリペプチド鎖は、配列番号：３３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第４のポリペプチド鎖は、配列番号：３４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｆ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：４４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第２のポリペプチド鎖は、配列番号：４３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第３のポリペプチド鎖は、配列番号：４１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第４のポリペプチド鎖は、配列番号：４２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｇ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：５２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：５２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第２のポリペプチド鎖は、配列番号：５１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：５１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第３のポリペプチド鎖は、配列番号：４９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第４のポリペプチド鎖は、配列番号：５０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：５０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｈ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：６０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：６０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第２のポリペプチド鎖は、配列番号：５９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：５９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第３のポリペプチド鎖は、配列番号：５７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：５７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第４のポリペプチド鎖は、配列番号：５８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：５８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｉ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：６８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：６８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第２のポリペプチド鎖は、配列番号：６７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：６７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第３のポリペプチド鎖は、配列番号：６５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：６５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第４のポリペプチド鎖は、配列番号：６６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：６６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｊ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：７６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：７６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第２のポリペプチド鎖は、配列番号：７５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：７５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第３のポリペプチド鎖は、配列番号：７３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：７３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第４のポリペプチド鎖は、配列番号：７４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：７４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｋ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：８４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：８４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第２のポリペプチド鎖は、配列番号：８３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：８３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第３のポリペプチド鎖は、配列番号：８１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：８１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第４のポリペプチド鎖は、配列番号：８２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：８２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｌ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：９２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：９２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第２のポリペプチド鎖は、配列番号：９１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：９１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第３のポリペプチド鎖は、配列番号：８９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：８９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第４のポリペプチド鎖は、配列番号：９０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：９０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｍ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：１００のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１００のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第２のポリペプチド鎖は、配列番号：９９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：９９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第３のポリペプチド鎖は、配列番号：９７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：９７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第４のポリペプチド鎖は、配列番号：９８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：９８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｎ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：１０８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１０８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第２のポリペプチド鎖は、配列番号：１０７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１０７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第３のポリペプチド鎖は、配列番号：１０５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１０５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第４のポリペプチド鎖は、配列番号：１０６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１０６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｏ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：１１６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１１６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第２のポリペプチド鎖は、配列番号：１１５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１１５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第３のポリペプチド鎖は、配列番号：１１３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１１３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第４のポリペプチド鎖は、配列番号：１１４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１１４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｐ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：１２４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１２４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第２のポリペプチド鎖は、配列番号：１２３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１２３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第３のポリペプチド鎖は、配列番号：１２１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１２１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第４のポリペプチド鎖は、配列番号：１２２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１２２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｑ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：１３２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１３２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第２のポリペプチド鎖は、配列番号：１３１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１３１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第３のポリペプチド鎖は、配列番号：１２９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１２９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第４のポリペプチド鎖は、配列番号：１３０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１３０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｒ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：１４０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１４０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第２のポリペプチド鎖は、配列番号：１３９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１３９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第３のポリペプチド鎖は、配列番号：１３７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１３７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第４のポリペプチド鎖は、配列番号：１３８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１３８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｓ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：１４８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１４８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第２のポリペプチド鎖は、配列番号：１４７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１４７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第３のポリペプチド鎖は、配列番号：１４５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１４５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第４のポリペプチド鎖は、配列番号：１４６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１４６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｔ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：１５６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１５６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第２のポリペプチド鎖は、配列番号：１５５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１５５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第３のポリペプチド鎖は、配列番号：１５３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１５３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第４のポリペプチド鎖は、配列番号：１５４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１５４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｕ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：１６４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１６４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第２のポリペプチド鎖は、配列番号：１６３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１６３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第３のポリペプチド鎖は、配列番号：１６１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１６１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第４のポリペプチド鎖は、配列番号：１６２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１６２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｖ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：１７２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１７２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第２のポリペプチド鎖は、配列番号：１７１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１７１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第３のポリペプチド鎖は、配列番号：１６９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１６９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第４のポリペプチド鎖は、配列番号：１７０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１７０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｗ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：１８０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１８０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第２のポリペプチド鎖は、配列番号：１７９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１７９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第３のポリペプチド鎖は、配列番号：１７７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１７７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第４のポリペプチド鎖は、配列番号：１７８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１７８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｘ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：１８８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１８８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第２のポリペプチド鎖は、配列番号：１８７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１８７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第３のポリペプチド鎖は、配列番号：１８５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１８５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第４のポリペプチド鎖は、配列番号：１８６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１８６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｙ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：１９６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１９６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第２のポリペプチド鎖は、配列番号：１９５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１９５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第３のポリペプチド鎖は、配列番号：１９３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１９３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第４のポリペプチド鎖は、配列番号：１９４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：１９４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｚ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：２０４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２０４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第２のポリペプチド鎖は、配列番号：２０３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２０３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第３のポリペプチド鎖は、配列番号：２０１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２０１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第４のポリペプチド鎖は、配列番号：２０２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２０２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ａａ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：２１２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２１２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第２のポリペプチド鎖は、配列番号：２１１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２１１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第３のポリペプチド鎖は、配列番号：２０９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２０９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第４のポリペプチド鎖は、配列番号：２１０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２１０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｂｂ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：２２０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２２０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第２のポリペプチド鎖は、配列番号：２１９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２１９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第３のポリペプチド鎖は、配列番号：２１７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２１７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第４のポリペプチド鎖は、配列番号：２１８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２１８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｃｃ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：２２８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２２８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第２のポリペプチド鎖は、配列番号：２２７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２２７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第３のポリペプチド鎖は、配列番号：２２５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２２５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第４のポリペプチド鎖は、配列番号：２２６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２２６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｄｄ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：２３５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２３５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第２のポリペプチド鎖は、配列番号：２３４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２３４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第３のポリペプチド鎖は、配列番号：２３２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２３２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第４のポリペプチド鎖は、配列番号：２３３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２３３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；または
（ｅｅ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：２４３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２４３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第２のポリペプチド鎖は、配列番号：２４２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２４２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第３のポリペプチド鎖は、配列番号：２４０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２４０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第４のポリペプチド鎖は、配列番号：２４１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：２４１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、
前記結合タンパク質。
項目６０：１つまたはそれ以上のＨＩＶ標的タンパク質および１つまたはそれ以上のＴ細胞標的タンパク質に特異的に結合する３つの抗原結合部位を形成する４本のポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって、
第１のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ２－Ｌ１－ＶＬ１－Ｌ２－ＣＬ ［Ｉ］
により表される構造を含み；
第２のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ１－Ｌ３－ＶＨ２－Ｌ４－ＣＨ１ ［ＩＩ］
により表される構造を含み；
第３のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ３－ＣＨ１ ［ＩＩＩ］
により表される構造を含み；
第４のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ３－ＣＬ ［ＩＶ］
により表される構造を含み；
式中、
ＶＬ１は、第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ２は、第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ３は、第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＨ１は、第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ２は、第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ３は、第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣＬは、免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣＨ１は、免疫グロブリンＣＨ１重鎖定常ドメインであり；
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４は、アミノ酸リンカーであり；
ここで、式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドは、交差軽鎖－重鎖対を形成する、
前記結合タンパク質。
項目６１：１つまたはそれ以上のＨＩＶ標的タンパク質および１つまたはそれ以上のＴ細胞標的タンパク質に特異的に結合する３つの抗原結合部位を形成する４本のポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって、
第１のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ２－Ｌ１－ＶＬ１－Ｌ２－ＣＬ ［Ｉ］
により表される構造を含み；
第２のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ１－Ｌ３－ＶＨ２－Ｌ４－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［ＩＩ］
により表される構造を含み；
第３のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ３－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［ＩＩＩ］
により表される構造を含み；
第４のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ３－ＣＬ ［ＩＶ］
により表される構造を含み；
式中、
ＶＬ１は、第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ２は、第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ３は、第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＨ１は、第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ２は、第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ３は、第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣＬは、免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣＨ１は、免疫グロブリンＣＨ１重鎖定常ドメインであり；
ＣＨ２は、免疫グロブリンＣＨ２重鎖定常ドメインであり；
ＣＨ３は、免疫グロブリンＣＨ３重鎖定常ドメインであり；
ヒンジは、ＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメインを接続する免疫グロブリンヒンジ領域であり；
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４は、アミノ酸リンカーであり；
ここで、式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドは、交差軽鎖－重鎖対を形成する、
前記結合タンパク質。
項目６２：１つまたはそれ以上のＨＩＶ標的タンパク質は、糖タンパク質１２０、糖タンパク質４１および糖タンパク質１６０からなる群から選択される、項目６０または項目６１に記載の結合タンパク質。
項目６３：１つまたはそれ以上のＴ細胞標的タンパク質は、ＣＤ３またはＣＤ２８である、項目６０または項目６１に記載の結合タンパク質。
項目６４：三重特異性であり、ＨＩＶ標的タンパク質および単一Ｔ細胞標的タンパク質上の２つの異なるエピトープに特異的に結合することができる、項目６０または項目６１に記載の結合タンパク質。
項目６５：三重特異性であり、ＨＩＶ標的タンパク質および２つの異なるＴ細胞標的タンパク質に特異的に結合することができる、項目６０または項目６１に記載の結合タンパク質。
項目６６：三重特異性であり、Ｔ細胞標的タンパク質および単一ＨＩＶ標的タンパク質上の２つの異なるエピトープに特異的に結合することができる、項目６０または項目６１に記載の結合タンパク質。
項目６７：三重特異性であり、Ｔ細胞標的タンパク質および２つの異なるＨＩＶ標的タンパク質に特異的に結合することができる、項目６０または項目６１に記載の結合タンパク質。
項目６８：第１および第２のポリペプチド鎖は、２つのＴ細胞標的タンパク質を特異的に標的にする２つの抗原結合部位を形成し、第３および第４のポリペプチド鎖は、ＨＩＶ
標的タンパク質に特異的に結合する抗原結合部位を形成する、項目６０または項目６１に記載の結合タンパク質。
項目６９：ＶＬ１は、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含み、該ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３は、
配列番号：２６６、２６７、および２６８に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：２６９、２７０、および２７１に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：５００、５０１、および２７４に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：２７５、２７６、および２７７に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：２８１、２８２、および２８３に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：２７８、２７９、および２８０に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：４８８、４８９、および４９０に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：４９１、４９２、および４９３に記載の配列をそれぞれ；または
配列番号：４９４、４９５、および４９６に記載の配列をそれぞれ
含む、項目６０～６８のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目７０：ＶＬ１は、配列番号：５１２、５１３、５１４、５１５、５１６、５１７、５１８、５１９、５２０、５２１、５２２、５２３、および５２４からなる群から選択される配列を含む軽鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含む、項目６０～６８のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目７１：ＶＬ１は、配列番号：５１２、５１３、５１４、５１５、５１６、５１７、５１８、５１９、５２０、５２１、５２２、５２３、および５２４からなる群から選択される配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、項目６０～７０のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目７２：ＶＬ２は、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含み、該ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３は、
配列番号：２６６、２６７、および２６８に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：２６９、２７０、および２７１に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：５００、５０１、および２７４に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：２７５、２７６、および２７７に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：２８１、２８２、および２８３に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：２７８、２７９、および２８０に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：４８８、４８９、および４９０に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：４９１、４９２、および４９３に記載の配列をそれぞれ；または
配列番号：４９４、４９５、および４９６に記載の配列をそれぞれ
含む、項目６０～７１のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目７３：ＶＬ２は、配列番号：５１２、５１３、５１４、５１５、５１６、５１７、５１８、５１９、５２０、５２１、５２２、５２３、および５２４からなる群から選択される配列を含む軽鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含む、項目６０～７１のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目７４：ＶＬ２は、配列番号：５１２、５１３、５１４、５１５、５１６、５１７、５１８、５１９、５２０、５２１、５２２、５２３、および５２４からなる群から選択される配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、項目６０～７３のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目７５：ＶＬ３は、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含み、該Ｃ
ＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３は、
配列番号：２６６、２６７、および２６８に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：２６９、２７０、および２７１に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：５００、５０１、および２７４に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：２７５、２７６、および２７７に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：２８１、２８２、および２８３に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：２７８、２７９、および２８０に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：４８８、４８９、および４９０に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：４９１、４９２、および４９３に記載の配列をそれぞれ；または
配列番号：４９４、４９５、および４９６に記載の配列をそれぞれ
含む、項目６０～７４のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目７６：ＶＬ３は、配列番号：５１２、５１３、５１４、５１５、５１６、５１７、５１８、５１９、５２０、５２１、５２２、５２３、および５２４からなる群から選択される配列を含む軽鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含む、項目６０～７４のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目７７：ＶＬ３は、配列番号：５１２、５１３、５１４、５１５、５１６、５１７、５１８、５１９、５２０、５２１、５２２、５２３、および５２４からなる群から選択される配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、項目６０～７６のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目７８：ＶＨ１は、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含み、該ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３は、
配列番号：２４８、４９７、および２５０に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：２５１、２５２、および２５３に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：２５４、２５５、および２５６に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：２５４、２５５、および４９８に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：２５７、２５８、および２５９に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：２６３、２６４、および２６５に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：４９９、２６１、および２６２に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：４７９、４８０、および４８１に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：４８２、４８３、および４８４に記載の配列をそれぞれ；または
配列番号：４８５、４８６、および４８７に記載の配列をそれぞれ
含む、項目６０～７７のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目７９：ＶＨ１は、配列番号：５０２、５０３、５０４、５０５、５０６、５０７、５０８、５０９、５１０、および５１１からなる群から選択される配列を含む重鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含む、項目６０～７７のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目８０：ＶＨ１は、配列番号：５０２、５０３、５０４、５０５、５０６、５０７、５０８、５０９、５１０、および５１１からなる群から選択される配列を含む重鎖可変ドメインを含む、項目６０～７９のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目８１：ＶＨ２は、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含み、該ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３は、
配列番号：２４８、４９７、および２５０に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：２５１、２５２、および２５３に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：２５４、２５５、および２５６に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：２５４、２５５、および４９８に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：２５７、２５８、および２５９に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：２６３、２６４、および２６５に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：４９９、２６１、および２６２に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：４７９、４８０、および４８１に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：４８２、４８３、および４８４に記載の配列をそれぞれ；または
配列番号：４８５、４８６、および４８７に記載の配列をそれぞれ
含む、項目６０～８０のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目８２：ＶＨ２は、配列番号：５０２、５０３、５０４、５０５、５０６、５０７、５０８、５０９、５１０、および５１１からなる群から選択される配列を含む重鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含む、項目６０～８０のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目８３：ＶＨ２は、配列番号：５０２、５０３、５０４、５０５、５０６、５０７、５０８、５０９、５１０、および５１１からなる群から選択される配列を含む重鎖可変ドメインを含む、項目６０～８２のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目８４：ＶＨ３は、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含み、該ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３は、
配列番号：２４８、４９７、および２５０に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：２５１、２５２、および２５３に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：２５４、２５５、および２５６に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：２５４、２５５、および４９８に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：２５７、２５８、および２５９に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：２６３、２６４、および２６５に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：４９９、２６１、および２６２に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：４７９、４８０、および４８１に記載の配列をそれぞれ；
配列番号：４８２、４８３、および４８４に記載の配列をそれぞれ；または
配列番号：４８５、４８６、および４８７に記載の配列をそれぞれ
含む、項目６０～８３のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目８５：ＶＨ３は、配列番号：５０２、５０３、５０４、５０５、５０６、５０７、５０８、５０９、５１０、および５１１からなる群から選択される配列を含む重鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含む、項目６０～８３のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目８６：ＶＨ３は、配列番号：５０２、５０３、５０４、５０５、５０６、５０７、５０８、５０９、５１０、および５１１からなる群から選択される配列を含む重鎖可変ドメインを含む、項目６０～８５のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目８７：ＶＬ１は、配列番号：４８８の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号：４８９の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号：４９０の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み；
ＶＬ２は、配列番号：４９４の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号：４９５の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号：４９６の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み；
ＶＬ３は、配列番号：２６９の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号：２７０の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号：２７１の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み；
ＶＨ１は、配列番号：４７９の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号：４８０の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号：４８１の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み；
ＶＨ２は、配列番号：４８５の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号：４８６の配列を含
むＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号：４８７の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み；
ＶＨ３は、配列番号：２５１の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号：２５２の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号：２５３の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、
項目６０～８６のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目８８：ＶＬ１は、配列番号：５２２の軽鎖可変ドメイン配列を含む軽鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含み；
ＶＬ２は、配列番号：５２４の軽鎖可変ドメイン配列を含む軽鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含み；
ＶＬ３は、配列番号：５１３の軽鎖可変ドメイン配列を含む軽鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含み；
ＶＨ１は、配列番号：５０９の重鎖可変ドメイン配列を含む重鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含み；
ＶＨ２は、配列番号：５１１の重鎖可変ドメイン配列を含む重鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含み；
ＶＨ３は、配列番号：５０３の重鎖可変ドメイン配列を含む重鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含む、
項目６０～８６のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目８９：ＶＬ１は、配列番号：５２２の配列を含む軽鎖可変ドメインを含み；
ＶＬ２は、配列番号：５２４の配列を含む軽鎖可変ドメインを含み；
ＶＬ３は、配列番号：５１３の配列を含む軽鎖可変ドメインを含み；
ＶＨ１は、配列番号：５０９の配列を含む重鎖可変ドメインを含み；
ＶＨ２は、配列番号：５１１の配列を含む重鎖可変ドメインを含み；
ＶＨ３は、配列番号：５０３の配列を含む重鎖可変ドメインを含む、
項目６０～８８のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目９０：ＶＬ１は、配列番号：４９４の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号：４９５の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号：４９６の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み；
ＶＬ２は、配列番号：４８８の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号：４８９の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号：４９０の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み；
ＶＬ３は、配列番号：２６９の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号：２７０の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号：２７１の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み；
ＶＨ１は、配列番号：４８５の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号：４８６の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号：４８７の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み；
ＶＨ２は、配列番号：４７９の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号：４８０の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号：４８１の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み；
ＶＨ３は、配列番号：２５１の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号：２５２の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号：２５３の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、
項目６０～８６のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目９１：ＶＬ１は、配列番号：５２４の軽鎖可変ドメイン配列を含む軽鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含み；
ＶＬ２は、配列番号：５２２の軽鎖可変ドメイン配列を含む軽鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含み；
ＶＬ３は、配列番号：５１３の軽鎖可変ドメイン配列を含む軽鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含み；
ＶＨ１は、配列番号：５１１の重鎖可変ドメイン配列を含む重鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含み；
ＶＨ２は、配列番号：５０９の重鎖可変ドメイン配列を含む重鎖可変ドメインのＣＤＲ
－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含み；
ＶＨ３は、配列番号：５０３の重鎖可変ドメイン配列を含む重鎖可変ドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含む、
項目６０～８６のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目９２：ＶＬ１は、配列番号：５２４の配列を含む軽鎖可変ドメインを含み；
ＶＬ２は、配列番号：５２２の配列を含む軽鎖可変ドメインを含み；
ＶＬ３は、配列番号：５１３の配列を含む軽鎖可変ドメインを含み；
ＶＨ１は、配列番号：５１１の配列を含む重鎖可変ドメインを含み；
ＶＨ２は、配列番号：５０９の配列を含む重鎖可変ドメインを含み；
ＶＨ３は、配列番号：５０３の配列を含む重鎖可変ドメインを含む、
項目６０～８６および９０～９１のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目９３：第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結されたＦｃ領域をさらに含み、該Ｆｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含む、項目６０に記載の結合タンパク質。
項目９４：第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結されたＦｃ領域をさらに含み、該Ｆｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含む、項目６０に記載の結合タンパク質。
項目９５：第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、該第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、該第１のＦｃ領域は、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３５４および３６６位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗであり；
第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、該第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、該第２のＦｃ領域は、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３４９、３６６、３６８、および４０７位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖである、
項目６０に記載の結合タンパク質。
項目９６：第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、該第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、該第１のＦｃ領域は、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３４９、３６６、３６８、および４０７位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖであり；
第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、該第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、該第２のＦｃ領域は、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３５４および３６６位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗである、
項目６０に記載の結合タンパク質。
項目９７：第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、該第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、
第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、該第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖
定常ドメインを含み；
該第１および第２のＦｃ領域は、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の４２８および４３４位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓである、
項目６０、９５、および９６のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目９８：第２のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインは、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３５４および３６６位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗであり；
第３のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインは、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３４９、３６６、３６８、および４０７位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖである、
項目６１に記載の結合タンパク質。
項目９９：第２のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインは、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３４９、３６６、３６８、および４０７位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖであり；
第３のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインは、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３５４および３６６位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗである、
項目６１に記載の結合タンパク質。
項目１００：第２および第３のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインはどちらも、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の４２８および４３４位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓである、項目６１、９８、および９９のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目１０１：Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、またはＬ４のうちの少なくとも１つは、独立して、長さが０アミノ酸である、項目６０または項目６１に記載の結合タンパク質。
項目１０２：Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、またはＬ４は、各々独立して、長さが少なくとも１アミノ酸である、項目６０または項目６１に記載の結合タンパク質。
項目１０３：Ｌ１は、Ｇｌｙ－Ｇｌｎ－Ｐｒｏ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ｐｒｏ（配列番号：２９９）である、項目６０～１０２のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目１０４：３つの抗原結合部位を形成する４本のポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって、
第１のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ２－Ｌ１－ＶＬ１－Ｌ２－ＣＬ ［Ｉ］
により表される構造を含み、
第２のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ１－Ｌ３－ＶＨ２－Ｌ４－ＣＨ１ ［ＩＩ］
により表される構造を含み、
第３のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ３－ＣＨ１ ［ＩＩＩ］
により表される構造を含み、
第４のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ３－ＣＬ ［ＩＶ］
により表される構造を含み、
式中：
ＶＬ１は、第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ２は、第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ３は、第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＨ１は、第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ２は、第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ３は、第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣＬは、免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣＨ１は、免疫グロブリンＣＨ１重鎖定常ドメインであり；
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４は、アミノ酸リンカーであり；
ここで、式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドは、交差軽鎖－重鎖対を形成し；
ここで：
（ａ）ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は、各々独立して、配列番号：３０３、３０５、３１１、３１３、３１９、３２１、３２７、３２９、３３５、３３７、３４３、３４５、３５１、３５３、３５９、３６１、３６７、３６９、３７５、３７７、３８３、３８５、３９１、３９３、３９９、４０１、４０７、４０９、４１５、４１７、４２３、４２５、４３１、４３３、４３９、４４１、４４７、４４９、４５５、４５７、４６３、４６５、４７１、４７３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に由来する可変ドメインであるか；または
（ｂ）ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は、各々独立して、配列番号：２６６～２７１、２７５～２７７、４８８～４９６のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む可変ドメインの軽鎖相補性決定領域を含み；
ここで：
（ａ）ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は、各々独立して、配列番号：３０２、３０４、３１０、３１２、３１８、３２０、３２６、３２８、３３４、３３６、３４２、３４４、３５０、３５２、３５８、３６０、３６６、３６８、３７４、３７６、３８２、３８４、３９０、３９２、３９８、４００、４０６、４０８、４１４、４１６、４２２、４２４、４３０、４３２、４３８、４４０、４４６、４４８、４５４、４５６、４６２、４６４、４７０、４７２のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に由来する可変ドメインであるか；または
（ｂ）ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は、各々独立して、配列番号：２４８～２５３、２５７～２５９、４７９～４８７のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む可変ドメインの重鎖相補性決定領域を含む、
前記結合タンパク質。
項目１０５：３つの抗原結合部位を形成する４本のポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって、
第１のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ２－Ｌ１－ＶＬ１－Ｌ２－ＣＬ ［Ｉ］
により表される構造を含み、
第２のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ１－Ｌ３－ＶＨ２－Ｌ４－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［ＩＩ］
により表される構造を含み、
第３のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ３－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［ＩＩＩ］
により表される構造を含み、
第４のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ３－ＣＬ ［ＩＶ］
により表される構造を含み、
式中：
ＶＬ１は、第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ２は、第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ３は、第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＨ１は、第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ２は、第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ３は、第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣＬは、免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣＨ１は、免疫グロブリンＣＨ１重鎖定常ドメインであり；
ＣＨ２は、免疫グロブリンＣＨ２重鎖定常ドメインであり；
ＣＨ３は、免疫グロブリンＣＨ３重鎖定常ドメインであり；
ヒンジは、ＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメインを接続する免疫グロブリンヒンジ領域であり；
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４は、アミノ酸リンカーであり；
ここで、式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドは、交差軽鎖－重鎖対を形成し；
ここで：
（ａ）ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は、各々独立して、配列番号：３０３、３０５、３１１、３１３、３１９、３２１、３２７、３２９、３３５、３３７、３４３、３４５、３５１、３５３、３５９、３６１、３６７、３６９、３７５、３７７、３８３、３８５、３９１、３９３、３９９、４０１、４０７、４０９、４１５、４１７、４２３、４２５、４３１、４３３、４３９、４４１、４４７、４４９、４５５、４５７、４６３、４６５、４７１、４７３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に由来する可変ドメインであるか；または
（ｂ）ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は、各々独立して、配列番号：２６６～２７１、２７５～２７７、４８８～４９６のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む可変ドメインの軽鎖相補性決定領域を含み；
ここで：
（ａ）ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は、各々独立して、配列番号：３０２、３０４、３１０、３１２、３１８、３２０、３２６、３２８、３３４、３３６、３４２、３４４、３５０、３５２、３５８、３６０、３６６、３６８、３７４、３７６、３８２、３８４、３９０、３９２、３９８、４００、４０６、４０８、４１４、４１６、４２２、４２４、４３０、４３２、４３８、４４０、４４６、４４８、４５４、４５６、４６２、４６４、４７０、４７２のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に由来する可変ドメインであるか；または
（ｂ）ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は、各々独立して、配列番号：２４８～２５３、２５７～２５９、４７９～４８７のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む可変ドメインの重鎖相補性決定領域を含む、
前記結合タンパク質。
項目１０６：第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結されたＦｃ領域をさらに含み、該Ｆｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常領域を含む、項目１０４に記載の結合タンパク質。
項目１０７：第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結されたＦｃ領域をさらに含み、該Ｆｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含む、項目１０４に記載の結合タンパク質。
項目１０８：第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、該第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グ
ロブリン重鎖定常ドメインを含み、該第１のＦｃ領域は、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３５４および３６６位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗであり；
第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、該第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、該第２のＦｃ領域は、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３４９、３６６、３６８、および４０７位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖである、
項目１０４に記載の結合タンパク質。
項目１０９：第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、該第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、該第１のＦｃ領域は、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３４９、３６６、３６８、および４０７位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖであり；
第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、該第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、該第２のＦｃ領域は、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３５４および３６６位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗである、
項目１０４に記載の結合タンパク質。
項目１１０：第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、該第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、
第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、該第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み；
該第１および第２のＦｃ領域は、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の４２８および４３４位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓである、
項目１０４、１０８、および１０９のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目１１１：第２のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインは、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３５４および３６６位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗであり；
第３のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインは、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３４９、３６６、３６８、および４０７位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖである、
項目１０５に記載の結合タンパク質。
項目１１２：第２のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインは、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３４９、３６６、３６８、および４０７位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖであり；
第３のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインは、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３５４および３６６位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗである、
項目１０５に記載の結合タンパク質。
項目１１３：第２および第３のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインはどちらも、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の４２８および４３４位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓである、項目１０５、１１１、および１１２のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目１１４：Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、またはＬ４のうちの少なくとも１つは、独立して、長さが０アミノ酸である、項目１０４または項目１０５に記載の結合タンパク質。
項目１１５：Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、またはＬ４は、各々独立して、長さが少なくとも１アミノ酸である、項目１０４または項目１０５に記載の結合タンパク質。
項目１１６：Ｌ１は、Ｇｌｙ－Ｇｌｎ－Ｐｒｏ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ｐｒｏ（配列番号：２９９）である、項目１０４～１１５のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目１１７：第１のポリペプチド鎖、第２のポリペプチド鎖、第３のポリペプチド鎖および第４のポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって：
（ａ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：３０５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３０５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第２のポリペプチド鎖は、配列番号：３０４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３０４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第３のポリペプチド鎖は、配列番号：３０２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３０２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第４のポリペプチド鎖は、配列番号：３０３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３０３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｂ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：３１３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３１３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第２のポリペプチド鎖は、配列番号：３１２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３１２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第３のポリペプチド鎖は、配列番号：３１０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３１０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第４のポリペプチド鎖は、配列番号：３１１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３１１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｃ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：３２１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３２１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第２のポリペプチド鎖は、配列番号：３２０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３２０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第３のポリペプチド鎖は、配列番号：３１８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３１８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第４のポリペプチド鎖は、配列番号：３１９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３１９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｄ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：３２９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３２９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第２のポリペプチド鎖は、配列番号：３２８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３２８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第３のポリペプチド鎖は、配列番号：３２６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３２６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第４のポリペプチド鎖は、配列番号：３２７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３２７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｅ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：３３７のアミノ酸配列を含むか、または配
列番号：３３７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第２のポリペプチド鎖は、配列番号：３３６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３３６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第３のポリペプチド鎖は、配列番号：３３４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３３４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第４のポリペプチド鎖は、配列番号：３３５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３３５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｆ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：３４５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３４５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第２のポリペプチド鎖は、配列番号：３４４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３４４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第３のポリペプチド鎖は、配列番号：３４２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３４２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第４のポリペプチド鎖は、配列番号：３４３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３４３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｇ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：３５３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３５３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第２のポリペプチド鎖は、配列番号：３５２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３５２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第３のポリペプチド鎖は、配列番号：３５０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３５０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第４のポリペプチド鎖は、配列番号：３５１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３５１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｈ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：３６１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３６１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第２のポリペプチド鎖は、配列番号：３６０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３６０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第３のポリペプチド鎖は、配列番号：３５８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３５８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第４のポリペプチド鎖は、配列番号：３５９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３５９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｉ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：３６９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３６９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第２のポリペプチド鎖は、配列番号：３６８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３６８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第３のポリペプチド鎖は、配列番号：３６６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３６６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第４のポリペプチド鎖は、配列番号：３６７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３６７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｊ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：３７７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３７７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第２のポリペプチド鎖は、配列番号：３７６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３７６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第３のポリペプチド鎖は、配列番号：３７４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３７４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第４のポリペプチド鎖は、配列番号：３７５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３７５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｋ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：３８５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３８５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第２のポリペプチド鎖は、配列番号：３８４のアミノ酸配列を含むか、または配
列番号：３８４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第３のポリペプチド鎖は、配列番号：３８２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３８２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第４のポリペプチド鎖は、配列番号：３８３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３８３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｌ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：３９３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３９３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第２のポリペプチド鎖は、配列番号：３９２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３９２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第３のポリペプチド鎖は、配列番号：３９０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３９０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第４のポリペプチド鎖は、配列番号：３９１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３９１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｍ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：４０１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４０１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第２のポリペプチド鎖は、配列番号：４００のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４００のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第３のポリペプチド鎖は、配列番号：３９８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３９８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第４のポリペプチド鎖は、配列番号：３９９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：３９９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｎ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：４０９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４０９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第２のポリペプチド鎖は、配列番号：４０８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４０８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第３のポリペプチド鎖は、配列番号：４０６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４０６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第４のポリペプチド鎖は、配列番号：４０７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４０７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｐ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：４１７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４１７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第２のポリペプチド鎖は、配列番号：４１６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４１６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第３のポリペプチド鎖は、配列番号：４１４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４１４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第４のポリペプチド鎖は、配列番号：４１５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４１５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｑ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：４２５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４２５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第２のポリペプチド鎖は、配列番号：４２４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４２４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第３のポリペプチド鎖は、配列番号：４２２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４２２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第４のポリペプチド鎖は、配列番号：４２３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４２３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｒ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：４３３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４３３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第２のポリペプチド鎖は、配列番号：４３２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４３２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第３のポリペプチド鎖は、配列番号：４３０のアミノ酸配列を含むか、または配
列番号：４３０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第４のポリペプチド鎖は、配列番号：４３１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４３１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｓ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：４４１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４４１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第２のポリペプチド鎖は、配列番号：４４０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４４０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第３のポリペプチド鎖は、配列番号：４３８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４３８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第４のポリペプチド鎖は、配列番号：４３９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４３９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｔ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：４４９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４４９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第２のポリペプチド鎖は、配列番号：４４８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４４８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第３のポリペプチド鎖は、配列番号：４４６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４４６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第４のポリペプチド鎖は、配列番号：４４７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４４７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｕ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：４５７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４５７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第２のポリペプチド鎖は、配列番号：４５６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４５６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第３のポリペプチド鎖は、配列番号：４５４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４５４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第４のポリペプチド鎖は、配列番号：４５５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４５５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｖ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：４６５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４６５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第２のポリペプチド鎖は、配列番号：４６４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４６４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第３のポリペプチド鎖は、配列番号：４６２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４６２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第４のポリペプチド鎖は、配列番号：４６３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４６３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；または
（ｗ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：４７３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４７３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第２のポリペプチド鎖は、配列番号：４７２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４７２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第３のポリペプチド鎖は、配列番号：４７０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４７０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
第４のポリペプチド鎖は、配列番号：４７１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号：４７１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、
前記結合タンパク質。
項目１１８：項目１～１１７のいずれか１項目に記載の結合タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子。
項目１１９：項目１１８に記載の核酸分子を含む発現ベクター。
項目１２０：項目１１８に記載の核酸分子を含む、単離された宿主細胞。
項目１２１：項目１１９に記載の発現ベクターを含む、単離された宿主細胞。
項目１２２：哺乳動物細胞または昆虫細胞である、項目１２０または項目１２１に記載の単離された宿主細胞。
項目１２３：項目１～１１７のいずれか１項目に記載の結合タンパク質の第１、第２、第３、および第４のポリペプチド鎖をコードする１つまたはそれ以上のベクターを含むベクター系。
項目１２４：結合タンパク質の第１のポリペプチド鎖をコードする第１のベクターと、結合タンパク質の第２のポリペプチド鎖をコードする第２のベクターと、結合タンパク質の第３のポリペプチド鎖をコードする第３のベクターと、結合タンパク質の第４のポリペプチド鎖をコードする第４のベクターとを含む、項目１２３に記載のベクター系。
項目１２５：結合タンパク質の第１および第２のポリペプチド鎖をコードする第１のベクターと、結合タンパク質の第３および第４のポリペプチド鎖をコードする第２のベクターとを含む、項目１２３に記載のベクター系。
項目１２６：１つまたはそれ以上のベクターは、発現ベクターである、項目１２３～１２５のいずれか１項目に記載のベクター系。
項目１２７：項目１２３～１２６のいずれか１項目に記載のベクター系を含む、単離された宿主細胞。
項目１２８：哺乳動物細胞または昆虫細胞である、項目１２７に記載の単離された宿主細胞。
項目１２９：結合タンパク質を産生する方法であって：
ａ）項目１２０～１２２および項目１２７～１２８のいずれか１項目に記載の宿主細胞を、該宿主細胞が該結合タンパク質を発現するような条件下で培養する工程；および
ｂ）該結合タンパク質を該宿主細胞から単離する工程
を含む前記方法。
項目１３０：患者におけるＨＩＶ感染症を予防および／または処置する方法であって、項目１～１１７のいずれか１項目に記載の少なくとも１つの結合タンパク質の治療有効量を該患者に投与する工程を含む前記方法。
項目１３１：結合タンパク質は、標準的抗レトロウイルス療法と併用投与される、項目１３０に記載の方法。
項目１３２：少なくとも１つの結合タンパク質の投与は、１つまたはそれ以上のＨＩＶビリオンの中和をもたらす、項目１３０または項目１３１に記載の方法。
項目１３３：少なくとも１つの結合タンパク質の投与は、患者における１つまたはそれ以上の潜伏および／または慢性ＨＩＶ感染細胞の排除をもたらす、項目１３０～１３２のいずれか１項目に記載の方法。
項目１３４：患者はヒトである、項目１３０～１３３のいずれか１項目に記載の方法。
項目１３５：患者におけるＨＩＶ感染症の予防または処置のための、項目１～１１７のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目１３６：標準的抗レトロウイルス療法と併用投与される、項目１３５に記載の結合タンパク質。
項目１３７：患者における１つまたはそれ以上のＨＩＶビリオンの中和を引き起こす、項目１３５または項目１３６に記載の結合タンパク質。
項目１３８：患者における１つまたはそれ以上の潜伏および／または慢性ＨＩＶ感染細胞の排除を引き起こす、項目１３５～１３７のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
項目１３９：患者はヒトである、項目１３５～１３８のいずれか１項目に記載の結合タンパク質。
下記の実施例は、本開示の特定の実施形態およびそれらの様々な使用の説明に役立つものである。これらの実施例は単に説明のために示すものであり、いかなる点においても本発明の範囲を制限するものと見なすべきではない。
ＨＩＶ－１ Ｅｎｖ糖タンパク質を標的にする三重特異性結合タンパク質の産生
ＨＩＶ－１エンベロープ糖タンパク質（Ｅｎｖ／ｇｐ１６０）は、ウイルス粒子の表面に位置し、非共有結合で連結された膜貫通ｇｐ４１とｇｐ１２０の３つの複合体を含むホモ三量体で構成されている。Ｅｎｖは、ＨＩＶの主受容体（ＣＤ４）および共受容体（ＣＣＲ５またはＣＸＣＲ４）へのｇｐ１２０の結合により標的細胞へのウイルス侵入、続いて、ｇｐ４１の立体構造変化による助長されるウイルス／細胞膜融合の誘導を可能にし、その結果、ウイルスカプシドの侵入およびウイルスゲノムの宿主細胞への送達が起こる。加えて、Ｅｎｖは、感染細胞の表面で発現される。
Ｅｎｖは、ＨＩＶ－１ビリオン上の中和抗体の唯一の標的としての役割を果たす。ウイルスＥｎｖへの中和抗体の結合は、ウイルスの付着／侵入を阻害する。さらに、ＨＩＶ－１に感染したＥｎｖ発現細胞への中和抗体の結合は、抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）によるそれらの破壊につながり、その結果、潜伏ウイルス保有宿主が低減される。したがって、Ｅｎｖを標的にする中和抗体は、魅力的な抗ウイルス療法開発分野である。しかし、ＨＩＶ－１ウイルスの高い配列多様性および変異率のため、Ｅｎｖを標的にする中和抗体の開発は困難を伴うと判明した。所与のＨＩＶ－１株には所与の中和抗体のエピトープがない尤度が高いか、または所与のＨＩＶ－１株は、変異を進化させて前記抗体に対して耐性になっている尤度が高いからである。ＨＩＶ－１を標的にする新規中和抗体を開発する場合、ウイルス株のブレイクスルーを軽減するための戦略を開発しなければならない。ここに記載の研究は、ＨＩＶ Ｅｎｖ糖タンパク質上の３つの異なるエピトープに特異的に結合する３つの抗原結合部位を形成する４本のポリペプチドを含む新規三重特異性結合タンパク質の開発、およびＨＩＶ－１を中和する際のこれらの新規三重特異性結合タンパク質の使用を探究するものである。
方法
結合タンパク質の産生および精製
三重特異性結合タンパク質を発現するベクターを、設計した重鎖および軽鎖遺伝子を哺
乳動物発現ベクターに挿入することにより構築した。対応する重鎖および軽鎖対合が自発的に起こり、Ｆｃ領域に工学的に作製したノブ・イン・ホール変異によりヘテロ二量体形成が促進された。
結合タンパク質をＥｘｐｉ２９３細胞において４つの発現プラスミドの共トランスフェクションにより産生した（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｅｘｐｉ２９３（商標）Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ Ｋｉｔ、カタログ番号Ａ１４６３５）。２工程精製スキームを使用して結合タンパク質を精製した。先ず、結合タンパク質をプロテインＡアフィニティークロマトグラフィー樹脂に捕捉し、洗浄し、次いでグリシン中、ｐＨ３．０で溶離した。次いで、溶離したタンパク質をＰＢＳで透析し、濃縮し、濾過した。濾過した抗体を、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００ ＳＥＣカラムを使用してさらに精製して、単量体結合タンパク質を得た。
結合タンパク質の親和性測定
抗ＨＩＶ三重特異性結合タンパク質の結合親和性を、Ｂｉａｃｏｒｅ３０００計器（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）により測定した。使用したアッセイ用緩衝液は、ＨＢＳ－ＥＰ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）であった。
Ｂｉａｃｏｒｅ計器を使用して表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）分析により、上述のタンパク質についてのＨＩＶ－１タンパク質ｇｐ４１上のＭＰＥＲ結合部位に対する親和性を、次のように測定した：結合タンパク質を、先ず、抗ヒトＦｃ抗体と結合したＣＭ５チップに捕捉し、その後、それに様々な濃度（１００ｎＭ～６．２５ｎＭ）のＭＰＥＲ結合ペプチド（アセチル－ＲＲＲＮＥＱＥＬＬＥＬＤＫＷＡＳＬＷＮＷＦＤＩＴＮＷＬＷＹＩＲＲＲ－Ｔｔｄｓ－Ｌｙｓ－（ビオチン）－ＮＨ２）（配列番号：２８４）を毎分３０μＬで流し、Ｂｉａｃｏｒｅ ３０００を用いる２５℃で２４０秒間の会合および３００秒間の解離の測定により結合を検出した。泳動用緩衝液はもちろん、ＨＢＳ－ＥＰ緩衝液も試料希釈に使用した。３Ｍ ＭｇＣｌ２を用いて３０μＬ毎分でチップの再生を行った。データ分析にはＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアｖ．４．１（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用した。物質移動を伴う１：１ラングミュアモデルを使用してデータのグローバルフィッティングを行った。ソフトウェアベースの曲線フィッティング後、ＭＰＥＲ結合ペプチドの各濃度での結合および解離速度を算出し、それを使用して各結合タンパク質についての結合親和性を得た。
ＨＩＶ－１タンパク質ｇｐ１２０上のＣＤ４ＢＳ結合部位に対する上述のタンパク質の親和性をＳＰＲにより次のように測定した：組換えＨＩＶ－１ ｇｐ１２０（Ｔｈｒ２７－Ａｒｇ４９８）タンパク質（ＨＩＶ－１／クレードＢ／Ｃ（ＣＮ５４）、ＡＲＣＯ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（カタログ番号ＧＰ４－Ｖ１５２２７））をＣＭ５チップに捕捉し、その後、それに様々な濃度（１００ｎＭ～６．２５ｎＭ）の結合タンパク質を流し、Ｂｉａｃｏｒｅ ３０００を用いる２５℃で２４０秒間の会合および３００秒間の解離の測定により結合を検出した。泳動用緩衝液はもちろん、ＨＢＳ－ＥＰ緩衝液も試料希釈に使用した。３Ｍ ＭｇＣｌ２を用いて３０μＬ毎分でチップの再生を行った。データ分析にはＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアｖ．４．１（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用した。物質移動を伴う１：１ラングミュアモデルを使用してデータのグローバルフィッティングを行った。ソフトウェアベースの曲線フィッティング後、結合タンパク質の各濃度での結合および解離速度を算出し、それを使用して各結合タンパク質についての結合親和性を得た。
立体構造安定性および凝集アッセイ
三重特異性結合タンパク質の立体構造安定性を、融点Ｔｍおよび凝集開始温度（Ｔａｇｇ）を決定することにより評定した。
融点Ｔｍの測定は、示差走査蛍光定量法（ＤＳＦ）により行った。試料を白色セミスカート９６ウェルプレート（ＢＩＯＲＡＤ）においてＤ－ＰＢＳ緩衝液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で希釈して、Ｄ－ＰＢＳ中のＳＹＰＲＯ－Ｏｒａｎｇｅ染色剤（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＤＭＳＯ中の５０００Ｘストック）の４×濃度溶液を含む０．２μｇ／μＬの最終濃度にした。すべての測定は、ＭｙｉＱ２リアルタイムＰＣＲ計器（ＢＩＯＲＡＤ）を使用して２回ずつ行った。融解曲線の負の一次導関数曲線（－ｄ（ＲＦＵ）／ｄＴ）をｉＱ５ソフトウェアｖ２．１（ＢＩＯＲＡＤ）で生成した。次いで、Ｔｍ決定およびグラフ表示のためにデータをＥｘｃｅｌにエクスポートした。
融点Ｔｍおよび凝集開始温度（Ｔａｇｇ）を、Ｕｎｉｔ計器（Ｕｎｃｈａｉｎｅｄ Ｌａｂｓ）を使用して静的光散乱（ＳＬＳ）によっても測定した。各試料９μＬを未希釈でマルチキュベットアレイに投入した。次いで、試料を０．３℃／分の加熱速度で２０℃から９５℃に加熱した。トリプトファン蛍光スペクトルの重心平均（ＢＣＭ）を使用して、タンパク質融解曲線を測定し、Ｔｍ値を決定した。２６６ｎｍ静的光散乱（ＳＬＳ）シグナルを使用して、凝集曲線を測定し、Ｔａｇｇ値を決定した。Ｕｎｉｔ分析ソフトウェアｖ２．１を使用してデータ分析を行った。
結果
ＨＩＶ－１に対する中和抗体効力を向上させ、その上、それに付随して、高い配列多様性および／またはウイルス変異に起因するウイルスブレイクスルーの尤度を制限する、新規戦略を開発した。この戦略は、ＨＩＶ Ｅｎｖ糖タンパク質上の３つの異なるエピトープに特異的に結合する３つの抗原結合部位を形成する４本のポリペプチドを含む三重特異性結合タンパク質（図１）の生成を含む。各抗原結合部位は、Ｅｎｖ糖タンパク質上の別個のエピトープを標的にする異なるＨＩＶ－１中和抗体からのＶＨおよびＶＬドメインを含んだ。三重特異性結合タンパク質は、２つの別個の抗原結合部位を形成する交差配向を有する二重可変ドメイン（ＣＯＤＶ Ｉｇフォーマットと呼ぶ）を有する第１のポリペプチド対と、第３の抗原結合部位を形成する単一可変ドメインを各ペプチドが有する第２のポリペプチド対とを含有した（図１Ａおよび１Ｂ）。
第１のポリペプチド対（これらのペプチドは、二重可変ドメインを有した）は、構造ＶＬ２－リンカー－ＶＬ１－リンカー－免疫グロブリン軽鎖定常ドメインを有する第１のポリペプチドと、構造ＶＨ１－リンカー－ＶＨ２－リンカー－免疫グロブリンＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３重鎖定常ドメインを有する第２のポリペプチドを含み、その結果、２つの別個の抗原結合部位：ＶＨ１－ＶＬ１およびＶＨ２－ＶＬ２を形成する交差配向を有するポリペプチド対となった（図１Ｃおよび１Ｄ、軽鎖および重鎖Ｂを参照されたい）。第２のポリペプチド対（これらのペプチドは、各々、単一可変ドメインを有した）は、構造ＶＨ３－免疫グロブリンＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３重鎖定常ドメインを有する第１のポリペプチドと、構造ＶＬ３－免疫グロブリン軽鎖定常ドメインを有する第２のポリペプチドとを含み、その結果、第３の抗原結合部位：ＶＨ３－ＶＬ３を形成するポリペプチド対となった（図１Ｃおよび１Ｄ、軽鎖および重鎖Ａを参照されたい）。加えて、ＬＳ変異を含むように三重特異性結合タンパク質を構築した。さらに、重鎖のヘテロ二量体化を助長するために１つの結合タンパク質中の一方のＣＨ３ドメインがノブ変異を含み、他方のＣＨ３ドメインがホール変異を含むように、三重特異性結合タンパク質を構築した（図１）。
三価結合タンパク質設計の上記手法を使用して、３つの三重特異性結合タンパク質（結合タンパク質２、３および２４）を生成した。これらの三重特異性結合タンパク質は、ＨＩＶ－１ Ｅｎｖ糖タンパク質上の３つの別個のエピトープを標的にする次の抗体から単離したＶＨおよびＶＬドメインを三重特異性結合タンパク質フレームワーク上にグラフト
することにより作出した：ＭＰＥＲ Ａｂ（ｇｐ４１上のＭＰＥＲエピトープを標的にする）、ＣＤ４ＢＳ Ａｂ「ｂ」（ｇｐ１２０上のＣＤ４結合部位を標的にする）、およびＶ１／Ｖ２指向性Ａｂ「ａ」（ｇｐ１２０上のＶ１／Ｖ２ドメインを標的にする）。結合タンパク質２は、第１のポリペプチド対（これらのポリペプチドは、２つの抗原結合部位を形成した）が、ＨＩＶ－１ Ｅｎｖ糖タンパク質エピトープＭＰＥＲおよびＶ１／Ｖ２を標的にし、第２のポリペプチド対（これらのポリペプチドは、単一抗原部位を形成した）が、ＨＩＶ－１ Ｅｎｖ糖タンパク質エピトープＣＤ４ＢＳを標的にするように、構築した（結合タンパク質２＝ＭＰＥＲ×Ｖ１／Ｖ２／ＣＤ４ＢＳ）。結合タンパク質３は、第１のポリペプチド対（これらのポリペプチドは、２つの抗原結合部位を形成した）が、ＨＩＶ－１ Ｅｎｖ糖タンパク質エピトープＶ１／Ｖ２およびＭＰＥＲを標的にし、第２のポリペプチド対（これらのポリペプチドは、単一抗原部位を形成した）が、ＨＩＶ－１
Ｅｎｖ糖タンパク質エピトープＣＤ４ＢＳを標的にするように、構築した（結合タンパク質３＝Ｖ１／Ｖ２×ＭＰＥＲ／ＣＤ４ＢＳ）。結合タンパク質２４は、第１のポリペプチド対（これらのポリペプチドは、２つの抗原結合部位を形成した）が、ＨＩＶ－１ Ｅｎｖ糖タンパク質エピトープＶ１／Ｖ２およびＣＤ４ＢＳを標的にし、第２のポリペプチド対（これらのポリペプチドは、単一抗原結合部位を形成した）が、ＨＩＶ－１ Ｅｎｖ糖タンパク質エピトープＭＰＥＲを標的にするように、構築した（結合タンパク質２４＝Ｖ１／Ｖ２×ＣＤ４ＢＳ／ＭＰＥＲ）。３つの三重特異性結合タンパク質、およびそれらの親抗体を、プロテインＡ親和性樹脂（図２Ａおよび３Ａ）、続いてサイズ排除クロマトグラフィー（図２Ｂおよび３Ｂ）で精製して、さらなる特性解明に適する単量体タンパク質を得た。３つすべての三重特異性結合タンパク質は、安定しており、高頻度で単量体を形成した。
異なるＨＩＶ－１ Ｅｎｖタンパク質エピトープ（３つではなく）２つを標的にする結合タンパク質の開発の可能性を試験するために、三重特異性結合タンパク質の作出に使用したのと同じ親抗体からの２つの異なるＶＨおよびＶＬドメインを使用して、上記ＣＯＤＶ Ｉｇフォーマット（ＷＯ２０１２／１３５３４５を参照されたい）に基づいて二重特異性結合タンパク質を設計した。しかし、これらの特異的可変ドメインを有する二重特異性結合タンパク質は、単量体ほど十分に精製しなかったが、対応する三重特異性結合タンパク質と比較して凝集形成の有意な増加を示した（図４Ａおよび４Ｂ）。
次に、精製した三重特異性タンパク質（およびそれらの親抗体）についてのｐｇ４１およびｇｐ１２０上のＨＩＶ－１ Ｅｎｖ糖タンパク質エピトープに対する結合親和性を測定した。先ず、ＭＰＥＲ結合エピトープを使用してＢｉａｃｏｒｅアッセイによりｇｐ４１に対する結合親和性を、３つの三重特異性結合タンパク質、および親ＭＰＥＲ抗体について測定した（図５）。ＭＰＥＲ抗体についての結合親和性を１８．７ｎＭであると算定した。驚くべきことに、３つの三重特異性結合タンパク質すべては、ＭＰＥＲ結合ペプチドに対して親抗体が有するより高い親和性を有し（表３）、結合タンパク質２はＭＰＥＲ抗体よりおおよそ３．１倍高い親和性を有した（それぞれ、６．０５ｎＭ対１８．７ｎＭ）。
Figure 0007328267000001
同様に、ｇｐ１２０上のＣＤ４結合部位に対する結合親和性をＢｉａｃｏｒｅアッセイにより３つの三重特異性結合タンパク質、および親ＣＤ４ＢＳ抗体について測定した（図６）。３つの三重特異性結合タンパク質すべては、親抗体と比較したとき、ＣＤ４結合部位に対して同様の親和性を有した（表４）。
Figure 0007328267000002
このように、三重特異性結合タンパク質は、ＨＩＶ－１ Ｅｎｖ糖タンパク質上の被験標的エピトープの両方に結合することができた（表５）。さらに、３つすべての三重特異性結合タンパク質は、それらの親抗体の親和性とほぼ同等の親和性で、またはそれらの親抗体の親和性を超える親和性で、標的エピトープに結合した。Ｖ１／Ｖ２指向性Ａｂ「ａ」の結合親和性、ならびに３つの三重特異性結合タンパク質２、３および２４中のＶ１／Ｖ２指向性Ａｂ「ａ」結合部位の結合親和性は、Ｂｉａｃｏｒｅ分析により決定することができなかった。これには、入手できない特異的ｇｐ１２０タンパク質抗原が必要であったからであった。
Figure 0007328267000003
三重特異性結合タンパク質および親抗体について生物物理学的特性を試験した（表６）。被験タンパク質のすべては、同様の安定性および限定された凝集体形成傾向を有した。
Figure 0007328267000004
これらの実験は、ＨＩＶ－１ Ｅｎｖ糖タンパク質上の３つの別個のエピトープを標的にする安定した単量体三重特異性結合タンパク質を構築することができ、効率的に精製することができることを示した。さらに、三重特異性結合タンパク質は、それらの標的エピトープに結合するそれらの能力を保持し、それらの親抗体と比べて同様のまたは向上した親和性を有した。最後に、三重特異性結合タンパク質は、適する生物物理学的特性を有し、対応する二重特異性結合タンパク質より有意に低い凝集を示した。
結合タンパク質の特性解明
適切な生物物理学的特性および結合能力を有する３つの三重特異性結合タンパク質（実施例１に記載の通り）の開発に成功したことから、２１のさらなる三重特異性結合タンパク質を開発し、試験した。ここに記載の実験は、ＨＩＶ－１をｉｎ ｖｉｔｒｏで中和する２４の三重特異性結合タンパク質の能力、および多数のこれらの三重特異性結合タンパク質のｉｎ ｖｉｖｏでの薬物動態特性を探究するものであった。
Ｅｎｖシュードタイプウイルスを用いる１ラウンドの感染後、ＨＩＶ－１ Ｔａｔ調節ホタルルシフェラーゼ（Ｌｕｃ）レポーター遺伝子発現の低下の関数として中和を測定するＴＺＭ－ｂｌアッセイを使用して、中和アッセイを行った。このアッセイは、Ｍａｒｃｅｌｌａ Ｓａｒｚｏｔｔｉ－Ｋｅｌｓｏｅら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ、４０９：１３１～１４６（２０１４）に記載の通りに行った。様々な抗体の中和結果を表８～１０に示す。
方法
Ｅｎｖシュードタイプウイルスの産生
Ｅｎｖシュードタイプウイルスのアッセイ用ストックを、２９３Ｔ／１７細胞において次の２つのプラスミドでの共トランスフェクションにより産生した：Ｅｎｖ発現プラスミド、およびＥｎｖを除く全ＨＩＶ－１ゲノムを発現するプラスミド。これらのプラスミドの共トランスフェクションは、標的細胞にＴａｔ遺伝子を送達することができる感染性シュードウイルス粒子を産生するが、これらのシュードウイルスでの感染自体は、感染性ウイルス子孫を産生することができなかった。
ウイルス中和アッセイ
ＴＺＭ－ｂｌ細胞（別名ＪＣ５３ＢＬ－１３細胞）を使用するＨＩＶ感染の中和を以前に記載された通りに行った（Ｍａｒｃｅｌｌａ Ｓａｒｚｏｔｔｉ－Ｋｅｌｓｏｅら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ、４０９：１３１～１４６（２０１４）
）。簡単に言うと、ＥｎｖシュードタイプＨＩＶ－１ビリオンを使用する１ラウンドの感染をＴＺＭ－ｂｌ細胞（ＣＸＣＲ－４陽性ヒーラ細胞クローン）において行った。ＣＤ４およびＣＣＲ５を発現し、ＨＩＶ末端反復配列制御下のホタルルシフェラーゼおよび大腸菌β－ガラクトシダーゼの統合レポーター遺伝子を含有するように、ＴＺＭ－ｂｌ細胞を工学的に操作した。レポーター遺伝子発現を１サイクル感染直後にウイルスＴａｔタンパク質（シュードタイプウイルスにより供給される）によりトランスで誘導した。ルシフェラーゼ活性を相対発光単位（ＲＬＵ）として定量した。ルシフェラーゼ活性は、最初の接種材料中に存在した感染性ウイルス粒子の数に広い値範囲にわたって正比例した。様々な濃度の上述の結合タンパク質の投与後にＴａｔ調節ホタルルシフェラーゼ（Ｌｕｃ）レポーター遺伝子発現減少の関数として中和を測定した。中和力価は、ＲＬＵが、バックグラウンドＲＬＵの減算後、ウイルス対照ウェルと比較して８０％低下した時点での、タンパク質希釈度として同定した。高い処理能力のためにアッセイを９６ウェルプレートで行い、研究全体にわたっての均一性のために十分に特性が解明された参照株を用いる。
薬物動態（ＰＫ）測定
体重３～６ｋｇの雌インドアカゲザルを体重に従って無作為に群（１群当りアカゲザル２匹）に割り当て、上述の濃度の結合タンパク質をそれらに静脈内注射した。０日目の注射前、ならびに注射の３０分、６時間、１日、２日、４日、７日、１４日、２１日および２８日後に、動物から血液を採取した。採取した血液からの血漿において、ＲＳＣ３ベースのＥＬＩＳＡアッセイを使用して、各結合タンパク質の血清濃度を定量した。
結果
３つの別個のＨＩＶ－１ Ｅｎｖ糖タンパク質エピトープを標的にする２１のさらなる三重特異性結合タンパク質を実施例１に記載の通りに生成し、精製した。これら２１のさらなる三重特異性結合タンパク質（結合タンパク質１および４～２３）は、ＨＩＶ－１ Ｅｎｖ糖タンパク質上の別個のエピトープを標的にする次の抗体から単離したＶＨおよびＶＬドメインを三重特異性結合タンパク質フレームワーク上にグラフトすることにより作出した：抗ＭＰＥＲ抗体ＭＰＥＲ Ａｂ「ａ」およびＭＰＥＲ Ａｂ「ｂ」（ｇｐ４１上のＭＰＥＲエピトープを標的にする）、抗ＣＤ４ＢＳ抗体ＣＤ４ＢＳ Ａｂ「ａ」およびＣＤ４ＢＳ Ａｂ「ｂ」（ｇｐ１２０上のＣＤ４結合部位を標的にする）、抗Ｖ１／Ｖ２抗体Ｖ１／Ｖ２指向性Ａｂ「ａ」およびＶ１／Ｖ２指向性Ａｂ「ｂ」（ｇｐ１２０上のＶ１／Ｖ２ドメインを標的にする）、ならびに抗Ｖ３抗体Ｖ３指向性Ａｂ（ｇｐ１２０上のＶ３ループを標的にする）（表７）。
Figure 0007328267000005
様々な濃度の三重特異性結合タンパク質のうちの５つ（およびそれらの親抗体）についての２０８の異なるＨＩＶ－１ Ｅｎｖシュードタイプウイルスのパネルに対するウイルス中和能力を試験した（表８）。ＴＺＭ－ｂｌルシフェラーゼレポーター遺伝子アッセイを使用して、シュードタイプＨＩＶ－１分離株の結合タンパク質媒介中和を測定した。各結合タンパク質についての阻害用量を、感染後の発光の８０％低下を引き起こす希釈度（ＩＣ８０）として、各シュードタイプウイルスについて算出した。驚くべきことに、被験三重特異性結合タンパク質の各々について算出したＩＣ８０幾何平均は、親抗体より低かった。これは、これらの三重特異性結合タンパク質が、それらの親中和抗体よりシュードタイプＨＩＶ－１を中和する点で強力であったことを示唆する。
Figure 0007328267000006
次に、様々な濃度の三重特異性結合タンパク質（およびそれらの親抗体）のより大きいパネルについての、１０の異なるＨＩＶ－１クレードを代表する２０のシュードタイプウイルスに対するウイルス中和能力を試験した（表９）。三重特異性結合タンパク質は、これら２０のウイルスによる感染に対して頑強な防護を提供した（表１０）。
Figure 0007328267000007
Figure 0007328267000008
最後に、三重特異性結合タンパク質および親抗体のサブセットについての薬物動態（ＰＫ）をアカゲザルにおいて試験した。簡単に言うと、タンパク質１０または２０ｍｇ／ｋｇを雌アカゲザルに静脈内注射し、注射前に採取した血液試料からの血漿を用いて、および注射後（４２日まで）の多数の時点で採取した血液試料からの血漿を用いて、ＥＬＩＳＡアッセイを行った（図７）。三重特異性結合タンパク質のすべてをＩＶ投与の少なくとも１４日後に検出することができ、結合タンパク質１は、注射の少なくとも３５日後に依然として検出可能であった。これは、結合タンパク質がｉｎ ｖｉｖｏで安定していたことを示す。
考え合わせると、このデータは、ＨＩＶ－１ Ｅｎｖ糖タンパク質上の３つの別個のエピトープを標的にする広域中和性三重特異性結合タンパク質を構築することができたことを示唆した。これらの結合タンパク質は、親中和抗体と比較して同様のまたは増加した力
価／はるかに向上した中和能力（広域性）を示した。さらに、これらの三重特異性結合タンパク質は、ｉｎ ｖｉｖｏで良好な耐容性を示すように見えた。理論によって拘束されることを望むものではないが、ＨＩＶ上の複数のエピトープを標的にする広域中和性三重特異性結合タンパク質の開発は、単一特異性または二重特異性抗体と比べて向上した抗ウイルス療法を可能にすることができる。ＨＩＶウイルス粒子は、単一特異性または二重特異性中和抗体上のそれぞれ単一または二重抗原結合部位より、中和性三重特異性結合タンパク質上の３つすべての抗原結合部位に耐性を示す可能性が低いからである。
Ｔ細胞エンゲージャーの特性解明
上で述べたように、Ｅｎｖは、ＨＩＶ感染細胞の表面で発現される。このため、Ｅｎｖは、感染細胞を同定するための、ならびに潜伏ウイルス保有宿主の低減をもたらす抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を誘導するための、抗体標的として作用することができる。ここに記載の研究は、３つの異なる抗原（ＨＩＶ－１ Ｅｎｖ糖タンパク質、ＣＤ３およびＣＤ２８）を標的にする３つの抗原結合部位を含有する新規三重特異性結合タンパク質（「Ｔ細胞エンゲージャー」と名付けた）の開発を探究するものである。これらの新規タンパク質は、中和抗体からの抗原結合部位を含むばかりでなく、エフェクターＴ細胞に結合して、それらを感染標的細胞のすぐ近くに持って行き、かくてＨＩＶ感染細胞溶解を誘導する能力も有する。
方法
Ｔ細胞エンゲージャーの結合特性
ホースラディッシュペルオキシダーゼ標識抗Ｆａｂプローブを使用して、ＥＬＩＳＡアッセイによりＴ細胞エンゲージャーの結合特性を測定して、ｇｐ１２０のＣＤ３、ＣＤ２８または表面再構成安定化コア３（ＲＳＣ３）タンパク質でコーティングされたＥＬＩＳＡプレートの表面へのＴ細胞エンゲージャー結合を検出した。Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ、ＭＡ、ＵＳＡからのヒトＣＤ３ｇｅ－ｈＩｇＧ４（ＫＩＨ）（カタログ番号：０３－０１－００５１）；Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ、ＭＡ、ＵＳＡからのヒトＣＤ２８－ｈＩｇＧ４（カタログ番号：０３－０１－０３０３）。
Ｔ細胞活性化アッセイ
ＣＤ４およびＣＤ８ Ｔ細胞活性化を次のように測定した：磁気ビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を使用して、ナイーブドナー（ＮＩＨ血液バンク）から得たバフィーコートから抹消血単核細胞（ＰＢＭＣ）を濃縮した。これらの細胞を、漸増濃度（０．０１～１．０μｇ／ｍＬ）の結合タンパク質とブレフェルジンＡの存在下で１４～１６時間、未感染またはＨＩＶ－１感染ＣＥＭ細胞とともに共培養した。次いで、細胞をＴ細胞マーカー（ＣＤ３、ＣＤ４およびＣＤ８）ならびに活性化マーカー（ＣＤ２５およびＣＤ６９）の表面発現について染色し、その後、蛍光標識抗体（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を使用してサイトカイン（ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α、およびＩＬ－２）について細胞内染色した。ＬＳＲＩＩフローサイトメーターに試料を流し、Ｆｌｏｗｊｏソフトウェア（Ｔｒｅｅｅｓｔａｒ）でデータを分析することにより、各サイトカインまたは活性化マーカーを発現するＣＤ４およびＣＤ８
Ｔ細胞の数を決定した。
ＣＤ３ダウンレギュレーション
Ｔ細胞エンゲージャーによるＴ細胞活性化後のＣＤ３ダウンレギュレーションを非競合マウス抗ヒトＣＤ３抗体での活性化ＰＢＭＣの染色により測定し、フローサイトメトリーを使用して定量した。
細胞傷害性アッセイ
ＣＥＭ－ＢａＬ、ＡＣＨ２、およびＪ１．１細胞に対するＴ細胞エンゲージャーの細胞傷害性をフローサイトメトリーにより次のようにモニターした：潜伏ウイルス株（ＡＣＨ２、Ｊ１．１、ＯＭ１０）をＮＩＨ ＡＩＤＳ Ｒｅａｇｅｎｔ Ｐｒｏｇｒａｍから得た。ＴＮＦ－α（１０ｎｇ／ｍＬ）の存在または非存在下で１４～１６時間、これらの細胞の培養することにより、これらの細胞の活性化を行った。アロフィコシアニン標識抗ＨＩＶ Ｅｎｖ抗体（２Ｇ１２）を使用してフローサイトメトリーにより細胞表面ＨＩＶエンベロープ糖タンパク質の発現を判定することによって、活性化を測定した。ＣＥＭ－ＩＩＩｂ、ＡＣＨ２、Ｊ１．１およびＯＭ１０細胞を膜染色剤ＰＫＨ－２６（Ｓｉｇｍａ）で標識し、細胞傷害性アッセイにおいて標的細胞として使用した。これらの標識標的細胞をエフェクター細胞としての濃縮ヒトＴ細胞とともに１０：１のＥ：Ｔ比で１４～１６時間、漸増量の結合タンパク質の存在下で共培養した。生／死細胞マーカー（Ｌｉｆｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）での染色、そしてＬＳＲＩＩフローサイトメーターに試料を流すことによる標識標的細胞集団中の死細胞数の測定、その後のＦｌｏｗｊｏソフトウェア（Ｔｒｅｅｓｔａｒ）を使用する分析により、標的細胞における細胞溶解度を決定した。
結果
Ｔ細胞表面タンパク質とＨＩＶ－１上の中和エピトープの両方を標的にする抗原結合部位を有するＴ細胞エンゲージャーを開発する可能性を探った。２つの異なるＴ細胞表面受容体（ＣＤ３およびＣＤ２８）を標的にする２つの抗原結合部位と、ＨＩＶ－１ Ｅｎｖ糖タンパク質を標的にする第３の抗原結合部位とを含有する、Ｔ細胞エンゲージャーを構築した（図８Ａおよび８Ｂ）。加えて、ＬＳ変異を含むようにＴ細胞エンゲージャーを構築した。さらに、重鎖のヘテロ二量体化を助長するために１つの結合タンパク質中の一方のＣＨ３ドメインがノブ変異を含み、他方のＣＨ３ドメインがホール変異を含むように、Ｔ細胞エンゲージャーを構築した（図８Ａおよび８Ｂ）。
この手法を使用して、Ｔ細胞表面タンパク質とＨＩＶ－１ Ｅｎｖ糖タンパク質（結合タンパク質３２とＣＤ３×ＣＤ２８／ＣＤ４ＢＳ「ｂ」Ａｂ）の両方を標的にする２つのＴ細胞エンゲージャーを構築した。これら２つのＴ細胞エンゲージャーは、Ｔ細胞表面タンパク質ＣＤ３およびＣＤ２８を標的にする親抗体ならびに抗ＨＩＶ－１抗体ＣＤ４ＢＳ
Ａｂ「ｂ」（ｇｐ１２０のＣＤ４結合部位を標的にする）から単離したＶＨおよびＶＬドメインを三重特異性結合タンパク質フレームワーク上にグラフトすることにより作出した。結合タンパク質３２は、第１のポリペプチド対（これらのポリペプチドは、２つの抗原結合部位を形成した）が、Ｔ細胞表面受容体ＣＤ２８およびＣＤ３を標的にし、第２のポリペプチド対（これらのポリペプチドは、単一抗原結合部位を形成した）が、ＨＩＶ－１抗原ＣＤ４ＢＳを標的にするように、構築した（結合タンパク質３２＝ＣＤ２８×ＣＤ３／ＣＤ４ＢＳ）。ＣＤ３×ＣＤ２８／ＣＤ４ＢＳ「ｂ」Ａｂ三重特異性結合タンパク質は、第１のポリペプチド対（これらのポリペプチドは、２つの抗原結合部位を形成した）が、Ｔ細胞表面受容体ＣＤ３およびＣＤ２８を標的にし、第２のポリペプチド対（これらのポリペプチドは、単一抗原部結合位を形成した）が、ＨＩＶ－１抗原ＣＤ４ＢＳを標的にするように、構築した（表１１）。
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２つのＴ細胞エンゲージャーの、それらの３つの標的抗原の各々に結合する能力を、ＥＬＩＳＡアッセイにより試験した。Ｔ細胞エンゲージャーは、Ｔ細胞エンゲージャーの二重特異性アームにおけるいずれかの配向のＣＤ３およびＣＤ２８抗原結合部位（すなわち、ＣＤ３×ＣＤ２８／ＣＤ４ＢＳ Ａｂ「ｂ」についてはＣＤ３×ＣＤ２８、または結合タンパク質３２についてはＣＤ２８×ＣＤ３）を用いて、ＣＤ３ Ｔ細胞表面タンパク質とＣＤ２８ Ｔ細胞表面タンパク質の両方に結合することができた。両方のＴ細胞エンゲージャーは、（Ｖ１、Ｖ２およびＶ３可変領域を欠くｇｐ１２０変異体であるＨＩＶ－１
ＲＳＣ３タンパク質を使用して測定して）ｇｐ１２０にも結合することができた（図９）。
次に、Ｔ細胞活性に対する効果を両方のＴ細胞エンゲージャーについて試験した。単球とＴ細胞エンゲージャーのインキュベーションは、Ｔ細胞エンゲージャーが頑強なＣＤ８＋Ｔ細胞活性化を誘導することを明示した（図１０）。同様に、Ｔ細胞エンゲージャーは、単独でのＰＢＭＣに関して、またはＨＩＶ－１感染Ｔ細胞株ＣＥＭ－ＮＫｒ細胞もしくはＣＥＭ－ＢａＬ細胞のいずれかとともにインキュベートしたＰＢＭＣに関して、有意なＣＤ４＋Ｔ細胞活性化を誘導することができた（図１１）。加えて、両方のＴ細胞エンゲージャーは、活性化Ｔ細胞上のＣＤ３の細胞表面発現を低下させた（図１２）。
最後に、ＨＩＶ感染細胞の溶解を誘導するＴ細胞エンゲージャーの能力を試験した。Ｔ細胞エンゲージャー（ならびにＣＤ３およびＨＩＶ抗原を標的にする陽性および陰性対照二重特異性結合タンパク質）をＨＩＶ－１感染Ｔ細胞株ＣＥＭ－ＢａＬ細胞とともにインキュベートした。感染細胞とＴ細胞エンゲージャーのインキュベーションは、広範な濃度にわたって頑強な細胞溶解を誘導した（図１３Ａ）。同様に、これらのＴ細胞エンゲージャーのインキュベーションは、潜伏感染Ｔ細胞株ＡＣＨ２細胞（図１３Ｂ）、およびＪ１．１細胞（図１３Ｃ）の溶解を誘導した。驚くべきことに、Ｔ細胞エンゲージャーは、二重特異性結合タンパク質と比較したとき、慢性および潜伏ＨＩＶ感染細胞株に対して匹敵するまたはそれより良好な細胞傷害活性を示した。
考え合わせると、本明細書に記載の新規Ｔ細胞エンゲージャーは、ＨＩＶ感染細胞上のＨＩＶ－１ Ｅｎｖ糖タンパク質ｇｐ１２０上のそれらの標的抗原に結合する、ならびに細胞表面に露出しているＴ細胞タンパク質ＣＤ３およびＣＤ２８とに結合する、それらの親抗体からの能力を保持した。Ｔ細胞エンゲージャーは、頑強なＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞活性化を誘導し、ＣＤ３表面発現を減少させた。最後に、これらのＴ細胞エンゲージャーは、ＨＩＶ－１感染Ｔ細胞の有意な溶解を誘導した。理論によって拘束されることを望むものではないが、これらのＴ細胞エンゲージャーは、ＨＩＶ／ＡＩＤＳ患者においてＴ細胞エンゲージメントにより潜伏ウイルス保有宿主を低減／排除することによる、抗ウイルス療法の新規戦略を提供することができる。
本開示は、様々な実施形態を含むが、当然のことながら、変形形態および修飾形態が当
業者の心に浮かぶであろう。したがって、添付の特許請求の範囲は、本開示の範囲に入るそのような等価の変形形態すべてを包含することを意図したものである。加えて、本明細書で使用されている節の見出しは、単に構成のためのものであり、記載の主題を限定すると見なすべきでない。
本明細書に記載の各実施形態は、相反する明確な指示がない限り、任意の他の単数の実施形態または複数の実施形態と組み合わせることができる。詳細には、好ましいまたは有利であると示されている任意の特徴または実施形態は、相反する明確な指示がない限り、好ましいまたは有利であると示されている任意の他の単数の特徴もしくは複数の特徴または単数の実施形態もしくは複数の実施形態と組み合わせることができる。
本願において引用したすべての参照文献は、参照により本明細書に明確に組み入れられている。
配列
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Claims (19)

  1. １つまたはそれ以上のＨＩＶ標的タンパク質および１つまたはそれ以上のＴ細胞標的タンパク質に特異的に結合する３つの抗原結合部位を形成する４本のポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって、
    第１のポリペプチド鎖は、式：
    ＶL2－Ｌ1－ＶL1－Ｌ2－ＣL ［Ｉ］
    により表される構造を含み、
    第２のポリペプチド鎖は、式：
    ＶH1－Ｌ3－ＶH2－Ｌ4－ＣH1－ヒンジ－ＣH2－ＣH3 ［ＩＩ］
    により表される構造を含み、
    第３のポリペプチド鎖は、式：
    ＶH3－ＣH1－ヒンジ－ＣH2－ＣH3 ［ＩＩＩ］
    により表される構造を含み、
    第４のポリペプチド鎖は、式：
    ＶL3－ＣL ［ＩＶ］
    により表される構造を含み、
    式中：
    ＶL1は、第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
    ＶL2は、第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
    ＶL3は、第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
    ＶH1は、第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
    ＶH2は、第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
    ＶH3は、第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
    ＣLは、免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
    ＣH1は、免疫グロブリンＣH1重鎖定常ドメインであり；
    ＣH2は、免疫グロブリンＣH2重鎖定常ドメインであり；
    ＣH3は、免疫グロブリンＣH3重鎖定常ドメインであり；
    ヒンジは、ＣH1ドメインとＣH2ドメインを接続する免疫グロブリンヒンジ領域であり；
    Ｌ1、Ｌ2、Ｌ3およびＬ4は、アミノ酸リンカーであり；
    ここで、式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドは、交差軽鎖－重鎖対を形成し、ここで、
    （ａ）Ｖ L1 は、配列番号：４９４の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号：４９５の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号：４９６の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み；
    Ｖ L2 は、配列番号：４８８の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号：４８９の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号：４９０の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み；
    Ｖ L3 は、配列番号：２７５の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号：２７６の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号：２７７の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み；
    Ｖ H1 は、配列番号：４８５の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号：４８６の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号：４８７の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み；
    Ｖ H2 は、配列番号：４７９の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号：４８０の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号：４８１の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み；
    Ｖ H3 は、配列番号：２５７の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号：２５８の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号：２５９の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む；
    （ｂ）Ｖ L1 は、配列番号：４９４の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号：４９５の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号：４９６の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み；
    Ｖ L2 は、配列番号：４９１の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号：４９２の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号：４９３の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み；
    Ｖ L3 は、配列番号：２７５の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号：２７６の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号：２７７の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み；
    Ｖ H1 は、配列番号：４８５の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号：４８６の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号：４８７の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み；
    Ｖ H2 は、配列番号：４８２の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号：４８３の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号：４８４の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み；
    Ｖ H3 は、配列番号：２５７の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号：２５８の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号：２５９の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む；
    （ｃ）Ｖ L1 は、配列番号：４９４の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号：４９５の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号：４９６の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み；
    Ｖ L2 は、配列番号：２７５の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号：２７６の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号：２７７の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み；
    Ｖ L3 は、配列番号：４８８の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号：４８９の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号：４９０の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み；
    Ｖ H1 は、配列番号：４８５の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号：４８６の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号：４８７の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み；
    Ｖ H2 は、配列番号：２５７の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号：２５８の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号：２５９の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み；
    Ｖ H3 は、配列番号：４７９の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号：４８０の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号：４８１の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む；
    （ｄ）Ｖ L1 は、配列番号：２７５の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号：２７６の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号：２７７の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み；
    Ｖ L2 は、配列番号：４９４の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号：４９５の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号：４９６の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み；
    Ｖ L3 は、配列番号：４８８の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号：４８９の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号：４９０の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み；
    Ｖ H1 は、配列番号：２５７の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号：２５８の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号：２５９の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み；
    Ｖ H2 は、配列番号：４８５の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号：４８６の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号：４８７の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み；
    Ｖ H3 は、配列番号：４７９の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号：４８０の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号：４８１の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む；
    （ｅ）Ｖ L1 は、配列番号：４９４の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号：４９５の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号：４９６の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み；
    Ｖ L2 は、配列番号：２７５の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号：２７６の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号：２７７の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み；
    Ｖ L3 は、配列番号：４９１の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号：４９２の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号：４９３の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み；
    Ｖ H1 は、配列番号：４８５の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号：４８６の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号：４８７の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み；
    Ｖ H2 は、配列番号：２５７の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号：２５８の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号：２５９の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み；
    Ｖ H3 は、配列番号：４８２の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号：４８３の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号：４８４の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む；または
    （ｆ）Ｖ L1 は、配列番号：２７５の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号：２７６の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号：２７７の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み；
    Ｖ L2 は、配列番号：４９４の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号：４９５の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号：４９６の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み；
    Ｖ L3 は、配列番号：４９１の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号：４９２の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号：４９３の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み；
    Ｖ H1 は、配列番号：２５７の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号：２５８の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号：２５９の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み；
    Ｖ H2 は、配列番号：４８５の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号：４８６の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号：４８７の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み；
    Ｖ H3 は、配列番号：４８２の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号：４８３の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号：４８４の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、
    前記結合タンパク質。
  2. （ａ）Ｖ L1 は、配列番号：５２４の配列を含み；
    Ｖ L2 は、配列番号：５２２の配列を含み；
    Ｖ L3 は、配列番号：５１９の配列を含み；
    Ｖ H1 は、配列番号：５１１の配列を含み；
    Ｖ H2 は、配列番号：５０９の配列を含み；
    Ｖ H3 は、配列番号：５０６の配列を含む；
    （ｂ）Ｖ L1 は、配列番号：５２４の配列を含み；
    Ｖ L2 は、配列番号：５２３の配列を含み；
    Ｖ L3 は、配列番号：５１９の配列を含み；
    Ｖ H1 は、配列番号：５１０の配列を含み；
    Ｖ H2 は、配列番号：５０９の配列を含み；
    Ｖ H3 は、配列番号：５０６の配列を含む；
    （ｃ）Ｖ L1 は、配列番号：５２４の配列を含み；
    Ｖ L2 は、配列番号：５１９の配列を含み；
    Ｖ L3 は、配列番号：５２２の配列を含み；
    Ｖ H1 は、配列番号：５１１の配列を含み；
    Ｖ H2 は、配列番号：５０６の配列を含み；
    Ｖ H3 は、配列番号：５０９の配列を含む；
    （ｄ）Ｖ L1 は、配列番号：５１９の配列を含み；
    Ｖ L2 は、配列番号：５２４の配列を含み；
    Ｖ L3 は、配列番号：５２２の配列を含み；
    Ｖ H1 は、配列番号：５０６の配列を含み；
    Ｖ H2 は、配列番号：５１１の配列を含み；
    Ｖ H3 は、配列番号：５０９の配列を含む；
    （ｅ）Ｖ L1 は、配列番号：５２４の配列を含み；
    Ｖ L2 は、配列番号：５１９の配列を含み；
    Ｖ L3 は、配列番号：５２３の配列を含み；
    Ｖ H1 は、配列番号：５０６の配列を含み；
    Ｖ H2 は、配列番号：５０９の配列を含み；
    Ｖ H3 は、配列番号：５１０の配列を含む；または
    （ｆ）Ｖ L1 は、配列番号：５１９の配列を含み；
    Ｖ L2 は、配列番号：５２４の配列を含み；
    Ｖ L3 は、配列番号：５２３の配列を含み；
    Ｖ H1 は、配列番号：５０６の配列を含み；
    Ｖ H2 は、配列番号：５１１の配列を含み；
    Ｖ H3 は、配列番号：５１０の配列を含む、
    請求項１に記載の結合タンパク質。
  3. （ａ）第２のポリペプチド鎖のＣH3ドメインは、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３５４および３６６位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗであり；
    第３のポリペプチド鎖のＣH3ドメインは、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３４９、３６６、３６８、および４０７位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖである、または
    （ｂ）第２のポリペプチド鎖のＣH3ドメインは、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３４９、３６６、３６８、および４０７位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖであり；
    第３のポリペプチド鎖のＣH3ドメインは、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の３５４および３６６位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗである、
    請求項１または請求項２に記載の結合タンパク質。
  4. 第２および第３のポリペプチド鎖のＣH3ドメインはどちらも、ＥＵインデックスによるヒトＩｇＧ１の４２８および４３４位に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓである、請求項１または請求項２に記載の結合タンパク質。
  5. （ａ）Ｌ1、Ｌ2、Ｌ3、またはＬ4のうちの少なくとも１つは、独立して、長さが０アミノ酸である、または
    （ｂ）Ｌ1、Ｌ2、Ｌ3、またはＬ4は、各々独立して、長さが少なくとも１アミノ酸である、
    請求項１または請求項２に記載の結合タンパク質。
  6. Ｌ1、Ｌ2、Ｌ3、および／またはＬ4は、配列Ａｓｐ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｈｉｓ－Ｔｈｒ（配列番号：５２５）を含む、請求項５に記載の結合タンパク質。
  7. 第１のポリペプチド鎖、第２のポリペプチド鎖、第３のポリペプチド鎖および第４のポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって：
    （ａ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：３２１のアミノ酸配列を含み；
    第２のポリペプチド鎖は、配列番号：３２０のアミノ酸配列を含み；
    第３のポリペプチド鎖は、配列番号：３１８のアミノ酸配列を含み；
    第４のポリペプチド鎖は、配列番号：３１９のアミノ酸配列を含む；
    （ｂ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：３２９のアミノ酸配列を含み；
    第２のポリペプチド鎖は、配列番号：３２８のアミノ酸配列を含み；
    第３のポリペプチド鎖は、配列番号：３２６のアミノ酸配列を含み；
    第４のポリペプチド鎖は、配列番号：３２７のアミノ酸配列を含む；
    （ｃ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：４１７のアミノ酸配列を含み；
    第２のポリペプチド鎖は、配列番号：４１６のアミノ酸配列を含み；
    第３のポリペプチド鎖は、配列番号：４１４のアミノ酸配列を含み；
    第４のポリペプチド鎖は、配列番号：４１５のアミノ酸配列を含む；
    （ｄ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：４２５のアミノ酸配列を含み；
    第２のポリペプチド鎖は、配列番号：４２４のアミノ酸配列を含み；
    第３のポリペプチド鎖は、配列番号：４２２のアミノ酸配列を含み；
    第４のポリペプチド鎖は、配列番号：４２３のアミノ酸配列を含む；
    （ｅ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：４３３のアミノ酸配列を含み；
    第２のポリペプチド鎖は、配列番号：４３２のアミノ酸配列を含み；
    第３のポリペプチド鎖は、配列番号：４３０のアミノ酸配列を含み；
    第４のポリペプチド鎖は、配列番号：４３１のアミノ酸配列を含む；
    （ｆ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：４４１のアミノ酸配列を含み；
    第２のポリペプチド鎖は、配列番号：４４０のアミノ酸配列を含み；
    第３のポリペプチド鎖は、配列番号：４３８のアミノ酸配列を含み；
    第４のポリペプチド鎖は、配列番号：４３９のアミノ酸配列を含む；
    （ｇ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：４４９のアミノ酸配列を含み；
    第２のポリペプチド鎖は、配列番号：４４８のアミノ酸配列を含み；
    第３のポリペプチド鎖は、配列番号：４４６のアミノ酸配列を含み；
    第４のポリペプチド鎖は、配列番号：４４７のアミノ酸配列を含む；
    （ｈ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：４５７のアミノ酸配列を含み；
    第２のポリペプチド鎖は、配列番号：４５６のアミノ酸配列を含み；
    第３のポリペプチド鎖は、配列番号：４５４のアミノ酸配列を含み；
    第４のポリペプチド鎖は、配列番号：４５５のアミノ酸配列を含む；
    （ｉ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：４６５のアミノ酸配列を含み；
    第２のポリペプチド鎖は、配列番号：４６４のアミノ酸配列を含み；
    第３のポリペプチド鎖は、配列番号：４６２のアミノ酸配列を含み；
    第４のポリペプチド鎖は、配列番号：４６３のアミノ酸配列を含む；または
    （ｊ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号：４７３のアミノ酸配列を含み；
    第２のポリペプチド鎖は、配列番号：４７２のアミノ酸配列を含み；
    第３のポリペプチド鎖は、配列番号：４７０のアミノ酸配列を含み；
    第４のポリペプチド鎖は、配列番号：４７１のアミノ酸配列を含む、
    前記結合タンパク質。
  8. 請求項１～７のいずれか１項に記載の結合タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子。
  9. 請求項８に記載の核酸分子を含む発現ベクター。
  10. 請求項１～７のいずれか１項に記載の結合タンパク質の第１、第２、第３、および第４のポリペプチド鎖をコードする１つまたはそれ以上のベクターを含むベクター系。
  11. 結合タンパク質の第１のポリペプチド鎖をコードする第１のベクターと、結合タンパク質の第２のポリペプチド鎖をコードする第２のベクターと、結合タンパク質の第３のポリペプチド鎖をコードする第３のベクターと、結合タンパク質の第４のポリペプチド鎖をコードする第４のベクターとを含む、請求項１０に記載のベクター系。
  12. 結合タンパク質の第１および第２のポリペプチド鎖をコードする第１のベクターと、結合タンパク質の第３および第４のポリペプチド鎖をコードする第２のベクターとを含む、請求項１０に記載のベクター系。
  13. 請求項８に記載の核酸分子、請求項９に記載の発現ベクター、または請求項１０～１２のいずれか１項に記載のベクター系を含む、単離された宿主細胞。
  14. 哺乳動物細胞である、請求項１３に記載の単離された宿主細胞。
  15. 昆虫細胞である、請求項１３に記載の単離された宿主細胞。
  16. 結合タンパク質を産生する方法であって：
    ａ）請求項１３～１５のいずれか１項に記載の宿主細胞を、該宿主細胞が該結合タンパク質を発現するような条件下で培養する工程；および
    ｂ）該結合タンパク質を該宿主細胞から単離する工程
    を含む前記方法。
  17. 治療有効量の請求項１～７のいずれか１項に記載の少なくとも１つの結合タンパク質を含む、患者におけるＨＩＶ感染症を予防および／または処置する方法において使用するための医薬組成物。
  18. 標準的抗レトロウイルス療法と併用投与される、請求項１７に記載の組成物。
  19. 患者がヒトである、請求項１７または１８に記載の組成物。
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