CN111819196B - 双特异性hiv-1中和抗体 - Google Patents

双特异性hiv-1中和抗体 Download PDF

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Abstract

在各个实施方案中，本发明总体上涉及使用双特异性抗体来预防和治疗HIV。

Description

双特异性HIV-1中和抗体
相关申请的交叉引用
本申请是2017年1月25日提交的美国专利申请号15/414,822的部分继续申请，美国专利申请号15/414,822是2014年12月2日提交的美国专利申请号14/558,341的分案，作为美国专利号9,587,012取得专利权，其要求2013年12月2日提交的美国临时专利申请号61/910,685的优先权和权益，它们各自以引用的方式整体并入本文中。
技术领域
在各个实施方案中，本发明总体上涉及使用双特异性抗体来预防和治疗HIV。
序列表
本申请含有序列表，所述序列表已经以ASCII格式通过EFS-Web提交并且据此以引用的方式整体并入。2017年12月21日创建的所述ASCII拷贝被命名为ADR-001CP_ST25.txt.，且大小为145,851字节。
背景技术
用抗体(Ab)的被动免疫接种是一种预防和治疗感染性疾病的公认方法。这种方法可以涉及从由感染性疾病恢复的供者制备人免疫球蛋白并利用此类含有对感染性生物体有特异性的Ab的制剂来保护接受者对抗相同的疾病。可选地，治疗性抗体可以通过用抗原免疫接种小鼠，然后将小鼠Ab工程改造/人源化成人类形式而制得。单克隆抗体(mAb)在物理特征和免疫化学反应性方面是同质的，且因此提供绝对特异性活性的可能性。
这种特异性最终可能成为一些靶标的限制，因此从业人员已经开发出由两种不同mAb的片段构成并且结合至两种不同抗原类型的“双特异性”mAb。这有助于例如结合至仅弱表达的抗原。一些双特异性mAb可以刺激强免疫应答，从而限制其临床应用。最近一种改善此效应的方法是“CrossMab”方法，即，一种采用更天然的抗体样结构的双特异性抗体格式。
产生针对病原体如HIV的高效力双特异性或二价抗体用于临床应用的前景涉及许多不确定性。例如，HIV上的低尖刺密度和尖刺结构可能妨碍抗体与HIV的二价结合，且细胞表面锚定的几何形状和空间关系没有得到明确表征。HIV包膜上是否存在足够的表位可接近性也是未知的。锚定至宿主细胞膜上的CrossMab双特异性抗体提供以下可能性：改善的局部抗体浓度、顺序性和/或相互依赖性进入步骤的靶向、及对单价结合的补偿。
进一步，抗体的大规模商业生产仍然具有挑战性。例如，治疗性抗体的生产通常需要在良好的生产实践条件下使用非常大规模的细胞培养，接着进行广泛的纯化步骤，从而导致极高的生产成本。其他限制如不溶性差、蛋白质聚集和蛋白质不稳定性也可能使抗体的制造不太理想。
因此，仍然需要治疗有效的HIV抗体，其可易于以商业规模生产。
发明内容
一方面，本发明涉及一种用于中和HIV的双特异性抗体。所述双特异性抗体包含第一抗体和第二抗体的部分，其中所述第一抗体结合至HIV包膜蛋白。在某些实施方案中，所述第一抗体选自PGT145、PG9、PGT128、PGT121、10-1074、3BNC117、VRC01、PGT151、4E10、10E8及其变体。在某些实施方案中，所述双特异性抗体包含第二抗体的部分，其中所述第二抗体结合至细胞膜蛋白。例如，所述第二抗体结合至细胞受体蛋白或细胞膜共受体蛋白。在一个实施方案中，所述第二抗体选自CD4抗体、CCR5抗体和CXCR4抗体，诸如Pro 140、伊巴利单抗(ibalizumab)、515H7或其变体。在各个实施方案中，所述双特异性抗体具有CrossMab格式。
另一方面，本发明提供了一种双特异性抗体，其包含第一抗体和第二抗体的部分，其中所述第一抗体结合至HIV包膜蛋白且所述第二抗体结合至细胞膜蛋白。在各个实施方案中，所述双特异性抗体具有CrossMab格式。
在各个实施方案中，还提供了药物组合物，其包含本文所公开的双特异性抗体。所述药物组合物可被配制用于经口、鼻内、肺、皮内、经皮、皮下、肌肉内、腹膜内或静脉内递送。
另一方面，提供了用于中和HIV的方法。所述方法包括以下步骤：使抗原结合位点与结合HIV包膜蛋白的双特异性抗体接触及使另一抗原结合位点与结合细胞膜蛋白的双特异性抗体接触。
另一方面，还提供了用于治疗感染HIV的患者的方法。所述方法包括向所述患者施用如本文所公开的双特异性抗体或药物组合物中的任一者。在一个实施方案中，所述患者为人。
附图说明
在附图中，贯穿不同的视图，相似的附图标记通常是指相同的部分。此外，附图不一定按比例，相反，重点一般放在说明本发明的原理。在以下描述中，本发明的各个实施方案参考以下附图来描述，在这些图中：
图1是展示了衍生自两种IgG单克隆抗体的CrossMab抗体的图。
图2A是展示了靶向CD4的iMab抗体(单克隆抗体伊巴利单抗的简写)和靶向CCR5的Pro 140抗体的图。
图2B是展示了靶向HIV包膜gp120的mAb的图。
图3是比较了使用iMab与10E8抗体的组合与CrossMab双特异性10E8/iMab抗体进行的抗细胞至细胞HIV传播的最大抑制百分比(MPI)的图。除非另外指出，否则所有基于iMab的双特异性抗体都使用MV1变体构建。
图4A-J是比较了使用不同浓度的10E8、Pro 140或10E8/P140抗体进行的针对X4和双嗜性HIV的各种毒株的抑制的一系列图。P140是Pro 140的简写。
图5A-G是比较了使用不同浓度的10E8、Pro 140、10E8/P140或个别10E8与Pro 140单克隆抗体的组合进行的针对各种HIV毒株的抑制的一系列图。
图6A-D是比较了使用不同浓度的10E8、X19、10E8/X19或10E8/P140抗体进行的针对各种HIV毒株的抑制的一系列图。
图7A-H是比较了使用不同浓度的10E8、Pro 140、10E8/P140和10E8/αHer2抗体进行的针对各种HIV毒株的抑制的一系列图。
图8A是比较了CrossMab双特异性抗体10E8/iMab和Δ10E8/iMab与HIV-1糖蛋白MPER的结合的图。
图8B-E是比较了10E8(浅灰色线)和Δ10E8(深灰色线)针对iMab抗性R5病毒(图8B)和X4病毒(图8C)的抑制百分比以及10E8/iMab(浅灰色线)和Δ10E8/iMab(深灰色线)针对iMab抗性R5病毒(图8D)和X4病毒(图8E)的抑制百分比的一系列图。
图9A-G是比较了使用不同浓度的10E8、Δ10E8、4E10、10E8/P140、Δ10E8/P140和4E10/P140抗体进行的针对各种HIV毒株的抑制的一系列图。
图10是比较了CrossMab抗体10E8/Pro140和10E8/iMab、其亲本单克隆抗体10E8、Pro140和iMab以及多种其他靶向HIV包膜的单克隆抗体针对一大批HIV包膜假型病毒的抗病毒覆盖率的图。
图11A-E是比较了单克隆抗体iMab(在所有图中都为灰色条)和CrossMab抗体PGT145/伊巴利单抗(145/iMab；图11A)、PGT128/伊巴利单抗(128/iMab；图11B)、PGT151/伊巴利单抗(151/iMab；图11C)、3BNC117/伊巴利单抗(117/iMab；图11D)和10E8/伊巴利单抗(10E8/iMab；图11E)针对一大批HIV包膜假型病毒的最大抑制百分比(MPI)的一系列图。
图12A-E是比较了CrossMab抗体PGT145/伊巴利单抗(145/iMab；图12A)、PGT128/伊巴利单抗(128/iMab；图12B)、PGT151/伊巴利单抗(151/iMab；图12C)、3BNC117/伊巴利单抗(117/iMab；图12D)和10E8/伊巴利单抗(10E8/iMab；图12E)针对一大批HIV包膜假型病毒的最大抑制百分比(MPI)和IC80抗体浓度的一系列图。
图13A-E是比较了基于iMab和Pro140的CrossMab双特异性抗体及其亲本抗体PGT145/iMab和PGT145/Pro140(图13A)、3BNC117/iMab和3BNC117/Pro140(图13B)、PGT128/iMab和PGT128/Pro140(图13C)、PGT151/iMab和PGT151/Pro140(图13D)以及10E8/iMab和10E8/Pro140(图13E)的IC80抗体浓度的一系列图。
图14A-E是比较了基于iMab和Pro140的CrossMab双特异性抗体及其亲本抗体PGT145/iMab和PGT145/Pro140(图14A)、3BNC117/iMab和3BNC117/Pro140(图14B)、PGT128/iMab和PGT128/Pro140(图14C)、PGT151/iMab和PGT151/Pro140(图14D)以及10E8/iMab和10E8/Pro140(图14E)的IC50抗体浓度的一系列图。
图15A-E是展现了基于iMab的CrossMab双特异性抗体及其亲本抗体10E8/iMab(图15A)、3BNC117/iMab(图15B)、PGT145/iMab(图15C)、PGT128/iMab(图15D)和PGT151/iMab(图15E)针对HIV的细胞至细胞传播的IC80抗体浓度的图。
图16是展现了CrossMab双特异性抗体及其亲本抗体针对HIV的细胞至细胞传播的最大抑制百分比(MPI)的图。
图17A是比较了不同浓度的10E8、Pro 140、10E8/P140CrossMab双特异性抗体以及个别10E8与Pro 140单克隆抗体的组合针对HIV毒株的抑制的图。
图17B是比较了不同浓度的iMab、10E8、10E8/iMab CrossMab双特异性抗体以及个别10E8与iMab单克隆抗体的组合针对HIV毒株的抑制的图。
图18A-D是比较了不同浓度的10E8、Pro140、10E8/P140和10E8/515H7抗体针对各种HIV R5毒株的抑制的一系列图。
图18E-H是比较了各种浓度的10E8、515H7和10E8/515H7抗体针对各种HIV X4毒株的抑制的一系列图。
图19A-B是比较了不同浓度的10E8/Pro140、10E8/iMab、10E8/515H7和10E8/X19抗体针对各种HIV毒株的抑制的一系列图。
图19C指示TZM-bl细胞上存在的CD4、CCR5和CXCR4受体的密度。
图20比较了CrossMab双特异性抗体10E8/Pro140、Δ10E8/Pro140和4E10/Pro140与HIV-1糖蛋白MPER的结合。
图21A-G是比较了不同浓度的4E10、Pro140和4E10/P140和10E8/P140抗体针对各种HIV毒株的抑制的一系列图。
图22A是CrossMab抗体10E8/iMab、10E8/P140和3BNC117/iMab的尺寸排阻色谱分析。
图22B是单克隆抗体iMab、10E8和Pro140的尺寸排阻色谱分析。
图23是单克隆抗体10E8和由10E8重链与4E10轻链配对组成的嵌合抗体的尺寸排阻色谱分析。
图24A-C是单克隆抗体10E8和4E10以及由10E8重链与4E10轻链配对组成的嵌合抗体(图24A)、单克隆抗体10E8和10E8突变体(具有在10E8轻链中被基因工程改造的潜在稳定突变)(图24B)以及单克隆抗体10E8和用非-10E8抗体的κ轻链基因移植的10E8突变体(图24C)的一系列尺寸排阻色谱图。
图25是单克隆抗体4E10和用10E8的轻区域(包括CDR1区、CDR2区、CDR3区或组合的CDR1、CDR2和CDR3区)基因移植的4E10突变体的尺寸排阻色谱图。
图26A是10E8嵌合抗体的尺寸排阻色谱图。CDR123是10E8重链与用10E8抗体生殖细胞系CDR区序列基因移植的10E8轻链配对的嵌合抗体。FW123是10E8重链与用10E8抗体生殖细胞系框架区序列基因移植的10E8轻链配对的嵌合抗体。
图26B是指示CDR123和FW123抗体的表达、HIV MPER结合能力、尺寸排阻色谱图谱和HIV中和图谱的表。
图27是单克隆抗体10E8、其体细胞变体H6L10和由H6L10与Pro140配对组成的CrossMab双特异性抗体的尺寸排阻色谱图。
图28是描绘了10E8、H6L10/Pro 140及其亲本抗体在小鼠模型中的药物动力学图谱的图。
图29是比较了10E8v1.0/iMab或P140 CrossMab抗体与10E8/iMab或P140抗体的效力的图。
图30是描绘了10E8和衍生自几种10E8变体和iMab或P140的CrossMab抗体在小鼠模型中的药物动力学的图。
图31A-B是描绘了10E8v1.1/P140和10E8v2.0/iMab抗体的HIV病毒覆盖率的一系列图。
图31C-D是描绘了10E8v1.1/P140和10E8v2.0/iMab抗体的尺寸排阻色谱稳定性图的一系列图。
图32A-B是描绘了储存在4℃下的PBS中的10E8v1.1/P140和10E8v2.0/iMab抗体的尺寸排阻稳定性图的一系列图。
图33描绘了10E8v2.0/iMab(N297A)抗体的天然质谱分析。
图34A-C是比较了10E8v1.1/P140与10E8v2.0/iMab对HIV分支C组的活性以及这些抗体的IC50和IC80活性的一系列图。
图35和36是比较了10E8v1.1/P140、10E8v2.0/iMab和各种单克隆抗体针对HIV的效力的图。
图37A-C显示选择数目的10E8V2.0/iMab(也称为10E8.2/iMab)变体保留功能抗病毒活性且提高溶解度。图37A显示在体外HIV-1中和测定中一些10E8.2/iMab变体保留功能活性。图37B显示10E8.2/iMab和一些10E8.2/iMab变体具有相似的体内药物动力学图谱。图37C示出了在热应激诱导条件下10E8.2/iMab和一些10E8.2/iMab变体的沉淀图谱。
图38A-B示出了尺寸排阻色谱的结果，其用于鉴别在热应激诱导条件后具有最少聚集的10E8.2/iMab变体。
图39A-B展示了超速离心后10E8.2/iMab和10E8.4/iMab变体在4℃下的溶解度。
图40显示了不同浓度的10E8.2/iMab和10E8.4/iMab变体随时间而变的浊度。
图41示出了如通过差示扫描量热法所评估的10E8.2/iMab和10E8.4/iMab变体的热稳定性。
图42显示了在50℃下强制降解六天后10E8.2/iMab和10E8.4/iMab变体的浊度。对于每组直方图，从左到右的条柱表示10E8.2/iMab(离心前)、10E8.4/iMab(离心前)、10E8.2/iMab(离心后)和10E8.4/iMab(离心后)。
图43示出了10E8.2/iMab和10E8.4/iMab变体的抗HIV覆盖率。
图44是示出了10E8.2/iMab和10E8.4/iMab变体在HIV-1感染的人源化小鼠模型中的体内抗病毒活性的图。
图45A示出了10E8.2/iMab的轻链(SEQ ID NO:33)与10E8.4/iMab变体的轻链(SEQID NO:44)的序列比对。
图45B示出了10E8.2/iMab的重链(SEQ ID NO:34)与10E8.4/iMab变体的重链(SEQID NO:42)的序列比对。加下划线的序列表示CDR1、CDR2和CDR3。斜体序列表示恒定轻链序列或恒定重链序列。
图46是示出了稳定且同时保留抗HIV活性的10E8抗体的示例性变体的图。
具体实施方式
本发明的实施方案提供对HIV的抑制。在各个实施中，形成双特异性抗体，各自包括来自两个不同亲本抗体的重链组分和轻链组分。在各个实施方案中，一种亲本抗体特异性结合HIV，例如，HIV包膜蛋白Env。在各个实施方案中，另一亲本抗体特异性结合细胞膜蛋白，例如CD4和CCR5。
在各个实施方案中，本发明的双特异性抗体(例如，HIV CrossMab抗体)具有IgG分子的天然结构，但具有双特异性。在一种双特异性抗体中，组合来自两种亲本抗体中的每一种的重链和轻链，从而提供其中片段抗原结合1(Fab1)和Fab2的抗原结合位点具有不同结合特异性的抗体。在某些实施方案中，双特异性抗体是如图1中所示的CrossMab格式抗体。在CrossMab格式中，一条重链包括“杵(knob)”结构且另一条重链包括对应的“臼(hole)”结构，并且来自一种亲本抗体的恒定域(即，CL和CH1)的位置被交换，它们在一起确保在装配期间重链与轻链的正确配对。
已经显示各种mAb通过靶向并结合至HIV包膜蛋白Env来阻断HIV感染(图2B和图10)。这些mAb包括例如PGT145、PG9、PGT128、PGT121、10-1074、3BNC117、VRC01、PGT151、4E10和10E8。图2B(改编自www.scripps.edu/news/press/2014/20140424hiv.html)展示了mAbPGT145如何靶向HIV病毒包膜gp120上的V1/V2表位；mAb PGT128如何靶向HIV gp120的V3主干区上的聚糖；mAb 3BNC117如何靶向HIV gp120的CD4结合位点；mAb 10E8如何靶向HIVgp41的膜近端外部区(MPER)；以及mAb PGT151如何靶向HIV gp120和HIV gp41两者上的表位。
另外，已经显示单克隆抗体Pro 140(“P140”)、伊巴利单抗(“iMab”)和515H7通过分别靶向并结合至CCR5、CD4和CXCR4人细胞膜蛋白来阻断HIV感染(图2A)。具体来说，图2A示出了iMab如何靶向CD4，即在人T细胞上表达的用于HIV-1进入的主要受体；以及Pro 140如何靶向CCR5，即通过CCR5嗜性HIV-1的用于HIV-1进入的共受体。
虽然随后的讨论重点是针对Env及细胞膜蛋白CD4和CCR5的双特异性抗体的用途，但是应理解，这仅是为了便于陈述，并且可以使用针对任何HIV表位的任何合适的抗体及针对任何合适的细胞膜蛋白的任何合适的抗体且它们都在本发明的范围内。
因此，在各个实施方案中，本发明提供了靶向并结合至HIV Env蛋白以及细胞膜蛋白CCR5、CD4和/或CXCR4的双特异性抗体。在某些实施方案中，双特异性抗体包括衍生自(但不限于)PGT145、PG9、PGT128、PGT121、10-1074、3BNC117、VRC01、PGT151、4E10和/或10E8抗体及其变体的序列(例如，重链序列和轻链序列)。
定义PGT145抗体的重链和轻链的氨基酸序列可以分别见于例如www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/3U1S_H和http://www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/3U1S_L处，其全部内容以引用的方式并入本文中。
定义PG9抗体的重链和轻链的氨基酸序列可以分别见于例如www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/3U4E_H和www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/3MUH_L处，其全部内容以引用的方式并入本文中。
定义PGT128抗体的重链和轻链的氨基酸序列可以分别见于例如www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/3TYG_H和www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/3TYG_L处，其全部内容以引用的方式并入本文中。
定义PGT121抗体的重链和轻链的氨基酸序列可以分别见于例如www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/4FQC_H和www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/4FQC_L处，其全部内容以引用的方式并入本文中。
定义10-1074抗体的重链和轻链的氨基酸序列可以见于例如Mouquet H.等人，(2012)PNAS,109(47):E3268-77(包括增补信息)中，其全部内容以引用的方式并入本文中。
定义3BNC117抗体的重链和轻链的氨基酸序列可以分别见于例如www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/4LSV_H和www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/4LSV_L处，其全部内容以引用的方式并入本文中。
定义VRC01抗体的重链和轻链的氨基酸序列可以分别见于例如www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/4LST_H和www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/4LST_L处，其全部内容以引用的方式并入本文中。
定义PGT151抗体的重链和轻链的氨基酸序列可以分别见于例如www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/4NUG_H和www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/4NUG_L处，其全部内容以引用的方式并入本文中。
定义4E10抗体的重链和轻链的氨基酸序列可以分别见于例如www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/4LLV_H和www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/4LLV_L处，其全部内容以引用的方式并入本文中。
定义10E8抗体的重链和轻链的氨基酸序列可以分别见于例如www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/4G6F_B和www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/4G6F_D处，其全部内容以引用的方式并入本文中。
在某些实施方案中，双特异性抗体包括衍生自(但不限于)P140、iMab(或MV1变体)和/或515H7抗体及其变体的序列(例如，重链序列和轻链序列)。Pro 140、iMab(或其MV1变体)和515H7抗体的重链序列和轻链序列进一步描述于例如Olson,W.C.等人，(1999)JVirol.,73(5):4145-55；Trkola,A.等人，(2001)J Virol.,75(2):579-88；美国专利号7,122,185；Burkly L.C.等人，(1992)J Immunol.,149(5):1779-87；Moore J.P.等人，(1992)J Virol.，66(8):4784-93；Reimann K.A.等人，(1997)AIDS Res Hum Retroviruses，13(11):933-43；国际专利公布号WO2014100139和欧洲专利公布号EP2246364中，这些文献的全部内容以引用的方式并入本文中。
如本文所用，抗体“变体”是指具有不同于其所衍生的亲本抗体的氨基酸序列的氨基酸序列的抗体。在各个实施方案中，变体具有相对于亲本抗体的一个或多个氨基酸改变。
在各个实施方案中，本发明的双特异性抗体包括来自PGT145、PG9、PGT128、PGT121、10-1074、3BNC117、VRC01、PGT151、4E10或10E8抗体或其变体的重链序列和轻链序列以及来自P140、iMab(或MV1变体)或515H7抗体或其变体的重链序列和轻链序列。
在示例性实施方案中，已经构建了一系列HIV CrossMab抗体，包括但不限于例如145/MV1、117/MV1、128/MV1、10E8/MV1、145/P140、128/P140、117/P140、10E8/P140、10E8/α-Her2、10E8/X19和4E10/P140。PGT145(“145”)、3BNC117(“117”)、PGT128(“128”)和10E8是四种不同的HIV包膜抗体。Pro 140(“P140”)是结合至细胞表面受体CCR5的mAb。MV1是CD4抗体，其是mAb伊巴利单抗(“iMab”；参见，例如国际专利公布号WO2014100139，其以引用的方式整体并入本文中)的修饰变体。X19是不结合至表达CXCR4的细胞的抗细胞表面受体CXCR4(参见例如，美国专利号8,329,178，其以引用的方式整体并入本文中)的抗体变体之一(且因此用作非表面结合对照)。α-Her2是结合至细胞上表达的Her2受体的mAb。这些CrossMab抗体中的许多与其亲本抗体(即，单克隆抗体MV1、145、117或10E8)相比扩大了HIV中和的广度。在各个实施方案中，本发明的双特异性抗体与其亲本抗体相比显著提高了抗HIV中和的效力。
定义各种示例性HIV CrossMab抗体的重链和轻链的氨基酸序列显示如下。
145/MV1抗体：
定义145/MV1抗体的MV1衍生的轻链的氨基酸序列-MV1-VLCH1(SEQ ID NO：1)：
Figure BDA0002640039350000141
定义145/MV1抗体的MV1衍生的重链的氨基酸序列-MV1-HC-臼-交叉(Cross)(SEQID NO:2)：
Figure BDA0002640039350000142
定义145/MV1抗体的PGT145衍生的轻链的氨基酸序列-PGT145-LC(SEQ ID NO:3)：
Figure BDA0002640039350000143
定义145/MV1抗体的PGT145衍生的重链的氨基酸序列-PGT145-HC-杵(SEQ ID NO:4)：
Figure BDA0002640039350000144
117/MV1抗体：
定义117/MV1抗体的MV1衍生的轻链的氨基酸序列-MV1-VLCH1(SEQ ID NO：1)：
Figure BDA0002640039350000151
定义117/MV1抗体的MV1衍生的重链的氨基酸序列-MV1-HC-臼-交叉(Cross)(SEQID NO:2)：
Figure BDA0002640039350000152
定义117/MV1抗体的3BNC117衍生的轻链的氨基酸序列-3BNC117-LC(SEQ ID NO:5)：
Figure BDA0002640039350000153
定义117/MV1抗体的3BNC117衍生的重链的氨基酸序列-3BNC117-HC-杵(SEQ IDNO:6)：
Figure BDA0002640039350000154
128/MV1抗体：
定义128/MV1抗体的MV1衍生的轻链的氨基酸序列-MV1-VLCH1(SEQ ID NO：1)：
Figure BDA0002640039350000161
定义128/MV1抗体的MV1衍生的重链的氨基酸序列-MV1-HC-臼-交叉(Cross)(SEQID NO:2)：
Figure BDA0002640039350000162
定义128/MV1抗体的PGT128衍生的轻链的氨基酸序列-PGT128-LC(SEQ ID NO:7)：
Figure BDA0002640039350000163
定义128/MV1抗体的PGT128衍生的重链的氨基酸序列-PGT128-HC-杵(SEQ ID NO:8)：
Figure BDA0002640039350000164
10E8/MV1抗体：
定义10E8/MV1抗体的MV1衍生的轻链的氨基酸序列-MV1-VLCH1(SEQ ID NO：1)：
Figure BDA0002640039350000171
定义10E8/MV1抗体的MV1衍生的重链的氨基酸序列-MV1-HC-臼-交叉(SEQ ID NO:2)：
Figure BDA0002640039350000172
定义10E8/MV1抗体的10E8衍生的轻链的氨基酸序列-10E8-LC(SEQ ID NO:9)：
Figure BDA0002640039350000173
定义10E8/MV1抗体的10E8衍生的重链的氨基酸序列-10E8-HC-杵(SEQ ID NO：10)：
Figure BDA0002640039350000174
Δ10E8/MV1抗体
定义Δ10E8/MV1抗体的MV1衍生的轻链的氨基酸序列MV1-VLCH1(SEQ ID NO：1)：
Figure BDA0002640039350000181
定义Δ10E8/MV1抗体的MV1衍生的重链的氨基酸序列MV1-HC-臼-交叉(SEQ IDNO:2)：
Figure BDA0002640039350000182
定义Δ10E8/MV1抗体的Δ10E8衍生的轻链的氨基酸序列Δ10E8-LC(SEQ ID NO:21)：
Figure BDA0002640039350000183
定义Δ10E8/MV1抗体的Δ10E8衍生的重链的氨基酸序列10E8-HC-杵(SEQ ID NO:22)：
Figure BDA0002640039350000184
151/MV1抗体
定义151/MV1抗体的MV1衍生的轻链的氨基酸序列-MV1-VLCH1(SEQ ID NO：1)：
Figure BDA0002640039350000191
定义151/MV1抗体的MV1衍生的重链的氨基酸序列MV1-HC-臼-交叉(SEQ ID NO:2)：
Figure BDA0002640039350000192
定义151/MV1抗体的PGT151衍生的轻链的氨基酸序列PGT151-LC(SEQ ID NO:23)：
Figure BDA0002640039350000193
定义151/MV1抗体的PGT151衍生的重链的氨基酸序列PGT151-HC-杵(SEQ ID NO:24)：
Figure BDA0002640039350000194
145/P140抗体：
定义145/P140抗体的Pro 140衍生的轻链的氨基酸序列-PRO140-VLCH1(SEQ IDNO：11)：
Figure BDA0002640039350000201
定义145/P140抗体的Pro 140衍生的重链的氨基酸序列-PRO140-HC-臼-交叉(SEQID NO：12)：
Figure BDA0002640039350000202
定义145/P140抗体的PGT145衍生的轻链的氨基酸序列-PGT145-LC(SEQ ID NO:3)：
Figure BDA0002640039350000203
定义145/P140抗体的PGT145衍生的重链的氨基酸序列-PGT145-HC-杵(SEQ IDNO:4)：
Figure BDA0002640039350000204
117/P140抗体：
定义117/P140抗体的Pro 140衍生的轻链的氨基酸序列-PRO140-VLCH1(SEQ IDNO：11)：
Figure BDA0002640039350000211
定义117/P140抗体的Pro 140衍生的重链的氨基酸序列-PRO140-HC-臼-交叉(SEQID NO：12)：
Figure BDA0002640039350000212
定义117/P140抗体的3BNC117衍生的轻链的氨基酸序列-3BNC117-LC(SEQ ID NO:5)：
Figure BDA0002640039350000213
定义117/P140抗体的3BNC117衍生的重链的氨基酸序列-3BNC117-HC-杵(SEQ IDNO:6)：
Figure BDA0002640039350000214
128/P140抗体：
定义128/P140抗体的Pro 140衍生的轻链的氨基酸序列-PRO140-VLCH1(SEQ IDNO：11)：
Figure BDA0002640039350000221
定义128/P140抗体的Pro 140衍生的重链的氨基酸序列-PRO140-HC-臼-交叉(SEQID NO：12)：
Figure BDA0002640039350000222
定义128/P140抗体的PGT128衍生的轻链的氨基酸序列-PGT128-LC(SEQ ID NO:7)：
Figure BDA0002640039350000223
定义128/P140抗体的PGT128衍生的重链的氨基酸序列-PGT128-HC-杵(SEQ IDNO:8)：
Figure BDA0002640039350000224
10E8/P140抗体：
定义10E8/P140抗体的Pro 140衍生的轻链的氨基酸序列-PRO140-VLCH1(SEQ IDNO：11)：
Figure BDA0002640039350000231
定义10E8/P140抗体的Pro 140衍生的重链的氨基酸序列-PRO140-HC-臼-交叉(SEQ ID NO：12)：
Figure BDA0002640039350000232
定义10E8/P140抗体的10E8衍生的轻链的氨基酸序列-10E8-LC(SEQ ID NO:9)：
Figure BDA0002640039350000233
定义10E8/P140抗体的10E8衍生的重链的氨基酸序列-10E8-HC-杵(SEQ ID NO：10)：
Figure BDA0002640039350000234
Δ10E8/P140抗体
定义Δ10E8/P140抗体的PRO140衍生的轻链的氨基酸序列-PRO140-VLCH1(SEQ IDNO：11)：
Figure BDA0002640039350000241
定义Δ10E8/P140抗体的PRO140衍生的重链的氨基酸序列-PRO140-臼-交叉(SEQID NO：12)：
Figure BDA0002640039350000242
定义Δ10E8/P140抗体的Δ10E8衍生的轻链的氨基酸序列-Δ10E8-LC(SEQ IDNO:21)：
Figure BDA0002640039350000243
定义Δ10E8/P140抗体的Δ10E8衍生的重链的氨基酸序列-10E8-HC-杵(SEQ IDNO:22)：
Figure BDA0002640039350000244
151/P140抗体
定义151/P140抗体的PRO140衍生的轻链的氨基酸序列-PRO140-VLCH1(SEQ IDNO：11)：
Figure BDA0002640039350000251
定义151/P140抗体的PRO140衍生的重链的氨基酸序列-PRO140-臼-交叉(SEQ IDNO：12)：
Figure BDA0002640039350000252
定义151/P140抗体的PGT151衍生的轻链的氨基酸序列-PGT151-LC(SEQ ID NO:23)：
Figure BDA0002640039350000253
定义151/P140抗体的PGT151衍生的重链的氨基酸序列-PGT151-HC-杵(SEQ IDNO:24)：
Figure BDA0002640039350000254
10E8/α-Her2抗体：
定义10E8/α-Her2抗体的α-Her2衍生的轻链的氨基酸序列-抗Her2-VLCH1(SEQ IDNO：13)：
Figure BDA0002640039350000261
定义10E8/α-Her2抗体的α-Her2衍生的重链的氨基酸序列-抗Her2-HC-臼-交叉(SEQ ID NO：14)：
Figure BDA0002640039350000262
定义10E8/α-Her2抗体的10E8衍生的轻链的氨基酸序列-10E8-LC(SEQ ID NO:9)：
Figure BDA0002640039350000263
定义10E8/α-Her2抗体的10E8衍生的重链的氨基酸序列-10E8-HC-杵(SEQ ID NO：10)：
Figure BDA0002640039350000264
4E10/P140抗体：
定义4E10/P140抗体的Pro 140衍生的轻链的氨基酸序列-PRO140-VLCH1(SEQ IDNO：11)：
Figure BDA0002640039350000271
定义4E10/P140抗体的Pro 140衍生的重链的氨基酸序列-PRO140-HC-臼-交叉(SEQ ID NO：12)：
Figure BDA0002640039350000272
定义4E10/P140抗体的4E10衍生的轻链的氨基酸序列-4E10-LC(SEQ ID NO：17)：
Figure BDA0002640039350000273
定义4E10/P140抗体的4E10衍生的重链的氨基酸序列-PGT145-HC-杵(SEQ ID NO：18)：
Figure BDA0002640039350000274
10E8/X19抗体：
定义10E8/X19抗体的X19衍生的轻链的氨基酸序列-X19-VLCH1(SEQ ID NO：19)：
Figure BDA0002640039350000281
定义10E8/X19抗体的X19衍生的重链的氨基酸序列- X19-HC-臼-交叉 (SEQ IDNO:20)：
Figure BDA0002640039350000282
定义10E8/X19抗体的10E8衍生的轻链的氨基酸序列- 10E8-LC(SEQ ID NO:9)：
Figure BDA0002640039350000283
定义10E8/X19抗体的10E8衍生的重链的氨基酸序列-PGT145-HC-杵(SEQ ID NO:10)：
Figure BDA0002640039350000284
10E8/515H7抗体
定义10E8/515H7抗体的515H7衍生的轻链的氨基酸序列-515H7-VLCH1 (SEQ IDNO:25)：
Figure BDA0002640039350000291
定义10E8/515H7抗体的515H7衍生的重链的氨基酸序列-515H7-臼-交叉(SEQ IDNO:26)：
Figure BDA0002640039350000292
定义10E8/515H7抗体的10E8衍生的轻链的氨基酸序列-10E8-LC(SEQ ID NO:9)：
Figure BDA0002640039350000293
定义10E8/515H7抗体的10E8衍生的重链的氨基酸序列-10E8-HC-杵(SEQ ID NO：10)：
Figure BDA0002640039350000294
嵌合CDR123抗体(SEQ ID NO:27)：
Figure BDA0002640039350000295
嵌合FW123(SEQ ID NO:28)：
Figure BDA0002640039350000301
10E8V1.0/iMab抗体
定义10E8v1.0/MV1抗体的MV1衍生的轻链的氨基酸序列-MV1-VLCH1(SEQ ID NO：1)：
Figure BDA0002640039350000302
定义10E8v1.0/MV1抗体的MV1衍生的重链的氨基酸序列MV1-HC-臼-交叉(SEQ IDNO:2)：
Figure BDA0002640039350000303
定义10E8v1.0/iMab抗体的10E8v1.0衍生的轻链的氨基酸序列-10E8v1.0-LC(SEQID NO:29)：
Figure BDA0002640039350000304
定义10E8v1.0/iMab抗体的10E8v1.0衍生的重链的氨基酸序列-10E8v1.0-HC-杵(SEQ ID NO:30)：
Figure BDA0002640039350000305
Figure BDA0002640039350000311
10E8V1.1/iMab抗体
定义10E8v1.1/iMab抗体的MV1衍生的轻链的氨基酸序列MV1-VLCH1(SEQ ID NO：1)：
Figure BDA0002640039350000312
定义10E8v1.1/iMab抗体的MV1衍生的重链的氨基酸序列MV1-HC-臼-交叉(SEQ IDNO:2)：
Figure BDA0002640039350000313
定义10E8v1.1/iMab抗体的10E8v1.1衍生的轻链的氨基酸序列-10E8v1.1-LC(SEQID NO:31)：
Figure BDA0002640039350000314
定义10E8v1.1/iMab抗体的10E8v1.1衍生的重链的氨基酸序列-10E8v1.1-HC-杵(SEQ ID NO:32)：
Figure BDA0002640039350000321
10E8V2.0/iMab抗体(也称为10E8.2/iMab抗体)
定义10E8v2.0/iMab抗体的MV1衍生的轻链的氨基酸序列MV1-VLCH1(SEQ ID NO：1)：
Figure BDA0002640039350000322
定义10E8v2.0/iMab抗体的MV1衍生的重链的氨基酸序列MV1-HC-臼-交叉(SEQ IDNO:2)：
Figure BDA0002640039350000323
定义10E8v2.0/iMab抗体的10E8v2.0衍生的轻链的氨基酸序列-10E8v2.0-LC(SEQID NO:33)：
Figure BDA0002640039350000324
定义10E8v2.0/iMab抗体的10E8v2.0衍生的重链的氨基酸序列-10E8v2.0-HC-杵(SEQ ID NO:34)：
Figure BDA0002640039350000331
10E8V3.0/iMab抗体
定义10E8v3.0/iMab抗体的MV1衍生的轻链的氨基酸序列MV1-VLCH1(SEQ ID NO：1)：
Figure BDA0002640039350000332
定义10E8v3.0/iMab抗体的MV1衍生的重链的氨基酸序列MV1-HC-臼-交叉(SEQ IDNO:2)：
Figure BDA0002640039350000333
定义10E8v3.0/iMab抗体的10E8v3.0衍生的轻链的氨基酸序列-10E8v3.0-LC(SEQID NO：15)：
Figure BDA0002640039350000334
定义10E8v3.0/iMab抗体的10E8v3.0衍生的重链的氨基酸序列-10E8v3.0-HC-杵(SEQ ID NO:16)：
Figure BDA0002640039350000341
10E8V1.0/P140(H6L10/PRO140)抗体
定义10E8V1.0/P140抗体的PRO140衍生的轻链的氨基酸序列-PRO140-VLCH1(SEQID NO：11)：
Figure BDA0002640039350000342
定义10E8V1.0/P140抗体的PRO140衍生的重链的氨基酸序列-PRO140-臼-交叉(SEQ ID NO：12)：
Figure BDA0002640039350000343
定义10E8V1.0/P140抗体的L10衍生的轻链的氨基酸序列-L10-LC(SEQ ID NO:29)：
Figure BDA0002640039350000344
定义10E8V1.0/P140抗体的H6衍生的重链的氨基酸序列-H6-HC-杵(SEQ ID NO:30)：
Figure BDA0002640039350000351
10E8V1.1/P140抗体
定义10E8v1.1/P140抗体的PRO140衍生的轻链的氨基酸序列PRO140-VLCH1(SEQID NO：11)：
Figure BDA0002640039350000352
定义10E8v1.1/P140抗体的P140衍生的重链的氨基酸序列PRO140-HC-臼-交叉(SEQ ID NO：12)：
Figure BDA0002640039350000353
定义10E8v1.1/P140抗体的10E8v1.1衍生的轻链的氨基酸序列-10E8v1.1-LC(SEQID NO:31)：
Figure BDA0002640039350000354
定义10E8v1.1/P140抗体的10E8v1.1衍生的重链的氨基酸序列-10E8v1.1 HC-杵(SEQ ID NO:32)：
Figure BDA0002640039350000361
10E8V2.0/P140抗体
定义10E8v2.0/P140抗体的PRO140衍生的轻链的氨基酸序列PRO140-VLCH1(SEQID NO：11)：
Figure BDA0002640039350000362
定义10E8v2.0/P140抗体的P140衍生的重链的氨基酸序列PRO140-HC-臼-交叉(SEQ ID NO：12)：
Figure BDA0002640039350000363
定义10E8v2.0/P140抗体的10E8v2.0衍生的轻链的氨基酸序列-10E8v2.0-LC(SEQID NO:33)：
Figure BDA0002640039350000364
定义10E8v2.0/P140抗体的10E8v2.0衍生的重链的氨基酸序列-10E8v2.0 HC-杵(SEQ ID NO:34)：
Figure BDA0002640039350000371
10E8V3.0/P140抗体
定义10E8v3.0/P140抗体的PRO140衍生的轻链的氨基酸序列PRO140-VLCH1(SEQID NO：11)：
Figure BDA0002640039350000372
定义10E8v3.0/P140抗体的P140衍生的重链的氨基酸序列PRO140-HC-臼-交叉(SEQ ID NO：12)：
Figure BDA0002640039350000373
定义10E8v3.0/P140抗体的10E8v3.0衍生的轻链的氨基酸序列-10E8v3.0-LC(SEQID NO：15)：
Figure BDA0002640039350000374
定义10E8v3.0/P140抗体的10E8v3.0衍生的重链的氨基酸序列-10E8v3.0 HC-杵(SEQ ID NO：16)：
Figure BDA0002640039350000381
10E8.2.1/iMab
定义10E8.2/iMab抗体的MV1衍生的轻链的氨基酸序列MV1-VLCH1(SEQ ID NO：1)
Figure BDA0002640039350000382
定义10E8.2/iMab抗体的MV1衍生的重链的氨基酸序列MV1-HC-臼-交叉(SEQ IDNO：2)
Figure BDA0002640039350000383
定义10E8.2/iMab抗体的10E8.2衍生的轻链的氨基酸序列-10E8.2-LC(SEQ IDNO：33)
Figure BDA0002640039350000384
定义10E8.2.1/iMab抗体的10E8.2.1衍生的重链的氨基酸序列-10E8.2.1-HC-杵(SEQ ID NO:35)
Figure BDA0002640039350000391
10E8.2.2/iMab
定义10E8.2/iMab抗体的MV1衍生的轻链的氨基酸序列MV1-VLCH1(SEQ ID NO：1)
Figure BDA0002640039350000392
定义10E8.2/iMab抗体的MV1衍生的重链的氨基酸序列MV1-HC-臼-交叉(SEQ IDNO：2)
Figure BDA0002640039350000393
定义10E8.2/iMab抗体的10E8.2衍生的轻链的氨基酸序列-10E8.2-LC(SEQ IDNO：33)
Figure BDA0002640039350000394
定义10E8.2.2/iMab抗体的10E8.2.2衍生的重链的氨基酸序列-10E8.2.2-HC-杵(SEQ ID NO:36)
Figure BDA0002640039350000401
10E8.2.3/iMab
定义10E8.2/iMab抗体的MV1衍生的轻链的氨基酸序列MV1-VLCH1(SEQ ID NO：1)
Figure BDA0002640039350000402
定义10E8.2/iMab抗体的MV1衍生的重链的氨基酸序列MV1-HC-臼-交叉(SEQ IDNO：2)
Figure BDA0002640039350000403
定义10E8.2/iMab抗体的10E8.2衍生的轻链的氨基酸序列-10E8.2-LC(SEQ IDNO：33)
Figure BDA0002640039350000404
定义10E8.2.3/iMab抗体的10E8.2.3衍生的重链的氨基酸序列-10E8.2.3-HC-杵(SEQ ID NO:37)
Figure BDA0002640039350000411
10E8.2.4/iMab
定义10E8.2.4/iMab抗体的MV1衍生的轻链的氨基酸序列MV1-VLCH1-LM52(SEQ IDNO:38)
Figure BDA0002640039350000412
定义10E8.2/iMab抗体的MV1衍生的重链的氨基酸序列MV1-HC-臼-交叉(SEQ IDNO：2)
Figure BDA0002640039350000413
定义10E8.2/iMab抗体的10E8.2衍生的轻链的氨基酸序列-10E8.2-LC(SEQ IDNO：33)
Figure BDA0002640039350000414
定义10E8.2.3/iMab抗体的10E8.2.3衍生的重链的氨基酸序列-10E8.2.3-HC-杵(SEQ ID NO:39)
Figure BDA0002640039350000421
10E8.2.5/iMab
定义10E8.2/iMab抗体的MV1衍生的轻链的氨基酸序列MV1-VLCH1(SEQ ID NO：1)
Figure BDA0002640039350000422
定义10E8.2/iMab抗体的MV1衍生的重链的氨基酸序列MV1-HC-臼-交叉(SEQ IDNO：2)
Figure BDA0002640039350000423
定义10E8.2/iMab抗体的10E8.2衍生的轻链的氨基酸序列-10E8.2-LC(SEQ IDNO：33)
Figure BDA0002640039350000424
定义10E8.2.5/iMab抗体的10E8.2.5衍生的重链的氨基酸序列-10E8.2.5-HC-杵(SEQ ID NO:40)
Figure BDA0002640039350000431
10E8.2.6/iMab
定义10E8.2/iMab抗体的MV1衍生的轻链的氨基酸序列MV1-VLCH1(SEQ ID NO：1)
Figure BDA0002640039350000432
定义10E8.2/iMab抗体的MV1衍生的重链的氨基酸序列MV1-HC-臼-交叉(SEQ IDNO：2)
Figure BDA0002640039350000433
定义10E8.2/iMab抗体的10E8.2衍生的轻链的氨基酸序列-10E8.2-LC(SEQ IDNO：33)
Figure BDA0002640039350000434
定义10E8.2.6/iMab抗体的10E8.2.6衍生的重链的氨基酸序列-10E8.2.6-HC-杵(SEQ ID NO:41)
Figure BDA0002640039350000441
10E8.2.7/iMab
定义10E8.2/iMab抗体的MV1衍生的轻链的氨基酸序列MV1-VLCH1(SEQ ID NO：1)
Figure BDA0002640039350000442
定义10E8.2/iMab抗体的MV1衍生的重链的氨基酸序列MV1-HC-臼-交叉(SEQ IDNO：2)
Figure BDA0002640039350000443
定义10E8.2/iMab抗体的10E8.2衍生的轻链的氨基酸序列-10E8.2-LC(SEQ IDNO：33)
Figure BDA0002640039350000444
定义10E8.4/iMab抗体的10E8.4衍生的重链的氨基酸序列-10E8.4-HC-杵(SEQ IDNO:42)
Figure BDA0002640039350000451
10E8.2.8/iMab
定义10E8.2/iMab抗体的MV1衍生的轻链的氨基酸序列MV1-VLCH1(SEQ ID NO：1)
Figure BDA0002640039350000452
定义10E8.2/iMab抗体的MV1衍生的重链的氨基酸序列MV1-HC-臼-交叉(SEQ IDNO：2)
Figure BDA0002640039350000453
定义10E8.2/iMab抗体的10E8.2衍生的轻链的氨基酸序列-10E8.2-LC(SEQ IDNO：33)
Figure BDA0002640039350000454
定义10E8.2.8/iMab抗体的10E8.2.8衍生的重链的氨基酸序列-10E8.2.8-HC-杵(SEQ ID NO:43)
Figure BDA0002640039350000461
10E8.2.10/iMab
定义10E8.2/iMab抗体的MV1衍生的轻链的氨基酸序列MV1-VLCH1(SEQ ID NO：1)
Figure BDA0002640039350000462
定义10E8.2/iMab抗体的MV1衍生的重链的氨基酸序列MV1-HC-臼-交叉(SEQ IDNO：2)
Figure BDA0002640039350000463
定义10E8.4/iMab抗体的10E8.4衍生的轻链的氨基酸序列-10E8.4-LC(SEQ IDNO:44)
Figure BDA0002640039350000464
定义10E8.2.8/iMab抗体的10E8.2.8衍生的重链的氨基酸序列-10E8.2.8-HC-杵(SEQ ID NO:45)
Figure BDA0002640039350000471
10E8.4/iMab
定义10E8.2/iMab抗体的MV1衍生的轻链的氨基酸序列MV1-VLCH1(SEQ ID NO：1)
Figure BDA0002640039350000472
定义10E8.2/iMab抗体的MV1衍生的重链的氨基酸序列MV1-HC-臼-交叉(SEQ IDNO：2)
Figure BDA0002640039350000473
定义10E8.4/iMab抗体的10E8.4衍生的轻链的氨基酸序列-10E8.4-LC(SEQ IDNO:46)
Figure BDA0002640039350000474
定义10E8.4/iMab抗体的10E8.4衍生的重链的氨基酸序列-10E8.4-HC-杵(SEQ IDNO:47)
Figure BDA0002640039350000481
在各个实施方案中，衍生自PGT145、PG9、PGT128、PGT121、10-1074、3BNC117、VRC01、PGT151、4E10、10E8、P140、iMab(或MV1变体)、515H7抗体及其变体的重链序列和/或轻链序列中的至少一者在一起配对以形成双特异性抗体(例如，HIV CrossMab抗体)。在一个示例性实施方案中，所公开的选自SEQ ID NO：1-36的重链和轻链中的至少一者在一起配对以形成双特异性抗体(例如，HIV CrossMab抗体)。
在各个实施方案中，双特异性抗体(例如，HIV CrossMab抗体)的氨基酸序列还包括氨基酸类似物、氨基酸衍生物或其他非典型氨基酸。
在各个实施方案中，双特异性抗体(例如，HIV CrossMab抗体)包含与PGT145、PG9、PGT128、PGT121、10-1074、3BNC117、VRC01、PGT151、4E10或10E8抗体的野生型重链或轻链序列至少60％相同的序列。在各个实施方案中，双特异性抗体(例如，HIV CrossMab抗体)包含与P140、iMab(或MV1变体)或515H7抗体的野生型重链或轻链序列至少60％相同的序列。在示例性实施方案中，双特异性抗体(例如，HIV CrossMab抗体)包含与本文所公开的任意序列至少60％相同的序列。
在各个实施方案中，双特异性抗体(例如，HIV CrossMab抗体)可以包含与PGT145、PG9、PGT128、PGT121、10-1074、3BNC117、VRC01、PGT151、4E10或10E8抗体的野生型重链或轻链序列至少约60％、至少约61％、至少约62％、至少约63％、至少约64％、至少约65％、至少约66％、至少约67％、至少约68％、至少约69％、至少约70％、至少约71％、至少约72％、至少约73％、至少约74％、至少约75％、至少约76％、至少约77％、至少约78％、至少约79％、至少约80％、至少约81％、至少约82％、至少约83％、至少约84％、至少约85％、至少约86％、至少约87％、至少约88％、至少约89％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或100％相同的序列。
在各个实施方案中，双特异性抗体(例如，HIV CrossMab抗体)可以包含与P140、iMab(或MV1变体)或515H7抗体的野生型重链或轻链序列至少约60％、至少约61％、至少约62％、至少约63％、至少约64％、至少约65％、至少约66％、至少约67％、至少约68％、至少约69％、至少约70％、至少约71％、至少约72％、至少约73％、至少约74％、至少约75％、至少约76％、至少约77％、至少约78％、至少约79％、至少约80％、至少约81％、至少约82％、至少约83％、至少约84％、至少约85％、至少约86％、至少约87％、至少约88％、至少约89％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或100％相同的序列。
在示例性实施方案中，双特异性抗体(例如，HIV CrossMab抗体)可以包含与本文所公开的任意序列至少约60％、至少约61％、至少约62％、至少约63％、至少约64％、至少约65％、至少约66％、至少约67％、至少约68％、至少约69％、至少约70％、至少约71％、至少约72％、至少约73％、至少约74％、至少约75％、至少约76％、至少约77％、至少约78％、至少约79％、至少约80％、至少约81％、至少约82％、至少约83％、至少约84％、至少约85％、至少约86％、至少约87％、至少约88％、至少约89％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或100％相同的序列。
可利用本领域技术范围内的各种方式，例如，使用可公开得到的计算机软件，诸如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件来测定同源性或同一性。使用由程序blastp、blastn、blastx、tblastn和tblastx所采用的算法的BLAST(基本局部比对搜索工具)分析(Karlin等人，(1990)PROC.NATL.ACAD.SCI.USA 87,2264-2268；Altschul,(1993)J.MOL.EVOL.36,290-300；Altschul等人，(1997)NUCLEIC ACIDS RES.25,3389-3402，以引用的方式并入)是专为序列相似性搜索定制的。由BLAST程序使用的方法首先考虑查询序列与数据库序列之间的相似片段，然后评价被识别的所有匹配的统计显著性，最后只总结出满足显著性的预选阈值的那些匹配。关于在序列数据库相似性检索方面的基本问题的讨论，参见Altschul等人，(1994)NATURE GENETICS 6，119-129，其以引用的方式完全并入本文。本领域技术人员可以确定用于测量比对的适当参数，包括对所比较的序列的全长实现最大比对所需的任何算法。直方图、描述、比对、预期(即，报告针对数据库序列的匹配的统计显著性阈值)、截止、矩阵和过滤的搜索参数是处于默认设置。由blastp、blastx、tblastn和tblastx使用的默认评分矩阵是BLOSUM62矩阵(Henikoff等人，(1992)Proc.NATL.ACAD.Sci.USA 89，10915-10919，以引用的方式完全并入)。四个blastn参数可以如下进行调整：Q＝10(空位生成罚分)；R＝10(空位延伸罚分)；wink＝1(沿着查询在每个wink.sup.th位置处产生字命中)；及gapw＝16(设置在其中产生空位比对的窗口宽度)。等效Blastp参数设置可以是Q＝9；R＝2；wink＝1；及gapw＝32。也可以使用NCBI(美国国家生物技术信息中心)BLAST高级选项参数(例如：-G，开放空位的成本[整数]：默认＝5，对于核苷酸/11，对于蛋白质；-E，延伸空位的成本[整数]：默认＝2，对于核苷酸/1，对于蛋白质；-q，核苷酸错配的罚分[整数]：默认＝-3；-r，核苷酸匹配的奖励[整数]：默认＝1；-e，预期值[真]：默认＝10；-W，字长[整数]：默认＝11，对于核苷酸/28，对于megablast/3，对于蛋白质；-y，空投(X)，对于blast延伸(以比特计)：默认＝20，对于blastn/7，对于其他；-X，空位比对的X空投值(以比特计)：默认＝15，对于所有程序，不适用于blastn；及-Z，空位比对的最终X空投值(以比特计)：50，对于blastn，25，对于其他)进行搜索。也可以使用用于成对蛋白质比对的ClustalW(默认参数可以包括，例如，Blosum62矩阵和空位开放罚分＝10及空位延伸罚分＝0.1)。在GCG软件包10.0版中可用的序列之间的最佳拟合(Bestfit)比较使用DNA参数GAP＝50(空位生成罚分)和LEN＝3(空位延伸罚分)，且在蛋白质比较中的等效设置是GAP＝8和LEN＝2。
在各个实施方案中，双特异性抗体(例如，HIV CrossMab抗体)包含包括相对于PGT145、PG9、PGT128、PGT121、10-1074、3BNC117、VRC01、PGT151、4E10或10E8抗体的野生型重链或轻链序列的至少一个氨基酸改变的序列。在各个实施方案中，双特异性抗体(例如，HIV CrossMab抗体)包含包括相对于P140、iMab(或MV1变体)、515H7抗体的野生型重链或轻链序列的至少一个氨基酸改变的序列。在示例性实施方案中，双特异性抗体(例如，HIVCrossMab抗体)包含包括相对于本文所公开的任意序列的至少一个氨基酸改变的序列。
在各个实施方案中，双特异性抗体(例如，HIV CrossMab抗体)包含包括相对于PGT145、PG9、PGT128、PGT121、10-1074、3BNC117、VRC01、PGT151、4E10或10E8抗体的野生型重链或轻链序列的至少约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、40、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79或80个氨基酸改变的序列。
在各个实施方案中，双特异性抗体(例如，HIV CrossMab抗体)包含包括相对于P140、iMab(或MV1变体)或515H7抗体的野生型重链或轻链序列的至少约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、40、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79或80个氨基酸改变的序列。
在示例性实施方案中，双特异性抗体(例如，HIV CrossMab抗体)包含包括相对于本文所公开的任意序列的至少约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、40、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79或80个氨基酸改变的序列。
所述氨基酸改变可以是氨基酸缺失、插入、取代或修饰。在一个实施方案中，氨基酸改变是氨基酸缺失。在另一个实施方案中，氨基酸改变是氨基酸取代。
在各个实施方案中，氨基酸改变可以在双特异性抗体的互补决定区(CDR)(例如，CDR1、CDR2或CDR3区)中。在另一个实施方案中，氨基酸改变可以在双特异性抗体的框架区(FW)(例如，FW1、FW2、FW3或FW4区)中。在又一个实施方案中，氨基酸改变可以在双特异性抗体的接合区(J区)(例如，J1、J2、J3、J4、J5、J6或J7区)中。
本文还提供了双特异性抗体的嵌合抗体衍生物，即，其中重链和/或轻链的一部分与衍生自特定物种或属于特定抗体类别或子类的抗体中的对应序列相同或同源，而链的剩余部分与衍生自另一物种或属于另一抗体类别或子类的抗体中的对应序列相同或同源的抗体分子，以及此类抗体的片段，只要它们表现出所需的生物活性即可。例如，双特异性抗体可以包括重链和/或轻链，其中一个或多个衍生自选自PGT145、PG9、PGT128、PGT121、10-1074、3BNC117、VRC01、PGT151、4E10、10E8、P140、iMab(或MV1变体)或515H7抗体的抗体的CDR或FW被一或多个衍生自选自PGT145、PG9、PGT128、PGT121、10-1074、3BNC117、VRC01、PGT151、4E10、10E8、P140、iMab(或MV1变体)或515H7抗体的不同抗体的CDR或FW取代。
在各个实施方案中，本发明提供了改进的双特异性抗体，其展示了与溶解度、稳定性和治疗活性相关的有利性质。设想到此类抗体可能特别适合大规模商业生产。例如，此类抗体可以表现出提高的溶解度、减少的聚集、减少的沉淀和/或提高的稳定性或对制造期间的降解的抗性。
在一个示例性实施方案中，改进的双特异性抗体是10E8V2.0/iMab抗体的变体(也称为10E8.2/iMab抗体)。在这样的实施方案中，与亲本10E8V2.0/iMab抗体相比，所述变体可以表现出提高的溶解度、稳定性和/或治疗活性(例如，抗病毒活性)。
在一些实施方案中，双特异性抗体(例如，HIV CrossMab抗体)可以包含与10E8V2.0/iMab抗体的重链或轻链序列(即，SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:33或SEQ ID NO:34)至少约60％、至少约61％、至少约62％、至少约63％、至少约64％、至少约65％、至少约66％、至少约67％、至少约68％、至少约69％、至少约70％、至少约71％、至少约72％、至少约73％、至少约74％、至少约75％、至少约76％、至少约77％、至少约78％、至少约79％、至少约80％、至少约81％、至少约82％、至少约83％、至少约84％、至少约85％、至少约86％、至少约87％、至少约88％、至少约89％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或100％相同的序列。
在各个实施方案中，双特异性抗体(例如，HIV CrossMab抗体)可以包含包括相对于10E8V2.0/iMab抗体的重链或轻链序列(即，SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:33或SEQ ID NO:34)的至少约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、40、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79或80个氨基酸改变的序列。
在各个实施方案中，双特异性抗体可以在10E8V2.0/iMab抗体的互补决定区(CDR)(例如，CDR1、CDR2或CDR3区)中包含一个或多个氨基酸改变。在另一个实施方案中，双特异性抗体可以在双特异性抗体的框架区(FW)(例如，FW1、FW2、FW3或FW4区)中包含一个或多个氨基酸改变。在又一个实施方案中，氨基酸改变可以在10E8V2.0/iMab抗体的接合区(J区)(例如，J1、J2、J3、J4、J5、J6或J7区)中。
在一些实施方案中，双特异性抗体包含衍生自10E8V2.0的变体重链(即，SEQ IDNO:34)。在这样的实施方案中，双特异性抗体可以包括在选自重链的L72、I75、F77、L89、Y98、F100a、W100b、Y100e、P100f、P100g、L108和/或L170的位置处的一个或多个突变(SEQID NO：34上的突变位置由Kabat编号系统确定)。在一些实施方案中，双特异性抗体可以包括在选自L72、I75、F77和/或L108的位置处的一个或多个突变。在一些实施方案中，双特异性抗体可以包括选自L72K、I75K、F77T和L108K的一个或多个突变。在一个实施方案中，双特异性抗体包含重链，所述重链包含SEQ ID NO：47的氨基酸序列。
在一些实施方案中，双特异性抗体包含衍生自10E8V2.0的变体轻链(即，SEQ IDNO:33)。在这样的实施方案中，双特异性抗体可以包括在选自轻链的L15、P40、I45和P112的位置处的一个或多个突变(SEQ ID NO：33上的突变位置由Kabat编号系统确定)。在一些实施方案中，双特异性抗体可以包括在选自P40和I45的位置处的一个或多个突变。在一些实施方案中，双特异性抗体可以包括选自P40T和I45K的一个或多个突变。在一个实施方案中，双特异性抗体包含轻链，所述轻链包含SEQ ID NO：46的氨基酸序列。
在一些实施方案中，双特异性抗体包含衍生自MV1的变体轻链(即，SEQ ID NO：1)。在这样的实施方案中，双特异性抗体可以包括在位置52-54处的突变(SEQ ID NO：1上的突变位置由Kabat编号系统确定)。在一些实施方案中，双特异性抗体可以包括在位置52-54处的氨基酸突变。在一些实施方案中，位置52处的氨基酸突变为Asn(N)，位置53处的氨基酸突变为Ser(S)，且位置54处的氨基酸突变为Thr(T)。在一些实施方案中，位置52处的Asn突变是N-连接糖基化的。在一个实施方案中，双特异性抗体包含轻链，所述轻链包含SEQ ID NO：38的氨基酸序列。
在说明性实施方案中，双特异性抗体包含衍生自10E8的重链和轻链，所述重链和轻链分别包含氨基酸序列SEQ ID NO：47和SEQ ID NO:46。所述双特异性抗体还包含衍生自MV1的重链和轻链，所述重链和轻链分别包含氨基酸序列SEQ ID NO：1和SEQ ID NO:2。
对重组结合蛋白的氨基酸序列的修饰使用本领域中的任何已知技术，例如定点诱变或基于PCR的诱变来实现。此类技术描述于例如Sambrook等人，Molecular Cloning:ALaboratory Manual,Cold Spring Harbor Press,Plainview,N.Y.,1989以及Ausubel等人，Current Protocols in Molecular Biology,John Wiley&Sons,New York,N.Y.,1989中。
用于产生抗体如本文所公开的那些抗体的方法是本领域中已知的。例如，编码轻链可变区和/或重链可变区的DNA分子可以使用本文所提供的序列信息来化学合成。合成的DNA分子可以连接到其他适当的核苷酸序列，包括例如表达控制序列，以产生编码所需抗体的常规基因表达构建体。所定义的基因构建体的产生在本领域的常规技能内。可选地，本文所提供的序列可以通过常规杂交技术或聚合酶链反应(PCR)技术，使用合成的核酸探针由杂交瘤克隆出来，所述探针的序列是基于本文提供的序列信息或关于编码重链和轻链的基因的现有技术序列信息。
可以将编码所需抗体的核酸并入(连接到)表达载体中，可以通过常规的转染或转化技术将其引入宿主细胞中。示例性宿主细胞是大肠杆菌细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、人胚胎肾293(HEK 293)细胞、HeLa细胞、幼仓鼠肾(BHK)细胞、猴肾细胞(COS)、人肝细胞癌细胞(例如，Hep G2)和不另外产生IgG蛋白的骨髓瘤细胞。转化的宿主细胞可以在允许宿主细胞表达编码免疫球蛋白轻链和/或重链可变区的基因的条件下生长。特定的表达和纯化条件将取决于所用的表达系统而有所不同。
在各个实施方案中，本发明的双特异性抗体(例如，HIV CrossMab抗体)是在疗法中使用。例如，双特异性抗体(例如，HIV CrossMab抗体)可以用于中和哺乳动物(例如，人患者)中的HIV。例如，本发明的抗体可以结合至HIV，以便部分或完全地抑制所述病毒的一种或多种生物活性。在一个实施方案中，双特异性抗体(例如，HIV CrossMab抗体)中和R5嗜性HIV。在另一个实施方案中，双特异性抗体(例如，HIV CrossMab抗体)中和X4嗜性HIV。在又一个实施方案中，双特异性抗体(例如，HIV CrossMab抗体)中和R5X4双嗜性HIV。在一些实施方案中，使用抗体来中和哺乳动物中的HIV包括向所述哺乳动物施用治疗有效量的所述抗体。
通常，活性组分的治疗有效量在例如约0.1mg/kg至约100mg/kg、例如约1mg/kg至约100mg/kg、例如约1mg/kg至约10mg/kg患者体重的范围内。在各个实施方案中，活性组分的治疗有效量在约0.01mg/kg至约30mg/kg患者体重的范围内，例如为约0.01mg/kg、约0.02mg/kg、约0.03mg/kg、约0.04mg/kg、约0.05mg/kg、约0.06mg/kg、约0.07mg/kg、约0.08mg/kg、约0.09mg/kg、约0.1mg/kg、约0.2mg/kg、约0.3mg/kg、约0.4mg/kg、约0.5mg/kg、约0.6mg/kg、约0.7mg/kg、约0.8mg/kg、约0.9mg/kg、约1mg/kg、约1.1mg/kg、约1.2mg/kg、约1.3mg/kg、约1.4mg/kg、约1.5mg/kg、约1.6mg/kg、约1.7mg/kg、约1.8mg/kg、1.9mg/kg、约2mg/kg、约3mg/kg、约4mg/kg、约5mg/kg、约6mg/kg、约7mg/kg、约8mg/kg、约9mg/kg、约10mg/kg、约11mg/kg、约12mg/kg、约13mg/kg、约14mg/kg、约15mg/kg、约16mg/kg、约17mg/kg、约18mg/kg、约19mg/kg、约20mg/kg、约21mg/kg、约22mg/kg、约23mg/kg、约24mg/kg、约25mg/kg、约26mg/kg、约27mg/kg、约28mg/kg、约29mg/kg、约30mg/kg体重，包括所有值及介于其间的范围。
在一些实施方案中，活性组分的治疗有效量是介于约1mg/kg至10mg/kg之间、介于约10mg/kg至20mg/kg之间、介于约20mg/kg至30mg/kg之间、介于约30mg/kg至40mg/kg之间、介于约40mg/kg至50mg/kg之间、介于约50mg/kg至60mg/kg之间、介于约60mg/kg至70mg/kg之间、介于约70mg/kg至80mg/kg之间、介于约80mg/kg至90mg/kg之间或介于约90mg/kg至100mg/kg之间的任何值。
在一些实施方案中，活性组分的治疗有效量是静脉内(IV)递送的约1mg/kg、约2mg/kg、约3mg/kg、约6mg/kg、约10mg/kg、约20mg/kg、约30mg/kg或约60mg/kg。
在一些实施方案中，活性组分的治疗有效量是皮下(s.c.)或肌肉内(i.m)递送的约2.5mg/kg、约5mg/kg、约10mg/kg或约20mg/kg。
施用的量将取决于以下变量，诸如要治疗的疾病或适应症的类型和程度、患者的整体健康状况、抗体的体内效力、药物制剂和施用途径。初始剂量可以增加到超出上限，以便迅速地实现所需血液水平或组织水平。可选地，初始剂量可以小于最佳值，并且剂量可以在治疗过程期间逐步增加。人剂量可以例如在设计成从例如0.5mg/kg增至20mg/kg的常规I期剂量递增研究中被优化。给药频率可以取决于诸如施用途径、剂量和被治疗的疾病等因素而有所不同。示例性给药频率是每天多于一次、约每天一次、约一天两次、约一天三次、约一天四次、约一天五次、约每隔一天、约每三天、约每周一次、约每两周一次、约每月一次、约每两个月一次、约每三个月一次、约每六个月一次或约每年一次。基于抗体的药物的配制在本领域的普通技术内。
在各个实施方案中，本发明的抗体可以长期施用。例如，抗体可以施用至少约1周、至少约4周、约8周或至少约12周。在一些实施方案中，方案持续至少约1个月、至少约6个月、至少约12个月、至少约1年、至少约2年、至少约3年、至少约4年、至少约5年、至少约6年、至少约7年、至少约8年、至少约9年、至少约10年、至少约15年、至少约20年、至少约30年、至少约40年或至少约50年。
对于治疗用途，抗体可以与药学上可接受的载剂组合。如本文所用，“药学上可接受的载剂”是指适用于与人和动物的组织接触而没有过度的毒性、刺激、过敏反应或其他问题或并发症，具有合理的利益/风险比的缓冲剂、载剂和赋形剂。所述载剂在与制剂的其他成分相容且对接受者无害的意义上应该是“可接受的”。药学上可接受的载剂包括与药物施用相容的缓冲剂、溶剂、分散介质、包衣、等渗和吸收延迟剂等。这类介质和试剂用于药学活性物质的用途在本领域中是已知的。
含有抗体如本文所公开的那些抗体的药物组合物可以以剂量单位形式存在，并且可以通过任何合适的方法来制备。药物组合物应被配制成与其预期施用途径相容。施用途径的实例是静脉内(IV)、皮内、吸入、经皮、局部、经粘膜和直肠施用。在一个实施方案中，施用本发明的抗体的途径是IV输注。有用的制剂可以通过药学领域中熟知的方法来制备。例如，参见Remington's Pharmaceutical Sciences，第18版(Mack Publishing Company,1990)。
在一些实施方案中，药物组合物被配制成适于经口施用的组合物。用于经口递送的组合物可以是例如片剂、锭剂、水性或油性混悬剂、颗粒剂、粉剂、散剂、乳剂、胶囊剂、糖浆剂或酏剂的形式。经口施用的组合物可以包含一种或多种试剂，例如甜味剂，诸如果糖、阿斯巴甜或糖精；调味剂，诸如薄荷、冬青油或樱桃红；着色剂；及防腐剂，以提供药学上可口的制剂。
在一些实施方案中，药物组合物被配制成适于肠胃外施用的组合物。适于肠胃外施用(例如，静脉内、皮下、肌肉内或腹膜内注射和输注)的剂型包括例如溶液、混悬液、分散体、乳液等。它们还可以以无菌固体组合物(例如，冻干组合物)的形式制造，其可在临用前溶解或悬浮于无菌可注射介质中。它们可以含有例如悬浮剂或分散剂。
在一些实施方案中，所述组合物另外可以包含药学上可接受的赋形剂或载剂。示例性赋形剂包括柠檬酸钠、磷酸二钙等，和/或a)填充剂或增量剂，诸如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇、硅酸、微晶纤维素和面包师专用糖(Bakers Special Sugar)等，b)粘合剂，例如像羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖、阿拉伯胶、聚乙烯醇、聚乙烯聚吡咯烷酮、甲基纤维素、羟丙基纤维素(HPC)和羟甲基纤维素等，c)湿润剂，诸如甘油等，d)崩解剂，诸如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、藻酸、某些硅酸盐、碳酸钠，交联聚合物，诸如交聚维酮(交联聚乙烯吡咯烷酮)、交联羧甲基纤维素钠(交联羧甲基纤维素钠)、淀粉乙醇酸钠等，e)溶液阻滞剂，诸如石蜡等，f)吸收促进剂，诸如季铵化合物等，g)润湿剂，例如像鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯等，h)吸收剂，诸如高岭土和膨润土等，及i)润滑剂，诸如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠、山嵛酸甘油酯等，以及这类赋形剂的混合物。本领域的技术人员将认识到，特定的赋形剂可以具有两种或更多种功能。
药物制剂优选是无菌的。例如，可以通过无菌过滤膜进行过滤来实现灭菌。在组合物被冻干的情况下，可以在冻干和复原之前或之后进行过滤灭菌。
实施例
实施例1.HIV CrossMab抗体的构建和表征
图[[13]]13A-E和图14A-E[[14]]展示一些基于iMab的CrossMab具有比亲本Ab大的效力和广度。除非另外指出，否则所有基于iMab的双特异性抗体都使用MV1变体来构建。IC80(即赋予病毒感染的80％中和的抗体浓度)是一种评价抗HIV的抗体效力的方法。IC80数值(图的y轴表示抗体浓度(μg/ml))越低，抗体在中和特定HIV毒株或分离株时越有效力。IC50(即赋予病毒感染的50％中和的抗体浓度)是另一种评价抗HIV的抗体效力的方法。IC50数值(图的y轴表示抗体浓度(μg/ml))越低，抗体在中和特定HIV毒株或分离株时越有效力。
各种抗体集是针对一大批HIV-1假病毒(118种不同的HIV病毒分离株)进行测试，这些假病毒通过地理、分支、嗜性和感染阶段成为HIV包膜多样性的代表。使用IC80和IC50来评价抗病毒效力强度和广度。图13E和14E清楚地展示，与亲本抗体iMab和10E8相比，两者一起的双特异性CrossMab(10E8/iMab)更强效地中和几乎所有的HIV病毒(每种病毒被指示为一个点)。其他抗体集(用于制造145/iMab、117/iMab、128/iMab和151/iMab)与其亲本组分相比有时增强HIV效力，而有时并不增强。
如图15A-E中所示，抗体iMab在细胞-细胞中和测定中也相对强效。PGT145、3BNC117、10E8、PGT128和PGT151在中和无细胞的病毒感染时相对强效，但在细胞-细胞传播测定中的中和病毒方面较差。产生包括PGT145、3BNC117、10E8、PGT128和PGT151与iMab的双特异性抗体使得这些嵌合抗体在细胞-细胞传播测定中的中和病毒方面具有活性。可以看出，在这些比较研究中，10E8/iMab是最强效的抗体。还发现，10E8/iMab在阻止体外细胞-细胞传播方面最具活性。
如图16中所示，10E8/iMab的改进效力在统计上是显著的。图3示出了改进的效力需要抗体的共价键联，即，CrossMab格式(由于两种亲本抗体iMab和10E8的共同施用提供比融合的及物理上连接的双特异性10E8/iMab抗体低的MPI)。图10、11A-E、12A-E、13A-E和14A-E提供了iMab衍生的CrossMab抗体优于其亲本抗体的改进的效力的进一步证据。
总之，发现对于基于iMab的CrossMab(与PGT145、3BNC117、PGT151、PGT128和10E8融合)，117/iMab改进广度而不改进效力；145/iMab、151/iMab和128/iMab改进广度和效力；且10E8/iMab显著改进广度和效力。就表位位置/可接近性及中和的潜在模型来说，10E8/iMab似乎表现出附着前中和与附着后中和；145/iMab、151/iMab和117/iMab似乎表现出附着前中和；且117/iMab可能显示空间限制的迹象并且对于某些病毒，潜在地降低效力。10E8/iMab还表现出针对HIV细胞至细胞传播的强效活性。
同样如在图13A-D和14A-D中所示，基于Pro 140的CrossMab活性有时比其亲本抗体和对应的基于iMab的CrossMab弱，如由达到IC80和IC50必需的高浓度所示。
这四种Mab与宿主细胞受体CCR5经由被称为Pro 140的另一宿主细胞受体结合抗体的锚定与其各自的亲本抗体相比不改进抗病毒效力或广度(如由针对一大批HIV分离株的IC80所量度)。这些图指示，这四种抗体的基于Pro140的CrossMab比其相应的基于iMab的CrossMab弱(基于Pro140的CrossMab与基于iMab的CrossMab的IC50和IC80比较)。
如图13E和14E中所示，10E8/P140(第五种基于Pro 140的CrossMab)比其亲本抗体和10E8/iMab CrossMab更强效。这些图展示，亲本mAb Pro140(图13E和14E中数据点的最右列)、双特异性CrossMab 10E8/P140(图13E和14E中数据点的右侧第二列)和亲本mAb 10E8(图13E和14E中数据点的中心列)针对一大批HIV分离株的效力(IC80或IC50)的比较。这些图还展示，亲本mAb iMab(图13E和14E中数据点的最左列)、双特异性CrossMab 10E8/iMab(图13E和14E中数据点的左侧第二列)和亲本mAb 10E8(图13E和14E中数据点的中心列)针对一大批HIV分离株的效力(IC80或IC50)的比较。图13E和14E中数据点的左侧第二列和右侧第二列展示双特异性CrossMab 10E8/iMab与10E8/P140针对一大批HIV分离株的效力(IC80或IC50)的比较。
已知Pro 140不具有抗X4 HIV病毒的活性，因为X4病毒使用CXCR4作为HIV-1进入的共受体，而Pro 140结合至CCR5。单独的10E8具有非常弱的抗X4病毒活性。然而，双特异性CrossMab10E8/Pro 140可以比任一种亲本抗体更好地中和迄今测试的所有X4病毒。图4A-J展示了10E8、Pro 140和10E8/P140双特异性CrossMab抗体在抑制HIV的各种毒株方面的有效性。
如图5A-G中所示，10E8/Pro140 CrossMab是比共同施用两种亲本抗体更强效的针对各种HIV毒株的抑制剂，这表明在用这种特定的双特异性抗体情况下的协同，而不仅仅是相加的效力增强。
如图6A-D中所示，10E8融合到非膜结合抗体(X19)上所得到的CrossMab不提供增强的效力，如在与膜结合的10E8/P140比较时可见。因此，10E8/P140 CrossMab的效力似乎需要将10E8锚定到细胞膜上。然而，单独的膜结合不提供这些CrossMab的增强的效力。图7A-H显示在HER2上锚定10E8不提供与在CCR5上锚定10E8相比显著的效力增强。10E8特异性锚定到病毒受体(在这种情况下，CCR5经由Pro 140，或CD4经由iMab)提供增强的抗病毒活性。
Δ10E8是10E8 mAb在轻链FR3中具有一个氨基酸缺失的突变版本。与10E8相比，Δ10E8具有弱得多的表位结合活性，如图8A-C中所示。然而，Δ10E8一旦锚定到细胞受体上(通过在CrossMab抗体中组合Δ10E8与iMab，iMab特异性结合细胞受体CD4)，图8D-E显示其抑制活性得到改善。这些数据提示，特异性细胞受体锚定，即锚定在病毒受体或病毒共受体上，在增强这种HIV抗体的活性方面的贡献。但是，虽然Δ10E8/P140 CrossMab具有与Δ10E8相比改进的抗病毒活性，但是其仍然不如10E8/P140 CrossMab强效。Δ10E8/P140CrossMab在中和R5病毒方面比其在中和X4病毒方面相对更有效。
4E10是已知不如抗gp41 MPER mAb 10E8强效的抗gp41 MPER mAb。与Δ10E8的结果相似，图20和21A-G显示，在共受体CCR5上锚定4E10(在CrossMab抗体中，经由Pro 140)显著增强4E10的抗病毒活性。综上所述，这表明许多抗gp41 MPER Ab锚定到CCR5或CD4(通过在CrossMab双特异性抗体中组合MPER Ab与P140或iMab)上可以大大改进各自的抗gp41MPER Ab的效力和广度。
多个参数有助于增强某些双特异性CrossMab抗HIV的活性，包括亲本Ab效力、亲和力及附着前中和能力和附着后中和能力。具体来说，10E8/Pro140 CrossMab代表在克服有活力的、空间和时间限制，靶向在进入过程中的顺序/相互依赖步骤、表位位置/可接近性、结合亲和力、附着前中和和附着后中和以及结合几何性质方面的有效组合。如图20中所示，与Δ10E8/Pro140和10E8/Pro140相比，4E10/Pro140具有对MPER的更大结合亲和力。图9A-G示出了10E8/Pro140、Δ10E8/Pro140和4E10/Pro140及其亲本抗体10E8、Δ10E8和4E10针对HIV的各种毒株的抑制效力。图10、13A-E、14A-E、15A-E、16和17A-B提供了CrossMab抗体与其个别的亲本抗体以及组合的亲本抗体相比更大的效力的额外证据。
10E8/iMab和10E8/Pro140 CrossMab的提高的抗病毒覆盖率在图10中展示，其描绘了几种抗体针对HIV的效力和广度。x轴表示特定抗体的浓度，y轴表示在特定浓度下由特定抗体中和的一大批HIV病毒分离株的百分比，且每条线表示所评价的不同抗体。沿x轴的最左侧线和那些可以紧密接近或达到y轴上100％的线表示抗HIV的高度强效和广泛的抗体。10E8/P140 CrossMab和10E8/iMab CrossMab是其中相对于病毒覆盖率和效力两者最有效的抗体，并且比其亲本抗体显著更有效。
图18A-H和19A-C示出了CrossMab 10E8/515H7抗体与其亲本抗体和先前讨论的抗体相比的效力。CrossMab抗体的效力似乎不与细胞膜蛋白靶标的密度直接相关，因为CCR5(Pro140的靶标)的密度小于CD4(伊巴利单抗的靶标)的密度，但10E8/Pro140衍生的CrossMab抗体的效力比10E8/iMab衍生的CrossMab抗体的效力更大。
如图22A-B中所示，在尺寸排阻色谱中单一尖峰的缺乏表示一种类型的不稳定性，其代表10E8和10E8衍生的CrossMab抗体的多种分子种类。表1列举了用于解决10E8不稳定性的各种方法和制剂修改。然而，如由SEC或尺寸排阻色谱柱中的“X”所指示，这些修改在提供单一尖峰方面是不成功的。
表1：解决10E8不稳定性的方法和制剂筛选
条件 SEC 目的
EDTA* X 螯合金属离子，↓酶活性
乙酸* X ↓pH，稳定质子化形式的游离硫醇，↓还原活性
L赖氨酸* X 针对还原组分的竞争性抑制剂
CuSO4* X 维持呈氧化形式的还原组分，酶抑制剂
3天收获 X 减少的细胞死亡，↓酶活性
SEC运行缓冲液条件 X 修改分析条件
His制剂缓冲液 X 修改分析条件
10E8重链与4E10轻链的配对解决不稳定性问题，如图23中所示，产生功能性但效力较低的抗体。此结果表明，10E8的不稳定性是由于轻链所致。图24B-C中所示的10E8轻链的各种修饰，如去除C末端丝氨酸、工程改造λ-可变区和κ-恒定区嵌合体、工程改造10E8重链与轻链之间的额外二硫键、或基因移植非10E8抗体的κ轻链区到10E8轻链上，没有完全解决10E8的不稳定性。如图25和26A-B中所示，不稳定性可能是由于10E8的互补决定区(“CDR”)与框架区(“FW”)的组合。使用10E8-HC/4E10-LC，如图25中所示，每个10E8轻链CDR被个别地或以小组移植到4E10LC中。10E8 LC CDR2和CDR3的添加耐受良好，但10E8 LCCDR1的添加破坏单峰。当所有10E8 CDR都被移植到4E10上时，峰是宽的。移植10E8CDR或框架到其生殖细胞系轻链λ上产生单峰，如图26A中所示，但MPER结合和HIV中和的有效性降低。表2总结所测试的10E8轻链变体及其功效。
表2：产生的10E8 LC变体
修饰 表达 MPER结合 SEC 中和
λLC’→ΔS √ √ X √
λLC’→κLC √ √ X √
LC CDR移植(κLC Ab1) √ ↓ ？
LC CDR移植(κLC Ab2) √ ↓ ？
H-L S-S键 X X
10E8-H/4E10-L √ ↓ √ ↓
10E8-H/4E 10-L CDR1(10E8) X X
10E8-H/4E 10-L CDR2(10E8) √ ↓ √ ↓
10E8-H/4E 10-L CDR3(10E8) √ ↓ √ ↓
10E8-H/4E 10-L CDR123(10E8) √ ↓ ？ ↓
如图27中所示，通过尺寸排阻色谱，发现10E8抗体的变体H6L10为有活性的、非自体反应性的和稳定的。如图28中所示，发现H6L10/Pro 140及其亲本抗体在小鼠中具有可比较的药物动力学图谱。然而，如图29中所示，在双特异性抗体中10E8的H6L10变体(称为10E8v1.0)与P140组合在针对一大批HIV毒株测试时实质上不如10E8/P140强效。在双特异性抗体中10E8的H6L10变体(称为10E8v1.0)与iMab组合在针对一大批HIV毒株测试时与10E8/iMab相比保留相同相对程度的效力，但10E8v1.0/iMab具有与10E8/iMab相同的不稳定性，如通过尺寸排阻色谱法所测定并在表3中由X指示。在一个实施方案中，H6L10变体还可以包括S74W突变。
下表3列出了示例性变体、其活性、尺寸排阻色谱结果和药物动力学(“PK”)结果(也参见图46)。
表3：稳定的同时保留抗HIV活性的示例性变体
构建体 活性 SEC PK
10E8/P140 +++++ X X
10E8<sub>V1.0</sub>/P140 ++ √ √
10E8<sub>v1.1</sub>/P140 ++++ √ √
10E8<sub>V2.0</sub>/P140 +++ X ND
10E8<sub>V3.0</sub>/P140 +++++ √ X
10E8/iMab +++ X X
10E8<sub>v1.0</sub>/iMab +++ X X
10E8<sub>v1.1</sub>/iMab +++ X X
10E8<sub>v2.0</sub>/iMab ++++ √ √
10E8<sub>v3.0</sub>/iMab ++++ √ X
如上所示，10E8V1.0是10E8的体细胞变体，称为H6L10。作为mAb，H6L10具有通过SEC得到的单峰，但与10E8相比活性降低。H6L10/Pro140 CrossMab具有单一SEC峰和良好的小鼠PK，但抗HIV活性降低。H6L10/iMab CrossMab具有双重SEC峰和不良的小鼠PK，但其抗HIV活性与10E8/iMab大致相同。10E8V1.1包括H6L10中的单点突变。当在CrossMab双特异性中与Pro140配对时，这种构建体具有单一SEC峰和良好的小鼠PK。其抗HIV活性与10E8V1.0/Pro140相比得以改进，但仍稍低于10E8/Pro140的活性。当在CrossMab双特异性中与iMab配对时，这种构建体具有双重SEC峰和不良的小鼠PK，且其抗HIV的活性仍与10E8/iMab和10E8V1.0/iMab大致相同。10E8V2.0是10E8的嵌合抗体变体，其中FW1、CDR1和一部分的FW2来自10E8V1.0且其中剩余部分的FW2、CDR2、FW3、CDR3和FW4来自10E8。当在CrossMab双特异性中与Pro140配对时，这种构建体具有双重SEC峰且与10E8/Pro140相比具有降低的抗HIV活性。当在CrossMab双特异性中与iMab配对时，这种构建体具有单一SEC峰、良好的PK，且具有与10E8/iMab相比改进的抗HIV活性。10E8V3.0是10E8的体细胞变体，称为H11L1。H11L1/Pro140 CrossMab具有单一SEC峰和比任何其他10E8/Pro140构建体(包括所鉴别的最初构建体)好的抗HIV活性，但由于自体反应性而具有不良的小鼠PK。H11L1/iMab CrossMab具有单一SEC峰和比所鉴别的最初10E8/iMab好的抗HIV活性和与针对10E8V2.0/iMab观察到的大致相当的活性，但由于自体反应性而具有不良的小鼠PK。
当与Pro140或iMab配对时，在特定CrossMab双特异性的环境中产生单一SEC峰的10E8变体是不同的。似乎这些CrossMab双特异性抗体的10E8臂的稳定性是环境依赖性的，且将取决于所配对的抗体而有所不同。因此，鉴别一种变体(10E8V1.1)，当与Pro140配对时，其根据SEC是稳定的且具有良好的小鼠PK和良好的抗HIV活性。还鉴别了另一种变体(10E8V2.0)，其根据SEC是稳定的，具有良好的小鼠PK和比最初鉴别的10E8/iMab好的抗HIV活性。
下表4描述了所测试的变体的自体反应性，其中“ANA”是指抗核活性，且“ACA”是指抗心磷脂活性。
表4：体外自体反应性评估
抗体(50μg/mL) ANA ACA *Hep-2染色得分
阴性对照 - -
低阳性对照 + +
高阳性对照 ++++ ++++
iMab - - ’
Pro140 - - ’
10E8<sub>V1.0</sub> - - 0
10E8<sub>v1.1</sub> - - ’
10E8<sub>V2.0</sub> - - ’
10E8<sub>V3.0</sub> -/+ +/++ 0.5
10E8<sub>V1.0</sub>/P140 - - ’
10E8<sub>v2.0</sub>/iMab - - ’
10E8<sub>v1.1</sub>/P140 - - ’
10E8<sub>v3.0</sub>/iMab - - ’
10E8<sub>V3.0</sub>/P140 - -/+ ’
图30描绘了10E8和衍生自几种10E8变体和iMab或P140的CrossMab抗体在小鼠模型中的药物动力学。如图[[31]]31A-D和32A-B[[32]]中所示，10E8v1.1/P140和10E8v2.0/iMab改进抗HIV活性和稳定性，并在4℃下储存在PBS中时具有良好的稳定性。图33描绘了10E8v2.0/iMab(N297A)的天然质谱分析。图34A-C比较10E8v1.1/P140和10E8v2.0/iMab对HIV分支C组的活性，并且比较了它们的IC50和IC80功效。图35和36比较10E8v1.1/P140、10E8v2.0/iMab和各种单克隆抗体抗HIV的效力。
实施例2.具有改进的溶解度、稳定性和/或效力的HIV CrossMab抗体的开发
进行实验以开发具有改进的溶解度、稳定性和活性的10E8/iMab CrossMab抗体。
最初，在10E8.2/iMab抗体(也称为10E8v2.0/iMab抗体)的表面上鉴别了许多疏水残基，其可以负面影响双特异性抗体的溶解度和稳定性。疏水残基呈现在下表5中(参考Kabat编号系统)：
表5.
位置 残基
L15 Leu
L40 Pro
L45 Ile
L112 Pro
H72 Leu
H75 Ile
H77 Phe
H89 Leu
H98 Tyr
H100a Phe
H100b Trp
H100e Tyr
H100f Pro
H100i Pro
H108 Leu
H170 Leu
疏水残基单独或组合突变以产生10E8.2/iMab变体，评估了它们抗HIV的功能活性和体内药物动力学图谱(参见图37A-B)。各种10E8.2/iMab变体的氨基酸序列在本文别处提供。
具体地，进行体外中和测定以测试10E8.2/iMab变体抗HIV的活性。如先前Sun等人，2014.JAIDS.66,473-483中所述制备假病毒。如前所述，使用TZM-bl细胞和HIV-1假病毒，用单周期测定评估病毒中和(Seaman等人，2010.J.Virol.84,1439-1452)。如图37A中所示，与亲本10E8.2/iMab抗体相比，一些10E8.2/iMab变体(例如，10E8.2.1/iMab、10E8.2.2/iMab和10E8.2.3/iMab抗体)在体外HIV-1中和测定中保留功能活性。
对于体内药物动力学分析，将BALB/c小鼠分成三组，并且对每组小鼠腹膜内施用100μg的所示抗体。在抗体施用后第1、2、4、7和10天从所有动物中抽血，分离血清并分析个别小鼠中的抗体水平。在4℃下将CoStar 96孔EIA/RIA板用100ng/孔山羊抗人IgG Fc-γ片段涂覆过夜。在室温下将板用PBS+Tween洗涤三次，并用含有5％乳和0.5％BSA的PBS封闭2小时。将来自治疗过的动物的小鼠血清和用于标准曲线的PBS中的纯化抗体以在含有2％乳和0.2％BSA的PBS中的1:2连续稀释度添加到孔中，并温育2小时。洗涤后，在室温下将过氧化物酶缀合的山羊抗人IgG温育1小时。通过TMB液体底物体系检测样品，并在450nm下进行分光光度读数。如图37B中所示，一些10E8.2/iMab变体(例如，10E8.2.1/iMab、10E8.2.2/iMab和10E8.2.3/iMab抗体)表现出与亲本10E8.2/iMab抗体相似的药物动力学图谱。
另外，在热应激诱导条件下评价变体的沉淀图谱。具体地，在293细胞中表达10E8.2/iMab变体，使用蛋白A柱纯化，交换到PBS溶液(pH 7.4)中，并使用具有50kDa的标称分子量限值的膜浓缩至＞30mg/mL。然后将样品在50℃下温育，并在指示的时间点下目测评估沉淀。热应激分析的结果示于图37C中。这些结果指示10E8.2.3/iMab变体保留了通过体外中和得到的有利抗病毒活性、有利的体内药物动力学和热应激诱导条件下增加的溶解度(减少的沉淀)的最佳组合。
基于10E8.2.3/iMab在沉淀测定中的有利性质，由这种双特异性抗体主链变体产生额外的亲水性变体和组合。在热应激诱导条件下温育后，通过尺寸排阻色谱法(SEC)评价这些新变体中的每种的聚集潜力(参见图38A-B)。具体来说，使用SEC来评估双特异性抗体变体的物理化学均匀性且自非单体种类解析单体。结果指示变体10E8.4/iMab和10E8.2.10/iMab表现出最低聚集，如图38B中介于7mL与11mL之间的减小的峰大小所指示。对10E8.4/iMab变体进行额外的溶解度和稳定性研究。与亲本10E8.2/iMab抗体相比，这种变体包含6个疏水残基到亲水残基突变的组合。图45A-B提供了亲本10E8.2/iMab抗体和10E8.4/iMab变体的序列比对。
基于10E8.4/iMab抗体的有利的功能和药物动力学特征以及减弱的沉淀和聚集特征，进行额外的研究以评价与10E8.2/iMab抗体相比，10E8.4/iMab抗体的溶解度、浊度、热稳定性和强制降解特征。
例如，测定10E8.4/iMab抗体在4℃下的溶解度。在一组实验中，将10E8.2/iMab和10E8.4/iMab抗体各自缓冲液交换成靶缓冲液，并通过在4℃下在3000-5000g下超速离心来浓缩。不同时间点下的蛋白质浓度使用NanoDrop 2000分光光度计由280nm下的吸光度测定。所有测量重复两次，每次用2.5μL样品，并且取平均值，然后将蛋白质浓度对时间作图。所达到的最大蛋白质浓度被确定为蛋白质的溶解度。如图39A-B中所示，在超过50mg/mL的浓度下，与10E8.2/iMab抗体相比，10E8.4/iMab抗体在缓冲液1(乙酸盐缓冲液，pH 4.5)和缓冲液2(组氨酸缓冲液，pH 5.5)中始终显示出更高的蛋白质浓度和溶解度。
还分析了10E8.4/iMab抗体的浊度特征。在分析中，将10E8.2/iMab和10E8.4/iMab抗体各自缓冲液交换成靶缓冲液，并通过在4℃下在3000-5000g下超速离心来浓缩。使用NanoDrop 2000分光光度计测量280nm和350nm下随时间而变的吸光度。所有测量重复两次，每次用2.5μL样品，并且取平均值，并且对于超速离心过程期间的相似时间点，将蛋白质浓度(A280)对浊度(A350)作图。如图40中所示，10E8.2/iMab和10E8.4/iMab抗体两者的浊度随时间随蛋白质浓度而增加。具体来说，在两种测试的缓冲液条件下，在超过100mg/mL的相同蛋白质浓度下，10E8.2/iMab抗体显示出比10E8.4/iMab高的浊度。
另外，使用差示扫描量热法(DSC)将10E8.4/iMab抗体的热稳定性图谱与亲本10E8.2/iMab抗体进行比较。DSC是一项热分析技术，其中测量提高样品和参考样品的温度所需的热量的差异作为温度的函数。热谱图中的每个峰对应于与特定过程诸如结晶或熔融相关的热效应，并且是随着温度提高，分子稳定性的指示。为了测定10E8.2/iMab和10E8.4/iMab抗体的热稳定性，在4℃和3000-5000g的条件下使用超滤离心装置将每种双特异性抗体缓冲液交换成相同的缓冲液组合物。然后将蛋白质浓度调节至约10mg/mL，并用0.22-μm过滤器无菌过滤。然后用参考缓冲液将样品稀释至1mg/mL。将参考缓冲液(400μL)添加到96孔板的奇数孔中，且将400μL样品添加到同一板的偶数孔中。以200℃/小时的速率从20℃至90℃扫描这些板。热谱图的分析用MicroCai VP-毛细管DSC
自动数据分析软件进行。如图41中所示，当通过DSC评价时，10E8.2/iMab和10E8.4/iMab抗体都表现出相似的热稳定性。
图42示出了10E8.2/iMab和10E8.4/iMab抗体强制降解后浊度分析的结果。在4℃和3000-5000g的条件下使用超滤离心装置将10E8.2/iMab和10E8.4/iMab抗体各自缓冲液交换成相同的缓冲液组合物。然后将蛋白质浓度调节至约10mg/mL，并用0.22-μm过滤器无菌过滤。然后将样品在50℃下温育以诱导强制降解，并在温育开始后0天、3天和6天通过350nm下的吸光度测量10E8.2/iMab和10E8.4/iMab的离心前样品和离心后样品两者的浊度发展。结果指示，在所有的研究时间点下，10E8.2/iMab抗体表现出比10E8.4/iMab总体更高的浊度。
还评估了10E8.2/iMab和10E8.4/iMab抗体强制降解后的分子纯度。在4℃和3000-5000g的条件下使用超滤离心装置将10E8.2/iMab和10E8.4/iMab抗体各自缓冲液交换成两种缓冲液组合物。然后将蛋白质浓度调节至约10mg/mL，并用0.22-μm过滤器无菌过滤。然后将样品在50℃下温育以诱导强制降解，并在温育开始后0天、3天和6天通过SDS-凝胶毛细管电泳在非还原条件下测定分子纯度的百分比。为了进行SDS-凝胶毛细管电泳，通过以20:1:0.7的体积比混合样品缓冲液、10％SDS和100mM N-乙基马来酰亚胺来制备变性溶液。将两微升样品和7μL变性溶液充分混合，在70℃下温育10分钟并离心。将35μL H2O添加到样品中，然后将42μL混合物转移到96孔板中并以4000rpm离心20分钟以除去气泡。在加载板后，样品被浸、染色、分离并在填充了脱色凝胶、荧光染料和标志物的微芯片中检测。然后由LabChip GX Reviewer分析数据以确定每个样品中完整的双特异性抗体分子对较小抗体片段的百分比。如下表6中所示，在所有的研究时间点下，在两种缓冲液中，10E8.4/iMab抗体均显示出比10E8.2/iMab抗体好的完整分子纯度：
表6.
Figure BDA0002640039350000731
还进行了聚集分析。具体地，在4℃和3000-5000g的条件下使用超滤离心装置将10E8.2/iMab和10E8.4/iMab抗体各自缓冲液交换成两种缓冲液组合物。然后将蛋白质浓度调节至约10mg/mL，并用0.22-μm过滤器无菌过滤。然后将样品在50℃下温育以诱导强制降解，且在每个蛋白质样品中的高分子量(HMW)分数
是通过SE-HPLC(尺寸排阻色谱法)来测定作为聚集的量度。使用Agilent1260Infinity系统和TSKGel G3000SWXL柱(300×7.8mm，5μm)进行尺寸排阻色谱。流动相为50mM PB，300mM NaCl，pH7.0±0.2，且流速设定为1.0mL/min。将样品离心(4℃下，约10000rpm，2分钟)，注入并在280nm下检测以测定样品中HMW的百分比。如下表7中所示，尽管10E8.4/iMab抗体在T0下具有更大的HMW群，但与10E8.2/iMab相比，其显示在强制降解诱导条件下温育期间HMW百分比随时间的过去不那么快速的变化。
表7.
Figure BDA0002640039350000732
Figure BDA0002640039350000741
另外，如图43中所示，在体外比较了10E8.2/iMab与10E8.4/iMab抗体的功能活性。具体来说，如前所述，使用TZM-bl细胞和118种代表不同分支和起源的HIV-1Tier-2 HIV-1包膜假病毒，用单周期测定评估病毒中和(Seaman等人，2010.J.Virol.84,1439-1452)。结果指示，除了在热应激诱导条件下的溶解度改进、浊度降低和生物物理学性质的改进之外，10E8.4/iMab抗体还表现出与10E8.2/iMab相比，针对一大批HIV-1包膜假型病毒的中和活性大约2.5倍的提高。
还在体内比较了10E8.2/iMab与10E8.4/iMab抗体的功能活性。将免疫缺陷NSG小鼠(NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ)用人的造血干细胞复原，并在抗体治疗开始前四周用Tier-2分支B HIV-1JR-CSF感染。然后用允许在人源化小鼠中进行评价的10E8.2/iMab或10E8.4/iMab的修饰变体每周治疗小鼠。如图44中所示，在用10E8.2/iMab治疗的小鼠中观察到约1.7log的最大平均病毒载量降低，且在用10E8.4/iMab治疗的小鼠中观察到约2.4log的最大平均病毒载量降低。”
本文中使用的术语和表述被用作描述而不是限制的术语和表述，并且在使用这些术语和表述时，没有想要排除所显示和描述的特征的任何等效物或其部分。另外，已经描述了本发明的某些实施方案，对于本领域的普通技术人员将显而易见的是，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，可以使用结合本文所公开的概念的其他实施方案。因此，所描述的实施方案在所有方面都被视为仅是说明性而不是限制性的。
序列表
<110> 艾伦戴蒙德艾滋病研究中心 (Aaron Diamond AIDS Research Center)
<120> 双特异性HIV-1中和抗体
<130> AJ3171PT2003
<140> US 15/850,832
<141> 2017-12-21
<150> US 15/414,822
<151> 2017-01-25
<150> US 14/558,341
<151> 2014-12-02
<150> US 61/910,685
<151> 2013-12-02
<160> 47
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成肽
<400> 1
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Met Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
20 25 30
Thr Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Ser Tyr Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser
115 120 125
Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys
130 135 140
Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu
145 150 155 160
Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr
180 185 190
Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val
195 200 205
Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215
<210> 2
<211> 456
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成肽
<400> 2
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Val Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Val Ile His Trp Val Arg Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Asp Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Asp Tyr Asp Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Lys Asp Asn Tyr Ala Thr Gly Ala Trp Phe Ala Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Ala Ala Pro
115 120 125
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
130 135 140
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
145 150 155 160
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
165 170 175
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
180 185 190
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
195 200 205
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
210 215 220
Asn Arg Gly Glu Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
225 230 235 240
Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
245 250 255
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
260 265 270
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
275 280 285
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
290 295 300
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
305 310 315 320
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
325 330 335
Leu Pro Ala Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
340 345 350
Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr
355 360 365
Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
370 375 380
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
385 390 395 400
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val
405 410 415
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
420 425 430
Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ser His Tyr Thr Gln Lys
435 440 445
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455
<210> 3
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成肽
<400> 3
Glu Val Val Ile Thr Gln Ser Pro Leu Phe Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Ala Ala Ser Leu Ser Cys Lys Cys Ser His Ser Leu Gln His Ser
20 25 30
Thr Gly Ala Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Leu Gln Arg Pro Gly Gln Thr
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile His Leu Ala Thr His Arg Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ser Asp Asp Val Gly Thr Tyr Tyr Cys Met Gln Gly
85 90 95
Leu His Ser Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 4
<211> 470
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成肽
<400> 4
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Asn Ser Phe Ser Asn His
20 25 30
Asp Val His Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Met Ser His Glu Gly Asp Lys Thr Gly Leu Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Ser Gly Ala Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Gly Leu Thr Ala Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys
85 90 95
Leu Thr Gly Ser Lys His Arg Leu Arg Asp Tyr Phe Leu Tyr Asn Glu
100 105 110
Tyr Gly Pro Asn Tyr Glu Glu Trp Gly Asp Tyr Leu Ala Thr Leu Asp
115 120 125
Val Trp Gly His Gly Thr Ala Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
130 135 140
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
145 150 155 160
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
165 170 175
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
180 185 190
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
195 200 205
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
210 215 220
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro
225 230 235 240
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
245 250 255
Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
260 265 270
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
275 280 285
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
290 295 300
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
305 310 315 320
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
325 330 335
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
340 345 350
Ala Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
355 360 365
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn
370 375 380
Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
385 390 395 400
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
405 410 415
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
420 425 430
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
435 440 445
Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ser His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
450 455 460
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465 470
<210> 5
<211> 210
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成肽
<400> 5
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Thr Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Asn Gly Tyr Leu Asn Trp Tyr
20 25 30
Gln Gln Arg Arg Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Gly Ser
35 40 45
Lys Leu Glu Arg Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Arg Arg Trp Gly
50 55 60
Gln Glu Tyr Asn Leu Thr Ile Asn Asn Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala
65 70 75 80
Thr Tyr Phe Cys Gln Val Tyr Glu Phe Val Val Phe Gly Gln Gly Thr
85 90 95
Lys Val Gln Val Asp Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe
100 105 110
Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val
115 120 125
Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp
130 135 140
Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr
145 150 155 160
Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr
165 170 175
Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val
180 185 190
Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly
195 200 205
Glu Cys
210
<210> 6
<211> 453
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成肽
<400> 6
Gln Val Gln Leu Leu Gln Ser Gly Ala Ala Val Thr Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Arg Val Ser Cys Glu Ala Ser Gly Tyr Asn Ile Arg Asp Tyr
20 25 30
Phe Ile His Trp Trp Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Gln Trp Val
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Pro Lys Thr Gly Gln Pro Asn Asn Pro Arg Gln Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Ser Leu Thr Arg His Ala Ser Trp Asp Phe Asp Thr
65 70 75 80
Phe Ser Phe Tyr Met Asp Leu Lys Ala Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala
85 90 95
Val Tyr Phe Cys Ala Arg Gln Arg Ser Asp Tyr Trp Asp Phe Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
115 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
165 170 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
195 200 205
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys
210 215 220
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe
225 230 235 240
Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
325 330 335
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Leu His Glu Ala Leu His Ser His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Pro Gly Lys
450
<210> 7
<211> 211
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成肽
<400> 7
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Asn Asn Phe Val Ser Trp
20 25 30
Tyr Gln Gln His Ala Gly Lys Ala Pro Lys Leu Val Ile Tyr Asp Val
35 40 45
Asn Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser
50 55 60
Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Val Ser Gly Leu Gln Thr Asp Asp Glu
65 70 75 80
Ala Val Tyr Tyr Cys Gly Ser Leu Val Gly Asn Trp Asp Val Ile Phe
85 90 95
Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro
100 105 110
Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys
115 120 125
Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr
130 135 140
Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly Val Glu Thr
145 150 155 160
Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr
165 170 175
Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys
180 185 190
Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr
195 200 205
Glu Cys Ser
210
<210> 8
<211> 465
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成肽
<400> 8
Gln Pro Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Thr Leu Val Glu Ala Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Asp Ser Thr Ala Ala Cys
20 25 30
Asn Ser Phe Trp Gly Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Val Gly Ser Leu Ser His Cys Ala Ser Tyr Trp Asn Arg Gly Trp
50 55 60
Thr Tyr His Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Leu Thr Leu Ala Leu Asp
65 70 75 80
Thr Pro Lys Asn Leu Val Phe Leu Lys Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala
85 90 95
Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Phe Gly Gly Glu Val Leu Arg
100 105 110
Tyr Thr Asp Trp Pro Lys Pro Ala Trp Val Asp Leu Trp Gly Arg Gly
115 120 125
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
130 135 140
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
145 150 155 160
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
165 170 175
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
180 185 190
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
195 200 205
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
210 215 220
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
225 230 235 240
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro
245 250 255
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
260 265 270
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
275 280 285
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
290 295 300
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
305 310 315 320
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
325 330 335
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Ser Ile Glu Lys
340 345 350
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
355 360 365
Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp
370 375 380
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
385 390 395 400
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
405 410 415
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
420 425 430
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu
435 440 445
Ala Leu His Ser His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
450 455 460
Lys
465
<210> 9
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成肽
<400> 9
Tyr Glu Leu Thr Gln Glu Thr Gly Val Ser Val Ala Leu Gly Arg Thr
1 5 10 15
Val Thr Ile Thr Cys Arg Gly Asp Ser Leu Arg Ser His Tyr Ala Ser
20 25 30
Trp Tyr Gln Lys Lys Pro Gly Gln Ala Pro Ile Leu Leu Phe Tyr Gly
35 40 45
Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Ala
50 55 60
Ser Gly Asn Arg Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Ala Gln Ala Glu Asp
65 70 75 80
Asp Ala Glu Tyr Tyr Cys Ser Ser Arg Asp Lys Ser Gly Ser Arg Leu
85 90 95
Ser Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Ser Gln Pro Lys
100 105 110
Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln
115 120 125
Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly
130 135 140
Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly
145 150 155 160
Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala
165 170 175
Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser
180 185 190
Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val
195 200 205
Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210
<210> 10
<211> 461
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成肽
<400> 10
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Asp Phe Asp Asn Ala
20 25 30
Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Ile Thr Gly Pro Gly Glu Gly Trp Ser Val Asp Tyr Ala Ala
50 55 60
Pro Val Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Leu Asn Ser Ile Asn Phe
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Glu Met Asn Asn Leu Arg Met Glu Asp Ser Gly Leu Tyr
85 90 95
Phe Cys Ala Arg Thr Gly Lys Tyr Tyr Asp Phe Trp Ser Gly Tyr Pro
100 105 110
Pro Gly Glu Glu Tyr Phe Gln Asp Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr
115 120 125
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
130 135 140
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
145 150 155 160
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
165 170 175
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
180 185 190
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
195 200 205
Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
210 215 220
Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys
225 230 235 240
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
245 250 255
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
260 265 270
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
275 280 285
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
290 295 300
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
305 310 315 320
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
325 330 335
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
340 345 350
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys
355 360 365
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys
370 375 380
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
385 390 395 400
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
405 410 415
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
420 425 430
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ser
435 440 445
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455 460
<210> 11
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成肽
<400> 11
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Arg Leu Leu Ser Ser
20 25 30
Tyr Gly His Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Glu Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr His Val Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser
115 120 125
Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys
130 135 140
Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu
145 150 155 160
Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr
180 185 190
Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val
195 200 205
Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215
<210> 12
<211> 456
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成肽
<400> 12
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Gly Asn Tyr Ile Arg Asn Asn Glu Lys Phe
50 55 60
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65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Gly Ser Ser Phe Gly Ser Asn Tyr Val Phe Ala Trp Phe Thr Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Ala Ala Pro
115 120 125
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
130 135 140
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
145 150 155 160
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
165 170 175
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
180 185 190
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
195 200 205
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
210 215 220
Asn Arg Gly Glu Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
225 230 235 240
Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
245 250 255
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
260 265 270
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
275 280 285
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
290 295 300
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
305 310 315 320
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
325 330 335
Leu Pro Ala Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
340 345 350
Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr
355 360 365
Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
370 375 380
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
385 390 395 400
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val
405 410 415
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
420 425 430
Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ser His Tyr Thr Gln Lys
435 440 445
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455
<210> 13
<211> 212
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成肽
<400> 13
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly His Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Asn Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Ser Ser Ala Ser Thr
100 105 110
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser
115 120 125
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
130 135 140
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
145 150 155 160
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys
180 185 190
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
195 200 205
Pro Lys Ser Cys
210
<210> 14
<211> 454
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成肽
<400> 14
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Asp Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Asp Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Val Ser Arg Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Ala Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Ala Ala Pro Ser Val
115 120 125
Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser
130 135 140
Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln
145 150 155 160
Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val
165 170 175
Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu
180 185 190
Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu
195 200 205
Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg
210 215 220
Gly Glu Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
225 230 235 240
Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
245 250 255
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
260 265 270
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
275 280 285
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
290 295 300
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
305 310 315 320
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
325 330 335
Ala Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
340 345 350
Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn
355 360 365
Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
370 375 380
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
385 390 395 400
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys
405 410 415
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
420 425 430
Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ser His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
435 440 445
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450
<210> 15
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成肽
<400> 15
Ser Glu Leu Thr Gln Glu Thr Gly Val Ser Val Ala Leu Gly Arg Thr
1 5 10 15
Val Thr Ile Thr Cys Arg Gly Asp Ser Leu Arg Ser His Tyr Ala Ser
20 25 30
Trp Tyr Gln Lys Lys Pro Gly Gln Ala Pro Ile Leu Leu Phe Tyr Gly
35 40 45
Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile His Asp Arg Phe Ser Gly Ser Ala
50 55 60
Ser Gly Asn Arg Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Ala Gln Ala Glu Asp
65 70 75 80
Asp Ala Glu Tyr Tyr Cys Ser Ser Arg Asp Lys Ser Gly Ser Arg Leu
85 90 95
Ser Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Ser Gln Pro Lys
100 105 110
Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln
115 120 125
Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly
130 135 140
Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly
145 150 155 160
Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala
165 170 175
Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser
180 185 190
Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val
195 200 205
Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210
<210> 16
<211> 461
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成肽
<400> 16
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ser Phe Lys Asn Thr
20 25 30
Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Ile Thr Gly Pro Gly Glu Gly Trp Thr Ser Asp Tyr Ala Ala
50 55 60
Thr Val Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asn Asn Met Ile Asp Met
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Glu Met Asn Arg Leu Arg Thr Asp Asp Thr Gly Leu Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val His Thr Glu Lys Tyr Tyr Asn Phe Trp Gly Gly Tyr Pro
100 105 110
Pro Gly Glu Glu Tyr Phe Gln His Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Ile
115 120 125
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
130 135 140
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
145 150 155 160
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
165 170 175
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
180 185 190
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
195 200 205
Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
210 215 220
Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys
225 230 235 240
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
245 250 255
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
260 265 270
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
275 280 285
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
290 295 300
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
305 310 315 320
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
325 330 335
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
340 345 350
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys
355 360 365
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys
370 375 380
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
385 390 395 400
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
405 410 415
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
420 425 430
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ser
435 440 445
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455 460
<210> 17
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成肽
<400> 17
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Gln Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Asn Asn
20 25 30
Lys Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Pro Ser Gly Val Ala Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Gln Ser Leu
85 90 95
Ser Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Val Lys Arg Thr Val Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
115 120 125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
130 135 140
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
145 150 155 160
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
180 185 190
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 18
<211> 457
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成肽
<400> 18
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Arg Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Thr Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Ser Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Ala Leu Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Val Ile Pro Leu Leu Thr Ile Thr Asn Tyr Ala Pro Arg Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Ile Thr Ile Thr Ala Asp Arg Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Leu Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Thr Thr Gly Ala Gly Trp Leu Gly Lys Pro Ile Gly
100 105 110
Ala Phe Ala His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala
115 120 125
Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser
130 135 140
Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
145 150 155 160
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly
165 170 175
Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu
180 185 190
Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr
195 200 205
Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys
210 215 220
Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
225 230 235 240
Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
245 250 255
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
260 265 270
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
275 280 285
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
290 295 300
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
305 310 315 320
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
325 330 335
Ala Leu Pro Ala Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
340 345 350
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu
355 360 365
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
370 375 380
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
385 390 395 400
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
405 410 415
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
420 425 430
Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ser His Tyr Thr Gln
435 440 445
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455
<210> 19
<211> 212
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成肽
<400> 19
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Arg Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Asn Thr Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Gly Ser Ser Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Ser Ser Ala Ser Thr
100 105 110
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser
115 120 125
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
130 135 140
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
145 150 155 160
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys
180 185 190
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
195 200 205
Pro Lys Ser Cys
210
<210> 20
<211> 455
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成肽
<400> 20
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Pro Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Thr Val Ile Ser Ser Asp Gly Arg Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Tyr His Asp Phe Trp Ser Gly Pro Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Ala Ala Pro Ser
115 120 125
Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala
130 135 140
Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val
145 150 155 160
Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser
165 170 175
Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr
180 185 190
Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys
195 200 205
Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn
210 215 220
Arg Gly Glu Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
225 230 235 240
Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
245 250 255
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
260 265 270
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
275 280 285
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
290 295 300
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
305 310 315 320
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
325 330 335
Pro Ala Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
340 345 350
Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys
355 360 365
Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
370 375 380
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
385 390 395 400
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser
405 410 415
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
420 425 430
Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ser His Tyr Thr Gln Lys Ser
435 440 445
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455
<210> 21
<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成肽
<400> 21
Tyr Glu Leu Thr Gln Glu Thr Gly Val Ser Val Ala Leu Gly Arg Thr
1 5 10 15
Val Thr Ile Thr Cys Arg Gly Asp Ser Leu Arg Ser His Tyr Ala Ser
20 25 30
Trp Tyr Gln Lys Lys Pro Gly Gln Ala Pro Ile Leu Leu Phe Tyr Gly
35 40 45
Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ala Ser
50 55 60
Gly Asn Arg Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Ala Gln Ala Glu Asp Asp
65 70 75 80
Ala Glu Tyr Tyr Cys Ser Ser Arg Asp Lys Ser Gly Ser Arg Leu Ser
85 90 95
Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Ser Gln Pro Lys Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln Ala
115 120 125
Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly Ala
130 135 140
Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly Val
145 150 155 160
Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser
165 170 175
Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser Tyr
180 185 190
Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val Ala
195 200 205
Pro Thr Glu Cys Ser
210
<210> 22
<211> 461
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成肽
<400> 22
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Asp Phe Asp Asn Ala
20 25 30
Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Ile Thr Gly Pro Gly Glu Gly Trp Ser Val Asp Tyr Ala Ala
50 55 60
Pro Val Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Leu Asn Ser Ile Asn Phe
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Glu Met Asn Asn Leu Arg Met Glu Asp Ser Gly Leu Tyr
85 90 95
Phe Cys Ala Arg Thr Gly Lys Tyr Tyr Asp Phe Trp Ser Gly Tyr Pro
100 105 110
Pro Gly Glu Glu Tyr Phe Gln Asp Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr
115 120 125
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
130 135 140
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
145 150 155 160
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
165 170 175
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
180 185 190
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
195 200 205
Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
210 215 220
Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys
225 230 235 240
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
245 250 255
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
260 265 270
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
275 280 285
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
290 295 300
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
305 310 315 320
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
325 330 335
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
340 345 350
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys
355 360 365
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys
370 375 380
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
385 390 395 400
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
405 410 415
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
420 425 430
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ser
435 440 445
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455 460
<210> 23
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成肽
<400> 23
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Glu Ser Leu Arg Gln Ser
20 25 30
Asn Gly Lys Thr Ser Leu Tyr Trp Tyr Arg Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Val Phe Glu Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Ser
50 55 60
Asp Arg Phe Val Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Arg Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Phe Tyr Tyr Cys Met Gln Ser
85 90 95
Lys Asp Phe Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Asp Leu Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 24
<211> 465
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成肽
<400> 24
Arg Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Lys
1 5 10 15
Ser Val Arg Leu Ser Cys Val Val Ser Asp Phe Pro Phe Ser Lys Tyr
20 25 30
Pro Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ala Ile Ser Gly Asp Ala Trp His Val Val Tyr Ser Asn Ser Val
50 55 60
Gln Gly Arg Phe Leu Val Ser Arg Asp Asn Val Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Met Asn Ser Leu Lys Ile Glu Asp Thr Ala Val Tyr Arg Cys
85 90 95
Ala Arg Met Phe Gln Glu Ser Gly Pro Pro Arg Leu Asp Arg Trp Ser
100 105 110
Gly Arg Asn Tyr Tyr Tyr Tyr Ser Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly
115 120 125
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
130 135 140
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
145 150 155 160
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
165 170 175
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
180 185 190
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
195 200 205
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
210 215 220
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
225 230 235 240
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro
245 250 255
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
260 265 270
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
275 280 285
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
290 295 300
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
305 310 315 320
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
325 330 335
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Ser Ile Glu Lys
340 345 350
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
355 360 365
Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp
370 375 380
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
385 390 395 400
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
405 410 415
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
420 425 430
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu
435 440 445
Ala Leu His Ser His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
450 455 460
Lys
465
<210> 25
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成肽
<400> 25
Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Ala Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Phe Asn Ser
20 25 30
Arg Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Ala Arg Asp Ser Gly Val
50 55 60
Pro Ala Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Glu Thr Tyr Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Arg Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Met Gln
85 90 95
Ser Phe Asn Leu Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
115 120 125
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
130 135 140
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
145 150 155 160
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
165 170 175
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
180 185 190
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
195 200 205
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215
<210> 26
<211> 454
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成肽
<400> 26
Glu Val Asn Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Thr Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Asn
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Phe Ile Arg Asn Lys Ala Asn Gly Tyr Thr Thr Asp Tyr Ser Ala
50 55 60
Ser Val Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Gln Ser Ile
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ala Leu Arg Ala Glu Asp Ser Ala Thr Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Arg Asp Val Gly Ser Asn Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Ala Ala Pro Ser Val
115 120 125
Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser
130 135 140
Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln
145 150 155 160
Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val
165 170 175
Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu
180 185 190
Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu
195 200 205
Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg
210 215 220
Gly Glu Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
225 230 235 240
Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
245 250 255
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
260 265 270
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
275 280 285
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
290 295 300
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
305 310 315 320
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
325 330 335
Ala Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
340 345 350
Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn
355 360 365
Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
370 375 380
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
385 390 395 400
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys
405 410 415
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
420 425 430
Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ser His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
435 440 445
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450
<210> 27
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成肽
<400> 27
Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln Thr
1 5 10 15
Val Arg Ile Thr Cys Arg Gly Asp Ser Leu Arg Ser His Tyr Ala Ser
20 25 30
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr Gly
35 40 45
Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Ser
50 55 60
Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp
65 70 75 80
Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Arg Asp Lys Ser Gly Ser Arg Leu
85 90 95
Ser Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Ser Gln Pro Lys
100 105 110
Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln
115 120 125
Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly
130 135 140
Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly
145 150 155 160
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165 170 175
Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser
180 185 190
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195 200 205
Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210
<210> 28
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成肽
<400> 28
Tyr Glu Leu Thr Gln Glu Thr Gly Val Ser Val Ala Leu Gly Arg Thr
1 5 10 15
Val Thr Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala Ser
20 25 30
Trp Tyr Gln Lys Lys Pro Gly Gln Ala Pro Ile Leu Leu Phe Tyr Gly
35 40 45
Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Ala
50 55 60
Ser Gly Asn Arg Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Ala Gln Ala Glu Asp
65 70 75 80
Asp Ala Glu Tyr Tyr Cys Asn Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn His Leu
85 90 95
Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Ser Gln Pro Lys
100 105 110
Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln
115 120 125
Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly
130 135 140
Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly
145 150 155 160
Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala
165 170 175
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Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val
195 200 205
Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210
<210> 29
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成肽
<400> 29
Ala Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Lys Gln
1 5 10 15
Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Gly Asp Ser Leu Arg Ser His Tyr Val
20 25 30
Ser Trp Tyr Gln Lys Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Phe Tyr
35 40 45
Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ala Gly Ala Gln Ala Glu
65 70 75 80
Asp Asp Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Arg Asp Lys Ser Gly Ser Arg
85 90 95
Leu Ser Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Ser Gln Pro
100 105 110
Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu
115 120 125
Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro
130 135 140
Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala
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Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala
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Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr
195 200 205
Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210 215
<210> 30
<211> 461
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成肽
<400> 30
Glu Val Arg Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Asn Phe Asp Asp Ala
20 25 30
Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
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115 120 125
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
130 135 140
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
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165 170 175
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
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195 200 205
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Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
325 330 335
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<210> 31
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成肽
<400> 31
Ala Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Lys Gln
1 5 10 15
Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Gly Asp Ser Leu Arg Ser His Tyr Val
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100 105 110
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Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro
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195 200 205
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210 215
<210> 32
<211> 461
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成肽
<400> 32
Glu Val Arg Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Asn Phe Asp Asp Ala
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Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
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Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
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195 200 205
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Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
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Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
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<210> 33
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成肽
<400> 33
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1 5 10 15
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<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成肽
<400> 34
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<211> 461
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成肽
<400> 35
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180 185 190
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195 200 205
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210 215 220
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225 230 235 240
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
245 250 255
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260 265 270
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
275 280 285
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
290 295 300
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
305 310 315 320
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
325 330 335
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
340 345 350
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355 360 365
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys
370 375 380
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
385 390 395 400
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405 410 415
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
420 425 430
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ser
435 440 445
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450 455 460
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<211> 461
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成肽
<400> 36
Glu Val Arg Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Asn Phe Asp Asp Ala
20 25 30
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Gly Arg Ile Ser Gly Pro Gly Glu Gly Trp Ser Val Asp Tyr Ala Glu
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Phe Cys Ala Arg Thr Gly Lys His Tyr Asp Phe Trp Ser Gly Tyr Pro
100 105 110
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115 120 125
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
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Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
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Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
165 170 175
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
180 185 190
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
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Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
210 215 220
Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys
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260 265 270
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<220>
<223> 合成肽
<400> 37
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195 200 205
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<220>
<223> 合成肽
<400> 38
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<223> 合成肽
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成肽
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<211> 461
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成肽
<400> 41
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<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成肽
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<220>
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<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成肽
<400> 44
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<400> 45
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195 200 205
Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
210 215 220
Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys
225 230 235 240
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
245 250 255
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
260 265 270
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
275 280 285
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
290 295 300
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
305 310 315 320
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
325 330 335
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
340 345 350
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys
355 360 365
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys
370 375 380
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
385 390 395 400
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
405 410 415
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
420 425 430
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ser
435 440 445
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455 460
<210> 46
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成肽
<400> 46
Ala Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Lys Gln
1 5 10 15
Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Gly Asp Ser Leu Arg Ser His Tyr Ala
20 25 30
Ser Trp Tyr Gln Lys Lys Thr Gly Gln Ala Pro Lys Leu Leu Phe Tyr
35 40 45
Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Ala Ser Gly Asn Arg Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Ala Gln Ala Glu
65 70 75 80
Asp Asp Ala Glu Tyr Tyr Cys Ser Ser Arg Asp Lys Ser Gly Ser Arg
85 90 95
Leu Ser Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Ser Gln Pro
100 105 110
Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu
115 120 125
Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro
130 135 140
Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala
145 150 155 160
Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala
165 170 175
Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg
180 185 190
Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr
195 200 205
Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210 215
<210> 47
<211> 461
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成肽
<400> 47
Glu Val Arg Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Asn Phe Asp Asp Ala
20 25 30
Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Ile Ser Gly Pro Gly Glu Gly Trp Ser Val Asp Tyr Ala Glu
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Lys Asn Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Glu Met Asn Asn Val Arg Thr Glu Asp Thr Gly Tyr Tyr
85 90 95
Phe Cys Ala Arg Thr Gly Lys His Tyr Asp Phe Trp Ser Gly Tyr Pro
100 105 110
Pro Gly Glu Glu Tyr Phe Gln Asp Trp Gly Gln Gly Thr Lys Val Ile
115 120 125
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130 135 140
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
145 150 155 160
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180 185 190
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210 215 220
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Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
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Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
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Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
275 280 285
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290 295 300
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
305 310 315 320
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
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Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
340 345 350
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355 360 365
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435 440 445
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450 455 460

Claims (5)

1.一种能够中和HIV的呈CrossMab格式的双特异性抗体，其中所述抗体包含结合至HIV包膜蛋白的第一抗体10E8变体的轻链和重链部分；以及结合至细胞膜受体蛋白或细胞膜共受体蛋白的第二抗体伊巴利单抗的轻链和重链部分，
其中所述第一抗体的轻链部分包含SEQ ID NO：46的氨基酸序列，所述第一抗体的重链部分包含SEQ ID NO: 47的氨基酸序列；
其中所第二抗体的轻链部分包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列，所述第二抗体的重链部分包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列。
2.一种药物组合物，其包含如权利要求1所述的双特异性抗体和药学上可接受的载剂。
3.如权利要求2所述的药物组合物，其中所述组合物被配制用于经口、鼻内、肺、皮内、经皮、皮下、肌肉内、腹膜内或静脉内递送。
4.如权利要求1所述的双特异性抗体或权利要求2或3所述的药物组合物在制备用于在患者中治疗HIV的药物中的用途。
5.如权利要求4的用途，其中所述患者为人。
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WO2024008177A1 (en) * 2022-07-08 2024-01-11 Nanjing Curegene Technology Co., Ltd. Engineered cells and uses thereof

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
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JP2017501986A (ja) * 2013-12-02 2017-01-19 アーロン ダイアモンド エイズ リサーチ センター ネイティブな構成を有する二重特異性抗体を使用した細胞レセプターアンカリングによる改善されたｈｉｖ−１中和抗体の効力及び幅
WO2016054023A1 (en) * 2014-09-29 2016-04-07 Duke University Hiv-1 antibodies and uses thereof (adcc and bispecific abs)
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