CN108676091B - Hiv-1的中和抗体及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了特异性结合HIV‑1 gp120的单克隆中和抗体及这些抗体的抗原结合片段。还提供了编码这些抗体的核酸、载体和宿主细胞。公开了使用这些抗体检测HIV的方法。此外，公开了这些抗体、抗原结合片段、核酸和载体用于预防和/或治疗HIV感染的用途。

Description

HIV-1的中和抗体及其用途

本申请为申请号为201280069415.3，发明名称为“HIV-1的中和抗体及其用途” 的中国专利申请的分案申请。

相关专利申请的交叉引用

本申请要求2012年9月7日提交的美国临时申请No.61/698,452、2012年3月20 日提交的美国临时申请No.61/613,431和2011年12月8日提交的美国临时申请No. 61/568,520的优先权；所有这些在先申请均以引用的方式全文纳入本文。

技术领域

本发明公开了与HIV-1 gp120结合的单克隆中和抗体，以及它们的鉴定和用途。

背景技术

尽管尽了很大的努力来开发抗HIV的治疗剂，但是人免疫缺陷病毒(HIV)感染 和所导致的获得性免疫缺陷综合征(AIDS)仍然对全球公共健康的威胁。一些感染 HIV的个体最后产生能够中和多种HIV病毒的广谱中和抗体(bNAb)。这些个体表现 出AIDS发展迟缓，甚至是在不存在对HIV感染的任何治疗的情况下。

以前表征的一种HIV-1中和单克隆抗体(被称为b12)能够结合gp120上的位点， 该位点是病毒结合到其主要细胞受体CD4所需要的。mAb b12来自于噬菌体展示文库， 但是该过程无法知道所述抗体是天然存在于被感染的人中还是由于抗体重链和轻链 的实验室结合。b12能够中和大约75％的HIV-1的进化枝(clade)B株系(最常见于北 美洲的那些株系)，但是它只能中和世界范围内发现的其它HIV-1株系的50％以下。因 此需要开发另外的HIV-1的中和抗体。

发明内容

本文公开了VRC07单克隆抗体的鉴定，所述VRC07单克隆抗体与HIV gp120蛋 白的CD4结合位点特异性结合。VRC07是VRC01样单克隆抗体，并包含新的重链 (“VRC07重链”)。该重链可与VRC01单克隆抗体的轻链交叉互补。VRC07重链为所 述VRC01重链的克隆变体。与VRC01相比，包含与VRC01轻链交叉互补的VRC07 重链的抗体具有增加的对gp120的结合亲和力，并且不具有明显增加的自身反应性。 本文还公开了所述VRC07重链和VRC01轻链的变体，以及包含这类变体的交叉互补 的单克隆抗体，例如，与VRC01相比，所述抗体具有增加的对gp120的结合亲和力 并且不具有自身反应性，或仅具有低的自身反应性。在一些实施方案中，所公开的 VRC07重链和VRC01轻链的变体包含框架区氨基酸置换(与VRC07重链或VRC01 轻链相比)但在CDR中仅包含最多达2个氨基酸置换(与VRC07重链或VRC01轻 链相比)。因此，本文公开了一类具有增加的对gp120的结合亲和力并且没有自身反应 性或具有低的自身反应性的单克隆抗体。在一些实施方案中，所述公开的抗体也没有 免疫原性，或具有低的免疫原性。

因此，本文提供了特异性结合HIV-1 gp120的分离的单克隆中和抗体。在某些实例中，这些抗体的结合能力和/或中和能力已经被优化。本文还公开了包含这些特异性 结合gp120的抗体、编码这些抗体的核酸、包含所述核酸的表达载体和表达所述核酸 的分离的宿主细胞的组合物。所述抗体可为全人的。在某些实施方案中，所述抗体包 含重链可变区和轻链可变区。

在一些实施方案中，所述分离的单克隆抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：40的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3)，其中 所述抗体特异性结合HIV-1的gp120，其中所述抗体为中和抗体。在具体的非限制性 实例中，所述分离的单克隆抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含(a)SEQ ID NO： 40的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3)，其中X₂为G；或(b) SEQ ID NO：40的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3)，其中 X₂为H，其中所述抗体特异性结合HIV-1的gp120，并且其中所述抗体为中和抗体。

在一些实施方案中，所述抗体的重链可变区包含SEQ ID NO：40。在一些实施方 案中，所述抗体的重链可变区包含SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：258、SEQ ID NO：259 或SEQ IDNO：260之一。

在另外的实施方案中，所述抗体的轻链可变区包含SEQ ID NO：238的氨基酸 27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)。在具体的非限制性实例中，所述 分离的单克隆抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含(a)SEQ ID NO：238的氨 基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)，其中X₁₁为D(具有F97D 的VRC01轻链CDR)，(b)SEQ ID NO：238的氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2) 和87-91(CDR3)，其中X₁₁为K(具有F97K的VRC01轻链CDR)，(c)SEQ ID NO： 238的氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)，其中X₁₁为S(具 有F97S的VRC01轻链CDR)，或(d)SEQ ID NO：238的氨基酸27-30(CDR1)、48-50 (CDR2)和87-91(CDR3)，其中X₁₁为H(具有F97H的VRC01轻链CDR)。

在一些实施方案中，所述抗体的轻链可变区包含SEQ ID NO：238。在一些实施方案中，所述抗体的轻链可变区包含SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：219、SEQ ID NO：220、 SEQ IDNO：221、SEQ ID NO：222、SEQ ID NO：223、SEQ ID NO：224、SEQ ID NO：225、 SEQ ID NO：226、SEQ ID NO：227、SEQ ID NO：228、SEQ ID NO：229、SEQ ID NO：230、 SEQ ID NO：231、SEQ ID NO：232、SEQ ID NO：233、SEQ ID NO：234、SEQ ID NO：235、 SEQ ID NO：236或SEQID NO：237之一。

在一些实施方案中，所公开的特异性结合gp120的单克隆抗体包含与重链交叉互补的轻链，所述轻链包含所公开的轻链可变区，所述重链包含所公开的重链可变区。

本发明公开的抗体和组合物能够用于多种目的，例如用于在受试者中检测HIV-1感染或诊断AIDS。这些方法可以包括使来自被诊断患有HIV-1或AIDS的受试者的样 本与特异性结合gp120的人单克隆抗体接触，并检测所述抗体与所述样本的结合。与 所述抗体与对照样本的结合相比，所述抗体与所述样本的结合的增加证实了所述受试 者患有HIV-1感染和/或AIDS。在一些实施方案中，所述方法进一步包括使特异性结 合gp120的第二抗体与所述样本接触，并检测所述第二抗体的结合。在一些非限制性 实例中，与所述抗体与对照样本的结合相比，所述抗体与所述样本的结合的增加检测 出所述受试者中的HIV-1。在一些非限制性实例中，所述抗体特异性结合所述样本中 的可溶性gp120。在一些实施方案中，所述方法还包括使特异性识别gp120特异性抗 体的第二抗体与所述样本接触，并检测所述第二抗体的结合。

在另外的实施方案中，本文公开了用于治疗具有HIV感染或具有HIV感染风险的受试者的方法，所述受试者例如，但不限于，HIV血清阳性的受试者或患有AIDS的 受试者，或已经暴露于潜在的HIV感染但尚未发生血清转变的人。所述方法包括给予 治疗有效量的本文公开的所述单克隆抗体、其抗原结合片段、或编码抗体或抗原结合 片段的核酸中的一种或多种。

根据参照附图进行的以下对几个实施方案的详细描述，本公开内容的上述和其它特征以及优点变得更加清楚。

附图说明

图1A和1B为一组举例说明通过细胞分选来分离产生gp120抗体的单个记忆B 细胞的结果的点图。将约2000万个来自供体45的外周血单核细胞(PBMC)分别与 在加入细胞之前与SA-APC和SA-PE复合的生物素标记的RSC3和ΔRSC3进行孵育。 如图所示，使用举例说明的策略将50个具有CD3-、CD8-、aqua blue-、CD14-、CD19+、 CD20+、IgG+、IgM-、RSC3+和ΔRSC3-的表型的记忆B细胞分选到含有裂解缓冲液 的96孔PCR板的各个孔中。从这些分选的细胞中鉴别除了VRC07b和VRC07c抗体。

图2为示出了VRC01(SEQ ID NO：5)，VRC02(SEQ ID NO：197)，VRC07(SEQ ID NO：2)，VRC07b(SEQ ID NO：3)，VRC07c(SEQ ID NO：4)和NIH4546(SEQ ID NO： 196)单克隆抗体和IGHV1-2*02种系序列(SEQ ID NO：195)的重链序列的比对的蛋 白序列比对。示出了框架(FR)和互补决定区(CDR)位置。

图3A-3B为蛋白和核苷酸序列比对，其示出了VRC01(SEQ ID NO：5)、VRC02 (SEQID NO：197)、VRC07(SEQ ID NO：2)、VRC07b(SEQ ID NO：3)、VRC07c (SEQ ID NO：4)和NIH4546(SEQ ID NO：196)重链可变区的重链蛋白序列的比对， 和编码所述VRC07重链可变区的相应的核苷酸序列(SEQ ID NO：10)以及与所述 VRC07核苷酸序列不同的核苷酸残基。

图4示出了编码VRC01(SEQ ID NO：13)、VRC02(SEQ ID NO：197)、VRC07 (SEQ IDNO：10)、VRC07b(SEQ ID NO：11)、VRC07c(SEQ ID NO：12)和NIH4546 (SEQ ID NO：196)单克隆抗体的重链的核苷酸序列的比对。

图5为示出了VRC01(SEQ ID NO：9)、VRC07b(SEQ ID NO：7)和VRC07c(SEQ ID NO：8)单克隆抗体的轻链可变区序列的比对的蛋白序列比对。每个轻链序列的 IMGT CDR1、CDR2和CDR3序列用下划线标示。

图6的表格示出了使用VRC01、VRC03、VRC-PG04和VRC07单克隆抗体进行 的抗体中和测定的结果。所述VRC07抗体包含VRC07重链可变区和VRC01轻链可 变区。如以前所述(参见，例如，PCT公开文本WO2011/038290)使用HIV-1 Env-假 病毒(表达来自所示出的HIV同种型的HIV Env)感染TZM-bl细胞来测量中和作用， 并且使用荧光素酶测定作为输出指示器。病毒输入设置为约0.01的感染多重性，这通 常在荧光素酶测定(Bright Glo，Promega，Madison，WI)中产生100,000至400,000相 对光单位(RLU)。所述抗体的浓度在用病毒上清孵育时定义。中和曲线是用5-参数 hill slope方程通过非线性回归方式拟合。50％和80％抑制浓度(IC50和IC80)列于表 中，并被报道为分别抑制50％和80％的感染所需要的抗体浓度。

图7A-D的一组表格示出了使用VRC01、VRC03、VRC-PG04、VRC-CH31、4E10 和VRC07单克隆抗体进行的抗体中和测定的结果。所述VRC07抗体包含VRC07重 链可变区(SEQ IDNO：2)和VRC01轻链可变区(SEQ ID NO：9)。如实施例2所述 对中和作用进行测量。

图8A-8F示出了关于VRC07重链可变区和VRC01轻链可变区的序列比对和表格。 图8A和8B示出了VRC01(SEQ ID NO：5)、VRC02(SEQ ID NO：197)、VRC07(SEQ ID NO：2)、VRC07b(SEQ ID NO：3)、VRC07c(SEQ ID NO：4)和NIH4546(SEQ ID NO：196)单克隆抗体的重链可变区序列的序列比对。FR和CDR位置是使用IMGT(图 8B)和Kabat(图8A)编号方案显示。图8C示出了VRC01轻链(SEQ ID NO：9)的 蛋白质序列，标出了Kabat和IMGT CDR。图8D-8F的表格示出了VRC07重链可变 区和VRC01轻链可变区的氨基酸的线性和Kabat定位。

图9举例说明一种用于优化VRC07单克隆抗体的策略。

图10的一系列数字图像举例说明了与gp120结合的VRC07(具有指示的氨基酸 置换)的蛋白质结构，以及一系列曲线图示出了关于所述VRC07(具有指示的氨基酸 置换)与gp120的结合的表面等离子体共振实验的结果。

图11示出了VRC01(SEQ ID NO：5)、VRC07(SEQ ID NO：2)、VRC07 G54W，I30Q (SEQID NO：24)、VRC07 G54W，I30R(SEQ ID NO：25)、VRC07 G54W，S58N(SEQ ID NO：26)单克隆抗体的重链可变区的蛋白质序列比对。示出了使用IMGT和Kabat 编号方案确定的Fr和CDR位置。

图12A-12B的一系列曲线图举例说明了对所示的单克隆抗体与所示的gp120蛋白的结合的ELISA测量结果。测试的单克隆抗体包括具有各自与VRC01轻链互补的 VRC07、VRC07(G54W)、VRC07(G54W，I30Q)、VRC07(G54W，I30R)和VRC07 (G54W，S58N)重链的抗体。

图13A-13D的一系列图举例说明了所示的单克隆抗体与所示的gp120蛋白的结合的ELISA测量结果。

图14的一组表格示出了使用单克隆抗体进行HIV-1中和测定的结果，所述单克隆抗体包括各自与VRC01轻链互补的VRC07、v1_v7h3_m03_G54W、 v1_v7h3_m02_G54W、VRC07(G54W)、VRC07(G54W，I30Q)、VRC07(G54W，I30R) 或VRC07(G54W，S58N)重链。使用实施例2所述的方法对中和进行测量。

图15A-15LL的一系列图举例说明了所示的单克隆抗体与所示的gp120蛋白的结合的ELISA测量结果(“con”代表共有序列)。每种抗体的重链和轻链列于每个图的上 部。y-轴为450nm下的OD，x-轴为以μg/ml计的抗体浓度。所述测定以一式两份进 行，显示的数值为平均值。用下划线标注了被选择用于进一步的中和作用研究的抗体 重链和轻链配对。对于图15V-15W，“07”是“VRC07”的缩写，并且所有重链都与VRC01 轻链配对。对于图15X-15EE，“07”是“VRC07ghv”的缩写，“01L”是VRC01轻链的缩 写，并且如果未列出轻链，那么VRC01轻链是所使用的轻链。

图16A-16B的一组表格示出了使用从所示的重链和轻链所形成的单克隆抗体而进行的HIV-1中和测定的结果。

图17的序列比对举例示出了重链可变区的部分种系回复和突变体。示出了以下重链可变区的序列：VRC01gVH(SEQ ID NO：198)、VRC01ghvH03(SEQ ID NO：199)、 VRC01sVH(SEQ ID NO：5)、NIH4546ghvH01(SEQ ID NO：200)、NIH4546ghvH02 (SEQ ID NO：201)NIH4546sVH(SEQ ID NO：196)、VRC07gVH(SEQ ID NO：202)、 VRC07ghvH01(SEQ ID NO：203)、VRC07ghvH02(SEQ ID NO：204)、VRC07ghvH04.1 (SEQ ID NO：205)、VRC07ghvH04.2(SEQ ID NO：206)、VRC0ghvH05(SEQ ID NO： 207)、和VRC07sVH(VRC07；SEQ ID NO：2)。示出了以下轻链可变区的序列： VRC01gVL(SEQ ID NO：208)、VRC01ghvL01(SEQ ID NO：209)、VRC01ghvL02(SEQ ID NO：210)、VRC01ghvL04(SEQ ID NO：211)、VRC01N72T(SEQ ID NO：212)、 VRC01ghvL05(SEQ ID NO：213)、VRC01sVL(VRC01；SEQ ID NO：9)、NIH4546glvL01(SEQ ID NO：214)和NIH4546sVL(NIH4546；SEQ ID NO：215)。

图18示出了序列和三维结构，该三维结构示出了VRC01单克隆抗体的gp120结 合表面和选择用于进行丙氨酸扫描诱变的VRC01重链和轻链的残基。VRC01结合能 热点：(A)VRC01重链可变区的氨基酸序列(SEQ ID NO：5)。粗体字指示接触gp120 的VRC01残基。氨基酸序列下的单个点、两个点和三个点指示当被突变为丙氨酸时 将导致对gp120的亲和力显著下降的位置。结合KD的降低程度——单个点＞两个点＞ 三个点。所述VRC01重链的Kabat位置G54的丙氨酸突变导致VRC01与gp120蛋白 的亲和力增加差不多4倍。(B)VRC01-重链和轻链上的重要接触残基的结构图。轻 度至重度灰色指示结合亲和力降低。白色指示结合无改变。深灰色指示结合KD增加。

图19A-19C的一系列表格示出了VRC01单克隆抗体(包含所示的丙氨酸置换) 与gp120分析物RSC3(图19A)、来自HIV-1株系YU2的gp120(图19B)和来自 HIV-1株系ZM109的gp120(图19C)的结合的亲和力的测量结果。示出了计算的KD。

图20是VRC07 G54重链变体(所述VRC07 G54变体与VRC01轻链互补)的ELISA 的一组柱形图。除了G54F、G54R、G54W和G54Y表现出与进化枝A gp120的结合 有所提高之外，G54A、G54H、G54K、G54M和G54Q也表现出与测试的两种进化枝 A病毒的结合有所增强；其中，G54H表现出与所述gp120的结合的最大提高。

图21是VRC07 G54重链变体(所述VRC07 G54变体与VRC01轻链互补)的ELISA 的一组柱形图。除了G54F、G54R、G54W和G54Y表现出与进化枝B gp120的结合 有所提高之外，G54A、G54H、G54K、G54M、G54Q和G54V也表现出与进化枝B 或进化枝C病毒的结合有所增强。

图22是VRC07 G54重链变体(所述VRC07 G54变体与VRC01轻链互补)的ELISA 的一组柱形图。除了G54F、G54R、G54W和G54Y表现出与Du172 gp120的结合有 所提高之外，G54A、G54H、G54K、G54M和G54Q也表现出与所述病毒的结合有所 增强。其中，G54H表现出与对VRC01具有抗性的所述gp120的结合的最大提高。

图23的表格示出了所示的单克隆抗体的抗-心磷脂测定的结果。抗-心磷脂测定用于表明抗体是非具有自身反应性。VRC07重链和所示的变体VRC07重链与VRC01轻 链互补以形成功能性抗体。结果表明包含所述VRC07 G54H重链可变区和所述VRC01 轻链可变区的单克隆抗体不具有自体反应的。

图24的一组表格示出了使用包含所示的重链可变区和轻链可变区的抗体进行的中和实验的结果。结果表明，与以VRC01轻链互补的VRC07重链的中和效能相比， 包含与VRC01轻链互补的所述VRC07 G54H变体重链的抗体的中和效能增加2倍以 上。因此，在TZM-bl中和测定中，VRC07 G54H比VRC07更有效地中和所选择的病 毒。当分别比较其IC50和IC80的几何平均值时，所评估的相对于VRC07的改善倍 数为约2.3和2.5倍。

图25示出了编码VRC07 G54H重链可变区的核酸序列(SEQ ID NO：37)和VRC07G54H重链可变区的氨基酸序列(SEQ ID NO：32)。

图26的示意图示出了部分回复的抗体变体的设计。

图27的示意图示出了利用CDR移植的部分回复的抗体变体的设计。

图28示出了VRC07重链和VRC01轻链的部分回复体的序列。示出了以下重链可 变区的序列：VRC01gVH(SEQ ID NO：198)、VRC07gVH(SEQ ID NO：202)、 VRC07ghvH01(SEQ IDNO：203)、VRC07ghvH02(SEQ ID NO：204)、VRC07ghvH04.1 (SEQ ID NO：205)、VRC07ghvH04.2(SEQ ID NO：206)、VRC07ghvH05(SEQ ID NO： 207)、VRC07ghvH05.1(SEQ IDNO：216)、VRC07ghvH05.2(SEQ ID NO：217)、 VRC07ghvH05.3(SEQ ID NO：218)和VRC07sVH(SEQ ID NO：2)。示出了以下轻链 可变区的序列：VRC01gVL(SEQ ID NO：208)、VRC01ghvL01(SEQ ID NO：209)、 VRC01ghvL02(SEQ ID NO：210)、VRC01ghvL04(SEQ ID NO：211)、VRC01_N72T (SEQ ID NO：212)、VRC01ghvL05(SEQ ID NO：213)和VRC01sVL(VRC01；SEQ ID NO：9)。

图29的表格示出了使用包括所示的重链和轻链的抗体进行的中和实验的结果。VRC07ghvH05.3是指具有R3Q、I37V和T93A氨基酸置换的VRC07重链。 VRC07ghvH05.3.1是指具有I37C和T93A氨基酸置换的VRC07重链。VRC01-EI-del 是指缺失最开始的2个氨基酸(E1和I2)的VRC01轻链。

图30是VRC07ghvH05.3的条带图，举例说明了R3Q、I37V和T93A氨基酸置换。

图31的示意图举例说明了从VRC01轻链中缺失最开始的两个氨基酸。

图32的表格列出了VRC01/07轻链变体。

图33的表格示出了使用包含所示的重链和轻链的抗体进行的中和实验的结果。结果表明了缺失轻链可变区的最开始的两个氨基酸所实现的效能增加。

图34的表格示出了使用包含所示的重链和轻链的抗体进行的中和实验的结果。结果表明了缺失轻链可变区的最开始的两个氨基酸所实现的效能增加。

序列表

列于所附序列表中的核酸序列和氨基酸序列使用37 C.F.R.1.822中定义的核苷酸 碱基的标准字母缩写和氨基酸的三字母编码显示。只显示每个核酸序列的一条链，但是应理解互补链通过参考所显示的链而被包括在内。所述序列表作为文件名为“sequence.txt”的ASCII文本文件的形式(～750kb)提交，所述文件在2012年12月 10日生成，其通过引用的方式纳入本文。在所附序列表中：

SEQ ID NO：1是VRC07、VRC07b和VRC07c gp120-特异性单克隆抗体的共有重 链可变区的氨基酸序列，所述序列在位置I30、G54和S58(Kabat编号)具有或不具 有某些氨基酸置换。

，

其中X₁为M或V，X₂为E或D，X₃为K或R，X₄为M或V，X₅为N或S，X₆为L 或F，X₇为M或V，X₈为E或D，X₉为S、A或P，X₁₀为Q或R，并且X₁₁为P或 L，X₁₂为I、R或Q，X₁₃为A、H、K、M、Q、V、G、F、R、Y或W。

SEQ ID NO：2是gp120-特异性抗体VRC07的重链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：3是gp120-特异性抗体VRC07b的重链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：4是gp120-特异性抗体VRC07c的重链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：5是gp120-特异性抗体VRC01的重链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：6是VRC01、VRC07b和VRC07c gp120-特异性抗体的共有轻链可变 区的氨基酸序列。

，

其中X₁为A或G，X₂为R或T，X₃为I或L，X₄为S或T，X₅为S或A，X₆为A 或T，X₇为A或P，X₈为E或D，并且X₉为E或G。

SEQ ID NO：7是gp120-特异性抗体VRC07b的轻链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：8是gp120-特异性抗体VRC07c的轻链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：9是gp120-特异性抗体VRC01的轻链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：10是编码gp120-特异性抗体VRC07的重链可变区的示例性核酸序列。

SEQ ID NO：11是编码gp120-特异性抗体VRC07b的重链可变区的示例性核酸序列。

SEQ ID NO：12是编码gp120-特异性抗体VRC07c的重链可变区的示例性核酸序列。

SEQ ID NO：13是编码gp120-特异性抗体VRC01的重链可变区的示例性核酸序列。

SEQ ID NO：14是编码gp120-特异性抗体VRC07b的轻链可变区的示例性核酸序列。

SEQ ID NO：15是编码gp120-特异性抗体VRC07c的轻链可变区的示例性核酸序列。

SEQ ID NO：16是编码gp120-特异性抗体VRC01的轻链可变区的示例性核酸序列。

SEQ ID NO：17是核酸引物的核酸序列。

SEQ ID NO：18是核酸引物的核酸序列。

SEQ ID NO：19是核酸引物的核酸序列。

SEQ ID NO：20是核酸引物的核酸序列。

SEQ ID NO：21是核酸引物的核酸序列。

SEQ ID NO：22是核酸引物的核酸序列。

SEQ ID NO：23是VRC07 gp120特异性单克隆抗体的共有重链可变区的氨基酸序列，所述序列在位置I30、G54和S58(Kabat编号)处具有某些氨基酸置换。

其中X₁为I，R或Q，X₂为G、F、R、Y或W，X₃为S或N。

SEQ ID NO：24是gp120特异性抗体VRC07 G54W、I30Q的重链可变区的氨基酸 序列。

SEQ ID NO：25是gp120特异性抗体VRC07 G54W、I30R的重链可变区的氨基酸 序列。

SEQ ID NO：26是gp120特异性抗体VRC07 G54W、S58N的重链可变区的氨基酸 序列。

SEQ ID NO：27是gp120特异性抗体VRC01 N72A的轻链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：28是gp120特异性抗体VRC07 G54W的重链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：29是VRC07、VRC07b和VRC07c gp120特异性抗体的共有重链的氨 基酸序列。

QVRLSQSGGQX₁[11]KKPGDSMRISCRASGYX₂[28]FINCPINWIRLAPGX₃[43]RPEWMGWX₄[51]KPR GGAVX₅[59]YARQX₆[64]QGRVTMTRDX₇[74]YSX₈[77]TAFLELRX₉[85]LTSDDTAVYFCTRGKYCTA RDYYNWDFEHWGX₁₀[117]GTX₁₁[120]VTVSS，其中X₁为M或V，X₂为E或D，X₃为K或 R，X₄为M或V，X₅为N或S，X₆为L或F，X₇为M或V，X₈为E或D，X₉为S， A或P，X₁₀为Q或R，并且X₁₁为P或L。

SEQ ID NO：30是在Kabat位置G54上具有A、F、H、K、M、Q、R、V、W或 Y氨基酸置换的gp120特异性抗体VRC07的重链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：31是gp120特异性抗体VRC07 G54A的重链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：32是gp120特异性抗体VRC07 G54H的重链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：33是gp120特异性抗体VRC07 G54K的重链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：34是gp120特异性抗体VRC07 G54M的重链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：35是gp120特异性抗体VRC07 G54Q的重链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：36是gp120特异性抗体VRC07 G54V的重链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：37是编码VRC07 G54H的核酸序列(参见图25)。

SEQ ID NO：38是具有部分种系回复(germline reversion)的共有VRC07重链的氨基酸序列。

SEQ ID NO：39是具有三个回复到种系的氨基酸的VRC07重链的氨基酸序列。

SEQ ID NO：40是在位置I37、G54、S58和T93(Kabat编号)中的一个或多个上 具有氨基酸置换的VRC07重链的共有氨基酸序列。

SEQ ID NO：41是共有VRC07轻链的氨基酸序列。

其中X₁为E或无氨基酸，X₂为I或无氨基酸，其中X₃为T或I，X₄为W或S，X₅为N或T，X₆为V或Q，并且X₇为I或N。

SEQ ID NO：42是共有VRC07轻链的氨基酸序列。

其中X₁为E、G、A或无氨基酸，X₂为I、G、A或无氨基酸，X₃为V、G、A或无氨 基酸，X₄为L、G、A或无氨基酸，并且X₅为N、F或T。

SEQ ID NO：43是轻链可变区的共有氨基酸序列。

SEQ ID NO：44是轻链可变区的共有氨基酸序列。

SEQ ID NO：45是肽的氨基酸序列。

SEQ ID NO：46是肽的氨基酸序列。

SEQ ID NO：47是肽的氨基酸序列。

SEQ ID NO：48是肽接头的氨基酸序列。

SEQ ID NO：49是寡核苷酸的核苷酸序列。

SEQ ID NO：50是VRC01hpL02轻链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：51是VRC01ghvL05轻链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：53是缺失E1和I2氨基酸的VRC01轻链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：54是缺失E1和I2氨基酸并具有N72T氨基酸置换的VRC01轻链可 变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：55是VRC01hpL02轻链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：56是缺失E1和I2氨基酸的VRC01hpL02轻链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：57-100是编码VRC07重链变体的质粒和质粒插入片段的核苷酸序列，如表2所示。

SEQ ID NO：101-108是VRC07重链变体的核苷酸序列和蛋白序列，如表3所示。

SEQ ID NO：109-194是编码VRC07重链和VRC01轻链变体的质粒和质粒插入片 段的核苷酸序列，如表2所示。

SEQ ID NO：195是IGHV1-2*02种系的氨基酸序列。

SEQ ID NO：196是VRC4546的重链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：197是VRC02的重链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：198是VRC01重链种系序列(VRC01_gVH)的氨基酸序列。

SEQ ID NO：199是VRC01_ghvH03重链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：200是VRC4546ghvH01重链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：201是VRC4546ghvH02重链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：202是VRC07_gVH种系序列的氨基酸序列。

SEQ ID NO：203是VRC07ghvH01重链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：204是VRC07ghvH02重链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：205是VRC07ghvH04.1重链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：206是VRC07ghvH04.2重链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：207是VRC07ghvH05重链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：208是VRC01gVL种系的氨基酸序列。

SEQ ID NO：209是VRC01ghvL01轻链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：210是VRC01ghvL02轻链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：211是VRC01ghvL04轻链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：212是VRC01N72T轻链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：213是VRC01ghvL05轻链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：214是VRC4546ghvL01轻链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：215是VRC4546L轻链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：216是VRC07ghvH05.1重链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：217是VRC07ghvH05.2重链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：218是VRC07ghvH05.3重链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：219是VRC01 E1/I2del V3E轻链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：220是VRC01 E1/I2del V3K轻链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：221是VRC01 E1/I2del V3S轻链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：222是VRC01 E1/I2del F97D轻链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：223是VRC01 E1/I2del F97K轻链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：224是VRC01 E1/I2del F97S轻链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：225是VRC01 E1/I2del F97H轻链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：226是VRC01 E1/I2del V3E/F97S轻链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：227是VRC01 E1/I2del V3E/F97H轻链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：228是VRC0IhpL03轻链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：229是VRC0IhpL04轻链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：230是VRC0IhpL05轻链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：23I是VRC0IhpL06轻链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：232是VRC01hpL02 E1/I2del V3S轻链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：233是VRC01 hpL03 E1/I2del V3S轻链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：234是VRC01 hpL04 E1/I2del V3S轻链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：235是VRC01hpL05 E1/I2del V3S轻链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：236是VRC01hpL06 E1/I2del V3S轻链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：237是VRC01hpL04 E1/I2del V3E轻链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：238是具有一个或多个氨基酸置换或缺失的VRC01轻链可变区的共 有氨基酸序列。

SEQ ID NO：239是包含VRC01 E1/I2del V3E轻链可变区的抗体轻链的氨基酸序列。

SEQ ID NO：240是包含VRC01 E1/I2del V3K轻链可变区的抗体轻链的氨基酸序列。

SEQ ID NO：241是包含VRC01 E1/I2del V3S轻链可变区的抗体轻链的氨基酸序列。

SEQ ID NO：242是包含VRC01 E1/I2del F97D轻链可变区的抗体轻链的氨基酸序列。

SEQ ID NO：243是包含VRC01 E1/I2del F97K轻链可变区的抗体轻链的氨基酸序列。

SEQ ID NO：244是包含VRC01 E1/I2del F97S轻链可变区的抗体轻链的氨基酸序列。

SEQ ID NO：245是包含VRC01 E1/I2del F97H轻链可变区的抗体轻链的氨基酸序列。

SEQ ID NO：246是包含VRC01 E1/I2del V3E/F97S轻链可变区的抗体轻链的氨基酸序列。

SEQ ID NO：247是包含VRC01 E1/I2del V3E/F97H轻链可变区的抗体轻链的氨基酸序列。

SEQ ID NO：248是包含VRC01hpL03轻链可变区的抗体轻链的氨基酸序列。

SEQ ID NO：249是包含VRC01hpL04轻链可变区的抗体轻链的氨基酸序列。

SEQ ID NO：250是包含VRC01hpL05轻链可变区的抗体轻链的氨基酸序列。

SEQ ID NO：251是包含VRC01hpL06轻链可变区的抗体轻链的氨基酸序列。

SEQ ID NO：252是包含VRC01hpL02 E1/I2del V3S轻链可变区的抗体轻链的氨基酸序列。

SEQ ID NO：253是包含VRC01hpL03 E1/I2del V3S轻链可变区的抗体轻链的氨基酸序列。

SEQ ID NO：254是包含VRC01hpL04 E1/I2del V3S轻链可变区的抗体轻链的氨基酸序列。

SEQ ID NO：255是包含VRC01hpL05 E1/I2del V3S轻链可变区的抗体轻链的氨基酸序列。

SEQ ID NO：256是包含VRC01hpL06 E1/I2del V3S轻链可变区的抗体轻链的氨基酸序列。

SEQ ID NO：257是包含VRC01hpL04 E1/I2del V3E轻链可变区的抗体轻链的氨基酸序列。

SEQ ID NO：258是VRC07 G54H S58N重链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：259是VRC07 I37V G54H T93A重链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：260是VRC07 I37V G54H S58N T93A重链可变区的氨基酸序列。

具体实施方式

能够阻断不同HIV-1株系的感染的广谱HIV-1中和抗体(bNAb)代表着重要的但 尚未得到完全开发的用于预防和治疗AIDS的疗法。bNAb靶向HIV-1包膜(env)上 易损性保守位点例如CD4结合位点(CD4bs)。虽然b12单克隆抗体只能够中和约40％ 的HIV-1株系，但是许多年来其被认为是典型和最佳的CD4bs bNAb。2010年公开了 名为VRC01、VRC02和VRC03的一组新的CD4bs抗体。其中，VRC01最有效且最 广谱。在一个大的中和试验组(190种病毒)中，VRC01以小于50μg/ml的IC₅₀中和 91％的病毒，以小于1μg/ml的IC₅₀中和72％的病毒(Wuet al.，Science， 329(5993)：856-861，2010)。结构分析已经解释了VRC01的高度有效性和广谱程度 (breadth)：VRC01部分模拟与gp120的CD4相互作用。具体地，VRC01靶向的gp120区域的大部分是gp120外部结构域中最初CD4结合的高度保守性位点，这使得VRC01 能够绕开使损伤先前鉴定的CD4bs bNAb的构象和聚糖遮蔽。VRC01的重链和轻链都 有助于gp120的结合，其中CDRH2提供主要的相互作用，CDRL1、CDRL3、CDRH1 和CDRH3提供另外的接触点。已经证明在非人的灵长类中，VRC01的被动转运能够 防御直肠内或阴道内猿-HIV(SHIV)的攻击。

尽管VRC01是成功的，但是仍然需要另外的能够抑制HIV感染的广谱中和抗体， 特别是与VRC01相比，具有增加的gp120亲和力但不会增加对自身抗原的反应性的 广谱中和抗体。

本文公开了VC07单克隆抗体的鉴定，所述VC07单克隆抗体特异性结合HIV的gp120蛋白的CD4结合位点，并且是中和抗体。VRC07是VRC01样单克隆抗体，并 且包含与所述VRC01单克隆抗体的轻链交叉互补的新的重链(“VRC07重链”)。VRC07 具有增加的gp120的结合亲和力，但是不具有显著增加的自身反应性，例如，与VRC01 相比。本文还公开了所述VRC07重链和所述VRC01轻链的变体，以及包含这类变体 的交叉互补的单克隆抗体，与对照相比，所述单克隆抗体对gp120的结合亲和力有所 增加，但是不具有自身反应性，或者具有低自身反应性。在一些实施方案中，(与VRC07 重链或VRC01轻链相比，)所公开的所述VRC07重链和所述VRC01轻链的变体包含 框架区氨基酸置换，但(与VRC07重链或VRC01轻链相比，)在CDR中仅包含至多 2个氨基酸置换。因此，本文公开了一类具有增加的对gp120的结合亲和力并且不具 有自身反应性或具有低自身反应性的单克隆抗体。在一些实施方案中，所公开的抗体 还不具有免疫原性，或具有低免疫原性。

本领域普通技术人员应理解，所公开的抗体具有实用性，例如，作为治疗剂用于治疗或预防HIV感染。

I.术语

除非另有说明，否则技术术语以常规用法使用。分子生物学中的常用术语的定义可见于Benjamin Lewin，Genes VII，published by Oxford University Press，1999；Kendrew et al.(eds.)，The Encyclopedia of Molecular Biology，published byBlackwell Science Ltd.， 1994；和Robert A.Meyers(ed.)，Molecular Biology andBiotechnology：a Comprehensive Desk Reference，published by VCH Publishers，Inc.，1995；和其他类似的参考文献。

用于本文时，术语“包含”意指“包括”。因此，“包含抗原”意指“包括抗原”而不排除其他元素。

还应该理解，除非另有说明，针对核酸或多肽所给出的任何或全部碱基尺寸或氨基酸尺寸以及全部分子量或分子质量值都是是近似值，提供这些值用于表述目的。尽 管可以使用许多与本文描述的方法和材料类似或等同的方法和材料，但是下文描述了 特别适合的方法和材料。如果出现冲突，以本说明书(包括对术语的解释)为准。另 外，材料、方法和实施例仅是举例说明，而不意欲进行限定。

为方便对多种实施方案的理解，提供了下述术语的解释：

给药：通过选定的途径将组合物引入受试者。给药可以是局部的或全身的。例如，如果选定的途径是静脉内途径，则通过将所述组合物引入受试者的静脉内来给予所述 组合物。在一些实例中，将所公开的特异性针对HIV蛋白或多肽的抗体，或编码所述 抗体的核酸给予受试者。

试剂：用于达成目标或结果的任何物质或任何物质的组合；例如，可用于抑制受试者中的HIV感染的物质或物质的组合。试剂包括蛋白质、核酸分子、化合物、小分 子、有机化合物、无机化合物或其他目的分子。试剂可包括治疗剂(例如抗逆转录病 毒试剂)、诊断剂或药剂。在一些实施方案中，所述试剂为多肽试剂(例如HIV-中和 抗体)或抗病毒剂。本领域技术人员应理解，特定试剂可以用于实现多于一个结果。

氨基酸置换：是指用不同的氨基酸替换肽中的一个氨基酸。

扩增：一种增加核酸分子(例如RNA或DNA)的拷贝数的技术。一个扩增的实 例是聚合酶链式反应，在聚合酶链式反应中使生物样本与一对寡核苷酸引物在允许所 述引物与所述样本中的核酸模板杂交的条件下接触。在合适的条件下延伸引物，使其 与模板解离，然后重新退火、延伸和解离以增加核酸的拷贝数。扩增产物可以通过使 用标准技术进行的电泳、限制性内切酶切割图谱、寡核苷酸杂交或连接、和/或核酸测 序来表征。扩增的其他实例包括美国专利No.5,744,311公开的链置换扩增；美国专利 No.6,033,881公开的无转录等温扩增(transcription-free isothermal amplicaiton)；WO 90/01069公开的修复链式反应扩增(repair chain reaction amplification)；EP-A-320 308 公开的连接酶链式反应扩增(ligase chain reaction amplification)；美国专利No. 5,427,930公开的缺口填充连接酶链式反应扩增(gap filling ligase chain reaction amplification)；以及美国专利No.6,025,134公开的NASBA^TM RNA无转录扩增。

动物：活的多细胞脊椎生物，包括例如哺乳动物和鸟类的一个类别。术语哺乳动物包括人和非人哺乳动物。类似地，术语“受试者”包括人和兽类受试者。

抗体：是指基本由一种或多种免疫球蛋白基因编码的多肽或其抗原结合片段，所述抗体和其抗原结合片段特异性地结合和识别分析物(抗原)，例如gp120或者gp120 的抗原片段。免疫球蛋白基因包括κ、λ、α、γ、δ、ε和μ恒定区基因以及极其大量的 免疫球蛋白可变区基因。

抗体以例如完整的免疫球蛋白的形式和通过多种肽酶消化产生的抗原结合片段的 形式存在。例如，与gp120或gp120的片段(其包含被原初抗体(originating antibody)结合的表位)特异性结合的Fab、Fv和单链Fv(scFv)是gp120-特异性结合物质。scFv 蛋白是其中免疫球蛋白的轻链可变区和免疫球蛋白的重链可变区通过接头结合的融合 蛋白，而在dsFv中，所述链已经被突变以引入二硫键来稳定所述链之间的连接。该术 语还包括遗传工程改造形式例如嵌合抗体(例如人源化的鼠抗体)或异源缀合物抗体 (heteroconjugateantibody)(例如双特异性抗体)。还参见Pierce Catalog and Handbook， 1994-1995(Pierce Chemical Co.，Rockford，IL)；Kuby，J.，Immunology，3^rd Ed.，W.H. Freeman &Co.，New York，1997。

抗原结合抗体片段的实例包括：(1)Fab，包含抗体分子的单价抗原结合片段的片段，其是通过用木瓜蛋白酶消化完整抗体以产生完整轻链和一条重链的一部分而产生 的；(2)Fab′，通过用胃蛋白酶处理完整抗体，之后还原以产生完整轻链和部分重链而 产生的抗体分子片段；每个抗体分子得到两个Fab′片段；(3)(Fab′)₂，将完整的抗体用 胃蛋白酶处理后未经还原得到的抗体片段；(4)F(ab′)₂，是两个Fab′片段通过两个二硫 键连接在一起的二聚体；(5)Fv，含有表达为2条链的轻链可变区和重链可变区的遗传 工程片段；和(6)单链抗体(“SCA”)，含有由合适的多肽接头连接在一起的轻链可变区 和重链可变区的遗传工程分子，为遗传融合的单链分子形式。本文使用的术语“抗体” 还包括通过对完整抗体进行修饰或用重组DNA方法从头合成的抗体片段。

一般地，天然存在的免疫球蛋白具有通过二硫键互相连接的重链(H)和轻链(L)。轻链有λ和κ两类。有5种决定抗体分子功能活性的主要重链类型：IgM、IgD、IgG、 IgA和IgE。

每条重链和轻链均含有恒定区和可变区(所述区还称为“结构域”)。在一些实施方案中，重链可变区和轻链可变区相结合来特异性结合抗原。在另外的实施方案中，仅 需要重链可变区。例如，仅由重链组成的天然存在的骆驼抗体在不存在轻链的情况下 是有功能的并且是稳定的(参见，例如，Hamers-Casterman et al.，Nature，363：446-448， 1993；Sheriff et al.，Nat.Struct.Biol.，3：733-736，1996)。轻链可变区和重链可变区含有 被三个超变区(也被称为“互补决定区”或“CDR”)隔开的“框架”区。(参见，例如，Kabat etal.，Sequences of Proteins of Immunological Interest，U.S.Department of Healthand Human Services，1991)。不同的重链或轻链框架区的序列在种内是相对保守的。抗体的框架区，也就是组成型轻链和重链的联合框架区，负责确定CDR在三维空间中的 位置和排列。

CDR主要负责与抗原的表位结合。使用多种熟知的方案中的任意一种可以容易地确定给定的CDR的氨基酸序列边界，所述方案包括Kabat et al(“Sequences of Proteinsof Immunological Interest，”5th Ed.Public Health Service，National Institutesof Health， Bethesda，MD，1991；“Kabat”编号方案)，Al-Lazikani et al.，(JMB 273，927-948，1997； “Chothia”编号方案)，和Lefranc et al.(“IMGT unique numbering forimmunoglobulin and T cell receptor variable domains and Ig superfamily V-likedomains，”Dev.Comp. Immunol.，27：55-77，2003；“IMGT”编号方案)所描述的那些。

每条链的CDR一般被称为CDR1、CDR2和CDR3(从N-末端至C-末端)，一般 还通过具体CDR所在的链标示。所以V_H CDR3是来自其所在抗体的重链可变区的 CDR3，而V_L CDR1是来自其所在抗体的轻链可变区的CDR1。轻链CDR有时被称为 LCDR1、LCDR2和LCDR3，重链CDR有时被称为LCDR1、LCDR2和LCDR3。

提及“V_H”或“VH”时，是指免疫球蛋白的重链可变区，包括例如Fv、scFv、dsFv 或Fab的抗体片段的重链可变区。提及“V_L”或“V_L”时，是指免疫球蛋白的轻链可变区， 包括Fv、scFv、dsFv或Fab的轻链可变区。

“单克隆抗体”是由B-淋巴细胞的单个克隆或由被单一抗体的轻链和重链基因转染 的细胞产生的抗体。单克隆抗体是由本领域技术人员所知晓的方法产生的，例如通过将骨髓瘤细胞和免疫脾细胞融合制备杂交抗体形成细胞。这些融合细胞及它们的后代 称为“杂交瘤细胞”。单克隆抗体包括人源化和全人单克隆抗体。在一些实例中，单克 隆抗体是从受试者中分离的。可以确定这种分离的单克隆抗体的氨基酸序列。

“人源化”免疫球蛋白是含有人框架区和一个或多个来自非人(例如小鼠、大鼠或合 成的)免疫球蛋白的CDR的免疫球蛋白。提供CDR的非人免疫球蛋白被称为“供体”， 提供框架的人免疫球蛋白被称为“受体”。在一个实施方案中，在人源化免疫球蛋白中， 所有的CDR均来源于供体免疫球蛋白。恒定区可以不存在，但是如果存在则必须与 人免疫球蛋白恒定区基本相同，例如具有至少约85-90％的同一性，例如约95％或更高 的同一性。因此，除了(可能地)CDR外，人源化免疫球蛋白的所有部分均与天然的 人免疫球蛋白序列的相应部分基本相同。“人源化抗体”是含有人源化轻链和人源化重 链免疫球蛋白的抗体。人源化抗体与提供CDR的供体抗体结合相同的抗原。人源化 免疫球蛋白或抗体的受体框架可以具有有限数量的置换，所述置换采用的是取自供体 框架中的氨基酸。人源化或其它的单克隆抗体可以有其它的基本不影响抗原结合或其 它免疫球蛋白功能的保守氨基酸置换(例如在框架区)。人源化免疫球蛋白可以通过遗 传工程方式构建(例如，参见美国专利NO.5,585,089)。

抗体支架：是指在抗体表面植入来自目的抗体的一个或多个CDR的外源蛋白。可以以维持其相关结构和构象的方式依靠计算进行CDR的移植。为了容纳CDR移植物， 在受体支架中进行突变。

抗体免疫原性：抗体的一种性质，当抗体被给予至受试者例如人受试者时，所述抗体因该性质而产生免疫应答。在一些实施方案中，公开的抗体不具有免疫原性或具 有低免疫原性，例如，与标准对照或参照抗体相比，公开的抗体不具有显著更高的免 疫原性。确定抗体的免疫原性的方法是本领域普通技术人员已知的(参见，例如， Krieckaert etal.，Current Opin Rheumatol.，24：306-311，2012；Stas和Lasters，IDrugs， 12：169-173，2009)。在一个非限制性实例中，可以通过使用针对目的抗体的ELISA对 来自测试受试者的血浆或血清进行测定，来确定免疫原性。

抗体自身反应性：抗体的一种性质，抗体因有该性质而会与自身表位反应，所述自身表位是由所述受试者产生的蛋白和/或脂质的表位。不具有自身反应性的抗体基本 上不与存在于来自受试者的细胞膜上的表位或脂质结合。确定抗体是否与自身表位反 应的方法是本领域普通技术人员已知的并在本文中(例如，在实施例1和8中)有所 描述。在一个实例中，使用抗-心磷脂测定或抗-核抗原(ANA)测定来评估抗体自身 反应性。例如，所述抗-ANA测定可包括抗-ANA

测定或ANA细胞染色 测定。在一些实施方案中，公开的抗体不具有自身反应性，或具有极小的自身反应性。 在一个非限制性实例中，与所述VRC01抗体相比，公开的抗体不具有显著的更高的 自身反应性，例如使用抗-ANA

测定或ANA细胞染色测定进行测量时。 在另外的非限制性实例中，公开的抗体不具有在本底水平以上的自身反应性，例如使 用抗-ANA

测定或ANA细胞染色测定进行测量时。

抗原：能够在动物体内刺激产生抗体或T细胞应答的多肽，包括通过注射或吸收进入动物体内的多肽。抗原与特异性体液免疫或细胞免疫产物反应，所述产物包括由 异源抗原(例如所述公开的抗原)诱导的产物。“表位”或“抗原决定簇”是指B和/或T 细胞应答的抗原区域。在一个实施方案中，当表位与MHC分子一同呈递时，T细胞 应答表位。表位可以由连续的氨基酸或因蛋白质的三级折叠而并排的不连续氨基酸形 成。由连续氨基酸形成的表位暴露在变性溶剂后通常还可以保持，而通过三级折叠形 成的表位用变性溶剂处理后通常不再存在。表位一般包括独特空间构象的至少3个并 且更常见地至少5个、约9个或约8-10个氨基酸。确定表位空间构象的方法包括，例 如X-射线晶体法和核磁共振。

免疫原性多肽和免疫原性肽是抗原的非限制性实例。在一些实例中，抗原包括来自目的病原体(例如病毒)的多肽。能够在受试者中刺激产生针对病毒表达的多肽的 抗体或T细胞应答的抗原是病毒抗原。“HIV抗原”能够在受试者中刺激产生针对HIV 表达的多肽的抗体或T细胞应答。在一些实施方案中，HIV抗原是HIV表达的多肽， 例如HIV ENV，或其片段例如gp120。

“靶表位”是抗原上与目的抗体例如单克隆抗体特异性结合的具体表位。在一些实例中，靶表位包括与目的抗体接触的氨基酸残基，因此靶表位可以通过确定与目的抗 体接触的氨基酸残基来选择。

抗原性表面：是指能够激发免疫应答的分子表面，所述分子例如蛋白质，例如gp120蛋白或多肽。抗原性表面包括所述表面的界定特征，例如三维形状和表面电荷。 抗原性表面包括出现在gp120多肽上的表面以及模仿gp120多肽表面的化合物(模仿 物(mimetics))的表面。在一些实例中，抗原性表面包括gp120上与CD4受体结合 的全部或部分表向。

抗-逆转录病毒试剂：特异性抑制逆转录病毒复制或感染细胞的试剂。抗逆转录病毒药物的非限制性实例包括进入抑制剂(entry inhibitor)(例如恩夫韦肽(enfuvirtide))、 CCR5受体拮抗剂(例如阿拉韦罗(aplaviroc)、维立韦罗(vicriviroc)、马拉韦罗 (maraviroc))、逆转录酶抑制剂(例如拉米夫定(lamivudine)、齐多夫定(zidovudine)、 阿巴卡韦(abacavir)、替诺福韦(tenofovir)、恩曲他滨(emtricitabine)、依非韦伦 (efavirenz))、蛋白酶抑制剂(例如lopivar、利托那韦(ritonavir)、拉替拉韦(raltegravir)、 达芦那韦(darunavir)、阿扎那韦(atazanavir))、成熟抑制剂(例如，α干扰素、贝韦 立马(bevirimat)和vivecon)。

抗逆转录病毒疗法(ART)：用于HIV感染的治疗疗法，包括在治疗过程中将至 少一种抗逆转录病毒试剂(例如，1种、2种、3种或4种抗逆转录病毒试剂)给予感 染HIV的个体。抗逆转录试剂的非限制性实例包括进入抑制剂(例如恩夫韦肽)、CCR5 受体拮抗剂(例如阿拉韦罗、维立韦罗、马拉韦罗)、逆转录酶抑制剂(例如拉米夫定、 齐多夫定、阿巴卡韦、替诺福韦、恩曲他滨、依非韦伦)、蛋白酶抑制剂(例如lopivar、 利托那韦、拉替拉韦、达芦那韦、阿扎那韦)、成熟抑制剂(例如，α干扰素、贝韦立 马和vivecon)。ART疗法的一个实例包括使用替诺福韦、恩曲他滨和依非韦伦的组合 进行治疗。在一些实例中，ART包括高效抗逆转录病毒疗法(Highly Active Anti-Retroviral Therapy)(HAART)。

原子坐标或结构坐标：与由原子(散射中心)例如抗原或与抗体形成复合物的抗原衍射X射线单色光束时获得的来自于模式相关数学方程式的数学坐标。在一些实例 中，所述抗原可以是晶体形式的gp120、gp120：抗体复合物或其结合物。衍射数据被用 于计算所述晶体重复单位的电子密度图。所述电子密度图被用于确定各原子在晶体晶 胞中的位置。在一个实例中，术语“结构坐标”是指由例如晶体形式的gp120的原子衍 射X射线单色光束时获得的来自于模式相关数学方程式的笛卡尔(Cartesian)坐标。

本领域普通技术人员理解由X-射线晶体学确定的一组结构坐标不是没有标准误差的。对于本发明的目的，当用骨架原子重叠时，具有小于约1.0埃例如约0.75、或 约0.5或约0.25埃的蛋白骨架原子(N、Cα、C和0)均方根偏差的任一组结构坐标应当 (没有明确声明相反时)被认为是相同的。

结合亲和力：是指抗体或其抗原结合片段对抗原的亲和力。在一个实施方案中，亲和力是通过Frankel et al.，Mol.Immunol.，16：101-106，1979描述的改进的Scatchard方 法计算的。在另一个实施方案中，结合亲和力是通过抗原/抗体的解离速率计算的。在又另一个实施方案中，高结合亲和力是通过竞争性放射免疫分析测定的。在一些实例 中，高亲和力是至少约1×10^-8M。在其他实施方案中，高结合亲和力是至少约1.0×10^-8， 至少约5.0×10^-8，至少约1.0×10^-9，至少约1.5×10^-9，至少约2.0×10^-9，至少约2.5×10^-9或至少约3.0×10^-9。

双重特异性抗体：

由两个不同抗原结合结构域组成从而与两个不同抗原表位结合的重组分子。双重特异性抗体包括通过化学方法或遗传学方法连接的具有两个抗原结合结构域的分子。 可使用接头来连接所述抗原结合结构域。所述抗原结合结构域可为单克隆抗体、抗原 结合片段(例如，Fab、scFv)、eAd、双重特异性单链抗体或其组合。双重特异性抗 体可包含一个或多个恒定区，但不必须包含恒定区。双重特异性抗体的实例为包含通 过肽接头连接的与gp120特异性结合的scFv和与除了gp120之外的其他抗原特异性结 合的ScFv。另一个实例是包含连接的Fab和scFv的双重特异性抗体，所述Fab与gp120 特异性结合，所述scFv与除了gp120之外的其他抗原特异性结合。

CD4：分化因子簇4多肽；介导与II类MHC分子的相互作用的T-细胞表面蛋白。 在HIV-1感染期间，CD4还作为HIV在T-细胞上的主要受体位点。已知CD4与HIV 的gp120结合。已知的CD4前体序列具有疏水信号肽、约370个氨基酸的细胞外区域、 与II类MHCβ链的跨膜结构域有显著同一性的高度疏水区段以及带有大量电荷的40 个残基的细胞内序列(Maddon，Cell 42：93，1985)。

术语“CD4”包括通过化学(例如酶)消化或遗传工程途径获得的衍生自CD4的多 肽分子(包括CD4片段)。这样的片段可以是一个或多个完整的CD4蛋白结构域。CD4 的胞外结构域由4个连续的免疫球蛋白样区域(D1、D2、D3和D4，参见Sakihama et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.92：6444，1995；美国专利No.6,117,655)组成，并且已证实第1-183位氨基酸参与gp120结合。例如，源自CD4的结合分子或结合结构域会包含足以介导 所述结合片段和CD4的天然或病毒结合位点之间特异性的且功能性的相互作用的 CD4蛋白部分。一种这样的结合片段包含CD4的D1和D2胞外结构域两者(D1D2还 是由D1D2D3和D4组成的可溶性CD4或sCD4的片段)，但是更短的片段也可能会 提供特异性且功能性的CD4样结合。gp120-结合位点已被定位至CD4的D1。

CD4多肽还包括“CD4衍生的分子”，其包括天然CD4结构的类似物(非蛋白质有 机分子)、衍生物(由所公开蛋白序列得到的化学官能化的蛋白质分子)或模拟物(三 维结构类似的化合物)以及保留了与靶分子的功能性结合能力的蛋白序列变体或遗传 等位基因。

CD4结合位点(CD4BS)抗体：与gp120多肽的CD4结合表面相结合或基本上 叠盖住该结合表面的抗体。该抗体干扰或阻止CD4结合gp120多肽。

嵌合抗体：是指含有源自两个不同抗体(例如来自不同的种)的序列的抗体。在 一些实例中，嵌合抗体包含一个或多个来自一种人抗体的CDR和/或框架区以及来自 另一种人抗体的CDR和/或框架区。

克隆变体：在存在具有与种系相比相同的突变的V区、相同VDJ或VH基因用途 和相同的D和J长度的情况下，区别在于一个或多个核苷酸或氨基酸的任何序列。所 述“种系”序列意为编码不含有突变(例如体细胞突变)的抗体/免疫球蛋白(或其任何 片段)的序列。同源性百分数代表任何类型的重链部分在与抗原接触后经历的突变事 件的指标。

缀合物：连接在一起(例如通过共价键连接在一起)的两个分子的复合物。在一 个实施方案中，抗体与效应分子连接：例如，与gp120特异性结合的抗体与效应分子 或毒素共价连接。所述连接可以是通过化学或重组方式形成的。在一个实施方案中， 所述连接是化学连接，其中，抗体部分和效应分子之间的反应产生了在所述两个分 子之间形成的共价键以形成一个分子。在所述抗体和效应分子之间可任选地包含肽 接头(短的肽序列)。因为缀合物可由两个具有独立功能的分子(例如抗体和效应 分子)制备，所以它们有时还被称为“嵌合分子”。在一个实施方案中，与效应分子连 接的抗体进一步与脂质或其他分子(蛋白或肽)连接以增加其在体内的半衰期。

接触：以直接物理联系方式的放置；包括固体和液体形式，其可在体内或体外发生。接触包括一个分子和另一个分子的接触，例如一个多肽(例如抗原)表面上的氨 基酸与另一个多肽(例如抗体)的接触。接触还可以包括接触细胞，例如通过放置抗 体使其与细胞直接物理联系。

对照：参考标准品。在一些实施方案中，所述对照是阴性对照，例如从未感染HIV的健康患者获得的样品。在其他实施方案中，所述对照为阳性对照，例如从诊断感染 了HIV的患者获得的组织样品。在其他实施方案中，所述对照为历史对照或标准参考 值或值域(例如以前测试的对照样品，例如预后或结果已知的HIV患者的组，或代表 基线或正常值的样品的组)。

测试样品与对照之间的差别可为增加或相反地为减少。所述差别可为定性的差别或定量的差别，例如统计学上显著的差别。在一些实例中，差别为相对于对照增加或 减少至少约5％，例如至少约10％，至少约20％，至少约30％，至少约40％，至少约 50％，至少与60％，至少约70％，至少约80％，至少约90％，至少约100％，至少约 150％，至少约200％，至少约250％，至少约300％，至少约350％，至少约400％，或 至少约500％。

交叉互补：使用特异性结合目的抗原的表位的抗体的重链可变区(来自第一抗体)和特异性结合的相同表位的抗体的轻链可变区(来自第二抗体)而形成包含重链可变 区和轻链可变区的抗体，其中由所述重链可变区和轻链可变区形成的抗体保留了其结 合所述表位的能力，并且其中所述第一和第二抗体是不同的抗体。因此，在交叉互补 中，形成抗体的所述轻链可变区和重链可变区来自不同来源，但所形成的嵌合抗体仍 然结合所述表位。在一些实施方案中，所述抗原为gp120。在一个实施方案中，与gp120 特异性结合的抗体包含与轻链交叉互补的重链，其中所述重链包含VRC07的重链可 变区(SEQ ID NO：2)，所述轻链包含VRC01的轻链可变区(SEQ ID NO：9)。

细胞毒性：与生物体其余部分的细胞相比，分子例如免疫毒素对意欲靶向的细胞的毒性。在一个实施方案中，与之相反，术语“毒性”是指免疫毒素对除了所述免疫毒 素的靶向部分所意欲靶向的那些细胞之外的细胞的毒性，并且术语“动物毒性”是指通 过所述免疫毒素对除了所述免疫毒素所意欲靶向的那些细胞之外的细胞的毒性，而实 现的所述免疫毒素对动物的毒性。

可检测的标记物：可检测的分子(也被称为标签标)，其直接或间接与第二分子(例如抗体)缀合以有助于所述第二分子的检测。例如，所述可检测的标记物能够通过 ELISA、分光光度法、流式细胞术、显微术或诊断成像技术(例如CT扫描、MRI、超 声、光导纤维镜检查和腹腔镜检查)来检测。可检测的标记物的具体非限制性实例包 括荧光基团、荧光蛋白、化学发光试剂、酶连接物、放射性同位素和重金属或化合物 (例如，超顺磁氧化铁纳米晶体，用于通过MRI进行的检测)。在一个实例中，“标签 标的抗体”是指在所述抗体中纳入另外的分子。例如，所述标签标为可检测的标记物， 例如纳入放射性标记的氨基酸或结合可通过标记的抗生物素蛋白来检测的具有生物素 基部分的多肽(例如，能够通过光学或比色方法检测的含有荧光标记物或酶学活性的 链亲和素)。多种标记多肽和糖蛋白的方法是本领域已知的并且可以使用。用于多肽的 标签标的实例包括，但不限于以下：放射性同位素或放射性核素(例如³⁵S或¹³¹I)、 荧光标签标(例如异硫氰酸荧光素(FITC)、罗丹明、镧系元素磷光体(lanthanide phosphor))、酶标签标(例如辣根过氧化物酶、β-半乳糖苷酶、荧光素酶、碱性磷酸 酶)、化学发光标记物、生物素基团、由第二报告分子物识别的预设多肽表位(例如亮 氨酸拉链对序列、第二抗体的结合位点、金属结合结构域、表位标签)或磁性试剂， 例如钆螯合物。在一些实施方案中，标签标被通过不同长度的间隔臂连接以减少可能的位阻。使用可检测的标记物的方法和对选择适用于不同目的的可检测标记物的指导 论述于例如Sambrook et al(Molecular Cloning：A Laboratory Manual，Cold SpringHarbor，New York，1989)和Ausubel et al.(In Current Protocols in MolecularBiology，John Wiley & Sons，New York，1998)中。

检测：鉴定某些事物的存在、出现或事实。检测的一般方法是本领域技术人员已知的，并且可以用本文公开的方案和试剂进行补充。例如，本文包括检测受试者中的 表达gp120的细胞的方法。

DNA测序：确定给定DNA分子的核苷酸顺序的方法。“深度测序”的一般特征是 对遗传材料进行扩增，例如通过聚合酶链式反应，然后将所述扩增的产物连接到固体 表面。然后对所述扩增的靶遗传材料进行平行测序，并通过计算机捕捉序列信号。一 般可使用自动化的Sanger测序(AB13730xl genome analyzer)、固体载体上的焦磷酸测 序(454测序，Roche)，使用可反转的终止物的边合成边测序(

Genome Analyzer)、连接测序(ABI

)或使用虚拟终止物的合成测序

来进行测序。

在一些实施方案中，使用由Frederick Sanger开发的链终止法进行DNA测序，因此称为“基于Sanger的测序”或“SBS”。该技术利用了使用修饰的核苷酸底物进行的 DNA合成反应的序列特异性终止。通过使用与该区域的模板互补的短的寡核苷酸引物， 来起始在所述模板DNA上的特定位点的延伸。在四种脱氧核苷酸碱基(DNA构建块) 和低浓度的链终止核苷酸(最常用双-脱氧核苷酸)的存在下，使用DNA聚合酶对所 述寡核苷酸引物进行延伸。通过DNA聚合酶有限地纳入所述链终止核苷酸，产生一 系列相关的DNA片段，所述片段仅在该特定核苷酸存在的位置终止。然后通过在聚 丙烯酰胺凝胶中或者在填充有粘性聚合物的窄玻璃管(毛细管)中进行电泳来将所述 片段按照大小分开。使用标记的引物的一种替代方案，是使用标记的终止物；该方法 通常被称为“染料终止物测序”。

“焦磷酸测序”是基于阵列的方法，其已经被454 Life Sciences(Branford，CT)商业化。在所述基于阵列的方法的一些实施方案中，将单链DNA退火到微珠上，然后 通过

进行扩增。然后将这些DNA-结合微珠与能够在ATP的存在下产生光的 酶一起置于光导纤维芯片上的孔中。当游离的核苷酸冲刷该芯片时，当核苷酸与它们 的互补碱基对连接时发生PCR扩增并产生ATP，从而产生光。添加一种(或多种)核 苷酸导致发生反应，该反应产生在所述仪器中可通过电荷耦合元件(CCD)相机记录 的光信号。信号强度与在一个核苷酸流中的核苷酸(例如均聚物延伸片段)的数目成 比例。

效应分子：嵌合分子中意欲对嵌合分子靶向的细胞或蛋白起到所需作用的一部分。 效应分子还被称为效应部分、治疗剂或诊断试剂，或类似术语。

表位：抗原决定簇。它们是具有抗原性(即引起特异性免疫应答)的分子上的特 定化学基团或肽序列。抗体特异性结合多肽上的特定抗原表位。在一些实例中，所公 开抗体与来自HIV的gp120表面上的表位特异性结合。

表位支架：是指表面移植有外源目的表位的外源蛋白。可以以维持其相关结构和构象的方式依靠计算进行表位的移植。在受体支架内进行突变以容纳表位移植物。可 以改造移植物以代表不同进化枝和株系的序列。

Fc多肽：是指含有除第一个恒定区免疫球蛋白结构域之外的抗体恒定区的多肽。Fc区域通常是指IgA、IgD和IgG的最后两个恒定区免疫球蛋白结构域以及IgE和IgM 的最后三个恒定区免疫球蛋白结构域。Fc区域还可以包含这些结构域N末端的部分或 全部的柔性铰链。对于IgA和IgM，Fc区域可以包含或不包含尾片段，并且可以由J 链结合或不由J链结合。对于IgG，Fc区域包含免疫球蛋白结构域Cγ2和Cγ3以及在 Cγ1和Cγ2之间的铰链的较低部分。虽然Fc区域的边界是可变的，但是人IgG重链 Fc区域通常被定义为包含残基C226或P230至其羧基末端，其中的编号以Kabat中的 EU索引为依据。对于IgA，Fc区域包含免疫球蛋白结构域Cα2和Cα3以及在Ccd和 Cα2之间的铰链的较低部分。Fc区域的定义中还包括Fc区域的功能等同类似物和变 体。Fc区域的功能等同类似物可以是变体Fc区域，其包含相对于野生型或天然存在 的Fc区域的一个或多个氨基酸修饰。变体Fc区域与天然存在的Fc区域具有至少50％ 的同源性，例如约80％和约90％或至少约95％的同源性。Fc区域的功能等同类似物可 以包含从蛋白的N-或C-末端的一个或多个氨基酸残基的添加或缺失，例如不超过30 个或不超过10个添加和/或缺失。Fc区域的功能等同类似物包括与融合伙伴可操作性 连接的Fc区域。Fc区域的功能等同类似物必须包含如上文所定义的构成Fc区域的所 有Ig结构域的主要部分；例如本文定义的IgG和IgA的Fc区域必须包含CH₂编码序 列的主要部分和CH₃编码序列的主要部分。因此，单独的CH₂区域或单独的CH₃区域 不被认为是Fc区域。Fc区域可以是单独的该区域或处于Fc融合多肽中的该区域(免 疫粘合素，见下文)。

框架区：是指介于CDR之间的氨基酸序列。包括可变轻链和可变重链的框架区。 框架区起到使CDR处于对抗原结合来说合适的方向的作用。

gp120：一种来自人免疫缺陷病毒(HIV)的包膜蛋白。该包膜蛋白最初作为大小为845-870个氨基酸的较长的前体蛋白(被称为gp160)合成。gp160由细胞蛋白酶切割 成gp120和gp41。gp120含有HIV包膜糖蛋白复合物暴露在表面的外部结构域的大部 分，并且gp120与细胞CD4受体和细胞趋化因子受体(例如CCR5)都能结合。

成熟的gp120野生型多肽在一级序列中有约500个氨基酸。gp120被高度N-糖基化，导致其表观分子量为120kD。该多肽由5个保守区域(C1-C5)和5个高变区域 (V1-V5)组成。野生型gp120多肽的示例性序列见

例如登记号 AAB05604和AAD12142(2009年10月16日公布)，其以引用的方式纳入本文。可以 理解，gp120序列与在

给出的gp120序列(例如登记号AAB05604和 AAD12142)之间有很多差异，这些变体由本领域技术人员认定是gp120。

gp120核心具有含有以下两个结构域的分子结构：“内部”结构域(面向gp41)和“外部”结构域(大部分暴露在寡聚包膜糖蛋白复合物的表面)。所述两个gp120结构域被 不属于其中任何一个结构域的“桥连片层”(bridging sheet)隔开。gp120核心含有25 个β链、5个α螺旋和10个确定的环区段。

在本文中被称为V3环的第三可变结构域是具有约35个氨基酸的环，其对结合共受体(co-receptor)和确定将结合哪个共受体是很关键的。在一些实例中，V3环包含 296-331位残基。

HIV包膜蛋白(Env)：HIV包膜蛋白最初被合成为命名为gp160的大小为845-870 个氨基酸的较长的前体蛋白。gp160形成同源三聚体并在高尔基体中被糖基化。然后 其在体内被细胞蛋白酶切割成gp120和gp41。gp120含有HIV包膜糖蛋白复合物暴露 在表面的外部结构域的大部分，并且gp120与细胞CD4受体和细胞趋化因子受体(例 如CCR5)都能结合。gp41包含跨膜结构域，并保留了三聚构型；其与gp120以非共价 的方式相互作用。

宿主细胞：载体可在其中增殖并且表达载体中的DNA的细胞，例如所公开的抗 体可在宿主细胞内表达。所述细胞可为原核的或真核的。所述术语还包括受试者宿主 细胞的任何子代。应理解，因为在复制过程中可能发生突变，所以所有子代可能不与 亲本细胞相同。然而，当使用术语“宿主细胞”时，包括这类子代。

人免疫缺陷病毒(HIV)：一种在人体中引起免疫抑制(HIV病)并导致被称为获 得性免疫缺陷综合征(AIDS)的综合征的逆转录病毒。“HIV病”是指被HIV病毒感染 (通过抗体或蛋白质印迹研究确定)的人的公认的体征和症状群(包括患有机会性感 染)。与该疾病相关的实验室发现包括T细胞的逐步下降。HIV包括1型HIV(HIV-1) 和2型HIV(HIV-2)。用作动物模型的相关病毒包括猿免疫缺陷病毒(SIV)和猫免 疫缺陷病毒(FIV)。使用HAART治疗HIV-1已经有效降低了病毒载量并减轻了HIV-1 感染在被感染的个体中的造成的影响。

HXB2编号系统：一种用于HIV蛋白和核酸序列的参考编号系统，对于所有其他 HIV株系序列，其使用HIV-1 HXB2株系序列作为参照。本领域普通技术人员熟悉所 述HXB2编号系统，并且该系统示于“Numbering Positions in HIV Relative to HXB2CG，” BetteKorber et al.，Human Retroviruses and AIDS 1998：A Compilation and Analysis ofNucleic Acid and Amino Acid Sequences.Korber B，Kuiken CL，Foley B，Hahn B，McCutchan F，Mellors JW，and Sodroski J，Eds.Theoretical Biology and BiophysicsGroup， Los Alamos National Laboratory，Los Alamos，NM中，其以引用的方式全文纳入本文。 HXB2也被称为：HXBc2(用于HXB克隆2)；HXB2R(Los Alamos HIV数据库中， R为修正的，因为其相对于最初的HXB2序列进行了轻微地修正)；和HXB2CG(在 GenBank^TM中，用于HXB2全基因组)。用于本文公开的gp120多肽的编码是相对于 HXB2编码方案的。

IgA：主要由公知的免疫球蛋白α基因编码的属于抗体类的多肽。在人中，该类 多肽或同种型包括IgA₁和IgA₂。IgA抗体可以以单体、主要为二聚体形式的聚合物(被 称为pIgA)以及分泌型IgA的形式存在。野生型IgA的恒定链包含被称为尾片段(tp) 的在其C-末端的18-氨基酸延伸。多聚IgA由浆细胞分泌，由被称为J链的15-kDa肽 通过尾片段中的保守半胱氨酸残基将IgA的两个单体相连。

IgG：主要由公知的免疫球蛋白γ基因编码的属于抗体类或同种型的多肽。在人中， 该类多肽包括IgG₁、IgG₂、IgG₃和IgG₄。在小鼠中，该类多肽包括IgG₁、IgG_2a、IgG_2b、IgG₃。

免疫复合物：抗体与可溶抗原结合形成免疫复合物。可以通过本领域技术人员已知的常规方法检测免疫复合物的形成，所述方法例如免疫组织化学、免疫沉淀法、流 式细胞术、免疫荧光显微镜检查、ELISA、免疫印迹(例如，蛋白质印迹)、磁共振成 像、CT扫描、X-射线和亲和色谱法。可使用本领域公知的方法对选择的抗体的免疫 结合性质进行定量。

免疫粘合素：是指蛋白质与免疫球蛋白的Fc区域的分子融合体，其中所述免疫球蛋白保留了特异性，例如Fc受体结合和增加的半衰期。Fc融合体将免疫球蛋白的Fc 区域与融合伙伴联合起来，所述融合伙伴一般可以是任何蛋白质、多肽、肽或小分子。 在一个实例中，免疫粘合素包含免疫球蛋白γ1重链恒定区的铰链、CH₂和CH₃结构域。 在另一个实例中，所述免疫粘合素包含IgG的CH₂和CH₃结构域。

免疫原：能够诱导哺乳动物中的免疫应答的化合物、组合物或物质(例如，蛋白 或其部分)，所述哺乳动物例如感染了病原体或具有感染病原体的风险的哺乳动物。免 疫原的给予可导致针对目的病原体的保护性免疫和/或主动免疫。在一些实例中，免疫 原为HIV抗原。免疫原的实例包括，但不限于，肽、脂质、多糖、其组合，和包含抗 原决定簇的核酸(例如被免疫细胞识别的那些核酸)。在一些实例中，免疫原包括来自 目的病原体的肽。示例性病原体包括细菌、真菌、病毒和寄生虫。在具体的实例中， 免疫原来自HIV，例如来自HIV的gp120多肽或其具有抗原性的片段。

免疫探针：可用于从血清(包括从人患者血清)中选择针对特定表位的抗体的分子。表位支架及其相关的点突变体可以在针对表位移植物的抗体的正选择和负选择中 用作免疫探针。在一些实例中，免疫探针是gp120的工程变体。

免疫反应条件：包括提及使针对特定表位产生的抗体能够与该表位结合的条件，在该条件下所述结合的程度可检测地高于与几乎所有其他表位结合的程度，并且/或者 基本排除与几乎所有其他表位的结合。免疫反应条件依赖于抗体结合反应的形式并且 通常是免疫测定方案中使用的条件或者体内遇到的反应条件。对于免疫测定形式和条 件的描述，参见Harlow & Lane，文献见上文。所述方法中使用的免疫反应条件是指“生 理条件”，包括有生命的哺乳动物或哺乳动物细胞中的典型条件(如温度、重量摩尔渗 透压浓度、pH值)。虽然认识到有些器官处于极端条件，但是生物内和细胞内的环境 通常在pH 7左右(例如pH 6.0至pH 8.0，更常见pH 6.5至7.5)，包含作为主要溶剂 的水，存在的温度为高于0℃并低于50℃。重量摩尔渗透压浓度在维持细胞生存和增 殖的范围内。

抑制或治疗疾病：抑制例如有患上疾病(诸如获得性免疫缺陷综合征(AIDS)) 的风险的受试者中的疾病或病症的完全发展。“治疗”是指在疾病或病理状态开始出现 之后改善其体征或症状的治疗性介入。术语“改善”当述及疾病或病理状态时是指所述 治疗的任何可观察到的有益效果。有益效果可被以下方面所证实：例如在易感受试者 中所述疾病临床症状的推迟发生、所述疾病的一些或全部临床症状严重程度的减轻、 所述疾病发展趋缓、病毒载量降低、所述受试者整体健康状况改善或其它本领域熟知 的所述具体疾病特定的其他参数。“预防性”治疗是指给予未出现疾病症状或只有初期 症状的旨在降低患病风险的治疗。

分离的：“分离的”生物组分(例如细胞(例如B细胞)、核酸、肽、蛋白质或抗体) 已被从其天然存在的有机体的细胞中的其他生物组分(例如其他染色体DNA和RNA 以及染色体外DNA和RNA以及蛋白质)基本分离、分开地生产或从中纯化出来。因 此，已经被“分离”的核酸、肽和蛋白质包括用标准纯化方法纯化的核酸和蛋白质。该 术语还包括通过在宿主细胞中重组表达制备的核酸、肽和蛋白质以及化学合成的核酸。 在一些实例中，抗体，例如对gp120特异的抗体，可以被分离，例如从HIV感染的受 试者中分离。

K_d：是指给定相互作用的解离常数，所述相互作用例如多肽配体相互作用或抗原抗体相互作用。例如，对抗体(例如VRC07或本文公开的其变体)和抗原(例如gp120) 的双分子相互作用来说，K_d是双分子相互作用中单个组分的浓度除以复合物的浓度。

标记物：是与另一个分子(例如抗体或蛋白)直接或间接缀合以便于该分子的检测的可检测化合物或组合物。标签的具体的非限定性实例包括荧光标签、酶连接(enzymatic linkage)和放射性同位素。在一些实例中，所公开抗体被标记。

接头：一种双功能的分子，其可用于将两个分子连接成一个连续分子，例如将效应分子与抗体分子连接起来。在一些实施方案中，缀合物包含介于效应分子或可检测 标记物与抗体之间的接头。在一些实施方案中，所述接头在细胞内条件下是可切割的， 使得所述接头的切割能够在细胞内环境中将所述效应分子或可检测标记物从所述抗体 释放出来。在其他实施方案中，所述接头是不可切割的，并且所述效应分子或可检测 标记物可以被释放，例如，通过抗体降解。在一些情况中，接头是在抗体结合片段(例 如Fv片段)内的肽，其用于间接地使重链可变区与轻链可变区连结起来。

在一些实施方案中，术语“缀合”、“接合”、“键合”或“连接”是指使两个多肽成为一个连续的多肽分子，以将放射性核素或其他分子共价地连接到多肽(例如特异性结合gp120的抗体或其抗体结合片段)。在具体上下文中，该术语包括提及将配体例如抗体 部分与效应分子连接在一起。所述连接可以通过化学或重组的方法。“化学方法”是指 所述抗体部分和所述效应分子之间的反应使得在所述两个分子之间形成共价键以形成 一个分子。

中和抗体：是指通过与传染原(infectious agent)上的特定抗原结合来降低所述传 染原的感染滴度的抗体。在一些实例中，传染原是病毒。在一些实例中，对gp120特 异的抗体中和HIV的感染滴度。“广谱中和抗体”是与相关抗原结合并抑制其功能的抗 体，所述相关抗原例如与所述抗原的抗原性表面具有至少85％、90％、95％、96％、 97％、98％或99％同一性的抗原。对于来自病原体的抗原例如病毒，所述抗体可与来 自所述病原体的多于一种类和/或亚类的抗原结合并抑制其功能。例如，对于人免疫缺 陷病毒，所述抗体可与抗原例如来自多于一个进化枝的gp120结合并抑制其功能。在 一个实施方案中，HIV的广谱中和抗体与HIV的其他抗体的不同之处在于它们中和循 环系统中的诸多类型的HIV的百分数很高。

核酸：由通过磷酸二酯键连接的核苷酸单位(核糖核苷酸、脱氧核糖核苷酸、其 相关的天然存在的结构变体，和其合成的非天然存在的类似物)组成的聚合物、其相 关的天然存在的结构变体和其合成的非天然存在的类似物。因此，该术语包括其中核 苷酸以及其间的键包括非天然存在的合成类似物的核苷酸聚合物，所述核苷酸以及其 间的键例如但不限于硫代磷酸酯、氨基磷酸酯(phosphoramidate)、甲基磷酸酯、手性 -甲基磷酸酯、2-O-甲基核糖核苷酸、肽核酸(PNA)等。这样的多核苷酸可例如使用自 动DNA合成仪来合成。术语“寡核苷酸”通常是指短的多核苷酸，一般不超过约50个 核苷酸。应理解当核苷酸序列用DNA序列(即，A、T、G、C)表示时，这也包括RNA 序列(即，A、U、G、C)，其中“U”代替“T”。

本文使用常规的符号描述核苷酸序列：单链核苷酸序列的左手端为5′-末端，双链核苷酸序列的左手方向称为5′-方向。从5′至3′将核苷酸加至新生RNA转录本的方向 称为转录方向。与mRNA有相同序列的DNA链被称为“编码链”：DNA链中与该DNA 转录产生的mRNA有相同的序列并且位于该RNA转录本5′-末端的5′一侧的序列被称 为“上游序列”；DNA链中与该DNA转录产生的mRNA链有相同的序列并且位于RNA 转录本3′-末端的3′一侧的序列被称为“下游序列”。

“cDNA”是指与mRNA互补或相同的DNA，可以是单链或双链形式。

“编码”是多核苷酸(例如基因、cDNA或mRNA)中的特定核苷酸序列作为在生 物学过程中合成具有确定核苷酸序列(即rRNA、tRNA和mRNA)或确定氨基酸序列 和由其产生的生物属性的其他聚合物和大分子的模板的固有特性。因此，如果某个基 因产生的mRNA的转录和翻译在细胞或其它的生物系统中产生蛋白质，则所述基因编 码蛋白质。某个基因或cDNA的编码链(其核苷酸序列与mRNA序列相同并且通常在 序列表中提供)和非编码链(被用作转录模板)两者都可以被称为编码该基因或cDNA 的蛋白或其它产物。除非另有说明，“编码氨基酸序列的核苷酸序列”包括所有为彼此 的简并形式并编码相同氨基酸序列的核苷酸序列。编码蛋白质和RNA的核苷酸序列 可以含有内含子。

“重组核酸”是指含有并非天然连接在一起的核苷酸序列的核酸。这包括可被用于转化合适宿主细胞包含经扩增或组装的核酸的核酸载体。含有重组核酸的宿主细胞称 为“重组宿主细胞”。然后基因在重组宿主细胞中表达以产生例如“重组多肽”。重组核 酸也可以起非编码作用(例如启动子、复制起始点和核糖体结合位点等)。

如果其序列为第一序列的多核苷酸序列与其序列为第二序列的多核苷酸特异性杂 交，则所述第一序列相对于所述第二序列为“反义的”。

用于描述两个或多个核苷酸序列或氨基酸序列之间的序列关系的术语包括“参考序列”、“选自”、“比较窗口”、“相同”、“序列同一性百分比”、“基本相同”、“互补” 和“基本互补”。

对于核酸序列的序列比较，通常一个序列作为参考序列，测试序列与之进行比较。当使用序列比较算法时，测试序列和参考序列均被输入到计算机，指定子序列坐标(如 果需要)，并指定序列算法程序参数。使用默认的程序参数。用于比较的序列的对比方 法是本领域技术人员所熟知的。用于比较的序列的最佳对比可以通过例如Smith & Waterman，Adv.Appl.Math.2：482，1981的局部同源性算法、Needleman & Wunsch，J. Mol.Biol.48：443，1970的同源性比对算法、Pearson & Lipman，Proc.Nat’l.Acad.Sci. USA 85：2444，1988的相似度检索方法、这些算法的计算化工具(Wisconsin Genetics Software Package中的GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA，Genetics Computer Group， 575 Science Dr.，Madison，WI)或者通过手工对比和视觉检查(参见，例如Current Protocols in MolecularBiology(Ausubel et al.，eds 1995增刊)等)进行。

有用算法的一个实例是PILEUP。PILEUP使用的是简化的Feng & Doolittle，J.Mol. Evol.35：351-360，1987中的逐步对比法(progressive alignment method)。使用的方法类 似于Higgins & Sharp，CABIOS 5：151-153，1989描述的方法。使用PILEUP，使用以下 参数将参考序列与其它的测试序列进行比较以确定序列同一性百分比关系：默认空位 权重(default gap weight)(3.00)、默认空位长度权重(default gap length weight)(0.10) 和加权末端空位(weighted end gap)。PILEUP可以从GCG序列分析软件包(例如7.0版)中获得(Devereaux et al.，Nuc.Acids Res.12：387-395，1984)。

适于确定序列同一性和序列相似性百分比的算法的另一个实例是Altschul etal，J. Mol.Biol.215：403-410，1990和Altschul et al，Nucleic Acids Res.25：3389-3402，1977中 描述的BLAST和BLAST 2.0算法。运行BLAST分析的软件公众可以通过美国国家生 物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information)获得(ncbi.nlm.nih.gov)。 BLASTN程序(用于核苷酸序列)使用的默认字长(W)为11，比对(B)为50，期 望(E)为10，M＝5，N＝-4并且对两条链进行比较。BLASTP程序(用于氨基酸序列) 使用默认字长(W)为3，期望(E)为10，并且使用BLOSUM62评分矩阵(参见 Henikoff &Henikoff，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89：10915，1989)。寡核苷酸是最长有约 100个核苷酸碱基的线性多核苷酸序列。

多核苷酸或核酸序列是指长度为至少10个碱基的聚合形式的核苷酸。重组多核苷酸包括两个编码序列不直接相连的多核苷酸，而在其来源的有机体的天然存在的基因 组中，所述两个编码序列是直接相连的(一个位于5′端，一个位于3′端)。所以该术语 包括，例如，被纳入载体的重组DNA；被纳入自主复制的质粒或病毒的重组DNA； 或者被纳入原核或真核生物基因组DNA的重组DNA，或者作为独立于其它序列的独 立分子(例如cDNA)存在的重组DNA。所述核苷酸可以是核糖核苷酸、脱氧核糖核苷 酸或任一种核苷酸的修饰形式。该术语包括单链和双链形式的DNA。gp120多核苷酸 是编码gp120多肽的核酸。

可操作地连接：当第一核酸序列与第二核酸序列以有功能关系的方式放置时，所述第一核酸序列与第二核酸序列是可操作地连接的。例如，如果启动子例如CMV启 动子影响编码序列的转录或表达，那么所述启动子与所述编码序列是可操作地连接的。 通常所述可操作地连接的DNA序列通常是连续的并且当需要将两个蛋白编码区域连 接时，位于相同的读码框中。

可药用载体：可用的可药用载体是常规的。Remington’s PharmaceuticalSciences， 由E.W.Martin，Mack Publishing Co，Easton，PA出版，第19版，1995，描述了适用于药 物递送所公开抗体的组合物和制剂。

总的来说，载体的性质依赖于使用的具体给药方式。例如，肠胃外制剂通常包括可注射流体作为载体，所述可注射流体包括可药用和生理上可接受的液体，例如水、 生理盐水、平衡盐溶液、葡萄糖水溶液、甘油等。对于固体组合物(例如，粉剂、丸剂、 片剂或胶囊剂形式)，常规的无毒固体载体可以包括，例如药品级甘露醇、乳糖、淀粉 或硬脂酸镁。除生物学中性载体之外，待给予的药物组合物还可以包含少量的无毒辅 助物质，例如湿润剂或乳化剂、防腐剂和pH缓冲剂等，例如醋酸钠或脱水山梨糖醇 单月桂酸酯。

治疗剂：当正确给药至受试者或者细胞时能够激发需要的治疗或预防效果的化合物或组合物。在一些实例中，药剂包括一种或多种所公开抗体。

多肽：任意的氨基酸链，不考虑其长度或有无翻译后修饰(例如，糖基化或磷酸化)。在一个实施方案中，所述多肽是gp120多肽。在另一个实施方案中，所述多肽是 所公开抗体或其片段。“残基”是指通过酰胺键或酰胺键类似物纳入多肽的氨基酸或氨 基酸类似物。多肽具有氨基末端(N-末端)和羧基末端。

启动子：启动子是指导核酸转录的一系列核酸控制序列。启动子包括转录起始位点附近的必要核酸序列，例如聚合酶II型启动子中的TATA元件。启动子还可任选地 包括远端增强元件或抑制元件，所述远端增强元件或抑制元件的位置离所述转录起始 位点可以多达几千碱基对。组成型和可诱导的启动子都包括在内(参见例如Bitter et al.，Methods in Enzymology 153：516-544，1987)。

可以使用的启动子的具体非限制性实例包括源自哺乳动物细胞基因组的启动子(例如金属硫蛋白启动子)或源自哺乳动物病毒的启动子(例如逆转录病毒长末端重 复序列；腺病毒后期启动子；牛痘病毒7.5K启动子)。还可以使用由重组DNA或合 成技术产生的启动子。可将多核苷酸插入到含有启动子序列的表达载体，其中所述启 动子序列可帮助所述宿主中插入遗传序列有效地转录。所述表达载体一般含有复制起 点、启动子、以及允许对所转化细胞进行表型筛选的特定核酸序列。

纯化的：术语纯化的并不需要绝对纯，而是一个相对的术语。因此，例如，纯化 的肽制品是指其中所述肽或蛋白质(例如抗体)比所述肽或蛋白在细胞中的自然环境 下更加富集的制品。在一个实施方案中，制品被纯化，从而使所述蛋白质或肽占所述 制品的总肽或蛋白质含量的至少50％。

重组体：重组核酸是具有非天然存在的序列或具有将两个原本分离序列区段进行人工组合而制成的序列的核酸。所述人工组合通常是通过化学合成或者更常见地是通 过对分离的核酸区段进行人工操作(例如通过遗传工程技术)而完成的。

序列同一性：氨基酸序列之间的相似性被表达为所述序列之间的相似性，或者被称为序列同一性。序列同一性通常以同一性(或相似性或同源性)百分数的方式来度 量；百分数越高，所述两个序列越相似。当用常规方法进行比对时，多肽的同源物或 变体具有相对较高程度的序列同一性。

用于比较的序列的对比方法是本领域技术人员所熟知的。许多程序和对比算法在： Smith和Waterman，Adv.Appl.Math.2：482，1981；Needleman和Wunsch，J.Mol.Biol.48：443，1970；Pearson和Lipman，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.85：2444，1988；Higgins 和Sharp，Gene 73：237，1988：Higgins和Sharp，CABIOS 5：151，1989；Corpet等Nucleic AcidsResearch 16：10881，1988以及Pearson和Lipman，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A. 85：2444，1988中有所描述。Altschul et al.，Nature Genet.6：119，1994中详细介绍了序列 对比方法和同源性计算。

NCBI局部序列比对基本检索工具(BLAST)(Altschul等J.Mol.Biol.215：403，1990)可以从一些来源获得，包括美国国家生物技术信息中心(NCBI，Bethesda，MD) 和互联网，用于与序列分析程序blastp、blastn、blastx、tblastn和tblastx联合使用。 互联网上的NCBI网站提供了如何使用该程序确定序列同一性的描述。

与多肽特异性结合的抗体的V_L或V_H的同源物和变体的典型特征是具有与目标氨基酸序列在全长比对上计得的至少约75％，例如至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性。用该方法评估时，与参考 序列有更高相似性的蛋白会显示增加的的同一性百分比，例如至少80％、至少85％、 至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列同一性。当比较短于全长的序列的 序列同一性时，同源物和变体通常在10-20个氨基酸的短窗口中具有至少80％的序列 同一性，并且依赖于它们与参考序列的相似性，可具有至少85％或至少90％或95％的 序列同一性。确定在这样的短窗口中的序列同一性的方法可以从因特网上的NCBI网 站获得。本领域的技术人员将理解，提供这些序列同一性范围仅用于指导，完全有可 能获得落在所提供范围之外的非常有价值的同源物。

特异性结合：在述及抗体时，特异性结合是确定异源群体的蛋白和其它生物制品存在的情况下靶蛋白、肽或多糖的存在的结合反应。因此，在指定条件下，抗体优先 与特定的靶蛋白、肽或多糖(例如存在于病原体表面的抗原，例如gp120)结合，而 不与样品或受试者中存在的其它蛋白或多糖以显著的量结合。特异性结合可以通过本 领域已知的方法确定。在述及抗体抗原复合物时，抗原与抗体特异性结合的K_d值小于 约10^-6摩尔，例如小于约10^-6摩尔、10^-7摩尔、10^-8摩尔、10^-9摩尔或者甚至小于约10^-10摩尔。

T细胞：对免疫应答来说关键的白细胞。T细胞包括但不限于：CD4⁺T细胞和CD8⁺T 细胞。CD4⁺T淋巴细胞是在其表面携带称为“分化簇4”(CD4)的标记物的免疫细胞。 这些细胞也称为辅助T细胞，帮助协调免疫应答(包括抗体应答和杀伤性T细胞应答)。 CD8⁺T细胞携带“分化簇8”(CD8)标记物。在一个实施方案中，CD8 T细胞是细胞毒 性T淋巴细胞。在另一个实施方案中，CD8细胞是抑制性T细胞。

治疗剂：以一般含义使用，它包括治疗剂、预防剂和替代剂。治疗剂用于改善患 有疾病或病症的的受试者中的一些具体病症。

治疗有效量：足以在接受治疗的受试者中达到期望效果的具体物质(例如所公开抗体) 的量。例如，有效量可以是抑制HIV复制或治疗AIDS必需的量。在一些实施方案中，治疗有效量是减轻受试者中HIV感染的体征或症状和/或减少受试者中的病毒滴度所 必需的量。当给予受试者时，通常使用会达到目标组织浓度的剂量，所述目标组织浓 度是已被证明达到合乎需要的体外作用的浓度。

毒素：当接触细胞时诱导细胞毒性的效应分子。毒素的具体非限制性实例包括但不限于，相思豆毒蛋白、蓖麻毒蛋白(例如monomethyl auristatin E(MMAE；参见例 如，Francisco et al.，Blood，102：1458-1465，2003))和monomethyl auristatin F(MMAF； 参见，例如，Doronina et al.，BioConjugate Chem.，17：114-124，2006)、Maytansinoid(例如DM1；参见，例如，Phillips et al.，Cancer Res.，68：9280-9290，2008)、假单胞菌外毒素(PE，例如PE35、PE37、PE38和PE40)、白喉毒素(DT)、肉毒杆菌毒素、皂草 素、局限曲菌素或白树毒素，或其修饰的毒素，或直接或间接抑制细胞生长或杀伤细 胞的其他毒性剂。例如，PE和DT是高毒性的化合物，一般通过肝脏毒性引起死亡。 但是，通过移除PE和DT毒素的天然靶向组分(例如PE的结构域Ia和DT的B链) 并将其替换为不同的靶向部分例如抗体，可将所述PE和DT修饰为可用作免疫毒素的 形式。

在足以......的条件下：用于描述允许所需活性的任何环境的短语。在一个实例中 所述所需活性是免疫复合物的形成。在具体实例中，所述所需活性是治疗HIV感染。

载体：被导入宿主细胞从而产生转化的宿主细胞的核酸分子。载体可以包含允许其在宿主细胞中复制的核酸序列，例如复制起点。载体还可以包含一个或多个可选择 的标记基因以及其它本技术领域已知的遗传元件。

病毒：在活细胞中复制的微小感染性有机体。病毒主要由蛋白质包衣包围的单个核酸核心组成，并且只能在活细胞中复制。“病毒复制”是指通过至少一个病毒生命周 期的发生产生另外的病毒。病毒可以破坏宿主细胞的正常功能，导致细胞的表现由病 毒决定。例如，病毒感染可导致生成细胞因子的细胞或对细胞因子作出反应的细胞， 而未感染细胞通常不会如此。

“逆转录病毒”是病毒基因组为RNA的RNA病毒。当宿主细胞被逆转录病毒感染 时，基因组RNA会反转录成被非常有效地整合到感染细胞的染色体DNA中的DNA 中间体。整合的DNA中间体称为前病毒。术语“慢病毒”以其常规含义使用，用于描述 含有逆转录酶的病毒属。慢病毒包括“免疫缺陷病毒”，免疫缺陷病毒包括人免疫缺陷 病毒(HIV)类型1和类型2(HIV-I和HIV-II)、猿免疫缺陷病毒(SIV)和猫免疫缺陷病毒 (FIV)。

VRC01：与gp120特异性结合并中和大范围的HIV病毒的单克隆抗体，其中所述VRC01的重链可变区和轻链可变区的序列在本文中分别示出为SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：9。还可参见，Wu et al.，Science，329(5993)：856-861，2010，和PCT公开 WO2012/154312，这些参考文献都以引用的方式全文纳入本文。

VRC01样抗体、重链或轻链：如本文中所具体定义的，VRC01样抗体或者可与来 自VRC01的相应重链或轻链互补的重链或轻链。本文公开了VRC01样抗体和用于鉴 定和产生这些抗体的方法。通常，这些抗体以与VRC01基本相同的取向与gp120的 CD4结合表面结合，并为广谱中和抗体。VRC01样抗体利用VRC01样抗体所模仿的 一些在CD4和gp120之间的重要接触点来模仿CD4与gp120的结合。

在一些实施方案中，本文公开的VRC07重链可变区或VRC07变体重链可变区可 包含在重链中，并与包含VRC01样抗体的可变区的轻链交叉互补，并保留对gp120 的高结合亲和力，所述VRC01样抗体例如VRC-PG04、VRC-PG04b、VRC-CH30、 VRC-CH31、VRC-CH32、VRC-CH33、VRC-CH34、VRC01、VRC02、VRC03、NIH4546、 NIH4546 G54W、3BNC60、3BNC117、12A12、12A21、1NC9、1B2530、8ANC131 或8ANC134。在其他实施方案中，本文公开的VRC01变体轻链可变区可包含在轻链 中，并与包含VRC01样抗体的可变区的重链交叉互补，并保留对gp120的高结合亲 和力，所述VRC01样抗体例如VRC-PG04、VRC-PG04b、VRC-CH30、VRC-CH31、 VRC-CH32、VRC-CH33、VRC-CH34、VRC01、VRC02、VRC03、NIH4546、NIH4546 G54W、3BNC60、3BNC117、12A12、12A21、1NC9、1B2530、8ANC131或8ANC134。

几个VRC01样抗体是可用的，包括：

以引用的方式纳入本文的2010年9月24日提交的PCT国际申请No. PCT/US2010/050295和以引用的方式纳入本文的Wu et al.，“Rational design of envelopeidentifies broadly neutralizing human monoclonal antibodies to HIV-1，”Science， 329(5993)：856-861，2010中公开的VRC01样抗体、重链和轻链。它们包括VRC01、VRC02和VRC03的重链和轻链。

在以引用的方式纳入本文的Scheid et al.，“Sequence and structuralconvergence of broad and potent HIV antibodies that mimic CD4 binding，”Science，333(6049)：1633-1637， 2011中公开的VRC01样抗体、重链和轻链。它们包括3BNC117、3BNC60、12A12、 12A21、NIH4546、8ANC131、8ANC134、1B2530、1NC9抗体(相应的登记号示于下 文的表1中，并公开于以引用的方式纳入本文的WIPO公开No.WO 2012/158948A1) 和最多达567种其他克隆相关的抗体(包括列于以引用的方式具体纳入本文的Scheidet al.的图S3、S13、S14和表S8中的那些抗体)的重链和轻链。

以引用的方式纳入本文的Wu et al.，“Focused evolution of HIV-1neutralizing antibodies revealed by structures and deep sequencing，”Science，333(6049)：1593-1602， 2011中公开的一些VRC01样抗体、重链和轻链。这些VRC01样抗体、重链和轻链包 括VRC-PG04和VRC-PG04b抗体(

登录号分别为JN159464至JN159467)、 VRC-CH30、VRC-CH31和VRC-CH32抗体(

登录号分别为JN159434至JN159439)、和VRC-CH33和VRC-CH34抗体(

登录号分别为JN159470 至159473)的重链和轻链(这些抗体的重链和轻链的相应SEQ ID NO示于表1中)。 这些VRC01样抗体、重链和轻链还包括来自供体74，2008的24个重链(

登录号JN159440至JN159463)、来自供体45，2008的2个重链(

登录号 JN159474和JN159475)和来自供体45，2001的2个轻链(

登录号JN159468 和JN159469)。这些VRC01样抗体、重链和轻链还包括Wu et al.，Science， 333(6049)：1593-1602，2011的图6B和图S16中所示的与使用至少一个低差异成员来中 和CDR H3分布相关的1561个独特序列(

登录号分别为JN157873至 JN159433)。

以引用的方式纳入本文的Diskin et al.，“Increasing the potency andbreadth of an HIV antibody by using structure-based rational design，”Science，334(6060)：1289-93，2011 和以引用的方式纳入本文的美国专利申请公开No.2012/0288502 A1中公开的VRC01 样抗体、重链和轻链。它们包括重链可变区中具有G54W氨基酸置换(Kabat编号) 的NIH4546抗体的重链和轻链。

在该“VRC01样抗体、重链或轻链”的定义中论述的2012年12月6日可得的所有 登录号以引用的方式纳入本文，这类登录号的实例示于表1。

表1.VRC01样抗体重链和轻链

II几个实施方案的描述

A.中和单克隆抗体

本文公开了分离的特异性结合gp120的单克隆抗体。所述抗体可为全人的。本文还公开了包含这些单克隆抗体和可药用载体的组合物。还提供了编码这些抗体的核酸、 包含这些核酸的表达载体以及表达所述核酸的分离的宿主细胞。

包含特异性针对gp120的单克隆抗体的组合物可以用于研究、诊断和治疗目的。例如，本文公开的单克隆抗体可用于诊断或治疗患有HIV-1感染和/或AIDS的受试者。 例如，所述抗体可以用于确定受试者中HIV-1滴度。本文公开的抗体还可用于人免疫 缺陷病毒的生物学研究。

下文对单克隆抗体的论述涉及包含重链可变区和轻链可变区的分离的单克隆抗体， 所述重链可变区和轻链可变区包含CDR1、CDR2和CDR3，所述CDR依照的是IMGT 或Kabat编号方案(除非上下文另有说明)。本领域普通技术人员应理解，可使用多种 CDR编号方案(例如Kabat、Chothia或IMGT编号方案)确定CDR位置。

本文公开了所述VRC07单克隆抗体的鉴定。所述VRC07单克隆抗体与HIV的 gp120蛋白的CD4结合位点特异性结合并且是中和抗体。VRC07是VRC01样单克隆 抗体，包含与所述VRC01单克隆抗体的轻链交叉互补的新的重链(“VRC07重链”)。 VRC07重链是所述VRC01重链的克隆变体。如实施例部分所描述的，与VRC01相比， VRC07具有增加的对gp120的结合亲和力，但不具有增加的自身反应性。本文还公开 了所述VRC07重链和所述VRC01轻链的变体，和包含这类变体的交叉互补的单克隆 抗体，所述抗体与VRC01相比具有增加的对gp120的结合亲和力，但不具有增加的 自身反应性。

依照Kabat和IMGT编号方案的所述VRC07单克隆抗体重链的CDR位置示于图 8中。依照Kabat和IMGT编号方案的所述VRC01轻链可变区的CDR位置示于图8 中。在一些实施方案中，依照Kabat编号方案提及所公开抗体的重链或轻链中的具体 氨基酸置换。例如，本文提到的所述VRC07重链置换G54H是指Kabat编号方案。本 领域普通技术人员应理解，所述VRC07重链可变区的Kabat位置G54对应于所述 VRC07重链可变区的线性序列的位置55(如SEQ ID NO：2所示)。所述VRC07重链 可变区和所述VRC01轻链可变区的线性和Kabat位置示于图8中。本领域技术人员会 容易地理解当提到本文公开的抗体的具体氨基酸时，可以使用多种CDR和可变区编 号方案。

I.示例性单克隆抗体

a.示例性重链

在一些实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中重链可变区包含SEQ ID NO：2(VRC07重链可变区)所示的氨基酸序列，并且还包含Kabat位置I37、 G54、S58和T93上的一个或多个氨基酸置换。如本文所公开的，SEQ ID NO：40是 VRC07的重链可变区的共有氨基酸序列，在位置I37、G54、S58和T93(Kabat编号) 中的1个、2个、3个、4个上具有氨基酸置换或在这些位置上都不具有氨基酸置换：

其中X₁为I或V；X₂为G或H；X₃为S或N；并且X₄为T或A。

在一些实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含使用Kabat或IMGT CDR位置所定义的SEQ ID NO：40的HCDR1、HCD2和/ 或HCD3，其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在一些 实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含使用 Kabat或IMGT CDR位置所定义的SEQ ID NO：40的HCDR1、HCDR2和HCDR3，其 中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。本领域普通技术人员 熟悉抗体可变区序列中的Kabat和IMGT CDR定位。

在一些实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含使用Kabat或IMGT CDR位置所定义的SEQ ID NO：2的HCDR1、HCD2和/ 或HCD3，并且还包含与SEQ ID NO：2的FR1(IMGT或Kabat)具有至少85％、至 少90％、至少95％、至少98％、至少99％序列同一性的FR1，与SEQ ID NO：2的FR1 (IMGT或Kabat)具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％序列 同一性的FR1，与SEQ ID NO：2的FRI(IMGT或Kabat)具有至少85％、至少90％、 至少95％、至少98％、至少99％序列同一性的FR1，其中所述抗体特异性结合gp120， 并且其中所述抗体是中和抗体。

在一些实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含使用Kabat或IMGT CDR位置所定义的SEQ ID NO：2的HCDR1、HCD2和/ 或HCD3，还包括G54H置换，并且还包含与SEQ ID NO：2的FR1(IMGT或Kabat) 具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％序列同一性的FR1，与 SEQ ID NO：2的FR1(IMGT或Kabat)具有至少85％、至少90％、至少95％、至少 98％、至少99％序列同一性的FR1，与SEQ ID NO：2的FR1(IMGT或Kabat)具有 至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％序列同一性的FR1，与SEQ ID NO：2的FR1(IMGT或Kabat)具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％序列同一性的FR1，其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中 和抗体。

例如，在一些实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO：40的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和/或97-114 (CDR3)(IMGT)，其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。 在另外的实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区 包含SEQ ID NO：40的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3)(IMGT)， 其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在一些实施方案中， 所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO：40的 氨基酸31-35(CDR1)、50-66(CDR2)和/或99-114(CDR3)(Kabat)，其中所述抗 体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在另外的实施方案中，所述抗 体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO：40的氨基酸 31-35(CDR1)、50-66(CDR2)和99-114(CDR3)(Kabat)，其中所述抗体特异性结 合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在一些实施方案中，所述抗体不是自身反 应性的和/或具有低自身反应性。在另外的实施方案中，所述抗体不是免疫原性的和/ 或具有低免疫原性。

在另外的实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO：40的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3) (IMGT)，其中X₂为G，其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和 抗体。在另外的实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链 可变区包含SEQ ID NO：40的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3) (IMGT)，其中X₂为H，其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和 抗体。在另外的实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链 可变区包含SEQ ID NO：40的氨基酸31-35(CDR1)、50-66(CDR2)和99-114(CDR3) (Kabat)，其中X₂为G并且X₃为S，其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所 述抗体是中和抗体。在另外的实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区， 其中所述重链可变区包含SEQ ID NO：40的氨基酸31-35(CDR1)、50-66(CDR2)和 99-114(CDR3)(Kabat)，其中X₂为H并且X₃为S，其中所述抗体特异性结合gp120， 并且其中所述抗体是中和抗体。在另外的实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻 链可变区，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO：40的氨基酸31-35(CDR1)、50-66 (CDR2)和99-114(CDR3)(Kabat)，其中X₂为G并且X₃为N，其中所述抗体特 异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在另外的实施方案中，所述抗体包 含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO：40的氨基酸31-35 (CDR1)、50-66(CDR2)和99-114(CDR3)(Kabat)，其中X₂为H并且X₃为N， 其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在一些实施方案中， 所述抗体不是自身反应性的和/或具有低自身反应性。在另外的实施方案中，所述抗体 不是免疫原性的和/或具有低免疫原性。

在另外的实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO：40的氨基酸序列，其中X₁为I，X₂为H，X₃为S并且X₄为T (VRC07 G54H；SEQ ID NO：32)，其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗 体是中和抗体。在另外的实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中 所述重链可变区包含SEQ IDNO：40的氨基酸序列，其中X₁为I，X₂为H，X₃为N 并且X₄为T(VRC07 G54H，S58N；SEQ ID NO：258)，其中所述抗体特异性结合gp120， 并且其中所述抗体是中和抗体。在另外的实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻 链可变区，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO：40的氨基酸序列，其中X₁为V， X₂为H，X₃为S并且X₄为A(VRC07 137V，G54H，T93A；SEQ ID NO：259)，其中 所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在另外的实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO：40的 氨基酸序列，其中X₁为V，X₂为H，X₃为N并且X₄为A(VRC07 I37V，G54H，S58N， T93A；SEQ ID NO：260)，其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和 抗体。在一些实施方案中，所述抗体不是自身反应性的和/或具有低自身反应性。在另 外的实施方案中，所述抗体不是免疫原性的和/或具有低免疫原性。

所公开的重链可变区可包含在与VRC01轻链或任何本文公开的所述VRC01轻链 变体(例如下一部分中所描述的抗体轻链)互补的重链中，以产生与gp120特异性结 合并且为中和抗体的单克隆抗体。在一些实施方案中，所述重链可与已知的VRC01 样抗体的轻链(例如VRC01或NIH4546的轻链)互补，以产生与gp120特异性结合 并且为中和抗体的单克隆抗体。

具有G54H置换的VRC01样重链

本领域普通技术人员应理解，本文公开的VRC07重链可变区的Kabat位置54上 的组氨酸置换可包含在其他VRC01样抗体中，以产生具有改善的对gp120的结合亲 和力但不是自身反应性的和/或具有低自身反应性的单克隆抗体。例如，在一些实施方 案中，Kabat位置54上的组氨酸置换可包含在VRC01样抗体的重链可变区中，以产 生具有改善的对gp120的结合亲和力但不是自身反应性的和/或具有低自身反应性的单 克隆抗体(例如与在Kabat位置54上不存在所述组氨酸置换的所述VRC01样抗体相 比)。

因此，在一些实施方案中，提供了分离的VRC01样单克隆抗体，其中所述抗体包 含VRC01样重链和VRC01样轻链，其中所述重链还包含以组氨酸残基对所述重链位 置54(Kabat编号)上残基的置换，其中所述抗体特异性结合HIV-1的gp120，并且 其中所述抗体是中和抗体。在一些实施方案中，所述氨基酸置换是G54H置换。可以 用Kabat位置54上的组氨酸置换进行修饰的VRC01样单克隆抗体重链可变区的非限 制性实例包括所述VRC01、VRC02、VRC03、NIH4546、VRC-PG04、VRC-PG04b、 VRC-CH30、VRC-CH31、VRC-CH32、VRC-CH33、VRC-CH34、3BNC60、3BNC117、 12A12、12A21、1NC9、1B2530、8ANC131或8ANC134单克隆抗体的重链可变区。 这些抗体的重链可变区的登录号的序列是本领域普通技术人员所熟悉的，并且在本文 中有提供。

例如，在一些实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO：196(NIH4546重链可变区)的氨基酸26-33(CDR1)、51-58 (CDR2)和97-114(CDR3)(IMGT CDR)，还包含Kabat位置54上的甘氨酸至组氨 酸的置换(G54H置换)，其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和 抗体。在另外的实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链 可变区包含SEQ ID NO：196(NIH4546重链可变区)的氨基酸31-35(CDR1)、50-66 (CDR2)和99-114(CDR3)(IMGT CDR)，并且还包含Kabat位置54上的甘氨酸至 组氨酸的置换(G54H置换)，其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是 中和抗体。在另外的实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述 重链可变区包含SEQ ID NO：196所示的氨基酸序列，还包含Kabat位置54上的甘氨 酸至组氨酸的置换(G54H置换)，其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗 体是中和抗体。在一些实施方案中，所述抗体不是自身反应性的和/或具有低自身反应 性。在另外的实施方案中，所述抗体不是免疫原性的和/或具有低免疫原性。

b.示例性轻链

如本文所公开，SEQ ID NO：238是VRC01样轻链可变区的共有氨基酸序列，与 所VRC01的轻链可变区相比，在位置E1、I2、V3、I20、S63、S65、W67、D70、N72、 T74、F97、V106和I108(Kabat编号)中的1个或多个上具有氨基酸置换：VRC01：

其中X₁为E或无氨基酸；X₂为I或无氨基酸；X₃为V、E、K或S；X₄为I、Q、E 或T；X₅为S或K；X₆为S或E；X₇为W、S、N或E；X₈为D或E；X₉为N、T 或R；X₁₀为T或R；X₁₁为F、D、K、S或H；X₁₂为V或Q；X₁₃为I或N。

在一些实施方案中，所述抗体包含本文公开的VRC01样重链可变区和轻链可变区，其中所述轻链可变区包含使用Kabat或IMGT CDR位置所定义的SEQ ID NO：238的 LCDR1、LCD2和/或LCD3，其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是 中和抗体。在一些实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述轻 链可变区包含使用Kabat或IMGT CDR位置所定义的SEQ ID NO：238的LCDR1、 LCDR2和LCDR3，其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。

在一些实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述轻链可变区包含使用Kabat或IMGT CDR位置所定义的SEQ ID NO：9的LCDR1、LCD2和/或 LCD3，并且还包含与SEQ ID NO：9的FR1(IMGT或Kabat)具有至少85％、至少 90％、至少95％、至少98％、至少99％序列同一性的FR1，与SEQ ID NO：9的FR1 (IMGT或Kabat)具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％序列 同一性的FR1，与SEQ ID NO：9的FR1(IMGT或Kabat)具有至少85％、至少90％、 至少95％、至少98％、至少99％序列同一性的FR1，与SEQID NO：9的FR1(IMGT 或Kabat)具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％序列同一性的 FR1，其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。

在一些实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含使用Kabat或IMGT CDR位置所定义的SEQ ID NO：2的HCDR1、HCD2和/ 或HCD3，并且还包含Kabat位置F97上的氨基酸置换(例如F97D、F97K、F97S、 F97H)，并且还包含与SEQ IDNO：2的FR1(IMGT或Kabat)具有至少85％、至少 90％、至少95％、至少98％、至少99％序列同一性的FR1，与SEQ ID NO：2的FR1 (IMGT或Kabat)具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％序列 同一性的FR1，与SEQ ID NO：2的FR1(IMGT或Kabat)具有至少85％、至少90％、 至少95％、至少98％、至少99％序列同一性的FR1，与SEQ ID NO：2的FR1(IMGT 或Kabat)具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％序列同一性的 FR1，其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。

例如，在一些实施方案中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：238的氨基酸24-32(CDR1)、48-54(CDR2)和/或87-91(CDR3)(Kabat)。在一些实施方案中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述轻链 可变区包含SEQ ID NO：238的氨基酸24-32(CDR1)、48-54(CDR2)和87-91(CDR3) (Kabat)。在另外的实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述 轻链可变区包含SEQID NO：238的氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和/或87-91 (CDR3)(IMGT)。在一些实施方案中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中 所述轻链可变区包含SEQ ID NO：238的氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和87-91 (CDR3)(IMGT)。在一些实施方案中，所述抗体不是自身反应性的和/或具有低自身 反应性。在另外的实施方案中，所述抗体不是免疫原性的和/或具有低免疫原性。

在一些实例中，所述抗体的轻链包含SEQ ID NO：238的LCDR1、LCDR2和/或 LCD3，并且还包含Kabat位置F97上的氨基酸置换，所述氨基酸置换包含在SEQ ID NO： 238的LCDR3中(使用Kabat或IMGT定位)。例如，在一些实施方案中，所述抗体 包含重链可变区和轻链可变区，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：238的氨基酸 24-32(CDR1)、48-54(CDR2)和87-91(CDR3)，其中X₁₁为F(具有F97的VRC01 轻链Kabat CDR)，其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。 在一些实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述轻链可变区包 含SEQ ID NO：238的氨基酸24-32(CDR1)、48-54(CDR2)和87-91(CDR3)，其 中X₁₁为D(具有F97D的VRC01轻链Kabat CDR)，其中所述抗体特异性结合gp120， 并且其中所述抗体是中和抗体。在另外的实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻 链可变区，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：238的氨基酸24-32(CDR1)、48-54 (CDR2)和87-91(CDR3)，其中X₁₁为K(具有F97K的VRC01轻链Kabat CDR)， 其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在另外的实施方案 中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：238 的氨基酸24-32(CDR1)、48-54(CDR2)和87-91(CDR3)，其中X₁₁为S(具有 F97S的VRC01轻链Kabat CDR)，其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗 体是中和抗体。在另外的实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中 所述轻链可变区包含SEQ ID NO：238的氨基酸24-32(CDR1)、48-54(CDR2)和 87-91(CDR3)，其中X₁₁为H(具有F97H的VRC01轻链Kabat CDR)，其中所述抗 体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在一些实施方案中，所述抗体不是自身反应性的和/或具有低自身反应性。在另外的实施方案中，所述抗体不是免疫 原性的和/或具有低免疫原性。

在另外的实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：238的氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)， 其中X₁₁为F(具有F97的VRC01轻链IMGT CDR)，其中所述抗体特异性结合gp120， 并且其中所述抗体是中和抗体。在另外的实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻 链可变区，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：238的氨基酸27-30(CDR1)、48-50 (CDR2)和87-91(CDR3)，其中X₁₁为D(具有F97D的VRC01轻链IMGT CDR)， 其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在另外的实施方案 中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：238 的氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)，其中X₁₁为K(具有 F97K的VRC01轻链IMGT CDR)，其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述 抗体是中和抗体。在另外的实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其 中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：238的氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和 87-91(CDR3)，其中X₁₁为S(具有F97S的VRC01轻链IMGT CDR)，其中所述抗 体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在另外的实施方案中，所述抗 体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：238的氨基酸 27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)，其中X₁₁为H(具有F97H的 VRC01轻链IMGT CDR)，其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中 和抗体。在一些实施方案中，所述抗体不是自身反应性的和/或具有低自身反应性。在 另外的实施方案中，所述抗体不是免疫原性的和/或具有低免疫原性。

VRC01L

在一些实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：238所示的氨基酸序列，其中X₁为E；X₂为I；X₃为V；X₄为I； X₅为S；X₆为S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为V；X₁₃为 I(VRC01轻链；SEQ ID NO：9)。所述轻链可与本文公开的任何VRC07重链变体(例 如上部分中所描述的抗体重链)互补，以产生与gp120特异性结合并且为中和抗体的 单克隆抗体。在一些实施方案中，所述抗体不是自身反应性的和/或具有低自身反应性。 在另外的实施方案中，所述抗体不是免疫原性的和/或具有低免疫原性。

VRC01L E1/I2缺失，V3E

在一些实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：238所示的氨基酸序列，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为E；X₄为I；X₅为S；X₆为S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为F； X₁₂为V；X₁₃为I(VRC01L V3E轻链；SEQ IDNO：219)。所述轻链可与本文公开的 VRC07重链或任何所述VRC07重链变体(例如上部分中所描述的抗体重链)互补， 以产生与gp120特异性结合并且为中和抗体的单克隆抗体。在一些实施方案中，所述 轻链可与已知的VRC01样抗体的重链(例如VRC01、NIH4546或NIH4546G54W的 重链)互补，以产生与gp120特异性结合并且为中和抗体的单克隆抗体。在一些实施方案中，所述抗体不是自身反应性的和/或具有低自身反应性。在另外的实施方案中， 所述抗体不是免疫原性的和/或具有低免疫原性。

VRC01L E1/I2缺失，V3K

在一些实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：238所示的氨基酸序列，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为K；X₄为I；X₅为S；X₆为S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为F； X₁₂为V；X₁₃为I(VRC01L V3K轻链；SEQ IDNO：220)。所述轻链可与本文公开的 VRC07重链或任何所述VRC07重链变体(例如上部分中所描述的抗体重链)互补， 以产生与gp120特异性结合并且为中和抗体的单克隆抗体。在一些实施方案中，所述 轻链可与已知的VRC01样抗体的重链(例如VRC01、NIH4546或NIH4546G54W的 重链)互补，以产生与gp120特异性结合并且为中和抗体的单克隆抗体。在一些实施方案中，所述抗体不是自身反应性的和/或具有低自身反应性。在另外的实施方案中， 所述抗体不是免疫原性的和/或具有低免疫原性。

VRC01L E1/I2缺失，V3S

在一些实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：238所示的氨基酸序列，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为S；X₄为I；X₅为S；X₆为S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为V；X₁₃为I(VRC01L V3S轻链；SEQ IDNO：221)。所述轻链可与本文公开的VRC07 重链或任何所述VRC07重链变体(例如上部分中所描述的抗体重链)互补，以产生 与gp120特异性结合并且为中和抗体的单克隆抗体。在一些实施方案中，所述轻链可 与已知的VRC01样抗体的重链(例如VRC01、NIH4546或NIH4546G54W的重链) 互补，以产生与gp120特异性结合并且为中和抗体的单克隆抗体。在一些实施方案中， 所述抗体不是自身反应性的和/或具有低自身反应性。在另外的实施方案中，所述抗体 不是免疫原性的和/或具有低免疫原性。

VRC01L E1/I2缺失，F97D

在一些实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：238所示的氨基酸序列，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为V；X₄为I；X₅为S；X₆为S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为D； X₁₂为V；X₁₃为I(VRC01L F97D轻链；SEQ IDNO：222)。所述轻链可与本文公开的 VRC07重链或任何所述VRC07重链变体(例如上部分中所描述的抗体重链)互补， 以产生与gp120特异性结合并且为中和抗体的单克隆抗体。在一些实施方案中，所述 轻链可与已知的VRC01样抗体的重链(例如VRC01、NIH4546或NIH4546G54W的 重链)互补，以产生与gp120特异性结合并且为中和抗体的单克隆抗体。在一些实施方案中，所述抗体不是自身反应性的和/或具有低自身反应性。在另外的实施方案中， 所述抗体不是免疫原性的和/或具有低免疫原性。

VRC01L E1/I2缺失，F97K

在一些实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：238所示的氨基酸序列，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为V；X₄为I；X₅为S；X₆为S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为K； X₁₂为V；X₁₃为I(VRC01L F97K轻链；SEQ IDNO：223)。所述轻链可与本文公开的 VRC07重链或任何所述VRC07重链变体(例如上部分中所描述的抗体重链)互补， 以产生与gp120特异性结合并且为中和抗体的单克隆抗体。在一些实施方案中，所述 轻链可与已知的VRC01样抗体的重链(例如VRC01、NIH4546或NIH4546G54W的 重链)互补，以产生与gp120特异性结合并且为中和抗体的单克隆抗体。在一些实施方案中，所述抗体不是自身反应性的和/或具有低自身反应性。在另外的实施方案中， 所述抗体不是免疫原性的和/或具有低免疫原性。

VRC01L E1/I2缺失，F97S

在一些实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：238所示的氨基酸序列，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为V；X₄为I；X₅为S；X₆为S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为S； X₁₂为V；X₁₃为I(VRC01L F97S轻链；SEQ IDNO：224)。所述轻链可与本文公开的 VRC07重链或任何所述VRC07重链变体(例如上部分中所描述的抗体重链)互补， 以产生与gp120特异性结合并且为中和抗体的单克隆抗体。在一些实施方案中，所述 轻链可与已知的VRC01样抗体的重链(例如VRC01、NIH4546或NIH4546G54W的 重链)互补，以产生与gp120特异性结合并且为中和抗体的单克隆抗体。在一些实施方案中，所述抗体不是自身反应性的和/或具有低自身反应性。在另外的实施方案中， 所述抗体不是免疫原性的和/或具有低免疫原性。

VRC01L E1/I2缺失，F97H

在一些实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：238所示的氨基酸序列，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为V；X₄为I；X₅为S；X₆为S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为H； X₁₂为V；X₁₃为I(VRC01L F97H轻链；SEQ IDNO：225)。所述轻链可与本文公开的 VRC07重链或任何所述VRC07重链变体(例如上部分中所描述的抗体重链)互补， 以产生与gp120特异性结合并且为中和抗体的单克隆抗体。在一些实施方案中，所述 轻链可与已知的VRC01样抗体的重链(例如VRC01、NIH4546或NIH4546G54W的 重链)互补，以产生与gp120特异性结合并且为中和抗体的单克隆抗体。在一些实施方案中，所述抗体不是自身反应性的和/或具有低自身反应性。在另外的实施方案中， 所述抗体不是免疫原性的和/或具有低免疫原性。

VRC01L E1/I2缺失，V3E/F97S

在一些实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：238所示的氨基酸序列，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为E；X₄为I；X₅为S；X₆为S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为S；X₁₂为V；X₁₃为I(VRC01L V3E/F97S轻链；SEQID NO：226)。所述轻链可与本文公开 的VRC07重链或任何所述VRC07重链变体(例如上部分中所描述的抗体重链)互补， 以产生与gp120特异性结合并且为中和抗体的单克隆抗体。在一些实施方案中，所述 轻链可与已知的VRC01样抗体的重链(例如VRC01、NIH4546或NIH4546 G54W的 重链)互补，以产生与gp120特异性结合并且为中和抗体的单克隆抗体。在一些实施 方案中，所述抗体不是自身反应性的和/或具有低自身反应性。在另外的实施方案中， 所述抗体不是免疫原性的和/或具有低免疫原性。

VRC01L E1/I2缺失，V3E/F97H

在一些实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：238所示的氨基酸序列，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为E；X₄为I；X₅为S；X₆为S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为H； X₁₂为V；X₁₃为I(VRC01L V3E/F97H轻链；SEQ ID NO：227)。所述轻链可与本文 公开的VRC07重链或任何所述VRC07重链变体(例如上部分中所描述的抗体重链) 互补，以产生与gp120特异性结合并且为中和抗体的单克隆抗体。在一些实施方案中， 所述轻链可与已知的VRC01样抗体的重链(例如VRC01、NIH4546或NIH4546 G54W 的重链)互补，以产生与gp120特异性结合并且为中和抗体的单克隆抗体。在一些实 施方案中，所述抗体不是自身反应性的和/或具有低自身反应性。在另外的实施方案中， 所述抗体不是免疫原性的和/或具有低免疫原性。

VRC01hpL03

在一些实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：238所示的氨基酸序列，其中X₁为E；X₂为I；X₃为V；X₄为I； X₅为S；X₆为S；X₇为S；X₈为D；X₉为T；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为V；X₁₃为I (VRC01hpL03轻链；SEQ ID NO：228)。所述轻链可与本文公开的VRC07重链或任 何所述VRC07重链变体(例如上部分中所描述的抗体重链)互补，以产生与gp120 特异性结合并且为中和抗体的单克隆抗体。在一些实施方案中，所述轻链可与已知的 VRC01样抗体的重链(例如VRC01、NIH4546或NIH4546 G54W的重链)互补，以 产生与gp120特异性结合并且为中和抗体的单克隆抗体。在一些实施方案中，所述抗 体不是自身反应性的和/或具有低自身反应性。在另外的实施方案中，所述抗体不是免 疫原性的和/或具有低免疫原性。

VRC01hpL04

在一些实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：238所示的氨基酸序列，其中X₁为E；X₂为I；X₃为V；X₄为Q； X₅为S；X₆为S；X₇为N；X₈为D；X₉为T；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为V；X₁₃为I (VRC01hpL04轻链；SEQ ID NO：229)。所述轻链可与本文公开的VRC07重链或任 何所述VRC07重链变体(例如上部分中所描述的抗体重链)互补，以产生与gp120 特异性结合并且为中和抗体的单克隆抗体。在一些实施方案中，所述轻链可与已知的 VRC01样抗体的重链(例如VRC01、NIH4546或NIH4546 G54W的重链)互补，以 产生与gp120特异性结合并且为中和抗体的单克隆抗体。在一些实施方案中，所述抗 体不是自身反应性的和/或具有低自身反应性。在另外的实施方案中，所述抗体不是免 疫原性的和/或具有低免疫原性。

VRC01hpL05

在一些实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：238所示的氨基酸序列，其中X₁为E；X₂为I；X₃为V；X₄为Q； X₅为S；X₆为S；X₇为N；X₈为D；X₉为T；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为Q；X₁₃为N (VRC01hpL05轻链；SEQ ID NO：230)。所述轻链可与本文公开的VRC07重链或任 何所述VRC07重链变体(例如上部分中所描述的抗体重链)互补，以产生与gp120 特异性结合并且为中和抗体的单克隆抗体。在一些实施方案中，所述轻链可与已知的 VRC01样抗体的重链(例如VRC01、NIH4546或NIH4546 G54W的重链)互补，以 产生与gp120特异性结合并且为中和抗体的单克隆抗体。在一些实施方案中，所述抗 体不是自身反应性的和/或具有低自身反应性。在另外的实施方案中，所述抗体不是免 疫原性的和/或具有低免疫原性。

VRC01hpL06

在一些实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：238所示的氨基酸序列，其中X₁为E；X₂为I；X₃为V；X₄为E； X₅为K；X₆为E；X₇为E；X₈为E；X₉为R；X₁₀为R；X₁₁为F；X₁₂为Q；X₁₃为N (VRC01hpL06轻链；SEQ ID NO：231)。所述轻链可与本文公开的VRC07重链或任 何所述VRC07重链变体(例如上部分中所描述的抗体重链)互补，以产生与gp120 特异性结合并且为中和抗体的单克隆抗体。在一些实施方案中，所述轻链可与已知的 VRC01样抗体的重链(例如VRC01、NIH4546或NIH4546 G54W的重链)互补，以 产生与gp120特异性结合并且为中和抗体的单克隆抗体。在一些实施方案中，所述抗 体不是自身反应性的和/或具有低自身反应性。在另外的实施方案中，所述抗体不是免 疫原性的和/或具有低免疫原性。

VRC01hpL02 E1/I2缺失/V3S

在一些实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：238所示的氨基酸序列，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为S；X₄为T；X₅为S；X₆为S；X₇为S；X₈为D；X₉为T；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为Q；X₁₃为N(VRC01hpL02 E1/I2缺失/V3S轻链；SEQ ID NO：232)。所述轻链可 与本文公开的VRC07重链或任何所述VRC07重链变体(例如上部分中所描述的抗体 重链)互补，以产生与gp120特异性结合并且为中和抗体的单克隆抗体。在一些实施 方案中，所述轻链可与已知的VRC01样抗体的重链(例如VRC01、NIH4546或NIH4546 G54W的重链)互补，以产生与gp120特异性结合并且为中和抗体的单克隆抗体。在 一些实施方案中，所述抗体不是自身反应性的和/或具有低自身反应性。在另外的实施 方案中，所述抗体不是免疫原性的和/或具有低免疫原性。

VRC01hpL03 E1/I2缺失/V3S

在一些实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：238所示的氨基酸序列，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为S；X₄为I；X₅为S；X₆为S；X₇为S；X₈为D；X₉为T；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为V；X₁₃为I(VRC01hpL03 E1/I2缺失/V3S轻链；SEQ ID NO：233)。所述轻链可与 本文公开的VRC07重链或任何所述VRC07重链变体(例如上部分中所描述的抗体重 链)互补，以产生与gp120特异性结合并且为中和抗体的单克隆抗体。在一些实施方 案中，所述轻链可与已知的VRC01样抗体的重链(例如VRC01、NIH4546或NIH4546 G54W的重链)互补，以产生与gp120特异性结合并且为中和抗体的单克隆抗体。在 一些实施方案中，所述抗体不是自身反应性的和/或具有低自身反应性。在另外的实施 方案中，所述抗体不是免疫原性的和/或具有低免疫原性。

VRC01hpL04 E1/I2缺失/V3S

在一些实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：238所示的氨基酸序列，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为S；X₄为Q；X₅为S；X₆为S；X₇为N；X₈为D；X₉为T；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为V；X₁₃为I(VRC01hpL04 E1/I2缺失/V3S轻链；SEQ ID NO：234)。所述轻链可与 本文公开的VRC07重链或任何所述VRC07重链变体(例如上部分中所描述的抗体重 链)互补，以产生与gp120特异性结合并且为中和抗体的单克隆抗体。在一些实施方 案中，所述轻链可与已知的VRC01样抗体的重链(例如VRC01、NIH4546或NIH4546 G54W的重链)互补，以产生与gp120特异性结合并且为中和抗体的单克隆抗体。在 一些实施方案中，所述抗体不是自身反应性的和/或具有低自身反应性。在另外的实施 方案中，所述抗体不是免疫原性的和/或具有低免疫原性。

VRC01hpL05 E1/I2缺失/V3S

在一些实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：238所示的氨基酸序列，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为S；X₄为Q；X₅为S；X₆为S；X₇为N；X₈为D；X₉为T；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为Q；X₁₃为N(VRC01hpL05 E1/I2缺失/V3S轻链；SEQ ID NO：235)。所述轻链可 与本文公开的VRC07重链或任何所述VRC07重链变体(例如上部分中所描述的抗体 重链)互补，以产生与gp120特异性结合并且为中和抗体的单克隆抗体。在一些实施 方案中，所述轻链可与已知的VRC01样抗体的重链(例如VRC01、NIH4546或NIH4546 G54W的重链)互补，以产生与gp120特异性结合并且为中和抗体的单克隆抗体。在 一些实施方案中，所述抗体不是自身反应性的和/或具有低自身反应性。在另外的实施 方案中，所述抗体不是免疫原性的和/或具有低免疫原性。

VRC01hpL06 E1/I2缺失/V3S

在一些实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：238所示的氨基酸序列，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为S；X₄为E；X₅为K；X₆为E；X₇为E；X₈为E；X₉为R；X₁₀为R；X₁₁为F；X₁₂为Q；X₁₃为N(VRC01hpL06 E1/I2缺失/V3S轻链；SEQ ID NO：236)。所述轻链可 与本文公开的VRC07重链或任何所述VRC07重链变体(例如上部分中所描述的抗体 重链)互补，以产生与gp120特异性结合并且为中和抗体的单克隆抗体。在一些实施 方案中，所述轻链可与已知的VRC01样抗体的重链(例如VRC01、NIH4546或NIH4546 G54W的重链)互补，以产生与gp120特异性结合并且为中和抗体的单克隆抗体。在 一些实施方案中，所述抗体不是自身反应性的和/或具有低自身反应性。在另外的实施 方案中，所述抗体不是免疫原性的和/或具有低免疫原性。

VRC01hpL04 E1/I2缺失/V3E

在一些实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：238所示的氨基酸序列，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为E；X₄为Q；X₅为S；X₆为S；X₇为N；X₈为D；X₉为T；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为V；X₁₃为I(VRC01hpL04 E1/I2缺失/V3E轻链；SEQ ID NO：237)。所述轻链可与 本文公开的VRC07重链或任何所述VRC07重链变体(例如上部分中所描述的抗体重 链)互补，以产生与gp120特异性结合并且为中和抗体的单克隆抗体。在一些实施方 案中，所述轻链可与已知的VRC01样抗体的重链(例如VRC01、NIH4546或NIH4546 G54W的重链)互补，以产生与gp120特异性结合并且为中和抗体的单克隆抗体。在 一些实施方案中，所述抗体不是自身反应性的和/或具有低自身反应性。在另外的实施 方案中，所述抗体不是免疫原性的和/或具有低免疫原性。

VRC01L E1/I2缺失

在一些实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：238所示的氨基酸序列，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为V；X₄为I；X₅为S；X₆为S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为F； X₁₂为V；X₁₃为I(VRC01L E1/I2缺失；SEQID NO：53)。所述轻链可与本文公开的 任何所述VRC07重链变体(例如上部分中所描述的抗体重链)互补，以产生与gp120 特异性结合并且为中和抗体的单克隆抗体。在一些实施方案中，所述抗体不是自身反 应性的和/或具有低自身反应性。在另外的实施方案中，所述抗体不是免疫原性的和/ 或具有低免疫原性。

VRC01hpL02

在一些实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：238所示的氨基酸序列，其中X₁为E；X₂为I；X₃为S；X₄为T； X₅为S；X₆为S；X₇为S；X₈为D；X₉为T；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为Q；X₁₃为N (VRC01hpL02；SEQ ID NO：50)。所述轻链可与本文公开的VRC07重链或任何所述 VRC07重链变体(例如上部分中所描述的抗体重链)互补，以产生与gp120特异性结 合并且为中和抗体的单克隆抗体。在一些实施方案中，所述轻链可与已知的VRC01 样抗体的重链(例如VRC01、NIH4546或NIH4546 G54W的重链)互补，以产生与 gp120特异性结合并且为中和抗体的单克隆抗体。

具有E1/E2缺失的VRC01样轻链

本领域普通技术人员应理解，本文公开的VRC07轻链可变区的前两个氨基酸的缺失可包含在其他VRC01样抗体中以产生这样的单克隆抗体，即与轻链不存在前两个 氨基酸的缺失的VRC01样抗体相比，所述单克隆抗体具有改善的对gp120的结合亲 和力但不具有增加的自身反应性。因此，在一些实施方案中，提供了分离的VRC01 样单克隆抗体，其中所述抗体包含VRC01样重链和VRC01样轻链，其中所述轻链还 包含轻链前两个氨基酸的缺失，其中所述抗体特异性结合HIV-1的gp120，并且其中 所述抗体是中和抗体。在一些实施方案中，所述缺失包含E1，I2缺失。可用轻链前两 个氨基酸的缺失进行修饰的VRC01样单克隆抗体轻链可变区的非限制性实例包含 VRC01、VRC02、VRC03、NIH4546、NIH4546 G54W、VRC-PG04、VRC-PG04b、 VRC-CH30、VRC-CH31、VRC-CH32、VRC-CH33、VRC-CH34、3BNC60、3BNC117、12A12、12A21、1NC9、1B2530、8ANC131或8ANC134单克隆抗体的轻链可变区。 这些抗体的重链可变区的登录号的序列是本领域普通技术人员熟悉的，并且在本文中 有提供。

c.重链和轻链的示例性组合

本领域普通技术人员应理解，所公开的重链可变区和轻链可变区可包含在重链和轻链中并且交叉互补，以产生与gp120特异性结合并且为中和抗体的单克隆抗体。在 一些实施方案中，所公开的抗体具有与VRC01相比增加的对gp120的结合亲和力， 但是不是自身反应性的和/或具有低自身反应性。在另外的实施方案中，所述抗体不是 免疫原性的和/或具有低免疫原性。

例如，在一些实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO：40的氨基酸31-35(CDR1)、50-66(CDR2)和/或99-114(CDR3)(Kabat)，并 且所述抗体的轻链可变区包含SEQ ID NO：238的氨基酸24-32(CDR1)、48-54(CDR2) 和/或87-91(CDR3)(Kabat)。在一些实施方案中，所述抗体含重链可变区和轻链可 变区，其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体，其中所述重 链可变区包含SEQ ID NO：40的氨基酸31-35(CDR1)、50-66(CDR2)和99-114(CDR3) (Kabat)，并且所述抗体的轻链可变区包含SEQ ID NO：238的氨基酸24-32(CDR1)、 48-54(CDR2)和87-91(CDR3)(Kabat)。

在一些实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述抗体特异性结 合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO：40 的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和/或97-114(CDR3)(IMGT)，并且所述 抗体的轻链可变区包含SEQ ID NO：238的氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和/ 或87-91(CDR3)(IMGT)。在一些实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可 变区，其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体，其中所述重 链可变区包含SEQ ID NO：40的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3) (IMGT)，并且所述抗体的轻链可变区包含SEQID NO：238的氨基酸27-30(CDR1)、 48-50(CDR2)和87-91(CDR3)(IMGT)。在一些实施方案中，所述抗体不是自身 反应性的和/或具有低自身反应性。在另外的实施方案中，所述抗体不是免疫原性的和 /或具有低免疫原性。

在另外的实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO：40的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3) (IMGT)，其中X₂为G，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：238的氨基酸27-30 (CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)，其中X₁₁为F，其中所述抗体特异性结 合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在另外的实施方案中，所述抗体包含重链 可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO：40的氨基酸26-33 (CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3)(IMGT)，其中X₂为G，其中所述轻 链可变区包含SEQ ID NO：238的氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)， 其中X₁₁为D，其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在另外的实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含 SEQID NO：40的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3)(IMGT)， 其中X₂为G，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：238的氨基酸27-30(CDR1)、48-50 (CDR2)和87-91(CDR3)，其中X₁₁为K，其中所述抗体特异性结合gp120，并且 其中所述抗体是中和抗体。在另外的实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可 变区，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO：40的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2) 和97-114(CDR3)(IMGT)，其中X₂为G，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：238 的氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)，其中X₁₁为S，其中所 述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在另外的实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO：40的氨 基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3)(IMGT)，其中X₂为G， 其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：238的氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2) 和87-91(CDR3)，其中X₁₁为H，其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗 体是中和抗体。在一些实施方案中，所述抗体不是自身反应性的和/或具有低自身反应 性。在另外的实施方案中，所述抗体不是免疫原性的和/或具有低免疫原性。

在另外的实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO：40的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3) (IMGT)，其中X₂为H，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：238的氨基酸27-30 (CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)，其中X₁₁为F，其中所述抗体特异性结 合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在另外的实施方案中，所述抗体包含重链 可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO：40的氨基酸26-33 (CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3)(IMGT)，其中X₂为H，其中所述轻 链可变区包含SEQ ID NO：238的氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)， 其中X₁₁为D，其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在另外的实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含 SEQID NO：40的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3)(IMGT)， 其中X₂为H，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：238的氨基酸27-30(CDR1)、48-50 (CDR2)和87-91(CDR3)，其中X₁₁为K，其中所述抗体特异性结合gp120，并且 其中所述抗体是中和抗体。在另外的实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可 变区，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO：40的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2) 和/或97-114(CDR3)(IMGT)，其中X₂为H，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO： 238的氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)，其中X₁₁为S，其中 所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在另外的实施方案中， 所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO：40的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3)(IMGT)，其中X₂为H， 其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：238的氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2) 和87-91(CDR3)，其中X₁₁为H，其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗 体是中和抗体。在一些实施方案中，所述抗体不是自身反应性的和/或具有低自身反应 性。在另外的实施方案中，所述抗体不是免疫原性的和/或具有低免疫原性。

在另外的实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO：40的氨基酸31-35(CDR1)、50-66(CDR2)和/或99-114(CDR3) (Kabat)，其中X₂为G并且X₃为S，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：238的氨 基酸24-32(CDR1)、48-54(CDR2)和/或87-91(CDR3)(Kabat)，其中X₁₁为F， 其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在另外的实施方案 中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO：40 的氨基酸31-35(CDR1)、50-66(CDR2)和/或99-114(CDR3)(Kabat)，其中X₂为G并且X₃为S，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：238的氨基酸24-32(CDR1)、 48-54(CDR2)和/或87-91(CDR3)(Kabat)，其中X₁₁为D，其中所述抗体特异性结 合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在另外的实施方案中，所述抗体包含重链 可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO：40的氨基酸31-35 (CDR1)、50-66(CDR2)和/或99-114(CDR3)(Kabat)，其中X₂为G并且X₃为 S，其中所述轻链可变区包含SEQID NO：238的氨基酸24-32(CDR1)、48-54(CDR2) 和/或87-91(CDR3)(Kabat)，其中X₁₁为K，其中所述抗体特异性结合gp120，并且 其中所述抗体是中和抗体。在另外的实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可 变区，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO：40的氨基酸31-35(CDR1)、50-66(CDR2) 和/或99-114(CDR3)(Kabat)，其中X₂为G并且X₃为S，其中所述轻链可变区包含 SEQ ID NO：238的氨基酸24-32(CDR1)、48-54(CDR2)和/或87-91(CDR3)(Kabat)， 其中X₁₁为S，其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在另 外的实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO：40的氨基酸31-35(CDR1)、50-66(CDR2)和/或99-114(CDR3)(Kabat)， 其中X₂为G并且X₃为S，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：238的氨基酸24-32 (CDR1)、48-54(CDR2)和/或87-91(CDR3)(Kabat)，其中X₁₁为H，其中所述抗 体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在一些实施方案中，所述抗体 不是自身反应性的和/或具有低自身反应性。在另外的实施方案中，所述抗体不是免疫 原性的和/或具有低免疫原性。

在另外的实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO：40的氨基酸31-35(CDR1)、50-66(CDR2)和/或99-114(CDR3) (Kabat)，其中X₂为H并且X₃为S，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：238的氨 基酸24-32(CDR1)、48-54(CDR2)和/或87-91(CDR3)(Kabat)，其中X₁₁为F， 其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在另外的实施方案 中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO：40 的氨基酸31-35(CDR1)、50-66(CDR2)和/或99-114(CDR3)(Kabat)，其中X₂为H并且X₃为S，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：238的氨基酸24-32(CDR1)、 48-54(CDR2)和/或87-91(CDR3)(Kabat)，其中X₁₁为D，其中所述抗体特异性结 合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在另外的实施方案中，所述抗体包含重链 可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO：40的氨基酸31-35 (CDR1)、50-66(CDR2)和/或99-114(CDR3)(Kabat)，其中X₂为H并且X₃为 S，其中所述轻链可变区包含SEQID NO：238的氨基酸24-32(CDR1)、48-54(CDR2) 和/或87-91(CDR3)(Kabat)，其中X₁₁为K，其中所述抗体特异性结合gp120，并且 其中所述抗体是中和抗体。在另外的实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可 变区，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO：40的氨基酸31-35(CDR1)、50-66(CDR2) 和/或99-114(CDR3)(Kabat)，其中X₂为H并且X₃为S，其中所述轻链可变区包含 SEQ ID NO：238的氨基酸24-32(CDR1)、48-54(CDR2)和/或87-91(CDR3)(Kabat)， 其中X₁₁为S，其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在另 外的实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO：40的氨基酸31-35(CDR1)、50-66(CDR2)和/或99-114(CDR3)(Kabat)， 其中X₂为H并且X₃为S，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：238的氨基酸24-32 (CDR1)、48-54(CDR2)和/或87-91(CDR3)(Kabat)，其中X₁₁为H，其中所述抗 体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在一些实施方案中，所述抗体 不是自身反应性的和/或具有低自身反应性。在另外的实施方案中，所述抗体不是免疫 原性的和/或具有低免疫原性。

在另外的实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO：40的氨基酸31-35(CDR1)、50-66(CDR2)和/或99-114(CDR3) (Kabat)，其中X₂为G并且X₃为N，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：238的氨 基酸24-32(CDR1)、48-54(CDR2)和/或87-91(CDR3)(Kabat)，其中X₁₁为F， 其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在另外的实施方案 中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO：40 的氨基酸31-35(CDR1)、50-66(CDR2)和/或99-114(CDR3)(Kabat)，其中X₂为G并且X₃为N，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：238的氨基酸24-32(CDR1)、 48-54(CDR2)和/或87-91(CDR3)(Kabat)，其中X₁₁为D，其中所述抗体特异性结 合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在另外的实施方案中，所述抗体包含重链 可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO：40的氨基酸31-35 (CDR1)、50-66(CDR2)和/或99-114(CDR3)(Kabat)，其中X₂为G并且X₃为 N，其中所述轻链可变区包含SEQID NO：238的氨基酸24-32(CDR1)、48-54(CDR2) 和/或87-91(CDR3)(Kabat)，其中X₁₁为K，其中所述抗体特异性结合gp120，并且 其中所述抗体是中和抗体。在另外的实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可 变区，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO：40的氨基酸31-35(CDR1)、50-66(CDR2) 和/或99-114(CDR3)(Kabat)，其中X₂为G并且X₃为N，其中所述轻链可变区包含 SEQ ID NO：238的氨基酸24-32(CDR1)、48-54(CDR2)和/或87-91(CDR3)(Kabat)， 其中X₁₁为S，其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在另 外的实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO：40的氨基酸31-35(CDR1)、50-66(CDR2)和/或99-114(CDR3)(Kabat)， 其中X₂为G并且X₃为N，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：238的氨基酸24-32 (CDR1)、48-54(CDR2)和/或87-91(CDR3)(Kabat)，其中X₁₁为H，其中所述抗 体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在一些实施方案中，所述抗体 不是自身反应性的和/或具有低自身反应性。在另外的实施方案中，所述抗体不是免疫 原性的和/或具有低免疫原性。

在另外的实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO：40的氨基酸31-35(CDR1)、50-66(CDR2)和/或99-114(CDR3) (Kabat)，其中X₂为H并且X₃为N，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：238的氨 基酸24-32(CDR1)、48-54(CDR2)和/或87-91(CDR3)(Kabat)，其中X₁₁为F， 其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在另外的实施方案 中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO：40 的氨基酸31-35(CDR1)、50-66(CDR2)和/或99-114(CDR3)(Kabat)，其中X₂为H并且X₃为N，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：238的氨基酸24-32(CDR1)、 48-54(CDR2)和/或87-91(CDR3)(Kabat)，其中X₁₁为D，其中所述抗体特异性结 合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在另外的实施方案中，所述抗体包含重链 可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO：40的氨基酸31-35 (CDR1)、50-66(CDR2)和/或99-114(CDR3)(Kabat)，其中X₂为H并且X₃为 N，其中所述轻链可变区包含SEQID NO：238的氨基酸24-32(CDR1)、48-54(CDR2) 和/或87-91(CDR3)(Kabat)，其中X₁₁为K，其中所述抗体特异性结合gp120，并且 其中所述抗体是中和抗体。在另外的实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可 变区，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO：40的氨基酸31-35(CDR1)、50-66(CDR2) 和/或99-114(CDR3)(Kabat)，其中X₂为H并且X₃为N，其中所述轻链可变区包含 SEQ ID NO：238的氨基酸24-32(CDR1)、48-54(CDR2)和/或87-91(CDR3)(Kabat)， 其中X₁₁为S，其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在另 外的实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO：40的氨基酸31-35(CDR1)、50-66(CDR2)和/或99-114(CDR3)(Kabat)， 其中X₂为H并且X₃为N，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：238的氨基酸24-32 (CDR1)、48-54(CDR2)和/或87-91(CDR3)(Kabat)，其中X₁₁为H，其中所述抗 体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在一些实施方案中，所述抗体 不是自身反应性的和/或具有低自身反应性。在另外的实施方案中，所述抗体不是免疫 原性的和/或具有低免疫原性。

例如，在一些实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO：196(NIH4546重链可变区)的氨基酸26-33(CDR1)、51-58 (CDR2)和97-114(CDR3)(IMGT CDR)，还包含Kabat位置54上的甘氨酸至组氨 酸的置换(G54H置换)，并且其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：215的27-30 (CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)(IMGT)，其中所述抗体特异性结合gp120， 并且其中所述抗体是中和抗体。在一些实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链 可变区，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO：196(NIH4546重链可变区)的氨基酸 26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3)(IMGTCDR)，还包含Kabat位 置54上的甘氨酸至组氨酸的置换(G54H置换)，并且其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：215的氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)(IMGT)，其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。例如，在一些实施方案 中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO：196 (NIH4546重链可变区)的氨基酸31-35(CDR1)、50-66(CDR2)和/或99-114(CDR3) (Kabat CDR)，还包含Kabat位置54上的甘氨酸至组氨酸的置换(G54H置换)，并 且其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：215的氨基酸24-32(CDR1)、48-54(CDR2) 和/或87-91(CDR3)(Kabat)，其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗体 是中和抗体。在一些实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述 重链可变区包含SEQ ID NO：196(NIH4546重链可变区)的氨基酸31-35(CDR1)、 50-66(CDR2)和/或99-114(CDR3)(Kabat CDR)，还包含Kabat位置54上的甘氨 酸至组氨酸的置换(G54H置换)，并且其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：215的 氨基酸24-32(CDR1)、48-54(CDR2)和/或87-91(CDR3)(Kabat)，其中所述抗体 特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在其他实施方案中，所述抗体包 含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO：196(NIH4546重 链可变区)所示的氨基酸序列，还包含Kabat位置54上的甘氨酸至组氨酸的置换(G54H 置换)，并且其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：215所示的氨基酸序列(Kabat)， 其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在一些实施方案中， 所述抗体不是自身反应性的和/或具有低自身反应性。在另外的实施方案中，所述抗体 不是免疫原性的和/或具有低免疫原性。

在一些实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO： 40的氨基酸序列，其中X₁为I，X₂为H，X₃为S并且X₄为T(VRC07 G54H；SEQ ID NO：32)并且其中所述轻链可变区包含本文所描述的轻链可变区或已知的VRC01样轻 链可变区。在一些实施方案中，所述抗体不是自身反应性的和/或具有低自身反应性。 在另外的实施方案中，所述抗体不是免疫原性的和/或具有低免疫原性。例如，在一些 实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述抗体特异性结合gp120， 并且其中所述抗体是中和抗体，其中所述抗体的重链可变区包含SEQ ID NO：40，其 中X₁为I，X₂为H，X₃为S并且X₄为T(VRC07 G54H；SEQ ID NO：32)，并且所述 抗体的轻链包含：

(a)SEQ ID NO：238，其中X₁为E；X₂为I；X₃为V；X₄为I；X₅为S；X₆为 S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为V；X₁₃为I(VRC01轻链； SEQ ID NO：9)；

(b)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为E；X₄为I； X₅为S；X₆为S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为V；并且 X₁₃为I(VRC01L E1/I2del-V3E；SEQ IDNO：219)；

(c)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为K；X₄为I； X₅为S；X₆为S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为V；并且 X₁₃为I(VRC01L V3K轻链；SEQ ID NO：220)；

(d)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为S；X₄为I； X₅为S；X₆为S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为V；并且 X₁₃为I(VRC01L E1/I2del V3S轻链；SEQID NO：221)；

(e)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为V；X₄为I； X₅为S；X₆为S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为D；X₁₂为V；并且 X₁₃为I(VRC01L E1/I2del F97D；SEQ IDNO：222)；

(f)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为V；X₄为I； X₅为S；X₆为S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为K；X₁₂为V；并且 X₁₃为I(VRC01L E1/I2del F97K；SEQ IDNO：223)；

(g)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为V；X₄为I； X₅为S；X₆为S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为S；X₁₂为V；并且 X₁₃为I(VRC01L E1/I2del F97S；SEQ IDNO：224)；

(h)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为V；X₄为I； X₅为S；X₆为S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为H；X₁₂为V；并且 X₁₃为I(VRC01L E1/I2del F97H；SEQ IDNO：225)；

(i)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为E；X₄为I； X₅为S；X₆为S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为S；X₁₂为V；并且 X₁₃为I(VRC01L E1/I2del V3E/F97S；SEQID NO：226)；

(j)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为E；X₄为I； X₅为S；X₆为S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为H；X₁₂为V；并且 X₁₃为I(VRC01L E1/I2del V3E/F97H；SEQID NO：227)；

(k)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为V；X₄为I； X₅为S；X₆为S；X₇为S；X₈为D；X₉为T；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为V；并且X₁₃为I(VRC01hpL03；SEQ ID NO：228)；

(l)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为V；X₄为Q； X₅为S；X₆为S；X₇为N；X₈为D；X₉为T；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为V；并且X₁₃为I(VRC01hpL04；SEQ ID NO：229)；

(m)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为V；X₄为Q； X₅为S；X₆为S；X₇为N；X₈为D；X₉为T；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为Q；并且X₁₃为N(VRC01hpL05；SEQ ID NO：230)；

(n)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为V；X₄为E； X₅为K；X₆为E；X₇为E；X₈为E；X₉为R；X₁₀为R；X₁₁为F；X₁₂为Q；并且X₁₃为N(VRC01hpL06；SEQ ID NO：231)；

(o)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为S；X₄为T； X₅为S；X₆为S；X₇为S；X₈为D；X₉为T；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为Q；并且X₁₃为N(VRC01hpL02 E1/I2缺失/V3S；SEQID NO：232)；

(p)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为S；X₄为I； X₅为S；X₆为S；X₇为S；X₈为D；X₉为T；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为V；并且X₁₃为I(VRC01hpL03 E1/I2缺失/V3S；SEQID NO：233)；

(q)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为S；X₄为Q； X₅为S；X₆为S；X₇为N；X₈为D；X₉为T；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为V；并且X₁₃为I(VRC01hpL04 E1/I2缺失/V3S；SEQID NO：234)；

(r)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为S；X₄为Q； X₅为S；X₆为S；X₇为N；X₈为D；X₉为T；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为Q；并且X₁₃为N(VRC01hpL05 E1/I2缺失/V3S；SEQID NO：235)；

(s)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为S；X₄为E； X₅为K；X₆为E；X₇为E；X₈为E；X₉为R；X₁₀为R；X₁₁为F；X₁₂为Q；并且X₁₃为N(VRC01hpL06 E1/I2缺失/V3S；SEQID NO：236)；

(t)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为E；X₄为Q； X₅为S；X₆为S；X₇为N；X₈为D；X₉为T；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为V；并且X₁₃为I(VRC01hpL04 E1/I2缺失/V3E；SEQID NO：237)；

(u)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为V；X₄为I； X₅为S；X₆为S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为V；并且 X₁₃为I(VRC01 E1/I2缺失；SEQ ID NO：53)；或者

(v)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为V；X₄为T； X₅为S；X₆为S；X₇为S；X₈为D；X₉为T；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为Q；并且X₁₃为N(VRC01hpL02；SEQ ID NO：50)。

在一些实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO： 40的氨基酸序列，其中X₁为I，X₂为H，X₃为N，并且X₄为T(VRC07 G54H，S58N)， 并且其中所述轻链可变区包含本文所描述的轻链可变区或已知的VRC01样轻链可变 区。在一些实施方案中，所述抗体不是自身反应性的和/或具有低自身反应性。在另外 的实施方案中，所述抗体不是免疫原性的和/或具有低免疫原性。例如，在一些实施方 案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述抗体特异性结合gp120，并 且其中所述抗体是中和抗体，其中所述抗体的重链可变区包含SEQ ID NO：40，其中 X₁为I，X₂为H，X₃为N并且X₄为T(VRC07 G54H，S58N；SEQ ID NO：258，并且 所述抗体的轻链包含：

(a)SEQ ID NO：238，其中X₁为E；X₂为I；X₃为V；X₄为I；X₅为S；X₆为 S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为V；X₁₃为I(VRC01轻链； SEQ ID NO：9)；

(b)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为E；X₄为I； X₅为S；X₆为S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为V；并且 X₁₃为I(VRC01L E1/I2del-V3E；SEQ IDNO：219)；

(c)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为K；X₄为I； X₅为S；X₆为S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为V；并且 X₁₃为I(VRC01L V3K轻链；SEQ ID NO：220)；

(d)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为S；X₄为I； X₅为S；X₆为S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为V；并且 X₁₃为I(VRC01L E1/I2del V3S轻链；SEQID NO：221)；

(e)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为V；X₄为I； X₅为S；X₆为S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为D；X₁₂为V；并且 X₁₃为I(VRC01L E1/I2del F97D；SEQ IDNO：222)；

(f)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为V；X₄为I； X₅为S；X₆为S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为K；X₁₂为V；并且 X₁₃为I(VRC01L E1/I2del F97K；SEQ IDNO：223)；

(g)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为V；X₄为I； X₅为S；X₆为S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为S；X₁₂为V；并且 X₁₃为I(VRC01L E1/I2del F97S；SEQ IDNO：224)；

(h)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为V；X₄为I； X₅为S；X₆为S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为H；X₁₂为V；并且 X₁₃为I(VRC01L E1/I2del F97H；SEQ IDNO：225)；

(i)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为E；X₄为I； X₅为S；X₆为S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为S；X₁₂为V；并且 X₁₃为I(VRC01L E1/I2del V3E/F97S；SEQID NO：226)；

(j)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为E；X₄为I； X₅为S；X₆为S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为H；X₁₂为V；并且 X₁₃为I(VRC01L E1/I2del V3E/F97H；SEQID NO：227)；

(k)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为V；X₄为I； X₅为S；X₆为S；X₇为S；X₈为D；X₉为T；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为V；并且X₁₃为I(VRC01hpL03；SEQ ID NO：228)；

(l)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为V；X₄为Q； X₅为S；X₆为S；X₇为N；X₈为D；X₉为T；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为V；并且X₁₃为I(VRC01hpL04；SEQ ID NO：229)；

(m)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为V；X₄为Q； X₅为S；X₆为S；X₇为N；X₈为D；X₉为T；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为Q；并且X₁₃为N(VRC01hpL05；SEQ ID NO：230)；

(n)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为V；X₄为E； X₅为K；X₆为E；X₇为E；X₈为E；X₉为R；X₁₀为R；X₁₁为F；X₁₂为Q；并且X₁₃为N(VRC01hpL06；SEQ ID NO：231)；

(o)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为S；X₄为T； X₅为S；X₆为S；X₇为S；X₈为D；X₉为T；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为Q；并且X₁₃为N(VRC01hpL02 E1/I2缺失/V3S；SEQID NO：232)；

(p)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为S；X₄为I； X₅为S；X₆为S；X₇为S；X₈为D；X₉为T；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为V；并且X₁₃为I(VRC01hpL03 E1/I2缺失/V3S；SEQID NO：233)；

(q)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为S；X₄为Q； X₅为S；X₆为S；X₇为N；X₈为D；X₉为T；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为V；并且X₁₃为I(VRC01hpL04 E1/I2缺失/V3S；SEQID NO：234)；

(r)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为S；X₄为Q； X₅为S；X₆为S；X₇为N；X₈为D；X₉为T；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为Q；并且X₁₃为N(VRC01hpL05 E1/I2缺失/V3S；SEQID NO：235)；

(s)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为S；X₄为E； X₅为K；X₆为E；X₇为E；X₈为E；X₉为R；X₁₀为R；X₁₁为F；X₁₂为Q；并且X₁₃为N(VRC01hpL06 E1/I2缺失/V3S；SEQID NO：236)；

(t)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为E；X₄为Q； X₅为S；X₆为S；X₇为N；X₈为D；X₉为T；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为V；并且X₁₃为I(VRC01hpL04 E1/I2缺失/V3E；SEQID NO：237)；

(u)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为V；X₄为I； X₅为S；X₆为S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为V；并且 X₁₃为I(VRC01 E1/I2缺失；SEQ ID NO：53)；或者

(v)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为V；X₄为T； X₅为S；X₆为S；X₇为S；X₈为D；X₉为T；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为Q；并且X₁₃为N(VRC01hpL02；SEQ ID NO：50)。

在一些实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO： 40的氨基酸序列，其中X₁为V，X₂为H，X₃为S并且X₄为A(VRC07 I37V，G54H，T93A； SEQ ID NO：259)，并且其中所述轻链可变区包含本文所描述的轻链可变区或已知的 VRC01样轻链可变区。在一些实施方案中，所述抗体不是自身反应性的和/或具有低 自身反应性。在另外的实施方案中，所述抗体不是免疫原性的和/或具有低免疫原性。 例如，在一些实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述抗体特 异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体，其中所述抗体的重链可变区包含SEQ ID NO：40，其中X₁为V，X₂为H，X₃为S并且X₄为A(VRC07 I37V，G54H，T93A； SEQ ID NO：259)，并且所述抗体的轻链包含：

(a)SEQ ID NO：238，其中X₁为E；X₂为I；X₃为V；X₄为I；X₅为S；X₆为 S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为V；X₁₃为I(VRC01轻链； SEQ ID NO：9)；

(b)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为E；X₄为I； X₅为S；X₆为S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为V；并且 X₁₃为I(VRC01L E1/I2del-V3E；SEQ IDNO：219)；

(c)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为K；X₄为I； X₅为S；X₆为S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为V；并且 X₁₃为I(VRC01L V3K轻链；SEQ ID NO：220)；

(d)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为S；X₄为I； X₅为S；X₆为S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为V；并且 X₁₃为I(VRC01L E1/I2del V3S轻链；SEQID NO：221)；

(e)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为V；X₄为I； X₅为S；X₆为S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为D；X₁₂为V；并且 X₁₃为I(VRC01L E1/I2del F97D；SEQ IDNO：222)；

(f)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为V；X₄为I； X₅为S；X₆为S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为K；X₁₂为V；并且 X₁₃为I(VRC01L E1/I2del F97K；SEQ IDNO：223)；

(g)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为V；X₄为I； X₅为S；X₆为S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为S；X₁₂为V；并且 X₁₃为I(VRC01L E1/I2del F97S；SEQ IDNO：224)；

(h)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为V；X₄为I； X₅为S；X₆为S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为H；X₁₂为V；并且 X₁₃为I(VRC01L E1/I2del F97H；SEQ IDNO：225)；

(i)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为E；X₄为I； X₅为S；X₆为S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为S；X₁₂为V；并且 X₁₃为I(VRC01L E1/I2del V3E/F97S；SEQID NO：226)；

(j)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为E；X₄为I； X₅为S；X₆为S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为H；X₁₂为V；并且 X₁₃为I(VRC01L E1/I2del V3E/F97H；SEQID NO：227)；

(k)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为V；X₄为I； X₅为S；X₆为S；X₇为S；X₈为D；X₉为T；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为V；并且X₁₃为I(VRC01hpL03；SEQ ID NO：228)；

(l)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为V；X₄为Q； X₅为S；X₆为S；X₇为N；X₈为D；X₉为T；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为V；并且X₁₃为I(VRC01hpL04；SEQ ID NO：229)；

(m)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为V；X₄为Q； X₅为S；X₆为S；X₇为N；X₈为D；X₉为T；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为Q；并且X₁₃为N(VRC01hpL05；SEQ ID NO：230)；

(n)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为V；X₄为E； X₅为K；X₆为E；X₇为E；X₈为E；X₉为R；X₁₀为R；X₁₁为F；X₁₂为Q；并且X₁₃为N(VRC01hpL06；SEQ ID NO：231)；

(o)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为S；X₄为T； X₅为S；X₆为S；X₇为S；X₈为D；X₉为T；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为Q；并且X₁₃为N(VRC01hpL02 E1/I2缺失/V3S；SEQID NO：232)；

(p)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为S；X₄为I； X₅为S；X₆为S；X₇为S；X₈为D；X₉为T；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为V；并且X₁₃为I(VRC01hpL03 E1/I2缺失/V3S；SEQID NO：233)；

(q)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为S；X₄为Q； X₅为S；X₆为S；X₇为N；X₈为D；X₉为T；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为V；并且X₁₃为I(VRC01hpL04 E1/I2缺失/V3S；SEQID NO：234)；

(r)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为S；X₄为Q； X₅为S；X₆为S；X₇为N；X₈为D；X₉为T；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为Q；并且X₁₃为N(VRC01hpL05 E1/I2缺失/V3S；SEQID NO：235)；

(s)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为S；X₄为E； X₅为K；X₆为E；X₇为E；X₈为E；X₉为R；X₁₀为R；X₁₁为F；X₁₂为Q；并且X₁₃为N(VRC01hpL06 E1/I2缺失/V3S；SEQID NO：236)；

(t)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为E；X₄为Q； X₅为S；X₆为S；X₇为N；X₈为D；X₉为T；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为V；并且X₁₃为I(VRC01hpL04 E1/I2缺失/V3E；SEQID NO：237)；

(u)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为V；X₄为I； X₅为S；X₆为S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为V；并且 X₁₃为I(VRC01 E1/I2缺失；SEQ ID NO：53)；或者

(v)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为V；X₄为T； X₅为S；X₆为S；X₇为S；X₈为D；X₉为T；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为Q；并且X₁₃为N(VRC01hpL02；SEQ ID NO：50)。

在一些实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO： 40的氨基酸序列，其中X₁为V，X₂为H，X₃为N并且X₄为A(VRC07I37V，G54H， S58N，T93A；SEQ ID NO：260)并且其中所述轻链可变区包含本文所描述的轻链可变 区或已知的VRC01样轻链可变区。在一些实施方案中，所述抗体不是自身反应性的 和/或具有低自身反应性。在另外的实施方案中，所述抗体不是免疫原性的和/或具有 低免疫原性。例如，在一些实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其 中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体，其中所述抗体的重链 可变区包括SEQ ID NO：40，其中X₁为V，X₂为H，X₃为N并且X₄为A(VRC07 I37V， G54H，S58N，T93A；SEQ ID NO：260)，并且所述抗体的轻链包含：

(a)SEQ ID NO：238，其中X₁为E；X₂为I；X₃为V；X₄为I；X₅为S；X₆为 S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为V；X₁₃为I(VRC01轻链； SEQ ID NO：9)；

(b)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为E；X₄为I； X₅为S；X₆为S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为V；并且 X₁₃为I(VRC01L E1/I2del-V3E；SEQ IDNO：219)；

(c)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为K；X₄为I； X₅为S；X₆为S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为V；并且 X₁₃为I(VRC01L V3K轻链；SEQ ID NO：220)；

(d)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为S；X₄为I； X₅为S；X₆为S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为V；并且 X₁₃为I(VRC01L E1/I2del V3S轻链；SEQID NO：221)；

(e)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为V；X₄为I； X₅为S；X₆为S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为D；X₁₂为V；并且 X₁₃为I(VRC01L E1/I2del F97D；SEQ IDNO：222)；

(f)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为V；X₄为I； X₅为S；X₆为S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为K；X₁₂为V；并且 X₁₃为I(VRC01L E1/I2del F97K；SEQ IDNO：223)；

(g)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为V；X₄为I； X₅为S；X₆为S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为S；X₁₂为V；并且 X₁₃为I(VRC01L E1/I2del F97S；SEQ IDNO：224)；

(h)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为V；X₄为I； X₅为S；X₆为S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为H；X₁₂为V；并且 X₁₃为I(VRC01L E1/I2del F97H；SEQ IDNO：225)；

(i)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为E；X₄为I； X₅为S；X₆为S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为S；X₁₂为V；并且 X₁₃为I(VRC01L E1/I2del V3E/F97S；SEQID NO：226)；

(j)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为E；X₄为I； X₅为S；X₆为S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为H；X₁₂为V；并且 X₁₃为I(VRC01L E1/I2del V3E/F97H；SEQID NO：227)；

(k)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为V；X₄为I； X₅为S；X₆为S；X₇为S；X₈为D；X₉为T；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为V；并且X₁₃为I(VRC01hpL03；SEQ ID NO：228)；

(l)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为V；X₄为Q； X₅为S；X₆为S；X₇为N；X₈为D；X₉为T；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为V；并且X₁₃为I(VRC01hpL04；SEQ ID NO：229)；

(m)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为V；X₄为Q； X₅为S；X₆为S；X₇为N；X₈为D；X₉为T；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为Q；并且X₁₃为N(VRC01hpL05；SEQ ID NO：230)；

(n)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为V；X₄为E；X₅为K；X₆为E；X₇为E；X₈为E；X₉为R；X₁₀为R；X₁₁为F；X₁₂为Q；并且 X₁₃为N(VRC01hpL06；SEQ ID NO：231)；

(o)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为S；X₄为T； X₅为S；X₆为S；X₇为S；X₈为D；X₉为T；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为Q；并且X₁₃为N(VRC01hpL02 E1/I2缺失/V3S；SEQID NO：232)；

(p)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为S；X₄为I； X₅为S；X₆为S；X₇为S；X₈为D；X₉为T；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为V；并且X₁₃为I(VRC01hpL03 E1/I2缺失/V3S；SEQID NO：233)；

(q)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为S；X₄为Q； X₅为S；X₆为S；X₇为N；X₈为D；X₉为T；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为V；并且X₁₃为I(VRC01hpL04 E1/I2缺失/V3S；SEQID NO：234)；

(r)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为S；X₄为Q； X₅为S；X₆为S；X₇为N；X₈为D；X₉为T；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为Q；并且X₁₃为N(VRC01hpL05 E1/I2缺失/V3S；SEQID NO：235)；

(s)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为S；X₄为E； X₅为K；X₆为E；X₇为E；X₈为E；X₉为R；X₁₀为R；X₁₁为F；X₁₂为Q；并且X₁₃为N(VRC01hpL06 E1/I2缺失/V3S；SEQID NO：236)；

(t)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为E；X₄为Q； X₅为S；X₆为S；X₇为N；X₈为D；X₉为T；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为V；并且X₁₃为I(VRC01hpL04 E1/I2缺失/V3E；SEQID NO：237)；

(u)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为V；X₄为I； X₅为S；X₆为S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为V；并且 X₁₃为I(VRC01 E1/I2缺失；SEQ ID NO：53)；或者

(v)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为V；X₄为T； X₅为S；X₆为S；X₇为S；X₈为D；X₉为T；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为Q；并且X₁₃为N(VRC01hpL02；SEQ ID NO：50)。

在一些实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO： 196(NIH4546重链可变区)的氨基酸序列，还包含Kabat位置54上的甘氨酸至组氨 酸的置换(G54H置换)，并且其中所述轻链可变区包含本文所描述的轻链可变区或已 知的VRC01样轻链可变区。在一些实施方案中，所述抗体不是自身反应性的，和/或 具有低自身反应性。在另外的实施方案中，所述抗体不是免疫原性的和/或具有低免疫 原性。例如，在一些实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述 抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体，其中所述抗体的重链可变区 包含SEQ ID NO：196(NIH4546重链可变区)，还包含Kabat位置54上的甘氨酸至组 氨酸的置换(G54H置换)，并且所述抗体的轻链包含：

(a)SEQ ID NO：238，其中X₁为E；X₂为I；X₃为V；X₄为I；X₅为S；X₆为 S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为V；X₁₃为I(VRC01轻链； SEQ ID NO：9)；

(b)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为E；X₄为I； X₅为S；X₆为S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为V；并且 X₁₃为I(VRC01L E1/I2del-V3E；SEQ IDNO：219)；

(c)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为K；X₄为I； X₅为S；X₆为S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为V；并且 X₁₃为I(VRC01L V3K轻链；SEQ ID NO：220)；

(d)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为S；X₄为I； X₅为S；X₆为S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为V；并且 X₁₃为I(VRC01L E1/I2del V3S轻链；SEQID NO：221)；

(e)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为V；X₄为I； X₅为S；X₆为S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为D；X₁₂为V；并且 X₁₃为I(VRC01L E1/I2del F97D；SEQ IDNO：222)；

(f)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为V；X₄为I； X₅为S；X₆为S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为K；X₁₂为V；并且 X₁₃为I(VRC01L E1/I2del F97K；SEQ IDNO：223)；

(g)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为V；X₄为I； X₅为S；X₆为S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为S；X₁₂为V；并且 X₁₃为I(VRC01L E1/I2del F97S；SEQ IDNO：224)；

(h)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为V；X₄为I； X₅为S；X₆为S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为H；X₁₂为V；并且 X₁₃为I(VRC01L E1/I2del F97H；SEQ IDNO：225)；

(i)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为E；X₄为I； X₅为S；X₆为S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为S；X₁₂为V；并且 X₁₃为I(VRC01L E1/I2del V3E/F97S；SEQID NO：226)；

(j)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为E；X₄为I； X₅为S；X₆为S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为H；X₁₂为V；并且 X₁₃为I(VRC01L E1/I2del V3E/F97H；SEQID NO：227)；

(k)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为V；X₄为I； X₅为S；X₆为S；X₇为S；X₈为D；X₉为T；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为V；并且X₁₃为I(VRC01hpL03；SEQ ID NO：228)；

(l)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为V；X₄为Q； X₅为S；X₆为S；X₇为N；X₈为D；X₉为T；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为V；并且X₁₃为I(VRC01hpL04；SEQ ID NO：229)；

(m)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为V；X₄为Q； X₅为S；X₆为S；X₇为N；X₈为D；X₉为T；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为Q；并且X₁₃为N(VRC01hpL05；SEQ ID NO：230)；

(n)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为V；X₄为E； X₅为K；X₆为E；X₇为E；X₈为E；X₉为R；X₁₀为R；X₁₁为F；X₁₂为Q；并且X₁₃为N(VRC01hpL06；SEQ ID NO：231)；

(o)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为S；X₄为T； X₅为S；X₆为S；X₇为S；X₈为D；X₉为T；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为Q；并且X₁₃为N(VRC01hpL02 E1/I2缺失/V3S；SEQID NO：232)；

(p)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为S；X₄为I； X₅为S；X₆为S；X₇为S；X₈为D；X₉为T；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为V；并且X₁₃为I(VRC01hpL03 E1/I2缺失/V3S；SEQID NO：233)；

(q)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为S；X₄为Q； X₅为S；X₆为S；X₇为N；X₈为D；X₉为T；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为V；并且X₁₃为I(VRC01hpL04 E1/I2缺失/V3S；SEQID NO：234)；

(r)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为S；X₄为Q； X₅为S；X₆为S；X₇为N；X₈为D；X₉为T；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为Q；并且X₁₃为N(VRC01hpL05 E1/I2缺失/V3S；SEQID NO：235)；

(s)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为S；X₄为E； X₅为K；X₆为E；X₇为E；X₈为E；X₉为R；X₁₀为R；X₁₁为F；X₁₂为Q；并且X₁₃为N(VRC01hpL06 E1/I2缺失/V3S；SEQID NO：236)；

(t)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为E；X₄为Q； X₅为S；X₆为S；X₇为N；X₈为D；X₉为T；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为V；并且X₁₃为I(VRC01hpL04 E1/I2缺失/V3E；SEQID NO：237)；

(u)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为V；X₄为I； X₅为S；X₆为S；X₇为W；X₈为D；X₉为N；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为V；并且 X₁₃为I(VRC01 E1/I2缺失；SEQ ID NO：53)；或者

(v)SEQ ID NO：238，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为V；X₄为T； X₅为S；X₆为S；X₇为S；X₈为D；X₉为T；X₁₀为T；X₁₁为F；X₁₂为Q；并且X₁₃为N(VRC01hpL02；SEQ ID NO：50)。

2.另外的示例性抗体

在一些实施方案中，所述分离的单克隆抗体特异性结合gp120，并且包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：1的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2) 和/或97-114(CDR3)，其中所述抗体特异性结合HIV-1的gp120，并且其中所述抗体 是中和抗体。在一些实施方案中，所述分离的单克隆抗体特异性结合gp120，并且包 含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：29的氨基酸26-33(CDR1)、51-58 (CDR2)和/或97-114(CDR3)，其中所述抗体特异性结合HIV-1的gp120，并且其 中所述抗体是中和抗体。在另外的实施方案中，所述单克隆抗体的重链可变区包含SEQ ID NO：2的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和/或97-114(CDR3)，其中所述 抗体特异性结合gp120并且其中所述抗体是中和抗体。在其他实施方案中，所述单克 隆抗体的重链可变区包含SEQ ID NO：3的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和 /或97-114(CDR3)，其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。 在其他实施方案中，所述单克隆抗体的重链可变区包含SEQ ID NO：4的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和/或97-114(CDR3)，其中所述抗体特异性结合gp120， 其中所述抗体是中和抗体。

在一些实施方案中，所述分离的单克隆抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：1的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3)，其中 所述抗体特异性结合HIV-1的gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在一些实施方 案中，所述分离的单克隆抗体特异性结合gp120，并且包含重链可变区，所述重链可 变区包含SEQ ID NO：29的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和/或97-114(CDR3)， 其中所述抗体特异性结合HIV-1的gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在另外的 实施方案中，所述单克隆抗体的重链可变区包含SEQ ID NO：2的氨基酸26-33 (CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3)，其中所述抗体特异性结合gp120，并 且其中所述抗体是中和抗体。在其他实施方案中，所述单克隆抗体的重链可变区包含 SEQ ID NO：3的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3)，其中所 述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在其他实施方案中，所述 单克隆抗体的重链可变区包含SEQ ID NO：4的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2) 和97-114(CDR3)，其中所述抗体特异性结合gp120，其中所述抗体是中和抗体。

在其他实施方案中，所述分离的单克隆抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：30的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和/或97-114(CDR3)， 其中所述抗体特异性结合HIV-1的gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在具体的 非限制性的实例中，所述分离的单克隆抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：31-36之一的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3)，其 中所述抗体特异性结合HIV-1的gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在一些实施 方案中，所述抗体不是自身反应性的，和/或具有低自身反应性。在另外的实施方案中， 所述抗体不是免疫原性的和/或具有低免疫原性。

在其他实施方案中，所述分离的单克隆抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：30的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3)，其 中所述抗体特异性结合HIV-1的gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在具体的非 限制性的实例中，所述分离的单克隆抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：31-36之一的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3)，其 中所述抗体特异性结合HIV-1的gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。

在另外的实施方案中，所述分离的单克隆抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：38的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和/或97-114(CDR3)， 其中所述抗体特异性结合HIV-1的gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在具体的 非限制性的实例中，所述单克隆抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO： 38的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和/或97-114(CDR3)，其中X₁₅为Q； X₁₆为V或I并且X₁₇为A或T。在其他具体的非限制性的实例中，所述单克隆抗体包 含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ IDNO：38的氨基酸26-33(CDR1)、51-58 (CDR2)和/或97-114(CDR3)，其中X₁₅为Q或R；X₁₆为V并且X₁₇为A或T。 在更具体的非限制性的实例中，所述单克隆抗体包含重链可变区，所述重链可变区包 含SEQ ID NO：38的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和/或97-114(CDR3)， 其中X₁₅为Q或R；X₁₆为V或I并且X₁₇为A。在其他具体的非限制性的实例中，所 述单克隆抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：38的氨基酸26-33 (CDR1)、51-58(CDR2)和/或97-114(CDR3)，其中X₁₅为Q；X₁₆为V并且X₁₇为A或T。在其他具体的非限制性的实例中，所述单克隆抗体包含重链可变区，所述 重链可变区包含SEQ ID NO：38的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和/或97-114 (CDR3)，其中X₁₅为Q或R；X₁₆为V并且X₁₇为A。在不同的具体非限制性的实例 中，所述单克隆抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：38的氨基酸 26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和/或97-114(CDR3)，其中X₁₅为Q；X₁₆为V或 I并且X₁₇为A。在另外的实施方案中，所述分离的单克隆抗体包含重链可变区，所述 重链可变区包含SEQ IDNO：39的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和/或97-114 (CDR3)，其中所述抗体特异性结合HIV-1的gp120。

在另外的实施方案中，所述分离的单克隆抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：38的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3)， 其中所述抗体特异性结合HIV-1的gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在其他具 体非限制性的实例中，所述单克隆抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：38的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和/或97-114(CDR3)，其中X₁₅为Q或R；X₁₆为V并且X₁₇为A或T。在更具体的非限制性的实例中，所述单克隆 抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：38的氨基酸26-33(CDR1)、 51-58(CDR2)和97-114(CDR3)，其中X₁₅为Q或R；X₁₆为V或I并且X₁₇为A。 在其他具体的非限制性的实例中，所述单克隆抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：38的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3)， 其中X₁₅为Q；X₁₆为V并且X₁₇为A或T。在其他具体的非限制性的实例中，所述单 克隆抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：38的氨基酸26-33 (CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3)，其中X₁₅为Q或R；X₁₆为V并且X₁₇为A。在不同的具体的非限制性的实例中，所述单克隆抗体包含重链可变区，所述重 链可变区包含SEQ ID NO：38的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3)， 其中X₁₅为Q；X₁₆为V或I并且X₁₇为A。在另外的实施方案中，所述分离的单克隆 抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：39的氨基酸26-33(CDR1)、 51-58(CDR2)和97-114(CDR3)，其中所述抗体特异性结合HIV-1的gp120。

在一些实施方案中，所述单克隆抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQID NO：1或SEQ ID NO：29。具体的非限制性的实例为包含重链可变区的抗体，所述 重链可变区包含SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列。

在一些实施方案中，所述分离的单克隆抗体特异性结合gp120，并且包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：23的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2) 和/或97-114(CDR3)，其中所述抗体特异性结合HIV-1的gp120，并且其中所述抗体 是中和抗体。在另外的实施方案中，所述单克隆抗体的重链可变区包含SEQ ID NO：24 的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和/或97-114(CDR3)，其中所述抗体特异 性结合gp120并且其中所述抗体是中和抗体。在另一个实施方案中，所述单克隆抗体 的重链可变区包含SEQ ID NO：25的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和/或97-114 (CDR3)，其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在其他 实施方案中，所述单克隆抗体的重链可变区包含SEQ ID NO：26的氨基酸26-33 (CDR1)、51-58(CDR2)和/或97-114(CDR3)，其中所述抗体特异性结合gp120， 其中所述抗体是中和抗体。

在一些实施方案中，所述分离的单克隆抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：23的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3)，其 中所述抗体特异性结合HIV-1的gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在另外的实 施方案中，所述单克隆抗体的重链可变区包含SEQ ID NO：24的氨基酸26-33(CDR1)、 51-58(CDR2)和97-114(CDR3)，其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述 抗体是中和抗体。在另一个实施方案中，所述单克隆抗体的重链可变区包含SEQ ID NO： 25的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3)，并且其中所述抗体 特异性结合gp120并且其中所述抗体是中和抗体。在其他实施方案中，所述单克隆抗 体的重链可变区包含SEQ ID NO：26的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和97-114 (CDR3)，并且其中所述抗体特异性结合gp120，其中所述抗体是中和抗体。

在一些实施方案中，所述单克隆抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQID NO：23。具体的非限制性的实例是包含重链可变区的抗体，所述重链可变区包含 SEQ IDNO：24、SEQ ID NO：25或SEQ ID NO：26所示的氨基酸序列。

在另外的实施方案中，所述单克隆抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQID NO：30所示的氨基酸序列。具体的非限制性的实例是包含重链可变区的抗体，所述 重链可变区包含SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：34、 SEQ ID NO：35或SEQ ID NO：36所示的氨基酸序列。

在另外的实施方案中，所述分离的单克隆抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：38所示的氨基酸序列。在具体的非限制性的实例中，所述单克隆抗 体包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：38所示的氨基酸序列，其中X₁₅为Q；X₁₆为V或I并且X₁₇为A或T。在其他具体的非限制性的实例中，所述单克隆 抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：38所示的氨基酸序列，其中 X₁₅为Q或R；X₁₆为V并且X₁₇为A或T。在更具体的非限制性的实例中，所述单克 隆抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：38所示的氨基酸序列，其 中X₁₅为Q或R；X₁₆为V或I并且X₁₇为A。在其他具体的非限制性的实例中，所述 单克隆抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：38所示的氨基酸序列， 其中X₁₅为Q；X₁₆为V并且X₁₇为A或T。在其他具体的非限制性的实例中，所述单 克隆抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：38所示的氨基酸序列，其中X₁₅为Q或R；X₁₆为V并且X₁₇为A。在不同的具体的非限制性的实例中，所述 单克隆抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：38所示的氨基酸序列， 其中X₁₅为Q；X₁₆为V或I并且X₁₇为A。在另外的实施方案中，所述分离的单克隆 抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：39所示的氨基酸序列。

在另外的实施方案中，所述分离的人单克隆抗体的轻链包含SEQ ID NO：6的氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和/或87-91(CDR3)其中所述抗体特异性结合gp120， 并且其中所述抗体是中和抗体。在其他实施方案中，所述分离的人单克隆抗体的轻链 包含SEQ IDNO：7的氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和/或87-91(CDR3)， 其中所述抗体特异性结合gp120并且其中所述抗体是中和抗体。在一些实施方案中， 所述分离的人单克隆抗体的轻链包含SEQ ID NO：8的氨基酸27-30(CDR1)、48-50 (CDR2)和/或87-91(CDR3)，其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗体 是中和抗体。在其他实施方案中，所述分离的人单克隆抗体的轻链包含SEQ ID NO：9 的氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和/或87-91(CDR3)，其中所述抗体特异 性结合gp120并且其中所述抗体是中和抗体。在其他实施方案中，所述分离的人单克 隆抗体的轻链包含SEQ ID NO：27的氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和/或87-91 (CDR3)，其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。

在其他实施方案中，所述分离的人单克隆抗体的轻链包含SEQ ID NO：6的氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)其中所述抗体特异性结合gp120， 并且其中所述抗体是中和抗体。在其他实施方案中，所述分离的人单克隆抗体的轻链 包含SEQ ID NO：7的氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)，其 中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在一些实施方案中， 所述分离的人单克隆抗体的轻链包含SEQ ID NO：8的氨基酸27-30(CDR1)、48-50 (CDR2)和87-91(CDR3)，其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是 中和抗体。在其他实施方案中，所述分离的人单克隆抗体的轻链包含SEQ ID NO：9 的氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)，其中所述抗体特异性 结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在其他实施方案中，所述分离的人单克隆抗体的轻链包含SEQ ID NO：27的氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和87-91 (CDR3)，其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。

在一些实施方案中，所述单克隆抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQID NO：6。具体的非限制性的实例为包含轻链可变区的抗体，所述轻链可变区包含SEQ IDNO：7或SEQ ID NO：8所示的氨基酸序列。在其他实施方案中，所述单克隆抗体包 含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：9。在其他实施方案中，所述单克隆 抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：27。

在一些实施方案中，所述抗体的轻链可变区包含SEQ ID NO：41的氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)。在另外的实施方案中，所述抗体的轻 链可变区包含SEQ ID NO：41，其中X₁为E，X₂为I，X₃为I，X₄为W，X₅为N，X₆为V，并且X₇为I[VRC01]。在另外的实施方案中，所述轻链可变区包含SEQ ID NO： 41，其中X₁为无氨基酸，X₂为无氨基酸，X₃为I，X₄为W，X₅为N，X₆为V，并且 X₇为I[VRC01 E1/I2缺失]。在其他实施方案中，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：41， 其中X₁为无氨基酸，X₂为无氨基酸，X₃为I，X₄为W，X₅为T，X₆为V并且X₇为 I[VRC01 E1/I2缺失N72T]。在一些实施方案中，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：41， 其中X₁为E，X₂为I，X₃为T，X₄为S，X₅为T，X₆为Q并且X₇为N。在另外的 实施方案中，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：41，其中X₁为无氨基酸，X₂为无氨基 酸，X₃为T，X₄为S，X₅为T，X₆为Q并且X₇为N。在所有这些实施方案中，所述 抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。

在一些实施方案中，所述分离的单克隆抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：40的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和/或97-114 (CDR3)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：41的氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2) 和/或87-91(CDR3)，其中所述抗体特异性结合HIV-1的gp120，并且其中所述抗体 是中和抗体。在另外的实施方案中，所述分离的单克隆抗体包含重链可变区和轻链可 变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：40的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2) 和/或97-114(CDR3)，其中X₁为I，X₂为H，X₃为S并且X₄为T，所述轻链可变区 包含SEQ ID NO：41的氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和/或87-91(CDR3)， 其中所述抗体特异性结合HIV-1的gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在其他实 施方案中，所述分离的单克隆抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包 含SEQ ID NO：40的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和/或97-114(CDR3)， 其中X₁为I，X₂为H，X₃为N并且X₄为T，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：41的 氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和/或87-91(CDR3)，其中所述抗体特异性 结合HIV-1的gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。

在其他实施方案中，所述分离的单克隆抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：40，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：41。在一些实施方 案中，所述抗体的重链可变区包含以下之一：(a)SEQ ID NO：40，其中X₁为I，X₂为H，X₃为S并且X₄为T；(b)SEQ ID NO：40，其中X₁为I，X₂为H，X₃为N并 且X₄为T；(c)SEQ ID NO：40，其中X₁为V，X₂为H，X₃为S并且X₄为A；或(d) SEQ ID NO：40，其中X₁为V，X₂为H，X₃为N并且X₄为A，并且所述轻链可变区 包含SEQ ID NO：41。在其他实施方案中，所述抗体的重链可变区包含以下序列之一：

(a)SEQ ID NO：40，其中X₁为I，X₂为H，X₃为S并且X₄为T；(b)SEQ ID NO： 40，其中X₁为I，X₂为H，X₃为N并且X₄为T；(c)SEQ ID NO：40，其中X₁为V， X₂为H，X₃为S并且X₄为A；或(d)SEQ ID NO：40，其中X₁为V，X₂为H，X₃为N并且X₄为V；并且所述轻链可变区包含以下序列之一：(e)SEQ ID NO：41，其 中X₁为E，X₂为I，X₃为I，X₄为W，X₅为N，X₆为V，并且X₇为I[VRC01]；(f) SEQ ID NO：41，其中X₁为无氨基酸，X₂为无氨基酸，X₃为I，X₄为W，X₅为N， X₆为V，并且X₇为I[VRC01 E1/I2缺失]；(g)SEQ ID NO：41，其中X₁为无氨基 酸，X₂为无氨基酸，X₃为I，X₄为W，X₅为T，X₆为V，并且X₇为I[VRC01 E1/I2 缺失N72T]；(h)SEQ ID NO：41，其中X₁为E，X₂为I，X₃为T，X₄为S，X₅为T， X₆为Q，并且X₇为N；或(i)SEQ ID NO：41，其中X₁为E，X₂为无氨基酸，X₃为T，X₄为S，X₅为T，X₆为Q，并且X₇为N。

在一些实施方案中，所述分离的单克隆抗体包含重链可变区，并且包含轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：1的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和 /或97-114(CDR3)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：6的氨基酸27-30(CDR1)、 48-50(CDR2)和/或87-91(CDR3)，其中所述抗体特异性结合HIV-1的gp120，并 且其中所述抗体是中和抗体。在其他实施方案中，所述分离的单克隆抗体包含重链可 变区，并且包含轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：2的氨基酸26-33 (CDR1)、51-58(CDR2)和/或97-114(CDR3)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：9 的氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和/或87-91(CDR3)，其中所述抗体特异 性结合HIV-1的gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在另外的实施方案中，所述 单克隆抗体的重链可变区包含SEQ ID NO：3的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和/或97-114(CDR3)，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO：7的氨基酸27-30(CDR1)、 48-50(CDR2)和/或87-91(CDR3)，其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所 述抗体是中和抗体。在其他实施方案中，所述分离的单克隆抗体包含重链可变区，并 且包含轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：4的氨基酸26-33(CDR1)、 51-58(CDR2)和/或97-114(CDR3)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：8的氨基酸 27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和/或87-91(CDR3)，其中所述抗体特异性结合HIV-1 的gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。

在另外的实施方案中，所述分离的单克隆抗体包含重链可变区，并且包含轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：1的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2) 和97-114(CDR3)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：6的氨基酸27-30(CDR1)、 48-50(CDR2)和87-91(CDR3)，其中所述抗体特异性结合HIV-1的gp120，并且其 中所述抗体是中和抗体。在其他实施方案中，所述分离的单克隆抗体包含重链可变区， 并且包含轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：2的氨基酸26-33(CDR1)、 51-58(CDR2)和97-114(CDR3)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：9的氨基酸27-30 (CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)，其中所述抗体特异性结合HIV-1的gp120， 并且其中所述抗体是中和抗体。在另外的实施方案中，所述单克隆抗体的重链可变区 包含SEQ ID NO：3的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3)，并 且所述轻链可变区包含SEQ ID NO：7的氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和87-91 (CDR3)，其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在其他 实施方案中，所述分离的单克隆抗体包含重链可变区，并且包含轻链可变区，所述重 链可变区包含SEQ ID NO：4的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3)， 所述轻链可变区包含SEQ ID NO：8的氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和87-91 (CDR3)，其中所述抗体特异性结合HIV-1的gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。

在其他实施方案中，所述分离的单克隆抗体包含重链可变区，并且包含轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：1的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和 97-114(CDR3)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：9的氨基酸27-30(CDR1)、48-50 (CDR2)和87-91(CDR3)，其中所述抗体特异性结合HIV-1的gp120，并且其中所 述抗体是中和抗体。在另外的实施方案中，所述单克隆抗体的重链可变区包含SEQ ID NO：3的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3)，并且所述轻链 可变区包含SEQ ID NO：9的氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)， 其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在其他实施方案中， 所述分离的单克隆抗体包含重链可变区，并且包含轻链可变区，所述重链可变区包含 SEQ ID NO：4的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3)，所述轻 链可变区包含SEQ ID NO：9的氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)，其中所述抗体特异性结合HIV-1的gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。

在其他实施方案中，所述分离的单克隆抗体包含重链可变区，并且包含轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：30的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2) 和/或97-114(CDR3)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：6的氨基酸27-30(CDR1)、 48-50(CDR2)和/或87-91(CDR3)，其中所述抗体特异性结合HIV-1的gp120，并 且其中所述抗体是中和抗体。在具体的非限制性的实例中，所述分离的单克隆抗体包 含重链可变区，并且包含轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：30的氨基酸 26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO： 6的氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)，其中所述抗体特异性 结合HIV-1的gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在另外的非限制性的实例中， 所述分离的单克隆抗体包含重链可变区，并且包含轻链可变区，所述重链可变区包含 SEQ ID NO：31-36之一的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和/或97-114(CDR3)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：6的氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和/或 87-91(CDR3)，其中所述抗体特异性结合HIV-1的gp120，并且其中所述抗体是中和 抗体。在另外的非限制性的实例中，所述分离的单克隆抗体包含重链可变区，并且包 含轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：31-36之一的氨基酸26-33(CDR1)、 51-58(CDR2)和97-114(CDR3)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：6的氨基酸27-30 (CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)，其中所述抗体特异性结合HIV-1的gp120， 并且其中所述抗体是中和抗体。在一些实施方案中，所述抗体不是自身反应性的，和/ 或具有低自身反应性。在另外的实施方案中，所述抗体不是免疫原性的和/或具有低免 疫原性。

在其他实施方案中，所述分离的单克隆抗体包含重链可变区，并且包含轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：30的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2) 和/或97-114(CDR3)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：7的氨基酸27-30(CDR1)、 48-50(CDR2)和/或87-91(CDR3)，其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所 述抗体是中和抗体。在具体的非限制性的实例中，所述分离的单克隆抗体包含重链可 变区，并且包含轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：30的氨基酸26-33 (CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：7 的氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)，其中所述抗体特异性 结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在另外的非限制性的实例中，所述分离 的单克隆抗体包含重链可变区，并且包含轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：31-36之一的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和/或97-114(CDR3)，所述轻 链可变区包含SEQ ID NO：7的氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和/或87-91 (CDR3)，其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在另外 的非限制性的实例中，所述分离的单克隆抗体包含重链可变区，并且包含轻链可变区， 所述重链可变区包含SEQ ID NO：31-36之一的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2) 和97-114(CDR3)，所述轻链可变区包含SEQ IDNO：7的氨基酸27-30(CDR1)、 48-50(CDR2)和87-91(CDR3)，其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗 体是中和抗体。在一些实施方案中，所述抗体不是自身反应性的和/或具有低自身反应 性。在另外的实施方案中，所述抗体不是免疫原性的和/或具有低免疫原性。

在一些实施方案中，所述分离的单克隆抗体包含重链可变区，并且包含轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：30的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2) 和/或97-114(CDR3)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：8的氨基酸27-30(CDR1)、 48-50(CDR2)和/或87-91(CDR3)，其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所 述抗体是中和抗体。在一些非限制性的实例中，所述分离的单克隆抗体包含重链可变 区，并且包含轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：30的氨基酸26-33(CDR1)、 51-58(CDR2)和97-114(CDR3)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：8的氨基酸27-30 (CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)，其中所述抗体特异性结合gp120，并且 其中所述抗体是中和抗体。在另外的非限制性的实例中，所述分离的单克隆抗体包含 重链可变区，并且包含轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：31-36之一的氨 基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和/或97-114(CDR3)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：8的氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和/或87-91(CDR3)，其中 所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在另外的非限制性的实 例中，所述分离的单克隆抗体包含重链可变区，并且包含轻链可变区，所述重链可变 区包含SEQ ID NO：31-36之一的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和97-114 (CDR3)，所述轻链可变区包含SEQ IDNO：8的氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2) 和87-91(CDR3)，其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。 在一些实施方案中，所述抗体不是自身反应性的和/或具有低自身反应性。在另外的实 施方案中，所述抗体不是免疫原性的和/或具有低免疫原性。

在其他实施方案中，所述分离的单克隆抗体包含重链可变区，并且包含轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：30的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2) 和/或97-114(CDR3)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：9的氨基酸27-30(CDR1)、 48-50(CDR2)和/或87-91(CDR3)，其中所述抗体特异性结合HIV-1的gp120，并 且其中所述抗体是中和抗体。在一些非限制性的实例中，所述分离的单克隆抗体包含 重链可变区，并且包含轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：30的氨基酸26-33 (CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：9 的氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)，其中所述抗体特异性 结合HIV-1的gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在具体非限制性的实例中，所 述分离的单克隆抗体包含重链可变区，并且包含轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：31-36之一的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和/或97-114(CDR3)， 所述轻链可变区包含SEQ ID NO：9的氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和/或 87-91(CDR3)，其中所述抗体特异性结合HIV-1的gp120，并且其中所述抗体是中和 抗体。在另外的非限制性的实例中，所述分离的单克隆抗体包含重链可变区，并且包 含轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：31-36之一的氨基酸26-33(CDR1)、 51-58(CDR2)和97-114(CDR3)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：9的氨基酸27-30 (CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)，其中所述抗体特异性结合HIV-1的gp120， 并且其中所述抗体是中和抗体。在一些实施方案中，所述抗体不是自身反应性的和/ 或具有低自身反应性。在另外的实施方案中，所述抗体不是免疫原性的和/或具有低免 疫原性。

在另外的实施方案中，所述分离的单克隆抗体包含重链可变区，并且包含轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：30的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2) 和/或97-114(CDR3)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：27的氨基酸27-30(CDR1)、 48-50(CDR2)和/或87-91(CDR3)，其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所 述抗体是中和抗体。在一些非限制性的实例中，所述分离的单克隆抗体包含重链可变 区，并且包含轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：30的氨基酸26-33(CDR1)、 51-58(CDR2)和97-114(CDR3)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：27的氨基酸27-30 (CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)，其中所述抗体特异性结合gp120，并且 其中所述抗体是中和抗体。在另外的非限制性的实例中，所述分离的单克隆抗体包含 重链可变区，并且包含轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ IDNO：31-36之一的氨 基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和/或97-114(CDR3)，所述轻链可变区包含 SEQ ID NO：27的氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和/或87-91(CDR3)，其 中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在另外的非限制性的 实例中，所述分离的单克隆抗体包含重链可变区，并且包含轻链可变区，所述重链可 变区包含SEQ ID NO：31-36之一的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和97-114 (CDR3)，所述轻链可变区包含SEQID NO：27的氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2) 和87-91(CDR3)，其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。 在一些实施方案中，所述抗体不是自身反应性的和/或具有低自身反应性。在另外的实 施方案中，所述抗体不是免疫原性的和/或具有低免疫原性。

在一些实例中，所述单克隆抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：30，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：6。在其他实例中，所述单克隆 抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：30，所述轻链可 变区包含SEQ ID NO：7。在其他实例中，所述单克隆抗体包含重链可变区和轻链可变 区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：30，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：8。在另外 的实例中，所述单克隆抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：30，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：9。在另外的实例中，所述单克隆抗体包 含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：30，所述轻链可变区包 含SEQ ID NO：27。

在其他实例中，所述单克隆抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：31，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：6。在其他实例中，所述单克隆 抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：31，所述轻链可 变区包含SEQ ID NO：7。在其他实例中，所述单克隆抗体包含重链可变区和轻链可变 区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：31，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：8。在另外 的实例中，所述单克隆抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：31，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：9。在另外的实例中，所述单克隆抗体包 含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：31，所述轻链可变区包 含SEQ ID NO：27。

在另外的实例中，所述单克隆抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：32，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：6。在其他实例中，所述单 克隆抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：32，所述 轻链可变区包含SEQ ID NO：7。在其他实例中，所述单克隆抗体包含重链可变区和轻 链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：32，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：8。 在另外的实例中，所述单克隆抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包 含SEQ ID NO：32，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：9。在另外的实例中，所述单克 隆抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：32，所述轻 链可变区包含SEQ ID NO：27。

在其他实例中，所述单克隆抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：33，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：6。在其他实例中，所述单克隆 抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：33，所述轻链可 变区包含SEQ ID NO：7。在其他实例中，所述单克隆抗体包含重链可变区和轻链可变 区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：33，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：8。在另外 的实例中，所述单克隆抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：33，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：9。在另外的实例中，所述单克隆抗体包 含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：33，所述轻链可变区包 含SEQ ID NO：27。

在一些实例中，所述单克隆抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：34，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：6。在其他实例中，所述单克隆 抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：34，所述轻链可 变区包含SEQ ID NO：7。在其他实例中，所述单克隆抗体包含重链可变区和轻链可变 区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：34，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：8。在另外 的实例中，所述单克隆抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：34，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：9。在另外的实例中，所述单克隆抗体包 含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：34，所述轻链可变区包 含SEQ ID NO：27。

在另外的实例中，所述单克隆抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：35，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：6。在其他实例中，所述单克 隆抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：35，所述轻链 可变区包含SEQ ID NO：7。在其他实例中，所述单克隆抗体包含重链可变区和轻链可 变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：35，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：8。在另 外的实例中，所述单克隆抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：35，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：9。在另外的实例中，所述单克隆抗体包 含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：35，所述轻链可变区包 含SEQ ID NO：27。

在其他实例中，所述单克隆抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：36，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：6。在其他实例中，所述单克隆 抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：36，所述轻链可 变区包含SEQ ID NO：7。在其他实例中，所述单克隆抗体包含重链可变区和轻链可变 区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：36，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：8。在另外 的实例中，所述单克隆抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：36，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：9。在另外的实例中，所述单克隆抗体包 含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：36，所述轻链可变区包 含SEQ ID NO：27。

在其他实施方案中，所述分离的单克隆抗体包含重链可变区，并且包含轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：38或SEQ ID NO：39的氨基酸26-33(CDR1)、 51-58(CDR2)和/或97-114(CDR3)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：6的氨基酸 27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和/或87-91(CDR3)，其中所述抗体特异性结合HIV-1 的gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在具体的非限制性的实例中，所述分离的 单克隆抗体包含重链可变区，并且包含轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：38或SEQ ID NO：39的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3)， 所述轻链可变区包含SEQ ID NO：6的氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和87-91 (CDR3)，其中所述抗体特异性结合HIV-1的gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。 在一些实施方案中，所述抗体不是自身反应性的和/或具有低自身反应性。在另外的实 施方案中，所述抗体不是免疫原性的和/或具有低免疫原性。

在其他实施方案中，所述分离的单克隆抗体包含重链可变区，并且包含轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：38或SEQ ID NO：39的氨基酸26-33(CDR1)、 51-58(CDR2)和/或97-114(CDR3)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：7的氨基酸 27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和/或87-91(CDR3)，其中所述抗体特异性结合gp120， 并且其中所述抗体是中和抗体。在具体的非限制性的实例中，所述分离的单克隆抗体 包含重链可变区，并且包含轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：38或SEQ ID NO：39的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3)，所述轻链可变 区包含SEQ ID NO：7的氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)， 其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在一些实施方案中， 所述抗体不是自身反应性的和/或具有低自身反应性。在另外的实施方案中，所述抗体 不是免疫原性的和/或具有低免疫原性。

在一些实施方案中，所述分离的单克隆抗体包含重链可变区，并且包含轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：38或SEQ ID NO：39的氨基酸26-33(CDR1)、 51-58(CDR2)和/或97-114(CDR3)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：8的氨基酸 27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和/或87-91(CDR3)，其中所述抗体特异性结合gp120， 并且其中所述抗体是中和抗体。在一些非限制性的实例中，所述分离的单克隆抗体包 含重链可变区，并且包含轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：38或SEQ ID NO：39的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3)，所述轻链可变 区包含SEQ ID NO：8的氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)， 其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在一些实施方案中， 所述抗体不是自身反应性的和/或具有低自身反应性。在另外的实施方案中，所述抗体 不是免疫原性的和/或具有低免疫原性。在其他实施方案中，所述分离的单克隆抗体包 含重链可变区，并且包含轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：38或SEQ ID NO：39的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和/或97-114(CDR3)，所述轻链可 变区包含SEQ ID NO：9的氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和/或87-91(CDR3)， 其中所述抗体特异性结合HIV-1的gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在一些非 限制性的实例中，所述分离的单克隆抗体包含重链可变区，并且包含轻链可变区，所 述重链可变区包含SEQ IDNO：38或SEQ ID NO：39的氨基酸26-33(CDR1)、51-58 (CDR2)和97-114(CDR3)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：9的氨基酸27-30 (CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)，其中所述抗体特异性结合HIV-1的gp120， 并且其中所述抗体是中和抗体。在一些实施方案中，所述抗体不是自身反应性的和/ 或具有低自身反应性。在另外的实施方案中，所述抗体不是免疫原性的和/或具有低免 疫原性。

在另外的实施方案中，所述分离的单克隆抗体包含重链可变区，并且包含轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：38或SEQ ID NO：39的氨基酸26-33(CDR1)、 51-58(CDR2)和/或97-114(CDR3)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：27的氨基酸 27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和/或87-91(CDR3)，其中所述抗体特异性结合gp120， 并且其中所述抗体是中和抗体。在一些非限制性的实例中，所述分离的单克隆抗体包 含重链可变区，并且包含轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：38或SEQ ID NO：39的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3)，所述轻链可变 区包含SEQ ID NO：27的氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)， 其中所述抗体特异性结合gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在一些实施方案中， 所述抗体不具有自身反应性和/或具有低自身反应性。在另外的实施方案中，所述抗体 不是免疫原性的和/或具有低免疫原性。

在一些实例中，所述单克隆抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：38，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：6。在其他实例中，所述单克隆 抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：38，所述轻链可 变区包含SEQ ID NO：7。在其他实例中，所述单克隆抗体包含重链可变区和轻链可变 区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：38，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：8。在另外 的实例中，所述单克隆抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：38，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：9。在另外的实例中，所述单克隆抗体包 含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：38，所述轻链可变区包 含SEQ ID NO：27。

在其他实例中，所述单克隆抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：39，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：6。在其他实例中，所述单克隆 抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：39，所述轻链可 变区包含SEQ ID NO：7。在其他实例中，所述单克隆抗体包含重链可变区和轻链可变 区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：39，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：8。在另外 的实例中，所述单克隆抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：39，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：9。在另外的实例中，所述单克隆抗体包 含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：39，所述轻链可变区包 含SEQ ID NO：27。

在一些实例中，所述单克隆抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：1，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：6。在其他实例中，所述单克隆 抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：2，所述轻链可 变区包含SEQID NO：9。在其他实例中，所述单克隆抗体包含重链可变区和轻链可变 区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：3，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：7。在另外 的实例中，所述单克隆抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：4，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：8。在另外的实例中，所述单克隆抗体包 含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：3，所述轻链可变区包 含SEQ ID NO：9。在另外的实例中，所述单克隆抗体包含重链可变区和轻链可变区， 所述重链可变区包含SEQ ID NO：4，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：9。

在一些实施方案中，所述分离的单克隆抗体包含重链可变区，并且包含轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：23的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2) 和/或97-114(CDR3)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：9的氨基酸27-30(CDR1)、 48-50(CDR2)和/或87-91(CDR3)，其中所述抗体特异性结合HIV-1的gp120，并 且其中所述抗体是中和抗体。在一些实施方案中，所述分离的单克隆抗体包含重链可 变区，并且包含轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：24的氨基酸26-33 (CDR1)、51-58(CDR2)和/或97-114(CDR3)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：9 的氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和/或87-91(CDR3)，其中所述抗体特异 性结合HIV-1的gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在一些实施方案中，所述分 离的单克隆抗体包含重链可变区，并且包含轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：25的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和/或97-114(CDR3)，所述轻链可 变区包含SEQ ID NO：9的氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和/或87-91(CDR3)， 其中所述抗体特异性结合HIV-1的gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在一些实 施方案中，所述分离的单克隆抗体包含重链可变区，并且包含轻链可变区，所述重链 可变区包含SEQ ID NO：26的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和/或97-114 (CDR3)，所述轻链可变区包含SEQ IDNO：9的氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2) 和/或87-91(CDR3)，其中所述抗体特异性结合HIV-1的gp120，并且其中所述抗体 是中和抗体。

在一些实施方案中，所述分离的单克隆抗体包含重链可变区，并且包含轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：23的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2) 和/或97-114(CDR3)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：27的氨基酸27-30(CDR1)、 48-50(CDR2)和/或87-91(CDR3)，其中所述抗体特异性结合HIV-1的gp120，并 且其中所述抗体是中和抗体。在一些实施方案中，所述分离的单克隆抗体包含重链可 变区，并且包含轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：24的氨基酸26-33 (CDR1)、51-58(CDR2)和/或97-114(CDR3)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：27 的氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和/或87-91(CDR3)，其中所述抗体特异 性结合HIV-1的gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在一些实施方案中，所述分 离的单克隆抗体包含重链可变区，并且包含轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：25的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和/或97-114(CDR3)，所述轻链可 变区包含SEQ ID NO：27的氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和/或87-91(CDR3)， 其中所述抗体特异性结合HIV-1的gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在一些实 施方案中，所述分离的单克隆抗体包含重链可变区，并且包含轻链可变区，所述重链 可变区包含SEQ ID NO：26的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和/或97-114 (CDR3)，所述轻链可变区包含SEQ IDNO：27的氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2) 和/或87-91(CDR3)，其中所述抗体特异性结合HIV-1的gp120，并且其中所述抗体 是中和抗体。

在一些实施方案中，所述分离的单克隆抗体包含重链可变区，并且包含轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：23的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2) 和97-114(CDR3)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：9的氨基酸27-30(CDR1)、 48-50(CDR2)和87-91(CDR3)，其中所述抗体特异性结合HIV-1的gp120，并且其 中所述抗体是中和抗体。在一些实施方案中，所述分离的单克隆抗体包含重链可变区， 并且包含轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：24的氨基酸26-33(CDR1)、 51-58(CDR2)和97-114(CDR3)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：9的氨基酸27-30 (CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)，其中所述抗体特异性结合HIV-1的gp120， 并且其中所述抗体是中和抗体。在一些实施方案中，所述分离的单克隆抗体包含重链 可变区，并且包含轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：25的氨基酸26-33 (CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：9的氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)，其中所述抗体特异性 结合HIV-1的gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在一些实施方案中，所述分离 的单克隆抗体包含重链可变区，并且包含轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：26的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3)，所述轻链可变 区包含SEQ ID NO：9的氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)， 其中所述抗体特异性结合HIV-1的gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。

在一些实施方案中，所述分离的单克隆抗体包含重链可变区，并且包含轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：23的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2) 和97-114(CDR3)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：27的氨基酸27-30(CDR1)、 48-50(CDR2)和87-91(CDR3)，其中所述抗体特异性结合HIV-1的gp120，并且其 中所述抗体是中和抗体。在一些实施方案中，所述分离的单克隆抗体包含重链可变区， 并且包含轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：24的氨基酸26-33(CDR1)、 51-58(CDR2)和97-114(CDR3)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：27的氨基酸27-30 (CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)，其中所述抗体特异性结合HIV-1的gp120， 并且其中所述抗体是中和抗体。在一些实施方案中，所述分离的单克隆抗体包含重链 可变区，并且包含轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：25的氨基酸26-33 (CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：27 的氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)，其中所述抗体特异性 结合HIV-1的gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。在一些实施方案中，所述分离 的单克隆抗体包含重链可变区，并且包含轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：26的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3)，所述轻链可变 区包含SEQ ID NO：27的氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)， 其中所述抗体特异性结合HIV-1的gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。

在一些实例中，所述单克隆抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：23，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：9。在一些实例中，所述单克 隆抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：24，所述轻 链可变区包含SEQ ID NO：9。在一些实例中，所述单克隆抗体包含重链可变区和轻链 可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：25，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：9。 在一些实例中，所述单克隆抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含 SEQ ID NO：26，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：9。在一些实例中，所述单克隆抗 体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：23，所述轻链可 变区包含SEQ ID NO：27。在一些实例中，所述单克隆抗体包含重链可变区和轻链可 变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：24，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：27。在 一些实例中，所述单克隆抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：25，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：27。在一些实例中，所述单克隆抗体包 含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：26，所述轻链可变区 包含SEQ ID NO：27。

在一些实施方案中，所述单克隆抗体包含由表2或表3中所列的核酸分子之一编码的单克隆抗体重链或轻链之一的HCDR1、HCDR2和/或HCDR3或者LCDR1、 LCDR2和/或LCDR3。在一些实施方案中，所述单克隆抗体包含由表2或表3中所列 的核酸分子之一编码的单克隆抗体重链或轻链之一的HCDR1、HCDR2和HCDR3或 者LCDR1、LCDR2和LCDR3。在另外的实施方案中，所述单克隆抗体包含由表2或 表3中所列的核酸分子之一编码的重链或轻链之一的重链可变区或轻链可变区。在其 他实施方案中，所述单克隆抗体包含由表2或表3中所列的核酸分子之一编码的重链 或轻链之一的重链或轻链。

3.对单克隆抗体其他描述

在一些实施方案中，与SEQ ID NO：5(VRC01重链可变区)所示的氨基酸序列相 比，所述抗体的重链包含至少1个(例如至少2个、至少3个、至少4个、至少5个、 至少6个、至少7个、至少8个、至少9个、至少1O个、至少11个、至少12个或至 少13个)氨基酸置换。在一些实施方案中，与SEQ ID NO：9(VRC01轻链可变区) 所示的氨基酸序列相比，所述抗体的轻链包含至少1个(例如至少2个、至少3个、 至少4个、至少5个、至少6个、至少7个、至少8个、至少9个、至少10个、至少 11个、至少12个或至少13个)氨基酸置换。在一些实施方案中，与SEQ IDNO：2 (VRC07重链可变区)所示的氨基酸序列相比，所述抗体的重链包含至少1个(例如 至少2个、至少3个、至少4个、至少5个、至少6个、至少7个、至少8个、至少 9个、至少10个、至少11个、至少12个或至少13个)氨基酸置换。

在一些实例中，所公开的单克隆抗体具有高的对gp120的亲和力，例如对gp120 的抗原表位的K_D＜3nM。在一些实施方案中，所述VRC07或VRC07变体与CD4竞 争结合gp120。

本领域技术人员应理解，与gp120或其部分复合的所述抗体或其部分的一组结构坐标是一组确定三维形状的相关点。因此，完全不同的一组坐标可能能够确定相似的 或相同的形状。此外，单个坐标的轻微变化对总体形状几乎没有影响。上述讨论的坐 标变化可能因为对结构坐标进行的数学操作而产生。

在一些实施方案中，所述抗体不是自身反应性的和/或具有低自身反应性。在另外的实施方案中，所述抗体不是免疫原性的和/或具有低免疫原性。在一些实施方案中， 所公开的单克隆抗体与gp120上的CD4结合位点特异性结合，该结合的亲和力比 VRC01的亲和力更大，但是当被给予受试者时，比VRC01的免疫原性更低。在另外 的实施方案中，所公开的单克隆抗体与gp120上的CD4结合位点特异性结合，该结合 的亲和力比VRC01的亲和力更大，但是当被给予受试者时比VRC01的自身反应性更 低。

在一些非限制性的实例中，所公开的不是自身反应性的或具有低自身反应性的抗体与等摩尔或更少量的已知结合自身抗原的对照抗体的竞争力很弱。例如，所述抗体 可激发对照抗体的约50％或更少的抑制(例如约40％、30％、20％或10％的抑制)，所 述对照抗体与抗-核抗原和/或心磷脂结合。在另外的非限制性的实例中，与对照(例 如标准值或所述对照抗体分别对心磷脂和/或核抗原的亲和力)相比，所述抗体对心磷 脂和/或核抗原的亲和力为对照的1/5或更低，例如为约1/6、1/7、1/8、1/9或1/10。

在一些实施方案中，为了优化体内半衰期，可以在抗体的FcRn受体结合区加入 LS突变。该突变对中和广谱程度或中和效能没有影响，但能够使所述抗体在人源化小 鼠和非人灵长类中的半衰期增加2-3倍。另外，对单克隆抗体进行LS突变是本领域技 术人员已知的(参见，例如，Zalevsky，et al.，Nature Biotechnology，28：157-159，2010)。

本文公开的单克隆抗体可以是任何同种型。例如，所述单克隆抗体可以是IgM或IgG抗体，例如IgG₁或IgG₂。特异性结合gp120的抗体种类可以互换。一方面，用本 领域熟知的方法分离编码V_L或V_H的核酸分子，使得所述核酸分子不含有任何编码所 述轻链或重链的恒定区的核酸序列。

然后将编码V_L或V_H的核酸分子可操作地连接至编码来自不同种类的免疫球蛋白分子的C_L或C_H的核酸序列。如本领域技术人员所知，这可以使用包含C_L或C_H链的 载体或核酸分子完成。例如，一种原本为IgM的特异性结合gp120的抗体可以种类转 换为IgG。种类转换可以用于将一个IgG亚类转变为另一亚类，例如将IgG₁转变为IgG₂。

在一些实例中，所公开的抗体是抗体的低聚物，例如二聚体、三聚体、四聚体、 五聚体、六聚体、七聚体、八聚体等。在一些实例中，所述抗体是五聚体。所述抗体 还可包括在双特异性抗体中。

还提供了本文公开的抗体的抗体片段，所述抗体片段包含重链可变区和轻链可变区并特异性结合gp120。这些抗体片段保留了选择性结合抗原的能力，是“抗原结合” 片段。这类片段包括，但不限于：

(1)Fab，含有抗体分子的单价抗原结合片段的片段，其可以通过木瓜蛋白酶 消化完整抗体产生完整轻链和一条重链的一部分而产生；

(2)Fab′，抗体分子的片段，其可以通过胃蛋白酶处理完整抗体，之后进行还 原，产生完整轻链和重链的一部分而获得；每个抗体分子得到两个Fab′片段；

(3)(Fab′)₂，抗体片段，其由胃蛋白酶处理完整抗体并且之后不经还原而得到； F(ab′)₂是通过两个二硫键连接在一起的两个Fab′片段的二聚体；

(4)Fv，是含有表达为两条链的轻链可变区和重链可变区的遗传工程片段；和

(5)单链抗体(例如scFv)，被定义为含有轻链可变区和重链可变区的遗传工程分子， 其通过合适的多肽接头连接为遗传融合的单链分子形式。

(6)单链抗体的二聚体(scFV₂)，被定义为scFV的二聚体。也被称为“微型抗体”。

制备这些抗体片段的方法是本领域中已知的(参见，例如，Harlow和Lane，Antibodies：A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory，New York，1988)。在一些实例中，所述抗体中包含的可变区是m912的可变区。

在另外的一组实施方案中，所述抗体是Fv抗体，其通常为约25kDa，并且含有 完整抗原结合位点，每条重链和每条轻链含有三个CDR。为制备这些抗体，V_H和V_L可以在宿主细胞中由两个独立的核酸构建体表达。在具体的实例中，V_H氨基酸序列包 含来自SEQ ID NO：1-4、23-26、30-36、38-40、199-201、203-207、216-218或258-260 之一的CDR。在其它实例中，V_L氨基酸序列包含来自SEQ ID NO：6-9或27、41-44、 50-55、209-215或219-257的CDR。在另外的实例中，V_H氨基酸序列包含SEQ ID NO： 1-4、23-26、30-36、38-40、199-201、203-207、216-218或258-260之一所示的氨基酸 序列。在其他实例中，V_L氨基酸序列含有SEQ ID NO：6-9或27、41-44、50-55、209-215 或219-257之一所示的氨基酸序列。

如果V_H和V_L是不连续表达的，则Fv抗体的链通常通过非共价相互作用连接在 一起。但是，这些链在稀释后倾向于解离，因此已经研发了一些方法通过戊二醛、分 子间二硫键或肽接头来使这些链交联。因此，在一个实例中，Fv可以是通过二硫键稳 定的Fv(dsFv)，其中重链可变区和轻链可变区通过二硫键以化学方式连接在一起。

在另一实例中，Fv片段包含通过肽接头相连的V_H和V_L链。这些单链抗原结合蛋 白(scFv)是通过构建结构基因制备的，所述结构基因包含由寡核苷酸链相连的编码V_H和V_L结构域的DNA序列。所述结构基因被插入到表达载体中，随后将所述表达载体 导入例如大肠杆菌(E.coli.)的宿主细胞中。所述重组宿主细胞单个多肽链，其中接头 肽桥连两个所述V结构域。制备scFv的方法是本领域中已知的(参见Whitlow et al.， Methods：a Companionto Methods in Enzymology，Vol.2，page 97，1991；Bird et al.， Science 242：423，1988；美国专利No.4,946,778；Pack et al.，Bio/Technology 11：1271，1993； 和Sandhu，文献见上文)。还考虑到了单链抗体的二聚体(scFV₂)。

抗体片段可以通过蛋白水解抗体或在大肠杆菌中表达编码所述片段的DNA来制备。抗体片段可以通过常规方法使用胃蛋白酶或木瓜蛋白酶消化完整抗体而得到。例 如，抗体片段可以通过胃蛋白酶酶切抗体提供被称为F(ab′)₂的5S片段来制备。该片 段可进一步用巯基还原剂和任选的从二硫键断裂得到的巯基基团的阻断基团来切割从 而制备3.5SFab′单价片段。或者，直接用胃蛋白酶酶切产生两个单价Fab′片段和一个 Fc片段(参见美国专利No.4,036,945和美国专利No.4,331,647以及其中的参考资料； Nisonhoff et al.，Arch.Biochem.Biophys.89：230，1960；Porter，Biochem.J.73：119，1959； Edelman etal.，Methods in Enzymology，Vol.1，page 422，Academic Press，1967；和 Coligan etal.2.8.1-2.8.10和2.10.1-2.10.4章节)。

还可以使用切割抗体的其他方法，例如分离重链以形成单价轻-重链片段，进一步切割片段或者其它的酶促的、化学的或遗传学的技术，只要所述片段能够结合被完整 抗体识别的抗原即可。

本领域的技术人员应理解，可以制备抗体的保守变体。这种用于抗体片段中例如dsFv片段或scFv片段中的保守变体会保留V_H和V_L区域之间的正确折叠和稳定所必 须的关键氨基酸残基，并且会保留所述残基的带电特性以保持所述分子的低pI值和低 毒性。可以在V_H和V_L区域产生氨基酸置换(例如最多1个、最多2个、最多3个、最 多4个或最多5个氨基酸置换)以增加产量。在具体的实例中，V_H序列是SEQ ID NO： 1-4、23-26、30-36、38-40、199-201、203-207、216-218或258-260。在其他实例中， V_L序列是SEQ ID NO：6-9或27、41-44、50-55、209-215或219-257。提供功能类似 的氨基酸的保守氨基酸置换表是本领域普通技术人员所熟知的。以下6组为认为是互 为保守性置换的氨基酸的实例：

1)丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)；

2)天冬氨酸(D)、谷氨酸(E)；

3)天冬酰胺(N)、谷氨酰胺(Q)；

4)精氨酸(R)、赖氨酸(K)；

5)异亮氨酸(I)、亮氨酸(L)、甲硫氨酸(M)、缬氨酸(V)；和

6)苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)、色氨酸(W)。

本文公开的抗体或抗体片段可以被衍生成或连接至另一个分子(例如另一个肽或蛋白质)。一般来说，将所述抗体或其部分衍生为这样：与gp120的结合不会受到衍生 化或标记的不利影响。例如，抗体可以被功能性地(通过化学偶联、遗传融合或非共价 连接或其他方式)连接至一个或多个其它分子实体，例如另一抗体(例如双特异性抗体 或双价抗体)、检测剂、药剂和/或能够介导所述抗体或其部分与另一个分子(例如链霉 亲和素核心区域或多组氨酸标签)连接的蛋白质或肽。

一类衍生抗体是通过使两个或多个抗体(相同种类或不同种类，例如以产生双特异 性抗体)交联产生的。合适的交联剂包括异基双功能的、具有被合适间隔物分开的两个具有不同反应性的基团的交联剂(例如间-马来酰亚胺苯甲酰-N-羟基琥珀酰亚胺酯)或 同基双功能的交联剂(例如二琥珀酰亚胺基辛二酸酯)。这样的交联剂可从Pierce化学 公司(Rockford，IL)购得。

特异性结合gp120的抗体可以用可检测部分进行标记。可用的检测剂包括荧光化合物，包括荧光素、异硫氰酸荧光素、罗丹明、5-二甲氨基-1-萘磺酰氯、藻红蛋白、 镧系元素、磷光体等。还可以使用生物发光标记，例如萤光素酶、绿色荧光蛋白、黄 色荧光蛋白。还可以使用可用于检测的酶来标记抗体，所述酶例如辣根过氧化物酶、β- 半乳糖苷酶、萤光素酶、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶等。当抗体被可检测酶标记时， 可以通过加入所述酶用于产生可辨别的反应产物的另外试剂来检测所述抗体。例如， 当试剂辣根过氧化物酶存在时，加入过氧化氢和二氨基联苯会产生肉眼可见的有色反 应产物。抗体还可以用生物素标记，并通过间接测量抗生物素蛋白或链霉亲和素的结 合进行检测。应该注意，抗生物素蛋白本身也可以被酶或荧光标记来标记。

抗体可以用磁性试剂例如钆标记。抗体也可以用镧系元素(例如铕和镝)和锰标记。 顺磁性颗粒例如超顺磁性氧化铁也可以用作标记物。抗体还可以用被第二报告物识别的预先确定的多肽表位(例如亮氨酸拉链对序列、第二抗体结合位点、金属结合结构域、 表位标签)标记。在一些实施方案中，标记物通过不同长度的间隔臂连接以减少可能的 空间位阻。

抗体还可以用放射性标记的氨基酸来标记。放射性标记物可以用于诊断和治疗目的。用于多肽的标记物的实例包括但不限于下述放射性同位素或放射性核素：³H、¹⁴C、 ¹⁵N、³⁵S、⁹⁰Y、⁹⁹Tc、¹¹¹In、¹²⁵I、¹³¹I。

抗体还可以被化学基团例如聚乙二醇(PEG)、甲基或乙基、或者碳水化合物基团衍生化。这类基团可用于改善抗体的生物特性，例如增加血清半衰期或增加组织结合。

检测这些标记物的方法是本领域技术人员所熟知的。因此，例如，放射性标记物可以用照相胶片或者闪烁计数器检测，荧光标记物可以用检测发射光的光检测器检测。 酶标记物通常通过提供酶和底物并检测所述酶对所述底物作用产生的反应产物来检测， 比色标记物(colorimetric label)可以通过简单地可视化所述显色标记物来检测。

B.多核苷酸及表达

本领域技术人员可以很容易地制备编码本文提供的多肽(包括但不限于抗体)的核酸 分子(也被称为多核苷酸)。例如，这些核酸分子可以使用本文提供的氨基酸序列(例如CDR 序列、重链和轻链序列)、本领域中可获得的序列(例如框架序列)和遗传密码产生。

示例性的V_H核酸序列如SEQ ID NO：10-13、37、57-101、103、105、107-140、 145-156、161-164和177-194所示，并且包括简并变体；示例性的V_L核酸序列如SEQ ID NO：14-16、141-144、157-160和165-176所示，并且包括其简并变体。本领域技术 人员可以容易地使用遗传密码构建多种功能等同的核酸，例如序列不同但是编码相同 的抗体序列的核酸或者包含V_L和/或V_H核酸序列的编码缀合蛋白或融合蛋白的核酸。

编码特异性结合gp120的抗体的核酸序列可以通过任意合适的方法制备，所述方法包括，例如克隆合适的序列或者通过直接化学合成，所述直接化学合成的方法例如Narang et al，Meth.Enzymol.68：90-99，1979中的磷酸三酯法；Brown et al，Meth.Enzymol.68：109-151，1979中的磷酸二酯法；Beaucage et al，Tetra.Lett.22：1859-1862，1981中的二乙基亚磷酰胺法；Beaucage & Caruthers，Tetra.Letts.22(20)：1859-1862，1981描述的固相亚磷酰胺三酯法，例如使用Needham-VanDevanter et al，Nucl.AcidsRes. 12：6159-6168，1984描述的自动合成仪；以及美国专利No.4,458,066中描述的固相载体法。化学合成产生单链寡核苷酸。所述单链寡核苷酸可以通过与互补序列杂交或以 所述单链为模板用DNA聚合酶聚合而转变成双链DNA。本领域技术人员可以理解， 虽然DNA的化学合成通常限于约100个碱基的序列，但是可以将较短的序列连接在 一起来获得较长的序列。

示例性核酸可以通过克隆技术制备。合适的克隆和测序技术的实例以及足以指导技术人员进行克隆操作的说明可见于Sambrook et al(文献见上文)、Berger和Kimmel(eds.)(文献见上文)以及Ausubel(文献见上文)。来自生物试剂和实验设备制造商 的产品信息也提供有用的信息。这样的生产商包括SIGMA^TM化学公司(Saint Louis， MO)、R&DSystems^TM(Minneapolis，MN)、Pharmacia Amersham(Piscataway，NJ)、 CLONTECHLaboratories公司(Palo Alto，CA)、Chem Genes公司、Aldrich化学公司 (Milwaukee，WI)、Glen Research公司、GIBCO^TM BRL Life Technologies公司 (Gaithersburg，MD)、FlukaChemica-Biochemika Analytika(Fluka Chemie AG，Buchs， 瑞士)、INVITROGEN^TM(Carlsbad，CA)和Applied Biosystems(Foster City，CA)以 及其它许多本领域技术人员所知的商业来源。

核酸还可以通过扩增方法制备。扩增方法包括聚合酶链式反应(PCR)、连接酶链式反应(LCR)、基于转录的扩增体系(TAS)、自动维持复制体系(3SR)。多种克隆方法、宿 主细胞和体外扩增方法是本领域技术人员所熟知的。

编码本文公开的任何抗体，V_H和/或V_L(或其片段)的任何核酸都可以在重组工程细胞，例如细菌、植物、酵母、昆虫和哺乳动物细胞中表达。这些抗体可以表达为单 独的V_H和/或V_L链，或者表达成融合蛋白。还可以表达免疫粘合素。因此，在一些实 例中，提供了编码V_H和V_L以及免疫粘合素的核酸序列。所述核酸序列可以任选地编 码前导序列。

为了生成单链抗体(scFv)，将编码V_H和V_L的DNA片段可操作地连接至另一个编 码柔性接头的片段(例如编码氨基酸序列(Gly₄-Ser)₃(SEQ ID NO：48)的片段)使得 V_H和V_L序列可被表达为连续的单链蛋白，其中所述V_L和V_H结构域通过所述柔性接 头相连(参见Birdet al，Science 242：423-426，1988；Huston et al，Proc.Natl.Acad.Sci. USA 85：5879-5883，1988；McCafferty et al，Nature 348：552-554，1990)。任选地，接头 中可以包含切割位点，例如弗林蛋白酶切割位点。

编码V_H和/或V_L的核酸序列可以任选地编码Fc结构域(免疫粘合素)。Fc结构域 可以是IgA、IgM或IgG Fc结构域。Fc结构域可以是优化的Fc结构域，如美国公布 的专利申请NO.20100/093979中所描述的，该申请以引用方式纳入本文。在一个实例 中，免疫粘合素是一个IgG₁ Fc。

当仅使用单个V_H和V_L时，单链抗体可以是单价的，当使用2个V_H和V_L时， 单链抗体可以是双价的，当使用多于2个V_H和V_L时，单链抗体可以是多价的。双特 异性抗体或多价抗体可被制备为与gp120和另一个抗原(例如，但不限于gp41)特异 性结合，或者结合两个不同的gp120表位。编码的V_H和V_L任选地可以含有位于V_H和V_L结构域之间的弗林蛋白酶切割位点。

可以预期，本领域技术人员能够知晓许多可用于表达蛋白的表达体系，包括大肠杆菌、其它细菌宿主、酵母以及多种高等真核细胞，例如COS、CHO、HeLa和骨髓 瘤细胞系。

宿主细胞可以是革兰氏阳性菌，包括但不限于芽孢杆菌属(Bacillus)、链球菌属(Streptococcus)、链霉菌属(Streptomyces)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、肠球菌属(Enterococcus)、乳杆菌属(Lactobacillus)、乳球菌属(Lactococcus)、梭菌属(Clostridium)、地芽孢杆菌(Geobacillus)和大洋芽孢杆菌(Oceanobacillus)。在革 兰氏阳性细菌例如乳杆菌中表达蛋白的方法是本领域技术人员所熟知的，参见例如美 国公布的专利申请NO.20100/080774。用于乳杆菌的表达载体描述于例如美国专利NO. 6,100,388和美国专利NO.5,728,571。可纳入前导序列用于在乳杆菌中表达。革兰氏阴 性菌包括但不限于大肠杆菌(E.coli)、假单胞菌属(Pseudomonas)、沙门氏菌属 (Salmonella)、弯曲杆菌属(Campylobacter)、螺杆菌属(Helicobacter)、黄杆菌属 (Flavobacterium)、梭杆菌属(Fusobacterium)、泥杆菌属(Ilyobacter)、奈瑟氏球菌 属(Neisseria)和尿支原体属(Ureaplasma)。

编码抗体或其片段的一种或多种DNA序列可以通过将DNA转移到合适的宿主细 胞中来在体外表达。所述细胞可以是原核细胞或真核细胞。该术语还包括所述受试宿 主细胞的任意后代。可以理解并不是所有的后代都跟亲本细胞相同，因为在复制过程 中可能会出现突变。如本领域中所知晓的，稳定转移的方法是指外源DNA持续保留 在宿主细胞中。本公开内容还包括表达目的抗体的杂交瘤细胞。

编码本文所述的分离蛋白的核酸的表达可以通过将DNA或cDNA可操作地连接 至启动子(组成型或诱导型)，然后将其纳入表达盒中来实现。所述启动子可以是任何 目标启动子，包括巨细胞病毒启动子和人T细胞淋巴营养病毒启动子(HTLV)-1。任选 地，将增强子(例如巨细胞病毒增强子)纳入所述构建体中。所述表达盒可以适合在 原核或者真核细胞中复制和整合。常规的表达盒含有可用于调节编码所述蛋白的DNA 表达的特定序列。例如，所述表达盒可以包含合适的启动子、增强子、转录和翻译终 止子、起始序列、蛋白编码基因前面的起始密码子(即，ATG)、内含子剪接信号、保 持该基因读码框正确以使mRNA正确翻译的序列以及终止密码子。所述载体可以编码 选择性标记物，例如编码药物抗性(例如氨苄青霉素或四环素抗性)的标记物。

为了获得克隆基因的高水平表达，需要构建最少包含指导转录的强启动子、用于翻译起始的核糖体结合位点(内部的核糖体结合序列)和转录/翻译终止子的表达盒。对 大肠杆菌而言，表达盒包括启动子，例如T7、trp、lac或λ启动子；核糖体结合位点 和(优选地)转录终止信号。对真核细胞而言，控制序列可以包括启动子和/或增强子 (例如来自于免疫球蛋白基因、HTLV、SV40或巨细胞病毒等的增强子/增强子)，和 多腺苷酸化序列，并且还可以包括剪接供体和/或受体序列(例如CMV和/或HTLV剪 接受体和供体序列)。所述表达盒可以通过熟知的方法转移到选定的宿主细胞中，所述 方法例如，对于大肠杆菌为转化或电穿孔法，对于哺乳动物细胞为磷酸钙处理、电穿 孔法或脂转染。被表达盒转化的细胞可以利用该表达盒中含有的基因例如amp、gpt、 neo和hyg基因所赋予的抗生素抗性进行筛选。

当宿主是真核生物时，可以使用DNA转染方法(例如磷酸钙共沉淀)，常规机械 方法(例如显微注射、电穿孔法、包裹在脂质体或病毒载体中的质粒插入)。真核细胞 还可以用编码所述抗体、标记的抗体或其功能片段的多核苷酸序列以及编码可选择的 表型的另一个外源DNA分子(例如单纯疱疹胸苷激酶基因)进行共转化。另一个方 法是使用真核病毒载体例如猿病毒40(SV40)或牛乳头瘤病毒瞬时感染或转化真核细 胞并表达蛋白(参见，例如Eukaryotic Viral Vectors，Cold Spring Harbor Laboratory， Gluzman ed.，1982)。本领域技术人员可以很容易地使用表达体系，例如用于在细胞(包 括高等真核细胞，例如COS、CHO、HeLa和骨髓瘤细胞系)中产生蛋白的质粒和载 体。

可对编码本文描述的多肽的核酸可以进行修饰而不降低其生物学活性。可进行一些修饰来帮助目标分子的克隆、表达或将其纳入到融合蛋白中。这样的修饰是本领域 技术人员所熟知的，包括例如终止密码子、在氨基端加入甲硫氨酸以提供起始点、在 两端之一加入另外的氨基酸以提供方便的酶切位点或者加入另外的氨基酸(例如多组 氨酸)以帮助纯化步骤。除重组方法以外，还可以使用本领域熟知的标准肽合成技术 全部或部分地构建本发明的抗体、免疫缀合物以及效应物部分。

一旦表达，就可以使用本领域的标准方法对重组的免疫缀合物、抗体和/或效应分子进行纯化，所述方法包括硫酸铵沉淀、亲和柱、柱层析等(一般参见，R.Scopes， PROTEINPURIFICATION，Springer-Verlag，N.Y.，1982)。所述抗体、免疫缀合物和效应 分子不需要100％纯。如果拟用于治疗目的，一旦被部分纯化或按需要纯化至同质， 所述多肽应该基本不含有内毒素。

从细菌(例如大肠杆菌)中表达抗体和/或重折叠至恰当的活性形式(包括单链抗体)的方法已有记载、是公知的并且可以用于本文公开的抗体。参见Buchner et al，Anal.Biochem.205：263-270，1992；Pluckthun，Biotechnology 9：545，1991；Huse et al，Science 246：1275，1989和Ward et al，Nature 341：544，1989。

通常情况下，来自大肠杆菌或其它细菌的有功能的外源蛋白被从包涵体中分离出来，并且需要使用强的变性剂使其溶解，之后重折叠。如本领域技术人员所熟知的， 在溶解步骤中，必须存在还原剂以断开二硫键。一种含有还原剂的示例性缓冲液是： 0.1M TrispH 8.6M胍、2mM EDTA、0.3M DTE(二硫赤藓糖醇)。如Saxena et al Biochemistry 9：5015-5021，1970所描述，特别如Buchner et al(文献见上文)所述，在 低分子量的硫醇试剂以还原的和氧化的形式存在时可以发生二硫键的再氧化。

通常通过将变性和还原的蛋白在重折叠缓冲液中稀释(例如，稀释100倍)来实 现复性。一种示例性缓冲液是：0.1M Tris，pH 8.0、0.5M L-精氨酸、8mM氧化谷胱 甘肽(GSSG)和2mM EDTA。

作为对双链抗体纯化方法的改进，将重链和轻链区域分别进行溶解和还原，然后在重折叠溶液中混合。当这两种蛋白以一种蛋白相对于另一种蛋白不超过5倍摩尔过 量的摩尔比例混合时，获得示例性的产量。氧化-还原移动(redox-shuffling)之后， 过量的氧化谷胱甘肽或其它低分子量的氧化化合物可以加入到重折叠溶液中。

除重组方法之外，本文公开的抗体、标记的抗体及其功能片段还可以用常规的肽合成法整体或部分地构建。长度小于约50个氨基酸的多肽的固相合成可以通过将所述 序列的C-末端氨基酸附着在不溶的载体上然后按顺序加入所述序列中剩余的氨基酸 来完成。固相合成技术记载于Barany & Merrifield，The Peptides：Analysis，Synthesis，Biology.Vol.2：Special Methods in Peptide Synthesis，Part A.pp.3-284；Merrifieldet al， J.Am.Chem.Soc.85：2149-2156，1963，以及Stewart et al，Solid Phase PeptideSynthesis， 第二版，Pierce Chem.Co，Rockford，Ill.，1984中。较长的蛋白可以通过较短片段的氨 基端和羧基端的缩合来合成。通过活化羧基末端(例如使用偶联剂N，N′-二环己基碳二 亚胺)形成肽键的方法是本领域技术人员所熟知的。

B.组合物和治疗方法

本文公开了用于预防或治疗HIV感染例如HIV-1感染的方法。预防可以包括HIV-1感染的抑制。所述方法包括使细胞与治疗有效量的本文公开的特异性结合gp120的人 单克隆抗体或其抗原结合片段或者编码这类抗体或抗原结合片段的核酸接触。所述方 法还可以包括给予受试者治疗有效量的所述人单克隆抗体或抗原结合片段，或者给予 受试者编码这类抗体或其抗原结合片段的核酸。在一些实例中，所述抗体或抗原结合 片段或者编码这类抗体或抗原结合片段的核酸可以在暴露前使用(例如，以预防或抑 制HIV感染)。在一些实例中，所述抗体或抗原结合片段或者编码这类抗体或其抗原 结合的核酸可以用于暴露后预防。在一些实例中，所述抗体或抗原结合片段或者编码 这类抗体或抗原结合片段的核酸可以用于消除或减少受试者中HIV的病毒贮存库 (reservoir)。例如，治疗有效量的抗体或抗原结合片段或者编码这类抗体或抗体结合 片段的核酸可以被给予至正在用抗病毒疗法治疗的受试者。在一些实例中，对所述抗 体或抗体结合片段进行修饰以使得其对感染的细胞具有直接的细胞毒性，或者其使用 天然防护物例如补体、抗体依赖性细胞毒性(ADCC)或巨噬细胞的吞噬作用。

测定中和活性的方法包括但不限于如Martin et al.(2003)NatureBiotechnology 21：71-76中所述的单循环感染测定法。在此分析中，病毒活性水平是通过选择性标记 物测量的，所述选择性标记物的活性能够反映样本中活病毒的量，并且确定了IC50 值。在其他分析中，急性感染可以在PM1细胞系或原代细胞(正常PBMC)中监测。在 此分析中，病毒活性水平可以通过使用ELISA测定p24浓度来监测。参见例如Martin et al.(2003)Nature Biotechnology 21：71-76。

对于有效的所述组合物，并不需要完全消除HIV感染。例如，组合物可以使HIV 感染相对于不存在所述组合物时的HIV感染降低需要的量，例如降低至少10％、至少 20％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％ 或者甚至至少100％(消除可检测到的HIV感染细胞)。在一些实施方案中，所述细胞 还与治疗有效量的其他试剂例如抗病毒试剂接触。细胞可以在体内或体外。所述方法 可以包括给予一种或多种本领域已知的其他试剂。在另外的实施方案中，可以通过类 似的方法降低或抑制HIV的复制。所述组合物要有效并不需要完全消除HIV的复制。 例如，组合物可以使HIV复制相对于所述组合物不存在时的HIV复制降低需要的量， 例如降低至少10％、至少20％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少 90％、至少95％、至少98％或者甚至至少100％(消除可检测到的HIV)。在一个实例中， 所述细胞还与治疗有效量的其他试剂例如抗病毒试剂接触。细胞可以在体内或体外。

提供了含有在载体中的本文公开的特异性结合gp120的抗体或其结合片段或编码这类抗体或抗原结合片段的核酸中的一种或多种的组合物。所述组合物可以以用于给 予受试者的单位剂型制备。给药量和给药时间由治疗医生决定以达到期望目标。所述 抗体被配制用于全身或局部给药。在一个实例中，特异性结合gp120的抗体或其抗原 结合片段或者编码这类抗体或抗原结合片段的核酸被配制用于肠胃外给药，例如静脉 内给药。

用于给药的组合物可以包含溶于可药用载体(例如水性载体)中的特异性结合gp120的抗体或其抗原结合片段或者编码这类抗体或抗体结合片段的核酸的溶液。可 以使用多种水性载体，例如缓冲盐水等。这些溶液是无菌的并且一般来说不含有不需 要的物质。这些组合物可以用常规、公知的灭菌技术来灭菌。这些组合物可以含有接 近生理条件所需要的可药用辅助物质，例如pH调节剂和缓冲剂、毒性调节剂等，例 如醋酸钠、氯化钠、氯化钾、氯化钙和乳酸钠等。这些制剂中抗体的浓度可以有很大 的差异，并且主要基于流体体积、粘度和体重等，并根据与所选择的具体给药方式和 受试者的需求进行选择。

用于静脉内给药的常规药物组合物含有约0.1至10mg抗体/受试者/天。可以使用从0.1至最高至约100mg/受试者/天的剂量，尤其当所述试剂被给药至隔离的位点而 不进入循环系统或淋巴系统(例如进入到体腔或器官的内腔)时。制备可给药组合物 的现有方法是本领域技术人员已知或者对其来说是明显的，并且在例如Remington′sPharmaceutical Science，第19版，Mack出版公司，Eaton，PA(1995)的文献中有更为详 细的描述。

抗体或其抗原结合片段或者编码这类抗体或抗原结合片段的核酸可以以冻干的形 式提供并在给药前用无菌水进行再水化，但是它们也可以以已知浓度的无菌溶液的形式提供。然后将所述抗体溶液或其抗原结合片段或者编码这类抗体或抗体结合片段的 核酸加入到含有0.9％氯化钠(USP)的输注袋中，并通常以0.5至15mg/kg体重的剂 量给药。本领域有大量的抗体药物(从1997年

被批准起，抗体药物已经 在美国上市)的给药经验。抗体或其抗原结合片段或者编码这类抗体或抗原结合片段 的核酸可以以缓慢输注的方式而不是静脉内推注或快速浓注方式给药。在一个实例中， 先给予较高的负荷剂量，然后给予较低水平的维持剂量。例如，可以在约90分钟时间 内输注4mg/kg的初始负荷剂量，如果初始剂量被良好地耐受，就可以随后每周1次 在30分钟时间内输注2mg/kg的维持剂量，持续4-8周。

gp120特异性抗体或其抗原结合片段或者编码这类抗体或抗体结合片段的核酸的治疗有效量取决于疾病和/或感染的严重程度以及患者健康的大体状况。所述抗体的治 疗有效量是提供症状的主观缓解或由临床医生或者其他有资质的观测者注意到的可客 观辨别的改善的量。这些组合物可以与另外的治疗试剂联合起来同时或惯序给药。

在一个实施方案中，所述抗体或其抗体结合片段或者编码这类抗体或抗体结合片段的核酸的给药降低了受试者中HIV感染的建立和/或减缓随后HIV疾病的进展。降 低HIV感染的建立和/或减缓随后HIV疾病的进展包括HIV活性的任何统计学上显著 的降低。在一些实施方案中，公开了用于治疗有HIV-1感染的受试者的方法。这些方 法包括将治疗有效量的抗体或编码所述抗体的核酸给予受试者，从而预防或治疗 HIV-1感染。

研究发现，在将齐多夫定(Zidovudine)给予妊娠和分娩期的HIV感染妇女和出 生后的婴儿时，HIV的母婴传播比率显著降低(Connor et al.，1994 Pediatr Infect Dis J14：536-541)。一些对HIV母婴传播的研究表明，分娩时母体病毒载量与HIV传播给 孩子的风险之间存在相关性。本发明提供了分离的人单克隆抗体，其用于降低HIV的 母婴传播。因此，在一些实例中，给予治疗有效量的人gp120特异性抗体或其抗原结 合片段或者编码这类抗体或抗体抗原结合片段的核酸以防止HIV的母婴传播或降低 HIV的母婴传播风险。在一些实例中，将治疗有效量的所述抗体或抗体结合片段或者 编码这类抗体或抗原结合片段的核酸在分娩时给予母亲和/或孩子。在其他实例中，将 治疗有效量的所述抗体或抗原结合片段或者编码所述抗体或抗原结合片段的核酸在母 乳喂养前给予母亲和/或婴儿，以阻止病毒传播给婴儿或者降低病毒传播给婴儿的风险。 在一些实施方案中，将治疗有效量的所述抗体、抗原结合片段或者编码这类抗体或抗 原结合片段的核酸和治疗有效量的其它试剂(例如齐多夫定)给予母亲和/或婴儿。

对于任何应用，所述抗体、抗原结合片段或者编码这类抗体或抗原结合片段的核酸可以与抗逆转录病毒治疗相结合。抗逆转录病毒药物一般根据所述药物抑制的逆转 录病毒生命周期的阶段来分类。所公开抗体可以与核苷类似物逆转录酶抑制剂(例如 齐多夫定、去羟肌苷(didanosine)、扎昔他宾(zalcitabine)、司他夫定(stavudine)、 拉米夫定(lamivudine)、阿巴卡韦(abacavir)、恩曲他滨(emtricitabine)、恩替卡韦 (entecavir)和阿立他滨(apricitabine))、核苷酸逆转录酶抑制剂(例如替诺福韦 (tenofovir)和阿德福韦(adefovir))、非核苷逆转录酶抑制剂(例如依法韦仑(efavirenz)、 奈韦拉平(nevirapine)、地拉韦定(delavirdine)、依曲韦林(etravirine)和利匹韦林(rilpivirine))、蛋白酶抑制剂(例如沙奎那韦(saquinavir)、利托那韦(ritonavir)、 茚地那韦(indinavir)、奈非那韦(nelfinavir)、氨普那韦(amprenavir)、洛匹那韦(lopinavir)、呋山那韦(fosamprenavir)、阿扎那韦(atazanavir)、替拉那韦(tipranavir)和达芦那韦(darunavir))、进入或融合抑制剂(例如马拉韦罗(maraviroc)和恩夫韦 肽(enfuvirtide))、成熟抑制剂(例如贝韦立马(bevirima)和vivecon)或广谱抑制剂 (例如天然抗病毒剂)联合给药。在一些实例中，所公开的抗体或其活性片段或编码 这类的核酸与IL-15联合给药或缀合至IL-15。

在一些实例中，受试者还被给予一种或多种结合HIV糖蛋白例如gp120和gp41 的其他抗体。可以与所公开的抗体联合给予的中和抗体的实例可见于2011年3月31 日公开的国际专利公布No.WO 2011/038290，其在此具体通过引用的方式全文纳入本 文。

包含本文公开的抗体、抗原结合片段或者编码所述抗体或抗原结合片段的核酸的组合物的单次或多次给药取决于患者所需要并可耐受的剂量和频率。在任何情况下， 所述组合物均应该提供足量的至少一种本文公开的抗体以有效地治疗所述患者。所述 剂量可以一次给予，但是也可以周期性给予，直到达到治疗结果或者直到副作用要求 中断治疗。在一个实例中，每隔一天在30分钟内输注一个剂量的抗体。在该实例中， 可给予约1至约10个剂量，例如可以每隔一天给予3或6个剂量。在另一个实例中， 给予持续输注约5天至约10天。可对受试者进行定期治疗，例如每月治疗，直到达到 所需要的治疗效果。一般地，所述剂量足以治疗或改善疾病的症状或体征而不对患者 产生不可接受的毒性。

控制释放的肠胃外制剂可被制成植入体、油性注射剂或被制成微粒体系。对于蛋白递送体系的广泛综述，参见Banga，A.J.，Therapeutic Peptides and Proteins：Formulation，Processing，and Delivery Systems，Technomic Publishing Company，Lancaster，PA，(1995)。微粒体系包括微球体、微颗粒、微胶囊、纳米胶囊、纳米球体 和纳米颗粒。微胶囊包含所述治疗蛋白，例如细胞毒素或药物，作为中央核心。在微 球体中，治疗药物分散在整个颗粒中。小于约1μm的颗粒、微球体和微胶囊通常分 别被称为纳米颗粒、纳米球体和纳米胶囊。毛细血管的直径为约5μm，使得只有纳米 颗粒通过静脉内给药。微颗粒的直径通常为约100μm，并且通过皮下或者肌内给药。 参见，例如Kreuter，J.，ColloidalDrug Delivery Systems，J.Kreuter，ed.，Marcel Dekker， Inc.，New York，NY，pp.219-342(1994)；和Tice & Tabibi，Treatise on Controlled Drug Delivery，A.Kydonieus，ed.，Marcel Dekker，Inc.New York，NY，pp.315-339，(1992)。

聚合物可以用于本文公开的抗体组合物的离子控制释放。用于受控制的药物递送的多种可降解和不可降解的聚合基质是本领域中已知的(Langer，Accounts Chem.Res.26：537-542，1993)。例如嵌段共聚物——polaxamer 407，其在低温下以粘稠但可流动的液体形式存在，但是在体温下形成半固体凝胶。它已经被证明是制剂和持续递送重组 白细胞介素-2和脲酶的有效运载体(Johnston et al.，Pharm.Res.9：425-434，1992和Pec etal.，J.Parent.Sci.Tech.44(2)：58-65，1990)。或者，羟基磷灰石已被用作控制释放蛋白的微载体(Ijntema et al.，Int.J.Pharm.112：215-224，1994)。在另一方面，将脂质体用于脂 质包裹的药物的控制释放以及药物寻靶(Betageri et al.，Liposome Drug DeliverySystems，Technomic Publishing Co.，Inc.，Lancaster，PA(1993))。已知有许多其它的控制 递送治疗蛋白的体系(参见美国专利号5,055,303；美国专利号5,188,837；美国专利号4,235,871；美国专利号4,501,728；美国专利号4,837,028；美国专利号4,957,735；美 国专利号5,019,369；美国专利号5,055,303；美国专利号5,514,670；美国专利号 5,413,797；美国专利号5,268,164；美国专利号5,004,697；美国专利号4,902,505；美 国专利号5,506,206；美国专利号5,271,961；美国专利号5,254,342和美国专利号 5,534,496)。

在一些实例中，受试者被给予编码所述抗体或其抗原结合片段的DNA或者一种 或多种植入至蛋白支架上的CDR，以例如使用受试者的细胞机器提供体内抗体生产。 用核酸构建体进行的免疫接种是本领域中熟知的，并且在例如美国专利号5,643,578 和美国专利号5,593,972和美国专利号5,817,637中有教导。美国专利号5,880,103描 述了一些将编码的核酸递送到生物体的方法。所述方法包括所述核酸的脂质体递送。 本领域普通技术人员可将这些方法应用于抗体或其抗体结合片段的生产。

给予核酸的一种方法是使用质粒DNA例如使用哺乳动物表达质粒的直接给药。 可以将编码所公开的抗体或其抗体结合片段的核苷酸序列置于启动子的控制下以增加 表达。

在另一个使用核酸的方法中，还可以通过减弱的病毒宿主或载体或细菌载体来表达所公开的抗体或其抗体结合片段。重组痘苗病毒、腺病毒相关病毒、疱疹病毒、逆 转录病毒、巨细胞病毒或其他病毒载体可用于表达所述抗体。例如，用于牛痘载体和 方法的方案记载于美国专利号4,722,848中。BCG(卡介苗)提供了另一种用于表达 所公开的抗体的载体(参见Stover，Nature 351：456-460，1991)。

在一个实施方案中，将编码所公开的抗体或其抗体结合片段的核酸直接导入细胞。 例如，可以通过标准方法将所述核酸装载到金微球体上，并通过例如Bio-Rad’sHelios^TM基因枪的设备将其导入皮肤中。所述核酸可为“裸露的”，由处于强启动子控制下的质 粒组成。

一般地，将所述DNA注射到肌肉中，但是还可将其直接注射到其他部位。注射 剂量通常为约0.5μg/kg至约50mg/kg，并且一般为约0.005mg/kg至约5mg/kg(参 见，例如，美国专利号5,589,466)。

C.诊断方法和试剂盒

本文提供一种在体外或体内检测gp120的表达的方法。在一个实例中，gp120的 表达是在生物样本中检测的并且当样本中存在HIV-1时，gp120的表达可用于检测 HIV-1感染。所述样本可以是任何样本，包括但不限于来自于活组织检查、尸检和病 理学样本的组织。生物样本还包括组织切片，例如用于组织学目的的冷冻切片。生物 样本还包括体液，例如血液、血清、血浆、唾液、脊液或尿液。

在一些实施方案中，提供了一种检测受试者中AIDS和/或HIV-1感染的方法。本 公开内容提供了一种检测生物样本中的HIV-1的方法，其中所述方法包括在有助于形 成免疫复合物的条件下使生物样本和所述抗体接触，并检测所述免疫复合物，以检测 所述生物样本中的gp120。在一个实例中，所述样本中gp120的检出表明所述受试者 具有HIV感染。在另一个实例中，所述样本中gp120的检出表明所述受试者患有AIDS。 在另一个实例中，所述样本中gp120的检出确认了对受试者中AIDS和/或HIV-1感染 的诊断。

在一些实施方案中，所公开的抗体被用于测试疫苗。例如测试疫苗组合物是否具有与gp120肽相同的构象。因此，本文提供了一种测试疫苗的方法，其中所述方法包 括在有助于形成免疫复合物的条件下使含有所述疫苗的样本(例如gp120免疫原)与 所述抗体接触，并检测所述免疫复合物，以检测所述样本中的所述疫苗。在一个实例 中，所述样本中所述免疫复合物的检出表明疫苗组分(例如gp120免疫原)具有能够 结合所述抗体的构象。

在一个实施方案中，直接用可检测的标记物对所述抗体进行标记。在另一个实施方案中，与gp120结合的抗体(第一抗体)没有被标记，并且使用了能够与结合gp120 的抗体相结合的第二抗体或者其它分子。如本领域技术人员所熟知的，选择能够特异 性结合所述第一抗体的特定种和类的第二抗体。例如，如果第一抗体是人IgG，那么 所述第二抗体就可以是抗人IgG。其它能够与抗体结合的分子包括但不限于蛋白A和 蛋白G，两者都可以从市场购得。

上文描述了适合于所述抗体或第二抗体的标记物，并且包括多种酶、辅基、荧光材料、发光材料、磁性试剂和放射性材料。合适酶的非限制性实例包括辣根过氧化物 酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或乙酰胆碱酯酶。合适的辅基复合物的非限制性实例 包括链霉亲和素/生物素和亲和素/生物素。合适的荧光材料的非限制性实例包括伞形 酮、荧光素、异硫氰酸荧光素、罗丹明、二氯三嗪氨基荧光素、丹磺酰氯或藻红蛋白。 一个非限制性的示例性发光材料是鲁米诺；一个非限制性的示例性磁性试剂是钆，非 限制性的示例性放射性标记包括¹²⁵I、¹³¹I、³⁵S或³H。

本文公开的免疫测定和方法可用于多种目的。用于检测多肽的试剂盒通常包含与gp120结合的抗体，例如本文公开的任何抗体。在一些实施方案中，所述试剂盒中包 含抗体片段，例如Fv片段或Fab。在另一个实施方案中，所述抗体是被标记的(例如 用荧光标记物、放射性标记物或酶标记物标记)。

在一个实施方案中，试剂盒中包含公开了使用方法的说明材料。所述说明材料可以为以电子版形式书写(例如电脑磁盘或压缩光盘)或者也可以是可视形式(例如录像文件)。所述试剂盒还可以包含帮助该试剂盒的具体用途(所述试剂盒被设计用于所述用 途)的其他组分。因此，例如，所述试剂盒中还可以包括检测标记物的工具(例如针对 酶标记物的酶底物、检测荧光标记物的滤波装置、合适的第二标记物例如第二抗体等)。 所述试剂盒还可以包括缓冲液和常规用于实施具体方法的其它试剂。这样的试剂盒和 合适的内容物是本领域技术人员所熟知的。

在一个实施方案中，所述诊断试剂盒中包括免疫测定。虽然免疫测定的细节会随着所用的具体形式不同而有所不同，但是检测生物样本中gp120的方法通常包括使所 述生物样本与在免疫反应条件下与gp120特异地反应的抗体接触的步骤。使所述抗体 在免疫反应条件下特异性结合从而形成免疫复合物，并且直接或间接地检测所述免疫 复合物(结合的抗体)的存在。

D.本发明的示例性实施方案

第1项.一种分离的单克隆抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，其中所述抗 体的重链可变区包含SEQ ID NO：1的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和/或 97-114(CDR3)，并且其中所述抗体特异性结合HIV-1的gp120，并且其中所述抗体 是中和抗体。

第2项.第1项的分离的单克隆抗体，其中所述重链可变区包含以下之一：

(a)SEQ ID NO：2的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和/或97-114(CDR3)；

(b)SEQ ID NO：3的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和/或97-114(CDR3)；

(c)SEQ ID NO：4的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和/或97-114(CDR3)；

(d)SEQ ID NO：30的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和/或97-114 (CDR3)；或

(e)SEQ ID NO：38的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和/或97-114(CDR3)。

第3项.第1项的分离的人单克隆抗体，其中所述抗体的重链区包含SEQ ID NO： 1的氨基酸26-33(CDR1)，51-58(CDR2)和97-114(CDR3)。

第4项.第1项的分离的单克隆抗体，其中所述重链可变区包含以下之一：

(a)SEQ ID NO：2的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3)；

(b)SEQ ID NO：3的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3)；

(c)SEQ ID NO：4的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3)；

(d)SEQ ID NO：30的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3)； 或

(e)SEQ ID NO：38的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3)。

第5项.第1-4项中任一项的分离的单克隆抗体，其中所述抗体的重链可变区包 含SEQ ID NO：1。

第6项.第1-5项中任一项的分离的单克隆抗体，其中所述抗体的重链可变区包 含SEQ ID NO：2-4之一。

第7项.第1项的分离的单克隆抗体，其中所述抗体的重链可变区包含以下之一：

(a)SEQ ID NO：31的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和/或97-114(CDR3)；

(b)SEQ ID NO：32的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和/或97-114 (CDR3)；

(c)SEQ ID NO：33的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和/或97-114(CDR3)；

(d)SEQ ID NO：34的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和/或97-114 (CDR3)；

(e)SEQ ID NO：35的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和/或97-114(CDR3)； 或

(f)SEQ ID NO：36的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和/或97-114(CDR3)。

第8项.第7项的分离的单克隆抗体，其中所述抗体的重链可变区包含以下之一：

(a)SEQ ID NO：31的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3)；

(b)SEQ ID NO：32的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3)；

(c)SEQ ID NO：33的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3)；

(d)SEQ ID NO：34的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3)；

(e)SEQ ID NO：35的氨基酸26-33(CDR1)，51-58(CDR2)和97-114(CDR3)； 或

(e)SEQ ID NO：36的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3)。

第9项.第7-8项中任一项的分离的单克隆抗体，其中所述抗体的重链可变区包 含以下之一：

(a)SEQ ID NO：31；

(b)SEQ ID NO：32；

(c)SEQ ID NO：33；

(d)SEQ ID NO：34

(e)SEQ ID NO：35；或

(f)SEQ ID NO：36。

第10项.第1项的分离的单克隆抗体，其中所述重链可变区包含以下之一：

(a)SEQ ID NO：38的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和/或97-114(CDR3)， 其中X₁₅为Q；X₁₆为V或I并且X₁₇为A或T；

(b)SEQ ID NO：38的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和/或97-114 (CDR3)，其中X₁₅为Q或R；X₁₆为V并且X₁₇为A或T；

(c)SEQ ID NO：38的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和/或97-114(CDR3)， 其中X₁₅为Q或R；X₁₆为V或I并且X₁₇为A；

(d)SEQ ID NO：38氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和/或97-114(CDR3)， 其中X₁₅为Q；X₁₆为V并且X₁₇为A或T；

(e)SEQ ID NO：38的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和/或97-114(CDR3)， 其中X₁₅为Q或R；X₁₆为V并且X₁₇为A；

(f)SEQ ID NO：38的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和/或97-114(CDR3)， 其中X₁₅为Q；X₁₆为V或I并且X₁₇为A；或

(g)SEQ ID NO：39的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和/或97-114 (CDR3)。

第11项.第10项的分离的单克隆抗体，其中所述重链可变区包含以下之一：

(a)SEQ ID NO：38的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3)， 其中X₁₅为Q；X₁₆为V或I并且X₁₇为A或T；

(b)SEQ ID NO：38的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3)， 其中X₁₅为Q或R；X₁₆为V并且X₁₇为A或T；

(c)SEQ ID NO：38的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3)， 其中X₁₅为Q或R；X₁₆为V或I并且X₁₇为A；

(d)SEQ ID NO：38的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3)， 其中X₁₅为Q；X₁₆为V并且X₁₇为A或T；

(e)SEQ ID NO：38的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3)， 其中X₁₅为Q或R；X₁₆为V并且X₁₇为A；

(f)SEQ ID NO：38的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3)， 其中X₁₅为Q；X₁₆为V或I并且X₁₇为A；或

(g)SEQ ID NO：39的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3)。

第12项.第10项或第11项的分离的单克隆抗体，其中所述重链可变区包含：

(a)SEQ ID NO：38所示的氨基酸序列，其中X₁₅为Q；X₁₆为V或I并且X₁₇为A 或T；

(b)SEQ ID NO：38所示的氨基酸序列，其中X₁₅为Q或R；X₁₆为V并且X₁₇为A或T；

(c)SEQ ID NO：38所示的氨基酸序列，其中X₁₅为Q或R；X₁₆为V或I并且X₁₇为A；

(d)SEQ ID NO：38所示的氨基酸序列，其中X₁₅为Q；X₁₆为V并且X₁₇为A 或T；

(e)SEQ ID NO：38所示的氨基酸序列，其中X₁₅为Q或R；X₁₆为V并且X₁₇为A；

(f)SEQ ID NO：38所示的氨基酸序列，其中X₁₅为Q；X₁₆为V或I并且X₁₇为A； 或

(g)SEQ ID NO：39所示的氨基酸序列。

第13项.一种分离的单克隆抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，其中所述 抗体的重链可变区包含SEQ ID NO：23的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和/ 或97-114(CDR3)，并且其中所述抗体特异性结合HIV-1的gp120，并且其中所述抗 体是中和抗体。

第14项.第13项的分离的单克隆抗体，其中所述重链可变区包含以下之一：

(a)SEQ ID NO：24的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和/或97-114(CDR3)；

(b)SEQ ID NO：25的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和/或97-114 (CDR3)；或

(c)SEQ ID NO：26的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和/或97-114(CDR3)。

第15项.第13项的分离的人单克隆抗体，其中所述抗体的重链区包含SEQ ID NO：23的氨基酸26-33(CDR1)，51-58(CDR2)和97-114(CDR3)。

第16项.第14项的分离的单克隆抗体，其中所述重链可变区包含以下之一：

(a)SEQ ID NO：24的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3)；

(b)SEQ ID NO：25的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3)； 或

(c)SEQ ID NO：26的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3)。

第17项.第2-6或13-15项中任一项的分离的单克隆抗体，其中所述抗体的重链 可变区包含SEQ ID NO：23。

第18项.第13-15项中任一项的分离的单克隆抗体，其中所述抗体的重链可变 区包含SEQ ID NO：24-26之一。

第19项.第1-18项中任一项的分离的单克隆抗体，其中所述分离的人单克隆抗 体的轻链可变区包含SEQ ID NO：6的氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和87-91 (CDR3)。

第20项.第1-18项中任一项的分离的单克隆抗体，其中所述抗体的轻链可变区 包含以下之一：

(a)SEQ ID NO：7的氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)；

(b)SEQ ID NO：8的氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)。

第21项.第1-1项任一项的分离的单克隆抗体，其中所述分离的人单克隆抗体 的轻链可变区包含SEQ ID NO：9的氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和87-91 (CDR3)。

第22项.第1-18项中任一项的分离的单克隆抗体，其中所述分离的人单克隆抗 体的轻链可变区包含SEQ ID NO：27的氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和87-91 (CDR3)。

第23项.第1-18项中任一项的分离的单克隆抗体，其中所述抗体的轻链可变区 包含SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：27。

第24项.第1项的分离的单克隆抗体，其中

(a)所述重链可变区包含SEQ ID NO：1的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2) 和97-114(CDR3)，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO：6的氨基酸27-30(CDR1)、 48-50(CDR2)和87-91(CDR3)；

(b)所述重链可变区包含SEQ ID NO：2的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2) 和97-114(CDR3)，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO：9的氨基酸27-30(CDR1)、 48-50(CDR2)和87-91(CDR3)；

(c)所述重链可变区包含SEQ ID NO：3的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2) 和97-114(CDR3)，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO：7的氨基酸27-30(CDR1)、 48-50(CDR2)和87-91(CDR3)；或

(d)所述重链可变区包含SEQ ID NO：4的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2) 和97-114(CDR3)，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO：8的氨基酸27-30(CDR1)、 48-50(CDR2)和87-91(CDR3)。

第25项.第13项的分离的单克隆抗体，其中

(a)所述重链可变区包含SEQ ID NO：23的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2) 和97-114(CDR3)，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO：9的氨基酸27-30(CDR1)、 48-50(CDR2)和87-91(CDR3)；

(b)所述重链可变区包含SEQ ID NO：24的氨基酸26-33(CDR1)、51-58 (CDR2)和97-114(CDR3)，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO：9的氨基酸27-30 (CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)；

(c)所述重链可变区包含SEQ ID NO：25的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2) 和97-114(CDR3)，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO：9的氨基酸27-30(CDR1)、 48-50(CDR2)和87-91(CDR3)；

(d)所述重链可变区包含SEQ ID NO：26的氨基酸26-33(CDR1)、51-58 (CDR2)和97-114(CDR3)，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO：9的氨基酸27-30 (CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)；

(e)所述重链可变区包含SEQ ID NO：23的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2) 和97-114(CDR3)，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO：27的氨基酸27-30(CDR1)、 48-50(CDR2)和87-91(CDR3)；

(f)所述重链可变区包含SEQ ID NO：24的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2) 和97-114(CDR3)，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO：27的氨基酸27-30(CDR1)、 48-50(CDR2)和87-91(CDR3)；

(g)所述重链可变区包含SEQ ID NO：25的氨基酸26-33(CDR1)、51-58 (CDR2)和97-114(CDR3)，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO：27的氨基酸27-30 (CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)；或

(h)所述重链可变区包含SEQ ID NO：26的氨基酸26-33(CDR1)、51-58 (CDR2)和97-114(CDR3)，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO：27的氨基酸27-30 (CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)。

第26项.第7-9项中任一项的分离的单克隆抗体，其中

(a)所述重链可变区包含SEQ ID NO：30的氨基酸26-33(CDR1)、51-58 (CDR2)和97-114(CDR3)，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO：6的氨基酸27-30 (CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)；

(b)所述重链可变区包含SEQ ID NO：30的氨基酸26-33(CDR1)、51-58 (CDR2)和97-114(CDR3)，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO：9的氨基酸27-30 (CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)；

(c)所述重链可变区包含SEQ ID NO：30的氨基酸26-33(CDR1)、51-58 (CDR2)和97-114(CDR3)，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO：7的氨基酸27-30 (CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)；

(d)所述重链可变区包含SEQ ID NO：30的氨基酸26-33(CDR1)、51-58 (CDR2)和97-114(CDR3)，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO：8的氨基酸27-30 (CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)；

(e)所述重链可变区包含SEQ ID NO：30的氨基酸26-33(CDR1)、51-58 (CDR2)和97-114(CDR3)，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO：27的氨基酸 27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)；

(f)所述重链可变区包含SEQ ID NO：31的氨基酸26-33(CDR1)、51-58 (CDR2)和97-114(CDR3)，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO：6的氨基酸27-30 (CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)；

(g)所述重链可变区包含SEQ ID NO：31的氨基酸26-33(CDR1)、51-58 (CDR2)和97-114(CDR3)，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO：9的氨基酸27-30 (CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)；

(h)所述重链可变区包含SEQ ID NO：31的氨基酸26-33(CDR1)、51-58 (CDR2)和97-114(CDR3)，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO：7的氨基酸27-30 (CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)；

(i)所述重链可变区包含SEQ ID NO：31的氨基酸26-33(CDR1)、51-58 (CDR2)和97-114(CDR3)，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO：8的氨基酸27-30 (CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)；

(j)所述重链可变区包含SEQ ID NO：31的氨基酸26-33(CDR1)、51-58 (CDR2)和97-114(CDR3)，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO：27的氨基酸 27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)；

(k)所述重链可变区包含SEQ ID NO：32的氨基酸26-33(CDR1)、51-58 (CDR2)和97-114(CDR3)，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO：6的氨基酸27-30 (CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)；

(l)所述重链可变区包含SEQ ID NO：32的氨基酸26-33(CDRI)、51-58 (CDR2)和97-114(CDR3)，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO：9的氨基酸27-30 (CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)；

(m)所述重链可变区包含SEQ ID NO：32的氨基酸26-33(CDR1)、51-58 (CDR2)和97-114(CDR3)，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO：7的氨基酸27-30 (CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)；

(n)所述重链可变区包含SEQ ID NO：32的氨基酸26-33(CDR1)、51-58 (CDR2)和97-114(CDR3)，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO：8的氨基酸27-30 (CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)；

(o)所述重链可变区包含SEQ ID NO：32的氨基酸26-33(CDR1)、51-58 (CDR2)和97-114(CDR3)，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO：27的氨基酸 27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)；

(p)所述重链可变区包含SEQ ID NO：33的氨基酸26-33(CDR1)、51-58 (CDR2)和97-114(CDR3)，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO：6的氨基酸27-30 (CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)；

(q)所述重链可变区包含SEQ ID NO：33的氨基酸26-33(CDR1)、51-58 (CDR2)和97-114(CDR3)，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO：9的氨基酸27-30 (CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)；

(r)所述重链可变区包含SEQ ID NO：33的氨基酸26-33(CDR1)、51-58 (CDR2)和97-114(CDR3)，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO：7的氨基酸27-30 (CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)；

(s)所述重链可变区包含SEQ ID NO：33的氨基酸26-33(CDR1)、51-58 (CDR2)和97-114(CDR3)，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO：8的氨基酸27-30 (CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)；

(t)所述重链可变区包含SEQ ID NO：33的氨基酸26-33(CDR1)、51-58 (CDR2)和97-114(CDR3)，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO：27的氨基酸 27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)；

(v)所述重链可变区包含SEQ ID NO：34的氨基酸26-33(CDR1)、51-58 (CDR2)和97-114(CDR3)，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO：6的氨基酸27-30 (CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)；

(w)所述重链可变区包含SEQ ID NO：34的氨基酸26-33(CDR1)、51-58 (CDR2)和97-114(CDR3)，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO：9的氨基酸27-30 (CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)；

(x)所述重链可变区包含SEQ ID NO：34的氨基酸26-33(CDR1)、51-58 (CDR2)和97-114(CDR3)，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO：7的氨基酸27-30 (CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)；

(y)所述重链可变区包含SEQ ID NO：34的氨基酸26-33(CDR1)、51-58 (CDR2)和97-114(CDR3)，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO：8的氨基酸27-30 (CDR1)、48-50(CDR2.)和87-91(CDR3)；

(z)所述重链可变区包含SEQ ID NO：34的氨基酸26-33(CDR1)、51-58 (CDR2)和97-114(CDR3)，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO：27的氨基酸 27-30(CDRI)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)；

(aa)所述重链可变区包含SEQ ID NO：35的氨基酸26-33(CDR1)、51-58 (CDR2)和97-114(CDR3)，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO：6的氨基酸27-30 (CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)；

(bb)所述重链可变区包含SEQ ID NO：35的氨基酸26-33(CDR1)、51-58 (CDR2)和97-114(CDR3)，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO：9的氨基酸27-30 (CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)；

(cc)所述重链可变区包含SEQ ID NO：35的氨基酸26-33(CDR1)、51-58 (CDR2)和97-114(CDR3)，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO：7的氨基酸27-30 (CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)；

(dd)所述重链可变区包含SEQ ID NO：35的氨基酸26-33(CDR1)、51-58 (CDR2)和97-114(CDR3)，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO：8的氨基酸27-30 (CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)；

(ee)所述重链可变区包含SEQ ID NO：35的氨基酸26-33(CDR1)、51-58 (CDR2)和97-114(CDR3)，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO：27的氨基酸 27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)；

(ff)所述重链可变区包含SEQ ID NO：36的氨基酸26-33(CDR1)、51-58 (CDR2)和97-114(CDR3)，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO：6的氨基酸27-30 (CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)；

(gg)所述重链可变区包含SEQ ID NO：36的氨基酸26-33(CDR1)、51-58 (CDR2)和97-114(CDR3)，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO：9的氨基酸27-30 (CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)；

(hh)所述重链可变区包含SEQ ID NO：36的氨基酸26-33(CDR1)、51-58 (CDR2)和97-114(CDR3)，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO：7的氨基酸27-30 (CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)；

(ii)所述重链可变区包含SEQ ID NO：36的氨基酸26-33(CDR1)、51-58 (CDR2)和97-114(CDR3)，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO：8的氨基酸27-30 (CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)；或

(jj)所述重链可变区包含SEQ ID NO：37的氨基酸26-33(CDR1)、51-58 (CDR2)和97-114(CDR3)，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO：27的氨基酸 27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)。

第27项.第7-9或22项中任一项的分离的单克隆抗体，其中与包含重链可变区 (其包含SEQ ID NO：2的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和/或97-114(CDR3)) 和轻链可变区(其包含SEQ ID NO：6的氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和/ 或87-91(CDR3)的轻链可变区)的单克隆抗体相比，所述分离的单克隆抗体具有降 低的自身反应性，其中包含所述重链可变区的抗体特异性结合HIV-1的gp120，并且 其中所述抗体是中和抗体。

第28项.第10-12项的分离的单克隆抗体，其中

(a)所述重链可变区包含SEQ ID NO：38的氨基酸26-33(CDR1)、51-58 (CDR2)和97-114(CDR3)，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO：6的氨基酸27-30 (CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)；

(b)所述重链可变区包含SEQ ID NO：38的氨基酸26-33(CDR1)、51-58 (CDR2)和97-114(CDR3)，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO：9的氨基酸27-30 (CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)；

(c)所述重链可变区包含SEQ ID NO：38的氨基酸26-33(CDR1)、51-58 (CDR2)和97-114(CDR3)，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO：7的氨基酸27-30 (CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)；

(d)所述重链可变区包含SEQ ID NO：38的氨基酸26-33(CDR1)、51-58 (CDR2)和97-114(CDR3)，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO：8的氨基酸27-30 (CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)；

(e)所述重链可变区包含SEQ ID NO：38的氨基酸26-33(CDR1)、51-58 (CDR2)和97-114(CDR3)，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO：27的氨基酸27-30 (CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)；

(f)所述重链可变区包含SEQ ID NO：39的氨基酸26-33(CDR1)、51-58 (CDR2)和97-114(CDR3)，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO：6的氨基酸27-30 (CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)；

(g)所述重链可变区包含SEQ ID NO：39的氨基酸26-33(CDR1)、51-58 (CDR2)和97-114(CDR3)，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO：9的氨基酸27-30 (CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)；

(h)所述重链可变区包含SEQ ID NO：39的氨基酸26-33(CDR1)、51-58 (CDR2)和97-114(CDR3)，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO：7的氨基酸27-30 (CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)；

(i)所述重链可变区包含SEQ ID NO：39的氨基酸26-33(CDR1)、51-58 (CDR2)和97-114(CDR3)，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO：8的氨基酸27-30 (CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)；

(j)所述重链可变区包含SEQ ID NO：39的氨基酸26-33(CDR1)、51-58 (CDR2)和97-114(CDR3)，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO：27的氨基酸27-30 (CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)。

第29项.一种分离的单克隆抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，其中所述 抗体的重链可变区包含SEQ ID NO:40的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和/ 或97-114(CDR3)，其中所述抗体特异性结合HIV-1的gp120，并且其中所述抗体是 中和抗体。

第30项.第3项的分离的人单克隆抗体，其中所述抗体的重链区包含SEQ ID NO:40的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3)。

第31项.第1项的分离的单克隆抗体，其中所述重链可变区包含以下之一：

(a)SEQ ID NO:40的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和/或97-114 (CDR3)，其中X₁为I，X₂为H，X₃为S并且X₄为T；或

(b)SEQ ID NO:40的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和/或97-114 (CDR3)，其中X₁为I，X₂为H，X₃为N并且X₄为T。

第32项.第1项的分离的单克隆抗体，其中所述重链可变区包含以下之一：

(a)SEQ ID NO:40的氨基酸26-33(CDR1)，51-58(CDR2)和97-114(CDR3)， 其中X₁为I，X₂为H，X₃为S并且X₄为T；或

(b)SEQ ID NO:40的氨基酸26-33(CDR1)，51-58(CDR2)和97-114(CDR3)， 其中X₁为I，X₂为H，X₃为N并且X₄为T。

第33项.第1-4项任一项的分离的单克隆抗体，其中所述抗体的重链可变区包 含SEQ ID NO:40。

第34项.第1-5项任一项的分离的单克隆抗体，其中所述抗体的重链可变区包 含以下之一：

(a)SEQ ID NO:40，其中X₁为I，X₂为H，X₃为S并且X₄为T；

(b)SEQ ID NO:40，其中X₁为I，X₂为H，X₃为N并且X₄为T；

(c)SEQ ID NO:40，其中X₁为V，X₂为H，X₃为S并且X₄为A；或

(d)SEQ ID NO:40，其中X₁为V，X₂为H，X₃为N并且X₄为A。

第35项.第1-18项任一项的分离的单克隆抗体，其中所述抗体的轻链可变区包 含SEQ ID NO:41的氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)，其中 X₁为E或无氨基酸，X₂为I或无氨基酸，其中X₃为T或I，X₄为W或S，X₅为N或 T，X₆为V或Q，并且X₇为I或N。

第36项.第1-7项任一项的分离的单克隆抗体，其中所述抗体的轻链可变区包 含以下之一：

(a)SEQ ID NO:41，其中X₁为E，X₂为I，X₃为I，X₄为W，X₅为N，X₆为V，并且X₇为I；

(b)SEQ ID NO：41，其中X₁为无氨基酸，X₂为无氨基酸，X₃为I，X₄为W， X₅为N，X₆为V，并且X₇为I；

(c)SEQ ID NO：41，其中X₁为无氨基酸，X₂为无氨基酸，X₃为I，X₄为W， X₅为T，X₆为V，并且X₇为I；

(d)SEQ ID NO：41，其中X₁为E，X₂为I，X₃为T，X₄为S，X₅为T，X₆为 Q，并且X₇为N；

(e)SEQ ID NO：41，其中X₁为E，X₂为无氨基酸，X₃为T，X₄为S，X₅为T， X₆为Q，并且X₇为N；

(f)SEQ ID NO：42；

(g)SEQ ID NO：43；或

(h)SEQ ID NO：44。

第37项.第1-36项任一项的分离的单克隆抗体，其中所述抗体是IgG、IgM或 IgA。

第38项.第1-36项任一项的分离的单克隆抗体，其中所述抗体是人的。

第39项.第1-38项任一项的分离的单克隆抗体的分离的抗原结合片段。

第40项.第39项的分离的抗原结合片段，其中所述片段是Fab片段、Fab′片段、 F(ab)′₂片段、单链Fv蛋白(scFv)或二硫键稳定的Fv蛋白(dsFv)。

第41项.第40项的分离的抗原结合片段，其中所述抗原结合片段是Fab或scFv 片段。

第42项.第1-41项任一项的分离的单克隆抗体，或其抗原结合片段，其中所述 抗体或抗原结合片段是被标记的。

第43项.第42项的分离的单克隆抗体或抗原结合片段，其中所述标记物是荧光 标记物、酶促标记物或放射性标记物。

第44项.一种组合物，其包含治疗有效量的第1-38项的抗体，或其抗原结合片 段，以及可药用的载体。

第45项.一种分离的核酸分子，其编码第1-38项任一项的单克隆抗体或编码所 述单克隆抗体的抗原结合片段。

第46项.第32项的分离的核酸分子，其包含SEQ ID NO：11-16或37所示的核 酸序列、表2或表3所示的核酸序列，或其部分。

第47项.第45项或第46项之一的分离的核酸分子，其与启动子可操作地连接。

第48项.一种表达载体，其包含第45-47项任一项的分离的核酸分子。

第49项.一种分离的宿主细胞，其是用第45-48项任一项的核酸分子或载体转 化的。

第50项.一种检测受试者中人免疫缺陷病毒(HIV)-1感染的方法，所述方法包 括：

使来自所述受试者的生物样本与至少一种第1-37项的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段中接触；和

检测与所述样本结合的抗体，

其中存在与所述样本结合的抗体表明所述受试者具有HIV-1感染。

第51项.第50项的方法，其中所述分离的人单克隆抗体是被直接标记的。

第52项.第50或51项的方法，还包括：

使所述样本与特异性结合所述分离的人单克隆抗体的第二抗体接触；和

检测所述第二抗体的结合，

其中与所述第二抗体与对照样本的结合相比，所述第二抗体与所述样本的结合的增加检测出所述受试者中存在HIV-1感染。

第53项.一种预防或治疗受试者中人自身免疫缺陷病毒(HIV)-1感染的方法， 所述方法包括给予所述受试者治疗有效量的至少一种第1-38项任一项的抗体、其抗原 结合片段、编码所述抗体的核酸、和/或编码所述抗原结合片段的核酸，从而预防或治 疗所述HIV-1感染。

第54项.第53项的方法，其中所述方法是治疗HIV-1感染的方法，并且其中所 述受试者患有获得性免疫缺陷综合征(AIDS)。

第55项.第53或54项的方法，还包括给予所述受试者抗病毒剂。

第56项.第53-55项任一项的方法，还包括测量所述受试者中的HIV-1病毒滴 度。

第57项.一种组合物，其包含治疗有效量的第44-47项的核酸或第48项的载体， 以及可药用载体。

提供下述实施例以举例说明一些具体的特征和/或实施方案。这些实施例不应被理 解为将本公开内容限定为所述的具体特征或实施方案。

实施例

实施例1-方法和结果的综述

1.VRC07的鉴定。

从来自北美的未经治疗的病情发展缓慢的45号患者中克隆VRC01。假设该患者 的血液可含有相关但更有效的抗体。为了进一步探究抗体组(antibodyome)，使用深 度测序(454焦磷酸测序)来扩增并分析免疫球蛋白G(IgG)的重链和轻链的可变区。 鉴定出了VRC07重链，其看起来是VRC01的克隆相关物(clone relative)，但是有16 个氨基酸的差异并且在CDRH3中含有4个氨基酸插入片断。当对来自外周血单核细 胞(PBMC)的重链和轻链一起进行测序时，没有发现天然的VRC07的轻链。因此， 将VRC07与VRC01轻链成对进行测试。最初的中和筛选显示，VRC07比VRC01更 加有效，并且能够中和许多VRC01耐受的株系。在181种病毒的筛选中(包含一组 18种VRC01耐受的病毒)，VRC07能够以小于50μg/ml的IC₅₀中和91％的病毒，并 且能够以小于1μg/ml的IC₅₀中和72％的病毒。VRC07的平均IC₅₀为O.11μg/ml，与 其前体相比提高2.8倍，并且能够中和许多VRC01耐受的株系。

2.合理的基于结构的优化。

初始优化：增加与gp120的接触面积。虽然野生型VRC07是高度有效并且与 VRC01相比表现出显著增加，然后又进行了研究来将VRC07改造为与VRC01相比至 少10倍的中和能力提高。使用生物化学和结构/功能方法两者来改进VRC07。

对所有gp120接触残基的丙氨酸扫描揭示出一个明确的热点：重链Gly54突变为Ala导致与gp120的结合增加至7倍。将大的疏水的或带电荷的残基(Arg，Trp，Phe，Tyr) 置换到VRC07的位置54_HC中。全部都增加了中和宽度和效能，并且与VRC07相比， Gly54_HCTrp突变使中和效能增加4.8倍(与VRC01相比约13倍的增加)。Diskin et al. (Science 2011)发现VRC01相关抗体(NIH4546)中的Gly54_HCTrp突变效能增加约 10倍。用更大的疏水性残基替代Gly使得所述抗体的CDRH2能够进入gp120上的腔 (cavity)中，增加了所述分子之间的总接触面积，因而增加了总相互作用的强度。

对于向人给药，抗体不应该具有自身反应性(即，不与人抗原结合)。许多测定可用于体外自身反应性的测试，所述测定包括基于ELISA的抗-心磷脂测定、基于 Luminex的抗-核抗原(ANA)测定，以及被认为是黄金标准的ANA细胞染色测定。 不幸的是，VRC07Gly54_HCTrp被证实在所有三种测定中都是高度的自身反应的。事实 上，所有四种测试的G54_HC变体(Trp，Arg，Tyr，Phe)都是高度的自身反应性的，表明 对于人类使用而言，这些变体并不是优选的，但是它们可用作诊断剂。

其他结构导向的重链优化。首先，解析与gp120复合的VRC07的结构。使用VRC01、VRC07的结构和来自于丙氨酸扫描的生物化学数据来鉴定对实验操作来说关键的残 基。

由于位置54_HC在增加与gp120的接触面积方面具有潜在的重要性，因此决定完全摧毁该残基并测试每个可能的氨基酸置换。由于已经确定许多G54_HC残基都是高度的 自身反应性的(参见上文)，因此对每种所得抗体都进行自身反应性的筛选。与VRC07 相比，位置54上的His使中和作用增加了约2.5倍(与VRC01相比约7倍)，并且在 初始分析中不是自身反应性的。

所述重链中的位置58也是目的位置。在初始分析中，Ser58_HC至Asn的突变使中 和效能增加了1.5倍(与VRC01相比约4.2倍)。在VRC01、VRC03和NIH4546(VRC01 和VRC07的所有克隆相关物)中，残基58_HC都是Asn，但是在VRC07中位置58_HC则是Ser。

轻链的结构导向的优化：N末端修饰。对所述轻链的gp120接触残基的丙氨酸扫 描表明，Val3_LC至Ala的突变导致结合增加4倍。另外，所解析的VRC01和VRC07 的晶体结构并未解析出所述轻链的最靠近N末端的2个残基(VRC01)或1个残基 (VRC07)，这表明这些残基未在所述抗体中或未与gp120形成关键接触。对VRC01 轻链的NH₂-末端结构域进行了修饰，包括氨基酸#1_LC-4_LC的缺失以及Ala和Gly置换。 两个氨基酸的缺失导致约2.5倍的效能增加(与VRC01相比约7倍的增加)。

3.其他优化。

种系回复(Germline reversions)以降低免疫原性。VRC01、VRC07和相关抗体是高度的体细胞(somatically)突变的。已经确定了VRC07可以在保留效能和广谱程度 的同时被回复(revert)到其种系。减少体细胞突变可以降低分子的体内免疫原性。在 所述重链中所述体细胞突变降低了一半(44％至22％)并且在所述轻链中降低了三分 之一(29％至19％)，并且成熟残基被反复地添加回来(add back)。所有回复突变都在 框架区内。大多数种系回复能够保留基本功能，例如gp120结合，但是它们不能具有 与所述成熟VRC07一样的效能和/或广谱。值得注意的是，在所述重链中鉴定的三种 种系突变(Arg3_HCGln、Ile37_HCVal、Thr93_HCAla)使效能增加12倍(与VRC01相比 约3.3倍)。值得注意的是，使效能增加约1.5倍的Ser58_HCAsn也是种系回复突变。

轻/重界面优化：增强轻链和重链之间的相互作用能够增加分子的稳定性，这可以增强中和效能。使用合理的基于结构的设计和生物信息学方法，设计了四个轻链突变 体以增强与所述重链的结合。尽管这些轻链增加了中和效能，但是它们是自身反应性 的并且尚未被开发。这证明了通常无法预测哪种合理的设计和生物信息学方法将会取 得成功。

可溶性的优化和聚糖的消除。除了仅设计用于增加中和潜能的突变之外，对影响大规模的蛋白质制备的参数进行优化。解决了2个方面：增加可溶性和减少聚糖。糖 基化产生更多的异质产物，这些异质产物虽然不必然对生产有害，但是确实使纯度分 析复杂化。令人惊奇的是，发现删除所述轻链位置72_LC上的N连接的糖基化位点 (Asn72_LCThr突变)，使效能增加1.2倍。在溶剂暴露面上含有4个突变残基(疏水至 亲水突变)并且同样删除了位置72_LC上的N连接的糖基化位点的可溶性突变体轻链 (VRC01hpL02)，也使中和作用增加约1.2倍(与VRC01相比约3.3倍)。

增加半衰期的突变。为了优化体内半衰期，将LS突变加入到FcRn受体结合区域 中(Zalevsky，et al.，Nature Biotechnology 2010)。该突变对中和广谱程度或效能没有影响，但是在人源化小鼠和非人灵长类中使所述抗体的半衰期增加2-3倍。

4.结合突变。

已经对多于200个工程改造的VRC07变体进行了测试。用含有6-12种病毒的病 毒组对大多数变体都进行了中和潜能的分析，并对一个亚组进行了自身反应性测试。 基于这些结果，鉴定出了特别值得注意的四条重链和五条轻链。对于重链，鉴定出 Ser58_HCAsn突变、2个种系突变(Ile37_HCVal和Thr93_HCAla)和Gly54_HCHis突变的组 合。与野生型VRC07相比，这些突变的组合可以使效能增加最高达4.5倍(与VRC01 相比约12.5倍)。

另外，在轻链上也将突变组合在一起，包括位置Phe97_LC上的置换、可溶性置换(VRC01hpL02、VRC01hpL03、VRC01hpL04、VRC01hpL05、VRC01hpL06)和具有 N末端修饰(Glul_LC的缺失、Val3_LC的Ile3_LC置换)的聚糖突变体(Asn72_LCThr)的 组合。这些突变可以导致效能达到3倍增加(与VRC01相比约8.5倍增加)。

与亲本VRC07相比，组合可导致约5倍的增加，其与VRC01相比为约15倍的增 加。VRC07重链为：

与所述VRC07重链配对的轻链可变区包含：

因此，合理的、基于结构/功能的设计被用来改造效能为VRC01的10倍的抗体。 结合突变和种系回复的组合使重链效能增加，例如与VRC07相比最高达4.5倍。与 VRC07相比，NH₂-末端修饰与聚糖缺失和可溶性突变的联合使轻链效能增加3倍。由 于VRC07的效能是VRC01的2.8倍，因此这可导致与VRC01效能相比，高于10倍 的增加阈值(计算为38倍)。

对抗体进行的许多操作会导致自身反应性。通常，发现许多最有效的修饰(包括Gly54_HCTrp和轻-重界面突变)导致自身反应性。尚未确立一种方法用来通过生物信息 学预测自身反应性，因此必须凭经验确定自身反应性。具有增加的自身反应性的抗体 可用于诊断测定，但是也可能会被用作治疗剂。

可以在开发早期对所有抗体进行三种自身反应性测定。上文所述的预测的效能增加包括被证明不是自身反应性的突变。所公开的抗体可与其他抗体联合使用，目的是 在使病毒逃逸的可能性最小化的同时，增加效能和广谱程度、从而增加功效。

实施例2-人单克隆HIV-1 gp120特异性中和抗体的鉴定

以下方法用于分离VRC07、VRC07b和VRC07c人单克隆抗体(参见图1-5)。分 离了所述VRC07抗体的重链以及所述VRC07b和VRC07c抗体的重链和轻链。

如以下方法中所述的，用Env假病毒的综合组评估所述VRC07抗体(与VRC01 轻链(SEQ ID NO：9)和IgG恒定区配对的VRC07重链(SEQ ID NO：2))的中和效 能和广谱程度(参见图6和7)。这190个病毒株系代表所有主要的流行的HIV-1遗传 亚型(进化枝)并包括来源于HIV感染的急性或慢性期的病毒。如图7所示，VRC07 中和这些假病毒中的92％，几何平均IC50值为0.114μg/ml。

材料和方法

人样本。用HIV-1进化枝B病毒感染供体45的外周血单核细胞(PBMC)，从所 述外周血单核细胞中分离了单克隆抗体(mAb)VRC01、VRC02、VRC03。所述供体 已经被进化枝B病毒感染超过15年，并且其病情进展缓慢，其CD4 T细胞计数多于 500个细胞/μl，血浆HIV-1 RNA值小于15,000个拷贝/ml。他已经是慢性感染的，并 且在PBMC采样时尚未开始进行抗逆转录病毒的治疗。所有人样本都是在具有知情许 可并以经适当的伦理委员会(IRB)批准的临床方案采集的。

用于454焦磷酸测序的样品制备。简言之，从2千万个PBMC中将mRNA提取 至200μl的洗脱缓冲液(Oligotex试剂盒，Qiagen)中，然后通过使洗脱液离心穿过30 kD微米过滤器(Millipore)来将其浓缩为10-30μl。在一个或多个35μl-反应体系中 进行反转录，每个反应体系由13μl的mRNA、3μl的0.5μg/μl的oligo(dT)12-18(SEQ ID NO：49)(Invitrogen)、7μl的5×第一链缓冲液(Invitrogen)、3μl的RNase Out (Invitrogen)、3μl的0.1M DTT、3μl的dNTP混合物(每种10mM)和3μl的SuperScript II(Invitrogen)组成。将反应体系在42℃下孵育2小时。将来自每个样品的cDNA合 并、清理并在20μl的洗脱缓冲液(NucleoSpinExtract II试剂盒，Clontech)中进行洗 脱。以这种方式，1μl cDNA差不多为来自1百万个PBMC的转录物的等量物。使用 5μl cDNA作为模板(来自5百万个PBMC的转录物的等量物)，使用总体积为50μl 的Platinum Taq DNA聚合酶高保真系统(Invitrogen)进行免疫球蛋白基因特异的PCR。 反应混合物由水、5μl的10×缓冲液、2μl的dNTP混合物(每种10mM)、2μl的25 μM的MgSO₄、1μl的25μM的每种引物和1μl的Platinum Taq DNA高保真聚合酶 组成。用于VH1基因扩增的正向引物为5’L-VH1， 5’ACAGGTGCCCACTCCCAGGTGCAG3’(SEQ ID NO：17)；5’L-VH1#2， 5’GCAGCCACAGGTGCCCACTCC3’(SEQ ID NO：18)；5’L-VH1-24， 5’CAGCAGCTACAGGCACCCACGC3’(SEQ ID NO：19)；5’L-VH1-69， 5’GGCAGCAGCTACAGGTGTCCAGTCC3’(SEQ ID NO：20)；反向引物为3’Cγ-CH1， 5’GGGGGAAGACCGATGGGCCCTTGGTGG3’(SEQ ID NO：21)和3’Cμ-CH1， 5’GGGAATTCTCACAGGAGACGA3’(SEQ ID NO：22)。PCR初始在95℃下进行2min， 接着进行25个如下的循环：95℃持续30sec、58℃持续30sec和72℃持续1min； 循环结束后72℃持续10min。将预期大小(450-500bp)的PCR产物进行凝胶纯化 (Qiagen)，接着用苯酚/氯仿进行提取。

454文库制备和焦磷酸测序。使用Qubit^TM(Life Technologies，Carlsbad，CA)对PCR产物进行定量。末端修复之后，通过连接反应加入454衔接体。使用KAPA BiosystemsqPCR系统(Woburn，MA)和KAPA系统中提供的454标准物来确定文库 浓度。在GS FLX测序仪(Roche-454 Life Sciences，Bradford，CT)上使用制造商建议 的方法和试剂进行对PCR产物的454焦磷酸测序。在GS FLX仪上进行最初的图像采 集，在脱机Linux机群上使用454应用软件(版本2.5.3)进行随后的信号处理、质量 过滤以及核酸序列生成和质量评分。基于制造商的推荐(Roche-454 Life Sciences Application BriefNo.001-2010)调整扩增子质量过滤参数。使用整合到454应用软件 中的方法对每个核苷酸计算质量得分，以将流图(flowgram)强度值转化为基于Phred 的质量得分。通过分析包含在454测序试剂中的内参序列来评估每次运行的质量。生 成对内参和样品的PicoTiterPlate(PTP)的每个区域的报告。

454焦磷酸测序确定的抗体组的生物信息学分析。已经开发了一种用于处理和分析454焦磷酸测序确定的抗体组的通用生物信息学流水线(pipeline)。每个处理步骤 中产生的信息用于表征抗体组的基本特性以及用于鉴定可能的中和抗体序列以用于确 认功能。具体地，对每个序列读段(read)进行以下操作：(1)改换格式和用独特的 索引号进行标记；(2)使用IgBLAST将其归为可变(V)基因家族和等位基因，淘汰 E值＞10^-3的序列；(3)使用核苷酸序列和在CLUSTALW2中执行的总体比对模块将 其与种系V基因和已知的VRC01样抗体进行比较，这提供了用于相同/差别-网格分析 (identity/divergence-gridanalysis)的基础(从相同/差别图中鉴定VRC07重链序列)； (4)对其进行基于模板的误差校正方案，其中基于与种系序列的比对来检测和校正V 基因中的454同聚体误差；(5)将其翻译为氨基酸序列，进一步将该氨基酸序与已知 的VRC01样抗体进行比较；(6)使用可变区序列中特征性序列基序对其进行过滤， 所述基序例如N末端的QVQ(或其他可能的三联体(triplets))、V区域末端的CAR (或其他可能的三联体)、CDR H3末端的WGXG和可变区的C末端的VSS(或其他 可能的三联体)。作为任选的步骤，可以通过指认(threading)来评估来自454焦磷酸 测序的重链或轻链序列与已知VRC01样抗体/gp120复合物结构的结构相容性。

通过荧光激活细胞分选术(FACS)进行抗原特异性记忆B细胞的分离。对Avi 标记的RSC3和RSC3进行表达、纯化并使用生物素连接酶Bir A(Avidity，Denver，CO) 生物素化。然后将所述蛋白与链霉亲和素-荧光染料试剂缀合，对于RSC3为链霉亲和 素-别藻蓝素(SA-APC)(Invitrogen)，对于ΔRSC3为链霉亲和素-藻红蛋白(SA-PE) (Sigma)。将约2千万个供体PBMC用RSC3-APC、ΔRSC3-PE和抗体混合物进行染 色，所述抗体混合物由抗-CD3-APC-Cy7(BD Pharmingen)、CD8-Qdot705(VRC)、 CD19-Qdot585(VRC)、CD20-Pacific Blu(VRC)、CD27-APC-AlexaFluor700(Beckman Coulter)、CD14-Qdot800(VRC)、IgG-FITC(BDPharmingen)和IgM-PE-Cy5(BD Pharmingen)组成。此外，使用aqua blue(Invitrogen)排除死细胞。将被染色的PBMC 用PBS洗涤，然后使用改良的3-激光FACSAria细胞分选仪以FACSDiva软件(BD Biosciences)对其进行分析和分选。将具有CD3-、CD8-、aqua blue-、CD14-、CD19+、 CD20+、IgG+、IgM-、RSC3+和ΔRSC3-表型的单细胞分选到每孔含有20μl的裂解缓 冲液的96孔PCR板中。裂解缓冲液含有0.5μl的RNase Out(Invitrogen)、5μl的5× 第一链缓冲液(Invitrogen)、1.25μl的0.1M的DTT(Invitrogen)和0.0625μl的Igepal(Sigma)。将具有分选的细胞的PCR板保存在-80℃下。将通过分选仪传递的供体 PBMC样品的全部信息保存在FCS文件中，用于使用FlowJo软件(TreeStar，Cupertino， CA)进行进一步的分析。使用RSC3+单个B细胞分选来分离VRC07b和VRC07c抗 体。

单个B细胞免疫球蛋白基因扩增和克隆。将具有单个B细胞RNA的冷冻板在室 温下解冻，然后通过向每孔中加入3ul的150ng/μl的随机六聚物(Gene Link， Hawthorne，NY)、2μl的dNTP混合物(每种10mM)和1μl的SuperScript III(Invitrogen) 进行反转录。反转录的热循环为42℃持续10min、25℃持续10min、50℃持续60min 和94℃持续5min。将cDNA板保存在-20℃下，通过巢式PCR独立地扩增IgH、Igκ 和Igλ可变区基因，所述PCR是5μl的cDNA作为模板开始。所有的PCR都在96孔 PCR板中进行，总体积为50μl，包含以下物质：水、5μl10×缓冲液、1μl dNTP混 合物(每种10mM)，1μl 25mM的MgCl₂(Qiagen，Valencia，CA)(用于第一轮PCR) 或10μl 5×Q-SOLUTION^TM(Qiagen)(用于第二轮PCR)、每个方向使用浓度为25μM 的1μl的引物或引物混合物，以及0.4μl HOTSTAR^TM Taq DNA聚合酶(Qiagen)。每 一轮PCR反应以94℃持续5分钟起始，然后是50个循环(94℃持续30秒，58℃(对 于IgH和Igκ)或60℃(对于Igλ)持续30秒，72℃持续1分钟)接下来是72℃持续 10分钟。仔细挑选阳性第二轮PCR产物，用于使用正向和反向PCR引物进行直接测 序。使用含有独特的限制性消化位点的定制引物，从第一轮PCR中再扩增产生大量IgH、 Igκ或Igλ重排序列的PCR产物，之后将所述PCR产物克隆至相应的Igγ1、Igκ和Igλ 表达载体中。通过使用等量的成对重链和轻链质粒共转染293F细胞来表达全长IgG1， 并用重组体蛋白A柱(GE Healthcare)进行纯化。

IgG基因家族分析。可变区的IgG重链和轻链核苷酸序列是用

分析包(从National Institute of Allergy and Infectious Disease，Bethesda，MD获得)和 IMGT/V-Quest(INTERNATIONAL IMMUNOGENETICS INFORMATION

Brochet，etal.，Nucl.Acids Res.，36：W503-508，2008))来分析。通过与主要2pI1.2IGK 基因座中的种系基因的同源性来确定VRC mAb V_K基因的用途。通过与在主要 14q32.33 IGH基因座中的基因的同源性来确定VRC mAb D基因的用途。在V至J之 间的距离，将连续匹配长度与+1/-2.02得分算法的组合用来确定IGHD比对和突变序 列中的VD与DJ连接(junction)。基于VDJ基因用途、替换的相似性和沉默突变以 及CDR3同一性对免疫球蛋白的重排进行分类。

抗体表达和纯化。各自合成编码VRC07b和VRC07c的重链和轻链以及VRC07 重链的基因，并将其各自克隆(GeneImmune，Gaithersburg，MD)到含有IgG1恒定区 的CMV/R表达载体中。VRC07重链与VRC01轻链配对。VRC07b和VRC07c重链与 相应的VRC07b或VRC07c轻链配对。通过使用293fectin(Invitrogen，Carlsbad，CA) 在293F细胞(Invitrogen)中进行的瞬时转染来产生全长IgG，所述293F细胞保存在 无血清自由式培养基(Invitrogen)中。转染后5-6天收集培养物上清，过滤通过0.22 μm过滤器，然后使用重组体蛋白A柱(GEHealthcare)进行IgG1纯化。

中和测定。中和测定是基本上如以前所描述进行(参见，例如PCT公开号 WO2011/038290)。简言之，使用Fugene 6转染试剂(Invitrogen)，用10μg rev/env表达 质粒和30μgenv-缺陷HIV-1骨架载体(pSG3ΔEnvelope)转染293T细胞(在T-175培养 瓶中的50ml生长培养液中的6×10⁶个细胞)来制备HIV-1 Env假病毒。转染两天后收 集含有假病毒的培养物上清，过滤(0.45μm)，保存于-80℃下或液氮的蒸气相11中。 如以前所述(参见，例如，PCT公开号WO2011/038290)使用HIV-1 Env-假病毒感染 TZM-bl细胞以测量中和作用。在96孔平底培养板的两个孔中将病毒与10μl系列稀 释的抗体在37℃下孵育30分钟。为保持测定条件恒定，在指定的对照孔中用作为对 照的培养基代替抗体。病毒输入设定为约0.01的感染多重性，这通常在荧光素酶测定 (Bright Glo，Promega，Madison，WI)中产生100,000至400,000相对光单位(relative light unit；RLU)。抗体浓度在与病毒上清孵育时定义。中和曲线是用5-参数hill slope方程 通过非线性回归方式拟合。50％和80％抑制浓度(IC50和IC80)被报告为分别代表抑制 50％和80％的感染所需要的抗体浓度。

实施例3-gp120特异性单克隆抗体的优化

基于结构的分析用于鉴定能够增加VRC07抗体的效能和广谱程度的修饰(参见图9)。对与VRC01轻链互补的VRC07重链(VRC07H/VRC01L)进行的晶体结构分析 用于鉴定可能会优化gp120亲和力和中和作用的氨基酸置换(参见图10)。基于该分 析，产生了一些氨基酸置换，并就VRC07重链进行了测试，所述突变包括G54L、G54F、 G54R、G54W和G54Y置换(指Kabat定位；参见图11)。还通过另外纳入I30Q、I30R 或S58N置换来测试双置换(参见图11)。使修饰的VRC07重链与VRC01轻链互补， 并且表达、纯化新抗体，并且通过表面等离子体共振(图10)和ELISA(图12A-12B) 测定来测试新抗体对HIV-1 gp120蛋白的亲和力。还进行了另外的ELISA分析，以检 测与VRC01或VRC07轻链互补的一些不同的VRC07重链修饰物的gp120结合(参 见图13；图13所示的蛋白的序列信息可见于本文，参见表2和3)。在这些测试的修 饰物中，具有I30R、I30Q或/和S58N突变的VRC07H(G54W)显示出至少与单独的 VRC07H(G54W)相当的或更好的亲和力。还测试了含有这些特定的VRC07H/VRC01L 修饰的抗体中和HIV-1病毒组的能力(参见图14)。如实施例1所述进行ELISA和中 和测定。这些发现表明，某些VRC07重链氨基酸置换能够增加该单克隆抗体针对这 组所测试的HIV-1病毒的效能和广谱程度。

实施例4-gp120结合和HIV-1中和作用

测试了一系列单克隆与多种gp120同工型的结合以及其对一组HIV-1病毒的中和作用。具体的单克隆抗体示于图15、16和17。首先通过ELISA检查所述一系列的单 克隆抗体与gp120蛋白的结合(参见图15A-15LL)。此外，测试了这些单克隆抗体中 和HIV病毒的能力(参见图16)。如实施例1所述进行ELISA和中和测定。

部分种系回复的设计和构建。使用CDR移植和部分种系回复突变来设计基于VRC01、NIH4546和VRC07的重链和轻链。使用结构/功能分析和反复测试的方法来 确定哪些残基在回复至种系的同时能够保留与gp120的结合。将不同的重链和轻链组 合以产生重组IgG分子。简言之，将重链和轻链转染到293F细胞中。6天后，从细胞 上清中收集抗体，使用G蛋白进行纯化，并在ELISA中测试与gp120的结合。选择 筛选的抗体(select antibody)用于进行针对一组7-12种HIV-1的中和作用分析(参见 图16)。

优化的、部分回复的VRC01、NIH4546和VRC07抗体对HIV-1的中和作用。测 试了筛选的抗体对一组7-12种HIV的中和作用(参见图16)。列出了抗体、所述重链 和轻链与种系之间的差异的百分数、IC50值(μg/ml)、广谱程度和效能。所述中和效 能是与VRC01进行比较。选择了三种优化策略：(A)重链中位置54上的突变已经被 证明能够增加结合以及中和作用广谱程度和效能。在筛选的抗体中测试了G54F/W/Y 突变。与野生型抗体相比，这些突变普遍改善了效能和/或广谱程度。例如，成熟的 VRC07 G54W的效能是VRC07的两倍多，是成熟VRC01的8倍多。当将所述G54F/W/Y 突变加入到部分种系回复抗体中时，15种测试的抗体中有13种抗体的效能高于成熟 VRC01的效能。(B)VRC01轻链含有N连接的糖基化位点。糖基化能够产生异质产 物，应该在临床级的制剂中避免它的出现。用VRC07 G54W重链测试了五种轻链突变 体(N72E/F/S/T和T74I)。VRC01LN72F具有所述突变体中最高的效能。(C)将G54 突变引入VRC07降低了所述蛋白的可溶性。设计了一组增加可溶性的突变体 (VRC07_hp_H01、VRC07_hp_L01和VRC07_hp_L02)。与亲本VRC07 G54W抗体相 比，VRC07 G54W和VRC07_hp_L02具有增加的效能。

实施例5-VRC01重链的丙氨酸扫描

使用基于结构的分析来选择VRC01重链或轻链氨基酸残基用于丙氨酸置换，以观察相应的氨基酸与VRC01和gp120的结合之间的关联性(参见图18)。基于该分析， 使用标准分子生物学技术产生编码所选择的VRC01丙氨酸突变体的表达载体(示于 图19A-19C，参照Kabat编号)。使所述修饰的VRC01重链和轻链与相应的重链或轻 链(未修饰的)互补，并表达、纯化新的抗体，测试所述抗体对所示的HIV-1 gp120 蛋白的结合亲和力。该技术基于使用FORTEBIO OCTET RED384^TM系统的生物膜层光 学干涉技术(BioLayer InterferometryTechnology；BLI)。结果表明，对特定的VRC01 重链和轻链残基的修饰可以改变VRC01对gp120的结合亲和力。具体地，VRC01重 链中的G54A置换使VRC01与gp120的结合亲和力增加了约一个数量级。

实施例6-特异性针对gp120的HIV-1单克隆中和抗体用于检测受试者中HIV-1

本实施例描述了特异性针对gp120的HIV-1单克隆中和抗体用于检测受试者中HIV-1的用途。本实施例还描述了这些抗体用于确认受试者中HIV-1的诊断的用途。

从诊断患有或者疑似患有HIV-1感染的患者中获得生物样本，例如血液样本。从未感染患者采集的血液样本被用作对照。进行ELISA以检测所述血液样本中HIV-1的 存在情况。根据本领域中熟知的方法(参见，例如Robinson et al.，Lancet 362：1612-1616， 2003，其以引用的方式纳入本文)，将存在于所述血液样本(所述患者样本和对照样本) 中的蛋白固定在一个固体载体上，例如96-孔板中。固定之后，将使用荧光标记物直 接标记的特异性针对gp120的HIV-1单克隆中和抗体应用至固定有所述蛋白的板中。 将所述板用合适的缓冲液例如PBS冲洗以去掉未结合的抗体并使抗体的非特异性结合 最小化。可以根据标准方法使用荧光测定平板读数器检测荧光。与对照样本相比，所 述患者样本的荧光强度的增加表明gp120抗体特异性结合来自所述血液样本的蛋白， 从而检测所述样品中HIV-1蛋白的存在。检测到所述患者样本中的HIV-1蛋白表明所 述患者具有HIV-1或者确认所述受试者患有HIV-1的诊断。

实施例7-特异性针对gp120的HIV-1单克隆中和抗体用于治疗HIV-1

本实施例描述了可用于通过给予一种或多种人gp120特异性中和mAb治疗人受试者中HIV的具体方法。尽管提供了具体的给药的方法、剂量和方式，但是本领域技术 人员可以理解，可以在没有实质性影响所述治疗的情况下做出改变。

基于本文公开的教导，可以通过给予治疗有效量的一种或多种本文描述的中和mAb，从而减少或消除HIV感染来治疗HIV-1。

筛选受试者 在具体的实施例中，首先对受试者进行筛选以确定他们是否患有HIV。 可用于筛选HIV的方法的实例包括测量受试者的CD4+ T细胞计数和血清血液水平中的HIV水平的组合。其他的使用本文公开的gp120特异性mAb的方法也可被用于筛 选HIV。

在一些实施例中，HIV测试包括用酶联免疫吸附测定(ELISA)进行初始筛选以检测针对HIV(例如HIV-1)的抗体。具有无反应性的初始ELISA结果的样本被认为是 HIV-阴性，除非出现了与感染同伴或未知HIV状态的同伴的新接触。具有反应性的 ELISA结果的样本以一式两份再次测试。如果两个平行测试中有一个的结果是反应性 的，那么就将该样品记录为具有重复反应性并且经历使用更特异的补充方法(例如， 蛋白质印迹或免疫荧光测定(IFA))的确证测试。具有ELISA的重复反应性以及IFA 的阳性或蛋白质印迹的反应性的样本可认为是HIV-阳性并且表明存在HIV感染。具有 重复ELISA-反应性的样本偶尔也提供不确定的蛋白质印迹结果，这可能是受感染个体 中对HIV的不完全应答，或者是在未感染个体中的非特异性反应。IFA可以用于确认 这些不明确情况中的感染。在一些实例中，对于具有不确定的蛋白质印迹结果的受试 者，可以在超过一个月之后收集第二样本并重新检测。在另外的实例中，在一些情况 下核酸测试(例如，病毒RNA或前病毒DNA扩增方法)也可以用于帮助诊断。

受试者血液中检测到HIV表明该受试者患有HIV，是接受本文公开的治疗性组合物的候选者。此外，检测到CD4+ T细胞计数少于每微升350个(例如每微升200个 细胞)也能够表明该受试者很可能患有HIV。

在给予本文公开的治疗性组合物之前不需要进行预筛选。

受试者的预治疗 在具体的实例中，在给予治疗试剂(包括本领域技术人员已知的一种或多种抗逆转录病毒治疗药物)之前治疗所述受试者。但是，这种预治疗并不总 是必需的，可以由熟练的临床医生确定。

给予治疗性组合物 在进行受试者选择之后，将治疗有效量的本文描述的gp120特异性中和mAb给予所述受试者(例如有接触HIV的风险或者已知被HIV感染的成 年人或新生婴儿)。另外的试剂(例如抗病毒剂)也可被同时给予所述受试者或者先于 或晚于所公开的试剂的给药。给药可以通过任何本领域已知的方法完成，例如口服给 药、吸入、静脉内、肌内、腹膜内或皮下。

用于预防、减少、抑制和/或治疗HIV或与之相关的病症的所述组合物的给药量取决于所治疗的受试者、所述疾病的严重程度和所述治疗组合物的给药方式。理想情况 下，试剂的治疗有效量是足以预防、减少和/或抑制和/或治疗受试者的病症(例如HIV) 而不会在所述受试者中引起严重细胞毒性效应的量。治疗有效量可由本领域技术人员 容易地确定，例如使用确定剂量反应曲线的常规试验。因此，这些组合物可以与惰性 稀释剂或可药用载体一起配制。

在一个具体的实例中，根据HIV的具体阶段，以每两周5mg/kg或者每两周10 mg/kg给予抗体。在一个实例中，连续给予所述抗体。在另一个实例中，以50μg/kg 给予抗体或抗体片段，一周两次，持续2至3周。可以长期(例如持续数月或数年) 给予所述治疗性组合物。

评估 给予一种或多种治疗剂后，可以监测患有HIV的受试者中HIV水平的降低、增加受试者CD4+ T细胞计数或减轻一种或多种与HIV相关的临床症状。在具体的实 例中，从治疗后7天开始一次或多次分析受试者。可以使用任何本领域已知的方法对 受试者进行监测。例如，可以获取来自受试者的生物样本(包括血液)，并且评估HIV 或CD4+ T细胞水平的变化。

其他治疗 在具体的实例中，如果受试者是稳定的或者对治疗有轻微的、混合的或部分的应答，可以在用相同的程序重新评估并且准备他们以前使用的剂量以后对他 们重新治疗并持续需要的时间，包括受试者的一生。部分的应答是HIV感染、HIV复 制或其组合减少，例如至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％或至少 70％。部分的应答还可以是CD4+ T细胞计数的增加，例如至少为每微升350个T细 胞。

实施例8-VRC07 G54突变体

材料和方法

产生突变体：将位置G54突变为每种可能的氨基酸(A、C、D、E、F、H、U、 K、L、M、N、P、Q、R、S、T、V、W和Y)。将每条重链与所述VRC01轻链一起 瞬时转染到293F细胞中。5-6天后收集上清，用蛋白A和蛋白G树脂纯化IgG。

ELISA(参见图20-22)：通过ELISA测试每个所得抗体与一组gp120的结合。将 2μg/ml的重组gp120过夜包被到ELISA板上。将板用PBS-T洗涤3-5次，用1％FBS 和5％乳溶液封闭，再次洗涤。测试0.4μg/ml的VRC07 G54突变体，孵育时间1小时。 将板洗涤，并添加1：5000稀释的第二HRP-缀合的山羊抗人IgG抗体。孵育1小时后， 将板洗涤，并用TMB显影。用1M H₂SO₄终止反应，在450nm下读取光密度。

抗-心磷脂测定(ACA)(图23)：用一种临床上用于诊断自身免疫疾病的基于ELISA的试剂盒——

ACA IgG III试剂盒(INOVA Diagnostics^TM)分析每种VRC07 G54X突变体的自身反应性。对每种抗体进行测试(从100ug/ml开始三倍系 列稀释)。测定条件按照制造商的方案。

中和作用(图24)：如本专利其他地方所描述的，在TZM-bl中和测定中测试ELISA测定中具有最高结合程度的抗体。

结果

示出了每种VRC07 G54X突变体与一组gp120的ELISA结合结果：进化枝A1和 A2的共有gp120(图20)；进化枝B和C的共有序列(图21)；和gp120 Du172(一 种VRC01-耐受株系)(图22)。示出了VRC01、野生型VRC07(G54)和人IgG1阴 性对照用于比较。还使用ACA对所有抗体的自身反应性进行了测试(图23)。

自身反应性的抗体(例如结合人抗原(例如心磷脂——线粒体膜的一种组分)的抗体)用于体内用途时可能不安全。四种G54突变体(A、H、L和Q)的ELISA结 合程度高，并且在ACA测定中为阴性。在六种病毒的中和组中对这些抗体进行测试。 与野生型相比，G54H突变将中和作用提高2.3-2.5倍(分别为IC50和IC80值)(图 24)。该突变体的序列示于图25中。

实施例9-部分种系回复能够增加VRC07的效能和广谱程度

VRC01和相关抗体靶向gp120的CD4结合位点(CD4bs)，具有广谱的中和作用 和高效能，并且已经经历了高水平的体细胞超突变。为了优化这类抗体用于被动免疫 以及为了进一步理解抗体开发，将抗体回复到其推定的种系并分析对广谱程度和效能 的效应。

VRC01、VRC07和相关抗体是高度的体细胞突变的，并且它们的种系抗体不能结 合gp120或中和HIV-1。还产生了能够增加中和潜能的关键的种系回复突变。减少体 细胞突变还能够降低所述抗体的体内免疫原性。

基于VRC07的成熟和种系序列，使用基于结构/功能的分析来设计部分回复的重链和轻链。保留成熟的CDR并将框架区突变回种系序列。设计策略示于图26和27 中。图28示出了成熟的VRC07序列(sHV)和种系序列(gHV)以及很多部分种系 突变(VRC07ghvH0X.X)。方框中划出了三种非限制性的目的种系回复位置(图28)。 类似的术语用于轻链，也示于图28中。测定了筛选的抗体对一组tier 2HIV-1假型病 毒的中和作用(图29)。

体细胞突变在所述重链中降低了一半(从44％降低到19％)，在所述轻链中降低了三分之一(从29％降低到19％)，并且成熟残基被反复加回。所有回复突变都在框 架区内(图28)。大多数种系回复能够保留基本功能，例如与gp120的结合。在所述 重链中鉴定了三个种系突变(Arg3Gln、Ile37Val、Thr93Ala)，所述突变使效能增加 1.3倍(图29)。在图30的VRC07晶体结构中示出了这三个突变的位置。

实施例10-轻链的N-末端修饰

轻链gp120-接触残基的丙氨酸筛选表明，所述轻链上的Val3突变为Ala导致结合的4倍增加(图19A)。另外，所解析的VRC01和VRC07的晶体结构未解析出最靠 近N-末端的2个残基(VRC01)或1个残基(VRC07)，表明这些残基未在所述抗体 内或未与gp120形成关键接触(图31)。图32示出了VRC01轻链的N-末端结构域， 其包含氨基酸#1-4的缺失以及Ala和Gly置换。下文所示的轻链可与本文公开的任何 重链配对。

产生突变体：使用定点诱变将突变引入质粒中。将每种所得轻链与VRC07变体重链一起转染到293F细胞中。5-6天后收集上清液，用蛋白A或蛋白G树脂纯化IgG。

中和：如以前所描述(参见，例如PCR公开WO2011/038290)，在TZM-bl测定 中测试所有抗体。

结果许多不同的轻链上的2个氨基酸缺失导致约2.5倍的效能增加(图33)。其 他N-末端修饰使中和效能最高达2.8倍(图34)。

用于N-末端修饰的轻链共有序列：

其中X₁＝E、G、A、缺失；X₂＝I、G、A、缺失；X₃＝V、G、A缺失；X₄＝L、G、 A、缺失；X₅＝N、F或T

示例性组合：

(A)4种不同缺失(del-I-V-L；del-del-V-L；del-del-del-L；del-del-del-del，对应 于

i)SEQ ID NO：42，其中X₁为无氨基酸；X₂为I；X₃为V；X₄为L；并且X₅为N、 F或T；

ii)SEQ ID NO：42，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为V；X₄为L；并且 X₅为N、F或T；

iii)SEQ ID NO：42，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为无氨基酸；X₄为 L；并且X₅为N、F或T；

iv)SEQ ID NO：42，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为V；X₄为无氨基 酸；并且X₅为N、F或T；

(B)4种丙氨酸置换(与上文相同的四种组合，而用Ala替代缺失)

i)SEQ ID NO：42，其中X₁为A；X₂为I；X₃为V；X₄为L；并且X₅为N、F或 T：

ii)SEQ ID NO：42，其中X₁为A；X₂为A；X₃为V；X₄为L；并且X₅为N、F 或T；

iii)SEQ ID NO：42，其中X₁为A；X₂为A；X₃为A；X₄为L；并且X₅为N、F 或T；

iv)SEQ ID NO：42，其中X₁为A；X₂为A；X₃为V；X₄为A；并且X₅为N、F 或T；

(C)4种甘氨酸置换(与上文相同的四种组合，而用Gly替代del)

i)SEQ ID NO：42，其中X₁为G；X₂为I；X₃为V；X₄为L；并且X₅为N、F或 T；

ii)SEQ ID NO：42，其中X₁为G；X₂为G；X₃为V；X₄为L；并且X₅为N、F 或T；

iii)SEQ ID NO：42，其中X₁为G；X₂为G；X₃为G；X₄为L；并且X₅为N、F 或T；

iv)SEQ ID NO：42，其中X₁为G；X₂为G；X₃为G；X₄为G；并且X₅为N、F 或T；

(D)Del-del-V3A，i)SEQ ID NO：42，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为A；X₄为L；并且X₅为N、F或T；

(E)Del-Del-V3G，SEQ ID NO：42，其中X₁为无氨基酸；X₂为无氨基酸；X₃为V； X₄为L；并且X₅为N、F或T。

另外，将所述两个氨基酸缺失(E1/I2缺失)加上上文的(D)和(E)与另外的 氨基酸置换结合，以产生以下共有的轻链序列：

(SEQ ID NO：43，其中X₁为无氨基酸或E，X₂为无氨基酸或I，X₃为V，A或G， X₄为T或I，X₅为S或W；X₆为V或Q，X₇为N或I并且X₈为N或F)。使特定的 序列与VRC07重链互补，并测试其与gp120的结合、中和效能和自身反应性，所述 序列包含：

(SEQ ID NO：50；VRC01_hp-L02；SEQ ID NO：43，其中X₁为E，X₂为I，X₃为V， X₄为T，X₅为S，X₆为Q，X₇为N并且X₈为T)；以及SEQ ID NO：43，其中X₁为 无氨基酸，X₂为无氨基酸，X₃为A，X₄为T，X₅为S，X₆为Q，X₇为N并且X₈为N 或F；和SEQ ID NO：43，其中X₁为无氨基酸，X₂为无氨基酸，X₃为G，X₄为T，X₅为S，X₆为Q，X₇为N，并且X₈为N或F。

在一些实施方案中，所述抗体的轻链可变区包括：

(SEQ ID NO：44，其中X₁为无氨基酸或E，X₂为无氨基酸或I，X₃为V、A或G， X₄为R或T；X₅为T或I，X₆为K或R，X₇为S或W，X₈为T或N，X₉为S或N， 并且X₁₀为P或Q)。使特定的序列与VRC07重链互补，并测试其与gp120的结合、 中和效能和自身反应性，所述序列包括：

(SEQ ID NO：51；VRC07ghvL05，其为SEQ ID NO：44，其中X₁为E，X₂为I，X₃为V，X₄为R；X₅为T，X₆为K，X₇为S，X₈为T，X₉为S，并且X₁₀为P)；SEQ ID NO：44，其中X₁为无氨基酸，X₂为无氨基酸，X₃为A，X₄为R；X₅为T，X₆为K， X₇为S，X₈为T，X₉为S，并且X₁₀为P；和SEQ ID NO：44，其中X₁为无氨基酸， X₂为无氨基酸，X₃为G，X₄为R；X₅为T，X₆为K，X₇为S，X₈为T，X₉为S，并 且X₁₀为P。

在另外的实施方案中，所述轻链可变区包含以下之一：

实施例11-质粒和质粒插入片段

以下是用于表达变体VRC07重链的质粒插入片段的核苷酸序列的名称和相应的SEQ ID NO：

表2：质粒名称和序列

另外的用于表达变体VRC07重链的质粒插入片段的核苷酸和蛋白 质序列：

表3：质粒名称和序列

考虑到可以应用本公开内容的原理的许多可能的实施方案，应当理 解所举例说明的实施方案只是实例，而不应当被认为是对权利要求范围 的限制。所以，本发明人要求保护处于这些权利要求的范围和精神内的 所有内容。

Claims (25)

1.一种分离的单克隆抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，其中：

所述抗体的重链可变区包含SEQ ID NO：259的氨基酸26-33(CDR1)、51-58(CDR2)和97-114(CDR3)；且

所述抗体的轻链可变区包含SEQ ID NO：9的氨基酸27-30(CDR1)、48-50(CDR2)和87-91(CDR3)；且

其中所述抗体特异性结合HIV-1的gp120，并且其中所述抗体是中和抗体。

2.权利要求1的分离的单克隆抗体，其中所述抗体的重链可变区包含与SEQ ID NO：259具有至少90％序列同一性的氨基酸序列并且所述抗体的轻链可变区包含与SEQ ID NO：221具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。

3.权利要求1的分离的单克隆抗体，其中所述抗体的重链可变区包含与SEQ ID NO：259具有至少95％序列同一性的氨基酸序列并且所述抗体的轻链可变区包含与SEQ ID NO：221具有至少95％序列同一性的氨基酸序列。

4.权利要求1的分离的单克隆抗体，其中所述抗体的重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NO：259和SEQ ID NO：221。

5.权利要求1-4中任一项的分离的单克隆抗体，其中所述抗体不是自身反应性的。

6.权利要求1-4中任一项的分离的单克隆抗体，其中所述抗体为IgG、IgM或IgA。

7.权利要求1-6中任一项的分离的单克隆抗体的分离的抗原结合片段。

8.权利要求7的分离的抗原结合片段，其中所述片段为Fab片段、Fab'片段、F(ab)'₂片段、单链Fv蛋白(scFv)或二硫键稳定的Fv蛋白(dsFv)。

9.权利要求1-8中任一项的分离的单克隆抗体或抗原结合片段，其与效应物部分连接。

10.权利要求9的分离的单克隆抗体或抗原结合片段，其中所述效应物部分为毒素或可检测的标记物。

11.一种支架蛋白，其包含权利要求7-8中任一项的抗原结合片段。

12.一种分离的核酸分子，其编码权利要求1-6中任一项的单克隆抗体、权利要求7-8中任一项的抗原结合片段或权利要求11的支架蛋白。

13.权利要求12的分离的核酸分子，其与启动子可操作地连接。

14.一种表达载体，其包含权利要求12或权利要求13的分离的核酸分子。

15.权利要求14的表达载体，其中所述载体为腺相关病毒载体。

16.一种分离的宿主细胞，其用权利要求12-15中任一项的核酸分子或载体转化。

17.一种组合物，其包含治疗有效量的权利要求1-6中任一项的抗体、权利要求7-8中任一项的抗原结合片段、权利要求11的支架蛋白、权利要求12或权利要求13的核酸分子或者权利要求14或权利要求15的表达载体，以及可药用的载体。

18.权利要求1-6中任一项的分离的单克隆抗体、权利要求7-8中任一项的抗原结合片段或权利要求11的支架蛋白在制备用于通过如下方法检测受试者中的人免疫缺陷病毒(HIV)-1感染的试剂中的用途，所述方法包括：

在足以形成免疫复合物的条件下，将来自所述受试者的生物样本与所述试剂接触；和

检测来自所述受试者的样本中所述免疫复合物的存在情况，其中来自所述受试者的样本中免疫复合物的存在表明所述受试者具有HIV-1感染。

19.权利要求17的组合物在制备用于通过如下方法预防或治疗受试者中的人免疫缺陷病毒(HIV)-1感染的药物的用途，所述方法包括给予所述受试者治疗有效量的所述药物，从而预防或治疗所述HIV-1感染。

20.权利要求19的用途，其中所述药物用于治疗HIV-1感染，并且其中所述受试者患有获得性免疫缺陷综合征(AIDS)。

21.权利要求19或权利要求20的用途，其中所述方法还包括给予所述受试者另外的抗病毒剂。

22.权利要求19或权利要求20的用途，其中所述方法还包括给予所述受试者一种或多种另外的抗体或编码此类抗体的核酸，其中所述另外的抗体特异性结合gp120和/或gp41。

23.权利要求1-6中任一项的抗体、权利要求7-8中任一项的抗原结合片段或权利要求11的支架蛋白在制备用于通过如下方法测试潜在免疫原的试剂中的用途，所述方法包括将所述潜在免疫原与所述试剂接触，并检测所述试剂与所述免疫原的结合，从而确定所述免疫原可用于产生针对人免疫缺陷病毒的免疫应答。

24.一种试剂盒，其包含：

(a)权利要求1-6中任一项的抗体、权利要求7-8中任一项的抗原结合片段、权利要求11的支架蛋白、权利要求12或权利要求13的核酸分子、或权利要求14或权利要求15的表达载体、权利要求17的组合物，或者它们中两种或更多种的组合；和

(b)使用所述试剂盒的说明书。

25.权利要求1-6中任一项的分离的单克隆抗体、权利要求7-8中任一项的抗原结合片段、权利要求11的支架蛋白、权利要求12或权利要求13的核酸分子、或权利要求14或权利要求15的表达载体、权利要求17的组合物或者它们中两种或更多种的组合用于制备抑制或预防受试者中的1型人免疫缺陷病毒感染的药物的用途。

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