JP6539257B2 - 微生物農薬組成物、その製造方法及び微生物農薬の安定化方法 - Google Patents
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Description
また、特開2004−35421号公報(特許文献2)には、微生物、粘土鉱物、界面活性剤及び乾燥剤を含有する微生物農薬が提案されている。乾燥剤としては、シリカゲル、塩化カルシウム、III型無水石膏が具体的に示されている。
(1) バチルス(Bacillus)属細菌の菌体乾燥物と塩化カルシウム及び/または硫酸マグネシウムを含有することを特徴とする微生物農薬組成物。
(2) バチルス(Bacillus)属細菌の菌体乾燥物と塩化カルシウムを含有する(1)に記載の微生物農薬組成物。
(3) バチルス(Bacillus)属細菌の菌体乾燥物と硫酸マグネシウムを含有する(1)に記載の微生物農薬組成物。
(4) 塩化カルシウム及び/または硫酸マグネシウムを1〜5質量%含有する(1)〜(3)のいずれかに記載の微生物農薬組成物。
(5) バチルス(Bacillus)属細菌が、バチルス・サブティリス(Bacillus subtilis)、バチルス・アミロリケファシエンス(Bacillus amyloliquefaciens)、またはそれらの変異株である(1)〜(4)のいずれかに記載の微生物農薬組成物。
(6) バチルス(Bacillus)属細菌が、バチルス・アミロリケファシエンスAT−332(Bacillus amyloliquefaciens AT-332)株、またはその変異株である(1)〜(5)のいずれかに記載の微生物農薬組成物。
(7) バチルス(Bacillus)属細菌の培養液について、pHを3.0〜5.0に調整する工程(pH調整工程)と、塩化カルシウム及び/または硫酸マグネシウムを混合する工程(混合工程)と、凍結乾燥またはスプレードライする工程(乾燥工程)を含む方法によって得られる(1)〜(6)のいずれかに記載の微生物農薬組成物。
(8) pH調整工程の後に混合工程を実施するか、pH調整工程と混合工程を同時に実施するか、または混合工程の後にpH調整工程を実施した後に乾燥工程を実施する方法によって得られる(7)に記載の微生物農薬組成物。
(9) 農薬組成物を蒸留水に懸濁した懸濁水溶液のpHが3.0〜5.0である(1)〜(8)のいずれかに記載の微生物農薬組成物。
(10) バチルス(Bacillus)属細菌の培養液について、pHを3.0〜5.0に調整する工程(pH調整工程)と、塩化カルシウム及び/または硫酸マグネシウムを混合する工程(混合工程)と、凍結乾燥またはスプレードライする工程(乾燥工程)を含むことを特徴とする微生物農薬組成物の製造方法。
(11) pH調整工程の後に混合工程を実施するか、pH調整工程と混合工程を同時に実施するか、または混合工程の後にpH調整工程を実施した後に乾燥工程を実施する(10)に記載の微生物農薬組成物の製造方法。
(12) バチルス(Bacillus)属細菌の培養液について、pHを3.0〜5.0に調整する工程(pH調整工程)と、塩化カルシウム及び/または硫酸マグネシウムを混合する工程(混合工程)と、凍結乾燥またはスプレードライする工程(乾燥工程)を含むことを特徴とする微生物農薬の安定化方法。
(13) pH調整工程の後に混合工程を実施するか、pH調整工程と混合工程を同時に実施するか、または混合工程の後にpH調整工程を実施した後に乾燥工程を実施する(12)に記載の微生物農薬の安定化方法。
本発明の微生物農薬組成物に菌体乾燥物として用いるバチルス(Bacillus)属の細菌は、特に限定されるものではないが、植物病害に対する防除能を有するバチルス(Bacillus)属の細菌であることが好ましい。例えば、バチルス・サブティリス(Bacillus subtilis)、バチルス・アミロリケファシエンス(Bacillus amyloliquefaciens)、バチルス・プミルス(Bacillus pumilus)、バチルス・セレウス(Bacillus cereus)、バチルス・リケニフォルミス(Bacillus licheniformis)、バチルス・ベレゼンシス(Bacillus velezensis)、バチルス・エスピー(Bacillus sp.)、及びこれらの変異株などが挙げられる。中でも植物病害に対する防除能が高いバチルス・サブティリス(Bacillus subtilis)、バチルス・アミロリケファシエンス(Bacillus amyloliquefaciens)及びその変異株が好ましく、さらに好ましくは、バチルス・アミロリケファシエンスAT−332(Bacillus amyloliquefaciens AT-332)株、及びその変異株が挙げられる。
本発明で用いる微生物農薬組成物は、微生物培養液を凍結乾燥またはスプレードライのいずれかの方法で得られた菌体乾燥物を含有する。
微生物培養液の乾燥は、塩化カルシウム及び/または硫酸マグネシウムの添加及びpH3.0〜5.0の調整を行った後に行うことができる。
本発明の微生物農薬組成物は、pHを3.0〜5.0に調整する工程(pH調整工程)と、塩化カルシウム及び/または硫酸マグネシウムを混合する工程(混合工程)と、凍結乾燥またはスプレードライする工程(乾燥工程)を含む方法によって調製される菌体乾燥物を含む。菌体乾燥物は、具体的には、(1)微生物培養液に塩化カルシウム及び/または硫酸マグネシウムを混合し、pH3.0〜5.0に調整した後乾燥するか、(2)微生物培養液をpH3.0〜5.0に調整した後に、塩化カルシウム及び/または硫酸マグネシウムを混合し、次いで乾燥するか、または(3)微生物培養液のpH3.0〜5.0に調整しながら塩化カルシウム及び/または硫酸マグネシウムを混合した後乾燥するかして得ることができる。
塩化カルシウム及び硫酸マグネシウムは、各々を単独で、もしくは両者を組み合わせて用いることができる。
剤形としては、粒剤、粉剤、顆粒水和剤、水和剤、水溶剤、懸濁製剤、乳剤等が挙げられ、中でも顆粒水和剤、水和剤、水溶剤、粒剤が好ましく、水和剤がより好ましい。
任意成分としては、本発明の効果を損なわない限り特に制限はないが、担体、界面活性剤、分散剤、補助剤、保護剤等が挙げられる。これらの任意成分は、バチルス(Bacillus)属細菌の培養液のpH調整に影響を与えないものであれば、微生物農薬組成物を製造する際、凍結乾燥前に塩化カルシウム及び/または硫酸マグネシウムと共に添加することができるが、通常は菌体乾燥物に添加し混合した後、所望の剤形に加工する。
本発明の微生物農薬組成物は、微生物を菌体乾燥物として含有する。微生物の菌体乾燥物は公知の装置及び条件によって得ることができる。
例えば、微生物がバチルス・アミロリケファシエンスAT−332(Bacillus amyloliquefaciens AT-332)株である場合、液体標準培地(ポリペプトン0.5%、グルコース0.1%、酵母エキス0.5%、pH7.0)で当該微生物を振とう培養した後、塩化カルシウム及び/または硫酸マグネシウムを混合、かつpHを3.0〜5.0に調整し、凍結乾燥またはスプレードライを行うことによって得られる。
凍結乾燥またはスプレードライは公知の装置の条件によって行い、粉末の菌体乾燥物を得ることができる。
得られた菌体乾燥物に所望の剤形に応じた任意成分を選択して混合することより、微生物農薬組成物(製剤)とすることができる。
本発明の微生物農薬組成物は、そのまま直接施用するか、あるいは水などで希釈して施用することができる。本発明の微生物農薬組成物は、蒸留水に懸濁した懸濁水溶液のpHが3.0〜5.0であることが好ましい。
微生物農薬組成物の施用方法は、特に限定されず、例えば、直接植物に散布する方法、土壌に散布する方法、植物の種子に直接塗布する方法、植物や土壌に添加する水や肥料に添加する方法などが挙げられる。その他、製剤の施用量は、対象病害、対象作物、施用方法、発生傾向、被害の程度、環境条件、使用する剤形などによって変動するので、適宜調整することが好ましい。
「イネ」のいもち病菌(Pyricularia oryzae)、ごま葉枯病菌(Cochliobolus miyabeanus)、紋枯病菌(Rhizoctonia solani)、馬鹿苗病菌(Gibberella fujikuroi)、
「ムギ類」のうどんこ病菌(Erysiphe graminis f.sp. hordei, Erysiphe graminis f.sp. tritici )、さび病菌(Puccinia striiformis, Puccinia graminis, Puccinia recondita f.sp.tritici, Puccinia hordei)、赤かび病菌(Gibberella zeae)、網斑病菌(Pyrenophora teres)、雪腐病菌(Typhula incarnata, Typhula ishikariensis, Sclerotinia borealis, Micronectriella nivalis)、裸黒穂病菌(Ustilago nuda)、なまぐさ黒穂病菌(Tilletia caries, Tilletia foetida)、眼紋病菌(Tapesia yallundea)、雲形病菌(Phynchosporium secalis f.sp. hordei)、葉枯病菌(Septoria tritici)、ふ枯病菌(Leptoshaeria nodorum)、
「カンキツ」の黒点病菌(Diaporthe citri)、そうか病菌(Elsinoe fawcettii)、褐色腐敗病菌(Phytophthora citrophthora)、緑かび病菌(Penicillium digitatum)、青かび病菌(Penicillium italicum)、
「リンゴ」のモニリア病菌(Monilinia mali)、腐らん病菌(Valsa ceratosperma)、うどんこ病菌(Podosphaera leucotricha)、斑点落葉病菌(Alternaria alternate pathotype apple)、黒星病菌(Venturia inaequalis)、赤星病菌(Gymnosporangium yamadae)、輪紋病菌(Botriophaeria berengeriana f.sp. piricola)、すす点病菌(Zygophiala jamaicensis)、すす斑病菌(Gloeodes pomigena)、黒点病菌(Mycosphaerella pomi)、炭そ病菌(Glomerella cingulata)、褐斑病菌(Diplocarpon mali)、
「ナシ」の黒星病菌(Venturia nashicola)、黒斑病菌(Alternaria alternata Japanese pear pathotype)、輪紋病菌(Physalospora piricola)、赤星病菌(Gymnosporangium asiaticum)、
「モモ」の灰星病菌(Monilinia fructicola)、黒星病菌(Cladosporium carpophilum)、フォモプシス腐敗病菌(Phomopsis sp.)、
「ブドウ」の褐斑病菌(Pseudocercospora vitis)、輪紋病菌(Marssonina viticola)、黒とう病菌(Elsinoe ampelina)、晩腐病菌(Glomerella cingulata)、うどんこ病菌(Uncinula necator)、さび病菌(Phakopsora ampelopsidis)、枝膨病菌(Phomopsis sp.)、
「カキ」のうどんこ病菌(Phyllactinia kakicola)、炭そ病菌(Colletotrichum gloeosporioides)、角斑落葉病菌(Cercospora kaki)、丸星落葉病菌(Mycosphaerella nawae)、
「ウメ」の黒星病菌(Cladosporium carpophilum)、
「オウトウ」の灰星病菌(Monilinia fructicola)、
「ウリ類」のうどんこ病菌(Sphaerotheca fuliginea)、つる枯病菌(Didymella bryoniae)、炭そ病菌(Colletotrichum lagenarium)、
「トマト」の輪紋病菌(Alternaria solani)、葉かび病菌(Cladosporium fulvum)、
「ナス」の褐紋病菌(Phomopsis vexans)、うどんこ病菌(Erysiphe cichoracearum)、
「アブラナ科野菜」 の黒斑病菌(Alternaria japonica, Alternaria bracicae, Alternaria brassicicola)、白斑病菌(Cercosporella brassicae)、
「ネギ」のさび病菌(Puccinia allii)、
「ショウガ」の根茎腐敗病菌(Pythium ultimum, Pythium zingiberis)、
「イチゴ」のうどんこ病菌(Sphaerotheca humuli)、炭そ病菌(Glomerella cingulata)、
「ダイズ」の紫斑病菌(Cercospora kikuchii)、黒とう病菌(Elsinoe glycines)、黒点病菌(Diaporthe phaseolorum var. sojae)、
「アズキ」の褐斑病菌(Cercospora canescens)、さび病菌(Uromyces phaseoli var. azukicola)、
「インゲン」の炭そ病菌(Colletotrichum lindemuthianum)、
「ラッカセイ」の黒渋病菌(Cercosporidium personatum)、褐斑病菌(Cercospora arachidicola)、そうか病菌(Sphaceloma arachidis)、
「エンドウ」のうどんこ病菌(Erysiphe pisi)、
「ジャガイモ」の夏疫病菌(Alternaria solani)、
「チャ」の網もち病菌(Exobasidium reticulatum)、白星病菌(Elsinoe leucospila)、輪斑病菌(Pestalotiopsis theae, Pestalotiopsis longiseta)、
「タバコ」の赤星病菌(Alternaria longipes)、うどんこ病菌(Erysiphe cichoracearum)、炭そ病菌(Colletotrichum gloeosporioides)、
「テンサイ」の褐斑病菌(Cercospora beticola)、
「シバ」のカーブラリア葉枯病菌(Curvularia geniculata)、疑似葉枯病菌(Ceratobasidium spp.)、
「バラ」の黒星病菌(Diplocarpon rosae)、うどんこ病菌(Shaerotheca pannosa)、
「キク」の褐斑病菌(Septoria obesa)、白さび病菌(Puccinia horiana)、
「種々の作物」の灰色かび病菌(Botrytis cinerea)、菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)等を挙げることができるが、これらの例により限定されるものではない。
バチルス(Bacillus)属細菌を用い、培養終了後の微生物培養液に各種のカルシウム化合物またはマグネシウム化合物を添加することによって製造した微生物農薬製剤の保存安定性改善効果を調べた。
[微生物農薬製剤の製造]
1.微生物培養液の調製
500ml容量三角フラスコに100mlの液体標準培地(ポリペプトン0.5質量%、グルコース0.1質量%、酵母エキス0.5質量%、pH7.0)を入れ、加熱滅菌した。バチルス(Bacillus)属の細菌(バチルス・アミロリケファシエンスAT−332(Bacillus amyloliquefaciens AT-332)株)の前培養物100μlを植菌し、30℃、150rpmで64hr振とう培養した。
バチルス・アミロリケファシエンスAT−332(Bacillus amyloliquefaciens AT-332)株の培養液に、表1に示したカルシウム化合物(塩化カルシウム、酢酸カルシウム、炭酸カルシウム、硫酸カルシウム、クエン酸カルシウム、リン酸水素カルシウム、シュウ酸カルシウム、及びパントテン酸カルシウム)またはマグネシウム化合物(硫酸マグネシウム、塩化マグネシウム、及びステアリン酸マグネシウム)を製剤中に終濃度5質量%になるように加え、5Nの塩酸を用いて、pH5.7に調整し、凍結乾燥機を用いて乾燥した。比較例として、カルシウム化合物またはマグネシウム化合物を添加しない培養液乾燥物を調製した。この培養液の乾燥物75.1質量%に、クエン酸三ナトリウム4質量%、クエン酸ナトリウム2質量%、塩化ナトリウム15.9質量%、アルキルサルフェート金属塩3質量%を混合粉砕し、微生物農薬組成物からなる製剤を得た。
アルミラミネート袋に上記で調製した5gの製剤を入れ、ヒートシールで密栓した。これを54℃で静置し、静置開始から3週間経過時にアルミラミネート袋から取り出し、各製剤の各種病害に対する防除効果を比較した。比較例として、4℃で3週間保存した製剤を調製した。
各製剤を水道水で所定倍率に希釈調整し、薬液を調製した。調製後の希釈溶液をキュウリ3ポット当たり40mlの割合でハンドスプレーヤーを用いて散布し、風乾後温室内にて管理した。翌日、キュウリ葉上で継代培養したキュウリうどんこ病菌の分生胞子をTween(TWEEN;登録商標)20の10000倍希釈溶液に懸濁し、同溶液で5×103cell/mlに調整した。この胞子懸濁液を1ポット当たり約8mlハンドスプレーヤーを用いて噴霧接種した。接種後、室内にて風乾させ、調査まで温室内にて管理した。接種10〜14日後に発病面積率を調査し、平均発病率を算出した。発病面積率は目視により判定した。また、防除価は下記式(数1)により算出し、また表1に示した残存活性は、下記式(数2)により算出した。残存活性は、製剤中にカルシウム化合物またはマグネシウム化合物を添加せず調製した微生物農薬製剤を、4℃、3週間処理した際の防除価を100とした時の比である。生物効果試験の結果を表1に示す。
塩化カルシウムと硫酸マグネシウムの2種類の化合物を微生物農薬製剤中に添加し、かつpHを調整することによって、どのような保存安定性改善効果が得られるかについて調べた。
バチルス・アミロリケファシエンスAT−332(Bacillus amyloliquefaciens AT-332)株の培養液に、塩化カルシウムまたは硫酸マグネシウムを製剤中に5%になるように加え、培養液のpHを5Nの塩酸または5Nの水酸化ナトリウムを用いて、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、9.0に調整し、凍結乾燥した。その他の操作は実施例1と同じ手法により調製し、得られた製剤をキュウリうどんこ病に対して評価した。結果を表2に示す。
保存安定性効果と植物病害防除効果が充分に得られる塩化カルシウムの濃度を検討した。
バチルス・アミロリケファシエンスAT−332(Bacillus amyloliquefaciens AT-332)株の培養液に、塩化カルシウムまたは硫酸マグネシウムを製剤中の終濃度(質量%)が0.5%、1.0%、2.5%、5%になるように加え、培養液のpHを5Nの塩酸を用いて4.0に調整し、凍結乾燥した。その他の操作は実施例1と同じ手法により調製し、得られた製剤をキュウリうどんこ病に対して評価した。結果を表3に示す。
キュウリうどんこ病以外の病害について、同様の保存安定性改善効果が得られるかどうかを検討した。
保存安定性試験に供した製剤をキュウリ灰色かび病による生物効果を評価した以外は、実施例1と同様の方法を用いた。以下にキュウリ灰色かび病による生物効果試験の詳細を示した。
製剤を水道水で所定倍率に希釈調整した。希釈溶液50μlを抗生物質検定用のペーパーディスクにドロップし、溶液の染み込んだ面を下にしてキュウリ子葉表面に静置した。次にPDA寒天培地上で生育させた灰色かび病菌(Botrytis cinerea)から分生胞子を採取し、蒸留水で4×105/mlに調整した。この胞子懸濁液に対して栄養液(2%スクロース、0.4%酵母エキス)を等量加え、最終的には2×105/mlに調整した。この胞子懸濁液50μlをキュウリ子葉上に並べたペーパーディスクにドロップし、21℃で3日間保温後、各病斑の直径を測定した。無処理区病斑直径と比較することによって、各薬剤の防除価を下記式(数3)により算出した。残存活性率は、製剤中に補助剤を添加せず、4℃、3週間処理した製剤の防除価を100とした時の比として、下記式(数4)により算出した。結果を表4に示す。
バチルス・アミロリケファシエンスAT−332(Bacillus amyloliquefaciens AT-332)株以外のバチルス(Bacillus)属の細菌について、同様の効果が得られるか否か検討した。
Bacillus subtilis QST-713 株(SDS社製インプレッションより分離)、Bacillus subtilis MBI-600株(出光興産社製ボトキラーより分離)、Bacillus subtilis HAI-0404株(日本曹達社製アグロケアから分離)及びBacillus amyloliquefaciens D747株(クミアイ化学工業社製エコショットより分離)の培養液に、塩化カルシウムを製剤中に終濃度5%になるように加え、pHを5Nの塩酸を用いて4.0に調整し、凍結乾燥した。その他の操作は実施例1と同じ手法により調製し、得られた製剤をキュウリうどんこ病に対して評価した。結果を表5に示す。
Claims (8)
- バチルス(Bacillus)属細菌の菌体乾燥物と硫酸マグネシウムを含有する微生物農薬組成物であって、前記組成物中の硫酸マグネシウムの含量が1〜5質量%であることを特徴とする微生物農薬組成物。
- バチルス(Bacillus)属細菌が、バチルス・サブティリス(Bacillus subtilis)、バチルス・アミロリケファシエンス(Bacillus amyloliquefaciens)、またはそれらの変異株である請求項1に記載の微生物農薬組成物。
- バチルス(Bacillus)属細菌が、バチルス・アミロリケファシエンスAT−332(Bacillus amyloliquefaciens AT-332)株、またはその変異株である請求項1または2に記載の微生物農薬組成物。
- 農薬組成物を蒸留水に懸濁した懸濁水溶液のpHが3.0〜5.0である請求項1〜3のいずれかに記載の微生物農薬組成物。
- バチルス(Bacillus)属細菌の培養液について、pHを3.0〜5.0に調整する工程(pH調整工程)と、硫酸マグネシウムを農薬組成物に対して1〜5質量%混合する工程(混合工程)と、凍結乾燥またはスプレードライする工程(乾燥工程)を含むことを特徴とする微生物農薬組成物の製造方法。
- pH調整工程の後に混合工程を実施するか、pH調整工程と混合工程を同時に実施するか、または混合工程の後にpH調整工程を実施した後に乾燥工程を実施する請求項5記載の微生物農薬組成物の製造方法。
- バチルス(Bacillus)属細菌の培養液について、pHを3.0〜5.0に調整する工程(pH調整工程)と、硫酸マグネシウムを微生物農薬に対して1〜5質量%混合する工程(混合工程)と、凍結乾燥またはスプレードライする工程(乾燥工程)を含むことを特徴とする微生物農薬の安定化方法。
- pH調整工程の後に混合工程を実施するか、pH調整工程と混合工程を同時に実施するか、または混合工程の後にpH調整工程を実施した後に乾燥工程を実施する請求項7記載の微生物農薬の安定化方法。
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