CN115594542B - 一种芽孢杆菌Bacillus sp.Za的菌剂保护剂及其应用 - Google Patents
一种芽孢杆菌Bacillus sp.Za的菌剂保护剂及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115594542B CN115594542B CN202210980745.3A CN202210980745A CN115594542B CN 115594542 B CN115594542 B CN 115594542B CN 202210980745 A CN202210980745 A CN 202210980745A CN 115594542 B CN115594542 B CN 115594542B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- bacillus
- protective agent
- agent
- microbial inoculum
- microbial
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000003223 protective agent Substances 0.000 title claims abstract description 70
- 239000002068 microbial inoculum Substances 0.000 title claims abstract description 52
- 241001055161 Bacillus sp. Za Species 0.000 title abstract description 7
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical group [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 45
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 44
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 38
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 claims abstract description 25
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 claims abstract description 25
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 claims abstract description 25
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical group O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims abstract description 25
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 claims abstract description 20
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 claims abstract description 20
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 claims abstract description 20
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 claims abstract description 20
- CONWAEURSVPLRM-UHFFFAOYSA-N lactofen Chemical compound C1=C([N+]([O-])=O)C(C(=O)OC(C)C(=O)OCC)=CC(OC=2C(=CC(=CC=2)C(F)(F)F)Cl)=C1 CONWAEURSVPLRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 15
- 239000002689 soil Substances 0.000 claims abstract description 14
- 229910017053 inorganic salt Inorganic materials 0.000 claims abstract description 11
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims abstract description 11
- 239000005416 organic matter Substances 0.000 claims abstract description 9
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 claims description 33
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 22
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 22
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 20
- DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;sodium Chemical compound [Na].CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 235000019812 sodium carboxymethyl cellulose Nutrition 0.000 claims description 5
- 235000011083 sodium citrates Nutrition 0.000 claims description 5
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 claims description 4
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 abstract description 41
- 239000007787 solid Substances 0.000 abstract description 35
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 abstract description 34
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 abstract description 33
- 239000003895 organic fertilizer Substances 0.000 abstract description 27
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 13
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 abstract description 11
- 238000003860 storage Methods 0.000 abstract description 10
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 6
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 abstract description 2
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 16
- 239000010871 livestock manure Substances 0.000 description 16
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 15
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 12
- 239000004009 herbicide Substances 0.000 description 10
- 230000002363 herbicidal effect Effects 0.000 description 8
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 8
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 5
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 235000017060 Arachis glabrata Nutrition 0.000 description 4
- 244000105624 Arachis hypogaea Species 0.000 description 4
- 235000010777 Arachis hypogaea Nutrition 0.000 description 4
- 235000018262 Arachis monticola Nutrition 0.000 description 4
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 4
- 239000003337 fertilizer Substances 0.000 description 4
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 4
- 235000020232 peanut Nutrition 0.000 description 4
- 239000000447 pesticide residue Substances 0.000 description 4
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 4
- 239000010902 straw Substances 0.000 description 4
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 3
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 3
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 3
- 230000000855 fungicidal effect Effects 0.000 description 3
- 239000000417 fungicide Substances 0.000 description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 3
- 239000008297 liquid dosage form Substances 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 239000003415 peat Substances 0.000 description 3
- -1 polyethylene Polymers 0.000 description 3
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 3
- 239000007909 solid dosage form Substances 0.000 description 3
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 3
- 238000009631 Broth culture Methods 0.000 description 2
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 2
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 235000010585 Ammi visnaga Nutrition 0.000 description 1
- 244000153158 Ammi visnaga Species 0.000 description 1
- 241000194110 Bacillus sp. (in: Bacteria) Species 0.000 description 1
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 239000012880 LB liquid culture medium Substances 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241001052560 Thallis Species 0.000 description 1
- 238000012271 agricultural production Methods 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 description 1
- 238000002144 chemical decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 238000003912 environmental pollution Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 230000007269 microbial metabolism Effects 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 230000010355 oscillation Effects 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 238000004064 recycling Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000005067 remediation Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000630 rising effect Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 230000001502 supplementing effect Effects 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C05—FERTILISERS; MANUFACTURE THEREOF
- C05D—INORGANIC FERTILISERS NOT COVERED BY SUBCLASSES C05B, C05C; FERTILISERS PRODUCING CARBON DIOXIDE
- C05D1/00—Fertilisers containing potassium
- C05D1/02—Manufacture from potassium chloride or sulfate or double or mixed salts thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A62—LIFE-SAVING; FIRE-FIGHTING
- A62D—CHEMICAL MEANS FOR EXTINGUISHING FIRES OR FOR COMBATING OR PROTECTING AGAINST HARMFUL CHEMICAL AGENTS; CHEMICAL MATERIALS FOR USE IN BREATHING APPARATUS
- A62D3/00—Processes for making harmful chemical substances harmless or less harmful, by effecting a chemical change in the substances
- A62D3/02—Processes for making harmful chemical substances harmless or less harmful, by effecting a chemical change in the substances by biological methods, i.e. processes using enzymes or microorganisms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C05—FERTILISERS; MANUFACTURE THEREOF
- C05G—MIXTURES OF FERTILISERS COVERED INDIVIDUALLY BY DIFFERENT SUBCLASSES OF CLASS C05; MIXTURES OF ONE OR MORE FERTILISERS WITH MATERIALS NOT HAVING A SPECIFIC FERTILISING ACTIVITY, e.g. PESTICIDES, SOIL-CONDITIONERS, WETTING AGENTS; FERTILISERS CHARACTERISED BY THEIR FORM
- C05G3/00—Mixtures of one or more fertilisers with additives not having a specially fertilising activity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C05—FERTILISERS; MANUFACTURE THEREOF
- C05G—MIXTURES OF FERTILISERS COVERED INDIVIDUALLY BY DIFFERENT SUBCLASSES OF CLASS C05; MIXTURES OF ONE OR MORE FERTILISERS WITH MATERIALS NOT HAVING A SPECIFIC FERTILISING ACTIVITY, e.g. PESTICIDES, SOIL-CONDITIONERS, WETTING AGENTS; FERTILISERS CHARACTERISED BY THEIR FORM
- C05G3/00—Mixtures of one or more fertilisers with additives not having a specially fertilising activity
- C05G3/80—Soil conditioners
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A62—LIFE-SAVING; FIRE-FIGHTING
- A62D—CHEMICAL MEANS FOR EXTINGUISHING FIRES OR FOR COMBATING OR PROTECTING AGAINST HARMFUL CHEMICAL AGENTS; CHEMICAL MATERIALS FOR USE IN BREATHING APPARATUS
- A62D2101/00—Harmful chemical substances made harmless, or less harmful, by effecting chemical change
- A62D2101/04—Pesticides, e.g. insecticides, herbicides, fungicides or nematocides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A62—LIFE-SAVING; FIRE-FIGHTING
- A62D—CHEMICAL MEANS FOR EXTINGUISHING FIRES OR FOR COMBATING OR PROTECTING AGAINST HARMFUL CHEMICAL AGENTS; CHEMICAL MATERIALS FOR USE IN BREATHING APPARATUS
- A62D2101/00—Harmful chemical substances made harmless, or less harmful, by effecting chemical change
- A62D2101/20—Organic substances
- A62D2101/22—Organic substances containing halogen
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A62—LIFE-SAVING; FIRE-FIGHTING
- A62D—CHEMICAL MEANS FOR EXTINGUISHING FIRES OR FOR COMBATING OR PROTECTING AGAINST HARMFUL CHEMICAL AGENTS; CHEMICAL MATERIALS FOR USE IN BREATHING APPARATUS
- A62D2101/00—Harmful chemical substances made harmless, or less harmful, by effecting chemical change
- A62D2101/20—Organic substances
- A62D2101/26—Organic substances containing nitrogen or phosphorus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A62—LIFE-SAVING; FIRE-FIGHTING
- A62D—CHEMICAL MEANS FOR EXTINGUISHING FIRES OR FOR COMBATING OR PROTECTING AGAINST HARMFUL CHEMICAL AGENTS; CHEMICAL MATERIALS FOR USE IN BREATHING APPARATUS
- A62D2101/00—Harmful chemical substances made harmless, or less harmful, by effecting chemical change
- A62D2101/20—Organic substances
- A62D2101/28—Organic substances containing oxygen, sulfur, selenium or tellurium, i.e. chalcogen
Abstract
本发明公开了一种芽孢杆菌Bacillus sp.Za的菌剂保护剂及其应用,所述菌剂保护剂包括液体菌剂保护剂和/或固体菌剂保护剂,所述液体菌剂保护剂为有机物、稳定剂和无机盐,所述有机物为柠檬酸钠,稳定剂为羧甲基纤维素,无机盐为氯化钾;所述固体菌剂保护剂为有机肥。本发明针对乳氟禾草灵残留土壤污染现象,筛选出液体菌剂保护剂的最适配比和固体菌剂的最适载体,解决了微生物菌剂活菌数少、降解活性低等问题,可有效保持菌剂性能、延长储存时间、降低菌剂污染率和制备成本,保藏方法成本低廉、降解效果良好,使用方便,进一步保障了乳氟禾草灵微生物液体菌剂和固体菌剂在农药降解中的实际应用。
Description
技术领域
本发明属于微生物降解领域,涉及一种芽孢杆菌Bacillus sp.Za的菌剂保护剂及其应用。
背景技术
除草剂作为中国农业生产中的重要生产资料,为农作物增产增收发挥了巨大作用。但由于除草剂在耕地土壤的长期大量施用,并且缺乏严格的科学监督和使用管理,除草剂造成的残留污染问题和其环境归趋已经引发世界范围的广泛关注。除草剂在土壤中的残留会导致土壤菌群结构多样性降低,影响后茬作物的出苗率和产量,甚至经植物根系吸收进入食物链后给人类健康带来不可逆危害。除草剂在土壤中的消减以化学降解和微生物降解方式为主,其中,微生物代谢在降解过程中起到关键作用,通过合理运用农药残留高效降解菌株,有望改善土壤中除草剂的残留污染问题。
目前,将微生物修复土壤农药残留投入实际应用的主要途径是将农药残留高效降解菌株加工成为液体剂型或固体剂型。液体剂型的生产耗时短、工序少,菌种纯度高,但在运输和保存的过程中菌种易失活。固体剂型相对于液体剂型而言,虽需要设备人力等投入,但可以延长保存周期、运输及施用方便。因此,在实际应用中,如何在降低成本的同时,维持除草剂降解菌剂的活菌数并提高降解效率,成为亟需解决的难题。通过在活菌制剂中添加保护剂并进行多种剂型的开发,为除草剂环境污染的生物治理提供了一条行之有效的途径。
发明内容
发明目的:针对微生物制剂现有技术存在的问题,本发明提供一种芽孢杆菌的菌剂保护剂,该保护剂包括液体菌剂保护剂和固体菌剂保护剂,可以有效解决芽孢杆菌微生物液体菌剂和固体菌剂活菌数低、储存期短等问题,并且使得微生物菌剂可以在常温下进行保藏,且降解性能不易退化,进一步保障了微生物菌剂在乳氟禾草灵除草剂降解中的实际应用。
本发明还提供芽孢杆菌液体菌剂保护剂和固体菌剂保护剂的应用。
技术方案:为了实现上述目的,本发明所述的一种芽孢杆菌Bacillus sp.Za的菌剂保护剂,所述菌剂保护剂包括液体菌剂保护剂和/或固体菌剂保护剂,所述液体保护剂为有机物、稳定剂和无机盐,所述有机物为柠檬酸钠,稳定剂为羧甲基纤维素,无机盐为氯化钾;所述固体菌剂保护剂为有机肥。
其中,所述柠檬酸钠、羧甲基纤维素或者氯化钾在菌剂中有效使用浓度范围为按质量分数0.1%-0.3%。其中,所述柠檬酸钠、羧甲基纤维素、氯化钾的质量比为1-2﹕1-3﹕1-3。
作为优选,所述柠檬酸钠、羧甲基纤维素、氯化钾的质量比为2﹕2﹕3。
其中,所述有机肥为鸡粪有机肥、蚯蚓粪有机肥或者猪粪有机肥。
作为优选,所述有机肥为猪粪有机肥。
作为优选,所述芽孢杆菌为Bacillus sp.Za,保藏号为:CCTCC NO:M2014050。
其中,所述保护剂中的柠檬酸钠、羧甲基纤维素、氯化钾分别添加到芽孢杆菌发酵液中或者将柠檬酸钠、羧甲基纤维素、氯化钾按比例混合再添加到发酵液中。
本发明所述的芽孢杆菌的菌剂保护剂在保护芽孢杆菌Za中的应用。
其中,所述芽孢杆菌的菌剂保护剂中柠檬酸钠、羧甲基纤维素、氯化钾在芽孢杆菌发酵液中的质量百分比为0.10-0.20%、0.10-0.30%和0.10-0.30%;
作为优选,所述芽孢杆菌的菌剂保护剂中柠檬酸钠、羧甲基纤维素、氯化钾添加到芽孢杆菌发酵液中的质量分别为0.20%、0.20%和0.30%;
其中,所述有机肥的添加量为每50-100g载体添加10mL芽孢杆菌种子液。
作为优选,所述猪粪有机肥的添加量为每100g载体添加10mL芽孢杆菌种子液。
其中,所述芽孢杆菌发酵液为对数生长期芽孢杆菌按1-3%接种量接种到发酵培养基进行发酵培养,作为发酵液。
其中,所述芽孢杆菌种子液为Za菌液接入发酵培养基中,30℃、160rpm培养至对数生长期;菌液5000rpm离心10min收集菌体,用无菌水洗涤重悬菌体,作为种子液。
作为优选,挑取Za单菌落接种至LB液体培养基中培养至对数生长期,按1-3%接种量接入1000mL发酵培养基进行发酵培养作为发酵液,培养条件为30℃,160rpm。其中,所述芽孢杆菌的菌剂保护剂在有效提高芽孢杆菌Za活菌数,延长储存期中的应用。
其中,所述芽孢杆菌的菌剂保护剂为保护芽孢杆菌Za菌剂降解土壤残留降解乳氟禾草灵中的应用。
本发明中芽孢杆菌Za的菌剂保护剂,优选通过以下技术方案制备得到:
1)Za液体菌剂保护剂最佳物质的筛选;
2)Za液体菌剂保护剂最佳物质浓度的筛选;
3)Za液体菌剂保护剂添加后的保存实验;
4)Za液体菌剂保护剂添加后的降解实验;
5)Za固体菌剂保护剂的筛选;
6)Za固体菌剂的制备
7)Za固体菌剂保护剂添加后的保存实验;
8)Za固体菌剂保护剂添加后的降解实验。
有益效果:与现有技术相比,本发明具有如下优点:本发明首次以乳氟禾草灵除草剂高效降解菌株Bacillus sp.Za为基础,设计菌剂保护剂的液体剂型和固体剂型,两种剂型可以单独使用也可以混合使用。本发明通过试验进行筛选优化,兼具成本考虑和应用效果,得到液体菌剂保护剂的最适物质配比和固体菌剂保护剂最适载体材料。本发明的保护剂可以有效解决菌剂保存过程中的菌株失活、降解效率降低等关键问题,满足微生物菌剂应用于农药残留降解的需求,具备实用价值。
本发明的芽孢杆菌液体菌剂保护剂,其有机物成分为0.20%的柠檬酸钠,稳定剂成分为0.20%的羧甲基纤维素,无机盐成分为0.30%的氯化钾,该液体保护剂可以提高菌株的存活率,保存60d后活菌数仍达8.19×108cfu/mL,7d内对乳氟禾草灵的降解率为83.50%。本发明的芽孢杆菌固体菌剂能够利用猪粪有机肥作为保护剂,保存60d后活菌数仍达8.26×108cfu/mL,7d内对土壤中乳氟禾草灵的降解率为85.52%。进一步保障了固体菌剂在农药降解中的实际应用。
本发明中,两类保护剂所用材料均来源广泛,成本低廉,工艺简单,使用方便,其中,固体菌剂保护剂还能够促进廉价农副产品的资源化利用。两种保护剂既可以联合使用,也可以分开使用,均具有良好的应用效果,当二者联合使用时,可以进一步提高菌株的存活率。
附图说明
图1为Za液体菌剂保护剂添加后的保存实验;
图2为Za液体菌剂保护剂添加后的降解实验;
图3为Za固体菌剂保护剂的筛选;
图4为Za固体菌剂保护剂添加后的保存实验;
图5为Za固体菌剂保护剂添加后的降解实验。
具体实施方式
以下结合附图和实施例对本发明作进一步说明。
实施例中所使用的材料、试剂等,如无特殊说明,均可从商业途径得到。
本发明中乳氟禾草灵购自上海安谱实验科技股份有限公司(纯度98%),供试菌株Za为芽孢杆菌(Bacillus sp.),2014年2月27日保藏于中国典型培养物保藏中心,菌种保藏号为:CCTCC NO:M2014050,由南京农业大学提供。
其中,泥炭、花生壳粉、秸秆肥、鸡粪有机肥、蚯蚓粪有机肥、猪粪有机肥等购自南京易循环农业科技有限公司,将各个材料自然风干3d并过40目筛,经121℃高温灭菌后备用。
实施例1
Za液体菌剂保护剂最佳物质的筛选
Za菌种活化后挑取单菌落于液体LB中,30℃、160rpm培养至对数生长期(菌落数约为108cfu/mL),按体积比1%接种量接种发酵培养基(葡萄糖9g/L,蛋白胨2g/L,KH2PO41.0g/L,MgSO4·7H2O 0.4g/L,NH4Cl 0.8g/L,NaCl 0.8g/L,pH 7.0-7.2),30℃、160rpm进行过夜培养,作为发酵液。将发酵液分装至100mL锥形瓶中,其它条件保持一致。
将保护剂分为A:有机物(柠檬酸钠和乙酸钠)、B:稳定剂(糊精和羧甲基纤维素)、C:无机盐(CaCl2和KCl)三类,作为三个因素,每类保护剂选择上述两种物质作为两个水平,每种物质浓度均为0.30%(按添加到发酵液的质量分数计算),进行三因素两水平L4(23)的正交试验,
由表1知,通过分析极差R值发现各因素对菌株Za存活提高率的影响作用顺序为:B>C>A,即稳定剂的影响较为显著,无机盐和有机物影响程度次之。综合分析3种因素的k值,其最优水平是A1B2C2,即与其他物质组合相比,柠檬酸钠、羧甲基纤维素、KCl组合对菌株生长影响最大。由活菌提高率结果可知,该组合对菌株保护效果最佳,为25.09%。因此,选择该组合作为最适保护剂组合开展后续浓度配比的研究。
表1 Za液体菌剂保护剂物质组合正交表
实施例2
Za液体菌剂保护剂最佳物质浓度的筛选
根据实施例2中筛选出的最佳保护剂组合,选择三种保护剂(A:柠檬酸钠、B:羧甲基纤维素、C:KCl)作为三种因素,每种保护剂设置三个终浓度(0.10%、0.20%和0.30%)作为三种水平,进行三因素三水平L9(33)正交试验筛选最适浓度组合。
由表2,各因素间的主次顺序为:A>C>B,最优水平为A2B2C3,即0.20%的柠檬酸钠、0.20%的羧甲基纤维素和0.30%的KCl。且该浓度组合下的菌株存活提高率为35.71%,保护效果最佳。由此确定该浓度组合为Za液体菌剂保护剂的最适使用浓度组合。
表2 Za液体菌剂保护剂浓度组合正交表
实施例3
Za液体菌剂保护剂添加后的保存实验
将所述实施例2中优化出的保护剂组合5添加至Za发酵液中(发酵液培养同实施例1),常温保存30、60d后进行梯度稀释涂布,培养3d后计算活菌数。
结果如图1所示,在没有保护剂的情况下,活菌数在30d内即出现明显下降。而随着保存期的延长,添加了0.20%柠檬酸钠、0.20%羧甲基纤维素和0.30%KCl保护剂的液体菌剂仍保持较高的生物量,60d活菌数仍达到8.19×108cfu/mL。即该保护剂组合可以在储存期内将活菌数维持在较高水平,从而延长液体降解菌剂的货架期。
实施例4
Za液体菌剂保护剂添加后的降解实验
选择实施例3中优化出的四个最适保护剂组合1(0.10%柠檬酸钠、0.10%羧甲基纤维素、0.10%KCl)、组合3(0.10%柠檬酸钠、0.30%羧甲基纤维素、0.30%KCl)、组合4(0.20%柠檬酸钠、0.10%羧甲基纤维素、0.20%KCl)、组合5(0.20%柠檬酸钠、0.20%羧甲基纤维素、0.30%KCl)添加至Za发酵液中(发酵液培养同实施例1)进行验证。取上述组合保存30d后的菌液,以体积比1%的接种比接种到含20mL终浓度50mg/L乳氟禾草灵的无机盐培养基中,3d后使用HPLC测定其中乳氟禾草灵的浓度,并计算降解率。如图2,加入四种保护剂保存30d后的Za液体菌剂对乳氟禾草灵的降解效果均显著高于对照组,其中正交组合5(0.20%柠檬酸钠、0.20%羧甲基纤维素、0.30%KCl)对乳氟禾草灵降解率最高,为83.50%。
实施例5
Za固体菌剂保护剂的筛选
Za菌种活化后挑取单菌落接入发酵培养基中,30℃、160rpm培养至对数生长期(菌落数约为108cfu/mL)。菌液5000rpm离心10min收集菌体,用无菌水洗涤3次重悬菌体,作为Za种子液。各取2g不同灭菌载体泥炭、秸秆肥、花生壳粉、米糠、鸡粪有机肥、蚯蚓粪有机肥、猪粪有机肥,分别加入20mL灭菌水,30℃、160rpm摇床震荡24h,得到载体悬浊液。将100μLZa种子液(菌落数约为5×108cfu/mL)接种至5mL载体悬浊液中,再次震荡培养,于第2、4d取样涂布测定不同载体处理下的活菌数,试验设置三个平行,判断载体对菌株生长的影响。
结果如图3所示,向各载体中接种Za后,菌株均可生存及繁殖。储存4d后发现猪粪有机肥载体中所含活菌数最高,达到8.88×108cfu/g,秸秆肥和花生壳粉所含活菌数较少。猪粪有机肥等载体本身含有其它类型载体无法提供的丰富有机质,可以为菌体生长提供良好的环境和营养。
实施例6
Za固体菌剂的制备
将实施例5中各载体自然风干后121℃、20min高温高压灭菌两次,无菌条件下准确称取30g载体于聚乙烯袋中,按体积质量比10mL/100g添加量将培养至对数生长期的菌株Za菌液(108cfu/mL)添加至不同载体中,混合均匀后在聚乙烯袋表面用灭菌牙签随机扎5个孔径一致的透气孔,再套一层同样扎5个透气孔的聚乙烯袋。成品固体菌剂置于30℃培养箱培养,3d后取出于干燥阴凉处保存待用。
实施例7
Za固体菌剂保护剂添加后的保存实验
称取实施例6中各成品固体菌剂2.00g至装有18mL无菌水的灭菌三角瓶内,三角瓶中加入若干灭菌玻璃珠,涡旋震荡10min后即为10-1菌悬液,吸取100μL菌悬液至含有900μL灭菌水的离心管中。依次稀释8个浓度梯度,取10-6-10-8稀释梯度的菌悬液100μL均匀涂布于相应的固体培养基平板上,每组处理设置3个重复,30℃培养3d后进行菌落计数。
结果如图4所示,随着固体菌剂储存期的延长,泥炭、秸秆肥和花生壳粉载体固体菌剂的活菌数均出现大幅度下降,其余几种载体中的活菌数呈现先上升后下降的趋势。30和60d时,活菌保存效果最好的均为猪粪有机肥,为8.26×108cfu/g。
实施例8
Za固体菌剂保护剂添加后的降解实验
选择实施例7中表现良好的保护剂(米糠、鸡粪有机肥、蚯蚓粪有机肥、猪粪有机肥)与乳氟禾草灵终浓度为10mg/kg的供试土壤按照1﹕9质量比充分混匀,装入黑色塑料杯中置于光照培养箱,培养条件为:光照12h,温度26℃,黑暗12h,温度20℃(24h交替进行)。通过补加水分调节土壤含水量在25%-30%之间,在第1、3、5和7d分别取5g土样检测乳氟禾草灵残留量。同时设置不加固体菌剂的对照组,对照与处理均设3个重复。
结果如图5所示,添加各固体菌剂后,土壤中乳氟禾草灵降解率均明显上升。相同条件下CK降解率只能达到27.66%,而四组固体菌剂的7d降解率均高于70%,其中以猪粪有机肥为保护剂的固体菌剂降解效果最优,为85.52%。综合考虑活菌数和降解效果,筛选得到猪粪有机肥为Za固体菌剂的最适保护剂。
Claims (6)
1.一种芽孢杆菌Bacillus sp. Za的菌剂保护剂,其特征在于,所述菌剂保护剂为液体菌剂保护剂,所述液体菌剂保护剂为有机物、稳定剂和无机盐,所述有机物为柠檬酸钠,稳定剂为羧甲基纤维素,无机盐为氯化钾;所述柠檬酸钠、羧甲基纤维素和氯化钾在菌剂中有效使用浓度范围为按质量分数0.1%-0.3%;所述芽孢杆菌Bacillus sp. Za菌种保藏号为:CCTCC NO:M2014050。
2.根据权利要求1所述的芽孢杆菌Bacillus sp. Za的菌剂保护剂,其特征在于,所述保护剂中的柠檬酸钠、羧甲基纤维素、氯化钾分别添加到芽孢杆菌发酵液中或者将柠檬酸钠、羧甲基纤维素、氯化钾按比例混合再添加到芽孢杆菌发酵液中。
3.一种芽孢杆菌Bacillus sp. Za的菌剂保护剂在保护芽孢杆菌Za中的应用;所述菌剂保护剂为液体菌剂保护剂;所述液体菌剂保护剂为有机物、稳定剂和无机盐,所述有机物为柠檬酸钠,稳定剂为羧甲基纤维素,无机盐为氯化钾;所述液体菌剂保护剂中柠檬酸钠、羧甲基纤维素、氯化钾在芽孢杆菌发酵液中质量分数为0.10-0.20%、0.10-0.30%和0.10-0.30%。
4.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,所述芽孢杆菌发酵液为对数生长期芽孢杆菌按1-3%接种量接种到发酵培养基进行发酵培养,作为发酵液。
5.根据权利要求3的应用,其特征在于,所述芽孢杆菌的菌剂保护剂在有效提高芽孢杆菌Za活菌数,延长储存期中的应用。
6.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,所述芽孢杆菌的菌剂保护剂为保护芽孢杆菌Za菌剂降解土壤残留降解乳氟禾草灵中的应用。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202210980745.3A CN115594542B (zh) | 2022-08-16 | 2022-08-16 | 一种芽孢杆菌Bacillus sp.Za的菌剂保护剂及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202210980745.3A CN115594542B (zh) | 2022-08-16 | 2022-08-16 | 一种芽孢杆菌Bacillus sp.Za的菌剂保护剂及其应用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN115594542A CN115594542A (zh) | 2023-01-13 |
CN115594542B true CN115594542B (zh) | 2024-03-12 |
Family
ID=84843239
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202210980745.3A Active CN115594542B (zh) | 2022-08-16 | 2022-08-16 | 一种芽孢杆菌Bacillus sp.Za的菌剂保护剂及其应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN115594542B (zh) |
Citations (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS63109771A (ja) * | 1986-10-28 | 1988-05-14 | Kao Corp | 新規微生物 |
JPS63137677A (ja) * | 1986-11-28 | 1988-06-09 | Kao Corp | アルカリセルラーゼ |
JPH07231782A (ja) * | 1986-12-09 | 1995-09-05 | Kao Corp | アルカリ耐性セルラーゼを産生する微生物 |
CN101096317A (zh) * | 2006-06-27 | 2008-01-02 | 荆向河 | 利用鲜猪粪生产高效生物有机肥的工艺 |
CN101279861A (zh) * | 2008-05-23 | 2008-10-08 | 西南大学 | 一种处理猪粪生产有机肥的方法 |
CN102630863A (zh) * | 2012-04-28 | 2012-08-15 | 光明乳业股份有限公司 | 巧克力酱、稳定剂及双层巧克力发酵乳、配方及制备方法 |
CN105263328A (zh) * | 2012-08-31 | 2016-01-20 | 拜尔作物科学有限合伙公司 | 提高植物的非生物胁迫抗性的方法 |
CN106231907A (zh) * | 2014-04-09 | 2016-12-14 | Sds生物技术株式会社 | 微生物农药组合物、其制造方法及微生物农药的稳定化方法 |
CN110015917A (zh) * | 2019-05-06 | 2019-07-16 | 辽宁圣岛纳米贝壳生物科技有限公司 | 一种贝壳粉生物肥料的生产方法 |
CN110484449A (zh) * | 2019-07-30 | 2019-11-22 | 南京农业大学 | 一种多菌灵降解菌的保护剂及其制备方法和应用 |
-
2022
- 2022-08-16 CN CN202210980745.3A patent/CN115594542B/zh active Active
Patent Citations (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS63109771A (ja) * | 1986-10-28 | 1988-05-14 | Kao Corp | 新規微生物 |
JPS63137677A (ja) * | 1986-11-28 | 1988-06-09 | Kao Corp | アルカリセルラーゼ |
JPH07231782A (ja) * | 1986-12-09 | 1995-09-05 | Kao Corp | アルカリ耐性セルラーゼを産生する微生物 |
CN101096317A (zh) * | 2006-06-27 | 2008-01-02 | 荆向河 | 利用鲜猪粪生产高效生物有机肥的工艺 |
CN101279861A (zh) * | 2008-05-23 | 2008-10-08 | 西南大学 | 一种处理猪粪生产有机肥的方法 |
CN102630863A (zh) * | 2012-04-28 | 2012-08-15 | 光明乳业股份有限公司 | 巧克力酱、稳定剂及双层巧克力发酵乳、配方及制备方法 |
CN105263328A (zh) * | 2012-08-31 | 2016-01-20 | 拜尔作物科学有限合伙公司 | 提高植物的非生物胁迫抗性的方法 |
CN106231907A (zh) * | 2014-04-09 | 2016-12-14 | Sds生物技术株式会社 | 微生物农药组合物、其制造方法及微生物农药的稳定化方法 |
CN110015917A (zh) * | 2019-05-06 | 2019-07-16 | 辽宁圣岛纳米贝壳生物科技有限公司 | 一种贝壳粉生物肥料的生产方法 |
CN110484449A (zh) * | 2019-07-30 | 2019-11-22 | 南京农业大学 | 一种多菌灵降解菌的保护剂及其制备方法和应用 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN115594542A (zh) | 2023-01-13 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Buntić et al. | Development of liquid rhizobial inoculants and pre-inoculation of alfalfa seeds | |
CN107325821B (zh) | 一种防治西瓜枯萎病的生物质炭基微生物菌剂及其制备方法与应用 | |
Zhou et al. | Molybdate in rhizobial seed-coat formulations improves the production and nodulation of alfalfa | |
CN113174351B (zh) | 一种抗病促生型混合微生物菌群 | |
CN113229294B (zh) | 一种基于哈茨木霉菌m-17厚垣孢子的可湿性粉剂组合物、制备方法及应用 | |
Bora et al. | Efficacy of substrate based bioformulation of microbial antagonists in the management of bacterial disease of some solanaceous vegetables in Assam | |
CN104232532A (zh) | 一种植物内生短小芽孢杆菌及其菌剂、制法与应用 | |
CN104630092B (zh) | 一种烟草根际促生菌yc9及其应用 | |
CN109456915B (zh) | 一种沙福芽孢杆菌株x3及其应用 | |
CN114107130A (zh) | 一种复合微生物菌肥及其制备方法和应用 | |
CN104450550A (zh) | 一株产acc脱氨酶活性的植生拉乌尔菌株srpg-4的筛选方法与用途 | |
CN102598978A (zh) | 一种堆肥发酵液提高高羊茅抗Cr和Cd能力的方法 | |
CN113234714A (zh) | 一种用于尾矿修复的植物促生菌剂及其制备方法和应用 | |
CN102598977B (zh) | 一种堆肥发酵液提高黑麦草抗Cr和Cd能力的方法 | |
CN102191205B (zh) | 能将难溶性磷酸盐转化为可溶性磷酸盐的菌株b1 | |
CN115594542B (zh) | 一种芽孢杆菌Bacillus sp.Za的菌剂保护剂及其应用 | |
CN111269859A (zh) | 一株溶磷、促生、适应性强的玉米根际促生菌及其应用 | |
CN115997791A (zh) | 洋葱伯克霍尔德氏菌在促进植物耐盐碱及降低重金属镉含量中的应用 | |
CN113354470B (zh) | 一种复合微生物缓释菌肥及其制备方法 | |
CN113755394B (zh) | 一种含解淀粉芽孢杆菌的生物炭基微生物肥料及其应用 | |
CN116396888A (zh) | 一种适于畜禽粪污和秸秆发酵的微生物复合菌剂及其制备方法 | |
CN104262049A (zh) | 一种生物有机化肥的制备方法 | |
CN111040955B (zh) | 一种强化型防病促生炭基菌剂及其制备方法与应用 | |
CN109337844B (zh) | 一种摩拉维亚假单胞菌株x2及其应用 | |
CN102599196A (zh) | 苏云金芽孢杆菌发酵液对高羊茅生长的调节方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |