JP6530760B2 - ステビオール配糖体の組換え製造 - Google Patents
ステビオール配糖体の組換え製造 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6530760B2 JP6530760B2 JP2016552419A JP2016552419A JP6530760B2 JP 6530760 B2 JP6530760 B2 JP 6530760B2 JP 2016552419 A JP2016552419 A JP 2016552419A JP 2016552419 A JP2016552419 A JP 2016552419A JP 6530760 B2 JP6530760 B2 JP 6530760B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- rebaudioside
- recombinant
- amino acid
- seq
- glucose
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 235000019202 steviosides Nutrition 0.000 title claims description 113
- 239000004383 Steviol glycoside Substances 0.000 title claims description 74
- 235000019411 steviol glycoside Nutrition 0.000 title claims description 74
- 229930182488 steviol glycoside Natural products 0.000 title claims description 74
- 150000008144 steviol glycosides Chemical class 0.000 title claims description 69
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 38
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 176
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 167
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 164
- RPYRMTHVSUWHSV-CUZJHZIBSA-N rebaudioside D Chemical compound O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)O[C@]12C(=C)C[C@@]3(C1)CC[C@@H]1[C@@](C)(CCC[C@]1([C@@H]3CC2)C)C(=O)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O RPYRMTHVSUWHSV-CUZJHZIBSA-N 0.000 claims description 90
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 88
- 229930188195 rebaudioside Natural products 0.000 claims description 80
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 71
- RLLCWNUIHGPAJY-RYBZXKSASA-N Rebaudioside E Natural products O=C(O[C@H]1[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1)[C@]1(C)[C@@H]2[C@@](C)([C@@H]3[C@@]4(CC(=C)[C@@](O[C@@H]5[C@@H](O[C@@H]6[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O6)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O5)(C4)CC3)CC2)CCC1 RLLCWNUIHGPAJY-RYBZXKSASA-N 0.000 claims description 64
- RLLCWNUIHGPAJY-SFUUMPFESA-N rebaudioside E Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@]12C(=C)C[C@@]3(C1)CC[C@@H]1[C@@](C)(CCC[C@]1([C@@H]3CC2)C)C(=O)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O RLLCWNUIHGPAJY-SFUUMPFESA-N 0.000 claims description 64
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 56
- 108010043934 Sucrose synthase Proteins 0.000 claims description 55
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 54
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 52
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 50
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 48
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 47
- HELXLJCILKEWJH-NCGAPWICSA-N rebaudioside A Chemical compound O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)O[C@]12C(=C)C[C@@]3(C1)CC[C@@H]1[C@@](C)(CCC[C@]1([C@@H]3CC2)C)C(=O)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O HELXLJCILKEWJH-NCGAPWICSA-N 0.000 claims description 46
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 43
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 42
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 42
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 40
- UEDUENGHJMELGK-HYDKPPNVSA-N Stevioside Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@]12C(=C)C[C@@]3(C1)CC[C@@H]1[C@@](C)(CCC[C@]1([C@@H]3CC2)C)C(=O)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O UEDUENGHJMELGK-HYDKPPNVSA-N 0.000 claims description 39
- OHHNJQXIOPOJSC-UHFFFAOYSA-N stevioside Natural products CC1(CCCC2(C)C3(C)CCC4(CC3(CCC12C)CC4=C)OC5OC(CO)C(O)C(O)C5OC6OC(CO)C(O)C(O)C6O)C(=O)OC7OC(CO)C(O)C(O)C7O OHHNJQXIOPOJSC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 39
- 229940013618 stevioside Drugs 0.000 claims description 39
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 claims description 36
- 239000001512 FEMA 4601 Substances 0.000 claims description 33
- HELXLJCILKEWJH-SEAGSNCFSA-N Rebaudioside A Natural products O=C(O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)[C@@]1(C)[C@@H]2[C@](C)([C@H]3[C@@]4(CC(=C)[C@@](O[C@H]5[C@H](O[C@H]6[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O6)[C@@H](O[C@H]6[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O6)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)(C4)CC3)CC2)CCC1 HELXLJCILKEWJH-SEAGSNCFSA-N 0.000 claims description 33
- HELXLJCILKEWJH-UHFFFAOYSA-N entered according to Sigma 01432 Natural products C1CC2C3(C)CCCC(C)(C(=O)OC4C(C(O)C(O)C(CO)O4)O)C3CCC2(C2)CC(=C)C21OC(C1OC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)OC(CO)C(O)C1OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O HELXLJCILKEWJH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 33
- 235000019203 rebaudioside A Nutrition 0.000 claims description 33
- 101000630755 Arabidopsis thaliana Sucrose synthase 1 Proteins 0.000 claims description 28
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 claims description 28
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 28
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 28
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 26
- HSCJRCZFDFQWRP-JZMIEXBBSA-N UDP-alpha-D-glucose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](N2C(NC(=O)C=C2)=O)O1 HSCJRCZFDFQWRP-JZMIEXBBSA-N 0.000 claims description 25
- HSCJRCZFDFQWRP-UHFFFAOYSA-N Uridindiphosphoglukose Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC1C(O)C(O)C(N2C(NC(=O)C=C2)=O)O1 HSCJRCZFDFQWRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 25
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 claims description 21
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 claims description 21
- 102000004357 Transferases Human genes 0.000 claims description 20
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 claims description 20
- XCCTYIAWTASOJW-XVFCMESISA-N Uridine-5'-Diphosphate Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 XCCTYIAWTASOJW-XVFCMESISA-N 0.000 claims description 18
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 16
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 15
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 15
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 15
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 claims description 13
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 claims description 13
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 claims description 13
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 claims description 12
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 claims description 12
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 12
- 241000219195 Arabidopsis thaliana Species 0.000 claims description 10
- 241000235648 Pichia Species 0.000 claims description 10
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 claims description 9
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 9
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 claims description 8
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 8
- 241000219194 Arabidopsis Species 0.000 claims description 7
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 7
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 claims description 6
- 235000011331 Brassica Nutrition 0.000 claims description 6
- 235000011299 Brassica oleracea var botrytis Nutrition 0.000 claims description 6
- 240000003259 Brassica oleracea var. botrytis Species 0.000 claims description 6
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 claims description 6
- 241000233866 Fungi Species 0.000 claims description 6
- 244000020551 Helianthus annuus Species 0.000 claims description 6
- 241000589344 Methylomonas Species 0.000 claims description 6
- 241000235395 Mucor Species 0.000 claims description 6
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 claims description 6
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 claims description 6
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 claims description 6
- 244000105624 Arachis hypogaea Species 0.000 claims description 5
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 claims description 5
- 240000002791 Brassica napus Species 0.000 claims description 5
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 claims description 5
- 244000025254 Cannabis sativa Species 0.000 claims description 5
- 241000193403 Clostridium Species 0.000 claims description 5
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 claims description 5
- 241000235035 Debaryomyces Species 0.000 claims description 5
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 claims description 5
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 claims description 5
- 240000006240 Linum usitatissimum Species 0.000 claims description 5
- 241000589354 Methylosinus Species 0.000 claims description 5
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 claims description 5
- 244000061176 Nicotiana tabacum Species 0.000 claims description 5
- 235000015173 baked goods and baking mixes Nutrition 0.000 claims description 5
- 235000015218 chewing gum Nutrition 0.000 claims description 5
- 229940112822 chewing gum Drugs 0.000 claims description 5
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 claims description 5
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 claims description 5
- 241000589291 Acinetobacter Species 0.000 claims description 4
- 244000075850 Avena orientalis Species 0.000 claims description 4
- 235000007319 Avena orientalis Nutrition 0.000 claims description 4
- 241000193401 Clostridium acetobutylicum Species 0.000 claims description 4
- 241000192700 Cyanobacteria Species 0.000 claims description 4
- 235000003222 Helianthus annuus Nutrition 0.000 claims description 4
- 241000588748 Klebsiella Species 0.000 claims description 4
- 240000004658 Medicago sativa Species 0.000 claims description 4
- 241001467578 Microbacterium Species 0.000 claims description 4
- 241000191025 Rhodobacter Species 0.000 claims description 4
- 241000316848 Rhodococcus <scale insect> Species 0.000 claims description 4
- YWPVROCHNBYFTP-UHFFFAOYSA-N Rubusoside Natural products C1CC2C3(C)CCCC(C)(C(=O)OC4C(C(O)C(O)C(CO)O4)O)C3CCC2(C2)CC(=C)C21OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O YWPVROCHNBYFTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 claims description 4
- 241000192584 Synechocystis Species 0.000 claims description 4
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 claims description 4
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 claims description 4
- 235000014510 cooky Nutrition 0.000 claims description 4
- YWPVROCHNBYFTP-OSHKXICASA-N rubusoside Chemical compound O([C@]12C(=C)C[C@@]3(C1)CC[C@@H]1[C@@](C)(CCC[C@]1([C@@H]3CC2)C)C(=O)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O YWPVROCHNBYFTP-OSHKXICASA-N 0.000 claims description 4
- 240000007087 Apium graveolens Species 0.000 claims description 3
- 235000015849 Apium graveolens Dulce Group Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000010591 Appio Nutrition 0.000 claims description 3
- 241000186063 Arthrobacter Species 0.000 claims description 3
- 241000219310 Beta vulgaris subsp. vulgaris Species 0.000 claims description 3
- 241000743774 Brachypodium Species 0.000 claims description 3
- 241000219198 Brassica Species 0.000 claims description 3
- 240000007124 Brassica oleracea Species 0.000 claims description 3
- 235000003899 Brassica oleracea var acephala Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000011301 Brassica oleracea var capitata Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000017647 Brassica oleracea var italica Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000001169 Brassica oleracea var oleracea Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000004977 Brassica sinapistrum Nutrition 0.000 claims description 3
- 241000220243 Brassica sp. Species 0.000 claims description 3
- 241000588923 Citrobacter Species 0.000 claims description 3
- 235000011309 Crambe hispanica subsp abyssinica Nutrition 0.000 claims description 3
- 241000220247 Crambe hispanica subsp. abyssinica Species 0.000 claims description 3
- 244000241257 Cucumis melo Species 0.000 claims description 3
- 235000015510 Cucumis melo subsp melo Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000002767 Daucus carota Nutrition 0.000 claims description 3
- 244000000626 Daucus carota Species 0.000 claims description 3
- 240000009088 Fragaria x ananassa Species 0.000 claims description 3
- 108700023372 Glycosyltransferases Proteins 0.000 claims description 3
- 235000004431 Linum usitatissimum Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000007688 Lycopersicon esculentum Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000017587 Medicago sativa ssp. sativa Nutrition 0.000 claims description 3
- 241000209117 Panicum Species 0.000 claims description 3
- 235000006443 Panicum miliaceum subsp. miliaceum Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000009037 Panicum miliaceum subsp. ruderale Nutrition 0.000 claims description 3
- 241001520808 Panicum virgatum Species 0.000 claims description 3
- 241000520272 Pantoea Species 0.000 claims description 3
- 240000004370 Pastinaca sativa Species 0.000 claims description 3
- 235000017769 Pastinaca sativa subsp sativa Nutrition 0.000 claims description 3
- 244000062780 Petroselinum sativum Species 0.000 claims description 3
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 claims description 3
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 claims description 3
- 235000010582 Pisum sativum Nutrition 0.000 claims description 3
- 240000004713 Pisum sativum Species 0.000 claims description 3
- 240000000111 Saccharum officinarum Species 0.000 claims description 3
- 235000007201 Saccharum officinarum Nutrition 0.000 claims description 3
- 241000209056 Secale Species 0.000 claims description 3
- 235000007238 Secale cereale Nutrition 0.000 claims description 3
- 240000003768 Solanum lycopersicum Species 0.000 claims description 3
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 claims description 3
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000011684 Sorghum saccharatum Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000021536 Sugar beet Nutrition 0.000 claims description 3
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 claims description 3
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000004067 bulking agent Substances 0.000 claims description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 3
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000000945 filler Substances 0.000 claims description 3
- 235000020232 peanut Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000011197 perejil Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000017060 Arachis glabrata Nutrition 0.000 claims description 2
- 235000010777 Arachis hypogaea Nutrition 0.000 claims description 2
- 235000018262 Arachis monticola Nutrition 0.000 claims description 2
- 235000016623 Fragaria vesca Nutrition 0.000 claims description 2
- 235000011363 Fragaria x ananassa Nutrition 0.000 claims description 2
- 241000235649 Kluyveromyces Species 0.000 claims description 2
- 235000009754 Vitis X bourquina Nutrition 0.000 claims description 2
- 235000012333 Vitis X labruscana Nutrition 0.000 claims description 2
- 240000006365 Vitis vinifera Species 0.000 claims description 2
- 235000014787 Vitis vinifera Nutrition 0.000 claims description 2
- FJJCIZWZNKZHII-UHFFFAOYSA-N [4,6-bis(cyanoamino)-1,3,5-triazin-2-yl]cyanamide Chemical compound N#CNC1=NC(NC#N)=NC(NC#N)=N1 FJJCIZWZNKZHII-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000011121 hardwood Substances 0.000 claims description 2
- 102000051366 Glycosyltransferases Human genes 0.000 claims 2
- 241000186031 Corynebacteriaceae Species 0.000 claims 1
- 241000219146 Gossypium Species 0.000 claims 1
- 244000062793 Sorghum vulgare Species 0.000 claims 1
- 101710156615 Sucrose synthase 1 Proteins 0.000 claims 1
- 101710156775 Sucrose synthase 3 Proteins 0.000 claims 1
- 244000098338 Triticum aestivum Species 0.000 claims 1
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 claims 1
- 150000002338 glycosides Chemical class 0.000 claims 1
- 108700014210 glycosyltransferase activity proteins Proteins 0.000 claims 1
- 239000011122 softwood Substances 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 122
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 68
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 61
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 46
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 43
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 36
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 36
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 36
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 32
- 239000000047 product Substances 0.000 description 24
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 23
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 20
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 20
- 101100262416 Stevia rebaudiana UGT76G1 gene Proteins 0.000 description 19
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 18
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 18
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 18
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 18
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 17
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 17
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 16
- 244000228451 Stevia rebaudiana Species 0.000 description 15
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 15
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 15
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 15
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 14
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 14
- -1 steviol glycoside compounds Chemical class 0.000 description 14
- 229960004793 sucrose Drugs 0.000 description 14
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 13
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 12
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 12
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 11
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 11
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 11
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- QFVOYBUQQBFCRH-UHFFFAOYSA-N Steviol Natural products C1CC2(C3)CC(=C)C3(O)CCC2C2(C)C1C(C)(C(O)=O)CCC2 QFVOYBUQQBFCRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 10
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 10
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 10
- 229940032084 steviol Drugs 0.000 description 10
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 9
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 8
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 8
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 8
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 7
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 7
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 7
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 7
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 6
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 6
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 6
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 6
- QSRAJVGDWKFOGU-WBXIDTKBSA-N rebaudioside c Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@]1(CC[C@H]2[C@@]3(C)[C@@H]([C@](CCC3)(C)C(=O)O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)CC3)C(=C)C[C@]23C1 QSRAJVGDWKFOGU-WBXIDTKBSA-N 0.000 description 6
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 6
- QFVOYBUQQBFCRH-VQSWZGCSSA-N steviol Chemical compound C([C@@]1(O)C(=C)C[C@@]2(C1)CC1)C[C@H]2[C@@]2(C)[C@H]1[C@](C)(C(O)=O)CCC2 QFVOYBUQQBFCRH-VQSWZGCSSA-N 0.000 description 6
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 6
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 6
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 6
- 244000299507 Gossypium hirsutum Species 0.000 description 5
- 241000219977 Vigna Species 0.000 description 5
- 230000001851 biosynthetic effect Effects 0.000 description 5
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 5
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 5
- 239000008057 potassium phosphate buffer Substances 0.000 description 5
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 5
- 241000894007 species Species 0.000 description 5
- 108010009534 Arabidopsis sucrose synthase-1 Proteins 0.000 description 4
- 241000701489 Cauliflower mosaic virus Species 0.000 description 4
- 108700010070 Codon Usage Proteins 0.000 description 4
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 4
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 4
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 4
- 230000006870 function Effects 0.000 description 4
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 4
- 238000003919 heteronuclear multiple bond coherence Methods 0.000 description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 4
- 238000001551 total correlation spectroscopy Methods 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 3
- 241001301148 Brassica rapa subsp. oleifera Species 0.000 description 3
- 206010013911 Dysgeusia Diseases 0.000 description 3
- 239000001776 FEMA 4720 Substances 0.000 description 3
- 240000006394 Sorghum bicolor Species 0.000 description 3
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 3
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 3
- 239000006167 equilibration buffer Substances 0.000 description 3
- 235000019439 ethyl acetate Nutrition 0.000 description 3
- 229930182478 glucoside Natural products 0.000 description 3
- 125000002791 glucosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 3
- 238000003929 heteronuclear multiple quantum coherence Methods 0.000 description 3
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 3
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 3
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 3
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 3
- 241001133760 Acoelorraphe Species 0.000 description 2
- TWCMVXMQHSVIOJ-UHFFFAOYSA-N Aglycone of yadanzioside D Natural products COC(=O)C12OCC34C(CC5C(=CC(O)C(O)C5(C)C3C(O)C1O)C)OC(=O)C(OC(=O)C)C24 TWCMVXMQHSVIOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000589158 Agrobacterium Species 0.000 description 2
- 241000589155 Agrobacterium tumefaciens Species 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- PLMKQQMDOMTZGG-UHFFFAOYSA-N Astrantiagenin E-methylester Natural products CC12CCC(O)C(C)(CO)C1CCC1(C)C2CC=C2C3CC(C)(C)CCC3(C(=O)OC)CCC21C PLMKQQMDOMTZGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000007558 Avena sp Nutrition 0.000 description 2
- 241000218631 Coniferophyta Species 0.000 description 2
- 241000195493 Cryptophyta Species 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical group O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 2
- 241001057636 Dracaena deremensis Species 0.000 description 2
- 241000701533 Escherichia virus T4 Species 0.000 description 2
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 2
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- 240000007377 Petunia x hybrida Species 0.000 description 2
- GIPHUOWOTCAJSR-UHFFFAOYSA-N Rebaudioside A. Natural products C1CC2C3(C)CCCC(C)(C(=O)OC4C(C(O)C(O)C(CO)O4)O)C3CCC2(C2)CC(=C)C21OC1OC(CO)C(O)C(O)C1OC(C1O)OC(CO)C(O)C1OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O GIPHUOWOTCAJSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000003434 Sesamum indicum Nutrition 0.000 description 2
- 244000040738 Sesamum orientale Species 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 241000723873 Tobacco mosaic virus Species 0.000 description 2
- 241000235017 Zygosaccharomyces Species 0.000 description 2
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 2
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 2
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 2
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 2
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 2
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PFOARMALXZGCHY-UHFFFAOYSA-N homoegonol Natural products C1=C(OC)C(OC)=CC=C1C1=CC2=CC(CCCO)=CC(OC)=C2O1 PFOARMALXZGCHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001519 homopolymer Polymers 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 2
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 2
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 238000001823 molecular biology technique Methods 0.000 description 2
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 2
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- DRSKVOAJKLUMCL-MMUIXFKXSA-N u2n4xkx7hp Chemical compound O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)O[C@]12C(=C)C[C@@]3(C1)CC[C@@H]1[C@@](C)(CCC[C@]1([C@@H]3CC2)C)C(O)=O)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O DRSKVOAJKLUMCL-MMUIXFKXSA-N 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- FQVLRGLGWNWPSS-BXBUPLCLSA-N (4r,7s,10s,13s,16r)-16-acetamido-13-(1h-imidazol-5-ylmethyl)-10-methyl-6,9,12,15-tetraoxo-7-propan-2-yl-1,2-dithia-5,8,11,14-tetrazacycloheptadecane-4-carboxamide Chemical compound N1C(=O)[C@@H](NC(C)=O)CSSC[C@@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]1CC1=CN=CN1 FQVLRGLGWNWPSS-BXBUPLCLSA-N 0.000 description 1
- HNSDLXPSAYFUHK-UHFFFAOYSA-N 1,4-bis(2-ethylhexyl) sulfosuccinate Chemical compound CCCCC(CC)COC(=O)CC(S(O)(=O)=O)C(=O)OCC(CC)CCCC HNSDLXPSAYFUHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VGONTNSXDCQUGY-RRKCRQDMSA-N 2'-deoxyinosine Chemical group C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(N=CNC2=O)=C2N=C1 VGONTNSXDCQUGY-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005084 2D-nuclear magnetic resonance Methods 0.000 description 1
- 101710163881 5,6-dihydroxyindole-2-carboxylic acid oxidase Proteins 0.000 description 1
- WBZFUFAFFUEMEI-UHFFFAOYSA-M Acesulfame k Chemical compound [K+].CC1=CC(=O)[N-]S(=O)(=O)O1 WBZFUFAFFUEMEI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000186361 Actinobacteria <class> Species 0.000 description 1
- 241000589156 Agrobacterium rhizogenes Species 0.000 description 1
- 102100034035 Alcohol dehydrogenase 1A Human genes 0.000 description 1
- 102100036826 Aldehyde oxidase Human genes 0.000 description 1
- 108020005544 Antisense RNA Proteins 0.000 description 1
- 241000722808 Arthrobotrys Species 0.000 description 1
- 235000016425 Arthrospira platensis Nutrition 0.000 description 1
- 240000002900 Arthrospira platensis Species 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010011485 Aspartame Proteins 0.000 description 1
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 1
- 235000011293 Brassica napus Nutrition 0.000 description 1
- 235000010149 Brassica rapa subsp chinensis Nutrition 0.000 description 1
- 235000000536 Brassica rapa subsp pekinensis Nutrition 0.000 description 1
- 241000499436 Brassica rapa subsp. pekinensis Species 0.000 description 1
- 239000002126 C01EB10 - Adenosine Substances 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Chemical group CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010066133 D-octopine dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- YAHZABJORDUQGO-NQXXGFSBSA-N D-ribulose 1,5-bisphosphate Chemical compound OP(=O)(O)OC[C@@H](O)[C@@H](O)C(=O)COP(O)(O)=O YAHZABJORDUQGO-NQXXGFSBSA-N 0.000 description 1
- 102000012410 DNA Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108010061982 DNA Ligases Proteins 0.000 description 1
- 102000004594 DNA Polymerase I Human genes 0.000 description 1
- 108010017826 DNA Polymerase I Proteins 0.000 description 1
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102000007260 Deoxyribonuclease I Human genes 0.000 description 1
- 108010008532 Deoxyribonuclease I Proteins 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 241000195634 Dunaliella Species 0.000 description 1
- 241001198387 Escherichia coli BL21(DE3) Species 0.000 description 1
- 108060002716 Exonuclease Proteins 0.000 description 1
- 101150094690 GAL1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150038242 GAL10 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100028501 Galanin peptides Human genes 0.000 description 1
- 102100024637 Galectin-10 Human genes 0.000 description 1
- 101000892220 Geobacillus thermodenitrificans (strain NG80-2) Long-chain-alcohol dehydrogenase 1 Proteins 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100031181 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 235000009432 Gossypium hirsutum Nutrition 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 101150009006 HIS3 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100246753 Halobacterium salinarum (strain ATCC 700922 / JCM 11081 / NRC-1) pyrF gene Proteins 0.000 description 1
- 101000780443 Homo sapiens Alcohol dehydrogenase 1A Proteins 0.000 description 1
- 101000928314 Homo sapiens Aldehyde oxidase Proteins 0.000 description 1
- 101100121078 Homo sapiens GAL gene Proteins 0.000 description 1
- 101000878605 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Proteins 0.000 description 1
- 101000920618 Homo sapiens Transcription and mRNA export factor ENY2 Proteins 0.000 description 1
- 101001046426 Homo sapiens cGMP-dependent protein kinase 1 Proteins 0.000 description 1
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N L-rhamnopyranose Chemical group C[C@@H]1OC(O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N 0.000 description 1
- PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N L-rhamnose Chemical group CC(O)C(O)C(O)C(O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100038007 Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Human genes 0.000 description 1
- 239000007993 MOPS buffer Substances 0.000 description 1
- 239000005913 Maltodextrin Substances 0.000 description 1
- 229920002774 Maltodextrin Polymers 0.000 description 1
- 235000010624 Medicago sativa Nutrition 0.000 description 1
- 102000007474 Multiprotein Complexes Human genes 0.000 description 1
- 108010085220 Multiprotein Complexes Proteins 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- 239000004384 Neotame Substances 0.000 description 1
- 241000209094 Oryza Species 0.000 description 1
- 101150012394 PHO5 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000567507 Panthea Species 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 241000209504 Poaceae Species 0.000 description 1
- 108010059820 Polygalacturonase Proteins 0.000 description 1
- 101100394989 Rhodopseudomonas palustris (strain ATCC BAA-98 / CGA009) hisI gene Proteins 0.000 description 1
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 101100434411 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) ADH1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101001000154 Schistosoma mansoni Phosphoglycerate kinase Proteins 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical class [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000007230 Sorghum bicolor Nutrition 0.000 description 1
- 235000006092 Stevia rebaudiana Nutrition 0.000 description 1
- 101100427140 Stevia rebaudiana UGT74G1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100048059 Stevia rebaudiana UGT85C2 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 1
- 239000004376 Sucralose Substances 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 102100031954 Transcription and mRNA export factor ENY2 Human genes 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150050575 URA3 gene Proteins 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001464837 Viridiplantae Species 0.000 description 1
- 241000219094 Vitaceae Species 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 235000010358 acesulfame potassium Nutrition 0.000 description 1
- 229960004998 acesulfame potassium Drugs 0.000 description 1
- 239000000619 acesulfame-K Substances 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 101150102866 adc1 gene Proteins 0.000 description 1
- 229960005305 adenosine Drugs 0.000 description 1
- 238000001261 affinity purification Methods 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000012223 aqueous fraction Substances 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Chemical group OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000637 arginyl group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 239000000605 aspartame Substances 0.000 description 1
- 235000010357 aspartame Nutrition 0.000 description 1
- IAOZJIPTCAWIRG-QWRGUYRKSA-N aspartame Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)OC)CC1=CC=CC=C1 IAOZJIPTCAWIRG-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- 229960003438 aspartame Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Chemical group OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical group OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000023732 binding proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000002551 biofuel Substances 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 230000006696 biosynthetic metabolic pathway Effects 0.000 description 1
- 230000036983 biotransformation Effects 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 102100022422 cGMP-dependent protein kinase 1 Human genes 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical group 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 239000008004 cell lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 230000019522 cellular metabolic process Effects 0.000 description 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 229930002868 chlorophyll a Natural products 0.000 description 1
- ATNHDLDRLWWWCB-AENOIHSZSA-M chlorophyll a Chemical compound C1([C@@H](C(=O)OC)C(=O)C2=C3C)=C2N2C3=CC(C(CC)=C3C)=[N+]4C3=CC3=C(C=C)C(C)=C5N3[Mg-2]42[N+]2=C1[C@@H](CCC(=O)OC\C=C(/C)CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)[C@H](C)C2=C5 ATNHDLDRLWWWCB-AENOIHSZSA-M 0.000 description 1
- 229930002869 chlorophyll b Natural products 0.000 description 1
- NSMUHPMZFPKNMZ-VBYMZDBQSA-M chlorophyll b Chemical compound C1([C@@H](C(=O)OC)C(=O)C2=C3C)=C2N2C3=CC(C(CC)=C3C=O)=[N+]4C3=CC3=C(C=C)C(C)=C5N3[Mg-2]42[N+]2=C1[C@@H](CCC(=O)OC\C=C(/C)CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)[C@H](C)C2=C5 NSMUHPMZFPKNMZ-VBYMZDBQSA-M 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 1
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000000975 co-precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000005100 correlation spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 244000038559 crop plants Species 0.000 description 1
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 1
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 239000002038 ethyl acetate fraction Substances 0.000 description 1
- 102000013165 exonuclease Human genes 0.000 description 1
- 108010093305 exopolygalacturonase Proteins 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 239000004459 forage Substances 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 235000021021 grapes Nutrition 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 235000015243 ice cream Nutrition 0.000 description 1
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 229940030980 inova Drugs 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 238000010829 isocratic elution Methods 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000001638 lipofection Methods 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- 229940035034 maltodextrin Drugs 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 235000021096 natural sweeteners Nutrition 0.000 description 1
- 235000019412 neotame Nutrition 0.000 description 1
- HLIAVLHNDJUHFG-HOTGVXAUSA-N neotame Chemical compound CC(C)(C)CCN[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)OC)CC1=CC=CC=C1 HLIAVLHNDJUHFG-HOTGVXAUSA-N 0.000 description 1
- 108010070257 neotame Proteins 0.000 description 1
- 235000013615 non-nutritive sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 108010058731 nopaline synthase Proteins 0.000 description 1
- 238000001208 nuclear magnetic resonance pulse sequence Methods 0.000 description 1
- 239000002417 nutraceutical Substances 0.000 description 1
- 235000021436 nutraceutical agent Nutrition 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 229920002113 octoxynol Polymers 0.000 description 1
- 238000000238 one-dimensional nuclear magnetic resonance spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 230000002974 pharmacogenomic effect Effects 0.000 description 1
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000029553 photosynthesis Effects 0.000 description 1
- 238000010672 photosynthesis Methods 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 235000012015 potatoes Nutrition 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 1
- QRGRAFPOLJOGRV-UHFFFAOYSA-N rebaudioside F Natural products CC12CCCC(C)(C1CCC34CC(=C)C(CCC23)(C4)OC5OC(CO)C(O)C(OC6OCC(O)C(O)C6O)C5OC7OC(CO)C(O)C(O)C7O)C(=O)OC8OC(CO)C(O)C(O)C8O QRGRAFPOLJOGRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HYLAUKAHEAUVFE-AVBZULRRSA-N rebaudioside f Chemical compound O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)CO1)O)O[C@]12C(=C)C[C@@]3(C1)CC[C@@H]1[C@@](C)(CCC[C@]1([C@@H]3CC2)C)C(=O)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O HYLAUKAHEAUVFE-AVBZULRRSA-N 0.000 description 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 230000022532 regulation of transcription, DNA-dependent Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 235000019204 saccharin Nutrition 0.000 description 1
- CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N saccharin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)NS(=O)(=O)C2=C1 CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940081974 saccharin Drugs 0.000 description 1
- 239000000901 saccharin and its Na,K and Ca salt Substances 0.000 description 1
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 235000014214 soft drink Nutrition 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 229940082787 spirulina Drugs 0.000 description 1
- QSIDJGUAAUSPMG-CULFPKEHSA-N steviolmonoside Chemical compound O([C@]12C(=C)C[C@@]3(C1)CC[C@@H]1[C@@](C)(CCC[C@]1([C@@H]3CC2)C)C(O)=O)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O QSIDJGUAAUSPMG-CULFPKEHSA-N 0.000 description 1
- 235000021012 strawberries Nutrition 0.000 description 1
- 235000019408 sucralose Nutrition 0.000 description 1
- BAQAVOSOZGMPRM-QBMZZYIRSA-N sucralose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](Cl)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@]1(CCl)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CCl)O1 BAQAVOSOZGMPRM-QBMZZYIRSA-N 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- OQPOFZJZPYRNFF-CULFPKEHSA-N tkd5uc898q Chemical compound O=C([C@]1(C)CCC[C@@]2([C@@H]1CC[C@]13C[C@](O)(C(=C)C1)CC[C@@H]23)C)O[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O OQPOFZJZPYRNFF-CULFPKEHSA-N 0.000 description 1
- 230000005026 transcription initiation Effects 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 230000010474 transient expression Effects 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004704 ultra performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/44—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides
- C12P19/56—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen atom of the saccharide radical directly bound to a condensed ring system having three or more carbocyclic rings, e.g. daunomycin, adriamycin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A21—BAKING; EDIBLE DOUGHS
- A21D—TREATMENT, e.g. PRESERVATION, OF FLOUR OR DOUGH, e.g. BY ADDITION OF MATERIALS; BAKING; BAKERY PRODUCTS; PRESERVATION THEREOF
- A21D13/00—Finished or partly finished bakery products
- A21D13/06—Products with modified nutritive value, e.g. with modified starch content
- A21D13/062—Products with modified nutritive value, e.g. with modified starch content with modified sugar content; Sugar-free products
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23G—COCOA; COCOA PRODUCTS, e.g. CHOCOLATE; SUBSTITUTES FOR COCOA OR COCOA PRODUCTS; CONFECTIONERY; CHEWING GUM; ICE-CREAM; PREPARATION THEREOF
- A23G3/00—Sweetmeats; Confectionery; Marzipan; Coated or filled products
- A23G3/34—Sweetmeats, confectionery or marzipan; Processes for the preparation thereof
- A23G3/36—Sweetmeats, confectionery or marzipan; Processes for the preparation thereof characterised by the composition containing organic or inorganic compounds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23G—COCOA; COCOA PRODUCTS, e.g. CHOCOLATE; SUBSTITUTES FOR COCOA OR COCOA PRODUCTS; CONFECTIONERY; CHEWING GUM; ICE-CREAM; PREPARATION THEREOF
- A23G3/00—Sweetmeats; Confectionery; Marzipan; Coated or filled products
- A23G3/34—Sweetmeats, confectionery or marzipan; Processes for the preparation thereof
- A23G3/36—Sweetmeats, confectionery or marzipan; Processes for the preparation thereof characterised by the composition containing organic or inorganic compounds
- A23G3/38—Sucrose-free products
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23G—COCOA; COCOA PRODUCTS, e.g. CHOCOLATE; SUBSTITUTES FOR COCOA OR COCOA PRODUCTS; CONFECTIONERY; CHEWING GUM; ICE-CREAM; PREPARATION THEREOF
- A23G4/00—Chewing gum
- A23G4/06—Chewing gum characterised by the composition containing organic or inorganic compounds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L2/00—Non-alcoholic beverages; Dry compositions or concentrates therefor; Their preparation
- A23L2/52—Adding ingredients
- A23L2/60—Sweeteners
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L27/00—Spices; Flavouring agents or condiments; Artificial sweetening agents; Table salts; Dietetic salt substitutes; Preparation or treatment thereof
- A23L27/30—Artificial sweetening agents
- A23L27/33—Artificial sweetening agents containing sugars or derivatives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L27/00—Spices; Flavouring agents or condiments; Artificial sweetening agents; Table salts; Dietetic salt substitutes; Preparation or treatment thereof
- A23L27/30—Artificial sweetening agents
- A23L27/33—Artificial sweetening agents containing sugars or derivatives
- A23L27/36—Terpene glycosides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
- C07H15/20—Carbocyclic rings
- C07H15/24—Condensed ring systems having three or more rings
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/52—Genes encoding for enzymes or proenzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/1048—Glycosyltransferases (2.4)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/1048—Glycosyltransferases (2.4)
- C12N9/1051—Hexosyltransferases (2.4.1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/1048—Glycosyltransferases (2.4)
- C12N9/1051—Hexosyltransferases (2.4.1)
- C12N9/1062—Sucrose synthase (2.4.1.13)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y204/00—Glycosyltransferases (2.4)
- C12Y204/01—Hexosyltransferases (2.4.1)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y204/00—Glycosyltransferases (2.4)
Description
本出願は2013年11月1日付け出願の米国仮特許出願第61/898,571号(その全体を参照により本明細書に組み入れるものとする)に基づく優先権を主張するものである。
配列表の紙コピー、および46,751バイト(Microsoft WINDOWS(登録商標) Explorerにより測定された場合)のサイズの32559-17 ST25.txtと称されるファイルを含む配列のコンピューター読取可能形態が本出願において提供され、これらを参照により本明細書に組み入れることとする。この配列表は配列番号1〜12からなる。
本技術は、全般的には、UDP-グリコシルトランスフェラーゼ活性を有する組換えポリペプチドに関する。特に、ステビオール配糖体に関する1,2-19-O-グルコースグリコシル化活性を有するポリペプチドを提供する。1つの態様においては、本技術は、配列番号6に対して少なくとも80%の同一性を有するアミノ酸配列を含む組換えポリペプチドに関する。典型的な実施形態においては、本明細書に記載されている組換えポリペプチドのアミノ酸配列は配列番号6に対して少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%または更には100%の同一性を有する。
本技術は、ステビオール配糖体を合成するためのUDP-グリコシルトランスフェラーゼ活性、例えば1,2-19-O-グルコースグリコシル化活性および1,2-13-O-グルコースグリコシル化活性を有する組換えポリペプチドを提供する。本技術の組換えポリペプチド(以下、「組換えHV1ポリペプチド」とも称されうる)はステビオール配糖体化合物の生合成に有用である。本開示においては、UDP-グリコシルトランスフェラーゼ(UGT)は、活性化供与分子(典型的にはUDP-グルコース)から受容分子へと糖残基を転移させる酵素を意味する。1,2-19-O-グルコースグリコシル化活性は、ステビオシド、レバウジオシドAまたはレバウジオシドEの19-O-グルコース部分のC-2'に糖部分を転移させる酵素活性を意味する(図1A〜1Cおよび図10)。1,2-13-O-グルコースグリコシル化活性は、レバウジオシドEの13-O-グルコース部分のC-2'に糖部分を転移させる酵素活性を意味する(図10)。
本明細書中で用いる単数形表現は、内容に明らかに矛盾していない限り、複数形対象物を含む。
1つの態様においては、本開示は、配列番号6に記載されているアミノ酸配列に対して少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、そして更には100%の同一性を有するアミノ酸配列を有する組換えポリペプチドに関する。適切には、該組換えポリペプチドのアミノ酸配列は配列番号6に対して少なくとも80%の同一性を有する。より適切には、該組換えポリペプチドのアミノ酸配列は配列番号6に対して少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、そして更には100%の同一性を有する。典型的な実施形態においては、該組換えポリペプチドのアミノ酸配列は配列番号6からなる。したがって、本明細書に記載されている組換えポリペプチドは、配列番号6の機能的断片、配列番号6の機能的変異体、および例えば配列番号6に対して少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、そして更には100%の同一性を有する他の相同ポリペプチドを含む。
本明細書に記載されているとおり、本技術の組換えポリペプチドはUDP-グリコシルトランスフェラーゼ活性、例えば、より詳細には、1,2-19-O-グルコースグリコシル化活性を有し、天然源において典型的には低い存在量で存在するステビオール配糖体、例えばレバウジオシドDおよびレバウジオシドEを製造するための生合成方法の開発に有用である。本技術の組換えポリペプチドはUDP-グリコシルトランスフェラーゼ活性を有し、新規ステビオール配糖体、例えばレバウジオシドZ1およびレバウジオシドZ2を製造するための生合成方法の開発に有用である。
(実施例)
実施例1:候補UGT遺伝子の選択
系統発生的およびタンパク質BLAST分析を用いて、1,2-19-O-グルコースグリコシル化活性のUGT91サブファミリーに属する7つの候補遺伝子を特定した。
全候補UGT遺伝子の完全長DNA断片を商業的に合成した。該cDNAのほとんど全てを大腸菌(E.coli)にとって好ましいものに変化させた(Genscript, NJ)。合成されたDNAを細菌発現ベクターpETite N-His SUMO Kanベクター(Lucigen)内にクローニングした。
図1A〜1Cに示されているとおり、レバウジオシドDはレバウジオシドEのC-13-O-グルコースのC-3'のグリコシル化によっても形成されうる。したがって、レバウジオシドDは、グリコシル化反応が生じる順序に応じて、異なる生合成経路(例えば、レバウジオシドA経由およびレバウジオシドE経由)により産生されうる。例えば、まず、ステビオシドのC-13-O-グルコースのC-3'におけるグリコシル化が生じて中間体レバウジオシドAが産生され、ついでレバウジオシドAの19-O-グルコースのC-2'におけるグリコシル化が生じてレバウジオシドDが産生される。これまでに、糖残基をステビオシドのC-13-O-グルコースのC-3'に転移させてレバウジオシドAを形成する酵素として、ステビアからのUGT76G1(配列番号11)が特定されている。
レバウジオシドZ(Reb Z)の特徴づけに用いる物質を、レバウジオシドEの酵素変換を用いて産生させ、HPLCにより精製した。
[1] 配列番号6に対して少なくとも80%の同一性を有するアミノ酸配列を含む組換えポリペプチド。
[2] 該アミノ酸配列が配列番号6に対して少なくとも90%の同一性を有する、1記載の組換えポリペプチド。
[3] 該アミノ酸配列が配列番号6に対して少なくとも95%同一である、1記載の組換えポリペプチド。
[4] 該アミノ酸配列が配列番号6からなる、1記載の組換えポリペプチド。
[5] 1記載の組換えポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単離された核酸。
[6] 該ヌクレオチド配列が配列番号7に対して少なくとも80%の同一性を有する、5記載の単離された核酸。
[7] 5記載の単離された核酸を含むベクター。
[8] 7記載のベクターを含む宿主細胞。
[9] 該宿主細胞が、細菌、酵母、糸状菌、ラン藻類および植物細胞からなる群から選択される、8記載の宿主細胞。
[10] 該宿主細胞が、エシェリキア(Escherichia)、サルモネラ(Salmonella)、バシラス(Bacillus)、アシネトバクター(Acinetobacter)、ストレプトマイセス(Streptomyces)、コリネバクテリウム(Corynebacterium)、メチロシヌス(Methylosinus)、メチロモナス(Methylomonas)、ロドコッカス(Rhodococcus)、シュードモナス(Pseudomonas)、ロドバクター(Rhodobacter)、シネコシスチス(Synechocystis)、サッカロミセス(Saccharomyces)、ジゴサッカロミセス(Zygosaccharomyces)、クライベロマイセス(Kluyveromyces)、カンジダ(Candida)、ハンゼヌラ(Hansenula)、デバリオマイセス(Debaryomyces)、ムコール(Mucor)、ピチア(Pichia)、トルロプシス(Torulopsis)、アスペルギルス(Aspergillus)、アルトロボトリス(Arthrobotrys)、ブレビバクテリア(Brevibacteria)、ミクロバクテリウム(Microbacterium)、アルスロバクター(Arthrobacter)、シトロバクター(Citrobacter)、エシェリキア(Escherichia)、クレブシエラ(Klebsiella)、パンテア(Pantoea)、サルモネラ(Salmonella)コリネバクテリウム(Corynebacterium)、クロストリジウム(Clostridium)およびクロストリジウム・アセトブチリクム(Clostridium acetobutylicum)からなる群から選択される、9記載の宿主細胞。
[11] 該宿主細胞が、ダイズ、ナタネ、ヒマワリ、ワタ、トウモロコシ、タバコ、アルファルファ、コムギ、オオムギ、エンバク、モロコシ、イネ、ブロッコリー、カリフラワー、キャベツ、パースニップ、メロン、ニンジン、セロリ、パセリ、トマト、ジャガイモ、イチゴ、ピーナッツ、ブドウ、草種(grass seed)作物、テンサイ、サトウキビ、豆、エンドウ、ライムギ、アマ、広葉樹、針葉樹、飼料草、アラビドプシス・サリアナ(Arabidopsis thaliana;シロイヌナズナ)、オリザ・サチバ(Oryza sativa;イネ)、ホルデウム・ブルガレ(Hordeum vulgare;オオムギ)、スイッチグラス(Panicum vigratum)、ブラキポジウム属種(Brachypodium spp)、アブラナ属種(Brassica spp.)およびクランベ・アビッシニカ(Crambe abyssinica)からなる群から選択される植物から単離された細胞である、9記載の宿主細胞。
[12] 配列番号6に対して少なくとも80%の同一性を有するアミノ酸配列を含む組換えポリペプチドと共に基質をインキュベートすることを含む、ステビオール配糖体組成物の製造方法。
[13] 該基質および該組換えポリペプチドと共に組換えスクロースシンターゼをインキュベートすることを更に含む、12記載の製造方法。
[14] 該組換えスクロースシンターゼが、配列番号9に対して少なくとも80%の同一性を有するアミノ酸配列を含む、13記載の製造方法。
[15] 該スクロースシンターゼ、該基質および該組換えポリペプチドと共に組換えUDP-グリコシルトランスフェラーゼをインキュベートすることを更に含む、13記載の製造方法。
[16] 該組換えUDP-グリコシルトランスフェラーゼが、配列番号11に対して少なくとも80%の同一性を有するアミノ酸配列を含む、15記載の製造方法。
[17] 該基質が、ステビオシド、レバウジオシドA、レバウジオシドEおよびそれらの組合せからなる群から選択される、12記載の製造方法。
[18] 12記載の製造方法により製造されるステビオール配糖体組成物。
[19] レバウジオシドD、レバウジオシドE、レバウジオシドZおよびそれらの組合せから選択されるステビオール配糖体化合物を含む、18記載のステビオール配糖体組成物。
[20] 18記載のステビオール配糖体組成物を含む甘味料。
[21] 配列番号6に対して少なくとも80%の同一性を有するアミノ酸配列を含む組換えポリペプチドと共に基質をインキュベートすることを含む、レバウジオシドZの製造方法。
[22] 該基質が、ルブソシド、ステビオシドおよびそれらの組合せからなる群から選択される、21記載の製造方法。
[23] 該基質および該組換えポリペプチドと共に組換えスクロースシンターゼをインキュベートすることを更に含む、21記載の製造方法。
[24] 該組換えスクロースシンターゼが、配列番号9に対して少なくとも80%の同一性を有するアミノ酸配列を含む、23記載の製造方法。
[25] 該スクロースシンターゼ、該基質および該組換えポリペプチドと共に組換えUDP-グリコシルトランスフェラーゼをインキュベートすることを更に含む、23記載の製造方法。
[26] 21記載の製造方法により製造されるレバウジオシドZ化合物。
[27] 該レバウジオシドZ化合物がレバウジオシドZ1(Reb Z1)とレバウジオシドZ2(Reb Z2)との混合物を含む、26記載のレバウジオシドZ化合物。
[28] レバウジオシドEからレバウジオシドZを合成するための方法であって、
レバウジオシドE、スクロース、ウリジンジホスファート(UDP)およびウリジンジホスファート-グルコース(UDP-グルコース)からなる群から選択される基質ならびにHV1を含む反応混合物を調製し、
レバウジオシドZを産生するのに十分な時間にわたって該反応混合物をインキュベートすることを含み、ここで、グルコースがレバウジオシドEに共有結合してレバウジオシドZを産生し、グルコースがレバウジオシドEのC2'-13-O-グルコースに共有結合してレバウジオシドZ1を産生し、グルコースがレバウジオシドEのC2'-19-O-グルコースに共有結合してレバウジオシドZ2を産生する、方法。
[29] スクロースシンターゼを該反応混合物に加えることを更に含む、28記載の方法。
[30] 該スクロースシンターゼが、アラビドプシス(Arabidopsis)スクロースシンターゼ1、アラビドプシス(Arabidopsis)スクロースシンターゼ3およびビグナ・ラディアテ(Vigna radiate)スクロースシンターゼからなる群から選択される、29記載の方法。
[31] 該スクロースシンターゼがアラビドプシス・サリアナ(Arabidopsis thaliana)スクロースシンターゼ1である、30記載の方法。
[32] レバウジオシドEからレバウジオシドDを合成するための方法であって、
レバウジオシドE、スクロース、ウリジンジホスファート(UDP)およびウリジンジホスファート-グルコース(UDP-グルコース)からなる群から選択される基質ならびにUGT76G1を含む反応混合物を調製し、
レバウジオシドDを産生するのに十分な時間にわたって該反応混合物をインキュベートすることを含み、ここで、グルコースがレバウジオシドEに共有結合してレバウジオシドDを産生する、方法。
[33] スクロースシンターゼを該反応混合物に加えることを更に含む、32記載の方法。
[34] 該スクロースシンターゼが、アラビドプシス(Arabidopsis)スクロースシンターゼ1、アラビドプシス(Arabidopsis)スクロースシンターゼ3およびビグナ・ラディアテ(Vigna radiate)スクロースシンターゼからなる群から選択される、33記載の方法。
[35] 該スクロースシンターゼがアラビドプシス・サリアナ(Arabidopsis thaliana)スクロースシンターゼ1である、34記載の方法。
[36] 構造:
を含むレバウジオシドZ1化合物。
[37] 構造:
を含むレバウジオシドZ2化合物。
[38] 化学構造:
を有する化合物を含む甘味料。
[39] 充填剤、増量剤および固化防止剤の少なくとも1つを更に含む、38記載の甘味料。
[40] 甘味量の、38記載の甘味料を含む、消耗品。
[41] 飲料、菓子類、ベーカリー製品、クッキーおよびチューインガムからなる群から選択される、40記載の消耗品。
[42] 化学構造:
を有する化合物を含む甘味料。
[43] 充填剤、増量剤および固化防止剤の少なくとも1つを更に含む、42記載の甘味料。
[44] 甘味量の、42記載の甘味料を含む、消耗品(消費可能な製品)。
[45] 飲料、菓子類、ベーカリー製品、クッキーおよびチューインガムからなる群から選択される、44記載の消耗品(消費可能な製品)。
Claims (15)
- 配列番号6に対して少なくとも95%の同一性を有するアミノ酸配列を含み、1,2-19-O-グルコースグリコシル化活性を有する組換えポリペプチドを含む、ステビオール配糖体製造用の組成物。
- 該組換えポリペプチドが配列番号6のアミノ酸配列からなる、請求項1に記載の組成物。
- (a)配列番号6に対して少なくとも95%の同一性を有するアミノ酸配列もしくは配列番号6からなるアミノ酸配列を有し、1,2-19-O-グルコースグリコシル化活性を有する組換えポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単離された核酸、または
(b)配列番号6に対して少なくとも95%の同一性を有するアミノ酸配列もしくは配列番号6からなるアミノ酸配列を有し、1,2-19-O-グルコースグリコシル化活性を有する組換えポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単離された核酸であって、該ヌクレオチド配列が配列番号7に対して少なくとも95%の同一性を有する、単離された核酸
を含む、ステビオール配糖体製造用の組成物。 - 請求項3に記載の単離された核酸がベクターに含まれる、請求項3に記載の組成物。
- (a)請求項4に記載のベクターが宿主細胞に含まれる、請求項4に記載の組成物、または
(b)請求項4に記載のベクターが宿主細胞に含まれ、該宿主細胞が、細菌、酵母、糸状菌、ラン藻類および植物細胞からなる群から選択される、請求項4に記載の組成物、または
(c)請求項4に記載のベクターが宿主細胞に含まれ、該宿主細胞が、エシェリキア(Escherichia)、サルモネラ(Salmonella)、バシラス(Bacillus)、アシネトバクター(Acinetobacter)、ストレプトマイセス(Streptomyces)、コリネバクテリウム(Corynebacterium)、メチロシヌス(Methylosinus)、メチロモナス(Methylomonas)、ロドコッカス(Rhodococcus)、シュードモナス(Pseudomonas)、ロドバクター(Rhodobacter)、シネコシスチス(Synechocystis)、サッカロミセス(Saccharomyces)、ジゴサッカロミセス(Zygosaccharomyces)、クライベロマイセス(Kluyveromyces)、カンジダ(Candida)、ハンゼヌラ(Hansenula)、デバリオマイセス(Debaryomyces)、ムコール(Mucor)、ピチア(Pichia)、トルロプシス(Torulopsis)、アスペルギルス(Aspergillus)、アルトロボトリス(Arthrobotrys)、ブレビバクテリア(Brevibacteria)、ミクロバクテリウム(Microbacterium)、アルスロバクター(Arthrobacter)、シトロバクター(Citrobacter)、エシェリキア(Escherichia)、クレブシエラ(Klebsiella)、パンテア(Pantoea)、サルモネラ(Salmonella)コリネバクテリウム(Corynebacterium)、クロストリジウム(Clostridium)およびクロストリジウム・アセトブチリクム(Clostridium acetobutylicum)からなる群から選択される、請求項4に記載の組成物、または
(d)請求項4に記載のベクターが宿主細胞に含まれ、該宿主細胞が植物細胞であり、該宿主細胞が、ダイズ、ナタネ、ヒマワリ、ワタ、トウモロコシ、タバコ、アルファルファ、コムギ、オオムギ、エンバク、モロコシ、イネ、ブロッコリー、カリフラワー、キャベツ、パースニップ、メロン、ニンジン、セロリ、パセリ、トマト、ジャガイモ、イチゴ、ピーナッツ、ブドウ、草種(grass seed)作物、テンサイ、サトウキビ、豆、エンドウ、ライムギ、アマ、広葉樹、針葉樹、飼料草、アラビドプシス・サリアナ(Arabidopsis thaliana;シロイヌナズナ)、オリザ・サチバ(Oryza sativa;イネ)、ホルデウム・ブルガレ(Hordeum vulgare;オオムギ)、スイッチグラス(Panicum vigratum)、ブラキポジウム属種(Brachypodium spp)、アブラナ属種(Brassica spp.)およびクランベ・アビッシニカ(Crambe abyssinica)からなる群から選択される植物から単離された細胞である、請求項4に記載の組成物。 - (a)配列番号6に対して少なくとも95%の同一性を有するアミノ酸配列を含み、1,2-19-O-グルコースグリコシル化活性を有する組換えポリペプチドと共に基質をインキュベートすることを含む、ステビオール配糖体組成物の製造方法、または
(b)配列番号6に対して少なくとも95%の同一性を有するアミノ酸配列を含み、1,2-19-O-グルコースグリコシル化活性を有する組換えポリペプチドと共に基質をインキュベートすることを含む、ステビオール配糖体組成物の製造方法であって、該基質が、ステビオシド、レバウジオシドA、レバウジオシドEおよびそれらの組合せからなる群から選択される、前記製造方法。 - 請求項7に記載のステビオール配糖体組成物を含む甘味料。
- (a)配列番号6に対して少なくとも95%の同一性を有するアミノ酸配列を含み、1,2-19-O-グルコースグリコシル化活性を有する組換えポリペプチドと共に基質をインキュベートすることを含む、レバウジオシドZの製造方法、または
(b)配列番号6に対して少なくとも95%の同一性を有するアミノ酸配列を含み、1,2-19-O-グルコースグリコシル化活性を有する組換えポリペプチドと共に基質をインキュベートすることを含み、基質が、ルブソシド、ステビオシドおよびそれらの組合せからなる群から選択される、レバウジオシドZの製造方法、
ここで該レバウジオシドZは
(a)構造:
(b)構造:
- (a)該基質および該組換えポリペプチドと共に組換えスクロースシンターゼをインキュベートすることを更に含む、請求項6または9に記載の製造方法、または
(b)該基質および該組換えポリペプチドと共に組換えスクロースシンターゼをインキュベートすることを更に含み、該組換えスクロースシンターゼが、配列番号9に対して少なくとも95%の同一性を有するアミノ酸配列を含み、スクロースシンターゼ活性を有する、請求項6または9に記載の製造方法、または
(c)該基質および該組換えポリペプチドと共に組換えスクロースシンターゼをインキュベートすることを更に含み、該スクロースシンターゼ、該基質および該組換えポリペプチドと共に、配列番号6のアミノ酸を有する組換えHV1ポリペプチド以外の組換えUDP-グリコシルトランスフェラーゼをインキュベートすることを更に含む、請求項6または9に記載の製造方法、または
(d) 該基質および該組換えポリペプチドと共に組換えスクロースシンターゼをインキュベートすることを更に含み、該スクロースシンターゼ、該基質および該組換えポリペプチドと共に組換えUDP-グリコシルトランスフェラーゼをインキュベートすることを更に含み、
該組換えUDP-グリコシルトランスフェラーゼが、配列番号11に対して少なくとも95%の同一性を有するアミノ酸配列を含み、UDP-グリコシルトランスフェラーゼ活性を有する、請求項6または9に記載の製造方法。 - レバウジオシドEからレバウジオシドZを合成するための方法であって、
スクロース、ウリジンジホスファート(UDP)およびウリジンジホスファート-グルコース(UDP-グルコース)からなる群から選択される基質、レバウジオシドE、ならびに配列番号6のアミノ酸配列を有する組換えポリペプチドであるHV1を含む反応混合物を調製し、
レバウジオシドZを産生するのに十分な時間にわたって該反応混合物をインキュベートすることを含み、ここで、グルコースがレバウジオシドEに共有結合してレバウジオシドZを産生し、グルコースがレバウジオシドEのC2'-13-O-グルコースに共有結合してレバウジオシドZ1を産生し、グルコースがレバウジオシドEのC2'-19-O-グルコースに共有結合してレバウジオシドZ2を産生する、方法、
ここで該レバウジオシドZは
(a)構造:
(b)構造:
- (a)スクロースシンターゼを該反応混合物に加えることを更に含み、該スクロースシンターゼが、アラビドプシス(Arabidopsis)スクロースシンターゼ1、及びアラビドプシス(Arabidopsis)スクロースシンターゼ3からなる群から選択される、請求項11に記載の方法、または
(b) スクロースシンターゼを該反応混合物に加えることを更に含み、該スクロースシンターゼがアラビドプシス・サリアナ(Arabidopsis thaliana)スクロースシンターゼ1である、請求項11に記載の方法。 - (a)甘味量の、請求項14に記載の甘味料を含む、消費可能な製品、または
(b) 甘味量の、請求項14に記載の甘味料を含む、消費可能な製品であって、飲料、菓子類、ベーカリー製品、クッキーおよびチューインガムからなる群から選択される、前記消費可能な製品。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201361898571P | 2013-11-01 | 2013-11-01 | |
US61/898,571 | 2013-11-01 | ||
PCT/US2014/059081 WO2015065650A2 (en) | 2013-11-01 | 2014-10-03 | Recombinant production of steviol glycosides |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2017500056A JP2017500056A (ja) | 2017-01-05 |
JP2017500056A5 JP2017500056A5 (ja) | 2017-11-16 |
JP6530760B2 true JP6530760B2 (ja) | 2019-06-12 |
Family
ID=53005355
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016552419A Active JP6530760B2 (ja) | 2013-11-01 | 2014-10-03 | ステビオール配糖体の組換え製造 |
Country Status (11)
Country | Link |
---|---|
US (3) | US20160251635A1 (ja) |
EP (1) | EP3063286B1 (ja) |
JP (1) | JP6530760B2 (ja) |
CN (1) | CN106103729B (ja) |
AU (2) | AU2014342939B2 (ja) |
CA (1) | CA2928940C (ja) |
DK (1) | DK3063286T3 (ja) |
ES (1) | ES2709439T3 (ja) |
MX (1) | MX367771B (ja) |
RU (2) | RU2706789C2 (ja) |
WO (1) | WO2015065650A2 (ja) |
Families Citing this family (26)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP6530760B2 (ja) | 2013-11-01 | 2019-06-12 | コナゲン インコーポレーテッド | ステビオール配糖体の組換え製造 |
US9522929B2 (en) | 2014-05-05 | 2016-12-20 | Conagen Inc. | Non-caloric sweetener |
EP3201212B1 (en) | 2014-10-03 | 2018-09-19 | Conagen Inc. | Non-caloric sweeteners and methods for synthesizing |
EP3232817A4 (en) | 2014-12-17 | 2018-10-10 | Cargill, Incorporated | Steviol glycoside compounds, compositions for oral ingestion or use, and method for enhancing steviol glycoside solubility |
CA2979931A1 (en) * | 2015-03-16 | 2016-09-22 | Dsm Ip Assets B.V. | Udp-glycosyltransferases |
BR112017021066B1 (pt) | 2015-04-03 | 2022-02-08 | Dsm Ip Assets B.V. | Glicosídeos de esteviol, método para a produção de um glicosídeo de esteviol, composição, usos relacionados, gênero alimentício, alimento para animais e bebida |
CA2977541A1 (en) * | 2015-04-14 | 2016-10-20 | Conagen Inc. | Production of non-caloric sweeteners using engineered whole-cell catalysts |
EP3303552A4 (en) * | 2015-05-29 | 2019-01-16 | Cargill, Incorporated | FERMENTATION PROCESSES FOR THE PRODUCTION OF STEVIOL GLYCOSIDES WITH MULTI-PHASE FEEDING |
CN105380224A (zh) * | 2015-11-19 | 2016-03-09 | 南京诺云生物科技有限公司 | 一种新型甜菊糖衍生物、制备方法及其应用 |
CN105348337B (zh) * | 2015-11-19 | 2018-07-27 | 南京诺云生物科技有限公司 | 一种甜菊苷生物转化制备的甜菊糖衍生物、制备方法及其应用 |
MX2018006599A (es) * | 2015-11-30 | 2018-09-21 | Purecircle Sdn Bhd | Proceso para producir glicosidos de esteviol de alta pureza. |
CN109312378A (zh) | 2016-05-16 | 2019-02-05 | 埃沃尔瓦公司 | 在重组宿主中产生甜菊醇糖苷 |
WO2017218325A1 (en) | 2016-06-15 | 2017-12-21 | Codexis, Inc. | Engineered beta-glucosidases and glucosylation methods |
CA3039105C (en) | 2016-10-14 | 2024-03-05 | Conagen Inc. | Biosynthetic production of steviol glycosides and processes therefore |
AU2016427130B2 (en) | 2016-10-21 | 2022-08-18 | Pepsico, Inc. | Method for preparing rebaudioside N using enzymatic method |
WO2018144679A2 (en) | 2017-02-03 | 2018-08-09 | Codexis, Inc. | Engineered glycosyltransferases and steviol glycoside glucosylation methods |
RU2764803C2 (ru) * | 2017-03-06 | 2022-01-21 | Конаджен Инк. | Биосинтетическое получение стевиолового гликозида ребаудиозида d4 из ребаудиозида e |
WO2018213279A1 (en) * | 2017-05-15 | 2018-11-22 | Purecircle Usa Inc. | High-purity steviol glycosides |
KR20200024789A (ko) | 2017-06-30 | 2020-03-09 | 코나겐 인크. | 베타-글루코시다제에 의한 스테비올 글리코시드의 가수분해 |
CN109423486B (zh) * | 2017-08-29 | 2022-02-25 | 中国科学院分子植物科学卓越创新中心 | 新型udp-糖基转移酶及其应用 |
WO2019055325A2 (en) | 2017-09-12 | 2019-03-21 | Biocapital Holdings, Llc | BIOOGICAL DEVICES AND METHODS OF USING THE SAME TO PRODUCE STEVIOL GLYCOSIDES |
CN109868265B (zh) * | 2017-12-01 | 2023-04-25 | 中国科学院分子植物科学卓越创新中心 | 新型糖基转移酶及其应用 |
BR112021011419A2 (pt) * | 2018-12-12 | 2021-09-08 | Conagen Inc. | Método de produção de rebaudiosídeo r6-2a e/ou r6-2b, r7-2, r6-1 e r6-4a e/ou r6-4b, rebaudiosídeo sintético e produto de consumo oral |
CN113388014B (zh) * | 2020-03-12 | 2023-02-03 | 中科农福(北京)生物技术有限公司 | Os02g0589400蛋白在调控植物化感作用中的应用 |
KR102628374B1 (ko) * | 2021-10-19 | 2024-01-24 | 씨제이제일제당 주식회사 | 신규한 당전이효소 및 이의 용도 |
WO2023183832A1 (en) | 2022-03-23 | 2023-09-28 | Sweegen, Inc. | Sweetener comprising rebaudiose m and brazzein |
Family Cites Families (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US8277862B2 (en) * | 2007-03-14 | 2012-10-02 | Concentrate Manufacturing Company Of Ireland | Beverage products having steviol glycosides and at least one acid |
CN101701238B (zh) * | 2009-10-14 | 2011-11-16 | 南京师范大学 | 一种由甜菊糖苷制备甜茶甙的方法 |
NZ708078A (en) * | 2010-06-02 | 2017-01-27 | Evolva Nutrition Inc | Recombinant production of steviol glycosides |
CA3128532A1 (en) * | 2011-08-08 | 2013-02-14 | Evolva Sa | Recombinant production of steviol glycosides |
WO2013133689A1 (en) * | 2012-03-08 | 2013-09-12 | Purecircle Sdn Bhd | High-purity rubusoside and process for producing of the same |
EP3735841A1 (en) * | 2011-12-19 | 2020-11-11 | PureCircle SDN BHD | Methods for purifying steviol glycosides and uses of the same |
RU2499427C1 (ru) * | 2012-09-19 | 2013-11-27 | Нина Васильевна Мелишева | Композиция подсластителя |
JP6530760B2 (ja) | 2013-11-01 | 2019-06-12 | コナゲン インコーポレーテッド | ステビオール配糖体の組換え製造 |
-
2014
- 2014-10-03 JP JP2016552419A patent/JP6530760B2/ja active Active
- 2014-10-03 MX MX2016005677A patent/MX367771B/es active IP Right Grant
- 2014-10-03 CN CN201480072126.8A patent/CN106103729B/zh active Active
- 2014-10-03 WO PCT/US2014/059081 patent/WO2015065650A2/en active Application Filing
- 2014-10-03 EP EP14857965.9A patent/EP3063286B1/en active Active
- 2014-10-03 AU AU2014342939A patent/AU2014342939B2/en active Active
- 2014-10-03 CA CA2928940A patent/CA2928940C/en active Active
- 2014-10-03 DK DK14857965.9T patent/DK3063286T3/en active
- 2014-10-03 RU RU2016120635A patent/RU2706789C2/ru active
- 2014-10-03 ES ES14857965T patent/ES2709439T3/es active Active
- 2014-10-03 RU RU2019135831A patent/RU2741103C2/ru active
- 2014-10-03 US US15/032,286 patent/US20160251635A1/en not_active Abandoned
-
2016
- 2016-12-01 US US15/366,209 patent/US10081826B2/en active Active
-
2017
- 2017-06-23 US US15/631,083 patent/US10253344B2/en active Active
- 2017-10-31 AU AU2017254856A patent/AU2017254856A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU2016120635A (ru) | 2017-12-06 |
US20170298404A1 (en) | 2017-10-19 |
CN106103729A (zh) | 2016-11-09 |
AU2014342939B2 (en) | 2018-03-22 |
RU2741103C2 (ru) | 2021-01-22 |
US20170081691A1 (en) | 2017-03-23 |
CN106103729B (zh) | 2020-07-07 |
RU2019135831A3 (ja) | 2020-06-19 |
US10253344B2 (en) | 2019-04-09 |
EP3063286B1 (en) | 2018-12-05 |
ES2709439T3 (es) | 2019-04-16 |
CA2928940A1 (en) | 2015-05-07 |
MX367771B (es) | 2019-09-05 |
RU2016120635A3 (ja) | 2018-05-31 |
AU2017254856A1 (en) | 2017-11-23 |
JP2017500056A (ja) | 2017-01-05 |
AU2014342939A1 (en) | 2016-05-19 |
RU2019135831A (ru) | 2020-01-20 |
CA2928940C (en) | 2021-12-14 |
MX2016005677A (es) | 2016-10-28 |
RU2706789C2 (ru) | 2019-11-21 |
WO2015065650A2 (en) | 2015-05-07 |
WO2015065650A3 (en) | 2015-11-05 |
EP3063286A2 (en) | 2016-09-07 |
EP3063286A4 (en) | 2017-06-21 |
US10081826B2 (en) | 2018-09-25 |
DK3063286T3 (en) | 2019-03-04 |
US20160251635A1 (en) | 2016-09-01 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6530760B2 (ja) | ステビオール配糖体の組換え製造 | |
JP7194111B2 (ja) | ステビオール配糖体レバウジオシドd4のレバウジオシドeからの生合成製造 | |
JP7116751B2 (ja) | β-グルコシダーゼによるステビオール配糖体の加水分解 | |
JP7305213B2 (ja) | 変異体酵素を介するステビオール配糖体レバウシオシドiの生合成的産生 | |
WO2020205685A1 (en) | Biosynthetic production of udp-rhamnose | |
US20220205007A1 (en) | Biosynthetic production of steviol glycoside rebaudioside i via variant enzymes |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20171003 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20171003 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20180918 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20181214 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20181219 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20190508 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20190517 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6530760 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |