JP6456470B2 - 抗ｐｃｓｋ９抗体を含む安定化製剤 - Google Patents

Description

本発明は、治療抗体製剤の分野に関する。より特には、本発明は、ヒトプロタンパク質転換酵素スブチリシン／ケキシンタイプ９（ＰＣＳＫ９）に特異的に結合するヒト抗体を含む医薬製剤の分野に関する。

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治療用高分子（例えば、抗体）は、その分子を患者への投与にとって好適なものとするだけでなく、保存およびその後の使用の間にその安定性を維持する様式で製剤化しなければならない。例えば、液体溶液中の治療抗体は、その溶液が適切に製剤化されない限り、分解、凝集または望ましくない化学的改変を受けやすい。液体製剤中での抗体の安定性は、製剤中で用いられる賦形剤の種類だけでなく、互いに比較した賦形剤の量および割合にも依存する。さらに、液体抗体製剤を製造する場合には、安定性以外の他のことも考慮しなければならない。そのようなさらなる考慮の例としては、所与の製剤により調整することができる溶液の粘度および抗体の濃度、ならびに製剤の眼に見える品質または外見が挙げられる。かくして、治療抗体を製剤化する場合、安定性を保持し、十分な濃度の抗体を含み、および好適な粘度を有し、ならびに製剤を患者に都合良く投与することができるようにする他の性質を有する製剤に到達するために大きな注意を払わなければならない。

ヒトプロタンパク質転換酵素スブチリシン／ケキシンタイプ９タンパク質（ＰＣＳＫ９）に対する抗体は、適切な製剤を必要とする治療上関連する大分子の一例である。抗ＰＣＳＫ９抗体は、高コレステロール血症および他の脂質異常症のような疾患、ならびに他の状態の処置または防止にとって臨床的に有用である。例示的な抗ＰＣＳＫ９抗体は、特に、特許文献１、特許文献２、特許文献３、特許文献４、特許文献５、特許文献６、特許文献７、特許文献８、および特許文献９に記載されている。

抗ＰＣＳＫ９抗体は公知であるが、十分に安定であり、患者への投与にとって好適である抗ＰＣＳＫ９抗体を含む新規医薬製剤が依然として当業界で必要である。

ＷＯ２００８／０５７４５７ ＷＯ２００８／０５７４５８ ＷＯ２００８／０５７４５９ ＷＯ２００８／０６３３８２ ＷＯ２００８／１２５６２３ 米国特許第７，５７２，６１８号 ＷＯ２０１０／０７７８５４ ＵＳ２０１０／０１６６７６８ ＵＳ２０１１／００６５９０２

本発明は、ヒトプロタンパク質転換酵素スブチリシン／ケキシンタイプ９タンパク質（ＰＣＳＫ９）に特異的に結合するヒト抗体を含む医薬製剤を提供することにより、上記必要性を満たす。

一態様において、（ｉ）ヒトプロタンパク質転換酵素スブチリシン／ケキシンタイプ９タンパク質（ＰＣＳＫ９）に特異的に結合するヒト抗体；（ｉｉ）バッファー；（ｉｉｉ）有機共溶媒；（ｉｖ）安定剤；および場合により、（ｖ）粘度低下剤を含む液体医薬製剤が提供される。

一実施形態においては、抗体は、約５０±７．５ｍｇ／ｍＬ〜約２００±３０ｍｇ／ｍＬの濃度で提供される。別の実施形態においては、抗体は、約５０ｍｇ／ｍｌ±７．５ｍｇ／ｍＬの濃度で提供される。別の実施形態においては、抗体は、約１００ｍｇ／ｍＬ±１５ｍｇ／ｍＬの濃度で提供される。別の実施形態においては、抗体は、約１５０ｍｇ／ｍＬ±２２．５ｍｇ／ｍＬの濃度で提供される。別の実施形態においては、抗体は、約１７５ｍｇ／ｍＬ±２６．２５ｍｇ／ｍＬの濃度で提供される。別の実施形態においては、抗体は、約２００ｍｇ／ｍＬ±３０ｍｇ／ｍＬの濃度で提供される。

一実施形態においては、抗体は、配列番号１〜８のアミノ酸配列のいずれか１つまたはそれ以上を含む。一実施形態においては、抗体は、（ａ）それぞれ、配列番号２、配列番号３および配列番号４の配列を含む、重鎖相補性決定領域１、２および３（ＨＣＤＲ１−ＨＣＤＲ２−ＨＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）；ならびに（ｂ）それぞれ、配列番号６、配列番号７および配列番号８の配列を含む軽鎖相補性決定領域１、２および３（ＬＣＤＲ１−ＬＣＤＲ２−ＬＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む。特定の実施形態においては、抗体は、それぞれ、配列番号１および配列番号５のアミノ酸配列を含む、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲを含む。

一実施形態においては、液体製剤のｐＨは、およそｐＨ６．０±０．５、ｐＨ６．０±０．４、ｐＨ６．０±０．３、ｐＨ６．０±０．２、ｐＨ６．０±０．１、ｐＨ６．０±０．０５、ｐＨ６．０±０．０１、またはｐＨ６．０である。特定の実施形態においては、液体製剤のｐＨは、およそｐＨ６．０±０．３である。一実施形態においては、液体医薬バッファーは、ｐＨ約５．５〜ｐＨ約７．４の有効緩衝範囲、または約６．０のｐＫａを有する、１種またはそれ以上のバッファーを含む。

一実施形態においては、バッファーはヒスチジンである。一実施形態においては、ヒスチジンは５ｍＭ±０．７５ｍＭ〜５０ｍＭ±７．５ｍＭの濃度である。一実施形態においては、ヒスチジンは、１０ｍＭ±１．５ｍＭまたは約１０ｍＭの濃度である。一実施形態においては、ヒスチジンは、２０ｍＭ±３ｍＭまたは約２０ｍＭの濃度である。一実施形態においては、ヒスチジンは、４０ｎＭ±６ｍＭまたは約４０ｎＭの濃度である。

一実施形態においては、有機共溶媒は、ポリオキシエチレン部分を含む非イオン性ポリマーである。いくつかの実施形態においては、有機共溶媒は、ポリソルベート２０、ポロキサマー１８８およびポリエチレングリコール３３５０のいずれか１種またはそれ以上である。特定の実施形態においては、有機共溶媒は、ポリソルベート２０である。

一実施形態においては、有機共溶媒は、約０．００５％±０．０００７５％〜約１％±０．１５％「重量／体積」または「ｗ／ｖ」の濃度であり、ここで、例えば、０．１ｇ／ｍｌ＝１０％であり、０．０１ｇ／ｍｌ＝１％である。一実施形態においては、有機共溶媒は、約０．２％±０．０３％ｗ／ｖの濃度であるポリソルベート２０である。別の実施形態においては、有機共溶媒は、０．０１％±０．００１５％ｗ／ｖまたは約０．０１％ｗ／ｖの濃度である、ポリソルベート２０である。

一実施形態においては、安定剤は糖である。一実施形態においては、糖は、スクロース、マンニトールおよびトレハロースからなる群から選択される。特定の実施形態においては、安定剤はスクロースである。

一実施形態においては、安定剤は、１％±０．１５％ｗ／ｖ〜２０％±３％ｗ／ｖの濃度である。特定の実施形態においては、安定剤は、５％±０．７５％ｗ／ｖまたは約５％ｗ／ｖの濃度のスクロースである。別の特定の実施形態においては、安定剤は、１０％±１．５％ｗ／ｖまたは約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロースである。別の特定の実施形態においては、安定剤は、１２％±１．８％ｗ／ｖまたは約１２％ｗ／ｖの濃度のスクロースである。

一実施形態においては、粘度低下剤は、塩酸アルギニン、チオシアン酸ナトリウム、チオシアン酸アンモニウム、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、塩化カルシウム、塩化亜鉛および酢酸ナトリウムからなる群から選択される塩である。一実施形態においては、粘度低下剤は、Ｌ−塩酸アルギニンである。

一実施形態においては、粘度低下剤は、１０ｍＭ±１．５ｍＭ〜１５０ｍＭ±２２．５ｍＭの濃度である。一実施形態においては、粘度低下剤は、５０ｍＭ±７．５ｍＭまたは約５０ｍＭの濃度のＬ−塩酸アルギニンである。一実施形態においては、粘度低下剤は、４０ｍＭ±６ｍＭまたは約４０ｍＭの濃度のＬ−塩酸アルギニンである。

一実施形態においては、２５℃での液体医薬製剤または再構成された凍結乾燥医薬製剤の粘度は、約１５センチポアズ±１０％以下である。一実施形態においては、２５℃での粘度は、１．０センチポアズ±１０％〜１８センチポアズ±１０％である。一実施形態においては、２５℃での粘度は、１．６センチポアズ±１０％、１．７センチポアズ±１０％、３．３センチポアズ±１０％、３．５センチポアズ±１０％、４．８センチポアズ±１０％、６．０センチポアズ±１０％、７．０センチポアズ±１０％、７．１センチポアズ±１０％、７．２センチポアズ±１０％、７．９センチポアズ±１０％、８．９センチポアズ±１０％、１０．０センチポアズ±１０％、１０．６センチポアズ±１０％、１１．４センチポアズ±１０％、１１．６センチポアズ±１０％、１１．８センチポアズ±１０％、１２．４センチポアズ±１０％、１３．９センチポアズ±１０％、１４．０センチポアズ±１０％、１５．５センチポアズ±１０％、または１７．９センチポアズ±１０％である。

一実施形態においては、液体医薬製剤のオスモル濃度は、１００±１５ｍＯｓｍ／ｋｇ〜４６０±６９ｍＯｓｍ／ｋｇである。一実施形態においては、液体医薬製剤のオスモル濃度は、１０３±１５ｍＯｓｍ／ｋｇまたは約１０３ｍＯｓｍ／ｋｇである。一実施形態においては、液体医薬製剤のオスモル濃度は、１９５±２９ｍＯｓｍ／ｋｇまたは約１９５ｍＯｓｍ／ｋｇである。一実施形態においては、液体医薬製剤のオスモル濃度は、２２０±３３ｍＯｓｍ／ｋｇまたは約２２０ｍＯｓｍ／ｋｇである。一実施形態においては、液体医薬製剤のオスモル濃度は、３３０±５０ｍＯｓｍ／ｋｇまたは約３３０ｍＯｓｍ／ｋｇである。一実施形態においては、液体医薬製剤のオスモル濃度は、４３５±６５ｍＯｓｍ／ｋｇまたは約４３５ｍＯｓｍ／ｋｇである。一実施形態においては、液体医薬製剤のオスモル濃度は、４４０±６６ｍＯｓｍ／ｋｇまたは約４４０ｍＯｓｍ／ｋｇである。一実施形態においては、液体医薬製剤のオスモル濃度は、４５８±６９ｍＯｓｍ／ｋｇまたは約４５８ｍＯｓｍ／ｋｇである。

一実施形態においては、サイズ排除クロマトグラフィーにより決定された場合、非凝集形態および非分解形態の抗ＰＣＳＫ９抗体の少なくとも９６％または少なくとも９７％が、−８０℃での液体医薬製剤の保存の３カ月後に液体医薬製剤から回収される。一実施形態においては、イオン交換クロマトグラフィーにより決定された場合、非塩基性形態および非酸性形態（すなわち、主要ピークまたは主電荷の形態）の抗ＰＣＳＫ９抗体の少なくとも５６％が、−８０℃での液体医薬製剤の保存の３カ月後に液体医薬製剤から回収される。

一実施形態においては、サイズ排除クロマトグラフィーにより決定された場合、非凝集形態および非分解形態の抗ＰＣＳＫ９抗体の少なくとも９６％または少なくとも９７％が、−３０℃で３カ月間の液体医薬製剤の保存後に液体医薬製剤から回収される。一実施形態においては、イオン交換クロマトグラフィーにより決定された場合、主電荷形態の抗ＰＣＳＫ９抗体の少なくとも５６％が、−３０℃で３カ月間の液体医薬製剤の保存後に液体医薬製剤から回収される。

一実施形態においては、サイズ排除クロマトグラフィーにより決定された場合、非凝集形態および非分解形態の抗ＰＣＳＫ９抗体の少なくとも９６％または少なくとも９７％が、−２０℃での液体医薬製剤の保存の３カ月後に液体医薬製剤から回収される。一実施形態においては、イオン交換クロマトグラフィーにより決定された場合、主電荷形態の抗ＰＣＳＫ９抗体の少なくとも５６％が、−２０℃で３カ月間の液体医薬製剤の保存後に液体医薬製剤から回収される。

一実施形態においては、サイズ排除クロマトグラフィーにより決定された場合、非凝集形態および非分解形態の抗ＰＣＳＫ９抗体の少なくとも９６％が、５℃での液体医薬製剤の保存の６カ月後に液体医薬製剤から回収される。一実施形態においては、イオン交換クロマトグラフィーにより決定された場合、主電荷形態の抗ＰＣＳＫ９抗体の少なくとも５８％または少なくとも５９％が、５℃で３カ月間の液体医薬製剤の保存後に液体医薬製剤から回収される。

一実施形態においては、サイズ排除クロマトグラフィーにより決定された場合、非凝集形態および非分解形態の抗ＰＣＳＫ９抗体の少なくとも９４％が、２５℃で６カ月間の液体医薬製剤の保存後に液体医薬製剤から回収される。一実施形態においては、イオン交換クロマトグラフィーにより決定された場合、非塩基性形態および非酸性形態の抗ＰＣＳＫ９抗体の少なくとも４５％または少なくとも４７％が、２５℃で６カ月間の液体医薬製剤の保存後に液体医薬製剤から回収される。

一実施形態においては、サイズ排除クロマトグラフィーにより決定された場合、非凝集形態および非分解形態の抗ＰＣＳＫ９抗体の少なくとも９１％または少なくとも９２％が、４５℃で２８日間の液体医薬製剤の保存後に液体医薬製剤から回収される。一実施形態においては、イオン交換クロマトグラフィーにより決定された場合、非塩基性形態および非酸性形態の抗ＰＣＳＫ９抗体の少なくとも３５％または少なくとも３７％が、４５℃で２８日間の液体医薬製剤の保存後に液体医薬製剤から回収される。

一態様において、（ｉ）ヒトＰＣＳＫ９に特異的に結合する５０±７．５ｍｇ／ｍｌ〜１７５±２６ｍｇ／ｍｌのヒト抗体；（ｉｉ）０ｍＭ〜４０±６ｍＭのヒスチジン；（ｉｉｉ）０％〜０．２％±０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０；（ｉｖ）０％〜１２％±１．８％（ｗ／ｖ）のスクロース；および（ｖ）０ｍＭ〜５０±７．５ｍＭのアルギニンを含む、約５．３〜約６．７のｐＨの液体医薬製剤が提供される。この態様の抗ＰＣＳＫ９抗体は、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）および軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含み、ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ組合せは、それぞれ配列番号２−配列番号３−配列番号４／配列番号６−配列番号７−配列番号８のアミノ酸配列を含む、重鎖および軽鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１−ＨＣＤＲ２−ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ１−ＬＣＤＲ２−ＬＣＤＲ３）を含む。特定の実施形態においては、抗ＰＣＳＫ９抗体は、それぞれ、配列番号１および配列番号５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）および軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む（以後「ｍＡｂ−３１６Ｐ」と呼ぶ）。

この態様の一実施形態においては、液体製剤は、（ｉ）５０±７．５ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ−３１６Ｐ；（ｉｉ）１０±１．５ｍＭのヒスチジン；（ｉｉｉ）０．１％±０．０１５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０；および（ｉｖ）６％±０．９％（ｗ／ｖ）のスクロースを含み、ｐＨが６．０±０．３である。この特定の製剤の一実施形態においては、粘度は約１．７センチポアズである。この特定の製剤の一実施形態においては、オスモル濃度は２２０±４４ｍＯｓｍ／ｋｇである。

別の実施形態においては、液体製剤は、ｐＨ６．０±０．３で、（ｉ）１００±２０ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ−３１６Ｐ；（ｉｉ）２０±４ｍＭのヒスチジン；（ｉｉｉ）０．２％±０．０４％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０；および（ｉｖ）１２％±２．４％（ｗ／ｖ）のスクロースを含む。この特定の製剤の一実施形態においては、粘度は約３．５センチポアズである。この特定の製剤の一実施形態においては、オスモル濃度は４４０±８８ｍＯｓｍ／ｋｇである。

別の実施形態においては、液体製剤は、ｐＨ６．０±０．３で、（ｉ）１５０±２２．５ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ−３１６Ｐ；（ｉｉ）１０±１．５ｍＭのヒスチジン；（ｉｉｉ）０．２％±０．０３％または０．０１％±０．００１５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０；および（ｉｖ）０％±１．５％（ｗ／ｖ）のスクロースを含む。この特定の製剤の一実施形態においては、粘度は約６センチポアズである。この特定の製剤の一実施形態においては、オスモル濃度は４３５±６５．２５ｍＯｓｍ／ｋｇである。この特定の製剤の一実施形態においては、４５℃で２８日間の製剤の保存後に、９２％以上の抗体が天然形態であり、３５％以上の抗体が主電荷形態のものである。この特定の製剤の一実施形態においては、２５℃で６カ月間の製剤の保存後に、９４％以上の抗体が天然形態であり、４５％以上の抗体が主電荷形態のものである。この特定の製剤の一実施形態においては、５℃で６カ月間の製剤の保存後に、９６％以上の抗体が天然形態であり、５８％以上の抗体が主電荷形態のものである。この特定の製剤の一実施形態においては、−２０℃で１２カ月間の製剤の保存後に、９７％以上の抗体が天然形態であり、５６％以上の抗体が主電荷形態のものである。この特定の製剤の一実施形態においては、−３０℃で１２カ月間の製剤の保存後に、９７％以上の抗体が天然形態であり、５６％以上の抗体が主電荷形態のものである。この特定の製剤の一実施形態においては、−８０℃で１２カ月間の製剤の保存後に、９７％以上の抗体が天然形態であり、５６％以上の抗体が主電荷形態のものである。

この特定の製剤のいくつかの実施形態においては、８５％以上の抗体が４５℃で２８日後、８２％以上の抗体が３７℃で２８日後、および／または９８％以上の抗体が２５℃で２８日後にその生物学的効果を保持する。この特定の製剤のいくつかの実施形態においては、８５％以上の抗体が−２０℃で６カ月後、７０％以上の抗体が−３０℃で６カ月後、および／または７９％以上の抗体が−８０℃で６カ月後にその生物学的効果を保持する。この特定の製剤のいくつかの実施形態においては、８１％以上の抗体が８回の凍結−融解サイクル後にその生物学的効果を保持し、および／または８４％以上の抗体が１２０分間の撹拌後にその生物学的活性を保持する。

この態様の別の実施形態においては、液体製剤は、（ｉ）１７５±２６．２５ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ−３１６Ｐ；（ｉｉ）１０±１．５ｍＭのヒスチジン；（ｉｉｉ）０．０１％±０．００１５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０；（ｉｖ）５％±０．７５％（ｗ／ｖ）のスクロース；および（ｖ）５０±７．５ｍＭのアルギニンを含み、ｐＨが６．０±０．３である。この特定の製剤の一実施形態においては、粘度は約１０．６センチポアズである。この特定の製剤の一実施形態においては、オスモル濃度は３３０±５０ｍＯｓｍ／ｋｇである。この特定の製剤の一実施形態においては、４５℃で２８日間の製剤の保存後に、９１％以上の抗体が天然形態であり、３８％以上の抗体が主電荷形態のものである。この特定の製剤の一実施形態においては、２５℃で６カ月間の製剤の保存後に、９４％以上の抗体が天然形態であり、４７％以上の抗体が主電荷形態のものである。この特定の製剤の一実施形態においては、５℃で６カ月間の製剤の保存後に、９６％以上の抗体が天然形態であり、５９％以上の抗体が主電荷形態のものである。この特定の製剤の一実施形態においては、−２０℃で３カ月間の製剤の保存後に、９６％以上の抗体が天然形態であり、５６％以上の抗体が主電荷形態のものである。この特定の製剤の一実施形態においては、−３０℃で３カ月間の製剤の保存後に、９６％以上の抗体が天然形態であり、５６％以上の抗体が主電荷形態のものである。この特定の製剤の一実施形態においては、−８０℃で３カ月間の製剤の保存後に、９６％以上の抗体が天然形態であり、５６％以上の抗体が主電荷形態のものである。

一態様において、前記態様のいずれかの液体医薬製剤は、容器中に提供される。一実施形態においては、容器はポリカーボネートバイアルである。別の実施形態においては、容器はガラスバイアルである。一実施形態においては、ガラスバイアルは、フッ化炭素被覆ブチルゴム栓を有する１型ホウケイ酸ガラスバイアルである。別の実施形態においては、容器はマイクロインフューザである。別の実施形態においては、容器はシリンジである。特定の実施形態においては、シリンジはフッ化炭素被覆プランジャを含む。１つの特定の実施形態においては、シリンジは、２７−Ｇ針、フッ化炭素被覆ブチルゴム栓、およびラテックスフリー非細胞毒性ゴムチップキャップを備えた、約５００ｐｐｂ（１０億分の１）未満のタングステンを含む１ｍＬ長ガラスシリンジである。より特定の実施形態においては、シリンジは、２７−Ｇ薄壁針、ＦＬＵＲＯＴＥＣ被覆４０２３／５０ゴム栓、およびＦＭ２７ゴムチップキャップを備えた、ＮＵＯＶＡ ＯＭＰＩ １ｍＬ長ガラスシリンジである。別の特定の実施形態においては、シリンジは、２７−Ｇ針を固定した１ｍＬまたは３ｍＬのプラスチック製シリンジである。より特定の実施形態においては、プラスチック製シリンジは、ＢＥＣＴＯＮ ＤＩＣＫＩＮＳＯＮにより流通されている。

一態様において、（ａ）１７５ｍｇ／ｍＬ±２６．２５ｍｇ／ｍＬの抗ＰＣＳＫ９抗体、（ｂ）１０ｍＭ±１．５ｍＭのヒスチジン、ｐＨ６±０．３、（ｃ）０．０１％ｗ／ｖ±０．００１５％のポリソルベート２０、（ｄ）５％ｗ／ｖ±０．７５％のスクロース、および（ｅ）５０ｍＭ±７．５ｍＭのアルギニンを含む医薬製剤であって、（ａ）前記抗体が配列番号１のＨＣＶＤおよび配列番号５のＬＣＶＤを含み、（ｂ）製剤中の９０％を超える抗体が１５５ｋＤａ±１ｋＤａの分子量を有し、（ｃ）製剤中の５０％を超える抗体が約８．５の等電点を有し、および（ｄ）製剤中の７５％〜９０％の抗体がフコシル化される、上記医薬製剤が提供される。

一実施形態においては、医薬製剤は、水中の、（ａ）１７５ｍｇ／ｍＬ±２６．２５ｍｇ／ｍＬの、直前の段落に記載の抗ＰＣＳＫ９抗体、（ｂ）１０ｍＭ±１．５ｍＭのヒスチジン、ｐＨ６±０．３、（ｃ）０．０１％ｗ／ｖ±０．００１５％のポリソルベート２０、（ｄ）５％ｗ／ｖ±０．７５％のスクロース、および（ｅ）５０ｍＭ±７．５ｍＭのアルギニンからなる。

一態様において、（ａ）１５０ｍｇ／ｍＬ±２２．５ｍｇ／ｍＬの抗ＰＣＳＫ９抗体、（ｂ）１０ｍＭ±１．５ｍＭのヒスチジン、ｐＨ６±０．３、（ｃ）０．２％ｗ／ｖ±０．０３％のポリソルベート２０、および（ｄ）１０％ｗ／ｖ±１．５％のスクロースを含む医薬製剤であって、（ｉ）前記抗体が配列番号１のＨＣＶＤおよび配列番号５のＬＣＶＤを含み、（ｉｉ）製剤中の９０％を超える抗体が１５５ｋＤａ±１ｋＤａの分子量を有し、（ｉｉｉ）製剤中の５０％を超える抗体が約８．５の等電点を有し、および（ｉｖ）製剤中の７５％〜９０％の抗体がフコシル化される、上記医薬製剤が提供される。

一実施形態においては、医薬製剤は、水中の、（ａ）１５０ｍｇ／ｍＬ±２２．５ｍｇ／ｍＬの、直前の段落に記載の抗ＰＣＳＫ９抗体、（ｂ）１０ｍＭ±１．５ｍＭのヒスチジン、ｐＨ６±０．３、（ｃ）０．２％ｗ／ｖ±０．０３％のポリソルベート２０、および（ｄ）１０％ｗ／ｖ±１．５％のスクロースからなる。

一態様において、（ａ）１５０ｍｇ／ｍＬ±２２．５ｍｇ／ｍＬの抗ＰＣＳＫ９抗体、（ｂ）１０ｍＭ±１．５ｍＭのヒスチジン、ｐＨ６±０．３、（ｃ）０．０１％ｗ／ｖ±０．００１５％のポリソルベート２０、および（ｄ）１０％ｗ／ｖ±１．５％のスクロースを含む医薬製剤であって、（ｉ）前記抗体が配列番号１のＨＣＶＤおよび配列番号５のＬＣＶＤを含み、（ｉｉ）製剤中の９０％を超える抗体が１５５ｋＤａ±１ｋＤａの分子量を有し、（ｉｉｉ）製剤中の５０％を超える抗体が約８．５の等電点を有し、および（ｉｖ）製剤中の７５％〜９０％の抗体がフコシル化される、上記医薬製剤が提供される。

一実施形態においては、医薬製剤は、水中の、（ａ）１５０ｍｇ／ｍＬ±２２．５ｍｇ／ｍＬの、直前の段落に記載の抗ＰＣＳＫ９抗体、（ｂ）１０ｍＭ±１．５ｍＭのヒスチジン、ｐＨ６±０．３、（ｃ）０．０１％ｗ／ｖ±０．００１５％のポリソルベート２０、および（ｄ）１０％ｗ／ｖ±１．５％のスクロースからなる。

一態様において、（ａ）１００ｍｇ／ｍＬ±１５ｍｇ／ｍＬの抗ＰＣＳＫ９抗体、（ｂ）２０ｍＭ±３ｍＭのヒスチジン、ｐＨ６±０．３、（ｃ）０．２％ｗ／ｖ±０．０３％のポリソルベート２０、および（ｄ）１２％ｗ／ｖ±１．８％のスクロースを含む医薬製剤であって、（ｉ）前記抗体が配列番号１のＨＣＶＤおよび配列番号５のＬＣＶＤを含み、（ｉｉ）製剤中の９０％を超える抗体が１５５ｋＤａ±１ｋＤａの分子量を有し、（ｉｉｉ）製剤中の５０％を超える抗体が約８．５の等電点を有し、および（ｉｖ）製剤中の７５％〜９０％の抗体がフコシル化される、上記医薬製剤が提供される。

一実施形態においては、医薬製剤は、水中の、（ａ）１００ｍｇ／ｍＬ±１５ｍｇ／ｍＬの、直前の段落に記載の抗ＰＣＳＫ９抗体、（ｂ）２０ｍＭ±３ｍＭのヒスチジン、ｐＨ６±０．３、（ｃ）０．２％ｗ／ｖ±０．０３％のポリソルベート２０、および（ｄ）１２％ｗ／ｖ±１．８％のスクロースからなる。

一態様において、（ａ）５０ｍｇ／ｍＬ±７．５ｍｇ／ｍＬの抗体、（ｂ）１０ｍＭ±１．５ｍＭのヒスチジン、ｐＨ６±０．３、（ｃ）０．１％ｗ／ｖ±０．０１５％のポリソルベート２０、および（ｄ）６％ｗ／ｖ±０．９％のスクロースを含む医薬製剤であって、（ｉ）前記抗体が配列番号１のＨＣＶＤおよび配列番号５のＬＣＶＤを含み、（ｉｉ）製剤中の９０％を超える抗体が１５５ｋＤａ±１ｋＤａの分子量を有し、（ｉｉｉ）製剤中の５０％を超える抗体が約８．５の等電点を有し、および（ｉｖ）製剤中の７５％〜９０％の抗体がフコシル化される、上記医薬製剤が提供される。

一実施形態においては、医薬製剤は、水中の、（ａ）５０ｍｇ／ｍＬ±７．５ｍｇ／ｍＬの、直前の段落に記載の抗ＰＣＳＫ９抗体、（ｂ）１０ｍＭ±１．５ｍＭのヒスチジン、ｐＨ６±０．３、（ｃ）０．１％ｗ／ｖ±０．０１５％のポリソルベート２０、および（ｄ）６％ｗ／ｖ±０．９％のスクロースからなる。

一態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体および０．３％未満の水を含む凍結乾燥組成物を製造する方法が提供される。その方法は、（ａ）ガラスバイアル中で、水、抗ＰＣＳＫ９抗体、ヒスチジン、スクロース、およびポリソルベート２０を混合する工程、（ｂ）次いで、約５℃に約６０分間、組合せ物を保持する工程、（ｃ）次いで、約０．５℃／分の速度で温度を低下させる工程、（ｄ）次いで、約−４５℃に約１２０分間、組合せ物を保持する工程、（ｅ）次いで、気圧を約１００ｍＴｏｒｒに低下させる工程、（ｆ）次いで、約０．５℃／分の速度で温度を上昇させる工程、（ｇ）次いで、約−２５℃で約７８時間、組合せ物を保持する工程、（ｈ）次いで、０．２℃／分の速度で温度を上昇させる工程、（ｉ）次いで、約３５℃で約６時間、組合せ物を保持する工程、（ｊ）次いで、約０．５℃の速度で温度を低下させる工程、および（ｋ）次いで、保存前に、約２５℃に約６０分間、組合せ物を保持する工程を含む。

一実施形態においては、前記方法は、（ｌ）工程（ｋ）の組合せ物を含むガラスバイアルに窒素ガスをバックフィルする工程、および（ｍ）大気圧の約８０％未満でバイアルに栓をする工程をさらに含む。一実施形態においては、組成物を、工程（ｉ）、（ｊ）または（ｋ）の後およびバイアルに栓をする工程の前に、２〜８℃に至らせる。

いくつかの実施形態においては、工程（ａ）において、抗ＰＣＳＫ９抗体は５０ｍｇ／ｍＬ±７．５ｍｇ／ｍＬであり、ヒスチジンは１０ｍＭ±１．５ｍＭ（ｐＨ６．０）であり、ポリソルベート２０は０．１％±０．０１５％であり、スクロースは６％±０．９％である。一実施形態においては、抗ＰＣＳＫ９抗体は、配列番号２のＨＣＤＲ１、配列番号３のＨＣＤＲ２、配列番号４のＨＣＤＲ３、配列番号６のＬＣＤＲ１、配列番号７のＬＣＤＲ２、および配列番号８のＬＣＤＲ３を含むｍＡｂ−３１６Ｐを含む。一実施形態においては、抗ＰＣＳＫ９抗体は、配列番号１のＨＣＶＤおよび配列番号５のＬＣＶＤを含む。一実施形態においては、（ｉ）抗体は配列番号１のＨＣＶＤおよび配列番号５のＬＣＶＤを含み、（ｉｉ）組合せ物中の９０％を超える抗体は１５５ｋＤａ±１ｋＤａの分子量を有し、（ｉｉｉ）組合せ物中の５０％を超える抗体は約８．５の等電点を有し、および（ｉｖ）組合せ物中の７５％〜９０％の抗体はフコシル化される。

一態様においては、前記態様に記載の方法に従って生成される、抗ＰＣＳＫ９抗体および０．３％未満の水を含む凍結乾燥医薬組成物が提供される。

一態様においては、水中に再懸濁された前記態様に記載の凍結乾燥医薬組成物を含む医薬組成物が提供される。一実施形態においては、医薬組成物は、水中の、５０ｍｇ／ｍＬ±７．５ｍｇ／ｍＬの抗ＰＣＳＫ９抗体、１０ｍＭ±１．５ｍＭのヒスチジン（ｐＨ６．０）、０．１％±０．０１５％のポリソルベート２０、および６％±０．９％のスクロースからなる。一実施形態においては、医薬組成物は、水中の、１００ｍｇ／ｍＬ±１５ｍｇ／ｍＬの抗ＰＣＳＫ９抗体、２０ｍＭ±３ｍＭのヒスチジン（ｐＨ６．０）、０．２％±０．０３％のポリソルベート２０、および１２％±１．８％のスクロースからなる。別の実施形態においては、医薬組成物は、水中の、１５０ｍｇ／ｍＬ±２２．５ｍｇ／ｍＬの抗ＰＣＳＫ９抗体、３０ｍＭ±４．５ｍＭのヒスチジン（ｐＨ６．０）、０．３％±０．０４５％のポリソルベート２０、および１８％±２．７％のスクロースからなる。さらに別の実施形態においては、医薬組成物は、水中の、１７５ｍｇ／ｍＬ±２６．２５ｍｇ／ｍＬの抗ＰＣＳＫ９抗体、３５ｍＭ±５．２５ｍＭのヒスチジン（ｐＨ６．０）、０．３５％±０．０５２５％のポリソルベート２０、および２１％±３．１５％のスクロースからなる。

いくつかの実施形態においては、抗ＰＣＳＫ９抗体は、配列番号１のＨＣＶＤおよび配列番号５のＬＣＶＤを含み、（ｂ）組成物中の９０％を超える抗体は１５５ｋＤａ±１ｋＤａの分子量を有し、（ｃ）組成物中の５０％を超える抗体は約８．５の等電点を有し、および（ｄ）組成物中の７５％〜９０％の抗体はフコシル化される。

一態様においては、前記組成物が容器中に含まれる、前記態様のいずれか一つの医薬組成物が提供される。一実施形態においては、容器はバイアルであり、いくつかの実施形態においては、ガラスバイアルである。別の実施形態においては、容器はシリンジである。いくつかの実施形態においては、シリンジは低タングステンガラスシリンジである。一実施形態においては、シリンジは、２７−Ｇ薄壁針、ＦＬＵＲＯＴＥＣ被覆４０２３／５０ゴム栓、およびＦＭ２７ゴムチップキャップを備えた、ＮＵＯＶＡ ＯＭＰＩ １ｍＬ長ガラスシリンジである。

一態様においては、前記態様のいずれか一つに記載の医薬組成物、容器、および説明書を含むキットが提供される。一実施形態においては、容器はプレフィルドシリンジである。特定の実施形態においては、シリンジは、２７−Ｇ薄壁針、ＦＬＵＲＯＴＥＣ被覆４０２３／５０ゴム栓、およびＦＭ２７ゴムチップキャップを備えた、ＮＵＯＶＡ ＯＭＰＩ １ｍＬ長ガラスシリンジである。

本発明の他の実施形態は、次の詳細な説明の概説から明らかとなるであろう。

本発明を説明する前に、方法および条件は変動し得るので、本発明は、記載された特定の方法および実験条件に限定されないことを理解すべきである。また、本明細書で用いられる用語は、特定の実施形態のみを説明するためのものであって、本発明の範囲は添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるので、限定することを意図するものではないことも理解すべきである。

別途定義しない限り、本明細書で用いられる全ての技術的および科学的用語は、本発明が属する技術分野の当業者により一般的に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書で用いられる用語「約」は、特定の記載される数値または数値範囲を参照して用いられる場合、その値が記載された値から１％を超えないで変化してもよいことを意味する。例えば、本明細書で用いられる場合、「約１００」という表現は、９９および１０１ならびにその間の全ての値（例えば、９９．１、９９．２、９９．３、９９．４など）を含む。

本明細書に記載のものと類似するか、または等価である任意の方法および材料を本発明の実施または試験において用いることができるが、好ましい方法および材料をここで説明する。本明細書に記載の全ての刊行物は、その全体が参照によって本明細書に組み入れられる。

医薬製剤
本明細書で用いられる表現「医薬製剤」は、少なくとも１種の活性成分（例えば、ヒトもしくは非ヒト動物において生物学的作用を示すことができる小分子、大分子、化合物など）と、少なくとも１種の不活性成分との組合せが、活性成分または１種もしくはそれ以上のさらなる不活性成分と組み合わせた場合、ヒトもしくは非ヒト動物への治療的投与にとって好適であることを意味する。本明細書で用いられる用語「製剤」は、別途具体的に指摘しない限り、「医薬製剤」を意味する。本発明は、少なくとも１種の治療ポリペプチドを含む医薬製剤を提供する。本発明の特定の実施形態によれば、治療ポリペプチドは、ヒトプロタンパク質転換酵素スブチリシン／ケキシンタイプ９（ＰＣＳＫ９）タンパク質に特異的に結合する抗体、またはその抗原結合断片である。より具体的には、本発明は、（ｉ）ヒトＰＣＳＫ９に特異的に結合するヒト抗体；（ｉｉ）ヒスチジンバッファー；（ｉｉｉ）非イオン性界面活性剤である有機共溶媒；（ｉｖ）炭水化物である熱安定剤；および場合により、（ｖ）塩である粘度低下剤を含む医薬製剤を含む。本発明内に含まれる特定の例示的な成分および製剤を、以下で詳細に説明する。

ＰＣＳＫ９に特異的に結合する抗体
本発明の医薬製剤は、ヒトＰＣＳＫ９に特異的に結合するヒト抗体、またはその抗原結合断片を含んでもよい。本明細書で用いられる用語「ＰＣＳＫ９」は、分泌スブチラーゼファミリーのプロテイナーゼＫサブファミリーに属するヒトプロタンパク質転換酵素を意味する。証拠は、ＰＣＳＫ９が低密度リポタンパク質粒子受容体に結合し、その分解を促進することにより、血漿ＬＤＬレベルを増加させることを示唆している。ヒトＰＣＳＫ９アミノ酸配列の例は、配列番号９に記載されている。ヒトＰＣＳＫ９に対する抗体は、特許出願公開ＵＳ２０１０／０１６６７６８、ＵＳ２０１１／００６５９０２およびＷＯ２０１０／０７７８５４に記載されている。

本明細書で用いられる用語「抗体」は、ジスルフィド結合により相互接続された２つの重鎖（Ｈ）および２つの軽鎖（Ｌ）である４つのポリペプチド鎖を含む免疫グロブリン分子、ならびにその多量体（例えば、ＩｇＭ）を指すことが一般的に意図される；しかしながら、重鎖だけからなる免疫グロブリン分子（すなわち、軽鎖を欠く）も、用語「抗体」の定義内に包含される。それぞれの重鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＨＣＶＲまたはＶ_Hと省略される）および重鎖定常領域を含む。重鎖定常領域は、３つのドメイン、ＣＨ
１、ＣＨ２およびＣＨ３を含む。それぞれの軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＬＣＶＲまたはＶ_Lと省略される）および軽鎖定常領域を含む。軽鎖定常領域は、１つのドメイン（ＣＬ１）を含む。Ｖ_HおよびＶ_L領域を、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる、より保存された領域が散在する、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる、超可変領域にさらに細分することができる。それぞれのＶ_HおよびＶ_Lは、アミノ末端からカルボキシ末端に向かって以下の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４に配置された３つのＣＤＲおよび４つのＦＲから構成される。

別途具体的に指摘しない限り、本明細書で用いられる用語「抗体」は、完全な抗体分子ならびにその抗原結合断片を包含することが理解されるべきである。本明細書で用いられる用語、抗体の「抗原結合部分」または「抗原結合断片」（または単に「抗体部分」または「抗体断片」）は、ヒトＰＣＳＫ９またはそのエピトープに特異的に結合する能力を保持する抗体の１つまたはそれ以上の断片を指す。

本明細書で用いられる「単離された抗体」は、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を指すことが意図される（例えば、ヒトＰＣＳＫ９に特異的に結合する単離された抗体は、ヒトＰＣＳＫ９以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない）。

用語「特異的に結合する」などは、抗体またはその抗原結合断片が、生理的条件下で比較的安定である抗原との複合体を形成することを意味する。特異的結合は、少なくとも約１×１０^-6Ｍ以上の解離定数を特徴としてもよい。２つの分子が特異的に結合するかどうかを決定する方法は当業界で周知であり、例えば、平衡透析、表面プラズモン共鳴などが挙げられる。しかしながら、ヒトＰＣＳＫ９に特異的に結合する単離された抗体は、他の種に由来するＰＣＳＫ９分子（オルトログ）のような他の抗原との交叉反応性を有してもよい。本発明の文脈においては、ヒトＰＣＳＫ９ならびに１つまたはそれ以上のさらなる抗原に結合する多特異的（例えば、二特異的）抗体は、ヒトＰＣＳＫ９に「特異的に結合する」と見なされる。さらに、単離された抗体は、他の細胞材料または化学物質を実質的に含まなくてもよい。

本発明の医薬製剤中に含まれてもよい抗ヒトＰＣＳＫ９抗体の例は、特許出願公開ＵＳ２０１０／０１６６７６８、ＵＳ２０１１／００６５９０２およびＷＯ２０１０／０７７８５４に記載されており、これらの開示はその全体が参照によって組み入れられる。

本発明の特定の実施形態によれば、抗ヒトＰＣＳＫ９ ｍＡｂ−３１６Ｐ抗体は、ＩＧＨＶ３−２３サブタイプのものである重鎖可変領域およびＩＧＫＶ４−１サブタイプのものである軽鎖可変領域を含むヒトＩｇＧ１である（ＢａｒｂｉｅおよびＬｅｆｒａｎｃ、Ｔｈｅ Ｈｕｍａｎ Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｋａｐｐａ Ｖａｒｉａｂｌｅ（ＩＧＫＶ）Ｇｅｎｅｓ ａｎｄ Ｊｏｉｎｉｎｇ（ＩＧＫＪ）Ｓｅｇｍｅｎｔｓ、Ｅｘｐ．Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔ．１９９８；１５：１７１〜１８３頁；ならびにＳｃａｖｉｎｅｒ，Ｄ．ら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｉｓｐｌａｙｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｈｕｍａｎ Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｈｅａｖｙ，Ｋａｐｐａ ａｎｄ Ｌａｍｂｄａ Ｖａｒｉａｂｌｅ ａｎｄ Ｊｏｉｎｉｎｇ Ｒｅｇｉｏｎｓ、Ｅｘｐ．Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔ．、１９９９；１６：２３４〜２４０頁を参照されたい）。

いくつかの実施形態においては、抗ヒトＰＣＳＫ９ ｍＡｂ−３１６Ｐは、生殖細胞系列ＩＧＫＶ４−１配列と比較して抗体の露出した表面での電荷変化をもたらす少なくとも１つのアミノ酸置換を含む。生殖細胞系列ＩＧＫＶ４−１配列、および本明細書で提供されるアミノ酸位置割り当て番号は、Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ．−Ｐ．ら、ＩＭＧＴ（登録商標）、ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ（登録商標）、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ、３７、Ｄ１００６−Ｄ１０１２頁（２００９）に記載された国際免疫遺伝学（ＩＭＧＴ）情報システムと適合する。いくつかの実施形態においては、露出した表面は、相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。いくつかの実施形態においては、アミノ酸置換（複数可）は、ＩＧＫＶ４−１のＣＤＲ１（例えば、３２位）内の非荷電極性アミノ酸へ置換された塩基性アミノ酸からなる群から選択される。特に環境界面での（例えば、ＣＤＲにおけるような）抗体の電荷分布におけるユニークな順列は、溶液中での抗体の安定性を維持するか、または前進させるための予測できない条件を作出すると予想される。

いくつかの実施形態においては、抗ヒトＰＣＳＫ９ ｍＡｂ−３１６Ｐ抗体は、生殖細胞系列ＩＧＨＶ３−２３配列または生殖細胞系列ＩＧＫＶ４−１配列と比較して、抗体の可変領域のフレームワーク領域内の電荷変化を作る少なくとも１つのアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態においては、アミノ酸置換（複数可）は、（ａ）ＩＧＨＶ３−２３のフレームワーク領域３（ＦＲ３）（例えば、７７位）中の極性アミノ酸へ置換された疎水性アミノ酸、および（ｂ）ＩＧＫＶ４−１のフレームワーク領域２（ＦＲ２）（例えば、５１位）中の塩基性アミノ酸へ置換された極性アミノ酸からなる群から選択される。溶媒とのＣＤＲ境界面に影響する、特にフレームワーク領域内でペプチド鎖が折畳まれる能力の変化は、溶液中での抗体の安定性を維持するか、または前進させるための予測できない条件を作出すると予想される。

本発明の特定の実施形態によれば、抗ヒトＰＣＳＫ９抗体、またはその抗原結合断片は、配列番号２の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１、配列番号３のＨＣＤＲ２、および配列番号４のＨＣＤＲ３を含む。特定の実施形態においては、抗ヒトＰＣＳＫ９抗体、またはその抗原結合断片は、配列番号１のＨＣＶＤを含む。

本発明の特定の実施形態によれば、抗ヒトＰＣＳＫ９、またはその抗原結合断片は、配列番号６の軽鎖（カッパ）相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１、配列番号７のＬＣＤＲ２、および配列番号８のＬＣＤＲ３を含む。特定の実施形態においては、抗ヒトＰＣＳＫ９抗体、またはその抗原結合断片は、配列番号５のＬＣＶＤを含む。

本明細書の実施例で用いられる非限定的な例示的抗体は、「ｍＡｂ−３１６Ｐ」と呼ばれる。また、この抗体は、米国特許第７，６０８，６９３号においてはＨ４Ｈ０９８Ｐと呼ばれている。ｍＡｂ−３１６Ｐ（Ｈ４Ｈ０９８Ｐ）は、配列番号１／５を有するＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対、および配列番号２−配列番号３−配列番号４／配列番号６−配列番号７−配列番号８により表されるＨＣＤＲ１−ＨＣＤＲ２−ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ１−ＬＣＤＲ２−ＬＣＤＲ３ドメインを含む。

本発明の医薬製剤中に含まれる抗体、またはその抗原結合断片の量は、製剤にとって望ましい特異的性質、ならびに製剤が使用を意図される特定の環境および目的に応じて変化してもよい。特定の実施形態においては、医薬製剤は、５０±７．５ｍｇ／ｍＬ〜２５０±３７．５ｍｇ／ｍＬの抗体；６０±９ｍｇ／ｍＬ〜２４０±３６ｍｇ／ｍＬの抗体；７０±１０．５ｍｇ／ｍＬ〜２３０±３４．５ｍｇ／ｍＬの抗体；８０±１２ｍｇ／ｍＬ〜２２０±３３ｍｇ／ｍＬの抗体；９０±１３．５ｍｇ／ｍＬ〜２１０±３１．５ｍｇ／ｍＬの抗体；１００±１５ｍｇ／ｍＬ〜２００±３０ｍｇ／ｍＬの抗体；１１０±１６．５ｍｇ／ｍＬ〜１９０±２８．５ｍｇ／ｍＬの抗体；１２０±１８ｍｇ／ｍＬ〜１８０±２７ｍｇ／ｍＬの抗体；１３０±１９．５ｍｇ／ｍＬ〜１７０±２５．５ｍｇ／ｍＬの抗体；１４０±２１ｍｇ／ｍＬ〜１６０±２４ｍｇ／ｍＬの抗体；１５０±２２．５ｍｇ／ｍＬの抗体；または１７５±２６．２５ｍｇ／ｍｌの抗体を含んでもよい液体製剤である。例えば、本発明の製剤は、ヒトＰＣＳＫ９に特異的に結合する、約５０ｍｇ／ｍＬ；約６０ｍｇ／ｍＬ；約６５ｍｇ／ｍＬ；約７０ｍｇ／ｍＬ；約７５ｍｇ／ｍＬ；約８０ｍｇ／ｍＬ；約８５ｍｇ／ｍＬ；約９０ｍｇ／ｍＬ；約９５ｍｇ／ｍＬ；約１００ｍｇ／ｍＬ；約１０５ｍｇ／ｍＬ；約１１０ｍｇ／ｍＬ；約１１５ｍｇ／ｍＬ；約１２０ｍｇ／ｍＬ；約１２５ｍｇ／ｍＬ；約１３０ｍｇ／ｍＬ；約１３５ｍｇ／ｍＬ；約１４０ｍｇ／ｍＬ；約１４５ｍｇ／ｍＬ；約１５０ｍｇ／ｍＬ；約１５５ｍｇ／ｍＬ；約１６０ｍｇ／ｍＬ；約１６５ｍｇ／ｍＬ；約１７０ｍｇ／ｍＬ；約１７５ｍｇ／ｍＬ；約１８０ｍｇ／ｍＬ；約１８５ｍｇ／ｍＬ；約１９０ｍｇ／ｍＬ；約１９５ｍｇ／ｍＬ；約２００ｍｇ／ｍＬ；約２０５ｍｇ／ｍＬ；約２１０ｍｇ／ｍＬ；約２１５ｍｇ／ｍＬ；約２２０ｍｇ／ｍＬ；約２２５ｍｇ／ｍＬ；約２３０ｍｇ／ｍＬ；約２３５ｍｇ／ｍＬ；約２４０ｍｇ／ｍＬ；約２４５ｍｇ／ｍＬ；または約２５０ｍｇ／ｍＬの抗体またはその抗原結合断片を含んでもよい。

賦形剤およびｐＨ
本発明の医薬製剤は、１種またはそれ以上の賦形剤を含む。本明細書で用いられる用語「賦形剤」は、望ましい稠度、粘度または安定化効果を提供するために製剤に添加される任意の非治療剤を意味する。

特定の実施形態においては、本発明の医薬製剤は、例えば、ボルテックスのような手荒な取り扱いまたは撹拌の条件下でもヒトＰＣＳＫ９抗体を安定化する型および量の少なくとも１種の有機共溶媒を含む。いくつかの実施形態においては、「安定化する」とは、手荒な取り扱いの過程にわたる抗体の総量の３％（モルベースで）を超える凝集した抗体の形成の防止を意味する。いくつかの実施形態においては、手荒な取り扱いは、抗体および有機共溶媒を含む溶液を約６０分間または約１２０分間ボルテックスすることである。

特定の実施形態においては、有機共溶媒は、アルキルポリ（エチレンオキシド）のような非イオン性界面活性剤である。本発明の製剤中に含有させることができる特定の非イオン性界面活性剤としては、例えば、ポリソルベート２０、ポリソルベート２８、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、ポリソルベート６５、ポリソルベート８０、ポリソルベート８１、およびポリソルベート８５のようなポリソルベート；ポロキサマー１８１、ポロキサマー１８８、ポロキサマー４０７のようなポロキサマー；またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が挙げられる。ポリソルベート２０はまた、ＴＷＥＥＮ２０、モノラウリン酸ソルビタンおよびモノラウリン酸ポリオキシエチレンソルビタンとしても知られる。ポロキサマー１８８は、ＰＬＵＲＯＮＩＣ Ｆ６８としても知られる。

本発明の医薬製剤中に含まれる非イオン性界面活性剤の量は、製剤にとって望ましい特異的性質、ならびに製剤が使用を意図される特定の環境および目的に応じて変化してもよい。特定の実施形態においては、製剤は、０．０１％±０．００１５％〜０．２％±０．０３％の界面活性剤を含んでもよい。例えば、本発明の製剤は、約０．００８５％；約０．０１％；約０．０２％；約０．０３％；約０．０４％；約０．０５％；約０．０６％；約０．０７％；約０．０８％；約０．０９％；約０．１％；約０．１１％；約０．１２％；約０．１３％；約０．１４％；約０．１５％；約０．１６％；約０．１７％；約０．１８％；約０．１９％；約０．２０％；約０．２１％；約０．２２％；または約０．２３％のポリソルベート２０またはポロキサマー１８８を含んでもよい。

本発明の医薬製剤はまた、熱ストレスの条件下でヒトＰＣＳＫ９抗体を安定化する型および量の１種またはそれ以上の安定剤を含んでもよい。いくつかの実施形態においては、「安定化する」とは、抗体および熱安定剤を含有する溶液が約４５℃に最大約２８日間保持された場合、約９１％を超える抗体が未変性コンホメーションを維持することを意味する。いくつかの実施形態においては、「安定化する」とは、抗体および熱安定剤を含有する溶液が約４５℃に最大約２８日間保持された時、約６％未満の抗体が凝集することを意味する。本明細書で用いられる場合、「天然」とは、一般的にはその抗体の無傷の単量体である、サイズ排除による抗体の主な形態を意味する。

特定の実施形態においては、熱安定剤は、スクロース、トレハロースおよびマンニトールから選択される糖もしくは糖アルコール、またはその任意の組合せであり、製剤中に含まれる量は、製剤が用いられる特定の環境および意図される目的に応じて変化してもよい。特定の実施形態においては、製剤は、約３％〜約１４％の糖もしくは糖アルコール；約４％〜約１３％の糖もしくは糖アルコール；約５％〜約１２％の糖もしくは糖アルコール；約６％〜約１１％の糖もしくは糖アルコール；約７％〜約１０％の糖もしくは糖アルコール；約８％〜約９％の糖もしくは糖アルコール；約４％〜約６％の糖もしくは糖アルコール；約５％〜約７％の糖もしくは糖アルコール；約９％〜約１１％の糖もしくは糖アルコール；または約１１％〜約１３％の糖もしくは糖アルコールを含んでもよい。例えば、本発明の医薬製剤は、４％±０．６％；５％±０．７５％；６％±０．９％；７％±１．０５％；８％±１．２％；９％±１．３５％；１０％±１．５％；１１％±１．６５％；１２％±１．８％；１３％±１．９５％；または約１４％±２．１％の糖もしくは糖アルコール（例えば、スクロース、トレハロースまたはマンニトール）を含んでもよい。

本発明の医薬製剤はまた、安定なｐＨを維持し、ヒトＰＣＳＫ９抗体を安定化するのを助けるのに役立つバッファーまたはバッファー系を含んでもよい。いくつかの実施形態においては、「安定化する」とは、抗体およびバッファーを含有する溶液が約４５℃で最大約２８日間保持された場合、４．５％±０．５％未満または６．０±０．５％未満の抗体が凝集することを意味する。いくつかの実施形態においては、「安定化する」とは、抗体およびバッファーを含有する溶液が約３７℃に最大約２８日間保持された場合、３％±０．５％未満または２．６％±０．５％未満の抗体が凝集することを意味する。いくつかの実施形態においては、「安定化する」とは、抗体およびバッファーを含有する溶液が約４５℃に最大約２８日間保持された場合、サイズ排除クロマトグラフィーにより決定された場合に少なくとも９１％±０．５％または少なくとも９２％±０．５％の抗体がその未変性コンホメーションにあることを意味する。いくつかの実施形態においては、「安定化する」とは、抗体およびバッファーを含有する溶液が約３７℃に最大約２８日間保持された場合、サイズ排除クロマトグラフィーにより決定された場合に少なくとも９４％±０．５％または少なくとも９５％±０．５％の抗体がその未変性コンホメーションにあることを意味する。「天然」または「未変性コンホメーション」とは、凝集も分解もしていない抗体画分を意味する。これは一般に、サイズ排除クロマトグラフィーアッセイのような、抗体の実体の相対サイズを測定するアッセイにより決定される。非凝集および非分解抗体は、天然抗体に一致する画分で溶出し、一般的には、主な溶出画分である。凝集抗体は、天然抗体よりも大きいサイズを示す画分で溶出する。分解抗体は、天然抗体よりも小さいサイズを示す画分で溶出する。

いくつかの実施形態においては、「安定化する」とは、抗体およびバッファーを含有する溶液が約４５℃に最大約２８日間保持された場合、陽イオン交換クロマトグラフィーにより決定された場合に少なくとも３８％±０．５％または少なくとも２９％±０．５％の抗体がその主電荷形態にあることを意味する。いくつかの実施形態においては、「安定化する」とは、抗体およびバッファーを含有する溶液が約３７℃で最大約２８日間保持された場合、陽イオン交換クロマトグラフィーにより決定された場合に少なくとも４６％±０．５％または少なくとも３９％±０．５％の抗体がその主電荷形態にあることを意味する。「主電荷」または「主電荷形態」とは、主要ピーク中のイオン交換樹脂から溶出する抗体の画分が、一般的に一方の側のより「塩基性」のピークおよび他方の側のより「酸性」のピークに隣接することを意味する。

本発明の医薬製剤は、約５．２〜約６．４のｐＨを有してもよい。例えば、本発明の製剤は、約５．５；約５．６；約５．７；約５．８；約５．９；約６．０；約６．１；約６．２；約６．３；約６．４；または約６．５のｐＨを有してもよい。いくつかの実施形態においては、ｐＨは６．０±０．４；６．０±０．３；６．０±０．２；６．０±０．１；約６．０；または６．０である。

いくつかの実施形態においては、バッファーまたはバッファー系は、ｐＨ５．５〜７．４の範囲に完全または部分的に重複する緩衝範囲を有する少なくとも１種のバッファーを含む。一実施形態においては、バッファーは、約６．０±０．５のｐＫａを有する。特定の実施形態においては、バッファーは、ヒスチジンバッファーを含む。特定の実施形態においては、ヒスチジンは、５ｍＭ±０．７５ｍＭ〜１５ｍＭ±２．２５ｍＭ；６ｍＭ±０．９ｍＭ〜１４ｍＭ±２．１ｍＭ；７ｍＭ±１．０５ｍＭ〜１３ｍＭ±１．９５ｍＭ；８ｍＭ±１．２ｍＭ〜１２ｍＭ±１．８ｍＭ；９ｍＭ±１．３５ｍＭ〜１１ｍＭ±１．６５ｍＭ；１０ｍＭ±１．５ｍＭ；または約１０ｍＭの濃度で存在する。特定の実施形態においては、バッファー系は、６．０±０．３のｐＨの、１０ｍＭ±１．５ｍＭのヒスチジンを含む。

本発明の医薬製剤はまた、高濃度の抗ＰＣＳＫ９抗体薬剤物質（例えば、一般的には、１５０ｍｇ／ｍｌを超える抗体）を含有する製剤の低下した粘度を維持するか、またはその粘度を低下させるのに役立つ１種またはそれ以上の賦形剤を含んでもよい。いくつかの実施形態においては、製剤は、液体製剤の粘度を２０±３センチポアズ未満、１５±２．２５センチポアズ未満、または１１±１．６５センチポアズ未満に維持するのに十分な量のアルギニンを含む。いくつかの実施形態においては、製剤は、１０．６±１．５９センチポアズ以下の粘度を維持するのに十分な量のアルギニンを含む。特定の実施形態においては、本発明の医薬製剤は、１０ｍＭ±１．５ｍＭ〜９０ｍＭ±１３．５ｍＭ、２０ｍＭ±３ｍＭ〜８０ｍＭ±１２ｍＭ、３０ｍＭ±４．５ｍＭ〜７０ｍＭ±１０．５、４０ｍＭ±６ｍＭ〜６０±９ｍＭまたは５０ｍＭ±７．５ｍＭの濃度のアルギニン、好ましくは、Ｌ−塩酸アルギニンを含有する。

例示的製剤
本発明の一態様によれば、医薬製剤は、（ｉ）５０ｍｇ／ｍＬ±７．５ｍｇ／ｍＬ、１００ｍｇ／ｍｌ±１５ｍｇ／ｍＬ、１５０ｍｇ／ｍＬ±２２．５ｍｇ／ｍＬ、または１７５ｍｇ／ｍＬ±２６．２５ｍｇ／ｍＬの濃度の、ヒトＰＣＳＫ９に特異的に結合するヒト抗体（例えば、ｍＡｂ−３１６Ｐ）；（ｉｉ）ｐＨ約６．０±０．３で十分な緩衝化を提供するバッファー系；（ｉｉｉ）特に、熱安定剤として役立つ糖；（ｉｖ）抗体の場合、構造的完全性を保護する有機共溶媒；および（ｖ）皮下投与にとって都合の良い容量での注射のために管理可能な粘度を保持するのに役立つアミノ酸の塩を含む、低粘度の、一般的には生理的等張性液体製剤である。

一実施形態によれば、医薬製剤は、（ｉ）５０±７．５ｍｇ／ｍＬ〜約１７５±２６．２５ｍｇ／ｍＬの濃度の、ヒトＰＣＳＫ９に特異的に結合し、置換されたＩＧＨＶ３−２３型重鎖可変領域および置換されたＩＧＬＶ４−１型軽鎖可変領域を含むヒトＩｇＧ１抗体（例えば、ｍＡｂ−３１６Ｐ）；（ｉｉ）ｐＨ約６．０±０．３で効果的にバッファーの役割を果たす、ヒスチジンを含むバッファー系；（ｉｉｉ）スクロース；（ｉｖ）ポリソルベートのような非イオン性界面活性剤；ならびに場合により（ｖ）アルギニン塩を含む。

一実施形態によれば、医薬製剤は、（ｉ）１７５ｍｇ／ｍｌ±２６．２５ｍｇ／ｍＬの濃度の、ヒトＰＣＳＫ９に特異的に結合し、配列番号２のＨＣＤＲ１、配列番号３のＨＣＤＲ２、配列番号４のＨＣＤＲ３、配列番号６のＬＣＤＲ１、配列番号７のＬＣＤＲ２、および配列番号８のＬＣＤＲ３を含むヒトＩｇＧ１抗体；（ｉｉ）ｐＨ６．０±０．３でバッファーの役割を果たす、１０ｍＭ±１．５ｍＭのヒスチジン；（ｉｉｉ）５％ｗ／ｖ±０．７５％ｗ／ｖのスクロース；（ｉｖ）０．０１％ｗ／ｖ±０．００１５％ｗ／ｖのポリソルベート２０；ならびに（ｖ）５０ｍＭ±７．５ｍＭのＬ−塩酸アルギニンを含む。

一実施形態によれば、医薬製剤は、（ｉ）約１５０ｍｇ／ｍｌ±２２．５ｍｇ／ｍＬの濃度の、ヒトＰＣＳＫ９に特異的に結合し、配列番号２のＨＣＤＲ１、配列番号３のＨＣＤＲ２、配列番号４のＨＣＤＲ３、配列番号６のＬＣＤＲ１、配列番号７のＬＣＤＲ２、および配列番号８のＬＣＤＲ３を含むヒトＩｇＧ１抗体；（ｉｉ）ｐＨ６．０±０．３でバッファーの役割を果たす、１０ｍＭ±１．５ｍＭのヒスチジン；（ｉｉｉ）１０％ｗ／ｖ±１．５％ｗ／ｖのスクロース；ならびに（ｉｖ）０．２％ｗ／ｖ±０．０３％ｗ／ｖまたは０．０１％ｗ／ｖ±０．００１５％ｗ／ｖのポリソルベート２０を含む。

一実施形態によれば、医薬製剤は、（ｉ）約１００ｍｇ／ｍＬ±１５ｍｇ／ｍＬの濃度の、ヒトＰＣＳＫ９に特異的に結合し、配列番号２のＨＣＤＲ１、配列番号３のＨＣＤＲ２、配列番号４のＨＣＤＲ３、配列番号６のＬＣＤＲ１、配列番号７のＬＣＤＲ２、および配列番号８のＬＣＤＲ３を含むヒトＩｇＧ１抗体；（ｉｉ）ｐＨ６．０±０．３でバッファーの役割を果たす、約２０ｍＭ±３ｍＭのヒスチジン；（ｉｉｉ）１２％ｗ／ｖ±１．８％ｗ／ｖのスクロース；ならびに（ｉｖ）０．２％ｗ／ｖ±０．０３％ｗ／ｖまたは０．０１％ｗ／ｖ±０．００１５％ｗ／ｖのポリソルベート２０を含む。

一実施形態によれば、医薬製剤は、（ｉ）約５０ｍｇ／ｍＬ±７．５ｍｇ／ｍＬの濃度の、ヒトＰＣＳＫ９に特異的に結合し、配列番号２のＨＣＤＲ１、配列番号３のＨＣＤＲ２、配列番号４のＨＣＤＲ３、配列番号６のＬＣＤＲ１、配列番号７のＬＣＤＲ２、および配列番号８のＬＣＤＲ３を含むヒトＩｇＧ１抗体；（ｉｉ）ｐＨ６．０±０．３でバッファーの役割を果たす、１０ｍＭ±１．５ｍＭのヒスチジン；（ｉｉｉ）６％ｗ／ｖ±０．９％ｗ／ｖのスクロース；ならびに（ｉｖ）０．１％ｗ／ｖ±０．０１５％ｗ／ｖまたは０．０１％ｗ／ｖ±０．００１５％ｗ／ｖのポリソルベート２０を含む。

一実施形態によれば、医薬製剤は、（ｉ）１７５ｍｇ／ｍｌ±２６．２５ｍｇ／ｍＬの濃度の、ヒトＰＣＳＫ９に特異的に結合し、配列番号１の重鎖可変ドメイン、および配列番号５の軽鎖可変ドメインを含むヒトＩｇＧ１抗体；（ｉｉ）ｐＨ６．０±０．３でバッファーの役割を果たす、１０ｍＭ±１．５ｍＭのヒスチジン；（ｉｉｉ）５％ｗ／ｖ±０．７５％ｗ／ｖのスクロース；（ｉｖ）０．０１％ｗ／ｖ±０．００１５％ｗ／ｖのポリソルベート２０；ならびに（ｖ）５０ｍＭ±７．５ｍＭのＬ−塩酸アルギニンを含む。

一実施形態によれば、医薬製剤は、（ｉ）約１５０ｍｇ／ｍｌ±２２．５ｍｇ／ｍＬの濃度の、ヒトＰＣＳＫ９に特異的に結合し、配列番号１の重鎖可変ドメイン、および配列番号５の軽鎖可変ドメインを含むヒトＩｇＧ１抗体；（ｉｉ）ｐＨ６．０±０．３でバッファーの役割を果たす、１０ｍＭ±１．５ｍＭのヒスチジン；（ｉｉｉ）１０％ｗ／ｖ±１．５％ｗ／ｖのスクロース；ならびに（ｉｖ）０．２％ｗ／ｖ±０．０３％ｗ／ｖまたは０．０１％ｗ／ｖ±０．００１５％ｗ／ｖのポリソルベート２０を含む。

一実施形態によれば、医薬製剤は、（ｉ）約１００ｍｇ／ｍＬ±１５ｍｇ／ｍＬの濃度の、ヒトＰＣＳＫ９に特異的に結合し、配列番号１の重鎖可変ドメイン、および配列番号５の軽鎖可変ドメインを含むヒトＩｇＧ１抗体；（ｉｉ）ｐＨ６．０±０．３でバッファーの役割を果たす、約２０ｍＭ±３ｍＭのヒスチジン；（ｉｉｉ）１２％ｗ／ｖ±１．８％ｗ／ｖのスクロース；ならびに（ｉｖ）０．２％ｗ／ｖ±０．０３％ｗ／ｖまたは０．０１％ｗ／ｖ±０．００１５％ｗ／ｖのポリソルベート２０を含む。

一実施形態によれば、医薬製剤は、（ｉ）約５０ｍｇ／ｍＬ±７．５ｍｇ／ｍＬの濃度の、ヒトＰＣＳＫ９に特異的に結合し、配列番号１の重鎖可変ドメイン、および配列番号５の軽鎖可変ドメインを含むヒトＩｇＧ１抗体；（ｉｉ）ｐＨ６．０±０．３でバッファーの役割を果たす、１０ｍＭ±１．５ｍＭのヒスチジン；（ｉｉｉ）６％ｗ／ｖ±０．９％ｗ／ｖのスクロース；ならびに（ｉｖ）０．１％ｗ／ｖ±０．０１５％ｗ／ｖまたは０．０１％ｗ／ｖ±０．００１５％ｗ／ｖのポリソルベート２０を含む。

本発明により包含される医薬製剤のさらなる非限定例は、以下に提示される実施例を含む本明細書の他の場所に記載される。

医薬製剤の安定性および粘度
本発明の医薬製剤は、典型的には、高レベルの安定性を示す。医薬製剤を参照して本明細書で用いられる用語「安定な」とは、医薬製剤中の抗体が規定の条件下での保存後に許容される程度の化学的構造または生物学的機能を保持することを意味する。製剤は、その中に含まれる抗体が規定の時間量にわたる保存後にその化学的構造または生物学的機能の１００％を維持しない場合であっても安定であってよい。特定の環境下で、規定の時間量にわたる保存後の抗体の構造または機能の約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％の維持を「安定」と見なすことができる。

安定性を、特に、規定の温度での規定の時間量にわたる保存後に製剤中に残留する天然抗体のパーセンテージを決定することにより測定することができる。天然抗体のパーセンテージを、天然が非凝集および非分解を意味するように、特に、サイズ排除クロマトグラフィー（例えば、サイズ排除高速液体クロマトグラフィー［ＳＥ−ＨＰＬＣ］）により決定することができる。「許容される程度の安定性」は、その語句が本明細書で用いられる場合、少なくとも９０％の天然形態の抗体を、所与の温度での規定の時間量にわたる保存後に製剤中で検出することができることを意味する。特定の実施形態においては、天然形態の抗体の少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％を、規定の温度での規定の時間量にわたる保存後に製剤中で検出することができる。安定性を測定する前の規定の時間量は、少なくとも１４日、少なくとも２８日、少なくとも１カ月、少なくとも２カ月、少なくとも３カ月、少なくとも４カ月、少なくとも５カ月、少なくとも６カ月、少なくとも７カ月、少なくとも８カ月、少なくとも９カ月、少なくとも１０カ月、少なくとも１１カ月、少なくとも１２カ月、少なくとも１８カ月、少なくとも２４カ月またはそれ以上であってよい。安定性を評価する場合に医薬製剤を保存することができる規定の温度は、約−８０℃〜約４５℃の任意の温度であってよく、例えば、約−８０℃、約−３０℃、約−２０℃、約０℃、約４〜８℃、約５℃、約２５℃、約３５℃、約３７℃、または約４５℃での保存であってよい。例えば、医薬製剤は、５℃で６カ月間の保存後に約９５％、９６％、９７％または９８％を超える天然抗体がＳＥ−ＨＰＬＣにより検出される場合に安定であると見なすことができる。医薬製剤はまた、２５℃での保存の６カ月後に、約９４％、９５％、９６％、９７％または９８％を超える天然抗体がＳＥ−ＨＰＬＣにより検出される場合に安定であると見なすことができる。医薬製剤はまた、４５℃での保存の２８日後に、約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％または９８％を超える天然抗体がＳＥ−ＨＰＬＣにより検出される場合に安定であると見なすことができる。医薬製剤はまた、−２０℃で３カ月間の保存後に、約９６％、９７％または９８％を超える天然抗体がＳＥ−ＨＰＬＣにより検出される場合に安定であると見なすことができる。医薬製剤はまた、−３０℃で３カ月間の保存後に、約９６％、９７％または９８％を超える天然抗体がＳＥ−ＨＰＬＣにより検出される場合に安定であると見なすことができる。医薬製剤はまた、−８０℃で３カ月間の保存後に、約９６％、９７％または９８％を超える天然抗体がＳＥ−ＨＰＬＣにより検出される場合に安定であると見なすことができる。

安定性は、特に、規定の温度での規定の時間量にわたる保存後に製剤中の凝集物中で形成する抗体のパーセンテージを決定することにより測定することができ、ここで安定性は形成される凝集物の％に反比例する。凝集抗体のパーセンテージを、特に、サイズ排除クロマトグラフィー（例えば、サイズ排除高速液体クロマトグラフィー［ＳＥ−ＨＰＬＣ］）により決定することができる。「許容される程度の安定性」は、その語句が本明細書で用いられる場合、多くても６％の抗体が、所与の温度での規定の時間量にわたる保存後に製剤中で検出される凝集形態にあることを意味する。特定の実施形態においては、許容される程度の安定性は、多くても約６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、または０．１％の抗体を、所与の温度での規定の時間量にわたる保存後に製剤中の凝集物中で検出することができることを意味する。安定性を測定する前の規定の時間量は、少なくとも２週、少なくとも２８日、少なくとも１カ月、少なくとも２カ月、少なくとも３カ月、少なくとも４カ月、少なくとも５カ月、少なくとも６カ月、少なくとも７カ月、少なくとも８カ月、少なくとも９カ月、少なくとも１０カ月、少なくとも１１カ月、少なくとも１２カ月、少なくとも１８カ月、少なくとも２４カ月またはそれ以上であってもよい。安定性を評価する場合に医薬製剤を保存することができる温度は、約−８０℃〜約４５℃の任意の温度であってよく、例えば、約−８０℃、約−３０℃、約−２０℃、約０℃、約４〜８℃、約５℃、約２５℃、約３５℃、約３７℃または約４５℃での保存であってよい。例えば、医薬製剤は、５℃での保存の６カ月後に、約３％、２％、１％、０．５％または０．１％未満の抗体が凝集形態で検出される場合、安定であると見なすことができる。医薬製剤はまた、２５℃での保存の６カ月後に、約４％、３％、２％、１％、０．５％または０．１％未満の抗体が凝集形態で検出される場合、安定であると見なすことができる。医薬製剤はまた、４５℃での保存の２８日後に、約６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％または０．１％未満の抗体が凝集形態で検出される場合、安定であると見なすことができる。医薬製剤はまた、−２０℃、−３０℃、または−８０℃での保存の３カ月後に、約３％、２％、１％、０．５％または０．１％未満の抗体が凝集形態で検出される場合、安定であると見なすことができる。

安定性を、特に、抗体の主画分（「主電荷形態」）中よりもイオン交換中のより酸性の画分（「酸性形態」）中に移動する抗体のパーセンテージを決定することにより測定することができ、ここで、安定性は酸性形態の抗体画分に反比例する。理論によって束縛されることを望むものではないが、抗体の脱アミド化により、抗体が非脱アミド化抗体と比較して、より負に荷電するようになり、かくして、より酸性になり得る（例えば、Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，Ｎ．、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｅａｍｉｄａｔｉｏｎ、ＰＮＡＳ、２００年４月１６日、９９（８）：５２８３〜５２８８頁を参照されたい）。「酸性化」抗体のパーセンテージを、特に、イオン交換クロマトグラフィー（例えば、陽イオン交換高速液体クロマトグラフィー［ＣＥＸ−ＨＰＬＣ］）により決定することができる。「許容される程度の安定性」は、その語句が本明細書で用いられる場合、多くても４９％の抗体が、規定の温度での規定の時間量にわたる保存後に製剤中で検出されるより酸性の形態にあることを意味する。特定の実施形態においては、許容される程度の安定性は、多くても約４９％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％または０．１％の抗体を、所与の温度での規定の時間量にわたる保存後に製剤中で酸性形態で検出することができることを意味する。安定性を測定する前の規定の時間量は、少なくとも２週間、少なくとも２８日、少なくとも１カ月、少なくとも２カ月、少なくとも３カ月、少なくとも４カ月、少なくとも５カ月、少なくとも６カ月、少なくとも７カ月、少なくとも８カ月、少なくとも９カ月、少なくとも１０カ月、少なくとも１１カ月、少なくとも１２カ月、少なくとも１８カ月、少なくとも２４カ月、またはそれ以上であってもよい。安定性を評価する場合に医薬製剤を保存することができる温度は、約−８０℃〜約４５℃の任意の温度であってよく、例えば、約−８０℃、約−３０℃、約−２０℃、約０℃、約４〜８℃、約５℃、約２５℃、または約４５℃での保存であってもよい。例えば、医薬製剤は、−８０℃、−３０℃、または−２０℃での３カ月の保存後に、約３０％、２９％、２８％、２７％、２６％、２５％、２４％、２３％、２２％、２１％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％または０．１％未満の抗体がより酸性の形態にある場合、安定であると見なすことができる。医薬製剤はまた、５℃での６カ月間の保存後に、約３２％、３１％、３０％、２９％、２８％、２７％、２６％、２５％、２４％、２３％、２２％、２１％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％または０．１％未満の抗体がより酸性の形態にある場合、安定であると見なすことができる。医薬製剤はまた、２５℃での６カ月間の保存後に、約４３％、４２％、４１％、４０％、３９％、３８％、３７％、３６％、３５％、３４％、３３％、３２％、３１％、３０％、２９％、２８％、２７％、２６％、２５％、２４％、２３％、２２％、２１％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％または０．１％未満の抗体がより酸性の形態にある場合、安定であると見なすことができる。医薬製剤はまた、４５℃で２８日間の保存後に、約４９％、４８％、４７％、４６％、４５％、４４％、４３％、４２％、４１％、４０％、３９％、３８％、３７％、３６％、３５％、３４％、３３％、３２％、３１％、３０％、２９％、２８％、２７％、２６％、２５％、２４％、２３％、２２％、２１％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％または０．１％未満の抗体をより酸性の形態で検出することができる場合、安定であると見なすことができる。

例えば、熱安定性を決定するための示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）、機械的安定性を決定するための撹拌制御、および溶液の濁度を決定するための約３５０ｎｍまたは約４０５ｎｍでの吸光度のような、他の方法を用いて、本発明の製剤の安定性を評価することができる。例えば、本発明の製剤は、約５℃〜約２５℃で６カ月間またはそれ以上の保存後に、製剤のＯＤ₄₀₅の変化が、時間０での製剤のＯＤ₄₀₅から約０．０５未満（例えば、０．０４、０．０３、０．０２、０．０１、またはそれ以下）である場合、安定であると考えることができる。

抗体のその標的に対する生物学的活性または結合親和性の測定を用いて、安定性を評価することもできる。例えば、本発明の製剤は、例えば、５℃、２５℃、４５℃などでの規定の時間量（例えば、１〜１２カ月）にわたる保存後に、製剤中に含まれる抗ＰＣＳＫ９抗体が、前記保存の前の抗体の結合親和性の少なくとも９０％、９５％またはそれ以上である親和性でＰＣＳＫ９に結合する場合、安定であると見なすことができる。結合親和性を、例えば、ＥＬＩＳＡまたはプラズモン共鳴により決定することができる。生物学的活性を、例えば、ＰＣＳＫ９を発現する細胞を抗ＰＣＳＫ９抗体を含む製剤と接触させることなどのＰＣＳＫ９活性アッセイにより決定することができる。そのような細胞への抗体の結合を、例えば、ＦＡＣＳ分析などにより直接測定することができる。あるいは、ＰＣＳＫ９系の下流の活性を、抗体の存在下で測定し、抗体の非存在下でのＰＣＳＫ９系の活性と比較することができる。いくつかの実施形態においては、ＰＣＳＫ９は、細胞にとって内因性でありうる。他の実施形態においては、ＰＣＳＫ９を細胞中で異所的に発現させることができる。

製剤中の抗体の安定性を評価するためのさらなる方法は、以下に提供される実施例に示される。

本発明の液体医薬製剤は、特定の実施形態においては、低レベルから中レベルの粘度を示してもよい。本明細書で用いられる「粘度」は、「運動粘度」または「絶対粘度」であってもよい。「運動粘度」は、重力の影響下での流体の抵抗流の尺度である。等量の２つの流体を同一の毛細管粘度計に入れ、重力により流動させた場合、粘性流体は、粘度の低い流体が毛細管を流動するよりも長くかかる。例えば、ある流体がその流動を完了するのに２００秒かかり、別の流体が４００秒かかる場合、第二の流体は運動粘度スケールにおいて第一の流体の２倍の粘度を有する。「絶対粘度」は、動的粘度または単純粘度と呼ばれることもあり、運動粘度と流体密度との積である（絶対粘度＝運動粘度×密度）。運動粘度の次元は、Ｌ²／Ｔ（ここで、Ｌは長さであり、Ｔは時間である）である。一般に、運動粘度は、センチストーク（ｃＳｔ）で表される。運動粘度のＳＩ単位はｍｍ²／ｓであり、これは１ｃＳｔである。絶対粘度は、センチポアズ（ｃＰ）の単位で表される。絶対粘度のＳＩ単位は、ミリパスカル−秒（ｍＰａ−ｓ）であり、ここで１ｃＰ＝１ｍＰａ−ｓである。

本発明の液体製剤を参照して、本明細書で用いられる場合、低レベルの粘度は、約１５センチポアズ（ｃＰ）未満の絶対粘度を示す。例えば、本発明の液体製剤は、標準的な粘度測定技術を用いて測定した時に、製剤が約１５ｃＰ、約１４ｃＰ、約１３ｃＰ、約１２ｃＰ、約１１ｃＰ、約１０ｃＰ、約９ｃＰ、約８ｃＰ、またはそれ以下の絶対粘度を示す場合、「低粘度」を有すると見なされる。本発明の液体製剤を参照して、本明細書で用いられる場合、中レベルの粘度は、約３５ｃＰ〜約１５ｃＰの絶対粘度を示す。例えば、本発明の液体製剤は、標準的な粘度測定技術を用いて測定した時に、製剤が約３４ｃＰ、約３３ｃＰ、約３２ｃＰ、約３１ｃＰ、約３０ｃＰ、約２９ｃＰ、約２８ｃＰ、約２７ｃＰ、約２６ｃＰ、約２５ｃＰ、約２４ｃＰ、約２３ｃＰ、約２２ｃＰ、約２１ｃＰ、約２０ｃＰ、約１９ｃＰ、１８ｃＰ、約１７ｃＰ、約１６ｃＰ、または約１５．１ｃＰの絶対粘度を示す場合、「中粘度」を有すると見なされる。

以下の実施例に示されるように、本発明者らは、高濃度の抗ヒトＰＣＳＫ９抗体（例えば、約１００ｍｇ／ｍｌ〜少なくとも２００ｍｇ／ｍＬ）を含む低〜中粘度の液体製剤を、該抗体を約２５ｍＭ〜約１００ｍＭのアルギニンと共に製剤化することにより取得することができるという驚くべき発見をした。さらに、スクロース含量を約１０％未満に調整することにより、製剤の粘度をさらにより高い程度で低下させることができることがさらに発見された。

容器および投与方法
本発明の医薬製剤を、医薬および他の治療組成物の保存に適する任意の容器内に含有させることができる。例えば、医薬製剤を、バイアル、アンプル、シリンジ、カートリッジ、またはビンのような規定の容量を有する密閉され、滅菌されたプラスチックまたはガラス容器内に含有させることができる。例えば、透明および不透明（例えば、琥珀色）のガラスまたはプラスチックバイアルを含む、様々な型のバイアルを用いて、本発明の製剤を含有させることができる。同様に、任意の型のシリンジを用いて、本発明の医薬製剤を含有させるか、または投与することができる。

本発明の医薬製剤を、「標準タングステン」シリンジまたは「低タングステン」シリンジ内に含有させることができる。当業者には理解されるように、ガラスシリンジを作製する方法は一般に、ガラスを貫通するように機能する加熱タングステン棒の使用を含み、それによって、液体を引き出し、シリンジから排出することができる穴を作出する。この方法は、シリンジの内部表面上に微量のタングステンの沈着をもたらす。その後の洗浄および他の加工工程を用いて、シリンジ中のタングステンの量を減少させることができる。本明細書で用いられる用語「標準タングステン」とは、シリンジが５００ｐｐｂ（１０億分の１）以上のタングステンを含有することを意味する。用語「低タングステン」とは、シリンジが５００ｐｐｂ未満のタングステンを含有することを意味する。例えば、本発明による低タングステンシリンジは、約４９０、４８０、４７０、４６０、４５０、４４０、４３０、４２０、４１０、３９０、３５０、３００、２５０、２００、１５０、１００、９０、８０、７０、６０、５０、４０、３０、２０、１０ｐｐｂ未満またはそれより少ないタングステンを含有してもよい。

シリンジにおいて用いられるゴムプランジャ、およびバイアルの開口部を閉じるのに用いられるゴム栓を、シリンジもしくはバイアルの薬剤内容物の汚染を防止するか、またはその安定性を保つために被覆することができる。かくして、特定の実施形態によれば、本発明の医薬製剤を、被覆プランジャを含むシリンジ内、または被覆ゴム栓で密閉されたバイアル内に含有させることができる。例えば、プランジャまたは栓を、フッ化炭素フィルムで被覆することができる。本発明の医薬製剤を含有するバイアルおよびシリンジと共に用いるのに適する被覆栓またはプランジャの例は、例えば、米国特許第４，９９７，４２３号；第５，９０８，６８６号；第６，２８６，６９９号；第６，６４５，６３５号；および第７，２２６，５５４号に記載されており、その内容はその全体が参照によって本明細書に組み入れられる。本発明の文脈において用いることができる被覆ゴム栓およびプランジャの特定例は、Ｗｅｓｔ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｉｎｃ．（Ｌｉｏｎｖｉｌｌｅ、ＰＡ）から入手可能な商標名「ＦｌｕｒｏＴｅｃ（登録商標）」の下で商業的に入手可能である。ＦｌｕｒｏＴｅｃ（登録商標）は、医薬品（ｄｒｕｇ ｐｒｏｄｕｃｔ）のゴム表面への付着を最小化するか、または防止するために用いられるフッ化炭素コーティングの一例である。

本発明の特定の実施形態によれば、医薬製剤を、フッ化炭素被覆プランジャを含む低タングステンシリンジ内に含有させることができる。

医薬製剤を、注射（例えば、皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内など）のような非経口経路または経皮、粘膜、経鼻、経肺もしくは経口投与により患者に投与することができる。いくつかの再利用できるペンまたは自己注射送達デバイスを用いて、本発明の医薬製剤を皮下送達することができる。例としては、限定されるものではないが、ＡＵＴＯＰＥＮ（商標）（Ｏｗｅｎ Ｍｕｍｆｏｒｄ，Ｉｎｃ．、Ｗｏｏｄｓｔｏｃｋ、ＵＫ）、ＤＩＳＥＴＲＯＮＩＣ（商標）ペン（Ｄｉｓｅｔｒｏｎｉｃ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｂｅｒｇｄｏｒｆ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）、ＨＵＭＡＬＯＧ ＭＩＸ７５／２５（商標）ペン、ＨＵＭＡＬＯＧ（商標）ペン、ＨＵＭＡＬＩＮ７０／３０（商標）ペン（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ ａｎｄ Ｃｏ．、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ）、ＮＯＶＯＰＥＮ（商標）Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩ（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、Ｄｅｎｍａｒｋ）、ＮＯＶＯＰＥＮ ＪＵＮＩＯＲ（商標）（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、Ｄｅｎｍａｒｋ）、ＢＤ（商標）ペン（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ、ＮＪ）、ＯＰＴＩＰＥＮ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ ＰＲＯ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ ＳＴＡＲＬＥＴ（商標）、およびＯＰＴＩＣＬＩＫ（商標）（ｓａｎｏｆｉ−ａｖｅｎｔｉｓ、Ｆｒａｎｋｆｕｒｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）が挙げられる。本発明の医薬組成物の皮下送達における適用を有する使い捨てペンまたは自己注射送達デバイスの例としては、限定されるものではないが、ＳＯＬＯＳＴＡＲ（商標）ペン（ｓａｎｏｆｉ−ａｖｅｎｔｉｓ）、ＦＬＥＸＰＥＮ（商標）（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ）、およびＫＷＩＫＰＥＮ（商標）（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）、ＳＵＲＥＣＬＩＣＫ（商標）Ａｕｔｏｉｎｊｅｃｔｏｒ（Ａｍｇｅｎ、Ｔｈｏｕｓａｎｄ Ｏａｋｓ、ＣＡ）、ＰＥＮＬＥＴ（商標）（Ｈａｓｅｌｍｅｉｅｒ、Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）、ＥＰＩＰＥＮ（Ｄｅｙ，Ｌ．Ｐ．）およびＨＵＭＩＲＡ（商標）Ｐｅｎ（Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｓ、Ａｂｂｏｔｔ Ｐａｒｋ、ＩＬ）が挙げられる。

本発明の医薬製剤を送達するためのマイクロインフューザの使用も、本明細書で想定される。本明細書で用いられる用語「マイクロインフューザ」とは、長時間（例えば、約１０、１５、２０、２５、３０分以上）にわたって大量（例えば、最大で約２．５ｍＬ以上）の治療製剤をゆっくり投与するように設計された皮下送達デバイスを意味する。例えば、米国特許第６，６２９，９４９号；米国特許第６，６５９，９８２号；およびＭｅｅｈａｎら、Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ ４６：１０７〜１１６頁（１９９６）を参照されたい。マイクロインフューザは、高濃度（例えば、約１００、１２５、１５０、１７５、２００ｍｇ／ｍＬ以上）または粘性の溶液中に含まれる高用量の治療タンパク質の送達にとって特に有用である。

一実施形態においては、約１７５ｍｇ／ｍＬ±２６．２５ｍｇ／ｍＬの抗ＰＣＳＫ９抗体を含有する液体医薬製剤は、プレフィルドシリンジ中の約１．１４ｍＬ±０．１７ｍｌの容量で皮下投与される。一実施形態においては、シリンジは、２７ゲージの薄壁針、フッ化炭素被覆ゴムプランジャおよびゴム針シールドを用いて充填された１ｍＬ長ガラスシリンジである。一実施形態においては、シリンジは、２７ゲージ針、ＦＭ２７ゴム針シールド、およびＦＬＵＲＯＴＥＣ（登録商標）被覆４０２３／５０ゴムプランジャを用いて固定されたＯＭＰＩ １ｍＬ長ガラスシリンジである。

一実施形態においては、約１５０ｍｇ／ｍＬ±２２．５ｍｇ／ｍＬの抗ＰＣＳＫ９抗体を含有する液体医薬製剤は、プレフィルドシリンジ中の約１ｍＬ±０．１５ｍｌの容量で皮下投与される。一実施形態においては、シリンジは、２７ゲージの薄壁針、フッ化炭素被覆ゴムプランジャおよびゴム針シールドを用いて充填された１ｍＬ長ガラスシリンジである。一実施形態においては、シリンジは、２７ゲージ針、ＦＭ２７ゴム針シールド、およびＦＬＵＲＯＴＥＣ（登録商標）被覆４０２３／５０ゴムプランジャを用いて固定されたＯＭＰＩ １ｍＬ長ガラスシリンジである。

医薬製剤の治療的使用
本発明の医薬製剤は、特に、ＰＣＳＫ９により媒介される疾患または障害を含めた、ＰＣＳＫ９活性と関連する任意の疾患または障害の処置、防止または改善にとって有用である。本発明の医薬製剤の投与により処置または防止することができる疾患および障害の非限定例としては、例えば、高コレステロール血症、家族性高コレステロール血症、高脂血症、家族性高脂血症、異常βリポタンパク質血症、家族性異常βリポタンパク質血症、高トリグリセリド血症、および家族性高トリグリセリド血症などの様々な脂質異常症が挙げられる。

以下の実施例は、本発明の方法および組成物を作製し、使用する方法の完全な開示および説明を当業者に提供するために提示され、本発明者らがその発明と見なすものの範囲を限定することを意図するものではない。用いられる数（例えば、量、温度など）に関して正確性を確保するための努力が為されたが、いくらかの実験誤差および偏差が生じるはずである。別途指摘しない限り、部はモル部であり、分子量は平均分子量であり、温度は摂氏温度であり、および圧力は大気圧でのもの、または大気圧に近いものである。

初期の製剤開発活動は、静脈内および皮下注射のためのほぼ生理的なオスモル濃度および低い粘度を維持しながら、タンパク質と適合し、その安定性を増強する賦形剤を同定するための、ｍＡｂ−３１６Ｐ（本発明の抗ＰＣＳＫ９抗体）の液体および凍結乾燥製剤における有機共溶媒、熱安定剤、およびバッファーのスクリーニングを含んでいた。最大のタンパク質安定性のための最適なｐＨを決定するためにバッファー条件も試験した。

〔実施例１〕
抗ＰＣＳＫ１ ＭＡＢ−３１６Ｐ製剤の開発
様々なバッファー、有機共溶媒、および熱安定剤をスクリーニングして、ＰＣＳＫ９抗体の安定性を増強する賦形剤を同定した。最大の抗体安定性のための最適なｐＨを決定するために、バッファー条件も試験した。これらの研究から得られた結果を用いて、静脈内（ＩＶ）または皮下投与（ＳＣ）のための臨床使用に適する安定な液体製剤、ならびに安定な凍結乾燥製剤を開発した。凍結乾燥医薬品のために、ＩＶについては５０ｍｇ／ｍＬまたはＳＣ投与については１００ｍｇ／ｍＬの濃度に、注射用滅菌水（ＷＦＩ）を用いて再構成させることができる単一の二重使用製剤を開発した。一度、５０ｍｇ／ｍＬに再構成されたら、ＩＶ送達のために０．９％塩化ナトリウムを含有するＩＶバッグ中で医薬品をさらに希釈することができる。液体製剤のために、ｍＡｂ−３１６Ｐを１７５±２７ｍｇ／ｍｌおよび１５０±２３ｍｇ／ｍｌで製剤化した。一実施形態においては、１７５±２７ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ−３１６Ｐを、１０±１．５ｍＭのヒスチジン（ｐＨ６．０±０．３）、０．０１％±０．００１５％のポリソルベート２０、５％±０．７５％のスクロース中で製剤化した。一実施形態においては、１５０±２３ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ−３１６Ｐを、１０±１．５ｍＭのヒスチジン（ｐＨ６．０±０．３）、０．２％±０．０３％または０．０１％±０．００１５％のポリソルベート２０、１０％±１．５％のスクロース中で製剤化した。

〔実施例２〕
抗ＰＣＳＫ１ ＭＡＢ−３１６ＰのバッファーおよびｐＨ
ＰＣＳＫ９抗体の安定性に対するｐＨおよびバッファーの種類の効果を、液体製剤中で試験した。２ｍｇ／ｍＬの抗ＰＣＳＫ９ ｍＡｂ−３１６Ｐを、それぞれ１０ｍＭの酢酸（ｐＨ５．０〜５．５）、クエン酸（ｐＨ５．５〜６．０）、コハク酸（ｐＨ６．０）、ヒスチジン（ｐＨ６．０）、リン酸（ｐＨ６．０〜７．５）、またはＴｒｉｓ（ｐＨ８．０）バッファー中、４５℃でインキュベートして、タンパク質の熱安定性に対するバッファーおよびｐＨの効果を評価した（表１）。この実験のために、液体製剤を、ＦＬＵＲＯＴＥＣ（登録商標）被覆４４３２／５０ブチルゴム栓を備えた２ｍＬ容量の１型ホウケイ酸ガラスバイアル中、０．３５ｍＬとしてそれぞれ保持した。回収されたｍＡｂ−３１６Ｐの総量を、逆相クロマトグラフィーを用いて決定した。天然形態と凝集形態のｍＡｂ−３１６Ｐのパーセンテージを、サイズ排除クロマトグラフィーを用いて決定した。酸性種と塩基性種のｍＡｂ−３１６Ｐのパーセンテージを、陽イオン交換クロマトグラフィーを用いて決定した。抗ＰＣＳＫ９ ｍＡｂ−３１６ＰをｐＨ６．０の１０ｍＭヒスチジンバッファー中で製剤化した場合、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥ）および陽イオン交換クロマトグラフィー（ＣＥＸ）の両方により決定されたように、最大のタンパク質安定性が観察された。

次いで、ｐＨ５．５〜ｐＨ６．５のヒスチジンバッファー中、４５℃で１０ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ−３１６Ｐをインキュベートすることにより、ｍＡｂ−３１６Ｐの最適ｐＨを決定した。ｍＡｂ−３１６ＰをｐＨ６．０に緩衝化されたヒスチジン中で製剤化した場合、ＳＥおよびＣＥＸにより決定されたように、最大のタンパク質安定性が観察された（表２）。これらの分析はまた、主なタンパク質分解経路が、凝集物、切断産物、および電荷変異体の形成であることも示した。これらの結果に基づいて、ｐＨ６．０の１０ｍＭヒスチジンバッファーを、液体および凍結乾燥ｍＡｂ−３１６Ｐ製剤の開発のために選択した。

製剤開発研究からの結果は、塩基性条件下（ｐＨ≧６．５）で、溶液中の抗ＰＣＳＫ９
ｍＡｂ−３１６Ｐは脱アミド化反応を受け得ることを示している。逆に、ｐＨ≦５．５では、ｍＡｂ−３１６Ｐの分子量変異体の形成速度の増加が観察された。これらのデータに基づいて、ｍＡｂ−３１６Ｐの製剤に用いられるバッファーのｐＨを、ｐＨ５．７〜ｐＨ６．３に維持する。ｍＡｂ−３１６Ｐの安定性の加速は、このｐＨ範囲にわたって類似する。

〔実施例３〕
撹拌ストレスに対する保護剤の選択
撹拌ストレスに起因するｍＡｂ−３１６Ｐを含有する混合物中での粒子状物質の形成を最小化する能力について、様々な共溶媒を個別に試験した。撹拌された薬剤物質の濁度分析により、ｍＡｂ−３１６Ｐを含有する溶液（ＦＬＵＲＯＴＥＣ（登録商標）被覆４４３２／５０ブチルゴム栓を備えた２ｍＬ容量の１型ホウケイ酸ガラスバイアル中、０．３５ｍＬの２５ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ−３１６Ｐ、１０ｍＭのヒスチジン、ｐＨ６．０±０．２）を１２０分間ボルテックスした場合、４０５ｎｍでの光密度（ＯＤ）の増加が示された（表３）。評価された共溶媒のいずれかを含む製剤は、撹拌により誘導される濁度の増加を防止したと考えられる。しかしながら、２０％のＰＥＧ３００、１０％のＰＥＧ３００、および２０％のプロピレングリコールは、ＳＥにより決定されたように、ｍＡｂ−３１６Ｐの熱安定性を有意に低下させた（表４；上記のボルテックス試験におけるものと同じｍＡｂ−３１６Ｐ濃度、バッファー、および容器条件）。ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、プルロニックＦ６８、およびＰＥＧ３３５０を含む製剤は、ＳＥおよびＣＥＸにより決定されたように、ｍＡｂ−３１６Ｐの熱安定性に対する有意な効果を有さず、これらの共溶媒を、抗ＰＣＳＫ９ ｍＡｂ−３１６Ｐを製剤化するのに好適にする。ポリソルベート２０はｍＡｂ−３１６Ｐの撹拌試験および熱試験の両方において良好な安定性属性を示したため、ｍＡｂ−３１６Ｐの凍結乾燥および液体製剤の両方の開発のための有機共溶媒としてポリソルベート２０を選択した。

〔実施例４〕
熱ストレスに対する保護剤の選択
糖、アミノ酸、および無機塩を含む多様な一覧から選択された様々な賦形剤を個別に試験して、ｍＡｂ−３１６Ｐの熱安定性を最適に増加させた。試験したいくつかの熱安定剤の概要を、表５に提示する。これらの実験のために、「熱安定剤」賦形剤を、１０ｍＭヒスチジン中の２０ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ−３１６Ｐの溶液（ＦＬＵＲＯＴＥＣ（登録商標）被覆４４３２／５０ブチルゴム栓を備えた２ｍＬ容量の１型ホウケイ酸ガラスバイアル中、０．３５ｍＬ）中に含有させた。スクロース、ソルビトール、マンニトール、およびトレハロースを含有する製剤は、ＳＥ分析により決定された場合、最少量のｍＡｂ−３１６Ｐ分解物を有していた。しかしながら、ソルビトールを含有するこれらの製剤は、スクロース、トレハロース、およびマンニトールを含有するこれらの製剤と比較して、驚くべき濁度の増加を示した（表５）。スクロース、トレハロース、およびマンニトールは抗ＰＣＳＫ９ ｍＡｂ−３１６Ｐの電荷変異体の形成に対する効果を有さないことが観察されたが、マンニトールは複数回の凍結−融解サイクルの間にタンパク質を脱安定化することが観察された。かくして、ｍＡｂ−３１６Ｐは、スクロースまたはトレハロースを用いて製剤化された場合に類似する安定性を有する。

〔実施例５〕
凍結乾燥製剤
特に電荷変異体に関して、抗ＰＣＳＫ９ ｍＡｂ−３１６Ｐの安定性を増加させるため、およびｍＡｂ−３１６Ｐの最大送達可能濃度を増加させるために、凍結乾燥製剤を開発した。ＦＬＵＲＯＴＥＣ（登録商標）被覆４４３２／５０ブチルゴム栓を備えた２ｍＬ容量の１型ホウケイ酸ガラスバイアル中、様々なリオプレテクタント（ｌｙｏｐｒｏｔｅｃｔａｎｔ）を、０．７ｍＬの５０ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ−３１６Ｐ、１０ｍＭのヒスチジンと混合し、凍結乾燥し、５０℃でインキュベートした時に凍結乾燥されたｍＡｂ−３１６Ｐを安定化するその能力について試験した。分析の前に、凍結乾燥ケーキを、１００ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ−３１６Ｐに再構成させた。ＳＥおよびＣＥＸにより決定された場合、最大の安定性を有する２つの凍結乾燥製剤は、１）６％のスクロースまたは２）２％のスクロース＋２％アルギニンを含んでいた。ｍＡｂ−３１６Ｐ医薬品製剤のために６％のスクロースを選択した。かくして、抗ＰＣＳＫ９ ｍＡｂ−３１６Ｐ凍結乾燥医薬品を、最適化された、１０ｍＭヒスチジン、ｐＨ６．０±０．１、０．１％（ｗ／ｖ）ポリソルベート２０、６％（ｗ／ｖ）スクロース、および５０ｍｇ／ｍＬ抗ＰＣＳＫ９ ｍＡｂ−３１６Ｐを含有する水性緩衝化製剤中での凍結乾燥により生成させた。この凍結乾燥製剤の保存およびストレス安定性を、表７に提示する。

周囲以下の（ｓｕｂａｍｂｉｅｎｔ）変調示差走査熱量測定法（ｍＤＳＣ）を用いて測定された、製剤の測定されたＴｇ’（凍結ガラス転移温度）に基づいて、抗ｐＰＣＳＫ９ ｍＡｂ−３１６Ｐ凍結乾燥サイクルを開発した。生成物の温度は一次乾燥中にＴｇ’を超えてはならず、これは−２７．９℃であると決定された。

５．３ｍＬの５０ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ−３１６Ｐ、１０ｍＭのヒスチジン（ｐＨ６．０）、０．１％のポリソルベート２０、６％のスクロース製剤を２０ｍＬの１型ガラスバイアル中に充填し、以下の工程に従って凍結乾燥することにより、凍結乾燥されたｍＡｂ−３１６Ｐを生成させた：
１．ロード中に必要とされる棚温度： ５〜２５℃
２．初期保持： ５℃で６０分間
３．凍結のためのランプ速度（時間）： ０．５℃／ｍｉｎ（１００分間）
４．保持： −４５℃で１２０分間
５．減圧設定点： １００ｍＴｏｒｒ
６．一次乾燥までの加熱のためのランプ速度（時間）：
０．５℃／ｍｉｎ（４０分間）
７．一次乾燥の棚温度： −２５℃
８．一次乾燥の長さ： ７８時間
９．二次乾燥までの加熱のためのランプ速度（時間）：
０．２℃／ｍｉｎ（３００分間）
１０．二次乾燥の棚温度： ３５℃
１１．二次乾燥の長さ： ６時間
１２．冷却のためのランプ速度（時間）： ０．５℃／ｍｉｎ（２０分間）
１３．保持： ２５℃で６０分間^＊
１４．窒素ガスをバックフィル
１５．減圧下での栓をする：大気圧の８０％（６０８，０００ｍＴｏｒｒ）。

二次乾燥の後であって栓をする工程の前に幅広い保存が必要とされる場合、凍結乾燥機の棚温度を２〜８℃にした。上記の最終サイクルを用いて生成された凍結乾燥医薬品は、良好なケーキ状外見、低い湿度含量（０．３％）を有し、再構成時間が４分未満であり、および濁りのない再構成された溶液に濁りはなかった。

ｍＡｂ−３１６Ｐ医薬品（ｍＡｂ−３１６Ｐ ＤＰ）を５０℃で２カ月間インキュベートするか、または５℃で３カ月間保存した場合、凍結乾燥ケーキの外見は影響されなかった。再構成されたｍＡｂ−３１６Ｐ医薬品のｐＨ、外見、または濁度に対する影響はなく、回収されたｍＡｂ−３１６Ｐの量に有意差はなかった。５０℃でのインキュベーションの２カ月後、凍結乾燥ｍＡｂ−３１６Ｐ医薬品は、ＳＥ−ＨＰＬＣにより決定された場合、１．１％多く分解され、ＣＥＸ−ＨＰＬＣにより決定された場合、８．３％多く分解された。凍結乾燥ｍＡｂ−３１６Ｐ医薬品を５℃で３カ月間保存した場合、有意な分解は観察されなかった。抗ＰＣＳＫ９バイオアッセイを用いて決定された場合、ストレスを加えた試料のいずれについても、効果の有意な喪失は観察されなかった。

〔実施例６〕
液体および再構成されたＭＡＢ−３１６Ｐ
投与経路に応じて、凍結乾燥ｍＡｂ−３１６Ｐ医薬品を再構成させるための２つの方法がある。ＩＶ投与については、ｍＡｂ−３１６Ｐ医薬品を、５．０ｍＬの滅菌ＷＦＩを用いて再構成させて、５０ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ−３１６Ｐ、１０ｍＭのヒスチジン、ｐＨ６．０、０．１％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０、および６％（ｗ／ｖ）のスクロースを含有する５．３ｍＬの溶液を得る。ＳＣ投与については、ｍＡｂ−３１６Ｐ医薬品を２．３ｍＬの滅菌ＷＦＩを用いて再構成させて、１００ｍｇ／ｍＬのＲＥＧＮ７２７、２０ｍＭのヒスチジン、ｐＨ６．０、０．２％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０、および１２％（ｗ／ｖ）のスクロースを含有する２．７ｍＬの溶液を得る。離脱のために利用可能な容量は、ＩＶについては４．８ｍＬであり、ＳＣ注射については２．０ｍＬである；過剰量の０．７ｍＬの再構成溶液がＳＣバイアル中に含有される。

別の方法では、凍結乾燥の介入工程を用いることなく、液体ｍＡｂ−３１６Ｐを液体製剤として製剤化する。液体ｍＡｂ−３１６Ｐ製剤は、１０±１．５ｍＭのヒスチジン（ｐＨ６．０±０．３）、０．０１％±０．００１５％または０．２％±０．０３％のポリソルベート２０、５％±０．７５％または１０％±１．５％のスクロース、および１７５ｍｇ／ｍＬの製剤の場合、５０±７．５ｍＭのアルギニン中の、１５０ｍｇ／ｍＬ（±１５％）または１７５ｍｇ／ｍＬ（±１５％）の抗ＰＣＳＫ９ ｍＡｂ−３１６Ｐである。

抗ＰＣＳＫ９ ｍＡｂ−３１６Ｐは、滅菌濾過された場合に安定であることがわかった。臨床供給物の製造においてはＭｉｌｌｉｐｏｒｅ ＭＩＬＬＩＰＡＫ濾過ユニットを用いたが、研究試験においては同一組成のフィルターを用いた（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ ＭＩＬＬＥＸ ＤＵＲＡＰＯＲＥ）。ガラスバイアル中での保存と比較して、ｍＡｂ−３１６Ｐ製剤化薬剤物質（ｍＡｂ−３１６Ｐ ＦＤＳ）の安定性は、ポリプロピレン管、ポリスチレン管、ポリカーボネート管、またはステンレススチール製ボールベアリングを含むガラスバイアル中で保存された場合に有意に影響されなかった（表８）。

〔実施例７〕
プレフィルドシリンジ中の液体製剤
ＳＣ送達のためにプレフィルドシリンジ（ＰＦＳ）中で用いることができるｍＡｂ−３１６Ｐの高濃度液体製剤を開発する目的で、製剤開発研究を行った。開発段階の凍結乾燥ＲＥＧＮ７２７製剤からの結果により、最適なバッファー、ｐＨ、有機共溶媒、および熱安定剤が、それぞれ、ヒスチジン、ｐＨ６．０、ポリソルベート２０、およびスクロースであることが示された（上掲）。これらの同じ賦形剤を用いて、１５０ｍｇ／ｍＬおよび１７５ｍｇ／ｍＬの両方のｍＡｂ−３１６Ｐ医薬品製剤を開発した。１７５ｍｇ／ｍＬ型のｍＡｂ−３１６Ｐ医薬品にアルギニンを添加して、製剤の粘度を低下させた。１５０および１７５ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ−３１６Ｐ医薬品のストレス安定性を、１ｍＬの長さのガラスＮｕｏｖａ ＯＭＰＩ Ｐｒｅ−ｆｉｌｌｅｄ Ｓｙｒｉｎｇｅ（ＰＦＳ）中で試験し、対照のガラスバイアル中の１５０および１７５ｍｇ／ｍＬ医薬品の安定性と比較した。ＯＭＰＩ ＰＦＳとガラス対照バイアルとの間で、４５℃での１５０または１７５ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ−３１６Ｐ医薬品のインキュベーション後に、物理的または化学的分解量の有意差は観察されなかった。これらのデータは、１５０および１７５ｍｇ／ｍＬの抗ＰＣＳＫ９ ｍＡｂ−３１６Ｐ医薬品製剤がＰＦＳにおける使用にとって十分に安定であることを示している。

〔実施例８〕
ＭＡＢ−３１６Ｐ製剤化薬剤物質の安定性
安定性試験を実施して、１５０および１７５ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ−３１６Ｐ製剤の保存およびストレス安定性の両方を決定した。濁度およびＲＰ−ＨＰＬＣアッセイを用いて、ｍＡｂ−３１６Ｐの物理的安定性を評価した。物理的安定性は、溶液中での抗ＰＣＳＫ９ ｍＡｂ−３１６Ｐの溶解形態の回収として定義される。タンパク質の喪失は、タンパク質沈降または表面吸着のいずれかに起因し得る。溶液中の粒子状物質の存在を、視覚的検査または４０５ｎｍでの光密度（ＯＤ）測定（濁度測定）により検出することができる。この後者のアッセイにおいて、ＯＤの増加は、粒子状物質の形成に起因する濁度の増加を示す。ＯＤ測定により決定される粒子状物質の存在は、試料が安定性を維持することができなかったことを示す。ｍＡｂ−３１６Ｐの回収を、ＲＰ−ＨＰＬＣにより測定する。ＲＰ−ＨＰＬＣアッセイにおいては、抗ＰＣＳＫ９ ｍＡｂ−３１６Ｐ抗体は、単一のピークとして逆相カラムから溶出される。それぞれの試験試料の濃度は、規定のタンパク質ロードのｍＡｂ−３１６Ｐ標準を用いて生成された検量線と比較した溶出したｍＡｂ−３１６Ｐ抗体ピークの面積から決定される。

化学的安定性とは、試料中の抗ＰＣＳＫ９抗体（ｍＡｂ−３１６Ｐ）の化学的構造の完全性を指す。多くの化学的不安定性は、共有改変形態のタンパク質（例えば、共有凝集物、切断産物、または電荷変異体）および非共有改変形態のタンパク質（例えば、非共有凝集物）の形成に起因し得る。今までのところ、検出されたｍＡｂ−３１６Ｐの唯一の分解産物は、分子量または電荷のいずれかにおいて異なる種である。ＳＥ−ＨＰＬＣにより、天然のｍＡｂ−３１６Ｐから、より高いおよびより低い分子量の分解産物を分離することができる。サイズ排除クロマトグラフ法における天然のｍＡｂ−３１６Ｐのパーセンテージを、天然のピーク面積と、全てのｍＡｂ−３１６Ｐ抗体ピークの総面積との比により決定する。

電荷変異形態のｍＡｂ−３１６Ｐを、陽イオン交換クロマトグラフィーを用いて天然のｍＡｂ−３１６Ｐから分解する。主要ピークのものよりも早い保持時間でＣＥＸ−ＨＰＬＣカラムから溶出するピークは「酸性ピーク」と標識されるが、主要ピークのものよりも遅い保持時間でＣＥＸ−ＨＰＬＣカラムから溶出するものは「塩基性ピーク」と標識される。陽イオン交換クロマトグラフ法における分解されたｍＡｂ−３１６Ｐのパーセンテージを、全てのｍＡｂ−３１６Ｐピークの総面積と比較した、主要ピーク、酸性ピーク、および塩基性ピークの面積の相対パーセンテージの変化により決定する。

加速条件下でのｍＡｂ−３１６Ｐの評価を、抗体を様々なストレス試験に供することにより実施した。これらの試験は、製剤化薬剤物質を医薬品の製造中に供される可能性がある極端な取り扱い条件を代表するものである。ｍＡｂ−３１６Ｐ製剤化薬剤物質を、撹拌、凍結／融解のサイクル、および凍結保存条件のために５ｍＬのポリカーボネートバイアル中に充填した。ｍＡｂ−３１６Ｐ製剤化薬剤物質を、ガラスバイアル中に充填して、高温でのストレス安定性を試験した。

〔実施例９〕
製剤化薬剤物質（ＦＤＳ）の保存安定性試験
１５０ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ−３１６Ｐ製剤化薬剤物質（ＦＤＳ；５ｍＬのポリカーボネートバイアル中の０．５ｍＬ；１５０ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ−３１６Ｐ抗体、１０ｍＭのヒスチジン（ｐＨ６．０）、０．２％のポリソルベート２０、および１０％のスクロース）は、−２０℃以下で１２カ月間保存した場合、物理的および化学的に安定であることがわかった。ｍＡｂ−３１６Ｐの有意な喪失は観察されず、サイズ排除クロマトグラフィーまたはイオン交換クロマトグラフィーにより有意な化学的分解は検出されなかった。９７％を超える回収されたｍＡｂ−３１６Ｐが、サイズ排除により決定された場合に「天然」構造のものであり、５６％を超える回収されたｍＡｂ−３１６Ｐが陽イオン交換により決定された場合に「主電荷変異体」のものであった。結果を表９にまとめる。

１７５ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ−３１６Ｐ製剤化薬剤物質（ＦＤＳ；５ｍＬのポリカーボネートバイアル中の０．７５ｍＬ；１７５ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ−３１６Ｐ抗体、１０ｍＭのヒスチジン（ｐＨ６．０）、０．０１％のポリソルベート２０、５％のスクロース、および５０ｍＭのアルギニン）は、−２０℃以下で３カ月間保存した場合、物理的および化学的に安定であることがわかった。ｍＡｂ−３１６Ｐの有意な喪失は観察されず、サイズ排除クロマトグラフィーまたはイオン交換クロマトグラフィーにより有意な化学的分解は検出されなかった。９６％を超える回収されたｍＡｂ−３１６Ｐが、サイズ排除により決定された場合に「天然」構造のものであり、５６％を超える回収されたｍＡｂ−３１６Ｐが陽イオン交換により決定された場合に「主電荷変異体」のものであった。結果を表１０にまとめる。

〔実施例１０〕
製剤化薬剤物質のストレス安定性試験
ストレス安定性試験を、１５０ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ−３１６Ｐ製剤化薬剤物質（ＦＤＳ）（０．３５ｍＬ〜０．５ｍＬの１５０ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ−３１６Ｐ、１０ｍＭのヒスチジン（ｐＨ６．０）、０．２％のポリソルベート２０、１０％のスクロース）および１７５ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ−３１６Ｐ製剤化薬剤物質（０．５ｍＬ〜１．７ｍＬの１７５ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ−３１６Ｐ、１０ｍＭのヒスチジン（ｐＨ６．０）、０．０１％のポリソルベート２０、５％のスクロース、５０ｍＭのアルギニン）に対して実施した。高温試験を、ＦＬＵＲＯＴＥＣ（登録商標）被覆４４３２／５０ブチルゴム栓を備えた２ｍＬ容量の１型ホウケイ酸ガラス中で行った；残りの試験を、５ｍＬのポリカーボネートバイアル中で実施した。１５０ｍｇ／ｍＬおよび１７５ｍｇ／ｍＬの抗ＰＣＳＫ９ ｍＡｂ−３１６Ｐ製剤化薬剤物質は、２時間撹拌（ボルテックス）した場合に物理的および化学的に安定であることがわかった。溶液は依然として視覚的に透明であり、タンパク質の喪失は起きず、分子量種または電荷変異体は形成されなかった（表１１および１２）。ｍＡｂ−３１６Ｐはまた、８サイクルの−８０℃への凍結および室温への融解に供した場合に物理的にも化学的にも安定であることが観察された。８サイクルの凍結／融解後に、タンパク質溶液は依然として視覚的に透明であり、タンパク質の喪失は観察されなかった。分子量（可溶性凝集物もしくは切断産物）または電荷変異形態は、それぞれ、ＳＥまたはＣＥＸアッセイによって検出されなかった。

１５０および１７５ｍｇ／ｍＬの抗ＰＣＳＫ９ ｍＡｂ−３１６Ｐ製剤化薬剤物質は、３７℃または４５℃で２８日間インキュベートした場合に物理的に安定であったが、それにも拘らず、いくらかの化学的分解が観察された（表１１および１２）。これらのストレス試験は、主な分解経路が凝集物、切断産物、および電荷変異体の形成であることを示していた。予想通り、抗ＰＣＳＫ９ ｍＡｂ−３１６Ｐ抗体の分解速度は、４５℃よりも３７℃で遅かった。２５℃で２８日間インキュベートした場合は、１５０または１７５ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ−３１６Ｐ製剤化薬剤物質の物理的または化学的安定性における有意な変化はなかった。

〔実施例１１〕
医薬品（ＤＰ）の保存安定性
１５０ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ−３１６Ｐ医薬品は、１０ｍＭのヒスチジン、ｐＨ６．０、０．０１％のポリソルベート２０、１０％のスクロース、および１５０ｍｇ／ｍＬの抗ＰＣＳＫ９ ｍＡｂ−３１６Ｐ抗体からなる。１７５ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ−３１６Ｐ医薬品は、１０ｍＭのヒスチジン、ｐＨ６．０、０．０１％のポリソルベート２０、５％のスクロース、５０ｍＭのアルギニン、および１７５ｍｇ／ｍＬの抗ＰＣＳＫ９ ｍＡｂ−３１６Ｐ抗体からなる。プレフィルドシリンジ（ＰＦＳ；ＦＬＵＲＯＴＥＣ（登録商標）被覆４０２３／５０ゴムプランジャで閉じた２７ゲージの薄壁針およびＦＭ２７ゴム針シールドを備えたＯＭＰＩ １ｍＬ長ガラスシリンジ）中、５℃で６カ月間保存された場合、１５０ｍｇ／ｍＬまたは１７５ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ−３１６Ｐ医薬品（ＤＰ）の物理的および化学的安定性には変化がなかった（表１３および表１４）。これらのストレス後に、溶液は依然として視覚的に透明であり、タンパク質の喪失は観察されず、ｐＨの変化が起こらなかった。さらに、それぞれＳＥおよびＣＥＸにより検出された分子量種または電荷変異体の有意な変化はなかった。

〔実施例１２〕
医薬品（ＤＰ）のストレス安定性
２５℃および４５℃でプレフィルドシリンジをインキュベートすることにより、１５０ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ−３１６Ｐ医薬品および１７５ｍｇ／ｍｌのｍＡｂ−３１６Ｐ医薬品のストレス安定性を試験した。それぞれ対応する医薬品は、４５℃で２８日間インキュベートするか、または２５℃で６カ月間インキュベートした場合、物理的に安定であった（表１３および１４）。これらのストレス後に、溶液は依然として視覚的に透明であり、タンパク質の喪失は観察されず、ｐＨの変化は起こらなかった。しかしながら、タンパク質を４５℃および２５℃でインキュベートした場合、凝集物および電荷変異体が検出された。このストレス試験は、これらのものが医薬品の主な分解経路であることを示している。１５０ｍｇ／ｍＬの医薬品のうち、４５℃で２８日間のインキュベーション後に、ｍＡｂ−３１６Ｐ凝集物は１．９％増加し、酸性種は１９．１％増加した。タンパク質を２５℃でインキュベートした場合、化学的分解レベルの低下が検出された。２５℃でのインキュベーションの６カ月後に、凝集物の相対量の０．８％の増加および酸性種の１０．３％の増加が存在した。１７５ｍｇ／ｍＬの医薬品のうち、４５℃で２８日間のインキュベーション後に、ｍＡｂ−３１６Ｐ凝集物は１．８％増加し、酸性種は１７．０％増加した。タンパク質を２５℃でインキュベートした場合、化学的分解レベルの低下が検出された。２５℃でのインキュベーションの６カ月後に、凝集物の０．７％の増加および酸性種の９．４％の増加が存在した。１５０および１７５ｍｇ／ｍＬの医薬品の両方について、２５℃でのインキュベーションの１カ月後に、ｍＡｂ−３１６Ｐの安定性の有意な変化はなかった。

〔実施例１３〕
充填容量
１５０ｍｇ／ｍＬのＲＥＧＮ７２７医薬品を含有するプレフィルドシリンジ（ＰＦＳ）からの注射可能容量は、１．０ｍＬである。１７５ｍｇ／ｍＬのＲＥＧＮ７２７医薬品を含有するＰＦＳからの注射可能容量は、１．１４ｍＬである。シリンジ内の死容量は無視できる程度であるため（０．００５〜０．０１ｍＬ）、いずれのＰＦＳ中にも過剰量は含まれない。

〔実施例１４〕
保存材料中でのＭＡＢ−３１６Ｐの安定性
抗ＰＣＳＫ９ ｍＡｂ−３１６Ｐは、滅菌濾過した場合に安定であることがわかった。研究試験のため、および臨床供給物の製造において、ＭＩＬＬＩＰＯＲＥ ＭＩＬＬＩＰＡＫ濾過ユニットを用いた。ガラスバイアル中での保存と比較して、１５０および１７５ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ−３１６Ｐ製剤化薬剤物質の安定性は、ポリプロピレン管、ポリスチレン管、ポリカーボネート管、またはステンレススチールガスケットを含むガラスバイアル中で保存した場合、有意に影響されなかった（表１５および表１６）。製剤化薬剤物質を４０℃で１４日間インキュベートした場合に分解が観察されたが、対照のガラスバイアルと、プラスチック容器およびステンレススチールへの曝露との間で、ｍＡｂ−３１６Ｐ分解量に有意差は観察されなかった。

〔実施例１５〕
抗ＰＣＳＫ９抗体ＭＡＢ−３１６Ｐの特性評価
少なくとも２ロットのｍＡｂ−３１６Ｐ（ロット１およびロット２）を、サイズ排除クロマトグラフィーおよびタンパク質または糖タンパク質のモル質量の見積もりを与える分析方法である多角度レーザー光散乱（ＳＥＣ−ＭＡＬＬＳ）により分析した。ロット１および２はそれぞれ、１５４．５および１５４．６ｋＤａのモル質量を有していた。他のロットは、ＳＥマトリックスから溶出した主要種のピークについて１５４．４〜１５４．８ｋＤａ（平均約１５５ｋＤａ）の範囲のモル質量を有していた。この主要ピークは、総タンパク質ピーク面積の約９６．７〜９９．２％に相当し、これは無傷のｍＡｂ−３１６Ｐ単量体（すなわち、本明細書で用いられる「天然」）に対応する。

ｍＡｂ−３１６Ｐを、キャピラリー等電点電気泳動（ｃＩＥＦ）により分析して、主な構成要素アイソフォームの等電点を決定した。ｃＩＥＦにより決定されたｍＡｂ−３１６Ｐ試料のｐＩおよび平均ピーク面積（％総ピーク面積）を、表１７にまとめる。それぞれのロットは、ロット１および２について、それぞれ６６．４％および６８．０％で提示された、約８．５の算出されたｐＩを有する主要種（ピーク５）を示した。優占種（ピーク５）は、十中八九、Ｃ末端リシンを欠く無傷の完全にグリコシル化された抗体（すなわち、本明細書で用いられる「主電荷形態」）に相当する。

ロット１およびロット２に由来する還元ｍＡｂ−３１６Ｐトリプシンマップの質量分析（ＭＳ）により、両ロット中のＦｃドメイン内の単一のグリコシル化部位、Ａｓｎ２９８が確認された。このグリコシル化部位の主な共有結合グリカン形態を、表１８にまとめる。全体として、両ロットは、複雑な二分岐グリカンを有し、それらの多くはＡｓｎ２９８でフコシル化されていると決定された。しかしながら、ロット２における糖鎖種を含有するフコシル化アガラクトシル（Ｇ０）の相対量は、ロット１におけるこの糖型の量と比較してわずかにより高かった。逆に、ロット２における糖鎖型を含有するフコシル化ジガラクトシル（Ｇ２）およびフコシル化モノガラクトシル（Ｇ１）の相対量は、ロット１におけるこれらの糖鎖構造の相対量と比較して減少していた。２つの薬剤物質試料（ピーク１６）のＬＣ／ＭＳ結果の分析により、ロット１およびロット２上でＡｓｎ２９８にグリカン占有のない重鎖ペプチドはそれぞれ２．９％および８．４％であると同定された。

２つのｍＡｂ−３１６Ｐロットのそれぞれからのオリゴ糖の放出後にＨＰＬＣにより生成されたグリカンプロファイルを分析した。それぞれのクロマトグラムにおいて、誘導体化されたオリゴ糖は２つの主な群に分離された：非フコシル化二分岐種およびフコシル化二分岐種。それぞれの群（フコシル化と非フコシル化）内で、オリゴ糖はジガラクトシル（Ｇ２）、モノガラクトシル（Ｇ１）、およびアガラクトシル（Ｇ０）型にさらに分離された。オリゴ糖構造割り当ては、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析により得られた。２つのクロマトグラムにおけるそれぞれのピークの積分により、２つのｍＡｂ−３１６Ｐロットのフコシル化レベルが一般的に高いことが示され、ロット１および２において、それぞれ８０．０％および８６．９％のフコシル化が観察された。

２つのロットのフコシル化の総パーセントは類似していたが、２つのロット中に存在するグリカン型の各々の相対存在量には量的な差異があった（表１９）。ロット１については、Ｇ０、Ｇ１、およびＧ２フコシル化グリカン構造について、それぞれ、３４．４％、３９．６％、および１１．７％のピーク面積パーセンテージが決定された。対照的に、ロット２に関するピーク面積パーセンテージは、Ｇ０、Ｇ１、およびＧ２フコシル化糖型構造について、それぞれ４５．８％、３３．３％、および７．１％であったが、これは、２つのロット間のガラクトシル化の程度における差異を示している。両ロットにおいて観察された糖鎖の総量と比較して、１．８％〜２．９％の相対存在量で、高マンノースグリカン（ｍａｎ５グリカン）ピーク（ピーク２）が検出された（表１９）。０．５％〜１．５％の範囲のピーク面積パーセンテージを有する合計９つの未同定のピークも、この方法により試験された両ロットにおいて検出されたが、これは各ロットにおいて検出された総グリカンピーク面積の３％以下に相当する。２つのロットの等モル共混合物の分析により、新しいピークは得られず、共混合物中の全てのピークのピーク面積パーセンテージは、各ロットの個々の分析に基づく期待値と良好に相関した（表１９）。

Claims (22)

1. （ａ）５０±７．５ｍｇ／ｍＬ〜２５０±３７．５ｍｇ／ｍＬのヒトプロタンパク質転換酵素スブチリシン／ケキシンタイプ９（ヒトＰＣＳＫ９）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント、ここで当該抗体は、配列番号２の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１、配列番号３のＨＣＤＲ２、配列番号４のＨＣＤＲ３、配列番号６の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１、配列番号７のＬＣＤＲ２、および配列番号８のＬＣＤＲ３を含む；
   （ｂ）１０±１．５ｍＭのヒスチジン（ｐＨ６．０±０．３）；
   （ｃ）０．０１±０．００１５％ｗ／ｖのポリソルベート２０；および
   （ｄ）１０±１．５％ｗ／ｖのスクロース
   を含む液体医薬製剤であって、
   ９０％を超える抗体が１５５ｋＤａ±１ｋＤａの分子量を有し； ５０％を超える抗体が約８．５の等電点を有し； ７５％〜９０％の抗体がフコシル化される、液体医薬製剤。
2. （ａ）５０±７．５ｍｇ／ｍＬ〜２５０±３７．５ｍｇ／ｍＬのヒトプロタンパク質転換酵素スブチリシン／ケキシンタイプ９（ヒトＰＣＳＫ９）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント、ここで当該抗体は、配列番号２の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１、配列番号３のＨＣＤＲ２、配列番号４のＨＣＤＲ３、配列番号６の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１、配列番号７のＬＣＤＲ２、および配列番号８のＬＣＤＲ３を含む；
   （ｂ）１０±１．５ｍＭのヒスチジン（ｐＨ６．０±０．３）；
   （ｃ）０．０１±０．００１５％ｗ／ｖのポリソルベート２０；および
   （ｄ）１０±１．５％ｗ／ｖのスクロース
   を含む液体医薬製剤であって、
   抗体の少なくとも９１％が、４５℃で２８日後に未変性コンホメーションを有する、液体医薬製剤。
3. （ａ）５０±７．５ｍｇ／ｍＬ〜２５０±３７．５ｍｇ／ｍＬのヒトプロタンパク質転
   換酵素スブチリシン／ケキシンタイプ９（ヒトＰＣＳＫ９）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント、ここで当該抗体は、配列番号２の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１、配列番号３のＨＣＤＲ２、配列番号４のＨＣＤＲ３、配列番号６の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１、配列番号７のＬＣＤＲ２、および配列番号８のＬＣＤＲ３を含む；
   （ｂ）１０±１．５ｍＭのヒスチジン（ｐＨ６．０±０．３）；
   （ｃ）０．０１±０．００１５％ｗ／ｖのポリソルベート２０；および
   （ｄ）１０±１．５％ｗ／ｖのスクロース
   を含む液体医薬製剤であって、
   抗体の少なくとも３５％が、４５℃で２８日後に抗体の主電荷変異体である、液体医薬製剤。
4. （ａ）５０±７．５ｍｇ／ｍＬ〜２５０±３７．５ｍｇ／ｍＬのヒトプロタンパク質転換酵素スブチリシン／ケキシンタイプ９（ヒトＰＣＳＫ９）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント、ここで当該抗体は、配列番号２の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１、配列番号３のＨＣＤＲ２、配列番号４のＨＣＤＲ３、配列番号６の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１、配列番号７のＬＣＤＲ２、および配列番号８のＬＣＤＲ３を含む；
   （ｂ）１０±１．５ｍＭのヒスチジン（ｐＨ６．０±０．３）；
   （ｃ）０．０１±０．００１５％ｗ／ｖのポリソルベート２０；および
   （ｄ）１０±１．５％ｗ／ｖのスクロース
   を含む液体医薬製剤であって、
   抗体の少なくとも９４％が、２５℃で６カ月後に未変性コンホメーションを有する、液体医薬製剤。
5. （ａ）５０±７．５ｍｇ／ｍＬ〜２５０±３７．５ｍｇ／ｍＬのヒトプロタンパク質転換酵素スブチリシン／ケキシンタイプ９（ヒトＰＣＳＫ９）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント、ここで当該抗体は、配列番号２の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１、配列番号３のＨＣＤＲ２、配列番号４のＨＣＤＲ３、配列番号６の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１、配列番号７のＬＣＤＲ２、および配列番号８のＬＣＤＲ３を含む；
   （ｂ）１０±１．５ｍＭのヒスチジン（ｐＨ６．０±０．３）；
   （ｃ）０．０１±０．００１５％ｗ／ｖのポリソルベート２０；および
   （ｄ）１０±１．５％ｗ／ｖのスクロース
   を含む液体医薬製剤であって、
   抗体の少なくとも４５％が、２５℃で６カ月後に抗体の主電荷変異体である、液体医薬製剤。
6. （ａ）５０±７．５ｍｇ／ｍＬ〜２５０±３７．５ｍｇ／ｍＬのヒトプロタンパク質転換酵素スブチリシン／ケキシンタイプ９（ヒトＰＣＳＫ９）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント、ここで当該抗体は、配列番号２の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１、配列番号３のＨＣＤＲ２、配列番号４のＨＣＤＲ３、配列番号６の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１、配列番号７のＬＣＤＲ２、および配列番号８のＬＣＤＲ３を含む；
   （ｂ）１０±１．５ｍＭのヒスチジン（ｐＨ６．０±０．３）；
   （ｃ）０．０１±０．００１５％ｗ／ｖのポリソルベート２０；および
   （ｄ）１０±１．５％ｗ／ｖのスクロース
   を含む液体医薬製剤であって、
   抗体の少なくとも９６％が、５℃で６カ月後に未変性コンホメーションを有する、液体医薬製剤。
7. （ａ）５０±７．５ｍｇ／ｍＬ〜２５０±３７．５ｍｇ／ｍＬのヒトプロタンパク質転換酵素スブチリシン／ケキシンタイプ９（ヒトＰＣＳＫ９）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント、ここで当該抗体は、配列番号２の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１、配列番号３のＨＣＤＲ２、配列番号４のＨＣＤＲ３、配列番号６の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１、配列番号７のＬＣＤＲ２、および配列番号８のＬＣＤＲ３を含む；
   （ｂ）１０±１．５ｍＭのヒスチジン（ｐＨ６．０±０．３）；
   （ｃ）０．０１±０．００１５％ｗ／ｖのポリソルベート２０；および
   （ｄ）１０±１．５％ｗ／ｖのスクロース
   を含む液体医薬製剤であって、
   抗体の少なくとも５８％が、５℃で６カ月後に抗体の主電荷変異体である、液体医薬製剤。
8. （ａ）５０±７．５ｍｇ／ｍＬ〜２５０±３７．５ｍｇ／ｍＬのヒトプロタンパク質転換酵素スブチリシン／ケキシンタイプ９（ヒトＰＣＳＫ９）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント、ここで当該抗体は、配列番号２の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１、配列番号３のＨＣＤＲ２、配列番号４のＨＣＤＲ３、配列番号６の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１、配列番号７のＬＣＤＲ２、および配列番号８のＬＣＤＲ３を含む；
   （ｂ）１０±１．５ｍＭのヒスチジン（ｐＨ６．０±０．３）；
   （ｃ）０．０１±０．００１５％ｗ／ｖのポリソルベート２０；および
   （ｄ）１０±１．５％ｗ／ｖのスクロース
   を含む液体医薬製剤であって、
   抗体の少なくとも９６％が、−２０℃、−３０℃、または−８０℃で３カ月後に抗体の主電荷変異体である、液体医薬製剤。
9. （ａ）５０±７．５ｍｇ／ｍＬ〜２５０±３７．５ｍｇ／ｍＬのヒトプロタンパク質転換酵素スブチリシン／ケキシンタイプ９（ヒトＰＣＳＫ９）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント、ここで当該抗体は、配列番号２の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１、配列番号３のＨＣＤＲ２、配列番号４のＨＣＤＲ３、配列番号６の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１、配列番号７のＬＣＤＲ２、および配列番号８のＬＣＤＲ３を含む；
   （ｂ）１０±１．５ｍＭのヒスチジン（ｐＨ６．０±０．３）；
   （ｃ）０．０１±０．００１５％ｗ／ｖのポリソルベート２０；および
   （ｄ）１０±１．５％ｗ／ｖのスクロース
   を含む液体医薬製剤であって、
   抗体の少なくとも５６％が、−２０℃、−３０℃、または−８０℃で３カ月後に抗体の主電荷変異体である、液体医薬製剤。
10. 製剤が、約１７５ｍｇ／ｍＬの抗体を含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の液体医薬製剤。
11. 製剤が、約１５０ｍｇ／ｍＬの抗体を含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の液体医薬製剤。
12. 製剤が、約１００ｍｇ／ｍＬの抗体を含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の液体医薬製剤。
13. 製剤が、約７５ｍｇ／ｍＬの抗体を含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の液体医
    薬製剤。
14. 製剤が、約５０ｍｇ／ｍＬの抗体を含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の液体医薬製剤。
15. 抗体が、配列番号１の重鎖可変領域（ＨＣＶＤ）および配列番号５の軽鎖可変領域（ＬＣＶＤ）を含む、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の液体医薬製剤。
16. 請求項１〜１５のいずれか1項に記載の液体医薬製剤を含むプレフィルドシリンジ組成物。
17. シリンジが標準タングステンシリンジである、請求項１６に記載のプレフィルドシリンジ組成物。
18. シリンジが低タングステンシリンジである、請求項１６に記載のプレフィルドシリンジ組成物。
19. シリンジが被覆プランジャーを含む、請求項１６に記載のプレフィルドシリンジ組成物。
20. 被覆プランジャーがフッ化炭素フィルムで被覆されている、請求項１９に記載のプレフィルドシリンジ組成物。
21. シリンジが低タングステンシリンジであり、当該シリンジが被覆プランジャーを含む、請求項１６に記載のプレフィルドシリンジ組成物。
22. シリンジが、２７ゲージ薄壁針、フッ化炭素で被覆されたゴムプランジャーおよびゴム針シールドを含む１ｍＬ長ガラスシリンジである、請求項１６に記載のプレフィルドシリンジ組成物。