EA047546B1 - Стабилизированные составы, содержащие антитела анти-pcsk9 - Google Patents
Стабилизированные составы, содержащие антитела анти-pcsk9 Download PDFInfo
- Publication number
- EA047546B1 EA047546B1 EA202091373 EA047546B1 EA 047546 B1 EA047546 B1 EA 047546B1 EA 202091373 EA202091373 EA 202091373 EA 047546 B1 EA047546 B1 EA 047546B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- antibody
- kit
- mab
- seq
- months
- Prior art date
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 143
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 69
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 66
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 66
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 66
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 62
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 claims description 61
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 61
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 claims description 61
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 claims description 61
- 229940068977 polysorbate 20 Drugs 0.000 claims description 59
- 101001098868 Homo sapiens Proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 Proteins 0.000 claims description 32
- 101710180553 Proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 Proteins 0.000 claims description 31
- 102100038955 Proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 Human genes 0.000 claims description 31
- 239000011521 glass Substances 0.000 claims description 31
- 229920001971 elastomer Polymers 0.000 claims description 21
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 18
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 18
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 18
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 18
- 229910052721 tungsten Inorganic materials 0.000 claims description 17
- 239000010937 tungsten Substances 0.000 claims description 17
- WFKWXMTUELFFGS-UHFFFAOYSA-N tungsten Chemical compound [W] WFKWXMTUELFFGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 claims description 14
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 14
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 7
- NBVXSUQYWXRMNV-UHFFFAOYSA-N fluoromethane Chemical compound FC NBVXSUQYWXRMNV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 claims description 4
- 238000000576 coating method Methods 0.000 claims description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 4
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 claims description 3
- 230000000116 mitigating effect Effects 0.000 claims 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 100
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 69
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 58
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 57
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 35
- 229940126534 drug product Drugs 0.000 description 31
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 31
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 30
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 26
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 25
- 102000053786 human PCSK9 Human genes 0.000 description 25
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 23
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N N-acetylglucosamine Natural products CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 description 23
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 23
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 23
- OVRNDRQMDRJTHS-RTRLPJTCSA-N N-acetyl-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-RTRLPJTCSA-N 0.000 description 22
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 22
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 22
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 21
- 230000008859 change Effects 0.000 description 21
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 21
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 20
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 20
- 239000012669 liquid formulation Substances 0.000 description 19
- 238000000034 method Methods 0.000 description 19
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 19
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 18
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 18
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 17
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 16
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 229960003121 arginine Drugs 0.000 description 16
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 description 16
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 14
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 13
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 13
- 239000013583 drug formulation Substances 0.000 description 12
- 238000003998 size exclusion chromatography high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 12
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 12
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 12
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N L-fucopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N 0.000 description 11
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 description 11
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 10
- 229920005549 butyl rubber Polymers 0.000 description 10
- 150000004676 glycans Chemical group 0.000 description 10
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 description 10
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 10
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 10
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 10
- 239000003017 thermal stabilizer Substances 0.000 description 10
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 9
- 238000001182 laser chemical vapour deposition Methods 0.000 description 9
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 9
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- KKEBXNMGHUCPEZ-UHFFFAOYSA-N 4-phenyl-1-(2-sulfanylethyl)imidazolidin-2-one Chemical compound N1C(=O)N(CCS)CC1C1=CC=CC=C1 KKEBXNMGHUCPEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 8
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 8
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 8
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 8
- ZTOKCBJDEGPICW-MYRNNJPSSA-N alpha-D-Manp-(1->3)-[alpha-D-Manp-(1->6)]-beta-D-Manp-(1->4)-beta-D-GlcpNAc-(1->4)-D-GlcpNAc Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](NC(=O)C)C(O)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@H]1[C@H](NC(C)=O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@H]([C@@H](O[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)O2)O)[C@@H](CO)O1 ZTOKCBJDEGPICW-MYRNNJPSSA-N 0.000 description 8
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 8
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 8
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 8
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 8
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 8
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 8
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 8
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 8
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 8
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 8
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 7
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 7
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 7
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 7
- 229920001993 poloxamer 188 Polymers 0.000 description 7
- -1 polyoxyethylene Polymers 0.000 description 7
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 7
- KWTQSFXGGICVPE-UHFFFAOYSA-N 2-amino-5-(diaminomethylideneamino)pentanoic acid;hydron;chloride Chemical group Cl.OC(=O)C(N)CCCN=C(N)N KWTQSFXGGICVPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 101000604674 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 4-1 Proteins 0.000 description 6
- 102100038198 Immunoglobulin kappa variable 4-1 Human genes 0.000 description 6
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 6
- RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N Poloxamer Chemical compound C1CO1.CC1CO1 RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229920002556 Polyethylene Glycol 300 Polymers 0.000 description 6
- 239000005388 borosilicate glass Substances 0.000 description 6
- 238000002144 chemical decomposition reaction Methods 0.000 description 6
- 239000006184 cosolvent Substances 0.000 description 6
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 6
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 6
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 6
- 229920002562 Polyethylene Glycol 3350 Polymers 0.000 description 5
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 5
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 5
- 230000009858 acid secretion Effects 0.000 description 5
- KJZMZIMBDAXZCX-XNRWUJQLSA-N alpha-D-Manp-(1->3)-[alpha-D-Manp-(1->6)]-alpha-D-Manp Chemical compound O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](O)[C@@H](O)O1 KJZMZIMBDAXZCX-XNRWUJQLSA-N 0.000 description 5
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 5
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 5
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 5
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 5
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 5
- 229940071643 prefilled syringe Drugs 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 5
- 125000000185 sucrose group Chemical group 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 5
- 101001037140 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 3-23 Proteins 0.000 description 4
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 4
- 102100040220 Immunoglobulin heavy variable 3-23 Human genes 0.000 description 4
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 4
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 4
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 4
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 4
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 4
- 229940044519 poloxamer 188 Drugs 0.000 description 4
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 4
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 4
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 4
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 4
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 description 4
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 4
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 3
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 230000004931 aggregating effect Effects 0.000 description 3
- 229940125644 antibody drug Drugs 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 238000000533 capillary isoelectric focusing Methods 0.000 description 3
- 230000006240 deamidation Effects 0.000 description 3
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 3
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 3
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 3
- 230000033581 fucosylation Effects 0.000 description 3
- 239000012931 lyophilized formulation Substances 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- 229950008882 polysorbate Drugs 0.000 description 3
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical group 0.000 description 3
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 3
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 3
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 3
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000032928 Dyslipidaemia Diseases 0.000 description 2
- 206010059183 Familial hypertriglyceridaemia Diseases 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 208000035150 Hypercholesterolemia Diseases 0.000 description 2
- 201000010252 Hyperlipoproteinemia Type III Diseases 0.000 description 2
- 102000007330 LDL Lipoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108010007622 LDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- CDOJPCSDOXYJJF-CBTAGEKQSA-N N,N'-diacetylchitobiose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](NC(=O)C)C(O)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@H]1[C@H](NC(C)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CDOJPCSDOXYJJF-CBTAGEKQSA-N 0.000 description 2
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 206010045261 Type IIa hyperlipidaemia Diseases 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- HIWPGCMGAMJNRG-VXSGSMIHSA-N alpha-D-Manp-(1->2)-D-Manp Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)OC(O)[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HIWPGCMGAMJNRG-VXSGSMIHSA-N 0.000 description 2
- YETHWGOYCQLNKG-FHERGOJNSA-N alpha-D-Manp-(1->3)-[alpha-D-Manp-(1->6)]-alpha-D-Manp-(1->2)-alpha-D-Manp-(1->2)-D-Manp Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)OC(O)[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O[C@@H]2[C@H]([C@@H](O[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)O2)O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 YETHWGOYCQLNKG-FHERGOJNSA-N 0.000 description 2
- DLRVVLDZNNYCBX-JZSVMVJISA-N beta-D-Galp-(1->6)-D-Galp Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC[C@@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O1 DLRVVLDZNNYCBX-JZSVMVJISA-N 0.000 description 2
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 2
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 2
- 230000006652 catabolic pathway Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 229910001873 dinitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- HQPMKSGTIOYHJT-UHFFFAOYSA-N ethane-1,2-diol;propane-1,2-diol Chemical compound OCCO.CC(O)CO HQPMKSGTIOYHJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 238000012395 formulation development Methods 0.000 description 2
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 2
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 description 2
- 208000000522 hyperlipoproteinemia type IV Diseases 0.000 description 2
- 230000002998 immunogenetic effect Effects 0.000 description 2
- 239000005414 inactive ingredient Substances 0.000 description 2
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 2
- 239000006193 liquid solution Substances 0.000 description 2
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 2
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 239000013618 particulate matter Substances 0.000 description 2
- ORMNNUPLFAPCFD-DVLYDCSHSA-M phenethicillin potassium Chemical compound [K+].N([C@@H]1C(N2[C@H](C(C)(C)S[C@@H]21)C([O-])=O)=O)C(=O)C(C)OC1=CC=CC=C1 ORMNNUPLFAPCFD-DVLYDCSHSA-M 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 2
- 238000012430 stability testing Methods 0.000 description 2
- 238000011146 sterile filtration Methods 0.000 description 2
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L zinc dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Zn+2] JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- UCTWMZQNUQWSLP-VIFPVBQESA-N (R)-adrenaline Chemical compound CNC[C@H](O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 UCTWMZQNUQWSLP-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- XZIIFPSPUDAGJM-UHFFFAOYSA-N 6-chloro-2-n,2-n-diethylpyrimidine-2,4-diamine Chemical compound CCN(CC)C1=NC(N)=CC(Cl)=N1 XZIIFPSPUDAGJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KWTQSFXGGICVPE-WCCKRBBISA-N Arginine hydrochloride Chemical compound Cl.OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N KWTQSFXGGICVPE-WCCKRBBISA-N 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- 208000034599 Dysbetalipoproteinemia Diseases 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 1
- 238000012413 Fluorescence activated cell sorting analysis Methods 0.000 description 1
- PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N Fucose Natural products C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 208000031226 Hyperlipidaemia Diseases 0.000 description 1
- 208000000563 Hyperlipoproteinemia Type II Diseases 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 102100024640 Low-density lipoprotein receptor Human genes 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 1
- 229920002508 Poloxamer 181 Polymers 0.000 description 1
- 229920001219 Polysorbate 40 Polymers 0.000 description 1
- 229920001214 Polysorbate 60 Polymers 0.000 description 1
- 229920002642 Polysorbate 65 Polymers 0.000 description 1
- 229920002651 Polysorbate 85 Polymers 0.000 description 1
- 102000006437 Proprotein Convertases Human genes 0.000 description 1
- 108010044159 Proprotein Convertases Proteins 0.000 description 1
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 1
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 1
- 241000219492 Quercus Species 0.000 description 1
- 241000124033 Salix Species 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 101710135785 Subtilisin-like protease Proteins 0.000 description 1
- 206010060751 Type III hyperlipidaemia Diseases 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- SOIFLUNRINLCBN-UHFFFAOYSA-N ammonium thiocyanate Chemical compound [NH4+].[S-]C#N SOIFLUNRINLCBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 150000001483 arginine derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229960003589 arginine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- 238000005251 capillar electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 238000005341 cation exchange Methods 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000001351 cycling effect Effects 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 238000000151 deposition Methods 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 238000000113 differential scanning calorimetry Methods 0.000 description 1
- 208000037765 diseases and disorders Diseases 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 238000007905 drug manufacturing Methods 0.000 description 1
- 230000000816 effect on animals Effects 0.000 description 1
- 229940015979 epipen Drugs 0.000 description 1
- 201000001386 familial hypercholesterolemia Diseases 0.000 description 1
- 201000005577 familial hyperlipidemia Diseases 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 230000009477 glass transition Effects 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 230000008642 heat stress Effects 0.000 description 1
- 229940062714 humalog mix Drugs 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 208000020887 hyperlipoproteinemia type 3 Diseases 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 238000001840 matrix-assisted laser desorption--ionisation time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000001565 modulated differential scanning calorimetry Methods 0.000 description 1
- 238000000569 multi-angle light scattering Methods 0.000 description 1
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 1
- 231100000065 noncytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002020 noncytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000424 optical density measurement Methods 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 1
- 229940085692 poloxamer 181 Drugs 0.000 description 1
- 229940044476 poloxamer 407 Drugs 0.000 description 1
- 229920001992 poloxamer 407 Polymers 0.000 description 1
- 229940050929 polyethylene glycol 3350 Drugs 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000000249 polyoxyethylene sorbitan monopalmitate Substances 0.000 description 1
- 235000010483 polyoxyethylene sorbitan monopalmitate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001818 polyoxyethylene sorbitan monostearate Substances 0.000 description 1
- 235000010989 polyoxyethylene sorbitan monostearate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001816 polyoxyethylene sorbitan tristearate Substances 0.000 description 1
- 235000010988 polyoxyethylene sorbitan tristearate Nutrition 0.000 description 1
- 229940101027 polysorbate 40 Drugs 0.000 description 1
- 229940113124 polysorbate 60 Drugs 0.000 description 1
- 229940099511 polysorbate 65 Drugs 0.000 description 1
- 229940113171 polysorbate 85 Drugs 0.000 description 1
- 229940068965 polysorbates Drugs 0.000 description 1
- 230000006920 protein precipitation Effects 0.000 description 1
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 238000001374 small-angle light scattering Methods 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- VGTPCRGMBIAPIM-UHFFFAOYSA-M sodium thiocyanate Chemical compound [Na+].[S-]C#N VGTPCRGMBIAPIM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940035044 sorbitan monolaurate Drugs 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 239000010959 steel Substances 0.000 description 1
- 239000008227 sterile water for injection Substances 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000009662 stress testing Methods 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 230000008646 thermal stress Effects 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000011592 zinc chloride Substances 0.000 description 1
- 235000005074 zinc chloride Nutrition 0.000 description 1
Description
Область изобретения
Настоящее изобретение относится к лекарственным препаратам на основе антител. Более конкретно, настоящее изобретение относится к области лекарственных средств, содержащих человеческое антитело, которые специфически связывают человеческую пропротеин конвертазу субтилизин/кексин тип 9 протеазу (PCSK9).
Перечень последовательностей
К настоящему описанию прилагается текстовой файл с перечнем последовательностей, соответствующий требованиям ST.25. Содержание текстового файла в силу ссылки на него включается в настоящий документ. Прилагаемая бумажная копия перечня последовательностей, идентичная по содержанию текстовому файлу, который соответствует требованиям ST.25, является частью настоящего описания.
Уровень техники
Лекарственные препараты на основе макромолекул (например, антител) должны составляться не только так, чтобы молекулы можно было бы вводить пациентам, но обеспечивать их стабильность во время хранения и последующего использования. Например, лекарственные препараты на основе антител в жидких растворах склонны к разложению, агрегированию или нежелательной химической модификации, если состав раствора не составлен надлежащим образом. Стабильность того или иного антитела в жидком составе зависит не только от природы вспомогательных средств, используемых в составе, но также и от количеств и относительного соотношения различных вспомогательных средств.
Более того, при подготовке жидких препаратов на основе антител следует учитывать и другие соображения, кроме стабильности. К примерам таких дополнительных соображений относятся вязкость раствора и концентрация антитела, которая может достигаться в определенном составе, а также визуальное качество или привлекательность состава. Поэтому к разработке состава лекарственного препарата на основе антител следует подходить с особым вниманием, с тем чтобы получить препарат, который сохраняет стабильность, содержит достаточную концентрацию антитела, а также обладает приемлемой вязкостью и другими свойствами, которые позволяют удобным образом вводить состав пациентам.
Антитела к пропротеин конвертазе субтилизин/кексин тип 9 протеазе белка человека (PCSK9) являются одним из примеров терапевтически важной макромолекулы, из которой необходимо надлежащим образом приготовить фармацевтический состав. Антитела анти-PCSK9 клинически используются для лечения или профилактики таких заболеваний, как гиперхолестеринемия и другие дислипидемии, а также других отклонений. Примеры антител анти-PCSK9 описаны, среди прочего, в заявках WO 2008/057457, WO 2008/057458, WO 2008/057459, WO 2008/063382, WO 2008/125623, патенте США № 7,572,618, заявках WO 2010/077854, US 2010/0166768 и US 2011/0065902.
Несмотря на то что антитела анти-PCSK9 известны специалистам в области, по-прежнему сохраняется потребность в новых фармацевтических составах, содержащих антитела αнти-PCSK9, которые достаточно стабильны и пригодны для введения пациентам.
Краткое описание изобретения
Настоящее изобретение восполняет упомянутую выше потребность, предлагая лекарственные средства, содержащие человеческое антитело, которое специфически связывает человеческую пропротеин конвертазу субтилизин/кексин тип 9 протеазу (PCSK9).
В одном из аспектов предлагается жидкий лекарственный препарат, содержащий: (i) человеческое антитело, которое специфически связывает человеческую пропротеин конвертазу субтилизин/кексин тип 9 протеазу (PCSK9); (ii) буфер; (iii) органический вспомогательный растворитель; (iv) стабилизатор; и в некоторых случаях (v) понизитель вязкости.
В одном из осуществлений антитело используется в концентрации от примерно 50±7,5 мг/мл до примерно 200±30 мг/мл. В другом осуществлении антитело используется в концентрации примерно 50 мг/мл±7,5 мг/мл. В другом осуществлении антитело используется в концентрации примерно 100 мг/мл±15 мг/мл. В другом осуществлении антитело используется в концентрации примерно 150 мг/мл±22,5 мг/мл. В другом осуществлении антитело используется в концентрации примерно 175 мг/мл±26,25 мг/мл. В другом осуществлении антитело используется в концентрации примерно 200 мг/мл±30 мг/мл.
В одном осуществлении антитело включает одну или несколько аминокислотных последовательностей SEQ ID NO:1-8. В одном осуществлении антитело содержит (а) вариабельную область тяжелой цепи (HCVR), включающую определяющие комплементарность области тяжелой цепи 1, 2 и 3 (HCDR1HCDR2-HCDR3), каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3 и SEQ ID NO:4, соответственно; и (b) вариабельную область легкой цепи (LCVR), включающую определяющие комплементарность области легкой цепи 1, 2 и 3 (LCDR1-LCDR2-LCDR3), каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7 и SEQ ID NO:8, соответственно. В конкретном осуществлении антитело содержит HCVR и LCVR, каждая из которых содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1 и SEQ ID NO:5, соответственно.
В одном осуществлении рН жидкого препарата составляет примерно рН 6,0±0,5, рН 6,0±0,4, рН 6,0±0,3, рН 6,0±0,2, рН 6,0±0,1, рН 6,0±0,05, рН 6,0±0,01, или рН 6,0. В конкретном осуществлении рН
- 1 047546 жидкого препарата составляет примерно рН 6,0±0,3. В одном осуществлении жидкий фармацевтический буфер содержит один или несколько буферов с эффективным диапазоном буферной емкости от примерно рН 5,5 до примерно рН 7,4 или pKa примерно 6,0.
В одном из осуществлений буфером является гистидин. В одном из осуществлений гистидин имеет концентрацию от 5 мМ±0,75 мМ до 50 мМ±7,5 мМ. В одном из осуществлений гистидин имеет концентрацию 10 мМ±1,5 мМ или примерно 10 мМ. В одном из осуществлений гистидин имеет концентрацию 20 мМ±3 мМ или примерно 20 мМ. В одном из осуществлений гистидин имеет концентрацию 40 нМ±6 мМ или примерно 40 нМ.
В одном из осуществлений в качестве органического вспомогательного растворителя используется неионогенный полимер, содержащий полиоксиэтилен. В некоторых осуществлениях органическим вспомогательным растворителем является любой или несколько из перечисленных: полисорбат 20, полоксамер 188 и полиэтиленгликоль 3350. В конкретном осуществлении органическим вспомогательным растворителем является полисорбат 20.
В одном осуществлении органический вспомогательный растворитель имеет концентрацию от примерно 0,005%±0,00075% до примерно 1%±0,15% веса к объему или вес./об., где, например, 0,1 г/мл = 10% и 0,01 г/мл =1%. В одном осуществлении органическим вспомогательным растворителем является полисорбат 20, который присутствует в концентрации примерно 0,2%±0,03% вес./об. В другом осуществлении органическим вспомогательным растворителем является полисорбат 20, который присутствует в концентрации 0,01%±0,0015% вес./об. или примерно 0,01% вес./об.
В одном из осуществлений стабилизатором является сахар. В одном из осуществлений сахар выбирается из группы, содержащей сахарозу, маннитол и трегалозу. В конкретном осуществлении стабилизатором является сахароза.
В одном осуществлении стабилизатор имеет концентрацию от 1%±0,15% вес./об. до 20%±3% вес./об. В конкретном осуществлении стабилизатором является сахароза в концентрации 5%±0,75% вес./об. или примерно 5% вес./об. В другом конкретном осуществлении стабилизатором является сахароза в концентрации 10%±1,5% вес./об. или примерно 10% вес./об. В другом конкретном осуществлении стабилизатором является сахароза в концентрации 12%±1,8% вес./об. или примерно 12% вес./об.
В одном осуществлении понизителем вязкости является соль, выбираемая из группы, включающей аргинина гидрохлорид, тиоцианат натрия, тиоцианат аммония, сульфат аммония, хлорид аммония, хлорид кальция, хлорид цинка и ацетат натрия. В одном из осуществлений понизителем вязкости является L-аргинина гидрохлорид.
В одном осуществлении концентрация понизителя вязкости составляет от 10 мМ±1,5 мМ до 150 мМ±22,5 мМ. В одном осуществлении понизителем вязкости является L-аргинина гидрохлорид в концентрации 50 мМ±7,5 мМ или примерно 50 мМ. В одном осуществлении понизителем вязкости является L-аргинина гидрохлорид в концентрации 40 мМ±6 мМ или примерно 40 мМ.
В одном осуществлении вязкость раствора или восстановленного лиофилизованного фармацевтического препарата при 25°C не превышает примерно 15 сП±10%. В одном осуществлении вязкость при 25°C составляет от 1,0 сП±10% до 18 сП±10%. В одном осуществлении вязкость при 25°C составляет 1,6 сП±10%, 1,7 сП±10%, 3,3 сП±10%, 3,5 сП±10%, 4,8 сП±10%, 6,0 сП±10%, 7,0 сП±10%, 7,1 сП±10%, 7,2 сП±10%, 7,9 сП±10%, 8,9 сП±10%, 10,0 сП±10%, 10,6 сП±10%, 11,4 сП±10%, 11,6 сП±10%, 11,8 сП±10%, 12,4 сП±10%, 13,9 сП±10%, 14,0 сП±10%, 15,5 сП±10% или 17,9 сП±10%.
В одном осуществлении осмоляльность жидкого лекарственного препарата составляет от 100±15 мосмоль/кг до 460±69 мосмоль/кг. В одном осуществлении осмоляльность жидкого лекарственного препарата составляет 103±15 мосмоль/кг или примерно 103 мосмоль/кг. В одном осуществлении осмоляльность жидкого лекарственного препарата составляет 195±29 мосмоль/кг млм примерно 195 мосмоль/кг. В одном осуществлении осмоляльность жидкого лекарственного препарата составляет 220±33 мосмоль/кг или примерно 220 мосмоль/кг. В одном осуществлении осмоляльность жидкого лекарственного препарата составляет 330±50 мосмоль/кг млм примерно 330 мосмоль/кг. В одном осуществлении осмоляльность жидкого лекарственного препарата составляет 435±65 мосмоль/кг или примерно 435 мосмоль/кг. В одном осуществлении осмоляльность жидкого лекарственного препарата составляет 440±66 мосмоль/кг или примерно 440 мосмоль/кг. В одном осуществлении осмоляльность жидкого лекарственного препарата составляет 458±69 мосмоль/кг или примерно 458 мосмоль/кг.
В одном осуществлении через три месяца хранения жидкого лекарственного препарата при -80°C из жидкого лекарственного препарата выделяется по крайней мере 96% или по крайней мере 97% неагрегированной и неразложившейся формы антитела анти-PCSK9, что подтверждают данные эксклюзионной хроматографии. В одном осуществлении через три месяца хранения жидкого лекарственного препарата при -80°C из жидкого лекарственного препарата выделяется по крайней мере 56% неосновной и некислой формы (то есть главный пик или главная заряженная форма) антитела анти-PCSK9, что подтверждают данные ионообменной хроматографии.
В одном осуществлении через три месяца хранения жидкого лекарственного препарата при -30°C из
- 2 047546 жидкого лекарственного препарата выделяется по крайней мере 96% или по крайней мере 97% неагрегированной и неразложившейся формы антитела анти-PCSK9, что подтверждают данные эксклюзионной хроматографии. В одном осуществлении через три месяца хранения жидкого лекарственного препарата при -30°C из жидкого лекарственного препарата выделяется по крайней мере 56% главной заряженной формы антитела анти-PCSK9, что подтверждают данные ионообменной хроматографии.
В одном осуществлении через три месяца хранения жидкого лекарственного препарата при -20°C из жидкого лекарственного препарата выделяется по крайней мере 96% или по крайней мере 97% неагрегированной и неразложившейся формы антитела анти-PCSK9, что подтверждают данные эксклюзионной хроматографии. В одном осуществлении через три месяца хранения жидкого лекарственного препарата при -20°C из жидкого лекарственного препарата выделяется по крайней мере 56% главной заряженной формы антитела анти-PCSK9, что подтверждают данные ионообменной хроматографии.
В одном осуществлении через шесть месяцев хранения жидкого лекарственного препарата при 5°C из жидкого лекарственного препарата выделяется по крайней мере 96% неагрегированной и неразложившейся формы антитела анти-PCSK9, что подтверждают данные эксклюзионной хроматографии. В одном осуществлении через три месяца хранения жидкого лекарственного препарата при 5°C из жидкого лекарственного препарата выделяется по крайней мере 58 или 59% главной заряженной формы антитела анти-PCSK9, что подтверждают данные ионообменной хроматографии.
В одном осуществлении через шесть месяцев хранения жидкого лекарственного препарата при 25°C из жидкого лекарственного препарата выделяется по крайней мере 94% неагрегированной и неразложившейся формы антитела анти-PCSK9, что подтверждают данные эксклюзионной хроматографии. В одном осуществлении через шесть месяцев хранения жидкого лекарственного препарата при 25°C из жидкого лекарственного препарата выделяется по крайней мере 45 или 47% неосновной и некислотной формы антитела анти-PCSK9, что подтверждают данные ионообменной хроматографии.
В одном осуществлении через 28 дней хранения жидкого лекарственного препарата при 45°C из жидкого лекарственного препарата выделяется по крайней мере 91 или 92% неагрегированной и неразложившейся формы антитела анти-PCSK9, что подтверждают данные эксклюзионной хроматографии. В одном осуществлении через 28 дней хранения жидкого лекарственного препарата при 45°C из жидкого лекарственного препарата выделяется по крайней мере 35 или 37% неосновной и некислотной формы антитела анти-PCSK9, что подтверждают данные ионообменной хроматографии.
В одном из аспектов предлагается жидкий лекарственный препарат, содержащий: (i) от 50±7,5 мг/мл до 175±26 мг/мл человеческого антитела, которое специфически связывает человеческую PCSK9; (ii) от 0 мМ до 40±6 мМ гистидина; (iii) от 0% до 0,2%±0,03% (вес/об) полисорбата 20; (iv) от 0 до 12%±1,8% (вес/об) сахарозы; и (v) от 0 мМ до 50±7,5 мМ аргинина при рН от примерно 5,3 до примерно 6,7. Антитело анти-PCSK9 настоящего аспекта содержит вариабельную область тяжелой цепи (HCVR) и вариабельную область легкой цепи (LCVR), так что сочетание HCVR/LCVR включает определяющие комплементарность области тяжелой и легкой цепей (HCDR1-HCDR2-HCDR3/LCDR1-LCDR2-LCDR3), которые содержат аминокислотные последовательности SEQ ID NOs:2-3-4/SEQ ID NOs:6-7-8, соответственно. В конкретном осуществлении антитело анти-PCSK9 содержит вариабельную область тяжелой цепи (HCVR) и вариабельную область легкой цепи (LCVR), каждая из которых содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1 и SEQ ID NO:5, соответственно (в дальнейшем mAb-316P).
В одном осуществлении настоящего аспекта жидкий препарат содержит (i) 50±7,5 мг/мл mAb-316Р; (ii) 10±1,5 мМ гистидина; (iii) 0,1%±0,015% (вес/об) полисорбата 20; и (iv) 6%±0,9% (вес/об) сахарозы при рН 6,0±0,3. В одном осуществлении данного конкретного препарата вязкость составляет примерно 1,7 сП. В одном осуществлении данного конкретного препарата осмоляльность составляет 220±44 мосмоль/кг.
В другом осуществлении жидкий препарат содержит (i) 100±20 мг/мл mAb-316Р; (ii) 20±4 мМ гистидина; (iii) 0,2%±0,04% (вес/об) полисорбата 20; и (iv) 12%±2,4% (вес/об) сахарозы при рН 6,0±0,3. В одном осуществлении данного конкретного препарата вязкость составляет примерно 3,5 сП. В одном осуществлении данного конкретного препарата осмоляльность составляет 440±88 мосмоль/кг.
В другом осуществлении жидкий препарат содержит (i) 150±22,5 мг/мл mAb-316Р; (ii) 10±1,5 мМ гистидина; (iii) 0,2%±0,03% или 0,01%±0,0015% (вес/об) полисорбата 20; и (iv) 10%±1,5% (вес/об) сахарозы при рН 6,0±0,3. В одном осуществлении данного конкретного препарата вязкость составляет примерно 6 сП. В одном осуществлении данного конкретного препарата осмоляльность составляет 435±65,25 мосмоль/кг. В одном осуществлении настоящего конкретного препарата после хранения препарата при 45°C в течение 28 дней >92% антитела остается нативным и >35% антитела сохраняет главную заряженную форму. В одном осуществлении настоящего конкретного препарата после хранения препарата при 25°C в течение шести месяцев >94% антитела остается нативным и >45% антитела сохраняет главную заряженную форму. В одном осуществлении настоящего конкретного препарата после хранения препарата при 5°C в течение шести месяцев >96% антитела остается нативным и >58% антитела сохраняет главную заряженную форму. В одном осуществлении настоящего конкретного препарата
- 3 047546 после хранения препарата при -20°C в течение двенадцати месяцев >97% антитела остается нативным и >56% антитела сохраняет главную заряженную форму. В одном осуществлении настоящего конкретного препарата после хранения препарата при -30°C в течение двенадцати месяцев >97% антитела остается нативным и >56% антитела сохраняет главную заряженную форму. В одном осуществлении настоящего конкретного препарата после хранения препарата при -80°C в течение двенадцати месяцев >97% антитела остается нативным и >56% антитела сохраняет главную заряженную форму.
В некоторых осуществлениях настоящего конкретного препарата >85% антитела сохраняет свою биологическую активность после 28 дней при 45°C, >82% после 28 дней при 37°C и/или >98% после 28 дней при 25°C.
В некоторых осуществлениях настоящего конкретного препарата >85% антитела сохраняет свою биологическую активность после шести месяцев при -20°C, >70% после шести месяцев при -30°C и/или >79% после шести месяцев при -80°C. В некоторых осуществлениях настоящего конкретного препарата >81% антитела сохраняет свою биологическую активность после восьми циклов замораживанияоттаивания и/или >84% антитела сохраняет свою биологическую активность после 120 мин встряхивания.
В другом осуществлении настоящего аспекта жидкий препарат содержит (i) 175+26,25 мг/мл mAb316Р; (ii) 10+1,5 мМ гистидина; (iii) 0,01%±0,0015% (вес/об) полисорбата 20; (iv) 5%±0,75% (вес/об) сахарозы; и (v) 50±7,5 мМ аргинина при 6,0±0,3. В одном осуществлении данного конкретного препарата вязкость составляет примерно 10,6 сП. В одном осуществлении данного конкретного препарата осмоляльность составляет 330±50 мосмоль/кг. В одном осуществлении настоящего конкретного препарата после хранения препарата при 45°C в течение 28 дней >91% антитела остается нативным и >38% антитела сохраняет главную заряженную форму. В одном осуществлении настоящего конкретного препарата после хранения препарата при 25°C в течение шести месяцев >94% антитела остается нативным и >47% антитела сохраняет главную заряженную форму. В одном осуществлении настоящего конкретного препарата после хранения препарата при 5°C в течение шести месяцев >96% антитела остается нативным и >59% антитела сохраняет главную заряженную форму. В одном осуществлении настоящего конкретного препарата после хранения препарата при -20°C в течение трех месяцев >96% антитела остается нативным и >56% антитела сохраняет главную заряженную форму. В одном осуществлении настоящего конкретного препарата после хранения препарата при -30°C в течение трех месяцев >96% антитела остается нативным и >56% антитела сохраняет главную заряженную форму. В одном осуществлении настоящего конкретного препарата после хранения препарата при -80°C в течение трех месяцев>96% антитела остается нативным и >56% антитела сохраняет главную заряженную форму.
В одном аспекте жидкий лекарственный препарат любого из приведенных выше осуществлений помещается в контейнер. В одном из осуществлений в качестве контейнера используется флакон из поликарбоната. В другом осуществлении в качестве контейнера используется стеклянный флакон. В одном из осуществлений стеклом является боросиликатное стекло типа 1 с пробкой из бутилкаучука, покрытой фторуглеводородами. В другом осуществлении в качестве контейнера используется микроинжектор. В другом осуществлении в качестве контейнера используется шприц. В конкретном осуществлении поршень шприца покрыт фторуглеводородами. В одном из конкретных осуществлений в качестве шприца используется длинный стеклянный шприц объемом 1 мл, содержащий менее 500 миллиардных долей вольфрама, с иглой размером 27-G, пробкой из бутилкаучука с покрытием фторуглеводородами, а также не содержащим латекса, нецитотоксическим защитным резиновым колпачком. В более конкретном осуществлении в качестве шприца используется длинный стеклянный шприц NUOVA OMPI объемом 1 мл с тонкостенной иглой размером 27-G, с пробкой из бутилкаучука с покрытием FLUROTEC 4023/50 и защитным резиновым колпачком FM 27. В другом конкретном осуществлении в качестве шприца используется пластиковый шприц объемом 1 мл или 3 мл с иглой размером 27-G. В более конкретном осуществлении пластиковый шприц поставляется компанией BECTON DICKINSON.
В одном аспекте предлагается фармацевтический препарат, содержащий (а) 175 мг/мл±26,25 мг/мл антитела анти-PCSK9, (b) 10 мМ±1,5 мМ гистидина, рН 6+0,3, (с) 0,01% вес./об+0,0015% полисорбата 20, (d) 5% вес./об.±0,75% сахарозы, и (е) 50 мМ±7,5 мМ аргинина, в котором (а) антитело содержит HCVD из SEQ ID NO:1 и LCVD из SEQ ID NO:5, (b) более 90% антител в препарате имеет молекулярный вес 155 кДа±1 кДа, (с) более 50% антител в препарате имеет изоэлектрическую точку примерно 8,5, и (d) от 75 до 90% антител в препарате фукозилированы.
В одном осуществлении фармацевтический препарат содержит (а) 175 мг/мл+26,25 мг/мл антитела анти-PCSK9 из предыдущего абзаца, (b) 10 мМ±1,5 мМ гистидина, рН 6+0,3, (с) 0,01% вес./об.±0,0015% полисорбата 20, (d) 5% вес./об.±0,75% сахарозы, и (е) 50 мМ±7,5 мМ аргинина в воде.
В одном аспекте предлагается фармацевтический препарат, содержащий (а) 150 мг/мл± 22,5 мг/мл антитела анти-PCSK9, (b) 10 мМ±1,5 мМ гистидина, рН 6+0,3, (с) 0,2% вес./об.±0,03% полисорбата 20, (d) 10% вес./об .±1,5% сахарозы, в котором (i) антитело содержит HCVD из SEQ ID NO:1 и LCVD из SEQ
- 4 047546
ID NO:5, (ii) более 90% антител в препарате имеет молекулярный вес 155 кДа+1 кДа, (iii) более 50% антител в препарате имеет изоэлектрическую точку примерно 8,5, и (iv) от 75 до 90% антител в препарате фукозилированы.
В одном осуществлении фармацевтический препарат содержит (а) 150 мг/мл+22,5 мг/мл антитела анти-PCSK9 из предыдущего абзаца, (b) 10 мМ+1,5 мМ гистидина, рН 6+0,3, (с) 0,2% вес./об+0,03% полисорбата 20, (d) 10% вес./об.±1,5% сахарозы в воде.
В одном аспекте предлагается фармацевтический препарат, содержащий (а) 150 мг/мл+22,5 мг/мл антитела анти-PCSK9, (b) 10 мМ+1,5 мМ гистидина, рН 6+0,3, (с) 0,01% вес./об.±0,0015% полисорбата 20, и (d) 10% вес./об.±1,5% сахарозы, в котором (i) антитело содержит HCVD из SEQ ID NO:1 и LCVD из SEQ ID NO:5, (ii) более 90% антител в препарате имеет молекулярный вес 155 кДа+1 кДа, (iii) более 50% антител в препарате имеет изоэлектрическую точку примерно 8,5, и (iv) от 75 до 90% антител в препарате фукозилированы.
В одном осуществлении фармацевтический препарат содержит (а) 150 мг/мл+22,5 мг/мл антитела анти-PCSK9 из предыдущего абзаца, (b) 10 мМ+1,5 мМ гистидина, рН 6+0,3, (с) 0,01% вес./об+0,0015% полисорбата 20, и (d) 10% вес./об.±1,5% сахарозы в воде.
В одном аспекте предлагается фармацевтический препарат, содержащий (а) 100 мг/мл+15 мг/мл антитела анти-PCSK9, (b) 20 мМ+3 мМ гистидина, рН 6+0,3, (с) 0,2% вес./об.±0,03% полисорбата 20, (d) 12% вес./об.+1,8% сахарозы, в котором (i) антитело содержит HCVD из SEQ ID NO:1 и LCVD из SEQ ID NO:5, (ii) более 90% антител в препарате имеет молекулярный вес 155 кДа+1 кДа, (iii) более 50% антител в препарате имеет изоэлектрическую точку примерно 8,5, и (iv) от 75 до 90% антител в препарате фукозилированы.
В одном осуществлении фармацевтический препарат содержит (а) 100 мг/мл+15 мг/мл антитела анtu-PCSK9 из предыдущего абзаца, (b) 20 мМ+3 мМ гистидина, рН 6+0,3, (с) 0,2% вес./об.+0,03% полисорбата 20, и (d) 12% вес./об.+1,8% сахарозы в воде.
В одном аспекте предлагается фармацевтический препарат, содержащий (а) 50 мг/мл+7,5 мг/мл антитела, (b) 10 мМ+1,5 мМ гистидина, рН 6+0,3, (с) 0,1% вес./об+0,015% полисорбата 20, (d) 6% вес./об+0,9% сахарозы, в котором (i) антитело содержит HCVD из SEQ ID NO:1 и LCVD из SEQ ID NO:5, (ii) более 90% антител в препарате имеет молекулярный вес 155 кДа+1 кДа, (iii) более 50% антител в препарате имеет изоэлектрическую точку примерно 8,5, и (iv) от 75 до 90% антител в препарате фукозилированы.
В одном осуществлении фармацевтический препарат содержит (а) 50 мг/мл+7,5 мг/мл антитела анtu-PCSK9 из предыдущего абзаца, (b) 10 мМ+1,5 мМ гистидина, рН 6+0,3, (с) 0,1% вес./об+0,015% полисорбата 20, и (d) 6% вес./об+0,9% сахарозы в воде.
В одном аспекте приводится способ приготовления лиофилизованного препарата, который содержит антитело анти-PCSK9 и менее 0,3% воды. Способ включает следующие стадии: (а) смешивание в стеклянном флаконе воды, антитела анти-PCSK9, гистидина, сахарозы и полисорбата 20, (b) последующее выдерживание смеси примерно при 5°C в течение примерно 60 мин, (с) последующее снижение температуры со скоростью примерно 0,5°C в мин, (d) последующее выдерживание смеси примерно при 45°C в течение примерно 120 мин, (е) последующее снижение атмосферного давления примерно до 100 мТорр, (f) последующее повышение температуры со скоростью примерно 0,5°C в мин, (g) последующее выдерживание смеси примерно при -25°C в течение примерно 78 ч, (h) последующее увеличение температуры со скоростью 0,2°C в мин, (i) последующее выдерживание смеси примерно при 35°C в течение примерно 6 ч, (j) последующее снижение температуры со скоростью примерно 0,5°C, (k) а также последующее выдерживание смеси примерно при 25° в течение примерно 60 мин до передачи на хранение.
В одном осуществлении способ также включает следующие стадии: (l) заполнение стеклянного флакона, содержащего смесь после стадии (k), газообразным азотом, и (m) укупорка флакона под давлением на уровне примерно 80% от атмосферного. В одном осуществлении смесь доводят до температуры 2-8°C после стадии (i), (j) или (k) и перед стадией укупорки флакона.
В некоторых осуществлениях на стадии (а) концентрация антитела анти-PCSK9 составляет 50 мг/мл+7,5 мг/мл, концентрация гистидина составляет 10 мМ+1,5 мМ (рН 6,0), концентрация полисорбата 20 составляет 0,1%+0,015%, а концентрация сахара составляет 6%+0,9%. В одном осуществлении антитело анти-PCSK9 содержит HCDR1 из SEQ ID NO:2, HCDR2 из SEQ ID NO:3, HCDR3 из SEQ ID NO:4, LCDR1 из SEQ ID NO: 6, LCDR2 из SEQ ID NO:7 и LCDR3 из SEQ ID NO:8.mAb-316P. В одном осуществлении антитело анти-PCSK9 содержит HCVD из SEQ ID NO:1 и LCVD из SEQ ID NO:5. В одном осуществлении (i) антитело содержит HCVD из SEQ ID NO:1 и LCVD из SEQ ID NO:5, (ii) более 90% антител в смеси имеет молекулярный вес 155 кДа+1 кДа, (iii) более 50% антител в смеси имеет изоэлектрическую точку примерно 8,5, и (iv) от 75% до 90% антител в смеси фукозилированы.
В одном аспекте приводится способ приготовления лиофилизованного препарата, который содержит антитело анти-PCSK9 и менее 0,3% воды, который готовится в соответствии со способом в предыдущем аспекте.
- 5 047546
В одном аспекте предлагается фармацевтический препарат, который содержит лиофилизованный фармацевтический препарат предыдущего аспекта, разведенный в воде. В одном осуществлении фармацевтический препарат содержит 50 мг/мл±7,5 мг/мл антитела анти-PCSK9, 10 мМ±1.5 мМ гистидина (рН 6.0), 0,1%±0,015% полисорбата 20 и 6%±0,9% сахарозы в воде. В одном осуществлении фармацевтический препарат содержит 100 мг/мл±15 мг/мл антитела анти-PCSK9, 20 мМ±3 мМ гистидина (рН 6.0), 0,2%±0,03% полисорбата 20 и 12%±1,8% сахарозы в воде. В другом осуществлении фармацевтический препарат содержит 150 мг/мл±22,5 мг/мл антитела анти-PCSK9, 30 мМ±4,5 мМ гистидина (рН 6.0), 0,3%±0,045% полисорбата 20 и 18%±2,7% сахарозы в воде. В еще одном осуществлении фармацевтический препарат содержит 175 мг/мл±26,25 мг/мл антитела анти-PCSK9, 35 мМ±5,25 мМ гистидина (рН 6.0), 0,35%±0,0525% полисорбата 20 и 21%±3,15% сахарозы в воде.
В некоторых осуществлениях антитело анти-PCSK9 содержит HCVD из SEQ ID NO:1 и LCVD из SEQ ID NO:5, и (b) более 90% антител в смеси имеет молекулярный вес 155 кДа±1 кДа, (с) более 50% антител в смеси имеет изоэлектрическую точку примерно 8,5, и (d) от 75 до 90% антител в смеси фукозилированы.
В одном аспекте предлагается лекарственный препарат любого из приведенных выше осуществлений, причем упомянутый препарат помещается в контейнер. В одном осуществлении в качестве контейнера используется флакон, который в некоторых осуществлениях представляет собой стеклянный флакон. В другом осуществлении в качестве контейнера используется шприц. В некоторых приложениях в качестве шприца используют шприц из стекла с низким содержанием вольфрама. В одном осуществлении в качестве шприца используется длинный стеклянный шприц NUOVA OMPI объемом 1 мл с тонкостенной иглой размером 27-G, с пробкой из бутилкаучука с покрытием FLUROTEC 4023/50 и защитным резиновым колпачком FM 27.
В одном аспекте предлагается комплект, в который входят лекарственный препарат любого из приведенных выше аспектов, контейнер и указания по применению. В одном осуществлении в качестве контейнера используется предварительно заполненный шприц. В конкретном осуществлении в качестве шприца используется длинный стеклянный шприц NUOVA OMPI объемом 1 мл с тонкостенной иглой размером 27-G, с пробкой из бутилкаучука с покрытием FLUROTEC 4023/50 и защитным резиновым колпачком a FM 27.
Другие осуществления настоящего изобретения станут очевидны при ознакомлении с приведенным ниже подробным описанием.
Подробное описание изобретения
Прежде чем приступить к описанию настоящего изобретения, необходимо отметить, что настоящее изобретение не ограничивается конкретными способами и изложенными экспериментальными условиями, поскольку такие способы и условия могут меняться. Следует также понимать, что используемая в настоящем документе терминология предназначена исключительно для описания конкретных осуществлений и не носит ограничительного характера, поскольку охват настоящего изобретения ограничивается только прилагаемой формулой изобретения.
Если не указано иное, все технические и научные термины, используемые в настоящем документе, имеют такое же значение, которое общеизвестно рядовым специалистам в области, к которой относится настоящее изобретение. Используемый в настоящем документе термин примерно в отношении конкретного упоминаемого численного значения или диапазона значений подразумевает, что значение может отклоняться от значения не более чем на 1%. Например, используемое в настоящем документе выражение примерно 100 охватывает 99 и 101, и все значения между ними (то есть 99,1, 99,2, 99,3, 99,4 и т.д.).
Хотя на практике или при проверке настоящего изобретения могут использоваться любые способы и материалы, аналогичные или идентичные описанным в настоящем документе, ниже приводится описание предпочтительных способов и материалов. Все публикации, упоминаемые в настоящем документе, включаются в него полностью в силу ссылки на них.
Фармацевтические составы
Используемое в настоящем документе выражение фармацевтический состав/препарат означает смесь по крайней мере одного активного ингредиента (например малой молекулы, макромолекулы, соединения и пр., которые в состоянии оказывать биологическое воздействие на человека или на животных) и по крайней мере одного неактивного ингредиента, который в сочетании с активным ингредиентом или одним или несколькими неактивными ингредиентами пригоден для терапевтического применения на человеке или животном. Термин состав/препарат, используемый в настоящем документе, если специально не оговорено иначе, означает фармацевтический состав/препарат. Настоящее изобретение относится к фармацевтическим составам, содержащим по крайней мере один лечебный полипептид. В соответствии с определенными осуществлениями настоящего изобретения под лечебным полипептидом понимается антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, который специфически связывается с человеческой пропротеин конвертазой субтилизин/кексин тип 9 (PCSK9). Более конкретно, настоящее изобретение включает фармацевтические препараты, которые содержат: (i) человеческое антитело, которое
- 6 047546 специфически связывается с человеческой PCSK9 (ii) гистидиновый буфер; (iii) органический вспомогательный растворитель, который представляет собой неионогенное поверхностно-активное вещество; (iv) термический стабилизатор, которым является углевод; и в некоторых случаях (v) понизитель вязкости, которым является соль. Конкретные примеры компонентов и составов, включенных в настоящее изобретение, подробно описаны ниже.
Антитела, которые специфически связываются с PCSK9.
Фармацевтические составы настоящего изобретения могут включать человеческое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые специфически связываются с человеческой PCSK9. Используемый в настоящем документе термин PCSK9 означает пропротеин конвертазу человека, относящуюся к подсемейству протеиназ К семейства секреторных субтилаз. Имеющиеся данные свидетельствуют о том, что PCSK9 повышает уровень ЛНП в плазме за счет связывания с рецептором частиц липопротеинов низкой плотности и стимулирования его распада. Пример аминокислотной последовательности человеческой PCSK9 приводится в SEQ ID NO:9. Антитела к человеческой PCSK9 описаны в публикациях патентных заявок US 2010/0166768, US 2011/0065902 и WO 2010/077854.
Используемый в настоящем документе термин антитело в общем случае предназначен для обозначения молекул иммуноглобулина, составленных из четырех полипептидных цепей, при этом две тяжелые (Н) цепи и две легкие (L) цепи связываются друг с другом дисульфидными связями, а также для обозначения их мультимеров (например IgM); при этом молекулы иммуноглобулина, содержащие только тяжелые цепи (то есть без легких цепей), также включаются в охват термина антитело. Каждая тяжелая цепь содержит вариабельную область тяжелой цепи (сокращенно называемую в настоящем документе HCVR, или VH) и константную область тяжелой цепи. Константная область тяжелой цепи состоит из трех доменов: СН1, СН2 и CH3. Каждая легкая цепь содержит вариабельную область легкой цепи (сокращенно называемую в настоящем документе LCVR, или VL) и константную область легкой цепи. Константная область легкой цепи содержит один домен (CL1). Области VH и VL могут подразделяться на области гипервариабельности, которые называются определяющими комплементарность областями (CDR), перемежаемые областями с более высоким уровнем консервативности, называемые остовными областями (FR). Каждая область VH и VL образована тремя CDR и четырьмя FR, расположенными от аминотерминального конца к карбокси-терминальному концу в следующем порядке: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4.
Если специально не оговорено иначе, термин антитело, используемый в настоящем документе, следует понимать, как включающий полные молекулы антител, а также их антигенсвязывающие фрагменты. Используемый в настоящем документе термин антиген-связывающая часть или антигенсвязывающий фрагмент антитела (или просто часть антитела или фрагмент антитела) обозначает один или несколько фрагментов антитела, которые сохраняют способность к специфическому связыванию с PCSK9 человека или с его эпитопом.
Используемый в настоящем документе термин изолированное антитело предназначен для обозначения антитела, существенно свободного от других антител, обладающих иной антигенной специфичностью (например изолированное антитело, которое специфически связывает PCSK9 человека, существенно свободно от антител, которые специфически связывают антигены, отличные от PCSK9 человека).
Термин специфически связываются или ему подобные означает, что антитело или его антигенсвязывающий фрагмент образует комплекс с антигеном, который сравнительно стабилен в физиологических условиях. Специфическое связывание может описываться константой диссоциации по крайней мере примерно 1х 10-6 М или выше. Методы определения специфического связывания молекул известны специалистам в области и включают, например, равновесный диализ, поверхностный плазмонный резонанс и пр. Изолированное антитело, которое специфически связывает PCSK9 человека, тем не менее, может проявлять перекрестную реактивность к другим антигенам, например молекулам PCSK9 из других видов (ортологов). В контексте настоящего изобретения мультиспецифические (например биспецифические) антитела, которые связываются с человеческой PCSK9, а также одним или несколькими другими антигенами, считаются специфически связывающимися с человеческой PCSK9. Более того, изолированное антитело может быть существенно свободно от иных клеточных материалов или химических реагентов.
Примеры античеловеческих антител PCSK9, которые могут входить в фармацевтические составы настоящего изобретения, приводятся в публикациях патентных заявок US 2010/0166768, US 2011/0065902 и WO 2010/077854, раскрытие которых в силу ссылки на них полностью включается в текст настоящего документа.
В соответствии с определенными осуществлениями настоящего изобретения античеловеческое антитело PCSK9 mAb-316P представляет собой человеческий lgG1, содержащий вариабельную область тяжелой цепи, которая имеет субтип IGHV3-23 и вариабельную область легкой цепи, которая имеет субтип IGKV4-1 (см. Barbie and Lefranc, The Human Immunoglobulin Kappa Variable (IGKV) Genes and Joining (IGKJ) Segments, Exp. Clin. Immunogenet. 1998; 15:171-183; и Scaviner, D. et al., Protein Displays of the Human Immunoglobulin Heavy, Kappa and Lambda Variable and Joining Regions, Exp. Clin. Immunogenet., 1999; 16:234-240).
В некоторых осуществлениях античеловеческое антитело PCSK9 mAb-316P содержит по крайней
- 7 047546 мере одно аминокислотное замещение, что приводит к изменению заряда на внешней поверхности антитела относительно эмбриональной последовательности IGKV4-1. Эмбриональная последовательность IGKV4-1 и номера позиций аминокислот, приведенные в настоящем документе, соответствуют Международной иммуногенетической информационной системе (IMGT), которая описана в Lefranc, M.-P., et al., IMGT®, the international ImMunoGeneTics information system®, Nucl. Acids Res, 37, D1006-D1012 (2009). В некоторых осуществлениях внешняя поверхность включает определяющую комплементарность область (CDR). В некоторых осуществления аминокислотное замещение или замещения выбираются из группы, включающей замещение незаряженной полярной аминокислоты на основную аминокислоту в пределах CDR1 (например в положении 32) IGKV4-1. Уникальные пермутации в распределении зарядов антитела, особенно на границе со средой (например в CDR), предположительно будут создавать непредсказуемые условия для поддержания или улучшения стабильности антитела в растворе.
В некоторых осуществлениях античеловеческое антитело PCSK9 mAb-316P содержит по крайней мере одно аминокислотное замещение, что приводит к изменению заряда в остовной области вариабельной области антитела относительно эмбриональной последовательности IGHV3-23 или эмбриональной последовательности IGKV4-1. В некоторых осуществления аминокислотное замещение или замещения выбираются из группы, включающей (а) замещение полярной аминокислоты в остовной области 3 (FR3) (например в положении 77) IGHV3-23 на гидрофобную аминокислоту, и (b) замещение основной аминокислоты в остовной области 2 (FR2) (например в положении 51) IGKV4-1 на полярную аминокислоту. Изменения в способности пептидной цепи к фолдингу, особенно в пределах остовной области, которая влияет на интерфейс между CDR и растворителем, будет, предположительно, создавать непредсказуемые условия для поддержания или улучшения стабильности антитела в растворе.
В соответствии с рядом осуществлений настоящего изобретения античеловеческое антитело PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент содержит тяжелую цепь определяющей комплементарность области (HCDR) 1 из SEQ ID NO: 2, HCDR2 из SEQ ID NO:3 и HCDR3 из SEQ ID NO: 4. В некоторых осуществлениях античеловеческое антитело PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент содержит HCVD из SEQ ID NO:1.
В соответствии с рядом осуществлений настоящего изобретения античеловеческое антитело PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент содержит легкую (каппа) цепь определяющей комплементарность области (LCDR) 1 из SEQ ID NO: 6, LCDR2 из SEQ ID NO: 7 и LCDR3 из SEQ ID NO: 8. В некоторых осуществлениях античеловеческое антитело PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент содержит LCVD из SEQ ID NO:5.
Неограничивающий пример антитела, используемый в примерах, называют mAb-316Р. Такое антитело, которое в US 7,608,693 также называлось Н4Н098Р. mAb-316Р (Н4Н098Р), содержит пару аминокислотных последовательностей HCVR/LCVR с SEQ ID NOs:1/5, а также домены HCDR1-HCDR2HCDR3/LCDR1-LCDR2-LCDR3, представленные последовательностями SEQ ID NOs:2-3-4/SEQ ID NOs:6-7-8.
Количество антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, содержащееся в фармацевтических составах настоящего изобретения, можно менять в зависимости от желаемых конкретных свойств составов, а также конкретных обстоятельств и целей, для достижения которых предполагается использовать составы. В определенных осуществлениях фармацевтическими составами являются жидкие препараты, которые могут содержать от 50±7,5 мг/мл до 250±37,5 мг/мл антитела; от 60±9 мг/мл до 240±36 мг/мл антитела; от 70±10.5 мг/мл до 230±34,5 мг/мл антитела; от 80±12 мг/мл до 220±33 мг/мл антитела; от 90±13,5 мг/мл до 210±31,5 мг/мл антитела; от 100±15 мг/мл до 200±30 мг/мл антитела; от 110±16,5 мг/мл до 190±28,5 мг/мл антитела; от 120±18 мг/мл до 180±27 мг/мл антитела; от 130±19,5 мг/мл до 170±25,5 мг/мл антитела; от 140±21 мг/мл до 160±24 мг/мл антитела; 150±22,5 мг/мл антитела или 175±26,25 мг/мл. Например, составы настоящего изобретения могут содержать примерно 50 мг/мл; примерно 60 мг/мл; примерно 65 мг/мл; примерно 70 мг/мл; примерно 75 мг/мл; примерно 80 мг/мл; примерно 85 мг/мл; примерно 90 мг/мл; примерно 95 мг/мл; примерно 100 мг/мл; примерно 105 мг/мл; примерно 110 мг/мл; примерно 115 мг/мл; примерно 120 мг/мл; примерно 125 мг/мл; примерно 130 мг/мл; примерно 135 мг/мл; примерно 140 мг/мл; примерно 145 мг/мл; примерно 150 мг/мл; примерно 155 мг/мл; примерно 160 мг/мл; примерно 165 мг/мл; примерно 170 мг/мл; примерно 175 мг/мл; примерно 180 мг/мл; примерно 185 мг/мл; примерно 190 мг/мл; примерно 195 мг/мл; примерно 200 мг/мл; примерно 205 мг/мл; примерно 210 мг/мл; примерно 215 мг/мл; примерно 220 мг/мл; примерно 225 мг/мл; примерно 230 мг/мл; примерно 235 мг/мл; примерно 240 мг/мл; примерно 245 мг/мл; или примерно 250 мг/мл антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, который специфически связывается с человеческим PCSK9.
Вспомогательные вещества и рН
Лекарственные препараты настоящего изобретения могут также содержать одно или несколько вспомогательных веществ. Используемый в настоящем документе термин вспомогательное вещество означает любой нелекарственный агент, добавляемый к препарату для достижения необходимой консистенции, вязкости или стабилизирующего эффекта.
В некоторых осуществлениях фармацевтический препарат настоящего изобретения содержит по
- 8 047546 крайней мере один органический вспомогательный растворитель такого рода и в таких количествах, которые стабилизируют человеческое антитело PCSK9 при грубом обращении или взбалтывании, например, при встряхивании. В некоторых осуществлениях под стабилизируют понимается предупреждение образования более 3% агрегированного антитела от общего количества антитела (на молярной основе) при грубом воздействии. В некоторых осуществлениях под грубым воздействием понимают встряхивание раствора, содержащего антитело и органический вспомогательный растворитель в течение примерно 60 мин или примерно 120 мин.
В некоторых осуществлениях органическим вспомогательным растворителем является неионогенное поверхностно-активное соединение, например алкилполиэтиленоксид. К характерным неионогенным поверхностно-активным веществам, которые могут входить в препарат настоящего изобретения, относятся, например, полисорбаты, например полисорбат 20, полисорбат 28, полисорбат 40, полисорбат 60, полисорбат 65, полисорбат 80, полисорбат 81 и полисорбат 85; полоксамеры, например полоксамер 181, полоксамер 188, полоксамер 407 или полиэтиленгликоль (PEG). Полисорбат 20 также известен под названием TWEEN 20, сорбитан монолаурат и полиоксиэтиленсорбитан монолаурат. Полоксамер 188 также известен как PLURONIC F68.
Количество неионогенного поверхностно-активного вещества, содержащееся в фармацевтических составах настоящего изобретения, можно менять в зависимости от желаемых конкретных свойств составов, а также конкретных обстоятельств и целей, для достижения которых предполагается использовать составы. В некоторых осуществлениях составы могут содержать от 0,01%±0,0015% до 0,2%±0,03% поверхностно-активного вещества. Например, составы настоящего изобретения могут содержать примерно 0,0085%; примерно 0,01%; примерно 0,02%; примерно 0,03%; примерно 0,04%; примерно 0,05%; примерно 0,06%; примерно 0,07%; примерно 0,08%; примерно 0,09%; примерно 0,1%; примерно 0,11%; примерно 0,12%; примерно 0,13%; примерно 0,14%; примерно 0,15%; примерно 0,16%; примерно 0,17%; примерно 0,18%; примерно 0,19%; примерно 0,20%; примерно 0,21%; примерно 0,22%; или примерно 0,23% полисорбата 20 или полоксамера 188.
Фармацевтические препараты настоящего изобретения могут также содержать один или несколько стабилизаторов такого рода и в таких количествах, которые стабилизируют человеческое антитело PCSK9 в условиях теплового стресса. В некоторых осуществлениях стабилизируют означает сохранение более примерно 91% антитела в нативной конформации в условиях, когда раствор, содержащий антитело и термический стабилизатор, выдерживают при температуре примерно 45°C в течение примерно до 28 дней. В некоторых осуществлениях под стабилизируют означает агрегирование менее примерно 6% антитела в условиях, когда раствор, содержащий антитело и термический стабилизатор, выдерживают при температуре примерно 45°C в течение примерно 28 дней. Используемый в настоящем документе термин нативный означает основную форму антитела, которая определяется по эксклюзионной хроматографии и обычно представляет собой интактный мономер антитела.
В некоторых осуществлениях термическим стабилизатором является сахар или сахароспирт, выбираемый из сахарозы, трегалозы и маннитола, или любого их сочетания, количество которого в препарате можно менять в зависимости от конкретных обстоятельств и целей, для достижения которых предполагается использовать составы. В некоторых осуществлениях препараты могут содержать от примерно 3% до примерно 14% сахара или сахароспирта; от примерно 4% до примерно 13% сахара или сахароспирта; от примерно 5% до примерно 12% сахара или сахароспирта; от примерно 6% до примерно 11% сахара или сахароспирта; от примерно 7% до примерно 10% сахара или сахароспирта; от примерно 8% до примерно 9% сахара или сахароспирта; от примерно 4% до примерно 6% сахара или сахароспирта; от примерно 5% до примерно 7% сахара или сахароспирта; от примерно 9% до примерно 11% сахара или сахароспирта; или от примерно 11% до примерно 13% сахара или сахароспирта. Например, фармацевтические препараты настоящего изобретения могут содержать 4%±0,6%; 5%±0,75%; 6%±0,9%; 7%±1,05%; 8%±1,2%; 9%±1,35%; 10%±1,5%; 11%±1,65%; 12%±1,8%; 13%±1,95%; или примерно 14%±2,1% сахара или сахароспирта (например сахарозы, трегалозы или маннитола).
Фармацевтические препараты настоящего изобретения могут также содержать буфер или буферную систему, которые служат для поддержания стабильного рН и способствуют стабилизации человеческого антитела PCSK9. В некоторых осуществлениях под стабилизируют означает агрегирование менее примерно 4,5%±0,5% или менее 6,0%±0,5% антитела в условиях, когда раствор, содержащий антитело и буфер, выдерживают при температуре примерно 45°C в течение примерно 28 дней. В некоторых осуществлениях стабилизируют означает агрегирование менее примерно 3%±0,5% или менее 2,6%±0,5% антитела в условиях, когда раствор, содержащий антитело и буфер, выдерживают при температуре примерно 37°C в течение примерно 28 дней. В некоторых осуществлениях под стабилизируют понимается, что по крайней мере 91%±0,5% или по крайней мере 92%±0,5% антитела по данным эксклюзионной хроматографии остается в своей нативной конформации в условиях, когда раствор, содержащий антитело и буфер, выдерживают при температуре примерно 45°C в течение примерно 28 дней. В некоторых осуществлениях под стабилизируют понимается, что по крайней мере 94%±0,5% или по крайней мере 95%±0,5% антитела по данным эксклюзионной хроматографии остается в своей нативной конформации
- 9 047546 в условиях, когда раствор, содержащий антитело и буфер, выдерживают при температуре примерно 37°C в течение примерно 28 дней. Под нативным или нативной конформацией подразумевают долю антитела, которая не подверглась агрегированию или распаду. Это обычно определяется по результатам анализа, при котором определяется относительный размер частиц антитела, например методом эксклюзионной хроматографии. Неагрегированное и неразложившееся антитело элюируется во фракции, которая идентична нативному антителу и, как правило, является основной фракцией элюата. Агрегированное антитело элюируется во фракции, которая указывает на размеры, превышающие размеры нативного антитела. Разложившееся антитело элюируется во фракции, которая указывает на размеры, меньшие размеров нативного антитела.
В некоторых осуществлениях под стабилизируют понимается, что по крайней мере 38%±0,5% или по крайней мере 29%±0,5% антитела по данным катионообменной хроматографии остается в своей главной заряженной форме в условиях, когда раствор, содержащий антитело и буфер, выдерживают при температуре примерно 45°C в течение примерно 28 дней. В некоторых осуществлениях под стабилизируют понимается, что по крайней мере 46%±0,5% или по крайней мере 39%±0,5% антитела по данным катионообменной хроматографии остается в своей главной заряженной форме в условиях, когда раствор, содержащий антитело и буфер, выдерживают при температуре примерно 37°C в течение примерно 28 дней. Под главным зарядом или главной заряженной формой подразумевают фракцию антитела, которая элюируется с ионообменной смолы в главном пике, к которому с одной стороны примыкают более основные пики, а с другой стороны - более кислые пики.
Фармацевтические составы настоящего изобретения могут иметь рН от примерно 5,2 до примерно 6,4. Например, составы настоящего изобретения могут иметь рН примерно 5,5; примерно 5,6; примерно 5,7; примерно 5,8; примерно 5,9; примерно 6,0; примерно 6,1; примерно 6,2; примерно 6,3; примерно 6,4; или примерно 6,5. В некоторых осуществлениях рН составляет 6,0±0,4; 6,0±0,3; 6,0±0,2; 6,0±0,1; примерно 6,0; или 6,0.
В некоторых осуществлениях буфер или буферная система включают по крайней мере один буфер с диапазоном буферной емкости, который полностью или частично перекрывается с интервалом рН 5,57,4. В одном осуществлении буфер имеет pKa примерно 6,0±0,5. В некоторых осуществлениях буфером является гистидиновый буфер. В некоторых осуществлениях гистидин присутствует в концентрации от 5 мМ±0,75 мМ до 15 мМ±2,25 мМ; от 6 мМ±0,9 мМ до 14 мМ±2,1 мМ; от 7 мМ±1,05 мМ до 13 мМ±1,95 мМ; от 8 мМ±1,2 мМ до 12 мМ±1,8 мМ; от 9 мМ±1,35 мМ до 11 мМ±1,65 мМ; 10 мМ±1,5 мМ; или примерно 10 мМ. В некоторых осуществлениях буферная система содержит гистидин в концентрации 10 мМ±1,5 мМ при рН 6,0±0,3.
Фармацевтические составы настоящего изобретения могут также содержать одно или несколько вспомогательных веществ, которые служат для поддержания низкой вязкости или для снижения вязкости препаратов, содержащих высокие концентрации лекарственного вещества на основе антитела антиPCSK9 (например, как правило, >150 мг/мл антитела). В некоторых осуществлениях состав включает аргинин в количествах, достаточных для поддержания вязкости жидкого состава на уровне менее 20±3 сП, менее 15±2,25 сП или менее 11±1,65 сП. В некоторых осуществлениях препараты содержат аргинин в количестве, достаточном для поддержания вязкости на уровне не выше 10,6±1,59 сП. В некоторых осуществлениях фармацевтический состав настоящего изобретения содержит аргинин, предпочтительно в форме гидрохлорида L-аргинина в концентрации от 10 мМ±1,5 мМ до 90 мМ±13,5 мМ, от 20 мМ±3 мМ до 80 мМ±12 мМ, от 30 мМ±4,5 мМ до 70 мМ±10,5, от 40 мМ±6 мМ до 60 мМ±9 мМ или 50 мМ±7,5 мМ.
Примеры составов
В соответствии с одним аспектом настоящего изобретения фармацевтический состав представляет собой, как правило, физиологически изотонический жидкий состав с низкой вязкостью, который содержит: (i) человеческое антитело, которое специфически связывается с человеческой PCSK9 (например mAb-316P), в концентрации 50 мг/мл±7,5 мг/мл, 100 мг/мл±15 мг/мл, 150 мг/мл±22,5 мг/мл или 175 мг/мл±26,25 мг/мл; (ii) буферную систему, которая поддерживает рН примерно на уровне 6,0±0,3; (iii) сахар, который также служит термическим стабилизатором; (iv) органический вспомогательный растворитель, который защищает структурную целостность антитела; и (v) соль аминокислоты, которая служит для поддержания достаточно низкой вязкости для инъекции подходящего объема для подкожного введения.
В соответствии с одним из осуществлений фармацевтический состав содержит: (i) человеческое антитело IgG1, которое специфически связывает человеческую PCSK9 и которое содержит замещенную тяжелую цепь вариабельной области типа IGHV3-23 и замещенную легкую цепь вариабельной области типа IGLV4-1 (например mAb-316P) в концентрации от примерно 50±7,5 мг/мл до примерно 175±26,25 мг/мл; (ii) буферную систему, содержащую гистидин, которая поддерживает рН примерно на уровне 6,0±0,3; (iii) сахарозу; (iv) неионогенный детергент, например полисорбат; и в некоторых случаях (v) соль аргинина.
В соответствии с одним из осуществлений фармацевтический состав содержит: (i) человеческое антитело IgG1, которое специфически связывает человеческую PCSK9 и которое содержит HCDR1 из SEQ
- 10 047546
ID NO:2, HCDR2 из SEQ ID NO:3, HCDR3 из SEQ ID NO:4, LCDR1 из SEQ ID NO:6, LCDR2 из SEQ ID NO:7, а также LCDR3 из SEQ ID NO:8, в концентрации 175+26,25 мг/мл; (ii) гистидин в концентрации 10 мМ+1,5 мМ, который обеспечивает рН на уровне 6,0+0,3; (iii) сахарозу в концентрации 5% вес./об.±0,75% вес/об; (iv) полисорбат 20 в концентрации 0,01% вес./об.±0,0015% вес/об; и (v) гидрохлорид L-аргинина в концентрации 50 мМ+7,5 мМ.
В соответствии с одним из осуществлений фармацевтический состав содержит: (i) человеческое антитело IgG1, которое специфически связывает человеческую PCSK9 и которое содержит HCDR1 из SEQ ID NO:2, HCDR2 из SEQ ID NO:3, HCDR3 из SEQ ID NO:4, LCDR1 из SEQ ID NO:6, LCDR2 из SEQ ID NO:7, а также LCDR3 из SEQ ID NO:8, в концентрации 150+22,5 мг/мл; (ii) гистидин в концентрации 10 мМ+1,5 мМ, который обеспечивает рН на уровне 6,0+0,3; (iii) сахарозу в концентрации 10% вес./об.±1,5% вес/об; и (iv) полисорбат 20 в концентрации 0,2% вес./об+0,03% вес./об. или 0,01% вес./об+0,0015% вес./об.
В соответствии с одним из осуществлений фармацевтический состав содержит: (i) человеческое антитело IgG1, которое специфически связывает человеческую PCSK9 и которое содержит HCDR1 из SEQ ID NO:2, HCDR2 из SEQ ID NO:3, HCDR3 из SEQ ID NO:4, LCDR1 из SEQ ID NO:6, LCDR2 из SEQ ID NO:7, а также LCDR3 из SEQ ID NO:8, в концентрации примерно 100+15 мг/мл; (ii) гистидин в концентрации 20 мМ+3 мМ, который обеспечивает рН на уровне 6,0+0,3; (iii) сахарозу в концентрации 12% вес./об.±1,8% вес/об; и (iv) полисорбат 20 в концентрации 0,2% вес./об+0,03% вес./об. или 0,01% вес./об+0,0015% вес./об.
В соответствии с одним из осуществлений фармацевтический состав содержит: (i) человеческое антитело IgG1, которое специфически связывает человеческую PCSK9 и которое содержит HCDR1 из SEQ ID NO:2, HCDR2 из SEQ ID NO:3, HCDR3 из SEQ ID NO:4, LCDR1 из SEQ ID NO:6, LCDR2 из SEQ ID NO:7, а также LCDR3 из SEQ ID NO:8, в концентрации 50+7,5 мг/мл; (ii) гистидин в концентрации 10 мМ+1,5 мМ, который обеспечивает рН на уровне 6,0+0,3; (iii) сахарозу в концентрации 6% вес./об+0,9% вес/об; и (iv) полисорбат 20 в концентрации 0,1% вес./об+0,015% вес./об. или 0,01% вес./об+0,0015% вес./об.
В соответствии с одним из осуществлений фармацевтический состав содержит: (i) человеческое антитело IgG1, которое специфически связывает человеческую PCSK9 и которое содержит вариабельную область тяжелой цепи из SEQ ID NO:1 и вариабельную область легкой цепи из SEQ ID NO:5 в концентрации 175+26,25 мг/мл; (ii) гистидин в концентрации 10 мМ+1,5 мМ, который обеспечивает рН на уровне 6,0+0,3; (iii) сахарозу в концентрации 5% вес./об.+0,75% вес/об; (iv) полисорбат 20 в концентрации 0,01% вес./об.+0,0015% вес/об; и (v) гидрохлорид L-аргинина в концентрации 50 мМ+7,5 мМ.
В соответствии с одним из осуществлений фармацевтический состав содержит: (i) человеческое антитело IgG1, которое специфически связывает человеческую PCSK9 и которое содержит вариабельную область тяжелой цепи из SEQ ID NO:1 и вариабельную область легкой цепи из SEQ ID NO:5 в концентрации примерно 150+22,5 мг/мл; (ii) гистидин в концентрации 10 мМ+1,5 мМ, который обеспечивает рН на уровне 6,0+0,3; (iii) сахарозу в концентрации 10% вес./об+1,5% вес/об; и (iv) полисорбат 20 в концентрации 0,2% вес./об+0,03% вес./об. или 0,01% вес./об+0,0015% вес./об.
В соответствии с одним из осуществлений фармацевтический состав содержит: (i) человеческое антитело IgG1, которое специфически связывает человеческую PCSK9 и которое содержит вариабельную область тяжелой цепи из SEQ ID NO:1 и вариабельную область легкой цепи из SEQ ID NO:5 в концентрации примерно 100+15 мг/мл; (ii) гистидин в концентрации 20 мМ+3 мМ, который обеспечивает на уровне рН 6,0+0,3; (iii) сахарозу в концентрации 12% вес./об+1,8% вес/об; и (iv) полисорбат 20 в концентрации 0,2% вес./об+0,03% вес./об. или 0,01% вес./об+0,0015% вес./об.
В соответствии с одним из осуществлений фармацевтический состав содержит: (i) человеческое антитело IgG1, которое специфически связывает человеческую PCSK9 и которое содержит вариабельную область тяжелой цепи из SEQ ID NO:1 и вариабельную область легкой цепи из SEQ ID NO:5 в концентрации примерно 50+7,5 мг/мл; (ii) гистидин в концентрации 10 мМ+1,5 мМ, который обеспечивает рН на уровне 6,0+0,3; (iii) сахарозу в концентрации 6% вес./об+0,9% вес/об; и (iv) полисорбат 20 в концентрации 0,1% вес./об+0,015% вес./об. или 0,01% вес./об+0,0015% вес./об.
Дополнительные неограничивающие примеры фармацевтических составов, входящих в сферу охвата настоящего изобретения, раскрываются в других разделах настоящего документа, в том числе в демонстрационных примерах, приведенных ниже.
Стабильность и вязкость фармацевтических составов
Фармацевтические составы настоящего изобретения, как правило, отличаются высокими уровнями стабильности. Термин стабильный, который используется в настоящем документе в отношении фармацевтических составов, означает, что антитела в фармацевтических составах сохраняют приемлемый уровень химической структуры или биологической функции после хранения в определенных условиях. Состав может быть стабильным, даже несмотря на то что содержащееся в нем антитело не сохраняет 100% своей химической структуры или биологической функции после хранения в течение определенного пе
- 11 047546 риода времени. В определенных обстоятельствах сохранение примерно 90%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% структуры или функции антитела после хранения в течение определенного периода времени может рассматриваться как стабильность.
Стабильность, кроме прочего, может измеряться по определяемому проценту нативного антитела, который остается в составе после хранения в течение определенного периода времени при определенной температуре. Процент нативного антитела может определяться, среди прочего, с помощью эксклюзионной хроматографии (например высокоэффективной жидкостной эксклюзионной хроматографии [эксклюзионная ВЭЖХ]), при этом под нативным понимается неагрегированное и неразложившееся антитело. Используемое в настоящем документе выражение приемлемый уровень стабильности означает, что после хранения в течение определенного периода времени при заданной температуре в препарате может обнаруживаться по крайней мере 90% нативной формы антитела. В некоторых осуществлениях после хранения в течение определенного времени при определенной температуре в препарате можно зарегистрировать по крайней мере примерно 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% нативной формы антитела. Заданный период времени, по истечении которого измеряется стабильность, может составлять по крайней мере 14 дней, по крайней мере 28 дней, по крайней мере 1 месяц, по крайней мере 2 месяца, по крайней мере 3 месяца, по крайней мере 4 месяца, по крайней мере 5 месяцев, по крайней мере 6 месяцев, по крайней мере 7 месяцев, по крайней мере 8 месяцев, по крайней мере 9 месяцев, по крайней мере 10 месяцев, по крайней мере 11 месяцев, по крайней мере 12 месяцев, по крайней мере 18 месяцев, по крайней мере 24 месяцев или более. Заданной температурой, при которой может храниться фармацевтический состав при определении стабильности, может быть любая температура от примерно -80°C до примерно 45°C, например, хранение примерно при -80°C, примерно -30°C, примерно -20°C, примерно 0°C, примерно 4-8°C, примерно 5°C, примерно 25°C, примерно 35°C, примерно 37°C или примерно 45°C. Например, фармацевтический состав может считаться стабильным, если через 6 месяцев хранения при 5°C с помощью эксклюзионной ВЭЖХ регистрируется более чем примерно 95, 96, 97 или 98% нативного антитела. Фармацевтический состав может считаться стабильным, если через 6 месяцев хранения при 25°C с помощью эксклюзионной ВЭЖХ регистрируется более чем примерно 94, 95, 96, 97 или 98% нативного антитела. Фармацевтический состав может считаться стабильным, если через 28 дней хранения при 45°C с помощью эксклюзионной ВЭЖХ регистрируется более чем примерно 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97 или 98% нативного антитела. Фармацевтический состав может считаться стабильным, если через три месяца хранения при -20°C с помощью эксклюзионной ВЭЖХ регистрируется более чем примерно 96, 97 или 98% нативного антитела. Фармацевтический состав может считаться стабильным, если через три месяца хранения при -30°C с помощью эксклюзионной ВЭЖХ регистрируется более чем примерно 96, 97 или 98% нативного антитела. Фармацевтический состав может считаться стабильным, если через три месяца хранения при -80°C с помощью эксклюзионной ВЭЖХ регистрируется более чем примерно 96, 97 или 98% нативного антитела.
Стабильность, кроме прочего, может измеряться по определяемому проценту антитела, которое образует агрегаты в составе после хранения в течение определенного периода времени при определенной температуре, причем стабильность обратно пропорциональна проценту образовавшегося агрегата. Процент агрегированного антитела может определяться, среди прочего, с помощью эксклюзионной хроматографии (например высокоэффективной жидкостной эксклюзионной хроматографии [эксклюзионная ВЭЖХ]). Используемое в настоящем документе выражение приемлемый уровень стабильности означает, что после хранения в течение определенного периода времени при заданной температуре в препарате может обнаруживаться не больше 6% антитела в агрегированной форме. В некоторых осуществлениях после хранения в течение определенного времени при определенной температуре в препарате может регистрироваться не больше примерно 6, 5, 4, 3, 2, 1, 0,5 или 0,1% агрегированного антитела. Заданный период времени, по истечении которого измеряется стабильность, может составлять по крайней мере 2 недели, по крайней мере 28 дней, по крайней мере 1 месяц, по крайней мере 2 месяца, по крайней мере 3 месяца, по крайней мере 4 месяца, по крайней мере 5 месяцев, по крайней мере 6 месяцев, по крайней мере 7 месяцев, по крайней мере 8 месяцев, по крайней мере 9 месяцев, по крайней мере 10 месяцев, по крайней мере 11 месяцев, по крайней мере 12 месяцев, по крайней мере 18 месяцев, по крайней мере 24 месяцев или более. Заданной температурой, при которой может храниться фармацевтический состав при определении стабильности, может быть любая температура от примерно -80°C до примерно 45°C, например, хранение примерно при -80°C, примерно -30°C, примерно -20°C, примерно 0°C, примерно 4-8°C, примерно 5°C, примерно 25°C, примерно 35°C, примерно 37°C или примерно 45°C. Например, фармацевтический состав может считаться стабильным, если через шесть месяцев хранения при 5°C регистрируется менее чем примерно 3, 2, 1, 0,5 или 0,1% антитела в агрегированной форме. Фармацевтический состав может также считаться стабильным, если через шесть месяцев хранения при 25°C регистрируется менее чем примерно 4, 3, 2, 1, 0,5 или 0,1% антитела в агрегированной форме. Фармацевтический состав может также считаться стабильным, если через 28 дней хранения при 45°C регистрируется менее чем примерно 6, 5, 4, 3, 2, 1, 0,5 или 0,1% антитела в агрегированной форме. Фармацевтический состав может также считаться стабильным, если через три месяца хранения при -20, -30 или -80°C регистрируется менее чем примерно 3, 2, 1, 0,5 или 0,1% антитела в агрегированной форме.
- 12 047546
Стабильность, кроме прочего, может измеряться по определяемому проценту антитела, которое переходит в более кислую фракцию в процессе ионного обмена (кислая форма), по сравнению с главной фракцией антитела (главная заряженная форма), причем стабильность обратно пропорциональна доле антитела в кислой форме. Не накладывая какие-либо теоретические ограничения, можно отметить, что деамидирование антитела может привести к повышению отрицательного заряда антитела, а значит, к его более высокой кислотности по сравнению с недеамидированным антителом (см., например, Robinson, N., Protein Deamidation, PNAS, April 16, 2002, 99(8):5283-5288). Процент подкисленного антитела можно определять, среди прочего, с помощью ионообменной хроматографии (например высокоэффективной жидкостной катионообменной хроматографии [катионообменная ВЭЖХ]). Используемое в настоящем документе выражение приемлемый уровень стабильности означает, что после хранения в течение определенного периода времени при заданной температуре в препарате может обнаруживаться не более 49% антитела в более кислой форме. В некоторых осуществлениях приемлемый уровень стабильности означает, что после хранения в течение определенного времени при определенной температуре в препарате может регистрироваться не более примерно 49, 45, 40, 35, 30, 25, 20, 15, 10, 5, 4, 3, 2, 1, 0,5 или 0,1% антитела в кислой форме. Заданный период времени, по истечении которого измеряется стабильность, может составлять по крайней мере 2 недели, по крайней мере 28 дней, по крайней мере 1 месяц, по крайней мере 2 месяца, по крайней мере 3 месяца, по крайней мере 4 месяца, по крайней мере 5 месяцев, по крайней мере 6 месяцев, по крайней мере 7 месяцев, по крайней мере 8 месяцев, по крайней мере 9 месяцев, по крайней мере 10 месяцев, по крайней мере 11 месяцев, по крайней мере 12 месяцев, по крайней мере 18 месяцев, по крайней мере 24 месяцев или более. Заданной температурой, при которой можно хранить фармацевтический состав при определении стабильности, может быть любая температура от примерно -80°C до примерно 45°C, например, хранение примерно при -80°C, примерно -30°C, примерно -20°C, примерно 0°C, примерно 4-8°C, примерно 5°C, примерно 25°C или примерно 45°C. Например, фармацевтический состав может считаться стабильным, если через три месяца хранения при -80, -30 или -20°C менее чем примерно 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1, 0,5 или 0,1% антитела оказывается в более кислой форме. Фармацевтический состав может также считаться стабильным, если через шесть месяцев хранения при 5°C менее чем примерно 32, 31, 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1, 0,5 или 0,1% антитела оказывается в более кислой форме. Фармацевтический состав может считаться стабильным, если через шесть месяцев хранения при 25°C менее чем примерно 43, 42, 41, 40, 39, 38, 37, 36, 35, 34, 33, 32, 31, 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1, 0,5 или 0,1% антитела оказывается в более кислой форме. Фармацевтический состав может также считаться стабильным, если через 28 дней хранения при 45°C менее чем примерно 49, 48, 47, 46, 45, 44, 43, 42, 41, 40, 39, 38, 37, 36, 35, 34, 33, 32, 31, 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1, 0,5 или 0,1% антитела оказывается в более кислой форме.
Для оценки стабильности составов настоящего изобретения могут использоваться и другие методы, например дифференциальная сканирующая калориметрия (ДСК), для определения термической стабильности, контролируемое встряхивание для определения механической стабильности и поглощение примерно при 350 нм или примерно при 405 нм для определения мутности раствора. Например, состав настоящего изобретения может считаться стабильным, если через 6 или более месяцев хранения при температуре от примерно 5°C до примерно 25°C изменение OD405 состава будет менее примерно 0,05 (например 0,04, 0,03, 0,02, 0,01 или менее) по сравнению с OD405 состава в начальный момент времени.
Измерение биологической активности или аффинности связывания антитела с его мишенью также может использоваться для оценки стабильности. Например, состав настоящего изобретения может считаться стабильным, если после хранения при, например, 5, 25, 45°C, и пр. в течение определенного периода времени (например от 1 до 12 месяцев) антитело анти-PCSK9, которое содержится в составе, связывается с PCSK9 с аффинностью, которая составляет по крайней мере 90, 95% или более от аффинности связывания антитела до упомянутого хранения. Аффинность связывания может определяться, например, с помощью ELISA или плазмонного резонанса. Биологическая активность может определяться по анализу активности PCSK9, например, взаимодействию клетки, которая экспрессирует PCSK9, с составом, содержащим антитело анти-PCSK9. Связывание антитела с такой клеткой может измеряться напрямую, например с помощью анализа FACS. В альтернативном варианте последующая активность системы PCSK9 может измеряться в присутствии антитела и сопоставляться с активностью системы PCSK9 в отсутствие антитела. В некоторых осуществлениях PCSK9 может быть эндогенной для клетки. В других осуществлениях PCSK9 может эктопически экспрессироваться в клетке.
Дополнительные способы оценки стабильности антитела в составе изложены в примерах, представленных ниже.
Жидкие фармацевтические препараты настоящего изобретения в некоторых осуществлениях могут отличаться низкими или средними уровнями вязкости. Используемый в настоящем документе термин вязкость относится к кинематической вязкости или абсолютной вязкости. Кинематическая вязкость является показателем резистивного течения жидкости под действием силы тяжести. Если две жидкости равного объема поместить в одинаковые капиллярные вискозиметры и позволить им вытекать
- 13 047546 под действием силы тяжести, то для прохождения через капилляр вязкой жидкости потребуется больше времени, чем жидкости с меньшей вязкости. Например, если одной жидкости для полного вытекания потребуется 200 с, а другой жидкости требуется 400 с, то вторая жидкость считается вдвое более вязкой по сравнению с первой по шкале кинематической вязкости. Абсолютная вязкость, которую иногда называют динамической или простой вязкостью, представляет собой произведение кинематической вязкости и плотности жидкости (абсолютная вязкость = кинематическая вязкость х плотность). Размерность кинематической вязкости - lVt, где L - длина, а Т - время. Кинематическая вязкость обычно выражается в сантистоксах (сСт). Единицей кинематической вязкости в системе СИ является мм2/с, равная 1 сСт. Абсолютная вязкость выражается в сантипуазах (сП). В системе СИ единицей абсолютной вязкости является миллипаскаль-секунда (мПа-с), где 1 сП =1 мПа-с.
Используемая в настоящем документе характеристика низкого уровня вязкости в отношении жидкого состава настоящего изобретения будет соответствовать абсолютной вязкости менее примерно 15 сП. Например, жидкий состав настоящего изобретения будет иметь низкую вязкость, если при регистрации с помощью стандартных методик измерения вязкости состав оказывается имеющим абсолютную вязкость примерно 15 сП, примерно 14 сП, примерно 13 сП, примерно 12 сП, примерно 11 сП, примерно 10 сП, примерно 9 сП, примерно 8 сП или менее. Используемая в настоящем документе характеристика среднего уровня вязкости в отношении жидкого состава настоящего изобретения будет соответствовать абсолютной вязкости в интервале между примерно 35 сП и примерно 15 сП. Например, жидкий состав настоящего изобретения будет иметь среднюю вязкость, если при регистрации с помощью стандартных методик измерения вязкости состав оказывается имеющим абсолютную вязкость примерно 34 сП, примерно 33 сП, примерно 32 сП, примерно 31 сП, примерно 30 сП, примерно 29 сП, примерно 28 сП, примерно 27 сП, примерно 26 сП, примерно 25 сП, примерно 24 сП, примерно 23 сП, примерно 22 сП, примерно 21 сП, примерно 20 сП, примерно 19 сП, 18 сП, примерно 17 сП, примерно 16 сП или примерно 15,1 сП.
Как явствует из приведенных ниже примеров, авторы настоящего изобретения неожиданно обнаружили, что при добавлении в состав антитела аргинина в концентрации от примерно 25 мМ до примерно 100 мМ можно получить жидкие составы с вязкостью от низкой до средней, содержащие высокие концентрации античеловеческого антитела PCSK9 (например от примерно 100 мг/мл до по крайней мере 200 мг/мл). Кроме того, было также обнаружено, что вязкость состава можно будет снизить в еще большей степени за счет снижения содержания сахарозы до менее чем примерно 10%.
Контейнеры и способы введения
Фармацевтические составы настоящего изобретения можно помещать в любой контейнер, пригодный для хранения лекарств и других лекарственных препаратов. Например, фармацевтические составы можно помещать в герметичный и стерилизованный пластиковый или стеклянный контейнер с определенным объемом, например флакон, ампулу, шприц, картридж или бутылку. Для хранения составов настоящего изобретения могут использоваться различные типы флаконов, в том числе, например, прозрачные и непрозрачные (например янтарного цвета) стеклянные или пластиковые флаконы. Аналогичным образом, для хранения или введения фармацевтического состава настоящего изобретения могут использоваться шприцы любого типа.
Фармацевтические составы настоящего изобретения можно помещать в шприцы с обычным содержанием вольфрама или шприцы с низким содержанием вольфрама. Специалистам в области будет очевидно, что процесс изготовления стеклянных шприцев обычно предполагает использование горячего вольфрамового стержня для формирования отверстия в стекле, через которое будут набираться и подаваться жидкости. Такой процесс приводит к отложению следовых количеств вольфрама на внутренней поверхности шприца. Последующая промывка и другие производственные стадии могут использоваться для снижения содержания вольфрама в шприце. Используемый в настоящем документе термин обычное содержание вольфрама означает, что шприц содержит не менее 500 миллиардных долей вольфрама. Термин низкое содержание вольфрама означает, что шприц содержит менее 500 миллиардных долей вольфрама. Например, в соответствии с настоящим изобретением шприц с низким содержанием вольфрама содержит менее примерно 490, 480, 470, 460, 450, 440, 430, 420, 410, 390, 350, 300, 250, 200, 150, 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10 или меньше миллиардных долей вольфрама.
Резиновые поршни, используемые в шприцах, а также резиновые пробки, которыми закрывают флаконы, могут иметь покрытие для предотвращения загрязнения лекарственного содержимого шприца или флакона, или же для обеспечения его стабильности. Таким образом, фармацевтические составы настоящего изобретения в соответствии с определенными осуществлениями можно помещать в шприц с покрытым поршнем или же во флакон, который закупоривается резиновой пробкой с покрытием. Например, поршень или пробку можно покрывать пленкой фторуглеводородов. Примеры пробок или поршней с покрытием, пригодных для использования с флаконами и шприцами, содержащими фармацевтические составы настоящего изобретения, приводятся, например, в патентах США № 4,997,423; 5,908,686; 6,286,699; 6,645,635 и 7,226,554, содержание которых в силу ссылки на них полностью включается в текст настоящего документа. Конкретные примеры резиновых пробок и поршней с покрытием, которые могут использоваться в контексте настоящего изобретения, серийно выпускаются под торговой
- 14 047546 маркой FluroTec®, поставляемой West Pharmaceutical Services, Inc. (Лайонвилль, штат Пенсильвания). FluroTec® является примером фторуглеводородного покрытия, которое используется, чтобы свести к минимуму или предотвратить налипание лекарственного вещества на резиновые поверхности.
В соответствии с определенными осуществлениями настоящего изобретения фармацевтические составы можно помещать в шприц с низким содержанием вольфрама и поршнем с фторуглеводородным покрытием.
Фармацевтические составы могут вводиться пациенту парентерально, например посредством инъекции (например подкожно, внутривенно, внутримышечно, внутрибрюшинно и пр.), или посредством чрескожного, чресслизистого, назального, ингаляционного или перорального введения. Для подкожного введения фармацевтического состава настоящего изобретения могут применяться самые различные конструкции многоразовых шприцов-ручек и устройств для автоматической инъекции. К примерам, среди прочего относятся AUTOPEN™ (Owen Mumford, Inc., Вудсток, Великобритания), шприц-ручка DISETRONIC™ (Disetronic Medical Systems, Бергдорф, Швейцария), шприц-ручка HUMALOG MIX 75/25™, шприц-ручка HUMALOG™, шприц-ручка HUMALIN 70/30™ (Eli Lilly and Co., Индианаполис, штат Индиана), NOVOPEN™ I, II и III (Novo Nordisk, Копенгаген, Дания), NOVOPEN JUNIOR™ (Novo Nordisk, Копенгаген, Дания), шприц-ручка BD™ (Becton Dickinson, Франклин-Лейкс, Нью-Джерси), OPTIPEN™, OPTIPEN PRO™, OPTIPEN STARLET™, и OPTICLIK™ (sanofi-aventis, Франкфурт, Германия). К примерам разовых шприцов-ручек или устройств для автоматической инъекции, которые могут применяться для подкожного введения фармацевтического состава настоящего изобретения, среди прочих, относятся шприц-ручка SOLOSTAR™ (sanofi-aventis), FLEXPEN™ (Novo Nordisk) и KWIKPEN™ (Eli Lilly), автоматическое устройство SURECLICK™ (Amgen, Таусенд-Оакс, штат Калифорния), PENLET™ (Haselmeier, Штуттгарт, Германия), EPIPEN (Dey, L.P.) и шприц-ручка HUMIRA™ (Abbott Labs, ЭбботПарк, штат Иллинойс).
Также возможно использовать микроинжектор для доставки фармацевтических составов настоящего изобретения. Используемый в настоящем документе термин микроинжектор означает устройство для подкожного введения, предназначенное для медленного вливания больших объемов (например до 2,5 мл и выше) лекарственного состава в течение продолжительного периода времени (например примерно 10, 15, 20, 25, 30 или более мин). См., например, U.S. 6,629,949; US 6,659,982; а также Meehan et al., J. Controlled Release 46:107-116 (1996). Микроинжекторы особенно удобны для доставки больших доз лекарственных белков, содержащихся в высоких концентрациях (например примерно 100, 125, 150, 175, 200 или более мг/мл), или вязких растворов.
В одном осуществлении жидкий фармацевтический препарат, содержащий примерно 175 мг/мл±26,25 мг/мл антитела анти-PCSK9 вводится подкожно в объеме примерно 1,14 мл±0,17 мл в предварительно заполненном шприце. В одном осуществлении в качестве шприца используется длинный стеклянный шприц объемом 1 мл с тонкостенной иглой размером 27-G, с поршнем из резины с фторуглеводородным покрытием и резиновым колпачком иглы. В одном осуществлении в качестве шприца используется длинный стеклянный шприц OMPI объемом 1 мл с иглой размером 27-G, с резиновым колпачком иглы FM27 и поршнем из резины с покрытием FLUROTEC® 4023/50.
В одном осуществлении жидкий фармацевтический препарат, содержащий примерно 150 мг/мл±22,5 мг/мл антитела анти-PCSK9 вводится подкожно в объеме примерно 1 мл±0,15 мл в предварительно заполненном шприце. В одном осуществлении в качестве шприца используется длинный стеклянный шприц объемом 1 мл с тонкостенной иглой размером 27-G, с поршнем из резины с фторуглеводородным покрытием и резиновым колпачком иглы. В одном осуществлении в качестве шприца используется длинный стеклянный шприц OMPI объемом 1 мл с иглой размером 27-G, с резиновым колпачком иглы FM27 и поршнем из резины с покрытием FLUROTEC® 4023/50.
Терапевтическое применение фармацевтических составов
Фармацевтические составы настоящего изобретения, среди прочего, применяются для лечения, профилактики или смягчения симптомов любого заболевания или нарушения, связанного с активностью PCSK9, в том числе заболеваний или нарушений, опосредованных PCSK9. К примерам неограничивающих заболеваний и нарушений, которые можно излечивать или предупредить посредством введения фармацевтических составов настоящего изобретения, относятся различные дислипидемии, например гиперхолестеринемия, наследственная гиперхолестеринемия, гиперлипидемия, наследственная гиперлипидемия, дисбеталипопротеинемия, наследственная дисбеталипопротеинемия, гипертриглицеридемия и наследственная гипертриглицеридемия.
Примеры
Приведенные ниже примеры призваны дать специалистам в области полное раскрытие информации и описание того, как следует формулировать и использовать способы и препараты настоящего изобретения, и не призваны ограничивать сферу охвата того, что изобретатели рассматривают как предмет своего изобретения. Были приложены все усилия обеспечить точность в отношении используемых показателей (например количеств, температуры и пр.), но необходимо учитывать некоторые экспериментальные ошибки и отклонения. Если не указано иное, под частями понимаются части в молях, молекулярным ве
- 15 047546 сом называют усредненный молекулярный вес, температура приводится в градусах Цельсия, а давление находится на уровне атмосферного или близко к этому уровню.
Начальные этапы разработки состава включали скрининг органических вспомогательных растворителей, термических стабилизаторов и буферов в жидких и лиофилизованных составах mAb-316P (антител анти-PCSK9 изобретения), чтобы определить вспомогательные вещества, совместимые с белком и повышающие его стабильность, одновременно поддерживая близкую к физиологической осмоляльность и низкую вязкость для внутривенного и подкожного введения. Анализировали также буферные условия, чтобы определить оптимальный рН для максимальной стабильности белка.
Пример 1: разработка состава анти-PCSK1 mAb-316Р.
Проводили скрининг различных буферов, органических вспомогательных растворителей и термических стабилизаторов для выявления вспомогательных веществ, которые повышают стабильность антитела PCSK9. Анализировали также буферные условия, чтобы определить оптимальный рН для максимальной стабильности антитела. Результаты этих исследований использовали для разработки стабильного жидкого состава, а также стабильного лиофилизованного состава, пригодного для клинического использования как при внутривенном (в/в), так и подкожном (п/к) введении. В случае лиофилизованного лекарства был разработан один состав для двойного применения, который можно разводить стерильной водой для инъекций (ВДИ) до концентрации либо 50 мг/мл для в/в или 100 мг/мл для п/к введения. После разведения до 50 мг/мл лекарство можно дополнительно разбавлять в пакете для в/в вливания, содержащем 0,9% хлорида натрия для в/в инъекций. Для жидкого состава концентрация mAb-316P готовили 175±27 мг/мл и 150±23 мг/мл. В одном осуществлении 175±27 мг/мл mAb-316P готовили в 10±1,5 мМ гистидине (рН 6,0±0,3), 0,01%±0,0015% полисорбате 20, 5%±0,75% сахарозе. В одном осуществлении 150±23 мг/мл mAb-316P готовили в 10±1,5 мМ гистидине (рН 6,0±0,3), 0,2%±0,03% или 0,01%±0,0015% полисорбате 20, 10%±1,5% сахарозе.
Пример 2: буфер и рН анти-PCSK1 mAb-316Р.
Для жидких растворов изучали воздействие рН и типа буфера на стабильность антител PCSK9. 2 мг/мл анти-PCSK9 mAb-316P инкубировали при 45°C в одном из следующих 10 мМ буферов: ацетатный (рН 5,0-5,5), цитратный (рН 5,5-6,0), сукцинатный (рН 6,0), гистидиновый (рН 6,0), фосфатный (рН 6,07,5) или Tris (рН 8,0) для оценки воздействия буфера и рН на термическую стабильность белка (таблица 1). Для этого эксперимента каждый из жидких составов объемом 0,35 мл помещали во флакон емкостью 2 мл из боросиликатного стекла типа 1 с пробкой из бутилкаучука с покрытием FLUROTEC® 4432/50. Общее выделенное количество mAb-316P определяли с использованием обращеннофазовой хроматографии. Процент нативной формы mAb-316P по сравнению с агрегированной определяли с помощью эксклюзионной хроматографии. Процент кислых и основных форм mAb-316Р определяли с помощью катионообменной хроматографии. Максимальную стабильность белка отслеживали по данным эксклюзионной хроматографии (ЭХ) и катионообменной хроматографии (КОХ) для состава анти-PCSK9 mAb316P в 10 мМ гистидиновом буфере при рН 6,0.
Оптимальный рН для mAb-316P затем определяли инкубированием 10 мг/мл mAb-316Р при 45°C в гистидиновом буфере в интервале от рН 5,5 до рН 6,5. Максимальную стабильность белка отслеживали по ЭХ и КОХ для составов mAb-316Р в гистидиновом буфере при рН 6,0 (табл. 2). Результаты проведенных анализов показали, что основные пути распада белка связаны с образованием агрегатов, продуктов разложения и различных зарядовых форм. На основании полученных результатов для подготовки жидких и лиофилизованных составов mAb-316Р выбрали 10 мМ гистидиновый буфер при рН 6,0.
Результаты исследований вариантов состава показывают, что в основных условиях (рН >6,5) антиPCSK9 mAb-316P в растворе может подвергаться деамидированию. Напротив, при рН <5,5 наблюдалась повышенная скорость образования вариантов молекулярного веса mAb-316P. На основании этих данных рН буфера, используемого для состава mAb-316P, поддерживается в интервале между рН 5,7 и рН 6,3. Для ускоренных исследований стабильности mAb-316P в этом интервале рН получены аналогичные результаты.
Пример 3: выбор средств защиты от стресса при встряхивании.
Раздельно изучали различные вспомогательные растворители по их способности сводить к минимуму образование частиц в смесях, содержащих mAb-316Р из-за стресса при встряхивании. Анализ мутности лекарственного препарата при встряхивании показал увеличение оптической плотности (OD) при 405 нм после 120 мин встряхивания раствора, содержащего mAb-316P (0,35 мл 25 мг/мл раствора mAb316P, 10 мМ гистидина, рН 6,0±0,2 во флаконе из боросиликатного стекла типа 1 емкостью 2 мл с пробкой из бутилкаучука с покрытием FLUROTEC® 4432/50) (табл. 3). Состав со всеми изученными вспомогательными растворителями препятствовал повышению мутности из-за встряхивания. При этом 20% PEG 300, 10% PEG 300 и 20% пропиленгликоля значительно снижали термическую стабильность mAb316P по данным ЭХ (табл. 4; та же концентрация mAb-316P, буфер и емкость, что и в приведенном выше исследовании встряхивания). Составы с полисорбатом 20, полисорбатом 80, Pluronic F68 и PEG 3350 по результатам ЭХ и КОХ не оказывали заметного эффекта на термическую стабильность mAb-316P, что делает указанные вспомогательные растворители пригодными для использования в составах αнтu-PCSK9
- 16 047546 mAb-316P. Полисорбат 20 выбирали в качестве органического вспомогательного растворителя для подготовки лиофилизованных и жидких составов mAb-316Р, поскольку при этом удавалось обеспечить высокие характеристики стабильности при встряхивании и исследовании термической стабильности mAb316P.
Пример 4: выбор средств защиты от термического стресса.
Раздельно анализировали различные вспомогательные вещества, которые выбирали из перечня, включающего сахара, аминокислоты и неорганические соли, для оптимального увеличения термической стабильности mAb-316P. Итоговая информация по некоторым термическим стабилизаторам, которые включали в исследование, приводится в табл. 5. Для этих экспериментов вспомогательные термические стабилизаторы добавляли в раствор 20 мг/мл mAb-316P в 10 мМ гистидине (0,35 мл во флаконе из боросиликатного стекла типа 1 емкостью 2 мл с пробкой из бутилкаучука с покрытием FLUROTEC® 4432/50). По результатам ЭХ анализа составы, содержащие сахарозу, сорбитол, маннитол и трегалозу демонстрировали наименьшую степень распада mAb-316P. При этом в составах с сорбитолом наблюдалось неожиданное увеличение мутности по сравнению с составами, содержащими сахарозу, трегалозу и маннитол (таблица 5). Несмотря на то что для сахарозы, трегалозы и маннитола не наблюдалось никакого воздействия на образование различных зарядовых форм анти-PCSK9 mAb-316P, оказалось, что маннитол дестабилизирует белок в ходе нескольких циклов замораживания-оттаивания. Таким образом, стабильность mAb-316P в составах с сахарозой и трегалозой была приблизительно одинаковой.
Пример 5: лиофилизованный состав.
Был разработан лиофилизованный состав для повышения стабильности анти-PCSK9 щД.Ь-316Р, в частности по отношению к различным зарядовым формам, и для увеличения максимальных доставляемых концентраций mAb-316P. Различные лиопротекторы добавляли к 0,7 мл 50 мг/мл раствора mAb316P, 10 мМ гистидина во флаконе из боросиликатного стекла типа 1 емкостью 2 мл с пробкой из бутилкаучука с покрытием FLUROTEC® 4432/50, лиофилизировали и анализировали их способность стабилизировать лиофилизованный mAb-316P при инкубации при 50°C. Перед анализом лиофилизованный остаток разводили до 100 мг/мл mAb-316Р. Два лиофилизованных состава с наибольшей стабильностью по данным ЭХ и КОХ содержали: 1) 6% сахарозы или 2) 2% сахарозы и 2% аргинина. Для приготовления лекарственного препарата mAb-316P выбрали 6% сахарозы. Таким образом, лиофилизованный лекарственный препарат на основе анти-PCSK9 mAb-316Р получали лиофилизацией оптимизированного забуференного водного раствора препарата содержащего 10 мМ гистидина, рН 6,0±0,1, 0,1% (вес/об) полисорбата 20, 6% (вес/об) сахарозы и 50 мг/мл анти-PCSK9 mAb-316P. Результаты анализа стабильности такого лиофилизованного препарата при хранении и стрессе приводятся в табл. 7.
Цикл лиофилизации анти-pPCSK9 mAb-316P формировали на основе измеряемой Tg' состава (температура низкотемпературного стеклования), которую определяли с помощью модулированной дифференциальной сканирующей калориметрии при пониженной температуре окружающей среды (мДСК). При первоначальной сушке температура продукта не должна подниматься выше Tg', которая по результатам измерений составляет -27,9°C.
Для получения лиофилизованного препарата mAb-316P во флаконы из стекла типа 1 помещали 5,3 мл 50 мг/мл mAb-316P, 10 мМ гистидина (рН 6,0), 0,1% полисорбата 20, 6% сахарозы и проводили лиофилизацию в следующей последовательности.
1. Температура препарата в процессе загрузки: 5-25°C.
2. Начальное выдерживание: 60 мин при 5°C.
3. Скорость (время) замораживания: 0,5°С/мин (100 мин).
4. Выдерживание: 120 мин при -45°C.
5. Установка вакуума: 100 мТорр.
6. Скорость (время) нагревания для первичной сушки: 0.5°С/мин (40 мин).
7. Температура препарата при первичной сушке: -25°C.
8. Продолжительность первичной сушки: 78 ч.
9. Скорость (время) нагревания для вторичной сушки: 0.2°С/мин (300 мин).
10. Температура препарата при вторичной сушке: 35°C.
11. Продолжительность вторичной сушки: 6 ч.
12. Скорость (время) охлаждения: 0.5°С/мин (20 мин).
13. Выдерживание: 60 мин при 25°C.
14. Заполнение газообразным азотом.
15. Укупорка под вакуумом: 80% атмосферного давления (608000 мТорр).
Если после вторичной сушки и до момента укупорки требуется продолжительное хранение, температура в лиофилизатор устанавливается на уровне 2-8°C. Лиофилизованный лекарственный препарат, который был получен в ходе описанных выше завершающих циклов, имел хороший внешний вид, низкое содержание влаги (0,3%), время растворения меньше 4 мин без признаков мутности разведенного раствора.
Внешний вид лиофилизованного остатка не менялся, если лекарственный препарат mAb-316P
- 17 047546 (mAb-316P DP) выдерживали 2 месяца при 50°C или хранили 3 месяца при 5°C. Не отмечалось воздействия на рН, внешний вид или мутность разведенного лекарственного препарата mAb-316P, и не отмечалось особых различий в количествах выделенного mAb-316P. Через 2 месяца после инкубации при 50°C лиофилизованный лекарственный препарат mAb-316P был на 1,1% более разложившимся по данным ЭХ ВЭЖХ и на 8,3% более разложившимся по данным КОХ ВЭЖХ. Не отмечалось заметного разложения лиофилизованного лекарственного препарата mAb-316P при хранении в течение 3 месяцев при 5°C. Для всех подвергшихся стрессовому воздействию образцов не отмечалось заметного снижения биологической активности по результатам биопроб анти-PCSK9.
Пример 6: жидкие и восстановленные препараты mAb-316Р.
Существует два метода восстановления лиофилизованного лекарственного препарата mAb-316P в зависимости от способа введения. Для в/в введения лекарственный препарат mAb-316P разводят 5,0 мл стерильной ВДИ с образованием 5,3 мл раствора, содержащего 50 мг/мл mAb-316P, 10 мМ гистидина, рН 6,0, 0,1% (вес/об) полисорбата 20 и 6% (вес/об) сахарозы. Для п/к введения лекарственный препарат mAb-316P разводят 2,3 мл стерильной ВДИ с образованием 2,7 мл раствора, содержащего 100 мг/мл REGN727, 20 мМ гистидина, рН 6,0, 0,2% (вес/об) полисорбата 20 и 12% (вес/об) сахарозы. Доступный для отбора объем составляет 4,8 мл для в/в и 2,0 мл для п/к введения; остаток разведенного раствора 0,7 мл оставляют во флаконе для п/к.
В альтернативном варианте жидкий mAb-316P готовят в виде жидкого препарата без промежуточного этапа лиофилизации. Жидкие препараты mAb-316Р имеют концентрацию 150 мг/мл (±15%) или 175 мг/мл (±15%) анти-PCSK9 mAb-316Р в 10±1,5 мМ гистидине (рН 6,0±0,3), полисорбате 20 при 0,01%±0,0015% или 0,2%±0,03%, сахарозы при 5%±0,75% или 10%±1,5%, а также в случае состава 175 мг/мл - аргинин при 50±7,5 мМ.
Ahtu-PCSK9 mAb-316P оказался стабильным при стерильном фильтровании. Для приготовления клинических препаратов использовали фильтрационную установку Millipore MILLIPAK, а для исследований применяли фильтр аналогичного состава (Millipore MILLEX DURAPORE). По сравнению охранением в стеклянном флаконе стабильность состава лекарственного препарата mAb-316P (mAb-316P FDS) менялась незначительно при хранении в полипропиленовой пробирке, полистирольной пробирке, поликарбонатной пробирке или в стеклянном флаконе со стальным шариковым клапаном (табл. 8).
Пример 7: жидкие препараты в предварительно заполненных шприцах.
Исследования по разработке состава проводили с целью приготовления высококонцентрированных жидких составов mAb-316P, которые могут использоваться в предварительно заполненных шприцах (PFS) для п/к введения. Результаты, полученные на стадии разработки лиофилизованного препарата REGN727, продемонстрировали, что оптимальным буфером, рН, вспомогательным растворителем и термическим стабилизатором являлись гистидин, рН 6,0, полисорбат 20 и сахароза, соответственно (см. выше). Эти же вспомогательные вещества использовались для разработки составов лекарственных препаратов в концентрации 150 мг/мл и 175 мг/мл mAb-316P. Для снижения вязкости состава к лекарственному препарату в концентрации 175 мг/мл mAb-316P добавляли аргинин. Стабильность при стрессовом воздействии лекарственного препарата 150 и 175 мг/мл mAb-316P изучали в длинных стеклянных шприцах Nuova OMPI емкостью 1 мл с предварительным заполнением (PFS) и сравнивали со стабильностью лекарственного препарата 150 и 175 мг/мл в контрольных стеклянных флаконах. После инкубирования лекарственного препарата 150 или 175 мг/мл mAb-316P при 45°C не наблюдалось различий в физической или химической деградации между OMPI PFS и контрольным стеклянным флаконом. Полученные данные показывают, что составы лекарственных препаратов 150 и 175 мг/мл анти-PCSK9 mAb-316P достаточно стабильны для использования в PFS.
Пример 8: стабильность составов лекарственных препаратов mAb-316Р.
Исследования стабильности проводили для выяснения стабильности при хранении и воздействии стрессовых условий составов 150 и 175 мг/мл mAb-316P. Для оценки физической стабильности mAb316P использовали анализ мутности и ОФ ВЭЖХ. Физическая стабильность определяется как восстановление растворимых форм анти-PCSK9 mAb-316P в растворе. Потеря белка может быть связана с осаждением белка или поверхностной адсорбцией. Наличие частиц в растворе можно регистрировать визуально или по измерениям оптической плотности (OD) на 405 нм (измерения мутности). В последнем анализе увеличение OD указывает на повышение мутности из-за образования твердых частиц. Присутствие твердых частиц, регистрируемое по измерениям OD, свидетельствует о том, что образец не в состоянии оставаться стабильным. Восстановление mAb-316P регистрируется с помощью ОФ ВЭЖХ. При анализе ОФ ВЭЖХ антитело анти-PCSK9 mAb-316P элюируется из обращеннофазовой колонки одним пиком. Концентрация каждого испытываемого образца определялась по площади элюируемого пика антитела mAb316P по сравнению с данными калибровочной кривой, построенной с использованием стандартов mAb316Р с фиксированной нагрузкой белка.
Химическая стабильность определяется по сохранению химической структуры антитела антиPCSK9 (mAb-316P) в образце. Химическая нестабильность в значительной мере может быть отнесена к образованию ковалентно модифицированных форм белка (например ковалентных агрегатов, продуктов
- 18 047546 распада или различных заряженных форм), а также нековалентно модифицированных форм белка (например нековалентных агрегатов). К настоящему времени единственными зарегистрированными продуктами распада mAb-316P были соединения, которые отличаются либо по молекулярному весу, либо по заряду. Продукты распада с более высоким и более низким молекулярным весом можно отделить от нативного mAb-316P с помощью ЭХ ВЭЖХ. Процент нативного mAb-316P в эксклюзионном хроматографическом методе определяется отношением площади нативного пика к суммарной площади всех пиков антитела mAb-316P.
Различные заряженные формы mAb-316P отделяют от нативного mAb-316P с помощью катионообменной хроматографии. Пики, которые элюируются с колонки КОХ ВЭЖХ с временами удерживания до главного пика, маркируются как кислые пики, а те, которые элюируются с колонки КОХ ВЭЖХ со временами удерживания после главного пика, маркируются как основные пики. Процент распавшегося mAb-316P в катионнообменном хроматографическом методе определяется изменением относительного процента площадей главного, кислого и основного пиков по сравнению с суммарной площадью всех пиков mAb-316P.
Оценка mAb-316P в условиях ускоренного исследования стабильности проводилась в рамках воздействия на антитело различных факторов стресса. В таких тестах используются экстремальные условия обращения, в которых состав лекарственного препарата может оказаться в процессе производства лекарства. Состав лекарственного препарата mAb-316P помещали в поликарбонатные флаконы емкостью 5 мл для встряхивания, циклов замораживания/оттаивания и моделирования условий хранения в замороженном состоянии. Для исследования стрессовой стабильности при высоких температурах составы лекарственных препаратов mAb-316P помещали в стеклянные флаконы.
Пример 9: исследования стабильности составов лекарственных препаратов (FDS) при хранении.
Состав лекарственного препарата 150 мг/мл mAb-316P (FDS; 0,5 мл в 5 мл поликарбонатном флаконе; 150 мг/мл антитела mAb-316P, 10 мМ гистидин (рН 6,0), 0,2% полисорбат 20 и 10% сахарозы) оказался физически и химически стабильным при хранении при <-20°C в течение 12 месяцев. По данным эксклюзионной и ионообменной хроматографии не обнаруживалось заметных потерь mAb-316Р и заметной химической деградации антитела. Более 97% восстановленного mAb-316P было в нативной структуре, как показали результаты эксклюзионной хроматографии, и более 56% восстановленного mAb-316Р было в главной заряженной форме, как показали результаты катионообменной хроматографии. Результаты приводятся в табл. 9.
Состав лекарственного препарата 175 мг/мл mAb-316P (FDS; 0,75 мл в 5 мл поликарбонатном флаконе; 175 мг/мл антитела mAb-316P, 10 мМ гистидин (рН 6,0), 0,01% полисорбат 20 и 5% сахарозы) оказался физически и химически стабильным при хранении при <-20°C в течение 3 месяцев. По данным эксклюзионной и ионообменной хроматографии не обнаруживалось заметных потерь mAb-316Р и заметной химической деградации антитела. Более 96% восстановленного mAb-316P было в нативной структуре, как показали результаты эксклюзионной хроматографии, и более 56% восстановленного mAb-316Р было в главной заряженной форме, как показали результаты катионообменной хроматографии. Результаты приводятся в табл. 10.
Пример 10: исследования стабильности составов лекарственных препаратов при стрессовом воздействии.
Исследования стабильности при стрессовом воздействии проводили для состава лекарственного препарата 150 мг/мл mAb-316P (FDS) (0,35 мл -0,5 мл 150 мг/мл mAb-316Р, 10 мМ гистидина (рН 6,0), 0,2% полисорбата 20, 10% сахарозы) и состава лекарственного препарата 175 мг/мл mAb-316P (0,5 мл 1,7 мл 175 мг/мл mAb-316Р, 10 мМ гистидина (рН 6,0), 0,01% полисорбата 20, 5% сахарозы, 50 мМ аргинина). Исследования при высокой температуре проводили во флаконах из боросиликатного стекла типа 1 емкостью 2 мл с бутил каучуковой пробкой с покрытием FLUROTEC® 4432/50; остальные исследования проводили в поликарбонатных флаконах емкостью 5 мл. Составы лекарственных препаратов 150 мг/мл и 175 мг/мл анти-PCSK9 mAb-316P оказались физически и химически стабильными при встряхивании в течение двух часов. Раствор оставался визуально прозрачным, не отмечались потери белка и не образовывались соединения с другим молекулярным весом или различные заряженные формы (табл. 11 и 12). МАЬ-316Р также оказалось физически и химически стабильным после восьми циклов замораживания до -80°C и оттаивания до комнатной температуры. После восьми циклов замораживания/оттаивания раствор белка оставался на вид прозрачным, и потери белка не регистрировались. Анализ с помощью ЭХ или КОХ не выявил образования соединений с другим молекулярным весом (растворимые агрегаты или продукты распада) или различных заряженных форм, соответственно.
Несмотря на то что составы лекарственных препаратов 150 и 175 мг/мл анти-PCSK9 mAb-316Р были физически стабильными при инкубировании при 37°C или 45°C в течение 28 дней, тем не менее наблюдалась определенная доля химического распада (табл. 11 и 12). Результаты испытаний в условиях стрессового воздействия показали, что основные пути распада связаны с образованием агрегатов, продуктов разложения и различных зарядовых форм. Как и ожидалось, скорость распада антитела антиPCSK9 mAb-316P была медленнее при 37°C, чем при 45°C. Не отмечалось заметных изменений физиче
- 19 047546 ской или химической стабильности составов лекарственных препаратов 150 или 175 мг/мл mAb-316P при инкубировании в течение 28 дней при температуре 25°C.
Пример 11: стабильность при хранении лекарственного препарата (DP).
В лекарственном препарате 150 мг/мл mAb-316P содержится 10 мМ гистидина, рН 6,0, 0,01% полисорбата 20, 10% сахарозы и 150 мг/мл антитела αнти-PCSK9 mAb-316Р. В лекарственном препарате 175 мг/мл mAb-316P содержится 10 мМ гистидина, рН 6,0, 0,01% полисорбата 20, 5% сахарозы, 50 мМ аргинина и 175 мг/мл антитела aнти-PCSK9 mAb-316P. He отмечалось никаких изменений в физической и химической стабильности лекарственного препарата 150 мг/мл или 175 мг/мл mAb-316Р (DP) при хранении при 5°C в течение 6 месяцев в предварительно заполненном шприце (PFS; длинный стеклянный шприц OMPI емкостью 1 мл с тонкостенной иглой размера 27 и резиновым защитным колпачком иглы FM27 с резиновым поршнем с покрытием FLUROTEC® 4023/50) (табл. 13 и 14). Растворы сохраняли визуальную прозрачность, не наблюдались потери белка, и после воздействия перечисленных факторов стресса на отмечалось никаких изменений рН. Кроме того, не регистрировалось существенных изменений в соединениях с различным молекулярным весом или различных зарядовых формах по данным ЭХ и КОХ, соответственно.
Пример 12: стабильность лекарственного препарата (DP) при стрессовом воздействии.
Стабильность лекарственных препаратов 150 мг/мл mAb-316P и 175 мг/мл mAb-316Р анализировали при инкубировании предварительно заполненных шприцов при 25 и 45°C. Каждый из соответствующих лекарственных препаратов был физически стабильным при инкубировании в течение 28 дней при 45°C или в течение 6 месяцев при 25°C (табл. 13 и 14). Растворы сохраняли визуальную прозрачность, не наблюдались потери белка, и после воздействия перечисленных факторов стресса не отмечалось никаких изменений рН. При этом агрегаты и различные заряженные формы регистрировались при инкубировании белка при 45 и 25°C. Такие стрессовые испытания показывают, что эти пути разложения лекарственного препарата являются основными. Для лекарственного препарата 150 мг/мл доля агрегатов mAb-316P после инкубирования в течение 28 дней при 45°C увеличилась на 1,9%, а доля кислых форм возросла на 19,1%. Снижение уровня химического распада отмечалось при инкубировании белка при 25°C. Отмечалось увеличение относительного количества агрегатов на 0,8%, а кислых форм - на 10,3% через 6 месяцев инкубирования при 25°C. Для лекарственного препарата 175 мг/мл доля агрегатов mAb-316P после инкубирования в течение 28 дней при 45°C увеличилась на 1,8%, а доля кислых форм возросла на 17,0%. Снижение уровня химического распада отмечалось при инкубировании белка при 25°C. Отмечалось увеличение относительного количества агрегатов на 0,7%, а кислых форм - на 9,4% через 6 месяцев инкубирования при 25°C. Для обоих лекарственных препаратов 150 мг/мл и 175 мг/мл доля агрегатов не отмечалось значительных изменений стабильности mAb-316P после инкубирования в течение 1 месяца при 25°C.
Пример 13: объемы заполнения.
Вводимый объем предварительно заполненного шприца (PFS), содержащего 150 мг/мл лекарственного препарата REGN727 составляет 1,0 мл. Вводимый объем PFS, содержащего 175 мг/мл лекарственного препарата REGN727 составляет 1,14 мл. Ни в один из PFS не включались излишки, поскольку мертвый объем шприца пренебрежимо мал (от 0,005 до 0,01 мл).
Пример 14: стабильность mAb-316P при хранении в различных материалах.
Ahtu-PCSK9 mAb-316P оказался стабильным при стерильном фильтровании. Для исследования и для приготовления клинических препаратов использовали фильтрационную установку MILLIPORE MILLIPAK. По сравнению с хранением в стеклянных флаконах стабильность составов 150 и 175 мг/мл лекарственного препарата mAb-316P менялась незначительно при хранении в полипропиленовой пробирке, полистирольной пробирке, поликарбонатной пробирке или в стеклянном флаконе с кольцом из нержавеющей стали (табл. 15 и 16). Несмотря на наблюдаемый распад при инкубировании состава лекарственного препарата при 40°C в течение 14 дней, не наблюдалось существенных различий по степени разложения mAb-316P между контролем, стеклянным флаконом и воздействием пластиковых контейнеров и нержавеющей стали.
Пример 15: анализ антитела анти-PCSK9 mAb-316Р.
По крайней мере две партии mAb-316P (партия 1 и партия 2) анализировали с помощью эксклюзионной хроматографии и лазерного светового рассеяния с кратными углами (ЭХ ЛСРКУ) - аналитического метода, который позволяет оценить молярную массу белка или гликопротеина. Партии 1 и 2 имели соответствующие молярные массы 154,5 и 154,6 кДа. В других партиях молярные массы находились в диапазоне от 154,4 кДа до 154,8 кДа (среднее примерно 155 кДа) для главного пика, который элюировался с носителя ЭХ. На такой главный пик приходилось примерно 96,7-99,2% суммарной площади пика белка, и это соответствует интактному мономеру mAb-316P (то есть нативному в соответствии с терминологией настоящего документа).
mAb-316Р анализировали капиллярным изоэлектрическим фокусированием (КИЭФ), чтобы определить изоэлектрические точки главных составляющих изоформ. pI и средняя площадь пика (% от суммарной площади пиков) для образцов mAb-316Р по данным КИЭФ приведены в табл. 17. В каждой партии присутствовал главный пик (пик 5) с расчетным pI примерно 8,5, который присутствовал в концентраци
- 20 047546 ях 66,4% и 68,0% в партиях 1 и 2, соответственно. Преобладающая форма (пик 5) с наибольшей вероятностью представляет собой интактное, полностью гликозилированное антитело без С-терминального лизина (то есть главную заряженную форму в соответствии с терминологией настоящего документа).
Масс-спектрометрический (МС) анализ восстановленных триптических пептидных карт mAb-316P для партии 1 и партии 2 позволил подтвердить наличие единственного сайта гликозилирования, Asn298, в домене Fc обеих партий. Основные ковалентно связанные гликановые формы этого сайта гликозилирования приводятся в табл. 18. В целом, было установлено, что обе партии содержат сложные 2антенарные гликаны, большинство которых фукозилированы при Asn298. При этом относительное количество фукозилированного агалактозила (G0), содержащего сахарные цепочки, в партии 2 было несколько больше по сравнению с количеством такой гликоформы в партии 1. Напротив, относительные количества фукозилированного дигалактозила (G2) и фукозилированного моногалактозила (G1), содержащие сахарные цепочки в партии 2 меньше по сравнению с относительными количествами таких сахарных цепочечных структур в партии 1. Анализ результатов ЖХ/МС двух образцов лекарственных препаратов (пик 16) также позволил выявить 2,9 и 8,4% пептида тяжелой цепи без сайта гликана при Asn298 в партии 1 и партии 2, соответственно.
Анализировались профили гликана, полученные с помощью ВЭЖХ после высвобождения олигосахаридов из каждой из двух партий mAb-316P. В каждой хроматограмме производные олигосахаридов подразделялись на две главные группы: нефукозилированные 2-антенарные формы и фукозилированные 2-антенарные формы. В каждой группе (фукозилированные и нефукозилированные) олигосахариды дополнительно разбивали на дигалактозильные (G2), моногалактозильные (G1) и агалактозильные (G0) формы. Структурные отнесения в олигосахаридах были получены с помощью время-пролетной массспектрометрии с матричной лазерной десорбцией/ионизацией. Интегрирование каждого пика в двух хроматограммах показало, что уровень фукозилирования в двух партиях mAb-316P был в целом достаточно высоким, при этом в партиях 1 и 2 отмечалось 80,0 и 86,9% фукозилирования.
Несмотря на близкий совокупный процент фукозилирования двух партий, отмечались количественные различия в относительном содержании каждой из гликановых форм, присутствующих в двух партиях (табл. 19). В партии 1 для фукозилированных гликановых структур G0, G1 и G2 регистрировали процент площадей пиков 34,4, 39,6 и 11,7%, соответственно. Напротив, процент площадей пиков в партии 2 составлял 45,8, 33,3 и 7,1% для фукозилированных гликоформных структур G0, G1 и G2, соответственно, указывая на различия в степени галактозилирования между двумя партиями. Пик гликана с высоким содержанием маннозы (гликан man5) (пик 2) регистрировался с относительным содержанием 1,8-2,9% по сравнению с общим количеством сахарной цепочки, регистрируемой в обеих партиях (табл. 19). Всего девять неидентифицированных пиков с процентным соотношением площадей пиков от 0,5 до 1,5% также регистрировалось в обеих партиях, проанализированных таким методом, и они составляют <3% суммарной площади гликановых пиков, выявленных в каждой партии. Анализ эквимолярной смеси двух партий не выявил новых пиков, и процентная доля площадей для всех пиков в смеси хорошо коррелировала с ожидаемыми значениями по результатам раздельного анализа каждой партии (табл. 19).
Таблица 1
Влияние буфера и рН на стабильность mAb-316P при 45°C в течение 28 дней
| рН/буфер | Мутность1 | Всего (мг/мл) | % нативног 0 | % а гр. | % главная | % кислая | % основная |
| без инкубации2 | 0,00 | 1,8 | 98,1 | 0,3 | 57,0 | 33,0 | 10,0 |
| pH 8,0, Tris | 0,00 | 1,7 | 88,9 | 0,8 | 15,2 | 82,4 | 2,4 |
| pH 8,0, фосфат | 0,01 | 2,0 | 89,4 | 1,3 | н.д. | н.Д. | н.Д. |
| pH 7,5, фосфат | 0,01 | 1,9 | 91,7 | 0,9 | н.д. | н.Д. | н.Д. |
| pH 7,0, фосфат | 0,01 | 2,1 | 92,4 | 0,7 | 16,7 | 78,8 | 4,5 |
| pH 6,5, фосфат | 0,00 | 2,0 | 93,2 | 0,6 | 25,0 | 68,3 | 6,6 |
| pH 6,0, фосфат | 0,00 | 1,8 | 93,9 | 0,3 | 29,8 | 62,3 | 8,0 |
| pH 6,0, гистидин | 0,00 | 1,9 | 94,5 | 0,0 | 36,9 | 54,0 | 9,1 |
| pH 6,0, сукцинат | 0,00 | 1,9 | 93,1 | 0,4 | 31,9 | 59,8 | 8,3 |
| pH 6,0, цитрат | 0,00 | 1,9 | 95,1 | 0,4 | 32,1 | 58,1 | 9,9 |
| pH 5,5, цитрат | 0,00 | 2,1 | 94,6 | 0,4 | 28,0 | 62,0 | 9,9 |
| pH 5,5, ацетат | 0,00 | 2,0 | 92,4 | 0,2 | 34,5 | 56,9 | 8,5 |
| pH 5,0, ацетат | 0,00 | 1,8 | 93,0 | 0,2 | 31,1 | 57,5 | 11,4 |
1 Мутность = изменение OD на 405 нм по сравнению с исходным веществом.
2 Средние значения неинкубированных образцов для всех 12 составов.
- 21 047546
Таблица 2
Влияние рН на 10 мг/мл mAb-316P, 10 мМ гистидин при 45°C в течение 28 дней
| рН/буфер | Мутность1 | Всего (мг/мл) | % нативного | % агр. | % главная | % кислая | % основная |
| без инкубации 2 | 0,00 | 9,5 | 98,1 | 0,2 | 57,8 | 31,1 | 11,1 |
| pH 5,5 | 0,01 | 9,5 | 94,3 | 0,5 | 34,7 | 52,2 | 13,1 |
| pH 6,0 | 0,01 | 9,7 | 94,7 | 0,9 | 37,5 | 51,8 | 10,6 |
| pH 6,5 | 0,01 | 10,1 | 93,4 | 1,8 | 35,7 | 55,2 | 9,1 |
1 Мутность = изменение OD на 405 нм по сравнению с исходным веществом.
2 Средние значения неинкубированных образцов для всех 3 составов.
Таблица 3
Влияние вспомогательных растворителей на 25 мг/мл mAb-316P при встряхивании в течение 120 мин
| Органический вспомогательн ый растворитель | Мутность1 | Всего (мг/мл) | % нативног 0 | % агр. | % главная | % кислая | % основная |
| Без встряхивания2 | 0,00 | 25,6 | 97,3 | 0,5 | 50,6 | 39,2 | 10,3 |
| Без вспомогательн ого растворителя | 0,10 | 25,6 | 97,3 | 0,5 | 51,1 | 39,0 | 9,9 |
| 0,2% полисорбата 20 | 0,01 | 24,7 | 97,2 | 0,5 | 51,1 | 38,9 | 10,1 |
| 0,2% полисорбата 80 | 0,01 | 24,7 | 97,3 | 0,5 | 50,9 | 38,9 | 10,2 |
| 0,2% Pluronic F68 | 0,01 | 25,2 | 96,9 | 0,5 | 50,5 | 39,2 | 10,3 |
| 3% PEG 3350 | 0,01 | 25,3 | 97,1 | 0,5 | 50,7 | 39,0 | 10,2 |
| 1,5% PEG 3350 | 0,01 | 24,9 | 97,1 | 0,5 | 50,8 | 39,1 | 10,1 |
| 20% PEG 300 | 0,00 | 26,7 | 97,0 | 0,6 | 48,8 | 40,5 | 10,7 |
| 10% PEG 300 | 0,01 | 25,7 | 97,2 | 0,5 | 49,9 | 39,8 | 10,3 |
| 20% пропиленглико ля | 0,01 | 25,8 | 96,9 | 0,5 | 51,1 | 38,6 | 10,3 |
1 Мутность = изменение OD на 405 нм по сравнению с исходным веществом.
2 Средние значения образцов без встряхивания для всех 9 составов.
Таблица 4
Влияние вспомогательных растворителей на 25 мг/мл mAb-316P, инкубированного при 45°C в течение 28 дней
| Органический вспомогатель ный растворитель | Мутное ть1 | рн | Всего (мг/мл) | % нативно го | % агр. | % главная | % кислая | % основна я |
| без инкубации2 | 0,00 | 6,1 | 25,6 | 97,3 | 0,5 | 50,6 | 39,2 | 10,3 |
| Без вспомогатель ного растворителя | 0,02 | 6,2 | 24,9 | 94,5 | 0,7 | 34,8 | 54,7 | 10,5 |
| 0,2% полисорбата 20 | 0,03 | 6,2 | 24,3 | 94,6 | 0,5 | 35,2 | 54,3 | 10,5 |
- 22 047546
| 0,2% полисорбата 80 | 0,02 | 6,2 | 24,3 | 94,8 | 0,6 | 35,1 | 54,5 | 10,4 |
| 0,2% Plutonic F68 | 0,03 | 6,1 | 24,6 | 94,7 | 0,6 | 33,8 | 55,6 | 10,6 |
| 3% PEG 3350 | 0,03 | 6,2 | 24,8 | 95,0 | 0,7 | 35,9 | 53,5 | 10,6 |
| 1,5% PEG 3350 | 0,02 | 6,2 | 24,4 | 94,8 | 0,6 | 36,0 | 53,5 | 10,5 |
| 20% PEG 300 | 0,12 | 4,8 | 25,4 | 88,8 | 4,2 | н.д. | н.Д. | н.Д. |
| 10% PEG 300 | 0,09 | 5,4 | 25,0 | 93,7 | 0,9 | 24,1 | 67,0 | 8,9 |
| 20% пропиленглик ОЛЯ | 0,03 | 6,1 | 24,6 | 89,9 | 5,6 | 34,6 | 54,2 | 11,2 |
1 Мутность = изменение OD на 405 нм по сравнению с исходным веществом.
2 Средние значения образцов без встряхивания для всех 9 составов.
Таблица 5
Влияние стабилизатора на 20 мг/мл mAb-316P, 10 мМ гистидин при 45°C в течение 28 дней
| Вспомогател ьное вещество | Визуа льно | Мутное ть1 | рн | Всего (мг/мл) | % нативн ого | % а гр. | % главна я | % кисла я | % основ ная |
| без инкубации2 3 | Годен | 0,00 | 6,0 | 20,2 | 97,7 | 0,5 | 51,1 | 39,3 | 9,6 |
| Без стабилизатор а | Годен | 0,02 | 6,1 | 19,8 | 93,6 | 2,0 | 33,5 | 56,5 | 10,1 |
| 150 мМ NaCI | Не год ен | 0,03 | 6,0 | 20,0 | 91,0 | 4,6 | 35,3 | 51,0 | 13,6 |
| 20% сахарозы | Годен | 0,04 | 6,0 | 22,6 | 94,4 | 1,0 | 32,1 | 57,0 | 10,9 |
| 20% сорбитола | Годен | 0,16 | 5,8 | 21,8 | 94,3 | 1,0 | 23,5 | 67,4 | 9,1 |
| 10% маннитола | Годен | 0,02 | 6,0 | 21,2 | 94,8 | 0,9 | 34,4 | 54,5 | 11,1 |
| 20% трегалозы | Годен | 0,05 | 6,0 | 22,7 | 94,7 | 0,5 | 33,2 | 56,6 | 10,2 |
| 5% глицерина | Годен | 0,10 | 5,9 | 20,8 | 90,2 | 5,4 | н.д. | н.Д. | н.Д. |
| 3% аргинина | Годен | 0,02 | 6,1 | 21,1 | 92,9 | 3,0 | 37,5 | 49,2 | 13,3 |
| 3% глицина | Годен | 0,03 | 6,1 | 19,8 | 93,7 | 1,7 | 31,0 | 58,0 | 10,9 |
1 Мутность = изменение OD на 405 нм по сравнению с исходным веществом.
2 Средние значения неинкубированных образцов для всех 9 составов.
Таблица 6
Влияние лиопротекторов на лиофилизованный mAb-316P, инкубированный при 50°C в течение 28 дней
| Вспомогательное вещество | Визуа льно | Мутное ть1 | рн | Всего (мг/мл) | % натив ного | % агр. | % главн ая | % кисла я | % основ ная |
| без инкубации | Годен | 0,00 | 6,0 | 100 | 97,1 | 1,2 | 51,0 | 38,3 | 10,7 |
| Без | Негод | 0,09 | 6,1 | 100 | 70,0 | 28,5 | 24,2 | 35,1 | 40,7 |
| лиопротектора | ен | ||||||||
| 2% сахарозы | Годен | 0,02 | 6,1 | 104 | 90,7 | 7,4 | 37,4 | 39,1 | 23,6 |
| 6% сахарозы | Годен | 0,00 | 6,1 | 105 | 96,1 | 1,8 | 46,8 | 39,2 | 14,1 |
| 2% сахар., 2% Gly | Годен | 0,02 | 6,0 | 114 | 94,5 | 3,4 | 40,9 | 42,4 | 16,8 |
| 2% сахар., 2% Arg | Годен | 0,00 | 5,9 | 109 | 95,9 | 2,0 | 47,2 | 38,4 | 14,4 |
1 Мутность = изменение OD на 405 нм по сравнению с исходным веществом.
2 Лиофилизованный лекарственный препарат, разведенный до 100 мг/мл REGN727 до анализа.
3 Средние значения для исходного материала 4 составов.
- 23 047546
Таблица 7
Стабильность лиофилизованного лекарственного препарата, разведенного до 100 мг/мл
| Температура хранения | Без хранения | 5°С 4 мес. | 25°С 3 мес. | 40 °C 3 мес. | 50°С 2 мес. |
| Мутность1 | 0,00 | 0,01 | 0,01 | 0,02 | 0,02 |
| pH | 6,2 | 6,3 | 6,2 | 6,2 | 6,2 |
| % суммарного выделения | 100 | 104 | 100 | 98 | 105 |
| % нативного | 96,0 | 96,5 | 96,2 | 95,7 | 94,9 |
| % агрегата | 1,7 | 1,4 | 1,7 | 2,4 | 2,9 |
| % главная | 50,6 | 51,5 | 49,2 | 46,2 | 43,5 |
| % кислая | 38,0 | 37,9 | 38,2 | 39,5 | 40,1 |
| % основная | 11,4 | 10,5 | 12,7 | 14,3 | 16,2 |
| Биопроба (% этап. станд.)2 | 146 | НП | НП | НП | 152 |
1 Мутность = изменение OD на 405 нм по сравнению с исходным веществом.
ТЛ _ _ _ _ ГП ^Г\Г\П/ _ ___ ____ _ __
Критерии приемлемости: 50-200% от эталонного стандарта.
Таблица 8
Совместимость 50 мг/мл mAb-316P после 14 дней при 40°C и влажности 75%
| Хранение | Без хранения | Стекло | Полипропилен | Полистирол | Поликарбонат | Нержаве ющая сталь |
| Мутность1 | 0,00 | 0,00 | 0,01 | 0,00 | 0,01 | 0,01 |
| % суммы | 100 | 98 | 99 | 104 | 103 | 98 |
| % нативного | 97,0 | 96,3 | 96,3 | 96,2 | 96,2 | 96,1 |
| % агрегата | 2,0 | 1,9 | 1,9 | 2,0 | 2,0 | 2,0 |
| % главная | 50,8 | 45,7 | 44,9 | 45,2 | 45,6 | 45,5 |
| % кислая | 38,1 | 42,8 | 43,6 | 43,0 | 42,5 | 43,2 |
| % основная | 11,2 | 11,5 | 11,6 | 11,9 | 11,8 | 11,2 |
1 Мутность = изменение OD на 405 нм по сравнению с исходным веществом.
Таблица 9
Стабильность 150 мг/мл анти-PCSK9 mAb-316P в течение 12 месяцев при -80°C
| Температура хранения Мутность (OD 405 нм) | Контрол ь 0,00 | -80°С 0,00 | -30°С 0,01 | -20°С 0,01 |
| % общего выделения mAb-316P | 100 | 104 | 108 | 111 |
| % выделения нативного | 97,5 | 97,3 | 97,2 | 97,2 |
| % выделения агрегатов | 1,7 | 1,8 | 1,8 | 1,9 |
| % выделения главной | 56,2 | 56,5 | 56,4 | 56,3 |
| % выделения кислой | 26,5 | 25,7 | 25,7 | 25,4 |
| % выделения основной | 17,4 | 17,9 | 17,9 | 18,2 |
Таблица 10
Стабильность 175 мг/мл анти-PCSK9 mAb-316P в течение 3 месяцев при -80°C
| Температура хранения | Контрол ь | -80°С | -30°С | -20°С |
| Мутность (OD 405 нм)1 | 0,00 | 0,01 | 0,01 | 0,01 |
| % общего выделения REGN727 (ОФ ВЭЖХ) | 100 | 100 | 104 | 101 |
| % выделения нативного REGN727 (ЭХ ВЭЖХ) | 96,2 | 96,5 | 96,4 | 96,3 |
| % выделения агрегированного REGN727 (ЭХ ВЭЖХ) | 2,7 | 2,5 | 2,6 | 2,7 |
| % выделения главной REGN727 (КОХ ВЭЖХ) | 58,5 | 56,2 | 56,6 | 56,7 |
| % выделения кислой REGN727 (КОХ ВЭЖХ) | 29,4 | 29,4 | 29,4 | 29,4 |
| % выделения основной REGN727 (КОХ ВЭЖХ) | 12,2 | 14,5 | 14,0 | 13,9 |
1 Мутность = изменение OD на 405 нм по сравнению с исходным веществом.
- 24 047546
Таблица 11
Стабильность 150 мг/мл mAb-316P FDS1 при стрессовом воздействии
| Стресстест | Без стресс а2 | Встряхивай ие | 45°С инкубирован ие | 37°С инкубирован ие | 25°С инкубирован ие | Замор ,/отта ив. | ||||
| Время воздейств ИЯ | 0 мин | 60 мин | 120 мин | 14 дн | 28 дн | 14 дн | 28 дн | 14 дн | 28 дн | 8 циклов |
| Внешний вид | Годен | Годен | Г оден | Годен | Годен | Годен | Годен | Годен | Годен | Годен |
| Мутность3 | 0,00 | 0,00 | 0,00 | 0,02 | 0,03 | 0,00 | 0,01 | 0,00 | 0,00 | 0,00 |
| pH % суммарног | 6,0 | 6,0 | 6,0 | 6,0 | 6,0 | 6,0 | 6,0 | 6,0 | 6,0 | 6,0 |
| о | 100 | 101 | 102 | 98 | 98 | 99 | 98 | 100 | 99 | 101 |
| выделени я % выделени я | 97,4 | 97,5 | 97,2 | 94,2 | 92,4 | 95,7 | 95,1 | 96,7 | 96,2 | 97,1 |
| нативного % выделени я | 1,6 | 1,7 | 2,1 | 3,4 | 4,1 | 2,4 | 2,6 | 2,0 | 2,2 | 1,7 |
| агрегатов % | ||||||||||
| выделени я главной % | 53,6 | 53,7 | 54,7 | 38,7 | 29,0 | 46,3 | 39,5 | 51,5 | 49,1 | 53,9 |
| выделени я кислой | 27,2 | 26,1 | 25,9 | 39,5 | 48,6 | 31,9 | 36,9 | 27,8 | 28,9 | 26,5 |
| % выделени я основной | 19,3 | 20,2 | 19,5 | 21,8 | 22,5 | 21,8 | 23,7 | 20,7 | 22,0 | 19,6 |
| Биопроба (% отн. акт.)4 | 84 | НП | 84 | НП | 85 | НП | 82 | НП | 98 | 81 |
1 10 мМ гистидин, рН 6.0, 0,2% полисорбат 20, 10% сахарозы, 150 мг/мл αнти-PCSK9 mAb-316P.
2 Значения без стресса представляют собой среднее обоих исследований стабильности.
3 Мутность определяется как относительное изменение OD на 405 нм по сравнению с исходным веществом.
4 Процент относительной активности; критерии приемлемости: 50-200% от эталонного стандарта.
Таблица 12
Стабильность 175 мг/мл mAb-316P FDS1 при стрессовом воздействии
| Стресс-тест | Без стресса2 | Встряхивание | 45°С инкубирование | 37°С инкубирование | 25°С инкубирование | Замор./ оттай в. | ||||
| Время | 0 | 60 | 120 | 14 дн | 28 дн | 14 дн | 28 дн | 14 | 31 дн | 8 |
| воздействия | мин | мин | мин | дн | циклов | |||||
| Внешний вид | Годен | Годен | Годен | Годен | Годен | Годен | Годен | нд | Годен | Годен |
- 25 047546
| Мутность3 рн | 0,00 6,0 | 0,00 6,0 | 0,01 6,0 | 0,01 6,1 | 0,03 6,1 | 0,00 6,0 | 0,01 6,0 | н.Д. н.Д. | 0,00 6,0 | 0,01 6,0 |
| % суммарного | 100 | 96 | 98 | 101 | 98 | 100 | 96 | н.Д. | 99 | 98 |
| выделения % выделения | 96,5 | 96,3 | 96,4 | 94,5 | 91,7 | 95,7 | 94,7 | н.Д. | 96,2 | 96,1 |
| нативного % выделения | 2,5 | 2,5 | 2,5 | 3,6 | 5,2 | 2,8 | 3,0 | н.Д. | 2,6 | 2,3 |
| агрегатов % выделения | 59,5 | 58,3 | 59,0 | 47,1 | 38,4 | 56,3 | 46,9 | н.Д. | 58,2 | 59,3 |
| главной % выделения | 30,1 | 29,3 | 29,4 | 39,5 | 47,6 | 32,3 | 39,8 | Н.Д. | 30,9 | 29,5 |
| кислой % выделения | 10,3 | 12,4 | 11,6 | 13,4 | 14,1 | 11,4 | 13,4 | Н.Д. | 11,0 | 11,1 |
| основной Биопроба (% отн. | 0,00 | 0,00 | 0,01 | 0,01 | 0,03 | 0,00 | 0,01 | Н.Д. | 0,00 | 0,01 |
акт.)4_____________________________________________________________________________________________________________________ 1 10 мМ гистидин, рН 6.0, 0,01% полисорбат 20, 5% сахарозы, 50 мМ аргинина, 175 мг/мл анти-PCSK9 mAb-316P.
2 Значения без стресса представляют собой среднее обоих исследований стабильности.
3 Мутность = изменение OD на 405 нм по сравнению с исходным веществом.
4 Процент относительной активности; критерии приемлемости: 50-200% от эталонного стандарта.
Таблица 13
Стабильность 150 мг/мл mAb-316P DP в PFS
| Хранение | 0 | 5°С 6 мес. | 25°С 6 мес. | 45°С 28 дней |
| Внешний вид | Годен | Годен | Годен | Годен |
| Мутность1 | 0,00 | 0,00 | 0,00 | 0,02 |
| рн | 6,1 | 6,1 | 6,1 | 6,1 |
| % суммарного выделения | 100 | 102 | 102 | 97 |
| % выделения нативного | 96,6 | 96,1 | 94,2 | 92,4 |
| % выделения агрегатов | 2,4 | 2,6 | 3,2 | 4,3 |
| % выделения главной | 58,4 | 58,5 | 45,7 | 35,8 |
| % выделения кислой | 31,8 | 31,3 | 42,1 | 50,9 |
| % выделения основной | 9,8 | 10,2 | 12,2 | 13,4 |
| 1 Мутность = изменение | OD на | 405 нм по | сравнению | с исходным |
веществом.
Таблица 14
Стабильность 175 мг/мл mAb-316P DP в PFS
| Хранение | 0 | 5°С 6 мес. | 25°С 6 мес. | 45°С 28 дней |
| Внешний вид | Годен | Годен | Годен | Годен |
| Мутность1 | 0,00 | 0,00 | 0,02 | 0,04 |
| рн | 6,1 | 6,1 | 6,1 | 6,1 |
| % суммарного выделения | 100 | 103 | 101 | 100 |
| % выделения нативного | 96,7 | 96,3 | 94,6 | 91,6 |
| % выделения агрегатов | 2,3 | 2,4 | 3,0 | 5,4 |
| % выделения главной | 59,1 | 59,7 | 47,1 | 37,7 |
| % выделения кислой | 31,2 | 30,6 | 40,6 | 48,2 |
| % выделения основной | 9,7 | 9,7 | 12,3 | 14,2 |
1 Мутность = изменение OD на 405 нм по сравнению с исходным веществом.
- 26 047546
Таблица 15
Совместимость 150 мг/мл mAb-316P1 после 14 дней при 40°C
| Хранение | Без хранения Стекло | Стекло | Поликарбонат | Полипропилен | Полистирол | Нержаве ющая сталь |
| Мутность12 | 0,00 | 0,00 | 0,00 | 0,01 | 0,01 | 0,01 |
| pH | 6,0 | 6,1 | 6,0 | 6,0 | 6,0 | 6,0 |
| % суммарного выделения | 100 | 97 | 104 | 99 | 105 | 104 |
| % выделения нативного | 97,4 | 95,9 | 95,8 | 95,7 | 95,7 | 95,5 |
| % суммарного выделения | 1,7 | 2,5 | 2,6 | 2,7 | 2,6 | 2,7 |
| % Main Recovered | 53,3 | 45,8 | 45,8 | 44,7 | 45,6 | 45,1 |
| % Acidic Recovered | 26,9 | 33,0 | 32,9 | 33,8 | 33,0 | 33,5 |
| % Basic Recovered | 19,8 | 21,3 | 21,6 | 21,6 | 21,5 | 21,4 |
1 10 мМ гистидин, рН 6.0, 0,2% полисорбат 20, 10% сахароза, 150 мг/мл анти- mAb-.
1 Мутность = изменение OD на 405 нм по сравнению с исходным веще ством.
Таблица 16
Совместимость 175 мг/мл mAb-316P1 после 14 дней при 40°C
| Хранение | Без хранения Стекло | Стекло | Поликарбонат | Полипропилен | Полистирол | Нержаве ющая сталь |
| Мутность3 | 0,00 | 0,00 | 0,00 | 0,00 | 0,00 | 0,01 |
| РН | 6,1 | 6,1 | 6,1 | 6,0 | 6,1 | 6,1 |
| % суммарного выделения | 100 | 98 | 104 | 100 | 105 | 98 |
| % выделения нативного | 96,6 | 95,3 | 95,2 | 95,1 | 95,2 | 94,9 |
| % выделения агрегатов | 2,4 | 3,0 | 3,1 | 3,2 | 3,1 | 3,3 |
| % выделения главной | 57,7 | 51,3 | 51,0 | 50,6 | 51,0 | 50,4 |
| % выделения кислой | 30,0 | 34,5 | 34,5 | 35,0 | 34,5 | 35,2 |
| % выделения основной | 12,3 | 14,2 | 14,5 | 14,4 | 14,4 | 14,4 |
1 10 мМ гистидин, рН 6,0, 0,01% полисорбат 20, 5% сахарозы, 50 мМ аргинина и 175 мг/мл mAb 2 Мутность = изменение OD на 405 нм по сравнению с исходным веществом. Таблица 17
Гетерогенность заряда mAb-316P по данным КИЭФ
| Партия 1 | Партия 2 | Партия 1:Партия 2 (смесь 1:1) | ||||
| № пика | р| | Площадь пика, % | р| | Площадь пика, % | р| | Площадь пика, % |
| 1 | 7,99 (0,01) | 0,8(0,1) | 7,99 (0,01) | 0,8 (0,0) | 7,98 (0,01) | 0,7 (0,1) |
| 2 | 8,15 (0,00) | 2,6 (0,1) | 8,15(0,01) | 2,6 (0,1) | 8,14(0,01) | 2,6 (0,1) |
| 3 | 8,29 (0,00) | 6,9(0,1) | 8,29 (0,00) | 7,0 (0,0) | 8,28 (0,01) | 6,9 (0,1) |
| 4 | 8,42 (0,00) | 18,4 (0,2) | 8,42 (0,00) | 18,6 (0,2) | 8,42 (0,01) | 18,5 (0,1) |
| 5 | 8,54 (0,01) | 66,4 (0,3) | 8,55 (0,01) | 68,0 (0,3) | 8,54 (0,00) | 67,3 (0,1) |
| 6 | 8,65 (0,00) | 4,0(0,1) | 8,65 (0,00) | 2,8 (0,1) | 8,64 (0,01) | 3,4 (0,0) |
| 7 | 8,82 (0,00) | 0,9(0,1) | 8,81 (0,00) | 0,3 (0,1) | 8,81 (0,01) | 0,6 (0,1) |
- 27 047546
Таблица 18
Гликозилированные пептиды mAb-316P
Тяжелая Полученная масса (Да)
| № цепь пика Фрагмен Партия 1 т | Комментарии Партия 2 | |||
| 15а | 294-302 | 2957,15 | 2957,19 | (Fuc)i(GlcNAc)2(Man)3(GlcNAc)2(Gal)2 |
| 294-302 | 2795,11 | 2795,11 | (Fuc)i(GlcNAc)2(Man)3(GlcNAc)2(Gal)i | |
| 294-302 | 2404,94 | 2404,94 | (GlcNAc)2(Man)5 | |
| 294-302 | 2592,02 | 2591,96 | (Fuc)i(GlcNAc)2(Man)3(GlcNAc)i(Gal)i | |
| 294-302 | 2267,94 | 2267,92 | (Fuc)i(GlcNAc)2(Man)2(GlcNAc)i | |
| 294-302 | 2121,82 | 2121,80 | (GlcNAc)2(Man)2(GlcNAc)i | |
| 15b | 294-302 | 2283,91 | 2283,91 | (GlcNAc)2(Man)3(GlcNAc)i |
| 294-302 | 2429,98 | 2429,98 | (Fuc)i(GlcNAc)2(Man)3(GlcNAc)i | |
| 294-302 | 2486,99 | 2486,97 | (GlcNAc)2(Man)3(GlcNAc)2 | |
| 294-302 | 2633,05 | 2633,06 | (Fuc)i(GlcNAc)2(Man)3(GlcNAc)2 | |
| 16 | 294-302 | 1188,52 | 1188,53 | non-glycosylated NST site |
| 17а | 290-302 | 3439,44 | 3439,44 | (Fuc)i(GlcNAc)2(Man)3(GlcNAc)2(Gal)2 |
| 290-302 | 3278,40 | 3277,35 | (Fuc)i(GlcNAc)2(Man)3(GlcNAc)2(Gal)i | |
| 290-302 | 2887,20 | 2887,26 | (GlcNAc)2(Man)5 | |
| 17b | 290-302 | 2766,24 | 2766,21 | (GlcNAc)2(Man)3(GlcNAc)i |
| 290-302 | 2969,34 | 2969,25 | (GlcNAc)2(Man)3(GlcNAc)2 | |
| 290-302 | 2912,28 | 2912,25 | (Fuc)i(GlcNAc)2(Man)3(GlcNAc)i | |
| 290-302 | 3115,32 | 3115,35 | (Fuc)i(GlcNAc)2(Man)3(GlcNAc)2 |
Таблица 19
Интегрированные площади пиков гликанов, по данным капиллярного электрофореза
| Площадь пика партии a % | Площадь пика партии 2, % | Площадь пика смесь партий 1:1, % | Идентификаци я гликана1 | Структура гликана2 | |
| 1 | 8,6 (0,2) | 6,8(0,1) | 7,6 (0,2) | G0-Fuc | У |
| 2 | 1,8 (0,0) | 2,9(0,1) | 2,3 (0,1) | Мап5 | |
| 3 | 0,7 (0,0) | 0,5 (0,0) | 0,6 (0,0) | Обнаружен небольшой пик | |
| 4 | Ниже ПО | Ниже ПО | Ниже ПО | Обнаружен небольшой пик | |
| 5 | Ниже ПО | Ниже ПО | Ниже ПО | Обнаружен небольшой пик | |
| 6 | 34,4 (0,1) | 45,8 (0,2) | 40,4 (0,2) | G0 | |
| 7 | 1,5 (0,0) | 0,7 (0,0) | 1,1 (0,0) | Обнаружен небольшой пик | |
| 8 | Ниже ПО | 0,9 (0,0) | 0,6 (0,0) | Обнаружен небольшой пик | |
| 9 | Ниже ПО | 0,7 (0,0) | 0,6 (0,0) | Обнаружен небольшой пик | |
| 10 | 29,5(0,1) | 24,7 (0,0) | 27,0(0,1) | G1 (1-6) | |
| 11 | 10,1 (0,1) | 8,6 (0,0) | 9,3 (0,1) | G 1(1-3) и/или G2-Fuc | |
| 12 | Ниже ПО | Ниже ПО | Ниже ПО | Обнаружен небольшой пик | |
| 13 | Ниже ПО | Ниже ПО | Ниже ПО | Обнаружен небольшой пик | |
| 14 | 11,7(0,0) | 7,1 (0,1) | 9,4 (0,2) | G2 |
1 G#-fuc и G# обозначают нефукозилированные и фукозилированные гликаны, соответственно. Символ # означает 0, 1 или 2.
2 Обозначение гликана: ▼ фукоза, N-ацетилглюкозамин, · манноза, ♦ галактоза.
ПО = предел определения.
Claims (22)
1. Набор для лечения, профилактики или смягчения заболевания или нарушения, связанных с человеческой пропротеиновой конвертазой субтилизин/кексин типа 9 (PCSK9), содержащий жидкий фармацевтический состав, контейнер и инструкции, где жидкий фармацевтический состав содержит:
(a) от 50±7,5 мг/мл до 250±37,5 мг/мл антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, которые специфически связывают человеческую пропротеиновую конвертазу субтилизин/кексин типа 9 (PCSK9), где антитело содержит определяющую комплементарность область тяжелой цепи (HCDR) 1 с SEQ ID NO:2, HCDR2 с SEQ ID NO:3, HCDR3 с SEQ ID NO:4, определяющую комплементарность область легкой цепи (LCDR) 1 с SEQ ID NO:6, LCDR2 с SEQ ID NO:7 и LCDR3 с SEQ ID NO:8;
(b) от 5±0.75 мМ до 50±7.5 мМ гистидина (рН 6.0±0.3);
(c) 0.01±0.0015% вес./об. полисорбата 20; и (d) 10±1.5% сахарозы;
где контейнер включает шприц, где шприц является предварительно заполненным жидким фармацевтическим составом.
2. Набор по п.1, где шприц является шприцем с обычным содержанием вольфрама.
3. Набор по п.1, где шприц является шприцем с низким содержанием вольфрама.
4. Набор по п.1, где шприц содержит покрытый поршень.
5. Набор по п.4, где покрытый поршень покрыт фторуглеводородной пленкой.
6. Набор по п.1, где шприц является шприцем с низким содержанием вольфрама, и где шприц содержит покрытый поршень.
7. Набор по п.1, где шприц представляет собой длинный стеклянный шприц объемом 1 мл, содержащий тонкостенную иглу размером 27-G, поршень из резины с фторуглеводородным покрытием и резиновый колпачок иглы.
8. Набор по п.1, где антитело содержит вариабельный домен тяжелой цепи (HCVD), содержащий SEQ ID NO:1, и вариабельный домен легкой цепи (LCVD), содержащий SEQ ID NO:5.
9. Набор по п.1, где более 90% антител имеет молекулярный вес 155 кДа±1 кДа; более 50% антител имеет изоэлектрическую точку около 8,5; и от 75 до 90% антител фукозилированы.
10. Набор по п.1, где по меньшей мере 91% антитела имеет нативную конформацию через 28 дней при 45°C.
11. Набор по п.1, где по меньшей мере 35% антитела остается в главной заряженной форме через 28 дней при 45°C.
12. Набор по п.1, где по меньшей мере 94% антитела имеют нативную конформацию через 6 месяцев при 25°C.
13. Набор по п.1, где по меньшей мере 45% антитела остается в главной заряженной форме через 6 месяцев при 25°C.
14. Набор по п.1, где по меньшей мере 96% антитела имеет нативную конформацию через 6 месяцев при 5°C.
15. Набор по п.1, где по меньшей мере 58% антитела остается в главной заряженной форме через 6 месяцев при 5°C.
16. Набор по п.1, где по меньшей мере 96% антитела остается в главной заряженной форме через три месяца при -20, -30 или -80°C.
17. Набор по п.1, где по меньшей мере 56% антитела остаются в главной заряженной форме через три месяца при -20, -30 или -80°C.
18. Набор по п.1, где состав содержит примерно 175 мг/мл антитела.
19. Набор по п.1, где состав содержит примерно 150 мг/мл антитела.
20. Набор по п.1, где состав содержит примерно 100 мг/мл антитела.
21. Набор по п.1, где состав содержит примерно 75 мг/мл антитела.
22. Набор по п.1, где состав содержит примерно 50 мг/мл антитела.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US61/512,666 | 2011-07-28 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA047546B1 true EA047546B1 (ru) | 2024-08-05 |
Family
ID=
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US11673967B2 (en) | Stabilized formulations containing anti-PCSK9 antibodies | |
| KR102667484B1 (ko) | 안정한 항체 제형 | |
| JP6144758B2 (ja) | 抗Ｄｌｌ４抗体を含有する安定化製剤 | |
| US20230346929A1 (en) | Stabilized Formulations Containing Anti-IL-33 Antibodies | |
| TW201716086A (zh) | 含有液態醫藥配製物之預填充針筒 | |
| KR20220131923A (ko) | 안정한 항체 제형 | |
| EA047546B1 (ru) | Стабилизированные составы, содержащие антитела анти-pcsk9 | |
| NZ619379B2 (en) | Stabilized formulations containing anti-pcsk9 antibodies | |
| EA042167B1 (ru) | Стабилизированные композиции, содержащие антитела к рецептору интерлейкина-4 (il-4r) |