JP5960060B2 - 腫瘍細胞の増殖、遊走および浸潤に影響を与えるために有用な物質および方法 - Google Patents
腫瘍細胞の増殖、遊走および浸潤に影響を与えるために有用な物質および方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP5960060B2 JP5960060B2 JP2012541156A JP2012541156A JP5960060B2 JP 5960060 B2 JP5960060 B2 JP 5960060B2 JP 2012541156 A JP2012541156 A JP 2012541156A JP 2012541156 A JP2012541156 A JP 2012541156A JP 5960060 B2 JP5960060 B2 JP 5960060B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- mir
- timp3
- expression
- cells
- cell
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
- C12N15/1137—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- A61K38/191—Tumor necrosis factors [TNF], e.g. lymphotoxin [LT], i.e. TNF-beta
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
- C12Q1/6886—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material for cancer
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/11—Antisense
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/11—Antisense
- C12N2310/113—Antisense targeting other non-coding nucleic acids, e.g. antagomirs
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/106—Pharmacogenomics, i.e. genetic variability in individual responses to drugs and drug metabolism
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/118—Prognosis of disease development
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/136—Screening for pharmacological compounds
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/158—Expression markers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/178—Oligonucleotides characterized by their use miRNA, siRNA or ncRNA
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Oncology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
[0001] 本件出願は、米国仮出願No. 61/263,655の利益を主張し、2009年11月23日に出願されており、その開示を本明細書中で参照により援用する。
[0002] 本発明は、いずれの政府の支援も受けておらず、政府は本発明に対して何ら権利を有さない。
[0003] 本発明は、一般的には、分子生物学の分野に関する。より具体的には、本発明は癌関連技術に関する。本発明の特定の側面には、miR-22lおよびmiR-222に関連した診断、治療、および予後診断における用途が含まれる。特に、肝臓癌および肺癌の診断、治療および予後診断が、本明細書中で検討される。
・肝細胞増殖因子受容体(MET)への肝細胞増殖因子の結合が、細胞外シグナル制御キナーゼ(ERKl/2)およびJun N末端キナーゼ(JNK)のリン酸化を亢進制御し、
・それが続いて、Jun転写活性化を亢進制御し、
・それが続いて非コーディングマイクロRNA(miR-221およびmiR-222)の発現を亢進制御し、
・それが続いてホスファターゼおよびテンシンホモログ(PTEN)およびメタロプロテアーゼの組織阻害剤3(TIMP3)の発現を下方制御し、
・それが続いて、腫瘍壊死因子アポトーシス誘導性リガンド(TRAIL)誘導化細胞死に対する耐性を付与し、そして肺および肝臓の癌細胞の腫瘍原性を亢進する。
[0006] 初期検出および標準的な処理における進展にもかかわらず、非小細胞肺癌(NSCLC)および肝細胞癌(HCC)は、しばしば進行した段階で診断され、そして予後が悪い。アポトーシスを促進することは、薬物開発の可能な目的である。TNF関連アポトーシス誘導性リガンド(TRAIL)は、現在臨床試験が行われている;しかしながら、NSCLCおよびHCCを含む多数の腫瘍のTRAILに対する抵抗性が、その臨床応用のための障害となっている。
[0033] miR-221、miR-222およびTIMP3を発現する腫瘍細胞におけるmiR-221およびmiR-222活性を阻害する工程、そしてTIMP3の下方制御阻害を観察する工程、を含む、miR-221、miR-222およびTIMP3を発現する腫瘍細胞におけるTIMP3発現の下方制御を阻害するための方法もまた、提供される。miR-221およびmiR-222の活性が、アンチセンスmiR-221およびmiR-222を介して阻害され、またはTIMP3発現下方制御の阻害が、TRAIL感受性を介して観察され、またはTIMP3発現下方制御の阻害が、TIMP3翻訳解析を介して観察される、上述した方法もまたこのましい。
[00111] 本件出願は、EFSウェブを介して提出しそして本明細書中でその全体を参照により援用する。ASCII形式のコピーは、2010年11月22日に作製した、「604_51413_SEQLIST_OSU 10076.txt」というファイル名であり、そして7,374 bytesのサイズである。
[00113] 本発明は、miR-221およびmiR-222の活性化が、少なくとも部分的に、METオンコジーンおよびc-Jun転写因子により制御され、それがついでPTENおよびTIMP3を下方制御することを提示する。
DNA:デオキシリボ核酸
HCC:肝細胞癌
IL:インターロイキン
ISH:In situハイブリダイゼーション
miR:マイクロRNA
miRNA:マイクロRNA
mRNA:メッセンジャーRNA
PCR:ポリメラーゼ連鎖反応
pre-miRNA:前駆体マイクロRNA
qRT-PCR:定量的逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応
RNA:リボ核酸
siRNA:低分子干渉RNA
snRNA:低分子核RNA
SVM:指示ベクター機構。
[00132] 上述の一般的記載および以下の詳細な説明の両方共、例示および説明のみを目的としたものであり、そしてここでの開示の範囲を限定することを意図していないことが理解されるべきである。この出願においては、単数形を使用する場合に、具体的にそうと記載していない限りは、複数も含まれる。
[00140] 補助的療法:主要な治療と組み合わせて使用され、主要な治療のこうかを高めるための治療。例えば、HCCと診断された患者は、主要な治療として肝臓の切除を行う場合があり、そしてアンチセンスmiR-221およびmiR-222治療は補助的療法と考えられている。
[00142] 臨床的結果:疾患または症状、例えばHCC、のための治療後の患者または治療なしの患者の健康状態のことをいう。臨床的結果には、死亡までの時間の長さの増加、死亡までの時間の長さの減少、生存の機会の増加、死亡のリスクの増加、生存、疾患フリーの生存、慢性的疾患、転移、進行性または攻撃的疾患、疾患再発、死亡、そして治療に対する好ましい反応または好ましくない反応、が含まれるが、これらには限定されない。
[00146] 発現レベルの検出:例えば、“miR-221およびmiR-222の発現レベルの検出”は、サンプル中のmiR-221およびmiR-222の量の定量のことをいう。miR-221およびmiR-222の発現の検出、またはいずれかのマイクロRNAの検出は、当該技術分野において公知のいずれかの方法または本明細書中で記載されるいずれかの方法を使用して、例えばqRT-PCRにより、達成することができる。miR-221およびmiR-222の発現の検出には、成熟型のmiR-221およびmiR-222またはmiR-221およびmiR-222発現と相関する前駆体型のいずれかの発現を検出することが含まれる。典型的には、miRNA検出方法には、配列特異的検出、例えばRT-PCRによる検出、が関連する。miR-221およびmiR-222特異的プライマーおよびプローブは、当該技術分野において公知でありそして配列の機能の変化を生じさせない修飾が含まれる、前駆体型および成熟型のmiR-221およびmiR-222核酸配列を使用して設計することができる。
[00157] 治療剤:化学化合物、低分子、またはその他の組成物、例えば、被験体に対して適切に投与された場合に、所望の治療効果または予防効果を雄黄することができる、アンチセンス化合物、抗体、プロテアーゼ阻害剤、ホルモン、ケモカインまたはサイトカインと記載される。例えば、TRAIL抵抗性癌細胞用の治療剤には、TRAIL抵抗性癌細胞の発生または転移を防止しまたは阻害する薬剤が含まれる。本明細書中で使用する場合、“候補薬剤”は、スクリーニングをして、療法剤がTRAIL抵抗性癌について療法剤として機能することが示されるように選択された化合物である。いくつかの態様において、候補薬剤は、薬剤が細胞をTRAIL抵抗性癌細胞へと変換する場合、療法剤として特定される。“インキュベートする”には、薬剤が細胞または組織と相互作用するための十分な長さの時間が含まれる。“接触する”には、薬剤を固体形状または液体形状中で細胞または組織とインキュベートすることが含まれる。薬剤を細胞または組織と接触させるかまたはインキュベートすることを含む。細胞または組織を薬剤を“治療”することには、薬剤を細胞または組織と接触させることまた細胞または組織ともにインキュベートすることが含まれる。
[00161] TRAIL抵抗性癌細胞、TRAIL抵抗性癌、TRAIL抵抗性腫瘍細胞または腫瘍、など:TRAILによりチャレンジを受けた場合、対照と比較して、TRAILに反応してアポトーシスを起こさないかまたはほとんど起こさないことが見出される、細胞(in vitro、in situ、in vivo)。この定義は、定義を満たすために、推定TRAIL抵抗性細胞のTRAILのチャレンジ試験を必要としない;むしろ、サンプリング、染色、表現型マーカーまたは遺伝子マーカーの同定、既知のTRAIL状態、またはTRAIL抵抗性のその他の示唆のいずれか、がこの定義の意味に含まれる。
[00163] 腫瘍、新生物、悪性または癌:異常で調節不能の細胞増殖の結果。新生物、悪性、癌および腫瘍は、しばしば互換的に使用され、そして過剰な細胞分裂を生じる組織または細胞の異常な増殖のことをいう。個体における腫瘍の量は、腫瘍の数、体積、または重量として測定することができる“腫瘍負荷”である。転移しない腫瘍は、“良性”と言われる。周囲組織に浸潤しおよび/または転移することができる腫瘍は、“悪性”と言われる。
[00169] 前駆体マイクロRNA(pre-miRNAs)の配列および成熟miRNAの配列は、Sanger Instituteによりオンラインで利用可能なmiRB aseデータベースなど、公に利用可能である(Griffiths-Jones et al., Nucleic Acids Res. 36:D154-D15 8, 2008;Griffiths-Jones et al., Nucleic Acids Res. 34:D140-D144, 2006;およびGriffiths Jones, Nucleic Acids Res. 32:D109-D111, 2004を参照)。
[00173] マイクロアレイは、顕微鏡的な、核酸、タンパク質、低分子、細胞またはその他の物質の配列されたアレイであり、複雑な生化学的サンプルの並行解析を可能にする。DNAマイクロアレイは、様々な核酸プローブからなり、固相支持体に化学的に結合された捕捉プローブとして知られており、それは、マイクロチップ、ガラススライドまたはミクロスフェアサイズのビーズであってもよい。マイクロアレイを使用して、例えば、多数のメッセンジャーRNA(mRNA)のおよび/またはmiRNAの発現レベルを同時的に測定することができる。
[00181] 定量的RT-PCR(qRT-PCR)は、ポリメラーゼ連鎖反応の生成物の量を迅速に測定するために使用される、ポリメラーゼ連鎖反応の修飾である。qRT-PCRは、遺伝的配列、例えばmiR、がサンプル中に存在するかどうか、そして存在する場合に、サンプル中のコピー数を決定することを目的として、一般的に使用される。miRNAを含め核酸分子の発現を決定することができるPCRのいずれかの方法は、。当該技術分野において公知のqRT-PCR法にはいくつかの変法があり、それらのうちの3つを以下に記載する。
[00188] In situハイブリダイゼーション(ISH)は、核酸ハイブリダイゼーションの技術を単一細胞レベルに適用しそして外挿し、そして細胞化学、免疫細胞化学および免疫組織化学の技術と組み合わせて、形態および維持されそして同定される細胞マーカーの同定を可能にし、組織および血液サンプルなどの集団中の特定の細胞に配列の局在化を可能にする。ISHは、相補的な核酸を使用して、組織の部分または組織切片中で(in situ)、または組織が小さい場合にはその組織全体中で(ホールマウントISH)、1またはそれ以上の特定の核酸配列を局在化するハイブリダイゼーションのタイプである。RNA ISHを使用して、miRNAの発現などの組織中の発現パターンをアッセイすることができる。
[00191] In situ PCRは、ISHの前の標的核酸配列のPCRに基づく増幅である。RNAの検出のため、細胞内逆転写酵素工程を導入して、in situ PCR の前にRNAテンプレートから相補的なDNAを生成する。これにより、低コピー数のRNA配列の検出が可能になる。
[00195] miR-221およびmiR-222、c-Jun、PTENおよびTIMP3の発現パターンは、TRAIL抵抗性患者における生存予後診断の予測因子であることが、本願明細書中で開示される。同一患者または健康被験体から採取された非癌性組織と比較して、miR-221およびmiR-222およびc-Junの高発現、およびPTENおよびTIMP3の低発現を伴うTRAIL抵抗性癌細胞サンプル(例えば、組織バイオプシーサンプル)は、生存の低下を示す。このように、腫瘍におけるTRAIL抵抗性発現パターンの状態を、TRAIL抵抗性癌患者の予後診断における臨床的ツールとして使用することができる。
[00211] 実施例I:miR-221およびmiR-222はPTEN 3’UTRおよびTIMP3 3’UTRを直接的に標的とする
[00212] 推定miR-221およびmiR標的を同定するため、バイオインフォマティックス検索(Targetscan, Pictar, RNhybrid)を行った。候補標的の中で、ヒトPTENの3’ UTR(ヌクレオチド200〜207、NM_000314)およびヒトTIMP3の3’ UTR(ヌクレオチド2443〜2449、NM_000362)が、hsa miR-221およびhsa miR-222のシード配列とマッチした領域を含有した(図1A)。PTENおよびTIMP3がmiR-221およびmiR-222の標的に対するものであるかどうかを確認するため、miR-221/miR-222結合部位を含有するPTEN 3’UTRおよびTIMP3 3’UTRを、ルシフェラーゼのオープンリーディングフレームの下流にクローニングした。これらのリポーター構造物を使用して、MEG01細胞をトランスフェクトし、それらは非常に低レベルのmiR-221およびmiR-222を発現し(図1B)、そして非常にトランスフェクト性が高かった(Freson et al., 2005)。トランスフェクションに際したこれらのmiRの発現の増加は、qRT-PCRにより確認し(図1B)、ルシフェラーゼ発現に顕著に影響し、ルシフェラーゼ活性として測定された(図1C)。逆に、ルシフェラーゼアッセイをPTEN mRNAの3’ UTRおよびTIMP3 mRNAの3’ UTRを有するプラスミドを使用して行った場合、miR-221およびmiR-222に対する結合部位が部位特異的変異生成により不活性化された場合、miR-221およびmiR-222阻害作用の一貫した減少が観察された(図1C)。これらのマイクロRNAがH460細胞環境においてPTEN発現およびTIMP3発現に影響を及ぼすか謳歌を確認するため、H460細胞中での異所性miR-221およびmiR-222の発現の結果を解析した。トランスフェクションに際したこれらのmiRの発現の増加は、qRT-PCRにより確認され(図1D)、そしてその後PTENおよびTIMP3の内在性レベルに対する作用を、ウェスタンブロットにより解析した(図1E);miR-221およびmiR-222の過剰発現は、スクランブル化pre-miRでトランフェクトされたH460細胞と比較して、PTENおよびTIMP3の内在性レベルが顕著に減少した。逆に、2’-O me抗miR-221および2’-O me抗miR-222によるmiR-221およびmiR-222のノックダウンは、高レベルの内在性miR-221およびmiR-222を有するCalu-1肺由来細胞中でqRT-PCR(図1F)により確認され、PTENおよびTIMP3のタンパク質レベルを増加した(図1G)。興味深いことに、定量的RT-PCRにより、PTEN mRNAレベルは、miR-221およびmiR-222トランスフェクト細胞(図1H)中で強力に減少したが、TIMP3 mRNAレベルは減少せず、このことはmiR-221およびmiR-222がPTEN mRNAの分解を誘導したが、TIMP3はこれらのマイクロRNAにより転写レベルのみが制御されていることを示唆していることを見出した。PTEN 3’UTRおよびTIMP3 3’UTRは、したがって、miR-221およびmiR-222の標的に向けられている。
[00214] miR-221およびmiR-222の内在性レベルを、正常の対応物と比較して、初代NSCLCおよびHCCの大きなパネルにおいて、ノーザンブロットにより評価した。miR-221およびmiR-222発現は、正常な肺細胞および肝臓細胞においてはほとんど検出不可能であったが、腫瘍細胞株の大半で非常に発現している。さらに、ウェスタンブロットにより評価する場合、miR-221およびmiR-222 RNAの発現とPTENおよびTIMP3のタンパク質発現との間の逆相関が、解析された殆どの細胞株において見い出され(図2A)、qRT-PCRによっても確認された(図2B)。強制的なmiR-221およびmiR-222発現の後のTIMP3 mRNAの下方制御が観察されなかったため、TIMP3 mRNA発現レベルは試験しなかった(図1H)。これらの結果は、miR-221およびmiR-222の高発現がNSCLCおよびHCCにおいてPTENおよびTIMP3を負に制御するように作用するメカニズムの一つであることが示唆される。
[00219] miR-221およびmiR-222および/またはPTEN-TIMP3サイレンシングの、NSCLCおよびHCCの両方の細胞生存およびTRAIL抵抗性に対する作用を、研究した。まず、5つのHCC由来細胞株に対して増殖アッセイを行い、それらのうちの3つ(HepG2、Sk-Hep1およびHuh 7)で低いmiR-221 / miR-222発現が、そして2つ(PLC/PRF-5およびSnu-387)で高いmiR-221 / miR-222発現レベルが、見出された(図4A)。細胞を24時間にわたりTRAILに暴露し、その後細胞増殖をMTTアッセイを使用して評価した。興味深いことに、低レベルのmiR-221およびmiR-222を発現する細胞は、TRAIL誘導性の細胞死を生じ、これら非常に低い増殖速度を意味しており、一方でmiR-221およびmiR-222を過剰発現する細胞は、可溶性TRAILに暴露した場合に感受性を示さなかった(図4A)。
[00228] 実施例IV:miR-221およびmiR-222によるPTENおよびTIMP3の下方制御は、NSCLCおよびHCC細胞における遊走および浸潤を誘導する
[00229] 腫瘍形成におけるmiR-221/miR-222の機能的役割を直接的に試験するため、H460およびSk-Hep1細胞においてこれらの2種のマイクロRNAを過剰発現させ、またはPTENおよびTIMP3をサイレンシングした。ついで、細胞周期解析により、miR-221およびmiR-222およびPTEN siRNA H460トランスフェクト細胞は、G1期の減少およびS期およびG2-M期の対応する増加を示した(図6A)。72時間のトランスフェクションの後、解析により、miR-221およびmiR-222またはPTENノックダウンにより誘導されるより初期のDNA合成の開始が示され、これがG1期細胞の素早い減少と並行しており、増殖効果に寄与することが示された(図6A)。同一の変化がSk-Hep1細胞において観察された(図13A)。
[00232] METは、Calu-1およびSnu-387細胞において、そしてDNA増幅のためMETオンコジーンを過剰発現することが以前に報告された(Giordano et al., 1989)胃細胞株(GTL16)において、siRNAを使用することによりサイレンシングした。最初に、miR-221 & miR-222発現レベルを、qRT-PCRにより評価した。METノックダウンの後、miR-221およびmiR-222の発現により、解析したすべての細胞株において下方制御された(図7A-7B-7C)。同一の結果が、GTL16細胞をMET阻害剤、SU11274で処置することにより、得られた(図15A)。
[00243] ルシフェラーゼアッセイ
[00244] ヒトPTENおよびTIMP3遺伝子の3’ UTRを、以下のプライマー:
PTEN Fw 5'-TCT AGA GAC TCT GAT CCA GAG AAT GAA CC-3'[SEQ ID No: 1]、および
PTEN Rw 5'-TCT AGA GTT GCC ACA AGT GCA AAG GGG TAG GAT GTG-3'[SEQ ID No: 2];
TIMP3 Fw 5'-TCT AGA CTG GGC AAA GAA GGG TCT TTC GCA AAG C-3’[SEQ ID No: 3]、および
TIMP3 Rw 5’-TCT AGA TTC CAA TAG GGA GGA GGC TGG AGG AGT CTC-3’[SEQ ID No: 4];
を使用してPCR増幅し、そしてRenillaルシフェラーゼ停止コドンpGL3対照ベクター(Promega)の下流にクローニングし、p3’UTR-PTENプラスミドおよびp3’UTR-TIMP3プラスミド作製した。
Fw:5'-GTT GAA AAA AGG TTG GGG GCG GGT GTC ATG TAT ATA C-3'[SEQ ID No: 5];
Rw:5'-GTA TAT ACA TGA CAC CCG CCC CCA ACC TTT TTT CAA C-3'[SEQ ID No: 6];
p3’-UTRmut-TIMP3プラスミド-プライマー:
Fw:5'-GTA TAA TTT AAA ATC ATT GGG CGG CGG GAG ACA CTT CTG TAT TTC-3'[SEQ ID No: 7];
Rw:5'-GAA ATA CAG AAG TGT CTC CCG CCG CCC AAT GAT TTT AAA TTA TAC-3'[SEQ ID No: 8]
を生成した。
[00248] 全部で、32個の瞬間凍結正常肺組織および悪性肺組織(19人の男性および13人の女性、中央値年齢:70.0、幅:55〜82)および60個の瞬間凍結した正常肝臓組織と60個の悪性肝臓組織を、Ohio State University Medical Center(Columbus, OH)にて採取した。その他の72個の癌肺組織および正常(24)肺組織を、US Biomax, Incから購入した。すべてのヒト組織を、Ohio State Institutional Review Boardにより承認されたプロトコルに従って得た。
[00250] 動物実験は、研究所のガイドラインに従って行った。NCI H460細胞は、shPTENおよびTIMP3プラスミド(Santa Cruz)を使用して安定的にトランスフェクトした;Calu-1細胞を、shMETを使用して安定的にトランスフェクトした。ピューロマイシン中で10日間選択した後、5×106(H460)または7×106(Calu-1)の生存細胞を、6週齢のオスヌードマウス(Charles RiverBreeding Laboratories, Wilmington,MA)の右脇腹の皮下に注射した。治療は、腫瘍細胞接種の5日後(H460異種移植の場合)または10日後(Calu-1異種移植の場合)に、TRAIL/Apo2(10 mg/kg/d)またはビヒクル(PBS)の腹腔内注射を毎日行うことにより開始し、5日のサイクルを2回行った。腫瘍のサイズは、デジタルキャリパーにより5日ごとに評価した。腫瘍体積は、長さ(l)および幅(w)を測定することによりそして体積を算出することにより(V=lw2/2)、測定した。注射の35日後、マウスを犠死させ、そして腫瘍サンプルを、PTEN、TIMP3およびMETの発現に関してウェスタンブロットにより解析した。対照と処置動物のあいだで統計的に有意であることを、Studentのt試験を使用して評価した。動物実験を、Ohio State Universityの研究所の動物ケアおよび使用についての委員会の承認の後に行った。
[00252] Studentのt試験および一方向性ANOVA解析を使用して、優位性を決定した。すべてのエラーバーは、平均の標準誤差を示す。Pearsonの相関係数を計算して、正常vs腫瘍のクラスで、miR-221/miR-222とPTENとの間の関連性を試験した。P値を算出することにより評価するすべての試験についての統計的優位性は、P<0.05であった。
[00254] NSCLCおよびHCC細胞由来の全タンパク質を、放射性免疫沈降アッセイ(RIPA)バッファー(0.15 mM NaCl、0.05 mM Tris-HCl、pH 7.5、1% Triton、0.1% SDS、0.1%デオキシコール酸ナトリウム、および1% Nonidet P40)を用いて抽出した。サンプル抽出物(50μg)を、ミニゲル装置(Bio-Rad Laboratories)を使用して7.5〜12%のSDS-ポリアクリルアミドゲル(PAGE)上で分離し、Hybond-C extraニトロセルロースに転写した。メンブレンを、0.05% Tween 20を含有するTris-緩衝化塩類溶液中の5%無脂肪ドライミルクを使用して1時間ブロッキングし、一次抗体とともに一晩インキュベートし、洗浄し、そして二次抗体とともにインキュベートし、そして化学蛍光発光により可視化した。以下の一次抗体を使用した:抗-PTEN、抗-c-Jun、抗-p-c-Jun、抗-Fos、抗-p-JNK、抗-MMP3、抗-Mcl 1(Santa Cruz)、抗-TIMP3(Millipore)、抗-PI3K(BD Biosciences)、抗-ERK、抗-リン酸化ERK、抗-AKT、抗-p-AKT、抗-GSK3b、抗-p-GSK3b(Ser9)、抗-PAK1、抗-カスパーゼ8、3および9、抗-PARP、抗-チトクロームc(Cell signaling)、及ぼい抗- MMP9、抗-FADD(Abcam)、抗-アクチン抗体(Sigma)。二次抗-ウサギまたは抗-マウス免疫グロブリンG(IgG)抗体ペルオキシダーゼ複合体(Chemicon)を使用した。
[00256] miR-222/ 221の上流の推定制御領域(+1〜-150 nt、+1〜-600、+1〜-1000(+1の位置は、miR-222ヘアピンの5’末端に対応する)を含有するDNAフラグメントを、増幅し、そしてpGL3basic(Promega)中にクローニングした。Meg01細胞を、Lipofectamine 2000(Invitrogen)、1.0 gのpGL3basic空ベクターまたは上述のゲノムフラグメントを含有する1.0 gのpGL3、200 ngのRenillaルシフェラーゼ発現構造物pRL-TK(Promega)およびMET、c-Jun、c-Fos siRNAを用いてトランスフェクトした。48時間後、4この細胞を溶解し、そして製造者の指示書に従ってDualルシフェラーゼアッセイ(Promega)によりアッセイした。3回の独立した実験を三重にして行った。クローニングに使用したプライマーは、以下のもの:
-1000pGL3b Forw:5'-gctagccctagccaccttatcgaaaatagcattcc-3'[SEQ ID No: 9];
-600 pGL3b Forw:5'-gctagcctgacatgctagtgagcacctgc-3'[SEQ ID No: 10];
-150 pGL3b Forw:5'-gctagcccagaggttgtttaaaattacgta 3'[SEQ ID No: 11];
miR-222 pGL3b Rev:5'-ctcgagagctgggtgatcctttgccttctg-3'[SEQ ID No: 12]
であった。
[00258] リアルタイムPCRを、標準的TaqMan PCR KitプロトコルをApplied Biosystems 7900HT配列検出システム(Applied Biosystems)上で使用して行った。10μlのPCR反応物には、0.67μlのRT生成物、1μlのTaqMan Universal PCR Master Mix(Applied Biosystems)、0.2 mMのTaqManプローブ、1.5 mMのフォワードプライマーおよび0.7 mMのリバースプライマーが含まれた。反応物を、96ウェルプレート中で95℃にて10分間インキュベートし、ついで95℃にて15秒および60℃にて1分のサイクルを40サイクル行った。すべての反応を、三重にして行った。閾値サイクル(CT)を、蛍光が固定閾値を超えた画分サイクル数として定義する。遺伝子発現の相対的定量のための比較CT方法(Applied Biosystems)を使用して、miRNA発現レベルを決定した。y軸は、2(-CT)を示し、または異なるmiRの相対的発現を示す。miRs発現は、U44およびU48 rRNAと比較して計算され、そして104をかけたものである。実験を各データ点について三重にして行い、そしてデータ解析をソフトウェア(Bio-Rad)を使用して行った。
[00260] 全RNAを TRIzol溶液(Invitrogen)を製造者の指示書に従って用いて抽出し、そしてRNAの完全性をAgilent BioAnalizer 2100(Agilent, Palo Alto, CA, USA)を用いて評価した。ノザンブロッティングをCalin et al., 2002により記載されるように行った。プローブとして使用されるオリゴヌクレオチドは、成熟miRNA(miRNA登録)の相補的配列であった:
miR-221、5’-GAAACCCAGCAGACAATGTAGCT-3’[SEQ ID No: 13]、
miR-222、5’-GAGACCCAGTAGCCAGATGTAGCT-3’[SEQ ID No: 14]。
[00262] 2’-Oメチル(2’-O me)オリゴリボヌクレオチドを、Fidelityにより合成した。2'-O me抗miR-221および2'-O me抗miR-222の配列は、以下のとおりである:
5'-gaaacccagcagacaauguagcu[SEQ ID No: 15]および
5'-gagacccagtagccagatgtagct[SEQ ID No: 16]。
2'-O me GFP miR(5'-aaggcaagcugacccugaagu[SEQ ID No: 17])を対照として使用した。細胞を6ウェルプレート中で24時間増殖させ(ウェル当たり1.7×106)、そして100 nmoli/L/wellの2'-O me-オリゴリボヌクレオチドをリポフェクトアミン2000によりトランスフェクトした。RNAおよびタンパク質を、トランスフェクションの72時間後に抽出した。
[00264] 細胞を96ウェルプレートに三重にしてまき、そして37℃にて5% CO2インキュベーター中でインキュベートした。Super Killer TRAIL(Alexis Biochemicals)を24〜48時間、400 ng/mlで使用した。細胞生存率を、3-(4,5-ジメチルチアゾール-2-イル)-2,5-ジフェニルテトラゾリウムブロミド(MTT)-Cell Titer 96 AQueous One Solution Cell Proliferation Assay(Promega)を、製造者のプロトコルに従って試験した。代謝的に活性な細胞を、20 plのMTTを各ウェルに添加することにより検出した。1時間のインキュベーションの後、プレートをMultilabel Counter(Bio-Rad Laboratories)中で解析した。アポトーシスを、Annexin V-FITCアポトーシス検出キットの後に、フローサイトメトリー解析およびカスパーゼ3/7活性化をおこなうことにより、評価した。細胞を、100 mmディッシュ当たり1.8×106細胞でまき、10% FBS/RPMI中で一晩増殖させ、リン酸緩衝化塩類溶液(PBS)で洗浄し、その後400 ng/mlのTRAILを用いて、24時間処置した。インキュベーションの後、細胞を冷PBSにより洗浄し、そしてトリプシン処置によりプレートから取り出した。再懸濁した細胞を冷PBSにより洗浄し、そしてFITC結合アネキシン-V抗体(Roche Applied Science)を製造者の指示に従って使用して染色した。ついで、細胞(サンプル当たり5×105)をフローサイトメトリー解析に供した。フローサイトメトリー解析を、記載として取り扱われる(Garofalo et al., 2007)。TRAILで処置したH460細胞の画分は、アポトーシス細胞集団として取り扱われる。示されるアポトーシスの割合は、対応する非処置対照において見出されたバックグラウンドレベルに対して補正した。統計的解析を、2サンプルt試験を使用し行い、均等な分散であると考えられ、そしてP値を2テール試験に基づいて計算した。カスパーゼ3/7活性の検出のため、細胞を96ウェルプレート中で培養し、400 ng/mlのTRAILにより処置し、そしてカスパーゼGlo 3/7 Assayキット(Promega)を製造者の指示に従って使用して解析した。連続的な変数を、平均値±標準偏差(s.d.)として表す。
[00266] クロマチン免疫沈降を、de Belle et al., 2000により記載される方法を若干変更して行った。H460、Calu-1およびSnu-387細胞株由来の細胞(5×106)を、1%ホルムアルデヒド中で37℃にて10分間固定した。細胞を氷冷1 PBSにより洗浄し、1×PBS+プロテアーゼ阻害剤中でスクレーピングし、そして遠心分離により回収した。細胞溶解バッファー[50 mmol/L Tris HCl(pH 8.0)、10 mmol/L EDTA、および1% SDS]+プロテアーゼ阻害剤中に再懸濁した細胞ペレットを、超音波処理した。DNA-タンパク質複合体を、5 gの抗c-Jun抗体(Santa Cruz)またはウサギポリクローナルIgG対照(Zymed)を使用して、免疫沈降した。
[00268] 領域1F:5'-GATGTGGAGAATAGATACCTTTGAG-3'[SEQ ID No: 18]
[00269] 領域1R:5'-GGCACTGCCTACAAACCAGAGCATA-3'[SEQ ID No: 19]
[00270] 領域2F:5'-GTCACTCAGTCAGTATCTGTTGGA-3'[SEQ ID No: 20]
[00271] 領域2R:5'-GTGTGTAATTCAAGGTAAAGTTTTC-3'[SEQ ID No: 21]。
[00273] 細胞を、80%コンフルエントになるまで培養し、そして遺伝子発現をノックダウンするために設計された4つの標的特異的20〜25 nt siRNAのプールである、100 nMの抗PTEN SMARTpool siRNAまたは100 nMの抗TIMP3 SMARTpool siRNAまたは対照siRNA(Dharmacon)とともにリポフェクトアミン2000を使用して一過性にトランスフェクトした。
[00275] In situハイブリダイゼーション(ISH)を、ペプシン(1.3 mg/ml)中にて30分間消化することが含まれる、以前に記載されたプロトコル(Nuovo et al., 2009)を使用して、脱パラフィン化ヒト肺組織および肝臓組織上で行った。5'末端にジゴキシゲニンが結合されている、6箇所に分散されたロック化核酸(LNA)修飾塩基を含有するプローブの配列は、以下のものである:
miR-221、5'-GAAACCCAGCAGACAATGTAGCT [SEQ ID No: 13]、
miR-222、5’-GAGACCCAGTAGCCAGATGTAGCT [SEQ ID No: 14]。
[00278] 細胞培養用の培養液、血清および抗生物質は、Life Technologies, Inc.(Grand Island, NY, USA)より購入した。タンパク質電気泳動試薬は、Bio-Rad Laboratoriesから購入し(Richmond, VA, USA)、ウェスタンブロット試薬およびECL試薬は、GE Healthcare(Piscataway, NJ, USA)から購入した。その他のすべての化学物質は、Sigma(St Louis, MO, USA)から購入した。
[00280] ヒトCalu-1およびA549細胞株を、10%加熱非働化ウシ胎児血清(FBS)および2 mM L-グルタミンおよび100 U/mlペニシリン-ストレプトマイシンを含有するダルベッコ改変イーグル培地中で増殖させた。Hel299細胞株、H460細胞株、A459細胞株、H1975細胞株、H1299細胞株、H1573細胞株、H23細胞株、PLCRF15細胞株、SNU-387細胞株、Snu-423細胞株、Snu-475細胞株を、10%加熱非働化FBSおよび2mM L-グルタミンおよび100 U/mlペニシリン-ストレプトマイシンを含有するRPMI中で増殖させた。Sk-hepl、Hep-G2、HepG2C3A、Hep3B、Huh7を、10%ウシ胎児血清、2 mM L-グルタミンおよび100 U/mlペニシリン-ストレプトマイシンを添加したMEM中で増殖させた。正常な肝臓細胞を、10%ウシ胎児血清、2 mM L-グルタミン、1%の肝細胞増殖サプリメント(HGS)および100 U/mlのペニシリン-ストレプトマイシンを添加した肝細胞増殖培地(Sciencell)中で増殖させた。
[00282] 8μm多孔性メンブレン(Greiner bio-one)を有するトランスウェル挿入チャンバーを、アッセイのために使用した。細胞をPBSを用いて3回洗浄し、そして血清不含培養液中で上部チャンバーに添加された。底部チャンバーには、10% FBSを含有する培養液を充填した。細胞を、37℃にて24時間、5% CO2加湿インキュベーター中でインキュベートした。遊走性細胞を定量するため、上部チャンバー上の細胞を、綿棒ぬぐいを使用して取り出し、そして遊走した細胞を、PBS中、25%グルタルアルデヒドで固定し、そしてCrystal Violet染色により染色し、位相差顕微鏡のもとで可視化し、そして撮像した。Cristal violet染色された細胞を、酢酸およびメタノール(1:1)中でさらに可溶化し、吸光度を595 nmで測定した。結果は、3回の独立した実験の平均±S.Dである。
[00284] H460およびSK-Hep-1細胞を、300 Lの血清不含ダルベッコ改変イーグル培地中、三重にして、8μm多孔性を含有するメンブレンを有するBD Falcon HTS FluoroBlokインサート(BD Biosciences)の上部チャンバー中に、配置した。インサートを、ダルベッコ改変イーグル培地およびウシ胎児血清(10%)を化学誘引物質として含有する24-ウェルプレートの底部チャンバーウェル中に、配置した。メンブレンのポアを通過して底部チャンバーに遊走した細胞を、リン酸緩衝化塩類溶液(PBS)中37℃にて30分間、8 g/mLのカルセインAM(Molecular Probes, Eugene, OR)により標識化した。遊走細胞の蛍光を、485 nmの励起波長および530 nmの放出波長で蛍光光度計を使用して定量し、そして任意蛍光単位として記述した。データは、4回の別個の測定の平均±標準誤差として表される。
[00286] PTEN cDNAおよびTIMP3 cDNAを、1工程RT-PCRキット(Invitrogen)を製造者の指示書に従って使用することにより、H460細胞RNAから得た。PCRフラグメントは、以下のプライマー:
NotI-TIMP3 HA:5' gcggccgcatgaccccttggctcgggctcatcgtgct 3'[SEQ ID No: 22]
BglII-TIMP3 HA:5' agatctcagggtctggcgctcaggggtctgt 3'[SEQ ID No: 23]
NotI-PTEN HA:5' gcggccgcatgacagccatcatcaaagagatcgttag 3'[SEQ ID No: 24]
XbaI-PTEN HA:5' tctagaggtgttttatccctcttgataaaaaaaaattca 3'[SEQ ID No: 25]
[00287] を使用することにより増幅し、その後NotI-XbaI(PTEN)またはNotI-BglII(TIMP3)を用いて消化した後、pCRUZ-HA(Santa Cruz)中にクローニングした。すべてのベクターは、配列決定により調節した。
[00289] バイオインフォマティックス解析を、これらの具体的なプログラムにより行われた:Targetscan(1)、Pictar(2)およびRNhybrid(3)。(1)http://www.targetscan.org/、(2)http://pictar.bio.nyu.edu/、そして(3)http://bibiserv.techfak.unibielefeld.de/。
[00291] 本実施例は、治療としてのTRAIL治療に対して好ましい反応を有する可能性がある。
[00297] 本実施例は、肝臓切除を行わずに、HCCと診断された患者を治療するための方法を記載する。HCCと診断された患者がTRAIL療法のための良い候補であるかどうかを決定するため、HCC腫瘍サンプルを、非癌性肝臓組織サンプルとともに、肝臓切除を行わない患者から得る。組織サンプルを、当該技術分野において公知のいずれかの方法にしたがって得ることができる。例えば、組織サンプルを、皮下注射ばりを使用するバイオプシー手順を行なって所望の組織を取り出すことにより得ることができる。
[00301] 本実施例は、患者が、HCC腫瘍中で、TRAIL抵抗性のTRAILの発現パターンを示す場合に、HCCと診断された患者を治療する方法を記載する。
[00304] 一つの特定の側面において、被験体が肝細胞癌(HCC)を有するかまたはそれを発症することのリスクを有するかどうかを診断するための方法が、本明細書中に提示される。この方法には、一般に、被験体から得られた試験サンプル中のTRAILの発現パターンを測定することが含まれ、そして対照サンプル中のTRAILの発現パターンのレベルと比較して試験サンプル中のTRAILの発現パターンが逸脱するかどうかを決定することが、HCCを有するかまたは発症するリスクを有するかの被験体の指標である。特定の態様において、少なくとも1個の遺伝子生成物のレベルは、ノザンブロット解析を使用して測定する。同様に、特定の態様において、試験サンプル中の少なくとも1個の遺伝子生成物のレベルが、対照サンプル中の対応するmiR遺伝子生成物のレベルよりも少なく、および/または試験サンプル中の少なくとも1個のmiR遺伝子生成物のレベルが、対照サンプル中の対応するmiR遺伝子生成物のレベルよりも多い。
[00306] 少なくとも1個のmiR遺伝子生成物のレベルを、被験体から得た試験サンプル由来のRNAを逆転写することにより測定し、標的オリゴデオキシヌクレオチドのセットを提供することができる;標的オリゴデオキシヌクレオチドの、miRNA特異的プローブオリゴヌクレオチドを含むマイクロアレイに対するハイブリダイズにより、試験サンプルについてのハイブリダイゼーションプロファイルを提供する;そして、試験サンプルハイブリダイゼーションプロファイルを、対照サンプルから生成されたハイブリダイゼーションプロファイルと比較する。少なくとも1個のmiRNAのシグナルにおける変化は、HCCを有するか、またはHCCを発症するリスクを有するかのいずれかが、被験体の指標である。
[00308] 別の側面において、被験体におけるHCCを治療する方法であって、少なくとも1個のmiRNAのシグナルが、対照サンプルから生成されたシグナルと比較して、脱制御されている(例えば、下方制御されるかおよび/または亢進制御される)。
[00312] 少なくとも2個の単離されたTRAILの発現パターンの遺伝子生成物および医薬的に許容可能なキャリアを含む、TRAIL抵抗性癌を治療するためのもまた、提供される。特定の態様において、医薬組成物は、適切な対照細胞と比較して、HCC細胞注で下方制御される遺伝子生成物に対応する遺伝子生成物を含む。
[00314] 適切な対照細胞と比較して、HCC細胞において亢進制御されるかまたは下方制御される遺伝子生成物に対して特異的な少なくとも1個の発現レギュレーター化合物を含む医薬組成物もまた、提供される。
[00316] 本明細書注で記載される組成物のいずれも、キットに含まれていてもよい。非限定的な事例において、miRNAを単離するための試薬、miRNAを標識するための試薬、および/またはアレイを使用してmiRNA集団を評価するための試薬が、キット中に含まれる。このキットには、miRNAプローブを生成しまたは合成するための試薬がさらに含まれていてもよい。このキットは、適切な容器手段中に、標識ヌクレオチドまたは実質的に標識されている非標識ヌクレオチドを取り込むことにより、miRNAを標識するための酵素が含まれていてもよい。反応バッファー、標識バッファー、洗浄バッファー、またはハイブリダイゼーションバッファー、などの1またはそれ以上のバッファー、miRNAプローブを調製するための化合物、およびmiRNAを単離するための構成成分が含まれていてもよい。その他のキットには、miRNAに対して相補的なオリゴヌクレオチドを含む核酸アレイを製造するための構成成分が含まれていてもよく、そしてしたがって、例えば、固相支持体を含んでいてもよい。
[00327] miRNAアレイの調製および使用もまた、本明細書中で提示され、そのようなアレイは、核酸分子の配置されたマクロアレイまたはマイクロアレイ(プローブ)であり、それが複数のmiRNA分子または前駆体miRNA分子と完全にまたはほぼ相補的であるかまたは複数のmiRNA分子または前駆体miRNA分子と同一であり、そして空間的に分離された組織中に支持体物質上に配置される。マクロアレイは、典型的にはニトロセルロースまたはナイロンのシートであり、その上にプローブをスポッティングする。マイクロアレイは、核酸プローブをより高密度で配置し、それにより10,000個までの核酸分子を典型的には1〜4 cm2の領域中に固定化することができる。
Claims (15)
- 細胞サンプル内におけるTRAIL発現パターンを変化させるin vitroの方法であって、c-Jun、miR-221、およびmiR-222を内在的に発現することができる細胞においてc-Jun、miR-221、およびmiR-222を阻害すること、そしてTRAIL発現パターン変化を測定することを含み;当該TRAIL発現パターンは、対照非癌細胞と比較した細胞サンプル内のc-Jun、miR-221、およびmiR-222の発現における変化を含み;ここで当該細胞サンプルは非小細胞肺癌または肺細胞癌の細胞である、前記方法。
- 細胞サンプル内におけるTRAIL発現パターンを変化させるin vitroの方法であって、miR-221、miR-222、およびTIMP3を内在的に発現することができる非小細胞肺癌または肺細胞癌の細胞サンプルにおいてTIMP3を過剰発現させること並びにmiR-221およびmiR-222の発現を阻害すること、そしてTRAIL発現パターン変化を測定することを含み;当該TRAIL発現パターンは対照非癌細胞と比較した細胞サンプル内のc-Jun, miR-221、およびmiR-222の発現における変化を含む、前記方法。
- 細胞サンプルにおけるTRAIL発現パターンを同定するための方法であって、
細胞サンプル中で少なくとも2個の核酸の発現レベルを同定すること、ここで当該少なくとも2個の核酸が、以下:miR-221、miR-222、およびc-Jun; miR-221、miR-222、およびTIMP3;ならびに、miR-221、miR-222、c-Jun、およびTIMP3;の核酸の群、からなる群より選択される;および
非癌対照細胞と比較した細胞サンプル内の発現レベルを測定すること;
を含み、ここで細胞サンプルは非小細胞肺癌または肺細胞癌の細胞である、前記方法。 - 癌を有すると診断された患者の癌を特徴づけする方法であって、患者から得られた癌細胞サンプルにおいてmiR-221およびmiR-222の発現レベルおよび以下のもの:c-JunおよびTIMP3からなる群より選択される核酸の少なくとも1個の核酸発現レベルを検出することを含み、
ここで非癌細胞由来の対照サンプルと比較して癌細胞サンプルにおいて、miR-221およびmiR-222のレベルの1.5倍またはそれ以上の増加が、TIMP3発現のレベルの1.5倍またはそれ以上の低下と組み合わされた場合は、当該癌をTRAIL抵抗性として特徴づけし、あるいは
ここで当該対照と比較して癌細胞サンプルにおいて、miR-221およびmiR-222のレベルの1.5倍またはそれ以上の増加が、c-Jun発現のレベルの1.5倍またはそれ以上の増加と組み合わされた場合は、当該癌をTRAIL抵抗性として特徴づけする、前記方法。 - TIMP3およびmiR-221およびmiR-222を内在的に発現することができる細胞においてTIMP3発現の制御を変化させるためのin vitroの方法であって、TIMP3発現かつmiR-221およびmiR-222発現細胞においてmiR-221およびmiR-222活性を変化させること、そしてTIMP3発現変化を観察すること、を含み、ここで当該細胞は非小細胞肺癌または肺細胞癌の細胞である、前記方法。
- TIMP3を内在的に発現することができる細胞においてTIMP3発現を阻害するためのin vitroの方法であって、TIMP3をも発現する細胞においてmiR-221およびmiR-222を過剰に発現させること、そしてTIMP3発現阻害を観察すること、を含み、ここで当該細胞は非小細胞肺癌または肺細胞癌の細胞である、前記方法。
- TIMP3発現阻害を有する細胞を同定するためのin vitroの方法であって、試験細胞をアンチセンスmiR-221およびmiR-222と接触させること、TIMP3発現の増加を観察すること、および、次いで当該試験細胞をTIMP3発現阻害を有するものとして同定することを含む、ここで当該試験細胞は非小細胞肺癌または肺細胞癌の細胞である、前記方法。
- 試験細胞サンプルが、対照と比較してmiR-221およびmiR-222核酸の高発現および対照と比較してTIMP3核酸の低発現を含むかどうかを同定することを含む、TRAIL抵抗性細胞を同定するための方法。
- TRAIL抵抗性癌の治療のための療法剤を同定するための方法であって、候補薬剤をin vitroでスクリーニングして、TRAIL抵抗性癌細胞において、miR-221およびmiR-222の発現を低下させ、そしてTIMP3の発現を増加させる薬剤を選択すること、それによりTRAIL抵抗性癌の治療のための薬剤を同定すること、を含む、前記方法。
- 癌と診断された患者の癌を特徴づけする方法であって、患者から得られた癌細胞サンプル中でのmiR-221、miR-222およびTIMP3発現レベルを検出する工程を含み、ここで、
非癌細胞由来の対照サンプルと比較して、癌細胞サンプルにおいてmiR-221およびmiR-222のレベルの1.5倍またはそれ以上の増加が、TIMP3発現のレベルの1.5倍またはそれ以上の低下と組み合わされた場合は、当該癌をTRAIL抵抗性として特徴づけする、前記方法。 - 非小細胞肺癌細胞または肺細胞癌細胞から選択される試験細胞におけるTIMP3のmiR-221およびmiR-222下方制御を同定するためのキットであって、miR-221およびmiR-222の少なくとも1個の分子識別子およびTIMP3の少なくとも1個の分子識別子を含む、ここで分子識別子は、以下のもの:プローブ;プライマー;または抗体;からなる群より選択される、前記キット。
- miR-221、miR-222、およびTIMP3を発現する腫瘍細胞におけるTIMP3発現の下方制御を阻害するためのin vitroの方法であって、miR-221、miR-222、およびTIMP3を発現する腫瘍細胞におけるmiR-221およびmiR-222活性を阻害する工程、そしてTIMP3の下方制御阻害を観察する工程、を含み、ここで当該腫瘍細胞は非小細胞肺癌細胞または肺細胞癌細胞である、前記方法。
- miR-221およびmiR-222の活性が、アンチセンスmiR-221およびmiR-222を介して阻害される、請求項12に記載の方法。
- TIMP3発現下方制御の阻害が、TRAIL感受性を介して観察される、請求項12に記載の方法。
- TIMP3発現下方制御の阻害が、TIMP3翻訳解析を介して観察される、請求項12に記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US26365509P | 2009-11-23 | 2009-11-23 | |
US61/263,655 | 2009-11-23 | ||
PCT/US2010/057758 WO2011063382A1 (en) | 2009-11-23 | 2010-11-23 | Materials and methods useful for affecting tumor cell growth, migration and invasion |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2015215591A Division JP2016052317A (ja) | 2009-11-23 | 2015-11-02 | 腫瘍細胞の増殖、遊走および浸潤に影響を与えるために有用な物質および方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2013511291A JP2013511291A (ja) | 2013-04-04 |
JP5960060B2 true JP5960060B2 (ja) | 2016-08-02 |
Family
ID=44060076
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2012541156A Expired - Fee Related JP5960060B2 (ja) | 2009-11-23 | 2010-11-23 | 腫瘍細胞の増殖、遊走および浸潤に影響を与えるために有用な物質および方法 |
JP2015215591A Pending JP2016052317A (ja) | 2009-11-23 | 2015-11-02 | 腫瘍細胞の増殖、遊走および浸潤に影響を与えるために有用な物質および方法 |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2015215591A Pending JP2016052317A (ja) | 2009-11-23 | 2015-11-02 | 腫瘍細胞の増殖、遊走および浸潤に影響を与えるために有用な物質および方法 |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (3) | US8916533B2 (ja) |
EP (1) | EP2504452A4 (ja) |
JP (2) | JP5960060B2 (ja) |
CN (1) | CN102803511A (ja) |
AU (2) | AU2010321555B2 (ja) |
CA (1) | CA2781547A1 (ja) |
WO (1) | WO2011063382A1 (ja) |
Families Citing this family (25)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP2302051B1 (en) | 2004-11-12 | 2015-01-07 | Asuragen, Inc. | Methods and compositions involving miRNA and miRNA inhibitor molecules |
WO2007081740A2 (en) | 2006-01-05 | 2007-07-19 | The Ohio State University Research Foundation | Micrornarna-based methods and compositions for the diagnosis and treatment of solid cancers |
JP5523825B2 (ja) | 2006-03-20 | 2014-06-18 | ジ・オハイオ・ステイト・ユニバーシティ・リサーチ・ファウンデイション | ヒト巨核球形成間のマイクロrnaフィンガープリント |
CN103866008B (zh) | 2007-08-03 | 2016-06-29 | 俄亥俄州立大学研究基金会 | 编码ncrna的超保守区域 |
US8258111B2 (en) | 2008-05-08 | 2012-09-04 | The Johns Hopkins University | Compositions and methods related to miRNA modulation of neovascularization or angiogenesis |
US8916533B2 (en) | 2009-11-23 | 2014-12-23 | The Ohio State University | Materials and methods useful for affecting tumor cell growth, migration and invasion |
JP5931897B2 (ja) | 2010-11-12 | 2016-06-08 | ジ・オハイオ・ステイト・ユニバーシティ・リサーチ・ファウンデイションThe Ohio State University Research Foundation | マイクロrna−21、ミスマッチ修復および結腸直腸癌に関連する物質および方法 |
AU2011329066B2 (en) | 2010-11-15 | 2017-03-09 | The Ohio State University Research Foundation | Controlled release mucoadhesive systems |
CN105969773A (zh) | 2011-02-03 | 2016-09-28 | 米尔纳医疗股份有限公司 | Mir-124的合成模拟物 |
AU2012323924A1 (en) | 2011-10-14 | 2014-05-29 | The Ohio State University | Methods and materials related to ovarian cancer |
CN104302767A (zh) * | 2011-12-10 | 2015-01-21 | 俄亥俄州国家创新基金会 | 用于减少肺癌肿瘤发生和化学疗法抗性的MiRNA以及相关组合物和方法 |
US9481885B2 (en) | 2011-12-13 | 2016-11-01 | Ohio State Innovation Foundation | Methods and compositions related to miR-21 and miR-29a, exosome inhibition, and cancer metastasis |
AU2013209477B2 (en) | 2012-01-20 | 2016-12-08 | The Ohio State University | Breast cancer biomarker signatures for invasiveness and prognosis |
KR102169891B1 (ko) * | 2012-05-23 | 2020-10-26 | 더 오하이오 스테이트 유니버시티 | 지질 나노입자 조성물 및 이를 제조하는 방법 및 사용하는 방법 |
CN103961720B (zh) * | 2013-03-19 | 2016-03-02 | 广州中国科学院先进技术研究所 | MicroRNA用于制备降低神经胶质瘤对TRAIL耐受性的药物的用途 |
TWI627275B (zh) * | 2013-07-15 | 2018-06-21 | Cell migration detection method, cell migration wafer and preparation method thereof | |
CN104293921A (zh) * | 2014-09-18 | 2015-01-21 | 中国人民解放军成都军区总医院 | 一种用于肺癌治疗的磁性纳米复合物及其制备方法 |
JP2018099031A (ja) * | 2015-03-20 | 2018-06-28 | アンジェス株式会社 | c−Met陽性癌の判定方法 |
CN105039320B (zh) * | 2015-07-02 | 2017-12-22 | 中国医学科学院基础医学研究所 | 一种rna及其用途、包含该rna的组合物、重组表达载体和宿主细胞 |
CN105176998A (zh) * | 2015-07-02 | 2015-12-23 | 中国医学科学院基础医学研究所 | 一种rna及其用途、包含该rna的组合物、重组表达载体和宿主细胞 |
WO2017186882A1 (en) * | 2016-04-29 | 2017-11-02 | Onxeo | A method of predicting a response to an anti-tumor treatment by means of signal interfering dna molecules |
EP3538109A4 (en) * | 2016-11-14 | 2020-07-01 | Virginia Commonwealth University | MDA-7 CANCER THERAPIES AND METHOD FOR DETECTING BIOMOLECULES |
EP3649250A4 (en) * | 2017-07-05 | 2021-03-24 | The Regents of the University of California | ASSAY FOR PREOPERATIVE PREDICTION OF RESTORATION OF ORGAN FUNCTION |
CN112831497B (zh) * | 2020-05-19 | 2023-07-14 | 中南大学湘雅医院 | 一种新型lncRNA及其抑制剂、诊断试剂、药物和应用 |
CN113252910B (zh) * | 2021-06-29 | 2022-05-17 | 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 | Timp3在焦虑抑郁症诊断中的应用 |
Family Cites Families (210)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4196265A (en) | 1977-06-15 | 1980-04-01 | The Wistar Institute | Method of producing antibodies |
US4172124A (en) | 1978-04-28 | 1979-10-23 | The Wistar Institute | Method of producing tumor antibodies |
US4608337A (en) | 1980-11-07 | 1986-08-26 | The Wistar Institute | Human hybridomas and the production of human monoclonal antibodies by human hybridomas |
US4701409A (en) | 1984-11-15 | 1987-10-20 | The Wistar Institute | Detection of B-cell neoplasms |
US4693975A (en) | 1984-11-20 | 1987-09-15 | The Wistar Institute | Human hybridroma fusion partner for production of human monoclonal antibodies |
US5015568A (en) | 1986-07-09 | 1991-05-14 | The Wistar Institute | Diagnostic methods for detecting lymphomas in humans |
US5202429A (en) | 1986-07-09 | 1993-04-13 | The Wistar Institute | DNA molecules having human BCL-2 gene sequences |
US5198338A (en) | 1989-05-31 | 1993-03-30 | Temple University | Molecular probing for human t-cell leukemia and lymphoma |
CA2063409A1 (en) | 1989-07-03 | 1991-01-04 | Carlo M. Croce | Tcl-5 gene rearrangement involved in t-cell leukemia and melanoma |
US5149628A (en) | 1989-11-15 | 1992-09-22 | Temple University | Methods for detecting bcl-3 gene in human leukemias |
US6040140A (en) | 1991-12-11 | 2000-03-21 | Thomas Jefferson University | Methods for screening and treating leukemias resulting from all-1 region chromosome abnormalities |
US5633135A (en) | 1991-12-11 | 1997-05-27 | Thomas Jefferson University | Chimeric nucleic acids and proteins resulting from ALL-1 region chromosome abnormalities |
WO1993012136A1 (en) | 1991-12-11 | 1993-06-24 | Thomas Jefferson University | Detection and treatment of acute leukemias resulting from chromosome abnormalities in the all-1 region |
US5674682A (en) | 1992-10-29 | 1997-10-07 | Thomas Jefferson University | Nucleic acid primers for detecting micrometastasis of prostate cancer |
ES2191018T3 (es) | 1992-10-29 | 2003-09-01 | Univ Jefferson | Procedimiento para detectar micrometastasis de cancer de prostata. |
GB9307754D0 (en) | 1993-04-15 | 1993-06-02 | Perry Robert E | Diagnostic probes and therapeutic products |
WO1994026930A1 (en) | 1993-05-14 | 1994-11-24 | Thomas Jefferson University | Methods for screening and treating leukemias resulting from all-1 region chromosome abnormalities |
US7175995B1 (en) | 1994-10-27 | 2007-02-13 | Thomas Jefferson University | TCL-1 protein and related methods |
US5985598A (en) | 1994-10-27 | 1999-11-16 | Thomas Jefferson University | TCL-1 gene and protein and related methods and compositions |
US5695944A (en) | 1995-05-05 | 1997-12-09 | Thomas Jefferson University | Modulation of bcl-2 phosphorylation |
US5567586A (en) | 1995-05-18 | 1996-10-22 | Thomas Jefferson University | Methods of indentifying solid tumors with chromosome abnormalities in the ALL-1 region |
US6242212B1 (en) | 1996-02-09 | 2001-06-05 | Thomas Jefferson University | Fragile histidine triad (FHIT) nucleic acids and methods of producing FHIT proteins |
US5928884A (en) | 1996-02-09 | 1999-07-27 | Croce; Carlo M. | FHIT proteins and nucleic acids and methods based thereon |
AU4003597A (en) | 1996-09-04 | 1998-03-26 | Howard Florey Institute Of Experimental Physiology And Medicine | Methods of diagnosing and treating cancer |
WO1998035707A1 (en) | 1997-02-18 | 1998-08-20 | Thomas Jefferson University | Compositions that bind to pancreatic cancer cells and methods of using the same |
CA2286328A1 (en) | 1997-04-04 | 1998-10-15 | The Texas A & M University System | Noninvasive detection of colonic biomarkers using fecal messenger rna |
US6303323B1 (en) | 1997-10-21 | 2001-10-16 | Cancer Research Campaign Technology Limited | Detection of dysplastic or neoplastic cells using anti-MCM5 antibodies |
ATE290213T1 (de) | 1997-10-21 | 2005-03-15 | Cancer Rec Tech Ltd | Nachweis von zellwachstumabnormalität |
CA2335315A1 (en) | 1998-07-20 | 2000-01-27 | Thomas Jefferson University | Nitrilase homologs |
AU5128999A (en) | 1998-07-24 | 2000-02-14 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Prevention of metastasis with 5-aza-2'-deoxycytidine |
US7141417B1 (en) | 1999-02-25 | 2006-11-28 | Thomas Jefferson University | Compositions, kits, and methods relating to the human FEZ1 gene, a novel tumor suppressor gene |
EP1163252A4 (en) | 1999-02-25 | 2004-04-07 | Univ Jefferson | COMPOSITIONS, KITS AND METHODS RELATING TO THE HUMAN FEZ1 GENE, A NEW TUMOR SUPPRESSOR |
JP2003519463A (ja) | 1999-03-15 | 2003-06-24 | トーマス・ジェファーソン・ユニバーシティー | TCL−1b遺伝子、蛋白質、それらに関連した方法およびそれらに関連する物質 |
US6579857B1 (en) | 1999-06-11 | 2003-06-17 | Evanston Northwestern Healthcare Research Institute | Combination cancer therapy comprising adenosine and deaminase enzyme inhibitors |
US7163801B2 (en) | 1999-09-01 | 2007-01-16 | The Burnham Institute | Methods for determining the prognosis for cancer patients using tucan |
US20040132017A1 (en) | 1999-12-16 | 2004-07-08 | Robert Richards | Oxidoreductase gene associated with the fra16d fragile site |
US6891031B2 (en) | 2000-02-18 | 2005-05-10 | The Regents Of The University Of California | Coordinate cytokine regulatory sequences |
US20010026796A1 (en) | 2000-03-14 | 2001-10-04 | Croce Carlo M. | TCL1 enhances Akt kinase activity and mediates its nuclear translocation |
US6924414B2 (en) | 2000-04-11 | 2005-08-02 | Thomas Jefferson University | Muir-torre-like syndrome in Fhit deficient mice |
WO2001087958A2 (en) | 2000-05-16 | 2001-11-22 | Thomas Jefferson University | CRYSTAL STRUCTURE OF WORM NitFhit REVEALS THAT A Nit TETRAMER BINDS TWO Fhit DIMERS |
EP1289472A4 (en) * | 2000-05-30 | 2004-09-08 | Advanced Res & Tech Inst | COMPOSITIONS AND METHODS FOR IDENTIFYING MODULATORS OF PTEN FUNCTION AND PI-3 KINASE MECHANISMS |
US7060811B2 (en) | 2000-10-13 | 2006-06-13 | Board Of Regents, The University Of Texas System | WWOX: a tumor suppressor gene mutated in multiple cancers |
WO2002064171A1 (en) | 2001-02-12 | 2002-08-22 | Thomas Jefferson University | Adenoviral transduction of fragile histidine triad (fhit) into cancer cells |
WO2002064172A2 (en) | 2001-02-12 | 2002-08-22 | Thomas Jefferson University | Fhit gene therapy prevents tumor development in fhit-deficient mice |
US20040033502A1 (en) | 2001-03-28 | 2004-02-19 | Amanda Williams | Gene expression profiles in esophageal tissue |
US20050176025A1 (en) | 2001-05-18 | 2005-08-11 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of B-cell CLL/Lymphoma-2 (BCL-2) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
WO2003070969A2 (en) | 2002-02-20 | 2003-08-28 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF BCL2 GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA) |
EP2447370B1 (en) | 2001-09-28 | 2018-07-18 | Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | MicroRNA molecules |
US7371736B2 (en) | 2001-11-07 | 2008-05-13 | The Board Of Trustees Of The University Of Arkansas | Gene expression profiling based identification of DKK1 as a potential therapeutic targets for controlling bone loss |
US7455995B2 (en) | 2001-11-09 | 2008-11-25 | The Ohio State University Research Foundation | BAALC expression as a diagnostic marker for acute leukemia |
GB0128898D0 (en) | 2001-12-03 | 2002-01-23 | Biotech Res Ventures Pte Ltd | Materials and methods relating to the stabilization and activation of a tumour suppressor protein |
AU2002231843A1 (en) | 2002-02-12 | 2003-09-04 | Nokia Corporation | Method for controlling data transmission, and data transmission system |
ES2555307T3 (es) | 2002-03-08 | 2015-12-30 | Eisai R&D Management Co., Ltd. | Compuestos macrocíclicos útiles como agentes farmacéuticos |
ATE529535T1 (de) | 2002-03-13 | 2011-11-15 | Genomic Health Inc | Genexpressionsprofilierung in einer biopsie unterzogenem tumorgewebe |
DE60332220D1 (de) | 2002-03-27 | 2010-06-02 | Univ Southern California | Phrasenbasiertes gemeines wahrscheinlichkeitsmodell zur statistischen maschinellen übersetzung |
EP1496928A4 (en) | 2002-04-08 | 2005-08-10 | Ciphergen Biosystems Inc | SERUM BIOMARKERS IN HEPATOCELLULAR CARCINOMA |
US20040078834A1 (en) | 2002-04-29 | 2004-04-22 | Croce Carlo M. | Human chronic lymphocytic leukemia modeled in mouse by targeted TCL1 expression |
WO2003102215A2 (en) | 2002-05-31 | 2003-12-11 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Methods of identifying and isolating stem cells and cancer stem cells |
US20050260639A1 (en) | 2002-09-30 | 2005-11-24 | Oncotherapy Science, Inc. | Method for diagnosing pancreatic cancer |
EP1581621A4 (en) | 2002-10-11 | 2006-07-05 | Univ Jefferson | NOVEL TUMOR SUPPRESSOR GENE, COMPOSITIONS AND METHODS OF MAKING AND USING SAME |
US20050266443A1 (en) | 2002-10-11 | 2005-12-01 | Thomas Jefferson University | Novel tumor suppressor gene and compositions and methods for making and using the same |
JP4939055B2 (ja) | 2002-11-13 | 2012-05-23 | トマス ジェファソン ユニバーシティ | 癌の診断および治療のための組成物および方法 |
US7250496B2 (en) | 2002-11-14 | 2007-07-31 | Rosetta Genomics Ltd. | Bioinformatically detectable group of novel regulatory genes and uses thereof |
WO2004071464A2 (en) | 2003-02-12 | 2004-08-26 | Johns Hopkins University School Of Medicine | Diagnostic application of differentially-expressed genes in lympho-hematopoietic stem cells |
WO2004079013A1 (en) | 2003-03-03 | 2004-09-16 | Arizona Board Of Regents On Behalf Of The University Of Arizona | Ecto-5’-nucleotidase (cd73) used in the diagnosis and the treatment of pancreatic cancer |
US7183384B2 (en) | 2003-03-06 | 2007-02-27 | A & G Pharmaceutical, Inc. | Monoclonal antibody 7H11 reactive with human cancer |
WO2004098377A2 (en) | 2003-05-02 | 2004-11-18 | Thomas Jefferson University | Methods and compositions for diagnosis and therapy of parkin-associated disorders |
US20050069918A1 (en) | 2003-05-29 | 2005-03-31 | Francois Claret | JAB1 as a prognostic marker and a therapeutic target for human cancer |
ATE420160T1 (de) | 2003-06-18 | 2009-01-15 | Genelux Corp | Modifizierte rekombinante vacciniaviren, verwendungen davon |
US8145436B2 (en) | 2003-07-15 | 2012-03-27 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Method and systems for identifying micro-RNA targets and synthesizing novel micro-RNAs and uses of the same |
US7683036B2 (en) | 2003-07-31 | 2010-03-23 | Regulus Therapeutics Inc. | Oligomeric compounds and compositions for use in modulation of small non-coding RNAs |
US8106180B2 (en) | 2003-08-07 | 2012-01-31 | Whitehead Institute For Biomedical Research | Methods and products for expression of micro RNAs |
US20050037362A1 (en) | 2003-08-11 | 2005-02-17 | Eppendorf Array Technologies, S.A. | Detection and quantification of siRNA on microarrays |
US8412541B2 (en) | 2003-08-14 | 2013-04-02 | Edda Technology, Inc. | Method and system for intelligent qualitative and quantitative analysis for medical diagnosis |
WO2005020795A2 (en) | 2003-08-25 | 2005-03-10 | The Johns Hopkins University | Method of diagnosis and treatment of pancreatic endocrine neoplasms based on differntial gene expression analysis |
JPWO2005028648A1 (ja) | 2003-09-22 | 2007-11-15 | 愛知県 | リンパ腫の病型および予後診断方法 |
CA2539651A1 (en) | 2003-09-22 | 2005-04-07 | Rosetta Inpharmatics Llc | Synthetic lethal screen using rna interference |
US20070054849A1 (en) | 2003-09-24 | 2007-03-08 | Oncotherapy Science, Inc. | Method for diagnosing hepatocellular carcinomas |
WO2005047477A2 (en) | 2003-11-07 | 2005-05-26 | University Of Massachusetts | Interspersed repetitive element rnas as substrates, inhibitors and delivery vehicles for rnai |
US20050164252A1 (en) | 2003-12-04 | 2005-07-28 | Yeung Wah Hin A. | Methods using non-genic sequences for the detection, modification and treatment of any disease or improvement of functions of a cell |
JP2007514442A (ja) | 2003-12-19 | 2007-06-07 | ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア | 前立腺癌治療を評価するための方法および物質 |
JP4120002B2 (ja) | 2004-01-07 | 2008-07-16 | 愛知県 | miRNAを用いた癌の予後判定方法、癌の遺伝子治療ベクター及び癌治療用医薬組成物 |
EP2295604B1 (en) | 2004-02-09 | 2015-04-08 | Thomas Jefferson University | Diagnosis and treatment of cancers with microRNA located in or near cancer-associated chromosomal features |
US20050256072A1 (en) | 2004-02-09 | 2005-11-17 | University Of Massachusetts | Dual functional oligonucleotides for use in repressing mutant gene expression |
CA2556435C (en) | 2004-02-13 | 2014-08-12 | The Rockefeller University | Anti-microrna oligonucleotide molecules |
CN101088089A (zh) | 2004-02-23 | 2007-12-12 | 鹿特丹伊拉斯姆斯大学医疗中心 | 通过基因表达图形对急性粒细胞性白血病进行分类、诊断和预后 |
WO2005094263A2 (en) | 2004-03-23 | 2005-10-13 | Pintex Pharmaceuticals, Inc. | Methods of determining the prognosis and treatment of subjects with colon cancer |
US20060134639A1 (en) | 2004-04-06 | 2006-06-22 | Huffel Christophe V | Method for the determination of cellular transcriptional regulation |
US7365058B2 (en) | 2004-04-13 | 2008-04-29 | The Rockefeller University | MicroRNA and methods for inhibiting same |
NZ551019A (en) | 2004-04-20 | 2009-08-28 | Genaco Biomedical Products Inc | Method for detecting ncRNA |
IL179285A (en) | 2004-05-14 | 2011-04-28 | Rosetta Genomics Ltd | Micrornas and uses thereof |
EP2471923B1 (en) | 2004-05-28 | 2014-08-20 | Asuragen, Inc. | Methods and compositions involving microRNA |
US7635563B2 (en) | 2004-06-30 | 2009-12-22 | Massachusetts Institute Of Technology | High throughput methods relating to microRNA expression analysis |
WO2006007529A2 (en) | 2004-07-01 | 2006-01-19 | University Of Pittsburgh Of The Commonwealth System For Higher Education | Immunosuppressive exosomes |
US20060037088A1 (en) | 2004-08-13 | 2006-02-16 | Shulin Li | Gene expression levels as predictors of chemoradiation response of cancer |
JP2008511678A (ja) | 2004-09-02 | 2008-04-17 | イェール ユニバーシティ | マイクロrnaによるオンコジーンの調節 |
US7592441B2 (en) | 2004-10-04 | 2009-09-22 | Rosetta Genomics Ltd | Liver cancer-related nucleic acids |
US7642348B2 (en) | 2004-10-04 | 2010-01-05 | Rosetta Genomics Ltd | Prostate cancer-related nucleic acids |
FR2877350B1 (fr) | 2004-11-03 | 2010-08-27 | Centre Nat Rech Scient | IDENTIFICATION ET UTILISATION DE miRNAs IMPLIQUES DANS LA DIFFERENCIATION DE CELLULES ISSUES D'UNE LEUCEMIE MYELOIDE |
EP2302051B1 (en) | 2004-11-12 | 2015-01-07 | Asuragen, Inc. | Methods and compositions involving miRNA and miRNA inhibitor molecules |
ATE544774T1 (de) | 2004-12-14 | 2012-02-15 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Rnai-modulation von mll-af4 und verwendungen dafür |
US20060185027A1 (en) | 2004-12-23 | 2006-08-17 | David Bartel | Systems and methods for identifying miRNA targets and for altering miRNA and target expression |
US20070099196A1 (en) | 2004-12-29 | 2007-05-03 | Sakari Kauppinen | Novel oligonucleotide compositions and probe sequences useful for detection and analysis of micrornas and their target mRNAs |
US20090123912A1 (en) | 2005-01-25 | 2009-05-14 | Rosetta Inpharmatics Llc | Methods for quantitating small RNA molecules |
US8071306B2 (en) | 2005-01-25 | 2011-12-06 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Methods for quantitating small RNA molecules |
CA2597767A1 (en) | 2005-02-11 | 2006-08-17 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Mir-155 assay |
US20070065840A1 (en) | 2005-03-23 | 2007-03-22 | Irena Naguibneva | Novel oligonucleotide compositions and probe sequences useful for detection and analysis of microRNAS and their target mRNAS |
GB2425311A (en) | 2005-04-15 | 2006-10-25 | Ist Superiore Sanita | Micro RNA against kit protein |
JP5173793B2 (ja) | 2005-04-29 | 2013-04-03 | ザ ロックフェラー ユニバーシティ | マイクロrna及びそれを阻害する方法 |
EP1880027B1 (en) | 2005-05-02 | 2014-02-19 | Cold Spring Harbor Laboratory | Composition and methods for cancer diagnosis utilizing the mir 17-92 cluster |
WO2006133022A2 (en) | 2005-06-03 | 2006-12-14 | The Johns Hopkins University | Compositions and methods for decreasing microrna expression for the treatment of neoplasia |
US20070065844A1 (en) | 2005-06-08 | 2007-03-22 | Massachusetts Institute Of Technology | Solution-based methods for RNA expression profiling |
US20060292616A1 (en) | 2005-06-23 | 2006-12-28 | U.S. Genomics, Inc. | Single molecule miRNA-based disease diagnostic methods |
CN103882124B (zh) | 2005-08-01 | 2015-11-18 | 俄亥俄州立大学研究基金会 | 用于乳腺癌的诊断、预后和治疗的基于MicroRNA的方法和组合物 |
WO2007021896A2 (en) | 2005-08-10 | 2007-02-22 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Chemically modified oligonucleotides for use in modulating micro rna and uses thereof |
US20070213292A1 (en) | 2005-08-10 | 2007-09-13 | The Rockefeller University | Chemically modified oligonucleotides for use in modulating micro RNA and uses thereof |
CA2845251A1 (en) | 2005-09-12 | 2007-03-22 | The Ohio State University Research Foundation | Compositions for the therapy of bcl2-associated cancers and methods of preparation thereof |
AU2006302496A1 (en) | 2005-10-05 | 2007-04-19 | The Ohio State University Research Foundation | WWOX gene, vectors containing the same, and uses in treatment of cancer |
US20070092882A1 (en) | 2005-10-21 | 2007-04-26 | Hui Wang | Analysis of microRNA |
US8445198B2 (en) | 2005-12-01 | 2013-05-21 | Medical Prognosis Institute | Methods, kits and devices for identifying biomarkers of treatment response and use thereof to predict treatment efficacy |
US7390792B2 (en) | 2005-12-15 | 2008-06-24 | Board Of Regents, The University Of Texas System | MicroRNA1 therapies |
EP2586455B1 (en) | 2006-01-05 | 2014-06-25 | The Ohio State University Research Foundation | MicroRNA expressions abnormalities in pancreatic endocrine and acinar tumors |
JP5451077B2 (ja) | 2006-01-05 | 2014-03-26 | ジ・オハイオ・ステイト・ユニバーシティ・リサーチ・ファウンデイション | 肺癌の診断、予後診断及び治療のためのマイクロrnaを基盤とした方法及び組成物 |
WO2007081740A2 (en) | 2006-01-05 | 2007-07-19 | The Ohio State University Research Foundation | Micrornarna-based methods and compositions for the diagnosis and treatment of solid cancers |
US20090007281A1 (en) | 2006-01-13 | 2009-01-01 | Battelle Memorial Institute | Animal Model for Assessing Copd-Related Diseases |
JP5523825B2 (ja) | 2006-03-20 | 2014-06-18 | ジ・オハイオ・ステイト・ユニバーシティ・リサーチ・ファウンデイション | ヒト巨核球形成間のマイクロrnaフィンガープリント |
US20090324618A1 (en) | 2006-03-24 | 2009-12-31 | Armstrong Scott A | Novel signature self renewal gene expression programs |
ES2715625T3 (es) | 2006-04-03 | 2019-06-05 | Roche Innovation Ct Copenhagen As | Composición farmacéutica que comprende oligonucleótidos antisentido anti-miARN |
CA2650026C (en) | 2006-04-24 | 2013-01-22 | The Ohio State University Research Foundation | Pre-b cell proliferation and lymphoblastic leukemia/high-grade lymphoma in mir155 transgenic mice |
AU2007293187A1 (en) | 2006-06-30 | 2008-03-13 | Rosetta Genomics Ltd | A method for detecting nucleic acids |
EP2436785B1 (en) | 2006-07-13 | 2013-09-11 | The Ohio State University Research Foundation | MIR-29a for diagnosing poor survival prognosis colon adenocarcinoma. |
US20080029279A1 (en) | 2006-08-01 | 2008-02-07 | Louis Zuccarello | Ground-working tool |
NZ575193A (en) | 2006-08-30 | 2011-12-22 | Unversity Of Michigan | Small molecule inhibitors of MDM2 comprising a spiropyrrolidine |
US20080193943A1 (en) | 2006-09-05 | 2008-08-14 | Abbott Laboratories | Companion diagnostic assays for cancer therapy |
JP2010504350A (ja) | 2006-09-19 | 2010-02-12 | アシュラジェン インコーポレイテッド | 治療的介入の標的としての、miR−200によって調節される遺伝子および経路 |
CA2664383C (en) | 2006-09-19 | 2017-08-22 | Asuragen, Inc. | Micrornas differentially expressed in pancreatic diseases and uses thereof |
CA2663962A1 (en) | 2006-09-19 | 2008-03-27 | Asuragen, Inc. | Mir-15, mir-26, mir-31,mir-145, mir-147, mir-188, mir-215, mir-216, mir-331, mmu-mir-292-3p regulated genes and pathways as targets for therapeutic intervention |
CN101535505A (zh) | 2006-09-19 | 2009-09-16 | 俄亥俄州立大学研究基金会 | 慢性淋巴细胞性白血病(CLL)中受miR-29和miR-181调控的TCL1的表达 |
JP2008086201A (ja) | 2006-09-29 | 2008-04-17 | Gifu Prefecture Kenkyu Kaihatsu Zaidan | マイクロrna生成の検出方法と癌の診断・治療およびマイクロrna生成調整剤 |
US8252538B2 (en) | 2006-11-01 | 2012-08-28 | The Ohio State University | MicroRNA expression signature for predicting survival and metastases in hepatocellular carcinoma |
WO2008064519A1 (en) | 2006-11-28 | 2008-06-05 | Capitalbio Corporation | Methods and compositions for diagnosis of esophageal cancer and prognosis and improvement of patient survival |
US8293684B2 (en) | 2006-11-29 | 2012-10-23 | Exiqon | Locked nucleic acid reagents for labelling nucleic acids |
WO2008070082A2 (en) | 2006-12-04 | 2008-06-12 | The Johns Hopkins University | Stem-progenitor cell specific micro-ribonucleic acids and uses thereof |
EP2104735A2 (en) | 2006-12-08 | 2009-09-30 | Asuragen, INC. | Mir-21 regulated genes and pathways as targets for therapeutic intervention |
CN101622348A (zh) | 2006-12-08 | 2010-01-06 | 奥斯瑞根公司 | 作为治疗性干预靶标的miR-20调节的基因和途径 |
AU2007333109A1 (en) | 2006-12-08 | 2008-06-19 | Asuragen, Inc. | Functions and targets of let-7 micro RNAs |
EP2104734A2 (en) | 2006-12-08 | 2009-09-30 | Asuragen, INC. | Mir-20 regulated genes and pathways as targets for therapeutic intervention |
US20090175827A1 (en) | 2006-12-29 | 2009-07-09 | Byrom Mike W | miR-16 REGULATED GENES AND PATHWAYS AS TARGETS FOR THERAPEUTIC INTERVENTION |
US8034560B2 (en) | 2007-01-31 | 2011-10-11 | The Ohio State University Research Foundation | MicroRNA-based methods and compositions for the diagnosis, prognosis and treatment of acute myeloid leukemia (AML) |
ATE553196T1 (de) | 2007-02-27 | 2012-04-15 | Rosetta Genomics Ltd | Zusammensetzung und verfahren zur modulation von zellproliferation und zelltod |
WO2008113758A1 (en) | 2007-03-16 | 2008-09-25 | Covalx Ag | Direct mass spectrometric analysis of drug candidates targeting protein complexes |
CA2695868A1 (en) | 2007-04-10 | 2008-10-16 | Dcb-Usa Llc | Predicting post-treatment survival in cancer patients with micrornas |
US20100144850A1 (en) | 2007-04-30 | 2010-06-10 | The Ohio State University Research Foundation | Methods for Differentiating Pancreatic Cancer from Normal Pancreatic Function and/or Chronic Pancreatitis |
US20090005336A1 (en) | 2007-05-08 | 2009-01-01 | Zhiguo Wang | Use of the microRNA miR-1 for the treatment, prevention, and diagnosis of cardiac conditions |
US20090232893A1 (en) | 2007-05-22 | 2009-09-17 | Bader Andreas G | miR-143 REGULATED GENES AND PATHWAYS AS TARGETS FOR THERAPEUTIC INTERVENTION |
US20090131354A1 (en) | 2007-05-22 | 2009-05-21 | Bader Andreas G | miR-126 REGULATED GENES AND PATHWAYS AS TARGETS FOR THERAPEUTIC INTERVENTION |
US20090099034A1 (en) | 2007-06-07 | 2009-04-16 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Reagents and Methods for miRNA Expression Analysis and Identification of Cancer Biomarkers |
WO2008154333A2 (en) | 2007-06-08 | 2008-12-18 | Asuragen, Inc. | Mir-34 regulated genes and pathways as targets for therapeutic intervention |
EP2152900B1 (en) | 2007-06-08 | 2014-10-15 | The Government of the United States of America as represented by the Secretary of the Department of Health and Human Services | Methods for determining hepatocellular carcinoma subtype |
AU2008266014B2 (en) | 2007-06-15 | 2013-06-06 | The Ohio State University Research Foundation | Oncogenic ALL-1 fusion proteins for targeting drosha-mediated microRNA processing |
CA2676113C (en) | 2007-07-25 | 2014-07-08 | University Of Louisville Research Foundation, Inc. | Exosome-associated microrna as a diagnostic marker |
CN101809169B (zh) | 2007-07-31 | 2013-07-17 | 俄亥俄州立大学研究基金会 | 通过靶向dnmt3a和dnmt3b恢复甲基化的方法 |
CN103866008B (zh) | 2007-08-03 | 2016-06-29 | 俄亥俄州立大学研究基金会 | 编码ncrna的超保守区域 |
CA2926831A1 (en) | 2007-08-22 | 2009-02-26 | The Ohio State University Research Foundation | Methods and compositions for inducing deregulation of epha7 and erk phosphorylation in human acute leukemias |
US20090061424A1 (en) | 2007-08-30 | 2009-03-05 | Sigma-Aldrich Company | Universal ligation array for analyzing gene expression or genomic variations |
EP2183393B1 (en) | 2007-09-06 | 2014-06-11 | The Ohio State University Research Foundation | Microrna signatures in human ovarian cancer |
US20090239818A1 (en) | 2007-09-07 | 2009-09-24 | Cheng Jin Q | Effective treatment of ovarian cancer using triciribine and related compounds |
CN101842484B (zh) | 2007-09-14 | 2015-07-29 | 俄亥俄州立大学研究基金会 | 人外周血微泡中的mirna表达和其用途 |
EP2208499A4 (en) | 2007-10-03 | 2011-12-28 | Kyowa Hakko Kirin Co Ltd | NUCLEIC ACID FOR REGULATING CELL PROLIFERATION |
JP6035010B2 (ja) | 2007-10-04 | 2016-11-30 | ロシュ・イノベーション・センター・コペンハーゲン・アクティーゼルスカブRoche Innovation Center Copenhagen A/S | マイクロmir |
CN101861401B (zh) | 2007-10-11 | 2014-03-12 | 俄亥俄州立大学研究基金会 | 用于诊断和治疗食管腺癌的方法和组合物 |
AU2008316577B2 (en) | 2007-10-26 | 2014-04-10 | The Ohio State University Research Foundation | Methods for identifying fragile histidine triad (FHIT) interaction and uses thereof |
AU2008318778B2 (en) | 2007-10-29 | 2014-10-02 | Regulus Therapeutics Inc. | Targeting microRNAs for the treatment of liver cancer |
CA2705488C (en) | 2007-11-12 | 2018-01-16 | Curtis C. Harris | Therapeutic applications of p53 isoforms in regenerative medicine, aging and cancer |
US20090123933A1 (en) | 2007-11-12 | 2009-05-14 | Wake Forest University Health Sciences | Microrna biomarkers in lupus |
AU2008329755A1 (en) | 2007-11-30 | 2009-06-04 | The Ohio State University Research Foundation | MicroRNA expression profiling and targeting in peripheral blood in lung cancer |
US8071562B2 (en) | 2007-12-01 | 2011-12-06 | Mirna Therapeutics, Inc. | MiR-124 regulated genes and pathways as targets for therapeutic intervention |
WO2009086156A2 (en) | 2007-12-21 | 2009-07-09 | Asuragen, Inc. | Mir-10 regulated genes and pathways as targets for therapeutic intervention |
CN101215560B (zh) | 2007-12-26 | 2010-09-29 | 暨南大学 | 一种具有抗白血病作用的miR-21反义寡核苷酸及其应用 |
EP3239305A3 (en) | 2008-02-01 | 2017-11-29 | The General Hospital Corporation | Use of microvesicles in diagnosis and prognosis of medical diseases and conditions |
US20090263803A1 (en) | 2008-02-08 | 2009-10-22 | Sylvie Beaudenon | Mirnas differentially expressed in lymph nodes from cancer patients |
US20110021609A1 (en) | 2008-02-28 | 2011-01-27 | The Ohio State University Research Foundation | MicroRNA Signatures Associated with Cytogenetics and Prognosis in Acute Myeloid Leukemia (AML) and Uses Thereof |
EP2254668A4 (en) | 2008-02-28 | 2012-08-15 | Univ Ohio State Res Found | MICRORNA SIGNATURES ASSOCIATED WITH HUMAN CHRONIC LYMPHOCYTIC LEUKEMIA (CLL) AND THEIR USE |
EP3064584A3 (en) | 2008-02-28 | 2016-12-07 | The Ohio State University Research Foundation | Micro rna-based methods and compositions for the diagnosis, prognosis and treatmentof gastric cancer |
EP3112477A1 (en) | 2008-02-28 | 2017-01-04 | The Ohio State University Research Foundation | Microrna-based methods and compositions for the diagnosis, prognosis and treatment of prostate related disorders |
US20090220589A1 (en) | 2008-03-01 | 2009-09-03 | Abraxis Bioscience, Llc | Treatment, diagnostic, and method for discovering antagonist using sparc specific mirnas |
EP2268832A2 (en) | 2008-03-06 | 2011-01-05 | Asuragen, INC. | Microrna markers for recurrence of colorectal cancer |
EP2271757A2 (en) | 2008-03-26 | 2011-01-12 | Asuragen, INC. | Compositions and methods related to mir-16 and therapy of prostate cancer |
WO2009131887A2 (en) | 2008-04-24 | 2009-10-29 | Merck & Co., Inc. | Methods of using mir210 as a biomarker for hypoxia and as a therapeutic agent for treating cancer |
US8258111B2 (en) | 2008-05-08 | 2012-09-04 | The Johns Hopkins University | Compositions and methods related to miRNA modulation of neovascularization or angiogenesis |
WO2009147525A1 (en) | 2008-06-04 | 2009-12-10 | Karolinska Institutet Innovations Ab | Skin cancer associated micrornas |
WO2009149418A2 (en) | 2008-06-06 | 2009-12-10 | Asuragen, Inc. | Novel compositions for the in vivo delivery of rnai agents |
CN102149827B (zh) | 2008-06-11 | 2014-08-20 | 由卫生与公众服务部代表的美利坚合众国政府 | MiR-26家族作为肝细胞癌和对治疗的应答性的预测性标志物的用途 |
US20100021734A1 (en) | 2008-07-22 | 2010-01-28 | Covalent Materials Corporation | Ceramic particles and producing method thereof |
KR101031305B1 (ko) | 2008-07-23 | 2011-04-29 | 국립암센터 | 마이크로rna-21 저해제를 포함하는 방사선 민감성증진용 조성물 |
US20110152357A1 (en) | 2008-08-12 | 2011-06-23 | The Ohio State University | Micro-RNA-Based Compositions and Methods for the Diagnosis, Prognosis and Treatment of Multiple Myeloma |
US20100179213A1 (en) | 2008-11-11 | 2010-07-15 | Mirna Therapeutics, Inc. | Methods and Compositions Involving miRNAs In Cancer Stem Cells |
CN102271706A (zh) | 2008-11-21 | 2011-12-07 | 俄亥俄州立大学研究基金会 | 作为转录调节剂的Tcl1 |
US20110275534A1 (en) | 2008-12-05 | 2011-11-10 | The Ohio State University | MicroRNA-Based Methods and Compositions for the Diagnosis, Prognosis and Treatment of Ovarian Cancer Using a Real-Time PCR Platform |
US20120027753A1 (en) | 2009-02-26 | 2012-02-02 | The Ohio State University | MicroRNAs in Never-Smokers and Related Materials and Methods |
US20110136124A1 (en) | 2009-09-23 | 2011-06-09 | Wilson Roa | Microrna expression profiles associated with lung cancer |
WO2011057304A2 (en) | 2009-11-09 | 2011-05-12 | Yale University | Microrna signatures differentiating uterine and ovarian papillary serous tumors |
US8916533B2 (en) | 2009-11-23 | 2014-12-23 | The Ohio State University | Materials and methods useful for affecting tumor cell growth, migration and invasion |
EP2354246A1 (en) | 2010-02-05 | 2011-08-10 | febit holding GmbH | miRNA in the diagnosis of ovarian cancer |
CA2794142A1 (en) | 2010-03-26 | 2011-09-29 | The Ohio State University | Materials and methods related to modulation of mismatch repair and genomic stability by mir-155 |
CN103109183A (zh) | 2010-06-24 | 2013-05-15 | 俄亥俄州立大学 | 通过靶向的miR-29表达建立的慢性淋巴细胞白血病小鼠模型 |
EP2600871A2 (en) | 2010-08-04 | 2013-06-12 | The Ohio State University | Methods for impairing the p53/hdm2 auto-regulatory loop in multiple myeloma development using mir-192, mir-194 and mir-215 |
JP5931897B2 (ja) | 2010-11-12 | 2016-06-08 | ジ・オハイオ・ステイト・ユニバーシティ・リサーチ・ファウンデイションThe Ohio State University Research Foundation | マイクロrna−21、ミスマッチ修復および結腸直腸癌に関連する物質および方法 |
US20130017964A1 (en) | 2011-01-11 | 2013-01-17 | Croce Carlo M | Methods to Identify Chronic Lymphocytic Leukemia Disease Progression |
WO2012122239A1 (en) | 2011-03-07 | 2012-09-13 | The Ohio State University | MUTATOR ACTIVITY INDUCED BY MICRORNA-155 (miR-155) LINKS INFLAMMATION AND CANCER |
-
2010
- 2010-11-23 US US13/511,474 patent/US8916533B2/en active Active
- 2010-11-23 CN CN2010800593399A patent/CN102803511A/zh active Pending
- 2010-11-23 WO PCT/US2010/057758 patent/WO2011063382A1/en active Application Filing
- 2010-11-23 CA CA 2781547 patent/CA2781547A1/en not_active Abandoned
- 2010-11-23 AU AU2010321555A patent/AU2010321555B2/en not_active Ceased
- 2010-11-23 EP EP10832355.1A patent/EP2504452A4/en not_active Ceased
- 2010-11-23 JP JP2012541156A patent/JP5960060B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
2014
- 2014-12-19 US US14/577,118 patent/US9212396B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2015
- 2015-10-26 US US14/923,189 patent/US20160046947A1/en not_active Abandoned
- 2015-11-02 JP JP2015215591A patent/JP2016052317A/ja active Pending
-
2016
- 2016-01-08 AU AU2016200108A patent/AU2016200108A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CA2781547A1 (en) | 2011-05-26 |
US20120252023A1 (en) | 2012-10-04 |
WO2011063382A1 (en) | 2011-05-26 |
AU2010321555B2 (en) | 2015-10-15 |
US20160046947A1 (en) | 2016-02-18 |
EP2504452A1 (en) | 2012-10-03 |
AU2010321555A1 (en) | 2012-06-07 |
EP2504452A4 (en) | 2014-06-11 |
CN102803511A (zh) | 2012-11-28 |
US20150104412A1 (en) | 2015-04-16 |
JP2016052317A (ja) | 2016-04-14 |
JP2013511291A (ja) | 2013-04-04 |
US9212396B2 (en) | 2015-12-15 |
AU2016200108A1 (en) | 2016-02-04 |
US8916533B2 (en) | 2014-12-23 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5960060B2 (ja) | 腫瘍細胞の増殖、遊走および浸潤に影響を与えるために有用な物質および方法 | |
AU2011232669B2 (en) | Materials and methods related to modulation of mismatch repair and genomic stability by miR-155 | |
JP5931897B2 (ja) | マイクロrna−21、ミスマッチ修復および結腸直腸癌に関連する物質および方法 | |
US20120027753A1 (en) | MicroRNAs in Never-Smokers and Related Materials and Methods | |
CN102892898A (zh) | 用于肝细胞癌诊断的含微rna生物标记的诊断试剂盒和方法 | |
CN108220446B (zh) | Linc01356作为分子标志物在胃癌中的应用 | |
CN104994883A (zh) | miR-494通过BIM下调来调节TRAIL诱导的细胞凋亡的用途 | |
Joshi et al. | Noncoding RNA landscape and their emerging roles as biomarkers and therapeutic targets in meningioma | |
Hull et al. | MicroRNAs in endometriosis | |
González-Barriga et al. | Role of miRNAs in muscle atrophy: the myotonic dystrophy paradigm | |
Adams | Elucidating microRNA-mediated regulation of estrogen signaling and response in human breast cancer cells |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20130528 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20140918 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20141217 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20141225 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20150116 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20150630 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20151102 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20151221 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20160219 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20160421 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20160524 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20160622 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5960060 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |