JP5822418B2 - 治療効果のある物質−ｉｉ - Google Patents

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Description

発明の分野
本発明は、一般的に、ヒト及び霊長類を含む哺乳動物、非哺乳動物並びに鳥類種の炎症状態の治療及び予防又は炎症状態によって惹起され又は促進される症状の改善に有用な化学物質に関する。より具体的には、本発明は、哺乳動物、動物又は鳥類種の炎症状態の治療又は予防又は炎症状態によって惹起され又は促進される症状の改善に使用するための、トウダイグサ科（Euphorbiaceae family) 植物の構成員又はそれらの植物学的若しくは園芸学的な近縁植物から得られる大環状ジテルペン群の化学物質、又は該物質の誘導体若しくは化学類似体若しくは化学的な合成形を提供する。本発明はさらに、トウダイグサ科の構成員又はそれらの植物学的若しくは園芸学的な近縁植物又は派生物から得られる大環状ジテルペン、又は該物質の誘導体、化学類似体若しくは化学的合成形の局所投与又は全身投与により、慢性又は一時的な炎症状態を含む炎症状態を患う哺乳動物、動物又は鳥類の被験体を予防又は治療する方法、又はそれらの炎症状態の症状を改善する方法を意図する。本発明の化学物質は精製された化合物の形態、化合物の混合物、治療的に活性な物質へ化学変換できる一以上の化合物の前駆体形又は該植物の化学的画分、亜画分、調製物及び抽出物の形態でありうる。
発明の背景
本明細書の著者により言及される刊行物の書誌的詳細は本記載の終わりにまとめられている。
本明細書におけるいずれの先行技術についての言及も、この先行技術がオーストラリア又は任意の他国での一般的常識の一部をなすという認識又は如何なる様式の示唆でもなく、そしてそのように解釈されるべきではない。
天然産物のスクリーニングとは、生物活性分子についての自然環境のスクリーニングに適用される用語である。とりわけ探究される生物活性分子は有用な治療効果のある物質としての潜在能力を有するものである。自然環境には、植物、微生物、サンゴ及び海生動物が含まれる。癌、及び病原生物による感染の治療のための潜在的な治療用物質についての研究は依然重要な焦点である。
トウダイグサ科植物はトウダイグサ種の植物及びその他の型の植物を含む広範囲の植物を網羅する。種々の状態に及ぼすこれらの植物の樹液の潜在的効果並びに腫瘍形成の促進及び皮膚及び目の刺激の惹起についての多様な報告があるが、結論には達していない。
この群の最も集中的に研究された種はシマニシキソウ（Euphorbia piluliferaL) （同義語はイー・ヒルタ・エル（E. hirta L.)、イー・キャピタタ・ラム（E capitata Lam.)）であり、これらの通称には、ピルベアリング・スパージ(pill-bearing spurge)、蛇草(snakeweed)、キャッツ・ヘア(cat's hair) 、クイーンズランド・アズマ・ウィード及びフラワリーヘディッド・スパージ(flowery-headed spurge)が含まれる。この植物はインドを含む熱帯諸国及びクイーンズランドを含む北オーストラリアに広く分布している。
最近の報告では、北ナイジェリアで見られる極めて有毒な植物のユーフォルビア・ポイゾニイ（Euphorbia poisonii)のラテックスから得られる幾つかのチグリレン(tiglilane)ジテルペンエステルの選択的細胞毒性が記載されており、これは園芸用除草剤として使用される。これらの化合物の一つは、ヒトの腎臓癌細胞系統であるＡ−４９８に対して、アドリアマイシンよりも10,000倍を上回る選択的細胞毒性を有する（ファトープら，1996）。
シマニシキソウ植物及びその抽出物は、腫瘍治療(EP 0 330 094)、ＡＩＤＳ関連コンプレックス及びＡＩＤＳ(HU-208790)並びに免疫の増進を含む種々の目的のために、並びに開放創(DE-4102054)の治療用の抗真菌物質として、検討されてきた。
こうして、種々のトウダイグサの調製物の抗癌活性について単発的な報告がある（ファトープら，1996、オクスズら，1996参照）一方で、発癌性であると報告された少なくとも一つのトウダイグサ種中に該化合物が存在する（エバンズとオスマン，1974、スタブリックとストルツ，1976、ヘッカー，1970）だけでなく、少なくとも一つの種は皮膚刺激及び腫瘍促進の効果を有し（ガンディズら，1993）そして他の種はバーキットリンパ腫におけるＥＢＶに特異的な細胞性免疫を低下させる（イマイら，1994）。
本発明によれば、本発明者らは哺乳動物、動物及び鳥類における炎症状態の治療及び予防に有用な化学物質及びこれらの物質を含む画分を同定した。
発明の概要
本明細書を通して、本文脈が他の意味を要しない限り、「含む(comprise)」という単語、又は「含む(comprises)」若しくは「含む(comprising)」などの変形は、明記した要素若しくは整数又は要素若しくは整数の群を含むことを意味するが、任意の他の要素若しくは整数又は要素若しくは整数の群の排除を意味するわけではないと理解される。
本発明は、炎症状態及び潜在的な炎症状態の治療及び予防に有用なトウダイグサ科植物から得られる化学物質並びに該物質を含む画分の同定に一部基づいている。このような状態には自己免疫状態、病原性状態による感染と関連する状態、炎症性免疫応答又は免疫系の細胞の増殖と関連する状態及び免疫増強を必要とする状態が含まれる。本発明者らは本発明の化学物質がプロテイン・キナーゼＣ（ＰＫＣ）活性を調節できることをさらに確認したので、ＰＫＣ活性の高レベル調節又は低レベル調節が要求される状態の治療のための基礎を提供できる。
従って、本発明の一側面は、被験体における炎症状態の治療方法又は予防方法であって、該方法がトウダイグサ科植物から得られうる化学物質又はその誘導体若しくは化学類似体の症状の改善に有効な量を、該被験体に投与する工程を含み、該化学物質がインゲナン(ingenane)、ペプルアン(pepluane)及びジャトロファン(jatrophane)の群の化合物から選択される大環状ジテルペンであり、該化学物質又は誘導体又は化学類似体が本明細書で定義される一般式（Ｉ）〜（Ｖ）のいずれか一つにより表されるものであり、該化学物質又はその誘導体若しくは化学類似体がＰＫＣ活性、ＰＫＣ依存性遺伝子発現又はＰＫＣ酵素の代謝回転を調節できるものであり、該化学物質又はその誘導体若しくは化学類似体が、該炎症状態と関連する一以上の症状を改善するのに十分な時間及び条件の下で投与されるものである方法を意図する。
本発明の他の側面は病原性の生物又は潜在的に病原性の生物による感染に対する被験体の治療及び予防における該被験体の免疫増強方法であって、該方法が、トウダイグサ科植物から得られる大環状ジテルペン又はそれを含む化学的画分又は上で定義された構造を有する該大環状ジテルペンの誘導体若しくは化学類似体の症状の改善に有効な量を該被験体に投与する工程を含み、該大環状ジテルペン又はその誘導体若しくは化学類似体がＰＫＣの活性、合成又は酵素代謝回転を調節するものであり、該投与が該免疫系の成分を増強するのに十分な時間及び条件の下でなされるものである方法を意図する。
本発明の更なる他の側面は、被験体における炎症状態を治療又は予防する方法であって、該方法が、トウダイグサ科の植物から得られる大環状ジテルペン、又はそれを含む化学的画分、又は上で定義された構造を有する該大環状ジテルペンの誘導体若しくは化学類似体の症状の改善に有効な量を該被験体に投与する工程を含み、該大環状ジテルペン又はその誘導体若しくは化学類似体がＰＫＣの活性、合成又は酵素代謝回転を調節するものであり、該投与が該炎症状態を治療するのに十分な時間及び条件の下でなされるものである方法を提供する。
本発明の更なる側面は、本発明を実施するためにトウダイグサ科から得られる化学物質の適性を評価する方法を意図する。例えば表Ａに記載される化学物質を含む画分を含む化学物質に対して数値が与えられる。
Figure 0005822418
［外３］
Figure 0005822418
本発明のさらに他の側面は、被験体における炎症状態を治療又は予防する方法であって、該方法がトウダイグサ科植物又はその植物学的若しくは園芸学的な近縁植物から得られうる大環状ジテルペン又はこれらの薬学的に許容しうる塩の症状の改善に有効な量を該被験体に投与する工程を含み、該大環状ジテルペンが、インゲナン、ペプルアン若しくはジャトロファン、又はその誘導体若しくは化学類似体から選択され且つ下に定義される一般式（Ｉ）〜（Ｖ）のいずれか一つにより表される構造を有するものであり、該化学物質が（ＰA ）＞１０の効力を示すものであり、ＰA ＝ΣＩV であり、ＩV が表Ａで定義された具体的特徴に関連する数値であり、該化学物質が、該炎症により惹起される又は該炎症と関連する少なくとも一つの症状を改善するのに十分な時間及び条件の下で投与されるものである方法を意図する。
本発明の他の側面は、被験体の免疫を増強する方法であって、該方法がトウダイグサ科植物又はその植物学的若しくは園芸学的な近縁植物から得られうる大環状ジテルペン又はこれらの薬学的に許容しうる塩の免疫を増強するのに有効な量を該被験体に投与する工程を含み、該大環状ジテルペンが、インゲナン、ペプルアン若しくはジャトロファン、又はその誘導体若しくは化学類似体から選択され且つ下に定義される一般式（Ｉ）〜（Ｖ）のいずれか一つにより表される構造を有するものであり、該化学物質が（ＰA ）＞１０の効力を示すものであり、ＰA ＝ΣＩV であり、ＩV が上で定義された具体的特徴に関連する数値であり、該化学物質が、該被験体の免疫を増強するのに十分な時間及び条件の下で投与されるものである方法を意図する。
本発明の更なる他の側面は、炎症の治療又は予防又は被験体の免疫性を増強するための候補化合物又は候補化合物群の有用性蓋然性を評価するコンピュータプログラム生産物であって、
（１） 該化合物に関連する少なくとも二つの特徴について入力指標値として受信するコードであって、該特徴が、
（ａ）ＰＫＣの活性又は効果を調節する能力、
（ｂ）両極性樹状活性を誘導する能力、
（ｃ）トウダイグサ科の構成員から誘導される能力、
（ｄ）チャボタイゲキ（E. peplus)から誘導される能力、
（ｅ）トウダイグサの種の樹液から水抽出されうる能力、又は
（ｆ）潜伏ウイルスを活性化する能力、
（ｇ）ＴＰＡ若しくはＰＭＡより低い腫瘍促進能力、
から選択されるものであるコード、
（２） 該指標値を加えて該化合物についての効力値に相当する総和を提供するコード、並びに
（３） 該コードを記憶するコンピュータ読み取り可能な媒体、
を含むものである生産物を意図する。
本発明の更なる他の側面は、炎症の治療又は被験体の免疫を増強するための候補化合物又は候補化合物群の有用性蓋然性を評価するためのコンピュータであって、
（１） 機械による読み取り可能データによりコードされたデータ記憶材料を含む機械による読み取り可能データ記憶媒体であって、該機械による読み取り可能データが該化合物に関連する少なくとも二つの特徴についての入力指標値を含むものであり、該特徴が、
（ａ）ＰＫＣの活性又は効果を調節する能力、
（ｂ）両極性樹状活性を誘導する能力、
（ｃ）トウダイグサ科の構成員から誘導される能力、
（ｄ）チャボタイゲキ（E. peplus)から誘導される能力、
（ｅ）トウダイグサの種の樹液から水抽出され得るの能力、又は
（ｆ）潜伏ウイルスを活性化する能力、
（ｇ）ＴＰＡ若しくはＰＭＡより低い腫瘍促進能力、
から選択されるものであり、
（２） 該機械による読み取り可能データを処理するための指令を記憶するワーキングメモリ、
（３） 該機械による読み取り可能データを処理し該化合物（複数又は単数）についての効力値に相当する該指標値の総和を提供するため、該ワーキングメモリ及び該機械による読み取り可能データ記憶媒体に連結した中央演算処理装置、並びに
（４） 該効力値を受信するため該中央演算処理装置に連結した出力ハードウェア、
を含むコンピュータに及ぶ。
化合物は本明細書では化合物コードで言及されうる。これらは下記のように定義される。
【外４】
Figure 0005822418
好ましい実施態様の詳細な説明
本発明は、トウダイグサ科植物の構成員又はそれらの植物学的若しくは園芸学的に近縁な植物から得られる化学物質及びそれを含む化学的画分の生物学的に有用な性質の同定に一部基礎を置くものである。これらの生物学的に有用な性質には、免疫系の強化の促進又は免疫系の細胞又は他の化合物の強化の促進を含む炎症状態の予防及び／又は治療、並びに炎症と関連する症状の改善におけるそれらの使用が含まれる。
「治療」という用語は、その最も広い意味で用いられ、疾病状態を予防すること並びに炎症の症状の結果の改善を促進すること、さらには又はその代わりに免疫系の成分を刺激することが含まれる。
「予防」という用語も、本明細書中でその最も広い意味で用いられ、炎症の進行の危険性を低下させることが包含される。ある状態において、ある物質は被験体を予防的に治療するよう作用しうる。更に、ある物質の予防的投与が、結果として該物質が病理学的状態の治療に関与するようになりうる。「治療」又は「予防」という用語の使用は、炎症の害作用を低下させるべきであり、又は免疫系を強化すべきであり又は免疫系の中の成分を強化すべきであり、及び／又は該症状を緩和させ又は炎症により惹起又は促進される症状の進行の危険性を低下させるべきであるという意図した結果に制限するものと解釈されるべきでない。
本発明は、具体的には、トウダイグサ科植物の構成員又は該植物の植物学的若しくは園芸学的な近縁植物から得られる一つ以上の大環状ジテルペンの使用を対象にする。本明細書中でのトウダイグサ科の構成員についての言及には、アカリファ（Acalypha）、アシドトン（Acidoton）、アクチノステモン（Actinostemon）、アデリア（Adelia）、アデノクリン（Adenocline）、アデノクレピス（Adenocrepis）、アデノファエドラ（Adenophaedra）、アディスカ（Adisca）、アグロスティスタチス（Agrostistachys）、アルコルネア（Alchornea）、アルコネオプシス（Alchorneopsis）、アルシナエアンザス（Alcinaeanthus ）、アルコセリア（Alcoceria）、アレウリテス（Aleurites）、アマノア（Amanoa）、アンドラチネ（Andrachne）、アンゴスチレス（Angostyles）、アニソフィラム（Anisophyllum）、アンチデスマ（Antidesma）、アフォラ（Aphora）、アポロサ（Aporosa）、アポロセラ（Aporosella）、アルギタムニア（Argythamnia）、アストロコッカス（Astrococcus）、アストロギネ（Astrogyne）、バッカンレア（Baccanrea）、バリオスペルマム（Baliospermum）、ベルナルディア（Beruardia）、ベイリオプシス（Beyeriopsis）、ビスコフィア（Bischofia ）、ブラチア（Blachia）、ブルメオドンドロン（Blumeodondron）、ボナニア（Bonania）、ブラドレイア（Bradleia）、ブレイニア（Breynia）、ブレイニオプシス（Breyniopsis）、ブリデリア（Briedelia）、ブラエアビア（Buraeavia）、カペロニア（Caperonia）、カリオデンドロン（Caryodendron）、セリアネラ（Celianella）、セファロクロトン（Cephalocroton）、チャエノセカ（Chaenotheca）、チャエトカルプス（Chaetocarpus）、チャマエシス（Chamaesyce）、チェイロサ（Cheilosa）、チロペタラム（Chiropetalum）、コリオフィラム（Choriophyllum）、シッカ（Cicca）、チャオキシロン（Chaoxylon）、クレイドン（Cleidon）、クレイスタンザス（Cleistanthus）、クルイティア（Cluytia）、クネスモネ（Cnesmone）、クニドスコラス（Cnidoscolus）、コッコセラス（Coccoceras）、コディアエウム（Codiaeum）、コエロディスカス（Coelodiscus）、コナミ（Conami）、コンセベイバ（Conceveiba）、コンセベイバストラム（Conceveibastrum）、コンセベイバム（Conceveibum）、コリセア（Corythea）、クロイザティア（Croizatia）、クロトン（Croton）、クロトノプシス（Crotonopsis）、クロゾフォラ（Crozophora）、クバンザス（Cubanthus）、クヌリア（Cunuria）、ダクチロステモン（Dactylostemon）、ダレチャンピア（Dalechampia）、デンドロコウシンシア（Dendrocousinsia）、ディアスペルサス（Diaspersus）、ディディモシスタス（Didymocistus）、ディモルフォカリックス（Dimorphocalyx）、ディスコカルパス（Discocarpus）、ディタキシス（Ditaxis）、ドデカスティングマ（Dodecastingma）、ドライペテス（Drypetes）、ディソプシス（Dysopsis）、エラテリオスペルマム（Elateriospermum）、エンダデニウム（Endadenium）、エンドスペルマム（Endospermum）、エリスマンザス（Erismanthus）、エリソロカルパス（Erythrocarpus）、エリソロチラス（Erythrochilus）、ユーメカンザス（Eumecanthus）、ユーフォルビア（Euphorbia）、ユーフォルビオデンドロン（Euphorbiodendron）、イクスコエカリア（Excoecaria）、フルエッゲア（Flueggea）、カレアリア（Calearia）、ガルシア（Garcia）、ガバッレティア（Gavarretia）、ゲロニウム（Gelonium）、ギアラ（Giara）、ギボティア（Givotia）、グロチディオン（Glochidion）、グロチディオノプシス（Glochidionopsis）、グリシデンドロン（Glycydendron）、ギムナンゼス（Gymnanthes）、ギムノスパリア（Gymnosparia）、ヘマトスペルマム（Haematospermum）、ヘンデカンドラ（Hendecandra）、ヘベア（Hevea）、ヒエロニマ（Hieronima）、ヒエロニマ（hieronyma）、ヒッポクレパンドラ（Hippocrepandra）、ホマランザス（Homalanthus）、ヒメノカルディア（Hymenocardia）、ジャニファ（Janipha）、ジャトロファ（Jatropha）、ジュロクロトン（Julocroton）、ラシオクロトン（Lasiocroton）、レイオカルパス（Leiocarpus）、レオナルディア（Leonardia）、レピダンザス（Lepidanthus）、ロイコクロトン（Leucocroton）、マベア（Mabea）、マカランガ（Macaranga）、マロタス（Mallotus）、マニホット（Manihot）、マッパ（Mappa）、マプロウネア（Maprounea）、メランゼサ（Melanthesa）、メルカリアリス（Mercurialis）、メッテニア（Mettenia）、ミクランドラ（Micrandra）、ミクロデスミス（Microdesmis）、ミクロエルス（Microelus）、ミクロスタチイ（Microstachy）、マオクロトン（Maocroton）、モナデニウム（Monadenium）、モジンナ（Mozinna）、ネオスコルテキニア（Neoscortechinia）、オマランザス（Omalanthus）、オムファレア（Omphalea）、オフェランザ（Ophellantha）、オルビクラリア（Orbicularia）、オストデス（Ostodes）、オキシデクテス（Oxydectes）、パレンガ（Palenga）、パンタデニア（Pantadenia）、パラドリペプテス（Paradrypeptes）、パウサンドラ（Pausandra）、ペディランザス（Pedilanthus）、ペラ（Pera）、ペリディウム（Peridium）、ペタロスティグマ（Petalostigma）、フィランザス（Phyllanthus）、ピクロデンドロ（Picrodendro）、ピエラルディア（Pierardia）、ピリノフィタム（Pilinophytum ）、ピメレオデンドロン（Pimeleodendron）、ピランヘア（Piranhea）、プラチギナ（Platygyna）、プルケネティア（Plukenetia）、ポドカリックス（Podocalyx）、ポインセチア（Poinsettia）、ポラレシア（Poraresia）、プロサルテマ（Prosartema）、シューダンザス（Pseudanthus）、ピクノコマ（Pycnocoma）、クアドラシア（Quadrasia）、レベルコニア（Reverchonia）、リチェリア（Richeria）、リチェリエラ（Richeriella）、リシネラ（Ricinella）、リシノカルプス（Ricinocarpus）、ロットレラ（Rottlera）、サゴティア（Sagotia）、サンウィチア（Sanwithia）、サピウム（Sapium）、サビア（Savia）、スクレロクロトン（Sclerocroton）、セバスティアナ（Sebastiana）、セクリネガ（Securinega）、セネフェルデラ（Senefeldera）、セネフィルデロプシス（Senefilderopsis）、セロフィトン（Serophyton）、シフォニア（Siphonia）、スパチオステモン（Spathiostemon）、スピキシア（Spixia）、スティリンギア（Stillingia）、ストロフィオブラチア（Strophioblachia）、シナデニウム（Synadenium）、テトラコッカス（Tetracoccus）、テトラプランドラ（Tetraplandra）、テトロルチディウム（Tetrorchidium ）、チルサンセラ（Thyrsanthera）、チチマラス（Tithymalus）、トラゲイア（Trageia）、トレヴィア（Trewia）、トリゴノステモン（Trigonostemon）、チリア（Tyria）及びキシロフィラ（Xylophylla ）の属の種についての言及が含まれる。
最も好ましく且つ本発明の実施に最も適する属はトウダイグサ属である。この属の特に有用な種には、ユーフォルビア・アアロン−ロッシ(Euphorbia aaron-rossii)、ユーフォルビア・アブレビアタ（abbreviata）、ユーフォルビア・アクタ（acuta ）、ユーフォルビア・アラトカウリス（alatocaulis ）、ユーフォルビア・アルビカウリス（albicaulis）、ユーフォルビア・アルゴマルギナタ(algomarginata)、ユーフォルビア・アリセア(aliceae)、ユーフォルビア・アルタ(alta)、ユーフォルビア・アナカムプセロス(anacampseros)、ユーフォルビア・アンドロメダ(andromedae)、ユーフォルビア・アングスタ(angusta)、ユーフォルビア・アントニイ(anthonyi) 、ユーフォルビア・アンチグエンシス(antiguensis)、ユーフォルビア・アポシニフォリア(apocynifolia) 、ユーフォルビア・アラビカ(arabica)、ユーフォルビア・アリエンシス(ariensis) 、ユーフォルビア・アリゾニカ(arizonica)、ユーフォルビア・アルカンサナ(arkansana)、ユーフォルビア・アルテアガエ(arteagae) 、ユーフォルビア・アランデラナ(arundelana) 、ユーフォルビア・アストロイテス（astroites ）、ユーフォルビア・アトロコッカ（atrococca ）、ユーフォルビア・バセリシス（baselicis ）、ユーフォルビア・バタバネンシス（batabanensis）、ユーフォルビア・ベルゲリ（bergeri ）、ユーフォルビア・ベルムディアナ（bermudiana）、ユーフォルビア・ビコロル（bicolor）、ユーフォルビア・ビフォルミス（biformis）、ユーフォルビア・ビフルカタ（bifurcata）、ユーフォルビア・ビロバタ（bilobata）、ユーフォルビア・ビラメンシス（biramensis）、ユーフォルビア・ビウンシアリス（biuncialis）、ユーフォルビア・ブレファロスティプラ（blepharostipula）、ユーフォルビア・ブロドゲッティ（blodgetti）、ユーフォルビア・ボエルハビオイデス（boerhaavioides）、ユーフォルビア・ボリビアナ（boliviana）、ユーフォルビア・ブラセイ（bracei）、ユーフォルビア・ブラチアタ（brachiata）、ユーフォルビア・ブラチセラ（brachycera）、ユーフォルビア・ブランデッゲ（brandegee ）、ユーフォルビア・ブリットニイ（brittonii ）、ユーフォルビア・カエシア（caesia）、ユーフォルビア・カルシコラ（calcicola）、ユーフォルビア・カムペストリス（campestris）、ユーフォルビア・カンデラブルム（candelabrum）、ユーフォルビア・カピテラッタ（capitellata）、ユーフォルビア・カルメネンシス（carmenensis）、ユーフォルビア・カルンクラタ（carunculata）、ユーフォルビア・カエンシス（cayensis）、ユーフォルビア・セラストロイデス（celastroides）、ユーフォルビア・カリコフィラ（chalicophila）、ユーフォルビア・カマエルホドス（chamaerrhodos）、ユーフォルビア・カマエスラ（chamaesula）、ユーフォルビア・チアペンシス（chiapensis）、ユーフォルビア・チオゲノイデス（chiogenoides）、ユーフォルビア・チネラスセンス（cinerascens）、ユーフォルビア・クラリオネンシス（clarionensis）、ユーフォルビア・コリマエ（colimae）、ユーフォルビア・コロラタ（colorata）、ユーフォルビア・コムタタ（commutata）、ユーフォルビア・コンソクイットラエ（consoquitlae）、ユーフォルビア・コンボルブロイデス（convolvuloides）、ユーフォルビア・コラリフェラ（corallifera）、ユーフォルビア・クレベッリマ（creberrima）、ユーフォルビア・クレヌラタ（crenulata）、ユーフォルビア・クベンシス（cubensis）、ユーフォルビア・クスピダタ（cuspidata）、ユーフォルビア・シムビフォルミス（cymbiformis）、ユーフォルビア・ダルリングトニ（darlingtonii）、ユーフォルビア・デフォリアタ（defoliata）、ユーフォルビア・デゲネリ（degeneri）、ユーフォルビア・デルトイデア（deltoidea）、ユーフォルビア・デンタタ（dentata）、ユーフォルビア・デプレッサ（depressa）、ユーフォルビア・ディクチオスペルマ（dictyosperma）、ユーフォルビア・ディクチオスペルマ（dictyosperma）、ユーフォルビア・ディオエカ（dioeca）、ユーフォルビア・ディスコイダリス（discoidalis）、ユーフォルビア・ドルシベントラリス（dorsiventralis）、ユーフォルビア・ドルモンディ（drumondii）、ユーフォルビア・デュクロウキシ（duclouxii）、ユーフォルビア・デュッシ（dussii）、ユーフォルビア・エアノフィラ（eanophylla）、ユーフォルビア・エッゲルシ（eggersii）、ユーフォルビア・エグランデュロサ(eglandulosa) 、ユーフォルビア・エラタ(elata)、ユーフォルビア・エナッラ(enalla)、ユーフォルビア・エリオゴノイデス(eriogonoides) 、ユーフォルビア・エリオフィラ(eriophylla) 、ユーフォルビア・エスクラエフォルミス(esculaeformis) 、ユーフォルビア・エスピリツエンシス(espirituensis) 、ユーフォルビア・エスラ(esula) 、ユーフォルビア・エキシシサ(excisa) 、ユーフォルビア・エキシクルサ(exclusa) 、ユーフォルビア・エキシスティピタタ(exstipitata) 、ユーフォルビア・エキシスティプラタ(exstipulata) 、ユーフォルビア・フェンドレリ(fendleri) 、ユーフォルビア・フィリカウリス(filicaulis) 、ユーフォルビア・フィリフォルミス(filiformis) 、ユーフォルビア・フロリダ(florida) 、ユーフォルビア・フルチクロサ(fruticulosa) 、ユーフォルビア・ガルベル(garber) 、ユーフォルビア・ガウメリ(gaumerii) 、ユーフォルビア・ゲラルディアナ(gerardiana) 、ユーフォルビア・ゲイエリ(geyeri) 、ユーフォルビア・グリプトスペルマ(glyptosperma) 、ユーフォルビア・ゴルゴニス(gorgonis) 、ユーフォルビア・グラシリオル(gracilior) 、ユーフォルビア・グラシリマ(gracillima) 、ユーフォルビア・グラディイ(gradyi) 、ユーフォルビア・グラミネア(graminea) 、ユーフォルビア・グラミニエア(graminiea) 、ユーフォルビア・グリセア(grisea) 、ユーフォルビア・グアダラヤラナ(guad alajarana)、ユーフォルビア・グアナレンシス(guanarensis) 、ユーフォルビア・ギムナデニア(gymnadenia) 、ユーフォルビア・ヘマタンザ(haematantha) 、ユーフォルビア・ヘディオトイデス(hedyotoides) 、ユーフォルビア・ヘルドリッチ(heldrichii) 、ユーフォルビア・ヘレナエ(helenae) 、ユーフォルビア・ヘレッリ(helleri) 、ユーフォルビア・ヘルヴィッギ(helwigii) 、ユーフォルビア・ヘンリクソニイ(henricksonii) 、ユーフォルビア・ヘテロフィラ(heterophylla) 、ユーフォルビア・ヘキサゴナ(hexagona) 、ユーフォルビア・ヘキサゴノイデス(hexagonoides) 、ユーフォルビア・ヒンクレイオルム(hinkleyorum) 、ユーフォルビア・ヒントニイ(hintonii） 、ユーフォルビア・ヒルツラ(hirtula) 、ユーフォルビア・ヒルタ(hirta) 、ユーフォルビア・ホオベリ(hooveri) 、ユーフォルビア・フミストラタ(humistrata) 、ユーフォルビア・ヒペリシフォリア(hypericifolia)、ユーフォルビア・イヌンダタ(inundata) 、ユーフォルビア・インボルタ(involuta) 、ユーフォルビア・ヤリスセンシス(jaliscensis) 、ユーフォルビア・ジェジュナ(jejuna) 、ユーフォルビア・ジョンストン(johnston) 、ユーフォルビア・ジュッタエ(juttae) 、ユーフォルビア・クヌッチ(knuthii) 、ユーフォルビア・ラシオカルパ(lasiocarpa) 、ユーフォルビア・ラタ(lata) 、ユーフォルビア・ラタジ(latazi) 、ユーフォルビア・ラテリコロル(latericolor) 、ユーフォルビア・ラキシフロラ(laxiflora) 、ユーフォルビア・レチェオイデス(lecheoides) 、ユーフォルビア・レディエニイ(ledienii) 、ユーフォルビア・ロイコフィラ(leucophylla) 、ユーフォルビア・リネアタ(lineata) 、ユーフォルビア・リングイフォルミス(linguiformis) 、ユーフォルビア・ロンゲコルヌタ(longecornuta) 、ユーフォルビア・ロンゲペティオラタ(longepetiolata) 、ユーフォルビア・ロンゲラモサ(longeramosa) 、ユーフォルビア・ロンギンスリコラ(longinsulicola) 、ユーフォルビア・ロンギピラ(longipila) 、ユーフォルビア・ルプリナ(lupulina) 、ユーフォルビア・ルリダ(lurida) 、ユーフォルビア・リシオイデス(lycioides) 、ユーフォルビア・マクロポドイデス(macropodoides) 、マクバウギアナ(macvaughiana) 、ユーフォルビア・マンカ(manca) 、ユーフォルビア・マンドニアナ(mandoniana) 、ユーフォルビア・マングレティ(mangleti) 、ユーフォルビア・マンゴ(mango) 、ユーフォルビア・マリランディカ(marylandica) 、ユーフォルビア・マヤナ(mayana) 、ユーフォルビア・メラナデニア(melanadenia) 、ユーフォルビア・メラノカルパ(melanocarpa) 、ユーフォルビア・メリデンシス(meridensis) 、ユーフォルビア・メルトニイ(mertonii) 、ユーフォルビア・メキシアエ(mexiae) 、ユーフォルビア・ミクロセファラ(microcephala) 、ユーフォルビア・ミクロクラダ(microclada) 、ユーフォルビア・ミクロメラ(micromera) 、ユーフォルビア・ミセラ(misella) 、ユーフォルビア・ミスリカ(missurica) 、ユーフォルビア・モンタナ(montana) 、ユーフォルビア・モンテレヤナ(montereyana) 、ユーフォルビア・ムルチカウリス(multicaulis) 、ユーフォルビア・ムルチフォルミス(multiformis) 、ユーフォルビア・ムルチノディス(multinodis) 、ユーフォルビア・ムルチセタ(multiseta) 、ユーフォルビア・ムスシコラ(muscicola) 、ユーフォルビア・ネオメキシカナ(neomexicana) 、ユーフォルビア・ネフラデニア(nephradenia) 、ユーフォルビア・ニクエロアナ(niqueroana) 、ユーフォルビア・オアキサカナ(oaxacana) 、ユーフォルビア・オッシデンタリス(occidentalis) 、ユーフォルビア・オドントデニア(odontodenia) 、ユーフォルビア・オリバセア(olivacea) 、ユーフォルビア・オロヴァルアナ(olowaluana) 、ユーフォルビア・オプタルミカ(opthalmica) 、ユーフォルビア・オバタ(ovata) 、ユーフォルビア・パチポダ(pachypoda) 、ユーフォルビア・パチリザ(pachyrhiza) 、ユーフォルビア・パディフォリア(padifolia) 、ユーフォルビア・パルメリ(Palmeri) 、ユーフォルビア・パルディコラ(paludicola) 、ユーフォルビア・パルシフロラ(parciflora) 、ユーフォルビア・パリシ(parishii) 、ユーフォルビア・パリイ(parryi) 、ユーフォルビア・パキシアナ(paxiana) 、ユーフォルビア・ペディクリフェラ(pediculifera) 、ユーフォルビア・ペプリディオン(peplidion) 、ユーフォルビア・ペプロイデス(peploides) 、ユーフォルビア・ペプルス(peplus) 、ユーフォルビア・ペルガメナ(pergamena) 、ユーフォルビア・ペルリグネア(perlignea) 、ユーフォルビア・ペタロイデア(petaloidea) 、ユーフォルビア・ペタロイデア(petaloidea) 、ユーフォルビア・ペトリナ(petrina) 、ユーフォルビア・ピカチェンシス(picachensis) 、ユーフォルビア・ピロスラ(pilosula) 、ユーフォルビア・ピルリフェラ(pilulifera) 、ユーフォルビア・ピナリオナ(pinariona) 、ユーフォルビア・ピネトラム(pinetorum) 、ユーフォルビア・ピオノスペルマ(pionosperma) 、ユーフォルビア・プラティスペルマ(platysperma) 、ユーフォルビア・プリカタ(plicata) 、ユーフォルビア・ポエッピギイ(poeppigii) 、ユーフォルビア・ポリオスペルマ(poliosperma) 、ユーフォルビア・ポリカルパ(polycarpa) 、ユーフォルビア・ポリクネモイデス(polycnemoides) 、ユーフォルビア・ポリフィッラ(polyphylla) 、ユーフォルビア・ポルトリセンシス(portoricensis) 、ユーフォルビア・ポルツラコイデス(portulacoides) 、ユーフォルビア・ポルツラナ(portulana) 、ユーフォルビア・プレスリイ(preslii) 、ユーフォルビア・プロストラタ(prostrata) 、ユーフォルビア・プテロネウラ(pteroneura) 、ユーフォルビア・ピクナンテマ(pycnanthema) 、ユーフォルビア・ラモサ(ramosa) 、ユーフォルビア・ラプラム(rapulum) 、ユーフォルビア・レミイ(remyi) 、ユーフォルビア・レトロスカブラ(retroscabra) 、ユーフォルビア・レボルタ(revoluta) 、ユーフォルビア・リブラリス(rivularis) 、ユーフォルビア・ロブスタ(robusta) 、ユーフォルビア・ロモサ(romosa) 、ユーフォルビア・ルビダ(rubida) 、ユーフォルビア・ルブロスペルマ(rubrosperma) 、ユーフォルビア・ルピコラ(rupicola) 、ユーフォルビア・サンマルテンシス(sanmartensis) 、ユーフォルビア・サキサティリス・エム．ビエブ(M. saxatilis Bieb)、ユーフォルビア・シゾロバ(schizoloba) 、ユーフォルビア・スクレロシアチウム(sclerocyathium) 、ユーフォルビア・スコプロラム(scopulorum) 、ユーフォルビア・セニリス(senilis) 、ユーフォルビア・セルピリフォリア(serpyllifolia) 、ユーフォルビア・セルラ(serrula) 、ユーフォルビア・セティロバ(setiloba) ・エンゲルム(Engelm) 、ユーフォルビア・ソノラエ(sonorae) 、ユーフォルビア・ソオビイ(soobyi) 、ユーフォルビア・スパルシフロラ(sparsiflora) 、ユーフォルビア・スファエロスペルマ(sphaerosperma) 、ユーフォルビア・シフィリティカ(syphilitica) 、ユーフォルビア・スプルセアナ(spruceana) 、ユーフォルビア・スブコエルレア(subcoerulea) 、ユーフォルビア・ステラタ(stellata) 、ユーフォルビア・スブマミラリス(submammilaris) 、ユーフォルビア・スブペルタタ(subpeltata) 、ユーフォルビア・スブプベンス(subpubens) 、ユーフォルビア・スブレニフォルメ(subreniforme) 、ユーフォルビア・スブトリフォリアタ(subtrifoliata) 、ユーフォルビア・スセダネア(succedanea) 、ユーフォルビア・タマウリパサナ(tamaulipasana) 、ユーフォルビア・テレフィオイデス(telephioides) 、ユーフォルビア・テヌイッシマ(tenuissima) 、ユーフォルビア・テトラポラ(tetrapora)、ユーフォルビア・チルカリ(tirucalli)、ユーフォルビア・トメンテラ(tomentella) 、ユーフォルビア・トメントサ(tomentosa)、ユーフォルビア・トラルバシイ(torralbasii)、ユーフォルビア・トバリエンシス(tovariensis)、ユーフォルビア・トラチスペルマ(trachysperma) 、ユーフォルビア・トリコロル(tricolor) 、ユーフォルビア・トロヤナ(troyana) 、ユーフォルビア・ツエルクヘイミイ(tuerckheimii) 、ユーフォルビア・ツルクザニノヴィイ(turczaninowii)、ユーフォルビア・ウムベルラタ(umbellulata)、ユーフォルビア・ウンデュラタ(undulata) 、ユーフォルビア・ベルミフォルミス(vermiformis) 、ユーフォルビア・ベルシコロル(versicolor) 、ユーフォルビア・ビリフェラ(villifera) 、ユーフォルビア・ビオラセア(violacea) 、ユーフォルビア・ウィテイ(whitei) 、ユーフォルビア・キサンチ(xanti)・エンゲルム(Engelm) 、ユーフォルビア・キシロポダ(xylopoda) ・グリイヌム(Greenm) 、ユーフォルビア・ヤヤレシア(yayalesia)・ウルブ(Urb.) 、ユーフォルビア・ユンガセンシス(yungasensis)、ユーフォルビア・ゼラブスチャニカ(zeravschanica)及びユーフォルビア・ジニイフロラ(zinniiflora)が含まれる。
シナデニウム(Synadeniunm)属の特に好ましい種としては、シナデニウム・グランティ(grantii)及びシナデニウム・コムパクツム(compactum)が挙げられる。
モナデニウム(Modadenium)属の特に好ましい種には、モナデニウム・ルガルダエ(lugardae)及びモナデニウム・グエンセリ(guentheri)が含まれる。
エンダデニウム(Endadenium)属の好ましい種はエンダデニウム・ゴスヴェイレニ(gossweileni)である。
ユーフォルビア・ペプルスは本発明の実施にとりわけ有用である。本明細書での「ユーフォルビア・ペプルス」又はその省略形である「イー・ペプルス」についての言及にはこの植物の多様な亜種、株、系統、ハイブリッド又は派生物並びにその植物学的若しくは園芸学的な近縁植物が含まれる。更に、本発明はトウダイグサ科の植物体全体若しくは樹液若しくは種を含むその部分を用いて実施されうるし、又は他の再生材料が使用されうる。一般的に、種又は再生材料を使用するためには、植物又は苗木をまず繁殖させることが必要である。
本明細書でのトウダイグサ科植物、トウダイグサ属の種又はイー・ペプルスについての言及は更に遺伝子的に改変された植物を包含する。遺伝子的に改変された植物には、トランスジェニック植物、又は形質が取除かれた植物、又は内在遺伝子配列が低レベルに調節された植物、突然変異された植物、又は特定の遺伝子に対して調節効果を示す遺伝物質の改変若しくは導入を含む他の方法で改変された植物が含まれる。従って、トウダイグサ科植物又はトウダイグサ属の種又はイー・ペプルスにおいては天然に存在しない特性を示す植物はそれにもかかわらず本発明に包含され上述した用語の範囲内に含まれる。
大環状ジテルペンは一般的にトウダイグサ科植物の抽出物中に存在する。抽出物は、従って、葉、幹、花、種子、樹皮若しくは樹皮と幹との間から滲出する又はそれらに存在する樹液又は液体又は半液体の物質を含みうる。該抽出物は樹液から得られるのが最も好ましい。更に、該抽出物は、トウダイグサ科植物の樹液、葉、幹、花、樹皮又は他の植物物質から抽出された画分中に存在する液体又は半液体の物質を含みうる。例えば、植物物質は物理的操作にかけられ植物繊維及び細胞外基質物質及び中間組織及び内部組織を破壊し水性環境を含む溶媒に抽出されうる。合成経路により得られる大環状ジテルペンを含むこのような大環状ジテルペンの供給源は全て本発明により包含される。
好ましい大環状ジテルペンは、インゲナン、ペプルアン及びジャトロファンのファミリーの化合物から選択される。化合物は、化学的構造及び／又は化学的若しくは物理的な性質に基づいてインゲナン、ペプルアン又はジャトロファンのファミリーの構成員であると決められる。インゲナン、ペプルアン又はジャトロファンの誘導体である化合物は、それでもなお、「インゲナン」、「ペプルアン」又は「ジャトロファン」という用語の使用を通じて本発明に包含される。なぜなら、これらの用語はこれらのファミリーの化合物の誘導体、化学類似体及び化学的な合成形を含むからである。特に好ましい誘導体の一つはインゲナンのアンゲロイル（angeloyl）誘導体である。
本発明の好ましい化学物質はプロテイン・キナーゼＣ（ＰＫＣ）酵素に効果を示すものである。このような効果はＰＫＣの活性の直接的な活性化若しくは阻害又は細胞中のＰＫＣ酵素若しくは細胞から輸送されたＰＫＣ酵素のレベルに及ぼす直接的な効果でありうる。更に、該効果は、一過性のものでもよく、ＰＫＣ活性の初期活性化又はＰＫＣ酵素の合成又は機能的コンフォメーションの誘導後のＰＫＣ活性や酵素レベルの低レベル調節若しくは失活コンフォメーションの形成等を含むものであってもよい。従って、ＰＫＣに及ぼす効果は、本明細書では調節効果とみなされ、改変された情報伝達に起因するなどの結果的事象により便宜上決定される。例えば、免疫機構の活性化又は遺伝子プロモーターの活性化が起こりうる、そしてこれは本明細書ではＰＫＣに及ぼす調節効果とみなされる。
本発明の化学物質は、その調製物が希釈剤、溶媒若しくは担体又は該物質のイソ型以外の他の化合物又は夾雑物質を実質的に含まないことを意味する精製された形でも単離された形でもよい。更に、「化学物質」という用語は、特定の供給源から共に混合され又は共精製された二以上の化合物の調製物を含む。該化学物質はトウダイグサ科植物から得られる化学的な画分、抽出物又は他の調製物であってもよい。
従って、本明細書での「化学物質」についての言及には、トウダイグサ科植物、とりわけトウダイグサ属の種、最も好ましくはイー・ペプルス又はその植物学的若しくは園芸学的な近縁植物又はその変異体の樹液などから得られる一つ以上の化合物の精製形又は化学画分又は抽出物が含まれる。
従って、本発明の一側面は、被験体における炎症状態を治療又は予防する方法であって、該方法が、トウダイグサ科植物から得られうる化学物質又はその誘導体若しくは化学類似体の症状を改善するのに有効な量を該被験体に投与する工程を含むものであり、上記化学物質がインゲナン、ペプルアン及びジャトロファンのファミリーの化合物から選択される大環状ジテルペンであり、該化学物質又は誘導体又は化学類似体が一般式（Ｉ）〜（Ｖ）、即ち
Figure 0005822418
上式中、ｎは、炭素、酸素、窒素、硫黄、燐、珪素、硼素、砒素及びセレニウムから選択される０〜１０個の原子であり、該原子により規定される環はエポキシド及びチオエポキシドを含む飽和又は不飽和のものであり、
Ａ〜Ｔは、水素、R1、R2、R3、F、Cl、Br、I、CN、OR1、SR1、NR1R2、N(=O)2、NR1OR2、ONR1R2、SOR1、SO2R1、SO3R1、SONR1R2、SO2NR1R2、SO3NR1R2、P(R1)3、P(=O)(R1)3、Si(R1)3、B(R1)2、(C=X)R3又はX(C=X)R3から独立に選択されるものであり、Ｘは硫黄、酸素及び窒素から選択されるものであり、
R1及びR2は、C1〜C20アルキル（分枝状及び／又は直鎖状）、C1〜C20アリールアルキル、C3〜C8シクロアルキル、C6〜C14アリール、C1〜C14ヘテロアリール、C1〜C14複素環、C2〜C10アルケニル（分枝状及び／又は直鎖状）、C2〜C10アルキニル（分枝状及び／又は直鎖状）、C1〜C10ヘテロアリールアルキル、C1〜C10アルコキシアルキル、C1〜C10ハロアルキル、ジハロアルキル、トリハロアルキル、ハロアルコキシ、C1〜C10[CN、OR1、SR1、NR1R2、N(=O)2、NR1OR2、ONR1R2、SOR1、SO2R1、SO3R1、SONR1R2、SO2NR1R2、SO3NR1R2、P(R1)3、P(=O)(R1)3、Si(R1)3、B(R1)2]アルキルからそれぞれ独立に選択されるものであり、
R3は、R1、R2、CN、COR1、CO2R1、OR1、SR1、NR1R2、N(=O)2、NR1OR2、ONR1R2、SOR1、SO2R1、SO3R1、SONR1R2、SO2NR1R2、SO3NR1R2、P(R1)3、P(=O)(R1)3、Si(R1)3、B(R1)2から選択されるものであり、
Ｂ（若しくはＣ）、Ｄ（若しくはＥ）、Ｒ（若しくはＱ）、Ｐ（若しくはＯ）又はＳ（若しくはＴ）に結合するＡは、C1〜C8 の二基置換（融合）された飽和又は不飽和の炭素環式又は複素環式の環で且つエポキシド及びチオエポキシドを含むR3、(C=X)R3及びX(C=X)R3により更に置換された環から選択されるものであり、
Ｉ（若しくはＨ）、Ｇ（若しくはＦ）、Ｋ（若しくはＬ）、Ｍ（若しくはＮ）又はＳ（若しくはＴ）に結合するＪは、C1〜C8の二基置換（融合）された飽和又は不飽和の炭素環式又は複素環式の環で且つエポキシド及びチオエポキシドを含むR3、(C=X)R3及びX(C=X)R3により更に置換された環から選択されるものであり、
Ｂ（若しくはＣ）又はＧ（若しくはＦ）に結合するＤ（若しくはＥ）、Ｇ（若しくはＦ）に結合するＩ（若しくはＨ）、Ｒ（若しくはＱ）又はＭ（若しくはＮ）に結合するＰ（若しくはＯ）、Ｎ（若しくはＭ）に結合するＫ（若しくはＬ）は、C1〜C8の二基置換（融合）された飽和又は不飽和の炭素環式又は複素環式の環で且つエポキシド及びチオエポキシドを含むR3、（C=X)R3及びX(C=X)R3により置換された環から選択されるものであり、
Ｂ及びＣ、Ｄ及びＥ、Ｒ及びＱ、Ｐ及びＯ、Ｉ及びＨ、Ｇ及びＦ、Ｋ及びＬ、Ｍ及びＮ又はＳ及びＴは、＝Ｘであり、Ｘは、硫黄、酸素、窒素、NR1R2、及び=CR1R2から選択されるものであり、
Figure 0005822418
上式中、ｎは、炭素、酸素、窒素、硫黄、燐、珪素、硼素、砒素及びセレニウムから選択される０〜１０個の原子であり、該原子により規定される環はエポキシド及びチオエポキシドを含む飽和又は不飽和の環であり、
Ａ′〜Ｔ′は、水素、R4、R5、R6、F、Cl、Br、I、CN、COR4、CO2R4、OR4、SR4、NR4R5、CONR4R5、N(=O)2、NR4OR5、ONR4R5、SOR4、SO2R4、SO3R4、SONR4R5、SO2NR4R5、SO3NR4R5、P(R4)3、P(=O)(R4)3、Si(R4)3、B(R4)2、(C=X)R6又はX(C=X)R6から独立に選択されるものであり、ここで、Ｘは硫黄、酸素及び窒素から選択されるものであり、
R4及びR5は、C1〜C20アルキル（分枝状及び／又は直鎖状）、C1〜C20アリールアルキル、C3〜C8シクロアルキル、C6〜C14アリール、C1〜C14ヘテロアリール、C1〜C14複素環、C2〜C10アルケニル（分枝状及び／又は直鎖状）、C2〜C10アルキニル（分枝状及び／又は直鎖状）、C1〜C10ヘテロアリールアルキル、C1〜C10アルコキシアルキル、C1〜C10ハロアルキル、ジハロアルキル、トリハロアルキル、ハロアルコキシ、C1〜C10[CN、OR4、SR4、NR4R5、N(=O)2、NR4OR5、ONR4R5、SOR4、SO2R4、SO3R4、SONR4R5、SO2NR4R5、SO3NR4R5、P(R4)3、P(=O)(R4)3、Si(R4)3、B(R4)2]アルキルからそれぞれ独立に選択されるものであり、
R6は、R4、R5、CN、COR4、CO2R4、OR4、SR4、NR4R5、N(=O)2、NR4OR5、ONR4R5、SOR4、SO2R4、SO3R4、SONR4R5、SO2NR4R5、SO3NR4R5、P(R4)3、P(=O)(R4)3、Si(R4)3、B(R4)2から選択されるものであり、
Ｅ′及びＲ′又はＨ′及びＯ′は、C2〜C8の飽和又は不飽和の炭素環式又は複素環式環系で且つエポキシド及びチオエポキシドを含むR6により更に置換された環系であり、
Ｍ′（若しくはＮ′）又はＱ′（若しくはＰ′）に結合するＯ′、Ｑ′（若しくはＰ′）又はＳ′（若しくはＴ′）に結合するＲ′、Ａ′（若しくはＢ′）に結合するＳ′（若しくはＴ′）、Ｃ′（若しくはＤ′）に結合するＡ′（若しくはＢ′）、Ｃ′（若しくはＤ′）又はＦ′（若しくはＧ′）に結合するＥ′、Ｉ′に結合するＨ′、Ｊ′に結合するＩ′、Ｋ′に結合するＪ′、Ｌ′に結合するＫ′、Ｍ′（若しくはＮ′）に結合するＬ′は、C1〜C8の二基置換（融合）された飽和又は不飽和の炭素環式又は複素環式の環系で且つエポキシド及びチオエポキシドを含むR6、(C=X)R6及びX(C=X)R6によりさらに置換された環系であり、
Ａ′、Ｂ′及びＣ′、Ｄ′及びＦ′、Ｇ′及びＭ′、Ｎ′及びＰ′、Ｑ′及びＳ′、Ｔ′は＝Ｘであり、Ｘは、硫黄、酸素、窒素、NR4R5、（C=X)R6、X(C=X)R6、及び=CR7R8から選択され、R7及びR8は、R6、（C=X)R6及びX(C=X)R6からそれぞれ独立に選択されるものであり、
Figure 0005822418
上式中、ｎは、炭素、酸素、窒素、硫黄、燐、珪素、硼素、砒素及びセレニウムから選択される０〜１０個の原子であり、該原子により規定される環はエポキシド及びチオエポキシドを含む飽和又は不飽和の環であり、
Ａ 1 〜Ｔ 1 は、水素、R9、R10、R11、F、Cl、Br、I、CN、OR9、SR9、NR9R10、N(=O)2、NR9OR10、ONR9R10、SOR9、SO2R9、SO3R9、SONR9R10、SO2NR9R10、SO3NR9R10、P(R9)3、P(=O)(R9)3、Si(R9)3、B(R9)2、(C=X)R11又はX(C=X)R11から独立に選択されるものであり、Ｘは硫黄、酸素及び窒素から選択されるものであり、
R9及びR10は、C1〜C20アルキル（分枝状及び直鎖状）、C1〜C20アリールアルキル、C3〜C8シクロアルキル、C6〜C14アリール、C1〜C14ヘテロアリール、C1〜C14複素環、C2〜C10アルケニル（分枝状及び直鎖状）、C2〜C10アルキニル（分枝状及び直鎖状）、C1〜C10ヘテロアリールアルキル、C1〜C10アルコキシアルキル、C1〜C10ハロアルキル、ジハロアルキル、トリハロアルキル、ハロアルコキシ、C1〜C10[CN、OR9、SR9、NR9R10、N(=O)2、NR9OR10、ONR9R10、SOR9、SO2R9、SO3R9、SONR9R10、SO2NR9R10、SO3NR9R10、P(R9)3、P(=O)(R9)3、Si(R9)3、B(R9)2]アルキルからそれぞれ独立に選択されるものであり、
R11は、R9、R10、CN、COR9、CO2R9、OR9、SR9、NR9R10、N(=O)2、NR9OR10、ONR9R10、SOR9、SO2R9、SO3R9、SONR9R10、SO2NR9R10、SO3NR9R10、P(R9)3、P(=O)(R9)3、Si(R9)3、B(R9)2から選択されるものであり、
Ｂ 1 及びＲ 1 、Ｅ 1 及びＯａ 1 及びにＥａ 1 及びＭ 1 は、C2〜C8の飽和又は不飽和の炭素環式又は複素環式環系で且つエポキシド及びチオエポキシドを含むR11により更に置換された環系から選択されるものであり、
Ａｂ 1 （若しくはＡｃ 1 ）又はＴ 1 （若しくはＳ 1 ）に結合するＡ 1 （又はＡａ 1 ）、Ａｂ 1 （若しくはＡｃ 1 ）又はＣ 1 （若しくはＤ 1 ）に結合するＢ 1 、Ｅａ 1 又はＣ 1 （若しくはＤ 1 ）に結合するＥ 1 、Ｅｂ 1 （若しくはＦ 1 ）に結合するＥａ 1 、Ｅｂ 1 （若しくはＦ 1 ）又はＩ 1 （若しくはＪ 1 ）に結合するＧ 1 （又はＨ 1 ）、Ｉ 1 （若しくはＪ 1 ）又はＭ 1 に結合するＫ 1 （若しくはＬ 1 ）、Ｏ 1 （若しくはＮ 1 ）に結合するＭ 1 、Ｏ 1 （若しくはＮ 1 ）又はＰ 1 （若しくはＱ 1 ）に結合するＯａ 1 、Ｐ 1 （若しくはＱ 1 ）又はＳ 1 （若しくはＴ 1 ）に結合するＲ 1 は、C1〜C8の二基置換（融合）された飽和又は不飽和の炭素環式又は複素環式環系で且つエポキシド及びチオエポキシドを含むR11、（C=X)R11及びX(C=X)R11によりさらに置換された環系であり、
Ａ 1 、Ａａ及びＡｂ、Ａｃ及びＣ 1 、Ｄ 1 及びＦ 1 、Ｅｂ及びＧ 1 、Ｈ 1 及びＩ 1 、Ｊ 1 及びＫ 1 、Ｌ 1 及びＮ 1 、Ｏ 1 及びＰ 1 、Ｑ 1 及びＳ 1 、Ｔ 1 は＝Ｘであり、Ｘは、硫黄、酸素、窒素、(C=X)R11及びX(C=X)R11を含むNR9R10、及び=CR12R13から選択されるものであり、
R12及びR13は、R11、(C=X)R11及びX(C=X)R11から独立に選択されるものであり、
Figure 0005822418
上式中、ｎは、炭素、酸素、窒素、硫黄、燐、珪素、硼素、砒素及びセレニウムから選択される０〜１０個の原子であり、該原子により規定される環はエポキシド及びチオエポキシドを含む飽和又は不飽和の環であり、
Ａ 2 〜Ｘ 2 は、水素、R14、R15、R16、F、Cl、Br、I、CN、OR14、SR14、NR14R15、N(=O)2、NR14OR15、ONR14R15、SOR14、SO2R14、SO3R14、SONR14R15、SO2NR14R15、SO3NR14R15、P(R14)3、P(=O)(R14)3、Si(R14)3、B(R14)、(C=Y)R16又はY(C=Y)R16から独立に選択されるものであり、ここで、Ｙは硫黄、酸素及び窒素から選択されるものであり、
R14及びR15は、C1〜C20アルキル（分枝状及び／又は直鎖状）、C1〜C20アリールアルキル、C3〜C8シクロアルキル、C6〜C14アリール、C1〜C14ヘテロアリール、C1〜C14複素環、C2〜C10アルケニル（分枝状及び／又は直鎖状）、C2〜C10アルキニル（分枝状及び／又は直鎖状)、C1〜C10ヘテロアリールアルキル、C1〜C10アルコキシアルキル、C1〜C10ハロアルキル、ジハロアルキル、トリハロアルキル、ハロアルコキシ、C1〜C10[CN、OR14、SR14、NR14R10、N(=O)2、NR14OR15、ONR14R15、SOR14、SO2R14、SO3R14、SONR14R15、SO2NR14R15、SO3NR14R15、P(R14)3、P(=O)(R14)3、Si(R14)3、B(R14)2]アルキルからそれぞれ独立に選択されるものであり、
R16は、R14、R15、CN、COR14、CO2R15、OR14、SR14、NR14R15、N(=O)2、NR14OR15、ONR14R15、SOR14、SO2R14、SO3R14、SONR14R15、SO2NR14R15、SO3NR14R15、P(R14)3、P(=O)(R14)3、Si(R14)3、B(R14)2から選択されるものであり、
Ｅ 2 及びＶ 2 、Ｈ 2 及びＳ 2 、並びにＩ 2 及びＰ 2 は、C2〜C8の飽和又は不飽和の炭素環式又は複素環式環系で且つエポキシド及びチオエポキシドを含むR16により更に置換された環系であり、
Ｃ 2 （若しくはＤ 2 ）又はＷ 2 （若しくはＸ 2 ）に結合するＡ 2 （若しくはＢ 2 ）、Ｃ 2 （若しくはＤ 2 ）又はＦ 2 （若しくはＧ 2 ）に結合するＥ 2 、Ｆ 2 （若しくはＧ 2 ）又はＩ 2 に結合するＨ 2 、Ｊ 2 （若しくはＫ 2 ）に結合するＩ 2 、Ｊ 2 （若しくはＫ 2 ）又はＮ 2 （若しくはＯ 2 ）に結合するＬ 2 （若しくはＭ 2 ）、Ｐ 2 又はＳ 2 に結合するＲ 2 （若しくはＱ 2 ）、Ｕ 2 （若しくはＴ 2 ）又はＷ 2 （若しくはＸ 2 ）に結合するＶ 2 は、C1〜C8の二基置換（融合）された飽和又は不飽和の炭素環式又は複素環式環系で且つエポキシド及びチオエポキシドを含むR16、（C=Y)R16及びY(C=Y)R16によりさらに置換された環系であり、
Ａ 2 ，Ｂ 2 、Ｃ 2 ，Ｄ 2 、Ｆ 2 ，Ｇ 2 、Ｊ 2 ，Ｋ 2 、Ｌ 2 ，Ｍ 2 、Ｎ 2 ，Ｏ 2 、Ｑ 2 ，Ｒ 2 、Ｕ 2 ，Ｔ 2 及びＸ 2 ，Ｗ 2 は＝Ｙであり、Ｙは、硫黄、酸素、窒素、NR14R15及び=CR17R18から選択されるものであり、
R17及びR18は、R16、（C=Y)R16及びY(C=Y)R16から独立に選択されるものであり、
Figure 0005822418
上式中、ｎは、炭素、酸素、窒素、硫黄、燐、珪素、硼素、砒素及びセレニウムから選択される０〜１０個の原子であり、該原子により規定される環はエポキシド及びチオエポキシドを含む飽和又は不飽和の環であり、
Ａ 3 〜Ｚ 3 は、水素、R19、R20、R21、F、Cl、Br、I、CN、OR19、SR19、NR19R20、N(=O)2、NR19OR20、ONR19R20、SOR19、SO2R19、SO3R19、SONR19R20、SO2NR19R20、SO3NR19R20、P(R19)3、P(=O)(R19)3、Si(R19)3、B(R19)2、(C=Ox)R21 又はOx(C=Ox)R21 から独立に選択されるものであり、ここで、Oxは硫黄、酸素及び窒素であり、
R19及びR20は、C1〜C20アルキル（分枝状及び／又は直鎖状）、C1〜C20アリールアルキル、C3〜C8シクロアルキル、C6〜C14アリール、C1〜C14ヘテロアリール、C1〜C14複素環、C2〜C10アルケニル（分枝状及び／又は直鎖状）、C2〜C10アルキニル（分枝状及び／又は直鎖状）C1〜C10ヘテロアリールアルキル、C1〜C10アルコキシアルキル、C1〜C10ハロアルキル、ジハロアルキル、トリハロアルキル、ハロアルコキシ、C1〜C10[CN、OR19、SR19、NR19R20、N(=O)2、NR19OR20、ONR19R20、SOR19、SO2R19、SO3R19、SONR19R20、SO2NR19R20、SO3NR19R20、P(R19)3、P(=O)(R19)3、Si(R19)3、B(R19)2]アルキルからそれぞれ独立に選択されるものであり、
R21は、R19、R20、CN、COR19、CO2R19、OR19、SR19、NR19R20、N(=O)2、NR19OR20、ONR19R20、SOR19、SO2R19、SO3R19、SONR19R20、SO2NR19R20、SO3NR19R20、P(R19)3、P(=O)(R19)3、Si(R19)3、B(R19)2から選択されるものであり、
Ｘ 3 に結合するＤ 3 は、C2〜C8の飽和又は不飽和の炭素環式又は複素環式環系で且つエポキシド及びチオエポキシドを含むR21により更に置換された環系である。Ｂ 3 （若しくはＣ 3 ）又はＺ 3 （若しくはＹ 3 ）に結合するＡ 3 （若しくはＡａ 3 ）、Ｂ 3 （若しくはＣ 3 ）又はＥ 3 （若しくはＦ 3 ）に結合するＤ 3 、Ｅ 3 （若しくはＦ 3 ）又はＩ 3 （若しくはＪ 3 ）に結合するＧ 3 （若しくはＨ 3 ）、Ｉ 3 （若しくはＪ 3 ）又はＭ 3 （若しくはＮ 3 ）に結合するＬ 3 （若しくはＫ 3 ）、Ｎ 3 （若しくはＭ 3 ）又はＰ 3 （若しくはＱ 3 ）に結合するＯ 3 （若しくはＯａ 3 ）、Ｑ 3 （若しくはＰ 3 ）又はＵ 3 （若しくはＴ 3 ）に結合するＳ 3 （若しくはＲ 3 ）、Ｕ 3 （若しくはＴ 3 ）又はＸ 3 に結合するＷ 3 （若しくはＶ 3 ）、Ｙ 3 （若しくはＺ 3 ）に結合するＸ 3 は、C1〜C8の二基置換（融合）された飽和又は不飽和の炭素環式又は複素環式環系で且つエポキシド及びチオエポキシドを含むR21、(C=Ox）R21 及びOx(C=Ox)R21によりさらに置換された環系であり、
Ａ 3 ，Ａａ 3 、Ｂ 3 ，Ｃ 3 、Ｅ 3 ，Ｆ 3 、Ｇ 3 ，Ｈ 3 、Ｉ 3 ，Ｊ 3 、Ｋ 3 ，Ｌ 3 、Ｍ 3 ，Ｎ 3 、Ｏ 3 ，Ｏａ 3 、Ｑ 3 ，Ｐ 3 ，Ｓ 3 ，Ｒ 3 ，Ｕ 3 ，Ｔ 3 ，Ｗ 3 ，Ｖ 3 及びＺ 3 、Ｙ 3 は＝Ｏｘであり、ここでＯｘは、硫黄、酸素、窒素、NR19R20及び=CR22R23から選択されるものであり、
R22及びR23は、R21、(C=Ox)R21 及びOx(C=Ox)R21 から選択されるものである、
のいずれか一つにより表されるものであり、該化学物質又はその誘導体若しくは化学類似体がＰＫＣ活性、ＰＫＣ依存性遺伝子発現又はＰＫＣ酵素の代謝回転を調節できるものであり、該化学物質又はその誘導体若しくは化学類似体が、該炎症状態と関連した一以上の症状を改善するのに十分な時間及び条件の下で投与されるものである方法を意図する。
関連する実施態様において、本発明は、被験体の免疫性を増強する方法であって、該方法が、上記の一般式（Ｉ）〜（Ｖ）のいずれか一つにより表される化学物質の有効な量を該被験体に投与する工程を含み、該化学物質又はその誘導体若しくは化学類似体がＰＫＣ活性、ＰＫＣ依存性遺伝子発現又はＰＫＣ酵素の代謝回転を調節できるものであり、該化学物質又はその誘導体若しくは化学類似体が免疫系又は免疫系の成分を強化するのに十分な時間及び条件の下で投与されるものである方法を意図する。
とりわけ好ましい化学物質又はその誘導体若しくは化学類似体は一般式（ＶＩ）により表される。
Figure 0005822418
上式中、R24、R25及びR26は、水素、R27、R28、F、Cl、Br、I、CN、OR27、SR27、NR27R28、N(=O)2、NR27OR28、ONR27R28、SOR27、SO2R27、SO3R27、SONR27R28、SO2NR27R28、SO3NR27R28、P(R27)3、P(=O)(R27)3、Si(R27)3、B(R27)2、(C=X)R29又はX(C=X)R29から独立に選択されるものであり、Xは硫黄、酸素及び窒素から選択されるものであり、
R27及びR28は、C1〜C20アルキル（分枝状及び／又は直鎖状）、C1〜C20アリールアルキル、C3〜C8シクロアルキル、C6〜C14アリール、C1〜C14ヘテロアリール、C1〜C14複素環、C2〜C10アルケニル（分枝状及び／又は直鎖状）、C2〜C10アルキニル（分枝状及び／又は直鎖状）、C1〜C10ヘテロアリールアルキル、C1〜C10アルコキシアルキル、C1〜C10ハロアルキル、ジハロアルキル、トリハロアルキル、ハロアルコキシ、C1〜C10[CN、OR27、SR27、NR27R28、N(=O)2、NR27OR28、ONR27R28、SOR27、SO2R27、SO3R27、SONR27R28、SO2NR27R28、SO3NR27R28、P(R27)3、P(=O)(R27)3、Si(R27)3、B(R27)2]アルキルからそれぞれ独立に選択されるものであり、
R29は、R27、R28、CN、COR27、CO2R27、OR27、SR27、NR27R28、N(=O)2、NR27OR28、ONR27R28、SOR27、SO2R27、SO3R27、SONR27R28、SO2NR27R28、SO3NR27R28、P(R27)3、P(=O)(R27)3、Si(R27)3、B(R27)2から選択されるものである。
好ましい実施態様において、R24は水素、Oアセチル又はOHである。
他の好ましい実施態様において、R25及びR26はOHである。
本明細書で用いられるとき、「アルキル」という用語は直線状又は分枝状の鎖を指す。「ハロアルキル」という用語は少なくとも一つのハロゲンにより置換されたアルキル基を指す。同様に、「ハロアルコキシ」という用語は少なくとも一つのハロゲンにより置換されたアルコキシ基を指す。本明細書で用いられるとき、「ハロゲン」という用語はフッ素、塩素、臭素及びヨウ素を指す。
本明細書で用いられるとき、「アリール」という用語は、フェニル又はナフチル、アントラセニルなどの芳香族炭素環式環系を指し、とりわけフェニルを指す。アリールは、F、Cl、Br、I、NO2、CF3、CN、OR1、COR1、CO2R1、NHR1、NR1R2、NR1OR2、ONR1R2、SOR1、SO2R1、SO3R1、SONR1R2、SO2NR1R2、SO3NR1R2、P(R1)3、P(=O)(R1)3、Si(R1)3、B(R1)2を含む一基、二基及び三基の置換のC6〜C14であることが好ましい。ここで、R1及びR2は上に定義されている。
本明細書で用いられるとき、「複素環」、「複素環式」、「複素環系」等の用語は、単環、複数の融合環（例えば、二環式、三環式、又は他の同様な架橋された環系又は置換基）、又は複数の縮合環を有し、且つ該環の少なくとも一つに窒素、酸素又は硫黄などの少なくとも一つのヘテロ原子を有する飽和、不飽和又は芳香族の炭素環の基を指す。この用語は、少なくとも一つの環が芳香族である複素環を指す「ヘテロアリール」も含む。任意の複素環式又はヘテロアリールの基は、上で定義したように、置換されていなくてもよく又は任意選択的に一以上の基で置換されてもよい。さらに、二環式又は三環式のヘテロアリール部分は少なくとも一つの環を含みうる。該環は完全に又は部分的に飽和している。適切なヘテロアリール部分には、オキサゾリル、チアザオイル、チエニル、フリル、１−イソベンゾフラニル、３Ｈ−ピロリル、２Ｈ−ピロリル、Ｎ−ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、ピラダジニル、インドリジニル、イソインドリル、インドイル、インドリル、プリニル、フタラジニル、1,2,3−トリアゾリル、1,2,4−トリアゾリル、1,2,3−オキサジアゾイル、1,2,4−オキサジアゾリル、1,2,5−オキサジアゾリル、1,3,4−オキサジアゾリル、1,2,3,4−オキサトリアゾリル、1,2,3,5−オキサトリアゾリル、1,3,5−トリアジニル、1,2,4−トリアジニル、1,2,3−トリアジニル、アゼピニル、オキセピニル、チエピニル、ベンゾフラニル、イソベンゾフラニル、チオナフテニル、イソチオナフテニル、インドレニニル、２−イソベンザゾリル、１,５−ピリンジニル、ピラノ[3,4-b]ピロリル、イソインダゾリル、インドキサジニル、ベンズオキサゾリル、アントラニリル、キノリニル、イソキノリニル、シノリニル、キナゾリニル、ナフチリジニル、ピリド[3,4-b]ピリジニル、及びピリド[3,2-b]ピリジニル、ピリド[4,3-b]ピリジニルが含まれるが、これらに限定されない。
炎症状態という場合は、治療に有用な炎症（例えば、免疫増強作用）及び臨床上有害な炎症の両者を含む。免疫系の免疫増強は、免疫を弱められた被験体において、並びに病原生物又は潜在的な病原生物による感染の治療において有用である。
後半の実施態様では、被験体の病原生物又は潜在的な病原生物による感染の治療及び予防における該被験体の免疫を増強する方法であって、トウダイグサ科の植物から得られる大環状ジテルペン、又はそれを含む化学的画分、又は上で定義された構造を有する該大環状ジテルペンの誘導体若しくは化学類似体の症状の改善に有効な量を該被験体に投与する工程を含み、該大環状ジテルペン又はその誘導体若しくは化学類似体がＰＫＣの活性、合成又は酵素代謝回転を調節するものであり、該投与が該免疫系の成分を増強するのに十分な時間及び条件の下でなされるものである方法が提供される。
病原生物又は潜在的病原生物には、原核微生物、下等真核微生物、複雑な真核生物又はウイルスが含まれる。
原核微生物には、グラム陽性、グラム陰性及びグラム変異性の細菌及び細胞内細菌などの細菌が含まれる。本明細書で意図される細菌の例としては、トレポネマ属(Treponema)の種、ボレリア属(Borrelia)の種、ナイセリア属(Neisseria)の種、レジオネラ属(Legionella)の種、ボルデテラ属(Bordetella)の種、エシェリヒア属(Escherichia)の種、サルモネラ属(Salmonella)の種、シゲラ属(Shigella)の種、クレブシエラ属(Klebsiella)の種、イェルシニア属(Yersinia)の種、ビブリオ属(Vibrio)の種、ヘモフィルス属(Hemophilus)の種、リケッチア属(Rickettsia)の種、クラミジア属(Chlamydia)の種、マイコプラズマ属(Mycoplasma)の種、スタフィロコッカス属(Staphylococcus)の種、ストレプトコッカス属(Streptococcus)の種、バチルス属(Bacillus)の種、クロストリジウム属(Clostridium)の種、コリネバクテリウム属(Corynebacterium)の種、プロプリオニバクテリウム属(Proprionibacterium)の種、マイコバクテリウム属(Mycobacterium)の種、ウレアプラズマ属(Ureaplasma)の種及びリステリア属(Listeria)の種が挙げられる。
特に好ましい種には、トレポネマ・パリデュム(pallidum)、ボレリア・ブルグドルフェリ(burgdorferi)、ナイセリア・ゴノリア(gonorrhea)、ナイセリア・メニンギチディス(meningitidis)、レジオネラ・ニューモフィラ(pneumophila)、ボルデテラ・ペルツシス(pertussis)、エシェリヒア・コリ(coli)、サルモネラ・チフィ(typhi)、サルモネラ・チフィムリウム(typhimurium)、シゲラ・ディセンテリエ(dysenteriae)、クレブシエラ・ニューモニエ(pneumoniae)、イェルシニア・ペスティス(pestis)、ビブリオ・コレラエ(cholerae)、ヘモフィラス・インフルエンザ(influenzae)、リケッチア・リケッチ(rickettsii)、クラミジア・トラコマチス(trachomatis)、マイコプラズマ・ニューモニエ、スタフィロコッカス・アウレウス(aureus)、ストレプトコッカス・ニューモニエ、ストレプトコッカス・ピオゲネス(pyogenes)、バチルス・アントラシス(anthracis)、クロストリジウム・ボツリナム(botulinum)、クロストリジウム・テタニ(tetani)、クロストリジウム・ペルフリンゲンス(perfringens)、コリネバクテリウム・ジフテリエ(diphtheriae)、プロプリオニバクテリウム・アクネス(acnes)、マイコバクテリウム・ツベルクロシス(tuberculosis)、マイコバクテリウム・レプラエ(leprae)、及びリステリア・モノシトゲネス(monocytogenes)が含まれる。
下等真核生物には、酵母又はニューモシスティス・カリニイ(Pneumocystis carinii)、カンジダ・アルビカンス(Candida albicans)、アスペルギラス(Aspergillus)、ヒストプラズマ・カプスラツム(Histoplasma capsulatum)、ブラストマイセス・デルマチチディス(Blastomyces dermatitidis)、クリプトコッカス・ネオフォルマンス(Cryptococcus neoformans)、トリコフィトン(Trichophyton )及びマイクロスポルム(Microsporum)などの菌類が含まれるが、これらに限定されない。
複雑な真核生物には虫、昆虫、クモ形類動物、線虫、アエモベ(aemobe)、エンタモエバ・ヒストリティカ(Entamoeba histolytica)、ギアルディア・ラムブリア(Giardia lamblia)、トリコモナス・バギナリス(Trichomonas vaginalis)、トリパノソーマ・ブルセイ・ガムビエンセ(Trypanosoma brucei gambiense)、トリパノソーマ・クルジ(Trypanosoma cruzi)、バランチジウム・コリ(Balantidium coli)、プラズモディウム・マラリアエ(Plasmodium malariae)、プラズモディウム・トロピカリス(Plasmodium tropicalis)、トキソプラズマ・ゴンディ(Toxoplasma gondii)、クリプトスポリジウム(Cryptosporidium)又はレイシュマニア(Leishmania) が含まれる。
「ウイルス」という用語は、その最も広い意味で用いられ、アデノウイルス、パポバウイルス、ヘルペスウイルス：単純、帯状疱疹、エプスタイン−バール、ＣＭＶ、ポックスウイルス：天然痘、ワクシニア、Ｂ型肝炎、ライノウイルス、Ａ型肝炎、ポリオウイルス、風疹ウイルス、Ｃ型肝炎、アルボウイルス、狂犬病ウイルス、Ａ型及びＢ型のインフルエンザウイルス、麻疹ウイルス、おたふく風邪ウイルス、ＨＩＶ、Ｉ型及びＩＩ型のＨＴＬＶの科のウイルスが含まれる。
特に好ましい原核微生物はサルモネラの種及び他の腸内微生物及びストレプトコッカスの種及びスタフィロコッカスの種である。特に好ましい下等真核生物にはトリコフィトス、マイクロスポルム及びエピデルモフィトス（Epidermophytos)、酵母、及びマラリア原虫などのプラスモディウム（Plasmodium)スピーシーズが含まれる。
好ましい複雑な真核生物は吸血昆虫などの昆虫である。
好ましいウイルスはＨＩＶ、ＥＢＶ及びＣＭＶである。
本発明の他の側面は、被験体における炎症状態を治療又は予防する方法であって、トウダイグサ科の植物から得られる大環状ジテルペン、又はそれを含む化学的画分、又は上で定義された構造を有する該大環状ジテルペンの誘導体若しくは化学類似体の症状の改善に有効な量を該被験体に投与する工程を含み、該大環状ジテルペン又はその誘導体若しくは化学類似体がＰＫＣの活性、合成又は酵素代謝回転を調節するものであり、該投与が該炎症状態を治療するのに十分な時間及び条件の下でなされるものである方法を提供する。
炎症状態には、組織及び／又は器官の移植拒絶、敗血症、急性呼吸困難症候群（ＡＲＤＳ）、喘息、外傷、酸化ストレス、細胞死、照射障害、虚血症、再灌流、癌、ウイルス感染、自己免疫症、リウマチ様関節炎、乾癬、炎症性腸疾患、糸球体腎炎、狼瘡、葡萄膜炎、慢性肝炎、若年性糖尿病、慢性非化膿性甲状腺炎、結核、梅毒、放線菌症、類肉腫症、アミロイドーシス、肉芽腫症甲状腺炎、リンパ球甲状腺炎、橋本甲状腺炎、浸入線維甲状腺炎、グレーヴス病、部分的腸炎、クローン病、肉芽腫症回腸炎、潰瘍性大腸炎、脈絡網膜炎症候群、膵炎、股滑膜炎、嚥下痛、嚥下異常、ウイルス及び細菌性咽頭炎、感染性単核球症、急性扁桃炎、扁桃周囲膿瘍、潰瘍性扁桃炎、舌扁桃炎、カンジダ症、喉頭蓋炎、気管気管支の炎症、口峡炎、自発性肺線維症、間質性肺疾患、扁平苔癬、硬化性苔癬、膿瘍、髄膜炎、脳炎、脈管炎、進行性多病巣性白質脳障害、蕁麻疹、海綿様皮膚炎、アレルギー性接触皮膚炎、皮膚炎、慢性接触皮膚炎、単純苔癬慢性、アトピー性皮膚炎、紅斑多形、スチーブンス・ジョンソン症候群、中毒性表皮壊死症、円板状紅斑性狼瘡及び尋常性アクネが含まれるが、これらに限定されない。
特に有用な本発明の化合物には、5,8,9,10,14−ペンタアセトキシ−３−ベンゾイロキシ−15−ヒドロキシペプルアン（ペプルアン）、該ペプルアンの誘導体、2,3,5,7,15−ペンタアセトキシ−9−ニコチノイロキシ−14−オキソジャトロファ−6(17),11E−ジエン（ジャトロファン１）、該ジャトロファン１の誘導体、2,5,7,8,9,14−ヘキサアセトキシ−3−ベンゾイロキシ−15−ヒドロキシ−ジャトロファ−6(17),11E−ジエン（ジャトロファン２）、該ジャトロファン２の誘導体、2,5,14−トリアセトキシ−3−ベンゾイロキシ−8,15−ジヒドロキシ−7−イソブチロイロキシ−9−ニコチノイロキシ−ジャトロファ−6(17),11E−ジエン（ジャトロファン３）、該ジャトロファン３の誘導体、2,5,9,14−テトラアセトキシ−3−ベンゾイロキシ−8,15−ジヒドロキシ−7−イソブチロイロキシジャトロファ−6(17),11E−ジエン（ジャトロファン４）、該ジャトロファン４の誘導体、2,5,7,14−テトラアセトキシ−3−ベンゾイロキシ−8,15−ジヒドロキシ−9−ニコチノイロキシジャトロファ−6(17),11E−ジエン（ジャトロファン５）、該ジャトロファン５の誘導体、2,5,7,9,14−ペンタアセトキシ−3−ベンゾイロキシ−8,15−ジヒドロキシジャトロファ−6(17),11E−ジエン（ジャトロファン６）、該ジャトロファン６の誘導体を含むコンフォメーション II のジャトロファン、又は薬学的に許容しうるこれらの塩が含まれる。
更に特に好ましい化合物は、アンゲロイル(angeloyl)置換されたインゲナン又はその誘導体、例えばインゲノール−3−アンゲレート、20−Ｏ−アセチル−インゲノール−3−アンゲレートなど、又は該アンゲレートの誘導体、又は薬学的に許容しうるこれらの塩である。
本発明の更なる側面は、トウダイグサ科から得られる化学物質の本発明を実施するための適性を評価する方法を意図する。例えば表Ａに記載される化学物質を含む画分を含む化学物質に対して数値が与えられる。
［外５］
Figure 0005822418
各特性についての値は指標値（ＩV ）として言及される。
ＩV の総和即ちΣＩV は、物質の効力（ＰA ）値を与え、これにより、本発明の実施に有用なトウダイグサ科から得られる化合物をスクリーニングし選択するための分析的アプローチが可能になる。
一例において、20−アセチル−インゲノール−３−アンゲレートは、ＰA ＝ΣＩV ＝15を示す。
従って、本発明の別の一側面は、被験体における炎症状態を治療又は予防する方法であって、トウダイグサ科植物又はその植物学的若しくは園芸学的な近縁植物から得られうる大環状ジテルペン又は薬学的に許容しうるその塩の症状を改善するのに有効な量を該被験体に投与する工程を含み、該大環状ジテルペンが、上に定義される一般式（Ｉ）〜（Ｖ）のいずれか一つにより表される構造を有するインゲナン、ペプルアン若しくはジャトロファン、又は、それらの誘導体若しくは化学類似体から選択されるものであり、該化学物質が、＞１０の物質の効力（ＰA ）を示すものであり、ＰA ＝ΣＩV であり、ＩV が下記に列挙される具体的特性に関連する数値であり、該化学物質が炎症により惹き起こされ又はそれと関連する少なくとも一つの症状を改善するのに十分な時間及び条件の下で投与されるものである方法を意図する。
［外６］
Figure 0005822418
別の一実施態様において、本発明は被験体の免疫を増強する方法であって、トウダイグサ科植物又はその植物学的若しくは園芸学的な近縁植物から得られうる大環状ジテルペン又は薬学的に許容しうるその塩の免疫増強に有効な量を該被験体に投与する工程を含み、該大環状ジテルペンが、上に定義される一般式（Ｉ）〜（Ｖ）のいずれか一つにより表される構造を有するインゲナン、ペプルアン若しくはジャトロファン、又は、それらの誘導体若しくは化学類似体から選択されるものであり、該化学物質が、＞１０の物質の効力（ＰA ）を示し、ＰA ＝ΣＩV であり、ＩV が下記に列挙される具体的特性に関連する数値であり、該化学物質が被験体の免疫を増強するのに十分な時間及び条件の下で投与されるものである方法を意図する。
［外７］
Figure 0005822418
好ましい化合物は、
5, 8, 9, 10, 14−ペンタアセトキシ−３−ベンゾイロキシ−15−ヒドロキシペプルアン（ペプルアン）、
2, 3, 5, 7, 15−ペンタアセトキシ−9−ニコチノイロキシ−14−オキソジャトロファ−6(17), 11E−ジエン（ジャトロファン１）、
2, 5, 7, 8, 9, 14 −ヘキサアセトキシ−3−ベンゾイロキシ−15−ヒドロキシ−ジャトロファ−6(17), 11E−ジエン（ジャトロファン２）、
2, 5, 14−トリアセトキシ−3−ベンゾイロキシ−8, 15 −ジヒドロキシ−7−イソブチロイロキシ−9−ニコチノイロキシ−ジャトロファ−6(17), 11E−ジエン（ジャトロファン３）、
2, 5, 9, 14 −テトラアセトキシ−3−ベンゾイロキシ−8, 15 −ジヒドロキシ−7−イソブチロイロキシ−ジャトロファ−6(17), 11E−ジエン（ジャトロファン４）、
2, 5, 7, 14 −テトラアセトキシ−3−ベンゾイロキシ−8, 15 −ジヒドロキシ−9−ニコチノイロキシ−ジャトロファ−6(17), 11E −ジエン（ジャトロファン５）、
2, 5, 7, 9, 14−ペンタアセトキシ−3−ベンゾイロキシ−8, 15 −ジヒドロキシ−ジャトロファ−6(17), 11E −ジエン（ジャトロファン６）、
20−Ｏ−アセチル−インゲノール−3−アンゲレート (angelate) 、20−Ｏ−アセチル−インゲノール−3−アンゲレートの誘導体、
20−ヒドロキシ−インゲノール−3−アンゲレート、20−ヒドロキシ−インゲノール−3−アンゲレートの誘導体、及び
インゲノール−3−アンゲレート、インゲノール−3−アンゲレートの誘導体
を含むリストから選択される。
本明細書での被験体についての言及には、ヒト、霊長類、家畜動物（例えばヒツジ、ウシ、ウマ、ブタ、ヤギ、ロバ）、実験用試験動物（例えばマウス、ラット、モルモット、ハムスター）、愛玩動物（例えばイヌ、ネコ）又は家禽鳥類（例えばニワトリ、アヒル、シチメンチョウ、ガチョウ）若しくは狩猟鳥（例えば、アリドダック、キジ）などの鳥類が含まれる。
好ましい被験体は、ヒト又は霊長類又は実験用試験動物である。
最も好ましい被験体はヒトである。
ある特徴に対して数値を与える能力を有することにより、データ処理手段は化学物質を形成する個々の化合物又は化合物群の有用性の蓋然性を評価できる。
化合物又は化合物群が本発明を実施するために適性であるかどうかの評価は、ソフトウェアでプログラム化されたコンピュータの助力で適切に容易化できる。このソフトウェアは、とりわけ該化合物に関連する少なくとも二つの特性についての指標値（ＩV ）を加算し、炎症状態を治療又は予防し又は免疫系又は免疫系の中の成分の刺激を促進するための化合物の有効性に相当する効力値（ＰA ）を提供する。該化合物の特性は、
（ａ）ＰＫＣの活性又は効果を調節する能力、
（ｂ）両極性樹状活性を誘導する能力、
（ｃ）トウダイグサ科の構成員から誘導される能力、
（ｄ）チャボタイゲキ(E. peplus)から誘導される能力、
（ｅ）トウダイグサの種の樹液から水抽出されうる能力、
（ｆ）潜伏ウイルスを活性化する能力、又は
（ｇ）ＴＰＡ若しくはＰＭＡより低い腫瘍促進能力
から選択され得る。
従って、本発明にしたがって、このような特性についての指標値は機械読み取り可能データ記憶媒体に記憶される。この記憶媒体は該データを処理して目的の化合物又は化合物群についての効力値を提供することができる。
従って、他の側面において、本発明は、炎症を治療又は予防し又は被験体の免疫を増強する場合の候補化合物又は候補化合物群の有用性の蓋然性を評価するコンピュータプログラム生産物を意図する。該生産物は、
（１） 化合物に関連する少なくとも二つの特性について入力指標値として受信するコードであって、該特性が、
（ａ）ＰＫＣの活性又は効果を調節する能力、
（ｂ）両極性樹状活性を誘導する能力、
（ｃ）トウダイグサ科の構成員から誘導される能力、
（ｄ）チャボタイゲキ(E. peplus)から誘導される能力、
（ｅ）トウダイグサの種の樹液から水油出されうる能力、
（ｆ）潜伏ウイルスを活性化する能力、又は
（ｇ）ＴＰＡ若しくはＰＭＡより低い腫瘍促進能力、
から選択されるものであるコード、
（４） 該指標値を加算して該化合物についての効力値に相当する総和を提供するコード、並びに
（５） 該コードを記憶するコンピュータ読み取り可能媒体、
を含む。
好ましい実施態様において、該コンピュータプログラム生産物は化合物又は化合物群の特性のそれぞれについての指標値を割り当てるコードを含む。特に好ましい実施態様では、指標値は上記の表Ａに記載されたように割り当てられる。
関連する側面において、本発明は、炎症を治療し又は被験体の免疫を増強する場合の候補化合物又は候補化合物群の有用性の蓋然性を評価するコンピュータであって、
（１） 機械読み取り可能データでコードされたデータ記憶材料を含む機械読み取り可能データ記憶媒体であって、該機械読み取り可能データが該化合物に関連する少なくとも二つの特性についての指標値を含み、該特性が、
（ａ）ＰＫＣの活性又は効果を調節する能力、
（ｂ）両極性樹状活性を誘導する能力、
（ｃ）トウダイグサ科の構成員に由来する能力、
（ｄ）チャボタイゲキ(E. peplus)に由来する能力、
（ｅ）トウダイグサの種の樹液から水抽出されうる能力、
（ｆ）潜伏ウイルスを活性化する能力、又は
（ｇ）ＴＰＡ若しくはＰＭＡより低い腫瘍促進能力、
から選択されるものである機械読み取り可能データ記憶媒体、
（２） 該機械読み取り可能データを処理するための指令を記憶するワーキングメモリ、
（３） 該機械読み取り可能データを処理し該化合物についての効力値に相当する該指標値の総和を提供するため該ワーキングメモリ及び該機械読み取り可能データ記憶媒体に連結した中央演算処理装置、並びに
（４） 該効力値を受信するため該中央演算処理装置に連結した出力ハードウェア、
を含むコンピュータに及ぶ。
これらの実施態様の一例は図１９に示される。図１９は、中央演算処理装置（「ＣＰＵ」）２０、例えばＲＡＭ（ランダム−アクセス・メモリ）又は「コア」メモリでありうるワーキングメモリ２２、大容量記憶メモリ２４（一以上のディスクドライブ又はＣＤ−ＲＯＭドライブなど）、一以上の陰極線管（「ＣＲＴ」）表示端末２６、一以上のキーボード２８、一以上の入力回線３０、及び一以上の出力回線４０を含み、これらが全て従来型の双方向性システムバス５０により相互接続されているコンピュータ１１を含むシステム１０を示す。。
入力回線３０によりコンピュータ１１に連結された入力ハードウェア３６は種々の方法で実行されうる。例えば、本発明の機械読み取り可能データは電話回線又は専用データ回線３４により接続された単独又は複数のモデム３２の使用を介して入力されうる。代わりに又は加えて、該入力ハードウェア３６はＣＤを含みうる。代わりに、表示端末２６、キーボード２８と接続したＲＯＭドライブ又はディスクドライブ２４も入力装置として使用されうる。
出力回線４０によりコンピュータ１１に連結された出力ハードウェア４６は従来型の装置により同様に実行されうる。一例として、出力ハードウェア４６は本明細書に記載される合成ポリヌクレオチド配列又は合成ポリペプチド配列を表示するためのＣＲＴ表示端末２６を含みうる。出力ハードウェアは、ハードコピー出力がされうるようプリンター４２、又はディスクドライブ２４も含み、後に使用するためシステム出力を記憶しうる。
実行中、ＣＰＵ２０は、種々の入力及び出力の装置３６、４６の使用を調整し、大容量記憶２４からのデータ・アクセス及びワーキングメモリ２２へのアクセス及びワーキングメモリからのアクセスを調整し、並びにデータ処理工程の順序を決定する。幾つかのプログラムは本発明の機械読み取り可能データを処理するために使用されうる。模範的なプログラムは例えば下記の工程、
（１）該化合物と関連する少なくとも二つの特性についての入力指標値を入力する工程であって、該特性が、
（ａ）ＰＫＣの活性又は効果を調節する能力、
（ｂ）両極性樹状活性を誘導する能力、
（ｃ）トウダイグサ科の構成員から誘導される能力、
（ｄ）チャボタイゲキから誘導される能力、
（ｅ）トウダイグサの種の樹液から水抽出されうる能力、
（ｆ）潜伏ウイルスを活性化する能力、
（ｇ）ＴＰＡ若しくはＰＭＡより低い腫瘍促進能力、及び
から選択されるものである工程、
（２）該特性についての該指標値を加え該化合物についての効力値を提供する工程、並びに
（３）該効力値を出力する工程、
を用いうる。
図２０は、機械読み取り可能データ、即ち本発明の合成分子を設計するための一連の指令でコードされ得る帯磁データ記憶媒体１００の断面を示す。上記指令は図１０のシステム１０などのシステムにより実行され得る。媒体１００は、従来型でありうる適切な基盤１０１、並びに磁区（見えない）を含み且つ従来型であってもよい適切な被膜１０２を片面又は両面に有する従来型のフロッピーディスク又はハードディスクであり得る。該基板は磁気領域（見えない）を有しており、この磁気領域の極性又は方向性は磁気によって変更し得る。媒体１００はディスクドライブ又は他のデータ記憶装置２４のスピンドルを受け入れるための開口部（示していない）も有しうる。媒体１００の被膜１０２の磁気領域は、図１９のシステム１０などのシステムによる実行のため、従来型でありうる様式で本明細書に記載されるような機械読み取り可能データをコードするよう分極され又は方向づけられる。
図２１は、機械読み取り可能データ又は本発明の合成分子を設計するための一連の指令でもコードされ得る光学的に読み取り可能なデータ記憶媒体１１０の断面を示す。該指令は図１９のシステム１０などのシステムにより実行され得る。媒体１１０は、従来型のコンパクトディスク読取専用メモリ（ＣＤ−ＲＯＭ）又は光磁気ディスクなどの書換可能媒体であり得る。この光磁気ディスクは光学的に読み取り可能であり且つ光磁気的に書き込み可能である。媒体１００は、従来型でありうる適切な基盤１１１、並びに従来型でありうる適切な被膜１１２を通常基盤１１１の片面に有することが好ましい。
ＣＤ−ＲＯＭの場合、周知のように、被膜１１２は反射性で且つ該機械読み取り可能データをコードするため複数のピット１１３で刻印される。ピットの配置はレーザー光を被膜１１２の表面で反射させることにより読み取られる。実質的に透明な保護被膜１１４が被膜１１２の最上層に供与されることが好ましい。
光磁気ディスクの場合、周知のように、被膜１１２は、ピット１１３を有さないが、レーザーにより（示していない）ある温度を上回って加熱されると極性又は方向性が磁気によって変化し得る複数の磁気領域を有する。該領域の方向性は被膜１１２から反射するレーザー光の偏光を測定することにより読み取られ得る。該領域の配置が上述したように該データをコードする。
本発明はさらに病原体感染を治療する際に有用な医薬組成物に及ぶ。この点で、本発明の化学物質は被験体における生物学的実体若しくはその一部又はそれらからの毒素若しくは毒液又はそれらにより惹起される遺伝的事象の存在に関連した状態の治療又は予防のための活性薬として使用され得る。該化学物質は、それ自体か又は該物質が薬学的に許容しうる適切な担体と混合された医薬組成物のいずれかで患者に投与され得る。
従って、本発明は、炎症状態を治療及び／又は予防するための組成物又は被験体の免疫の増強を誘導するための組成物であって、一以上の本発明の化学物質を薬学的に許容しうる担体及び／又は希釈剤とともに含む組成物をも提供する。
治療される特定の状態に応じて、化学物質は全身的に又は局部的に処方され投与される。処方及び投与の方法は「レミントンの薬剤科学」，マック・パブリッシング・コウ．，イーストン，Ｐａ，最新版に記載されている。適切な経路には、例えば、経口、経直腸、経粘膜、又は腸内の投与、及び筋肉内、皮下、骨髄内の注射並びに鞘内の、直接心室内の、静脈内の、腹腔内の、鼻孔内の、又は眼球内の注射などの非経口投与が含まれる。注射用には、本発明の化学物質は、水溶液、好ましくはハンクの溶液、リンガー溶液若しくは生理的食塩緩衝液などの生理学的に両立しうる緩衝液の中で調剤されうる。経粘膜投与用には、透過の障壁に対する適当な浸透剤が該処方中に使用される。このような浸透剤は当分野で一般的に知られている。筋肉内注射及び皮下注射は、例えば、免疫調節用組成物やワクチンの投与用に適している。
該化学物質は、当分野で良く知られた薬学的に許容しうる担体を用いて経口投与に適する用量に容易に調剤できる。このような担体は、本発明の化合物を、錠剤、丸剤、カプセル、液体、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁液などの投与剤形に調剤することを可能にする。これらの担体は、糖、澱粉、セルロース及びその誘導体、麦芽、ゼラチン、タルク、硫酸カルシウム、植物油、合成油、ポリオール、アルギン酸、リン酸緩衝化溶液、乳化剤、等張食塩水、及びパイロジェン・フリーの水から選択される。
本発明での使用に適した医薬組成物には、活性成分がそれらの意図する目的を達成するのに有効な量の該活性成分を含む組成物が含まれる。患者に投与される物質の用量は、被験体における炎症状態の存在と関連した症状の低減などの有益な応答を長期に該患者に生じさせるのに十分なものである。投与されるべき物質の量は、被験体の年齢、性別、体重及び一般的な健康状態を含んだ治療される被験体に応じて変化しうる。この点で、投与する物質の正確な量は医師の判断に依存する。該炎症と関連した状態の治療又は予防において投与されるべき化学物質の有効量を決定する場合、該医師は該障害の進行を評価しうる。とにかく、当業者は本発明の化学物質の適切な用量を容易に決定しうる。
非経口投与用の医薬調製物は水溶性の剤形での該活性化合物の水溶液を含む。更に、該活性化合物の懸濁液は適切な油性注射懸濁液として調製されうる。適切な親油性の溶媒又は賦形剤は、胡麻油などの脂肪油、オレイン酸エチル若しくはトリグリセリドなどの合成脂肪酸エステル、又はリポソームを含む。水性注射懸濁液は、カルボキシメチル・セルロース・ナトリウム、ソルビトール、又はデキストランなどの懸濁液の粘度を増大させる物質を含みうる。任意選択的に、該懸濁液は該化合物の溶解度を増大させ極めて濃縮された溶液の調製を可能とする適切な安定剤又は物質も含みうる。
経口用途の医薬調製物は、該活性化合物を固体の賦形剤と混合し、任意選択的に得られる混合物を破砕し、そして所望ならば適切な助剤を添加した後、顆粒の混合物を加工して錠剤又は糖衣丸錠の芯を得ることにより得られ得る。適切な賦形剤は、具体的には、ラクトース、スクロース、マンニトール、若しくはソルビトールを含む糖類などの充填剤、例えばトウモロコシの澱粉、コムギの澱粉、コメの澱粉、ポテトの澱粉、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース・ナトリウム、及び／又はポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）などのセルロース調製物である。所望ならば、架橋したポリビニルピロリドン、寒天、又はアルギン酸若しくはアルギン酸ナトリウム等のその塩などの崩壊剤が添加されてもよい。このような組成物は任意の薬学の方法により調製されうるが、全ての方法には一以上の必要成分を構成する担体と上述の一以上の化学物質とを混合させる工程が含まれる。一般的に、本発明の医薬組成物は、それ自体既知の様式で、例えば従来の混合、溶解、造粒、糖衣作製、粉状化、乳化、カプセル化、閉じ込め、凍結乾燥の処理により、製造されうる。
糖衣丸の芯には適切な被覆を行なう。このため、任意選択的にアラビアガム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポールゲル、ポリエチレングリコール、及び／又は二酸化チタン、ラッカー液、並びに適切な有機溶媒又は混合溶媒を含みうる濃縮された糖液が用いられてもよい。確認用又は異なる組み合わせの活性化合物量を特徴づけるために染料又は顔料を該錠剤又は糖衣被覆に添加してもよい。
経口で使用され得る医薬組成物は、ゼラチンから成るプッシュ−フィット(push-fit)・カプセル、並びにゼラチン及びグリセロール又はソルビトールなどの可塑剤から成る軟密閉カプセルを含む。該プッシュ−フィット・カプセルは、ラクトースなどの充填剤、澱粉などの結合剤、及び／又はタルク若しくはステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤、並びに任意選択的に安定剤と混合して、該活性成分を含有し得る。軟カプセルでは、該活性化合物は、脂肪油、流動パラフィン、又は流動ポリエチレングリコールなどの適切な液体に溶解又は懸濁されうる。さらに、安定剤を添加してもよい。
本発明の化学物質の投与剤形は、この目的用に特別に設計された注射又は埋め込み用の徐放装置又はこの様式で付加的に作用するよう改変された埋め込み用の他の剤形も含まれうる。本発明の物質の徐放は、例えば、アクリル樹脂、ワックス、高級脂肪族アルコール、ポリ乳酸及びポリグリコール酸を含む疎水性ポリマー、並びにヒドロキシプロピルメチルセルロースなどのある種のセルロース誘導体を用いて該物質を被覆することにより達成されうる。さらに、徐放は他のポリマー基質、リポソーム及び／又は微小球を使用することにより達成されうる。
本発明の化学物質は薬学的に適合する対イオンとの塩として提供されうる。薬学的に適合する塩は、塩酸、硫酸、酢酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸等を含む多数の酸と形成されうるが、これらに限定されない。塩は対応する遊離塩基形となる水性溶媒又は他のプロトン系溶媒中でより可溶性になる傾向がある。
本発明の方法で使用されうるいずれの化学物質についても、治療に有効な用量は例えばイン・ビトロで炎症を低減させる又はイン・ビトロで免疫を増強させるなどの細胞培養検定から最初に見積もることができる。例えば、用量は、細胞培養で測定されたＩＣ50（例えば、炎症の最大半値(half-maximal)阻害を達成する試験物質の濃度）を含む血中濃度の範囲を達成するために動物モデルで形成できる。このような情報はヒトでの有用な用量をより正確に決定するために用いられ得る。
このような化学物質の毒性及び治療効果は、例えばＬＤ50（集団の50％に致死的な用量）及びＥＤ50（集団の50％に治療上有効な用量）を決定するために、細胞培養又は実験動物で標準的な薬学手順により決定され得る。毒性効果と治療効果との間の用量比が治療指数であり、これはＬＤ50／ＥＤ50の比として表すことができる。大きな治療指数を示す化合物が好ましい。これらの細胞培養検定及び動物研究から得られたデータをヒトで使用する用量範囲を決定する際に使用できる。このような化合物の用量は、ほとんど又は全く毒性の無いＥＤ50を含む血中濃度の範囲内にあることが好ましい。この用量は使用される剤形及び利用される投与経路に応じてこの範囲内で変更されうる。正確な製剤、投与経路及び用量は患者の状態に基づいて各医師により選択され得る（例えばフィングルら、1975年、「治療の薬学基礎」、１章１頁を参照）。
投与量及び投与の間隔は、症状を改善する効果を持続するのに十分な活性物質の血漿レベルを与えるために個々に調整されうる。全身投与用の通常の患者の用量は、1〜2000mg／日、一般的に1〜250mg／日、そして代表的には10〜150mg／日の範囲である。患者の体重の見地から言うと、通常の用量は0.02〜25mg/kg/日、一般的に0.02〜3mg/kg/日、典型的には0.2〜1.5mg/kg/日の範囲である。患者の体表面積の見地から言うと、通常の用量は0.5〜1200mg/m2/日、一般的に0.5〜150mg/m2/日、典型的には5〜100mg/m2/日の範囲である。
また、しばしば貯蔵性又は持続放出性の製剤で、全身投与よりむしろ局部投与の方法で、例えば該化合物を直接組織内に注入することにより、該化合物を投与しうる。さらに、標的化した薬物送達システムで、例えば組織特異的な抗体で被覆されたリポソームで、該薬物を投与しうる。該リポソームは該組織を標的とし該組織により選択的に取込まれる。局部投与又は選択的な取込みの場合、該物質の効果的な局部濃度は血漿濃度に相関しえない。
本発明の化学物質も局部的に送達され得る。局部投与では、0.001〜5％又はそれ以上の化学物質を含む組成物が一般的に適している。局部投与する領域には皮膚表面が含まれ、膣、直腸、鼻、口、及び喉の粘膜組織も含まれる。皮膚及び粘膜を経由する局部投与用の組成物は膨潤又は発赤などの刺激の兆候を生じるべきでない。
この局部用組成物は局部投与用に適応された薬学的に許容しうる担体を含みうる。従って、該組成物は、例えば懸濁液、溶液、軟膏、外用水薬、性的潤滑剤、クリーム、泡、エアロゾル、スプレー、座剤、インプラント、吸入剤、錠剤、カプセル、乾燥粉末、シロップ、バルサム又はトローチの剤形をとりうる。このような組成物を調製する方法は医薬産業で周知である。
一つの実施態様において、該局部用組成物は、例えば被験体の表皮組織又は上皮組織の上に該組成物を直接重ね若しくは塗布することにより、又は経皮的に「パッチ」を介して、該被験体に局部的に投与される。このような組成物には、例えば外用水薬、クリーム、溶液、ゲル及び固体が含まれる。局部用投与に適した担体は、一枚の連続膜として該皮膚上の適所に留まり、汗又は水侵による除去に耐えることが好ましい。一般的に、該担体は本質的に有機物であり本発明の化学物質をそれに分散又は溶解させることができる。該担体は薬学的に許容しうる皮膚軟化剤、乳化剤、増粘剤、溶媒などを含みうる。
本発明は大環状ジテルペンを含むバイオマスから該ジテルペンを分離する工程も特徴づける。該工程は該大環状ジテルペンを水性溶媒内に抽出するのに十分な時間及び条件の下で該バイオマスと該溶媒とを接触させる工程を含む。
該水性溶媒は水であることが好ましい。
該バイオマスは植物に由来することが好ましく、該植物はトウダイグサ科植物の構成員又はこのような植物の植物学的若しくは園芸学的な近縁植物であることが好ましい。該植物由来の物質（例えば、葉、幹、根、種子、樹皮など）は、該大環状ジテルペンの水性抽出のために該植物物質の表面積を増大させるべく、切断され、磨り潰され又は蒸発防止されることが好ましい。
該工程は該大環状ジテルペンを非イオン性吸着剤に吸着させる工程をさらに含むことが好ましい。該吸着剤は非イオン性多孔質合成吸着剤が適している。本発明の目的に使用され得る非イオン性多孔質合成吸着剤の中には、スチレンとジビニルベンゼンから主に構成される芳香族共重合体、並びにモノメタクリレートとジメタクリレートから主に構成されるメタクリル共重合体が含まれるが、これらに限定されない。スチレンとジビニルベンゼンから主に構成される芳香族共重合体を基本構造として含むこのような非イオン性多孔質合成吸着剤は、例えば、ジアイオン(Diaion) HP10、HP20、HP21、HP30、HP40、HP50、SP850、及びSP205（商標名：ミツビシ・ケミカル社）、並びに Amberlite XAD-2、XAD4（商標名：ローム・アンド・ハース社）を含む。モノメタクリレートとジメタクリレートから主に構成されるメタクリル共重合体を基本構造として含む非イオン性多孔質合成吸着剤の例にはジアイオンHP2MG、Amberlite(商標)XAD-7 、XAD-8、及びXAD-16等が含まれる。
該工程は水及び水溶性有機溶媒を用いて該非イオン性吸着剤から大環状ジテルペンを溶出する工程をさらに含むことが好ましい。
該処理は、大環状ジテルペンを溶解する水及び水溶性有機溶媒を用いるバッチ方法により実施してもよく又はカラムクロマトグラフィー方法で連続的に若しくはバッチで実施してもよい。
本発明で使用されうる水溶性有機溶媒の例は、メタノール、エタノール、n−プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、及び第三級ブタノールなどのアルコール、ジオキサン及びテトラヒドロフランなどのエーテル、アセトンなどのケトン、ジメチルホルムアミドなどのアミド、ジメチルスルホキシドなどの硫黄含有化合物である。二以上の該有機溶媒を使用のために混合してもよい。さらに、水にほとんど溶解しない溶媒、例えばn−ブタノールなどのアルコール、ギ酸メチル及び酢酸メチルなどのエステル、並びにメチルエチルケトンなどのケトンも展開中分離しない程度に使用しうる。特に好ましい水溶性有機溶媒はアルコールであり、とりわけメタノール、エタノール、プロピルアルコール等である。更に、異なる種類の溶媒も展開用に順次使用しうる。
分子サイズ及び／又は極性に基づいて化合物を分離する媒体及び方法を用いて、大環状ジテルペンをさらに精製し得る。この型の好ましい実施態様において、該大環状ジテルペンはセファデックスHL-20樹脂を用い、そして好ましくは展開用に水及び水溶性有機溶媒を用いて分離しる。
本発明は下記の非限定的実施例によりさらに説明される。
実施例１
ＰＫＣの活性化：酵素検定により測定されたＰＫＣのキナーゼ活性
イー・ペプルスから得られる化学画分の調整
イー・ペプルス植物から得られる樹液を採取し、−20℃で凍結し、解凍しそして使用一週間前に４℃で保存した。このＨ画分を国際特許出願番号PCT/AU98/00656号に記載の薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）により冷凍樹液から調製し、乾燥シリカを伴う物質として4℃で保存した。この物質はジャトロファン及びペプルアンを豊富に含んでいた。使用の一から二ヶ月前に、該物質をエチレングリコールジメチルエーテル（ＤＭＥ）に溶解して４℃で保存した。この濃度は該物質の乾燥重量から決定した。ＰＫＣ検定では、粗樹液（ＰＥＰ001）及びＰＥＰ004の画分を二回エーテル抽出し、ジテルペン類、即ちインゲナン、ジャトロファン及びペプルアンが濃縮されたエーテル可溶性画分を得た。残りの水溶性画分も使用した。インゲナン画分は国際特許出願番号PCT/AU98/00656号に記載のようにエーテル可溶性抽出物からＴＬＣにより調製された。
ＰＫＣ検定
従来型及び新規のプロテイン・キナーゼＣ（ＰＫＣ）イソ型はそれらの非刺激状態ではキナーゼとして不活性である。これらのＰＫＣのＣ１ドメインは、その基質部位（Ｃ４ドメイン）に結合し且つ該タンパク質のキナーゼ機能を不活性化する自己阻害性の擬似基質部位を含む。ＰＫＣの活性化は該Ｃ１ドメインにジアシルグリセロール（ＤＡＧ）が結合することに起因し、これは、複数のリン酸化事象及び該タンパク質へのコンフォメーションの変化を経て、最終的にＰＫＣの自己阻害の遊離に至る。ＴＰＡ及び他の関連化合物は種々のＰＫＣイソ型のＣ１ドメインに結合し、おそらくＤＡＧは同様な手段によりそれらの活性化に至ることが示されている。
ラットの脳のＰＫＣ（プロメガ社）のキナーゼ活性はＰｅｐｔａｇ（商標）・ノンラジオアクティブ・プロテイン・キナーゼ・キット（プロメガ社）を用いて測定した。アガロースゲル電気泳動の使用は、この技術は蛍光標識ペプチド（ＰＬＳＲＴＬＳＶＡＡＫ）の反対の静電的電荷を同ペプチドのリン酸化物と比較して可視化する。
該蛍光基質（ペップタグ）を用いたＰＫＣの検定結果は図１に示す。該反応混合物をゲル電気泳動により分離し、未反応基質（ａ）の陽極（上端）への移動、及びＰＫＣによるリン酸化のためより一層負に帯電し陰極（下端）の方に移動する生成物（ｂ）を示した。製造業者により供給される正の対照の活性化剤（ホスファチジルセリン）（レーン２）はＰＫＣ及び基質単独（レーン１）と比べて強力な活性化を示した。ＴＰＡの種々の希釈もＰＫＣの活性化を示した（レーン３、４及び５）。
ジメトキシエタン（ＤＭＥ）中で戻し、樹液５に対し１の最終希釈でＰＫＣとインキュベートしたイー・ペプルス樹液のエーテル抽出物は、粗樹液自体（レーン９）と同様に有意なレベルで作用した（レーン７）。しかしながら、粗樹液自体の場合、基質及び生成物（バンドｃ、レーン９）の両方共さらに陰極寄りであった。この結果は粗樹液中のカルボキシペプチダーゼ活性によるものと解釈された。この活性は基質ペプチドからＣ末端の正に帯電したリシンを切断する。これは、エーテル抽出物から得られる水層が最小のＰＫＣ活性化能を有するが、該粗樹液と同様な方法で該基質の移動を変化させた（レーン８）という発見により確認された。ＤＭＥ自体は活性をもたなかった（レーン１０）。
図２は負の対照（レーン１）及び正の対照（レーン２）と同時に分画化した物質の試験結果を示す。画分Ｈ（ジャトロファン及びペプルアンの混合物）は、未反応基質から離れて移動する生成物（矢印）の環として見られる低い活性を示した（レーン３）。同様な結果はインゲナン画分についても見られた（レーン４）。
イー・ペプルスの全ての画分は、上記のペプチド系蛍光タグ試験を用いて入手可能なプロテイン・キナーゼ酵素全ての活性化について試験される。この実験で入手可能なアイソザイム（パネベラ）はα、β１、β１１、γ、δ、ε、η及びζであった。
原則的に、ＰＫＣ試料のキナーゼ活性は、刺激の前（負の対照）、及びＰＥＰ001、ホスファチジルセリン（ＰＫＣを活性化することが知られている酸性脂質、プロメガ社により供給された正の対照）及びＴＰＡ（20μg／ｍL ）による刺激の後に評価した。図３に提示される結果は、1:125及び1:500の希釈のＰＥＰ001がホスファチジルセリン（200μg／ｍL）と同様なレベルまで且つＴＰＡ（20μg／ｍL）より高いレベルまでＰＫＣを活性化することを示す。この実験から、該ＰＥＰ001がＰＫＣを活性化することは明白である。
実施例２
ＰＫＣの活性化：ＰＫＣの移動
ＰＫＣの活性化は簡単な蛍光顕微鏡に基づく検定によっても証明され得る。活性化時に、ＰＫＣは細胞質から細胞の原形質膜へ移動することが知られている。ＰＫＣ酵素を緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）又は増強されたＧＦＰ（ＥＧＦＰ）と融合することにより、ＰＫＣの活性化は拡散性細胞質ＧＦＰの原形質膜と関連した蛍光環への移動により検出できる。この検定を用いて、イー・ペプルスの粗抽出物はＰＫＣβ及びＰＫＣγを活性化することが示された。
MM96Ｌ細胞をまず市販のキット（キアーゲン・エフェクチン・トランスフェクション・キット）とＰＫＣ−ＧＦＰ発現ベクター（クローンテック社；http://www.clontech.com/gfp/）を用いてトランスフェクトし、該ＰＫＣ−ＧＦＰタンパク質を２４時間生産させた。次いで、該細胞をイー・ペプルス粗抽出物及びＴＰＡで処理し蛍光顕微鏡（488nm励起）の下で観察した。二つの対照、即ち、非トランスフェクション細胞を同定できるDNA無し、並びにＰＫＣ活性化無しでのトランスフェクション効率の計算及びトランスフェクション細胞の同定を可能とする物質無しが使用された。ｐＰＫＣβ−ＥＧＦＰ及びｐＰＫＣγ−ＥＧＦＰを試験し、イー・ペプルス粗抽出物が細胞質ゾルから原形質膜へ蛍光の移動を誘導することが示された。これはイー・ペプルス粗拙出物がこれらのＰＫＣ酵素を活性化したことを示している。その結果は図４Ａ及び図４Ｂで例示され、これらはそれぞれ如何なる物質も存在しない場合のＰＫＣβの発現、及びイー・ペプルス粗拙出物と２時間接触させた後のＰＫＣβの発現を示す。
他の実験では、蛍光顕微鏡を用いて個々のＰＫＣイソ型の移動が観察し、ＰＥＰ003及びＰＥＰ005による活性化の指標として用いた。
五つのＥＧＦＰ−ＰＫＣイソ型（クローンテック社）がこの実験で入手可能であり、三つの主なＰＫＣファミリー（即ち、従来型、新規及び異型のＰＫＣ）をスクリーニングできる。種々のＰＫＣファミリーの構成員はα、β、及びγ（古典的）、θ（新規）及びζ（異型）である。
ヒーラ細胞は、カバースリップを含む24穴プレートに播種し、市販のエフェクチン−トランスフェクション・キット（キアーゲン社）を用いて、ＥＧＦＰに融合させたＰＫＣイソ型でトランスフェクトした。細胞を16〜24時間該トランスフェクション試薬に曝した。続いて、トランスフェクトされた細胞を、ＴＰＡ(100 ng/mL)、ブリオスタチン−１（5 pg/mL）、ＰＥＰ003（2.25μg/mL；5μM）又はＰＥＰ005（670μg/mL、1.5μM）で一時間処理した。処理後、細胞をカバースリップ上で固定し、スライドガラス上に載せた。該スライドを続いて蛍光顕微鏡により可視的に調べ、撮影し、150を上回る細胞を計数した／処理／ＰＫＣイソ型。計数した細胞をＩｍａｇｅＰｒｏ（登録商標）4.1を用いて該ＰＫＣ−ＥＧＦＰ蛍光の局在にしたがって細胞質又は原形質膜のいずれかに分類した（図５）。幾つかの細胞はゴルジ体又は同様に位置する細胞構造物への局在をも示した（図５）。これらの細胞数も計数した。結果は細胞の百分率の平均及び標準偏差として示す（表１）。
図６に示した結果は、ＰＫＣα、β及びγがＰＥＰ003、ＰＥＰ005及びＴＰＡによる処理に応答して細胞質から原形質膜へ移動するがブリオスタチン−１には応答しないことを示す。予期されるように、ジアシルグリセロールに依存するＰＫＣζはいずれの処理への応答においても移動しない。ＰＫＣθはＰＥＰ003、ＴＰＡ及びブリオスタチン−１に応答して移動するが、ＰＥＰ005は該アイソザイムの局在化にいかなる変化も誘導しない。この結果は、ＰＫＣα及びＰＫＣγでトランスフェクトされた細胞のＴＰＡ、ＰＥＰ003及びＰＥＰ005による処理により、ゴルジ様の蛍光を示す細胞の数が増加することも示す。ＰＫＣβでトランスフェクトされ且つＴＰＡで処理されたヒーラ細胞もゴルジ様の蛍光の増大を示す。対照的に、ＰＥＰ005及びブリオスタチン−１による処理はゴルジに濃縮されたＰＫＣβを持つ細胞数を減少させる。ＰＫＣθでトランスフェクトされ且つゴルジ様の局在を示すヒーラ細胞の数は全ての処理に応答して増加する。
上記の結果は、ＰＥＰ003及びＰＥＰ005が試験された従来型及び新規のＰＫＣイソ型の移動を誘導することを示し、これはこれらの化合物が従来型及び新規のＰＫＣファミリーの構成員を活性化することを示唆している。ＴＰＡ、ブリオスタチン−１、ＰＥＰ003及びＰＥＰ005はＰＫＣζの移動を誘導しない、これはＰＥＰ003及びＰＥＰ005が異型のＰＫＣファミリーの構成員を活性化しないことを示唆している。さらに、ＴＰＡ、ブリオスタチン−１、ＰＥＰ003及びＰＥＰ005は、特異的ＰＫＣイソ型の原形質膜及び／又はゴルジ体への移動を誘導する能力において差異を示す。これらの差異は、これらの化合物の異なる生物学的作用を決定する際に重要な役割を果たしうる。
実施例３
ＰＫＣへの化合物の結合
競合検定は、本発明のジテルペンエステルがＰＫＣのホルボールエステル結合部位に結合するか否かを決定するために実施された。この競合検定は、ＰＫＣの供給源として使用されたラットの脳のホモジネート（ゴンザレツら、1999）への結合から、23μg/mLのＰＥＰ003が[3H]−ホルボールジブチレートに９０％を超えて置換わったことを示した。この結合はビスインドリルマレイミドとの共インキュベーションにより阻止されなかった。これらの結果はＰＥＰ003がＰＫＣのホルボールエステル結合部位に結合するがビスインドリルマレイミドは結合しないことを示している。
実施例４
ＨＩＶ潜伏感染の活性化
逆転写酵素阻害剤とプロテアーゼ阻害剤（ＨＡＡＲＴ）との組合わせなどの極めて活性な抗レトロウイルス治療の使用は、ＨＩＶに感染した個体を有意に延命させる。しかしながら、その処方計画は非常に負担であり、ウイルス血症の再発を防止するために該計画の厳守を必要とする。ＣＤ４+ 細胞などの、ウイルスを活発に転写できる長命の細胞は主要な潜伏の貯蔵庫として作用し、該細胞は該ウイルスが抗レトロウイルス化学療法又は免疫系の監視を免れることを可能とする。従って、感染細胞から潜伏ウイルスを活性化させる物質を発見することが急務である。そのときは、活性化されたウイルスは攻撃的な抗レトロウイルス化学療法により殺されうるであろう、そして免疫系の監視もこれらの条件下で改良されうるであろうと仮定されてきた。このような物質は、例えばヘルペス感染などの、感染細胞中にウイルスが隔離されている他の疾病状態において有用性を有しうるであろう。抗癌物質は潜在的な抗ＨＩＶ物質として広く研究されてきた。幾つかのＰＫＣ活性化物質は潜伏レトロウイルスを活性化することが示されてきた。例えば、ＰＭＡは単球中の潜伏ＨＩＶを活性化することを示した（トビウメら、1998）。しかしながら、ＰＭＡは既知の腫瘍プロモーターである。
ＨＩＶ−１・ＬＡＩ株に感染した後の前単球（promonocytic) 細胞系統Ｕ９３７に由来するＨＩＶ−１に潜伏感染した細胞系統（Ｕ１）がこれらの実験で用いられた。活性化の無い場合、ｐ２４の生産として測定されたウイルスは該Ｕ１細胞系統により全く又はほとんど生産されない。ホルボールエステルはこれらの細胞からのウイルスの生産を活性化することが知られている（トビウメら、1998）。そこでＴＰＡ／ＰＭＡがこれらの実験で正の対照として使用された。
Ｕ１細胞を10％の仔牛血清を補足したRPM1-1640培地で培養し、105 細胞/mLを様々な濃度のホルボールエステルＴＰＡ又はイー・ペプルス粗樹液（ＰＥＰ001）又はそれに由来するＰＥＰ004（Ｈ１）のいずれかの存在下及び非存在下で２０時間培養した。上清を回収し、ウイルスの複製をＮＥＮライフサイエンスＨＩＶ−１・ｐ２４・ＥＬＩＳＡキットを用いてＥＬＩＳＡにより該培養上清中のＨＩＶ・ｐ２４・ｇａｇタンパク質の量を測定することにより監視した。ｐ２４の値は標準曲線を用いてＯＤ値から計算した。
ＴＰＡ、イー・ペプルスから得られた粗樹液（ＰＥＰ001）、及び該ＰＥＰ004画分は、図７で例示するように、全てＵ１細胞からＨＩＶを活性化した。該粗樹液（ＰＥＰ001）はＴＰＡより５０倍活性が低かった。該ＰＥＰ004画分はＴＰＡより1000倍活性が低かった。
実施例５
ＰＥＰ003及びＰＥＰ004により阻害されるＨＩＶ溶解活性
レトロウイルスであるヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）は世界で四番目に多い致命的病気の原因であり、3600万を超える人々に感染する。幾つかの抗レトロウイルス化合物が臨床用途に承認されてきたが、多くのＨＩＶ株はこれらの薬物に対する耐性を獲得した。新たな抗レトロウイルス化合物に対する明確な且つ迅速な必要性がある。
実験は、急性感染したＴ細胞におけるＨＩＶ−１の複製に及ぼす本発明の化合物の効果を評価するために行った。末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）は、ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２、Ｂ／Ｃ型肝炎に感染していないドナーから得られ、フィトヘマグルチニン−Ｍで刺激し、そして10Ｕ/mLのインターロイキン−２を補足した培養液で培養した。活性化したＰＢＭＣを、10ｇ（低力価）及び100 ｎｇ（高力価）のＨＩＶ株ｐＮＬ4−3のＣＡ−ｐ２４相当物で感染させた。細胞を２時間感染させ、その後該ウイルスを除去し、該細胞を培養培地で洗浄した。同数の細胞を２４穴プレートに播種し、（最終濃度）8nM及び80nMのＴＰＡ、280nMのインゲノール、500nM、50nM及び5nMのＰＥＰ003、又はストックから1x104及び1x105の希釈のＰＥＰ004を含む化合物を該培養細胞に添加した。さらに、非感染の活性化したＰＢＭＣをＴＰＡ（80nM）、インゲノール（280nM）、ＰＥＰ003（500nM）、及びＰＥＰ004（1x104希釈）の存在下で増殖させた。他の培養物は、感染もさせず如何なる化合物でも処理しなかった、又は感染させたがいずれの化合物でも処理しなかった。上清を０、３、７及び１０日目に各培養から得た。ＨＩＶ−１・ＣＡ−ｐ２４の量は市販のＥＬＩＳＡキットを用いて測定した。三回の独立実験を行った。
図８Ａ〜図８Ｄに示すデータはＰＥＰ003が用量依存性様式でウイルス複製速度を減少させたことを示す。500nM、50nM及び5nMの濃度のＰＥＰ003は、未処理の感染細胞と比べてそれぞれ約99.9％、95％及び47％まで該複製速度を減少させた。1x104及び1x105の希釈のＰＥＰ004はそれぞれ約66％及び15％まで該複製速度を減少させた。より高濃度のウイルスの初期接種は500nM又は50nMのＰＥＰ003の全体阻害をそれぞれ約97％（ｔ試験、p<0.001）又は88％（ｔ試験、p<0.074）まで減少させたので、ウイルス負荷の程度は上記の結果を僅かに改変するように思われた。対照化合物のインゲノール（2.8μM）及びＴＰＡ（80nM及び8nM）はそれぞれ約35％、98％及び38％までＨＩＶ−1複製速度を減少させた。
実施例６
遺伝子治療を改良する方法としての
サイトメガロウイルス・プロモーター活性の増強
ウイルス及びウイルスプロモーター、とりわけアデノウイルス及びＣＭＶは様々なヒトの疾病状態に遺伝子治療を送達するために用いられる。該ウイルスの転写を駆動するプロモーターが何等かの物質によりさらに活性化され得るならば、遺伝子発現、従って、治療効果は増強されるであろう。
ヒトの黒色腫細胞を培養中に10倍希釈のアデノウイルス５で感染させ、ＰＥＰ005、ＰＥＰ006、ＰＥＰ008及びＰＥＰ010の希釈液で処理し、そしてアデノウイルスの複製をウイルス複製細胞の免疫組織化学検出により２日後に測定した。ウイルスの複製（アデノウイルス抗体、ペルオキシダーゼ結合タンパク質Ａ及びペルオキシダーゼ基質との逐次インキュベーション後に染色された細胞の数を数えた）は、67ng/mLのＰＥＰ005で344％、295ng/mLのＰＥＰ006で256％、226ng/mLのＰＥＰ008で248％及び67.5ng/mLのＰＥＰ010で147％まで増加した。
ＣＭＶプロモーターは、種々のヒトの細胞型におけるその強力な転写活性により、多様な細胞へトランスフェクトされた構築物中の遺伝子の転写を活性化するために普通に使用される。この活性を増大させるＴＰＡの能力がアデノウイルス構築物で非生産的感染をした細胞で証明された（クリステンソンら、1999）。こうして、同様な構築物によりコードされる治療用タンパク質の生産を増大させる可能性が生じてきた。
ヒトの黒色腫細胞（ＭＭ９６Ｌ，１マイクロタイターウェルあたり50,000個）を、ＴＰＡ又はイー・ペプルス粗樹液の希釈液で処理し、ＣＭＶプロモーターにより駆動されβ−ガラクトシダーゼを発現するアデノウイルス−５のプールの1/20希釈で感染させた。20時間のインキュベーションの後、該ウェルをＰＢＳで３回洗浄し、50μLのクロロフェノール・レッド・ガラクトシド（ＧＰＲＧ）基質溶液を添加し、90分後に540nmの吸光度を測定した。本発明者らは、ＴＰＡ（100ng/mL）及びイー・ペプルス粗樹液（10,000分の1に希釈）が両方共ＣＭＶプロモーター活性を３倍を超える程度まで誘導することを見出した。
実施例７
先天性免疫応答の活性化：皮膚における好中球の浸潤の誘導
好中球はヒトの末梢白血球細胞の約70％に相当し炎症及び病気に対する生得的防御に極めて重要な役割を果たしている（モリネド、1999）。活性化の際、好中球は超酸化物ラジカル並びに種々の酵素及び他の化合物を含有する顆粒を放出する。これらの分泌物は浸入する病原体を破壊できるが炎症及び関連する組織の損傷をも結果として生ずる。
本発明者らはイー・ペプルス樹液が塗布部位に好中球の蓄積を惹き起こすことを見出した。これはイー・ペプルス樹液が好中球を補充できることを示している。イー・ペプルス樹液からのエーテル抽出物として得られた活性ジテルペンの混合物（100mg/mLのエタノール液2μL）をnu/nuマウスの皮膚上に塗布した。24時間後、該動物を犠牲にし、該皮膚を切片作製及びヘマトキシリン／エオシン染色のため10％のホルマリンに固定し、た。図９Ａ及び図９Ｂに示すように、対照の皮膚は浸潤する単球のほとんどない正常な皮膚構造を示した。処理された皮膚は、多型核により特徴づけられる多数の浸潤する好中球を示した。皮膚への大きな損傷の証拠は無かった。
実施例８
好中球の浸潤活性
基底細胞癌（ＢＣＣ）は白人集団で最も一般的な癌であり、全世界的に最高の年間発生率がオーストラリアで記録されている（ミラーら，1994、マークスら，1993）。新しい動きが局部治療を用いた非黒色腫皮膚癌（ＮＭＳＣ）の治療を観察し始めた。この治療の本質は、白血球、特に好中球の浸潤を伴う炎症性応答の誘導に依存しうる。
本発明の化合物が好中球の浸潤を誘導するか否かを評価するために、実験はC57BL/6Jマウスを用いて設計した。24匹のマウスを１群あたり４匹のマウスから成る６群に分けた。これらの群の３つでは、該マウスはB16黒色腫を皮下注射され（１マウスあたり２部位、5X105細胞／部位）、腫瘍サイズが直径5〜8mmに近づくまで８日間増殖させた。次いで、三化合物全てについてそれぞれの単回適用を該腫瘍又は正常な皮膚に適用した。各化合物を２群のマウスに適用した、一群は腫瘍とともに、一群は腫瘍無しの適用であった。該三化合物は、イソプロパノールゲル（イソプロピルアルコール25％(w/w)、プロピルアルコール25％(w/w)）（ビークル）10μL中のＰＥＰ010（2μL；150mM）、ビークル10μL中のＰＥＰ009（ストック2μL）又は対照としてのビークル単独であった。次に、各群から得られる一匹のマウスを、化合物の単回適用の4時間、24時間、48時間又は144時間のいずれかの後に犠牲とし、その後、組織を摘出し組織学用に切片を調製した。
4時間目の結果は、Ｂ16腫瘍上のＰＥＰ010及び正常皮膚上のＰＥＰ009についてともに１＋斑状好中球を示し、Ｂ16腫瘍上のＰＥＰ009については２＋好中球を示す（表２）程度のの最小の応答を示すに過ぎなかった。24時間目では、ビークル単独の対照群には好中球が存在しないが、腫瘍及び正常皮膚の両方の上でのＰＥＰ010及びＰＥＰ009の適用では４＋好中球の浸潤が存在する（図１０Ａ及び図１０Ｂ）。更に、該Ｂ16群においては表在腫瘍細胞の60〜85％はアポトーシス又は壊死であった。48時間目では、ＰＥＰ010及びＰＥＰ009の適用で４＋好中球が存在し同様なパターンであったが、一方、対照群では好中球の存在を示さなかった（図１０Ａ及び図１０Ｂ）。腫瘍細胞の壊死及びアポトーシスとともに、48時間間隔で一部の好中球が崩壊したという証拠も存在する。144時間の群は、該対照群における好中球の欠如を示しそしてＰＥＰ010群及びＰＥＰ009群で大半が今や変性した２〜４＋好中球の存在を示した。腫瘍及び皮膚の広範囲の壊死並びに肉芽組織及び初期修復の明白な徴候があった。
この研究はＰＥＰ010及びＰＥＰ009がビークル単独と比較して好中球の著しい炎症性浸潤を誘導することを示し、多形核細胞のこの流入はある種の皮膚癌の増殖を改変するのに重要でありうる。
実施例９
先天性免疫応答の活性化：末梢血単核細胞における呼吸バーストの誘導
単球／マクロファージは血液で形成され且つＴリンパ球及び抗体により通常活性化される組織細胞である。活性化時にこれらは病原体を食菌でき、スーパーオキシドラジカルを放出でき、サイトカインの重要な供給源である。イー・ペプルス粗抽出物は、蛍光標示式細胞分取（ＦＡＣＳ）に基づく方法の使用により、スーパーオキシドラジカルの放出を誘導できることが示された。この方法では、スーパーオキシドラジカルはジヒドロエチジウム色素により検出される。さらに、食作用の活性はニトロブルー・テトラゾリウムの取込み増加により示されるようにイー・ペプルスにより活性化され、プラスチックへの粘着はイー・ペプルスにより増大した。即ち、これはマクロファージの活性化及び分化を示すと考えられる。
標準的なフィコール分離により調製されたヒトの末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）は約５％の単球を含む。ＰＢＭＣを、呼吸バーストにより酸化された際に蛍光性になる色素の還元型のジヒドロエチジウムとインキュベートした後、1/1000に希釈されたイー・ペプルス粗抽出物又は100ng/mLのＴＰＡを用いて10％のＦＣＳ−ＲＰＭＩ1640中で37℃で15分間処理し、従来の方法（フローサイトメトリー法ハンドブック、151頁）を用いるフローサイトメトリーにより分析した。蛍光の平均チャネル数は 618（対照）及び 818（1/1000に希釈されたイー・ペプルス抽出物）であった。図１１Ａ及び図１１Ｂに例示されるこれらの結果は、該イー・ペプルス抽出物が典型的な該色素の細胞内酸化、即ち呼吸バーストを誘導したことを示す。食作用の活性は従来の方法（ハドソンとヘイ、実践免疫学、第三版、74頁）により測定した。細胞はイントロブルー・テトラゾリウム（ＮＢＴ）及び1/1000に希釈されたイー・ペプルス粗抽出物（ＰＥＰ001）又は100ng/mLのＴＰＡを用いて10％のＦＣＳ−ＲＰＭＩ1640中で37℃で20分間処理した後、血球計で青色に染色された細胞の数を計数した。三視野の平均により、青色に染色された細胞が＜2％（対照）、10％（ＴＰＡ）及び8.7％（イー・ペプルス樹液）という数値を得た。これは、細胞による青色ＮＢＴ沈殿物の取込みにより示されるように、感染体に対する正常な応答の一部であるイー・ペプルス樹液による食作用活性の誘導を立証する。
Ｈ2Ｏ2の生産を測定するために2',7'-ジクロロフルオレセイン・ジアセテート（DCFH-DA）を用いた実験も実施した（JP,ロビンソン、酸化バースト方法、フローサイトメトリー法ハンドブック、ヴィレー−リス社、147〜149頁、1993年）。Ｈ2Ｏ2は該非蛍光性プローブ（DCFH-DA）を蛍光性プローブに酸化し、次いで該プローブはフローサイトメーターにより検出され得る。末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）はヘパリン添加血液の溶解により供与者の血液試料から抽出され、1x106/mLのリン酸緩衝液（pH7.3）の懸濁液で使用される。次に該細胞をDCFH−DA（20mMストックの1μL/mL）と15分間インキュベートしてそれを取込ませ、細胞エステラーゼでの加水分解により捕捉させた。次いで該細胞を試験化合物により37℃で15分間刺激した。実験に含まれる対照は非負荷対照（DCFH-DA無処理の細胞）及び負荷対照（DCFH-DA処理したが刺激無しの細胞）であった。これらは非刺激細胞の非特異的酸化を監視するために用いられた。次に該細胞をフローサイトメーター（488nmの励起、525±20nmの放射）で分析し、各細胞集団、即ち顆粒球、単球及びリンパ球について各試料をゲーティングした（表３）。
ブリオスタチンを除く全ての化合物は呼吸バーストを誘導し、その効果はリンパ球と比べて顆粒球及び単球で最強であった。同様な結果は、顕微鏡下で計数される紫染色された細胞の割合として測定される同一条件下でのニトロブルー・テトラゾリウムの減少を測定することにより得られた。
ＰＫＣ活性化の要件についての証拠は、ＰＥＰ005、ＰＥＰ006、ＰＥＰ008及びＰＥＰ010と同時のビスインドリルマレイミド（10μg/mL又は1μg/mL）の添加により得られた。このＰＫＣ阻害剤はＴＰＡ及びＰＥＰ003の処理で見られた呼吸バーストを阻止した。
蛍光性ビーズを用いる食作用
末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）による食作用は１μMの Fluoresbrite(商標）黄−緑蛍光ラテックス球（ポリサイエンス社、ウォリントン、ペンシルバニア州）を用いて検定した（ステインカンプら、1982）。ヘパリン添加全血の試料を薬物で処理し、1ｍLの懸濁液に対しＰＢＳ10μL中の5x107 蛍光性ラテックスビーズを添加した。細胞を懸濁液中で振とうプラットフォーム上で37℃で30分間インキュベートし保持した。次いで、刺激した試料及び無刺激の試料を溶解してＰＢＭＣを単離した。該ＰＢＭＣをＦＩＴＣを測定するフローサイトメーターにかけ（488nmの励起、525±20nmの放射）、蛍光（貪食された球）及び光散乱（細胞サイズ）についてゲーティングした。
表４に示したデータはＴＰＡ、ＰＥＰ006、ＰＥＰ008、ＰＥＰ003及びＰＥＰ005が全てＰＢＭＣの食作用を刺激することを示している。
実施例１０
先天性抗ウイルス活性の活性化
アルファウイルスを含む多くのウイルスは先天性抗ウイルス活性に感受性であり、該活性はしばしばインターフェロンα／β応答の活性化により媒介される（アンタリスら、1998）。このような抗ウイルス活性はウイルスの複製を支持する細胞の能力を阻害する。ロス・リバー・ウイルスにより惹起されるものを含む多くのウイルス感染では、ウイルスの複製は結果としてウイルスに誘導される細胞変性効果（ＣＰＥ）又は細胞死を生ずる。イー・ペプルスのインゲナン（ingenanes）によるヒトの線維芽細胞の処理は抗ウイルス活性を活性化することを示し、アルファウイルス感染により誘導されるＣＰＥを防御した。
ヒトの皮膚線維芽細胞（104 ／ウェル）を96穴プレートに播種し、付着させるため一晩静置した。イー・ペプルス・インゲナンの抽出物を48時間5μg/mLで添加した。次に、アルファウイルス（ロス・リバー・ウイルス、Ｔ48）は1、10及び100の細胞培養ＩＤ50の用量で６日間添加した（ラ・リンら、1996）。ウイルス感染の細胞変性効果はクリスタル・バイオレット染色を用いて検定した。防御された細胞はスミレ色に染まるが、一方、ＣＰＥに罹った細胞は該プレートから脱離しそのウェルは染色されない。アルファウイルスに誘導されるＣＰＥは非処理細胞でＣＰＥを誘導するのに必要なウイルスの用量より100倍高い用量で処理された細胞にのみ観察された。これは有意な程度の防御が該イー・ペプルス抽出物により付与されたことを示している。
実施例１１
腹腔内ストレプトコッカス感染に対する防御：マウスにおけるＡ群ストレプト
コッカスによる全身性感染に及ぼすＰＥＰ003及びＰＥＰ004の効果
Ａ群のストレプトコッカス（ストレプトコッカス・ピオゲネス）（ＧＡＳ）によるヒトの感染は、比較的軽微な咽頭炎（「トレップ・スロート(trep throat)」）及び膿痂疹（表皮感染）から毒性ショック症候群及び壊疽性筋膜炎（両者は多系統臓器不全に至りうる）等のより深刻な侵襲性感染までを含む多様な臨床的発現を惹起し得る。最後に、リューマチ熱（ＲＦ）、リューマチ性心臓病（ＲＨＤ）及び急性糸球体腎炎（ＡＧＮ）などのＧＡＳ感染後後遺症は発展途上国及び現地人集団、とりわけオーストラリア先住民で主要な問題である。ＧＡＳ感染を制御するための現在の処理は抗生物質治療である。しかしながら、急性ＲＦの反復する症状の発現及びＲＨＤの発症の場合、抗生物質の連続的高用量投与が要求されるため、高用量遵守の欠如がしばしばこれらのＧＡＳ関連病の持続に関係する。ＧＡＳ感染に対するワクチンの開発はＲＦ及びＲＨＤを含むＧＡＳ関連疾病を予防するであろう。しかしながら、ワクチンが無い場合、改良された抗細菌活性をもつ新たな薬物の開発が有望な治療用薬剤を提供しうる。
本発明者らの目的はインビボでのＧＡＳ感染に対するＰＥＰ003及びＰＥＰ004の全身性の防御能力を試験することであった。マウス（n=10）は50μLのＰＥＰ003（500nM）、ＰＥＰ004（ストックから1:100希釈）又は対照（PBS/10％アセトン）で処理し、処理の24時間前及び後に生きているＧＡＳで腹腔内チャレンジした。二つの異なる株のマウス（クアケンブッシュ及びB10.BR）及び四つの異なるＧＡＳ株（NS-1、PL-1、88/30及びM1）が用いられた。チャレンジ後２週間にマウスを監視し、マウスの生存百分率を測定した。PL-1 GASでチャレンジしたクアケンブッシュマウスの生存率は70％（ＰＥＰ003）、60％（ＰＥＰ004）及び40％（対照）であった（表５）。該化合物のいかなる潜在的な有害な副作用をも排除するため、ＰＥＰ003及びＰＥＰ004の同じ連続処理を受けた（しかしチャレンジされなかった）対照マウスをも次いでPL-1でチャレンジした。生存率はＰＥＰ003、ＰＥＰ004及び対照についてそれぞれ40％、80％及び20％であった（表６）。後者の実験において、ＰＥＰ004の防御効果は有意（p=0.06）に近かったが、少数のマウスしか使用しなかった（n=5）。NS-1 GASでチャレンジしたクアケンブッシュマウスにおいて、生存率はPEP003及び対照については50％、PEP004については80％であった（表５）。M1 GASでチャレンジしたB10.BRマウスでは、生存率は対照が10％、ＰＥＰ003が30％そしてＰＥＰ004が0％であった（表５）。88/30 GASでチャレンジしたB10.BRマウスでは、生存率は対照が20％、PEP004が30％そしてＰＥＰ003が0％であった（表５）。これらのデータはクアケンブッシュマウスにおける全身性ＧＡＳチャレンジに対するＰＥＰ004の可能性のある防御効果を示している。さらに、これらのデータはＧＡＳチャレンジ前のＰＥＰ003及びＰＥＰ004の毎週の治療計画がより効果的になりうることを示している。
実施例１２
ＰＥＰ003の抗大腸菌活性：白血球の活性化
血液をソディウム・ヘパリン・チューブ（ベクトン・ディッキンソン社のＶＡＣＵＴＡＩＮＥＲ）内に採取し、白血球を赤血球細胞の溶解により調製した（フローサイトメトリー法ハンドブック、ロビンソン,ＪＰ、ヴィレー−ライス社、1993年，酸化的バースト方法、フローサイトメトリーによるＨ2Ｏ2 ＤＣＦ検定、147〜149頁）。白血球を再懸濁し各チューブが7x106個の末梢血細胞（ＰＢＣ）を含むよう二つのチューブ内へ均等に分けた。次いで両チューブを1000rpmで10分間遠心分離（ベックマン，GS-6)した。この上清を得た後、容量をRPMI 1640（ギブコBRL社、抗生物質を含有しない、10％(v/v)の牛胎児血清で補足）で1mLに調整した。次に100μLのＰＥＰ003（10％のアセトンを含有する23μg/mLの最終濃度を得るため）を一方のチューブに加え、他方に100μLのPBS/10%アセトンを加えた。各チューブに10μLの大腸菌（コンピテント細胞、XL10-ブルー、ストラタジーン社）も添加した（静置培養の〜1/100希釈を得た）。両チューブはボルテックス攪拌した後2500rpmで10分間遠心分離（ベックマン、GS-6）した。蓋を緩め該チューブを37℃/5％CO2でインキュベートした。
16時間のインキュベーションの後、該チューブをボルテックス攪拌した。大腸菌の数を見積もるため、両チューブ並びに元の静置培養（4℃で保存）から50μLを採り、エッペンドルフチューブに移し10,000rpmで10分間遠心分離（ベックマン、GS-15R）した。上清（約45μL）を取除き、ペレットを残りの約5μLに再懸濁した。塗抹標本は5μLの細菌懸濁液を用いてスライドガラス上に作製され、細菌を青色に染めるライト−ギムザ染色の改変方法であるクイック・ディップ（ヒスト・ラブズ、リバーストーン、オーストラリア）を用いて染色した。大腸菌は接眼レンズマイクロメーター（100μmx100μm）を備えた従来の光学顕微鏡（x400）を用いて計数した。この計数を次に該塗抹標本（面積＝12.5x105μm2）の総数を得るよう調整し、１mLあたりの大腸菌数として表した。大腸菌の増殖を測定する他の方法は上清の吸光度（595nm）を読み取ることであった。
図１２及び図１３で示す結果はＰＥＰ003による白血球の処理が結果として細菌数の有意の減少を生ずることを示している。
実施例１３
白癬の処置
白癬は、その感染が身体のケラチン構造に限定される、トリコフィトン、マイクロスポラム及びエピデルモフィトンなどの種の真菌類により惹起される皮下真菌症又は皮膚糸状菌症である。培養によりトリコフィトン・メンタグロフィテス・バール・メンタグロフィテスであると決定された成人男性の前腕の掌表面上にある２週齢の白癬病巣を、イー・ペプルス粗抽出物の１回局部塗布で処置し、７日後に消失したことが示された。処置無しでもこのような病巣の消失は起こるが、極めて稀であると考えられる。
実施例１４
吸血性昆虫の咬傷の処置
蚊及びサシチョウバエなどの吸血性昆虫の咬傷は咬傷部位にしばしば痒い炎症反応を惹起する。この反応の正確な機構はあまり理解されていないが、肥満細胞及びヒスタミンの放出がこの反応の構成要素であるように思われる（グリーブスとウォール、1996；ホルスマンヘイモら、1996）。
予備実験で、本発明者らはヒトのサシチョウバエの咬傷をイー・ペプルス抽出物で処置し離れた部位での非処理咬傷と比べて痒みの感覚が迅速に減じることを見出した。いかなる提唱された作用機構にも縛られることを望まないが、本発明者らは、該イー・ペプルス抽出物が肥満細胞のエキソサイトーシス及びヒスタミンの放出を強力に刺激することにより、痒みと関連する特性を持つこれらの化合物の経時的な徐放を防止すると考えている。
実施例１５
治療手段としてのプロモーター活性化：ＥＢＶに感染した細胞系統
及びＥＢＶ陽性のバーキットリンパ腫細胞系統の活性化に及ぼす
ＰＥＰ003及びＰＥＰ004の効果
最初に、B95-8細胞系統（ＥＢＶ最大生産細胞の一つとして世界中で使用されるＥＢＶ陽性のマーモセット細胞系統）について、ＰＥＰ003及びＰＥＰ004の効果を試験した。この細胞系統をこれらの化合物のそれぞれで（異なる濃度で）それぞれ３日間及び７日間処理し、ＥＢＶウイルス生産の活性化をウェスタンブロットでウイルス・キャプシド抗原（ＶＣＡ）の出現により測定した。また、比較として、ＥＢＶをＴＰＡで処理したこの細胞系統でも活性化した。
同量の各試料が分析されることを確実にするため、該ゲルはクマシーブルーで染色しローディングはそれらを等しくするよう調整された。各試料のＶＣＡの分析は、ＰＥＰ003及びＰＥＰ004がともに65nMのＴＰＡを用いた場合と同じレベルまで（使用した濃度の全てで）ＥＢＶを活性化できることを示した（図１４）。次に該ＰＥＰ003及びＰＥＰ004を二つのバーキットリンパ腫細胞系統及びＬＣＬで検定した。今回は10-5及び10-7の濃度のみを用いた。ＰＥＰ003及びＰＥＰ004はいずれもほとんどＬＣＬに効果を示さなかった（このＬＣＬは化学的誘導無しに幾つかのＶＣＡを生産する。これがこれらの化合物により増大しなかった）。ＰＥＰ004は使用したいずれの細胞系統でもＶＣＡの生産に効果を及ぼさなかった。しかしながら、ＰＥＰ003は両方のバーキットリンパ腫細胞系統（MutuI及びBL74）で高レベルのＶＣＡを確かに誘導したが、105濃度でのみであった（図１５）。該細胞系統がＥＢＶ複製の初期トランスアクチベーターであるＢＺＬＦ１の誘導について検定された際には同様な結果が得られた（図１６）。この結果は、ＰＥＰ003がバーキットリンパ腫細胞系統でＥＢＶを活性化できたがＬＣＬにはほとんど効果を持たないように見えたことを示している。
結論として、（１）ＴＰＡ及びＰＥＰ003は両方とも使用した用量でＥＢＶで形質転換した腫瘍細胞における遺伝子発現を調節できる、（２）ＰＥＰ003はMutuI細胞でＶＣＡを誘導したが、一方、ＴＰＡは誘導しなかった。これは異なる作用様式を示している、（３）驚くべきことに、リンパ芽球細胞に及ぼすＰＥＰ003の明白な効果は無かった。これは正常な感染に作用することなく腫瘍の潜伏ヘルペスウイルスを活性化する可能性を示している。
実施例１６
黒色腫細胞のＮＫ活性を刺激する能力に及ぼすＰＥＰ003の効果の解明
黒色腫及び他の癌は、免疫応答の特異的武器（Ｔ細胞媒介性）及び非特異的な武器（ナチュラルキラー細胞及び他の機構）により殺され得る。これらのキラー細胞は、選別された黒色腫患者から得られる末梢血Ｔ細胞を同一患者に由来する（自己由来の）黒色腫細胞で刺激することによりイン・ビトロで形成し得る。ナチュラルキラー細胞はナチュラルキラー感受性細胞系統Ｋ562の溶解により認識され得る。幾つかの抗腫瘍物質が免疫応答に対する黒色腫の感受性を改変すると理論付けされている。
自己の黒色腫細胞に対して強い特異的Ｔ細胞応答を有する患者Ａ02から得た末梢血リンパ球（A02-M）を、解凍し、照射されたA02-Mにより刺激し、(a)ＰＥＰ003（2.25μg/mL；50μM）、(b)ＴＰＡ（100ng/mL）、又は(c)対照溶媒／緩衝液を用いて37℃で一晩前処理し、そして応答するリンパ球への添加前に２回洗浄した（２回の洗浄は100,000倍の残留薬物の希釈を達成する）。培養の10日後、刺激された該細胞は採取しＮＫに感受性の細胞系統（Ｋ562）に対するエフェクターとして使用し、培養で生じるＮＫ活性のレベルについて試験した。全測定は45:1、15:1、5:1及び1.7:1のE:T比で三連で実施した。標準的な５時間の51Cr放出検定を行った。刺激は10％の牛胎児血清／RPMI-1640中で実施した。
表７及び図１７で示される結果は、ＰＥＰ003による黒色腫細胞の前処理が45:1のE:T比でのＴＰＡ処理及び対照処理の両方と比べて（両事例でｐ＜0.01）Ｋ562の溶解を有意に増加することを示している。これはＰＥＰ003がＡ02培養でＮＫ活性を増加することを示唆している。
実施例１７
イー・ペプルス及び他の植物種から低クロロフィル疎水性画分を得る方法
植物から疎水性化合物を単離する標準的方法には全植物体のアルコール抽出が含まれる。これは葉に由来するクロロフィル及び他の疎水性物質を含有する抽出物を生成し、それらは溶媒抽出及びクロマトグラフィーによる化合物のその後の精製を妨げる。シリカゲルクロマトグラフィーでクロロフィルと共移動するので、これはトウダイグサ科の構成員から生物活性の高いジテルペンを単離する際に特有の問題である。本実施例及び実施例１８に記載するように二つの方法がこの問題を克服するために開発された。両方法とも経済的な商業的な生産に拡大できる。
新鮮なイー・ペプルス植物（17kg）を切り刻み、4℃の150リットルの水に20時間浸した。この水を50メッシュ及び100メッシュの篩にポンプで通し、5ミクロン及び2ミクロンのフィルターで濾過した後、直径100mmのアンバーライトXAD-16（1.5kg、逐次、酢酸エチル、メタノール及び水でコンディショニングした）のカラムに4℃で（約1.2L/分）72時間再循環させた。この樹脂への生物活性の吸着は事実上20時間以内に完了することが見出された。
次いで、該樹脂を水及び50％メタノールで逐次洗浄した後、１Lのメタノール、続いて１Lのアセトンで２回溶出した。溶出液を蒸発させ混合して約7gの高粘度の油を得た。これは実質的にクロロフィルを含まず且つ所望のインゲナンエステルを含有することがＨＰＴＬＣにより示された。次に該エステルは下記に記載するように精製した。
切り刻んだ植物から水中でジテルペンエステルを抽出する能力は、それらの相対的な疎水性及び水不溶性を考えると、驚くべきものである。種々の人力的（はさみでの切断）及び機械的（回転式カッター、電動マルチャー）な植物破砕方法は室温での抽出と同様に効を奏した。該XAD-16への吸着は、濾過した又は濾過していない水抽出液と該樹脂を一緒に攪拌した後、抽出物を排出することにより、達成しうる。濾過は珪藻土又は膜フィルター（220〜650ミクロン）を用いても生物活性の最小の損失で実施できうる。XAD-7及びXAD-4はXAD-16と同様に効果的であった。
疎水性吸着剤のポリアミド（ICN・バイオメディカル・リサーチ・プロダクト）も水から該ジテルペンを捕捉するために使用された。これは該ジテルペンエステルを50〜80％のメタノールで選択的に溶出させるという利点を有しており、こうして、それらをカラムに残留した不活性な疎水性化合物から分離させた。
実施例１８
他のジテルペンからインゲナンエステルを分離する方法
下記の方法は、イー・ペプルスの幹が生物活性なジテルペンおほぼ90％を含み且つ葉と比べて有意にクロロフィルが少ないという意外な発見に基づいている。
該植物を風乾し葉を振り落とし、幹を圧縮し同重量のメタノールに24時間浸した。次いで、該溶媒は流して減圧下で乾燥するまで蒸発させ、その残留物を以下に記載するセファデックスHL20でのクロマトグラフィーのためにメタノールに溶解した。この方法も他の植物種から低クロロフィル画分を単離するのに適している。
イー・ペプルスから得らたメタノール粗抽出物を４ｍLの90％エタノール中に溶解して得た溶液を25mmx1000mmカラム上に載せ、90％メタノールで溶出した。画分（4mL）はＨＰＴＬＣ（シリカゲル、4:1のトルエン：アセトンで展開し110度で15分間リン酸と加熱した）により分析した。典型的には、54〜63の画分はジャトロファン及びペプルアンのエステルを含み、64〜77の画分はインゲナンエステルを含むため、満足すべき分離を達成した。ヒトの黒色腫細胞系統MM96Ｌにおける双極形態の誘導により判断した場合の生物活性は、例えばPCT/AU98/00656で開示されたように、保持されていた。
この分離は、シリカでのＨＰＴＬＣにより判断された場合インゲナンエステルの極性がジャトロファンエステル及びペプルアンエステルにより示される範囲と完全に重なっていたので、驚くべきことであった。
実施例１９
イー・ペプルスからジテルペンエステルを精製する工程
上記の実施例１７若しくは実施例１８の方法により又はラテックスのエーテル抽出により得られる粗抽出物は、セファデックスHL-20クロマトグラフィー（上記参照）により分画された。後者から得られる適切な画分を混合し、メタノールを減圧下で蒸発させ、残留する水を凍結乾燥又はエーテル抽出により除去した。この試料（一回の注入につきメタノール中100mg/mlの200μL）をフェノメネックス・ガード・カラムを備えたフェノメネックス・ルナ250x10mm C18カラムで70〜100％メタノール中、2mL/分でＨＰＬＣにより分画し、230nmで検出した。ジャトロファンエステル及びペプルアンエステルは25〜42分で、ＰＥＰ005は42〜44分で、ＰＥＰ008は46〜50分で、そしてＰＥＰ006は50〜54分で出現した。同タイプの分離はＣ３及びＣ８のカラムでのＨＰＬＣにより得られた。
反復実施からプールされた画分を乾燥するまで蒸発させ（回転式蒸発装置又は凍結乾燥装置）、アルゴン又は窒素下で-20℃でアセトン中に保存した。
実施例２０
培養中のヒトの腫瘍細胞を選択的に殺すための
ジテルペンエステルによる白血球の活性化
ヒトの末梢血の溶解により得られた白血球を1000:1、100:1及び10:1のエフェクター：標的比で１マイクロタイターウェル当たり5000個のMM96Ｌヒト黒色腫細胞又は7000個の新生児包皮線維芽細胞に加えた。Ｉｎｇ９（60ng/mL）を添加し、48時間のインキュベーションの後、該培養物を洗浄し、[3H]−チミジンで２時間標識した。100:1のエフェクター：標的細胞の比で、ＰＥＰ008処理の該黒色腫細胞は９％の生存を示したのに対し、正常線維芽細胞は100％生存した。未処理の白血球は細胞生存に影響を及ぼさなかった。
これらの結果は、本発明のジテルペンエステルがヒトの末梢血白血球を活性化し、微生物及び他の細胞に潜在的に致死的な食作用及び呼吸バーストをＰＫＣ依存性の様式で生じさせることを示している。
この実施例は薬物で活性化されるＰＫＣ依存性のプロセスが先天性免疫系の細胞による腫瘍特異的な殺害を対象とし得ることを示す。
実施例２１
培養中のヒト腫瘍細胞のジテルペンエステルによる前処理は
未処理の白血球による選択的殺害を強化する
標的腫瘍細胞の薬物処理が該細胞を免疫系のエフェクター細胞の影響を受け易くするか否かの問題は下記のように取り扱われた。
ヒトの末梢血の溶解により得られた白血球を1000:1、100:1及び10:1のエフェクター：標的比で１マイクロタイターウェル当たり5000個のMM96Ｌヒト黒色腫細胞又は7000個の新生児包皮線維芽細胞に加えた。この標的細胞を予め60ng/mLのＰＥＰ008で20時間処理し、洗浄し、白血球を添加する前に培地を交換した。該白血球との48時間のインキュベーション後、該培養物は洗浄し、[3H]−チミジンで２時間標識した。100:1のエフェクター：標的細胞の比で、ＰＥＰ008処理の該黒色腫は12％の生存を示したのに対し、正常線維芽細胞は100％生存した。未処理の白血球は細胞生存に影響を及ぼさなかった。
この結果はこれらの薬物も腫瘍細胞を該免疫系による溶解に対して特異的に感受性にすることによって作用することを示した。
実施例２２
皮膚を冒す状態（例えば感染、皮膚癌）を処置するための局部用組成物Ａ
チンキ： 本発明の化合物を、MM96Lヒト黒色腫細胞での双極活性により測定された場合イー・ペプルスのラテックスと同じ最終生物活性になるまでアセトン、エタノール又はイソプロパノールで希釈した（１mLあたり1000万bp単位）。試料（2〜5μL）をマウス黒色腫B16の腫瘍の表面に３日間毎日塗布し、3〜5日後に100万個の細胞をヌードマウスの横腹に皮下移植した。67％以上の部位が治癒したと定義される有効性がイー・ペプルス樹液、ＰＥＰ005、ＰＥＰ008並びにＰＥＰ005、ＰＥＰ006及びＰＥＰ008の混合物について得られた。
実施例２３
皮膚を冒す状態（例えば感染、皮膚癌）を処置するための局部用組成物Ｂ
クリーム及びゲル： 種々の疎水性クリーム基剤は、チンキについて上述したように、該皮膚に化合物を送達するために使用する場合効果が無いことが見出された。有効性はチンキで記載したように製剤されたイソプロパノールゲルの使用で得られた。
その結果は、イー・ペプルス樹液及びそのテルペノイド成分がＰＫＣを活性化し、結果としてＴＰＡの高腫瘍促進活性を伴わずに多様な細胞応答を誘導する潜在能力を示す。カルボキシペプチダーゼ活性は組織浸透の強化及び最適な免疫応答のための抗原処理に適用しうる。
概して、これらの結果はイー・ペプルス抽出物が一連の細胞応答を誘導し、ＰＫＣ、細胞周期遺伝子及び炎症伝達物質に影響を与えることを示している。それらの幾つか（だが決して全てではない）はＴＰＡの作用と類似している。具体的には、該結果はイー・ペプルス樹液及びそのテルペノイド成分が種々の感染の治療にそして免疫応答を刺激するためのアジュバントとして有用であることを示している。
実施例２４
トウダイグサ科の他の構成員に由来する樹液のMM96L細胞に及ぼす効果
樹液はシナデニウム・グランティイ、シナデニウム・コンパクツム、モンデニウム・ルガルデ、モンデニウム・グエンセリ、エンダデニウム・ゴスヴェイレニ、及びイー・ペプルスから採取し、増殖培地を用いて滅菌した1.5ｍLのEppendorf（商標）チューブへ10-7まで10倍に系列希釈した。ＰＫＣ阻害剤のビスインドリルマレイミド（1μg/mL又は10μg/mL）の存在下又は非存在下で、各希釈の10マイクロリットルの部分標本をマイクロタイタープレートの１ウェルあたり5000個のMM96L細胞に添加した。３日後、細胞を細胞傷害性又は双極性樹状表現型への分化について調べた。
表８に示す結果は、イー・ペプルスの樹液と同様に、エス・グランティイ、エス・コンパクツム、エム・ルガルデ、エム・グエンセリ、及びイー・ゴスヴェイレニの樹液がMM96L細胞の双極性表現型への分化を誘導し、そしてこの分化が該ビスインドリルマレイミドにより阻害されることを示している。この阻害は該樹液の活性成分がＰＫＣ活性の阻害により細胞分化を誘導することを強く示唆している。この結果は、高濃度（10-4以上）で、樹液がMM96L細胞の殺害に効果的であることも示している。
実施例２５
トウダイグサ科の他の構成員に由来する樹液のJAM細胞に及ぼす効果
実施例２４の樹液を卵巣癌細胞系統JAMに及ぼす細胞障害効果についても調べた。ＰＫＣ阻害剤のビスインドリルマレイミド（10μg/mL）の存在下若しくは非存在下で又はＰＫＣ・ホルボールエステル結合部位リガンドのホルボール・ジブチレートの存在下若しくは非存在下で、実施例２４に従って調製された各希釈樹液の10マイクロリットルの部分標本をマイクロタイタープレートの１ウェルあたり5000個のJAM細胞に添加した。３日後、該細胞をエタノールで固定し、細胞数をサルフロードアミンＢで染色された未処理の対照と比較した。
図１８Ａ及び図１８Ｂに示す結果は、イー・ペプルスの樹液と同様に、エス・グランティイ、エス・コンパクツム、エム・ルガルデ、エム・グエンセリ、及びイー・ゴスヴェイレニの樹液が10-4以上の濃度でJAM細胞の殺害に効果的であることを示している。これらの結果は細胞傷害性がビスインドリルマレイミドにより阻害されることも示している。これは、この効果がＰＫＣの調節により媒介されることを示唆している。
図１８Ｃの精査により、エム・グエンセリ及びイー・ゴスヴェイレニに由来する樹液の細胞障害効果がホルボール・ジブチレートの存在下で阻止されたことが明らかである。これは、これらの樹液の活性成分がＰＫＣのホルボールエステル結合部位に結合することによりそれらの細胞障害性を媒介することを示唆している。
当業者は、本明細書に記載された本発明が具体的に記載されたもの以外の変形及び修飾を受け入れる余地があることを理解するであろう。本発明はこのようなあらゆる変形及び修飾を包含することが理解されるべきである。本発明は、この明細書中で言及した又は示した段階、特徴、組成物及び化合物の全てを個別に又は集合的に包含し、そして任意の二つ以上の該段階若しくは特徴の任意の組合わせ又はあらゆる組合わせをも包含する。
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図１は、蛍光ペプチド検定（「ペップタグ(PepTag)」、非放射性プロテイン・キナーゼ・キット、プロメガ社）を用いたＰＫＣの活性化を示す。レーン１はＰＫＣと基質のみ、レーン２は正の対照の活性化剤の追加、レーン３は 100ng/ml のＴＰＡの追加、レーン４は 0.1ng/ml のＴＰＡの追加、レーン５は 0.01ng/ml のＴＰＡの追加、レーン６は 0.001ng/ml のＴＰＡの追加、レーン７はチャボタイゲキ（イー・ペプルス）樹液のエーテル抽出物の５倍に希釈したＤＥＭ溶液、レーン８はエーテル抽出から得られる水性層、２５倍に希釈、レーン９は２５倍に希釈された粗樹液、レーン１０はＤＭＥのみ。 図２は、チャボタイゲキの画分によるＰＫＣの活性化を示す。レーン１及びレーン２は図１と同じ、レーン３は 2mg/ml のＨ画分、レーン４は 2mg/ml のインゲナン。 図３は、ラットの脳のＰＫＣを用いたＰＫＣ検定の結果を示す写真である。レーン１は負の対照、レーン２は正の対照、レーン３は空、レーン４はＰＥＰ００１（1/125 希釈）、レーン５はＰＥＰ００１（1/500希釈）及びレーン６はＴＰＡ(20μｇ)。 図４は、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）と融合したＰＫＣを発現するＭＭ96Ｌ細胞におけるＰＫＣの活性化を示す写真である。（Ａ）薬物の非存在下におけるＭＭ96Ｌヒト黒色腫ＰＫＣＭＭ96Ｌ細胞の核で発現したＰＫＣβ。（Ｂ）粗チャボタイゲキ抽出物による２時間処理の後。 図５は、活性化されたＰＫＣの細胞質、原形質膜及びゴルジ体又は同様の局在化した細胞構造物への移動の本発明の化合物による誘導を示す写真である。 図６は、ＰＥＰ００３、ＰＥＰ００５、ブリオスタチン(bryostatin)−１及びＴＰＡに応答する従来型及び新規のＰＫＣイソ型の移動誘導を示すグラフ表示である。 図７は、Ｕ１細胞から得られるＨＩＶの活性化を示すグラフ表示である。 図８は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の溶解性ＨＩＶ感染の、ＰＥＰ００３、ＰＥＰ００４、ＴＰＡ及びインゲノール(ingenol)による治療を示すグラフ表示であり、10日の治療期間にわたるｐ２４の生産として表現される。（Ａ）は未感染細胞、（Ｂ）は低力価の感染細胞、（Ｃ）はｐ２４の生産対薬物濃度として表された低力価感染細胞、（Ｄ）は（Ｃ）と同じだが高力価の感染である。 図９は、ＰＥＰ００１抽出物により誘導された皮膚の好中球の回復を示す写真である。（Ａ）はヌードマウスの正常な皮膚、（Ｂ）はチャボタイゲキの樹液で処理した一日後の好中球の浸潤を示すヌードマウスの皮膚である。 図１０は、ヌードマウスの正常な皮膚及び皮下に移植されたＢ１６黒色腫の上を覆う皮膚における好中球の回復に及ぼすＰＥＰ０１０の効果を示す写真である。（Ａ）は２４時間の処理、（Ｂ）は４８時間の処理。 図１１は、蛍光標示式細胞分取法により証明された、スーパーオキシドラジカルの放出を誘導するＰＥＰ００１の能力を例示するグラフ表示である。 図１２は、ＰＢＳ対照と比較した大腸菌の活性（１６時間のインキュベーション）に及ぼすＰＥＰ００３による白血球の前処理の効果を示すグラフ表示であり、大腸菌細胞数／ｍｌ培地として表される。 図１３は、濁度に基づいて表された大腸菌数に及ぼすＰＥＰ００３による白血球の前処理の効果を示すグラフ表示である。 図１４は、ＴＰＡ、ＰＥＰ００３及びＰＥＰ００４による３日間及び７日間の処理後の、Ｂ９５−８（ＥＢＶ＋マーモセット細胞系統）におけるウイルスキャップシド抗原（ＶＣＡ）の生産を示す写真である。 図１５は、ＴＰＡ、ＰＥＰ００３及びＰＥＰ００４による３日間及び７日間の処理後の、ＢＬ７４及びＭｕｔｕＩ（バーキット(Burkitts)リンパ腫細胞系統）におけるウイルスキャップシド抗原（ＶＣＡ）の生産を示す写真である。 図１６は、ＴＰＡ、ＰＥＰ００３及びＰＥＰ００４による３日間及び７日間の処理後の、ＢＺＬＦ１（ＥＢＶの初期トランスアクチベータ）の生産を示す写真である。 図１７は、ナチュラルキラー細胞活性の活性化を示すグラフ表示であり、ＰＥＰ００３及びＴＰＡによるＡＯ２−Ｍ黒色腫細胞の前処理後におけるＫ５６２細胞（ナチュラルキラーに感受性の細胞系統）の比溶解の％として検定された。 図１８は、トウダイグサ科から得られた樹液による処理後のジャム細胞の生存を示すグラフ表示であり、細胞のサルファローダミンＢ染色により決定される細胞生存の百分率として表される。 図１９は、図９及び図１０の記憶媒体によりコードされる指令を実行するために用いられるシステムの図式表示である。 図２０は、磁気記憶媒体の断面の図式表示である。 図２１は、任意選択的な読み取り可能データ記憶システムの断面の図式表示である。

Claims (5)

  1. 被験体におけるＰＫＣ活性化のための薬剤の調製における、トウダイグサ科植物から得られる化学物質、またはその誘導体、化学類似体、もしくはその薬学的に許容される塩の使用であって、
    前記化学物質、またはその誘導体、もしくは化学類似体が、インゲノール-3-アンゲレート、または20-O-アセチル-インゲノール-3-アンゲレート、もしくはその薬学的に許容される塩である、使用。
  2. 植物が、アカリファ（Acalypha）、アシドトン（Acidoton）、アクチノステモン（Actinostemon）、アデリア（Adelia）、アデノクリン（Adenocline）、アデノクレピス（Adenocrepis）、アデノファエドラ（Adenophaedra）、アディスカ（Adisca）、アグロスティスタチス（Agrostistachys）、アルコルネア（Alchornea）、アルコネオプシス（Alchorneopsis）、アルシナエアンザス（Alcinaeanthus ）、アルコセリア（Alcoceria）、アレウリテス（Aleurites）、アマノア（Amanoa）、アンドラチネ（Andrachne）、アンゴスチレス（Angostyles）、アニソフィラム（Anisophyllum）、アンチデスマ（Antidesma）、アフォラ（Aphora）、アポロサ（Aporosa）、アポロセラ（Aporosella）、アルギタムニア（Argythamnia）、アストロコッカス（Astrococcus）、アストロギネ（Astrogyne）、バッカンレア（Baccanrea）、バリオスペルマム（Baliospermum）、ベルナルディア（Bernardia）、ベイリオプシス（Beyeriopsis）、ビスコフィア（Bischofia ）、ブラチア（Blachia）、ブルメオドンドロン（Blumeodondron）、ボナニア（Bonania）、ブラドレイア（Bradleia）、ブレイニア（Breynia）、ブレイニオプシス（Breyniopsis）、ブリデリア（Briedelia）、ブラエアビア（Buraeavia）、カペロニア（Caperonia）、カリオデンドロン（Caryodendron）、セリアネラ（Celianella）、セファロクロトン（Cephalocroton）、チャエノセカ（Chaenotheca）、チャエトカルプス（Chaetocarpus）、チャマエシス（Chamaesyce）、チェイロサ（Cheilosa）、チロペタラム（Chiropetalum）、コリオフィラム（Choriophyllum）、シッカ（Cicca）、チャオキシロン（Chaoxylon）、クレイドン（Cleidon）、クレイスタンザス（Cleistanthus）、クルイティア（Cluytia）、クネスモネ（Cnesmone）、クニドスコラス（Cnidoscolus）、コッコセラス（Coccoceras）、コディアエウム（Codiaeum）、コエロディスカス（Coelodiscus）、コナミ（Conami）、コンセベイバ（Conceveiba）、コンセベイバストラム（Conceveibastrum）、コンセベイバム（Conceveibum）、コリセア（Corythea）、クロイザティア（Croizatia）、クロトン（Croton）、クロトノプシス（Crotonopsis）、クロゾフォラ（Crozophora）、クバンザス（Cubanthus）、クヌリア（Cunuria）、ダクチロステモン（Dactylostemon）、ダレチャンピア（Dalechampia）、デンドロコウシンシア（Dendrocousinsia）、ディアスペルサス（Diaspersus）、ディディモシスタス（Didymocistus）、ディモルフォカリックス（Dimorphocalyx）、ディスコカルパス（Discocarpus）、ディタキシス（Ditaxis）、ドデカスティングマ（Dodecastingma）、ドライペテス（Drypetes）、ディソプシス（Dysopsis）、エラテリオスペルマム（Elateriospermum）、エンダデニウム（Endadenium）、エンドスペルマム（Endospermum）、エリスマンザス（Erismanthus）、エリソロカルパス（Erythrocarpus）、エリソロチラス（Erythrochilus）、ユーメカンザス（Eumecanthus）、ユーフォルビア（Euphorbia）、ユーフォルビオデンドロン（Euphorbiodendron）、イクスコエカリア（Excoecaria）、フルエッゲア（Flueggea）、カレアリア（Calearia）、ガルシア（Garcia）、ガバッレティア（Gavarretia）、ゲロニウム（Gelonium）、ギアラ（Giara）、ギボティア（Givotia）、グロチディオン（Glochidion）、グロチディオノプシス（Glochidionopsis）、グリシデンドロン（Glycydendron）、ギムナンゼス（Gymnanthes）、ギムノスパリア（Gymnosparia）、ヘマトスペルマム（Haematospermum）、ヘンデカンドラ（Hendecandra）、ヘベア（Hevea）、ヒエロニマ（Hieronima）、ヒエロニマ（hieronyma）、ヒッポクレパンドラ（Hippocrepandra）、ホマランザス（Homalanthus）、ヒメノカルディア（Hymenocardia）、ジャニファ（Janipha）、ジャトロファ（Jatropha）、ジュロクロトン（Julocroton）、ラシオクロトン（Lasiocroton）、レイオカルパス（Leiocarpus）、レオナルディア（Leonardia）、レピダンザス（Lepidanthus）、ロイコクロトン（Leucocroton）、マベア（Mabea）、マカランガ（Macaranga）、マロタス（Mallotus）、マニホット（Manihot）、マッパ（Mappa）、マプロウネア（Maprounea）、メランゼサ（Melanthesa）、メルカリアリス（Mercurialis）、メッテニア（Mettenia）、ミクランドラ（Micrandra）、ミクロデスミス（Microdesmis）、ミクロエルス（Microelus）、ミクロスタチイ（Microstachy）、マオクロトン（Maocroton）、モナデニウム（Monadenium）、モジンナ（Mozinna）、ネオスコルテキニア（Neoscortechinia）、オマランザス（Omalanthus）、オムファレア（Omphalea）、オフェランザ（Ophellantha）、オルビクラリア（Orbicularia）、オストデス（Ostodes）、オキシデクテス（Oxydectes）、パレンガ（Palenga）、パンタデニア（Pantadenia）、パラドリペプテス（Paradrypeptes）、パウサンドラ（Pausandra）、ペディランザス（Pedilanthus）、ペラ（Pera）、ペリディウム（Peridium）、ペタロスティグマ（Petalostigma）、フィランザス（Phyllanthus）、ピクロデンドロ（Picrodendro）、ピエラルディア（Pierardia）、ピリノフィタム（Pilinophytum ）、ピメレオデンドロン（Pimeleodendron）、ピランヘア（Piranhea）、プラチギナ（Platygyna）、プルケネティア（Plukenetia）、ポドカリックス（Podocalyx）、ポインセチア（Poinsettia）、ポラレシア（Poraresia）、プロサルテマ（Prosartema）、シューダンザス（Pseudanthus）、ピクノコマ（Pycnocoma）、クアドラシア（Quadrasia）、レベルコニア（Reverchonia）、リチェリア（Richeria）、リチェリエラ（Richeriella）、リシネラ（Ricinella）、リシノカルプス（Ricinocarpus）、ロットレラ（Rottlera）、サゴティア（Sagotia）、サンウィチア（Sanwithia）、サピウム（Sapium）、サビア（Savia）、スクレロクロトン（Sclerocroton）、セバスティアナ（Sebastiana）、セクリネガ（Securinega）、セネフェルデラ（Senefeldera）、セネフィルデロプシス（Senefilderopsis）、セロフィトン（Serophyton）、シフォニア（Siphonia）、スパチオステモン（Spathiostemon）、スピキシア（Spixia）、スティリンギア（Stillingia）、ストロフィオブラチア（Strophioblachia）、シナデニウム（Synadenium）、テトラコッカス（Tetracoccus）、テトラプランドラ（Tetraplandra）、テトロルチディウム（Tetrorchidium ）、チルサンセラ（Thyrsanthera）、チチマラス（Tithymalus）、トラゲイア（Trageia）、トレヴィア（Trewia）、トリゴノステモン（Trigonostemon）、チリア（Tyria）及びキシロフィラ（Xylophylla ）からなる群より選択される属のものである、請求項１記載の使用。
  3. 化学物質、その誘導体または化学類似体が、インゲノール-3-アンゲレート、またはその薬学的に許容される塩である、請求項１または２記載の使用。
  4. 薬剤が、薬学的に又は化粧品的に許容される担体を含む組成物の剤形である、請求項１〜３のいずれか一項記載の使用。
  5. 担体がβ−アラニンベタイン塩酸塩、及びｔ-4- ヒドロキシ-N,N- ジメチルプロリンからなる群より選択されるものである、請求項４記載の使用。
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