KR101735785B1 - 트리고노스테몬 레이디오이데스 추출물을 이용한 항알러지용 조성물 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 트리고노스테몬 레이디오이데스 추출물을 이용한 항알러지용 조성물을 개시한다. 상기 트리고노스테몬 레이디오이데스 추출물은 IgE 및 항원(DNP-BSA)으로 활성화된 비만세포주 RBL-2H3(rat basophilic leukemia)에 처리될 때 탈과립의 억제 활성 및 사이토카인의 생성 억제 활성을 보이며, 나아가 리폭시게나아제의 억제 활성을 보인다.
Description
본 발명은 트리고노스테몬 레이디오이데스(Trigonostemon reidioides) 추출물을 이용한 항알러지용 조성물에 관한 것이다.
알러지(Allergy)란 선천적 또는 후천적으로 면역기능에 이상이 있어 무해한 항원 즉 알러지원(allergen)과의 접촉에 의하여 발생하는 병리적 반응을 말한다. 전형적인 알러지원은 꽃가루, 약물, 식물성 섬유, 세균, 곰팡이, 집먼지진드기, 음식물(난알부민, 우유단백질, 땅콩), 염색약, 화학 물질 등이 있다. 알러지는 과민반응(hypersensitivity reactions)의 일종으로 과민반응은 Coombs와 Gell의 분류법에 의하여 네 가지 형으로 분류되는데, 알러지는 일반적으로 Type Ⅰ 과민반응(즉시형 알러지)과 동일한 의미로 사용된다.
대표적인 알러지성 질환으로는 아토피성 피부염, 기관지 천식, 알러지성 비염, 알러지성 각막염, 피부 두드러기 등이 있으며, 이들 질환에는 대부분 비만세포(mast cell)가 관여하는 것으로 알려져 있다(Wills-Karp M., et al., Science, 282, pp 2258-61, 1998; Grunig G., et al., Science, 282, pp 2261-2263, 1998).
비만세포는 알러지 반응을 매개하는 중요한 세포 중 하나로서 피부, 호흡기, 림프관 주위, 위장관의 점막, 혈관 주위, 뇌 등 전신의 장기에 널리 분포하고 있다(Ishizaka t., et al. J. Immunol. 119:1589, 1997)
알러지 반응의 기작에 대해서 살펴보면, 알러지원이 생체에 침입하면 T-조력세포(T-helper cell)와 B 세포가 순차적으로 활성화되어 IgE가 생성된다. 구체적으로 생체에 침입한 알러지원은 항원제시세포에 의해 인지되며, 이 항원제시세포는 알러지원 제시를 통해 Th0(T helper cell type 0)를 Th2 세포로 분화시킨다. 이렇게 분화된 Th2 세포는 IL-4, IL-5 및 IL-13과 같은 사이토카인을 분비하며 이들은 골수에서의 산성백혈구 발달을 촉진시켜 염증이 발생한 조직으로 산성백혈구를 유도할 뿐만 아니라, B세포에 작용하여 IgE 및 IgG1의 생성을 유도한다.
이렇게 생성된 IgE는 비만세포막의 고친화성 IgE 수용체(FcRIα)에 결합하고 여기에 진드기, 꽃가루 등의 알러지원이 결합하여 가교를 이루면 수용체 (FcRIα)가 응집한다. 수용체(FcRIα)의 가교 및 응집에 의하여 비만세포는 활성화되어 세포질 내의 칼슘이온(Ca++) 농도 등이 상승한다. 칼슘이온 농도의 상승은 세포막의 콜레스테롤이나 세포골격계 등 여러 종류의 세포내 조절인자에 작용하여 과립을 세포막에 이동시킴과 동시에 과립의 공포화, 과립 상호의 융합 및 과립과 세포막의 융합 등을 거쳐 탈과립을 일으킨다. 탈과립이 되면 히스타민(histamine)과 같이 비만세포 내에 미리 저장되어 있는 화학전달물질(preformed mediator)이 유리됨과 동시에 새로 합성된 프로스타글란딘(prostaglandin), 류코트리엔(leukotriene) 등이 함께 분비된다. 탈과립으로 유리되는 화학전달물질에는 혈관확장, 혈관투과성 항진, 기관지 평활근의 수축이나 분비항진 등의 작용을 갖는 히스타민, 세로토닌(serotonin) 및 류코트리엔 이외에 호산구나 호중구등 염증 세포의 주화성 인자로 작용하는 NCF, ECF, PAF등이 있어서 알러지 반응이 일어나게 된다(Ennis M, et al., Br J Pharmacol 70: 329-334, 1980; Metcalfe DD, et al., Crit Rev Immunol 3: 23-74, 1981; Miyajima I, et al., J Clin Invest 99: 901-914, 1997; Church MK, et al., J Allergy Clin Immunol 99: 155-160, 1997; Jones DA, et al., J Biol Chem 268: 9049-9054, 1993).
사이클로옥시게나제(cyclooxygenase, COX)와 리폭시게나제(lipoxygenase, LO)는 아라키돈산(arachidonic acid)으로부터 알러지 증상 유발 물질인 프로스타글란딘류와 류코트리엔류를 만들어내는 과정의 일부를 촉매한다고 알려져 있다(Sekiya K, et al., Biochem Biophys Acta 713:68-72, 1982)
따라서 비만세포의 활성화를 억제하거나, 히스타민 방출을 억제하거나 프로스타글란딘류와 류코트리엔류의 합성을 억제하는 물질 등은 알러지의 유효한 치료약이 될 수 있다.
현재 항알러지 약물로서는 항히스타민제(alkylamines, desloratadine 등), 비만세포 안정화제(cromoglycate 등), 류코트리엔 차단제(montelukast 등), 항-IgE 항체(Omalizumab) 등이 사용되고 있다. 그러나 이러한 약물은 그 효과가 일시적인 경우가 대부분이고 부작용이 심한 경우도 많다. 따라서 알러지 질환의 예방 및 개선효과를 가지면서 부작용이 적고 효과가 지속적인 새로운 물질의 개발이 여전히 필요하다고 할 수 있다. 특히 천연물은 독성이 적은 장점을 가진다.
트리고노스테몬 레이디오이데스(Trigonostemon reidioides)는 캄보디아, 베트남, 태국, 미얀마, 라오스 등이 원산지인 식물로 그 뿌리 추출물은 전통적으로 거담제(expectorant), 완하제(laxative) 등으로 사용되어 왔으며(Journal of Natural Products, 53(5):1148-1151, 1990), 이로부터 분리된 레디오사이드(rediocide) B 내지 E가 살충제의 후보 물질로서 제안된 바 있다(J Nat Prod. 2004 Feb;67(2):228-31). 그러나 트리고노스테몬 레이디오이데스의 항알러지 활성에 대해서는 현재까지 제안된 바 없다.
본 발명은 트리고노스테몬 레이디오이데스 추출물의 항알러지 활성을 개시한다.
본 발명의 목적은 트리고노스테몬 레이디오이데스 추출물을 이용한 항알러지용 조성물을 제공하는 데 있다.
본 발명의 구체적인 목적은 트리고노스테몬 레이디오이데스 추출물을 이용한 항알러지용 약제학적 조성물을 제공하는 데 있다.
본 발명의 다른 구체적인 목적은 트리고노스테몬 레이디오이데스 추출물을 이용한 항알러지용 식품 조성물을 제공하는 데 있다.
본 발명의 또 다른 구체적인 목적은 트리고노스테몬 레이디오이데스 추출물을 이용한 항알러지용 화장품 조성물을 제공하는 데 있다.
본 발명자들은 아래의 실시예 및 실험예에서 확인되는 바와 같이, 트리고노스테몬 레이디오이데스 추출물이 IgE 및 항원(DNP-BSA)으로 활성화된 비만세포주 RBL-2H3(rat basophilic leukemia)에 처리될 때 탈과립을 억제하고 사이토카인의 생성을 억제하며, 나아가 리폭시게나아제에 대해서도 억제 활성을 보임을 확인할 수 있었다.
전술한 바를 고려할 때, 본 발명은 트리고노스테몬 레이디오이데스 추출물을 유효성분으로 포함하는 항알러지용 조성물로 파악할 수 있다.
본 명세서에서, "트리고노스테몬 레이디오이데스 추출물"이란 추출 대상인 트리고노스테몬 레이디오이데스 줄기, 잎, 열매, 꽃, 뿌리 등을 물, 메탄올, 에탄올, 부탄올 등의 탄소수 1 내지 4의 저급 알콜, 메틸렌클로라이드, 에틸렌, 아세톤, 헥산, 에테르, 클로로포름, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, N, N-디메틸포름아미드(DMF), 디메틸설폭사이드(DMSO), 1,3-부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 또는 이들의 혼합 용매를 사용하여 침출하여 얻어진 추출물, 이산화탄소, 펜탄 등 초임계 추출 용매를 사용하여 얻어진 추출물 또는 그 추출물을 분획하여 얻어진 분획물을 의미하며, 추출 방법은 활성물질의 극성, 추출 정도, 보존 정도를 고려하여 냉침, 환류, 가온, 초음파 방사, 초임계 추출 등 임의의 방식을 적용할 수 있다. 분획된 추출물의 경우 상기 조추출물을 특정 용매에 현탁시킨 후 극성이 다른 용매와 혼합·정치시켜 얻은 분획물, 상기 조추출물을 실리카겔 등이 충진된 칼럼에 흡착시킨 후 소수성 용매, 친수성 용매 또는 이들의 혼합 용매를 이동상으로 하여 얻은 분획물을 포함하는 의미이다. 또한 상기 추출물의 의미에는 동결건조, 진공건조, 열풍건조, 분무건조 등의 방식으로 추출 용매가 제거된 농축된 액상의 추출물 또는 고형상의 추출물이 포함된다. 바람직하게는 추출용매로서 물, 에탄올 또는 이들의 혼합 용매를 사용하여 얻어진 추출물, 더 바람직하게는 추출용매로서 물과 에탄올의 혼합 용매를 사용하여 얻어진 추출물을 의미한다.
또 본 명세서에서 "유효성분"이란 단독으로 목적하는 활성을 나타내거나 또는 그 자체는 활성이 없는 담체와 함께 활성을 나타낼 수 있는 성분을 의미한다.
또 본 명세서에서, "항알러지"는 아래에서 정의되는 알러지성 질환의 개선(증상의 경감), 치료, 그러한 질환의 발병 억제 또는 지연을 포함하는 의미이다.
또 본 명세서에서, "알러지성 질환"은 비만세포의 탈과립 등 비만세포의 활성화가 매개된 알러지 반응으로 인하여 초래되는 병리적 증상을 의미하는데, 이러한 병리적 증상에는 접촉성 피부염, 아토피성 피부염, 습진, 소양(搔痒), 화분증, 천식, 기관지염, 두드러기, 혈관염, 비염, 위장증, 설사, 간질성 폐렴, 관절염, 안염, 결막염, 신경염, 중이염, 육아종증, 뇌척수염, 방광염, 후두염, 자반병(紫斑病), 음식물 알러지, 곤충 알러지, 약물 알러지, 금속 알러지, 아나필락시성 쇼크(anaphylactic shock) 등이 포함된다(Bierman CW, et al.(eds.) Allergy, asthma, and immunology from infancy to adulthood. page xvii, Saunders, Philadelphia, 1996).
본 발명의 항알러지용 조성물은 그 유효성분을 용도, 제형, 배합 목적 등에 따라 치료를 의도하는 알러지성 질환의 개선 활성 등을 나타낼 수 있는 한 임의의 양(유효량)으로 포함할 수 있는데, 통상적인 유효량은 조성물 전체 중량을 기준으로 할 때 0.001 중량 % 내지 15 중량 % 범위 내에서 결정될 것이다. 여기서 "유효량"이란 그 적용 대상인 포유동물 바람직하게는 사람에게서, 알러지성 질환의 개선, 치료, 또는 그러한 병리적 증상의 발병 억제/지연을 유도할 수 있는 유효성분의 양을 말한다. 이러한 유효량은 당업자의 통상의 능력 범위 내에서 실험적으로 결정될 수 있다.
본 발명의 항알러지용 조성물은 구체적인 양태에 있어서, 식품 조성물로 파악할 수 있다.
본 발명의 식품 조성은 기능성 음료 등의 건강 기능 식품, 건강 보조 식품, 특수 영양 보충용 식품으로 제조될 수 있으며, 식품의 형태는 차, 쥬스, 탄산음료, 이온음료 등의 음료류, 우유, 요구루트 등의 가공 유류, 껌류, 떡, 한과, 빵, 과자, 면 등의 식품류, 산제, 정제, 캡슐제 등의 건강 기능 식품 제제류 등이 될 수 있다.
본 발명의 식품 조성물에는 그 유효성분 이외에 감미제, 풍미제, 생리활성 성분, 미네랄 등이 포함될 수 있다.
감미제는 식품이 적당한 단맛을 나게 하는 양으로 사용될 수 있으며, 천연의 것이거나 합성된 것일 수 있다. 바람직하게는 천연 감미제를 사용하는 경우인데, 천연 감미제로서는 옥수수 시럽 고형물, 꿀, 수크로오스, 프룩토오스, 락토오스, 말토오스 등의 당 감미제를 들 수 있다.
풍미제는 맛이나 향을 좋게 하기 위하여 사용될 수 있는데, 천연의 것과 합성된 것 모두 사용될 수 있다. 바람직하게는 천연의 것을 사용하는 경우이다. 천연의 것을 사용할 경우에 풍미 이외에 영양 강화의 목적도 병행할 수 있다. 천연 풍미제로서는 사과, 레몬, 감귤, 포도, 딸기, 복숭아 등에서 얻어진 것이거나 녹차잎, 둥굴레, 대잎, 계피, 국화 잎, 자스민 등에서 얻어진 것일 수 있다. 또 인삼(홍삼), 죽순, 알로에 베라, 은행 등에서 얻어진 것을 사용할 수 있다. 천연 풍미제는 액상의 농축액이나 고형상의 추출물일 수 있다. 경우에 따라서 합성 풍미제가 사용될 수 있는데, 합성 풍미제는 에스테르, 알콜, 알데하이드, 테르펜 등이 이용될 수 있다.
생리 활성 물질로서는 카테킨, 에피카테킨, 갈로가테킨, 에피갈로카테킨 등의 카테킨류나, 레티놀, 아스코르브산, 토코페롤, 칼시페롤, 티아민, 리보플라빈 등의 비타민류 등이 사용될 수 있다.
미네랄로서는 칼슘, 마그네슘, 크롬, 코발트, 구리, 불소화물, 게르마늄, 요오드, 철, 리튬, 마그네슘, 망간, 몰리브덴, 인, 칼륨, 셀레늄, 규소, 나트륨, 황, 바나듐, 아연 등이 사용될 수 있다.
또한 본 발명의 식품 조성물은 상기 감미제 등 이외에도 필요에 따라 보존제, 유화제, 산미료, 점증제 등을 포함할 수 있다.
이러한 보존제, 유화제 등은 그것이 첨가되는 용도를 달성할 수 있는 한 극미량으로 첨가되어 사용되는 것이 바람직하다. 극미량이란 수치적으로 표현할 때 식품 조성물 전체 중량을 기준으로 할 때 0.0005중량％ 내지 약 0.5중량％ 범위를 의미한다.
사용될 수 있는 보존제로서는 소듐 소르브산칼슘, 소르브산나트륨, 소르브산칼륨, 벤조산칼슘, 벤조산나트륨, 벤조산칼륨, EDTA(에틸렌디아민테트라아세트산) 등을 들 수 있다.
사용될 수 있는 유화제로서는 아카시아검, 카르복시메틸셀룰로스, 잔탄검, 펙틴 등을 들 수 있다.
사용될 수 있는 산미료로서는 연산, 말산, 푸마르산, 아디프산, 인산, 글루콘산, 타르타르산, 아스코르브산, 아세트산, 인산 등을 들 수 있다. 이러한 산미료는 맛을 증진시키는 목적 이외에 미생물의 증식을 억제할 목적으로 식품 조성물이 적정 산도로 되도록 첨가될 수 있다.
사용될 수 있는 점증제로서는 현탁화 구현제, 침강제, 겔형성제, 팽화제 등을 들 수 있다.
또한 본 발명의 식품 조성물은 향미나 기호성을 향상시키고 여타의 기능성을 부가하기 위하여 천연물 유래의 분말 또는 추출물을 포함할 수 있는데, 선지 분말 또는 추출물, 콩나물 분말 또는 추출물, 조개 분말 또는 추출물, 굴 분말 또는 추출물, 산미나리 분말 또는 추출물, 무 즙 또는 추출물, 오이 즙 또는 추출물, 부추 즙 또는 추출물, 시금치 즙 또는 추출물, 연근 즙 또는 추출물, 칡 즙 또는 추출물, 솔잎 즙 또는 추출물, 인삼 즙 또는 추출물, 백화사설초 분말 또는 추출물, 감초 분말 또는 추출물, 갈화 분말 또는 추출물, 갈근 분말 또는 추출물, 사인 분말 또는 추출물, 박 분말 또는 추출물, 생강 분말 또는 추출물, 대추 분말 또는 추출물, 인진 분말 또는 추출물, 지구자 분말 또는 추출물, 수비계 분말 또는 추출물, 백출 분말 또는 추출물, 저령 분말 또는 추출물, 진피(진귤의 껍질) 분말 또는 추출물, 구기자 분말 또는 추출물, 녹차 분말 또는 추출물, 오미자 분말 또는 추출물, 헛개나무 분말 또는 추출물, 지치 분말 또는 추출물, 노근 분말 또는 추출물, 계피 분말 또는 추출물, 데커시놀 등이 예시될 수 있다. 이러한 추출물은 추출 대상을 혼합하여 얻어질 수도 있다.
본 발명의 항알러지용 조성물은 다른 구체적인 양태에 있어서, 화장료 조성물로 파악할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 그 유효성분 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들, 예컨대, 안정화제, 용해화제, 계면활성제, 비타민, 색소 및 항료와 같은 통상적인 보조제 및 담체를 포함할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.
본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 항알러지 활성을 나타내는 그 유효성분을 포함하는 것을 제외하고는 당업계에 통상적으로 행하여지는 화장료 조성물의 제조방법에 따라 제조할 수 있다.
본 발명의 항알러지용 조성물은 다른 구체적인 양태에 있어서 약제학적 조성물로 파악될 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 유효성분 이외에 약제학적으로 허용되는 담체, 부형제 등을 포함하여, 경구용 제형(정제, 현탁액, 과립, 에멀젼, 캡슐, 시럽 등), 비경구형 제형(멸균 주사용 수성 또는 유성 현탁액), 국소형 제형(용액, 크림, 연고, 겔, 로션, 패치) 등으로 제조될 수 있다.
상기에서 "약제학적으로 허용되는" 의미는 유효성분의 활성을 억제하지 않으면서 적용(처방) 대상이 적응 가능한 이상의 독성을 지니지 않는다는 의미이다.
약제학적으로 허용되는 담체의 예로서는 락토스, 글루코스, 슈크로스, 전분(예컨대 옥수수 전분, 감자 전분 등), 셀룰로오스, 그것의 유도체(예컨대 나트륨 카르복시메틸 셀룰로오스, 에틸셀룰로오스, 등), 맥아, 젤라틴, 탈크, 고체 윤활제(예컨대 스테아르산, 스테아르산 마그네슘 등), 황산 칼슘, 식물성 기름(예컨대 땅콩 기름, 면실유, 참기름, 올리브유 등), 폴리올(예컨대 프로필렌 글리콜, 글리세린 등), 알긴산 등을 들 수 있으며 이러한 담체는 본 발명의 약제학적 조성물의 제형에 따라 적당한 것을 하나 이상 선택하여 사용할 수 있다. 약제학적으로 허용되는 적합한 담체와 제제에 대해서는 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences(19th ed., 1995)]을 참조할 수 있다. 본 발명의 약제학적 조성물은 유화제(예컨대 TWEENS), 습윤제(예컨대 라우릴 황산 나트륨), 착색제, 풍미제, 안정화제, 보존제, 물, 식염수, 인산염 완충 용액 등을 추가로 포함할 수 있다.
부형제도 본 발명의 약제학적 조성물의 제형에 따라 적합한 것을 선택하여 사용할 수 있는데, 예컨대 나트륨 카르복시메틸 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 히드로프로필메틸셀룰로오스, 알긴산 나트륨, 폴리비닐피롤리돈 등의 현탁제나 분산제 등을 들 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 경구 또는 비경구로 투여될 수 있으며, 그 1일 투여량이 통상 0.001 ~ 150 mg/kg 체중 범위이고, 1회 또는 수회로 나누어 투여할 수 있다. 그러나 본 발명의 약제학적 조성물의 투여량은 투여 경로, 환자의 연령, 성별, 체중, 환자의 중증도 등의 여러 관련 인자에 비추어 결정되는 것이므로 상기 투여량은 어떠한 측면으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 이해되어서는 아니 된다.
전술한 바와 같이, 본 발명에 따르면 트리고노스테몬 레이디오이데스 추출물을 이용한 항알러지용 조성물을 제공할 수 있다.
본 발명의 항알러지용 조성물은 알러지성 질환의 개선 등의 용도로 식품, 화장품, 약품 등으로 제품화될 수 있다.
도 1은 트리고노스테몬 레이디오이데스 추출물의 IgE 및 항원(DNP-BSA)으로 활성화된 비만세포주 RBL-2H3(rat basophilic leukemia)에서의 탈과립 억제 활성을 보여주는 결과이다.
도 2는 트리고노스테몬 레이디오이데스 추출물의 IgE 및 항원(DNP-BSA)으로 활성화된 비만세포주 RBL-2H3(rat basophilic leukemia)에서의 사이토카인 생성 억제 활성을 보여주는 결과이다.
도 2는 트리고노스테몬 레이디오이데스 추출물의 IgE 및 항원(DNP-BSA)으로 활성화된 비만세포주 RBL-2H3(rat basophilic leukemia)에서의 사이토카인 생성 억제 활성을 보여주는 결과이다.
이하 본 발명을 실시예 및 실험예를 참조하여 설명한다. 그러나 본 발명의 범위가 이러한 실시예 및 실험예에 한정되는 것은 아니다.
<
실시예
>
트리고노스테몬
레이디오이데스
추출물의 제조
트리고노스테몬 레이디오이데스(Trigonostemon reidioides)의 잎 분쇄물 100 g에 70% 에탄올 1 L를 가하여 상온에서 24시간 1회 반복추출 후 여과지로 여과하였다. 얻어진 70% 에탄올 여액을 가압 농축 후 동결 건조하여 트리고노스테몬 레이디오이데스 추출물을 얻었다.
<
실험예
>
트리고노스테몬
레이디오이데스
추출물의
항알러지
활성 실험
<실험예 1> 비만세포주의 탈과립 억제 활성 실험 - β- hexosaminidase assay
Rat basophilic leukemia 셀 라인인 RBL-2H3 세포주를 15% FBS, 100 unit/ml의 페니실린과 스트렙토마이신을 포함하는 MEM 배지와 37℃, 5% CO2 조건에서 24 well plate에 2×105/well로 분주한 후 24시간 배양하였다.
상등액을 제거 후 25 ng/ml anti-DNP IgE가 포함된 MEM 배지를 넣고 4시간 배양하였다. 배양 후 PIPES buffer (25mM PIPES, 119mM NaCl, 5mM KCl, 1mM CaCl2, 0.4mM MgCl2, 40mM NaOH, 5.6mM glucose, 0.1% BSA)로 두 번 세척하고 10분 동안 전 배양하였다. 전 배양 후 실시예의 시료(트리고노스테몬 레이디오이데스 추출물, NIBR No. 87 extract)를 농도별로 20분간 처리 후 DNP-BSA 20분간 반응시켰다. Ice에 10분간 방치하여 반응을 종결시킨 후 상등액을 96 well plate에 넣고, 1mM P-니트로페닐-아세틸-β-D-글루코사미니드를 넣은 후 37℃에서 1시간 반응시켰다. stop solution(0.1M NaHCO3, O.1M Na2CO3)를 넣고 반응을 종결시킨 후 405nm 파장대에서 ELISA 리더로 흡광도를 측정하였다. 양성 대조군으로는 ketotifen(100 ㎍/ml)을 사용하였다.
결과를 [도 1] 에 나타내었는데, 실시예의 시료(NIBR No. 87)는 농도 의존적으로 탈과립을 억제함을 알 수 있으며, 동일한 처리 농도에서 양성대조군인 ketotifen 보다 높은 활성을 보였다. IC50은 15.48 ㎍/mL로 ketotifen의 35.83 ㎍/mL 보다 약 2배 정도 높게 나타났다. ketotifen은 항히스타민제로서 알러지성 비염, 아토피 등 알러지성 피부 질환, 알러지성 천식 등에 쓰이는 약물이다.
<실험예 2> 사이토카인의 생성 억제 활성 실험 - RT PCR
RBL-2H3 세포를 1×106/well로 6 well plate에 배양 후 IgE를 넣은 후 4시간 반응시켰다. 그 이후 실시예의 시료(NIBR No. 87) 처리 후 DNP-BSA를 첨가하여 37℃에서 20분씩 반응시켰다. PBS(phosphate buffered saline)로 세척 후 Trizol(Invitrogen)과 chloroform(Sigma)를 넣고 제조사의 프로토콜에 따라 RNA를 분리하였다. 추출한 RNA를 이용하여 정량한 후 역전사 효소인 SuperscriptⅢ (Invitrogen)를 사용하여 역전사 연쇄중합반응에 의해 cDNA를 합성하였다. PCR 조건은 94℃ 45초, 55℃ 45초, 72℃ 1분 30초를 설정하여 35 cycle 반응시켜 DNA를 증폭시켰다. 유전자의 발현 억제 효과를 agarose gel 상에서 비교하였다. 사용한 primer는 아래의 [표 1]과 같고 대조군 유전자는 GAPDH를 사용하였다. 양성 대조군으로는 ketotifen(100 ㎍/ml)을 사용하였다.
| TNF- | F: 5' CACCACGCTCTTCTGTCTACTGAAC 3'(서열번호 1) |
| R: 5' CCGGACTCCGTGATGTCTAAGTACT 3'(서열번호 2) | |
| IL-4 | F: 5' ACCTTGCTTCACCCTGTTC 3'(서열번호 3) |
| R: 5' TTGTGAGCGTGGACTCATTC 3'(서열번호 4) | |
| IL-10 | F: 5' TAGAAGTGATGCCCCAGG 3'(서열번호 5) |
| R: 5' TCATCCTCCACCTGCTCCACTGC 3'(서열번호 6) | |
| GAPDH | F-GAGTCAACGGATTTGGTCGT(서열번호 7) |
| R-GACAAGCTTCCCGTTCTCAG(서열번호 8) |
결과를 [도 2]에 나타내었다. [도 2]를 참조하여 보면 실시예의 시료는 농도 의존적로 사이토카인인 IL-4, IL-10, TNF-α의 생성을 뚜렷하게 억제함을 알 수 있다.
<실험예 3> Lipoxygenase assay
0.1 M 트리스 완충용액 (Tris buffer, pH 8.5)에 각각의 농도별로 실시예의 시료(NIBR No. 87)를 첨가하고, 기질인 linoleic acid (최종농도 110 uM)를 혼합하여 실온에서 5분간 전반응 시켰다. 반응액에 soybean lipoxygenase (Type Ⅴ, 500 UNIT/ 최종농도)를 첨가한 후 5분간 반응시키고 234 nm에서 흡광도를 측정한다. 양성대조군으로 페놀계 식품 항산화제인 NDGA (nordihydroguaiaretic acid)를 사용하였고, 각각의 시료에 대한 IC50 (㎍/mL)값을 구해 평가하였다. 결과를 아래의 [표 2]에 나타내었다.
| 시료 | IC50(㎍/mL) |
| NIBR No. 87 extract | 54.89 |
| NDGA | 9.82 |
Claims (6)
- 트리고노스테몬 레이디오이데스 잎 추출물을 유효성분으로 포함하되,
상기 추출물은 물, 에탄올 또는 이들의 혼합 용매로 추출하여 얻은 추출물인 것을 특징으로 하는 항알러지용 조성물.
- 삭제
- 삭제
- 제1항에 있어서,
상기 조성물은 약제학적 조성물인 것을 특징으로 하는 항알러지용 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 조성물은 식품 조성물인 것을 특징으로 하는 항알러지용 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 조성물은 화장품 조성물인 것을 특징으로 하는 항알러지용 조성물.
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Non-Patent Citations (1)
| Title |
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| Chemical and pharmaceutical bulletin, 2005, 53(10), 1321-1323* |
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