JP5241849B2

JP5241849B2 - インスリン及びインスリン分泌性ペプチドを含む薬学的組成物

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Publication number: JP5241849B2
Application number: JP2010533601A
Authority: JP
Inventors: アンネプラム，; ドールテ，ビエーレステーンスゴー，; イェンス，カールビートムセン，; モーテンシュライン，; アンネソフィ，キャールマルクッセン，; クリスチャンポールセン，
Original assignee: ノボ・ノルデイスク・エー／エス
Priority date: 2007-11-16
Filing date: 2008-11-14
Publication date: 2013-07-17
Anticipated expiration: 2028-11-14
Also published as: EP2209800A2; JP2011503152A; JP5757530B2; EP2597103B1; EP2597103A1; US20110152185A1; CN101861333A; NO2017015I2; DK2597103T3; HUE030383T2; CN107412742A; ES2612736T3; US8937042B2; ES2430042T3; CN107115523A; CA2705821A1; PT2597103T; CN107412742B; WO2009063072A2; EP2209800B1

Description

本発明は薬学的組成物の分野に関する。より詳細には、本発明は二種の異なった薬学的に活性なペプチドを含有する薬学的組成物に関する。

真性糖尿病は、グルコースを利用する能力が部分的又は完全に喪失している代謝性疾患である。１９２０年代にインスリンが導入されて以来、真性糖尿病の治療を改善するため絶え間ない努力がなされている。糖尿病に罹患している人々は、数十年以上、長期間にわたる治療を受けているために、安全で簡便であり、生活の質を改善するインスリン製剤に対して大きな需要がある。

真性糖尿病の治療において、多くの様々なインスリン製剤、例えばレギュラーインスリン、イソフェンインスリン(ＮＰＨと称される)、インスリン亜鉛懸濁剤(例えばＳｅｍｉｌｅｎｔｅ(登録商標)、Ｌｅｎｔｅ(登録商標)、及びＵｌｔｒａｌｅｎｔｅ(登録商標))、及び二相性イソフェンインスリンが示唆され使用されている。商業的に入手可能なインスリン製剤のあるものは、作用発現が速いことで特徴付けられ、他の製剤は、作用発現は比較的遅いが、程度の差はあれ、持続作用を示す。速効性インスリン製剤は、通常インスリンの溶液であるが、遅効性インスリン製剤は、亜鉛塩を単独で添加するか、又はプロタミンを添加するか、又は双方を組合せることにより沈殿させられる結晶及び／又は非晶質形態のインスリンを含む懸濁剤でありうる。ここ１０年で多くのヒトインスリンアナログが開発された。それらは特定の作用プロファイル、つまり速効又は持続作用に対して設計されている。

糖尿病の治療において非常に重要になると期待されている別のペプチドはグルカゴン様ペプチド-１(ＧＬＰ-１)である。ヒトＧＬＰ-１は、とりわけ回腸末端部、膵臓及び脳のＬ細胞で合成されるプレプログルカゴンに由来する３７のアミノ酸残基ペプチドである。ＧＬＰ-１は、グルコース代謝及び消化器分泌及び代謝において調節機能を有する重要な消化管ホルモンである。ＧＬＰ-１は、グルコース依存的な形でインスリン分泌を刺激し、インスリン生合成を刺激し、ベータ細胞レスキューを促進し、グルカゴン分泌、胃内容排出及び食物摂取を低減させる。世界の２型糖尿病人口は急速に増加しているので、より効果的な薬剤をより簡単に投与することに対して更に大きな需要がある。固定された二薬剤比でインスリンペプチドとＧＬＰ−１ペプチドを含有する併用製剤は非常に効果的な治療であり、また同じ患者に投与する場合、必要とする注射回数が少ないものでありうる。

インスリンとＧＬＰ−１の投与を含むインスリンが必要な糖尿病の併用治療は国際公開第９５／３１２１４号に開示されている。ＧＬＰ−１化合物と基礎インスリンのプレミックス製剤は国際公開第０３／０２０２０１号に開示されている。ＧＬＰ−１、基礎インスリン及び界面活性剤を含有する貯蔵安定な薬学的組成物は国際公開第２００６／０５１１０３号に開示されている。

加速負荷試験によって評価した４種の薬学的組成物の物理的安定性を示す。回転試験の結果を示す。回転試験の結果を示す。回転試験の結果を示す。ブタにおいて試験したインスリンアナログＮ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンとリラグルチドの固定された併用製剤の薬物動態（ＰＫ）を示している。ブタにおいて試験したインスリンアナログＮ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンとリラグルチドの固定された併用製剤の薬物動態（ＰＫ）を示している。ブタにおいて試験したインスリンアナログＮ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンとリラグルチドの固定された併用製剤の薬物動態（ＰＫ）を示している。ブタにおいて試験したインスリンアナログＮ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンとリラグルチドの固定された併用製剤の薬物動態（ＰＫ）を示している。

本発明の一目的は、個々の活性成分と比較して併用ペプチドの変わらないＰＫ／ＰＤ特性を有するＧＬＰ−１化合物及び基礎インスリン化合物の貯蔵安定な毎日一回の固定併用薬を提供することにある。
より詳細には、本発明は、６個の基礎インスリン分子当たり少なくとも５の亜鉛イオンを含む、インスリン分泌性ＧＬＰ−１化合物及び基礎インスリンの固定された組合せを含む貯蔵安定な薬物学的組成物に関する。

一実施態様では、薬学的組成物は、６個の基礎インスリン分子当たり少なくとも６の亜鉛イオンを含む。
他の実施態様では、薬学的組成物は、６個の基礎インスリン分子当たり少なくとも７の亜鉛イオンを含む。
他の実施態様では、薬学的組成物は、６個の基礎インスリン分子当たり少なくとも８の亜鉛イオンを含む。
更なる実施態様では、薬学的組成物は６個の基礎インスリン分子当たり、少なくとも９；１０；１１；１２；１３；１４；１５；又は１６の亜鉛イオンを含む。

一実施態様では、亜鉛含有量は、６個のインスリン分子当たり５から１６の亜鉛イオンである。
他の実施態様では、亜鉛含有量は、６個のインスリン分子当たり５から１５；５から１４；５から１３；５から１２；５から１１；５から１０；５から９、５から８又は５から７の亜鉛イオンである。
更なる実施態様では、亜鉛含有量は、６個のインスリン分子当たり６から１６の亜鉛イオンである。
更なる実施態様では、亜鉛含有量は、６個のインスリン分子当たり６から１５；６から１４；６から１３；６から１２；６から１１；６から１０；６から９又は６から８の亜鉛イオンである。
他の実施態様では、亜鉛含有量は、６個のインスリン分子当たり７から１６の亜鉛イオンである。
更なる実施態様では、亜鉛含有量は、６基礎インスリン分子当たり、７から１４；７から１５；７から１４；７から１３；７から１２；７から１１；７から１０；又は７から９の亜鉛イオンである。
他の実施態様では、亜鉛含有量は、６個のインスリン分子当たり８から１６の亜鉛イオンである。
他の実施態様では、亜鉛含有量は、６個のインスリン分子当たり、８から１５；８から１４；８から１３；８から１２；８から１１；又は８から１０の亜鉛イオンである。

薬学的製剤のｐＨは、上記実施態様の何れにおいても典型的には中性を越え、典型的には約７から約９の間である。
一実施態様では、薬学的組成物のｐＨは、およそｐＨ７．４からおよそｐＨ９；およそｐＨ７．４からおよそｐＨ８．５又はおよそｐＨ７．４からおよそｐＨ８．２である。
他の実施態様では、薬学的組成物のｐＨは、およそｐＨ７．５からおよそｐＨ８．５；およそｐＨ７．５からおよそｐＨ８．２又はおよそ７．５からおよそ７．７である。
他の実施態様では、薬学的組成物のｐＨは、およそｐＨ７．６からおよそｐＨ８．２である。更なる実施態様では、ｐＨは約７．７から約８．２である。
他の実施態様では、ｐＨは約７．７から約９である。
他の実施態様では、ｐＨは約７．７から約８．９である。
他の実施態様では、ｐＨは約７．７から約８．８である。
他の実施態様では、ｐＨは約７．７から約８．７である。
他の実施態様では、ｐＨは約７．７から約８．６である。
他の実施態様では、ｐＨは約７．７から約８．５である。
他の実施態様では、ｐＨは約７．７から約８．４である。
他の実施態様では、ｐＨは約７．７から約８．３である。
他の実施態様では、ｐＨは約７．７から約８．２である。
他の実施態様では、ｐＨは約７．７から約８．１である。
他の実施態様では、ｐＨは約７．７から約８である。

インスリン分泌性ＧＬＰ−１化合物は、上記実施態様の何れにおいても２型の治療に効果がある任意のＧＬＰ−１化合物でありうる。ここで使用される「ＧＬＰ−１ペプチド」なる用語は、ＧＬＰ−１（７−３７）、ＧＬＰ−１（７−３７）アナログ、ＧＬＰ−１（７−３７）誘導体又はＧＬＰ−１（７−３７）アナログの誘導体を意味する。ＧＬＰ−１の誘導体は、国際公開第９８／０８８７１号又は国際公開第２００６／０９７５３７号に開示されているようなアシル化ＧＬＰ−１化合物でありうる。

一実施態様では、ＧＬＰ−１化合物は、アシル化ＧＬＰ−１アナログ、例えばＡｒｇ^３４，Ｌｙｓ^２６（Ｎ^ε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎ^α−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７），Ａｉｂ８，Ｌｙｓ２６（ＯＥＧ−ＯＥＧ−ガンマ−Ｇｌｕ−Ｃ１８−二酸），Ａｒｇ３４）ＧＬＰ−１Ｈ（７−３７）−ＯＨ又は（Ｎ−イプシロン２６−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシ−ヘプタデカノイルアミノ）ブチリルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）−アセチル］［Ａｉｂ８，Ａｒｇ３４］ＧＬＰ−１−（７−３７）である。
他の実施態様では、ＧＬＰ−１は、エキセンディン−３、エキセンディン−４又はエキセンディン−４アナログである。エキセンディン−４−アナログは、Ｃ末端又はＮ末端の何れかに付加された４−１０、４−８又は４−６の塩基性アミノ酸残基を含みうる。

基礎インスリンは、上記実施態様の何れにおいても１型及び２型糖尿病の治療に対して知られている任意の基礎インスリンでありうる。一実施態様では、基礎インスリンは、国際公開第９５／０７９３１号、国際公開第２００５／０１２３４７号及びＥＰ２００７／０５４４４４に開示されているような、インスリン及びそのアナログのＢ鎖のＢ２９Ｌｙｓのε−アミノ基がアシル化されたインスリンである。
他の実施態様では、基礎インスリンはｐＩシフト基礎インスリン、例えばインスリン分子の塩基性アミノ酸残基の置換又は付加を有する米国特許第５６５６７２２号に開示されたタイプである。そのような基礎インスリンの一例は、ＧｌｙＡ２１，ＡｒｇＢ３１，ＡｒｇＢ３２ヒトインスリン（インスリングラルギン）である。他の基礎インスリンは、国際公開第２００８／００６４９６号及び国際公開第２００８／００６４９７号に開示された化合物のようなアミド化インスリングラルギンでありうる。

一実施態様では、基礎インスリンは、Ｎ^εＢ２９−テトラデカノイルｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリンである。
更なる実施態様では、基礎インスリンは、Ｌｙｓ^Ｂ２９（Ｎεリトコリル−γ−Ｇｌｕ）−ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリンである。
更なる実施態様では、基礎インスリンは、Ｎ^εＢ２９−テトラデカノイルｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン又はＮ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンである。
更なる実施態様では、基礎インスリンは、Ｎ^εＢ２９−ω−カルボキシペンタデカノイル−γ−Ｌ−グルタイルアミドｄｅｓＢ３０ヒトインスリン又はＮ^εＢ２９−ω−カルボキシペンタデカノイル−γ−アミノ−ブタノイルｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリンである。

一実施態様では、薬学的組成物は、インスリン分泌性ＧＬＰ−１化合物と、Ｎ^εＢ２９−テトラデカノイルｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン、Ｌｙｓ^Ｂ２９（Ｎεリトコリル−γ−Ｇｌｕ）−ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン、Ｎ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、Ｎ^εＢ２９−ω−カルボキシペンタデカノイル−γ−Ｌ−グルタイルアミドｄｅｓＢ３０ヒトインスリン及びＮ^εＢ２９−ω−カルボキシペンタデカノイル−γ−アミノ−ブタノイルｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリンからなる群から選択されるアシル化基礎インスリンの固定された組合せを適切な薬学的に許容可能なアジュバントと共に含み、６個のインスリン分子当たり少なくとも５；６；７；８又は９の亜鉛原子を含む。

更なる実施態様では、薬学的組成物は、インスリン分泌性ＧＬＰ−１化合物と、Ｎ^εＢ２９−テトラデカノイルｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン、Ｌｙｓ^Ｂ２９（Ｎεリトコリル−γ−Ｇｌｕ）−ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン、Ｎ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、Ｎ^εＢ２９−ω−カルボキシペンタデカノイル−γ−Ｌ−グルタイルアミドｄｅｓＢ３０ヒトインスリン及びＮ^εＢ２９−ω−カルボキシペンタデカノイル−γ−アミノ−ブタノイルｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリンからなる群から選択されるアシル化基礎インスリンの固定された組合せを適切な薬学的に許容可能なアジュバントと共に含み、６個のインスリン分子当たり５から１６；５から１４；５から１２；５から１０；又は５から８の亜鉛イオンを含む。

更なる実施態様では、薬学的組成物は、インスリン分泌性ＧＬＰ−１化合物と、Ｎ^εＢ２９−テトラデカノイルｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン、Ｌｙｓ^Ｂ２９（Ｎεリトコリル−γ−Ｇｌｕ）−ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン、Ｎ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、Ｎ^εＢ２９−ω−カルボキシペンタデカノイル−γ−Ｌ−グルタイルアミドｄｅｓＢ３０ヒトインスリン及びＮ^εＢ２９−ω−カルボキシペンタデカノイル−γ−アミノ−ブタノイルｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリンから選択されるアシル化基礎インスリンの固定された組合せを適切な薬学的に許容可能なアジュバントと共に含み、６個のインスリン分子当たり６から１６；６から１４；６から１２；６から１０；又は６から８亜鉛イオンを含む。

更なる実施態様では、薬学的組成物は、インスリン分泌性ＧＬＰ−１化合物と、Ｎ^εＢ２９−テトラデカノイルｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン、Ｌｙｓ^Ｂ２９（Ｎεリトコリル−γ−Ｇｌｕ）−ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン、Ｎ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、Ｎ^εＢ２９−ω−カルボキシペンタデカノイル−γ−Ｌ−グルタイルアミドｄｅｓＢ３０ヒトインスリン及びＮ^εＢ２９−ω−カルボキシペンタデカノイル−γ−アミノ−ブタノイルｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリンからなる群から選択されるアシル化基礎インスリンの固定された組合せを適切な薬学的に許容可能なアジュバントと共に含み、６個のインスリン分子当たり７から１６；７から１４；７から１２；又は７から１０の亜鉛イオンを含む。

更なる実施態様では、薬学的組成物は、インスリン分泌性ＧＬＰ−１化合物と、Ｎ^εＢ２９−テトラデカノイルｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン、Ｌｙｓ^Ｂ２９（Ｎεリトコリル−γ−Ｇｌｕ）−ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン、Ｎ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、Ｎ^εＢ２９−ω−カルボキシペンタデカノイル−γ−Ｌ−グルタイルアミドｄｅｓＢ３０ヒトインスリン及びＮ^εＢ２９−ω−カルボキシペンタデカノイル−γ−アミノ−ブタノイルｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリンからなる群から選択されるアシル化基礎インスリンの固定された組合せを適切な薬学的に許容可能なアジュバントと共に含み、６個のインスリン分子当たり８から１６；８から１４；８から１２：又は８から１０の亜鉛イオンを含む。

更なる実施態様では、薬学的組成物は、インスリン分泌性ＧＬＰ−１化合物と、式Ｎ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンのアシル化基礎インスリンの固定された組合せをヒトインスリン適切な薬学的に許容可能なアジュバントと共に含み、６個のインスリン分子当たり少なくとも５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５又は１６の亜鉛イオンを含む。
更なる実施態様では、薬学的組成物は、インスリン分泌性ＧＬＰ−１化合物とアシル化基礎インスリンＮ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンの固定された組合せを適切な薬学的に許容可能なアジュバントと共に含み、６個のインスリン分子当たり５から１６の亜鉛イオンを含む。
更なる実施態様では、薬学的組成物は、インスリン分泌性ＧＬＰ−１化合物とアシル化基礎インスリンＮ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンの固定された組合せを適切な薬学的に許容可能なアジュバントと共に含み、６個のインスリン分子当たり６から１６；６から１５；６から１４；６から１３；６から１２；６から１０；又は６から８の亜鉛イオンを含む。

更なる実施態様では、薬学的組成物は、インスリン分泌性ＧＬＰ−１化合物とアシル化基礎インスリンＮ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンの固定された組合せを適切な薬学的に許容可能なアジュバントと共に含み、６個のインスリン分子当たり７から１６；７から１５；７から１４；７から１３；７から１２；７から１１；７から１０；７から９；又は７から８の亜鉛イオンを含む。
更なる実施態様では、薬学的組成物は、インスリン分泌性ＧＬＰ−１化合物とアシル化基礎インスリンＮ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンの固定された組合せを適切な薬学的に許容可能なアジュバントと共に含み、６個のインスリン分子当たり８から１６；８から１５；８から１４；８から１３；８から１２；８から１１；８から１０；又は８から９の亜鉛イオンを含む。

一実施態様では、本発明は、インスリン分泌性ＧＬＰ−１化合物と基礎インスリンＮ^εＢ２９−テトラデカノイルｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリンの固定された組合せを適切な薬学的に許容可能なアジュバントと共に含み、亜鉛含有量が６個のインスリン分子当たり少なくとも５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５又は１６の亜鉛イオンである薬物学的組成物に関する。
他の実施態様では、本発明は、インスリン分泌性ＧＬＰ−１化合物と基礎インスリンＮ^εＢ２９−テトラデカノイルｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリンの固定された組合せを適切な薬学的に許容可能なアジュバントと共に含み、亜鉛含有量が６個のインスリン分子当たり５から１６；６から１６；７から１６；又は８から１６の亜鉛イオンを含む薬学的組成物に関する。

更なる実施態様では、薬学的組成物は、ＧＬＰ−１（７−３７）又はそのアナログ又は誘導体と、Ｎ^εＢ２９−テトラデカノイルｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン、Ｌｙｓ^Ｂ２９（Ｎεリトコリル−γ−Ｇｌｕ）−ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン、Ｎ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、Ｎ^εＢ２９−ω−カルボキシペンタデカノイル−γ−Ｌ−グルタイルアミドｄｅｓＢ３０ヒトインスリン及びＮ^εＢ２９−ω−カルボキシペンタデカノイル−γ−アミノ−ブタノイルｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリンからなる群から選択されるアシル化基礎インスリンの固定された組合せを適切な薬学的に許容可能なアジュバントと共に含み、６個のインスリン分子当たり少なくとも５又は６の亜鉛イオンを含む。
更なる実施態様では、薬学的組成物は、ＧＬＰ−１（７−３７）又はそのアナログ又は誘導体と、Ｎ^εＢ２９−テトラデカノイルｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン、Ｌｙｓ^Ｂ２９（Ｎεリトコリル−γ−Ｇｌｕ）−ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン、Ｎ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、Ｎ^εＢ２９−ω−カルボキシペンタデカノイル−γ−Ｌ−グルタイルアミドｄｅｓＢ３０ヒトインスリン及びＮ^εＢ２９−ω−カルボキシペンタデカノイル−γ−アミノ−ブタノイルｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリンからなる群から選択されるアシル化基礎インスリンの固定された組合せを適切な薬学的に許容可能なアジュバントと共に含み、６個のインスリン分子当たり５から１６；５から１４；５から１２；５から１０又は５から８の亜鉛イオンを含む。

更なる実施態様では、薬学的組成物は、ＧＬＰ−１（７−３７）又はそのアナログ又は誘導体と、Ｎ^εＢ２９−テトラデカノイルｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン、Ｌｙｓ^Ｂ２９（Ｎεリトコリル−γ−Ｇｌｕ）−ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン、Ｎ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、Ｎ^εＢ２９−ω−カルボキシペンタデカノイル−γ−Ｌ−グルタイルアミドｄｅｓＢ３０ヒトインスリン及びＮ^εＢ２９−ω−カルボキシペンタデカノイル−γ−アミノ−ブタノイルｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリンからなる群から選択されるアシル化基礎インスリンの固定された組合せを適切な薬学的に許容可能なアジュバントと共に含み、６個のインスリン分子当たり６から１６；６から１４；６から１２；又は６から１０の亜鉛イオンを含む。
更なる実施態様では、薬学的組成物は、ＧＬＰ−１（７−３７）又はそのアナログ又は誘導体と、Ｎ^εＢ２９−テトラデカノイルｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン、Ｌｙｓ^Ｂ２９（Ｎεリトコリル−γ−Ｇｌｕ）−ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン、Ｎ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、Ｎ^εＢ２９−ω−カルボキシペンタデカノイル−γ−Ｌ−グルタイルアミドｄｅｓＢ３０ヒトインスリン及びＮ^εＢ２９−ω−カルボキシペンタデカノイル−γ−アミノ−ブタノイルｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリンからなる群から選択されるアシル化基礎インスリンの固定された組合せを適切な薬学的に許容可能なアジュバントと共に含み、６個のインスリン分子当たり７から１６；７から１４；７から１２；又は７から１０の亜鉛イオンを含む。

更なる実施態様では、薬学的組成物は、ＧＬＰ−１（７−３７）又はそのアナログ又は誘導体と、Ｎ^εＢ２９−テトラデカノイルｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン、Ｌｙｓ^Ｂ２９（Ｎεリトコリル−γ−Ｇｌｕ）−ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン、Ｎ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、Ｎ^εＢ２９−ω−カルボキシペンタデカノイル−γ−Ｌ−グルタイルアミドｄｅｓＢ３０ヒトインスリン及びＮ^εＢ２９−ω−カルボキシペンタデカノイル−γ−アミノ−ブタノイルｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリンからなる群から選択されるアシル化基礎インスリンの固定された組合せを適切な薬学的に許容可能なアジュバントと共に含み、６個のインスリン分子当たり８から１６；８から１２；又は８から１０の亜鉛イオンを含む。

一実施態様では、本発明は、ＧＬＰ−１（７−３７）又はそのアナログ又は誘導体とＮ^εＢ２９−テトラデカノイルｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリンの固定された組合せを適切な薬学的に許容可能なアジュバントと共に含み、亜鉛含有量が６個のインスリン分子当たり少なくとも５、６、７、８、９，又は１０の亜鉛イオンである薬学的組成物に関する。
更なる実施態様では、本発明は、ＧＬＰ−１（７−３７）又はそのアナログ又は誘導体とＮ^εＢ２９−テトラデカノイルｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリンの固定された組合せを適切な薬学的に許容可能なアジュバントと共に含み、亜鉛含有量が６個のインスリン分子当たり６から１６；７から１６；８から１６；８から１４；８から１２；又は８から１０の亜鉛イオンである薬学的組成物に関する。

更なる実施態様では、薬学的組成物は、Ａｒｇ^３４，Ｌｙｓ^２６（Ｎ^ε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎ^α−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）と、Ｎ^εＢ２９−テトラデカノイルｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン、Ｌｙｓ^Ｂ２９（Ｎεリトコリル−γ−Ｇｌｕ）−ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン、Ｎ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、Ｎ^εＢ２９−ω−カルボキシペンタデカノイル−γ−Ｌ−グルタイルアミドｄｅｓＢ３０ヒトインスリン及びＮ^εＢ２９−ω−カルボキシペンタデカノイル−γ−アミノ−ブタノイルｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリンからなる群から選択されるアシル化基礎インスリンの固定された組合せを適切な薬学的に許容可能なアジュバントと共に含み、６個のインスリン分子当たり少なくとも５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５又は１６の亜鉛原子を含む。
更なる実施態様では、薬学的組成物は、Ａｒｇ^３４，Ｌｙｓ^２６（Ｎ^ε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎ^α−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）と、Ｎ^εＢ２９−テトラデカノイルｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン、Ｌｙｓ^Ｂ２９（Ｎεリトコリル−γ−Ｇｌｕ）−ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン、Ｎ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、Ｎ^εＢ２９−ω−カルボキシペンタデカノイル−γ−Ｌ−グルタイルアミドｄｅｓＢ３０ヒトインスリン及びＮ^εＢ２９−ω−カルボキシペンタデカノイル−γ−アミノ−ブタノイルｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリンからなる群から選択されるアシル化基礎インスリンを適切な薬学的に許容可能なアジュバントと共に含み、６個のインスリン分子当たり５から１６；５から１４；５から１２；又は５から１０の亜鉛イオンを含む。

更なる実施態様では、薬学的組成物は、Ａｒｇ^３４，Ｌｙｓ^２６（Ｎ^ε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎ^α−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）と、Ｎ^εＢ２９−テトラデカノイルｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン、Ｌｙｓ^Ｂ２９（Ｎεリトコリル−γ−Ｇｌｕ）−ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン、Ｎ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、Ｎ^εＢ２９−ω−カルボキシペンタデカノイル−γ−Ｌ−グルタイルアミドｄｅｓＢ３０ヒトインスリン及びＮ^εＢ２９−ω−カルボキシペンタデカノイル−γ−アミノ−ブタノイルｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリンからなる群から選択されるアシル化基礎インスリンの固定された組合せを適切な薬学的に許容可能なアジュバントと共に含み、６個のインスリン分子当たり６から１６；６から１４；６から１２；又は６から１０の亜鉛イオンを含む。
更なる実施態様では、薬学的組成物は、Ａｒｇ^３４，Ｌｙｓ^２６（Ｎ^ε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎ^α−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）と、Ｎ^εＢ２９−テトラデカノイルｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン、Ｌｙｓ^Ｂ２９（Ｎεリトコリル−γ−Ｇｌｕ）−ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン、Ｎ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、Ｎ^εＢ２９−ω−カルボキシペンタデカノイル−γ−Ｌ−グルタイルアミドｄｅｓＢ３０ヒトインスリン及びＮ^εＢ２９−ω−カルボキシペンタデカノイル−γ−アミノ−ブタノイルｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリンからなる群から選択されるアシル化基礎インスリンの固定された組合せを適切な薬学的に許容可能なアジュバントと共に含み、６個のインスリン分子当たり７から１６；７から１４；７から１２又は７から１０の亜鉛イオンを含む。

更なる実施態様では、薬学的組成物は、Ａｒｇ^３４，Ｌｙｓ^２６（Ｎ^ε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎ^α−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）と、Ｎ^εＢ２９−テトラデカノイルｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン、Ｌｙｓ^Ｂ２９（Ｎεリトコリル−γ−Ｇｌｕ）−ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン、Ｎ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、Ｎ^εＢ２９−ω−カルボキシペンタデカノイル−γ−Ｌ−グルタイルアミドｄｅｓＢ３０ヒトインスリン及びＮ^εＢ２９−ω−カルボキシペンタデカノイル−γ−アミノ−ブタノイルｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリンからなる群から選択されるアシル化基礎インスリンの固定された組合せを適切な薬学的に許容可能なアジュバントと共に含み、６個のインスリン分子当たり８から１６；８から１４；８から１２又は８から１０の亜鉛イオンを含む。

更なる実施態様では、本発明は、Ａｒｇ^３４，Ｌｙｓ^２６（Ｎ^ε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎ^α−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）とＮ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンの固定された組合せを適切な薬学的に許容可能なアジュバントと共に含み、亜鉛含有量が６個のインスリン分子当たり少なくとも５の亜鉛イオンである薬学的組成物に関する。
更なる実施態様では、本発明は、Ａｒｇ^３４，Ｌｙｓ^２６（Ｎ^ε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎ^α−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）とＮ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンの固定された組合せを適切な薬学的に許容可能なアジュバントと共に含み、亜鉛含有量が６個のインスリン分子当たり少なくとも６の亜鉛イオンである薬学的組成物に関する。
更なる実施態様では、本発明は、Ａｒｇ^３４，Ｌｙｓ^２６（Ｎ^ε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎ^α−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）とＮ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンの固定された組合せを適切な薬学的に許容可能なアジュバントと共に含み、亜鉛含有量が６個のインスリン分子当たり少なくとも７の亜鉛イオンである薬学的組成物に関する。

更なる実施態様では、本発明は、Ａｒｇ^３４，Ｌｙｓ^２６（Ｎ^ε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎ^α−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）とＮ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンの固定された組合せを適切な薬学的に許容可能なアジュバントと共に含み、亜鉛含有量が６個のインスリン分子当たり少なくとも８の亜鉛イオンである薬学的組成物に関する。
更なる実施態様では、本発明は、Ａｒｇ^３４，Ｌｙｓ^２６（Ｎ^ε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎ^α−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）とＮ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンの固定された組合せを適切な薬学的に許容可能なアジュバントと共に含み、亜鉛含有量が６個のインスリン分子当たり少なくとも９の亜鉛イオンである薬学的組成物に関する。

更なる実施態様では、本発明は、Ａｒｇ^３４，Ｌｙｓ^２６（Ｎ^ε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎ^α−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）とＮ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンの固定された組合せを適切な薬学的に許容可能なアジュバントと共に含み、亜鉛含有量が６個のインスリン分子当たり少なくとも１０の亜鉛イオンである薬学的組成物に関する。
更なる実施態様では、本発明は、Ａｒｇ^３４，Ｌｙｓ^２６（Ｎ^ε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎ^α−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）とＮ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンの固定された組合せを適切な薬学的に許容可能なアジュバントと共に含み、亜鉛含有量が６個のインスリン分子当たり５から１６；５から１５；５から１４；５から１３；５から１２；５から１１；５から１０；５から９；又は５から８亜鉛イオンである薬学的組成物に関する。
更なる実施態様では、本発明は、Ａｒｇ^３４，Ｌｙｓ^２６（Ｎ^ε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎ^α−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）とＮ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンの固定された組合せを適切な薬学的に許容可能なアジュバントと共に含み、亜鉛含有量が６から１６；６から１５；６から１４；６から１３；６から１２；６から１１；又は６から１０の亜鉛イオンである薬学的組成物に関する。

更なる実施態様では、本発明は、Ａｒｇ^３４，Ｌｙｓ^２６（Ｎ^ε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎ^α−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）とＮ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンの固定された組合せを適切な薬学的に許容可能なアジュバントと共に含み、亜鉛含有量が６個のインスリン分子当たり７から１６；７から１５；７から１４；７から１３；７から１２；７から１１；７から１０；７から９；又は７から８の亜鉛イオンである薬学的組成物に関する。
更なる実施態様では、本発明は、Ａｒｇ^３４，Ｌｙｓ^２６（Ｎ^ε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎ^α−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）とＮ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンの固定された組合せを適切な薬学的に許容可能なアジュバントと共に含み、亜鉛含有量が６個のインスリン分子当たり８から１６；８から１５；８から１４；８から１３，８から１２；８から１１；８から１０；又は８から９の亜鉛イオンである薬学的組成物に関する。

更なる実施態様では、本発明は、インスリングラルギンとエキセンディン−４アナログ、例えば４−６の付加されたＬｙｓ−又はＡｒｇ−アミノ酸残基を含むエキセンディン−４アナログの固定された組合せを適切な薬学的に許容可能なアジュバントと共に含み、亜鉛含有量が６個のインスリン分子当たり少なくとも５、６、７又は８を越える亜鉛イオンである薬学的組成物に関する。
この実施態様では、インスリングラルギンはまた国際公開第２００８／００６４９６号及び国際公開第２００８／００６４９７号に開示されたアミド化インスリングラルギンとできる。

ｐＨは上記実施態様の何れにおいても７．４；７．５；７．６；７．８；７．９；８；８．１；８．２；８．３；８．４又は８．５とできる。他の実施態様では、ｐＨは７．４から８．２又は７．５から８である。更に他の実施態様では、ｐＨは７．６と８の間である。
ＧＬＰ−１化合物がＡｒｇ^３４，Ｌｙｓ^２６（Ｎ^ε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎ^α−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）の場合、ｐＨは典型的には約７．７から約８．２の間である。

本発明の更なる態様は、上記基礎インスリンを溶解させ、それを保存料及び等張性改変剤と混合した後、亜鉛を加え、最後に溶解したインスリン分泌性ペプチドと混合することを含む上記実施態様の何れか一に係る薬学的組成物の調製方法に関する。
一実施態様では、本発明に係る方法は、次の工程を含む：１）バッファー及び等張剤の水溶液に基礎インスリンを溶解させ、２）場合によっては段階的に亜鉛を加え、３）ｐＨを調節し、４）溶液を約４−５℃と室温の間の温度で保存し、５）ＧＬＰ−１化合物を加える。

更なる態様では、本発明は、上記実施態様の何れか一に係る薬学的組成物の有効量をそのような治療を必要とする哺乳動物に非経口投与することを含む高血糖症の治療方法に関する。
更なる態様では、本発明は、上記実施態様の何れか一に係る薬学的組成物の有効量をそのような治療を必要とする哺乳動物に非経口投与することを含む肥満症、β細胞欠損、ＩＧＴ又は脂質異常症の治療方法に関する。

本発明の更なる態様は、インスリン分泌性ＧＬＰ−１化合物と基礎インスリンの混合物を含み、６個のインスリン分子当たり、少なくとも６の亜鉛原子を含む高血糖症の治療のための非経口投与による貯蔵安定な薬物学的組成物に関する。
他の態様では、本発明は、インスリン分泌性ＧＬＰ−１化合物と基礎インスリンの混合物を含み、６個のインスリン分子当たり少なくとも６の亜鉛原子を含む有効量の薬物学的組成物を投与することを含む体重減少の方法に関する。

本発明は、２型糖尿病患者に対して基礎インスリンとインスリン分泌性ＧＬＰ−１化合物の固定された混合物を投与することに関する。ＧＬＰ−１化合物と基礎インスリンを単一製剤で組み合わせると、患者は、二成分を別個に投与するために必要となる２回の別個の注射と比較して一回分の注射を少なくでき、更に重要なことには、基礎インスリンアナログとＧＬＰ−１化合物の双方を同時に投与する場合に多くのポジティブな相乗効果が期待される。

かかる混合物では、個々の活性成分、つまり基礎インスリン及びＧＬＰ−１化合物が、単一治療から知られているその魅力的なＰＫプロファイルを維持しなければならない。例えば、基礎インスリンアナログインスリンＮ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンは毎日一回の投与に適した魅力的なプロファイルを有している。同様に、ＧＬＰ−１アナログＡｒｇ^３４，Ｌｙｓ^２６（Ｎ^ε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎ^α−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）は毎日一回、投与される。よって、インスリンＮ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンとリラグルチドの組合せは基礎インスリンアナログとＧＬＰ−１アナログの魅力的な組合せを構成する。
しかしながら、例えばＮ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンのようなアシル化インスリンアナログを、例えばＡｒｇ^３４，Ｌｙｓ^２６（Ｎ^ε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎ^α−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）のようなＧＬＰ−１化合物と直接混合すると、物理的に安定性が低い製剤になり、またアシル化インスリンのＰＫ特性の改変を生じる。しかしながら、市販の製剤は高い物理的安定性を有していなければならない。また、基礎インスリンのＰＫ特性が余りに変更され過ぎると、その２４時間のカバー範囲が失われうる。

殆どの基礎インスリンは満足すべきＰＫ及び物理的安定性を有するように亜鉛と共に製剤化される。例えば、Ｎ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンは６個のインスリン当たり伝統的に２−３の亜鉛イオンよりも多くに結合し得ることが示された。更なる２−３の亜鉛イオン（６個のインスリン分子当たり全部で５−６の亜鉛イオン）が、Ｎ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンが最適な毎日一回のプロファイルを有するために必要となる。
我々は、Ａｒｇ^３４，Ｌｙｓ^２６（Ｎ^ε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎ^α−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）が低亜鉛結合親和性を有しており、Ｎ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンの物理的安定性とＰＫ特性の双方が、２成分の混合物中においてこれによって影響されることを見出した。Ａｒｇ^３４，Ｌｙｓ^２６（Ｎ^ε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎ^α−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）とＮ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンの混合物では、Ａｒｇ^３４，Ｌｙｓ^２６（Ｎ^ε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎ^α−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）がインスリンＮ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンと競合するのは、これらの更なる亜鉛イオンの結合においてである。

我々は、Ｎ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンのＡｒｇ^３４，Ｌｙｓ^２６（Ｎ^ε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎ^α−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）との混合物に更なる亜鉛イオンを加えると、インスリンＮ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン単独に対してインスリン分子当たり５−６の亜鉛イオンで得られた所望のプロファイルに対してＮ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンの物理的安定性を改善しＰＫプロファイルを改善することを見出した。

ここで使用される「ＧＬＰ−１化合物」なる用語は、ＧＬＰ−１（７−３７）、そのインスリン分泌性アナログ及びそのインスリン分泌性誘導体を意味する。ＧＬＰ−１化合物にはまたエキセンディン化合物、例えばエキセンディン−３及びエキセンディン−４及びそのアナログ、例えばその分子のＣ末端に６のリジン残基が付加されたエキセンディン−４アナログであるＺＰ１０又はＺＰ１０Ａが含まれる。Cristian Thorkildsen等, The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics, Vol 307, No. 2 (2003), 490-496を参照のこと。
本発明の一実施態様は、インスリン分泌性ＧＬＰ−１ペプチドがアシル化エキセンディン−４又はアシル化エキセンディン−４アナログ、例えば［Ｎ−イプシロン（１７−カルボキシヘプタデカン酸）２０エキセンディン−４（１−３９）−アミド及びＮ−イプシロン３２−（１７−カルボキシ−ヘプタデカノイル）［Ｌｙｓ３２］エキセンディン−４（１−３９）アミドである上記実施態様の何れかに記載の薬学的組成物を含む。

単純なシステムがＧＬＰ−１の断片及びアナログを記述するために使用される。よって、例えば、Ｇｌｙ^８−ＧＬＰ−１（７−３７）は、８位の天然に生じるアミノ酸残基（Ａｌａ）をＧｌｙによって置換することによってＧＬＰ−１（７−３７）から形式的に誘導されるＧＬＰ−１（７−３７）のアナログを意味する。同様に、Ｌｙｓ^３４（Ｎ^ε−テトラデカノイル）−ＧＬＰ−１（７−３７）は３４位のＬｙｓ残基のε−アミノ基がテトラデカノイル化されたＧＬＰ−１（７−３７）を意味する。ＰＣＴ公報の国際公開第９８／０８８７１号及び国際公開第９９／４３７０６号は、親油性置換基を有するＧＬＰ−１アナログの安定な誘導体を開示している。ＧＬＰ−１アナログのこれらの安定な誘導体は、対応するＧＬＰ−１アナログと比較して持続性作用プロファイルを有している。

ペプチド又は化合物に言及するここで使用される「インスリン分泌性」なる用語は、血漿グルコース値に応答してインスリンの分泌を刺激する能力を意味する。インスリン分泌性ペプチド及び化合物はＧＬＰ−１レセプターのアゴニストである。化合物のインスリン分泌特性は当該分野で知られているインビトロ又はインビボアッセイによって決定することができる。
本発明の一実施態様では、ＧＬＰ−１は３４位にＡｒｇ残基を有している。他の実施態様では、ＧＬＰ−１は２２位にＧｌｕ残基を有している。本発明の他の実施態様では、ＧＬＰ−１は８位にＬ−ヒスチジン残基を有している。本発明の他の実施態様では、ＧＬＰ−１は８位にＶａｌ残基を有している。本発明の他の実施態様では、ＧＬＰ−１（７−３７）アナログの誘導体はＧＬＰ−１（７−３６）−アミドである。

本発明の一実施態様では、ＧＬＰ−１（７−３７）アナログは、ＧＬＰ−１（７−３６）アミド、Ａｒｇ^３４−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｇｌｙ^８−ＧＬＰ−１（７−３６）−アミド、Ｇｌｙ^８−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ^８−ＧＬＰ−１（７−３６）−アミド、Ｖａｌ^８−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ^８Ａｓｐ^２２−ＧＬＰ−１（７−３６）−アミド、Ｖａｌ^８Ａｓｐ^２２−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ^８Ｇｌｕ^２２−ＧＬＰ−１（７−３６）−アミド、Ｖａｌ^８Ｇｌｕ^２２−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ^８Ｌｙｓ^２２−ＧＬＰ−１（７−３６）−アミド、Ｖａｌ^８Ｌｙｓ^２２−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ^８Ａｒｇ^２２−ＧＬＰ−１（７−３６）−アミド、Ｖａｌ^８Ａｒｇ^２２−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ^８Ｈｉｓ^２２−ＧＬＰ−１（７−３６）−アミド、Ｖａｌ^８Ｈｉｓ^２２−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ^８Ｔｒｐ^１９Ｇｌｕ^２２−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ^８Ｇｌｕ^２２Ｖａｌ^２５−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ^８Ｔｙｒ^１６Ｇｌｕ^２２−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ^８Ｔｒｐ^１６Ｇｌｕ^２２−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ^８Ｌｅｕ^１６Ｇｌｕ^２２−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ^８Ｔｙｒ^１８Ｇｌｕ^２２−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ^８Ｇｌｕ^２２Ｈｉｓ^３７−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ^８Ｇｌｕ^２２Ｉｌｅ^３３−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ^８Ｔｒｐ^１６Ｇｌｕ^２２Ｖａｌ^２５Ｉｌｅ^３３−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ^８Ｔｒｐ^１６Ｇｌｕ^２２Ｉｌｅ^３３−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ^８Ｇｌｕ^２２Ｖａｌ^２５Ｉｌｅ^３３−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｖａｌ^８Ｔｒｐ^１６Ｇｌｕ^２２Ｖａｌ^２５−ＧＬＰ−１（７−３７）からなる群から選択される。

本発明の他の実施態様では、インスリン分泌性ペプチドは、ＧＬＰ−１（７−３７）の誘導体又は例えば一つのリジンのようなリジン残基を有し、親油性置換基が場合によってはスペーサーを介して該リジンのイプシロンアミノ基に結合したＧＬＰ−１（７−３７）アナログの誘導体である。本発明の一実施態様では、上記親油性置換基は８から４０の炭素原子、好ましくは８から２４、例えば１２−１８の炭素原子を有する。本発明の他の実施態様では、上記スペーサが存在し、アミノ酸、例えばβ−Ａｌａ、Ｌ−Ｇｌｕ、アミノブチロイルから選択される。本発明の他の実施態様では、上記インスリン分泌性ペプチドはジペプチジルアミノペプチダーゼＩＶ保護ＧＬＰ−１化合物である。本発明の他の実施態様では、上記インスリン分泌性ペプチドは血漿安定ＧＬＰ−１化合物である。本発明の他の実施態様では、ＧＬＰ−１（７−３７）アナログの上記誘導体は、Ａｒｇ^３４，Ｌｙｓ^２６（Ｎ^ε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎ^α−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）である。ＧＬＰ−１誘導体の非限定的な例はｄｅｓアミノ−Ｈｉｓ^７，Ａｒｇ^２６，Ｌｙｓ^３４（Ｎ^ε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎ^α−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）、ｄｅｓアミノ−Ｈｉｓ^７，Ａｒｇ^２６，Ｌｙｓ^３４（Ｎ^ε−オクタノイル）−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ａｒｇ^{２６，３４}，Ｌｙｓ^３８（Ｎ^ε−（ω−カルボキシペンタデカノイル））−ＧＬＰ−１（７−３８）、Ａｒｇ^{２６，３４}，Ｌｙｓ^３６（Ｎ^ε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎ^α−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３６）及びＡｒｇ^３４，Ｌｙｓ^２６（Ｎ^ε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎ^α−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）である。ＧＬＰ−１誘導体の非限定的な例はｄｅｓアミノ−Ｈｉｓ^７，Ａｒｇ^２６，Ｌｙｓ^３４（Ｎ^ε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎ^α−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）、ｄｅｓアミノ−Ｈｉｓ^７，Ａｒｇ^２６，Ｌｙｓ^３４（Ｎ^ε−オクタノイル）−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ａｒｇ^{２６，３４}，Ｌｙｓ^３８（Ｎ^ε−（ω−カルボキシペンタデカノイル））−ＧＬＰ−１（７−３８）、Ａｒｇ^{２６，３４}，Ｌｙｓ^３６（Ｎ^ε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎ^α−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３６）及びＡｒｇ^３４，Ｌｙｓ^２６（Ｎ^ε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎ^α−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）である。

他の実施態様では、ＧＬＰ−１アナログは国際公開第２００６／０９７５３７号に開示されたタイプの更なる持続型アナログ、例えばＡｉｂ８，Ｌｙｓ２６（ＯＥＧ−ＯＥＧ−ガンマ−Ｇｌｕ−Ｃ１８−二酸），Ａｒｇ３４）ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｎ−^ε２６−（１７−カルボキシヘプタデカノイル）−［Ａｉｂ８，Ａｒｇ３４］ＧＬＰ−１−（７−３７）−ペプチド，Ｎ−^ε２６−（１９−カルボキシノナデカノイル）−［Ａｉｂ８，Ａｒｇ３４］ＧＬＰ−１−（７−３７）−ペプチド，Ｎ−^ε２６−（４−｛［Ｎ−（２−カルボキシエチル）−Ｎ−（１５−カルボキシペンタデカノイル）アミノ］メチル｝ベンゾイル）［Ａｒｇ３４］ＧＬＰ−１−（７−３７）、Ｎ−^ε２６−［２−（２−［２−（２−［２−（２−［４−（１７−カルボキシヘプタデカノイルアミノ）−４（Ｓ）−カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセチルアミノ）エトキシ］エトキシ）アセチル］［Ａｉｂ８，Ａｒｇ３４］ＧＬＰ−１−（７−３７）ペプチドである。
一実施態様では、ＧＬＰ１−誘導体はＡｉｂ８，Ｌｙｓ２６（ＯＥＧ−ＯＥＧ−ガンマ−Ｇｌｕ−Ｃ１８−二酸），Ａｒｇ３４）ＧＬＰ−１（７−３７）である。Ａｒｇ^３４，Ｌｙｓ^２６（Ｎ^ε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎ^α−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）と比較してのその高い効力と毎週一回の投薬よりも毎日一回に必要とされる低用量は、基礎インスリンとの併用製剤において必要とされるＧＬＰ−１化合物を低濃度なものにする。
基礎インスリンは国際公開第９５／０７９３１号、国際公開第２００５／０１２３４７号又はＥＰ２００７／０５４４４４に開示されたような可溶型アシル化インスリンでありうる。

アシル化基礎インスリンは次のリストから選択されうる：
Ｎ^εＢ２９−トリデカノイルｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン、
Ｎ^εＢ２９−テトラデカノイルｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン、
Ｎ^εＢ２９−デカノイルｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン、
Ｎ^εＢ２９−ドデカノイルｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン、
Ｎ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン；
Ｎ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１５ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン；
Ｎ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１６ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン；
Ｎ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１７ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン；
Ｎ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１８ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン；
Ｎ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１６ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ−Ｎ^α−（γ−Ｇｌｕ））ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン；
Ｎ^εＢ２９−（Ｎ^α−（Ａｓｐ−ＯＣ（ＣＨ_２）_１６ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン；
Ｎ^εＢ２９−（Ｎ^α−（Ｇｌｕ−ＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン；
Ｎ^εＢ２９−（Ｎ^α−（Ｇｌｕ−ＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ−）ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン；
Ｎ^εＢ２９−（Ｎ^α−（Ａｓｐ−ＯＣ（ＣＨ_２）_１６ＣＯ−）ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン；
Ｎ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１６ＣＯ）−α−Ｇｌｕ−Ｎ^α−（β−Ａｓｐ））ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン；
Ｎ^εＢ２９−（Ｎ^α−（Ｇｌｙ−ＯＣ（ＣＨ_２）_１３ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン；
Ｎ^εＢ２９−（Ｎ^α−（Ｓａｒ−ＯＣ（ＣＨ_２）_１３ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン、
Ｎ^ｅＢ２９−ω−カルボキシ−ペンタデカノイル−γ−Ｌ−グルタミルアミドｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、
Ｎ^ｅＢ２９−ω−カルボキシ−ペンタデカノイル−γ−アミノ−ブタノイルｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、
Ｎ^ｅＢ２９−ω−カルボキシ−テトラデカノイル−γ−Ｌ−グルタミルアミドｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、
Ｎ^ｅＢ２９−ω−カルボキシ−トリデカノイル−γ−Ｌ−グルタミルアミドｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、
Ｎ^ｅＢ２９−ω−カルボキシ−ペンタデカノイル−β−アラニルｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、
Ｎ^ｅＢ２９−ω−カルボキシ−ペンタデカノイル−γ−Ｌ−アスパルチルアミドｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、
Ｎ^ｅＢ２９−ω−カルボキシ−ペンタデカノイル−ε−アミノヘキサノイルｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、
Ｎ^ｅＢ２９−ω−カルボキシ−ペンタデカノイル−δ−アミノペンタノイルｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、
Ｎ^ｅＢ２９−１０−（４−カルボキシフェノキシ）−デカノイル−γ−Ｌ−グルタミルアミドｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、
Ｎ^ｅＢ２９−４−［１１−（４−カルボキシフェニル）ウンデカノイルアミノ］ブチリルｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、
Ｎ^ｅＢ２９−（３−（３−｛４−［３−（７−カルボキシヘプタノイルアミノ）プロポキシ］ブトキシ｝プロピルカルバモイル）−プロピオニル−γ−グルタミルアミド）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、
Ｎ^ｅＢ２９−ω−カルボキシ−トリデカノイル−γ−アミノ−ブタノイルｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、
Ｎ^ｅＢ２９−ω−カルボキシ−ウンデカノイル−γ−アミノ−ブタノイルｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、
Ｎ^ｅＢ２９−ω−カルボキシ−テトラデカノイル−γ−アミノ−ブタノイルｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、
Ｎ^ｅＢ２９−｛４−［１０−（４−カルボキシ−フェノキシ）−デカノイルアミノ］−ブチリル｝ｄｅｓＢ３０インスリン、
Ｎ^ｅＢ２９−｛４−［（１４−カルボキシ−テトラデカノイルアミノ）−メチル］−ベンゾイル｝ｄｅｓＢ３０インスリン、
Ｎ^ｅＢ２９−［１６−（４−カルボキシ−フェノキシ）−ヘキサデカノイル］ｄｅｓＢ３０インスリン、
Ｎ^ｅＢ２９−｛４−［（１５−カルボキシペンタデカノイルアミノ）ベンゾイル］−ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン及び
Ｎ^ｅＢ２９−｛４−［（１５−カルボキシ−ペンタデカノイルアミノ）−メチル］−ベンゾイル｝−ｄｅｓＢ３０インスリン。

本発明に係る薬学的組成物中のＧＬＰ−１化合物の濃度は、約１から２５、約２から約１５、約２から約１０、約２から約８又は約２から約６ｍｇ／ｍＬでありうる。
基礎インスリンの濃度は、約１から約２５、約１．５から約１５、約１．５から約１２；約１．５から８；約２から約１５、約２から約１０、約２から約８；２から約７；約３から６ｍｇ／ｍＬでありうる。
一実施態様では、基礎インスリンの濃度は２ｍｇ／ｍＬである。
他の実施態様では、基礎インスリンの濃度は４ｍｇ／ｍＬである。
他の実施態様では、基礎インスリンの濃度は８ｍｇ／ｍＬである。

本発明の一実施態様では、Ａｒｇ^３４，Ｌｙｓ^２６（Ｎ^ε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎ^α−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）の濃度は約２ｍｇ／ｍＬから約１０ｍｇ／ｍＬの範囲にあり、基礎インスリンの濃度は約３ｍｇ／ｍＬから約５ｍｇ／ｍＬの範囲にある。
本発明の他の実施態様では、Ａｒｇ^３４，Ｌｙｓ^２６（Ｎ^ε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎ^α−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）の濃度は約２ｍｇ／ｍＬから約１０ｍｇ／ｍＬの範囲にあり、基礎インスリンの濃度は約７ｍｇ／ｍＬから約９ｍｇ／ｍＬの範囲にある。

併用製剤を混合する場合、各単一成分の添加順序は重要である。第一の工程として、水、バッファー（リン酸バッファーと異なる場合）、等張性改変剤が混合される。ついで、適切な量の基礎インスリンアナログ保存溶液が添加され、穏やかに混合される。その後、保存料、例えばフェノールが添加され、混合物が約１５−６０分間、穏やかに混合される。次の工程として、６個のインスリン分子当たり３の亜鉛イオンの濃度に相当する量の亜鉛の一部が加えられる。ついで、混合物は少なくとも５分間穏やかに混合される。次の工程として、残りの量の亜鉛イオンが所望の濃度になるまで加えられる。ついで、ｐＨが所望のｐＨ範囲外の場合、調整される。ついで、適切な量のＧＬＰ−１化合物保存溶液が、所望の最終濃度に達するまで加えられ、ｐＨが所望値になるまで調整される。

薬学的組成物を調製する方法の一実施態様では、保存料が、混合物への亜鉛の添加前に加えられる。よって、一実施態様では、個々の成分の添加順序は、１）基礎インスリン、２）保存料、３）亜鉛及び４）ＧＬＰ−１化合物である。一実施態様では、亜鉛は数回の工程で、例えば３−４工程で添加される。

物理的安定性はチオフラビンＴフィブリル化アッセイ及びＰｅｎｆｉｌｌの回転試験によって評価した。
ＧＬＰ−１化合物による亜鉛の結合は１ＤＨ−ＮＭＲを使用して研究した。
ＧＬＰ−１化合物の不在下及び存在下及び増加した亜鉛濃度の存在下でのインスリンの自己会合平衡を、（クロマトグラム中のＧＬＰ−１化合物を同定するために）蛍光検出を伴うサイズ排除クロマトグラフィー法を使用して研究した。
併用製剤のＰＫ特性は標準的な外観のブタモデルを使用して評価した。

本発明に係る薬物学的組成物は、活性成分に加えて、通常の薬学的に許容可能なアジュバント、例えば等張剤、バッファー、保存料及び安定剤を含む。
薬学的に許容可能な保存料は、フェノール、ｏ-クレゾール、ｍ-クレゾール、ｐ-クレゾール、ｐ-ヒドロキシ安息香酸メチル、ｐ-ヒドロキシ安息香酸プロピル、２-フェノキシエタノール、ｐ-ヒドロキシ安息香酸ブチル、２-フェニルエタノール、ベンジルアルコール、クロロブタノール、及びチオメロサール(thiomerosal)、ブロノポール、安息香酸、イミド尿素、クロロヘキシジン、デヒドロ酢酸ナトリウム、クロロクレゾール、ｐ-ヒドロキシ安息香酸エチル、塩化ベンゼトニウム、クロルフェネシン(３ｐ-クロロフェノキシプロパン-１,２-ジオール)又はそれらの混合物からなる群から選択される。

一実施態様では、保存料はフェノールとｍ-クレゾールの混合物である。他の実施態様では、保存料はフェノールである。薬学的組成物に保存料を使用することは、当業者によく知られている。簡便には、Remington：The Science and Practice of Pharmacy, 第19版, 1995が参照される。

本発明に係る製剤は典型的には等張剤、例えばマンニトール、ソルビトール、グリセロール、プロピレングリコール又はそれら混合物を含むであろう。一実施態様では、等張性は塩ではない。薬学的組成物に等張剤を使用することは、当業者によく知られている。簡便には、Remington：The Science and Practice of Pharmacy, 第19版, 1995が参照される。

本発明に係る薬物学的組成物はまたバッファーを含みうる。バッファーは、双性イオンバッファーであるバッファー、グリシル−グリシン、ＴＲＩＳ、ビシン、ＨＥＰＥＳ、ＭＯＢＳ、ＭＯＰＳ、ＴＥＳ及びそれらの混合物から選択されうる。更に適切なバッファーは、酢酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、シトレート、ヒスチジン、グリシン、リジン、アルギニン、リン酸二水素ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、リン酸ナトリウム、トリス（ヒドロキシメチル）−アミノメタン、トリシン、リンゴ酸、スクシネート、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、アスパラギン酸又はそれらの混合物である。
本発明に係る薬学的製剤は、ホスフェートバッファーのような亜鉛結合バッファーは含まないのが好ましい。

組成物はまた、製剤中の遊離の亜鉛イオンに対して亜鉛バッファーとして作用しうる亜鉛キレート化合物をまた含みうる。これにより、相対的に低いリラグルチドジヘプタマー形成となる増加した亜鉛濃度が可能になる。かかる亜鉛キレート化合物には、（限定するものではないが）ヒスチジン、イミダゾール、シトレート又はその誘導体が含まれる。
一実施態様では、亜鉛キレート剤はヒスチジンである。
他の実施態様では、亜鉛キレート剤はイミダゾールである。
かかる亜鉛キレート剤の添加は、好ましくは１０ｍＭ以下、より好ましくは５ｍＭ以下、より好ましくは２ｍＭ以下、より好ましくは１ｍＭ以下、より好ましくは０．５ｍＭ以下である。

ここで使用される「貯蔵安定な薬学的組成物」なる用語は、少なくとも治療用タンパク質に関連して規制機関が要求する期間の間、安定である薬物学的組成物を意味する。好ましくは、貯蔵安定な薬物学的組成物は５℃で少なくとも１年間安定である。安定性には化学的安定性並びに物理的安定性が含まれる。

ここで使用される「基礎インスリン」なる用語は、標準的な糖尿病モデルにおいて８時間を超える作用時間を有するインスリンペプチドを意味する。好ましくは、基礎インスリンは少なくとも９時間の作用時間を有する。好ましくは、基礎インスリンは少なくとも１０時間の作用時間を有する。好ましくは、基礎インスリンは９から１５時間の作用時間を有する。好ましくは、食事関連インスリンはＮＰＨインスリン及びＮ^εＢ２９−テトラデカノイルｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリンの市販の薬学的組成物の場合に観察されるものと同様の作用時間を有している。

ここで使用される「有効量」なる用語は、治療されない患者と比較して患者の治療に有効であるのに十分な投薬量を意味する。
ここで使用される「薬学的に許容可能な」なる用語は、通常の薬学的な応用に適していること、つまり患者等に有害事象を生じせしめないことを意味する。

ここで使用される「バッファー」なる用語は、化学反応のために生じるような組成物のｐＨが経時的に変化する傾向を低減させる薬学的組成物中の化学的化合物を意味する。バッファーには、化学物質、例えばリン酸ナトリウム、トリス、グリシン及びクエン酸ナトリウムが含まれる。
ここで使用される「保存料」なる用語は、微生物活性(増殖及び代謝)を防止又は遅延化させるために薬学的組成物に添加される化学的化合物を意味する。

ここで使用する「等張剤」なる用語は、浸透圧をヒト血漿のそれに近づけるために製薬学的組成物の浸透圧を修正する役割をする薬学的組成物中の化学的化合物を意味する。等張剤にはＮａＣｌ、グリセロール、マンニトール等が含まれる。
ここで使用される「安定剤」なる用語は、ペプチドを安定させるために、すなわちこのような組成物の保存期間及び／又は使用期間を増加させるために、ペプチドを含有する薬学的組成物に添加される化学物質を意味する。薬学的製剤に使用される安定剤の例は、Ｌ-グリシン、Ｌ-ヒスチジン、アルギニン、ポリエチレングリコール、及びカルボキシメチルセルロースである。

ここで使用される「インスリンペプチド」なる用語は、ヒトインスリンか又はインスリン活性を有するそのアナログ又は誘導体であるペプチドを意味する。
ここで使用される「ヒトインスリン」なる用語は、その構造及び特性がよく知られているヒトホルモンを意味する。ヒトインスリンはシステイン残基間のジスルフィド架橋によって連結した２つのポリペプチド鎖、すなわちＡ鎖とＢ鎖を有する。Ａ鎖は２１アミノ酸のペプチドであり、Ｂ鎖は３０アミノ酸のペプチドであり、２つの鎖は３つのジスルフィド架橋（１つはＡ鎖の６位と１１位のシステインの間にあり、２つ目はＡ鎖の７位のシステインとＢ鎖の７位のシステインの間にあり、３つ目はＡ鎖の２０位のシステインとＢ鎖の１９位のシステインの間にある）によって連結されている。

ペプチドに言及してここで使用される「アナログ」なる用語は、ペプチドの一又は複数のアミノ酸残基が、他のアミノ酸残基で置換され、及び／又は一又は複数のアミノ酸残基が該ペプチドから欠失され、及び／又は一又は複数のアミノ酸残基が該ペプチドに付加されている修飾されたペプチドを意味する。アミノ酸残基のかかる付加又は欠失は、ペプチドのＮ末端及び／又はペプチドのＣ末端で起こりうる。
インスリンアナログはヒトインスリンと比較して約７を越えない変異、より典型的には５を越えず、更により典型的にはせいぜい３の変異を含む。
ここ何年かで、インスリンＡ鎖及び／又はＢ鎖のかなり多数の修飾が開示されている。よって、Ｂ鎖の２８位が、天然Ｐｒｏ残基から、Ａｓｐ、Ｌｙｓ、又はＩｌｅに修飾され得、Ｂ２９位のＬｙｓがまたＰｒｏに修飾されうる。

また、Ａ２１位のＡｓｎは、Ａｌａ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ又はＶａｌ、特にＧｌｙ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、又はＴｈｒ、特にＧｌｙに修飾されうる。更に、Ｂ３位のＡｓｎはＬｙｓ又はＡｓｐに修飾されうる。インスリンアナログの更なる例は、ｄｅｓ(Ｂ３０)ヒトインスリン；Ｂ１とＢ２の一方又は双方が欠失されているインスリンアナログ；Ａ鎖及び／又はＢ鎖がＮ末端伸長を有しているインスリンアナログ、及びＡ鎖及び／又はＢ鎖がＣ末端伸長を有しているインスリンアナログである。また、Ａ１８位の天然アミノ酸残基はＧｌｎ残基に変更され得、あるいはＢ２６−Ｂ３０位のアミノ酸残基の一又は複数は欠失されうる。

親ペプチドに関してここで使用される「誘導体」という用語は、少なくとも一の置換基が親タンパク質又はそのアナログには存在していない化学的に修飾された親タンパク質又はそのアナログを意味し、つまり共有結合的に修飾された親タンパク質である。典型的な修飾はアミド、炭水化物、アルキル基、アシル基、エステル、ペグ化等である。ヒトインスリンの誘導体の例は、スレオニンメチルエステル^Ｂ３０ヒトインスリン及びＮ^εＢ２９−テトラデカノイルｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリンである。

ここで使用される「等電点」なる用語は、ペプチドのような巨大分子の全体の正味の電荷がゼロであるｐＨ値を意味する。ペプチドには、幾つかの荷電基が存在し得、等電点では、これら電荷の全ての合計がゼロである。等電点を超えるｐＨでは、ペプチドの全体の正味の電荷は負である一方、等電点より低いｐＨ値ではペプチドの全体の正味の電荷は正である。
薬学的組成物中のペプチドの濃度に関連してここで使用される「約」なる用語は、プラス又はマイナス１０％を意味する。よって、「約５ｍｇ／ｍＬインスリン」なる濃度は、４．５ｍｇ／ｍＬインスリンから５．５ｍｇ／ｍＬインスリンの濃度を意味する。

本発明は次の実施態様を含む：
実施態様１：インスリン分泌性ＧＬＰ−１化合物、基礎インスリンペプチド、薬学的に許容可能な添加剤及び亜鉛を含有し、亜鉛含有量が６個のインスリン分子当たり少なくとも５のＺｎイオンである非経口投与のための可溶性薬物学的組成物。
実施態様２：インスリン分泌性ＧＬＰ−１化合物、基礎インスリンペプチド、薬学的に許容可能な添加剤及び亜鉛を含有し、亜鉛含有量が６個のインスリン分子当たり少なくとも６のＺｎイオンである非経口投与のための可溶性薬物学的組成物。
実施態様３：亜鉛含有量が６個のインスリン分子当たり５から１６の亜鉛イオンである実施態様１に記載の薬学的組成物。
実施態様４：亜鉛含有量が６個のインスリン分子当たり５から１５の亜鉛イオンである実施態様１に記載の薬学的組成物。
実施態様５：亜鉛含有量が６個のインスリン分子当たり５から１４の亜鉛イオンである実施態様１に記載の薬学的組成物。
実施態様６：亜鉛含有量が６個のインスリン分子当たり５から１３の亜鉛イオンである実施態様１に記載の薬学的組成物。
実施態様７：亜鉛含有量が６個のインスリン分子当たり５から１２の亜鉛イオンである実施態様１に記載の薬学的組成物。
実施態様８：亜鉛含有量が６個のインスリン分子当たり５から１１の亜鉛イオンである実施態様１に記載の薬学的組成物。
実施態様９：亜鉛含有量が６個のインスリン分子当たり５から１０の亜鉛イオンである実施態様１に記載の薬学的組成物。
実施態様１０：亜鉛含有量が６個のインスリン分子当たり５から９の亜鉛イオンである実施態様１に記載の薬学的組成物。
実施態様１１：亜鉛含有量が６個のインスリン分子当たり５から８の亜鉛イオンである実施態様１に記載の薬学的組成物。
実施態様１２：亜鉛含有量が６個のインスリン分子当たり５から７の亜鉛イオンである実施態様１に記載の薬学的組成物。
実施態様１３：亜鉛含有量が６個のインスリン分子当たり６から１６の亜鉛イオンである実施態様２に記載の薬学的組成物。
実施態様１４：亜鉛含有量が６個のインスリン分子当たり６から１５の亜鉛イオンである実施態様２に記載の薬学的組成物。
実施態様１５：亜鉛含有量が６個のインスリン分子当たり６から１４の亜鉛イオンである実施態様２に記載の薬学的組成物。
実施態様１６：亜鉛含有量が６個のインスリン分子当たり６から１３の亜鉛イオンである実施態様２に記載の薬学的組成物。
実施態様１７：亜鉛含有量が６個のインスリン分子当たり６から１２の亜鉛イオンである実施態様２に記載の薬学的組成物。
実施態様１８：亜鉛含有量が６個のインスリン分子当たり６から１１の亜鉛イオンである実施態様２に記載の薬学的組成物。
実施態様１９：亜鉛含有量が６個のインスリン分子当たり６から１０の亜鉛イオンである実施態様２に記載の薬学的組成物。
実施態様２０：亜鉛含有量が６個のインスリン分子当たり６から９の亜鉛イオンである実施態様２に記載の薬学的組成物。
実施態様２１：亜鉛含有量が６個のインスリン分子当たり６から８の亜鉛イオンである実施態様２に記載の薬学的組成物。
実施態様２２：亜鉛含有量が６個のインスリン分子当たり７から１６の亜鉛イオンである先の実施態様の何れかに記載の薬学的組成物。
実施態様２３：亜鉛含有量が６個のインスリン分子当たり７から１５の亜鉛イオンである先の実施態様の何れかに記載の薬学的組成物。
実施態様２４：亜鉛含有量が６個のインスリン分子当たり７から１４の亜鉛イオンである先の実施態様の何れかに記載の薬学的組成物。
実施態様２５：亜鉛含有量が６個のインスリン分子当たり７から１３の亜鉛イオンである先の実施態様の何れかに記載の薬学的組成物。
実施態様２６：亜鉛含有量が６個のインスリン分子当たり７から１２の亜鉛イオンである先の実施態様の何れかに記載の薬学的組成物。
実施態様２７：亜鉛含有量が６個のインスリン分子当たり７から１１の亜鉛イオンである先の実施態様の何れかに記載の薬学的組成物。
実施態様２８：亜鉛含有量が６個のインスリン分子当たり７から１０の亜鉛イオンである先の実施態様の何れかに記載の薬学的組成物。
実施態様２９：亜鉛含有量が６個のインスリン分子当たり７から９の亜鉛イオンである先の実施態様の何れかに記載の薬学的組成物。
実施態様３０：亜鉛含有量が６個のインスリン分子当たり８から１６の亜鉛イオンである先の実施態様の何れかに記載の薬学的組成物。
実施態様３１：亜鉛含有量が６個のインスリン分子当たり８から１５の亜鉛イオンである先の実施態様の何れかに記載の薬学的組成物。
実施態様３２：亜鉛含有量が６個のインスリン分子当たり８から１４の亜鉛イオンである先の実施態様の何れかに記載の薬学的組成物。
実施態様３３：亜鉛含有量が６個のインスリン分子当たり８から１３の亜鉛イオンである先の実施態様の何れかに記載の薬学的組成物。
実施態様３４：亜鉛含有量が６個のインスリン分子当たり８から１２の亜鉛イオンである先の実施態様の何れかに記載の薬学的組成物。
実施態様３５：亜鉛含有量が６個のインスリン分子当たり８から１１の亜鉛イオンである先の実施態様の何れかに記載の薬学的組成物。
実施態様３６：亜鉛含有量が６個のインスリン分子当たり８から１０の亜鉛イオンである先の実施態様の何れかに記載の薬学的組成物。
実施態様３７：上記薬学的組成物のｐＨがおよそｐＨ７．４からおよそｐＨ９である先の実施態様の何れかに記載の薬学的組成物。
実施態様３８：上記薬学的組成物のｐＨがおよそｐＨ７．４からおよそｐＨ８．２である先の実施態様の何れかに記載の薬学的組成物。
実施態様３９：上記薬学的組成物のｐＨがおよそｐＨ７．４からおよそｐＨ７．７である先の実施態様の何れかに記載の薬学的組成物。
実施態様４０：上記薬学的組成物のｐＨがおよそｐＨ７．６からおよそｐＨ８．２である先の実施態様の何れかに記載の薬学的組成物。
実施態様４１：上記薬学的組成物のｐＨがおよそｐＨ７．７からおよそｐＨ８．２である先の実施態様の何れかに記載の薬学的組成物。
実施態様４２：上記薬学的組成物のｐＨがおよそｐＨ８．０からおよそｐＨ９である先の実施態様の何れかに記載の薬学的組成物。
実施態様４３：インスリン分泌性ＧＬＰ−１ペプチドが、ＧＬＰ−１（７−３７）、ＧＬＰ−１（７−３７）アナログ、ＧＬＰ−１（７−３７）の誘導体、又はＧＬＰ−１（７−３７）アナログの誘導体である先の実施態様の何れかに記載の薬学的組成物。
実施態様４４：ＧＬＰ−１（７−３７）の誘導体がリジン残基を含む先の実施態様の何れかに記載の薬学的組成物。
実施態様４５：ＧＬＰ−１（７−３７）アナログの上記誘導体がＡｒｇ^３４，Ｌｙｓ^２６（Ｎ^ε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎ^α−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）である実施態様４４に記載の薬学的組成物。
実施態様４６：ＧＬＰ−１（７−３７）アナログの上記誘導体がＡｉｂ８，Ｌｙｓ２６（ＯＥＧ−ＯＥＧ−ガンマ−Ｇｌｕ−Ｃ１８−二酸），Ａｒｇ３４）ＧＬＰ−１（７−３７）である実施態様４４に記載の薬学的組成物。
実施態様４７：ＧＬＰ−１（７−３７）アナログの上記誘導体が［デスアミノＨｉｓ^７，Ａｒｇ^３４］ＧＬＰ−１−（７−３７），［Ａｉｂ^８，Ｇｌｕ^２２，Ａｒｇ^２６，Ａｒｇ^３４，Ｌｙｓ^３７］ＧＬＰ−１−（７−３７）アミドである実施態様４４に記載の薬学的組成物。
実施態様４８：インスリン分泌性ＧＬＰ−１ペプチドがエキセンディン−４又はそのアナログである先の実施態様１−４２の何れかに記載の薬物学的組成物。
実施態様４９：基礎インスリンペプチドがアシル化インスリンである先の実施態様の何れか一に記載の薬学的組成物。
実施態様５０：アシル化インスリンはＢ２９位が親油性基でアシル化されている先の実施態様の何れか一に記載の薬学的組成物。
実施態様５１：親油性基が８から４０、８から２４、又は１２−１８の炭素原子を有している実施態様５０に記載の薬学的組成物。
実施態様５２：基礎インスリンが、Ｎ^εＢ２９−テトラデカノイルｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン、Ｎ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、Ｌｙｓ^Ｂ２９（Ｎεリトコリル−γ−Ｇｌｕ）−ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン、Ｎ^εＢ２９−ω−カルボキシペンタデカノイル−γ−Ｌ−グルタイルアミドｄｅｓＢ３０ヒトインスリン及びＮ^εＢ２９−ω−カルボキシペンタデカノイル−γ−アミノ−ブタノイルｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリンからなる群から選択される実施態様５０に記載の薬学的組成物。
実施態様５３：基礎インスリンがＮ^εＢ２９−テトラデカノイルｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン、Ｎ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンである実施態様５０に記載の薬学的組成物。
実施態様５４：基礎インスリンがＮ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンである実施態様５０に記載の薬学的組成物。
実施態様５５：基礎インスリンが、Ｎ^εＢ２９−ω−カルボキシペンタデカノイル−γ−Ｌ−グルタイルアミドｄｅｓＢ３０ヒトインスリン又はＮ^εＢ２９−ω−カルボキシペンタデカノイル−γ−アミノ−ブタノイルｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリンである実施態様５０に記載の薬学的組成物。
実施態様５６：基礎インスリンがＮ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンであり、インスリン分泌性ＧＬＰ−１化合物がＡｒｇ^３４，Ｌｙｓ^２６（Ｎ^ε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎ^α−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）である先の実施態様１−４２の何れか一に記載の薬学的組成物。
実施態様５７：基礎インスリンの濃度が約１．５から約８ｍｇ／ｍＬの範囲にあり、ＧＬＰ−１化合物の濃度が約２から約１０ｍｇ／ｍＬの範囲にある先の実施態様の何れか一に記載の薬学的組成物。
実施態様５８：基礎インスリンがインスリングラルギンであり、インスリン分泌性ＧＬＰ−１化合物がＺＰ１０である実施態様１−３６に記載の薬学的製剤。ｐＨが約４である実施態様５７に記載の実施態様。
実施態様５９：亜鉛含有量が、６分子のインスリングラルギン当たり４から５の亜鉛イオンである実施態様５８に記載の薬学的製剤。

実施例１
インスリンアナログＮ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンとＧＬＰ−１アナログＡｒｇ^３４，Ｌｙｓ^２６（Ｎ^ε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎ^α−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７），リラグルチドからなる固定された組合せの典型的な製剤を次のようにして調製した。インスリンアナログ及びＧＬＰ−１アナログから、適切な保存水溶液を調製した。双方の原液のペプチド濃度は典型的には約１０ｍＭであり、ｐＨをインスリンアナログ保存液に対してはおよそｐＨ７．７に、リラグルチド保存液に対してはおよそｐＨ８．２に調節した。これらのｐＨ調節は、最大濃度１．０ＮのＮａＯＨ又はＨＣｌＯ_４溶液を使用して実施した。

次の賦形剤を適切な保存水溶液からこの順で混合した：１）水、２）グリセロール（等張性改変剤）、３）インスリンアナログ、４）フェノール。亜鉛の前のフェノールの添加は重要である；さもないとゲルが形成される。１５分後、酢酸亜鉛を３回に分けて加えた；第一に、３亜鉛／６インスリンアナログ分子の濃度に相当する亜鉛量；第二に、３亜鉛／６インスリンアナログ分子の濃度に相当する亜鉛量；及び第三に任意の更なる亜鉛。各添加後に５分、溶液を平衡にした。ｐＨを測定し、上述のようにｐＨ８．２に調節した。この溶液を４℃でおよそ４８時間平衡のままにした後、適切な量のリラグルチド保存溶液を加えた。最後に、ｐＨを測定し、必要ならばｐＨ８．２に調節した。この手順に従って、表１に記載されたような製剤を調製した。

実施例２
インスリンアナログＮ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンの持続機序は６個のインスリンアナログ分子当たり３を越える亜鉛イオンの存在下での自己会合体の形成に依存すると記載されている。よって、インスリンアナログＮ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンの製剤がモノマー形態のアナログの有意な画分を含んでいる場合、製剤は望ましくない速効要素を示すことが予想される。更に、高いインスリンアナログモノマー含有量は製剤の物理的安定性を悪化させうる。インスリンアナログＮ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンとの固定された組合せにおけるＧＬＰ−１アナログリラグルチドの存在は、リラグルチド亜鉛結合錯体を同時に形成すると共にインスリンアナログの自己会合平衡をモノマー状態に向けて混乱させうる。リラグルチドが製剤関連条件下でヘプタマー自己会合体を形成し、等モル濃度の亜鉛イオンの存在下で亜鉛結合リラグルチドジヘプタマーが形成されることが証明された。

インスリンアナログＮ^εＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンとリラグルチドの双方を含む製剤を、蛍光検出を用いたサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって分析した。ＳＥＣ法ではＳｕｐｅｒｏｓｅ１２１０／３００ＧＬカラムを使用し、５０μｌの試料を注入し、流量は０．８ｍｌ／分とした。フェノールを含むものとフェノールを含まないものの二つの方法を、溶媒１４０ｍＭのＮａＣｌ、１０ｍＭのトリス／ＨＣｌ，ｐＨ７．７、＋／−２ｍＭのフェノールと共に使用した。検出は、２７６ｎｍの吸光度（全ペプチド量を測定）での一つのチャンネルと、リラグルチドに対して特異的であった蛍光検出（３１０ｎｍでの励起、３８０ｎｍでの発光）の他のチャンネルによって実施した。

ある条件下では特定の定量は実験条件のためにできなかった。ここでは、モノマー形態のインスリンアナログの量を、ペプチドの全量に対して定量した。
製剤は実施例１に記載されたようにして調製した。それぞれ０．３ｍＭ及び０．６ｍＭのインスリンアナログを含む４種の製剤を、６個のインスリンアナログ分子当たり６、８、１０、及び１２の亜鉛イオンに相当する亜鉛含有量を用いて調製した。これらの８種の製剤は４℃と３７℃で保存した。
全ての製剤は、０．３又は０．６ｍＭのインスリンアナログ、酢酸亜鉛、１．６ｍＭのリラグルチド、５０ｍＭのフェノール、１７４ｍＭのグリセロール，ｐＨ８．２を含んでいた。

０、２、４、及び８週の保存後にフェノールを用いたＳＥＣ法とフェノールを用いないＳＥＣ法の双方を使用して保存製剤を分析した。表２及び表３はモノマー形態のインスリンアナログの量を示す。陰の部分は正確な定量ができなかった条件を示している。従って、定量はまた全ペプチド量に対するインスリンアナログモノマーに対して行った。これは表４及び表５に示す。

亜鉛結合リラグルチドジヘプタマーの量は蛍光検出を使用して直ぐに測定した。表６及び表７は分析した試料中の測定した量を示す。

実施例３
実施例１の手順に従って、表８に示す組成を有する４種の製剤を調製した。製剤３では、グリシルグリシンバッファーを水と共に添加した。製剤４では、リン酸バッファーを、酢酸亜鉛を添加した後、加えた。これは、リン酸亜鉛の沈殿を最小にするためになされた。使用したインスリンアナログはＮ^εＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンであった。
４種の薬学的組成物の物理的安定性を加速負荷試験によって評価した。負荷試験は回転試験として実施した。５０μＬの空気を各製剤の５つのカートリッジ（ガラスバイアル）の各々に加えた。カートリッジを毎日４時間、毎分３０回転の回数で回転させた。カートリッジの検査を毎日又は必要に応じて続けた。製剤の濁度を、比濁測定によって特徴付け、「比濁計濁度単位」(NTU)で特定した。タンパク質の物理的不安定性は高濁度の測定によって特徴付けた。

この回転試験は図１に示す。インスリンアナログとリラグルチドを併用しｐＨ７．７で製剤化した製剤（製剤３）は、ｐＨ７．４で単独で製剤化したインスリンアナログ（製剤１）よりも安定性がなく、おそらくは更なる開発には許容され得ない安定性であったことが明らかになった。製剤４はまたインスリンアナログとリラグルチドの組合せを有していたが、ｐＨ８．２で製剤化された。この製剤はインスリンアナログ単独よりもほんの僅か低い物理的安定性を有していた。よって、この比較は、何ら最適化することなくインスリンアナログとリラグルチドを組み合わせたのでは不安定な製剤となってしまうことを示している。しかしながら、ｐＨをｐＨ８．２に増加させると、インスリンアナログ単独のものに匹敵する改善された物理的安定性が得られた。

実施例４
実施例３に記載されたようにして実施した他の回転試験では、インスリンアナログＮ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンとリラグルチドを両方含む４種の併用製剤とインスリンアナログ及びリラグルチド単独での２種の参照剤を試験した。
実施例１に記載されているようにして製剤を調製し、その組成を表９に示す。

回転試験からの結果を図２−４に示す。
製剤３は８亜鉛／６インスリンアナログ分子を含み、インスリンアナログ（６亜鉛／６インスリンアナログ分子）及びリラグルチド単独を含む両参照体に匹敵する安定性を有していた。製剤６だけは０．３ｍＭのインスリンアナログを含んでいたが、参照体と同様の安定性を示すためには１０亜鉛／６インスリンアナログ分子を必要とした。これは、インスリンアナログの量に対して高い亜鉛含有量が６亜鉛イオン／６インスリンアナログ分子を含むインスリンアナログ参照体単独と同じ安定性を達成するために必要とされることを示している。

実施例５
インスリンアナログＮ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンとリラグルチドを含む固定された組合せの製剤の薬物動態（ＰＫ）特性をブタで調べた。血流中の二つのペプチドの出現を、注射後７２時間までの間、標準的なアッセイ法によって測定した。しかし、明確化のために、インスリンアナログについては最初の２４時間のみを示す。結果を６通りの複製によって図５及び図６に示し、平均の標準誤差と共に示した。３種の併用製剤及び二種の参考製剤を実施例１に概説したようにして調製した。その組成を表１０に示す。インスリンアナログに対するＰＫ推移曲線を図５に示し、リラグルチドに対するＰＫ推移曲線を図６に示す。

併用におけるインスリンアナログの出現は幾つかの理由から重要である：速効成分は効果の予期しない早期の発現を生じる。増加した生物学的利用能はまた大なる血糖低下効果を生じ、続いて用量の調節が必要とされる。併用製剤３（８亜鉛／６インスリンアナログ分子を用いて製剤化）がインスリンアナログ単独（製剤１）の曲線と比較して非常に類似したインスリン表示曲線を示したと結論づけられることは興味深い。よって、８亜鉛／６インスリンアナログ分子の併用製剤は、インスリンアナログ単独と比較したとき、非常に類似したインスリンＰＫ特性を示した。全ての併用製剤は非常に類似したリラグルチド表示曲線を示した（製剤３−５）。

実施例６
インスリンアナログＮ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンとリラグルチドを異なった比で含む他の固定された組合せの製剤の薬物動態（ＰＫ）特性をブタで同様にして調べた。この比は、リラグルチドに対して、より多くの量のインスリンアナログが一回の注射で患者に送達されることを可能にする。インスリンアナログ参照体(製剤１)と併用剤(製剤3-5)の双方の等用量のインスリンをブタに投与した。血流中の二つのペプチドの出現を、注射後７２時間までの間、標準的なアッセイ法によって測定した。しかし、明確化のために、インスリンアナログについては最初の６時間と２４時間のみを示す。結果を６通りの複製によって図７及び図８に示し、平均の標準誤差と共に示した。３種の併用製剤及び二種の参考製剤を実施例１に概説したようにして調製した。その組成を表１１に示す。インスリンアナログに対するＰＫ推移曲線を図７に示し、リラグルチドに対するＰＫ推移曲線を図８に示す。

インスリンアナログ参照体（製剤１）と比較して、６Ｚｎ^２＋／６インスリン分子を含む併用剤（製剤３）は、参照体の主ピークよりも早期の発現を持つマイナーな肩部を示した。亜鉛含有量を７Ｚｎ^２＋／６インスリン分子まで増加させると（製剤４）、インスリン参照体（製剤１）のものに更に類似したよりもインスリンアナログ表示曲線を生じた。亜鉛含有量を８Ｚｎ^２＋／６インスリン分子（製剤５）まで更に増加させても更なる改善は生じなかった。３種の組合せ（製剤３−５）中のリラグルチドとリラグルチド単独（製剤２）に対するＰＫ推移曲線間に統計的に有意な差は見出されなかった。これは、１．２ｍＭのインスリンアナログ−１．６ｍＭのリラグルチド併用剤に対する７Ｚｎ^２＋／６インスリン分子の亜鉛含有量が、アナログ単独と比較して併用中のインスリンアナログに対して同様のＰＫ推移曲線を得るために好ましいことを示している。

実施例７
リラグルチドとの併用下でのインスリンアナログＮ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンモノマーの量に対するｐＨの影響を研究した。実施例１に概説されたようにして３種の製剤を調製したが、ｐＨ８．２、ｐＨ７．７、及びｐＨ７．４に調整した。３種の製剤全ての組成は、０．６ｍＭのインスリンアナログ、０．８ｍＭの酢酸亜鉛（６個のインスリンアナログ分子当たり８の亜鉛）、１．６ｍＭのリラグルチド、５０ｍＭのフェノール、２１４ｍＭのグリセロールであった。調製後、０週の時点での最初の測定前の数週間の間、製剤を４℃に保存した。その後、製剤を５℃と３７℃の双方で保存し、二通りの温度で更に２週及び４週の保存後に分析した。製剤を実施例２に記載されたＳＥＣ法を使用して分析した。フェノールを用いたものと用いないものの双方の方法を使用した。

フェノールを用いた場合とフェノールを用いない場合のＳＥＣ分析によって測定された全インスリンアナログと比較したインスリンアナログモノマーの相対量をそれぞれ表１２と表１３に示す。両ＳＥＣ法及び両温度において、ｐＨの減少により測定の各時点でインスリンアナログモノマー量は低下した。これは、ｐＨが、リラグルチドとの併用下でインスリンモノマー量を制御し調節するための重要な因子であることを示している。より低いインスリンモノマー量は、ｐＨ８．２より低いｐＨ、例えばｐＨ７．７を使用して得ることができた。

リラグルチドジヘプタマー量をまた同様の形で測定し、これらの結果を、フェノールを用いた場合とフェノールを用いない場合のＳＥＣ法でそれぞれ表１４と表１５に示す。

実施例８
実施例７に記載された研究にはまた低濃度のヒスチジンを含むインスリンアナログＮ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン−リラグルチド併用製剤を含めた。アミノ酸は増加した亜鉛含有量の存在下で亜鉛バッファーとして作用することが意図された。製剤１は０．６ｍＭのインスリンアナログ、０．８ｍＭの酢酸亜鉛（６個のインスリンアナログ分子当たりの８の亜鉛）、１．６ｍＭのリラグルチド、５０ｍＭのフェノール、２１４ｍＭのグリセロール（ｐＨをｐＨ８．２に調整）から構成した。製剤２は０．６ｍＭのインスリンアナログ、１．０ｍＭの酢酸亜鉛（６個のインスリンアナログ分子当たりの１０の亜鉛）、１．６ｍＭのリラグルチド、５０ｍＭのフェノール、２１４ｍＭのグリセロール、０．５ｍＭのヒスチジン（ｐＨをｐＨ８．２に調整）から構成した。両製剤は基本的には実施例１に概説されたようにして製造し、ヒスチジンはリラグルチドの後の最終の賦形剤として添加した。製剤を実施例２及び実施例７に記載されたようにして分析した。

フェノールを用いた場合とフェノールを用いない場合のＳＥＣ分析によって測定された全インスリンアナログと比較したインスリンアナログモノマーの相対量をそれぞれ表１６と表１７に示す。１０亜鉛／６インスリン分子及び０．５ｍＭのヒスチジンが存在する製剤２は、８亜鉛／６インスリン分子のみを含む製剤１よりも両温度において経時的により少ないインスリンモノマーを含んでいた。

リラグルチドジヘプタマー量をまた同様の形で測定し、これらの結果を、フェノールを用いた場合とフェノールを用いない場合のＳＥＣ法でそれぞれ表１８と表１９に示す。

実施例９
実施例７に記載された研究にはまた０．３ｍＭのインスリンアナログ、０．８ｍＭの酢酸亜鉛（６個のインスリンアナログ分子当たり１６の亜鉛）、１．６ｍＭのリラグルチド、５０ｍＭのフェノール、２１４ｍＭのグリセロール（ｐＨ８．２に調整）からなるインスリンアナログＮ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン−リラグルチドの組合せを含めた。
フェノールを用いた場合とフェノールを用いない場合のＳＥＣ分析によって測定された全インスリンアナログと比較したインスリンアナログモノマーの相対量をそれぞれ表２０と表２１に示す。

リラグルチドジヘプタマー量をまた同様の形で測定し、これらの結果を、フェノールを用いた場合とフェノールを用いない場合のＳＥＣ法でそれぞれ表２２と表２３に示す。

実施例１０
インスリングラルギンとエキセンディン−４アナログＺＰ１０（ＡＶＥ００１０としても知られている）を組み合わせた製剤を調製した。ＺＰ１０・エキセンディン−４アナログは、Thorkildsen等(2003), JPET 307:490-496に記載されており、系統名［ｄｅｓ−Ｐｒｏ３８］エキセンディン−４−（１−３９）ｙｌ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−ＮＨ２を有している。適切な保存液から、次の組成物を水に希釈することによって調製した：製剤１は０．６ｍＭのインスリングラルギン、０．４６ｍＭの酢酸亜鉛（４．６亜鉛／６インスリングラルギン）、６０μＭのＺＰ１０から構成された。製剤２は０．６ｍＭのインスリングラルギン、０．６ｍＭの酢酸亜鉛（６亜鉛／６インスリングラルギン）、６０μＭのＺＰ１０から構成された。両製剤をＨＣｌ及びＮａＯＨを使用しておよそｐＨ４．０に調節し、室温で３日間保存した。保存後も両製剤はまだおよそｐＨ４．０であった。二つの製剤は調製直後と室温での保存後透明な溶液のままであった。

Claims

インスリン分泌性ＧＬＰ−１化合物、基礎インスリンペプチド、薬学的に許容可能な添加剤及び亜鉛を含有する注射用の液体製剤であって、
インスリン分泌性ＧＬＰ−１化合物がＡｒｇ^３４，Ｌｙｓ^２６（Ｎ^ε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎ^α−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）であり、基礎インスリンペプチドがＮ^εＢ２９−（Ｎ^α−（ＨＯＯＣ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンであり、亜鉛含有量が６分子のインスリン当たり７〜１２のＺｎイオンであり、ｐＨがおよそｐＨ７．７からおよそｐＨ８．２である、液体製剤。
基礎インスリンペプチドの濃度がおよそ１．５からおよそ８ｍｇ／ｍＬの範囲にあり、ＧＬＰ−１化合物の濃度がおよそ２からおよそ１０ｍｇ／ｍＬの範囲にある、請求項１に記載の液体製剤。
ヒスチジンを更に含有する、請求項１又は２に記載の液体製剤。
１型および２型の糖尿病、肥満症、β細胞欠損、耐糖能障害（ＩＧＴ）、脂質異常症、高血糖症又は体重減少の治療のための、請求項１から３の何れか一項に記載の液体製剤。