JP4733271B2

JP4733271B2 - 核磁気共鳴診断用の血液プール剤

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Publication number: JP4733271B2
Application number: JP2000590689A
Authority: JP
Inventors: アネリ，ピエル・ルチオ; ブロチェッタ，マリノ; デ・ハエン，クリストフ; ガツォッティ，オルネラ; ラットゥアダ，ルチアーノ; ルクス，ジョヴァンナ; マンフレディ，ジュセッペ; モロシニ，ピエルフランチェスコ; パラノ，ダニエラ; セルレティ，ミケレ; ウッゲリ，フルヴィオ; ヴィジガッリ，マッシモ
Original assignee: Bracco Imaging SpA
Current assignee: Bracco Imaging SpA
Priority date: 1998-12-23
Filing date: 1999-12-16
Publication date: 2011-07-27
Anticipated expiration: 2019-12-16
Also published as: ZA200104820B; HK1042432A1; US6461588B1; CZ20012330A3; CA2355888C; MXPA01006344A; CA2355888A1; EP1935435B1; IL143730A; RU2004127136A; NO20013154L; HUP0104715A3; ITMI982802A1; PL349488A1; IL143730A0; WO2000038738A1; CN1854122A; NO322551B1; EP1935435A3; EP1935435A2

Description

【０００１】
本発明は、「磁気共鳴画像法」として知られる診断技術におけるコントラスト剤（contrast agents）としての、特に、血液プール剤（blood pool agents）としての、胆汁酸とキレーティング活性を有する分子との抱合体の金属イオン複合体の新規な使用に関する。
【０００２】
キレーティング剤と適当な金属とから形成された複合体は、Ｘ線画像法、核磁気共鳴画像法（Ｍ．Ｒ．Ｉ．）及びシンチグラフィーといった診断技術におけるコントラスト剤として、既に使用されている。
【０００３】
特に、臨床実務における強力な診断技術として認められている磁気共鳴画像法（Ｍ．Ｒ．Ｉ．）（Stark, D. D., Bradley, W. G., Jr. 編「磁気共鳴画像法 (Magnetic Resonance Imaging)」The C. V. Mosby Company, St. Louis, Missouri (USA), 1988年）を使用した医学的診断は、好ましくは２〜３価の常磁性金属イオンとポリアミノポリカルボキシルリガンド及び／又はそれらの誘導体もしくはアナログとのキレート化複合体を含有する、常磁性医薬組成物を主に利用する。
【０００４】
基本的には水プロトンのＮＭＲシグナルから導出される画像は、プロトン密度並びにＴ₁及びＴ₂緩和時間のような、異なるパラメータ間の複雑な相互作用の結果である。コントラストの増強は、近傍の水プロトンの共鳴特性を有意に変化させる外因性の化学物質の投与により得ることができる（Lauffer, R. B., Chem. Rev. 1987, 87, 901参照）。
【０００５】
Ｎ．Ｍ．Ｒ画像法に使用される常磁性コントラスト剤は、該コントラスト剤が濃縮されている組織に存在する水プロトンの緩和時間を修飾するように作用し、従って、異なる組織間、又は健常組織と病的組織との間のコントラストを増加させる。
【０００６】
ガドリニウム常磁性複合体は、二極性相互作用を介して近傍の水分子のプロトンの緩和時間を減少させる能力が高いために、研究、発表及び特許の目的となってきた。
【０００７】
Ｇｄ−ＤＴＰＡ、ジエチレントリアミノ五酢酸とのガドリニウム複合体のＮ−メチルグルカミン塩、ＭＡＧＮＥＶＩＳＴ（登録商標）；Ｇｄ−ＤＯＴＡ、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸とのガドリニウム複合体のＮ−メチルグルカミン塩、ＤＯＴＡＲＥＭ（登録商標）；Ｇｄ−ＨＰＤＯ３Ａ、〔１０−（２−ヒドロキシプロピル）−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７−三酢酸とのガドリニウム複合体、ＰＲＯＨＡＮＣＥ（登録商標）；Ｇｄ−ＤＴＰＡ−ＢＭＡ、ジエチレン−トリアミノ五酢酸ビス（メチルアミド）とのガドリニウム複合体、ＯＭＮＩＳＣＡＮ（登録商標）といった、それらの一部は、現在、Ｍ．Ｒ．Ｉ．コントラスト剤として臨床的に使用されている。
【０００８】
上に挙げた、市販されているコントラスト剤は、一般的な使用を目的としている。実際、該Ｍ．Ｒ．Ｉ．コントラスト剤は、投与後、血中及び体内の様々な部分の細胞外領域に拡散した後に排出される。従って、この点で、それらはＸ線医学的診断に使用されるヨード化化合物と類似している。
【０００９】
現在、医学分野は、既に市販されている生成物によっては良好に画定されえない、特異的な臓器を照準とした、又は血液系の画像法のためのコントラスト剤を必要としている。血液系の画像法のためのコントラスト剤を得るための第一の手法は、コントラスト剤を、タンパク質のような巨大分子と共有結合させること、又はリポソームのような安定な分子凝集物の内部へイングロベート（inglobating）すること、又はさらには、いわゆる超常磁性粒子を使用することからなる。
【００１０】
例えば、血中から細胞外液への拡散を最小限に抑えるか、又は抑制すらし、それにより血液系における薬剤の保持を高めるため、ジエチレントリアミノ五酢酸とのガドリニウム複合体（Ｇｄ−ＤＴＰＡ）が、ヒトアルブミン（ＨＳＡ）、ポリリジン又はデキストランと結合させられた（Oksendal A. N. et al., J. Magn. Reson. Imaging, 157, 1993; Rocklage S. M., 「コントラスト剤（Contrast Agents）」、Magn. Res. Imaging, Mosby Year Book, 372-437, 1992）。そのような手法においては、所望の効果は達成されるが、薬剤自体の排出が困難であるため、不都合な副作用が問題となる。
【００１１】
異なる戦法は、小胞体又はその他の系による肝臓取り込みを減少させ、それにより血中における該薬剤の持続性を高めるための、ポリエチレングリコール又は炭化水素でコーティングされた超常磁性粒子の使用である（Tilcock C., Biochim. Biophys. Acta, 77, 1993; Bogdanoy A. A. et al., Radiology, 701, 1993）。この場合には、やはり前記のような副作用が起こるのみならず、高い製造コストが問題となる。
【００１２】
従って、低い毒性及び適度に経済的なコストを有する効率的な血液プール剤の需要は、依然として満たされていない。
【００１３】
本発明は、胆汁酸と、２〜３価の常磁性金属のイオンをキレート化することができるキレーティング剤との抱合から得られる、国際特許出願ＷＯ−Ａ−９５／３２７４１において出願人らにより既に記載されている、特別に選択された化合物の、血液プール剤としての新規な使用に関し、さらに、新規化合物、それらの調製のための方法及び血液プール剤としてのそれらの使用に関する。
【００１４】
該化合物は、良好な肝胆汁性排出を示しているため（Anelli P. L. et al., Acta Radiologica, 38, 125, 1997）、肝胆汁系を可視化するための有望なコントラスト剤である。
【００１５】
驚くべきことに、該化合物の特定のクラスは、十分に長い時間にわたり血管系に留まるため、血管系、特に冠状動脈の画像法のためコントラスト剤として使用するために有用であることが見出された。
【００１６】
この効果は、（ウサギ、サルのような）動物におけるin vivo試験を実施することにより、明確に証明されうる。血管系における持続性は、実際、コントラスト剤の投与後に適切な間隔で採取された動物の血液サンプルのプロトン緩和値（１／Ｔ₁）をプロットすれば、直ちに可視化されうる。
【００１７】
Ｇｄ（III）複合体は常磁性種であるため、高い１／Ｔ₁値は、血中のコントラスト剤の高い濃度の証拠である。
【００１８】
従来の細胞外コントラスト剤と血液プール剤との差違は、コントラスト剤投与後の経過時間の関数としての血中のＴ₁プロファイルを報告している、ラウファーらによる論文（Lauffer et al., Radiology, 529, 1998）において十分に説明されている。
【００１９】
特に、本発明の複合体は、適度の安全指数と適合性の用量で、例えばウサギに投与された場合、投与の１０分後に、５ｓ^-1より高い血中の緩和速度（Δ１／Ｔ₁で測定される）の変化を誘導することができ、従って、血管系の画像法のためのコントラスト剤としての使用に関して有望である。
【００２０】
この型の効果は、単に胆汁酸の存在に関係しているのではなく、該複合体の化学的構造に依存していることが見出された。実際、キレーティング単位は、好ましくは、胆汁酸の３位、７位又は１２位での結合を介して、ステロイド骨格と結合しているべきであると考えられる。
【００２１】
実際、２４位のカルボキシル基が関与するキレーティング単位と胆汁酸との結合は、不十分な血管系における持続性を有する複合体を生じるであろう。
【００２２】
【化１６】

【００２３】
【課題を解決するための手段】
したがって、本発明の目的は、一般式（Ｉ）の化合物とＦｅ⁽⁺²⁾、Ｆｅ⁽⁺³⁾、Ｃｕ⁽⁺²⁾、Ｃｒ⁽⁺³⁾、Ｇｄ⁽⁺³⁾、Ｅｕ⁽⁺³⁾、Ｄｙ⁽⁺³⁾、Ｙｂ⁽⁺³⁾又はＭｎ⁽⁺²⁾からなる群より選択される常磁性二価〜三価金属イオンとの錯体の混合血液剤としての使用であり、
Ｘ−Ｌ−Ｙ（Ｉ）
〔式中、
Ｘは、エチレンジアミノ四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジエチレントリアミノ五酢酸（ＤＴＰＡ）、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸（ＤＯＴＡ）、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７−三酢酸（ＤＯ３Ａ）、〔１０−（２−ヒドロキシプロピル）−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７−トリ酢酸（ＨＰＤＯ３Ａ）、４−カルボキシ−５，８，１１−トリス（カルボキシメチル）−１−フェニル−２−オキサ−５，８，１１−トリアザトリデカン−１３−酸（ＢＯＰＴＡ）からなる群より選択されるポリアミノカルボキシルリガンド又はそれらの誘導体の残基であり；
Ｙは、場合により、最終生成物の立体化学とは無関係に反応基としてヒドロキシ基を有する位置において官能化されていてもよい、コール酸、ケノデオキシコール酸、デオキシコール酸、ウルソデオキシコール酸、リトコール酸
【００２４】
【化１７】

【００２５】
の残基からなる群より選択される胆汁酸の誘導体であり（該誘導体は、２４位の酸基のタウリン及びグリシンによる抱合体も含む）；
Ｌは、下記式（II）
【００２６】
【化１８】

【００２７】
〔式中、
ｍは、１〜１０の範囲の整数であり、１より大きい値である場合には、Ａは異なる意味を有していてもよく、
Ａは、下記式（III）
【００２８】
【化１９】

【００２９】
〔ここで、ｎ及びｑは、０又は１でありうるが、同時にゼロではなく、
ｐは、０〜１０の範囲であってよく、
Ｚは、酸素原子又は−ＮＲ基〔ここで、Ｒは、水素原子、又は非置換型であるか、もしくは−ＣＯＯＨ基により置換された（Ｃ₁〜Ｃ₅）アルキル基である〕である〕を有する〕を有する、アミド基へと変換されるカルボキシル基の一つを場合により含む、Ｘの任意の位置と結合し、かつＹのＣ−３位、Ｃ−７位、Ｃ−１２位と結合した鎖である〕
【００３０】
特に好ましい化合物は、スペーシング鎖Ｌが、下記の一般式（IIIa）及び（ＩＩＩｂ）のものである。
【００３１】
【化２０】

【００３２】
また、好ましくは、Ｚが酸素原子であり、それによりＬが最終生成物の立体化学とは無関係に３位、７位、１２位に存在するヒドロキシ基を介して形成される化合物である。
【００３３】
特に好ましくは、残基Ｘが、ＥＤＴＡ、ＤＴＰＡ、ＤＯＴＡ、ＤＯ３Ａ、ＢＯＰＴＡからなる群より選択され；Ｌが、（IIIa）、（IIIb）からなる群より選択され；Ｙが、３位のアミノ基によりＬと結合している、コール酸、デオキシコール酸、ケノデオキシコール酸、リトコール酸の残基（それらの２４位の酸性基は、場合によりタウリンもしくはグリシン誘導体として存在してもよい）からなる群より選択される。
【００３４】
Ｙは、また、例えば水酸基の１個以上をケト基へ変換することにより、異なって官能化されうる。
【００３５】
上記で規定された常磁性金属イオンとの特に好ましい錯体は、ガドリニウム又はマンガンとの錯体である。
【００３６】
好ましくは、式（Ｉ）中の残基Ｘが、中央鎖上で置換されたＤＴＰＡであり、Ｒ₁が、水素原子又は−ＣＯＯＨ基であり、Ｙが、コール酸、デオキシコール酸、ケノデオキシコール酸、リトコール酸の残基からなる群より選択され、Ｌが、式（III）の構造を有する一般式（IV）
【００３７】
【化２１】

【００３８】
の化合物である。
【００３９】
特に好ましくは、Ｒ₁が−ＣＯＯＨ基であり、Ｙが一般式（IV）の化合物の場合と同義であり、Ｌが構造（IIIa）及び（IIIｂ）を有する一般式（IVa）
【００４０】
【化２２】

【００４１】
の化合物である。
【００４２】
本発明の更なる目的は、一般式（IVa）の類に属する下記の新規化合物、並びにその調製方法である：
〔３β（Ｓ），５β〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソ−ブチル〕（カルボキシメチル）−アミノ〕−コラン−２４−酸；
【００４３】
【化２３】

【００４４】
〔３β（Ｓ），５β〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕コラン−２４−酸；
【００４５】
【化２４】

【００４６】
〔３β（Ｓ），５β，７β〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕−７−ヒドロキシコラン−２４−酸；
【００４７】
【化２５】

【００４８】
〔３α（Ｓ），５β〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕コラン−２４−酸；
【００４９】
【化２６】

【００５０】
〔３β（Ｓ），５β〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕−１２−オキソコラン−２４−酸；
【００５１】
【化２７】

【００５２】
〔３β（Ｓ），５β，７α〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕−７−ヒドロキシコラン−２４−酸；
【００５３】
【化２８】

【００５４】
Ｎ²−ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕−Ｎ−〔（３β，５β，７α，１２α）−７，１２−ジヒドロキシ−２４−オキソ−２４−〔（２−スルホエチル）アミノ〕コラン−３−イル〕−Ｌ−グルタミン；
【００５５】
【化２９】

【００５６】
Ｎ²−ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕−Ｎ−〔（３β，５β）−２４−オキソ−２４−〔（２−スルホエチル）アミノ〕コラン−３−イル〕−Ｌ−グルタミン；
【００５７】
【化３０】

【００５８】
〔３β（Ｓ），５β，１２α〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸；
【００５９】
【化３１】

【００６０】
〔３β（Ｒ），５β，１２α〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸；
【００６１】
【化３２】

【００６２】
〔３β（ＲＳ），５β，１２α〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸；
【００６３】
【化３３】

【００６４】
〔３β（Ｒ），５β，１２α〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸；
【００６５】
【化３４】

【００６６】
〔３β（ＲＳ），５β，７α，１２α〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕−７，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸；
【００６７】
【化３５】

【００６８】
〔３α（Ｓ），５β，７α，１２α〕−３−〔〔〔〔５−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−５−カルボキシペンチル〕アミノ〕カルボニル〕オキシ〕−７，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸；
【００６９】
【化３６】

【００７０】
〔３α（Ｓ），５β〕−３−〔２−〔〔５−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−５−カルボキシペンチル〕アミノ〕−２−オキソエトキシ〕コラン−２４−酸；
【００７１】
【化３７】

【００７２】
この類に属する他の化合物（ガドリニウムとの錯体が特許出願ＷＯ−Ａ−９５／３２７４１に記載されている）は、下記である：
〔３β（Ｓ），５β，７α，１２α〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕−７，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸；
【００７３】
【化３８】

【００７４】
〔３β（Ｓ），５β，７α，１２α〕−３−〔〔４−〔〔５−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−５−カルボキシペンチル〕アミノ〕−１，４−ジオキソブチル〕アミノ〕−７，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸。
【００７５】
【化３９】

【００７６】
好ましくは、また、一般式（IVb）の化合物（それはまた中央位置において置換されているＤＴＰＡ誘導体である）である。
【００７７】
【化４０】

【００７８】
〔式中、Ｙは、一般式（IV）の化合物の場合と同義であり、Ｌは構造（IIIa）を有する〕
【００７９】
本発明は、更に、一般式（IVb）の類に属する下記の新規化合物、並びにその調製方法に関する：
〔３β，５β，７α，１２α〕−３−〔〔〔ビス〔２−[ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕アセチル〕アミノ〕−７，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸；
【００８０】
【化４１】

【００８１】
〔３β，５β〕−３−〔〔〔〔〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕アセチル〕アミノ〕アセチル〕アミノ〕コラン−２４−酸；
【００８２】
【化４２】

【００８３】
この類に属する他の化合物（ガドリニウムとの錯体が特許出願ＷＯ−Ａ−９５／３２７４１に記載されている）は、下記である：
〔３β，５β，７α，１２α〕−３−〔〔〔〔〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−アセチル〕アミノ〕アセチル〕アミノ〕−７，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸；
【００８４】
【化４３】

【００８５】
〔３β，５β，７α，１２α〕−３−〔〔６−〔〔〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−アセチル〕アミノ〕−１−オキソヘキシル〕アミノ〕−７，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸。
【００８６】
【化４４】

【００８７】
特に好ましくは、また、一般式（Ｉ）中、残基ＸがＤＴＰＡであり、Ｙが一般式（IV）の化合物の場合と同義であり、Ｌが式（IIIa）の構造を有する一般式（Ｖ）、
【００８８】
【化４５】

【００８９】
の化合物である。
【００９０】
この類に属する他の化合物（ガドリニウムとの錯体が特許出願ＷＯ−Ａ−９５／３２７４１に記載されている）は、下記である：
（３β，５β，７α，１２α）−３−〔〔Ｎ−〔Ｎ−〔２−〔〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕−Ｎ−（カルボキシメチル）グリシル〕グリシル〕アミノ〕−７，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸；
【００９１】
【化４６】

【００９２】
１８−〔〔（３β，５β，７α，１２α〕−２３−カルボキシ−７，１２−ヒドロキシ−２４−ノルコラン−３−イル〕アミノ〕−３，６，９−トリス（カルボキシメチル）−１１，１８−ジオキソ−３，６，９，１２−テトラアザオクタデカン酸。
【００９３】
【化４７】

【００９４】
また好ましくは、一般式中、残基ＸがＤＯ３Ａであり、Ｙが一般式（IV）の化合物の場合と同義であり、Ｌが構造（IIIa）及び（IIIb）から選択される一般式（VI）、
【００９５】
【化４８】

【００９６】
の化合物である。
【００９７】
式（VI)の化合物のうち、特に好ましくは、１０−〔３−〔〔（３α，５β，７α，１２α）−２３−カルボキシ−７，１２−ジヒドロキシ−２４−ノルコリン−３−イル〕オキシ〕−２−ヒドロキシプロピル〕−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７−三酢酸（ガドリニウムとの錯体が特許出願ＷＯ−Ａ−９５／３２７４１に記載されている）である。
【００９８】
【化４９】

【００９９】
同様に、一般式（VII)の化合物は、好ましくは、一般式（Ｉ）中、残基ＸがＥＤＴＡであり、Ｙが一般式（IV）の化合物の場合と同義であり、Ｌが式（III）の構造を有する。
【０１００】
特に好ましくは、式（VII)の化合物とマンガンとの錯体である。
【０１０１】
【化５０】

【０１０２】
式（VII)の化合物のうち、特に好ましくは、下記である：
〔３α（Ｓ），５β，１２α〕−３−〔〔〔〔５−〔〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕（カルボキシメチル）アミノ〕−５−カルボキシペンチル〕アミノ〕カルボニル〕オキシ〕−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸；
【０１０３】
【化５１】

【０１０４】
〔３β（Ｓ），５β，７α，１２α〕−３−〔〔４−〔〔５−〔〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕（カルボキシメチル）アミノ〕−５−カルボキシ−ペンチル〕アミノ〕−１，４−ジオキソブチル〕アミノ〕−７，１２−ジ−ヒドロキシコラン−２４−酸；
【０１０５】
【化５２】

【０１０６】
〔３β（Ｓ），５β〕−３−〔２−〔〔５−〔〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕（カルボキシメチル）アミノ〕−５−カルボキシペンチル〕アミノ〕−２−オキソエトキシ〕コラン−２４−酸；
【０１０７】
【化５３】

【０１０８】
〔３β（Ｓ），５β，１２α〕−３−〔〔４−〔〔２−〔〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕（カルボキシメチル）アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸；
【０１０９】
【化５４】

【０１１０】
〔３β（Ｓ），５β〕−３−〔〔４−〔〔２−〔〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕（カルボキシメチル）アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕−１２−オキソコラン−２４−酸。
【０１１１】
【化５５】

【０１１２】
一般式（Ｉ）の化合物は、収束合成の方法により調製することができ、その方法は以下を含む：
１）官能化リガンド、即ち、適切な官能基により胆汁酸に安定して結合しながら、常磁性金属イオンの１個を配位できるリガンドの合成；
２）官能化胆汁酸の合成；
３）２個の異なるシントン間の結合反応；
４）あらゆる保護基の開裂；
５）常磁性金属イオンの錯体化；
（これらは上記で引用した特許出願ＷＯ−Ａ−９５／３２７４１で詳細に説明されている）。
【０１１３】
本発明のリガンドの好ましい調製方法のいくつかは、２個のシントン（一方は、常磁性イオンキレート系の前駆体（Synton A）であり、他方は、最終錯体中に含有される胆汁酸残基の前駆体（Synton B）である）の間にアミド結合を形成することに関わる。
【０１１４】
以下に記載される方法は、本発明の化合物の合成を制限するものとして考慮されるべきではない。
【０１１５】
アミド結合は、下記のようにして形成できる：
ａ）カルボン酸官能基を含有するSynton Aを第一級又は第二級アミノ官能基を含有するSynton Bと反応させる；
ｂ）第一級又は第二級アミノ官能基を含有するSynton Aをカルボン酸官能基を含有するSynton Bと反応させる；
ｃ）ＤＴＰＡジアンヒドリド（市販されている製品）を第一級又は第二級アミノ官能基を含有するSynton Bと反応させる。
【０１１６】
本発明に使用されるSynton A及びSynton Bのいくつかの一覧が、下記の表に示されている。
【０１１７】
【表１】

【０１１８】
使用されるSyntonは、勿論、アミド結合の形成に使用される条件下で寄生的反応を起こすことができる基において適切に保護されている。２個のシントン間に結合を形成した後、もとの基を回復するために１回以上の脱保護工程が考慮されるべきである。
【０１１９】
この種の方法の代わりに、下記のスキーム１で説明されている、試験項の実施例３に記載の化合物の合成と同様に、胆汁酸誘導体から出発して多工程反応によりキレートサブユニットを導入することができる。
【０１２０】
【化５６】

【０１２１】
本発明は、また、下記のスキーム２で説明されている新規の方法に関する。
【０１２２】
【化５７】

【０１２３】
（ここで、
Ｒ₄は、アミノ保護基であり；
Ｒ₅は、直鎖若しくは分岐鎖Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル又はアリールであり；
Ｒ₂及びＲ₃は、独立して、水素原子、直鎖若しくは分岐鎖Ｃ₁−Ｃ₂₀アルキル（これは、非置換若しくはアリール基により置換されている）又はこれらはＣ₃−Ｃ₁₀環を形成する）；
この方法は、アミド交換反応を利用し、そして、出発ピロリジノンの窒素原子に隣接するキラル中心において立体化学を保持し、第二級アミドを得ることができる。Ｒ₄及びＲ₅の基を合わせたものの選択は、開裂が多様な条件下で行われるという点から重要である。Ｒ₄の可能な例は、カルボベンジルオキシ（Cbz）基であり、Ｒ₅の可能な例は、メチル基又はｔ−ブチル基である。
【０１２４】
この方法は、一般的にグルタミン酸γ−アミドを得るために適用され、本発明の化合物を調製するため、特に、上記のようにグルタミン酸γ−アミドを残基Ｙの３−アミノ誘導体により調製するために適切であり有益である。実際、グルタミン酸と対応するアミンとの間にγ−アミド結合を形成する高価な縮合剤を使用することなく最終化合物を得ることができる。
【０１２５】
この完全に新規の合成方法の適用例は、〔３β（Ｓ），５β，１２α〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）−アミノ〕エチル〕アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸の合成方法（その慣用の合成は、試験項の実施例４に記載されているが、代替の方法は、実施例５に記載されいる）であり、完全な合成スキームが、下記のスキーム３に示されている。
【０１２６】
【化５８】

【０１２７】
同様に調製されるものは、コール酸誘導体（特許出願ＷＯ−Ａ−９５／３２７４１に既に記載されている）である、〔３β（Ｓ），５β，７α，１２α〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）−アミノ〕エチル〕アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕−７，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸である。
【０１２８】
一般式（Ｉ）のキレート剤と錯塩を形成する適切な金属イオンは、Ｆｅ⁽⁺²⁾、Ｆｅ⁽⁺³⁾、Ｃｕ⁽⁺²⁾、Ｃｒ⁽⁺³⁾、Ｇｄ⁽⁺³⁾、Ｅｕ⁽⁺³⁾、Ｄｙ⁽⁺³⁾、Ｙｂ⁽⁺³⁾若しくはＭｎ⁽⁺²⁾からなる群より選択される元素の二価又は三価イオンである。
【０１２９】
本発明の新規キレート錯体の診断用の用途としては、造影剤として、特に磁気共鳴による画像診断技術における混合血液剤として使用できる。
【０１３０】
錯体の調製は、常磁性金属の酸化物若しくは適切な塩を水に溶解又は水−アルコール溶液に懸濁したものを、キレート剤の水性溶液又は水−アルコール溶液に撹拌しながら加え、必要であれば、反応が終了するまで穏かに加熱するか又は沸騰温度に加熱する方法に従って慣用的に実施される。錯体が反応溶媒に不溶性の場合、濾過されうる。可溶性の場合、例えば噴霧乾燥で溶媒を蒸発させて残渣にすることにより回収できる。
【０１３１】
得られた錯体がまだ遊離酸基を含有する場合、溶液に生理的に適合するカチオンを形成する無機又は有機塩基と反応させて、中性塩に変換する。
【０１３２】
これらの中性塩の調製としては、十分な量の塩基を、水溶液又は懸濁液中の遊離酸基を含有する錯体に加えて中性にすることができる。このようにして得られた溶液を、都合よく蒸発させるか又は適切な溶媒を加えて、錯体塩を結晶化させることができる。
【０１３３】
本発明のキレート錯体の塩化に適切な好ましい無機カチオンとしては、特にアルカリ又はアルカリ土類金属イオンが挙げられ、例えばカリウム、ナトリウム、カルシウム、マグネシウム及びその混合物である。特に好ましくはナトリウムイオンである。
【０１３４】
上記の目的に適切な有機塩基から誘導される好ましいカチオンとしては、とりわけ、第一級、第二級及び第三級アミンのものが挙げられ、例えばエタノールアミン、ジエタノールアミン、モルホリン、グルカミン、Ｎ−メチルグルカミン、Ｎ，Ｎ−ジメチルグルカミンであり、Ｎ−メチルグルカミンが特に好ましい。
【０１３５】
アミノ酸から誘導される好ましいカチオンとしては、例えばタウリン、グリシン、リシン、アルギニン又はオルニチンのものが挙げられる。
【０１３６】
この方法の代替的な方法には、錯塩を単離しないで注射用配合物を調製する方法が含まれる。この場合、最終溶液が、人体に有害な遊離金属イオンを含有しないことが必須である。
【０１３７】
これは、例えばキシレノールオレンジのような着色指示薬による滴定によって検査できる。錯塩の最終精製工程を考慮してもよい。
【０１３８】
この種の方法においては、キレート剤、塩又は金属酸化物、及びあらゆる塩化塩基を、注射用水において理論率で反応させ、次に反応を終了させた後、発熱物質を濾取し、生成物を適切な容器に分配し、次に熱滅菌を行う。
【０１３９】
注射用薬剤配合物は、上記で調製した活性成分と賦形剤を、薬理学的な検知から適切な純度である水に溶解して、経腸又は非経口的投与に適切な薬剤配合物を、０．０１〜１．０モルの濃度で得ることにより、典型的に調製される。得られた造影剤は、適切に滅菌される。
【０１４０】
造影剤は、診断要件に依存して投与され、０．０１〜０．３mmol/kg体重の容量である。
【０１４１】
原則的に、非経口的投与量は、０．００１〜約１．０mmol/kg体重の範囲である。好ましい非経口的投与量は、０．０１〜約０．５mmol/kg体重の範囲である。
【０１４２】
経腸投与量は、一般的に０．５〜約１０mmol/kg、好ましくは約１．０〜約１０mmol/kg体重である。
【０１４３】
本発明の新規配合物は良好な耐性を示し、更に、その水可溶性は、核磁気共鳴におけるその使用を特に適切にする、更なる重要な特徴である。
【０１４４】
本発明の診断用組成物は、慣用的に使用される。組成物は、磁気共鳴により映像化される全身及び臓器又は組織の局所の両方において、患者、特に温血動物に対して投与できる。
【０１４５】
分析プロトコール及び装置は、例えばStark, D. D., Bradley, W. G., Magnetic Resonance Imaging, Mosby Year Book, St. Louise, Mo. 1992のような研究で見出すことができる。
【０１４６】
【実施例】
使用された試験条件を、試験項で詳細に説明する。
【０１４７】
試験項
実施例１
１−デオキシ−１−（メチルアミノ）−Ｄ−グルシトール（１：３）で塩化した〔３β（Ｓ），５β〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕コラン−２４−酸のガドリニウム錯体
【０１４８】
【化５９】

【０１４９】
Ａ）〔３β（Ｓ），５β〕−３−〔〔５−（１，１−ジメチルエトキシ）−４−〔ビス〔２−〔ビス〔２−（１，１−ジメチルエトキシ）−２−オキソエチル〕アミノ〕エチル〕アミノ〕−１，５−ジオキソペンチル〕アミノ〕コラン−２４−酸メチルエステル
（３β，５β）−３−アミノコラン−２４−酸メチルエステル（ＷＯ−Ａ−９５／３２７４１の実施例５に記載された方法と同様にして調製した）３．６ｇ（９．２４mmol）、Ｎ，Ｎ−ビス〔２−〔ビス〔２−（１，１−ジメチルエトキシ）−２−オキソエチル〕アミノ〕エチル〕−Ｌ−グルタミン酸ｔ−ブチルエステル（ＷＯ−Ａ−９５／３２７４１の実施例１５に記載された方法と同様にして調製した）８．５ｇ（１１．３９mmol）及びジエチルシアノホスホナート１．６４ｇ（９．３９mmol）を、ＤＭＦ１６０mLに溶解した。溶液を０℃に冷却し、Ｅｔ₃Ｎ１．２８mL（９．２４mmol）を滴下し、反応混合物を室温で３０分間放置した。１時間後、溶液を減圧下に蒸発させて、残渣をＥｔＯＡｃで取り、５％ＮａＨＣＯ₃、次にブラインで洗浄した。有機相を分離し、Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥し、次に減圧下に蒸発させた。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィーで精製し、所望の生成物９．５ｇ（８．５０mmol）を得た。
収率：９２％
Ｋ．Ｆ．：３．４７％
元素分析ＣＨＮ
計算値（％）：６６．６３９．７４５．０１
実測値（％）：^a ６７．４２１０．０８５．０７
a：真空下に１２０℃で乾燥した後
ＴＬＣ：固定相：シリカゲルプレート 60F 254 Merck
溶離剤：４：６ＥｔＯＡｃ/ｎ−へキサン
検出：１M ＮａＯＨ中０．５％ＫＭｎＯ₄ Ｒ_f＝０．４６
¹Ｈ−ＮＭＲ、¹³Ｃ−ＮＭＲ、ＩＲ及びＭＳスペクトルは、示された構造と一致した。
【０１５０】
Ｂ）〔３β（Ｓ），５β〕−３−〔〔４−カルボキシ−４−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシエチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−１−オキソブチル〕アミノ〕コラン−２４−酸メチルエステル
ＣＨ₂Ｃｌ₂ ５０mL中の工程Ａ）で調製した化合物９．３ｇ（８．３２mmol）の撹拌溶液に、ＣＦ₃ＣＯＯＨ５．１mL（６６．６mmol）を加え、０〜５℃で１０分後、溶液を蒸発させた。残渣をＣＦ₃ＣＯＯＨ５０mLに取り、室温で２４時間後、更にＣＦ₃ＣＯＯＨ３０mLを加えて反応を終了させた。５時間後、反応混合物を蒸発させて、残渣をＣＨ₂Ｃｌ₂で処理して、粉末を得るまで減圧下に溶媒をそれぞれ蒸発させた。固体をＨ₂Ｏで洗浄し、濾過し、乾燥して、所望の生成物（６．９ｇ；８．２４mmol）を得た。
収率：９９％融点：２０５℃
Ｋ．Ｆ．：７．７８％
元素分析ＣＨＮ
計算値（％）：６０．２７８．１８６．６９
実測値（％）：^a ５９．２８８．１１６．６８
a：真空下に１２０℃で乾燥した後
ＴＬＣ：固定相：シリカゲルプレート 60F 254 Merck
溶離剤：６：４：１ＣＨＣｌ₃/ＭｅＯＨ/２５％ＮＨ₄ＯＨ
検出：１M ＮａＯＨ中０．５％ＫＭｎＯ₄ Ｒ_f＝０．２８
¹Ｈ−ＮＭＲ、¹³Ｃ−ＮＭＲ、ＩＲ及びＭＳスペクトルは、示された構造と一致した。
【０１５１】
Ｃ）〔３β（Ｓ），５β〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕コラン−２４−酸
Ｈ₂Ｏ５０mL中の工程Ｂ）で調製した化合物６．１４ｇ（７．３３mmol）の懸濁液に、pH-stat装置によりｐＨ１３に保持しながら、１M ＮａＯＨ５０mL（５０mmol）を加えた。室温で２時間後、反応混合物を１２M ＨＣｌで酸性化（ｐＨ０．５）して、懸濁液を得て、それを濾過し、Ｈ₂Ｏで洗浄し、乾燥して、所望の生成物（５．６４ｇ；６．８５mmol）を得た。
収率：９３％融点：２０５℃
Ｋ．Ｆ．：９．０２％
元素分析ＣＨＮＣｌ、Ｎａ
計算値（％）：５９．８４８．０８６．８１
実測値（％）：^a ５９．５６８．１５６．８０＜０．１
a：真空下に１２０℃で乾燥した後
ＴＬＣ：固定相：シリカゲルプレート 60F 254 Merck
溶離剤：６：４：１ＣＨＣｌ₃/ＭｅＯＨ/２５％ＮＨ₄ＯＨ
検出：１M ＮａＯＨ中０．５％ＫＭｎＯ₄ Ｒ_f＝０．２５
¹Ｈ−ＮＭＲ、¹³Ｃ−ＮＭＲ、ＩＲ及びＭＳスペクトルは、示された構造と一致した。
【０１５２】
Ｄ）１−デオキシ−１−（メチルアミノ）−Ｄ−グルシトール（１：３）で塩化した〔３β（Ｓ），５β〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕コラン−２４−酸のガドリニウム錯体
工程Ｃ）で調製した化合物４．３５ｇ（５．５mmol）をＨ₂Ｏ５０mLに懸濁し、２Mメグルミン水溶液１０mL（２０mmol）で可溶化して、ｐＨ６．８の溶液を得た。その後、２M メグルミン水溶液６．５mL（１３mmol）を加えてｐＨ６．８に保持しながら、０．５M ＧｄＣｌ₃水溶液１１mL（５．５mmol）を１時間かけて加えた。細管電気泳動により反応の進展を監視した。２時間後、溶液をMillipore（登録商標）膜を通して濾過し、ナノ濾過し、蒸発させた。残渣を乾燥して、所望の化合物（６．１５ｇ；４．１７mmol）を得た。

a：真空下に１２０℃で乾燥した後
ＩＲ及びＭＳスペクトルは、示された構造と一致した。
【０１５３】
下記の化合物及び関連するガドリニウム錯体は、同様にして調製した：
１−デオキシ−１−（メチルアミノ）−Ｄ−グリシトール（１：３）で塩化した〔３β（Ｓ），５β，７β〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕−７−ヒドロキシコラン−２４−酸のガドリニウム錯体；
１−デオキシ−１−（メチルアミノ）−Ｄ−グリシトール（１：３）で塩化した〔３β（Ｓ），５β〕−３−〔２〔−〔５−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−５−カルボキシペンチル〕アミノ〕−２−オキソエトキシ〕コラン−２４−酸のガドリニウム錯体。
【０１５４】
実施例２
１−デオキシ−１−（メチルアミノ）−Ｄ−グルシトール（１：３）で塩化した〔３β（Ｓ），５β〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕−１２−オキソコラン−２４−酸のガドリニウム錯体
【０１５５】
【化６０】

【０１５６】
Ａ）（３β，５β）−３−アジド−１２−オキソコラン−２４酸メチルエステル
Jones試薬１２．５mL〔３３．３mmol Ｃｒ（ＶＩ）〕を、アセトン（６００mL）中の（３β，５β，１２α）−３−アジド−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸メチルエステル（ＷＯ−Ａ−９５／３２７４１の実施例５で（３β，５β，７α，１２α）−３−アジド−７，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸メチルエステルについて記載された方法と同様にして調製した）１７．８ｇ（４１．１mmol）の溶液に室温で９０分間かけて滴下した。２０時間後、混合物を濾過し、溶液を蒸発させた。残渣をＣＨ₂Ｃｌ₂（４００mL）に溶解し、溶液を飽和ＮａＨＣＯ₃水溶液、次にＨ₂Ｏで洗浄した。溶液を乾燥し、蒸発させて、粗生成物を得て、それを９６％ＥｔＯＨから結晶化して、所望の生成物１４．１ｇ（３２．９mmol）を得た。
収率：８４％融点：１５３℃
Ｋ．Ｆ．：＜０．１％
〔α〕²⁰ _D＝＋８３．２５（ｃ２．１、ＣＨＣｌ₃）
元素分析ＣＨＮ
計算値（％）：６９．９０９．１５９．７８
実測値（％）：６９．９８９．３２９．６９
ＴＬＣ：固定相：シリカゲルプレート 60F 254 Merck
溶離剤：８：２ｎ−へキサン/ＥｔＯＡｃ
検出：１M ＮａＯＨ中０．５％ＫＭｎＯ₄ Ｒ_f＝０．４３
¹Ｈ−ＮＭＲ、¹³Ｃ−ＮＭＲ、ＩＲ及びＭＳスペクトルは、示された構造と一致した。
【０１５７】
Ｂ）（３β，５β）−３−アミノ−１２−オキソコラン−２４酸メチルエステルＴＨＦ（１３０mL）中のＡ）の化合物１６．４ｇ（３８．２mmol）の溶液を、５％Ｐｄ／Ｃ（１．６ｇ）の存在下に、Parr（登録商標）オートクレーブ中で室温及び４０barで１５時間水素化した。反応混合物を濾過（濾紙及びＦＨ０．５μm Millipore（登録商標）膜）し、蒸発させた。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィーで精製して、所望の生成物１１．８ｇ（２９．２mmol）を得た。
収率：７７％融点：１２９〜１３０℃
Ｋ．Ｆ．：１．０４％
〔α〕²⁰ _D＝＋８７．８（ｃ２．０２、ＣＨＣｌ₃）
元素分析ＣＨＮ
計算値（％）：７４．４０１０．２４３．４７
実測値（％）：７２．７２１０．００３．３５
ＴＬＣ：固定相：シリカゲルプレート 60F 254 Merck
溶離剤：９５：５ＭｅＯＨ/Ｅｔ₃Ｎ
検出：１M ＮａＯＨ中０．５％ＫＭｎＯ₄ Ｒ_f＝０．３１
¹Ｈ−ＮＭＲ、¹³Ｃ−ＮＭＲ、ＩＲ及びＭＳスペクトルは、示された構造と一致した。
【０１５８】
Ｃ）〔３β（Ｓ），５β〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス〔２−（１，１−ジメチルエトキシ）−２−オキソエチル〕アミノ〕エチル〕アミノ〕−５−（１，１−ジメチルエトキシ）−１，５−ジオキソペンチル〕アミノ〕−１２−オキソコラン−２４−酸メチルエステル
ＣＨ₂Ｃｌ₂（２５mL）中のＤＣＣ（６．２４ｇ；３０．３mmol）の溶液を、ＣＨ₂Ｃｌ₂（３００mL）中のＮ，Ｎ−ビス〔２−〔ビス〔２−（１，１−ジメチルエトキシ）−２−オキソエチル〕アミノ〕エチル〕−Ｌ−グルタミン酸１−（１，１−ジメチルエチル）エステル（ＷＯ−Ａ−９５／３２７４１の実施例１５の記載と同様にして調製した）（２１．５ｇ；２８．９mmol）、Ｂ）の化合物（１１．１ｇ；２７．５mmol）及びＨＯＢＴ（１−ヒドロキシベンゾトリアゾール）（３．７２ｇ；２７．５mmol）の溶液に、窒素下に０℃で３０分間かけて滴下した。混合物を放置して室温に温めた。２１時間後、反応混合物を濾過し、溶液をＮａＨＣＯ₃飽和水溶液、次にＨ₂Ｏで洗浄し、続いて蒸発させた。粗生成物を、フラッシュクロマトグラフィーで精製して、所望の生成物２４．５ｇ（２１．７mmol）を得た。
収率：７９％
〔α〕²⁰ _D＝＋１２．１７（ｃ２．０７、ＣＨＣｌ₃）
ＴＬＣ：固定相：シリカゲルプレート 60F 254 Merck
溶離剤：１：１ＥｔＯＡｃ/ｎ−へキサン
検出：１M ＮａＯＨ中０．５％ＫＭｎＯ₄ Ｒ_f＝０．４５
¹Ｈ−ＮＭＲ、¹³Ｃ−ＮＭＲ、ＩＲ及びＭＳスペクトルは、示された構造と一致した。
【０１５９】
Ｄ）〔３β（Ｓ），５β〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕−１２−オキソコラン−２４−酸
ＴＦＡ（１．０mol）８０mLを、ＣＨ₂Ｃｌ₂（５０mL）中の工程Ｃ）で調製した化合物２３．８ｇ（２１．０mmol）の溶液に、０℃で１時間かけて滴下した。反応混合物を室温で撹拌し、次に２時間後に蒸発させた。残渣をＴＦＡ（１００mL；１．３mol）で取り、溶液を更に２４時間撹拌した。次に反応混合物を蒸発させて、ＣＨ₂Ｃｌ₂で取り、再び蒸発させた。粗生成物を、氷浴で冷却しながら１M ＮａＯＨ１５０mLに溶解し、溶液を室温で１５時間（ｐＨ１０）撹拌した。反応混合物を、３０％ＮａＯＨ３．３０mLでｐＨ１３に調整し、４時間後、Millipore（登録商標）膜（ＨＡＳ０．４５μm）を通して濾過した。濾液を３０％ＨＣｌ１２．５mL及び１M ＨＣｌ１９mLでｐＨ１．６０に酸性化した。沈殿物を濾過し、Ｈ₂Ｏで洗浄し、乾燥して、所望の生成物１５．８ｇ（１８．９mmol）を得た。

¹Ｈ−ＮＭＲ、¹³Ｃ−ＮＭＲ、ＩＲ及びＭＳスペクトルは、示された構造と一致した。
【０１６０】
Ｅ）１−デオキシ−１−（メチルアミノ）−Ｄ−グルシトール（１：３）で塩化した〔３β（Ｓ），５β〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕−１２−オキソコラン−２４−酸のガドリニウム錯体
０．９１８M メグルミン水溶液４９．０mL（４５．０mmol）を、Ｈ₂Ｏ（１００mL）中の工程Ｄで調製した化合物１４．０ｇ（１６．７mmol）の懸濁液に、室温で滴下して、透明な溶液（ｐＨ６．５）を得た。pH-statにより０．９１８Mメグルミン水溶液５５．７mL（５１．１mmol）を加えてｐＨ６．５に保持しながら、０．５０３M ＧｄＣｌ₃水溶液３１．６mL（１５．９mmol）を滴下した。添加の終了時に、混合物を、Millipore（登録商標）膜（ＨＡＷＰ０．４５μm）を通して濾過し、ナノ濾過し、０．９１８Mメグルミン水溶液０．１００mL（０．０９２mmol）によりｐＨ７．０に調整し、蒸発させた。残渣を乾燥して、所望の生成物２２．０ｇ（１４．０mmol）を得た。

ＩＲ及びＭＳスペクトルは、示された構造と一致した。
【０１６１】
実施例３
１−デオキシ−１−（メチルアミノ）−Ｄ−グルシトール（１：２）で塩化した（３β，５β，７α，１２α）−３−〔〔〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕アセチル〕アミノ〕−７，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸のガドリニウム錯体
【０１６２】
【化６１】

【０１６３】
Ａ）（３β，５β，７α，１２α）−３−〔〔〔ビス〔２−〔ビス〔２−（１，１−ジメチルエトキシ）−２−オキソエチル〕アミノ〕エチル〕アミノ〕アセチル〕アミノ〕−７，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸メチルエステル
（３β，５β，７α，１２α）−３−〔（アミノアセチル）アミノ〕−７，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸メチルエステル（ＷＯ−Ａ−９５／３２７４１の実施例５に記載された方法に従って調製した）２４．８ｇ（５１．９mmol）を、ＣＨ₃ＣＮ３９０mL中のＮ−（２−ブロモエチル）−Ｎ−〔２−（１，１−ジメチルエトキシ）−２−オキソエチル〕グリシン１，１−ジメチルエチルエステル（ＷＯ−Ａ−９５／３２７４１の実施例１５に記載された方法に従って調製した）３８．７ｇ（１１０mmol）の撹拌溶液に懸濁した。２Mリン酸塩緩衝液（ｐＨ８）２４５mLを加えて２相溶液にして、それを室温で１４４時間激しく撹拌した。有機相を分離し、蒸発させて、残留油状物をＣＨ₂Ｃｌ₂ ２５０mLに溶解した。溶液をＨ₂Ｏで洗浄し、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、蒸発させた。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（溶離剤＝９５：５ＣＨ₂Ｃｌ₂/ＣＨ₃ＯＨ）で精製して、所望の生成物（２４．８ｇ；２４．３mmol）を得た。
収率：４７％
〔α〕²⁰ _D＝＋９．４５（ｃ１．５、ＣＨＣｌ₃）
元素分析ＣＨＮ
計算値（％）：６４．６８９．４７５．３９
実測値（％）：６４．５５９．４４５．４６
ＴＬＣ：固定相：シリカゲルプレート 60F 254 Merck
溶離剤：８８：１２ＣＨＣｌ₃/ＭｅＯＨ
検出：１M ＮａＯＨ中０．５％ＫＭｎＯ₄ Ｒ_f＝０．５７
¹Ｈ−ＮＭＲ、¹³Ｃ−ＮＭＲ、ＩＲ及びＭＳスペクトルは、示された構造と一致した。
【０１６４】
Ｂ）（３β，５β，７α，１２α）−３−〔〔〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕アセチル〕アミノ〕−７，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸
２M ＬｉＯＨ水溶液３１８mL（６３６mmol）を、ＥｔＯＨ３１０mL中の工程Ａ）で調製した化合物（２１．６ｇ；２１．１mmol）の溶液に、１５分間かけて滴下して加えた。２３時間後、ＥｔＯＨを蒸発させて、反応混合物を更に２時間撹拌した。溶液を２．６M ＨＣｌ２５５mLに滴下し、ｐＨを３０％ＮａＯＨで１．４に調整した。１．５時間後、沈殿物を濾過し、０．１M ＨＣｌ３００mLで洗浄し、乾燥して、所望の生成物（１３．１ｇ；１６．７mmol）を得た。

【０１６５】
Ｃ）１−デオキシ−１−（メチルアミノ）−Ｄ−グルシトール（１：２）で塩化した（３β，５β，７α，１２α）−３−〔〔〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕アセチル〕アミノ〕−７，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸のガドリニウム錯体
工程Ｂ）で調製した化合物１１．３ｇ（１３．８mmol）を、Ｈ₂Ｏ４０mLに懸濁し、１M メグルミン水溶液４４．７mL（４４．７mmol）を加えてｐＨ６になるまで溶解した。１Mメグルミン水溶液７３．５mL（７３．５mmol）を加えてｐＨ６．５に保持しながら、１M ＧｄＣｌ₃水溶液１３．７mL（１３．７mmol）を混合物に１時間かけて滴下した。反応混合物をナノ濾過し、ｐＨを０．１Mメグルミン０．３mLで６．８に調整した。蒸発させ、乾燥した後、所望の生成物（１７．２ｇ；１２．９mmol）を得た。
収率：９３％融点：２４５〜２４９℃（分解）
遊離リガンド：＜０．１％（０．００１M ＧｄＣｌ₃）
ＨＰＬＣアッセイ：１００％（面積％）
固定相：Lichrospher 100 RP-8 ５μm；２５０×４．６mmカラム Merck KGaA
温度：４０℃
移動相：プレミックス相によるアイソクラチック溶出：
ｎ−オクチルアミン１ｇ及びＮａ₂ＥＤＴＡ０．３mmolを、ＣＨ₃ＣＮ
２６０mL及びＨ₂Ｏ７４０mlに加える。溶液をＨ₃ＰＯ₄でｐＨ７に緩
衝する。
流速：１mL/分
検出（ＵＶ）：２１０nm
元素分析ＣＨＧｄＮ
計算値（％）：４７．０５７．０６１１．８４６．３３
実測値（％）：４５．１９７．２１１１．２２６．０７Ｈ₂Ｏ４．１６
ＩＲ及びＭＳスペクトルは、示された構造と一致した。
【０１６６】
実施例４
１−デオキシ−１−（メチルアミノ）−Ｄ−グルシトール（１：３）で塩化した〔３β（Ｓ），５β，１２α〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸のガドリニウム錯体
【０１６７】
【化６２】

【０１６８】
Ａ）〔３β（Ｓ），５β，１２α〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス〔２−（１，１−ジメチルエトキシ）−２−オキソエチル〕アミノ〕エチル〕アミノ〕−５−（１，１−ジメチルエトキシ）−１，５−ジオキソペンチル〕アミノ〕−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸メチルエステル
トリエチルアミン（２．２３ｇ；２２mmol）を、ＤＭＦ３００mL中の（３β，５β，１２α）−３−アミノ−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸メチルエステル（ＷＯ−Ａ−９５／３２７４１の実施例５に記載されたコール酸誘導体と同様にして調製した）８．９３ｇ（２２mmol）、Ｎ，Ｎ−ビス〔２−〔ビス〔２−（１，１−ジメチルエトキシ）−２−オキソエチル〕アミノ〕エチル〕−Ｌ−グルタミン酸１−（１，１−ジメチルエチル）エステル（ＷＯ−Ａ−９５／３２７４１の実施例１５の記載と同様にして調製した）１６．４１ｇ（２２mmol）及びジエチルシアノホスホナート３．９１ｇ（２４mmol）の溶液に０℃で加えた。０℃で１．５時間、室温で１８時間後、反応混合物を蒸発させて、残渣をＥｔＯＡｃに溶解した。溶液をＮａＨＣＯ₃飽和水溶液及びＨ₂Ｏで洗浄し、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、蒸発させた。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィーで精製して、所望の生成物（２０．６７ｇ；１８．２mmol）を得た。
収率：８３％
〔α〕²⁰ _D＝−６．７５（ｃ２．０、ＣＨＣｌ₃）
元素分析ＣＨＮ
計算値（％）：６５．６９９．６０４．９４
実測値（％）：６６．５４９．９５４．９９
ＴＬＣ：固定相：シリカゲルプレート 60F 254 Merck
溶離剤：１：１ｎ−ヘキサン/ＥｔＯＡｃＲ_f＝０．０９
検出：１０％Ｈ₂ＳＯ₄中のＣｅ（ＳＯ₄）₂・４Ｈ₂Ｏ（０．１８％）及び（ＮＨ₄）₆Ｍｏ₇Ｏ₂₄・４Ｈ₂Ｏ（３．８３％）
¹Ｈ−ＮＭＲ、¹³Ｃ−ＮＭＲ、ＩＲ及びＭＳスペクトルは、示された構造と一致した。
【０１６９】
Ｂ）〔３β（Ｓ），５β，１２α〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）−アミノ〕エチル〕アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸
工程Ａ)で調製した化合物（１９．７２ｇ；１７．４mmol）を、ＣＦ₃ＣＯ₂Ｈ１０５mLに室温で溶解した。２６時間後、溶液を蒸発させて、残渣をＨ₂Ｏで処理し、固体を濾過し、Ｈ₂Ｏで洗浄し、真空下で部分的に乾燥した。得られた中間体を、Ｈ₂Ｏに懸濁し、１M ＮａＯＨでｐＨ１３になるまで溶解した。室温で５時間後、０．５M ＨＣｌを、ｐＨ１．４になるまで溶液に滴下した。室温で１５時間後、沈殿物を濾過し、Ｈ₂Ｏで洗浄し、乾燥して粗生成物を得て、それを樹脂Amberlite（登録商標）XAD 1600樹脂のクロマトグラフィーで精製して、所望の生成物（９．９２ｇ；１１．８mmol）を得た。
収率：６８％融点：１８４℃（分解）
錯滴定濃度（０．１M ＧｄＣｌ₃）：９９．３％
酸性滴定濃度（０．１M ＮａＯＨ）：９９．８％
〔α〕²⁰λ（ｃ２．０；１M ＮａＯＨ）
λ（nm） 589 578 546 436 405 365
〔α〕 +23.61 +24.59 +27.90 +46.67 +55.61 +71.40
元素分析ＣＨＮ
計算値（％）：５８．７０７．９３６．６８
実測値（％）：５８．２２８．１６６．５９Ｈ₂Ｏ０．７０％
ＴＬＣ：固定相：シリカゲルプレート 60F 254 Merck
溶離剤：５：４：２ＣＨＣｌ₃/ＭｅＯＨ/２５％ＮＨ₄ＯＨ
Ｒ_f＝０．１３
検出：１０％Ｈ₂ＳＯ₄中のＣｅ（ＳＯ₄）₂・４Ｈ₂Ｏ（０．１８％）及び（ＮＨ₄）₆Ｍｏ₇Ｏ₂₄・４Ｈ₂Ｏ（３．８３％）
¹Ｈ−ＮＭＲ、¹³Ｃ−ＮＭＲ、ＩＲ及びＭＳスペクトルは、示された構造と一致した。
【０１７０】
Ｃ）１−デオキシ−１−（メチルアミノ）−Ｄ−グルシトール（１：３）で塩化した〔３β（Ｓ），５β，１２α〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸のガドリニウム錯体
工程Ｂ)で調製した化合物（８．３９ｇ；１０mmol）をＨ₂Ｏ（３０mL）に懸濁し、１Mメグルミン水溶液（３６．５mL；３６．５mmol）をｐＨ６になるまで加えて溶解した。１Mメグルミン水溶液（１９．３mL；１９．３mmol）を加えてｐＨ６に保持しながら、１．０２５M ＧｄＣｌ₃水溶液（９．８５mL；１０．１mmol）を１時間かけて加えた。溶液を、ナノ濾過し、ｐＨを１Mメグルミン水溶液で７．０に調整した。蒸発させ、乾燥した後、所望の生成物（８．５７ｇ；５．４mmol）を得た。
収率：５４％融点：１５０〜１６６℃（１７０℃で分解）
元素分析 C H N Gd
計算値（％）： 47.17 7.28 6.21 9.96
実測値（％）： 43.40 7.31 5.68 9.31 H₂O 7.14%
ＩＲ及びＭＳスペクトルは、示された構造と一致した。
【０１７１】
Ｄ）工程Ｃ）で調製した化合物と同様にして、ナトリウム（１：３）で塩化した〔３β（Ｓ），５β，１２α〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸のガドリニウム錯体を調製した。
工程Ｂ）で調製した化合物（２６．９２ｇ；３２．０８mmol）をＨ₂Ｏ（１００mL）に懸濁し、２M ＮａＯＨ（５６mL；１１２mmol）をｐＨ６になるまで加えて溶解した。２M ＮａＯＨ（２８．９５mL；５７．９mmol）を加えてｐＨ６に保持しながら、０．５１２M ＧｄＣｌ₃水溶液（５８．２mL；２９．７７mmol）３時間かけて加えた。溶液のｐＨを２M ＮａＯＨ（４mL；８mmol）で６．７に調整し、溶液をナノ濾過した。凍結乾燥した後、所望の生成物（２９．８６ｇ；２８．２mmol）を得た。
収率：８８％融点：＞３００℃
元素分析 C H N Gd Na
計算値（％）： 46.49 5.71 5.29 14.85 6.51
実測値（％）： 43.98 6.34 4.92 13.86 6.16 H₂O 4.63%
ＩＲ及びＭＳスペクトルは、示された構造と一致した。
【０１７２】
実施例５
スキーム３に従う〔３β（Ｓ），５β，１２α〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸の代替の調製方法Ａ）（Ｓ）−５−オキソ−１，２−ピロリジンジカルボン酸２−メチル１−（フェニルメチル）ジエステル
ＣＨ₃Ｉ７．１ｇ（５０mmol）を、ＣＨ₂Ｃｌ₂（３３mL）中の（Ｓ）−５−オキソ−１，２−ピロリジンジカルボン酸１−（フェニルメチル）エステル６．５８ｇ（２５mmol）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（３．５５ｇ；２７．５mmol）の溶液に加え、反応混合物を６．５時間還流した。室温に冷却し、ＣＨ₂Ｃｌ₂（５０mL）で稀釈した後、反応混合物を、Ｈ₂Ｏ、２％Ｎａ₂ＣＯ₃水溶液、０．２M ＨＣｌ及びＨ₂Ｏで洗浄した。Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥した後、蒸発させて、所望の生成物（６．８ｇ；２４．５mmol）を得た。
収率：９８％
ＨＰＬＣアッセイ：９８．５％（面積％）
固定相：Lichrosorb RP-Select B ５μm；２５０×４．６mmカラム
Merck KGaA
温度：４５℃
移動相：勾配溶離
Ａ＝水中０．０１７M Ｈ₃ＰＯ₄
Ｂ＝ＣＨ₃ＣＮ
分Ａ（％）Ｂ（％）
０８０２０
１５８０２０
３５４０６０
流速：１mL/分
検出（ＵＶ）：２１０nm
〔α〕²⁰λ（ｃ２；ＣＨＣｌ₃）
λ（nm） 589 578 546 365
〔α〕 -42.97 -44.79 -50.09 -100.43
元素分析ＣＨＮ
計算値（％）：６０．６４５．４５５．０５
実測値（％）：６０．９４５．５４５．００
¹Ｈ−ＮＭＲ、¹³Ｃ−ＮＭＲ、ＩＲ及びＭＳスペクトルは、示された構造と一致した。
【０１７３】
Ｂ）〔３β（Ｓ），５β，１２α〕−３−〔〔５−メトキシ−１，５−ジオキソ−４−〔〔（フェニルメトキシ）カルボニル〕アミノ〕ペンチル〕アミノ〕−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸メチルエステル
（３β，５β，１２α）−３−アミノ−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸メチルエステル（ＷＡ−Ａ−９５／３２７４１の実施例５に記載されたコール酸誘導体と同様にして調製した）８．９２ｇ（２２mmol）を、ジオキサン（５５mL）中のＡ）の化合物（６．１ｇ；２２mmol）の溶液に加え、得られた混合物を５０℃で２４時間、次に１０５℃で２９時間加熱した。溶媒を減圧下に蒸発させて、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ｎ−へキサンによる勾配溶離）で精製し、続いて１：１ＥｔＯＡｃ／ｎ−へキサン混合物で結晶化して、所望の生成物（１１．２ｇ；１６．４mmol）を得た。
収率：７５％融点：１４０℃
ＨＰＬＣアッセイ：９９．２％（面積％）
固定相：Lichrosorb RP-Select B ５μm；２５０×４mmカラム
Merck KGaA
温度：４５℃
移動相：勾配溶離
Ａ＝水中０．０１７M Ｈ₃ＰＯ₄
Ｂ＝ＣＨ₃ＣＮ
分Ａ（％）Ｂ（％）
０６５３５
２５１５８５
３０１５８５
流速：１mL/分
検出（ＵＶ）：２１０nm
〔α〕²⁰λ（ｃ２．０１；ＣＨＣｌ₃）
λ（nm） 589 578 546 365
〔α〕 +24.14 +25.13 +28.51 +73.81
元素分析ＣＨＮ
計算値（％）：６８．７０８．４３４．１１
実測値（％）：６９．３６８．７２４．１３
ＴＬＣ：固定相：シリカゲルプレート 60F 254 Merck
溶離剤：ＥｔＯＡｃ
検出：１０％Ｈ₂ＳＯ₄中のＣｅ（ＳＯ₄）₂・４Ｈ₂Ｏ（０．２％）及び（ＮＨ₄）₆Ｍｏ₇Ｏ₂₄・４Ｈ₂Ｏ（３．８％）Ｒ_f＝０．１１
¹Ｈ−ＮＭＲ、¹³Ｃ−ＮＭＲ、ＩＲ及びＭＳスペクトルは、示された構造と一致した。
【０１７４】
Ｃ）〔３β（Ｓ），５β，１２α〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス〔２−（１，１−ジメチルエトキシ）−２−オキソエチル〕アミノ〕エチル〕アミノ〕−５−メトキシ−１，５−ジオキソペンチル〕アミノ〕−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸メチルエステル
５％Ｐｄ／Ｃ１ｇを、ＭｅＯＨ（１００mL）中のＢ）の化合物（１０．４ｇ；１５．３mmol）の溶液に加え、懸濁液を水素雰囲気下（吸収Ｈ₂：３４８mL；１５．５mmol）に室温で３．５時間撹拌した。Millipore(登録商標)ＦＨフィルタ（０．４５μm）で濾過した後、溶液を減圧下に蒸発させて、残渣を得て、それをＣＨ₃ＣＮ（６０mL）に溶解した。２M水性ｐＨ８リン酸塩緩衝液（６０mL）を加え、次にＣＨ₃ＣＮ（１５mL）中のＮ−（２−ブロモエチル）−Ｎ−〔２−（１，１−ジメチルエトキシ）−２−オキソエチル〕グリシン１，１−ジメチルエチルエステル（ＷＯ−Ａ−９５／３２７４１の実施例１５に記載された方法と同様にして調製した）（１１．８６ｇ；３３．７mmol）の溶液を、室温で１０分間かけて滴下して加えた。混合物を、３９時間撹拌した。分離した後、有機相を減圧下に蒸発させて、残渣をＡｃＯＥｔ（２００mL）に溶解した。溶液をＨ₂Ｏで洗浄し、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、蒸発させた。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ｎ−へキサンで勾配溶離）で精製して、所望の生成物（１１．３６ｇ；１０．４mmol）を得た。
収率：６８％融点：５５〜５８℃
ＨＰＬＣアッセイ：１００％（面積％）
〔α〕²⁰λ（ｃ２．０１；ＣＨＣｌ₃）
λ（nm） 589 578 546 365
〔α〕 -6.97 -7.41 -8.61 -32.89
元素分析ＣＨＮ
計算値（％）：６４．９３９．４２５．１３
実測値（％）：６５．０６９．３６５．１１
ＴＬＣ：固定相：シリカゲルプレート 60F 254 Merck
溶離剤：ＥｔＯＡｃ
検出：１０％Ｈ₂ＳＯ₄中のＣｅ（ＳＯ₄）₂・４Ｈ₂Ｏ（０．２％）及び（ＮＨ₄）₆Ｍｏ₇Ｏ₂₄・４Ｈ₂Ｏ（３．８％）Ｒ_f＝０．４５
¹Ｈ−ＮＭＲ、¹³Ｃ−ＮＭＲ、ＩＲ及びＭＳスペクトルは、示された構造と一致した。
【０１７５】
Ｄ）〔３β（Ｓ），５β，１２α〕−３−〔４−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸
ジオキサン（５０mL）中のＣ）の化合物（８．５ｇ；７．８mmol）の溶液に、２M ＬｉＯＨ水溶液（１１７mL；２３４mmol）を加えた。得られた混合物を、室温で７２時間撹拌し、次に３７％ＨＣｌを徐々に加えてｐＨ６に酸性化した。溶液を減圧下に蒸発させて５０ｇに濃縮し、Ｈ₂Ｏ（４０mL）で稀釈した。溶液を、３７％ＨＣｌを加えてｐＨ２．５に酸性化し、５０〜５５℃に加熱し、強く撹拌しながら、２N ＨＣｌで非常にゆっくりとｐＨ１．３に酸性化した。５分後、不均質混合物を、撹拌しながら１５時間放置して徐々に室温に冷却した。沈殿物を濾過し、Ｈ₂Ｏで洗浄し、乾燥して、所望の生成物（５．９２ｇ；７mmol）を得た。
収率：９０％融点：１８０〜１９８℃
ＨＰＬＣアッセイ：９９．９％（面積％）
固定相：Zorbax ECLIPSE XDB-C8 ３．５μm；１５０×４．６mmカラム
Roclkand Technologies, Inc.
温度：４０℃
移動相：勾配溶離
Ａ＝０．０１７M Ｈ₃ＰＯ₄、Ｈ₂Ｏ中０．３mM ＥＤＴＡ
Ｂ＝ＣＨ₃ＣＮ
勾配：分Ａ（％）Ｂ（％）
０８５１５
４０６５３５
５０６５３５
流速：１．５mL/分
検出（ＵＶ）：２１０nm
酸性滴定濃度（０．１M ＮａＯＨ）：９９％
〔α〕²⁰λ（ｃ２．０４；１M ＮａＯＨ）
λ（nm） 589 578 546 436 405 365
〔α〕 +24.80 +25.83 +29.22 +49.02 +58.43 +75.59
元素分析 C H N Cl,Li
計算値（％）： 58.70 7.93 6.68
実測値（％）： 57.90 7.97 6.57 <0.1 H₂O 0.95
¹Ｈ−ＮＭＲ、¹³Ｃ−ＮＭＲ、ＩＲ及びＭＳスペクトルは、示された構造と一致した。
【０１７６】
実施例６
１−デオキシ−１−（メチルアミノ）−Ｄ−グルシトール（１：２）で塩化した（３β，５β，７α，１２α）−３−〔〔〔〔〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕アセチル〕アミノ〕アセチル〕アミノ〕−７，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸のガドリニウム錯体
【０１７７】
【化６３】

【０１７８】
Ａ）Ｎ−〔〔ビス〔２−〔ビス〔２−（１，１−ジメチルエトキシ−２−オキソエチル〕アミノ〕エチル〕アミノ〕アセチル〕グリシン
グリシルグリシン６．５ｇ（４９．３mmol）を、１：１Ｈ₂Ｏ／ＥｔＯＨ混合物１００mLに懸濁し、１０M ＮａＯＨ（４．８mL）によってｐＨ１０で溶解した。１０M ＮａＯＨ（５．８mL）でｐＨ１０．５に保持しながら、ＥｔＯＨ４０mL中のＮ−（２−ブロモエチル）−Ｎ〔２−（１，１−ジメチルエトキシ）−２−オキソエチル〕グリシン１，１−ジメチルエチルエステル（４２ｇ；１１０．９mmol）を２時間かけて滴下した。溶液は急速にエマルションに変わり、１０M ＮａＯＨを加えた２．５時間後に溶解した。２２時間後、溶媒を蒸発させ、混合物を水で稀釈し、ＣＨ₂Ｃｌ₂で抽出した。有機相をＨ₂Ｏで洗浄し、乾燥し、蒸発させて、残渣を得て、それをフラッシュクロマトグラフィーで精製した。残渣を水に溶解し、１M ＨＣｌを加えて、ｐＨを４．５に調整し、溶液をクロロホルムで抽出した。有機相をＨ₂Ｏで洗浄し、乾燥し、蒸発させて、所望の生成物１３ｇ（１９．３mmol）を得た。
収率：３９％
元素分析ＣＨＮ
計算値（％）：５６．９５８．６６８．３０
実測値（％）：５６．６７８．６８８．３０
ＴＬＣ：固定相：シリカゲルプレート 60F 254 Merck
溶離剤：６：３：１ＣＨＣｌ₃/ＭｅＯＨ/２５％ＮＨ₄ＯＨ
Ｒ_f＝０．６５
検出：１M ＮａＯＨ中１％ＫＭｎＯ₄
¹Ｈ−ＮＭＲ、¹³Ｃ−ＮＭＲ、ＩＲ及びＭＳスペクトルは、示された構造と一致した。
【０１７９】
Ｂ）（３β，５β，７α，１２α）−３−〔〔〔〔〔ビス〔２−〔ビス〔２−（１，１−ジメチルエトキシ）−２−オキシエチル〕アミノ〕エチル〕アミノ〕アセチル〕アミノ〕アセチル〕アミノ〕−７，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸メチルエステル
ＴＥＡ２．８mL（２０．２mmol）を、ＤＭＦ（２９０mL）中に工程Ａ）で調製した化合物１３．６ｇ（２０．２mmol）、（３β，５β，７α，１２α）−３−アミノ−７，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸メチルエステル８．５２ｇ（２０．２mmol）及びＤＥＰＣ（３．４mL；２２．２mmol）を含む溶液に、０℃で撹拌しながら５分間かけて滴下して加えた。１時間後、反応物を室温に温め、溶液を６．５時間撹拌した。ＤＥＰＣ０．３mL（２mmol）を加え、溶液を更に１５．５時間撹拌した。ＤＭＦを蒸発させ、残渣をＥｔＯＡｃに溶解し、ＮａＨＣＯ₃水溶液、次に水で洗浄し、最後に乾燥した。フラッシュクロマトグラフィーで精製した後、所望の生成物１３．７ｇ（１２．７mmol）を得た。
収率：６３％
〔α〕²⁰ _D＝＋５．２６（ｃ１．５；ＣＨＣｌ₃）
元素分析ＣＨＮ
計算値（％）：６３．４８９．２５６．４９
実測値（％）：６３．２２９．４０６．４０
¹Ｈ−ＮＭＲ、¹³Ｃ−ＮＭＲ、ＩＲ及びＭＳスペクトルは、示された構造と一致した。
【０１８０】
Ｃ）（３β，５β，７α，１２α）−３−〔〔〔〔〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕アセチル〕アミノ〕アセチル〕アミノ〕−７，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸
工程Ｂ）で調製した化合物１２．８５ｇ（１２mmol）を、ＴＦＡ（２１０mL）に−５/０℃で撹拌しながら溶解した。１６時間後、ＴＦＡを蒸発させ、残渣を得て、それを０．８M ＮａＯＨ９０mLにｐＨ１３で溶解し、室温で１５時間撹拌した。溶液を５０mLに濃縮し、０．６M ＨＣｌ１０５mLに滴下し、２時間撹拌した。固体を濾過し、０．１M ＨＣｌで洗浄し、乾燥して、粗生成物を得て、それをクロマトグラフィーで精製した。所望の化合物を塩化形態で含有する画分を蒸発させて、残渣を得て、それを水に溶解し、ｐＨを１．４５に維持しながら１M ＨＣｌに滴下した。沈殿物を濾過し、０．１M ＨＣｌで洗浄し、乾燥して、所望の生成物２．６ｇ（３．１mmol）を得た。
収率：２６％融点：１２０〜１２５℃
ＨＰＬＣアッセイ：９８％（面積％）
¹Ｈ−ＮＭＲ、¹³Ｃ−ＮＭＲ、ＩＲ及びＭＳスペクトルは、示された構造と一致した。
【０１８１】
Ｄ）１−デオキシ−１−（メチルアミノ）−Ｄ−グルシトール（１：２）で塩化した（３β，５β，７α，１２α）−３−〔〔〔〔〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕アセチル〕アミノ〕アセチル〕アミノ〕−７，１２−ジ−ヒドロキシコラン−２４−酸のガドリニウム錯体
工程Ｃ）で調製した化合物２．５９ｇ（３．０８mmol）を、水（２０mL）に懸濁し、１Mメグルミン水溶液（３．０８mL；３．０８mmol）を加えて溶解して、ｐＨ５にした。Ｇｄ₂Ｏ₃（０．５０１ｇ；２．７７mmol）を、５０℃に加熱しながら混合物に加えた。１時間後、１Mメグルミン（２．８mL；２．８mmol）を加えて沈殿物を溶解した。２４時間後、反応混合物を濾過し、ｐＨを１M メグルミン水溶液（０．４mL）で６．８に調整した。蒸発させ、乾燥した後、所望の生成物４．２ｇ（３．００mmol）を得た。
収率：９９％融点：２０９〜２１３℃（分解）
ＨＰＬＣアッセイ：９９．７％（面積％）
遊離リガンド：＜０．１％（０．００１ＧｄＣｌ₃）
元素分析ＣＨＮＧｄ
計算値（％）：４６．８４６．９９７．０８１１．３６
実測値（％）：４４．０１７．３５６．６８１０．３９Ｈ₂Ｏ４．９５
ＩＲ及びＭＳスペクトルは、示された構造と一致した。
【０１８２】
実施例７
１−デオキシ−１−（メチルアミノ）−Ｄ−グルシトール（１：４）で塩化した〔３β（Ｓ），５β〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕（カルボキシメチル）アミノ〕コラン−２４−酸のガドリニウム錯体
【０１８３】
【化６４】

【０１８４】
Ａ）（３β，５β）−３−〔〔２−（１，１−ジメチルエトキシ）−２−オキソエチル〕アミノ〕コラン−２４−酸メチルエステル
（３β，５β）−３−アミノコラン−２４−酸メチルエステル（上記の実施例１と同様にして調製した）４０．０ｇ（１０３mmol）を、ＤＭＦ（１．０L）に窒素下に室温で懸濁した。トリエチルアミン（１３．０ｇ；１２９mmol）を加え、次にＤＭＦ（３０mL）中のブロモ酢酸１，１−ジメチルエチルエステル（２４．０ｇ；１２３mmol）の溶液を、反応混合物に溶解するまで１時間かけて滴下した。３日後、混合物を濃縮し、４％ＮａＨＣＯ₃水溶液で稀釈した。得られた懸濁液を濾過し、沈殿物をＨ₂Ｏで洗浄し、乾燥して、所望の生成物３３．７ｇ（６６．９mmol）を得た。
収率：６５％融点：６２〜６４℃
〔α〕²⁰ _D＝＋２３．５５（ｃ１．９６；ＭｅＯＨ）
元素分析ＣＨＮ
計算値（％）：７３．９１１０．６０２．７８
実測値（％）：７４．６７１０．８５２．７８Ｈ₂Ｏ＜０．１
ＴＬＣ：固定相：シリカゲルプレート 60F 254 Merck
溶離剤：７：３ｎ−へキサン/ＥｔＯＡｃＲ_f＝０．３１
¹Ｈ−ＮＭＲ、¹³Ｃ−ＮＭＲ、ＩＲ及びＭＳスペクトルは、示された構造と一致した。
【０１８５】
Ｂ）〔３β（Ｓ），５β〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス〔２−（１，１−ジメチルエトキシ）−２−オキソエチル〕アミノ〕エチル〕アミノ〕−５−（１，１−ジメチルエトキシ）−１，５−ジオキソペンチル〕〔２−（１，１−ジメチルエトキシ）−２−オキソエチル〕アミノ〕コラン−２４−酸メチルエステル
ジイソプロピルエチルアミン（１９．５ｇ；１５１mmol）を、ＤＭＦ（４００mL）中のＡ）の化合物（３３．０ｇ；６５．５mmol）、Ｎ，Ｎ−ビス〔２−〔ビス〔２−（１，１−ジメチルエトキシ）−２−オキソエチル〕アミノ〕エチル〕−Ｌ−グルタミン酸１−（１，１−ジメチルエチル）エステル（ＷＯ−Ａ−９５／３２７４１の実施例１５の記載と同様にして調製した。）（５３．８ｇ；７２．１mmol）及び（ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ）トリス（ジメチランアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスファート（ＢＯＰ）（４０．６ｇ；９１．８mmol）の溶液（窒素下に室温で撹拌した）に、２０分間かけて滴下して加えた。２日後、反応混合物を濃縮し、ＥｔＯＡｃで取った。溶液をＨ₂Ｏで洗浄し、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、蒸発させた。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィーで２回精製して、所望の生成物３８．７ｇ（３１．４mmol）を得た。
収率：４８％
〔α〕²⁰ _D＝−５４．５０（ｃ２．５１；ＣＨＣｌ₃）
ＴＬＣ：固定相：シリカゲルプレート 60F 254 Merck
溶離剤：７：３ｎ−へキサン/ＥｔＯＡｃＲ_f＝０．２２
¹Ｈ−ＮＭＲ、¹³Ｃ−ＮＭＲ、ＩＲ及びＭＳスペクトルは、示された構造と一致した。
【０１８６】
Ｃ）〔３β（Ｓ），５β〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕（カルボキシメチル）アミノ〕コラン−２４−酸
ＥｔＯＨ（３５０ml）中のＢ）の化合物（３８．７ｇ；３１．４mmol）の溶液（室温で撹拌した）に、２M ＬｉＯＨ溶液５００mLを１時間かけて滴下して加えた。１６時間後、反応混合物を５００mLに濃縮し、２M ＬｉＯＨ溶液（３５０mL）を、５０℃に加熱しながら再び加えた。２４時間後、反応混合物を室温に冷却し、５℃で激しく撹拌した６M ＨＣｌ３２０mLに滴下した。得られた懸濁液のｐＨを２M ＮａＯＨ５５mLで１．０に調整した。固体を濾過し、０．１M ＨＣｌで洗浄し、乾燥した。粗生成物を、Ｈ₂Ｏに懸濁し、１M ＮａＯＨを加えて可溶化し、次に塩基溶液を０．５M ＨＣｌ溶液に滴下した。沈殿物を濾過し、０．０５M ＨＣｌ、Ｈ₂Ｏで洗浄し、乾燥して、所望の生成物２３．５ｇ（２６．７mmol）を得た。
収率：８５％融点：１７８〜１８２℃
〔α〕⁴⁰⁵ ₂₀＝＋２４．１０（ｃ１．４９；１M ＮａＯＨ）
ＨＰＬＣアッセイ：１００％（面積％）
固定相：HYPURITY（登録商標）Elite C 18 ５μm；カラム２５０×４．６mm
温度：４０℃
移動相：勾配溶離
Ａ＝０．０１M ＫＨ₂ＰＯ₄、水中０．３mM ＥＤＴＡ
Ｂ＝ＣＨ₃ＣＮ
勾配：分Ａ（％）Ｂ（％）
０９５５
４０６５３５
５０６５３５
流速：１mL/分
検出（ＵＶ）：２１０nm
元素分析 C H N Na Cl
計算値（％）： 58.62 7.78 6.36
実測値（％）： 57.71 8.07 6.20 0.13 0.55 H₂O＜0.1
¹Ｈ−ＮＭＲ、¹³Ｃ−ＮＭＲ、ＩＲ及びＭＳスペクトルは、示された構造と一致した。
【０１８７】
Ｄ）１−デオキシ−１−（メチルアミノ）−Ｄ−グルシトール（１：４）で塩化した〔３β（Ｓ），５β〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕（カルボキシメチル）アミノ〕コラン−２４−酸のガドリニウム錯体
Ｈ₂Ｏ（１００mL）中の工程Ｃ）で調製した化合物（１２．９ｇ；１４．６mmol）の懸濁液に、１Mメグルミン水溶液（７２．０mL；７２．０mmol）を室温で加えて、ｐＨ６．２の透明な溶液を得た。pH-statにより１Mメグルミン（３０．０mL；３０．０mmol）を加えてｐＨ６．２に保持しながら、０．３９３M ＧｄＣｌ₃水溶液（３７．２mL；１４．６mmol）を滴下して加えた。添加の終了時に、反応混合物を濾紙、次にMillipore(登録商標)膜（ＨＡＷＰ０．４５μm）を通して濾過し、ナノ濾過し、１Mメグルミン（０．２０mL；０．０２mmol）を加えてｐＨ７．０に調整し、蒸発させた。固体を乾燥して、所望の生成物２４．０ｇ（１３．２mmol）を得た。
収率：９１％融点：９０〜９２℃
ＨＰＬＣアッセイ：１００％（面積％）
固定相：Lichrospher 100 RP-8 ５μm；２５０×４mmカラム Merck KGaA
温度：４０℃
移動相：プレミックス移動相によるアイソクラチック溶出：
ｎ−オクチルアミン１ｇを、アセトニトリル４００mL及び水６００mlに
加える。溶液をＨ₃ＰＯ₄でｐＨ６に緩衝する。
流速：１mL/分
検出（ＵＶ）：２１０nm
元素分析 C H N Gd Na,Cl
計算値（％）： 46.96 7.38 6.17 8.66
実測値（％）： 44.27 7.59 5.76 8.21 ＜0.1 H₂O 6.61
ＩＲ及びＭＳスペクトルは、示された構造と一致した。
【０１８８】
実施例８
ナトリウム（１：３）で塩化した〔３β（Ｒ），５β，１２α〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸のガドリニウム錯体
【０１８９】
【化６５】

【０１９０】
スキーム３の反応及び実施例５の試験手順に従って、（Ｒ）−５−オキソ−１，２−ピロリジンジカルボン酸１−（フェニルメチル）エステル（市販されている製品）を、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下にヨウ化メチルでエステル化し、そのようにして得られた（Ｒ）−メチルエステルを、（３β，５β，１２α）−３−アミノ−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸メチルエステル（ＷＯ−Ａ−９５／３２７４１の実施例５に記載されたコール酸誘導体と同様にして調製した）と反応させて、〔３β（Ｒ），５β，１２α〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス〔２−（１，１−ジメチルエトキシ）−２−オキソエチル〕アミノ〕エチル〕アミノ〕−５−メトキシ−１，５−ジオキソペンチル〕アミノ〕−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸メチルエステルを得た。Cbz保護基を除去（Ｈ₂/Ｐｄ）し、ＣＨ₃ＣＮ/リン酸塩緩衝液ｐＨ８中でＮ−（２−ブロモエチル）−Ｎ−〔２−（１，１−ジメチルエトキシ）−２−オキソエチル〕−グリシン１，１−ジメチルエチルエステル（ＷＯ−Ａ−９５／３２７４１の実施例１５に記載された方法と同様にして調製した）によりアルキル化した後、ヘキサエステルを得て、それを関連のヘキサ酸に変換（ＬｉＯＨ水溶液／ジオキサン）した。後者を、実施例４のＤ）で記載した方法に従って錯体化して、全収率４４％の所望の生成物を得た。
融点：＞３００℃
元素分析 C H N Gd Na
計算値（％）： 46.49 5.71 5.29 14.85 6.51
実測値（％）： 44.02 6.13 5.10 14.09 6.17 H₂O 4.50%
ＩＲ及びＭＳスペクトルは、示された構造と一致した。
【０１９１】
実施例９
ナトリウム（１：３）で塩化した〔３β（ＲＳ），５β，１２α〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸のガドリニウム錯体
【０１９２】
【化６６】

【０１９３】
化合物を、（３β，５β，１２α）−３−アミノ−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸メチルエステル（ＷＯ−Ａ−９５／３２７４１の実施例５に記載のコール酸誘導体と同様にして調製した）及びＮ，Ｎ−ビス〔２−〔ビス〔２−（１，１−ジメチルエトキシ）−２−オキソエチル〕アミノ〕−エチル〕−ＤＬ−グルタミン酸１−（１，１−ジメチルエチル）エステル（ＷＯ−Ａ−９５／３２７４１の実施例１５におけるＬ異性体の記載と同様にして、ＤＬグルタミン酸から調製した）から、実施例４で詳細に記載された方法に従って合成した。生成物を全収率６１％で得た。
融点：＞３００℃
ＨＰＬＣアッセイ：９９％（面積％）
固定相：Zorbax ECLIPSE XDB-C8 ３．５μm；１５０×４．６mmカラム
Rockland Technologies, Inc.
温度：４０℃
移動相：勾配溶離
Ａ＝０．００５M ＫＨ₂ＰＯ₄、０．００５M Ｋ₂ＨＰＯ₄、
水中０．３mM ＥＤＴＡ
Ｂ＝ＣＨ₃ＣＮ
勾配：分Ａ（％）Ｂ（％）
０９０１０
５９０１０
２０５０５０
流速：１．０mL/分
検出（ＵＶ）：２１０nm
クロマトグラフィー法は、ＤＴＰＡ残基中のＲＳ立体中心によりジアステレオ異性体と関連している、ほぼ等率の２個のピークを示した。
元素分析 C H N Gd Na
計算値（％）： 46.49 5.71 5.29 14.85 6.51
実測値（％）： 43.98 6.34 4.98 13.86 6.16 H₂O 4.63%
ＩＲ及びＭＳスペクトルは、示された構造と一致した。
【０１９４】
実施例１０
ナトリウム（１：３）で塩化した〔３α（Ｓ），５β，１２α〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸のガドリニウム錯体
【０１９５】
【化６７】

【０１９６】
（３α，５β，１２α）−３−アミノ−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸メチルエステル
（３α，５β，１２α）−３，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸メチルエステルを、ＴＨＦ中でトリフェニルホスフィン、ジエチルアゾジカルボキシラート及びギ酸によりミツノブ条件下（Mitsunobu, O. Synthesis 1981, 1-28; Denike, J. K. et al. Chem. Phys. Lipids 1995, 77, 261-267）に反応させて、（３β，５β，１２α）−３−ホルミルオキシ−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸メチルエステルを得た。後者を、（３β，５β，１２α）−３，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸メチルエステルに脱保護（ＭｅＯＨ/ＨＣｌ）して、それを、ＷＯ−Ａ−９５／３２７４１の実施例５におけるコール酸誘導体で記載された一連の反応に付した。（３α，５β，１２α）−３−アミノ−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸メチルエステルを、全収率３２％で得た。
融点：９０〜９２℃
〔α〕²⁰ _D＝＋５３．４６（ｃ１．３、ＣＨ₃ＯＨ）
元素分析ＣＨＮ
計算値（％）：７４．０３１０．６９３．４４
実測値（％）：７４．２０１０．９９３．２６
ＴＬＣ：固定相：シリカゲルプレート 60F 254 Merck
溶離剤：９：１：０．１５ＣＨＣｌ₃/ＣＨ₃ＯＨ/２５％ＮＨ₄ＯＨ
Ｒ_f＝０．２１
¹Ｈ−ＮＭＲ、¹³Ｃ−ＮＭＲ、ＩＲ及びＭＳスペクトルは、示された構造と一致した。
【０１９７】
反応スキーム３及び実施例５の実験手順に従って、（Ｓ）−５−オキソ−１，２−ピロリジンジカルボン酸２−メチル１−（フェニルメチル）ジエステルをＡ）の化合物と反応させた。そのようにして得られた〔（３α（Ｓ），５β，１２α〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス〔２−（１，１−ジメチルエトキシ）−２−オキソエチル〕アミノ〕エチル〕アミノ〕−５−メトキシ−１，５−ジオキソペンチル〕アミノ〕−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸メチルエステルを、水素化（Ｈ₂/Ｐｄ）して、Cbz保護基を除去した。続いて、ＣＨ₃ＣＮ/リン酸塩緩衝液ｐＨ８中でＮ−（２−ブロモエチル）−Ｎ−〔２−（１，１−ジメチルエトキシ）−２−オキソエチル〕グリシン１，１−ジメチルエチルエステル（ＷＯ−Ａ−９５／３２７４１の実施例１５に記載の方法に従って調製した）によりアルキル化して、関連するヘキサエステルを得た。後者をヘキサ酸に変換（ＬｉＯＨ水溶液／ジオキサン）し、それを実施例４のＤ）に記載された方法に従って錯体化して、全収率３３％で所望の生成物を得た。
融点：＞３００℃
ＨＰＬＣアッセイ：１００．０％（面積％）
元素分析 C H N Gd Na
計算値（％）： 46.49 5.71 5.29 14.85 6.51
実測値（％）： 42.04 6.37 4.76 13.28 5.91 H₂O 9.79%
ＩＲ及びＭＳスペクトルは、示された構造と一致した。
【０１９８】
実施例１１
ナトリウム（１：３）で塩化した〔３β（Ｓ），５β，７α〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕−７−ヒドロキシコラン−２４−酸のガドリニウム錯体
【０１９９】
【化６８】

【０２００】
化合物を、（３β，５β，７α）−３−アミノ−７−ヒドロキシコラン−２４−酸メチルエステル（ＷＯ−Ａ−９５／３２７４１の実施例５に記載のコール酸誘導体と同様にして調製した）及びＮ，Ｎ−ビス〔２−〔ビス〔２−（１，１−ジメチルエトキシ）−２−オキソエチル〕アミノ〕−エチル〕−Ｌ−グルタミン酸１−（１，１−ジメチルエチル）エステル（ＷＯ−Ａ−９５／３２７４１の実施例１５の記載と同様にして調製した）から、実施例４で詳細に記載された方法に従って合成した。生成物を全収率８９％で得た。
融点：＞３００℃
元素分析 C H N Gd Na
計算値（％）： 46.49 5.71 5.29 14.85 6.51
実測値（％）： 43.88 6.50 4.91 13.62 6.04 H₂O 7.11%
ＩＲ及びＭＳスペクトルは、示された構造と一致した。
【０２０１】
実施例１２
〔３β（ＲＳ），５β，７α，１２α〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕−７，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸
【０２０２】
【化６９】

【０２０３】
化合物を、（３β，５β，７α，１２α）−３−アミノ−７，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸メチルエステル（ＷＯ−Ａ−９５／３２７４１の実施例５の記載と同様にして調製した）及びＮ，Ｎ−ビス〔２−〔ビス〔２−（１，１−ジメチルエトキシ）−２−オキソエチル〕アミノ〕−エチル〕−ＤＬ−グルタミン酸１−（１，１−ジメチルエチル）エステル（ＷＯ−Ａ−９５／３２７４１の実施例１５におけるＬ異性体の記載と同様にして、ＤＬグルタミン酸から調製した）から、実施例４のＢ）の化合物の調製において詳細に記載された方法に従って合成した。生成物を全収率６５％で得た。
融点：２２４℃（分解）
ＨＰＬＣアッセイ：９７％（面積％）
固定相：Zorbax ECLIPSE XDB-C8 ３．５μm；１５０×４．６mmカラム
Rockland Technologies, Inc.
温度：４０℃
移動相：勾配溶離
Ａ＝０．０１７M Ｈ₃ＰＯ₄、水中０．３mM ＥＤＴＡ
Ｂ＝ＣＨ₃ＣＮ
勾配：分Ａ（％）Ｂ（％）
０９５５
４０６５３５
５０６５３５
流速：１．０mL/分
検出（ＵＶ）：２１０nm
クロマトグラフィー法は、ＤＴＰＡ残基中のＲＳ立体中心によりジアステレオ異性体と関連している、ほぼ等率の２個のピークを示した。
元素分析 C H N Li,Cl
計算値（％）： 57.60 7.78 6.55
実測値（％）： 54.34 7.81 6.19 ＜0.1 H₂O 5.12%
ＩＲ、ＮＭＲ及びＭＳスペクトルは、示された構造と一致した。
【０２０４】
実施例１３
ナトリウム（１：３）で塩化した〔３α（Ｓ），５β，７α，１２α〕−３−〔〔〔〔５−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−５−カルボキシペンチル〕アミノ〕カルボニル〕オキシ〕−７，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸のガドリニウム錯体
【０２０５】
【化７０】

【０２０６】
Ａ）〔３α（Ｓ），５β，７α，１２α〕−３−〔〔〔〔６−（１，１−ジメチルエトキシ）−５−〔ビス〔２−〔ビス〔２−（１，１−ジメチルエトキシ）−２−オキソエチル〕アミノ〕エチル〕アミノ〕−６−オキソヘキシル〕アミノ〕カルボニル〕オキシ〕−７，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸メチルエステル
方法１：
無水ＣＨ₂Ｃｌ₂（４０mL）中のビス（トリクロロメチル）カルボナート（２．９ｇ；９．７mmol）の溶液を、無水ＣＨ₂Ｃｌ₂（１００mL）中の（３α，５β，７α，１２α）−３，７，１２−トリヒドロキシコラン−２４−酸メチルエステル（市販製品）（１０．０ｇ；２３．７mmol）及びピリジン（２．３mL；２８．４mmol）の０℃に冷却した溶液に、窒素下で滴下して加えた。次に混合物を温め、室温で１時間後、溶液を再び０℃に冷却し、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（７．９mL；４７．３mmol）を加え、次に無水ＣＨ₂Ｃｌ₂（５０mL）中のＮ²，Ｎ²−ビス〔２−〔ビス〔２−（１，１−ジメチルエトキシ）−２−オキソエチル〕アミノ〕エチル〕−Ｌ−リシン（１，１−ジメチルエチル）エステル（Anelli, P. L. et al., Bioconjugate Chem. 1999, 10, 137）（１７．６ｇ；２３．７mmol）の溶液を滴下して加えた。溶液を室温で３時間撹拌し、次にＨ₂Ｏ（２×１００mL）で洗浄し、Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥し、蒸発させた。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィーで精製して、所望の生成物（１４．８ｇ；１２．４mmol）を得た。
収率：５２％
¹Ｈ−ＮＭＲ、¹³Ｃ−ＮＭＲ、ＩＲ及びＭＳスペクトルは、示された構造と一致した。
【０２０７】
方法２：
無水ＣＨ₂Ｃｌ₂（１５０mL）中の〔３α，５β，７α，１２α〕−３−〔（クロロカルボニル）オキシ〕−７，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸メチルエステル（Janout, V., Lanier, M.; Regen, S. L. J. Am. Chem. Soc. 1997, 119, 640）（６．１ｇ；１２．６mmol）の溶液を窒素下で０℃に冷却し、次にＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（４．８mL；２７．６mmol）を加えた。次に無水ＣＨ₂Ｃｌ₂（５０mL）中のＮ²，Ｎ²−ビス〔２−〔ビス〔２−（１，１−ジメチルエトキシ）−２−オキソエチル〕アミノ〕エチル〕−Ｌ−リシン（１，１−ジメチルエチル）エステル（９．３ｇ；１２．６mmol）の溶液を滴下して加えた。溶液を室温で３時間撹拌し、次にＨ₂Ｏ（２×１００mL）で洗浄し、Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥し、蒸発させた。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィーで精製して、所望の生成物（１１．９ｇ；９．９mmol）を得た。
収率：７９％
¹Ｈ−ＮＭＲ、¹³Ｃ−ＮＭＲ、ＩＲ及びＭＳスペクトルは、示された構造と一致した。
【０２０８】
Ｂ）〔３α（Ｓ），５β，７α，１２α〕−３−〔〔〔〔５−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−５−カルボキシペンチル〕アミノ〕カルボニル〕オキシ〕−７，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸
２M ＬｉＯＨ水溶液（１４１mL）を、１，４−ジオキサン（１４１mL）中のＡ）の化合物（１１．２ｇ；９．４mmol）の溶液に、室温で滴下して加えた。１０４時間後、溶液を濃縮（１５０mL）し、２M ＨＣｌ水溶液（１７５mL）に滴下して加えた。最終ｐＨは１．９であった。沈殿物を濾過し、Ｈ₂Ｏ（５×５０mL）で洗浄し、真空乾燥した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィーで精製した。得られた固体を、１０％ＣＨ₃ＣＮ水溶液に溶解し、濃ＨＣｌを加えてｐＨを１に調整し、溶液をAmberlite（登録商標）XAD 16.00樹脂カラム（２５０mL）に装填し、ＣＨ₃ＣＮ/Ｈ₂Ｏ勾配で溶離した。生成物を含有する画分を蒸発させて、所望の生成物（４．３ｇ；４．８mmol）を得た。

¹Ｈ−ＮＭＲ、¹³Ｃ−ＮＭＲ、ＩＲ及びＭＳスペクトルは、示された構造と一致した。
【０２０９】
Ｃ）ナトリウム（１：３）で塩化した〔３α（Ｓ），５β，７α，１２α〕−３−〔〔〔〔５−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−５−カルボキシペンチル〕アミノ〕カルボニル〕オキシ〕−７，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸のガドリニウム錯体
工程Ｂ）で調製した化合物（４．７ｇ；５．２mmol）を、Ｈ₂Ｏ（１００mL）に懸濁し、１M ＮａＯＨ（１０mL）を、ｐＨが６．５になるまで加えて溶解した。１M ＮａＯＨ（１５．６mL）でｐＨ６．５に保持しながら、Ｈ₂Ｏ（１７mL）中のＧｄＣｌ₃（１．９ｇ；５．２mmol）の溶液を加えた。室温で１時間後、溶液をAmberlite（登録商標）XAD 16.00樹脂カラム（２５０mL）に装填し、それをＣＨ₃ＣＮ/Ｈ₂Ｏ勾配で溶離した。生成物を含有する画分を蒸発させて、所望の生成物（４．２ｇ；３．８mmol）を得た。
収率：７２％融点：＞３００℃
Ｋ．Ｆ．：９．４９％
〔α〕²⁰ _D＝＋２．６３（ｃ２、Ｈ₂Ｏ）
ＨＰＬＣアッセイ：１００％（面積％）（工程Ｂと同一の方法）
元素分析 C H N Gd Na Cl
計算値（％）： 46.15 5.75 5.00 14.05 6.17
実測値（％）： 41.80 6.28 4.54 12.64 5.73 ＜0.1
¹Ｈ−ＮＭＲ、¹³Ｃ−ＮＭＲ、ＩＲ及びＭＳスペクトルは、示された構造と一致した。
【０２１０】
実施例１４
ナトリウム（１：３）で塩化した〔３β（Ｓ），５β，１２α〕−３−〔〔４−〔〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕（カルボニルメチル）アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸のマンガン錯体
【０２１１】
【化７１】

【０２１２】
Ａ）〔３β（Ｓ），５β，１２α〕−３−〔〔４−アミノ−５−メトキシ−１，５−ジオキソペンチル〕アミノ〕−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸メチルエステル
５％Ｐｄ／Ｃ３．４ｇを、ＭｅＯＨ（３４０mL）中の〔３β（Ｓ），５β，１２α〕−３−〔〔５−メトキシ−１，５−ジオキソ−４−〔〔（フェニルメトキシ）カルボニル〕アミノ〕ペンチル〕アミノ〕−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸メチルエステル（実施例５、Ｂ）の化合物）（３４．１４ｇ；５０mmol）の溶液に加えた。懸濁液を水素雰囲気下に室温で３．５時間撹拌した。Millipore(登録商標)フィルタＦＨ（０．４５μm）を通して濾過した後、溶液を蒸発乾固させて、所望の生成物（２７．１ｇ；４９．３mmol）を得た。
収率：９８．６％
損失重量（５０℃；高真空）：＜０．１％
元素分析ＣＨＮ
計算値（％）：６７．８５９．５５５．１０
実測値（％）：６８．５８９．７２５．１２
〔α〕²⁰ _D＝＋３６．６１（ｃ２．０１；ＣＨＣｌ₃）
酸性滴定濃度（０．１M ＨＣｌ）：９４．６％
¹Ｈ−ＮＭＲ、¹³Ｃ−ＮＭＲ、ＩＲ及びＭＳスペクトルは、示された構造と一致した。
【０２１３】
Ｂ）〔３β（Ｓ），５β，１２α〕−３−〔〔４−〔〔２−〔ビス〔２−（１，１−ジメチルエトキシ）−２−オキソエチル〕アミノ〕エチル〕〔２−（１，１−ジメチルエトキシ）−２−オキソエチル〕アミノ〕−５−メトキシ−１，５−ジオキソペンチル〕アミノ〕−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸メチルエステル
工程Ａ）で調製した化合物（１６．０ｇ；２９．１mmol）及びＮ−（２−ブロモエチル）−Ｎ−〔２−（１，１−ジメチルエトキシ）−２−オキソエチル〕グリシン１，１−ジメチルエチルエステル（１３．３ｇ；３７．８mmol）（ＷＯ−Ａ−９５／３２７４１の実施例１５に記載された方法に従って調製した）を、ＥｔＯＡｃ（１２０mL）に溶解した。２Mリン酸塩緩衝液ｐＨ８（１２０mL）を加えた後、混合物を２時間激しく撹拌し、次に水相を新たな２Mリン酸塩緩衝液ｐＨ８（１２０mL）と交換して、更に７０時間撹拌した。混合物を１２時間４０℃に温め、室温に冷却し、分離し、有機相を蒸発させ、残渣を得て、それをＣＨ₂Ｃｌ₂（１５０mL）に溶解し、水（２×１００mL）で洗浄し、Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥し、蒸発させた。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィーで精製して、所望の生成物（１２．３ｇ；１５．０mmol）を得た。
収率：５２％
元素分析ＣＨＮ
計算値（％）：６５．９０９．４６５．１２
実測値（％）：６５．９９９．７２５．０３
ＴＬＣ：固定相：シリカゲルプレート 60F 254 Merck
溶離剤：１：１ＥｔＯＡｃ/ｎ−へキサンＲ_f＝０．４０
検出：１M ＮａＯＨ中１％ＫＭｎＯ₄
¹Ｈ−ＮＭＲ、¹³Ｃ−ＮＭＲ、ＩＲ及びＭＳスペクトルは、示された構造と一致した。
【０２１４】
Ｃ）〔３β（Ｓ），５β，１２α〕−３−〔〔４−〔〔２−〔ビス〔２−（１，１−ジメチルエトキシ）−２−オキソエチル〕アミノ〕エチル〕〔２−（１，１−ジメチルエトキシ）−２−オキソエチル〕アミノ〕−５−メトキシ−１，５−ジオキソペンチル〕アミノ〕−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸メチルエステル
tert−ブチルブロモアセタート（３．９ｇ；２０．１mmol）を、ＣＨ₂ＣＮ中の工程Ｂ）で調製した化合物（１１．０ｇ；１３．４mmol）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（３．５mL；２０．１mmol）の溶液に滴下して加えた。混合物を室温で２４時間撹拌し、次に更なるＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．９mL；４．０mmol）及びtert−ブチルブロモアセタート（０．８ｇ；４．０mmol）を加えた。混合物を更に７０時間撹拌し、分離し、有機相を蒸発させて、残渣を得て、それをＣＨ₂Ｃｌ₂（１５０mL）に溶解し、水（２×１００mL）で洗浄し、Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥し、蒸発させた。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィーで精製して、所望の生成物（１０．７ｇ；１１．５mmol）を得た。
収率：８５％
元素分析ＣＨＮ
計算値（％）：６５．５７９．３９４．５０
実測値（％）：６６．２７９．６２４．５２
ＴＬＣ：固定相：シリカゲルプレート 60F 254 Merck
溶離剤：１：１ＥｔＯＡｃ/ｎ−へキサンＲ_f＝０．４６
検出：１M ＮａＯＨ中１％ＫＭｎＯ₄
¹Ｈ−ＮＭＲ、¹³Ｃ−ＮＭＲ、ＩＲ及びＭＳスペクトルは、示された構造と一致した。
【０２１５】
Ｄ)〔３β（Ｓ），５β，１２α〕−３−〔〔４−〔〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕（カルボキシメチル）アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸
２M ＬｉＯＨ水溶液（１２０mL）を、１，４−ジオキサン（１２０mL）中の工程Ｃ）で調製した化合物（９．２ｇ；９．８mmol）の溶液に、室温で滴下して加えた。２４時間後、溶液を濃縮（１００mL）し、２M ＨＣｌ水溶液（１３５mL）に滴下して加えた。最終ｐＨは１．９であった。沈殿物を濾過し、Ｈ₂Ｏ（５×５０mL）で洗浄し、真空乾燥して、所望の生成物（７．３ｇ；９．６mmol）を得た。

¹Ｈ−ＮＭＲ、¹³Ｃ−ＮＭＲ、ＩＲ及びＭＳスペクトルは、示された構造と一致した。
【０２１６】
Ｅ）ナトリウム（１：３）で塩化した〔３β（Ｓ），５β，１２α〕−３−〔〔４−〔〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕（カルボキシメチル）アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸のマンガン錯体
工程Ｄ）で調製した化合物（５．３ｇ；７．２mmol）をＨ₂Ｏ（２５０mL）に懸濁し、１M ＮａＯＨ（３６mL）をｐＨが６．５になるまで加えて溶解した。１M ＮａＯＨ（７．９mL）でｐＨを６．５に保持しながら、Ｈ₂Ｏ（５０mL）中のＭｎＣｌ₂・４Ｈ₂Ｏ（１．４ｇ；７．２mmol）の溶液を加えた。室温で１時間後、溶液をナノ濾過により脱塩し、次に蒸発させて所望の生成物を得た。

ＩＲ及びＭＳスペクトルは、示された構造と一致した。
【０２１７】
同様にして、実施例２のＢ）の化合物から出発して、〔３β（Ｓ），５β〕−３−〔〔４−〔〔２−〔〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕−（カルボニルメチル）アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕−１２−オキソコラン−２４−酸のガドリニウム錯体を調製した。
【０２１８】
実施例１５
ナトリウム（１：３）で塩化した〔３α（Ｓ），５β，１２α〕−３−〔〔〔〔５−〔〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕（カルボキシメチル）アミノ〕−５−カルボキシペンチル〕アミノ〕カルボニル〕オキシ〕−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸のマンガン錯体
【０２１９】
【化７２】

【０２２０】
Ａ）Ｎ²−〔２−〔ビス〔２−（１，１−ジメチルエトキシ）−２−オキソエチル〕アミノ〕エチル〕−Ｎ²−〔２−（１，１−ジメチルエトキシ）−２−オキソエチル〕−Ｎ⁶−〔（フェニルメトキシ）カルボニル〕−Ｌ−リシンメチルエステル
ＣＨ₂ＣＮ（２５ml）に溶解したＮ−（２−ブロモエチル）−Ｎ−〔２−（１，１−ジメチルエトキシ）−２−オキソエチル〕グリシン１，１−ジメチルエチルエステル（ＷＯ−Ａ−９５／３２７４１の実施例１５に記載された方法に従って調製した）（２５．６ｇ；７２．５５mmol）を、ＣＨ₃ＣＮ（２５０mL）中のＮ⁶−〔（フェニルメトキシ）カルボニル〕−Ｌ−リシンメチルエステル塩酸塩（２０ｇ；６０．４６mmol）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１２．６４mL；７２．５５mmol）の溶液に滴下して加えた。反応混合物を室温で撹拌した。５日後、更なるＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１７．７mL；１０１．６mmol）及びtert−ブチルブロモアセタート（１８．８ｇ；１３．５mL；１０１．６mmol）を溶液に加えた。２４時間後、溶媒を蒸発させ、残渣をＥｔ₂Ｏ（２００mL）で処理した。混合物を濾過し、溶液を０．１M ＨＣｌ（２×１００mL）で洗浄し、Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥し、減圧下に蒸発させた。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィーで精製して、所望の生成物（１３．０３ｇ；１９．２mmol）を得た。
収率：３２％
Ｋ．Ｆ．：＜０．１％
〔α〕²⁰ _D＝−２２．４７（ｃ１．９３、ＣＨＣｌ₃）
元素分析ＣＨＮ
計算値（％）：６１．８３８．４５６．１８
実測値（％）：６１．７０８．５２５．８４
ＴＬＣ：固定相：シリカゲルプレート 60F 254 Merck
溶離剤：３：７ＥｔＯＡｃ/ｎ−へキサンＲ_f＝０．４０
検出：１０％Ｈ₂ＳＯ₄中のＣｅ（ＳＯ₄）₂・４Ｈ₂Ｏ（０．１８％）及び（ＮＨ₄）₆Ｍｏ₇Ｏ₂₄・４Ｈ₂Ｏ（３．８３％）
¹Ｈ−ＮＭＲ、¹³Ｃ−ＮＭＲ、ＩＲ及びＭＳスペクトルは、示された構造と一致した。
【０２２１】
Ｂ）（３α，５β，７α，１２α）−３−〔（クロロカルボニル）オキシ〕−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸メチルエステル
注意：操作はすべて十分に換気されたヒュームフードの下で実施されなければならない。
トルエン（１００mL；２０２．２mmol）中のホスゲンの２０％溶液を、無水ＣＨ₂Ｃｌ₂（３５０mL）中の（３α，５β，７α，１２α）−３，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸メチルエステル（１４．７ｇ；３６mmol）の０℃に冷却した溶液に窒素下で滴下して加えた。溶液を室温で３時間撹拌し、次に蒸発（注意）させ、所望の生成物（１５．２ｇ；３２．４mmol）を得た。
収率：９０％
¹Ｈ−ＮＭＲ、¹³Ｃ−ＮＭＲ、ＩＲ及びＭＳスペクトルは、示された構造と一致した。
【０２２２】
Ｃ）〔３α（Ｓ），５β，１２α〕−３−〔〔〔〔５−〔〔２−〔ビス〔２−（１，１−ジメチルエトキシ）−２−オキソエチル〕アミノ〕エチル〕〔２−（１，１−ジメチルエトキシ）−２−オキソエチル〕アミノ〕−６−メトキシ−６−オキソヘキシル〕アミノ〕カルボニル〕オキシ〕−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸メチルエステル
５％Ｐｄ／Ｃ（１．３ｇ）を、ＭｅＯＨ（１２０mL）中の工程Ａ）で調製した化合物（１２．３ｇ；１８．１mmol）の溶液に加え、懸濁液を水素雰囲気下に室温で３時間撹拌した。Millipore（登録商標）フィルタ（ＦＴ０．４５μm）を通して濾過し、溶液を減圧下に蒸発させた。粗生成物を無水ＣＨ₂Ｃｌ₂（２０mL）に溶解し、無水ＣＨ₂Ｃｌ₂（２００mL）中の工程Ｂ）で調製した化合物（８．７ｇ；１８．５４mmol）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）（６．５mL；３７．０７mmol）の溶液に、窒素雰囲気下に０℃で滴下して加えた。３時間後、反応混合物をＨ₂Ｏ（２×１００mL）で洗浄し、有機相を分離し、Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥し、減圧下に蒸発させた。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィーで精製して、所望の生成物（８．６ｇ；８．８mmol）を得た。
収率：４９％
Ｋ．Ｆ．：＜０．１％
元素分析ＣＨＮ
計算値（％）：６５．０７９．３８４．３０
実測値（％）：６５．６７９．５２４．２４
ＴＬＣ：固定相：シリカゲルプレート 60F 254 Merck
溶離剤：３：７ＥｔＯＡｃ/ｎ−へキサンＲ_f＝０．３０
検出：１０％Ｈ₂ＳＯ₄中のＣｅ（ＳＯ₄）₂・４Ｈ₂Ｏ（０．１８％）及び（ＮＨ₄）₆Ｍｏ₇Ｏ₂₄・４Ｈ₂Ｏ（３．８３％）
¹Ｈ−ＮＭＲ、¹³Ｃ−ＮＭＲ、ＩＲ及びＭＳスペクトルは、示された構造と一致した。
【０２２３】
Ｄ）〔３α（Ｓ），５β，１２α〕−３−〔〔〔〔５−〔〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕（カルボキシメチル）アミノ〕−５−カルボキシペンチル〕アミノ〕カルボニル〕オキシ〕−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸２M ＬｉＯＨ（１３３mL；２６６mmol）を、１，４−ジオキサン（１３０mL）中の工程Ｃ）で調製した化合物（８．５ｇ；１０．６４mmol）の溶液に加えた。得られた溶液を室温で２４時間撹拌し、次に２N ＨＣｌ（１２０mL）を加えてｐＨ７に中和した。溶液を減圧下に蒸発させて半分の容量に濃縮し、激しく撹拌しながらｐＨ１．５に非常にゆっくりと酸性化して、白色の沈殿物を得て、それを濾過し、Ｈ₂Ｏ（２×１００mL）で洗浄し、乾燥して、所望の生成物（６．４５ｇ；８．１３mmol）を得た。

¹Ｈ−ＮＭＲ、¹³Ｃ−ＮＭＲ、ＩＲ及びＭＳスペクトルは、示された構造と一致した。
【０２２４】
Ｅ）ナトリウム（１：３）で塩化した〔３α（Ｓ），５β，１２α〕−３−〔〔〔〔５−〔〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕（カルボキシメチル）アミノ〕−５−カルボキシペンチル〕アミノ〕カルボニル〕オキシ〕−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸のマンガン錯体
工程Ｄ）で調製した化合物（５ｇ；６．３mmol）をＨ₂Ｏ（５０mL）に懸濁し、１M ＮａＯＨ（１８mL；１８mmol）を加えて溶解した。１M ＮａＯＨ（７．８mL）でｐＨ６．５に保持しながら、ＭｎＣｌＯ₂（１１．２７mL；６．３mmol）の０．５５９M水溶液を３時間かけて加えた。１M ＮａＯＨ（０．９mL；０．９mmol）で溶液をｐＨ６．８に調整し、濾過（ＨＡ０．４５μm Millipore（登録商標）膜）し、ナノ濾過により脱塩した。溶液を蒸発させ、乾燥して、所望の生成物（５．４５ｇ；６．０５mmol）を得た。

ＩＲ及びＭＳスペクトルは、示された構造と一致した。
【０２２５】
実施例１６
ナトリウム（１：３）で塩化したＮ²−ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕−Ｎ−〔（３β，５β，７α，１２α）−７，１２−ジヒドロキシ−２４−オキソ−２４−〔（２−スルホエチル）アミノ〕コラン−３−イル〕−Ｌ−グルタミンのガドリニウム錯体
【０２２６】
【化７３】

【０２２７】
Ａ）〔３β（Ｓ），５β，７α，１２α〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス〔２−（１，１−ジメチルエトキシ）−２−オキソエチル〕アミノ〕エチル〕アミノ〕−５−（１，１−ジメチルエトキシ）−１，５−ジオキソペンチル〕アミノ〕−７，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸フェニルメチルエステル
Ｎ，Ｎ−ビス〔２−〔ビス〔２−（１，１−ジメチルエトキシ）−２−オキソエチル〕アミノ〕エチル〕−Ｌ−グルタミン酸１−（１，１−ジメチルエチル）エステル（Anelli, P. L. et at., Bioconjugate Chem. 1999, 10, 137）（３７ｇ；５０mmol）、（３β，５β，７α，１２α）−３−アミノ−７，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸フェニルメチルエステル（Anelli, P. L.; Lattuada, L.; Uggeri, F. Synth. Commun. 1998, 28, 109）（３１ｇ；５５mmol）及びジエチルシアノホスホナート（市販製品）（９．６ｇ；５５mmol；９．２mL）をＤＭＦ（７５０mL）に溶解した。得られた溶液を０℃に冷却し、Ｅｔ₃Ｎ（７．３mL）を滴下して加えた。室温で１時間後、溶液を減圧下に蒸発させ、残渣をＥｔＯＡｃ（３００mL）に溶解し、５％ＮａＨＣＯ₃水溶液（２×２００mL）、次にブライン（２×２００mL）で洗浄した。有機相を分離し、Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥し、次に減圧下に蒸発させた。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィーで精製して、所望の生成物（３６ｇ；２９mmol）を得た。
収率：５８％
Ｋ．Ｆ．：０．９８％
元素分析ＣＨＮ
計算値（％）：６５．６４９．２１４．５７
実測値（％）：６６．３１９．２０４．５１
ＴＬＣ：固定相：シリカゲルプレート 60F 254 Merck
溶離剤：２：８＝ＥｔＯＡｃ/ｎ−へキサンＲ_f＝０．３
検出：ＡｃＯＨ/濃Ｈ₂ＳＯ₄/ｐ−アニスアルデヒド＝１００：２：１
¹Ｈ−ＮＭＲ、¹³Ｃ−ＮＭＲ、ＩＲ及びＭＳスペクトルは、示された構造と一致した。
【０２２８】
Ｂ）〔３β（Ｓ），５β，７α，１２α〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス〔２−（１，１−ジメチルエトキシ）−２−オキソエチル〕アミノ〕エチル〕アミノ〕−５−（１，１−ジメチルエトキシ）−１，５−ジオキソペンチル〕アミノ〕−７，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸トリエチルアンモニウム塩
５％Ｐｄ／Ｃ（３．６ｇ）を、ＥｔＯＨ（１．５L）中の工程Ａ）で調製した化合物（３６ｇ；２９．４mmol）の溶液に加え、懸濁液を水素雰囲気下に室温で３時間撹拌した。濾過（Millipore（登録商標）フィルタＦＴ０．４５μmを通して）した後、溶液を減圧下に蒸発させた。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィーで精製して、所望の生成物（２２ｇ；１８mmol）を得た。
収率：６０％融点：５８℃
Ｋ．Ｆ．：１．３４％
元素分析ＣＨＮ
計算値（％）：６５．０７９．８６５．６６
実測値（％）：６４．３４１０．０７５．４８
ＴＬＣ：固定相：シリカゲルプレート 60F 254 Merck
溶離剤：１：５：９５＝Ｅｔ₃Ｎ/ＭｅＯＨ/ＣＨ₂Ｃｌ₂ Ｒ_f＝０．３３
検出：ＡｃＯＨ/濃Ｈ₂ＳＯ₄/ｐ−アニスアルデヒド＝１００：２：１
¹Ｈ−ＮＭＲ、¹³Ｃ−ＮＭＲ、ＩＲ及びＭＳスペクトルは、示された構造と一致した。
【０２２９】
Ｃ）Ｎ²−ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕−Ｎ−〔（３β，５β，７α，１２α）−７，１２−ジヒドロキシ−２４−オキソ−２４−〔（２−スルホエチル）アミノ〕コラン−３−イル〕−Ｌ−グルタミン
Ｅｔ₃Ｎ（１．２ｇ；１２mmol；１．７mL）を、ＤＭＦ（４００mL）中のＢ）の化合物（１２．５ｇ；１１mmol）、２−アミノエタンスルホン酸（市販製品）（１．５ｇ；１２mmol）及びジエチルシアノホスホナート（市販製品）（２．１ｇ；１２mmol；２mL）の溶液に、窒素下に０℃で滴下して加えた。２０分後、反応混合物を室温に上昇させ、３時間撹拌した。溶液を減圧下に蒸発させて、残渣をジオキサン（２５０mL）に溶解し、０．５M Ｈ₂ＳＯ₄水溶液（２５０mL、１２５mmol）を滴下して加えた。得られた混合物を９０℃で２時間加熱した。溶液のｐＨを、２N ＮａＯＨにより１．４から７に調整し、溶媒を減圧下に蒸発させた。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィーで精製した。生成物をＨ₂Ｏ（２５０mL）及び２N ＨＣｌ（１２．５mL）に溶解し、Amberlite（登録商標）XAD−16.00樹脂カラムを通してＣＨ₃ＣＮ/Ｈ₂Ｏ勾配で溶離することにより脱塩し、所望の生成物（１．５ｇ；１．５mmol）を得た。
収率：１４％融点：＞２００℃
Ｋ．Ｆ．：５．８７％
元素分析ＣＨＮＳ
計算値（％）：５３．６８７．４４７．２８３．３３実測値（％）：５０．３４７．７１６．６４２．９９¹Ｈ−ＮＭＲ、¹³Ｃ−ＮＭＲ、ＩＲ及びＭＳスペクトルは、示された構造と一致した。
【０２３０】
Ｄ）ナトリウム（１：３）で塩化したＮ²−ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕−Ｎ−〔（３β，５β，７α，１２α）−７，１２−ジヒドロキシ−２４−オキソ−２４−〔（２−スルホエチル）アミノ〕コラン−３−イル〕−Ｌ−グルタミンのガドリニウム錯体
Ｃ）の生成物（８８０mg；０．９１５mmol）をＨ₂Ｏ（５０mL）に溶解し、ｐＨ６．８になるまで１N ＮａＯＨを加えた。Ｇｄ₂Ｏ₃（１６５mg；０．４６mmol）を加え、得られた懸濁液を５０℃で６時間加熱した。反応混合物を、Millipore（登録商標）装置（ＨＡ０．４５μmフィルタ）を通して濾過し、濾液を、Dowex（登録商標）CCR 3LB弱カチオン交換樹脂カラム（Ｎａ⁺形態、２０mL）に装填した。溶離剤を減圧下に蒸発させ、乾燥して、所望の生成物（１．００ｇ；０．７５mmol）を得た。
収率：８２％融点：＞２５０℃
Ｋ．Ｆ．：１３．９５％
ＨＰＬＣアッセイ：１００％（面積％）
固定相：Lichrospher 100 RP-8 ５μm；２５０×４mmカラム
Merck KGaAにより充填
温度：４０℃
移動相：プレミックス移動相によるアイソクラチック溶出：
ｎ−オクチルアミン１ｇを、水７００mLと混合したアセトニトリル３０
０mLに加える。溶液をＨ₃ＰＯ₄でｐＨ６に緩衝する。
流速：１mL/分
検出（ＵＶ）：２００nm
元素分析 C H N S Gd Na
計算値（％）：43.78 5.54 5.92 2.71 13.30 5.83
実測値（％）：36.82 6.04 5.11 2.18 10.64 5.35
ＩＲ及びＭＳスペクトルは、示された構造と一致した。
【０２３１】
同様にして、Ｎ²−ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕−Ｎ−〔（３β，５β）−２４−オキソ−２４−〔（２−スルホエチル）アミノ〕コラン−３−イル〕−Ｌ−グルタミンのガドリニウム錯体を調製した。
【０２３２】
実施例１７
ナトリウム（１：３）で塩化した〔３α（Ｓ），５β〕−３−〔２−〔〔５−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕−エチル〕アミノ〕−５−カルボキシペンチル〕−アミノ〕−２−オキソエトキシ〕コラン−２４−酸のガドリニウム錯体
【０２３３】
【化７４】

【０２３４】
Ａ）（３α，５β）−３−（カルボキシメトキシ）コラン−２４−酸メチルエステル
ベンジルグリコラートトリフラート（Williams, M. A.; Rapoport, H. J. Org. Chem. 1994, 59, 3616）（１６．８ｇ；５６．３mmol）を、無水ＣＨ₃ＣＮ（４００mL）中の（３α，５β）−３−ヒドロキシコラン−２４−酸メチルエステル（Dayal, B. et al., Steroids 1981, 37, 239）（２０ｇ；５１．２mmol）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１０mL；５７．４mmol）の撹拌溶液に−２０℃で１５分間かけて加えた。−２０℃で４時間後、混合物を室温に温め、更に４時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残渣をＥｔＯＡｃ（３００mL）と飽和ＮａＨＣＯ₃（３００mL）に分配した。有機相をＮａ₂ＳＯ₄で乾燥し、蒸発させた。残渣をＥｔＯＨ（２００mL）に溶解し、次に５％Ｐｄ／Ｃ（３ｇ）を加え、混合物を水素雰囲気下に室温で５時間撹拌した。Millipore（登録商標）フィルタＦＨ（０．４５μm）を通して濾過した後、溶液を蒸発させ、残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製して、所望の生成物（１４．２ｇ；３１．７mmol）を得た。
収率：６２％
Ｋ．Ｆ．：＜０．１
元素分析ＣＨ
計算値（％）：７２．２８９．８９
実測値（％）：７１．９７９．８１
¹Ｈ−ＮＭＲ、¹³Ｃ−ＮＭＲ、ＩＲ及びＭＳスペクトルは、示された構造と一致した。
【０２３５】
Ｂ）〔３α（Ｓ），５β〕−３−〔２−〔〔５−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕−エチル〕アミノ〕−５−カルボキシペンチル〕アミノ〕−２−オキソエトキシ〕コラン−２４−酸
Ｎ²，Ｎ²−ビス〔２−〔ビス〔２−（１，１−ジメチルエトキシ）−２−オキソエチル〕アミノ〕エチル〕−Ｌ−リシン（１，１−ジメチルエチル）エステル（Anelli, P. L. et al., Bioconjugate Chem. 1999, 10, 137）（１８．５６ｇ；２５mmol）、（１８．６ｇ；２５mmol）、Ａ）の化合物（１１．２ｇ；２５mmol）及び及びジエチルシアノホスホナート（市販製品）（４．９ｇ；２８mmol）をＤＭＦ（３００mL）に溶解した。得られた溶液を０℃に冷却し、Ｅｔ₃Ｎ（４mL）を滴下して加えた。室温で６時間後、溶液を減圧下に蒸発させ、残渣をＥｔＯＡｃ（２５０mL）に溶解し、５％ＮａＨＣＯ₃水溶液（２×１００mL）、次にブライン（２×１００mL）で洗浄した。有機相を分離し、Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥し、次に減圧下に蒸発させた。残渣をジオキサン（３００mL）に溶解し、０．５M Ｈ₂ＳＯ₄水溶液（３００mL；１５０mmol）を滴下して加えた。得られた混合物を９０℃で２時間加熱した。溶液のｐＨを２N ＮａＯＨで７に調整し、溶媒を減圧下に蒸発させた。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィーで精製した。生成物をＨ₂Ｏ（３００mL）及び２N ＨＣｌ（３０ml）に溶解し、Amberlite（登録商標）XAD−16.00樹脂カラムを通してＣＨ₃ＣＮ/Ｈ₂Ｏの勾配で溶離することにより脱塩し、所望の生成物（９．０３ｇ；１０．２５mmol）を得た。
収率：４１％
Ｋ．Ｆ．：２．７８％
元素分析ＣＨＮ
計算値（％）：５９．９８８．２４６．３６
実測値（％）：５８．１１８．２８６．１４
¹Ｈ−ＮＭＲ、¹³Ｃ−ＮＭＲ、ＩＲ及びＭＳスペクトルは、示された構造と一致した。
【０２３６】
Ｃ）ナトリウム（１：３）で塩化した〔３α（Ｓ），５β〕−３−〔２−〔〔５−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕−エチル〕アミノ〕−５−カルボキシペンチル〕アミノ〕−２−オキソエトキシ〕コラン−２４−酸のガドリニウム錯体
ｐＨが６．８になるまで１N ＮａＯＨを加えて、Ｂ）の生成物（５ｇ；５．６７mmol）をＨ₂Ｏ（２００mL）に溶解した。Ｇｄ₂Ｏ₃（１．０３ｇ；２．８４mmol）を加え、得られた懸濁液を５０℃で８時間加熱した。反応混合物を、Millipore（登録商標）装置（ＨＡ０．４５μmフィルタ）を通して濾過し、濾液を減圧下に蒸発させ、乾燥して、所望の生成物（５．７４ｇ；５．２１mmol）を得た。
収率：９２％融点：＞２５０℃
Ｋ．Ｆ．：５．８１％
元素分析 C H N Gd Na
計算値（％）： 47.99 6.04 5.09 14.28 6.26
実測値（％）： 45.09 6.15 4.77 13.39 5.81
ＩＲ及びＭＳスペクトルは、示された構造と一致した。
【０２３７】
同様にして、実施例１５のＡ）の化合物から出発して、〔３α（Ｓ），５β〕−３−〔２−〔〔５−〔〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕−エチル〕（カルボキシメチル）アミノ〕−５−カルボキシペンチル〕−アミノ〕−２−オキソエトキシ〕コラン−２４−酸のガドリニウム錯体を調製した。
【０２３８】
同様にして、実施例１５のＡ）の化合物及び（３β，５β，７α，１２α）−３−〔（３−カルボキシ−１−オキソプロピル）アミノ〕−７，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸メチルエステル（ＷＯ−Ａ−９５／３２７４１の実施例１２に記載された方法に従って調製した）から出発して、〔３β（Ｓ），５β，７α，１２α〕−３−〔〔４−〔〔５−〔〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕−エチル〕（カルボキシメチル）アミノ〕−５−カルボキシペンチル〕アミノ〕−１，４−ジオキソブチル〕アミノ〕−７，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸のガドリニウム錯体を調製した。
【０２３９】
実施例１８
弛緩率（Δ１/Ｔ₁）の測定
本発明の化合物の血液プール剤としての効能を、縦弛緩率１/Ｔ₁の推移に対する投与後の経過時間をプロットして評価した。一定時間に採取された血液試料のプロトン弛緩率１/Ｔ₁を、「反転回復」の３個の連続パラメータを使用して、Brucker Minispec PC 120装置により３９℃で測定した。
【０２４０】
実施例１で調製した化合物、１−デオキシ−１−（メチルアミノ）−Ｄ−グルシトール（１：３）で塩化した〔３β（Ｓ），５β〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕コラン−２４−酸のガドリニウム錯体を、ウサギに０．１mmol/kgの用量で投与した。ダイアグラム（図１）は、弛緩率のプロフィールを表す。
【０２４１】
特許明細書ＷＯ９５／３２７４１の実施例９で調製した化合物、１−デオキシ−１−（メチルアミノ）−Ｄ−グルシトール（１：２）で塩化した（３β，５β，７α，１２α）−３−〔〔Ｎ−〔Ｎ−〔２−〔〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕−Ｎ−（カルボキシメチル）グリシル〕グリシル〕アミノ〕−７，１２−ジヒドロキシ−コラン−２４−酸のガドリニウム錯体を、ウサギに０．１mmol/kgの用量で投与した。ダイアグラム（図２）は、弛緩率のプロフィールを表す。
【０２４２】
特許明細書ＷＯ９５／３２７４１の実施例１５で調製した化合物、１−デオキシ−１−（メチルアミノ）−Ｄ−グルシトール（１：３）で塩化した〔３β（Ｓ），５β，７α，１２α〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕−７，１２−ジヒドロキシ−コラン−２４−酸のガドリニウム錯体を、ウサギに０．１mmol/kgの用量で投与した。ダイアグラム（図３）は、弛緩率のプロフィールを表す。
【０２４３】
実施例４で調製した化合物、１−デオキシ−１−（メチルアミノ）−Ｄ−グルシトール（１：３）で塩化した〔３β（Ｓ），５β，１２α〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸のガドリニウム錯体を、ウサギに０．０５mmol/kgの用量で投与した。ダイアグラム（図４）は、弛緩率のプロフィールを表す。
【０２４４】
実施例１９
１−デオキシ−１−（メチルアミノ）−Ｄ−グルシトール（１：３）で塩化した〔３β（Ｓ），５β，１２α〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸のガドリニウム錯体の０．３M薬剤配合物
１−デオキシ−１−（メチルアミノ）−Ｄ−グルシトール（１：３）で塩化した〔３β（Ｓ），５β，１２α〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸のガドリニウム錯体（実施例４の例示と同様にして調製した）３１．７７５kg及びトロメタモール塩酸塩１００ｇを、ステンレススチール薬剤反応器中で無菌水１００Lに室温で溶解した。溶解した後、溶液のｐＨを、１Mトロメタモールを加えて７．４に調整した。溶液を、直径０．２２mmのフィルタを通して滅菌濾過し、２０mLのバイアルに分配し、それらをハロブチルプラグで閉め、アルミニウムリングで密閉し、ＦＯ＝１８で蒸気滅菌を行った。ＨＰＬＣは、０．２９４M滴定濃度を示した。
【０２４５】
実施例２０
実施例１９の配合物を含有する予備充填プラスチックシリンジ
実施例１９で調製した２０mLづつの溶液を、先端をキャップで閉じたＣＺプラスチックシリンジ中に配置した。真空下にピストンを装入し、予備充填シリンジをオートクレーブでＦＯ＝１８の値に滅菌した。
【図面の簡単な説明】
【図１】実施例１の化合物を投与した場合の弛緩率のプロフィールを表わす図である。
【図２】特許明細書ＷＯ９５／３２７４１の実施例９の化合物を投与した場合の弛緩率のプロフィールを表わす図である。
【図３】特許明細書ＷＯ９５／３２７４１の実施例１５の化合物を投与した場合の弛緩率のプロフィールを表わす図である。
【図４】実施例１の化合物を投与した場合の弛緩率のプロフィールを表わす図である。

Claims

核磁気共鳴によりヒト及び動物の体内の血管系の画像を得るための、Ｆｅ⁽²⁺⁾、Ｆｅ⁽³⁺⁾、Ｃｕ⁽²⁺⁾、Ｃｒ⁽³⁺⁾、Ｇｄ⁽³⁺⁾、Ｅｕ^(3+）、Ｄｙ⁽³⁺⁾、Ｙｂ⁽³⁺⁾又はＭｎ⁽²⁺⁾からなる群より選択される２〜３価常磁性金属イオンと、式（Ｉ）の化合物とのキレート化複合体、及び第一級アミン、第二級アミン、第三級アミンもしくは塩基性アミノ酸から選択される生理学的に適合性の有機塩基、又はナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウムもしくはそれらの混合物であるカチオンを有する無機塩基とのそれの塩を含む診断用製剤：
Ｘ−Ｌ−Ｙ（Ｉ）
｛式中、
Ｘは、エチレンジアミノ四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジエチレントリアミノ五酢酸（ＤＴＰＡ）、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸（ＤＯＴＡ）、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７−三酢酸（ＤＯ３Ａ）、〔１０−（２−ヒドロキシプロピル）−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７−トリ酢酸（ＨＰＤＯ３Ａ）、４−カルボキシ−５，８，１１−トリス（カルボキシメチル）−１−フェニル−２−オキサ−５，８，１１−トリアザトリデカン−１３−酸（ＢＯＰＴＡ）からなる群より選択されるポリアミノカルボキシルリガンドであり；
Ｙは、場合により、最終生成物の立体化学とは無関係に反応基としてのヒドロキシ基を有する位置においてそのヒドロキシ基のアミノ若しくはケト基への変換により官能化されていてもよいか、又はタウリン若しくはグリシンにより抱合された２４位の酸基を有してもよい、コール酸、ケノデオキシコール酸、デオキシコール酸、ウルソデオキシコール酸、リトコール酸

からなる群より選択される胆汁酸の誘導体であり；
Ｌは、下記式（II）

〔式中、
ｍは、１〜１０の範囲の整数であり、１より大きい値である場合には、Ａは異なる意味を有していてもよく、
Ａは、下記式（III）

〔ここで、ｎ及びｑは、０又は１でありうるが、同時にゼロではなく、
ｐは、０〜１０の範囲であってよく、
Ｚは、酸素原子又は−ＮＲ基〔ここで、Ｒは、水素原子、又は非置換型であるか、もしくは−ＣＯＯＨ基により置換された（Ｃ₁〜Ｃ₅）アルキル基である〕である〕を有する〕を有する、アミド基へと変換されるカルボキシル基の一つを場合により含む、Ｘの任意の位置と結合し、かつＹのＣ−３位、Ｃ−７位、Ｃ−１２位と結合した鎖である｝。
複合体がガドリニウムイオン又はマンガンイオンから形成される、請求項１記載の化合物を含む、診断用製剤。
スペーシング鎖Ｌが、下記式（IIIa）又は（IIIb）

を有する、請求項１記載の式（Ｉ）の化合物を含む、診断用製剤。
Ｚが酸素原子であり、それによりＬが最終生成物の立体化学とは無関係に３位、７位、１２位に存在するヒドロキシ基を介して形成される、請求項１記載の式（Ｉ）の化合物を含む、診断用製剤。
Ｘが、ＥＤＴＡ、ＤＴＰＡ、ＤＯＴＡ、ＤＯ３Ａ、ＢＯＰＴＡからなる群より選択され；Ｌが、（IIIa）又は（IIIb）

からなる群より選択され；Ｙが、３位のアミノ基によりＬと結合している、場合により一つ以上のヒドロキシ基がケト基へと変換されている、コール酸、デオキシコール酸、ケノデオキシコール酸、リトコール酸（これらの２４位の酸基は、場合によりタウリンもしくはグリシンと抱合し得る）からなる群より選択され；該化合物の複合体が、ガドリニウムイオンもしくはマンガンイオンから形成され、及び中和に適した有機塩基のカチオンが、エタノールアミン、ジエタノールアミン、モルホリン、グルカミン、Ｎ−メチルグルカミン、Ｎ，Ｎ−ジメチルグルカミンからなる群より選択されるか、又は無機塩基のカチオンが、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウムもしくはそれらの混合物からなる群より選択される、請求項１記載の式（Ｉ）の化合物を含む、診断用製剤。
式（Ｉ）の化合物中の残基Ｘが、中央鎖上で置換されたＤＴＰＡであり、その結果、一般式（IV）

（式中、Ｒ ₁ は、水素原子又は−ＣＯＯＨ基であり、Ｙは、コール酸、デオキシコール酸、ケノデオキシコール酸、リトコール酸からなる群より選択され、Ｌが、式（III）の構造を有する）の化合物が生じている、請求項１記載の診断用製剤。
式（IV）の化合物中のＲ₁が−ＣＯＯＨ基であり、その結果、一般式（IVa）

（式中、Ｙが一般式（IV）の化合物の場合と同義であり、Ｌが構造（IIIa）又は（IIIb）

を有する）の化合物が生じている、請求項６記載の診断用製剤。
一般式（IVa）の化合物が、
〔３β（Ｓ），５β〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソ−ブチル〕（カルボキシメチル）−アミノ〕−コラン−２４−酸；
〔３β（Ｓ），５β〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕コラン−２４−酸；
〔３β（Ｓ），５β〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕−１２−オキソコラン−２４−酸；
〔３β（Ｓ），５β，７α〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕−７−ヒドロキシコラン−２４−酸；
Ｎ²−ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕−Ｎ−〔（３β，５β）−２４−オキソ−２４−〔（２−スルホエチル）アミノ〕コラン−３−イル〕−Ｌ−グルタミン；
Ｎ²−ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕−Ｎ−〔（３β，５β，７α，１２α）−７，１２−ジヒドロキシ−２４−オキソ−２４−〔（２−スルホエチル）アミノ〕コラン−３−イル〕−Ｌ−グルタミン；
〔３β（Ｓ），５β，７β〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕−７−ヒドロキシコラン−２４−酸；
〔３β（Ｒ），５β，１２α〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸；
〔３β（ＲＳ），５β，１２α〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸；
〔３β（ＲＳ），５β，７α，１２α〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕−７，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸；
〔３β（Ｓ），５β，７α，１２α〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕−７，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸；
〔３α（Ｓ），５β〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕−エチル〕アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕−アミノ〕−コラン−２４−酸；
〔３β（Ｓ），５β，１２α〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕−エチル〕アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕−アミノ〕−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸；
〔３α（Ｓ），５β，１２α〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕−アミノ〕−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸；
からなる群より選択される、請求項７記載の診断用製剤。
式（IV）中のＲ ₁ が水素であり、その結果、一般式（IVb）

〔式中、Ｙは、コール酸、デオキシコール酸、ケノデオキシコール酸、リトコール酸からなる群より選択され、Ｌは構造（IIIa）

を有する〕の化合物が生じている、請求項６記載の診断用製剤。
一般式（IVb）の化合物が、
〔３β，５β，７α，１２α〕−３−〔〔〔ビス〔２−[ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕アセチル〕アミノ〕−７，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸；
〔３β，５β〕−３−〔〔〔〔〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕アセチル〕アミノ〕アセチル〕アミノ〕コラン−２４−酸；
〔３β，５β，７α，１２α〕−３−〔〔〔〔〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−アセチル〕アミノ〕アセチル〕アミノ〕−７，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸；
〔３β，５β，７α，１２α〕−３−〔〔６−〔〔〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−アセチル〕アミノ〕−１−オキソヘキシル〕アミノ〕−７，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸からなる群より選択される、請求項９記載の診断用製剤。
一般式（Ｉ）の化合物中の残基ＸがＤＴＰＡであり、その結果、一般式（Ｖ）

（式中、Ｙがコール酸、デオキシコール酸、ケノデオキシコール酸、リトコール酸からなる群より選択され、Ｌが式（IIIa）

の構造を有する）の化合物が生じている、請求項１記載の診断用製剤。
一般式（Ｖ）の化合物が、
（３β，５β，７α，１２α）−３−〔〔Ｎ−〔Ｎ−〔２−〔〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕−Ｎ−（カルボキシメチル）グリシル〕グリシル〕アミノ〕−７，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸；
１８−〔〔（３β，５β，７α，１２α〕−２３−カルボキシ−７，１２−ヒドロキシ−２４−ノルコラン−３−イル〕アミノ〕−３，６，９−トリス（カルボキシメチル）−１１，１８−ジオキソ−３，６，９，１２−テトラアザオクタデカン酸からなる群より選択される、請求項１１記載の診断用製剤。
一般式（Ｉ）の化合物中の残基ＸがＤＯ３Ａであり、その結果、一般式（VＩ）

（式中、Ｙがコール酸、デオキシコール酸、ケノデオキシコール酸、リトコール酸からなる群より選択され、Ｌが構造（IIIa）及び（IIIb）

から選択される）の化合物が生じている、請求項１記載の診断用製剤。
一般式（Ｉ）の化合物中の残基ＸがＥＤＴＡであり、その結果、一般式（VII）

（式中、Ｙがコール酸、デオキシコール酸、ケノデオキシコール酸、リトコール酸からなる群より選択され、Ｌが式（III）の構造を有する）の化合物が生じている、請求項１記載の診断用製剤。
一般式（VII）の化合物が、
〔３α（Ｓ），５β，１２α〕−３−〔〔〔〔５−〔〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕（カルボキシメチル）アミノ〕−５−カルボキシペンチル〕アミノ〕カルボニル〕オキシ〕−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸；
〔３β（Ｓ），５β，７α，１２α〕−３−〔〔４−〔〔５−〔〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕（カルボキシメチル）アミノ〕−５−カルボキシ−ペンチル〕アミノ〕−１，４−ジオキソブチル〕アミノ〕−７，１２−ジ−ヒドロキシコラン−２４−酸；
〔３β（Ｓ），５β〕−３−〔２−〔〔５−〔〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕（カルボキシメチル）アミノ〕−５−カルボキシペンチル〕アミノ〕−２−オキソエトキシ〕コラン−２４−酸；
〔３β（Ｓ），５β，１２α〕−３−〔〔４−〔〔２−〔〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕（カルボキシメチル）アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸；
〔３β（Ｓ），５β〕−３−〔〔４−〔〔２−〔〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕（カルボキシメチル）アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕−１２−オキソコラン−２４−酸からなる群より選択される、請求項１４記載の診断用製剤。
一般式（Ｉ）の化合物が、
〔３α（Ｓ），５β，７α，１２α〕−３−〔〔〔〔５−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−５−カルボキシペンチル〕アミノ〕カルボニル〕オキシ〕−７，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸；
〔３α（Ｓ），５β〕−３−〔２−〔〔５−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−５−カルボキシペンチル〕アミノ〕−２−オキソエトキシ〕コラン−２４−酸；
〔３β（Ｓ），５β，７α，１２α〕−３−〔〔４−〔〔５−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−５−カルボキシペンチル〕アミノ〕−１，４−ジオキソブチル〕アミノ〕−７，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸；
１０−〔３−〔〔（３α，５β，７α，１２α）−２３−カルボキシ−７，１２−ジヒドロキシ−２４−ノルコラン−３−イル〕オキシ〕−２−ヒドロキシプロピル〕−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７−三酢酸からなる群より選択される、請求項１記載の診断用製剤。
キレート化複合体塩が、ナトリウム又はＮ−メチルグルカミンから形成される、請求項１〜１６のいずれか１項記載の化合物を含む、診断用製剤。
下記スキーム

〔式中、
Ｒ₄は、アミノ保護基であり；
Ｒ₅は、直鎖又は分岐のＣ₁〜Ｃ₁₀アルキル又はアリールであり；
Ｒ₂及びＲ₃は、独立に、水素原子、非置換型であるかもしくはアリール基により置換された直鎖又は分岐のＣ₁〜Ｃ₂₀アルキルであるか、又はこれらはＣ₃〜Ｃ₁₀環を形成し；
Ｒ−ＮＨ ₂ は、請求項１記載の胆汁酸の３−アミノ誘導体である〕による、グルタミン酸γ−アミドの調製のための方法。
請求項１８記載の胆汁酸の３−アミノ誘導体を用いるグルタミン酸γ−アミドの調製を含む、請求項１記載の式（Ｉ）：Ｘ−Ｌ−Ｙ
〔式中、Ｘは、中央鎖上で置換されたジエチレントリアミノ五酢酸（ＤＴＰＡ）であり、
Ｙは、コール酸、ケノデオキシコール酸、デオキシコール酸、ウルソデオキシコール酸、リトコール酸

からなる群より選択される請求項１記載の胆汁酸の誘導体であり；
Ｌは、下記式（IIIa）

（式中、ｍは１である）の鎖である〕の化合物の調製のための方法。
化合物：〔３β（Ｓ），５β，１２α〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸及び〔３β（Ｓ），５β，７α，１２α〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕−７，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸の調製のための、請求項１９記載の方法。
下記スキーム

として実施される、化合物：〔３β（Ｓ），５β，１２α〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸の調製のための請求項２０記載の方法。