MXPA01006344A

MXPA01006344A - Agentes de combinacion sanguinea para diagnosticos por resonancia magnetica nuclear.

Info

Publication number: MXPA01006344A
Application number: MXPA01006344A
Authority: MX
Inventors: Pier Lucio Anelli
Original assignee: Bracco Imaging Spa
Priority date: 1998-12-23
Filing date: 1999-12-16
Publication date: 2002-06-04
Also published as: DE69939398D1; ITMI982802A1; CN1333695A; HUP0104715A3; IT1304501B1; CA2355888A1; CN1854122A; JP4733271B2; EP1935435B1; NO20013154D0; ZA200104820B; AU773876B2; EP1140209B1; EP1935435A2; HK1042432A1; KR20010099889A; PL349488A1; EP1140209A1; NO322551B1; CN100450996C

Abstract

El uso de los complejos de los compuestos de la formula general (I) con iones bi- trivalentes, paramagneticos seleccionados del grupo que consiste de Fe(2+), F (3+), Cu(2+), Cr(3+), Gd(3+), Eu(3+), Dy(3+), Yb(3+) o Mn(2+), asi como las sales de Los mismos con bases organicas fisiologicamente compatibles seleccionadas de aminoacidos basicos o aminas primarias, secundarias, terciarias, o con bases inorganicas cuyos cationes son sodio, potasio, magnesio, calcio o mezclas de los, mismos. En la formula (I) X-L-Y en donde: X es el residuo de un ligando poliamonopolicarboxilico o derivados del mismo, seleccionado del grupo que consiste de: EDTA, DTPA, DOTA, DO3A, HPDO3A, BOPTA; Y es el derivado de un acido biliar seleccionado del grupo que consiste de residuos de acido colico, quenodesoxicolico, desoxicolico, ursodesoxicolico, litocolico, ambos como estan y funcionalizados en las posiciones que tienen el grupo hidroxi como el grupo reactivo, L es una cadena enlazada a cualquier posicion X, que comprende opcionalmente uno de los grupos carboxilicos que se transforma de esta manera en un grupo amido, y a las posiciones C-33, C-7, C-12 de Y, para la preparacion de formulaciones de diagnostico para la formacion de imagenes del sistema sanguineo del cuerpo humano y de animal, por medio de la resonancia magnetica nuclear; nuevos compuestos de la formula general (I) y composiciones de diagnostico que los contienen.

Description

AGENTES DE COMBINACIÓN SANGUÍNEA PARA DIAGNÓSTICOS POR RESONANCIA MAGNÉTICA NUCLEAR La presente invención se refiere al nuevo uso de complejos de iones metálicos de conjugados de ácidos biliares con moléculas que tienen actividad quelante como agentes de contraste en la técnica de diagnóstico conocida como "formación de imágenes por resonancia magnética" (M.R.I.), en particular como agentes de combinación sanguínea. Los complejos formados de agentes quelantes y metales adecuados se usan ya como agentes de contraste en las siguientes técnicas de diagnostico: formación de imágenes por rayos X, formación de imágenes por resonancia magnética nuclear (M.R.I.) y escintigrafia . En particular, la diagnosis médica que usa la formación de imágenes por resonancia magnética (M.R.I.), una poderosa técnica de diagnóstico, reconocida, en la práctica clínica '(Stark, D.D., Bradley, . G., Jr . , Eds. "Magnetic Resonance Imaging" The C. V. Mosby Company, St. Louis, Missouri (USA), 1988), emplea principalmente composiciones farmacéuticas paramagnéticas, que contienen de manera preferente complejos quelados de iones metálicos paramagnéticos bi-trivalentes con ligandos poliaminopolicarboxilicos y/o sus derivados o análogos.

REF: 130768 Las imágenes, que se derivan básicamente de la señal de RMN de los protones de agua, son el resultado de una interacción compleja entre diferentes parámetros, tal como densidad del protón y tiempos de relajación Ti y T2. 5 Se puede obtener una mejora del contraste a través de la administración de substancias químicas exógenas que cambian significativamente las propiedades de resonancia de los protones de agua cercanos (ver, Lauffer, R.B., Chem. Rev. 1987, 87, 901). 10 Los agentes de contraste paramagéticos usados para la formación de imágenes por RMN actúan modificando los tiempos de relajación de los protones de agua presentes en los tejidos en los cuales se concentran los agentes de contraste y por lo tanto pueden incrementar el 15 contraste entre los diferentes tejidos, o entre tejidos saludables y enfermos. Los complejos paramagnéticos de gadolinio, debido a su alta capacidad de reducir los tiempos de relajación de los protones de las moléculas de agua 20 cercanas a través de la interacción dipolar, han sido el objeto de estudios, publicaciones y patentes. Algunos de los mismos están en la actualidad en uso clínico como agentes de contraste de M.R.I. Gd-DTPA, sal de N-metilgucamina del complejo de 25 gadolinio con ácido dietilentriaminopentaacético, w^t Ui MAGNEVISR; Gd-DOTA, sal de N-metilglucamina del complejo de gadolinio con ácido 1, 4 , 7, 10-tetraazaciclododecano-1, 4, 7, 10-tetraacético, DOTAREMR; Gd-HPD03A, complejo de gadolinio con ácido [10- (2-hidroxipropil) -1, 4, 7, 10-tetraazaciclododecano-1, 4, 7-triacético, PROHANCER; Gd-DTPA-BMA, complejo de gadolinio con bis (metilamida) del ácido dietilentriaminopentaacético, OMNISCANR. Los agentes de contraste listados anteriormente y los comercialmente disponibles se proponen para un uso general. En realidad, después de la administración, los agentes de contraste de M.R.I. se difunden en la sangre y en las áreas extracelulares de varias partes del cuerpo antes de que se excreten. Por lo tanto, son similares a este respecto, a los compuestos yodados usados para la diagnosis médica con rayos X. En la actualidad, la profesión médica está en necesidad de agentes de contraste que se dirijan a órganos específicos o para la formación de imágenes del sistema sanguíneo, que no se puede definir bien por medio de los productos ya comercialmente disponibles. El primer planteamiento para obtener esto último consistió en el enlace covalente del agente de contraste a macromoléculas, tal como proteínas, o* al englobarlo dentro de agregados moleculares estables tal como liposomas, o aún al usar las llamadas particulas superparamagnéticas .

Por ejemplo, el complejo de gadolinio con ácido dietielentriaminopentaacético (Gd-DTPA) se enlazó a albúmina humana (HSA) , polilisina o dextrano (Oksendal A. N. et al., J. Magn. Reson. Imaging, 157, 1993; Rocklage S. .M, "Contrast Agentes, Magn. Res. Imaging, Mosby Year Book, 372-437, (1992) a fin de reducir al minimo o aún suprimir la difusión desde sangre en el fluido extracelular, proporcionando de este modo una retención mayor del agente en el sistema sanguíneo. Este planteamiento, aunque logra el efecto deseado, sufre de efectos laterales desagradables puesto que el agente mismo se excreta con dificultad. Una estrategia diferente es el uso de particulas superparamagnéticas '"revestidas con polietilenglicoles o hidrocarburos a fin de reducir la captación hepática por el- retículo endotelial o por otros sistemas (Tilcock C, Biochim. Biophys. Acta, 77, 1993; Bogdanoy A. A. et al., Radiology, 701, 1993), prolongando de esta manera la permanencia de estos agentes en la sangre. En este caso, también se presentan lo.s efectos laterales mencionados anteriormente, asi como problemas debido al alto costo de producción . La demandar de un agente de mezclado sanguíneo, eficiente, que tenga baja toxicidad y un costo razonablemente económico, por lo tanto aún está insatisfecha . La presente invención se refiere al nuevo uso de agentes de mezclado sanguíneo de compuestos específicamente seleccionados, ya descritos previamente por el solicitante en la solicitud de Patente Internacional WO-A-95/32741, que resultan de la conjugación de un ácido biliar con un agente quelante, que son capaces de quelar los iones de metales bi-tri'valentes, paramagnéticos, asi ...como a nuevos compuestos, el proceso para la preparación de los mismos y el uso de los mismos como agentes de mezclado sanguíneo. Estos compuestos han mostrado una buena excreción hepatobiliar (ver, Anelli, P. L. et al., Acta Radiológica, 38, 125, 1997) que los hace promisorios agentes de contraste para visualizar el sistema hepatobiliar . Se ha encontrado, de manera sorprendente, que una clase especifica de estos compuestos permanece en el sistema vascular durante un tiempo suficientemente prolongado, para ser valiosos para el uso como agentes de contraste para la formación de imágenes del sistema vascular, particularmente de las coronarias. Este efecto se puede poner en evidencia claramente llevando a cabo in vivo pruebas en animales (tal como conejos, monos) . La permanencia en el sistema vascular se puede visualizar en realidad, inmediatamente, cuando se grafican los valores de relajación del protón (1/T?) de muestras sanguíneas del animal, tomadas en intervalos de tiempo apropiados después de la administración del agente -de contraste. Puesto que los complejos de Gd(III) son especias paramagnéticas, los altos valores de 1/T? son evidencia de altas concentraciones del agente de contraste en la sangre . La diferencia entre un agente de contraste extracelular, convencional y un agente de mezclado sanguíneo, se pone en claro bien en el articulo de Lauffer et al., Radiology, 529, 1998 en el cual se reportan los perfiles de Ti en la sangre como una función del tiempo transcurrido después de la administración del agente de contraste . En particular, los complejos de la presente invención, cuando se administran por ejemplo al conejo a una dosis compatible con un Índice de seguridad razonable, son capaces de inducir cambios en las velocidades de relajación (medidas en ?l/Ti) en sangre mayor que 5 s_1 10 minutos después de administración, de este manera que prometen ser para' el" uso como agentes de contraste para la formación de imágenes del sistema vascular. Se ha encontrado que este tipo de efectos no se puede relacionar únicamente a la presencia de ácidos biliares, sino que depende de la estructura química de los complejos. Se ve, en realidad, que la unidad quelante se debe enlazar de manera preferente al esqueleto esferoidal a través de un enlace en las posiciones 3, 7 ó 12 del ácido biliar. En realidad, se ha probado que cualquier enlace entre la unidad quelante y el ácido biliar que comprenda el ácido carboxilico en la posición 24 producirá complejos que tienen permanencia insatisfactoria en el sistema vascular .

Por lo tanto, es un objeto de la presente invención el uso como agentes de mezclado sanguíneo de los complejos de los compuestos de la fórmula general (I) con iones metálicos bi-trivalentes, paramagnéticos seleccionados del grupo que consiste de Fe(2+), Fe(3+>, Cu Yb + ) o Mn l ( ¿2++ ) ) .

X-L-Y (I), en la cual X es, - el residuo de un ligando poliamonopolicarboxilico o derivados del mismo, seleccionado del grupo que consiste de: ácido etilendiaminotetracético (EDTA) , ácido dietilentriaminopentacético (DTPA), ácido 1,4,7,10-tetraaza-ciclododecan-1, , 7 , 10-tetraacético (DOTA), ácido 1,4,7, 10-tetraazacilododecano-l, , 7-triacético (D03A) , ácido [10- (2-hidroxipropil) -1, 4,7, 10-tetraazaciclododecano-1, 4, 7-triacético (HPD03A) , ácido 4-carboxi-5, 8 , 11-tris (-carboximetil) -1-fenil-2-oxa-5, 8,11-triazatridecan-13-óico (BOPTA) ; Y es el derivado de un ácido biliar seleccionado del grupo que consiste de residuos de ácido cólico, quenodesoxicólico, desoxicólico, ursodesoxicólico, litocólico, Ácido ursodesoxicólico ambos como están y funcionalizados en las posiciones que tienen el grupo hidroxi como el grupo reactivo, independientemente de la estereoquímica de los productos finales, el derivado que también comprende el conjugado del grupo ácido en la posición 24 con taurina y glicina; L es una cadena enlazada a cualquier posición X, que comprende opcionalmente uno de los grupos carboxilicos que se transforma de esta manera en un grupo amido, y a las posiciones C-33, C-7, C-12 de Y, y tiene la siguiente fórmula (II) en la cual m es un número entero que varia de 1 a 10, en donde para los valores por arriba de 1, A puede tener diferentes significados, A tiene la siguiente fórmula (III), n y q pueden 0 ó 1, pero no son al mismo tiempo cero, p puede variar de 0 a 10, Z es un átomo de oxigeno o un grupo -NR, en el cual R es un átomo de hidrógeno, o un grupo alquilo de 1 a 5 átomos de carbono ya sea insustituido o sustituido por un grupo -COOH. Los compuestos particularmente preferidos son aquellos en los cuales las cadenas L de espaciado tienen las siguientes fórmulas generales (Illa) y ('?llb¡ También preferidas son las estructuras en las cuales Z es el átomo de oxigeno y por lo tanto L se forma a través de los grupos hidroxi presentes en las posiciones 3, 7, 12, independientemente de la estereoquímica de los productos finales. Particularmente preferidos son los compuestos de la fórmula (I) en la cual el residuo X se selecciona del grupo que consiste de EDTA, DTPA, DOTA, D03A, BOPTA; L seleccionado del grupo que consiste de (Illa), (Illb); Y se selecciona de manera preferente del grupo que consiste de residuos de ácido cólico, desoxicólico, quenodesoxicólico, litocólico, enlazados a L por un grupo amino en la posición 3- y el grupo ácido en la posición 24 está presente como está o como su derivado de taurina o glicina . Y también se puede funcionalidad de manera diferente, por ejemplo, a través de la conversión de uno o más grupos hidroxi en grupos ceto.

Los complejos particularmente preferidos con iones metálicos paramagnéticos definidos anteriormente son los complejos con gadolinio o con manganeso. Preferidos son los compuestos de la fórmula general (IV), en la cual, en la Fórmula General (I), el residuo X es DTPÁ, substituido en la cadena central, y en la cual Ri es un átomo de hidrógeno o el grupo -COOH, Y se selecciona del grupo que consiste de residuos cólicos, desoxicólicos, quenodesoxicólicos, litocólicos y L tiene la estructura de la fórmula (III). Particularmente preferidos son los compuestos de la Fórmula General (IVa). en la cual Ri es el grupo -COOH e Y tiene los significados definidos anteriormente para los compuestos de la Fórmula General (IV) y L tiene las estructuras (Illa) o (Illb) .

Los objßts-s adicionales de la presente invención son los siguientes compuestos novedosos, que corresponden a la clase de la Fórmula General (IVa) , asi como a los procesos para la preparación de los mismos; Ácido [3ß (S) , 5ß] -3- [ [4- [bis [2- [bis (carboximetil) amino] -etil] -amino] -4-carboxi-l-oxo-butil] (carboximetil) amino] -colan-24-oico Ácido [3ß(S) ,5ß]-3-[ [4- [bis [2- [bis (carboximetil) amino; etil] arrimo] -4-carboxi-l-oxobutil] amino] colan-24-oico; Ácido [3ß(S) ,5ß,7ß]-3-[ [ 4- [bis [2- [bis (carboximetil) amino] etil] -amino] -4-carboxi-l-oxobutil] amino] -7-hidroxicolan-24-o?co Ácido [3a(S) ,5ß]-3-[2[-[5-[bis[2-[bis (carboximetil) amino; etil] amino] -5-carboxipentil] -amino] -2-oxoetoxi] colan-24-oico Ácido [3ß(S) , 5ß]-3- [ [4- [bis [2- [bis (carboximetil) amino; etil] -amino] -4-carboxi-l-oxobutil] amino] -12-oxocolan-24 oico Ácido [3ß (S) , 5ß, 7a] -3- [ [4- [bis [2- [bis (carboximetil) amino] etil ] ammo] -4-carboxi-1-oxobutil] amino] -7-hidroxicolan-24-oico; N2-b?s[2-[bis (carboximetil) amino] etil] -N-[ (3ß, 5ß,7a, 12a) -7, 12-d?h?droxi-24-oxo-24 [ (2-sulfoetil) amino] colan-3-il] -L-glutamina.

N -bis [2- [bis (carboximetil) amino] etil] -N- [ (3ß, 5ß) -24-oxo-2 [ (2-sulfoet?l) amino] colan-3-il] -L-glutamina; Ácido [3ß (S) , 5ß, 12a] -3- [ [4- [bis [2- [bis (carboximetil; amino] -etil] amino] -4-carboxi-l-oxobutil] amino] -12-hidrox?colan-24-oico; Ácido [3ß (R) , 5ß, 12a] -3- [ [4- [bis [2- [bis (carboximetil; amino] etil] amino] -4-carboxi-l-oxobutil] amino] -12-hidrox?colan-24-oico; Ácido [3ß (RS) , 5ß, 12a] -3- [ [4- [bis [2- [bis (carboximetil) amino] -etil] amino] -4-carboxi-l-oxobutil] amino] -12-hidroxicolan-24-oico; Ácido [3a(S) ,5ß, 12a]-3-[ [4- [bis [2- [bis (carb?ximetil) amino] -etil] amino] -4-carboxi-l-oxobutil] amino] -12- hidroxicolan-2 -oico; Ácido [3ß(S) ,5ß,7a,12a]-3-[ [4- [bis [2- [bis (carboximetil; amino] etil] amino] -4-carboxi-l-oxobutil] amino] -7, 12- dihidroxicolan-24-oi'co; Ácido [3a(S) , 5ß, la, 12a] -3- [ [ [ [5- [bis [2- 10 [bis (carboximetil) amino] etil] amino] -5- carboxipentil] amino] carbonil] oxi] -7, 12-dihidroxcolan-24- oico; ^ju^^k^g^gHt^mj^Mn^^ Ácido [3a(S),5ß]-3-[2-[[5-[bis[2-[bis (carboximetil) amino; etil] amino] -5-carboxipentil] amino] -2-oxoetoxi] colan-24- oico .

Otros compuestos que corresponden a esta clase, cuyos complejos de gadolinio se han escrito en la solicitud de patente O-A-95/32741, son los siguientes: Ácido [3ß(S) , 5ß,7a, 12,a]-3-[ [4- [bis [2- 10 [bis (carboximetil) amino] etil] amino] -4 -carboxi-1- oxobutil] amino] -7, 12-dihidroxi-colan-24-oico; Ácido [3ß(S) ,5ß,7a,12a]-3-[ [4- [ [5- [bis [2- [bis (carboximetil) -amino] etil] amino] -5- 15 carboxipentil] amono] -1, 4-dioxo-butil] amino] -7, 12- dihidroxicolan-24-oi-co; A^auiuiíb&a También preferidos son los compuestos de la Fórmula General (IVb) , los cuales también son derivados de DTPA substituidos en la posición central, en la cual Y tiene los significados definidos anter ormente para los compuestos de la Fórmula (IV) y L tiene la estructura (Illa). La presente invención se refiere adicionalmente a los siguientes compuestos novedosos, que corresponden a la clase de la Fórmula General (IVb), asi como a los procesos para la preparación de los mismos: Ácido [3ß, 5ß, la, 12a] -3- [ [ [bis [2- [bis (carboximetil) amino] -etil ] amino] acetil] amino] -7, 12-dihidroxicolan-24-oico; Ácido [3ß,5ß]-3-[[[[[bis[2-[bis (carboximetil) amino] etil; aminoj acetil] amino] acetil] amino] colan-24-oico; Otros compuestos que corresponden a esta clase, cuyos complejos con gadolinio se han descrito en la solicitud de patente WO-A-95/32741, son los siguientes: Ácido [3ß, 5ß, la, 12a) -3- [ [ [ [ [bis [2- [bis (carboximetil) -ap c] etil] amino] acetil] amino] -acetil] amino] -7, 12-dihidroxi-colan-24-o..co; Ácido [3ß,5ß,7a,12a)-3-[ [6-[ [ [bis [2- [bis (carboximetil) -amino] etil] amino] -acetil] amino] -1-oxohexil] amino] -7, 12-dihidroxicolan-24-oico; Particularmente preferidos también son los compuestos de la Fórmula General (V), en la cual, en la Fórmula General (I) el residuo X es DTPA, Y tiene los significados definidos para los compuestos (IV) y L tiene la estructura de la Fórmula (Illa) .

Otros compuestos que corresponden a esta clase, cuyos complejos con gadolinio se han descrito en la solicitud de patente WO-A-95/32741, son los siguientes Ácido (3ß, 5ß, 7a, 12a) -3- [ [N- [N- [2- [ [2- [bis (carboximetil) amino] -etil] (carboximetil) amino] etil] -N- (carboximetil) -glicil] glicil] amino] -7, 12-dihidroxicolan-24-oico; Ácido 18- [ [ (3ß, 5ß, la, 12a) -23-carboxi-7 , 12-hidroxi-24-norcolan-3-?l] amino] -3, 6, 9-tris (carboximetil) -11, 18-dioxo-3, 6, 9, 12-tetraazaoctadecanoico También preferidos son los compuestos de la Formula (IV), en la cual, la Fórmula (I), el residuo X es D03A, Y tiene los significados definidos anteriormente para los compuestos de la Fórmula (IV) y L se selecciona entre las estructuras (Illa) y (Illb).

Entre los compuestos de la Fórmula (VI), particularmente preferido es el ácido 10- [3- [ [ (3a, 5ß, la, 12ß) -23-carboxi-7 , 12-di-hidroxi-24-norcolan-3-il] oxi] -2-hidroxipropil] -1,4,7, 10-tetraazaciclododecano-1 , 4 , 7-triacético, cuyo complejo con gadolinio se ha descrito en la solicitud de patente O-A-95/32741.

De manera similar, los compuestos de la Fórmula General (VII) se prefieren, en la cual en la Fórmula (I), el residuo X es EDTA, y L tiene los significados definidos anteriormente para los compuestos de la Fórmula (IV) y L tiene la estructura de la Fórmula (III). Particularmente preferidos son los compuestos de la Fórmula (VII) con manganeso.

Entre los compuestos de la Fórmula (VII) particularmente preferidos son los siguientes: Ácido [3a(S) ,5ß,12a]-3-[ [ [ [5-[ [2- [bis (carboximetil) amino] -etil] (carboximetil) amino] -5-carboxipentil] amino] - carbonil] oxi] -12-hidroxicolan-24-oico Ácido [3ß(S) , 5ß,7a, 12a]-3-[ [4-[ [5-[ [2-[bis (carboximetil) 10 animo] etil] (carboximetil) amino] -5-carboxipentil] amino] - 1 , 4-d?oxobutil] ammo] -7 , -12-d?hidroxicolan-24-oico Acido [3a(S) , 5ß]-3-[2-[ [5-[ [2- [bis (carboximetil) amino] - ^¡l!¡?^_ ít¿ etil] (carboximetil) amino] -5-carboxipentil] amino] carbonil] 2-oxoetoxi] colan-24-oico Ácido [3ß(S) ,5ß, 12a]-3-[ [4-[ [2-[ [bis (carboximetil) amino] etil] (carboximetil) amino] -4-carboxi-l-oxobutil] amino] -12-hidroxicolan-24-oico Ácido [3ß(S),5ß]-3-[[4-[[2-[bis (carboximetil) amino] etil] (carboximetil ) amino] -4-carboxi-l-oxobutil] amino] -12-oxocolan-2 -o?co Los compuestos de la Fórmula General (I) se pueden preparar oon "el método de sintesis convergente que comprende : 1) sintesis de un ligando funcionalizado, es decir, de un ligando capaz de coordina un ion metálico en tanto que se une establemente al ácido biliar por medio de un grupo funcional adecuado; 2) sintesis de un ácido biliar funcionalizado; 3) reacción de acoplamiento entre los dos diferentes sintones; 4) escisión de cualquier grupo protector; 5) formación en complejo del ion metálico paramagnético; ilustrado en detalle de la solicitud de patente WO-A-95/32741 citada anteriormente. Algunos de los compuestos preferidos para la preparación de los ligandos de la presente invención comprenden la formación de un enlace de amida entre dos s tones, uno de los cuales que es el precursor del sistema quelante del ion paramagnético (Sinton A) , el otro que es el precursor del residuo de ácido biliar contenido en el complejo final (Sinton B) . Los métodos descritos posteriormente en la 5 presente no se deben considerar limitantes de la sintesis de los compuestos de la presente invención. La unión de amida se puede formar: a) al hacer reaccionar los Sintones A que contienen una función carboxilica con los Sintones B que 10 contienen una función amino primaria o secundaria; b) al hacer reaccionar los Sintones A que contienen una función amino primaria o secundaria con los Sintones B que contienen una función carboxilicas; c) al hacer reaccionar dianhidrido de DTPA 15 (producto comercialmente disponible) con un Sinton B que contiene una función amino primaria o secundaria. Una lista de algunos de los Sintones A y B usados para esta invención se reportan en la siguiente Tabla. 20 ^^tiM¡t ?t¡ ?l? TABLA Sinton A Sinton B Los sintones usados se protegen adecuadamente, por supuesto, en estos grupos que podrían ocasionar reacciones parásitas bajo las condiciones usadas para la formación del enlace de amida. Después de la formación del enlace entre los dos sintones, uno o más grupos de desprotección para restaurar los grupos originales se debe contemplar . De manera alternativa a este tipo de procesos, la sub-unidad quelante se puede introducir por reacciones de varios pasos iniciando de un derivado de ácido biliar, como en el caso de la sintesis del compuesto descrito del Ejemplo 3 de la sección experimental, ilustrado en el siguiente Esquema 1.

Esquema 1 La presente invención también se refiere a un nuevo proceso ilustrado en el siguiente Esquema 2: Esquema 2 en el cual R4 es un grupo amino-protector R5 es un alquilo o arilo de 1 a 10 átomos de carbono, recto o ramificado, R2 y R3 son independientemente un átomo de hidrógeno, alquilo de 1 a 20 átomos de carbono, recto o ramificado, insubstituido o substituido por grupos arilo, o los grupos forman un ciclo de 3 a 10 átomos de carbono; proceso que hace uso de una reacción de transamidación y permite mantener la estereoquímica en el centro quiral adyacente al átomo de nitrógeno de la pirrolidona de inicio y para dar una amida secundaria. La selección combinada de los grupos R4 y R5 es importante ya que la escisión debe tomar lugar bajo condiciones diversificadas. Los posibles ejemplos de R4 son los grupos carbobenciloxi (Cbz) y de R5 son el grupo' metilo o el grupo t-butilo. Este proceso es en general aplicable a fin de obtener ?-amidas de ácido glutámico y es muy útil y ventajoso para la preparación de los compuestos de la invención, en particular ?-amidas de ácido glutámico con derivados de 3-amino de residuos Y, como se define anteriormente. En realidad, permite obtener el producto final evitando el uso de agentes de condensación costosos para la formación del enlace ?-amido entre ácido glutámico y la amina correspondiente. Un ejemplo de la aplicación kde este procedimiento sintético y completamente nuevo es la sintesis de ácido [3ß, (S) , 5ß, 12a) -3- [ [4- [bis [2-[bis (carboximetil) -amino] etil] amino] -4-carboxi-l-oxobutil] amino] -12-hidroxicolan-24-oico, cuya sintesis convencional se reporta en el Ejemplo 4 de la sección Experimental, en tanto que la alternativa se reporta en el Ejemplo 5 y el esquema sintético completo se muestra en el siguiente Esquema 3.

Esquema 3 1. H-, Pd/C 5°/o, MeOH , COOtBu ,NA , COOtBu LiOM, dioxano De manera análoga se preparó el derivado de ácido cólico ya descrito en la solicitud de patente WO-A-95/32741, ácido [3ß, (S) , 5ß, la, 12a) -3- [ [ 4- [bis [2-[bis (carboximetil) amino] -etil] amino] -4-carboxi-l-oxobutil] amino] -7 , 12-dihidroxicolan-24-oico . Los iones metálicos adecuados para formar sales complejas con los agentes quelantes de la Fórmula General (I) son iones divalentes o trivalentes de los elementos seleccionados de grupo que consiste de Fe<2+), Fe(3+), Cu(2+), Cr<3+), Gdt3+), Eu(3+), Dy<3+), Yb(3+) o Mn(2+) . En cuanto al uso del diagnóstico de los nuevos complejos quelados de la invención, se pueden usar como agentes de contraste, particularmente para el uso como agentes de mezclado sanguíneo en la técnica del diagnóstico por formación de imágenes por ^medio de resonancia magnética. La preparación de los complejos se lleva a cabo de manera convencional, de acuerdo a un proceso en el cual el óxido o la sal adecuada del metal paramagnético, disuelto en agua o dispersado en una solución alcohol-agua, se adiciona a una solución acuosa o de agua-alcohol del agente quelante, bajo agitación y si es necesario, se calienta suavemente a la temperatura de ebullición, hasta el término de la reacción. Si el complejo es insoluble en el solvente de reacción, se puede filtrar. Si es soluble, se puede recuperar al evaporar el solvente a un residuo, por ejemplo, a través de secado por rociado. En el caso en que el complejo resultante aún contenga grupos ácidos libres, se transforma en una sal neutral por reacción con una base orgánica o inorgánica que forma cationes fisiológicamente compatibles en soluciones . Para la preparación de estas sales neutrales, se puede adicionar una cantidad suficiente de la base a los complejos que contienen grupos ácidos libres en solución acuosa o suspensión hasta la neutralidad. La1' solución resultante de esta-, manera se puede evaporar de manera conveniente o se puede adicionar un solvente adecuado para cristalizar la sal compleja. Los cationes inorgánicos preferidos adecuados para salificar los complejos quelados de la invención comprenden en particular iones de metales alcalinos o alcalinotérreos tal como potasio, sodio, calcio, magnesio y mezclas de los mismos. Particularmente preferido es el ion de sodio. Los cationes preferidos que se derivan de bases orgánicas adecuadas para el propósito mencionado con anterioridad comprenden, inter alia, aquellos de aminas primarias, secundarias y terciarias, tal como etanolamina, dietanolamina, morfolina, glucamina, N-metilmetilglucamina, N, N-dimetilglucamina, N-metilglucamina que es particularmente preferida. Los cationes preferidos que se derivan de aminoácidos comprenden, por ejemplo, aquellos de' taurina, glicina, lisina, arginina o omitiría. Una alternativa a este proceso consiste en preparar la formulación inyectable sin aislar la sal compleja. En este caso, es obligatorio que las soluciones finales no contengan iones metálicos libres, que son tóxicos para el cuerpo. Esto se verifica por titulación, por ejemplo, con indicadores coloreados tal como naranja de xilenol.

También se puede contemplar un paso final de purificación de la sal compleja. En este tipo de proceso, el agente quelante, la sal o el óxido metálico, y cualquier base de salificación, se hacen reaccionar -en las relaciones estequiométricas en agua para inyecciones, luego, después de la terminación de la reacción, se filtran completamente los pirógenos y el producto se distribuye en recipientes adecuados y luego se esteriliza de manera térmica. Las formulaciones farmacéuticas inyectables se preparan tipicamente al disolver el ingrediente activo, se preparan como se describe anteriormente y los excipientes en agua de pureza adecuada desde el punto de vista farmacológico, paca proporcionar una formulación farmacéutica adecuada para la administración enteral o parenteral, en concentraciones que varian de 0.01 a 1.0 molar. El agente de contraste resultante se esteriliza de forma adecuada. Los agentes de contraste se administran, dependiendo de los requisitos de diagnostico, a una dosis de o.01-0.3 mmol/kg de peso corporal. En principio, las dosis para la administración parenteral varian desde 0.001 a aproximadamente 1.0 mmol/kg de peso corporal. Las dosis preferidas para la administración parenteral varian desde 0.01 a aproximadamente 0.5 mmol/kg de peso corporal. Las dosis para la administración enteral varian, en general, desde 0.5 a aproximadamente 10 mmol/kg, de manera preferente desde aproximadamente 1.0 a aproximadamente 10 mmol/kg de peso corporal. Las nuevas formulaciones de la presente invención muestran buena tolerabilidad; además, su solubilidad en agua es una característica importante, adicional que las hace particularmente adecuadas para el uso en resonancia' magnética nuclear. Las composiciones de diagnóstico de la presente invención se usan de manera convencional. Las composiciones se pueden administrar a un paciente, tipicamente a uh animal de sangre caliente, ya sea de forma sistémica o tópica en el órgano o en el tejido que se va a visualizar por resonancia magnética. Los protocolos de análisis y los aparatos se pueden encontrar en trabajos tal como Stark, D. D. , Bradley, W. G., ' Magnetic Resonance Imaging, Mosby Year Book, St. Louis, Mo., 1992. Las condiciones experimentales usadas se ilustrarán en detalle en la sección experimental.

Sección Experimental EJEMPLO 1 Complejo de gadolinio de ácido [3ß, (S) , 5ß) -3- [ [4- [bis [2- [bis (carboximetil) amino] etil] amino] -4-carboxi-l-oxobutil] -amino] colan-24-oico salificado con 1-desoxi-l- (metilamino) -D-glucitol (1:3) A) Éster metílico del ácido [3ß, (S) , 5ß) -3- [ [5- (1, 1-dimetiletoxi) -4- [bis [2- [bis [2- (1, 1-dimetiletpxi) -2-oxoetil ] amino] -etil] amino] -1, 5-dioxopentil] amino] colan-24-oico 3.6 g del éster metílico del ácido (3ß,5ß)-3-ammocolan-24-oico (preparado de manera análoga al procedimiento descrito en WO-A-95/32741 : Ejemplo 5) (9.24 mmol), 8.5 g del éster t-butilico del ácido N,N-bis[2-[bis [2- (1, 1-dimetiletoxi ) -2-oxoetil] amino] -etil] -L-glutámico (preparado como se describe en WO-A-95/32741 : Ejemplo 15) (11.39 mmol) y 1.64 de cianofosfonato de dietilo (9.39 mmol) se disuelven en 160 mL de DMF. La solución se enfria a 0°C, se adicionan gota a gota 1.28 mL de Et3N (9.24 mmol) en el mismo y la mezcla de reacción se deja durante 30 min'titos a temperatura ambiente. • Después de 1 hora, la solución se evapora bajo presión reducida, el residuo se toma con EtOAc, se lava con NaHC03 al 5% y luego con salmuera. La fase orgánica se separa, se seca sobre Na2S04 y luego se evapora bajo presión reducida. El producto crudo se purifica por cromatografía instantánea para obtener 9.5 g del producto deseado (8.50 mmol ) .

Rendimiento: 92% K.F.: 3.47% Análisis elemental C H N calculado 66.63 9.47 5.01 encontrado: 67.42 10.08 5.07 d después de secado a 120°C bajo vacio TLC: Fase estacionaria: placa de gel de silice 60F 254 Merck Eluyente= 4: EtOAc/n-hexano 4:6 Detección: KMn04 al 0.5% en NaOH ÍM, Rf = 0.46 - Los espectros de RMN 1H , RMN 13C, e IR y MS son consistentes con la estructura indicada.

B) Éster metílico del ácido [3ß, (S) , 5ß) -3- [ [4-carboxi-4- [bis [2- [bis (carboxietil) amino] etil] amino] -1-oxobutil] amino] colan-24-oico. Una solución agitada de 9.3g del compuesto preparado en el paso A) (8.32 mmol) en 50 mL de CH2C12 se adicionó con 5.1 mL de CF3COOH (66.6 mmol); después de 10 minutos a una temperatura de 0-5°C la solución se evaporó. El residuo se toma en 50 mL de CF3COOH y después de 24 horas a temperatura ambiente, se adiciona con 30 mL adicionales de CF3COOH para terminar la reacción. Después de 5 horas la mezcla de reacción se evapora y el residuo se trata con CH2C12, evaporando cada vez el solvente bajo presión reducida hasta obtener un polvo. El sólido se lava con H20, se filtra y se seca para obtener el producto deseado (6.9 g; 8.24 mmol).

Rendimiento: 99% p.f".: 205°C K.F.: 7.78% Análisis elemental C H N % calculado 60.27 8.18 6.69 % encontrado: 59.28 8.11 6.68 después de secado a 120°C bajo vacio TLC: Fase estacionaria: placa de gel de silice 60F 254 Merck Eluyente = 6:4:1 CHCl3/MeOH/25% NH4OH de Detección: KMn04 al 0.5% en NaOH ÍM, Rf = 0.28 Los espectros de RMN XH, RMN 13C, e IR y MS son consistentes con la estructura indicada.

C) Ácido [3ß(S) ,5ß)-3-[ [4-[bis[2-[bis (carboximetil) amino] etil] amino] -4-carboxi-l-oxobutil] amino] colan-24-oico Una suspensión de 6.14 g del compuesto preparado en el paso B) (7.33 mmol) en 50 mL de H20 se adiciona con 50 mL de NaOH ÍM (50 mmol) manteniendo pH 13 por medio de un aparato pH-stat. Después de 2 horas a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se acidifica (pH 0.5) con HCl 12 M para dar una suspensión que se filtra, se lava con H20 y se seca para dar el producto deseado (5.64; 6.85 mmol ) .

Rendimiento: 93% p.f.: 205°C K. F. : 9.02% Análisis elemental C H N Cl , Na % calculado 59.84 8 . 08 6 . 81 % encontrado: 59.56 8 . 15 6 . 80 <0 . 1 a después de secado a 120°C bajo vacio TLC: Fase estacionaria: placa de gel de silice 60F 254 Merck Eluyente: 6:4:1 CHCl3/MeOH/ 25% NH40H ÍM Detección: KMn04 al 0.5% en NaOH ÍM, Rf = 0.25 Los espectros de RMN XH, RMN 13C, e IR y MS son consistentes con la estructura indicada.

D) Complejo de gadolinio del ácido [3ß (S) , 5ß] -3- [ [4- [bis [2- [bis (carboximetil) amino] etil] amino] -4-carboxi1-oxobutil] amino] colan-24-oico salificado con 1-desoxi-l- (metilamino) -D-glucitol (1:3). Se dispersan 4.53 g del compuesto preparado en el paso C) (5.5 mmol) en 50 mL de H20 y se solubilizan con 10 ml de solución acuosa de meglumina 2 M (20 mmol) obteniendo una solución a pH 6.8. Después de eso, se adicionan a 11 L de una solución acuosa de GdCl3 0.5 M (5.5 mmol) en 1 hora, manteniendo pH 6.8 por adición de 6.5 mL de solución -.acuosa de meglumina 2M (13 mmol) . El progreso de la reacción se monitorea por electroforesis capilar. Después de 2 horas, la solución se filtra a través de una membrana Millipore®, se nanofiltra y se evapora. El residuo se seca para dar el compuesto deseado (6.15 g; 4.17 mmol) .

Rendimiento: 76% p.f.: 220°C K.F. : 8.44% Ensayo CE: 100% (% de área) Capilaridad: Silice fusionada 0.56 m x 50 mm con una celda de bulbo Voltaje : 25 Kv /Amortiguador: Boratos 0.05 M, pH 9.3, EDTA 0.3 mM Temperatura : 40°C Tiempo de detención: 20 minutos Detección (UV) : 200-210 nm Inyección : hidrostática (50 mbar, 5 s) Muestra de concentración: 1 mg mL 1; Instrumentación: ' Hewlett PacKard 3D HPCE Preacondicionamiento: t (min) Acción 2 Lavado con H20 2 Lavado con NaOH 0. ÍM 1 Lavado con H20 5 Lavado con amortiguador 9 Iniciar análisis Análisis elemental c H Gd N Cl, Na % calculado 7.65- 7.35 10.06 6.27 % encontrado: 7.83 7.36 10.01 6.24 <0.1 a después de secado a 120°C bajo vacio Los espectros de IR y MS son consistentes con la estructura indicada. Los siguientes compuestos y los complejos de gadolinio relacionados se preparan de manera análoga: Complejo de gadolinio del ácido [3ß (S) , 5ß, 7ß) -3- [ [4- [bis [2- [bis (carboximetil) amino] etil] amino] -4-carboxi-1-oxobutil] amino] -7-hidroxicolan-24-oico salificado con 1-desoxi-1- (metilamino.) -D-glucitol (1:3) ; Complejo de gadolinio del ácido [3a (S) , 5ß] -3-[2 [-[5-[bis[2-[bis (carboximetil) amino] etil] amino] -5-carboxipentil] amino] -2-oxoetoxi] -colan-24-oico salificado con 1-desoxi-l- (metilamino) -D-glucitol (1:3); EJEMPLO 2 Complejo de gadolinio del ácido [3ß (S) , 5ß] -3-[[4-[b?s[2-[b?s (carboximetil) amino] etil] amino] -4-carboxi-1-oxobutil] amino] -12-oxocolan-24-oico salificado con 1-desoxi-1- (metilamino) -D-glucitol (1:3).

A) Éster metílico del ácido (3ß, 5ß) -3-azido-12-oxocolan-24-oico. Se adicionan gota a gota 12.5 mL del reactivo de Jones [33.3 mmol Cr(VI)] en una solución de 17.8 g del éster metílico del [3ß, 5ß, 12a) -3-azido-12-hidroxicolan-24-oico (41.1 mmol) (preparado de manera análoga al método descrito para el éster metílico del ácido (3ß, 5ß, la, 12a) -3-az?do-7, 12-dihidroxicolán-24-oico en la WO-A-95/32741 : Ejemplo 5) en acetona (600 mL) en 90 minutos a temperatura ambiente. Después de 20 horas la mezcla se filtra y la solución se evapora. El residuo se disuelve en CHC13 (400 mL) y la solución se lava con NaHC03 acuoso saturado luego con H_0. La solución se seca y se evapora para dar un producto crudo que se cristaliza a partir de EtOAc al 96% para obtener 14. lg del producto deseado (32.9 mmol).

Rendimiento: 84% 'p.f.: 153°C K.F. : <0.1% [a]20D = + 83.25 (c 2. 1 , CHC13) Análisis elemental C H N % calculado 69.90 9.15 9.78 % encontrado: 69.98 9.32 9.69 después de secado a 120°C bajo vacio TLC: Fase estacionaria: placa de gel de silice 60F 254 Merck Eluyente: n-hexano/EtOAc 8:2 Detección: KMn04 al 0.5% en NaOH ÍM, Rf = 0.43 Los espectrros de RMN XH, RMN 13C, e IR y MS son consistentes con la estructura indicada.

B) Éster metílico del ácido (3ß, 5ß) -3-amino-12-oxocolan-24-oico. Se hidrogenó una solución de 16.4 g del compuesto A) (38.2 mmol) en THF (130 mL) en la presencia de Pd al 5%/C (1.6g) a temperatura ambiente y a 40 bar durante 15 horas en un autoclave Parr®. La mezcla de reacción se filtra ('-papel y membrana Millipore® FH 0.5 µm) y se evapora. El producto crudo se purifica por cromatografía instantánea para dar 11.8g del producto deseado (29.2 mmol).

Rendimiento: 77% p.f.: 129-130°C K. F. : 1.04% [a]20D = + 87.8 (c 2.02, CHC13) Análisis elemental C H N % calculado 74.40 10.24 3.47 % encontrado: 72.72 10.00 3.35 TLC: Fase estacionaria: placa de .gel de silice 60F 254 Merck Eluyente: MeOH/Et3N 95:5 Detección: KMn04 al 0.5% en NaOH ÍM, Rf = 0.31 Los espectros de RMN XH, RMN 13C, e IR y MS son consistentes con la estructura indicada.

C) éster metílico del ácido [3ß (S) , 5ß] -3- [ [4- [bis[2-[bis[2-(l, 1-dimetiletoxi) -2-oxoetil ] amino] etil] amino] -5- (1, 1-dimetiletoxi ) -1 , 5-dioxopentil] amino] -12-oxocolan-24'-oico Una solución de DCC (6.24 g; 30.3 mmol) en CH2C12 (25 mL) se adiciona gota a gota en 30 minutos en una solución del éster 1- (1, 1-dimetiletilico) del ácido N,N-bis [2- ( 1 , 1-dimetiletoxi ) -2-oxoetil] amino] etil] -L-glutámico (1:3) . N,N-bis [2-bis] [2- (1, 1-dimetiletoxi) -2-oxoetil ] amino] etil] -L-glutámico (preparado como se describe en WO-A-95/32741 : ejemplo 15) (21.5 g; 28.9 mmol), compuesto B) (11.1 g; 27.5 mmol) y HOBT (1-hidroxibenzotriazol) (3.72 g; 27.5 mmol) en CH2C12 (300 mL) a 0°C bajo nitrógeno. La mezcla se deja calentar a temperatura ambiente-. Después de 21 horas, la mezcla de reacción se filtra y la solución se lava con solución acuosa saturada de NaHC03, luego H20 y se evapora subsecuentemente. El producto crudo se purifica por cromatografía instantánea para dar 24.5g del producto deseado (21.7 mmol).

Rendimiento: 79% [a]20D = + 12.17 (c 2.07, CHC13) TLC: Fase estacionaria: placa de gel de silice 60F 254 Merck Eluyente: 1:1 EtOAc/n-hexano Detección: KMn04 al 0.5% en NaOH ÍM, Rf = 0.45 Los espectros de RMN XH, RMN 13C, e IR y MS son consistentes con la estructura indicada.

D) ácido [3ß(S) ,5ß]-3-[ [4- [bis [2- [bis (carboximetil) amino] etil] amino] -4-carboxi-l-oxobutil] amino] -12-o.xocolan-24-oico Se adicionan gota a gota 80 mL de TFA (1.0 mol) en una solución de 23.8 g del compuesto preparado del paso C) (21.0 mmol) en CHtCl2 (50 mL) a 0°C, en 1 hora. La mezcla de reacción se agita a temperatura ambiente, luego, después de 2 horas, se evapora. El residuo se toma con TFA (100 Ml; 1.3 mol) y la solución se agita durante 24 horas adicionales. La mezcla de reacción luego se evapora, se toma con CH2C12 y se evapora nuevamente. El producto crudo se disuelve en 150 mL de NaOH ÍM, se enfriando con un baño de hielo, y la solución se agita durante 15 horas (pH 10) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se ajusta a pH 13 con 3.30 mL de NaOH al 30% y después de 4 horas, se filtra a través de una membrana Millipore® (HAS 0.45 µm) . El filtrado se acidifica con 12.5 mL de HCl al 30% y 19 mL de HCl ÍM a pH 1.60. El precipitado se filtra, se lava con H20 y se seca para dar 15.8g del producto deseado (18.9 mmol).

Rendimiento: 90% p.f.: 172-175°C K.F. : 1.98% [a]20D = + 43.54 (c 2-.02, 1M NaOH) HPLC: 97% (% de área) Fase estacionaria: Zorbax ECLIPSE XDB-C8 3.7 µm; 150 X 4.6 mm; Temperatura 40°C; Fase móvil: elución gradiente; A = h3P04 0 . 017 m, EDTA 0 . 3 mM en H20 ; B = CH3CN Gradiente Min de A % de B 0 85 15 40 65 35 50 65 35 Velocidad de flujo: 1.5 mL min"1; Detección (UV) : 210 nm; Análisis elemental C H N Cl Na % calculado 58.84 7.71 6.69 % encontrado: 56.57 7.68 6.37 0.25 0.15 TLC: Fase estacionaria: placa de gel de silice ' 60F 254 Merck Eluyente: CHCl3/MeOH/24% NH40H 5:4:2 Detección: KMn04 al 0.5% en NaOH ÍM, Rf = 0.28 Los espectros de RMN 1H, RMN 13C, e IR y MS son consistentes con la estructura indicada.

E) Complejo de gadolinio de ácido [3ß (S) , 5ß) -3- [ [4- [bis [2- [bis (carboximetil) amino] etil] amino] -4-carboxi-1-oxobutil] amino] -12-oxocolan-24-oico salificado - con 1-desoxi-1- (metilamino) -D-glucitol (1:3) . Se adicionan gota a gota 49.0 mL de solución acuosa de meglumina 0.918 M (45.0 mmol) en una suspensión de 14.0 g del compuesto preparado en el paso D) (16.7 mmol) en H20 (100 mL) , a temperatura ambiente, para dar una solución clara (pH 6.5). Se adicionan gota a gota 31.6 mL de solución acuosa de GdCl3 0.503 M (15.9 mmol) en la misma manteniendo el pH 6.5 por adición de 55.7 mL de solución acuosa de meglumina 0.918 M (51.1 mmol) por medio de un pH-stat. Al final de las adiciones, la mezcla se filtra a través de una membrana Millipore® (HAWP 0.45 µm) , se nanofiltra, se ajusta a pH 7.0 con 0.100 ml de solución acuosa de meglumina 0.918 M (0.92 mmol) y se evapora. El residuo se seca para dar 22.0 g del producto deseado (14.0 mmol) .

Rendimiento: 84% p.f.: 100-105°C K.F. : 5.06% HPLC: 97% (% de área) Fase estacionaria: HYPURITYMR Élite C18 5 µm; 250 x 4.6 mm columna de Hypersil; Temperatura: 40°C; Fase móvil: elución gradiente; A = KH2 P04 0 . 01 M en agua ; B = CH3CN Gradiente Min % de A o. de B 0 95 5 40 65 35 Velocidad de flujo: 1 mL min" ; Detección (UV) : 210 ?im; Análisis elemental C H N Gd Na, Cl % calculado 47.23 7.16 6.22 9.97 % encontrado: 45.70 7.32 6.00 9.41 <0.1 Los espectros de IR y MS son consistentes con la estructura indicada.

EJEMPLO 3 Complejo de gadolinio del ácido (3ß, 5ß-7a, 12a) -3- [[[bis [2- # -- [bis (carboximetil) amino] etil] amino] acetil] amino] -7, 12-dihidroxicolan-24-oico salificada con 1-desoxi-l-(metilamino) -D-glucitol (1:2) A) Éster metílico del ácido (3ß, 5ß-7a, 12a) -3- [ [ [bis [2- [bis [2- (1, 1-dimetiletoxi) -2-oxoetil] amino] etil] amino] acetil] amino] -7, 12-dihidroxicolan-24-oico Se dispersan 24.8 g del éster metílico del ácido (3ß, 5ß-7a, 12a) -3- [ (aminoacetil) amino] -7, 12-dihidroxicolan-24-oico (preparado efe acuerdo al - procedimiento descrito en la WO-A-95/32741: ejemplo 5) (51.9 mmol) en una solución agitada de 38.7 g del éster 1, 1-dimetiletilico de N-(2-bromoetil) -N- [2- (1, 1-dimetiletoxi) -2-oxoetil] glicina (preparado de acuerdo al procedimiento descrito en la WO-A-95/32741: Ejemplo 15) (110 mmol) en 390 mL de CH3CN . La adición de 245 mL de amortiguador de fosfato 2 M, pH 8 da una solución bifásica que se agita vigorosamente a temperatura ambiente durante 144 horas. La fase orgánica se separa y se evapora y el aceite residual se disuelve en 250 mL de CH2CI2. La solución se lava con H2O, se seca (Na2S0 ) y se evapora. El producto crudo se purifica por cromatografía instantánea (eluyente = CHCI3/CH3OH 95:5) para dar el producto deseado (24.8 g; 24.3 mmol) . Rendimiento: 47% [a ] 2X = .+ 9.45 (c 1.5, CHC13) Análisis elemental C H N % calculado 64.68 9.47 5.'49 % encontrado: ••- 64.55 9.44 5.46 TLC: Fase estacionaria: placa de gel de silice 60F 254 Merck Eluyente: 88:12 CHCl3/MeOH Detección: KMn04 al 0.5% en NaOH ÍM, Rf = 0.57 Los espectros de RMN XH, RMN 13C, e IR y MS son consistentes con la estructura indicada.

B) Ácido (3ß,5ß-7a, 12a)-3-[ [ [bis[2-[bis (carboximetil) amino] -etil] amino] acetil] amino] -7, 12-dihidroxicolan-24-oico Se adicionan gota a gota 318 mL de una solución acuosa de LiOH '2 M (636 mmol) en 15 minutos, a una solución del compuesto preparado en el paso A) (21.6g; 21.1 mmol) en 310 mL de EtOH. Después de 23 horas, se evapora el EtOH y la mezcla de reacción se agita durante 2 horas adicionales. La solución se adiciona gota a gota en 255 mL de HCl 2.6 M y el pH se ajusta a 1.4 con NaOH al 30%. Después de 1.5 horas, el precipitado se filtra, se lava con 300 mL de HCl 0. ÍM y se seca para dar el producto deseado (13.1 g; 16.7 mmol).

Rendimiento: 78% p.f.: 129-132°C descomposición [ ]20D = + (c 2.02, ÍM NaOH) ensayo HPLC: 97.8% de área) Fase estacionaria: Lichrosorb RP-Select B 5 µm; 250 x 4 mm columna Merck KGaA; Temperatura: 45°C; Fase móvil: elución gradiente; A = KH2P0 a 0 . 01 M y H3P0 0 . 017 M en H3P04 en H20 B = CH3CN .in • % de A % de B 0 95 5 5 20 80 45 20 80 Velocidad de flujo: 1 mL min"1; Detección (UV) : 210 nm; Titulo complej ométrico: 95.5% (GdCl3 0.1M) [ ]20D = + 13.03 (c 5, 1 M NaOH) Análisis elemental C H N Cl % calculado 58.30 7.98 7.16 % encontrado: 54.63 8.12 6.64 1.82 H20 4.89 C) Complejo de gadolinio de ácido (3ß,5ß-7a, 12a) -3- [ [ [bis [2- [bis (carboximetil) amino] etil] -amino] acetil] amino] -7 , 12-dihidroxicolan-24-oico salificado con 1-desoxi-l- (metilamino) -D-glucitol (1:2). • 11.3 g del compuesto preparado en el paso B) (13.8 mmol) se dispersan en 40 mL de H20 y se 'disuelven por la adición de 44.7 mL de solución acuosa de meglumina ÍM (44.7 mmol) hasta pH 6. Se adicionan gota a gota 13.7 mL de solución acuosa de GdCl3 ÍM (13.7 mmol) en la mezcla en 1 hora manteniendo a pH 6.5 por la adición de 73.5 mL de solución acuosa de meglumina ÍM (73.5 mmol). La mezcla de reacción se nanofiltra y el pH se ajusta a 6.8 por 0.3 mL de meglumina 0.1M. Después de la evaporación y secado, el producto deseado se obtiene (17.2 g; 12.9 mmol) .

Rendimiento: 93% p.f_: 245-249°C descomposición Ligando libre: <0.1% (GdCl3 0.001 M) Ensayo de HPLC: 100% (% de área) Fase estacionaria: Lichrospher 100 RP-8 5 µm; columna de 250 x 4 mm Merck KGaA; Temperatura: 40°C; Fase móvil: elución isocrática con fase premezclada: 1 g de n-octilamina y 0.3 mmol de Na2EDTA se adicionan a 260 mL de CHCN y 740 mL de H20. La solución se amortigua a pH 7 con H3PO4 Velocidad de flujo: 1 mL min"1; Detección (UV) : 210 nm; Análisis elemental C H Gd N % calculado 47.05 7.06 11 . 84 6 . 33 % encontrado: 45.19 7.21 11 . 22 6 . 07 Los espectros de IR y MS son consistentes con la estructura indicada.

EJEMPLO 4 Complejo de gadolinio -del ácido [3ß (S) , 5ß, 12a] -3- [ [4- [bis [2- [bis (carboximetil) amino] etil] amino] -4-carboxi-1-oxobutil] amino] -12-oxocolan-24-oico salificada con 1-desoxi-l- (metilamino) -D-glucitol (1:3).

A) Éster metílico del ácido [3ß (S) , 5ßl2 ] -3- [ [ 4- [bis[2-[bis[2-(l, 1-dimetil-etoxi) -2-oxoetil ] amino] etil ] amino] -5- (1, 1-dimetiletoxi) -1,5-dioxopentil] amino] -12-hidroxi-colan-24-oico Se adiciona trietilamina (2.23 g; 22 mmol a una solución de 8.93 g del éster metílico del ácido [3ß, 5ß, 12a) -3-amino-12-hidroxicolan-24-oico (preparado de manera análoga al derivado de ácido cólico descrito en la O-A-95/32741: ejemplo 5) (22 mmol), 16.41 g del éster 1- (1, 1-dimetiletilico) del ácido N, N-bis [2- [bis [2- (1, 1-dimetiletoxi) -2-oxoetil] amino] -etil] -L-glutámico (preparado como se describe en la O-A-95/32741 : ejemplo 15) (22 mmol) y 3.91 g de cianofosfato de dietilo (24 mmol) en 300 mL de DMF a 0°C. Después de 1.5 horas a 0°C y 18 horas a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se evapora y el residuo se disuelve en EtOAc. La solución se lava con solución acuosa saturada de NaHC03 y H20, se seca (Na S04) y se evapora. El producto crudo se purifica por cromatografía instantánea para dar el producto deseado (20.67g; 18.2 mmol) .

Rendimiento: 83% [a?^D = 6.75 (c 2.0, CHC13) Análisis elemental C H N % calculado 6569 9.60 4.94 % encontrado: 66.54 9.95 4.99 TLC: Fase estacionaria: placa de gel de silice 60F 254 Merck Eluyente: n-hexano/EtOAC 1:1 Rf = 0.09 Detección: Ce (S04) 2» 4H20 (0.18%) y (NH4) 6Mo024» 4H20 (3.83%) en H2S04 al 10%.

Los espectros de RMN 1H, RMN 13C, e IR y MS son consistentes con la estructura indicada.

B) Ácido [3ß(S) ,5ß,12a]-3-[ [4-[bis[2- [bis (carboximetil) amino] etil] amino] -4-carboxi-l-oxobutil] amino] -12-hidroxicolan-24-oico El compuesto preparado en el ejemplo A) (19.72 g; 17.4 mmol) se disuelve en 105 mL de CF3C02H a temperatura ambiente. Después de 26 horas la solución se evapora y el residuo se trata con H20; el sólido se filtra, se lava con H20 y se seca parcialmente bajo vacio. El compuesto intermedio resultante se dispersa en H2O y se disuelve en NaOH hasta pH 13. Después de 5 horas a temperatura ambiente, se adiciona gota a gota HCl 0.5M en la solución hasta pH 1.4. Después de 15 horas a temperatura ambiente, el precipitado se filtra, se lava con H20 y se seca para dar un producto fluido que se purifica por cromatografía sobre resina Amberlite® XAD 1600 para obtener el producto deseado (9.92 g; 11.8 mmol).

Rendimiento: 68% p.f.: 184°C (descomposición) Titule complejométrico (GdCl3 0.1M): 99.3% Titulo ácido (NaOH 0.1 N) : 99.8% [a]20? (c.2.0; NaOH ÍM) ?(nm) 589 578 546 436 405 365 [a] + 23.61 + 24.59 + 27.90 + 46.67 + 55.61 + 71.40 Análisis elemental '" C H N % calculado 58.70 7.93 6.68 % encontrado: 58.22 8.16 6.59 H20 0.70% TLC: Fase estacionaria: placa de gel de silice 60F 254 Merck Eluyente: 5:4:2 CHC13 MeOH/25% NH4OH Rf = 0.13 Detección: Ce (S04) 2* 4H20 (0.18%) y (NH4) 6Mo7024» 4H20 (3.83%) en H2S04 al 10% Los espectros de RMN 1H, RMN 13C, e IR1 y MS son consistentes con la 'estructura indicada.

C) Complejo de gadolinio del ácido [3ß(S) ,5ß, 12a]-3-[ [4- [bis [2- [bis (carboximetil ) amino] etil] amino] -4-carboxi-l-oxobutil ] amino] -12-oxocolan-24-oico salificado con 1-desox?-1- (metilamino) -D-glucitol (1:3) . El compuesto preparado en el paso B) (8.39 g; 10 mmol) se dispersa en H20 (30 mL) y se disuelve por adición de meglumina acuosa.. ÍM (36.5 mL; 36.5 mmol) hasta pH 6. Se adiciona una solución acuosa de GdCl3 1.025 M (9.85 mL; 10.1 mmol) en 1 hora manteniendo pH 6 por adición de meglumina ÍM (19.3 mL; 19.3 mmol). La solución se nanofiltra y el pH se ajusta a 7.0 con meglumina acuosa ÍM. Después de la evaporación y secado el producto deseado se obtiene (8.57 g; 5.4 mmol) .

Rendimiento: 54% p.f.: 150-166°C (170°C descomposición) Análisis elemental C H N Gd % calculado 47.14 7.28 6.21 9.96 % encontrado: • '"43.40- 7.31 - 6.68 9.31 H20 7.14% Los espectros de IR y MS son consistentes con la estructura indicada.

D) De manera análoga al compuesto preparado en el paso C) , se prepara el complejo de gadolinio del ácido [3ß(S) ,5ß,12a]-3-[ [4- [bis [2- [bis (carboximetil) amino] etil] amino] -4-carboxi-l-oxobutil] amino] -12-hidroxicolan-24-oico salificado con sodio (1:3) . . ' El compuesto preparado en el paso B) (26.92 g; 32.08 mmol) se dispersa en H20 (100 mL) y se disuelve por adición de NaOH 2 M (56 mL; 112 mmol) a pH 6. Se adiciona una solución acuosa de GdCl3 0.512 M (58.2 mL; 29.77 mmol) en 3 horas manteniendo pH 6 por adiciona por NaOH 2M (28.95 mL; 57.9 mmol). El pH de la solución se ajusta a 6.7 con NaOH 2 M (4 mL; 8 mmol) y la solución se nanofiltra. Después de la liofilización, el producto deseado se obtiene (29.86 g; 28.2 mmol).

Rendimiento: 88% p.f.: >300°C Análisis elemental C ' H N Gd Na % calculado 46.49 5.71 5.29 14.85 6.51 % encontrado: 43.98 6.34 4.92 313.86 6.16 H20 4.63% 5 Los espectros de IR y MS son consistentes con la estructura indicada.

EJEMPLO 5 Método alternativo para la preparación del ácido 10 [3ß (S) , 5ß, 12a] -3-[ [4- [bis [2- [bis (carboximetil) - amino] etil] amino] -4-carboxi-l-oxobutil] amino] -12- hidroxicolan-24-oico de acuerdo al Esquema 3.

A) Diéster 2-metil-l- ( fenilmetilico) del ácido 15 (S)-5-oxo-l, 2-pirrolidinadicarboxilico Se adicionan 7. lg de CH3I (50 mmol) a una solución de 6.58g del éster 1- (fenilmetilico) del ácido (S ) -5-oxo-l, 2-pirrolidinacarboxilico (25 mmol) y N,N- dusopropiletilamina" (3.55 g; 27.5 mmol) en CH2C12 (33 mL) 20 y la mezcla de reacción se somete a reflujo durante 6.5 horas. Después de enfriamiento a temperatura ambiente y ? n t ?? í?m¡t É*»i im?L. dilución con CH2C1 (50 mL) la mezcla de reacción se lava con H20, Na2C03 acuoso al 2%, HCl 0.2M y H20. Después del secado sobre Na2S04 y evaporación, el producto deseado (6.8g; 24.5 mmol) se obtiene. Rendimiento: 98% Ensayo de HPLC: 98.5% (% de área) Fase estacionaria: Lichrosorb RP-Select B 5 µm; columna 250 x 4mm Merck KGaA; Temperatura: 45°C; Fase móvil: elución gradiente; A = H3P04 0 . 017 M en agua B = CH3CN Gradiente Min % de A % de B 0 80 20 15 80 20 35 40 60 Velocidad de flujo: 1 mL min"1; Detección (UV) : 210 nm; [a]20? (2; CHC13) ? (nm) 589 578 546 365 [a] - 42.97 - 44.79 - 50.09 - 100.43 Análisis elemental C H N % calculado 60.64 5.45 5.05 % encontrado: 60.94 5.54 5.00 Los espectros de RMN XH, RMN 13C, e IR' y MS son consistentes con la -estructura indicada.

B) Éster metílico del ácido [3ß (S) , 5ß, 12a] -3- [ [5-metoxi-l, 5-dioxo-4- [ [ (fenilmetoxi) carbonil) amino] pentil] amino] 12-hidroxicolan-24-oico Se adicionan 8.92 g del éster metílico del ácido (3ß, 5ß, 12a) -3-amino-l-2-hidroxicolan-24-oico (preparado de manera análoga al derivado de ácido cólico descrito en la WO-A-95/32741 : ejemglo 5) (22 mmol) a una solución del compuesto A) (6.1g; 22 mmol) en dioxano (55 mL) y la mezcla resultante se calienta a 50°C durante 24 horas, luego a 105°C durante 29 horas. El solvente se evapora bajo presión reducida y el residuo se purifica por cromatografía instantánea (elución gradiente con EtOAc/n-hexano) seguido por cristalización con mezcla de EtOAc/n-hexano 1:1, para dar el producto deseado (11.2g; 16.4 mmol) .

Rendimiento: 75% p.f.: 140°C Ensayo HPLC: 99.2% (% de área) Fase estacionaria: 'Lichrosorb RP-Select B 5 µm; columna 250 x 4 mm Merck KGaA; Temperatura: 45°C; Fase móvil: elución gradiente; A = H3P04 0.017 M en agua B = CH3CN Gradiente Min % de A % de B 0 65 35 25 15 ' 85 30 15 85 Velocidad de flujo: 1 mL min 1; Detección (UV) : 210 nm. [a]20?(c 2.01; CHC13) ?(nm) 589 578 546 365 [a] + 24.14 + 25.13 + 28.51 + 73.81 Análisis elemental C H N % calculado 68.70 8.43 4.11 % encontrado: _ £9.36 8.72 4.13 TLC: Fase estacionaria: placa de gel de sílice 60F 254 Merck Eluyente: EtOAc Detección: Ce (S04) 2* 4H20 (0.2 %) y (NH4) 6Mo7024 • 4H0 (3,8%) en H2S04 al 10% Rf= 0.11 Los espectros de RMN 1ti, RMN 13C, e IR y MS son consistentes con la estructura indicada.

C) Éster metílico del ácido [3ß (S) , 5ß, 12a] -3- [ [4- [bis [2- [bis [2- ( 1, 1-dimetil-etoxi) -2-oxoetil] amino] etil] amino] -5-metoxi-l, 5-dioxopentil] amino] -12-hidroxicolan-24-oico Se adiciona 1 g de Pd al 5%/C a una solución del compuesto B) (10. g; 15.3 mmol) en MeOH (100 mL) ; la suspensión se agita durante 3.5 horas bajo atmósfera de hidrógeno (H2 absorbido: 348 mL; 15.5 mml) a temperatura ambiente. Después de la filtración sobre un filtro Millipore® FH (0.45 µm) , la solución se evapora bajo presión reducida para dar un residuo que se disuelve en CH3CN (60 mL) . Se adiciona amortiguador de fosfato pH, acuoso, 2M (60 mL)'~, luego una solución de éster 1,1-dimetiletilico de N- (2-bromoetil) -N- [2- ( 1, 1-dimetiletoxi) -2-oxo-etil] glicina (preparado de acuerdo al procedimiento descrito en WO-A-95/32741 : ejemplo 15) (11.86g; 33.7 mmol) en CH-CN (15 L) se adiciona gota a gota en 10 minutos a temperatura ambiente. La mezcla se agita durante 39 horas. Después de la separación, la fase orgánica se evapora bajo presión reducida y el residuo se disuelve en AcOEt (200 mL) . La solución se calienta con H20, se seca (Na2S04) y se evapora. El producto crudo se purifica por cromatografía instantánea (elución gradiente con EtOAc/n-hexano) para dar el producto deseado (11.36g; 10.4 mmol).

Rendimiento: 68% p.f.: 55-58°C Ensayo de HPLC: 100% (% de área) [a]20? (c 2.01; CHC13) ? (nm) 589 578 546 365 [a] -6.97 -741 -8.61 -32.89 Análisis elemental C H N % calculado 64.93 9.42 5.13 % encontrado: 65.06' 9.36 5.11 TLC: Fase estacionaria: placa de gel de silice 60F 254 Merck Eluyente: EtOAc Detección: Ce (S04) 2* 4H20 (0.2 %) y (NH4) 6Mo7024 • 4H20 (3.8%) en H2S04 al 10% Rf= 0.45 Los espectros de RMN XH, RMN 13C, e IR y MS son consistentes con la estructura indicada.

D) ' Ácido ' [3ß(S) , 5ß, 12a]-3-[4- [bis [2- [bis (carboximetil) amino] etil] -amino] -4-carboxi-l-oxobutil] amino] -12-hidroxicolan-24-oico Una solución del compuesto C) (8.5g; 7.8 mmol) en dioxano (50 mL) se adiciona con solución acuosa de LiOH 2m (117 mL; 234 mmol) . La mezcla resultante se agita a temperatura ambiente durante 72 horas, luego se acidifica a pH 6 por adición lenta de HCl al 37%. La solución se concentra a 50g por evaporación bajo presión reducida y se diluye con H20 (40 mL) . La solución se acidifica a pH 2.5 5 por adición de HCl al 37%, se calienta a 50-55'°C y bajo agitación fuerte, , sé- acidifica muy lentamente a pH 1.3 con HCl 2N. Después de 5 minutos, la mezcla heterogénea se deja enfriar lentamente a temperatura ambiente, bajo agitación, durante 15 horas. El precipitado se filtra, se 10 lava con H20 y se seca para dar el producto deseado ( 5.92g; 7 mmol) .

Rendimiento: 90% p.f.: 180-198°C Ensayo de HPLC: 99.9% (% de área) 15 Fase estacionaria: Zorbax ECLIPSE XDB-C8 3.5 µm; columna de 150 x 4.6 mm Rockland Technologies, Inc.; Temperatura: 40°C; Fase móvil: elución gradiente; A= H3PO4 a 0 . 017M , EDTA 0 . 3 mM en agua ; 20 B = CH3N Gradiente: Min % A %B 0 85 15 40 65 35 50 65 35 Velocidad de flujo: 1.5 mL mm"1; Detección (UV) : 210 ?m; Titulo ácido (NaOH 0.1N): 99% [ ]20? (c 2.04; NaOH ÍN) ? (nm) 589 578 546 436 405 365 [a] +24 +25.83 +29.22 +49.02 +58.43 +75.59 .80 Análisis C H N Cl,L? elemental % calculado: 58.70 7.93 6.68 % encontrado 57.9O 7.97 6.57 <0.1 H20 0.95 5 Los espectros de RMN 1H, RMN 13C, IR y MS son consistentes con la estructura indicada.

EJEMPLO 6 Complejo de gadolinio del acido ( 3ß, 5ß, la, 12a) - 10 3- [ [ [ [ [bis [2- [bis (carboximetil) ammo] etil] ammo] acetil] - ammo] acetil] ammo] -7, 12-d?h?drox?colan-24-o?co salificado con 1-desox?-l- (metilammo) -D-glucitol (1:2). ^£^^gj^ "*-*—&- A) N-[ [bis- [2- [bis- [2- (1, l-dimetiletoxi-2-oxoetil] -amino] etil] amino] acetil] glicina Se dispersan 6.5 g de glicilglicina (49.3 mmol) en 100 mL en una mezcla de H20/EtOH 1:1 y se disuelven' a pH 10 con NaOH 10M (4.8 mL) . Se adicionan gota a gota éster 1 , 1-dimetiletilico de N- (2-bromoetil) -N [2- ( 1, 1-dimetiletoxi) -2-oxoetil] glicina (42 g; 110.9 mm?l) en 40 mL de EtOH en la misma en 2 horas, manteniendo pH 10.5 con NaOH 10M (5.8 mL) . La solución se torna rápidamente en una emulsión, que se disuelve después de 2.5 horas por la adición de NaOH 10 M. Después de 22 horas, el solvente se evapora, la mezcla se diluye con agua y se extrae con CH-CIT. La fase orgánica se lava con H20, se seca y se evapora, para dar un residuo que se purifica por cromatografía instantánea. El residuo se disuelve en agua, el pH se ajusta a 4.5 por adición de HC1' ÍM y la solución se extrae .con cloroformo. La fase orgánica se lava con H20, se seca y se evapora, para dar 13 g del producto deseado (19.3 mmol). Rendimiento: 39% Análisis elemental C H N % calculado 56.95 8.66 8.30 % encontrado: 56.67 8.68 8.30 TLC: Fase estacionaria: placa de gel de silice 60F 254 Merck Eluyente: CHCl3/MeOH/ 25% NH4OH 6:3:1 Rf = 0.65 Detección: KMn04 al 1% en NaOH ÍM Los espectros de RMN XH, RMN 13C, e IR y MS son consistentes con la estructura indicada.

B) Éster metílico del ácido ( 3ß, 5ß, la, 12a) -3- [[[[[bis[2-[bis[2-(l, 1-d?metiletoxi) -2-oxoetil] amino] etil] amino] acetil] amino] -acetil] amino] -7 , 12-d?h?drox?colan-24-o?co Se adicionan gota a gota 2.8 mL de TEA (20.2 mmol) en 5 minutos en una solución que contiene 13.6 g del compuesto preparado "en el- paso A) (20.2 mmol), 8.52 g del éster metílico del ácido (3ß, 5ß, la, 12a) -3-amino-7, 12-dihidroxicolan-24-oico (20.2 mmol) y DEPC (3.4 mL; 22.2 mmol) en DMF (290 mL) agitado a 0°C. Después de 1 hora la reacción se calienta a temperatura ambiente y la solución se agita durante 6.5 horas. Se adicionan 0.3 mL de DEPC (2 mmol) y la solución se agita durante 15.5 horas adicionales. Se evapora la DMF, el residuo se disuelve en EtOAc, se lava con NaHC0 acuoso luego con agua y finalmente se seca. Después de la purificación por cromatografía instantánea, se obtienen 13.7 g del producto deseado (12.7 mmol).

Rendimiento: 63% [a]20D = +5.26 (c 1.5; CHC13) C H N Análisis elemental % calculado 63.48 9.52 6.49 % encontrado: 63.22 9.40 6.40 Los espectros de RMN XH, RMN 13C, e IR y MS son consistentes con la estructura indicada.

C) Ácido (3ß,5ß,7a,12a)-3-[ [ [ [ [bis[2-[bis (carboximetil) -amino] etil] amino] acetil] amino] -acet- ] amino] -7, 12-dihidroxicolan-24-oico Se disuelven 12.85 g del compuesto preparado en el paso B) (12 mmol) en TFA (210 mL) agitando a -5/0°C.

Después de 16 horas, se evapora el TFA para dar un residuo que se disuelve en 90 mL de NaOH 0.8M a pH 13 y se agita a temperatura ambiente durante 15 horas. La solución se ^ MAM concentra a 50 mL, se adiciona gota a gota en 105 mL de HCl 0.6 M y se agita durante 2 horas. El sólido se filtra, se lava con HCl 0. ÍM y se seca para obtener un producto crudo que se purifica por cromatografía. Las fracciones que contienen los compuestos deseados en la forma salificada se evaporan para dar un residuo que se disuelve en agua y se adiciona gota a gota en HCl ÍM, manteniendo a 1.45. El precipitado se filtra, se lava con HCl 0. ÍM y se seca para dar 2.6 g del producto deseado (3.1 mmol) .

Rendimiento: 26% p.f.: 120-125°C Ensayo de HPLC: 98% (% en área) Los espectros de RMN 1ti, RMN 13C, IR y MS son consistentes con la estructura indicada.

D) Complejo de gadolinio del ácido (3ß,5ß,7a, 12a)-3-[ [ [ [ [bis [2- [bis (carboximetil) amino] etil] amino] acetil] amino] acetil] ami no] -amino] -7 , 12-di-hidroxicolan-24-oico salificado con 1-desox?-1- (metilamino) -D-glucitol (1:2) . Se dispersan en agua (20 mL) 2.59 g del compuesto preparado en el paso C) (3.08 mmol) que se disuelven por adición de solución acuosa de meglumina ÍM (3.08 mL; 3.08 mmol) a pH 5. Se adiciona Gd203 (0.501 g; 2.77 ,mmol) a la mezcla calentando a 50°C. Después de 1 hora, se adiciona meglumina ÍM (2.8 mL; 2.8 mmol) para disolver el precipitado. Después de 24 horas, la mezcla de reacción se filtra y el pH se ajusta a 6.8 con meglumina acuosa (0.4 mL) . Después de la evaporación de secado, que tienen 4.2g (3.00 mmol) del producto deseado.

Rendimiento: 99% •- p.f.: 209-213°C (descomposición) Ensayo de HPLC: 99.7% (% en área) Ligando libre: <0.1% (0.001 GdCl3) Análisis elemental: C H Gd % calculado 46.84 6.99 7.08 11.36 % encontrado 44.01 7.35 6.68 10.39 H20 4.95 Los espectros de y MS son consistentes con la estructura indicada.

EJEMPLO 7 Complejo de gadolinio de ácido [3ß (S) , 5ß] -3- [ [4- [bis [2- [bis (carboximetil) amino] etil] amino] -4-carboxi-l-oxobutil] - (carboximetil) amino] -colan-24-oico salificado con 1-desoxi-l- (metilamino) -D-glucitol (1:4).

A) Éster metílico del ácido ( 3ß, 5ß) -3- [ [2- ( 1, 1, -dimetiletoxi) -2-oxoet?l] amino] -colan-24-oico Se dispersan 40.0 g de éster metílico del ácido (3ß, 5ß) -3-aminocolan-24-o?co (preparado como en el ejemplo 1 anterior) (103 mmol) en DMF (1.0 L) a temperatura ambiente bajo nitrógeno. Se adiciona trietilamina (13.0 g; 129 mmol), . luego una solución de éster 1,1-dimetiletilico del ácido bromoacético (24. Og; 123 mmol) en DMF (30 mL) se adicionan gota a gota en la mezcla de reacción en 1 hora hasta disolución. Después de 3 dias, la mezcla se concentra y se diluye con solución acuosa de NaHC03 al 4%. La suspensión resultante se filtra, el precipitado se lava con H20 y se seca para dar 33.7g del producto deseado (66.9 mmol).

Rendimiento: 65% p . f . : 62-64 °C [ar 20uD = +23 . 55 ( c 1 . 96 , MeOH ) Análisis elemental: C H N % calculado 73.91 10.60 2.78 % encontrado 74.67 10.85 2.78 H20 <0.1 TLC: Fase estacionaria: placa de gel de silice 60F 254 Merck Eluyente: n-hexano/EtOAc 7:3 Rf = 0.31 Los espectros de RMN 1H, RMN 13C, IR y MS son 5 consistentes con la estructura indicada.

B) Éster metílico del ácido [3ß (S) , 5ß] -3- [ [4- [bis [2- [bis [2- (1, 1-dimetiletoxi) -2-oxoetil] amino] - etil ] amino] -5- (1, 1, -dimetiletoxi) -1, 5-dioxopentil] [2- 10 1(1, 1-dimetiletoxi) -2-oxo-etil] amino] colan-24-oico Se adiciona diisopropiletilamina (19.5 g; 151 mmol) gota a gota durante 20 minutos en una solución del composición A) (33.0 g; 65.5 mmol), éster 1-(1,1- dimetiletilico) del ácido N, N-bis [2- [bis [2- (1, 1- 15 dimetiletoxi) -2-oxoetil] amino] etil] -L-glutámico (preparado como se describe en O-A-95/32741 : ejemplo 15) (53.8 g; 72.1 mmol) y hexafluorofosfato de (benzotriazol-1- íloxi) tris (dimetilamino) fosfonio (BOP) (40.6 g; 91.8 mmol) en DMF (400 mL) , se agita a temperatura ambiente bajo 20 nitrógeno. Después de 2 dias, la mezcla de reacción se concentra y se toma con EtOAc. La solución se lava con dtfs??b«Ai H20, se seca (Na2S04) y se evapora. El producto crudo se purifica dos veces por cromatografía instantánea para dar 38.7 g del producto deseado (31.4 mmol). 5 Rendimiento: 48% [a]20D = 54.50 (c-2.51, CHC13) TLC: Fase estacionaria: placa de gel de silice 60F 254 Merck Eluyente: n-hexano/EtOAC 7:3 Rf = 0.22 10 Los espectros de RMN XH, RMN 13C, IR y MS son consistentes con la estructura indicada.

C) ..Ácido ' [3ß(S) ,5ß]-3-[ [4-[bis[2- [bis (carboximetil) amino] etil] amino] -4-carboxi-l- 15 oxobutil] (carboximetil) amino] -colan-24-oico En una solución del compuesto B) (38.7g; 31.4 mmol) en EtOH (350 mL) , agitada a temperatura ambiente, se adicionan gota a gota 500 mL de solución de LiOH 2M durante 1 hora. Después de 16 horas la mezcla de reacción 20 se concentra a 500 mL y se adiciona nuevamente solución de LiOH 2M (350 mL) , calentando a 50°C. Después de, -24 horas, la mezcla de reacción se enfria a temperatura ambiente y se adiciona gota a gota en 320 mL de HCl 6M, agitado de manera vigorosa a 5°C. El pH de la solución resultante se 25 ajusta a 1.0 con 55 mL de NaOH 2M. El sólido se filtra, -?m se lava con HCl 0. ÍM y se seca. El producto crudo se dispersa en H20 y se solubiliza por adición de NaOH ÍM, luego la solución básica se adiciona gota a gota en solución de HCl 0.5 M. El precipitado se filtra, se lava 5 con HCl 0.05 M, H20 y se seca para dar 23.5 g del producto deseado (26.7 mmol) .

Rendimiento: 85% p.f.: 178-182°C [a]':-20 = + 24.10 (c.1.49, ÍM NaOH) 10 Ensayo de HPLC: 100% (% de área) Fase estacionaria: Hypurity Élite C-18 5 µm; columna de 250 x 4.6 mm; Temperatura: 40°C; Fase móvil: elución gradiente; 15 A = KH2P04 0.01M, EDTA 0.3 mM en agua B = CH3CN Gradiente Min % de A de B 0 95 5 4 0 65 35 50 65 35 Velocidad de flujo: 1 mL min 1 ; Detección (UV) : 210 nm; 20 «ÉÉÉIÉÉIWMb Análisis C H N Na Cl elemental % calculado 58.62 7.78 6.36 % encontrado: 57.71 8.07 6.20 0.13 0.55 H20 , '" <0.1 Los espectros de RMN 1H , RMN 13C, e IR y MS son consistentes con la estructura indicada.

D) Complejo de gadolinio del ácido [ 3ß (S) , 5ß] -3- [[4-[bis[2-[bis (carboximetil) amino] etil] amino] -4-carboxi- 1-oxobutil] (carboximetil) amino] -colan-24-oico salificado con 1-desoxi-l- (metilamino) -D-glucitol (1:4). Se adiciona una suspensión del 'compuesto preparado en el paso C) (12.9 G; 14.6 mmol) en H20 (100 mL) con solución acuosa de meglumina ÍM (72.0 mL; 72.0 mmol) a temperatura ambiente para obtener una solución clara que tiene pH 6.2. Se adiciona gota a gota una solución acuosa de GdCl3 0.393 M (37.2 ml ; 14.6 mmol) manteniendo pH 6.2 por la adición de meglumina ÍM (30.0 ml; 30.0 mmol) por medio de un pH-stat. Al final de las adiciones, la mezcla de reacción se filtra a través de papel y luego a través de una membrana Millipore® (HAWP 0.45 um) , se nanofiltra, se ajusta a pH 7.0 por la adición de meglumina ÍM (0.20 ml; 0.20 mm ol) y se evapora. El sólido se seca para dar 24.0 g del producto deseado (13.2 , .. . ,-am. i mmol) . ' Rendimiento: 91% p.f.: 90-92°C Ensayo de HPLC: 100% (% de área) Fase estacionaria: Lichrospher 100 RP-8 5 µm; columna Merck KGAa 250 x 4 mm; Temperatura: 40°C; Fase móvil: elución isocrática con fase móvil premezclada: 1 g de n-octalamina se adiciona a 400 mL de acetonitrilo y 600 mL de agua. La solución se amortigua a pH con H3PO4; Velocidad de flujo: 1 mL min"1; Detección (UV) : 210 nm; Análisis elemental C H H N N G Gdd Na, Cl % calculado 46.96 7 . 38 6 . 17 8 . 66 % encontrado: 44.27 7 7..5599 5 5..7766 8 8..2211 <0.1 H20 6.61 Los espectros de IR y MS son consistentes con la estructura indicada.

. - EJEMPLO 8 Complejo de gadolinio del ácido [3ß (R) , 5ß, 12a] -3-[[4-[bis[2-[bis (carboximetil) amino] etil] amino] -4-carbox?-1-oxobutil] amino] -12-hidroxicolan-24-oico salificado con sodio (1:3).

Siguiendo el esquema de reacción 3 y el procedimiento experimental dado en el ejemplo 5, se esterificó el éster 1- (fenilmetilico) del ácido (R) -5-oxo-1, 2-pirrolidinadicarboxilico (producto comercialmente disponible) se esterificó con yoduro de metilo en la presencia de N, N-diisopropiletilamina y el éster (R)-metilico obtenido de esta manera se hizo reaccionar con éster metílico - del ácido -[3ß (S) , 5ß, 12a] -3-amino-12-hidroxicolan-24-oico (preparado de manera análoga al derivado de ácido cólico descrito en la WO-A-95/32741 : ejemplo 5) para dar el éster metílico del ácido [3ß(R) ,5ß,12a]-3-[ [ - [bis [2- [bis ( 1 , 1-dimetiletoxi) -2-oxoetil ] amino] etil] amino] -5-metoxi-l , 5-dioxopentil] -amino] -12-hidroxicolan-24-oico . Después de la remoción (H2/Pd) del grupo protector Cbz y alquilación con éster 1, 1-dimetiletilico de N- (2-bromoetil) -N- [2- ( 1, 1-dimetiletoxi) -2-oxoe'til] -glicina (preparado de acuerdo al procedimiento descrito en WO-A-95/32741 : ejemplo 15) en CH3CN/amortiguador de fosfato, ' pH 8, se obtuvo un hexaéster que se transformó (LiOH acuoso/hexano) en el hexaácido relacionado. Éste último se volvió complejo, de acuerdo al procedimiento reportado en el ejemplo 4, punto 5 D) , para obtener el producto deseado con un rendimiento total de 44%. p.f.: >300°C Análisis C H N Gd Na elemental % calculado 46.49 5.71 5.29 14.85 6.51 H20 % encontrado: 44.02 6.13 5.10 14.09 6.17 4.50% Los espectros de IR y MS son consistentes con la 10 estructura indicada.

EJEMPLO 9 Complejo de gadolinio del ácido [ 3ß (RS) , 5ß, 12a] - 3-[[4-[bis[2-[bis (carboximetil) amino] etil] amino] -4- 15 carboxi-1-oxobutil] amino] -12-hidroxicolan-24-oico salificado con sodio (1:3).

^^^A El compuesto se sintetizó a partir de éster metílico del (3ß, 5ß, 12a) -3-amino-12-hidroxicolan-24-oico (preparado de manera análoga al derivado de ácido cólico descrito en WO-A-95/32741 : ejemplo 5) y éster 1-(1,1-dimetiletilico del ácido N, N-bis [2- [bis [2- ( 1, 1-dimetiletoxi) -2-oxoetil] amino] -etil] -DL-glutámico, a partir de ácido DL glutámico, como se describe en WO-A-95/32741: ejemplo 15 para el isómero L) de acuerdo al procedimiento dado en detalle en el ejemplo 4. El producto se obtuvo con un rendimiento total de 61%. p.f. : >300°C Ensayo de HPLC: 99% (% de área) Fase estacionaria: Zorbax ECLIPSE XDB-C8 3.5 um; columna de 150 x 4.6 mm Rockland Technologies, Inc.; Temperatura: 40°C Fase móvil: elución gradiente; A = KH2P04 0.005 M, K2HP04, 0.005m, Edta 0.3 mM en agua; _ B = CH3CN Gradiente Min % A % B 0 90 10 5 90 10 20 50 50 Velocidad de flujo: 1.0 mL min"1; Detección (UV) : 210 nm; El método,._ cromatográfico muestra dos picos, en casi igual porcentaje, que se relacionan a los diastereoisómeros debido al esterocentro RS en el residuo de DTPA.

Análisis C H N Gd Na elemental %Calc. 46.49 5.71 5.29 14.85 6.51 %Encontra 43.98 6.4 4.98 13.86 6.16, H20 do 4.63% Los espectros de IR y MS son consistentes con la estructura indicada.

EJEMPLO 10 Complejo de gadolinio del ácido [3a (S) , 5ß, 12a] 3-[[4-[bis[2-[bis (carboximetil) amino] etil] amino] -4-carboxi-1-oxobutil] amino] -12-hidroxicolan-24-oico salificado con sodio'- (1:3).

Ester metílico del ácido 3a-5ß-12a) -3-amino-12-hidroxicolan-24-oico El éster ..metílico del ácido (3a-5ß-12a) -3, 12-h?droxicolan-24-oico se hizo reaccionar bajo condiciones de Mitsunobo (Mitsunobu, O. Sinthesis 1981, 1-28; Denike, J. K. et al., Chem. Phys. Lipids 1995, 77, 261-267) con trifenilfosfina, azodicarboxilato de dietilo y ácido fórmico en THF para dar el éster metílico del ácido ( 3a-5ß-12a) -3-formiloxi-12-hidroxicolan-24-oico . Este último se desprotegió (MeOH/HCl al éster metílico del ácido ( 3a-5ß-12a) -3, 12-dihidroxicolan-24-oico que se sometió a las series de reacciones descritas en la WO-A-95/32741 : ejemplo 5 para el derivado de ácido cólico. Se obtuvo el éster metílico del ácido (3a-5ß-12a) -3-amino-12-hidroxicolan-24-oico con 32% de rendimiento total. p.f.: 90-92°C [a]20D = + 53.46 (c 1.3, CH3OH) Análisis elemental C H N % calculado 74.03 10.69 3.44 % encontrado: 74.20 10.99 3.26 TLC: Fase estacionaria: placa de gel de silice 60F 254 Merck • Eluyente: CHCl3/CH3OH/25% NH4OH 9:1:0.15 Rf = 0.21 Los espectros de RMN XH, RMN 13C, IR y MS son consistentes con la estructura indicada.

Siguiendo el Esquema de reacción 3 y el procedimiento experimental dado en el ejemplo 5, el diéster de 2-metil-l- ( fenilmetilico) del ácido (S)-5-oxo-1 , 2-p?rrolidinadicarboxilico se hizo reaccionar con el compuesto A). El, éster metílico del ácido 3a (S) , 5ß, 12a] -3-[ [4- [bis [2- [bis [2- ( 1 , 1-dimetiletoxi) -2-oxoetil] amino] etil] amino] -5-metoxi-1, 5-dioxopentil] amino] -12-hidroxicolan-24-oico obtenido de esta manera se hidrogenó (H2/Pd) para remover el grupo protector Cbz.

La alquilación subsecuente con éster 1,1-dimetiletilico de N- (2-bromoetil) -N- (2- (1, 1-dimetiletoxi) -2-oxoetil] glicina (preparado de acuerdo al procedimiento descrito en WO-A-95/32741 : ejemplo 15) en CH3CN/amortiguador de fosfato, pH 8, dio el hexaéster relacionado. Este último se transformó (LiOH acuoso/dioxano) en el hexaácido que se volvió complejo, de acuerdo al procedimiento ' reportado en el ejemplo 4, D) , para obtener el producto deseado con 33% de rendimiento total. p.f. >300°C Ensayo de HPLC: 100.0% (%de área) Análisis C H N Gd Na elemental % calculado: 46.49 5.71 5.29 14.85 6.51 % encontrado 42.04 6.37 4.76 13.28 5.91 H20 9.79% Los espectros de IR y MS son consistentes para estructurar la relación indicada.

EJEMPLO 11 Complejo de gadolinio de ácido [3ß (S) , 5ß, 7a] -3-[[4-[bis[2-[bis (carboximetil) amino] etil] amino] -4-carboxi-1-oxobutil] amino] -7-hidroxicolan-24-oico salificado con sodio (1:3) .

El compuesto se sintetizó a partir del éster metílico del ácido (3ß-5ß-7a) -3-amino-7-hidroxicolan-24-oico (preparado de manera análoga al derivado de ácido cólico descrito en WO-A-95/32741 : ejemplo 5) y el éster 1- (1, 1-dimetiletilico) del ácido N, N-bis [2- [bis [2- (1, 1-dimetiletoxi) -2-oxoe.til] amino] -etil] -L-glutámico (preparado como se describe en WO-A-95/32741 : ejemplo 15) de acuerdo al procedimiento dado en detalle en el ejemplo 4. El producto se obtuvo con 89% de rendimiento total. p.f. >300°C Análisis Gd Na elemental % calculado: 46.49 5.71 5.29 14.85 6.51 % encontrado 43.88 6.50 4.91 13.62 6.04 H20 7.11% Los espectros de IR y MS están consistentes con la estructura indicada.

EJEMPLO 12 Ácido [3ß(RS) ,5ß,7a,12a]-3-[ [4- [bis [2- [bis (carboximetil) -amino] etil] amino] -4-carboxi-1-oxobutil] amino] -7, 12-dihidroxicolan-24-oico El compuesto se sintetizó a partir del éster metílico del ácido ( 3ß, 5ß, la, 12 ) -3-amino-7, 12-dihidroxicolan-24-oico (preparado como se describe en WO-A-95/32741: ejemplo 5) y el éster 1- ( 1, 1-dimetiletilico) del ácido N, N-bis (2- (bis (2- (1, 1-dimetiletoxi) -2-oxoetil] amino] -etil] -DL-glutámico (preparado, a partir de ácido DL glutámico, como se describe en la WO-A-95/32741 : ejemplo 15 para el isómero L) de acuerdo al procedimiento dado en detalle en el ejemplo 4 para la preparación del compuesto B) . El producto se obtuvo con un rendimiento total de 65%. p.f. 224°C descomposición Ensayo de HPLC: 97% (% de área) Fase estacionaria: Zorbax ECLIPSE XDB-C8 3.5 µm; columna de 150 x 4.6 mm Rockland Technologies, Inc.; Temperatura: 40 °C; Fase móvil: . elución gradiente; A = H3P04, 0.017 M, EDTA 0.3 mM en agua; B = CH3CN Gradiente min . de A O, O de B 0 95 5 40 65 35 50 65 35 Velocidad de flujo: -1.0 mL min"1; Detección (UV) : 210 nm; El método cromatográfico muestra dos picos, en porcentaje casi igual, que se relacionan a los diastereoisómeros debido al estereocentro RS en el residuo de DTPA. Análisis C H " N Li,Cl elemental % calculado 57.60 7.78 6.55 % encontrado: 54.34 7.81 6.19 <0.1 H20 5.12% Los espectros de IR y MS son consistentes con la estructura indicada.

EJEMPLO 13 Complejo de gadolinio del ácido [3a(S) ,5ß,7a,12a]-3-[ [ [5- [bis [2- [bis (carboximetil) amino] etil] amino] -5-carboxipentil] amino] carbonil] oxi] -7, 12-hidroxicolan-24-oico salificado con sodio (1:3) .

A) Éster metílico del ácido [ 3a (S) , 5ß, la, 12a] -3- [ [ [ [6- (1, 1-dimetiletoxi) -5- [bis [2- [bis [2- (1, 1-dimetiletoxi) -2-oxoetil] amino] etil] amino] -6-oxohexil] amino] carbonil] oxi] -7, 12-dihidroxicolan-24-oico Método 1 : Una solución de carbonato de bis (triclorometilo) (2.9 g, 9.7 mmol) en CH2C12 anhidro (40 mL) se adicionó gota a gota, bajo nitrógeno, a una solución de éster metílico del ácido [3a, 5ß, la, 12a] -3, 7 , 12-trihidroxiconal-24-oico (producto comercial) (10.0 g; 23.7 mmol) y piridina (2.3 mL; 28.4 mmol) en CH2C12 anhidro (100 mL enfriado a 0°C. La mezcla luego se deja calentar y después de 1 hora a temperatura ambiente la solución se enfria nuevamente a 0°C, N,N-diisopropiletilamina (7.9 mL; 47.3- mmol) se adiciona a una solución de éster ( 1, í-dimetiletilico de N2,N2-bis[2- [bis [2- (1, 1-dimetiletoxi) -2-oxoetil] amino] etil] -L-lisina (Anelli, P. L. et al., Bioconjugate Chem. 1999, 10, 137) (17.6 g; 23.7 mmol) en CH2C12 anhidro (50 mL) se adiciona gota a gota. La solución se agita 3 horas a temperatura ambiente, luego se lava con H20 (2 x 100 mL) , se seca sobre Na2S04 y se evapora. El producto se purifica por cromatografía instantánea para dar el producto deseado (14.8 kg; 12.4 mmol) . Rendimiento: 52% Los espectros de RMN:H, RMN13C, IR y MS son consistentes con la estructura indicada.

Método 2: Una solución del éster metílico del ácido [3a,5ß,7a,12a]-3-[ (clorocarbonil) oxi] -7, 12-dihidroxicolan-24-oico (Janout, V., Lanier, M.; Regen, S. L. J. Am. Chem. Soc. 1997, 119, 640) (6.1 g; 12.6 mmol) en CH2CI2 anhidro (150 mL) se enfrio a 0°C bajo nitrógeno y luego se adiciona N, N-diisopropiletilamina (4.8 mL; 27.6 mmol). Luego, se adiciona gota a gota una solución del éster (1, 1-dimetiletilico) de N2, N2-bis [2- [bis [2- (1, 1-dimetiletoxi) -2-oxoetil] amino] etil] -L-lisina (9.3 g; 12.6 mmol) en CH2C12 anhidro (20 mL) . La solución se agitó durante 3 horas a temperatura ambiente luego se lavó con H20 (2 x 100 mL) , se secó sobre Na S04 y se evaporó. El producto crudo se purificó por cromatografía instantánea para dar el producto deseado (11.9 g; 9.9 mmol). Rendimiento: 79% Los espectros de RMNXH, RMN13C, IR y MS son consistentes con la estructura indicada.

B) Ácido [3a(S) ,5ß,7a,12a]-3-[{ [ [5-[bis[2- [bis (carboximetil) amino] etil] amino] -5-carboxipentil] amino] -carbonil] oxi] -7, 12-dihidroxicolan-24-oico Se adicionó una solución acuosa 2M de LiOH (141 mL) gota a gota a una solución del compuesto A) (11.2 g; 9.4 mmol) en 1,4-dioxano (141 mL) a temperatura ambiente. Después de 104 horas, la solución se concentró (150 mL) y se adicionó gota a gota a HCl acuoso 2M (175 mL) : el pH final fue de 1.9. El precipitado se filtró, se lavó con H20 (5 x 50 mL) y se secó al vacio. El producto crudo se purificó por cromatografía instantánea. El sólido obtenido se disolvió en CH3CN acuoso al 10% y el pH se ajustó a 1 por la adición de CH1 concentrado, luego la solución se cargó en una columna de resina Ambertile® XAD 16.00 (250 mL) y se eluyó con gradiente de CH3CN/H20. Las fracciones que contienen el producto se evaporaron para dar el producto deseado (4.3 g; 4.8 mmol). Rendimiento: 51 % p.f.: 184-191 K.F.: 4.36% [a]20D = + 19.5 (c 1, NaOH 1 M) Ensayo HPLC: 97% (% de área) Fase estacionaria: Hypupty Élite C 18 5 µm; columna de 250 x 4.6 mm empacada por Hypersil; Temperatura: 40°C; Fase móvil: elución gradiente; A = KH2P04 0.01 M, EDTA 0.3 mM en agua; B = CH3CN Gradiente mmiinn.. % % ddee AA % de B 0 95 5 20 65 35 50 65 35 Ve.ccj.dad de flujo: 1 mL mm"1; Detección (UV) : 200 nm; Análisis elemental C H N Cl % calculado 57.45 7.85 6.23 % encontrado: 55.22 7.91 6.08 < 0.1 Los espectros de RM^H, RMN13C, IR y MS son consistentes con la estructura indicada.

C) complejo de gadolinio del ácido [3a(S) ,5ß,7a,12a]-3-[ [ [ [5- [bis [2- [bis (carboximetil) amino] etil] amino] -5-carboxipentil] amino] -carbonil] oxi] -7 , 12-dihidroxicolan-24-oico salificado con sodio (1:3). El compuesto preparado en el ejemplo B) (4.7 g; 5.2 mmol) se dispersó en. H20 (100 mL) y se disolvió por adición de NaOH ÍM (10 mL) hasta que el pH fue de 6.5. Se adicionó una solución de GdCl3 (1.9 g; 5.2 mmol) en H20 (17 mL) manteniendo el pH 6.5 con NaOH ÍM (15.6 mL) . Después de 1 hora a temperatura ambiente, la solución de cargó sobre una columna de resina Amberlite® XAD 16.00 (250 mL) que se eluyó con gradiente de CH3CN/H20. Las fracciones que contienen el producto se evaporaron para dar el producto deseado (4.2 g; 3.8 mmol). Rendimiento: 72% p.f-,: >300°C K.F. : % 9.49% [a]20D = + 2.63 (c 2, H20) ensayo de HPLC: 100% (% de área) (mismo método del paso B) Análisis C N Gd Na Cl elemental % calculado: 46.15 5.76 5.00 14.05 6.14 % encontrado 41.80 6.5 4.54 12.64 5.73 <0.1 Los espectros de RMNXH, RMN13C, IR y MS son consistentes con la estructura indicada.

EJEMPLO 14 Complejo de manganeso de ácido [3ß (S) , 5ß, 12 ] -3-[[4-[[2-[bis- (carboximetil) amino] etil] -carboximetil] amino] -4-carboxi-l-oxobut?l] amino] -12-h?droxicolan-24-oico salificado con sodio (1:3).

A) éster metílico del ácido [3ß (S) , 5ß, 12a] -3-[ [4-amino-5-metoxl-1, 5-dioxopentil] amino] -12-hidroxicolan-24-o?co 3.4 g de Pd al 5%/C se adicionan a una solución del éster metílico del ácido [3ß (S) , 5ß, 12a] -3- [ [5-metoxi-1, 5-dioxo-4- [ [ (fenilmetoxi) carbonil] amino] peñtil] amino] -12-hidroxicolan-24-oico (ejemplo 5, producto B) (34.14 g; 50 mmol) en MeOH (340 mL) . La suspensión se agitó, a temperatura ambiente, durante 3.5 horas bajo una atmósfera de hidrógeno. Después de la filtración a través de un filtro FH Millipore® (0.45 µm, la solución se evaporó a sequedad para dar el producto deseado (27.1 g; 49.3 mmol). Rendimiento 98.6% Pérdida de peso (50°C; alto vacio): <0.1% Análisis elemental c H N % calculado: 67 . 85 9 . 55 5 . 10 % encentrado: 68 . 58 9 . 72 5 . 12 [a]20D = + 36.61 (c 2.01, CHC13) Titulo ácido (HCl 0.1 M) : 94.6% Los espectros de RMNXH, RMN13C, IR" y MS son consistentes con la estructura' indicada.

B) Éster metílico del ácido [3ß (S) , 5ß, 12a] -3-[ [4- [ [2-[Bis [2- (1, 1-dimetiletoxi) -2-oxoetil] amino] etil] [2-( 1 ,- 1-dimetiletoxi) -2-oxoetil] amino] -5-metoxi-l, 5-dioxopentil] amino] -12-hidroxicolan-24-oico El compuesto preparado en el paso A) (16.0 g; 29.1 mmol) y el éster 1, 1-dimetiletilico de N-(2- bromoetil) -N- [2- (1, 1-dimetiletoxi) -2-oxoetil] -glicina (13.3 g; 37.8 mmol) (preparado de acuerdo al procedimiento 5 descrito en WO-A-95/32741 : ejemplo 15) se disolvió en EtOAc (120 mL) . Después de la adición de amortiguador de fosfato 2M, pH 8 (120 mL) , la mezcla se agitó vigorosamente durante 2 horas, luego la fase acuosa se reemplazó con amortiguador de fosfato 2M fresco, pH 8 (120 10 ml) y se agitó durante 70 horas adicionales. La mezcla se calentó a 40°C durante 12 horas, se enfrió a temperatura ambiente, se separó y la fase orgánica se evaporó para dar un residuo que se disolvió en CH2C12 (150 mL) , se lavó con agua (2 x 100 mL) , se secó sobre Na2S04 y se evaporó. El 15 producto crudo se purificó por cromatografía instantánea para dar el producto deseado (12.3 g; 15.0 mmol). Rendimiento: 52% Análisis elemental C H N % calculado: 65.90 9.46 5.12 % encontrado 65.99 9.72 5.03 TLC: Fase estacionaria: placa de gel de silice 60F 254 20 Merck Eluyente: EtOAc/n-hexano 1:1 Rf = 0.40 Detección: KMn04 ál 1% en NaOH ÍM ^áj^jj ggijg^rfto Los espectros de RMNXH, RMN13C, IR y MS son consistentes con la -estructura indicada.

C) éster metílico del ácido [3ß (S) , 5ß, 12a] -3- [ [4-[ [2- [bis [2- (1, 1-dimeti letoxi) -2-oxoetil] amino] etil] (2- (1, l-dimetiletoxi-2-oxoetil] amino] -5-metoxi-l, 5-dioxopentil] amino] -12-hidroxicolan-24-oico Se adicionó bromoacetato de ter-butilo (3.9 g; 20.1 mmol) gota a gota a una solución del compuesto preparado en el paso B) (11.0 g; 13.4 mmol-) y N,N-diisopropiletilamina._ (3.5 mL; 20.1 mmol) en CH3CN . La mezcla se agitó 24 horas a temperatura ambiente y luego se adicionó más N, N-diisopropiletilamina (0.9 mL; 4.0 mmol) y bromoacetato de ter-butilo (0.8 g; 4.0 mmol). La mezcla se agitó durante 70 horas adicionales, se separó y la fase orgánica se evaporó para dar un residuo que se disolvió en CH2CI2 (150 mL) , se lavó con agua (2 x 100 mL) , se secó soore Na2S04 y se evaporó. El producto crudo se purificó por cromatografía instantánea para dar el producto deseado (10.7 g; 11.5 mmol) . Rendimiento: 85% Análisis elemental C H N % calculado: 65.57 9.39 4.50 % encontrado 66.27 9.62 4.52 TLC: Fase estacionaria: placa de gel de silice 60F 254 Merck Eluyente: EtOAc/n-hexano 1:1 Rf = 0.46 Detección: KMn04 al 1% en NaOH ÍM Los espectros de RMNXH, RMN13C, IR y MS son consistentes con la estructura indicada.

D) Ácido [3ß(S) ,5ß,12a]-3-[ [4-[ [2- [bis (carboximetil) amino] etil] (carboximetil) amino] -4-carboxi-1-oxobutil] -amino] -12-hidroxicolan-24-oico Una solución acuosa 2M de LiOH (120 mL) se adicionó gota a gota a una solución del compuesto preparado en el paso C) (9.2 g; 9.8 mmol) en 1,4-dioxano (120 mL) a temperatura ambiente. Después de 24 horas, la solución se concentró (100 mL) y se adicionó gota' a gota a HCl acuoso 2M (135-- mL): el pH final fue de 1.9. El precipitado se filtró, se lavó con H20 (5 x 50 mL) y se secó al vacio para dar el producto deseado (7.3 g; 9.6 mmol) . Rendimiento: 98% p.f.: 163-168°C K.F. : 1.81% [a]20D = + 29.03 (c 1, NaOH 1 M) HPLC: 100% (% de área) Fase estacionaria: Zorbax Eclipse XDB-C8 3.5 µm; columna de 150 x 4.6 mm empacada por Rocklánd Technologies Inc.; Temperatura: - 40°C; Fase móvil: elución gradiente; A = KH2P04 0 . 01 M, K2HP04 0 . 01 M, EDTA 0 . 3 mM en agua ; B = CH3CN - Gradiente min . de A de B 0 93 7 5 93 7 50 60 40 Velocidad de flujo: 1 mL min -"1;, Detección (UV) : 200 nm; Análisis elemental " C . H N Li Cl % calculado 60.23 8.06 5.69 % encontrado: 58.60 8.25 5.49 <0.1 <0.1 Los espectros de RMNXH, RMN13C, IR y MS son consistentes con la estructura indicada.

E) Complejo de manganeso del ácido [3ß(S),5ß,12a]-3-[[4-[[2-[bis (carboximetil) amino] etil] (carboximetil) amino] -4-carboxi-1-oxobutil] amino] -12-hidr;oxicolan-24-oico salificado con sodio (1:3). El compuesto preparado en el paso D) (5.3 g; 7.2 mmol) se dispersó en H20 (250 mL) y se disolvió por adición de NaOH ÍM (36 mL) hasta que el pH fue de 6.5. Una solución de MnCl2»4H20 (1.4 g; 7.2 mmol) en H20 (50 mL) se adicionó manteniendo pH 6.5 con NaOH ÍM (7.9 mL) . Después de 1 hora a temperatura ambiente, la solución se desalificó por nanofiltración, luego se evaporó para dar el producto deseado.

Rendimiento: 98% p.f.: >300°C K.F.: 13.54% [a]20D = + 2.3 (c 2, H20) Ensayo de CE: 100% (% de área) Capilaridad: silice fusionada 0.72 m x 50 µm Voltaje: 30 kV Amortiguador: borato 0.07 M, pH 9.3, EDTA 0.3 mM Temperatura: 25°C Punto de detención: 20 min; Detección (UV) : 200 nm; Inyección: ' hidrodinámica (50 mbar, 4 s); Concentración de muestra: 1 mg mL"1 Instrumentación: Hewlett Packard 3D HPCE Itinerario de pre-acondicionamientos : t (min) acción 2 enjuague con H20 2 enjuague con NaOH 0^. ÍM 1 enjuague con H20 5 enjuague con amortiguador Análisis elemental C H N Mn Na Cl % calculado: 51.87 6.35 4.90 6.41 8.05 % encontrado: 45.50 6.95 4.30 5.28 6.86 <0.1 Los espectros de IR y MS son consistentes con la estructura indicada. De la misma manera, iniciando del compuesto B) en el ejemplo 2, el complejo de gadolinio del ácido [3ß(S) ,5ß]-3-[ [4-[ [2- [bis (carboximetil) amino] etil] -(carboximetil) amino] -4-carboxi-l-oxobutil] amino] -12-oxocolan-24-oico salificado se preparó.

EJEMPLO 15 Complejo de manganeso del ácido [3a (S) , 5ß, 12a] -3-[[[[5-[[2-[bis (carboximetil) amino] etil] (carboximetil) amino] -5-carboxipentil] amino] carbonil] oxi] -12-hidroxicolan-24-oico salificado. con sodio (1:3).

A) Ester metílico del ácido N2- [2- [bis- [2- (1, 1-dimetiletoxi) -2-oxoetil] -amino] etil] -N2- [2- (1, 1-dimetiletoxi) -2-oxoetil] -N6- [ (fenilmetoxi) carbonil] -L-lisina , El éster 1, 1-dimetiletilico de N- (2-bromoetil) -N-[2-(l, l-dimetiletoxi)-2-oxoetil] glicina (25.6 g; 72.55 mmol) (preparado de acuerdo al' procedimiento descrito en WO-A-95/32741: ejemplo 15) disuelto en CH3CN (25 mL) se adicionó gota a gota a una solución del clorhidrato del éster metílico de N6 [ (fenilmetoxi) carbonil] -L-lisina (20 g; 60.46 mmol) y N, N-diisopropiletilamina (12.64 mL; 72.55 mmol) en CH3CN (250 mL) . La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente. Después de 5 dias . más se adicionaron N, N- . diisopropiletilamina (17.7 mL; 101.6 mmol) y bromoacetato de ter-butilo (18.8 g; 13.5 mL; 101.6 mmol) a la solución. Después de 24 horas el solvente se evaporó y el residuo se trató con Et20 (200 mL) . La mezcla se filtró, la solución se lavó con HCl 0. ÍM (2 x 100 mL) , se secó sobre Na2S04 y se evaporó bajo presión reducida. El producto crudo se purificó por cromatografía instantánea para dar el producto deseado (13.03 g; 19.2 mmol) . Rendimiento: 32% K.F. : >0.1% [a]20D = 22.47 (c ,1.9-3, CHC13) Análisis elemental C H N % calculado 61.83 8.45 6.18 % encontrado: 61.70 8.52 5.84 TLC: Fase estacionaria: placa de gel de silice 60F 254 Merck Eluyente: EtOAc/n-hexano 3:7 Rf = 0.40 Detección: Ce (S04) 2» 4H20 (0.18 %) y (NH4) 6Mo7024» 4H20 (3.83%) en H2S04 al 10% Los espectros de RMNXH, RMN13C, IR y MS son consistentes con la estructura indicada.

B) Éster metílico del ácido (3a, 5ß, la, 12a) -3- [ (clorocarbonil) oxi] -12-hidroxicolan-24-oico PRECAUCIÓN: Todas las operaciones se deben realizar bajo una campana de humos bien ventilada Se adicionó gota a gota una solución al 205 de fosgeno en tolueno (-.00 mL; 202.2 mmol) a una solución del éster metílico del ácido (3a, 5ß, 7a, 12a) -3, 12-dihidroxicolan-24-oico (14.7 g; . 36 mmol) en CH2C12 anhidro (350 mL) enfriado a 0°C bajo nitrógeno. La solución se agitó 3 horas a temperatura ambiente luego se evaporó (PRECAUCIÓN) para dar el producto deseado (15.2 g; 32.4 mmol) . Rendimiento: 90% Los espectros de RMNXH, RMN13C, IR y MS son consistentes con la estructura indicada.

C) Éster metílico del ácido [3a(S), 5ß,12a]-3- [ [ [ [5-[ [2- [bis- [2- (l", l-dimetiletoxi)-2-oxoetil] amino] etil] [2- (1, 1-dimetiletoxi) -2-oxoetil] amino] -6-metoxi-6-oxohexil] amino] carbonil] oxi] -12-hidroxicolan-24-oico . Se adicionó Pd al 5%/C (1.3 g) a una solución del compuesto preparado en el paso A) (12.3 g; 18.1 mmol) en MeOH (120 mL) y la suspensión se agitó durante 3 horas bajo atmósfera de hidrógeno a temperatura ambiente. Después de la filtración a través de un filtro Millipore® (FT 0.45 µm) , -la" solución se evaporó bajo presión reducida. El producto crudo se disolvió en CH2C12 anhidro (20 mL) y se adicionó gota a gota a una solución del compuesto preparado en el paso B) (8.7 g; 18.54 mmol) y N, N-diisopropiletilamina (DIEA) (6.5 mL; 37.07 mmol) en CH..C 2 anhidra (200 mL) a 0°C y bajo nitrógeno. Después de 3 horas, la mezcla de reacción se lavó con H20 (2 x 100 mL) , la fase orgánica se separó, se secó sobre Na2S0 y se evaporó bajo presión reducida. El producto crudo se purificó por cromatografía instantánea para dar el producto deseado (8.6 g; 8.8 mmol).

Rendimiento: 49% K.F. : <0.1% Análisis elemental C H N % calculado 65.07 9.38 4.30 % encontrado: 65.67 9.52 4.24 TLC: Fase estacionaria: placa de gel de silice 60F 254 Merck Eluyente: EtOAc/n-hexano 3:7 Rf = 0.30 Detección: Ce (S04) 2'4H20 (0.18 %) y (NH4) 6Mo7024» 4H20 (3.83%) en H2S04 al 10% Los espectros de RMNXH, RMN13C, IR y MS son consistentes con la estructura indicada.

D) Ácido [3a(S) ,5ß,12a]-3-[ [ [ [5-[ [2-[bis (carboximetil) amino] etil] (carboximetil) amino] -5-carboxipentil] amino] carbonil] oxi] -12-hidroxicolan-24-oico Se adicionó LiOH 2M (133 mL; 266 mmol) a una solución del compuesto preparado en el paso C) (8.5 g; 10.64 mmol) en 1,4-dioxano (130 mL) . La A solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 24 horas y luego se neutralizó a pH 7 por adición de HCl 2 N (120 mL) . La solución se concentró por evaporación bajo presión reducida a medio volumen y se acidificó muy lentamente a pH 1.5 bajo agitación vigorosa para dar un precipitado blanco que se filtró, se lavó con H20 (2 x 100 mL) y se secó para dar el producto deseado (6.45 g; 8.13 mmol) .

Rendimiento: 76% p.f.: 188.9°C K.F.: 1.44% [a]20D = + 35.47 (c 2.01, NaOH 1 M) Ensayo de HPLC: 96.8% (% de área) Fase estacionaria: Zorbax Eclipse XDB-C8 3.5 µm; columna de 150 x 4.6 mm empacada por Rockland Technologies Inc.; Temperatura: 40°C; Fase móvil: elución gradiente; A = H3P04 0.017 M en agua;0 B = CH3CN Gradiente min. % de A % de B 0 65 35 25 15 85 30 15 85 Velocidad de flujo: 1 mL min"1; Detección (UV) : 210 nm; Análisis elemental C H N Li Cl % calculado 59.91 8.12 5.37 % encontrado: 58.44 8.04 5.03 <0.1 - <0.1 Los espectros de RMNXH, RMN13C, IR y MS son consistentes con la estructura indicada.

E) Complejo de manganeso de ácido [3a(S) , 5ß, 12a]-3-[ [ [ [5- [ [2- [bis (carboximetil) amino] etil] (carboximetil) amino] -5-carboxipentil] amino] carbonil] oxi] -12-h?droxicolan-24-oico salificado con sodio (1:3). El compuesto preparado en el paso D) (5 g; 6.3 mmol) se dispersó en H20 (50 mL) y se disolvió por adición de NaOH ÍM (18 mL;. 18 mmol) . Se adicionó una solución acuosa 0.559M de MnCl2 (11.27 mL; 6.3 mmol) durante 3 horas manteniendo el pH a 6.5 por medio de NaOH ÍM (7.8 mL) . La solución se ajustó a pH 6.8 con NaOH ÍM (0.9 mL; 0.9 mmol), se filtró (membrana Millipore® HA 0.45 um) y se salificó por nanofíltración. La solución se evaporó y se secó para dar el producto deseado (5.45 g; 6.05 mmol) . Rendimiento: 96% p.f.: >300°C K.F. : 3.78% [a]20D = + 2.74 (c 2, H20) ensayo de CE: 100% de área) Capilaridad: 'Silice fusionada 0.72 m x 50 µm Voltaje 30 kV Amortiguador: Borato 0.07 M, pH 9,3, EDTA 0.03 mM Temperatura 25°C Tiempo de 20 min; detención: Detención (UV) ; 200 nm; Inyección Hidrodinámica (50 mbar, 4 s) ; Concentración de muestra: -1 mg mL"1; Instrumentación: Hewlett Packard 3D HPCE Itinerario de Pre-acondicionamiento T (min) acción 2 enjuague con H2O 2 enjuague con NaOH 0.1 M 1 enjuague con H20 5 enjuague con amortiguador Análisis Elemental C H N Mn a Cl % calculado: -52.00 6.49 4.66 6.10 7.66 % encontrado: 49.54 7.17 4.44 5.65 7.58 <0.1 Los espectros de IR y MS son consistentes con la estructura indicada.

EJEMPLO 16 Complejo de gadolinio de N2-bis[2-[bis (carboximetil ) amino]etil]-N-[ (3ß, 5ß, la, 12a, ) -7 , 12-dihidroxi-24-oxo-24-[ (2-sulfoetil) amino]cholan-3-il) -L-glutamina salificada con sodio (1:3) (A) Ester fenilmetilico del ácido [ 3ß (S) , 5ß, 7a, 12a] -3-[ [4- [Bis [2- [bis [2-(l, 1-dimetiletoxi) -2-oxoetil] amino] etil] amino-5- (1, 1-dimetiletoxi) -1, 5-dioxopentil] amino] -7 , 12-dihidroxicolan-24-oico El éster 1- (1, 1-dimetil-etilico) del ácido N,N-Bis[2-[bis[2-(l, 1-dimetiletoxi) -2-oxoetil] -amino] etil] -L-glutámico (Anelli, P. L. et al. Bioconjugate Chem. 1999, 10, 137) (37 g; 50 mmol), el éster fenilmetilico del ácido (3ß, 5ß, la, 12a) -3-amino-7, 12-dihidroxicolan-24-oico (Anelli, P. L.; Lattuada, L.; Uggeri, F. Synth. Común. 1998, 28, 109) (31 g; 55 mmol) y cianofosfonato de dietilo (producto comercial) (9.6 g; 55 mmol; 9.2 mL) se disolvieron con DMF (750 mL) . La solución resultante se enfrió a 0°C y se adicionó gota a gota Et3N (7.3 mL) . Después de 1 hora a temperatura ambiente, la solución se evaporó bajo presión reducida, el residuo se disolvió en EtOAc (300 mL) , se lavó con NaHC03 acuoso al 5 % (2 x 200 mL) y luego con salmuera (2 x 200 mL) . La fase orgánica se separó, se secó sobre Na2S04 y luego se evaporó bajo presión reducida. El producto crudo se purifico por cromatografía instantánea para dar el producto deseado (36 g; 29 mmol) . Rendimiento 58 %. K.F. : 9.98 % Análisis C H N Elemental % calculado: 65.64 9.21 4.57 % encontrado: 66.31 9.20 4.51 TLC: Fase estacionaria: placa de gel de silice 60F 254 Merck Eluyente: 2 : 8 0 EtOAc/n-hexano Rf = 0.3 Detección: AcOH/cónc". H2S04/p-aniSaldehido = 100:2.1 Los espectros de RMN-1H, RMN13C, IR y MS son consistentes con la estructura indicada.

B) Sal de trietilamonio del ácido [3ß (S) , 5ß, 7a, 12a] -3- [ [4- [Bis [bis [2- (1, 1-dimetil-etoxi) -2- oxoetil] auno] etil] amino] -5- (1, 1-dimet?letox?) -1,5- dioxopentil] amino] -7, 12-dihidroxi-colan-24-oico 5 Se adicionó Pd al 5 %/C (3.6 g) a una solución del compuesto preparado en el paso A) (36 g; 29.4 mmol) en EtOH (1.5 L) y la suspensión se agitó durante , 3 h bajo atmósfera de hidrógeno a temperatura ambiente. Después de la filtración (a través de un filtro Millipore®, FT 0.45 10 µm) la solución se evaporó bajo presión reducida. El producto crudo se purificó por cromatografía instantánea para dar el producto deseado (22 g; 18 mmol) . Rendimiento 60 %. P.f.: 58°C K:F: : 1.34 % 15 Análisis C H t N Elemental % calculado: 65 .07 9.86 5.66 % encontrado: 64, .34 10.07 5.48 TLC : Fase estacionaria : placa de gel de silice 60F 254 Merck Eluyente : Et3N/MeOH/CH2Cl2 1 : 5 : 95 Rf = 0 . 33 20 Detección : AcOH/H2S04 concentrado/p-anisaldehido = 100 : 2 : 1 Los espectros de RMNXH . RMN13C, IR y MS son «^^¡¿^^¡^^^ ¿X consistentes con la estructura indicada.

C) N2-Bis [2-bis (carboximetil) amino] eti'l] -N- [ (3ß, 5ß, la, 12a) -7, 12c-dihidroxi-24-oxo-24- [ (2-sulfoetil) amino] colan-3-il] -L-glutamina Se adicionó gota a gota Et3N (1.2 g; 12 mmol; 1.7 mL) a una solución del compuesto B) (12.5 g; 11 mmol) (ácido 2-aminoetanosulfónico) (producto comercial) (1.5 g; 12 mmol) y cianofosfato de dietilo (producto comercial) (2.1 g; 12 mmol; 2 mL) en DMF (400 mL) a 0°C bajo nitrógeno. Después de 20 minutos, la mezcla de reacción se dejó aumentar a temperatura ambiente y se agitó -durante 3 h. La solución se., evaporó bajo presión reducida, el residuo se disolvió en dioxano (250 mL) y se adicionó gota a gota H2S04 acuoso y 0.5 M (250 mL; 125 mmol). La mezcla resultante se calentó a 90°C por 2 horas. El pH de la solución se ajustó desde 1.4 a 7 con NaOH con 2 N y el solvente se evaporó bajo presión reducida. El producto crudo se purificó por cromatografía instantánea. El producto se disolvió en H20 (250 mL) y HCL 2 N (12.5 mL) y se desalificó por elución a través de una columna de resina A berlite® XAD-16.00 con uh gradiente de CH3CN/H20 para dar el producto deseado (1.5 g; 1.6 mmol).

Rendimiento 14%. p.f.: >200°C K:F:: 5.87% Análisis C H N S Elemental %Calculado: 53.68 7.44 7.28 3.33 %Encontrado: 50.34 7.71 6.64 2.99 Los espectros .de RMNXH, RMN13C, IR y MS son consistentes con la estructura indicada.

D) Complejo de gadolinio de N2-bis[2-[bis (carboximetil) amino] etil] -N- [ (3ß,5ß,7a,12a)-7,12-dihidroxi-24-oxo-24- [ (2-sulfoetil) amino] colan-3-il] -L-glutamina salificada con sodio (1:3) El producto C) (880 mg; 0.915 mmol) se disolvió en H20 (50 mL) y se adicionó gota a gota NaOH '1 N hasta que se alcanzó pH •€ .8. Se adicionó Gd203 (1.65 .mg; 0.46 mmol) y la suspensión resultante se calentó a 50°C durante 6 horas. La mezcla de reacción se filtró a través de un aparato Millipore® (filtro HA 0.45 µm) y el filtrado se cargó sobre una columna de resina de intercambio catiónico débil Dowex® CCR 3LB (forma Na+, 20 mL) . El producto eluido se evaporó bajo presión reducida y se secó para dar el producto deseado (1.00 g; 0.75 mmol).

Rendimiento 82 %. p.f.: >250°C K:F:: 13.95% Ensayo de HPLC: 100 % (% de área) Fase estacionaria: Lichrospher 100 RP-8 5µm, columna empacada de 250 x' 4 mm por Merck KgaA, Temperatura: 40°C, Fase móvil: elución isocrática con fase móvil premezclada: 1 g de n-octilamina se adicionó a 300 mL de acetonitrilo mezclado con 700 mL de agua. La solución se amortiguo a pH 6 con H3PO4; Velocidad de flujo: 1 mL min"1; Detección (UV) : 200 nm; Análisis G '" H • N S Gd Na Elemental % calculado: 43.78 5.54 5.92 2.71 13.30 5.83 % encontrado: 36.82 6.04 5.11 2.18 10.64 5.35 Los espectros de IR y MS son consistentes con la estructura indicada. De la misma manera, se preparó el complejo de gadolinio N2-bis [2- [bis (carboximetil) amino] etil] -N-[ (3ß, 5ß) -24-OXO-24- ['12-sulfoetil) amino] colan-3-il] -L-glutamina.

EJEMPLO 17 Complejo de gadolinio de ácido [3a (S) , 5ß] -3- [2- [ [bis [2- [bis (carboximetil) amino] -etil] amino] -5-carboxipentil] -amino] -2-oxoetoxi] colan-24-oico salificada con sodio (1:3) A) Ester metílico del ácido (3a,5ß)-3- (carboximetoxi) colan-24-oico Se adicionó triflato de glicolato de bencilo (Williams, M. A.; Rapoport, H. J. Org. Chem. 1994, 59, 3616) (6.8 g; 56.3 mmol) durante un periodo de 15 minutos a una solución agitada de éster metílico del ácido (3a, 5ß) -3-hidroxicolan-24-oico (Dayal, B. et al. Steroids 1981, 37, 239) (20 g; 51.2 mmol) y N,N-diisopropiletilamina (10 mL; 57.4 mmol) en CH3CN anhidro .(400 mL) a -20°C. Después de 4 horas a -20°C, la mezcla se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 4 horas adicionales. El solvente se evaporó y el residuo se dividió entre EtOAc (300 mL) y NaHC03 saturado (300 mL) .

La fase orgánica se secó sobre Na2S04 y se evaporó . El residuo se disolvió en EtOH (200 mL) y Pd al 5 %/C (3 g) se adicionó y la mezcla se agitó, a temperatura ambiente, durante 5 horas bajo una atmósfera de nidrógeno'. Después 5 de la filtración a, través de un filtro MilliporeR FH (0.45 µm) la solución se evaporó y el residuo se purificó por cromatografía instantánea para dar el producto deseado (14.2 g; 31.7 mol) . 10 Rendimiento: 62 % K:F: <0.1 Análisis Elemental C H % calculado: 72.28 9.89 % encontrado: 71.97 9.81 Los espectros de RMNXH, RMN13C, IR y MS son 15 consistentes con la estructura indicada.

B) Ácido [3a(S) ,5ß]-3-[2-[ [5-[bis[2- [bis (carboximetil) amino] -etil] amino] -5- carboxipentil] amino] -2-oxoetoxi] colan-24-oico 20 El éster ( 1, 1-dimetiletil) de N2, N2-bis [2- [bis [2- (1, 1-dimetiletoxi) -2-oxoetil] -amino] etil] -L-lisina (Anelli, P. L: et al Bioconjugate Chem. 1999, 10, 137) (18.56 g; 25 mmol) , •- (18.6 g; 25 mmol), compuesto A) (11.2 g; 25 mmol) y cianofosfonato de dietilo (producto comercial) (4.9 g; 28 mmol) se disolvieron en DMF (300 mL) . La solución resultante se enfrio a 0°C y se adicionó a Et3N (4 mL) gota a gota. Después de 6 horas a temperatura ambiente, la solución se evaporó bajo presión reducida, el residuo se disolvió en EtOAc (250 mL) , se lavó con NaHCÜ3 acuoso al 5 % (2 x 100 mL) y luego con salmuera (2 x 100 mL) . La fase orgánica se separó, se secó sobre Na2S04 y luego, se evaporó bajo presión reducida. El residuo se disolvió en dioxano (300 ml) y H2S04 acuoso 0.5 M (300 mL; 150 mmol) se adicionó gota a gota. La mezcla resultante se calentó a 90°C durante 2 horas. El pH de la solución se ajustó a 7 con NaOH 2 N y el solvente se evaporó bajo presión reducida. El producto crudo se purificó por cromatografía instantánea. El producto se disolvió en H20 (300 mL) y HCl 2 N (30 mL) y se desalificó por elución a través de columna de resina AmberliteR XAD-16.00 con un gradiente de CH3CN/H20 para dar el producto deseado (9.03 g; 10.25 mmol).

Rendimiento 41 % K.F. : 2.78 % Análisis C H N Elemental % calculado: 59.98 8.24 6.36 %encontrado : 58.11 8.28 6.14 Los espectros de RMNXH, RMN13C, IR y MS son consistentes con la estructura indicada.

C) Complejo de gadolinio de ácido [3 (S),5ß]-3- [2- [ [5-[bis[2-[bis (carboximetil) amino] -etil] amino] -5-carboxipentil] amino] -2-oxoetoxi] colan-24-oico salificado con sodio (1:3) . Se disolvió el producto B) (5 g; 5.67' mmol) en H20 (200 mL) por adición de NaOH 1 N hasta que se alcanzó pH 6.8 alcanzado. Se adicionó Gd03 (1.03 g; 2.84 mmol) y la suspensión resultante se calentó a 50°C durante 8 horas. La mezcla de reacción se filtró a través de un aparato MilliporeR (filtro HA 0.45 µm) y el filtrado se evaporó bajo presión reducida y se secó para dar el proaucto deseado (5.74 g; 5.21 mmol). Rendimiento 92 %. p.f.: >250°C K:F: : 5.81 % Análisis C H N Gd Na Elemental % calculado: 47.99 6.04 5.09 14.28 6.26 % encontrado: 45.09 6.15 4.77 13.39 5.81 Los espectros de IR y MS son consistentes con la estructura indicada. De la misma manera, del compuesto A) del ejemplo 15, se preparó el complejo de gadolinio con el ácido [3a(S),5ß]-3-[2-[[5-"[[2- ' [bis (carboximetil) amino] etil] (carboximetil) -amino] -5-carboxipentil] amino] -2-oxoetoxi] colan-24-oico De la misma manera, iniciando el compuesto A) del ejemplo 15 y éster metílico del ácido (3ß, 5ß, la, 12a) -3- [ (3-carboxi-l-oxopropil) amino] -7, 12-dihidroxicolan-24-oico (preparado de acuerdo al procedimiento descrito en el ejemplo 12) de la WO-A-95/32741 : ejemplo 12), se preparó el complejo de gadolinio del ácido [3ß (S) , 5ß, la, 12a] -3-[ [4- [ [5- [ [2- [bis (carboximetil)- • amino] etil] (carboximetil) amino] -5-carboxipentil] amino] -1, 4-dioxobutil] amino] -7 , 12-dihidroxicolan-24-oico.

EJEMPLO 18 Mediciones de la velocidad de relajación (?l/T.) La efectividad de los compuestos de la invención como agentes de mezclado sanguíneo se evaluó al graficar el progreso de la velocidad de relajación longitudinal 1/T? contra el tiempo transcurrido después de la administración. La velocidad de relajación del protón 1/T? de muestras sanguíneas, recolectadas en tiempos predeterminados, se midió a 39°C por medio de un instrumento Brucker Minispec PC120 usando las secuencias de tres parámetros de "recuperación de inversión". El compuesto preparado del Ejemplo 1, complejo de gadolinio del ácido [3ß (S) , 5ß] -3- [ [4- [bis [2-[bis (carboximetil) amino] etil] amino] -4-carboxi-l-oxobutil] amino] colan-24-oico salificado con 1-desoxi-l-(metilamino) -D-glucitol (i: 3), se administró a un conejo a una dosis de 0.1 mmol/kg. El diagrama (figura 1) representa el perfil de la velocidad de relajación. El compuesto preparado en el Ejemplo 9 de la solicitud de patente WO 95/32741, el complejo de gadolinio del ácido (3ß, 5ß, la, 12a) -3- [ [N- [N- [2- [ [2- [bis (carboximetil) -amino] etil] carboximetil) amino] etil] -N-( carboximetil) -glicil] glicil] amino] -7, 12-dihidroxi-colan-24-oico salificado .con 1-desoxi-l- (metilamino) -D-glucitol (1:2), se administró a 'un conejo a una dosis de 0.1 mmol/kg. El diagrama (figura 2) representa el perfil de la velocidad de relajación. El compuesto preparado en el Ejemplo 15 de la solicitud de patente WO 95/32741, complejo de gadolinio 5 del ácido [3ß) S) , 5ß, 7a, 12a] -3- [ [4- [bis [2- [bis (carboximetil) amino] etil] amino] -4-carboxi-l- oxobutil] amino] -7 , 12-dihidroxicolan-24-oico salificado con 1-desoxi-l- (metilamino) -D-glucitol (1:3), se administró al conejo a una dosis de 0.1 mmol/kg. El diagrama (figura 3) 10 representa el perfil de la velocidad de relajación. El compuesto preparado en el Ejemplo 4, el complejo de gadolinio del ácido [ [3ß (S) , 5ß, 12a] -3- [ [4- bis [2- [bis (carboximetil) amino] etil] amino] -4-carboxi-1- oxobutil] amino] -12-hidrox?colan-24-oico salificado con 1- 15 desoxi-1- (metilamino) -D-glucitol (1:3), se administró al mono a una dosis de 0.05 mmol/kg. El diagrama (figura 4) es el perfil de la velocidad de relajación.

EJEMPLO 19 20 Formulación farmacéutica 0.3 M del complejo de gadolinio con acido [3ß (S) , 5ß, 12a] -3- [ [4- [bis (carboximetil) -amino] etil] amino] -4-carboxi-l-oxobutil] amino] -12- hidroxicolan-24-oico salificado con 1-desoxi-l- (metilamino) -D-glucitol (1:3). 25 En un reactor farmacéutico de acero inoxidable a -^|$^^< temperatura ambiente se disolvieron en 100 mL de agua estéril y 100 g de clorhidrato de trometamol, 31.775 kg de complejo de gadolinio del ácido [3ß (S) , 5ß, 12a] -3- [ [4- [bis [2- [bis (carboximetil) amino] -etil] amino] -4-carboxi-l-oxobutil] amino] -12-hidroxicolan-24-oico salificado con 1-desoxi-1- (metilamino) -D-glucitol (1:3) (preparado como se ejemplifica en el Ejemplo 4). Después de la disolución, el pH de la solución se ajusta a 7.4 por la adición de trometamol 1 M. La solución se filtra estéril a través de los filtros de un diámetro de 0.22 mm y se distribuye en frascos de 20 mL, que se cierran con tapones de halobutilo, sellado con anillo de aluminio y se esteriliza el vapor a Fo = 18. HPLC muestra un titulo de 0.294 M. EJEMPLO 20 Jeringas plásticas pre-llenas que contienen la formulación del Ejemplo 19. Porciones de 20 mL de la solución preparada en el Ejemplo 19 se colocan en una jeringa plástica CZ con la punta cerrada por una tapa. El pistón se inserta bajo vacio y la jeringa pre-llena se esteriliza en autoclave a un valor de Fo = 18. Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la presente invención, es el que resulta claro a partir de la presente descripción de la invención.

Claims

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones : 1. El uso de los complejos quelados de iones metálicos, paramagnéticos, bi-trivalentes seleccionados del grupo que, consiste de Fe(2+), Fe(3+), Cu(2+), Cr(3+), Dy<3+), Yb(3+) o Mn(2+) con los compuestos de la fórmula (I), asi como las sales de los mismos con bases orgánicas fisiológicamente compatibles seleccionadas de aminas primarias, secundarias, terciarias o aminoácidos básicos, o con 'bases inorgánicas cuyos cationes son sodio, potasio, magnesio, calcio o mezclas de los mismos:
X-L-Y (I), en donde: X es el residuo de un ligando poliaminocarboxilico o derivados del mismo, seleccionado del grupo que consiste de: ácido etilendiaminotetraacético (EDTA) , ácido dietilentriaminopentaacético (DTPA) , ácido 1,4,7, 10-tetraazaciclododecano-l, 4,7, 10-tetraacético (DOTA), ácido 1, 4, 7, 10-tetraazaciclododecano-l, 4, 7-triacético (D03A), ácido [10- (2-hidroxipropil) -1, 4 , 7, 10-tetraazaciclododecano-1, 4, 7-triacético (HPD03A) , ácido 4-carboxi-5, 8, 11-tris (carboximetil) -1-fenil-2-oxa-5, 8, 11-triazatridecan-13-oico (BOPTA) ; Y es el derivado del ácido biliar seleccionado del grupo que consiste de residuos de ácido cólico, quenodesoxicólico, desoxicólico, ursodesoxicólico, litocólico,
Acido ursodesoxicólico Acido litocólico ambos como tales y funcionalizados en las posiciones que tienen el grupo hidroxi como el grupo reactivo, independientemente de la estereoquímica de los productos finales, el derivado también comprende el conjugado del grupo ácido de la posición 24 con taurina y glicina; L es una cadena enlazada a cualquier posición de X, que comprende opcionalmente uno de- los grupos carboxilicos que se transforma de esta manera en un grupo amida, y a las posiciones C-3, C-7, C-12 de Y, que tiene la siguiente fórmula (II) en la cual m es un número entero que varia de 1 a 10, en donde para valores por arriba de 1, A puede tener significados diferentes, A tiene la siguiente fórmula (III), n y q pueden ser O ó 1, pero no son al mismo tiempo cero, P puede variar de 0 a 10, Z es un átomo de oxigeno o un grupo -NR, en el cual R es un átomo de hidrógeno, o un grupo alquilo (C1-C5) insustituido o sustituido por un grupo -COOH; para la preparación de formulaciones de diagnóstico para obtener imágenes del sistema sanguíneo del cuerpo humano y de animal, por medio de resonancia magnética nuclear. 2. El uso de los compuestos de conformidad con la reivindicación 1, en el cual 'los complejos se forman con iones de Gadolinio o Manganeso. 3. El uso de los compuestos de la fórmula (I) de conformidad con la reivindicación 1, en el cual las cadenas L de espaciado tienen las formulas (Illa) y (iiib) .
4. El uso de los compuestos de la fórmula (1), de conformidad con las reivindicaciones 1-3, en el cual Z es un átomo de oxigeno L se forma de este modo a través de los grupos hidroxi presentes en las posiciones 3, 7, 12, independientemente de la estereoquímica de los productos finales .
5. El uso de los compuestos de la fórmula (I), de conformidad con la reivindicación 3, en el cual el residuo X se selecciona del grupo que consiste de: EDTA, DTPA, DOTA, D03A, BOPTA; L se selecciona del grupo que consiste de (Illa), (Illb) ; e Y se selecciona del grupo que consiste de residuos de ácido cólico, desoxicólico, quenodesoxicólico, litocólico, como están o en los cuales uno o más grupos hidroxi se han transformado en grupos ceto, enlazado a L por un grupo amino en la posición 3, en grupo ácido en la posición 24 que está presente como está o como su derivado de taurina o glicina; los complejos de estos compuestos se forman con iones de gadolinio o manganeso y los cationes de bases orgánicas adecuados a la neutralización se seleccionan del grupo que consiste de etanolamina, dietanolamina, morfolina, glucamina, N-metilglucamina, N, N-dimetilglucamina o los cationes de bases inorgánicas se seleccionan del grupo que consiste de sodio, potasio, magnesio, calcio o mezclas de los mismos.
6. El uso de los compuestos de la fórmula general (IV), de conformidad con la reivindicación 5, en la cual en la fórmula (I) el residuo X es DTPA sustituido en la cadena central y en la cual Ri es un átomo de hidrógeno o el grupo -COOH. Y se selecciona del compuesto que consiste de residuos cólicos, desoxicólicos, quenodesoxicólicos, litocólicos y L tiene la estructura de la fórmula^ (III).
7. El uso de los compuestos de la fórmula general (IVa), de conformidad con la reivindicación 6, en el cual Ri es el grupo -COOH e Y tiene los significados definidos anteriormente par'a los compuestos de la fórmula general (IV) y L tiene las estructuras (Illa) y (Illb).
8. El uso de los compuestos de la fórmula general (IVa) , de conformidad con la reivindicación 7, seleccionados del grupo que consiste de: ácido [3ß(S),5ß]-3-[[4-[bis[2-[bis (carboximetil) amino] -etil] amino] -4-carboxi-l-oxo-butil] (carboximetil) -amino] colan-24-oico; ácido [3ß (S) , 5ß] -3- [ [4- [bis [2- [bis (carboximetil) amino] -etil] amino] -4-carboxi-l-oxobutil] amino] colan-24-oico; ácido [3ß(S) ,5ß]-3-[ [4- [bis [2- [bis (carboximetil) amino] -etil] amino] -4-carboxi-l-oxobutil]'amino] -12-oxocolan-24-oico; ácido [3ß (S) , 5ß, 7a] -3- [ [4- [bis [2- [bis (carboximetil) amino] -etil] amino] -4-carboxi-l-oxobutil] amino] -7-hidroxicolan-24-oico; N2-bis [2- [bis (carboximetil) amino] etil] -N- [ (3ß, 5ß) -24-oxo- 24- [ (2-sulfoetil) amino] colan-3-il] -L-glutamina; N2-bis [2- [bis (carboximetil) amino] etil] -N- [ (3ß, 5ß, -la, 12 ) - 7, 12-dihidroxi-24-oxo-24- [ (2-sulfoetil) amino] -colan-3-il] - L-glutamina; • ácido [3ß(S) ,5ß,7ß]-3-[ [4- [bis [2- [bis (carboximetil) amino] -etil] amino] -4-carboxi-1-oxobutil] amino] -7-hidroxicolan-24-oico; ácido [3ß (R) , 5ß, 12a] -3- [ [4- [bis [2- [bis (carboximetil) -amino] -etil] amino] -4-carboxi-l-oxobutil] amino] -12-hidroxicolan-24-oico; ácido [3ß (RS) , 5ß, 12a] -3- [ [4- [bis [2- [bis (carboximetil) -amino] -etil] amino] -4-carboxi-l-oxobutil] amino] -12-hidroxicolan-24-oico'7 ácido [3ß (RS) , 5ß, la, 12a] -3- [ [4- [bis [2- [bis (carboximetil) -amino] -etil] amino] -4-carboxi-1-oxobutil] amino] -7, 12-dihidroxicolan-24-oico; ácido [3ß (RS) , 5ß, la, 12a] -3- [ [4- [bis [2- [bis (carboximetil) amino] -etil] amino] -4-carboxi-1-oxobutil] amino] -7, 12-dihidroxicolan-24-oico; ácido [3ß(RS) ,5ß, la, 12a] -3- [ [4-[bis [2-[bis (carboximetil) -amino] etil] amino] -4-carboxi-l-oxobutil] amino] -7, 12-dihidroxicolan-24-oico; ácido [3a(S) , 5ß, la, 12a] -3- [ [ [ [5- [bis [2- [bis (carboximetil) -amino] etil] amino] -5-carboxipentil] ] amino] carbonil] oxi] -7 , 12-dihidroxicolán-24-oico; ácido [3a(S) , 5ß] -3- [2- [ [5- [bis [2- [bis (carboximetil) amino] -etil] amino] -5-carboxipentil] amino] -2-oxoetoxi] colan-24-oico; ácido [3ß(S) ,5ß,7a, 12 ] -3- [ [4- [bis [2- [bis (carboximetil) amino] etil] amino] -4-carboxi-l-oxobutil] amino] -7, 12-dihidroxicolan-24-oico; ácido [3ß(S) ,5ß,7a,12a]-3-[ [4-[ [5- [bis [2- [bis (carboxi-metii) -amino] etil] amino] -5-carboxipentil] amina] -1, -dioxobutil] amino] -7,12-dihidroxiColan-24-oico.
9. El uso de los compuestos de la fórmula general (IVb), de conformidad con la reivindicación 6, en la cual Y tiene los significados definidos anteriormente para los compuestos de la fórmula general (IV) y L tiene la estructura (Illa) .
10. El uso de los compuestos de la fórmula general (IVb), de conformidad con la reivindicación 9, seleccionado del grupo que consiste de: acido [3ß, 5ß, la, 12a] -3- [ [ [bis [2- (bis (carboximetil) amino] -etil] amino] acetil] amino] -7, 12-dihidroxicolan-24-oico; ácido [3ß, 5ß) -3- [ [ [ [bis [2- [bis (carboximetil) amino] -etil] amino] acetil} amino] colan-24-oico; ácido [3ß, 5ß, la, 12a] -3- [ [ [ [bis [2- [bis (carboximetil) amino] -etil] amino] -acetil] amino] -7, 12-dihidroxicolan-24-oico; [3ß,5ß,7a,12 ]-3-[ [6-[bis[2-[bis (carboximetil) amino] -etil] amino] -acetil] amino] -1-oxohexil] amino] -7, 12-dihidroxicolan-24-oico.
11. El uso de los compuestos de la fórmula general (V), de conformidad con la reivindicación 5, en donde en la fórmula general (I) el residuo X es DTPA, Y tiene los significados definido's anteriormente para los compuestos de la fórmula general (IV) y L tiene la estructura de la fórmula (Illa)
12. El uso de los compuestos de la fórmula general (V), de conformidad con la reivindicación 11, seleccionado del grupo que consiste de: ácido [3ß, 5ß, la, 12a] -3-.[ [N- [N- [2- [ [2- [bis (carboximetil) -amino] -etil] (carboximetil) amino] etil] -N- (carboximetil) -glicil] -glicil] amino] -7, 12-dihidroxicolan-24-oico; ácido 18- [ [ (3ß,5ß,7 , 12a] -23-carboxi-7 , 12-hidroxi-24-norcolan-3-il] amino] -3, 6, 9-tris (carboximetil) -11, 18-d?oxo-3, 6, 9, 12-tetraazaoctadecanoico .
13. El uso de los compuestos de la fórmula general (VI) , de conformidad con la reivindicación 5, en el cual en la fórmula general, el residuo X es D03A, Y tiene los significados definidos anteriormente para los compuestos de la fórmula general (IV) y L se selecciona de las estructuras (Illa) y (Illb) .
14. El uso del ácido 10- [ [ (3a, 5ß, la, 12a) -23-carboxi-7, 12-dihidroxi-24-norcolan-3-il] oxi] -2-hidroxipropil] -1, ,7, 10-tetraazaciclododecano-l, 4, 7-triacético como se reivindica en la reivindicación 11.
15. El uso de los compuestos de la fórmula general (VII) de conformidad con la reivindicación 5, en el cual en la fórmula general (I) el residuo X es EDTA, Y tiene los significados definidos anteriormente para los compuestos de la fórmula general (IV) y L tiene la estructura de la fórmula (III).
16. El uso de los compuestos de la fórmula general (VII) de conformidad con la reivindicación 11, seleccionados del grupo que consiste de: ácido [3a (S) , 5ß, 12a] -3- [ [ [ [5- [ [bis (carboximetil) amino] -etil] (carboximetil ) amino] -5-carboxipentil] amino] am'inocar-bonil] oxi] -12-hidroxicolan-24-oico; ácido [3ß (S) 5ß,~7a, 12a] -3- [ [4- [bis [5- [ [2- [bis (carboximetil) amino] etil] (carboximetil) amino] -5-carboxi-pentil] -amino] -1, 4-dioxobutilamino] -7, 12-di-hidroxicolan-24-oico; ácido [3ß(S) ,5ß] -3- [2- [ [2- [bis (carboximetil) amino] -etil] -(carboximetil] amino] -5-carboxipentil] amino] 2-oxoetoxi] colan-24-oico; ácido [3ß (S) , 5ß, 12a] -3- [ [4- [ [bis (carboximetil) amino] -etil] carboximetil) amino] -4-carboxi-l-oxobutil] amino] -12-hidroxicolan-24-oico; ácido [3ß(S),,5ß]-3-[.[4-[ [2-.[ [bis (carboximetil) amino] -etil] (carboximetil) amino] -4-carboxi-l-oxobutil] amino] -12-oxocolan-24-oico.
17. El uso de los compuestos de conformidad con las reivindicaciones 1 a 16, en el cual las sales de complejo queladas se forman con sodio y N-metilglucamina .
18. Los compuestos de la fórmula general (IVa) en la cual Y se selecciona del grupo que consiste de residuos cólicos, desoxicólicos, quenodesoxicólicos, litocólicos, como están en los cuales se han transformado uno o más grupos hidroxi en grupos ceto, enlazados a L por un grupo amino en la posición 3 y grupo ácido en la posición 24 está presente como tal o como su derivado de taurina o glicina; los complejos de los compuestos que se forman con iones ,de"~g;aclolinio o .manganeso, y los . cationes de bases adecuadas a la neutralización se seleccionan del grupo que consisten de: etanolamina, dietanolamina, morfolina, glucamina, N-metilglucamina, N,N-dimetilglucamina o del grupo que consisten de bases inorgánicas cuyos cationes son sodio, potasio, magnesio y calcio, y L tiene las estructuras de las fórmulas (Illa) y (Illb) en las cuales m es un número entero que varia de 1 a 10, con la excepción de ácido [3ß (S) , 5ß, la, 12a] -3- [ ['4- [bis [2-[bis (carboximetil) aprino] etil] amino} -4-carboxi-l-oxobutil] amino] -7, 12-dihidroxicolan-24-oico y ácido [3ß(S) , 5ß,7a,12a]-3-[ [4-[ [5-bis [2- [bis (carboximetil) -amino] -etil] amino] -5-carbóxipentil] amino] -1, 4-dioxobutil] -amino] -7, 12-dihidroxicolan-24-oico .
19. Los compuestos de conformidad con la reivindicación 18, caracterizados porque se seleccionan del grupo que consiste de: ácido [3ß (S) , 5ß] -3- [ [4- [bis [2- [bis (carboximetil) amino] -etil] amino] -4-carboxi-l-oxo-butil] (carboximetil) -amino] colan-24-oico; ácido [3ß (S) , 5ß] -3- [ [4- [bis [2- [bis (carboximetil) amino] -etil] amino] -4-carboxi-l-oxobutil]'amino] colan-24-oico; ácido [3ß (S) , 5ß] -3- [ [4- [bis [2- [bis (carboximetil) amino] -etil] amino] -4-carboxi-l-oxobutil] amino] -12-oxocolan-24-oico; ácido [3ß (S) , 5ß, 7a] -3- [ [4- [bis [2- [bis (carboximetil) amino] -etil] amino] -4-carboxi-l-oxobutil] amino] -7-hidroxicolan-24-oico; N2-bis [2- [bis (carboximetil) amino] etil] -N- [ (3ß, 5ß) -24-oxo-24- [ (2-sulfoetil) amino] colan-3-il] -L-glutamina; N2-bis [2- [bis (carboxi etil) amino] etil] -N- [ (3ß, 5ß, la, 12a) - 7, 12-dihidroxi-24-oxo-24- [ (2-sulfoetil) amino] colan-3-il] - L-glutamina; ácido [3ß (S) , 5ß, 7ß] -3- [ [4- [bis [2- [bis (carboximetil) amino] -etil] amino] -4-carboxi-1-oxobutil] amino] -7-hidroxicolan-24-oico; ácido [3ß (R) , 5ß, 12a] -3- [ [4- [bis [2- [bis (carboximetil) -amino] -etil] amino] -4-carboxi-l-oxobutil] amino] -12-hidroxi-colan-24-oico; ácido [3ß(RS) ,5ß,12a]-3-[ [4-[bis [2-[bis (carboximetil) -amino] -etil] amino] -4-carboxi-l-oxobutil] amino] -12-hidroxicolan-24-oico; ácido [3ß (RS) , 5ß, la, 12a] -3- [ [4- [bis [2- [bis (carboximetil) amino] -etil] amino] -4-carboxi-1-oxobutil] amino] -7, 12-dihidroxicolan-24-oico; ácido [3ß(RS) , 5ß,7a, 12a] -3- [ [4- [bis [2- [bis (carboxi-metil) -amino] etil] amino] -4-carboxi-l-oxobutil] amino] -7, 12-hidroxicolan-24-oico; ácido [3ß (RS) , 5ß, la, 12a] -3- [ [4- [bis [2- [bis (carboxi-metil) -amino] etil] amino] -4-carboxi-1-oxobutil] amino] -7, 12-hidroxicolan-24-oico; ácido [3a(S) , 5ß, 7a, 12a] -3- [ [ [ [5- [bis [2- [bis (carboximetil) amino] -etil] amino] -5-carboxipentil] amino] carbonil] oxi] -7, 12-dihidroxicolan-24-oico; ácido [3a(S) , 5ß] -3- [2- [ [5- [bis [2- [bis (carboximetil) amino] -etil] amino] -5-carboxipentil] amino] -2-oxoetoxi] colan-24-oico;
20. Los compuestos de la fórmula general (IVb) HOOC COOH N HOOC _/ COOH (IVb), L-Y caracterizados porque: Y es como se define en la reivindicación 18 y L tiene la estructura (Illa), como se define en la reivindicación 18, con la excepción de ácido [3ß (S) , 5ß, la, 12 ] -3- [ [ [ [bis [2- [bis (carboximetil) amino] -etil] amino] acetil] amino] acetil] amino] -7, 12-dihidroxicolan-24-oico; y ácido [3ß (S) , 5ß, la, 12a] -3- [ [6-[ [ [bis [2- [bis (carboximetil) amino]—etil] amino] -acetil] amino] -1-oxohexil] amino] -7, 12-dihidroxicolan-24-oico.
21. Los compuestos de conformidad con la reivindicación 20, caracterizados porque se selecciona del grupo que consiste de: ácido [3ß, 5ß, la, 12a] -3- [ [ [bis [2- [bis (carboximetil) amino] -etil] amino] acetil] amino] -7, 12-dihidroxicolan-24-oico; ácido [3ß,5ß)-3-[ [ [ [ [bis [2- [bis (carboximetil) amino] etil] amino] -acetil] amino]"acetil] amino]colan-24-oico.
22. Los compuestos de la fórmula general (VII). caracterizados porque Y es como se define en la reivindicación 18 y L tiene la estructura (III)- como se define en la reivindicación 1.
23. Los compuestos de conformidad con la reivindicación 22, caracterizados porque se seleccionan del grupo que consiste de: ácido [3a(S) ,5ß,12a]-3-[ [ [ [5-[ [2- [bis (carboximetil) amino] -etil] carboximetil] amino] -5-carboxipentil] amino] carbonil] oxi] -12-hidroxicolan-24-oico; ácido [3ß(S) ,5ß,7a,12a]-3-[ [4-[ [5-[ [2- [bis- (carboximetil) amino] etil] (carboximetil) amino] -5-carboxipentil] amino] -1, 4-dioxobutil] amino] -7 , 12-dihidroxicolan-24-sico; ácido [3ß(S) ,'5ß] -3- [2- [ [5- [2- [bis (carboximetil) amino] -etil] carboximetil) amino] -5-carboxipentil] amino] -2-oxoetoxi] colan-24-oico; ácido [3ß(S) ,5ß, 12a]-3-[ [4- [bis [2- [bis (carboximetil) -amino] -etil] (carboximetil) amino] -4-carboxi-l-oxobutil] amino] -12-hidroxicolan-24-oico; ácido [3ß (S) , 5ß] -3- [ [4- [ [2- [ [bis (carboximetil) amino] -etil] - (carboximetil) amino] -4-carboxi-l-oxobutil] amino] -12- oxocolan-24-oico .
24. Composición farmacéutica de diagnóstico contrastográfico, caracterizado porque comprende al menos uno de los compl jos .quelados de acuerdo con las 5 reivindicaciones 17 a 23 o una sal de los mismos de acuerdo con las reivindicaciones 1 a 4.
25. Composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 24, caracterizado porque comprende una adición de no más de 5 % por mol del complejo quelatado 10 salificado con calcio o magnesio y/o un amortiguador fisiológicamente aceptable seleccionado de trometamol y glicilglicina .
26. Un, proceso para la preparación de. ?-amidas de ácido glutámico, de acuerdo con el siguiente Esquema: 15 caracterizado porque R4 es un grupo amino-protector; 20 R5 es' un alquilo o arilo de 1 a 10 átomos de carbono recto o ramificado, R2 y R3 son independientemente un átomo de »'?-íai¿k?., ,,.-hidrógeno, alquilo de 1 a 10 átomos de carbono recto o ramificado, insustituido o sustituido por grupos arilo, o estos grupos forman un ciclo de 3 a 10 átomos de carbono.
27. Un proceso de conformidad con la reivindicación 26, para la preparación de los compuestos de ia fórmula (I), ?-amidas de ácido glutámico con derivados de 3-amino de los residuos Y, como se reivindica en la reivindicación 1.
28. Un' proceso de' conformidad con la reivindicación 27, caracterizado porque es para la preparación de los compuestos: ácido [3ß(S) , 5ß,7 , 12a]-3-[ [4- [bis [2- [bis (carboximetil) -amino] etil] amino] -4-carboxi-l-oxobutil] amino] -12-hidroxicolan-24-oico y ácido [3ß(S) , 5ß,7a, 12a] -3- [ [4- [bis [2- [bis (carboxi-metil) -amino] etil] amino] -4 -carboxi-1-oxobutil] amino] -7, 12-dihidroxicolan-24-oico.