DE69514350T2

DE69514350T2 - Gallensäurekonjugate, ihre metallkomplexe und verwandte verwendungen

Info

Publication number: DE69514350T2
Application number: DE69514350T
Authority: DE
Inventors: Lucio Pier ANELLI; Christoph De Haen; Luciano Lattuada; Pierfrancesco Morosini; Fulvio Uggeri
Original assignee: Bracco Imaging SpA
Current assignee: Bracco Imaging SpA
Priority date: 1994-05-26
Filing date: 1995-05-23
Publication date: 2008-10-09
Anticipated expiration: 2015-05-24
Also published as: JPH10501528A; DE69514350D1; US5649537A; AU2566495A; ITMI941074A1; NO313701B1; JP4108120B2; JP2009091346A; WO1995032741A1; NO964967L; IT1269839B; ITMI941074A0; EP0760683A1; EP0760683B1; NO964967D0

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft neue paramagnetische Metallionen-Chelate und ihre Verwendung als Kontrastmittel in der diagnostischen Technik, die als „magnetische Resonanzabbildung (magnetic resonance imaging)" (M. R. I.) bekannt ist. Insbesondere betrifft die vorliegende Erfindung Gallensäure-Konjugate mit Molekülen mit einer chelatisierenden Eigenschaft, genauso wie ihre komplexe Chelate mit paramagnetischen Metallionen und/oder deren Salzen und die Verwendung dieser Komplexe als Kontrastmittel für M. R. I.
Aus chelatisierenden Mitteln und geeigneten spezifischen Metallen gebildete Komplexe werden bereits als kontrastographische Mittel in den folgenden diagnostischen Techniken verwendet: Röntgen-Abbildung, magnetische Kernresonanz-Abbildung (M. R. I.) und Scintigraphie.
Insbesondere die medizinische Diagnose unter Verwendung von „magnetischer Resonanzabbildung" (magnetic resonance imaging (M. R. I.)), die als wirksames diagnostisches Mittel in der klinischen Praxis anerkannt ist (Stark, D. D., Bradley, W. G., Jr., Herausgeber „Magnetic Resonance Imaging" The C. V. Mosby Company, St. Louis, Missouri (USA), 1988) verwendet vor allem paramagnetische pharmazeutische Zusammensetzungen, die bevorzugt komplexe Chelate von bi-trivalenten paramagnetischen Metallionen mit Aminopolycarbonsäuren und/oder deren Derivaten oder Analoga enthalten.
Einige von diesen werden gegenwärtig klinisch als Kontrastmittel für M. R. I. verwendet (Gd-DTPA, N-Methylglucamin-Salz des Gadolinium-Komplexes mit Diethylentriaminopentaessigsäure, MAGNEVIST^®, Schering; Gd-DOTA, N-Methylglucamin-Salz des Gadolinium/1,4,7,10-tetraazacyclododecan-1,4,7,10-tetraessigsäure-Komplexes, DOTAREM^® Guerbet).
Zur Illustrierung des Stands der Technik in diesem Gebiet folgt hier eine unvollständige, obwohl andeutende Liste signifikanter Patentdokumente: EP 71564 (Schering), US4639365 (Sherry), US-A-4615879 (Runge), DE-A-3401052 (Schering), EP 130934 (Schering), EP 65728 (Nycomed), EP 230893 (Bracco), US-A-4826673 (Mallinckrodt), US-A-4639365 (Sherry), EP 299795 (Nycomed), EP 258616 (Salutar), WO 8905802 (Bracco).
Die oben aufgelisteten und auf dem Markt erhältlichen Kontrastmittel sind auf eine vollständige allgemeine Anwendung hin ausgelegt. In der Tat wird das MRI-Kontrastmittel nach der Verabreichung in den Extracellularräumen in verschiedenen Teilen des Körpers vor der Ausscheidung verteilt. In diesem Sinn verhalten sie sich auf gleiche Weise wie Iod-Verbindungen, die bei der medizinischen Röntgen-Diagnose verwendet werden.
Heutzutage besteht in der Medizin stärker als je zuvor der Bedarf an Kontrastmitteln, die auf spezifische Organe zielen; ein Bedarf, der nicht adäquat durch die gegenwärtig auf dem Markt erhältlichen Produkte befriedigt wird. Insbesondere besteht ein Bedarf an Kontrastmitteln für die Leber, ein Organ, das besonders anfällig gegen Tumormetastasen ist, die fast immer karzinomatöse Metastasen sind. Mittel dieses Typs sollten die folgenden Ergebnisse liefern können:

a) klar und selektiv das gesunde Gewebe der Leber zeigen und dadurch das Herauspicken kleiner Läsionen wie Metastasen ermöglichen (fokale Leberkrankheit);
b) Anzeige der hepatischen Funktion, wodurch eine so weit verbreitete Erkrankung wie Leberzirrhose klar dargestellt werden kann;
c) hoch aufgelöste Visualisierung der Gallenleiter und der Gallenblase.

Primäres hepatisches Karzinom (HCC) ist eine Pathologie, die sich in den letzten 20 Jahren zunehmend und schnell verbreitet hat, sowohl in der westlichen Welt als auch in Japan (Okuda K., Hepatology, 15, 948, 1992). Als Ergebnis entsteht ein Bedarf an einer schnellen und effizienten Methode zur Diagnose des Nachweises von HCC; zu diesem Zweck übernimmt die Kernresonanz eine führende Rolle, wobei die Voraussetzung die Verfügbarkeit eines Kontrastmittels ist, das die Differenzierung zwischen den gesunden Hepatocyten und den befallenen Hepatocyten ermöglicht.
Heutzutage scheint nur ein Produkt (AMI-HS von Advanced Magnetics, Reimer, P.; Weissleder, R. et. al.; Radiology 177, 729, 1990, Patentanmeldung WO-9001295 ) die notwendigen Voraussetzungen für die Diagnose von HCC zu besitzen. Eine behandelt „ultra-kleine" Partikel von Eisenoxid (mittlerer Durchmesser: 12 nm), die mit Arabinogalactose beschichtet sind, welche eine besondere Affinität zu den Asialoglycoprotein-Rezeptoren aufweisen, die auf der Oberfläche der Hepatocyten vorhanden sind. Die Verwendung dieser Partikel ruft jedoch verschiedene Nebenwirkungen hervor, insbesondere im Hinblick auf das Kreislaufsystem. Die Identifizierung eines idealen hepatisch spezifischen Kontrastmittels ist daher immer och weit entfernt.
Von den MIR-Kontrastmitteln in der Entwicklung stellten sich sowohl die als Gd-BOPTA bekannte Verbindung (BRACCO, EP 230893 ) als auch das Schering-Produkt Gd-EOB-DTPA ( EP-A-405704 ) stellten sich als besonders geeignet für die Visualisierung des hepatischen Gewebes aufgrund ihrer Eigenschaften heraus, auch durch den Gallentrakt ausgeschieden zu werden.
Der Transport sowohl endogener als auch xenobiotitscher Substanz mit Hilfe der Hepatocyten und die biliären Exkretionsmechanismen wurden breit in der Literatur diskutiert, wobei nur wenige Basis-Konzepte im folgenden ins Gedächtnis gerufen werden sollen (vergleiche beispielsweise Meier, P. J. in „Biliary Excretion of Drugs and Other Chemicals", Siegers, C. -P. und Watkins III J. B., Herausgeber, Gustav Fischer Verlag, Stuttgart, 1991).
Die Passage eines Moleküls in der Galle vom Blut durch den Disse-Raum findet in verschiedenen Schritten statt, die schematisch wie folgt zusammengefaßt werden können:

– das Molekül tritt in den Hepatocyten durch die sinusoide Membran ein nach einem spezifischen oder nicht spezifischen Mechanismus (vermittelt durch einen Träger oder einen Rezeptor).
– Im Hepatocyten kann das Molekül 1) unverändert und an ein intracelluläres Protein gebunden oder innerhalb eines Vesikels transportiert werden, 2) eine Konjugations- Reaktion mit einem Enzym erleiden und in die Gallenflüssigkeit als Konjugat ausgeschieden werden, 3) innerhalb der Lyposomen enzymatisch abgebaut werden. Das Molekül verläßt den Hepatocyten durch die Gallen-Canaliculus-Membran durch einen Mechanismus, der von einem Träger vermittelt wird, oder durch einen Exocytose-Mechanismus (falls das Molekül innerhalb des Vesikels transportiert wird.

Falls das Ziel ist, ein hepatotropes Kontrastmittel zu synthetisieren, das in Hepatocyten eintritt, sind die interessantesten Mechanismen diejenigen, die von einem Rezeptor oder Träger vermittelt werden. Bisher wurden die folgenden Träger identifiziert und teilweise auf der sinusoiden Membran charakterisiert:

– Gallensäureträger
– ein Bilirubin-Träger
– ein Fettsäureträger
– ein Träger für organische Kationen.

Die ersten beiden Träger-Typen wurden in größerer Tiefe untersucht, und das Wissen im Hinblick auf sie ist bedeutend weiter fortgeschritten.
Die bis heute untersuchten HCC-Zellinien stellten sich als aus Hepatocyten aufgebaut heraus, welche die Bilirubin-Träger aufweisen. Da sowohl Gd-BOPTA als auch Gd-EOB-DTPA das Innere der Hepatocyten durch Verwendung dieses Trägers zu penetrieren scheinen, können beide Produkte von keinerlei Nutzen und Hilfe bei der Diagnose von HCC sein, da sie nicht zwischen gesunden und befallenen Hepatocyten unterscheiden können.
Es wurde gezeigt, daß in einigen Human-HCC-Linien die Hepatocyten frei sind von Tauroalkoholsäure-Trägern (von Dippe, PGHS; Levy, D.; J. Biol. Chem. 265, 5942, 1990 und zitierte Referenzen). Es scheint daher, daß die Suche nach einem Kontrastmittel von großem Interesse ist, welches diesen Träger zur Penetration der Hepatocyten verwendet.
Eine Patentanmeldung ( EP-A-279307 , Abbott) beansprucht chelatisierende Polyaminocarboxyl-Konjugate, die Metallionen komplexieren können, mit verschiedenen Substraten, unter denen die Gallensäuren sind. Der einzige illustrative Komplex im Fall der Patentanmeldung ist ein ¹¹¹In-Komplex eines Konjugats, in dem ein funktionalisiertes Derivat von EDTA kovalent durch eine Amidbindung an die Carboxylfunktion von Cholsäure gebunden ist. Die Möglichkeit der Chelatisierung von paramagnetischen Metallionen für die Verwendung im MRI wird in keiner Weise angesprochen.
Eine andere Patentanmeldung ( EP-A-417725 , Hoechst) beansprucht allgemein Produkte, in denen eine Gallensäure mit pharmakologisch aktiven Resten konjugiert ist wie Peptiden, Antibiotika, Antivirusmitteln, Renininhibitoren und Medikamenten für die Behandlung von Diabetes. Kürzlich wurden die Ergebnisse der Verwendung von Gallensäurekonjugaten mit Chlorambucil, einem Antitumor-Mittel mit cytotoxischer Wirkung, veröffentlicht (Kramer, W. et al.,; J. Biol. Chem., 267, 18598, 1992).
Die vorliegende Erfindung betrifft neue Verbindungen, die aus der Konjugation einer Gallensäure mit einem Chelatisierungsmittel resultieren und zur Chelatisierung der Ionen von bi-trivalenten Metallen fähig sind.
Die vorliegende Erfindung betrifft auch die komplexen Chelate dieser Moleküle mit den Ionen von bi-trivalenten Metallen, genauso wie Salze dieser Chelate.
Es stellte sich heraus, daß diese Verbindungen hervorragende MRI-Kontrastmittel sind, insbesondere für die „Abbildung" des hepabiliären Systems.
Die vorliegende Erfindung betrifft die Verbindung der allgemeinen Formel (I): A-L-B (I)wobei
A der Rest einer Gallensäure ist, wobei mit Gallensäure die Gruppe der durch Bioumwandlung aus Cholesterin erhältlichen Gallensäuren gemeint ist, insbesondere die Säuren: Cholsäure, Deoxycholsäure, Chenodeoxycholsäure, Ursodeoxycholsäure, Lithocholsäure und deren Derivate, einschließlich derer mit Taurin und Glycin;
L ein Linker zwischen einer der C-3-, C-7-, C-12- oder C-24-Positionen des Gallensäure-Restes und B ist, entsprechend einer Gruppe der Formel (Π)
in der
m eine ganze Zahl variierend von 1 bis 10 ist, wobei für Werte oberhalb von 1
Y verschiedene Bedeutungen haben kann,
Y der folgenden Aufeinanderfolge von Gruppen entspricht
n, l und q 0 oder 1 sein können,
p von 0 bis 10 variieren kann,
X ein O-Atom, ein S-Atom oder eine -NR-Gruppe ist, in der
R ein H-Atom oder eine (C₁-C₅)Alkylgruppe ist,
K eine -CHR₁-Gruppe ist, wobei
R₁ ein Wasserstoffatom oder eine -COOH-Gruppe oder eine -SO₃H-Gruppe ist,
Z ein O-Atom oder ein S-Atom oder eine der -CO- oder -CS-Gruppen ist,
B der Rest eines Chelatisierungsmittels der bi-trivalenten Metallionen mit einer Atomzahl ist, die von 20 bis 31, 39, 42, 43, 44, 49 oder von 57 bis 83 variiert, wobei dieser Rest seinerseits durch eine zweite Kette L der Formel (II) an einen weiteren, wie oben definierten Rest A konjugiert sein kann oder nicht,
unter der Voraussetzung, daß mindestens einer von l, n, q, p von 0 verschieden ist, und daß für den Fall, daß Y und Z beide O- oder S-Atome sind, q oder n gleich 1 ist,
Gegenstand der Erfindung sind auch die komplexen Chelate dieser Verbindungen der Formel (I) mit den bi-trivalenten Ionen von Metallelementen mit Atomzahlen im Bereich von 20 bis 31, 39, 42, 43, 44, 49 oder von 57 bis 83 und deren Salze mit physiologisch verträglichen organischen Basen, die ausgewählt werden aus primären, sekundären, tertiären Aminen oder basischen Aminosäuren, oder mit anorganischen Basen, deren Kationen Natrium, Kalium, Magnesium, Calcium oder Mischungen davon sind, oder mit Mischungen von physiologisch verträglichen Anionen von organischen Säuren, die beispielsweise ausgewählt werden aus Acetat, Succinat, Citrat, Fumarat, Malest, Oxalat, oder mit Anionen von anorgansichen Säuren, wie den Ionen von Halogenwasserstoffsäuren, d. h. Chloriden, Bromiden, Iodiden.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können gegebenenfalls chemisch an geeignete Makromoleküle konjugiert sein oder in geeigneten Trägern eingeschlossen sein.
Gegenstand der Erfindung ist auch die Herstellung der Produkte der allgemeinen Formel (I) und der komplexen Salze davon, deren Verwendungen und die damit zusammenhängenden pharmazeutischen Zusammensetzungen für die diagnostische Verwendung.
Besonders bevorzugte Verbindungen der Erfindung sind solche, in denen die Spacer-Ketten L die folgenden allgemeinen Formeln (III), (IV), (VI) aufweisen.
Darüber hinaus sind besonders bevorzugt die Strukturen, in denen A ein Rest ist, der von den folgenden Gallensäuren oder von deren Derivaten wie Taurin und Glycin abgeleitet ist:
Die Bindung zwischen A und L wird hergestellt entweder unter Benutzung der sauren Funktion an der 24-Position oder durch Funktionalisierung der Hydroxygruppen an den Positionen 3, 7, 12, unabhängig von der Stereochemie der Endprodukte.
B ist bevorzugt der Rest eines sauren Polyaminopolycarbonsäure-Linkers und von dessen Derivaten, insbesondere Diethylentriaminopentaessigsäure (DTPA), 1,4,7,10-Tetraazacyclododecan-1,4,7,10-tetraessigsäure (DOTA), 1,4,7,10-Tetraazacyclododecan-1,4,7,10-Essigsäure (DO3A), [10-(2-Hydroxypropyl)-1,4,7,10-tetraazacyclododecan-1,4,7-triessigsäure (HPDO3A), 4-Carboxy-5,8,11-tris(carboxymethyl)-1-phenyl-2-oxa-5,8,11-triazatridecan-13-onsäure (BOPTA), N-(2-[Bis(carboxymethyl)amino]-3-(4-ethoxyphenyl)propyl]-N-[2-[bis(carboxymethyl)amino]ethylglycin (EOB-DTPA), N,N-Bis[2-[(carboxymethyl)[methylcarbamoyl)methyl]amino]ethyl]glycin (DTPA-BMA), 2-Methyl-1,4,7,10-tetraazacyclododecan-1,4,7,10-tetraessigsäure (MCTA), (a,a',a'',a''')-Tetramethyl-1,4,7,10-Tetraazacyclododecan-1,4,7,10-tetraessigsäure (DOTMA); oder B ist der Rest eines sauren Polyaminophosphat-Linkers oder von dessen Derivaten, insbesondere N,N'-Bis-(pyridoxal-5-phosphat)ethylendiamino-N,N'-diessigsäure (DPDP) und Ethylendinitrilotetrakis(methylphoshpon)säure (EDTP); oder B ist der Rest eines sauren Polyaminophosphonsäure-Linkers und von dessen Derivaten davon, oder Polyaminophospinsäure und Derivaten davon, insbesondere 1,4,7,10-Tetraazacyclododecan-1,4,7,10-tetrakis[methylen(methylphosphon)]säure und 1,4,7,10-Tetraazacyclododecan-1,4,7,10-tetrakis[methylen(methylphosphin)]säure; oder B ist der Rest eines makrocyclischen Chelatisierungsmittels wie Texaphyrine, Porphyrine und Phthalocyanine.
Die Bindung zur Spacer-Kette kann hergestellt werden mit Hilfe der sauren Gruppen des Linkers oder durch eine geeignete reaktive Gruppe, die im Ausgangs-Linker vorhanden ist, beispielsweise eine Aminogruppe, oder eine funktionelle Gruppe, die an einem Phenyl vorhanden ist, etc.
Besonders bevorzugte reaktive Gruppen werden ausgewählt aus der Gruppe, die besteht aus -NH₂, -NCS, -NHCSNHNH₂, -NHCSNH(CH₂)₂NH₂, -NCO, -NHNH₂, -NHCONHNH₂, -CHO.
Besonders bevorzugt sind die Strukturen, in denen A ein Rest von Cholsäure ist, B ein Rest der Linker BOPTA, DTPA oder DOTA ist.
Geeignete Metallionen zur Bildung von komplexen Salzen mit den Chelatisierungsmitteln der allgemeinen Formel (I) sind hauptsächlich die bivalenten oder trivalenten Ionen der Elemente mit Ordnungszahlen variierend von 20 bis 31, 39, 42, 43, 44, 49, oder von 57 bis 83; besonders bevorzugt sind Fe²⁺, Fe³ ⁺, Cu² ⁺, Cr³ ⁺, Gd³ ⁺, Eu³ ⁺, Dy³ ⁺, La³ ⁺, Yb³⁺ oder Mn² ⁺, oder auch Radioisotope wie ⁵¹Cr, ⁶⁷Ga, ⁶⁸Ga, ¹¹¹In, ^99mTc, ¹⁴⁰La, ¹⁷⁵Yb, ¹⁵³Sm, ¹⁶⁶Ho, ⁹⁰Y, ¹⁴⁹Pm, ¹⁷⁷Lu, ⁴⁷Sc, ¹⁴²Pr, ¹⁵⁹Gd, ²¹²Bi.
Die Verbindungen der allgemeinen Formel (I) können hergestellt werden mit Synthesemethoden, die konventionell in der industriellen Technologie bekannt sind. Insbesondere können mit Gallensäuren konjugierte MRI-Kontrastmittel hergestellt werden mit Hilfe einer konvergenten Synthese, welche umfaßt:

1) Synthese eines funktionalisierten Liganden, d. h. eines Liganden, der zur Koordinierung eines paramagnetischen Metallions und gleichzeitig zur stabilen Bindung an die Gallensäure mit Hilfe einer geeigneten funktionellen Gruppe fähig ist;
2) Synthese einer funktionalisierten Gallensäure;
3) Kopplungsreaktion zwischen zwei verschiedenen Synthonen;
4) Abspaltung aller Schutzgruppen;
5) Komplexierung des paramagnetischen Metallions.

Im folgenden Schema 1 sind einige der funktionellen Gruppen, die am leichtesten jeweils bei Gallensäure und beim Liganden erhältlich sind, genauso wie die gegenseitigen Möglichkeiten zur Reaktion zur Erzielung stabiler Bindungen beispielhaft angegeben. Schema 1
Wie erkennbar ist, wird die Konjugation der beiden Synthone durchgeführt durch drei verschiedene bekannte Bindungsmethoden, die verbreitet in der Synthese angewendet werden (siehe Brinkley, M., Bioconjugate Chem. 1992, 3, 2), die Bildung eines Amids (Weg a), eine Thioharnstoffs (Weg b) oder durch Reduktion des Zwischenprodukt-Imins eines Amins (Weg c) beinhalten.
Die funktionellen Gruppen der beiden Synthone von Schema 1 sind weitere Modifikationen vor der Bindungsreaktion zugänglich, beispielsweise durch Reaktion mit geeigneten bifunktionellen Spacern.
Ein Beispiel von Liganden, die dem oben beschriebenen Punkt 1) entsprechen, ist durch die Moleküle in Schema 2 dargestellt. Schema 2
Als nicht-limitierendes Beispiel kann hier die Synthese von Liganden C und D angegeben werden, wobei der letztere das Glycin-Derivat ist (Schema 3).
Die Synthese von t-Butyl-2-bromo-3-[(4-nitrophenyl)methoxy]propionat wurde entsprechend dem von P. L. Rings et al., Synth. Commun., 23, 2639, 1993 beschriebenen Verfahren durchgeführt. Auf gleiche Weise kann ausgehend von t-Butyl-2-bromo-4-[(4-nitrophenyl)]butanoat (hergestellt entsprechend dem in Kruper W. J.; Rudolf P. R.; Langhoff C. A. J. Org. Chem., 58, 3869, 1993) beschriebenen Verfahren ein Ligand hergestellt werden, der keine Benzyloxygruppen beinhaltet.
In Schema 3 sind die t-Butylester dargestellt, sie können jedoch leicht durch andere Alkylgruppen ersetzt werden.
Die Synthese wird fortgesetzt mit der Kondensation der α-Bromopropionsäure-Zwischenprodukte mit Diethylentriamin und der anschließenden Carboxymethylierung mit t-Butyl-α-bromoacetat unter den üblichen in der Literatur bekannten Bedingungen.
Die Reduktion der Nitrogruppe wird mit Hilfe von Wasserstoff unter Verwendung von 10% Pd/C als Katalysator durchgeführt. An diesem Punkt ist das Schlüsselsynthon für die Bindung durch die Aminogruppe, der am aromatischen Ring des Liganden vorhanden ist, mit den sauren Gruppen der Gallensäuren oder mit deren Derivaten verfügbar, in denen Carbonsäuregruppen vorhanden sind. Schema 3
Ein Beispiel für die Funktionalisierung des Steroids kann dargestellt werden durch die Synthese von Cholsäure-3β-amino-Derivat nach Schema 4, unter Verwendung der Mitsunobu-Reaktion (Review, Synthesis, 1, 1981) auf originelle Weise, die die selektive Transformation der 3α-Hydroxylgruppe in die entsprechende 3β-Azidogruppe ermöglicht. Schema 4
Zwischenprodukt G kann als solches verwendet werden, oder es kann leicht in genauso interessantere weitere Zwischenprodukte umgewandelt werden, wie in Schema 5 dargestellt. Schema 5
Ein Beispiel für die Bindungsreaktion zwischen den Komponenten A und B der allgemeinen Formel (I) der erfindungsgemäßen Verbindungen ist die Bildung der Aminobindung zwischen der Steroid-Carboxylgruppe in 24-Position und der Aminogruppe, die im Liganden vorhanden ist, beispielsweise C und D von Schema 2.
Die Reaktion wird bevorzugt aktiviert durch Zugabe von Diethoxyphosporylcyanid (DEPC), entsprechend dem für die Peptidsynthese beschriebenen Verfahren (Shioiri, T. et al., Tetrahedron, 32, 2211, 1976). Die Reaktion mit DEPC findet bevorzugt in einem dipolaren aprotischen Lösungsmittel statt, wie Dimethylformamid (DMF) oder Dimethylacetamid (DMA) oder in einem Gemisch davon bei einer Temperatur, die variiert von –5°C bis 40°C, bevorzugt von 0°C bis 25°C.
Ein weiteres Beispiel für die Bindungsreaktion macht Gebrauch von der Bildung einer Schiff-Base zwischen den Ligaeden von Typ E und F und einem geeigneten Steroid-Derivat, beispielsweise Derivat J, das entsprechend Schema 5 aus dem 3β-Aminocholsäure-Derivat erhalten wird.
Die Aldehyd-Gruppe des Liganden reagiert mit der Aminogruppe, die im Steroid vorhanden ist, und anschließend wird das Amino-Derivat mit NaBH₃CN entsprechend einem gut bekannten Verfahren der Literatur reduziert (C. F. Lane, Synthesis, 135, 1975).
Die Auswahl der Diversifizierung der Estergruppen, die in beiden Komponenten der Bindungsreaktion vorhanden sind, ermöglicht die Modulierung der Hydrolyse in verschiedenen Syntheseschritten.
Die Umwandlung der Estergruppe vom t-Butyl-Typ in Säuregruppen findet in saurer Lösung statt. Die resultierende Lösung wird auf einen kontrollierten pH eingestellt, was die gleichzeitige Bildung des gewünschten Komplexes durch Zugabe der stöchiometrischen Menge von Metall in Form von Oxid oder Salz ermöglicht.
Die Hydrolysereaktion der Estergruppen vom Methyl-Typ findet bevorzugt in Gegenwart einer geeigneten organischen oder anorganischen Base statt wie Natriumhydroxid, Kaliumhydroxid, Kaliumcarbonat oder beispielsweise Lithiumhydroxid bei einem pH-Wert, der von 8 bis 12 variiert, bevorzugt zwischen 0°C und 100°C, bevorzugter zwischen 0°C und 50°C.
Die mögliche Konjugation mit den Aminosäuren Taurin und Glycin findet entsprechend dem Verfahren statt, das in Tserng, K-Y.; Hachey, D. L.; Klein, P. D. J. Lipid Res. 1977, 18, 404 beschrieben ist.
Schließlich wird die Bildung des Metallkomplexsalzes bevorzugt in Wasser oder in einer geeigneten Wasser-Alkohol-Mischung durchgeführt, während die Temperatur von 25°C bis 100°C, bevorzugt von 40°C bis 80°C variieren kann.
Die Auswahl des Metallions und etwaiger neutralisierender Ionen ist streng an die Verwendung des herzustellenden Komplexes gebunden.
Es wurde gezeigt, daß die neuen erfindungsgemäßen Verbindungen eine gute Verträglichkeit aufweisen; darüber hinaus sind ihre Wasserlöslichkeit und die niedrige Osmolalität der Lösungen ein weiteres wichtiges Merkmal, das sie besonders geeignet erscheinen läßt für die Verwendung in der kernmagnetischen Resonanz.
Es zeigte sich, daß die in vitro-Relaxations-Daten, die für die erfindungsgemäßen Verbindungen erhalten wurden, ziemlich gut waren. Beispielsweise als nicht nicht beschränkendes Beispiel sind die r₁- und r₂-Werte, die für zwei der bevorzugten erfindungsgemäßen Verbindungen gefunden wurden, d. h. 4-Carboxy-5,8,11-tris(carboxymethyl)-1-[4-[[[[(3α,5β,7α,12α)-3,7,12-trihydroxy-24-oxocholan-24-yl]amino]acetyl]amino]phenyl]-2-oxa-5,8,11-triazatridecan-13-säure-Gadolinium-Komplex als Salz mit 1-Deoxy-1-(methylamino)-D-glucitol (1:2); und [[10-[2-Oxo-2-[[3-[[-2-[[(3α,5β,7α,12α)-3,7,12-trihydroxy-24-oxocholan-24-yl]amino]ethyl]amino]propyl]amino]ethyl]-1,4,7,10-tetraazacyclododecan-1,4,7-triacetoat(3^–)]gadolinat(0)]-Wasserstoffverbindung mit HCl (1:1) in Beispiel 19 angegeben, verglichen mit den Daten, die für paramagnetische Verbindungen verfügbar sind, welche unter den Marken MAGNEVIST^® (Schering) und DOTAREM^® (Guerbet) vermarktet werden oder mit den Daten von Gd-BOPTA und des Gd³⁺-Ions als solchem.
Sowohl lösliche als auch weniger lösliche Verbindungen sind geeignet für die orale oder enterale Gabe und daher insbesondere für die Abbildung des Gastrointestinaltraktes.
Für die parenterale Gabe werden sie bevorzugt als sterile wäßrige Lösungen oder Suspensionen formuliert, deren pH beispielsweise von 6,0 bis 8,5 reichen kann.
Diese wäßrigen Lösungen oder Suspensionen können in Konzentrationen gegeben werden, die von 0,002 bis 1,0 Mol variieren.
Diese Formulierungen können gefriergetrocknet werden und als solche für die spätere Verwendung bereitgestellt werden. Für die gastrointestinale Verwendung oder für die Injektion in Körperhöhlen können diese Mittel als Lösungen oder Suspensionen formuliert werden, die geeignete Additive enthalten, welche beispielsweise zur Kontrolle der Viskosität geeignet sind.
Für die orale Gabe können sie entsprechend den Herstellungsmethoden formuliert werden, die üblicherweise in der pharmazeutischen Technik angewendet werden, möglicherweise auch als beschichtete Formulierungen zur Erzielung eines zusätzlichen Schutzes gegen den sauren pH im Magen, so daß die Freisetzung des chelatisierten Metallions verhindert wird, die besonders bei den pH-Werten stattfindet, die typisch sind für Magensaft.
Andere Exzipienten wie Süßstoffe und/oder Geschmacksstoffe können ebenfalls zugegeben werden, entsprechend bekannten Techniken der pharmazeutischen Formulierungen.
Was die diagnostische Verwendung der erfindungsgemäßen Chelate betrifft, so können sie sowohl als Kontrastmedien als auch als therapeutische Mittel in der Nuklearmedizin verwendet werden.
In diesem Fall ist das chelatisierte Metallion jedoch ein Radioisotop, beispielsweise ⁵¹Cr, ⁶⁷Ga, ⁶⁸Ga, ¹¹¹In, ^99mTc, ¹⁴⁰La, ¹⁷⁵Yb, ¹⁵³Sm, ¹⁶⁶Ho, ⁹⁰y, ¹⁴⁹Pm, ¹⁷⁷Lu, ⁴⁷Sc, ¹⁴²Pr, ¹⁵⁹Gd, ²¹²Bi.
Bevorzugte Kationen anorganischer Basen, die möglicherweise zur Salzbildung mit den komplexen Chelaten der vorliegenden Erfindung geeignet sind, umfassen insbesondere die Alkali- oder Erdalkalimetallionen wie Kalium, Natrium, Calcium, Magnesium und Mischungen davon.
Bevorzugte Kationen organischer Basen, die geeignet sind für den oben genannten Zweck umfassen unter anderem diejenigen von primären, sekundären und tertiären Aminen wie Ethanolamin, Diethanolamin, Morpholin, Glucamin, N-Methylglucamin, N,N-Dimethylglucamin.
Bevorzugte Anionen anorganischer Säuren, die möglicherweise geeignet sind zur Salzbildung mit den komplexen Chelaten der vorliegenden Erfindung, umfassen insbesondere die Halogenwasserstoffsäureionen wie Chloride, Bromide, Iodide oder andere Ionen wie Sulfat.
Bevorzugte Anionen organischer Säuren für den oben genannten Zweck umfassen diejenigen von Säuren, die üblicherweise in der pharmazeutischen Technik für die Salzbildung von Alkalisubstanzen verwendet werden, wie Acetat, Succinat, Citrat, Fumarat, Malest.
Bevorzugte Aminosäurekationen und -anionen umfassen beispielsweise die von Taurin, Glycin, Lysin, Arginin oder Ornithin oder von Asparagin und Glutaminsäure.
Die mit den Gallensäuren konjugierten komplexen Chelate, Gegenstand der vorliegenden Erfindung, können auch in Liposomen eingehüllt werden oder Komponenten von deren chemischer Struktur sein und als mono- oder multilamellare Vesikel verwendet werden.
Eine nicht beschränkende Liste von bevorzugten Verbindungen der Erfindung (im experimentellen Teil beschrieben) wird im folgenden angegeben, um die vorliegende Erfindung weiter zu illustrieren. Verbindung 3 (Beispiel 3)
[[3,6,9-Tris(carboxymethyl)-10-(phenylmethoxy)methyl-11-oxo-14-((3α,5β,7α,12α)-3,7,12-trihydroxy-24-oxocholan-24-yl)amino]-3,6,9,12-tetraazatetradecansäure; Verbindung 4 (Beispiel 4)
[[10-[2-Oxo-2-[[3-[[2-[[3α,5β,7α,12α)-3‚7,12-trihydroxy-24-oxocholan-24-yl]amino]ethyl]amino]propyl]amino]ethyl]-1,4,7,10-tetraazacyclododecan-1,4,7-triessigsäure; Verbindung 5 (Beispiel 5)
[[(3β,5β,7α,12α)-3-[[13-Carboxy-6,9,12-tris(carboxymethyl)-1,4-dioxo-5-[(phenylmethoxy)methyl]-3,6,9,12-tetraazatridecyl]amino]-7,12-dihydroxy-cholan-24-säure; Verbindung 6 (Beispiel 6)
[[3β,5β,7α,12α)-3-[[17-Carboxy-10,13,16-tris(carboxymethyl)-8-oxo-9-[(phenylmethoxy)methyl]-3,7,10,13,16-pentaazaheptadecyl]oxy]-7,12-dihydroxy-cholan-24-säure Verbindung 8 (Beispiel 4)
(3β,5β,7α,12α)-7,12-Dihydroxy-3-[[[[3-[[[4,7,10-tris(carboxymethyl)-1,4,7,10-tetraazacyclodec-1-yl]acetyl]amino]propyl]amino]acetyl]amino]-cholan-24-säure Verbindung 9 (Beispiel 8)
[[3,6,9-Tris(carboxymethyl)-10-[(phenylmethoxy)methyl]-11-oxo-17-[[(3α,5β,7α,12α)-3,7,12-trihydroxy-24-oxocholan-24-yl]amino]-3,6,9,12-tetraazaoctadecandisäure Verbindung 10 (Beispiel 9)
[[(3β,5β,7α,12α)-3-[[13-Carboxy-6,9,12-tris(carboxymethyl)-1,4-dioxo-3,6,9,12-tetraazatridecyl]amino]-7,12-dihydroxy-cholan-24-säure Verbindung 11 (Beispiel 10)
[(3β,5β,7α,12α)-(3'β,5'β,7'α,12'α)-3,3'-[[6,9,12-Tris(carboxymethyl)-1,4,14,17-tetraoxo-3,6,9,12,15-pentaazaheptadecan-1,17-diyl]bisimino]bis[7,12-dihydroxycholan-24-säure Verbindung 13 (Beispiel 12)
[[[3β(S),5β,7α,12α]-7,12-Dihydroxy-3-[[4-[[5-[bis[2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl]amino]-5-carboxypentyl]amino]-1,4-dioxobutyl]amino]cholan-24-säure Verbindung 15 (Beispiel 5)
3,6,9-Tris(carboxymethyl)-14-[[(3β,5β,7α,12α)-7,12-dihydroxy-24-oxo-24-[(2-sulfoethyl)amino]-cholan-3-yl]amino]-11,14-dioxo-10-(phenylmethoxy)methyl-3,6,9,12-tetraazatetradecansäure Verbindung 16 (Beispiel 5)
N-[(3β,5β,7α,12α)-3-[[13-Carboxy-6,9,12-tris(carboxymethyl)-1,4-dioxo-5-[(phenylmethoxy)methyl]3,6,9,12-tetraazatridecyl]amino]-7,12-dihydroxy-24-oxocholan-24-yl]glycin Verbindung 17 (Beispiel 5)
(3β,5β,7α)-3-[[13-Carboxy-6,9,12-tris(carboxymethyl)-1,4-dioxo-5-[(phenylmethoxy)methyl]-3,6,9,12-tetraazatridecyl]amino]-7-hydroxy-cholan-24-säure Verbindung 18 (Beispiel 5)
(3β,5β,12α)-3-[[13-Carboxy-6,9,12-tris(carboxymethyl)-1,4-dioxo-5-[(phenylmethoxy)methyl]-3‚6,9,12-tetraazatridecyl]a<mino]-12-hydroxy-cholan-24-säure Verbindung 19 (Beispiel 5)
(3β,5β)-3-[[13-Carboxy-6,9,12-tris(carboxymethyl)-1,4-dioxo-5-[(phenylmethoxy)methyl]-3,6,9,12-tetraazatridecyl]amino]-cholan-24-säure Verbindung 20 (Beispiel 5)
(3β,5β,7α,12α)-3-[[17-Carboxy-10,13,16-tris(carboxymethyl)-1,8-dioxo-9-[(phenylmethoxy)-methyl]-7,10,13,16-tetraazaheptadecyl]amino]-7,12-dihydroxy-cholan-24-säure Verbindung 21 (Beispiel 4)
(3β,5β,7α,12α)-7,12-Dihydroxy-3-[[3-[[4,7,10-tris(carboxymethyl)-1,4,7,10-tetraazacyclododec-1-yl]acetyl]amino]propyl]amino]-cholan-24-säure Verbindung 22 (Beispiel 9)
3,6,9-Tris(carboxymethyl)-14-[[3β,5β,7α,12α)-7,12-dihydroxy-24-oxo-[(2- sulfoethyl)amino]-cholan-3-yl]amino]-11,14-dioxo-3,6,9,12-tetraazatetradecansäure Verbindung 23 (Beispiel 9)
[(3β,5β,7α,12α)-3-{{17-Carboxy-10,13,16-tris(carboxymethyl)-1,8-dioxo-7,10,13,16- tetraazaheptadecyl]amino]-7,12-dihydroxy-cholan-24-säure Verbindung 24 (Beispiel 9)
(17S)-3,6,9-Tris(carboxymethyl)-11-oxo-17-[[(3β,5β,7α,12α)-3,7-12-trihydroxy-24-oxocholan-24-yl]amino]-3,6,9,12-tetraazaoctadecandisäure Verbindung 25 (Beispiel 14)
[[(3β,5β,7α,12α)-3-[[6-[[[Bis[2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl]amino]acetyl]amino]-1-oxohexyl]amino]-7,12-dihydroxy-cholan-24-säure Verbindung 26 (Beispiel 14)
(3β,5β,7α,12α)-3-[[[[[Bis[2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl]amino]acetyl]amino]acetyl]amino]-7,12-dihydroxy-cholan-24-säure Verbindung 27 (Beispiel 14)
N⁶-[[Bis[2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl]amino]acetyl]-N²-[(3α,5β,7α,12α)-3,7,12-trihydroxy-24-oxocholan-24-yl]-L-lysin. Verbindung 28 (Beispiel 15)
[[N⁶-[(4S)[4-[Bis[2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl]amio]-4-carboxy]-1-oxobutyl]-N²-[(3α,5β,7α,12α)-3‚7,12-trihydroxy-24-oxocholan-24-yl]-L-lysin Verbindung 29 (Beispiel 15)
[3β(S),5β,7α,12α]-3-[4-Carboxy-4-[bis[2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl]amino]-1-oxobutyl]amino]-7,12-dihydroxy-cholan-24-säure Verbindung 30 (Beispiel 16)
[[10-[2-[[2-[[(3β,5β,7α,12α)-7,12-Dihyroxy-24-oxo-24-[(2-sulfoethyl]amino]cholan-3-yl]amino]-2-oxoethyl]amio]-2-oxoethyl]-1,4,7,10-tetraazacyclododecan-1,4,7-triessigsäure Verbindung 31 (Beispiel 16)
(3β,5β,7α,12α)-3-[[[[[4,7,10-Tris(carboxymethyl)-1,4,7,10-tetraazacyclododecyl]acetyl]amino]acetyl]amino]-7,12-dihydroxy-cholan-24-Säure Verbindung 32 (Beispiel 16)
N²-[(3α,5β,7α,12α)-3,7,12-Trihydroxy-24-oxo-cholan-24-yl]-N⁶-((4,7,10-tris(carboxymethyl)-1,4,7,10-tetraazacyclododecyl]acetyl]-L-lysin Verbindung 33 (Beispiel 16)
(3β,5β,7α,12α)-3-[[6-[[[4,7,10-Tris(carboxymethyl)-1,4,7,10-tetraazacclodocecyl]acetyl]amino]-1-oxohexyl]amino]-7,12-dihydroxy-cholan-24-säure Verbindung 34 (Beispiel 17)
[[(3α,5β,7α,12α)-3-[[3-[4,7,10-Tris(carboxymethyl)-1,4,7,10-tetraazacyclododecyl]-2-hydroxypropyl]oxy]-7,12-dihydroxy-cholan-24-säure Verbindung 35 (Beispiel 18)
[[(3β,5β,7α,12α)-3-[[5-[4,7,10-Tris(carboxymethyl)-1,4,7,10-tetraazacyclododecyl]-4-hydroxy-1-oxopentyl]amino]-7,12-dihydroxy-cholan-24-säure
Es ist beabsichtigt, daß aller im folgenden Teil angegebener Inhalt als illustrativ und nicht in beschränkendem Sinn interpretiert werden soll.
Beispiel 3
[[3,6,9-Tris(carboxymethyl)-10-(phenylmethoxy)methyl-11-oxo-14-((3α,5β,7α,12α)-3,7,12-trihydroxy-24-oxo-cholan-24-yl]amino]-3,6,9,12-tetraazatetradecanoat(4^–)]gadolinate(1^–)]-Wasserstoffverbindung mit 1-Deoxy-1-(methylamino)-D-glucitol (1:1)
A) O-Phenylmethyl-N-[2-methoxy-2-oxoethyl]-N-[2-[[2-[bis(2-methoxy-2-oxoethyl)amino]ethyl](2-methoxy-2-oxoethyl)amino]ethyl]-D,L-serin
Eine Suspension von 40 g 4-Carboxy-5,8,11-tris(carboxymethyl)-1-phenyl-2-oxa-5,8,11-triazatridecan-13-säure (hergestellt wie in EP-A-230893 beschrieben) (0,07789 Mol) in 400 ml wasserfreiem MeOH, bei 0°C gehalten, wurde mit 150 ml Thionylchlorid während 2 Stunden versetzt. Die klare Lösung, auf 25°C erhitzt, wurde während 30 Stunden mit einem Magnetrührer gerührt. Die Lösung wurde zur Trockne eingedampft und der resultierende weiße Feststoff, in Kochsalzlösung gekühlt (–15°C), mit 400 ml Et₂O und langsam und unter Rühren mit 500 ml einer gesättigten NaHCO₃-Lösung (pH 10) versetzt. Nach Abtrennung wurde die wäßrige Phase, bei 0°C gehalten, mit 6 HCl auf pH 6,5 angesäuert und dann mit EtOAc extrahiert. Die organische Phase wurde zur Trockne eingedampft. 23,4 g des gewünschten Produktes (0,0411 Mol) wurden erhalten.
Ausbeute: 53%
HPLC-Titer: 98% (in % Fläche)
Stationäre Phase: Säule E. Merck Lichrosorb Select B, 5 μm; 250 × 4 mm;
Mobile Phase: Gradientenelution;
A = 0,01 M KH₂PO₄ und 0,017 M H₃PO₄ wäßrige Lösung
B = CH₃CN

min % A % B

0 95 5

30 20 80

45 20 80

Flußgeschwindigkeit: 1 ml min^–1;
Temperatur: 45°C
Detektor (UV): 210 nm, 254 nm und 280 nm
DSC: Träger: Kieselgelplatten 50 F₂₅₄ Merck
Eluens: CH₂Cl₂:MeOH = 8:2 (v:v)
Detektor: 0,5% KMnO₄ in 0,1 N NaOH R_f = 0,5
Die ¹H-NMR-, ¹³C NMR-, IR- und MS-Spektren sind konsistent mit der angegebenen Struktur.
B) Methyl-3,6,9-tris(2-methoxy-2-oxoethyl)-10-(phenylmethoxy)methyl-11-oxo-14-[[(3α,5β,7α,12α)-3,7,12-trihydroxy-24-oxocholan-24-yl]amino]-3,6,9,12-tetraazatetradecanoat
Eine Lösung von 39,2 g der Verbindung A) (0,0688 Mol), 33,1 g (3α,5β,7α,12α)-N-(2-aminoethyl)-3,7,12-trihydroxycholan-24-amid (hergestellt entsprechend dem Verfahren, das von Nilton, M. L.; Jones, A. S.; Westwood, J. R. B. J. Chem. Soc., 3449–3453, 1955 beschrieben wurde) (0,0734 Mol) und 13,33 g Diethoxyphosphorylcyanid (0,076 Mol) in 400 ml DMF wurde Tropfen für Tropfen bei 0°C und in 10 Minuten mit 7,69 g Triethylamin (0,076 Mol) versetzt. Nach 4 Stunden bei 0°C und 16 Stunden bei Raumtemperatur wurde die Reaktionsmischung konzentriert und in eine gesättigte NaHCO₃-Lösung gegossen und mit AcOEt extrahiert. Die organischen Phasen wurden kombiniert, mit einer gesättigten NaCl-Lösung und H₂O gewaschen, über Na₂SO₄ getrocknet und unter reduziertem Druck eingedampft. Der feste Rückstand wurde durch Flash-Chromatographie gereinigt und ergab 25,2 g des gewünschten Produktes (0,0251 Mol).
Ausbeute: 36%
HPLC-Titer: 91% (in % Fläche)
Stationäre Phase: Säule E. Merck Lichrosorb Select B, 5 μm; 250 × 4 mm
Mobile Phase: Gradientenelution
A = 0,01 M KH₂PO₄ und 0,017 M H₃PO₄ wäßrige Lösung
B = CH₃CN

min % A % B

0 95 5

30 20 80

45 20 80

Flußgeschwindigkeit: 1 ml min^–1
Temperatur: 30°C
Detektor (UV): 210 nm
DSC: Träger: Kieselgelplatten 60 F₂₅₄ Merck
Eluens: CH₂Cl₂:MeOH:25% NH₄OH (m/m) = 9:1:0,1 (v/v/v)
Detektor: AcOH:Konz. H₂SO₄:p-Anisaldehyd = 100:2:1 (v/v/v) R_f = 0,34
Die ¹H-NMR-, ¹³C-NMR-, IR- und MS-Spektren sind konsistent mit der angegebenen Struktur.
C) Titelverbindung
11,5 g Verbindung B) (11,4 mMol) wurden in 1:1 MeOH/H₂O (300 ml) gelöst und 2N NaOH (5 ml) wurde zugegeben, bis pH 12 erreicht wurde. Die Reaktionsmischung wurde während 48 Stunden bei Raumtemperatur gerührt, wobei der pH durch Zugabe von 1N NaOH (35 ml) durch eine pH-Stat-Apparatur bei 12 gehalten wurde. Die Reaktion wurde durch HPLC verfolgt. Die resultierende Lösung wurde mit 2 N HCL auf pH 7 eingestellt und eingedampft. Der Rückstand wurde mit 3:7 MeOH/H₂O (500 ml) gelöst, mit 6N HCL (15 ml) angesäuert, und die Lösung wurde auf eine Amberlite^R XAD-16-Harzsäule gegeben und mit einem MeOH/H₂O-Gradienten eluiert. Entfernung des Lösungsmittels aus den das Produkt enthaltenden Fraktionen ergab einen Feststoff, der durch präparative Reverse-Phase-HPLC weiter gereinigt wurde und 2,13 g 3,6,9-Tris(carboxymethyl)-10-(phenylmethoxy)methyl-11-oxo-14-[[(3α,5β,7α,12α)-3,7,12-trihydroxy-24-oxocholan-24-yl]amino]-3,6,9,12-tetraazatetradecansäure (2,25 mMol) als weißen Feststoff ergab. Die Säure wurde in H₂O (100 ml) und MeOH (20 ml) suspendiert, und 1 N Meglumin (5,6 ml; 5,6 mMol) wurde bis zur vollständigen Auflösung zugegeben (pH 6,8). Eine Lösung von GdCl₃ × 6H₂O (0,83 g; 2,23 mMol) in H₂O (20 ml) wurde Tropfen für Tropfen zu der Reaktionsmischung gegeben, die durch Zugabe von 1 N Meglumin (8,4 ml; 8,4 mMol) bei pH 6,8 gehalten wurde. Nach 16 Stunden wurde die wolkige Lösung filtriert, auf eine Amberlite^R XAD-16-Harzsäule gegeben und mit einem MeOH/H₂O-Gradienten eluiert. Die das Chelat enthaltenden Fraktionen wurden unter reduziertem Druck zur Trockne konzentriert und ergaben das gewünschte Produkt (2,0 g; 1,5 mMol).
Ausbeute: 13% Smp. = > 300
KF-Titer: 4,56% (m/m)
HPLC-Titer: 98% (in % Fläche)
Stationäre Phase: Säule E. Merck Supershper RP-18; 250 × 4 mm
Mobile Phase: Gradientenelution
A = wäßrige 0,05 M KH₂PO₄
B = CH₃CN

min % A % B

0 70 30

30 50 50

Flußgeschwindigkeit: 1 ml min^–1
Temperatur: 40°C
Detektor (UV): 210 nm

Elementaranalyse C H N Gd

% berechnet 50,99 6,92 6,48 12,14

% gefunden 49,26 7,26 6,20 11,57 H₂O < 0,1
Die IR- und MS-Spektren sind konsistent mit der Struktur.
Beispiel 4
[[10-[2-Oxo-2-[[3-[[2-[[3α,5β,7α,12α)-3,7,12-trihydroxy-24-oxocholan-24-yl]amino]ethyl]amino]propyl]amino]ethyl]-1,4,7,10-tetraazacyclododecan-1,4,7-triessigsäure-(3^–)]gadolinat(0)]-Wasserstoffverbindung mit HCL (1:1)
A) 2-(2-Aminoethyl)-1,3-dioxolan
Eine Suspension aus 50 g 2-(2-Bromoethyl)-1,3-dioxolan (aus der Literatur bekanntes Produkt, CAS RN = 5754-35-8) (0,27 ml, 32,5 Mol), 62,5 g Kalium-Phthalimid (0,34 Mol), 9,16 g Bu₄N⁺HSO₄ ^– (0,027 Mol) in 150 ml Toluol wurde unter Stickstoff-Strom während 3 Stunden auf 100°C erhitzt. Nach dem Abkühlen auf Raumtemperatur wurde die Mischung filtriert und zur Trockne eingedampft. Durch Kristallisation des Rückstands aus abs. EtOH wurde das Phthalimido-Derivat erhalten. Eine Lösung von 58,5 g NH₂NH₂ × H₂O (1,17 ml; 56,8 Mol), 64,36 g Phthalimido-Derivat (0,26 Mol) in 21 abs. EtOH wurde unter N₂-Strom während 2,5 Stunden unter Rückfluß erhitzt. Nach Abkühlen auf 0°C wurde das ausgefallene Phthalhydrazid durch einen Sintertrichter filtriert. Durch Eindampfen des Filtrats zur Trockne wurden 23,26 g des gewünschten Produktes (0,198 Mol) erhalten.
Ausbeute: 73%

Elementaranalyse C H N

% berechnet 51,25 9,48 11,94

% gefunden 49,27 9,77 10,53
Die ¹H-NMR-, ¹³C-NMR-, IR- und MS-Spektren sind konsistent mit der angegebenen Struktur.
B) 2-[2-[(2-Chloro-1-oxoethyl)amino]ethyl]-1,3-dioxolan
Eine Lösung aus 23,0 g Verbindung A) (0,196 Mol) und 19,8 g Et₃N (0,196 Mol; 27,16 ml) in 90 ml CHCl₃ und N₂-Strom wurde mit einer Lösung aus 22,17 g Chloroacetylchlorid (0,196 Mol; 15,6 ml) in 60 ml CHCl₃ versetzt, wobei die Temperatur bei 0 bis 10°C gehalten wurde.
Nach dem Ende der Reaktion wurde die Reaktionsmischung mit H₂O gewaschen, und die wäßrige Phase wurde mit CHCl₃ extrahiert. Die kombinierten organischen Phasen wurden getrocknet und zur Trockne eingedampft. Durch Kristallisationsrückstand aus Et₃O wurden 30,6 g des gewünschten Produktes (0,158 Mol) erhalten.
Ausbeute: 81% Smp.: 62–63°C (Zers.)

Elementaranalyse C H Cl N

% berechnet 43,40 6,25 18,30 7,23

% gefunden 43,13 6,22 18,28 7,20
Die ¹H-NMR-, ¹³C-NMR-, IR- und MS-Spektren sind konsistent mit der angegebenen Struktur.
C) N-[2-(1,3-Dioxolan-2-yl)ethyl]-1,4,7,10-tetraazacyclododecan-1-acetamid
Eine Lösung aus 203,3 g 1,4,7,10-Tetraazacyclododecan (Handelsprodukt) (1,18 Mol) in 21 CH₃CN wurde bei 80°C und unter N₂-Strom mit einer Lösung aus 23 g Verbindung B) (0,118 Mol) in 500 ml CH₃CN während 2 Stunden versetzt. Nach dem Ende der Reaktion wurde die Reaktionsmischung konzentriert, und der Niederschlag (1,4,7,10-Tetraazacyclododecan-Überschuß) wurde abfiltriert. Der Rückstand wurde zur Trockne eingedampft und durch Säulenchromatographie gereinigt und ergab 36 g des gewünschten Produktes (0,109 Mol).
Ausbeute: 93%

Elementaranalyse: C H N

% berechnet 54,67 9,50 21,26

% gefunden 54,18 9,49 20,91

DSC: Träger: Kieselgel-Platten 60 F₂₅₄ Merck
Eluens: CHCl₃:MeOH:NH₄OH = 4:4:2
Detektor: UV-Lampe (254 nm) oder KMnO₄ in NaOH R_f = 0,3
Die ¹H-NMR-, ¹³C-NMR-, IR- und MS-Spektren sind konsistent mit der angegebenen Struktur.
D) 10-[2-Oxo-2-[(oxopropyl)amino]ethyl]-1,4,7,10-tetraazacyclododecan-1,4,7-triessigsäure
48,6 g Bromessigsäure (0,35 Mol) wurden in 40 ml H₂O gelöst, und der pH der Lösung wurde durch Zugabe von 175 ml 2 N NaOH auf 5 eingestellt, wobei die Temperatur < 10°C gehalten wurde. Die Lösung wurde nach Zugabe von 35 g Verbindung C) (0,106 Mol) während 5 Stunden auf 50°C erhitzt, wobei der pH durch Zugabe von 160 ml 2N NaOH (0,32 Mol) bei 10 gehalten wurde. Die Reaktionsmischung wurde mit 30 ml 37% HCl bis pH 2 versetzt, und die Lösung wurde für 2 Stunden bei 50°C erhitzt. Die Reaktionsmischung wurde durch Elektrodialyse entsalzt, und nach Eindampfen der wäßrigen Lösung und Trocknen des Rückstands wurden 40 g des gewünschten Produktes (0,087 Mol) erhalten.
Ausbeute: 82% Smp.: 115–120°C
KF-Titer: 8,81% (m/m)

Elementaranalyse: C H N

% berechent 49,66 7,25 15,24

% gefunden 45,30 8,09 13,38
Die ¹H-NMR-, ¹³C-NMR-, IR- und MS-Spektren sind konsistent mit der angegebenen Struktur.
E) 10-[2-Oxo-2-[[3-[[2-[[(3α,5β,7α,12α)-3,7,12-trihydroxy-24-oxocholan-24-yl]amino]ethyl]amino]propyl)amino]ethyl]-1,4,7,10-tetraazacyclododecan-1,4,7-triessigsäure
Eine Lösung aus 80 g N-(2-Aminoethyl)-(3α,5β,7α,12α)-3,7,12-trihydroxycholan-24-amid (hergestellt entsprechend dem von Nilton, M. L.; Jones, A. S.; Westwood, J. R. B., J. Chem, Soc. 1955, 3449–3453 beschriebenen Verfahren) (178 mMol) in 800 ml wasserfreiem MeOH wurde mit 16,31 g Verbindung (D) (36 mMol), 35 ml 1 N HCl (35 mMol) und 1,49 g NaBH₃CN (24 mMol) versetzt. Die Lösung wurde unter Stickstoff gehalten und mit einem Magnetrührer in Gegenwart von Molekularsieb (0,4 nm) gerührt.
Nach 50 Stunden wurde das Lösungsmittel unter reduziertem Druck abgedampft und es wurde ein Rohprodukt erhalten, das durch Säulenchromatographie gereinigt wurde. Das Produkt wurde in 1 N HCl gelöst und durch ein Amberlite^R XAD-16-Polystyrolharz eluiert und ergab 8,79 g des gewünschten Produktes (9,8 mMol).
Ausbeute: 28% Smp.: 154°C
KF-Titer: 10,64% (m/m)
HPLC-Titer: 98,9% (in % Fläche)
Stationäre Phase: Säule E. Merck Lichrosorb Select B; 5 μm; 250 × 4 mm
Mobile Phase: Gradientenelution
A = 0,01 M KH₂PO₄ und 0,017 M H₃PO₄ wäßrige Lösung
B = CH₃CN

min % A % B

0 95 5

30 20 80

45 20 80

Flußgeschwindigkeit: 1 ml min^–1
Temperatur: 45°C
Detektor (UV): 210 nm

Elementaranalyse C H N

% berechnet 60,44 8,91 10,97

% gefunden 53,72 9,49 9,51

DSC: Träger: Kieselgelplatten 60 F₂₅₄ Merck
Eluens: CH₂Cl₂:MeOH:25% NH₄OH (m/m) = 7:3:1 (v/v/v)
Detektor: AcOH:Konz. H₂SO₄:p-Anisaldehyd = 100:2:1 (v/v/v) R_f = 0,26
Die ¹H-NMR-, ¹³C-NMR-, IR- und MS-Spektren sind konsistent mit der angegebenen Struktur.
F) Titelverbindung
Eine Lösung von 6,40 g Verbindung (E) (7,2 mMol) in 60 ml H₂O wurde bei 50°C unter Stickstoffatmosphäre gerührt und mit 1,18 g GdO₃ (3,3 mMol) versetzt. Der pH vor der Zugabe des Oxids war 6,65. Anschließend wurde 1 N HCl (7,2 ml) zugegeben, und der pH auf 2,75 gesenkt. Die Lösung wurde durch ein Millipore-Filter (HAS 0,45 μm) filtriert und das Lösungsmittel wurde unter reduziertem Druck eingedampft, wobei 6,90 g des gewünschten Produktes (6,36 mMol) erhalten wurden.
Ausbeute: 88,34% Smp.: 294°C (Zers.)

Elementaranalyse C H N Gd Cl

% berechnet: 49,82 7,15 9,04 14,50 3,27

% gefunden 47,37 7,78 8,45 13,53 3,09

H₂O 6,44

DSC: Träger: Kieselgelplatten 60 F₂₅₄ Merck
Eluens: CHCl₃:MeOH:H₂O:Et₃N = 8:2:0,1:0,1
Detektor: AcOH:Konz. H₂SO₄:p-Anisaldehyd = 100:2:1 (v/v/v) R_f = 0,13
Die IR- und MS-Spektren sind konsistent mit der angegebenen Struktur.
Auf dieselbe Weise wurden die Gadolinium-Komplexe der folgenden Liganden hergestellt:
(3β,5β,7α,12α)-7,12-Dihydroxy-3-[[[[3-[[[4,7,10-tris(carboxymethyl)-1,4,7,10-tetraazacyclododec-1-yl]acetyl]amino]propyl]amino]acetyl]amino]-cholan-24-säure (Verbindung 8);
(3β,5β,7α,12α)-7,12-Dihydroxy-3-[[3-[[[4,7,10-tris(carboxymethyl)-1,4,7,10-tetraazacyclododec-1-yl]acetyl]amino]propyl]amino]-cholan-24-säure (Verbindung 21).
Beispiel 5
[[(3β,5β,7α,12α)-3-[[13-Carboxy-6,9,12-tris(carboxymethyl)-1,4-dioxo-5-[(phenylmethoxy)methyl]-3,6,9,12-tetraazatridecyl]amino]-7,12-dihydroxy-cholan-24-oat-(5^–)]gadolinat(2^–)]-Wasserstoffverbindung mit 1-Deoxy-1-(methylamino)-D-glucitol (1:2)
A) (3β,5β,7α,12α)-3-Azido-7,12-dihydroxy-cholan-24-säure-methylester
Eine Lösung von 2,06 g Cholsäuremethylester (Handelsprodukt) (4,87 mMol), 1,28 g Triphenylphosphin (4,88 mMol) und 1,70 g Diethylazadicarboxylat (0,76 ml, 4,88 mMol) in 50 ml THF wurde bei Raumtemperatur unter Inertgasatmosphäre mit einer Lösung von 1,4 g Diphenylphosphorylazid (1,1 ml, 5,11 mMol) in 5 ml THF während 15 Minuten versetzt. Nach 24 Stunden bei Raumtemperatur wurden 1 Äquivalent Diethylazadicarboxylat (0,76 ml, 4,88 mMol) und 1 Äquivalent Triphenylphosphin (1,28 g, 4,88 mMol) zugegeben. Nach weiteren 24 Stunden wurde das Lösungsmittel unter reduziertem Druck abgedampft, und das resultierende Rohprodukt wurde durch Flash-Chromatographie gereinigt. 1,6 g des gewünschten Produktes (3,57 mMol) wurden erhalten.
Ausbeute: 73%

Elementaranalyse C H N

% berechnet 67,08 9,23 9,38

% gefunden: 66,86 9,30 9,15 H₂O 0,74

DSC: Träger: Kieselgelplatten 60 F₂₅₄ Merck
Eluens: AcOEt:Hexan = 1:1
Detektor: AcOH:Konz. H₂SO₄:p-Anisaldehyd = 100:2: 1 (v/v/v) R_f = 0,56
Die ¹H-NMR-, ¹³C-NMR-, IR- und MS-Spektren sind konsistent mit der angegebenen Struktur.
B) (3β,5β,7α,12α)-3-Amino-7,12-dihydroxy-cholan-24-säuremethylester
Eine Lösung von 28,28 g der Verbindung A) Methylester (0,063 Mol) in 100 ml THF wurde mit 5 ml H₂O und 16,59 g Triphenylphosphin (0,063 Mol) versetzt. Nach 96 Stunden bei Raumtemperatur wurde die Reaktionsmischung unter reduziertem Druck eingedampt und der Rückstand wurde durch Flash-Chromatographie gereinigt, wobei 23,21 g des gewünschten Produktes erhalten wurden (0,055 Mol).
Ausbeute: 87%

Elementaranalyse C H N

% berechnet 71,29 10,39 3,32

% gefunden 70,06 10,57 3,41 H₂O 0,26

DSC: Träger: Kieselgelplatten 60 F₂₅₄ Merck
Eluens: MeOH:Et₃N = 95:5
Detektor: AcOH:Konz. H₂SO₄:p-Anisaldehyd = 100:2:1 (v/v/v) R_f = 0,36
Die ¹H-NMR-, ¹³C-NMR-, IR- und MS-Spektren sind konsistent mit der angegebenen Struktur.
C) (3β,5β,7α,12α)-3-[[[[(Phenylmethoxy)carbonyl]amino]acetyl]amino]-7,12-dihydroxy-cholan-24-säuremethylester
Eine Lösung von 12,25 g Carbobenzyloxyglycin (Handelsprodukt) (58,5 mMol) und 6 g N-Methylmorpholin (59,3 mMol) in 400 ml THF wurde tropfenweise unter Stickstoff bei –4°C mit 8 g Isobutylchloroformiat (58,4 mMol) und anschließend 21,8 g Verbindung B) (51,7 mMol) gelöst in 100 ml THF versetzt. Nach 30 Minuten bei –4°C wurde die Reaktionsmischung filtriert und unter reduziertem Druck eingedampft. Der Rückstand wurde mit Et₂O und H₂O aufgenommen; die organische Phase wurde abgetrennt, mit H₂O gewaschen, über Na₂SO₄ getrocknet und unter reduziertem Druck eingedampft. Der feste Rückstand wurde durch Flash-Chromatographie gereinigt, wobei 27,9 g des gewünschten Produkts erhalten wurden (45,5 mMol).
Ausbeute: 88%

Elementaranalyse C H N

% berechnet 68,59 8,55 4,57

% gefunden 68,27 8,74 4,52 H₂O 0,25

DSC: Träger: Kieselgelplatten 60 F₂₅₄ Merck
Eluens: MeOH:Et₃N = 95:5
Detektor: AcOH:Konz. H₂SO₄:p-Anisaldehyd = 100:2:1 (v/v/v) R_f = 0,85
Die ¹H-NMR-, ¹³C-NMR-, IR- und MS-Spektren sind konsistent mit der angegebenen Struktur.
D) (3β,5β,7α,12α)-3-(Aminoacetyl)amino-7,12-dihydroxy-cholan-24-säuremethylester
Eine Lösung von Verbindung C) Methylester in MeOH wurde mit 10% Pd/C versetzt, und die Mischung wurde bei Raumtemperatur und Raumdruck hydriert, wobei das gewünschte Produkt erhalten wurde.
E) (3β,5β,7α,12α)-3-[[13-Carboxy-6,9,12-tris(carboxymethyl)-1,4-dioxo-5-[(phenylmethoxy)methyl]-3‚6,9,12-tetraazatridecyl]amino]-7,12-dihydroxycholan-24-säure
Entsprechend dem in Beispiel 3 beschriebenen Verfahren wurden O-Phenylmethyl-N-[2-methoxy-2-oxoethyl]-N-[2-[[2-[bis-(2-methoxy-2-oxoethyl)amino]ethyl](2-methoxy-2-oxo-ethyl)amino]ethyl]-D,L-serin und Verbindung D) in DMF und Triethylamin mit Diethoxyphosphorylcyanid kondensiert. Nach Ende der Reaktion wurde die Reaktionsmischung in eine gesättigte NaHCO₃-Lösung gegossen und mit AcOEt extrahiert. Die organischen Phasen wurden kombiniert und unter reduziertem Druck eingedampft. Der Rückstand wurde in MeOH gelöst und mit einer wäßrigen Lösung von LiOH-Monohydrat hydrolysiert. Die Reaktionsmischung wurde zur Trockne eingedampft, der feste Rückstand wurde in 1 N HCl gelöst und durch ein Amberlite^R XAD-16 Polystyrolharz eluiert, wobei das gewünschte Produkt erhalten wurde.
Die ¹H-NMR-, ¹³C-NMR-, IR- und MS-Spektren sind konsistent mit der angegebenen Struktur.
F) Titelverbindung
Entsprechend dem in Beispiel 1 beschriebenen Verfahren wurde Verbindung E) mit GdCl₃·6H₂O in H₂O umgesetzt, wobei der pH 6,5 durch Zugabe von 1 N Meglumin aufrechterhalten wurde. Das gewünschte Produkt wurde erhalten.
Die IR- und MS-Spektren sind konsistent mit der angegebenen Struktur.
Auf dieselbe Weise wurden die Gadolinium-Komplexe der folgenden Liganden hergestellt:
3,6,9-Tris(carboxymethyl)-14-[[(3β,5β,7α,12α)-7,12-dihydroxy-24-oxo-24-[(2-sulfoethyl)amino]cholan-3-yl]amino]-11,14-dioxo-10-(phenylmethoxy)methyl-3,6,9,12-tetraazatetradecansäure (Verbindung 15);
N-[(3β,5β,7α,12α)-3-[[13-Carboxy-6,9,12-tris(carboxymethyl)-1,4-dioxo-5-[(phenylmethoxy)methyl]-3,6,9,12-tetraazatridecyl]amino]-7,12-dihydroxy-24-oxocholan-24-yl]glycin (Verbindung 16);
(3β,5β,7α)-3-[[13-Carboxy-6,9,12-tris(carboxymethyl)-1,4-dioxo-5-[(phenylmethoxy)methyl]-3,6,9,12-tetraazatridecyl]amino]-7-hydroxy-cholan-24-säure (Verbindung 17);
(3β,5β,12α)-3-[[13-Carboxy-6,9,12-tris(carboxymethyl)-1,4-dioxo-5-[(phenylmethoxy)methyl]-3,6,9,12-tetraazatridecyl]amino]-12-hydroxy-cholan-24-säure (Verbindung 18);
(3β,5β)-3-[[13-Carboxy-6,9,12-tris(carboxymethyl)-1,4-dioxo-5-[(phenylmethoxy)methyl]-3,6,9,12-tetraazatridecyl]amino]-cholan-24-säure (Verbindung 19);
(3β,5β,7α,12α)-3-[[17-Carboxy-10,13,16-tris(carboxymethyl)-12,8-dioxo-9-[(phenylmethoxy)-methyl]-7,10,13,16-tetraazaheptadecyl]amino]-7,12-dihydroxy-cholan-24-säure (Verbindung 20).
Beispiel 6
[[3β,5β,7α,12α)-3-[[17-Carboxy-19,13,16-tris(carboxymethyl)-8-oxo-9-[(phenylmethoxy)methyl]-3,7,10,13,16-pentaazaheptadecyl]oxy]-7,12-dihydroxy-cholan-24-oat-(5^–)]gadolinat(2^–)]-Wasserstoffverbindung mit 1-Deoxy-1-(methylamino)-D-glucitol (1:2)
A) 2-Chloro-N-[2-(1,3-dioxolan-2-yl)ethyl]-3-phenyl-methoxypropanamid
Eine Lösung von 69,63 g 2-Chloro-3-(phenylmethoxy)propanoylchlorid (hergestellt entsprechend dem in Inorg. Chem., 31, 2422, 1992 beschriebenen Verfahren) (0,299 Mol) in 90 ml CHCl₃ wurde zu einer Lösung von 35,49 g 2-(2-Aminoethyl)-1,3-dioxolan (hergestellt entsprechend dem in Beispiel 4 beschriebenen Verfahren) (0,303 Mol) und zu 60,3 g Triethylamin (83 ml; 0,596 Mol) in 100 ml CHCl₃ unter Inertgasatmosphäre gegeben, wobei die Temperatur bei 0°C bis 5°C gehalten wurde. Die Reaktionsmischung wurde während 5 Stunden bei 25°C gerührt und dann mit H₂O gewaschen. Die organische Phase wurde getrocknet und zur Trockne eingedampft, und der Rückstand durch Flash-Chromatographie gereinigt. 61,68 g des gewünschten Produkts (0,197 Mol) wurden erhalten.
Ausbeute: 66%
DSC: Träger: Kieselgelplatten 60 F₂₅₄ Merck
Eluens: AcOEt:n-Hexan = 1:1 (v/v)
Detektor: 0,5% KMnO₄ in 0,1 N NaOH R_f = 0,34
Die ¹H-NMR-, ¹³C-NMR-, IR- und MS-Spektren sind konsistent mit der angegebenen Struktur.
B) 5,8,11-Tris[2-(1,1-dimethylethoxy)-2-oxoethyl]-1-phenyl-4-[[2-(1,3-dioxolan-2-yl)ethyl]amino]carbonyl-2-oxa-5,8,11-triazatridecan-13-säure-(1,1-dimethylethyl)ester
30,97 g Diethylentriamin (0,300 Mol) wurden zu einer Lösung von 20,94 g Verbindung A) (0,067 Mol) in 100 ml MeCN unter Inertgasatmosphäre gegeben, und die Mischung wurde während 72 Stunden bei 50°C und während 8 Stunden bei 80°C gehalten. Nach Abkühlen auf 0°C wurde der Niederschlag (Diethyltriaminhydrochlorid) abfiltriert und mit 50 ml MeCN gewaschen. Nach Eindampfen des Lösungsmittels unter reduziertem Druck wurde der Diethylentriamin-Überschuß unter Vakuum abdestilliert. Das Rohprodukt wurde in 80 ml AcOEt aufgenommen, filtriert und zur Trockne eingedampft, wobei ein Rückstand erhalten wurde, der durch Säulenchromatographie gereinigt wurde [Kieselgel; Eluens CHCl₃:MeOH:NH₃ 25% (w/w) = 20:4:0,4 (v/v/v). 12,61 g 2-[[2-[(2- Aminoethyl)amino]ethyl]amino]-3-(phenylmethoxy)-N-[2-(1,3-dioxolan-2-yl)ethyl]propanamid (0,03 Mol) wurden erhalten, die direkt im nachfolgenden Schritt verwendet wurden (46% Ausbeute).
Eine Lösung von 7,50 g 2-[[2-[(2-Aminoethyl)amino]ethyl]amino]-3-(phenylmethoxy)-N-[2-(1,3-dioxolan-2-yl)ethyl]propanamid in 30 ml 1,2-Dichlorethan wurde unter Inertgasatmosphäre mit 20,64 g Diisopropylethylamin (0,160 Mol) versetzt, und mit 15,58 t-Butylbromoacetat (0,080 Mol), wobei die Temperatur bei 0 bis 5°C gehalten wurde. Die Lösung wurde während 24 Stunden bei 15°C gehalten, mit weiterem t-Butylbromoacetat versetzt (4,25 g, 0,022 Mol) und während 72 Stunden bei 15°C gehalten. Die Lösung wurde auf 0°C abgekühlt und filtriert. Das Filtrat wurde konzentriert, in H₂O aufgenommen und mit AcOEt extrahiert. Die organische Phase wurde mit H₂O gewaschen, getrocknet und zur Trockne eingedampft, wobei ein Rohprodukt erhalten wurde, das durch Säulenchromatographie gereinigt wurde [Kieselgel 935 g; Eluens: AcOEt:n-Hexan 1:1 (v/v)]. Die Fraktionen mit gleicher Reinheit wurden kombiniert und zur Trockne eingedampft, wobei das gewünschte Produkt erhalten wurde (5,18 g; 0,062 mMol).
Ausbeute: 34%
Ausbeute: 16% über zwei Stufen
DSC: Träger: Kieselgelplatten 60 F₂₅₄ Merck
Eluens: AcOEt:n-Hexan = 1:1
Detektor: 0,5% KMnO₄ in 0,1 N NaOH R_f = 0,21
Die ¹H-NMR-, ¹³C-NMR-, IR- und MS-Spektren sind konsistent mit der angegebenen Struktur.
C) 5,8,11-Tris(carboxymethyl)-1-phenyl-4-[(3-oxopropyl)amino]carbonyl-2-oxa-5,8,11-triazatridecan-13-säure
67 ml 1 N HCl (0,067 Mol) wurden zu einer Lösung von 14 g Verbindung B) (0,017 Mol) in 280 ml Dioxan gegeben. Die Lösung wurde mit 215 ml H₂O verdünnt, bei 35°C während 54 Stunden und dann bei 4°C während 48 Stunden gerührt. Nach Abdampfen des Dioxans wurde die wäßrige Lösung mit AcOEt extrahiert. Die organische Phase wurde mit H₂O gewaschen, dann getrocknet und zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wurde mit CH₂Cl₂ aufgenommen, und die Lösung wurde zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wurde mit CH₂Cl₂ aufgenommen und die Lösung wurde in etwa 1 Stunde mit 82 g Trifluoressigsäure (55,7 ml; 0,719 Mol) versetzt. Die Lösung wurde während 24 Stunden bei 5°C unter Inertgasatmosphäre gehalten und dann zur Trockne eingedampft.
Der Rückstand wurde in CH₂Cl₂ aufgenommen und zur Trockne eingedampft, wobei das Verfahren einigemale wiederholt wurde. Das Rohprodukt wurde in CH₂Cl₂ aufgenommen und mit H₂O extrahiert. Die wäßrige Phase wurde abgetrennt, zu einem kleinen Volumen eingedampft und durch HPLC chromatographiert. 1,5 g des gewünschten Produktes (2,64 mMol) wurden erhalten.
Ausbeute: 16% Smp.: 100 bis 102°C (Zers.)
KF.-Titer: 2,27% (m/m)
HPLC-Titer: 97% (in % Fläche)
Stationäre Phase: Säule E. Merck Lichrosorb RP-Select B 5 μm; 250 × 4 mm;
Mobile Phase: Gradientenelution;
A = 0,01 M KH₂PO₄ und 0,017 M H₃PO₄ wäßrige Lösung
B = A/CH₃CN = 3:7

min. % A % B

0 90 10

30 10 90

40 10 90

Flußgeschwindigkeit: 1,5 ml min^–1
Temperatur: 35°C;
Detektor (UV): 210 nm.

Elementaranalyse C H N Na Cl H₂O

% berechnet 52,81 6,38 9,85

% gefunden 51,82 6,34 9,62 < 0,10 < 0,10 2,27
Die ¹H-NMR-, ¹³C-NMR-, IR- und MS-Spektren sind konsistent mit der angegebenen Struktur.
D) (3β,5β,7α,12α)-3-[[17-Carboxy-10,13,16-tris(carboxymethyl)-8-oxo-9-[(phenylmethoxy)methyl]-3‚7,10,13,16-pentaazaheptadecyl]oxy]-7,12-dihydroxycholan-24-säure
Entsprechend dem in Beispiel 4 beschriebenen Verfahren wurden Verbindung C) und (3β,5β,7α,12α)-3-[2-Amino)ethoxy]-7,12-dihydroxcholan-24-säure (hergestellt entsprechend dem in EP-A-417725 beschriebenen Verfahren) in wasserfreiem MeOH und HCl mit NaBH₃CN unter Inertgasatmosphäre umgesetzt. Das gewünschte Produkt wurde erhalten.
Die ¹H-NMR-, ¹³C-NMR-, IR- und MS-Spektren sind konsistent mit der angegebenen Struktur.
E) Titelverbindung
Entsprechend dem in Beispiel 1 beschriebenen Verfahren wurde Verbindung D) mit GdCl₃·6H₂O in H₂O umgesetzt, wobei pH 6,5 durch Zugabe von 1 N Meglumin aufrechterhalten wurde. Das gewünschte Produkt wurde erhalten.
Die IR- und MS-Spektren sind konsistent mit der angegebenen Struktur.
Beispiel 8
[[3,6,9-Tris(carboxymethyl)-10-[(phenylmethoxy)methyl]-11-oxo-17-[[(3α,5β,7α,12α)-3,7,12-trihydroxy-24-oxocholan-24-yl]amino]-3,6,9,12-tetraazaoctadecandionat-(5^–)]gadolinat(2^–)]-Diwasserstoffverbindung mit 2-Deoxy-1-(methylamino)-D-glucitol (1:2)
N⁶-Phenylmethoxy)carbonyl-N²-[(3α,5β,7α,12α)-3,7,12-trihydroxy-24-oxocholan-24-yl]-L-lysinmethylester
Eine Suspension von Cholsäure (16,3 g; 40 mMol) und Triethylamin (4,86 g; 48 mMol) in THF (350 ml) wurde bei 0°C unter Stickstoffatmosphäre gehalten und tropfenweise mit Isobutylchloroformiat (6,56 g; 48 mMol) in 10 Minuten versetzt. Nach 30 Minuten wurde eine Lösung von N⁶-(Phenylmethoxy)carbonyl-L-lysin (Handelsprodukt) (11,2 g; 40 mMol) in 0,67 NaoH (60 ml) während 20 Minuten dazugetropft. Die Reaktionsmischung wurde bei 0°C während einer weiteren Stunde und dann während 5 Stunden bei Raumtemperatur gehalten. Eine 2 N wäßrige HCl-Lösung wurde bis zum sauren pH zu der Mischung gegeben, dann wurde das organische Lösungsmittel unter reduziertem Druck abgedampft. Die restliche wäßrige Suspension wurde mit einer gesättigten NaCl-Lösung verdünnt und mit AcOEt extrahiert. Die organischen Phasen wurden kombiniert, getrocknet und zur Trockne eingedampft, wobei ein Feststoff isoliert wurde, der gepulvert und über P₂O₅ unter reduziertem Druck getrocknet wurde. Das resultierende Rohprodukt wurde der nachfolgenden Reaktion ohne weitere Reinigungsschritte unterzogen.
Eine Lösung von N⁶-(Phenylmethoxy)carbonyl-N²-[(3α,5β,7α,12α)-3,7,12-trihydroxy-24-oxocholan-24-yl]-L-lysin (27,5 g) in MeOH (600 ml) wurde bei Raumtemperatur und unter Stickstoffatmosphäre gehalten und mit p-Toluolsulfonsäure-Monohydrat (1,56 g; 8,2 mMol) versetzt. Nach 20 Stunden wurde die Reaktionsmischung mit Et₃N (0,832 g; 8,2 mMol) versetzt. Die Mischung wurde unter reduziertem Druck eingedampft, und das resultierende Rohprodukt wurde durch Flash-Chromatographie gereinigt, wobei das gewünschte Produkt erhalten wurde (24,1 g; 35,2 mMol).
Ausbeute: 88% Smp.: 80 bis 83°C
KF-Titer: 1,37% (m/m)
HPLC-Titer: 99,5% (in % Fläche)
Stationäre Phase: Säule E. Merck Lichrosorb Select B; 5 μm; 250 × 4 mm
Mobile Phase: Gradientenelution
A = 0,01 M KH₂PO₄ und 0,017 M H₃PO₄ wäßrige Lösung
B = CH₃CN

min. % A % B

0 95 5

30 20 80

45 20 80

Flußgeschwindigkeit: 1 ml min^–1
Temperatur: 45°C
Detektor (UV): 210 nm
[a]²⁰ _D: +16,2° (c 2,1; MeOH)

Elementaranlyse C H N

% berechnet 68,39 8,83 4,09

% gefunden 66,82 9,01 3,73

DSC: Träger: Kieselgelplatten 60 F₂₅₄ Merck
Eluens: AcOEt:i-PrOH = 9:1 (v/v)
Detektor: AcOH:Konz. H₂SO₄:p-Anisaldehyd = 100:2:1 (v/v/v) R_f = 0,22
Die ¹H-NMR-, ¹³C-NMR-, IR- und MS-Spektren sind konsistent mit der angegebenen Struktur.
B) N²-[(3α,5β,7α,12α)-3,7,12-Trihydroxy-24-oxocholan-24-yl]-L-lysinmethylestermonohydrochlorid
Eine Lösung von 15,0 g der Verbindung A) (21,9 mMol) in MeOH (150 ml) wurde mit Pd/C (1,5 g) versetzt. Die Mischung wurde bei Raumtemperatur und Normaldruck hydriert. Die Umsetzung wurde mit DSC und HPLC verfolgt. Nach 1,5 Stunden wurde die Reaktionsmischung durch ein Papierfilter abfiltriert, und das Filtrat wurde in einem H₂O/Eisbad auf 0°C abgekühlt und mit einer HCl-Lösung in MeOH (20,5 ml; 23,2 mMol) versetzt. Die Lösung wurde unter reduziertem Druck eingedampft, und der Rückstand wurde gepulvert und unter reduziertem Druck getrocknet, wobei das gewünschte Produkt erhalten wurde (12,4 g; 21,1 mMol).
Aubeute: 96% Smp.: 108 bis 110°C
KF-Titer: 2,20% (m/m)
HPLC-Titer: 92,4% (in % Fläche)
Stationäre Phase: Säule E. Merck Lichrosorb Select B; 5 μm; 250 × 4 mm
Mobile Phase: Gradientenelution
A = 0,01 M KH₂PO₄ und 0,017 M H₃PO₄ wäßrige Lösung
B = CH₂CN

min % A % B

0 95 5

30 20 80

45 20 80

Flußgeschwindigkeit: 1 ml min^–1
Temperatur: 45°C
Detektor (UV): 210 nm
[a]^D ₂₀ = +14,4° (c 2,16, MeOH)

Elementaranalyse C H N Cl

% berechnet 63,40 9,44 4,77 6,04

% gefunden 62,01 9,89 4,59 5,93

DSC: Träger: Kieselgelplatten 60 F₂₅₄ Merck
Eluens: MeOH:Et₃N = 95:5 (v/v)
Detektor: AcOH:Konz. H₂SO₄:p-Anisaldehyd = 100:2:1 (v/v/v) R_f = 0,33
Die ¹H-NMR-, ¹³C-NMR-, IR- und MS-Spektren sind konsistent mit der angegebenen Struktur.
C) 3,6,9-Tris(carboxymethyl)-10-[(phenylmethoxy)methyl]-11-oxo-17-[[(3α,5β,7α,12α)-3,7,12-trihydroxy-24-oxocholan-24-yl]amino]-3‚6,9,12-tetrazaoctadecandisäure
9,35 g Verbindung B) (14,3 mMol), O-Phenylmethyl-N-(2-methoxy-2-oxoethyl)-N-[2-[[2-[bis(2-methoxy-2-oxo-ethyl)amino]ethyl](2-methoxy-2-oxoethyl)amino]ethyl]-D,L-serin (hergestellt wie in Beispiel 3 beschrieben) (9,28 g; 14,3 mMol) und BOP-Reagens (Handelsprodukt) (6,32 g; 14,3 mMol) wurden in DMF (140 ml) bei Raumtemperatur gelöst. N,N-Diisopropylethylamin (8,51 ml; 50,1 mMol) wurde während 15 Minuten zu dieser gerührten Lösung gegeben. Die Reaktion wurde durch HPLC verfolgt. Nach 6 Stunden wurde die Reaktionsmischung unter reduziertem Druck eingedampft, und der Rückstand wurde in EtOAc gelöst. Die Lösung wurde schrittweise mit gesättigter wäßriger NH₄Cl, H₂O bis zum neutralen pH gewaschen, getrocknet und unter reduziertem Druck eingedampft. Der feste Rückstand wurde durch Flash-Chromatographie gereinigt, wobei ein gelb-brauner Feststoff erhalten wurde, der in 2:1 MeOH/H₂O gelöst wurde und 1 N NaOH (1,5 ml) wurde zugegeben, bis pH 12 erreicht wurde. Die Reaktionsmischung wurde während 21 Stunden bei Raumtemperatur gerührt, wobei der pH durch Zugabe von 1 N NaOH (35,5 ml) durch eine pH-Start-Apparatur bei 12 gehalten wurde. Die Reaktion wurde durch HPLC verfolgt. Die resultierende Lösung wurde mit 1 N HCl auf pH 6,5 eingestellt und unter reduziertem Druck eingedampft. Der Rückstand wurde in 7:3 1 N HCl/MeOH gelöst, und die Lösung wurde auf eine Amberlite^R XAD-16,00 Harzsäule gegeben und mit einem MeOH/H₂O-Gradienten eluiert. Die den Liganden enthaltenden Fraktionen wurden unter reduziertem Druck zur Trockne eingedampft und ergaben das gewünschte Produkt (4,51 g; 4,37 mMol).
Ausbeute: 31% Smp.: 158 bis 160°C
KF: 4,13% (m/m)
HPLC: 97% (Flächenprozent)
Stationäre Phase: Säule E. Merck Lichrosorb Select B; 5 μm; 250 × 4 mm
Mobile Phase: Gradientenelution
A = wäßrige Lösung 0,01 M in KH₂PO₄ und 0,017 M in H₃PO₄
B = CH₃CN

min % A % B

0 95 5

30 20 80

45 20 80

Flußgeschwindigkeit: 1 ml min^–1
Temperatur: 45°C
Detektor (UV): 210 nm

Elementaranalyse C H N Cl

% berechnet 60,50 7,91 6,79 0,00

% gefunden 58,13 8,22 6,33 < 0,1

DSC: Kieselgelplatte 60 F₂₅₄ (E. Merck Art. 5719)
Eluens: 80:30:5:5 = CHCl₃:MeOH:H₂O:Et₃N
Nachweis: AcOH:Konz. H₂SO₄:p-Anisaldehyd = 100:2: 1 (v/v/v) R_f = 0,25
Die ¹H-NMR-, ¹³C-NMR-, IR- und MS-Spektren sind konsistent mit der angegebenen Struktur.
D) Titelverbindung
3,52 g Verbindung C) (3,20 mMol) wurden in 9:1 H₂O/MeOH (70 ml) bei 50°C unter Stickstoff suspendiert. Meglumin (1,241 g; 6,357 mMol) wurde zugegeben, wobei vollständige Auflösung erzielt wurde. Gd₂O₃ (0,581 g; 1,60 mMol) wurde zu der Reaktionsmischung gegeben, und die resultierende Suspension wurde während 21 Stunden bei 50°C gerührt. Die fast klare Lösung wurde durch eine Millipore^R-Apparatur (HAS 0,45 μm Filter) filtriert und das Filtrat wurde mit 1% Meglumin-Lösung (0,90 ml; 9,0 mg; 4,6 μMol) auf pH 7 eingestellt. Die Lösung wurde unter reduziertem Druck zur Trockne eingedampft, wobei ein Feststoff erhalten wurde, der pulverisiert und unter reduziertem Druck getrocknet wurde und das gewünschte Produkt ergab (4,90 g; 3,11 mMol).
Ausbeute 94% Smp.: 170 bis 175°C (160°C, Sinterung)
KF-Titer: 2,15% (m/m)
HPLC: 97% (Flächenprozent)
Stationäre Phase: Säule E. Merck Superseher RP-18; 250 × 4 mm
Mobile Phase: Isokratische Elution: 74:26 AB
A = 0,05 M wäßrige Lösung in KH₂PO₄
B = CH₃CN

Flußgeschwindigkeit: 1 ml min^–1
Temperatur: 45°C
Detektor (UV): 210 nm

Elementaranalyse C H N Gd

% berechnet 50,27 7,16 6,22 9,97

% gefunden 49,77 7,49 6,07 9,68

DSC: Kieselgelplatte 60 F₂₅₄ (E. Merck Art. 5719)
Eluens: 80:30:5:5 = CHCl₃:MeOH:H₂O:Et₃N
Nachweis: AcOH:Konz. H₂SO₄:p-Anisaldehyd = 100:2:1 (v/v/v) R_f = 0,33
Die IR- und MS-Spektren sind konsistent mit der angegebenen Struktur.
Beispiel 9
[[(3β,5β,7α,12α)-3-[[13-Carboxy-6,9,12-tris(carboxymethyl)-1,4-dioxo-3,6,9,12-tetraaratridecyl]amino]-7,12-dihydroxy-cholan-24-oat(5^–)]gadolinat(1^–)]-Wasserstoffverbindung mit 1-Deoxy-1-(methylamino)-D-glucitol (1:2)
A) (3β,5β,7α,12α)-3-[[13-Carboxy-6,9,12-tris(carboxymethyl)-1,4-dioxo-3‚6,9,12-tetraazatridecyl]amino]-7,12-dihydroxy-cholan-24-säure
Eine Suspension von Diethylentriaminpentaessigsäure-dianhydrid (Handelsprodukt) (0,142 Mol) in DMF (850 ml) bei 80°C wurde tropfenweise mit einer Lösung von H₂O (0,211 Mol) und DMF (50 ml) versetzt. 1,5 Stunden wurde eine Lösung von (3β,5β,7α,12α)-3-(Aminoacetyl)amino-7,12-dihydroxy-cholan-24-säuremethylester (hergestellt entsprechend dem Verfahren von Beispiel 5) (0,0356 Mol) in DMF (100 ml) zugetropft. Nach Ende der Zugabe wurde die Mischung auf 20°C abgekühlt, und 2 N NaOH (360 ml) wurden zugetropft. Nach 24 Stunden wurde die Reaktionsmischung mit 37% HCl auf pH 7 eingestellt, und die Lösung wurde unter Vakuum eingedampft. Der Rückstand wurde mit MeOH/H₂O = 3/7 (500 ml) und 37%iger HCl (7 ml) gelöst. Die resultierende Lösung wurde auf Amberlite^R XAD-16-Harz gegeben und mit einem MeOH/H₂O-Gradienten eluiert, wobei das gewünschte Produkt erhalten wurde.
Die ¹H-NMR-, ¹³C-NMR-, IR- und MS-Spektren sind konsistent mit der angegebenen Struktur.
B) Titelverbindung
Entsprechend dem in Beispiel 1 beschriebenen Verfahren wurde Verbindung A) mit GdCl₃·6H₂O in H₂O umgesetzt, wobei der pH 6,5 durch Zugabe von 1 N Meglumin aufrechterhalten wurde. Das gewünschte Produkt wurde erhalten.
Die IR- und MS-Spektren sind konsistent mit der angegebenen Struktur.
Auf dieselbe Weise wurden die Gadolinium-Komplexe der folgenden Liganden hergestellt:
3,6,9-Tris(carboxymethyl)-14-[[3β,5β,7α,12α)-7,12-dihydroxy-24-oxo-[(2-sulfoethyl)amino]-cholan-3-yl]amino]-11,14-dioxo-3‚6,9,12-tetraazatetradecansäure (Verbindung 22);
[(3β,5β,7α,12α)-3-[[17-Carboxy-10,13,16-tris(carboxymethyl)-1,8-dioxo-7,10,13,16-tetraazaheptadecyl]amino]-7,12-dihydroxy-cholan-24-säure (Verbindung 23);
(17S)-3,6,9-Tris(carboxymethyl)-11-oxo-17-[[(3β,5β,7α,12α)-3,7-12-trihydroxy-24-oxocholan-24-yl]amino]-3,6,9,12-tetraazaoctadecansäure (Verbindung 24).
Beispiel 10
[(3β,5β,7α,12α)-(3'β,5'β,7'α,12'α)-3,3'-[[6,9,12-Tris(carboxymethyl)-1,4,14,17-tetraoxo,3,6,9,12,15-pentaazaheptadecan-1,17-diyl]bisimino]bis[7,12-dihydroxycholan-24-oat-(5^–)]gadolinat(2^–)]-Wasserstoffverbindung mit 1-Deoxy-1-(methylamino)-D-glucitol (1:2).
A) [(3β,5β,7α,12α)-(3'β,5'β,7'α,12'α)-3,3'-[[6,9,12-Tris(carboxymethyl)-1,4,14,17-tetraoxo-3,6,9,12,15-pentaazaheptadecan-1,17-diyl]bisimino]bis[7,12-dihydroxycholan-24-]-säure
Diethylentriaminopentaessigsäure-Dianhydrid (Handelsprodukt) wurde in DMF mit zwei Äquivalenten (3β,5β,7α,12α)-3-(Aminoacetyl)amino-7,12-dihydroxycholan-24-säuremethylester (hergestellt entsprechend dem in Beispiel 5 beschriebenen Verfahren) umgesetzt. Die Reaktionsmischung wurde anschließend mit einer wäßrigen LiOH-Monohydrat-Lösung behandelt, eingedampft und der Rückstand in 1 N HCl gelöst und durch ein Amberlite^R XAD-16-Polystyrolharz eluiert, wobei das gewünschte Produkt erhalten wurde.
Die ¹H-NMR-, ¹³C-NMR-, IR- und MS-Spektren sind konsistent mit der angegebenen Struktur.
B) Titelverbindung
Entsprechend dem in Beispiel 1 beschriebenen Verfahren wurde Verbindung A) mit GdCl₃·6H₂O in H₂O umgesetzt, wobei der pH 6,5 durch Zugabe von 1 N Meglumin aufrechterhalten wurde. Das gewünschte Produkt wurde erhalten.
Die IR- und MS-Spektren sind konsistent mit der angegebenen Struktur.
Beispiel 12
[[[3β(S),5β,7α,12α]-7,12-Dihydroxy-3-[[4-[[5-[bis[2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl]amino]5-carboxypentyl]amino]-1,4-dioxobutyl]amino]cholan-24-oat-(6^–)]gadolinat(3^–)]-Wasserstoffverbindung mit 1-Deoxy-1-(methylamino)-D-glucitol (1:3)
A) (3β,5β,7α,12α)-3-[(3-Carboxy-1-oxopropyl)amino]-7,12-dihydroxycholan-24-säuremethylester
Eine Lösung von 6,15 g (3β,5β,7α,12α)-3-Amino-7,12-dihydroxycholan-24-säuremethylester (hergestellt entsprechend dem in Beispiel 5 beschriebenen Verfahren) (15 mMol) in 85 ml THF und 17 ml Triethylamin wurde mit 1,5 g Bernsteinsäureanhydrid (15 mMol) versetzt. Nach 4 Stunden bei Raumtemperatur wurde die Reaktionsmischung in 200 ml 1 N HCl gegossen und mit AcOEt extrahiert. Die organische Phase wurde mit H₂O gewaschen, getrocknet und unter reduziertem Druck eingedampft. Der Rückstand wurde durch Flash-Chromatographie gereinigt, wobei 4,5 g des gewünschten Produktes erhalten wurde (8,6 mMol).
Ausbeute: 57% Smp.: 92–94°C

Elementaranalyse C H N

% berechnet 66,76 9,08 2,68

% gefunden: 65,45 9,40 2,50 H₂O 0,56

DSC: Träger: Kieselgelplatten 60 F₂₅₄ Merck
Eluens: AcOEt:AcOH = 4:1
Detektor: AcOH:Konz. H₂SO₄:p-Anisaldehyd = R_f = 0,47
Die ¹H-NMR-, ¹³C-NMR-, IR- und MS-Spektren sind konsistent mit der angegebenen Struktur.
B) (3β,5β,7α,12α)-3-[[4-[(2,5-Dioxo-1-pyrrolidinyl)oxy]-1,4-dioxobutyl]amino]-7,12-dihydroxy-cholan-24-säuremethylester
Eine Lösung von Verbindung A) in wasserfreiem THF und wasserfreiem Acetonitril wurde mit N-Hydroxysuccinimid versetzt und anschließend mit Dicyclohexylcarbodiimid: Dicyclohexylharnstoff fiel aus und wurde abfiltriert. Die Lösung wurde unter reduziertem Druck eingedampft, wobei das gewünschte Produkt erhalten wurde.
Die ¹H-NMR-, ¹³C-NMR-, IR- und MS-Spektren sind konsistent mit der angegebenen Struktur.
C) [3β(S),5β,7α,12α)-7,12-Dihydroxy-3-[[4-[[5-[bis[2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl]amino]-5-carboxy-pentyl]amino]-1,4-dioxobutyl]amino]-cholan-24-säure
Eine Lösung von Verbindung B) in DMF wurde mit einer Lösung von N²-Bis[2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl]-L-lysin (hergestellt entsprechend dem in Beispiel 11 beschriebenen Verfahren) in DMF und Triethylamin versetzt. Nach 24 Stunden wurde die Reaktionsmischung mit einer wäßrigen Lösung von LiOH-Monohydrat versetzt, dann wurde das Lösungsmittel abgedampft und der Rückstand wurde in 1 N HCl gelöst und durch ein Amberlite^R XAD-16-Polystyrolharz eluiert, wobei das gewünschte Produkt erhalten wurde.
Die ¹H-NMR-, ¹³C-NMR-, IR- und MS-Spektren sind konsistent mit der angegebenen Struktur.
D) Titelverbindung
Entsprechend dem in Beispiel 1 beschriebenen Verfahren wurde Verbindung C) mit GdCl₃·6H₂O in H₂O umgesetzt, wobei pH 6,5 durch Zugabe von 1 N Meglumin aufrechterhalten wurde. Das gewünschte Produkt wurde erhalten.
Die ¹H-NMR-, ¹³C-NMR-, IR- und MS-Spektren sind konsistent mit der angegebenen Struktur.
Beispiel 14
[[(3β,5β,7α,12α)-3-[[6-[[[Bis[2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl]amino]acetyl]amino]-1-oxohexyl]amino]-7,12-dihydroxy-cholan-24-oat-(5^–)]gadolinat(2^–)]-Wasserstoffverbindung mit 1-Deoxy-1-(methylamino)-D-glucitol (1:2).
A) N-[Bis[2-[bis[[2-(1,1-dimethylethoxy)-2-oxoethyl]amino]ethyl]glycin
1 g Glycin (Handelsprodukt) (0,0133 Mol) wurde in 100 ml H₂O/EtOH (25/75) gelöst, und eine Lösung von NaOH 1 N (8,8 ml, 8,8 mMol) wurde zugegeben, bis pH = 10 erreicht wurde. Dann wurde eine Lösung von 10 g N-(2-Bromoethyl)-N-[2-(1,1-dimethylethoxy)-2-oxoethyl]glycin-1,1-dimethylethylester (hergestellt entsprechend Williams, M., A. et al., J. Org. Chem., 1993, 58, 1151) (0,0284 mMol) in 10 ml 95%igem EtOH zugegeben. Nach Halten der Reaktion bei Raumtemperatur während 18 Stunden wurde die Mischung zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wurde durch Flash-Chromatographie gereinigt, wobei 6 g des gewünschten Produktes erhalten wurden (0,010 Mol).
Ausbeute: 73%
DSC: Träger: Kieselgelplatten 60 F₂₅₄ (E. Merck Artikel 5719)
Eluens: 1:9 = MeOH:AcOH
Nachweis: 0,5% KMnO₄ in 0,1 N NaOH R_f = 0,20
Die ¹H-NMR-, ¹³C-NMR-, IR- und MS-Spektren sind konsistent mit der angegebenen Struktur.
B) (3β,5β,7α,12α)-3-[[[6-[(Phenylmethoxy)carbonyl]amino]1-oxohexyl]amino]-7,12-dihydroxy-cholan-24-säuremethylester
Eine Lösung von 3,46 g N-Cbz-6-Aminohexansäure (kommerziell erhältlich von Lancaster) (0,0130 Mol) in 70 ml THF und 1,8 ml TEA (1,31 g, 0,0130 Mol) wurde sehr schnell mit 1,77 g Isobutylchloroformiat (Handelsprodukt) (1,7 ml, 0,0130 Mol) versetzt, wobei die Temperatur bei 0 bis 3°C gehalten wurde. Nach 15 Minuten wurden 5 g (3β,5β,7α,12α)-3-Amino-7,12-dihydroxy-cholan-24-säuremethylester (hergestellt entsprechend Beispiel 5) (0,119 Mol) in 30 ml THF zugegeben. Nach 30 Minuten vom Ende des Zutropfens an wurde die Temperatur bei Raumtemperatur gehalten und die Reaktionsmischung durch einen Glasfilter abfiltriert und unter reduziertem Druck eingedampft. Der Feststoff wurde in CH₂Cl₂ gelöst und mit H₂O und gesättiger Kochsalzlösung gewaschen. Die Phasen wurden getrennt und die organische Phase wurde eingedampft. Der Rückstand wurde in CH₂Cl₂ gelöst und mit einer gesättigten Lösung NaHCO₃ und H₂O gewaschen. Die organischen Phasen wurden kombiniert, getrocknet und unter reduziertem Druck eingedampft und ergaben einen Feststoff, der mit AcOEt kristallisiert wurde, wobei das gewünschte Produkt erhalten wurde (4,7 g, 0,0070 Mol).
Ausbeute: 60%
HPLC: 98,5% (Flächenprozent)
Stationäre Phase: Säule E. Merck Lichrosorb Select B; 5 μm; 250 × 4 mm
Mobile Phase: Gradientenelution
A = wäßrige Lösung 0,01 M von KH₂PO₄ und 0,017 M von H₃PO₄
B) CH₃CN

min % A % B

0 95 5

30 20 80

45 20 80

Flußgeschwindigkeit: 1 ml min^–1
Temperatur: 45°C
Detektor (UV): 210 nm

Elementaranalyse C H N

% berechnet 70,03 9,04 4,19

% gefunden 69,82 9,08 4,18 H₂O 0,24

TLC: Kieselgelplatte 60 F₂₅₄ (E. Merck Artikel 5719)
Eluens: AcOEt:i-PrOH = 95:5 (v/v)
Nachweis: AcOH:Konz. H₂SO₄:p-Anisaldehyd = 100:2:1 (v/v/v) R_f = 0,41
Die ¹H-NMR-, ¹³C-NMR-, IR- und MS-Spektren sind konsistent mit der angegebenen Struktur.
C) (3β,5β,7α,12α)-3-[(6-Amino-1-oxohexyl]amino]-7,12-dihydroxy-cholan-24-säuremethylester
4 g der Verbindung B) (0,00598 Mol) wurden in 50 ml abs. EtOH gelöst und 800 mg Pd/C wurden zugegeben. Die Hydrierung wurde bei Raumtemperatur und Atmosphärendruck durchgeführt. Nach Ende der Reaktion wurde die Mischung abfiltriert und zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wurde durch Flash-Chromatographie gereinigt, wobei das gewünschte Produkt erhalten wurde (2,7 g, 0,005 Mol).
Ausbeute: 84,4%
HPLC: 95% (Flächenprozent)
Stationäre Phase: Säule E. Merck Lichrosorb Select B; 5 μm; 250 × 4 mm
Mobile Phase: Gradientenelution
A = wäßrige Lösung 0,01 M von KH₂PO₄ und 0,017 M von H₃PO₄
B) CH₃CN

min % A % B

0 95 5

30 20 80

45 20 80

Flußgeschwindigkeit: 1 ml min^–1
Temperatur: 45°C
Detektor (UV): 210 nm
DSC: Kieselgelplatten 60 F₂₅₄ (E. Merck Artikel 5719)
Eluens: MeOH:TEA = 95:5 (v/v)
Nachweis: AcOH:Konz. H₂SO₄:p-Anisaldehyd = 100:2:1 (v/v/v) R_f = 0,33
Die ¹H-NMR-, ¹³C-NMR-, IR- und MS-Spektren sind konsistent mit der angegebenen Struktur.
D) (3β,5β,7α,12α)-3-[[6-[[[Bis[2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl]amino]acetyl]amino]-1-oxohexyl]amino]-7,12-dihydroxy-cholan-24-säure
Äquimolare Mengen von Verbindung A) und von Verbindung C) wurden bei Raumtemperatur mit Benzotriazol-1-yloxy-tris(dimethylamino)phosphoniumhexafluorophosphat (BOP, Handelsprodukt) in DMF und in Gegenwart eines Überschusses von N,N-Diisopropylethylamin umgesetzt. Nach Ende der Reaktion wurde die Reaktionsmischung unter Vakuum eingedampft und der Rückstand in EtOAc aufgenommen. Die Lösung wurde mit einer gesättigten NH₄Cl-Lösung und mit H₂O bis zum neutralen pH gewaschen und dann eingedampft. Der Rückstand wurde zunächst mit 1 N NaOH in MeOH/H₂O und dann mit CF₃COOH in CH₂Cl₂ hydrolysiert, wobei das gewünschte Produkt erhalten wurde, das gereinigt und durch Elution auf einem Amberlite^R XAD-16-Harz unter Verwendung eines MeOH/H₂O-Gradienten entsalzt wurde.
Die ¹H-NMR-, ¹³C-NMR-, IR- und MS-Spektren sind konsistent mit der angegebenen Struktur.
E) Titelverbindung
Entsprechend dem in Beispiel 1 beschriebenen Verfahren wurde Verbindung A) mit GdCl₃·6H₂O in H₂O umgesetzt, wobei der pH 6,5 durch Zugabe von 1 N Meglumin aufrechterhalten wurde. Das gewünschte Produkt wurde erhalten, das durch Elution mit einem MeOH/H₂O-Gradienten auf einem Amberlite^R XAD-16-Harz entsalzt wurde.
Die ¹H-NMR-, ¹³C-NMR-, IR- und MS-Spektren sind konsistent mit der angegebenen Struktur.
Auf dieselbe Weise wurden die Gadolinium-Komplexe der folgenden Liganden hergestellt:
(3β,5β,7α,12α)-3-[[[[[Bis[2-[bis(carboxymethyl)amino]-ethyl]amino]acetyl]amino]acetyl]amino]-7,12-dihydroxy-cholan-24-säure (Verbindung 26);
N⁶-[[Bis[2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl]amino]acetyl]-N²-[(3α,5β,7α,12α)-3,7,12-trihydroxy-24-oxocholan-24-yl]-L-lysin (Verbindung 27)
Beispiel 15
[[N⁶-[(4S)[4-[Bis[2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl]amino]-4-carboxy]-1-oxobutyl]-N²-[(3α,5β,7α,12α)-3,7,12-trihydroxy-24-oxocholan-24-yl]-L-lysinat(6^–)]-gadolinat(3^–)]-Wasserstoffverbindung mit 1-Deoxy-1-(methylamino)-D-glucitol (1:3)
A) N,N-Bis[2-[bis[2-(1,1-dimethylethoxy)-2-oxoethyl]amino]ethyl]-L-glutaminsäure-1-(1,1-dimethylethyl)ester-5-(phenylmethyl)ester
132,01 g L-Glutaminsäure-1-(1,1-dimethylethyl)ester-5-(phenylmethylester)(hergestellt entsprechend Helv. Chim. Acta, 199, 1864, 1958) (0,45 Mol) wurden in 200 ml H₂O und 1L EtOH gelöst und zu 320,2 g N-(2-Bromoethyl)-N-[2-(1,1-dimethylethoxy)-2-oxoethyl]glycin-1,1-dimethylethylester (hergestellt entsprechend Williams, M., A. et al., J. Org. Chem. 58, 1151, 1993) (0,909 Mol) gegeben, wobei pH 8 durch Zugabe von 10N NaOH aufrechterhalten wurde. Nach 50 Stunden bei 5°C wurde die Temperatur während weiterer 80 Stunden auf 20°C und während 5 Stunden auf 50°C gebracht. Die Mischung wurde mit Konz. HCl auf pH 7 eingestellt, eingedampft und mit Hexan extrahiert; die organische Phase wurde konzentriert und der Rückstand durch Flash-Chromatographie gereinigt, wobei das gewünschte Produkt erhalten wurde (75,2 g, 0,09 Mol).
Ausbeute: 20%
DSC: Kieselgelplatten 60 F₂₅₄ (E. Merck Artikel 5719)
Eluens: Hexan:AcOEt = 2:1 (v/v)
Nachweis: 0,5% KMnO₄ in 0,1 N NaOH R_f = 0,76
Die ¹H-NMR-, ¹³C-NMR-, IR- und MS-Spektren sind konsistent mit der angegebenen Struktur
B) N,N-Bis[2-[bis[2-(1,1-dimethylethoxy)-2-oxoethyl]amino]ethyl]-L-glutaminsäure-1-(1,1-dimethylethyl)ester
15,05 g Verbindung A) (18 mMol) gelöst in 100 ml EtOH wurden mit 4 g 5% nassem Pd/C versetzt, und die Mischung wurde unter einem H₂-Druck von 110,36 kPa hydriert. Nach Ende der Reaktion wurde die Mischung filtriert, zu einem Rückstand konzentriert und durch Flash-Chromatographie gereinigt, wobei das gewünschte Produkt erhalten wurde (11,01 g, 14,76 mMol).
Ausbeute: 82%
DSC: Kieselgelplatten 60 F₂₅₄ (E. Merck Artikel 5719)
Eluens: AcOEt
Nachweis: 0,5% KMnO₄ in 0,1 N NaOH R_f = 0,85
Die ¹H-NMR-, ¹³C-NMR-, IR- und MS-Spektren sind konsistent mit der angegebenen Struktur
C) N⁶-[(4S)[4-[Bis[2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl]amino]-4-carboxyl]-1-oxobutyl]-N²-[(3α,5β,7α,12α)-3,7,12-trihydroxy-24-oxocholan-24-yl]-L-lysin
Äquimolare Mengen Verbindung B) und N²-[(3α,5β,7α,12α)-3,7,12-Trihydroxy-24-oxocholan-24-yl]-L-lysinmethylestermonohydrochlorid (hergestellt wie in Beispiel 8 beschrieben) wurden bei Raumtemperatur mit BOP in DMF und in Gegenwart eines Überschusses von N,N-Diisopropylethylamin umgesetzt. Nach Ende der Reaktion wurde die Reaktionsmischung unter Vakuum eingedampft und der Rückstand mit EtOAc aufgenommen. Die Lösung wurde mit einer gesättigten NH₄Cl-Lösung und mit H₂O bis zum neutralen pH gewaschen und dann eingedampft. Der Rückstand wurde zuerst mit 1M NaOH in MeOH/H₂O und dann mit CF₃COOH in CH₂Cl₂ hydrolysiert, wobei das gewünschte Produkt erhalten wurde, das gereinigt und durch Elution auf einem Amberlite^R XAD-16-Harz unter Verwendung eines MeOH/H₂O-Gradienten entsalzt wurde.
Die ¹H-NMR-, ¹³C-NMR-, IR- und MS-Spektren sind konsistent mit der angegebenen Struktur.
D) Titelverbindung
Entsprechend dem in Beispiel 1 beschriebenen Verfahren wurde Verbindung B) mit GdCl₃·6H₂O in H₂O umgesetzt, wobei pH 6,5 durch Zugabe von 1 N Meglumin aufrechterhalten wurde. Das resultierende Produkt wurde durch Elution mit einem MeOH/H₂O-Gradienten auf einem Amberlite^R XAD-16-Harz entsalzt.
Die IR- und MS-Spektren sind konsistent mit der angegebenen Struktur.
Auf dieselbe Weise wurde der Gadolinium-Komplex des folgenden Liganden hergestellt:
[3β(S),5β,7α,12α]-3-[4-Carboxy-4-[bis[2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl]amino]-1-oxobutyl]amino]-7,12-dihydroxy-cholan-24-säure (Verbindung 29);
Beispiel 16
[[10-[2-[[2-[[(3β,5β,7α,12α)-7,12-Dihyroxy-24-oxo-24-[(2-sulfoethyl]amino]cholan-3-yl]amino]-2-oxoethyl]amio]-2-oxoethyl]-1,4,7,10-tetraazacyclododecan-1,4,7-triacetat(4^–)]gadolinat(1^–)]-Wasserstoffverbindung mit 1-Deoxy-1-(methylamino)-D-glucitol (1:1)
A) 1,4,7,10-Tetraazacyclododecan-1,4,7-triessigsäure-tris(1,1-dimethylethyl)estermonohydrochlorid.
Eine gerührte Lösung von 90 g 10-Formyl-1,4,7,10-tetrazacyclododecan-triessigsäuretris(1,1-dimethylethyl)ester (hergestellt entsprechend EP-A-292689 ) (0,166 Mol) in 1 Liter wasserfreiem EtOH wurde mit 12,24 g Hydroxylaminhydrochlorid (0,1826 Mol) versetzt und unter Argonatmosphäre während 18 Stunden unter Rückfluß erhitzt. Am Ende dieser Zeit wurde die Reaktionsmischung abgekühlt, und Ethanol wurde unter reduziertem Druck entfernt. Zu dem resultierenden Feststoff wurde CH₂Cl₂ gegeben und die Suspension in einen Scheidetrichter gegeben. Nach Waschen mit Wasser und gesättigter Kochsalzlösung wurde die organische Phase abgetrennt, getrocknet und unter reduziertem Druck konzentriert, wobei ein Rückstand erhalten wurde. Der Feststoff wurde zweimal aus einer CH₂Cl₂/Hexan-Mischung umkristallisiert und in einem Vakuumofen bei 35°C während 18 Stunden getrocknet, wobei 57 g des gewünschten Produktes erhalten wurden (0,103 Mol).
Ausbeute: 62,3%

Elementaranalyse C H N Cl

% berechnet 55,21 9,25 9,84 7,49

% gefunden 55,40 9,43 9,84 7,48 H₂O 1,41

DSC: Kieselgelplatten 60 F₂₅₄ (E. Merck Artikel 5719)
Eluens: 95:5 = MeOH:AcOH
Nachweis: 0,5% KMnO₄ in 0,1 N NaOH R_f = 0,67
Die ¹H-NMR-, ¹³C-NMR-, IR- und MS-Spektren sind konsistent mit der angegebenen Struktur.
B) (3β,5β,7α,12α)-3-[[[[(1,1-Dimethylethoxy)carbonyl]amino]acetyl]amino]-7,12-dihydroxy-cholan-24-säuremethylester
Zu einer Lösung von N-(t-Butoxycarbonyl)glycin (Handelsprodukt) (14,7 g; 84,0 mMol) und Et₃N (8,50 g; 11,6 ml; 84,0 mMol) in THF (400 ml) bei 0°C und unter Stickstoff wurden tropfenweise Isobutylchloroformiat (11,5 g; 10,9 ml; 84,0 mMol) gegeben. Nach 15 Minuten wurde eine Lösung von (3β,5β,7α,12α)-3-Amino-7,12-dihydroxy-cholan-24-säuremethylester (hergestellt entsprechend Beispiel 5) (29,5 g; 70,0 mMol) in THF (100 ml) tropfenweise bei 0°C zu der Reaktionsmischung gegeben. Nach 20 Minuten wurde die Reaktionsmischung auf Raumtemperatur gebracht und über Nacht gerührt. Die Suspension wurde durch einen Sintertrichter abfiltriert, und das Filtrat wurde unter reduziertem Druck abgedampft, wobei ein Rückstand erhalten wurde, der in Et₂O gelöst wurde und mit einer gesättigten wäßrigen Lösung von NaHCO₃ und H₂O gewaschen wurde. Die organische Phase wurde abgetrennt, getrocknet und dann unter reduziertem Druck eingedampft. Der feste Rückstand wurde durch Flash-Chromatographie gereinigt und ergab das gewünschte Produkt als weißen Feststoff (25,3 g; 43,7 mMol).
Ausbeute: 62% Smp.: 110–114°C
KF.: 0,75%
HPLC: 97% (Flächenprozent)
Stationäre Phase: Säule E. Merck Lichrosorb Select B; 5 μm; 250 × 4 mm
Mobile Phase: Gradientenelution
A = wäßrige Lösung 0,01 M von KH₂PO₄ und 0,017 M von H₃PO₄
B = CH₃CN

min % A % B

0 95 5

30 20 80

45 20 80

Flußgeschwindigkeit: 1 ml min^–1
Temperatur: 45°C
Detektor (UV): 210 nm

Elementaranalyse C H N

% berechnet 66,40 9,40 4,84

% gefunden 64,97 9,07 4,60

DSC: Kieselgelplatten 60 F₂₅₄ (E. Merck Artikel 5719)
Eluens: EtOAc:i-PrOH = 9:1 (v/v)
Nachweis: AcOH:Konz. H₂SO₄:p-Anisaldehyd = 100:2:1 (v/v/v) R_f = 0,43
Die ¹H-NMR-, ¹³C-NMR-, IR- und MS-Spektren sind konsistent mit der angegebenen Struktur.
C) (3β,5β,7α,12α)-3-[[[[(1,1-Dimethylethoxy)carbonyl]amino]acetyl]amino]-7,12-dihydroxy-cholan-24-säure
Zu einer Lösung von Verbindung B) (24,5 g; 41,4 mMol) in MeOH/H₂O (2:1, v/v; 160 ml) bei Raumtemperatur wurde tropfenweise 1 N NaOH (49,7 ml; 49,7 mMol) während 2 Stunden zugetropft. Nach 48 Stunden wurde die Reaktionsmischung durch einen Sinterglasfilter abfiltriert und unter reduziertem Druck eingedampft. Der Rückstand wurde mit 0,5 N HCl/EtOAc (1:2, 240 ml) behandelt, und der pH der resultierenden Mischung wurde unter heftigem Rührem mit 2 N HCl (10 ml) auf 2 eingestellt. Nach Abtrennung wurden die die organischen Phasen kombiniert, getrocknet und unter reduziertem Druck eingedampft, wobei das gewünschte Produkt erhalten wurde (22,2 g, 39,3 mMol).
Ausbeute: 96% Smp.: 150–155°C
KF.: 0,75%
Saurer Titer: (0,1 N NaOH): 95%
HPLC: 96% (Flächenprozent)
Stationäre Phase: Säule E. Merck Lichrosorb Select B; 5 μm; 250 × 4 mm
Mobile Phase: Gradientenelution
A = wäßrige Lösung 0,01 M von KH₂PO₄ und 0,017 M von H₃PO₄
B = CH₃CN

min %A %B

0 95 5

30 20 80

45 20 80

Flußgeschwindigkeit: 1 ml min^–1
Temperatur: 45°C
Detektor (UV): 210 nm

Elementaranalyse C H N

% berechnet 65,92 9,28 4,96

% gefunden 65,41 9,98 4,60

DSC: Kieselgelplatten 60 F₂₅₄ (E. Merck Artikel 5719)
Eluens: EtOAc:i-PrOH:AcOH = 90:15:1 (v/v/v)
Nachweis: AcOH:Konz. H₂SO₄:p-Anisaldehyd = 100:2:1 (v/v/v) R_f = 0,47
Die ¹H-NMR-, ¹³C-NMR-, IR- und MS-Spektren sind konsistent mit der angegebenen Struktur.
D) 2-[[(3β,5β,7α,12α)-3-[[[[(1,1-Dimethylethoxy)carbonyl]amino]acetyl]amino]-7,12-dihydroxy-24-oxocholan-24-yl]amino]ethansulfonsäure
Taurin(2-aminoethansulfonsäure) (Handelsprodukt) (5,40 g; 43,1 mMol) und Et₃N (5,16 g; 7,07 ml; 51,0 mMol) wurden zu einer Lösung von Verbindung C) (22,1 g; 39,1 mMol) und (2-Ethoxy-1-ethoxycarbonyl-1,2-dihydrochinolin, EEDQ) (Handelsprodukt) (12,6 g; 51,0 mMol) in DMF (100 ml) unter Stickstoffgegeben. Die resultierende Suspension wurde während 70 Minuten auf 90°C erhitzt, wobei eine klare Lösung erhalten wurde, die dann auf 25°C gekühlt wurde. Nach 30 Minuten wurde die Reaktionsmischung langsam in kalten Et₂O (0°C, 900 ml) gegossen: ein harziges Produkt wurde gebildet. Die Suspension wurde über Nacht bei 4°C gehalten. Die Mischung wurde dekantiert, und die harzige Substanz wurde mit Et₂O gewaschen, mit CH₂Cl₂ behandelt und abfiltriert, um unreagiertes Taurin zu entfernen. Das Filtrat wurde in kaltes Et₂O (0°C) gegossen, der Niederschlag wurde durch einen Glassinterfilter abfiltriert und sofort in 0,4 N NaOH in MeOH (100 ml) gelöst. Nach Verdünnen der Lösung mit Et₂O wurde die Suspension während einiger Stunden bei 4°C gehalten und dann durch einen Glassinterfilter abfiltriert. Der Feststoff wurde gründlich mit Et₂O gewaschen und unter reduziertem Druck getrocknet und ergab das gewünschte Produkt (24,7 g; 35,6 mMol).
Ausbeute: 91% Smp.: 150–155°C
DSC: Kieselgelplatten 60 F₂₅₄ (E. Merck Artikel 5719)
Eluens: CHCl₃:MeOH:AcOH = 90:30:4 (v/v/v)
Nachweis: AcOH:Konz. H₂SO₄:p-Anisaldehyd = 100:2:1 (v/v/v) R_f = 0,16
Die ¹H-NMR-, ¹³C-NMR-, IR- und MS-Spektren sind konsistent mit der angegebenen Struktur.
E) 2-[[(3β,5β,7α,12α)-3-[(Aminoacetyl)amino]-7,12-dihyroxy-24-oxocholan-24-yl]amino]ethansulfonsäure-natriumsalz
22,4 g Verbindung D) (32,3 mMol) wurde in 1 M methanolischer HCl (160 mMol; 160 ml) bei Raumtemperatur suspendiert. Während der Reaktionszeit wurde die Suspension dicker, und nach einem Tag wurde die Reaktionsmischung durch einen Glassinterfilter abfiltriert.
Der isolierte Feststoff wurde gründlich mit Et₂O/MeOH (1:1 v/v) gewaschen und unter reduziertem Druck getrocknet, wobei das gewünschte Produkt erhalten wurde (13,0 g; 20,6 mMol).
Ausbeute: 64% Smp.: 200°C
HPLC: 94% (Flächenprozent)
Stationäre Phase: Säule E. Merck Lichrosorb Select BH; 5 μm; 250 × 4 mm
Mobile Phase: Gradientenelution
A = wäßrige Lösung 0,01 M von KH₂PO₄ und 0,017 M von H₃PO₄.
B = CH₃CN

min % A % B

0 95 5

30 20 80

45 20 80

Flußgeschwindigkeit: 1 ml min^–1
Temperatur: 45°C
Detektor (UV): 210 nm
DSC: Kieselgelplatten 60 F₂₅₄ (E. Merck Artikel 5719)
Eluens: MeOH:AcOH = 95:5 (v/v)
Nachweis: AcOH:Konz. H₂SO₄:p. Anisaldehyd = 100:2:1 (v/v/v) R_f = 0,67
Die ¹H-NMR-, ¹³C-NMR-, IR- und MS-Spektren sind konsistent mit der angegebenen Struktur.
F) 10-[2-[[2-[[(3β,5β,7α,12α)-7,12-Dihydroxy-24-oxo-24-[(2-sulfoethyl)amino]cholan-3-yl]amino]-2-oxoethyl]amino]-2-oxoethyl]-1,4,7,10-tetraazacyclododecan-1,4,7-triessigsäure
Eine Lösung von Verbindung A) und Triethylamin in DMF wurde bei 5°C tropfenweise mit Isobutylchloroformiat und anschließend mit einer Lösung von Verbindung E) in DMF versetzt. Nach Ende der Reaktion wurde das Lösungsmittel unter Vakuum eingedampft, der Rückstand in CH₂Cl₂ gelöst und Trifluoressigsäure wurde bei 0°C zugetropft. Nach Ende der Zugabe wurde die Reaktion bei Raumtemperatur fortgesetzt. Nach Ende der Reaktion wurde die Reaktionsmischung unter reduziertem Druck eingedampft. Der Rückstand wurde mit CH₂Cl₂ aufgenommen und erneut eingedampft, wobei dieses Verfahren zweimal wiederholt wurde. Der Rückstand wurde gereinigt und durch Elution mit einem Amberlite^R XAD-16-Harz unter Verwendung eines MeOH/H₂O-Gradienten entsalzt, wobei das gewünschte Produkt erhalten wurde.
Die ¹H-NMR-, ¹³C-NMR-, IR- und MS-Spektren sind konsistent mit der angegebenen Struktur.
G) Titelverbindung
Entsprechend dem in Beispiel 1 beschriebenen Verfahren wurde Verbindung F) mit GdCl₃·6H₂O in H₂O umgesetzt, wobei der pH 6,5 durch Zugabe von 1 N Meglumin aufrechterhalten wurde. Das gewünschte Produkt wurde erhalten, das durch Elution mit ein MeOH/H₂O-Gradienten auf einem Amberlite XAD-16-Harz entsalzt wurde.
Die IR- und MS-Spektren sind konsistent mit der angegebenen Struktur.
Auf dieselbe Weise wurden die Gadolinium-Komplexe der folgenden Liganden hergestellt:
(3β,5β,7α,12α)-3-[[[[[4,7,10-Tris(carboxymethyl)-1,4,7,10-tetraazacyclododecyl]acetyl]amino]acetyl]amino]-7,12-dihydroxy-cholan-24-säure (Verbindung 31);
N²-[(3α,5β,7α,12α)-3,7,12-Trihydroxy-24-oxo-cholan-24-yl]-N⁶-((4,7,10-tris(carboxymethyl)-1,4,7,10-tetraazacyclododecyl]acetyl]-L-lysin (Verbindung 32);
(3β,5β,7α,12α)-3-[[6-[[[4,7,10-Tris(carboxymethyl)-1,4,7,10-tetraazacclodocecyl]acetyl]amino]-1-oxohexyl]amino]-7,12-dihydroxy-cholan-24-säure (Verbindung 33).
Beispiel 17
[[(3α,5β,7α,12α)-3-[[3-[4,7,10,10-Tris(carboxymethyl)-1,4,7,10-tetraazacyclododecyl]-2-hydroxypropyl]oxy]-7,12-dihydroxy-cholan-24-oat-(4^–)]gadolinat(1^–)]-Wasserstoffverbindung mit 1-Deoxy-1-(methylamino)-D-glucitol (1:1)
A) (3α,5β,7α,12α)-3-(2,3-Epoxypropylö)oxy-7,12-dihydroxy-cholan-24-säure-1,1-dimethylethylester
Eine Mischung von 50% NaOH (10 ml), Epichlorhydrin (6 ml) und Tetrabutylammoniumhydrogensulfat (0,3 g) wurde bei 0°C gehalten und tropfenweise mit einer Lösung von (3α,5β,7α,12α)-3,7,12-Trihydroxy-cholan-24-säure-1,1-dimethylethylester (hergestellt entsprechend dem Verfahren von R. P. B onar-Law et al., J. Chem, Soc. Perkin Trans. I, 1990, 2245) (0,0045 Mol) in CH₂Cl₂ (10 ml) versetzt. Nach Ende der Zugabe wurde die Mischung bei Raumtemperatur während 24 Stunden umgesetzt. Die organische Phase wurde abgetrennt, mit H₂O bis zur Neutralität gewaschen, über Na₂SO₄ getrocknet und eingedampft. Der Rückstand wurde durch Flash-Chromatographie gereinigt und ergab 0,86 g des gewünschten Produktes (0,0017 Mol).
Ausbeute: 37%
DSC: Träger: Kieselgelplatten 60 F₂₅₄ Merck
Eluens: n-Hexan:AcOEt = 1:1 (v/v)
Detektor: AcOH:Konz. H₂SO₄:p-Anisaldehyd = 100:2:1 R_f = 0,3
Die ¹H-NMR-, ¹³C-NMR-, IR- und MS-Spektren sind konsistent mit der angegebenen Struktur.
B) (3α,5β,7α,12α)-3-[[3-[4,7,10-Tris[2-(1,1-dimethylethoxy)-2-oxoethyl]-1,4,7,10-tetraazacyclododecyl]-2-hydroxypropyl]oxy]-7,12-dihydroxy-cholan-24-säure-(1,1-dimethylethyl)ester
Eine Verbindung A) (0,001 Mol), 1,4,7,10-Tetraazacyclododecan-1,4,7-triessigsäuretris(1,1-dimethylethyl)estermonohydrochlorid (hergestellt entsprechend Beispiel 16) (0,001 Mol) und Triethylamin (1,5 ml) enthaltende Lösung in EtOH (30 ml) wurde während 4 Stunden unter Rückfluß erhitzt. Die Reaktionsmischung wurde eingedampft und der Rückstand durch Flash-Chromatographie gereinigt, wobei 0,3 g des gewünschten Produktes erhalten wurden (0,003 Mol).
Aubeute: 27%
DSC: Träger: Kieselgelplatten 60 F₂₅₄ Merck
Eluens: CH₂Cl₂:MeOH = 9:1 (v/v)
Detektor: AcOH:Konz. H₂SO₄:p-Anisaldehyd = 100:2:1 R_f = 0,34
Die ¹H-NMR-, ¹³C-NMR-, IR- und MS-Spektren sind konsistent mit der angegebenen Struktur.
C) (3α,5β,7α,12α)-3-[[3-[4,7,10-Tris(carboxymethyl)-1,4,7,10-tetraazacyclododecyl]-2-hydroxypropyl]-oxy]-7,12-dihydroxy-cholan-24-säure
Eine Lösung von Verbindung B) in CH₂Cl₂ bei 0°C wurde tropfenweise mit Trifluoressigsäure versetzt. Nach Ende der Zugabe wurde die Mischung bei Raumtemperatur umgesetzt. Nach Ende der Reaktion wurde die Reaktionsmischung unter reduziertem Druck eingedampft. Der Rückstand wurde mit CH₂Cl₂ aufgenommen und erneut eingedampft, wobei dieses Verfahren zweimal wiederholt wurde. Der Rückstand wurde gereinigt und durch Elution auf einem Amberlite^R XAD-16-Harz unter Verwendung eines MeOH/H₂O-Gradienten entsalzt, wobei das gewünschte Produkt erhalten wurde.
Die ¹H-NMR-, ¹³C-NMR-, IR- und MS-Spektren sind konsistent mit der angegebenen Struktur.
D) Titelverbindung
Entsprechend dem in Beispiel 1 beschriebenen Verfahren wurde Verbindung C) mit GdCl₃·6H₂O in H₂O umgesetzt, wobei pH 6,5 durch Zugabe von 1 N Meglumin aufrechterhalten wurde. Das resultierende Produkt wurde durch Elution mit einem MeOH/H₂O-Gradienten auf einem Amberlite^R XAD-16-Harz entsalzt.
Die IR- und MS-Spektren sind konsistent mit der angegebenen Struktur.
Beispiel 18
[[(3β,5β,7α,12α)-3-[[5-[4,7,10-Tris(carboxymethyl)-1,4,7,10-tetraazacyclododecyl]-4-hydroxy-1-oxopentyl]amino]-7,12-dihydroxy-cholan-24-oat-(4^–)]gadolinat-(1^–)]-Wasserstoffverbindung mit 1-Deoxy-1-(methylamino)-D-glucitol (1:1)
A) (3β,5β,7α,12α)-3-(1-Oxopent-4-enyl)amino-7,12-dihydroxy-cholan-24-säuremethylester
Eine Lösung von 4-Pentensäure (Handelsprodukt) und Triethylamin in THF wurde tropfenweise unter Stickstoff bei 5°C mit Isobutylchloroformiat und anschließend mit einer Lösung von (3β,5β,7α,12α)-3-Amino-7,12-dihydroxy-cholan-24-säuremethylester (hergestellt entsprechend dem in Beispiel 5 beschriebenen Verfahren) in THF versetzt. Nach Ende der Reaktion wurde das Lösungsmittel abgedampft und der Rückstand wurde mit H₂O und AcOEt aufgenommen. Die organische Phase wurde abgetrennt, mit H₂O gewaschen, über Na₂SO₄ getrocknet und unter reduziertem Druck eingedampft. Der Rückstand wurde durch Flash-Chromatographie gereinigt, wobei das gewünschte Produkt erhalten wurde.
Die ¹H-NMR-, ¹³C-NMR-, IR- und MS-Spektren sind konsistent mit der angegebenen Struktur.
B) (3β,5β,7α,12α)-3-(4,5-Epoxy-1-oxopentyl)amino-7,12-dihydroxy-cholan-24-säuremethylester
Eine Lösung von Magnesiummonoperphthalat in H₂O wurde in eine Lösung der Verbindunng A) in CHCl₃ getropft, die Methyltrioctylammoniumchlorid enthielt, und bei 50°C gehalten wurde. Der pH der Reaktionsmischung wurde durch Zugabe von 5%iger NaOH bei 4,5 bis 5 gehalten. Nach Ende der Reaktion wurde die organische Phase abgetrennt und die wäßrige Phase mit CHCl₃ extrahiert. Die organischen Phasen wurden kombiniert, mit H₂O gewaschen, über Na₂SO₄ getrocknet und eingedampft, nachdem die Abwesenheit von Peroxid überprüft worden war. Der Rückstand wurde durch Flash-Chromatographie gereinigt, wobei das gewünschte Produkt erhalten wurde.
Die ¹H-NMR-, ¹³C-NMR-, IR- und MS-Spektren sind konsistent mit der angegebenen Struktur.
C) (3β,5β,7α,12α)-3-[[5-[4,7,10-Tris[2-(1,1-dimethylethocxy)-2-oxoethyl]-1,4,7,10-tetraazacyclododecyl]-4-hydroxy-1-oxopentyl]amino]-7,12-dihydroxy-cholan-24-säure
Eine Verbindung B), 1,4,7,10-Tetraazacyclodedecan-1,4,7-triessigsäure-tris(1,1-dimethylethyl)-estermonohydrochlorid (hergestellt entsprechend Beispiel 16) und Triethylamin in EtOH enthaltende Lösung wurde während 4 Stunden unter Rückfluß erhitzt. Die Reaktionsmischung wurde eingedampft und der Rückstand wurde durch Flash-Chromatographie gereinigt, wobei das gewünschte Produkt erhalten wurde.
Die ¹H-NMR-, ¹³C-NMR-, IR- und MS-Spektren sind konsistent mit der angegebenen Struktur.
D) (3β,5β,7α,12α)-3-[[5-[4,7,10-Tris(carboxymethyl)-1,4,7,10-tetraazacyclododecyl]-4-hydroxy-1-oxopentyl]amino]-7,12-dihydroxy-cholan-24-Säure
Eine Lösung von Verbindung C) in CH₂Cl₂ bei 0°C wurde tropfenweise mit Trifluoressigsäure versetzt. Nach Ende der Zugabe wurde die Mischung bei Raumtemperatur gehalten. Nach Ende der Reaktion wurde die Mischung unter reduziertem Druck eingedampft. Der Rückstand wurde mit CH₂Cl₂ aufgenommen und erneut eingedampft, wobei dieses Verfahren zweimal wiederholt wurde. Der Rückstand wurde gereinigt und durch Elution auf einem Amberlite^R XAD-16-Harz unter Verwendung eines MeOH/H₂O-Gradienten entsalzt, wobei das gewünschte Produkt erhalten wurde.
Die ¹H-NMR-, ¹³C-NMR-, IR- und MS-Spektren sind konsistent mit der angegebenen Struktur.
E) Titelverbindung
Entsprechend dem in Beispiel 1 beschriebenen Verfahren wurde Verbindung D) mit GdCl₃·6H₂O in H₂O umgesetzt, wobei der pH 6,5 durch Zugabe von 1 N Meglumin aufrechterhalten wurde. Das resultierende gewünschte Produkt wurde durch Elution mit einem MeOH/H₂O-Gradienten auf einem Amberlite XAD-16-Harz entsalzt.
Die IR- und MS-Spektren sind konsistent mit der angegebenen Struktur.
Beispiel 19

Die Relaxationswerte r1 und r2 (mM^–1·s^–1) des [[10-[2-Oxo-2-[[3-[[2-[[(3α,5β,7α,12α)-3,7,12-trihydroxy-24-oxocholan-24-yl]amino]-ethyl]-amino]propyl]amino]ethyl]-1,4,7,10-tetraazacyclododecan-1,4,7-triessigsäure-Gadolinium-Komplexes (Verbindung 4F) wurde in SERONORM-HUMAN^TM-Serum (NYCOMED) in einem Magnetfeld mit einer Frequenz von 20 MHz bei einer Temperatur von 39°C (MINISPEC PC-120-Vorrichtung) gemessen unter Verwendung der folgenden Sequenzen: Inversion Recovery; CPMG; und mit den von Gd-DTPA/Dimeg (Magnevist^R), Gd-DOTA/meg (Dotarem^R), Gd-BOPTA/Dimeg und GdCl₃ verglichen [Prozentverhältnisse bezogen auf GdCl₃ berechnet], die unter denselben experimentellen Bedingungen erhalten wurden. Die Ergebnisse sind in Tabelle 1 angegeben. Tabelle 1

A = r₁ (Gd-Verbindung)	B = r₂ (Gd-Verbindung)
r₁ (GdCl₃)	r₂ (GdCl₃)

Verbindung	r1 (mM^–1·s^–1)	A.100	r2 (mM^–1·s^–1)	B.100
Verbindung 4F	12,02	114,9	13,74	113,6
Magnevist	4,96	47,42	5,43	44,91
Dotarem	4,34	41,49	5,02	41,52
Gd-BOPTA	9,31	89,00	11,19	92,55
GdCl₃	10,46	100	12,09	100

Claims

Verbindungen der allgemeinen Formen (I) A-L-B (I)wobei A der Rest einer Gallensäure ist, wobei mit Gallensäure die Gruppe der durch Bioumwandlung aus Cholesterin erhältlichen Gallensäuren gemeint ist, insbesondere die Säuren: Chol-, Deoxychol-, Chenodeoxychol-, Ursodeoxychol-, Lithocholsäure und deren Derivate, einschließlich derer mit Taurin und Glycin; L ein Ligand zwischen einer der C-3-, C-7-, C-12- oder C-24-Positionen des Gallensäurerestes und B ist, entsprechend einer Gruppe der Formel (II)
in der m eine ganze Zahl variierend von 1 bis 10 ist, wobei für Werte größer 1 Y verschiedene Bedeutungen haben kann, Y der folgenden Aufeinanderfolge von Gruppen entspricht
n, l und q 0 oder 1 sein können, p von 0 bis 10 variieren kann, X ein O-Atom, ein S-Atom oder eine NR-Gruppe ist, in der R ein H-Atom oder eine (C₁-C₅)Alkylgruppe ist, K eine -CHR₁-Gruppe ist, wobei R₁ ein Wasserstoffatom oder eine -COOH-Gruppe oder eine -SO₃H-Gruppe ist, Z ein O-Atom oder ein S-Atom oder eine der Gruppen -CO- oder -CS- ist, B der Rest eines Chelatisierungsmittels der bi- oder trivalenten Metallionen mit einer Ordnungszahl ist, die von 20 bis 31, 39, 42, 43, 44, 49 oder von 57 bis 83 variiert, wobei dieser Rest seinerzeits durch eine zweite Kette L der Formel (II) an einen weiteren, wie oben definierten Rest A konjugiert sein kann oder nicht, unter der Voraussetzung, daß mindestens einer von l, n, q, p von 0 verschieden ist, und daß für den Fall, daß Y und Z beide O- oder S-Atome sind, q oder n gleich 1 ist, genauso wie komplexe Chelate dieser Verbindungen der Formel (I) mit Ionen von Metallelementen mit Ordnungszahlen im Bereich von 20 bis 31, 39, von 42 bis 44, 49 und von 57 bis 83 und deren Salze mit physiologisch verträglichen organischen Basen, die ausgewählt werden aus primären, sekundären, tertiären Aminen oder basischen Aminosäuren, oder mit anorganischen Basen, deren Kationen Natrium, Kalium, Magnesium, Calcium oder Mischungen davon sind, oder mit physiologisch verträglichen Anionen von organischen Säuren, die ausgewählt werden aus Acetat, Succinat, Citrat, Fumarat, Malest, Oxalat oder mit Anionen von anorganischen Säuren, die ausgewählt werden aus Halogenwasserstoffsäureionen, unter Ausschluß von N-(Carboxymethyl)-N-[2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl]-3-[4-[N'-[3-[3α,7α,12α-trihydroxy-5-cholan-24-oyl)amino]ethyl](thioureido)]phenyl]alanin, seinem Dihydrochlorid-Salz, und seinen Komplexen mit ¹¹¹In(III), Cu(II), Zn(II), La(III), Gd(III), Lu(III).
Verbindung nach Anspruch 1, wobei A aus einer der folgenden Gallensäuren ausgewählt wird: Chol-, Deoxychol-, Chenodeoxychol-, Ursodeoxychol-, Lithocholsäure und deren Derivaten, einschließlich der mit Taurin und Glycin konjugierten.
Verbindung nach Anspruch 1, wobei B aus den folgenden Polyaminocarbonsäuren und Ester- oder Amidderivaten davon ausgewählt wird: EDTA; DTPA; EOB-DTPA; BOPTA; DTPA-BMA; DOTA; DOTMA; DO3A; HPDO3A; MCTA; oder B aus den folgenden Säuren ausgewählt wird: DPDP; EDTP; oder B aus den folgenden Polyaminophosphonsäuren und deren Derivaten oder Polyaminophosphinsäuren und deren Derivaten ausgewählt wird; 1,4,7,10-Tetraazacyclododecan-1,4,7,10-tetrakis[methylen(methylphosphin)]säure und 1,4,7,10-Tetraazacyclododecan-1,4,7,10-tetrakis[methylen(methylphosphin)]säure; oder B ausgewählt wird aus makrocyclischen Chelatisierungsmitteln, die ausgewählt werden aus Texafirinen, Porphyrinen und Phthalocyaninen.
Verbindung nach Anspruch 1, wobei die Spacer-Kette L die folgende allgemeine Formel (III) aufweist:
wobei R, R₁, l, m, n, p und q wie oben definiert sind.
Verbindungen nach Anspruch 1, wobei die Spacer-Kette die folgende allgemeine Formel (IV) aufweist
wobei R, R₁, l, m, n, p und q wie oben definiert sind.
Verbindungen nach Anspruch 1, wobei die Spacer-Kette L die folgende allgemeine Formel (VI) aufweist
wobei R, l, m, n, p und q wie oben definiert sind.
Verbindungen nach Anspruch 1, wobei das vom chelatisierenden Rest B komplexierte bi- oder trivalente Metallion ausgewählt wird aus Fe² ⁺, Fe³ ⁺, Gd³ ⁺, Eu³ ⁺, Dy³ ⁺, La³⁺, Yb³⁺ und Mn² ⁺, oder ein Radioisotop ist, das ausgewählt wird aus ⁵¹Cr, ⁶⁷Ga, ⁶⁸Ga, ¹¹¹In, ^99mTc, ¹⁴⁰La, ¹⁷⁵Yb, ¹⁵³Sm, ¹⁶⁶Ho, ⁹⁰Y, ¹⁴⁹Pm, ¹⁷⁷Lu, ⁴⁷Sc, ¹⁴²Pr, ¹⁵⁹Gd, ²¹²Bi.
Verbindungen nach Anspruch 1, wobei die physiologisch verträgliche salzbildende organische Base ausgewählt wird aus Ethanolamin, Diethanolamin, Morpholin, Glucamin, N,N-Dimethylglucamin, N-Methylglucamin, Lysin, Arginin, Ornithin.
Verbindungen nach Anspruch 1, wobei das physiologisch verträgliche salzbildende Anion einer organischen Säure ein Ion einer Halogenwasserstoffsäure ist, ausgewählt aus Chloriden, Bromiden und Iodiden.
Verbindungen nach Anspruch 1, wobei A ein Cholsäure-Rest oder ein Derivat davon ist und B ein DTPA-Rest oder ein Derivat davon ist.
Verbindungen nach Anspruch 1, wobei A ein Cholsäure-Rest oder ein Derivat davon ist und B ein BOPTA-Rest oder ein Derivat davon ist.
Verbindungen nach Anspruch 1, wobei A ein Cholsäure-Rest oder ein Derivat davon ist und B ein DOTA-Rest oder ein Derivat davon ist.
Verbindung nach den Ansprüchen 1 bis 12, wobei das Derivat der Formel (I) ausgewählt wird aus den folgenden: Verbindung 3 [[3,6,9-Tris(carboxymethyl)-10-(phenylmethoxy)methyl-11-oxo-14-((3α,5β,7α,12α)-3,7,12-trihydroxy-24-oxocholan-24-yl]amino]-3,6,9,12-tetraazatetradecansäure; Verbindung 4 [[10-[2-Oxo-2-[[3-[[2-[[3α,5β,7α,12α)-3‚7,12-trihydroxy-24-oxocholan-24-yl]amino]ethyl]amino]propyl]amino]ethyl]-1,4,7,10-tetraazacyclododecan-1,4,7-triessigsäure; Verbindung 5 [[(3β,5β,7α,12α)-3-[[13-Carboxy-6,9,12-tris(carboxymethyl)-1,4-dioxo-5-[(phenylmethoxy)methyl]-3,6,9,12-tetraazatridecyl]amino]-7,12-dihydroxy-cholan-24-säure; Verbindung 6 [[3β,5β,7α,12α)-3-[[17-Carboxy-10,13,16-tris(carboxymethyl)-8-oxo-9-[(phenylmethoxy)methyl]-3‚7,10,13,16-pentaazaheptadecyl]oxy]-7,12-dihydroxy-cholan-24-säure; Verbindung 8 (3β,5β,7α,12α)-7,12-Dihydroxy-3-[[[[3-[[[4,7,10-tris(carboxymethyl)-1,4,7,10-tetraazacyclodec-1-yl]acetyl]amino]propyl]amino]acetyl]amino]-cholan-24-säure; Verbindung 9 [[3,6,9-Tris(carboxymethyl)-10-[(phenylmethoxy)methyl]-11-oxo-17-[[(3α,5β,7α,12α)-3,7,12-trihydroxy-24-oxocholan-24-yl]amino]-3‚6,9,12-tetraazaoctadecandionsäure; Verbindung 10 [[(3β,5β,7α,12α)-3-[[13-Carboxy-6,9,12-tris(carboxymethyl)-1,4-dioxo-3,6,9,12-tetraazatridecyl]amino]-7,12-dihydroxy-cholan-24-säure; Verbindung 11 [(3β,5β,7α,12α)-(3'β,5'β,7'α,12'α)-3,3'-[[6,9,12-Tris(carboxymethyl)-1,4,14,17-tetraoxo-3,6,9,12,15-pentaazaheptadecan-1,17-diyl]bisimino]bis[7,12-dihydroxycholan-24-säure; Verbindung 13 [[[3β(S),5β,7α,12α]-7,12-Dihydroxy-3-[[4-[[5-[bis[2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl]amino]-5-carboxypentyl]amino]-1,4-dioxobutyl]amino]cholan-24-säure; Verbindung 15 3,6,9-Tris(carboxymethyl)-14-[[(3β,5β,7α,12α)-7,12-dihydroxy-24-oxo-24-[(2-sulfoethyl)amino]cholan-3-yl]amino]-11,14-dioxo-3,6,9,12-tetraazatetradecansäure; Verbindung 16 N-[(3β,5β,7α,12α)-3-[[13-Carboxy-6,9,12-tris(carboxymethyl)-1,4-dioxo-5-[(phenylmethoxy)methyl]-3,6,9,12-tetraazatridecyl]amino]-7,12-dihydroxy-24-oxocholan-24-yl]glycin Verbindung 17 (3β,5β,7α)-3-[[13-Carboxy-6,9,12-tris(carboxymethyl)-1,4-dioxo-5-[(phenylmethoxy)methyl]-3,6,9,12-tetraazatridecyl]amino]-7-hydroxy-cholan-24-säure; Verbindung 18 (3β,5β,12α)-3-[[13-Carboxy-6,9,12-tris(carboxymethyl)-1,4-dioxo-5-[(phenylmethoxy)methyl]-3,6,9,12-tetraazatridecyl]amino]-12-hydroxy-cholan-24-säure; Verbindung 19 (3β,5β)-3-[[13-Carboxy-6,9,12-tris(carboxymethyl)-1,4-dioxo-5-[(phenylmethoxy)methyl]-3,6,9,12-tetraazatridecyl]amino]-cholan-24-säure; Verbindung 20 (3β,5β,7α,12α)-3-[[17-Carboxy-10,13,16-tris(carboxymethyl)-1,8-dioxo-9-[(phenylmethoxy)-methyl]-7,10,13,16-tetraazaheptadecyl]amino]-7,12-dihydroxy-cholan-24-säure; Verbindung 21 (3β,5β,7α,12α)-7,12-Dihydroxy-3-[[3-[[4,7,10-tris(carboxymethyl)-1,4,7,10-tetraazacyclododec-1-yl]acetyl]amino]propyl]amino]-cholan-24-säure; Verbindung 22 3,6,9-Tris(carboxymethyl)-14-[[3β,5β,7α,12α)-7,12-dihydroxy-24-oxo-[(2-sulfoethyl)amino]-cholan-3-yl]amino]-11,14-dioxo-3,6,9,12-tetraazatetradecansäure; Verbindung 23 [(3β,5β,7α,12α)-3-{{17-Carboxy-10,13,16-tris(carboxymethyl)-1,8-dioxo-7,10,13,16-tetraazaheptadecyl]amino]-7,12-dihydroxy-cholan-24-säure; Verbindung 24 (17S)-3,6,9-Tris(carboxymethyl)-11-oxo-17-[[(3β,5β,7α,12α)-3,7-12-trihydroxy-24-oxocholan-24-yl]amino]-3,6,9,12-tetraazaoctadecandionsäure; Verbindung 25 [[(3β,5β,7α,12α)-3-[[6-[[[Bis[2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl]amino]acetyl]amino]-1-oxo-hexyl]amino]-7,12-dihydroxy-cholan-24-säure; Verbindung 26 (3β,5β,7α,12α)-3-[[[[[Bis[2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl]amino]acetyl]amino]acetyl]amino]-7,12-dihydroxy-cholan-24-säure; Verbindung 27 N⁶-[[Bis[2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl]amino]acetyl]-N²-[(3α,5β,7α,12α)-3,7,12-trihydroxy-24-oxocholan-24-yl]-L-lysin. Verbindung 28 [[N⁶-[(4S)[4-[Bis[2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl]amio]-4-carboxy]-1-oxobutyl]-N²-[(3α,5β,7α,12α)-3‚7,12-trihydroxy-24-oxocholan-24-yl]-L-lysin Verbindung 29 [3β(S),5β,7α,12α]-3-[4-Carboxy-4-[bis[2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl]amino]-1-oxobutyl]amino]-7,12-dihydroxy-cholan-24-säure; Verbindung 30 [[10-[2-[[2-[[(3β,5β,7α,12α)-7,12-Dihyroxy-24-oxo-24-[(2-sulfoethyl]amino]cholan-3-yl]amino]-2-oxoethyl]amio]-2-oxoethyl]-1,4,7,10-tetraazacyclododecan-1,4,7-triessigsäure; Verbindung 31 (3β,5β,7α,12α)-3-[[[[[4,7,10-Tris(carboxymethyl)-1,4,7,10-tetraazacyclododecyl]acetyl]amino]acetyl]amino]-7,12-dihydroxy-cholan-24-säure; Verbindung 32 N²-[(3α,5β,7α,12α)-3,7,12-Trihydroxy-24-oxo-cholan-24-yl]-N⁶-((4,7,10-tris(carboxymethyl)-1,4,7,10-tetraazacyclododecyl]acetyl]-L-lysin Verbindung 33 (3β,5β,7α,12α)-3-[[6-[[[4,7,10-Tris(carboxymethyl)-1,4,7,10-tetraazacclodocecyl]acetyl]amino]-1-oxohexyl]amino]-7,12-dihydroxy-cholan-24-säure; Verbindung 34 [[(3α,5β,7α,12α)-3-[[3-[4,7,10-Tris(carboxymethyl)-1,4,7,10-tetraazacyclododecyl]-2-hydroxypropyl]oxy]-7,12-dihydroxy-cholan-24-säure; Verbindung 35 [[(3β,5β,7α,12α)-3-[[5-[4,7,10-Tris(carboxymethyl)-1,4,7,10-tetraazacyclododecyl]-4-hydroxy-1-oxopentyl]amino]-7,12-dihydroxy-cholan-24-säure.
Pharmazeutische diagnostische Kontrastzusammensetzungen, umfassend mindestens einen der komplexen Chelate nach Anspruch 1 bis 13 oder ein Salz davon.
Pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 14 zur Herstellung von Abbildungen von Organen und/oder Geweben aus dem menschlichen oder tierischen Körper durch die Anwendung magnetischer Kernresonanz.
Verwendung der Komplexchelate der Verbindungen der Formel (I) oder der Salze davon für die Herstellung von diagnostischen Formulierungen zur Herstellung von Abbildungen von Organen und/oder Geweben aus dem menschlichen oder tierischen Körper durch Anwendung von magnetischer Kernresonanz.
Verwendung der Komplexchelate der Verbindungen der Formel (I) oder von deren Salzen für die Herstellung von diagnostischen Formulierungen zur Herstellung von Abbildungen des hepatobiliären Systems des menschlichen und tierischen Körpers durch die Anwendung magnetischer Kernresonanz.
Verwendung der Komplexchelate der Verbindungen der Formel (I) oder von deren Salzen für die Herstellung von diagnostischen Formulierungen zur Herstellung von Abbildungen des hepatobiliären Systems des menschlichen oder tierischen Körpers durch die Anwendung magnetischer Kernresonanz.