CN1333695A - 用于核磁共振诊断的血池剂 - Google Patents

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Abstract

通式(Ⅰ)的化合物与选自Fe(2+)、Fe(3+)、Cu(2+)、Cr(3+)、Gd(3+)、Eu(3+)、Dy(3+)、Yb(3+)或Mn(2+)的顺磁性二－三价金属离子的络合物,及其与生理相容性有机碱或与无机碱的盐在制备通过核磁共振方式人体和动物血液系统成像的诊断制剂中的应用,所述有机碱选自伯、仲、叔胺或碱性氨基酸,所述无机碱的阳离子是钠、钾、镁、钙或其混合物。在式(Ⅰ)X－L－Y中:X是聚氨基聚羧酸配体及其衍生物的基团,选自EDTA、DTPA、DOTA、DO3A、BOPTA;Y是胆酸衍生物,选自胆酸、鹅去氧胆酸、脱氧胆酸、熊去氧胆酸、石胆酸类混合物的基团,它们是其本身和在羟基位官能化作为反应基团;L是连接在X的任何位置和Y的C－3、C－7、C－12位的链;新的通式(Ⅰ)的化合物和含有它们的诊断组合物。

Description

用于核磁共振诊断的血池剂
本发明涉及胆酸类化合物与具有螯合活性的分子的共轭物的金属离子络合物在称为“磁共振成像”(M.R.I.)的已知诊断技术中作为造影剂，特别是作为血池剂(blood pool agent)的应用。
螯合剂和适当金属形成的络合物业已在下列诊断技术中用作造影剂：X射线成像，核磁共振成像(M.R.I.)和闪烁成像(scintigraphy)。
特别是，利用磁共振成像(M.R.I.)的医学诊断是一种在临床实践中被公认为非常有效的诊断技术(Stark，D.D.，Bradley，W.G.，Jr.，编辑″磁共振成像″The C.V.Mosby Company，St.Louis，Missouri(USA)，1988)，其主要采用顺磁性药物组合物，优选含有二-三价金属离子与聚氨基多元羧酸配体的螯合络合物和/或其衍生物或类似物。
基本上由水质子的NMR信号获得的成像是不同参数如质子密度和T1和T2弛豫时间之间的相互复合作用。通过给予显著改变近水质子的共振特性的外源性化学物质可以使对比度增强。(参见Lauffer，R.B.化学评述(Chem.Rev.)1987，87，901)。
N.M.R.成像所采用的顺磁造影剂起着改变存在于组织内的水质子的弛豫时间的作用，其中该造影剂被浓缩，因此它们可以提高不同组织之间或健康与病变组织之间的对比度。
因其高度通过偶极相互作用减少近水分子的质子的弛豫时间的能力，钆类顺磁络合物已经成为研究、出版物和专利的目标。
其中一些在临床中提供用作M.R.I.造影剂：
Gd-DTPA，钆与二亚乙基三胺五乙酸络合的N-甲基葡糖胺盐，MAGNEVIST；Gd-DOTA，钆与1，4，7，10-四氮杂环十二烷1，4，7，10-四乙酸络合的N-甲基葡糖胺盐，DOTAREM；Gd-HPDO3A，钆与[10-(2-羟丙基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7-三乙酸的络合物，PROHANCE；Gd-DTPA-BMA，钆与二亚乙基三胺五乙酸双(甲基酰胺)的络合物，OMNISCAN；
上述和市售的造影剂适合一般性应用。事实上，给药后，在被排泄之前所述M.R.I.造影剂扩散到血液内和机体的不同部分的细胞外区域中。因此在这方面，它们类似于X射线医学诊断中所用的碘代化合物。
目前，医疗业需要以特定器官为目标或用于血液系统成像的造影剂，这样的造影剂是现有市售产品的方式所无法充分定义的。获得后者的第一条途径包括把造影剂和大分子如蛋白质共价连接，或使其位于稳定分子聚集体如脂质体内成为球形，或仍然采用所谓的超顺磁性微粒。
譬如，钆与二亚乙基三胺五乙酸的络合物(Gd-DTPA)和人体白蛋白(HSA)、聚赖氨酸或葡聚糖相连(Oksendal A.N.等人，磁共振成像杂志(J.Magn.Reson.Imaging)，157，1993；Rocklage S.M.，“造影剂、磁共振成像”，Mosby Year Book，372-437，1992)为的是减少或甚至抑制由血液扩散到细胞外液，由此令试剂在血液系统中的保留更高。虽然可以获得所需效果，但这种途径存在不良副作用，因为难以排泄出该试剂。
一种不同的策略是利用用聚乙二醇类化合物或烃类涂层的超顺磁性微粒，从而减少被内皮网状组织或其他系统肝脏摄取(Tilcock C.，生物化学和生物物理学学报(Biochim.Biophys.Acta)，77，1993；Bogdanoy A.A.等人，放射学(Radiology)，701，1993)，由此延长所述试剂在血液中的持久性，但也会出现上述副作用，以及因生产成本高造成的问题。
因此，目前仍然无法满足对具有低毒性和适当经济成本的有效血池剂的需求。
本发明涉及特别选择的、已在国际专利申请WO-A-95/32741中公开的、由胆酸类化合物与螯合剂轭合制得的化合物作为血池剂的新用途，其能够螯合顺磁二-三价金属，并且涉及新的化合物、其制备方法及其作为血池剂的应用。
所述化合物表现出良好的肝胆排泄作用(参见Anelli P.L.等人，放射学评述(Acta Radiologica)，38，125，1997)，这使它们有希望成为肝胆系统显象的造影剂。
令人惊奇地发现，特定种类的所述化合物可以在血管系统中保留足够长的时间从而成为血管系统、特别是冠状血管成像的造影剂。
在动物(如兔子、猴子)的体内试验中进行时这种效果非常明显。事实上，当绘制动物血液样本的质子弛豫值(1/T1)时可以立刻显示出在血管系统中的持久性，血样是在给予造影剂后适当的时间间隔采集。
由于Gd(III)络合物是顺磁性物质，血液中的高1/T1值就是高浓度的造影剂的证据。
根据Lauffer等人在放射学(Radiology)，529，1998中的文章可以很好地澄清普通细胞外造影剂和血池剂之间的区别，其中报导了血液中T1分布图在造影剂给药后是所逝时间的函数。
特别是，当以与合理安全指数相容的剂量对例如兔子给药时，本发明的络合物能够在给药后10分钟改变弛豫速率(测量为Δ1/T1)使其在血液中高于5s-1，由此有希望用作血管系统成像的造影剂。
目前发现，此类效应不仅仅与胆酸类化合物的存在有关，而且取决于所述络合物的化学结构。事实上，似乎螯合单位适宜通过胆酸类化合物的3、7或12位与甾族骨架相连。
实际中，已经证实螯合单位和包含24位羧基的胆酸之间的任何连接键将生成络合物，但该络合物在血管系统中具有无法令人满意的保留性。
Figure A9981579200151
因此，本发明的目的是通式(I)的化合物与选自Fe(2+)、Fe(3+)、Cu(2+)、Cr(3+)、Gd(3+)、Eu(3+)、Dy(3+)、Yb(3+)或Mn(2+)的二-三价金属离子的络合物作为血池剂的应用：X-L-Y(I)其中X是聚氨基聚羧酸配体或其衍生物的基团，选自组成如下的基团：乙二胺四乙酸(EDTA)、二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)、1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四乙酸(DOTA)、1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7-三乙酸(DO3A)、[10-(2-羟丙基)-1，4，7，10-四氮杂-环十二烷-1，4，7-三乙酸(HPDO3A)、4-羧基-5，8，11-三(羧甲基)-1-苯基-2-氧杂-5，8，11-三氮杂十三烷-13-酸(BOPTA)；Y是选自胆酸、鹅去氧胆酸、脱氧胆酸、熊去氧胆酸、石胆酸基团的胆酸衍生物，
Figure A9981579200161
且它们都在具有羟基的位置官能化为反应基团，并具有独立于终产物的立体化学，所述衍生物也包括24位酸基与牛磺酸和甘氨酸的轭合物；L是与X的任何位置以及Y的C-3、C-7、C-12位相连的链，X选择性地含有一个由此转化为酰氨基的羧基，并且具有下式(II)：
Figure A9981579200171
其中m是1-10的整数，其中对于大于1的值，A可以具有不同的含义，A具有下式(III)，
Figure A9981579200172
n和q可以是0或1，但是它们不能同时为0，p可以介于0至10，Z是氧原子或-NR基，
其中R为氢原子，或(C1-C5)烷基，其未取代或被-COOH基取代。
特别优选的化合物是其中间隔链L具有以下通式(IIIa)和(IIIb)的那些化合物。
还优选其中Z是氧原子的结构且由此L经3、7、12位存在的羟基形成独立于终产物的立体化学。
特别优选式(I)的化合物，其中基团X选自：EDTA、DTPA、DOTA、DO3A、BOPTA；L选自(IIIa)、(IIIb)组成的基团；
Y优选自胆酸、脱氧胆酸、鹅去氧胆酸、石胆酸的基团，其通过3位氨基与L相连，并且24位的酸基以其本身或以牛磺酸或甘氨酸衍生物存在。
Y也可以被各种不同的官能化，譬如通过转化使一个或多个羟基成为酮基。
上述特别优选的与顺磁性金属离子的络合物是与钆或与锰的络合物。
优选通式(IV)的化合物，其中通式(I)中的基团X是取代在中间链上的DTPA，并且其中R1是氢原子或-COOH基，
Figure A9981579200181
Y选自胆酸、脱氧胆酸、鹅去氧胆酸、石胆酸基并且L具有式(III)的结构。
特别优选通式(IVa)的化合物：
Figure A9981579200182
其中R1是-COOH基并且Y具有上述通式(IV)定义的含义和L具有结构(IIIa)或(IIIb)。
本发明的另一个目的是下列属于通式(IVa)类型的新化合物，及其制备方法；[3β(S)，5β]-3-[[4-[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代-丁基](羧甲基)氨基]胆烷-24-酸
Figure A9981579200191
[3β(S)，5β]-3-[[4-[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]胆烷-24-酸；[3β(S)，5β，7β]-3-[[4-[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-7-羟基胆烷-24-酸；
Figure A9981579200193
[3α(S)，5β]-3-[2[-[5-[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-5-羧戊基]-氨基]-2-氧代乙氧基]胆烷-24-酸；
Figure A9981579200194
[3β(S)，5β]-3-[[4-[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-12-氧代胆烷-24-酸；
Figure A9981579200201
[3β(S)，5β，7α]-3-[[4-[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-7-羟基胆烷-24-酸；N2-双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]-N-[(3β，5β，-7α，12α)-7，12-二羟基-24-氧代-24-[(2-磺乙基)氨基]胆烷-3-基]-L-谷氨酰胺；
Figure A9981579200203
N2-双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]-N-[(3β，5β)-24-氧代-24-[(2-磺乙基)氨基]胆烷-3-基]-L-谷氨酰胺；
Figure A9981579200204
[3β(S)，5β，12α]-3-[[4-[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-12-羟基胆烷-24-酸；
Figure A9981579200205
[3β(R)，5β，12α]-3-[[4-[双[2-[双(羧甲基)氨基]-乙基]氨基]-4-羧基-1-氧基丁基]氨基]-12-羟基胆烷-24-酸；
Figure A9981579200211
[3β(RS)，5β，12α]-3-[[4-[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-12-羟基胆烷-24-酸；
Figure A9981579200212
[3α(S)，5β，12α]-3-[[4-[双[2-[双(羧甲基)氨基]-乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-12-羟基胆烷-24-酸；
Figure A9981579200213
[3β(RS)，5β，7α，12α]-3-[[4-[双[2-[双(羧甲基)-氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-7，12-二羟基胆烷-24-酸；
Figure A9981579200214
[3α(S)，5β，7α，12α]-3-[[[[5-[双[2-[双(羧甲基)-氨基]乙基]氨基]-5-羧戊基]氨基]羰基]氧基]-7，12-二羟基胆烷-24-酸；
Figure A9981579200215
[3α(S)，5β]-3-[2-[[5-[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-5-羧戊基]氨基]-2-氧代乙氧基]胆烷-24-酸
Figure A9981579200221
其他属于此类的、其与钆的络合物业已公开在专利申请WO-A-95/32741中的化合物为下列化合物：[3β(S)，5β，7α，12α]-3-[[4-[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-7，12-二羟基-胆烷-24-酸；[3β(S)，5β，7α，12α]-3-[[4-[[5-[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-5-羧戊基]氨基]-1，4-二氧代-丁基]氨基]-7，12-二羟基胆烷-24-酸。
Figure A9981579200223
另外优选通式(IVb)的化合物，其也是中间位取代的DTPA衍生物，
Figure A9981579200231
其中Y具有定义上式(IV)化合物的含义并且L具有结构(IIIa)。
本发明进一步涉及下列属于通式(IVb)类的新化合物，及其制备方法：(3β，5β，7α，12α)-3-[[[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]乙酰基]氨基]-7，12-二羟基胆烷-24-酸
Figure A9981579200232
(3β，5β)-3-[[[[[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]-氨基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]胆烷-24-酸
Figure A9981579200233
其他属于此类的、其与钆的络合物业已公开在专利申请WO-A-95/32741中的化合物是下列化合物：(3β，5β，7α，12α)-3-[[[[[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]-7，12-二羟基-胆烷-24-酸；(3β，5β，7α，12α)-3-[[6-[[[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]乙酰基]氨基]-1-氧代己基]氨基]-7，12-二羟基胆烷-24-酸。
Figure A9981579200241
另外特别优选通式(V)的化合物，其中在通式(I)中基团X为DTPA，Y具有上式化合物(IV)所定义的含义并且L具有式(IIIa)的结构。
其他属于此类的、其与钆的络合物业已公开在WO-A-95/32741中的化合物为下列化合物：(3β，5β，7α，12α)-3-[[N-[N-[2-[[2-[双(羧甲基)氨基]乙基](羧甲基)氨基]乙基]-N-(羧甲基)甘氨酰基]甘氨酰基]氨基]-7，12-二羟基胆烷-24-酸；18-[[(3β，5β，7α，12α)-23-羧基-7，12-羟基-24-降胆烷-3-基]氨基]-3，6，9-三(羧甲基)-11，18-二氧代-3，6，9，12-四氮杂十八烷酸。
Figure A9981579200244
另外优选式(VI)的化合物，其中式(I)中基团X为DO3A，Y具有上式(IV)化合物定义的含义和L选自结构(IIIa)和(IIIb)。
Figure A9981579200251
在(VI)的化合物中，特别优选10-[3-[[(3α，5β，7α，12β)-23-羧基-7，12-二羟基-24-降胆烷-3-基]氧基]-2-羟丙基]-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7-三乙酸，其与钆的络合物业已公开在专利申请WO-A-95/32741中。
Figure A9981579200252
类似地，优选通式(VII)的化合物，其中在式(I)中基团X为EDTA，Y具有上式(IV)的化合物所定义的含义和L具有式(III)的结构。
特别优选式(VII)的化合物与锰的络合物。
Figure A9981579200253
在式(VII)的化合物中，特别优选下列化合物：[3α(S)，5β，12α]-3-[[[[5-[[2-[双(羧甲基)氨基]乙基](羧甲基)氨基]-5-羧戊基]氨基]羰基]氧基]-12-羟基胆烷-24-酸
Figure A9981579200254
[3β(S)，5β，7α，12α]-3-[[4-[[5-[[2-[双(羧甲基)氨基]乙基](羧甲基)氨基]-5-羧戊基]氨基]-1，4-二氧代丁基]氨基]-7，12-二羟基胆烷-24-酸
Figure A9981579200261
[3α(S)，5β]-3-[2-[[5-[[2-[双(羧甲基)氨基]-乙基](羧甲基)氨基]-5-羧戊基]氨基]-2-氧代乙氧基]胆烷-24-酸
Figure A9981579200262
[3β(S)，5β，12α]-3-[[4-[[2-[[双(羧甲基)氨基]乙基](羧甲基)氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-12-羟基胆烷-24-酸[3β(S)，5β]-3-[[4-[[2-[[双(羧甲基)氨基]乙基](羧甲基)氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-12-氧代胆烷-24-酸
Figure A9981579200264
通式(I)的化合物可以用会聚合成的方法制备，其中包括：1)官能化配体的合成，即能够与一个顺磁金属离子配位并通过适当官能团的方式与胆酸稳定结合的配体的合成；2)官能化胆酸的合成；3)两个不同共振物(synton)之间的偶合反应；4)任何保护基的裂解；5)顺磁性金属离子的络合；在上文引用的专利申请WO-A-95/32741中详细举例说明。
某些制备本发明的配体的优选方法包括在两个共振物之间酰胺键的形成，其中之一是螯合体系的顺磁离子的前体(共振物A)，另一个是含在最终络合物中的胆酸基的前体。
下面所述的方法不应该被视为限定本发明化合物的合成。
酰胺键可以通过下列方式形成：a)通过含有羧基官能的共振物A与含有伯或仲氨基官能的共振物B反应；b)通过含有伯或仲氨基官能的共振物A与含有羧基官能的共振物B反应；c)通过DTPA二酐(市售产品)与含有伯或仲氨基官能的共振物B反应。
适用于本发明的一些共振物A和B如下表所述。表
显然，所用共振物在那些在酰胺键形成的条件下用产生寄生反应的基团适当保护。在两个共振物之间的键形成之后，考虑采用一个或多个脱保护步骤来恢复原始基团。
另外，对于此类方法，可以通过多步骤反应、由胆酸衍生物起始引入螯合亚基，如同在试验部分的实施例3中所述的化合物合成情况中，举例说明下面的合成路线1。合成路线1
Figure A9981579200291
本发明还涉及新的方法，其在下面的合成路线2中具体说明：合成路线2
Figure A9981579200292
其中R4是氨基保护基；R5是直链或支链C1-C10烷基或芳基，R2和R3独立地是氢，直链或支链C1-C20烷基，其未取代或被芳基取代，
或这两个基团形成C3-C10环；该方法采用酰胺基转移反应，并且能够保持起始吡咯烷酮的氮原子的相邻手性中心的立体化学和提供仲酰胺。基团R4和R5的联合选择在多种条件下进行的裂解中是至关重要的。R4的可行实例是苄氧羰基(Cbz)基和R5的可行实施例为甲基或叔丁基。
该方法通常适用于获得谷氨酸γ-酰胺，并且它非常有效和适宜制备本发明的化合物，特别是具有如上定义基团Y的3-氨基衍生物的谷氨酸γ-酰胺。事实上，该方法获得最终的化合物而避免在形成谷氨酸和相应胺之间的γ-酰胺键时使用昂贵的缩合剂。
这种全新合成方法的应用实例是[3β(S)，5β，12α]-3-[[4-[双[2-[双(羧甲基)-氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-12-羟基胆烷-24-酸的合成，其常规合成在试验部分的实施例4中描述，而另一种方法报导在实施例5中并且完整的合成路线如下面的合成路线3所示：
Figure A9981579200301
类似地制备业已公开在专利申请WO-A-95/32741中的胆酸类衍生物，[3β(S)，5β，7α，12α]-3-[[4-[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-7，12-二羟基-胆烷-24-酸。
适合与通式(I)的螯合剂形成络合物盐的金属离子是选自Fe(2+)、Fe(3+)、Cu(2+)、Cr(3+)、Gd(3+)、Eu(3+)、Dy(3+)、Yb(3+)或Mn(2+)元素的二价或三价离子。
由于本发明的新螯合络合物的诊断用途，它们可以在利用磁共振方式的成像诊断技术中用作造影剂，特别是血池剂。
按惯例、根据一种方法进行络合物的制备，其中氧化物或顺磁性金属的适当盐溶解在水中或悬浮在水-醇溶液中，将其在搅拌条件下加入到螯合剂的水溶液或水-醇溶液中，并且如果必要，适度加热或加热至沸点直至反应完全。如果络合物不溶于反应溶剂，可将其过滤。如果络合物可溶，可以通过蒸除溶剂回收残余物，例如通过喷雾干燥。
在所得络合物仍然含有游离酸基的情况中，通过与在溶液中可以生成生理相容性阳离子的有机或无机碱反应转化为中性盐。
为了制备这些中性盐，可以把足够量的碱加入含有游离酸基的络合物的水溶液或混悬液中至中性。所得溶液可以按照常规方法蒸发，或加入适宜的溶剂令络合物盐结晶。
适宜使本发明螯合络合物成盐的优选无机阳离子特别包括碱金属或碱土金属离子，例如钾、钠、钙、镁及其混合物。特别优选钠离子。
适合上述目的的、从有机碱衍生的优选阳离子特别包括伯、仲和叔胺类化合物的那些，例如乙醇胺、二乙醇胺、吗啉、葡糖胺、N-甲基葡糖胺、N，N-二甲基葡糖胺，特别优选N-甲基葡糖胺。
由氨基酸衍生的优选阳离子包括，例如牛磺酸、甘氨酸、赖氨酸、精氨酸或鸟氨酸的那些。
另一个这种方法包括制备可注射制剂而无需分离络合物盐。在这样的情况中，终溶液必须不含有游离金属离子，它们对机体有毒。
这可以通过滴定，例如采用显色指示剂(如二甲苯酚橙)检测。也可进行络合盐的最终纯化步骤。
在此类的方法中，螯合剂、所述盐或金属氧化物和任何成盐碱在水中以化学计量比反应，反应完全后，滤除焦精并且将产物分散在适当容器内并且热灭菌。
可注射药物制剂一般通过把如上制得的活性成分和赋形剂溶解在水中制备，所用水具有药理学观点上适宜的纯度，提供适合肠胃或肠胃外给药的药物制剂，活性成分的浓度为0.01-1.0摩尔。把所得造影剂适当灭菌。
根据诊断的要求，造影剂给药剂量为0.01-0.3mmol/kg体重。
原则上，肠胃外给药的剂量范围是0.001-约1.0mmol/kg体重。肠胃外给药的优选剂量是0.01-约0.5mmol/kg体重。
肠胃给药的剂量范围一般为0.5-约10mmol/kg，优选约1.0-约10mmol/kg体重。
本发明的新制剂表现出良好的耐受性；此外，其水溶性是另一个重要特征，这使它们特别适用于核磁共振。
本发明的诊断组合物可以按照惯例应用。所述组合物可以全身性和局部地给予患者、通常为温血动物的通过磁共振显影的器官或组织内。
分析方案和仪器可以参见著作如Stark，D.D.，Bradley，W.G.，磁共振成像，Mosby Year Book，St.Louis，Mo，1992。
所用试验条件将在试验部分中详细说明。试验部分
实施例1和1-脱氧-1-(甲基氨基)-D-山梨醇(1∶3)成盐的[3β(S)，5β]-3-[[4-[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]胆烷-24-酸的钆络合物
Figure A9981579200321
A)[3β(S)，5β]-3-[[5-(1，1-二甲基乙氧基)-4-[双[2-[双[2-(1，1-二甲基乙氧基)-2-氧代乙基]氨基]-乙基]氨基]-1，5-二氧代戊基]氨基]胆烷-24-酸甲酯
3.6g(3β，5β)-3-氨基胆烷-24-酸甲酯(类似于WO-A-95/32741：实施例5所述方法制备)(9.24mmol)、8.5gN，N-双[2-[双[2-(1，1-二甲基乙氧基)-2-氧代乙基]氨基]-乙基]-L-谷氨酸叔丁酯(按照类似于WO-A-95/32741：实施例15所述方法制备)(11.39mmol)和1.64g氰基膦酸二乙酯(9.39mmol)溶解在160mL的DMF中。把该溶液冷却至0℃，将1.28mL的Et3N(9.24mmol)滴加其中，将该反应混合物在室温下放置30分钟。1小时后，减压下蒸发该溶液，将残余物溶于EtOAc中，依次用5％NaHCO3和盐水洗涤。分离有机相，用Na2SO4干燥，随后减压下蒸发。粗品通过闪式色谱纯化得到9.5g的预期产物(8.50mmol)。收率：92％K.F.：3.47％元素分析     C   H    N％计算值：  66.63 9.74  5.01％实测值：a67.42 10.08 5.07a 在120℃真空下干燥后TLC：固定相∶硅胶板60F 254 Merck洗脱剂＝4∶6 EtOAc/正己烷检测：0.5％KMnO4在1M NaOH中，Rf＝0.46
1H-NMR、13C-NMR、IR和MS谱与所示结构吻合。B)[3β(S)，5β]-3-[[4-羧基-4-[双[2-[双(羧乙基)氨基]乙基]氨基]-1-氧代丁基]氨基]胆烷-24-酸甲酯
向9.3g步骤A)制得的化合物(8.32mmol)在50mLCH2Cl2中的搅拌溶液内加入5.1mL的CF3COOH(66.6mmol)；0-5℃的温度下10分钟后，蒸发该溶液。将残余物溶于50mL的CF3COOH中，室温下24小时后，进一步加入30mL的CF3COOH使反应完全。5小时后，蒸发该反应混合物并且用CH2Cl2处理残余物，每次在减压下蒸发溶剂直至得到粉末。用H2O洗涤该固体，过滤，干燥，得到预期产物(6.9g；8.24mmol)。收率：99％ m.p.：205℃K.F.：7.78％元素分析      C   H   N％计算值：  60.27 8.18 6.69％实测值：a59.28 8.11 6.68a 在120℃真空下干燥后TLC：固定相：硅胶板60F 254 Merck洗脱剂＝6∶4∶1 CHCl3/MeOH/25％NH4OH。检测：0.5％KMnO4在1MNaOH中 Rf＝0.28
1H-NMR、13C-NMR、IR和MS光谱与所示结构吻合。C)[3β(S)，5β]-3-[[4-[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]胆烷-24-酸
向6.14g步骤B)制备的化合物(7.33mmol)在50mL H2O中的混悬液中加入50mL的1M NaOH(50mmol)，利用pH-静电仪的装置保持pH13。室温下2小时后，用12M HCl酸化反应混合物(pH 0.5)得到混悬液，将其过滤，用H2O洗涤并且干燥，得到预期产物(5.64g；6.85mmol)。收率：93％ m.p.：205℃K.F.：9.02％元素分析：    C   H   N    Cl，Na％计算值：  59.84 8.08    6.81％实测值：a59.56 8.15    6.80   ＜0.1a 在120℃真空下干燥后TLC：固定相：硅胶板60F 254 Merck洗脱剂：6∶4∶1 CHCl3/MeOH/25％NH4OH检测：0.5％KMnO4在1M NaOH中，Rf＝0.25
1H-NMR、13C-NMR、IR和MS波谱与所示结构吻合。D)与1-脱氧-(甲基氨基)-D-山梨醇(1∶3)成盐的[3β(S)，5β]-3-[[4-[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]胆烷-24-酸的钆络合物
将4.53g步骤C)制备的化合物(5.5mmol)悬浮在50mL H2O中并且用10mL 2M葡甲胺水溶液(20mmol)溶解得到pH 6.8的溶于。此后，在1小时内加入11mL的0.5M GdCl3水溶液(5.5mmol)，通过加入6.5mL的2M葡甲胺水溶液(13mmol)保持pH 6.8。利用毛细管电泳监测该反应的进程。2小时后，经微孔膜过滤该溶液，纳米过滤和蒸发。干燥残余物得到预期化合物(6.15g；4.17mmol)。收率：76％ m.p.：220℃K.F.：8.44％CE试验：100％(面积％)毛细管：熔融二氧化硅0.56m×50mm，带有球形池电压：25kV缓冲液：0.05M硼酸盐pH 9.3，0.3mM EDTA温度：40℃停止时间：20分钟检测(UV)：200-210nm注射：流体静力(50mbar，5s)样品浓度：1mg mL-1；仪器：Hewlett PacKard 3D HPCE预处理：t(分钟)    处理
    2       用H2O冲洗
    2       用0.1M NaOH冲洗
    1       用H2O冲洗
    5       用缓冲液冲洗
    9       开始分析元素分析：   C    H     Gd   N   Cl，Na％计算值：  47.65 7.35   10.06 6.27％实测值：a47.83 7.36   10.01 6.24  ＜0.1a 在120℃真空下干燥后
IR和MS光谱与所示结构吻合。
类似地制备下列化合物和有关钆络合物：
与1-脱氧-1-(甲基氨基)-D-山梨醇(1∶3)成盐的[3β(S)，5β，7β]-3-[[4-[双[2[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-7-羟基胆烷-24-酸的钆络合物；
与1-脱氧-1-(甲基氨基)-D-山梨醇(1∶3)成盐的[3α(S)，5β]-3-[2[-[5-[双[2[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-5-羧戊基]-氨基]-2-氧代乙氧基]胆烷-24-酸的钆络合物；
实施例2与1-脱氧-1-(甲基氨基)-D-山梨醇(1∶3)成盐的[3β(S)，5β]-3-[[4-[双[2[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-12-氧代胆烷-24-酸的钆络合物
Figure A9981579200361
A)(3β，5β)-3-叠氮基-12-氧代胆烷-24-酸甲酯
室温下90分钟内，将12.5mL的琼斯试剂[33.3mmol Cr(VI)]滴加到17.8g(3β，5β，12α)-3-叠氮基-12-羟基胆烷-24-酸甲酯(41.1mmol)(按照类似于WO-A-95/32741：实施例5中所述(3β，5β，7α，12α)-3-叠氮基-7，12-二羟基胆烷-24-酸甲酯的方法制备)的丙酮(600mL)溶液中。20分钟后，过滤该混合物并且蒸发该溶液。将残余物溶于CHCl3(400mL)，该溶液依次用饱和NaHCO3水溶液、H2O洗涤。将溶液干燥和蒸发，得到粗品，由96％EtOH结晶得到14.1g的预期产物(32.9mmol)。收率：84％ m.p.：153℃K.F.：＜0.1％[α]20D＝+83.25(c 2.1，CHCl3)元素分析：  C   H   N％计算值：69.90 9.15 9.78％实测值：69.98 9.32 9.69TLC：固定相：硅胶板60F 254 Merck洗脱剂：8∶2正己烷/EtOAc检测：0.5％KMnO4 in 1M NaOH Rf＝0.43
1H-NMR、13C-NMR、IR和MS光谱与所示结构吻合。B)(3β，5β)-3-氨基-12-氧代胆烷-24-酸甲酯
室温和40巴(bar)下，于Parr加压釜中令16.4g的化合物A)(38.2mmol)的THF(130mL)溶液在5％Pd/C(1.6g)存在下氢化。过滤该反应混合物(滤纸和FH 0.5pm微孔膜Milliporemenbrane)和蒸发。粗产物通过闪式色谱纯化，得到11.8g的预期产物(29.2mmol)。收率：77％ m.p.：129-130℃K.F.：1.04％[α]20D＝+87.8(c 2.02，CHCl3)元素分析：  C    H   N％计算值：74.40 10.24 3.47％实测值：72.72 10.00 3.35TLC：固定相：硅胶板60F 254 Merck洗脱剂：95∶5 MeOH/Et3N检测：0.5％KMnO4在1M NaOH中，Rf＝0.31
1H-NMR、13C-NMR、IR和MS光谱与所示结构吻合。C)[3β(S)，5β]-3-[[4-[双[2-[双[2-(1，1-二甲基乙氧基)-2-氧代乙基]氨基]乙基]氨基]-5-(1，1-二甲基乙氧基)-1，5-二氧代戊基]氨基]-12-氧代胆烷-24-酸甲酯
0℃和氮气下，将DCC(6.24g；30.3mmol)的CH2Cl2(25mL)溶液在30分钟内滴加到N，N-双[2[双[2-(1，1-二甲基乙氧基)-2-氧代乙基]氨基]乙基]-L-谷氨酸1-(1，1-二甲基乙基)酯(按照WO-A-95/32741：实施例15所述方法制备)(21.5g；28.9mmol)、化合物B)(11.1g；27.5mmol)和HOBT(1-羟基苯并三唑)(3.72g；27.5mmol)的CH2Cl2(300mL)溶液中。令该混合物升至室温。21小时后，过滤该反应混合物，溶液用NaHCO3饱和水溶液、随后用H2O洗涤，进而蒸发。粗产物通过闪式色谱纯化得到24.5g预期产物(21.7mmol)。收率：79％[α]20D＝+12.17(c 2.07，CHCl3)TLC：固定相：硅胶板60F 254 Merck洗脱剂：1∶1 EtOAc/正己烷检测：0.5％KMnO4在1M NaOH中，Rf＝0.45
1H-NMR、13C-NMR、IR和MS光谱与所示结构吻合。D)[3β(S)，5β]-3-[[4-[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-12-氧代胆烷-24-酸
0℃下，在1小时内将80mL TFA(1.0mol)滴加到23.8g步骤C)制得的产物(21.0mmol)的CH2Cl2(50mL)溶液中。室温下搅拌该反应混合物，2小时后，蒸发。将残余物溶于TFA(100mL；1.3mol)中，将该溶液进一步搅拌24小时。随后蒸发该反应混合物，溶于CH2Cl2并且再次蒸发。将粗产物溶于150mL的1M NaOH，用冰浴冷却，溶液在室温下搅拌15小时(pH 10)。用3.30mL的30％NaOH调节该反应混合物至pH 13，4小时后，经微孔膜(HAS 0.45μm)过滤。滤液用12.5mL的30％HCl和19mL 1MHCl酸化至pH 1.60。过滤沉淀，用H2O洗涤并且干燥，得到15.8g预期产物(18.9mmol)。收率：90％ m.p.：172-175℃K.F.：1.98％[α]20D＝+43.54(c 2.02，1M NaOH)HPLC：97％(面积％)固定相：Zorbax ECLIPSE XDB-C8 3.5m；150×4.6mm.；温度：40℃；流动相：梯度洗脱；
A＝H2O中0.017M H3PO4，0.3mM EDTA；
B＝CH3CN梯度：    分钟    ％A    ％B
       0       85     15
      40       65     35
      50       65     35流速：1.5mL分钟-1；检测(UV)：210nm；元素分析：C   H   N   Cl  Na％计算值：58.84 7.71   6.69％实测值：56.57 7.68   6.37  0.25  0.18TLC：固定相：硅胶板60F 254 Merck洗脱剂：5∶4∶2 CHCl3/MeOH/25％NH4OH检测：0.5％KMnO4在1M NaOH中，Rf＝0.28
1H-NMR、13C-NMR、IR和MS光谱与所示结构吻合。E)与1-脱氧-1-(甲基氨基)-D-山梨醇(1∶3)成盐的[3β(S)，5β]-3-[[4-[双[2[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-12-氧代胆烷-24-酸的钆络合物
室温下，把49.0mL的0.918M葡甲胺水溶液(45.0mmol)滴加到14.0g步骤D)制备的化合物(16.7mmol)的H2O(100mL)溶液中，得到澄清溶液(pH 6.5)。将31.6mL的0.503M GdCl3水溶液(15.9mmol)滴加在其中，通过加入55.7mL的0.918M葡甲胺水溶液(51.1mmol)、利用pH-静电装置保持pH 6.5。加料结束时，混合物经微孔膜(HAWP 0.45/m)过滤，纳米过滤，用0.100mL的0.918M葡甲胺水溶液(0.092mmol)调至pH 7.0和蒸发。干燥残余物得到22.0g预期产物(14.0mmol)。收率：84％ m.p.：100-105℃K.F.：5.06％HPLC分析：97％(面积％)固定相：HYPURITYTMElite C18 5μm；250×4.6mm柱Hypersil；温度：40℃；流动相：梯度洗脱；A＝0.01M KH2PO4在水中；B＝CH3CN梯度：    分钟    ％A    ％B0      95      5
      40      65     35
      50      65     35流速：1mL分钟-1；检测(UV)：210nm；元素分析：C  H   N  Gd   Na，Cl％计算值：47.23 7.16 6.22   9.97％实测值：45.70 7.32 6.00   9.41   ＜0.1
IR和MS光谱与所示结构吻合。
实施例3与1-脱氧-1-(甲基氨基)-D-山梨醇(1∶2)成盐的(3β，5β，7α，12α)-3-[[[双[2[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]乙酰基]氨基]-7，12-二羟基胆烷-24-酸的钆络合物
Figure A9981579200401
A)(3β，5β，7α，12α)-3-[[[双[2-[双[2-(1，1-二甲基-乙氧基)-2-氧代乙基]氨基]乙基]氨基]乙酰基]氨基]-7，12-二羟基胆烷-24-酸甲酯
将24.8g(3β，5β，7α，12α)-3-[(氨基乙酰基)氨基]-7，12-二羟基胆烷-24-酸甲酯(按照WO-A-95/32741：实施例5所述方法制备)(51.9mmol)悬浮在38.7g N-(2-溴乙基)-N-[2-(1，1-二甲基乙氧基)-2-氧代乙基]甘氨酸1，1-二甲基乙基酯(按照WO-A-95/32741：实施例15所述方法制备)(110mmol)在390mL CH3CN中的搅拌溶液内。加入245mL的2M磷酸盐缓冲液pH 8得到二相溶液，将其在室温下剧烈搅拌144小时。分离有机相，蒸发，残余油溶于250mL的CH2Cl2。溶液用H2O洗涤，干燥(Na2SO4)并且蒸发。粗产物通过闪式色谱纯化(洗脱剂-95∶5 CHCl3/CH3OH)得到预期产物(24.8g；24.3mmol)。收率：47％[α]20D＝+9.45(c 1.5，CHCl3)元素分析：  C   H   N％计算值：64.68 9.47 5.49％实测值：64.55 9.44 5.46TLC：固定相：硅胶板60F 254 Merck洗脱剂：88∶12 CHCl3/MeOH检测：0.5％KMnO4在1M NaOH中，Rf＝0.57
1H-NMR、13C-NMR、IR和MS光谱和所示结构吻合。B)(3β，5β，7α，12α)-3-[[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]乙酰基]氨基]-7，12-二羟基胆烷-24-酸
在15分钟内，将318mL的2M LiOH水溶液(636mmol)滴加到步骤A)制得化合物(21.6g；21.1mmol)在310mL EtOH中的溶液内。23小时后，蒸发EtOH，反应混合物进一步搅拌2小时。把溶液滴加到255mL的2.6M HCl中，并且用30％NaOH调至pH 1.4。1.5小时后，过滤沉淀，用300mL的0.1M HCl洗涤和干燥，得到预期产物(13.1g；16.7mmol)。收率：78％ m.p.：129-132℃分解HPLC分析：97.8％(面积％)固定相：Lichrosorb RP-Select B 5m；250×4mm柱Merck KGaA；温度：45℃；流动相：梯度洗脱；A＝0.01M KH2PO4和0.017M H3PO4在H2O中B＝CH3CN
  分钟    ％A    ％B
    0      95     5
    5      20    80
   45      20    80流速：1mL分钟-1；检测(UV)：210nm；配位滴定度：95.5％(0.1M GdCl3)[α]20D＝+13.03(c 5，1M NaOH)元素分析：  C   H   N   Cl％计算值：58.30 7.98 7.16％实测值：54.63 8.12 6.64   1.82 H2O4.89C)与1-脱氧-1-(甲基氨基)山梨醇(1∶2)成盐的(3β，5β，7α，12α)-3-[[[双[2[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]乙酰基]氨基]-7，12-二-羟基胆烷-24-酸的钆络合物
将11.3g步骤B)制得的化合物(13.8mmol)悬浮在40mL H2O中并且利用44.7mL的1M葡甲胺水溶液(44.7mmol)至pH 6使该化合物溶解。在1小时内把13.7mL的1M GdCl3水溶液(13.7mmol)滴加到该混合物中，同时加入73.5mL 1M葡甲胺水溶液(73.5mmol)保持pH 6.5。反应混合物纳米过滤且用0.3mL的0.1M葡甲胺调节pH至6.8。蒸发和干燥后，得到预期产物(17.2g；12.9mmol)。收率：93％ m.p.：245-249℃C  分解。游离配体：＜0.1％(0.001M GdCl3)HPLC分析：100％(面积％)固定相：Lichrospher 100 RP-8 5μm；250×4mm柱Merck KGaA；温度：40℃；流动相：用预混相等度洗脱：
1g的n-辛胺和0.3mmol Na2EDTA加入260mL CH3CN和740mL H2O
中。该溶液用H3PO4缓冲至pH 7。流速：1mL分钟-1检测(UV)：210nm；元素分析：  C   H   Gd   N％计算值：47.05 7.06 11.84   6.33％实测值：45.19 7.21 11.22   6.07 H2O4.16
IR和MS光谱与所示结构吻合。
实施例4与1-脱氧-1-(甲基氨基)-D-山梨醇(1∶3)成盐的[3β(S)，5β，12α]-3-[[4-[双[2[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-12-羟基胆烷-24-酸的钆络合物
Figure A9981579200431
A)[3β(S)，5β，12α]-3-[[4-[双[2-[双[2-(1，1-二甲基-乙氧基)-2-氧代乙基]氨基]乙基]氨基]-5-(1，1-二甲基乙氧基)-1，5-二氧代戊基]氨基]-12-羟基胆烷-24-酸甲酯
0℃下，将三乙胺(2.23g；22mmol)加入8.93g(3β，5β，12α)-3-氨基-12-羟基胆烷-24-酸甲酯(按照WO-A-95/32741：实施例5所述胆酸衍生物的方法制备)(22mmol)、16.41g N，N双[2-[双[2-(1，1-二甲基乙氧基)-2-氧代乙基]氨基]-乙基]-L-谷氨酸 1-(1，1-二甲基乙基)甲酯(按照WO-A-95/32741：实施例15所述方法制备)(22mmol)和3.91g羟基膦酸二乙酯(24mmol)在300mL DMF中的溶液内。0℃1.5小时和室温18小时后，反应混合物蒸发且将残余物溶解在EtOAc。溶液用NaHCO3饱和水溶液和H2O洗涤，干燥(Na2SO4)和蒸发。粗产物通过闪式色谱纯化得到预期产物(20.67g；18.2mmol)。收率：83％[α]20D＝-6.75(c 2.0，CHCl3)元素分析：  C   H   N％计算值：65.69 9.60 4.94％实测值：66.54 9.95 4.99TLC：固定相：硅胶板60F 254 Merck洗脱剂：1∶1正己烷/EtOAc Rf＝0.09检测：Ce(SO4)2·4H2O(0.18％)和(NH4)6Mo7O24·4H2O(3.83％)在10％H2SO4中
1H-NMR、13C-NMR、IR和MS光谱与所示结构吻合。B)[3β(S)，5β，12α]-3-[[4-[双[2-[双(羧甲基)-氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-12-羟基胆烷-24-酸
室温下，将步骤A)制备的化合物(19.72g；17.4mmol)溶解在105mL CF3CO2H中。26小时后，蒸发该溶液，残余物用H2O处理；过滤固体，用H2O洗涤且真空下部分干燥。所得中间体悬浮在H2O中并利用1M NaOH达到pH 13使中间体溶解。室温下5小时后，将0.5M HCl滴加在溶液中至pH 1.4。室温下15小时后过滤沉淀，用H2O洗涤和干燥，得到的粗产物通过色谱法、利用树脂Amberlitee XAD 1600色谱纯化，得到预期产物(9.92g；11.8mmol)。收率：68％ m.p.：184℃(分解)配位滴定度(0.1M GdCl3)：99.3％酸性滴定度(0.1N NaOH)：99.8％[α]20λ(c 2.0；1M NaOH)λ(nm) 589 578 546 436 405 365[α] +23.61 +24.59 +27.90 +46.67 +55.61 +71.40元素分析    C   H   N％计算值：58.70 7.93 6.68％实测值：58.22 8.16 6.59 H2O0.70％TLC：固定相：硅胶板60F 254 Merck洗脱剂：5∶4∶2 CHCl3/MeOH/25％NH4OH Rf＝0.13检测：Ce(SO4)2·4H2O(0.18％)和(NH4)6Mo7O24·4H2O(3.83％)在10％H2SO4中
1H-NMR、13C-NMR、IR和MS光谱与所示结构吻合。C)用1-脱氧-1-(甲基氨基)-D-山梨糖醇(1∶3)成盐的[3β(S)，5β，12α]-3-[[4-[双[2[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-12-羟基胆烷-24-酸的钆络合物
步骤B)制备的化合物(8.39g；10mmol)悬浮在H2O(30mL)中并且通过加入1M葡甲胺水溶液(36.5mL；36.5mmol)至pH 6使化合物溶解。在1小时内加入1.025M GdCl3水溶液(9.85mL；10.1mmol)，同时加入1M葡甲胺水溶液(19.3mL；19.3mmol)使pH保持6。该溶液纳米级过滤，用1M葡甲胺水溶液调至pH 7.0。蒸发和干燥后得到预期产物(8.57g；5.4mmol)。收率：54％ m.p.：150-166℃(170℃分解.)元素分析：   C H   N  Gd％计算值：47.17 7.28 6.21 9.96％实测值：43.40 7.31 5.68 9.31 H2O7.14％
IR和MS光谱与所示结构吻合。D)类似于步骤C)制备的化合物，制备与钠(1∶3)成盐的[3β(S)，5β，12α]-3-[[4-[双[2[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基-12-羟基胆烷-24-酸的钆络合物
步骤B)制备的化合物(16.92g；32.08mmol)悬浮在H2O(100mL)中并且通过加入2M NaOH(56mL；112mmol)至pH 6使其溶解。在3小时内加入0.512M GdCl3水溶液(58.2mL；29.77mmol)，同时加入2MNaOH(28.95mL；57.9mmol)使pH保持在6。该溶液的pH用2M NaOH(4mL；8mmol)调至6.7并且将该溶液纳米级过滤。冷冻干燥后，得到预期产物(29.86g；28.2mmol)。收率88％ m.p.：＞300℃元素分析： C H   N   Gd   Na％计算值：46.49 5.71 5.29 14.85 6.51％实测值：43.98 6.34 4.92 13.86 6.16 H2O4.63％
IR和MS光谱与所示结构吻合。
实施例5
按照合成路线3制备[3β(S)，5β，12α]-3-[[4-[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-12-羟基胆烷-24-酸的另一种方法A)(S)-5-氧代-1，2-吡咯烷二甲酸2-甲基1-(苯基甲基)二酯7.1g CH3I(50mmol)加入6.58g(S)-5-氧代-1，2-吡咯烷二甲酸1-(苯基甲基)酯(25mmol)和N，N-二异丙基乙胺(3.55g；27.5mmol)在CH2Cl2(33mL)中的溶液内，和反应混合物回流6.5小时。冷却至室温并用CH2Cl2(50mL)稀释后，反应混合物用H2O、2％Na2CO3水溶液、0.2MHCl和H2O洗涤。Na2SO4干燥和蒸发，得到预期产物(6.8g；24.5mmol)。收率：98％HPLC分析：98.5％(面积％)固定相：Lichrosorb RP-Select B 5μm；250×4mm柱Merck KGaA；温度：45℃；流动相：梯度洗脱；A＝水中0.017M H3PO4B＝CH3CN梯度：    分钟    ％A    ％B
       0      80      20
      15      80      20
      35      40      60流速：1mL分钟-1；检测(UV)：210nm。[α]20λ(c 2；CHCl3)λ(nm) 589    578    546    365[α]  -42.97 -44.79 -50.09 -100.43元素分析：  C   H   N％计算值：60.64 5.45 5.05％实测值：60.94 5.54 5.00
1H-NMR、13C-NMR、IR和MS光谱与所示结构吻合。B)[3β(S)，5β，12α]-3-[[5-甲氧基-1，5-二氧代-4-[[(苯基-甲氧基)羰基]氨基]戊基]氨基]-12-羟基胆烷-24-酸甲酯
8.92g(3β，5β，12α)-3-氨基-12-羟基胆烷-24-酸甲酯(按照类似于WO-A-95/32741：实施例5所述胆酸衍生物的方法制备)(22mmol)加入化合物A)(6.1g；22mmol)的二噁烷(55mL)溶液中，所得混合物在50℃下加热24小时，随后在105℃下29小时。减压下蒸发溶剂，残余物通过闪式色谱(用EtOAc/正己烷梯度洗脱)纯化，随后用1∶1 EtOAc/正己烷混合物结晶，得到预期产物(11.2g；16.4mmol)。收率：75％ m.p.：140℃HPLC分析：99.2％(面积％)固定相：Lichrosorb RP-Select B 5um；250×4mm柱Merck KGaA；温度：45℃：流动相：梯度洗脱；A＝0.017M H3PO4水溶液B＝CH3CN梯度：    分钟    ％A    ％B
       0      65     35
      25      15     85
      30      15     85流速：1mL分钟-1；检测(UV)：210nm。[α]20λ(c2.01；CHCl3)λ(nm) 589    578    546    365[α]  +24.14 +25.13 +28.51 +73.81元素分析：  C   H   N％计算值：68.70 8.43 4.11％实测值：69.36 8.72 4.13TLC：固定相：硅胶板60F 254 Merck洗脱剂：EtOAc检测：Ce(SO4)2·4H2O(0.2％)和(NH4)6Mo7O24·4H2O(3.8％)，存在于10％
H2SO4 Rf＝0.11
1H-NMR、13C-NMR、IR和MS光谱与所示结构吻合。C)[3β(S)，5β，12α]-3-[[4-[双[2-[双[2-(1，1-二甲基-乙氧基)-2-氧代乙基]氨基]乙基]氨基]-5-乙氧基-1，5-二氧代戊基]氨基]-12-羟基胆烷-24-酸甲酯
将1g 5％Pd/C加到化合物B)(10.4g；15.3mmol)的MeOH(100mL)溶液中；室温下，于氢气氛下将该混悬液搅拌3.5小时(吸收H2：348mL；15.5mmol)。经微孔FH滤膜(0.45μm)过滤后，减压下蒸发该溶液得到残余物，将残余物溶解在CH3CN(60mL)中。加入2M pH8的磷酸盐缓冲水溶液(60mL)，随后室温下在10分钟内滴加N-(2-溴乙基)-N-[2-(1，1-二甲基乙氧基)-2-氧代-乙基]甘氨酸1，1-二甲基乙酯(按照WO-A-95/32741：实施例15所述方法制备)(11.86g；33.7mmol)的CH3CN(15mL)溶液。将该混合物搅拌39小时。分离后，减压下蒸发有机相，把残余物溶于AcOEt(200mL)。该溶液用H2O洗涤，干燥(Na2SO4)和蒸发。粗产物通过闪式色谱(用EtOAc/正己烷梯度洗脱)纯化得到预期产物(11.36g；10.4mmol)。收率：68％ m.p.：55-58℃HPLC分析：100％(面积％)[α]20λ(c 2.01；CHCl3)λ(nm) 589  578  546  365[α]  -6.97  -7.41  -8.61  -32.89元素分析：  C    H   N％计算值： 64.93 9.42 5.13％实测值： 65.06 9.36 5.11TLC：固定相：硅胶板60F 254 Merck洗脱剂：EtOAc检测：Ce(SO4)2·4H2O(0.2％)和(NH4)6Mo7O24·4H2O(3.8％)，在10％H2SO4中，Rf＝0.45
1H-NMR、13C-NMR、IR和MS光谱与所示结构吻合。D)[3β(S)，5β，12α]-3-[4-[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-12-羟基-胆烷-24-酸
化合物C)(8.5g；7.8mmol)的二噁烷(50mL)溶液加入2M LiOH水溶液(117mL；234mmol)。室温下将所得混合物搅拌72小时，随后通过缓慢加入37％HCl酸化至pH 6。减压下通过蒸发使溶液浓缩为50g，用H2O(40mL)稀释。通过加入37％HCl酸化至pH 2.5，加热至50-55℃，并且在有力搅拌下用2N HCl缓慢酸化至pH 1.3。5分钟后，令该多相混合物缓慢冷却至室温，搅拌15小时。过滤沉淀，用H2O洗涤和干燥，得到预期产物(5.92g；7mmol)。收率：90％ m.p.：180-198℃HPLC分析：99.9％(面积％)固定相：Zorbax ECLIPSE XDB-C8 3.5μm；150×4.6mm柱RocklandTechnologies，Inc.；温度：40℃：流动相：梯度洗脱；A＝0.017M H3PO4，0.3mM EDTA，在水中；B＝CH3CN梯度：    分钟    ％A    ％B
       0       85     15
      40       65     35
     50    65    35流速：1.5mL分钟-1；检测(UV)：210nm；酸性滴定度(0.1N NaOH)：99％[α]20λ(c 2.04；1N NaOH)λ(nm)  589   578    546    436    405    365[α]  +24.80 +25.83 +29.22 +49.02 +58.43 +75.59元素分析：  C   H     N    Cl，Li％计算值： 58，70  7，93  6，68％实测值： 57，90  7，97  6，57   ＜0.1  H2O0.95
1H-NMR、13C-NMR、IR和MS光谱与所示结构吻合。
实施例6与1-脱氧-1-(甲基氨基)-D-山梨醇(1∶2)成盐的(3β，5β，7α，12α)-3-[[[[[双[2[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]-7，12-二羟基胆烷-24-酸的钆络合物
Figure A9981579200501
A)N-[[双[2-[双[2-(1，1-二甲基乙氧基-2-氧代乙基]-氨基]乙基]氨基]乙酰基]甘氨酸
6.5g甘氨酰基甘氨酸(49.3mmol)悬浮在100mL的1∶1 H2O/EtOH混合物并且在pH 10下用10M NaOH(4.8mL)溶解。将存在于40mL EtOH中的N-(2-溴乙基)-N[2-(1，1-二甲基乙氧基)-2-氧代乙基]甘氨酸1，1-二甲基乙酯(42g；110.9mmol)在2小时内滴加其中，用10MNaOH(5.8ml)保持pH 10.5。溶液迅速转化为乳液，2.5小时后通过加入10M NaOH溶解。22小时后，蒸发溶解，混合物用水稀释和用CH2Cl2提取。有机相用H2O洗涤，干燥和蒸发。得到残余物，利用闪式色谱纯化残余物。将残余物溶解在水中，加入1M HCl调节pH 4.5，用氯仿提取该溶液。有机相用H2O洗涤，干燥和蒸发，得到13g预期产物(19.3mmol)。收率：39％元素分析    C   H   N％计算值：56.95 8.66 8.30％实测值：56.67 8.68 8.30TLC：固定相：硅胶板60F 254 Merck洗脱剂：6∶3∶1 CHCl3/MeOH/25％ NH4OHRf＝0.65检测：1％KMnO4在1M NaOH中
1H-NMR、13C-NMR、IR和MS光谱与所示结构吻合。B)(3β，5β，7α，12α)-3-[[[[[双[2-[双[2-(1，1-二甲基-乙氧基)-2-氧代乙基]氨基]乙基]氨基]乙酰基]氨基]-乙酰基]氨基]-7，12-二羟基胆烷-24-酸甲酯
0℃，搅拌下，在5分钟内将2.8mL TEA(20.2mmol)加入含有13.6g步骤A)制备的化合物(20.2mmol)、8.52g(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸甲酯(20.2mmol)和DEPC(3.4 mL；22.2mmol)的DMF(290mL)溶液中。1小时后，令反应升至室温，将该溶液搅拌6.5小时，加入0.3mL DEPC(2mmol)，将该溶液进一步搅拌15.5小时。蒸发DMF，将残余物溶解在EtOAc中，用NaHCO3水溶液、随后用水洗涤，最后干燥。通过闪式色谱纯化后，得到13.7g预期产物(12.7mmol)。收率：63％[α]20D＝+5.26(c 1.5；CHCl3)元素分析：  C   H   N％计算值：63.48 9.25 6.49％实测值：63.22 9.40 6.40
1H-NMR、13C-NMR、IR和MS光谱与所示结构吻合。C)(3β，5β，7α，12α)-3-[[[[[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]-7，12二羟基胆烷-24-酸
-5/0℃，搅拌下将12.85g步骤B)制备的化合物(12mmol)溶解在TFA(210mL)中。16小时后，蒸发TFA得到残余物，将残余物溶解在90mL的0.8M NaOH中至pH 13，室温下搅拌15小时。将溶液浓缩为50mL，滴加到105mL的0.6M HCl中并且搅拌2小时。过滤该固体，用0.1M HCl洗涤和干燥，得到粗产物，将该粗产物通过色谱法纯化。蒸发含有成盐形式的预期化合物的馏份，得到残余物，将该残余物溶解在水中，滴加到1M HCl中，保持pH 1.45。过滤沉淀，用0.1M HCl洗涤和干燥，得到2.6g预期产物(3.1mmol)。收率：26％ m.p.：120-125℃HPLC分析：98％(面积％)
1H-NMR、13C-NMR、IR和MS光谱与所示结构吻合。D)与1-脱氧-1-(甲基氨基)-D-山梨醇(1∶2)成盐的(3β，5β，7α，12α)-3-[[[[[双[2[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]-7，12-二羟基胆烷-24-酸
2.59g步骤C)制备的化合物(3.08mmol)悬浮在水(20mL)中并且通过加入1M葡甲胺水溶液(3.08mL；3.08mmol)至pH 5使化合物溶解。将Gd2O3(0.501g；2.77mmol)加入加热至50℃的混合物中。1小时后，加入1M葡甲胺(2.8mL；2.8mmol)溶解沉淀。24小时后过滤该反应混合物并且用1M葡甲胺水溶液(0.4mL)调节pH至6.8。蒸发后和干燥，得到4.2g(3.00mmol)预期产物。收率：99％ m.p.：209-213℃分解HPLC分析：99.7％(面积％)游离配体：＜0.1％(0.001 GdCl3)元素分析：  C   H   N   Gd％计算值：46.84 6.99 7.08 11.36％实测值：44.01 7.35 6.68 10.39  H2O4.95
IR和MS光谱与所示结构吻合。
实施例7与1-脱氧-1-(甲基氨基)-D-山梨醇(1∶4)成盐(1∶4)的[3β(S)，5β]-3-[[4-[双[2-[双-(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基](羧甲基)氨基]胆烷-24-酸的钆络合物
Figure A9981579200531
A)(3β，5β)-3-[[2-(1，1-二甲基乙氧基)-2-氧代乙基]氨基]-胆烷-24-酸甲酯
室温和氮气下，将40.0g(3β，5β)-3-氨基胆烷-24-酸甲酯(按照上述实施例1)(103mmol)悬浮在DMF(1.0L)。加入三乙胺(13.0g；129mmol)，随后在1小时内把溴乙酸1，1-二甲基乙酯(24.0g；123mmol)的DMF(30mL)溶液加入反应混合物中直至溶解。3天后，浓缩该混合物并且用4％NaHCO3水溶液稀释。过滤所得混悬液，沉淀用H2O洗涤和干燥，得到33.7g预期产物(66.9mmol)。收率：65％ m.p.：62-64℃[α]20D＝+23.55(c 1.96，MeOH)元素分析：  C   H    N％计算值：73.91 10.60 2.78％实测值：74.67 10.85 2.78  H2O＜0.1TLC：固定相：硅胶板60F 254 Merck洗脱剂：7∶3正己烷/EtOAc Rf＝0.31
1H-NMR、13C-NMR、IR和MS光谱与所示结构吻合。B)[3β(S)，5β]-3-[[4-[双[-2-[双[2-(1，1-二甲基乙氧基)-2-氧代乙基]氨基]乙基]氨基]-5-(1，1-二甲基乙氧基)-1，5-二氧代戊基][2-(1，1-二甲基乙氧基)-2-氧代-乙基]氨基]胆烷-24-酸甲酯
室温搅拌下，氮气下，将二异丙基乙胺(19.5g；151mmol)在20分钟内滴加到化合物A)(33.0g；65.5mmol)、N，N-双[2-[双[2-(1，1-二甲基乙氧基)-2-氧代乙基]氨基]乙基]-L-谷氨酸1-(1，1-二甲基-乙基)酯(按照WO-A-95/32741：实施例15所述制备)(53.8g；72.1mmol)和(苯并三唑-1-基氧基)三(二甲烷基氨基)鏻六氟磷酸盐(BOP)(40.6g；91.8mmol)的DMF(400mL)溶液中。2天后，浓缩该反应混合物并且溶于EtOAc。用H2O洗涤溶液，干燥(Na2SO4)和蒸发。利用闪式色谱纯化粗产物两次，得到38.7g预期产物(31.4mmol)。收率：48％。[α]20D＝-54.50(c 2.51，CHCl3)TLC：固定相：硅胶板60F 254 Merck洗脱剂：7∶3正己烷/EtOAc Rf＝0.22
1H-NMR、13C-NMR、IR和MS光谱与所示结构吻合。C)[3β(S)，5β]-3-[[4-[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基](羧甲基)氨基]胆烷-24-酸
室温搅拌下，在1小时内向化合物B)(38.7g；31.4mmol)的EtOH(350mL)溶液内滴加500mL 2M LiOH溶液。16小时后，反应混合物浓缩至500mL，再次加入2M LiOH溶液(350mL)，加热至50℃。24小时，反应混合物冷却至室温，5℃剧烈搅拌下滴入320mL 6M HCl。用55mL的2M NaOH调节所得混悬液的pH至1.0。过滤固体，用0.1M HCl洗涤和干燥。将粗产物悬浮在H2O中，通过加入1M NaOH溶解，随后将碱性溶液滴加到0.5M HCl溶液。过滤沉淀，用0.05M HCl、H2O洗涤并且干燥，得23.5g预期产物(26.7mmol)。收率：85％ m.p.：178-182℃[α]40520＝+24.10(c 1.49，1M NaOH)HPLC分析：100％(面积％)固定相：Hypurity Elite C-18 5μm；柱250×4.6mm；温度：40℃；流动相：梯度洗脱；A＝0.01M KH2PO4，0.3mM EDTA，在水中B＝CH3CN梯度：  分钟    ％A    ％B
               0      95      5
              40      65     35
              50      65     35流速：1mL分钟-1；检测(W)：210nm。元素分析： C   H   N   Na  Cl％计算值： 58.62 7.78 6.36％实测值： 57.71 8.07 6.20 0.13 0.55 H2O＜0.1
1H-NMR、13C-NMR、IR和MS光谱与所示结构吻合。D)与1-脱氧-1-(甲基氨基)-D-山梨醇(1∶4)成盐的[3β(S)，5β]-3-[[4-[双[2[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基](羧甲基)氨基]胆烷-24-酸的钆络合物
室温下向步骤C)制得的化合物(12.9g；14.6mmol)在H2O(100mL)中的悬浮液内加入1M葡甲胺水溶液(72.0mL；72.0mmol)得到pH 6.2的澄清溶液。滴加0.393M GdCl3水溶液(37.2mL；14.6mmol)，通过加入1M葡甲胺(30.0mL；30.0mmol)利用pH-静电的装置保持pH 6.2。加入完毕后，经滤纸且随后经微孔膜(HAWP 0.45pm)过滤该反应混合物，纳米级过滤，加入1M葡甲胺(0.20mL；0.20mmol)调至pH7.0。干燥固体得到24.0g预期产物(13.2mmol)。收率：91％m.p.：90-92CHPLC分析：100％(面积％)固定相：Lichrospher 100 RP-85μm；Merck KGAa 250×4mm柱；温度：40C；流动相：用预混流动相等度洗脱：1g正辛基胺加入400mL乙腈和600mL
    水中。该溶液用H3PO4缓冲至pH6；流速：1mL分钟-1；检测(UV)：210nm。元素分析： C  H  N   Gd  Na，Cl％计算值：46.96 7.38 6.17 8.66％实测值：44.27 7.59 5.76 8.21  ＜0.1  H2O 6.61
IR和MS光谱与所示结构吻合。
实施例8与钠(1∶3)成盐的[3β(R)，5β，12α]-3-[[4-[双[2[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-12-羟基胆烷-24-酸的钆络合物
Figure A9981579200561
按照反应路线3实施例5所述的试验方法，(R)-5-氧代-1，2-吡咯烷二甲酸1-(苯基甲基)酯(市售产品)用碘甲烷在N，N-二异丙基乙胺存在下酯化，由此所得(R)甲酯与(3β，5β，12α)-3-氨基-12-羟基胆烷-24-酸甲酯(按照WO-A-95/32741：实施例5所述胆酸衍生物方法制备)反应得到[3β(R)，5β，12α]-3-[[4-双[双[2-[双[2-(1，1-二甲基乙氧基)-2-氧代乙基]氨基]-乙基]氨基]-5-甲氧基-1，5-二氧代戊基]氨基]-12-羟基-胆烷-24-酸甲酯。在脱除(H2/Pd)Cbz保护基后，用N-(2-溴乙基)-N-[2-(1，1-二甲基乙氧基)-2-氧代乙基]-甘氨酸1，1-二甲基乙酯(按照WO-A-95/32741：实施例15所述方法制备)在CH3CN/磷酸盐缓冲液pH 8下烷基化，得到六酯，将其转化为(含水LiOH/二噁烷)相关六元酸。后者按照实施例4D)点所述方法络合，得到预期产物，总收率44％。m.p.：＞300℃元素分析：    C    H    N    Gd    Na％计算值： 46.49 5.71 5.29 14.85 6.51％实测值： 44.02 6.13 5.10 14.09 6.17  H2O 4.50％
IR和MS光谱与所示结构吻合。
实施例9与钠(1∶3)成盐的[3β(RS)，5β，12α]-3-[[4-[双[2[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-12-羟基胆烷-24-酸的钆络合物
Figure A9981579200571
该化合物是由(3β，5β，12α)-3-氨基-12-羟基胆烷-24-酸甲酯(类似于WO-A-95/32741：实施例5所述胆酸衍生物方法制备)和N，N-双[2-[双[2-(1，1-二甲基乙氧基)-2-氧代乙基]氨基]-乙基]-DL-谷氨酸1-(1，1-二甲基乙基)酯(由DL谷氨酸、按照WO-A-95/32741：实施例15中对L异构体所述方法制备)、按照实施例4所述详细方法合成。所得产物的总收率为61％。m.p.：＞300℃HPLC分析：99％(面积％)固定相：Zorbax ECLIPSE XDB-C8 3.5μm；150×4.6mm柱RocklandTechnologies，Inc.；温度：40℃；流动相：梯度洗脱；A＝0.005M KH2PO4，0.005M K2HPO4，0.3mM EDTA，水中；B＝CH3CN梯度：    分钟    ％A    ％B
        0      90    10
        5      90    10
       20      50    50流速：1.0mL分钟-1；检测(W)：210nm；
色谱法显示出两个峰，这两个峰几乎等比例，它们与二酯非对映异构体有关，这归因于DTPA残基中的RS立体中心。元素分析：   C H   N   Gd   Na％计算值： 46.49 5.71 5.29 14.85 6.51％实测值： 43.98 6.34 4.98 13.86 6.16 H2O 4.63％
IR和MS光谱与所示结构吻合。
实施例10
与钠(1∶3)成盐的[3α(S)，5β，12α]-3-[[4-[双[2[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-12-羟基胆烷-24-酸的钆络合物
(3α，5β，12α)-3-氨基-12-羟基胆烷-24-酸甲酯-3，12-二羟基胆烷-24-酸甲酯
(3α，5β，12α)-3，12-二羟基胆烷-24-酸甲酯在Mitsunobu条件下(Mitsunobu，有机合成(Synthesis)1981，1-28；Denike，J.K.等人。脂质的化学和物理学(Chem.Phys.Lipids)1995，77，261-267)与三苯基膦、偶氮二甲酸二乙基酯和甲酸在THF反应得到(3β，5β，12α)-3-甲酰氧基-12-羟基胆烷-24-酸甲酯。后者脱保护(MeOH/HCl)得到(3β，5β，12α)-3，12-二羟基胆烷-24-酸甲酯，令该化合物进行WO-A-95/32741：实施例5对于胆酸衍生物的一系列反应，得到(3a，5β，12α)-3-氨基-12-羟基胆烷-24-酸甲酯，总收率为32％，m.p.：90-92℃[α]20D＝+53.46(c 1.3，CH3OH)元素分析    C    H    N％计算值：74.03 10.69 3.44％实测值：74.20 10.99 3.26TLC：固定相：硅胶板60F 254 Merck洗脱剂：9∶1∶0.15 CHCl3/CH3OH/25％NH4OH Rf＝0.21
1H-NMR、13C-NMR、IR和MS光谱与所示结构吻合。按照反应路线3和实施例5所述的试验方法，(S)-5-氧代-1，2-吡咯烷二甲酸2-甲基 1-(苯基甲基)二酯与化合物A)反应。由此所得3α(S)，5β，12α]-3-[[4-[双[2-[双[2-(1，1-二甲基乙氧基)-2-氧代乙基]-氨基]乙基]氨基]-5-甲氧基-1，5-二氧代戊基]氨基-12-羟基胆烷-24-酸甲酯氢化(H2/Pd)以脱除Cbz保护基。随后用N-(2-溴乙基)-N-[2-(1，1-二甲基乙氧基)-2-氧代乙基]-甘氨酸1，1-二甲基甲酯(按照WO-A-95/32741：实施例15所述方法制备)在CH3CN/磷酸盐缓冲液pH 8下烷基化，得到相关六酯。后者(含水LiOH/二噁烷)转化为六元酸，该酸按照实施例4D)点所述方法络合，得到预期产物，总收率33％。m.p.：＞300℃HPLC分析：100.0％(面积％)元素分析：   C H   N   Gd   Na％计算值：  46.49 5.71 5.29 14.85 6.51％实测值：  42.04 6.37 4.76 13.28 5.91 H2O9.79％
IR和MS光谱与所示结构吻合。
实施例11与钠(1∶3)成盐的[3β(S)，5β，7α]-3-[[4-[双[2[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-7-羟基胆烷-24-酸的钆络合物
Figure A9981579200591
该化合物由(3β，5β，7α)-3-氨基-7-羟基胆烷-24-酸甲酯(按照类似于WO-A-95/32741：实施例5所述胆酸衍生物的方法制备)和N，N-双[2-[双[2-(1，1-二甲基乙氧基)-2-氧代乙基]氨基]-乙基]-L-谷氨酸1-(1，1-二甲基乙基)酯(WOA-95/32741：实施例15所述方法制备)、按照实施例4详细方法制备。得到产物，总收率89％。m.p.：＞300℃元素分析： C  H   N   Gd   Na％计算值：46.49 5.71 5.29 14.85 6.51％实测值：43.88 6.50 4.91 13.62 6.04   H2O7.11％
IR和MS光谱与所示结构吻合。
实施例12[3β(RS)，5β，7α，12α]-3-[[4-[双[2[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-7，12-二羟基胆烷-24-酸
该化合物由(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸甲酯(WO-A-95/32741：实施例5所述方法制备)和N，N-双[2-[双[2-(1，1-二甲基乙氧基)-2-氧代乙基]氨基]-乙基]-DL-谷氨酸1-(1，1-二甲基乙基)酯(由DL谷氨酸、按照WO-A95/32741：实施例15对于L异构体所述方法制备)、按照实施例4制备化合物B的详细步骤合成)。所得产物的总收率为65％。m.p.：224℃分解。HPLC分析：97％(面积％)固定相：Zorbax ECLIPSE XDB-C8 3.5μm；150×4.6mm柱RocklandTechnologies，Inc.；温度：40℃；流动相：梯度洗脱；A＝0.017M H3PO4，0.3mM EDTA水中；B＝CH3CN梯度：    分钟    ％A    ％B
       0      95      5
      40      65     35
      50      65     35流速：1.0mL分钟-1；检测(W)：210nm；
色谱法显示出两个峰，这两个峰几乎等比例，它们与二酯非对映异构体有关，这归因于DTPA残基中的RS立体中心。元素分析：  C  H   N   Li， Cl％计算值：  57.60 7.78 6.55％实测值：  54.34 7.81 6.19  ＜0.1  H2O 5.12％
IR、NMR和MS光谱与所示结构吻合。
实施例13与钠(1∶3)成盐的[3α(S)，5β，7α，12α]-3-[[[[5-[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-5-羧戊基]氨基]羰基]氧基]-7，12-5羟基胆烷-24-酸的钆络合物A)[3α(S)，5β，7α，12α]-3-[[[[6-(1，1-二甲基乙氧基)-5-[双[2-[双[2-(1，1-二甲基乙氧基)-2-氧代乙基]氨基]乙基]氨基]-6-氧代己基]氨基]羰基]氧基]-7，12-二羟基胆烷-24-酸甲酯方法1：双(三氯甲基)碳酸酯(2.9g；9.7mmol)在无水CH2Cl2(40mL)溶液在氮气氛下滴加到(3α，5β，7α，12α)-3，7，12-三羟基胆烷-24-酸甲酯(市售产品)(10.0g；23.7mmol)和吡啶(2.3mL；28.4mmol)在无水CH2Cl2(100mL)中的冷却至0℃的溶液内。随后令该混合物升至室温并且在室温下1小时后，再次将该溶液冷却至0℃，向该溶液中加入N，N-二异丙基乙胺(7.9mL；47.3mmol)，随后滴加N2，N2-双[2-[双[2(1，1-二甲基乙氧基)-2-氧代乙基]氨基]乙基]-L-赖氨酸(1，1-二甲基乙基)酯(Anelli，P.L.等人生物偶联化学(Bioconjugate Chem.)1999，10，137)(17.6g；23.7mmol)在无水CH2Cl2(50mL)中的溶液。室温下搅拌3小时该溶液，随后用水(2×100mL)洗涤，Na2SO4干燥和蒸发。粗产物通过闪式色谱纯化得到预期产物(14.8g；12.4mmol)。收率：52％.
1H-NMR、13C-NMR、IR和MS光谱与所示结构吻合。方法2：氮气氛下，将[3α，5β，7α，12α]-3-[(氯代羰基)氧基]-7，12-二羟基胆烷-24-酸甲酯(Janout，V.，Lanier，M.；Regen，S.L.美国化学协会会志(J.Am.Chem.Soc.)1997，119，640)(6.1g；12.6mmol)在无水CH2Cl2(150mL)溶液冷却至0℃，随后加入N，N-二异丙基乙胺(4.8mL；27.6mmol)。此后滴加N2，N2-双[2-[双[2(1，1-二甲基乙氧基)-2-氧代乙基]氨基]乙基]-L-赖氨酸(1，1-二甲基乙基)酯(9.3g；12.6mmol)在无水CH2Cl2(20mL)中的溶液。室温下搅拌3小时，用水(2×100ml)洗涤，Na2SO4干燥，蒸发。粗产物通过闪式色谱纯化得到预期产物(11.9g；9.9mmol)。收率：79％.
1H-NMR、13C-NMR、IR和MS光谱与所示结构吻合。B)[3α(S)，5β，7α，12α]-3-[[[[5-[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-5-羧戊基]氨基]-羰基]氧基]-7，12-二羟基胆烷-24-酸
室温下，将2M LiOH(141mL)的水溶液滴加到化合物A)(11.2g；9.4mmol)在1，4-二噁烷(141mL)中的溶液内。104小时后，浓缩该溶液(150mL)且滴加2M HCl(175mL)水溶液：最终pH达到1.9。过滤沉淀，用H2O(5×50mL)洗涤且真空干燥。粗产物通过闪式色谱纯化。所得固体溶解在10％CH3CN水溶液中，加入浓盐酸调至pH 1，随后将该溶液填装在AmberliteXAD 16.00树脂柱(250mL)上且用CH3CN/H2O梯度洗脱。蒸发含有产物的馏份得到预期产物(4.3g；4.8mmol)。收率：51％.m.p.：184-191℃K.F.：4.36％[α]20D＝+19.5(c 1，1M NaOH)HPLC分析：97.3％(面积％)固定相：Hypurity Elite C 18 5μm；250×4.6mm柱，填装有Hypersil：温度：40℃；流动相：梯度洗脱；A＝0.01M KH2PO4，0.3mM EDTA，在水中；B＝CH3CN梯度：    分钟    ％A    ％B
       0       95     5
       20      65     35
       50      65     35流速：1mL分钟-1；检测(UV)：200nm；元素分析    C   H   N     Cl％计算值：57.45 7.85 6.23％实测值：  55.22 7.91 6.08   ＜0.1
1H-NMR、13C-NMR、IR和MS光谱与所示结构吻合。C)与钠(1∶3)成盐的[3α(S)，5β，7α，12α]-3-[[[[5-[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-5-羧戊基]氨基]羰基]氧基]-7，12-二羟基-胆烷-24-酸的钆络合物
步骤B)制备的化合物(4.7g；5.2mmol)悬浮在H2O(100mL)中并且通过加入1M NaOH(10mL)直至pH为6.5溶解该化合物。加入GdCl3(1.9g；5.2mmol)的H2O(17mL)溶液，用1M NaOH(15.6mL)维持pH 6.5。室温下1小时后，将溶液填装在AmberliteXAD 16.00树脂柱(250mL)上，其用CH3CN/H2O梯度洗脱。蒸发含有产物的馏份，得到预期产物(4.2g；3.8mmol)。收率72％.m.p.：＞300℃K.F.：9.49％[α]20D＝+2.63(c 2，H2O)HPLC分析：100％(％面积)(与步骤B相同的方法)元素分析：  C  H   N   Gd   Na   Cl％计算值：  46.15 5.76 5.00 14.05 6.17％实测值：  41.80 6.28 4.54 12.64 5.73  ＜0.1
1H-NMR、13C-NMR、IR和MS光谱与所示结构吻合。
实施例14与钠(1∶3)成盐的[3β(S)，5β，12α]-3-[[4-[[2-[双(羧甲基)氨基]乙基](羧甲基)氨基]-4-羧基-]-氧代丁基]氨基]-12-羟基胆烷-24-酸的锰络合物
Figure A9981579200641
A)[3β(S)，5β，12α]-3-[[4-氨基-5-甲氧基-1，5-二氧代戊基]氨基]-12-羟基胆烷-24-酸甲酯
将3.4g 5％Pd/C加入[3β(S)，5β，12α]-3-[[5-甲氧基-1，5-二氧代-4-[[(苯基甲氧基)羰基]氨基]戊基]氨基]-12-羟基胆烷-24-酸甲酯(实施例5，产物B)(34.14g；50mmol)的MeOH(340mL)溶液中。室温下，氢气氛下，将该混悬液搅拌3.5小时。经Millipore滤膜FH(0.45μm)过滤后，将该溶液蒸发至干得到预期产物(27.1g；49.3mmol)。收率98.6％。失重(50℃；高真空)：＜0.1％元素分析：  C   H  N％计算值：  67.85 9.55 5.10％实测值：  68.58 9.72 5.12[α]20D＝+36.61(c 2.01，CHCl3)酸滴定度(0.1M HCl)：94.6％
1H-NMR、13C-NMR、IR和MS光谱与所示结构吻合。B)[3β(S)，5β，12α]-3-[[4-[[2-[双[2-(1，1-二甲基乙氧基)-2-氧代乙基]氨基]乙基][2-(1，1-二甲基乙氧基)-2氧代乙基]氨基]-5-甲氧基-1，5-二氧代戊基]氨基]-12-羟基胆烷-24-酸甲酯
把步骤A)制备的化合物(16.0g；29.1mmol)和N-(2-溴甲基)-N-[2-(1，1-二甲基乙氧基)-2-氧代乙基]-甘氨酸1，1-二甲基乙酯(13.3g；37.8mmol)(按照WO-A95/32741：实施例15所述方法制备)溶解在EtOAc(120mL)。加入2M磷酸盐缓冲液pH 8(120mL)后，将该混合物剧烈搅拌2小时，随后水相用新制的2M磷酸盐缓冲液pH8(120mL)代替且继续搅拌70小时。将该混合物在40℃下加热12小时，冷却至室温，分离，蒸发有机相，得到残余物，将残余物溶于CH2Cl2(150mL)，用水洗涤(2×100mL)，干燥Na2SO4和蒸发。粗产物通过闪式色谱纯化，得到预期产物(12.3g；15.0mmol)。收率：52％。元素分析：  C  H  N％计算值：  65.90 9.46 5.12％实测值：  65.99 9.72 5.03TLC：固定相：硅胶板60F 254 Merck洗脱剂：1∶1＝EtOAc/正己烷 Rf＝0.40检测：1％KMnO4在1M NaOH中
1H-NMR、13C-NMR、IR和MS光谱与所示结构吻合。C)[3β(S)，5β，12α]-3-[[4-[[2-[双[2-(1，1-二甲基乙氧基)-2-氧代乙基]氨基]乙基][2-(1，1-二甲基乙氧基)-2氧代乙基]氨基]-5-甲氧基-1，5-二氧代戊基]氨基]-12-羟基胆烷-24-酸甲酯
把溴乙酸叔丁酯(3.9g；20.1mmol)滴加到步骤B)制备的化合物(11.0g；13.4mmol)和N，N-二异丙基乙胺(3.5mL；20.1mmol)的CH3CN溶液中。室温下，将该混合物搅拌24小时，随后加入N，N-二异丙基乙胺(0.9mL；4.0mmol)和溴乙酸叔丁酯(0.8g；4.0mmol)。进一步搅拌该混合物70小时，分离和蒸发有机相，得到残余物，将该残余物溶于CH2Cl2(150mL)中，用水洗涤(2×100mL)，Na2SO4干燥并蒸发。粗产物通过闪式色谱纯化，得到预期产物(10.7g；11.5mmol)。收率：85％。元素分析：  C  H  N％计算值：  65.57 9.39 4.50％实测值：  66.27 9.62 4.52TLC：固定相：硅胶板60F 254 Merck洗脱剂：1∶1＝EtOAc/正己烷  Rf＝0.46检测：1％KMnO4在1M NaOH中
1H-NMR、13C-NMR、IR和MS光谱与所示结构吻合。D)[3β(S)，5β，12a]-3-[[4-[[2-[双(羧甲基)氨基]乙基](羧甲基)氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]-氨基]-12-羟基胆烷-24-酸
室温下将2M LiOH水溶液(120mL)滴加到步骤C)制备的化合物(9.2g；9.8mmol)的1，4-二噁烷(120mL)溶液中。24小时后，浓缩该溶液，滴加2M HCl水溶液(135mL)：最终pH为1.9。过滤沉淀，用H2O洗涤(5×50mL)和真空干燥，得到预期产物(7.3g；9.6mmol)。收率98％m.p.：163-168℃K.F.：1.81％[α]20D＝+29.03(c 1，1M NaOH)HPLC分析：100％(面积％)固定相：Zorbax Eclipse XDB-C8 3.5μm；150×4.6mm柱，填装有Rockland Technologies Inc.；温度：40℃；流动相：梯度洗脱；
A＝0.01M KH2PO4，0.01M K2HPO4 0.3mM EDTA的水溶液；
B＝CH3CN梯度：    分钟    ％A    ％B
       0       93     7
       5       93     7
      50       60     40流速：1mL 分钟-1；检测(UV)：200nm；元素分析： C H  N   Li   Cl％计算值： 60.23 8.06 5.69％实测值： 58.60 8.25 5.49 ＜0.1 ＜0.1
1H-NMR、13C-NMR、IR和MS光谱与所示结构吻合。E)与钠(1∶3)成盐的[3β(S)，5β，12α]-3-([4-[[2-[双(羧甲基)氨基]乙基](羧甲基)氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-12-羟基胆烷-24-酸的锰络合物令步骤D)制备的化合物(5.3g；7.2mmol)悬浮在H2O(250mL)中并且通过加入1M NaOH(36mL)至pH 6.5溶解该化合物。加入MnCl24H2O(1.4g；7.2mmol)的H2O(50mL)溶液，同时用1M NaOH(7.9mL)维持pH 6.5。室温下1小时后，通过纳米级过滤脱盐，随后蒸发得到预期产物。收率：98％ m.p.：＞300℃K.F.：13.54％[α]20D＝+2.63(c 2，H2O)CE分析：100％(面积％)毛细管：熔融二氧化硅0.72m×50μm电压：30kV缓冲剂：0.07M硼酸盐，pH 9，3，0.3mM EDTA温度：25C停止时间：20分钟；检测(W)：200nm；注射：水压式(50mbar，4s)；样本浓度：1mgmL-1；仪器：Hewlett Packard 3D HPCE预处理时间表：    t(分钟)作用
     2         用H2O洗脱
     2         用0.1M NaOH洗脱
     1         用H2O洗脱
     5         用缓冲液洗脱元素分析：C  H  N  Mn Na   Cl％计算值：51.87 6.35 4.90 6.41 8.05％实测值：45.50 6.95 4.30 5.28 6.86 ＜0.1
IR和MS光谱与所示结构吻合。
以相同方式由实施例2中的化合物B)制备[3β(S)，5β]-3-[[4-[[2[[双(羧甲基)氨基]乙基]-(羧甲基)氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-12-氧代胆烷-24-酸。
实施例15与钠(1∶3)成盐的[3α(S)，5β，12α]-3-[[[[5-[[2-[双(羧甲基)氨基]乙基](羧甲基)氨基]-5羧戊基]氨基]羰基]氧基]-12-羟基胆烷-24-酸的钆络合物
Figure A9981579200681
A)N2-[2-[双[2-(1，1-二甲基乙氧基)-2-氧代乙基]-氨基]乙基]-N2-[2-(1，1-二甲基乙氧基)-2-氧代乙基]-N6-[(苯基甲氧基)羰基]-L-赖氨酸甲酯
将溶解在CH3CN(25mL)中的N-(2-溴乙基)-N-[2-(1，1-二甲基乙氧基)-2-氧代乙基]甘氨酸1，1-二甲基乙酯(25.6g；72.55mmol)(按照WO-A-95/32741：实施例15所述方法制备)滴加在N6-[(苯基甲氧基)羰基]-L-赖氨酸甲酯盐酸盐(20g；60.46mmol)和N，N二异丙基乙胺(12.64mL；72.55mmol)的CH3CN(250mL)溶液中。室温下搅拌该反应混合物。5天后，向该溶液中加入更多的N，N-二异丙基乙胺(17.7mL；101.6mmol)和溴乙酸叔丁酯(18.8g；13.5mL；101.6mmol)。24小时后，蒸发溶剂并且残余物用Et2O(200mL)处理。过滤该混合物，用0.1MHCl(2×100mL)处理该溶液，干燥Na2SO4和减压下蒸发。粗产物通过闪式色谱纯化得到预期产物(13.03g；19.2mmol)。收率：32％。K.F.：＜0.1％[α]20D＝-22.47(c 1.93，CHCl3)元素分析：  C  H  N％计算值：  61.83 8.45 6.18％实测值：  61.70 8.52 5.84TLC：固定相：硅胶板60F 254 Merck洗脱剂：3∶7＝EtOAc/正己烷  Rf＝0.40检测：Ce(SO4)2，4H2O(0.18％)和(NH4)6Mo7O24 4H2O(3.83％)，在10％H2SO4中
1H-NMR、13C-NMR、IR和MS光谱与所示结构吻合。B)(3α，5β，7α，12α)-3-[(氯代羰基)氧基]-12-羟基-胆烷-24-酸甲酯
注意：所有操作必须在很好的通风烟橱下进行
氮气氛下，将20％光气的甲苯溶液(100mL；202.2mmol)滴加到(3α，5β，7α，12α)-3，12-二羟基胆烷-24-酸甲酯(14.7g；36mmol)在无水CH2Cl2(350mL)中的、冷却至0℃的溶液内。室温下搅拌3小时该溶液，随后蒸发(注意)得到预期产物(15.2g；32.4mmol)。收率：90％。
1H-NMR、13C-NMR、IR和MS光谱与所示结构吻合。C)[3α(S)，5β，12α]-3-[[[[5-[[2-[双[2-(1，1-二甲基乙氧基)-2-氧代乙基]氨基]乙基][2-(1，1-二甲基乙氧基)-2-氧代乙基]氨基]-6-甲氧基-6-氧代己基]氨基]羰基]氧基]-12-羟基胆烷-24-酸甲酯
把5％Pd/C(1.3g)加入步骤A)制备的化合物(12.3g；18.1mmol)的MeOH(120mL)溶液中，该混悬液在氢气氛、室温下搅拌3小时。经Millipore滤膜(FT 0.45μm)过滤后，减压下蒸发该溶液。将残余物溶解在无水CH2Cl2(20mL)，0℃、氮气氛下滴加步骤B)制备的化合物(8.7g；18.54mmol)和N，N-二异丙基乙胺(DIEA)(6.5mL；37.07mmol)在无水CH2Cl2(200mL)中的溶液内。3小时后，反应混合物用H2O(2×100mL)洗涤，分离有机相，干燥Na2SO4和减压下蒸发。粗产物通过闪式色谱纯化得到预期产物(8.6g；8.8mmol)。收率：49％。K.F.：＜0.1％元素分析：  C  H  N％计算值：  65.07 9.38 4.30％实测值：  65.67 9.52 4.24TLC：固定相：硅胶板60F 254 Merck洗脱剂：3∶7＝EtOAc/正己烷 Rf＝0.30检测：Ce(SO4)2，4H2O(0-18％)和(NH4)6Mo7O24 4H2O(3.83％)，在10％H2SO4，
1H-NMR、13C-NMR、IR和MS光谱与所示结构吻合。D)[3α(S)，5β，12α]-3-[[[[5-[[2-[双(羧甲基)氨基]乙基](羧甲基)氨基]-5-羧戊基]氨基]羰基]氧基]-12-羟基胆烷-24-酸
将2M LiOH(133mL；266mmol)加入步骤C)制备的化合物(8.5g；10.64mmol)的1，4-二噁烷(130mL)溶液中。室温下将所得溶液搅拌24小时，随后加入2N HCl(120mL)中和至pH 7。减压下蒸发浓缩该溶液至一半体积，在剧烈搅拌下非常缓慢地酸化至pH 1.5，得到白色沉淀，将其过滤，用H2O洗涤(2×100mL)和干燥，得到预期产物(6.45g；8.13mmol)。收率：76％。m.p.：188.9℃K.F.：1.44％[α]20D＝+35.47(c 2.01，1M NaOH)HPLC分析：96.8％(面积％)固定相：Zorbax Eclipse XDB-C8 3.5μm；150×4.6mm柱，由RocklandTechnologies Inc.填装；温度：40℃；流动相：梯度洗脱；
A＝0.017M H3PO4水溶液；
B＝CH3CN梯度：    分钟    ％A    ％B
       0      65      35
      25      15      85
      30      15      85流速：1mL分钟-1；检测(UV)：210nm；元素分析： C  H  N   Li   Cl％计算值： 59.91  8.12 5.37％实测值： 58.44  8.04 5.03 ＜0.1 ＜0.1
1H-NMR、13C-NMR、IR和MS光谱与所示结构吻合。E)与钠(1∶3)成盐的[3α(S)，5β，12α]-3-[[[[5-[[2-[双(羧甲基)氨基]乙基](羧甲基)氨基]-5-羧戊基]氨基]羰基]氧基]-12-羟基-胆烷-24-酸的锰络合物
将步骤D)制备的化合物(5g；6.3mmol)悬浮在H2O(50mL)中并且通过加入1MNaOH(18mL；18mmol)使该化合物溶解。在3小时内加入0.559M MnCl2水溶液(11.27mL；6.3mmol)，利用1M NaOH(7.8mL)保持pH 6.5。用1M NaOH(0.9mL；0.9mmol)调至pH 6.8，过滤(HA 0.45μm Millipore膜)并且通过纳米过滤脱盐。蒸发该溶液，干燥得到预期产物(5.45g；6.05mmol)。收率：96％m.p.：＞300℃K.F.：3.78％[α]20D＝+2.74(c2，H2O)CE分析：100％(面积％)毛细管：熔融二氧化硅0.72m×50μm电压：30kV缓冲液：0.07M硼酸盐，pH 9.3，0.3mM EDTA温度：25C停止时间：20分钟；检测(UV)：200nm；注射：水压式(50mbar，4s)；样本浓度：1mgmL-1；仪器：Hewlett Packard 3D HPCE预处理时间表：t(分钟)     作用
         2          用H2O洗脱
         2          用0.1M NaOH洗脱
         1          用H2O洗脱
         5          用缓冲液洗脱元素分析：C  H N Mn Na  Cl％计算值：52.00 6.49 4.66 6.10 7.66％实测值：49.54 7.17 4.44 5.65 7.58 ＜0.1
IR和MS光谱与所示结构吻合。
实施例16与钠(1∶3)成盐的N2-双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]-N-[(3β，5β，7α，12α)-7，12-二羟基-24-氧代-24-[(2-磺乙基)氨基]胆烷-3-基]-L-谷氨酰胺的钆络合物
Figure A9981579200731
A)[3β(S)，5β，7α，12α]-3-[[4-[双[2-[双[2-(1，1-二甲基乙氧基)-2-氧代乙基]氨基]乙基]氨基]-5-(1，1-二甲基乙氧基)-1，5-二氧代戊基]氨基]-7，12-二羟基胆烷-24-酸苯基甲酯
N，N-双[2-[双[2-(1，1-二甲基乙氧基)-2-氧代乙基]-氨基]乙基]-L-谷氨酸1-(1，1-二甲基乙基)酯(Anelli，P.L.等人。生物偶联化学(Bioconjugate Chem.)1999，10，137)(37g；50mmol)、(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸苯基甲酯(Anelli，P.L.；Lattuada，L.；Uggeri，F.Synth.Commun.1998，28，109)(31g；55mmol)和氰基膦酸二乙酯(市售产物)(9.6g；55mmol；9.2mL)溶解在DMF(750mL)中。将所得溶液冷却至0℃，滴加Et3N(7.3mL)。室温下1小时后，减压下蒸发溶液，将残余物溶解在EtOAc(300mL)中，用5％NaHCO3水溶液(2×200mL)洗涤，随用盐水(2×200mL)洗涤。分离有机相，干燥Na2SO4和减压下蒸发。粗产物通过闪式色谱纯化，得到预期产物(36g；29mmol)。Yield 58％。K.F.：0.98％元素分析  C  H  N％计算值：65.64 9.21 4.57％实测值：66.31 9.20 4.51TLC：固定相：硅胶板60F 254 Merck洗脱剂：2∶8＝EtOAc/正己烷 Rf＝0.3检测：AcOH/浓H2SO4/对茴香醛＝100∶2∶1
1H-NMR、13C-NMR、IR和MS光谱与所示结构吻合。B)[3β(S)，5β，7α，12α]-3-[[4-[双[2-[双[2-(1，1-二甲基-乙氧基)-2-氧代乙基]氨基]乙基]氨基]-5-(1，1-二甲基乙氧基)-1，5-二氧代戊基]氨基]-7，12-二羟基胆烷-24-酸三乙胺盐
将5％Pd/C(3.6g)加入步骤A)制备的化合物(36g；29.4mmol)在EtOH(1.5L)中的溶液，在氢气氛、室温下将该混悬液搅拌3小时。过滤后(经Millipore过滤器FT 0.45μm)，减压下蒸发溶液。粗产物通过闪式色谱纯化得到预期产物(22g；18mmol)。收率：60％。 m.p.：58℃K.F.：1.34％元素分析  C    H   N％计算值：65.07   9.86   5.66％实测值：64.34  10.07   5.48TLC：固定相：硅胶板60F 254 Merck洗脱剂：1∶5∶95＝Et3N/MeOH/CH2Cl2 Rf＝0.33检测：AcOH/浓H2SO4/对茴香醛＝100∶2∶1
1H-NMR、13C-NMR、IR和MS光谱与所示结构吻合。C)N2-双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]-N-[(3β，5β，7α，12α)-7，12-二羟基-24-氧代-24-[(2-磺乙基)氨基]胆烷-3-基]-L-谷氨酰胺
0℃氮气氛下，将Et3N(1.2g；12mmol；1.7mL)滴加到化合物B)(12.5g；11mmol)、(2-氨基乙磺酸(市售产品)(1.5g；12mmol)和氰基磺酸二乙酯(市售产品)(2.1g；12mmol；2mL)在DMF(400mL)中的溶液内。20分钟后，令该化合物升至室温并且搅拌3小时。减压下蒸发该溶液，将残余物溶解在二噁烷(250mL)中，滴加0.5M H2SO4水溶液(250mL；125mmol)。所得混合物在90℃下加热2小时。用2N NaOH将溶液的pH调至1.4至7，减压下蒸发溶剂。粗产物通过闪式色谱纯化。将产物溶于H2O(250mL)和2N HCl(12.5mL)中，经AmberliteAD-16.00树脂柱、用CH3CN/H2O梯度洗脱脱盐得到预期产物(1.5g；1.6mmol)。收率：14％。m.p.：＞200℃K.F.：5.87％元素分析      C     H    N    S％计算值：    53.68    7.44    7.28    3.33％实测值：    50.34    7.71    6.64    2.99
1H-NMR、13C-NMR、IR和MS光谱与所示结构吻合。D)与钠(1∶3)成盐的N2-双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]-N-[(3β，5β，7α，12α)-7，12-二羟基-24-氧代-24-[(2-磺乙基)氨基]胆烷-3-基]-L-谷氨酰胺的钆络合物
将产物C)(880mg；0.915mmol)溶于H2O(50mL)中，滴加1N NaOH直至pH 6.8为止。加入Gd2O3(165mg；0.46mmol)，所得混悬液在50℃下加热6小时。经Millipore装置(HA 0.45μm滤膜)过滤反应混合物，将滤液填装在DowexCCR 3LB弱阳离子交换树脂柱(Na+型，20mL)上。减压下蒸发洗脱液并且干燥得到预期产物(1.00g；0.75mmol)。收率：82％。    m.p.：＞250℃K.F.：13.95％HPLC分析：100％(面积％)固定相：Lichrospher 100 RP-85μm；250×4mm柱，由Merck KGaA填装；温度：40℃；流动相：用预混流动相等度洗脱：1g正辛胺加入300mL乙腈中，与700mL水混合。用H3PO4将溶液缓冲到pH6；流速：1mL分钟-1；检测(UV)：200nm；元素分析：    C  H   N   S   Gd   Na％计算值：    43.78 5.54 5.92 2.71 13.30 5.83％实测值：    36.82 6.04 5.11 2.18 10.64 5.35
IR和MS光谱与所示结构吻合。
以相同方式制备N2-双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]-N-[(3β，5β)-24-氧代-24-[(2-磺乙基)氨基]胆烷-3-基]-L-谷氨酰胺的钆络合物。
实施例17
与钠(1∶3)成盐的[3α(S)，5β]-3-[2-[[5-[双[2[双(羧甲基)氨基]-乙基]氨基]-5-羧戊基]-氨基]-2-氧基乙氧基]胆烷-24-酸的钆络合物
Figure A9981579200761
A)(3α，5β)-3-(羧基甲氧基)胆烷-24-酸甲酯
-20℃下，在15分钟内将甘氨酸苄酯三氟甲磺酸盐(Williams，M.A.；Rapoport，H.有机化学杂志(J.Org.Chem.)1994，59，3616)(16.8g；56.3mmol)加入(3α，5β)-3-羟基胆烷-24-酸甲酯(Dayal，B.等人。甾族化合物(Steroids)1981，37，239)(20g；51.2mmol)和N，N-二异丙基乙胺(10mL；57.4mmol)在无水CH3CN(400mL)中的搅拌溶液内。-20℃下4小时后，令该混合物升至室温并且另外搅拌4小时。蒸发溶剂，令残余物在EtOAc(300mL)和饱和NaHCO3(300mL)之间分配。有机相用Na2SO4干燥和蒸发。将残余物溶于EtOH(200mL)中，随后加入5％Pd/C(3g)，室温下在5小时内氢气氛下搅拌该混合物。经Millipore滤器FH(0.45μm)过滤，蒸发溶液，残余物通过闪式色谱纯化得到预期产物(14.2g；31.7mmol)。收率：62％K.F.：＜0.1元素分析：    C      H％计算值：    72.28    9.89％实测值：    71.97    9.81
1H-NMR、13C-NMR、IR和MS光谱与所示结构吻合。B)[3a(S)，5β]-3-[2-[[5-[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-5-羧戊基]氨基]-2-氧代乙氧基]胆烷-24-酸
把N2，N2-双[2-[双[2-(1，1-二甲基乙氧基)-2-氧代乙基]-氨基]乙基]-L-赖氨酸(1，1-二甲基乙基)酯(Anelli，P.L.等人，生物偶联化学(Bioconjugate Chem.)1999，10，137)(18.6g；25mmol)、化合物A)(11.2g；25mmol)和氰基磷酸二乙酯(市售产品)(4.9g；28mmol)溶于DMF(300mL)中。将所得溶液冷却至0℃并滴加Et3N(4mL)。室温下6小时后，减压下蒸发该溶液，把残余物溶于EtOAc(250mL)，用5％NaHCO3水溶液(2×100mL)洗涤，随后用盐水(2×100mL)洗涤。分离有机相，用Na2SO4干燥，减压下蒸发。残余物溶于二噁烷(300mL)中，滴加0.5M H2SO4水溶液(300mL；150mmol)。所得混合物在90℃下加热2小时。用2N NaOH将溶液的pH调至7，减压下蒸发溶剂。粗产物通过闪式色谱纯化。将产物溶解在H2O(300mL)和2N HCl(30mL)中，经AmberlitesXAD-16.00树脂柱、用CH3CN/H2O梯度洗脱脱盐得到预期产物(9.03g；10.25mmol)。收率：41％。K.F.：2.78％元素分析：      C   H   N％计算值：    59.98 8.24 6.36％实测值：    58.11 8.28 6.14
1H-NMR、13C-NMR、IR和MS光谱与所示结构吻合。C)与钠(1∶3)成盐的[3α(S)，5β]-3-[2-[[5-[双[2[双(羧甲基)氨基]-乙基]氨基]-5-羧戊基]氨基]-2-氧代乙氧基]胆烷-24-酸的钆络合物
通过加入1N NaOH直至pH 6.8使产物B)(5g；5.67mmol)溶于H2O(200mL)中。加入Gd2O3(1.03g；2.84mmol)，所得混悬液在50℃下加热8小时。经Millipore装置(HA 0.45μm滤膜)过滤该反应混合物，减压下蒸发滤液，干燥，得到预期产物(5.74g；5.21mmol)。收率：92％.m.p.：＞250℃K.F.：5.81％元素分析：    C  H   N   Gd   Na％计算值：    47.99 6.04 5.09 14.28 6.26％实测值：    45.09 6.15 4.77 13.39 5.81
IR和MS光谱与所示结构吻合。
以相同方式、由实施例15的化合物A)开始制备[3α(S)，5β]-3-[2[[5-[[2-[双(羧甲基)氨基]乙基](羧甲基)氨基]-5-羧戊基]氨基]-2-氧代乙氧基]胆烷-24-酸的钆络合物。
以相同方式、由实施例15的化合物A)和(3β，5β，7α，12α)-3-[(3-羧基-1-氧代丙基)氨基]-7，12-二羟基胆烷-24-酸甲酯(按照WO-A-95/32741：实施例12所述方法制备)开始，制备[3β(S)，5β，7α，12α]-3-[[4-[[5-[[2-[双(羧甲基)-氨基]乙基](羧甲基)氨基]-5-羧戊基]氨基]-1，4-二氧代丁基]氨基]-7，12-二羟基胆烷-24-酸的钆络合物。
实施例18弛豫速率(A1/T1)的测定
通过相对于给药后所逝时间纵向绘制弛豫速率1/T1来评估本发明化合物作为血池剂的有效性。在预定时间采集的血样的质子弛豫速率1/T1是在39℃下、通过Brucker minispec PC120仪、利用″逆向回收″三种参数序列来测定。
将实施例1制备的化合物，与1-脱氧-1-(甲基氨基)-D-山梨糖醇(1∶3)成盐的[3β(S)，5β]-3-[[4-[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]胆烷-24-酸的钆络合物以0.1mmol/kg的剂量对兔子给药。简图(图1)表示弛豫速率的分布图。
专利申请WO 95/32741实施例9中制备的化合物，与1-脱氧-1-(甲基氨基)-D-山梨醇(1∶2)成盐的(3β，5β，7α，12α)-3-[[N-[N-[2-[[2-[双(羧甲基)-氨基]乙基](羧甲基)氨基]乙基]-N-(羧甲基)甘氨酰基]甘氨酰基]氨基]-7，12-二羟基-胆烷-24-酸的钆络合物以0.1mmol/kg的剂量对兔子给药。简图(图2)表示弛豫速率的分布图。
专利申请WO 95/32741的实施例15制备的化合物，与1-脱氧-1-(甲基氨基)-D-山梨醇(1∶3)成盐的[3β(S)，5β，7α，12α]-3-[[4-[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-7，12-二羟基胆烷-24-酸的钆络合物以0.1mmol/kg的剂量对兔子给药。简图(图3)表示弛豫速率的分布图。
实施例4制备的化合物，与1-脱氧-1-(甲基氨基)-D-山梨醇(1∶3)成盐的[[3β(S)，5β，12α]-3-[[4-[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-12-羟基胆烷-24-酸的钆络合物以O.1mmol/kg的剂量对兔子给药。简图(图4)表示弛豫速率的分布图。
实施例19
0.3M的与 1-脱氧-1-(甲基氨基)-D-山梨糖醇(1∶3)成盐的[3β(S)，5β，12α]-3-[[4-[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-12-羟基胆烷-24-酸钆络合物的药物制剂
室温下，在药用不锈钢反应釜中将31.775kg与1-脱氧-1-(甲基氨基)-D-山梨糖醇(1∶3)成盐的[3β(S)，5β，12α]-3-[[4-[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-12-羟基胆烷-24-酸钆络合物(例如实施例4制备)和100g氨丁三醇(trometamol)盐酸盐溶解在100L灭菌水中。溶解后，通过加入1M氨丁三醇将溶液的pH调节至7.4。该溶液经0.22mm直径的滤器过滤灭菌并且分配在20mL的瓶内，瓶子用卤丁基塞封闭，用铝环密封并且在Fo＝18下蒸气灭菌。HPLC显示滴定度为0.294M。
实施例20含有实施例19的制剂的预填充塑料注射器
将实施例19制备的20mL份的溶液置于CZ塑料注射器中，该注射器顶部被盖子密封。减压下插入活塞，将该预填充注射器在高压釜中灭菌达到Fo＝18。

Claims (28)

1.二-三价顺磁性金属离子与式(I)的化合物及其和生理相容性有机碱或无机碱的盐的螯合络合物在制备用于通过核磁共振获得人体或动物体血液系统的成像的诊断制剂中的应用，所述二-三价顺磁性金属离子选自Fe(2+)、Fe(3+)、Cu(2+)、Cr(3+)、Gd(3+)、Eu(3+)、Dy(3+)、Yb(3+)或Mn(2+)，所述生理相容性有机碱选自伯、仲、叔胺类化合物和碱性氨基酸类化合物，所述无机碱的阳离子为钠、钾、镁、钙或其混合物：
X-L-Y(I)
其中：
X是聚氨基聚羧酸配体或其衍生物的基团，选自组成如下的基团：
乙二胺四乙酸(EDTA)、二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)、1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四乙酸(DOTA)、1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7-三乙酸(DO3A)、[10-(2-羟丙基)-1，4，7，10-四氮杂-环十二烷-1，4，7-三乙酸(HPDO3A)、4-羧基-5，8，11-三(羧甲基)-1-苯基-2-氧杂-5，8，11-三氮杂十三烷-13-酸(BOPTA)；
Y是选自胆酸、鹅去氧胆酸、脱氧胆酸、熊去氧胆酸、石胆酸基团的胆酸1类衍生物，
且它们都在具有羟基的位置官能化为反应基团，并具有独立于终产物的立体化学，
所述衍生物也包括24位酸基与牛磺酸和甘氨酸的轭合物；
L是与X的任何位置以及Y的C-3、C-7、C-12位相连的链，X选择性地含有一个由此转化为酰氨基的羧基，并且具有下式(II)：
Figure A9981579200031
其中m是1-10的整数，其中对于大于1的值，A可以具有不同的含义，A具有下式(III)，
n和q可以是O或1，但是它们不能同时为0，
p可以介于0至10，
Z是氧原子或-NR基，
其中
R为氢原子，或取代或被-COOH基取代的(C1-C5)烷基。
2.如权利要求1所述的化合物的应用，其中所述络合物与钆或锰离子形成。
3.如权利要求1所述式(I)化合物的应用，其中间隔链L具有式(IIIa)和(IIIb)，
Figure A9981579200041
4.按照权利要求1-3的式(I)化合物的应用，其中Z是氧原子和L通过存在于3、7、12位的羟基形成，与终产物的立体化学无关。
5.如权利要求3所述的式(I)化合物的应用，其中基团X选自：EDTA、DTPA、DOTA、DO3A、BOPTA；L选自(IIIa)、(IIIb)组成的基团；和Y是选自胆酸、脱氧胆酸、鹅去氧胆酸、石胆酸类化合物的基团，Y是这些基团本身或其中一个或多个羟基已经转化为酮基，Y通过3位氨基与L相连，24位酸基为其本身或是牛磺酸或甘氨酸衍生物；所述化合物的络合物是与钆或锰离子形成，适合中和的有机碱阳离子选自乙醇胺、二乙醇胺、吗啉、葡糖胺、N-甲基葡糖胺、N，N-二甲基葡糖胺，或所述无机碱的阳离子选自钠、钾、镁、钙或其混合物。
6.如权利要求5中所述通式(IV)的化合物的应用，其中在式(I)中基团X是取代在中间链上的DTPA，和其中R是氢原子或-COOH。
Y选自胆酸、脱氧胆酸、鹅去氧胆酸、石胆酸基团且L具有式(III)的结构。
7.如权利要求6所述的通式(IVa)化合物的应用，其中R1是-COOH
Figure A9981579200051
和Y具有定义通式(IV)的化合物的含义，和L具有结构(IIIa)和(IIIb)。
8.如权利要求7所述的通式(IVa)化合物的应用，所述化合物选自：
[3β(S)，5β]-3-[[4-[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代-丁基](羧甲基)-氨基]-胆烷-24-酸；
[3β(S)，5β]-3-[[4-[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]胆烷-24-酸；
[3β(S)，5β]-3-[[4-[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-12-氧代胆烷-24-酸；
[3β(S)，5β，5α]-3-[[4-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-7-羟基胆烷-24-酸；
N2-双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]-N-[(3β，5β)-24-氧代-24-[(2-磺乙基)氨基]胆烷-3-基]-L-谷氨酰胺；
N2-双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]-N-[(3β，5β，7α，12α)-7，12-二羟基-24-氧代-24-[(2-磺乙基)氨基]-胆烷-3-基]-L-谷氨酰胺；
[3β(S)，5β，7β)-3-[[4-[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-7-羟基胆烷-24-酸；
[3β(R)，5β，12α]-3-[[4-[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-12-羟基胆烷-24-酸；
[3β(RS)，5β，12α]-3-[[4-[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-12-羟基胆烷-24-酸；
[3β(RS)，5β，7α，12α]-3-[[4-[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-]-氧代丁基]氨基]-7，12二羟基胆烷-24-酸；
[3β(RS)，5β，7α，12α]-3-[[4-[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-7，12-二羟基胆烷-24-酸；
[3β(RS)，5β，7α，12α]-3-[[4-[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-7，12-二羟基胆烷-24-酸；
[3α(S)，5β，7α，12α]-3-[[[[5-[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-5-羧戊基]氨基]羰基]氧基]-7，12-二羟基胆烷-24-酸；
[3α(S)，5β]-3-[2-[[5-[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-5-羧戊基]氨基]-2-氧代乙氧基]胆烷-24-酸；
[3β(S)，5β，7α，12α]-3-[[4-[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-7，12-二羟基胆烷-24-酸；
[3β(S)，5β，7α，12α]-3-[[4-[[5-[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-5-羧戊基]氨基]-1，4-二氧代丁基]氨基]-7，12-二羟基胆烷-24-酸。
9.如权利要求6所述的通式(IVb)化合物的应用，
其中Y具有上述定义通式(IV)的化合物的含义和L具有结构(IIIa)。
10.如权利要求9的通式(IVb)化合物的应用，该化合物选自：
(3β，5β，7α，12α)-3-[[[双[2[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]乙酰基]氨基]-7，12-二羟基胆烷-24-酸；
(3β，5β)-3-[[[[[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]胆烷-24-酸；
(3β，5β，7α，12α)-3-[[[[[双[2-[双(羧甲基)氨基]-乙基]氨基]-乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]-7，12-二羟基胆烷-24-酸；
(3β，5β，7α，12α)-3-[16-[[[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-乙酰基]氨基]-1-氧代己基]氨基]-7，12-二羟基胆烷-24-酸。
11.如权利要求5所述的通式(V)的化合物的应用，其中在通式(I)中基团X是DTPA，Y具有上述定义通式(IV)的化合物的含义和L具有式(IIIa)的结构，
12.如权利要求11所述的通式(V)化合物的应用，选自：
(3β，5β，7α，12α)-3-[[N-[N-[2-[[2-[双(羧甲基)氨基]乙基](羧甲基)氨基]乙基]-N-(羧甲基)甘氨酰基]甘氨酰基]氨基]-7，12-二羟基胆烷-24-酸；
18-[[(3β，5β，7α，12α)-23-羧基-7，12-羟基-24-降胆烷-3-基]氨基]-3，6，9-三(羧甲基)-11，18-二氧代-3，6，9，12-四氮杂十八烷酸。
13.如权利要求5所述的通式(VI)化合物的应用，其中在通式中基团X为DO3A，Y具有上述定义通式(IV)的化合物的含义和L选自结构(IIIa)和(IIIb)，
Figure A9981579200072
14.如权利要求11所述的10-[3-[[(3α，5β，7α，12α)-23-羧基-7，12二羟基-24-降胆烷-3-基]氧基]-2-羟丙基]-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7-三乙酸的应用。
15.如权利要求5所述的通式(VII)化合物的应用，其中通式(I)中基团X是EDTA，
Y具有上述定义通式(IV)化合物的含义和L具有式(III)的结构。
16.如权利要求11所述的通式(VII)化合物的应用，所述化合物选自：
[3α(S)，5β，12α]-3-[[[[5-[[2-[双(羧甲基)氨基]-乙基](羧甲基)氨基]-5-羧戊基]氨基]羰基]氧基]-12-羟基胆烷-24-酸；
[3β(S)，5β，7α，12α]-3-[[4-[[5-[[2-[双(羧甲基)氨基]乙基](羧甲基)氨基]-5-羧基-戊基]氨基]-1，4-二氧代丁基]氨基]-7，12-二羟基胆烷-24-酸；
[3β(S)，5β]-3-[2-[[5-[[2-[双(羧甲基)氨基]乙基](羧甲基)氨基]-5-羧戊基]氨基]-2-氧代乙氧基]胆烷-24-酸；
[3β(S)，5β，12α]-3-[[4-[[2-[[双(羧甲基)氨基]乙基](羧甲基)氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-12-羟基胆烷-24-酸；
[3β(S)，5β]-3-[[4-[[2-[[双(羧甲基)氨基]乙基](羧甲基)氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-12-氧代胆烷-24-酸。
17.按照权利要求1-16的化合物的应用，其中所述螯合络合物盐是与钠和N-甲基葡糖胺形成。
18.通式(IVa)的化合物：
Figure A9981579200082
其中
Y是选自胆酸、脱氧胆酸、鹅去氧胆酸、石胆酸的基团，其是这些基团本身或其中一个或多个羟基已经转化为酮基，Y通过3位氨基与L相连，且24位酸基以其本身或作为牛磺酸或甘氨酸衍生物存在；所述化合物的络合物是与钆或锰离子形成，适于中和的碱的阳离子选自乙醇胺、二乙醇胺、吗啉、葡糖胺、N-甲基葡糖胺、N，N-二甲基葡糖胺或无机碱阳离子选自为钠、钾、镁和钙，L具有式(IIIa)和(IIIb)的结构，  
Figure A9981579200092
其中m是1至10的整数，但不包括[3β(S)，5β，7α，12α]-3-[[4-[双[2[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-7，12-二羟基胆烷-24-酸和[3β(S)，5β，7α，12α]-3-[[4-[[5-[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-5-羧戊基]氨基]-1，4-二氧代丁基]氨基]-7，12-二羟基胆烷-24-酸。
19.权利要求18的化合物，选自：
[3β(S)，5β]-3-[[4-[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代-丁基](羧甲基)-氨基]胆烷-24-酸；
[3β(S)，5β]-3-[[4-[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]胆烷-24-酸；
[3β(S)，5β]-3-[[4-[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-12-氧代胆烷-24-酸；
[3β(S)，5β，7α]-3-[[4-[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-7-羟基胆烷-24-酸；
N2-双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]-N-[(3β，5β)-24-氧代-24-[(2-磺乙基)氨基]胆烷-3-基]-L-谷氨酰胺；
N2-双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]-N-[(3β，5β，7α，12α)-7，12-二羟基-24-氧代-24-[(2-磺乙基)氨基]胆烷-3-基]-L-谷氨酰胺；
[3β(S)，5β，7β]-3-[[4-[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-7-羟基胆烷-24-酸；
[3β(R)，5β，12α]-3-[[4-[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-12-羟基胆烷-24-酸；
[3β(RS)，5β，12α]-3-[[4-[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-12-羟基胆烷-24-酸；
[3β(RS)，5β，7α，12α]-3-[[4-[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-7，12-二羟基胆烷-24-酸；
[3β(RS)，5β，7α，12α]-3-[[4-[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-7，12-二羟基胆烷-24-酸；
[3β(RS)，5β，7α，12α]-3-[[4-[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-7，12-二羟基胆烷-24-酸；
[3α(S)，5β，7α，12α]-3-[[[[5-[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-5-羧戊基]氨基]羰基]氧基]-7，12-二羟基胆烷-24-酸
[3α(S)，5β]-3-[2-[[5-[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-5-羧戊基]氨基]-2-氧代乙氧基]胆烷-24-酸；
20.通式(IVb)的化合物
其中：
Y如权利要求18定义和L具有如权利要求18定义的结构(IIIa)，但除了(3β，5β，7α，12α)-3-[[[[[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]-7，12-二羟基-胆烷-24-酸；和(3β，5β，7α，12α)-3-[[6-[[[双[2[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-乙酰基]氨基]-1-氧代己基]氨基]-7，12-二羟基胆烷-24-酸以外。
21.如权利要求20所述的化合物，选自：
(3β，5β，7α，12α)-3-[[[双[2-[双(羧甲基)氨基]-乙基]氨基]乙酰基]氨基]-7，12-二羟基胆烷-24-酸；
(3β，5β)-3-[[[[[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]胆烷-24-酸。
22.通式(VII)的化合物
其中Y如权利要求18所述定义和L具有权利要求1定义的结构(III)。
23.如权利要求22所述的化合物，选自：
[3α(S)，5β，12α]-3-[[[[5-[[2-[双(羧甲基)氨基]乙基](羧甲基)氨基]-5-羧戊基]氨基]羰基]氧基]-12-羟基胆烷-24-酸；
[3β(S)，5β，7α，12α]-3-[[4-[[5-[[2-[双(羧甲基)氨基]乙基](羧甲基)氨基]-5-羧戊基]氨基]-1，4-二氧代丁基]氨基]-7，12-二羟基胆烷-24-酸；
[3β(S)，5β]-3-[2-[[5-[[2-[双(羧甲基)氨基]乙基](羧甲基)氨基]-5-羧戊基]氨基]-2-氧代乙氧基]胆烷-24-酸；
[3β(S)，5β，12α]-3-[[4-[[2-[[双(羧甲基)氨基]乙基](羧甲基)氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]12-羟基胆烷-24-酸；
[3β(S)，5β]-3-[[4-[[2-[[双(羧甲基)氨基]乙基](羧甲基)氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-12-氧代胆烷-24-酸。
24.造影诊断药物组合物，含有至少一种权利要求17-23所述螯合络合物或其如权利要求1-4所述的盐。
25.如权利要求24所述的药物组合物，含有附加的摩尔数不超过5％的与钙或镁和/或选自氨丁三醇和甘氨酰基甘氨酸的生理可接受缓冲剂成盐的螯合络合物。
26.一谷氨酸γ-酰胺类化合物的制备方法，按照下列合成路线：
其中
R4是氨基保护基；
R5是直链或支链C1-C10烷基或芳基，
R2和R3独立地是氢原子、直链或支链未取代或被芳基取代的C1-C20烷基，或这两个基团形成C3-C10环。
27.如权利要求26的方法，用于制备如权利要求1所述的式(I)化合物，谷氨酸γ-酰胺类化合物具有基团Y的3-氨基衍生物。
28.如权利要求27所述的方法，用于制备化合物：
[3β(S)，5β，7α，12α]-3-[[4-[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-12-羟基胆烷-24-酸和[3β(S)，5β，7α，12α]-3-[[4-[双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-7，12-二羟基胆烷-24-酸。
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