JP4477813B2 - ポリマーマトリックスおよび医薬組成物中でのそれらの使用 - Google Patents
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明はポリマーマトリックス含有医薬組成物、特にＩＬ−１および／またはＴＮＦα介在疾患、例えば慢性炎症性疾患の処置に使用するＩＬ−６を含有するものに関する。本発明の特定のポリマー、特に本明細書に記載のポリ(エチレンカーボネート)ポリマーは、しかしながら医薬活性化合物含有組成物の持続放出組成物におけるマトリックス材料として一層有用であり、特にインビボ非加水分解表面浸食を受ける新規な、予期されないそして非常に望ましい特性を有することが示される。従って、他の医薬を含むマトリックスは、ポリマー製造法およびそれらを含む医薬組成物と共にまた例示され提供される。更に、ＩＬ−１および／またはＴＮＦα介在疾患の処置のためのＩＬ−６の使用は新規および予期されないもの(多くのこのような疾患は、前はＩＬ−６により悪化すると信じられていた)であり、従って本発明は更にＩＬ−６の、例えば慢性病原体誘発炎症性疾患、脱髄疾患ならびに細菌性ショックのような急性および超急性の炎症性疾患の処置への新規な使用を提供する。
【０００２】
【従来の技術および発明が解決しようとする課題】
Ｉ．ＩＬ−１および／またはＴＮＦαにより介在される疾患の処置
多くの自然発生、慢性炎症性疾患の(恐らく自己免疫)病因は未知であり、ＩＬ−１および／またはＴＮＦαが介在していると信じられている。例えば、多発性硬化症(ＭＳ)ならびに脳内および脊索内の脱髄疾患の拡散斑点を特徴とする大きな損害を与える神経疾患は、長年研究機関の注意を引いている。多発性硬化症の正確な病因は充分理解されていないが、例えば、この疾患の患者におけるあるＨＬＡ抗原の増加事象により示唆されるように、強い自己免疫要素を有すると信じられている。ＡＣＴＨ(向副腎皮質性ホルモン)またはコルチコステロイド、例えばプレドニゾロンのような現在入手可能な抗炎症剤は、特に初期に投与した場合、急性攻撃からの回復を早めるように思えるが、この疾患の基となる病因には影響を与えない。コルチコステロイドまたは免疫抑制剤の長期投与は、深刻な副作用の危険を伴う。ＩＦＮ−β１の組換え形は、短期間プラーク(plaque)形成を減少することが最近示されたが、この疾患の長期進行の影響は示されていない。治療効果の評価は、疾患の自然進行が、自然に回復し、慢性的に再発するものであるという事実から複雑である。簡単には、長年の徹底的な研究にも拘わらず、この非常に重い疾患の一般的に許容できる具体的な処置法は今までのところない。
【０００３】
他の慢性炎症性疾患は、例えば病原体のような外的要因により誘発されると信じられている。例えば、ライム病は、だに伝播ボレリア・ブルグドルフェリ(Borrelia burgdorferi)の感染により開始する重い慢性疾病である。皮膚障害およびインフルエンザ様症状を特徴とする最初の急性相に続き、この疾患は関節炎および慢性神経異常により特徴付得る慢性相へ進行する。この疾患は、通常抗生物質および非ステロイド系抗炎症剤で処置するが、特に慢性になった疾患に対する最適な治療はまだ確立されていない。
【０００４】
急性または超急性、非制御炎症性疾患は、また外的因子、例えば重い熱傷または重い感染により引き起こされ得る。例えば、細菌性ショックおよび特に成人呼吸窮迫症候群(ＡＲＤＳ)は有効な処置が現在存在しない生命を脅かす疾患である。発病は急速であり、死亡率は通常５０％を越える。細菌性ショックは通常重い細菌感染によりもたらされ、典型的には熱およびしばしばそれに続く後段階の低体温、血圧変動(ハイパーダイナミック症候群)、続く後段階の低血圧、代謝性アシドーシス、精神機能障害および広範囲な器官機能障害、最後に、多くの場合、死亡してしまうことにより特徴付られる。最も一般的に、細菌性ショックは、グラム陰性細菌感染(エンドトキシンショック)に起因し得るが、グラム陽性細菌感染または他の感染にもまた起因し得る。本明細書で使用の「細菌性ショック」の語は、従って微生物感染、具体的に細菌感染、最も具体的にはグラム陰性細菌感染に起因する、ＡＲＤＳを含むショック状態を広く意味すると解釈すべきである。
【０００５】
ＩＬ−６は既知のサイトカインである。それは種々の疾患、例えば血小板減少症およびある癌の処置に有用であることが知られている。それは通常細菌感染に応答して体内で産生され、炎症、熱および細菌性ショックの伝播と関係がある。それは有効な免疫刺激剤であり、実際ある文献では、ＩＬ−６動因機構は、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症および関節リューマチならびに細菌性ショックを含むある自己免疫または炎症性疾患の原因となること示唆している。
【０００６】
従って、ＩＬ−６が(糸球体腎炎を除く)慢性炎症性疾患、例えば多発性硬化症の処置、および急性および超急性炎症性疾患、例えば細菌性ショックの処置に有用であるというのは非常に驚くべき発見である。この作用機構は不明であるが、具体的な理論に縛られることなく、我々は、フィードバック機構を通じて、恐らく可溶性ＴＮＦα受容体および／またはＩＬ−１受容体アンタゴニストの遊離の上向調節によりＩＬ−６は他のサイトカイン、特にＴＮＦαおよび／またはＩＬ−１の発現、遊離または機能を抑制または阻害でき、それによりこれらのサイトカインにより主に介在される活性およびその結果の自己免疫、炎症またはショック疾患を抑制すると信じている。しかしながら、ＩＬ−６介在補体−活性化抗原−抗体(ＩgＧ)複合体により特徴付けられる疾患、特に糸球体腎炎(通常腎臓でのこのような複合体の凝集が原因である)の場合、ＩＬ−６は疾患の悪化を示す。従って、我々は、ＩＬ−６は主にＩＬ−１および／またはＴＮＦαに起因すると信じられているＭＳおよびライム関節炎の動物モデルで病気に効くが、ＩＬ−６に直接起因すると信じられているループスマウスにおける糸球体腎炎を悪化させることを示している。我々は、ＩＬ−６が、主にＩＬ−１および／またはＴＮＦαに起因すると同様に仮定されているエンドトキシンショックのマウスモデルにまた効くことを示している。
【０００７】
従って、ＩＬ−６は、ＴＮＦαおよび／またはＩＬ−１の発現、遊離または機能の抑制または阻害、特に糸球体腎炎以外の炎症性疾患の処置および細菌性ショックの処置用薬剤として有用であると考えられる。ＩＬ−６を使用して処置される炎症性疾患は、例えば関節炎疾患、具体的には病原体誘発関節炎、例えばライム病関節炎、細菌誘発関節炎およびポリオ関節炎(polioarthritis)；多発性硬化症および他の脱髄疾患(即ち、多発性硬化症、急性播種性脳脊髄炎または感染後脳炎、視神経脊髄炎、耳鳴、汎発性脳硬化症、シルダー病、アドレノロイコジストロフィー、第三期ライム病、熱帯痙攣性パラポエシス(tropical spastic parapoesis)および脱髄、特に自己免疫介在脱髄が主な症状である他の疾患を含む神経、脳および／または脊髄の脱髄を特徴とする疾患)；熱傷、細菌性ショック、髄膜炎および肺炎のような急性重症炎症性疾患；ならびに多軟髄炎、スクレロドーマ(sclerodoma)、ウェゲナー肉芽腫症、皮膚筋炎、慢性活動性肝炎、重症筋無力症、乾癬、乾癬性関節炎、スチーブンス−ジョンソン症候群、特発性スプルー、自己免疫炎症性腸疾患(例えば潰瘍性大腸炎およびクローン病を含む)、内分泌眼病、甲状腺機能亢進症、サルコイドーシス、原発性胆汁性肝硬変、若年性糖尿病(Ｉ型糖尿病)、(前方または後方)ぶどう膜炎、乾性角結膜炎および春季角結膜炎および間質性肺線維組織増殖を含む自己免疫疾患を含む。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
従って、本発明は：
ｉ）ＴＮＦαおよび／またはＩＬ−１の発現、遊離または機能阻害；
糸球体腎炎以外の炎症性疾患の処置または予防；
ＩＬ−１および／またはＴＮＦα介在疾患の処置または予防；
上記の疾患の処置または予防；
脱髄疾患、例えば多発性硬化症の処置または予防；
外的誘発炎症性疾患の処置または予防；
重症急性感染、例えば細菌性ショック、髄膜炎または肺炎に対する免疫応答の処置または予防；
熱傷の処置；
慢性病原体誘発炎症性疾患、例えばライム病の処置または予防；
方法であり、
(例えば、特にＩＬ−６が単独治療または予防剤として投与される場合、または所望により抗生物質または血管活性剤と共に、例えば所望によりＴＮＦαアゴニストまたはアンタゴニスト、または抗−ＴＮＦα抗体と共にではなく投与される場合)治療的または予防的有効量のＩＬ−６、例えばＴＮＦαおよび／またはＩＬ−１阻害量のＩＬ−６、例えばrhＩＬ−６；所望により、ポリマーマトリックス、例えば本明細書で更に記載するようなポリ(エチレンカーボネート)マトリックスと関連して持続放出またはデポ形で、このような処置または予防が必要な患者、例えば、哺乳類、例えばヒトに投与することを含む方法；
【０００９】
ii）例えば、上記(ｉ)に列記した疾病の処置または予防のための(ｉ)の方法で使用するための医薬の製造におけるＩＬ−６、例えばrhＩＬ−６の使用(ここで、医薬は所望により持続放出形、例えば所望によりポリマーマトリックス、例えば本明細書で更に記載するポリ(エチレンカーボネート)マトリックスを更に含む)；
iii)上記(ｉ)に列記した疾病の処置または予防のためのＩＬ−６、例えばrhＩＬ−６の使用；および
【００１０】
iv）所望により持続放出形であり、所望によりポリマーマトリックス、例えば本明細書で更に記載するようなポリ(エチレンカーボネート)マトリックスを更に含む、(ｉ)の方法で使用するための、例えば上記(ｉ)に列記した疾病の処置または予防のためのＩＬ−６、例えばrhＩＬ−６を含む医薬組成物；例えば、ＩＬ−６をポリマーマトリックス中に含む、例えば微小粒子またはデポの形の、例えばポリマーがインビボ非加水分解表面浸食を示す、特に本明細書に記載の任意の薬物送達系の、上記疾病の処置に使用される、例えば慢性炎症性疾患の処置に使用される持続放出組成物(即ち数日、数週または数カ月にわたりインビボ生体内分解される組成物)：
を提供する。
【００１１】
ＩＬ−６は既知のインターロイキン−６(インターフェロンベーター−２(ＩＦＮ−βＩＩ)、Ｂ−細胞刺激因子２(ＢＳＦ−２)、インターロイキンＨＰ−１(ＨＲ１)、肝細胞刺激因子(ＨＳＦ)、ハイブリドーマ骨髄腫成長因子(hybridoma plasmacytoma growth factor)(ＨＰＧＦ)および２６kＤ因子としてもまた既知)に対応する任意の化合物を意味する。例えば、ＩＬ−６分泌癌細胞系により産生されるような非組換えＩＬ−６も使用できるが、組換えＩＬ−６が好ましい。ＩＬ−６は商業的に入手可能であるか、または、例えば、その出願の内容を引用して本明細書に包含するＥＰＡ０２２０５７４、ＥＰＡ０２５７４０６、ＥＰＡ０３２６１２０、ＷＯ８８／００２０６、ＧＢ２０６３８８２またはＧＢ２２１７３２７に記載のような既知の方法で産生し得る。ＩＬ−６は、例えば真核細胞、例えばＣＨＯ細胞で産生されるようにグリコシル化され、または例えば原核細胞、例えば大腸菌で産生されるようにグリコシル化されていないものであり得る。ＩＬ−６は種交差活性であることが知られているため、ヒトでない種由来のＩＬ−６もまた使用でき、本明細書のＩＬ−６の意味の中に含まれるが、組換えヒトＩＬ−６(rhＩＬ−６)が好ましい。ＩＬ−６の配列に僅かな変化、例えば１、２、３またはそれ以上のアミノ酸の付加、欠失または変異を有するタンパク質、ＩＬ−６および他のタンパク質を含む融合タンパク質；ＩＬ−６の活性フラグメント；および／またはＩＬ−６活性を有するＩＬ−６の変形、切断または変異体が本発明のＩＬ−６の中に含まれると見なされる。
【００１２】
ＩＬ−６と薬理学的に許容可能な希釈剤または担体を含む医薬は既知である。ＩＬ−６は、非経口投与、例えば注射可能溶液または懸濁液の形で、例えばRemington's Pharmaceutical Science, 16th ed.(Mack Publishing Company, Easton, PA 1980)の記載の記載にしたがって、または類似して投与し得る。好適な担体は、食塩水、リンガー液、デキストロース溶液およびハンクス溶液のような水溶性担体および不揮発性油およびエチルオレエートのような非水溶性担体を含む。通常の非経口投与のために、ＩＬ−６は単位投与量の凍結乾燥形で入手可能であり、それを担体と混合し、注射のための好適な溶液または懸濁液を形成し得る。
【００１３】
別法として、ＩＬ−６は、例えば、ポリマーと関連して微小粒子またはデポ形で、インプラント可能または持続放出医薬送達形を使用して投与し得、医薬がマリックスからゆっくり放出されるポリマーマトリックスを形成する。これは、例えば処置すべき疾病が慢性である場合、例えば慢性炎症性疾患である場合、および必要な処置が数週間または数カ月にわたる場合、好ましい。ポリマーは、好適な(例えば、薬理学的に許容可能な)繰り返し単位からなる直鎖状、所望により分枝鎖または架橋していてもよい、高分子量分子(ホモポリマー、共ポリマーおよびヘテロポリマーを含む)で、それは、例えば単一分子の重合化または１個以上の分子の共重合(例えば、ポリ(エチレンカーボネート)は、下記のように酸化エチレンおよび二酸化炭素からである)により作られ得、所望により他の単位でポリマー鎖が遮断されていてもよい。好ましくはポリマーは直鎖状であり、炭素、酸素および水素から成る、例えばポリ−ＤＬ−ラクチド−コ−グリコリド、ポリエチレングリコールまたはポリ(エチレンカーボネート)である。好ましくは、ポリマーは非加水分解表面浸食を示す、例えば本明細書で更に記載するポリ(エチレンカーボネート)である。
【００１４】
用量は、用いるＩＬ−６の正確な型、宿主、投与経路および処置すべき疾病の性質および重さに依存して当然変化する。ＩＬ−６は、大型哺乳類、例えばヒトに、皮下注射または持続放出形で投与し、０.５μg／kg／日から３０μg／kg／日、好ましくは２.５μg／kg／日から１０μg／kg／日、もしくは既知のＩＬ−６の治療投与で、インビボで安全で有効な量、例えば血小板増加用量を提供する。重い急性炎症性疾患、例えば細菌性ショックの場合、高投与量i.v.が、急速で強い反応を達成するのに所望であり得る。ＩＬ−６の投与頻度は、持続放出形の場合、所望により毎日から一日おきまたは毎週またはそれ以下に減少し得、これは処置が長期間になる場合好ましい。ＩＬ−６処置は、悪寒、熱およびインフルエンザ様症状をもたらし得るが、通常アスピリン、アセトアミノフェンまたはインドメタシンのような非麻薬性鎮痛剤の共投与により処置または予防できる。他の明白な副作用は、通常、例えば１０μg／kg／日以上の高投与量でのみ見られ、用量を減少することにより緩和できる。
【００１５】
II．持続放出用ポリマーマトリックス
本発明は、例えば上記徴候における、例えばＩＬ−６の投与および他の医薬のための、医薬の持続放出に好適な医薬組成物を更に提供する。医薬組成物は、特にポリ(エチレンカーボネート)ポリマー類(ポリ(エチレンカーボネート)類またはＰＥＣsともまた呼ばれる)を含むものである。
【００１６】
先行文献は、ポリ(エチレンカーボネート)類の医薬送達系への使用の幾つかの例を提供しているが、先行文献は本発明の特定のポリマーを記載しておらず、インビボ非加水分解表面浸食を受けることができるポリマーを記載していない。先行文献は、本明細書に記載の特定の医薬、例えばＩＬ−６の送達のためのこのような医薬送達系をまた記載しておらず、持続放出系がこのような医薬の送達のために望ましいという示唆もしていない。
【００１７】
本発明のポリマーの分解特性は特に驚きである。一般的な化学知識を基に、炭酸エステル結合は原則として開裂されると予期される。しかしながら、ポリカーボネーツは、インビトロの緩和な条件下では安定であることが証明されている。
【００１８】
Chem.Pharm.Bull. 31(4), 1400-1403(1983)に従うと、ポリ(エチレンカーボネート)類はインビボで分解可能であるが、試験されたポリマーは、例えば最新の分光測定法により、明白に同定されていない。１４０２頁によると、インビボ分解は、加水分解酵素の影響としてのみ説明可能であった。
【００１９】
Chem.Pharm.Bull. 32(7), 2795-2802(1984)に従うと、微小粒子はジブカイン含有ポリ(エチレンカーボネート)から製造された。記載は最初に引用した技術に関連しているが、ジブカインの放出はポリマーのインビトロまたはインビボ分解パターンに関連しているように見えず、ポリマーからの分散に関連している。また、試験したポリ(エチレンカーボネート)の物理的および化学的特性は十分に評価されていない。
【００２０】
Makromol.Chem. 183, 2085-2092(1982)、特に２０８６頁に従うと、二酸化炭素エポキシドポリマーは、生体内分解可能と見なされ、予備的結果は、二酸化炭素−エチレンオキシドポリマーの生体内分解、したがって制御医薬放出の使用を確認したと記載している。生体内分解の主張の裏付けとして、人工臓器３(追補)212(1974)を引用した。この刊行物において、ポリ(エチレンカーボネート)は、最も容易に加水分解され、酵素プロナーゼでさえ、容易に分解できる化合物群に属していると記載されていた。これは、プロナーゼが加水分解酵素の混合物から成るため、インビトロおよびインビボ酵素加水分解が可能であることを意味する。しかしながら、このコメントは非常に疑わしいように思える。我々は、５mm直径および２５mg重量の圧縮円盤形の本願発明のポリ(エチレンカーボネート)類を、リン酸緩衝化食塩水(ＰＢＳ)、ｐＨ７.４中の１０mg／mlプロナーゼおよび５mＭ ＣａＣｌ２・２Ｈ２Ｏならびにリン酸緩衝化食塩水、ｐＨ７.４中の１０mg／mlプロナーゼＥおよび５mＭ ＣａＣｌ２・２Ｈ２Ｏ、３７℃に付し、分解は観察されなかった(図１)。プロナーゼ溶液は毎日変えた。
【００２１】
加水分解により分解されない(例えば、加水分解酵素、例えばプロナーゼの存在下または塩基性条件下)、特定のエチレンカーボネート含量、粘度およびガラス転移(glass transition)温度範囲のポリ(エチレンカーボネート)類を選択したにもかかわらず、インビトロおよびインビボで分解（または崩壊；degradable）される、即ち、排他的に表面浸食されることは驚くべき発見である。本明細書で使用する「表面浸食」の語は、特にポリ無水物およびポリオルトエステルの加水分解に関して使用されているが、まだ明白に定義はされていない。
【００２２】
ポリマー粒子の表面でのマス分解が単に起こる場合、表面浸食は残ったポリマー残基の分子量の減少なしに起こる。表面浸食が観察されたことを本明細書で断言した場合、質量損失決定と一致した残存質量の分子量決定は起こらず、このように、実際表面浸食は一度も証明されていなかった。
【００２３】
実際、今までのところ試験したポリマーのほとんどで、ポリマーバルク浸食が観察された。ポリマーバルク浸食を示す系は、ポリマーが、放出される生体内媒体の環境下で相対的に不安定な医薬化合物、例えばペプチドを挿入している場合、医薬化合物がバルク部分内で既に媒体と接触し、ポリマーから放出されるかなり前にその活性を失うことが可能であるので、明らかに不利である。ポリマーが表面浸食を受ける場合、即ちバルク浸食が起こらない場合、包含された医薬化合物、例えばペプチドは、表面浸食進行が医薬部分まで到達し、医薬粒子が残存ポリマーマスの表面から放出されるその時まで、生体内媒体の有害な影響から守られたままである。バルク浸食に対して表面浸食を示すポリマーマトリックス医薬送達系の場合、従って医薬粒子はより短い時間の間しか生体内媒体の悪影響を受けないため、ポリマーマトリックスからより長い、より高いそしてより一定の薬理学的活性剤の放出を可能にする。
【００２４】
最近の刊行物Proc.Nat.Acad.Sci.USA 90, 552-556(1993)および90, 4176-4180(1993)のポリ無水物について、表面浸食様行動のある特性が記載されている。しかしながら、全バルクが影響を受け、分子量決定は行われてないように思える。更に、この浸食は加水分解型である。下記に定義の選択されたポリ(エチレンカーボネート)類は、インビトロおよびインビボで、排他的に非加水分解表面浸食を示すことが分かった。
【００２５】
本発明は、インビボおよびインビトロで、非加水分解機構で作用する表面浸食により分解可能な、式Ａ
−(−Ｃ(Ｏ)−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−)− Ａ
のエチレンカーボネート単位を有し、７０から１００Ｍol％のエチレンカーボネート含量を有し、クロロホルム中２０℃で測定して固有粘度０.４から４.０dl／ｇを有し、１５から５０℃のガラス転移温度を有するポリマーを提供する。
【００２６】
本発明のポリマーのエチレンカーボネート含量は、７０から１００Ｍol％、特に８０−１００％、好ましくは９０−９９.９％、例えば９４から９９.９％である。このポリマーの固有粘度は、クロロホルム中２０℃で測定して、０.４から４.０dl／ｇである。好ましくは、ポリマーは、２０℃で、クロロホルム中１ｇ／dlの濃度で測定して、０.４から３.０dl／ｇの固有粘度を有する。
【００２７】
そのガラス転移温度は、１５°から５０℃、好ましくは１８°から５０℃である。
文献において、５から１７℃のガラス転移温度を有するポリ(エチレンカーボネート)類が記載されている。
【００２８】
本発明のポリマーは好ましくはエチレンオキシドおよび二酸化炭素の共重合により作られ、その製造工程はまた本発明の一部である。この製造法の結果として、ポリマーは、ほとんどの場合式Ｂ
−(−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−)− Ｂ
のエチレンオキシドを共単位として含有する。
【００２９】
本発明のポリマーが水性媒体、例えばｐＨ７.４のリン酸緩衝化食塩水にさらされた場合、特に、例えば、図２に見られるように、媒体はそのバルク部分には輸送されない。従って、バルク浸食は起こらず、残ったマスは、図３の右欄に見られるように、少なくとも２８日間一定(１００％)を保持する。
【００３０】
ポリ−ＤＬ−ラクチド−コ−グリコリドは、現在、持続医薬放出系において最も普通に使用されているマトリックス材料である。しかしながら、このようなポリマーは、本発明のポリマーと異なり、加水分解により分解する。例えば、最も精巧なポリ−ＤＬ−ラクチド−コ−グリコリド型、即ちグルコース開始ポリＤＬ−ラクチド−コ−グリコリド(ＤＬ−ＰＬＧＧＬＵ)の一つについて、図３の左欄に示すようなＰＢＳ中のマス分解は、ＵＫ特許ＧＢ２１４５４２２に記載されている。
【００３１】
本発明のポリ(エチレンカーボネート)類と当分野のポリ−ＤＬ−ラクチド−コ−グリコリド(ＤＬ−ＰＬＧ)のインビボ分解行動における差異を図３にまた示す。ポリラクチド−コ−グリコリドは、ＤＬ−ＰＬＧＧＬＵの残余マスの分子量減少から見られるように、バルク浸食が起きるが、ポリ(エチレンカーボネート)類の残余マスの質量は一定(１００％)のままである。
【００３２】
両方の場合、インビボ全インプラントの残余マスは１カ月以内に０まで減少し、これはポリ(エチレンカーボネート)がバルク浸食よりむしろ表面浸食を受けていることを意味する。バルク浸食が存在しない結果、導入ポリマーは保存の間、即ち投与前、湿気に影響されず、産生された時と同じ乾燥状態のままである。包含医薬は、湿気に感受性であれ、安定なままである。
【００３３】
本発明は、エチレンオキシドおよびＣＯ２がモル比１：４から１：５で、触媒の影響下重合されるポリマーの製造法をまた提供する。この反応の範囲から、二つのエポキシド分子がＣＯ２分子の妨害ないし互いに反応しても、即ち、オキシアニオン中間体が、ＣＯ２によるカルボキシル化前に他のエチレンオキシド分子を攻撃しても、ポリマー鎖内へのエチレンオキシドの挿入が可能であることは明らかである。従って、ポリマーが数個のエチレンオキシド単位を含むことは予想される。本発明のポリマーは、エチレンオキシド単位を含んでいても、合計式
Ａｍ−Ｂｎ＝
−(Ｃ(Ｏ)−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−)−ｍ−(−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−)−ｎ
【数１】
に従ったエチレンカーボネートおよびエチレンオキシドの無作為分散を有する。
【００３４】
しかしながら、本発明のエチレンオキシド単位のほとんどが、特に、エチレンオキシド単位のモル比が小さい場合、統計的に隣接したエチレンカーボネート単位を有している。これは、これらの場合、得られるエーテル官能基のほとんどが、ポリマー鎖に沿って炭酸官能基の間に不作為に分散していることを意味する。本発明の生産物のＣＤＣｌ３中の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルはこの仮説を確認する。δ＝約４.３７ppm(積分Ｉa)のエチレンカーボネート単位(２つの炭酸官能基の間のエチレン単位)、一つの炭酸および一つのエーテル官能基の間の約４.２９および３.７３ppm(積分ＩbおよびＩc)、および２つのエーテル官能基の間のエチレン単位の約３.６５ppm(積分Ｉｄ)の信号を示す。エチレンカーボネート単位(Ａ)の比を、次いでＮＭＲ正確限界内で、式：
【数２】
に従って計算する。
【００３５】
ポリ(エチレンカーボネート)類の構造特性として、文献中には、しばしば、そのエチレンカーボネート含量の変わりに、そのエーテル官能基が示されている。本発明のポリマー中のエーテル官能機(Ｅ)の比は、式
【数３】
に従って計算し得る。
【００３６】
ＰＣＴ特許出願ＷＯ９２／２２６００により、エチレンオキシド単位およびエチレンカーボネート単位を、ポリマーが少なくとも５０Ｍol％のエチレンオキシドおよび５０Ｍol％より少ないエチレンカーボネート単位を含むことを意味する、２から４００：２のモル比で含むポリ(エチレンカーボネート)類が製造される。その出願は、ポリマーの生体内分解および薬理学的活性化合物の持続放出のための生体浸食可能マトリックスとしての使用を記載している。しかしながら、ポリマーが実際生体内分解可能であるというデータは示されていない。一般に、このように多量のエーテル官能基を有するポリ(エチレンカーボネート)類はほとんど生体内分解可能ではない。その出願は、ポリマーの表面浸食の官能性に関するいかなる暗示もしていない。
【００３７】
ＵＳ特許３２４８４１５の実施例において、低分子量のMw＝７００−５０００のポリ(エチレンカーボネート)類は、少なくとも７０Ｍol％のエチレンカーボネート単位を含むと記載され、本発明のポリマーと異なり、その生体内分解能について記載がない。
【００３８】
ＰＣＴ出願ＷＯ８９／０５６６４によると、記載の式IIにおいてエチレンオキシドおよびエチレンカーボネート単位を、ポリマーが少なくとも５０Ｍol％のエチレンオキシドを含み、従って最大５０Ｍol％のエチレンカーボネート単位を含むことを意味する１から８：１のモル比で含むポリ(エチレンカーボネート)類が記載されており、本発明のポリマーと異なる。ポリマーは、医薬化合物を含み得る生体内分解可能デバイス、例えばインプラントとしての使用に関して記載されているが、表面浸食に関しての情報は提供されていない。
【００３９】
本発明の工程において、ポリマーの生体内分解速度の遅延または阻害をするエチレンオキシド単位の含量および従ってエーテル官能基の含量は、反応要素の記載されたモル比、反応温度のような反応条件の特定により、および、更に、例えばＺn(Ｃ２Ｈ５)２および水またはアセトンまたはジ−またはトリフェノール、例えばフロログルシンから、それぞれ０.９：１から１：０.９または２：１から１：２のモル比で製造された、または好ましくはＺn(Ｃ２Ｈ５)２およびジオール、特にエチレングリコールから、０.９：１から１：０.９のモル比で製造されたような好適な触媒の選択によりかなり減少できる。
【００４０】
本工程は、好ましくは有機溶媒の媒体または分散剤系、例えばジオキサンおよびＣＯ２内で行う。ＣＯ２は好ましくは液体形で適用し、過剰に存在する。圧力は、好ましくは２０から７０バール、温度は好ましくは１０から８０℃、特に２０から７０℃である。
【００４１】
このようにして得た本発明のポリマーは、通常１５％以下、好ましくは１０％以下、特に５％以下、例えば３％以下のエーテル官能基を含む。エチレングリコールまたはアセトンおよびジエチル亜鉛の触媒を使用して製造した場合、本発明のポリ(エチレンカーボネート)類は、通常５以下、例えば２.５以下の低い多分散性(Ｍw／Ｍn)を示す。
【００４２】
本発明の工程において、触媒またはその一部は、(コ)ポリマーの鎖イニシエーターと見なされている。反応が終わり、鎖が完結した場合、その最終基は水酸基である。鎖が出発した所である、鎖の反対側は、触媒グループまたはそのフラグメントで満たされ得る。もし触媒がエチレングリコールおよびジエチル亜鉛または水およびジエチル亜鉛から作られた場合、ポリマー鎖の両方の末端は同じであると考えられる。しかしながら、触媒がジ−またはトリフェノールおよびジエチル亜鉛から作られた場合、芳香基が、鎖が開始した鎖の末端に挿入され、一方、鎖の他端は、水酸基である、図４から、一つの末端基が、例えばフロログルシンのような芳香イニシエーターで遮断されている場合、遅い生体内分解であることが見られる。この理由から、ポリマー鎖分解は、末端水酸基から開始すると思われる。あるいは、末端水酸基の、末端水酸基を遮断し、本発明のポリ(エチレンカーボネート)類の生体内分解を制御するための、後の誘導体化、例えばエステル化が考えられる。好適な末端エステル基は、(Ｃ１−４８)脂肪酸エステル基、好ましくは(Ｃ１−３０)、特に(Ｃ１−１８)脂肪酸エステル基、例えば酢酸およびステアリン酸のエステル基、または炭酸エステル基、例えばエチレンカーボネート基、またはパモ酸エステル基または乳酸またはグリコール酸またはポリ乳酸またはポリグリコール酸またはポリラクティック−コ−グリコール酸エステル基の様な生体適合性エステル基である。
【００４３】
本発明のポリ(エチレンカーボネート)類は、熱水(９０−１００℃)中で、考慮に入れるべき分子量の減少なく、数時間安定である。５時間沸騰２回蒸溜水に暴露した後、例えば約１８℃以上、例えば２８℃のガラス転移温度の明白な上昇が観察される。この反応工程を行うことにより、高ポリマー純度が得られる。我々は、この方法で処理したポリマーはまた非常に処理し易いことを発見した。
【００４４】
本発明のポリマーのポリ(エチレンカーボネート)部分は、前記のように、即ち少なくとも１カ月生物学的条件下、加水分解酵素により、またはｐＨ１２および３７℃の水により、加水分解可能ではない(図１および８参照)。しかしながら、本発明のポリマーは、インビボおよびインビトロで、スーパーオキシドラジカルアニオンＯ２ ．−の影響下で表面侵食により分解されることが発見された。スーパーオキシドラジカルアニオンＯ２ ．−は、本発明のポリ(エチレンカーボネート)類の存在下、図５に見られるように、インビボおよびエキソビボ(体外)炎症細胞で産生される。現在持続医薬放出系で最も普通に使用されるマトリックス材料であり、バルク加水分解により分解されるポリラクチド−コ−グリコリドは、スーパーオキシドラジカルアニオンＯ２ ．−の産生を誘発せず、同図にグルコース開始ポリ−ＤＬ−ラクチド−コ−グリコリドについて示し、これはまた図３にも使用された。
【００４５】
カリウムスーパーオキシドをＯ２ ．−源として含むインビトロ、水性系が確立され、本発明のポリ(エチレンカーボネート)類の表面浸食を示す(図８)。Ｏ２ ．−ラジカルはこのｐＨ値で充分安定なため、インビトロでｐＨ１２を選択した。
【００４６】
興味深いことに、ポリ(エチレンカーボネート)と、エチレン単位の水素をメチル基に置換したことが異なるポリ(炭酸プロピレン)は、Chem. Pharm. Bull. 31(4), 1400-1403(1983)の日本人著者により示されるように、全く生体内分解性ではない。
【００４７】
本発明のポリ(エチレンカーボネート)類の微小粒子懸濁液を使用した毒性研究は、４８匹のラットで２１日間、および２４匹のイヌで３５日間行った。各々の種で、１日目および１７日目の２回の投与を行った。１０および４０mgポリマー微小粒子／体重kgの皮下および筋肉内注射の後、全身性毒性の臨床的症状、血液学的パラメーター、臨床的血液化学のパラメーター、体重、食物消費における関連作用は観察されなかった。投与部位での組織病理学的変化を、ラットにおいて投与後４および２１日に、イヌにおいて投与後１８および３５日に試験した。予期された炎症反応以外に、異常な組織病理学的変化は見られなかった。
【００４８】
本発明のポリマーの分解速度は、その分子量、エチレンオキシド含量、末端基、例えば生体適合性エステル基の性質、およびＯ２ ．−ラジカルスカベンジャー、例えばビタミンＣの存在に依存して、広範囲で調節し得、５日から６カ月、またはそれ以上、例えば１年、持続し得る。ラジカルスカベンジャーは、好ましくはポリマー内に添加剤として包含され得る。
【００４９】
本発明の(コ)ポリマーの分子量Ｍwは、塩化メチレンを溶出液とし、ポリスチレンを対照としたゲル透過クロマトグラフィーで測定して８０,０００、好ましくは１００,０００、特に２００,０００から２,０００,０００ダルトンである。
【００５０】
上記のChem.Pharm.Bull.32(7)2795-2802(1984)は、分子量５０,０００から１５０,０００ダルトンを有するポリ(エチレンカーボネート)類を使用した。我々は、ポリマーのインビトロおよびインビボ分解は、分子量が８０,０００以上、好ましくは１００,０００以上の場合のみ、充分な比率で達成され得ることを発見した(図６)；これは、本発明の好ましい態様である。
【００５１】
本発明のポリマーは、医薬組成物中で、特に医薬活性物質の包含のためのマトリックス材料として使用し得る。インビトロおよびインビボ条件下で、バルク浸食は起こらず、活性化合物はポリマーにより保護され、活性化合物は、マトリックスの表面浸食のためにマトリックス表面に出現すると直ぐに(前ではない)放出される。Ｏ２ ．−を含まないインビトロのｐＨ７.４の水性系は、痕跡量の活性化合物が放出される(図９参照)。
【００５２】
表面浸食の更なる利点は、医薬活性化合物分子の大きさが、その放出速度に影響を及ぼさないことである。
【００５３】
従って、本発明は、特に活性化合物放出と非加水分解ポリマーマス分解の１：１の直線関係の非加水分解表面浸食を示し、活性化合物がポリマーマトリックス内で保護されている、ポリマー中の医薬活性化合物の医薬組成物を提供する。
【００５４】
本組成物は、好ましくは微小粒子またはインプラントの形で使用する。
【００５５】
本発明の医薬組成物の製造は、それ自身既知の方法で、好適な噴霧乾燥または乳濁技術により微小粒子を、ポリ(エチレンカーボネート)類が柔らかくなり、従って処理可能になる高温で、両方粒子状で固体状態の医薬化合物およびポリ(エチレンカーボネート)類の混合により、所望により続いて混合物を固体状態まで冷却し、好適な形に修飾することによりインプラントを製造し得る。ポリ(エチレンカーボネート)の溶液に溶解または分散状態の医薬化合物を混合し、溶媒中を蒸発させ、その後、固体残余物を好適なインプラント形に形作ることもまた可能である。
【００５６】
微小粒子含有医薬組成物は、それらを好適なガレヌス賦形剤と共に後処理し、所望によりそれらを好適なディスペンサーにもって行くことにより製造し得る。
【００５７】
医薬特性および製造法に依存し、医薬装薬含量は、広範囲で、０.００１％から約７０重量％、例えば０.００１から２０重量％、好ましくは０.００１から５重量％の範囲で変化できる。高医薬装薬のためのポリマー中への媒体の浸透は、避けるべきであり、装薬含量の上限を制限する。
【００５８】
医薬化合物の投与の医学的実施において、全ての型医薬活性化合物が、本発明のポリ(エチレンカーボネート)と共に使用し得る。微小粒子の場合、好ましくは、少量で医薬活性であり、長期間途切れることない血中濃度が必要である、例えばホルモン、ペプチドまたはタンパク質、例えばソマトスタチン、インターフェロンまたはインターロイキンのような型であるが、特に不安定であり、胃腸で経口使用後において吸収されず(desintegrate)、従って非経口投与が好ましい医薬の使用が好ましい。
【００５９】
本発明のデポ製剤は、広範囲な活性剤、例えば避妊薬、鎮静剤、ステロイド、スルホンアミド、ワクチン、ビタミン、抗偏頭痛薬、酵素、気管支拡張剤、心臓血管薬、鎮痛剤、抗生物質、抗原、抗痙攣剤、抗炎症剤、抗パーキンソン剤、プロラクチン分泌阻害剤、抗喘息薬、老人病薬および抗マラリア剤のような医薬活性物質の投薬用に使用し得る。活性剤は、広範囲の化学化合物、例えば、オクトレオチド(イギリス特許ＧＢ第２２３４８９６Ａ号に記載)のようなペプチドを含む、親油性および／または親水性活性剤から選択し得る。
【００６０】
活性タンパク質またはペプチドは好ましくはサイトカイン、例えばインターロイキン、Ｇ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦまたはＬＩＦ、インターフェロン、エリスロポエチン、シクロスポリンまたはホルモンまたはそれらの同族体、例えばオクトレオチドである。
【００６１】
医薬組成物は、
活性成分が、例えばワクチンアジュバントとしてのサイトカイン、例えばインターロイキン(ＩＬ−３、ＩＬ−６)または造血コロニー刺激因子(Ｇ−ＣＳＦ、例えばフィルグラスティム、ＧＭ−ＣＳＦ、例えばモルグラモスティム、サルグラモスティム、Ｍ−ＣＳＦ)である場合、免疫調節、
【００６２】
活性成分が造血成長因子、例えばＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＩＬ−３、ＩＬ−６、白血病阻害因子(ＬＩＦ)、幹細胞因子(ＳＣＦ)またはこれらの組み合わせから成る場合、骨髄抑制性治療または骨髄移植の後の造血回復の達成
活性成分が、例えば、放射線治療癌細胞またはワクチン抗原(各々のサイトカイン遺伝子を形質導入した放射線治療癌細胞に類似)と共に投与される場合、防御免疫応答を刺激するための医薬またはサイトカイン、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−６、ＩＬ−２、ＩＬ−４またはこれらの組み合わせを含む場合、活性成分の高局所濃縮の達成
【００６３】
活性成分が、例えば抗原、特に癌抗原、ウイルス抗原または細菌抗原と共に投与されるＧＭ−ＣＳＦを含む場合、有効な免疫反応の誘発
例えば、活性成分がＧＭ−ＣＳＦを含む場合、組成物の局所注射による傷治癒の誘発
【００６４】
活性成分が、例えば補助分子(共受容体)の阻害剤、特にＣＤ２８−Ｂ７相互作用、ＣＤ４０−ＣＤ４０架橋相互作用、癒着性因子相互作用阻害剤と組み合わせたＧＭ−ＣＳＦである場合、Ａｇ特異的免疫耐性の誘発
【００６５】
活性成分が、例えばサイトカイン、特にインターロイキン(ＩＬ−３、ＩＬ−６)またはサイトカイン分泌誘発剤、例えば脂質誘導体、例えばＥＰ０３０９４１１、特に実施例１の化合物、またＭＲＬ９５３として既知の化合物である場合、細胞増殖抑制処置と組み合わせた、またはワクチンアジュバントとしての治療
【００６６】
例えば、活性成分がイムノフィリン(immunophilin)結合免疫抑制剤、例えばシクロスポリン(例えばシクロスポリンＡ)、アスコマイシン(例えばＦＫ５０６)またはラパマイシン(例えば、ＷＯ９４／０９０１０に記載のようなラパマイシンまたはその誘導体、例えば、４０−Ｏ−ヒドロキシエチル−ラパマイシン)である場合、特異的免疫抑制
【００６７】
抗炎症サイトカイン、例えばＩＬ−６、ＩＬ−１０またはＴＧＦβ；またはインターフェロン、例えばＩＦＮ−β１またはベタセロン；またはＩＬ−１、ＴＮＦαまたはＩＬ−４のための可溶性サイトカイン受容体またはサイトカイン受容体アンタゴニストの持続放出による自己免疫疾患および炎症性疾患の処置または予防
【００６８】
ＩｇＥのための高親和性受容体の可溶性α鎖(ＦcＥＲＩ)の持続放出によるアレルギー性疾患の処置または予防
例えばオクトレオチド、サイトカイン、特にインターロイキンによる癌処置
例えば、リーシュマニア、細菌感染、酵素蓄積疾患(テイザックス病、ゴーシェ病)の処置のための選択的標的指向
【００６９】
ＡＩＤＳまたはＡＲＣ治療
例えば破傷風毒素ワクチンのワクチン接種
例えば活性成分がエリスロポエチンである場合、造血
活性成分が抗炎症剤、特に経口で生体内利用できないものまたは非常に短い半減期のもの、例えばＩＬ−１β変換酵素阻害剤、メタロプロテアーゼ(metalloprotease)阻害剤である場合、炎症性関節への関節内注射
に使用し得る。
【００７０】
哺乳類のワクチンに対する免疫反応を促進する方法は、ワクチン接種が必要な哺乳類へ有効量のＧＭ−ＣＳＦとワクチンと組み合わせた投与を含むことが、国際ＰＣＴ出願ＷＯ９４／０１１３３に記載されている。しかしながら、ＧＭ−ＣＳＦは、活性化合物が、長期間にわたり殆ど一定放出され、それによりＧＭ−ＣＳＦの反復投与は減少できる本発明の方法では正確に(carefully)遅延しなかった。
【００７１】
本発明は、インターロイキンまたはＣＳＦの非経口投与のための、特に非加水分解浸食を示すポリマー内、特に上記に定義のポリマー内の、薬理学的活性化合物の医薬組成物を特に提供する。
【００７２】
本発明はまた、このような処置を必要とする患者への非経口投与を含む、このような組成物の患者への投与方法を提供する。
本発明のデポ製剤は、その中に包含されている具体的な医薬の既知の適応症に使用し得る。
【００７３】
医薬化合物およびデポ製剤の投与すべき正確な量は、多くの因子、例えば処置すべき疾病、処置の所望の期間、医薬化合物の放出速度およびポリ(エチレンカーボネート)の生体内分解性に依存する。
【００７４】
所望の製剤は、既知の方法で製造し得る。必要な薬理学的活性剤の量およびその放出速度は、既知のインビトロまたはインビボ技術、例えばどのくらい、具体的な活性剤濃度が血漿中に許容濃度で残るかを基本にして決定し得る。マトリックスの分解性は、またインビトロまたは、特に、例えば皮下組織中のマトリックス材料の量が一定時間後に測定されるようなインビボ技術により得られる。
【００７５】
本発明のデポ製剤は、例えば微小粒子の形で、経口、経鼻または経肺、好ましくは皮下、筋肉内または静脈内投与、具体的には好適な液体担体中の懸濁液として、またはインプラントの形、例えば皮下により投与し得る。
【００７６】
本発明のデポ製剤の反復投与は、例えば１、２または３週間、または１カ月後にポリマーマトリックスが充分分解した場合、有効であり得る。
【００７７】
本発明のポリ(エチレンカーボネート)マトリックスの利点は、医薬化合物の放出の間、ポリマー鎖は小さい分子量まで分解され、それが投与部位から体液により輸送されることである。
【００７８】
好ましい化合物オクトレオチドのための医薬装薬の例は、下垂体機能亢進症のための、ペプチドを(コ)ポリマーに対して少なくとも０.１重量％、好ましくは０.５から２０重量％、好ましくは２.０から１０、特に３から６重量％含む微小粒子を有する非経口投与液体デポ製剤である。オクトレオチドの全用量は、例えば、１カ月の処置のために、下垂体機能亢進症において２０から３０mg、肺癌において１００から２００mgまでである。
【００７９】
微小粒子からのペプチドの放出時間は、５日から約２週間またはそれ以上であり得る。
【００８０】
簡便には、持続性放出製剤は、ウサギまたはラットに２mgオクトレオチド／動物体重kgの量で皮下投与した場合、血漿中のオクトレオチド濃度を少なくとも０.３ng／mlおよび好ましくは２０ng／ml以下を長期間示す(コ)ポリマー担体中にオクトレオチドを含む。
【００８１】
本発明の医薬組成物は、好ましくはまた(コ)ポリマー中に包含される更なる添加剤、例えば、特にＯ２ ．−のスカベージャーとしてのラジカルスカベンジャーを含む。このようなスカベージャー、例えばメナジオンまたはビタミンＣの存在は、ポリ(エチレンカーボネート)の分解速度を減少させる(図７)。
【００８２】
添加剤の他の型は、恐らくスーパーオキシドラジカルアニオンＯ２ ．−、例えばポリオール、特に糖アルコール、具体的にマンニトールの影響化で恐らく発達する、ヒドロキシラジカルのスカベージャーである。この添加剤は、例えばマイクロカプセル包含したＩＬ−３を投与した試験動物の体重増加において好ましい影響を有することがまた分かった。この添加剤なしては、体重増加は遅い。組成物が微小粒子形である場合、凝析および沈殿に対して−微小粒子懸濁液の安定に良い影響を有するため、同じまたは他の添加剤を、存在する微小粒子に外部的に添加し得る。
【００８３】
添加剤が存在する場合、好ましくは製剤の全重量に対して１から９０重量％の量である。
【００８４】
スーパーオキシドラジカルアニオンＯ２ ．−の影響下での好ましいインビトロおよびインビボマス分解は図８に見られ得る。残余マス分解曲線はほとんど直線であり、インビボおよびインビトロ分解条件が異なるため異なった傾きを有する。時間単位当たりの分解質量の量はほとんど一定である。
【００８５】
スーパーオキシドラジカルアニオンＯ２ ．−の影響下での薬理活性化合物、例えばヒトＩＬ−３のインビボ放出曲線は分解曲線の様にほとんど直線(図１０)であり、これは時間単位当たりの医薬化合物放出の量がほとんど一定であることを意味する。
【００８６】
インビボヒトＩＬ−３放出およびインビボマス分解の両方の組み合わせは、図１１に記録され、インビボマス分解と医薬放出の間に１：１の相関を示す。
【００８７】
実施例１−６：ジエチル亜鉛および水から製造する触媒によるポリ ( エチレンカーボネート ) 類の一般的な製造法
具体的な実験の反応物、溶媒、触媒等の量は表１参照。
乾燥ジオキサン２００mlおよびＺn(Ｃ２Ｈ５)２１９.５ｇ(１５８mmol)をＮ２−雰囲気下７５０mlフラスコ内に入れた。フラスコは撹拌機、滴下漏斗、温度計およびＮ２−注入口が付いていた。滴下漏斗はＣaＣl２−管が付いていた。溶液を氷浴中で１０℃まで冷却し、ジオキサン(表１参照)中のＨ２Ｏ２.７mlを、温度が１０−１５℃の間に保たれるようにゆっくり添加した。反応混合物を、最初の無色溶液が薄黄色に変わるまで、室温で更に４５分撹拌した。この触媒溶液をオートクレーブに移し、ＣＯ２４０ｇで処理し、表１に示唆の時間１２５℃に加熱した。混合物を、次いで室温まで冷却し、ＣＯ２５６０ｇ(１２.７mol)を加え、続いて１時間にわたりエチレンオキシド１３２ｇ(３mol)をゆっくり添加した。反応を、表１に示唆の時間、進行させた。この期間の後、圧力を数時間にわたりゆっくり下げた。粘性のスラリーである生産物をジオキサンで希釈し、ジオキサン溶液を０.２５Ｍ水性ＨＣｌ溶液に注ぐことにより沈殿させた。沈殿を適切な量のＣＨ２Ｃl２(２−４リットル)に溶解し、水性０.５Ｍ ＨＣｌ(２×)およびＨ２Ｏ(１×)で洗浄した。溶液を無水Ｎa２ＳＯ４で乾燥させ、溶液の粘性に応じて、最終量０.５から１.５リットルまで蒸発させた。ＣＨ２Ｃl２溶液を４倍量のメタノールに注ぐことにより生産物を沈殿させた。白色沈殿を濾取し、一晩０.５mbar／５０℃で乾燥させた。粗生産物を更なる生成のためにアセトンに再沈殿させた、表２参照。全ての生産物は、エチレンカーボネート単位含量の差による３.６５、３.７３、４.２９および４.３７ppmのシグナルの相対的強度以外、同一な１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを提供した。
【００８８】
【表１】
全ての実験は１.０リットルオートクレーブＮＢ２内で行った。全ての実験でmol比Ｈ２Ｏ：Ｚn(Ｃ２Ｈ５)２＝０.９５であった。触媒は実施例１(１０時間)以外、ＣＯ２４０ｇで１２５℃、１時間前処理した。
【００８９】
【表２】
ａ）他に示唆がない限り、２０℃および１０mg／mlの濃度で
ｂ）１mg／mlの濃度で
【００９０】
実施例７−１１：ジエチル亜鉛およびジオールから製造する触媒によるポリ ( エチレンカーボネート ) 類の一般的な製造法
１．触媒の製造
乾燥ジオキサン２００mlを乾燥、４首７５０mlフラスコに窒素雰囲気下入れた。ジエチル亜鉛１９.５０ｇ(１５８mmol)をガラスシリンジにより加えた。フラスコは撹拌機、滴下漏斗、温度計およびアルゴン注入口が付いていた。滴下漏斗は乾燥ジオキサン１００mlで満たし、塩化カルシウム管が付いていた。次いで、装置をアルゴン流下に設置した。新しく蒸留した乾燥エチレングリコール(モレキュラーシーブス上に保持)９.００ｇ(１４５mmol、０.９２mol当量)を、滴下漏斗中のジオキサンにアルゴン流下加えた。機械的に撹拌しているフラスコをアルゴン下氷浴中で１０℃に冷却した。ジオキサン中のエチレングリコール溶液をジオキサン中のジエチル亜鉛の撹拌している溶液に３０分にわたり滴下し、その間温度は１０−１４℃に保った。エタンガスの発生および沈殿がエチレングリコール溶液の添加と同時に観察された。添加が終了した後、冷却浴を除去し、混合物を更に６０分撹拌し、その間に室温まで暖めた。次いで、均質の混合物をアルゴン下オートクレーブ(１リットルオートクレーブＮＢ２)に入れた。オートクレーブは二酸化炭素約４０ｇ(０.９mol)で満たされ、撹拌しながら１時間１２５℃で加熱し、触媒を二酸化炭素で前処理した。
【００９１】
２．重合
前処理触媒の入ったオートクレーブを室温まで下げ、更に二酸化炭素５６０ｇ(１２.７mol)で満たした。次いで、エチレンオキシド(９９.８％)１３２ｇ(３mol)をオートクレーブ内の撹拌している混合物に、１時間のゆっくりの注入により加えた。添加が終了した後、オートクレーブを表３に示唆の温度まで加熱し、混合物をその温度で示唆された時間撹拌した。
【００９２】
３．後処理
オートクレーブを室温まで冷却し、圧力を定圧までゆっくり下げた。白色の粘性スラリーである生産物を、全量７リットルのジクロロメタン内に取り、１０３５mlの０.４Ｍ ＨＣｌ溶液を加え、混合物を室温で３時間撹拌した。層が分離し、有機層を２回０.５Ｍ ＨＣｌ ３リットルおよび２回水４.５リットルで洗浄した。次いで、ジクロロメタン溶液を硫酸ナトリウム１２０ｇで乾燥し、最終量約２リットルまで濃縮した。生産物をメタノール６リットルへこの溶液をゆっくり添加することにより沈殿させた。沈殿を１６時間、真空で４０℃で乾燥し、粗ポリマーを得、それを以下のように更に精製した：
【００９３】
粗生産物をジクロロメタンに溶解し、溶液を１５分間５倍量のアセトンに注ぎ、生産物を沈殿させた。沈殿を１６時間、真空で４０℃で乾燥させ、対応するポリ(エチレンカーボネート)を得た。本生産物の物理的特性は、表４に示す。全ての生産物は１７５０および１２２５cm−１で強いＩＲ−吸収を示した。エチレンカーボネート単位の１Ｈ−ＮＭＲシグナルは４.３７ppmに出現した。
【００９４】
ａ）他に指示がない限り、ジオキサン
ｂ）他に指示がない限り、エチレングリコール
ｃ）ジオキサンの代わりに溶媒としてテトラヒドロフラン
ｄ）エチレングリコールの代わりに１,４−ブタンジオール
【００９５】
【表３】
ａ）他に示唆がない限り、２０℃および１０mg／mlの濃度で
ｂ）１mg／mlの濃度で
【００９６】
実施例１２：ジエチル亜鉛およびフロログルシンから製造する触媒によるポリ ( エチレンカーボネート ) 類の合成の実験法
１．触媒の製造
乾燥ジオキサン２００mlを乾燥、４首７５０mlフラスコに窒素雰囲気下入れた。ジエチル亜鉛１９.６０ｇ(１５８.７mmol)をガラスシリンジにより加えた。フラスコは撹拌機、滴下漏斗、温度計およびアルゴン注入口が付いていた。滴下漏斗は乾燥ジオキサン１００mlで満たし、塩化カルシウム管が付いていた。装置をアルゴン流下に設置した。乾燥フロログルシン１３.３４ｇ(１０５.８mmol、０.９２mol当量)を、滴下漏斗中のジオキサンにアルゴン流下加えた。機械的に撹拌しているフラスコをアルゴン下氷浴中で１０℃に冷却した。ジオキサン中のフロログルシン溶液をジオキサン中のジエチル亜鉛の撹拌している溶液に３０分にわたり滴下し、その間温度は１０−１４℃に保った。エタンガスの発生および沈殿がフロログルシン溶液の添加と同時に観察された。添加が終了した後、冷却浴を除去し、混合物を更に３０分撹拌し、その間に室温まで暖めた。次いで、均質の混合物をアルゴン下オートクレーブ(１リットルオートクレーブＮＢ２)に入れた。オートクレーブは二酸化炭素約４０ｇ(０.９mol)で満たされ、撹拌しながら１時間１２５℃で加熱し、触媒を二酸化炭素で前処理した。
【００９７】
２．重合
前処理触媒の入ったオートクレーブを室温まで下げ、更に二酸化炭素５６０ｇ(１２.７mol)で満たした。次いで、エチレンオキシド(９９.８％)１３２ｇ(３mol)をオートクレーブ内の撹拌している混合物に、１時間のゆっくりの注入により加えた。添加が終了した後、オートクレーブを２１℃で２６０時間撹拌した。
【００９８】
３．後処理
オートクレーブの圧力を定圧までゆっくり下げた。生産物を、全量４リットルのジクロロメタン内に取り、１０３５mlの０.４Ｍ ＨＣｌ溶液を加え、混合物を室温で３時間撹拌した。層が分離し、有機層を２回０.５Ｍ ＨＣｌ １.５リットルおよび２回水２リットルで洗浄した。次いで、ジクロロメタン溶液を硫酸ナトリウム１２０ｇで乾燥し、最終量約１リットルまで濃縮した。生産物をメタノール３リットルへこの溶液をゆっくり添加することにより沈殿させた。沈殿を１６時間、真空で４０℃で乾燥し、粗ポリマーを得、それを以下のように更に精製した：
【００９９】
粗生産物をジクロロメタンに溶解し、溶液を１５分間５倍量のアセトンに注ぎ、生産物を沈殿させた。沈殿を再びジクロロメタンに溶解し、メタノールで再び沈殿させ、１６時間、真空で４０℃で乾燥させ、対応するポリ(エチレンカーボネート)を得た。
【０１００】
生産物の物理的特性：
Ｍw＝２５８０００Ｄa、Ｍn＝３５６００Ｄa、Ｔg＝１５.４℃。
ＩＲ：１７５１および１２２５cm−１で強い吸収
１Ｈ−ＮＭＲによると、生産物のエチレンカーボネート含量は約９６％である。
【０１０１】
実施例１３：ジエチル亜鉛およびアセトンから製造する触媒によりポリ ( エチレンカーボネート ) 類の合成の実験法
エチレンオキシド１３２ｇ(３Ｍol)をＣＯ２６００ｇ(１３.６Ｍol)と、５０℃、９６時間、アセトン８.４３ｇ(１４５.１６mmol)およびジエチル亜鉛１９.６２ｇ(１５９mmol)から製造した触媒を使用して共重合させた。
触媒の合成および重合は、触媒を製造するのに、ジオールの代わりにアセトンを使用した以外、実施例７−１１に記載の方法と同様に行った。
このようにして得たポリ(エチレンカーボネート)のエチレンカーボネート含量は９３％であり、以下の特性を有する：
Ｍw＝２３３kＤa、Ｍn＝１０９kＤa、Ｍw／Ｍn＝２.１４、Ｔg＝２２.４℃。
【０１０２】
実施例１４：末端基−ステアロイル化ポリ ( エチレンカーボネート ) の合成
Ｍw＝１５３０００Ｄa、Ｍn＝６８９００Ｄa、Ｔg＝２９.１℃を有するポリ(エチレンカーボネート)１ｇを乾燥ジクロロメタン３０mlに溶解した。溶液を、連続してピリジン０.９８ｇ(１２.３８mmol)および塩化ステアロイル１０ｇ(３３.０mmol)で処理した。反応混合物を室温で４８時間撹拌し、次いでジクロロメタン５０mlで希釈し、連続して２×１５０mlの飽和炭酸水素ナトリウムおよび水で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、このジクロロメタン溶液をｎ−ヘキサン３００mlに滴下することにより、生産物を沈殿させた。このようにして得た粗生産物を、ジクロロメタンに溶解し、３倍量のジエチルエーテルからの沈殿により更に精製した。最後に、生産物を真空で、４０℃、１６時間乾燥し、末端基−ステアロイル化ポリ(エチレンカーボネート)を得た。
Ｍw＝１４４０００Ｄa、Ｍn＝７１０００Ｄa、Ｔg＝２５.６℃。
【０１０３】
実施例１５：末端基−アセチル化ポリ ( エチレンカーボネート ) の合成
(Ｍw＝１５３０００Ｄa、Ｍn＝６８９００Ｄa、Ｔg＝２９.１℃を有する)ポリ(エチレンカーボネート)１ｇを乾燥ジクロロメタン１０mlに溶解した。ピリジン０.９８ｇ(１２.３８mmol)を加え、続いて無水酢酸１０.０８ｇ(９８.７mmol)を加えた。反応混合物を室温で１２０時間撹拌した。次いでジクロロメタン５０mlで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム２００mlにゆっくり注いだ。混合物を３０分撹拌し、次いで層を分離した。有機層を再び１５０mlの飽和炭酸水素ナトリウムおよび最後に水で洗浄した。ジクロロメタン溶液を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、このジクロロメタン溶液をジエチルエーテル３００mlに滴下することにより、生産物を沈殿させた。沈殿を再びジクロロメタンに溶解し、ジエチルエーテルで再沈殿させた。生産物を真空で、４０℃、１６時間乾燥し、末端基がアセチル化されたポリ(エチレンカーボネート)を得た。
Ｍw＝１５００００Ｄa、Ｍn＝６９１００Ｄa、Ｔg＝２６.８℃。
【０１０４】
実施例１６：沸騰水処理によるポリ ( エチレンカーボネート ) の精製
(Ｍw＝３２８０００Ｄa、Ｍn＝１４９０００Ｄa、Ｔg＝１６.４℃の実施例８の)ポリ(エチレンカーボネート)１ｇを小片に切断し、沸騰２回蒸留水５０ml中で２時間撹拌する。この水を除き、新しい水で置換し、それを再び沸騰温度まで加熱した。更に３時間後、ポリマー片を単離し、真空で４０℃、１６時間乾燥した。得られた生産物は、以下の物理的特性を有する：Ｍw＝３４００００Ｄa、Ｍn＝１４８０００Ｄa、Ｔg＝２８.３℃。従って、ポリマーの分子量の変化をもたらさないガラス転移温度の劇的な上昇が観察された。
【０１０５】
実施例１７：１％ h ＩＬ−３医薬装薬組成物 ( 微小粒子 )
１．微小粒子を含む医薬の製造
実施例８のＭw＝３２８,０００のポリ(エチレンカーボネート)(ＰＥＣ)１ｇを塩化メチレン１０mlに撹拌しながら溶解し、続いて水０.６mlに溶解したヒトインターロイキン３(hＩＬ−３)１２.１mgを加えた。混合物を１分間、２０,０００rpmでUltra-Turraxで激しく撹拌した(＝内部Ｗ／Ｏ相)。ゼラチンＡ１ｇを脱イオン水２０００mlに５０℃で溶解し、溶液を２０℃まで冷却した(＝外部Ｗ相)。Ｗ／Ｏ相およびＷ相を激しく混合した。それにより内部Ｗ／Ｏ相は外部Ｗ相に微小滴として均質に分散した。得られる３層エマルジョンを１時間ゆっくり撹拌した。この結果、塩化メチレンが蒸発し、微小粒子が内部相の滴から産生され、硬化した。
【０１０６】
微小粒子の沈降の後、上清を吸引し、微小粒子を真空分画または遠心により回収し、水で濯いでゼラチンを除いた。最後に、微小粒子は増量剤としてのマンニトールの使用によりフリーズドライするか、７２時間真空オーブン(無マンニトール製剤)で乾燥し、ふるいにかけて(０.１２５mmメッシュサイズ)最終生産物を得た。
【０１０７】
２．偽薬製造
Ｍw＝３２８,０００の実施例８のＰＥＣ１ｇを撹拌しながら塩化メチレン１０mlに溶解した(内部Ｏ相)。ゼラチンＡ１ｇを脱イオン水２０００mlに溶解し、溶液を２０℃まで冷却した(＝外部Ｗ相)。ＯおよびＷ相を激しく撹拌した。それによりＯ相は外部Ｗ相に微小滴として均質に分散した。得られるエマルジョンを１時間ゆっくり撹拌し、上記の方法で更に処理した。
【０１０８】
実施例１８−２６：
以下に記載の全ての生薬は、表３の実施例８に従って合成し、実施例１６の記載のものと同じ方法で更に精製したＰＥＣを使用して製造した。それら全ては３００,０００から４５０,０００のＭw、９４％以上のエチレンカーボネート含量および１８から５０℃の範囲のＴgを有した。
【０１０９】
実施例１８：０ . ２％ h ＩＬ−２装薬組成物 ( 微小粒子 )
ヒトインターロイキン２(hＩＬ−２)２.９mgを水１.５mlに溶解し、実施例１７に記載のようにＩＬ−２含有微小粒子を製造した。
微小粒子を、マンニトールを増量剤として使用することによりフリーズドライし、ふるいにかけて(メッシュサイズ０.１２５mm)最終製品を得た。
【０１１０】
実施例１９： h ＩＬ−２装薬組成物 ( 微小粒子 )( 無水 )
ヒトインターロイキン２ ２.９mgを直接有機層(塩化メチレンに溶解したＰＥＣ)に分散させた以外、実施例１８と同様にして製剤した。
【０１１１】
実施例２０：０ . ８％ h ＩＬ−３装薬組成物 ( インプラント )
１．圧縮造形
１００％(w／w)ポリ(エチレンカーボネート)(偽薬)、９９％(w／w)ポリ(エチレンカーボネート)および１％(w／w)ヒトインターロイキン−３または７９.２％(w／w)ポリ(エチレンカーボネート)、２０％(w／w)マンニトールおよび０.８％(w／w)ヒトインターロイキン−３からなる微小粒子２５mgを３分、６０−７０℃で１６０バールで圧縮造形し、直径５mmのインプラント(錠剤)を得た。錠剤をインビトロおよびインビボ医薬放出実験に使用するまで密封ガラス容器中、４℃で保存した。
【０１１２】
２．インビトロ医薬放出実験
マンニトール非含有およびマンニトール含有ヒトインターロイキン３製剤および偽薬の各３個錠剤を３７℃で、２.５％(v／v)Ｎ−[２−ヒドロキシエチル]−ピペラジン−Ｎ'−[２−エタンスルホン酸](１ｍ)、１０％(v／v)ウシ胎児血清および２％(v／v)ペニシリン／ストレプトマイシン溶液含有合成培養培地中で震盪した。サンプルを、０.５、１、２、５時間および１、２、３、７、１４、２０日に培地から取り、続いて培地を新しくした。サンプル中のヒトインターロイキン３含量はＥＬＩＳＡにより測定した。
【０１１３】
３．インビボ医薬放出実験
最適条件下に置いた雄ラットを、吸入麻酔薬で麻酔し、各々のラットに、ヒトインターロイキン−３製剤および偽薬を皮下皮膚嚢に移植した。１、４、７、１４、２１日後、ラットを吸入麻酔の過剰投与により殺戮した。残った錠剤を取り出し、粘着組織を除き、乾燥させた。錠剤の質量損失を重力計で測定した。続いて、残った錠剤のヒトインターロイキン−３含量をＨＰＬＣおよびＥＬＩＳＡで測定した。
【０１１４】
実施例２１：０ . ０００２％−２％ h ＩＬ−２装薬組成物 (w ／ o ／ w 微小粒子 )
ＰＥＣ４ｇを、塩化メチレン８０mlにマグネティックスターラーで撹拌しながら溶解した。この溶液に、蒸留水またはエタノール数滴含有水６mlに溶解した適量のＩＬ−２(２％では１１３.２mg、０.２％では１１.３２mg等)を加えた。混合物をUltra-Turaxで激しく混合し、ポリマー層(＝内部Ｗ／Ｏ層)にＩＬ−２溶液を分散させた。１／１５Ｍリン酸緩衝液(ｐＨ７.４)２００mlに５０℃でゼラチンＡ１ｇを溶解し、その溶液を２０℃に冷却した(＝外部Ｗ層)。Ｗ／ＯおよびＷ層を激しく撹拌した。それにより内部Ｗ／Ｏ層は小滴に分離し、外部Ｗ層に均質に分散した。得られた３重エマルジョンを１時間ゆっくり撹拌した。これにより塩化メチレンが蒸発し、微小粒子が内部層の滴から硬化した。
【０１１５】
上清の微小粒子の沈殿(または遠心)の後、上清を吸引し、微小粒子を真空濾過により回収し、水で濯いでゼラチンを除去した。最後に、微小粒子を２４時間真空オーブンで乾燥させ、ふるいにかけて最終製品を得た。
ＨＰＬＣおよび生検で試験した封入能率は１０から１００％の間であった。
【０１１６】
実施例２２：０ . ０００２％−２％ h ＩＬ−２装薬組成物 (s ／ o ／ w 微小粒子 )
ＩＬ−２を水に溶解しない以外、実施例２１に記載のように製造した。ＩＬ−２溶解の変わりに、医薬を直接ポリマー層(＝Ｏ層)に分散させた。ＨＰＬＣおよび生検で試験した封入能率は１０から１００％の間であった。
【０１１７】
注：ポリマー、塩化メチレン、水および医薬の量は、製品品質を変えることなく、広範囲で変化する。２０％までの高医薬装薬が得られる。外層において、ゼラチンをポリビニルアルコール等の他の乳化剤と置き換えることができおよび／または乳化剤／緩衝液の濃度は変わる。記載の分離および乾燥工程は、濾過、凍結乾燥および噴霧乾燥のような既知の医薬技術に置き換わる。
【０１１８】
実施例２３：１％ h ＧＭ−ＣＳＦ装薬組成物 (w ／ o ／ w および s ／ o ／ w 微小粒子 )
製造は、実施例２１および２２に記載の方法により行った。記載のようにＳ／Ｏ／ＷおよびＷ／Ｏ／Ｗ調整物が製造される。しかしながら、Ｗ／Ｏ／Ｗの封入能率は６０％であるが、一方Ｓ／Ｏ／Ｗ製剤は、低い封入能率を示した。
【０１１９】
実施例２４：１−１０％オクトレオチド−パモ酸 ( ＳＭＳ−ＰＡ ) 装薬組成物 (w ／ o ／ w および s ／ o ／ w 微小粒子 )
製造は、実施例１９および２０に記載のように行った。しかしながら、ＳＭＳ−ＰＡは水溶性ではない。したがって、医薬は、Ｗ／Ｏ／Ｗ製剤のために、水に溶解せず、分散した。封入能率をＨＰＬＣで測定し、２０から１００％の間であった。
【０１２０】
実施例２５：１−１０％オクトレオチド−酢酸装薬組成物 (w ／ o ／ w および s ／ o ／ w 微小粒子 )
製造は、実施例２１および２２に記載の方法に従って行った。封入能率は、ＨＰＬＣで測定して、２から４０％の間であり、親油性ＳＭＳ−ＰＡより明らかに低い。
高い価は、凍結乾燥活性化合物物質を使用した後のＳ／Ｏ／Ｗ製剤において得られた(より小さい医薬粒子)。
【０１２１】
実施例２６：ウサギにおける微小粒子ならびにウサギおよびラットにおけるインプラントからのオクトレオチドパモ酸 ( ＳＭＳ−ＰＡ ) 放出
約２mg／体重kgの量のポリ(エチレンカーボネート)ディスクの皮下移植またはポリ(エチレンカーボネート)微小粒子(医薬装薬１.９５％)の注射を、雄ウサギ(チンチラ・バスタード、体重約３kg)に、ディスクの皮下移植を雄ラット(ウィスター、体重約３７５ｇ)に行った。ラットおよびウサギ当たり、それぞれ約４０mgおよび３００mgの微小粒子の形の医薬含有ポリマーを、それぞれインプラントに圧縮するか、または懸濁液として投与した。
【０１２２】
ラットおよびウサギのためのインプラントディスクは、それぞれ０.５および１cmの直径を有し、実施例２０に記載のように製造した。
【０１２３】
医薬放出を測定するために、血液サンプルを１４および２１日後にそれぞれラットおよびウサギから回収し、インプラント内の医薬残留を放射免疫測定およびＨＰＬＣにより測定した。
【０１２４】
ポリ(エチレンカーボネート)の質量損失とＳＭＳ−ＰＡ放出の直線相互関係が、高分子量hＩＬ−３(図１１)に示されるように見られた(図１３)。インプラント材料の最大７５％が、ウサギに投与後３重間で分解し、最大９５％のインプラント材料が、ラットに投与後２週間で分解した。
【０１２５】
炎症反応(多形核白血球および他の細胞の浸入を含む)は、ポリ(エチレンカーボネート)の生体内分解の必須用件である。炎症反応の過程は、医薬の種特異的血漿濃度プロフィールを提供する種特異的であると期待できる。これはＳＭＳ−ＰＡで見られた(図１２)。ラットにおいて、ポリ(エチレンカーボネート)の生物分解は、ウサギより早い。ウサギにおいて、ＳＭＳ−ＰＡの血漿濃度はゆっくり上昇し、約９日目で一定放出相に到達し、２１日まで続く。
【０１２６】
実施例２７：０ . ０００２％−２％ rh ＩＬ−６装薬組成物 (w ／ o ／ w 微小粒子 )
ＰＥＣ４ｇを塩化メチレン８０mlにマグネティックスターラーで撹拌しながら溶解する。この溶液に、蒸留水またはエタノール数滴を添加した水６mlに溶解した適当量のrhＩＬ−６(２％では１１３.２mg、０.２％では１１.３２mg等)を添加する。混合物をＵltra−Ｔuraxで激しく撹拌し、ＩＬ−６溶液をポリマー層(＝内部Ｗ／Ｏ層)に分散させる。ゼラチンＡ１ｇを１／１５Ｍ リン酸緩衝液(ｐＨ７.４)に５０℃で溶解し、溶液を２０℃に冷却する(＝外部Ｗ層)。Ｗ／ＯおよびＷ層を激しく混合する。それにより内部Ｗ／Ｏ層は、小滴へ分離し、それは外部Ｗ層に均質に分散した。得られる３重エマルジョンを１時間ゆっくり撹拌し、塩化メチレンを蒸発させ、微小粒子が内部層の滴から硬化する。
【０１２７】
微小粒子の沈澱(または遠心)の後、上清を吸引し、微小粒子を真空濾過により回収し、水で濯いでゼラチンを除去する。最後に、微小粒子を２４時間真空オーブンで乾燥させ、ふるって最終製品を得る。
封入能率をＨＰＬＣおよび生検で測定し、１０から１００％の間である。
【０１２８】
実施例２８：０ . ０００２％−２％ rh ＩＬ−６装薬組成物 (s ／ o ／ w 微小粒子 )
製剤は、ＩＬ−６を水に溶解しない以外、実施例２７に記載のように製造する。ＩＬ−６を溶解する変わりに、医薬を直接ポリマー層(＝Ｏ層)に分散させる。ＨＰＬＣおよび生検で測定した封入能率は、１０から１００％の間であった。
【０１２９】
注：ポリマー、塩化メチレン、水および医薬の量は、製品品質を変えることなく、広範囲で変化する。２０％までの高医薬装薬が得られる。外層において、ゼラチンをポリビニルアルコール等の他の乳化剤と置き換えることができおよび／または乳化剤／緩衝液の濃度は変わる。記載の分離および乾燥工程は、濾過、凍結乾燥および噴霧乾燥のような既知の医薬技術に置き換わる。
【０１３０】
実施例２９−３１：ＴＮＦαおよび／またはＩＬ−１介在疾病の処置におけるＩＬ−６の使用
実施例２９：多発性硬化症の動物モデル：ルイスラットの慢性再発実験的誘発アレルギー性脳脊髄炎モデル ( ＣＲ−ＥＡＥ )
ラットにおける実験的誘発アレルギー性脳脊髄炎(ＥＡＥ)は、よく研究されたヒトの多発性硬化症の実験モデルである。[パターソン、ADV.IMMUNOL. 5(1966)131-208；レビンら、AM.J.PATH.47(1965)61；マックファーリンら、J.IMMUNOL. 113(1974)712；ボレル、TRANSPLANT&CLIN.IMMUNOL. 13(1981)3]。ラットに、他種の神経組織をアジュバンドと共に注射し、得られるアレルギー反応は、多発性硬化症で産生される自己免疫領域を模倣したラットの神経領域を導く。ラットは部分的または完全に麻痺し、疾病の重症度を試験薬ありまたはなしで測定する。ステロイドおよび免疫抑制剤のような多くの医薬は、疾病の発病を遅くするように働くが、一度疾病が確立されたら、再発を予防できない。
【０１３１】
慢性再発実験的誘発アレルギー性脳脊髄炎モデル(ＣＲ−ＥＡＥ)[フューラーら、J. NEUROIMMUNOL：10(1985)159-166]は、従って確立された疾病の多発性硬化症の患者の処置の実際の困難さを非常に模倣している、詳細要求モデルと見なされる。このモデルにおいて、疾病はモルモット脊索およびマイクオバクテリウム・ツベルクロシス(Mycobacterium tuberculosis)に富むフロインド完全アジュバントの混合物を注射して誘発する。典型的に、７５−８０％の感受性ラットは、最初の４０日間に２−３回の臨床再発を示すＣＲ−ＥＡＥを発症する。６０−８０日後、ＣＲ−ＥＡＥのラットの約５０％は、全例のわずか３５％しか完全に回復しない、更なる再発を起こす。残りの６５％のこれらの動物は、疾病の進行した過程を示す。医薬処置は、最初の疾病の発作から回復した後の１６日目に開始する。
【０１３２】
生理食塩水に溶解した組換えヒトインターロイキン６(rhＩＬ−６、サンド)を１６日目に開始して、２日毎にラット当たり１０マイクログラムのＩＬ−６(約５０μg／kg)を使用して、i.p.注射した。対照動物およびＩＬ−６群の動物は、１１−１４日に通常の重症度(severity)の疾病発作(急性)を起こした。０＝疾病なしから４＝動物の完全麻痺の重症度の目盛りにおいて、対照群は平均３.０およびＩＬ−６群は平均３.２であった。ＩＬ−６の１６日目から３０日目(全７回の投与)の２日毎の投与は、疾病の殆ど完全な阻害をもたらした。５匹のＩＬ−６処置ラットのうち１匹だけが僅かな第２疾病発作(重症度０.４)を示した。５匹の対照動物のうち５匹が、平均重症度１.８の第２疾病発作を１６日目に、および第３の発作を２２−２９日目に起こした。ＩＬ−６処置群では他の再発は見られなかった。
【０１３３】
実施例３０：関節炎の動物モデル：重症複合免疫不全症 ( ＳＣＩＤ ) マウスにおけるボレリア誘発関節炎
ライム関節炎(またはライム病関節炎)は、開始事象が確信をもって知られているため、慢性関節炎の独特な形を示す。この疾病は、だに伝播スピロヘータ ボレリア・ブルグドルフェリ(Borrelia burgdorferi)の感染により誘発される顕著な特徴の一つの疾病である。ライム関節炎の患者の滑液領域の特徴は、関節リューマチの滑液と非常に似ている。両方の患者群において、滑液裏細胞増大、滑液細胞肥大、血管増殖および滑液裏領域での単核細胞炎症が観察できる。多くの血漿細胞、高内皮細静脈、散在マクロファージおよび僅かな樹枝状細胞が、激しいＭＨＣクラスII抗原存在と共に見られる。加えて、ＩＬ−１、ＩＬ−６およびＴＮＦ−αのようなサイトカインが、種々の関節炎の患者の滑液で検出され、これらのサイトカイン関節破壊の病原の一因であることを示唆する。最近、ライム関節炎のマウスモデルが、機能的ＴおよびＢ細胞を欠くＳＣＩＤマウスで開発された(エム・エム・シモンら(1991)Immunology Today 12:11)。免疫不全マウスへのボレリア・ブルグドフェリの感染は、顕著な持続性の寡少関節炎(oligoarthritis)を導く。ＳＣＩＤマウスにおけるボレリア誘発関節炎は、コルチコステロイド(プレドニゾロン３０mg／kg sc)に反応するが、３０mg／kg s.c.までの量のＳＩＭ(シクロスポリンＡ)のような免疫抑制剤には反応しない。開始事象が確実には知られてはいない他の型の関節炎を含む、サイトカイン誘発関節炎の優れたモデルと見なされている。
【０１３４】
６週令Ｃ.Ｂ.−１７ＳＣＩＤマウス(ＳＣＩＤ変異はホモ接合であり、ボムホルトガルト、デンマークから得、５−６匹動物／群)に１００mio.ボレリア・ブルグドルフェリ生物を、尾の付け根にs.c.注射して接種した。免疫完全C.B.−１７マウス(同じ源)を対照動物として使用した。それらはボレリア・ブルグドフェリ注射でいかなる疾病も発症しない。組換えヒトＩＬ−６(rhＩＬ−６、サンド、貯蔵溶液５mg／ml)を生理食塩水で希釈し、１０マイクログラム／マウスi.p.の量で１週間５回、全１７回の注射をした。マウスで脛骨と足根足首および尺骨手根関節の関節炎の臨床的兆候を無作為に追跡した。臨床関節炎は、以下のパラメーターに従って得点付した。
− 兆候なし
？ 兆候疑問
(＋) 関節の赤味
＋ 僅かな腫張
＋＋ 中程度の腫張
＋＋＋ 脛骨と足根足首および尺骨手根関節の重い腫張
【０１３５】
臨床関節炎のピークにおいて、マウスを屠殺し、関節をシャッファー溶液に固定し、プラスティック９１００に乗せ、ヘマトキシリンエオジン染色した。
【表４】
ＩＬ−６で処置していないＳＣＩＤマウスは、ボレリア・ブルグドフェリの感染による重い関節炎を、抗原注射後１３日目頃に発症する。低用量のrhＩＬ−６は、全ての苦しんでいるマウスで平均６０−７５％関節炎の重症度を軽減する。
【０１３６】
実施例３１：細菌性ショックのマウスモデル
ヒト細菌性ショックのモデルとして広範囲に使用されているため、ｄ−ガラクトサミン感受性マウスを使用して、マウス内毒素ショックモデルにおけるＩＬ−６の効果の研究を決定した。我々の方法および結果は下記の通りである：
体重１８−２２ｇの雌ＯＦ１マウスに、０.１５mg／kgリポポリサッカライド内毒素(ＬＰＳ)および５００mg／kg ｄ−ガラクトサミン含有ＰＢＳ溶液０.２mlをi.p.注射した。マウスをそれぞれ１０匹の群に分け、下記のように処理した:
【０１３７】
【０１３８】
【０１３９】
rhＩＬ−６(ＩＬＳ９６９、サンド)、rhＩＬ−２(サンド)およびrhＩＬ−４(サンド)をＰＢＳで希釈した。総ての注射(０.２ml容)は腹腔内で投与した。第３群(実験１)および第３群から第８群(実験２)において、ＩＬ−６およびＩＬ−２は、マウスが単一０.２ml注射を受けるように、ＬＰＳ／ｄ−ＧＡＬ溶液に希釈した。括弧内の数値は、各々のマウスに投与した量を示唆する。ＰＢＳの多数回投与が、ＬＰＳ投与前または後に異なった時間扱うことにより誘発されるストレス反応による群内変化性を制御するために必要であった。
【０１４０】
マウス生存は４８時間観察した。統計的研究のために、我々はカイ平方試験を使用した。図１に示すように、ＬＰＳ投与２４時間後、１０匹中９匹の対照マウスが死んだ。ＬＰＳ注射３時間前またはＬＰＳ注射２時間後のＩＬ−６処置は、それぞれ約６０％(ｐ＝０.１２)および７０％(ｐ＝０.２６)まで死亡率を減少させた。一方、ＬＰＳ投与時のＩＬ−６投与は、群の死亡率を１０％(ｐ＜０.０１)まで減少させた。防御効果は、４８時間後、第３群の死亡率が僅かに、即ち３０％上昇し、対照群に対して有意高い防御(ｐ＜０.０１)をまだ示唆したため、長期間持続した。第４群の死亡率は、７０％から８０％に移動するが、第１および２群において変化は見られなかった。
【０１４１】
これらの結果を基にして、我々は異なった用量のＩＬ−６の効果を試験した。第１の実験によると、最適な時間であったため、我々はＩＬ−６をＬＰＳ注射時に与えた。我々はＬＰＳと同時に投与したＩＬ−３およびＩＬ−４の効果を、ＬＰＳ／ｄ−ＧＡＬ調製物において組換えタンパク質を使用することにより可能性のある人工物を排除する方法として、また調査した。我々は、また、ＩＬ−６がＬＰＳ投与前または後で１００μg／マウスの用量で投与して、内毒素死亡からマウスを防御するのに有効か否か試験した。
【０１４２】
実験２の結果(図２)は、実験１のものと一致している。この試験でまた、ＩＬ−６処置は、マウスを内毒素死から防御した。ＩＬ−６をＬＰＳと共に投与した場合、ＬＰＳ２４時間後に得られる防御は、２０(３０％死亡率、ｐ＝０.０３)、４(５０％死亡率、ｐ＝０.１６)および０.８(７０％死亡率、ｐ＝０.６１)μg／マウスで用量依存的てあったが、１００μg／マウス(６０％死亡率、ｐ＝３３)の用量で、マウスは２０μg／マウスよりも低く防御された。１００μgＩＬ−６／マウスの前および後処置は、同じ用量のＩＬ−６をＬＰＳと同時に投与した場合に観察される結果と同等の防御をもたらす。同様のマウス生存結果がＬＰＳ４８時間後に観察された。
【０１４３】
ＬＰＳ投与時に投与したＩＬ−４は、マウスを内毒素死から防御するのに有効ではなかったが、ＩＬ−２はマウス生存率を減少させた。
【図面の簡単な説明】
【図１】 ポリ(エチレンカーボネート)のインビトロのマウス分解におけるプロナーゼの影響を示すグラフである。
【図２】 リン酸緩衝化食塩水(ＰＢＳ)ｐＨ７.４中のポリ(エチレンカーボネート)インプラントの膨張を示すグラフである。
【図３】 Ｄ−グルコース開始ポリ（ＤＬ−ラクチド−コ−グリコリド（５４．６：４５．４）およびポリ（エチレンカーボネート）の加水分解バルク浸食および非加水分解表面浸食を示すグラフである。
【図４】 ラットにおける皮下投与ポリ(エチレンカーボネート)誘導体のマウス分解を示すグラフである。
【図５】 多形核白血球におけるポリ(エチレンカーボネート)開始スーパーオキシド産生を示すグラフである。
【図６】 分子量の関数としてのポリ(エチレンカーボネート)のインビボおよびインビトロマス分解を示すグラフである。
【図７】 ラットにおける皮下投与１４日後のポリ(エチレンカーボネート)のマス分解におけるスーパーオキシドラジカルスカベンジャーの影響を示すグラフである。
【図８】 インビボおよびインビトロのポリ(エチレンカーボネート)のマス分解を示すグラフである。
【図９】 インビトロにおけるポリ(エチレンカーボネート)インプラントからのｈＩＬ−３放出を示すグラフである。
【図１０】 ラットにおけるポリ(エチレンカーボネート)インプラントからの皮下ひＬ−３放出を示すグラフである。
【図１１】 ラットにおけるポリ(エチレンカーボネート)の質量損失とｈＩＬ−３放出の関係を示すグラフである。
【図１２】 ラットおよびウサギにおけるＳＭＳ−ＰＡの血漿濃度を示すグラフである。
【図１３】 ラットおよびウサギにおけるポリ(エチレンカーボネート)の質量損失とＳＭＳ−ＰＡ放出の関係を示すグラフである。
【発明の属する技術分野】
本発明はポリマーマトリックス含有医薬組成物、特にＩＬ−１および／またはＴＮＦα介在疾患、例えば慢性炎症性疾患の処置に使用するＩＬ−６を含有するものに関する。本発明の特定のポリマー、特に本明細書に記載のポリ(エチレンカーボネート)ポリマーは、しかしながら医薬活性化合物含有組成物の持続放出組成物におけるマトリックス材料として一層有用であり、特にインビボ非加水分解表面浸食を受ける新規な、予期されないそして非常に望ましい特性を有することが示される。従って、他の医薬を含むマトリックスは、ポリマー製造法およびそれらを含む医薬組成物と共にまた例示され提供される。更に、ＩＬ−１および／またはＴＮＦα介在疾患の処置のためのＩＬ−６の使用は新規および予期されないもの(多くのこのような疾患は、前はＩＬ−６により悪化すると信じられていた)であり、従って本発明は更にＩＬ−６の、例えば慢性病原体誘発炎症性疾患、脱髄疾患ならびに細菌性ショックのような急性および超急性の炎症性疾患の処置への新規な使用を提供する。
【０００２】
【従来の技術および発明が解決しようとする課題】
Ｉ．ＩＬ−１および／またはＴＮＦαにより介在される疾患の処置
多くの自然発生、慢性炎症性疾患の(恐らく自己免疫)病因は未知であり、ＩＬ−１および／またはＴＮＦαが介在していると信じられている。例えば、多発性硬化症(ＭＳ)ならびに脳内および脊索内の脱髄疾患の拡散斑点を特徴とする大きな損害を与える神経疾患は、長年研究機関の注意を引いている。多発性硬化症の正確な病因は充分理解されていないが、例えば、この疾患の患者におけるあるＨＬＡ抗原の増加事象により示唆されるように、強い自己免疫要素を有すると信じられている。ＡＣＴＨ(向副腎皮質性ホルモン)またはコルチコステロイド、例えばプレドニゾロンのような現在入手可能な抗炎症剤は、特に初期に投与した場合、急性攻撃からの回復を早めるように思えるが、この疾患の基となる病因には影響を与えない。コルチコステロイドまたは免疫抑制剤の長期投与は、深刻な副作用の危険を伴う。ＩＦＮ−β１の組換え形は、短期間プラーク(plaque)形成を減少することが最近示されたが、この疾患の長期進行の影響は示されていない。治療効果の評価は、疾患の自然進行が、自然に回復し、慢性的に再発するものであるという事実から複雑である。簡単には、長年の徹底的な研究にも拘わらず、この非常に重い疾患の一般的に許容できる具体的な処置法は今までのところない。
【０００３】
他の慢性炎症性疾患は、例えば病原体のような外的要因により誘発されると信じられている。例えば、ライム病は、だに伝播ボレリア・ブルグドルフェリ(Borrelia burgdorferi)の感染により開始する重い慢性疾病である。皮膚障害およびインフルエンザ様症状を特徴とする最初の急性相に続き、この疾患は関節炎および慢性神経異常により特徴付得る慢性相へ進行する。この疾患は、通常抗生物質および非ステロイド系抗炎症剤で処置するが、特に慢性になった疾患に対する最適な治療はまだ確立されていない。
【０００４】
急性または超急性、非制御炎症性疾患は、また外的因子、例えば重い熱傷または重い感染により引き起こされ得る。例えば、細菌性ショックおよび特に成人呼吸窮迫症候群(ＡＲＤＳ)は有効な処置が現在存在しない生命を脅かす疾患である。発病は急速であり、死亡率は通常５０％を越える。細菌性ショックは通常重い細菌感染によりもたらされ、典型的には熱およびしばしばそれに続く後段階の低体温、血圧変動(ハイパーダイナミック症候群)、続く後段階の低血圧、代謝性アシドーシス、精神機能障害および広範囲な器官機能障害、最後に、多くの場合、死亡してしまうことにより特徴付られる。最も一般的に、細菌性ショックは、グラム陰性細菌感染(エンドトキシンショック)に起因し得るが、グラム陽性細菌感染または他の感染にもまた起因し得る。本明細書で使用の「細菌性ショック」の語は、従って微生物感染、具体的に細菌感染、最も具体的にはグラム陰性細菌感染に起因する、ＡＲＤＳを含むショック状態を広く意味すると解釈すべきである。
【０００５】
ＩＬ−６は既知のサイトカインである。それは種々の疾患、例えば血小板減少症およびある癌の処置に有用であることが知られている。それは通常細菌感染に応答して体内で産生され、炎症、熱および細菌性ショックの伝播と関係がある。それは有効な免疫刺激剤であり、実際ある文献では、ＩＬ−６動因機構は、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症および関節リューマチならびに細菌性ショックを含むある自己免疫または炎症性疾患の原因となること示唆している。
【０００６】
従って、ＩＬ−６が(糸球体腎炎を除く)慢性炎症性疾患、例えば多発性硬化症の処置、および急性および超急性炎症性疾患、例えば細菌性ショックの処置に有用であるというのは非常に驚くべき発見である。この作用機構は不明であるが、具体的な理論に縛られることなく、我々は、フィードバック機構を通じて、恐らく可溶性ＴＮＦα受容体および／またはＩＬ−１受容体アンタゴニストの遊離の上向調節によりＩＬ−６は他のサイトカイン、特にＴＮＦαおよび／またはＩＬ−１の発現、遊離または機能を抑制または阻害でき、それによりこれらのサイトカインにより主に介在される活性およびその結果の自己免疫、炎症またはショック疾患を抑制すると信じている。しかしながら、ＩＬ−６介在補体−活性化抗原−抗体(ＩgＧ)複合体により特徴付けられる疾患、特に糸球体腎炎(通常腎臓でのこのような複合体の凝集が原因である)の場合、ＩＬ−６は疾患の悪化を示す。従って、我々は、ＩＬ−６は主にＩＬ−１および／またはＴＮＦαに起因すると信じられているＭＳおよびライム関節炎の動物モデルで病気に効くが、ＩＬ−６に直接起因すると信じられているループスマウスにおける糸球体腎炎を悪化させることを示している。我々は、ＩＬ−６が、主にＩＬ−１および／またはＴＮＦαに起因すると同様に仮定されているエンドトキシンショックのマウスモデルにまた効くことを示している。
【０００７】
従って、ＩＬ−６は、ＴＮＦαおよび／またはＩＬ−１の発現、遊離または機能の抑制または阻害、特に糸球体腎炎以外の炎症性疾患の処置および細菌性ショックの処置用薬剤として有用であると考えられる。ＩＬ−６を使用して処置される炎症性疾患は、例えば関節炎疾患、具体的には病原体誘発関節炎、例えばライム病関節炎、細菌誘発関節炎およびポリオ関節炎(polioarthritis)；多発性硬化症および他の脱髄疾患(即ち、多発性硬化症、急性播種性脳脊髄炎または感染後脳炎、視神経脊髄炎、耳鳴、汎発性脳硬化症、シルダー病、アドレノロイコジストロフィー、第三期ライム病、熱帯痙攣性パラポエシス(tropical spastic parapoesis)および脱髄、特に自己免疫介在脱髄が主な症状である他の疾患を含む神経、脳および／または脊髄の脱髄を特徴とする疾患)；熱傷、細菌性ショック、髄膜炎および肺炎のような急性重症炎症性疾患；ならびに多軟髄炎、スクレロドーマ(sclerodoma)、ウェゲナー肉芽腫症、皮膚筋炎、慢性活動性肝炎、重症筋無力症、乾癬、乾癬性関節炎、スチーブンス−ジョンソン症候群、特発性スプルー、自己免疫炎症性腸疾患(例えば潰瘍性大腸炎およびクローン病を含む)、内分泌眼病、甲状腺機能亢進症、サルコイドーシス、原発性胆汁性肝硬変、若年性糖尿病(Ｉ型糖尿病)、(前方または後方)ぶどう膜炎、乾性角結膜炎および春季角結膜炎および間質性肺線維組織増殖を含む自己免疫疾患を含む。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
従って、本発明は：
ｉ）ＴＮＦαおよび／またはＩＬ−１の発現、遊離または機能阻害；
糸球体腎炎以外の炎症性疾患の処置または予防；
ＩＬ−１および／またはＴＮＦα介在疾患の処置または予防；
上記の疾患の処置または予防；
脱髄疾患、例えば多発性硬化症の処置または予防；
外的誘発炎症性疾患の処置または予防；
重症急性感染、例えば細菌性ショック、髄膜炎または肺炎に対する免疫応答の処置または予防；
熱傷の処置；
慢性病原体誘発炎症性疾患、例えばライム病の処置または予防；
方法であり、
(例えば、特にＩＬ−６が単独治療または予防剤として投与される場合、または所望により抗生物質または血管活性剤と共に、例えば所望によりＴＮＦαアゴニストまたはアンタゴニスト、または抗−ＴＮＦα抗体と共にではなく投与される場合)治療的または予防的有効量のＩＬ−６、例えばＴＮＦαおよび／またはＩＬ−１阻害量のＩＬ−６、例えばrhＩＬ−６；所望により、ポリマーマトリックス、例えば本明細書で更に記載するようなポリ(エチレンカーボネート)マトリックスと関連して持続放出またはデポ形で、このような処置または予防が必要な患者、例えば、哺乳類、例えばヒトに投与することを含む方法；
【０００９】
ii）例えば、上記(ｉ)に列記した疾病の処置または予防のための(ｉ)の方法で使用するための医薬の製造におけるＩＬ−６、例えばrhＩＬ−６の使用(ここで、医薬は所望により持続放出形、例えば所望によりポリマーマトリックス、例えば本明細書で更に記載するポリ(エチレンカーボネート)マトリックスを更に含む)；
iii)上記(ｉ)に列記した疾病の処置または予防のためのＩＬ−６、例えばrhＩＬ−６の使用；および
【００１０】
iv）所望により持続放出形であり、所望によりポリマーマトリックス、例えば本明細書で更に記載するようなポリ(エチレンカーボネート)マトリックスを更に含む、(ｉ)の方法で使用するための、例えば上記(ｉ)に列記した疾病の処置または予防のためのＩＬ−６、例えばrhＩＬ−６を含む医薬組成物；例えば、ＩＬ−６をポリマーマトリックス中に含む、例えば微小粒子またはデポの形の、例えばポリマーがインビボ非加水分解表面浸食を示す、特に本明細書に記載の任意の薬物送達系の、上記疾病の処置に使用される、例えば慢性炎症性疾患の処置に使用される持続放出組成物(即ち数日、数週または数カ月にわたりインビボ生体内分解される組成物)：
を提供する。
【００１１】
ＩＬ−６は既知のインターロイキン−６(インターフェロンベーター−２(ＩＦＮ−βＩＩ)、Ｂ−細胞刺激因子２(ＢＳＦ−２)、インターロイキンＨＰ−１(ＨＲ１)、肝細胞刺激因子(ＨＳＦ)、ハイブリドーマ骨髄腫成長因子(hybridoma plasmacytoma growth factor)(ＨＰＧＦ)および２６kＤ因子としてもまた既知)に対応する任意の化合物を意味する。例えば、ＩＬ−６分泌癌細胞系により産生されるような非組換えＩＬ−６も使用できるが、組換えＩＬ−６が好ましい。ＩＬ−６は商業的に入手可能であるか、または、例えば、その出願の内容を引用して本明細書に包含するＥＰＡ０２２０５７４、ＥＰＡ０２５７４０６、ＥＰＡ０３２６１２０、ＷＯ８８／００２０６、ＧＢ２０６３８８２またはＧＢ２２１７３２７に記載のような既知の方法で産生し得る。ＩＬ−６は、例えば真核細胞、例えばＣＨＯ細胞で産生されるようにグリコシル化され、または例えば原核細胞、例えば大腸菌で産生されるようにグリコシル化されていないものであり得る。ＩＬ−６は種交差活性であることが知られているため、ヒトでない種由来のＩＬ−６もまた使用でき、本明細書のＩＬ−６の意味の中に含まれるが、組換えヒトＩＬ−６(rhＩＬ−６)が好ましい。ＩＬ−６の配列に僅かな変化、例えば１、２、３またはそれ以上のアミノ酸の付加、欠失または変異を有するタンパク質、ＩＬ−６および他のタンパク質を含む融合タンパク質；ＩＬ−６の活性フラグメント；および／またはＩＬ−６活性を有するＩＬ−６の変形、切断または変異体が本発明のＩＬ−６の中に含まれると見なされる。
【００１２】
ＩＬ−６と薬理学的に許容可能な希釈剤または担体を含む医薬は既知である。ＩＬ−６は、非経口投与、例えば注射可能溶液または懸濁液の形で、例えばRemington's Pharmaceutical Science, 16th ed.(Mack Publishing Company, Easton, PA 1980)の記載の記載にしたがって、または類似して投与し得る。好適な担体は、食塩水、リンガー液、デキストロース溶液およびハンクス溶液のような水溶性担体および不揮発性油およびエチルオレエートのような非水溶性担体を含む。通常の非経口投与のために、ＩＬ−６は単位投与量の凍結乾燥形で入手可能であり、それを担体と混合し、注射のための好適な溶液または懸濁液を形成し得る。
【００１３】
別法として、ＩＬ−６は、例えば、ポリマーと関連して微小粒子またはデポ形で、インプラント可能または持続放出医薬送達形を使用して投与し得、医薬がマリックスからゆっくり放出されるポリマーマトリックスを形成する。これは、例えば処置すべき疾病が慢性である場合、例えば慢性炎症性疾患である場合、および必要な処置が数週間または数カ月にわたる場合、好ましい。ポリマーは、好適な(例えば、薬理学的に許容可能な)繰り返し単位からなる直鎖状、所望により分枝鎖または架橋していてもよい、高分子量分子(ホモポリマー、共ポリマーおよびヘテロポリマーを含む)で、それは、例えば単一分子の重合化または１個以上の分子の共重合(例えば、ポリ(エチレンカーボネート)は、下記のように酸化エチレンおよび二酸化炭素からである)により作られ得、所望により他の単位でポリマー鎖が遮断されていてもよい。好ましくはポリマーは直鎖状であり、炭素、酸素および水素から成る、例えばポリ−ＤＬ−ラクチド−コ−グリコリド、ポリエチレングリコールまたはポリ(エチレンカーボネート)である。好ましくは、ポリマーは非加水分解表面浸食を示す、例えば本明細書で更に記載するポリ(エチレンカーボネート)である。
【００１４】
用量は、用いるＩＬ−６の正確な型、宿主、投与経路および処置すべき疾病の性質および重さに依存して当然変化する。ＩＬ−６は、大型哺乳類、例えばヒトに、皮下注射または持続放出形で投与し、０.５μg／kg／日から３０μg／kg／日、好ましくは２.５μg／kg／日から１０μg／kg／日、もしくは既知のＩＬ−６の治療投与で、インビボで安全で有効な量、例えば血小板増加用量を提供する。重い急性炎症性疾患、例えば細菌性ショックの場合、高投与量i.v.が、急速で強い反応を達成するのに所望であり得る。ＩＬ−６の投与頻度は、持続放出形の場合、所望により毎日から一日おきまたは毎週またはそれ以下に減少し得、これは処置が長期間になる場合好ましい。ＩＬ−６処置は、悪寒、熱およびインフルエンザ様症状をもたらし得るが、通常アスピリン、アセトアミノフェンまたはインドメタシンのような非麻薬性鎮痛剤の共投与により処置または予防できる。他の明白な副作用は、通常、例えば１０μg／kg／日以上の高投与量でのみ見られ、用量を減少することにより緩和できる。
【００１５】
II．持続放出用ポリマーマトリックス
本発明は、例えば上記徴候における、例えばＩＬ−６の投与および他の医薬のための、医薬の持続放出に好適な医薬組成物を更に提供する。医薬組成物は、特にポリ(エチレンカーボネート)ポリマー類(ポリ(エチレンカーボネート)類またはＰＥＣsともまた呼ばれる)を含むものである。
【００１６】
先行文献は、ポリ(エチレンカーボネート)類の医薬送達系への使用の幾つかの例を提供しているが、先行文献は本発明の特定のポリマーを記載しておらず、インビボ非加水分解表面浸食を受けることができるポリマーを記載していない。先行文献は、本明細書に記載の特定の医薬、例えばＩＬ−６の送達のためのこのような医薬送達系をまた記載しておらず、持続放出系がこのような医薬の送達のために望ましいという示唆もしていない。
【００１７】
本発明のポリマーの分解特性は特に驚きである。一般的な化学知識を基に、炭酸エステル結合は原則として開裂されると予期される。しかしながら、ポリカーボネーツは、インビトロの緩和な条件下では安定であることが証明されている。
【００１８】
Chem.Pharm.Bull. 31(4), 1400-1403(1983)に従うと、ポリ(エチレンカーボネート)類はインビボで分解可能であるが、試験されたポリマーは、例えば最新の分光測定法により、明白に同定されていない。１４０２頁によると、インビボ分解は、加水分解酵素の影響としてのみ説明可能であった。
【００１９】
Chem.Pharm.Bull. 32(7), 2795-2802(1984)に従うと、微小粒子はジブカイン含有ポリ(エチレンカーボネート)から製造された。記載は最初に引用した技術に関連しているが、ジブカインの放出はポリマーのインビトロまたはインビボ分解パターンに関連しているように見えず、ポリマーからの分散に関連している。また、試験したポリ(エチレンカーボネート)の物理的および化学的特性は十分に評価されていない。
【００２０】
Makromol.Chem. 183, 2085-2092(1982)、特に２０８６頁に従うと、二酸化炭素エポキシドポリマーは、生体内分解可能と見なされ、予備的結果は、二酸化炭素−エチレンオキシドポリマーの生体内分解、したがって制御医薬放出の使用を確認したと記載している。生体内分解の主張の裏付けとして、人工臓器３(追補)212(1974)を引用した。この刊行物において、ポリ(エチレンカーボネート)は、最も容易に加水分解され、酵素プロナーゼでさえ、容易に分解できる化合物群に属していると記載されていた。これは、プロナーゼが加水分解酵素の混合物から成るため、インビトロおよびインビボ酵素加水分解が可能であることを意味する。しかしながら、このコメントは非常に疑わしいように思える。我々は、５mm直径および２５mg重量の圧縮円盤形の本願発明のポリ(エチレンカーボネート)類を、リン酸緩衝化食塩水(ＰＢＳ)、ｐＨ７.４中の１０mg／mlプロナーゼおよび５mＭ ＣａＣｌ２・２Ｈ２Ｏならびにリン酸緩衝化食塩水、ｐＨ７.４中の１０mg／mlプロナーゼＥおよび５mＭ ＣａＣｌ２・２Ｈ２Ｏ、３７℃に付し、分解は観察されなかった(図１)。プロナーゼ溶液は毎日変えた。
【００２１】
加水分解により分解されない(例えば、加水分解酵素、例えばプロナーゼの存在下または塩基性条件下)、特定のエチレンカーボネート含量、粘度およびガラス転移(glass transition)温度範囲のポリ(エチレンカーボネート)類を選択したにもかかわらず、インビトロおよびインビボで分解（または崩壊；degradable）される、即ち、排他的に表面浸食されることは驚くべき発見である。本明細書で使用する「表面浸食」の語は、特にポリ無水物およびポリオルトエステルの加水分解に関して使用されているが、まだ明白に定義はされていない。
【００２２】
ポリマー粒子の表面でのマス分解が単に起こる場合、表面浸食は残ったポリマー残基の分子量の減少なしに起こる。表面浸食が観察されたことを本明細書で断言した場合、質量損失決定と一致した残存質量の分子量決定は起こらず、このように、実際表面浸食は一度も証明されていなかった。
【００２３】
実際、今までのところ試験したポリマーのほとんどで、ポリマーバルク浸食が観察された。ポリマーバルク浸食を示す系は、ポリマーが、放出される生体内媒体の環境下で相対的に不安定な医薬化合物、例えばペプチドを挿入している場合、医薬化合物がバルク部分内で既に媒体と接触し、ポリマーから放出されるかなり前にその活性を失うことが可能であるので、明らかに不利である。ポリマーが表面浸食を受ける場合、即ちバルク浸食が起こらない場合、包含された医薬化合物、例えばペプチドは、表面浸食進行が医薬部分まで到達し、医薬粒子が残存ポリマーマスの表面から放出されるその時まで、生体内媒体の有害な影響から守られたままである。バルク浸食に対して表面浸食を示すポリマーマトリックス医薬送達系の場合、従って医薬粒子はより短い時間の間しか生体内媒体の悪影響を受けないため、ポリマーマトリックスからより長い、より高いそしてより一定の薬理学的活性剤の放出を可能にする。
【００２４】
最近の刊行物Proc.Nat.Acad.Sci.USA 90, 552-556(1993)および90, 4176-4180(1993)のポリ無水物について、表面浸食様行動のある特性が記載されている。しかしながら、全バルクが影響を受け、分子量決定は行われてないように思える。更に、この浸食は加水分解型である。下記に定義の選択されたポリ(エチレンカーボネート)類は、インビトロおよびインビボで、排他的に非加水分解表面浸食を示すことが分かった。
【００２５】
本発明は、インビボおよびインビトロで、非加水分解機構で作用する表面浸食により分解可能な、式Ａ
−(−Ｃ(Ｏ)−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−)− Ａ
のエチレンカーボネート単位を有し、７０から１００Ｍol％のエチレンカーボネート含量を有し、クロロホルム中２０℃で測定して固有粘度０.４から４.０dl／ｇを有し、１５から５０℃のガラス転移温度を有するポリマーを提供する。
【００２６】
本発明のポリマーのエチレンカーボネート含量は、７０から１００Ｍol％、特に８０−１００％、好ましくは９０−９９.９％、例えば９４から９９.９％である。このポリマーの固有粘度は、クロロホルム中２０℃で測定して、０.４から４.０dl／ｇである。好ましくは、ポリマーは、２０℃で、クロロホルム中１ｇ／dlの濃度で測定して、０.４から３.０dl／ｇの固有粘度を有する。
【００２７】
そのガラス転移温度は、１５°から５０℃、好ましくは１８°から５０℃である。
文献において、５から１７℃のガラス転移温度を有するポリ(エチレンカーボネート)類が記載されている。
【００２８】
本発明のポリマーは好ましくはエチレンオキシドおよび二酸化炭素の共重合により作られ、その製造工程はまた本発明の一部である。この製造法の結果として、ポリマーは、ほとんどの場合式Ｂ
−(−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−)− Ｂ
のエチレンオキシドを共単位として含有する。
【００２９】
本発明のポリマーが水性媒体、例えばｐＨ７.４のリン酸緩衝化食塩水にさらされた場合、特に、例えば、図２に見られるように、媒体はそのバルク部分には輸送されない。従って、バルク浸食は起こらず、残ったマスは、図３の右欄に見られるように、少なくとも２８日間一定(１００％)を保持する。
【００３０】
ポリ−ＤＬ−ラクチド−コ−グリコリドは、現在、持続医薬放出系において最も普通に使用されているマトリックス材料である。しかしながら、このようなポリマーは、本発明のポリマーと異なり、加水分解により分解する。例えば、最も精巧なポリ−ＤＬ−ラクチド−コ−グリコリド型、即ちグルコース開始ポリＤＬ−ラクチド−コ−グリコリド(ＤＬ−ＰＬＧＧＬＵ)の一つについて、図３の左欄に示すようなＰＢＳ中のマス分解は、ＵＫ特許ＧＢ２１４５４２２に記載されている。
【００３１】
本発明のポリ(エチレンカーボネート)類と当分野のポリ−ＤＬ−ラクチド−コ−グリコリド(ＤＬ−ＰＬＧ)のインビボ分解行動における差異を図３にまた示す。ポリラクチド−コ−グリコリドは、ＤＬ−ＰＬＧＧＬＵの残余マスの分子量減少から見られるように、バルク浸食が起きるが、ポリ(エチレンカーボネート)類の残余マスの質量は一定(１００％)のままである。
【００３２】
両方の場合、インビボ全インプラントの残余マスは１カ月以内に０まで減少し、これはポリ(エチレンカーボネート)がバルク浸食よりむしろ表面浸食を受けていることを意味する。バルク浸食が存在しない結果、導入ポリマーは保存の間、即ち投与前、湿気に影響されず、産生された時と同じ乾燥状態のままである。包含医薬は、湿気に感受性であれ、安定なままである。
【００３３】
本発明は、エチレンオキシドおよびＣＯ２がモル比１：４から１：５で、触媒の影響下重合されるポリマーの製造法をまた提供する。この反応の範囲から、二つのエポキシド分子がＣＯ２分子の妨害ないし互いに反応しても、即ち、オキシアニオン中間体が、ＣＯ２によるカルボキシル化前に他のエチレンオキシド分子を攻撃しても、ポリマー鎖内へのエチレンオキシドの挿入が可能であることは明らかである。従って、ポリマーが数個のエチレンオキシド単位を含むことは予想される。本発明のポリマーは、エチレンオキシド単位を含んでいても、合計式
Ａｍ−Ｂｎ＝
−(Ｃ(Ｏ)−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−)−ｍ−(−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−)−ｎ
【数１】
【００３４】
しかしながら、本発明のエチレンオキシド単位のほとんどが、特に、エチレンオキシド単位のモル比が小さい場合、統計的に隣接したエチレンカーボネート単位を有している。これは、これらの場合、得られるエーテル官能基のほとんどが、ポリマー鎖に沿って炭酸官能基の間に不作為に分散していることを意味する。本発明の生産物のＣＤＣｌ３中の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルはこの仮説を確認する。δ＝約４.３７ppm(積分Ｉa)のエチレンカーボネート単位(２つの炭酸官能基の間のエチレン単位)、一つの炭酸および一つのエーテル官能基の間の約４.２９および３.７３ppm(積分ＩbおよびＩc)、および２つのエーテル官能基の間のエチレン単位の約３.６５ppm(積分Ｉｄ)の信号を示す。エチレンカーボネート単位(Ａ)の比を、次いでＮＭＲ正確限界内で、式：
【数２】
【００３５】
ポリ(エチレンカーボネート)類の構造特性として、文献中には、しばしば、そのエチレンカーボネート含量の変わりに、そのエーテル官能基が示されている。本発明のポリマー中のエーテル官能機(Ｅ)の比は、式
【数３】
【００３６】
ＰＣＴ特許出願ＷＯ９２／２２６００により、エチレンオキシド単位およびエチレンカーボネート単位を、ポリマーが少なくとも５０Ｍol％のエチレンオキシドおよび５０Ｍol％より少ないエチレンカーボネート単位を含むことを意味する、２から４００：２のモル比で含むポリ(エチレンカーボネート)類が製造される。その出願は、ポリマーの生体内分解および薬理学的活性化合物の持続放出のための生体浸食可能マトリックスとしての使用を記載している。しかしながら、ポリマーが実際生体内分解可能であるというデータは示されていない。一般に、このように多量のエーテル官能基を有するポリ(エチレンカーボネート)類はほとんど生体内分解可能ではない。その出願は、ポリマーの表面浸食の官能性に関するいかなる暗示もしていない。
【００３７】
ＵＳ特許３２４８４１５の実施例において、低分子量のMw＝７００−５０００のポリ(エチレンカーボネート)類は、少なくとも７０Ｍol％のエチレンカーボネート単位を含むと記載され、本発明のポリマーと異なり、その生体内分解能について記載がない。
【００３８】
ＰＣＴ出願ＷＯ８９／０５６６４によると、記載の式IIにおいてエチレンオキシドおよびエチレンカーボネート単位を、ポリマーが少なくとも５０Ｍol％のエチレンオキシドを含み、従って最大５０Ｍol％のエチレンカーボネート単位を含むことを意味する１から８：１のモル比で含むポリ(エチレンカーボネート)類が記載されており、本発明のポリマーと異なる。ポリマーは、医薬化合物を含み得る生体内分解可能デバイス、例えばインプラントとしての使用に関して記載されているが、表面浸食に関しての情報は提供されていない。
【００３９】
本発明の工程において、ポリマーの生体内分解速度の遅延または阻害をするエチレンオキシド単位の含量および従ってエーテル官能基の含量は、反応要素の記載されたモル比、反応温度のような反応条件の特定により、および、更に、例えばＺn(Ｃ２Ｈ５)２および水またはアセトンまたはジ−またはトリフェノール、例えばフロログルシンから、それぞれ０.９：１から１：０.９または２：１から１：２のモル比で製造された、または好ましくはＺn(Ｃ２Ｈ５)２およびジオール、特にエチレングリコールから、０.９：１から１：０.９のモル比で製造されたような好適な触媒の選択によりかなり減少できる。
【００４０】
本工程は、好ましくは有機溶媒の媒体または分散剤系、例えばジオキサンおよびＣＯ２内で行う。ＣＯ２は好ましくは液体形で適用し、過剰に存在する。圧力は、好ましくは２０から７０バール、温度は好ましくは１０から８０℃、特に２０から７０℃である。
【００４１】
このようにして得た本発明のポリマーは、通常１５％以下、好ましくは１０％以下、特に５％以下、例えば３％以下のエーテル官能基を含む。エチレングリコールまたはアセトンおよびジエチル亜鉛の触媒を使用して製造した場合、本発明のポリ(エチレンカーボネート)類は、通常５以下、例えば２.５以下の低い多分散性(Ｍw／Ｍn)を示す。
【００４２】
本発明の工程において、触媒またはその一部は、(コ)ポリマーの鎖イニシエーターと見なされている。反応が終わり、鎖が完結した場合、その最終基は水酸基である。鎖が出発した所である、鎖の反対側は、触媒グループまたはそのフラグメントで満たされ得る。もし触媒がエチレングリコールおよびジエチル亜鉛または水およびジエチル亜鉛から作られた場合、ポリマー鎖の両方の末端は同じであると考えられる。しかしながら、触媒がジ−またはトリフェノールおよびジエチル亜鉛から作られた場合、芳香基が、鎖が開始した鎖の末端に挿入され、一方、鎖の他端は、水酸基である、図４から、一つの末端基が、例えばフロログルシンのような芳香イニシエーターで遮断されている場合、遅い生体内分解であることが見られる。この理由から、ポリマー鎖分解は、末端水酸基から開始すると思われる。あるいは、末端水酸基の、末端水酸基を遮断し、本発明のポリ(エチレンカーボネート)類の生体内分解を制御するための、後の誘導体化、例えばエステル化が考えられる。好適な末端エステル基は、(Ｃ１−４８)脂肪酸エステル基、好ましくは(Ｃ１−３０)、特に(Ｃ１−１８)脂肪酸エステル基、例えば酢酸およびステアリン酸のエステル基、または炭酸エステル基、例えばエチレンカーボネート基、またはパモ酸エステル基または乳酸またはグリコール酸またはポリ乳酸またはポリグリコール酸またはポリラクティック−コ−グリコール酸エステル基の様な生体適合性エステル基である。
【００４３】
本発明のポリ(エチレンカーボネート)類は、熱水(９０−１００℃)中で、考慮に入れるべき分子量の減少なく、数時間安定である。５時間沸騰２回蒸溜水に暴露した後、例えば約１８℃以上、例えば２８℃のガラス転移温度の明白な上昇が観察される。この反応工程を行うことにより、高ポリマー純度が得られる。我々は、この方法で処理したポリマーはまた非常に処理し易いことを発見した。
【００４４】
本発明のポリマーのポリ(エチレンカーボネート)部分は、前記のように、即ち少なくとも１カ月生物学的条件下、加水分解酵素により、またはｐＨ１２および３７℃の水により、加水分解可能ではない(図１および８参照)。しかしながら、本発明のポリマーは、インビボおよびインビトロで、スーパーオキシドラジカルアニオンＯ２ ．−の影響下で表面侵食により分解されることが発見された。スーパーオキシドラジカルアニオンＯ２ ．−は、本発明のポリ(エチレンカーボネート)類の存在下、図５に見られるように、インビボおよびエキソビボ(体外)炎症細胞で産生される。現在持続医薬放出系で最も普通に使用されるマトリックス材料であり、バルク加水分解により分解されるポリラクチド−コ−グリコリドは、スーパーオキシドラジカルアニオンＯ２ ．−の産生を誘発せず、同図にグルコース開始ポリ−ＤＬ−ラクチド−コ−グリコリドについて示し、これはまた図３にも使用された。
【００４５】
カリウムスーパーオキシドをＯ２ ．−源として含むインビトロ、水性系が確立され、本発明のポリ(エチレンカーボネート)類の表面浸食を示す(図８)。Ｏ２ ．−ラジカルはこのｐＨ値で充分安定なため、インビトロでｐＨ１２を選択した。
【００４６】
興味深いことに、ポリ(エチレンカーボネート)と、エチレン単位の水素をメチル基に置換したことが異なるポリ(炭酸プロピレン)は、Chem. Pharm. Bull. 31(4), 1400-1403(1983)の日本人著者により示されるように、全く生体内分解性ではない。
【００４７】
本発明のポリ(エチレンカーボネート)類の微小粒子懸濁液を使用した毒性研究は、４８匹のラットで２１日間、および２４匹のイヌで３５日間行った。各々の種で、１日目および１７日目の２回の投与を行った。１０および４０mgポリマー微小粒子／体重kgの皮下および筋肉内注射の後、全身性毒性の臨床的症状、血液学的パラメーター、臨床的血液化学のパラメーター、体重、食物消費における関連作用は観察されなかった。投与部位での組織病理学的変化を、ラットにおいて投与後４および２１日に、イヌにおいて投与後１８および３５日に試験した。予期された炎症反応以外に、異常な組織病理学的変化は見られなかった。
【００４８】
本発明のポリマーの分解速度は、その分子量、エチレンオキシド含量、末端基、例えば生体適合性エステル基の性質、およびＯ２ ．−ラジカルスカベンジャー、例えばビタミンＣの存在に依存して、広範囲で調節し得、５日から６カ月、またはそれ以上、例えば１年、持続し得る。ラジカルスカベンジャーは、好ましくはポリマー内に添加剤として包含され得る。
【００４９】
本発明の(コ)ポリマーの分子量Ｍwは、塩化メチレンを溶出液とし、ポリスチレンを対照としたゲル透過クロマトグラフィーで測定して８０,０００、好ましくは１００,０００、特に２００,０００から２,０００,０００ダルトンである。
【００５０】
上記のChem.Pharm.Bull.32(7)2795-2802(1984)は、分子量５０,０００から１５０,０００ダルトンを有するポリ(エチレンカーボネート)類を使用した。我々は、ポリマーのインビトロおよびインビボ分解は、分子量が８０,０００以上、好ましくは１００,０００以上の場合のみ、充分な比率で達成され得ることを発見した(図６)；これは、本発明の好ましい態様である。
【００５１】
本発明のポリマーは、医薬組成物中で、特に医薬活性物質の包含のためのマトリックス材料として使用し得る。インビトロおよびインビボ条件下で、バルク浸食は起こらず、活性化合物はポリマーにより保護され、活性化合物は、マトリックスの表面浸食のためにマトリックス表面に出現すると直ぐに(前ではない)放出される。Ｏ２ ．−を含まないインビトロのｐＨ７.４の水性系は、痕跡量の活性化合物が放出される(図９参照)。
【００５２】
表面浸食の更なる利点は、医薬活性化合物分子の大きさが、その放出速度に影響を及ぼさないことである。
【００５３】
従って、本発明は、特に活性化合物放出と非加水分解ポリマーマス分解の１：１の直線関係の非加水分解表面浸食を示し、活性化合物がポリマーマトリックス内で保護されている、ポリマー中の医薬活性化合物の医薬組成物を提供する。
【００５４】
本組成物は、好ましくは微小粒子またはインプラントの形で使用する。
【００５５】
本発明の医薬組成物の製造は、それ自身既知の方法で、好適な噴霧乾燥または乳濁技術により微小粒子を、ポリ(エチレンカーボネート)類が柔らかくなり、従って処理可能になる高温で、両方粒子状で固体状態の医薬化合物およびポリ(エチレンカーボネート)類の混合により、所望により続いて混合物を固体状態まで冷却し、好適な形に修飾することによりインプラントを製造し得る。ポリ(エチレンカーボネート)の溶液に溶解または分散状態の医薬化合物を混合し、溶媒中を蒸発させ、その後、固体残余物を好適なインプラント形に形作ることもまた可能である。
【００５６】
微小粒子含有医薬組成物は、それらを好適なガレヌス賦形剤と共に後処理し、所望によりそれらを好適なディスペンサーにもって行くことにより製造し得る。
【００５７】
医薬特性および製造法に依存し、医薬装薬含量は、広範囲で、０.００１％から約７０重量％、例えば０.００１から２０重量％、好ましくは０.００１から５重量％の範囲で変化できる。高医薬装薬のためのポリマー中への媒体の浸透は、避けるべきであり、装薬含量の上限を制限する。
【００５８】
医薬化合物の投与の医学的実施において、全ての型医薬活性化合物が、本発明のポリ(エチレンカーボネート)と共に使用し得る。微小粒子の場合、好ましくは、少量で医薬活性であり、長期間途切れることない血中濃度が必要である、例えばホルモン、ペプチドまたはタンパク質、例えばソマトスタチン、インターフェロンまたはインターロイキンのような型であるが、特に不安定であり、胃腸で経口使用後において吸収されず(desintegrate)、従って非経口投与が好ましい医薬の使用が好ましい。
【００５９】
本発明のデポ製剤は、広範囲な活性剤、例えば避妊薬、鎮静剤、ステロイド、スルホンアミド、ワクチン、ビタミン、抗偏頭痛薬、酵素、気管支拡張剤、心臓血管薬、鎮痛剤、抗生物質、抗原、抗痙攣剤、抗炎症剤、抗パーキンソン剤、プロラクチン分泌阻害剤、抗喘息薬、老人病薬および抗マラリア剤のような医薬活性物質の投薬用に使用し得る。活性剤は、広範囲の化学化合物、例えば、オクトレオチド(イギリス特許ＧＢ第２２３４８９６Ａ号に記載)のようなペプチドを含む、親油性および／または親水性活性剤から選択し得る。
【００６０】
活性タンパク質またはペプチドは好ましくはサイトカイン、例えばインターロイキン、Ｇ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦまたはＬＩＦ、インターフェロン、エリスロポエチン、シクロスポリンまたはホルモンまたはそれらの同族体、例えばオクトレオチドである。
【００６１】
医薬組成物は、
活性成分が、例えばワクチンアジュバントとしてのサイトカイン、例えばインターロイキン(ＩＬ−３、ＩＬ−６)または造血コロニー刺激因子(Ｇ−ＣＳＦ、例えばフィルグラスティム、ＧＭ−ＣＳＦ、例えばモルグラモスティム、サルグラモスティム、Ｍ−ＣＳＦ)である場合、免疫調節、
【００６２】
活性成分が造血成長因子、例えばＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＩＬ−３、ＩＬ−６、白血病阻害因子(ＬＩＦ)、幹細胞因子(ＳＣＦ)またはこれらの組み合わせから成る場合、骨髄抑制性治療または骨髄移植の後の造血回復の達成
活性成分が、例えば、放射線治療癌細胞またはワクチン抗原(各々のサイトカイン遺伝子を形質導入した放射線治療癌細胞に類似)と共に投与される場合、防御免疫応答を刺激するための医薬またはサイトカイン、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−６、ＩＬ−２、ＩＬ−４またはこれらの組み合わせを含む場合、活性成分の高局所濃縮の達成
【００６３】
活性成分が、例えば抗原、特に癌抗原、ウイルス抗原または細菌抗原と共に投与されるＧＭ−ＣＳＦを含む場合、有効な免疫反応の誘発
例えば、活性成分がＧＭ−ＣＳＦを含む場合、組成物の局所注射による傷治癒の誘発
【００６４】
活性成分が、例えば補助分子(共受容体)の阻害剤、特にＣＤ２８−Ｂ７相互作用、ＣＤ４０−ＣＤ４０架橋相互作用、癒着性因子相互作用阻害剤と組み合わせたＧＭ−ＣＳＦである場合、Ａｇ特異的免疫耐性の誘発
【００６５】
活性成分が、例えばサイトカイン、特にインターロイキン(ＩＬ−３、ＩＬ−６)またはサイトカイン分泌誘発剤、例えば脂質誘導体、例えばＥＰ０３０９４１１、特に実施例１の化合物、またＭＲＬ９５３として既知の化合物である場合、細胞増殖抑制処置と組み合わせた、またはワクチンアジュバントとしての治療
【００６６】
例えば、活性成分がイムノフィリン(immunophilin)結合免疫抑制剤、例えばシクロスポリン(例えばシクロスポリンＡ)、アスコマイシン(例えばＦＫ５０６)またはラパマイシン(例えば、ＷＯ９４／０９０１０に記載のようなラパマイシンまたはその誘導体、例えば、４０−Ｏ−ヒドロキシエチル−ラパマイシン)である場合、特異的免疫抑制
【００６７】
抗炎症サイトカイン、例えばＩＬ−６、ＩＬ−１０またはＴＧＦβ；またはインターフェロン、例えばＩＦＮ−β１またはベタセロン；またはＩＬ−１、ＴＮＦαまたはＩＬ−４のための可溶性サイトカイン受容体またはサイトカイン受容体アンタゴニストの持続放出による自己免疫疾患および炎症性疾患の処置または予防
【００６８】
ＩｇＥのための高親和性受容体の可溶性α鎖(ＦcＥＲＩ)の持続放出によるアレルギー性疾患の処置または予防
例えばオクトレオチド、サイトカイン、特にインターロイキンによる癌処置
例えば、リーシュマニア、細菌感染、酵素蓄積疾患(テイザックス病、ゴーシェ病)の処置のための選択的標的指向
【００６９】
ＡＩＤＳまたはＡＲＣ治療
例えば破傷風毒素ワクチンのワクチン接種
例えば活性成分がエリスロポエチンである場合、造血
活性成分が抗炎症剤、特に経口で生体内利用できないものまたは非常に短い半減期のもの、例えばＩＬ−１β変換酵素阻害剤、メタロプロテアーゼ(metalloprotease)阻害剤である場合、炎症性関節への関節内注射
に使用し得る。
【００７０】
哺乳類のワクチンに対する免疫反応を促進する方法は、ワクチン接種が必要な哺乳類へ有効量のＧＭ−ＣＳＦとワクチンと組み合わせた投与を含むことが、国際ＰＣＴ出願ＷＯ９４／０１１３３に記載されている。しかしながら、ＧＭ−ＣＳＦは、活性化合物が、長期間にわたり殆ど一定放出され、それによりＧＭ−ＣＳＦの反復投与は減少できる本発明の方法では正確に(carefully)遅延しなかった。
【００７１】
本発明は、インターロイキンまたはＣＳＦの非経口投与のための、特に非加水分解浸食を示すポリマー内、特に上記に定義のポリマー内の、薬理学的活性化合物の医薬組成物を特に提供する。
【００７２】
本発明はまた、このような処置を必要とする患者への非経口投与を含む、このような組成物の患者への投与方法を提供する。
本発明のデポ製剤は、その中に包含されている具体的な医薬の既知の適応症に使用し得る。
【００７３】
医薬化合物およびデポ製剤の投与すべき正確な量は、多くの因子、例えば処置すべき疾病、処置の所望の期間、医薬化合物の放出速度およびポリ(エチレンカーボネート)の生体内分解性に依存する。
【００７４】
所望の製剤は、既知の方法で製造し得る。必要な薬理学的活性剤の量およびその放出速度は、既知のインビトロまたはインビボ技術、例えばどのくらい、具体的な活性剤濃度が血漿中に許容濃度で残るかを基本にして決定し得る。マトリックスの分解性は、またインビトロまたは、特に、例えば皮下組織中のマトリックス材料の量が一定時間後に測定されるようなインビボ技術により得られる。
【００７５】
本発明のデポ製剤は、例えば微小粒子の形で、経口、経鼻または経肺、好ましくは皮下、筋肉内または静脈内投与、具体的には好適な液体担体中の懸濁液として、またはインプラントの形、例えば皮下により投与し得る。
【００７６】
本発明のデポ製剤の反復投与は、例えば１、２または３週間、または１カ月後にポリマーマトリックスが充分分解した場合、有効であり得る。
【００７７】
本発明のポリ(エチレンカーボネート)マトリックスの利点は、医薬化合物の放出の間、ポリマー鎖は小さい分子量まで分解され、それが投与部位から体液により輸送されることである。
【００７８】
好ましい化合物オクトレオチドのための医薬装薬の例は、下垂体機能亢進症のための、ペプチドを(コ)ポリマーに対して少なくとも０.１重量％、好ましくは０.５から２０重量％、好ましくは２.０から１０、特に３から６重量％含む微小粒子を有する非経口投与液体デポ製剤である。オクトレオチドの全用量は、例えば、１カ月の処置のために、下垂体機能亢進症において２０から３０mg、肺癌において１００から２００mgまでである。
【００７９】
微小粒子からのペプチドの放出時間は、５日から約２週間またはそれ以上であり得る。
【００８０】
簡便には、持続性放出製剤は、ウサギまたはラットに２mgオクトレオチド／動物体重kgの量で皮下投与した場合、血漿中のオクトレオチド濃度を少なくとも０.３ng／mlおよび好ましくは２０ng／ml以下を長期間示す(コ)ポリマー担体中にオクトレオチドを含む。
【００８１】
本発明の医薬組成物は、好ましくはまた(コ)ポリマー中に包含される更なる添加剤、例えば、特にＯ２ ．−のスカベージャーとしてのラジカルスカベンジャーを含む。このようなスカベージャー、例えばメナジオンまたはビタミンＣの存在は、ポリ(エチレンカーボネート)の分解速度を減少させる(図７)。
【００８２】
添加剤の他の型は、恐らくスーパーオキシドラジカルアニオンＯ２ ．−、例えばポリオール、特に糖アルコール、具体的にマンニトールの影響化で恐らく発達する、ヒドロキシラジカルのスカベージャーである。この添加剤は、例えばマイクロカプセル包含したＩＬ−３を投与した試験動物の体重増加において好ましい影響を有することがまた分かった。この添加剤なしては、体重増加は遅い。組成物が微小粒子形である場合、凝析および沈殿に対して−微小粒子懸濁液の安定に良い影響を有するため、同じまたは他の添加剤を、存在する微小粒子に外部的に添加し得る。
【００８３】
添加剤が存在する場合、好ましくは製剤の全重量に対して１から９０重量％の量である。
【００８４】
スーパーオキシドラジカルアニオンＯ２ ．−の影響下での好ましいインビトロおよびインビボマス分解は図８に見られ得る。残余マス分解曲線はほとんど直線であり、インビボおよびインビトロ分解条件が異なるため異なった傾きを有する。時間単位当たりの分解質量の量はほとんど一定である。
【００８５】
スーパーオキシドラジカルアニオンＯ２ ．−の影響下での薬理活性化合物、例えばヒトＩＬ−３のインビボ放出曲線は分解曲線の様にほとんど直線(図１０)であり、これは時間単位当たりの医薬化合物放出の量がほとんど一定であることを意味する。
【００８６】
インビボヒトＩＬ−３放出およびインビボマス分解の両方の組み合わせは、図１１に記録され、インビボマス分解と医薬放出の間に１：１の相関を示す。
【００８７】
実施例１−６：ジエチル亜鉛および水から製造する触媒によるポリ ( エチレンカーボネート ) 類の一般的な製造法
具体的な実験の反応物、溶媒、触媒等の量は表１参照。
乾燥ジオキサン２００mlおよびＺn(Ｃ２Ｈ５)２１９.５ｇ(１５８mmol)をＮ２−雰囲気下７５０mlフラスコ内に入れた。フラスコは撹拌機、滴下漏斗、温度計およびＮ２−注入口が付いていた。滴下漏斗はＣaＣl２−管が付いていた。溶液を氷浴中で１０℃まで冷却し、ジオキサン(表１参照)中のＨ２Ｏ２.７mlを、温度が１０−１５℃の間に保たれるようにゆっくり添加した。反応混合物を、最初の無色溶液が薄黄色に変わるまで、室温で更に４５分撹拌した。この触媒溶液をオートクレーブに移し、ＣＯ２４０ｇで処理し、表１に示唆の時間１２５℃に加熱した。混合物を、次いで室温まで冷却し、ＣＯ２５６０ｇ(１２.７mol)を加え、続いて１時間にわたりエチレンオキシド１３２ｇ(３mol)をゆっくり添加した。反応を、表１に示唆の時間、進行させた。この期間の後、圧力を数時間にわたりゆっくり下げた。粘性のスラリーである生産物をジオキサンで希釈し、ジオキサン溶液を０.２５Ｍ水性ＨＣｌ溶液に注ぐことにより沈殿させた。沈殿を適切な量のＣＨ２Ｃl２(２−４リットル)に溶解し、水性０.５Ｍ ＨＣｌ(２×)およびＨ２Ｏ(１×)で洗浄した。溶液を無水Ｎa２ＳＯ４で乾燥させ、溶液の粘性に応じて、最終量０.５から１.５リットルまで蒸発させた。ＣＨ２Ｃl２溶液を４倍量のメタノールに注ぐことにより生産物を沈殿させた。白色沈殿を濾取し、一晩０.５mbar／５０℃で乾燥させた。粗生産物を更なる生成のためにアセトンに再沈殿させた、表２参照。全ての生産物は、エチレンカーボネート単位含量の差による３.６５、３.７３、４.２９および４.３７ppmのシグナルの相対的強度以外、同一な１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを提供した。
【００８８】
【表１】
【００８９】
【表２】
ｂ）１mg／mlの濃度で
【００９０】
実施例７−１１：ジエチル亜鉛およびジオールから製造する触媒によるポリ ( エチレンカーボネート ) 類の一般的な製造法
１．触媒の製造
乾燥ジオキサン２００mlを乾燥、４首７５０mlフラスコに窒素雰囲気下入れた。ジエチル亜鉛１９.５０ｇ(１５８mmol)をガラスシリンジにより加えた。フラスコは撹拌機、滴下漏斗、温度計およびアルゴン注入口が付いていた。滴下漏斗は乾燥ジオキサン１００mlで満たし、塩化カルシウム管が付いていた。次いで、装置をアルゴン流下に設置した。新しく蒸留した乾燥エチレングリコール(モレキュラーシーブス上に保持)９.００ｇ(１４５mmol、０.９２mol当量)を、滴下漏斗中のジオキサンにアルゴン流下加えた。機械的に撹拌しているフラスコをアルゴン下氷浴中で１０℃に冷却した。ジオキサン中のエチレングリコール溶液をジオキサン中のジエチル亜鉛の撹拌している溶液に３０分にわたり滴下し、その間温度は１０−１４℃に保った。エタンガスの発生および沈殿がエチレングリコール溶液の添加と同時に観察された。添加が終了した後、冷却浴を除去し、混合物を更に６０分撹拌し、その間に室温まで暖めた。次いで、均質の混合物をアルゴン下オートクレーブ(１リットルオートクレーブＮＢ２)に入れた。オートクレーブは二酸化炭素約４０ｇ(０.９mol)で満たされ、撹拌しながら１時間１２５℃で加熱し、触媒を二酸化炭素で前処理した。
【００９１】
２．重合
前処理触媒の入ったオートクレーブを室温まで下げ、更に二酸化炭素５６０ｇ(１２.７mol)で満たした。次いで、エチレンオキシド(９９.８％)１３２ｇ(３mol)をオートクレーブ内の撹拌している混合物に、１時間のゆっくりの注入により加えた。添加が終了した後、オートクレーブを表３に示唆の温度まで加熱し、混合物をその温度で示唆された時間撹拌した。
【００９２】
３．後処理
オートクレーブを室温まで冷却し、圧力を定圧までゆっくり下げた。白色の粘性スラリーである生産物を、全量７リットルのジクロロメタン内に取り、１０３５mlの０.４Ｍ ＨＣｌ溶液を加え、混合物を室温で３時間撹拌した。層が分離し、有機層を２回０.５Ｍ ＨＣｌ ３リットルおよび２回水４.５リットルで洗浄した。次いで、ジクロロメタン溶液を硫酸ナトリウム１２０ｇで乾燥し、最終量約２リットルまで濃縮した。生産物をメタノール６リットルへこの溶液をゆっくり添加することにより沈殿させた。沈殿を１６時間、真空で４０℃で乾燥し、粗ポリマーを得、それを以下のように更に精製した：
【００９３】
粗生産物をジクロロメタンに溶解し、溶液を１５分間５倍量のアセトンに注ぎ、生産物を沈殿させた。沈殿を１６時間、真空で４０℃で乾燥させ、対応するポリ(エチレンカーボネート)を得た。本生産物の物理的特性は、表４に示す。全ての生産物は１７５０および１２２５cm−１で強いＩＲ−吸収を示した。エチレンカーボネート単位の１Ｈ−ＮＭＲシグナルは４.３７ppmに出現した。
【００９４】
ｂ）他に指示がない限り、エチレングリコール
ｃ）ジオキサンの代わりに溶媒としてテトラヒドロフラン
ｄ）エチレングリコールの代わりに１,４−ブタンジオール
【００９５】
【表３】
ｂ）１mg／mlの濃度で
【００９６】
実施例１２：ジエチル亜鉛およびフロログルシンから製造する触媒によるポリ ( エチレンカーボネート ) 類の合成の実験法
１．触媒の製造
乾燥ジオキサン２００mlを乾燥、４首７５０mlフラスコに窒素雰囲気下入れた。ジエチル亜鉛１９.６０ｇ(１５８.７mmol)をガラスシリンジにより加えた。フラスコは撹拌機、滴下漏斗、温度計およびアルゴン注入口が付いていた。滴下漏斗は乾燥ジオキサン１００mlで満たし、塩化カルシウム管が付いていた。装置をアルゴン流下に設置した。乾燥フロログルシン１３.３４ｇ(１０５.８mmol、０.９２mol当量)を、滴下漏斗中のジオキサンにアルゴン流下加えた。機械的に撹拌しているフラスコをアルゴン下氷浴中で１０℃に冷却した。ジオキサン中のフロログルシン溶液をジオキサン中のジエチル亜鉛の撹拌している溶液に３０分にわたり滴下し、その間温度は１０−１４℃に保った。エタンガスの発生および沈殿がフロログルシン溶液の添加と同時に観察された。添加が終了した後、冷却浴を除去し、混合物を更に３０分撹拌し、その間に室温まで暖めた。次いで、均質の混合物をアルゴン下オートクレーブ(１リットルオートクレーブＮＢ２)に入れた。オートクレーブは二酸化炭素約４０ｇ(０.９mol)で満たされ、撹拌しながら１時間１２５℃で加熱し、触媒を二酸化炭素で前処理した。
【００９７】
２．重合
前処理触媒の入ったオートクレーブを室温まで下げ、更に二酸化炭素５６０ｇ(１２.７mol)で満たした。次いで、エチレンオキシド(９９.８％)１３２ｇ(３mol)をオートクレーブ内の撹拌している混合物に、１時間のゆっくりの注入により加えた。添加が終了した後、オートクレーブを２１℃で２６０時間撹拌した。
【００９８】
３．後処理
オートクレーブの圧力を定圧までゆっくり下げた。生産物を、全量４リットルのジクロロメタン内に取り、１０３５mlの０.４Ｍ ＨＣｌ溶液を加え、混合物を室温で３時間撹拌した。層が分離し、有機層を２回０.５Ｍ ＨＣｌ １.５リットルおよび２回水２リットルで洗浄した。次いで、ジクロロメタン溶液を硫酸ナトリウム１２０ｇで乾燥し、最終量約１リットルまで濃縮した。生産物をメタノール３リットルへこの溶液をゆっくり添加することにより沈殿させた。沈殿を１６時間、真空で４０℃で乾燥し、粗ポリマーを得、それを以下のように更に精製した：
【００９９】
粗生産物をジクロロメタンに溶解し、溶液を１５分間５倍量のアセトンに注ぎ、生産物を沈殿させた。沈殿を再びジクロロメタンに溶解し、メタノールで再び沈殿させ、１６時間、真空で４０℃で乾燥させ、対応するポリ(エチレンカーボネート)を得た。
【０１００】
生産物の物理的特性：
Ｍw＝２５８０００Ｄa、Ｍn＝３５６００Ｄa、Ｔg＝１５.４℃。
ＩＲ：１７５１および１２２５cm−１で強い吸収
１Ｈ−ＮＭＲによると、生産物のエチレンカーボネート含量は約９６％である。
【０１０１】
実施例１３：ジエチル亜鉛およびアセトンから製造する触媒によりポリ ( エチレンカーボネート ) 類の合成の実験法
エチレンオキシド１３２ｇ(３Ｍol)をＣＯ２６００ｇ(１３.６Ｍol)と、５０℃、９６時間、アセトン８.４３ｇ(１４５.１６mmol)およびジエチル亜鉛１９.６２ｇ(１５９mmol)から製造した触媒を使用して共重合させた。
触媒の合成および重合は、触媒を製造するのに、ジオールの代わりにアセトンを使用した以外、実施例７−１１に記載の方法と同様に行った。
このようにして得たポリ(エチレンカーボネート)のエチレンカーボネート含量は９３％であり、以下の特性を有する：
Ｍw＝２３３kＤa、Ｍn＝１０９kＤa、Ｍw／Ｍn＝２.１４、Ｔg＝２２.４℃。
【０１０２】
実施例１４：末端基−ステアロイル化ポリ ( エチレンカーボネート ) の合成
Ｍw＝１５３０００Ｄa、Ｍn＝６８９００Ｄa、Ｔg＝２９.１℃を有するポリ(エチレンカーボネート)１ｇを乾燥ジクロロメタン３０mlに溶解した。溶液を、連続してピリジン０.９８ｇ(１２.３８mmol)および塩化ステアロイル１０ｇ(３３.０mmol)で処理した。反応混合物を室温で４８時間撹拌し、次いでジクロロメタン５０mlで希釈し、連続して２×１５０mlの飽和炭酸水素ナトリウムおよび水で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、このジクロロメタン溶液をｎ−ヘキサン３００mlに滴下することにより、生産物を沈殿させた。このようにして得た粗生産物を、ジクロロメタンに溶解し、３倍量のジエチルエーテルからの沈殿により更に精製した。最後に、生産物を真空で、４０℃、１６時間乾燥し、末端基−ステアロイル化ポリ(エチレンカーボネート)を得た。
Ｍw＝１４４０００Ｄa、Ｍn＝７１０００Ｄa、Ｔg＝２５.６℃。
【０１０３】
実施例１５：末端基−アセチル化ポリ ( エチレンカーボネート ) の合成
(Ｍw＝１５３０００Ｄa、Ｍn＝６８９００Ｄa、Ｔg＝２９.１℃を有する)ポリ(エチレンカーボネート)１ｇを乾燥ジクロロメタン１０mlに溶解した。ピリジン０.９８ｇ(１２.３８mmol)を加え、続いて無水酢酸１０.０８ｇ(９８.７mmol)を加えた。反応混合物を室温で１２０時間撹拌した。次いでジクロロメタン５０mlで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム２００mlにゆっくり注いだ。混合物を３０分撹拌し、次いで層を分離した。有機層を再び１５０mlの飽和炭酸水素ナトリウムおよび最後に水で洗浄した。ジクロロメタン溶液を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、このジクロロメタン溶液をジエチルエーテル３００mlに滴下することにより、生産物を沈殿させた。沈殿を再びジクロロメタンに溶解し、ジエチルエーテルで再沈殿させた。生産物を真空で、４０℃、１６時間乾燥し、末端基がアセチル化されたポリ(エチレンカーボネート)を得た。
Ｍw＝１５００００Ｄa、Ｍn＝６９１００Ｄa、Ｔg＝２６.８℃。
【０１０４】
実施例１６：沸騰水処理によるポリ ( エチレンカーボネート ) の精製
(Ｍw＝３２８０００Ｄa、Ｍn＝１４９０００Ｄa、Ｔg＝１６.４℃の実施例８の)ポリ(エチレンカーボネート)１ｇを小片に切断し、沸騰２回蒸留水５０ml中で２時間撹拌する。この水を除き、新しい水で置換し、それを再び沸騰温度まで加熱した。更に３時間後、ポリマー片を単離し、真空で４０℃、１６時間乾燥した。得られた生産物は、以下の物理的特性を有する：Ｍw＝３４００００Ｄa、Ｍn＝１４８０００Ｄa、Ｔg＝２８.３℃。従って、ポリマーの分子量の変化をもたらさないガラス転移温度の劇的な上昇が観察された。
【０１０５】
実施例１７：１％ h ＩＬ−３医薬装薬組成物 ( 微小粒子 )
１．微小粒子を含む医薬の製造
実施例８のＭw＝３２８,０００のポリ(エチレンカーボネート)(ＰＥＣ)１ｇを塩化メチレン１０mlに撹拌しながら溶解し、続いて水０.６mlに溶解したヒトインターロイキン３(hＩＬ−３)１２.１mgを加えた。混合物を１分間、２０,０００rpmでUltra-Turraxで激しく撹拌した(＝内部Ｗ／Ｏ相)。ゼラチンＡ１ｇを脱イオン水２０００mlに５０℃で溶解し、溶液を２０℃まで冷却した(＝外部Ｗ相)。Ｗ／Ｏ相およびＷ相を激しく混合した。それにより内部Ｗ／Ｏ相は外部Ｗ相に微小滴として均質に分散した。得られる３層エマルジョンを１時間ゆっくり撹拌した。この結果、塩化メチレンが蒸発し、微小粒子が内部相の滴から産生され、硬化した。
【０１０６】
微小粒子の沈降の後、上清を吸引し、微小粒子を真空分画または遠心により回収し、水で濯いでゼラチンを除いた。最後に、微小粒子は増量剤としてのマンニトールの使用によりフリーズドライするか、７２時間真空オーブン(無マンニトール製剤)で乾燥し、ふるいにかけて(０.１２５mmメッシュサイズ)最終生産物を得た。
【０１０７】
２．偽薬製造
Ｍw＝３２８,０００の実施例８のＰＥＣ１ｇを撹拌しながら塩化メチレン１０mlに溶解した(内部Ｏ相)。ゼラチンＡ１ｇを脱イオン水２０００mlに溶解し、溶液を２０℃まで冷却した(＝外部Ｗ相)。ＯおよびＷ相を激しく撹拌した。それによりＯ相は外部Ｗ相に微小滴として均質に分散した。得られるエマルジョンを１時間ゆっくり撹拌し、上記の方法で更に処理した。
【０１０８】
実施例１８−２６：
以下に記載の全ての生薬は、表３の実施例８に従って合成し、実施例１６の記載のものと同じ方法で更に精製したＰＥＣを使用して製造した。それら全ては３００,０００から４５０,０００のＭw、９４％以上のエチレンカーボネート含量および１８から５０℃の範囲のＴgを有した。
【０１０９】
実施例１８：０ . ２％ h ＩＬ−２装薬組成物 ( 微小粒子 )
ヒトインターロイキン２(hＩＬ−２)２.９mgを水１.５mlに溶解し、実施例１７に記載のようにＩＬ−２含有微小粒子を製造した。
微小粒子を、マンニトールを増量剤として使用することによりフリーズドライし、ふるいにかけて(メッシュサイズ０.１２５mm)最終製品を得た。
【０１１０】
実施例１９： h ＩＬ−２装薬組成物 ( 微小粒子 )( 無水 )
ヒトインターロイキン２ ２.９mgを直接有機層(塩化メチレンに溶解したＰＥＣ)に分散させた以外、実施例１８と同様にして製剤した。
【０１１１】
実施例２０：０ . ８％ h ＩＬ−３装薬組成物 ( インプラント )
１．圧縮造形
１００％(w／w)ポリ(エチレンカーボネート)(偽薬)、９９％(w／w)ポリ(エチレンカーボネート)および１％(w／w)ヒトインターロイキン−３または７９.２％(w／w)ポリ(エチレンカーボネート)、２０％(w／w)マンニトールおよび０.８％(w／w)ヒトインターロイキン−３からなる微小粒子２５mgを３分、６０−７０℃で１６０バールで圧縮造形し、直径５mmのインプラント(錠剤)を得た。錠剤をインビトロおよびインビボ医薬放出実験に使用するまで密封ガラス容器中、４℃で保存した。
【０１１２】
２．インビトロ医薬放出実験
マンニトール非含有およびマンニトール含有ヒトインターロイキン３製剤および偽薬の各３個錠剤を３７℃で、２.５％(v／v)Ｎ−[２−ヒドロキシエチル]−ピペラジン−Ｎ'−[２−エタンスルホン酸](１ｍ)、１０％(v／v)ウシ胎児血清および２％(v／v)ペニシリン／ストレプトマイシン溶液含有合成培養培地中で震盪した。サンプルを、０.５、１、２、５時間および１、２、３、７、１４、２０日に培地から取り、続いて培地を新しくした。サンプル中のヒトインターロイキン３含量はＥＬＩＳＡにより測定した。
【０１１３】
３．インビボ医薬放出実験
最適条件下に置いた雄ラットを、吸入麻酔薬で麻酔し、各々のラットに、ヒトインターロイキン−３製剤および偽薬を皮下皮膚嚢に移植した。１、４、７、１４、２１日後、ラットを吸入麻酔の過剰投与により殺戮した。残った錠剤を取り出し、粘着組織を除き、乾燥させた。錠剤の質量損失を重力計で測定した。続いて、残った錠剤のヒトインターロイキン−３含量をＨＰＬＣおよびＥＬＩＳＡで測定した。
【０１１４】
実施例２１：０ . ０００２％−２％ h ＩＬ−２装薬組成物 (w ／ o ／ w 微小粒子 )
ＰＥＣ４ｇを、塩化メチレン８０mlにマグネティックスターラーで撹拌しながら溶解した。この溶液に、蒸留水またはエタノール数滴含有水６mlに溶解した適量のＩＬ−２(２％では１１３.２mg、０.２％では１１.３２mg等)を加えた。混合物をUltra-Turaxで激しく混合し、ポリマー層(＝内部Ｗ／Ｏ層)にＩＬ−２溶液を分散させた。１／１５Ｍリン酸緩衝液(ｐＨ７.４)２００mlに５０℃でゼラチンＡ１ｇを溶解し、その溶液を２０℃に冷却した(＝外部Ｗ層)。Ｗ／ＯおよびＷ層を激しく撹拌した。それにより内部Ｗ／Ｏ層は小滴に分離し、外部Ｗ層に均質に分散した。得られた３重エマルジョンを１時間ゆっくり撹拌した。これにより塩化メチレンが蒸発し、微小粒子が内部層の滴から硬化した。
【０１１５】
上清の微小粒子の沈殿(または遠心)の後、上清を吸引し、微小粒子を真空濾過により回収し、水で濯いでゼラチンを除去した。最後に、微小粒子を２４時間真空オーブンで乾燥させ、ふるいにかけて最終製品を得た。
ＨＰＬＣおよび生検で試験した封入能率は１０から１００％の間であった。
【０１１６】
実施例２２：０ . ０００２％−２％ h ＩＬ−２装薬組成物 (s ／ o ／ w 微小粒子 )
ＩＬ−２を水に溶解しない以外、実施例２１に記載のように製造した。ＩＬ−２溶解の変わりに、医薬を直接ポリマー層(＝Ｏ層)に分散させた。ＨＰＬＣおよび生検で試験した封入能率は１０から１００％の間であった。
【０１１７】
注：ポリマー、塩化メチレン、水および医薬の量は、製品品質を変えることなく、広範囲で変化する。２０％までの高医薬装薬が得られる。外層において、ゼラチンをポリビニルアルコール等の他の乳化剤と置き換えることができおよび／または乳化剤／緩衝液の濃度は変わる。記載の分離および乾燥工程は、濾過、凍結乾燥および噴霧乾燥のような既知の医薬技術に置き換わる。
【０１１８】
実施例２３：１％ h ＧＭ−ＣＳＦ装薬組成物 (w ／ o ／ w および s ／ o ／ w 微小粒子 )
製造は、実施例２１および２２に記載の方法により行った。記載のようにＳ／Ｏ／ＷおよびＷ／Ｏ／Ｗ調整物が製造される。しかしながら、Ｗ／Ｏ／Ｗの封入能率は６０％であるが、一方Ｓ／Ｏ／Ｗ製剤は、低い封入能率を示した。
【０１１９】
実施例２４：１−１０％オクトレオチド−パモ酸 ( ＳＭＳ−ＰＡ ) 装薬組成物 (w ／ o ／ w および s ／ o ／ w 微小粒子 )
製造は、実施例１９および２０に記載のように行った。しかしながら、ＳＭＳ−ＰＡは水溶性ではない。したがって、医薬は、Ｗ／Ｏ／Ｗ製剤のために、水に溶解せず、分散した。封入能率をＨＰＬＣで測定し、２０から１００％の間であった。
【０１２０】
実施例２５：１−１０％オクトレオチド−酢酸装薬組成物 (w ／ o ／ w および s ／ o ／ w 微小粒子 )
製造は、実施例２１および２２に記載の方法に従って行った。封入能率は、ＨＰＬＣで測定して、２から４０％の間であり、親油性ＳＭＳ−ＰＡより明らかに低い。
高い価は、凍結乾燥活性化合物物質を使用した後のＳ／Ｏ／Ｗ製剤において得られた(より小さい医薬粒子)。
【０１２１】
実施例２６：ウサギにおける微小粒子ならびにウサギおよびラットにおけるインプラントからのオクトレオチドパモ酸 ( ＳＭＳ−ＰＡ ) 放出
約２mg／体重kgの量のポリ(エチレンカーボネート)ディスクの皮下移植またはポリ(エチレンカーボネート)微小粒子(医薬装薬１.９５％)の注射を、雄ウサギ(チンチラ・バスタード、体重約３kg)に、ディスクの皮下移植を雄ラット(ウィスター、体重約３７５ｇ)に行った。ラットおよびウサギ当たり、それぞれ約４０mgおよび３００mgの微小粒子の形の医薬含有ポリマーを、それぞれインプラントに圧縮するか、または懸濁液として投与した。
【０１２２】
ラットおよびウサギのためのインプラントディスクは、それぞれ０.５および１cmの直径を有し、実施例２０に記載のように製造した。
【０１２３】
医薬放出を測定するために、血液サンプルを１４および２１日後にそれぞれラットおよびウサギから回収し、インプラント内の医薬残留を放射免疫測定およびＨＰＬＣにより測定した。
【０１２４】
ポリ(エチレンカーボネート)の質量損失とＳＭＳ−ＰＡ放出の直線相互関係が、高分子量hＩＬ−３(図１１)に示されるように見られた(図１３)。インプラント材料の最大７５％が、ウサギに投与後３重間で分解し、最大９５％のインプラント材料が、ラットに投与後２週間で分解した。
【０１２５】
炎症反応(多形核白血球および他の細胞の浸入を含む)は、ポリ(エチレンカーボネート)の生体内分解の必須用件である。炎症反応の過程は、医薬の種特異的血漿濃度プロフィールを提供する種特異的であると期待できる。これはＳＭＳ−ＰＡで見られた(図１２)。ラットにおいて、ポリ(エチレンカーボネート)の生物分解は、ウサギより早い。ウサギにおいて、ＳＭＳ−ＰＡの血漿濃度はゆっくり上昇し、約９日目で一定放出相に到達し、２１日まで続く。
【０１２６】
実施例２７：０ . ０００２％−２％ rh ＩＬ−６装薬組成物 (w ／ o ／ w 微小粒子 )
ＰＥＣ４ｇを塩化メチレン８０mlにマグネティックスターラーで撹拌しながら溶解する。この溶液に、蒸留水またはエタノール数滴を添加した水６mlに溶解した適当量のrhＩＬ−６(２％では１１３.２mg、０.２％では１１.３２mg等)を添加する。混合物をＵltra−Ｔuraxで激しく撹拌し、ＩＬ−６溶液をポリマー層(＝内部Ｗ／Ｏ層)に分散させる。ゼラチンＡ１ｇを１／１５Ｍ リン酸緩衝液(ｐＨ７.４)に５０℃で溶解し、溶液を２０℃に冷却する(＝外部Ｗ層)。Ｗ／ＯおよびＷ層を激しく混合する。それにより内部Ｗ／Ｏ層は、小滴へ分離し、それは外部Ｗ層に均質に分散した。得られる３重エマルジョンを１時間ゆっくり撹拌し、塩化メチレンを蒸発させ、微小粒子が内部層の滴から硬化する。
【０１２７】
微小粒子の沈澱(または遠心)の後、上清を吸引し、微小粒子を真空濾過により回収し、水で濯いでゼラチンを除去する。最後に、微小粒子を２４時間真空オーブンで乾燥させ、ふるって最終製品を得る。
封入能率をＨＰＬＣおよび生検で測定し、１０から１００％の間である。
【０１２８】
実施例２８：０ . ０００２％−２％ rh ＩＬ−６装薬組成物 (s ／ o ／ w 微小粒子 )
製剤は、ＩＬ−６を水に溶解しない以外、実施例２７に記載のように製造する。ＩＬ−６を溶解する変わりに、医薬を直接ポリマー層(＝Ｏ層)に分散させる。ＨＰＬＣおよび生検で測定した封入能率は、１０から１００％の間であった。
【０１２９】
注：ポリマー、塩化メチレン、水および医薬の量は、製品品質を変えることなく、広範囲で変化する。２０％までの高医薬装薬が得られる。外層において、ゼラチンをポリビニルアルコール等の他の乳化剤と置き換えることができおよび／または乳化剤／緩衝液の濃度は変わる。記載の分離および乾燥工程は、濾過、凍結乾燥および噴霧乾燥のような既知の医薬技術に置き換わる。
【０１３０】
実施例２９−３１：ＴＮＦαおよび／またはＩＬ−１介在疾病の処置におけるＩＬ−６の使用
実施例２９：多発性硬化症の動物モデル：ルイスラットの慢性再発実験的誘発アレルギー性脳脊髄炎モデル ( ＣＲ−ＥＡＥ )
ラットにおける実験的誘発アレルギー性脳脊髄炎(ＥＡＥ)は、よく研究されたヒトの多発性硬化症の実験モデルである。[パターソン、ADV.IMMUNOL. 5(1966)131-208；レビンら、AM.J.PATH.47(1965)61；マックファーリンら、J.IMMUNOL. 113(1974)712；ボレル、TRANSPLANT&CLIN.IMMUNOL. 13(1981)3]。ラットに、他種の神経組織をアジュバンドと共に注射し、得られるアレルギー反応は、多発性硬化症で産生される自己免疫領域を模倣したラットの神経領域を導く。ラットは部分的または完全に麻痺し、疾病の重症度を試験薬ありまたはなしで測定する。ステロイドおよび免疫抑制剤のような多くの医薬は、疾病の発病を遅くするように働くが、一度疾病が確立されたら、再発を予防できない。
【０１３１】
慢性再発実験的誘発アレルギー性脳脊髄炎モデル(ＣＲ−ＥＡＥ)[フューラーら、J. NEUROIMMUNOL：10(1985)159-166]は、従って確立された疾病の多発性硬化症の患者の処置の実際の困難さを非常に模倣している、詳細要求モデルと見なされる。このモデルにおいて、疾病はモルモット脊索およびマイクオバクテリウム・ツベルクロシス(Mycobacterium tuberculosis)に富むフロインド完全アジュバントの混合物を注射して誘発する。典型的に、７５−８０％の感受性ラットは、最初の４０日間に２−３回の臨床再発を示すＣＲ−ＥＡＥを発症する。６０−８０日後、ＣＲ−ＥＡＥのラットの約５０％は、全例のわずか３５％しか完全に回復しない、更なる再発を起こす。残りの６５％のこれらの動物は、疾病の進行した過程を示す。医薬処置は、最初の疾病の発作から回復した後の１６日目に開始する。
【０１３２】
生理食塩水に溶解した組換えヒトインターロイキン６(rhＩＬ−６、サンド)を１６日目に開始して、２日毎にラット当たり１０マイクログラムのＩＬ−６(約５０μg／kg)を使用して、i.p.注射した。対照動物およびＩＬ−６群の動物は、１１−１４日に通常の重症度(severity)の疾病発作(急性)を起こした。０＝疾病なしから４＝動物の完全麻痺の重症度の目盛りにおいて、対照群は平均３.０およびＩＬ−６群は平均３.２であった。ＩＬ−６の１６日目から３０日目(全７回の投与)の２日毎の投与は、疾病の殆ど完全な阻害をもたらした。５匹のＩＬ−６処置ラットのうち１匹だけが僅かな第２疾病発作(重症度０.４)を示した。５匹の対照動物のうち５匹が、平均重症度１.８の第２疾病発作を１６日目に、および第３の発作を２２−２９日目に起こした。ＩＬ−６処置群では他の再発は見られなかった。
【０１３３】
実施例３０：関節炎の動物モデル：重症複合免疫不全症 ( ＳＣＩＤ ) マウスにおけるボレリア誘発関節炎
ライム関節炎(またはライム病関節炎)は、開始事象が確信をもって知られているため、慢性関節炎の独特な形を示す。この疾病は、だに伝播スピロヘータ ボレリア・ブルグドルフェリ(Borrelia burgdorferi)の感染により誘発される顕著な特徴の一つの疾病である。ライム関節炎の患者の滑液領域の特徴は、関節リューマチの滑液と非常に似ている。両方の患者群において、滑液裏細胞増大、滑液細胞肥大、血管増殖および滑液裏領域での単核細胞炎症が観察できる。多くの血漿細胞、高内皮細静脈、散在マクロファージおよび僅かな樹枝状細胞が、激しいＭＨＣクラスII抗原存在と共に見られる。加えて、ＩＬ−１、ＩＬ−６およびＴＮＦ−αのようなサイトカインが、種々の関節炎の患者の滑液で検出され、これらのサイトカイン関節破壊の病原の一因であることを示唆する。最近、ライム関節炎のマウスモデルが、機能的ＴおよびＢ細胞を欠くＳＣＩＤマウスで開発された(エム・エム・シモンら(1991)Immunology Today 12:11)。免疫不全マウスへのボレリア・ブルグドフェリの感染は、顕著な持続性の寡少関節炎(oligoarthritis)を導く。ＳＣＩＤマウスにおけるボレリア誘発関節炎は、コルチコステロイド(プレドニゾロン３０mg／kg sc)に反応するが、３０mg／kg s.c.までの量のＳＩＭ(シクロスポリンＡ)のような免疫抑制剤には反応しない。開始事象が確実には知られてはいない他の型の関節炎を含む、サイトカイン誘発関節炎の優れたモデルと見なされている。
【０１３４】
６週令Ｃ.Ｂ.−１７ＳＣＩＤマウス(ＳＣＩＤ変異はホモ接合であり、ボムホルトガルト、デンマークから得、５−６匹動物／群)に１００mio.ボレリア・ブルグドルフェリ生物を、尾の付け根にs.c.注射して接種した。免疫完全C.B.−１７マウス(同じ源)を対照動物として使用した。それらはボレリア・ブルグドフェリ注射でいかなる疾病も発症しない。組換えヒトＩＬ−６(rhＩＬ−６、サンド、貯蔵溶液５mg／ml)を生理食塩水で希釈し、１０マイクログラム／マウスi.p.の量で１週間５回、全１７回の注射をした。マウスで脛骨と足根足首および尺骨手根関節の関節炎の臨床的兆候を無作為に追跡した。臨床関節炎は、以下のパラメーターに従って得点付した。
− 兆候なし
？ 兆候疑問
(＋) 関節の赤味
＋ 僅かな腫張
＋＋ 中程度の腫張
＋＋＋ 脛骨と足根足首および尺骨手根関節の重い腫張
【０１３５】
臨床関節炎のピークにおいて、マウスを屠殺し、関節をシャッファー溶液に固定し、プラスティック９１００に乗せ、ヘマトキシリンエオジン染色した。
【表４】
【０１３６】
実施例３１：細菌性ショックのマウスモデル
ヒト細菌性ショックのモデルとして広範囲に使用されているため、ｄ−ガラクトサミン感受性マウスを使用して、マウス内毒素ショックモデルにおけるＩＬ−６の効果の研究を決定した。我々の方法および結果は下記の通りである：
体重１８−２２ｇの雌ＯＦ１マウスに、０.１５mg／kgリポポリサッカライド内毒素(ＬＰＳ)および５００mg／kg ｄ−ガラクトサミン含有ＰＢＳ溶液０.２mlをi.p.注射した。マウスをそれぞれ１０匹の群に分け、下記のように処理した:
【０１３７】
rhＩＬ−６(ＩＬＳ９６９、サンド)、rhＩＬ−２(サンド)およびrhＩＬ−４(サンド)をＰＢＳで希釈した。総ての注射(０.２ml容)は腹腔内で投与した。第３群(実験１)および第３群から第８群(実験２)において、ＩＬ−６およびＩＬ−２は、マウスが単一０.２ml注射を受けるように、ＬＰＳ／ｄ−ＧＡＬ溶液に希釈した。括弧内の数値は、各々のマウスに投与した量を示唆する。ＰＢＳの多数回投与が、ＬＰＳ投与前または後に異なった時間扱うことにより誘発されるストレス反応による群内変化性を制御するために必要であった。
【０１４０】
マウス生存は４８時間観察した。統計的研究のために、我々はカイ平方試験を使用した。図１に示すように、ＬＰＳ投与２４時間後、１０匹中９匹の対照マウスが死んだ。ＬＰＳ注射３時間前またはＬＰＳ注射２時間後のＩＬ−６処置は、それぞれ約６０％(ｐ＝０.１２)および７０％(ｐ＝０.２６)まで死亡率を減少させた。一方、ＬＰＳ投与時のＩＬ−６投与は、群の死亡率を１０％(ｐ＜０.０１)まで減少させた。防御効果は、４８時間後、第３群の死亡率が僅かに、即ち３０％上昇し、対照群に対して有意高い防御(ｐ＜０.０１)をまだ示唆したため、長期間持続した。第４群の死亡率は、７０％から８０％に移動するが、第１および２群において変化は見られなかった。
【０１４１】
これらの結果を基にして、我々は異なった用量のＩＬ−６の効果を試験した。第１の実験によると、最適な時間であったため、我々はＩＬ−６をＬＰＳ注射時に与えた。我々はＬＰＳと同時に投与したＩＬ−３およびＩＬ−４の効果を、ＬＰＳ／ｄ−ＧＡＬ調製物において組換えタンパク質を使用することにより可能性のある人工物を排除する方法として、また調査した。我々は、また、ＩＬ−６がＬＰＳ投与前または後で１００μg／マウスの用量で投与して、内毒素死亡からマウスを防御するのに有効か否か試験した。
【０１４２】
実験２の結果(図２)は、実験１のものと一致している。この試験でまた、ＩＬ−６処置は、マウスを内毒素死から防御した。ＩＬ−６をＬＰＳと共に投与した場合、ＬＰＳ２４時間後に得られる防御は、２０(３０％死亡率、ｐ＝０.０３)、４(５０％死亡率、ｐ＝０.１６)および０.８(７０％死亡率、ｐ＝０.６１)μg／マウスで用量依存的てあったが、１００μg／マウス(６０％死亡率、ｐ＝３３)の用量で、マウスは２０μg／マウスよりも低く防御された。１００μgＩＬ−６／マウスの前および後処置は、同じ用量のＩＬ−６をＬＰＳと同時に投与した場合に観察される結果と同等の防御をもたらす。同様のマウス生存結果がＬＰＳ４８時間後に観察された。
【０１４３】
ＬＰＳ投与時に投与したＩＬ−４は、マウスを内毒素死から防御するのに有効ではなかったが、ＩＬ−２はマウス生存率を減少させた。
【図面の簡単な説明】
【図１】 ポリ(エチレンカーボネート)のインビトロのマウス分解におけるプロナーゼの影響を示すグラフである。
【図２】 リン酸緩衝化食塩水(ＰＢＳ)ｐＨ７.４中のポリ(エチレンカーボネート)インプラントの膨張を示すグラフである。
【図３】 Ｄ−グルコース開始ポリ（ＤＬ−ラクチド−コ−グリコリド（５４．６：４５．４）およびポリ（エチレンカーボネート）の加水分解バルク浸食および非加水分解表面浸食を示すグラフである。
【図４】 ラットにおける皮下投与ポリ(エチレンカーボネート)誘導体のマウス分解を示すグラフである。
【図５】 多形核白血球におけるポリ(エチレンカーボネート)開始スーパーオキシド産生を示すグラフである。
【図６】 分子量の関数としてのポリ(エチレンカーボネート)のインビボおよびインビトロマス分解を示すグラフである。
【図７】 ラットにおける皮下投与１４日後のポリ(エチレンカーボネート)のマス分解におけるスーパーオキシドラジカルスカベンジャーの影響を示すグラフである。
【図８】 インビボおよびインビトロのポリ(エチレンカーボネート)のマス分解を示すグラフである。
【図９】 インビトロにおけるポリ(エチレンカーボネート)インプラントからのｈＩＬ−３放出を示すグラフである。
【図１０】 ラットにおけるポリ(エチレンカーボネート)インプラントからの皮下ひＬ−３放出を示すグラフである。
【図１１】 ラットにおけるポリ(エチレンカーボネート)の質量損失とｈＩＬ−３放出の関係を示すグラフである。
【図１２】 ラットおよびウサギにおけるＳＭＳ−ＰＡの血漿濃度を示すグラフである。
【図１３】 ラットおよびウサギにおけるポリ(エチレンカーボネート)の質量損失とＳＭＳ−ＰＡ放出の関係を示すグラフである。
Claims (13)
- 式：−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−）−
のエチレンカーボネート単位を有し、７０から１００Ｍｏｌ％のエチレンカーボネート含量を有し、クロロホルム中２０℃、１ｇ／ｄｌの濃度で測定して固有粘度０．４から４．０ｄｌ／ｇを有し、１５から５０℃のガラス転移温度を有する、生物分解性ポリマーのマトリックス中に、分散された状態で医薬的活性化合物を含む、医薬組成物。 - 活性化合物がタンパク質またはペプチドである、請求項１に記載の医薬組成物。
- 活性化合物がサイトカインである、請求項２記載の医薬組成物。
- 活性化合物がインターロイキンである、請求項３記載の医薬組成物。
- 活性化合物がＩＬ−６である、請求項４記載の医薬組成物。
- 微小粒子またはインプラントの形の、請求項１〜５のいずれかに記載の医薬組成物。
- ポリマーマトリックス中にさらに添加剤を分散された状態で含む、請求項１〜６のいずれかに記載の医薬組成物。
- 添加剤がラジカルスカベンジャーである、請求項７記載の医薬組成物。
- 添加剤がポリオールである、請求項７記載の医薬組成物。
- 添加剤が糖アルコールである、請求項９記載の医薬組成物。
- 添加剤がマンニトールである、請求項１０記載の医薬組成物。
- 組成物の全重量を基づいて１〜９０重量％の添加剤を含む、請求項７〜１１のいずれかに記載の医薬組成物。
- 非経口投与のための、請求項１〜１２のいずれかに記載の医薬組成物。
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