JP3121072B2 - コンアルブミンが結合した光学異性体分離剤 - Google Patents

コンアルブミンが結合した光学異性体分離剤

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Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明はコンアルブミンが担体に
結合した光学異性体用分離剤及び該担体を充填した高速
液体クロマトグラフィ−用カラムに関する。
【０００２】
【従来の技術】自然界においては、ラセミ体を構成する
光学異性体のうち１つのものだけが存在したり、生理活
性を有することが知られている。近年、医薬品の分野に
おいてもラセミ体を構成する一方の光学異性体のみが顕
著な薬理作用を有したり、毒性が低い場合のあることが
見いだされ、分離された光学異性体による医薬品開発の
重要性が増している。光学異性体の分離については、従
来から、数多くの分離方法が知られているが、工業的規
模で実施できるものは少なく、簡便で安価に分離できる
方法が望まれていた。最近では、高速液体クロマトグラ
フィ−の進歩により、光学異性体を分離する方法が一般
に知られるようになり、種々の性能を有した分離カラム
が報告されている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】しかし、光学異性体を
有する化合物の種類は非常に多いのに対し、それらを分
離するカラムの種類は少なく、必ずしもすべての光学異
性体が効率的に分離できるわけではない。したがって、
新しい分離カラムが望まれている。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、新たな分
離能を有した光学異性体分離剤を開発すべく鋭意検討し
た結果、次に示す構成により、上記目的を達成できるこ
とを見いだし本発明を完成した。すなわち、本発明は、
コンアルブミンまたは化学修飾したコンアルブミンを担
体に結合した固定相からなることを特徴とする光学異性
体分離剤である。また、本発明は、コンアルブミンまた
は化学修飾したコンアルブミンを担体に結合した固定相
からなることを特徴とする光学異性体分離剤を充填した
高速液体クロマトグラフィ−用カラムである。
【０００５】本発明によると、従来不可能あるいは不十
分であった光学異性体の分離を効果的に行うことができ
る。したがって、本発明の目的は、新たな光学異性体分
離能を有した新たな光学異性体分離剤及びそれを充填し
た高速液体クロマトグラフィ−用カラムを供給すること
である。
【０００６】本発明において担体とは、コンアルブミン
が化学的に結合することができる微細な支持体を意味
し、例えばシリカゲル、ガラス、セルロ−ス、合成ポリ
マ−またはアミノプロピルシリカゲルを挙げることがで
きる。コンアルブミンは、アルブミンに属するタンパク
質であり、分子量は７００００（８７０００とする説も
ある）である。等電点ｐＨは５．８である。卵白中に存
在し、鶏卵中の卵白タンパク質の１３．８％に相当す
る。コンアルブミンは、市販のものを利用しても良い
し、公知の方法（化学大辞典３、ｐ．７４４、昭和５２
年）により卵白から調製しても良い。
【０００７】コンアルブミンを担体に結合するには、固
定相を形成するために通常行われている方法によること
ができる。例えば、アミノプロピルシリカゲルを担体と
した場合には、Ｎ，Ｎ−ジサクシニミジルカ−ボネ−ト
を架橋剤として、コンアルブミンを結合することがで
き、更に、シリカゲルを担体とした場合には、３−グリ
シドオキシプロピルトリメトキシシランを架橋剤として
コンアルブミンを結合することができる。
【０００８】本発明における化学修飾したコンアルブミ
ンとは、グルタ−ル化、ジオ−ル化、アシル化、還元さ
れたグルタ−ル化等により、コンアルブミンの一部を化
学的に変換したコンアルブミンを意味する。化学修飾の
方法は、例えばグルタ−ル化の場合、コンアルブミン及
びグルタ−ルアルデヒドをｐＨ６．８のリン酸緩衝液に
入れ、３０℃で１５時間撹拌してグクタ−ル化コンアル
ブミンを得る。更に、水素化ホウ素ナトリウムを用いて
ｐＨ６．８のリン酸緩衝液中で、４℃１２時間撹拌して
還元型コンアルブミンを得ることができる。次に、スク
シンイミジルスベレイトをアセトニトリルに溶解し、炭
酸水素ナトリウム緩衝液とアミノプロピルシリカゲルを
加え反応させる。有機溶媒をよく洗浄後、炭酸水素ナト
リウム緩衝液中で上記の化学修飾したコンアルブミンを
反応させ、化学修飾したコンアルブミンが結合した担体
を得ることができる。化学修飾したコンアルブミンが結
合した担体は、コンアルブミンが結合した担体を化学修
飾することによっても得ることができる。
【０００９】本発明において、光学異性体とは、分子内
に不整炭素原子を有するキラル化合物を意味し、多くの
化合物があるが、医薬品分野の例を挙げれば、クロルプ
レナリン、アスコルビン酸、アンピシリン、トコフェロ
−ル、エピネフリン、エフェドリン、キニ−ネ、フェニ
レフリン、プロプラノロ−ル、メタンフェタミン、スコ
ポラミン、メチルド−パ、アゼラスチン、ベラパミル等
である。
【００１０】本発明による光学異性体分離剤は、主とし
てカラムに充填後、高速液体クロマトグラフィ−に接続
することにより使用される。したがって、光学異性体の
分離は、ＨＰＬＣに関する通常の操作により、目的物質
の性質に応じて適宜移動相組成等の分析条件を選択して
行えば良い。
【００１１】
【実施例】次に実施例を挙げて本発明を更に詳細に説明
するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではな
い。 実施例１ アミノプロピルシリカゲル３ｇおよびＮ，Ｎ−ジサクシ
ニミジルカ−ボネ−ト２ｇを０．１Ｍ炭酸水素ナトリウ
ム緩衝液（ｐＨ６．８）１００ｍｌに入れ、一夜撹拌
し、ガラスフィルタ−上に取り、水洗して活性化アミノ
プロピルシリカゲルの懸濁液を用意した。別に、コンア
ルブミン２ｇを０．１Ｍ炭酸水素ナトリウム緩衝液（ｐ
Ｈ６．８）３０ｍｌに溶解した溶液を用意し、それを前
記懸濁液に加え、本発明分離剤を得た。
【００１２】実施例２ 実施例１で得た分離剤をスチ−ルカラムに充填し、光学
異性体分離用カラムを得た。 実施例３ シリカゲル１０ｇを１４０℃で２４時間乾燥し、冷却
後、トルエン１４０ｍｌに懸濁し、３−グリシドオキシ
プロピルトリメトキシシラン１５ｍｌを加え、過熱還流
し、５時間後に上部より低沸点留分を除き、ガラスフィ
ルタ−上に取り、トルエン、テトラヒドロフラン、メタ
ノ−ルで順次洗浄し、６０℃で２時間乾燥して、エポキ
シ活性化シリカゲルを得た。この５ｇをｐＨ８．５のホ
ウ酸緩衝液５０ｍｌに懸濁し、これにコンアルブミン５
００ｍｇを加え、室温で２４時間反応後、ガラスフィル
タ−上に取り、水洗して本発明分離剤を得た。
【００１３】実施例４ 実施例３で得た分離剤を２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ
７．０）に懸濁し、カラムに充填して光学異性体分離用
カラムとした。 実施例５ 実施例１で得た担体２ｇ及びグルタ−ルアルデヒド０．
１ｇを０．０６Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．８）３０ｍｌ
に入れ、３０℃で１５時間撹拌し、グルタ−ル化された
コンアルブミン（非還元型）が結合した担体を得た。更
に、０．２ｇの水素化ホウ素ナトリウムを加え、４℃で
１２時間撹拌、還元しグルタ−ル化されたコンアルブミ
ン（還元型）が結合した担体を得た。 実施例６ 実施例５で得た担体をカラムに充填し、光学異性体分離
用カラムとした。
【００１４】
【効果】以下の実験例により本発明の効果を示す。 実験例１ 実施例２で得られた光学異性体分離用カラムを用いて、
アゼラスチンの分離を行った。 ＨＰＬＣ条件 移動相 ８％エタノ−ル含有５０ｍＭリン酸緩衝液
（ｐＨ５．０） 流速 １．０ｍｌ／ｍｉｎ 検出 ２３０ｎｍ 結果を図１に示す。
【００１５】
【図１】保持時間１９分のピ−クはｄ体であり、２５分
のピ−クはｌ体である。図１より、本発明分離剤によ
り、アゼラスチンの光学異性体が分離されることが明ら
かである。
【００１６】比較例１ 糖タンパク質の一種であるオボムコイドを用いた市販の
オボムコイドカラム（商品名ＵＬＴＲＯＮ ＥＳ−ＯＶ
Ｍ）を使用してアゼラスチンの光学異性体分離を行っ
た。図２及び３には、移動相として２％及び１％のテト
ラヒドロフラン／２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ４．８）
を用いたときのクロマトグラムを示す。
【図２】
【図３】図２、３より、アゼラスチンの光学異性体は分
離されないことが分かる。移動相にメタノ−ル、アセト
ニトリルを用いても同様に分離されなかった。
【００１７】実験例２ 実施例２で得られた光学異性体分離用カラムを用いて、
ベラパミルの分離を行った。 ＨＰＬＣ条件 移動相 ５％エタノ−ル含有５０ｍＭリン酸緩衝液
（ｐＨ４．５） 流速 １．０ｍｌ／ｍｉｎ 検出 ２３０ｎｍ 結果を図４に示す。
【図４】保持時間２．５分のピ−クはｄ体であり、３．
５分のピ−クはｌ体である。図４より、本発明分離剤に
より、ベラパミルの光学異性体が分離されることが明ら
かである。
【００１８】
【図面の簡単な説明】
図１は本発明にかかるカラムを用いた時のｄ，ｌ−アゼ
ラスチンの液体クロマトグラムを表す。図２、３は、オ
ボムコイドカラムを用いたときのｄ，ｌ−アゼラスチン
の液体クロマトグラムを示す。図４は本発明にかかるカ
ラムを用いたときのｄ，ｌ−ベラパミルの液体クロマタ
グラムを表す。図１、図４共に、左がｄ体、右がｌ体で
ある。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き 審査官 西川 和子 (56)参考文献 特開 昭62−161051（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C07B 63/00 B01D 15/08 C07B 57/00 310 G01N 30/48

Claims (5)

    (57)【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】コンアルブミンを担体に結合した固定相か
    らなることを特徴とする光学異性体分離剤。
  2. 【請求項２】担体がシリカゲル、ガラス、セルロ−ス、
    合成ポリマ−またはアミノプロピルシリカゲルである請
    求項１記載の光学異性体分離剤。
  3. 【請求項３】コンアルブミンが化学修飾したコンアルブ
    ミンである請求項１記載の光学異性体分離剤。
  4. 【請求項４】コンアルブミンの化学修飾がグルタ−ル化
    もしくはその還元化、ジオ−ル化またはアシル化である
    請求項３記載の光学異性体分離剤。
  5. 【請求項５】コンアルブミンまたは化学修飾したコンア
    ルブミンを担体に結合した固定相からなることを特徴と
    する光学異性体分離剤を充填した高速液体クロマトグラ
    フィ−用カラム。
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