JPS6041619A - 分離用物質およびその製造方法 - Google Patents
分離用物質およびその製造方法Info
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- JPS6041619A JPS6041619A JP59116324A JP11632484A JPS6041619A JP S6041619 A JPS6041619 A JP S6041619A JP 59116324 A JP59116324 A JP 59116324A JP 11632484 A JP11632484 A JP 11632484A JP S6041619 A JPS6041619 A JP S6041619A
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- orosomucoid
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- enantiomer
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は分離用物質およびその製造方法に関し、分離目
的のために、オロソムコイド（ｏｒｏｓｏｍｕｃｏｉｄ
）・その官能類似体（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ａｎａ
ｌｏｇｓ ）、誘導体（ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ ）
、またはフラグメント（ｆｒａｇｎｅｎｔｓ ）を使用
するものである。
的のために、オロソムコイド（ｏｒｏｓｏｍｕｃｏｉｄ
）・その官能類似体（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ａｎａ
ｌｏｇｓ ）、誘導体（ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ ）
、またはフラグメント（ｆｒａｇｎｅｎｔｓ ）を使用
するものである。
キラ／ｌ／ （ｃｈｉｒａｌ）な、すなわち不斉炭素原
子を含む分子からなる薬剤においては、その治療効果は
ある種の鏡像異性体（ｅＨａｎｔ、ｉｏｍｅｒ ：以下
型ｅこ鏡像体という）ないし光学異性体（ｏｐｔｉｃａ
ｌ ｉｓｏｍｅｒ）に依存していることが立証されてい
る。臨床的に用いられる薬剤が、等量の二つの鏡像体か
らなるラセミ化合物（ｒａｃｅｍａｔｅ ） 、または
複数の鏡像体のうちの一つのみが臨床的に所望の効果を
有している鏡像体混合物からなる場合は、゛不活性′”
体が相応の治療効果を有せず副作用をもたらすことがあ
る。従って“活性”の鏡像体のみを利用することがこの
種の薬剤の治療効果を増進させること１こなる。
子を含む分子からなる薬剤においては、その治療効果は
ある種の鏡像異性体（ｅＨａｎｔ、ｉｏｍｅｒ ：以下
型ｅこ鏡像体という）ないし光学異性体（ｏｐｔｉｃａ
ｌ ｉｓｏｍｅｒ）に依存していることが立証されてい
る。臨床的に用いられる薬剤が、等量の二つの鏡像体か
らなるラセミ化合物（ｒａｃｅｍａｔｅ ） 、または
複数の鏡像体のうちの一つのみが臨床的に所望の効果を
有している鏡像体混合物からなる場合は、゛不活性′”
体が相応の治療効果を有せず副作用をもたらすことがあ
る。従って“活性”の鏡像体のみを利用することがこの
種の薬剤の治療効果を増進させること１こなる。
上述のような特性の薬剤の開発と製造において、分析的
および調製的規検で鏡像体の分離を可能にする技術が要
求されている。薬剤の発展は副作用を最少にするために
より選択的な治療に向けられており、現在登録されてい
る薬剤のほとんどのものは厳格Ｅこ立体的に規定されて
いる。すなわち、これらの薬剤は所望の薬理学的効果を
有する鏡像体のみを含んでいる。
および調製的規検で鏡像体の分離を可能にする技術が要
求されている。薬剤の発展は副作用を最少にするために
より選択的な治療に向けられており、現在登録されてい
る薬剤のほとんどのものは厳格Ｅこ立体的に規定されて
いる。すなわち、これらの薬剤は所望の薬理学的効果を
有する鏡像体のみを含んでいる。
このような状況下において、この種の薬剤の製造および
調合における工程を検査するための分離方法に対する要
求が増大している。さらに血漿や尿のような体液中の鏡
像体の含有量を測定する方法に対する要求も増加してい
る。この測定は、一つの鏡像体のみが投与された場合に
治療上の利点が得られるかどうかを計測するためにｇ像
体の薬動力学的特徴付け（ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔ
ｉｃ ｏｈａｒａｏｔｅｒ−ｉｚａｔｉｏｎ ）に使用
することができる。
調合における工程を検査するための分離方法に対する要
求が増大している。さらに血漿や尿のような体液中の鏡
像体の含有量を測定する方法に対する要求も増加してい
る。この測定は、一つの鏡像体のみが投与された場合に
治療上の利点が得られるかどうかを計測するためにｇ像
体の薬動力学的特徴付け（ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔ
ｉｃ ｏｈａｒａｏｔｅｒ−ｉｚａｔｉｏｎ ）に使用
することができる。
現在、液体クロマトグツフィーによってラセミ化合物の
薬剤の鏡像体を直接分離する可能性は制限されている。
薬剤の鏡像体を直接分離する可能性は制限されている。
公知の方法の大半はラセミアミノｒｅ （ｒａｃｅｍｉ
ｃ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ ）の分割をｔテなうもの
である。鏡像体を分離する三つの異なる方法が知られて
いる。
ｃ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ ）の分割をｔテなうもの
である。鏡像体を分離する三つの異なる方法が知られて
いる。
鮫も古い方法は間接的方法であり、ラセミ物質と他の物
質の純粋な鏡像体との反応に基づいている。この反応に
よりいわゆるジアステレオマー誘導体（ｄｉａｓｔｅｒ
ｅｏｍｅｒｉｃ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ ）カニ形成
さｉｔ。
質の純粋な鏡像体との反応に基づいている。この反応に
よりいわゆるジアステレオマー誘導体（ｄｉａｓｔｅｒ
ｅｏｍｅｒｉｃ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ ）カニ形成
さｉｔ。
コノジアステレオ−ｑ −（ｄｉａｓｔｅｒｅｏｍｅｒ
ｓ）は非キフルカヲム（ｎｏｎ−ｃｈｉｒａｌ ｃｏｌ
ｕｍｎ ）で分離できる０しかし、この方法は時間がた
かり、しかも使用したキフル試ａ （Ｇｈ ｌ ｒ Ｑ
ｌ ｒ ｅａ ５ ｅ ｎ ｆｉ ）のラセミ化のた
めに、あるいは鏡像体がキラル試桑と種々の割合で反応
するために、例えば薬剤物質の光学的純度の測定に重大
な誤差を生じることがある。
ｓ）は非キフルカヲム（ｎｏｎ−ｃｈｉｒａｌ ｃｏｌ
ｕｍｎ ）で分離できる０しかし、この方法は時間がた
かり、しかも使用したキフル試ａ （Ｇｈ ｌ ｒ Ｑ
ｌ ｒ ｅａ ５ ｅ ｎ ｆｉ ）のラセミ化のた
めに、あるいは鏡像体がキラル試桑と種々の割合で反応
するために、例えば薬剤物質の光学的純度の測定に重大
な誤差を生じることがある。
ａ像体の分離には、キフルな静止相も使用されている。
この相はキラルな宿造の化合物を固定相上に不動化ない
し固定することによって形成される。しかし、これらの
相の大半は異なる種類の化学物質に対する使用可能性ｅ
こ対して重大な制限がある。その上、これらの相の多く
のものについてそれを使用することができるためには彼
検物質が誘導体の形で存在することが必要である。この
ことはこの方法の調製的使用が制限されていることを意
味する。
し固定することによって形成される。しかし、これらの
相の大半は異なる種類の化学物質に対する使用可能性ｅ
こ対して重大な制限がある。その上、これらの相の多く
のものについてそれを使用することができるためには彼
検物質が誘導体の形で存在することが必要である。この
ことはこの方法の調製的使用が制限されていることを意
味する。
特にアミノ酸の鏡像体はキラ／錯化剤化剤（ｃｈｉｒａ
ｌｃｏｍｐｌｅｙｉｎｇａｇｅｎｔ）を液体クロマトグ
ラフィーによる分離系中の移動相１こ加えることによっ
ても分離できる。しかし、この錯化剤を移動相に加える
方法は、調製目的の使用には適さない。さらにこの方法
はキグル銘化剤を多Ｊ＋１に必要とするためをこ、経済
的ＩｕＪ点から不利である。
ｌｃｏｍｐｌｅｙｉｎｇａｇｅｎｔ）を液体クロマトグ
ラフィーによる分離系中の移動相１こ加えることによっ
ても分離できる。しかし、この錯化剤を移動相に加える
方法は、調製目的の使用には適さない。さらにこの方法
はキグル銘化剤を多Ｊ＋１に必要とするためをこ、経済
的ＩｕＪ点から不利である。
本発明の目的は、従来技術の欠点を除き誘導体を前もっ
て作ることなく、種々の異なる種類の物質（アミン、酸
、および非陽子移行性化合物 （ｎｏｎ−ｐｒｏｔｏｌ
ｙｔｉｃ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ））ｒこ対して逍用で
きる鏡像体の直接分離方法を提供すること１こある。
て作ることなく、種々の異なる種類の物質（アミン、酸
、および非陽子移行性化合物 （ｎｏｎ−ｐｒｏｔｏｌ
ｙｔｉｃ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ））ｒこ対して逍用で
きる鏡像体の直接分離方法を提供すること１こある。
以下図面を参照して実施例を説明する。
第１図〜第３図は、それぞれシソピッミド （ｄｉｓｏ
ｐｙｒａｍｉｄｅ ） 、臭化メペンゾレー） （ｍｅ
ｐｅｎｚｏｌａｔｅｂｒｏｍｉｄｅ ）およびＲＡＯ１
０９の化学溝造式と、これらの薬剤の鏡像体の分離クロ
マトグラムを示す。
ｐｙｒａｍｉｄｅ ） 、臭化メペンゾレー） （ｍｅ
ｐｅｎｚｏｌａｔｅｂｒｏｍｉｄｅ ）およびＲＡＯ１
０９の化学溝造式と、これらの薬剤の鏡像体の分離クロ
マトグラムを示す。
＃￥４図は種々のラセミ化合物の８１像体のキャパシテ
ィーファクター（ｃａｐａｃｉｔｙ ｆａｃｔｏｒｓ
）を移動相における２−グロバノー／ｌ／ （２−ｐｒ
ｏｐａｎｏｌ）の舟の関数として示す。
ィーファクター（ｃａｐａｃｉｔｙ ｆａｃｔｏｒｓ
）を移動相における２−グロバノー／ｌ／ （２−ｐｒ
ｏｐａｎｏｌ）の舟の関数として示す。
第５図は異なる鏡像体の分離係数（ｓｅｐａｒａｔｉｏ
ｎｆａｏｔＯｒ ）を移動相中における２−グロバノー
ルの関数として示す。
ｎｆａｏｔＯｒ ）を移動相中における２−グロバノー
ルの関数として示す。
本発明によれば、オロソムコイドと呼ばれるα、−酸性
糖クンりク質（α１− ａｃｉｄ Ｐｌｙｃｏｐｒｏｔ
ｅｉｎ ）を保持体（キャリヤー）ないし固定相に不動
化なし１し固定し、この固定したタンパク質を分離カフ
ムに充填しても２仰体の直接分離のためのキラル相とし
て使用する。
糖クンりク質（α１− ａｃｉｄ Ｐｌｙｃｏｐｒｏｔ
ｅｉｎ ）を保持体（キャリヤー）ないし固定相に不動
化なし１し固定し、この固定したタンパク質を分離カフ
ムに充填しても２仰体の直接分離のためのキラル相とし
て使用する。
オＯツム：１イドはペプチド（ｍ （ｐｅｐｔｉｄｅ
ｃｈａｉｎ）と炭水化物（ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ
）部分とからなる。その分子は五つの炭水化物部分を含
む。この炭水化物部分はこの分子の質旦０４５％を構成
している。
ｃｈａｉｎ）と炭水化物（ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ
）部分とからなる。その分子は五つの炭水化物部分を含
む。この炭水化物部分はこの分子の質旦０４５％を構成
している。
炭水化物鎖の中の末端の糖（ｔｅｒｎｎｉｎａｌ ｓｕ
ｇａｒ ）はシアル酸（ｉ、ａ、 ５ｉａｌｉａ ａｃ
ｊ、ｄ）からなり、このシアル酸は６２性官能基（ａｃ
ｉｄｉｃ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ）と７Ａ／コール性水酸
基（ａｌｃｏｈｏｌｉｃ ｈｙｄｒｏｘｙｌ ｇｒｏｕ
ｐｓ ）とからなる。
ｇａｒ ）はシアル酸（ｉ、ａ、 ５ｉａｌｉａ ａｃ
ｊ、ｄ）からなり、このシアル酸は６２性官能基（ａｃ
ｉｄｉｃ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ）と７Ａ／コール性水酸
基（ａｌｃｏｈｏｌｉｃ ｈｙｄｒｏｘｙｌ ｇｒｏｕ
ｐｓ ）とからなる。
本発明の一実施例によれば、オロソムコイドは共有結合
１こよって例えばシリカの微粒子からなる固定相に結合
される。すなわち、まず固定相を反応性エポキシド基（
ｒｅａｃｔｉｖｅ ｅｐｏｘｉｄｅ ｇｒｏｕｐｓ ）
を−釜 含む３−グリシドオキシグロビルトリメトキシフン（３
−ｇｌｙｃｉｄｏｘｙｐｒｏｐｙｌ−ｔｒｉｍｅｔｈｏ
ｘｙｓｉｌａｎｅ）と反応させる。そしてこのエポキシ
ドで活性化された固定相をｐＨＢ、５の緩衝液中でオロ
ソムコイドと反応させる。このオロソムコイドが固定さ
れた固定相をカラムに充填し、このカラムに高圧ポンプ
のようなポンプによって移動相を流通させる。
１こよって例えばシリカの微粒子からなる固定相に結合
される。すなわち、まず固定相を反応性エポキシド基（
ｒｅａｃｔｉｖｅ ｅｐｏｘｉｄｅ ｇｒｏｕｐｓ ）
を−釜 含む３−グリシドオキシグロビルトリメトキシフン（３
−ｇｌｙｃｉｄｏｘｙｐｒｏｐｙｌ−ｔｒｉｍｅｔｈｏ
ｘｙｓｉｌａｎｅ）と反応させる。そしてこのエポキシ
ドで活性化された固定相をｐＨＢ、５の緩衝液中でオロ
ソムコイドと反応させる。このオロソムコイドが固定さ
れた固定相をカラムに充填し、このカラムに高圧ポンプ
のようなポンプによって移動相を流通させる。
本発明の他の実施例ｔこよれば、オロソムコイドのアル
コ−へ酸基なメタ過沃素酸塩（ｍｅｔａ−ｐｅｒｉｏｄ
ａｔｅ ５ａｌｔｓ ）のような酸化剤ｔこよって酸化
させてアルデヒド基とする。この酸化反応において酸化
剤とタンパク質のモル比は１２０である。酸化反応後、
過剰のメタ過沃素酸塩はグリセロールを加えて除去する
。そして反応混合物をゲルろ過し、グリセロールとメタ
過沃素酸塩との反応生成物質および余分のグリセロール
を除去する。
コ−へ酸基なメタ過沃素酸塩（ｍｅｔａ−ｐｅｒｉｏｄ
ａｔｅ ５ａｌｔｓ ）のような酸化剤ｔこよって酸化
させてアルデヒド基とする。この酸化反応において酸化
剤とタンパク質のモル比は１２０である。酸化反応後、
過剰のメタ過沃素酸塩はグリセロールを加えて除去する
。そして反応混合物をゲルろ過し、グリセロールとメタ
過沃素酸塩との反応生成物質および余分のグリセロール
を除去する。
それから酸化されたオロソムコイドを例えは正に帯電し
た多孔性の７リ力微粒子のような固定相に吸着させる。
た多孔性の７リ力微粒子のような固定相に吸着させる。
この吸着処理はタンパク質分子のシアル酸および他の酸
性官能基が固定相の正電荷によって帯電され吸引される
ようなｐＨ値において行なわれる。それから反応混合物
のｐｎを高める。
性官能基が固定相の正電荷によって帯電され吸引される
ようなｐＨ値において行なわれる。それから反応混合物
のｐｎを高める。
その結呆として、ペプチド錯中のアミノ基が帯電されな
い形に変換され、これと同時（ここれらのアミノ基と隣
接分子の炭水化合物部分のアルデヒド基との間に架橋反
応が開始される。分子は互いに結合して大きい連続した
鎖となり、大ぎなタンパク質凝集体が固定相の細孔に固
着されるＯアルデヒドと第一アミノ基の反応ｔこよって
シップ塩基（５ｃｈｉｆｆ ｂａｓｅｓ）が形成される
。このシップ塩基は水素化硼素ナトリウム（ｓｏｄｉｕ
ｍ ｂｏｒｏｈｙｄｒｌ ｄ ｅ ）または他の還元剤
の添加によって還元される。
い形に変換され、これと同時（ここれらのアミノ基と隣
接分子の炭水化合物部分のアルデヒド基との間に架橋反
応が開始される。分子は互いに結合して大きい連続した
鎖となり、大ぎなタンパク質凝集体が固定相の細孔に固
着されるＯアルデヒドと第一アミノ基の反応ｔこよって
シップ塩基（５ｃｈｉｆｆ ｂａｓｅｓ）が形成される
。このシップ塩基は水素化硼素ナトリウム（ｓｏｄｉｕ
ｍ ｂｏｒｏｈｙｄｒｌ ｄ ｅ ）または他の還元剤
の添加によって還元される。
上述の固定方法は他の方法に比べて大きい利点がある。
すなわち、タンパク質が固定相に共有結合される本発明
の第１宍施例に比べると、固定相のグフム当り５〜１０
倍の爪のタンパク質を固定することができる。この多量
のタンパク質は、多量の低分子量のラセミ物質を多量の
タンパク質を含む固定相のカラムに吸着させることがで
きる。
の第１宍施例に比べると、固定相のグフム当り５〜１０
倍の爪のタンパク質を固定することができる。この多量
のタンパク質は、多量の低分子量のラセミ物質を多量の
タンパク質を含む固定相のカラムに吸着させることがで
きる。
オロソムコイドを固定した固定相は公知のスチールカラ
ムｔこ充填し、これにポンプ、はとんどの場合高圧ポン
プｔこよって移動相を流通させる。
ムｔこ充填し、これにポンプ、はとんどの場合高圧ポン
プｔこよって移動相を流通させる。
本発明による物質は、従来カフムクロマトグヲフイーで
直接分離ができなかった鏡像体の分離を可能にする。ラ
セミ薬剤としては次のものを例示することができる。
直接分離ができなかった鏡像体の分離を可能にする。ラ
セミ薬剤としては次のものを例示することができる。
ジンピッミド、臭化メペンゾレート、メピヴア力イン
（ｍｅｐｉｖａｏａｉｎｅ ） 、グピヴアカイ７ン
（ｂｕｐｉｖａｃａｉｎｅ ） 、１０ピオマジｙ （
ｐｒｏｐｉｏｍａｚｉｎｅ）、オキｖ７ｘンｖ／ｙリミ
ｙ （ｏｘｙｐｈｅｎｃｙｃｌｉｍｉｎｅ ） 。
（ｍｅｐｉｖａｏａｉｎｅ ） 、グピヴアカイ７ン
（ｂｕｐｉｖａｃａｉｎｅ ） 、１０ピオマジｙ （
ｐｒｏｐｉｏｍａｚｉｎｅ）、オキｖ７ｘンｖ／ｙリミ
ｙ （ｏｘｙｐｈｅｎｃｙｃｌｉｍｉｎｅ ） 。
など。
第１図は抗不整脈薬であるジンピッミドの鏡像体の分離
を示すクロマトグラムである。この分離は前述の第２実
施例によって形成されたキラル固定相を充填した長さ１
００絹直径３．０闘のカラムを用いて行なわれた。この
カラムに８％（ｖ／ｖ ） ２−プロパツールを含むｐ
ｕ ７．２３のリン酸塩級衝液を０．５ ｍ１７分の流
速で流して溶離を行なった。
を示すクロマトグラムである。この分離は前述の第２実
施例によって形成されたキラル固定相を充填した長さ１
００絹直径３．０闘のカラムを用いて行なわれた。この
カラムに８％（ｖ／ｖ ） ２−プロパツールを含むｐ
ｕ ７．２３のリン酸塩級衝液を０．５ ｍ１７分の流
速で流して溶離を行なった。
第２図第３図は臭化メペンゾレートとＴ（ＡＣＩＯ（１
の鏡像体の分離クロマトグツムを示す。第２図第３図で
使用した分離カラムは第１図で使用したものと同じであ
る。このカラムを用いて２％２−プロパノ−ｐと０．９
８ ｍＭジメチルオクチμアミン （ｄｉｍｅｔｈｙｌ
ｏｃｔｙｌａｍｉｎｓ ）とを含むｐＨ’ｉ’、１５の
リン酸塩緩衝液、および８％２−プロパツールを含むｐ
Ｈ７，２０のリン酸塩緩御液で溶離した。
の鏡像体の分離クロマトグツムを示す。第２図第３図で
使用した分離カラムは第１図で使用したものと同じであ
る。このカラムを用いて２％２−プロパノ−ｐと０．９
８ ｍＭジメチルオクチμアミン （ｄｉｍｅｔｈｙｌ
ｏｃｔｙｌａｍｉｎｓ ）とを含むｐＨ’ｉ’、１５の
リン酸塩緩衝液、および８％２−プロパツールを含むｐ
Ｈ７，２０のリン酸塩緩御液で溶離した。
本発明１こよる分離物質の利点は、その利用範囲が広い
ことである。すなわち、この物質は非常に異する特性の
物質（アミン、アミド、エステル）に対して鏡像体選択
性（ｅｎａｎｔｉｏｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙ ）を示す
。その理由は、オロソムコイドが多くのキフル位置（ｃ
ｈｉｒａｌ ５ｉｔｅ ）を有しているからであると思
われる。すなわち、オロソムコイドは分子量が約４００
００の大きい分子であり、この点小さい分子の鏡像体を
固定したキヲル相に比べて有利である。
ことである。すなわち、この物質は非常に異する特性の
物質（アミン、アミド、エステル）に対して鏡像体選択
性（ｅｎａｎｔｉｏｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙ ）を示す
。その理由は、オロソムコイドが多くのキフル位置（ｃ
ｈｉｒａｌ ５ｉｔｅ ）を有しているからであると思
われる。すなわち、オロソムコイドは分子量が約４００
００の大きい分子であり、この点小さい分子の鏡像体を
固定したキヲル相に比べて有利である。
本発明の゛物質を充填した分離カラムでは、水をペース
とする種々のｐＨの移動相により溶離を行なうのが好ま
いミ。血液の生理的なｐ［Ｉ約７．４ヲこ一致する６〜
８のｐｉ範囲内で使用するのが有利であることが判明し
た。移動相のｐｕを単に調整することによって、あるい
は第４図第５図ｔこ示すように移動相ｅこ低濃度のアル
コールを添加することｅこよって、保持時間、キャパシ
ティーファクターおよび分離選択性（５ｅｐａｒａｔｉ
ｏｎ ５ｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙ）を制御することができ
る。
とする種々のｐＨの移動相により溶離を行なうのが好ま
いミ。血液の生理的なｐ［Ｉ約７．４ヲこ一致する６〜
８のｐｉ範囲内で使用するのが有利であることが判明し
た。移動相のｐｕを単に調整することによって、あるい
は第４図第５図ｔこ示すように移動相ｅこ低濃度のアル
コールを添加することｅこよって、保持時間、キャパシ
ティーファクターおよび分離選択性（５ｅｐａｒａｔｉ
ｏｎ ５ｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙ）を制御することができ
る。
第４図はわ）１々の薬剤の鏡像体の保有時間に比例する
キャパシティーファクターに′が、移シｊ相である２−
グロバノールのｆｆｉ ｔこ対し℃いかｔこ変化するか
を示す。第４図において、ａは（Ｓ）〜グピヴアカイン
、ｂは（Ｆ（）−グビウ′アカイン、Ｃは（Ｓ）−メピ
ヴアカイン、ｄは（Ｒ）−メピヴアカイン。
キャパシティーファクターに′が、移シｊ相である２−
グロバノールのｆｆｉ ｔこ対し℃いかｔこ変化するか
を示す。第４図において、ａは（Ｓ）〜グピヴアカイン
、ｂは（Ｆ（）−グビウ′アカイン、Ｃは（Ｓ）−メピ
ヴアカイン、ｄは（Ｒ）−メピヴアカイン。
ｅは臭化メベンゾレー）１１．ｆは臭化メペンゾレ−１
１を示す。ここに、１．１は純粋な鏡像体が入手できな
い場合の鏡像体を表わす。すなわち、Ｉは最初に溶離さ
れる鏡像体、すなわち、最低のキャパシティーファクタ
ーの鏡像体を示し、菫は最後に溶離される鏡像体、すな
わち、最高のキャパシティーファクターの鏡像体を示す
。
１を示す。ここに、１．１は純粋な鏡像体が入手できな
い場合の鏡像体を表わす。すなわち、Ｉは最初に溶離さ
れる鏡像体、すなわち、最低のキャパシティーファクタ
ーの鏡像体を示し、菫は最後に溶離される鏡像体、すな
わち、最高のキャパシティーファクターの鏡像体を示す
。
第５図は種々の物質について分離係数αを移動相のｐｕ
の関数として示す。第５図において、ａはジソピフミド
、ｂはＲＡＯ１０９％Ｃはブピヴアカイン、ｄは臭化メ
ペンゾレート、ｅはメピヴア力インを示す。分離係数α
は、最高のキャパシティー７アクターヲ有スる鏡像体の
キャパシティーファクターを最低のキャパシティーファ
クターなイｆする鏡像体のキャパシティー７アクターで
除したものとして定６される。
の関数として示す。第５図において、ａはジソピフミド
、ｂはＲＡＯ１０９％Ｃはブピヴアカイン、ｄは臭化メ
ペンゾレート、ｅはメピヴア力インを示す。分離係数α
は、最高のキャパシティー７アクターヲ有スる鏡像体の
キャパシティーファクターを最低のキャパシティーファ
クターなイｆする鏡像体のキャパシティー７アクターで
除したものとして定６される。
光学異性体以外の物質も本発明の物質によって分離でき
ることはもちろんである。次に実施例を説明する。
ることはもちろんである。次に実施例を説明する。
実施例１
オロソムコイド、その官能類似体、誘導体またはフラグ
メントを共有結合によって例えばシリカの微粒子のよう
な固定相Ｅこ固定した。この固定相をカラムｔこ充填す
るか、薄層板上に適用するか、あるいは懸濁液で使用す
るかして鏡像体をパッチ操作で分離した。カラムまたは
薄板は例えば所要のｐＨの水相で溶離を行なった。
メントを共有結合によって例えばシリカの微粒子のよう
な固定相Ｅこ固定した。この固定相をカラムｔこ充填す
るか、薄層板上に適用するか、あるいは懸濁液で使用す
るかして鏡像体をパッチ操作で分離した。カラムまたは
薄板は例えば所要のｐＨの水相で溶離を行なった。
実施例２
オロソムコイド、その官能類似体、誘導体またはフラグ
メントを既知のＰＨＩのＨａ液ｅこ溶解させた。
メントを既知のＰＨＩのＨａ液ｅこ溶解させた。
この溶液を固定相に吸着させてカラムに充填するか、薄
層板に適用するか、あるいは溶液として使用するかした
。被検ラセミ物質を上記タンパク質で処理した固定相と
混合液とのＩＩＵに分布させた。
層板に適用するか、あるいは溶液として使用するかした
。被検ラセミ物質を上記タンパク質で処理した固定相と
混合液とのＩＩＵに分布させた。
実施例３
オロンムコイド、その官能類似体、誘導体または７フグ
メントを既知のｐＨのＭｆｉ液に溶解させた。
メントを既知のｐＨのＭｆｉ液に溶解させた。
このタンパク質水溶液と少なくとも他の一種の液体とで
液体をベースとする多相システムを形成し、その間にラ
セミ物質を分布させた。この方法はパッチ操作によって
もまた連続操作によっても実施することかできる。
液体をベースとする多相システムを形成し、その間にラ
セミ物質を分布させた。この方法はパッチ操作によって
もまた連続操作によっても実施することかできる。
実施例４
オロソムコイドを低温（＋４℃）のｐＨ５ノア セテー
ト緩衝液に溶解させた。タンパク質とタンパク質１モル
当り１２ｏ−ｆ−ルのメタ過沃素酸塩とを光を遮断して
＋４℃で１時間反応させた。この反応混合物にメタ過沃
素酸塩１モル当り１８〜２０モルのグリセロールを添加
して室温で１０分間反応させた。
ト緩衝液に溶解させた。タンパク質とタンパク質１モル
当り１２ｏ−ｆ−ルのメタ過沃素酸塩とを光を遮断して
＋４℃で１時間反応させた。この反応混合物にメタ過沃
素酸塩１モル当り１８〜２０モルのグリセロールを添加
して室温で１０分間反応させた。
この反応混合物をｐＨ５の０．０１Ｍアセテ−日ｌ液で
平衡化されたセファデックス（５ＥｐＩＩＡ＋Ｊｇｘ
、商標名）Ｇ−２５を充填したカラムでゲルろ過した。
平衡化されたセファデックス（５ＥｐＩＩＡ＋Ｊｇｘ
、商標名）Ｇ−２５を充填したカラムでゲルろ過した。
反応混合物をカラムに注入し、０．ＯＩＭアセテート綬
衝液ｐＨ５で溶離した。０化されたタンパク質を収集し
、上記ｐＨ値で正の基を含む表面を有する支持体にｐＨ
５で吸着させた。正の基は例えば第４アンモニウム化合
物または第３アミンがある。吸着はバッチ操作で行なう
ことができる。あるいは酸化されたタンパク質を正電荷
の固定相が充填されたカラムをこポンプで流通させるこ
ともできる。
衝液ｐＨ５で溶離した。０化されたタンパク質を収集し
、上記ｐＨ値で正の基を含む表面を有する支持体にｐＨ
５で吸着させた。正の基は例えば第４アンモニウム化合
物または第３アミンがある。吸着はバッチ操作で行なう
ことができる。あるいは酸化されたタンパク質を正電荷
の固定相が充填されたカラムをこポンプで流通させるこ
ともできる。
吸着後、固定相のｐＨを変えた。これは０．０３Ｍ硼酸
塩緩衝液ｐＨ９，２をタンパク質が吸着された固定相を
充填したカラムにポンプで流通させて行なってもよいし
、あるいは吸着をバッチ操作で行なった場合は、このｐ
ＩＩの変化をろ過漏斗 （ｆｉｌｔｅｒｆｕｎｎｅｌ
） で行なってもよい。固定相はρ１１９．２で１５〜
１７詩間反応させた。
塩緩衝液ｐＨ９，２をタンパク質が吸着された固定相を
充填したカラムにポンプで流通させて行なってもよいし
、あるいは吸着をバッチ操作で行なった場合は、このｐ
ＩＩの変化をろ過漏斗 （ｆｉｌｔｅｒｆｕｎｎｅｌ
） で行なってもよい。固定相はρ１１９．２で１５〜
１７詩間反応させた。
それからこの固定相を０．１Ｍ硼歳塩駁彷液ｐＨ３，５
に懸濁させ、過剰の水素化硼素ナトリウムによつて室温
で１時間処理して還元した。この固定相を水素ガスの発
生が停止するまで、ｐＨ’ｉ’の紛衝液で洗浄した。
に懸濁させ、過剰の水素化硼素ナトリウムによつて室温
で１時間処理して還元した。この固定相を水素ガスの発
生が停止するまで、ｐＨ’ｉ’の紛衝液で洗浄した。
実施例５
オロソムコイドをｐＨ５で正の基を含む表面を有する支
持体ｔこｐＨ５で吸着させた。正の基としては第４アン
モニウム化合物または第３アミンがある。
持体ｔこｐＨ５で吸着させた。正の基としては第４アン
モニウム化合物または第３アミンがある。
吸着はパッチ操作で行なうことができる。あるいは、タ
ンパク質を正電荷を有する固定相を充填したカラムにポ
ンプで流通させてもよい。
ンパク質を正電荷を有する固定相を充填したカラムにポ
ンプで流通させてもよい。
以下本発明を要約するが本発明はこれらｔこ限定されな
いこともちろんである。
いこともちろんである。
（１）オロソムコイド、その官能類似体、誘導体または
フラグメントのいずれかからなる分離物質。
フラグメントのいずれかからなる分離物質。
（２）前記オロソムコイド、その官能類似体、誘導体ま
たは７ヲグメントのいずれ力菖を固定相に固定した（１
）項の分離物質。
たは７ヲグメントのいずれ力菖を固定相に固定した（１
）項の分離物質。
（３）前記オロソムコイド、その官能類似体、誘導体ま
たはフラグメントを、少なくと七一つの相が液相である
多相システムの一つまたはそれ以上の液に溶解させたｉ
１１項の分離物質。
たはフラグメントを、少なくと七一つの相が液相である
多相システムの一つまたはそれ以上の液に溶解させたｉ
１１項の分離物質。
（４）エポキシドで活性化された固定相をオロソムコイ
ド、その官能類似体、誘導体またはフラグメントと反応
させる分離物質の製造方法。
ド、その官能類似体、誘導体またはフラグメントと反応
させる分離物質の製造方法。
（５）オロソムコイド、その官能類似体、誘導体または
フラグメントを酸化剤１こよって酸化させ、酸化したオ
ロソムコイド、酸化した官能類似体、酸化した誘導体ま
たは酸化したフラグメントを固定相ｔこ吸着させ、ｐＩ
Ｉ調整ｔこよって醇化したオロソムコイド、醇化した官
能類似体、酸化した誘導体、または酸化したフラグメン
トの分子を架橋させる分離物質の製造方法。
フラグメントを酸化剤１こよって酸化させ、酸化したオ
ロソムコイド、酸化した官能類似体、酸化した誘導体ま
たは酸化したフラグメントを固定相ｔこ吸着させ、ｐＩ
Ｉ調整ｔこよって醇化したオロソムコイド、醇化した官
能類似体、酸化した誘導体、または酸化したフラグメン
トの分子を架橋させる分離物質の製造方法。
（６）オロソムコイド、その官能類似体、誘導体または
フラグメントを分離目的のために使用する方法。
フラグメントを分離目的のために使用する方法。
第１図第２図第３図はそれぞれ異なる薬剤の化学構造式
およびその鏡像体の分離クロマトグツムを示す図、第４
図は種々のラセミ薬剤物質のり像体のキャパシティーフ
ァクターを移動相における２−プロパツールの爪の関数
として示スゲラフ、第５図は種々の薬剤の鏡像体の分離
係数を移動相ｔこおける２−プロパツールのＨの関数と
して示すグフフである。 特許出ｉ人 クロムチク エービー 吟）２０ ７Ｑ Ｑ 葛２図 （介））７５ ７０ ’ｌ； υ （′剣り
およびその鏡像体の分離クロマトグツムを示す図、第４
図は種々のラセミ薬剤物質のり像体のキャパシティーフ
ァクターを移動相における２−プロパツールの爪の関数
として示スゲラフ、第５図は種々の薬剤の鏡像体の分離
係数を移動相ｔこおける２−プロパツールのＨの関数と
して示すグフフである。 特許出ｉ人 クロムチク エービー 吟）２０ ７Ｑ Ｑ 葛２図 （介））７５ ７０ ’ｌ； υ （′剣り
Claims (2)
- （１）オロソムコイド、その官能類似体、誘導体または
フラグメントからなることを特徴とする分離用物質。 - （２）エポキシドで活性化された固定相をオロソムコイ
ド、その官能類似体、誘導体またはフラグメントと反応
させることを特徴とする分雑用物質の製造方法。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SE8303221-9 | 1983-06-08 | ||
| SE8303221A SE445649B (sv) | 1983-06-08 | 1983-06-08 | Anvendning av en fast berare med immobiliserad orosomucoid for separation, forfarande for framstellning av separationsmaterial, separationsanordning samt separationsmaterial |
| SE8307023-5 | 1983-12-19 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6041619A true JPS6041619A (ja) | 1985-03-05 |
| JPH0213648B2 JPH0213648B2 (ja) | 1990-04-04 |
Family
ID=20351491
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59116324A Granted JPS6041619A (ja) | 1983-06-08 | 1984-06-05 | 分離用物質およびその製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6041619A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61157698U (ja) * | 1985-03-25 | 1986-09-30 | ||
| WO1993007104A1 (fr) * | 1991-10-09 | 1993-04-15 | Eisai Co., Ltd. | Agent de separation comprenant de la conalbumine liee |
| JP2015064330A (ja) * | 2013-08-29 | 2015-04-09 | 株式会社ダイセル | 光学異性体用分離剤 |
| WO2015122031A1 (ja) * | 2014-02-17 | 2015-08-20 | 株式会社Ｌｔｔバイオファーマ | メペンゾラート光学活性体及びそれを有効成分とする慢性閉塞性肺疾患改善剤 |
-
1984
- 1984-06-05 JP JP59116324A patent/JPS6041619A/ja active Granted
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61157698U (ja) * | 1985-03-25 | 1986-09-30 | ||
| JPH0428400Y2 (ja) * | 1985-03-25 | 1992-07-09 | ||
| WO1993007104A1 (fr) * | 1991-10-09 | 1993-04-15 | Eisai Co., Ltd. | Agent de separation comprenant de la conalbumine liee |
| US5900144A (en) * | 1991-10-09 | 1999-05-04 | Eisai Co., Ltd. | Separating agent comprising bonded conalbumin |
| JP2015064330A (ja) * | 2013-08-29 | 2015-04-09 | 株式会社ダイセル | 光学異性体用分離剤 |
| WO2015122031A1 (ja) * | 2014-02-17 | 2015-08-20 | 株式会社Ｌｔｔバイオファーマ | メペンゾラート光学活性体及びそれを有効成分とする慢性閉塞性肺疾患改善剤 |
| JPWO2015122031A1 (ja) * | 2014-02-17 | 2017-03-30 | 株式会社Ｌｔｔバイオファーマ | メペンゾラート光学活性体及びそれを有効成分とする慢性閉塞性肺疾患改善剤 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0213648B2 (ja) | 1990-04-04 |
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Legal Events
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|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |