JP2897190B2 - 超音波検査のために液体キャリヤーにおける懸濁液として有用な高分子ガス又は空気充填マイクロバルーン - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】本発明は、水性媒体において分散され又は
懸濁され得、そして経口、直腸及び尿道適用又は生物中
への注入のためにたとえば超音波検査及び他の医学的な
用途のためにこの形で使用され得る有機ポリマーエンベ
ロープにより包まれた空気又はガス充填マイクロカプセ
ル又はマイクロバルーンに関する。

【０００２】本発明はまた、前記マイクロバルーンを乾
燥状態で製造するための方法を含んで成り、ここで前記
マイクロバルーンは存在する類似する生成物にわたって
改良された性質を有する懸濁液を付与するために水性液
体キャリヤーにすぐに分散され得る。従って、投与のた
めに容易なキャリヤー液体中、マイクロバルーンの懸濁
液もまた、本発明の一部である。

【０００３】液体中に懸濁される、空気又はガスの微小
体又は微小球、たとえばマイクロバブル又はマイクロバ
ルーンのような微小球体は、超音波検査のために非常に
効果的な超音波レフレクターであることは良く知られて
いる。この開示において、用語“マイクロバブル”と
は、分割された形でのその中への空気又はガスの導入に
一般的に起因する、キャリヤー流体中、懸濁液における
空気又はガス微小球体を特に意味し、その液体は好まし
くは、またバブルの安定性及び表面性質を調節するため
に界面活性剤又はテンシド（tensides）を含む。マイク
ロバブルにおいて、液体界面上のガスは、キャリヤー液
体のゆるく結合された分子を実質的に含んで成る。用語
“マイクロカプセル”又は“マイクロバルーン”とは、
キャリヤー流体の分子以外の分子の材料境界又はエンベ
ロープ、すなわちポリマー膜壁を有する空気又はガス体
を意味する。マイクロバブル及びマイクロバルーンの両
者は、超音波コントラスト剤として有用である。たとえ
ば、キャリヤー液体中、ガスマイクロバルブ又はマイク
ロバルーン（0.５〜10μｍの範囲）の懸濁液の生物の血
流中への導入は、超音波検査用イメージングを強く強化
し、従って内部器官の可視化を助ける。血管及び内部器
官のイメージングは、たとえば心血管及び他の疾患の検
出のために医学的診断において強く助けることができ
る。

【０００４】音波検査法のために適切な注入可能な液体
キャリヤー中、マイクロバブルの懸濁液の形成は、この
液体中に圧力下で溶解されるガスの開放により又はガス
生成物を発生する化学反応により、又はその中に閉じ込
められた又は吸着された空気又はガスを含む可溶性又は
不溶性固体と前記液体とを混合することにより生成され
得る。

【０００５】たとえば、ＵＳ−Ａ−4,466,442(Scherin
g) においては、（ａ）キャリヤー液体（水性）中、テ
ンシド（界面活性剤）の溶液及び（ｂ）安定剤としての
粘度増強剤の溶液を用いて、殺菌された注入可能な液体
キャリヤー中、ガスマイクロバルブの懸濁液を生成する
ための一連の異なった技法を開示する。バブルの発生の
ためには、そこに開示される技法は、（ａ),（ｂ）及び
空気の混合物を小さな開口部を通して高速度で通し；又
は生理学的に許容できるガスと共に使用するすぐ前に
（ｂ）中に（ａ）を注入し；又は（ａ）に酸を及び
（ｂ）にカーボネートを添加し、ここで両成分は、使用
のすぐ前で一緒に混合され、そして酸はCO₂ バブルを発
生するためにカーボネートと反応し；又は貯蔵下で
（ａ）及び（ｂ）の混合物に過剰加圧されたガスを添加
し、ここで前記ガスは、混合物が注入のために使用され
る時点でマイクロバルブ中に開放されることを包含す
る。

【０００６】マイクロバブルに関する１つの問題は、そ
れらが一般的に、安定剤の存在下でさえ短い生存性であ
ることである。従って、ＥＰ−Ａ−131,540(Schering)
においては、マイクロバルブ懸濁液の調製が開示されて
おり、ここで安定化された注入可能なキャリヤー液体、
たとえば塩の生理学的水溶液又はマルトース、デキスト
ロース、ラクトース又はガラクトースのような糖の溶液
が閉じ込められた空気を含む前記同じ糖の固体微粒子
（0.１〜１μｍの間）と共に混合される。液体キャリヤ
ー中、バブルの懸濁液を開発するためには、両液体及び
固体成分が殺菌条件下で数秒間一緒に攪拌され、そして
その後すぐにその懸濁液は使用されるべきであり、すな
わちそれは音波検査測定のために５〜10分以内で注入さ
れるべきであり；実際、バブルはしだいに消出するの
で、その濃度は、その期間の後、使用のためには低過ぎ
る。

【０００７】注入の後、音波検査測定法のためのマイク
ロバブルに関するもう１つの問題は大きさである。通常
許容される場合、小さな血管を通しての容易な透過を可
能にするために有用な大きさのマイクロバブルは約0.５
〜10μｍの範囲であり；大きなバブルに関しては、凝集
及び連続的なエンボリの危険性が存在する。たとえば、
ＵＳ−Ａ−4,466,442(Schering) に開示されるバブル懸
濁液においては、界面活性剤、たとえばレシチン、脂肪
酸及び脂肪アルコールとポリオキシエチレン及びポリオ
キシエチル化ポリオール、たとえばソルビトール、グル
コール及びグリセロールとのエステル及びエーテル、コ
レステロール又はポリオキシ−エチレン−ポリオキシプ
ロピレンポリマーの水溶液が、粘度上昇性及び安定性化
合物、たとえば単糖類及び多糖類（グルコース、ラクト
ース、スクロース、デキストラン、ソルビトール）；ポ
リオール、たとえばグリセロール、ポリグリコール；及
びポリペプチド、たとえばタンパク質、ゼラチン、オキ
シポリゼラチン及び血漿タンパク質の溶液と共に激しく
振盪され、ここで単に約50％のマイクロバブルが、多く
の音波検査用途において不適切な懸濁液を形成する40〜
50μｍ以下である。

【０００８】対照的に、マイクロカプセル又はマイクロ
バルーンが、前記欠点を克服するために開発されて来
た。前記のように、マイクロバブルは単に非物質的な又
は消出するエンベループを有し、すなわちそれらは単
に、表面張力が界面活性剤の存在により変性される液体
の壁により取り囲まれるが、マイクロバルーン又はマイ
クロカプセルは、キャリヤー自体以外の物質材料により
製造された実体的なエンベロープ、たとえば明確な機械
強度を有するポリマー膜を有する。言い換えれば、それ
らは、空気又はガスが多かれ少なかれ堅く包封されてい
る固体材料の微小球体である。

【０００９】たとえばＵＳ−Ａ−4,276,885(Tickner な
ど) は、超音波イメージを増強するためにガスを包む表
面膜マイクロカプセルを用いることを開示し、その膜は
複数の非毒性及び非抗原性有機分子を含む。開示される
態様においては、それらのマイクロバブルは、融合に耐
性であるゼラチン膜を有し、そしてそれらの好ましい大
きさは５〜10μｍである。これらのマイクロバブルの膜
は、音波検査測定を行うために十分に安定していると言
われるが、しかしながら、その期間の後、その中に閉じ
込められたガスが血流に溶解し、そしてそのバブルがし
だいに消出するであろうことが言われており、それはた
ぶん、ゼラチンのゆっくりした溶解によるものであろ
う。使用の前、マイクロカプセルは、それらが貯蔵安定
性であるゼラチン溶液に維持されるが、しかしゼラチン
は、懸濁液が注入のために使用される時点で液体になる
よう加熱され、そして溶融される必要がある。

【００１０】ゼラチンではない改良された貯蔵安定性の
微小球体がＵＳ−Ａ−4,718,433(Feinstein)に開示され
ている。これらの微小球体は、５％の血清アルブミンの
ような粘性タンパク質溶液の音波処理（５〜30KHz)によ
り製造され、そして２〜20μｍ、主に２〜４μｍの有径
を有する。その微小球体は、音波処理後、膜形成タンパ
ク質の変性により、たとえば熱を用いて又は化学的手
段、たとえばホルムアルデヒド又はグルタルアルデヒド
との反応により安定化される。この技法により得られる
安定した微小球体の濃度は、２〜４μｍの範囲において
約８×10⁶ ／mL、４〜５μｍの範囲において約10⁶ ／mL
及び５〜６μｍの範囲において５×10⁵ 以下／mLである
と言われる。これらの微小球体の安定性時間は48時間又
はそれ以上であると言及されており、そしてそれらは、
静脈内注入の後、左心臓の便利なイメージングを可能と
する。たとえば、末梢静脈中に注入される場合、その音
波処理されたアルブミンマイクロバブルは、肺動脈間を
通過することができる。これは、左心室及び心筋組織の
超音波心臓検査の不透明化をもたらす。

【００１１】最近さらに一層改良された超音波検査法の
ための注入用マイクロバルーンがＥＰ−Ａ−324.938(Wi
dder) に報告されている。この明細書においては、数カ
月又はそれ以上の寿命を有する10μｍ以下の高濃度(10⁸
以上）又は空気充填タンパク質結合微小球体が開示され
ている。これらのマイクロバルーンの水性懸濁液は、変
性可能なタンパク質、たとえばヒト血清アルブミンの溶
液の超音波キャビテーションにより生成され、この操作
はまた、膜形成タンパク質のある程度の発泡及び加熱に
よるその続く硬化を導びく。他のタンパク質、たとえば
ヘモグロビン及びコラーゲンもまた便利であると思われ
る。

【００１２】さらに最近、M.A.Wheatleyなど., Blomate
rials 11 (1990), 713〜717 は、アルギネートのイオノ
トロピックゼラチン化によるポリマー被覆された微小球
体の調製を報告している。その引例は、微小球体を生成
するためのいくつかの技法を言及し；１つの場合、アル
ギネート溶液が、1.２％の水性CaCl₂ の槽において硬化
される発生期空気充填カプセルの噴霧を生成する針を通
してエアジェットで強制された。ガス及び液体の同時押
出を包含する第２の場合、ガスバルブがトリプル−ベア
ールドヘッドにより発生期カプセル中に導入され、すな
わち空気が中央毛細管中に注入され、ここでアルギネー
ト溶液がその毛細管と同軸に配置された大きな方の管を
通され、そして殺菌された空気が第２の管を取り囲むマ
ントルを通してそのまわりで流れる。また、第３の場
合、ホモジナイザー又は音波処理のいづれかにより噴霧
する前、アルギネート溶液にガスが閉じ込められた。こ
のようにして得られたマイクロバルーンは、30〜100 μ
ｍの範囲の直径を有するが、しかしながら、肺毛細管を
通して容易に流れるためにはまだ大き過ぎる。

【００１３】ＥＰ−Ａ−324.938 に開示されるマイクロ
バルーンの懸濁液の高い貯蔵安定性は、使用の前の調製
がもはや必要ではないので、それなりに、すなわち強い
市場性の利点である液体キャリヤー相によりそれらの市
場化を可能にする。しかしながら、この明細書に使用さ
れるタンパク質材料は、感受性の患者とのアレルギー反
応を引き起こし、そしてさらに、その膜材料のひじょう
な強さ及び安定性がいくつかの欠点を有する：たとえ
ば、それらの剛性のために、膜は、微小球体が血流を通
して移動する間にゆだねられ得る突然の圧力変化を維持
することができず、ここでこれらの圧力の変化は心臓の
脈拍によるものである。従って、実際の超音波処理試験
下では、像の再現性を都合悪くする多数の微小球体が破
壊され；また、これらのマイクロバルーンは、それらが
胃腸管に存在する消化酵素に耐性でないので、経口投与
のためには適切でない。さらに、柔軟な壁を有する微小
球体は、硬質の壁を有する対応する微小球体よりもより
音波検査に有効であることが知られている。

【００１４】さらに、注入の場合、微小球体の壁を形成
する材料の過度の安定性は、試験下での生物によるその
生物分解を遅くし、そして代謝問題をもたらす。従っ
て、圧力の変化下で一時的に変形することができる柔軟
で且つ軟らかな膜により包まれ、そして高められた音波
処理性を付与された圧力特効性マイクロバルーンを開発
することが好ましく；また、生物学的液体の透過を遅く
するために調節された微孔性を有する半透性生物分解性
ポリマーから製造された、調節可能な生物分解性を有す
るマイクロバルーンはひじょうに好都合であることが見
出された。

【００１５】これらの所望する特徴は、請求項１及び２
並びに続く請求項に定義される本発明のマイクロバルー
ンにより達成される。さらに、本発明の微小球体は一般
的に比較的短い寿命であり、すなわち選択されたタイプ
のポリマーを用いることによって前記代謝問題を処理す
るために生物分解性に対して敏感なように製造され得る
が、この性質（実際、加工パラメーターにより調節され
る）は、マイクロバルーンが、不明確に安定している乾
燥条件下で貯蔵され、そして輸送され得又はその膜がキ
ャリヤー液体に対して実質的に耐湿性にされ（劣化は注
入の後でのみ開始する）るので、市場での欠点ではな
い。第１の場合、乾燥粉末形で供給されるマイクロバル
ーンは、使用の前、ある割合の水性相キャリヤーと共に
単純に混合され、ここで前記割合は必要に依存して選択
される。これは、濃度が随意に選択され得、そして前記
10⁸ ／mLをはるかに超える、すなわち10⁵ 〜10¹⁰の範囲
の初値が容易に許容できるので、従来技術の生成物以上
の追加の利点であることを注目すべきである。本発明の
方法（この後に開示される）は、広範囲の多孔度の調節
を可能にし；従って、実質的に耐湿性の膜を有するマイ
クロバルーン（水性液体中、懸濁液の形で安定し、そし
てまたそれ自体市販され得る）が容易に製造され得るこ
とが注目されるべきである。

【００１６】請求項１に定義されたような界面的に付着
されたポリマーの膜を有する微小球体は、それらは液体
により満たされた状態で存在するが、当業界において良
く知られている。それらは通常、ポリマーの有機溶液に
おける第１水性相の液滴（この大きさは乳化パラメータ
ーに対する関数として調節できる）への乳化、続く第２
水性相中へのこのエマルジョンの分散及び続く有機溶媒
の蒸発に起因する。揮発性溶媒の蒸発の間、ポリマーは
液滴の境界で界面的に付着し、そして周囲の第２水性相
からの包封された第１水性相を効果的に包む微孔質性膜
を形成する。この技法は、可能ではあるが、本発明にお
いては好ましくない。

【００１７】他方、水性相中、疎水性相を乳化剤により
乳化し（通常、乳化安定剤として粘度上昇剤を含む）、
このようにして疎水性相の液滴の水中油タイプのエマル
ジョンを得、そしてその後、水性相と混和性でない揮発
性有機溶媒に溶解された膜形成ポリマーを添加すること
ができる。

【００１８】ポリマーが疎水性相において不溶性である
場合、それは液滴と水性相との境界で界面的に付着する
であろう。他方、揮発性溶媒の蒸発は、乳化された疎水
性相の液滴のまわりに前記界面的に付着された膜の形成
を導びくであろう。包封された揮発性疎水性相の続く蒸
発は、界面的に付着されたポリマー膜により囲まれた水
充填微小球体を提供する。本発明において都合良く使用
されるこの技法は、K.Uno など、J.Microencapsulation
１ (1984)，３〜８及びK.Makinoなど., Chem.Pharm.
Bull. 33 (1984)，1195〜1201により開示されている。
前記のように、液滴の大きさは、乳化パラメーター、す
なわち乳化剤の性質（界面活性剤がより効果的なほど、
すなわち親油性バランスに対する親水性バランスが大き
いほど、より小さな液滴が得られる）及び攪拌条件（よ
り早く且つよりエネルギッシュな攪拌が、より小さな液
滴を生成する）を変えることによって調節され得る。

【００１９】他の変法においては、界面壁形成ポリマー
が出発疎水性相自体に溶解され；後者が水性相中におい
て液滴に乳化され、そしてその液滴の囲りへの膜が、こ
の包封された疎水性相の続く蒸発に基づいて形成するで
あろう。この例は、J.R.Farnand など., Powder Techno
logy 22 (1978)，11〜16により報告されており、ここ
で煮沸水中にナフタレン、ポリマー（たとえばポリエチ
レン）の溶液を乳化し、次に、冷却の後、冷水中、ポリ
マー包封微小ビーズの懸濁液の形でナフタレンを回収
し、そして最後に、微小ビーズを昇華にゆだねることに
よってナフタレンを除き、それによって25μｍのマイク
ロバルーンが生成される。他の例も存在し、ここでポリ
マーが揮発性疎水性有機溶媒及び水溶性有機溶媒を含ん
で成る混合された疎水性相に溶解され、次にこのポリマ
ー溶液が乳化剤を含む水相に乳化され、それによって水
溶性溶媒がその水相中に分散し、従って、疎水性相の微
小液滴のエマルジョンの形成を助け、そして界面でのポ
リマーの沈澱を引き起こす；これはＥＰ−Ａ−274.961
(H.Fessi)に開示される。

【００２０】前記技法は、適切な条件が所望する範囲で
の球体の大きさ、細胞壁透過性又は耐湿性及び包封され
た液体相の空気又は選択されたガスとの置換を調整する
ことが見出される場合、超音波イメージングのために空
気又は好適なガス充填マイクロバルーンの調製に適合さ
れ得る。全球体サイズの調節は、マイクロバルーンの使
用目的、すなわち注入又は経口摂取のために明らかに重
要である。注入のための大きさの条件（約0.５〜10μｍ
の平均的大きさ）は前で論ぜられた。経口投与に関して
は、その範囲はより広く、超音波検査性はその大きさと
共に上昇すると思われ；従って１〜100 μｍの間の範囲
の大きさのマイクロバルーンが、必要に依存して使用さ
れ、そして胃及び腸における移動の間、分解しないほど
十分に弾性である膜が供給される。細胞壁の透過性の調
節は、注入可能な水性キャリヤー相による浸透が存在せ
ず、又は超音波検査測定を弱めないほど十分に遅いこと
を確保するために重要であり、しかも、比較的早い試験
後の生物分解性、すなわち生物による懸濁液の容易な代
謝を実質的に確保するために重要である。また、マイク
ロバルーンエンベロープの微孔性構造（数nm〜数百nmの
孔サイズ又は50〜500nm の範囲の厚さのマイクロバルー
ンエンベロープ）はレジリエンスの要因であり、すなわ
ち微小球体は破壊を伴わないで圧力変化を容易に受け入
れることができる。好ましい孔サイズの範囲は約50〜20
00nmである。

【００２１】これらの結果を達成するための条件は、請
求項17，18及び続く請求項に開示される方法を用いるこ
とによって満たされる。

【００２２】マイクロバルーン膜の透過性の調節を可能
にする１つの要因は、たとえば請求項20に引用される態
様の場合である凍結乾燥の条件下で、請求項17の方法の
段階（４）における水の蒸発に対する疎水性相の蒸発の
割合である。たとえば、蒸発が約−40〜０度Ｃの間で行
なわれ、そしてヘキサンが疎水性相として使用される
（ポリスチレンが界面的に付着されるポリマーである）
場合、比較的大きな孔を有するビーズが得られ；これ
は、選択された湿度範囲での炭化水素の蒸気圧が水の蒸
気圧よりも有意に高いためであり、これは、球体の内部
と外部との間での圧力差が、その内部材料が蒸発され
る、球体膜における孔の大きさを大きくする傾向がある
ことを意味する。対照的に、疎水性相としてシクロオク
タンを用いる場合（−17度Ｃで、その蒸気圧は水の蒸気
圧と同じである）、蒸発の間、球体の内部と外部との間
の圧力の差が最少にされるためにひじょうに小さな孔を
有するビーズが供給される。

【００２３】多孔度の程度に依存して、本発明のマイク
ロバルーンは、数時間〜数か月間、水性キャリヤーにお
いて安定化され得、そして長期間、再現性の超音波検査
用シグナルを付与することができる。実際、選択される
ポリマーに依存して、マイクロバルーンの膜は、適切な
浸透性質；すなわち適切な濃度で溶質を含むキャリヤー
液体に懸濁される場合、実質的に耐湿性にされ得る。本
発明のマイクロバルーンのエンベロープにおける微小孔
の存在は、超音波検査応答にも関係しているように思わ
れ、すなわちすべての他の要因は一定である場合、微孔
性小胞は対応する非多孔性小胞よりも一層効果的な超音
波検査用シグナルを提供することが注目されるべきであ
る。その理由は知られていないが、しかしガスが密閉構
造において共鳴して存在する場合、その構造体の制動性
は、それが多孔性か又は非多孔性かのいづれかで異なる
ことが予測され得る。

【００２４】約−40度Ｃ〜０度Ｃの間の温度で同じ大き
さの蒸気圧を有する他の非水溶性有機溶媒が本発明にお
いて疎水性溶媒として便利である。これらは、炭化水
素、たとえばｎ−オクタン、シクロオクタン、デメチル
シクロヘキサン、エチル−シクロヘキサン、２−、３−
及び４−メチル−ヘプタン、３−エチル−ヘキサン、ト
ルエン、キシレン、２−メチル−２−ヘプタン、２，
２，３，３−テトラメチルブタン及び同様のものを包含
する。エステル、たとえばプロピル及びイソプロピルブ
チレート及びイソブチレート、ブチル−ホルメート及び
同様のものもまた、この範囲において便利である。凍結
乾燥の他の利点は、空気の代わりにガスの減圧下で操作
することであり、それによってガス充填マイクロバルー
ンがもたらされるであろう。生理学的に許容できるガ
ス、たとえばCO₂ ，N₂O 、メタン、フレオン、ヘリウム
及び他の稀ガスも可能である。放射性トレーサー活性を
有するガスもまた可能である。

【００２５】界面的に沈澱されるべきポリマーを溶解す
るために使用される水に不溶性の揮発性溶媒として、ハ
ロー化合物、たとえばCCl₄，CH₃Br, CH₂Cl₂ 、クロロホ
ルム、フレオン、低い沸点のエステル、たとえばメチ
ル、エチル及びプロピルアセテート、及び低級エーテル
及び低い水溶解性のケトンを挙げることができる。水に
必ずしも不溶性でない溶媒、たとえばジエチル−テーテ
ルが使用される場合、前記溶媒により飽和された水溶液
を水性相として用いることが好都合である。

【００２６】疎水性相が水中油エマルジョンとして乳化
される水性相は好ましくは、安定剤として糖及びポリマ
ーのような水溶性親水性化合物１〜20重量％を含み、こ
こでそれらの化合物として、たとえばポリビニルアルコ
ール(PVA) 、ポリビニルピロリドン(PVP) 、ポリエチレ
ングリコール(PEG) 、ゼラチン、ポリグルタミン酸、ア
ルブミン及び多糖類、たとえばスターチ、デキストラ
ン、寒天、キサンテン及び同様のものを挙げることがで
きる。類似する水性相は、マイクロバルーンが使用の
前、懸濁されるキャリヤー液体として使用され得る。

【００２７】この水溶性ポリマーの一部は、マイクロバ
ルーンのエンベロープに存続することができ、又はそれ
は、包封された疎水性コアー相の最終的な蒸発にゆだね
る前、ビーズを洗浄することによって除去され得る。

【００２８】水性相における疎水性相の水中油エマルジ
ョンを供給するために使用される乳化剤（0.１〜１重量
％）は、最っとも生理学的に許容できる乳化剤、たとえ
ば卵レシチン又は大豆レシチン、又は合成レシチン、た
とえば飽和された合成レシチン、たとえばジミリストイ
ルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジ
ルコリン又はジステアロイルホスファチジルコリン又は
不飽和合成レシチン、たとえばジオレイルホスファチジ
ルコリン又はジリノレイルホスファチジルコリンを包含
する。乳化剤はまた、界面活性剤、たとえば遊離脂肪
酸、脂肪酸とポリオキシアルキレン化合物、たとえばポ
リオキシプロピレングリコール及びポリオキシエチレン
グリコールとのエステル；脂肪アルコールとポリオキシ
アルキレングリコールとのエーテル；脂肪酸とポリオキ
シアルキル化ソルビタンとのエステル；ソープ；グリセ
ロール−ポリアルキレンステアレート；グリセロール−
ポリオキシエチレンリシノレエート；ポリアルキレング
リコールのホモ−及びコポリマー；ポリエトキシル化さ
れた大豆油及びヒマシ油及び水素化誘導体；スクロース
又は他の炭水化物と脂肪酸、脂肪アルコールとのエーテ
ル及びエステル（これらは場合によってはポリオキシア
ルキル化されている）；飽和又は不飽和脂肪酸のモノ
ー、ジー及びトリグリセリド；グリセリド又は大豆油及
びスクロースを包含する。

【００２９】注入可能なマイクロバルーンのエンベロー
プ又は結合膜を構成するポリマーは、最っとも親水性で
生物分解性の生理学的に適合するポリマーから選択され
得る。そのようなポリマーの中には、低い水溶解性の多
糖類、ポリラクチド及びポリグリコリド並びにそれらの
コポリマー、ラクチドとラクトンのコポリマー、たとえ
ばε−カプロラクトン及び、δ−バレロラクトン、及び
ポリペプチドを挙げることができる。合成ポリマーの選
択における高い多様性は、本発明のもう１つの利点であ
る。なぜならば、アレルギー患者に関しては、ＵＳ−Ａ
−4,276,885 又はＥＰ−Ａ−324.938 におけるように天
然のタンパク質（アルブミン、ゼラチン）から製造され
たマイクロバルーンを用いて回避することが望まれるか
らである。他の適切なポリマーは、ポリ−（オルト）エ
ステル（たとえばＵＳ−Ａ−4,093,709;ＵＳ−Ａ−4,13
1,648;ＵＳ−Ａ−4,138,344;ＵＳ−Ａ−4,180,646 を参
照のこと）；ポリ乳酸及びポリグリコール酸及びそれら
のコポリマー、たとえばDEXON(J.Heller, Biomaterials
１ (1980)，51を参照のこと）；ポリ（ＤＬ−ラクチ
ド−コ−δ−カプロラクトン）、ポリ（ＤＬ−ラクチド
−コ−δ−バレロラクトン）、ポリ（ＤＬ−ラクチド−
コ−δ−ブチロラクトン）、ポリアルキルシアノアクリ
レート；ポリアミド、ポリヒドロキシブチレート；ポリ
ジオキサノン；ポリ−β−アミノケトン(Polymer 23
(1982)，1693を参照のこと）；ポリホスファゼン(Scien
ce 193 (1976), 1214 を参照のこと）；及びポリ無水
物を包含する。生物分解性ポリマーに関する参照文献
は、R.Langerなど.,Macromol, Chem. Phys. C23 (198
3), 61〜126 に見出され得る。ポリアミノ酸、たとえば
ポリグルタミン酸及びポリアスパラギン酸、並びにそれ
らの誘導体、低級アルコール又はグリコールとの部分エ
ステルもまた使用され得る。そのようなポリマーの１つ
の有用な例は、ポリ−（ｔ−ブチル−グルタメート）で
ある。他のアミノ酸、たとえばメチオニン、ロイシン、
バリン、プロリン、グリシン、アラミン等とのコポリマ
ーもまた可能である。調節された生物分解性を有する、
ポリグルタミン酸及びポリアスパラギン酸の最近のいく
つかの新規誘導体が報告されている（引用により本明細
書中に取り込むＷＯ87／03891;ＵＳ4,888,398 及びＥＰ
−130.935 を参照のこと）。これらのポリマー（及び他
のアミノ酸とのコポリマー）は、下記タイプの式を有す
る；

【化２】 ここでｘはアミノ酸残基の側鎖を示し、そしてＡは式−
(CH₂) _n COOCR¹R²−OCOR(II)（R¹及びR²はＨ又は低級ア
ルキルであり、そしてＲはアルキル又はアリールであ
り；又はＲ及びＲ¹ は５−又は６−員環を提供するため
に置換された又は非置換された結合員により一緒に結合
されている）で表わされる基である。

【００３０】Ａはまた、下記一般式：

【化３】 で表わされる基及び対応する無水物を表わすことができ
る。これらのすべての式において、ｎ，ｍ及びｐは５を
越えない整数であり、そしてｘ及びｙはまた、5000未満
でない分子量をもつように選択された整数である。

【００３１】前記ポリマーは本発明のマイクロバルーン
を製造するために適切であり、そして置換基R, R¹,R²及
びＸの性質に依存して、その膜の性質、たとえば強度、
弾性及び生物分解性が調節され得る。たとえばＸはメチ
ル（アラニン）、イソプルピル（バリン）、イソブチル
（ロイシン及びイソロイシン）、ベンジル（フェニルア
ラニン）であり得る。

【００３２】添加剤は、物性、たとえば分散性、弾性及
び水透過性を変性するためにマイクロバルーンのポリマ
ー壁中に導入され得る。ポリマー中への導入のために
は、添加剤はポリマー担持相、たとえば水相において乳
化されるべき疎水性相に溶解され、それによってそれら
は、界面膜形成の間、ポリマーと共に同時沈澱するであ
ろう。

【００３３】有用な添加剤の中には、水透過性を低める
ためにマイクロバルーン膜を“疎水化”することができ
る化合物、たとえば脂肪、ワックス及び高分子量炭化水
素を列挙することができる。注入可能な液体キャリヤー
におけるマイクロバルーンの分散性を改良する添加剤
は、リン脂質のような親油性化合物であり；それらはま
た水透過性及び生物分解性の速度を高める。

【００３４】消化管に使用されるべきマイクロバルーン
を製造するための非生物分解性ポリマーは、最っとも水
不溶性で生理学的に許容できる耐生物性ポリマー、たと
えばポリオレフィン（ポリスチレン）、アクリル酸樹脂
（ポリアクリレート、ポリアクリロニトリル）、ポリエ
ステル（ポリカーボネート）、ポリウレタン、ポリ尿素
及びそれらのコポリマーから選択され得る。ＡＢＳ（ア
クリル−ブタジエン−スチレン）が好ましいコポリマー
である。

【００３５】膜の弾性を高める添加剤は、可塑剤、たと
えばイソプロピルミリステート及び同様のものである。
また、ひじょうに有用な添加剤は、膜自体のポリマーに
類似するが、しかし比較的低い分子量のポリマーにより
構成される。たとえば、膜形成材料としてポリ乳酸／ポ
リグリコール酸タイプのコポリマーを用いる場合、膜の
性質は、添加剤として低分子量(1,000〜15,000ドルト
ン）のポリグリコリド又はポリラクチドを導入すること
によって都合良く変性され得る（高められた軟度及び生
物分解性）。また低〜中ぐらいの分子量のポリエチレン
グリコール（たとえばPEG2000)は、有用な軟化添加剤で
ある。

【００３６】本発明の界面付着膜を形成するポリマーに
導入されるべき添加剤の量はひじょうに異なり、そして
その必要性に依存する。ある場合、添加剤はまったく使
用されず；他の場合、ポリマーの約20重量％に達する添
加剤の量が可能である。

【００３７】本発明の注入可能なマイクロバルーンは、
保存性を改良し、そして融合を妨ぐために添加剤の存在
又は不在下で乾燥状態で保存され得る。添加剤として、
水溶性で生理学的に許容できる化合物（0.１〜25重量
％）、たとえばマンニトール、ガラクトース、ラクトー
ス又はスクロース又は親水性ポリマー、たとえばデキス
トラン、キサンタン、寒天、スターチ、ＰＶＤ、ポリグ
ルタミン酸、ポリビニルアルコール(PVA）、アルブミン
及びゼラチンから選択され得る。注入可能な液体キャリ
ヤー相におけるマイクロバルーンの有用な寿命、すなわ
ち有用な超音波検査用シグナルが観察される期間は、数
分〜数か月間、その必要性に依存して続くように調節さ
れ得；これは、キャリヤー液体に対して実質的に耐湿性
〜数ナノメーター〜数百ナノメーターの孔を有する多孔
性の膜の多孔度を調節することによって行われ得る。こ
の多孔性の程度は、膜形成ポリマー及びポリマー添加剤
を正しく選択する他に、請求項17の方法の段階（４）に
おける蒸発速度及び温度を調整し、そして疎水性相を構
成する化合物（又は化合物の混合物）の性質を正しく選
択することによって調節され得、すなわち、水相の部分
圧と蒸発の部分圧との差が大きくなるほど、マイクロバ
ルーン膜における孔は粗大になるであろう。もちろん、
疎水性相の選択によるこの調節は、マイクロバルーンの
形成の間、水蒸発の速度を調節するために、安定剤の選
択により及びその濃度を調整することによりさらに改良
され得る。これらのすべての変更は当業者により容易に
行なわれ、そしてさらに論じる必要はない。

【００３８】本発明のマイクロバルーンは乾燥状態で市
販され得るが、特に、それらが注入の後、制限された寿
命を有するように企画される場合、それはまた、容易な
調製物、すなわち注入又は経口投与のために容易な水性
液体キャリヤー中、マイクロバルーンの懸濁液としても
売ることが所望される。これは、マイクロバルーンの膜
がキャリヤー液体に対して実質的に耐湿性（少なくとも
数か月又はそれ以上の間）であることを必要とする。そ
のような条件は、ポリマーの性質及び界面付着パラメー
ターを正しく選択することにより本発明の方法により容
易に達成され得ることが本明細書に示されている。実
際、疎水性相の蒸発の後、膜の多孔度はひじょうに低い
ので、マイクロバルーンはそれらが懸濁される水性キャ
リヤー液体に対して実質的に耐湿性であるようなパラメ
ーターが見出された（たとえば疎水性相としてポリグル
タミン酸ポリマー（ここではＡは式IIの基である）及び
シクロオクタンを用いて）。

【００３９】診断目的のための好ましい投与可能な調製
物は、10⁸〜10¹⁰個の小胞体／mLを含む、緩衝化された
又は緩衝化されていない塩溶液（0.９％の水性NaCl；緩
衝液10mMのトリス−HCl)中、懸濁液を含んで成る。これ
は、Campany Boehringer, Ingelheim, Germanyからのポ
リ−（ＤＬ−ラクチド）ポリマーを用いて、下記例、好
ましくは例３及び４の方針に従って主に調製され得る。
次の例は本発明を例示するものである。

【００４０】

【実施例】例１ １ｇのポリスチレンを、 100度Ｃで液体ナフタレン19ｇ
に溶解した。このナフタレン溶液を90〜95度Ｃで、0.１
％のTween-40乳化剤を含むポリビニルアルコール(PVA)
(４重量％）の水溶液 200mL中に乳化した。乳化ヘッド
は約10,000rpm でのPolytron PT-3000であった。次に、
そのエマルジョンを、攪拌しながら、同じ水性相 500mL
により希釈し、それによってナフタレン液滴は、50μｍ
のメッシュスクリーンを通過することによって確認され
るように50μｍ以下のビーズに凝固した。その懸濁液を
1000ｇ下で遠心分離し、そしてビーズを水により洗浄
し、そして再び遠心分離した。この段階を２度くり返し
た。

【００４１】ビーズを、溶解されたラクトース0.８ｇと
共に水 100mLに再懸濁し、そしてその懸濁液を−30度Ｃ
でブロックに凍結した。その後、そのブロックを、約−
20〜−10度Ｃの温度で約0.５〜２トル下で蒸発せしめ
た。５〜10μｍの平均サイズ及び調節されて多孔性を有
する空気充填マイクロバルーンを得、これは、水に分散
された後（分散液３重量％）、2.25及び7.5MHzで超音波
検査用シグナルを付与する。乾燥状態でのマイクロバル
ーンの安定性はある不安定期間有効であり；水性キャリ
ヤー液体に懸濁された後、超音波検査法のための有用な
寿命は約30分又はそれ以上であった。非生物分解性であ
るポリスチレンは注入超音波検査法のためには好ましく
ないが、しかし消化管の検査のためには有用である。こ
の例は、本発明の方法の実施可能性を明確に確立する。

【００４２】例２ ＤＬ−ラクチド及びグリコリド(Du Pont Medisorb)の5
0：50コポリマー混合物(0.3g)及び卵−レシチン16mg
を、CHCl₃ 7.５mLに溶解し、溶液（１）を得た。

【００４３】シクロオクタン(M.P. 10〜13度Ｃ)10mLに
パラフィン−ワックス(M.P. 54〜56度Ｃ)20mg を含む溶
液（２）を調製し、そして1.２ｇのCHCl₃ もまた含むPl
uronic Ｆ-108（酸化エチレン及び酸化プロピレンのブ
ロックコポリマー）の水溶液（0.13重量％)150mLに乳化
した。乳化を、Polytronヘッドを用いて 7000rpmで１分
間、室温で行なった。次に溶液（１）を攪拌(7000rpm）
しながら添加し、そして約30〜60秒後、乳化機ヘッドを
螺施攪拌機(500rpm)と取り換え、そして攪拌を室温（22
度Ｃ）で約３時間続けた。その懸濁液を50μｍのスクリ
ーンに通し、そしてブロックに凍結し、続いて−20〜０
度Ｃの温度で高い真空下で（−60〜−80度Ｃに達する）
蒸発せしめた。乾燥状態で安定する空気充填のマイクロ
バルーン0.264 ｇ（88％）を得た。

【００４４】水中、前記マイクロバルーンの懸濁液（安
定剤を含まない）は、少なくとも１時間、強い超音波検
査用シグナルを付与した。生物への注入の後、それらは
数日で生物分解した。

【００４５】例３ テトラヒドロフラン(THF)200mL、ＤＬ−ラクチド／グリ
コリドの50：50コポリマー(Boehringer AG)0.8ｇ卵−レ
シチン80mg、パラフィン−ワックス64mg及びオクタン４
mLを用いて溶液を調製した。この溶液を、Pluronic Ｆ
-108の0.１％水溶液 400mL中に螺施攪拌(500r.p.m)下で
ゆっくりと添加することによって乳化した。15分間の攪
拌の後、その乳濁色の分散液を、その体積が約 400mLに
減ぜられるまで25度Ｃで10〜12トル下で蒸発せしめた。
その分散液を50μｍのスクリーン上で節分けし、次にそ
れを−40度Ｃで凍結し、そして約１トル下で凍結乾燥せ
しめた。残留物、すなわちひじょうに細かな粉末1.32ｇ
を、蒸留水40mLに取り、手で３分間攪拌した後、粒子分
析器(MalvernからのMastersizer)を用いて測定される場
合、平均サイズ4.５μｍのマイクロバルーンのひじょう
に均質な分散液を得た。マイクロバルーンの濃度は２×
10⁹ ／mLであった(Coulter Counter) 。この懸濁液は、
約１時間持続する強い超音波検査用シグナルを付与し
た。

【００４６】この例において、膜ポリマーへの添加物が
除かれ、すなわち THF／オクタン溶液にラクチド／グリ
コリドコポリマーたった 800mgを用いる場合、細胞壁の
透過性の劇的な低下が観察され、水性キャリヤー中、分
散液の超音波検査用シグナルは３日後、有意に低下し
た。中ぐらいの量の添加剤の使用は、調節された中ぐら
いの多孔性及び寿命を有するビーズを提供した。

【００４７】例４ 側基が式II（式中、Ｒ¹ 及びＲ² は水素であり、そして
Ｒはtert・ブチルである）を有する請求項８記載の式の
ポリマーが、この例において使用された。このポリマー
（ポリ−POMEG として定義される）の調製法はＵＳ−Ａ
−4,888,398 に記載される。

【００４８】この方法は例３に類似し、そしてポリ−PO
MEG 0.１ｇ、THF 70mL、シクロオクタン１mL及びPluron
ic Ｆ-108の0.１％水溶液 100mLを用いた。レシチン又
は高分子量炭化水素は添加されなかった。乳濁色のエマ
ルジョンを、残留物が約 100mLになるまで27度Ｃ／10ト
ルで蒸発せしめ、次にそれを50μｍメッシュ上でスクリ
ーンし、そして凍結した。凍結ブロックの蒸発を、乾燥
まで0.５〜１トルで行なった。その収量は、界面活性剤
の存在のために0.18ｇであった。これを蒸留水10mLに分
散し、そしてCoulter Counter により計数した。測定さ
れた濃度は1.43×10⁹ 個のマイクロカプセル／mLであ
り、粒子分析器(MalvernからのMastersizer)により測定
される場合、5.21μｍの平均粒子を有することが見出さ
れた。その分散液を 100倍、すなわち約1.５×10⁷ 個の
マイクロカプセル／mLに希釈し、そして超音波検査性に
ついて測定した。超音波シグナルの振幅は2.25MHz より
も7.5MHzで５倍大きかった。これらのシグナルは、長期
間、再現可能であった。

【００４９】20μｍの厚さのMylar 音響窓を有するプレ
キシグラス検体用ホルダー（直径30mm）、一定温度の水
浴に含浸されたトランスジューサーホルダー、40dBの一
定増量での外部プレー増幅器及び−40〜＋40dBに調節で
きる増量での内部増幅器を有するパルサーレシーバー(A
ccutron M3010JS)及び互換性の13mmの末焦点トランスジ
ューサーから成るパルス−音響システムにより超音波検
査を行なった。

【００５０】この例において、使用されるポリマーが乳
酸−ラクトンコポリマーにより交換される場合〔ここで
ラクトンはδ−ブチロラクトン、δ−ラレロラクトン又
はε−カプロラクトンである（Fukuzakiなど., J.Bioch
emical Mater.Res. 25 (1991),315〜328 を参照のこ
と）〕、類似する好ましい結果が得られた。また類似す
る関係において、ポリアルキルシアノアクリレート及び
特に90：10のコポリマーであるポリ（ＤＬ−ラクチド−
コグリコリド）が満足する結果を付与した。最後に、好
ましいポリマーは、“Resomer Ｒ-206”又はResomer Ｒ
-207として売られているCampany Boehringer Ingelheim
からのポリ（ＤＬ−ラクチド）である。

【００５１】二次元超音波心臓検査が、例４の調製物の
分散液（1.43×10⁹ ／mL）0.１〜２mLを実験用犬の末梢
静脈に注入した後、Acuson-128装置を用いて行なわれ
た。右心臓の通常予測されるコントラスト増強イメージ
ングの後、心内膜の明確な外形でもって左心臓のはっき
りした及び永続的なシグナル増強が観察され、それによ
って、ポリ−POMEG により製造されたマイクロバルーン
（又はそれらの少なくとも有意な一部）は肺毛管循環を
横切って、そして効果的な超音波分析を行なうのに十分
な時間、血流に残存することができた。

【００５２】他の一連の実験においては、全身性動脈及
び門静脈からのドップラーシグナルの持続的な増強が、
例４に開示されるようにして調製された（但し、ポリマ
ー相としてポリ（ＤＬ−乳酸）を用いた）マイクロバル
ーンの調製物0.５〜２mLの末梢静脈注入の後、ウサギ及
びラットに観察された。使用される組成物は、1.９×10
⁸ 個の小胞体／mLを有した。

【００５３】例４に従ってまた調製されたもう１つの組
成物を、ポリ（tert・ブチルグルタメートを用いて達成
した。3.４×10⁸ 個のマイクロバルーン／mLの希釈度で
のこの組成物（0.５mL）をラットの門静脈に注入し、そ
して肝臓実質の持続したコントラスト増強を付与した。

【００５４】例６ マイクロバルーン懸濁液（1.１×10⁹ 個の小胞体／mL）
を、例１に開示されているようにして調製した（樹脂＝
ポリスチレン）。この懸濁液１mLを 300mMのマンニトー
ル溶液 100mLにより希釈し、そしてその得られた希釈溶
液７mLを実験用ラットの胃腸内に投与した。消化管の二
次元超音波検査用イメージングのためにAcuson-128装置
によりその動物を試験し、そしてそれは小腸及び結腸の
単一のループを明確に示した。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ミッシェル シュナイダー スイス国，1256 トロイネ，ルート ダ ネシー 34，ドメン デュ ムーラン (56)参考文献 特開 平１−203337（ＪＰ，Ａ) 特開 昭62−181033（ＪＰ，Ａ) 特開 昭60−36452（ＪＰ，Ａ) 特開 昭63−232840（ＪＰ，Ａ) 特開 昭58−79930（ＪＰ，Ａ) 特開 昭59−205328（ＪＰ，Ａ) 特開 昭63−155224（ＪＰ，Ａ) 特表 昭63−502037（ＪＰ，Ａ) 国際公開89／6978（ＷＯ，Ａ１) 国際公開88／3388（ＷＯ，Ａ１) (58)調査した分野(Int.Cl.⁶，ＤＢ名) A61K 49/00 ＣＡ（ＳＴＮ)

Claims (29)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 微小球体が、柔軟かつ、弾性で５０〜５
   ００ｎｍの間の厚さをもつポリマー膜で囲まれ、圧力変
   化により一時的に変形可能であり、かつ合成の、弾性で
   かつ界面に付着されたポリマーから作られる、空気又は
   ガス充填マイクロバルーンであることを特徴とする、液
   体担体中の懸濁液の状態にあるとき超音波検査画像形成
   を含む治療又は診断用途のためにヒト又は動物患者に授
   与されるに適した、空気又はガスを充填したポリマー膜
   を含んでなる微小又は超微小サイズの微小球体。
2. 【請求項２】 治療又は診断目的のために経口、直腸及
   び尿道摂取されることができ、又は生物中に注射するこ
   とができる安定な水性懸濁液を生物学的に許容される水
   性液体担体と共に形成し、非凝集性、乾燥性であり、そ
   して上記液体担体と混合することにより、即座に分散さ
   れることができる、弾性の界面付着合成ポリマー膜によ
   って囲まれた、厚さが５０〜５００ｎｍの空気又はガス
   充填マイクロバルーン。
3. 【請求項３】 生物の血液中への注射に好適なほとんど
   ０．５〜１０μｍのレンジ内のサイズを有し、その膜
   が、生物学的分解速度を高めるために生物学的活性液体
   に対して不浸透性であるか又はそれに対して透過性であ
   るかのいずれかであるような、請求項１に記載のマイク
   ロバルーン。
4. 【請求項４】 ポリマー膜が多孔性であり、５０〜２，
   ０００ｎｍのレンジ内の多孔度を有する、請求項３に記
   載のマイクロバルーン。
5. 【請求項５】 膜のポリマーが、多糖類、ポリアミノ
   酸、ポリラクチド及びポリグリコリド並びにそれらのコ
   ポリマー、ラクチド及びラクトンのコポリマー、ポリペ
   プチド、ポリー（オルト）エステル、ポリジオキサノ
   ン、ポリ−β−アミノケトン、ポリホスファゼン、ポリ
   無水物及びポリアルキル−（シアノ）アクリレートから
   選ばれた生物学的分解性ポリマーである、請求項１又は
   ２に記載のマイクロバルーン。
6. 【請求項６】 膜ポリマーが、ポリグルタミン酸又はポ
   リアスパラギン酸の誘導体及び他のアミノ酸とのそれら
   のコポリマーから選ばれた、請求項１又は２に記載のマ
   イクロバルーン。
7. 【請求項７】ポリグルタミン酸及びポリアスパラギン酸
   誘導体が、そのカルボキシル化された側官能基を含むエ
   ステル及びアミドから選ばれ、その側官能基が、以下の
   式： 【化１】 −（ＣＨ_２）_ｎＣＯＯ−ＣＨＲ^１ＣＯＯＲ （Ｉ），又は −（ＣＨ_２）_ｎＣＯＯＣＲ^１Ｒ^２−Ｏ−ＣＯＲ （ＩＩ），又は −（ＣＨ_２）_ｎＣＯ（ＮＨ−ＣＨＸ−ＣＯ）_ｍＮＨＣＨ（ＣＯＯＨ）−（Ｃ Ｈ_２）_ｎＣＯＯＨ （ＩＩＩ） ｛基中、Ｒがアルキル又はアリール置換基であり；Ｒ^１
   及びＲ^２がＨ又は低級アルキルであり、又はＲ及びＲ^１
   が５−又は６−員環を形成するように置換された又は置
   換されていない結合員により一緒に結合され；ｎが１又
   は２であり；Ｐが１、２又は３であり；ｍが１〜５の整
   数であり、そしてＸがアミノ酸残基の側鎖である。｝に
   より表わされるような、請求項６に記載のマイクロバル
   ーン。
8. 【請求項８】 膜ポリマーが、弾性の程度並びに透過性
   調節のための多孔サイズ及び密度を調節するための添加
   物を含む、請求項１又は２に記載のマイクロバルーン。
9. 【請求項９】 添加物が、可塑剤、両親媒性物質及び疎
   水性化合物を含む、請求項８に記載のマイクロバルー
   ン。
10. 【請求項１０】 可塑剤が、柔軟性を調節するためのイ
    ソプロピル・ミリステート、グリセリル・モノステアレ
    ートを含み、両親媒性物質が、多孔度を高めることによ
    って透過性を調節するための界面活性剤及びレシチンの
    ようなリン脂質を含み、そして疎水性化合物が、多孔度
    を低減するためのパラフィン−ワックスのような高分子
    量炭化水素を含む、請求項９に記載のマイクロバルー
    ン。
11. 【請求項１１】 添加物が、マイクロバルーン膜の軟度
    （Ｓｏｆｔｎｅｓｓ）及びレジリエンシー（ｒｅｓｉｌ
    ｉｅｎｃｙ）を調節するために１，０００〜１５，００
    ０のレンジ内の分子量をもつポリマーを含む請求項９に
    記載のマイクロバルーン。
12. 【請求項１２】 低分子量ポリマー添加物が、ポリラク
    チド、ポリグリコリド、ポリエチレン・グリコール及び
    ポリプロピレン・グリコールのような、ポリアルキレン
    ・グリコール及びポリグリセロールのようなポリオール
    から選ばれた請求項１１に記載のマイクロバルーン。
13. 【請求項１３】 経口、直腸及び尿道適用に好適な約
    １，０００μｍまでのサイズを有し、膜ポリマーが、消
    化管内で生物学的分解性でなく、そして生物学的液体に
    対して不浸透性であるような、請求項１又は２に記載の
    マイクロバルーン。
14. 【請求項１４】 ポリマーが、ポリオレフィン、ポリア
    クリレート、ポリアクリロニトリル、非加水分解性ポリ
    エステル、ポリウレタン及びポリウレアから選ばれる、
    請求項１３に記載のマイクロバルーン。
15. 【請求項１５】 請求項１〜１４のいずれか１項に記載
    のマイクロバルーンの注射可能な水性懸濁液であって、
    そのマイクロバルーンが、１０^６〜１０^１０個のマイク
    ロバルーン／ｍｌの濃度において存在し、その懸濁液が
    少なくとも３０日間安定であることを特徴とする懸濁
    液。
16. 【請求項１６】 マイクロバルーンが、界面に付着され
    たＤＬ−ラクチド・ポリマーの膜により囲まれた、請求
    項１５に記載のマイクロバルーンの注射可能な水性懸濁
    液。
17. 【請求項１７】 経口、直腸及び尿道適用、又は生物へ
    の注射のための担体液体中の懸濁液として使用される空
    気又はガス充填マイクロバルーンの製造方法であって、
    以下の段階； （１）水相中の油／水エマルジョンとして疎水性相の滴
    を得るように水相中に疎水性有機相を乳化し； （２）ポリマーの層が滴のまわりに形成されるように、
    上記エマルジョンに、上記水相中で不溶性である揮発性
    溶媒中の少なくとも１のポリマーの溶液を添加し； （３）上記ポリマーが、そのポリマーの膜により包まれ
    た疎水性相のコアーを有するビーズであって上記水相中
    懸濁して存在するものをその後に形成する滴のまわりに
    界面沈殿により付着するであろうように、上記揮発性溶
    媒を蒸発せしめ；そして （４）上記の包まれた疎水性相が、蒸発により除去され
    るような条件下で上記懸濁液を減圧にゆだねる、を含ん
    で成り、ここで、その疎水性相が、それが上記水相と実
    質的に同時に蒸発し、そして空気又はガスにより置換さ
    れ、それにより、乾燥し、流動性の、容易に分散するマ
    イクロバルーンが得られるように選択されるような方
    法。
18. 【請求項１８】 段階（２）及び（３）が省略されるこ
    とができ、そしてポリマー膜が、段階（４）の間に界面
    沈殿により形成するであろうようにポリマーを疎水性相
    中に溶解する、請求項１７に記載の方法。
19. 【請求項１９】 段階（４）における疎水性相の蒸発
    が、その疎水性相の蒸気分圧が水蒸気の分圧と同一オー
    ダーである温度において行われる、請求項１７に記載の
    方法。
20. 【請求項２０】 段階（４）の蒸発が、凍結乾燥条件下
    で行われる、請求項１７に記載の方法。
21. 【請求項２１】 凍結乾燥が、−４０℃〜０℃の間の温
    度で行われる、請求項２０に記載の方法。
22. 【請求項２２】 疎水性相が、−４０℃〜０℃の間の温
    度で約１Ｔｏｒｒの蒸気圧をもつ有機化合物から選ばれ
    る、請求項１７又は１９に記載の方法。
23. 【請求項２３】 水性相が、糖、ＰＶＡ、ＰＶＰ、ゼラ
    チン、デンプン、デキストラン、ポリデキストロース、
    アルブミンその他から選ばれた親水性化合物を含んで成
    る、溶解された１〜２０重量％の安定剤を含んで成る、
    請求項１７又は１８に記載の方法。
24. 【請求項２４】 マイクロバルーン膜の透過性の程度を
    調節するための添加物が、疎水性相に添加され、生物内
    でのそのマイクロバルーンの注射後のポリマーの生物学
    的分解性速度が、その透過性の程度の関数である、請求
    項１８に記載の方法。
25. 【請求項２５】 添加物が、脂肪、ワックスおよび高分
    子量炭化水素のような疎水性固体を含み、マイクロバル
    ーンの膜ポリマーの中でのその存在が、水性液体に向か
    う透過性を低減するであろう、請求項２４に記載の方
    法。
26. 【請求項２６】 添加物が、リン脂質などの両親媒性化
    合物、又は低分子量ポリマーのような両親媒性化合物を
    含み、膜ポリマー中でのその存在が、水性液体へのマイ
    クロバルーンの透過性を高めるであろう、請求項２４に
    記載の方法。
27. 【請求項２７】 水性相中での乳化に供された疎水性相
    が、水溶性溶媒をも含み、この水溶性溶媒が、乳化の間
    に上記水性相中に希釈される間に、滴のサイズの減少を
    助け、そして段階（４）が行なわれる前にポリマーの界
    面沈殿を誘導するであろう、請求項１８に記載の方法。
28. 【請求項２８】 超音波検査画像形成で使用されるため
    の請求項１〜１４のいずれか１項に記載のマイクロバル
    ーン。
29. 【請求項２９】 肝臓の超音波検査画像形成で使用され
    るための請求項１〜１４のいずれか１項に記載のマイク
    ロバルーン。