JP2504923B2 - 免疫学的測定方法 - Google Patents
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、シート状分析デバイス
を用いる免疫学的測定方法に関する。
を用いる免疫学的測定方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】診断方法において、特定の化合物を同定
および測定することができるようになったため、医薬の
投与、生理活性化合物またはその二次生産物および感染
症の診断のモニターが可能となっている。この点に関
し、免疫検定法（ＲＩＡ、 ＥＬＩＳＡおよび凝集試験）
は特に重要である。これらの試験に用いられる特異的結
合反応は免疫学的相互作用、例えば抗原−抗体またはハ
プテン−抗体相互作用に限らず、生物学的親和性を有す
る相互作用、例えばレクチン−糖または活性化合物−受
容体なども利用される。
および測定することができるようになったため、医薬の
投与、生理活性化合物またはその二次生産物および感染
症の診断のモニターが可能となっている。この点に関
し、免疫検定法（ＲＩＡ、 ＥＬＩＳＡおよび凝集試験）
は特に重要である。これらの試験に用いられる特異的結
合反応は免疫学的相互作用、例えば抗原−抗体またはハ
プテン−抗体相互作用に限らず、生物学的親和性を有す
る相互作用、例えばレクチン−糖または活性化合物−受
容体なども利用される。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】従来の試験は高感度で
特異的ではあるが、それらは試験に長時間（大抵の場合
数時間あるいは数日間も）要しまた多くの試験段階例え
ば免疫反応、洗浄段階および酵素反応などを要するため
便利な応用形態を呈していない。前述の長い試験時間は
救急診断法に用いるのにはふさわしくない。本発明に記
載されているような一体化された乾燥化学試験エレメン
トは試験実施を簡素化しまた試験時間を短縮する。固相
検出を用いる不均質免疫検定法の免疫反応、作用の遂行
および「結合相−遊離相（bound-free）」分離のための
すべての成分が一体化されているシート状試験エレメン
トは、これまで全く記載されていない。
特異的ではあるが、それらは試験に長時間（大抵の場合
数時間あるいは数日間も）要しまた多くの試験段階例え
ば免疫反応、洗浄段階および酵素反応などを要するため
便利な応用形態を呈していない。前述の長い試験時間は
救急診断法に用いるのにはふさわしくない。本発明に記
載されているような一体化された乾燥化学試験エレメン
トは試験実施を簡素化しまた試験時間を短縮する。固相
検出を用いる不均質免疫検定法の免疫反応、作用の遂行
および「結合相−遊離相（bound-free）」分離のための
すべての成分が一体化されているシート状試験エレメン
トは、これまで全く記載されていない。
【０００４】試験用帯状片アセンブリにおいては免疫反
応段階、および結合相および遊離相の分離は方向付けら
れた液体流により不均質試験で行われるのに対し、薄層
を相互に重ねたものにより働く試験エレメントアセンブ
リ（フィルム法）では、拡散による制御、および濃度勾
配により方向付けられる過程が可能な推進力である。蛍
光標識が西独特許出願公開第３,３２９,７２８号（特開
昭５７−１４４３４１号）およびＥＰ Ａ ０,０９７,９
５２号（特開昭５７−１１４３５９号）明細書に用いら
れている。その標識は低分子量を有し、従って拡散によ
り制御される過程を促進する。しかしながら、試験は高
められた温度で行われなければならない。これら２つの
ケースの最初のものにおいて、遊離相と結合相の両者が
評価されている。フィルム法では、溶媒の吸収は膨潤性
成分を水和させるかまたは毛細空隙を充填することによ
り行われる。相互に積層された層を有するアセンブリの
場合には、上層と底層だけが、主たる困難を伴うことな
く検出に利用できるにすぎない。反応段階が行われた後
は、試薬を中間に位置する層の成分と反応させることは
困難である。本発明に用いられるような相前後して位置
するゾーンを有する試験片アセンブリにおいては、基本
的に各ゾーンは、測定のためにもまた必要となるかもし
れない試薬の添加のためにも、上からもまた下からも接
近しうる。
応段階、および結合相および遊離相の分離は方向付けら
れた液体流により不均質試験で行われるのに対し、薄層
を相互に重ねたものにより働く試験エレメントアセンブ
リ（フィルム法）では、拡散による制御、および濃度勾
配により方向付けられる過程が可能な推進力である。蛍
光標識が西独特許出願公開第３,３２９,７２８号（特開
昭５７−１４４３４１号）およびＥＰ Ａ ０,０９７,９
５２号（特開昭５７−１１４３５９号）明細書に用いら
れている。その標識は低分子量を有し、従って拡散によ
り制御される過程を促進する。しかしながら、試験は高
められた温度で行われなければならない。これら２つの
ケースの最初のものにおいて、遊離相と結合相の両者が
評価されている。フィルム法では、溶媒の吸収は膨潤性
成分を水和させるかまたは毛細空隙を充填することによ
り行われる。相互に積層された層を有するアセンブリの
場合には、上層と底層だけが、主たる困難を伴うことな
く検出に利用できるにすぎない。反応段階が行われた後
は、試薬を中間に位置する層の成分と反応させることは
困難である。本発明に用いられるような相前後して位置
するゾーンを有する試験片アセンブリにおいては、基本
的に各ゾーンは、測定のためにもまた必要となるかもし
れない試薬の添加のためにも、上からもまた下からも接
近しうる。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明はすべての試薬成
分を含有し、そして作用シーケンスに必要なすべての成
分のみならず、作用シーケンス自体をも一体化された形
で含み、そして被分析物の溶液をこの目的のために設計
されたデバイスの作用領域と接触させそして被分析物を
信号発生系を介して単一作用領域（固相ゾーン）で検出
することにより生物学的親和性特性を有する被分析物を
検出または測定する方法に関する。同じ溶液中の成分と
しての第２の被分析物または更なる被分析物は、これら
被分析物が第１被分析物とは異なる生物学的親和性特性
を有すれば、このデバイスにより同時に検出することが
できる。それらはまた、単一作用領域（それらに適した
固相ゾーン）で第１被分析物と同様にして検出される。
第２の、または別の被分析物の検出のための作用領域
は、シート状デバイスにおいて第１被分析物の検出のた
めの作用領域の前または後に位置している。このデバイ
スはまた、ある被分析物、およびこの被分析物の様々な
測定範囲に対し適切ないくつかの固相ゾーンを含むこと
ができる。このデバイスはすべての反応成分および試薬
を脱水された形で含む。
分を含有し、そして作用シーケンスに必要なすべての成
分のみならず、作用シーケンス自体をも一体化された形
で含み、そして被分析物の溶液をこの目的のために設計
されたデバイスの作用領域と接触させそして被分析物を
信号発生系を介して単一作用領域（固相ゾーン）で検出
することにより生物学的親和性特性を有する被分析物を
検出または測定する方法に関する。同じ溶液中の成分と
しての第２の被分析物または更なる被分析物は、これら
被分析物が第１被分析物とは異なる生物学的親和性特性
を有すれば、このデバイスにより同時に検出することが
できる。それらはまた、単一作用領域（それらに適した
固相ゾーン）で第１被分析物と同様にして検出される。
第２の、または別の被分析物の検出のための作用領域
は、シート状デバイスにおいて第１被分析物の検出のた
めの作用領域の前または後に位置している。このデバイ
スはまた、ある被分析物、およびこの被分析物の様々な
測定範囲に対し適切ないくつかの固相ゾーンを含むこと
ができる。このデバイスはすべての反応成分および試薬
を脱水された形で含む。
【０００６】シート状診断デバイスは、水性溶液吸収能
を有する材料の帯状片１枚または相前後して配置する数
枚よりなる。それら帯状片は固体支持体に固定される。
それらは特定の診断剤に必要な試薬成分を含有し、また
従って作用セクターまたは作用領域となる。帯状片形状
デバイスの一方の端に位置する作用セクター（移動相適
用ゾーン）は被分析物溶液中に浸漬することにより、あ
るいは該溶液を塗布することにより該溶液と接触させ
る。その溶液はすべての作用領域を通過移動する。帯状
片を構成する支持体材料の吸収能により生じる液体の流
れは、帯状片形状デバイスの他方の端で停止する。被分
析物はまた、デバイスの中部領域に適用することがで
き、次いでデバイスの一端から他端への液体の流れを誘
起させることができる。
を有する材料の帯状片１枚または相前後して配置する数
枚よりなる。それら帯状片は固体支持体に固定される。
それらは特定の診断剤に必要な試薬成分を含有し、また
従って作用セクターまたは作用領域となる。帯状片形状
デバイスの一方の端に位置する作用セクター（移動相適
用ゾーン）は被分析物溶液中に浸漬することにより、あ
るいは該溶液を塗布することにより該溶液と接触させ
る。その溶液はすべての作用領域を通過移動する。帯状
片を構成する支持体材料の吸収能により生じる液体の流
れは、帯状片形状デバイスの他方の端で停止する。被分
析物はまた、デバイスの中部領域に適用することがで
き、次いでデバイスの一端から他端への液体の流れを誘
起させることができる。
【０００７】試料をデバイスのクロマトグラフィ・セク
ションに直接適用する必要はない。それはまた、デバイ
ス上に位置しそして試料から血液細胞を除去する機能を
有する吸収性材料に適用することもできる。試料は濾過
をうけた後デバイスに適する。この濾過過程で試薬の添
加を、後者を乾燥状態でフィルタ中に存在する成分から
溶出することにより同時に行うことができる。かかる成
分により干渉因子を溶液から除去することができる。す
なわち、例えば、オキシダーゼやペルオキシダーゼを標
識剤として用いる場合に干渉する、検体中に存在するア
スコルビン酸は適当な酸化剤により無害化することがで
きる。更にまた、フィルタは吸着により検体から干渉因
子を除去する吸着剤の機能も有しうる。この試験のため
に検体を調整するための、濾過、吸着および試薬混合機
能は、移動相適用ゾーンによって遂行させることもでき
る。
ションに直接適用する必要はない。それはまた、デバイ
ス上に位置しそして試料から血液細胞を除去する機能を
有する吸収性材料に適用することもできる。試料は濾過
をうけた後デバイスに適する。この濾過過程で試薬の添
加を、後者を乾燥状態でフィルタ中に存在する成分から
溶出することにより同時に行うことができる。かかる成
分により干渉因子を溶液から除去することができる。す
なわち、例えば、オキシダーゼやペルオキシダーゼを標
識剤として用いる場合に干渉する、検体中に存在するア
スコルビン酸は適当な酸化剤により無害化することがで
きる。更にまた、フィルタは吸着により検体から干渉因
子を除去する吸着剤の機能も有しうる。この試験のため
に検体を調整するための、濾過、吸着および試薬混合機
能は、移動相適用ゾーンによって遂行させることもでき
る。
【０００８】個々の作用領域における溶媒分布は使用材
料の吸着能および寸法に依存する。移動相適用ゾーンは
計量要素の機能を有しうる（西独特許第３，０４３，６
０８号および第２，３３２，７６０号、および米国特許
第３，４６４，５６０号、第３，６００，３０６号、第
３，６６７，６０７号、第３，９０２，８４７号、第
４，１４４，３０６号および第４，２５８，００１号明
細書参照）。それは、試験要素の機能に必要とされる様
々な試薬を乾燥状態で含有することができる。移動相適
用ゾーンは試薬要素の一方の端に位置し、そして単に溶
液、例えば試料の溶液中に浸漬するかまたは試料の溶液
を塗布するだけで所定量の液体で完全に飽和するところ
となり、次いで後続のゾーンよりゆっくりとそして制御
された形でその液体を放出する一片の布帛紙であっても
よい。移動相適用ゾーンは、デバイスの他方の端、すな
わち吸収ゾーンの終端まで移動するのに充分な液体を吸
収するような寸法を有する。
料の吸着能および寸法に依存する。移動相適用ゾーンは
計量要素の機能を有しうる（西独特許第３，０４３，６
０８号および第２，３３２，７６０号、および米国特許
第３，４６４，５６０号、第３，６００，３０６号、第
３，６６７，６０７号、第３，９０２，８４７号、第
４，１４４，３０６号および第４，２５８，００１号明
細書参照）。それは、試験要素の機能に必要とされる様
々な試薬を乾燥状態で含有することができる。移動相適
用ゾーンは試薬要素の一方の端に位置し、そして単に溶
液、例えば試料の溶液中に浸漬するかまたは試料の溶液
を塗布するだけで所定量の液体で完全に飽和するところ
となり、次いで後続のゾーンよりゆっくりとそして制御
された形でその液体を放出する一片の布帛紙であっても
よい。移動相適用ゾーンは、デバイスの他方の端、すな
わち吸収ゾーンの終端まで移動するのに充分な液体を吸
収するような寸法を有する。
【０００９】移動相適用ゾーンと吸収ゾーンとの間に
は、試験の実施のための反応成分が含まれ、そして試験
実施のすべての反応段階が行われる作用領域が配設され
る。試験実施のための反応成分の一部を試料適用ゾーン
に収納しておくこともできる。吸収ゾーンは、過剰の、
および自由に動きうる試薬成分および信号発生系の反応
生成物を吸収する機能を有する。各種作用領域の構成分
としての１枚または２枚以上の帯状片の形の吸収性支持
体は、選択に応じて、セルロース、セルロースの化学的
誘導体、または多孔質もしくは繊維質構造および充分な
親水性特性を有するプラスチック、または合成膜中に埋
設されたセルロースまたはシリカなどの粒子、および親
水性ではあるが非水溶性化されている天然物から構成さ
れていてもよい。異なる材料から構成される帯状片の組
合せを用いることもできる。適当な吸収性材料は個々の
診断デバイスに対し設定された要件に基づいて選択され
ている。
は、試験の実施のための反応成分が含まれ、そして試験
実施のすべての反応段階が行われる作用領域が配設され
る。試験実施のための反応成分の一部を試料適用ゾーン
に収納しておくこともできる。吸収ゾーンは、過剰の、
および自由に動きうる試薬成分および信号発生系の反応
生成物を吸収する機能を有する。各種作用領域の構成分
としての１枚または２枚以上の帯状片の形の吸収性支持
体は、選択に応じて、セルロース、セルロースの化学的
誘導体、または多孔質もしくは繊維質構造および充分な
親水性特性を有するプラスチック、または合成膜中に埋
設されたセルロースまたはシリカなどの粒子、および親
水性ではあるが非水溶性化されている天然物から構成さ
れていてもよい。異なる材料から構成される帯状片の組
合せを用いることもできる。適当な吸収性材料は個々の
診断デバイスに対し設定された要件に基づいて選択され
ている。
【００１０】免疫学的結合特性を有する反応成分、例え
ば抗原、ハプテンまたは抗体はデバイスの様々な態様に
取り込むことができる。レクチンに結合する糖タンパク
またはオリゴサッカライドを検出する場合には、生物学
的親和性を有する一つの反応成分は特定のレクチンであ
ってもよいが、免疫学的親和性を有する第２の反応成分
はレクチンのそれ以外の被分析物上の結合点に対する抗
体であってもよい。微生物の活性化合物を検出する場合
には、一つの結合パートナーはその活性化合物に対する
受容体物質とすることができ、一方第２の結合パートナ
ーは活性化合物上のもう一つの結合点に対する抗体であ
ることができる。
ば抗原、ハプテンまたは抗体はデバイスの様々な態様に
取り込むことができる。レクチンに結合する糖タンパク
またはオリゴサッカライドを検出する場合には、生物学
的親和性を有する一つの反応成分は特定のレクチンであ
ってもよいが、免疫学的親和性を有する第２の反応成分
はレクチンのそれ以外の被分析物上の結合点に対する抗
体であってもよい。微生物の活性化合物を検出する場合
には、一つの結合パートナーはその活性化合物に対する
受容体物質とすることができ、一方第２の結合パートナ
ーは活性化合物上のもう一つの結合点に対する抗体であ
ることができる。
【００１１】生物学的親和性を有する一つの結合パート
ナーは反応の進行過程で結合するようになるか、また
は、被分析物の検出のために設計された作用領域（固相
ゾーン）の支持体材料にすでに結合している。それは固
有結合パートナーともよばれる。他の結合パートナー
（１種または複数種）は支持体中に存在する。それらに
は標識を施す。標識には様々な可能性が知られているが
なかでも酵素標識が好ましい。それは、色素原基質系ま
たは蛍光または化学発光を生じる基質系を必要とする。
化学発光標識は、試薬の添加後にのみ測定される標識の
もう一つの例である。化学発光それ自体または後者（基
質系）により励起された蛍光のいずれかを測定すること
ができる。大抵の場合に、蛍光標識は、試薬の添加を要
せずして測れる。しかしながら、ある種の希土類元素キ
レートを用いる場合などは、試薬を添加した結果として
のみ測定されるべき蛍光団を生成させるか、または第１
蛍光団により励起されるようになるかまたは第１蛍光団
を励起する第２蛍光団を添加することも望ましいことで
ありうる。蛍光はある時点で、時間の関数として、ある
いは蛍光偏光として測定することができる。検出に必要
な試薬は分離段階の後、様々な方法で検出されるべき免
疫複合体（コンブレックス）と反応するよう誘導するこ
とができる。信号発生系の一部は固相ゾーンに位置する
ことができる。固相を充分洗浄後、標識の検出に必要な
試薬を結合相の検出を伴う不均質免疫検定法において、
様々な態様で低速で放出することができる。次に、可能
な例を挙げる。
ナーは反応の進行過程で結合するようになるか、また
は、被分析物の検出のために設計された作用領域（固相
ゾーン）の支持体材料にすでに結合している。それは固
有結合パートナーともよばれる。他の結合パートナー
（１種または複数種）は支持体中に存在する。それらに
は標識を施す。標識には様々な可能性が知られているが
なかでも酵素標識が好ましい。それは、色素原基質系ま
たは蛍光または化学発光を生じる基質系を必要とする。
化学発光標識は、試薬の添加後にのみ測定される標識の
もう一つの例である。化学発光それ自体または後者（基
質系）により励起された蛍光のいずれかを測定すること
ができる。大抵の場合に、蛍光標識は、試薬の添加を要
せずして測れる。しかしながら、ある種の希土類元素キ
レートを用いる場合などは、試薬を添加した結果として
のみ測定されるべき蛍光団を生成させるか、または第１
蛍光団により励起されるようになるかまたは第１蛍光団
を励起する第２蛍光団を添加することも望ましいことで
ありうる。蛍光はある時点で、時間の関数として、ある
いは蛍光偏光として測定することができる。検出に必要
な試薬は分離段階の後、様々な方法で検出されるべき免
疫複合体（コンブレックス）と反応するよう誘導するこ
とができる。信号発生系の一部は固相ゾーンに位置する
ことができる。固相を充分洗浄後、標識の検出に必要な
試薬を結合相の検出を伴う不均質免疫検定法において、
様々な態様で低速で放出することができる。次に、可能
な例を挙げる。
【００１２】主要液体流に対し並行に配されるが、より
低速で流動しそして移動相溜めから出発し、標識成分含
有ゾーンの前に入る液体流による試薬の適用。この並行
液体流は、より低速にクロマトグラフィを行う吸収性媒
体、例えば適度に低速にクロマトグラフィを行う紙、ま
たは所々「進路を一時的に妨害する成分（componentste
mporarily blocking the way）」、例えば溶液に移行す
る際に高粘度を付与するポリマー（例えばポリビニール
アルコールまたはデキストラン）で含浸した紙を用いる
ことにより制御することができる。
低速で流動しそして移動相溜めから出発し、標識成分含
有ゾーンの前に入る液体流による試薬の適用。この並行
液体流は、より低速にクロマトグラフィを行う吸収性媒
体、例えば適度に低速にクロマトグラフィを行う紙、ま
たは所々「進路を一時的に妨害する成分（componentste
mporarily blocking the way）」、例えば溶液に移行す
る際に高粘度を付与するポリマー（例えばポリビニール
アルコールまたはデキストラン）で含浸した紙を用いる
ことにより制御することができる。
【００１３】固相を充分洗浄後（すなわちクロマトグラ
フィ完了後）、試薬の適用を、試薬要素の固体成分であ
る要素を押下げる（press down）ことにより行うことが
できる。この「押下げ」は機械的に、または液体流の作
用による離間片を除くことにより行うことができる。例
えば、試薬含有要素の押下げは、フラップをまたは離間
片により支持された紙片を押下げることにより行うこと
ができる。流体流の作用による試薬含有要素の下方移行
は例えばその固相、水溶性ポリマーおよび試薬担体（例
えば適当に含浸された紙片）を相互に積層することによ
り行うことができる。
フィ完了後）、試薬の適用を、試薬要素の固体成分であ
る要素を押下げる（press down）ことにより行うことが
できる。この「押下げ」は機械的に、または液体流の作
用による離間片を除くことにより行うことができる。例
えば、試薬含有要素の押下げは、フラップをまたは離間
片により支持された紙片を押下げることにより行うこと
ができる。流体流の作用による試薬含有要素の下方移行
は例えばその固相、水溶性ポリマーおよび試薬担体（例
えば適当に含浸された紙片）を相互に積層することによ
り行うことができる。
【００１４】液体流中への試薬の導入遅延は固相が充分
洗浄された後でのみカプセルから現れるマイクロカプセ
ル化された試薬を用いるか、またはマトリックス内でゆ
っくり溶解する成分に付着した試薬をコーティングする
ことにより行うことができる。特別な酵素標識の場合に
提供される一つの可能な手段は次のとおりである。すな
わち、ペルオキシダーゼ標識を用いる場合には、グルコ
ースオキシダーゼ・ゾーンを固相ゾーンの前におくこと
ができる。次にグルコースおよび色素原を液体流に取込
むことができ、その結果グルコースオキシダーゼの後方
で呈色させることができる。認めうる呈色は、適度のペ
ルオキシダーゼ濃度で充分なＨ2Ｏ2がそのオキシダーゼ
により形成される場合にのみ観察される。この過酸化物
形成はゆっくりと始まり、至適濃度に達し、そして最終
的に酵素阻害を生じ従って呈色を自動的に停止させる高
濃度に達する。この呈色は、Ｈ2Ｏ2受容体、例えば緩和
な還元剤としてのチオエーテル、または酵素カタラーゼ
をオキシダーゼ・ゾーンに、または後者の前方に取込め
ば、調整することができる。
洗浄された後でのみカプセルから現れるマイクロカプセ
ル化された試薬を用いるか、またはマトリックス内でゆ
っくり溶解する成分に付着した試薬をコーティングする
ことにより行うことができる。特別な酵素標識の場合に
提供される一つの可能な手段は次のとおりである。すな
わち、ペルオキシダーゼ標識を用いる場合には、グルコ
ースオキシダーゼ・ゾーンを固相ゾーンの前におくこと
ができる。次にグルコースおよび色素原を液体流に取込
むことができ、その結果グルコースオキシダーゼの後方
で呈色させることができる。認めうる呈色は、適度のペ
ルオキシダーゼ濃度で充分なＨ2Ｏ2がそのオキシダーゼ
により形成される場合にのみ観察される。この過酸化物
形成はゆっくりと始まり、至適濃度に達し、そして最終
的に酵素阻害を生じ従って呈色を自動的に停止させる高
濃度に達する。この呈色は、Ｈ2Ｏ2受容体、例えば緩和
な還元剤としてのチオエーテル、または酵素カタラーゼ
をオキシダーゼ・ゾーンに、または後者の前方に取込め
ば、調整することができる。
【００１５】この例では、標識検出試薬は、酵素を用い
た遅延回路により作られる。固相ゾーンでの呈色は、こ
のゾーンが液体流によって非特異的に結合した標識が不
含となるよう充分に洗浄された後でのみ開始する。固相
ゾーンの調製手段はいくつか可能である。そこに固定さ
れる成分は試験要素の一部である吸収性支持体に化学共
有結合によりまたは吸着により付着させることができ
る。これらの成分は吸収性支持体に適用後に適用部位に
固定されたままの粒子分散体に結合させることができ
る。例えば、表面に特異受容体を有する細胞の懸濁液、
例えばスタフィロコッカス・オーレウス・コワンI（Sta
phylococcus aureus Cowan I）菌体、または生物学的親
和性を有する結合パートナーを表面に結合した状態で担
持するラテックス粒子は、ペーパーマトリックスに固定
するのにふさわしい。ピペット操作可能な支持体に結合
された試験用帯状片の成分およびそのデバイスの未結合
成分も風乾によりそのエレメントの吸収性マトリックス
上に乾燥することができる。凍結乾燥段階は全く必要で
はない。
た遅延回路により作られる。固相ゾーンでの呈色は、こ
のゾーンが液体流によって非特異的に結合した標識が不
含となるよう充分に洗浄された後でのみ開始する。固相
ゾーンの調製手段はいくつか可能である。そこに固定さ
れる成分は試験要素の一部である吸収性支持体に化学共
有結合によりまたは吸着により付着させることができ
る。これらの成分は吸収性支持体に適用後に適用部位に
固定されたままの粒子分散体に結合させることができ
る。例えば、表面に特異受容体を有する細胞の懸濁液、
例えばスタフィロコッカス・オーレウス・コワンI（Sta
phylococcus aureus Cowan I）菌体、または生物学的親
和性を有する結合パートナーを表面に結合した状態で担
持するラテックス粒子は、ペーパーマトリックスに固定
するのにふさわしい。ピペット操作可能な支持体に結合
された試験用帯状片の成分およびそのデバイスの未結合
成分も風乾によりそのエレメントの吸収性マトリックス
上に乾燥することができる。凍結乾燥段階は全く必要で
はない。
【００１６】いくつかの試験実施例を使用標識から独立
したものとみなすことのできる態様例として説明する。
簡潔にするために、診断デバイスによる単一被分析物の
検出についてのみ記述する。拮抗的免疫検定の原理に基
づく次の２つの態様を被分析物が生物学的親和性を有す
る結合部位をただ一つしかもたないかまたは、生物学的
親和性を有するいくつかの結合部位のうちただ一つの結
合部位しか利用されない場合について説明する。
したものとみなすことのできる態様例として説明する。
簡潔にするために、診断デバイスによる単一被分析物の
検出についてのみ記述する。拮抗的免疫検定の原理に基
づく次の２つの態様を被分析物が生物学的親和性を有す
る結合部位をただ一つしかもたないかまたは、生物学的
親和性を有するいくつかの結合部位のうちただ一つの結
合部位しか利用されない場合について説明する。
【００１７】固相結合パートナーは固相作用領域の支持
材料に共有結合によりまたは吸着により結合する。被分
析物の溶液は、診断剤中に含まれる所定量の標識を移動
性にする。それら２成分は固相結合パートナーを含む作
用セクター中に移行しそしてその固相結合パートナーと
の結合を求めて拮抗する。被分析物の割合が標識被分析
物に比べて高いと、標識被分析物はほとんど結合されな
くなる。それが低いと、多量の標識被分析物が結合され
ることになる。固相結合パートナーは未結合成分として
作用領域中、固相作用領域の前方に収納する。接近して
くる溶媒先端によりそれは固相作用領域に運ばれ、そこ
で結合されるようになる。この固相結合は被分析物の結
合系から独立した生物学的親和性を有する結合系により
作られる。ビオチンと接合した結合パートナーは支持体
に結合したアビジンに結合する。結合パートナーとして
の免疫グロブリン例えばＩｇＧは、そのＦｃ成分を介し
て支持体に結合したＳ．オーレウスのプロテインＡに固
定されるか、または非イディオタイプ的に当該免疫グロ
ブリンに向けられた別の種の固相抗体により結合され
る。
材料に共有結合によりまたは吸着により結合する。被分
析物の溶液は、診断剤中に含まれる所定量の標識を移動
性にする。それら２成分は固相結合パートナーを含む作
用セクター中に移行しそしてその固相結合パートナーと
の結合を求めて拮抗する。被分析物の割合が標識被分析
物に比べて高いと、標識被分析物はほとんど結合されな
くなる。それが低いと、多量の標識被分析物が結合され
ることになる。固相結合パートナーは未結合成分として
作用領域中、固相作用領域の前方に収納する。接近して
くる溶媒先端によりそれは固相作用領域に運ばれ、そこ
で結合されるようになる。この固相結合は被分析物の結
合系から独立した生物学的親和性を有する結合系により
作られる。ビオチンと接合した結合パートナーは支持体
に結合したアビジンに結合する。結合パートナーとして
の免疫グロブリン例えばＩｇＧは、そのＦｃ成分を介し
て支持体に結合したＳ．オーレウスのプロテインＡに固
定されるか、または非イディオタイプ的に当該免疫グロ
ブリンに向けられた別の種の固相抗体により結合され
る。
【００１８】前述の如く、被分析物と標識被分析物とは
診断剤の成分として、処理時間中固相結合パートナーへ
の結合を求めて拮抗する。この拮抗反応の一部は、溶存
固相結合パートナーに対して、そして一部は、固相に結
合済みの固相結合パートナーに対して生起する。特異性
の異なる２つの結合点が被分析物中に存在する場合に
は、サンドイッチ式免疫検定の原理に基づく、診断剤の
いくつかの態様が考えられる。これらのうち２例につい
て以下に説明する。固相結合パートナーを固相作用領域
の支持体材料に共有結合によりまたは吸着により結合す
る場合、被結合と標識結合パートナーとで形成される二
成分複合体は溶媒と共に固相作用領域中に移行しそして
そこで固相結合パートナーと反応して固相に結合した三
成分複合体と形成するが、これは最初の結合パートナー
の標識を通じて検出することができる。過剰の標識結合
パートナーは溶媒により、次の作用領域中に除去され
る。
診断剤の成分として、処理時間中固相結合パートナーへ
の結合を求めて拮抗する。この拮抗反応の一部は、溶存
固相結合パートナーに対して、そして一部は、固相に結
合済みの固相結合パートナーに対して生起する。特異性
の異なる２つの結合点が被分析物中に存在する場合に
は、サンドイッチ式免疫検定の原理に基づく、診断剤の
いくつかの態様が考えられる。これらのうち２例につい
て以下に説明する。固相結合パートナーを固相作用領域
の支持体材料に共有結合によりまたは吸着により結合す
る場合、被結合と標識結合パートナーとで形成される二
成分複合体は溶媒と共に固相作用領域中に移行しそして
そこで固相結合パートナーと反応して固相に結合した三
成分複合体と形成するが、これは最初の結合パートナー
の標識を通じて検出することができる。過剰の標識結合
パートナーは溶媒により、次の作用領域中に除去され
る。
【００１９】固相結合パートナーが診断剤中で未結合の
形で存在していて溶媒により移動性となる場合には、生
物学的親和性を有する分析物の２反応成分は、被分析物
が同時にあるいは順次に両反応成分と反応しそして生成
三成分複合体が次に固相作用領域（そこでは前述の如
く、それは被分析物のそれから独立した生物学的親和性
を有する第２の系を介して固相に結合されるようにな
る）に移行するように作用領域に収納される。
形で存在していて溶媒により移動性となる場合には、生
物学的親和性を有する分析物の２反応成分は、被分析物
が同時にあるいは順次に両反応成分と反応しそして生成
三成分複合体が次に固相作用領域（そこでは前述の如
く、それは被分析物のそれから独立した生物学的親和性
を有する第２の系を介して固相に結合されるようにな
る）に移行するように作用領域に収納される。
【００２０】前述の態様、および免疫測定（ｉｍｍｕｎ
ｏｍｅｔｒｉｃ）試験原理、間接的抗体検出の原理また
は免疫検定のＥＬＡ（酵素標識抗原）原理に基づく別な
態様を説明するために総括表Ｉは、作用領域中の剤の成
分の分布、および反応完了後の固相複合体の組成（その
量は試料中の被分析物の濃度の尺度である）を例示的に
説明している。
ｏｍｅｔｒｉｃ）試験原理、間接的抗体検出の原理また
は免疫検定のＥＬＡ（酵素標識抗原）原理に基づく別な
態様を説明するために総括表Ｉは、作用領域中の剤の成
分の分布、および反応完了後の固相複合体の組成（その
量は試料中の被分析物の濃度の尺度である）を例示的に
説明している。
【００２１】
【表１】
【００２２】
【００２３】固相検出による不均質免疫検定の原理に従
って働く完全に一体化された試験帯状片は、原理的に実
施可能であるばかりでなく、更に、１時間以内の時間内
に評価でき、通常のＲＩＡやＥＬＩＳＡの定量化および
感度が達成されることを見出した。１０-12モル／リッ
トル程度の微量成分の検出は室温で３０分以下の反応時
間で可能となり、また試料の必要量は例えば約１pgに相
当する１０-16モルである。しかしながら、前述の配置
はより低い感度要件の試験をも可能にする。評価をSano
quell反射計（Quelle製）を用いて行った場合に２０〜
３０についての標準曲線を得た。完全な呈色を含む試験
要素に対するクロマトグラフィ時間は１６分間を超えな
い。評価はまた肉眼的に行うことができる。ＨＣＧを被
分析物として用いた場合、固相に結合したグルコースオ
キシダーゼおよびペルオキシダーゼ標識を用いた例にお
ける測定範囲の始点は０.３ng／ml（３Ｕ／リットルに
相当する）であった。
って働く完全に一体化された試験帯状片は、原理的に実
施可能であるばかりでなく、更に、１時間以内の時間内
に評価でき、通常のＲＩＡやＥＬＩＳＡの定量化および
感度が達成されることを見出した。１０-12モル／リッ
トル程度の微量成分の検出は室温で３０分以下の反応時
間で可能となり、また試料の必要量は例えば約１pgに相
当する１０-16モルである。しかしながら、前述の配置
はより低い感度要件の試験をも可能にする。評価をSano
quell反射計（Quelle製）を用いて行った場合に２０〜
３０についての標準曲線を得た。完全な呈色を含む試験
要素に対するクロマトグラフィ時間は１６分間を超えな
い。評価はまた肉眼的に行うことができる。ＨＣＧを被
分析物として用いた場合、固相に結合したグルコースオ
キシダーゼおよびペルオキシダーゼ標識を用いた例にお
ける測定範囲の始点は０.３ng／ml（３Ｕ／リットルに
相当する）であった。
【００２４】次の実施例において、拮抗的二重抗体試験
の原理の応用を具体例として示す。この試験配置では、
四成分を測定反応および分離段階のために順次に反応さ
せる必要があり、そして反応時間および反応成分の濃度
は臨界値である。この実施例は本発明を限定するものと
考えられるべきものでは全くなく、本発明を更に説明す
るために用いるにすぎない。
の原理の応用を具体例として示す。この試験配置では、
四成分を測定反応および分離段階のために順次に反応さ
せる必要があり、そして反応時間および反応成分の濃度
は臨界値である。この実施例は本発明を限定するものと
考えられるべきものでは全くなく、本発明を更に説明す
るために用いるにすぎない。
【００２５】
【実施例】組込まれた色素原基質系によるＨＣＧ検出の
ための完全に一体化された酵素−免疫化学的デバイス。 １.１ 試薬 １.１.１ ＨＣＧ−ペルオキシダーゼ接合体 約３０００Ｕ／mgの比活性を有するＨＣＧをOrganon社
から得た。西洋ワサビからのペルオキシダーゼをBoehri
nger Mannheim社（カタログ番号４１３,４７０）より得
た。ヘテロ−二官能性試薬Ｎ−γ−マレイミドブチリル
オキシスクシンイミド（ＧＭＢＳ）をBehring Diagnost
ics社から得、そしてTanimoriらが１９８３年に「J. Im
m. Meth. 62, 123〜131」に記載したようなＨＣＧと反
応させた。２−イミノチオラン塩酸塩（Sigma、 カタロ
グ番号Ｉ ６２５６）を、Kingらが１９７８年に「Bioch
emistry」17，1499〜1506に記載した方法によりペルオ
キシダーゼと反応させた。Tanimoriらによって記載され
た方法でＧＭＢＳ−ＨＣＧとイミノチオラン−ペルオキ
シダーゼから接合体を調製した。粗製接合体をUltrogel
ACA 44（ＬＫＢ）でのゲルクロマトグラフィにより精
製した。ＨＣＧ １分子あたり約１〜２個のペルオキシ
ダーゼ分子が結合した画分を試験に用いた。その接合体
をBehringwerke社製（注文番号ＯＳ Ｄ）のEnzygnost I
gEインキュベーション媒質（以下においては単にインキ
ュベーション媒質と称される）で希釈した。
ための完全に一体化された酵素−免疫化学的デバイス。 １.１ 試薬 １.１.１ ＨＣＧ−ペルオキシダーゼ接合体 約３０００Ｕ／mgの比活性を有するＨＣＧをOrganon社
から得た。西洋ワサビからのペルオキシダーゼをBoehri
nger Mannheim社（カタログ番号４１３,４７０）より得
た。ヘテロ−二官能性試薬Ｎ−γ−マレイミドブチリル
オキシスクシンイミド（ＧＭＢＳ）をBehring Diagnost
ics社から得、そしてTanimoriらが１９８３年に「J. Im
m. Meth. 62, 123〜131」に記載したようなＨＣＧと反
応させた。２−イミノチオラン塩酸塩（Sigma、 カタロ
グ番号Ｉ ６２５６）を、Kingらが１９７８年に「Bioch
emistry」17，1499〜1506に記載した方法によりペルオ
キシダーゼと反応させた。Tanimoriらによって記載され
た方法でＧＭＢＳ−ＨＣＧとイミノチオラン−ペルオキ
シダーゼから接合体を調製した。粗製接合体をUltrogel
ACA 44（ＬＫＢ）でのゲルクロマトグラフィにより精
製した。ＨＣＧ １分子あたり約１〜２個のペルオキシ
ダーゼ分子が結合した画分を試験に用いた。その接合体
をBehringwerke社製（注文番号ＯＳ Ｄ）のEnzygnost I
gEインキュベーション媒質（以下においては単にインキ
ュベーション媒質と称される）で希釈した。
【００２６】１.１.２ 抗体 ＨＣＧに対する抗体を、家兎を免疫することにより得、
そして家兎−ＩｇＧに対する抗体をヤギを免疫すること
により得た。ＩｇＧ画分を硫酸アンモニウム沈殿および
陰イオン交換クロマトグラフィにより血清から単離し、
そして免疫吸着により更に精製した。使用した方法は、
「Immunologische Arbeitsmethoden（免疫学研究法)」
（1984）、Helmut Friemel, 編に記載されている。抗−
ＨＣＧ抗体は最終的に前述の接合体希釈緩衝液で希釈し
た。
そして家兎−ＩｇＧに対する抗体をヤギを免疫すること
により得た。ＩｇＧ画分を硫酸アンモニウム沈殿および
陰イオン交換クロマトグラフィにより血清から単離し、
そして免疫吸着により更に精製した。使用した方法は、
「Immunologische Arbeitsmethoden（免疫学研究法)」
（1984）、Helmut Friemel, 編に記載されている。抗−
ＨＣＧ抗体は最終的に前述の接合体希釈緩衝液で希釈し
た。
【００２７】１.１.３ グルコースオキシダーゼ アスパージラス・ニガー（Aspergillus niger）からの
グルコースオキシダーゼを３００Ｕ／mg含有溶液（Serv
a、カタログ番号２２,７３７）として得た。グルコース
オキシダーゼを最終的にインキュベーション媒質で希釈
した。 １.１.４ グルコースおよびテトラメチルベンジン α−Ｄ−グルコースとテトラメチルベンジン塩酸塩をSe
rva社（それぞれカタログ番号２２,７２０および３５,
９２６）から得た。
グルコースオキシダーゼを３００Ｕ／mg含有溶液（Serv
a、カタログ番号２２,７３７）として得た。グルコース
オキシダーゼを最終的にインキュベーション媒質で希釈
した。 １.１.４ グルコースおよびテトラメチルベンジン α−Ｄ−グルコースとテトラメチルベンジン塩酸塩をSe
rva社（それぞれカタログ番号２２,７２０および３５,
９２６）から得た。
【００２８】１.２ デバイスの調製 シート状作用領域を次のように調製した：移動相適用ゾ
ーンはKalle社製スポンジ布帛を２０×６mmの寸法に切
断することにより調製した。これは乾燥状態で圧縮され
た再生セルロースの合成スポンジである。それを水１ml
あたりグルコース５０mgおよびテトラメチルベンジジン
塩酸塩０.７５mgで含浸し、そして空気流中で乾燥し
た。前記接合体、抗−ＨＣＧ抗体およびグルコースオキ
シダーゼ（それぞれ２５μｌ／ml、１００μｌ／mlおよ
び０.１mg／ml濃度のもの各５μｌ）を均一の距離で、
４５×５mm ＭＮ １番紙（Macherey & Nagel）片に相前
後して適用し、そし風乾した。５×５mmの寸法のSchlei
cher & Schuell ５９７番紙片を常法により、固相ゾー
ンとしての抗−家兎ＩｇＧ−抗体で被覆した。これは臭
化シアンで活性化した紙に抗体を結合させることにより
行った（Clarkeほか、「Meth. Enzymology」（1979），68
巻，441〜442参照）。２０×５mmのSchleicher & Schue
ll ２６６８／８番紙片を吸収ゾーンとして用いた。そ
れら４つの紙片を相前後して、０.５〜１mmオーバーラ
ップさせながら両側粘着テープ（Beiersdorf社製“Tesa
band"）によりプラスチックリボンに固定して幅５mmの
試験用帯状片を形成した。
ーンはKalle社製スポンジ布帛を２０×６mmの寸法に切
断することにより調製した。これは乾燥状態で圧縮され
た再生セルロースの合成スポンジである。それを水１ml
あたりグルコース５０mgおよびテトラメチルベンジジン
塩酸塩０.７５mgで含浸し、そして空気流中で乾燥し
た。前記接合体、抗−ＨＣＧ抗体およびグルコースオキ
シダーゼ（それぞれ２５μｌ／ml、１００μｌ／mlおよ
び０.１mg／ml濃度のもの各５μｌ）を均一の距離で、
４５×５mm ＭＮ １番紙（Macherey & Nagel）片に相前
後して適用し、そし風乾した。５×５mmの寸法のSchlei
cher & Schuell ５９７番紙片を常法により、固相ゾー
ンとしての抗−家兎ＩｇＧ−抗体で被覆した。これは臭
化シアンで活性化した紙に抗体を結合させることにより
行った（Clarkeほか、「Meth. Enzymology」（1979），68
巻，441〜442参照）。２０×５mmのSchleicher & Schue
ll ２６６８／８番紙片を吸収ゾーンとして用いた。そ
れら４つの紙片を相前後して、０.５〜１mmオーバーラ
ップさせながら両側粘着テープ（Beiersdorf社製“Tesa
band"）によりプラスチックリボンに固定して幅５mmの
試験用帯状片を形成した。
【００２９】１.３ 試験の実施 各例について試験はインキュベーション媒質中のＨＣＧ
希釈液２００μｌを布帛に適用することにより行った。 １.４ 結果 試験要素のクロマト展開および自動的呈色は室温で１５
分後に完了し、そして評価は肉眼的に、あるいは反射計
により行うことができた。固相ゾーン（５９７番紙）を
Quelle社製のSanoquell血中グルコース評価装置で評価
したところ、次の値を得た。
希釈液２００μｌを布帛に適用することにより行った。 １.４ 結果 試験要素のクロマト展開および自動的呈色は室温で１５
分後に完了し、そして評価は肉眼的に、あるいは反射計
により行うことができた。固相ゾーン（５９７番紙）を
Quelle社製のSanoquell血中グルコース評価装置で評価
したところ、次の値を得た。
【００３０】
【表２】 Ｂｅｈｒｉｎｇｗｅｒｋｅ社製Ｒａｐｉｍａｔ尿試験用
帯状片評価装置を用いたところ同じ試験用帯状片に対し
て次の値が得られた。
帯状片評価装置を用いたところ同じ試験用帯状片に対し
て次の値が得られた。
【００３１】
【表３】
【００３２】ここに示された試験用帯状片アセンブリは
グルコースオキシダーゼと抗−ＨＣＧ抗体が同じゾーン
に位置していても達成することができる。それだけ短く
した試験用帯状片は約１０分後に結果を与える。
グルコースオキシダーゼと抗−ＨＣＧ抗体が同じゾーン
に位置していても達成することができる。それだけ短く
した試験用帯状片は約１０分後に結果を与える。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ハンス−エルヴイン・パウリ ドイツ連邦共和国デー−3563ダウトフエ タール２．フインケンシユトラーセ１ (72)発明者 ヘルムート・コール ドイツ連邦共和国デー−3552ヴエター. ゲーテシユトラーセ32 (72)発明者 クラウス・ハーベンシユタイン ドイツ連邦共和国デー−3552ヴエター. イム・ケツアーグルント33 (72)発明者 ヨーゼフ・シユテルク ドイツ連邦共和国デー−3557エーブスド ルフアーグルント８．イム・ヴインケル ２
Claims (5)
- 【請求項１】 液体中に存在する免疫学的な結合特性を
有する一対の組み合わせの一方の成分（以下被分析物と
いう）を検出または測定するための分析デバイスであっ
て、該デバイスは、相前後して配置されかつそれらの縁
を介して相互に吸収可能な接触状態にある１個またはそ
れ以上の細片からなるシート状ゾーンと固体支持体とか
ら形成されたシート状のクロマトグラフィー分析デバイ
スであり、該デバイスの一方の端に移動相適用ゾーン
（ＭＰＡＺ）、他方の端に吸収ゾーン（ＡＺ）、そして
その中間にさらに吸収性のゾーンを含み、該吸収性のゾ
ーンでは被分析物と免疫学的な相互作用をなしうる複数
の反応成分が相互に空間的に分離して配置されており、
１つの反応成分は共有結合または吸着によりＭＰＡＺと
ＡＺとの間に位置しそしてＡＺと接触して存在する固相
ゾーン（ＳＰＺ）に固定されており、そして標識反応成
分がＭＰＡＺまたはＭＰＡＺとＳＰＺとの間のゾーンで
未結合状態で位置している分析デバイスにおいて、該デ
バイスは全ての反応成分および反応試薬を脱水状態で含
み、そして試料は該デバイスのＭＰＡＺに適用され、Ｍ
ＰＡＺが後続ゾーンに毛細管力により制御される液体が
ＡＺの端部に達するのに少なくとも充分な液体を放出す
るものである前記分析デバイスを準備し、該分析デバイ
スの前記ＭＰＡＺに前記被分析物を含有する液体試料を
適用し、該試料を毛細管力の制御下に前記ＡＺの端部に
達せしめ、前記ＳＰＺ中の標識量を測定することを特徴
とする、前記被分析物の免疫学的測定方法。 - 【請求項２】 前記分析デバイスで生起する反応が免疫
学的検出反応、拮抗的免疫測定またはサンドイッチ式免
疫検定、標識抗体による間接的抗体検出または標識抗原
による抗体検出の原理に基づく請求項１記載の方法。 - 【請求項３】 標識剤が直接に検出または測定されるか
または前記分析デバイス中に存在する試薬の添加後に検
出または測定される蛍光団であるか、または直接にまた
は更なる試薬の添加後に検出または測定される蛍光団が
標識剤から前記分析デバイス中に存在する試薬の添加に
より形成される請求項１記載の方法。 - 【請求項４】 標識剤が励起されると化学発光を生じう
る化合物であり、前記分析デバイス中に存在する試薬の
添加後に化学発光を検出または測定することができる請
求項１記載の方法。 - 【請求項５】 標識剤がその活性を前記分析デバイス中
に存在する試薬を用いて測定することのできる酵素であ
る請求項１記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3445816:6 | 1984-12-15 | ||
| DE3445816A DE3445816C1 (de) | 1984-12-15 | 1984-12-15 | Flaechenfoermiges diagnostisches Mittel |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60279418A Division JPH0778503B2 (ja) | 1984-12-15 | 1985-12-13 | シート状診断デバイス |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0755808A JPH0755808A (ja) | 1995-03-03 |
| JP2504923B2 true JP2504923B2 (ja) | 1996-06-05 |
Family
ID=6252876
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60279418A Expired - Lifetime JPH0778503B2 (ja) | 1984-12-15 | 1985-12-13 | シート状診断デバイス |
| JP6068634A Expired - Lifetime JP2504923B2 (ja) | 1984-12-15 | 1994-04-06 | 免疫学的測定方法 |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60279418A Expired - Lifetime JPH0778503B2 (ja) | 1984-12-15 | 1985-12-13 | シート状診断デバイス |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US4861711A (ja) |
| EP (1) | EP0186799B2 (ja) |
| JP (2) | JPH0778503B2 (ja) |
| AT (1) | ATE50457T1 (ja) |
| AU (1) | AU600657B2 (ja) |
| CA (1) | CA1267083A (ja) |
| DE (2) | DE3445816C1 (ja) |
| ES (1) | ES8607556A1 (ja) |
| MX (1) | MX173718B (ja) |
| YU (1) | YU45751B (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2063269A2 (en) | 2004-06-07 | 2009-05-27 | DENKA SEIKEN Co., Ltd. | Chromatography apparatus for detecting Staphylococcus aureus |
| WO2009136477A1 (ja) | 2008-05-07 | 2009-11-12 | パナソニック株式会社 | バイオセンサ |
Families Citing this family (279)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5622871A (en) | 1987-04-27 | 1997-04-22 | Unilever Patent Holdings B.V. | Capillary immunoassay and device therefor comprising mobilizable particulate labelled reagents |
| US6472160B2 (en) * | 1919-09-08 | 2002-10-29 | Fujirebio Inc. | Immunoassay device and immunoassay method using the same |
| US5073484A (en) * | 1982-03-09 | 1991-12-17 | Bio-Metric Systems, Inc. | Quantitative analysis apparatus and method |
| DE3445816C1 (de) | 1984-12-15 | 1986-06-12 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Flaechenfoermiges diagnostisches Mittel |
| US4740468A (en) * | 1985-02-14 | 1988-04-26 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Concentrating immunochemical test device and method |
| GB8526741D0 (en) * | 1985-10-30 | 1985-12-04 | Boots Celltech Diagnostics | Binding assay device |
| US5500350A (en) * | 1985-10-30 | 1996-03-19 | Celltech Limited | Binding assay device |
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| DE3722273A1 (de) * | 1986-07-08 | 1988-01-21 | Bio Rad Laboratories | Festphasen-bindungsreagentien, ihre herstellung und sie enthaltende assay-kits |
| US4963468A (en) * | 1986-09-05 | 1990-10-16 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Immunoseparating strip |
| US4959307A (en) * | 1986-09-05 | 1990-09-25 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Immunoseparating strip |
| US5260194A (en) * | 1986-09-05 | 1993-11-09 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Immunoseparating strip |
| US5085988A (en) * | 1986-09-05 | 1992-02-04 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Immunoseparating strip |
| US5260193A (en) * | 1986-09-05 | 1993-11-09 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Immunoseparating strip |
| US5085987A (en) * | 1986-09-05 | 1992-02-04 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Immunoseparating strip |
| US4960691A (en) * | 1986-09-29 | 1990-10-02 | Abbott Laboratories | Chromatographic test strip for determining ligands or receptors |
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