ES2322297T3 - Elemento de ensayo inmunologico con zona de control perfeccionada. - Google Patents
Elemento de ensayo inmunologico con zona de control perfeccionada. Download PDFInfo
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Abstract
Elemento de ensayo para la ejecución de un ensayo inmunológico en sándwich, para la determinación de un analito a partir de una muestra líquida, la cual contiene - una zona de reactivo, la cual contiene un conjugado soluble en la muestra líquida, de un socio de unión con el analito y un marcador que puede detectarse directa o indirectamente, visualmente, ópticamente o electroquímicamente; - una zona de detección, la cual contiene un socio de unión permanentemente inmovilizado para el analito o para los complejos que contienen el analito; y - una zona de control, la cual contiene un socio de unión permanentemente inmovilizado para el conjugado del socio de unión con el analito y un marcador, caracterizado porque, la zona de control contiene además uno o varios socios de unión permanentemente inmovilizados para el analito o para los complejos que contienen el analito.
Description
Elemento de ensayo inmunológico con zona de
control perfeccionada.
La invención se refiere a un elemento de ensayo
para la ejecución de un ensayo inmunológico en sándwich para la
determinación de un analito a partir de una muestra líquida, con una
zona de control de nueva concepción, de preferencia en forma de
dispositivos de ensayo inmunocromatográficos (tiras de ensayo) o
elementos de ensayo inmunológicos (elementos de ensayo microfluidos
o de ranura capilar).
Los ensayos de diagnóstico para la investigación
de muestras líquidas, como la sangre, el suero, el plasma, la
orina, la saliva, el sudor, etc., contienen a menudo un mecanismo de
control, el cual debe garantizar debidamente la ejecución del
ensayo y la capacidad de su función.
En la ejecución de ensayos de diagnóstico en
aparatos automáticos de laboratorio, un mecanismo de control
interno del ensayo es más bien inusual, puesto que la ejecución del
ensayo debidamente efectuado está habitualmente garantizado y/o
supervisado por el propio aparato. En los aparatos automáticos de
laboratorio se supervisan por ejemplo los volúmenes de pipeteado o
los tiempos de incubación y otras magnitudes, la mayor parte de las
veces automáticamente, por los aparatos automáticos de análisis. La
capacidad de función del ensayo (tanto con respecto a los reactivos
como también respecto a los aparatos) se garantiza habitualmente
mediante la determinación conjunta de muestras de control dentro de
una serie de medición.
En el ámbito del
"Point-of-Care" ("punto de
cuidado al paciente" (PoC), es decir, en el lugar donde se
efectúan las mediciones de muestras del paciente fuera de un
laboratorio especializado, se efectúan a menudo determinaciones
aisladas. Los elementos de ensayo empleados en las mismas, contienen
la mayor parte de las veces reactivos secos, los cuales se
disuelven con la muestra de nuevo y de esta forma se reactivan para
el análisis propiamente dicho. En particular, en el campo de los
inmunoensayos, se han acreditado en el ámbito del PoC, ciertos
elementos de ensayo inmunológicos, como por ejemplo las tiras de
ensayo inmunocromatográficas o los elementos de ensayo
inmunológicos de rendija capilar, como
particular-mente idóneos. Los elementos de ensayo
inmunológicos se basan a menudo en reacciones ópticamente
detectables, las cuales la mayor parte de las veces son detectables
visualmente o mediante un aparato de medición (lector). A la persona
que ejecuta el ensayo le atañe en este caso una particular
responsabilidad, puesto que funciones que en los ensayos de química
húmeda son efectuadas por los aparatos automáticos de
labora-torio, deben ser ejecutadas en parte por la
persona que efectúa el ensayo (por ejemplo el pipeteado correcto
del volumen de muestra o el mantenimiento del tiempo de
evaluación).
Habitualmente se trata, en el caso del personal
que trabaja en el entorno del PoC, la mayor parte de las veces, de
colaboradores no especialmente preparados. Los ensayos en el ámbito
del PoC se realizan a menudo por médicos, enfermeras, auxiliares de
médicos, farmacéuticos o los propios pacientes. En los laboratorios
especializados (por ejemplo en los laboratorios centrales de los
hospitales, grandes laboratorios), por el contrario, los ensayos
son efectuados por ayudantes técnicos especialmente formados (por
ejemplo los MTA).
En consecuencia se han desarrollado ofertas de
ensayos para estos especiales "controles descentralizados" o
aplicaciones PoC, así llamadas "on-board
controls" ("controles a bordo"), los cuales, al ser
ejecutados incurren en burdos fallos de manipulación (por ejemplo
baja dosificación) y/o falta de capacidad funcional del ensayo, y
sorprendiendo desagradablemente al usuario con un resultado de
ensayo no válido.
En el caso especial de los elementos de ensayo
inmunológicos, que trabajan según el llamado "principio
sándwich", se efectúan "on board controls" ("controles a
bordo") habitualmente en forma de franjas o zonas de control
(ambos conceptos se emplean a continuación como sinónimos).
Esas franjas o zonas de control, sirven
idealmente, para garantizar que el usuario reconoce, que se ha
aplicado un suficiente volumen de la muestra para la correcta
ejecución del ensayo, que en el elemento de ensayo los reactivos
inmunoquímicos impregnados o secos, se encuentran todavía en una
forma con capacidad de migración (es decir movibles en el elemento
de ensayo), y que los reactivos con una función decisiva,
proporcionan - dentro de un cierto marco - una actividad
inmunológica. En otro caso, la franja de control o respectivamente
la zona de control, permite reconocer que la la ejecución del ensayo
se realiza de forma no experta, o la inutilidad del elemento de
ensayo, y de esta forma ayuda a impedir que se reciban falsos
resultados de ensayo.
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Una típica construcción de un ensayo es por
ejemplo la siguiente:
entre la zona de aplicación de la muestra y la
zona de detección, se encuentra habitualmente la zona del conjugado
(llamada también zona del reactivo), en o sobre, el elemento de
ensayo. La zona de aplicación de la muestra y la zona del conjugado
pueden ser la misma. La zona del conjugado contiene un socio de
unión inmunológica dirigido contra el analito, a través del líquido
de muestra de nuevo soluble y rescatable, y de esta forma
movilizable (típicamente un anticuerpo o un fragmento del mismo) el
cual habitualmente está conjugado a una enzima generadora de una
señal (por ello llamado "conjugado"), o un así llamado,
marcador directo, (por ejemplo partículas de oro o de látex
coloreado, un marcador fluorescente, etc.).
La zona de detección contiene un segundo socio
de unión irreversiblemente inmovilizado, independiente, dirigido
contra el analito (o un complejo formado por el analito).
En presencia de analito en la muestra, éste se
enriquece en forma de un llamado sándwich (es decir un complejo
inmunológico formado por el socio de unión inmovilizado, el analito
y el socio de unión encargado de dar la señal) en la zona de
detección, y se hace visible, eventualmente después de la adición de
otros reactivos.
En el caso del principio
estreptavidina-biotina (como representativo del
llamado principio sándwich indirecto), se encuentra el segundo
socio de unión en forma de un conjugado de biotina movilizable en la
zona del conjugado. La zona de detección contiene estreptavidina
irreversiblemente inmovilizada.
El exceso de conjugado del socio de unión y el
marcador o biotina, se transporta juntamente con la muestra,
"corriente abajo" a la zona de desperdicios (zona de absorción
que sirve para la extracción de la muestra sobrante), que se
encuentra en la zona de detección.
Entre la zona de detección y la zona de
desperdicios se encuentra habitualmente la zona de control.
Los siguientes principios funcionales en las
zonas de control son ya conocidos por el experto, y serán descritos
con sus ventajas y desventajas:
La zona de control situada entre la zona de
detección y la zona de desperdicios, contiene el analito
irreversible-mente inmovilizado (o un análogo del
analito). El conjugado, socio de unión-marcador, en
exceso, se une con el analito inmovilizado, o respectivamente el
análogo del analito, y conduce de esta manera a una señal detectable
en la franja de control.
Este mecanismo está hoy en día a menudo cubierto
mediante zonas de control de polihapteno; por ello se describen
ventajas y desventajas en el punto 2, con más detalle.
Una desventaja especial de la franja de control
del analito es que el analito, por ejemplo, un antígeno, se ha
obtenido a menudo, con dificultad y de forma costosa, en cantidad
suficiente.
La zona de control situada entre la zona de
detección y la zona de desperdicios, contiene un polihapteno
dirigido contra el anticuerpo conjugado.
Ventaja: junto a la capacidad de
migración de los reactivos y del control del volumen de muestra
correcto, garantiza la formación de la señal en la zona de control
también la actividad inmunológica del conjugado del socio de unión
del analito y el marcador. Desventaja: en el caso de una alta
concentración de analito en la muestra, la capacidad de unión al
antígeno del conjugado socio de unión-marcador antes
de alcanzar la zona de control ya está saturada, y el polihapteno
en la zona de control no puede captar ningún conjugado más. El
mecanismo de control por consiguiente, no funciona.
En este caso, el usuario debe partir
erróneamente, de un resultado de ensayo no válido, en la zona de
detección.
Esto es particularmente a menudo, una desventaja
cuando entre el valor "cut-off" ("valor de
corte") del ensayo (es decir el límite inferior de medición), y
el margen superior de concentración debe cubrirse un amplio tramo
de concentración. Este es por ejemplo el caso en los ensayos de
embarazo, en donde la hormona hCG de la orina debe detectarse con
un límite de aproximadamente 10-20 mlU/ml, por otra
parte deben observarse también, valores hCG de hasta 500.000 mlU/ml
al final del primer trimestre de embarazo. Estas altas
concentraciones de analito conducen a resultados negativos en la
zona de control y simulan así un resultado no válido del ensayo en
la zona de detección.
La zona de control contiene un anticuerpo
dirigido contra el conjugado anticuerpo-marcador.
Este principio de zonas de control está muy difundido en las tiras
de ensayo del embarazo.
Ejemplo: cuando se emplea un anticuerpo
de ratón marca-do, específico para el analito, la
zona de control contiene por ejemplo un anticuerpo policlonal
dirigido contra el anti-cuerpo de ratón (por ejemplo
el PAK<ratónFc\gamma>S-IgG).
Ventaja: la preparación de la franja de
control no está influida por las altas concentraciones de analito
de la muestra.
Desventaja: la actividad inmunológica
correcta del conjugado no está comprendida por este mecanismo. Esto
ha conducido últimamente a que las nuevas autorizaciones de
elementos de ensayo han provocado con más frecuencia, discusiones
con la autoridades de admisión, por ejemplo, la FDA en USA. Otra
desventaja reside en que al emplear los anticuerpos
anti-interferencias en los ensayos, que trabajan con
sangre, la intensidad de la señal en la zona de control disminuye
fuertemente. Los anticuerpos anti-interferencias se
emplean en el ensayo habitualmente en un exceso de 10 a 500 veces
con respecto al anticuerpo del conjugado específico para el analito.
Como anticuerpos anti-interferencias se emplean
virtualmente anticuerpos sin conjugar de la misma especie, los
cuales pueden capturarse igualmente de la franja de control.
En presencia de analito en la muestra,
constituye una dificultad, que una gran parte del conjugado en la
zona de detección ya está unido, y la cantidad de conjugado
restante, a menudo pequeña, en presencia del anticuerpo
anti-interferencias conduce a un completo fracaso de
la zona de control.
La franja de control contiene un socio de unión
que está dirigido contra un "marcador independiente" del
conjugado. Ejemplo: el socio de unión del conjugado específico para
el analito se digoxigeniza adicionalmente y es captado mediante un
anticuerpo antidigoxigenina en la franja de control (véase por
ejemplo, la patente US-A 2002-0055
126).
Ventaja: la capacidad de unión de la
franja de control no disminuye con una alta concentración de
analito. Además, la capacidad de unión de la franja de control no
disminuye por la presencia de anticuerpos
anti-interferencias.
Desventaja: los anticuerpos del conjugado
deben además modificarse especialmente, lo cual significa trabajo,
costes y tiempo adicionales. Además, en caso de un contenido
endógeno alto del marcador seleccionado, la franja de control puede
fallar de nuevo.
A partir del actual estado de la técnica
descrito, puede deducirse que existe una necesidad de un mecanismo
de franja de control perfeccionado.
La tarea de la presente inversión consiste en
solventar las desventajas del estado actual de la técnica. En
particular, la tarea de la invención consiste en poner a punto un
mecanismo de control para los elementos de ensayo inmunológicos, el
cual funcione con fiabilidad independientemente de los componentes
de la receta del ensayo (en particular respecto al empleo de los
llamados anticuerpos anti-interferencias), en un
amplio margen de concentración del analito, sin ser influenciado
por los componentes endógenos de la muestra.
Esta tarea se resuelve mediante el objeto de la
presente invención.
Objeto de la invención es un elemento de ensayo
según la reivindicación 1, así como un procedimiento según la
reivindicación 10. Las versiones preferidas de la invención son
objeto de las reivindicaciones anexas.
Objeto de la invención es en primer lugar un
elemento de ensayo para la ejecución de un ensayo inmunológico en
sándwich, para la determinación de un analito a partir de una
muestra líquida, como ya es conocido en principio - a excepción de
la nueva zona de control - a partir del actual estado de la técnica
en muchas variantes. Por ejemplo el elemento de ensayo puede estar
construido esencialmente a partir de materiales absorbentes, como
por ejemplo, napa, membranas, papeles, etc. (véanse por ejemplo las
patentes US 4.861.711, US-A
2002-0055126, WO 2005/111607), o efectuar el
transporte de líquido mediante estructuras microfluidizadas
(parcialmente accionadas por la acción de fuerzas externas como
absorción, presión, centrifugación), o canales capilares (ver por
ejemplo, la patente US 6.156.270).
El elemento de ensayo contiene una zona de
reactivos, que a su vez contiene un conjugado
analito-socio de unión, soluble en la muestra
líquida (típicamente - caso de que el analito sea un antígeno o
hapteno, un anticuerpo o un fragmento de anticuerpo
inmunológicamente activo capaz de unirse al analito, o
respectivamente - caso de que el analito sea un anticuerpo - a un
antígeno o hapteno), y un marcador que sea visible directa o
indirectamente, detectable ópticamente o electroquímicamente.
Marcadores apropiados son por ejemplo las enzimas, los marcadores
fluorescentes, los grupos electroquímicamente activos o los llamados
marcadores directos como los marcadores de metal o carbono, o los
látex coloreados. Esta zona recibe también el nombre de zona del
conjugado.
La zona del conjugado puede servir como zona de
trabajo de la muestra, o colocarse antes o después de una zona
separada de trabajo de la muestra. Puede contener al lado del
conjugado antes descrito, un analito-socio de
unión, y el marcador, y también otro conjugado de un segundo socio
de unión del analito (de nuevo típicamente un anticuerpo o un
fragmento de anti-cuerpo inmunológicamente activo
capaz de unirse con el analito) y una substancia marcadora, que es
ella misma socia de un par de unión. La sustancia marcadora puede
ser por ejemplo la biotina o la digoxigenina, y puede servir para
inmovilizar un complejo sándwich formado por, el conjugado marcado,
el analito, y el conjugado marcado de la zona de detección y/o la
zona de control.
El elemento de ensayo comprende además una zona
de detección, la cual contiene un socio de unión permanentemente
inmovilizado, es decir, no soluble en la muestra líquida, para el
analito o para los complejos que contienen el analito. El socio de
unión inmovilizado es de nuevo típicamente un anticuerpo o un
fragmento de anticuerpo, inmunológicamente activo, capaz de unirse
al analito, o respectivamente un antígeno o un (poli-)hapteno. En
el caso de que se emplee un conjugado marcado de los citados más
arriba, los cuales llevan por ejemplo, biotina o respectivamente
digoxigenina en unión con un socio de unión al analito, el socio de
unión inmovilizado puede ser también estreptavidina o
poliestreptavidina, o respectivamente un anticuerpo
anti-digoxigenina.
Finalmente se encuentra en, o sobre el elemento
de ensayo una zona de control, que contiene un socio de unión
permanentemente inmovilizado para el conjugado,
analito-socio de unión y la marca, por ejemplo en
forma de un polihapteno inmovilizado, el cual actúa como un análogo
del analito, y está en posición de unirse al
analito-socio de unión del conjugado marcado. Es
esencial según la invención, que la zona de control contenga además
uno o varios socios de unión (n) permanentemente inmovilizados,
para el analito o para el complejo que contiene el analito. Los
socios de unión citados últimamente pueden escogerse a este respecto
entre los mismos compuestos que se han descrito más arriba en
conexión con los socios de unión inmovilizados de la zona de
detección. Típicamente estos socios de unión inmovilizados son
idénticos en la zona de detección y en la zona de control. Sin
embargo, es posible también, que sean diferentes, por ejemplo, que
en la zona de detección esté inmovilizado un socio de unión para un
conjugado marcado con biotina (también por ejemplo,
poliestreptavidina), y en la zona de control - junto al polihapteno
-
se encuentre un anticuerpo anti-analito. En el caso últimamente citado, el anticuerpo anti-analito, inmovilizado adicionalmente en la zona de control, debe ser dirigido contra un (otro) epítopo independiente y por ello no reconocido por los anticuerpos del conjugado (conjugado marcado con biotina y conjugado marcado).
se encuentre un anticuerpo anti-analito. En el caso últimamente citado, el anticuerpo anti-analito, inmovilizado adicionalmente en la zona de control, debe ser dirigido contra un (otro) epítopo independiente y por ello no reconocido por los anticuerpos del conjugado (conjugado marcado con biotina y conjugado marcado).
Otro objeto de la invención es un procedimiento
para la detección de una analito a partir de una muestra líquida
con ayuda del elemento de ensayo según la invención. La muestra (la
cual puede ser líquida, o - en caso de que no sea líquida - está
disuelta o suspendida en un líquido, por ejemplo, un tampón, y de
esta forma pueda ser empleada), se aplica sobre el elemento de
ensayo y se deja que alcance la zona de reactivos (zona del
conjugado), en donde están presentes los reactivos de forma que sean
capaces de migrar. En la zona del conjugado se pone en contacto el
analito
- siempre que esté presente en la muestra - con el conjugado marcado, y reacciona con el complejo analito-conjugado. La mezcla de la muestra y el reactivo alcanza a continuación la zona de detección en donde por lo menos una parte del complejo analito-conjugado se une al socio de unión permanentemente inmovilizado para el analito o para los complejos que contienen el analito. El conjugado marcado que no ha reaccionado con el analito se une en la zona de control al socio de unión permanentemente inmovilizado para el conjugado. Además la parte de los complejos analito-conjugado, que no han sido captados en la zona de detección se unen en la zona de control al socio de unión permanentemente inmovilizado para el analito o para los complejos que contienen el analito.
- siempre que esté presente en la muestra - con el conjugado marcado, y reacciona con el complejo analito-conjugado. La mezcla de la muestra y el reactivo alcanza a continuación la zona de detección en donde por lo menos una parte del complejo analito-conjugado se une al socio de unión permanentemente inmovilizado para el analito o para los complejos que contienen el analito. El conjugado marcado que no ha reaccionado con el analito se une en la zona de control al socio de unión permanentemente inmovilizado para el conjugado. Además la parte de los complejos analito-conjugado, que no han sido captados en la zona de detección se unen en la zona de control al socio de unión permanentemente inmovilizado para el analito o para los complejos que contienen el analito.
La invención se aclara con más detalle, a la
vista del ejemplo que sigue a continuación, y la figura anexa.
En la figura 1 está representada
esquemáticamente una versión preferida de un elemento de ensayo
según la invención en forma de una tira de ensayo
inmunocromatográfica.
Las cifras y las letras de la figura,
significan:
- A -
- zona de trabajo de la muestra y zona del conjugado
- B -
- zona de separación de los eritrocitos
- C -
- zona de detección
- D -
- zona de absorción
- 1 -
- material de soporte
- 2 -
- napa absorbente (desperdicios)
- 3 -
- membrana cromatografía con tira de detección y tira de control
- 4 -
- matriz de separación de los eritrocitos (napa de separación de la sangre)
- 5 -
- napa de conjugado de oro (conjugado marcado)
- 6 -
- napa de conjugado de biotina (conjugado marcado)
- 7 -
- tira de detección (poliestreptavidina inmovilizada)
- 8 -
- tira de control.
La tira de ensayo representada en la figura 1
corresponde - con excepción de la tira de control según la invención
-
a la construcción y a la función de la tira de ensayo Roche Cardiac T Quantitative (Roche Diagnostics GmbH, Mannheim, Alemania) Troponin T. Pueden obtenerse tiras de ensayo análogas para la determinación de otros analitos (ver por ejemplo la patente US-2005-0118662-A1, en la cual se describe una correspondiente tira de ensayo NT-probBNP).
a la construcción y a la función de la tira de ensayo Roche Cardiac T Quantitative (Roche Diagnostics GmbH, Mannheim, Alemania) Troponin T. Pueden obtenerse tiras de ensayo análogas para la determinación de otros analitos (ver por ejemplo la patente US-2005-0118662-A1, en la cual se describe una correspondiente tira de ensayo NT-probBNP).
Sobre un material de soporte 1 de plástico, se
encuentran una después de otra, i) una zona de entrega de la
muestra A, la cual tiene un material de napa 5 con anticuerpo
anti-analito-conjugado de oro,
impregnado soluble, y un material de napa 6 con anticuerpo
anti-analito-conjugado de biotina
impregnado soluble, ii) una zona de separación de eritrocitos B,
que contiene una napa de fibra de vidrio como matriz de separación
de eritrocitos 4, el cual está en situación de separar los
eritrocitos de la sangre entera y producir gran cantidad de plasma
de sangre incoloro, iii) una zona de detección C, la cual contiene
una membrana cromatográfica 3 de nitrocelulosa, en la cual o sobre
la cual están inmovilizadas respectivamente una franja de detección
de poliestreptavidina 7 y una franja de control 8, así como iv) una
zona de absorción D con su napa absorbente, la cual facilita la
migración de la muestra a través de la membrana cromatográfica 3, y
al mismo tiempo sirve para la recepción de la muestra migrada como
desperdicio.
El conjugado anticuerpo
anti-analito - oro, (llamado también conjugado
marcado) en la napa 5, y el conjugado anticuerpo
anti-analito - biotina (llamado también conjugado
marcado) en la napa 6, sirven para la formación de un sándwich con
el analito; la poli estreptavidina inmovilizada en la membrana 3
sirve para la formación de la franja de detección 7.
La franja de control 8 según la invención,
contiene en este caso junto al socio de unión permanentemente
inmoviliza-do para el conjugado anticuerpo
anti-analito - oro (es decir un polihapteno (o
analito) específico para el anticuerpo, adicionalmente, un socio de
unión permanentemente inmoviliza-do para los
complejos que contienen el analito (es decir, en este caso la
poliestreptavidina).
Esto tiene como consecuencia, que en el caso de
una concentración de pequeña a media de analito, la franja de
control 8 capta el conjugado marcado directa e
inmunoespecificamente, principalmente vía unión con el conjugado
polihapteno/analito. En este caso no funciona todavía la parte de
sándwich estreptavidina-biotina de la franja de
control 8, puesto que la pequeña cantidad formada de sándwich es
captada casi cuantitativamente "corriente arriba" por la
franja de detección 7.
En el caso de altas concentraciones de analito,
fracasa el mecanismo de unión polihapteno-conjugado
de la franja de control 8, puesto que el conjugado está ya saturado
con el analito de la muestra. En este caso es captado sin embargo
en forma de complejo sándwich (de conjugado marcado, analito y
conjugado marcado), el conjugado presente del mecanismo
estreptavidina biotina de la franja de control 8. Esto funciona dado
que la tira de detección 7 condicionada cinéticamente, no capta el
total del complejo sándwich y la parte a cromatografiar
"corriente abajo" está unida por la franja de control 8.
En el caso de una concentración de analito
extremada-mente alta, puede ocurrir en el formato
sándwich de la franja de detección 7 el llamado
"High-Dose-Hook-Effect"
("efecto gancho debido a la alta dosis"). La causa para ello
se puede explicar como sigue: en el caso de una cantidad limitada de
analito (déficit de antígeno respecto a la cantidad de anticuerpo
presente en el elemento de ensayo) se une una molécula de antígeno a
ambos socios de unión (anticuerpo con marcador y anticuerpo
marcado) al mismo tiempo mediante un epítopo independiente. De esta
manera se forma el complejo sándwich deseado y el analito se une
tanto a un socio de unión el cual se ocupa de la inmovilización en
la zona de detección 7 (aquí: anticuerpo biotinilado, el cual puede
unirse a la estreptavidina), como también a un socio de unión
marcado (aquí: anticuerpo marcado con oro), el cual cuida de la
capacidad de detección del analito. En el caso de un gran exceso de
analito (referido a la cantidad de conjugado señalizado y conjugado
marcado) los dos socios del sándwich se unen (es decir el conjugado
señalizado por un lado y el conjugado marcado por otro lado) cada
vez, y dos moléculas de analito presentes independientes, de forma
que en la zona de detección 7 se une en verdad al analito mediante
el conjugado marcado, aunque éste debido a que no existe la unión
con el conjugado marcado, no puede ser detectado.
Cuando aparece el efecto gancho debido a una
alta dosis en la franja de detección 7, entonces ésta produce, a
pesar de la alta concentración de analito, un resultado de ensayo
negativo de analito. Una franja de control independiente del
analito 8 (por ejemplo a base de un anticuerpo inmovilizado
anticuerpo PAK<Fc\gamma de ratón>S-IgG),
muestra en este caso un correcto funcionamiento del ensayo, lo cual
finalmente conduce a una interpretación del ensayo falsamente
negativa. En este caso sería propiamente deseable que la franja de
control 8 se sometiera al mismo "efecto gancho debido a la alta
dosis", como la franja de detección 7, y mediante el simultáneo
fracaso el resultado de ensayo se mostrara como no válido (y con
ello, por lo menos no falsamente negativo).
Este es exactamente el caso en la presente nueva
tira de control 8, y debe considerarse como otra ventaja: debido a
la alta concentración de analito de la muestra ya no existe al
alcanzar la zona de control prácticamente ningún conjugado libre,
es decir ningún conjugado marcado unido al analito, de manera que la
parte de la franja de control 8 que figura sobre el socio de unión
permanentemente inmovilizado para el conjugado marcado (aquí:
polihapteno), en la mezcla muestra-reactivo, ya no
encuentra ningún socio de unión. En consecuencia actúa tan solo la
parte de la franja de control 8, basada sobre el socio de unión
permanentemente inmovilizado para el analito o respectivamente los
complejos que contienen el analito (aquí: mecanismo
estreptavidina-biotina). Si ahora se impide la
formación del sándwich mediante el citado efecto gancho debido a una
alta dosis, fracasa junto a la franja de detección 7 también la
franja de control 8. El resultado del ensayo es reconocido entonces
por el usuario como "no válido" y no erróneamente como
"negativo".
La invención no puede aplicarse solamente al
"principio del sándwich indirecto" descrito en detalle más
arriba, mediante el empleo de la unión
estreptavidina-biotina. Es posible una
generalización del "principio del sándwich directo". En este
caso se inmoviliza un socio del sándwich irreversiblemente en la
zona de la franja de detección. La franja de control contiene junto
al polihapteno (dirigido contra el anticuerpo conjugado),
adicionalmente el anticuerpo sándwich inmovilizado en la franja de
detección. Hay que hacer notar, que en este caso el empleo
alternativo de un antígeno en lugar de un polihapteno como socio de
unión inmovilizado en la zona de control no es preferido, puesto
que en la zona de la franja de control al mismo tiempo con el
antígeno aplicado anticuerpo sándwich y a un complejo
antígeno-anticuerpo ya se ha formado y con ello
ambos mecanismos parciales de la nueva franja de control por lo
menos parcialmente han sido "neutralizados". Por este motivo se
prefiere el empleo de un polihapteno, puesto que este "epítopo
sintético" está dirigido solamente contra el anticuerpo
conjugado capaz de migración pero no contra el segundo anticuerpo
sándwich. Con esto se proporciona la capacidad de
funcionamiento.
Ejemplo
1
La invención se describe a continuación, a
título de ejemplo, en una tira de ensayo para la detección de la
troponina I cardíaca (cTn I, ó abreviadamente: Tn I) a partir de
sangre completa.
Se preparan tiras de ensayo según la figura
1.
Sobre una lámina soporte de 5 mm de ancho y 78
mm de largo 1, de poliéster, (Melinex, 350 \mum de grueso, de
Imperial Chemistry Industries, GB), se pegan con un adhesivo a
fusión (Dynapol S 1358 de Hüls AG, Alemania).
- una napa de 1,5 mm de grueso, y 7 mm de largo,
de 100 partes de fibra de vidrio (diámetro 0,49 a 0,58 \mum largo
1000 \mum) y 5 partes de fibras de polivinilalcohol (Kuralon VPB
105-2 de Kuraray) con un peso superficial de
aproximadamente 180 g/m^{2} como zona de recogida de líquidos
(desperdicios) 2 (zona de absorción D).
- una membrana de nitrato de celulosa de 1,5 cm
de largo (tipo CN 11301 de Sartorius, Alemania) como zona de
detección y zona de control conteniendo la membrana cromatográfica 3
(zona de detección C).
- una napa de 1,5 mm de grueso y 13 mm de largo,
de 100 partes de fibras de vidrio y 10 partes de fibras de
polivinilalcohol (ambas fibras análogas a las de la zona de recogida
de líquidos) con un peso superficial de
aproximada-mente 180 g/m^{2} como napa de
separación de sangre 4 (zona de separación de los eritrocitos
B).
- y dos napas de 18 mm ó respectivamente 20 mm
de largo, de 80 partes de fibras de poliéster, 20 partes de lana de
celulosa, y 20 partes de fibras de polivinilalcohol con un grueso de
aproximadamente 0,32 mm y un peso superficial de aproximadamente 80
g/m^{2} (cuya preparación está descrita en la memoria de la
patente europea EP 0 326 135, en el ejemplo 1), el cual contiene el
conjugado de oro (napa de conjugado de oro 5), como zona con el
socio marcado del par de unión específico y conteniendo el conjugado
de biotina (napa de conjugado de biotina 6) como la otra zona con
el socio marcado del par de unión específico,
cada vez fijados uno junto a otro ligeramente
solapados.
Sobre la membrana de nitrato de celulosa
anteriormente descrita de la zona de detección 3 se aplica mediante
dosificación graduada una solución de estreptavidina acuosa (4,5
mg/ml). Para ello se selecciona la dosificación de tal manera
(cantidad dosificada 0,1 ml/minuto, velocidad de la cinta 3
m/minuto), que aparece una franja con un ancho de aproximadamente
0,4 mm. Esta franja 7 sirve para la detección del analito a
determinar, y contiene aproximadamente 0,8 \mug de estreptavidina
por tira de ensayo.
A una distancia de aproximadamente 4 mm
corriente abajo de la franja de estreptavidina, se aplica en
idénticas condiciones de dosificación, una solución acuosa de Tn
1-polihapteno con 1 mg/ml (ver preparación del
polihapteno más adelante), una solución de estreptavidina con 1
mg/ml ó una mezcla 1:1 de solución de polihapteno y solución de
estreptavidina (1 mg/ml de cada uno). Esta franja 8 sirve como
control de funcionamiento de la tira de ensayo y contienen o bien
aproximadamente 0,15 \mug de polihapteno, y/o bien 0,15 \mug
de estreptavidina por tira de ensayo.
La membrana se seca a continuación, al aire.
El polihapteno se obtiene como sigue: se prepara
un péptido con una secuencia de aminoácidos, la cual corresponde al
epítopo con los aminoácidos (aa) 27-43 de la
troponina I cardíaca (véase FEBS, vol. 270; nº 1,2; página
57-61: "Molecular cloning of human cardiac
troponin I using polymerase chain reaction" ("clonación
molecular de la troponina I cardíaca humana, empleando la reacción
en cadena de la polimerasa"), mediante una síntesis de péptidos
clásica en fase sólida ya conocida por el experto. Como espaciador
N- terminal para la unión a la proteína soporte se emplea un
radical péptico compuesto de \beta-alanina, ácido
\varepsilon-amino-caprónico,
\beta-alanina y cisteína, de manera que el péptido
tenga un peso molecular de 1716,13.
El péptido se copula a continuación en una
relación molar 10:1 (péptido a proteína soporte) mediante una
copulación MH(RPLA)/SH-péptido en albúmina
de plasma de buey como proteína soporte.
El polihapteno se liofiliza a continuación en
presencia de 40 mg/ml de trehalosa, y se disuelve en agua
desmineralizada para la dosificación graduada.
El polihapteno se designará en adelante como PH,
TnI
(27-43)[UZU-Cys-43]amida.
La napa de conjugado de oro 5 se prepara como
sigue: un sol de oro con un diámetro medio de partícula de
aproximadamente 40 nm se prepara según el método de Frens (Frens,
G., "Preparation of gold dispersions varying particle size:
controlled nucleation for the regulation of the particle size in
monodisperse gold suspensions" ("preparación de dispersiones
de oro con tamaño de partícula variable: nucleación controlada para
la regulación del tamaño de partícula en suspensiones monodispersas
de oro") en Nature: Physical Science ("Naturaleza: Física"),
241 (1973), 20-22) mediante reducción de una
solución de ácido tetracloroáurico al 0,01 por ciento en peso a
ebullición con citrato trisódico.
La preparación del conjugado
anticuerpo-oro se efectúa de acuerdo con el método
de Roth, J. ("The colloidal gold marker system for light and
electron microscopic cytochemistry" ("sistema de marcado con
oro coloidal para la citoquímica microscópica con luz y
electrónica"), en Bullock, G.R. y Petrusz, P., Eds.,
"Techniques in immunocytochemistry" ("Técnicas en
inmunocitoquímica"), vol 2, Nueva York, Academic Press 1983,
216-284).
Para ello, después de enfriar la solución de sol
de oro a temperatura ambiente, se ajusta el valor del pH del sol de
oro con K_{2}CO_{3} 0,2 M de manera que resulte alrededor de 0,5
unidades del pH por encima del punto isoeléctrico del anticuerpo
<cTn>. El anticuerpo monoclonal de ratón <cTnI>, con la
denominación clónica M155, puede adquirirse comercialmente a partir
del catálogo nº 4T21 de la firma HyTest (Turku, Finlandia). Este
anticuerpo monoclonal reconoce el epítopo cTnI aa
27-43º.
La densidad óptica (OD) del sol de oro
(extinción a 525 nm y 1 cm de iluminación) es típicamente de 1,0. El
anti-cuerpo <cTnI> se añade en forma de
solución acuosa, de forma que esta concentración después de la
adición a la solución del sol de oro, sea de 1,2 \mug/ml. Después
de 30 minutos de agitación a temperatura ambiente, se satura el
conjugado de oro mediante la adición de una solución de albúmina de
plasma de buey de alta concentración (concentración final en la
solución de conjugado, 1 mg/ml).
Después de 30 minutos más de agitación a
temperatura ambiente, se concentra el conjugado de oro saturado
mediante ultrafiltración sobre una membrana de 30 KDa frente a un
tampón de Tris 20 mM de pH 7,0, con una densidad óptica típicamente
de 20. La solución del conjugado se guarda finalmente sobre 100
\muM de Brij 35 y 0,05% en peso de NaN_{3}, y se almacena
enrollándola a 4ºC, hasta que es usada.
La napa de conjugado de oro 5 se impregna con la
siguiente solución de impregnación: 50 mM de HEPES de pH 7,5; 1,0%
en peso de albúmina de plasma de buey; 1,0% de sacarosa; 0,1% de
Tween 20; conjugado de
MAK<cTnI>M155-IgG-40 nm de
sol de oro OD 4,5.
Para ello se trata la napa mixta poliesterlana
de celulosa-polivinilalcohol, en primer lugar en una
tina que contiene una solución de impregnación, a continuación se
estruja mediante dos cilindros de acero inoxidable colocados a una
distancia de 250 \mum, y finalmente se seca mediante un secador de
circulación de aire a 60ºC. En las condiciones descritas, la
absorción por impregnación de la napa es típicamente de 240
ml/m^{2}.
La napa de conjugado de biotina (6) se prepara
como sigue: para la preparación del conjugado de biotina se emplea
el anticuerpo monoclonal de ratón <cTnI> con la denominación
de clon 16A11 (adquirible comercialmente mediante el catálogo nº
4T21 de la firma HyTest). Este anticuerpo monoclonal reconoce el
epítopo cTn 1 aa 87-91.
A una solución de 10 mg/ml de IgG en 0,1 M de
fosfato de potasio de pH 8,5, se añade un derivado éster de
succinimida de la biotina en un exceso 8 veces molar. La mezcla se
incuba durante 90 minutos a 25ºC con agitación. La reacción se
interrumpe almacenando la solución con lisina a una concentración
final de 10 mM. El reactivo sobrante de la biotinación se elimina
mediante diálisis y se almacena en presencia de 6% en peso de
sacarosa, hasta que se emplea, a -70ºC.
La napa de conjugado de biotina 6, se impregna
con la siguiente solución de impregnación: 20 mM de Tris de pH 7,2;
50 mM de NaCl; 1,0% en peso de albúmina de plasma de buey; 1,0% en
peso de sacarosa; 0,1% en peso de Tween 20 y 7 mg/litro de
MAK<cTnI>M-16A11-IgG-biotina
(XOSu 8:1). La impregnación y el secado tienen lugar de forma
análoga a las condiciones empleadas en la preparación de la napa de
conjugado de oro.
Según el procedimiento descrito en a.) se
prepararon las siguientes variantes de tiras de ensayo 3, que se
diferencian solamente en la composición de la franja de control 8.
En las tres variantes están contenidas las soluciones para la
preparación de la franja de control 8.
Variante 1: 1 mg/ml de polihapteno [PH, TnI
(27-43)]; tiras de ensayo con la clásica franja de
control.
Variante 2: 1 mg/ml de estreptavidina; tiras de
ensayo con dos franjas de detección con reactivo como franja de
control.
Variante 3: 1 mg/ml de polihapteno y 1 mg/ml de
estreptavidina; tiras de ensayo con franja de control según la
invención.
Como ya se ha descrito anteriormente, todas las
variantes de tiras de ensayo contienen una idéntica franja de
detección 7 con 4,5 mg/ml de estreptavidina.
Para la evaluación de las tiras de ensayo se
emplea una sangre de donante cTnI negativa, a la cual se añadieron
cantidades crecientes del complejo
cTnI-C-T (adquirible comercialmente
del catálogo nº 8T62 de HyTest). Para ello se añadieron mediante
pipeta, 150 \mul de sangre de donante almacenada, por tira de
ensayo como muestra sobre la napa de conjugado de biotina 6, la
cual sirve al mismo tiempo como zona de aplicación de la muestra, y
el resultado del ensayo después de 15 minutos se evaluó visualmente
por la aparición de una franja de detección y una franja de control
así como para la cuantificación de la intensidad de la franja por
medio de un aparato de medición (lector cardíaco Roche, Roche
Diagnostics GmbH, nº de catálogo 1902229) fotométrica de reflexión.
Se observa además un 100% de remisión por la falta de una franja en
la zona de la franja de detección o la zona de la franja de
control, mientras que por el contrario existe un 20% de remisión
para las franjas de un rojo oscuro intenso, en la intensidad de las
cuales, el sistema de detección del aparato de medición se
encuentra en la saturación de color.
Los resultados están resumidos en la siguiente
tabla:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Los resultados se interpretan como sigue:
Según lo esperado, la intensidad de la franja de
detección aumenta en primer lugar con una concentración creciente
de analito (disminución de los valores de remisión entre 1 ng/ml y
50 ng/ml de cTnI) se observa un máximo de intensidad (18% de
remisión, es decir una saturación del color), para a continuación
en extremadamente altas concentraciones de analito debido a su
efecto gancho debido a la alta dosis condicionada por un formato
sándwich, descender de nuevo. El citado efecto gancho debido a las
dosis altas, conduce a una franja de detección de la tira de ensayo
a 1000 ng/ml de cTnI a valores de la remisión cercanos al 100%
(visualmente negativos) y con ello a una franja de detección
falsamente negativa.
\newpage
Variante
1
En ausencia de analito, el conjugado de oro
mediante la unión M155-anticuerpo/polihapteno (aa
27-43) se enriquece casi cuantitativamente en la
franja de control (20% de remisión). Con una concentración de
analito creciente la intensidad del color de la franja de control
disminuye, puesto que por un lado una gran parte del conjugado de
oro en forma del complejo sándwich es captado en la franja de
detección y por otro lado la parte de conjugado de oro que no ha
sido captada en la franja de detección por la creciente
concentración del analito presente ya está saturada, por todo lo
cual ya no puede unirse más suficientemente al polihapteno de la
franja de control. En este caso el conjugado de oro cromatografiado
migra por encima de la franja de detección y por encima de la
franja de control, a la napa de desperdicios 2, que se halla
corriente abajo.
A partir de 50 ng/ml de cTnI en la muestra, esto
conduce a un fracaso de la franja de control (visualmente
negativa), aunque la franja de detección a esta concentración, y
también a 250 ng/ml, es todavía claramente positiva.
Debido a que no aparece la franja de control, el
usuario debe partir en este caso, aunque erróneamente, de un
resultado de ensayo no válido.
Este hallazgo se corresponde con el estado
actual de la técnica y aclara con ello las limitaciones de una
franja de control de polihapteno, clásica.
Variante
2
La segunda franja de detección de estreptavidina
considerada como franja de control, no funciona naturalmente en
ausencia de analito (en su función como franja de control), puesto
que no se ha formado ningún complejo sándwich. El resultado del
ensayo tendría que considerarse por ello no válido, aunque la
primera franja de detección negativa confirma correctamente la
ausencia de analito.
En presencia de analito, la franja de control de
estreptavidina detecta, análogamente a la franja de detección, el
complejo sándwich formado, aunque menos intensivamente, puesto que
la mayor parte del complejo sándwich formado ya ha sido unido
corriente arriba por la franja de detección.
A muy altas concentraciones de analito (1000
ng/ml de cTnI) no funciona tampoco, junto a la franja de detección,
la franja de control, puesto que ambas están sujetas al mismo
mecanismo (véase más arriba, el efecto gancho debido a la alta
dosis).
Variante
3
Como puede deducirse de los valores medidos y
las asignaciones visuales de la tabla, la franja de control muestra
en ausencia de analito, un correcto resultado de ensayo (mediante el
mecanismo polihapteno-conjugado de oro).
En la zona media de concentraciones, la franja
de control genera sobre ambos mecanismos inmunológicos, señales que
se suman.
Por encima de la zona superior de
concentraciones (50-250 ng/ml de cTnI) la franja de
control genera la señal de medición, esencialmente mediante el
mecanismo estreptavidina-biotina (la "clásica"
franja de control de polihapteno, se encuentra en este caso ya en
la saturación del analito y por ello no funciona). Si existe un
efecto gancho debido a la alta dosis, en la franja de detección
(1000 ng/ml de cTnI), fracasa también la franja de control, como
era deseable.
A partir de la suma de estas propiedades se
desprende que este nuevo mecanismo de la franja de control es mejor
que las versiones técnicas conocidas hasta ahora.
Claims (10)
1. Elemento de ensayo para la ejecución de un
ensayo inmunológico en sándwich, para la determinación de un
analito a partir de una muestra líquida, la cual contiene
- una zona de reactivo, la cual contiene un
conjugado soluble en la muestra líquida, de un socio de unión con
el analito y un marcador que puede detectarse directa o
indirectamente, visualmente, ópticamente o electroquímicamente;
- una zona de detección, la cual contiene un
socio de unión permanentemente inmovilizado para el analito o para
los complejos que contienen el analito; y
- una zona de control, la cual contiene un socio
de unión permanentemente inmovilizado para el conjugado del socio
de unión con el analito y un marcador,
caracterizado porque,
la zona de control contiene además uno o varios
socios de unión permanentemente inmovilizados para el analito o
para los complejos que contienen el analito.
\vskip1.000000\baselineskip
2. Elemento de ensayo según la reivindicación 1,
caracterizado porque,
los socios de unión permanentemente
inmovilizados para el analito o para los complejos que contienen el
analito en la zona de detección y en la zona de control, son
iguales.
\vskip1.000000\baselineskip
3. Elemento de ensayo según la reivindicación 1,
caracterizado porque,
los socios de unión permanentemente
inmovilizados para el analito o para los complejos que contienen el
analito en la zona de detección y en la zona de control, son
distintos.
\vskip1.000000\baselineskip
4. Elemento de ensayo según una cualquiera de
las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque,
el socio de unión permanentemente inmovilizado
para el conjugado de un socio de unión con el analito y un marcador
en la zona de control, es un polihapteno.
\vskip1.000000\baselineskip
5. Elemento de ensayo según una cualquiera de
las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque,
el socio de unión permanentemente inmovilizado
para el analito o para los complejos que contienen el analito en la
zona de detección, se ha escogido del grupo formado por:
- los anticuerpos o un fragmento
inmunológicamente activo de un anticuerpo contra el analito;
- los antígenos, los haptenos o los
polihaptenos; y
- la estreptavidina o la poliestreptavidina.
\vskip1.000000\baselineskip
6. Elemento de ensayo según una cualquiera de
las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque,
el socio de unión permanentemente inmovilizado
para el analito o para los complejos que contienen el analito en la
zona de control se ha escogido del grupo formado por:
- los anticuerpos o un fragmento
inmunológicamente activo de un anticuerpo contra el analito;
- los antígenos, los haptenos o los
polihaptenos; y
- la estreptavidina o la poliestreptavidina.
\vskip1.000000\baselineskip
7. Elemento de ensayo según una cualquiera que
de las reivindicaciones precedentes, caracterizado
porque,
el socio de unión permanentemente inmovilizado
para el analito en la zona de detección es un anticuerpo o un
fragmento inmunológicamente activo de un anticuerpo contra el
analito; y
el socio de unión permanentemente inmovilizado
para el analito en la zona de control es un anticuerpo o un
fragmento inmunológicamente activo de un anticuerpo contra el
analito.
\vskip1.000000\baselineskip
8. Elemento de ensayo según una cualquiera de
las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque,
el socio de unión permanentemente inmovilizado
para los complejos que contienen el analito, en la zona de
detección es la estreptavidina o la poliestreptavidina; y
el socio de unión permanentemente inmovilizado
para los complejos que contienen el analito en la zona de control
es la estreptavidina o la poliestreptavidina.
\vskip1.000000\baselineskip
9. Elemento de ensayo según la reivindicación
1, caracterizado porque, el socio de unión permanentemente
inmovilizado para los complejos que contienen el analito en la zona
de detección, es la estreptavidina o la poliestreptavidina; y
el socio de unión permanentemente inmovilizado
para el analito y/o para los complejos que contienen el analito en
la zona de control
- es un anticuerpo o un fragmento
inmunológicamente activo de un anticuerpo contra el analito; y/o
- es la estreptavidina o la
poliestreptavidina.
\vskip1.000000\baselineskip
10. Procedimiento para la detección de un
analito a partir de una muestra líquida, en donde
- la muestra se entrega sobre un elemento de
ensayo según una de las reivindicaciones 1 a 9;
- el analito - en tanto está presente en la
muestra - reacciona con el conjugado marcado para dar un complejo
analito-conjugado;
- el complejo analito-conjugado
en la zona de detección se une al socio de unión permanentemente
inmovilizado para el analito o para los complejos que contienen el
analito; y
- el conjugado marcado que no ha reaccionado con
el analito en la zona de control, se une al socio de unión
permanentemente inmovilizado para el conjugado; y
- el complejo analito-conjugado
en la zona de control, se une al socio de unión permanentemente
inmovilizado para el analito o para los complejos que contienen el
analito.
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| US20110086359A1 (en) | 2008-06-10 | 2011-04-14 | Rapid Pathogen Screening, Inc. | Lateral flow assays |
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| EP2194381B1 (de) * | 2008-12-03 | 2015-12-02 | Roche Diagnostics GmbH | Testelement mit kombinierter Kontroll- und Kalibrationszone |
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| JP5541748B2 (ja) * | 2012-03-29 | 2014-07-09 | 株式会社Ｌｓｉメディエンス | アビジン−ビオチン連結標識試薬を用いたイムノクロマトグラフ用試験具及びその利用 |
| JP5545683B2 (ja) * | 2012-03-29 | 2014-07-09 | 株式会社Ｌｓｉメディエンス | イムノクロマトグラフ用試験具 |
| KR101952957B1 (ko) * | 2012-06-20 | 2019-02-28 | 주식회사 미코바이오메드 | 센서 스트립 |
| FR3009386A1 (fr) * | 2013-08-02 | 2015-02-06 | Biomerieux Sa | Dispositif et procede d'analyses biologiques |
| US10808287B2 (en) | 2015-10-23 | 2020-10-20 | Rapid Pathogen Screening, Inc. | Methods and devices for accurate diagnosis of infections |
| CN107918015A (zh) * | 2017-07-14 | 2018-04-17 | 王镕 | 免疫层析半定量试纸条、试剂盒以及检测方法 |
| EP3833735A4 (en) * | 2018-08-06 | 2022-05-11 | Becton, Dickinson and Company | LATERAL FLOW IMMUNOASSAY DEVICE WITH DISCONNECT MEMBRANE |
| US20220412961A1 (en) * | 2019-11-15 | 2022-12-29 | President And Fellows Of Harvard College | Device and method for analyte detection |
Family Cites Families (29)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4595661A (en) * | 1983-11-18 | 1986-06-17 | Beckman Instruments, Inc. | Immunoassays and kits for use therein which include low affinity antibodies for reducing the hook effect |
| DE3445816C1 (de) * | 1984-12-15 | 1986-06-12 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Flaechenfoermiges diagnostisches Mittel |
| DE291194T1 (de) | 1987-04-27 | 1992-03-19 | Unilever N.V., Rotterdam | Immunoassays und vorrichtungen dafuer. |
| DE3802366A1 (de) * | 1988-01-27 | 1989-08-10 | Boehringer Mannheim Gmbh | Traegervlies fuer abloesbar impraegnierte reagenzien |
| US5939272A (en) * | 1989-01-10 | 1999-08-17 | Biosite Diagnostics Incorporated | Non-competitive threshold ligand-receptor assays |
| CA2072758A1 (en) * | 1990-09-14 | 1992-03-15 | Kenneth Francis Buechler | Antibodies to complexes of ligand receptors and ligands and their utility in ligand-receptor assays |
| US5296347A (en) * | 1991-02-08 | 1994-03-22 | Ciba Corning Diagnostics Corp. | Bridge immunoassay |
| US5451504A (en) * | 1991-07-29 | 1995-09-19 | Serex, Inc. | Method and device for detecting the presence of analyte in a sample |
| US6156270A (en) * | 1992-05-21 | 2000-12-05 | Biosite Diagnostics, Inc. | Diagnostic devices and apparatus for the controlled movement of reagents without membranes |
| US5968839A (en) * | 1996-05-13 | 1999-10-19 | Metrika, Inc. | Method and device producing a predetermined distribution of detectable change in assays |
| GB9709821D0 (en) * | 1997-05-15 | 1997-07-09 | Clinical Diagnostic Chemicals | Allergy assay |
| US6183972B1 (en) * | 1998-07-27 | 2001-02-06 | Bayer Corporation | Method for the determination of analyte concentration in a lateral flow sandwich immunoassay exhibiting high-dose hook effect |
| JP2000097941A (ja) * | 1998-09-18 | 2000-04-07 | Matsushita Electric Ind Co Ltd | 免疫クロマトグラフィーのためのキット |
| WO2000031538A1 (en) * | 1998-11-23 | 2000-06-02 | Praxsys Biosystems, Inc. | Improved lateral flow assays |
| US6528323B1 (en) * | 1999-06-14 | 2003-03-04 | Praxsys Biosystems, Inc. | Bidirectional lateral flow test strip and method |
| DE10009503A1 (de) * | 2000-02-29 | 2001-08-30 | Roche Diagnostics Gmbh | Verfahren zur Immobilisierung von Konjugaten in diagnostischen Tests |
| DE10064827A1 (de) * | 2000-12-22 | 2002-06-27 | Dade Behring Marburg Gmbh | Nachweisverfahren |
| FR2853077B1 (fr) * | 2003-03-28 | 2005-12-30 | Vedalab | Procedes immunochromatographiques en phase solide |
| PT1634078E (pt) * | 2003-06-03 | 2008-06-11 | Siemens Healthcare Diagnostics | Analito nativo utilizado como referência em ensaios de escoamento lateral |
| EP1664781B1 (en) * | 2003-09-22 | 2013-05-08 | Quidel Corporation | Devices for the detection of multiple analytes in a sample |
| US7943395B2 (en) * | 2003-11-21 | 2011-05-17 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Extension of the dynamic detection range of assay devices |
| DE10355731A1 (de) * | 2003-11-28 | 2005-06-30 | Roche Diagnostics Gmbh | Analytischer Sandwichtest zur Bestimmung von NT-proBNP |
| DE102004023402A1 (de) * | 2004-05-12 | 2005-12-08 | Roche Diagnostics Gmbh | Verfahren zur Erhöhung des dynamischen Messbereichs von auf spezifischen Bindereaktionen basierenden, insbesondere immunologischen Testelementen |
| US7439079B2 (en) * | 2005-04-29 | 2008-10-21 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Assay devices having detection capabilities within the hook effect region |
| US7803319B2 (en) * | 2005-04-29 | 2010-09-28 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Metering technique for lateral flow assay devices |
| FR2890173B1 (fr) * | 2005-08-23 | 2008-02-22 | Vedalab Sa | Dispositif de determination d'un analyte dans un echantillon liquide par un test sandwich et un test de competition |
| US7829347B2 (en) * | 2005-08-31 | 2010-11-09 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Diagnostic test kits with improved detection accuracy |
| US7279136B2 (en) * | 2005-12-13 | 2007-10-09 | Takeuchi James M | Metering technique for lateral flow assay devices |
| US7745158B2 (en) * | 2005-12-14 | 2010-06-29 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Detection of secreted aspartyl proteases from Candida species |
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