JP2022530026A - アマトキシン抗体薬物複合体及びその使用 - Google Patents

アマトキシン抗体薬物複合体及びその使用 Download PDF

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Abstract

アマトキシン並びにアマトキシンを含む抗体薬物複合体（ＡＤＣ）、並びにそれを使用する組成物及び方法が提供される。本明細書に提供される組成物及び方法は、癌療法に使用できる。それらを使用して、移植処置に先立って内因性造血幹細胞を選択的に枯渇させることにより、患者を造血幹細胞移植療法のために準備させ、造血幹細胞移植物の生着を改善することもできる。種々の造血疾患、代謝疾患、癌、及び自己免疫疾患の治療、並びに移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の予防の方法及び組成物が提供される。

Description

本発明は、アマトキシン、アマトキシンを含む抗体薬物複合体（ＡＤＣ）、そのようなＡＤＣを含む組成物、及びそれを使用する方法に関する。
モノクローナル抗体（ｍＡｂ）は治療剤にコンジュゲートされて、抗体薬物複合体（ＡＤＣ）が形成され得る。ＡＤＣは、コンジュゲートされていない抗体と比べて、増加した効能を示し得る。抗体の薬物への連結は、直接的でも、又はリンカーにより間接的でもあり得る。成功する治療用ＡＤＣの重要な側面は、ＡＤＣが有効であるだけでなく忍容性が良好なことである。多くの場合、細胞毒は効能と忍容性の両方に影響を及ぼす。
ＡＤＣは、癌の治療のための治療剤として提案されてきた。細胞傷害剤又は細胞増殖抑制剤、すなわち癌の治療において腫瘍細胞を殺傷又は阻害する薬物の局所送達のためのＡＤＣの使用は、理論的には、薬物部分の腫瘍への標的化送達及びそこでの細胞内蓄積を可能にするが、これらのコンジュゲートされていない薬剤の全身投与は、正常な細胞にも許容できないレベルの毒性をもたらし得る。
ＡＤＣは、患者に移植及び幹細胞治療の準備をさせるための治療レジメンとしても提案されてきた。患者を細胞特異的ＡＤＣにより前処置することにより、幹細胞又は免疫細胞が選択的に枯渇され得ると同時に、患者の残りの免疫系は大部分無傷のままである。例えば、Ｐａｌｃｈａｕｄｈｕｒｉ ｅｔ ａｌ．（２０１６）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３４，７３８－７４５は、抗ＣＤ４５抗体がサポリンにコンジュゲートされている、単回投与の抗ＣＤ４５ ＡＤＣの使用及び鎌状赤血球貧血モデルにおける治療のためのドナー細胞の生着を可能にするその能力を記載している。放射線とは異なり、ＣＤ４５－ＳＡＰ ＡＤＣは、好中球減少症及び貧血を回避して、全体的な毒性は最低限にしてＴ細胞及びＢ細胞の迅速な回復を与えたと報告された。毒素が標的細胞に対して強力であると同時に患者の副作用を最低限にする、非遺伝毒性標的化ＡＤＣ前処置に使用できる毒素が依然として必要とされている。
本発明は、例えば、アマトキシンの標的細胞への送達のための抗体薬物複合体（ＡＤＣ）に使用できるアマトキシンを提供する。本発明は、アマトキシンの標的細胞への送達のための抗体薬物複合体に使用できる抗体の特定の修飾もさらに提供する。本発明は、増加した効能、向上したインビボの忍容性、及び、したがって、好都合な治療域を有する、前記アマトキシンと抗体の組合せにさらに関する。
式ＩＶ（図１Ａ）、ＶＩ（図１Ｂ）、及びＩＩａ（図１Ｃ）の構造を描写する。図１Ａから１Ｃ中の「Ａｂ」は抗体を表す。図１Ａ、１Ｂ、及び１Ｃは、それぞれ実施例において言及される複合体Ａ、Ｂ、及びＣを表す。複合体Ａ、Ｂ、及びＣは、ＡＤＣ Ａ、ＡＤＣ Ｂ、及びＡＤＣ Ｃとも称される。
培地（Ａ）又は５０％ヒト血清（Ｂ）中のＡＤＣのプレインキュベーションを伴い、ＡＤＣの存在下でＫａｓｕｍｉ－１細胞を使用して、コンジュゲートの血清安定性を評価するインビトロの細胞傷害性（ｃｙｔｏｘｉｃｉｔｙ）アッセイの結果を図示する。
抗体価測定されたＡＤＣ試料とのインキュベーションの時間を繰り返してＡＤＣの存在下でＫａｓｕｍｉ－１細胞を使用して、切断性コンジュゲートと非切断性コンジュゲートの間の細胞傷害性のキネティクスの違いを評価するインビトロのサイトキシティアッセイの結果を図示する。
Ｋａｓｕｍｉ－１細胞（４Ａ）及びＣＤ３４＋細胞（４Ｂ）を使用する２つのインビトロ細胞殺傷アッセイの結果を図示する。試験されたＡＤＣは抗ＣＤ１１７ ＡＤＣ Ｃであった。
ヒト化ＮＳＧマウスの骨髄中のヒトＣＤ３４＋を強力に枯渇させる抗ＣＤ１１７ ＡＤＣ Ｃの能力を図示する。
示された投与量の複合体又は対照により処置された、Ｋａｓｕｍｉ－１が移植されたヒト化ＮＳＧマウスの生存を反映するカプラン・マイヤープロットである。
雄のカニクイザルで評価された複合体Ｃの効能を図示する。２．０ｍｇ／ｋｇ投与量（ＬＡＬＡ）３０．２８６７バッチ問題（ｂａｔｃｈ ｉｓｓｕｅｓ）がＨＳＣ感受性の減少を起こした可能性がある。
雄のカニクイザルにおける、複合体Ａか複合体Ｃのいずれかを含むＡＤＣの忍容性を図示する。
雄のカニクイザルに投与された複合体Ａ及び複合体Ｃの薬物動態的分析を図示する。
抗ＣＤ２及びＣＤ５ ＡＤＣ ＣがＴ細胞を枯渇させることが可能であることを図示する。
抗ＣＤ２ ＡＤＣ Ａ及びＣが第５日までに飽和している一方で、いくらかの細胞は依然としてＣＤ５を発現していることを図示する。
インビトロ細胞殺傷アッセイにおける抗ＣＤ４５ ＡＤＣ Ａ若しくはＣ（図１４Ａ）又は抗ＣＤ４５ ＡＤＣ Ａ若しくはＢ（図１４Ｂ）を示す結果を図示する。
インビトロ細胞殺傷アッセイにおける抗ＣＤ４５ ＡＤＣ Ａ又はＣを示す結果を図示する。
インビボ細胞枯渇実験における抗ＣＤ４５ ＡＤＣ Ａ又はＣの結果を図示する。
いくつかの投与量での抗ＣＤ４５ ＡＤＣ Ａ又はＣのマウスへの投与の結果を図示する。末梢リンパ球、ＨＳＣ、及びリンパ球のレベルが示される。全てのＡＤＣは１ｍｇ／ｋｇで投与された。
Ｔ細胞殺傷アッセイにおける抗ＣＤ１３７ ＡＤＣ Ａ及びＣを示す結果を図示する。
４８時間にわたる抗ＣＤ１３７ ＡＤＣ Ａ及びＣの細胞株血清安定性を図示する。
それぞれ、アマニチン－リンカーコンストラクトＨＤＰ３０．２８６７、３０．０８８０、３０．２３７１、及び３０．１６９９の構造を描写する。
それぞれ、アマニチン－リンカーコンストラクトＨＤＰ３０．２１１５、３０．２０６０、及び３０．２３４７の構造を描写する。
９６時間ＢｒｄＵアッセイにおける、ＡＤＣ化合物Ｔ－Ｄ２６５Ｃ－３０．２８６７及びＴ－Ｄ２６５Ｃ－３０．０８８０の、それぞれ、（Ａ）ＳＫＢＲ－３、（Ｂ）ＮＣＩ－Ｎ８７、（Ｃ）ＢＴ４７４、及び（Ｄ）ＪＩＭＴ－１細胞株に対するインビトロの細胞傷害活性を図示する。
それぞれ、（Ａ）ヒト－、（Ｂ）マウス－、（Ｃ）カニクイザル血漿、及び（Ｄ）ＰＢＳ（対照）中の、それぞれ、０、４、及び１０日間のインキュベーションの後の、それぞれ、ＡＤＣ化合物Ｔ－Ｄ２６５Ｃ－３０．２８６７及びＴ－Ｄ２６５Ｃ－３０．０８８０の安定性のＳＤＳ－ＰＡＧＥ／ウェスタンブロット分析の結果を図示する。
それぞれ、（Ａ）ヒト－、（Ｂ）マウス－、（Ｃ）カニクイザル血漿、及び（Ｄ）ＰＢＳ（対照）中での、それぞれ、０、４、及び１０日間のインキュベーション後のＡＤＣ化合物Ｔ－Ｄ２６５Ｃ－３０．２８６７のＳＢＲ－３細胞に対するインビトロの細胞傷害活性を図示する。
それぞれ、（Ａ）ヒト－、（Ｂ）マウス－、（Ｃ）カニクイザル血漿、及び（Ｄ）ＰＢＳ（対照）中の、それぞれ、０、４、及び１０日間のインキュベーションの後の、ＡＤＣ化合物Ｔ－Ｄ２６５Ｃ－３０．２８６７のＮＣＩ－Ｎ８７細胞に対するインビトロの細胞傷害活性を図示する。
それぞれ、（Ａ）ヒト－、（Ｂ）マウス－、（Ｃ）カニクイザル血漿、及び（Ｄ）ＰＢＳ（対照）中の、それぞれ、０、４、及び１０日間のインキュベーションの後の、ＡＤＣ化合物Ｔ－Ｄ２６５Ｃ－３０．２８６７のＪＩＭＴ－１細胞に対するインビトロの細胞傷害活性を図示する。
ＡＤＣ化合物Ｔ－Ｄ２６５Ｃ－３０．２８６７、Ｔ－Ｄ２６５Ｃ－３０．０８８０、及びＴ－Ｄ２６５Ｃ－３０．１６９９を使用する、インビボでのＪＩＭＴ－１－細胞異種移植腫瘍マウスモデルにおける抗Ｈｅｒ２－ＡＤＣの細胞傷害性効能分析の結果を図示する。
ＡＤＣ化合物Ｔ－Ｄ２６５Ｃ－３０．２８６７、Ｔ－Ｄ２６５Ｃ－３０．０８８０、及びＴ－Ｄ２６５Ｃ－３０．１６９９を使用する、インビボでＮＣＩ－Ｎ８７－細胞異種移植腫瘍マウスモデルにおける抗Ｈｅｒ２－ＡＤＣの細胞傷害性効能分析の結果を図示する。
９６時間ＢｒｄＵアッセイにおける（Ａ）ＬＮＣａｐ、（Ｂ）２２ＲＶ１、及び（Ｃ）ＰＣ３細胞株に対する、それぞれ、ＡＤＣ化合物ｈ３／Ｆ１１－Ｄ２６５Ｃ－Ｖａｒ１６－３０．２８６７、及びｈ３／Ｆ１１－Ｄ２６５Ｃ－Ｖａｒ１６－３０．０８８０のインビトロの細胞傷害活性を図示する。
ＡＤＣ化合物ｈ３／Ｆ１１－Ｄ２６５Ｃ－Ｖａｒ１６－３０．２８６７、ｈ３／Ｆ１１－Ｄ２６５Ｃ－Ｖａｒ１６－３０．０８８０、及びｈ３／Ｆ１１－Ｄ２６５Ｃ－Ｖａｒ１６－３０．２０６０を使用する、インビボでのＬＮＣａｐ－細胞異種移植腫瘍マウスモデルにおける抗ＰＳＭＡ－ＡＤＣの細胞傷害性効能分析の結果を図示する。
抗ジゴキシゲニンＡＤＣ化合物ＤＩＧ－Ｄ２６５Ｃ－３０．２８６７を１ｍｇ／ｋｇと２０ｍｇ／ｋｇの間の異なる投与量で使用する、サルにおける忍容性試験の結果を図示する。ＬＤＨ、ＡＳＴ、ＡＬＴパラメーターの評価の結果が示される。
ＤＩＧ－Ｄ２６５Ｃ－３０．２８６７を使用する、サルにおける忍容性試験の結果を図示する。血清中のＡＤＣの薬物動態的データが示される。
ＤＩＧ－Ｄ２６５Ｃ－３０．２８６７を使用する、サルにおける忍容性試験の結果を図示する。血清中のアマトキシンの薬物動態的データが示される。
構造上異なるアマニチン誘導体にコンジュゲートされたＤ２６５Ｃ変異（Ｔ－Ｄ２６５Ｃ）を有する抗Ｈｅｒ２抗体を含むＡＤＣ化合物の、ＪＩＭＴ－１細胞に対するインビトロの細胞傷害活性を図示する（Ａ、Ｂ）。
構造上異なるアマニチン誘導体にコンジュゲートされたＤ２６５Ｃ変異（Ｔ－Ｄ２６５Ｃ）を有する抗Ｈｅｒ２抗体を含むＡＤＣ化合物の、ＮＣＩ－Ｎ８７細胞に対するインビトロの細胞傷害活性を図示する（Ａ、Ｂ）。
構造上異なるアマニチン誘導体にコンジュゲートされたＤ２６５Ｃ変異（Ｔ－Ｄ２６５Ｃ）を有する抗Ｈｅｒ２抗体を含むＡＤＣ化合物の、ＳＫＢＲ－３細胞に対するインビトロの細胞傷害活性を図示する（Ａ、Ｂ）。
構造上異なるアマニチン誘導体にコンジュゲートされたＤ２６５Ｃ変異（ｈ３／Ｆ１１－Ｄ２６５Ｃ－Ｖａｒ１６）を有する抗ＰＳＭＡ抗体を含むＡＤＣ化合物の、ＬＮＣａｐ細胞に対するインビトロの細胞傷害活性を図示する（Ａ、Ｂ）。
構造上異なるアマニチン誘導体にコンジュゲートされたＤ２６５Ｃ変異（ｈ３／Ｆ１１－Ｄ２６５Ｃ－Ｖａｒ１６）を有する抗ＰＳＭＡ抗体を含むＡＤＣ化合物の、２２ＲＶ１細胞に対するインビトロの細胞傷害活性を図示する（Ａ、Ｂ）。
インビボでのＬＮＣａｐ－細胞異種移植腫瘍マウスモデルにおける、構造上異なるアマニチン誘導体を含む種々の抗ＰＳＭＡ－ＡＤＣの細胞傷害性効能分析の結果を図示する。最大耐用量（ＭＴＤ）の１／２及び１／４での全群の平均±ＳＥＭが示される。
インビボでのＬＮＣａｐ－細胞異種移植腫瘍マウスモデルにおける、構造上異なるアマニチン誘導体を含む種々の抗ＰＳＭＡ－ＡＤＣの細胞傷害性効能分析の結果を図示する。最大耐用量（ＭＴＤ）の１／２での全群の平均±ＳＥＭが示される。
インビボでのＬＮＣａｐ－細胞異種移植腫瘍マウスモデルにおける、構造上異なるアマニチン誘導体を含む種々の抗ＰＳＭＡ－ＡＤＣの細胞傷害性効能分析の結果を図示する。最大耐用量（ＭＴＤ）の１／４での全群の平均±ＳＥＭが示される。
インビボでのＬＮＣａｐ－細胞異種移植腫瘍マウスモデルにおける、構造上異なるアマニチン誘導体を含む種々の抗ＰＳＭＡ－ＡＤＣの細胞傷害性効能分析の結果を図示する。最大耐用量（ＭＴＤ）の１／２及び１／４での、アマトキシンのアミノ酸１でのリンカー接続を有するＡＤＣの平均±ＳＥＭが示される。
インビボでのＬＮＣａｐ－細胞異種移植腫瘍マウスモデルにおける、構造上異なるアマニチン誘導体を含む種々の抗ＰＳＭＡ－ＡＤＣの細胞傷害性効能分析の結果を図示する。最大耐用量（ＭＴＤ）の１／２及び１／４での、アマトキシンのアミノ酸４でのリンカー接続を有するＡＤＣの平均±ＳＥＭが示される。
インビボでのＬＮＣａｐ－細胞異種移植腫瘍マウスモデルにおける、構造上異なるアマニチン誘導体を含む種々の抗ＰＳＭＡ－ＡＤＣの細胞傷害性効能分析の結果を図示する。最大耐用量（ＭＴＤ）の１／４での切断性リンカーを有するＡＤＣの平均±ＳＥＭが示される。
ＣＤＸマウスモデルにおける、三重Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｄ２６５Ｃ変異並びにそれぞれ、アマトキシン－リンカーコンストラクトＨＤＰ３０．２０６０及びＨＤＰ３０．２８６７（それぞれ、Ｔ－ＬＡＬＡ－Ｄ２６５Ｃ－３０．２０６０、Ｔ－ＬＡＬＡ－Ｄ２６５Ｃ－３０．２８６７）を含む抗Ｈｅｒ２ ＡＤＣの、Ｈｅｒ２陽性ＮＣＩ－Ｎ８７細胞に対する細胞傷害性効能分析の結果を図示する。
ＣＤＸマウスモデルにおける、三重Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｄ２６５Ｃ変異並びにそれぞれ、アマトキシン－リンカーコンストラクトＨＤＰ３０．２０６０及びＨＤＰ３０．２８６７（それぞれ、ｈ３／Ｆ１１－ＬＡＬＡ－Ｄ２６５Ｃ－Ｖａｒ－３０．２０６０、ｈ３／Ｆ１１－ＬＡＬＡ－Ｄ２６５Ｃ－Ｖａｒ－３０．２８６７）を含む抗ＰＳＭＡ ＡＤＣの、ＰＳＭＡ陽性ＬＮＣａｐ細胞に対する細胞傷害性効能分析の結果を図示する。
Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ変異及び／若しくはＤ２６５Ｃ変異、又は対照変異を有する抗体を含むＨｅｒ２特異性ＡＤＣの、Ｈｅｒ２陽性ＳＫＢＲ－３細胞に対するインビトロの細胞傷害可能性の評価のための９６時間ＢｒｄＵアッセイの結果を図示する（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ）。
Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ変異及び／若しくはＤ２６５Ｃ変異、又は対照変異を有する抗体を含むＨｅｒ２特異性ＡＤＣの、Ｈｅｒ２陰性ＴＨＰ－１細胞に対するインビトロの細胞傷害可能性の評価のための９６時間ＣＴＧアッセイの結果を図示する（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ）。
Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ変異及び／若しくはＤ２６５Ｃ変異又は対照変異を有する抗体を含むＨｅｒ２特異性ＡＤＣの、Ｈｅｒ２陰性ＴＨＰ－１細胞に対するインビトロの細胞傷害可能性の評価のための１２０時間ＣＴＧアッセイの結果を図示する（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ）。
本開示の明瞭さのため、且つ限定的ではなく、本発明の詳細な説明は、以下のサブセクションに分けられる。
本発明は、式（Ａｎ）又は式（Ｂｎ）
Figure 2022530026000002
 （式中、ｎは、２、３、４、５、６、７、８、又は９である）
の構造を含むアマトキシン又はその誘導体若しくはアナログに関する。
一実施形態において、本発明は、式（Ａ）
Figure 2022530026000003
 式（Ａ）（ＨＤＰ ３０．２８６７）
の構造を含むアマトキシン又はその誘導体若しくはアナログ又はそのエナンチオマー若しくはジアステレオマーに関する。
さらなる実施形態において、本発明は、式（Ｂ）
Figure 2022530026000004
 式（Ｂ）（ＨＤＰ ３０．０８８０）
の構造を含むアマトキシン又はその誘導体若しくはアナログ又はそのエナンチオマー若しくはジアステレオマーに関する。
前記アマトキシン又はその誘導体若しくはアナログは、抗体薬物複合体（ＡＤＣ）の調製に使用できる。
本発明によるＡＤＣは、特に高い血漿安定性及び忍容性を有し、したがって、改善された治療域を有することが発明者らにより示された。
本発明は、リンカーによりアマトキシンにコンジュゲートされた抗体又はその抗原結合断片を含み、式（Ｉ）：
Figure 2022530026000005
 （式中：
Ｑは、Ｓ又はスルホキシド（ｓｕｌｆｏｘｉｄ）基であり；
Ｌは非切断性リンカーであり；
Ｚは、Ｌ上に存在する反応性置換基と抗体又はその抗原結合断片内に存在する反応性置換基の間のカップリング反応により形成される化学部分であり；及び
Ａｂは、抗体又はその抗原結合断片である）
の構造を有する抗体薬物複合体（ＡＤＣ）又はその立体異性体にさらに関する。
前記ＡＤＣは式（Ｉａ）：
Figure 2022530026000006
 の構造を有し得る。
前記ＡＤＣは式（Ｉｂ）：
Figure 2022530026000007
 の構造も有し得る。
前記ＡＤＣにおいて、Ｌは、結合、－（Ｃ＝Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－基、－ＯＣ（Ｏ）ＮＨ－基、Ｃ１～Ｃ６アルキレン、Ｃ１～Ｃ６ヘテロアルキレン、Ｃ２～Ｃ６アルケニレン、Ｃ２～Ｃ６ヘテロアルケニレン、Ｃ２～Ｃ６アルキニレン、Ｃ２～Ｃ６ヘテロアルキニレン、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキレン、ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、ヘテロアリーレン、ｐが１～６の整数である－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｐ－基、又は溶解度向上基（ｓｏｌｕｂｉｌｉｔｙ ｅｎｈａｎｃｉｎｇ ｇｒｏｕｐ）の１つ以上を含み得；
ここで、各Ｃ１～Ｃ６アルキレン、Ｃ１～Ｃ６ヘテロアルキレン、Ｃ２～Ｃ６アルケニレン、Ｃ２～Ｃ６ヘテロアルケニレン、Ｃ２～Ｃ６アルキニレン、Ｃ２～Ｃ６ヘテロアルキニレン、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキレン、ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、若しくはヘテロアリーレンは、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルカリール、アルキルヘテロアリール、アミノ、アンモニウム、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニル、ウレイド、カルバマート、アリール、ヘテロアリール、スルフィニル、スルホニル、ヒドロキシル、アルコキシ、スルファニル、ハロゲン、カルボキシ、トリハロメチル、シアノ、ヒドロキシ、メルカプト、及びニトロからなる群から各場合で独立に選択される１～５つの置換基により任意選択で置換され得るか；
又は、各Ｃ１～Ｃ６アルキレン、Ｃ１～Ｃ６ヘテロアルキレン、Ｃ２～Ｃ６アルケニレン、Ｃ２～Ｃ６ヘテロアルケニレン、Ｃ２～Ｃ６アルキニレン、Ｃ２～Ｃ６ヘテロアルキニレン、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキレン、ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、若しくはヘテロアリーレンは、Ｏ、Ｓ、及びＮから選択される１つ以上のヘテロ原子により任意選択で中断され得る。
前記溶解度向上基は、式－Ｏａ－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－ＳＯ２－ＮＲ１－を有し得、式中：
ａは、０又は１であり；並びに
Ｒ１は、水素、Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ３～Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基、及びＣ３～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から選択され、そのそれぞれは、Ｏ、Ｓ、及びＮＲ３から選択される１つ以上のヘテロ原子により任意選択で置換されていても任意選択で中断されていてもよく、ここで、Ｒ３は、水素及びＣ１～Ｃ４アルキルからなる群から独立に選択される。
前記ＡＤＣにおいて、Ｌは、ｎが２～６の整数である－（ＣＨ２）ｎ－単位を含み得る。好ましくは、Ｌは、ｎが６である－（ＣＨ２）ｎ－である。
前記ＡＤＣにおいて、Ａｂと、Ｚと、Ｌは共にＡｂ－Ｚ－Ｌとして、以下の式：
Figure 2022530026000008
 （式中、Ｓは、抗体又はその抗原結合断片中に存在するシステイン残基の硫黄原子である）により表され得る。
一実施形態において、本発明は、リンカーによりアマトキシンにコンジュゲートされた抗体又はその抗原結合断片を含み、式（Ｉ）：
Figure 2022530026000009
 （式中：
Ｑは、Ｓ又はスルホキシド基であり；
Ｌは切断性リンカーであり；
Ｚは、Ｌ上に存在する反応性置換基と抗体又はその抗原結合断片内に存在する反応性置換基の間のカップリング反応により形成される化学部分であり；及び
Ａｂは、抗体又はその抗原結合断片である）
の構造を有する抗体薬物複合体（ＡＤＣ）又はその立体異性体に関する。
前記ＡＤＣは、式（Ｉａ）：
Figure 2022530026000010
 の構造を有し得る。
前記ＡＤＣは、式（Ｉｂ）：
Figure 2022530026000011
 の構造を有し得る。
前記ＡＤＣにおいて、Ｌは、ヒドラジン、ジスルフィド、チオエーテル、アミノ酸、１０個までのアミノ酸からなるペプチド、ｐ－アミノベンジル（ＰＡＢ）基、複素環式自壊型基（ｓｅｌｆ－ｉｍｍｏｌａｔｉｖｅ ｇｒｏｕｐ）、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６ヘテロアルキル、Ｃ２～Ｃ６アルケニル、Ｃ２～Ｃ６ヘテロアルケニル、Ｃ２～Ｃ６アルキニル、Ｃ２～Ｃ６ヘテロアルキニル、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、－（Ｃ＝Ｏ）－基、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－基、－ＯＣ（Ｏ）ＮＨ－基、ｐが１～６の整数である－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｐ－基、又は溶解度向上基の１つ以上を含み；
ここで、各Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６ヘテロアルキル、Ｃ２～Ｃ６アルケニル、Ｃ２～Ｃ６ヘテロアルケニル、Ｃ２～Ｃ６アルキニル、Ｃ２～Ｃ６ヘテロアルキニル、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、若しくはヘテロアリール基は、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルカリール、アルキルヘテロアリール、アミノ、アンモニウム、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニル、ウレイド、カルバマート、アリール、ヘテロアリール、スルフィニル、スルホニル、ヒドロキシル、アルコキシ、スルファニル、ハロゲン、カルボキシ、トリハロメチル、シアノ、ヒドロキシ、メルカプト、及びニトロからなる群から各場合で独立に選択される１～５つの置換基により任意選択で置換され得るか；
又は、各Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６ヘテロアルキル、Ｃ２～Ｃ６アルケニル、Ｃ２～Ｃ６ヘテロアルケニル、Ｃ２～Ｃ６アルキニル、Ｃ２～Ｃ６ヘテロアルキニル、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、若しくはヘテロアリール基は、Ｏ、Ｓ、及びＮから選択される１つ以上のヘテロ原子により任意選択で中断され得る）。
前記溶解度向上基は、式－Ｏａ－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－ＳＯ２－ＮＲ１－を有し得、式中：
ａは、０又は１であり；並びに
Ｒ１は、水素、Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ３～Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基、及びＣ３～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から選択され、そのそれぞれは、Ｏ、Ｓ、及びＮＲ３から選択される１つ以上のヘテロ原子により任意選択で置換されていても任意選択で中断されていてもよく、ここで、Ｒ３は、水素及びＣ１～Ｃ４アルキルからなる群から独立に選択される。
本発明の一実施形態によると、Ｌは、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ａｌａ、Ｐｈｅ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｖａｌ－Ｃｉｔ、及びＶａｌ－Ａｒｇからなる群から選択されるペプチドを含む。Ｌは、ＰＡＢ基をさらに含み得る。
一実施形態において、Ｌは、以下の式：
Figure 2022530026000012
 により表される。
好ましい実施形態によると、本発明は、アマトキシンにコンジュゲートされた抗体を含み、式（ＩＩ）：
Figure 2022530026000013
 による構造を有するＡＤＣ又はその立体異性体に関する。
前記ＡＤＣは、式（ＩＩａ）：
Figure 2022530026000014
 の構造を有し得る。
前記ＡＤＣは、式（ＩＩｂ）：
Figure 2022530026000015
 の構造を有し得る。
本発明の好ましい実施形態によると、抗体又はその抗原結合断片は、癌細胞、又はヒト幹細胞、とりわけ造血幹細胞（ＨＳＣ）、又はＴ細胞の細胞表面上に発現された抗原に特異的に結合する。
本発明のさらなる好ましい実施形態によると、抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＨｅｒ２、ＰＳＭＡ、ＣＤ３７、又はＣＤ１２３に特異的に結合する。
本発明の別の好ましい実施形態によると、抗体又はその抗原結合断片は、Ｄ２６５Ｃ、Ｄ２６５Ａ、Ａ１１８Ｃ、Ｈ４３５Ａ、Ｌ２３４Ａ、又はＬ２３５Ａ（ＥＵインデックスによる）からなる群から選択される少なくとも１つの変異を含むＦｃ領域を含む。
本発明の別の好ましい実施形態によると、抗体又はその抗原結合断片はＰＳＭＡに特異的に結合し、配列番号３７８によるＣＤＲＨ１、配列番号３７９によるＣＤＲＨ２、配列番号３８０によるＣＤＲＨ３、配列番号３８１によるＣＤＲＬ１、配列番号３８２によるＣＤＲＬ２、及び配列番号３８３によるＣＤＲＬ３を含む。
本発明の別の好ましい実施形態によると、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号３７５による重鎖可変領域及び配列番号３７７による軽鎖可変領域を含む。
本発明の別の好ましい実施形態によると、前記抗体は、配列番号３７１、配列番号３７２、配列番号３７３、又は配列番号３７４による重鎖、及び配列番号３７６による軽鎖、又はその抗原結合断片を含む。
本発明は、リンカーによりアマトキシン又はその誘導体若しくはアナログにコンジュゲートされた抗体又はその抗原結合断片を含む抗体薬物複合体（ＡＤＣ）であって、抗体又はその抗原結合断片が、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ（ＥＵインデックスによる）からなる少なくとも２つの変異を含むＦｃ領域を含む抗体薬物複合体にさらに関する。
特に好ましい実施形態によると、前記Ｆｃ領域は、Ｄ２６５Ｃ（ＥＵインデックスによる）からなる変異をさらに含んでいる。
本発明の好ましい実施形態によると、前記抗体又はその抗原結合断片は、癌細胞、好ましくはヒト癌細胞の細胞表面上に発現された抗原に特異的に結合する。
本発明の別の好ましい実施形態によると、前記抗体又はその抗原結合断片は、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、好ましくはヒトＰＳＭＡ、又はＨｅｒ２抗原、ＣＤ３７、若しくはＣＤ１２３に特異的に結合する。
好ましい実施形態は、抗体薬物複合体（ＡＤＣ）であって、前記抗体又はその抗原結合断片がＰＳＭＡに特異的に結合し、配列番号３７８によるＣＤＲＨ１、配列番号３７９によるＣＤＲＨ２、配列番号３８０によるＣＤＲＨ３、配列番号３８１によるＣＤＲＬ１、配列番号３８２によるＣＤＲＬ２、及び配列番号３８３によるＣＤＲＬ３を含む抗体薬物複合体に関する。
本発明の好ましい実施形態によると、前記抗体は、ＰＳＭＡ又はその抗原結合断片に特異的に結合し、配列番号３７５による重鎖可変領域及び配列番号３７７による軽鎖可変領域を含む。
本発明の別の好ましい実施形態によると、前記抗体は、配列番号３７２、配列番号３７３、又は配列番号３７４による重鎖、及び配列番号３７６による軽鎖、又はその抗原結合断片を含む。
さらなる好ましい実施形態において、抗体薬物複合体（ＡＤＣ）は、ＨＤＰ３０．２０６０、ＨＤＰ３０．２１１５、ＨＤＰ３０．２３４７、ＨＤＰ３０．１６９９、ＨＤＰ３０．２３７１、ＨＤＰ３０．０８８０、及びＨＤＰ３０．２８６７からなる群から選択されるいずれかの化合物にコンジュゲートされた抗体又はその抗原結合断片を含む。
本発明は、ヒトＰＳＭＡに特異的に結合し、配列番号３７４によるアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号３７６によるアミノ酸配列を有する軽鎖を含み、化合物ＨＤＰ３０．２０６０にコンジュゲートされた抗体又はその抗原結合断片を含む抗体薬物複合体（ＡＤＣ）にさらに関する。最も好ましくは、前記ＡＤＣにおいて、化合物ＨＤＰ３０．２０６０は、前記抗体のシステインＤ２６５Ｃ（ＥＵナンバリング）の硫黄原子に直接連結している。
本発明は、ヒトＰＳＭＡに特異的に結合し、配列番号３７４によるアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号３７６によるアミノ酸配列を有する軽鎖を含み、化合物ＨＤＰ３０．２１１５にコンジュゲートされた抗体又はその抗原結合断片を含む抗体薬物複合体（ＡＤＣ）にさらに関する。最も好ましくは、前記ＡＤＣにおいて、化合物ＨＤＰ３０．２１１５は、前記抗体のシステインＤ２６５Ｃの硫黄原子に直接連結している。
本発明は、ヒトＰＳＭＡに特異的に結合し、配列番号３７４によるアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号３７６によるアミノ酸配列を有する軽鎖を含み、化合物ＨＤＰ３０．２３４７にコンジュゲートされた抗体又はその抗原結合断片を含む抗体薬物複合体（ＡＤＣ）にさらに関する。最も好ましくは、前記ＡＤＣにおいて、化合物ＨＤＰ３０．２３４７は、前記抗体のシステインＤ２６５Ｃの硫黄原子に直接連結している。
本発明は、ヒトＰＳＭＡに特異的に結合し、配列番号３７４によるアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号３７６によるアミノ酸配列を有する軽鎖を含み、化合物ＨＤＰ３０．１６９９にコンジュゲートされた抗体又はその抗原結合断片を含む抗体薬物複合体（ＡＤＣ）にさらに関する。最も好ましくは、前記ＡＤＣにおいて、化合物ＨＤＰ３０．１６９９は、前記抗体のシステインＤ２６５Ｃの硫黄原子に直接連結している。
本発明は、ヒトＰＳＭＡに特異的に結合し、配列番号３７４によるアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号３７６によるアミノ酸配列を有する軽鎖を含み、化合物ＨＤＰ３０．２３７１にコンジュゲートされた抗体又はその抗原結合断片を含む抗体薬物複合体（ＡＤＣ）にさらに関する。最も好ましくは、前記ＡＤＣにおいて、化合物ＨＤＰ３０．２３７１は、前記抗体のシステインＤ２６５Ｃの硫黄原子に直接連結している。
本発明は、ヒトＰＳＭＡに特異的に結合し、配列番号３７４によるアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号３７６によるアミノ酸配列を有する軽鎖を含み、化合物ＨＤＰ３０．０８８０にコンジュゲートされた抗体又はその抗原結合断片を含む抗体薬物複合体（ＡＤＣ）にさらに関する。最も好ましくは、前記ＡＤＣにおいて、化合物ＨＤＰ３０．０８８０は、前記抗体のシステインＤ２６５Ｃの硫黄原子に直接連結している。
本発明は、ヒトＰＳＭＡに特異的に結合し、配列番号３７４によるアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号３７６によるアミノ酸配列を有する軽鎖を含み、化合物ＨＤＰ３０．２８６７にコンジュゲートされた抗体又はその抗原結合断片を含む抗体薬物複合体（ＡＤＣ）にさらに関する。最も好ましくは、前記ＡＤＣにおいて、化合物ＨＤＰ３０．２８６７は、前記抗体のシステインＤ２６５Ｃの硫黄原子に直接連結している。
本発明による前記抗体薬物複合体（ＡＤＣ）において、薬物抗体比（ＤＡＲ）は、約１、２、３、又は４であり、好ましくは、ＤＡＲは２である。
本発明のさらなる態様は、特に、癌が、乳癌、膵臓癌、胆管癌、大腸癌、肺癌、前立腺癌、卵巣癌、前立腺癌、胃癌、腎臓癌、悪性メラノーマ、血液系癌、白血病、及び悪性リンパ腫からなる群から選択される、患者の癌の治療に使用するための前記ＡＤＣに関する。
本発明は、特に癌が、乳癌、膵臓癌、胆管癌、大腸癌、肺癌、前立腺癌、卵巣癌、前立腺癌、胃癌、腎臓癌、悪性メラノーマ、血液系癌、白血病、及び悪性リンパ腫からなる群から選択される、患者の癌の治療のための前記ＡＤＣのいずれかの使用にさらに関する。
本発明の別の好ましい実施形態によると、前記抗体薬物複合体（ＡＤＣ）は、造血幹細胞（ＨＳＣ）、好ましくはヒトＨＳＣの細胞表面上に発現された抗原に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片を含む。
本発明のさらなる実施形態は、ヒト対象における細胞の集団を枯渇させる方法であって、前記ＡＤＣを対象に投与することを含み、ＡＤＣが、細胞の集団中の細胞により発現される細胞外抗原に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片を含む方法に関する。
本発明のさらなる実施形態は、細胞移植のためにヒト対象を前処置する方法であって、ヒト対象における内因性幹細胞又は内因性免疫細胞が枯渇されるように前記ＡＤＣをヒト対象に投与することを含み、ＡＤＣが、内因性幹細胞又は内因性免疫細胞により発現される細胞外抗原に特異的に結合する方法に関する。
本発明のさらなる実施形態は、ヒト対象に同種異系幹細胞又は同種異系免疫細胞を投与することをさらに含む前記方法に関する。
本発明のさらなる実施形態は、ＡＤＣが、免疫細胞上に発現される細胞外抗原に特異的に結合し、対象が移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を有するか、又は発症するリスクがある前記方法に関する。
本発明は、前記ＡＤＣのいずれか又はそれらの組合せ及び少なくとも薬学的に許容できる担体を含む医薬組成物にさらに関する。
定義
特記されない限り、本明細書で使用される以下の用語及び句は、以下の意味を有するものとする。
本明細書で使用される用語「アシル」は－Ｃ（＝Ｏ）Ｒを指し、ここで、Ｒは、水素（「アルデヒド」）、本明細書に定義されるＣ１～Ｃ１２アルキル、Ｃ２～Ｃ１２アルケニル、Ｃ２～Ｃ１２アルキニル、Ｃ３～Ｃ７カルボシクリル、Ｃ６～Ｃ２０アリール、５～１０員ヘテロアリール、又は５～１０員ヘテロシクリルである。非限定的な例には、ホルミル、アセチル、プロパノイル、ベンゾイル、及びアクリロイルがある。
本明細書で使用される用語「Ｃ１～Ｃ１２アルキル」は、１～１２個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖の飽和炭化水素を指す。代表的なＣ１～Ｃ１２アルキル基には、－メチル、－エチル、－ｎ－プロピル、－ｎ－ブチル、－ｎ－ペンチル、及び－ｎ－ヘキシルがあるが、これらに限定されず、分岐鎖のＣ１～Ｃ１２アルキルには、－イソプロピル、－ｓｅｃ－ブチル、－イソブチル、－ｔｅｒｔ－ブチル、－イソペンチル、及び２－メチルブチルがあるが、これらに限定されない。Ｃ１～Ｃ１２アルキル基は、非置換でも置換されていてもよい。
本明細書で使用される用語「アルケニル」は、少なくとも１つの不飽和部位、すなわち炭素－炭素ｓｐ２二重結合を有する、ノルマル、二級、又は三級炭素原子を含むＣ２～Ｃ１２炭化水素を指す。例には、エチレン又はビニル、－アリル、－１－ブテニル、－２－ブテニル、－イソブチレニル、－１－ペンテニル、－２－ペンテニル、－３－メチル－１－ブテニル、－２－メチル－２－ブテニル、－２，３－ジメチル－２－ブテニルなどがあるが、これらに限定されない。アルケニル基は、非置換でも置換されていてもよい。
本明細書で使用される「アルキニル」は、少なくとも１つの不飽和部位、すなわち炭素－炭素ｓｐ三重結合を有する、ノルマル、二級、又は三級炭素原子を含むＣ２～Ｃ１２炭化水素を指す。例には、アセチレン（ａｃｅｔｙｌｅｎｉｃ）及びプロパルギルがあるが、これらに限定されない。アルキニル基は、非置換でも置換されていてもよい。
本明細書で使用される「アリール」は、Ｃ６～Ｃ２０炭素環式芳香族基を指す。アリール基の例には、フェニル、ナフチル、及びアントラセニルがあるが、これらに限定されない。アリール基は、非置換でも置換されていてもよい。
本明細書で使用される「アリールアルキル」は、炭素原子、典型的には末端又はｓｐ３炭素原子に結合している水素原子の１つがアリールラジカルに置き換えられた非環式アルキルラジカルを指す。典型的なアリールアルキル基には、ベンジル、２－フェニルエタン－１－イル、２－フェニルエテン－１－イル、ナフチルメチル、２－ナフチルエタン－１－イル、２－ナフチルエテン－１－イル、ナフトベンジル、２－ナフトフェニルエタン－１－イルなどがあるが、これらに限定されない。アリールアルキル基は６～２０個の炭素原子を含み、例えば、アリールアルキル基のアルカニル、アルケニル、又はアルキニル基を含むアルキル部分は１～６個の炭素原子であり、アリール部分は５～１４個の炭素原子である。アルカリール基は、非置換でも置換されていてもよい。
本明細書で使用される「シクロアルキル」は、単環式でも二環式でもよい飽和炭素環式ラジカルを指す。シクロアルキル基は、単環として３～７個の炭素原子又は二環として７～１２個の炭素原子を有する環を含む。単環式シクロアルキル基の例には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、及びシクロオクチルがある。シクロアルキル基は、非置換でも置換されていてもよい。
本明細書で使用される「シクロアルケニル」は、単環式でも二環式でもよい不飽和炭素環式ラジカルを指す。シクロアルケニル基は、単環として３～６個の炭素原子又は二環として７～１２個の炭素原子を有する環を含む。単環式シクロアルケニル基の例には、１－シクロペンタ－１－エニル、１－シクロペンタ－２－エニル、１－シクロペンタ－３－エニル、１－シクロヘキサ－１－エニル、１－シクロヘキサ－２－エニル、及び１－シクロヘキサ－３－エニルがある。シクロアルケニル基は、非置換でも置換されていてもよい。
本明細書で使用される「ヘテロアラルキル」は、炭素原子、典型的には末端又はｓｐ３炭素原子に結合している水素原子の１つがヘテロアリールラジカルに置き換えられている非環式アルキルラジカルを指す。典型的なヘテロアリールアルキル基には、２－ベンゾイミダゾリルメチル、２－フリルエチルなどがあるが、これらに限定されない。ヘテロアリールアルキル基は、６～２０個の炭素原子を含み、例えば、ヘテロアリールアルキル基のアルカニル、アルケニル、又はアルキニル基を含むアルキル部分は１～６個の炭素原子であり、ヘテロアリール部分は、５～１４個の炭素原子並びにＮ、Ｏ、Ｐ、及びＳから選択される１～３個のヘテロ原子である。ヘテロアリールアルキル基のヘテロアリール部分は、３～７個の環員（２～６個の炭素原子）を有する単環でも、７～１０個の環員（４～９個の炭素原子並びにＮ、Ｏ、Ｐ、及びＳから選択される１～３個のヘテロ原子）を有する二環でもよく、例えば：ビシクロ［４，５］、［５，５］、［５，６］、又は［６，６］系がある。
本明細書で使用される「ヘテロアリール」及び「ヘテロシクロアルキル」は、それぞれ、１つ以上の環原子が、ヘテロ原子、例えば、窒素、酸素、及び硫黄である芳香族又は非芳香環系を指す。ヘテロアリール又はヘテロシクロアルキルラジカルは、２～２０個の炭素原子並びにＮ、Ｏ、Ｐ、及びＳから選択される１～３個のヘテロ原子を含む。ヘテロアリール又はヘテロシクロアルキルは、３～７個の環員（２～６個の炭素原子並びにＮ、Ｏ、Ｐ、及びＳから選択される１～３個のヘテロ原子）を有する単環でも、７～１０個の環員（４～９個の炭素原子並びにＮ、Ｏ、Ｐ、及びＳから選択される１～３個のヘテロ原子）を有する二環でもよく、例えば：ビシクロ［４，５］、［５，５］、［５，６］、又は［６，６］系がある。ヘテロアリール及びヘテロシクロアルキルは、非置換でも置換されていてもよい。
ヘテロアリール及びヘテロシクロアルキル基は、Ｐａｑｕｅｔｔｅ，Ｌｅｏ Ａ．；“Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｍｏｄｅｒｎ Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”（Ｗ．Ａ．Ｂｅｎｊａｍｉｎ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９６８）、特に１、３、４、６、７、及び９章；“Ｔｈｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，Ａ ｓｅｒｉｅｓ ｏｆ Ｍｏｎｏｇｒａｐｈｓ”（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９５０年から現在まで）、とりわけ１３、１４、１６、１９、及び２８巻；並びにＪ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．．（１９６０）８２：５５６６に記載されている。
ヘテロアリール基の例には、限定ではなく例として、ピリジル、チアゾリル、テトラヒドロチオフェニル、ピリミジニル、フラニル、チエニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、テトラゾリル、ベンゾフラニル、チアナフタレニル、インドリル、インドレニル（ｉｎｄｏｌｅｎｙｌ）、キノリニル、イソキノリニル、ベンゾイミダゾリル、イソオキサゾリル、ピラジニル、ピリダジニル、インドリジニル、イソインドリル、３Ｈ－インドリル、１Ｈ－インダゾリル、プリニル、４Ｈ－キノリジニル、フタラジニル、ナフチリジニル、キノキサリニル、キナゾリニル、シンノリニル、プテリジニル、４ａＨ－カルバゾリル、カルバゾリル、フェナントリジニル、アクリジニル、ピリミジニル、フェナントロリニル、フェナジニル、フェノチアジニル、フラザニル、フェノキサジニル、イソクロマニル、クロマニル、イミダゾリジニル、イミダゾリニル、ピラゾリジニル、ピラゾリニル、ベンゾトリアゾリル、ベンゾイソオキサゾリル、及びイサチノイル（ｉｓａｔｉｎｏｙｌ）がある。
ヘテロシクロアルキルの例には、限定ではなく例として、ジヒドロイピリジル（ｄｉｈｙｄｒｏｙｐｙｒｉｄｙｌ）、テトラヒドロピリジル（ピペリジル）、テトラヒドロチオフェニル、ピペリジニル、４－ピペリドニル、ピロリジニル、２－ピロリドニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、ビス－テトラヒドロピラニル、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、デカヒドロキノリニル、オクタヒドロイソキノリニル、ピペラジニル、キヌクリジニル、及びモルホリニルがある。
限定ではなく例として、炭素が結合したヘテロアリール及びヘテロシクロアルキルは、ピリジンの２、３、４、５、若しくは６位、ピリダジンの３、４、５、若しくは６位、ピリミジンの２、４、５、若しくは６位、ピラジンの２、３、５、若しくは６位、フラン、テトラヒドロフラン、チオフラン、チオフェン、ピロール、若しくはテトラヒドロピロールの２、３、４、若しくは５位、オキサゾール、イミダゾール、若しくはチアゾールの２、４、若しくは５位、イソオキサゾール、ピラゾール、若しくはイソチアゾールの３、４、若しくは５位、アジリジンの２若しくは３位、アゼチジンの２、３、若しくは４位、キノリンの２、３、４、５、６、７、若しくは８位、又はイソキノリンの１、３、４、５、６、７、若しくは８位で結合している。さらにより典型的には、炭素が結合したヘテロシクリルには、２－ピリジル、３－ピリジル、４－ピリジル、５－ピリジル、６－ピリジル、３－ピリダジニル、４－ピリダジニル、５－ピリダジニル、６－ピリダジニル、２－ピリミジニル、４－ピリミジニル、５－ピリミジニル、６－ピリミジニル、２－ピラジニル、３－ピラジニル、５－ピラジニル、６－ピラジニル、２－チアゾリル、４－チアゾリル、又は５－チアゾリルがある。
限定ではなく例として、窒素が結合したヘテロアリール及びヘテロシクロアルキルは、アジリジン、アゼチジン、ピロール、ピロリジン、２－ピロリン、３－ピロリン、イミダゾール、イミダゾリジン、２－イミダゾリン、３－イミダゾリン、ピラゾール、ピラゾリン、２－ピラゾリン、３－ピラゾリン、ピペリジン、ピペラジン、インドール、インドリン、１Ｈ－インダゾールの１位、イソインドール又はイソインドリンの２位、モルホリンの４位、及びカルバゾール又はβ－カルボリンの９位で結合している。さらにより典型的には、窒素が結合したヘテロシクリルには、１－アジリジル（ａｚｉｒｉｄｙｌ）、１－アゼテジル（ａｚｅｔｅｄｙｌ）、１－ピロリル、１－イミダゾリル、１－ピラゾリル、及び１－ピペリジニルがある。
「置換された」は、本明細書で使用される通り、且つ上記のアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロシクリルなどのいずれにも適用される通り、１つ以上の水素原子が、それぞれ独立に置換基に置き換えられることを意味する。個々の置換基の定義により別途制約されない限り、「アルキル」、「アルキレン」、「ヘテロアルキル」、「ヘテロアルキレン」、「アルケニル」、「アルケニレン」、「ヘテロアルケニル」、「ヘテロアルケニレン」、「アルキニル」、「アルキニレン」、「ヘテロアルキニル」、「ヘテロアルキニレン」、「シクロアルキル」、「シクロアルキレン」、「ヘテロシクロルアルキル（ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｏｌａｌｋｙｌ）」、「ヘテロシクロアルキレン」、「アリール」、「アリーレン」、「ヘテロアリール」、及び「ヘテロアリーレン」基などの上記化学部分は、任意選択で置換され得る。典型的な置換基には、－Ｘ、－Ｒ、－ＯＨ、－ＯＲ、－ＳＨ、－ＳＲ、ＮＨ２、－ＮＨＲ、－Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ＋（Ｒ）３、－ＣＸ３、－ＣＮ、－ＯＣＮ、－ＳＣＮ、－ＮＣＯ、－ＮＣＳ、－ＮＯ、－ＮＯ２、－Ｎ３、－ＮＣ（＝Ｏ）Ｈ、－ＮＣ（＝Ｏ）Ｒ、－Ｃ（＝Ｏ）Ｈ、－Ｃ（＝Ｏ）Ｒ、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－ＳＯ３－、－ＳＯ３Ｈ、－Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ、－ＯＳ（＝Ｏ）２ＯＲ、－Ｓ（＝Ｏ）２ＮＨ２、－Ｓ（＝Ｏ）２Ｎ（Ｒ）２、－Ｓ（＝Ｏ）Ｒ、－ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＨ）２、－ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲ）２、－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ）２、－ＰＯ３、－ＰＯ３Ｈ２、－Ｃ（＝Ｏ）Ｘ、－Ｃ（＝Ｓ）Ｒ、－ＣＯ２Ｈ、－ＣＯ２Ｒ、－ＣＯ２－、－Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ、－Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ、－Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｃ（＝Ｓ）ＮＨ２、－Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、及び－Ｃ（＝ＮＲ）Ｎ（Ｒ）２があるが、これらに限定されず；式中、各Ｘは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＩから各場合で独立に選択され；並びに、各Ｒは、Ｃ１～Ｃ１２アルキル、Ｃ６～Ｃ２０アリール、Ｃ３～Ｃ１４ヘテロシクロアルキル又はヘテロアリール、保護基、及びプロドラッグ部分から各場合で独立に選択される。基が「任意選択で置換されている」と記載されている場合はいつでも、その基は、上記置換基の１つ以上により、各場合で独立に置換され得る。
特定のラジカル命名規則が、文脈に応じて、モノラジカルもジラジカルも含み得ることが理解されるべきである。例えば、置換基が、分子の残りへの２つの接続点を必要とする場合、置換基がジラジカルであることが理解される。例えば、２つの接続点を必要とするアルキルとして特定される置換基には、－ＣＨ２－、－ＣＨ２ＣＨ２－、－ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２－などのジラジカルがある。他のラジカル命名規則は、ラジカルが、「アルキレン」、「アルケニレン」、「アリーレン」、「ヘテロシクロアルキレン」などのジラジカルであることを明らかに示す。
置換基がジラジカルとして描写されている（すなわち、分子の残りへの２つの接続点を有する）場合はいつでも、置換基が、特記されない限り、あらゆる方向的な配置で接続できることが理解されるべきである。
「異性」は、同一の分子式を有するが、それらの原子の結合の配列又は空間中のそれらの原子の配置が異なる化合物を意味する。空間中のそれらの原子の配置が異なる異性体は「立体異性体」と称される。互いの鏡像でない立体異性体は「ジアステレオ異性体」と称され、互いの重ね合わせることができない鏡像である立体異性体は「エナンチオマー」又は場合によって「光学異性体」と称される。
４つの同一でない置換基に結合した炭素原子は「キラル中心」と称される。「キラル異性体」は、少なくとも１つのキラル中心を有する化合物を意味する。２つ以上のキラル中心を有する化合物は、個別のジアステレオマーとしても、「ジアステレオマー混合物」と称されるジアステレオマーの混合物としても存在し得る。１つのキラル中心が存在する場合、立体異性体は、そのキラル中心の絶対配置（Ｒ又はＳ）により特徴づけられ得る。絶対配置は、キラル中心に結合した置換基の空間中での配置を指す。検討中のキラル中心に結合した置換基は、カーン、インゴルド、及びプレローグの順位則により順位付けられる（Ｃａｈｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔｅｒ．Ｅｄｉｔ．１９６６，５，３８５；ｅｒｒａｔａ ５１１；Ｃａｈｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．１９６６，７８，４１３；Ｃａｈｎ ａｎｄ Ｉｎｇｏｌｄ，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９５１（Ｌｏｎｄｏｎ），６１２；Ｃａｈｎ ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｉｅｎｔｉａ １９５６，１２，８１；Ｃａｈｎ，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｅｄｕｃ．１９６４，４１，１１６）。等量の反対のキラリティの個々のエナンチオマー形態を含む混合物は「ラセミ混合物」と称される。
本明細書及び請求項に開示される化合物は、１つ以上の不斉中心を含み得て、化合物のそれぞれの異なるジアステレオマー及び／又はエナンチオマーが存在し得る。本明細書及び請求項におけるあらゆる化合物の説明は、特記されない限り、全エナンチオマー、ジアステレオマー、及びそれらの混合物を含むものとする。さらに、本明細書及び請求項におけるあらゆる化合物の説明は、特記されない限り、個別のエナンチオマーの両方、並びにラセミであるか他の形態であるかを問わずエナンチオマーのあらゆる混合物を含むものとする。化合物の構造が特定のエナンチオマーとして描写される場合、本願の発明がその特定のエナンチオマーに限定されないことが理解されるべきである。したがって、本開示の構造式のそれぞれのエナンチオマー、光学異性体、及びジアステレオマーが本明細書で企図される。本明細書において、化合物の構造式は、場合によって便宜上特定の異性体を表すが、本開示は、幾何異性体、不斉炭素に基づく光学異性体、立体異性体、互変異性体などの全異性体を含み、全異性体が同じレベルの活性を有し得るのではないことが理解される。化合物は、異なる互変異性形態で存在し得る。本開示による化合物は、特記されない限り、全互変異性形態を含むものとする。化合物の構造が特定の互変異性体として描写されている場合、本願の発明がその特定の互変異性体に限定されないことが理解されるべきである。
本明細書に記載されるあらゆる式の化合物は、化合物自体、並びに、該当する場合それらの塩及びそれらの溶媒和物を含む。塩は、例えば、アニオンと、本開示の化合物上の正電荷を帯びた基（例えばアミノ）との間に形成され得る。好適なアニオンには、クロリド、ブロミド、ヨージド、スルファート、バイスルファート、スルファマート、ニトラート、ホスファート、シトラート、メタンスルホナート、トリフルオロアセタート、グルタマート、グルクロナート、グルタラート、マラート、マレアート、スクシナート、フマラート、タータラート、トシラート、サリチラート、ラクタート、ナフタレンスルホナート、及びアセタート（例えば、トリフルオロアセタート）がある。用語「薬学的に許容できるアニオン」は、薬学的に許容できる塩を形成するために好適なアニオンを指す。同様に、塩は、カチオンと、本開示の化合物上の負電荷を帯びた基（例えば、カルボキシラート）との間に形成され得る。好適なカチオンには、ナトリウムイオン、カリウムイオン、マグネシウムイオン、カルシウムイオン、及びテトラメチルアンモニウムイオンなどのアンモニウムカチオンがある。いくつかの好適な置換されたアンモニウムイオンの例は、エチルアミン、ジエチルアミン、ジシクロヘキシルアミン、トリエチルアミン、ブチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペラジン、ベンジルアミン、フェニルベンジルアミン、コリン、メグルミン、及びトロメタミン、並びにリジン及びアルギニンなどのアミノ酸から誘導されるものである。本開示の化合物は、四級窒素原子を含む塩も含む。
好適な無機アニオンの例には、以下の無機酸：塩化水素酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、亜硫酸、硝酸、亜硝酸、リン酸、及び亜リン酸から誘導されるものがあるが、これらに限定されない。好適な有機アニオンの例には、以下の有機酸：２－アセチオキシ安息香酸（ａｃｅｔｙｏｘｙｂｅｎｚｏｉｃ）、酢酸、アスコルビン酸、アスパラギン酸、安息香酸、カンファースルホン酸、ケイ皮酸、クエン酸、エデト酸、エタンジスルホン酸、エタンスルホン酸、フマル酸、グルクヘプトン酸（ｇｌｕｃｈｅｐｔｏｎｉｃ）、グルコン酸、グルタミン酸、グリコール酸、ヒドロキシマレイン酸、ヒドロキシナフタレンカルボン酸、イセチオン酸、乳酸、ラクトビオン酸、ラウリン酸、マレイン酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、粘液酸、オレイン酸、シュウ酸、パルミチン酸、パモ酸、パントテン酸、フェニル酢酸、フェニルスルホン酸、プロピオン酸、ピルビン酸、サリチル酸、ステアリン酸、コハク酸、スルファニル酸、酒石酸、トルエンスルホン酸、及び吉草酸から誘導されるものがあるが、これらに限定されない。好適なポリマー性有機アニオンの例には、以下のポリマー酸：タンニン酸、カルボキシメチルセルロースから誘導されるものがあるが、これらに限定されない。
さらに、本開示の化合物、例えば化合物の塩は、水和された形態又は水和されていない（無水）形態でも、他の溶媒分子との溶媒和物としても存在し得る。水和物の非限定的な例には、一水和物、二水和物などがある。溶媒和物の非限定的な例には、エタノール溶媒和物、アセトン溶媒和物などがある。「溶媒和物」は、化学量論量又は非化学量論量の溶媒を含む溶媒付加形態を意味する。いくつかの化合物は、一定のモル比の溶媒分子を結晶性固体状態に取り込む傾向を有し、そのため溶媒和物を形成する。溶媒が水である場合、形成される溶媒和物は水和物である。溶媒がアルコールである場合、形成される溶媒和物はアルコラートである。水和物は、１分子以上の水と、水がＨ２Ｏとしてのその分子状態を保持する１分子の物質の組合せにより形成される。水和物は、例えば、一水和物、二水和物、三水和物などを指す。
さらに、結晶多形が、本明細書に開示される式により表される化合物又はその塩に関して存在し得る。あらゆる結晶形、結晶形混合物、又はその無水物若しくは水和物が本開示の範囲内に含まれることが留意される。
本明細書で使用される通り、用語「約」は、記載されている値の１０％上又は下以内である値を指す。例えば、用語「約５ｎＭ」は、４．５ｎＭ～５．５ｎＭの範囲を示す。
本明細書で使用される通り、用語「アマトキシン」は、アマニタ・ファロイデス（Ａｍａｎｉｔａ ｐｈａｌｌｏｉｄｅｓ）キノコにより産生されるアマトキシンファミリーのペプチドの一員、又はそのバリアント若しくは誘導体、例えば、ＲＮＡポリメラーゼＩＩ活性を阻害することが可能であるそのバリアント又は誘導体などを指す。好適なアマトキシン及びその誘導体は、以下にさらに説明される。本明細書に記載される通り、アマトキシンは、例えばリンカー部分（Ｌ）により、抗体又はその抗原結合断片にコンジュゲートされ得る（その結果、複合体（すなわちＡＤＣ）を形成する）。アマトキシンコンジュゲーションの例示的な方法及びそのようなプロセスに有用なリンカーは以下に記載される。
本発明の文脈では、用語「アマトキシン」は、アマニタ（Ａｍａｎｉｔａ）属から単離され、Ｗｉｅｌａｎｄ，Ｔ．ａｎｄ Ｆａｕｌｓｔｉｃｈ Ｈ．（Ｗｉｅｌａｎｄ Ｔ，Ｆａｕｌｓｔｉｃｈ Ｈ．，ＣＲＣ Ｃｒｉｔ Ｒｅｖ Ｂｉｏｃｈｅｍ．５（１９７８）１８５－２６０）に記載される８アミノ酸で構成される全環状ペプチド、さらなるその全化学誘導体；さらなるその全半合成アナログ；天然化合物（環状、８アミノ酸）のマスター構造に従ってビルディングブロックから作製されたさらなるその全合成アナログ、ヒドロキシル化アミノ酸の代わりに非ヒドロキシ化アミノ酸を含むさらなる全合成又は半合成アナログ、スルホキシド部分が、スルホン、チオエーテルにより、又は硫黄とは異なる原子、例えばアマニチンの炭素アナログ（ｃａｒｂａｎａｌｏｇ）のように炭素原子に置き換えられたさらなる全合成又は半合成アナログを含む。
本明細書で使用される通り、化合物の「誘導体」は、化合物に類似している化学構造を有するが、化合物に存在しない少なくとも１つの化学基を含むか、及び／又は化合物に存在する少なくとも１つの化学基が欠けている種を指す。誘導体が比較される化合物は「親」化合物として知られている。典型的には、「誘導体」は、親化合物から、１つ以上の化学反応工程で製造され得る。
本明細書で使用される通り、化合物の「アナログ」は、化合物に構造上関連するが同一ではなく、化合物の少なくとも１つの活性を示す。アナログが比較される化合物は「親」化合物として知られている。上述の活性には、非限定的に：別の化合物に対する結合活性；阻害活性、例えば、酵素阻害活性；毒性作用；活性化活性、例えば、酵素活性化活性がある。アナログが、親化合物と同程度そのような活性を示すことは要求されない。化合物は、それが、親化合物の活性の少なくとも１％（より好ましくは少なくとも５％、より好ましくは少なくとも１０％、より好ましくは少なくとも２０％、より好ましくは少なくとも３０％、より好ましくは少なくとも４０％、及びより好ましくは少なくとも５０％）程度の関連活性を示す場合、本願の文脈内でアナログであるとみなされる。そのため、「アマトキシンのアナログ」は、本明細書で使用される通り、 －アマニチン、β－アマニチン、γ－アマニチン、ε－アマニチン、アマニン、アマニンアミド、アマヌリン、及びアマヌリン酸のいずれか１つに構造上関連し、α－アマニチン、β－アマニチン、γ－アマニチン、ε－アマニチン、アマニン、アマニンアミド、アマヌリン、及びアマヌリン酸の少なくとも１つと比べて少なくとも１％（より好ましくは少なくとも５％、より好ましくは少なくとも１０％、より好ましくは少なくとも２０％、より好ましくは少なくとも３０％、より好ましくは少なくとも４０％、及びより好ましくは少なくとも５０％）の哺乳動物ＲＮＡポリメラーゼＩＩに対する阻害活性を示す化合物を指す。本発明における使用に好適な「アマトキシンのアナログ」は、α－アマニチン、β－アマニチン、γ－アマニチン、ε－アマニチン、アマニン、アマニンアミド、アマヌリン、又はアマヌリン酸のいずれか１つより、哺乳動物ＲＮＡポリメラーゼＩＩに対する、より高い阻害活性すら示し得る。阻害活性は、５０％阻害が起こる濃度（ＩＣ５０値）を決定することにより測定され得る。哺乳動物ＲＮＡポリメラーゼＩＩに対する阻害活性は、細胞増殖に対する阻害活性を測定することにより間接的に決定され得る。
「半合成アナログ」は、天然源（例えば、植物原料、細菌培養物、真菌培養物、又は細胞培養物）由来の化合物を出発物質として使用して化学合成により得られたアナログを指す。典型的には、本発明の「半合成アナログ」は、テングタケ（Ａｍａｎｉｔａｃｅａｅ）科のキノコから単離された化合物から出発して合成された。対照的に、「合成アナログ」は、小さい（典型的には石油化学）ビルディングブロックから、いわゆる全合成により合成されたアナログを指す。通常、この全合成は、生物学的プロセスの補助なしに実施される。
本発明のいくつかの実施形態によると、アマトキシンは、α－アマニチン、β－アマニチン、アマニン、アマニンアミド、並びにそのアナログ、誘導体、及び塩からなる群から選択され得る。
機能的には、アマトキシンは、哺乳動物ＲＮＡポリメラーゼＩＩを阻害するペプチド又はデプシペプチドと定義される。好ましいアマトキシンは、以下に定義されるリンカー分子又は標的結合部分と反応できる官能基（例えば、カルボキシル基、アミノ基、ヒドロキシ基、チオール、又はチオール捕捉基を有するものである。
本発明の文脈では、用語「アマニチン」は、特に、１位のアスパラギン酸又はアスパラギン残基、２位のプロリン残基、特にヒドロキシプロリン残基、３位のイソロイシン、ヒドロキシイソロイシン、又はジヒドロキシイソロイシン、４位のトリプトファン又はヒドロキシトリプトファン残基、５及び７位のグリシン残基、６位のイソロイシン残基、並びに８位のシステイン残基、特にスルホキシド又はスルホン誘導体に酸化されているシステインの誘導体に基づく二環式構造を指し（アマニチンのナンバリング及び代表例に関しては図１参照）、その全化学誘導体；さらなるその全半合成アナログ；天然化合物（環状、８アミノ酸）のマスター構造に従ってビルディングブロックから作製されたさらなるその全合成アナログ、ヒドロキシル化アミノ酸の代わりに非ヒドロキシ化アミノ酸を含むさらなる全合成又は半合成アナログ、さらなる全合成又は半合成アナログをさらに含み、各場合において、あらゆるそのような誘導体又はアナログは、哺乳動物ＲＮＡポリメラーゼＩＩを阻害することにより機能的に活性である。
本明細書で使用される通り、用語「抗体」は、特定の抗原に特異的に結合するか、又は免疫学的にそれと反応性がある免疫グロブリン分子を指し、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヘテロコンジュゲート抗体（例えば、二重、三重、及び四重特異的抗体、ダイアボディ、トリアボディ、及びテトラボディ）を含むがこれらに限定されないモノクローナルの、遺伝子操作及び他の面で修飾された形態の抗体、並びに、例えば、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｒｌｇＧ、及びｓｃＦｖ断片を含む抗体の抗原結合断片を含む。特記されない限り、用語「モノクローナル抗体」（ｍＡｂ）は、標的タンパク質に特異的に結合することが可能なインタクト分子、並びに抗体断片（例えば、Ｆａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片を含む）の両方を含むものとする。本明細書で使用される通り、Ｆａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片は、インタクト抗体のＦｃ断片を欠く抗体断片を指す。これらの抗体断片の例は、本明細書に記載される。
本明細書で使用される通り、用語「モノクローナル抗体」は、あらゆる真核生物、原核生物、又はファージクローンを含む単一クローンから誘導される抗体を指し、それが産生される方法ではない。
本発明の抗体は、一般的に、単離されているか、又は組換え型である。本明細書で使用される「単離された」は、ポリペプチド、例えば抗体が発現された細胞又は細胞培養物から分離された及び／又は回収されたポリペプチド、例えば抗体を指す。そのため、「単離された抗体」は、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を指す。例えばＣＤ１１７に特異的に結合する単離された抗体は、ＣＤ１１７以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない。
本明細書で使用される用語「抗原結合断片」は、標的抗原に特異的に結合する能力を保持する抗体の断片を指す。抗体の抗原結合機能は、完全長抗体の断片により発揮され得る。抗体断片は、例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、トリアボディ、アフィボディ、ナノボディ、アプタマー、又はドメイン抗体であり得る。用語抗体の「抗原結合断片」に包含される結合断片の例には、（ｉ）Ｆａｂ断片、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、及びＣＨ１ドメインからなる一価断片；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片、ヒンジ領域でジスルフィドブリッジにより連結されている２つのＦａｂ断片を含む二価の断片；（ｉｉｉ）ＶＨ及びＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；（ｉｖ）抗体の単一のアームのＶＬ及びＶＨドメインからなるＦｖ断片、（ｖ）ＶＨ及びＶＬドメインを含むｄＡｂ；（ｖｉ）ＶＨドメインからなるｄＡｂ断片（例えば、Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４－５４６，１９８９参照）；（ｖｉｉ）ＶＨ又はＶＬドメインからなるｄＡｂ；（ｖｉｉｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）；並びに（ｉｘ）任意選択で合成リンカーにより結合され得る２つ以上（例えば、２、３、４、５、又は６）の単離されたＣＤＲの組合せがあるが、これらに限定されない。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメイン、ＶＬ及びＶＨは別な遺伝子によりコードされているが、それらは、組換え法を使用して、ＶＬ領域とＶＨ領域が一対になり一価分子が形成される単一のタンパク質鎖としてそれらが生成されることが可能なリンカーにより結合できる（単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる；例えば、Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－４２６，１９８８及びＨｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９－５８８３，１９８８参照）。抗体断片は、当業者に公知である従来の技法を使用して得ることができ、断片は、有用性に関してインタクト抗体と同様にスクリーニングできる。抗原結合断片は、組換えＤＮＡ技法、インタクトな免疫グロブリンの酵素的若しくは化学的切断、又は、特定の場合には、当技術分野に公知である化学的なペプチド合成手順により製造できる。
本明細書で使用される通り、用語「抗ＣＤ１１７抗体」又は「ＣＤ１１７に結合する抗体」は、抗体が診断剤及び／又は治療剤としてＣＤ１１７を標的化する際に有用であるように、ＣＤ１１７、例えばヒトＣＤ１１７と充分な親和性を持って結合することが可能である抗体を指す。ヒトＣＤ１１７の２つの主なアイソフォームのアミノ酸配列は、配列番号：１４５（アイソフォーム１）及び配列番号：１４６（アイソフォーム２）に提供されている。「抗ＣＤ１１７ ＡＤＣ」は、抗体が抗ＣＤ１１７抗体であるＡＤＣを指す。
本明細書で使用される通り、用語「抗ＣＤ４５抗体」又は「ＣＤ４５に結合する抗体」は、抗体が診断剤及び／又は治療剤としてＣＤ４５を標的化する際に有用であるように、ＣＤ４５、例えばヒトＣＤ１１７と充分な親和性を持って結合することが可能である抗体を指す。「抗ＣＤ４５ ＡＤＣ」は、抗体が抗ＣＤ４５抗体である抗体を指す。
本明細書で使用される通り、用語「抗ＣＤ１３７抗体」又は「ＣＤ１３７に結合する抗体」は、抗体が診断剤及び／又は治療剤としてＣＤ１３７を標的化する際に有用であるように、ＣＤ１３７、例えばヒトＣＤ１３７と充分な親和性を持って結合することが可能である抗体を指す。「抗ＣＤ１３７ ＡＤＣ」は、抗体が抗ＣＤ１３７抗体であるＡＤＣを指す。
本明細書で使用される通り、用語「抗ＣＤ２抗体」又は「ＣＤ２に結合する抗体」は、抗体が診断剤及び／又は治療剤としてＣＤ２を標的化する際に有用であるように、ＣＤ２、例えばヒトＣＤ２と充分な親和性を持って結合することが可能である抗体を指す。「抗ＣＤ２ ＡＤＣ」は、抗体が抗ＣＤ２抗体であるＡＤＣを指す。
本明細書で使用される通り、用語「抗ＣＤ５抗体」又は「ＣＤ５に結合する抗体」は、抗体が診断剤及び／又は治療剤としてＣＤ５を標的化する際に有用であるように、ＣＤ５、例えばヒトＣＤ５と充分な親和性を持って結合することが可能である抗体を指す。「抗ＣＤ５ ＡＤＣ」は、抗体が抗ＣＤ５抗体であるＡＤＣを指す。
本明細書で使用される通り、用語「二重特異性抗体」は、少なくとも２つの異なる抗原に結合することが可能である、例えばモノクローナルな、多くの場合ヒト又はヒト化抗体を指す。例えば、結合特異性の一方は造血幹細胞表面抗原、ＣＤ１１７（例えばＧＮＮＫ＋ＣＤ１１７）に向けられ得て、もう一方は異なる造血幹細胞表面抗原又はとりわけ細胞成長を強めるシグナル伝達経路に含まれる受容体又は受容体サブユニットなど別の細胞表面タンパク質と特異的に結合できる。
本明細書で使用される通り、用語「相補性決定領域」（ＣＤＲ）は、抗体の軽鎖及び重鎖可変ドメインの両方に見られる超可変領域を指す。可変ドメインのより高度に保存された部分はフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。抗体の超可変領域の境界をつくるアミノ酸位置は、文脈及び当技術分野に公知である種々の定義により変わり得る。可変ドメイン内のいくつかの位置は、これらの位置がある一式の基準では超可変領域内にあるとみなされ得る一方で、異なる一式の基準では超可変領域の外にあるとみなされるという点で、ハイブリッド超可変位置とみなされ得る。これらの位置の１つ以上は、拡張超可変領域にも見出され得る。本明細書に記載される抗体は、これらのハイブリッド超可変位置に修飾を含み得る。天然重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、それぞれ、主としてβ－シート配置をとる４つのフレームワーク領域を含み、それらは３つのＣＤＲにより接続され、ＣＤＲはβ－シート構造を連結し、場合によってその一部を形成するループを形成する。各鎖中のＣＤＲは、共にフレームワーク領域のすぐ近くに、ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４の順で保持されており、他の抗体鎖由来のＣＤＲと共に、抗体の標的結合部位の形成に寄与する（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ．，１９８７参照）。特定の実施形態において、免疫グロブリンアミノ酸残基のナンバリングは、特記されない限り、Ｋａｂａｔらの免疫グロブリンアミノ酸残基ナンバリングシステムに従って実施される（ＩＭＧＴ及びＣｈｏｔｈｉａを含むがこれらに限定されない任意の抗体ナンバリングスキームも利用され得る）。
本明細書で使用される通り、用語「前処置する」及び「前処置すること」は、患者が、移植、例えば造血幹細胞を含む移植の受入れの準備をするプロセスを指す。そのような手順は、造血幹細胞移植の生着を促進する（例えば、前処置手順及びその後の造血幹細胞移植の後で患者から単離された血液試料内の生存可能な造血幹細胞の量の持続的な増加から推測される。本明細書に記載される方法によると、患者は、ＣＤ１１７（例えば、ＧＮＮＫ＋ＣＤ１１７）などの造血幹細胞により発現される抗原に結合することが可能なＡＤＣの患者への投与により、造血幹細胞移植療法のために前処理され得る。造血幹細胞移植療法を必要とする患者への、ＨＳＣ抗原と結合することが可能なＡＤＣの投与は、例えば、内因性造血幹細胞を選択的に枯渇させて、それにより外因性の造血幹細胞移植により埋められる空隙をつくることにより造血幹細胞移植片の生着を促進し得る。
本明細書で使用される通り、用語「複合体」は、抗体又はその抗原結合断片などのある分子の反応性官能基を、本明細書に記載される細胞毒などの別の分子の適切に反応性がある官能基と化学結合させることにより形成される化合物を指す。複合体は、互いに結合する２分子の間にリンカーを含み得る。複合体の形成に使用され得るリンカーの例には、Ｄ－アミノ酸など、天然に存在する又は天然に存在しないアミノ酸を含むものなどのペプチド含有リンカーがある。リンカーは、本明細書に記載され当技術分野に公知である種々の戦略を利用して調製できる。その中の反応性成分に応じて、リンカーは、例えば、酵素加水分解、光分解、酸性条件下での加水分解、塩基性条件下での加水分解、酸化、ジスルフィド還元、求核開裂、又は有機金属開裂により切断され得る。（例えば、Ｌｅｒｉｃｈｅ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２０：５７１－５８２，２０１２参照）。注目すべきことに、用語「複合体」（化合物を指す場合）は、本明細書において互換的に「薬物複合体」、「抗体薬物複合体」、又は「ＡＤＣ」とも称される。
本明細書で使用される通り、用語「カップリング反応」は、各置換基に結合した分子断片を（例えば共有）結合させる化学部分を形成するように、互いとの反応に好適な２つ以上の置換基が反応する化学反応を指す。カップリング反応は、当技術分野に公知であるか又は本明細書に記載される細胞毒などの細胞毒である断片に結合した反応性置換基が、当技術分野に公知であるか又は本明細書に記載される抗体、その抗原結合断片、又はＣＤ１１７（ＧＮＮＫ＋ＣＤ１１７など）に結合する特異的抗ＣＤ１１７抗体などの抗体又はその抗原結合断片である断片に結合した好適に反応性がある置換基と反応するものを含む。好適に反応性がある置換基の例には、求核／求電子剤ペア（例えば、とりわけ、チオール／ハロアルキルペア、アミン／カルボニルペア、又はチオール／α，β－不飽和カルボニルペア）、ジエン／ジエノファイルペア（例えば、とりわけアジド／アルキンペア）などがある。カップリング反応には、非限定的に、チオールアルキル化、ヒドロキシルアルキル化、アミンアルキル化、アミン縮合、アミド化、エステル化、ジスルフィド形成、環化付加（例えば、とりわけ、［４＋２］ディールス・アルダー環化付加、［３＋２］フーズゲン環化付加）、求核芳香族置換、求電子芳香族置換、及び当技術分野に公知であるか又は本明細書に記載される他の反応性様式がある。
本明細書で使用される通り、「ＣＲＵ（競合的再構築単位（ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅ ｒｅｐｏｐｕｌａｔｉｎｇ ｕｎｉｔ）」は、インビボ移植の後で検出され得る長期生着幹細胞の尺度の単位を指す。
本明細書で使用される通り、用語「ドナー」は、１つ以上の細胞が、レシピエントへの細胞又はその子孫の投与の前に単離される元のヒト又は動物を指す。１つ以上の細胞は、例えば造血幹細胞の集団であり得る。
本明細書で使用される通り、用語「ダイアボディ」は、２つのポリペプチド鎖を含む二価抗体であって、各ポリペプチド鎖が、同じペプチド鎖上のＶＨドメインとＶＬドメインの分子内会合を可能にするには短過ぎるリンカー（例えば、５つのアミノ酸で構成されたリンカー）により結合されたＶＨ及びＶＬドメインを含む二価抗体を指す。この構成により、各ドメインは別のポリペプチド鎖上の相補的ドメインと対になりホモ二量体構造を形成することを強いられる。したがって、用語「トリアボディ」は、３つのペプチド鎖を含む三価抗体であって、そのそれぞれが、同じペプチド鎖内のＶＨドメインとＶＬドメインの分子内会合を可能にするにはきわめて短いリンカー（例えば、１～２つのアミノ酸で構成されているリンカー）により結合された１つのＶＨドメイン及び１つのＶＬドメインを含む三価抗体を指す。その天然の構造にフォールディングするために、このように構成されたペプチドは、典型的には、隣接するペプチド鎖のＶＨ及びＶＬドメインが互いに空間的に近くなるように三量体化する（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４－４８，１９９３参照）。
本明細書で使用される通り、「薬物抗体比」又は「ＤＡＲ」は、複合体の抗体に接続した薬物、例えばアマトキシンの数を指す。ＡＤＣのＤＡＲは１～８の範囲になり得るが、より高いロードも、抗体上の連結部位の数に応じて可能である。特定の実施形態において、複合体は、１、２、３、４、５、６、７、又は８のＤＡＲを有する。
本明細書で使用される通り、用語「内因性」は、天然でヒト患者などの特定の生物に見られる分子、細胞、組織、又は器官（例えば、造血幹細胞又は造血系統の細胞、例えば、巨核球、血小板（ｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｅ）、血小板（ｐｌａｔｅｌｅｔ）、赤血球、肥満細胞、骨髄芽球、好塩基球、好中球、好酸球、ミクログリア細胞、顆粒球、単球、破骨細胞、抗原提示細胞、マクロファージ、樹状細胞、ナチュラルキラー細胞、Ｔリンパ球、又はＢリンパ球など）などの物質を説明する。
本明細書で使用される通り、用語「生着可能性（ｅｎｇｒａｆｔｍｅｎｔ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ）」は、造血幹細胞及び始原細胞が天然で循環しているか、又は移植により提供されるかにかかわらずそのような細胞が組織を再構築する能力を指すように使用される。用語は、細胞の組織定着及び対象とする組織内の細胞のコロニー形成など、生着を取り巻き生着まで至る全事象を包含する。生着効率又は生着の割合は、当業者に公知である通り任意の臨床的に許容できるパラメーターを使用して評価又は定量化され得て、例えば、競合的再構築単位（ＣＲＵ）の推定；幹細胞が定着し、コロニー化し、若しくは生着した組織中のマーカーの組込み若しくは発現；又は対象の疾患増悪の進行の評価、造血幹細胞及び始原細胞の生存、若しくはレシピエントの生存を含み得る。生着は、移植後期間の間に末梢血中の白血球数を測定することによっても決定できる。生着は、骨髄穿刺液試料中のドナー細胞による骨髄細胞の回復を測定することによっても推定できる。
本明細書で使用される通り、用語「外因性」は、天然で、ヒト患者などの特定の生物に見られない分子、細胞、組織、又は器官（例えば、造血幹細胞又は造血系統の細胞、例えば、巨核球、血小板（ｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｅ）、血小板（ｐｌａｔｅｌｅｔ）、赤血球、肥満細胞、骨髄芽球、好塩基球、好中球、好酸球、ミクログリア細胞、顆粒球、単球、破骨細胞、抗原提示細胞、マクロファージ、樹状細胞、ナチュラルキラー細胞、Ｔリンパ球、又はＢリンパ球など）などの物質を説明する。外因性物質は、外部源から、生物に、又はそれから抽出された培養物に与えられるものを含む。
本明細書で使用される用語「Ｆｃ」、「Ｆｃ領域」、及び「Ｆｃドメイン」は、ＩｇＧ分子のパパイン消化により得られる結晶化可能な断片に関連するＩｇＧ抗体の一部分を指す。Ｆｃ領域は、ジスルフィド結合により連結している、ＩｇＧ分子の２つの重鎖のＣ末端半分を含む。それは、抗原結合活性は全く有さないが、炭水化物部分及び補体及びＦｃＲｎ受容体を含むＦｃ受容体の結合部位を含む。Ｆｃ領域は、第２定常ドメインＣＨ２（例えば、ＩｇＧ１のＥＵ位置２３１～３４０の残基）及び第３定常ドメインＣＨ３（例えば、ヒトＩｇＧ１のＥＵ位置３４１～４４７の残基）を含む。本明細書で使用される通り、Ｆｃ領域は、「低ヒンジ領域」（例えば、ＩｇＧ１のＥＵ位置２３３～２３９の残基）を含む。Ｆｃは、単離されているこの領域も、抗体、抗体断片、又はＦｃ融合タンパク質の状況におけるこの領域も指す。多型が、ＥＵ位置２７０、２７２、３１２、３１５、３５６、及び３５８を含むがこれらに限定されないＦｃドメインにおけるいくつかの位置で観察されており、そのため、本願に提示される配列と当技術分野に公知である配列の間にわずかな差異が存在し得る。そのため、「野生型ＩｇＧ Ｆｃドメイン」又は「ＷＴ ＩｇＧ Ｆｃドメイン」は、あらゆる天然に存在するＩｇＧ Ｆｃ領域（すなわち、あらゆるアレル）を指す。ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４の重鎖の配列は、いくつかの配列データベース、例えば、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベース（ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ）で、それぞれ、受入れ番号Ｐ０１８５７（ＩＧＨＧ１＿ＨＵＭＡＮ）、Ｐ０１８５９（ＩＧＨＧ２＿ＨＵＭＡＮ）、Ｐ０１８６０（ＩＧＨＧ３＿ＨＵＭＡＮ）、及びＰ０１８６１（ＩＧＨＧ１＿ＨＵＭＡＮ）で見られ得る。「ＷＴ」Ｆｃ領域の例は、配列番号：１２２（Ｆｃ領域を含む重鎖定常領域を提供する）に提供される。
本明細書で使用される用語「修飾されたＦｃ領域」又は「バリアントＦｃ領域」は、Ｆｃ領域内の任意の位置で導入された１つ以上のアミノ酸置換、欠失、挿入、又は改変を含むＩｇＧ Ｆｃドメインを指す。
用語「完全長抗体」及び「インタクト抗体」は、その実質的にインタクトな形態であり、且つ本明細書に定義される抗体断片でない抗体を指すように、本明細書で互換的に使用される。一実施形態において、本明細書に記載されるＡＤＣはインタクト抗体を含む。そのため、ＩｇＧ抗体では、インタクト抗体は、可変領域、定常領域、及びＦｃ領域をそれぞれ含む２つの重鎖並びに可変領域及び定常領域をそれぞれ含む２つの軽鎖を含む。より具体的には、インタクトＩｇＧは、軽鎖可変領域（ＶＬ）及び軽鎖定常領域（ＣＬ）をそれぞれ含む２つの軽鎖を含み、重鎖可変領域（ＶＨ）及び３つの重鎖定常領域（ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）をそれぞれ含む２つの重鎖を含む。ＣＨ２及びＣＨ３は、重鎖のＦｃ領域を表す。
本明細書で使用される通り、用語「フレームワーク領域」又は「ＦＷ領域」は、抗体又はその抗原結合断片のＣＤＲに隣接するアミノ酸残基を含む。ＦＷ領域残基は、例えば、とりわけ、ヒト抗体、ヒト化抗体、モノクローナル抗体、抗体断片、Ｆａｂ断片、単鎖抗体断片、ｓｃＦｖ断片、抗体ドメイン、及び二重特異性抗体中に存在し得る。
本明細書で使用される通り、用語「造血幹細胞」（「ＨＳＣ」）は、自己複製し、顆粒球（例えば、前骨髄球、好中球、好酸球、好塩基球）、赤血球（例えば、網赤血球、赤血球）、血小板（例えば、巨核芽球、血小板を産生する巨核球、血小板）、単球（例えば、単球、マクロファージ）、樹状細胞、ミクログリア、破骨細胞、及びリンパ球（例えば、ＮＫ細胞、Ｂ細胞、及びＴ細胞）を含むがこれらに限定されない様々な系統を含む成熟血液細胞に分化する能力を有する未熟な血液細胞を指す。そのような細胞はＣＤ３４＋細胞を含み得る。ＣＤ３４＋細胞は、ＣＤ３４細胞表面マーカーを発現する未熟な細胞である。ヒトにおいて、ＣＤ３４＋細胞は、上記で定義された幹細胞性を有する細胞の亜集団を含むと考えられている一方で、マウスにおいて、ＨＳＣはＣＤ３４－である。さらに、ＨＳＣは、長期再構築ＨＳＣ（ＬＴ－ＨＳＣ）及び短期再構築ＨＳＣ（ＳＴ－ＨＳＣ）も指す。ＬＴ－ＨＳＣ及びＳＴ－ＨＳＣは、機能的可能性及び細胞表面マーカー発現に基づいて分化している。例えば、ヒトＨＳＣは、ＣＤ３４＋、ＣＤ３８－、ＣＤ４５ＲＡ－、ＣＤ９０＋、ＣＤ４９Ｆ＋、及びｌｉｎ－（ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ１０、ＣＤ１１Ｂ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ５６、ＣＤ２３５Ａを含む成熟系統マーカー（ｍａｔｕｒｅ ｌｉｎｅａｇｅ ｍａｒｋｅｒ）陰性）である。マウスにおいて、骨髄ＬＴ－ＨＳＣは、ＣＤ３４－、ＳＣＡ－１＋、Ｃ－ｋｉｔ＋、ＣＤ１３５－、Ｓｌａｍｆｌ／ＣＤ１５０＋、ＣＤ４８－、及びｌｉｎ－（Ｔｅｒ１１９、ＣＤ１１ｂ、Ｇｒ１、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、Ｂ２２０、ＩＬ７ｒａを含む成熟系統マーカー陰性）である一方で、ＳＴ－ＨＳＣは、ＣＤ３４＋、ＳＣＡ－１＋、Ｃ－ｋｉｔ＋、ＣＤ１３５－、Ｓｌａｍｆｌ／ＣＤ１５０＋、及びｌｉｎ－（Ｔｅｒ１１９、ＣＤ１１ｂ、Ｇｒ１、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、Ｂ２２０、ＩＬ７ｒａを含む成熟系統マーカー陰性）である。さらに、ＳＴ－ＨＳＣは、恒常的な条件下でＬＴ－ＨＳＣより静止性が低く増殖性が高い。しかし、ＬＴ－ＨＳＣが、より高い自己複製可能性を有する（すなわち、それらは成人期の間にわたり生存し、次のレシピエントに連続して移植され得る）一方で、ＳＴ－ＨＳＣは限定された自己複製を有する（すなわち、それらは限定された期間のみ生存し、連続的移植可能性を有さない）。これらのＨＳＣのいずれも本明細書に記載される方法に使用できる。ＳＴ－ＨＳＣは、それらが高度に増殖性であり、そのため、より迅速に分化した子孫を生じさせることができるので、特に有用である。
本明細書で使用される通り、用語「造血幹細胞機能的可能性」は、１）多能性（顆粒球（例えば、前骨髄球、好中球、好酸球、好塩基球）、赤血球（例えば、網赤血球、赤血球）、血小板（例えば、巨核芽球、血小板を産生する巨核球、血小板）、単球（例えば、単球、マクロファージ）、樹状細胞、ミクログリア、破骨細胞、及びリンパ球（例えば、ＮＫ細胞、Ｂ細胞、及びＴ細胞）を含むがこれらに限定されない多数の異なる血液系統に分化する能力を指す、２）自己複製性（母細胞と等しい可能性を有する娘細胞を生じさせる造血幹細胞の能力を指し、さらに、この能力は、個人の生涯にわたって消耗せずに繰り返して起こり得る）、及び３）造血幹細胞又はその子孫が、移植レシピエントに再導入されてすぐに造血幹細胞ニッチに定着し、生産的で持続した造血を再確立する能力を含む造血幹細胞の機能的性質を指す。
本明細書で使用される通り、用語「ヒト抗体」は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列から誘導された可変領域及び定常領域を有する抗体を含むものとする。ヒト抗体は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列によりコードされていないアミノ酸残基を含み得る（例えば、インビトロのランダム若しくは部位特異的変異誘発により、又は遺伝子再構成の間に、又はインビボで体細胞変異により導入される変異）。しかし、用語「ヒト抗体」は、本明細書で使用される通り、マウスなどの別の哺乳動物種の生殖細胞系から誘導されたＣＤＲ配列が、ヒトフレームワーク配列にグラフトされた抗体を含むとは意図されない。ヒト抗体は、ヒト細胞中でも（例えば、組換え発現による）、機能的に再構成されたヒト免疫グロブリン（重鎖及び／又は軽鎖など）遺伝子を発現することが可能な非ヒト動物又は原核細胞若しくは真核細胞によっても製造できる。ヒト抗体が単鎖抗体である場合、それは、天然のヒト抗体には見られないリンカーペプチドを含み得る。例えば、Ｆｖは、重鎖の可変領域と軽鎖の可変領域を接続する、２～約８のグリシン又は他のアミノ酸残基などのリンカーペプチドを含み得る。そのようなリンカーペプチドはヒト由来であると考えられる。ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン配列から誘導された抗体ライブラリーを使用するファージディスプレイ法を含む、当技術分野に公知である種々の方法により製造できる。ヒト抗体は、機能的内因性免疫グロブリンを発現することは不可能であるがヒト免疫グロブリン遺伝子を発現することができる遺伝子導入マウスを使用しても製造できる（例えば、国際公開第１９９８／２４８９３号パンフレット；国際公開第１９９２／０１０４７号パンフレット；国際公開第１９９６／３４０９６号パンフレット；国際公開第１９９６／３３７３５号パンフレット；米国特許第５，４１３，９２３号明細書；米国特許第５，６２５，１２６号明細書；米国特許第５，６３３，４２５号明細書；米国特許第５，５６９，８２５号明細書；米国特許第５，６６１，０１６号明細書；米国特許第５，５４５，８０６号明細書；米国特許第５，８１４，３１８号明細書；米国特許第５，８８５，７９３号明細書；米国特許第５，９１６，７７１号明細書；及び米国特許第５，９３９，５９８号明細書参照）。
「ヒト化」抗体は、非ヒト免疫グロブリンから誘導された最低限の配列を含む抗体を指す。そのため、「ヒト化」形態の非ヒト（例えばネズミ）抗体は、非ヒト抗体から誘導された最低限の配列を含むキメラ抗体である。全て又は実質的に全てのＦＷ領域は、ヒト免疫グロブリン配列のものであり得る。ヒト化抗体は、典型的にはヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部分も含み得る。抗体ヒト化の方法は、当技術分野に公知であり、例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－７，１９８８；米国特許第５，５３０，１０１号明細書；米国特許第５，５８５，０８９号明細書；米国特許第５，６９３，７６１号明細書；米国特許第５，６９３，７６２号明細書；及び米国特許第６，１８０，３７０号明細書に記載されている。
本明細書で使用される通り、用語「抗体様タンパク質」は、標的分子に特異的に結合するように（例えばＩｇループの変異誘発により）操作されたタンパク質を指す。典型的には、そのような抗体様タンパク質は、タンパク質足場の両端に接続した少なくとも１つの可変ペプチドループを含む。この二重の構造制約は、抗体様タンパク質の結合親和性を、抗体のものに匹敵するレベルにまで大きく増加させる。可変ペプチドループの長さは、典型的には１０～２０個のアミノ酸からなる。足場タンパク質は、良好な溶解性を有する任意のタンパク質でよい。好ましくは、足場タンパク質は、小型の球状タンパク質である。抗体様タンパク質には、非限定的に、アフィボディ、アンチカリン、及び設計されたアンキリンリピートタンパク質（Ｂｉｎｚ ｅｔ ａｌ．，２００５）がある。抗体様タンパク質は、例えば大きなファージディスプレイライブラリーからのパニングにより変異体の大きなライブラリーから誘導でき、規則抗体に類似して単離できる。また、抗体様結合タンパク質は、球状のタンパク質中の表面露出残基のコンビナトリアル変異誘発により得られ得る。
本明細書で使用される通り、用語「Ｆａｂ」は、抗原結合領域を含むＩｇＧ断片に関するが、前記断片は、抗体の各重鎖及び軽鎖からの１つの定常ドメイン及び１つの可変ドメインから構成されている。
本明細書で使用される通り、用語「Ｆ（ａｂ）２」は、ジスルフィド結合により互いに結合している２つのＦａｂ断片からなるＩｇＧ断片に関する。
本明細書で使用される通り、用語「ｓｃＦｖ」は、通常セリン（Ｓ）及び／又はグリシン（Ｇ）残基を含む短いリンカーにより連結されている免疫グロブリンの重鎖及び軽鎖の可変領域の融合である単鎖断片に関する。このキメラ分子は、定常領域の除去及びリンカーペプチドの導入にもかかわらず元の免疫グロブリンの特異性を保持する。
本発明の一態様によると、本発明は、癌の治療における使用に関して記載される前記複合体又は医薬組成物に関する。
本発明の一態様によると、本発明は、Ｂリンパ球に関連する悪性腫瘍又はＢ細胞媒介性の自己免疫疾患の治療における使用に関して、とりわけ、非ホジキンリンパ腫、濾胞性リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病、関節リウマチ、多発血管炎性肉芽腫症、及び顕微鏡的多発血管炎並びに尋常性天疱瘡の治療における使用に関して記載される前記複合体又は医薬組成物に関する。
本明細書で使用される通り、造血幹細胞移植を「必要とする」患者は、１つ以上の血液細胞型に欠陥又は欠乏を示す患者、並びに幹細胞疾患、自己免疫疾患、癌、又は本明細書に記載される他の病変を有する患者を含む。造血幹細胞は、一般的に、１）多能性を示し、そのため、顆粒球（例えば、前骨髄球、好中球、好酸球、好塩基球）、赤血球（例えば、網赤血球、赤血球）、血小板（例えば、巨核芽球、血小板を産生する巨核球、血小板）、単球（例えば、単球、マクロファージ）、樹状細胞、ミクログリア、破骨細胞、及びリンパ球（例えば、ＮＫ細胞、Ｂ細胞、及びＴ細胞）を含むがこれらに限定されない多数の異なる血液系統に分化でき、２）自己複製性を示し、そのため、母細胞に等しい可能性を有する娘細胞を生じさせることができ、並びに３）移植レシピエントに再導入されると同時に、造血幹細胞ニッチに定着して、生産的で持続的な造血を確立する能力を示す。そのため、造血幹細胞は、欠陥があるか又は欠乏している細胞の集団をインビボで再構成するために、造血系統の１つ以上の細胞型に欠陥があるか又は欠乏している患者に投与され得る。例えば、患者は癌に罹患している可能性があり、欠乏は、癌細胞集団を、選択的又は非選択的に枯渇させる化学療法剤又は他の医薬品の投与により起こり得る。さらに又はその代わりに、患者は、鎌状細胞貧血、サラセミア、ファンコニ貧血、再生不良性貧血、及びウィスコット・アルドリッチ症候群などの異常ヘモグロブリン症（例えば、非悪性異常ヘモグロビン症）に罹患している可能性がある。対象は、アデノシンデアミナーゼ重症複合型免疫不全症（ＡＤＡ ＳＣＩＤ）、ＨＩＶ／ＡＩＤＳ、異染性白質ジストロフィー、ダイアモンド・ブラックファン貧血、及びシュワッハマン・ダイアモンド症候群を患っている者であり得る。対象は、遺伝性血液疾患（例えば、鎌状細胞貧血）又は自己免疫疾患を有し得るか、又は罹患している可能性がある。さらに又はその代わりに、対象は、神経芽細胞腫又は血液系癌などの悪性腫瘍を有し得るか、又は罹患している可能性がある。例えば、対象は、白血病、リンパ腫、又は骨髄腫を有し得る。いくつかの実施形態において、対象は、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、又は非ホジキンリンパ腫を有する。いくつかの実施形態において、対象は骨髄異形成症候群を有する。いくつかの実施形態において、対象は、強皮症、多発性硬化症、潰瘍性大腸炎、クローン病、１型糖尿病、又は本明細書に記載される別の自己免疫病変などの自己免疫疾患を有する。いくつかの実施形態において、対象はキメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲＴ）療法を必要としている。いくつかの実施形態において、対象は、代謝性蓄積症を有するか、又は他の面で罹患している。対象は、糖原病、ムコ多糖症、ゴーシェ病、ハーラー病、スフィンゴ脂質蓄積症、異染性白質ジストロフィー、又は本明細書に開示される治療及び療法から利益を得る可能性があるあらゆる他の疾患若しくは障害であって、非限定的に、重症複合型免疫不全症、ウィスコット・アルドリッチ（Ｗｉｓｃｏｔｔ－Ａｌｄｒｉｃｈ）症候群、高免疫グロブリンＭ（ＩｇＭ）症候群、チェディアック・東病、遺伝性リンパ組織球症、大理石骨病、骨形成不全症、蓄積症、サラセミアメジャー、鎌状赤血球症、全身性強皮症、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、若年性関節リウマチ及び“Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｎｏｎ－Ｍａｌｉｇｎａｎｔ Ｄｉｓｅａｓｅ，”ＡＳＨ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ Ｂｏｏｋ，１：３１９－３３８（２０００）に記載されている疾患又は障害（その開示は、造血幹細胞移植療法の投与により治療され得る病変に関するので、参照により全体として本明細書に組み込まれる）を含む他の疾患若しくは障害からなる群から選択される代謝疾患を患い得るか、又は他の面で罹患し得る。さらに又はその代わりに、造血幹細胞移植を「必要とする」患者は、上記病変の１つを患っているか、又は患っていないが、それでもなお、巨核球、血小板（ｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｅ）、血小板（ｐｌａｔｅｌｅｔ）、赤血球、肥満細胞、骨髄芽球、好塩基球、好中球、好酸球、ミクログリア、顆粒球、単球、破骨細胞、抗原提示細胞、マクロファージ、樹状細胞、ナチュラルキラー細胞、Ｔリンパ球、及びＢリンパ球など、低下したレベルの（例えば、他の点で健康な対象のものと比べて）造血系統内の１つ以上の内因性細胞型を示す者であり得る。当業者は、上記細胞型の１つ以上、又は他の血液細胞型のレベルが、他の点で健康な対象を基準として低下しているかどうかを、例えば、当技術分野に公知である他の手順のうちでもフローサイトメトリー及び蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）法により、容易に決定できる。
本明細書で使用される通り、「中立抗体（ｎｅｕｔｒａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ）」は、受容体のリガンドへの結合又は酵素と基質の相互作用を含む、特定又は明示された標的（例えばＣＤ１１７）の活性を著しく中和し、遮断し、阻害し、抑止し、減少させ、又は干渉することが可能でない抗体又はその抗原結合断片を指す。一実施形態において、中立抗ＣＤ１１７抗体又はその断片は、ＳＣＦ依存性細胞増殖を実質的に阻害せず、ＣＤ１１７へのＳＣＦ結合を交差ブロックしない抗ＣＤ１１７抗体である。中立抗体の例は、Ａｂ６７（又はＡｂ６７の結合領域を有する抗体）である。対照的に、「アンタゴニスト」抗ＣＤ１１７抗体は、ＳＣＦ依存性増殖を阻害し、ＣＤ１１７へのＳＣＦ結合を交差ブロックすることが可能である。アンタゴニスト抗体の例は、Ａｂ５５（又はＡｂ５５の結合領域を有する抗体）である。
本明細書で使用される通り、用語「レシピエント」は、造血幹細胞の集団を含む移植などの移植を受け取る患者を指す。レシピエントに投与される移植された細胞は、例えば、自己由来細胞でも、同系細胞でも、同種異系細胞でもよい。
本明細書で使用される通り、用語「試料」は、対象から採取された検体（例えば、血液、血液成分（例えば、血清又は血漿）、尿、唾液、羊水、脳脊髄液、組織（例えば、胎盤又は皮膚）、膵液、絨毛膜絨毛試料、及び細胞）を指す。
本明細書で使用される通り、用語「ｓｃＦｖ」は、抗体からの重鎖及び軽鎖の可変ドメインが結合して１つの鎖を形成した単鎖Ｆｖ抗体を指す。ｓｃＦｖ断片は、リンカーにより分離された抗体軽鎖の可変領域（ＶＬ）（例えば、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及び／又はＣＤＲ－Ｌ３）及び抗体重鎖の可変領域（ＶＨ）（例えば、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、及び／又はＣＤＲ－Ｈ３）を含む単一のポリペプチド鎖を含む。ｓｃＦｖ断片のＶＬ領域とＶＨ領域を結合するリンカーは、タンパク質構成アミノ酸で構成されたペプチドリンカーであり得る。ｓｃＦｖ断片の溶解度を増大させ（例えば、ポリエチレングリコール含有リンカー又は反復するグリシン及びセリン残基を含むポリペプチドなどの親水性リンカー）、分子の生物物理的安定性を改善し（例えば、分子内又は分子間ジスルフィド結合を形成するシステイン残基を含むリンカー）、又はｓｃＦｖ断片の免疫原性を弱める（例えば、グリコシル化部位を含むリンカー）ために、タンパク質分解に対するｓｃＦｖ断片の耐性を増加させるように（例えば、Ｄ－アミノ酸を含むリンカー）代わりのリンカーを使用できる。本明細書に記載されるｓｃＦｖ分子の可変領域が、それらが誘導された元の抗体分子からアミノ酸配列の点で変わるように修飾され得ることも当業者により理解されるだろう。例えば、保存的置換又はアミノ酸残基での変更をもたらすヌクレオチド又はアミノ酸置換（例えば、ＣＤＲ及び／又はフレームワーク残基中）は、ｓｃＦｖが、対応する抗体により認識される抗原に結合する能力を保存又は増大させるためになされ得る。
本明細書で使用される用語「特異的結合」又は「特異的に結合する」は、抗体が、タンパク質全般ではなく特定のタンパク質構造（エピトープ）を認識して結合する能力を指す。抗体がエピトープ「Ａ」に特異的である場合、標識された「Ａ」と抗体を含む反応におけるエピトープＡ（又は遊離の未標識Ａ）を含む分子の存在は、抗体に結合した標識されたＡの量を減らすだろう。例としては、抗体が、標識されている場合、対応する未標識の抗体によりその標的から競合により離され得る場合、抗体は、標的に「特異的に結合する」。一実施形態において、抗体が、少なくとも約１０－４Ｍ、１０－５Ｍ、１０－６Ｍ、１０－７Ｍ、１０－８Ｍ、１０－９Ｍ、１０－１０Ｍ、１０－１１Ｍ、１０－１２Ｍ、又はそれ未満（未満は、１０－１２未満の数字、例えば１０－１３を意味する）の標的に対するＫＤを有する場合、抗体は、標的、例えば、ＣＤ１１７、ＣＤ４５、ＣＤ２、ＣＤ５、ＣＤ１３７、ＣＤ１３４、又はＣＤ２５２に特異的に結合する。一実施形態において、本明細書で使用される用語「ＣＤ１１７への特異的結合」又は「ＣＤ１１７に特異的に結合する」は、ＣＤ１１７に結合し、表面プラズモン共鳴により測定して１．０×１０－７Ｍ以下の解離定数（ＫＤ）を有する抗体を指す。一実施形態において、ＫＤ（Ｍ）は、標準的なバイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）に従って決定される。一実施形態において、Ｋｏｆｆ（１／ｓ）は、標準的なバイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）に従って決定される。しかし、抗体が、配列の面で関連する２つ以上の抗原に特異的に結合することが可能な場合もあることが理解されるものとする。例えば、一実施形態において、抗体は、ＣＤ１１７、ＣＤ４５、ＣＤ２、ＣＤ５、ＣＤ１３７、ＣＤ１３４、又はＣＤ２５２のヒトと非ヒト（例えば、マウス又は非ヒト霊長類）のオルソログの両方に特異的に結合し得る。
本明細書で使用される通り、用語「対象」及び「患者」は、本明細書に記載される特定の疾患又は病態の治療を受けるヒトなどの生物を指す。例えば、ヒト患者などの患者は、外因性造血幹細胞の生着を促進するために造血幹細胞移植療法の前に治療を受け得る。
本明細書で使用される通り、句「実質的に血中から除去された」は、患者から単離された血液試料中の治療剤、例えば、アマトキシンを含むＡＤＣの濃度が、治療剤が従来の手段により検出可能でない（例えば、治療剤が、治療剤の検出に使用される装置又はアッセイのノイズ閾値より上で検出可能でない）ようである場合の、治療剤の患者への投与後の時点を指す。当技術分野に公知であるか又は本明細書に記載されるＥＬＩＳＡ系検出アッセイなど、当技術分野に公知である種々の技法を使用して、抗体又は抗体断片を検出できる。抗体又は抗体断片の検出に使用できる追加のアッセイには、当技術分野に公知であるものの中でも、免疫沈降法技法及びイムノブロットアッセイがある。
本明細書で使用される通り、句「幹細胞疾患」は、対象の標的組織を前処置することにより、及び／又は標的組織中の内因性幹細胞集団を除去することにより（例えば、内因性造血幹細胞又は始原細胞集団を対象の骨髄組織から除去する）、及び／又は対象の標的組織中に幹細胞を生着若しくは移植することにより治療又は治癒され得る、あらゆる疾患、障害、又は病態を広く指す。例えば、Ｉ型糖尿病は造血幹細胞移植により治癒され得ることが示され、本明細書に記載される組成物及び方法に従って前処置することから利益を得ることができる。本明細書に記載される組成物及び方法を使用して治療できる追加の疾患には、非限定的に、鎌状細胞貧血、サラセミア、ファンコニ貧血、再生不良性貧血、ウィスコット・アルドリッチ症候群、ＡＤＡ ＳＣＩＤ、ＨＩＶ／ＡＩＤＳ、異染性白質ジストロフィー、ダイアモンド・ブラックファン貧血、及びシュワッハマン・ダイアモンド（Ｓｃｈｗａｃｈｍａｎ－Ｄｉａｍｏｎｄ）症候群がある。本明細書に記載される患者前処置及び／又は造血幹細胞移植方法を使用して治療できる追加の疾患には、遺伝性血液疾患（例えば、鎌状細胞貧血）並びに強皮症、多発性硬化症、潰瘍性大腸炎、及びクローン病などの自己免疫疾患がある。本明細書に記載される前処置及び／又は移植方法を使用して治療できる追加の疾患には、神経芽細胞腫又は白血病、リンパ腫、及び骨髄腫などの血液系癌などの悪性腫瘍がある。例えば、癌は、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、又は非ホジキンリンパ腫であり得る。本明細書に記載される前処置及び／又は移植方法を使用して治療可能な追加の疾患には骨髄異形成症候群がある。いくつかの実施形態において、対象は、代謝性蓄積症を有するか、又は他の面で罹患している。例えば、対象は、糖原病、ムコ多糖症、ゴーシェ病、ハーラー病、スフィンゴ脂質蓄積症、異染性白質ジストロフィー、又は本明細書に開示される治療及び療法から利益を得ることがあるあらゆる他の疾患又は障害であって、非限定的に、重症複合型免疫不全症、ウィスコット・アルドリッチ症候群、高免疫グロブリンＭ（ＩｇＭ）症候群、チェディアック・東病、遺伝性リンパ組織球症、大理石骨病、骨形成不全症、蓄積症、サラセミアメジャー、鎌状赤血球症、全身性強皮症、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、若年性関節リウマチ及び“Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｎｏｎ－Ｍａｌｉｇｎａｎｔ Ｄｉｓｅａｓｅ，”ＡＳＨ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ Ｂｏｏｋ，１：３１９－３３８（２０００）（その開示は、造血幹細胞移植療法の投与により治療され得る病理に関するので、参照により全体として本明細書に組み込まれる）に記載されている疾患又は障害を含む他の疾患又は障害からなる群から選択される代謝疾患を患い得るか、又は他の面で罹患し得る。
本明細書で使用される通り、用語「トランスフェクション」は、電気穿孔、リポフェクション、リン酸カルシウム沈殿、ＤＥＡＥ－デキストラントランスフェクションなど、原核生物又は真核生物の宿主細胞への外因性のＤＮＡの導入に通常使用される多種多様な技法のいずれも指す。
本明細書で使用される通り、用語「治療する」又は「治療」は、疾患症状の重症度及び／又は頻度を減少させること、疾患症状及び／又は前記症状の基礎病因をなくすこと、疾患症状及び／又はそれらの基礎病因の頻度又は可能性を減少させること、並びに疾患により直接又は間接に起こされる損傷を改善又は直すことを指す。有益な又は所望の臨床結果には、本明細書に記載される抗体前処置療法及びその後の造血幹細胞移植療法の後の、患者における外因性の造血細胞の生着を促進することがあるが、これに限定されない。追加の有益な結果には、前処置療法及び外因性の造血幹細胞移植片の患者へのその後の投与の後の、造血幹細胞移植を必要とする患者における造血幹細胞の細胞数又は相対濃度の増加がある。本明細書に記載される療法の有益な結果は、前処置療法及びその後の造血幹細胞移植療法の後の、巨核球、血小板（ｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｅ）、血小板（ｐｌａｔｅｌｅｔ）、赤血球、肥満細胞、骨髄芽球、好塩基球、好中球、好酸球、ミクログリア細胞、顆粒球、単球、破骨細胞、抗原提示細胞、マクロファージ、樹状細胞、ナチュラルキラー細胞、Ｔリンパ球、又はＢリンパ球などの造血系統の１種以上の細胞の細胞数又は相対濃度の増加も含み得る。追加の有益な結果は、癌細胞（例えばＣＤ１１７＋白血病細胞）又は自己免疫細胞（例えば、自己抗原と交差反応するＴ細胞受容体を発現するＣＤ１１７＋Ｔ細胞などＣＤ１１７＋自己免疫リンパ球）の集団など、疾患を起こす細胞集団の量の減少も含み得る。本発明の方法が疾患を予防することを対象にする限り、用語「予防する」が、病態が完全に阻止されることを要求しないことが理解される。むしろ、本明細書で使用される通り、予防することという用語は、本発明の化合物の投与が疾患の発症の前に起こり得るように疾患になりやすい集団を当業者が特定する能力を指す。この用語は、病態が完全に回避されることを意味しない。
本明細書で使用される通り、用語「バリアント」及び「誘導体」は互換的に使用され、本明細書に記載される化合物、ペプチド、タンパク質、又は他の物質の天然の、合成の、及び半合成のアナログを指す。本明細書に記載される化合物、ペプチド、タンパク質、又は他の物質のバリアント又は誘導体は、元の物質の生物学的活性を保持することも、向上させることもある。
本明細書で使用される通り、用語「ベクター」は、プラスミド、ＤＮＡベクター、プラスミド、ＲＮＡベクター、ウイルス、又は他の好適なレプリコンなどの核酸ベクターを含む。本明細書に記載される発現ベクターは、ポリヌクレオチド配列並びに、例えば、タンパク質の発現及び／又はこれらのポリヌクレオチド配列の哺乳動物細胞のゲノムへの一体化に使用される追加の配列因子を含み得る。本発明の抗体及び抗体断片の発現に使用できる特定のベクターには、遺伝子転写を指示するプロモーター及びエンハンサー領域などの制御配列を含むプラスミドがある。抗体及び抗体断片の発現のための他の有用なベクターは、これらの遺伝子の翻訳の速度を増大させるか、又は遺伝子転写から生じるｍＲＮＡの安定性若しくは核外搬出を改善するポリヌクレオチド配列を含む。これらの配列因子は、発現ベクター上に運ばれる遺伝子の効率よい転写を指示するために、例えば、５’及び３’非翻訳領域並びにポリアデニル化シグナル部位を含み得る。本明細書に記載される発現ベクターは、そのようなベクターを含む細胞の選択のためのマーカーをコードするポリヌクレオチドも含み得る。好適なマーカーの例には、アンピシリン、クロラムフェニコール、カナマイシン、及びノーセオスリシンなどの抗生物質に対する耐性をコードする遺伝子がある。
抗体薬物複合体（ＡＤＣ）
本明細書に記載される抗体及びその抗原結合断片は、細胞傷害性分子（すなわち細胞毒）にコンジュゲート（連結）されて、抗体薬物複合体（ＡＤＣ）を形成し得る。本明細書で使用される通り、用語「細胞毒」、「細胞傷害性部分」、及び「薬物」は互換的に使用される。
特に、本明細書に開示されるＡＤＣは、アマトキシン、例えば式（Ｖ）に説明されるアマトキシンにコンジュゲートされた抗体（その抗原結合断片を含む）を含み、ここで、細胞傷害性部分は、抗体にコンジュゲートされていない場合、細胞傷害作用又は細胞増殖抑制作用を有する。種々の実施形態において、細胞傷害性部分は、複合体内に結合されている場合は減少した細胞傷害性を示すか、又は細胞傷害性を全く示さないが、リンカーからの切断後に細胞傷害性を再開する。種々の実施形態において、細胞傷害性部分は、リンカーからの切断なしに細胞傷害性を維持する。いくつかの実施形態において、細胞傷害性分子は、抗体又はその断片の細胞取込みの後で、細胞毒がその細胞内標的にアクセスして、例えば造血細胞の死を媒介できるように、本明細書に開示される細胞内部移行抗体又はその抗原結合断片にコンジュゲートされる。したがって、本開示のＡＤＣは、一般式
Ａｂ－（Ｚ－Ｌ－Ｃｙ）ｎ
のものであり得る（式中、抗体又はその抗原結合断片（Ａｂ）は、化学部分（Ｚ）を介して、細胞傷害性部分（Ｃｙ）に至るリンカー（Ｌ）にコンジュゲート（共有結合）されている。
したがって、抗体又はその抗原結合断片は、整数ｎにより示される通りいくつかの薬物部分にコンジュゲートされ得るが、ｎは、抗体あたりの細胞毒の平均数を表し、例えば、約１～約２０の範囲であり得る。任意の数、例えば、１、２、３、４、５、６、７、又は８の細胞毒が抗体にコンジュゲートされ得る。いくつかの実施形態において、ｎは１～４である。いくつかの実施形態において、ｎは１である。コンジュゲーション反応からのＡＤＣの調製における抗体あたりの薬物部分の平均数は、質量分析法、ＥＬＩＳＡアッセイ、及びＨＰＬＣなどの従来の手段により特性化され得る。ｎで表されるＡＤＣの定量的な分布も決定され得る。いくつかの場合に、他の薬物負荷を有するＡＤＣからｎが特定の値である均質なＡＤＣの分離、精製、及び特性化が、逆相ＨＰＬＣ又は電気泳動などの手段から達成され得る。
いくつかの抗体薬物複合体では、ｎは、抗体上の接続部位の数により限定され得る。例えば、接続がシステインチオールである場合、抗体は、１つのみ若しくは数個のシステインチオール基を有し得るか、又は１つのみ若しくは数個の充分に反応性があるチオール基を有して、それを介してリンカーが接続され得る。一般的に、抗体は、薬物部分に連結され得る遊離していて反応性があるシステインチオール基を多くは含まない；主として、抗体中のシステインチオール残基はジスルフィドブリッジとして存在する。特定の実施形態において、抗体は、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）又はトリカルボニルエチルホスフィン（ＴＣＥＰ）などの還元剤により、部分的又は全体的還元条件下で還元されて、反応性のシステインチオール基が生じ得る。特定の実施形態において、より高い薬物負荷、例えば５を超えるｎは、特定の抗体薬物複合体の凝集、不溶性、毒性、又は細胞透過性の喪失を起こし得る。
特定の実施形態において、コンジュゲーション反応の間、理論的最大より少ない薬物部分が抗体にコンジュゲートされる。抗体は、例えば、以下で記載される通り、薬物－リンカー中間体又はリンカー試薬と反応しないリジン残基を含み得る。最も反応性があるリジン基のみが、アミン－反応性リンカー試薬と反応し得る。特定の実施形態において、抗体は、変性条件に付されて、リジン又はシステインなどの反応性求核基が現わされる。
ＡＤＣの負荷（薬物／抗体比）は、いろいろな方法で、例えば、（ｉ）抗体に対して、モル過剰の薬物－リンカー中間体又はリンカー試薬を制限することにより、（ｉｉ）コンジュゲーション反応時間又は温度を制限することにより、（ｉｉｉ）システインチオール修飾の部分的又は限定的な還元条件、（ｉｖ）組換え技法により、システイン残基の数及び位置がリンカー－薬物接続の数及び／又は位置の制御のために調節されるように抗体のアミノ酸配列を操作することにより制御され得る。
細胞毒
本明細書に記載される抗体薬物複合体の細胞毒はアマトキシン又はその誘導体である。アマトキシンは、ＲＮＡポリメラーゼＩＩの強力で選択的な阻害剤であり、それにより、作用された細胞の転写及びタンパク質生合成も阻害する。本明細書で使用される通り、用語「アマトキシン」は、アマニタ・ファロイデス（Ａｍａｎｉｔａ ｐｈａｌｌｏｉｄｅｓ）キノコにより産生されるアマトキシンファミリーのペプチドの一員又はＲＮＡポリメラーゼＩＩ活性を阻害することが可能なそのバリアント若しくは誘導体などのそのバリアント若しくは誘導体を指す。アマトキシンは、トリプタチオニンを形成するＣｙｓ硫黄とＴｒｐインドール環の２位の間の接続により架橋された、基本配列Ｉｌｅ－Ｔｒｐ－Ｇｌｙ－Ｉｌｅ－Ｇｌｙ－Ｃｙｓ－Ａｓｎ（又はＡｓｐ）－Ｐｒｏを有する固定された二環式オクタペプチドである。特定のアマトキシンによって、特定のアミノ酸置換が、翻訳後修飾により変化する（すなわちＰｒｏからＨｙｐへ；ＩｌｅからＤＨＩｌｅへ；及びＴｒｐから５－ＯＨ Ｔｒｐへ）。
アマトキシンは、種々のキノコ種（例えば、アマニタ・ファロイデス（Ａｍａｎｉｔａ ｐｈａｌｌｏｉｄｅｓ）、ガレリナ・マルギナタ（Ｇａｌｅｒｉｎａ ｍａｒｇｉｎａｔａ）、レピオタ・ブルニオインカナタ（Ｌｅｐｉｏｔａ ｂｒｕｎｎｅｏ－ｉｎｃａｒｎａｔａ））から単離され得るか、又は半合成若しくは合成により調製され得る。異なるキノコ種は、様々な量の異なるアマトキシンファミリーメンバーを含む。このファミリーのメンバー、α－アマニチンは、真核生物のＲＮＡポリメラーゼＩＩの、及び程度は低いがＲＮＡポリメラーゼＩＩＩのきわめて強力な阻害剤であり、それにより転写及びタンパク質生合成を阻害することが知られている。Ｗｉｅｌａｎｄ，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐｔ．Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｓ．１９８３，２２（３）：２５７－２７６。
種々の天然に存在するアマトキシンの構造は、式（ＩＩＩ）及び添付の表１に表され、例えば、参照により全体として本明細書に組み込まれているＺａｎｏｔｔｉ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｓ．３０，１９８７，４５０－４５９に開示されている。
Figure 2022530026000016
 。
＜表１＞
Figure 2022530026000017
ヒト幹細胞又はＴ細胞の細胞表面上に発現された抗原を認識して結合する抗体又はその抗原結合断片は、例えば、α－アマニチンなどのアマトキシン並びに共有結合のコンジュゲーションに使用できる共有結合リンカーに関するので、例えば、それぞれの開示が参照により本明細書に組み込まれている米国特許第９，２３３，１７３号明細書及び米国特許第９，３９９，６８１号明細書及び米国特許出願公開第２０１６／００８９４５０号明細書、米国特許出願公開第２０１６／０００２２９８号明細書、米国特許出願公開第２０１５／０２１８２２０号明細書、米国特許出願公開第２０１４／０２９４８６５号明細書に記載される通り、α－アマニチン又はその誘導体などのアマトキシンにコンジュゲートされ得る。アマトキシンコンジュゲーションの例示的な方法及びそのようなプロセスに有用なリンカーは本明細書に記載されている。組成物及び方法に従って、抗体又は抗原結合断片へのコンジュゲーションに有用な例示的なリンカー含有アマトキシンも本明細書に記載される。
本明細書で使用される通り、用語「アマトキシン誘導体」又は「アマニチン誘導体」は、α－アマニチン、β－アマニチン、γ－アマニチン、ε－アマニチン、アマニン、アマニンアミド、アマヌリン、アマヌリン酸、又はプロアマヌリンなど、天然に存在するアマトキシンに対して１つ以上の位置で化学修飾されたアマトキシンを指す。各場合において、誘導体は、天然に存在する化合物の化学修飾により得られ得るか（「半合成」）、又は完全に合成の源から得られ得る。種々のアマトキシン誘導体への合成経路は、例えば、そのそれぞれがアマトキシンを調製し誘導体化する合成方法に関して全体として参照により本明細書に組み込まれている米国特許第９，６７６，７０２号明細書及びＰｅｒｒｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．．２０１８，１４０，ｐ．６５１３－６５１７に開示されている。
いくつかの実施形態において、アマトキシン又はその誘導体は、式（Ｖ）：
Figure 2022530026000018
 又はそのエナンチオマー若しくはジアステレオマーにより表される。
いくつかの実施形態において、ＱはＳである。いくつかの実施形態において、Ｑはスルホキシド基である。
一実施形態において、アマトキシン又はその誘導体は、式（Ｖａ）：
Figure 2022530026000019
 により表される。
いくつかの実施形態において、ＱはＳである。いくつかの実施形態において、Ｑはスルホキシド基である。
この特定の実施形態において、マトキシン又はその誘導体は、式（Ｖｂ）：
Figure 2022530026000020
 により表される。
いくつかの実施形態において、ＱはＳである。いくつかの実施形態において、Ｑはスルホキシド基である。
本明細書に記載される組成物及び方法に従って抗体又はその抗原結合断片へのコンジュゲーションに使用され得る追加のアマトキシンは、例えば、その開示が参照により本明細書にその全体として組み込まれる国際公開第２０１６／１４２０４９号パンフレット；国際公開第２０１６／０７１８５６号パンフレット；国際公開第２０１７／１４９０７７号パンフレット；国際公開第２０１８／１１５４６６号パンフレット；及び国際公開第２０１７／０４６６５８号パンフレットに記載されている。
リンカー
本明細書で使用される用語「リンカー」は、抗体又はその断片（Ａｂ）を、本明細書に記載のアマトキシン、例えば、式（ＩＶ）、（ＩＶａ）、（ＩＶｂ）、（Ｖ）、（Ｖａ）、又は（Ｖｂ）のアマトキシンに共有結合させて抗体薬物複合体（ＡＤＣ）を形成する、共有結合又は原子の鎖を含む二価化学部分を意味する。
抗体とアマトキシンの共有結合には、リンカーが２つの反応性官能基を有すること、すなわち反応性の意味で二価性が必要である。ペプチド、核酸、薬物、毒素、抗体、ハプテン、及びレポーター基など、２つ以上の機能性又は生物活性のある部分を接続するのに有用な二価のリンカー試薬は公知であり、方法が、それらの得られるコンジュゲートと共に記載されてきた（Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｇ．Ｔ．（１９９６）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ；Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ：Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐ．２３４－２４２）。
したがって、本リンカーは、２つの反応性末端を有し、１つは抗体へのコンジュゲーション用で、もう１つはアマトキシンへのコンジュゲーション用である。リンカーの抗体コンジュゲーション反応性末端（反応性部分、本明細書でＺ’と定義される）は、典型的には、例えば、抗体上のシステインチオール又はリジンアミン基を介して抗体へのコンジュゲーションが可能である化学部分であり、典型的には、マイケル受容体（マレイミド中など）などのチオール－反応性基、クロロ、ブロモ、ヨード、若しくはＲ－スルファニル基などの脱離基、又はカルボキシル基などのアミン－反応性基も同様である。抗体へのリンカーのコンジュゲーションは、以下でより完全に説明される。
リンカーのアマトキシンコンジュゲーション反応性末端は、典型的には、アマトキシン分子内の反応性置換基との結合の形成により、アマトキシンへのコンジュゲーションが可能である化学部分である。非限定的な例には、例えば、アマトキシン上の塩基性アミン若しくはカルボキシル基との、それぞれリンカー上のカルボキシル若しくは塩基性アミン基によるアミド結合の形成、又は例えば、リンカー上の脱離基によるアマトキシン上のＯＨ基のアルキル化によるエーテルなどの形成がある。
用語「リンカー」が、コンジュゲートされた形態のリンカーを記載する際に使用される場合、反応性末端の一方又は両方が、リンカー及び／又はアマトキシンの間、並びにリンカー及び／又は抗体若しくはその抗原結合断片の間の結合の形成のため、存在しないか（以下に記載される通り化学部分Ｚに転化した反応性部分Ｚ’など）又は不完全である（カルボン酸のカルボニルのみであるなど）。そのようなコンジュゲーション反応は、以下にさらに説明される。
種々のリンカーを使用して、記載される抗体、抗原結合断片、及びリガンドを、細胞傷害性分子にコンジュゲートできる。一般的に、本開示に好適なリンカーは、循環中に実質的に安定であり得るが、標的細胞内又はすぐ近くへのアマトキシンの放出を可能にする。いくつかの実施形態において、本開示に好適な特定のリンカーは、「切断性」又は「非切断性」として分類され得る。一般的に、切断性リンカーは、生理学的環境に反応して切断される１つ以上の官能基を含む。例えば、切断性リンカーは、細胞内酵素（例えば、カテプシンＢ）の存在下で分解する酵素基質（例えばバリン－アラニン）、細胞区画の酸性環境中で分解する酸切断性基（例えばヒドロゾン（ｈｙｄｒｏｚｏｎｅ））、又は細胞内還元性環境中で分解する還元性基（例えばジスルフィド）を含み得る。対照的に、一般的に、非切断性リンカーは、標的細胞内部のＡＤＣの抗体部分の分解（例えばリソソーム分解）の間にＡＤＣから放出される。
非切断性リンカー
本明細書での使用に好適な非切断性リンカーは、結合、－（Ｃ＝Ｏ）－、Ｃ１～Ｃ６アルキレン、Ｃ１～Ｃ６ヘテロアルキレン、Ｃ２～Ｃ６アルケニレン、Ｃ２～Ｃ６ヘテロアルケニレン、Ｃ２～Ｃ６アルキニレン、Ｃ２～Ｃ６ヘテロアルキニレン、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキレン、ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、ヘテロアリーレン、及びこれらの組合せから選択される１つ以上の基をさらに含み得るが、そのそれぞれは、任意選択で置換され得るか、及び／又は１つ以上の炭素原子の代わりに１つ以上のヘテロ原子（例えば、Ｓ、Ｎ、又はＯ）を含み得る。そのような基の非限定的な例には、（ＣＨ２）ｐ、（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｐ、及びポリエチレングリコール（ＰＥＧ；（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｐ）単位（式中、ｐは、各場合で独立に選択される１～６の整数である）がある。
いくつかの実施形態において、リンカーＬは、結合、－（Ｃ＝Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－基、－ＯＣ（Ｏ）ＮＨ－基、Ｃ１～Ｃ６アルキレン、Ｃ１～Ｃ６ヘテロアルキレン、Ｃ２～Ｃ６アルケニレン、Ｃ２～Ｃ６ヘテロアルケニレン、Ｃ２～Ｃ６アルキニレン、Ｃ２～Ｃ６ヘテロアルキニレン、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキレン、ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、ヘテロアリーレン、ｐが１～６の整数である－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｐ－基、又は溶解度向上基の１つ以上を含み；
ここで、各Ｃ１～Ｃ６アルキレン、Ｃ１～Ｃ６ヘテロアルキレン、Ｃ２～Ｃ６アルケニレン、Ｃ２～Ｃ６ヘテロアルケニレン、Ｃ２～Ｃ６アルキニレン、Ｃ２～Ｃ６ヘテロアルキニレン、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキレン、ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、又はヘテロアリーレンは、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルカリール、アルキルヘテロアリール、アミノ、アンモニウム、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニル、ウレイド、カルバマート、アリール、ヘテロアリール、スルフィニル、スルホニル、ヒドロキシル、アルコキシ、スルファニル、ハロゲン、カルボキシ、トリハロメチル、シアノ、ヒドロキシ、メルカプト、及びニトロからなる群から各場合で独立に選択される１～５つの置換基により任意選択で置換され得て；
いくつかの実施形態において、各Ｃ１～Ｃ６アルキレン、Ｃ１～Ｃ６ヘテロアルキレン、Ｃ２～Ｃ６アルケニレン、Ｃ２～Ｃ６ヘテロアルケニレン、Ｃ２～Ｃ６アルキニレン、Ｃ２～Ｃ６ヘテロアルキニレン、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキレン、ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、又はヘテロアリーレンは、Ｏ、Ｓ、及びＮから選択される１つ以上のヘテロ原子により任意選択で中断され得る。
いくつかの実施形態において、各Ｃ１～Ｃ６アルキレン、Ｃ１～Ｃ６ヘテロアルキレン、Ｃ２～Ｃ６アルケニレン、Ｃ２～Ｃ６ヘテロアルケニレン、Ｃ２～Ｃ６アルキニレン、Ｃ２～Ｃ６ヘテロアルキニレン、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキレン、ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、又はヘテロアリーレンは、Ｏ、Ｓ、及びＮから選択される１つ以上のヘテロ原子により任意選択で中断され得て、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルカリール、アルキルヘテロアリール、アミノ、アンモニウム、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニル、ウレイド、カルバマート、アリール、ヘテロアリール、スルフィニル、スルホニル、ヒドロキシル、アルコキシ、スルファニル、ハロゲン、カルボキシ、トリハロメチル、シアノ、ヒドロキシ、メルカプト、及びニトロからなる群から各場合で独立に選択される１～５つの置換基により任意選択で置換され得る。
いくつかの実施形態において、リンカーＬは、式－Ｏａ－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－ＳＯ２－Ｎ（Ｒ１）－の溶解度向上基を含む（式中、
ａは、０又は１であり；
Ｒ１は、水素、Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ３～Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基、及びＣ３～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から選択され、そのそれぞれは、Ｏ、Ｓ、及びＮＲ３から選択される１つ以上のヘテロ原子により任意選択で置換されていても任意選択で中断されていてもよく、ここで、Ｒ３は、水素及びＣ１～Ｃ４アルキルからなる群から独立に選択される）。そのような溶解度向上基は、例えば、それぞれの開示が参照により本明細書にその全体として組み込まれる米国特許第９，６３６，４２１号明細書及び米国特許出願公開第２０１７／０２９８１４５号明細書に記載されている。
いくつかの実施形態において、式－Ｏａ－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－ＳＯ２－Ｎ（Ｒ１）－の溶解度向上基は、Ｃ１～Ｃ６アルキレン又はｐが１～６の整数である－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｐ－基をさらに含む。そのような溶解度向上基の非限定的な例には、上記表２に描写されているものがある。
＜表２＞
Figure 2022530026000021
いくつかの実施形態において、非切断性リンカーは－（ＣＨ２）ｎ－単位を含み、ｎは、２～１２、例えば２～６の整数である。いくつかの実施形態において、非切断性リンカーは－（ＣＨ２）ｎ－を含み、ｎは、１、２、３、４、５、又は６である。いくつかの実施形態において、非切断性リンカーは、式：
Figure 2022530026000022
 により表される、ｎが６である－（ＣＨ２）ｎ－である。
切断性リンカー
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合断片とアマトキシンをコンジュゲートするリンカーは、リンカーの切断が細胞内環境中で薬物単位を抗体から放出するように、細胞内条件下で切断性である。切断性リンカーは、例えば、ｐＨ、還元電位、又は酵素濃度を含む局所環境、例えば、細胞外と細胞内の環境の差異を利用して、標的細胞中のアマトキシンの放出を引き起こすように設計されている。一般的に、切断性リンカーは、循環中に比較的安定であるが、１つ以上の機構（例えば、プロテアーゼ、ペプチダーゼ、及びグルクロニダーゼの活性を含むがこれらに限定されない）により細胞内環境中で特に切断を起こしやすい。本明細書で使用される切断性リンカーは、循環血漿中及び／又は標的細胞の外で実質的に安定であり、標的細胞内部又は標的細胞のすぐ近くで、いくらかの有効な速度で切断され得る。
好適な切断性リンカーには、例えば、酵素加水分解、光分解、酸性条件下での加水分解、塩基性条件下での加水分解、酸化、ジスルフィド還元、求核開裂、又は有機金属開裂により切断され得るものがある（例えば、その開示が、共有結合コンジュゲーションに好適なリンカーに関するので参照により本明細書に組み込まれるＬｅｒｉｃｈｅ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２０：５７１－５８２，２０１２参照）。好適な切断性リンカーは、例えば、ヒドラジン、ジスルフィド、チオエーテル、又はジペプチドなどの化学部分を含み得る。
酸性条件下で加水分解なリンカーには、例えば、ヒドラゾン、セミカルバゾン、チオセミカルバゾン、シス－アコニットアミド、オルトエステル、アセタール、ケタールなどがある（例えば、それぞれの開示が、共有結合コンジュゲーションに好適なリンカーに関連するので参照により全体として本明細書に組み込まれている米国特許第５，１２２，３６８号明細書；米国特許第５，８２４，８０５号明細書；米国特許第５，６２２，９２９号明細書；Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ ａｎｄ Ｗａｌｋｅｒ，１９９９，Ｐｈａｒｍ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ８３：６７－１２３；Ｎｅｖｉｌｌｅ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４：１４６５３－１４６６１参照。そのようなリンカーは、血液中など中性ｐＨ条件下で比較的安定であり、リソソームのおよそのｐＨであるｐＨ５．５又は５．０未満で不安定である。
還元条件下で切断性であるリンカーには、例えば、ジスルフィドがある。種々のジスルフィドリンカーは当技術分野に公知であり、例えば、ＳＡＴＡ（Ｎ－スクシンイミジル－Ｓ－アセチルチオアセタート）、ＳＰＤＰ（Ｎ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオ）プロピオナート）、ＳＰＤＢ（Ｎ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオ）ブチラート）、及びＳＭＰＴ（Ｎ－スクシンイミジル－オキシカルボニル－α－メチル－α－（２－ピリジル－ジチオ）トルエン）、ＳＰＤＢ及びＳＭＰＴを使用して形成できるものがある（例えば、Ｔｈｏｒｐｅ ｅｔ ａｌ．，１９８７，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．４７：５９２４－５９３１；Ｗａｗｒｚｙｎｃｚａｋ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ：Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ ｉｎ Ｒａｄｉｏｉｍａｇｅｒｙ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ（Ｃ．Ｗ．Ｖｏｇｅｌ ｅｄ．，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕ．Ｐｒｅｓｓ，１９８７）参照）。それぞれの開示が、共有結合コンジュゲーションに好適なリンカーに関連するので参照により全体として本明細書に組み込まれている米国特許第４，８８０，９３５号明細書も参照されたい。
酵素加水分解を受けやすいリンカーは、例えば、リソソーム又はエンドソームプロテアーゼを含むがこれらに限定されない細胞内ペプチダーゼ又はプロテアーゼ酵素により切断されるペプチド含有リンカーであり得る。治療剤の細胞内タンパク質分解性放出を使用する１つの利点は、コンジュゲートされる場合薬剤が典型的には弱力化されており、複合体の血清安定性が典型的には高いことである。いくつかの実施形態において、ペプチジルリンカーは、少なくとも２つのアミノ酸の長さ、又は少なくとも３つのアミノ酸の長さである。例示的なアミノ酸リンカーには、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチド、又はペンタペプチドがある。好適なペプチドの例には、バリン、アラニン、シトルリン（Ｃｉｔ）、フェニルアラニン、リジン、ロイシン、及びグリシンなどのアミノ酸を含むものがある。アミノ酸リンカー成分を構成するアミノ酸残基には、天然に存在するもの、並びにシトルリンなどマイナーなアミノ酸及び天然に存在しないアミノ酸アナログがある。例示的なジペプチドには、バリン－シトルリン（ｖｃ又はｖａｌ－ｃｉｔ）及びアラニン－フェニルアラニン（ａｆ又はａｌａ－ｐｈｅ）がある。例示的なトリペプチドには、グリシン－バリン－シトルリン（ｇｌｙ－ｖａｌ－ｃｉｔ）及びグリシン－グリシン－グリシン（ｇｌｙ－ｇｌｙ－ｇｌｙ）がある。いくつかの実施形態において、リンカーは、Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ａｌａ－Ｖａｌ、又はＰｈｅ－Ｌｙｓ、Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ａｌａ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ｃｉｔ、Ｌｅｕ－Ｃｉｔ、Ｉｌｅ－Ｃｉｔ、Ｐｈｅ－Ａｒｇ、又はＴｒｐ－Ｃｉｔなどのジペプチドを含む。Ｖａｌ－Ｃｉｔ又はＰｈｅ－Ｌｙｓなどのジペプチドを含むリンカーは、例えば、その開示が、共有結合コンジュゲーションに好適なリンカーに関するので参照により全体として本明細書に組み込まれる米国特許第６，２１４，３４５号明細書に開示されている。いくつかの実施形態において、リンカーは、Ｖａｌ－Ａｌａ及びＶａｌ－Ｃｉｔから選択されるジペプチドを含む。
本明細書に記載される抗体、抗原結合断片を細胞傷害性分子にコンジュゲートするのに好適なリンカーには、１，６－脱離プロセスによりアマトキシンを放出することが可能なものがある。この脱離プロセスが可能である化学部分には、ｐ－アミノベンジル（ＰＡＢ）基、６－マレイミドヘキサン酸、ｐＨ感受性カーボナート、及びその開示が、共有結合コンジュゲーションに好適なリンカーに関するので参照により全体として本明細書に組み込まれるＪａｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．３２：３５２６－３５４０，２０１５に記載される他の試薬がある。
いくつかの実施形態において、リンカーは、上述のＰＡＢ又はＰＡＢＣ（パラ－アミノベンジルオキシカルボニル）などの「自壊型」基を含み、それらは、例えば、Ｃａｒｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（１９８１）２４：４７９－４８０；Ｃｈａｋｒａｖａｒｔｙ ｅｔ ａｌ（１９８３）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２６：６３８－６４４；米国特許第６２１４３４５号明細書；米国特許出願公開第２００３０１３０１８９号明細書；米国特許出願公開第２００３００９６７４３号明細書；米国特許第６７５９５０９号明細書；米国特許出願公開第２００４００５２７９３号明細書；米国特許第６２１８５１９号明細書；米国特許第６８３５８０７号明細書；米国特許第６２６８４８８号明細書；米国特許出願公開第２００４００１８１９４号明細書；国際公開第９８／１３０５９号パンフレット；米国特許出願公開第２００４００５２７９３号明細書；米国特許第６６７７４３５号明細書；米国特許第５６２１００２号明細書；米国特許出願公開第２００４０１２１９４０号明細書；国際公開第２００４／０３２８２８号パンフレット）に開示されている。このプロセスが可能である他のそのような化学部分（「自壊型リンカー」）には、メチレンカルバマート及びアミノチアゾール、アミノイミダゾール、アミノピリミジンなどのヘテロアリール基がある。そのような複素環式自壊型基を含むリンカーは、例えば、米国特許出願公開第２０１６０３０３２５４号明細書及び米国特許出願公開第２０１５００７９１１４号明細書、並びに米国特許第７，７５４，６８１号明細書；Ｈａｙ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．９：２２３７；米国特許出願公開第２００５／０２５６０３０号明細書；ｄｅ Ｇｒｏｏｔ ｅｔ ａｌ（２００１）Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６６：８８１５－８８３０；及び米国特許第７２２３８３７号に開示されている。いくつかの実施形態において、ジペプチドが、自壊型リンカーと組み合わせて使用される。
いくつかの実施形態において、リンカーＬは、ヒドラジン、ジスルフィド、チオエーテル、アミノ酸、１０個までのアミノ酸からなるペプチド、ｐ－アミノベンジル（ＰＡＢ）基、複素環式自壊型基、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６ヘテロアルキル、Ｃ２～Ｃ６アルケニル、Ｃ２～Ｃ６ヘテロアルケニル、Ｃ２～Ｃ６アルキニル、Ｃ２～Ｃ６ヘテロアルキニル、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、－（Ｃ＝Ｏ）－基、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－基、－ＯＣ（Ｏ）ＮＨ－基、ｐが１～６の整数である－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｐ－基、又は溶解度向上基の１つ以上を含み；
ここで、各Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６ヘテロアルキル、Ｃ２～Ｃ６アルケニル、Ｃ２～Ｃ６ヘテロアルケニル、Ｃ２～Ｃ６アルキニル、Ｃ２～Ｃ６ヘテロアルキニル、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、又はヘテロアリール基は、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルカリール、アルキルヘテロアリール、アミノ、アンモニウム、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニル、ウレイド、カルバマート、アリール、ヘテロアリール、スルフィニル、スルホニル、ヒドロキシル、アルコキシ、スルファニル、ハロゲン、カルボキシ、トリハロメチル、シアノ、ヒドロキシ、メルカプト、及びニトロからなる群から各場合で独立に選択される１～５つの置換基により任意選択で置換され得る。
いくつかの実施形態において、各Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６ヘテロアルキル、Ｃ２～Ｃ６アルケニル、Ｃ２～Ｃ６ヘテロアルケニル、Ｃ２～Ｃ６アルキニル、Ｃ２～Ｃ６ヘテロアルキニル、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、又はヘテロアリール基は、Ｏ、Ｓ、及びＮから選択される１つ以上のヘテロ原子により任意選択で中断され得る。
いくつかの実施形態において、各Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６ヘテロアルキル、Ｃ２～Ｃ６アルケニル、Ｃ２～Ｃ６ヘテロアルケニル、Ｃ２～Ｃ６アルキニル、Ｃ２～Ｃ６ヘテロアルキニル、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、又はヘテロアリール基は、Ｏ、Ｓ、及びＮから選択される１つ以上のヘテロ原子により任意選択で中断され得て、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルカリール、アルキルヘテロアリール、アミノ、アンモニウム、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニル、ウレイド、カルバマート、アリール、ヘテロアリール、スルフィニル、スルホニル、ヒドロキシル、アルコキシ、スルファニル、ハロゲン、カルボキシ、トリハロメチル、シアノ、ヒドロキシ、メルカプト、及びニトロからなる群から各場合で独立に選択される１～５つの置換基により任意選択で置換され得る。
当業者は、列記された基の１つ以上が、二価（二端）種、例えばＣ１～Ｃ６アルキレンなどの形態で存在し得ることを認識するだろう。
いくつかの実施形態において、リンカーＬは、式－Ｏａ－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－ＳＯ２－Ｎ（Ｒ１）－の溶解度向上基を含む（式中、
ａは、０又は１であり；
Ｒ１は、水素、Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ３～Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基、及びＣ３～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から選択され、そのそれぞれは、Ｏ、Ｓ、及びＮＲ３から選択される１つ以上のヘテロ原子により任意選択で置換されていても任意選択で中断されていてもよく、ここで、Ｒ３は、水素及びＣ１～Ｃ４アルキルからなる群から独立に選択される）。そのような溶解度向上基は、例えば、それぞれの開示が参照により本明細書にその全体として組み込まれる米国特許第９，６３６，４２１号明細書及び米国特許出願公開第２０１７／０２９８１４５号明細書に記載されている。
いくつかの実施形態において、式－Ｏａ－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－ＳＯ２－Ｎ（Ｒ１）－の溶解度向上基は、Ｃ１～Ｃ６アルキレン又はｐが１～６の整数である－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｐ－基をさらに含む。そのような溶解度向上基の非限定的な例には、上記の表２に描写されるものがある。
いくつかの実施形態において、リンカーはｐ－アミノベンジル基（ＰＡＢ）を含む。一実施形態において、ｐ－アミノベンジル基は、細胞傷害性薬剤とリンカー中のプロテアーゼ切断部位の間に配置される。一実施形態において、ｐ－アミノベンジル基は、ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル単位の一部である。一実施形態において、ｐ－アミノベンジル基は、ｐ－アミノベンジルアミド単位の一部である。
いくつかの実施形態において、リンカーは、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ａｌａ、Ｐｈｅ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｖａｌ－Ｃｉｔ、及びＶａｌ－Ａｒｇからなる群から選択されるジペプチドを含む。いくつかの実施形態において、リンカーは、ＰＡＢ、Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ、Ｖａｌ－Ａｌａ－ＰＡＢ、Ｖａｌ－Ｌｙｓ（Ａｃ）－ＰＡＢ、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ－ＰＡＢ、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ（Ａｃ）－ＰＡＢ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｌｅｕ－Ｌｙｓ、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ａｒｇ、Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｓｎ－ＰＡＢ、又はＡｌａ－ＰＡＢの１つ以上を含む。
いくつかの実施形態において、リンカーは、ペプチド、オリゴ糖、－（ＣＨ２）ｐ－、－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｐ－、ＰＡＢ、Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ、Ｖａｌ－Ａｌａ－ＰＡＢ、Ｖａｌ－Ｌｙｓ（Ａｃ）－ＰＡＢ、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ－ＰＡＢ、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ（Ａｃ）－ＰＡＢ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｌｅｕ－Ｌｙｓ、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ａｒｇ、Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｓｎ－ＰＡＢ、又はＡｌａ－ＰＡＢの１つ以上の組合せを含む。
いくつかの実施形態において、リンカーは、ｐが１～６の整数である－（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｐ－単位を含む。
いくつかの実施形態において、リンカーは、式：
Figure 2022530026000023
 により表されるＰＡＢ－Ａｌａ－Ｖａｌ－プロピオニルを含む。
いくつかの実施形態において、リンカーは、式：
Figure 2022530026000024
 により表されるＰＡＢ－Ｃｉｔ－Ｖａｌ－プロピオニルを含む。
そのようなＰＡＢ－ジペプチド－プロピオニルリンカーは、例えば、参照により全体として本明細書に組み込まれている国際公開第２０１７／１４９０７７号パンフレットに開示されている。さらに、国際公開第２０１７／１４９０７７号パンフレットに開示された細胞毒は参照により本明細書に組み込まれている。
本明細書に開示される化学基、部分、及び特徴のいずれか１つ以上が多数の方法で組み合わされて、本明細書に開示される抗体とアマトキシンのコンジュゲーションに有用なリンカーを形成し得ることが当業者により認識されるだろう。本明細書に記載される組成物及び方法と併せて有用なさらなるリンカーは、例えば、その開示が参照により全体として本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１５／０２１８２２０号明細書に記載されている。
リンカー－アマトキシン及びリンカー－抗体コンジュゲーション
特定の実施形態において、リンカーは、式（Ｖ）、（Ｖａ）、又は（Ｖｂ）のいずれかによるアマトキシン又はその誘導体と、適切な条件下で反応させられて、リンカー－アマトキシン複合体が形成される。特定の実施形態において、反応性基がアマトキシン又はリンカー上で使用されて、共有結合が形成される。
アマトキシン－リンカー複合体は、その後に、抗体、誘導体化された抗体、又はその抗原結合断片と、適切な条件下で反応させられて、ＡＤＣが形成される。或いは、リンカーは、最初に、抗体、誘導体化された抗体、又はその抗原結合断片と反応させられて、リンカー－抗体複合体が形成され、次いで、アマトキシンと反応させられて、ＡＤＣが形成される。そのようなコンジュゲーション反応が、これからより完全に説明される。
いくつかの異なる反応が、リンカー又はアマトキシン－リンカー複合体の、抗体又はその抗原結合断片への共有結合に利用可能である。抗体分子上の好適な接続点には、リジンのアミン基、グルタミン酸及びアスパラギン酸の遊離カルボン酸基、システインのスルフヒドリル基、並びに芳香族アミノ酸の種々の部分があるが、これらに限定されない。例えば、非特異的な共有結合は、リンカー上のカルボキシ（又はアミノ）基を抗体部分上のアミノ（又はカルボキシ）基に連結するカルボジイミド反応を使用して行われ得る。さらに、ジアルデヒド又はイミドエステルなどの二官能性作用物質を使用しても、リンカー上のアミノ基を抗体部分上のアミノ基に連結できる。アマトキシンの抗体部分への接続にやはり利用可能であるのは、シッフ塩基反応である。この方法は、抗体又はリンカーのいずれかの上にあるグリコール又はヒドロキシ基の過ヨウ素酸酸化を含み、それによりアルデヒドを形成し、次いでそれがそれぞれリンカー又は抗体と反応させられる。共有結合形成は、アルデヒドとアミノ基の間のシッフ塩基の形成により起こる。イソチオシアナートも、アマトキシン又は抗体部分をリンカーに共有結合させるカップリング剤として使用できる。他の技法は当業者に公知であり、本開示の範囲内にある。
本明細書に記載される抗体又は抗原結合断片へのコンジュゲーションに有用なリンカーには、非限定的に、以下の表３に描写される、抗体とリンカー上の反応性化学部分（本明細書で反応性置換基、Ｚ’と称される）との間のカップリング反応により形成される化学部分Ｚを含むリンカーがある。波線は、それぞれ、抗体又は抗原結合断片及び細胞傷害性分子への接続点を示す。
＜表３＞
Figure 2022530026000025
Figure 2022530026000026
Figure 2022530026000027
Figure 2022530026000028
当業者は、リンカー及び抗体又はその抗原結合断片上の反応性置換基に接続した反応性置換基Ｚ’が共有結合カップリング反応に関与して、化学部分Ｚを製造することを認識し、反応性置換基Ｚ’を認識するだろう。したがって、本明細書に記載される方法と併せて有用である抗体薬物複合体は、本明細書に記載の通り、抗体又はその抗原結合断片と、リンカー又はアマトキシン－リンカー複合体との反応により形成され得るが、リンカー又はアマトキシン－リンカー複合体は、抗体又はその抗原結合断片上の反応性置換基との反応に好適で、化学部分Ｚを形成する反応性置換基Ｚ’を含んでいる。
表３に描写される通り、リンカー上の好適に反応性がある置換基Ｚ’及び抗体又はその抗原結合断片上の反応性置換基の例には、求核／求電子剤ペア（例えば、チオール／ハロアルキルペア、アミン／カルボニルペア、又はチオール／α，β－不飽和カルボニルペアなど）、ジエン／ジエノファイルペア（例えば、とりわけ、アジド／アルキンペア、又はジエン／α，β－不飽和カルボニルペア）などがある。反応性置換基の間のカップリング反応による化学部分Ｚの形成には、非限定的に、チオールアルキル化、ヒドロキシルアルキル化、アミンアルキル化、アミン又はヒドロキシルアミン縮合、ヒドラジン形成、アミド化、エステル化、ジスルフィド形成、環化付加（例えば、とりわけ、［４＋２］ディールス・アルダー環化付加、［３＋２］フーズゲン環化付加）、求核芳香族置換、求電子芳香族置換、及び当技術分野に公知であるか又は本明細書に記載される他の反応性様式がある。いくつかの実施形態において、反応性置換基Ｚ’は、抗体又はその抗原結合断片上の求核官能基との反応に好適な求電子官能基である。
本明細書に開示される抗体又はその抗原結合断片内に存在し得る反応性置換基には、非限定的に、（ｉ）Ｎ末端アミン基、（ｉｉ）側鎖アミン基、例えば、リジン、（ｉｉｉ）側鎖チオール基、例えば、システイン、及び（ｉｖ）抗体がグリコシル化された場合の糖ヒドロキシル又はアミノ基などの求核基がある。本明細書に開示される抗体又はその抗原結合断片内に存在し得る反応性置換基には、非限定的に、セリン、スレオニン、及びチロシン残基のヒドロキシル部分；リジン残基のアミノ部分；アスパラギン酸及びグルタミン酸残基のカルボキシル部分；並びにシステイン残基のチオール部分、並びに天然に存在しないアミノ酸のプロパルギル、アジド、ハロアリール（例えば、フルオロアリール）、ハロヘテロアリール（例えば、フルオロヘテロアリール）、ハロアルキル、及びハロヘテロアルキル部分がある。いくつかの実施形態において、本明細書に開示される抗体又はその抗原結合断片内に存在する反応性置換基にはアミン又はチオール部分がある。特定の抗体は、還元性鎖間ジスルフィド、すなわちシステインブリッジを有する。抗体は、ＤＴＴ（ジチオスレイトール）などの還元剤による処理により、リンカー試薬とのコンジュゲーションのために反応性になり得る。各システインブリッジは、このように、理論上２つの反応性チオール求核剤を形成するだろう。追加の求核基は、リジンと２－イミノチオラン（トラウト試薬）の反応によりアミンをチオールに転化することにより、抗体に導入され得る。反応性チオール基は、１、２、３、４、又はそれ以上のシステイン残基を導入することにより抗体（又はその断片）に導入され得る（例えば、１つ以上の非天然のシステインアミノ酸残基を含む変異抗体の調製）。米国特許第７，５２１，５４１号明細書は、反応性システインアミノ酸の導入により、抗体を操作することを教示している。
いくつかの実施形態において、リンカーに接続された反応性置換基Ｚ’は、抗体上に存在する求電子基と反応性である求核基である。抗体上の有用な求電子基には、アルデヒド及びケトンカルボニル基があるが、これらに限定されない。求核基（例えば、ａ）ヘテロ原子（（ｅ．ｇ．，ａ）ｈｅｔｅｒｏａｔｏｍ）は、抗体上の求電子基と反応して、抗体への共有結合を形成し得る。有用な求核基には、ヒドラジド、オキシム、アミノ、ヒドロキシル、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、ヒドラジンカルボキシラート、及びアリールヒドラジドがあるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態において、化学部分Ｚは、アミン及びチオール部分など、抗体又はその抗原結合断片内に存在する反応性求核置換基と、リンカーに接続された反応性求電子置換基Ｚ’との反応の生成物である。例えば、Ｚ’は、とりわけ、マイケル受容体（例えば、マレイミド）、活性化エステル、電子不足カルボニル化合物、又はアルデヒドであり得る。
反応性置換基Ｚ’及び生じる化学部分Ｚのいくつかの代表的で非限定的な例が表４に与えられる。
＜表４＞
Figure 2022530026000029
例えば、リンカー－抗体複合体及びＡＤＣの合成に好適なリンカーには、非限定的に、リンカーに接続したマレイミド又はハロアルキル基などの反応性置換基Ｚ’がある。これらは、例えば、その開示が、化学コンジュゲーションのためのリンカーに関連するので参照により本明細書に組み込まれるＬｉｕ ｅｔ ａｌ．，１８：６９０－６９７，１９７９に記載されるものの中でも、例えば、スクシンイミジル４－（Ｎ－マレイミドメチル）－シクロヘキサン－Ｌ－カルボキシラート（ＳＭＣＣ）、Ｎ－スクシンイミジルヨードアセタート（ＳＩＡ）、スルホ－ＳＭＣＣ、ｍ－マレイミドベンゾイル－Ｎ－ヒドロキシスクシンイミジルエステル（ＭＢＳ）、スルホ－ＭＢＳ、及びスクシンイミジルヨードアセタートなどの試薬によりリンカーに接続され得る。
いくつかの実施形態において、リンカーＬに接続された反応性置換基Ｚ’は、マレイミド、アジド、又はアルキンである。マレイミド含有リンカーの例は非切断性マレイミドカプロイル系リンカーであり、アウリスタチンなどの微小管破壊剤のコンジュゲーションに特に有用である。そのようなリンカーは、その開示が、化学コンジュゲーションのためのリンカーに関連するので参照により本明細書に組み込まれるＤｏｒｏｎｉｎａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．１７：１４－２４，２００６により記載されている。
いくつかの実施形態において、リンカーが、－（Ｃ＝Ｏ）－又は－ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）－基と抗体又はその抗原結合断片のアミノ基との反応から生じるそれぞれアミド又は尿素部分により抗体又はその抗原結合断片に結合できるように、反応性置換基Ｚ’は－（Ｃ＝Ｏ）－又は－ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）－である。
いくつかの実施形態において、反応性置換基Ｚ’は、Ｎ－マレイミジル基、ハロゲン化されたＮ－アルキルアミド基、スルホニルオキシＮ－アルキルアミド基、カーボナート基、スルホニルハライド基、チオール基又はその誘導体、内部炭素－炭素三重結合を含むアルキニル基、（ヘテロ）シクロアルキニル基、ビシクロ［６．１．０］ノン－４－イン－９－イル基、内部炭素－炭素二重結合を含むアルケニル基、シクロアルケニル基、テトラジニル基、アジド基、ホスフィン基、ニトリルオキシド基、ニトロン基、ニトリルイミン基、ジアゾ基、ケトン基、（Ｏ－アルキル）ヒドロキシルアミノ基、ヒドラジン基、ハロゲン化されたＮ－マレイミジル基、１，１－ビス（スルホニルメチル）メチルカルボニル基又はその脱離誘導体、カルボニルハライド基、又はアレンアミド基であり、そのそれぞれは任意選択で置換され得る。いくつかの実施形態において、反応性置換基（ｓｕｂｓｔｉｕｅｎｔ）は、シクロアルケン基、シクロアルキン基、又は任意選択で置換されている（ヘテロ）シクロアルキニル基を含む。
いくつかの実施形態において、化学部分Ｚは、表３又は表４から選択される。いくつかの実施形態において、化学部分Ｚは
Figure 2022530026000030
 である（式中、Ｓは、ヒト幹細胞又はＴ細胞の細胞表面上に発現された抗原に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片内に存在する反応性置換基を表す硫黄原子である（例えば、システイン残基の－ＳＨ基由来））。
いくつかの実施形態において、リンカー－反応性置換基は、共にＬ－Ｚ’として、抗体又はその抗原結合断片とのコンジュゲーションの前に、構造：
Figure 2022530026000031
 を有する（式中、波線は、アマトキシン上の置換基（ｓｕｂｓｔｕｅｎｔ）への結合点を示す）。このリンカー－反応性置換基Ｌ－Ｚ’は、或いは、Ｎ－β－マレイミドプロピル－Ｖａｌ－Ａｌａ－パラ－アミノベンジル（ＢＭＰ－Ｖａｌ－Ａｌａ－ＰＡＢ）とも称され得る。リンカー末端の波線は、アマトキシンへの結合点を示す。いくつかの実施形態において、リンカーＬ及び化学部分Ｚは、抗体へのコンジュゲーションの後に、共にＬ－Ｚ－Ａｂとして、構造：
Figure 2022530026000032
 を有する（式中、Ｓは、ヒト幹細胞又はＴ細胞の細胞表面上に発現された抗原に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片内に存在する反応性置換基を表す硫黄原子である（例えば、システイン残基の－ＳＨ基由来））。リンカー末端の波線は、アマトキシンへの結合点を示す。
いくつかの実施形態において、リンカー－反応性置換基は、共にＬ－Ｚ’として、抗体又はその抗原結合断片とのコンジュゲーションの前に、構造：
Figure 2022530026000033
 を有する。このリンカー－反応性置換基は、或いは１－ｎ－ヘキシル－マレイミドと称され得て、非切断性リンカーである。リンカー末端の波線はアマトキシンへの結合点を示す。
いくつかの実施形態において、リンカーＬと化学部分Ｚは、抗体へのコンジュゲーションの後に、共にＬ－Ｚ－Ａｂとして、構造：
Figure 2022530026000034
 を有する（式中、Ｓは、細胞、例えば、腫瘍細胞又はヒト幹細胞又はＴ細胞の細胞表面上に発現された抗原に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片内に存在する反応性置換基を表す硫黄原子である（例えば、システイン残基の－ＳＨ基由来））。リンカー末端の波線はアマトキシンへの結合点を示す。当業者は、この実施形態において、リンカー－反応性置換基構造Ｌ－Ｚ’が、抗体又はその抗原結合断片とのコンジュゲーションの前に、マレイミドを基Ｚ’として含むことを認識するだろう。本明細書に記載される組成物及び方法と併せて有用であるものの中でも、上記リンカー部分及びアマトキシン－リンカー複合体は、例えば、それぞれの開示が参照により全体として本明細書に組み込まれている米国特許出願公開第２０１５／０２１８２２０号明細書及び国際公開第２０１７／１４９０７７号パンフレットに記載されている。
一態様において、本明細書に開示されるＡＤＣの細胞毒は、式（Ｖ）、（Ｖａ）、又は（Ｖｂ）のいずれかにより表されるアマトキシン又はその誘導体である。当業者は、そのようなアマトキシンが、リンカーへの接続点の多数の可能性を提示することを認識するだろう。
いくつかの実施形態において、アマトキシンは式（Ｖ）の構造を有し、リンカーは、エーテル結合により、ヒドロキシルトリプトファン残基のＯＨ基に接続する。そのような実施形態において、ＡＤＣは、式（Ｉ）：
Figure 2022530026000035
 （式中：
それぞれ本明細書に開示される通り、
ＱはＳであり；
Ｌはリンカーであり；
Ｚは、Ｌ上に存在する反応性置換基と抗体又はその抗原結合断片内に存在する反応性置換基の間のカップリング反応により形成された化学部分であり；及び
Ａｂは抗体である）
又はその立体異性体により表され得る。
いくつかの実施形態において、アマトキシンは式（Ｖａ）の構造を有し、リンカーは、エーテル結合により、ヒドロキシルトリプトファン残基のＯＨ基に接続する。そのような実施形態において、ＡＤＣは、式（Ｉａ）：
Figure 2022530026000036
 により表され得る。
いくつかの実施形態において、アマトキシンは式（Ｖｂ）の構造を有し、リンカーは、エーテル結合により、ヒドロキシルトリプトファン残基のＯＨ基に接続する。そのような実施形態において、ＡＤＣは、式（Ｉｂ）：
Figure 2022530026000037
 により表され得る。
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）、（Ｉａ）、又は（Ｉｂ）のＡＤＣのリンカーＬは非切断性リンカーである。いくつかの実施形態において、非切断性リンカーＬは、結合、－（Ｃ＝Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－基、－ＯＣ（Ｏ）ＮＨ－基、Ｃ１～Ｃ６アルキレン、Ｃ１～Ｃ６ヘテロアルキレン、Ｃ２～Ｃ６アルケニレン、Ｃ２～Ｃ６ヘテロアルケニレン、Ｃ２～Ｃ６アルキニレン、Ｃ２～Ｃ６ヘテロアルキニレン、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキレン、ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、ヘテロアリーレン、ｐが１～６の整数である－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｐ－基、又は溶解度向上基の１つ以上を含み；
ここで、各Ｃ１～Ｃ６アルキレン、Ｃ１～Ｃ６ヘテロアルキレン、Ｃ２～Ｃ６アルケニレン、Ｃ２～Ｃ６ヘテロアルケニレン、Ｃ２～Ｃ６アルキニレン、Ｃ２～Ｃ６ヘテロアルキニレン、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキレン、ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、若しくはヘテロアリーレンは、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルカリール、アルキルヘテロアリール、アミノ、アンモニウム、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニル、ウレイド、カルバマート、アリール、ヘテロアリール、スルフィニル、スルホニル、ヒドロキシル、アルコキシ、スルファニル、ハロゲン、カルボキシ、トリハロメチル、シアノ、ヒドロキシ、メルカプト、及びニトロからなる群から各場合で独立に選択される１～５つの置換基により任意選択で置換され得るか；又は
各Ｃ１～Ｃ６アルキレン、Ｃ１～Ｃ６ヘテロアルキレン、Ｃ２～Ｃ６アルケニレン、Ｃ２～Ｃ６ヘテロアルケニレン、Ｃ２～Ｃ６アルキニレン、Ｃ２～Ｃ６ヘテロアルキニレン、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキレン、ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、若しくはヘテロアリーレンは、Ｏ、Ｓ、及びＮから選択される１つ以上のヘテロ原子により任意選択で中断され得る。
いくつかの実施形態において、非切断性リンカーＬは、式－Ｏａ－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－ＳＯ２－ＮＲ１－の溶解度向上基を含む（式中：
ａは、０又は１であり；並びに
Ｒ１は、水素、Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ３～Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基、及びＣ３～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から選択され、そのそれぞれが、Ｏ、Ｓ、及びＮＲ３から選択される１つ以上のヘテロ原子により任意選択で置換され得るか、任意選択で中断され得るか、又はその両方であり、式中、Ｒ３は、水素及びＣ１～Ｃ４アルキルからなる群から独立に選択される）。
いくつかの実施形態において、非切断性リンカーＬは、ｎが２～６の整数である－（ＣＨ２）ｎ－単位を含む。いくつかの実施形態において、非切断性リンカーＬは、ｎが６である－（ＣＨ２）ｎ－である。
いくつかの実施形態において、Ａｂ、Ｚ、及び非切断性リンカーＬは、共にＡｂ－Ｚ－Ｌとして、式：
Figure 2022530026000038
 （式中、Ｓは、細胞上、例えば、ヒト幹細胞又はＴ細胞の表面に発現された抗原に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片内に存在する反応性置換基を表す硫黄原子である（例えば、システイン残基の－ＳＨ基由来））により表される。リンカー末端の波線はアマトキシンへの結合点を示す。
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）によるＡＤＣは、式（ＩＩ）：
Figure 2022530026000039
 その立体異性体又はその薬学的に許容できる塩により表される。
いくつかの実施形態において、式（ＩＩ）によるＡＤＣは、式（ＩＩａ）：
Figure 2022530026000040
 その立体異性体又はその薬学的に許容できる塩により表される。
いくつかの実施形態において、式（ＩＩ）によるＡＤＣは、式（ＩＩｂ）：
Figure 2022530026000041
 その立体異性体又はその薬学的に許容できる塩により表される。
驚くべきことに、本開示によると、アマトキシン及びアマトキシンをＡＤＣの抗体部分にコンジュゲートする非切断性リンカーを含むＡＤＣが、アマトキシン及び切断性リンカーを含むＡＤＣと比べて、向上した忍容性を有することが見出された。例えば、いくつかの実施形態において、向上した忍容性は増加した治療指数であり得る。いくつかの実施形態において、向上した忍容性は、切断性リンカーを含むＡＤＣと比べて、非切断性リンカーを含むＡＤＣの特定の投与量での１種以上の血液肝臓酵素レベル（例えば、ＡＳＴ、ＡＬＴ、ＡＤＨ、又は総ビリルビン）の上昇が低いこと又は上昇が存在しないことであり得る。
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）、（Ｉａ）、又は（Ｉｂ）のＡＤＣのリンカーＬは切断性リンカーである。いくつかの実施形態において、切断性リンカーＬは、ヒドラジン、ジスルフィド、チオエーテル、アミノ酸、１０個までのアミノ酸からなるペプチド、ｐ－アミノベンジル（ＰＡＢ）基、複素環式自壊型基、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６ヘテロアルキル、Ｃ２～Ｃ６アルケニル、Ｃ２～Ｃ６ヘテロアルケニル、Ｃ２～Ｃ６アルキニル、Ｃ２～Ｃ６ヘテロアルキニル、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、－（Ｃ＝Ｏ）－基、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－基、－ＯＣ（Ｏ）ＮＨ－基、ｐが１～６の整数である－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｐ－基、又は溶解度向上基の１つ以上を含み；
ここで、各Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６ヘテロアルキル、Ｃ２～Ｃ６アルケニル、Ｃ２～Ｃ６ヘテロアルケニル、Ｃ２～Ｃ６アルキニル、Ｃ２～Ｃ６ヘテロアルキニル、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、若しくはヘテロアリール基は、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルカリール、アルキルヘテロアリール、アミノ、アンモニウム、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニル、ウレイド、カルバマート、アリール、ヘテロアリール、スルフィニル、スルホニル、ヒドロキシル、アルコキシ、スルファニル、ハロゲン、カルボキシ、トリハロメチル、シアノ、ヒドロキシ、メルカプト、及びニトロからなる群から各場合で独立に選択される１～５つの置換基により任意選択で置換され得るか；
又は各Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６ヘテロアルキル、Ｃ２～Ｃ６アルケニル、Ｃ２～Ｃ６ヘテロアルケニル、Ｃ２～Ｃ６アルキニル、Ｃ２～Ｃ６ヘテロアルキニル、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、若しくはヘテロアリール基は、Ｏ、Ｓ、及びＮから選択される１つ以上のヘテロ原子により任意選択で中断され得る。
いくつかの実施形態において、切断性リンカーＬは、式－Ｏａ－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－ＳＯ２－ＮＲ１－の溶解度向上基を含む（式中：
ａは、０又は１であり；並びに
Ｒ１は、水素、Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ３～Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基、及びＣ３～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から選択され、そのそれぞれは、Ｏ、Ｓ、及びＮＲ３から選択される１つ以上のヘテロ原子により任意選択で置換されていても任意選択で中断されていてもよく、式中、Ｒ３は、水素及びＣ１～Ｃ４アルキルからなる群から独立に選択される）。
いくつかの実施形態において、切断性リンカーＬは、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ａｌａ、Ｐｈｅ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｖａｌ－Ｃｉｔ、及びＶａｌ－Ａｒｇからなる群から選択されるペプチドを含む。
いくつかの実施形態において、切断性リンカーＬはＰＡＢ基をさらに含む。
いくつかの実施形態において、切断性リンカーＬは、式：
Figure 2022530026000042
 により表される。
抗体薬物複合体の調製
式（Ｉ）、（Ｉａ）、又は（Ｉｂ）、（ＩＩ）、（ＩＩａ）、又は（ＩＩｂ）のいずれかのＡＤＣなどの本明細書に開示される式Ａｂ－（Ｚ－Ｌ－Ｃｙ）ｎのＡＤＣにおいて、抗体又はその抗原結合断片（Ａｂ）は、それぞれ本明細書に開示されるリンカーＬ及び化学部分Ｚを介して、１つ以上の細胞傷害性薬剤部分（Ｃｙ；例えばアマトキシン）、例えば、抗体あたり約１～約２０個の細胞傷害性部分にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態において、ｎは１である。いくつかの実施形態において、ｎは、約１～約５、約１～約４、約１～約３、又は約３～約５である。いくつかの実施形態において、ｎは、約１、約２、約３、又は約４である。
本開示のＡＤＣは、下記を含む当業者に公知である有機化学反応、条件、及び試薬を使用して、いくつかの経路により調製され得る：（１）抗体又はその抗原結合断片の反応性置換基と二価のリンカー試薬との反応による、本明細書で先に記載されたＡｂ－Ｚ－Ｌの形成と、それに続く細胞傷害性部分Ｃｙとの反応；又は（２）細胞傷害性部分の反応性置換基と二価のリンカー試薬との反応によるＣｙ－Ｌ－Ｚ’の形成と、それに続く本明細書で先に記載された抗体又はその抗原結合断片の反応性置換基との反応による、式Ａｂ－（Ｚ－Ｌ－Ｃｙ）ｎのＡＤＣの形成。ＡＤＣを調製する追加の方法は本明細書に記載される。
一実施形態において、抗体又はその抗原結合断片は１つ以上の炭水化物基を有し得て、それが化学修飾されて、１つ以上のスルフヒドリル基を有し得る。次いで、本明細書で先に記載された通りスルフヒドリル基の硫黄原子を介するコンジュゲーションによりＡＤＣが形成される。
別の実施形態において、抗体は、１つ以上の炭水化物基を有し得て、それが酸化されてアルデヒド（－ＣＨＯ）基を提供し得る（例えば、Ｌａｇｕｚｚａ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９８９，３２（３），５４８－５５参照）。次いで、本明細書で先に記載された通り対応するアルデヒドを介するコンジュゲーションにより、ＡＤＣが形成される。細胞毒の接続又は会合のためのタンパク質の修飾の他のプロトコルは、参照により本明細書に組み込まれるＣｏｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ，ｖｏｌ．２，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ（２００２）に記載されている。
抗体、免疫グロブリン又はその断片などの細胞標的化タンパク質へのリンカー－薬物部分のコンジュゲーションの方法は、例えば、全て参照により全体として明白に組み込まれている米国特許第５，２０８，０２０号明細書；米国特許第６，４４１，１６３号明細書；国際公開第２００５０３７９９２号パンフレット；国際公開第２００５０８１７１１号パンフレット；及び国際公開第２００６／０３４４８８号パンフレットに見出される。
或いは、抗体及び細胞毒性剤を含む融合タンパク質は、例えば、組換え技法又はペプチド合成により製造され得る。ＤＮＡの長さは、互いに隣接しているか又は複合体の所望の性質を損なわないリンカーペプチドをコードする領域により分離された、複合体の２つの部分をコードするそれぞれの領域を含み得る。
いくつかの実施形態において、式（ＩＩａ）のＡＤＣは、構造：
Figure 2022530026000043
 により表されるアマトキシン－リンカー複合体Ｃｙ－Ｌ－Ｚ’への抗体上のチオール基のコンジュゲーションにより調製され得る。
このアマトキシン－リンカー複合体は、市販の６－ヒドロキシトリプトファン（１）から出発して、スキーム１～３に従って調製され得る。化合物１は、ｔｅｒｔ－ブチルオキシカルボニル無水物（（ＢＯＣ）２Ｏ）により保護され得る。ヘキサヒドロピロロインドール３は、酸素及び増感剤（ローズベンガル）の存在下での保護されたヒドロキシトリプトファン２の照射時に、シス及びトランス異性体の混合物として製造され得る。化合物３の調製（並びに化合物２からＶａの調製の手順）は、その開示が参照により全体として本明細書に組み込まれている国際公開第２０１９／０３０１７３号パンフレットに提供されている。市販の９－フルオレニルメトキシカルボニル（ＦＭＯＣ）保護された４－ヒドロキシプロリン（４）は、臭化アリルによりアルキル化され得て、その後に、弱酸性条件下で（ピリジニウムパラトルエンスルホナート；ＰＰＴＳ）テトラヒドロピラニル（ＴＨＰ）ポリスチレン樹脂に接続されて、樹脂結合アリルエステル５を与え得るが、それは、パラジウムテトラキストリフェニルホスフィンパラジウム及びジメチルバルビツール酸により脱保護されて、中間体６を与え得る。保護されたアミノ酸７は、その開示が全体として本明細書に組み込まれる国際公開第２０１４／００９０２５号パンフレットに報告された方法に従って調製され得る。次いで、保護されたアミン７は、樹脂結合ヒドロキシプロリン６に接続されて、ペプチド８を与え得る。
スキーム１
Figure 2022530026000044
次いで、ペプチド８は、複数のカップリング及び脱保護反応を受けて、単環式中間体９（スキーム２）を提供し得る。アミノ酸ＦｍｏｃＡｓｎ（Ｔｒｔ）ＯＨ、ＦｍｏｃＣｙｓ（ＯＴｒｔ）ＯＨ、ＦｍｏｃＧｌｙＯＨ、ＦｍｏｃＩｌｅＯＨ、ＦｍｏｃＧｌｙＯＨ、及びヘキサヒドロピロロインドール３が、連続的な固相カップリング反応に使用されて、中間体９が生じ得る。それぞれのアミノ酸は、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）の存在下でジクロロメタン及びジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中でＰｙＢＯＰ／ＨＯＢＴを使用してカップリングされ得る。脱保護は、ＤＭＦ中２０％ピペリジンにより実施され得る。
スキーム２
Figure 2022530026000045
最後のカップリング反応の後、中間体９は、トリイソプロピルシランの存在下でトリフルオロ酢酸により固相担体樹脂から切断されて、ペプチド１０を与え得る。ジフェニルホスホリルアジド（ＤＰＰＡ）及びＤＩＥＡによる１０の処理はマクロ環化を誘導し、アンモニア性メタノールによる脱保護は、アマトキシン誘導体１１（すなわちＱ＝Ｓである式Ｖａ）を与えた。
マレイミドヘキシルアマトキシン複合体１４は、化合物１１からスキーム３に従って調製され得る。ディールス・アルダーアダクト１２はマレイミド及び２，５－ジメチルフランから調製され得て、次いで１，６－ジブロモヘキサンによりアルキル化されて保護されたリンカー１３を与え得る。化合物１１は、水酸化ナトリウムの存在下でジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中で化合物１３によりアルキル化されて、それに続いてＤＭＳＯ中で１００℃に加熱されて、アマトキシン－リンカー複合体１４を与え得る。化合物１２及び１３を調製する手順、並びに関連するアマトキシン（α－アマニチン）のＯ－アルキル化は、その開示が参照により全体として本明細書に組み込まれている米国特許出願公開第２０１８／００４３０３３号明細書に以前に報告されている。
スキーム３
Figure 2022530026000046
抗体
本明細書に開示されるＡＤＣ組成物及び方法は、標的組織中の細胞の集団（例えば、癌若しくは腫瘍細胞、又は骨髄幹細胞ニッチの造血幹細胞）へのそのようなＡＤＣの選択的送達を促進する薬剤を含む。ＡＤＣの細胞標的特異性は、抗体又はその抗原結合部分などの抗原結合タンパク質により決定される。
一実施形態において、本発明は、ヒトＣＤ４５、ＣＤ４９ｄ（ＶＬＡ－４）、ＣＤ４９ｆ（ＶＬＡ－６）、ＣＤ５１、ＣＤ８４、ＣＤ９０、ＣＤ１１７、ＣＤ１３３、ＣＤ１３４、ＣＤ１８４（ＣＸＣＲ４）、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１８、ＣＤ３４、ＣＤ４１／６１、ＣＤ４３、ＣＤ５８、ＣＤ７１、ＣＤ９７、ＣＤ１６２、ＣＤ１６６、ＣＤ２０５及びＣＤ３６１、ＣＤ１３、ＣＤ３３、ＣＤ３４、ＣＤ４４、ＣＤ４、ＣＤ５９、ＣＤ８４／ＣＤ１５０、ＣＤ９０／Ｔｈｙ１、ＣＤ９３、ＣＤ１０５／エンドグリン、ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒ、ＣＤ１２６／ＩＬ－６Ｒ、ＣＤ１３３、ＣＤ１３５／Ｆｌｔ３受容体、ＣＤ１６６／ＡＬＣＡＭ、プロミニン２、エリスロポエチンＲ、内皮細胞選択的接着分子、ＣＤ２４４、Ｔｉｅ１、Ｔｉｅ２、ＭＰＬ、Ｇ－ＣＳＦＲ、ＣＳＦ３Ｒ、ＩＬ－１Ｒ、ｇｐ１３０、白血病抑制因子受容体、オンコスタチンＭ受容体、エンビジン、及びＩＬ－１８Ｒに特異的に結合する抗体及びその抗原結合断片を含むＡＤＣを包む。本明細書に開示されたＡＤＣにより結合され得る抗原の他の例には、ＣＤ７、ＣＤｗ１２、ＣＤ１３、ＣＤ１５、ＣＤ１９、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２９、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３４、ＣＤ３６、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４１、ＣＤ４２ａ、ＣＤ４２ｂ、ＣＤ４２ｃ、ＣＤ４２ｄ、ＣＤ４３、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ４５ＲＢ、ＣＤ４５ＲＣ、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ４８、ＣＤ４９ｂ、ＣＤ４９ｄ、ＣＤ４９ｅ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ５０、ＣＤ５３、ＣＤ５５、ＣＤ６４ａ、ＣＤ６８、ＣＤ７１、ＣＤ７２、ＣＤ７３、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ８５Ａ、ＣＤ８５Ｋ、ＣＤ９０、ＣＤ９９、ＣＤ１０４、ＣＤ１０５、ＣＤ１０９、ＣＤ１１０、ＣＤ１１１、ＣＤ１１２、ＣＤ１１４、ＣＤ１１５、ＣＤ１２３、ＣＤ１２４、ＣＤ１２６、ＣＤ１２７、ＣＤ１３０、ＣＤ１３１、ＣＤ１３３、ＣＤ１３５、ＣＤ１３８、ＣＤ１５１、ＣＤ１５７、ＣＤ１６２、ＣＤ１６４、ＣＤ１６８、ＣＤ１７２ａ、ＣＤ１７３、ＣＤ１７４、ＣＤ１７５、ＣＤ１７５ｓ、ＣＤ１７６、ＣＤ１８３、ＣＤ１９１、ＣＤ２００、ＣＤ２０１、ＣＤ２０５、ＣＤ２１７、ＣＤ２２０、ＣＤ２２１、ＣＤ２２２、ＣＤ２２３、ＣＤ２２４、ＣＤ２２５、ＣＤ２２６、ＣＤ２２７、ＣＤ２２８、ＣＤ２２９、ＣＤ２３０、ＣＤ２３５ａ、ＣＤ２３５ｂ、ＣＤ２３６、ＣＤ２３６Ｒ、ＣＤ２３８、ＣＤ２４０、ＣＤ２４２、ＣＤ２４３、ＣＤ２７７、ＣＤ２９２、ＣＤｗ２９３、ＣＤ２９５、ＣＤ２９８、ＣＤ３０９、ＣＤ３１８、ＣＤ３２４、ＣＤ３２５、ＣＤ３３８、ＣＤ３４４、ＣＤ３４９又はＣＤ３５０があるが、これらに限定されない。本明細書に開示されたＡＤＣにより結合され得る抗原の他の例には、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１８、ＣＤ３７、ＣＤ４７、ＣＤ５２、ＣＤ５８、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ６９、ＣＤ７４、ＣＤ９７、ＣＤ１０３、ＣＤ１３２、ＣＤ１５６ａ、ＣＤ１７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１８４、ＣＤ２３２、ＣＤ２４４、ＣＤ２５２、ＣＤ３０２、ＣＤ３０５、ＣＤ３１７及びＣＤ３６１があるが、これらに限定されない。
特定の実施形態において、本明細書に記載されるＡＤＣ中の抗体又はその抗原結合断片は、複合体の一部として使用される場合に特に好都合である特定の解離速度を有する。例えば、抗ＣＤ１１７抗体は、特定の実施形態において、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）により測定して１×１０－２～１×１０－３、１×１０－３～１×１０－４、１×１０－５～１×１０－６、１×１０－６～１×１０－７、又は１×１０－７～１×１０－８のヒトＣＤ１１７及び／又はアカゲザルＣＤ１１７に対するオフレート定数（ｏｆｆ ｒａｔｅ ｃｏｎｓｔａｎｔ）（Ｋｏｆｆ）を有する。いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合断片は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）アッセイにより測定して約１００ｎＭ以下、約９０ｎＭ以下、約８０ｎＭ以下、約７０ｎＭ以下、約６０ｎＭ以下、約５０ｎＭ以下、約４０ｎＭ以下、約３０ｎＭ以下、約２０ｎＭ以下、約１０ｎＭ以下、約８ｎＭ以下、約６ｎＭ以下、約４ｎＭ以下、約２ｎＭ以下、約１ｎＭ以下のＫＤで細胞表面抗原（例えば、ヒトＣＤ１１７及び／又はアカゲザルＣＤ１１７）と結合する。
抗ＣＤ１１７抗体
一実施形態において、本発明は、ＧＮＮＫ＋ＣＤ１１７などのＣＤ１１７に特異的に結合する抗体及びその抗原結合断片を含むＡＤＣを包む。そのようなＡＤＣは、例えば、（ｉ）ＣＤ１１７＋細胞を特徴とする癌及び自己免疫疾患を治療するため、及び（ｉｉ）移植療法を必要とする患者における移植された造血幹細胞の生着を促進するための治療剤として使用され得る。これらの治療活性は、例えば、癌細胞、自己免疫細胞、又は造血幹細胞などの細胞の表面上に発現されるＣＤ１１７（例えば、ＧＮＮＫ＋ＣＤ１１７）に結合する単離された抗ＣＤ１１７抗体、その抗原結合断片の結合及びその後の細胞死の誘導により起こされ得る。内因性造血幹細胞の枯渇は、移植された造血幹細胞が定着できるニッチを提供し、その後に生産的な造血を確立し得る。このようにして、移植された造血幹細胞は、本明細書に記載される幹細胞疾患を患っているヒト患者などの患者内で首尾よく生着できる。
ＧＮＮＫ＋ＣＤ１１７に結合することが可能なものを含み、ヒトＣＤ１１７（別名ｃ－Ｋｉｔ、ｍＲＮＡ ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿０００２２２．２、タンパク質ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿０００２１３．１）に結合することが可能な抗体及び抗原結合断片は、造血幹細胞移植療法のために患者を前処置するために、本明細書に記載される組成物及び方法と併せて使用され得る。集団のかなりなパーセンテージにおけるＣＤ１１７のコード領域又は細胞外ドメインに影響する多型は、現在、非腫瘍学適応症において周知ではない。少なくとも４種の特定されたＣＤ１１７のアイソフォームがあり、さらなるアイソフォームが腫瘍細胞中で発現されている可能性がある。ＣＤ１１７アイソフォームのうち２種はタンパク質の細胞内ドメインに位置し、２種は外部膜近接領域に存在する。２種の細胞外アイソフォーム、ＧＮＮＫ＋及びＧＮＮＫ－は、４つのアミノ酸配列の存在（ＧＮＮＫ＋）又は非存在（ＧＮＮＫ－）という点で異なる。これらのアイソフォームは、リガンド（ＳＣＦ）に対して同じ親和性を有すると報告されているが、ＧＮＮＫ－アイソフォームへのリガンド結合は、内部移行及び分解を増加させると報告された。ＧＮＮＫ＋アイソフォームは、このアイソフォームに対して生じる抗体がＧＮＮＫ＋及びＧＮＮＫ－タンパク質を含むだろうから、ＣＤ１１７と結合することが可能な抗体を生成させるために免疫原として使用できる。ヒトＣＤ１１７アイソフォーム１及び２のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号１４５及び１４６に記載される。特定の実施形態において、本明細書に開示される抗ヒトＣＤ１１７（ｈＣＤ１１７）抗体は、ヒトＣＤ１１７のアイソフォーム１とアイソフォーム２の両方に結合することが可能である。
以下に記載される通り、ヒト抗体の酵母ライブラリースクリーンが実施され、診断及び治療用途を有する新規抗ＣＤ１１７抗体及びその断片が特定された。抗体５４（Ａｂ５４）、抗体５５（Ａｂ５５）、抗体５６（Ａｂ５６）、抗体５７（Ａｂ５７）、抗体５８（Ａｂ５８）、抗体６１（Ａｂ６１）、抗体６６（Ａｂ６６）、抗体６７（Ａｂ６７）、抗体６８（Ａｂ６８）、及び抗体６９（Ａｂ６９）は、このスクリーンで特定されたヒト抗体だった。これらの抗体は、ヒトＣＤ１１７及びアカゲザルＣＤ１１７と交差反応する。さらに、本明細書に開示されるこれらの抗体は、ヒトＣＤ１１７のアイソフォームの両方、すなわちアイソフォーム１（配列番号：１４５）及びアイソフォーム２（配列番号：１４６）と結合することが可能である。
Ａｂ５４、Ａｂ５５、Ａｂ５６、Ａｂ５７、Ａｂ５８、Ａｂ６１、Ａｂ６６、Ａｂ６７、Ａｂ６８、及びＡｂ６９を含む抗ＣＤ１１７抗体の種々の結合領域のアミノ酸配列は、以下の配列表に記載される。以下の配列表に述べられるＣＤＲを含むヒト抗ＣＤ１１７抗体並びに以下の配列表に述べられる可変領域を含むヒト抗ＣＤ１１７抗体を含むＡＤＣが本発明に含まれる。
一実施形態において、本発明は、抗体５５のものに対応する結合領域、例えば、ＣＤＲ、可変領域を含む抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合断片を含むＡＤＣを提供する。抗体５５（すなわちＡｂ５５）の重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列は、配列番号：１９に述べられる（配列表参照）。抗体５５のＶＨ ＣＤＲドメインアミノ酸配列は、配列番号：２１（ＶＨ ＣＤＲ１）；配列番号：２２（ＶＨ ＣＤＲ２）、及び配列番号：２３（ＶＨ ＣＤＲ３）に述べられる。抗体５５の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列は、配列番号：２０に記載される（配列表参照）。抗体５５のＶＬ ＣＤＲドメインアミノ酸配列は、配列番号：２４（ＶＬ ＣＤＲ１）；配列番号：２５（ＶＬ ＣＤＲ２）、及び配列番号：２６（ＶＬ ＣＤＲ３）に述べられる。抗体５５の重鎖定常領域は、配列番号：１２２に述べられる。抗体５５の軽鎖定常領域は、配列番号：１２１に述べられる。そのため、特定の実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：２１、２２、及び２３に述べられる可変重鎖ＣＤＲセット（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）並びに配列番号：２４、２５、及び２６に述べられる軽鎖可変領域ＣＤＲセットを含む。他の実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：２０に述べられるアミノ酸残基を含む可変軽鎖及び配列番号：１９に述べられる重鎖可変領域を含む。
一実施形態において、本発明は、抗体５４のものに対応する結合領域、例えば、ＣＤＲ、可変領域を含む抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合断片を含むＡＤＣを提供する。抗体５４（すなわちＡｂ５４）の重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列は、配列番号：２９に述べられる（配列表参照）。抗体５４のＶＨ ＣＤＲドメインアミノ酸配列は、配列番号：３１（ＶＨ ＣＤＲ１）；配列番号：３２（ＶＨ ＣＤＲ２）、及び配列番号：３３（ＶＨ ＣＤＲ３）に述べられる。抗体５４の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列は、配列番号：３０に記載される（配列表参照）。抗体５４のＶＬ ＣＤＲドメインアミノ酸配列は、配列番号：３４（ＶＬ ＣＤＲ１）；配列番号：３５（ＶＬ ＣＤＲ２）、及び配列番号：３６（ＶＬ ＣＤＲ３）に述べられる。抗体５４の重鎖定常領域は、配列番号：１２２に述べられる。抗体５４の軽鎖定常領域は、配列番号：１２１に述べられる。そのため、特定の実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：３１、３２、及び３３に述べられる可変重鎖ＣＤＲセット（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）並びに配列番号：３４、３５、及び３６に述べられる軽鎖可変領域ＣＤＲセットを含む。他の実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：３０に述べられるアミノ酸残基を含む可変軽鎖及び配列番号：２９に述べられる重鎖可変領域を含む。
一実施形態において、本発明は、抗体５６のものに対応する結合領域、例えば、ＣＤＲ、可変領域を含む抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合断片を含むＡＤＣを提供する。抗体５６（すなわちＡｂ５６）の重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列は、配列番号：３９に述べられる（配列表参照）。抗体５６のＶＨ ＣＤＲドメインアミノ酸配列は、配列番号：４１（ＶＨ ＣＤＲ１）；配列番号：４２（ＶＨ ＣＤＲ２）、及び配列番号：４３（ＶＨ ＣＤＲ３）に述べられる。抗体５６の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列は、配列番号：４０に記載される（配列表参照）。抗体５６のＶＬ ＣＤＲドメインアミノ酸配列は、配列番号：４４（ＶＬ ＣＤＲ１）；配列番号：４５（ＶＬ ＣＤＲ２）、及び配列番号：４６（ＶＬ ＣＤＲ３）に述べられる。抗体５６の重鎖定常領域は、配列番号：１２２に述べられる。抗体５６の軽鎖定常領域は、配列番号：１２１に述べられる。そのため、特定の実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：４１、４２、及び４３に述べられる可変重鎖ＣＤＲセット（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）並びに配列番号：４４、４５、及び４６に述べられる軽鎖可変領域ＣＤＲセットを含む。他の実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：４０に述べられるアミノ酸残基を含む可変軽鎖及び配列番号：３９に述べられる重鎖可変領域を含む。
一実施形態において、本発明は、抗体５７に対応する結合領域、例えば、ＣＤＲ、可変領域を含む抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合断片を含むＡＤＣを提供する。抗体５７（すなわちＡｂ５７）の重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列は、配列番号：４９に述べられる（配列表参照）。抗体５７のＶＨ ＣＤＲドメインアミノ酸配列は、配列番号：５１（ＶＨ ＣＤＲ１）；配列番号：５２（ＶＨ ＣＤＲ２）、及び配列番号：５３（ＶＨ ＣＤＲ３）に述べられる。抗体５７の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列は、配列番号：５０に記載される（配列表参照）。抗体５７のＶＬ ＣＤＲドメインアミノ酸配列は、配列番号：５４（ＶＬ ＣＤＲ１）；配列番号：５５（ＶＬ ＣＤＲ２）、及び配列番号：５６（ＶＬ ＣＤＲ３）に述べられる。抗体５７の重鎖定常領域は、配列番号：１２２に述べられる。抗体５７の軽鎖定常領域は、配列番号：１２１に述べられる。そのため、特定の実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：５１、５２、及び５３に述べられる可変重鎖ＣＤＲセット（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）並びに配列番号：５４、５５、及び５６に述べられる軽鎖可変領域ＣＤＲセットを含む。他の実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：５０に述べられるアミノ酸残基を含む可変軽鎖及び配列番号：４９に述べられる重鎖可変領域を含む。
一実施形態において、本発明は、抗体５８のものに対応する結合領域、例えば、ＣＤＲ、可変領域を含む抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合断片を含むＡＤＣを提供する。抗体５８（すなわちＡｂ５８）の重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列は、配列番号：５９に述べられる（配列表参照）。抗体５８のＶＨ ＣＤＲドメインアミノ酸配列は、配列番号：６１（ＶＨ ＣＤＲ１）；配列番号：６２（ＶＨ ＣＤＲ２）、及び配列番号：６３（ＶＨ ＣＤＲ３）に述べられる。抗体５８の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列は、配列番号：６０に記載される（配列表参照）。抗体５８のＶＬ ＣＤＲドメインアミノ酸配列は、配列番号：６４（ＶＬ ＣＤＲ１）；配列番号：６５（ＶＬ ＣＤＲ２）、及び配列番号：６６（ＶＬ ＣＤＲ３）に述べられる。抗体５８の重鎖定常領域は、配列番号：１２２に述べられる。抗体５８の軽鎖定常領域は、配列番号：１２１に述べられる。そのため、特定の実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：６１、６２、及び６３に述べられる可変重鎖ＣＤＲセット（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）並びに配列番号：６４、６５、及び６６に述べられる軽鎖可変領域ＣＤＲセットを含む。他の実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：６０に述べられるアミノ酸残基を含む可変軽鎖及び配列番号：５９に述べられる重鎖可変領域を含む。
一実施形態において、本発明は、抗体６１のものに対応する結合領域、例えば、ＣＤＲ、可変領域を含む抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合断片を含むＡＤＣを提供する。抗体６１（すなわちＡｂ６１）の重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列は、配列番号：６９に述べられる（配列表参照）。抗体６１のＶＨ ＣＤＲドメインアミノ酸配列は、配列番号：７１（ＶＨ ＣＤＲ１）；配列番号：７２（ＶＨ ＣＤＲ２）、及び配列番号：７３（ＶＨ ＣＤＲ３）に述べられる。抗体６１の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列は、配列番号：７０に記載される（配列表参照）。抗体６１のＶＬ ＣＤＲドメインアミノ酸配列は、配列番号：７４（ＶＬ ＣＤＲ１）；配列番号：７５（ＶＬ ＣＤＲ２）、及び配列番号：７６（ＶＬ ＣＤＲ３）に述べられる。抗体６１の重鎖定常領域は、配列番号：１２２に述べられる。抗体６１の軽鎖定常領域は、配列番号：１２１に述べられる。そのため、特定の実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：７１、７２、及び７３に述べられる可変重鎖ＣＤＲセット（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）並びに配列番号：７４、７５、及び７６に述べられる軽鎖可変領域ＣＤＲセットを含む。他の実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：７０に述べられるアミノ酸残基を含む可変軽鎖及び配列番号：６９に述べられる重鎖可変領域を含む。
一実施形態において、本発明は、抗体６６のものに対応する結合領域、例えば、ＣＤＲ、可変領域を含む抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合断片を含むＡＤＣを提供する。抗体６６（すなわちＡｂ６６）の重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列は、配列番号：７９に述べられる（配列表参照）。抗体６６のＶＨ ＣＤＲドメインアミノ酸配列は、配列番号：８１（ＶＨ ＣＤＲ１）；配列番号：８２（ＶＨ ＣＤＲ２）、及び配列番号：８３（ＶＨ ＣＤＲ３）に述べられる。抗体６６の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列は、配列番号：８０に記載される（配列表参照）。抗体６６のＶＬ ＣＤＲドメインアミノ酸配列は、配列番号：８４（ＶＬ ＣＤＲ１）；配列番号：８５（ＶＬ ＣＤＲ２）、及び配列番号：８６（ＶＬ ＣＤＲ３）に述べられる。抗体６６の重鎖定常領域は、配列番号：１２２に述べられる。抗体６６の軽鎖定常領域は、配列番号：１２１に述べられる。そのため、特定の実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：８１、８２、及び８３に述べられる可変重鎖ＣＤＲセット（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）並びに配列番号：８４、８５、及び８６に述べられる軽鎖可変領域ＣＤＲセットを含む。他の実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：８０に述べられるアミノ酸残基を含む可変軽鎖及び配列番号：７９に述べられる重鎖可変領域を含む。
一実施形態において、本発明は、抗体６７のものに対応する結合領域、例えば、ＣＤＲ、可変領域を含む抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合断片を含むＡＤＣを提供する。抗体６７の重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列は、配列番号：９に述べられる（表２参照）。抗体６７のＶＨ ＣＤＲドメインアミノ酸配列は、配列番号１１（ＶＨ ＣＤＲ１）；配列番号：１２（ＶＨ ＣＤＲ２）、及び配列番号：１３（ＶＨ ＣＤＲ３）に述べられる。抗体６７の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列は、配列番号：１０に記載される（表２参照）。抗体６７のＶＬ ＣＤＲドメインアミノ酸配列は、配列番号１４（ＶＬ ＣＤＲ１）；配列番号：１５（ＶＬ ＣＤＲ２）、及び配列番号：１６（ＶＬ ＣＤＲ３）に述べられる。抗体６７の完全長重鎖（ＨＣ）は、配列番号：１１０に述べられ、抗体６７の完全長重鎖定常領域は、配列番号：１２２に述べられる。抗体６７の軽鎖（ＬＣ）は、配列番号：１０９に述べられる。抗体６７の軽鎖定常領域は、配列番号：１２１に述べられる。そのため、特定の実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：１１、１２、及び１３に述べられる可変重鎖ＣＤＲセット（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）並びに配列番号：１４、１５、及び１６に述べられる軽鎖可変領域ＣＤＲセットを含む。他の実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：９に述べられるアミノ酸残基を含む可変重鎖及び配列番号：１０に述べられる重鎖可変領域を含む。さらなる実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体は、配列番号：１１０を含む重鎖及び配列番号：１０９を含む軽鎖を含む。
一実施形態において、本発明は、抗体６８のものに対応する結合領域、例えば、ＣＤＲ、可変領域を含む抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合断片を含むＡＤＣを提供する。抗体６８（すなわちＡｂ６８）の重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列は、配列番号：８９に述べられる（配列表参照）。抗体６８のＶＨ ＣＤＲドメインアミノ酸配列は、配列番号：９１（ＶＨ ＣＤＲ１）；配列番号：９２（ＶＨ ＣＤＲ２）、及び配列番号：９３（ＶＨ ＣＤＲ３）に述べられる。抗体６８の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列は、配列番号：９０に記載される（配列表参照）。抗体６８のＶＬ ＣＤＲドメインアミノ酸配列は、配列番号：９４（ＶＬ ＣＤＲ１）；配列番号：９５（ＶＬ ＣＤＲ２）、及び配列番号：９６（ＶＬ ＣＤＲ３）に述べられる。抗体６８の重鎖定常領域は、配列番号：１２２に述べられる。抗体６８の軽鎖定常領域は、配列番号：１２１に述べられる。そのため、特定の実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：９１、９２、及び９３に述べられる可変重鎖ＣＤＲセット（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）並びに配列番号：９４、９５、及び９６に述べられる軽鎖可変領域ＣＤＲセットを含む。他の実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：９０に述べられるアミノ酸残基を含む可変軽鎖及び配列番号：８９に述べられる重鎖可変領域を含む。
一実施形態において、本発明は、抗体６９のものに対応する結合領域、例えば、ＣＤＲ、可変領域を含む抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合断片を含むＡＤＣを提供する。抗体６９（すなわちＡｂ６９）の重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列は、配列番号：９９に述べられる（配列表参照）。抗体６９のＶＨ ＣＤＲドメインアミノ酸配列は、配列番号：１０１（ＶＨ ＣＤＲ１）；配列番号：１０２（ＶＨ ＣＤＲ２）、及び配列番号：１０３（ＶＨ ＣＤＲ３）に述べられる。抗体６９の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列は、配列番号：１００に記載される（配列表参照）。抗体６９のＶＬ ＣＤＲドメインアミノ酸配列は、配列番号：１０４（ＶＬ ＣＤＲ１）；配列番号：１０５（ＶＬ ＣＤＲ２）、及び配列番号：１０６（ＶＬ ＣＤＲ３）に述べられる。抗体６９の重鎖定常領域は、配列番号：１２２に述べられる。抗体６９の軽鎖定常領域は、配列番号：１２１に述べられる。そのため、特定の実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：１０１、１０２、及び１０３に述べられる可変重鎖ＣＤＲセット（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）並びに配列番号：１０４、１０５、及び１０６に述べられる軽鎖可変領域ＣＤＲセットを含む。他の実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：１００に述べられるアミノ酸残基を含む可変軽鎖及び配列番号：９９に述べられる重鎖可変領域を含む。
さらに、抗ＣＤ１１７抗体 Ａｂ７７、Ａｂ７９、Ａｂ８１、Ａｂ８５、Ａｂ８６、Ａｂ８７、Ａｂ８８、及びＡｂ８９の種々の結合領域のアミノ酸配列は、以下に提供される配列表に記載される。これらの配列を有する抗ＣＤ１１７抗体も、本明細書に記載されるＡＤＣにおいて使用できる。
一実施形態において、本発明は、抗体７７のものに対応する結合領域、例えば、ＣＤＲ、可変領域を含む抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合断片を含むＡＤＣを提供する。抗体７７（すなわちＡｂ７７）の重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列は、配列番号：１４７に述べられる（配列表参照）。抗体７７のＶＨ ＣＤＲドメインアミノ酸配列は、配列番号：２６３（ＶＨ ＣＤＲ１）；配列番号：２（ＶＨ ＣＤＲ２）、及び配列番号：３（ＶＨ ＣＤＲ３）に述べられる。抗体７７の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列は、配列番号：２３１に記載される（配列表参照）。抗体７７のＶＬ ＣＤＲドメインアミノ酸配列は、配列番号：２６４（ＶＬ ＣＤＲ１）；配列番号：２６５（ＶＬ ＣＤＲ２）、及び配列番号：２６６（ＶＬ ＣＤＲ３）に述べられる。抗体７７の重鎖定常領域は、配列番号：２６９に述べられる。抗体７７の軽鎖定常領域は、配列番号：２８３に述べられる。そのため、特定の実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：２６３、２、及び３に述べられる可変重鎖ＣＤＲセット（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）並びに配列番号：２６４、２６５、及び２６６に述べられる軽鎖可変領域ＣＤＲセットを含む。他の実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：２３１に述べられるアミノ酸残基を含む可変軽鎖及び配列番号：１４７に述べられる重鎖可変領域を含む。
一実施形態において、本発明は、抗体７９のものに対応する結合領域、例えば、ＣＤＲ、可変領域を含む抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合断片を含むＡＤＣを提供する。抗体７９（すなわちＡｂ７９）の重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列は、配列番号：１４７に述べられる（配列表参照）。抗体７９のＶＨ ＣＤＲドメインアミノ酸配列は、配列番号：２６３（ＶＨ ＣＤＲ１）；配列番号：２（ＶＨ ＣＤＲ２）、及び配列番号：３（ＶＨ ＣＤＲ３）に述べられる。抗体７９の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列は、配列番号：２３３に記載される（配列表参照）。抗体７９のＶＬ ＣＤＲドメインアミノ酸配列は、配列番号：２６７（ＶＬ ＣＤＲ１）；配列番号：２６５（ＶＬ ＣＤＲ２）、及び配列番号：２６６（ＶＬ ＣＤＲ３）に述べられる。抗体７９の重鎖定常領域は、配列番号：２６９に述べられる。抗体７９の軽鎖定常領域は、配列番号：２８３に述べられる。そのため、特定の実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：２６３、２、及び３に述べられる可変重鎖ＣＤＲセット（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）並びに配列番号：２６７、２６５、及び２６６に述べられる軽鎖可変領域ＣＤＲセットを含む。他の実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：２３３に述べられるアミノ酸残基を含む可変軽鎖及び配列番号：１４７に述べられる重鎖可変領域を含む。
一実施形態において、本発明は、抗体８１のものに対応する結合領域、例えば、ＣＤＲ、可変領域を含む抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合断片を含むＡＤＣを提供する。抗体８１（すなわちＡｂ８１）の重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列は、配列番号：１４７に述べられる（配列表参照）。抗体８１のＶＨ ＣＤＲドメインアミノ酸配列は、配列番号：２６３（ＶＨ ＣＤＲ１）；配列番号：２（ＶＨ ＣＤＲ２）、及び配列番号：３（ＶＨ ＣＤＲ３）に述べられる。抗体８１の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列は、配列番号：２３５に記載される（配列表参照）。抗体８１のＶＬ ＣＤＲドメインアミノ酸配列は、配列番号：２６４（ＶＬ ＣＤＲ１）；配列番号：２６８（ＶＬ ＣＤＲ２）、及び配列番号：２６６（ＶＬ ＣＤＲ３）に述べられる。抗体８１の重鎖定常領域は、配列番号：２６９に述べられる。抗体８１の軽鎖定常領域は、配列番号：２８３に述べられる。そのため、特定の実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：２６３、２、及び３に述べられる可変重鎖ＣＤＲセット（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）並びに配列番号：２６４、２６８、及び２６６に述べられる軽鎖可変領域ＣＤＲセットを含む。他の実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：２３５に述べられるアミノ酸残基を含む可変軽鎖及び配列番号：１４７に述べられる重鎖可変領域を含む。
一実施形態において、本発明は、抗体８５のものに対応する結合領域、例えば、ＣＤＲ、可変領域を含む抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合断片を含むＡＤＣを提供する。抗体８５（すなわちＡｂ８６）の重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列は、配列番号：２４３に述べられる（配列表参照）。抗体８５のＶＨ ＣＤＲドメインアミノ酸配列は、配列番号：２４５（ＶＨ ＣＤＲ１）；配列番号：２４６（ＶＨ ＣＤＲ２）、及び配列番号：２４７（ＶＨ ＣＤＲ３）に述べられる。抗体８５の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列は、配列番号：２４２に記載される（配列表参照）。抗体８５のＶＬ ＣＤＲドメインアミノ酸配列は、配列番号：２４８（ＶＬ ＣＤＲ１）；配列番号：２４９（ＶＬ ＣＤＲ２）、及び配列番号：２５０（ＶＬ ＣＤＲ３）に述べられる。抗体８５の重鎖定常領域は、配列番号：２６９に述べられる。抗体８５の軽鎖定常領域は、配列番号：２８３に述べられる。そのため、特定の実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：２４５、２４６、及び２４７に述べられる可変重鎖ＣＤＲセット（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）並びに配列番号：２４８、２４９、及び２５０に述べられる軽鎖可変領域ＣＤＲセットを含む。他の実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：２４４に述べられるアミノ酸残基を含む可変軽鎖及び配列番号：２４３に述べられる重鎖可変領域を含む。
一実施形態において、本発明は、抗体８６のものに対応する結合領域、例えば、ＣＤＲ、可変領域を含む抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合断片を含むＡＤＣを提供する。抗体８６（すなわちＡｂ８６）の重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列は、配列番号：２５１に述べられる（配列表参照）。抗体８６のＶＨ ＣＤＲドメインアミノ酸配列は、配列番号：２４５（ＶＨ ＣＤＲ１）；配列番号：２５３（ＶＨ ＣＤＲ２）、及び配列番号：３（ＶＨ ＣＤＲ３）に述べられる。抗体８６の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列は、配列番号：２５２に記載される（配列表参照）。抗体８６のＶＬ ＣＤＲドメインアミノ酸配列は、配列番号：２５４（ＶＬ ＣＤＲ１）；配列番号：２４９（ＶＬ ＣＤＲ２）、及び配列番号：２５５（ＶＬ ＣＤＲ３）に述べられる。抗体８６の重鎖定常領域は、配列番号：２６９に述べられる。抗体８６の軽鎖定常領域は、配列番号：２８３に述べられる。そのため、特定の実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：２４５、２５３、及び３に述べられる可変重鎖ＣＤＲセット（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）並びに配列番号：２５４、２４９、及び２５５に述べられる軽鎖可変領域ＣＤＲセットを含む。他の実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：２５２に述べられるアミノ酸残基を含む可変軽鎖及び配列番号：２５１に述べられる重鎖可変領域を含む。
一実施形態において、本発明は、抗体８７のものに対応する結合領域、例えば、ＣＤＲ、可変領域を含む抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合断片を含むＡＤＣを提供する。抗体８７（すなわちＡｂ８７）の重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列は、配列番号：２４３に述べられる（配列表参照）。抗体８７のＶＨ ＣＤＲドメインアミノ酸配列は、配列番号：２４５（ＶＨ ＣＤＲ１）；配列番号：２４６（ＶＨ ＣＤＲ２）、及び配列番号：２４７（ＶＨ ＣＤＲ３）に述べられる。抗体８７の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列は、配列番号：２５６に記載される（配列表参照）。抗体８７のＶＬ ＣＤＲドメインアミノ酸配列は、配列番号：２５７（ＶＬ ＣＤＲ１）；配列番号：５（ＶＬ ＣＤＲ２）、及び配列番号：２５５（ＶＬ ＣＤＲ３）に述べられる。抗体８７の重鎖定常領域は、配列番号：２６９に述べられる。抗体８７の軽鎖定常領域は、配列番号：２８３に述べられる。そのため、特定の実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：２４５、２４６、及び２４７に述べられる可変重鎖ＣＤＲセット（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）並びに配列番号：２５７、５、及び２５５に述べられる軽鎖可変領域ＣＤＲセットを含む。他の実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：２５６に述べられるアミノ酸残基を含む可変軽鎖及び配列番号：２４３に述べられる重鎖可変領域を含む。
一実施形態において、本発明は、抗体８８のものに対応する結合領域、例えば、ＣＤＲ、可変領域を含む抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合断片を含むＡＤＣを提供する。抗体８８（すなわちＡｂ８８）の重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列は、配列番号：２５８に述べられる（配列表参照）。抗体８８のＶＨ ＣＤＲドメインアミノ酸配列は、配列番号：２４５（ＶＨ ＣＤＲ１）；配列番号：２５９（ＶＨ ＣＤＲ２）、及び配列番号：３（ＶＨ ＣＤＲ３）に述べられる。抗体８８の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列は、配列番号：２５６に記載される（配列表参照）。抗体８８のＶＬ ＣＤＲドメインアミノ酸配列は、配列番号：２５７（ＶＬ ＣＤＲ１）；配列番号：５（ＶＬ ＣＤＲ２）、及び配列番号：２５５（ＶＬ ＣＤＲ３）に述べられる。抗体８８の重鎖定常領域は、配列番号：２６９に述べられる。抗体８８の軽鎖定常領域は、配列番号：２８３に述べられる。そのため、特定の実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：２４５、２５９、及び３に述べられる可変重鎖ＣＤＲセット（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）並びに配列番号：２５７、５、及び２５５に述べられる軽鎖可変領域ＣＤＲセットを含む。他の実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：２５６に述べられるアミノ酸残基を含む可変軽鎖及び配列番号：２５８に述べられる重鎖可変領域を含む。
一実施形態において、本発明は、抗体８９のものに対応する結合領域、例えば、ＣＤＲ、可変領域を含む抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合断片を含むＡＤＣを提供する。抗体８９（すなわちＡｂ８９）の重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列は、配列番号：２６０に述べられる（配列表参照）。抗体８９のＶＨ ＣＤＲドメインアミノ酸配列は、配列番号：２４５（ＶＨ ＣＤＲ１）；配列番号：２（ＶＨ ＣＤＲ２）、及び配列番号：３（ＶＨ ＣＤＲ３）に述べられる。抗体８９の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列は、配列番号：２５２に記載される（配列表参照）。抗体８９のＶＬ ＣＤＲドメインアミノ酸配列は、配列番号：２５４（ＶＬ ＣＤＲ１）；配列番号：２４９（ＶＬ ＣＤＲ２）、及び配列番号：２５５（ＶＬ ＣＤＲ３）に述べられる。抗体８９の重鎖定常領域は、配列番号：２６９に述べられる。抗体８９の軽鎖定常領域は、配列番号：２８３に述べられる。そのため、特定の実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：２４５、２、及び３に述べられる可変重鎖ＣＤＲセット（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）並びに配列番号：２５４、２４９、及び２５５に述べられる軽鎖可変領域ＣＤＲセットを含む。他の実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：２５２に述べられるアミノ酸残基を含む可変軽鎖及び配列番号：２６０に述べられる重鎖可変領域を含む。
一実施形態において、本発明は、抗体２４９のものに対応する結合領域、例えば、ＣＤＲ、可変領域を含む抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合断片を含むＡＤＣを提供する。抗体２４９（すなわちＡｂ２４９）の重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列は、配列番号：２３８に述べられる（配列表参照）。抗体２４９のＶＨ ＣＤＲドメインアミノ酸配列は、配列番号：２８６（ＶＨ ＣＤＲ１）；配列番号：２（ＶＨ ＣＤＲ２）、及び配列番号：２８７（ＶＨ ＣＤＲ３）に述べられる。抗体２４９の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列は、配列番号：２４２に記載される（配列表参照）。抗体２４９のＶＬ ＣＤＲドメインアミノ酸配列は、配列番号：２８８（ＶＬ ＣＤＲ１）；配列番号：２４９（ＶＬ ＣＤＲ２）、及び配列番号：２８９（ＶＬ ＣＤＲ３）に述べられる。抗体２４９の重鎖定常領域は、配列番号：２６９に述べられる。抗体２４９の軽鎖定常領域は、配列番号：２８３に述べられる。そのため、特定の実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：２８６、２、及び２８７に述べられる可変重鎖ＣＤＲセット（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）並びに配列番号：２８８、２４９、及び２８９に述べられる軽鎖可変領域ＣＤＲセットを含む。他の実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：２４２に述べられるアミノ酸残基を含む可変軽鎖及び配列番号：２３８に述べられる重鎖可変領域を含む。
さらに、配列番号：１４７～１６８に述べられる結合領域（重鎖及び軽鎖ＣＤＲ又は可変領域）を含む抗ＣＤ１１７抗体薬物複合体（ＡＤＣ）が本開示に含まれる。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：１４７のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：１４８のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：１４７のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：１４９のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：１４７のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：１５０のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：１４７のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：１５１のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：１４７のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：１５２のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：１４７のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：１５３のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：１４７のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：１５４のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：１４７のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：１５５のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：１４７のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：１５６のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：１４７のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：１５７のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：１４７のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：１５８のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：１４７のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：１５９のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：１４７のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：１６０のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：１４７のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：１６１のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：１４７のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：１６２のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：１４７のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：１６３のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：１６４のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：１６５のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：１６６のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：１６７のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：１６８のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：１６９のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：１７０のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：１７１のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：１７２のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：１７３のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：１７４のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：１７５のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：１７６のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：１７７のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：１７８のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：１７９のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：１８０のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：１８１のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：１７２のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：１８２のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：１８３のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：１８４のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：１８５のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：１８６のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：１８７のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：１８８のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：１８９のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：１９０のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：１９１のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：１９２のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：１９３のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：１９４のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：１９５のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：１９６のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：１９７のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：１９８のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：１９９のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：２００のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：２０１のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：１９０のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：２０２のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：２０３のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：２０４のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：２０５のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：２０６のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：２０７のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：２０８のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：２０９のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：２１０のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：２１１のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：２１２のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：２１３のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：２１４のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：２１５のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：２１６のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：２１７のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：２１８のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：２１９のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：２２０のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：２２１のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：２２２のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：２２３のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：２２４のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：２２５のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：２２６のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：２２７のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：１４７のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：２２８のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：１４７のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：２２９のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：１４７のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：２３０のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：１４７のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：２３１のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：１４７のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：２３２のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：１４７のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：２３３のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：１４７のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：２３４のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。
一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：１４７のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：２３５のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：１４７のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：２３６のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。
一実施形態において、本明細書に記載されるＡＤＣの抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：１４７のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：２３７のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：２４３のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：２４４のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：２５１のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：２５２のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：２４３のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：２５６のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：２５８のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：２５６のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：２６０のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：２５２のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：２３８のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：２３９のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：１４７のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：２３９のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：１４７のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：２４０のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：２３８のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：２４１のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合部分は、配列番号：２３８のアミノ酸配列に述べられる重鎖可変領域及び配列番号：２４２のアミノ酸配列に述べられる軽鎖可変領域を含む。
本明細書に記載される抗ＣＤ１１７抗体のいくつかは、抗体が、ＣＤ１１７を発現している細胞上でＣＤ１１７活性を実質的に阻害しないという点で中立抗体である。中立抗体は、例えばインビトロ幹細胞因子（ＳＣＦ）依存性細胞増殖アッセイを使用して特定できる。ＳＣＦ依存性細胞増殖アッセイにおいて、中立ＣＤ１１７抗体は、中立抗体が、ＣＤ１１７活性を阻害するためなど、ＳＣＦがＣＤ１１７に結合するのをブロックしないため、分裂するのにＳＣＦに依存性であるＣＤ３４＋細胞を殺傷しないだろう。
中立抗体は、ヒトＣＤ１１７に特異的に結合するその能力を考慮すると、診断目的で使用できるが、本明細書に記載のものなどの細胞毒とコンジュゲートされると、ＣＤ１１７を発現している細胞を殺傷するためにも有効である。典型的には、複合体に使用される抗体は、抗体に独特な作動活性又は拮抗活性を有する。しかし、特に複合体が幹細胞移植の前に前処置剤として使用されている状況で、複合体に独特な手法が本明細書に記載される。単独又は複合体として細胞毒と組み合わされたアンタゴニスト抗体は、細胞毒に加えて抗体のみの殺傷能力を考慮すると有効であり得るが、中立抗ＣＤ１１７抗体を含む複合体による前処置は、抗体の活性が細胞毒の効果に次ぐものであるが、抗体の内部移行及び親和性特性、例えば解離速度が細胞毒の有効な送達に重要である代替戦略を提示する。
中立抗ＣＤ１１７抗体の例には、Ａｂ５８、Ａｂ６１、Ａｂ６６、Ａｂ６７、Ａｂ６８、及びＡｂ６９がある。中立な抗ＣＤ１１７抗体ＣＤＲのＣＤＲのアミノ酸配列の比較は、特定された中立抗体の２つの群の間のコンセンサス配列を明らかにする。Ａｂ５８及びＡｂ６１は同じ軽鎖ＣＤＲ及びＨＣ ＣＤＲ３を共有し、ＨＣ ＣＤＲ１及びＨＣ ＣＤＲ２にわずかに変動がある。ＨＣ ＣＤＲ１及びＣＤＲ２のコンセンサス配列は、配列番号：１３３及び１３４に記載されている。Ａｂ６６、Ａｂ６７、Ａｂ６８、及びＡｂ６９も中立抗体である。Ａｂ６６、Ａｂ６７、Ａｂ６８、及びＡｂ６９は、同じ軽鎖ＣＤＲ及び同じＨＣ ＣＤＲ３を共有するが、これらの抗体は、それらのＨＣ ＣＤＲ１及びＨＣ ＣＤＲ２領域内に変動を有する。ＨＣ ＣＤＲ１及びＨＣ ＣＤＲ２領域中のこれらの抗体のコンセンサス配列は、それぞれ、配列番号：１３９及び１４０に与えられている。
Ａｂ５４、Ａｂ５５、Ａｂ５６、及びＡｂ５７を含むアンタゴニスト抗体も本明細書に提供されている。Ａｂ５４、Ａｂ５５、Ａｂ５６、及びＡｂ５７は、同じ軽鎖ＣＤＲ及び同じＨＣ ＣＤＲ３を共有するが、これらの抗体は、それらのＨＣ ＣＤＲ１及びＨＣ ＣＤＲ２領域内に変動を有する。ＨＣ ＣＤＲ１及びＨＣ ＣＤＲ２領域中のこれらの抗体のコンセンサス配列は、それぞれ、配列番号：１２７及び１２８に与えられている。
一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合断片は、本明細書に開示される配列番号に少なくとも９５％、９６％、９７％、又は９９％同一であるアミノ酸配列を有する可変領域を含む。或いは、抗ＣＤ１１７抗体又はその抗原結合断片は、本明細書に開示される配列番号を含むＣＤＲを、本明細書に開示される配列番号に少なくとも９５％、９６％、９７％、又は９９％同一であるアミノ酸配列を有する本明細書に記載される可変領域のフレームワーク領域と共に含む。
本明細書に記載される抗ＣＤ１１７抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ）、ｓｃＦｖ（単鎖Ｆｖ）、サロボディ（サロゲート軽鎖コンストラクトを含む）、シングルドメイン抗体、ラクダ化抗体などを含むがこれらに限定されない、ヒトＣＤ１１７に特異的に結合する完全長抗体、二重特異性抗体、二重可変ドメイン抗体、多鎖（ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｃｈａｉｎ）若しくは単鎖抗体、及び／又は結合断片の形態であり得る。それらは、例えば、ＩｇＡ（例えば、ＩｇＡ１又はＩｇＡ２）、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４）、又はＩｇＭを含むあらゆるアイソタイプのものでも、それらから誘導されてもよい。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体は、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４）である。
本明細書に記載される方法と併せて使用するための抗体には、Ｆｃドメインを含むか又は欠く抗体断片などの上述の抗体のバリアント並びに本明細書に記載される非ヒト抗体のヒト化バリアント及び本明細書に記載される抗体又は抗体断片のＣＤＲ又はその等価な領域の１つ以上又は全てを含む抗体様タンパク質スキャホールド（例えば、１０Ｆｎ３ドメイン）がある。上記抗体の例示的な抗原結合断片には、とりわけ、二重可変免疫グロブリンドメイン、単鎖Ｆｖ分子（ｓｃＦｖ）、ダイアボディ、トリアボディ、ナノボディ、抗体様タンパク質スキャホールド、Ｆｖ断片、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２分子、及びタンデムジ－ｓｃＦｖがある。
一実施形態において、１つ以上の放射標識されたアミノ酸を含む抗ＣＤ１１７抗体が提供される。放射標識された抗ＣＤ１１７抗体は、診断目的と治療目的の両方に使用され得る（放射標識された分子へのコンジュゲーションは、別の可能性がある特徴である）。ポリペプチドの標識の非限定的な例には、３Ｈ、１４Ｃ、１５Ｎ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、及び１２５Ｉ、１３１Ｉ、及び１８６Ｒｅがあるが、これらに限定されない。放射標識されたアミノ酸及び関連するペプチド誘導体を調製する方法は、当技術分野に公知である（例えば、Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ ６５５－６８６（２ｄ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｈａｆｎｅｒ ａｎｄ Ｌｏｎｇｏ，ｅｄｓ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｒａｖｅｎ（１９９６）中のＪｕｎｇｈａｎｓ ｅｔ ａｌ．，）及び米国特許第４，６８１，５８１号明細書、米国特許第４，７３５，２１０号明細書、米国特許第５，１０１，８２７号明細書、米国特許第５，１０２，９９０号明細書（Ｕ．Ｓ．ＲＥ３５，５００号明細書）、米国特許第５，６４８，４７１号明細書、及び米国特許第５，６９７，９０２号明細書を参照されたい。例えば、放射性同位元素は、クロラミンＴ法によりコンジュゲートされ得る。
抗ＣＤ４５抗体
一実施形態において、本発明は、ＣＤ４５ポリペプチド、例えば、ヒトＣＤ４５ポリペプチドに特異的に結合する抗体及びその抗原結合断片を含むＡＤＣ並びにその使用を包む。例示的な実施形態において、ＣＤ４５ポリペプチドに特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む。
ＣＤ４５は、Ｔ及びＢ細胞抗原受容体媒介性シグナル伝達に必須な造血細胞特異的な膜貫通型タンパク質チロシンホスファターゼである。ＣＤ４５は、大きい細胞外ドメイン及びホスファターゼ含有サイトゾルドメインを含む。ＣＤ４５は、刺激の性質及び関与する細胞型に応じて、正と負の両方の調節因子として作用し得る。ＣＤ４５遺伝子中に可能な順列変異（ｐｅｒｍｕｔａｔｉｏｎ）が多数あるが、６つのアイソフォームのみが従来ヒトに確認されている。アイソフォームは、ＲＡ、ＲＯ、ＲＢ、ＲＡＢ、ＲＢＣ、及びＲＡＢＣである（Ｈｅｒｍｉｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．２００３“ＣＤ４５：ａ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｒｅｇｕｌａｔｏｒ ｏｆ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｔｈｒｅｓｈｏｌｄｓ ｉｎ ｉｍｍｕｎｅ ｃｅｌｌｓ．” Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２：１０７－１３７）。ＣＤ４５ＲＡは、ナイーブＴ細胞上に発現され、ＣＤ４５ＲＯは、活性化及びメモリーＴ細胞、いくつかのＢ細胞サブセット、活性化単球／マクロファージ、及び顆粒球上に発現される。ＣＤ４５ＲＢは、末梢のＢ細胞、ナイーブＴ細胞、胸腺細胞上に発現され、マクロファージ、及び樹状細胞上に弱く発現される。
特定の実施形態において、抗ＣＤ４５抗体は、アパミスタマブ（ａｐａｍｉｓｔａｍａｂ）（別名９０Ｙ－ＢＣ８、Ｉｏｍａｂ－Ｂ、ＢＣ８；例えば、米国特許出願公開第２０１７０３２６２５９号明細書、国際公開第２０１７１５５９３７号パンフレット、及びＯｒｏｚｃｏ ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ．１２７．３（２０１６）：３５２－３５９に記載される通り）又はＢＣ８－Ｂ１０（例えば、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．ＰｌｏＳ ｏｎｅ １３．１０（２０１８）：ｅ０２０５１３５に記載される通り）から選択される（上記文献はそれぞれが参照により組み込まれている）。他の抗ＣＤ４５抗体は、例えば、それぞれが参照により組み込まれている国際公開第２００３０４８３２７号パンフレット、国際公開第２０１６０１６４４２号パンフレット、米国特許出願公開第２０１７０２２６２０９号明細書、米国特許出願公開第２０１６０１５２７３３号明細書、米国特許第９７０１７５６号明細書；米国特許出願公開第２０１１００７６２７０号明細書、又は米国特許第７８２５２２２号明細書に記載されている。
抗ＣＤ１３７抗体
本発明は、ＣＤ１３７ポリペプチド、例えば、ヒトＣＤ１３７ポリペプチドに特異的に結合する抗体及びその抗原結合断片を含むＡＤＣ並びにその使用を包む。例示的な実施形態において、ＣＤ１３７ポリペプチドに特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む。
Ｔ細胞は、ＣＤ１３７を発現することが示されてきたが、その理由は、この抗原が膜貫通型ＴＮＦ受容体スーパーファミリーの共刺激分子であり、種々の造血細胞上で発現されており、Ｔ細胞活性化を促進し、Ｔ細胞の増殖及び生存を調節するからである（例えば、その開示がＴ細胞によるＣＤ１３７の発現に関連するので参照により本明細書に組み込まれるＣａｎｎｏｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６７：１３１３－１３２４，２００１参照）。或いは、ＣＤ１３７は、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー９（ＴＮＦＲＳＦ９）、４－１ＢＢと名付けられているか、又はリンパ球活性化により誘導される（ＩＬＡ）。
特定の実施形態において、抗ＣＤ１３７抗体は、ＡＤＧ１０６（例えば、米国特許出願公開第２０１９００５５３１４号明細書、国際公開第２０１９０３７７１１号パンフレット、国際公開第２０１９０３６８５５号パンフレットに記載される）；ＡＧＥＮ２３７３（例えば、国際公開第２０１８１９１５０２号パンフレット、米国特許出願公開第２０１８０３４４８７０号明細書に記載される）；ＡＴＯＲ－１０１７（例えば、国際公開第２０１８０９１７４０号パンフレット、米国特許出願公開第２０１８０１１８８４１号明細書に記載される）ＰＥ０１６６（例えば、Ｓｏｎｇ ｅｔ ａｌ．ＡＡＣＲ ２０１９，Ａｂｓｔｒａｃｔ ２３９７／２１に記載される）、ウレルマブ（別名ＢＭＳ－６６３５１３；例えば、国際公開第２００４０１０９４７号パンフレット、国際公開第２００５０３５５８４号パンフレット、米国特許出願公開第２００９００６８１９２号明細書、米国特許第７６５９３８４号明細書、米国特許第８４７５７９０号明細書、米国特許第８１３７６６７号明細書、米国特許出願公開第２０１００１８３６２１号明細書、米国特許第８７１６４５２号明細書、米国特許出願公開第２０１２０１４１４９４号明細書、米国特許第９３８２３２８号明細書、米国特許出願公開第２０１４０１９３４２２号明細書、国際公開第２０１６０２９０７３号パンフレット、米国特許出願公開第２０１６０３６８９９８号明細書、国際公開第２０１７１８１０３４号パンフレット、米国特許出願公開第２０１９００６２４４５号明細書、Ｃｈｉｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ．９．１（２０１８）：４６７９．；Ｓｅｇａｌ ｅｔ ａｌ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ．２３．８（２０１７）：１９２９－１９３６に記載される）；及びウトミルマブ（別名ＰＦ－０５０８２５６６、ＭＯＲ－７４８０．；例えば、国際公開第２０１２０３２４３３号パンフレット、米国特許出願公開第２０１２０２３７４９８号明細書、米国特許出願公開第２０１４０１７８３６８号明細書、国際公開第２０１２１４５１８３号パンフレット、国際公開第２０１５１１９９２３号パンフレット、国際公開第２０１５１７９２３６号パンフレット、米国特許出願公開第２０１６０１５２７２２号明細書、米国特許出願公開第２０１９００３１７６５号明細書、国際公開第２０１７１３００７６号パンフレット、Ｃｈｉｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ．９．１（２０１８）：４６７９．；Ｓｅｇａｌ ｅｔ ａｌ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ．２４．８（２０１８）：１８１６－１８２３；Ｆｉｓｈｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ．６１．１０（２０１２）：１７２１－１７３３に記載される）から選択される（上記文献は、そのそれぞれが参照により組み込まれている）。
他の抗ＣＤ１３７抗体は、例えば、国際公開第２０１８１３４７８７号パンフレット、国際公開第２０１９０２０７７４号パンフレット、国際公開第２０１７０７７０８５号パンフレット、米国特許出願公開第２０１８０３２７５０４号明細書、米国特許出願公開第２０１９００９９４８８号明細書、米国特許出願公開第２０１９００６０４５号明細書、米国特許出願公開第２０１９００１５５０８号明細書、国際公開第２０１９０１４３２８号パンフレット、米国特許出願公開第２０１９００７１５１０号明細書、国際公開第２０１８１２７７８７号パンフレット、米国特許出願公開第２０１８０２５８１７７号明細書、米国特許第１０１７４１２２号明細書、国際公開第２０１６１１０５８４号パンフレット、国際公開第２０１８０１７７６１号パンフレット、国際公開第２０１８０９８３７０号パンフレット、米国特許出願公開第２０１３０１４９３０１号明細書、国際公開第２０１９０２７７５４号パンフレット、国際公開第２０１８１５６７４０号パンフレット、米国特許出願公開第２０１６０２４４５２８号明細書、国際公開第２０１６１３４３５８号パンフレット、米国特許第１０２３３２５１号明細書、米国特許出願公開第２０１７０２２６２１５号明細書、米国特許出願公開第２０１６００８３４７４号明細書、国際公開第２０１７０４９４５２号パンフレット、米国特許出願公開第２０１８０２８２４２２号明細書、国際公開第２０１５１８８０４７号パンフレット、国際公開第２０１０１３２３８９号パンフレット、米国特許出願公開第２０１２００７６７２２号明細書、米国特許出願公開第２０１１０１７７１０４号明細書、国際公開第２０１１０３１０６３号パンフレット、米国特許出願公開第２００８０３０５１１３号明細書、米国特許出願公開第２００８０００８７１６号明細書、米国特許第７８２９０８８号明細書、米国特許出願公開第２００９００４１７６３号明細書、国際公開第２００６１２６８３５号パンフレット、Ｓｏｅｄｅｒｓｔｒｏｅｍｅｔ ａｌ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ Ｊ．８１．１２（２０１７）：１９４５－１９５２；Ｍａｋｋｏｕｋ，ｅｔ ａｌ．Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ２８．２（２０１６）：４１５－４２０；Ｍａｒｔｉｎｅｚ－Ｆｏｒｅｒｏ ｅｔ ａｌ．Ｊ．ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．１９０．１２（２０１３）：６６９４－６７０６；Ｄｕｂｒｏｔ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ．５９．８（２０１０）：１２２３－１２３３に記載されており；そのそれぞれは参照により組み込まれている。
別の実施形態において、抗体又はその抗原結合断片は、本明細書の抗ＣＤ１３７抗体に少なくとも９５％の同一性、例えば、本明細書の抗ＣＤ１３７抗体に少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。特定の実施形態において、抗体は、本明細書の抗ＣＤ１３７抗体又はそのバリアントのＨＣ可変ドメインを含む修飾された重鎖（ＨＣ）可変領域を含むが、そのバリアントは、（ｉ）１、２、３、４、若しくは５つのアミノ酸置換、付加、若しくは欠失において抗ＣＤ１３７抗体とは異なる；（ｉｉ）多くとも５、４、３、２、若しくは１つのアミノ酸置換、付加、若しくは欠失において抗ＣＤ１３７抗体とは異なる；（ｉｉｉ）１～５、１～３、１～２、２～５、若しくは３～５つのアミノ酸置換、付加、若しくは欠失において抗ＣＤ１３７抗体とは異なるか、及び／又は（ｉｖ）抗ＣＤ１３７抗体に少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含むが、ここで、（ｉ）～（ｉｖ）のいずれにおいても、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換でも非保存的アミノ酸置換でもあり得て；且つ、修飾された重鎖可変領域は、抗体のＣＤ１３７結合特異性を保持しながら、抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域と比べて増大された生物学的活性を有し得る。
一実施形態において、本明細書に記載される方法及び組成物（ＡＤＣを含む）に使用され得る抗ＣＤ１３７抗体は、マウス抗ＣＤ１３７抗体ＢＢＫ２（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ；ＭＳ６２１ＰＡＢＸ）又はＢＢＫ２抗体に対応する抗原結合領域を含む抗ＣＤ１３７抗体である。ＢＢＫ２抗体（ＢＢＫ－２抗体又は抗４－１ＢＢ抗体とも称され得る）は、ヒト４－１ＢＢ組換え型タンパク質（４－１ＢＢはＣＤ１３７としても知られる）の細胞外ドメインに結合するマウスモノクローナル抗体（ＩｇＧ１、κ）である。特定の実施形態において、本開示の方法及び組成物は、ＢＢＫ２抗体の結合領域（例えば、ＣＤＲ）を含む抗ＣＤ１３７抗体を包む。別の実施形態において、本開示の方法及び組成物は、ＢＢＫ２抗体が、ＣＤ１３７上のそのエピトープに結合するのを競合阻害する抗体を含む。特定の実施形態において、抗ＣＤ１３７抗体は、ヒト化ＢＢＫ２又はキメラのＢＢＫ２である。
一実施形態において、本明細書に記載される方法及び組成物は、ＢＢＫ２の可変重鎖及び軽鎖領域を含むキメラ抗ＣＤ１３７（ｃｈ－ＢＢＫ２）抗体を含む。特定の実施形態において、キメラＢＢＫ２抗体は、ヒト定常領域を含むＩｇＧ１抗体である。ｃｈ－ＢＢＫ２の重鎖アミノ酸配列は配列番号：２９０に記載されており、ｃｈ－ＢＢＫ２の軽鎖アミノ酸配列は配列番号：２９１に記載されている。重鎖及び軽鎖配列のそれぞれのＣＤＲ領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）は、以下にボールド体で記載されている。ＢＢＫ２のＣＤＲ領域は、カバットナンバリングに従って定義され得る。カバットナンバリングにより定義されたＣＤＲが、重鎖及び軽鎖配列のそれぞれに対して以下で記載されている（以下にボールド体で記載）。ＢＢＫ２の可変領域はイタリック体である。
Figure 2022530026000047
Figure 2022530026000048
そのため、一実施形態において、抗ＣＤ１３７抗体ＢＢＫ２（ｃｈ－ＢＢＫ２を含む）のＶＨ ＣＤＲアミノ酸配列は、ＳＹＷＩＮ（ＶＨ ＣＤＲ１；配列番号：２９２）；ＮＩＹＰＳＤＳＹＴＮＹＮＱＫＦＫＤ（ＶＨ ＣＤＲ２；配列番号：２９３）及びＮＧＶＥＧＹＰＨＹＹＡＭＥＹ（ＶＨ ＣＤＲ３；配列番号：２９４）であり、抗ＣＤ１３７抗体ＢＢＫ２（ｃｈ－ＢＢＫ２を含む）のＶＬ ＣＤＲアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＤＬＳＮＨＬＹ（ＶＬ ＣＤＲ１；配列番号：２９５）；ＹＴＳＲＬＨＳ（ＶＬ ＣＤＲ２；配列番号：２９６）及びＱＱＧＹＴＬＰＹＴ（ＶＬ ＣＤＲ３；配列番号：２９７）である。
ＢＢＫ２の重鎖可変領域は、配列番号：２９８に、
Figure 2022530026000049
 と述べられている。ＢＢＫ２の軽鎖可変領域は、配列番号：２９９に、
Figure 2022530026000050
 と述べられている。抗ＣＤ１３７抗体（抗ＣＤ１３７ ＡＤＣを含む）は、それぞれ、配列番号：２９８及び２９９に述べられる重鎖及び軽鎖可変領域アミノ酸配列を含み得る。
一実施形態において、抗ＣＤ１３７抗体、例えば、キメラ（ｃｈ－ＢＢＫ２）抗体又はヒト化ＢＢＫ２抗体は、配列番号：２９２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号：２９３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号：２９４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含み；配列番号：２９５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号：２９６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号：２９７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む。
一実施形態において、抗ＣＤ１３７抗体、例えば、キメラ（ｃｈ－ＢＢＫ２）抗体又はヒト化ＢＢＫ２抗体は、配列番号：２９２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号：２９３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号：２９４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含み；配列番号：２９５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号：２９６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号：２９７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む。
このように、ＢＢＫ２、ヒト化ＢＢＫ２、又はキメラのＢＢＫ２抗体は、本明細書に記載される抗ＣＤ１３７ ＡＤＣ及び方法で使用できる。これらの抗体のそれぞれは、当技術分野に公知である方法及び本明細書に記載の方法を使用して、以下に記載される細胞毒のいずれにもコンジュゲートできる。
抗ＣＤ５抗体
特定の実施形態において、本明細書に記載される組成物及び方法は、ヒトＣＤ５に特異的に結合する抗体又はその断片を含むＡＤＣを包む。ヒトＣＤ５は、ＬＥＵ１又はＴ１とも称される。ヒトＣＤ５は、胸腺細胞、Ｔリンパ球、及びＢリンパ球のサブセットの表面上に見られるＩ型膜貫通型糖タンパク質である。ヒトＣＤ５の２種のアイソフォームが特定されている。アイソフォーム１は４３８個のアミノ酸を含み、Ｊｏｎｅｓ．ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ ３２３（６０８６），３４６－３４９及び以下に記載されている（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００１３３３３８５．１）：
Figure 2022530026000051
Ｔ細胞はＣＤ５を発現することが示されており、それは細胞接着分子であり、活性化Ｔ細胞の増殖応答とＴ細胞ヘルパー機能の両方に関わっている。それは、受容体として機能することも示されており、Ｂ細胞にしかない細胞表面タンパク質であるＣＤ７２と相互作用することにより共刺激シグナルをＴ細胞に送る。ＣＤ５と結合する抗体又はその抗原結合断片は、例えば、ＣＤ５とＣＤ７２の間の相互作用を阻害することにより、Ｔ細胞活性化及び造血幹細胞移植片に対するＴ細胞媒介性免疫応答を抑制し得る。ＣＤ５と結合する抗体及びその抗原結合断片は、例えば、抗体若しくはその抗原結合断片を細胞毒（本明細書に記載されるか又は当技術分野に公知である細胞毒など）にコンジュゲートすることにより、又は補体タンパク質をＴ細胞に動員することが可能なコンジュゲートされていない抗体若しくはその抗原結合断片を使用することにより、ＣＤ５＋Ｔ細胞を直接殺傷するためにも使用できる。
さらに、活性化Ｂ細胞のサブセットはＣＤ５を発現することが示されており、この発現パターンは自己反応性Ｂ細胞の中で特に一般的である（その開示が参照により全体として本明細書に組み込まれるＷｅｒｎｅｒ－Ｆａｖｒｅ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １９：１２０９－１２３１（１９８９））。ＣＤ５は、ＮＫ細胞のサブセットにより発現されることも示されている；特に、多発性骨髄腫を有する患者の間で、低密度ＣＤ５＋（ＣＤ５ＬＯＷ＋）ＮＫ細胞の集団を宿すことが示され、この表面抗原はＮＫ細胞活性化に関与している（その開示が参照により全体として本明細書に組み込まれるＩｓｈｉｙａｍａ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １４：７２５－７３０（１９９４））。そのため、ＣＤ５と特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片を使用して、Ｂ細胞及びＮＫ細胞の活性化を弱めることができる。ＣＤ５と結合する抗体又はその抗原結合断片を使用して、例えば、抗体若しくはその抗原結合断片を細胞毒（本明細書に記載されるか又は当技術分野に公知である細胞毒など）にコンジュゲートすることにより、又は補体タンパク質をＢ細胞又はＮＫ細胞に動員することが可能なコンジュゲートされていない抗体若しくはその抗原結合断片を使用することにより、ＣＤ５＋Ｂ細胞及びＮＫ細胞を直接殺傷することもできる。
本発明は、ＣＤ５ポリペプチド、例えば、ヒトＣＤ５ポリペプチドに特異的に結合する抗体及びその抗原結合断片を含むＡＤＣ並びにその使用を包含する。例示的な実施形態において、ＣＤ５ポリペプチドに特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む。
一実施形態において、ＡＤＣは、１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む重鎖可変領域を含む抗体を含む。一実施形態において、重鎖可変領域は、配列番号：３４１のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１を含む。一実施形態において、重鎖可変領域は、配列番号：３４２のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２を含む。一実施形態において、重鎖可変領域は、配列番号：３４３のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。一実施形態において、重鎖可変領域は、配列番号：３４１、配列番号：３４２、及び配列番号：３４３からなる群から選択される１つ以上のＶＨ ＣＤＲを含む。一実施形態において、重鎖可変領域は、配列番号：３４１、配列番号：３４２、及び配列番号：３４３からなる群から選択される２つ以上のＶＨ ＣＤＲを含む。一実施形態において、重鎖可変領域は、配列番号：３４１を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号：３４２を含むＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号：３４３を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。
一実施形態において、ＡＤＣは、１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む軽鎖可変領域を含む抗体を含む。一実施形態において、軽鎖可変領域は、配列番号：３４４のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１を含む。一実施形態において、軽鎖可変領域は、配列番号：３４５のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２を含む。一実施形態において、軽鎖可変領域は、配列番号：３４６のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。一実施形態において、軽鎖可変領域は、配列番号：３４４、配列番号：３４５、及び配列番号：３４６からなる群から選択される１つ以上のＶＬ ＣＤＲを含む。一実施形態において、軽鎖可変領域は、配列番号：３４４、配列番号：３４５、及び配列番号：３４６からなる群から選択される２つ以上のＶＬ ＣＤＲを含む。一実施形態において、軽鎖可変領域は、配列番号：３４４を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号：３４５を含むＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号：３４６を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。
例示的な実施形態において、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号：３４１を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号：３４２を含むＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号：３４３を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに配列番号：３４４を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号：３４５を含むＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号：３４６を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む。
特定の実施形態において、ＣＤＲの１つ以上（すなわち、配列番号：３４１～３４３を有する１つ以上の重鎖ＣＤＲ、及び／又は配列番号：３４４～３４６を有する１つ以上の軽鎖ＣＤＲ）は、抗体のＣＤ５特異性を保持しながら（すなわち、配列番号：３４１～３４３の重鎖ＣＤＲ及び配列番号：３４４～３４６の軽鎖ＣＤＲを含む抗体又はその抗原結合断片に類似の特異性）、保存的アミノ酸置換（又は２、３、４、又は５つのアミノ酸置換）を含み得る。
特定の実施形態において、抗ＣＤ５抗体又はその抗原結合断片は、マウス抗体５Ｄ７、又はそのヒト化バージョンである。マウス抗体５Ｄ７はヒトＣＤ５に結合し、本明細書に開示される抗体配列に関連するその内容が参照により組み込まれている米国特許出願公開第２０００８／０２４５０２７号明細書に記載されている。配列要約表に記載されている配列番号：３５３～３５８は、マウス抗ＣＤ５抗体５Ｄ７のＣＤＲに対応している。抗ＣＤ５抗体５Ｄ７のヒト化バージョンは、配列番号：３５９（ヒト化重鎖可変領域）及び配列番号：３６０（ヒト化軽鎖可変領域）に記載される。一実施形態において、本明細書に記載されるＡＤＣ及びその使用は、配列番号：３５３～３５８に述べられるＣＤＲを含む抗体を含む。一実施形態において、本明細書に記載されるＡＤＣ及びその使用は、それぞれ配列番号：３５９及び３６０に述べられる重鎖及び軽鎖可変領域を含む抗体を含む。
一実施形態において、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号：３５９に述べられるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。別の実施形態において、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号：３５９に少なくとも９５％の同一性、例えば、配列番号：３５９に少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。特定の実施形態において、抗体は、配列番号：３５９又は配列番号：３５９のバリアントを含むＨＣ可変ドメインを含む修飾された重鎖（ＨＣ）可変領域を含むが、そのバリアントは、（ｉ）１、２、３、４又は５つのアミノ酸置換、付加、若しくは欠失において配列番号：３５９とは異なる；（ｉｉ）多くとも５、４、３、２、若しくは１つのアミノ酸置換、付加、若しくは欠失において配列番号：３５９とは異なる；（ｉｉｉ）１～５、１～３、１～２、２～５、若しくは３～５つのアミノ酸置換、付加、若しくは欠失において配列番号：３５９とは異なる、及び／又は（ｉｖ）配列番号：３５９に少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含み、ここで、（ｉ）～（ｉｖ）のいずれにおいても、アミノ酸置換は保存的アミノ酸置換でも非保存的アミノ酸置換でもあり得て；且つ、修飾された重鎖可変領域は、抗体のＣＤ５結合特異性を保持し、すなわち配列番号：３５９を含む抗体又はその抗原結合断片に類似の結合特異性を有しながら、配列番号：３５９の重鎖可変領域と比べて増大された生物学的活性を有し得る。
一実施形態において、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号：３６０に述べられるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。別の実施形態において、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号：３６０に少なくとも９５％の同一性、例えば、配列番号：３６０に少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態において、抗体は、配列番号：３６０又は配列番号：３６０のバリアントを含むＬＣ可変ドメインを含む修飾された軽鎖（ＬＣ）可変領域を含み、ここで、そのバリアントは、（ｉ）１、２、３、４、若しくは５つのアミノ酸置換、付加、若しくは欠失において、配列番号：３６０とは異なる；（ｉｉ）多くとも５、４、３、２、若しくは１つのアミノ酸置換、付加、若しくは欠失において、配列番号：３６０とは異なる；（ｉｉｉ）１～５、１～３、１～２、２～５、若しくは３～５つのアミノ酸置換、付加、若しくは欠失において、配列番号：３６０とは異なる、及び／又は（ｉｖ）配列番号：３６０に少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一であるアミノ酸配列を含み、ここで、（ｉ）～（ｉｖ）のいずれにおいても、アミノ酸置換は保存的アミノ酸置換でも非保存的アミノ酸置換でもあり得て；且つ、修飾された軽鎖可変領域は、抗体のＣＤ５結合特異性を保持し、すなわち配列番号：３６０を含む抗体又はその抗原結合断片に類似の結合特異性を有しながら、配列番号：３６０の軽鎖可変領域と比べて増大された生物学的活性を有し得る。
例示的な実施形態において、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号：３５９に少なくとも９５％の同一性、例えば、配列番号：３５９に少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号：３６０に少なくとも９５％の同一性、例えば、配列番号：３６０に少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号：３５９を含む重鎖可変領域及び配列番号：３６０を含む軽鎖可変領域を含む。
別の実施形態において、抗ＣＤ５抗体又はその抗原結合断片は、配列番号：３５３のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１を含む重鎖可変領域を含み得る。一実施形態において、重鎖可変領域は、配列番号：３５４のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２を含む。一実施形態において、重鎖可変領域は、配列番号：３５５のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。一実施形態において、重鎖可変領域は、配列番号：３５３、配列番号：３５４、及び配列番号：３５５からなる群から選択される１つ以上のＶＨ ＣＤＲを含む。一実施形態において、重鎖可変領域は、配列番号：３５３、配列番号：３５４、及び配列番号：３５５からなる群から選択される２つ以上のＶＨ ＣＤＲを含む。一実施形態において、重鎖可変領域は、配列番号：３５３を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号：３５４を含むＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号：３５５を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。
一実施形態において、軽鎖可変領域は、１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。一実施形態において、軽鎖可変領域は、配列番号：３５６のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１を含む。一実施形態において、軽鎖可変領域は、配列番号：３５７のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２を含む。一実施形態において、軽鎖可変領域は、配列番号：３５８のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。一実施形態において、軽鎖可変領域は、配列番号：３５６、配列番号：３５７、及び配列番号：３５８からなる群から選択される１つ以上のＶＬ ＣＤＲを含む。一実施形態において、軽鎖可変領域は、配列番号：３５６、配列番号：３５７、及び配列番号：３５８からなる群から選択される２つ以上のＶＬ ＣＤＲを含む。一実施形態において、軽鎖可変領域は、配列番号：３５６を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号：３５７を含むＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号：３５８を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。
例示的な実施形態において、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号：３５３を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号：３５４を含むＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号：３５５を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに配列番号：３５６を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号：３５７を含むＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号：３５８を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む。
特定の実施形態において、ＣＤＲの１つ以上（すなわち配列番号：３５３～３５５を有する１つ以上の重鎖ＣＤＲ、及び／又は配列番号：３５６～３５８を有する１つ以上の軽鎖ＣＤＲ）は、抗体のＣＤ５特異性（すなわち、配列番号：３５３～３５５の重鎖ＣＤＲ及び配列番号：３５６～３５８の軽鎖ＣＤＲを含む抗体又はその抗原結合断片に類似した特異性）を保持しながら、保存的アミノ酸置換（又は２、３、４、又は５つのアミノ酸置換）を有し得る。
ＣＤ５抗原に結合することが可能な抗体及びその抗原結合断片は、免疫法、計算によるモデリング技法、並びに以下に記載されるファージディスプレイ及び細胞系ディスプレイプラットフォームなどのインビトロ選択方法など、当技術分野に公知であり且つ本明細書に記載される技法を使用して特定することができる。
本明細書に記載される組成物及び方法と併せて使用できる抗ＣＤ５抗体は、以下の可変領域の一方若しくは両方、又はそれに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列（例えば、それに対して８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又はそれ以上の配列同一性を有するアミノ酸配列）を有するものを含む：
下記アミノ酸配列を有するＶＬ
Figure 2022530026000052
 及び
下記アミノ酸配列を有するＶＨ
Figure 2022530026000053
前記ＶＬ及びＶＨ配列を含む抗体及びその抗原結合断片は、例えば、その開示が、ｈｅ１抗体などの抗ＣＤ５抗体及びその抗原結合断片に関連するので参照により本明細書に組み込まれる米国特許第５，８６９，６１９号明細書に記載されている。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ５抗体又はその抗原結合断片は、配列番号：３２５及び配列番号：３２６のＶＬ及びＶＨ鎖を含む。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ５抗体又はその抗原結合断片は、配列番号：３２５及び配列番号：３２６のＶＬ及びＶＨ鎖に含まれるＣＤＲを含む。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ５抗体又はその抗原結合断片は、配列番号：３２５及び配列番号：３２６のＶＬ及びＶＨ鎖に含まれるＣＤＲを含み、ＶＬ及びＶＨ配列の残りは、配列番号：３２５及び配列番号：３２６のＶＬ及びＶＨ配列に少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又はそれ以上の配列同一性）を有する。
いくつかの実施形態において、抗ＣＤ５抗体又はその抗原結合断片は以下のＣＤＲを含む：
アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹ（配列番号：３２７）を有するＣＤＲ－Ｈ１；
アミノ酸配列ＮＴＨＴＧＥ（配列番号：３２８）を有するＣＤＲ－Ｈ２；
アミノ酸配列ＲＧＹＤＷＹＦＤＶ（配列番号：３２９）を有するＣＤＲ－Ｈ３；
アミノ酸配列ＲＡＳＱＤＩＮＳＹＬＳ（配列番号：３３０）を有するＣＤＲ－Ｌ１；
アミノ酸配列ＲＡＮＲＬＶＤ（配列番号：３３１）を有するＣＤＲ－Ｌ２；及び
アミノ酸配列ＱＱＹＤＥＳＰＷＴ（配列番号：３３２）を有するＣＤＲ－Ｌ３。
本明細書に記載される組成物及び方法と併せて使用できる追加の抗ＣＤ５抗体は、以下の可変領域の一方若しくは両方又はそれに少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列（例えば、それに８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又はそれ以上の配列同一性を有するアミノ酸配列）を有するものを含む：
下記アミノ酸配列を有するＶＬ
Figure 2022530026000054
 下記アミノ酸配列を有するＶＨ
Figure 2022530026000055
上記ＶＬ及びＶＨ配列を含む抗体及びその抗原結合断片は、例えば、その開示が、ｈｅ３抗体などの抗ＣＤ５抗体及びその抗原結合断片に関連するため参照により本明細書に組み込まれる米国特許第５，８６９，６１９号明細書に記載されている。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ５抗体又はその抗原結合断片は、配列番号：３２７及び配列番号：３２８のＶＬ及びＶＨ鎖を含む抗体のＶＬ及びＶＨ鎖に含まれるＣＤＲを含む。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ５抗体又はその抗原結合断片は、配列番号：３２７及び配列番号：３２８のＶＬ及びＶＨ鎖に含まれるＣＤＲを含み、ＶＬ及びＶＨ配列の残りは、配列番号：３２７及び配列番号：３２８のＶＬ及びＶＨ配列に少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又はそれ以上の配列同一性）を有する。
いくつかの実施形態において、抗ＣＤ５抗体又はその抗原結合断片は以下のＣＤＲを含む：
アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹ（配列番号：３３５）を有するＣＤＲ－Ｈ１；
アミノ酸配列ＮＴＨＹＧＥ（配列番号：３３６）を有するＣＤＲ－Ｈ２；
アミノ酸配列ＲＲＧＹＤＷＹＦＤＶ（配列番号：３３７）を有するＣＤＲ－Ｈ３；
アミノ酸配列ＲＡＳＱＤＩＮＳＹＬＳ（配列番号：３３８）を有するＣＤＲ－Ｌ１；
アミノ酸配列ＲＡＮＲＬＥＳ（配列番号：３３９）を有するＣＤＲ－Ｌ２；及び
アミノ酸配列ＱＱＹＤＥＳＰＷＴ（配列番号：３４０）を有するＣＤＲ－Ｌ３。
上記ＣＤＲ配列を含む抗体及びその抗原結合断片は、例えば、その開示が、抗ＣＤ５抗体及びその抗原結合断片に関連するため参照により本明細書に組み込まれる米国特許第５，８６９，６１９号明細書に記載されている。
本明細書に記載される組成物及び方法と併せて使用できる他の抗ＣＤ５抗体には、例えば、それぞれの開示が、抗ＣＤ５抗体及びその抗原結合断片に関連するため参照により本明細書に組み込まれる米国特許第５，８２１，１２３号明細書；米国特許第５，７６６，８８６号明細書；米国特許第５，７７０，１９６号明細書；米国特許第７，１５３，９３２号明細書；米国特許第５，６２１，０８３号明細書；米国特許第６，６４９，７４２号明細書；米国特許第６，１４６，６３１号明細書；米国特許第５，７５６，６９９号明細書；米国特許第５，７４４，５８０号明細書；米国特許第６，３７６，２１７号明細書；米国特許第５，８３７，４９１号明細書；及び米国特許第６，１４６，８５０号明細書に記載される抗ＣＤ５抗体がある。
本明細書に記載される組成物及び方法と併せて使用できる他の抗ＣＤ５抗体には、例えば、ＡＴＣＣ ＣＲＬ ８０００として寄託されたハイブリドーマ細胞株により産生されたものがある（抗ＣＤ５マウス抗体ＯＫＴ１）。そのような抗体は、それぞれの開示が、抗ＣＤ５抗体及びその抗原結合断片に関連するので参照により本明細書に組み込まれる米国特許第４，５１５，８９４号明細書；米国特許第４，６５７，７６０号明細書；及び米国特許第４，３６３，７９９号明細書に記載されている。
本明細書に記載される組成物及び方法と併せて使用できる抗ＣＤ５抗体は、以下のＣＤＲの１つ以上又は全てを有するものを含む：
アミノ酸配列ＧＹＳＩＴＳＧＹＹ（配列番号：３４１）を有するＣＤＲ－Ｈ１；
アミノ酸配列ＩＳＹＳＧＦＴ（配列番号：３４２）を有するＣＤＲ－Ｈ２；
アミノ酸配列ＡＧＤＲＴＧＳＷＦＡＹ（配列番号：３４３）を有するＣＤＲ－Ｈ３；
アミノ酸配列ＱＤＩＳＮＹ（配列番号：３４４）を有するＣＤＲ－Ｌ１；
アミノ酸配列ＡＴＳ（配列番号：３４５）を有するＣＤＲ－Ｌ２；及び
アミノ酸配列ＬＱＹＡＳＹＰＦＴ（配列番号：３４６）を有するＣＤＲ－Ｌ３。
上記ＣＤＲ配列を含む抗体及びその抗原結合断片は、例えば、その開示が、抗ＣＤ５抗体及びその抗原結合断片に関連するので参照により本明細書に組み込まれる米国特許第８，６７９，５００号明細書に記載されている。
本明細書に記載される組成物及び方法と併せて使用できる抗ＣＤ５抗体は、以下のＣＤＲの１つ以上又は全てを有するものを含む：
アミノ酸配列ＧＹＩＦＴＮＹＧ（配列番号：３４７）を有するＣＤＲ－Ｈ１；
アミノ酸配列ＩＮＴＹＮＧＥＰ（配列番号：３４８）を有するＣＤＲ－Ｈ２；
アミノ酸配列ＡＲＧＤＹＹＧＹＥＤＹ（配列番号：３４９）を有するＣＤＲ－Ｈ３；
アミノ酸配列ＱＧＩＳＮＹ（配列番号：３５０）を有するＣＤＲ－Ｌ１；
アミノ酸配列ＹＴＳ（配列番号：３５１）を有するＣＤＲ－Ｌ２；及び
アミノ酸配列ＱＱＹＳＫＬＰＷＴ（配列番号：３５２）を有するＣＤＲ－Ｌ３。
上記ＣＤＲ配列を含む抗体及びその抗原結合断片は、例えば、米国特許第８，６７９，５００号明細書に記載されている。
本明細書に記載される組成物及び方法と併せて使用できる抗ＣＤ５抗体は、以下のＣＤＲの１つ以上又は全てを有するものを含む：
アミノ酸配列ＦＳＬＳＴＳＧＭＧ（配列番号：３５３）を有するＣＤＲ－Ｈ１；
アミノ酸配列ＷＷＤＤＤ（配列番号：３５４）を有するＣＤＲ－Ｈ２；
アミノ酸配列ＲＲＡＴＧＴＧＦＤＹ（配列番号：３５５）を有するＣＤＲ－Ｈ３；
アミノ酸配列ＱＤＶＧＴＡ（配列番号：３５６）を有するＣＤＲ－Ｌ１；
アミノ酸配列ＷＴＳＴＲＨＴ（配列番号：３５７）を有するＣＤＲ－Ｌ２；及び
アミノ酸配列ＹＮＳＹＮＴ（配列番号：３５８）を有するＣＤＲ－Ｌ３。
上記ＣＤＲ配列を含む抗体及びその抗原結合断片は、例えば、その開示が、抗ＣＤ５抗体及びその抗原結合断片に関連するため参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２００８／０２５４０２７号明細書に記載されている。
本明細書に記載される組成物及び方法と併せて使用できる他の抗ＣＤ５抗体は、例えば、Ｉｎｓｔｉｔｕｔ ＰａｓｔｅｕｒにＮｏ．１－１０２５で１９９１年１月１０日に寄託されたハイブリドーマ細胞株により産生された抗ＣＤ５抗体など、国際公開第１９９２／０１４４９１号パンフレットに記載されている抗ＣＤ５抗体を含む。国際公開第１９９２／０１４４９１号パンフレットの開示は、抗ＣＤ５抗体及びその抗原結合断片に関連するため参照により本明細書に組み込まれる。
本明細書に記載される組成物及び方法と併せて使用できる他の抗ＣＤ５抗体は、例えば、米国特許第６，０１０，９０２号明細書及び米国特許第７，１９２，７３６号明細書、米国特許出願公開第２０１１／０２５０２０３号明細書及び米国特許出願公開第２０１７／０１２９１２８号明細書並びに国際公開第２０１６／１７２６０６号パンフレット；国際公開第１９９４／０２３７４７号パンフレット；及び国際公開第１９９６／０４１６０８号パンフレットに記載される抗ＣＤ５抗体を含み；そのそれぞれの開示は、抗ＣＤ５抗体及びその抗原結合断片に関連するため参照により本明細書に組み込まれている。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される組成物及び方法と併せて使用できる抗ＣＤ５抗体は、以下の表に述べられるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３領域の組合せを含むものを含む。
＜表５＞
Figure 2022530026000056
Figure 2022530026000057
上記表の上記ＣＤＲ配列を含む抗体及びその抗原結合断片は、例えば、その開示が、抗ＣＤ５抗体及びその抗原結合断片に関連するため参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１１／０２５０２０３号明細書に記載されている。
抗ＣＤ２抗体
本明細書に記載される組成物及び方法は、特定の実施形態において、ヒトＣＤ２に特異的に結合する抗体又はその断片を包む。ヒトＣＤ２は、Ｔ細胞表面抗原Ｔ１１／Ｌｅｕ－５、Ｔ１１、ＣＤ２抗原（ｐ５０）、及びヒツジ赤血球受容体（ＳＲＢＣ）とも称される。ＣＤ２は、Ｔ細胞上に発現される。ヒトＣＤ２の２種のアイソフォームが特定されている。アイソフォーム１は３５１アミノ酸を含み、Ｓｅｅｄ，Ｂ．ｅｔ ａｌ．（１９８７）８４：３３６５－６９（Ｓｅｗｅｌｌ ｅｔ ａｌ．（１９８６）８３：８７１８－２２も参照されたい）及び下記（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００１７５８．２）に記載されている：
Figure 2022530026000058
ＣＤ２の第２のアイソフォームは３７７アミノ酸であり、本明細書でＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００１３１５５３８．１と特定される。
Ｔ細胞及びＮＫ細胞がＣＤ２を発現することが示されており、それは細胞接着分子であり、そのようなリンパ球の特異的マーカーである。例えば、ＣＤ２は、リンパ球機能関連抗原－３（ＬＦＡ－３／ＣＤ５８）などの他の接着分子と相互作用して、Ｔ細胞活性化を増強する。ＣＤ２と結合することが可能な抗体及びその抗原結合断片は、例えば、ＣＤ２とＬＦＡ－３の相互作用を阻害することにより、Ｔ細胞活性化及び造血幹細胞移植片に対するＴ細胞媒介性免疫応答を抑制し得る。この細胞表面抗原に結合する抗体及びその抗原結合断片は、免疫法、計算によるモデリング技法、並びに以下に記載されるファージディスプレイ及び細胞系ディスプレイプラットフォームなどインビトロ選択方法を含む、当技術分野に公知であり且つ本明細書に記載される技法を使用して特定できる。
特定の実施形態において、本発明は、ＣＤ２ポリペプチド、例えば、ヒトＣＤ２ポリペプチドに特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片を含むＡＤＣ及びその使用を包含する。
一実施形態において、ＡＤＣは、１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む重鎖可変領域を含む抗ＣＤ２抗体を含む。一実施形態において、重鎖可変領域は、配列番号：３００のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１を含む。一実施形態において、重鎖可変領域は、配列番号：３０１のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２を含む。一実施形態において、重鎖可変領域は、配列番号：３０２のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。一実施形態において、重鎖可変領域は、配列番号：３００、配列番号：３０１、及び配列番号：３０２からなる群から選択される１つ以上のＶＨ ＣＤＲを含む。一実施形態において、重鎖可変領域は、配列番号：３００、配列番号：３０１、及び配列番号：３０２からなる群から選択される２つ以上のＶＨ ＣＤＲを含む。一実施形態において、重鎖可変領域は、配列番号：３００を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号：３０１を含むＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号：３０２を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。
一実施形態において、ＡＤＣは、１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ２抗体を含む。一実施形態において、軽鎖可変領域は、配列番号：３０３のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１を含む。一実施形態において、軽鎖可変領域は、配列番号：３０４のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２を含む。一実施形態において、軽鎖可変領域は、配列番号：３０５のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。一実施形態において、軽鎖可変領域は、配列番号：３０３、配列番号：３０４、及び配列番号：３０５からなる群から選択される１つ以上のＶＬ ＣＤＲを含む。一実施形態において、軽鎖可変領域は、配列番号：３０３、配列番号：３０４、及び配列番号：３０５からなる群から選択される２つ以上のＶＬ ＣＤＲを含む。一実施形態において、軽鎖可変領域は、配列番号：３０３を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号：３０４を含むＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号：３０５を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。
例示的な実施形態において、抗ＣＤ２抗体又はその抗原結合断片は、配列番号：３００を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号：３０１を含むＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号：３０２を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに配列番号：３０３を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号：３０４を含むＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号：３０５を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む。
特定の実施形態において、ＣＤＲの１つ以上（すなわち配列番号：３００～３０２を有する１つ以上の重鎖ＣＤＲ、及び／又は配列番号：３０３～３０５を有する１つ以上の軽鎖ＣＤＲ）は、抗体のＣＤ２特異性（すなわち、配列番号：３００～３０２の重鎖ＣＤＲ及び配列番号：３０３～３０５の軽鎖ＣＤＲを含む抗体又はその抗原結合断片に類似した特異性）を保持しながら、保存的アミノ酸置換（又は２、３、４、又は５つのアミノ酸置換）を有し得る。
一実施形態において、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号：３０６に述べられるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。別の実施形態において、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号：３０６に少なくとも９５％の同一性、例えば、配列番号：３０６に少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。特定の実施形態において、抗体は、配列番号：３０６又は配列番号：３０６のバリアントを含むＨＣ可変ドメインを含む修飾された重鎖（ＨＣ）可変領域を含むが、ここで、バリアントは、（ｉ）１、２、３、４、若しくは５つのアミノ酸置換、付加、若しくは欠失において、配列番号：３０６とは異なる；（ｉｉ）多くとも５、４、３、２、若しくは１つのアミノ酸置換、付加、若しくは欠失において、配列番号：３０６とは異なる；（ｉｉｉ）１～５、１～３、１～２、２～５、若しくは３～５つのアミノ酸置換、付加、若しくは欠失において、配列番号：３０６とは異なる、及び／又は（ｉｖ）配列番号：３０６に少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一であるアミノ酸配列を含み、ここで、（ｉ）～（ｉｖ）のいずれにおいても、アミノ酸置換は保存的アミノ酸置換でも非保存的アミノ酸置換でもあり得て；且つ、修飾された重鎖可変領域は、抗体のＣＤ２結合特異性を保持し、すなわち配列番号：３０６を含む抗体又はその抗原結合断片に類似した結合特異性を有しながら、配列番号：３０６の重鎖可変領域と比べて増大された生物学的活性を有し得る。一実施形態において、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号：３０６に述べられるアミノ酸配列とは、１、２、３、又は４つのアミノ酸で異なる重鎖可変領域を含む。例えば、抗体又はその抗原結合断片とは、配列番号：３０６に述べられるアミノ酸配列と、１２、１３、２８、及び／又は４８位の１、２、３、又は４つで異なる重鎖可変領域を含み得る。一実施形態において、重鎖可変領域は、配列番号：３０６に述べられるアミノ酸配列とは、１２、１３、２８、及び４８位で異なる。一実施形態において、重鎖可変領域は、配列番号：３０６に述べられる配列に対して、以下の置換の１、２、３、又は４を含む：Ｋ１２Ｑ；Ｋ１３Ｒ；Ｔ２８Ｉ；及びＭ４８Ｖ。一実施形態において、重鎖可変領域は、配列番号：３０６に対して、置換Ｋ１２Ｑ；Ｋ１３Ｒ；Ｔ２８Ｉ；及びＭ４８Ｖを含む。
一実施形態において、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号：３０７に述べられるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。別の実施形態において、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号：３０７に少なくとも９５％の同一性、例えば、配列番号：３０７に少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態において、抗体は、配列番号：３０７又は配列番号：３０７のバリアントを含むＬＣ可変ドメインを含む修飾された軽鎖（ＬＣ）可変領域を含み、ここで、バリアントは、（ｉ）１、２、３、４、若しくは５つのアミノ酸置換、付加、若しくは欠失において、配列番号：３０７とは異なる；（ｉｉ）多くとも５、４、３、２、若しくは１つのアミノ酸置換、付加、若しくは欠失において、配列番号：３０７とは異なる；（ｉｉｉ）１～５、１～３、１～２、２～５、若しくは３～５つのアミノ酸置換、付加、若しくは欠失において、配列番号：３０７とは異なる、及び／又は（ｉｖ）配列番号：３０７に少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一であるアミノ酸配列を含み、ここで、（ｉ）～（ｉｖ）のいずれにおいても、アミノ酸置換は保存的アミノ酸置換でも非保存的アミノ酸置換でもあり得て；且つ、修飾された軽鎖可変領域は、抗体のＣＤ２結合特異性を保持し、すなわち、配列番号：３０７を含む抗体又はその抗原結合断片に類似した結合特異性を有しながら、配列番号：３０７の軽鎖可変領域と比べて増大された生物学的活性を有し得る。
例示的な実施形態において、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号：３０６に少なくとも９５％の同一性、例えば、配列番号：３０６に少なくとも約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号：３０７に少なくとも約９５％の同一性、例えば、配列番号：３０７に少なくとも約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号：３０６を含む重鎖可変領域及び配列番号：３０７を含む軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗体は、配列番号：３０６を含む重鎖可変領域及び配列番号：３０７を含む軽鎖可変領域を含むＡｂ１抗体である。
一実施形態において、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号：３０８に述べられるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。別の実施形態において、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号：３０８に少なくとも９５％の同一性、例えば、配列番号：３０８に少なくとも約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。例示的な実施形態において、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号：３０８に少なくとも９５％の同一性、例えば、配列番号：３０８に少なくとも約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号：３０９に少なくとも約９５％の同一性、例えば、配列番号：３０９に少なくとも約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号：３０８を含む重鎖可変領域及び配列番号：３０９を含む軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗体は、配列番号：３０８を含む重鎖可変領域及び配列番号：３０９を含む軽鎖可変領域を含むＡｂ１ａ抗体である。
一実施形態において、重鎖可変領域は１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。一実施形態において、重鎖可変領域は、配列番号：３１３１のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１を含む。一実施形態において、重鎖可変領域は、配列番号：３１４のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２を含む。一実施形態において、重鎖可変領域は、配列番号：３１５のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。一実施形態において、重鎖可変領域は、配列番号：３１３、配列番号：３１４、及び配列番号：３１５からなる群から選択される１つ以上のＶＨ ＣＤＲを含む。一実施形態において、重鎖可変領域は、配列番号：３１３、配列番号：３１４、及び配列番号：３１５からなる群から選択される２つ以上のＶＨ ＣＤＲを含む。一実施形態において、重鎖可変領域は、配列番号：３１３を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号：３１４を含むＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号：３１５を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。
一実施形態において、重鎖可変領域は１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。一実施形態において、重鎖可変領域は、配列番号：３１３のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１を含む。一実施形態において、重鎖可変領域は、配列番号：３１４のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２を含む。一実施形態において、重鎖可変領域は、配列番号：３１６のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。一実施形態において、重鎖可変領域は、配列番号：３１３、配列番号：３１４、及び配列番号：３１６からなる群から選択される１つ以上のＶＨ ＣＤＲを含む。一実施形態において、重鎖可変領域は、配列番号：３１３、配列番号：３１４、及び配列番号：３１６からなる群から選択される２つ以上のＶＨ ＣＤＲを含む。一実施形態において、重鎖可変領域は、配列番号：３１３を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号：３１４を含むＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号：３１６を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。
一実施形態において、軽鎖可変領域は１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。一実施形態において、軽鎖可変領域は、配列番号：３１７のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１を含む。一実施形態において、軽鎖可変領域は、配列番号：３１８のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２を含む。一実施形態において、軽鎖可変領域は、配列番号：３１９のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。一実施形態において、軽鎖可変領域は、配列番号：３１７、配列番号：３１８、及び配列番号：３１９からなる群から選択される１つ以上のＶＬ ＣＤＲを含む。一実施形態において、軽鎖可変領域は、配列番号：３１７、配列番号：３１８、及び配列番号：３１９からなる群から選択される２つ以上のＶＬ ＣＤＲを含む。一実施形態において、軽鎖可変領域は、配列番号：３１７を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号：３１８を含むＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号：３１９を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。
例示的な実施形態において、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号：３１３を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号：３１４を含むＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号：３１５を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに配列番号：３１７を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号：３１８を含むＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号：３１９を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む。
例示的な実施形態において、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号：３１３を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号：３１４を含むＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号：３１６を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに配列番号：３１７を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号：３１８を含むＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号：３１９を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む。
特定の実施形態において、ＣＤＲの１つ以上（すなわち配列番号：３１３～３１６を有する１つ以上の重鎖ＣＤＲ、及び／又は配列番号：３１７～３１８を有する１つ以上の軽鎖ＣＤＲ）は、抗体のＣＤ２特異性（すなわち、配列番号：３１３～３１５の重鎖ＣＤＲ及び配列番号：１８～２０の軽鎖ＣＤＲを含むか；又は配列番号：３１３、３１４、３１６の重鎖ＣＤＲ及び配列番号：３１７～３１９の軽鎖ＣＤＲを含む抗体又はその抗原結合断片に類似した特異性）を保持しながら、保存的アミノ酸置換（又は２、３、４、又は５つのアミノ酸置換）を含み得る。
一実施形態において、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号：３２０に述べられるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。別の実施形態において、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号：３２０に少なくとも約９５％の同一性、例えば、配列番号：３２０に少なくとも約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。特定の実施形態において、抗体は、配列番号：３２０又は配列番号：３２０のバリアントを含むＨＣ可変ドメインを含む修飾された重鎖（ＨＣ）可変領域を含むが、ここで、バリアントは、（ｉ）１、２、３、４、若しくは５つのアミノ酸置換、付加、若しくは欠失において、配列番号：３２０とは異なる；（ｉｉ）多くとも５、４、３、２、若しくは１つのアミノ酸置換、付加、若しくは欠失において、配列番号：３２０とは異なる；（ｉｉｉ）１～５、１～３、１～２、２～５、若しくは３～５つのアミノ酸置換、付加、若しくは欠失において、配列番号：３２０とは異なる、及び／又は（ｉｖ）配列番号：３２０に少なくとも約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、又は約９９％同一であるアミノ酸配列を含み、ここで、（ｉ）～（ｉｖ）のいずれにおいても、アミノ酸置換は保存的アミノ酸置換でも非保存的アミノ酸置換でもあり得て；且つ、修飾された重鎖可変領域は、抗体のＣＤ２結合特異性を保持し、すなわち配列番号：３２０を含む抗体又はその抗原結合断片に類似した結合特異性を有しながら、配列番号：３２０の重鎖可変領域と比べて増大された生物学的活性を有し得る。
一実施形態において、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号：３２１に述べられるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。別の実施形態において、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号：３２１に少なくとも約９５％の同一性、例えば、配列番号：３２１に少なくとも約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。特定の実施形態において、抗体は、配列番号：３２０又は配列番号：３２１のバリアントを含むＨＣ可変ドメインを含む修飾された重鎖（ＨＣ）可変領域を含むが、ここで、バリアントは、（ｉ）１、２、３、４、若しくは５つのアミノ酸置換、付加、若しくは欠失において、配列番号：３２１とは異なる；（ｉｉ）多くとも５、４、３、２、若しくは１つのアミノ酸置換、付加、若しくは欠失において、配列番号：３２１とは異なる；（ｉｉｉ）１～５、１～３、１～２、２～５、若しくは３～５つのアミノ酸置換、付加、若しくは欠失において、配列番号：３２１とは異なる、及び／又は（ｉｖ）配列番号：３２１に少なくとも約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、又は約９９％同一であるアミノ酸配列を含み、ここで、（ｉ）～（ｉｖ）のいずれにおいても、アミノ酸置換は保存的アミノ酸置換でも非保存的アミノ酸置換でもあり得て；且つ、修飾された重鎖可変領域は、抗体のＣＤ２結合特異性を保持し、すなわち配列番号：３２１を含む抗体又はその抗原結合断片に類似した結合特異性を有しながら、配列番号：３２１の重鎖可変領域と比べて増大された生物学的活性を有し得る。
一実施形態において、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号：３２２に述べられるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。別の実施形態において、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号：３２２に少なくとも約９５％の同一性、例えば、配列番号：３２２に少なくとも約（ａｂｏｕｔ ａｂｏｕｔ）９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態において、抗体は、配列番号：３２２又は配列番号：３２２のバリアントを含むＬＣ可変ドメインを含む修飾された軽鎖（ＬＣ）可変領域を含むが、ここで、バリアントは、（ｉ）１、２、３、４、若しくは５つのアミノ酸置換、付加、若しくは欠失において、配列番号：３２２とは異なる；（ｉｉ）多くとも５、４、３、２、若しくは１つのアミノ酸置換、付加、若しくは欠失において、配列番号：３２２とは異なる；（ｉｉｉ）１～５、１～３、１～２、２～５、若しくは３～５つのアミノ酸置換、付加、若しくは欠失において、配列番号：３２２とは異なる、及び／又は（ｉｖ）配列番号：３２２に少なくとも約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、又は約９９％同一であるアミノ酸配列を含むが、ここで、（ｉ）～（ｉｖ）のいずれにおいても、アミノ酸置換は保存的アミノ酸置換でも非保存的アミノ酸置換でもあり得て；且つ、修飾された軽鎖可変領域は、抗体のＣＤ２結合特異性を保持し、すなわち、配列番号：３２２を含む抗体又はその抗原結合断片に類似した結合特異性を有しながら、配列番号：３２２の軽鎖可変領域と比べて増大された生物学的活性を有し得る。
例示的な実施形態において、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号：３２０に少なくとも９５％の同一性、例えば、配列番号：３２０に少なくとも約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、又は約９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号：３２２に少なくとも約９５％の同一性、例えば、配列番号：３２２に少なくとも約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、又は約９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号：３２０を含む重鎖可変領域及び配列番号：３２２を含む軽鎖可変領域を含む。
例示的な実施形態において、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号：３２１に少なくとも約９５％の同一性、例えば、配列番号：３２１に少なくとも約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、又は約９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号：３２２に少なくとも約９５％の同一性、例えば、配列番号：３２２に少なくとも約９５％、約９６％、約９７％、約９８％又は約９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号：３２１を含む重鎖可変領域及び配列番号：３２２を含む軽鎖可変領域を含む。
本明細書に記載される組成物及び方法と併せて使用できる抗ＣＤ２抗体には以下のＣＤＲの１つ以上又は全てを有するものがある：
ａ．アミノ酸配列ＥＹＹＭＹ（配列番号：３００）を有するＣＤＲ－Ｈ１；
ｂ．アミノ酸配列ＲＩＤＰＥＤＧＳＩＤＹＶＥＫＦＫＫ（配列番号：３０１）を有するＣＤＲ－Ｈ２；
ｃ．アミノ酸配列ＧＫＦＮＹＲＦＡＹ（配列番号：３０２）を有するＣＤＲ－Ｈ３；
ｄ．アミノ酸配列ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＳＧＮＴＹＬＮ（配列番号：３０３）を有するＣＤＲ－Ｌ１；
ｅ．アミノ酸配列ＬＶＳＫＬＥＳ（配列番号：３０４）を有するＣＤＲ－Ｌ２；及び
ｆ．アミノ酸配列ＭＱＦＴＨＹＰＹＴ（配列番号：３０５）を有するＣＤＲ－Ｌ３。
上記ＣＤＲ配列を含む抗体及びその抗原結合断片は、例えば、その開示が、抗ＣＤ２抗体及びその抗原結合断片に関連するため参照により本明細書に組み込まれる米国特許第６，８４９，２５８号明細書に記載されている。
ＬＯ－ＣＤ２ａ、ＢＴＩ－３２２、及びＡＴＣＣ Ｄｅｐｏｓｉｔ Ｎｏ．ＨＢ １１４２３として寄託されたハイブリドーマ細胞株により産生された抗体（例えば、ＡＴＣＣ Ｄｅｐｏｓｉｔ Ｎｏ．ＨＢ １１４２３として寄託されたハイブリドーマ細胞株から単離された抗体ＬＯ－ＣＤ２ａのＣＤＲ配列の１つ以上又は全てを含む抗体又はその抗原結合断片）など、米国特許第５，７３０，９７９号明細書；米国特許第５，８１７，３１１号明細書；米国特許第５，９５１，９８３号明細書；及び米国特許第７，５９２，００６号明細書に開示されている抗体及びその断片は、本明細書に開示される組成物及び方法と併せて使用できる。本明細書に記載される組成物及び方法と併せて使用できる例示的な抗体には、ＭＥＤＩ－５０７など、ＡＴＣＣ Ｄｅｐｏｓｉｔ Ｎｏ．ＨＢ １１４２３として寄託されたハイブリドーマ細胞株から単離された抗体のＣＤＲ配列の１つ以上又は全てを含むヒト化抗体がある。ＭＥＤＩ－５０７は、上記（ａ）～（ｆ）のＣＤＲ－Ｈ及びＣＤＲ－Ｌ配列を含むヒト化抗ＣＤ２モノクローナル抗体であり、Ｂｒａｎｃｏ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ６８：１５８８－１５９６（１９９９）に記載されている。ＭＥＤＩ－５０７は、それぞれの開示が、抗ＣＤ２抗体ＭＥＤＩ－５０７などの抗ＣＤ２抗体及びその抗原結合断片に関連するので参照により本明細書に組み込まれている国際公開第９９／０３５０２Ａ１号パンフレット及び国際公開第１９９４／０２０６１９Ａ１号パンフレット；米国特許第７，５９２，００６号明細書、米国特許第６，８４９，２５８号明細書、米国特許第５，９５１，９８３号明細書、米国特許第５，８１７，３１１号明細書、及び米国特許第５，７３０，９７９号明細書；並びに米国特許出願公開２０１１／０２８０８６８号明細書、米国特許出願公開２００４／０２６５３１５号明細書、及び米国特許出願公開２０１１／００９１４５３号明細書にさらに記載されている。一実施形態において、抗ＣＤ２抗体は、シプリズマブ又はその抗原結合断片である。
本明細書に記載される組成物及び方法と併せて使用できる他の抗ＣＤ２抗体には、例えば、それぞれの開示が、抗ＣＤ２抗体ＬＯ－ＣＤ２ｂ及びＡＴＣＣ Ｄｅｐｏｓｉｔ Ｎｏ．ＰＴＡ－８０２として寄託されたハイブリドーマ細胞株により産生された抗体などの抗ＣＤ２抗体及びその抗原結合断片に関連するので参照により本明細書に組み込まれる米国特許第６，５４１，６１１号明細書及び米国特許第７，２５０，１６７号明細書に記載される抗ＣＤ２抗体がある。本明細書に記載される組成物及び方法と併せて使用できる例示的な抗体には、ＡＴＣＣ Ｄｅｐｏｓｉｔ Ｎｏ．ＰＴＡ－８０２として寄託されたハイブリドーマ細胞株から単離された抗体のＣＤＲ配列の１つ以上又は全てを含むヒト化抗体がある。
本明細書に記載される組成物及び方法と併せて使用できる他の抗ＣＤ２抗体には、例えば、それぞれの開示が、ＡＴＣＣ Ｄｅｐｏｓｉｔ Ｎｏ．ＨＢ ６９２７７として寄託されたハイブリドーマ細胞株により産生された抗ＣＤ２抗体などの抗ＣＤ２抗体及びその抗原結合断片に関連するので参照により本明細書に組み込まれる米国特許第５，７９５，５７２号明細書及び米国特許第５，８０７，７３４号明細書に記載される抗ＣＤ２抗体がある。例えば、本明細書に記載される組成物及び方法と併せて使用できる抗ＣＤ２抗体及びその抗原結合断片には、ＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＳＰＰＳＰ（配列番号：３１６）のアミノ酸配列を有するヒンジ領域を含むｓｃＦｖ断片など、ＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＳＰＰＳＰ（配列番号：３１６）のアミノ酸配列を有するヒンジ領域を含むものがある。配列番号：３１６のアミノ酸配列を有するヒンジ領域の組込みは、このヒンジモチーフが、ｓｃＦｖ断片などの単鎖抗体断片の望ましくない酸化的二量化を促進し得る、潜在的に反応性があるシステイン残基を除去するように野生型ヒンジ領域配列に対して変異されているので有益であり得る。
本明細書に記載される組成物及び方法と併せて使用できる他の抗ＣＤ２抗体には、例えば、抗ＣＤ２抗体ＴＳ２／１８及びＡＴＣＣ Ｄｅｐｏｓｉｔ Ｎｏ．ＨＢ－１９５として寄託されたハイブリドーマ細胞株により産生された抗体など、米国特許第６，７６４，６８８号明細書に記載される抗ＣＤ２抗体がある。米国特許第６，７６４，６８８号明細書の開示は、抗ＣＤ２抗体及びその抗原結合断片に関連するので参照により本明細書に組み込まれる。
本明細書に記載される組成物及び方法と併せて使用できる他の抗ＣＤ２抗体には、例えば、それぞれの開示が、抗ＣＤ２抗体及びその抗原結合断片に関連するので参照により本明細書に組み込まれる米国特許第６，１６２，４３２号明細書、米国特許第６，５５８，６６２号明細書、米国特許第７，４０８，０３９号明細書、米国特許第７，３３２，１５７号明細書、米国特許第７，６３８，１２１号明細書、米国特許第７，９３９，０６２号明細書、及び米国特許第７，１１５，２５９号明細書、米国特許出願公開第２００６／００８４１０７号明細書、米国特許出願公開第２０１４／０３６９９７４号明細書、米国特許出願公開第２００２／００５１７８４号明細書、及び米国特許出願公開第２０１３／０１８３３２２号明細書、並びに国際公開第１９９２／０１６５６３号パンフレットに記載される抗ＣＤ２抗体がある。
抗Ｈｅｒ２抗体
Ｈｅｒ２抗原に特異的な抗体は当業者に公知であり、例えばトラスツズマブである。
抗ＰＳＭＡ抗体
本発明によるＡＤＣに含まれる前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）に特異的な抗体は、その開示が参照により全体として本明細書に組み込まれる国際公開第２０２０／０２５５６４Ａ１号パンフレットに開示されている。
Ｆｃ変異
本明細書に記載される抗体又は結合断片は、当技術分野に公知である通り、半減期を増加させるもの、ＡＤＣＣを増減させるものなど、抗体及び／又は断片の性質を変更し得る修飾及び／又は変異も含み得る。
一実施形態において、抗体又はその結合断片はバリアントＦｃ領域を有し、前記バリアントＦｃ領域は、前記分子がＦｃγＲへの変更された親和性を有するように、野生型Ｆｃ領域に対して少なくとも１つのアミノ酸修飾を含む。Ｆｃ領域内の特定のアミノ酸位置は、結晶学研究により、ＦｃγＲと直接接触することが知られている。具体的には、アミノ酸２３４～２３９（ヒンジ領域）、アミノ酸２６５～２６９（Ｂ／Ｃループ）、アミノ酸２９７～２９９（Ｃ’／Ｅループ）、及びアミノ酸３２７～３３２（Ｆ／Ｇ）ループ（Ｓｏｎｄｅｒｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，２０００ Ｎａｔｕｒｅ，４０６：２６７－２７３参照）。そのため、本明細書に記載される抗体（例えば、抗ＣＤ１１７、ＣＤ４５、ＣＤ１３７、ＣＤ２、ＣＤ５、ＣＤ２６２、又はＣＤ１３４）は、構造及び結晶学的分析に基づいて、ＦｃγＲと直接接触する少なくとも１つの残基の修飾を含むバリアントＦｃ領域を含み得る。一実施形態において、抗体（又はその断片）のＦｃ領域は、参照により明白に本明細書に組み込まれるＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，ＮＨ１，ＭＤ（１９９１）にあるＥＵインデックスによるアミノ酸２６５でのアミノ酸置換を含む。「ＫａｂａｔにあるＥＵインデックス」は、ヒトＩｇＧ１ＥＵ抗体のナンバリングを指す。ＥＵインデックス又はＫａｂａｔにあるＥＵインデックス又はＥＵナンバリングスキームは、ＥＵ抗体のナンバリングを指す（Ｅｄｅｌｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９６９，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ６３：７８－８５、参照により本明細書に全体として組み込まれる）。一実施形態において、Ｆｃ領域はＤ２６５Ａ変異を含む。一実施形態において、Ｆｃ領域はＤ２６５Ｃ変異を含む。いくつかの実施形態において、抗体（又はその断片）のＦｃ領域は、ＫａｂａｔにあるＥＵインデックスによるアミノ酸２３４でのアミノ酸置換を含む。一実施形態において、Ｆｃ領域はＬ２３４Ａ変異を含む。いくつかの実施形態において、抗体（又はその断片）のＦｃ領域は、ＫａｂａｔにあるＥＵインデックスによるアミノ酸２３５でのアミノ酸置換を含む。一実施形態において、Ｆｃ領域はＬ２３５Ａ変異を含む。さらに別の実施形態において、Ｆｃ領域はＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ変異を含む。さらなる実施形態において、本明細書に記載されるＡＤＣの抗体のＦｃ領域は、Ｄ２６５Ｃ、Ｌ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａ変異を含む。
特定の態様において、バリアントＩｇＧ Ｆｃドメインは、１つ以上のアミノ酸置換を含まない野生型Ｆｃドメインと比べて、ＦｃγＲ及び／又はＣ１ｑへの結合親和性を減少又は除去する１つ以上のアミノ酸置換を含む。Ｆｃ結合相互作用は、抗体依存性細胞媒介性の細胞傷害（ＡＤＣＣ）及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を含むがこれらに限定されない種々のエフェクター機能及び下流シグナル伝達事象に必須である。したがって、特定の態様において、修飾されたＦｃ領域を含む（例えば、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＤ２６５Ｃ変異を含む）抗体は、実質的に減少又は消滅したエフェクター機能を有する。
Ｆｃ領域への親和性は、例えば、平衡法（例えば、酵素結合免疫吸収測定法（ｅｎｚｙｍｅ－ｌｉｎｋｅｄ ｉｍｍｕｎｏａｂｓｏｒｂｅｎｔ ａｓｓａｙ）（ＥＬＩＳＡ）；ＫｉｎＥｘＡ，Ｒａｔｈａｎａｓｗａｍｉ ｅｔ ａｌ．Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｖｏｌ．３７３：５２－６０，２００８；又はラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ））を含むがこれらに限定されない当技術分野に公知である種々の技法を使用して、又は表面プラズモン共鳴アッセイ若しくは他の機構のキネティクス系アッセイ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）分析又はＯｃｔｅｔ（商標）分析（ｆｏｒｔｅＢＩＯ））、及び間接結合アッセイ、競合結合アッセイ、蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）、ゲル電気泳動及びクロマトグラフィー（例えば、ゲル濾過）などの他の方法により測定できる。これら及び他の方法は、調査されている成分の１つ以上に標識を利用し、及び／又は発色、蛍光、発光、若しくは同位体標識を含むがこれらに限定されない種々の検出方法を利用し得る。結合親和性及びキネティクスの詳細な説明は、抗体－免疫原相互作用に焦点を置いたＰａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，ｅｄ．，Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈ Ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ－Ｒａｖｅｎ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ（１９９９）に見出すことができる。競合結合アッセイの一例は、増加する量の非標識抗原の存在下での標識抗原と対象とする抗体のインキュベーション及び標識抗原に結合した抗体の検出を含むラジオイムノアッセイである。対象とする抗体の特定の抗原への親和性及び結合オフレートは、スキャッチャードプロット分析によるデータから測定できる。第２の抗体との競合も、ラジオイムノアッセイを使用して測定できる。この場合、抗原は、増加する量の非標識の第２の抗体の存在下で標識化合物にコンジュゲートされた対象とする抗体と共にインキュベートされる。
抗体は、例えば、（Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２８１：２３５１４－２４）、（Ｚａｌｅｖｓｋｙ ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ２８：１５７－９）、（Ｈｉｎｔｏｎ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７９：６２１３－６）、（Ｈｉｎｔｏｎ ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １７６：３４６－５６）、（Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７６：６５９１－６０４）、（Ｐｅｔｋｏｖａ ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｉｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ １８：１７５９－６９）、（Ｄａｔｔａ－Ｍａｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｄｒｕｇ Ｍｅｔａｂ Ｄｉｓｐｏｓ ３５：８６－９４）、（Ｖａｃｃａｒｏ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ２３：１２８３－８）、（Ｙｅｕｎｇ ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ７０：３２６９－７７）、及び（Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２９：２８１９－２５）に記載されるものなど、追加のＦｃ変異を導入することにより抗体半減期をさらに調節するようにさらに操作でき、２５０、２５２、２５３、２５４、２５６、２５７、３０７、３７６、３８０、４２８、４３４、及び４３５位を含む。単独又は組み合わせてなされ得る例示的な変異は、Ｔ２５０Ｑ、Ｍ２５２Ｙ、１２５３Ａ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｐ２５７１、Ｔ３０７Ａ、Ｄ３７６Ｖ、Ｅ３８０Ａ、Ｍ４２８Ｌ、Ｈ４３３Ｋ、Ｎ４３４Ｓ、Ｎ４３４Ａ、Ｎ４３４Ｈ、Ｎ４３４Ｆ、Ｈ４３５Ａ、及びＨ４３５Ｒ変異である。
そのため、一実施形態において、Ｆｃ領域は、半減期の減少をもたらす変異を含む。短い半減期を有する抗体は、抗体が一時的な治療法として機能することが期待される場合、例えば、抗体が投与されてそれに続きＨＳＣが投与される本明細書に記載の前処置工程の特定の場合に好都合であり得る。理想的には、抗体は、ＨＳＣの送達前に実質的に除去されるだろうが、それは、一般的に、本明細書に記載されるＡＤＣにより標的にされる抗原、例えばＣＤ１１７を発現するが、内因性幹細胞とは異なりＡＤＣの標的ではない。一実施形態において、Ｆｃ領域は、４３５位（ＫａｂａｔによるＥＵインデックス）で変異を含む。一実施形態において、変異はＨ４３５Ａ変異である。
一実施形態において、本明細書に記載される抗体は、２４時間以下の半減期、２２時間以下の半減期、２０時間以下の半減期、１８時間以下の半減期、１６時間以下の半減期、１４時間以下の半減期、１３時間以下、１２時間以下、又は１１時間以下の半減期を有する。一実施形態において、抗体の半減期は、１１時間～２４時間；１２時間～２２時間；１０時間～２０時間；８時間～１８時間；又は１４時間～２４時間である。
いくつかの態様において、Ｆｃ領域は、減少した半減期を与え、抗体のエフェクター機能を大幅に軽減又は完全に消滅させる２つ以上の変異を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、半減期の減少をもたらす変異及びＦｃγＲと直接接触できる少なくとも１つの残基の変異（例えば構造及び結晶学的分析に基づく）を含む。一実施形態において、Ｆｃ領域は、Ｈ４３５Ａ変異、Ｌ２３４Ａ変異、及びＬ２３５Ａ変異を含む。一実施形態において、Ｆｃ領域は、Ｈ４３５Ａ変異及びＤ２６５Ｃ変異を含む。一実施形態において、Ｆｃ領域は、Ｈ４３５Ａ変異、Ｌ２３４Ａ変異、Ｌ２３５Ａ変異、及びＤ２６５Ｃ変異を含む。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合断片は、抗体又はその抗原結合断片のＦｃドメイン中のシステイン残基により細胞毒（例えばアマトキシン）にコンジュゲートされている。いくつかの実施形態において、システイン残基は、抗体又はその抗原結合断片のＦｃドメイン中の変異により導入される。例えば、システイン残基は、Ｃｙｓ１１８、Ｃｙｓ２３９、及びＣｙｓ２６５からなる群から選択され得る。一実施形態において、抗ＣＤ１１７抗体（又はその断片）のＦｃ領域は、ＫａｂａｔにあるＥＵインデックスによるアミノ酸２６５でのアミノ酸置換を含む。一実施形態において、Ｆｃ領域はＤ２６５Ｃ変異を含む。一実施形態において、Ｆｃ領域は、Ｄ２６５Ｃ及びＨ４３５Ａ変異を含む。一実施形態において、Ｆｃ領域は、Ｄ２６５Ｃ、Ｌ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａ変異を含む。一実施形態において、Ｆｃ領域は、Ｄ２６５Ｃ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＨ４３５Ａ変異を含む。
これらの態様のいくつかの実施形態において、システイン残基は、抗体又はその抗原結合断片のＦｃドメインにおいて天然に存在する。例えば、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ１ ＦｃドメインなどのＩｇＧ Ｆｃドメインであり得て、システイン残基は、Ｃｙｓ２６１、Ｃｓｙ３２１、Ｃｙｓ３６７、及びＣｙｓ４２５からなる群から選択され得る。
例えば、一実施形態において、抗体６７のＦｃ領域は、Ｄ２６５Ｃ変異を含むように修飾されている（例えば、配列番号：１１１）。別の実施形態において、抗体６７のＦｃ領域は、Ｄ２６５Ｃ、Ｌ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａ変異を含むように修飾されている（例えば、配列番号：１１２）。さらに別の実施形態において、抗体６７のＦｃ領域は、Ｄ２６５Ｃ及びＨ４３５Ａ変異を含むように修飾されている（例えば、配列番号：１１３）。さらなる実施形態において、抗体６７のＦｃ領域は、Ｄ２６５Ｃ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＨ４３５Ａ変異を含むように修飾されている（例えば、配列番号：１１４）。
抗体５５に関して、一実施形態において、抗体５５のＦｃ領域は、Ｄ２６５Ｃ変異を含むように修飾されている（例えば、配列番号：１１７）。別の実施形態において、抗体５５のＦｃ領域は、Ｄ２６５Ｃ、Ｌ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａ変異を含むように修飾されている（例えば、配列番号：１１８）。さらに別の実施形態において、抗体５５のＦｃ領域は、Ｄ２６５Ｃ及びＨ４３５Ａ変異を含むように修飾されている（例えば、配列番号：１１９）。さらなる実施形態において、抗体５５のＦｃ領域は、Ｄ２６５Ｃ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＨ４３５Ａ変異を含むように修飾されている（例えば、配列番号：１２０）。
抗体５４、抗体５５、抗体５６、抗体５７、抗体５８、抗体６１、抗体６６、抗体６７、抗体６８、又は抗体６９のいずれか１つのＦｃ領域は、Ｄ２６５Ｃ変異（例えば、配列番号：１２３にある通り）；Ｄ２６５Ｃ、Ｌ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａ変異（例えば、配列番号：１２４にある通り）；Ｄ２６５Ｃ及びＨ４３５Ａ変異（例えば、配列番号：１２５にある通り）；又はＤ２６５Ｃ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＨ４３５Ａ変異（例えば、配列番号：１２６にある通り）を含むように修飾され得る。
本明細書に記載のバリアントＦｃドメインは、それを構成するアミノ酸修飾に従って定義される。Ｆｃ領域に関して本明細書で議論される全アミノ酸置換に関して、ナンバリングは常にＥＵインデックスによるものである。そのため、例えば、Ｄ２６５Ｃは、親Ｆｃドメインに対してＥＵ位置２６５のアスパラギン酸（Ｄ）がシステイン（Ｃ）に置換されているＦｃバリアントである。同様に、例えば、Ｄ２６５Ｃ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａは、親Ｆｃドメインに対してＥＵ位置２６５（ＤからＣへ）、２３４（ＬからＡへ）、及び２３５（ＬからＡへ）で置換を有するバリアントＦｃバリアントを定義する。バリアントは、変異したＥＵアミノ酸位置でのその最終的なアミノ酸組成に従っても示され得る。例えば、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ変異体は、ＬＡＬＡと称され得る。置換が提供される順序が任意であることが留意される。
一実施形態において、抗体又はその抗原結合断片は、本明細書に開示される配列番号に少なくとも９５％、９６％、９７％、又は９９％同一であるアミノ酸配列を有する可変領域を含む。或いは、抗体又はその抗原結合断片は、本明細書に開示される配列番号を含むＣＤＲを、本明細書に開示される配列番号に少なくとも９５％、９６％、９７％、又は９９％同一であるアミノ酸配列を有する本明細書に記載される可変領域のフレームワーク領域と共に含む。
一実施形態において、抗体又はその抗原結合断片は、本明細書に開示されているアミノ酸配列を有する重鎖可変領域及び重鎖定常領域を含む。別の実施形態において、抗体又はその抗原結合断片は、本明細書に開示されているアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域及び軽鎖定常領域を含む。さらに別の実施形態において、抗体又はその抗原結合断片は、本明細書に開示されているアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、軽鎖可変領域、重鎖定常領域、及び軽鎖定常領域を含む。
抗体を特定する方法
例えば幹細胞移植のための前処置方法に使用され得る新規ＡＤＣが本明細書に提供される。本明細書の開示を考慮して、本発明のＡＤＣ及び方法に使用できる他の抗体が特定できる。
細胞表面抗原（例えば、ＣＤ１１７、ＣＤ４５、ＣＤ２、ＣＤ５、ＣＤ１３４、ＣＤ２５２、ＣＤ１３７）と結合することが可能な分子の抗体又は抗体断片ライブラリーのハイスループットスクリーニングの方法を使用して、癌、自己免疫疾患を治療するために、及び本明細書に記載される造血幹細胞治療を必要とする患者（例えばヒト患者）を前処置するのに有用な親和性成熟抗体を特定できる。そのような方法には、とりわけ、ファージディスプレイ、細菌ディスプレイ、酵母ディスプレイ、哺乳動物細胞ディスプレイ、リボソームディスプレイ、ｍＲＮＡディスプレイ、及びｃＤＮＡディスプレイなどの当技術分野に公知であるインビトロディスプレイ技法がある。生物学的に重要な分子と結合するリガンドを単離するためのファージディスプレイの使用は、例えば、それぞれの開示が、インビトロディスプレイ技法に関連するため参照により本明細書に組み込まれるＦｅｌｉｃｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖ．１：１４９－１８３，１９９５；Ｋａｔｚ，Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｓｔｒｕｃｔ．２６：２７－４５，１９９７；及びＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ４：１－２０，１９９８に概説されている。ランダム化コンビナトリアルペプチドライブラリーが、それぞれの開示が、抗原結合分子の発見に関連しているため参照により本明細書に組み込まれるＫａｙ，Ｐｅｒｓｐｅｃｔ．Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｄｅｓ．２：２５１－２６８，１９９５及びＫａｙ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｄｉｖｅｒｓ．１：１３９－１４０，１９９６に記載の通り、細胞表面抗原と結合するポリペプチドを選択するために構築された。マルチマータンパク質などのタンパク質が、機能性分子として首尾よくファージディスプレイされた（例えば、それぞれの開示が、抗原結合分子の発見のためのインビトロディスプレイ技法の使用に関連するため参照により本明細書に組み込まれる欧州特許第０３４９５７８号明細書；欧州特許第４５２７８３９号明細書；及び欧州特許第０５８９８７７号明細書並びにＣｈｉｓｗｅｌｌ ａｎｄ ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１０：８０－８４ １９９２を参照されたい）。さらに、Ｆａｂ及びｓｃＦｖ断片などの機能性抗体断片がインビトロディスプレイフォーマット中に発現された（例えば、それぞれの開示が、抗原結合分子の発見のためのインビトロディスプレイプラットフォームに関連するため参照により本明細書に組み込まれるＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２－５５４，１９９０；Ｂａｒｂａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：７９７８－７９８２，１９９１；及びＣｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４－６２８，１９９１を参照されたい）。とりわけ、これらの技法を使用して、例えば、ＣＤ１１７、ＣＤ４５、ＣＤ２、ＣＤ５、ＣＤ１３４、ＣＤ２５２、ＣＤ１３７（例えば、ＧＮＮＫ＋ＣＤ１１７）と結合する抗体を特定し、その親和性を改善でき、次いで、それを使用して、造血幹細胞移植療法を必要とする患者（例えばヒト患者）における内因性造血幹細胞を枯渇させることができる。
インビトロディスプレイ技法に加え、計算によるモデリング技法を使用して、細胞表面抗原（例えば、ＣＤ１１７、ＣＤ４５、ＣＤ２、ＣＤ５、ＣＤ１３４、ＣＤ２５２、ＣＤ１３７）と結合する抗体及び抗体断片を、インシリコで設計及び特定できる。例えば、計算によるモデリング技法を使用して、当業者は、この抗原の細胞外エピトープなどの特異的なエピトープと結合することが可能な分子を求めて、抗体及び抗体断片のライブラリーをインシリコでスクリーニングできる。これらのコンピューターによる技法により特定された抗体及びその抗原結合断片を、本明細書に記載される癌及び自己免疫疾患治療方法並びに本明細書に記載される患者前処置手順など、本明細書に記載される治療方法と併せて使用できる。
追加の技法を使用して、細胞（例えば、癌細胞、自己免疫細胞、又は造血幹細胞）の表面上の細胞表面抗原（例えばＣＤ１１７）と結合し、細胞により、例えば受容体媒介性のエンドサイトーシスにより内部移行される抗体及びその抗原結合断片を特定できる。例えば、上述のインビトロディスプレイ技法を、癌細胞、自己免疫細胞、又は造血幹細胞の表面上の細胞表面抗原（例えばＣＤ１１７）と結合し、その後に内部移行される抗体及びその抗原結合断片をスクリーニングするように適合させることができる。ファージディスプレイは、このスクリーニングパラダイムと併せて使用できるそのような一技法を示す。細胞表面抗原（例えばＣＤ１１７）と結合し、その後に癌細胞、自己免疫細胞、又は造血幹細胞により内部移行される抗体及びその断片を特定するために、当業者は、例えば、その開示が参照により全体として本明細書に組み込まれるＷｉｌｌｉａｍｓ ｅｔ ａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ １９：１４３２－１４３８，２００５に記載されるファージディスプレイ技法を適合できる。例えば、当技術分野に公知である変異誘発法を使用して、（例えば、ＣＤＲ若しくはその等価な領域の１つ以上若しくは全て又は抗体若しくは抗体断片中に）ランダム化されたアミノ酸カセットを含む抗体、抗体断片、とりわけ、ｓｃＦｖ断片、Ｆａｂ断片、ダイアボディ、トリアボディ、及び１０Ｆｎ３ドメインなど、又はリガンドをコードする組換えファージライブラリーを作製できる。抗体又は抗体断片のフレームワーク領域、ヒンジ、Ｆｃドメイン、及び他の領域を、例えば、ヒト生殖細胞系抗体配列又はヒト生殖細胞系抗体に対してわずかな変動しか示さない配列を有することにより、それらがヒトにおいて非免疫原性であるように設計できる。
本明細書に記載されるか又は当技術分野に公知であるファージディスプレイ技法を使用して、例えば、最初に、ファージライブラリーをブロッキング剤（例えば、ミルクプロテイン、ウシ血清アルブミン、及び／又はＩｇＧなど）と共にインキュベートして、非特異的タンパク質結合を示す抗体又はその断片をコードするファージ及びＦｃドメインと結合する抗体又はその断片をコードするファージを除去し、次いで、ファージライブラリーを造血幹細胞の集団とインキュベートすることにより、ファージ粒子に共有結合したランダム化された抗体又は抗体断片を含むファージライブラリーを、細胞表面標的抗原（例えばＣＤ１１７）抗原と共にインキュベートできる。ファージライブラリーを、癌細胞、自己免疫細胞、又は造血幹細胞などの標的細胞と共に、細胞表面抗原特異的抗体又はその抗原結合断片（例えばＣＤ１１７－特異的抗体又はその抗原結合断片）が細胞表面抗原（例えば、細胞表面（ｓｅｌｌ－ｓｕｒｆａｃｅ）ＣＤ１１７）抗原と結合し、その後に癌細胞、自己免疫細胞、又は造血幹細胞により内部移行されることが可能な充分な時間（例えば、４℃で１時間など、４℃で３０分～６時間）インキュベートできる。癌細胞、自己免疫細胞、又は造血幹細胞への結合及びそれらによる内部移行を可能にするようなこれらの抗原の１つ以上に充分な親和性を示さない抗体又はその断片を含むファージは、細胞を、例えば、ｐＨ２．８の冷（４℃）０．１Ｍグリシン緩衝液で洗浄することによりその後に除去され得る。癌細胞、自己免疫細胞、又は造血幹細胞により内部移行された抗体又はその断片に結合しているファージは、例えば、細胞を溶解させ、内部移行したファージを細胞培地から回収することにより特定され得る。次いで、ファージは、例えば、当技術分野に公知である方法を使用して細菌細胞を回収されたファージと共に２ｘＹＴ培地中でインキュベートすることにより、細菌細胞中で増幅され得る。次いで、この培地から回収されたファージは、例えば、ファージゲノム内に挿入された抗体又はその断片をコードする遺伝子の核酸配列を決定することにより特性化され得る。その後に、コードされた抗体又はその断片は、（例えば、ｓｃＦｖ断片などの抗体断片の）化学合成により、又は（例えば、完全長抗体の）組換え発現により新たに調製され得る。
本明細書に記載される組成物及び方法と共に使用するための細胞表面抗原抗体（例えば、抗ＣＤ１１７）抗体のインビトロ進化の例示的な方法は、ファージディスプレイである。ファージディスプレイライブラリーは、デザインされた系列の変異又は変動を抗体のＣＤＲ又は抗体様スキャホールドの類似の領域（例えば、１０Ｆｎ３ドメインのＢＣ、ＣＤ、及びＤＥループ）のコード配列内に作ることにより作製され得る。これらの変異が導入されるテンプレート抗体コード配列は、例えばナイーブヒト生殖細胞系配列であり得る。これらの変異は、当技術分野に公知である標準的な変異誘発技法を使用して実施され得る。そのため、各変異体配列は、１つ以上のアミノ酸変動以外はテンプレートに対応する抗体をコードする。レトロウイルス及びファージディスプレイベクターは、当技術分野に公知である標準的なベクター構築技法を使用して操作され得る。Ｐ３ファージディスプレイベクターを、適合するタンパク質発現ベクターと共に使用して、抗体多様化のためにファージディスプレイベクターを生成させることができる。
変異したＤＮＡは配列多様性を提供し、各形質転換体ファージは、ＤＮＡによりコードされた最初のテンプレートアミノ酸配列の１バリアントを展示し、異なるが構造上関連する莫大な数のアミノ酸配列を展示するファージ集団（ライブラリー）をもたらす。抗体超可変領域の明瞭な構造のため、ファージディスプレイスクリーンに導入されたアミノ酸変動は、その全体的な分子構造を著しく変えることなく、結合ペプチド又はドメインの結合性を変えることが期待される。
典型的なスクリーンにおいて、ファージライブラリーを、上記抗原の１つ又はそのエピトープと接触させ、結合させることができる。結合体と非結合体の分離を容易にするために、標的を固体担体に固定化することが簡便である。細胞表面結合部分を有するファージは、固体担体上の標的と複合体を形成できるが、非結合ファージは溶解状態のままであり、過剰の緩衝液により洗い流され得る。次いで、結合ファージは、緩衝液を極端なｐＨ（ｐＨ２又はｐＨ１０）に変えること、緩衝液のイオン強度を変えること、変性剤を加えること、又は他の公知の手段により標的から放出され得る。
次いで、回収されたファージは、細菌細胞の感染により増幅され得て、スクリーニングプロセスは、今や非結合抗体が枯渇し、標的抗原（例えばＣＤ１１７）と結合する抗体に富んだ新たなプールにより反復され得る。数個の結合ファージの回収すら、ファージをその後のスクリーニングの反復のために増幅するのに充分である。数回の選択の後に、結合プール中で選択されたファージクローンから誘導された抗体又はその抗原結合断片をコードする遺伝子配列は、従来の方法により決定され、そのようにしてファージの結合親和性を標的に付与するペプチド配列が明らかになる。パンニングプロセスの間に、集団の配列多様性は、望ましいペプチド結合抗体が残るまで、各回の選択と共に減少する。配列は、少数の関連する抗体又はその抗原結合断片に収束し得る。各回の選択で回収されるファージの数の増加は、ライブラリーの収束がスクリーンに起こったことを示している。
抗体を特定する別の方法には、例えば、以下の手順に従って細胞表面標的抗原（例えばＣＤ１１７）と結合する非ヒト抗体をヒト化することを使用することがある。コンセンサスヒト抗体重鎖及び軽鎖配列は当技術分野に公知である（例えば、それぞれの開示が、コンセンサスヒト抗体重鎖及び軽鎖配列に関連するため参照により本明細書に組み込まれる「ＶＢＡＳＥ」ヒト生殖細胞系配列データベース；Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２，１９９１；Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：７７６－７９８，１９９２；及びＣｏｘ ｅｔ ａｌ．．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：８２７－８３６，１９９４を参照されたい。確立された手順を使用して、当業者は、コンセンサス抗体配列の可変ドメインフレームワーク残基及びＣＤＲを特定できる（例えば配列アラインメントにより）。ヒト化抗体を製造するために、コンセンサスヒト抗体の重鎖及び／又は軽鎖可変ドメインの１つ以上のＣＤＲが、本明細書に記載の細胞表面抗原（例えばＣＤ１１７）と結合する非ヒト抗体の１つ以上の対応するＣＤＲに替えられ得る。このＣＤＲ交換は、本明細書に記載されるか又は当技術分野に公知である遺伝子編集技法により実施され得る。
ヒト化抗体を製造するために、１つ以上の可変領域ＣＤＲが細胞表面標的抗原（例えばＣＤ１１７）と結合する非ヒト抗体の１つ以上の可変領域ＣＤＲ配列に替わった上記コンセンサス配列をコードするポリヌクレオチドを遺伝子組み換えにより発現させることができる。造血幹細胞抗原への抗体の親和性は、主としてＣＤＲ配列により決定されるので、生じたヒト化抗体は、ヒト化抗体が誘導された元の非ヒト抗体のものとほぼ同じ造血幹細胞抗原への親和性を示すことが期待される。標的抗原への抗体の親和性を決定する方法には、例えば、とりわけ、本明細書に記載され且つ当技術分野に公知であるＥＬＩＳＡ系技法、並びに表面プラズモン共鳴、蛍光異方性、及び等温滴定型熱量測定がある。
抗体又はその断片の内部移行能力は、例えば、当技術分野に公知である放射性核種内部移行アッセイを使用して推定され得る。例えば、本明細書に記載されるか又は当技術分野に公知であるインビトロディスプレイ技法を使用して特定された抗体又はその断片は、１８Ｆ、７５Ｂｒ、７７Ｂｒ、１２２Ｉ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１２９Ｉ、１３１Ｉ、２１１Ａｔ、６７Ｇａ、１１１Ｉｎ、９９Ｔｃ、１６９Ｙｂ、１８６Ｒｅ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、１７７Ｌｕ、７７Ａｓ、７２Ａｓ、８６Ｙ、９０Ｙ、８９Ｚｒ、２１２Ｂｉ、２１３Ｂｉ、又は２２５Ａｃなどの放射性同位元素の組込みにより官能化され得る。例えば、１８Ｆ、７５Ｂｒ、７７Ｂｒ、１２２Ｉ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１２９Ｉ、１３１Ｉ、２１１Ａｔなどの放射性のハロゲンは、求電子ハロゲン試薬を含むポリスチレンビーズなどのビーズを使用して（例えば、Ｉｏｄｉｎａｔｉｏｎ Ｂｅａｄｓ，Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｉｎｃ．，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）抗体又はその断片に組み込まれ得る。放射標識された抗体又はその断片は、癌細胞、自己免疫細胞、又は造血幹細胞と共に、内部移行を可能にする充分な時間（例えば、４℃で１時間など４℃で３０分～６時間）インキュベートされ得る。次いで、細胞は洗浄されて、内部移行されていない抗体又はその断片が除去され得る（例えば、ｐＨ２．８の冷（４℃）０．１Ｍグリシン緩衝液を使用して）。内部移行された抗体又はその断片は、回収された洗浄緩衝液の放出される放射線（例えばγ線）と比べて、得られた癌細胞、自己免疫細胞、又は造血幹細胞の放出される放射線（例えばγ線）を検出することにより特定され得る。
抗体は、例えば米国特許第４，８１６，５６７号明細書に記載される組換え法及び組成物を使用して製造され得る。一実施形態において、本明細書に記載される抗体をコードする単離された核酸が提供される。そのような核酸は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び／又はＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖及び／又は重鎖）をコードし得る。さらなる実施形態において、そのような核酸を含む１つ以上のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。さらなる実施形態において、そのような核酸を含む宿主細胞が提供される。そのような一実施形態において、宿主細胞は、：（１）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、又は（２）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第１のベクター及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第２のベクターを含む（例えば、それにより形質転換された）。一実施形態において、宿主細胞は、真核生物、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞又はリンパ球様細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。一実施形態において、抗ＣＬＬ－１抗体を製造する方法であって、抗体の発現に好適な条件下で、上記で提供された抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を培養すること、及び任意選択で抗体を宿主細胞（又は宿主細胞培地）から回収することを含む方法が提供される。
抗体の組換え製造のために、例えば上述の通りの抗体をコードする核酸が単離され、さらなるクローニング及び／又は宿主細胞内での発現のために１つ以上のベクターに挿入される。そのような核酸は、従来の手順を使用して（例えば、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することが可能なオリゴヌクレオチドプローブを使用することにより）容易に単離され、シーケンシングされ得る。
抗体をコードするベクターのクローニング又は発現のために好適な宿主細胞には、本明細書に記載の原核細胞又は真核細胞がある。例えば、抗体は、特にグリコシル化及びＦｃエフェクター機能が必要でない場合、細菌中で製造され得る。細菌中の抗体断片及びポリペプチドの発現に関して、例えば、米国特許第５，６４８，２３７号明細書、米国特許第５，７８９，１９９号明細書、及び米国特許第５，８４０，５２３号明細書を参照されたい（大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）中の抗体断片の発現を記載しているＣｈａｒｌｔｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，Ｎ．Ｊ．，２００３），ｐｐ．２４５－２５４）も参照されたい）。発現の後で、抗体は、可溶性フラクション中の細菌細胞ペーストから単離され得て、さらに精製され得る。
脊椎動物細胞も宿主として使用され得る。例えば、懸濁状態で成長するように適合された哺乳動物細胞株は有用であり得る。有用な哺乳動物宿主細胞株の他の例は、ＳＶ４０（ＣＯＳ－７）により形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株；ヒト胎児腎臓株（例えばＧｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７）に記載されている２９３又は２９３細胞）；ベビーハムスター腎細胞（ＢＨＫ）；マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３－２５１（１９８０）に記載されているＴＭ４細胞）；サル腎細胞（ＣＶ１）；アフリカミドリザル腎細胞（ＶＥＲＯ－７６）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ）；イヌ腎細胞（ＭＤＣＫ；バッファローラット肝細胞（ＢＲＬ ３Ａ）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８）；ヒト肝細胞（Ｈｅｐ Ｇ２）；マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２）；例えば、Ｍａｔｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４－６８（１９８２）に記載されているＴＲＩ細胞；ＭＲＣ ５細胞；及びＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳動物宿主細胞株には、ＤＨＦＲ－ＣＨＯ細胞（Ｕｒｌａｕｂ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４２１６（１９８０））を含むチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞；並びにＹ０、ＮＳ０、及びＳｐ２／０などの骨髄腫細胞株がある。抗体産生に好適な特定の哺乳動物宿主細胞株の概説には、例えば、Ｙａｚａｋｉ ａｎｄ Ｗｕ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，Ｎ．Ｊ．），ｐｐ．２５５－２６８（２００３）を参照されたい。
医薬組成物
本発明の一態様によると、本発明は、記載された前記複合体を含む医薬組成物に関する。
前記医薬組成物は、１種以上の薬学的に許容できる緩衝剤、界面活性剤、希釈剤、担体、賦形剤、充填剤、結合剤、滑沢剤、流動促進剤、崩壊剤、吸着剤、及び／又は保存剤を含み得る。
水性形態において、前記医薬製剤はすぐに投与でき得る一方で、凍結乾燥形態では、前記製剤は、例えば、保存剤、例えば非限定的にベンジルアルコール、ビタミンＡ、ビタミンＥ、ビタミンＣ、パルミチン酸レチニル、及びセレンのような酸化防止剤、アミノ酸システイン及びメチオニン、クエン酸及びクエン酸ナトリウム、パラベンメチルパラベン及びプロピルパラベンのような合成保存剤などを含むことも含まないこともある注射用水の添加により、投与前に液体形態に移され得る。
前記医薬製剤は、例えば、アミノ酸、糖ポリオール、二糖及び／又は多糖であり得る１種以上の安定剤をさらに含み得る。前記医薬製剤は、１種以上の界面活性剤、１種以上の等張化剤、及び／又は１種以上の金属イオンキレート化剤、及び／又は１種以上の保存剤をさらに含み得る。
本明細書に記載の医薬製剤は、少なくとも静脈内、筋肉内、又は皮下投与に好適であり得る。或いは、本発明による前記複合体は、特定の期間にわたる生物活性薬剤の持続放出を可能にするデポ製剤で提供され得る。
本発明のさらに別の態様において、本発明の先の態様による前記製剤を含むプレフィルドシリンジ若しくはペン、バイアル、又は注入バッグなどの一次包装が提供される。
プレフィルドシリンジ又はペンは、製剤を、凍結乾燥形態（投与前に、例えば注射用水により可溶化される必要がある）又は水性形態で含み得る。前記シリンジ又はペンは、多くの場合、単回使用のみの使い捨て物品であり、０．１～２０ｍｌの容量を有し得る。しかし、シリンジ又はペンは、多回使用又は多用量シリンジ又はペンでもあり得る。
前記バイアルは、製剤を、凍結乾燥形態でも水性形態でも含み得て、単回又は多回使用装置として機能し得る。多回使用装置として、前記バイアルはより大きい容量を有し得る。前記注入バッグは、通常、製剤を水性形態で含み、２０～５０００ｍｌの容量を有し得る。
本明細書に記載されるＡＤＣは、種々の剤形で患者（例えば、免疫疾患又は癌に罹患しているヒト患者）に投与できる。例えば、本明細書に記載されるＡＤＣは、免疫疾患又は癌に罹患している患者に、１種以上の薬学的に許容できる賦形剤を含む水溶液などの水溶液の形態で投与できる。本明細書に記載される組成物及び方法と共に使用するための好適な薬学的に許容できる賦形剤には、粘度調節剤がある。水溶液は、当技術分野に公知である技法を使用して滅菌され得る。
本明細書に記載のＡＤＣを含む医薬製剤は、そのようなＡＤＣを、１種以上の任意選択の薬学的に許容できる担体と（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０））、凍結乾燥製剤又は水溶液の形態で混合することにより調製される。薬学的に許容できる担体は、利用される用量及び濃度でレシピエントにとって一般的に非毒性であり、リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸などの緩衝剤；アスコルビン酸及びメチオニンを含む酸化防止剤；保存剤（オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；ヘキサメトニウムクロリド；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル又はベンジルアルコール；メチル又はプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；及びｍ－クレゾールなど）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、若しくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、若しくはリジンなどのアミノ酸；グルコース、マンノース、若しくはデキストリンを含む単糖、二糖、及び他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロース、若しくはソルビトールなどの糖；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質錯体）；並びに／又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤があるが、これらに限定されない。
使用方法
本明細書に記載されるＡＤＣは、経口的、経皮的、皮下、鼻腔内、静脈内、筋肉内、眼球内、又は非経口など種々の経路により投与され得る。どのような場合においても最適な投与経路は、投与される特定の抗体又は抗原結合断片、患者、医薬製剤方法、投与方法（例えば、投与時間及び投与経路）、患者の年齢、体重、性別、治療されている疾患の重症度、患者の食事、及び患者の排泄速度によるだろう。
本明細書に記載のＡＤＣ、抗体又はその抗原結合断片の有効な投与量は、抗体、その抗原結合断片の最適な血清濃度（例えば０．０００１～５０００μｇ／ｍＬの血清濃度）を達成するのに、例えば、単回（例えば、ボーラス剤）投与、反復投与、又は連続的な投与あたり約０．００１～約１００ｍｇ／体重ｋｇの範囲になり得る。投与量は、１日、１週間、又は１か月あたり１回以上（例えば２～１０回）、癌、自己免疫疾患に罹患しているか、又は造血幹細胞移植の受入れに備えて前処置療法を受けている対象（例えばヒト）に投与され得る。造血幹細胞移植の前の前処置手順の場合、ＡＤＣ、抗体又はその抗原結合断片は、外因性造血幹細胞の生着を最適に促進する時間で、例えば、外因性の造血幹細胞移植の投与の１時間～１週間（例えば、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間、約１２時間、約１３時間、約１４時間、約１５時間、約１６時間、約１７時間、約１８時間、約１９時間、約２０時間、約２１時間、約２２時間、約２３時間、約２４時間、約２日、約３日、約４日、約５日、約６日、又は約７日）以上前に患者に投与され得る。
以下の実施例は、当業者に、本明細書に記載される組成物及び方法がどのように使用され、製造され、評価されるのかの説明を与えるために提示され、単に本発明を例示するものとし、発明者らがその発明とみなすものの範囲を限定しないものとする。
実施例１：アマニチンの比較試験
３種の異なるアマニチンを並行して試験して、それらのキネティクス及び毒素としての忍容性を決定した。図１は、３種のアマニチン／リンカー複合体の構造を与える。図１Ａは、式（ＩＶ）により表されるアマニチン／リンカー複合体（「複合体Ａ」又は「ＡＤＣ Ａ」とも称される）を与え、アマニチンは、ＡＡ１（Ａｓｎ）上に切断性リンカー（ＢＭＰ－Ｖａｌ－Ａｌａ－ＰＡＢ）リンカーを有する。式（ＩＶ）中のアマニチンは、チオトリプトファン部分を有するアマトキシンに基づいている。図１Ｂは、式（ＶＩ）により表されるアマニチン／リンカー複合体（「複合体Ｂ」又は「ＡＤＣ Ｂ」とも称される）を与えるが、アマニチンは、インドール６’酸素上で非切断性リンカーにコンジュゲートされている。式（ＶＩ）に記載されるアマニチンは、６－ヒドロキシ－トリプトファンスルホキシド部分を有するアマトキシンに基づいている。図１Ｃは、インドール６’酸素上の非切断性リンカーを含む、本明細書で式（ＩＩａ）に記載されるアマニチン／リンカー複合体（「複合体Ｃ」又は「ＡＤＣ Ｃ」とも称される）を与えるが、アマニチンは、６－ヒドロキシ－チオトリプトファン部分を有するアマトキシンに基づいている。
複合体Ａ、Ｂ、及びＣを、ヒト血清中でのプレインキュベーションと共に又は無しにＣＤ１１７を発現している細胞に対するそれらの効力に関して並行して試験した。ＡＤＣ Ａ、Ｂ、及びＣを、ヒト血清又は５０％ヒト血清無しで、細胞培養培地中で、３７℃で４８時間プレインキュベートした。次いで、抗体価測定されたＡＤＣをＫａｓｕｍｉ－１細胞に加え、３日間３７℃でインキュベートし、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏを使用して細胞殺傷を測定した。図２に説明される通り、血清インキュベーションのない状態では、切断性複合体Ａ及び非切断性複合体Ｃは第３日までに類似の効能に達したが、非切断性複合体Ｂはより高濃度で減少した最大殺傷を示した。各ＡＤＣ複合体は、ピコモルのＩＣ５０殺傷を示した。ＡＤＣをヒト血清の存在下で４８時間プレインキュベートした場合、効力は非切断性複合体Ｂで著しく減少したが、切断性複合体Ａ及び非切断性複合体Ｃでは維持された。そのため、インビトロ細胞傷害性により測定すると、切断性及び非切断性複合体Ａ及びＣは血清安定である一方で、非切断性複合体Ｂはヒト血清の存在下で不活性化された。
ＡＤＣ媒介性細胞傷害性のキネティクスの差異を測定するために、Ｋａｓｕｍｉ－１細胞を、抗体価測定された切断性複合体Ａ又は非切断性複合体Ｃと共に３～７日間３７℃でインキュベートし、細胞生存率を、第３、４、５、６、及び７日にＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏにより測定した。図３に示される通り、切断性及び非切断性ＡＤＣで、高濃度で最大細胞殺傷の有意差が観察された。細胞を、全体で６日間３７℃でＡＤＣとインキュベートした場合、切断性複合体Ａと非切断性複合体Ｃの両方が、高濃度でほぼ完全な細胞殺傷を達成可能であった。１６０ｐＭ非切断性複合体Ｃによる培養物中の８０％を超えるＫａｓｕｍｉ－１細胞の殺傷は、Ｋａｓｕｍｉ－１細胞の５日以上のインキュベーションの後でのみ達成可能であったが、類似の閾値は、切断性複合体Ａで３日以上のインキュベーションの後に達成された。
まとめると、図１Ａの酵素切断性アマニチン（複合体Ａ）及び非切断性アマニチン（図１Ｃの複合体Ｃ）は血清中の長期の安定性を示したが、アマニチン／リンカーＢは、血清中での不安定性及び不活性化を示した。非切断性複合体Ｃは、インビトロアッセイで測定して、類似の切断性アマニチン複合体（複合体Ａ）と比べて細胞傷害性の延長されたキネティクスを示した。
実施例２：抗ＣＤ１１７ ＡＤＣはインビトロでＡＭＬ細胞及びヒトＣＤ３４＋細胞の強力な殺傷を示し、ヒト化マウス中でヒトＣＤ３４＋細胞を選択的に枯渇させ、異種移植モデル中で抗ＡＭＬ活性を実証する
抗ＣＤ１１７抗体（Ｆｃ修飾Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｄ２６５Ｃ、及びＨ４３５Ａを有する抗体８５）を、複合体Ｃにコンジュゲートして、抗ＣＤ１１７ ＡＤＣ Ｃを形成した。抗ＣＤ１１７ ＡＤＣ Ｃを、インビトロとインビボの両方で、ＣＤ１１７を発現する細胞及びヒトＨＳＣを標的化し、殺傷するその能力に関して試験した。
抗ＣＤ１１７ ＡＤＣ Ｃを使用して２つのインビトロアッセイを実施した。第１のものは、ＡＤＣが、ヒトＣＤ１１７を発現するＫａｓｕｍｉ－１細胞（ＡＭＬ細胞株）を殺傷する能力を試験した。図４Ａに説明されている通り、抗ＣＤ１１７ ＡＤＣ Ｃ（図４Ａ中で「抗ＣＤ１１７－ＡＭ」と称される）を抗体価測定して、Ｋａｓｕｍｉ－１細胞と共に６日間３７℃でインキュベートし、生存能力をＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏにより評価した。対照は、非特異的アイソタイプ適合ＡＤＣ Ｃであった。非切断性複合体Ｃは、ＩＣ５０が６．４ｐＭで、Ｋａｓｕｍｉ－１細胞の強力な殺傷を実証した。図４Ｂにおいて、収集されたヒトＣＤ３４＋骨髄細胞を使用する類似の細胞傷害性アッセイを実施した。ヒトＣＤ３４＋骨髄細胞を、非切断性複合体Ｃ又は対応するアイソタイプ対照ＡＤＣと共に６日間インキュベートした。細胞殺傷は、フローサイトメトリーにより測定した。非切断性複合体Ｃは、ＩＣ５０が５．１ｐＭで、初代ヒトＣＤ３４＋ＣＤ９０＋細胞の強力な殺傷を実証した。
インビボアッセイも実施して、抗ＣＤ１１７ ＡＤＣ ＣがヒトＣＤ３４＋細胞を選択的に枯渇させる能力を試験した。０．１、０．３、又は１．０ｍｇ／ｋｇの抗ＣＤ１１７ ＡＤＣ Ｃの単回投与を、ヒト化ＮＳＧマウスに投与した。対照は、１ｍｇ／ｋｇ投与量の非切断性複合体Ｃの一部を含む非コンジュゲート抗体及びビヒクル（ＰＢＳ）処置からなっていた。第２１日に、ヒトＣＤ３４＋細胞の数を、処置されたヒト化ＮＳＧマウスの大腿骨から回収した骨髄のフローサイトメトリー分析により測定した。図５に説明される通り、抗ＣＤ１１７ ＡＤＣ Ｃは、ヒトＣＤ３４＋細胞を強力に枯渇させることが可能であり、０．３及び１ｍｇ／ｋｇの両方の投与量でＰＢＳと比べて９５％を超える枯渇を達成した。非コンジュゲート抗体は、ビヒクル対照と比べて枯渇を全く示さなかった。
ＡＤＣのインビボ抗腫瘍活性を評価するために、ヒト化ＮＳＧマウスにＫａｓｕｍｉ－１細胞を移植し、次いで、ビヒクル、３０ｍｇ／ｋｇ １日１回×５シタラビン（ＡＲＡ－Ｃ）、切断性複合体Ａ（１ｍｇ／ｋｇ １×、１ｍｇ／ｋｇ １日おき×２）又は１０ｍｇ／ｋｇの切断性アマニチンにコンジュゲートされたアイソタイプ（図１Ａ）により処置した。さらに、Ｋａｓｕｍｉ－１を移植されたマウスを、非切断性複合体Ｃ（１ｍｇ／ｋｇ １×、３ｍｇ／ｋｇ １×、１０ｍｇ／ｋｇ １×）又は１０ｍｇ／ｋｇの非切断性アマニチンにコンジュゲートされたアイソタイプ（図１Ｃ）により処置した。示される通り処置された動物の生存を示すカプラン・マイヤー曲線を図６に図示する。切断性複合体Ａにより処置されたＫａｓｕｍｉ－１を移植されたマウスは、アイソタイプ、ＡＲＡ－Ｃ、又はビヒクル処置動物と比べて、１ｍｇ／ｋｇ又は１ｍｇ／ｋｇ １日おき×２で処置された群で、第１３０日で５０％を超える生存期間中央値を実証する。３ｍｇ／ｋｇ又は１０ｍｇ／ｋｇ非切断性複合体Ｃで処置されたマウスは、アイソタイプ、ＡＲＡ－Ｃ、１ｍｇ／ｋｇ非切断性複合体Ｃ、又はビヒクル処置された動物と比べて、第１３０日で完全な生存を実証する。
まとめると、非切断性複合体Ｃは、Ｋａｓｕｍｉ－１細胞、ＡＭＬ細胞株、及び初代ヒトＣＤ３４＋ＣＤ９０＋骨髄細胞の強力なインビトロ細胞殺傷を実証する。複合体Ｃは、ヒト化ＮＳＧマウスの骨髄から、９５％を超えるヒトＣＤ３４＋細胞を枯渇させることが可能である。切断性複合体と非切断性複合体は両方ともインビボで強力な抗腫瘍活性を実証する。
実施例３：非ヒト霊長類（ＮＨＰ）におけるＡＤＣ Ｃの効能及び忍容性
非ヒト霊長類における非切断性複合体Ｃの効能を測定するために、雄のカニクイザルを、０．５、１．０、及び２．０ｍｇ／ｋｇの非切断性複合体Ｃの単回投与により処置した。０．５及び１．０ｍｇ／ｋｇ投与量は、非切断性アマニチンＣ（図１Ｃ）にコンジュゲートされた以下のＦｃ修飾：Ｄ２６５Ｃ Ｈ４３５Ａ（ＥＵナンバリング）を有する抗体８５によるものであった。２．０ｍｇ／ｋｇ投与量は、非切断性アマニチンＣ（図１Ｃ）にコンジュゲートされた以下のＦｃ修飾：Ｌ２３４Ａ Ｌ２３５Ａ Ｄ２６５Ｃ Ｈ４３５Ａ（ＥＵナンバリング）を有する抗体８５を含んでいた。骨髄穿刺液（ａｓｉｐｉｒａｔｅｓ）を、処置された動物から第７日に回収し、効能を、フローサイトメトリーによるＣＤ３４＋ＣＤ９０＋ＣＤ４５ＲＡ－集団の定量（ｑｕａｎｔｉｔｉａｔｉｏｎ）により評価した。著しい枯渇が、０．５及び１．０ｍｇ／ｋｇ投与量で観察された。末梢血試料を、２８日試験の過程にわたって回収した。０．５、１．０、及び２．０ｍｇ／ｋｇで処置された動物の網赤血球数は、第２日に始まって著しく減少し、網赤血球の回復が用量依存的に起こった。網赤血球は短命で、この造血系統における前駆体集団はＣＤ１１７を強く発現するため、これは、期待されたオンターゲット薬理作用（ｏｎ－ｔａｒｇｅｔ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ）である。好中球枯渇が、第１８日に始まって全処置群に見られた。好中球は、再生に関して造血幹細胞分化に依存性であるため、これも期待されるオンターゲット薬理作用である。
効能の他に、抗ＣＤ１１７ ＡＤＣ Ａか抗ＣＤ１１７ ＡＤＣ Ｃのいずれかを含むＡＤＣの忍容性をＮＨＰで試験した。図８に説明される通り、０．３ｍｇ／ｋｇ投与量の抗体ＣＫ６（Ｆｃ修飾Ｄ２６５Ｃ及びＨ４３５Ａ）にコンジュゲートされた切断性複合体Ａによるカニクイザルの処置は、軽度な一過性且つ可逆的なアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）レベルの上昇を起こし、試験の過程で、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）、又は総ビリルビン（ＴＢＩＬ）の正常範囲を超える上昇はなかった。０．６ｍｇ／ｋｇ投与量の複合体Ａによる動物の処置は、ＡＳＴ、ＡＬＴ、ＬＤＨ、及びＴＢＩＬのより著しい上昇をもたらした。
０．５及び１．０ｍｇ／ｋｇ非切断性複合体Ｃにより処置されたカニクイザルにおいて、非切断性アマニチンＣ（図１Ｃ）にコンジュゲートされた以下のＦｃ修飾：Ｄ２６５Ｃ Ｈ４３５Ａ（ＥＵナンバリング）を有する抗体８５は、軽度な一過性且つ可逆的なＡＳＴの上昇を示したが、試験の過程でＡＬＴ、ＬＤＨ、及びＴＢＩＬの正常範囲を超える上昇はなかった。２．０ｍｇ／ｋｇ非切断性複合体Ｃ、非切断性アマニチンＣ（図１Ｃ）にコンジュゲートされた以下のＦｃ修飾：Ｌ２３４Ａ Ｌ２３５Ａ Ｄ２６５Ｃ Ｈ４３５Ａ（ＥＵナンバリング）を有する抗体８５により処置された動物において、より著しい上昇がＡＳＴ及びＡＬＴで観察された。
薬物動態的特性を、抗ＣＤ１１７ ＡＤＣ Ａ対Ｃで試験した。図９に説明される通り、忍容性が良好な投与量のＡＤＣ複合体Ｃは、ＡＤＣ複合体Ａと比べてＮＨＰ中で飽和した曝露（ｅｘｐｌｏｓｕｒｅｓ）を達成した。薬物動態的データを、種々のＦｃ変異を有するＡＤＣ複合体Ｃに関しても分析した。抗ＣＤ１１７ ＡＤＣ Ａと抗ＣＤ１１７ ＡＤＣ Ｃの両方で、エクスビボ細胞傷害性アッセイは、両（ｂｏｔｈｓ）ＡＤＣで、１００ｎｇ／ｍｌ未満の血漿濃度で効能の減少があったことを明らかにした（データ示さず）。
まとめると、抗ＣＤ１１７ ＡＤＣ Ｃは０．５ｍｇ／ｋｇほどの投与量で効能を実証し、２．０ｍｇ／ｋｇの単回投与でカニクイザルに忍容された一方で、切断性複合体Ａは０．３ｍｇ／ｋｇほどの投与量で効能があったが、０．６ｍｇ／ｋｇの単回投与で忍容されず、非切断性アマニチン（図１Ｃ）がより良好に忍容されるという知見を支持する。
実施例４：抗ＣＤ２ ＡＤＣ Ｃ及びＣＤ５ ＡＤＣ Ｃによる初代ヒトＴ細胞殺傷
ＡＤＣ Ｃ（上記及び図１に説明された）に使用される抗ＣＤ２及び抗ＣＤ５ Ｄ２６５Ｃ Ｈ４３５Ａ抗体が、複合体Ａと同程度、初代Ｔ細胞の殺傷に効能があるかどうかを確認する試験を実施した。そのため、インビトロ細胞殺傷アッセイを使用した。試験のプロトコルを以下に与える：
＜表＞
Figure 2022530026000059
抗ＣＤ２ ＡＤＣ Ａ及びＣは、ＦＣ修飾Ｄ２６５Ｃ／Ｈ４３５Ａを有する抗ＣＤ２抗体ＲＰＡを含んでいた。裸のＲＰＡを対照として使用した。抗ＣＤ５ ＡＤＣ Ａ及びＣは、Ｆｃ修飾Ｄ２６５Ｃ／Ｈ４３５Ａを有する抗ＣＤ５抗体（ａｎｉｔｂｏｄｙ）５Ｄ７を含んでいた。裸の５Ｄ７を対照として使用した。図１２に説明される通り、複合体Ｃは、複合体Ａと同等のＴ細胞枯渇を示した。効能（Ｅｆｆｉｉｃａｃｙ）結果を以下の表にも与える。
＜表＞
Figure 2022530026000060
図１３は、ＣＤ２が第５日までに飽和するが、いくらかの細胞が依然としてＣＤ５を発現していることを示す結果を与える。
上記及び図１２及び１３中の結果は、抗ＣＤ２と抗ＣＤ５の両方のＡＤＣ Ｃ（Ｄ２６５Ｃ Ｈ４３５Ａ）が、初代ヒトＴ細胞に対してインビトロで複合体Ａと同等に効能があったことを示す。
実施例５：抗ＣＤ４５ ＡＤＣ Ｃの効能（Ｅｆｆｉｃｉｃａｙ）
ＣＤ２、ＣＤ５、及びＣＤ１１７に加え、複合体Ｃを、抗ＣＤ４５抗体の状況で複合体Ａと比較して試験した。キメラ抗ＣＤ４５抗体３Ｄ６を以下の実験に使用した（Ｆｃ修飾Ｄ２６５Ｃ及びＨ４３５Ａを有するマウス３Ｄ６可変領域及びヒトＩｇＧ１フレームワーク）。
抗ＣＤ４５ ＡＤＣ Ａと抗ＣＤ４５ ＡＤＣ Ｃを比較するインビトロ細胞殺傷アッセイを実施した。図１４Ａに説明される通り、ＡＤＣ ＡとＣは両方とも、ヒト骨髄ＣＤ３４＋細胞並びにＰＢＭＣを殺傷することが可能であった。アイソタイプ陰性対照も試験した。図１４Ａに提示された表に記載される通り、抗ＣＤ４５ ＡＤＣ ＡとＣは両方とも、ＣＤ３４＋骨髄及びＰＢＭＣ細胞の殺傷に有効であった。このアッセイを、抗ＣＤ４５ ＡＤＣ Ａ及びＢで繰り返した。図１４Ｂに説明される通り、抗ＣＤ４５ ＡＤＣ Ａは、抗ＣＤ４５ ＡＤＣ Ｂに対してＣＤ３４＋骨髄細胞の殺傷により高い効率を示した。両分子は、ヒト及びカニクイザルＰＢＭＣの殺傷に、同様に有効であった。
各ＡＤＣがＳＫＮＯ－１かＲＥＨのいずれかを発現している細胞を殺傷する能力に注目して、抗ＣＤ４５ ＡＤＣ Ａ及びＣを使用して第２のインビトロ細胞殺傷アッセイも実施した。結果を図１３に与える（左のパネルは、抗ＣＤ４５ ＡＤＣ Ａ又はＣへの曝露後の生存ＳＫＮＯ－１細胞の数であり；右のパネルは、抗ＣＤ４５ ＡＤＣ Ａ又はＣへの曝露後の生存ＲＥＨ細胞の数である）。これらのアッセイにおける各分子の効率を図１３中の表に記載する。
抗ＣＤ４５ ＡＤＣ Ａ及びＣを、各ＡＤがＣＤ４５＋細胞をインビボで枯渇させる能力に関してさらに試験した。ＡＤＣ Ａ（切断性）とＡＤＣ Ｃ（非切断性）は両方とも、ヒト化ＮＳＧマウスモデルにおいてＣＤ４５＋細胞を効率よく枯渇させることができた。試験の結果を図１４に与える。図１６に説明される通り、両ＡＤＣは、末梢ＣＤ４５＋細胞並びに骨髄（ＢＭ）ＣＤ３４＋細胞を枯渇させることができた。抗ＣＤ４５ ＡＤＣ Ａのマウスへの最大総投与量は３ｍｇ／ｋｇであった一方、はるかに高い投与量のＡＤＣ Ｃが、抗ＣＤ４５ ＡＤＣ Ｃでは、５１ｍｇ／ｋｇ超で忍容された。そのため、効能は両方の抗ＣＤ４５ ＡＤＣで観察されたが、ＡＤＣ Ｃは、より高い投与量でマウスにより忍容された。
抗ＣＤ４５ ＡＤＣ Ａ及びＣを、ヒト化ＮＳＧマウスにおいて末梢リンパ球、骨髄（ＢＭ）ＨＳＣ、及びリンパ球を枯渇させるそれらの能力に関しても試験した。抗ＣＤ４５ ＡＤＣ Ａ及びＣは、それぞれ、１ｍｇ／ｋｇの投与量でマウスに送達した。これらの試験の結果を図１５に記載するが、抗ＣＤ４５ ＡＤＣ Ａ及びＣが、１ｍｇ／ｋｇでの注射後第７日に、末梢リンパ球、ＨＳＣ、及びＢＭリンパ球の同等な枯渇を有したことを示す。抗ＣＤ４５ ＡＤＣ Ａは、１ｍｇ／ｋｇで軽度な一過性で可逆的な肝臓酵素上昇を示したが、同じ１ｍｇ／ｋｇ投与量の抗ＣＤ４５ ＡＤＣ Ｃでは、肝臓酵素上昇はほとんど又は全く観察されなかった。
実施例６：抗ＣＤ１３７ ＡＤＣ Ａ及びＣ特性化
抗ＣＤ１３７ ＡＤＣ Ａ及びＡＤＣ Ｃを、Ｔ細胞を殺傷するそれらの能力並びに血清安定性に関して試験した。抗ＣＤ１３７抗体ＢＢＫ２をこの実施例に使用した。インビトロＴ細胞殺傷（ｋｉｌｌｉｎ）アッセイを実施し、図１６に示される結果は、アイソタイプＡＤＣ Ａ及びＣ対照と比べて、抗ＣＤ１３７ ＡＤＣ ＡとＣの両方が、活性化Ｔ細胞を殺傷できたことを実証した。さらに、細胞株血清安定性を、図１７に説明される通り、４８時間にわたり、抗ＣＤ１３７ ＡＤＣ ＡとＣの両方で試験した。
実施例７：Ｓ－デスオキシ－５’－ヒドロキシ－アマニンアミドの合成
本明細書に開示される式（ＩＩａ）のＡＤＣを、対応するリンカー－アマトキシン複合体から、当業者に公知である標準的な方法に従って調製した。式（ＩＩａ）のＡＤＣに至る最後から２番目のアマトキシン－リンカー複合体（化合物１４；スキーム３）は、アマトキシン誘導体１１から、その開示が参照により全体として本明細書に組み込まれている米国特許出願公開第２０１８／００４３０３３号明細書に開示された関連するアマトキシン（α－アマニチン）のＯ－アルキル化の一般的手順に従って調製され得る。アマトキシン誘導体１１は、その開示が参照により全体として本明細書に組み込まれている国際公開第２０１９／０３０１７３号パンフレットに開示されている手順に従って調製され得る。化合物７（スキーム１）は、その開示が全体として本明細書に組み込まれている国際公開第２０１４／００９０２５号パンフレットに報告されている方法に従って調製され得る。
実施例８：アマニチン誘導体
種々のアマニチン誘導体を、標的特異的抗体とのコンジュゲーションに使用した（図１８、図１９）。それらは、その開示が全体として本明細書に組み込まれる国際公開第２０１８／１１５４６６号パンフレット及び国際公開第２０１９／１９７６５４号パンフレットに開示された方法に従って生成させた。
＜表６＞
Figure 2022530026000061
実施例９：コンジュゲーションの方法
Ｈｅｒ２又は前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）に対する抗体を、いわゆるチオマブ（Ｔｈｉｏｍａｂ）技術によりアマトキシンリンカー複合体にコンジュゲートした。この手法では、コンジュゲーションは、以下の反応スキームに示される通り、毒素リンカーコンストラクトのマレイミド残基の、抗体中の操作されたシステイン残基の遊離ＳＨ基へのコンジュゲーションにより起こる：
Figure 2022530026000062
 。
このコンジュゲーション方法の原理は、内容が参照により本明細書に組み込まれるＪｕｎｕｔｕｌａ ｅｔ ａｌ（２００８）に開示されている。
本実験に使用するＨｅｒ２（トラスツズマブ）又は前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）に対する抗体は、そのような遊離ＳＨ基を有するシステイン残基を与えるために、両ＦｃドメインにＤ２６５Ｃ置換を含む。それぞれの技術は、内容が参照により本明細書に組み込まれる、本出願者に譲渡された国際公開第２０１６１４２０４９Ａ１号パンフレットに開示されており、２の一定の薬物対抗体比（「ＤＡＲ」）及び部位特異的コンジュゲーションを有する均質な生成物をもたらす。
実施例１０：抗Ｈｅｒ２－ＡＤＣによるインビトロの細胞傷害性アッセイ
抗Ｈｅｒ２アマトキシン複合体の細胞傷害活性を、インビトロで標的陽性腫瘍細胞株及び化学ルミネセンスＢｒｄＵ取り込みアッセイ（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）により評価した。３７℃及び５％ＣＯ２での異なる濃度の複合体との９６時間のインキュベーションの後で、ＢＭＧ Ｌａｂｔｅｃｈ Ｏｐｔｉｍａマイクロプレートリーダー中での抗ＢｒｄＵ－ＨＲＰ抗体による、固定化され透過処理された細胞の測定により細胞生存率を測定した。用量反応曲線のＥＣ５０値を、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ４．０ソフトウェアにより計算した。
それぞれ化合物３０．２８６７（式（Ａ））に、及び化合物３０．０８８０（式（Ｂ））にそのＤ２６５Ｃ残基によりコンジュゲートされたＤ２６５Ｃ変異（Ｔ－Ｄ２６５Ｃ）を有するトラスツズマブの細胞傷害活性を、ＳＫＢＲ－３、ＮＣＩ－Ｎ８７、ＢＴ４７４及びＪＩＭＴ－１細胞株で試験した（図２０）。Ｔ－Ｄ２６５Ｃ－３０．２８６７は、試験した全細胞株でＴ－Ｄ２６５Ｃ－３０．０８８０よりわずかに性能が勝った。
実施例１１：ヒト、マウス、及びカニクイザル血漿中の抗Ｈｅｒ２－ＡＤＣの安定性
Ｈｅｒ２抗原に対するＡＤＣコンジュゲート、それぞれＴ－Ｄ２６５Ｃ－３０．２８６７及びにＴ－Ｄ２６５Ｃ－３０．０８８０を、ヒト、マウス、及びカニクイザル血漿、並びにリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ、対照）と共に、それぞれ０、４、及び１０日間インキュベートした。試料を、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）ポリアクリルアミド（ＰＡＡ）ゲル電気泳動ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）に付し、抗体重鎖分子を、ウェスタンブロッティングにより、アマニチン特異的ポリクローナル抗血清により検出した（図２１）。
ＡＤＣコンジュゲートＴ－Ｄ２６５Ｃ－３０．２８６７は、全試験種で、ＡＤＣコンジュゲートＴ－Ｄ２６５Ｃ－３０．０８８０と比べて、より高い血漿安定性を示した。Ｔ－Ｄ２６５Ｃ－３０．２８６７は、それぞれヒト血漿及びカニクイザル血漿中よりもマウス血漿中で、より低い安定性を示した。
安定性のさらなる評価のために、それぞれ、ヒト血漿、マウス血漿、カニクイザル血漿、及びＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水、対照）中での、それぞれ０、４及び１０日間のインキュベーションの後のＡＤＣ化合物Ｔ－Ｄ２６５Ｃ－３０．２８６７のインビトロの細胞傷害活性を、ＳＫＢＲ－３細胞（図２２）、ＮＣＩ－Ｎ８７細胞（図２３）、及びＪＩＭＴ－１細胞（図２４）に対して分析した。
それぞれ、ヒト血漿、マウス血漿、及びカニクイザル血漿中での４日間のインキュベーションの後で、ＳＫＢＲ－３細胞に対するＴ－Ｄ２６５Ｃ－３０．２８６７の細胞傷害可能性は、ごくわずかに減少した。ヒト血漿及びカニクイザル血漿中での１０日間のインキュベーションの後で細胞傷害可能性は２０分の１に減少したが、マウス血漿中で３３分の１の減少が観察された。３７℃のＰＢＳ中でのインキュベーションは、ＳＫＢＲ－３細胞に対するＴ－Ｄ２６５Ｃ－３０．２８６７の細胞傷害可能性にほとんど影響しなかった（図２２、表７）。
＜表７＞
Figure 2022530026000063
それぞれ、ヒト血漿、マウス血漿、及びカニクイザル血漿中での４日間のインキュベーションの後で、ＮＣＩ－Ｎ８７細胞に対するＴ－Ｄ２６５Ｃ－３０．２８６７の細胞傷害可能性は、ごくわずか減少した。ヒト血漿及びカニクイザル血漿中での１０日間のインキュベーションの後で、細胞傷害可能性は１５分の１に減少したが、およそ５０％の残存細胞生存率が、カニクイザル血漿中での１０日間のインキュベーションの後に観察された。マウス血漿中で１０日間インキュベーションの後で、６７分の１の減少が観察された。３７℃のＰＢＳ中でのインキュベーションは、ＮＣＩ－Ｎ８７細胞に対するＴ－Ｄ２６５Ｃ－３０．２８６７の細胞傷害可能性に低い影響を与えた（図２３）。
ヒト血漿及びカニクイザル血漿中での４日間のインキュベーションの後で、ＪＩＭＴ－１細胞に対するＴ－Ｄ２６５Ｃ－３０．２８６７の細胞傷害可能性はごくわずか減少した。マウス血漿中での４日間のインキュベーションの後で、Ｔ－Ｄ２６５Ｃ－３０．２８６７は、ＪＩＭＴ－１細胞に対して細胞傷害可能性を全く示さなかった。ヒト血漿、マウス血漿、及びカニクイザル血漿中での１０日間のインキュベーションの後で、ＪＩＭＴ－１細胞に対して細胞傷害可能性は全く観察されなかった。３７℃のＰＢＳ中でのインキュベーションは、ＪＩＭＴ－１細胞に対するＴ－Ｄ２６５Ｃ－３０．２８６７の細胞傷害可能性にほとんど全く影響しかなった（図２４）。
実施例１２：マウス異種移植腫瘍モデルにおけるインビボでの抗Ｈｅｒ２－ＡＤＣの効能
ＪＩＭＴ－１マウス異種移植モデルにおいて、雌のＮＭＲＩヌードマウスに、マウスあたり５×１０６のＪＩＭＴ－１乳癌細胞を右脇腹の皮下に接種した。およそ１２０ｍｍ３の平均腫瘍体積で、第０日に動物を３群に割りあてた。同じ日に、動物に、単回静脈内投与のアマニチン系抗Ｈｅｒ２抗体薬物複合体（ＡＤＣ）を与えた。腫瘍体積及び体重を週に２回測定した。
図２５に示されるように、インビボでのＴ－Ｄ２６５Ｃ－３０．２８６７の効能は、Ｔ－Ｄ２６５Ｃ－３０．０８８０の効能より良好だった。処置後１１３日で、Ｔ－Ｄ２６５Ｃ－３０．２８６７の２ｍｇ／ｋｇの投与を受けた動物の０／１０及び６ｍｇ／ｋｇの投与を受けた動物の４／１０が生存していた；後者の群では、動物の１／４に腫瘍がなかった。対照的に、処置後１１３日で、Ｔ－Ｄ２６５Ｃ－３０．０８８０の２ｍｇ／ｋｇの投与を受けた動物の０／１０及び６ｍｇ／ｋｇの投与を受けた動物の０／１０が生存していた。処置後１１３日で、Ｔ－Ｄ２６５Ｃ－３０．１６９９の１ｍｇ／ｋｇの投与を受けた動物の４／１０は生存しており、動物の１／４に腫瘍がなかった。
それぞれのＮＣＩ－Ｎ８７マウス腫瘍異種移植モデルにより、図２６に示されるように、やはり、インビボでのＴ－Ｄ２６５Ｃ－３０．２８６７の細胞傷害性効能は、Ｔ－Ｄ２６５Ｃ－３０．０８８０の細胞傷害性効能より良好だった。処置後１４１日で、Ｔ－Ｄ２６５Ｃ－３０．２８６７の２ｍｇ／ｋｇの投与を受けた動物の０／１０及び６ｍｇ／ｋｇの投与を受けた動物の３／１０は生存していた；しかし、後者の群において、動物の０／３には腫瘍がなかった。対照的に、処置後１４１日で、Ｔ－Ｄ２６５Ｃ－３０．０８８０の２ｍｇ／ｋｇの投与を受けた動物の０／１０及び６ｍｇ／ｋｇの投与を受けた動物の０／１０が生存していた。処置後１４１日で、Ｔ－Ｄ２６５Ｃ－３０．１６９９の１ｍｇ／ｋｇの投与を受けた動物の０／１０は生存していた。
実施例１３：インビトロでの抗ＰＳＭＡ－ＡＤＣによる細胞傷害性アッセイ
それぞれ、化合物３０．２８６７（式（Ａ））に、及び化合物３０．０８８０（式（Ｂ））に、そのＤ２６５Ｃ残基によりコンジュゲートされたＤ２６５Ｃ変異を有する抗ＰＳＭＡ抗体（ｈ３／Ｆ１１－Ｄ２６５Ｃ－Ｖａｒ１６）のインビトロの細胞傷害活性を、ＬＮＣａｐ－、２２ＲＶ１－（両者ともＰＳＭＡ陽性）、及びＰＣ３（ＰＳＭＡ陰性）細胞株で試験した（図２７）。化合物ｈ３／Ｆ１１－Ｄ２６５Ｃ－Ｖａｒ１６－３０．２８６７は、２種の試験した細胞株のうち１つで、ｈ３／Ｆ１１－Ｄ２６５Ｃ－Ｖａｒ１６－３０．０８８０よりわずかに性能が勝った。ＰＳＭＡ陰性細胞株ＰＣ３で細胞傷害可能性は観察されなかった。
実施例１４：ヒト、マウス、及びカニクイザル血漿中での抗ＰＳＭＡ－ＡＤＣの安定性
ＰＳＭＡ抗原に対するＡＤＣ複合体、それぞれ、ｈ３／Ｆ１１－Ｄ２６５Ｃ－Ｖａｒ１６－３０．２８６７及びｈ３／Ｆ１１－Ｄ２６５Ｃ－Ｖａｒ１６－３０．０８８０を、それぞれ、０、４、及び１０日間、ヒト、マウス、及びカニクイザル血漿、及びリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ、対照）中でインキュベートした。試料を、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）ポリアクリルアミド（ＰＡＡ）ゲル電気泳動ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）に付し、抗体重鎖分子を、ウェスタンブロッティングにより、アマニチン特異的ポリクローナル抗血清を使用して検出した。
ｈ３／Ｆ１１－Ｄ２６５Ｃ－Ｖａｒ１６－３０．２８６７は、ｈ３／Ｆ１１－Ｄ２６５Ｃ－Ｖａｒ１６－３０．０８８０と比べて、全試験血漿種でより高い血漿安定性を示した。ｈ３／Ｆ１１－Ｄ２６５Ｃ－Ｖａｒ１６－３０．２８６７は、それぞれヒト血漿及びカニクイザル血漿中よりも、マウス血漿中でより低い安定性を示した。
実施例１５：マウス異種移植腫瘍モデルにおけるインビボでの抗ＰＳＭＡ－ＡＤＣの効能
ＬＮＣａｐ異種移植腫瘍マウスモデルにおいて、雄のＣＢ１７ ＳＣＩＤマウスに、マウスあたり２．５×１０６のＬＮＣａｐ前立腺癌細胞を右脇腹の皮下に接種した。およそ１５０ｍｍ３の平均腫瘍体積で、動物を第０日に群に割り当てた。同じ日に、動物に、アマニチン系抗ＰＳＭＡ抗体薬物複合体（ＡＤＣ）の単回静脈内投与を与えた。腫瘍体積及び体重を週に２回測定した。
図２８に示されるように、インビボでのｈ３／Ｆ１１－Ｄ２６５Ｃ－Ｖａｒ１６－３０．２８６７の効能は、ｈ３／Ｆ１１－Ｄ２６５Ｃ－Ｖａｒ１６－３０．０８８０の効能より良好だった。
実施例１６：サルにおける忍容性試験
１ｍｇ／ｋｇから２０ｍｇ／ｋｇへの増加する投与量を使用する非結合性抗ジゴキシゲニンＡＤＣ（ＤＩＧ－Ｄ２６５Ｃ－３０．２８６７）によるサルの忍容性試験を実施した。ＬＤＨ、ＡＳＴ、ＡＬＴパラメーターの評価の結果は、良好な忍容性を示した（図２９）。血清中のＡＤＣ及びアマトキシンの薬物動態的データを、それぞれ、図３０及び図３１に示す。両動物は、最後の投薬（２０ｍｇ／ｋｇ）の、それぞれ１５日及び１９日後に死亡した。最大耐用量（ＭＴＤ）は、１５ｍｇ／ｋｇ＜ＭＴＤ＜２０ｍｇ／ｋｇであると推定した。
実施例１７：構造上異なるアマニチン誘導体を使用するインビトロでの細胞傷害性アッセイ
表８に列記するＡＤＣは、構造上異なるアマニチン誘導体にそのＤ２６５Ｃ残基によりコンジュゲートされたＤ２６５Ｃ変異を有する抗Ｈｅｒ２抗体（Ｔ－Ｄ２６５Ｃ、抗Ｈｅｒ２－Ｄ２６５Ｃ）であるが、そのインビトロの細胞傷害活性を、ＪＩＭＴ－１細胞、ＮＣＩ－Ｎ８７細胞、及びＳＫＢＲ－３細胞で試験した。
＜表８＞
Figure 2022530026000064
それぞれのＡＤＣの、それぞれＪＩＭＴ－１細胞（図３２）、ＮＣＩ－Ｎ８７細胞（図３３）、及びＳＫＢＲ－３細胞（図３４）に対する細胞傷害性効能を表９に示す。
＜表９＞
Figure 2022530026000065
表１０に列記されたＡＤＣは、構造上異なるアマニチン誘導体にそのＤ２６５Ｃ残基によりコンジュゲートされたＤ２６５Ｃ変異を有する抗ＰＳＭＡ抗体（ｈ３／Ｆ１１－Ｄ２６５Ｃ－Ｖａｒ１６、抗ＰＳＭＡ－Ｄ２６５Ｃ）を含むが、そのインビトロの細胞傷害活性を、ＬＮＣａｐ－及び２２ＲＶ１細胞株（両者ともＰＳＭＡ陽性）で試験した。
＜表１０＞
Figure 2022530026000066
それぞれ、ＬＮＣａｐ細胞に対する（図３５）、及び２２ＲＶ１細胞に対する（図３６）それぞれのＡＤＣの細胞傷害性効能を表１１に示す。
＜表１１＞
Figure 2022530026000067
実施例１８：マウス異種移植腫瘍モデルにおける構造上異なるアマニチン誘導体を含む抗ＰＳＭＡ－ＡＤＣのインビボの効能
ＬＮＣａｐ異種移植腫瘍マウスモデルにおいて、雄のＣＢ１７ ＳＣＩＤマウスに、マウスあたり２．５×１０６のＬＮＣａｐ前立腺癌細胞を、右脇腹の皮下に接種した。およそ１５０ｍｍ３の平均腫瘍体積で、動物を第０日に群に割り当てた。同じ日に、動物に、表６に列記される構造上異なるアマニチン系抗ＰＳＭＡ抗体薬物複合体（ＡＤＣ）の１つの単回静脈内投与を与えた。腫瘍体積及び体重を週に２回測定した。
異なった構造のアマニチン誘導体を含むＡＤＣの結果を図３７～４２及び表１２に示す。アマトキシンのトリプトファン（アミノ酸４）の６’－ヒドロキシ基にコンジュゲートされた非切断性リンカーを含むＡＤＣ、とりわけ、ＴｒｐとＣｙｓの間にチオエーテルブリッジを有するｈ３／Ｆ１１－Ｄ２６５Ｃ－Ｖａｒ１６－３０．２８６７は、アマトキシンのアミノ酸４かアミノ酸１のいずれかにコンジュゲートされた切断性リンカーを含むＡＤＣと比べて、インビボで高い細胞傷害性効能を有することが示された。
＜表１２＞
Figure 2022530026000068
実施例１９：ＬＡＬＡ及び／又はＤ２６５Ｃ変異を有する抗体を含むＡＤＣの効能
Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ変異並びにＤ２６５Ｃ変異の両方を有する抗体を含むＡＤＣの効能を、細胞株由来の腫瘍異種移植片（ＣＤＸ）マウスモデルにおいて試験した。三重Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｄ２６５Ｃ変異及びそれぞれアマトキシン－リンカーコンストラクトＨＤＰ３０．２０６０及びＨＤＰ３０．２８６７を含む抗Ｈｅｒ２ ＡＤＣ（それぞれ、Ｔ－ＬＡＬＡ－Ｄ２６５Ｃ－３０．２０６０及びＴ－ＬＡＬＡ－Ｄ２６５Ｃ－３０．２８６７）を、Ｈｅｒ２陽性ＮＣＩ－Ｎ８７細胞で試験した。結果を図４３に示す。三重Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｄ２６５Ｃ変異及びそれぞれアマトキシン－リンカーコンストラクトＨＤＰ３０．２０６０及びＨＤＰ３０．２８６７を含む抗ＰＳＭＡ ＡＤＣ（それぞれ、ｈ３／Ｆ１１－ＬＡＬＡ－Ｄ２６５Ｃ Ｖａｒ１６－３０．２０６０及びｈ３／Ｆ１１－ＬＡＬＡ－Ｄ２６５Ｃ Ｖａｒ１６－３０．２８６７）を、ＰＳＭＡ陽性ＬＮＣａｐ細胞で試験した。結果を図４４に示す。両試験において、三重変異を有するＡＤＣは、それぞれのＣＤＸマウスモデルでの腫瘍体積の減少において効率がよいことが示された。
Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｄ２６５Ｃ変異がないＡＤＣと比べて、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ変異及びＤ２６５Ｃ変異を有する抗体を含むＡＤＣにより、同じ範囲の生成収量が得られた。さらに、変異は、変異のない抗体と比べて、それぞれの抗体により得られたコンジュゲーション収量に影響しなかった。
実施例２０：オンターゲット細胞対ノンターゲット細胞におけるインビトロでの細胞傷害性アッセイ
図４５に示されるように、Ｈｅｒ２陽性ＳＫＢＲ－３細胞での９６時間ＢｒｄＵアッセイにおいて評価された、変異のないＡＤＣと比べた、及び他の変異（Ａ１１８Ｃ、Ｄ２６５Ａ）を有する同じ抗体を含む対照ＡＤＣと比べた、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ変異及び／又はＤ２６５Ｃ変異を有する抗体を含むＨｅｒ２特異性ＡＤＣのインビトロの細胞傷害可能性は同等であった；完全な細胞傷害性が、全変異体及び対照ＡＤＣで観察された。
対照的に、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ変異及び／又はＤ２６５Ｃ変異を有する抗体を含むＨｅｒ２特異性ＡＤＣのインビトロの細胞傷害可能性を、同じ抗体骨格中の変異のないそれぞれのＡＤＣと比べて、９６時間ＣＴＧアッセイ（図４６）及び１２０時間ＣＴＧアッセイ（図４７）でＨｅｒ２陰性マクロファージ細胞株ＴＨＰ－１に対して評価した場合、非特異的な毒性が、抗体中に変異のないＡＤＣ（Ｔ－３０．１６９９、図４６Ａ、Ｃ；図４７Ｃ）で、１０－１０～１０－９Ｍより高いＡＤＣ濃度で観察された。Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ（「ＬＡＬＡ」）変異（Ｔ－ＬＡＬＡ－３０．１６９９）、又はＤ２６５Ｃ変異（Ｔ－Ｄ２６５Ｃ）、又は３つの全変異（Ｔ－ＬＡＬＡ－Ｄ２６５Ｃ－３０．１６９９）を有する抗体を含むＡＤＣでは、ノンターゲットＴＨＰ－１細胞に対するそのような非特異的な毒性は、９６時間ＣＴＧアッセイ（図４６Ａ、Ｂ）において、１０倍から１００倍高いＡＤＣ濃度ですら全く観察されなかった。Ｄ２６５Ａ変異を有する抗体を含むＡＤＣ（Ｔ－Ｄ２６５Ａ－３０．１６９９）では、ノンターゲットＴＨＰ－１細胞に対する非特異的な毒性はやはり観察されなかった。１２０時間ＣＴＧアッセイにおいて、これらのデータは基本的に確認された；抗体中に変異のないＡＤＣの非特異的な毒性は、単一又は三重変異を有する抗体を含むＡＤＣより大幅に高かった（図４７Ｃ）。ＬＡＬＡとＤ２６５Ｃ（又はＤ２６５Ａ）変異の組合せは、ノンターゲット細胞に対する非特異的な毒性を減少させる点で、相加効果、又は相乗効果すら有するようである（図４７Ｃ、Ｄ）。ＴＨＰ－１細胞に対する非特異的な細胞傷害性がＦｃγ受容体媒介性であることが示され、それにより、ＴＨＰ－１細胞に対する細胞傷害性を示さないこれらのＡＴＡＣ（ＬＡＬＡ、Ｄ２６５Ｃ及びＤ２６５Ａバリアント）が、減少したＦｃγ受容体相互作用を有し、そのため減少したＦｃγＲ媒介性取込みを有することが確認される。
まとめると、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ及びＤ２６５Ａ／Ｃ変異は、試験された条件下で、ＴＨＰ－１細胞に対するＡＤＣの非特異的な毒性を除去する。
実施例２１：ＡＤＣ中のＬＡＬＡ及び／又はＤ２６５Ｃ変異のＦｃγＲ結合に対する影響
ＡＤＣのＦｃγＲ相互作用をバイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）により試験した。これらの結合試験の結果を表１３に示す。
＜表１３＞
Figure 2022530026000069
表１３に示される通り、ＡＤＣに含まれる抗体へのＬＡＬＡ、Ｄ２６５Ａ、又はＤ２６５Ｃ変異の導入は、ＦｃγＲＩへの親和性を著しく減少させ、ＦｃγＲＩＩａ及びＦｃγＲＩＩＩａへの結合も減少させた。Ｄ２６５変異（Ｄ２６５Ｃ、Ｄ２６５Ａ）との組合せは、さらに大幅にＦｃγＲＩ結合を減少させた。
実施例２２：インビボでの忍容性に対するＡＤＣ中のＬＡＬＡ及び／又はＤ２６５Ｃ変異の影響
変異を有するそれぞれＨｅｒ２－又はＰＳＭＡ特異的抗体を含むＡＤＣの忍容性をマウスで評価した。結果を表１４に示す。使用した全抗体は同じ骨格を有し、マウスにおいて交差反応性ではなかった。
＜表１４＞
Figure 2022530026000070
表１４に示される通り、アマトキシン／リンカー化合物ＨＤＰ ３０．２０６０並びにＬＡＬＡ及びＤ２６５Ｃ変異を有する抗体を含むＡＤＣでは、最大耐用量は、前記アマトキシン／リンカー化合物及びＤ２６５Ｃ変異のみを有する抗体を含むＡＤＣよりも著しく高かった。アマトキシン／リンカー化合物ＨＤＰ ３０．２８６７並びにＬＡＬＡ及びＤ２６５Ｃ変異を有する抗体を含むＡＤＣでは、忍容性はさらに高かった。
それぞれの変異を有する抗体を含むＡＤＣの忍容性を、非ヒト霊長類においても評価した。使用した全抗体は同じ骨格を有し、非ヒト霊長類において非結合体である。抗ＰＳＭＡ ＡＤＣ ｈ３／Ｆ１１－ＬＡＬＡ－Ｄ２６５Ｃ Ｖａｒ１６－３０．２０６０（ＬＡＬＡ及びＤ２６５Ｃ変異を有する）、ｈ３／Ｆ１１－Ｄ２６５Ｃ Ｖａｒ１６－３０．２０６０（Ｄ２６５Ｃ変異のみを有する）、並びに抗ジゴキシゲニンＡＤＣ ＤＩＧ－Ｄ２６５Ｃ－３０．２０６０、及びＤＩＧ－Ｄ２６５Ｃ－３０．２８６７（Ｄ２６５Ｃ変異のみを有する）を、用量漸増忍容性試験に関してカニクイザルにおいて評価した。
２匹の雌の動物の群に、ｈ３／Ｆ１１－ＬＡＬＡ－Ｄ２６５Ｃ Ｖａｒ１６－３０．２０６０を、第１日（１ｍｇ／ｋｇ）、第２３日（３ｍｇ／ｋｇ）、第４４日（５ｍｇ／ｋｇ）、第６５日（６ｍｇ／ｋｇ）、第８６日（７．５ｍｇ／ｋｇ）、第１２８日（１０ｍｇ／ｋｇ）に、ｈ３／Ｆ１１－Ｄ２６５Ｃ Ｖａｒ１６－３０．２０６０を、第１日（１ｍｇ／ｋｇ）、第２３日（３ｍｇ／ｋｇ）、及び第４４日（５ｍｇ／ｋｇ）に、ＤＩＧ－Ｄ２６５Ｃ－３０．２０６０を、第１日（１ｍｇ／ｋｇ）、第２２日（３ｍｇ／ｋｇ）、第４３日（５ｍｇ／ｋｇ）、第６４日（７．５ｍｇ／ｋｇ）に、又はＤＩＧ－Ｄ２６５Ｃ－３０．２８６７を、第１日（１ｍｇ／ｋｇ）、第２２日（３ｍｇ／ｋｇ）、第４３日（５ｍｇ／ｋｇ）、第６４日（７．５ｍｇ／ｋｇ）、第１０６日（１０ｍｇ／ｋｇ）、第１４８日（１５ｍｇ／ｋｇ）、及び第１９６日（２０ｍｇ／ｋｇ）に注射した。動物を、生化学的及び血液学的血液パラメーター、体重、食餌消費、臨床徴候、及び死亡率に関して経時的にモニターした。さらに、血液試料を、薬物動態的試験のために収集した。実験の最後に、組織試料を組織病理学的調査のために使用した。
７．５ｍｇ／ｋｇまでのｈ３／Ｆ１１－ＬＡＬＡ－Ｄ２６５Ｃ Ｖａｒ１６－３０．２０６０（ＬＡＬＡ及びＤ２６５Ｃ変異を有する）、３ｍｇ／ｋｇのｈ３／Ｆ１１－Ｄ２６５Ｃ Ｖａｒ１６－３０．２０６０（Ｄ２６５Ｃ変異のみを有する）、５ｍｇ／ｋｇのＤＩＧ－Ｄ２６５Ｃ－３０．２０６０、及び１５ｍｇ／ｋｇのＤＩＧ－Ｄ２６５Ｃ－３０．２８６７（Ｄ２６５Ｃ変異のみを有する）投与は忍容性が良好であり、血清パラメーターによる腎臓損傷の徴候がなく、体重及び食餌消費に影響がなかった。１０ｍｇ／ｋｇのｈ３／Ｆ１１－ＬＡＬＡ－Ｄ２６５Ｃ Ｖａｒ１６－３０．２０６０、５ｍｇ／ｋｇのｈ３／Ｆ１１－Ｄ２６５Ｃ Ｖａｒ１６－３０．２０６０、７．５ｍｇ／ｋｇのＤＩＧ－Ｄ２６５Ｃ－３０．２０６０、及び２０ｍｇ／ｋｇのＤＩＧ－Ｄ２６５Ｃ－３０．２８６７の投与は動物の死をもたらした。結果を表１５に示す。
＜表１５＞
Figure 2022530026000071
非ヒト霊長類におけるデータにより、ＬＡＬＡ及びＤ２６５Ｃ変異を有する抗体を含むＡＤＣでは、Ｄ２６５Ｃ変異のみを有する抗体を含むＡＤＣより最大耐用量が著しく高かったことが確認された。アマトキシン／リンカー化合物ＨＤＰ ３０．２８６７並びにＬＡＬＡ及びＤ２６５Ｃ変異を有する抗体を含むＡＤＣでは、忍容性が特に高かった。
＜表＞
Figure 2022530026000072
Figure 2022530026000073
Figure 2022530026000074
Figure 2022530026000075
Figure 2022530026000076
Figure 2022530026000077
Figure 2022530026000078
Figure 2022530026000079
Figure 2022530026000080
Figure 2022530026000081
Figure 2022530026000082
Figure 2022530026000083
Figure 2022530026000084
Figure 2022530026000085
Figure 2022530026000086
Figure 2022530026000087
Figure 2022530026000088
Figure 2022530026000089
Figure 2022530026000090
Figure 2022530026000091
Figure 2022530026000092
Figure 2022530026000093
Figure 2022530026000094
Figure 2022530026000095
Figure 2022530026000096
Figure 2022530026000097
Figure 2022530026000098
Figure 2022530026000099
Figure 2022530026000100
Figure 2022530026000101
Figure 2022530026000102
Figure 2022530026000103
Figure 2022530026000104
Figure 2022530026000105
Figure 2022530026000106
Figure 2022530026000107
Figure 2022530026000108
Figure 2022530026000109
Figure 2022530026000110
Figure 2022530026000111
Figure 2022530026000112
Figure 2022530026000113
Figure 2022530026000114
Figure 2022530026000115
Figure 2022530026000116
Figure 2022530026000117
Figure 2022530026000118
Figure 2022530026000119
Figure 2022530026000120
Figure 2022530026000121
Figure 2022530026000122
Figure 2022530026000123
Figure 2022530026000124
Figure 2022530026000125
Figure 2022530026000126
他の実施形態
本明細書において言及された全刊行物、特許、及び特許出願は、それぞれの独立した刊行物又は特許出願が、参照により組み込まれると具体的且つ個別に示されるかのように、同じ程度に参照により本明細書に組み込まれる。
本発明がその具体的な実施形態に関連して説明されてきたが、それはさらなる改変が可能であり、本願が、本発明のあらゆる変形体、使用、又は翻案を、一般的に本発明の原理に従い、本発明が関連する分野内の公知又は通常の慣行内にあり、且つ本明細書で先に述べられた基本的な特徴に適用され得る本発明からのそのような逸脱を含んで網羅するものであり、請求項の範囲内にあることが理解されるだろう。
他の実施形態は請求項の範囲内にある。

Claims (53)

  1. 式（Ａｎ）又は式（Ｂｎ）
    Figure 2022530026000127
     （式中、ｎは、２、３、４、５、６、７、８、又は９である）
    の構造を含むアマトキシン又はその誘導体若しくはアナログ。
  2. 式（Ａ）
    Figure 2022530026000128
     式（Ａ）（ＨＤＰ ３０．２８６７）
    の構造を含むアマトキシン又はその誘導体若しくはアナログ又はそのエナンチオマー若しくはジアステレオマー。
  3. 式（Ｂ）
    Figure 2022530026000129
     式（Ｂ）（ＨＤＰ ３０．０８８０）
    の構造を含むアマトキシン又はその誘導体若しくはアナログ又はそのエナンチオマー若しくはジアステレオマー。
  4. 抗体薬物複合体（ＡＤＣ）の調製に使用するための、請求項１～３のいずれか一項に記載のアマトキシン又はその誘導体若しくはアナログ。
  5. リンカーによりアマトキシンにコンジュゲートされた抗体又はその抗原結合断片を含み、式（Ｉ）：
    Figure 2022530026000130
     （式中：
    Ｑは、Ｓ又はスルホキシド基であり；
    Ｌは非切断性リンカーであり；
    Ｚは、Ｌ上に存在する反応性置換基と前記抗体又はその抗原結合断片内に存在する反応性置換基の間のカップリング反応により形成される化学部分であり；及び
    Ａｂは、前記抗体又はその抗原結合断片である）
    の構造を有する抗体薬物複合体（ＡＤＣ）又はその立体異性体。
  6. 式（Ｉａ）：
    Figure 2022530026000131
     の構造を有する、請求項５に記載のＡＤＣ。
  7. 式（Ｉｂ）：
    Figure 2022530026000132
     の構造を有する、請求項５に記載のＡＤＣ。
  8. Ｌが、結合、－（Ｃ＝Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－基、－ＯＣ（Ｏ）ＮＨ－基、Ｃ１～Ｃ６アルキレン、Ｃ１～Ｃ６ヘテロアルキレン、Ｃ２～Ｃ６アルケニレン、Ｃ２～Ｃ６ヘテロアルケニレン、Ｃ２～Ｃ６アルキニレン、Ｃ２～Ｃ６ヘテロアルキニレン、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキレン、ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、ヘテロアリーレン、ｐが１～６の整数である－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｐ－基、又は溶解度向上基の１つ以上を含み；
    ここで、各Ｃ１～Ｃ６アルキレン、Ｃ１～Ｃ６ヘテロアルキレン、Ｃ２～Ｃ６アルケニレン、Ｃ２～Ｃ６ヘテロアルケニレン、Ｃ２～Ｃ６アルキニレン、Ｃ２～Ｃ６ヘテロアルキニレン、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキレン、ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、若しくはヘテロアリーレンが、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルカリール、アルキルヘテロアリール、アミノ、アンモニウム、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニル、ウレイド、カルバマート、アリール、ヘテロアリール、スルフィニル、スルホニル、ヒドロキシル、アルコキシ、スルファニル、ハロゲン、カルボキシ、トリハロメチル、シアノ、ヒドロキシ、メルカプト、及びニトロからなる群から各場合で独立に選択される１～５つの置換基により任意選択で置換され得るか；
    又は、各Ｃ１～Ｃ６アルキレン、Ｃ１～Ｃ６ヘテロアルキレン、Ｃ２～Ｃ６アルケニレン、Ｃ２～Ｃ６ヘテロアルケニレン、Ｃ２～Ｃ６アルキニレン、Ｃ２～Ｃ６ヘテロアルキニレン、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキレン、ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、若しくはヘテロアリーレンが、Ｏ、Ｓ、及びＮから選択される１つ以上のヘテロ原子により任意選択で中断され得る、請求項５～７のいずれか一項に記載のＡＤＣ。
  9. 前記溶解度向上基が式－Ｏａ－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－ＳＯ２－ＮＲ１－を有し、
    式中：
    ａが、０又は１であり；並びに
    Ｒ１が、水素、Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ３～Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基、及びＣ３～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から選択され、そのそれぞれが、Ｏ、Ｓ、及びＮＲ３から選択される１つ以上のヘテロ原子により任意選択で置換されていても任意選択で中断されていてもよく、ここで、Ｒ３が、水素及びＣ１～Ｃ４アルキルからなる群から独立に選択される、請求項８に記載のＡＤＣ。
  10. Ｌが、ｎが２～６の整数である－（ＣＨ２）ｎ－単位を含む、請求項５～９のいずれか一項に記載のＡＤＣ。
  11. Ｌが、ｎが６である－（ＣＨ２）ｎ－である、請求項１０に記載のＡＤＣ。
  12. Ａｂ、Ｚ、及びＬが、共にＡｂ－Ｚ－Ｌとして、式：
    Figure 2022530026000133
     （式中、Ｓは、前記抗体又はその抗原結合断片中に存在するシステイン残基の硫黄原子である）により表される、請求項１１に記載のＡＤＣ。
  13. リンカーによりアマトキシンにコンジュゲートされた抗体又はその抗原結合断片を含み、式（Ｉ）：
    Figure 2022530026000134
     （式中：
    Ｑは、Ｓ又はスルホキシド基であり；
    Ｌは切断性リンカーであり；
    Ｚは、Ｌ上に存在する反応性置換基と前記抗体又はその抗原結合断片内に存在する反応性置換基の間のカップリング反応により形成される化学部分であり；及び
    Ａｂは、前記抗体又はその抗原結合断片である）
    の構造を有する抗体薬物複合体（ＡＤＣ）又はその立体異性体。
  14. 式（Ｉａ）：
    Figure 2022530026000135
     の構造を有する、請求項１３に記載のＡＤＣ。
  15. 式（Ｉｂ）：
    Figure 2022530026000136
     の構造を有する、請求項１３に記載のＡＤＣ。
  16. Ｌが、ヒドラジン、ジスルフィド、チオエーテル、アミノ酸、１０個までのアミノ酸からなるペプチド、ｐ－アミノベンジル（ＰＡＢ）基、複素環式自壊型基、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６ヘテロアルキル、Ｃ２～Ｃ６アルケニル、Ｃ２～Ｃ６ヘテロアルケニル、Ｃ２～Ｃ６アルキニル、Ｃ２～Ｃ６ヘテロアルキニル、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、－（Ｃ＝Ｏ）－基、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－基、－ＯＣ（Ｏ）ＮＨ－基、ｐが１～６の整数である－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｐ－基、又は溶解度向上基の１つ以上を含み；
    ここで、各Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６ヘテロアルキル、Ｃ２～Ｃ６アルケニル、Ｃ２～Ｃ６ヘテロアルケニル、Ｃ２～Ｃ６アルキニル、Ｃ２～Ｃ６ヘテロアルキニル、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、若しくはヘテロアリール基が、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルカリール、アルキルヘテロアリール、アミノ、アンモニウム、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニル、ウレイド、カルバマート、アリール、ヘテロアリール、スルフィニル、スルホニル、ヒドロキシル、アルコキシ、スルファニル、ハロゲン、カルボキシ、トリハロメチル、シアノ、ヒドロキシ、メルカプト、及びニトロからなる群から各場合で独立に選択される１～５つの置換基により任意選択で置換され得るか；
    又は各Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６ヘテロアルキル、Ｃ２～Ｃ６アルケニル、Ｃ２～Ｃ６ヘテロアルケニル、Ｃ２～Ｃ６アルキニル、Ｃ２～Ｃ６ヘテロアルキニル、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、若しくはヘテロアリール基が、Ｏ、Ｓ、及びＮから選択される１つ以上のヘテロ原子により任意選択で中断され得る、請求項１３～１５のいずれか一項に記載のＡＤＣ。
  17. 前記溶解度向上基が、式－Ｏａ－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－ＳＯ２－ＮＲ１－を有し、
    式中：
    ａが、０又は１であり；並びに
    Ｒ１が、水素、Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ３～Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基、及びＣ３～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から選択され、そのそれぞれが、Ｏ、Ｓ、及びＮＲ３から選択される１つ以上のヘテロ原子により任意選択で置換されていても任意選択で中断されていてもよく、ここで、Ｒ３が、水素及びＣ１～Ｃ４アルキルからなる群から独立に選択される、請求項１６に記載のＡＤＣ。
  18. Ｌが、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ａｌａ、Ｐｈｅ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｖａｌ－Ｃｉｔ、及びＶａｌ－Ａｒｇからなる群から選択されるペプチドを含む、請求項１３～１７のいずれか一項に記載のＡＤＣ。
  19. ＰＡＢ基をさらに含む、請求項１８に記載のＡＤＣ。
  20. Ｌが、式：
    Figure 2022530026000137
     により表される、請求項１９に記載のＡＤＣ。
  21. アマトキシンにコンジュゲートされた抗体を含み、式（ＩＩ）：
    Figure 2022530026000138
     による構造を有するＡＤＣ又はその立体異性体。
  22. 式（ＩＩａ）：
    Figure 2022530026000139
     の構造を有する、請求項２１に記載のＡＤＣ。
  23. 式（ＩＩｂ）：
    Figure 2022530026000140
     の構造を有する、請求項２１に記載のＡＤＣ。
  24. 前記抗体又はその抗原結合断片が、癌細胞、又はヒト幹細胞、とりわけ造血幹細胞（ＨＳＣ）、又はＴ細胞の細胞表面上に発現された抗原に特異的に結合する、請求項５～２３のいずれか一項に記載のＡＤＣ。
  25. 前記抗体又はその抗原結合断片が、ヒトＨｅｒ２、ＰＳＭＡ、ＣＤ３７、又はＣＤ１２３に特異的に結合する、請求項５～２４のいずれか一項に記載のＡＤＣ。
  26. 前記抗体又はその抗原結合断片が、Ｄ２６５Ｃ、Ｄ２６５Ａ、Ａ１１８Ｃ、Ｌ２３４Ａ、又はＬ２３５Ａ（ＥＵインデックスによる）からなる群から選択される少なくとも１つの変異を含むＦｃ領域を含む、請求項５～２５のいずれか一項に記載のＡＤＣ。
  27. 前記抗体又はその抗原結合断片がＰＳＭＡに特異的に結合し、配列番号３７８によるＣＤＲＨ１、配列番号３７９によるＣＤＲＨ２、配列番号３８０によるＣＤＲＨ３、配列番号３８１によるＣＤＲＬ１、配列番号３８２によるＣＤＲＬ２、及び配列番号３８３によるＣＤＲＬ３を含む、請求項５～２３のいずれか一項に記載のＡＤＣ。
  28. 前記抗体又はその抗原結合断片が、配列番号３７５による重鎖可変領域及び配列番号３７７による軽鎖可変領域を含む、請求項２７に記載のＡＤＣ。
  29. 前記抗体が、配列番号３７１、配列番号３７２、配列番号３７３、若しくは配列番号３７４による重鎖及び配列番号３７６による軽鎖、又はその抗原結合断片を含む、請求項２８に記載のＡＤＣ。
  30. リンカーによりアマトキシン又はその誘導体若しくはアナログにコンジュゲートされた抗体又はその抗原結合断片を含む抗体薬物複合体（ＡＤＣ）であって、前記抗体又はその抗原結合断片が、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ（ＥＵインデックスによる）からなる少なくとも２つの変異を含むＦｃ領域を含むＡＤＣ。
  31. 前記Ｆｃ領域がＤ２６５Ｃ（ＥＵインデックスによる）からなる変異をさらに含んでいる、請求項３０に記載の抗体薬物複合体（ＡＤＣ）。
  32. 前記抗体又はその抗原結合断片が、癌細胞、好ましくはヒト癌細胞の細胞表面上に発現された抗原に特異的に結合する、請求項３０又は３１に記載の抗体薬物複合体（ＡＤＣ）。
  33. 前記抗体又はその抗原結合断片が、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、Ｈｅｒ２抗原、ＣＤ３７、又はＣＤ１２３に特異的に結合する、請求項３２に記載の抗体薬物複合体（ＡＤＣ）。
  34. 前記抗体又はその抗原結合断片がＰＳＭＡに特異的に結合し、配列番号３７８によるＣＤＲＨ１、配列番号３７９によるＣＤＲＨ２、配列番号３８０によるＣＤＲＨ３、配列番号３８１によるＣＤＲＬ１、配列番号３８２によるＣＤＲＬ２、及び配列番号３８３によるＣＤＲＬ３を含む、請求項３０～３２のいずれか一項に記載の抗体薬物複合体（ＡＤＣ）。
  35. 前記抗体又はその抗原結合断片が、配列番号３７５による重鎖可変領域及び配列番号３７７による軽鎖可変領域を含む、請求項３４に記載の抗体薬物複合体（ＡＤＣ）。
  36. 前記抗体が、配列番号３７２、配列番号３７３、若しくは配列番号３７４による重鎖及び配列番号３７６による軽鎖、又はその抗原結合断片を含む、請求項３５に記載の抗体薬物複合体（ＡＤＣ）。
  37. 前記抗体又はその抗原結合断片が、ＨＤＰ３０．２０６０、ＨＤＰ３０．２１１５、ＨＤＰ３０．２３４７、ＨＤＰ３０．１６９９、ＨＤＰ３０．２３７１、ＨＤＰ３０．０８８０、及びＨＤＰ３０．２８６７からなる群から選択されるいずれかの化合物にコンジュゲートされている、請求項３０～３６のいずれか一項に記載の抗体薬物複合体（ＡＤＣ）。
  38. ヒトＰＳＭＡに特異的に結合し、配列番号３７４によるアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号３７６によるアミノ酸配列を有する軽鎖を含み、化合物ＨＤＰ３０．２０６０にコンジュゲートされた抗体又はその抗原結合断片を含む抗体薬物複合体（ＡＤＣ）。
  39. ヒトＰＳＭＡに特異的に結合し、配列番号３７４によるアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号３７６によるアミノ酸配列を有する軽鎖を含み、化合物ＨＤＰ３０．２１１５にコンジュゲートされた抗体又はその抗原結合断片を含む抗体薬物複合体（ＡＤＣ）。
  40. ヒトＰＳＭＡに特異的に結合し、配列番号３７４によるアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号３７６によるアミノ酸配列を有する軽鎖を含み、化合物ＨＤＰ３０．２３４７にコンジュゲートされた抗体又はその抗原結合断片を含む抗体薬物複合体（ＡＤＣ）。
  41. ヒトＰＳＭＡに特異的に結合し、配列番号３７４によるアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号３７６によるアミノ酸配列を有する軽鎖を含み、化合物ＨＤＰ３０．１６９９にコンジュゲートされた抗体又はその抗原結合断片を含む抗体薬物複合体（ＡＤＣ）。
  42. ヒトＰＳＭＡに特異的に結合し、配列番号３７４によるアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号３７６によるアミノ酸配列を有する軽鎖を含み、化合物ＨＤＰ３０．２３７１にコンジュゲートされた抗体又はその抗原結合断片を含む抗体薬物複合体（ＡＤＣ）。
  43. ヒトＰＳＭＡに特異的に結合し、配列番号３７４によるアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号３７６によるアミノ酸配列を有する軽鎖を含み、化合物ＨＤＰ３０．０８８０にコンジュゲートされた抗体又はその抗原結合断片を含む抗体薬物複合体（ＡＤＣ）。
  44. ヒトＰＳＭＡに特異的に結合し、配列番号３７４によるアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号３７６によるアミノ酸配列を有する軽鎖を含み、化合物ＨＤＰ３０．２８６７にコンジュゲートされた抗体又はその抗原結合断片を含む抗体薬物複合体（ＡＤＣ）。
  45. 薬物抗体比（ＤＡＲ）が、約１、２、３、又は４であり、好ましくはＤＡＲが２である、請求項３７～４４のいずれか一項に記載の抗体薬物複合体（ＡＤＣ）。
  46. 特に、乳癌、膵臓癌、胆管癌、大腸癌、肺癌、前立腺癌、卵巣癌、前立腺癌、胃癌、腎臓癌、悪性メラノーマ、血液系癌、白血病、及び悪性リンパ腫からなる群から選択される、患者の癌の治療に使用するための、請求項５～４５のいずれか一項に記載のＡＤＣ。
  47. 前記抗体又はその抗原結合断片が、造血幹細胞（ＨＳＣ）、好ましくはヒトＨＳＣの細胞表面上に発現された抗原に特異的に結合する、請求項３０又は３１に記載の抗体薬物複合体（ＡＤＣ）。
  48. ヒト対象における細胞の集団を枯渇させる方法であって、請求項５～２４及び４７のいずれか一項に記載のＡＤＣを前記対象に投与することを含み、前記ＡＤＣが、前記細胞の集団中の細胞により発現される細胞外抗原に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片を含む方法。
  49. 細胞移植のためにヒト対象を前処置する方法であって、前記ヒト対象における内因性幹細胞又は内因性免疫細胞が枯渇されるように、請求項５～２３及び４７のいずれか一項に記載のＡＤＣを前記ヒト対象に投与することを含み、前記ＡＤＣが、前記内因性幹細胞又は内因性免疫細胞により発現される細胞外抗原に特異的に結合する方法。
  50. 前記ヒト対象に同種異系幹細胞又は同種異系免疫細胞を投与することをさらに含む、請求項４８又は４９に記載の方法。
  51. 前記ＡＤＣが免疫細胞上に発現される細胞外抗原に特異的に結合し、前記対象が移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を有するか、又は移植片対宿主病を発症するリスクがある、請求項４８～５０のいずれか一項に記載の方法。
  52. 請求項５～４７のいずれか一項に記載のＡＤＣ及び少なくとも薬学的に許容できる担体を含む医薬組成物。
  53. 特に、乳癌、膵臓癌、胆管癌、大腸癌、肺癌、前立腺癌、卵巣癌、前立腺癌、胃癌、腎臓癌、悪性メラノーマ、血液系癌、白血病、及び悪性リンパ腫からなる群から選択される、患者の癌の治療のための、請求項５～４５のいずれか一項に記載のＡＤＣの使用。
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