JPWO2020219959A5

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Publication number: JPWO2020219959A5
Application number: JP2021563185A
Authority: JP
Publication date: 2023-05-08

Description

［関連出願の相互参照］
本出願は、2019年4月24日に出願された米国仮出願第62/838,280号に対して優先権を主張する。その優先出願の全内容は、本出願に参照により取り込まれる。

［配列リスト］
この出願には、ASCIIフォーマットで電子的に提出された、及びその全体が本出願に参照により取り込まれる配列リスト（Sequence Listing）が含まれる。前記ASCIIコピーは、2020年4月23日に作成され、M103034_2100WO_0359_4_SL.txtと名付けられ、サイズは99,264バイトである。

［技術分野］
本発明は、抗-CD45抗体又はその抗体薬物コンジュゲートの分野に関する。本発明は更に、抗-CD45抗体又は抗体薬物コンジュゲート(ADC)の投与による、とりわけ、血液疾患、代謝障害、がん、及び自己免疫疾患などの様々な病態に罹患している患者の治療に関する、ここで、前記抗体又はADCは、造血幹細胞又は免疫細胞の何れかの表面にあるCD45に対して結合することができる。

医療技術の進歩にもかかわらず、造血システムの病態（とりわけ、特定の血液細胞の疾患、代謝障害、がん、及び自己免疫症状など）を治療することが依然として求められている。造血幹細胞(HSC)は、大きな治療可能性を有する一方で、宿主において、HSC移植片を確実に生着させることが困難であることによって、臨床での使用を妨げている限界がある。特に、内因性のHSC上にある細胞表面抗原をターゲットとする抗体を含む造血幹細胞療法は、外因性のHSC移植片が生着することを妨げる、望ましくない免疫刺激機能及びエフェクター機能を誘発することがある。

抗-CD45抗体又はその抗原結合部分、及びベンゾジアゼピン部分構造（例えば、ピロロベンゾジアゼピン(PBD)又はインドリノベンゾジアゼピン(IGN)）を含む細胞毒素、を含む抗体薬物コンジュゲート(ADC)が、本出願で開示される。CD45+細胞を減少させるためのADCの使用も提供される。

従って、1つの態様では、本開示は、抗-CD45抗体又はその抗原結合部分(Ab)を含み、リンカー(L)を介して細胞毒素(Cy)にコンジュゲートした、抗体-薬物コンジュゲート(ADC)、ここで、前記細胞毒素はピロロベンゾジアゼピン(PBD)を含む、を提供する。1つの実施形態では、前記細胞毒素はPBD二量体であることがある。例えば、1つの実施形態では、前記PBDは、式(I)で表される：

ここで、波線は、ADCのリンカーへの共有結合の位置を示す。

いくつかの実施形態では、前記リンカー（L）は、1種以上のペプチド、オリゴ糖、-(CH₂)_p-, -(CH₂CH₂O)_q-, -(C=O)(CH₂)_r-, -(C=O)(CH₂CH₂O)_t-, -(NHCH₂CH₂)_u-,-PAB, Val-Cit-PAB, Val-Ala-PAB, Val-Lys(Ac)-PAB, Phe-Lys-PAB, Phe-Lys(Ac)-PAB, D-Val-Leu-Lys, Gly-Gly-Arg, Ala-Ala-Asn-PAB, 又は Ala-PAB、含む、ここで、p、q、r、t、及びuの各々は、1から12の整数であり、各場合毎に、独立して選択される。例示的な実施形態では、前記リンカーは、式(II)の構造を有する：

ここで、R₁ は、CH₃(Ala)又は(CH₂)₃NH(CO)NH₂(Cit)である。

1つの実施形態では、前記リンカーは、前記抗体にコンジュゲートする前に、反応性置換基Z'を含み、L-Z'として一緒になっていて、以下の構造を有する：

。

例示的な実施形態では、前述の構造のR₁は、CH₃であることがある。

1つの実施形態では、前記細胞毒素-リンカー・コンジュゲートは、前記抗体にコンジュゲートする前に、反応性置換基Z'を含み、Cy-L-Z'として一緒になっていて、テシリンであり、式(IV)の構造を有する：

。

例示的な実施形態では、前記ADCは、式(V)の構造を含むことがある：

ここで、Abは、抗-CD45抗体又はその抗原結合フラグメントである、及びSは、前記抗体又はその抗原結合フラグメントの、中に存在する又は中に導入した、硫黄原子である。

別の態様では、リンカー(L)を介して細胞毒素(Cy)にコンジュゲートした、抗-CD45抗体又はその抗原結合部分(Ab)を含む、抗体-薬物コンジュゲート(ADC)、ここで、前記細胞毒素はインドリノベンゾジアゼピン(IGN)を含む、が本出願で提供される。

いくつかの実施形態では、前記細胞毒素は、IGN二量体又は偽二量体であることがある。例えば、いくつかの実施形態では、前記細胞毒素は、式(VI)で表されるIGN偽二量体であることがある：

上述の態様のいくつかの実施形態では、前記リンカーは、ジペプチド、ジスルフィド、C1-C12アルキル、C=O、又はそれらの組み合わせ、を含む。いくつかの実施形態では、前記リンカーは、

を含む。

いくつかの実施形態では、前記細胞毒素-リンカー・コンジュゲートは、前記抗体又はその抗原結合部分にコンジュゲートする前に、反応性置換基Z'を含み、Cy-L-Z'として一緒になっていて、式(VII)の構造を有する：

。

上述の態様のいくつかの実施形態では、前記ADCは、1から10の薬物抗体比(drug to antibody ratio (DAR))を有することがある。例えば、1つの実施形態では、前記ADCは、1、2、3、4、5、6、7、8、9又は10の薬物抗体比を有することがある。他の実施形態では、前記ADCは、1から8のDARを有することがある。例えば、1つの実施形態では、前記ADCは、1、2、3、4、5、6、7、又は8のDARを有することがある。他の実施形態では、前記ADCは、1から4のDARを有することがある。例えば、1つの実施形態では、前記ADCは、1、2、3又は4のDARを有することがある。いくつかの実施形態では、前記ADCは、1のDARを有する。他の実施形態では、前記ADCは、2のDARを有する。他の実施形態では、前記ADCは、3のDARを有する。他の実施形態では、前記ADCは、4のDARを有する。他の実施形態では、前記ADCは、5のDARを有する。他の実施形態では、前記ADCは、6のDARを有する。他の実施形態では、前記ADCは、7のDARを有する。他の実施形態では、前記ADCは、8のDARを有する。

上述の態様のいくつかの実施形態では、前記抗-CD45抗体は、キメラ抗体又はその抗原結合部分であることがある。他の実施形態では、前記抗体は、ヒト化抗体又はその抗原結合部分であることがある。他の実施形態では、前記抗体は、完全ヒト抗体又はその抗原結合部分であることがある。

例示的な実施形態では、抗-CD45抗体又はその抗原-結合部分は、モノクローナル抗体又はその抗原-結合部分、ポリクローナル抗体又はその抗原-結合部分、バイスペシフィック抗体又はその抗原-結合部分、二重可変免疫グロブリン・ドメイン(dual-variable immunoglobulin domain)、単鎖Fv分子(scFv)、ダイアボディ、トリアボディ、ナノボディ、抗体-様タンパク質スキャッフォルド、Fvフラグメント、Fabフラグメント、F(ab')₂分子、又はタンデムdi-scFv、であることがある。前記抗体は、IgG、IgA、IgM、IgD及びIgE、などの何れかのアイソタイプであることがある。1つの実施形態では、前記抗体は、IgGである。例えば、前記抗体は、いくつかの実施形態では、ヒトIgG1、IgG2、IgG3、又はIgG4アイソタイプFcドメインを含むことがある。

1つの実施形態では、前記抗体又はその抗原結合部分は、Fcドメインを含む、及び前記抗体又はその抗原結合部分は、Fcドメイン内のシステイン残基を経由して、PBDにコンジュゲートする。Fcドメイン内のシステイン残基は、生来のFc配列内に存在することがある。他の実施形態では、前記システイン残基を、Fcドメイン内のアミノ酸置換によって導入することがある。例えば、前記Fc ドメインは、置換D265C及び／又はV205C (EU 番号付け) を含むことがある。

1つの実施形態では、前記ADCは、ヒトCD45 ROに特異的に結合することができる、抗-CD45抗体又はその抗原結合部分を含むことがある。

別の態様では、本開示は、本出願に記載されるADC及び薬学的に許容可能な担体又は賦形剤、を含む医薬組成物を提供する。

別の態様では、本開示は、ヒト患者において、CD45+細胞の集団を減少させる方法、ここで、前記方法は、本出願に記載されるADC又は医薬組成物の有効量を前記患者に投与することを含む、を提供する。

この態様の1つの実施形態では、前記CD45+細胞は、造血幹細胞である。いくつかの実施形態では、前記造血幹細胞は、CD45ROを発現することがある。

他の実施形態では、前記CD45+細胞は、免疫細胞である。いくつかの実施形態では、前記免疫細胞は、CD137、CD2、及び／又はCD5、を発現する。

いくつかの実施形態では、前記方法は、更に、造血幹細胞を含む移植片を、前記患者に投与することを含む。

1つの態様では、本開示は、造血幹細胞を含む移植片を、ヒト患者に投与することを含む方法、ここで、前記患者は、本出願に記載されるADC、又は医薬組成物を、前記患者からCD45+細胞の集団を減少させるのに十分な量で、以前に投与されたことがある。この態様の1つの実施形態では、前記CD45+細胞は、造血幹細胞である。いくつかの実施形態では、前記造血幹細胞は、CD45ROを発現することがある。

別の態様では、本開示は、造血幹細胞を含む移植片を、ヒト患者に投与することを含む方法、ここで、前記患者は、本出願に記載されるADC、又は医薬組成物を、前記患者から免疫細胞の集団を減少させるのに十分な量で、以前に投与されたことがある。いくつかの実施形態では、前記免疫細胞は、CD137、CD2、及び／又はCD5、を発現する。

上述の態様に関して、前記患者は、いくつかの実施形態では、血液疾患、代謝障害、がん、自己免疫疾患、又は重度複合免疫不全症(SCID)を有する患者である。

いくつかの実施形態では、前記移植片は、同種異系である。例えば、前記移植片は同種異系の造血幹細胞移植であることがある。他の実施形態では、前記移植片は、自己の移植片であることがある。

例えば、前記患者は、血液がん（例えば、白血病又はリンパ腫など）を有することがある。他の実施形態では、前記患者は、自己免疫疾患（例えば、多発性硬化症又は強皮症など）を有することがある。

別の態様では、本開示は、造血幹細胞(HSC)移植を必要とするヒトの患者において、CD45+細胞の集団を減少させる方法、ここで、前記方法は、CD45+細胞の集団が減少するように、有効量の抗体-薬物コンジュゲート(ADC)を前記ヒト患者に投与することを含む、ここで、前記ADCは、リンカーを介して細胞毒素にコンジュゲートした、抗-CD45抗体又はその抗原結合部分を含む、ここで、前記細胞毒素はピロロベンゾジアゼピン(PBD)を含む。

別の態様では、本開示は、造血幹細胞(HSC)移植を受けるために、ヒト患者をコンディショニングする方法、ここで、前記方法は、抗体-薬物コンジュゲート(ADC)を前記ヒト患者に投与することを含む、ここで、前記ADCは、リンカーを介して細胞毒素にコンジュゲートした、抗-CD45抗体又はその抗原結合部分を含む、ここで、前記細胞毒素はピロロベンゾジアゼピン(PBD)を含む。

上述の態様のいくつかの実施形態では、前記細胞毒素はPBD二量体である。例示的な実施形態では、前記PBDは、式(I)で表される：

上述の態様のいくつかの実施形態では、前記リンカーは、1種以上のペプチド、オリゴ糖、-(CH₂)_p-, -(CH₂CH₂O)_q-, -(C=O)(CH₂)_r-, -(C=O)(CH₂CH₂O)_t-, -(NHCH₂CH₂)_u-,-PAB, Val-Cit-PAB, Val-Ala-PAB, Val-Lys(Ac)-PAB, Phe-Lys-PAB, Phe-Lys(Ac)-PAB, D-Val-Leu-Lys, Gly-Gly-Arg, Ala-Ala-Asn-PAB, 又は Ala-PAB、含む、ここで、p、q、r、t、及びuの各々は、1から12の整数であり、各場合毎に、独立して選択される。例示的な実施形態では、前記リンカーは、式(II)の構造を有する：

ここで、R₁は、CH₃(Ala) 又は(CH₂)₃NH(CO)NH₂(Cit)である。

。

1つの実施形態では、上述の構造にあるR₁は、CH₃である。

別の実施形態では、前記細胞毒素-リンカー・コンジュゲートは、前記抗体にコンジュゲートする前に、反応性置換基Z'を含み、Cy-L-Z'として一緒になっていて、テシリンであり、式(IV)の構造を有する：

。

上述の態様の別の実施形態では、前記ADCは、式(V)の構造を有する：

別の態様では、造血幹細胞(HSC)移植を必要とするヒト患者において、CD45+細胞の集団を減少させる方法、ここで、前記方法は、CD45+細胞の集団が減少するように、有効量の抗体-薬物コンジュゲート(ADC)を前記ヒト患者に投与することを含む、ここで、前記ADCは、リンカーを介して細胞毒素にコンジュゲートした、抗-CD45抗体又はその抗原結合部分を含む、ここで、前記細胞毒素はインドリノベンゾジアゼピン(IGN)を含む、が本出願で提供される。

別の態様では、造血幹細胞(HSC)移植を受けるために、ヒト患者をコンディショニングする方法、ここで、前記方法は、抗体-薬物コンジュゲート(ADC)を前記ヒト患者に投与することを含む、ここで、前記ADCは、リンカーを介して細胞毒素にコンジュゲートした、抗-CD45抗体又はその抗原結合部分を含む、ここで、前記細胞毒素はインドリノベンゾジアゼピン(IGN)を含む、が本出願で提供される。

上述の態様のいくつかの実施形態では、前記細胞毒素は、IGN二量体又は偽二量体である。いくつかの実施形態では、前記細胞毒素は、式(VI)で表されるIGN偽二量体である：

いくつかの実施形態では、前記リンカーは、ジペプチド、ジスルフィド、C1-C12アルキル、C=O、又はそれらの組み合わせ、を含む。いくつかの実施形態では、前記リンカーは、

を含む。

。

上述の態様の1つの実施形態では、前記ADCは、上記の通り、1から10、即ち、1、2、3、4、5、6、7、8、9、又は10の薬物抗体比(DAR)を有することがある。

いくつかの実施形態では、前記抗体又はその抗原結合部分は、キメラ抗体、ヒト化抗体、若しくはヒト抗体、又はそれらの抗原結合部分であることがある。いくつかの実施形態では、前記抗体又はその抗原-結合部分は、モノクローナル抗体又はその抗原-結合部分、ポリクローナル抗体又はその抗原-結合部分、バイスペシフィック抗体又はその抗原-結合部分、二重可変免疫グロブリン・ドメイン(dual-variable immunoglobulin domain)、単鎖Fv分子(scFv)、ダイアボディ、トリアボディ、ナノボディ、抗体-様タンパク質スキャッフォルド、Fvフラグメント、Fabフラグメント、F(ab')₂分子、及びタンデムdi-scFv、からなる群から選択される。

いくつかの実施形態では、前記抗体又はその抗原結合部分は、Fcドメインを含む。いくつかの実施形態では、前記抗体又はその抗原結合部分は、CD45+細胞によって内部に取り込まれる。いくつかの実施形態では、前記抗体は以下のアイソタイプのうちの1種を有することがある：IgG、IgA、IgM、IgD、又はIgE。例えば、前記抗体は、ヒトIgG1、IgG2、IgG3、又はIgG4アイソタイプのFcドメインを有することがある。前記抗体又はその抗原結合部分が、Fcドメインを含むいくつかの実施形態では、前記抗体又はその抗原結合部分は、Fcドメイン内のシステイン残基を経由して、PBDにコンジュゲートすることがある。前記システイン残基は、Fcドメイン内で天然にあるかもしれない、又は、前記システイン残基を、Fcドメイン内のアミノ酸置換によって導入することがある。例えば、前記Fc ドメインは、D265C及び／又はV205Cの置換 (EU番号付け) を含むことがある。

いくつかの実施形態では、前記抗体又はその抗原結合部分は、ヒトCD45 ROに、特異的に結合することができる。そのような実施形態では、前記ADCは、CD45 RO+細胞によって、内部に取り込まれることがある。

上述の態様のいくつかの実施形態では、前記方法は、前記患者が造血幹細胞を含む移植片を受ける前に、前記ADCを前記患者に投与することを含む。例えば、前記方法は、前記患者が造血幹細胞を含む移植片を受ける約3日前に、前記ADCを前記患者に投与することを含む。

いくつかの実施形態では、前記患者は、血液疾患、代謝障害、がん、自己免疫疾患、幹細胞障害、又は重度複合免疫不全症(SCID)、を有する。いくつかの実施形態では、前記患者は、幹細胞障害（例えば、血液がん又は自己免疫疾患など）を有する。例示的な実施形態では、前記患者は、血液がん（例えば、白血病又はリンパ腫）を有する。別の例示的な実施形態では、前記患者は、自己免疫疾患（例えば、多発性硬化症又は強皮症など）を有する。

上述の態様のいくつかの実施形態では、内因性のCD45+ HSCの集団は、前記ヒト患者において、前記ADCを投与した後、減少する。

上述の態様のいくつかの実施形態では、前記方法は、更に、前記患者に造血幹細胞移植片を投与すること、を含む。いくつかの実施形態では、前記ADCが前記患者の血液から実質的にクリアランスされた後に、前記移植片を前記ヒト患者に投与する。1つの実施形態では、前記造血幹細胞移植は、同種異系の細胞を含む。

図１は、リンカーにコンジュゲートした例示的なPBD(式(IV)；即ちテシリン)の化学構造を、抗-CD45抗体と結合する前、反応性置換基Z'を含み、Cy-L-Z'として一緒になって、示す。図２Ａ及び２Ｂは、抗-CD45-PBD ADC (即ち、「104 PBD」)を含む、in vitro T細胞傷害アッセイの結果を、ネガティブ・コントロール(即ち、「iso PBD」)と比較して、図示する。本結果は、ADC濃度(x軸)を変化させた場合の、T細胞の総数(図２Ａ)、又はKI-67+細胞のパーセンテージ(図２Ｂ) (y軸)、を示す。図３Ａ及び図３Ｂは、抗-CD45-ADC (即ち、「104 PBD」)で処置した、同種異系反応性T細胞活性化のマウス・モデルにおけるin vivo減少アッセイの結果を図示する。図３Ａは、抗-CD45-ADC処置マウスから採取した脾臓及び血液を評価する、及びCD45.2+(ドナー)細胞にゲーティングした、フロー・サイトメトリー・アッセイの結果を図示する。図３Ｂは、コントロール(即ち、「Iso PBD」)で処置したマウスと比較して、抗-CD45-ADCで処置したマウスの脾臓中の又は血液中の、細胞数(全CD45.2+細胞、CD45.2+ T細胞、若しくはKi-67+細胞)又は親細胞の割合(% T細胞［全ドナー細胞］、%Ki-67+［全T細胞］)の定量を図示する。図４は、抗-CD45抗体薬物コンジュゲート (CD45-PBD)を用いて処置した、ヒト化NSGマウスにおけるin vivo減少アッセイの結果を図示する。このアッセイでは、末梢血中のヒト細胞の減少を評価した。媒体(PBS)、アイソタイプ・コントロール-PBD ("Iso-PBD")、又はCD45-PBDのいずれかの、示した単回用量を、hNSGマウスに投与した。示した時点で、末梢血を採取し、全ヒト血液細胞含有量(hβ₂M⁺)、骨髄細胞含有量(CD33⁺)、B細胞含有量(CD19⁺)、及びT細胞含有量(CD3⁺)について評価した。本結果を、ベースラインに対して標準化した減少率として示す。図５は、抗-CD45-ADC (CD45-PBD)で処置した、ヒト化NSGマウスにおけるin vivo減少アッセイの結果を図示する。このアッセイでは、骨髄におけるヒト細胞の減少を評価した。媒体(PBS)、アイソタイプ-PBD又はCD45-PBDのいずれかの、示した単回用量を、hNSGマウスに投与した。BMサンプルを、処置後14日目に採取し、ヒトの前駆細胞／HSC含有量について評価した。本結果を、ヒト細胞の割合と絶対数／大腿骨で表す。図６は、抗-CD45-ADC (CD45-PBD)で処置した、ヒト化NSGマウスにおけるin vivo減少アッセイの結果を図示する。このアッセイでは、ヒトCD45+細胞、ダブル-ポジティブ(DP)胸腺細胞、成熟したCD4⁺シングル-ポジティブ(SP)胸腺細胞、又は成熟したCD8⁺シングル-ポジティブ(SP)胸腺細胞の減少を、処置後14日間、評価した。媒体(PBS)、アイソタイプ-PBD又はCD45-PBDのいずれかの、示した単回用量を、hNSGマウスに投与した。図７は、抗-CD45抗体薬物コンジュゲート(CD45-IGN)で処置した、ヒト化NSGマウスにおけるin vivo減少アッセイの結果を図示する。このアッセイでは、末梢血中のヒト細胞の減少を評価した。媒体(PBS)、アイソタイプ・コントロール-IGN ("「Iso-IGN」)、又はCD45-IGNのいずれかの、示した単回用量を、hNSGマウスに投与した。示した時点で、末梢血を採取し、全ヒト血液細胞含有量(hβ₂M⁺)、骨髄細胞含有量(CD33⁺)、B細胞含有量(CD19⁺)、及びT細胞含有量(CD3⁺)について評価した。本結果を、ベースラインに対して標準化した減少率として示す。図８は、CD45-IGNで処置した、ヒト化NSGマウスにおけるin vivo減少アッセイの結果を図示する。このアッセイでは、骨髄におけるヒト細胞の減少を評価した。媒体(PBS)、アイソタイプ-IGN又はCD45-IGNのいずれかの、示した単回用量を、hNSGマウスに投与した。BMサンプルを、処置後14日目に採取し、ヒトの前駆細胞／HSC含有量について評価した。本結果を、ヒト細胞の割合と絶対数／大腿骨で表す。図９は、CD45-IGNで処置した、ヒト化NSGマウスにおけるin vivo減少アッセイの結果を図示する。このアッセイでは、ヒトCD45+細胞、ダブル-ポジティブ(DP)胸腺細胞、成熟したCD4⁺シングル-ポジティブ(SP)胸腺細胞、又は成熟したCD8⁺シングル-ポジティブ(SP)胸腺細胞の減少を、評価した。示した、媒体(PBS)、アイソタイプ-IGN又はCD45-IGNのいずれかの、示した単回用量を、hNSGマウスに投与した。

［発明の詳細な説明］
以下のセクションでは、抗体、その抗原-結合フラグメント、又は抗体-薬物コンジュゲート (ADC)について説明する。これらを、移植片対宿主病(GVHD)に罹患している、又はそのリスクがある患者に投与することがある。並びに、以下のセクションでは、前記患者に、このような治療剤を投与する方法を提供する。

［定義］
別段に記載のない限り、本出願で使用される以下の用語及びフレーズは、以下の意味を持つことが意図される。

本出願で使用される場合、用語「約」は、記載される値より10%高い値又は低い値をいう。例えば、用語「約5 nM」は、4.5 nMから5.5 nMの範囲を示す。

本出願で使用される場合、用語「抗体」は、特定の抗原に特異的に結合するか、又は特定の抗原と免疫学的に反応性である、免疫グロブリン分子のことを指す。抗体としては、限定されるものではないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、マルチスペシフィック抗体（例えば、バイスペシフィック抗体）、遺伝子工学的に操作した抗体、及びその他の改変した形態の抗体（例えば、限定されるものではないが、脱-免疫化抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、マルチスペシフィック抗体［例えば、バイスペシフィック抗体］、ヘテロコンジュゲート抗体［例えば、バイ-、トリ-及びクアッド-スペシフィック抗体、ダイアボディ、トリアボディ、及びテトラボディ］、並びに抗体フラグメント［即ち、抗体の抗原結合フラグメント］［例えば、Fab'、F(ab')₂、Fab、Fv、rlgG、及びscFvフラグメントなど］、それらが所望の抗原-結合活性を示す限り含まれる）、が挙げられる。別段に記載のない場合、用語「モノクローナル抗体」（mAb）は、ターゲット・タンパク質に特異的に結合することができる、インタクトな分子、並びに抗体フラグメント（例えば、FabやF(ab')₂のフラグメントなど）、の両方を含むことが意味される。本出願で使用される場合、Fab及びF(ab')₂フラグメントは、インタクトな抗体のFcフラグメントを欠く抗体フラグメントを指す。これらの抗体フラグメントの例を、本出願で記載する。

本開示の抗体は、通常、単離されている、又は組換えである。本出願で使用される場合、「単離されている」とは、それが発現した細胞又は細胞培養から、同定され、分離され、及び／又は回収された、ポリペプチド（例えば、抗体）を指す。通常、少なくとも1つの精製工程によって、単離された抗体を調製する。従って、「単離された抗体」とは、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に有さない、抗体を意味する。例えば、CD45に特異的に結合する、単離された抗体は、CD45以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない。

一般的に、抗体は、抗原結合領域を含む重鎖及び軽鎖を含む。各重鎖は、重鎖可変領域(本出願では、HCVR又はVHと略す)及び重鎖定常領域を含む。前記重鎖定常領域は、CH1、CH2及びCH3の3つのドメインを含む。各軽鎖は、軽鎖可変領域(本出願では、LCVR又はVLと略す)及び軽鎖定常領域を含む。軽鎖定常領域は、1つのドメイン(CL)を含む。前記VH及びVL領域は、更に、相補性決定領域(complementarity determining regions (CDR))と呼ばれる、超可変性の領域に分けられ、骨格領域(framework regions (FR))と呼ばれる、より保存された領域が点在する。各VH及びVLは、3つのCDRと4つのFRで構成され、これらは、アミノ末端からカルボキシル末端まで、以下の順で配置している：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重鎖及び軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合領域を含む。抗体の定常領域は、宿主組織又は因子（例えば、免疫系の種々の細胞［例えば、エフェクター細胞］及び古典的補体系の第一成分(Clq)など）への免疫グロブリンの結合を媒介することがある。

本出願で使用される場合、用語「抗原-結合フラグメント」は、ターゲット抗原に特異的に結合する作用能を保持する1つ以上の抗体のフラグメント、を意味する。抗体の抗原-結合機能を、全長抗体のフラグメントによって果たすことができる。前記抗体フラグメントは、例えば、Fab、F(ab')₂、scFv、ダイアボディ、トリアボディ、アフィボディ、ナノボディ、アプタマー、又はドメイン抗体であることがある。抗体の「抗原-結合フラグメント」という用語に包含される結合フラグメントの例としては、限定されるものではないが、以下が挙げられる：(i)Fabフラグメント、VL、VH、CL及びCH1ドメインからなる一価フラグメント；(ii)F(ab')₂フラグメント、ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結した、2つのFabフラグメントを含む二価フラグメント；(iii) VH及びCH1ドメインからなるFdフラグメント；(iv)抗体の単一アームのVL及びVHドメインからなるFvフラグメント；(v) VH及びVLドメインを含むdAb；(vi) VHドメインからなるdAbフラグメント(例えば、Ward et al., Nature 341:544-546、1989を参照のこと)；(vii) VH又はVLドメインからなるdAb；(viii)単離した相補性決定領域(CDR)；並びに(ix)合成リンカーによって任意選択的に連結することがある2つ以上(例えば、2つ、3つ、4つ、5つ、又は6つ)の単離したCDRの組み合わせ。更に、Fvフラグメントの2つのドメイン（VL及びVH）は、別々の遺伝子によってコードされているが、それらを、組換え方法を使用することで、リンカーによって連結して、その結果、単一タンパク質鎖（VL及びVH領域が対になって一価分子を形成する）とすることができる(単鎖Fv(scFv)として公知である；例えば、Bird et al., Science 242:423-426, 1988 及び Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883, 1988を参照のこと)。これらの抗体フラグメントを、当業者に公知の従来の技術を使用して入手することができ、及び前記フラグメントを、インタクトな(intact)抗体と同じ様式で、有用性についてスクリーニングすることができる。抗原-結合フラグメントを、組換えDNA技術、インタクトな免疫グロブリンの酵素的な又は化学的な切断によって、又は、ある場合には、当該技術分野で公知の化学的ペプチド合成手順によって、産生することができる。

本出願で使用される場合、用語「抗-CD45抗体」又は「CD45に結合する抗体」は、前記抗体が、CD45をターゲットとする診断薬剤及び／又は治療薬剤として有用であるように、十分な親和性でCD45に特異的に結合することができる、少なくとも免疫グロブリン分子の一部、例えば、限定されるものではないが、重鎖若しくは軽鎖、又はそのリガンド結合部分の少なくとも1つの相補性決定領域(CDR)、重鎖若しくは軽鎖の可変領域、重鎖若しくは軽鎖の定常領域、骨格領域、又はそれらの任意の領域、を含むタンパク質又はペプチド含有分子、を意味する。抗-CD45抗体としては、また、10番目のフィブロネクチン・タイプIIIドメイン(¹⁰Fn3)のような、抗体-様タンパク質スキャッフォルド（これは、抗体CDRに、構造及び溶媒アクセス可能性において類似している、BC、DE、及びFG構造ループを含む）、も挙げられる。¹⁰Fn3ドメインの三次構造は、IgG重鎖の可変領域の三次構造に類似しており、当業者は、例えば、¹⁰Fn3のBC、DE、及びFGループの残基を、抗-CD45モノクローナル抗体のCDRH-1、CDRH-2又はCDRH-3領域に由来する残基と置き換えることによって、抗-CD45モノクローナル抗体のCDRを、フィブロネクチン・スキャッフォルドの上に接ぎ木することができる。いくつかの実施形態では、抗-CD45抗体又はその抗原-結合部分は、ヒトCD45アイソフォームCD45ROに結合することができる。

本出願で使用される場合、用語「バイスペシフィック抗体(bispecific antibody)」は、同一の又は異なる抗原上にあることがある、少なくとも2種の異なる抗原、又は2種の異なるエピトープに結合することができる、例えば、モノクローナル抗体、しばしば、ヒト抗体、脱-免疫化抗体、ヒト化抗体、又はキメラ抗体、を指す。例えば、結合特異性のうちの1つを、造血幹細胞表面抗原（例えば、CD45）にあるエピトープに向けることができ、他方を、特に細胞増殖を増強するシグナル伝達経路に関与するレセプター又はレセプター・サブユニットのような、様々な造血幹細胞表面抗原又は別の細胞表面タンパク質にあるエピトープに特異的に結合させることができる。いくつかの実施形態では、その結合特異性を、同一のターゲット抗原上の、ユニークな、重複しないエピトープに向けることがある(即ち、バイパラトピック抗体[biparatopic antibody])。

本出願で使用される場合、用語「相補性決定領域」(CDR)は、抗体の軽鎖及び重鎖可変ドメインの両方に見出される超可変領域のことをいう。可変ドメインのより高度に保存された部分は、骨格領域(FR)と呼ばれる。抗体の超可変領域を表すアミノ酸の位置は、文脈及び当該技術分野で公知の種々の定義に依存して、変化することがある。可変ドメイン内のいくつかの位置は、ハイブリッド超可変位置と見なされることがあり、これらの位置は、ある組の基準の下では超可変領域内にあると見なされることがあり、一方、別の組の基準の下では超可変領域外にあると見なされることがある。これらの位置の1つ以上はまた、拡張超可変領域において見出されることもある。本出願に記載される抗体は、これらのハイブリッド超可変位置に、改変を含むことがある。生来の重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、それぞれ、主にβ-シート構造をとり、3つのCDRによって連結した（CDRは、β-シート構造を連結し、場合によってはその一部を形成する、ループを形成する）、4つの骨格領域を含む。各々の鎖中のCDRは、FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4の順序で、骨格領域によって近接して一緒にまとまり、そして他の抗体鎖由来のCDRと共に、抗体のターゲット結合部位の形成に寄与する(Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, National Institute of Health, Bethesda, MD., 1987を参照のこと)。ある特定の実施形態では、免疫グロブリンのアミノ酸残基の番号付けは、別段に示さない限り、Kabatらの免疫グロブリンのアミノ酸残基の番号付けシステムに従って行う(しかし、限定されるものではないが、IMGT及びChothia等を含む、任意の抗体の番号付けスキームを利用することがある)。

用語「Fc」、「Fc領域」、「Fcドメイン」、及び「IgG Fcドメイン」は、本出願で使用される場合、IgG分子のパパイン消化によって得られる結晶化可能なフラグメントに関する免疫グロブリン（例えば、IgG分子）の一部を指す。前記Fc領域は、ジスルフィド結合によって連結した、IgG分子の2本の重鎖のC末端側の半分を含む。これは、抗原結合活性を有さないが、糖部分、並びに補体及びFcRnレセプター等を含むFcレセプターに対する結合部位を含む（下記参照）。例えば、Fc領域は、第2の定常ドメインCH2(例えば、ヒトIgG1のEU位置231から340の残基)及び第3の定常ドメインCH3(例えば、ヒトIgG1のEU位置341から447の残基)を含む。本出願で使用される場合、前記Fc領域は、「ロワー・ヒンジ領域(lower hinge region)」(例えば、ヒトIgG1のEU位置233から239の残基)を含む。

Fcは、単離されたこの領域、又は抗体、抗体フラグメント、若しくはFc融合タンパク質の文脈におけるこの領域、を指すことがある。多型が、限定されるものではないが、EU位置270、272、312、315、356、及び358等を含む、Fcドメイン内の多くの位置で観察されてきており、従って、本出願で提示される配列と当該技術分野で知られている配列との間にわずかな差異が存在することがある。従って、「野生型IgG Fcドメイン」又は「WT IgG Fcドメイン」は、任意の天然に存在するIgG Fc領域(即ち、任意のアレル)を指す。ヒトIgG1、IgG2、IgG3及びIgG4の重鎖の配列は、多くの配列データベース中に見つけることができ、例えば、Uniprotデータベース(www.uniprot.org)では、それぞれ、アクセション番号P01857(IGHG1_human)、P01859(IGHG2_human)、P01860(IGHG3_human)及びP01861(IGHG1_human)である。

本出願で使用される場合、用語「改変したFc領域」又は「バリアントFc領域」は、Fcドメイン内の任意の位置に導入された、1つ以上のアミノ酸置換、欠失、挿入又は改変を含むIgG Fcドメインを指す。ある特定の態様では、バリアントIgG Fcドメインは、1つ以上のアミノ酸置換を含まない野生型Fcドメインと比較して、FcガンマR及び／又はC1qに対する結合親和性が減少する又は無くなるという結果を産む、1つ以上のアミノ酸置換を含む。更に、Fc結合相互作用は、様々なエフェクター機能及び下流のシグナル伝達イベント（抗体依存性細胞媒介性細胞傷害(antibody dependent cell-mediated cytotoxicity (ADCC))及び補体依存性細胞傷害(complement dependent cytotoxicity (CDC))等を含むが、これらに限定されない）にとって必須である。従って、ある特定の態様では、バリアントFcドメインを含む抗体(例えば、抗体、融合タンパク質、又はコンジュゲート)は、1つ以上のアミノ酸置換、欠失、挿入、又は改変を含まない (例えば、Fc領域内の対応する位置に天然に存在するアミノ酸残基を含む、改変していないFc領域)が他の点では同じアミノ酸配列を有する、対応する抗体と比較して、少なくとも1種以上のFcリガンド（例えば、FcガンマR）に対する結合親和性が変わることがある。

バリアントFcドメインは、それらを構成するアミノ酸改変に従って定義される。Fc領域に関して本出願で議論される全てのアミノ酸置換について、番号付けは、常にKabatにあるようなEUインデックスに従う。従って、例えば、D265Cは、親Fcドメインに対して、EU位置265のアスパラギン酸(D)がシステイン(C)で置換されたFcバリアントである。同様に、例えば、D265C/L234A/L235Aは、親Fcドメインに対して、EU位置265(DからCへ)、234(LからAへ)、及び235(LからAへ)に置換を有するFcバリアントを定義する。バリアントはまた、変異EUアミノ酸位置における、その最終的なアミノ酸組成に従って指定されることもある。例えば、L234A/L235A変異は、「LALA」と呼ぶことがある。更なる例として、E233P.L234V.L235A.delG236(236の欠失)変異は、「EPLVLAdelG」と呼ぶことがある。更に別の例として、I253A.H310A.H435A変異は、「IHH」と呼ぶことがある。置換を示す順序は任意であることに留意されたい。

用語「Fcガンマ・レセプター」又は「FcガンマR」は、本出願で使用される場合、IgG抗体Fc領域に結合する、及びFcガンマR遺伝子によってコードされるタンパク質のファミリーの任意のメンバーを指す。ヒトにおいては、このファミリーは、限定されるものではないが、FcガンマRI (CD64)（例えば、アイソフォーム FcガンマRIa、FcガンマRIb、及びFcガンマRIcなど）；FcガンマRII (CD32)（例えば、アイソフォームFcガンマRIIa［例えば、アロタイプH131及びR131］、FcガンマRIIb［例えば、FcガンマRIIb-1 及び FcガンマRIIb-2］、並びにFcガンマRIIcなど）；並びにFcガンマRIII (CD16)（例えば、アイソフォームFcガンマRIIIa［例えば、アロタイプV158及びF158］並びにFcガンマRIIIb［例えば、アロタイプFcガンマRIIIb-NA1及びFcガンマRIIIb-NA2］、並びに任意の未発見のヒトFcガンマR又はFcガンマRのアイソフォーム若しくはアロタイプ、を含む。FcガンマRは、任意の生命体（例えば、限定されるものではないが、ヒト、マウス、ラット、ウサギ及びサルなど）に由来することがある。マウスFcガンマRは、限定されるものではないが、FcガンマRI (CD64)、FcガンマRII (CD32)、FcガンマRIII (CD16)、及びFcガンマRIII-2 (CD16-2)、並びに任意の未発見のマウスFcガンマR又はFcガンマRのアイソフォーム若しくはアロタイプ、を含む。

用語「エフェクター機能」は、本出願で使用される場合、FcドメインとFcレセプターとの相互作用から生じる、生化学的な事象を指す。エフェクター機能としては、限定されるものではないが、ADCC、ADCP、及びCDCが挙げられる。本出願で使用される「エフェクター細胞」は、1つ以上のFcレセプターを発現する、及び1つ以上のエフェクター機能を媒介する、免疫システムの細胞をいう。エフェクター細胞としては、限定されるものではないが、単球、マクロファージ、好中球、樹状細胞、好酸球、マスト細胞、血小板(platelets)、B細胞、大顆粒リンパ球、ランゲルハンス細胞、ナチュラル・キラー(NK)細胞、及びガンマ・デルタT細胞、が挙げられる、並びに任意の生命体（例えば、限定されるものではないが、ヒト、マウス、ラット、ウサギ及びサル）に由来する。

本出願で使用される場合、用語「サイレント(silent)」、「サイレンス化(silenced)」又は「サイレンシング(silencing)」は、改変していないFc領域を含む同じ抗体のFcガンマ・レセプター(FcγR)への結合と比較して、Fcガンマ・レセプター(FcγR)への結合が減少した、本出願に記載される改変したFc領域を有する抗体を指す（例えば、BLIで測定した場合、例えば、改変していないFc領域を含む同じ抗体のFcγRへの結合と比較して、FcγRへの結合の減少が、少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%、である)。いくつかの実施形態では、Fcサイレンス化(Fc silenced)抗体は、FcγRに、検出可能な結合を示さない。改変したFc領域を有する抗体のFcγRへの結合を、当技術分野で公知の様々な技術（例えば、限定されるものではないが、平衡方法［例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ(ELISA)；KinExA、Rathanaswami et al. Analytical Biochemistry, Vol. 373:52-60, 2008；ラジオイムノアッセイ(RIA)］、又は表面プラズモン共鳴アッセイ若しくは他のメカニズムの動態に基づくアッセイ［例えば、BIACORE^TM解析若しくはOctet^TM解析(forteBIO)］、並びに他の方法［例えば、間接的結合アッセイ、競合的結合アッセイ、蛍光共鳴エネルギー移動(FRET)、ゲル電気泳動及びクロマトグラフィー（例えば、ゲルろ過）など］）を使用して、測定することができる。これらの及び他の方法は、1つ以上の評価する構成成分上にある標識を利用することがある、及び／又は、様々な検出方法（例えば、限定されるものではないが、発色性標識、蛍光性標識、発光性標識、又は同位体標識など）を使用することがある。結合親和性及び動態に関しては、Paul, W. E., ed., Fundamental Immunology, 4th Ed., Lippincott-Raven, Philadelphia (1999)（これは、抗体-免疫原相互作用に焦点を当てている）に、詳細に記載されている。競合的結合アッセイの一例は、標識抗原と目的の抗体とを、非-標識の抗原の量を増やしながら、その存在下で、インキュベーションすること、及び前記標識抗原に結合した抗体を検出すること、を含むラジオイムノアッセイである。そのデータから、スキャッチャード・プロット解析により、特定の抗原に対する目的の抗体の親和性及び結合オフ-レート(off-rate)を決定することがある。第2の抗体との競合を、ラジオイムノアッセイを使用して、測定することもある。この場合、前記抗原を、標識化合物にコンジュゲートした目的の抗体と、非-標識の第2の抗体の量を増やしながら、その存在下で、インキュベーションする。

本出願で使用される場合、用語「改変していないFc領域を含む同じ抗体」は、列挙したアミノ酸置換(例えば、D265C、H435A 、L234A、及び／又はL235A)を欠くが、他の点では、比較されるFcを改変した抗体と、同じアミノ酸配列を有する抗体を指す。

本出願で使用される場合、用語「コンディショニングをする」及び「コンディショニング」は、造血幹細胞を含む移植片を受けることに備えて、患者に対して準備をするプロセスのことを指す。このような手順によって、造血幹細胞の移植片の生着は促進される(例えば、コンディショニング手順及び続いて行った造血幹細胞移植の後に、患者から単離した血液サンプル内の生存可能な造血幹細胞の量が持続的に増大していることから推測される)。本出願に記載される方法に従って、造血幹細胞が発現する抗原（例えば、CD45［例えば、GNNK+ CD45］など）に結合し得るADC、抗体、又はその抗原結合フラグメントを患者に投与することによって、造血幹細胞移植療法に備えて、前記患者をコンディショニングすることがある。本出願に記載されるように、前記抗体を、薬物-抗体コンジュゲートを形成するように、細胞毒素に共有結合的にコンジュゲートさせることがある。上記の抗原の1種以上に結合し得る、ADC、抗体、その抗原-結合フラグメント、又は薬物-抗体コンジュゲートを、造血幹細胞移植療法を必要とする患者に投与することは、例えば、内因性の造血幹細胞を選択的に減少させて、それによって、外因性の造血幹細胞の移植片によって埋められる空きができることにより、造血幹細胞移植片が生着することを促進することがある。

用語「減少させる」は、CD45-発現細胞に対する抗-CD45抗体又はADCの効果に関する文脈において、CD45-発現細胞の数を減少させること、又は除去すること、を意味する。

本出願で互換的に使用される、用語「治療有効量」又は「治療有効用量」は、患者に1回又は複数回の用量を投与したときに、所望の治療を提供する、治療薬剤、（例えば、抗-CD45 ADC）の量又は用量を指す。治療薬剤の「治療有効量」は、その量が個体において所望の応答を引き起こすことができるように、個体の疾患の状態、年齢、性別、及び体重などの要因に応じて、変化することがある。用語「治療有効量」は、対象（例えば、患者）を「治療する」ことに効果がある量を含む。治療量が示されれば、投与すべき本発明の組成物の正確な量を、年齢、体重、腫瘍サイズ、感染又は転移の程度、患者（対象）の症状における個人差を考慮して、医師は決めることができる。

本出願で使用される場合、「半減期」とは、身体中の抗体薬物の血漿中濃度が、対象（例えば、ヒト対象）において、半分又は50%減少するのに要する時間をいう。この50%の血清中濃度の低下は、薬物が循環している量を反映している。

本出願で使用される場合、用語「コンジュゲート」は、1つの分子（例えば、抗体、又はその抗原-結合フラグメントなど）の反応性官能基と、別の分子（例えば、本出願に記載される細胞毒素など）の適切な反応性官能基との、化学的な結合によって形成される化合物を指す。コンジュゲートは、互いに結合した2つの分子間に、リンカーを含むことがある。コンジュゲートの形成に用いることができるリンカーの例としては、ペプチド含有リンカー（例えば、天然に存在する又は天然に存在しないアミノ酸、例えば、D-アミノ酸を含有するリンカー）が挙げられる。リンカーを、本出願に記載される、及び当該技術分野で公知である、種々のストラテジー（strategies）を使用して調製することがある。その中の反応性成分に依存して、リンカーを、例えば、酵素的加水分解、光分解、酸性条件下での加水分解、塩基性条件下での加水分解、酸化、ジスルフィド還元、求核切断、又は有機金属切断によって、切断することがある(例えば、Leriche et al., Bioorg. Med. Chem., 20:571-582, 2012を参照のこと)。

本出願で使用される場合、用語「カップリング反応」は、互いに反応するのに適した2つ以上の置換基が反応して、それぞれの置換基に結合した分子フラグメントを(例えば、共有結合的に)結合させる化学的な部分構造を形成する化学反応を指す。カップリング反応には、細胞毒素（例えば、当該技術分野で公知の又は本出願に記載される細胞毒素）であるフラグメントに結合した反応性置換基が、抗体、又はその抗原結合フラグメント（例えば、当該技術分野で公知の若しくは本出願に記載される、CD45に結合する、抗体、その抗原-結合フラグメント、又は特異的な抗-CD45抗体）であるフラグメントに結合した好適な反応性置換基と反応する反応が含まれる。好適な反応性置換基の例としては、求核／求電子対(例えば、特に、チオール／ハロアルキル対、アミン／カルボニル対、又はチオール／α, β-不飽和カルボニル対等)、ジエン／ジエノフィル対(例えば、とりわけ、アジド／アルキン対)等が挙げられる。カップリング反応としては、限定されるものではないが、チオール・アルキル化、ヒドロキシル・アルキル化、アミン・アルキル化、アミン縮合、アミド化、エステル化、ジスルフィド形成、環化付加(例えば、特に、[4+2]Diels-Alder環化付加、[3+2]Huisgen環化付加)、芳香族求核置換、芳香族求電子置換、及び当該技術分野で知られているか又は本出願に記載される他の反応様式が挙げられる。

本出願で使用される場合、「CRU(競合的再生着ユニット(competitive repopulating unit))」は、in vivo移植後に検出され得る、長期生着する幹細胞に関する測定の単位のことを指す。

本出願で使用される場合、用語「ドナー(donor)」は、レシピエントに細胞又はその後代を投与する前に、その1つ以上の細胞を単離したヒト又は動物を指す。前記1つ以上の細胞は、例えば、造血幹細胞の集団であることがある。

本出願で使用される場合、用語「ダイアボディ」は、2つのポリペプチド鎖を含む二価抗体を指す、ここで、各々のポリペプチド鎖は、同じペプチド鎖上のV_H及びV_Lドメインの分子内会合が不可能であるくらい短いリンカー(例えば、5つのアミノ酸から構成されるリンカー)によって連結されたV_H及びV_Lドメインを含む。この構成によって、それぞれのドメインは、別のポリペプチド鎖上の相補的ドメインと対になって、ホモ二量体構造を形成する。従って、用語「トリアボディ」は、3つのペプチド鎖を含む三価抗体を指し、その各々は、同じペプチド鎖内のV_H及びV_Lドメインの分子内会合を可能にするには非常に短すぎるリンカー(例えば、1から2アミノ酸から構成されるリンカー)によって連結された1つのV_Hドメイン及び1つのV_Lドメインを含む。このようにして構成されたペプチドは、その生来の構造に折りたたまれるために、通常は、隣接するペプチド鎖のV_Hドメイン及びV_Lドメインが空間的に互いに近接するように、三量体化する(例えば、Holliger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-48, 1993を参照)。

本出願で使用される場合、「二重可変ドメイン免疫グロブリン(dual variable domain immunoglobulin)」(「DVD-Ig」)は、四価の、デュアル-ターゲティングの単剤(a tetravalent, dual-targeting single agent)を生成するために、リンカーを介して、2つのモノクローナル抗体のターゲット結合可変ドメインを結合させた抗体を指す(例えば、Gu et al., Meth. Enzymol., 502:25-41, 2012、を参照)。

本出願で使用される場合、用語「内因性」は、ヒト患者のような特定の生命体に天然に見出される分子、細胞、組織、又は臓器(例えば、造血幹細胞、又は巨核球、血小板(thrombocyte)、血小板(platelet)、赤血球、マスト細胞、骨髄芽球（myeoblast）、好塩基球、好中球、好酸球、ミクログリア細胞、顆粒球、単球、破骨細胞、抗原提示細胞、マクロファージ、樹状細胞、ナチュラル・キラー細胞、T-リンパ球、又はB-リンパ球のような造血系列の細胞)のような物質を記載する。

本出願で使用される場合、用語「生着能力(engraftment potential)」は、造血幹細胞及び造血前駆細胞が組織に再定着する能力を指すために使用され、そのような細胞が自然に循環しているか、又は移植によって提供されるかに関わらない。前記用語は、細胞の組織ホーミング及び注目する組織内への細胞のコロニー形成のような、生着を取り巻くか、又は生着に至る全ての事象を包含する。生着の効率又は生着の割合は、当業者に公知の任意の臨床的に許容されるパラメータを用いて評価又は定量することができ、例えば、競合的再生着ユニット(competitive repopulating unit)(CRU)を評価すること；幹細胞がホーミングした、コロニー形成をした、又は生着した組織において、マーカーが取り込まれること若しくは発現すること；又は、疾患の進行、造血幹細胞及び造血前駆細胞の生存、若しくはレシピエントの生存により、対象の進行を評価すること、が含まれることがある。生着は、移植後の末梢血中の白血球細胞数を測定することによっても判定することができる。生着は、骨髄吸引サンプルにおけるドナー細胞による骨髄細胞の回復率を測定することによって評価することもできる。

本出願で使用される場合、用語「外因性(exogenous)」は、ヒトの患者のような特定の生命体に天然には見出されない分子、細胞、組織、又は臓器(例えば、造血幹細胞、又は巨核球、血小板(thrombocyte)、血小板(platelet)、赤血球、マスト細胞、骨髄芽球，好塩基球、好中球、好酸球、ミクログリア細胞、顆粒球、単球、破骨細胞、抗原提示細胞、マクロファージ、樹状細胞、ナチュラル・キラー細胞、T-リンパ球、又はB-リンパ球のような造血系列の細胞)のような物質を記載する。レシピエント生命体（例えば、レシピエント患者）にとって外因性である物質は、前記物質の由来であるドナー生命体（例えば、ドナー対象）の中に天然に存在することがある。例えば、同種異系の細胞移植片は、レシピエントに対して外因性であるが、ドナーに対しては生来である。外因性物質には、外部供給源から生命体に又はそこから抽出した培養物に提供されるものが含まれる。

用語「完全長抗体」及び「インタクトな抗体」は、本出願では、その実質的にインタクトな形態の抗体を指すために互換的に使用され、本出願で定義されるような抗体フラグメントではない。このように、IgG 抗体については、インタクトな抗体は、可変領域、定常領域、及びFc領域をそれぞれ含む2つの重鎖、並びに可変領域、及び定常領域をそれぞれ含む2つの軽鎖、を含む。より具体的には、インタクトなIgGは、軽鎖可変領域(VL)及び軽鎖定常領域(CL)をそれぞれ含む2つの軽鎖を含む、並びに重鎖可変領域(VH)及び3つの重鎖定常領域(CH1, CH2,及びCH3)をそれぞれ含む2つの重鎖を含む。CH2及びCH3は、重鎖のFc領域を表す。

本出願で使用される場合、用語「骨格領域」又は「FW領域」は、抗体又はその抗原結合フラグメントのCDRに隣接するアミノ酸残基を含む。 FW領域の残基は、例えば、ヒト抗体、ヒト化抗体、モノクローナル抗体、抗体フラグメント、Fabフラグメント、単鎖抗体フラグメント、scFvフラグメント、抗体ドメイン、及びバイスペシフィック抗体などに存在することがある。

本出願で使用される場合、用語「免疫細胞」は、限定されるものではないが、血液学的な起源を持ち、かつ、その免疫反応において役割を果たす細胞を含むことが意図される。免疫細胞としては、限定されるものではないが、T細胞及びナチュラル・キラー(NK)細胞が挙げられる。ナチュラル・キラー細胞は、当該技術分野でよく知られている。1つの実施形態では、ナチュラル・キラー細胞としては、NK-92細胞のような細胞株が挙げられる。NK細胞株の更なる例としては、NKG、YT、NK-YS、HANK-1、YTS細胞、及びNKL細胞が挙げられる。免疫細胞は、同種異系又は自己であることがある。1つの実施形態では、免除細胞は、T細胞である。

本出願で使用される場合、用語「造血幹細胞」(「HSC」)とは、自己複製する能力、及び顆粒球(例えば、前骨髄球、好中球，好酸球、好塩基球)、赤血球(例えば、網状赤血球、赤血球)、血小板(thrombocyte)(例えば、巨核芽球、血小板(platelet)産生巨核球、血小板(platelets))、単球(例えば、単球、マクロファージ)、樹状細胞、ミクログリア、破骨細胞、及びリンパ球(例えば、NK細胞、B細胞及びT細胞)を含むがこれらに限定されない多様な系列を含む成熟血液細胞に分化する能力、を有する未成熟血液細胞を指す。そのような細胞は、CD34⁺細胞を含むことがある。CD34⁺細胞は、CD34細胞表面マーカーを発現する未成熟細胞である。ヒトでは、CD34+細胞は、上記に定義された幹細胞の特性を有する細胞の亜集団を含むと考えられているが、一方マウスでは、HSCはCD34-である。更に、HSCはまた、長期再生着HSC(LT-HSC)及び短期再生着HSC(ST-HSC)も指す。LT-HSC及びST-HSCは、機能的な可能性及び細胞表面マーカーの発現に基づいて区別される。例えば、ヒトHSCは、CD34+、CD38-、CD45RA-、CD90+、CD49F+、及びlin-(CD2、CD3、CD4、CD7、CD8、CD10、CD11B、CD19、CD20、CD56、CD235A等を含む成熟系列マーカーについてネガティブ)である。マウスでは、骨髄LT-HSCは、CD34-、SCA-1+、C-kit+、CD135-、Slamfl/CD150+、CD48-、及びlin-(Ter119、CD11b、Gr1、CD3、CD4、CD8、B220、IL7ra等を含む成熟系列マーカーについてネガティブ)であるが、一方、ST-HSCは、CD34+、SCA-1+、C-kit+、CD135-、Slamfl/CD150+、及びlin-(Ter119、CD11b、Gr1、CD3、CD4、CD8、B220、IL7ra等を含む成熟系列マーカーについてネガティブ)である。加えて、ST-HSCは、ホメオスタシス条件下で、LT-HSCよりも静止性が低く、増殖性が高い。しかし、LT-HSCは、自己複製能がより高い(即ち、LT-HSCは、成人期を通して生存し、レシピエントを代々介して連続的に移植することができる)のに対し、ST-HSCは、自己複製能が限られている(即ち、ST-HSCは、限られた期間のみ生存し、連続して移植することはできない)。これらのHSCの何れも、本出願に記載される方法において使用され得る。ST-HSCは、それらが高度に増殖性であり、それ故、分化した後代をより迅速に生じ得るので、特に有用である。

本出願で使用される場合、用語「造血幹細胞の機能的な可能性」は、1)多能性(multi-potency)（これは、限定されるものではないが、顆粒球［例えば、前骨髄球、好中球，好酸球、好塩基球］、赤血球［例えば、網状赤血球、赤血球］、血小板(thrombocyte)［例えば、巨核芽球、血小板(platelet)産生巨核球、血小板(platelets)］、単球［例えば、単球、マクロファージ］、樹状細胞、ミクログリア、破骨細胞、及びリンパ球［例えば、NK細胞、B-細胞及びT-細胞］等を含む、複数の様々な血液系列に分化する能力を指す）、2)自己複製（これは、母細胞と同等の可能性を有する娘細胞を生じさせる造血幹細胞の能力を指す、更に、この能力は消耗することなく個々の生存期間を通して繰り返し起こりうる）、並びに3)造血幹細胞又はその後代が、移植レシピエントに再導入されると、造血幹細胞ニッチにホーミングし、生産的で持続的な造血を再確立する作用能、を含む、造血幹細胞の機能的な特性を指す。

本出願で使用される場合、用語「ヒト抗体」は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域及び定常領域を有する抗体を含むことが意図される。ヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってコードされていないアミノ酸残基(例えば、in vitroでのランダムな若しくは部位特異的な変異誘発によって導入された変異、又はin vivoでの遺伝子再構成若しくは体細胞変異によって導入された変異)を含むことがある。しかし、本出願で使用される場合、用語「ヒト抗体」に、マウス等の別の哺乳動物種の生殖系列に由来するCDR配列をヒトの骨格配列上に移植した抗体が含まれることを、意図していない。ヒト抗体を、ヒト細胞において(例えば、組換え発現によって)、又は機能的に再構成したヒト免疫グロブリン(例えば、重鎖及び／又は軽鎖)遺伝子を発現し得る非-ヒト動物又は原核若しくは真核細胞によって、産生することがある。ヒト抗体が単鎖抗体である場合、それは生来のヒト抗体には見出されないリンカー・ペプチドを含むことがある。例えば、Fvは、2個から約8個のグリシン又は他のアミノ酸残基のようなリンカー・ペプチドを含むことがあり、リンカー・ペプチドは前記重鎖の可変領域及び前記軽鎖の可変領域を連結する。このようなリンカー・ペプチドは、ヒト起源であると見なされる。ヒト抗体を、ヒト免疫グロブリン配列に由来する抗体ライブラリを使用するファージ・ディスプレイ法を含む、当該技術分野で公知の種々の方法によって作製することがある。ヒト抗体はまた、機能的な内因性の免疫グロブリンを発現することはできないが、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現することができるトランスジェニック・マウスを使用して産生することもある(例えば、PCT公開番号WO 1998/24893; WO 1992/01047; WO 1996/34096; WO 1996/33735;米国特許第5,413,923号;第5,625,126号;第5,633,425号;第5,569,825号;第5,661,016号;第5,545,806号;第5,814,318号;第5,885,793号;第5,916,771号;及び第5,939,598号を参照のこと)。

「ヒト化」抗体とは、非-ヒト免疫グロブリンに由来する配列を最小限に含む抗体をいう。従って、非-ヒト（例えば、マウス）抗体の「ヒト化」体は、非-ヒト抗体に由来する配列を最小限に含む抗体である。FW領域の全て又は実質的に全ては、ヒト免疫グロブリン配列のFW領域であることもある。ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域(Fc)の少なくとも一部、典型的にはヒト免疫グロブリン・コンセンサス配列の少なくとも一部、を含むことがある。抗体をヒト化する方法は、当該技術分野で公知であり、及び、例えば、Riechmannら、Nature 332:323-7,1988；米国特許第5,530,101号;第5,585,089号;第5,693,761号;第5,693,762号;及び第6,180,370号に記載されている。

本出願で使用される場合、用語「キメラ」抗体とは、非-ヒト免疫グロブリン（例えば、ラット又はマウス抗体）に由来する可変配列及びヒト免疫グロブリン定常領域（典型的にはヒト免疫グロブリン鋳型から選ぶ）、を有する抗体をいう。キメラ抗体を作成する方法は、当該技術分野で公知である。Morrison, 1985, Science 229(4719):1202-7; Oi et al., 1986, BioTechniques 4:214-221; Gillies et al., 1985, J. Immunol. Methods 125:191-202; U.S. Pat. Nos. 5,807,715; 4,816,567; 及び 4,816,397を参照。

用語「脱-免疫化された（“de-immunized"）」又は「脱-免疫化（"de-immunization"）」とは、本出願で使用される場合、野生型構築物をヒトにおいて非-免疫原性にすることによって、又はより減弱した免疫原性にすることによって、元の前記野生型構築物(又は親抗体)を改変することに関する。脱-免疫化抗体は、非-ヒト起源の部分(例えば、骨格領域及び／又はCDR)を含む。本出願で使用される場合、用語「脱-免疫化された抗体」は、対象の免疫システムを活性化しないように、変異によって脱-免疫化した抗体を指す(例えば、Nanus et al., J. Urology 170:S84-S89、2003；WO98/52976；WO00/34317)。

本出願で使用される場合、「薬物対抗体比(drug-to-antibody ratio)」又は「DAR」は、抗体にコンジュゲートした細胞毒素(例えば、アマトキシン)の数を指す。一般的に、ADCのDARは1から8の範囲であることがあるが、抗体の結合部位の数によって、より高い搭載も可能である。従って、ある特定の実施形態では、本出願で記載される抗-CD45 ADCは、1、2、3、4、5、6、7、又は8のDARを有する。

本出願で使用される場合、造血幹細胞移植を「必要とする」患者は、1種以上の血液細胞の型に欠陥又は欠損を示す患者、並びに幹細胞障害、自己免疫疾患、がん、又は本出願に記載される他の病態を有する患者を含む。造血幹細胞は、一般に、1)多能性(multi-potency)、従って、限定されるものではないが、顆粒球（例えば、前骨髄球、好中球，好酸球、好塩基球)、赤血球(例えば、網状赤血球、赤血球)、血小板(thrombocyte)(例えば、巨核芽球、血小板(platelet)産生巨核球、血小板(platelets))、単球(例えば、単球、マクロファージ)、樹状細胞、ミクログリア、破骨細胞、及びリンパ球(例えば、NK細胞、B-細胞及びT-細胞)等を含む、複数の様々な血液系列に分化することができる、2)自己複製、従って、母細胞と同等の可能性を有する娘細胞を生じさせることができる、並びに3)移植レシピエントに再導入されると、造血幹細胞ニッチにホーミングし、生産的で持続的な造血を再確立する作用能、を示す。従って、造血系列の1種以上の細胞型において欠陥がある又は欠損した患者に、in vivoで、欠陥がある又は欠損した細胞の集団を再構成するために、造血幹細胞を投与することがある。例えば、前記患者は、がんに罹患していることがあり、前記欠損は、がん性細胞集団を選択的に又は非特異的に減少させる化学療法剤又は他の薬剤を投与することによって引き起こされることがある。更に、又はその代わりとして、前記患者は鎌状赤血球貧血、サラセミア、ファンコニ貧血、再生不良性貧血、及びウィスコット-アルドリッチ症候群等の異常ヘモグロビン症(例えば、非-悪性異常ヘモグロビン症)に罹患していることがある。前記対象は、アデノシン・デアミナーゼ重度複合免疫不全症(ADA SCID)、HIV/AIDS、異染性白質ジストロフィー、ダイアモンド-ブラックファン貧血、及びシュワックマン-ダイアモンド症候群に罹患している対象であることがある。前記対象は遺伝性の血液障害(例えば、鎌状赤血球貧血)又は自己免疫疾患を有するか、又はその影響を受けていることがある。更に、又はその代わりとして、前記対象は、神経芽細胞腫又は血液がん等の悪性腫瘍を有するか、又はその影響を受けていることがある。例えば、前記対象は、白血病、リンパ腫又は骨髄腫を有していることがある。いくつかの実施形態では、前記対象は、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫又は非-ホジキン・リンパ腫(non-Hodgkin’s lymphoma)を有する。いくつかの実施形態では、前記対象は骨髄異形成症候群を有する。いくつかの実施形態では、前記対象は、強皮症、多発性硬化症、潰瘍性大腸炎、クローン病、I型糖尿病等の自己免疫疾患、又は本出願に記載される別の自己免疫性の病態を有する。いくつかの実施形態では、前記対象は、キメラ抗原レセプターT-細胞(CART)療法を必要とする。いくつかの実施形態では、前記対象は、代謝性貯蔵障害を有するか、又はその影響を受けている。前記対象は、グリコーゲン蓄積症、ムコ多糖症、ゴーシェ病、ハーラー病、スフィンゴ脂質症、異染性白質ジストロフィー、からなる群より選択される代謝障害、又は本出願に開示される治療及び療法から恩恵を得ることができる任意の他の疾患又は障害（限定されるものではないが、重度複合免疫不全症、ウィスコット-アルドリッチ症候群、高免疫グロブリンM症候群、チェディアック-東病、遺伝性リンパ組織球症、大理石骨病、骨形成不全症、貯蔵疾患、サラセミア・メジャー、鎌状赤血球症、全身性硬化症、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、若年性関節リウマチ）、並びに"Bone Marrow Transplantation for Non-Malignant disease"、ASH Education Book、1:319-338(2000)（この開示は、造血幹細胞移植療法を処方することによって治療される可能性のある病態に関するものであり、その全体が本出願に参照により取り込まれる）に記載されている疾患又は障害、に罹患している、又はその影響を受けていることがある。更に、又はその代わりとして、造血幹細胞移植を「必要とする」患者は、前述の病態のうちの1種に罹患している又は罹患していない患者（それにもかかわらず、巨核球、血小板(thrombocyte)、血小板(platelet)、赤血球、マスト細胞、骨髄芽球、好塩基球、好中球、好酸球、ミクログリア、顆粒球、単球、破骨細胞、抗原提示細胞、マクロファージ、樹状細胞、ナチュラル・キラー細胞、T-リンパ球、及びB-リンパ球等の造血系列内の1種以上の内因性の細胞型のレベルの低下［例えば、その他の点では健康である対象のレベルと比較して、低下］を示す）であることがある。当業者の中のある者は、例えば、当該技術分野で公知の手順の中でも特に、フロー・サイトメトリー及び蛍光活性化細胞選別(FACS)方法によって、前記の細胞型又は他の血液細胞の型のうちの1種以上のもののレベルが、その他の点では健康である対象に対して、低下しているかどうかを容易に決定することができる。

本出願で使用される場合、用語「モノクローナル抗体」（mAb）は、任意の真核生物、原核生物、又はファージ・クローンを含む単一のクローンから得られる抗体を指す、並びにそれを産生する方法のことではない。本開示で有用なモノクローナル抗体を、ハイブリドーマ、組換え、及びファージ・ディスプレイ技術、又はそれらの組合せを使用することを含む、当技術分野で公知の多種多様な技術を使用して調製することができる。別段に示さなければ、用語「モノクローナル抗体」は、ターゲット・タンパク質に特異的に結合することができる、インタクトな分子及び抗体フラグメント（例えば、Fab及びF(ab')₂フラグメント等を含む）の両方を含むことを意味する。本出願で使用される場合、Fab及びF(ab')₂フラグメントは、インタクトな抗体のFcフラグメントを欠く抗体フラグメントを指す。1つの実施形態では、抗体フラグメントは、Fc領域を含む。

本出願で使用される場合、「中性抗体(neutral antibody)」は、レセプターのリガンドへの結合又は酵素の基質との相互作用等を含む、個別のターゲット又は特定のターゲット(例えば、CD45)の活性を有意に中和、遮断、阻害、無効化、減少又は妨害することができない抗体、又はその抗原結合フラグメントをいう。

本出願で使用される場合、用語「レシピエント」は、造血幹細胞の集団を含む移植片等の移植片を受ける患者を指す。レシピエントに投与される移植細胞は、例えば、自家、同系、又は同種異系細胞であることがある。

本出願で使用される場合、用語「サンプル」は、対象から採取された検体(例えば、血液、血液成分(例えば、血清又は血漿)、尿、唾液、羊水、脳脊髄液、組織(例えば、胎盤又は真皮)、膵液、絨毛膜絨毛サンプル、及び細胞)を指す。

本出願で使用される場合、用語「scFv」は、抗体由来の重鎖の可変ドメインと軽鎖の可変ドメインとが結合して1本の鎖を形成している、単鎖Fv抗体を指す。scFvフラグメントは、リンカーによって分離された、抗体軽鎖の可変領域(V_L) (例えば、CDR-L1、CDR-L2、及び／又はCDR-L3)及び抗体重鎖の可変領域(V_H) (例えば、CDR-H1、CDR-H2、及び／又はCDR-H3)を含む単一のポリペプチド鎖を含む。scFvフラグメントのV_L領域及びV_H領域を連結するリンカーは、タンパク質を構成するアミノ酸から構成されるペプチド・リンカーであることがある。代替のリンカーを、タンパク質分解に対するscFvフラグメントの耐性を増大させるために(例えば、D-アミノ酸を含有するリンカー)、scFvフラグメントの溶解性を増大させるために(例えば、ポリエチレン・グリコール含有リンカー又は繰り返しのグリシン及びセリン残基を含有するポリペプチド等の親水性リンカー)、前記分子の生物物理学的安定性を改善するために(例えば、分子内又は分子間ジスルフィド結合を形成するシステイン残基を含有するリンカー)、又は前記scFvフラグメントの免疫原性を弱めるために(例えば、グリコシル化部位を含有するリンカー)、使用することがある。本出願に記載されるscFv分子の可変領域を、それらが由来する抗体分子からアミノ酸配列が変化するように、改変することができることもまた、当業者は理解する。例えば、scFvの作用能（対応する抗体が認識する抗原に結合する作用能）を保存又は増強するために、アミノ酸残基での保存的置換又は変化をもたらすヌクレオチド又はアミノ酸置換を(例えば、CDR及び／又は骨格残基において)行うことがある。

「特異的な結合」又は「特異的に結合する」という用語は、本出願で使用される場合、抗体が、タンパク質を広く認識し及び結合するというよりも、寧ろ特異的なタンパク質構造(エピトープ)を認識し及び結合する作用能のことをいう。抗体がエピトープ「A」に特異的である場合、標識した「A」と前記抗体とを含有する反応物中に、エピトープA(又は遊離の非標識A)を含有する分子が存在すると、前記抗体に結合する標識Aの量が減少する。例えば、抗体は、もし前記抗体が、標識されている場合、対応する非標識抗体によって、そのターゲットから競合的に解離することがあるならば、ターゲットに「特異的に結合する」。1つの実施形態では、抗体はターゲット（例えば、CD45）に特異的に結合する（もし前記抗体が前記ターゲットに対して、少なくとも約10^-4 M、約10^-5 M、約10^-6M、約10^-7 M、約10^-8 M、約10^-9M、約10^-10 M、約10^-11 M、約10^-12M又は未満（未満は10^-12未満である数字を意味する、例えば、10^-13）のK_Dを有する場合である）。1つの実施形態では、本出願で使用される場合、用語「CD45への特異的結合」又は「CD45に特異的に結合する」は、CD45に結合し、表面プラズモン共鳴によって測定した場合、1.0×10^-7 M以下の解離定数(K_D)を有する抗体を指す。1つの実施形態では、K_Dを、標準的なバイオレイヤー干渉法(Bio-Layer Interferometry) (BLI)に従って測定する。しかし、前記抗体は、配列が関連している2種以上の抗原に特異的に結合することができることを理解されたい。例えば、1つの実施形態では、抗体は、CD45のヒト及び非-ヒト(例えば、マウス又は非-ヒトの霊長類)オルソログの両方に特異的に結合することがある。従って、本出願で使用される場合、「ヒトCD45に特異的に結合する」とは、ヒトCD45(及び、おそらく、1種以上の非-ヒト種に由来するCD45)と結合するが、非-CD45タンパク質とは実質的に結合しない抗体、をいう。好ましくは、前記抗体は、1x10^-7M以下のK_D、5x10^-8 M以下のK_D、3x10^-8M以下のK_D、1x10^-8 M以下のK_D、又は5x10^-9M以下のK_Dで、ヒトCD45に結合する。いくつかの実施形態では、前記抗-CD45抗体は、ヒトCD45の様々なアイソフォーム（例えば、CD45RA (Uniprot Accession No: P08575-8; 配列番号(SEQ ID NO): 2)、CD45RO (NCBI Accession No: NP_563578.2; 配列番号(SEQ ID NO): 1)、CD45RB (NCBI Accession No: XP_006711537.1; 配列番号(SEQ ID NO): 3)、CD45RC (Uniprot Accession No. P08575-10; 配列番号(SEQ ID NO): 4)、CD45RAB (NCBI Accession No: XP_006711535.1; 配列番号(SEQ ID NO): 5)、CD45RBC (NCBI Accession No: XP_006711536.1; 配列番号(SEQ ID NO): 6)及びCD45RABC (NCBI Accession No. NP_002829.3; 配列番号(SEQ ID NO): 7)）の内の各々1種の細胞外ドメインに、特異的に結合することができる。従って、ある特定の実施形態では、本出願の抗体は、汎-特異的な抗-CD45抗体（即ち、全てのヒトCD45アイソフォームの細胞外領域に特異的に結合する抗体）である。

本出願で使用される場合、語句「幹細胞障害」は、対象のターゲット組織をコンディショニングすることによって、及び／又はターゲット組織中の内因性の幹細胞集団を除去することによって(例えば、対象の骨髄組織から内因性の造血幹細胞集団又は造血前駆細胞集団を除去することによって)、及び／又は対象のターゲット組織中に幹細胞を生着させる又は移植することによって、治療又は治癒され得る任意の疾患、障害、又は症状を広く指す。例えば、タイプI糖尿病は、造血幹細胞移植によって治癒されることが示されており、本出願に記載される組成物及び方法に従ったコンディショニングが有益であることが示されている。本出願に記載される組成物及び方法を使用して治療され得る更なる障害には、限定されるものではないが、鎌状赤血球貧血、サラセミア、ファンコニ貧血、再生不良性貧血、ウィスコット‐アルドリッチ症候群、ADA SCID、HIV/AIDS、異染性白質ジストロフィー、ダイアモンド‐ブラックファン貧血、及びシュワックマン‐ダイアモンド症候群が挙げられる。本出願に記載される患者コンディショニング及び／又は造血幹細胞の移植の方法を用いて治療することができる更なる疾患には、遺伝性血液障害(例えば、鎌状赤血球貧血)及び強皮症、多発性硬化症、潰瘍性大腸炎、及びクローン病等の自己免疫疾患が含まれる。本出願に記載されるコンディショニング及び／又は移植方法を使用して治療され得る更なる疾患には、悪性腫瘍(例えば、神経芽細胞腫)、又は血液がん(例えば、白血病、リンパ腫、及び骨髄腫)が含まれる。例えば、前記がんは、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫、又は非-ホジキン・リンパ腫(non-Hodgkin’s lymphoma)であることがある。本出願に記載されるコンディショニング及び／又は移植方法を用いて治療可能な更なる疾患には、骨髄異形成症候群が含まれる。いくつかの実施形態では、前記対象は、代謝性貯蔵障害を有するか、又はそれによって影響を受けている。例えば、前記対象は、グリコーゲン蓄積症、ムコ多糖症、ゴーシェ病、ハーラー病、スフィンゴ脂質症、異染性白質ジストロフィー、から選択される代謝性障害、又は本出願に開示される治療及び療法から恩恵を受けることができる任意の他の疾患又は障害（限定されるものではないが、重度複合免疫不全症、ウィスコット‐アルドリッチ症候群、高免疫グロブリンM(IgM)症候群、チェディアック‐東病、遺伝性リンパ組織球症、大理石骨病、骨形成不全症、貯蔵疾患、サラセミア・メジャー、鎌状赤血球症、全身性硬化症、全身性エリテマトーデス(systemic lupus erythematosus)、多発性硬化症、若年性関節リウマチ）、並びに"Bone Marrow Transplantation for Non-Malignant disease"、ASH Education Book、1:319-338(2000)（本開示は、造血幹細胞移植療物を投与する療法によって治療される可能性のある病態に関するものであり、その全体が本出願に参照により取り込まれる）に記載されている疾患又は障害、に罹患している、又は影響を受けていることがある。

本出願で使用される場合、用語「対象」及び「患者」は、本出願に記載される特定の疾患又は症状に対して治療を受ける、ヒトのような生命体をいう。例えば、ヒト患者のような患者は、外因性の造血幹細胞の生着を促進させるために、造血幹細胞移植療法の前に治療を受けることがある。

本出願で使用される場合、語句「血液から実質的にクリアランスされる」は、治療薬剤（例えば、抗-CD45抗体、又はその抗原-結合フラグメントなど）を患者に投与した後の時点であって、前記患者から単離された血液サンプル中の前記治療薬剤の濃度が、前記治療薬剤を従来の方法によって検出できないようなものである場合(例えば、前記治療薬剤が、前記治療薬剤を検出するために使用されるデバイス又はアッセイのノイズ閾値を超えて検出できないような場合)のことをいう。当該技術分野で知られている、様々な技法（当該技術分野で知られている又は本出願に記載されるELISAベースの検出アッセイなど）を使用して、抗体、又は抗体フラグメント、を検出することがある。抗体、又は抗体フラグメントを検出するために使用され得る更なるアッセイとしては、とりわけ当該技術分野で公知の、免疫沈降法及びイムノブロット・アッセイが挙げられる。

本出願で使用される場合、用語「トランスフェクション」は、エレクトロポレーション、リポフェクション、リン酸カルシウム沈殿、DEAE-デキストラン・トランスフェクション等のような、原核宿主細胞又は真核宿主細胞に外因性のDNAを導入するために一般的に使用される、任意の多種多様な技術のことをいう。

本出願で使用される場合、用語「治療する」又は「治療」は、疾患症状の重篤度及び／又は頻度を減少させること、疾患症状及び／又は前記症状の根本的な原因を取り除くこと、疾患症状及び／又はその根本的な原因の頻度又は可能性を減少させること、並びに疾患によって直接的又は間接的に引き起こされる損傷を改善又は修復すること、をいう。有益な又は所望の臨床的な結果としては、限定されるものではないが、本出願に記載されるような抗体コンディショニング療法及び続いて行う造血幹細胞の移植療法後に、患者において外因性の造血細胞の生着が促進されることが挙げられる。更なる有益な結果としては、造血幹細胞移植を必要としている患者において、コンディショニング療法及び続いて外因性の造血幹細胞の移植片を前記患者に投与した後、造血幹細胞の細胞数が増加すること又は相対濃度が増加すること、が挙げられる。本出願に記載される療法の有益な結果としてはまた、コンディショニング療法及び続いて行う造血幹細胞移植療法の後、造血系列の1種以上の細胞（巨核球、血小板(thrombocyte)、血小板(platelet)、赤血球、マスト細胞、骨髄芽球、好塩基球、好中球、好酸球、ミクログリア細胞、顆粒球、単球、破骨細胞、抗原提示細胞、マクロファージ、樹状細胞、ナチュラル・キラー細胞、T-リンパ球、又はB-リンパ球等）の細胞数が増加すること又は相対濃度が増加すること、が挙げられることもある。更なる有益な結果としては、がん細胞 (例えば、CD45+白血病細胞)又は自己免疫細胞(例えば、自己抗原と交差反応するT-細胞レセプターを発現するCD45+ T-細胞等のCD45+自己免疫リンパ球) の集団等の、疾患を引き起こす細胞集団、の量が減少すること、が挙げられることがある。本開示の方法が障害を予防することを対象とする限り、用語「予防する」は、疾患の状態が完全に阻止されることを必要としないことが理解される。むしろ、本出願で使用される場合、予防するという用語は、疾患に感受性がある集団を同定し、疾患の発症前に本開示の化合物を投与すること等を、当業者ができることをいう。前記用語は、疾患の状態が完全に回避されることを意味するものではない。

本出願で使用される場合、用語「バリアント」及び「誘導体」は、互換的に使用され、そして本出願に記載される化合物、ペプチド、タンパク質、又は他の基質の天然に存在する、合成の、及び半合成のアナログ(analogues)のことをいう。本出願に記載される化合物、ペプチド、タンパク質、又は他の物質のバリアント又は誘導体は、元の物質の生物学的活性を保持又は改善することがある。

本出願で使用される場合、用語「ベクター」は、プラスミド、DNAベクター、プラスミド、RNAベクター、ウイルス、又は他の好適なレプリコン等の、核酸ベクターを含む。本出願に記載される発現ベクターは、ポリヌクレオチド配列、並びに、例えば、タンパク質を発現させる及び／又は哺乳動物細胞のゲノムの中にこれらのポリヌクレオチド配列を組み込ませるために使用する、更なる配列エレメントを含むことがある。本開示の抗体及び抗体フラグメントを発現させるのに用いることができる特定のベクターとしては、遺伝子転写を指示するプロモータ領域及びエンハンサー等の、調節配列を含むプラスミド、が挙げられる。抗体及び抗体フラグメントを発現させるための他の有用なベクターは、これらの遺伝子の翻訳割合を増強するか、又は遺伝子転写から生じるmRNAの安定性又は核外への移行を改善するポリヌクレオチド配列を含む。これらの配列要素としては、例えば、発現ベクター上にある遺伝子を効率的に転写するようにする、5'及び3'非翻訳領域及びポリアデニル化シグナル部位、が挙げられることがある。本出願に記載される発現ベクターはまた、このようなベクターを含む細胞を選択するためのマーカーをコードするポリヌクレオチドを含むこともある。好適なマーカーの例としては、アンピシリン、クロラムフェニコール、カナマイシン、及びノウルセオスリシン(nourseothricin)等の抗生物質に対する耐性をコードする遺伝子、が挙げられる。

本出願で使用される用語「アシル」は、-C(=O)Rを指す、ここで、本出願で定義するように、Rは水素(「アルデヒド」)、C₁-C₁₂アルキル、C₂-C₁₂アルケニル、C₂-C₁₂アルキニル、C₃-C₇カルボシクリル、C₆-C₂₀アリール、5-10員ヘテロアリール、又は5-10員ヘテロシクリルである。非-限定的な例としては、ホルミル、アセチル、プロパノイル、ベンゾイル、及びアクリロイルが挙げられる。

本出願で使用される用語「C₁-C₁₂アルキル」は、1から12個の炭素原子を有する直鎖又は分岐の飽和炭化水素を指す。典型的なC₁-C₁₂アルキル基としては、限定されるものではないが、-メチル、-エチル、-n-プロピル、-n-ブチル、-n-ペンチル、及び-n-ヘキシルが挙げられる；一方、分岐C₁-C₁₂アルキルとしては、限定されるものではないが、-イソプロピル、-sec-ブチル、-イソブチル、-tert-ブチル、-イソペンチル、及び2-メチルブチルが挙げられる。C₁-C₁₂のアルキル基は、置換されていない、又は置換されていることがある。

本出願で使用される用語「アルケニル」は、不飽和の少なくとも1つの部位、即ち、炭素-炭素、sp²二重結合、を有する、通常の、第2級の、又は第3級の炭素原子を含むC₂-C₁₂炭化水素を指す。例としては、限定されるものではないが、以下が挙げられる：エチレン又はビニル、-アリル、-1-ブテニル、-2-ブテニル、-イソブチレニル、-1-ペンテニル、-2-ペンテニル、-3-メチル-1-ブテニル、-2-メチル-2-ブテニル、-2,3-ジメチル-2-ブテニルなどが挙げられる。アルケニル基は、置換されていない、又は置換されていることがある。

本出願で使用される「アルキニル」は、不飽和の少なくとも1つの部位、即ち、炭素-炭素、sp三重結合を有する、通常の、第2級の、又は第3級の炭素原子を含むC₂-C₁₂炭化水素を指す。例としては、限定されるものではないが、アセチレン及びプロパルギルが挙げられる。アルキニル基は、置換されていない、又は置換されていることがある。

本出願で使用される「アリール」は、C₆-C₂₀炭素環芳香族基を指す。アリール基の例としては、限定されるものではないが、フェニル、ナフチル及びアントラセニルが挙げられる。アリール基は、置換されていない、又は置換されていることがある。

本出願で使用される「アリールアルキル」は、炭素原子（典型的には末端又はsp³炭素原子）に結合した水素原子の1つがアリール・ラジカルで置換されている、非環状アルキル・ラジカルを指す。典型的なアリールアルキル基としては、限定されるものではないが、ベンジル、2-フェニルエタン-1-イル、2-フェニルエテン-1-イル、ナフチルメチル、2-ナフチルエタン-1-イル、2-ナフチルエテン-1-イル、ナフトベンジル、2-ナフトフェニルエタン-1-イルなどが挙げられる。前記アリールアルキル基は6から20個の炭素原子を含み、例えば、アリールアルキル基のアルキル部分構造（例えば、アルカニル、アルケニル又はアルキニル基等が挙げられる）は1から6個の炭素原子であり、アリール部分構造は5から14個の炭素原子である。アルカリル基は、置換されていない、又は置換されていることがある。

本出願で使用される「シクロアルキル」は、飽和炭素環ラジカルを指し、これは単環式又は二環式であることがある。シクロアルキル基としては、単環として3から7個の炭素原子を有する環、又は二環として7から12個の炭素原子を有する環が挙げられる。単環式シクロアルキル基の例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、及びシクロオクチルが挙げられる。シクロアルキル基は、置換されていない、又は置換されていることがある。

本出願で使用される「シクロアルケニル」は不飽和炭素環ラジカルを指し、これは単環式又は二環式であることがある。シクロアルケニル基としては、単環として3から6個の炭素原子を有する環、又は二環として7から12個の炭素原子を有する環が挙げられる。単環式シクロアルケニル基の例としては、1-シクロペント-1-エニル、1-シクロペント-2-エニル、1-シクロペント-3-エニル、1-シクロヘキス-1-エニル、1-シクロヘキス-2-エニル、及び1-シクロヘキス-3-エニルが挙げられる。シクロアルケニル基は、置換されていない、又は置換されていることがある。

本出願で使用される「ヘテロアラルキル」は、炭素原子（典型的には末端又はsp³炭素原子）に結合した水素原子の1つがヘテロアリール・ラジカルで置換されている、非環状アルキル・ラジカルを指す。典型的なヘテロアリールアルキル基としては、限定されるものではないが、2-ベンズイミダゾリルメチル、2-フリルエチル等が挙げられる。前記ヘテロアリールアルキル基は6から20個の炭素原子を含み、例えば、ヘテロアリールアルキル基のアルキル部分構造(アルカニル、アルケニル又はアルキニル基等が挙げられる)は1から6個の炭素原子である、並びにヘテロアリール部分構造は5から14個の炭素原子である並びにN、O、P、及びSより選択される1から3個のヘテロ原子である。前記ヘテロアリールアルキル基のヘテロアリール部分構造は、3から7個の環員(2から6個の炭素原子)を有する単環であることがある、又は7から10個の環員(4から9個の炭素原子並びにN、O、P、及びSより選択される1から3個のヘテロ原子)を有する二環であることがある（例えば：二環[4,5]、[5,5]、[5,6]、又は[6,6]システム）。

本出願で使用される「ヘテロアリール」及び「ヘテロシクロアルキル」は、それぞれ芳香族又は非-芳香族環システムを指し、ここで1つ以上の環原子は、ヘテロ原子、例えば窒素、酸素、及び硫黄である。ヘテロアリール又はヘテロシクロアルキル・ラジカルは、2から20個の炭素原子及びN、O、P、及びSより選択される1から3個のヘテロ原子を含む。ヘテロアリール又はヘテロシクロアルキルは、3から7個の環員(2から6個の炭素原子並びにN、O、P、及びSより選択される1から3個のヘテロ原子)を有する単環であることがある、又は7から10個の環員(4から9個の炭素原子並びにN、O、P、及びSより選択される1から3個のヘテロ原子)を有する二環であることがある（例えば：二環[4,5]、[5,5]、[5,6]、又は[6,6]システム）。ヘテロアリール及びヘテロシクロアルキルは、置換されていない、又は置換されていることがある。

ヘテロアリール及びヘテロシクロアルキル基は、Paquette, Leo A.; "Principles of Modern Heterocyclic Chemistry" (W. A. Benjamin, New York, 1968), 特に1, 3, 4, 6, 7, 及び 9章; "The Chemistry of Heterocyclic Compounds, A series of Monographs" (John Wiley & Sons, New York, 1950 to present), 特に13, 14, 16, 19, 及び 28巻; 並びに J. Am. Chem. Soc. (1960) 82:5566、に記載されている。

ヘテロアリール基の例としては、例えば、限定されるものではないが、ピリジル、チアゾリル、テトラヒドロチオフェニル、ピリミジニル、フラニル、チエニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、テトラゾリル、ベンゾフラニル、チアナフタレニル、インドリル、インドレニル、キノリニル、イソキノリニル、ベンズイミダゾリル、イソキサゾリル、ピラジニル、ピリダジニル、インドリジニル、イソインドリル、3H-インドリル、1H-インダゾリル、プリニル、4H-キノリジニル、フタラジニル、ナフチリジニル、キノキサリニル、キナゾリニル、シンノリニル、プテリジニル、4aH-カルバゾリル、カルバゾリル、フェナントリジニル、アクリジニル、ピリミジニル、フェナントロリニル、フェナジニル、フェノチアジニル、フラザニル、フェノキサジニル、イソクロマニル、クロマニル、イミダゾリジニル、イミダゾリニル、ピラゾリジニル、ピラゾリニル、ベンゾトリアゾリル、ベンゾイソオキサゾリル、及びイサチノイルが挙げられる。

ヘテロシクロアルキルの例としては、例えば、限定されるものではないが、ジヒドロピリジル、テトラヒドロピリジル(ピペリジル)、テトラヒドロチオフェニル、ピペリジニル、4-ピペリドニル、ピロリジニル、2-ピロリドニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、ビス-テトラヒドロピラニル、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、デカヒドロキノリニル、オクタヒドロイソキノリニル、ピペラジニル、キヌクリジニル、及びモルホリニルが挙げられる。

限定ではなく例として、炭素結合ヘテロアリール類及びヘテロシクロアルキル類は、ピリジンの2、3、4、5、若しくは6位、ピリダジンの3、4、5、若しくは6位、ピリミジンの2、4、5、若しくは6位、ピラジンの2、3、5、若しくは6位、フラン、テトラヒドロフラン、チオフラン、チオフェン、ピロール若しくはテトラヒドロピロールの2、3、4、若しくは5位、オキサゾール、イミダゾール若しくはチアゾールの2、4、若しくは5位、イソオキサゾール、ピラゾール、若しくはイソチアゾールの3、4、若しくは5位、アジリジンの2、若しくは3位、アゼチジンの2、3若しくは4位、キノリンの2、3、4、5、6、7、若しくは8位、又はイソキノリンの1、3、4、5、6、7、若しくは8位、で結合する。更により典型的には、炭素結合ヘテロ環類としては、2-ピリジル、3-ピリジル、4-ピリジル、5-ピリジル、6-ピリジル、3-ピリダジニル、4-ピリダジニル、5-ピリダジニル、6-ピリダジニル、2-ピリミジニル、4-ピリミジニル、5-ピリミジニル、6-ピリミジニル、2-ピラジニル、3-ピラジニル、5-ピラジニル、6-ピラジニル、2-チアゾリル、4-チアゾリル、又は5-チアゾリルが挙げられる。

限定ではなく例として、窒素結合ヘテロアリール類及びヘテロシクロアルキル類は、アジリジン、アゼチジン、ピロール、ピロリジン、2-ピロリン、3-ピロリン、イミダゾール、イミダゾリジン、2-イミダゾリン、3-イミダゾリン、ピラゾール、ピラゾリン、2-ピラゾリン、3-ピラゾリン、ピペリジン、ピペラジン、インドール、インドリン、1H-インダゾールの1位で、イソインドール又はイソインドリンの2位、モルホリンの4位、及びカルバゾール又はベータ・カルボリンの9位、で結合する。更により典型的には、窒素結合ヘテロ環類としては、1-アジリジル、1-アゼテジル(1-azetedyl)、1-ピロリル、1-イミダゾリル、1-ピラゾリル、及び1-ピペリジニルが挙げられる。

本出願で使用される、並びに上記のアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロシクリルなどの何れかに適用される、「置換された」とは、1個以上の水素原子がそれぞれ独立して置換基で置換されていることを意味する。個々の置換基の定義によって別段に制約されない限り、前述の化学的部分構造は、例えば、"アルキル"、"アルキレン"、"ヘテロアルキル"、"ヘテロアルキレン"、"アルケニル"、"アルケニレン"、"ヘテロアルケニル"、"ヘテロアルケニレン"、"アルキニル"、"アルキニレン"、"ヘテロアルキニル"、"ヘテロアルキニレン"、"シクロアルキル"、"シクロアルキレン"、"ヘテロシクロアルキル"、ヘテロシクロアルキレン"、"アリール"、"アリーレン"、"ヘテロアリール"、及び "ヘテロアリーレン" 基は、任意選択的に置換されている。典型的な置換基としては、限定されるものではないが、-X, -R, -OH, -OR, -SH, -SR, NH₂, -NHR, -N(R)₂, -N⁺(R)₃, -CX₃, -CN, -OCN, -SCN, -NCO, -NCS, -NO, -NO₂, -N₃, -NC(=O)H, -NC(=O)R, -C(=O)H, -C(=O)R, -C(=O)NH₂, -C(=O)N(R)₂, -SO₃-, -SO₃H, -S(=O)₂R, -OS(=O)₂OR, -S(=O)₂NH_2,-S(=O)₂N(R)₂, -S(=O)R, -OP(=O)(OH)_2,-OP(=O)(OR)₂, -P(=O)(OR)₂, -PO₃, -PO₃H₂, -C(=O)X, -C(=S)R, -CO₂H, -CO₂R, -CO₂-, -C(=S)OR, -C(=O)SR, -C(=S)SR, -C(=O)NH_2,-C(=O)N(R)₂, -C(=S)NH_2,-C(=S)N(R)₂, -C(=NH)NH_2,及び -C(=NR)N(R)₂、が挙げられる；ここで、各Xは、F、Cl、Br、及びIから、それぞれの場合毎について独立に選択される；及び、各Rは、C₁-C₁₂アルキル、C₆-C₂₀アリール、C₃-C₁₄ヘテロシクロアルキル又はヘテロアリール、保護基及びプロドラック部分構造から、それぞれの場合毎について独立に選択される。基が「任意選択的に置換された」と記載されている場合はどんな場合でも、その基は、それぞれの場合毎について独立に、1個以上の上記の置換基で置換されることがある。前記置換は、隣接する置換基が閉環（例えば、隣接する官能性置換基の閉環など）をして、例えば、ラクタム、ラクトン、環状無水物、アセタール、ヘミアセタール、チオアセタール、アミナール、及びヘミアミナールを形成し、閉環によって、例えば、保護基となるように形成される、という状況、を含むことがある。

あるラジカルの命名規則には、状況に応じて、モノ-ラジカル又はジ-ラジカルの何れかが含まれうることを理解しておく必要がある。例えば、置換基が分子の残りの部分への2つの結合の位置を必要とする場合、前記置換基はジ-ラジカルであると理解される。例えば、2つの結合の位置を必要とするアルキルとして識別される置換基としては、-CH₂-、-CH₂CH₂-、-CH₂CH(CH₃)CH₂-、等のジ-ラジカルが挙げられる。他のラジカル命名規則は、前記ラジカルが「アルキレン」、「アルケニレン」、「アリーレン」、「ヘテロシクロアルキレン」等のようなジ-ラジカルであることを明確に示す。

置換基がジ-ラジカルとして示される(即ち、分子の残りの部分への2つの結合の位置を有する)場合はいつでも、前記置換基は、別段に断らない限り、任意の方向性配置で結合することができることを理解されたい。

「異性 (Isomerism)」とは、同一の分子式を有するが、その原子の結合の配列、又はその原子の空間配置が異なる化合物を意味する。その原子の空間配置が異なる異性体を「立体異性体」と呼ぶ。互いに鏡像関係にない立体異性体を「ジアステレオマー」と呼ぶ、及び互いに重ね合わせることができない、鏡像関係にある立体異性体を「エナンチオマー」と呼び、時には「光学異性体」と呼ぶ。

4つの非-同一置換基に結合した炭素原子を「キラル中心」と呼ぶ。「キラル異性体」とは、少なくとも1つのキラル中心を有する化合物を意味する。1つ以上のキラル中心を有する化合物は、個々のジアステレオマーとして、又は「ジアステレオマー混合物(diastereomeric mixture)」と呼ばれるジアステレオマーの混合物として存在することがある。1つのキラル中心が存在する場合、立体異性体は、そのキラル中心の絶対配置(R又はS)によって特徴付けることができる。絶対配置とは、前記キラル中心に結合した置換基の空間配置をいう。検討するキラル中心に結合した置換基を、Cahn、Ingold及びPrelogの配列規則に従ってランク付けする。(Cahn et al., Angew. Chem. Inter. Edit. 1966, 5, 385; errata 511; Cahn et al., Angew. Chem. 1966, 78, 413; Cahn and Ingold, J. Chem. Soc. 1951 (London), 612; Cahn et al., Experientia 1956, 12, 81; Cahn, J. Chem. Educ. 1964, 41, 116)。キラリティーが反対である個々のエナンチオマー形態を等量で含む混合物を、「ラセミ混合物」と呼ぶ。

本明細書及び特許請求の範囲に開示される化合物は、1つ以上の不斉中心を含むことがある、及び、各化合物の異なるジアステレオマー及び／又はエナンチオマーが存在することがある。この明細書及び特許請求の範囲において、任意の化合物についての記載は、別段の記載がない限り、全てのエナンチオマー、ジアステレオマー及びそれらの混合物を含むことを意味する。更に、この明細書及び特許請求の範囲において、任意の化合物についての記載は、別段の記載がない限り、個々のエナンチオマー、並びに前記エナンチオマーの任意の混合物、ラセミ体又は他のものを含むことを意味する。化合物の構造を特定のエナンチオマーとして描いた場合、本出願の開示は、その特定のエナンチオマーに限定されないことを理解されたい。従って、本開示の各々の構造式のエナンチオマー、光学異性体、及びジアステレオマーが、本出願で企図される。本明細書において、前記化合物の構造式は、便宜上、いくつかの場合において、特定の異性体を表すが、本開示は、幾何異性体、不斉炭素に基づく光学異性体、立体異性体、互変異性体等のような全ての異性体を含み、全ての異性体が同じレベルの活性を有するわけではないことが理解される。これらの化合物類は、異なる互変異性体形態で存在することがある。本開示による化合物は、別段の記載がない限り、全ての互変異性体形態を含むことを意味する。化合物の構造を特定の互変異性体として描いた場合、本出願の開示は、その特定の互変異性体に限定されないことが理解されるべきである。

本出願に記載される任意の式の化合物は、適用可能であれば、化合物自体、並びにそれらの塩、及びそれらの溶媒和物を含む。例えば、塩は、アニオンと本開示の化合物上の正に荷電した基(例えば、アミノ)との間で形成されることがある。好適なアニオンとしては、塩化物、臭化物（ブロミド）、ヨウ化物、硫酸塩、重硫酸塩、スルファミン酸塩（スルファメート）、硝酸塩、リン酸塩、クエン酸塩、メタンスルホン酸塩、トリフルオロ酢酸塩、グルタミン酸塩、グルクロン酸塩、グルタル酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、コハク酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、トシル酸塩、サリチル酸塩、乳酸塩、ナフタレンスルホン酸塩及び酢酸塩（例、トリフルオロ酢酸塩）が挙げられる。用語「薬学的に許容可能なアニオン」は、薬学的に許容可能な塩を形成するための好適なアニオンをいう。同様に、塩は、カチオンと本開示の化合物上の負に荷電した基(例えば、カルボキシレート)との間で形成されることがある。好適なカチオンとしては、ナトリウム・イオン、カリウム・イオン、マグネシウム・イオン、カルシウム・イオン、及びテトラメチルアンモニウム・イオンなどのアンモニウム・カチオンが挙げられる。いくつかの好適な置換アンモニウム・イオンの例としては、以下から誘導されるものが挙げられる：エチルアミン、ジエチルアミン、ジシクロヘキシルアミン、トリエチルアミン、ブチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペラジン、ベンジルアミン、フェニルベンジルアミン、コリン、メグルミン、及びトロメタミン、リジン及びアルギニンなどのアミノ酸。本開示の化合物はまた、第四級窒素原子を含有する塩を含む。

好適な無機アニオンの例としては、限定されるものではないが、以下の無機酸から誘導されるものが挙げられる：塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、亜硫酸、硝酸、亜硝酸、リン(phosphoric)及びリン(phosphorous)。好適な有機アニオンの例としては、限定されるものではないが、以下の有機酸から誘導されるものが挙げられる：2-アセトキシ安息香酸、酢酸、アスコルビン酸、アスパラギン酸、安息香酸、カンファースルホン酸、桂皮酸、クエン酸、エデト酸、エタンジスルホン酸、エタンスルホン酸、フマル酸、グルケプトン酸、グルコン酸、グルタミン酸、グリコール酸、ヒドロキシマレイン酸、ヒドロキシナフタレン・カルボン酸、イセチオン酸、乳酸、ラクトビオン酸、ラウリン酸、マレイン酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、ムチン酸、オレイン酸、シュウ酸、パルミチン酸、パモ酸、パントテン酸、フェニル酢酸、フェニルスルホン酸、プロピオン酸、ピルビン酸、サリチル酸、ステアリン酸、コハク酸、スルファニル酸、酒石酸、トルエンスルフォン酸、及び吉草酸。好適なポリマー有機アニオンの例としては、限定されるものではないが、以下のポリマー酸から誘導されるものが挙げられる：タンニン酸、カルボキシメチル・セルロース。

更に、本開示の化合物（例えば、前記化合物の塩）は、水和物の若しくは非水和物(無水)の形態で、又は他の溶媒分子との溶媒和物として存在することがある。水和物の非-限定的な例としては、一水和物、二水和物などが挙げられる。溶媒和物の非-限定的な例としては、エタノール溶媒和物、アセトン溶媒和物などが挙げられる。「溶媒和物」は、化学量論的な量又は非-化学量論的な量の何れかの溶媒を含有する、溶媒が付加された形態を意味する。いくつかの化合物は、結晶性の固相中に、固定したモル比率の溶媒分子を捕捉する傾向を有し、それによって溶媒和物を形成する。そして、前記溶媒が水である場合、形成される溶媒和物は水和物である；及び前記溶媒がアルコールである場合、形成される溶媒和物はアルコラートである。水和物は、1分子の物質と1分子以上の水の組合せによって形成され、その中では、水がH₂Oとしての分子状態を保持する。水和物とは、例えば、一水和物、二水和物、三水和物などを指す。

更に、本出願に開示する式が表す化合物又はその塩について、結晶多型が存在することがある。任意の結晶形態、結晶形態の混合物、又はそれらの無水物若しくは水和物が、本開示の範囲に含まれることに留意されたい。

抗体-薬物コンジュゲート(ADC)
本出願に記載されるように、CD45に結合する抗体及びその抗原結合フラグメントは、細胞毒素分子（即ち、細胞毒素）にコンジュゲート（結合）することがあり、それによって、抗体-薬物コンジュゲート(ADC)を形成する。本出願で使用される場合、用語「細胞毒素」、「細胞毒素部分構造」及び「薬物」を、互換的に使用する。

特に、本出願に開示されるADCは、細胞毒素部分構造(例えば、ベンゾジアゼピン部分構造［例えば、ピロロベンゾジアゼピン(PBD)、又はインドリノベンゾジアゼピン(IGN)］にコンジュゲートした(即ち、リンカーによって共有結合した)、CD45に結合する抗体(その抗原結合フラグメントを含む)を含み、ここで、前記細胞毒素部分構造は、抗体部分構造にコンジュゲートしていない場合、細胞傷害性効果又は細胞増殖抑制効果を有する。様々な実施形態では、細胞毒素部分構造は、コンジュゲート中で結合している場合、細胞傷害性が減少している又は全く無くなっているが、前記リンカーから切断された後に細胞傷害性を再び発揮するようになる。様々な実施形態では、前記細胞毒素部分構造は、前記リンカーから切断されること無しに、細胞毒性を維持する。いくつかの実施形態では、細胞毒素分子は、本出願に開示されているように、細胞内部に取り込まれる抗体、又はその抗原結合フラグメントにコンジュゲートする、その結果、前記抗体、又はそのフラグメントが細胞内に取り込まれた後、前記細胞毒素は、その細胞内のターゲットにアクセスすることがある、及び、例えば、血液細胞死を媒介することがある。従って、本開示のADCは、一般的な式
Ab-(Z-L-Cy)_n、
であることがある。ここで、抗体又はその抗原結合フラグメント(Ab)は、化学的な部分構造(Z)を介して、リンカー(L)にコンジュゲート（共有結合）し、細胞毒素部分構造(Cy)にコンジュゲート（共有結合）することがある。

従って、前記抗体又はその抗原結合フラグメントは、整数nによって示されるような多数の薬物部分構造にコンジュゲートすることがある、ここで、整数nは抗体当たりの細胞毒素の平均個数を表す、ここで、整数nは、例えば約1から約20の範囲であることがある。任意の数の細胞毒素が抗-CD45抗体にコンジュゲートすることがある、例えば、1、2、3、4、5、6、7、又は8個。いくつかの実施形態では、nは、約1から約5、約1から約4、約1から約3、又は約2から約5、又は約3から約5である。いくつかの実施形態では、nは約1、約2、約3、又は約4である。コンジュゲーション反応によるADCの調製物中の抗体当たりの薬物部分構造の平均個数を、質量分析、ELISAアッセイ、及びHPLCのような従来の手段によって明らかにすることができる。nに関するADCの定量的な分布も決定することができる。場合によっては、逆相HPLC又は電気泳動のような手段によって、nが特定の数値である均質なADCを、他の薬物搭載量を有するADCから、分離する、精製する、及び特性評価することができる。

いくつかの抗体-薬物コンジュゲートについて、nは、その抗体上の結合(attachment)部位の数によって制限されることがある。例えば、結合(attachment)がシステインのチオールである場合、抗体は1個だけ又は数個のシステインのチオール基を持つ、又はリンカーが結合する(attached)のに十分な反応性をもつチオール基を1個だけ又は数個持つ。一般に、抗体は、薬物部分構造に結合することができる遊離及び反応性システイン基を多くは含まない；主に、抗体中のシステインのチオール残基は、ジスルフィド架橋として存在する。ある特定の実施形態では、抗体を、ジチオトレイトール(DTT)又はトリカルボニルエチルホスフィン(TCEP)などの還元剤で還元して、部分的還元条件下又は全還元条件下で、反応性システインのチオール基を生成させることがある。ある特定の実施形態では、より高い薬物の搭載、例えば、n>5、によって、ある特定の抗体-薬物コンジュゲートの凝集、不溶性、毒性、又は細胞透過性の喪失、が引き起こされることがある。

ある特定の実施形態では、コンジュゲーション反応の間に、理論上の最大よりも少ない薬物部分構造が、抗体にコンジュゲートする。抗体は、例えば、以下に論じるように、薬物-リンカー中間体又はリンカー試薬と反応しないリジン残基を含むことがある。最も反応性の高いリジン基のみがアミン反応性リンカー試薬と反応することができる。ある特定の実施形態では、抗体を、変性条件下に供し、リジン又はシステインのような反応性求核基を表に露出させる。

ADCの搭載(薬物／抗体比)を、種々の方法で（例えば、(i)抗体に対する、薬物-リンカー中間体又はリンカー試薬のモル過剰を制限すること、(ii)コンジュゲーション反応の時間又は温度を制限すること、(iii)システインのチオール修飾のために、部分的な又は制限的な還元条件下にすること、(iv)リンカー-薬物結合(attachment)の数及び／又は位置をコントロールするために、システイン残基の数及び位置を改変するように、抗体のアミノ酸配列を組換え技術によって操作すること、によって）、コントロールすることがある。

抗-CD45抗体
本開示は、CD45に結合することが可能である、抗体、その抗原-結合フラグメント及びリガンドを治療薬剤として使用し、(i) 1種以上のこれらの抗原を発現する細胞を特徴とする、がん及び自己免疫疾患を直接的に治療する、及び(ii) 移植療法を必要とする患者において、移植した造血幹細胞が生着することを促進する、という発見に、部分的に基づく。これらの治療活性は、例えば、細胞（例えば、がん細胞、自己免疫細胞又は造血幹細胞など）の表面に発現しているCD45に、抗体、その抗原-結合フラグメント、及び／又はリガンドが結合することによって、そしてその後に細胞死が誘導されることによって、引き起こされることがある。内因性の造血幹細胞を減少させることによって、移植した造血幹細胞がホーミングすることができるニッチが提供されることがある、及び、その後、生産的な造血が確立することがある。このようにして、移植した造血幹細胞は、患者（例えば、本出願に記載される幹細胞障害に罹患しているヒト患者など）内で、うまく生着することができる。

ヒトCD45(mRNA NCBI参照配列：NM_080921.3, タンパク質NCBI参照配列： NP_563578.2)に結合することができる抗体及び抗原-結合フラグメントを、本出願に開示される組成物及び方法と併せて使用して、例えば、造血幹細胞移植療法を必要とする患者における造血幹細胞移植片の生着を促進することがある。いくつかの実施形態では、前記抗-CD45抗体、又はその抗原結合部分は、脱-免疫化した抗-CD45抗体、又はその抗原結合部分である。いくつかの実施形態では、抗-CD45抗体、又はその抗原結合部分は、キメラの抗-CD45抗体、又はその抗原結合部分である。他の実施形態では、前記抗-CD45抗体、又はその抗原結合部分は、ヒト化抗-CD45抗体、又はその抗原結合部分である。他の実施形態では、前記抗-CD45抗体、又はその抗原結合部分は、完全にヒト抗-CD45抗体、又はその抗原結合部分である。

CD45は、T及びB細胞抗原レセプターを介したシグナル伝達に必須の造血細胞特異的な膜貫通型タンパク質チロシン・ホスファターゼである。CD45には、大きな細胞外ドメイン、及びホスファターゼを含む細胞質ドメイン、がある。複数のCD45のアイソフォームが、1次転写物中の34個のエクソンが選択的スプライシング(alternative splicing)を受けることから生じる。エクソン4, 5, 6及び恐らく7のスプライシングによって複数のCD45の多様性が生じる。CD45遺伝子は、様々に並べ替えられたものがあるが、6種類のアイソフォームが、ヒトで、最も良く同定されている。前記アイソフォームは、RA(Uniprotアクセッション番号: P08575-8；配列番号(SEQ ID NO): 31)、RO(NCBIアクセッション番号: NP_563578.2；配列番号(SEQ ID NO): 32)、RB(NCBIアクセッション番号: XP_006711537.1；配列番号(SEQ ID NO): 33)、RAB(NCBIアクセッション番号: XP_006711535.1；配列番号(SEQ ID NO): 34)、RBC(NCBIアクセッション番号: XP_006711536.1；配列番号(SEQ ID NO): 35)、及びRABC(NCBIアクセッション番号NP_002829.3；配列番号(SEQ ID NO): 36)である (Hermiston et al. 2003 “CD45: a critical regulator of signaling thresholds in immune cells.” Annu Rev Immunol. 2:107-137.)。CD45RAは、ナイーブT細胞上に発現している、並びにCD45ROは、活性化及びメモリーT細胞、一部のB細胞サブセット、活性化単球／マクロファージ、及び顆粒球上に発現している。CD45RBは、末梢B細胞、ナイーブT細胞、胸腺細胞上に発現していて、マクロファージ、及び樹状細胞上には弱く発現している。選択的なエクソンの発現は、以下、表１に記載するCD45のアイソフォームとして、観察される。

選択的スプライシングによって、CD45タンパク質の様々なアイソフォーム(例えば、CD45RA、CD45RAB、CD45RABC)で発現する、個々のエキソン又はエキソンの組合せがもたらされる。対照的に、CD45ROは、エクソン4から6の発現を欠き、エクソン1から3及び7から34の組合せから生成される。エクソン7も前記タンパク質から排除され、エクソン1から3及び8から34が一緒にスプライシングされるというエビデンスがある。E3-8と名づけられたこのタンパク質は、mRNAレベルでは検出されているが、現在のところフロー・サイトメトリーによっては同定されていない。

CD45ROは、現在、造血幹細胞で発現する唯一の既知のCD45アイソフォームである。CD45RA及びCD45RABCは、検出されていないか、造血幹細胞の表現型から除外されている。CD45RBは胎児の造血幹細胞に発現しているが、成人の骨髄造血幹細胞には存在しないという、マウスで行われた研究からのエビデンスがある。特に、CD45RCには、アジア人集団内で認められる、エクソン6の多型が高い割合である(CD45RCのエクソン6の多型は、日本人集団の約25%に認められる)。この多型によって、CD45ROの高発現及びCD45RA、CD45RB、及びCD45RCのレベルの低下がもたらされる。更に、CD45RAバリアント(例えば、CD45RAB及びCD45RAC等)は、自己免疫疾患と関連しているエクソン4の多型を示す。

造血幹細胞上にCD45ROが存在すること、及び他の免疫細胞(例えば、T及びBリンパ球サブセット並びに種々の骨髄性細胞等)上のCD45ROの発現が比較的限定的であることによって、CD45ROは、造血幹細胞移植を必要とする患者へのコンディショニング療法のための、特に非常に適したターゲットになる。CD45ROは、エキソン4、5、及び6の発現を欠くのみであるので、免疫原としてそれを使用することによって、汎CD45Ab及びCD45RO-特異的な抗体をスクリーニングすることが可能になる。

いくつかの実施形態では、本出願に記載されるADC、組成物、及び方法において使用される、抗-CD45抗体、又はその抗原結合部分は、CD45の全てのアイソフォームに結合する、汎-CD45抗体、又はその抗原結合部分である。他の実施形態では、本出願に記載されるADC、組成物、及び方法において使用される、抗-CD45抗体、又はその抗原結合部分は、1種以上のヒトCD45の前述のアイソフォーム（例えば、1種以上のCD45RA、CD45RB、CD45RC、CD45RO、CD45RAB、CD45 RBC、及びCD45 RABC）に特異的に結合する、アイソフォーム特異的な抗-CD45抗体である。

本出願に記載される患者コンディショニング方法と共に使用することがある抗-CD45抗体は、抗-CD45抗体、及びその抗原-結合部分を含む。抗体の抗原-結合部分は当該分野で周知であり、前記抗体の抗原-結合領域に基づいて容易に構築することができる。例示的な実施形態では、本出願に記載されるコンディショニング方法と併せて使用する抗-CD45抗体は、モノクローナル抗体若しくはその抗原-結合フラグメント、ポリクローナル抗体若しくはその抗原-結合フラグメント、ヒト化抗体若しくはその抗原-結合フラグメント、完全ヒト抗体若しくはその抗原-結合フラグメント、キメラ抗体若しくはその抗原-結合フラグメント、バイスペシフィック抗体(bispecific antibody)若しくはその抗原-結合フラグメント、二重可変免疫グロブリン・ドメイン、一本鎖Fv分子(scFv)、ダイアボディ、トリアボディ、ナノボディ、抗体-様タンパク質スキャッフォルド、Fvフラグメント、Fabフラグメント、F(ab')2分子、又はタンデムdi-scFv、であることがある。本出願に記載されるADC又は方法において全体的に又は部分的に使用することがある例示的な抗-CD45抗体を、以下で提供する。

1つの実施形態では、抗-CD45抗体は、BIOLEGEND^{(登録商標)}(サンディエゴ、CA)から購入可能なクローンHI30である、若しくはそれに由来する、又はそれらのヒト化バリアントである。抗体のヒト化は、非ヒト抗体の骨格残基及び定常領域残基を、当技術分野で公知の手順に従って(例えば、以下の実施例７に記載されるように)生殖系列ヒト抗体のもので置換することによって行うことができる。本出願に記載される方法と併せて使用することがある、更なる抗-CD45抗体としては、抗-CD45抗体ab10558, EP322Y, MEM-28, ab10559, 0.N.125, F10-89-4, HIe-1, 2B11, YTH24.5, PD7/26/16, F10-89-4, 1B7, ab154885, B-A11, phosphor S1007, ab170444, EP350, Y321, GA90, D3/9, X1 6/99, 及び LT45（これらはABCAM^{(登録商標)}(ケンブリッジ、MA)から購入可能である）、並びにそれらのヒト化バリアント、が挙げられる。本出願に記載される患者コンディショニング手順と併せて使用することがある、更なる抗-CD45抗体としては、抗-CD45抗体HPA000440（これは、SIGMA-ALDRICH^{(登録商標)}(セント・ルイス、MO)から購入可能である）、及びそのヒト化バリアントが挙げられる。本出願に記載される患者コンディショニング方法と併せて使用することがある、更なる抗-CD45抗体としては、マウス・モノクローナル抗体BC8（これは、例えば、Matthews et al., Blood 78:1864-1874, 1991に記載されていて、この開示は、抗-CD45抗体に関するものとして、本出願に参照により取り込まれる）、並びにそのヒト化バリアントが挙げられる。本出願に記載される方法と併せて使用することがある更なる抗-CD45抗体としては、モノクローナル抗体YAML568（これは、例えば、Glatting et al., J. Nucl. Med. 8:1335-1341, 2006に記載されていて、この開示は、抗-CD45抗体に関するものとして、本出願に参照により取り込まれる）、並びにそのヒト化バリアントが挙げられる。本出願に記載される患者コンディショニング手順と併せて使用することがある、更なる抗-CD45抗体としては、モノクローナル抗体YTH54.12及びYTH25.4（これは、例えば、Brenner et al., Ann. N.Y. Acad. Sci. 996:80-88, 2003に記載されていて、この開示は、抗-CD45抗体に関するものとして、本出願に参照により取り込まれる）、並びにそのヒト化バリアントが挙げられる。本出願に記載される患者コンディショニング方法と併せて使用することがある、更なる抗-CD45抗体としては、UCHL1, 2H4, SN130, MD4.3, MBI, 及び MT2（これらは、例えば、Brown et al., Immunology 64:331-336, 1998に記載されていて、この開示は、抗-CD45抗体に関するものとして、本出願に参照により取り込まれる）、並びにそのヒト化バリアントが挙げられる。本出願に記載される方法と併せて使用することがある更なる抗-CD45抗体としては、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション(American Type Culture Collection (ATCC))のアクセッション番号RA3-6132、RA3-2C2、及びTIB122から産生される、及び放出される抗-CD45抗体、並びにモノクローナル抗体C363.16A、及び13/2（これらは、例えば、Johnson et al., J. Exp. Med. 169:1179-1184, 1989に記載されていて、この開示は、抗-CD45抗体に関するものとして、本出願に参照により取り込まれる）、並びにそのヒト化バリアントが挙げられる。本出願に記載される患者コンディショニング方法と併せて使用することがある、更なる抗-CD45抗体としては、モノクローナル抗体AHN-12.1、AHN-12、AHN-12.2、AHN-12.3、AHN-12.4、HLe-1、及びKC56(T200) （これらは、例えば、Harvath et al., J. Immunol. 146:949-957, 1991に記載されていて、この開示は、抗-CD45抗体に関するものとして、本出願に参照により取り込まれる）、並びにそのヒト化バリアントが挙げられる。

本出願に記載される患者コンディショニング手順と併せて使用することがある、更なる抗-CD45抗体としては、例えば、米国特許番号7,265,212（これは、例えば、とりわけ、抗-CD45抗体39E11、16C9、及び1G10を記載する）に記載されている抗-CD45抗体；米国特許番号7,160,987（これは、例えば、ATCCアクセッション番号HB-11873が産生する及び放出する抗-CD45抗体（例えば、モノクローナル抗体6G3等）を記載する）に記載されている抗-CD45抗体；及び米国特許番号6,099,838（これは、例えば、抗-CD45抗体MT3、並びにATCCアクセッション番号HB220（MB23G2とも呼ばれる）及びHB223が産生する及び放出する抗体を記載する）に記載されている抗-CD45抗体、並びにUS 2004/0096901及びUS 2008/0003224（これらは、例えば、ATCCアクセッション番号PTA-7339が産生する及び放出する抗-CD45抗体（例えば、モノクローナル抗体17.1等）を記載する）に記載されている抗-CD45抗体、が挙げられる（これらの開示は、抗-CD45抗体に関するものとして、本出願に参照により取り込まれる）。

本出願に記載される患者コンディショニング手順と併せて使用することがある、更なる抗-CD45抗体としては、ATCCアクセッション番号MB4B4、MB23G2、14.8、GAP 8.3、74-9-3、I/24.D6、9.4、4B2、M1/9.3.4.HL.2から生成及び放出される抗体、並びにそれらのヒト化及び／又は親和性成熟バリアントが挙げられる。親和性成熟を、例えば、本出願に記載されるか、又は当該分野で公知のin vitroディスプレイ技術(例えば、以下の実施例６に記載されるようなファージ・ディスプレイ)を使用して実施することがある。

本出願に記載される患者コンディショニング手順と併せて使用することがある、更なる抗-CD45抗体としては、抗-CD45抗体T29/33が挙げられ、これは、例えば、Morikawa et al., Int. J. Hematol. 54:495-504, 1991に記載される（この開示は、抗-CD45抗体に関するものとして、本出願に参照により取り込まれる）。

ある特定の実施形態では、前記抗-CD45抗体は、アパミスタマブ(若しくは、公知の90Y-BC8、Iomab-B、BC8；例えば、US20170326259、WO2017155937、及びOrozco et al. Blood.127.3 (2016): 352-359.に記載される)、又はBC8-B10(例えば、Li et al. PloS one 13.10 (2018): e0205135に記載される)から選択される（これらの各々は、参照により取り込まれる）。他の抗-CD45抗体は、例えば、WO2003/048327, WO2016/016442, US2017/0226209, US2016/0152733, US9,701,756; US2011/0076270, 又は US7,825,222に記載されている（これらの各々は、参照により取り込まれる）。

例えば、1つの実施形態では、前記抗-CD45抗体又はその抗原-結合フラグメントは、アパミスタマブの結合領域に対応する結合領域（例えばCDR、可変領域）を含む。アパミスタマブの重鎖可変領域(VH)アミノ酸配列を、配列番号(SEQ ID NO)： 10に記載する（表５を参照）。アパミスタマブの軽鎖可変領域(VL)アミノ酸配列を、配列番号(SEQ ID NO)： 11に記載する（表５を参照）。いくつかの実施形態では、抗-CD45抗体、又はその抗原-結合部分は、配列番号(SEQ ID NO)： 10に記載のアミノ酸残基を含む可変重鎖、及び配列番号(SEQ ID NO)： 11に記載の軽鎖可変領域を含む。1つの実施形態では、前記抗-CD45抗体は、アパミスタマブのCDR1、CDR2及びCDR3を含む重鎖、並びにアパミスタマブのCDR1、CDR2及びCDR3を含む軽鎖可変領域を含む。

1つの実施形態では、抗-CD45抗体は、モノクローナル抗体104の可変領域を含む。104は、マウスCD45.2アイソフォーム(BioLegend, San Diego, CA)に結合する、市販されている抗-CD45抗体である、及びmAb Ly-5.2としても知られている。いくつかの実施形態では、104の可変領域は、Fcドメイン内に、1つ以上のアミノ酸置換を含むヒトIgG定常領域と結合する。例えば、いくつかの実施形態では、104の可変領域は、Fcドメイン内のS239C及びN297Aの置換を含むヒトIgG定常領域と結合する。いくつかの実施形態では、104の可変領域は、Fcドメイン内のS239C及びIHH (即ち、I253A、H310A及びH435A)の置換を含むヒトIgG定常領域と結合する。

例えば、1つの実施形態では、前記抗-CD45抗体又はその抗原-結合フラグメントは、104 S239C/IHHの結合領域に対応する結合領域（例えばCDR、可変領域）を含む。104 S239C/IHHの重鎖アミノ酸配列を、配列番号(SEQ ID NO): 12に記載する（表５参照）。104 S239C/IHHの軽鎖アミノ酸配列を、配列番号(SEQ ID NO): 13に記載する（表５参照）。いくつかの実施形態では、抗-CD45抗体、又はその抗原-結合部分は、配列番号(SEQ ID NO): 12に記載されたアミノ酸残基を含む重鎖、及び配列番号(SEQ ID NO): 13に記載されたアミノ酸残基を含む軽鎖、を含む。

1つの実施形態では、前記抗-CD45抗体は、モノクローナル抗体AbAのCDR領域及び／又は可変領域を含む。AbAの重鎖可変領域(VH)アミノ酸配列を、配列番号(SEQ ID NO): 14に記載する（表５を参照）。AbAのVH CDRドメイン・アミノ酸配列を、配列番号(SEQ ID NO): 15(VH CDR1)、配列番号(SEQ ID NO): 16(VH CDR2)、及び配列番号(SEQ ID NO): 17(VH CDR3)に記載する。AbAの軽鎖可変領域(VL)アミノ酸配列を、配列番号(SEQ ID NO): 18に記載する。AbAのVL CDRドメイン・アミノ酸配列を、配列番号(SEQ ID NO):19(VL CDR1); 配列番号(SEQ ID NO):20(VL CDR2)、及び配列番号(SEQ ID NO): 21(VL CDR3)に記載する。従って、ある特定の実施形態では、本出願において提供される抗-CD45抗体、又はその抗原-結合フラグメントは、配列番号(SEQ ID NO): 14に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO):18に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、を含む。1つの実施形態では、前記抗-CD45抗体、又はその抗原結合フラグメントは、配列番号(SEQ ID NO):15、16、及び17に記載されたアミノ酸配列を含むCDR1、CDR2、及びCDR3を含む重鎖、並びに配列番号(SEQ ID NO):19、20、及び21に記載されたアミノ酸配列を含むCDR1、CDR2、及びCDR3を含む軽鎖可変領域、を含む。

1つの実施形態では、前記抗-CD45抗体は、モノクローナル抗体AbBのCDR領域及び／又は可変領域を含む。AbBの重鎖可変領域(VH)アミノ酸配列を、配列番号(SEQ ID NO): 22に記載する（表５を参照）。AbBのVH CDRドメイン・アミノ酸配列を、配列番号(SEQ ID NO): 23(VH CDR1)、配列番号(SEQ ID NO): 24(VH CDR2)、及び配列番号(SEQ ID NO): 25(VH CDR3)に記載する。AbBの軽鎖可変領域(VL)アミノ酸配列を、配列番号(SEQ ID NO): 26に記載する。AbBのVL CDRドメイン・アミノ酸配列を、配列番号(SEQ ID NO):27(VL CDR1); 配列番号(SEQ ID NO):28(VL CDR2)、及び配列番号(SEQ ID NO): 29(VL CDR3)に記載する。従って、ある特定の実施形態では、本出願において提供される抗-CD45抗体、又はその抗原-結合フラグメントは、配列番号(SEQ ID NO): 22に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO):26に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、を含む。1つの実施形態では、前記抗-CD45抗体、又はその抗原結合フラグメントは、配列番号(SEQ ID NO):23、24、及び25に記載されたアミノ酸配列を含むCDR1、CDR2、及びCDR3を含む重鎖、並びに配列番号(SEQ ID NO):27、28、及び29に記載されたアミノ酸配列を含むCDR1、CDR2、及びCDR3を含む軽鎖可変領域、を含む。

1つの実施形態では、前記抗-CD45抗体は、モノクローナル抗体AbCのCDR領域及び／又は可変領域を含む。AbCの重鎖可変領域(VH)アミノ酸配列を、配列番号(SEQ ID NO): 30に記載する（表５を参照）。AbCのVH CDRドメイン・アミノ酸配列を、配列番号(SEQ ID NO): 31(VH CDR1)、配列番号(SEQ ID NO): 32(VH CDR2)、及び配列番号(SEQ ID NO): 33(VH CDR3)に記載する。AbCの軽鎖可変領域(VL)アミノ酸配列を、配列番号(SEQ ID NO): 34に記載する。AbCのVL CDRドメイン・アミノ酸配列を、配列番号(SEQ ID NO):35(VL CDR1); 配列番号(SEQ ID NO):36(VL CDR2)、及び配列番号(SEQ ID NO): 37(VL CDR3)に記載する。従って、ある特定の実施形態では、本出願において提供される抗-CD45抗体、又はその抗原-結合フラグメントは、配列番号(SEQ ID NO): 30に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO):34に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、を含む。1つの実施形態では、前記抗-CD45抗体、又はその抗原結合フラグメントは、配列番号(SEQ ID NO):31、32、及び33に記載されたアミノ酸配列を含むCDR1、CDR2、及びCDR3を含む重鎖、並びに配列番号(SEQ ID NO):35、36、及び37に記載されたアミノ酸配列を含むCDR1、CDR2、及びCDR3を含む軽鎖可変領域、を含む。1つの実施形態では、前記抗-CD45抗体は、本出願に記載される抗-CD45抗体の重鎖、及び、本出願に記載される抗-CD45抗体の軽鎖可変領域、を含む。1つの実施形態では、前記抗-CD45抗体は、本出願に記載される抗-CD45抗体のCDR1、CDR2及びCDR3、を含む重鎖、及び本出願に記載される抗-CD45抗体のCDR1、CDR2及びCDR3、を含む軽鎖可変領域、含む。

別の実施形態では、前記抗体、又はその抗原-結合フラグメントは、本出願の抗-CD45抗体と、少なくとも95%の同一性、例えば、本出願の抗-CD45抗体と、少なくとも95%、96%、97%、98%、99%、又は100%の同一性、を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、本出願の抗-CD45抗体、又はそのバリアントの重鎖(HC)可変ドメインを含む改変した重鎖(HC)可変領域を含む。そのバリアントは、(i)1,2,3,4又は5個のアミノ酸の置換、付加又は欠損において、前記抗-CD45抗体とは異なる；(ii)せいぜい、5,4,3,2若しくは1個のアミノ酸の置換、付加又は欠損において、前記抗-CD45抗体とは異なる；(iii) 1-5、1-3、1-2、2-5若しくは3-5個のアミノ酸の置換、付加又は欠損において、前記抗-CD45抗体とは異なる、及び／又は(iv)前記抗-CD45抗体に対して、少なくとも約75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%若しくは99%同一である、アミノ酸配列を含む、ここで、(i)から(iv)の何れにおいても、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換、又は非-保存的アミノ酸置換、であることがある；並びにここで、前記改変した重鎖可変領域は、前記抗体のCD45結合特異性を保持しながら、前記抗-CD45抗体の重鎖可変領域に対して、生物学的な活性が増加することがある。

更なる抗-CD45抗体は、国際特許出願番号PCT/US2019/058973及びPCT/US2019/058971、に記載されている（その各々の全体の内容は、本出願に参照により取り込まれる）。

更なる抗-CD45抗体、及びその抗原-結合部分は、限定されるものではないが、本出願に記載される抗体を同定する方法（例えば、抗体ライブラリのハイ・スループット・スクリーニング、ファージ・ディスプレイ、計算モデリングなど)などの、周知の方法を用いて生成することがある。

上述の各刊行物の開示は、その全体が本出願に参照により取り込まれる。本出願に記載される組成物及び方法と併用されることがある抗体及び抗原-結合フラグメントとしては、上記の抗体及びその抗原-結合フラグメント、並びに上記それらの非-ヒト抗体及び抗原-結合フラグメントのヒト化バリアント、及び上記抗体又はその抗原-結合フラグメントのエピトープと同じエピトープに結合する抗体又はその抗原-結合フラグメント（例えば、競合的CD45結合アッセイによって評価した場合）、が挙げられる。

Fc-改変抗体
いくつかの実施形態では、本出願で提供される、抗-CD45抗体又はその抗原結合部分は、抗体定常領域、例えば、Fc領域(例えば、タンデムscFv、(scFv)2、ジアボディー(diaodies)等)、を欠く。他の実施形態では、本出願で提供される、抗-CD45抗体又は抗原結合部分は、1つ以上の抗体定常領域(例えば、1つ以上のCH1、CH2、又はCH3)を含む。いくつかの実施形態では、本出願で提供される、抗-CD45抗体又はその抗原結合部分は、1つ以上のFc領域を含む。

いくつかの実施形態では、本出願で提供される、抗-CD45抗体又はその抗原結合部分は、生来の又は野生型のFc領域を含む。他の実施形態では、本出願に記載される抗体又は結合フラグメントは、半減期を増加させる、又はADCCを増加させる若しくは減少させるもののような、前記抗体及び／又はフラグメントの特性を変化させる、Fc領域内の改変及び／又は変異、を含むことがある。本出願で提供されるFc-改変抗体及びADCによって、内因性の造血幹細胞を選択的に減少させることが可能になるだけでなく、外因性の造血幹細胞移植片に対する細胞傷害性効果が減少し、それによって、造血幹細胞移植片の生着が更に促進する。

本出願に記載される、抗体、又は結合フラグメントは、前記抗体及び／又はフラグメントの特性を変化させる改変及び／又は変異（例えば、半減期を増大させる、又はADCCを増大させる若しくは低下させる、改変及び／又は変異）を含むことがある。

1つの実施形態では、1つ以上の放射性標識アミノ酸を含む抗体が提供される。放射性標識された抗体は、診断及び治療の両方の目的のために使用され得る(別の特徴として、放射性標識された分子にコンジュゲートすることが可能である)。ポリペプチドの標識に関する限定されない例としては、3H、14C、15N、35S、90Y、99Tc及び125I、131I及び186Reが挙げられるが、これらに限定されない。放射性標識アミノ酸及び関連ペプチド誘導体を調製するための方法は当該技術分野で公知である(例えば、Junghans et al.、Cancer Chemotherapy and Biotherapy 655-686、第2版、Chafner及びLongo編、Lippincott Raven(1996)及び米国特許第4,681,581号、米国特許第4,735,210号、米国特許第5,101,827号、米国特許第5,102,990［U.S. RE35,500号］、米国特許第5,648,471号、米国特許第5,697,902号を参照のこと)。例えば、放射性同位体を、クロラミンTの方法によってコンジュゲートさせることがある。

1つの実施形態では、抗-CD45抗体、又はその結合フラグメントは、改変したFc領域を含む、ここで、前記改変したFc領域は、野生型Fc領域に対して少なくとも1つのアミノ酸改変を含み、その結果、前記分子は、FcガンマR(FcγR)に対する親和性又は結合が変わる。前記Fc領域内のある特定のアミノ酸位置は、FcγRと直接接触させた結晶学的研究によって分かっている。具体的には、アミノ酸234～239(ヒンジ領域)、アミノ酸265～269(B/Cループ)、アミノ酸297～299(C'/Eループ)、及びアミノ酸327～332(F/G)ループである。(Sondermann et al、2000 Nature、406: 267-273参照)。いくつかの実施形態では、本出願に記載される抗体は、構造的な及び結晶学的な解析に基づいて、FcγRと直接的に接触する、少なくとも1つの残基が改変されたバリアントFc領域を含むことがある。1つの実施形態では、抗-CD45抗体（又はそのフラグメント）のFc領域は、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, NH1, MD (1991) (本出願に明確に参照により取り込まれる)にあるようなEUインデックスによるアミノ酸265でのアミノ酸置換を含む。「KabatにあるようなEUインデックス」は、ヒトIgG1 EU抗体の番号付けをいう。1つの実施形態では、前記Fc領域は、D265A変異を含む。1つの実施形態では、前記Fc領域はD265C変異を含む。いくつかの実施形態では、前記抗体（又はそのフラグメント）のFc領域は、例えばKabatにあるようなEUインデックスによるアミノ酸234でのアミノ酸置換を含む。

1つの実施形態では、前記Fc領域は、D265、V205、H435、I253、及び／又はH310のアミノ酸位置に変異を含む。例えば、これらの位置での特異的な変異としては、D265C、V205C、H435A、I253A、及び／又はH310Aが挙げられる。

1つの実施形態では、前記Fc領域は、L234A変異を含む。いくつかの実施形態では、前記抗-CD45抗体(又はそのフラグメント)のFc領域は、KabatにあるようなEUインデックスによるアミノ酸235でのアミノ酸置換を含む。1つの実施形態では、前記Fc領域は、L235A変異を含む。更に別の実施形態では、前記Fc領域は、L234A及びL235A変異を含む。更なる実施形態では、前記Fc領域は、D265C、L234A、及びL235A変異を含む。更に更なる実施形態では、前記Fc領域は、D265C、L234A、L235A、及びH435A変異を含む。更なる実施形態では、前記Fc領域は、D265C及びH435A変異を含む。

1つの実施形態では、前記Fc領域は、S239に変異を単独で、又は本出願に記載される他のFcに加えて、含む。例示的な実施形態では、前記Fc領域は、S239C変異を含む。

更に別の実施形態では、前記Fc領域は、L234A及びL235A変異（本出願では、「L234A.L235A」又は「LALA」とも呼ぶ）を含む。別の実施形態では、前記Fc領域は、L234A及びL235A変異を含む、ここで、前記Fc領域は、P329G変異を含まない。更なる実施形態では、前記Fc領域は、D265C、L234A、及びL235A変異(本出願では、「D265C.L234A.L235A」とも呼ぶ)を含む。別の実施形態では、前記Fc領域は、D265C、L234A、及びL235A変異を含む、ここで、前記Fc領域は、P329G変異を含まない。また更なる実施形態では、前記Fc領域は、D265C、L234A、L235A、及びH435A変異(本出願では、「D265C.L234A.L235A.H435A」とも呼ぶ)を含む。別の実施形態では、前記Fc領域は、D265C、L234A、L235A、及びH435A変異を含む、ここで、前記Fc領域は、P329G変異を含まない。更なる実施形態では、前記Fc領域は、D265C及びH435A変異(本出願では、「D265C.H435A」とも呼ぶ)を含む。更に別の実施形態では、前記Fc領域は、D265A、S239C、L234A、及びL235A変異(本出願では、「D265A.S239C.L234A.L235A」とも呼ぶ)を含む。更に別の実施形態では、前記Fc領域は、D265A、S239C、L234A、及びL235A変異を含む、ここで、前記Fc領域は、P329G変異を含まない。別の実施形態では、前記Fc領域は、D265C、N297G、及びH435A変異(本出願では、「D265C.N297G.H435A」とも呼ぶ)を含む。別の実施形態では、前記Fc領域は、D265C、N297Q、及びH435A変異(本出願では、「D265C.N297Q.H435A」とも呼ぶ)を含む。別の実施形態では、前記Fc領域は、E233P、L234V、L235A及びdelG236(236の欠失)変異(本出願では、「E233P.L234V.L235A.delG236」又は「EPLVLAdelG」とも呼ぶ)を含む。別の実施形態では、前記Fc領域は、E233P、L234V、L235A及びdelG236(236の欠失)変異を含む、ここで、前記Fc領域は、P329G変異を含まない。別の実施形態では、前記Fc領域は、E233P、L234V、L235A、delG236(236の欠失)及びH435A変異(本出願では、「E233P.L234V.L235A.delG236.H435A」又は「EPLVLAdelG.H435A」とも呼ぶ)を含む。別の実施形態では、前記Fc領域は、E233P、L234V、L235A、delG236(236の欠失)及びH435A変異を含む、ここで、前記Fc領域は、P329G変異を含まない。別の実施形態では、前記Fc領域は、L234A、L235A、S239C及びD265A変異を含む。別の実施形態では、前記Fc領域は、L234A、L235A、S239C及びD265A変異を含む、ここで、前記Fc領域は、P329G変異を含まない。別の実施形態では、前記Fc領域は、H435A、L234A、L235A、及びD265C変異を含む。別の実施形態では、前記Fc領域は、H435A、L234A、L235A、及びD265C変異を含む、ここで、前記Fc領域は、P329G変異を含まない。

いくつかの実施形態では、前記抗体は、改変したFc領域を有し、その結果、前記抗体では、in vitroエフェクター機能アッセイにおいて、Fcレセプター(FcR)への結合が、改変していないFc領域を含む同じ抗体の前記FcRへの結合と比較して、減少して、エフェクター機能が減少する。いくつかの実施形態では、前記抗体は、改変したFc領域を有し、その結果、前記抗体では、in vitroエフェクター機能アッセイにおいて、Fcガンマ・レセプター(FcγR)への結合が、改変していないFc領域を含む同じ抗体の前記FcγRへの結合と比較して、減少して、エフェクター機能が減少する。いくつかの実施形態では、前記FcγRは、FcγR1である。いくつかの実施形態では、前記FcγRは、FcγR2Aである。いくつかの実施形態では、前記FcγRは、FcγR2Bである。いくつかの実施形態では、前記FcγRは、FcγR2Cである。いくつかの実施形態では、前記FcγRは、FcγR3Aである。いくつかの実施形態では、前記FcγRは、FcγR3Bである。他の実施形態では、結合の減少は、FcγRへの抗体結合で、改変していないFc領域を含む同じ抗体の前記FcγRへの結合と比較して、少なくとも70%の減少、少なくとも80%の減少、少なくとも90%の減少、少なくとも95%の減少、少なくとも98%の減少、少なくとも99%の減少、又は100%の減少である。他の実施形態では、結合の減少は、FcγRへの抗体結合で、改変していないFc領域を含む同じ抗体の前記FcγRへの結合と比較して、少なくとも70%から100%の減少、少なくとも80%から100%の減少、少なくとも90%から100%の減少、少なくとも95%から100%の減少、又は少なくとも98%から100%の減少である。

いくつかの実施形態では、前記抗体は、改変したFc領域を有し、その結果、前記抗体では、in vitroサイトカイン放出アッセイにおいて、改変していないFc領域を含む同じ抗体のサイトカイン放出と比較して、少なくとも50%のサイトカイン放出に減少して、サイトカイン放出が減少する。いくつかの実施形態では、サイトカイン放出の減少は、改変していないFc領域を含む同じ抗体のサイトカイン放出と比較して、サイトカイン放出の少なくとも70%の減少、少なくとも80%の減少、少なくとも90%の減少、少なくとも95%の減少、少なくとも98%の減少、少なくとも99%の減少、又は100%の減少である。いくつかの実施形態では、サイトカイン放出の減少は、改変していないFc領域を含む同じ抗体のサイトカイン放出と比較して、サイトカイン放出の少なくとも70%から100%の減少、少なくとも80%から100%の減少、少なくとも90%から100%の減少、少なくとも95%から100%の減少である。ある特定の実施形態では、サイトカイン放出は免疫細胞による。

いくつかの実施形態では、前記抗体は、改変したFc領域を有し、その結果、前記抗体では、in vitroマスト細胞脱顆粒アッセイにおいて、改変していないFc領域を含む同じ抗体のマスト細胞脱顆粒と比較して、少なくとも50%のマスト細胞脱顆粒に減少して、マスト細胞脱顆粒が減少する。いくつかの実施形態では、マスト細胞脱顆粒の減少は、改変していないFc領域を含む同じ抗体のマスト細胞脱顆粒と比較して、マスト細胞脱顆粒の少なくとも70%の減少、少なくとも80%の減少、少なくとも90%の減少、少なくとも95%の減少、少なくとも98%の減少、少なくとも99%の減少、又は100%の減少である。いくつかの実施形態では、マスト細胞脱顆粒の減少は、改変していないFc領域を含む同じ抗体のマスト細胞脱顆粒と比較して、マスト細胞脱顆粒の少なくとも70%から100%の減少、少なくとも80%から100%の減少、少なくとも90%から100%の減少、少なくとも95%から100%の減少である。

いくつかの実施形態では、前記抗体は、改変したFc領域を有し、その結果、前記抗体では、in vitro抗体依存性細胞ファゴサイトーシス・アッセイ(antibody dependent cell phagocytosis (ADCP) assay)において、改変していないFc領域を含む同じ抗体のADCPと比較して、少なくとも50%の抗体依存性細胞ファゴサイトーシス（ADCP）に減少して、ADCPが減少する、又は回避される。いくつかの実施形態では、ADCPの減少は、改変していないFc領域を含む同じ抗体のサイトカイン放出と比較して、サイトカイン放出の少なくとも70%の減少、少なくとも80%の減少、少なくとも90%の減少、少なくとも95%の減少、少なくとも98%の減少、少なくとも99%の減少、又は100%の減少である。

いくつかの実施形態では、本出願に記載される抗-HC抗体（例えば、抗-CD45抗体）は、以下の改変又は以下の改変の組み合わせのうちの1つを含むFc領域を含む：D265A, D265C, D265C / H435A, D265C / LALA, D265C / LALA / H435A, D265A / S239C / L234A / L235A / H435A, D265A / S239C / L234A / L235A, D265C / N297G, D265C / N297G / H435A, D265C (EPLVLAdelG *), D265C (EPLVLAdelG ) / H435A, D265C / N297Q / H435A, D265C / N297Q, EPLVLAdelG / H435A, EPLVLAdelG / D265C, EPLVLAdelG / D265A, N297A, N297G, 又は N297Q。

いくつかの実施形態では、本出願の抗-CD45抗体は、以下の改変又は以下の改変の組み合わせのうちの1つを含むFc領域を含む：D265A, D265C, D265C / H435A, D265C / LALA, D265C / LALA / H435A, D265C / N297G, D265C / N297G / H435A, D265C (IgG2*), D265C (IgG2) / H435A, D265C / N297Q / H435A, D265C / N297Q, EPLVLAdelG / H435A, N297A, N297G, 又は N297Q。

改変したFc領域とFcガンマ・レセプターとの間の結合又は親和性を、当技術分野で公知の様々な技術（例えば、限定されるものではないが、平衡方法［例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ(ELISA)；KinExA、Rathanaswami et al. Analytical Biochemistry, Vol. 373:52-60, 2008；ラジオイムノアッセイ(RIA)］、又は表面プラズモン共鳴アッセイ若しくは他のメカニズムの動態に基づくアッセイ［例えば、BIACORE(登録商標)解析若しくはOctet^{(登録商標)}解析(forteBIO)］、並びに他の方法［例えば、間接的結合アッセイ、競合的結合アッセイ、蛍光共鳴エネルギー移動(FRET)、ゲル電気泳動及びクロマトグラフィー（例えば、ゲルろ過）など］）を使用して、測定することがある。これらの及び他の方法は、1つ以上の評価する構成成分上にある標識を利用することがある、及び／又は、様々な検出方法（例えば、限定されるものではないが、発色性標識、蛍光性標識、発光性標識、又は同位体標識など）を使用することがある。結合親和性及び動態に関しては、Paul, W. E., ed., Fundamental Immunology, 4th Ed., Lippincott-Raven, Philadelphia (1999)（これは、抗体-免疫原相互作用に焦点を当てている）に、詳細に記載されている。競合的結合アッセイの一例は、標識抗原と目的の抗体とを、非-標識の抗原の量を増やしながら、その存在下で、インキュベーションすること、及び前記標識抗原に結合した抗体を検出すること、を含むラジオイムノアッセイである。そのデータから、スキャッチャード・プロット解析により、特定の抗原に対する目的の抗体の親和性及び結合オフ-レート(off-rate)を決定することがある。第2の抗体との競合を、ラジオイムノアッセイを使用して、測定することもある。この場合、前記抗原を、標識化合物にコンジュゲートした目的の抗体と、非-標識の第2の抗体の量を増やしながら、その存在下で、インキュベーションする。

1つの実施形態では、本出願に記載されるFc改変(例えば、D265C、L234A、L235A、及び／又はH435A)を有する抗体は、Fcガンマ・レセプターへの結合が、改変していないFc領域を含む同じ抗体の前記Fcガンマ・レセプターへの結合と比較して、少なくとも70%の減少、少なくとも80%の減少、少なくとも90%の減少、少なくとも95%の減少、少なくとも98%の減少、少なくとも99%の減少、又は100%の減少である（例えば、バイオレイヤー干渉法(biolayer Interferometry)(BLI)で評価した場合）。

いかなる理論にも拘束されることを望まないが、Fcガンマ・レセプターとのFc領域結合相互作用は、種々のエフェクター機能及び下流のシグナル伝達イベント（例えば、限定されるものではないが、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害(antibody dependent cell-mediated cytotoxicity (ADCC))及び補体依存性細胞傷害(complement dependent cytotoxicity (CDC))など）に必須であると考えられる。従って、ある特定の態様では、改変したFc領域を含む抗体(例えば、L234A、L235A、及び／又はD265C変異を含む)では、エフェクター機能が実質的に減少している、又は消失している。エフェクター機能を、当技術分野で公知の種々の方法を使用して（例えば、目的の抗体に対する細胞応答［例えば、マスト細胞脱顆粒又はサイトカイン放出］を測定することによって）アッセイすることがある。例えば、当技術分野での標準的な方法を用いて、Fc改変抗体を、そのin vitroでマスト細胞脱顆粒を誘発する作用能、又はそのサイトカイン放出（例えば、ヒト末梢血単核細胞により放出される）を誘発する作用能、について、アッセイすることがある。

従って、1つの実施形態では、前記Fc領域は、半減期の低下（例えば、改変していないFc領域を有する抗体と比較して）をもたらす変異を含む。短い半減期を有する抗体は、抗体が短寿命の治療薬として機能することが期待される、ある特定の例では（例えば、抗体を投与し、続いてHSCを投与するという本出願に記載されるコンディショニング・ステップでは）、有益であることがある。理想的には、内因性の幹細胞とは異なり、一般にターゲット抗原（例えば、CD45）を発現してもいるが前記抗-CD45抗体のターゲットではないHSCを投与する前に、前記抗体は実質的にクリアランスされるべきである。1つの実施形態では、前記Fc領域は、435（KabatによるEUインデックス）の位置での変異を含む。1つの実施形態では、前記変異はH435A変異である。

1つの実施形態では、本出願に記載される抗-CD45抗体は、(例えば、ヒトにおいて)約24時間以下、約23時間以下、約22時間以下、約21時間以下、約20時間以下、約19時間以下、約18時間以下、約17時間以下、約16時間以下、約15時間以下、約14時間以下、約13時間以下、約12時間以下、又は約11時間以下の半減期を有する。

1つの実施形態では、本出願に記載される抗-CD45抗体は、1から5時間、5から10時間、10から15時間、15から20時間、又は20から25時間の半減期(例えば、ヒトにおける)を有する。1つの実施形態では、前記抗-CD45抗体の半減期は、約5から7時間；約5から9時間；約5から11時間；約5から13時間；約5から15時間；約5から20時間；約5から24時間；約7から24時間；約9から24時間；約11から24時間；約12から22時間；約10から20時間；約8から18時間；又は約14から24時間である。

いくつかの態様では、前記Fc領域は、半減期を減少させる、及び前記抗体のエフェクター機能を低下させる、2つ以上の変異を含む。いくつかの実施形態では、前記Fc領域は、半減期の減少をもたらす変異、及びFcγRと直接的に接触することができる(例えば、構造的な及び結晶学的な解析に基づく)少なくとも1つの残基の変異、を含む。1つの実施形態では、前記Fc領域は、H435A変異、L234A変異、及びL235A変異、を含む。1つの実施形態では、前記Fc領域は、H435A変異及びD265C変異を含む。1つの実施形態では、前記Fc領域は、H435A変異、L234A変異、L235A変異、及びD265C変異を含む。

いくつかの実施形態では、前記抗体、又はその抗原結合フラグメントは、本抗体、又はその抗原結合フラグメントのFcドメインにおけるシステイン残基を介して、細胞毒素(例えば、PBD)にコンジュゲートする。いくつかの実施形態では、前記システイン残基は、前記抗体、又はその抗原結合フラグメントのFcドメインにおける変異によって導入される。例えば、前記システイン残基は、Cys118、Cys239、及びCys265からなる群より選択されることがある。1つの実施形態では、前記抗-CD45抗体（又はそのフラグメント）のFc領域は、KabatにあるようなEUインデックスによるアミノ酸265でのアミノ酸置換を含む。1つの実施形態では、前記Fc領域は、D265C変異を含む。1つの実施形態では、前記Fc領域は、D265C及びH435A変異を含む。1つの実施形態では、前記Fc領域は、D265C、L234A、及びL235A変異を含む。1つの実施形態では、前記Fc領域は、D265C、L234A、L235A、及びH435A変異を含む。上述の変異に加えて、又は代わりに、いくつかの実施形態では、前記Fc領域は、S239C変異を含む。1つの実施形態では、前記Fc領域は、L234A変異、L235A変異、S239C変異及びD265A変異を含む。別の実施形態では、前記Fc領域は、S239C及びH435A変異を含む。別の実施形態では、前記Fc領域は、L234A変異、L235A変異、及びS239C変異を含む。更に別の実施形態では、前記Fc領域は、H435A変異、L234A変異、L235A変異、及びS239C変異を含む。更に別の実施形態では、前記Fc領域は、H435A変異、L234A変異、L235A変異、S239C変異及びD265A変異を含む。

特に、Fcのアミノ酸位置は、別段に示さない限り、EU番号付けインデックスを参照している。

本出願に記載される組成物及び方法と組み合わせて使用することがある抗体及び抗原結合フラグメントとしては、上記の抗体及びその抗原結合フラグメント、並びに上記の非-ヒト抗体及び抗原-結合フラグメントのバリアント、及び(例えば、競合的抗原結合アッセイによって評価した場合に)上記の抗体及びその抗原結合フラグメントと同じエピトープに結合する抗体又は抗原結合フラグメント、が挙げられる。

本開示の抗体は、更に手を加えて、例えば(Dall'Acqua et al.(2006)J Biol Chem 281: 23514-24)、(Zalevsky et al.(2010)Nat Biotechnol 28: 157-9)、(Hinton et al.(2004)J Biol Chem 279: 6213-6)、(Hinton et al.(2006)J Immunol 176: 346-56)、(Shields et al.(2001)J Biol Chem 276: 6591-604)、(Petkova et al.(2006)Int Immunol 18: 1759-69)、(Datta-Mannan et al.(2007)Drug Metab Dispos 35: 86-94)、(Vaccaro et al.(2005)Nat Biotechnol 23: 1283-8)、(Yeung et al. (2010)Cancer Res 70: 3269-77)及び(Kim et al. (1999)Eur J Immunol 29: 2819-25)に記載のFc変異のようなFc変異を更に導入することによって、抗体の半減期を更に調節することがあり、並びに位置250、252、253、254、256、257、307、376、380、428、434及び435を含むことがある。単独で又は組み合わせて作製され得る例示的な変異は、T250Q、M252Y、1253A、S254T、T256E、P2571、T307A、D376V、E380A、M428L、H433K、N434S、N434A、N434H、N434F、H435A及びH435R変異である。

抗体を操作して本出願の何れかのFc改変を入れる方法は、当技術分野で周知である。これらの方法としては、限定されるものではないが、前記抗体又は少なくとも前記抗体の定常領域をコードする、調製したDNA分子に関する、部位特異的(又はオリゴヌクレオチドを媒介した)変異誘発、PCR変異誘発、及びカセット変異誘発、による調製が挙げられる。部位特異的変異誘発は、当技術分野で周知である（例えば、Carter et al., Nucleic Acids Res., 13:4431-4443 (1985) 及び Kunkel et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82:488 (1987)を参照）。PCR変異誘発もまた、出発ポリペプチドのアミノ酸配列バリアントを作製するのに適している。Higuchi, in PCR Protocols, pp. 177-183 (Academic Press, 1990); 及び Vallette et al., Nuc. Acids Res. 17:723-733 (1989)を参照。配列バリアントを調製するための別の方法（カセット変異誘発）は、Wells et al., Gene, 34:315-323 (1985)に記載されている技術に基づく。

抗体を同定する方法
造血幹細胞が発現するCD45に結合することができる、抗体、又は抗体フラグメントのライブラリをハイスループット・スクリーニングするための方法を使用して、がん、自己免疫疾患を治療するために、及び本出願に記載されるような造血幹細胞療法を必要とする患者(例えば、ヒト患者)をコンディショニングするために、有用な抗-CD45抗体を同定することがある。このような方法を使用して、本出願に記載されるAb1の改良品を同定することがある。このような方法としては、当技術分野で公知のin vitroディスプレイ技術、例えば、とりわけ、ファージ・ディスプレイ、バクテリア・ディスプレイ、酵母ディスプレイ、哺乳動物細胞ディスプレイ、リボソーム・ディスプレイ、mRNAディスプレイ、及びcDNAディスプレイなど、が挙げられる。

生物学的に関連する分子に結合する抗体、又は抗原結合フラグメントを単離するためにファージ・ディスプレイを使用することは、例えば、Felici et al., Biotechnol. Annual Rev. 1:149-183, 1995; Katz, Annual Rev. Biophys. Biomol. Struct. 26:27-45, 1997; 及び Hoogenboom et al., Immunotechnology 4:1-20, 1998、でレビューされてきている、これらの各々の開示は、in vitroディスプレイ技術に関連するものとして、本出願に参照により取り込まれる。Kay, Perspect. Drug Discovery Des. 2:251-268, 1995 及び Kay et al., Mol. Divers. 1:139-140, 1996に記載されるように、ランダム化したコンビナトリアル・ペプチド・ライブラリを構築して、細胞表面抗原に結合するポリペプチドを選択することも行われてきている、これらの各々の開示は、抗原結合分子の発見に関連するものとして、本出願に参照により取り込まれる。タンパク質類(例えば、多量体タンパク質類)を、機能的分子として、ファージ・ディスプレイすることが、うまくできてきている(例えば、EP 0349578; EP 4527839;及びEP 0589877、並びにChiswell and McCafferty, Trends Biotechnol. 10:80-84 1992を参照、これらの各々の開示は、抗原結合分子を発見するためにin vitroディスプレイ技術を使用することに関するものとして、本出願に参照により取り込まれる）。更に、機能的抗体フラグメント(例えば、Fab及びscFvフラグメント)を、in vitroディスプレイ・フォーマットで、発現させることも行われてきている(例えば、McCafferty et al., Nature 348:552-554, 1990; Barbas et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:7978-7982, 1991; 及び Clackson et al., Nature 352:624-628, 1991を参照、これらの各々の開示は、抗原結合分子を発見するためのin vitroディスプレイ・プラットフォームに関連するものとして、本出願に参照により取り込まれる）。ヒト抗-CD45抗体を、例えば、HuMAb-マウス^登録商標又はXenoMouse^TMにおいて産生させることもある。とりわけ、これらの技術を使用して、造血幹細胞が発現するCD45に結合することができる、次いで、造血幹細胞移植療法を必要とする患者(例えば、ヒト患者)において内因性の造血幹細胞を減少させるために使用することができる、抗体類、抗体、又はフラグメントの親和性を同定する、及び改善する、ことがある。

in vitroディスプレイ技術に加えて、計算モデリング技術を使用して、造血幹細胞が発現する抗原（例えば、CD45）に結合することができる抗体を、設計する、及び同定することがある。例えば、計算モデリング技術を使用して、当業者のある者は、造血幹細胞が発現する抗原（例えば、CD45）にある特異的なエピトープ（例えば、前記抗原の細胞外のエピトープ）に結合することができる分子を求めて、抗体、又は抗体フラグメントのライブラリをin silicoでスクリーニングすることがある。

更なる技術を使用して、造血幹細胞が発現するCD45に結合することができる、及び、例えば、レセプター媒介エンドサイトーシスによって、前記細胞が中に取り込むことができる、抗体、又は抗体フラグメントを同定することがある。例えば、上記のin vitroディスプレイ技術を、CD45に結合する、及び続いて中に取り込まれる、抗体、又はその抗体フラグメントを求めてスクリーニングすることに、適合させることがある。ファージ・ディスプレイは、このスクリーニング・パラダイムと組み合わせて使用することがあるような技術の1つの代表である。造血幹細胞の中に取り込まれることがある抗-CD45抗体、又は抗体フラグメントを同定するために、当業者のある者は、Williams et al., Leukemia 19:1432-1438, 2005に記載されるファージ・ディスプレイ技術を使用することがある（その開示は、その全体が本出願に参照により取り込まれる）。例えば、当技術分野で公知の変異誘発方法を使用して、抗体、抗体フラグメント（例えば、とりわけscFvフラグメント、Fabフラグメント、ダイアボディ、トリアボディ、及び¹⁰Fn3ドメイン）、又はリガンド（これらは、ランダム化アミノ酸カセットを［例えば、CDR若しくはその等価領域、又は抗体若しくは抗体フラグメントの1つ以上、若しくは全ての中に］含有する）をコードする組換えファージ・ライブラリを産生することができる。前記抗体又は抗体フラグメントの骨格領域、ヒンジ、Fcドメイン、及び他の領域を、例えば、ヒト生殖系列抗体配列又はヒト生殖系列抗体と比較して僅かに違う配列を有するようにすることによって、ヒトにおいて非-免疫原性であるように設計することがある。

本出願に記載される、又は当技術分野で公知のファージ・ディスプレイ技術を使用して、ファージ粒子に共有結合したランダム化抗体、又は抗体フラグメントを含むファージ・ライブラリを、CD45とインキュベートする（例えば、まず最初に、非-特異的なタンパク質結合を示す抗体、又は抗体フラグメントをコードするファージを除去するために、及びFcドメインに結合する抗体又はそのフラグメントをコードするファージを除去するために、前記ファージ・ライブラリをブロッキング薬剤［例えば、乳タンパク質、ウシ血清アルブミン、及び／又はIgGなど］とインキュベートする、並びに次に、前記ファージ・ライブラリを、CD45を発現する、細胞（例えば、造血幹細胞）の集団とインキュベートする）。抗-CD45抗体、又は抗体フラグメントが細胞表面の同種抗原に結合する、及び続いて、前記造血幹細胞によって中に取り込まれる、のに十分な時間（例えば、4℃で30分から6時間、例えば、4℃で1時間など）、前記ファージ・ライブラリを前記造血幹細胞とインキュベートすることがある。続いて、例えば、冷した(4℃)pH 2.8の0.1 Mグリシン・バッファーで洗うことによって、造血幹細胞に結合すること、及び造血幹細胞によって中に取り込まれること、の目的にとって、前記CD45に対して十分な親和性を示さない、抗体、又は抗体フラグメントを含むファージを、除去することがある。前記造血幹細胞が中に取り込んだ、抗体、又はその抗体フラグメントに結合したファージを、例えば、前記細胞を溶解し、その細胞培養培地から中に取り込まれたファージを回収することによって、同定することがある。次いで、例えば、当技術分野で公知の方法を使用して、バクテリア細胞を回収したファージと共に2×YT培地中でインキュベートすることによって、前記ファージをバクテリア細胞中で増幅することがある。次いで、この培地から回収したファージを、例えば、ファージ・ゲノム内に挿入された抗体又は抗体フラグメントをコードする遺伝子の核酸配列を決定することによって、同定することがある。そのコードされた抗体又は抗体フラグメントを、続いて、(例えば、その抗体フラグメント、例えば、scFvフラグメントについては)化学合成することによって、又は(例えば、全長抗体については)組換え発現することによって、新たに調製することがある。

調製した抗体、又は抗体フラグメントを中に取り込む許容量を、例えば、当技術分野で公知の放射性核種内部取込アッセイを使用して、評価することがある。例えば、本出願に記載される、又は当技術分野で公知のin vitroディスプレイ技術を用いて同定した抗-CD45抗体、又は抗体フラグメントを、放射性同位元素（例えば、¹⁸F, ⁷⁵Br,⁷⁷Br, ¹²²I,¹²³I, ¹²⁴I,¹²⁵I, ¹²⁹I, ¹³¹I, ²¹¹At, ⁶⁷Ga, ¹¹¹In, ⁹⁹Tc, ¹⁶⁹Yb, ¹⁸⁶Re, ⁶⁴Cu, ⁶⁷Cu, ¹⁷⁷Lu, ⁷⁷As, ⁷²As, ⁸⁶Y,⁹⁰Y, ⁸⁹Zr, ²¹²Bi, ²¹³Bi, 又は ²²⁵Ac）を組み込ませることにより、機能的にすることがある。例えば、放射性ハロゲン（例えば、¹⁸F, ⁷⁵Br,⁷⁷Br, ¹²²I,¹²³I, ¹²⁴I,¹²⁵I, ¹²⁹I, ¹³¹I, ²¹¹At等）を、求電子性ハロゲン試薬を含むビーズ（例えば、ポリスチレン・ビーズ）(例えば、ヨード化ビーズ、Thermo Fisher Scientific, Inc., Cambridge, MA)を使用して、抗体、又は抗体フラグメントの中に組み込ませることがある。放射性標識した抗体、そのフラグメント又はADCを、中に取り込まれるのに十分な時間(例えば、4℃で30分から6時間、例えば、4℃で1時間等)、造血幹細胞と共にインキュベートすることがある。次いで、（例えば、冷した(4℃)pH 2.8の0.1 Mグリシン・バッファーを使用して）前記細胞を洗浄して、中に取り込まれなかった抗体又はそのフラグメントを除去する。中に取り込まれた抗体、又は抗体フラグメントを、得られた造血幹細胞から放出される放射線(例えば、γ線)を検出し、回収した洗浄バッファーから放出される放射線(例えば、γ線)と比べることによって、同定することがある。前記の内部取込アッセイを使用して、ADCを特徴付けることもある。

抗体を、例えば、米国特許第4,816,567号に記載されるように、組換え方法及び組成物を使用して産生することがある。1つの実施形態では、本出願に記載される抗-CD45抗体をコードする単離された核酸が提供される。このような核酸は、本抗体のVLを含むアミノ酸配列及び／又は本抗体のVHを含むアミノ酸配列(例えば、本抗体の軽鎖及び／又は重鎖)をコードすることがある。更なる実施形態では、このような核酸を含む1種以上のベクター(例えば、発現ベクター)が提供される。更なる実施形態では、このような核酸を含む宿主細胞が提供される。1つのこのような実施形態では、宿主細胞は以下を含む(例えば、以下で形質転換されている)：(1)本抗体のVLを含むアミノ酸配列及び本抗体のVHを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、又は(2)本抗体のVLを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第1のベクター及び本抗体のVHを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第2のベクター。1つの実施形態では、前記宿主細胞は、真核生物、例えばチャイニーズ・ハムスター卵巣(CHO)細胞又はリンパ系細胞(例えばY0、NS0、Sp20細胞)である。1つの実施形態では、抗-CLL-1抗体を作製する方法が提供され、ここで、前記方法は、上記に提供されるような抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を、前記抗体の発現に適した条件下で、培養することを、及び任意選択的に、前記宿主細胞(又は宿主細胞培養培地)から前記抗体を回収することを、含む。

抗-CD45抗体を組換え的に産生するために、抗体をコードする核酸(例えば、上記のような核酸)を、単離し、そして宿主細胞中で更にクローニングする及び／又は発現させるために、1種以上のベクターに挿入する。このような核酸は、従来の手順を使用して(例えば、本抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合し得るオリゴヌクレオチド・プローブを使用することによって)容易に単離することができ、及びシークエンシングをすることができる。

抗体をコードするベクターをクローニングする又は発現させるのに適した宿主細胞としては、本出願に記載される原核生物又は真核生物細胞が挙げられる。例えば、抗体を、特にグリコシル化及びFcエフェクター機能を必要としない場合に、バクテリア中で産生させても良い。バクテリア中で抗体フラグメント及びポリペプチドを発現させることについては、例えば、米国特許第5,648,237、5,789,199、及び5,840,523号を参照のこと（Charlton, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, N.J., 2003), pp. 245-254も参照のこと、これには、大腸菌中で抗体フラグメントを発現させることが記載されている）。発現させた後、前記抗体を、バクテリア細胞ペーストから可溶性画分として単離し、更に精製しても良い。

宿主として、脊椎動物細胞を使用することもできる。例えば、懸濁液中で増殖するように適合した哺乳動物細胞株が有用であることがある。有用な哺乳動物宿主細胞株の他の例は、SV40で形質転換したサル腎臓CV1株(COS-7)；ヒト胚性腎臓細胞株(例えば、Graham et al., J. Gen Virol. 36:59 (1977)に記載されるような293又は293細胞)；ベビー・ハムスター腎臓細胞(BHK)；マウス・セルトリ細胞(例えば、Mather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980)に記載されるようなTM4細胞)；サル腎臓細胞(CV1)；アフリカ・ミドリザル腎臓細胞(VERO-76)；ヒト子宮頸がん細胞(HELA)；イヌ腎臓細胞(MDCK)；バッファロー・ラット肝臓細胞(BRL 3A)；ヒト肺細胞(W138)；ヒト肝臓細胞(Hep G2)；マウス乳がん(MMT 060562)；TRI細胞(例えば、Mather et al., Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68 (1982)に記載される)；MRC 5細胞；及びFS4細胞、である。他の有用な哺乳動物宿主細胞株としては、チャイニーズ・ハムスター卵巣(CHO)細胞（DHFR-CHO細胞(Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980))等を含む)；及び骨髄腫細胞株(例えば、Y0、NS0及びSp2/0等)が挙げられる。抗体産生に適したある特定の哺乳動物宿主細胞株に関するレビューについては、例えば、Yazaki and Wu, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B. K. C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, N.J.), pp. 255-268 (2003)を参照のこと。1つの実施形態では、前記宿主細胞は真核生物、例えば、チャイニーズ・ハムスター卵巣(CHO)細胞又はリンパ系細胞(例えば、Y0、NS0、Sp20細胞)である。

細胞毒素
本出願に記載されているように、抗-CD45抗体、及びその抗原結合フラグメントは、細胞毒素にコンジュゲート(結合)することがある。例えば、細胞毒素は、本出願に記載されるようなベンゾジアゼピン部分構造(例えば、PBD又はIGN)を含む。

ピロロベンゾジアゼピン類(PBDs)
いくつかの実施形態では、本出願に記載されるCD45に結合する、抗体、又はその抗原-結合フラグメントは、ピロロベンゾジアゼピン(「PBD」)である細胞毒素に、又はPBDを含む細胞毒素に、コンジュゲートすることがある。PBD類は、ある特定の放線菌によって産生される天然物であり、配列選択的なDNAアルキル化化合物であることが示されてきている。PBD細胞毒素類としては、限定されるものではないが、アントラマイシン、二量体PBD類、及び、例えば、Hartley, J.A. (2011). “The development of pyrrolobenzodiazepines as antitumor agents.” Expert Opin. Inv. Drug, 20(6), 733-744; 及び Antonow, D.; Thurston, D.E. (2011) “Synthesis of DNA-interactive pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepines (PBDs).” Chem. Rev. 111: 2815-2864の中で開示されているものが挙げられる。

PBDsは、以下の一般的な構造である：

これらの化合物は、置換基の数、種類、及び位置において、芳香族（「A」）環及びピロロ（「C」）環の両方において、並びにC環の飽和度において、異なる。ジアゼピンB-環において、N10-C11位には、イミン（N=C）、カルビノールアミン（NH-CH（OH））、又はカルビノールアミン・メチル・エーテル（NH-CH(OMe)）のうちの、何れかが存在する。この位置は、DNAアルキル化の原因となる親電子性の部分構造である。既知の天然物PBDsは、全て、キラルC11a位に(S)構造を持ち、C環からA環に向かって見た場合に、右巻きのねじれが生じている。このため、B型DNAの小溝（minor groove）を有する等価ヘリックス構造に適した3次元形状（appropriate three-dimensional shape for isohelicity with the minor groove of B-form DNA）になり、結合部位にぴったりとフィットするようになる（Kohn, In Antibiotics III. Springer-Verlag, New York, pp. 3-11 (1975); Hurley and Needham-VanDevanter, Acc. Chem. Res., 19, 230-237 (1986))に記載されている。前記小溝（minor groove）に付加物を形成するPBDsの作用能により、DNAのプロセシングは妨害され、抗-腫瘍活性がもたらされることがある。

可撓性アルキレン・リンカーを介して、2つのPBDユニットを、C8-ヒドロキシル官能基を介して結合させることにより、これらの分子の生物学的活性を向上させることができることが、以前に開示されてきている（Bose, D. S., et al., J. Am. Chem. Soc., 114, 4939-4941 (1992); Thurston, D. E., et al., J. Org. Chem., 61, 8141-8147 (1996)）。PBD二量体は、パリンドローム5'-Pu-GATC-Py-3'鎖内間架橋のような、配列選択的なDNA損傷を形成すると考えられ（Smellie, M., et al., Biochemistry, 42, 8232-8239 (2003); Martin, C., et al., Biochemistry, 44, 4135-4147）、これが、主にそれらの生物活性に関与すると考えられる。有利な二量体ピロロベンゾジアゼピン化合物は、Gregson et al. (Chem. Commun. 1999, 797-798; "compound 1", and by Gregson et al. (J. Med. Chem. 2001, 44, 1161-1174; "compound 4a")に記載されている。この化合物は、SG2000としても知られていて、構造式は以下である：

。

一般的に、ピロリジン・アルケン部分構造への改変によって、結合させる部分構造（それ故に、抗体又はその抗原結合フラグメント）への共有結合に使われるハンドルが提供される（本出願に記載されているように、それぞれ、-L-Z'及び-L-Z-Ab）。或いは、リンカーを、N10の位置に結合させることもある。

いくつかの実施形態では、前記細胞毒素は、以下の構造式によって表されるピロロベンゾジアゼピン二量体である：

ここで、nは、2から5までの整数である。nが3であるこの式の化合物は、DSB-120として知られている(Bose et al., J. Am. Chem. Soc. 1992, 114, 4939-4941)。

ここで、nは、2から5までの整数である。nが3であるこの式の化合物は、SJG-136として知られている(Gregson et al., J. Med. Chem. 2001, 44, 737 - 748)。nが5であるこの式の化合物は、DRG-16として知られている(Gregson et al., Med. Chem. 2004;47:1161-1174)。

ここで、波線は、本出願に記載されるADCのリンカーへの、共有結合 (covalent attachment)の位置を示す。このPBDに基づくADCは、例えば、Sutherland et al., Blood 2013 122:1455-1463に開示され、これは、その全体が、本出願に参照により取り込まれる。

いくつかの実施形態では、前記細胞毒素は、以下の構造式によって表されるPBD二量体である：

ここで、nは、3又は5である、及びここで、波線は、本出願に記載されるADCのリンカーへの、共有結合(covalent attachment)の位置を示す。

いくつかの実施形態では、前記細胞毒素は、以下の構造式(I)によって表されるPBD二量体である：

、
ここで、波線は、本出願に記載されるADCのリンカーへの、共有結合 (covalent attachment)の位置を示す。

インドリノベンゾジアゼピン類(IGNs)
いくつかの実施形態では、本出願に記載される、CD45に結合する抗体又はその抗原-結合フラグメントは、インドリノベンゾジアゼピン(「IGN」)である細胞毒素に、又はIGNを含む細胞毒素に、コンジュゲートすることがある。いくつかの実施形態では、IGN細胞毒素は、インドリノベンゾジアゼピン二量体又はインドリノベンゾジアゼピン偽二量体である。

インドリノベンゾジアゼピン二量体は、がん細胞に対して、in vitroの効果が高い（低pMレンジIC₅₀値）、比較的新しいケミカル・クラス（chemical class）の細胞毒素である。PBD二量体のSJG-136と同様に、IGN二量体は、DNAの小溝（minor groove）に結合し、前記二量体中の2つのイミン官能基を介して、グアニン残基に共有結合し、その結果、DNAのクロスリンキングがもたらされる。IGN二量体(IGN 6；PBD部分構造のメチレン基をフェニル環に置き換える)は、おそらくDNA IGNとの付加物形成がより速い速度であるために、SJG-136と比較して、in vitroで、～10倍以上高い効果を示した(例えば、Miller et al., "A New Class of Antibody-Drug Conjugates with Potent DNA Alkylating Activity" Mol. Cancer Ther. 2016, 15(8), 1870-1878、を参照)。対照的に、IGN偽二量体は、単一の反応性のインドリノベンゾジアゼピンのイミンを含む；二量体細胞毒素中の第2のインドリノベンゾジアゼピンは、還元（アミン）形態で存在する。従って、IGN偽二量体は、前記二量体中に存在する単一のイミン部分構造を介して、DNAをアルキル化する、及びDNAをクロスリンクしない。

いくつかの実施形態では、前記細胞毒素は、以下の構造の式を有するIGN偽二量体である；

、
ここで、波線は、前記リンカーの結合位置を示す。

いくつかの実施形態では、細胞毒素-リンカー・コンジュゲートは、前記抗体にコンジュゲートする前に、反応性置換基Z'を含み、Cy-L-Z'として一緒になっていて、以下の構造を有する：

。

この細胞毒素-リンカー・コンジュゲートは、本出願ではDGN549という、及びADC IMGN632中に存在する。両者は、例えば、国際特許出願 WO2017004026に開示されている（これは、本出願に参照により取り込まれる）。

いくつかの実施形態では、前記細胞毒素は、以下の構造の式を有するインドリノベンゾジアゼピン偽二量体である。

ここで、波線は、前記リンカーの結合位置を示す。このIGN偽二量体の細胞毒素は、本出願ではDGN462といい、例えば、米国特許出願公開第20170080102号において開示されている（これは、本出願に参照により取り込まれる）。

いくつかの実施形態では、前記細胞毒素-リンカー・コンジュゲートは、前記抗体にコンジュゲートする前に、化学的部分構造Zを含み、Cy-L-Zとして一緒になっていて、以下の構造を有する：

ここで、波線は、前記抗体（例えば、抗-CD45抗体又はそのフラグメント）への結合位置(point of attachment)を示す。この細胞毒素-リンカー・コンジュゲートは、ADC IMGN779中に存在し、例えば、米国特許出願公開第20170080102号において開示されている（これは、本出願に参照により、以前に取り込まれる）。

リンカー
本出願で使用される用語「リンカー」は、抗-CD45抗体又はそのフラグメント(Ab)を細胞毒素(例えばPBD)に共有結合させて、抗体-薬物コンジュゲート(ADC)を形成する、共有結合又は原子鎖を含む2価の化学的な部分構造を意味する。

前記抗体及び前記薬物部分構造の共有結合(covalent attachment)は、前記リンカーが2つの反応性官能基を有することを要求する（即ち反応性の意味での二価である）。ペプチド、核酸、薬物、毒素、抗体、ハプテン、及びレポーター基等の2つ以上の機能的な又は生物学的に活性な部分構造を結合させるのに役立つ二価のリンカー試薬が知られており、それらのコンジュゲートを得る方法については記載されている(Hermanson,G.T.(1996)Bioconjugate Techniques; Academic Press: New York、p.234-242)。

従って、現在のリンカーは、2つの反応性末端を有する。1つは、抗体にコンジュゲートするためのものである、もう1つは、細胞毒素にコンジュゲートするためのものである。前記リンカーの抗体コンジュゲーション反応性末端(本出願では、Z'として定義する反応性部分構造)は、典型的には、例えば、前記抗体にあるシステイン・チオール基又はリジン・アミン基を経て、前記抗体にコンジュゲートすることができる化学的な部分構造である、従って、典型的には、マイケル・アクセプター(マレイミドのような)のようなチオール反応性基、クロロ、ブロモ、ヨード若しくはR-スルファニル基のような脱離基、又はカルボキシル基のようなアミン反応性基である。前記抗体に、前記リンカーをコンジュゲートさせることについては、本出願中以下により詳しく説明する。

前記リンカーの細胞毒素コンジュゲーション反応性末端は、典型的には、前記細胞毒素分子内の反応性置換基との結合を形成することによって、前記細胞毒素にコンジュゲートすることができる化学的な部分構造である。非-限定的な例としては、例えば、前記リンカーにあるカルボキシル基又は塩基性アミン基を経由して、それぞれ、前記細胞毒素にある塩基性アミン基又はカルボキシル基とアミド結合を形成すること、又は、前記細胞毒素にあるOH基の又はSH基のアルキル化を経て、それぞれエーテル、スルフィド又はそれに類するものを形成すること、が挙げられる。

前記用語「リンカー」を、コンジュゲートした形態のリンカーを説明する際に使用する場合、反応性末端の一方又は両方は、前記リンカー及び／又は前記細胞毒素間の、並びに前記リンカー及び／又は前記抗体若しくはその抗原結合フラグメント間の、結合が形成されているので、存在しない(例えば、本出願の以下に記載されるように、反応性部分構造Z′、化学的な部分構造Zに変換されている)か、又は反応途中にある(例えば、カルボン酸のカルボニルだけになっている等)。このようなコンジュゲートさせる反応を、本出願中以下に更に記載する。

種々のリンカーを使用して、記載された抗体、抗原-結合フラグメント、及びリガンドを、細胞毒素分子にコンジュゲートさせることがある。一般的には、本開示に適したリンカーは、循環中は実質的に安定的であるが、そのターゲット細胞の中で又は近傍で、前記細胞毒素を放出することを可能にする。いくつかの実施形態では、本開示に適した、ある特定のリンカーを、「切断可能」又は「非-切断可能」としてカテゴリー化することがある。一般に、切断可能なリンカーは、生理学的な環境に応じて切断される1つ以上の官能基を含む。例えば、切断可能なリンカーには、細胞内酵素(例えば、カテプシンB)の存在下で分解する酵素基質(例えば、バリン-アラニン)、細胞コンパートメントの酸性環境下で分解する酸性-切断可能基(例えば、ハイドロゾン(hydrozone))、又は細胞内の還元環境下で分解する還元可能な基(例えば、ジスルフィド)、が含まれることがある。対照的に、一般的に、非-切断可能なリンカーは、ターゲット細胞内で、前記ADCの抗体部分構造が分解(例えば、リソソーム分解)される中で、前記ADCから放出される。

非-切断可能なリンカー
本出願での使用に適した、非-切断可能なリンカーは、結合、 -(C=O)-, C₁-C₁₂アルキレン、C₁-C₁₂ヘテロアルキレン、C₂-C₁₂アルケニレン、C₂-C₁₂ヘテロアルケニレン、C₂-C₁₂アルキニレン、C₂-C₁₂ヘテロアルキニレン、C₃-C₁₂シクロアルキレン、ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、ヘテロアリーレン、及びそれらの組合せから選択される1つ以上の基を更に含むことがある。そして、これらの各々は、任意選択的に置換されていることがある、及び／又は1つ以上のヘテロ原子（例えば、S、N、又はO）を1つ以上の炭素原子の代わりに含むことがある。このような基の非-限定的な例としては、アルキレン(CH₂)_p, (C=O)(CH₂)_r,及びポリエチレングリコール(PEG; (CH₂CH₂O)_q)、ユニット、-(NHCH₂CH₂)_u-、こここで、p、q、r、t、及びuの各々は、1から12の整数であり、各場合毎に、独立して選択される、が挙げられる。

いくつかの実施形態では、前記リンカーLは、1つ以上の、結合、-(C=O)-、-C(O)NH- 基、-OC(O)NH-基、C₁-C₁₂アルキレン、C₁-C₁₂ヘテロアルキレン、C₂-C₁₂アルケニレン、C₂-C₁₂ヘテロアルケニレン、C₂-C₁₂アルキニレン、C₂-C₁₂ヘテロアルキニレン、C₃-C₁₂シクロアルキレン、ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、ヘテロアリーレン、qが1から12の整数である-(CH₂CH₂O)_q- 基、又は溶解性増強基を含む；ここで、各々のC₁-C₁₂アルキレン、C₁-C₁₂ヘテロアルキレン、C₂-C₁₂アルケニレン、C₂-C₁₂ヘテロアルケニレン、C₂-C₁₂アルキニレン、C₂-C₁₂ヘテロアルキニレン、C₃-C₁₂シクロアルキレン、ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、又はヘテロアリーレンは、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルカリル、アルキル・ヘテロアリール、アミノ、アンモニウム、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニル、ウレイド、カルバメート、アリール、ヘテロアリール、スルフィニル、スルフォニル、ヒドロキシル、アルコキシ、スルファニル、ハロゲン、カルボキシ、トリハロメチル、シアノ、ヒドロキシ、メルカプト、及びニトロ、からなる群より、それぞれの場合毎に独立して選択される、1から5個の置換基で、任意選択的に置換されることがある。

いくつかの実施形態では、各々のC₁-C₁₂アルキレン、C₁-C₁₂ヘテロアルキレン、C₂-C₁₂アルケニレン、C₂-C₁₂ヘテロアルケニレン、C₂-C₁₂アルキニレン、C₂-C₁₂ヘテロアルキニレン、C₃-C₁₂シクロアルキレン、ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、又はヘテロアリーレンには、任意選択的に、O、S及びNから選択される1つ以上のヘテロ原子が割り込むことがある。

いくつかの実施形態では、各々のC₁-C₆アルキレン、C₁-C₁₂ヘテロアルキレン、C₂-C₁₂アルケニレン、C₂-C₁₂ヘテロアルケニレン、C₂-C₁₂アルキニレン、C₂-C₁₂ヘテロアルキニレン、C₃-C₁₂シクロアルキレン、ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、又はヘテロアリーレンには、任意選択的に、O、S及びNから選択される1つ以上のヘテロ原子が割り込むことがある、並びにアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルカリル、アルキル・ヘテロアリール、アミノ、アンモニウム、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニル、ウレイド、カルバメート、アリール、ヘテロアリール、スルフィニル、スルフォニル、ヒドロキシル、アルコキシ、スルファニル、ハロゲン、カルボキシ、トリハロメチル、シアノ、ヒドロキシ、メルカプト、及びニトロ、からなる群より、それぞれの場合毎に独立して選択される、1から5個の置換基で、任意選択的に置換されることがある。

いくつかの実施形態では、前記非-切断可能なリンカーは、-(CH₂)_n-ユニットを含む、ここで、nは、2から12、例えば2から6、の整数である。いくつかの実施形態では、前記非-切断可能なリンカーは、-(CH₂)_n-を含む、ここで、nは、1、2、3、4、5、又は6である。いくつかの実施形態では、前記非-切断可能なリンカーは、nは6であり、以下の式によって表される、-(CH₂)_n-である：

。

切断可能なリンカー
いくつかの実施形態では、抗-CD45抗体又はその抗原結合フラグメントと細胞毒素(例えば、PBD)をコンジュゲートするリンカーは、細胞内の条件下において、切断可能である、その結果、前記リンカーの切断により、細胞内環境において、前記抗体から前記細胞毒素ユニットが放出される。切断可能なリンカーは、局所環境（例えば、細胞外及び細胞内環境［例えば、pH、還元電位、又は酵素濃度］）における違いを利用して、ターゲット細胞内で細胞毒素の放出を引き起こすように設計されている。一般的に、切断可能なリンカーは、循環中において比較的安定であるが、1種以上のメカニズム(例えば、限定されるものではないが、プロテアーゼ、ペプチダーゼ、及びグルクロニダーゼの活性など)を通して、細胞内環境において、特に切断されやすい。本出願で使用される切断可能なリンカーは、循環している血漿の中で、及び／又はターゲット細胞の外側で、実質的に安定である、並びにターゲット細胞の内側で、又はターゲット細胞の近傍で、ある効率的な速度で切断されることがある。

好適な切断可能なリンカーとしては、例えば、酵素的加水分解、光分解、酸性条件下での加水分解、塩基性条件下での加水分解、酸化、ジスルフィド還元、求核切断、又は有機金属切断、によって切断され得るリンカーが挙げられる (例えば、Leriche et al., Bioorg. Med. Chem., 20:571-582, 2012,を参照のこと、その開示は、共有結合的なコンジュゲートに適したリンカーに関連するとして、本出願に参照により取り込まれる)。好適な切断可能なリンカーは、例えば、ヒドラジン、ジスルフィド、チオエーテル又はジペプチドなどの化学的な部分構造を含むことがある。

酸性条件下で加水分解可能なリンカーとしては、例えば、ヒドラゾン類、セミカルバゾン類、チオセミカルバゾン類、cis-アコニット・アミド類、オルトエステル類、アセタール類、ケタール類、などが挙げられる。(例えば、U.S. Pat. Nos. 5,122,368; 5,824,805; 5,622,929; Dubowchik and Walker, 1999, Pharm. Therapeutics 83:67-123; Neville et al., 1989, Biol. Chem. 264:14653-14661, を参照、これら開示のそれぞれは、共有結合的なコンジュゲートに適したリンカーに関連するとして、本出願に参照により取り込まれる)。このようなリンカーは、中性のpH条件下（例えば、血液中）では比較的安定であるが、pH 5.5又は5.0(リソソームの凡そのpH)より下では不安定である。

還元条件下で切断可能なリンカーとしては、例えば、ジスルフィドが挙げられる。例えば、SATA(N-スクシンイミジル-S-アセチルチオアセテート)、SPDP (N-スクシンイミジル-3-(2-ピリジルジチオ)プロピオネート)、SPDB (N-スクシンイミジル-3-(2-ピリジルジチオ)酪酸)及びSMPT (N-スクシンイミジル-オキシカルボニル-α-メチル-α-(2-ピリジル-ジチオ)トルエン)、SPDB及びSMPTを用いて形成することができるジスルフィド・リンカー等、種々のジスルフィド・リンカーが当該技術分野において公知である（例えば、Thorpe et al., 1987, Cancer Res. 47:5924-5931; Wawrzynczak et al., In Immunoconjugates: Antibody Conjugates in Radioimagery and Therapy of Cancer (C. W. Vogel ed., Oxford U. Press, 1987. 以下も参照 U.S. Pat. No. 4,880,935, この開示は、共有結合的なコンジュゲートに適したリンカーに関連するとして、本出願に参照により取り込まれる)。

酵素的加水分解を受けるリンカーは、例えば、細胞内ペプチダーゼ又はプロテアーゼ酵素（例えば、限定されるものではないが、リソソーム・プロテアーゼ又はエンドソーム・プロテアーゼが挙げられる）によって切断されるペプチド含有リンカーであることがある。細胞内タンパク質分解による治療薬剤の放出を利用することの1つの利点は、前記薬剤は、コンジュゲートしている場合に典型的には減弱していること、及びコンジュゲートの血清安定性が典型的には高いこと、である。いくつかの実施形態では、ペプチジル・リンカーは、少なくとも2アミノ酸長、又は少なくとも3アミノ酸長、である。例示的なアミノ酸リンカーとしては、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチド又はペンタペプチドが挙げられる。好適なペプチドの例としては、バリン、アラニン、シトルリン（Cit）、フェニルアラニン、リジン、ロイシン、及びグリシンのようなアミノ酸を含有するペプチド、が挙げられる。アミノ酸リンカー構成要素を含むアミノ酸残基としては、天然のアミノ酸残基、並びにマイナーなアミノ酸類及びシトルリン等の非-天然のアミノ酸アナログ類、が挙げられる。例示的なジペプチド類としては、バリン-シトルリン (vc 又な val-cit) 及びアラニン-フェニルアラニン (af 又は ala-phe)、が挙げられる。例示的なトリペプチド類としてはグリシン-バリン-シトルリン (gly-val-cit) 及びグリシン-グリシン-グリシン (gly-gly-gly)、が挙げられる。いくつかの実施形態では、前記リンカーとしては、ジペプチド（例えば、Val-Cit, Ala-Val, 若しくはPhe-Lys, Val-Lys, Ala-Lys, Phe-Cit, Leu-Cit, Ile-Cit, Phe-Arg, 又は Trp-Citなど）、が挙げられる。Val-Cit 又は Phe-Lys のようなジペプチドを含むリンカーは、例えば、U.S. Pat. No. 6,214,345,に開示されている、この開示は、共有結合的なコンジュゲートに適したリンカーに関連するとして、本出願に参照により取り込まれる。いくつかの実施形態では、前記リンカーは、Val-Ala及びVal-Citから選択されるジペプチドを含む。

本出願に記載される抗体、抗原-結合フラグメント、及びリガンドを、細胞毒素分子にコンジュゲートするのに適したリンカーとしては、1,6-脱離プロセスによって、細胞毒素を放出することができるリンカー、が挙げられる。この脱離プロセスが可能な化学的な部分構造としては、p-アミノベンジル(PAB)基、6-マレイミドヘキサン酸、pH感受性炭酸塩、及びJain et al., Pharm. Res. 32:3526-3540, 2015に記載されているような他の試薬、が挙げられる、この開示は、共有結合的なコンジュゲートに適したリンカーに関連するとして、本出願に参照により取り込まれる。

いくつかの実施形態では、前記リンカーとしては、前述のPAB又はPABC(パラ-アミノベンジルオキシカルボニル)等の「自壊(self-immolative)」基が挙げられ、これらは、例えば、Carl et al., J. Med. Chem. (1981) 24:479-480; Chakravarty et al (1983) J. Med. Chem. 26:638-644; US 6214345; US20030130189; US20030096743; US6759509; US20040052793; US6218519; US6835807; US6268488; US20040018194; W098/13059; US20040052793; US6677435; US5621002; US20040121940; W02004/032828)、に開示されている。このプロセスが可能な他のこのような化学的な部分構造(「自壊リンカー」)としては、メチレン・カルバメート類及びヘテロアリール基、例えばアミノチアゾール類、アミノイミダゾール類、アミノピリミジン類などが挙げられる。このようなヘテロ環式自壊(self-immolative)基を含むリンカーは、例えば、米国特許出願公開20160303254 及び 20150079114、並びに米国特許第7,754,681; Hay et al. (1999) Bioorg. Med. Chem. Lett. 9:2237; US 2005/0256030; de Groot et al (2001) J. Org. Chem. 66:8815-8830; 及び US 7223837に開示されている。いくつかの実施形態では、ジペプチドを、自壊リンカーと併せて使用する。

いくつかの実施形態では、前記リンカーLは、1つ以上の、ヒドラジン、ジスルフィド、チオエーテル、アミノ酸、最大10個のアミノ酸からなるペプチド、p-アミノベンジル(PAB)基、ヘテロ環式自壊(self-immolative)基、C₁-C₁₂アルキル、C₁-C₁₂ヘテロアルキル、C₂-C₁₂アルケニル、C₂-C₁₂ヘテロアルケニル、C₂-C₁₂アルキニル、C₂-C₁₂ヘテロアルキニル、C₃-C₁₂シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、-(C=O)-基、-C(O)NH-基、-OC(O)NH-基、又はpが1から12の整数である-(CH₂CH₂O)q-基、を含む：ここで、各々のC₁-C₁₂アルキル、C₁-C₁₂ヘテロアルキル、C₂-C₁₂アルケニル、C₂-C₁₂ヘテロアルケニル、C₂-C₁₂アルキニル、C₂-C₁₂ヘテロアルキニル、C₃-C₁₂シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、又はヘテロアリールは、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルカリル、アルキル・ヘテロアリール、アミノ、アンモニウム、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニル、ウレイド、カルバメート、アリール、ヘテロアリール、スルフィニル、スルフォニル、ヒドロキシル、アルコキシ、スルファニル、ハロゲン、カルボキシ、トリハロメチル、シアノ、ヒドロキシ、メルカプト、及びニトロ、からなる群より、それぞれの場合毎に独立して選択される、1から5個の置換基で、任意選択的に置換されることがある。

いくつかの実施形態では、各々のC₁-C₁₂アルキル、C₁-C₁₂ヘテロアルキル、C₂-C₁₂アルケニル、C₂-C₁₂ヘテロアルケニル、C₂-C₁₂アルキニル、C₂-C₁₂ヘテロアルキニル、C₃-C₁₂シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、又はヘテロアリール基には、任意選択的に、O、S及びNから選択される1つ以上のヘテロ原子が割り込むことがある。

いくつかの実施形態では、各々のC₁-C₁₂アルキル、C₁-C₁₂ヘテロアルキル、C₂-C₁₂アルケニル、C₂-C₁₂ヘテロアルケニル、C₂-C₁₂アルキニル、C₂-C₁₂ヘテロアルキニル、C₃-C₁₂シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、又はヘテロアリール基には、任意選択的に、O、S及びNから選択される1つ以上のヘテロ原子が割り込むことがある、並びにアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルカリル、アルキル・ヘテロアリール、アミノ、アンモニウム、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニル、ウレイド、カルバメート、アリール、ヘテロアリール、スルフィニル、スルフォニル、ヒドロキシル、アルコキシ、スルファニル、ハロゲン、カルボキシ、トリハロメチル、シアノ、ヒドロキシ、メルカプト、及びニトロ、からなる群より、それぞれの場合毎に独立して選択される、1から5個の置換基で、任意選択的に置換されることがある。

当業者は、1つ以上の列記した基は、二価(ジラジカル)種（例えば、C₁-C₁₂アルキレン等）の形態で存在することがあると認識するであろう。

いくつかの実施形態では、前記リンカーLは、部分構造 *-L₁L₂-** を含む、ここで：
L₁は存在しない、又は-(CH₂)_mNR¹C(=O)-, -(CH₂)_mNR¹-, -(CH₂)_mX₃(CH₂)_m-,

である；
L₂は存在しない、又は-(CH₂)_m-, -NR¹(CH₂)_m-, -(CH₂)_mNR¹C(=O)(CH₂)_m-, -X₄, -(CH₂)_mNR¹C(=O)X₄, -(CH₂)_mNR¹C(=O)-, -((CH₂)_mO)_n(CH₂)_m-, -((CH₂)_mO)_n(CH₂)_mX₃(CH₂)_m-, -NR¹((CH₂)_mO)_nX₃(CH₂)_m-, -NR¹((CH₂)_mO)_n(CH₂)_mX₃(CH₂)_m-, -X₁X₂C(=O)(CH₂)_m-, - (CH₂)_m(O(CH₂)_m)_n-, -(CH₂)_mNR¹(CH₂)_m-, -(CH₂)_mNR¹C(=O)(CH₂)_mX₃(CH₂)_m-, - (CH₂)_mC(=O)NR¹(CH₂)_mNR¹C(=O)(CH₂)_m-, -(CH₂)_mC(=O)-, - (CH₂)_mNR¹(CH₂)_mC(=O)X₂X₁C(=O)-, -(CH₂)_mX₃(CH₂)_mC(=O)X₂X₁C(=O)-, - (CH₂)_mC(=O)NR¹(CH₂)_m-, -(CH₂)_mC(=O)NR¹(CH₂)_mX₃(CH₂)_m-, -(CH₂)_mX₃(CH₂)_mNR¹C(=O)(CH₂)_m-, -(CH₂)_mX₃(CH₂)_mC(=O)NR¹(CH₂)_m-, - (CH₂)_mO)_n(CH₂)_mNR¹C(=O)(CH₂)_m-, -(CH₂)_mC(=O)NR¹(CH₂)_m(O(CH₂)_m)_n-, - (CH₂)_m(O(CH₂)_m)_nC(=O)-, -(CH₂)_mNR¹(CH₂)_mC(=O)-, -(CH₂)_mC(=O)NR¹(CH₂)_mNR¹C(=O)-, -(CH₂)_m(O(CH₂)_m)_nX₃(CH₂)_m-, - (CH₂)_mX₃((CH₂)_mO)_n(CH₂)_m-, -(CH₂)_mX₃(CH₂)_mC(=O)-, - (CH₂)_mC(=O)NR¹(CH₂)_mO)_n(CH₂)_mX₃(CH₂)_m-, - (CH₂)_mX₃(CH₂)_m(O(CH₂)_m)_nNR¹C(=O)(CH₂)_m-, -(CH₂)_mX₃(CH₂)_m(O(CH₂)_m)_nC(=O)-, -(CH₂)_mX₃(CH₂)_m(O(CH₂)_m)_n-, -(CH₂)_mC(=O)NR¹(CH₂)_mC(=O)-, -(CH₂)_mC(=O)NR¹(CH₂)_m(O(CH₂)_m)_nC(=O)-, -((CH₂)_mO)_n(CH₂)_mNR¹C(=O)(CH₂)_m-, -(CH₂)_mC(=O)NR¹(CH₂)_mC(=O)NR¹(CH₂)_m-, -(CH₂)_mNR¹C(=O)(CH₂)_mNR¹C(=O)(CH₂) -(CH₂)_mX₃(CH₂)_mC(=O)NR¹-, -(CH₂)_mC(=O)NR¹-, -(CH₂)_mX₃-, -C(R¹)₂(CH₂)_m-, -(CH₂)_mC(R¹)₂NR¹-, -(CH₂)_mC(=O)NR¹(CH₂)_mNR¹-, - (CH₂)_mC(=O)NR¹(CH₂)_mNR¹C(=O)NR¹-, -(CH₂)_mC(=O)X₂X₁C(=O)-, - C(R¹)₂(CH₂)_mNR¹C(=O)(CH₂)_m-, -(CH₂)_mC(=O)NR¹(CH₂)_mC(R¹)₂NR¹-, - C(R¹)₂(CH₂)_mX₃(CH₂)_m-, -(CH₂)_mX₃(CH₂)_mC(R¹)₂NR¹-, -C(R¹)₂(CH₂)_mOC(=O)NR¹(CH₂)_m-, -(CH₂)_mNR¹C(=O)O(CH₂)_mC(R¹)₂NR¹-, -(CH₂)_mX₃(CH₂)_mNR¹-, -(CH₂)_mX₃(CH₂)_m(O(CH₂)_m)_nNR¹-, -(CH₂)_mNR¹-, -(CH₂)_mC(=O)NR¹(CH₂)_m(O(CH₂)_m)_nNR¹-, -(CH₂)_m(O(CH₂)_m)_nNR¹-, -(CH₂CH₂O)_n(CH₂)_m-, -(CH₂)_m(OCH₂CH₂)_n;-(CH₂)_mO(CH₂)_m-, -(CH₂)_mS(=O)₂-, - (CH₂)_mC(=O)NR¹(CH₂)_mS(=O)₂-, -(CH₂)_mX₃(CH₂)_mS(=O)₂-, -(CH₂)_mX₂X₁C(=O)-, -(CH₂)_m(O(CH₂)_m)_nC(=O)X₂X₁C(=O)-, -(CH₂)_m(O(CH₂)_m)_nX₂X₁C(=O)-, - (CH₂)_mX₃(CH₂)_mX₂X₁C(=O)-, -(CH₂)_mX₃(CH₂)_m(O(CH₂)_m)_nX₂X₁C(=O)-, - (CH₂)_mX₃(CH₂)_mC(=O)NR¹(CH₂)_mNR¹C(=O)-, -(CH₂)_mX₃(CH₂)_mC(=O)NR¹(CH₂)_mC(=O)-, -(CH₂)_mX₃(CH₂)_mC(=O)NR¹(CH₂)_m(O(CH₂)_m)_nC(=O)-, -(CH₂)_mC(=O)X₂X₁C(=O)NR¹(CH₂)_m-, -(CH₂)_mX₃(O(CH₂)_m)_nC(=O)-, -(CH₂)_mNR¹C(=O)((CH₂)_mO)_n(CH₂)_m-, -(CH₂)_m(O(CH₂)_m)_nC(=O)NR¹(CH₂)_m-, -(CH₂)_mNR¹C(=O)NR¹(CH₂)_m- 若しくは -(CH₂)_mX₃(CH₂)_mNR¹C(=O)-;
である；
ここで、X₁は

である；
X₂は

である；
X₃は

である；及び、
X₄は

である；
ここで、
R¹は、H及びC₁-C₆アルキル、から、それぞれの場合毎に独立して選択される；
mは、1、2、3、4、5、6、7、8、9、及び10、から、それぞれの場合毎に独立して選択される；
nは、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、及び14、から、それぞれの場合毎に独立して選択される；並びに、
ここで、1個の星印(*)は、細胞毒素（例えば、PBD）への結合(attachment)の位置を示し、2個の星印(**)は、反応性置換基Z'又は化学的な部分構造Zへの結合(attachment)の位置を示す、但し、L₁とL₂の両方が存在しないことは無い。

いくつかの実施形態では、前記リンカーとしては、p-アミノベンジル基(PAB)を含む。1つの実施形態では、前記p-アミノベンジル基は、前記細胞毒性薬物と前記リンカー内のプロテアーゼ切断部位との間に、配置される。1つの実施形態では、前記p-アミノベンジル基は、p-アミノベンジルオキシカルボニル・ユニットの一部である。1つの実施形態では、前記p-アミノベンジル基は、p-アミノベンジルアミド・ユニットの一部である。

いくつかの実施形態では、前記リンカーは、Phe-Lys, Val-Lys, Phe-Ala, Phe-Cit, Val-Ala, Val-Cit, 及び Val-Arg、からなる群より選択されるペプチドを含む。いくつかの実施形態では、前記リンカーは、1つ以上のPAB, Val-Cit-PAB, Val-Ala-PAB, Val-Lys(Ac)-PAB, Phe-Lys-PAB, Phe-Lys(Ac)-PAB, D-Val-Leu-Lys, Gly-Gly-Arg, Ala-Ala-Asn-PAB, 又は Ala-PAB、を含む。

いくつかの態様において、前記リンカーは、1種以上のペプチド、オリゴ糖, -(CH₂)_p-, -(CH₂CH₂O)_q-, -(C=O)(CH₂)_r-, -(C=O)(CH₂CH₂O)_t-, -(NHCH₂CH₂)_u-,-PAB, Val-Cit-PAB, Val-Ala-PAB, Val-Lys(Ac)-PAB, Phe-Lys-PAB, Phe-Lys(Ac)-PAB, D-Val-Leu-Lys, Gly-Gly-Arg, Ala-Ala-Asn-PAB, 又は Ala-PAB、を含む、ここで、p、q、r、t、及びuの各々は、1から12の整数であり、各場合毎に、独立して選択される。

いくつかの実施形態では、前記リンカーは、

を含む。

いくつかの実施形態では、前記リンカーは、MCC (4-[N-マレイミドメチル]シクロヘキサン-1-カルボキシレートを含む。

いくつかの実施形態では、前記リンカーは、PAB-Ala-Val-又はPAB-Cit-Val-、-(C=O)(CH₂)_r-ユニット、-(C=O)(CH₂CH₂O)_t-ユニット、及び-(NHCH₂CH₂)_u-ユニット、を含む、ここで、r、t、及びuは、1から12までの整数であり、各場合毎に、独立して選択される。

いくつかの実施形態では、前記リンカーは、PAB-Ala-Val-又はPAB-Cit-Val-、-(C=O)(CH₂)_r-ユニット、-(C=O)(CH₂CH₂O)_t-ユニット、及び-(NHCH₂CH₂)_u-ユニット、を含む、ここで、r=2、t=8、及びu=1である。具体的な実施形態では、前記リンカーは、式(II)：

で表されることがある、
ここで、R₁は、CH₃(Ala) 又は(CH₂)₃NH(CO)NH₂(Cit) である。

当該技術分野の当業者は、本出願で開示されるような化学的な基、部分構造、及び特徴の何れか1つ以上を、複数の方法によって組み合わせて、本出願で開示されるような、抗体と細胞毒素とをコンジュゲートするのに有用なリンカーを形成することがある、と認識するであろう。

リンカー-細胞毒素及びリンカー-抗体のコンジュゲーション
ある特定の実施形態では、前記リンカーを適切な条件下で前記細胞毒素と反応させて、リンカー-細胞毒素コンジュゲートを形成する。ある特定の実施形態では、反応性の基を、前記細胞毒素又はリンカーにおいて使用し、共有結合(covalent attachment)を形成する。

いくつかの実施形態では、前記細胞毒素は、式(I)によるPBD又はその誘導体である。細胞毒素-リンカー・コンジュゲートを、続いて、適切な条件下で、CD45に結合する、前記抗体、誘導体化した抗体、又はそれらの抗原結合フラグメントと反応させて、ADCを形成する。或いは、前記リンカーを、まず最初に、CD45に結合する、前記抗体、誘導体化した抗体、又はそれらの抗原結合フラグメントと反応させて、リンカー-抗体コンジュゲートを形成し、それから、前記細胞毒素と反応させて、ADCを形成する。そのようなコンジュゲーション反応を、これからより詳しく説明する。

前記抗体又はその抗原結合フラグメントに、リンカー又は細胞毒素-リンカー・コンジュゲートを共有結合(covalent attachment)させるために、多くの様々な反応を利用することができる。前記抗体分子上の好適な結合(attachment）の位置としては、限定されるものではないが、リジンのアミン基、グルタミン酸及びアスパラギン酸の遊離カルボン酸基、システインのスルフヒドリル基、及び芳香族アミノ酸の種々の部分構造が挙げられる。例えば、リンカー上のカルボキシ(又はアミノ)基を抗体部分構造上のアミノ(又はカルボキシ)基に結合させるために、非-特異的な共有結合を、カルボジイミド反応を用いて行うことがある。更に、リンカー上のアミノ基を抗体部分構造上のアミノ基に結合させるために、ジアルデヒド又はイミドエステルなどの二官能基性の薬剤を使用することもある。細胞毒素を抗体部分構造に結合させることには、シッフ塩基反応を利用することも可能である。この方法は、前記抗体又はリンカーのどちらかのグリコール又は水酸基を過ヨウ素酸酸化させることを含み、このようにしてアルデヒドを形成させ、次いで、これを、それぞれ、前記リンカー又は抗体と反応させる。共有結合は、前記アルデヒドとアミノ基との間にシッフ塩基を形成することを介して、形成される。イソチオシアネート類を、細胞毒素又は抗体部分構造をリンカーに共有結合させる(covalently attaching)ためのカップリング剤として使用することもある。他の技術は当業者に知られており、本開示の範囲内である。

本出願に記載される、抗体又は抗原結合フラグメントへのコンジュゲーションに有用なリンカーとしては、限定されるものではないが、以下の表２に示すような、前記抗体と前記リンカーの反応性の化学的な部分構造（本出願では、反応性置換基、Z'、と呼ぶ）との間のカップリング反応によって形成される、化学的な部分構造Zを含むリンカー、が挙げられる。波線は、前記抗体又は抗原結合フラグメント、及び細胞毒素分子、への結合(attachment）の位置を示す。

表２．抗体-薬物コンジュゲートを形成する際のカップリング反応により形成される例示的な化学的な部分構造Z。

当業者の中のある者は、前記リンカーに結合した反応性置換基Z'、及び前記抗体又はその抗原-結合フラグメントにある反応性置換基が、化学的な部分構造Zを生成する共有結合カップリング反応に関与するものであることを認識し、前記反応性置換基Z'を認識する。従って、本出願に記載される方法と併せることにおいて有用な抗体-薬物コンジュゲートは、抗体、又はその抗原-結合フラグメントが、リンカー又は細胞毒素-リンカー・コンジュゲートと反応することによって形成されることがあり、本出願に記載されるように、前記リンカー又は細胞毒素-リンカー・コンジュゲートは反応性置換基Z'等を含み、抗体、又はその抗原結合フラグメント上の反応性置換基との反応に適していて、化学的な部分構造Zを形成する。

いくつかの実施形態では、Z'は、-NR¹C(=O)CH=CH₂, -N₃, -SH, -S(=O)₂(CH=CH₂), -(CH₂)₂S(=O)₂(CH=CH₂), -NR¹S(=O)₂(CH=CH₂), -NR¹C(=O)CH₂R², -NR¹C(=O)CH₂Br, -NR¹C(=O)CH₂I, -NHC(=O)CH₂Br, -NHC(=O)CH₂I, -ONH₂, -C(O)NHNH₂, -CO₂H, -NH₂, -NH(C=O), -NC(=S),

である；
ここで、
R¹は、H及びC₁-C₆アルキル、から、それぞれの場合毎に独立して選択される；
R²は、-S(CH₂)_nCHR³NHC(=O)R¹；
R³は、R¹又は-C(=O)OR¹；
R⁴は、H、C₁-C₆アルキル、F、Cl、及び-OH、から、それぞれの場合毎に独立して選択される；
R⁵は、H, C₁-C₆ アルキル, F, Cl, -NH₂, -OCH₃, -OCH₂CH₃, -N(CH₃)₂, -CN, -NO₂,及び -OH、から、それぞれの場合毎に独立して選択される；並びに、
R⁶は、H、C₁-C₆ アルキル、F、-C(=O)OHで置換されたベンジルオキシ、-C(=O)OHで置換されたベンジル、-C(=O)OHで置換されたC₁-C₄アルコキシ、及び-C(=O)OHで置換されたC₁-C₄アルキル、から、それぞれの場合毎に独立して選択される。

表２に示されるように、前記リンカーにある好適な反応性置換基Z'、及び抗体、又はその抗原結合フラグメントにある反応性置換基の例としては、求核／求電子対(例えば、チオール／ハロアルキル対、アミン／カルボニル対、又はチオール／α, β-不飽和カルボニル対など)、ジエン／ジエノフィル対(例えば、とりわけ、アジド／アルキン対、又はジエン／α,β-不飽和カルボニル対)などが挙げられる。化学的な部分構造Zを形成するための反応性置換基間のカップリング反応としては、限定されるものではないが、チオール・アルキル化、ヒドロキシル・アルキル化、アミン・アルキル化、アミン又はヒドロキシルアミン縮合、ヒドラジン形成、アミド化、エステル化、ジスルフィド形成、環化付加(例えば、とりわけ、[4+2]Diels-Alder環化付加、[3+2]Huisgen環化付加)、芳香族求核置換、芳香族求電子置換、及び当該技術分野で知られているか又は本出願に記載される他の反応様式が挙げられる。いくつかの実施形態では、前記反応性置換基Z'は、前記抗体、又はその抗原結合フラグメント上の求核性官能基との反応に好適な求電子性官能基である。

本出願で開示するように、抗体、又はその抗原-結合フラグメント内に存在し得る反応性置換基としては、限定されるものではないが、(i)N-末端アミン基、(ii)側鎖アミン基(例えば、リジン)、(iii)側鎖チオール基(例えば、システイン)、及び(iv)糖水酸基又はアミノ基(ここで、前記抗体はグリコシル化されている)、のような求核基が挙げられる。本出願で開示するように、抗体、又はその抗原結合フラグメント内に存在し得る反応性置換基としては、限定されるものではないが、セリン、スレオニン、及びチロシン残基のヒドロキシル部分構造；リジン残基のアミノ部分構造；アスパラギン酸及びグルタミン酸残基のカルボキシル部分構造；並びにシステイン残基のチオール部分構造、並びに、非-天然アミノ酸のプロパルギル、アジド、ハロアリール(例えば、フルオロアリール)、ハロヘテロアリール(例えば、フルオロヘテロアリール)、ハロアルキル、及びハロヘテロアルキル部分構造が挙げられる。いくつかの実施形態では、本出願で開示するように、抗体、又はその抗原-結合フラグメント内に存在する反応性置換基としては、アミン又はチオール部分構造が挙げられる。ある特定の抗体は、還元可能な鎖間ジスルフィド（即ち、システイン架橋）を有する。抗体は、DTT(ジチオトレイトール)等の還元剤で処理することによって、リンカー試薬とコンジュゲーションさせるために、反応性にすることができる。従って、各システイン架橋は、理論的には、2つの反応性チオール求核基を形成する。リジンと2-イミノチオラン(トラウト試薬)との反応によって、更なる求核基を抗体中に導入して、アミンをチオールに転化させることができる。1個、2個、3個、4個、又はそれ以上のシステイン残基を導入することによって(例えば、1個以上の非-生来的なシステイン・アミノ酸残基を含む変異抗体を調製することによって)、反応性チオール基を、抗体(又はそのフラグメント)に導入することがある。米国特許第7,521,541号は、反応性システイン・アミノ酸を導入することによる工学的に操作した抗体を教示している。

いくつかの実施形態では、前記リンカーに結合した反応性置換基Z'は、抗体上に存在する求電子基と反応性である求核基である。抗体上の有用な求電子基としては、限定されるものではないが、アルデヒド及びケトンのカルボニル基が挙げられる。求核基のヘテロ原子は、抗体上の求電子基と反応し、前記抗体と共有結合を形成することがある。有用な求核基としては、限定されるものではないが、ヒドラジド、オキシム、アミノ、ヒドロキシル、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、ヒドラジン・カルボキシレート、及びアリールヒドラジド、が挙げられる。

いくつかの実施形態では、化学的な部分構造Zは、抗体、又はその抗原結合フラグメント内に存在する反応性求核置換基(例えば、アミン及びチオール部分構造)と前記リンカーに結合した反応性求電子置換基Z'との間の反応の生成物である。例えば、Z'は、とりわけ、マイケル・アクセプター(例えば、マレイミド)、活性化エステル、電子欠損カルボニル化合物、又はアルデヒドであることがある。

反応性置換基Z'とその結果として得られる化学的な部分構造Zのいくつかの代表的で非-限定的な例を、表３に示す。

表３．補完的な反応性置換基及び化学的な部分構造

例えば、リンカー-抗体コンジュゲート及びADCの合成に好適なリンカーとしては、限定されるものではないが、前記リンカーに結合した反応性置換基Z'（例えば、マレイミド又はハロアルキル基など）が挙げられる。これらは、試薬類（例えば、特に、スクシンイミジル4-(N-マレイミドメチル)-シクロヘキサン-L-カルボキシレート(SMCC)、N-スクシンイミジル・ヨードアセテート(SIA)、スルホ-SMCC、m-マレイミドベンゾイル-N-ヒドロキシスクシンイミジル・エステル(MBS)、スルホ-MBS、及びスクシンイミジル・ヨードアセテート、等であり、例えば、Liu et al., 18:690-697, 1979に記載されている［この開示は、化学的にコンジュゲートさせるためのリンカーに関するものとして、本出願に参照により取り込まれる］）によって、前記リンカーに結合することがある。

いくつかの実施形態では、リンカーLに結合した反応性置換基Z'は、マレイミド、アジド、又はアルキンである。マレイミド含有リンカーの例は、非-切断可能なマレイミドカプロイル-ベースのリンカーであり、これは、アウリスタチンなどの微小管破壊剤をコンジュゲートするのに特に有用である。このようなリンカーはDoronina et al., Bioconjugate Chem. 17:14-24, 2006に記載されている（この開示は、化学的にコンジュゲーションさせるためのリンカーに関するものとして、本出願に参照により取り込まれる）。

いくつかの実施形態では、反応性置換基Z'は-(C=O)-又は-NH(C=O)-であり、その結果、前記リンカーは、それぞれ、-(C=O)-又は-NH(C=O)-基と抗体又はその抗原結合フラグメントのアミノ基との反応から生じるアミド又は尿素の部分構造によって、前記抗体又はその抗原-結合フラグメントに結合することがある。

いくつかの実施形態では、前記反応性置換基Z'は、N-マレイミジル基、ハロゲン化N-アルキルアミド基、スルホニルオキシN-アルキルアミド基、カーボネート基、ハロゲン化スルホニル基、チオール基又はその誘導体、内部に炭素-炭素の三重結合を含むアルキニル基、（ヘテロ）シクロアルキニル基、ビシクロ[6.1.0]ノン-4-イン-9-イル基（bicyclo[6.1.0]non-4-yn-9-yl group）、内部に炭素-炭素の二重結合を含むアルケニル基、シクロアルケニル基、テトラジニル基、アジド基、ホスフィン基、ニトリル・オキシド基、ニトロン基、ニトリル・イミン基、ジアゾ基、ケトン基、(O-アルキル)ヒドロキシルアミノ基、ヒドラジン基、ハロゲン化N-マレイミジル基、1,1-ビス(スルホニルメチル)メチルカルボニル基又はその脱離誘導体、ハロゲン化カルボニル基、又はアレンアミド基であり、これらはそれぞれ任意選択的に置換されることがある。いくつかの実施形態では、前記反応性置換基は、シクロアルケン基、シクロアルキン基、又は任意選択的に置換された(ヘテロ)シクロアルキニル基を含む。

いくつかの実施形態では、化学的な部分構造Zを、表３から選択する。いくつかの実施形態では、化学的な部分構造Zは、以下のとおりである：

、
ここで、Sは、ヒトの幹細胞又はT細胞の細胞表面上で発現する抗原に特異的に結合する、抗体の又はその抗原-結合フラグメントの、中に存在する反応性置換基を表す硫黄原子である（例えば、システイン残基の-SH基に由来する)。

前記リンカーが式(II)のものであるいくつかの実施形態では、リンカー-反応性置換基は、L-Z'として一緒になっている、前記抗体又はその抗原結合フラグメントとコンジュゲートする前に、以下の構造を有する：

、
ここで、波線は、前記細胞毒素（例えば、PBD又はその誘導体) 上の置換基への結合(attachment）の位置を示す。前記リンカーの末端の波線は、前記細胞毒素（例えば、PBD）への結合(attachment）の位置を示す。いくつかの実施形態では、前記リンカーL及び化学的な部分構造Zは、前記抗体にコンジュゲートした後、L-Z-Abとして一緒になっている、以下の構造を有する：

ここで、Sは、ヒトの幹細胞又はT細胞の細胞表面上で発現する抗原に特異的に結合する、抗体の又はその抗原結合フラグメントの、中に存在する反応性置換基を表す硫黄原子である（例えば、システイン残基の-SH基に由来する)。前記リンカーの末端の波線は、前記細胞毒素（例えば、PBD又はその誘導体)への結合(attachment）の位置を示す。

いくつかの実施形態では、前記細胞毒素は、構造式(I)で表されるピロロベンゾジアゼピンである、及び前記リンカーは、ジアゼピン・アミノ基への結合によって結合(attachment）する。そのような実施形態では、前記ADCは、式(III)で表されることがある：

、
ここで、各L、Z、及びAbは、本出願で説明される。

いくつかの実施形態では、式(III)のADCのリンカーLは、切断可能なリンカーである。いくつかの実施形態では、前記切断可能なリンカーLは、1つ以上の、ヒドラジン、ジスルフィド、チオエーテル、アミノ酸、最大10個のアミノ酸からなるペプチド、p-アミノベンジル(PAB)基、ヘテロ環式自壊(self-immolative)基、C₁-C₁₂アルキル、C₁-C₁₂ヘテロアルキル、C₂-C₁₂アルケニル、C₂-C₁₂ヘテロアルケニル、C₂-C₁₂アルキニル、C₂-C₁₂ヘテロアルキニル、C₃-C₁₂シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、-(C=O)-基、-C(O)NH-基、-OC(O)NH-基、pが1から12の整数である-(CH₂CH₂O)q-基、又は溶解性増強基を含む；
ここで、各々のC₁-C₁₂アルキル、C₁-C₁₂ヘテロアルキル、C₂-C₁₂アルケニル、C₂-C₁₂ヘテロアルケニル、C₂-C₁₂アルキニル、C₂-C₁₂ヘテロアルキニル、C₃-C₁₂シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、又はヘテロアリール基は、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルカリル、アルキル・ヘテロアリール、アミノ、アンモニウム、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニル、ウレイド、カルバメート、アリール、ヘテロアリール、スルフィニル、スルフォニル、ヒドロキシル、アルコキシ、スルファニル、ハロゲン、カルボキシ、トリハロメチル、シアノ、ヒドロキシ、メルカプト、及びニトロ、からなる群より、それぞれの場合毎に独立して選択される、1から5個の置換基で、任意選択的に置換されることがある；
又は、各々のC₁-C₁₂アルキル、C₁-C₁₂ヘテロアルキル、C₂-C₁₂アルケニル、C₂-C₁₂ヘテロアルケニル、C₂-C₁₂アルキニル、C₂-C₁₂ヘテロアルキニル、C₃-C₁₂シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、又はヘテロアリール基には、任意選択的に、O、S及びNから選択される1つ以上のヘテロ原子が割り込むことがある。

いくつかの実施形態では、前記リンカーは、ペプチド、オリゴ糖、-(CH₂)_p-, -(CH₂CH₂O)_q-, -(C=O)(CH₂)_r-, -(C=O)(CH₂CH₂O)_t-, -(NHCH₂CH₂)_u-,-PAB, Val-Cit-PAB, Val-Ala-PAB, Val-Lys(Ac)-PAB, Phe-Lys-PAB, Phe-Lys(Ac)-PAB, D-Val-Leu-Lys, Gly-Gly-Arg, Ala-Ala-Asn-PAB, 又は Ala-PAB、含む、ここで、p、q、r、t、及びuの各々は、1から12の整数であり、各場合毎に、独立して選択される。

いくつかの実施形態では、前記リンカーは、PAB-Ala-Val- 又は PAB-Cit-Val-, a-(C=O)(CH₂)_r- ユニット, -(C=O)(CH₂CH₂O)_t- ユニット, 及び -(NHCH₂CH₂)_u- ユニット、を含む、ここで、 r=2、t=8、及びu=1である。具体的な実施形態では、前記リンカーは、式(II)で表されることがある：

ここで、R₁ は、CH₃(Ala)、又は(CH₂)₃NH(CO)NH₂(Cit)、である。

前記細胞毒素が式(I)のものである、及び前記リンカーが式(II)のものである、ここで、R₁がCH₃である、特定の実施形態では、前記細胞毒素-リンカー-コンジュゲートは、前記抗体にコンジュゲートする前に反応性置換基Z'を含み、Cy-L-Z'として一緒になっている、式(IV)で表されることがある：

。

この特定の細胞毒素-リンカー・コンジュゲートは、テシリン(SG3249)として知られており、例えば、Howard et al., ACS Med. Chem. Lett. 2016, 7(11), 983-987（この開示は、その全体が、本出願に参照により取り込まれる）に記載されている。式(IV)の化合物は、本出願で開示する抗-CD45抗体にコンジュゲートすると、式(V)で表すことができる：

、
ここで、Abは、本出願で開示されるような抗-CD45抗体又はその抗原結合フラグメントである、及びSは、前記抗体の中に存在する、又は前記抗体の中に導入された、硫黄原子(例えば、システイン残基チオール)を表す。

いくつかの実施形態では、前記細胞毒素は、以下の式で表されるピロロベンゾジアゼピン二量体である：

、
ここで、波線は、前記リンカーの結合位置(attachment point)を示す。

いくつかの実施形態では、前記細胞毒素-リンカー・コンジュゲートは、前記抗体にコンジュゲートする前に、反応性置換基Z'を含み、Cy-L-Z'として一緒になっている、以下の構造を有する：

。

この特定の細胞毒素-リンカー・コンジュゲートはタリリンとして知られており、例えば、ADC バダスツキシマブ・タリリン(Vadastuximab talirine)(SGN-CD33A)に関連して、Mantaj et al., Angewandte Chemie International Edition English 2017,56, 462-488、に記載されている、この開示は、その全体が本出願に参照により取り込まれる。

抗体-薬物コンジュゲートの調製
式(V)のADCのような、本出願に開示される式Ab-(Z-L-Cy)_nのADCにおいて、抗-CD45抗体又はその抗原結合フラグメント(Ab)は、本出願に開示されるようなリンカーL及び化学的な部分構造Zを介して、1個以上の細胞毒性薬物部分構造(Cy;例えば、PBD)（例えば、抗体あたり約1個から約20個の細胞毒素部分構造）にコンジュゲートする。任意の数の細胞毒素が、前記抗-CD45抗体にコンジュゲートすることがある（例えば、1、2、3、4、5、6、7、又は8）。いくつかの実施形態では、nは、約1から約5、約1から約4、約1から約3、又は約2から約5、又は約3から約5、である。いくつかの実施形態では、nは、約1、約2、約3、又は約4、である。

本開示のADCは、以下を含む、当業者に公知の有機化学反応、条件、及び試薬を使用するいくつかの経路によって調製され得る：(1)抗体、又はその抗原結合フラグメントの反応性置換基を、2価リンカー試薬と反応させて、本出願中上記のようなAb-Z-Lを形成させる、続いて、細胞毒素部分構造Cyと反応させる；又は、(2)細胞毒素部分構造の反応性置換基を、2価リンカー試薬と反応させて、Cy-L-Z'を形成させる、続いて、本出願中上記のような抗体又はその抗原結合フラグメントの反応性置換基と反応させて、式Ab-(Z-L-Cy)_nのADCを形成させる。ADCを調製するための更なる方法を、本出願に記載する。

1つの実施形態では、前記抗体又はその抗原結合フラグメントは、1つ以上のスルフヒドリル基を有するように化学的に修飾され得る1つ以上の糖基(carbohydrate groups)を有することがある。次いで、本出願中上記に記載されるように、スルフヒドリル基の硫黄原子を介してコンジュゲートさせることによって、前記ADCを形成する。

更に別の実施形態では、前記抗体は、酸化されてアルデヒド(-CHO)基を提供し得る1つ以上の糖基(carbohydrate groups)を有することがある(例えば、Laguzza, et al., J. Med. Chem. 1989, 32(3), 548-55を参照のこと)。次いで、本出願中上記に記載されるように、対応するアルデヒドを介してコンジュゲートさせることによって、前記ADCを形成する。細胞毒素を結合(attachment)させる又は会合させるためのタンパク質を改変する他のプロトコールは、Coligan et al., Current Protocols in Protein Science, vol. 2, John Wiley & Sons (2002)に記載されている（本出願に参照により取り込まれる）。

抗体、免疫グロブリン又はそのフラグメント等の、細胞をターゲットにするタンパク質に、リンカー-薬物部分構造をコンジュゲートさせるための方法は、例えば、米国特許第5,208,020号; 米国特許第6,441,163号; WO2005037992; WO2005081711; 及びWO2006/034488に記載されている（これらの全ては、その全体が本出願に明確に参照により取り込まれる）。

或いは、前記抗体及び細胞毒性薬剤を含む融合タンパク質を、例えば、組換え技術又はペプチド合成によって、作製することがある。DNAの長さは、互いに隣接した、又は前記コンジュゲートの所望の特性を破壊しないリンカー・ペプチドをコードする領域によって分離された、前記コンジュゲートの2つの部分をコードするそれぞれの領域を、含むことがある。

医薬組成物
本出願に記載されるADCを、種々の投薬形態で患者(例えば、自己免疫疾患又はがんに罹患しているヒト患者)に投与することがある。例えば、本出願に記載されるADCを、免疫疾患又はがんに罹患している患者に、水溶液（例えば、1種以上の薬学的に許容可能な賦形剤を含む水溶液など）の形態で投与することがある。本出願に記載される組成物及び方法と共に使用するために好適な薬学的に許容される賦形剤としては、粘度調整剤が挙げられる。前記水溶液を、当該技術分野で公知の技術を使用して滅菌することがある。

本出願に記載されるようなADCを含む医薬製剤は、このようなADCを、1種以上の任意選択的な薬学的に許容可能な担体と混合することによって(Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980))、凍結乾燥製剤又は水溶液の形態で、調製する。薬学的に許容可能な担体は、一般に、使用する用量及び濃度で、レシピエントに対して無毒性であり、これには、限定されるものではないが、以下が挙げられる：リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸などのバッファー；アスコルビン酸及びメチオニンを含む酸化防止剤；保存剤（塩化オクタデシルジメチルベンジル・アンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル若しくはベンジル・アルコール；メチル若しくはプロピル・パラベン等のアルキル・パラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；3-ペンタノール；及びm-クレゾールなど）；低分子量(約10残基未満)ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、若しくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、若しくはリジンなどのアミノ酸；グルコース、マンノース、若しくはデキストリンなどの、単糖類、二糖類、及び他の糖類；EDTAなどのキレート剤；ショ糖、マンニトール、トレハロース、若しくはソルビトールなどの糖類；ナトリウムなどの塩形成性対イオン；金属錯体（例えば、Zn-タンパク質錯体）；並びに／又はポリエチレン・グリコール（PEG）などの非-イオン性界面活性剤。

投与
本出願に記載されるADCを、経口、経皮、皮下、鼻腔内、静脈内、筋肉内、眼内、又は非経口等の様々な経路によって投与することがある。任意の所与のケースにおいて、投与に最も適した経路は、投与する特定の抗体、又は抗原-結合フラグメント、患者、医薬製剤化方法、投与方法(例えば、投与時刻及び投与経路)、患者の年齢、体重、性別、治療する疾患の重症度、患者の食事、及び患者の排泄速度に依存する。

本出願に記載されるADC、抗体、又はその抗原-結合フラグメントの有効用量は、例えば、単回(例えば、ボーラス)投与、複数回投与、又は持続投与あたりで、体重に関して約0.001から約100 mg/kgの範囲にして、前記抗体、その抗原-結合フラグメントの最適血中濃度(例えば、約0.0001から約5000 μg/mLの血中濃度)になることがある。前記用量を、がん、自己免疫疾患に罹患している対象、又は造血幹細胞移植を受けることに備えてコンディショニング療法を受けている対象(例えば、ヒト)に、1日、1週間、又は1ヶ月あたり1回以上(例えば、2から10回)、投与することがある。造血幹細胞移植前におけるコンディショニング処置の場合では、前記ADC、抗体、又はその抗原結合フラグメントを、外因性の造血幹細胞の生着が最適に促進される時に、例えば、外因性の造血幹細胞移植片を投与する1時間から1週間(例えば、約1時間、約2時間、約3時間、約4時間、約5時間、約6時間、約7時間、約8時間、約9時間、約10時間、約11時間、約12時間、約13時間、約14時間、約15時間、約16時間、約17時間、約18時間、約19時間、約20時間、約21時間、約22時間、約23時間、約24時間、約2日、約3日、約4日、約5日、約6日、又は約7日)又はそれ以上前に、前記患者に投与することがある。

1つの実施形態では、ヒト患者に投与される、リンカーを介して細胞毒素にコンジュゲートした抗-CD45抗体の用量は、約0.1 mg/kgから約0.3 mg/kgである。

1つの実施形態では、ヒト患者に投与される、リンカーを介して細胞毒素にコンジュゲートした抗-CD45抗体の用量は、約0.15 mg/kgから約0.3 mg/kgである。

1つの実施形態では、ヒト患者に投与される、リンカーを介して細胞毒素にコンジュゲートした抗-CD45抗体の用量は、約0.15 mg/kgから約0.25 mg/kgである。

1つの実施形態では、ヒト患者に投与される、リンカーを介して細胞毒素にコンジュゲートした抗-CD45抗体の用量は、約0.2 mg/kgから約0.3 mg/kgである。

1つの実施形態では、ヒト患者に投与される、リンカーを介して細胞毒素にコンジュゲートした抗-CD45抗体の用量は、約0.25 mg/kgから約0.3 mg/kgである。

1つの実施形態では、ヒト患者に投与される、リンカーを介して細胞毒素にコンジュゲートした抗-CD45抗体の用量は、約0.1 mg/kgである。

1つの実施形態では、ヒト患者に投与される、リンカーを介して細胞毒素にコンジュゲートした抗-CD45抗体の用量は、約0.2 mg/kgである。

1つの実施形態では、ヒト患者に投与される、リンカーを介して細胞毒素にコンジュゲートした抗-CD45抗体の用量は、約0.3 mg/kgである。

1つの実施形態では、ヒト患者に投与される、本出願に記載される抗-CD45 ADCの用量は、約0.001 mg/kgから10 mg/kg, 約0.01 mg/kgから9.5 mg/kg, 約0.1 mg/kgから9 mg/kg, 約0.1 mg/kgから8.5 mg/kg, 約0.1 mg/kgから8 mg/kg, 約0.1 mg/kgから7.5 mg/kg, 約0.1 mg/kgから7 mg/kg, 約0.1 mg/kgから6.5 mg/kg, 約0.1 mg/kgから6 mg/kg, 約0.1 mg/kgから5.5 mg/kg, 約0.1 mg/kgから5 mg/kg, 約0.1 mg/kgから4.5 mg/kg, 約0.1 mg/kgから4 mg/kg, 約0.5 mg/kgから3.5 mg/kg, 約0.5 mg/kgから3 mg/kg, 約1 mg/kgから10 mg/kg, 約1 mg/kgから9 mg/kg, 約1 mg/kgから8 mg/kg, 約1 mg/kgから7 mg/kg, 約1 mg/kgから6 mg/kg, 約1 mg/kgから5 mg/kg, 約1 mg/kgから4 mg/kg,又は、約1 mg/kgから3 mg/kg、である。

1つの実施形態では、治療又はコンディショニングのために、ヒト患者に投与される、本出願に記載される抗-CD45 ADCは、24時間以下、22時間以下、20時間以下、18時間以下、16時間以下、14時間以下、13時間以下、12時間以下、11時間以下、10時間以下、9時間以下、8時間以下、7時間以下、6時間以下、又は5時間以下、の半減期を有する。1つの実施形態では、抗-HC ADCの半減期は、5時間から7時間；5時間から9時間；15時間から11時間；5時間から13時間；5時間から15時間；5時間から20時間；5時間から24時間；7時間から24時間；9時間から24時間；11時間から24時間；12時間から22時間；10時間から20時間；8時間から18時間；又は、14時間から24時間、である。

1つの実施形態では、本出願で開示する方法によって、コンディショニングのためにADCの投与を受ける患者において、肝毒性が最小限に抑えられる。例えば、ある特定の実施形態では、本出願で開示する方法によって、約24時間、約48時間、約72時間、又は約96時間を超えて、前記患者において、肝臓のマーカー・レベルが、既知の毒性レベル未満に留まるようになる。他の実施形態では、本出願で開示する方法によって、約24時間、約48時間、約72時間、又は約96時間を超えて、前記患者において、肝臓のマーカー・レベルが、基準範囲内に留まるようになる。ある特定の実施形態では、本出願で開示する方法によって、肝臓のマーカー・レベルの上昇が、約24時間、約48時間、約72時間、又は約96時間を超えて、基準範囲を超えて約1.5倍より大きく、基準範囲を超えて約3倍より大きく、基準範囲を超えて約5倍より大きく、又は基準範囲を超えて約10倍より大きく、はならない。毒性試験に使用することがある肝臓のマーカーの例としては、アラニン・アミノトランスアミナーゼ(ALT)、乳酸脱水素酵素(LDH)、及びアスパラギン酸アミノトランスアミナーゼ(AST)等が挙げられる。ある特定の実施形態では、本出願に記載されるようにADCを投与することによって(即ち、単回用量の代わりに2回用量で投与する)、肝臓のマーカー(例えば、AST、LDH、及び／又はALT)は一過的に増加する。いくつかの例では、毒性を示す肝臓のマーカーは高レベルに達することがあるが、ある特定の期間（例えば、約12時間、約18時間、約24時間、約36時間、約48時間、約72時間、約3日、約3.5日、約4日、約4.5日、約5日、約5.5日、約6日、約6.5日、約7日、約7.5日、又は1週間未満）の範囲内であり、前記肝臓のマーカー・レベルは、肝毒性に関連しない正常レベルに戻る。例えば、ヒト(平均的な成人男性)において、ALTの正常な非-毒性レベルは1リットル当たり7から55単位(U/L)であり；ASTの正常な非-毒性レベルは8から48U/Lである。ある特定の実施形態では、患者の血中AST、ALT、又はLDHレベルのうちの少なくとも1つは、前記患者に、第1の用量のADCを投与することと前記第1の用量を投与した14日後との間に、毒性レベルに達しない。例えば、前記患者に第1の用量を投与し、続いて、前記第1の用量を投与してから例えば5、10、又は14日以内に、第2の用量、第3の用量、第4の用量、又はそれより大きい数の用量を投与することがある。しかし、前記患者の血中AST、ALT、又はLDHレベルのうちの少なくとも1つは、前記患者に、第1の用量のADCを投与することと前記第1の用量を投与した14日後との間に、毒性レベルに達しない。

ある特定の実施形態では、前記患者の血中AST、ALT、又はLDHレベルのうちの少なくとも1つは、正常レベルを超えて上昇しない、正常レベルを1.5倍を超えて上昇しない、正常レベルを3倍を超えて上昇しない、正常レベルを5倍を超えて上昇しない、又は正常レベルを10倍を超えて上昇しない。

本出願に記載される場合、造血幹細胞移植療法を、1種以上の血液細胞型を生着させる又は再生着させるために、治療を必要とする対象に処方することがある。造血幹細胞は、一般に多能性を示し、従って、限定されるものではないが、顆粒球（例えば、前骨髄球、好中球，好酸球、好塩基球)、赤血球(例えば、網状赤血球、赤血球)、血小板(例えば、巨核芽球、血小板(platelet)産生巨核球、血小板(platelets))、単球(例えば、単球、マクロファージ)、樹状細胞、ミクログリア、破骨細胞、及びリンパ球(例えば、NK細胞、B細胞及びT細胞)等を含む、複数の様々な血液系列に分化することができる。造血幹細胞は、更に自己複製能を有し、従って、母細胞と同等の潜在能力を有する娘細胞を生じさせることができ、また、移植レシピエントに再導入され、造血幹細胞ニッチにホーミングし、生産的で持続的な造血を再確立する作用能、も特徴とする。

従って、in vivoで欠陥のある又は欠損した細胞集団を再構成するために、造血系列の1種以上の細胞型に欠陥のある又は欠損した患者に、造血幹細胞を投与することがあり、それによって、内因性の血液細胞集団における欠陥又は減少に関連する病態を治療することができる。従って、本出願に記載される組成物及び方法を、非-悪性異常ヘモグロビン症(例えば、鎌状赤血球貧血、サラセミア、ファンコニー貧血、再生不良性貧血、及びウィスコット‐アルドリッチ症候群からなる群より選択される異常ヘモグロビン症)を治療するために、使用することがある。更に、又はその代わりとして、本出願に記載される組成物及び方法を、先天性免疫不全症などの免疫不全を治療するために使用することがある。更に、又はその代わりとして、本出願に記載される組成物及び方法を、後天性免疫不全症(例えば、HIV及びAIDSからなる群より選択される後天性免疫不全症)を治療するために使用することがある。本出願に記載される組成物及び方法を、代謝性障害(例えば、グリコーゲン蓄積症、ムコ多糖症、ゴーシェ病、ハーラー病、スフィンゴ脂質症、及び異染性白質ジストロフィー、から選択される代謝性障害)を治療するために使用することがある。

更に、又はその代わりとして、本出願に記載される組成物及び方法を使用して、悪性腫瘍又は増殖性障害、例えば血液がん、骨髄増殖性疾患など、を治療することができる。がん治療の場合、本出願に記載される組成物及び方法は、造血幹細胞移植療法の前に内因性の造血幹細胞の集団を減少させるように患者に投与されてもよく、その場合、移植した細胞は、内因性の細胞を減少させる工程によって作り出されたニッチにホーミングし、生産的な造血を確立することができる。これによって、全身性の化学療法の間のようながん細胞を根絶させる間に減少した細胞の集団を、今度は再構成することができる。本出願に記載される組成物及び方法を用いて治療することができる例示的な血液がんとしては、限定されるものではないが、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫、及び非-ホジキン・リンパ腫(non-Hodgkin’s lymphoma)、並びに神経芽細胞腫を含む他のがん症状、が挙げられる。

本出願に記載される組成物及び方法で治療することができる更なる疾患としてはアデノシン・デアミナーゼ欠損症及び重度複合免疫不全症、高免疫グロブリンM症候群、チェディアック‐東病、遺伝性リンパ組織球症、大理石骨病、骨形成不全症、貯蔵疾患、サラセミア・メジャー、全身性硬化症、全身性エリテマトーデス(systemic lupus erythematosus)、多発性硬化症、並びに若年性関節リウマチが挙げられるが、これらに限定されるものではない。

本出願に記載される抗体、その抗原-結合フラグメント、リガンド、及びコンジュゲートを使用して、固形臓器移植トレランスを誘導することがある。例えば、本出願に記載される組成物及び方法を使用して、ターゲット組織から細胞の集団を減少させるか又は欠損させることがある(例えば、骨髄幹細胞ニッチから造血幹細胞を減少させる)。前記ターゲット組織から細胞をこのように減少させた後、臓器ドナーからの幹細胞又は前駆細胞の集団(例えば、臓器ドナーからの造血幹細胞)を移植レシピエントに投与することがある。そしてこのような幹細胞又は前駆細胞が生着した後では、一時的な又は安定な混合キメラとなり、これにより、更なる免疫抑制剤を必要とすることなく、長期の移植臓器トレランスが可能になる。例えば、本出願に記載される組成物及び方法を使用して、固形臓器移植レシピエントにおいて移植トレランスを誘導することがある(例えば、とりわけ、腎臓移植、肺移植、肝臓移植、及び心臓移植)。本出願に記載される組成物及び方法は、例えば、一時的な又は安定なドナーの生着が低割合でも移植された臓器の長期トレランスを充分に誘導するため、固形臓器移植トレランスを誘導することに関連して使用するのに充分に適している。

更に、本出願に記載される組成物及び方法を使用して、CD45+である細胞を特徴とするがん等のがんを直接的に治療することがある。例えば、本出願に記載される組成物及び方法を使用して、特に、CD45+白血病細胞を示す患者において、白血病を治療することがある。CD45+がん性細胞(例えば、白血病性細胞)を減少させることによって、本出願に記載される組成物及び方法を使用して、種々のがんを直接的に治療することがある。この様式で治療することがある例示的ながんとしては、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫、及び非-ホジキン・リンパ腫(non-Hodgkin’s lymphoma)のような血液がんが挙げられる。

更に、本出願に記載される組成物及び方法を使用して、自己免疫障害を治療することがある。例えば、抗体、その抗原-結合フラグメント、又はリガンドを、CD45+免疫細胞を傷害させるために、自己免疫障害に罹患しているヒト患者のような対象に投与することがある。前記CD45+免疫細胞は、自己抗原に特異的に結合するT-細胞レセプターを発現する、及び自己抗原に対して免疫反応を開始する、T-細胞のような自己反応性リンパ球であることがある。自己反応性CD45+細胞を減少させることによって、本出願に記載される組成物及び方法を使用して、以下に記載されるような自己免疫性の病態を治療することがある。更に、又はその代わりとして、本出願に記載される組成物及び方法を使用して、造血幹細胞移植療法の前に、内因性の造血幹細胞の集団を減少させることによって、自己免疫疾患を治療することがあり、その場合、移植した細胞は、内因性の細胞を減少させるステップによって作り出されたニッチにホーミングし、生産的な造血を確立することがある。これにより、自己免疫細胞を根絶させる間に減少した細胞の集団を、今度は再構成させることができる。

本出願に記載される組成物及び方法を用いて治療することができる自己免疫疾患としては、限定されるものではないが、乾癬、乾癬性関節炎、1型糖尿病(1型糖尿病)、関節リウマチ(RA)、ヒト全身性エリテマトーデス(SLE)、多発性硬化症(MS)、炎症性腸疾患(IBD)、リンパ球性大腸炎、急性散在性脳脊髄炎(ADEM)、アジソン病、汎発性脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質抗体症候群(APS)、再生不良性貧血、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性内耳疾患(AIED)、自己免疫性リンパ増殖症候群(ALPS)、自己免疫性卵巣炎、バロー病、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、心筋症、シャーガス病、慢性疲労免疫不全症候群(CFIDS)、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー、クローン病、瘢痕性類天疱瘡、セリアック・スプルー疱疹状皮膚炎、寒冷凝集素症、CREST症候群、デゴス病、円板状エリテマトーデス、自律神経障害、子宮内膜症、本態性混合型クリオグロブリン血症、線維筋痛症－線維筋炎、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギラン‐バレー症候群(GBS)、橋本甲状腺炎、化膿性汗腺炎、特発性及び／又は急性血小板減少性紫斑病、特発性肺線維症、IgAニューロパチー、間質性膀胱炎、若年性関節炎、川崎病、扁平苔癬、ライム病、メニエール病、混合性結合組織病(MCTD)、重症筋無力症、ニューロミオトニア、オプソクローヌス・ミオクローヌス症候群(OMS)、視神経炎、オルド甲状腺炎（Ord's thyroiditis）、尋常性天疱瘡、悪性貧血、多発軟骨炎、多発性筋炎及び皮膚筋炎、原発性胆汁性肝硬変、結節性多発動脈炎、多内分泌腺症候群、リウマチ性多発筋痛症、原発性無ガンマグロブリン血症(primary agammaglobulinemia)、レイノー現象、ライター症候群、リウマチ熱、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、スティッフ・パーソン症候群、高安動脈炎、側頭動脈炎(巨細胞性動脈炎としても知られる)、潰瘍性大腸炎、膠原線維性大腸炎、ぶどう膜炎、血管炎、白斑、外陰部痛（外陰部前庭炎）、及びヴェーゲナー肉芽腫症、が挙げられる。

実施例１：抗-CD45-ADC (104-PBD)は、in vitroで、T細胞を傷害する
抗-CD45-ADC（104-PBD）を、in vitro T細胞傷害アッセイで、T細胞傷害活性について、評価した。104-PBDは、モノクローナル抗体104の可変領域を含み、CD45.2アイソフォームに結合する市販の抗-CD45抗体である(BioLegend, San Diego, CA)、及びmAb Ly-5.2としても知られている。mAb 104の可変領域を、システイン残基を介して、テシリンにコンジュゲートするために、S239C及びN297A のFc置換を含むヒトIgG定常領域に、結合させる。PBMCを種々の条件下で培養し、マウスT細胞の生存及び増殖を促進させた。1ウェル当たり25,000 個のT細胞を播種し、そのウェルに、ADCを様々な濃度で添加し、その後、37℃及び5% CO₂のインキュベーターに入れた。3日間の培養の後、各サンプルを、フロー・サイトメトリーで解析した。フロー・サイトメトリー解析によって、各ウェルから回収された生きたCD3+ T細胞の数を数えることによって、T細胞の数(図２Ａ)を測定した。Ki-67+ T細胞の割合を、Ki-67を発現する生きたCD3+ T細胞の数を、そのサンプル内の生きたCD3+ T細胞の総数で割ることによって測定した。PDBにコンジュゲートした非-特異的なヒトIgG(「Iso PBD」)は、ネガティブ・コントロールとしての役割とした。

Ki-67+ T細胞は、104-PBDによる処理後、in vitroで蓄積しなかった。図２Ａに示すように、in vitroで、104-PBDの用量の増加とともに、T細胞死が観察された。更に、in vitroで、104-PBDの用量の増加とともに、分裂細胞の出現が減少した(図２Ｂ)。

実施例２：同種反応性T細胞活性化のマウス・モデルにおける、抗-CD45-ADC (104-PBD)のin vivoでの有効性
抗-CD45-ADC（104-PBD）による処置を、同種反応性のマウス・モデルにおいて、in vivoで評価した(研究デザインについては表４を参照のこと)。要約すると、650 cGyの全身照射法(Total Body Irradiation (TBI))によって、移植前コンディショニングを行った24時間後のBalb/c (CD45.2)宿主(マイナーHAミスマッチ)に、全B10.D2脾臓細胞を移入した。7日後、1 mg/kg若しくは3 mg/kgの抗-CD45-ADC (104-PBD; n=5匹のマウス／処置群／接種)、又は3 mg/kgのネガティブ(アイソタイプ)コントロール(「Iso-PBD」)、を投与した。マウスから末梢血及び脾臓を採取し、ADC投与5日後にフロー・サイトメトリーにより評価した。

図３Ａ及び３Ｂに示すように、アイソタイプ-PBDと比較して、抗-CD45-ADC (即ち、104-PBD)を投与すると、同種反応性T細胞活性化のマウス・モデルにおける、ドナーT細胞の数が実質的に減少した。更に、分裂細胞の割合は、抗-CD45-ADC (即ち、104-PBD)での処置後に、アイソタイプ PBDで処置した場合と比較して、減少した。これらの結果は、抗-CD45-ADC(即ち、104-PBD)に対するin vivoでの暴露によって、活性化した／分裂しているT細胞が選択的に傷害されること、を示す。これによって、in vivo及びin vitroで観察されるように、104-PBDは、自己反応性又は同種-拒絶T細胞を傷害することに、効果的であること、が確認された。

実施例３：ヒト化NSGマウス・モデルにおける、抗-CD45-PBD ADCのin vivoでの有効性
PBD細胞毒素(テセリン)にコンジュゲートした、ヒトCD45に特異的に結合することができる抗体を含む、抗-CD45抗体薬物コンジュゲート(ADC)を、本実施例において評価した(「CD45-PBD」)。前記ADCの抗-CD45 抗体は、Fc領域内に、アミノ酸置換L234A L235A D265C及びH435Aを含んでいた。

ヒト化NSGマウスにおいて、末梢血リンパ球、骨髄(BM) HSC、又は成熟したシングル・ポジティブ(single positive (SP))胸腺細胞、を減少させる作用能について、CD45-PBDを評価した(図４)。媒体(PBS)、PBDにコンジュゲートしたアイソタイプ・コントロール抗体(「Iso-PBD」)、又はCD45-PBDのいずれかの、示した単回用量を、hNSGマウスに投与した。0.3 mg/kg、1 mg/kg、3 mg/kg、又は6 mg/kg ADCの単回用量で、CD45-PBDをマウスに投与した。1 mg/kg、3 mg/kg又は6 mg/kg ADCの単回用量で、Iso-PBDをマウスに投与した。

0日目、7日目、及び14日目に末梢血を採取し、全ヒト血液細胞含有量(hβ₂M⁺)、骨髄細胞含有量(CD33⁺)、B細胞含有量(CD19⁺)、及びT細胞含有量(CD3⁺)を評価した。本末梢血試験による結果を図４に示す。これらの結果は、末梢血において、CD45-PBDの忍容用量で、ヒト細胞の用量依存的な減少が達成されたことを示す。3 mg/kg以上のCD45-PBD用量は、忍容性がなかった。

骨髄の減少を評価するために、処置後14日目にマウスから骨髄サンプルを採取し、ヒト前駆細胞/HSC含有量を評価した。本骨髄試験の結果を図５に示し、ヒト細胞の割合(「パーセンテージ」)又は大腿骨当たりの細胞の絶対数(「数」)として示す。これらの結果は、CD45-PBDによって、CD45-PBD処置後の骨髄において、ヒト前駆細胞及びHSCが、ターゲット化して、用量依存的に及び大きく減少することを示した。アイソタイプ-PBDは、高用量の3 mg/kg及び6 mg/kgで、骨髄において、有意なプラットホームの毒性を示した。

次に、ダブル・ポジティブ(double positive (DP))胸腺細胞及び成熟したシングル・ポジティブ(single positive (SP))胸腺細胞の、CD45-PBDによる減少を評価した。hNSGマウスを無作為化し、アイソタイプ-PBD、CD45-PBD又は媒体(PBS)の用量を増加させながら処置した。本胸腺細胞減少試験の結果を図６に示す。CD45-PBDで処置した動物において、ヒトCD45+細胞及びヒト・ダブル・ポジティブ(double positive (DP))胸腺細胞の用量依存的な減少が観察された。CD45-PBDの忍容用量では、成熟したCD4及びCD8 SP胸腺細胞にターゲット化して完全に減少することは観察されなかった。高用量のアイソタイプ-PBDでダブル・ポジティブ(double positive (DP))胸腺細胞の減少が観察されたことは、PBDに関する既知のプラットホームの毒性と一致した。

実施例４：ヒト化NSGマウス・モデルにおける、抗-CD45-IGN ADCのin vivo での有効性
IGN細胞毒素(DGN549)にコンジュゲートした、ヒトCD45に特異的に結合することができる抗体を含む、抗-CD45抗体薬物コンジュゲート(ADC)を、本実施例で評価した(「CD45-IGN」)。前記ADCの抗-CD45抗体は、Fc領域内に、アミノ酸置換L234A L235A D265C及びH435Aを含んでいた。

媒体(PBS)、IGNにコンジュゲートしたアイソタイプ・コントロール(「Iso-IGN」)、又はCD45-IGNのいずれかの、単回用量を、hNSGマウスに投与した。0.3 mg/kg、1 mg/kg、3 mg/kg、又は6 mg/kg ADCの単回用量で、CD45-IGNをマウスに投与した。1 mg/kg、3 mg/kg又は6 mg/kg ADCの単回用量で、Iso-IGNをマウスに投与した。

0日目、7日目、及び14日目に末梢血を採取し、全ヒト血液細胞含有量(hβ₂M⁺)、骨髄細胞含有量(CD33⁺)、B細胞含有量(CD19⁺)、及びT細胞含有量(CD3⁺)を評価した。本末梢血試験による結果を図７に示す。これらの結果は、末梢血において、CD45-IGNの単回用量の投与後に、ヒト細胞の用量依存的な減少が達成されたことを示す。CD45-IGNは、試験した全ての用量で、良好な忍容性を示した。

投与後14日目にマウスから骨髄サンプルを採取することによって、骨髄の減少を評価した。ヒト前駆細胞／HSC含有量について、サンプルを評価した。本骨髄試験の結果を図８に示し、ヒト細胞の割合(「パーセンテージ」)又は大腿骨当たりの細胞の絶対数(「数」)として示す。これらの結果は、CD45-IGNによって、CD45-IGN処置後の骨髄において、ヒト前駆細胞及びHSCが、ターゲット化して、用量依存的に及び大きく減少することを示した。アイソタイプ-IGNは、何れの試験した用量でも、有意な影響を示さなかった。

ダブル・ポジティブ(double positive (DP))胸腺細胞及び成熟したシングル・ポジティブ(single positive (SP))胸腺細胞の、CD45-IGNによる減少を評価した。hNSGマウスを無作為化し、アイソタイプ-IGN、CD45-IGN又は媒体コントロール (PBS)の用量を増加させながら処置した。本胸腺細胞減少試験の結果を図９に示す。CD45-IGNで処置した動物において、ヒトCD45+細胞及びヒト・ダブル・ポジティブ(double positive (DP))胸腺細胞の用量依存的な減少が観察された。加えて、CD45-IGNによるターゲティングは、マッチさせた用量でのアイソタイプ-IGNと比較して、CD4及びCD8 SP胸腺細胞をより大きく減少させた。このことは、CD45-IGN ADCがヒト胸腺細胞を確実に、及びターゲット化して減少させることを実証する。

その他の実施形態
本出願において言及される全ての刊行物、特許、及び特許出願は、あたかも各独立した刊行物又は特許出願が具体的かつ個別に示され、参照により取り込まれたかのように、同じ程度まで、本出願に参照により取り込まれる。

本発明を、その特定の実施形態に関連して説明してきたが、更なる改変をすることが可能であることを、並びに、本出願は、一般に、本発明の原理に従う本発明の任意の改変、使用、又は適応を、並びに、本発明が関係する技術内の既知の又は慣習的な実務内に入る本発明からの逸脱を、及び本出願に記載され、特許請求の範囲に従う本質的な特徴に適用され得る本発明からの逸脱を、含む本発明の任意の改変、使用、又は適応を、包含することが意図されていることを、理解されるであろう。

他の実施形態は、本願の特許請求の範囲の範囲内である。

Claims

造血幹細胞(HSC)移植を必要とするヒト患者において、CD45+細胞の集団を減少させるための医薬組成物、
ここで、前記医薬組成物は、CD45+細胞の集団が減少するように、有効量の抗体-薬物コンジュゲート(ADC)を含む、
ここで、前記ADCは、リンカーを介して細胞毒素にコンジュゲートした、抗-CD45抗体又はその抗原結合部分を含む、及び、
ここで、前記細胞毒素はピロロベンゾジアゼピン(PBD)、又はインドリノベンゾジアゼピンを含む。
造血幹細胞(HSC)移植を受けるために、ヒト患者をコンディショニングするための医薬組成物、
ここで、前記医薬組成物は、有効量の抗体-薬物コンジュゲート(ADC)を含む、
ここで、前記ADCは、リンカーを介して細胞毒素にコンジュゲートした、抗-CD45抗体又はその抗原結合部分を含む、及び、
ここで、前記細胞毒素はピロロベンゾジアゼピン(PBD) 、又はインドリノベンゾジアゼピンを含む
請求項１又は２に記載の医薬組成物、ここで、前記細胞毒素は、PBD二量体である。
請求項１から３の何れか一項に記載の医薬組成物、ここで、前記細胞毒素は、式(I)によって表されるPBD二量体である：

ここで、波線は、ADCのリンカーへの共有結合の位置を示す。
請求項１から４の何れか一項に記載の医薬組成物、ここで、前記リンカーは、1種以上のペプチド、オリゴ糖、-(CH₂)_p-, -(CH₂CH₂O)_q-, -(C=O)(CH₂)_r-, -(C=O)(CH₂CH₂O)_t-, -(NHCH₂CH₂)_u-,-PAB, Val-Cit-PAB, Val-Ala-PAB, Val-Lys(Ac)-PAB, Phe-Lys-PAB, Phe-Lys(Ac)-PAB, D-Val-Leu-Lys, Gly-Gly-Arg, Ala-Ala-Asn-PAB, 又は Ala-PAB、含む、ここで、p、q、r、t、及びuの各々は、1から12の整数であり、各場合毎に、独立して選択される。
請求項１から５の何れか一項に記載の医薬組成物、ここで、前記リンカーは、式(II)の構造を有する：

ここで、R₁は、CH₃(Ala) 又は(CH₂)₃NH(CO)NH₂(Cit)である。
請求項１から６の何れか一項に記載の医薬組成物、ここで、前記リンカーは、前記抗体にコンジュゲートする前に、反応性置換基Z'を含み、L-Z'として一緒になっていて、以下の構造を有する：

。
請求項７に記載の医薬組成物、ここで、R₁は、CH₃である。
請求項１から８の何れか一項に記載の医薬組成物、ここで、前記細胞毒素-リンカー・コンジュゲートは、前記抗体にコンジュゲートする前に、反応性置換基Z'を含み、Cy-L-Z'として一緒になっていて、テシリンであり、式(IV)の構造を有する：

。
請求項１から９の何れか一項に記載の医薬組成物、ここで、前記ADCは、式(V)の構造を有する：

ここで、Abは、抗-CD45抗体又はその抗原結合フラグメントである、及びSは、前記抗体又はその抗原結合フラグメントの、中に存在する又は中に導入した、硫黄原子である。
請求項１に記載の医薬組成物、ここで、前記細胞毒素は、インドリノベンゾジアゼピン二量体又はインドリノベンゾジアゼピン偽二量体である。
請求項１に記載の医薬組成物、ここで、前記細胞毒素は、式(VI)で表されるインドリノベンゾジアゼピン偽二量体である：

ここで、波線は、ADCのリンカーへの共有結合の位置を示す。
請求項１に記載の医薬組成物、ここで、前記リンカーは、ジペプチド、ジスルフィド、C1-C12アルキル、C=O、又はそれらの組み合わせ、

を含む。
請求項１に記載の医薬組成物、ここで、前記細胞毒素-リンカー・コンジュゲートは、前記抗体又はその抗原結合部分にコンジュゲートする前に、反応性置換基Z'を含み、Cy-L-Z'として一緒になっていて、式(VII)の構造を有する：

。
請求項１に記載の医薬組成物、ここで、前記抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、若しくはヒト抗体である；
ここで、前記抗体若しくはその抗原-結合部分は、モノクローナル抗体若しくはその抗原-結合部分、ポリクローナル抗体若しくはその抗原-結合部分、バイスペシフィック抗体若しくはその抗原-結合部分、二重可変免疫グロブリン・ドメイン(dual-variable immunoglobulin domain)、単鎖Fv分子(scFv)、ダイアボディ、トリアボディ、ナノボディ、抗体-様タンパク質スキャッフォルド、Fvフラグメント、Fabフラグメント、F(ab')₂分子、及びタンデムdi-scFv、からなる群から選択される；並びに／又は、
ここで、前記抗体は、IgG、IgA、IgM、IgD及びIgE、からなる群から選択されるアイソタイプを有する。
請求項１に記載の医薬組成物、ここで、前記抗体又はその抗原結合部分は、Fcドメインを含む、及びCD45+細胞によって内部に取り込まれる。
請求項１に記載の医薬組成物、ここで、前記抗体又はその抗原結合部分は、Fcドメインを含む、及びここで、前記抗体又はその抗原結合部分は、Fcドメイン内のシステイン残基を経由して、細胞毒素にコンジュゲートする。
請求項１７に記載の医薬組成物、ここで、前記システイン残基を、Fcドメイン内のアミノ酸置換によって導入する。
請求項１８に記載の医薬組成物、ここで、前記アミノ酸置換は、D265C (EU番号付け)、V205C (EU番号付け)、又はS239C (EU番号付け)である。
請求項１に記載の医薬組成物、ここで、前記患者は、造血幹細胞を含む移植片を受ける前に、前記医薬組成物の投与を受ける。
請求項1に記載の医薬組成物、ここで、前記患者は、血液疾患、代謝障害、がん、自己免疫疾患、幹細胞障害、又は重度複合免疫不全症(SCID)、を有する。
請求項２１に記載の医薬組成物、ここで、前記患者は、血液がんを有する。
請求項２１に記載の医薬組成物、ここで、前記血液がんは、白血病若しくはリンパ腫である、又は前記自己免疫疾患は、多発性硬化症若しくは強皮症である。
請求項１に記載の医薬組成物、ここで、内因性のCD45+ HSCの集団は、前記医薬組成物を投与した後に、前記ヒト患者において、減少する。
請求項１から２４の何れか一項に記載の医薬組成物、ここで、前記患者は、更に、造血幹細胞移植片の投与を受ける。
請求項２５に記載の医薬組成物、ここで、前記ADCが前記患者の血液から実質的にクリアランスされた後に、前記移植片を前記ヒト患者に投与する。
請求項２５又は２６に記載の医薬組成物、ここで、前記造血幹細胞移植片は、同種異系細胞を含む。