JP2022530089A - 抗ｃｄ４５抗体薬物結合体とその利用法 - Google Patents

抗ｃｄ４５抗体薬物結合体とその利用法 Download PDF

Info

Publication number
JP2022530089A
JP2022530089A JP2021563185A JP2021563185A JP2022530089A JP 2022530089 A JP2022530089 A JP 2022530089A JP 2021563185 A JP2021563185 A JP 2021563185A JP 2021563185 A JP2021563185 A JP 2021563185A JP 2022530089 A JP2022530089 A JP 2022530089A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
adc
cells
antigen
linker
cytotoxin
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2021563185A
Other languages
English (en)
Other versions
JPWO2020219959A5 (ja
Inventor
ボイタノ アンソニー
クック マイケル
オー ジラード ジェフリー
フェントン マクドナー シャーロット
パルチョウデュリー ラーフル
アール ピアース ブラッドリー
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Dianthus Therapeutics Inc
Original Assignee
Magenta Therapeutics Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Magenta Therapeutics Inc filed Critical Magenta Therapeutics Inc
Publication of JP2022530089A publication Critical patent/JP2022530089A/ja
Publication of JPWO2020219959A5 publication Critical patent/JPWO2020219959A5/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/289—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against CD45
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/55—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
    • A61K31/551—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole having two nitrogen atoms, e.g. dilazep
    • A61K31/5513—1,4-Benzodiazepines, e.g. diazepam or clozapine
    • A61K31/5517—1,4-Benzodiazepines, e.g. diazepam or clozapine condensed with five-membered rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. imidazobenzodiazepines, triazolam
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68035—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a pyrrolobenzodiazepine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6867—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from a cell of a blood cancer
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/524—CH2 domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/526—CH3 domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/71—Decreased effector function due to an Fc-modification

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本発明は、抗CD45抗体の薬物コンジュゲート(ADC)およびその使用方法を提供する。一実施の形態では、本発明は、本明細書に提供された抗CD45 ADCを投与することにより、対象からCD45+細胞の集団を枯渇させる方法を提供する。いくつかの実施形態において、ADCには、ベンゾジアゼピン部分を含む細胞毒素、例えば、ピロロベンゾジアゼピン(PBD)またはインドリノベンゾジアゼピン(IGN)部分が含まれる。

Description

関連出願
本出願は、2019年4月24日に出願された米国仮出願第62/838,280号を優先する。優先出願の全内容をここに参考として取り入れる。
配列エンスリスト
このインスタント出願には、ASCII形式で電子的に提出され、ここにその全体として参考文献に組み込まれた配列リストが含まれる。2020年4月23日に作成されたASCIIのコピーは、M103034_2100WO_0359_4_SL.txtとなり、サイズは99,264バイトになる。
分野
本発明は、抗CD45抗体またはその抗体薬物結合体の分野に関する。本発明は、更に、血液疾患、代謝障害、ガン、自己感染症等の様々な病状に苦しむ患者の治療に関し、特に、血液細胞又は自己細胞のいずれか上でCD45に結合することができる抗CD45(抗CD45)の又は薬品各種体(ADC)の投与により、上記抗CD45(抗CD45)の治療に関わる。
医学技術の進歩にもかかわらず、特に特定の血球の疾患、代謝障害、癌、および自己免疫状態などの造血系の病理を治療する要求が依然として存在する。造血幹細胞(HSC)は重大な治療可能性を有するが、診療所でのそれらの使用を妨げている限界は、宿主におけるHSC移植の確実な生着に関連する困難であった。特に、内因性HSC上の細胞表面抗原を標的とする抗体を含む造血幹細胞治療は、外因性HSC移植の生着を妨げる望ましくない免疫刺激機能およびエフェクター機能を誘発することができる。
ここに開示されているのは、抗CD45(抗原結合部)を構成する、抗CD45(ADCs)と、ベンゾジアゼピン(pyrrolobenzodiazepine (PBD)またはインドリノベンゾジアゼピン(IGN)を含む、ベンゾジアゼピン(サイトトキシン)である、である。CD45+細胞の枯渇に対するADCの用途も提供される。
従って、一側面において、本開示は、細胞毒素がピロロロンボンゾジアゼピン(PBD)を含むリンカー(L)を介して細胞毒素(Cy)に結合された、抗CD45(Ab)の抗抗原結合部を含む、抗薬物共役(ADC)を提供する。1つの実施形態において、細胞毒素はPBD量体であることができる。例えば、一実施の形態では、PBDを式(I)で表す。
[化１]
波線はADCのリンカーへの等価な付着点を示す。
いくつかの実施形態では、リンカー(L)は、ペプチド、オリゴ糖OBC=OOOAPAB、Val-Cit-PAB、Val-Ala-PAB、Val-Lys(Ac)-PAB、Phe-Lys-PAB、Phe-Lys(Ac)-PAB、D-Val-Leu-Lys、Gly-Gly-Arg、Ala-Ala-Asn-PAB、またはAla-PABのうちの1つ以上を含むことができ、p、q、r、t、およびuのそれぞれは、出現ごとに独立して選択される1～12の整数である。例示的な実施例において、リンカーは、式(II)の構造を有する。
[化２]
ここで、R1 はCH3 (Ala) または(CH2)3NH(CO)NH2 (Cit) である。
一実施の形態では、リンカーは、抗菌への接合前に、L-Z'としてまとめられた反応代用Z'を含む、構造を持つことができる。
[化３]
例示的な実施形態では、前述の構造のR1をCH3することができる。
1つの実施形態において、細胞毒素リンカーの活用は、抗菌への接合の前に、反応性代替物Z'を含む、Cy-L-Z'としてまとめられたものはテシリンであり、式(IV)の構造を有する。
[化４]
例示的な実施例において、ADCは式(V)の構造を構成することができる。
[化５]
ここで、Abは、抗CD45抗原結合フラグメントであり、Sは、それに含まれる、又はその抗原結合フラグメントに導入される硫黄原子を表す。
ここに提供される別の側面は、リンカー(L)を介して細胞毒素(Cy)に共役され、細胞毒素がインドリノベンゾジアゼピン(IGN)を含む、抗CD45抗原結合部(Ab)を含む、抗薬物共役(ADC)である。
いくつかの実施形態において、細胞毒素は、IGN量体または擬似物であることができる。例えば、いくつかの実施例において、細胞毒素は、式(VI)で表されるIGN擬似体となりうる。
[化６]
波線はADCのリンカーへの等価な付着点を示す。
上述のアスペクトの幾つかの実施例において、リンカーはジペプチド、ジスルフィド、C1-C12アルキル、C=O、又はそれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態において、リンカーは、を構成する。
[化７]
いくつかの実施形態において、細胞毒素-リンカー結合体は、抗体またはその抗原結合部分への結合前に、Cy-L-Z'として一緒になって、反応性置換基Z'を含む、式(VII)の構造を有する。
[化８]
上記側面のいくつかの実施例において、ADCは、1-10の麻薬/抗原薬比(DAR)を有することができる。例えば、一実施の形態では、ADCは、1、2、3、4、5、6、7、8、9または10の麻薬/抗原薬比を有することができる。他の実施形態では、ADCはDARを1-8とすることができる。例えば、一実施の形態において、ADCは、1、2、3、4、5、6、7、または8のDARを有することができる。他の実施形態では、ADCはDARを1-4とすることができる。例えば、一実施の形態では、ADCは1、2、3または4のDARを有することができる。いくつかの実施形態において、ADCはDARが1である。他の実施形態において、ADCはDARが2である。他の実施態様において、ADCはDARが3である。他の実施形態において、ADCはDAR4を有する。他の実施形態において、ADCはDARが5である。他の実施態様において、ADCはDARが6である。他の実施態様において、ADCはDARが7である。他の実施形態において、ADCはDAR8を有する。
上述のアスペクトの幾つかの実施例において、抗CD45抗原は、キメリック抗原、又はそれらの抗原結合部とすることができる。他の実施形態において、抗体は、ヒト化抗体、またはその抗原結合部分であり得る。他の実施形態では、当該技術は、完全な人間の抗原、又はそれらの抗原結合部とすることができる。
例示的な実施形態では、抗CD45抗体またはその抗原結合部分は、モノクローナル抗体またはその抗原結合部分、ポリクローナル抗体またはその抗原結合部分、二重特異性抗体またはその抗原結合部分、二重可変免疫グロブリンドメイン、一本鎖Fv分子(scFv)、ダイアボディ、トリアボディ、ナノボディ、抗体様タンパク質足場、Fvフラグメント、Fabフラグメント、F(ab')2分子、またはタンデムジ-scFvであり得る。IgG、IgA、IgM、IgD、およびIgEを含む、あらゆるアイソタイプであることができる。一実施の形態では、当該技術はIgGである。例えば、この抗菌剤は、いくつかの実施例において、ヒトIgG1、IgG2、IgG3、又はIgG4同型Fcドメインを含むことができる。
一実施の形態では、抗原結合部、すなわち、Fcドメインを含んでおり、また、抗原結合部は、Fcドメイン内のシステイン残基を経てPBDに結合される。Fc領域のシステイン残基は、天然Fc配列に存在することができる。他の実施形態では、システイン残基は、Fc領域内のアミノ酸置換によって導入することができる。たとえば、Fc ドメインには、置換D265C および/または V205C (EU 番号) を含めることができる。
一実施の形態では、ADCは、特にヒトCD45 ROに拘束力を持つことができる、抗CD45抗原結合部を含むことができる。
別の側面において、本開示は、本記載のADCと、薬事的に薬学的に許容可能な担体又は補助剤を含む医薬品組成を提供する。
別の側面において、本開示は、本項に記載されたADC又は薬品組成の有効量を患者に管理することを含む、ヒト患者におけるCD45+細胞の集団を減少させる方法を提供する。
このアスペクトの1つの実施形態では、CD45+細胞は、血液細胞である。いくつかの態様において、造血幹細胞は、CD45ROを発現し得る。
他の実施形態では、CD45+電池は、防除電池である。幾つかの実施例では、細胞はCD137、CD2、及び/又はCD5を表現する。
幾つかの実施形態において、この方法は、患者に血液細胞からなる移植を更に施すことができる。
1つの側面において、本開示は、患者からCD45+細胞の人口を減少させるのに十分な量のADC又は本項に記載された医薬組成物を、既に実施している、血液細胞から成る移植を、患者に施す方法を提供する。このアスペクトの1つの実施形態では、CD45+細胞は、血液細胞である。いくつかの態様において、造血幹細胞は、CD45ROを発現し得る。
別の側面において、本開示は、患者からの抗菌細胞の集団を減少させるのに十分な量のADC又は本項に記載された医薬組成物を、既に実施している、血液細胞から成る移植を、患者に施すことを含む方法を提供する。幾つかの実施例では、細胞はCD137、CD2、及び/又はCD5を表現する。
上述の局面に関して、患者は、いくつかの実施形態において、血液疾患、代謝障害、癌、自己免疫疾患、または重症複合免疫不全症(SCID)を有する患者である。
いくつかの実施形態において、移植は同種異性である。例えば、移植は同種の血液細胞移植であることができる。他の実施形態では、移植は自作移植であることができる。
たとえば、白血病や白血病などの血液がんにかかる。
他の実施態様では、患者は多発性硬化または硬化症のような自発性の病気を持つことができる。別の側面において、本開示は、血液細胞(HSC)移植を必要とするヒトの患者におけるCD45+細胞の集団を減少させる方法を提供する。この方法は、CD45+細胞の集団が枯渇するように、ヒト患者に有効量の抗毒素がピロロロンボゾディアゼピン(「PBD」)を含むリンカーを介してサイトトキシンに結合された抗CD45-抗原結合部を含む。
別の側面において、本開示は、血液細胞(HSC)移植を受け取るための人の患者をコンディショニングする方法を提供する。この方法は、人の患者に、ピロロロンボゾジアゼピン(PBD)を含む、リンカーを介して細胞毒素に結合された抗CD45(抗CD45)又は抗原結合部を含む、人の患者に、抗CDCを管理する方法を提供する。
上記側面のいくつかの実施例において、細胞毒素はPBD量体である。例示的な実施例において、PBDは、式(I)で表される。
[化９]
波線はADCのリンカーへの等価な付着点を示す。
前述の態様のいくつかの実施形態において、リンカーは、ペプチド、オリゴ糖, -(CH2)p-, -(CH2 CH2 O)q -, -(C=O)(CH2)r-, -(C=O)(CH2 CH2 O)t -, -(NHCH2 CH2)u-, -PAB、Val-Cit-PAB、Val-Ala-PAB、Val-Lys(Ac)-PAB、Phe-Lys(Ac)-PAB、Phe-Lys(Ac)-PAB、D-Val-Leu-Lys、Gly-Gly-Arg、Ala-Ala-Asn-PAB、またはAla-PABのうちの1つまたは複数を含むことができ、ここで、p、q、r、t、およびuはそれぞれ独立して、1～12から選択される。例示的な実施例において、リンカーは、式(II)の構造を有する。
[化１０]
ここで、R1 はCH3 (Ala) または(CH2)3NH(CO)NH2 (Cit) である。
一実施の形態では、リンカーは、抗菌への接合前に、L-Z'としてまとめられた反応代用Z'を含む、構造を有する。
[化１１]
一実施形態では、上述の構造のR1はCH3である。
別の実施形態では、細胞毒素リンカー活用物は、抗菌への接合前に、反応性代替物Z'を含む、Cy-L-Z'としてまとめられたテシリンであり、式(IV)の構造を有する。
[化１２]
上記側面の別の実施形態では、ADCは式(V)の構造を持っている。
[化１３]
ここで、Abは、抗CD45抗原結合フラグメントであり、Sは、それに含まれる、又はその抗原結合フラグメントに導入される硫黄原子を表す。
ここに提供される別の側面は、血液細胞(HSC)の移植を必要とするヒトの患者におけるCD45+細胞の集団を減少させる方法であり、この方法は、CD45+細胞の集団が枯渇するように、ヒト患者に有効な量を施すことであり、これは、ADCがリンカーを介して細胞毒素に結合された抗CD45-CD45 bindingまたは抗原結合部を含み、細胞毒素がインドリノベンゾジアゼピン(IGN)を含む。
ここに提供される別の側面は、血液細胞(HSC)移植を受けるための人患者のコンディショニングの方法であり、ADCがリンカーを介して細胞毒素に結合された抗CD45-抗原結合部を含み、細胞毒素がインドリノベンゾジアゼピン(IGN)を含む、人の患者に抗CD45-薬物共役(ADC)を施す方法である。
上記側面のいくつかの実施例において、細胞毒素はIGN量体または擬似物である。いくつかの実施形態において、細胞毒素は、式(VI)で表されるIGN擬似体である。
[化１４]
波線はADCのリンカーへの等価な付着点を示す。
いくつかの実施形態において、リンカーはジペプチド、ジスルフィド、C1-C12アルキル、C=O、又はそれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態において、リンカーは、を構成する。
[化１５]
いくつかの実施形態において、細胞毒素-リンカー結合体は、抗体またはその抗原結合部分への結合前に、Cy-L-Z'として一緒になって、反応性置換基Z'を含む、式(VII)の構造を有する。
[化１６]
上述したように、ADCは1-10、すなわち、1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10の麻薬/抗原薬比(DAR)を有することができる。
幾つかの実施例において、それらの抗原又は抗原結合部は、キメリック・ビーズ、ヒト化・ビーズ、或いはヒト・ビーズ、或いはそれらの抗原結合部であることができる。いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合部分は、モノクローナル抗体またはその抗原結合部分、ポリクローナル抗体またはその抗原結合部分、二重特異性抗体またはその抗原結合部分、二重可変免疫グロブリンドメイン、一本鎖Fv分子(scFv)、ダイアボディ、トリアボディ、ナノボディ、抗体様タンパク質足場、Fvフラグメント、Fabフラグメント、F(ab')2分子、およびタンデムジ-scFvからなる群から選択される。
幾つかの実施例において、その抗原結合部は、Fc領域を構成する。いくつかの実施例では、それらの抗原結合部がCD45+電池によって内在化される。いくつかの実施形態では、当該抗菌は以下のアイソタイプの1つを持つことができる。IgG、IgA、IgM、IgD、又はIgE。たとえば、この抗菌は、ヒトIgG1、IgG2、IgG3、又はIgG4アイソタイプFcドメインを持つことができる。当該技術が、Fcドメイン、抗原結合部を含むいくつかの実施形態では、Fcドメイン内のシステイン残留物を経由して、抗原結合部をPBDにコンジュゲートすることができる。システイン残基は、Fc領域で自然に起こるかもしれないし、システイン残基はFc領域でのアミノ酸置換によって導入されるかもしれない。たとえば、Fc ドメインには D265C および/または V205C の置換 (EU 番号) を含めることができる。
いくつかの実施形態では、抗原結合部、すなわち、ヒトCD45 ROに特に拘束力を持つことができる。このような実施形態では、ADCはCD45 RO +電池によって内部化することができる。
上記側面の幾つかの実施例において、この方法は、血液細胞から成る移植を受け取る前に、患者にADCを管理することを含む。例えば、この方法は、患者が血液細胞からなる移植を受け取る約3日前に、患者にADCを管理することを含むことができる。
いくつかの実施形態において、患者は、血液疾患、代謝障害、癌、自己免疫疾患、幹細胞障害、または重症複合免疫不全症(SCID)を有する。いくつかの実施形態において、患者は、血学的ガン又は自己感染症のような幹細胞障害を有する。実施の形態において、患者は、例えば、白血病又はリンゴマのような血液学的ガンを有する。別の実施の形態では、患者は、多発性硬化または硬化症のような自治性の病気を有する。
上述のアスペクトのいくつかの実施例において、内生CD45+ HSCの集団は、ADCの管理後、ヒト患者において枯渇している。
上述のアスペクトの幾つかの実施例において、本方法は、患者に血液細胞移植を実施することを更に含むことができる。いくつかの実施形態において、移植は、ADCがヒト患者の血から実質的に除去された後、ヒト患者に施される。1つの実施形態において、血液細胞移植は異性細胞を含む。
図1は、リンカー(公式(IV);すなわちテシリン)に結合した典型的なPBDの化学的構造を、反CD45抗菌と結合する前に、反応性代用Z'を含めて、Cy-L-Z'としてまとめたものである。 図2A及び2Bは、ネガティブコントロール(すなわち、「伊勢PBD」)と比較して、防CD45-PBD ADC (すなわち、「104 PBD」)を含むin vitro細胞殺処分アッセイの結果をグラフィックに描写する。結果は、ADC濃度(x軸)の機能として、T細胞の総数(図2A)、またはKI-67+細胞の割合(図2B) (y軸)を示した。 図3A及び図3Bは、抗CD45-ADC (すなわち、"104 PBD")で処理された、非遺伝的T細胞活性化のマウスモデルにおける生体内消耗アッセイの結果をグラフィックに描写している。図3Aは、CD45.2+(ドナー)細胞にゲートされた、防CD45-ADC処理マウスから採取されたスプリーンと血液を評価するフローサイトメトリーアッセイの結果をグラフィックに描写したものである。図3Bは、制御(すなわち、「Iso PBD」)で処理されたマウスと比較して、抗CD45-ADC処理マウスの脾臓または血液中の細胞数(合計CD45.2+細胞、CD45.2+ T細胞、またはKi-67+細胞)または親細胞の割合(% T細胞(合計ドナー細胞)、%Ki-67+(合計T細胞))の定量を図示する。 図4は、周辺血中のヒト細胞の消耗を評価した抗CD45-PBD(CD45-PBD)を用いて治療した人工NSGネズミの生体内消耗アッセイの結果をグラフィックに描写したものである。hNSGマウスを車両(PBS)、Isotype control-PBD ("Iso-PBD")、またはCD45-PBDのいずれかの単一量を与えた。所定の時点で周期血液を採取し、ヒト全血液細胞含有量(h2 M+)、骨髄細胞含有量(CD33+)、細胞含有量(CD19+)、およびT細胞含有量(CD3+)について評価した。結果は、ベースラインに標準化した枯渇率として示す。 図5は、抗CD45-ADC (CD45-PBD)で処理されたヒト化NSGマウスにおけるin vivo枯渇アッセイの結果を図示する。このアッセイでは、骨髄におけるヒト細胞の枯渇が評価された。hNSGマウスを車両(PBS)、Isotype‐PBDまたはCD45‐PBDのいずれかの単一量を与えた。BM試料は、処理後14日目に採取し、ヒトの前駆細胞/HSC含有量について評価した。結果は、ヒト細胞の割合と絶対数/フィームで表される。 図6は、ヒトCD45+電池、ダブルポジティブ(DP)チモサイト、成熟したCD4+単ポジティブ(SP)チモサイト、または成熟したCD8+単ポジティブ(SP)チモサイトの減少を治療後14日間評価した、抗CD45-ADC (CD45-PBD)で処理したヒト化NSGマウスの生体内消耗分析の結果を図式的に描写した。hNSGマウスを車両(PBS)、Isotype‐PBDまたはCD45‐PBDのいずれかの単一量を与えた。 図7は、周辺血中のヒト細胞の消耗を評価した抗CD45-IGN(CD45-IGN)で治療した人工NSGマウスの生体内消耗アッセイの結果を図式的に描写したものである。hNSGマウスは車両(PBS)、Isotype control-IGN ("Iso-IGN")、またはCD45-IGNのいずれかの単量を指示した。所定の時点で周期血液を採取し、ヒト全血液細胞含有量(h2 M+)、骨髄細胞含有量(CD33+)、細胞含有量(CD19+)、およびT細胞含有量(CD3+)について評価した。結果は、ベースラインに標準化した枯渇率として示す。 図8は、CD45-IGNで処理されたヒト化NSGマウスにおけるインビボ枯渇アッセイの結果を図示し、このアッセイでは、骨髄におけるヒト細胞の枯渇が評価された。hNSGマウスは、車両(PBS)、Isotype‐IGNまたはCD45‐IGNのいずれかの指示された単量を与えられた。BM試料は、処理後14日目に採取し、ヒトの前駆細胞/HSC含有量について評価した。結果は、ヒト細胞の割合と絶対数/フィームで表される。 図9は、CD45-IGNで処理された人為化NSGマウスの生体内消耗アッセイの結果をグラフィックに描写し、ヒトCD45+電池、ダブルポジティブ(DP)チモサイト、成熟したCD4+単ポジティブ(SP)チモサイト、または成熟したCD8+単ポジティブ(SP)チモサイトの消耗を評価した。hNSGマウスは、車両(PBS)、Isotype‐IGNまたはCD45‐IGNのいずれかの指示された単量を与えられた。
以下のセクションでは、抗物質、その抗原結合フラグメント、あるいは、ADC(ADC)について説明する。これらは、移植片対宿主病(GVHD)に苦しんでいるか、あるいはその危険にさらされている患者に施すことができ、また、患者にこのような治療法を施す方法を提供する。
定義
特に記載のない限り、本書で使用する以下の用語およびフレーズは、以下の意味を持つことを意図している。
本明細書で使用される「約」という用語は、記載される値よりも10%上または下の値を指し、例えば、「約5 nM」という用語は、4.5nM～5.5 nMの範囲を示す。
ここで用いられるように、「抗菌」という用語は、特定の抗原に特別に結合するか、あるいは、特定の抗原に対して反応性である、イムグロブリン分子を意味する。抗体としては、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体(例えば、二重特異性抗体)、遺伝子操作された抗体、および他に修飾された形態の抗体が挙げられ、これらに限定されないが、例えば、脱免疫抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、多重特異性抗体(例えば、二重特異性抗体)、ヘテロコンジュゲート抗体(例えば、ビトリおよびクアッド特異性抗体、ジアボディ、トリアボディ、およびテトラボディ)、および抗体フラグメント(すなわち、抗体の抗原結合断片)(例えば、Fab'、F(ab')2、Fab、Fv、rlgG、およびscFv断片が挙げられ、これらが所望の抗原結合活性を示す限り)が挙げられる。特に示されていない限り、「モノクローナル(monoclonal)」という用語は、「モノクローナル(mAb)」という用語は、目的タンパク質に特に結合することができる、無傷の分子および(例えば、FabおよびF(ab)2断片を含む)の両方を含むことを意図している。本稿で使用するように、Fab及びF(ab')2フラグメントは、無傷の抗菌のFcフラグメントを欠く抗菌フラグメントを指す。これらの断片の実施例は本稿に記載されている。
本開示の抗生物質は、通常、分離されているか、組換えされている。ここでいう「分離」とは、「分離」とは、ポリペプティド、例えば、それが表明された細胞又は細胞培養特定され、分離され、又は回収された、又は/又は回収された、例えば、「分離」とは、通常、1つ以上の精製工程によって分離された、ポリペプティドを指す。従って、「分離された」とは、異なる抗原性を有する他の抗物質を実質的にフリーとなる、「分離された」ことを意味する。たとえば、CD45に特別に結合する単離された抗生物質には、CD45以外の抗原を特に結合する抗物質は実質的に含まれていない。
一般的に、抗原結合領域を含む重鎖とL鎖からなる。各重鎖は重鎖可変領域(本出願ではHCVRまたはVHと略)と重鎖定常領域で構成される。鎖定常領域は、CH1、CH2およびCH3の3つのドメインから構成されている。各軽鎖は軽鎖可変領域(本出願ではLCVRまたはVLと略)と軽鎖定常領域で構成される。軽鎖定常領域は一つの領域であるCLから構成されている。VHとVL領域はさらに、補完性決定領域(CDR)と呼ばれる超変動の領域と、より保存されたフレームワーク領域(FR)と呼ばれる領域に分けられることができる。VHとVLは3つのCDRと4つのFRで構成され、アミノ端からカーボキシル末までFR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4の順に並べられている。重鎖とL鎖のいろいろな領域には、抗原と相互作用する結合領域がある。抗体の定常領域は、免疫系の種々の細胞(例えば、エフェクター細胞)および古典的補体系の第一成分(Clq)を含む宿主組織または因子への免疫グロブリンの結合を媒介することができる。
ここで使用する「抗原結合フラグメント」という用語は、標的抗原に特別に結合する能力を保持する1つ以上の抗原のフラグメントを意味する。抗原結合機能は、例えば、Fab、F(ab')2、scFv、ディアボディ、アボディ、アフィボディ、ナノボディ、アプタマー、またはドメインであることができる。「抗原結合フラグメント」という用語に含まれる結合フラグメントの例としては、(i)VL、VH、CLおよびCH1ドメインからなる一価フラグメント、(ii)F(ab')2フラグメント、ヒンジ領域でジスルフィドブリッジ部でつながれた2つのFabフラグメント、(iii)VHおよびCH1ドメインからなるFvフラグメント、(iv)単一のVLおよびVHドメインからなるFvフラグメント VHドメインとVLドメインを含むdAbフラグメント、(v)VHドメインとVLドメインを含むdAbフラグメント、(ward et al., Nature 341:544-546, 1989を参照)、(vii)VHドメインまたはVLドメインからなるdAb、(viii)孤立相補性決定領域(CDR)、(ix)2つ以上(例えば、2つ、3つ、4つ、5つ、6つ)の組み合わせ(任意に合成リンカーで結合できる)さらに、Fvフラグメント、VLおよびVHの2つの領域は、別個の遺伝子によってコード化されるが、それらは、それらが一価分子(scFvとして知られる)を形成するVLおよびVH領域の一対を形成する単一のタンパク質チェーンとして作ることを可能にするリンカーによって、再結合法を用いて結合することができる(scFv);例えば、鳥ら、Science 242:423-426、1988およびHustonら、Procを参照。Natl.アカド。科学アメリカ85:5879-5883, 1988).これらの抗体フラグメントは、当業者に公知の従来の技術を使用して得ることができ、断片は、無傷の抗体と同じ様式で有用性についてスクリーニングすることができる。アンチゲン抗原結合フラグメントは、組換えDNA技術、無傷のイムノ免疫グロブリンのエンザイマティックまたは化学的な割断、または、ある場合には、当業者に知られている化学ペプチド合成手順によって作り出すことができる。
ここで用いられる、「抗CD45」又は「CD45に結合する抗CD45」という用語は、CD45を標的とする際に診断及び/又は治療剤として有用であるような十分な親和性をもってCD45に特に結合することができる、重鎖又は軽鎖可変領域、重鎖又は軽鎖不変領域、重鎖又は軽鎖不変領域、フレームワーク領域又はその一部のような、少なくとも1つの補完性決定領域(CDR)を含むタンパク質又はペプチドを含む分子を意味するが、これらに限定されない。抗CD45抗菌剤には、また、10番目のフィボネクチンタイプIII領域(10 Fn3)のような、BC、DE、およびFG構造の類似のループを含み、また、抗菌CDRへの溶媒へのアクセスしやすさのような、抗菌のようなタンパク質スキャフォールドも含まれる。10 Fn3領域の第三次構造は、IgG重鎖の可変領域のそれに類似しており、当業者は、例えば、10 Fn3のBC、DE、およびFGループの残渣を、抗CD45モノクローン検出のCDRH-1、CDRH-2またはCDRH-3領域の残渣と置き換えることによって、抗CD45モノクローン検出足場に接ぎ木することができる。幾つかの実施例では、抗CD45イソフォームCD45、又はその抗原結合部が、ヒトCD45イソフォームCD45ROを結合することができる。
本明細書で使用される「二重特異性抗体」という用語は、例えば、同一または種々の抗原上にあり得る少なくとも2つの種々の抗原または2つの異なるエピトープに結合することができるモノクローナル、しばしばヒト、非免疫化、ヒト化、またはキメラ抗体を指す。たとえば、結合特異性の1つは、たとえばCD45のような血球細胞表面抗原に上記られることができ、もう1つは、細胞成長を強力にするシグナル変換経路に関与するレセプターまたはレセプターサブユニットのような、異なる血球細胞表面抗原または他の細胞表面タンパク質を特別に結合することができる。いくつかの実施形態において、結合特殊性は、同じ標的抗原上のユニークで重複していないエピトープ(すなわち、バイパラトピック・ビーズ・ビー・アフィンチ)に向けることができる。
ここで用いられるように、「相補性決定領域」(CDR)とは、液体の軽鎖および重鎖の両方に見いだされる超可変領域を指す。様々なドメインのより高度に保存された部分は、フレームワーク領域(FRs)と呼ばれる。超可変領域を描写するアミノ酸位置は、当該技術における既知の文脈及び種々の定義に応じて変化し得る。可変ドメイン内のいくつかの位置は、異なる一連の基準の下では超可変ドメイン外であるとみなされる一方で、これらの位置は1組の基準の下で超可変ドメイン内であるとみなすことができる、というハイブリッド超可変位置とみなすことができる。これらの位置のうちの1つ以上は、拡大超可変領域にも見いだすことができる。ここに記載されている抗生物質は、これらのハイブリッド・ハイパーバリアブル・ポジションの変化を含んでいる可能性がある。固有の重鎖とL鎖の可変ドメインは、それぞれ4つの骨格領域を含んでおり、主に3つのCDRで結ばれたベータシート構造を採用しており、それらは接続ループを形成し、場合によってはベータシート構造の一部を形成している。各チェーンのCDRは、FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4の骨格領域によって密接に結びついており、また、他の抗生物質チェーンからのCDRと共に、抗物質の標的結合サイトの形成に寄与する(Kabatら、参照、国立健康研究所、Bethesda、MD、1987)。特定の実施形態では、別途記載のない限り、カバトらの(IMGT及びチョチアに限定されないが、いずれかの抗菌番号づけスキームを使用することができるが)、イムグロブリンアミノ酸残基物の番号づけが、イムグロブリンアミノ酸残基物番号づけシステムに従って行われる。
ここで使用する「Fc」、「Fc領域」、「Fcドメイン」、「IgG Fcドメイン」という用語は、IgG分子のパペーン消化によって得られる結晶化可能なフラグメントに相関するイグウリン、例えばIgG分子の一部を指す。Fc領域は、ジスルフィド結合によって結合されたIgG分子の2つの重鎖のC-端子半分を構成する。それは抗原結合作用はないが、炭水化物潤沢を含み、FcRnレセプター(以下参照)を含む補完的およびFcレセプターの結合サイトを含む。例えば、Fcドメインには、第2の定常ドメインCH2(例えば、ヒトIgG1のEU位置231-340の残余)と第3の定常ドメインCH3(例えば、ヒトIgG1のEU位置341-447の残余)が含まれる。ここで用いられるように、Fc領域には「下ヒンジ領域」(例、EU位置におけるヒトIgG1の233-239の残余)が含まれる。
Fcは、この領域、すなわち、この領域を、抗菌、抗菌断片、あるいはFc融合性たんぱく質という文脈において、単独で言及することができる。ポリモルフィスは、EUの位置270、272、312、315、356、358を含むが、限定されないFcドメインのいくつかの位置で観察されており、したがって、本技術で知られているインスタント適用に提示される配列と既知の配列とのわずかな差が存在することができる。従って、「野生型IgG Fcドメイン」または「WT IgG Fcドメイン」は、自然に発生するすべてのIgG Fc領域(すなわち、すべてのアレル)を意味する。ヒトIgG1、IgG2、IgG3、IgG4の重鎖の配列は、多数の順序データベース(例えば、アクセッション番号P01857(IGHG1_HUMAN)、P01859(IGHG2_HUMAN)、P01860(IGHG3_HUMAN)、P01861(IGHG1_HUMAN)で見られる。
ここで用いられる用語「改良Fc領域」又は「改良Fc領域」は、1つ以上のアミノ酸の置換、削除、挿入又は改良を含むIgG Fcドメインを意味する。特定の態様において、変形IgG Fcドメインは、1以上のアミノ酸代替物を含まない野生型Fcドメインと比較して、FcガンマRおよび/またはC1qに対する1つ以上のアミノ酸代替物またはアブレーション結合親和性の減少またはアブレーション結合親和性をもたらす1つ以上のアミノ酸代替物を含む。さらに、Fc結合相互作用は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害(ADCC)および補体依存性細胞傷害(CDC)を含むが、これらに限定されない、様々なエフェクター機能および下流シグナル伝達イベントに必須である。従って、特定の態様において、変形したFcドメイン(例えば、接合性たんぱく質又は共役)を含む抗菌は、別の側面では同じアミノ酸配列を有するが、1以上のアミノ酸置換、削除、挿入又は変形、例えば、Fc領域内の対応する位置に天然に起こるアミノ酸残基を含む不変のFc領域を含まないようなものではない、少なくとも1つ以上のFc配位子(例えば、FcガンマRs)に対して変化した結合親和性を示すことができる。
様々なFc領域は、それらを構成するアミノ酸の改変によって定義される。Fc領域に関してここで議論したすべてのアミノ酸置換物について、数え方は常にカバトのようにEU指数に従う。したがって、例えば、D265Cは、EU位置265におけるアスパルチン酸(D)のFc変形例であり、親Fc領域に対してシスタイン(C)で置き換えられる。同様に、例えば、D265C/L234A/L235Aは、EU位置265(D～C)、234(L～A)、および、親のFcドメインに対する235(L～A)で代用した変形例Fcを定義する。変種は、EUアミノ酸の変位位置における最終アミノ酸組成によっても指定することができる。たとえば、L234A/L235Aミュータントは「LA」と呼ばれることができる。さらに別の例として、E233P.L234V.L235A.delG236(236の削除)ミュータントは「EPLVLAdelG」と呼ばれることができる。また別の例として、I253A.H310A.H435Aミュータントは「IHH」と呼ばれることができる。置換が提供される順序は、任意であることに注意されたい。
ここで用いられる用語「Fcガンマレセプター」または「FcガンマR」は、IgGの抗タンパク質領域を結合し、FcガンマR遺伝子によってエンコードされる、種族のどれかを指す。ヒトにおいて、この家庭は、アイソフォームFc-γRI(CD64)、Fcγリブ、およびFcγRIcを含むFcγRII(CD32)、アイソフォームFcγRIIa(アロタイプH131およびR131を含む)、FcγRIIb(FcγRIIb-1およびFcγRIIb-2を含む)、ならびにアイソフォームFcγRIIIa (アロタイプV158およびF158を含む)、およびFcγRIIIb (アロタイプFcγRIIIb-NA1およびFcγRIIIb-NA2を含む)を含むFcγRIII (CD16)、ならびにあらゆる未検出のヒトFcγRまたはFcγRアイソフォームまたはアロタイプを含むが、これらに限定されない。FcガンマRは、ヒト、マウス、ラット、ウサギおよびサルを含む、しかしそれに限らないあらゆる生き物から得られる。マウスFcガンマRには、FcガンマRI (CD64)、FcガンマRII (CD32)、FcガンマRII (CD16)、FcガンマRII-2(CD16-2)に限らず、未発見のマウスFcガンマRsまたはFcガンマR同型または同類型が含まれる。
ここで使用される「エフェクター関数」という用語は、FcレセプターとFcドメインの相互作用から結果生化学的事象を意味する。エフェクター関数には、ADCC、ADCP、CDCが含まれるが、これらに限定されない。ここで使用される「エフェクターセル」とは、1つ以上のFcレセプターを表現し、1つ以上のエフェクター関数を仲介する、イフェクターセルを意味する。エフェクター細胞は、単球、マクロファージ、好中球、樹状細胞、好酸球、マスト細胞、血小板、B細胞、大型顆粒リンパ球、ランゲルハンス細胞、ナチュラルキラー(NK)細胞、およびガンマデルタT細胞を含むが、これらに限定されず、ヒト、マウス、ラット、ウサギ、およびサルを含むがこれらに限定されない任意の生物由来であり得る。
「サイレント」、「サイレンシング」、または「サイレンシング」という用語は、本明細書中で使用される場合、未修飾Fc領域を含む同一抗体のFcγRへの結合(例えば、BLIにより測定される、未修飾Fc領域を含む同一抗体のFcγRへの結合と比較して、少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも98%、少なくとも99%、または100%のFcγRへの結合の減少)に対して、Fcγ受容体(FcγR)への結合が減少した、本明細書中に記載される修飾Fc領域を有する抗体を指す。いくつかの態様において、Fcサイレンシング抗体は、FcγRへの検出可能な結合を有さない。改良されたFc領域を有する抗菌のFcimrRへの結合は、例えば、平衡法(例えば、ELISA;KinExA, Rathanaswamiら)に限定されないが周知の様々な技術を用いて決定することができる。分析生化学Vol.373:52-60, 2008; 2008年;または、ラジオイムノアッセイ(RIA)、または、表面プラズモン共鳴アッセイまたは他のキネティクスベースのアッセイのメカニズム(例:BIACORETM分析またはOctetTM分析(forteBIO))、および他の方法(間接結合アッセイ、競争結合アッセイ、蛍光共鳴エネルギー移動(FRET)、ゲル電気泳動法およびクロマトグラフィー(例:ゲルろ過))。これらおよび他の方法は、検討中の成分の一つまたはそれ以上のラベルを利用することができ、また/または、発色性、蛍光、発光、または同位体標識を含むが、それに限らない多様な検出方法を使用することができる。結合する親和性と運動学についての詳細な記述は、Paul, W. E., ed., Fundamental Immunology, 4th Ed., Lippincott-Raven, Philadelphia (1999)に見られる。競合結合アッセイの一例は、増大する量の非標識抗原の存在下での標識抗原と目的の抗体とのインキュベーション、および標識抗原に結合した抗体の検出を含むラジオイムノアッセイである。特定の抗原に対する興味のある標本の親和性と結合オフレートは、スキャッチャードプロット分析によりデータから決定することができる。また、ラジオイムノアッセイを用いて、第二の抗菌剤との競合を判断することもできる。この場合、この抗原は、標識されていない第2のビーンズの増加量の存在の中で、標識化された複合物に接合された興味のあるビーンズと共にインキュベートされる。
ここで用いられるように、「非改良Fc領域を含む同一抗菌」という用語は、復唱されたアミノ酸の置換(例えば、D265C、H435A、L234Aおよび/またはL235A)が欠けているが、それ以外の場合には、それが比較されているFc改良抗菌と同じアミノ酸配列を有する。
ここで使用する「条件」および「条件づけ」という語は、患者が血液細胞を含む移植を受け取るために準備される過程を指す。このような手順は、血液細胞移植の接種を促進する(例えば、コンディショニング手順の後に患者から分離された血液サンプル内の生存可能な血液細胞の量の持続的増加から推測されるように、患者は、CD45(例えば、GNK+ CD45)のような、血液細胞によって表現される抗原を結合することが可能な、ADCの患者への投与により、血液細胞移植治療のためにコンディショニングされることがある。この方法によれば、患者は、CD45(例えば、GNK+ CD45)のような、血液細胞によって表現される抗原に結合することが可能な、抗原結合フラグメント、を行うことができる。ここに記載されているように、抗原薬はサイトトキシンと結合し、ドラッグ・抗体レンジゲートを形成することができるであろう。血液細胞移植治療を必要とする患者に上記の抗原の1つ以上を結合することができるADC、自己、抗原、抗原結合断片、又は薬物-ビーズの共役物を投与することは、例えば、内生血液細胞を選択的に枯渇させることによって、血液細胞移植の接木を促進することができ、それによって外生血液細胞移植によって埋め尽くされる空白を作り出すことができる。
用語「枯渇」は、CD45発現細胞に対する抗CD45抗体またはADCの効果との関連において、CD45発現細胞の数の減少または除去を意味する。
ここで同じように使用される「治療効果量」または「治療効果量」という句は、治療薬剤、例えば、CD45 ADCの量または量を指し、患者に1回または複数回の施術で所望の治療を提供する。治療薬の「治療効果量」は、病気状態、年齢、性別、および体重などの要因により、個々の所望の反応を引き出すことができるように変化することができる。「治療効果量」という語は、被検者(例えば、患者)を「治療する」ことに効果がある量を含む。治療量が示されれば、本発明の組成物の正確な量は、年齢、体重、大きさ、感染・移住の程度、患者の状態(被検者)の個人差を考慮して、医師が決めることができる。
ここで用いられるように、「半減期」とは、身体中の薬物のプラズマ濃度が、被検者、例えば、人間の被検者において1/2ないし50%減少するのに要する時間をいう。この50%の血清濃度低下は、薬物循環量を反映している。
本明細書中で使用される場合、用語「コンジュゲート」は、抗体またはその抗原結合フラグメントなどの1つの分子の反応性官能基と、本明細書中に記載される細胞毒素などの別の分子の適切に反応性の官能基との化学結合によって形成される化合物を指す。共役には、互いに結合した2つの分子間のリンカーが含まれる。接合体の形成に使用できるリンカーの実施例には、ペプチドを含むリンカー、実施例えば、上記に起きている、あるいはD-アミノ酸のような非自然に起きているアミノ酸を含むリンカーが含まれる。リンカーは、本技術に記載され、かつ本技術に知られている様々な戦略を用いて調製することができる。その中の反応性成分に応じて、リンカーは、例えば、加水分解、加水分解、酸性条件下の加水分解、基礎条件下の加水分解、酸化、ジスルフィド還元、核友性切断、または有機メタリック切断(例えば、Leriche et al., Bioorg. Med. Chem., 20:571-582, 2012を参照)によって切断することができる。
ここで用いられるように、「カップリング反応」という用語は、それぞれの置換体に結合した分子断片を(例えば、同価に)結合する化学的水を形成するように、互いに反応するのに適した2つ以上の置換体が反応する化学反応を意味する。カップリング反応には、細胞毒素である抗原結合フラグメントした反応性代替物、例えば、本技術で知られているか、本技術で説明されている細胞毒素のようなものが、適切な反応性代替物、又はその断片である抗原結合断片、又は本技術で知られている又は本技術で説明されているCD45を結合する特定の抗CD45のような抗原結合断片と反応するものが含まれる。適当に反応性の代替物の例としては、求核剤/電友対(例えば、チオール/ハロアルキンペア、アミン/カルボニールペア、またはチオール/α、特に、非飽和カルボニールペア)、ジエン/ジエンフィルペア(例えば、アジド/アルキンペア、その他)などが含まれる。カップリング反応は、限定されるものではないが、チオールアルキル化、ヒドロキシルアルキル化、アミンアルキル化、アミン縮合、アミド化、エステル化、ジスルフィド形成、環状付加(例えば、[4+2] Diels-Alder環状付加、[3+2] Huisgen環状付加、とりわけ)、求核芳香族置換、求電子芳香族置換、および本明細書に記載される他の反応様式を含む。
ここで用いられる「CRU(競合的再パリング単位)」とは、in-vivo移植後に検出される長期接木細胞の測定単位を指す。
ここで用いられるように、「供与者」という用語は、受取人に電池またはその子孫を投与する前に、1つ以上の電池から分離される人または動物を意味する。1つ以上の細胞は、例えば、数学的幹細胞の集団である。
本明細書中で使用される「ダイアボディ」という語は、2つのポリペプチド鎖を含む二価抗体を意味し、ここで、各々のポリペプチド鎖は、同じペプチド鎖上のVHおよびVL領域の分子内会合を可能にするには短すぎるリンカー(例えば、5つのアミノ酸からなるリンカー)によって連結されたVHおよびVL領域を含む。この配置によって、各ドメインは別のポリペプチド鎖上の相補的なドメインと対になり、ホモジメリックな構造を形成することになる。従って、「トリアボディ」という用語は、ペプチド・チェーン3つを含む三価の抗性物質を意味し、それぞれは、同じペプチド・チェーン内でVHおよびVL・ドメインの分子内結合を可能にする非常に短いリンカー(例えば、1-2アミノ酸からなるリンカー)に結合した1つのVH領域および1つのVL領域を含む。その固有の構造に折り畳むために、このように構成されたペプチドは、通常、隣接するペプチド鎖のVHおよびVL領域を空間的に互いに近接するように位置付けるように三重化される(例えば、Holligerら、Proc. Natal. Acad. Sci. USA 90:6444-48, 1993を参照)。
ここで用いられるように、「デュアル・バリアブル・ドメイン・イムグロブリン」(「DVD-Ig」)は、テトラバレント、デュアル・ターゲティング・シングル・エージェントを創造するためにリンカーを介して2つのモノクローナル・アビディングの変数領域のターゲット結合変数を結合している(例えば、Gu et al., Meth. Enzymol., 502:25-41, 2012を参照)。
本明細書で使用される場合、「内因性」という語は、ヒトのような特定の生物に自然に見出される、分子、細胞、組織、または臓器(例えば、造血幹細胞、または造血系列の細胞、例えば、巨核球、血小板、血小板、赤血球、マスト細胞、筋芽細胞、好塩基球、好中球、好酸球、ミクログリア細胞、顆粒球、単球、破骨細胞、抗原提示細胞、マクロファージ、樹状細胞、ナチュラルキラー細胞、Tリンパ球、またはBリンパ球)のような物質を記載する。
ここで使用されるように、「生着電位」という用語は、そのような細胞が自然に循環しているか、移植によって提供されているかを問わず、組織を再現するための、血液細胞および前駆細胞の能力を指すために使用される。この用語は、細胞の組織への帰巣や、興味のある組織内での細胞の定着といった、接木を取り巻く、またはそれに至るすべての出来事を包含する。生着効率または生着率は、当業者に知られているような、医学的に受け入れられるパラメータを用いて評価または定量化することができ、また、例えば、競合的な再パルピング単位(CRU)の評価を含むことができ、幹細胞が帰宅し、植え付けられ、生着された組織にマーカーを組み込むまたは表現することができ、あるいは病気の進行、血液系および前駆細胞の生存、または受領者の生存を通した被検者の進展を評価することができる。生着は、移植後の時期に末梢血中の白血球血球数を測定することによっても判定できる。生着はまた、骨髄吸引試料中のドナー細胞による骨髄細胞の回収を測定することによって評価することができる。
本明細書で使用される場合、「外因性」という語は、ヒトのような特定の生物に自然に見出されない、分子、細胞、組織、または臓器(例えば、巨核球、血小板、血小板、赤血球、マスト細胞、筋芽細胞、好塩基球、好中球、好酸球、ミクログリア細胞、顆粒球、単球、破骨細胞、抗原提示細胞、マクロファージ、樹状細胞、ナチュラルキラー細胞、Tリンパ球、またはBリンパ球のような造血幹細胞または造血系列の細胞)のような物質を記載する。被援助国の生物、例えば被援助国の生体に外来性の物質は、その物質が由来する供与国の被検者のような供与国の有機体に自然に存在することがある。たとえば、同種異系細胞移植には、受け手には外生的であるが、受け手には固有の細胞が含まれている。外生物質とは、外部から生命体に、あるいはそこから抽出された培養物質に供給される物質をいう。
用語「全長抗体」および「インタクト抗体」は、本明細書中で、その実質的にインタクトな形態の抗体を指すために交換可能に使用され、本明細書中で定義される抗体フラグメントではない。このように、IgG bidについては、無傷のAdfは可変領域、一定領域、Fc領域からなるそれぞれ2つの重鎖と、可変領域と一定領域からなるそれぞれ2つのL鎖からなる。より具体的には、無傷のIgGは、それぞれ軽鎖可変領域(VL)と軽鎖不変領域(CL)からなる2つの軽鎖からなり、それぞれ重鎖可変領域(VH)と3つの重鎖不変領域(CH1, CH2, CH3)からなる2つの重鎖からなる。CH2とCH3は重鎖のFc領域を表す。
ここで用いられるように、「骨格領域」又は「FW領域」は、抗原結合フラグメントのCDRに隣接するアミノ酸残留物を含む。FW領域残渣は、例えば、ヒト抗体、ヒト化抗体、モノクローナル抗体、抗体断片、Fab断片、一本鎖抗体断片、scFv断片、抗体ドメイン、および二重特異性抗体中に存在し得る。
ここで用いられるように、"immune cell"という用語は、血液学的起点を持ち、かつ、その反応において役割を果たす細胞を含むが、これに限定されない。免疫細胞には、T細胞およびナチュラルキラー(NK)細胞が含まれるが、これらに限定されない。ナチュラルキラー細胞はこの当業者でよく知られている。一実施の形態では、ナチュラルキラー細胞は、NK-92セルのようなセルラインを含む。NK細胞株のさらなる例としては、NKG、YT、NK-YS、HANK-1、YTS細胞、およびNKL細胞が挙げられる。免疫細胞には、同種または自己のものがある。一実施の形態では、免除細胞はTセルである。
本明細書中で使用される、用語「造血幹細胞」(「HSC」)は、自己複製し、顆粒球(例えば、前骨髄球、好中球、好酸球、好塩基球)、赤血球(例えば、網状赤血球、赤血球)、血小板(例えば、巨核芽球、血小板産生巨核球、血小板)、単球(例えば、単球、マクロファージ)、樹状細胞、ミクログリア、破骨細胞、およびリンパ球(例えば、NK細胞、B細胞およびT細胞)を含むがこれらに限定されない多様な系統を含む成熟血球に分化する能力を有する未成熟血球を指す。このような電池はCD34+電池を含むことができる。CD34+細胞は、CD34セル表面マーカーを表す未成熟細胞です。ヒトでは、CD34+電池は、上述の幹電池特性を有する電池の亜集団を含むと考えられているが、マウスでは、HSCはCD34-である。さらに、HSCは、長期再増殖HSC(LT‐HSC)および短期再増殖HSC(ST‐HSC)も指す。LT‐HSCsとST‐HSCsは、機能電位と細胞表面マーカー式に基づいて区別される。例えば、ヒトHSC は、CD34+、CD38-、CD45RA-、CD90+、CD49F+、lin(CD2、CD3、CD4、CD7、CD8、CD10、CD11B、CD19、CD20、CD56、CD235A を含む成熟した直線マーカーについては負の値です)。マウスにおいて、骨髄LT-HSCは、CD34-、SCA-1+、C-kit+、CD135-、Slamfl/CD150+、CD48-、およびlin(Ter119、CD11b、Gr1、CD3、CD4、CD8、B220、IL7raを含む成熟系統マーカーに対して陰性)であるのに対し、ST-HSCは、CD34+、SCA-1+、C-kit+、CD135-、Slamfl/CD150+、およびlin(Ter119、CD11b、Gr1、CD3、CD4、CD8、B220、IL7raを含む成熟系統加えて、ST‐HSCはホメオスタシス条件下でLT‐HSCよりも静止期が少なく、より増殖性である。
しかしながら、LT-HSCはより大きな自己複製能を有する(すなわち、それらは成人期を通して生存し、連続した受取人を通して連続的に移植時間)のに対し、ST-HSCは限定された自己複製を有する(すなわち、それらは限られた期間のみ生存し、連続した移植能を有しない)。これらのHSCのどれも、ここに記載された方法で使用することができる。ST-HSCは、非常に拡散性があり、したがって、より迅速に差別化された子孫を生み出すことができるので、特に有用である。
本明細書中で使用される「造血幹細胞機能電位」という用語は、1)顆粒球(例えば、前骨髄球、好酸球、好塩基球)、赤血球(例えば、網状赤血球)、血小板(例えば、巨核球、血小板)、単球(例えば、単球、マクロファージ)、樹状細胞、ミクログリア、破骨細胞、およびリンパ球(例えば、NK細胞、B細胞およびT細胞)を含むが、これらに限定されない複数の異なる血液系統に分化する能力を指す、2)自己複製(母細胞として同等の電位を有する造血幹細胞の能力を指す、さらに、この能力は、枯渇することなく個々の寿命にわたって繰り返し生じ得ること、および3)移植レシピエントに再導入される造血幹細胞またはその後代の能力 それらは造血幹細胞ニッチに入り、生産的で持続的な造血を再確立する。
ここで用いられる「人間の抗菌」という用語は、ヒトジェルムラインのイグロブリン配列に由来する様々で一定の領域を有する抗性質を含むことを意図している。ヒトの抗菌は、ヒトジェルムラインのイグロブリン配列によってエンコードされていないアミノ酸残基(例えば、無作為またはサイト特有の遺伝子組換え中に導入されたか、あるいは生体内での遺伝子組換え中または体交代中に導入された)を含み得る。しかしながら、ここで用いられる「人間の抗菌」という用語は、マウスのような他の哺乳動物のゲルムラインに由来するCDR配列をヒトのフレームワーク配列に接ぎ木したものを含むことを意図していない。ヒトの抗菌は、ヒトの細胞(たとえば組み換え式)の中で、あるいは、機能的に再配置されたヒトの遺伝子(たとえば重鎖やL鎖)を表すことができる、ヒト以外の動物や原核あるいは真核細胞によって作り出すことができる。ヒトの抗たんぱく質が単一の鎖である場合、それは天然のヒトの抗たんぱく質には見られないリンカーペプチドを含むことができる。例えば、Fvは、重鎖の可変領域とL鎖の可変領域とを結びつける2～8のグリシンまたは他のアミノ酸残基のようなリンカーペプチドを含むことができる。このようなリンカーペプチドは、人間の起源であると考えられている。ヒト抗毒素は、ヒトのイムグロブリン配列から派生した抗菌ライブラリーを用いたファージディスプレイ法を含む、当業者に知られている種々の方法によって作ることができる。ヒト抗体はまた、機能的内因性免疫グロブリンを発現することができないが、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現することができるトランスジェニックマウスを使用して作製され得る(例えば、PCT公開番号WO 1998/24893; WO 1992/01047; WO 1996/34096; WO 1996/33735;米国特許第5,413,923号;第5,625,126号;第5,633,425号;第5,569,825号;第5,661,016号;第5,545,806号;第5,814,318号;第5,885,793号;第5,916,771号;および第5,939,598号を参照のこと)。
「人間化された」のは、ヒト以外のイムノグロブリンに由来する最小限シークエンスを含む「最小限シークエンス」を意味するため、ヒト以外の(例えば、ムリン)の「人化された」形態の抗生物質は、ヒト以外の抗たんより由来する最小限シークエンスを含む、である。FW領域のすべて、あるいはほぼすべてが、ヒト・イムグロブリン配列のものであることもある。ヒト化された抗原はまた、少なくとも、通常、ヒト・イムグロブリンのコンセンサス配列の、イムグロブリン定常領域(Fc)を含むことができる。当技術分野では、例えば、Riechmann他、Nature 332:323-7、1988、米国特許番号5,530,101、5,585,089、5,693,761、5,693,762、および6,180,370では、人工化の方法が知られており、説明されている。ここで使用される「キメリック」とは、ネズミまたはマウスのような非ヒトのイムグロブリンから派生した可変配列を有し、また、通常、ヒトのイムグロブリンテンプレートから選択されるヒトのイムグロブリン定常領域を有する「キメリック」という用語を指す。キメラ抗体の作製方法は当当業者で公知である。例えば、Morrison, 1985, Science 229(4719): 1202-7; Oi et al., 1986, BioTechniques 4:214-221; Gillies et al., 1985, J. Immunolを参照。方法125:191-202;米国特許。No.5,807,715; 4,816,567; 4,816,567; 4,816,397。
ここで使用される「非予防接種」または「非予防接種」という用語は、当該野生型構築物(または親の抗菌)を、ヒトにおいて非予防接種であるか、あるいはより弱い予防接種であるようにすることによる、元の野生型構築物(または親の抗菌)の改変に関するものである。非ヒト起源のフレームワーク領域および/またはCDRを含む。本稿で使用するように、「非予防接種型」という用語は、被検者の耐性を作動させないように、突然接種によって非予防接種されたものを意味する(例えば、Nanusら、J. Urology 170:S84-S89, 2003; WO98/52976; WO00/34317)。
本明細書で使用される場合、「薬物対抗体比」または「DAR」は、抗体にコンジュゲートされた細胞毒素、例えばアマトキシンの平均数を指す。一般的にADCのDARは約1～約8であるが、それよりも高い負荷を与えることは、抗菌のリンク部位の数によっても可能である。したがって、ある実施例において、ここに記載される反CD45 ADCは、1、2、3、4、5、6、7、または8のDARを有する。
ここで用いられるように、血液細胞移植を「必要としている」患者には、1種類以上の血球型に欠陥または欠陥がある患者、並びにここに記載されている幹細胞障害、自己感染症、ガン、または他の病理を有する患者が含まれる。造血幹細胞は、一般に、1)多分化能を示し、従って、次のように複数の異なる血液系統に分化することができる:顆粒球(例えば、前骨髄球、好中球、好酸球、好塩基球)、赤血球(例えば、網状赤血球、赤血球)、血小板(例えば、巨核芽球、血小板産生巨核球、血小板)、単球(例えば、単球、マクロファージ)、樹状細胞、ミクログリア、破骨細胞、およびリンパ球(例えば、NK細胞、B細胞およびT細胞)、2)自己複製能を有し、したがって、母細胞として同等の可能性を有する娘細胞を生じ得る、3)移植レシピエントに再導入され、その際、それらが造血幹細胞ニッチに帰着し、再生産的かつ持続的な造血を確立する能力。このようにして、造血幹細胞を、インビボでの細胞の欠損または欠損集団を再構成するために、造血系列の1つ以上の細胞型において欠損または欠損している患者に投与することができる。例えば、患者はがんに苦しんでいるかもしれないし、その欠陥は、選択的または非特定的に、がん細胞集団を枯渇させる安価な母性剤または他の薬品の投与によって引き起こされるかもしれない。さらに、またはその代替として、患者は、鎌状赤血球貧血、サラセミア、ファンコニ貧血、再生不良性貧血、およびヴィスコット-オールドリッチ症候群などの異常ヘモグロビン症(例えば、非悪性異常ヘモグロビン症)を患っていてもよい。この被検者は、アデノシンデアミナーゼ重度複合免疫不全症(ADA SCID)、HIV/AIDS、異染性白質ジストロフィー、ダイアモンド-ブラックファン貧血、およびシュワックスマン-ダイアモンド症候群に罹患しているものであり得る。被検者は、遺伝性の血液疾患(鎌状赤血球貧血など)または自己免疫疾患を有するか、またはその影響を受けている可能性がある。さらに、またはその代替として、被検者は、悪性腫瘍、例えば、神経芽細胞腫または血液癌を有するか、またはその影響を上記。例えば、被検者は、白血病、リンパ腫、または骨髄腫を有することがある。いくつかの実施形態において、被検者は、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫、または非ホジキンリンパ腫を有する。いくつかの実施形態において、被検者は骨髄異形症候群を有する。幾つかの実施例において、被検者は、硬皮症、多発性硬化症、陶器性大腸炎、クローン病、1型糖尿病、またはここに記載されている他の自己感染病理のような自己感染性の病気を有する。いくつかの実施形態において、被検者はキメラ抗原レセプターT細胞(CART)療法を必要としている。いくつかの実施形態において、被検者は代謝貯蔵障害を有するか、あるいはそうでなければ影響を受ける。被験体は、糖原病、ムコ多糖類症、ゴーシェ病、スフィンゴ脂質症、異染性白質ジストロフィー、または本明細書に開示される治療および治療から有益であり得る任意の他の疾患または障害(限定されるわけではないが、重症複合免疫不全症、ウィスコット-オールドリッチ症候群、高免疫グロブリンM (IgM)症候群、チェディアック-東病、遺伝性リンパ組織球症、骨形成不全症、貯蔵疾患、サラセミア・メジャー、鎌状赤血球症、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、若年性関節リウマチ、またはそれらの疾患、またはASH教育ブック、1:319-338(2000)。ここでは、その開示は、造血幹細胞移植治療の実施によって治療され得る病態に関するものであり、さらに、造血幹細胞移植を「必要としている」患者は、以下のいずれかに罹患しているか、または罹患していない それにもかかわらず、上述の病態は、巨核球、血小板、血小板、赤血球、肥満細胞、筋好酸球、好中球、好酸球、ミクログリア、顆粒球、単球、破骨細胞、抗原提示細胞、マクロファージ、樹状細胞、ナチュラルキラー細胞、Tリンパ球、およびBリンパ球のような、造血系列内の1つ以上の内因性細胞型のレベルの低下(例えば、それ以外は健康な被験者のレベルと比較して)を示す。当業者の1つは、他の健全な被検者に関して、前記の細胞タイプの1つ以上の量が、フローサイトメトリー及び蛍光活性化セルソーティング(FACS)手法のように、既知の他の方法の中で、フローサイトメトリー及び蛍光活性化セルソーティング(FACS)手法により、削減されているかどうかを、容易に判断することができる。
ここで用いられるように、「モノクローン」という用語は、単一クローン(真核、原核、又はファージクローンを含む。)に由来するものであって、それが生成される方法を意味しない。本開示で有用なモノクロナル・アシドは、ハイブリドマ、組み換え及びファージ・ディスプレイ技術を含む、又はそれらの組み合わせを含む、本技術で知られている広範な技術を用いて調製することができる。特に示されていない限り、「モノクローン・イノベーション」(mAb)という用語は、目的タンパク質に具体的に結合することができる、無傷の分子及び(例えば、Fab及びF(ab')2の断片を含む)の両方を含むことを意図している。本項で使用するように、Fab及びF(ab')2断片は、無傷の抗菌のFc断片を欠いている抗菌断片を指す。一実施の形態では、抗菌断片は、Fc領域を含む。
ここで使用される「中性の」とは、リガンドに対するレセプターの結合や、基質とのエンザイムの相互作用を含む、特定の又は特定の標的(例えばCD45)の活動を著しく中和、遮断、抑制、抑制、阻害、阻害、縮小、干渉することができない、又は妨害することができない、抗原結合フラグメントをいう。
ここで用いられるように、「受領者」という用語は、移植を受ける患者、例えば、血液細胞の集団を含む移植を意味する。受取人に投与される移植細胞は、例えば、自家細胞、同系細胞、または同種異系細胞であり得る。
本明細書で使用される場合、「試料」という語は、被検者から採取された試料(例えば、血液、血液成分(例えば、血清または血漿)、尿、唾液、羊水、脳脊髄液、組織(例えば、胎盤または皮膚)、膵液、絨毛サンプル、および細胞)を指す。
ここで用いられるように、「scFv」という用語は、重鎖の可変ドメインと抗原からのL鎖が一本の鎖を形成するために結合された単一の連鎖Fv(fv)を意味する。scFv断片は、VL(例:CDR-L1、CDR-L2、および/またはCDR-L3)の可変領域と、リンカーによって分離されたVH(例:CDR-H1、CDR-H2および/またはCDR-H3)の可変領域を含む単一のポリペプチドチェーンを含む。scFv断片のVLとVH領域に結合するリンカーは、プロテイン生成アミノ酸からなるペプチドリンカーである。代替リンカーは、scFvフラグメント(たとえば、D-アミノ酸を含むリンカー)の溶解性を高めるために、scFvフラグメント(例えば、ポリエチレングリコールを含むリンカーまたは繰り返しのグリシンとセリン残留物を含むポリペプチドのような親水性リンカー)の溶解性を高めるために、分子(たとえば、分子内または分子間ジスルフィド結合を形成するシステイン残基物を含むリンカー)の生物物理学的安定性を改善するために、またはscFvフラグメント(たとえば、グリコシル化部位を含むリンカー)のウィンジェニック性を弱めるために、プロテオリトリック劣化に対するscFvフラグメントの耐を高めるために、またはscFvフラグメント(たとえば、グリコシル化部位を含むリンカー)を弱めるために使用することができる。本明細書中に記載されるscFv分子の可変領域は、それらが由来した抗体分子からのアミノ酸配列が変化するように修飾され得ることも、当業者によって理解される。たとえば、保守的な置換や、アミノ酸残基の変化につながるヌクレオチドやアミノ酸の置換(たとえばCDRやフレームワーク残基)を作り、scFvが対応する抗原に結合する能力を維持または強化することができる。
ここでいう「比バインディング」又は「特別バインディング」とは、一般に、タンパク質に対してではなく、比のタンパク質構造(エピトープ)を認識し、結合する能力をいう。もし、エピトープ「A」に対して、比のAを含む分子(又は非ラベル化されたA)が存在する場合、ラベル化された「A」及び「A」を含む反応において、それらに結合されたラベル化されたAの量を減少させる。例として、もし、ラベル化された場合、当該非ラベル化されたビールによって、当該のターゲットから離れて競合することができるならば、「比」を「結合する」ことをいう。1つの実施形態において、抗体は、標的、例えばCD45に特異的に結合する(抗体が、約10KD M、約10-4 M、約10-5 M、約10-7 M、約10-8 M、約10-9 M、約10-10 M、約10-11 M、約10-4 M、またはそれ未満(10未満、例えば10未満の数字を意味する)の-12を有する場合)。一実施の形態では、「CD45に固有結合する」又は「CD45に固く結合する」という用語は、本項で使用するように、CD45に結合する又はCD45を意味し、表面プラズモン共鳴により決定されるように、酸解離定数(KD)が1.0×10-7 M以下である。一実施形態では、KDは、標準バイオ層干渉法に従って決定される。しかしながら、この抗原は、連続して関連する2つ以上の抗原に特別に結合することができるかもしれないことを理解しなければならない。例えば、一実施の形態では、CD45のヒト及び非ヒト(例えば、マウス又は非ヒト霊長類)の両方のオーソログに、特定的に結合することができる。従って、ここで用いられるように、「ヒトCD45と特別に結合する」とは、ヒトCD45(およびおそらく、1つ以上の非ヒト種からのCD45)と結合するが、非CD45タンパク質と実質的に結合しない、を意味する。好ましくは、1x10-7M以下のKD、5x10-8M以下のKD、3x10-8M以下のKD、1x10-8M以下のKD、または5x10-9M以下のKDで、ヒトCD45に結合する。いくつかの実施形態において、抗CD45抗体は、ヒトCD45の様々なアイソフォーム(例えば、CD45RA (Uniprot Accession No: P08575-8; 配列番号: 2)、CD45RO (NCBI Accession No: NP_563578.2; 配列番号: 1)、CD45RB (NCBI Accession No: XP_006711537.1; 配列番号: 3)、CD45RC (Uniprot Accession No. P08575-10; 配列番号: 4)、CD45RAB (NCBI Accession No: XP_006711535.1; 配列番号: 5)、CD45RBC (NCBI Accession No: XP_006711536.1; 配列番号: 6)およびCD45RABC (NCBI Accession No. NP_002829.3; 配列番号: 7))の各々の1つ。したがって、特定の実施形態では、本明細書中の抗体は、汎特異的抗CD45抗体(すなわち、すべてのヒトCD45アイソフォームの細胞外領域に特異的に結合する抗体)である。
ここで用いられるように、「幹細胞障害」という用語は、広く、被検者の標的組織を整理し、また/又は標的組織内の内生の幹細胞集団を治癒すること(例えば、被検者の骨髄組織から内生の血液細胞または祖先細胞集団を治癒すること)、及び/又は被検者の標的組織に幹細胞を接木または移植することによって治療または治療することができる病気、障害または状態を指す。例えば、タイプI糖尿病は血液細胞移植によって治癒されることが示されており、本書に記載された構成と方法に従った調整が有益であることが示されている。本書に記載された組成物及び方法を用いて治療することができる追加の障害には、限定されないが、鎌細胞貧血、サラセミア、ファンコニ貧血、無弾性貧血、ウィスコット・アルドリッチシンドローム、ADA SCID、HIV/エイズ、メタクロドロピストロフィー、ダイアモンド・ブラックファン貧血およびシュワックマン・ダイアモンドシンドロームが含まれる。ここに記載されている患者の調整および/または血液細胞移植法を用いて治療され上記追加の病気には、遺伝した血液障害(例、鎌細胞貧血)および硬化症、多角性硬化症、陶器性大腸炎、およびクローン病などの自己インフルエンザが含まれる。ここに記載された調整及び/又は移植方法を用いて治療され上記追加の病気には、リンパ腫、リンパ腫、肺、及び骨髄膜のような悪性又は血液がんが含まれる。例えば、癌は、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫、または非ホジキンリンパ腫であり得る。ここに記載されている調整および/または移植方法を用いて治療可能な追加の病気には、骨髄細胞障害症候群が含まれる。いくつかの実施形態において、被検者は代謝貯蔵障害を有するか、あるいはそうでなければ影響を受ける。例えば、被検者は、糖原病、ムコ多糖症、ハーラー病、スフィンゴ脂質症、異染性白質ジストロフィー、または本明細書に開示される治療および治療から有益であり得る任意の他の疾患または障害(限定されるわけではないが、重度複合免疫不全症、ウィスコット-オールドリッチ症候群、高免疫グロブリンM (IgM)症候群、チェディアック-東病、遺伝性リンパ組織球症、骨形成不全症、蓄積症、サラセミアメジャー、鎌状赤血球症、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、若年性関節リウマチ、またはそれらの疾患、またはASH教育書籍、1:319-338(2000)、その開示は、造血幹細胞移植療法の投与によって治療され得る病態に関するものであるため、ここではその全体を引用して組み込む。
ここで使用される「被検者」および「患者」という用語は、ここに記載されているように特定の病気または状態の治療を受けている人間のような有機体を指す。例えば、ヒト患者のような患者は、外因性造血幹細胞の生着を促進するために、造血幹細胞移植療法に先立って治療を受けることができる。
ここで用いられるように、「実質的に血液から除去される」という句は、患者から分離された血液サンプル中の治療薬の濃度が従来の方法では検出できないような場合(例えば、治療薬が治療薬を検出するために使用された装置のノイズスレッショルドを越えて検出できない、又はアッセイを越えて検出できないような場合)、治療薬(例えば、抗CD45のような、又は抗原結合断片)を患者に投与した後の時点を指す。当技術分野で公知の種々の技術を使用して、抗体、または抗体断片(例えば、当技術分野で公知の、または本明細書に記載されるELISAベースの検出アッセイ)を検出することができる。本技術分野で知られているものの中で、アッセイを用いて、抗毒剤、又は抗菌断片を検出することができる追加のアッセイには、予防接種技術及びイムブロットアッセイが含まれる。
ここで用いられるように、「トランスフェクション」という用語は、原核または真核の宿主細胞への外生DNAの導入に一般的に使用される、エレクトロポレーション、リッポフェクト、カルシウムリン上記析出、DEAEdextranトランスフェクションなどの広範囲にわたる技術の総称である。
ここで用いられる「治療」又は「治療」とは、病気の症状の重度及び/又は頻度を低減し、病気の症状及び/又は当該症状の根本的な原因を除去し、病気の症状及び/又はその根本的原因の頻度又は可能性を低減し、病気によって直接又は間接に生じた被害を改善又は是正することをいう。有益な、または望ましい臨床結果には、本書およびその後の血液細胞移植治療に続く患者のための外生血液細胞の移植を促進することが含まれるが、これに限定されない。さらなる有益な結果には、コンディショニング療法およびその後の患者への外因性造血幹細胞移植片の投与に続く、造血幹細胞移植を必要とする患者における造血幹細胞の細胞数または相対濃度の増加が含まれる。本明細書に記載される治療の有益な結果はまた、コンディショニング療法およびその後の造血幹細胞移植療法に続いて、巨核球、血小板、血小板、赤血球、マスト細胞、筋芽細胞、好塩基球、好中球、好酸球、ミクログリア細胞、顆粒球、単球、破骨細胞、抗原提示細胞、マクロファージ、樹状細胞、ナチュラルキラー細胞、Tリンパ球、またはBリンパ球などの造血系列の1つ以上の細胞の細胞数または相対濃度の増加を含み得る。さらなる有益な結果には、癌細胞の集団(例えば、CD45+白血病細胞)または自己免疫細胞の集団(例えば、自己抗原と交差反応するT細胞レセプターを発現するCD45+ T細胞のようなCD45+自己免疫リンパ球)のような障害を引き起こす細胞集団の量の低下が含まれ得る。本開示の方法が障害の予防に向けられる限りにおいては、「予防する」という用語は、障害状態を完全に阻止する必要がないと理解される。むしろ、ここで用いられるように、予防という用語は、当業者が障害に影響されやすい集団を特定する能力を意味し、したがって、本開示の化合物の投与は、病気の発生前に起こり得る。この用語は、病態が完全に回避されていることを意味するものではない。
ここで用いられるように、「バリアント」および「派生物」という用語は、互換的に使用され、また、ここに記載されている複合物、ペプチド、タンパク質、またはその他の物質の自然発生的、合成的および半合成アナログを指す。ここに記載されている複合物、ペプチド、タンパク質、またはその他の物質の変形または派生物は、元の物質の生物学的活性を維持または改善することができる。
ここで用いられるように、「ベクター」という用語は、プラスミド、DNAベクトル、プラスミド、RNベクトル、ウイルス、または他の適切なレプリコンのような核酸ベクトルを含む。ここに記載される表現ベクトルは、ポリヌクレオチド配列並びに、例えば、タンパク質の表現及び/又はこれらポリヌクレオチド配列を哺乳類細胞のゲノムに積分のに用いられる追加の配列要素を含むことができる。本開示の抗毒剤及び抗菌断片の表現に使用できる特定のベクターには、遺伝子転写を指示する促進剤及び向上剤のような規制配列を含むプラスミドが含まれる。他にも、抗生物質および抗生物質断片の表現に有用なベクターには、ポリヌクレオチド配列が含まれており、これはこれらの遺伝子の翻訳速度を高めるか、遺伝子転写から結果mrnaの安定性または核輸出を改善する。これらの配列要素は、例えば、発現ベクター上に担持された遺伝子の効率的な転写を指示するために、5'および3'非翻訳領域、ならびにポリアデニル化シグナル部位を含み得る。本明細書中に記載される発現ベクターはまた、そのようなベクターを含有する細胞の選択のためのマーカーを符号化するポリヌクレオチドを含有上記。適切なマーカーの実施例には、アンピシリン、クロランフェニコール、カナマイシン、ノルソトリシンなどの抗生物質に抵抗性を示す遺伝子が含まれる。
本明細書で使用される「アシル」という語は、-C(=O)Rを指し、ここで、Rは、本明細書で定義されるように、H(「アルデヒド」)、C 1 -C 12アルケニール、C 2 -C 12アルキニール、C 2-C 12アルキニール、C 3 -C 7カルボサイクリル、C 6 -C 20アリール、5-10メンバーヘテロアリール、または5-10メンバーヘテロサイクリルである。無制限の実施例としては、フォルミル、アセチル、プロパノイル、ベンゾイル、およびアクリロイルが挙げられる。
ここで使用する「C1-C12アルキル」という用語は、1から12の炭素原子を持つ、直鎖または枝分かれした、飽和炭化水素を意味する。代表的なC1 -C12のアルキル群には、-methyl、-ethyl、-n-propyl、-n-butyl、-n-pentyl、および-n-hexylが含まれるが、これらに限定されない分岐C1 -C12のアルキルには、-isopyl、-sec-butyl、-isobutyl、-tert-butyl、-isopentyl、および2-methylbutylが含まれるが、これらに限定されない。C1-C12のアルキル基は、置換されないか、または置換されることができる。
ここで使用する「アルケニール」という用語は、非飽和性の少なくとも1つの部位、すなわち、炭素-炭素、スパ2二重結合を持つ、通常、二次、または三次炭素を含むC2 -C12炭化水素を指す。例としては、エチレン又はビニル、-アリル、-1-ブテニル、-2-ブテニル、-イソブチレニル、-1-ペンテニル、-2-ペンテニル、-3-メチル-1-ブテニル、-2-メチル-2-ブテニル、-2,3-ジメチル-2-ブテニル等が挙げられるが、これらに限定されない。アルケニール基は置換されないか、あるいは置換されることができる。
ここで使用する「アルキニール」は、非飽和性の少なくとも1つの部位、すなわち、炭素-炭素、spトリプル結合を持つ、通常、二次、または三次炭素原子を含むC2 -C12炭化水素を指す。例としては、アセチレン及びプロパルギルが含まれるが、これらに限定されない。アルキニル基は、非置換または置換されていてもよい。
「アリール」は、本明細書中で使用される場合、C 6 -C 20炭素環芳香族基を指す。アリール基の例には、フェニル基、ナフチル及びアントラセニールが含まれるが、これらに限定されない。アリール基は代替することも、代替することもできる。
ここで使用する「アリラルキル」は、炭素原子に結合した水素原子の1つ、典型的には端子またはsp 3炭素アトムが、アリールの急進的なものに置き換えられる、非環状アルキル基を意味する。代表的なアリールアルキル基としては、ベンジル、2-フェニルエタン-1-イル、2-フェニルエテン-1-イル、ナフチルメチル、2-ナフチルエタン-1-イル、2-ナフチルエテン-1-イル、ナフトベンジル、2-ナフトフェニルエタン-1-イルなどが挙げられるが、これらに限定はされない。アリールアルキル基は6～20個の炭素原子を含み、例えばアリールアルキル基のアルカニル、アルケニルまたはアルキニル基を含むアルキル部分は1～6個の炭素原子であり、アリール部分は5～14個の炭素原子である。アルカリ基は置換されないか、あるいは置換されることができる。
本稿で使用する「シクロアルキル」とは、1つまたは二環式であるかもしれない、飽和した炭素環状ラジカルを指す。シクロアルキル基には、二環式として3～7個の炭素原子を持つ環、または7～12個の炭素原子を持つ環が含まれる。単環式シクロアルキル基の実施例には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、およびシクロオクチルが含まれる。Cycloalkyl基は代替することもできない。
「シクロアルケニル」とは、本明細書中で使用される場合、不飽和炭素環ラジカルをいい、これは、単環または二環であってもよい。シクロアルケニール基には、二環式として3～6個の炭素原子を持つ環、または7～12個の炭素原子を含む。単環式シクロアルケニル基の実施例には、1-シクロペント-1-エニル、1-シクロペント-2-エニル、1-シクロペント-3-エニル、1-シクロヘキサ-1-エニル、1-シクロヘキサ-2-エニル、および1-シクロヘキサ-3-エニルが含まれる。シクロアルケニル基は代替または代替することができる。
ここで使用する「ヘテロアラルキール」とは、炭素原子に結合した水素原子の1つ、典型的には端子またはsp 3炭素原子がヘテロアリールラジカルに置き換えられる非環状アルキル基を指す。典型的なヘテロアリールアルキル基は、限定されるものではないが、2-ベンズイミダゾリルメチル、2-フリルエチル等を含む。ヘテロアリールアルキル基は、6～20個の炭素原子、例えば、ヘテロアリールアルキル基のアルカニル、アルケニルまたはアルキニル基を含むアルキル部分が1～6個の炭素原子であり、ヘテロアリール部分が5～14個の炭素原子およびN、O、P、およびSから選択される1～3個のヘテロ原子を含み、ヘテロアリールアルキル基のヘテロアリール部分は、3～7個のリング部材(2～6個の炭素原子、または7～10個のリング部材(4～9個の炭素原子およびN、O、P、およびSから選択される1～3個のヘテロ原子)を有する単環、例えば、ビシクロ[4,5]、[5,5]、[5,6]、または[6,6]システムであり得る。
ここで使用する「ヘテロアリル」および「ヘテロシクロアルキル」は、それぞれ、1つ以上の環原子がヘテロ原子、例えば、窒素、酸素および硫黄である芳香性または非芳香性の環系を指す。ヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキルラジカルは、N、O、P、Sから選ばれた2～20の炭素原子と1～3のヘテロ原子からなる。ヘテロシクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルは、3～7のリング部材(N、O、P、Sから選ばれた2～6の炭素原子と1～3のヘテロ原子)を持つ単環であってもよいし、7～10のリング部材(N、O、P、Sから選ばれた4～9の炭素原子と、N、O、P、Sから選ばれた1～3のヘテロ原子)を持つ自転車であってもよい。例えば、自転車[4,5]、[5,5]、[5,ヘテロアリルとヘテロシクロアルキルは、置換することができないか、または置換することができる。
ヘテロアリールおよびヘテロシクロアルキル基は、Paquette, Leo A.;「現代のヘテロ環状化学の原理」(W. A. Benjamin, New York, 1968)、特に第1章、3章、4章、6章、7および9;「複素環化合物の化学、A一連のモノグラフ」(John Wiley & Sons, New York, 1950年から現在まで)、特に巻13, 14, 16, 19および28;およびJ. Amに記載されている。化学協会(1960) 82:5566.
ヘテロアリール基の実施例としては、ピリジル、チアゾリル基、ピリミジル、ピリミジル、イミダリル、ピリゾリル、インドリル、イソリジニール、イソリジニール、ピリダジニール、3H-インドリル、1H-インドリジル、プリニル、4H-キノリジル、フタジニール、ナフチリジニール、キノザリニール、キノリニル、シニジニール、4aH-カルバリジニール、アクリジニール、ピリミジニール、フェナントロリニール、フェノチアジニール、フラザニール、イソクロマニール、イミダゾリジニール、ピラゾリジニール、ベンゾトリアゾリル、イザチノイルヘテロシクロアルキルの実施例としては、実施例として、ジヒドロピリジル、テトラヒドロピリジル(ピペリジル)、テトラヒドロチオフェニル、ピペリジニル、4-ピペリドニル、ピロリジニル、2-ピロリドニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、ビス-テトラヒドロピラニル、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、デカヒドロキノリニル、オクタヒドロイソキノリニル、ピペラジニル、キヌクリジニル及びモルホリニルが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
例として、限定ではなく、炭素結合ヘテロアリールとヘテロシクロアルキルはピリジンの2、3、4、5、6番目、ピリジンの2番目、4番目、5番目、6番目、ピリミジンの2番目、5番目、5番目、6番目、ピラジンの3番目、5番目、または6番目、ピラジンの2番目、3番目、5番目、4番目、または4番目、または4番目、または4番目のアゼチジンの4番目、3番目、4番目、5番目、または4番目のアゼチジンの4番目、5番目、5番目、または5番目のアゼチジンの4番目、または8杯のイソキノリン。更に典型的には、炭素結合ヘテロシクリルは2-ピリジル、3-ピリジル、4-ピリジル、5-ピリジル、6-ピリジル、3-ピリダジニル、4-ピリダジニル、5-ピリダジニル、6-ピリダジニル、2-ピリミジニル、4-ピリミジニル、5-ピリミジニル、6-ピリミジニル、2-ピラジニル、3-ピラジニル、5-ピラジニル、6-ピラジニル、2-チアゾリル、4-チアゾリル、又は5-チアゾリルを包含する。
限定ではなく例として、窒素結合ヘテロアリールおよびヘテロシクロアルキルは、アジリジン、アゼチジン、ピロール、ピロリジン、2-ピロリン、3-ピロリン、イミダゾール、イミダゾリジン、2-イミダゾリン、3-イミダゾリン、ピラゾール、ピラゾリン、2-ピラゾリン、3-ピラゾリン、ピペリジン、ピペリジン、インドール、インドール、1H-インダゾール、イソインドールの位置2、モルホリンの位置4、およびカルバゾール、またはベータ-カルボリンの位置9で結合される。更に典型的には、窒素結合ヘテロシクリルは1-アジリジル、1-アゼチジル、1-ピロリル、1-イミダゾリル、1-ピラゾリル、及び1-ピペリジニルを包含する。
本項で使用し、また上記のアルキル、アルキン、アリール、アルキニール、ハルキン、ヘテロシクリル、その他に適用した「置換」とは、1つ以上の水素原子が、それぞれ別個に置き換えられることを意味する。上述の「アルキル」、「アルキレン」、「アルキレン」、「アルキン」、「アルキンキン」、「アルキンキン」、「シクロアルキレン」、「ヘテロシクロアルキレン」、「ヘテロシクロアルキレン」、「アリール」、「アリレン」、「ヘテロアリール」、「ヘテロアリーレン」グループは、任意に置き換えることができる。典型的な置換剤は、-XOBR)3, -CX3, -CN, -OCN, -SCN, -NCO, -NCS, -OOaH, -NC(=O)R, -C(=O)H, -C(=O)R, -C(=O)2, -SO3 -, -SO3H, -S(=O)2 R, -OS(=OFR)2, -S(=O)R, -OP(=O)(OH)2, -OP(=O)(OR)2, -P(=O)(OR)OONN(R)2, -C(=O)SR, -C(=S)SR, -C(=O)NH2, -C(=O)OJS), -R, -OH, -OR, -SH, -SR, NH2, -NHR, -N(R)2, -N+ ()2、-C(=NH)NH2, -C(=O)N(および-C(=NR)N(R)2を含むが、これらに限定されない。ここで、各々のXは、F、Cl、Br、およびIからのそれぞれのオカレンスに対して独立して選択され、各々のRは、2 OR, -S(=O)2 NH2, -S(=O)2 N(のアルキル、C6 -C20のアリール、, -C(=S)R, -CO2 H, -CO2 R, -CO2 -, -C(=S)OR, -C(=のヘテロシクロアルクまたはヘテロアリールからのオカレンス、保護群およびプロダクトモティーからのそれぞれのオカレンスに対して独立して選択される。群が「任意に置換」と記述されるところでは、どこであれ、その群は、個々の場合とは独立に、上記置換体のうちの1つ以上で置換することができる。置換は、隣接する置換基が閉環を受けて、例えば、ラクタム、ラクトン、環状無水物、アセタール、ヘミアセタール、チオアセタール、アミナール、およびヘミアミナールを形成し、例えば、保護基を与えるために閉環によって形成される、隣接する官能性置換基の閉環などの状況を含み得る。
特定のラジカル命名規則には、状況に応じて、モノラル・ラディカルまたはディ・ラディカルのどちらかが含まれることがあることを理解する必要があります。たとえば、置換基が分子の残りの部分に2つの付着点を必要とする場合、その置換基はジラジカルであることがわかる。例えば、2結合点を必要とする「アルキ」として識別される代替物は、-CH2 -, -CH2 CH2 -, -CH2CH(CH3)CH2 -,等のような「ジラジカル」を含む。他の根本的な命名規則は、この急進的なものが、「アルキレン」、「アルケニレン」、「アリーレン」、「ヘテロシクロアルキレン」などのディ・ラジカルであることを明確に示している。
代替体がディラジカル(すなわち、分子の他の部分に2つの付着点を持つ)として描写される場合、他に示されない限り、代替体はどんな方向にも付着することができることを理解する必要がある。
「イソメリズム」とは、同一の分子式をもっているが、その原子の結合の順序や空間における原子の配列が異なっている化合物をいう。空間における原子の配置が異なっているイソマーを「立体異性体」と呼び、互いに鏡映しない立体異性体を「ジアステレオ異性体」と呼び、重ね合わせることができない鏡像他を「エナンチウム」、あるいは「光学異性体」と呼ぶこともある。
4つの非同一の置換基に結合した炭素原子は「キラル中心」と呼ばれ、「キラルイソマー」は少なくとも1つのキラル中心を持つ複合体を意味し、複数のキラル中心を持つ複合体は、個々のジアステレオマーとして存在するか、「ジアステレオマー混合物」と呼ばれるジアステレオマーの混合物として存在することがある。一つのキラル中心が存在するとき、立体体体はそのキラル中心の絶対的な配置(RまたはS)によって特徴づけられる。絶対配置とは、キラル中心に付着した置換基の空間における配置をいう。検討中のキラル中心に付着した置換基は、Cahn, Ingold,Prelogの配列規則に従ってランク付けされた。(Cahn et al., Angew. Chem. Inter. Edit. 1966, 5, 385; errata 511; Cahn et al., Angew. Chem. 1966, 78, 413; Cahn and Ingold, J. Chem. Soc. 1951 (London), 612; Cahn et al., Experientia 1956, 12, 81; Cahn, J. Chem. Educ.1964, 41, 116).正反対のキラリティの個々のエナンチメリック形成を等量含む混合物を「ラセミク混合物」と呼ぶ。
この説明及びクレームにおいて開示される化合物は、1つ以上の非対称中心を含み、また、各化合物の異なるジアステレオマー及び/又は鏡像異性体が存在することがある。この説明及びクレームのどれかの化合物の記述は、特に記載のない限り、すべての鏡像異性体、ジアステレオマー、及びそれらの混合物を含むことを意図している。加えて、この説明及びクレームのどれかの化合物の記述は、別に記載されていない限り、鏡像異性体の、個々の鏡像異性体、並びに、ラセミク、その他の混合物の両方を含むことを意図したものである。複合物の構造が、特定のエンベンチマーとして描写される場合、本出願の開示は、その特定のエンベンチマーに限定されないことを理解する必要がある。したがって、本開示の構造式の各々の鏡像異性体、光学異性体、およびジアステレオマーが、本明細書中で企図される。本明細書では、複合物の構造式は、便宜上、ある種の異性体を表しているが、本明細書には、幾何学的異性体、非対称炭素に基づく光学異性体、立体異性体、トートマー等の全ての異性体が含まれており、全ての異性体が同じ活動レベルを持つとは限らないことが理解されている。化合物は、異なる互変異性体形態で生じ得る。本開示による化合物は、特に記載のない限り、すべての同性体形成を含むことを意図している。複合物の構造が特定のトートマーとして描写される場合、本出願の開示は、特定のトートマーに限定されないことを理解する必要がある。
本明細書に記載される任意の式の化合物は、化合物自体、ならびにそれらの塩、および該当する場合にはそれらの溶媒和物を含む。例えば、塩は、開示の複合体上のアニオンと正電荷を帯びた群(例えば、アミノ)の間で形成することができる。適切なアニオンとしては、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硫酸塩、重硫酸塩、スルファミン、硝酸塩、リン酸塩、クエン酸塩、メタンスルホン酸、トリフルオロ酢酸塩、グルタメート、グルクロネート、グルクロネート、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、コハク酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、トシレート、サリチル酸エステル、乳酸塩、ナフタレンスルホン酸塩、および酢酸塩(例えば、トリフルオロ酢酸塩)が挙げられる。「薬学的に許容されるアニオン」という用語は、薬学的に許容される塩を形成するのに適したアニオンを意味する。同様に、開示の複合体上で、カチオンと負電荷を帯びたグループ(例えばカルボキシレート)の間で塩を形成することもできる。適当なイオンには、ナトリウムイオン、カリウムイオン、マグネシウムイオン、カルシウムイオン、およびテトラエチランモニウムイオンのようなアンモニウムイオンが含まれる。いくつかの適切な置換アンモニウムイオンの実施例は、エチルアミン、ジエチルアミン、ジシクロヘキシルアミン、トリエチルアミン、ブチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペラジン、ベンジルアミン、フェニルベンジルアミン、コリン、メグルミン、およびトロメタミン、ならびにアミノ酸、実施例えばリジンおよびアルギニンから誘導されるものである。開示される化合物にはまた、第四紀窒素原子を含むそれらの塩も含まれる。
適当な無機アニオンの実施例としては、以下の無機酸から誘導されるものが挙げられるが、これらに限定されない:塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、亜硫酸、硝酸、亜硝酸、リン酸、およびリン。適切な有機アニオンの実施例としては、以下の有機酸が含まれるが、これらに限定されないが、以下の有機アニオンの実施例には以下が含まれる: 2-アセチ安息香、コルビック、安息香、安息香、スルフォニック、ケティック、クエン酸、エタニスルフォニック、エタネスルフォニック、エタネスルフォニック、フマリック、グルプトニック、グルトニック、グルタミン、グルティック、グリコリック、ハイキシマレイク、ハイドロキシマレインカルボキシリック、チオン酸、乳酸、乳酸、ラクトビック、ラウリック、マレイク、マリック、メタネルフォニック、ムカリック、オキサリック、パルミチック、パモアチック、パトセニック、パ適当なポリマー有機アニオンの実施例には、以下のポリマー酸から得られたものが含まれるが、これらに限定されない:タンニン酸、カルボキシミルセルロース。
加えて、本開示の化合物の化合物、例えば、は、水分補給または水分補給されていない(無水)形態で存在することもあれば、他の溶媒分子と共にソルベートとして存在することもある。ハイドレートの無限の実施例には、単水分、ジハイドレートなどがある。溶媒和物の非限定的な例としては、エタノール溶媒和物、アセトン溶媒和物などが挙げられ、「溶媒和物」とは、化学量論的または非化学量論的な量の溶媒を含有する溶媒付加形態を意味する。いくつかの化合物は、結晶性固体状態において溶媒分子の固定されたモル比を捕捉し、したがって溶媒和物を形成する傾向を有する。溶媒が水の場合、生成する溶媒和物は水和物であり、溶媒がアルコールの場合、生成する溶媒和物はアルコラートである。水化物は、水がH2 O.A.ハイドレートと同様に、水がその分子を保持している物質の1分子と、1つ以上の水分子との組合せによって形成される。水化物とは、例えば、一水位体、二水位体、三水位体などを指す。
加えて、本明細書に開示される公式により表される化合物またはそれらの塩に対して結晶多型が存在することができる。本開示の範囲には、水晶形成、結晶形成、混合物、無水物化物またはそのハイドレートが含まれることに注意されたい。
抗体-薬物共役(ADC)
ここに記載されているCD45を結合するアンチボディおよび抗原結合フラグメントは、サイトトキシック分子(すなわちサイトトキシン)と結合されて、それゆえに、ADC-薬物の結合体を形成することができる。ここで用いられるように、「細胞毒素」、「サイトトキシック・モイティー」および「ドラッグ」という用語は、互換的に使用される。
特に、本明細書に開示されるADCは、CD45(その抗原結合フラグメントを含む)を、細胞傷害性部分、例えば、ベンゾジアゼピン部分を含む細胞毒素(例えば、ピロロベンゾジアゼピン(PBD)、またはインドリノベンゾジアゼピン(IGN))に結合させた(すなわち、リンカーによって共有結合させた)抗体を含み、ここで、細胞傷害性部分は、抗体部分に結合させない場合、細胞傷害性または細胞増殖抑制効果を有する。様々な実施形態において、細胞毒性部分は、共役中で結合された場合、減少したまたは全く細胞毒性を示さないが、リンカーからの切断後に細胞毒性を再開する。種々の態様において、細胞毒性部分は、リンカーからの切断なしに細胞毒性を維持する。幾つかの実施例において、サイトトキシクル分子は、本明細書に開示されているように、細胞内化された抗原結合フラグメントに接合され、このように、細胞内吸収、又はその断片に続いて、細胞毒素は細胞内標的にアクセスし、例えば、血液細胞死を媒介することができる。従って、本開示のADCは、一般的な公式であるかもしれない。
Ab-(Z-L-Cy)nで、その抗原結合フラグメント(Ab)が、化学物質(Z)を通して、細胞中毒(Cy)にリンカー(L)と結合している(同価に結合している)。
従って、それらの抗原結合フラグメントは、例えば約1から約20までの範囲のある、抗原毒素1個あたりの平均数を表す整合nによって示されるように、多くの薬物モイートに結合することができる。どのような数の細胞毒素でも、例えば、1、2、3、4、5、6、7、または8の抗CD45抗毒素と結合することができる。いくつかの実施形態において、nは、約1から約5、約1から約4、約1から約3、または約2から約5、または約3から約5である。いくつかの実施形態において、nは約1、約2、約3、又は約4である。共役反応からのADCの調製における、1個当たりの薬物モイティーの平均数は、質量分析、ELISAアッセイ、およびHPLCのような従来の方法によって特徴づけられる。nでのADCの定量的分布も決定できる。場合によっては、nが他の薬物ロードを有するADCからある一定の価値である場合には、逆相HPLCまたは電気泳動によって分離、精製および均質ADCの特性化を達成することができる。
幾つかの抗菌薬の結合体については、nは、その抗菌に対する付着部位の数によって制限されることがある。例えば、接着がシステインチオールである場合、1つか複数のシステインチオールグループを持つことができるか、またはリンカーが付着することができる十分に反応するチオール基つか数つしか持たないことがある。一般的に、抗生物質には、薬物母性と結びついている可能性のある、多くの自由で反応性のあるシステインチオール基が含まれていない;主に、システインチオール残渣は、ジスルフィドブリッジ部として存在する。ある種の実施形態では、部分的又は全面的な減少条件下で、ジチオスレイトール(DTT)又はトリカルボンチルフォスフィン(TCEP)のような減少剤により、反応性システインチオールグループを生成するために、抗菌を減少させることができる。ある種の実施形態では、より高い薬物負荷、例えばn>5は、特定の抗ドラッグ共役体の集合、不溶性、有毒または細胞透過性の損を引き起こす可能性がある。
ある種の実施形態では、共役反応の間に、薬物モイテイの理論的な最大値よりも少ない数が、抗菌に接合される。たとえば、以下で論じるように、抗菌剤は、薬物-リンカー中間体またはリンカー試薬と反応しないリジン残渣を含むことができる。最も反応性のリジン基のみが、アミン反応性リンカー試薬と反応し得る。ある種の実施形態では、リジンまたはシステインのような反応性の核好性グループを明らかにするために、抗菌は劣化状態にさらされる。
ADCの負荷(ドラッグ/ビーチ比)は、例えば、(i)抗たんぱく質リンカー中間体又はリンカー試薬のモル余剰を、たとえば、(ii)共役反応時間または温度を制限すること、(iii)システインチオール修飾の部分的または制限的な条件、(iv)再結合技術により、システイン残留物の数と位置を、リンカー薬物接合の数および/または位置を制御するために変えるような、その抗たんのアミノ酸配列を工学的に調整することによって、異なる方法で制御することができる。
抗CD45抗体
本開示は、一部、抗原結合フラグメント、およびCD45を結合することができるリガンが、(i)これら抗原の1つ以上を表現する細胞によって特徴づけられる細胞によって特徴づけられるガンおよび自己感染症を直接治療するために、および(ii)移植治療を必要とする患者における移植血液細胞の接木を促進するために、治療剤として使用できることの発見に基づく。これらの治療活動は、例えば、抗毒素、抗原結合フラグメント、および/または配位子を、ガン細胞、自己感染細胞または血液細胞のような細胞の表面に表現されるCD45に結合させ、その後に細胞死を引き起こすことによって引き起こすことができる。内因性造血幹細胞の枯渇は、移植された造血幹細胞が帰宅できるニッチを提供し、続いて、生産的造血を確立することができる。このように、移植された血液細胞は、ここに記載された幹細胞障害に苦しむ人間のような患者において、接ぎ木に成功する可能性がある。
ヒトCD45(mRNCBIリファレンスシリーズ: NM_080921.3, Protein NCBIリファレンスシリーズ: NP_563578.2)を結合することができるアンチボディおよび抗原結合フラグメントは、本明細書に開示される組成物及び方法、例えば、血液細胞移植治療を必要とする患者における血液細胞グラフトの促進のために使用することができる。幾つかの実施例において、抗CD45(又はその抗原結合部)は、非予防接種抗CD45(又はその抗原結合部)である。幾つかの実施例では、抗CD45、又はその抗原結合部は、キメリックな抗CD45、又はその抗原結合部である。他の実施形態では、抗CD45、又はその抗原結合部は、人間化された抗CD45、又はその抗原結合部である。他の実施形態では、抗CD45(又はその抗原結合部)は、完全にヒトの抗CD45(又はその抗原結合部)である。
CD45は、T細胞およびB細胞抗原レセプターを介するシグナル伝達に必須の造血細胞特異的膜貫通タンパク質チロシンホスファターゼである。CD45には大きな細胞外ドメインと細胞質ドメインを含むアルカリホスファターゼがある。CD45の複数のアイソフォームは、一次転写産物中の34個のエキソンの選択的スプライシングから生じる。エクソン4、5、6、および潜在的に7のスプライシングは、複数のCD45変異を生じる。CD45遺伝子には多数の変異が考えられるが、ヒトでは6つのアイソフォームが最も一般的に同定されている。アイソフォームは、RA (ユニプロット受付番号:P08575-8;配列番号: 31)、RO (NCBI受付番号: NP_563578.2;配列番号: 32)、RB (NCBI受付番号: XP_006711537.1;配列番号: 33)、RAB (NCBI受付番号: XP_006711535.1;配列番号: 34)、RBC (NCBI受付番号: XP_006711536.1;配列番号: 35)およびRABC (NCBI受付番号: NP_002829.3;配列番号: 36)である(Hermistonら 2003「CD45:免疫細胞におけるシグナル伝達閾値の重要な調節因子」、Annu Rev Immunol. 2:107-137.)。CD45RAはナイーブT細胞に発現し、CD45ROは活性化および記憶部T細胞、一部のB細胞サブセット、活性化単球/マクロファージ、顆粒球に発現する。CD45RBは末梢B細胞、ナイーブT細胞、胸腺細胞、マクロファージ、樹状細胞に弱く発現している。選択的エキソン式は、以下の表1に記載のCD45アイソフォームで観察される。
[表１]
選択的スプライシングは、CD45タンパク質の様々なアイソフォーム(例えば、CD45RA、CD45RAB、CD45RABC)で発現される個々のエキソンまたはエキソンの組合せをもたらしうる。対照的に、CD45ROはエクソン4～6の発現を欠き、エクソン1～3および7～34の組合せから生成される。エクソン7もタンパク質から排除でき、その結果、エクソン1-3と8-34が一緒にスプライシングされるという証拠がある。E3-8と命名されたこのタンパク質はmRNAレベルで検出されているが、現在のところフローサイトメトリーでは同定されていない。
CD45ROは現在、造血幹細胞に発現する唯一の既知のCD45アイソフォームである。CD45RAおよびCD45RABCは検出されていないか、または造血幹細胞の表現型から除外されている。CD45RBが胎児の造血幹細胞に発現しているが、成人の骨髄造血幹細胞には存在しないという証拠が、マウスを用いて行われた研究から得られている。特に、CD45RCはアジア人集団内で認められるエクソン6の多型の割合が高い(CD45RCのエクソン6の多型は日本人集団の約25%に認められる)。この多型は、CD45ROの高発現およびCD45RA、CD45RB、およびCD45RCのレベルの低下をもたらす。さらに、CD45RA変形例(CD45RABおよびCD45RACなど)は、自己免疫疾患と関連しているエクソン4の多型を示す。
造血幹細胞上のCD45ROの存在および他の免疫細胞上のその比較的限定された式(TおよびBリンパ球サブセットおよび種々の骨髄細胞のような)は、CD45ROを、造血幹細胞移植を必要とする患者のためのコンディショニング療法のための特に十分に適した標的にする。CD45ROはエクソン4、5、6のみの表現が不足しているため、パンCD45 AbsとCD45RO特有の抗生物質のスクリーニングを可能にする。
幾つかの実施例では、ここに記載されるADCにおいて使用される、抗CD45抗原結合部は、CD45の全同質方法を結合するパンCD45、又はその抗原結合部である。他の実施例では、本説明されるADCにおいて使用される、抗CD45 binding(抗CD45)、又はその抗原結合部は、同質形態固有の抗CD45(抗CD45RA、CD45RB、CD45RC、CD45RAB、CD45 RABC、CD45 RABCのいずれか又はそれ以上のヒトCD45の同質組成物に特別に結合する)である。
ここに記載した患者のコンディショニング法と併用することができる抗CD45抗たんぱくは、CD45抗たんぱく質およびそれらの抗原結合部を含む。抗体の抗原結合部分は、当該分野で周知であり、抗体の抗原結合領域に基づいて容易に構築することができる。例示的な実施形態では、本明細書に記載の調整方法と共に使用される抗CD45抗体は、モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント、ポリクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメント、完全ヒト抗体またはその抗原結合フラグメント、キメラ抗体またはその抗原結合フラグメント、二重特異性抗体またはその抗原結合フラグメント、二重可変免疫グロブリンドメイン、一本鎖Fv分子(scFv)、ダイアボディ、トリアボディ、ナノボディ、抗体様タンパク質足場、Fvフラグメント、Fabフラグメント、F(ab')2分子、またはタンデムジ-scFvであり得る。ここに記載されたADCまたは方法の全体または一部で使用されうる例示的なCD45抗生物質を以下に示す。
一実施の形態では、抗CD45検出法は、BIOLEGEND(R) (カリフォルニア州サンディエゴ)から市販されているクローン化HI30に由来するか、又はそれに由来する。抗生物質の人為化は、当該技術における手順(実施例7、以下に説明されるように)に従い、骨格残渣物および非人的抗菌の一定領域残渣物をゲルムラインヒトのものに置き換えることによって行うことができる。本明細書に記載の方法と併せて使用できる追加の抗CD45抗体には、ABCAM(R) (ケンブリッジ、MA)から市販されている抗CD45抗体ab10558、EP322Y、MEM-28、ab10559、0.N.125、F10-89-4、HIe-1、2B11、YTH24.5、PD7/26/16、F10-89-4、1B7、ab154885、B-A11、蛍光体S1007、ab170444、EP350、Y321、GA90、D3/9、X1 6/99、およびLT45、ならびにそれらのヒト化変異体が含まれる。ここに記載されている患者のコンディショニング手順と併用されることができるさらなるCD45反抗物質には、SIGMA-ALDRICH(R) (セントルイス、ミズーリ州)から市販されている反CD45のHPA000440およびそれらの人間化されたバリエーションが含まれる。ここに記載されている患者の調整方法と併用できる追加の抗CD45抗生物質は、例えば、Matthewsら、Blood 78:1864-1874、1991において記載されている、ムリンモノクローン抗BC8を含み、これは、抗CD45抗生物質と同様に、それらの人間化改良物に関連する、ここに含まれる。本明細書中に記載される方法と組み合わせて使用され得るさらなる抗CD45抗体は、モノクローナル抗体YAML568を含み、これは、例えば、Glatting et al., J. Nuclに記載される。中央値。8:1335-1341, 2006, 2006, この特許は、それが抗CD45抗並びにそれらの人間化された改良物に関するものとして、ここに参考文献に組み込まれている。ここに記載されている患者の調整手順と併用できる追加の抗CD45薬物は、例えばBrenner et al., Annに記載されているモノクローナル抗TH54.12およびYTH25.4を含む。ニューヨークアカド。科学996:80-88, 2003, 2003, この特許は、それが抗CD45抗並びにそれらの人間化された改良物に関するものとして、ここに参考文献に組み込まれている。ここに記載されている患者のコンディショニング法に使用するための追加の抗CD45抗薬は、例えば、褐色ら、Immunology 64:331-336,1998に記載されている、UCHL1、2H4、SN130、MD4.3、MBI、およびMT2を含んでおり、これらはアンチCD45抗薬およびそれらの人間化バリエーションに関連するものとしてここに含まれる。本明細書中に記載される方法と組み合わせて使用され追加のさらなる抗CD45抗体は、American Type Culture Collection (ATCC)アクセッション番号から産生され、放出されるものを含む。RA3-6132、RA3-2C2、およびTIB122、ならびにJohnsonら、J. Exp.に記載されているモノクローン抗生物質C363.16Aおよび13/2。中央値。169:1179-1184, 1989, 1989, この特許は、それが抗CD45抗並びにそれらの人間化された改良物に関するものとして、ここに参考文献に組み込まれている。本明細書に記載される患者の調整方法と併せて使用することができるさらなる抗CD45抗体には、例えばHarvathら、J. Immunolに記載されているモノクローナル抗体AHN-12.1、AHN-12、AHN-12.2、AHN-12.3、AHN-12.4、HLe-1、およびKC56(T200)が含まれる。146:949-957, 1991, 1991, この特許は、それが抗CD45抗並びにそれらの人間化された改良物に関するものとして、ここに参考文献に組み込まれている。
ここに記載されている患者のコンディショニング法と併用できる追加の抗CD45物質には、例えば米国特許番号に記載されているものが含まれる。7,265,212 (例えば、他のクローンの中でも、抗CD45抗体39E11、16C9、および1G10を記載する)7,160,987(例えば、モノクローナル抗体6G3などのATCC受託番号HB-11873によって産生および放出される抗CD45抗体を記載する)、および6,099,838(例えば、抗CD45抗体MT3、ならびにATCC受託番号HB220(MB23G2とも記載する)およびHB223によって産生および放出される抗体を記載する)、ならびにUS 2004/0096901およびUS 2008/0003224(例えば、ATCC受託番号PTA-7339によって産生および放出される抗CD45抗体、例えば、モノクローナル抗体17.1)を記載する。
ここに記載された患者のコンディショニング法と併用抗体更なるCD45反抗物質には、ATCCアクセションNosから生産され、放出される抗CD45が含まれる。MB4B4, MB23G2, 14.8, GAP 8.3, 74-9-3, I/24.D6, 9.4, 4B2, M1/9.3.4.HL.2、およびそれらの人間化および/または親和性成熟型バリエーション。親和性熟成は、実施例えば、以下の実施例6に説明されるように、本分野に記載された、又は本技術で知られている、ファージディスプレイのようなin vitroディスプレイ技術を用いて行うことができる。
ここに記載されている患者のコンディショニング法と併用できる追加の抗CD45 bidodyは、例えば、Morikawa et al., Int.に記載されている反CD45 bide T29/33を含んでいる。J. ヘマトール。54:495-504, 1991, 1991, 当該特許の開示は、抗CD45抗薬に関するものとしてここに引用している。
ある種の実施例において、抗CD45抗菌液は、アパミスタマブ(別名90Y-BC8、Iomab-B、BC8;例えば、US20170326259、WO2017155937、およびOrozco et al. Blood. 127.3 (2016): 352-359.)またはBC8-B10(説明されるように、例えばLi et al.)から選択される。PloS one 13.10 (2018): e0205135. は、各参考として組み込まれています。他の反CD45抗性物質は、例えば、WO2003/048327、WO2016/016442、US2017/0226209、US2016/0152733、US9,701,756、US2011/0076270、またはUS7,825,222に記載されており、各は、その全体として参考文献に組み込まれている。
例えば、一実施の形態では、抗CD45の、又はその抗原結合断片は、アパミスタマブのそれに対応する様々な領域、例えばCDRの結合領域を含んでいる。アパミスタマブの重鎖可変領域(VH)アミノ酸配列は、SEQ ID No:10(表5参照)に示されている。アパミスタマブの軽鎖可変領域(VL)アミノ酸配列は、SEQ ID NO: 11(表5参照)に記載されている。幾つかの実施例では、抗CD45(又はその抗原結合部)は、SEQ ID NO: 10に記載されたアミノ酸残基からなる可変重鎖と、SEQ ID NO: 11に記載された軽鎖可変領域からなる。一実施の形態では、抗CD45抗菌液は、アパミスタマブのCDR1、CDR2及びCDR3からなる重鎖と、アパミスタマブのCDR1、CDR2及びCDR3からなる軽鎖可変領域を含む。
一実施の形態では、抗CD45検出法は、モノクローン液104の様々な領域を含んでいる。104は、マウスCD45.2イソフォルム(カリフォルニア州サンディエゴの抗体レジェンド)を結合する市販されている反CD45イソフォルムであり、mAb Ly-5.2としても知られている。いくつかの実施例において、104の可変領域は、Fc領域内の1以上のアミノ酸置換を含むヒトIgG定常領域と結合する。例えば、いくつかの実施例において、104の可変領域は、Fc領域内のS239C及びN297Aの置換からなるヒトIgG定常領域と結合される。いくつかの実施形態において、104の可変領域は、Fc領域内のS239CおよびIHH (すなわちI253A、H310AおよびH435A)の置換を含むヒトIgG定常領域と結合される。
例えば、一実施形態では、抗CD45抗原結合フラグメントは、104 S239C/IHHのそれらに対応する結合領域、例えばCDR、可変領域を含む。104 S239C/IHHの重鎖アミノ酸配列は、SEQ ID NO: 12(表5参照)に記載されている。104 S239C/IHHの軽鎖アミノ酸配列アミノ酸配列は、SEQ ID NO: 13(表5参照)に記載されている。幾つかの実施例では、抗CD45(又はその抗原結合部)は、SEQ ID NO: 12に記載されたアミノ酸残基からなる重鎖と、SEQ ID NO: 13に記載されたアミノ酸残基からなるL鎖からなる。
1つの実施形態において、抗CD45の領域は、CDR領域及び/又はモノクローンAbAの可変領域を含む。AbAの重鎖可変領域(VH)アミノ酸配列は、SEQ ID NO: 14(表5参照)に示されている。AbAのVH CDRドメインアミノ酸配列は、SEQ ID NO: 15(VH CDR1)、SEQ ID NO: 16(VH CDR2)、およびSEQ ID NO: 17(VH CDR3)に記載されている。AbAの軽鎖可変領域(VL)アミノ酸配列は、SEQ ID NO: 18に記載されている。AbAのVL CDRドメインアミノ酸配列は、配列番号19(VL CDR1);配列番号20(VL CDR2)、および配列番号21(VL CDR3)に記載される。したがって、特定の実施形態において、本明細書において提供される抗CD45抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号14に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号18に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。一実施の形態では、抗CD45(又はその抗原結合断片)は、SEQ ID NO:15、16及び17に記載されたアミノ酸配列からなるCDR1、CDR2及びCDR3並びにSEQ ID NO:19、20及び21に記載されたアミノ酸配列からなるCDR1、CDR2及びCDR3からなる重鎖からなる。
一実施の形態では、抗CD45の領域は、CDR領域及び/又はモノクローンAbBの可変領域を含んでいる。AbBの重鎖可変領域(VH)アミノ酸配列は、SEQ ID NO: 22(表5参照)に示されている。AbBのVH CDRドメインアミノ酸配列は、配列番号23(VH CDR1);配列番号24(VH CDR2)、および配列番号25(VH CDR3)に記載される。AbBの軽鎖可変領域(VL)アミノ酸配列は、SEQ ID NO: 26に記載されている。AbBのVL CDRドメインアミノ酸配列は、SEQ ID NO: 27(VL CDR1)、SEQ ID NO: 28(VL CDR2)、SEQ ID NO: 29(VL CDR3)に記載されている。したがって、特定の実施形態において、本明細書において提供される抗CD45抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号22に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号26に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。一実施形態では、抗CD45(又はその抗原結合断片)は、SEQ ID NO:23、24及び25に記載されたアミノ酸配列からなるCDR1、CDR2及びCDR3並びにSEQ ID NO:27、28及び29に記載されたアミノ酸配列からなるCDR1、CDR2及びCDR3からなる重鎖からなる。
1つの実施形態において、抗CD45の領域は、CDR領域及び/又はモノクローンAbCの可変領域を含む。AbCの重鎖可変領域(VH)アミノ酸配列は、SEQ ID NO: 30(表5参照)に示されている。AbCのVH CDRドメインアミノ酸配列は、SEQ ID NO: 31(VH CDR1)、SEQ ID NO: 32(VH CDR2)、SEQ ID NO: 33(VH CDR3)に記載されている。AbCの軽鎖可変領域(VL)アミノ酸配列は、SEQ ID NO: 34に記載されている。AbCのVL CDRドメインアミノ酸配列は、配列番号35(VL CDR1);配列番号36(VL CDR2)、および配列番号37(VL CDR3)に記載される。したがって、特定の実施形態において、本明細書において提供される抗CD45抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号30に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号34に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。一実施の形態では、抗CD45は、SEQ ID番号: 31、32及び33に記載されたアミノ酸配列からなるCDR1、CDR2及びCDR3並びにSEQ ID番号: 35、36及び37に記載されたアミノ酸配列からなるCDR1、CDR2及びCDR3からなる軽鎖可変領域からなる。一実施の形態では、当該抗CD45モノは、本稿に記載した抗CD45モノの重鎖と、本稿に記載した抗CD45モノの軽鎖可変領域からなる。一実施の形態では、当該抗CD45のうちのCDR1、CDR2及びCDR3からなる重鎖と、本項に記載した抗CD45のCDR1、CDR2及びCDR3からなる軽鎖可変領域とを含んでいる。
別の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書中の抗CD45抗体と少なくとも95%のアイデンティティ、例えば、本明細書中の抗CD45抗体と少なくとも95%、96%、97%、98%、99%、または100%のアイデンティティを有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。一定の実施例では、Anti-CD45のHC変数領域(HC)を含んでいる。この領域、又はその変形であって、(i)1,2,3,4又は5のアミノ酸の置換、補足又は削除においてAnti-CD45とは異なる; (ii)最大で5,4,3,2又は1のアミノ酸置換、補足又は削除においてAnti-CD45と異なる; (iii)Anti-CD45の1-5、1-3、1-2、2-5又は3-5のアミノ酸置換、補足又は削除並びに(iv)はAnti-CD45のAnti-CD45とは異なる;(iv)のいずれかにおいて、Anti-CD45のAndi-CD45のAndi-CD45と少なくとも約75%、80%、85%、95%、96%、97%、98%又は99% 控えめなアミノ酸代替;そして、改良重鎖可変領域は、抗CD45の重鎖可変領域に比べて、強化された生物学的活性を持ち得る一方で、反CD45結合特異性を保持することができる。
追加の反CD45抗物質は、国際特許出願番号に提供される。PCT/US2019/058973およびPCT/US2019/058971は、それぞれの全内容をここに引用して含んでいる。
追加の反CD45抗物質およびそれらの抗原結合部は、ここに記載されている抗物質を同定する方法(例えば、高スループット・スクリーニング、ファージ・ディスプレイ、コンピュータ・モデリングなど)を含む、周知の方法を用いて生成することができる。
上述の各出版物の開示は、ここにそれらの全体として参考文献に盛り込まれている。上述の組成および方法と併用されることができる反体および抗原結合フラグメントには、上述の抗生物質および抗原結合フラグメント、並びに上述の非ヒト抗生物質および抗原結合フラグメントのヒト化改良版および抗原結合フラグメントが含まれ、これらは上述のものと同じエピトープを結合する、たとえば、競合するCD45結合アッセイによって評価される。
Fc-Modified Antibodies
幾つかの実施例では、ここに提供される、抗CD45/抗原結合部には、例えば、Fc領域(例、タンデムscFv(scFv)2、ジアボディー等)のような、一定の抗菌領域が欠如している。他の実施例では、ここに提供された、抗CD45抗原結合部は、1つ以上の(例えば、CH1、CH2、CH3のうちの1つ以上)定常領域を構成する。幾つかの実施例において、ここに提供される、抗CD45抗原結合部は、1つ以上のFc領域を含んでいる。
幾つかの実施例では、ここに提供されるこれらの抗CD45/抗原結合部は、天然又はワイルドタイプのFc領域を含んでいる。他の実施形態では、ここに記載されている抗生物質又は結合フラグメントは、半減期を増加させる、又はADCCを増加又は減少させるもののような、抗生物質及び/又は断片の特性を変化させるFc領域の改変及び/又は突然を含み得る。ここに提供されたFc改良型抗生物質およびADCは、内生の血液細胞の選択的枯渇を可能にするだけでなく、外生の造血幹細胞移植に対する細胞傷害性効果を減少させ、それによって、造血幹細胞接木のさらなる移植を促進した。
ここに記載される抗生物質または結合フラグメントはまた、半減期を増加させる、またはADCCを増加または減少させるもののような、抗生物質および/または断片の特性を変化させる改変および/または突然を含み得る。
1つの実施形態において、1つ以上の放射性ラベル表示されたアミノ酸からなる抗物質が提供される。放射性標識された抗体は、診断目的と治療目的の両方に使用することができる(放射性標識された分子への結合は、別の可能な特徴である)。ポリペプチドのラベルの無制限の実施例には、3H、14C、15N、35S、90Y、99Tcおよび125I、131Iおよび186Reが含まれるが、これらに限定されない。放射性ラベル表示されたアミノ酸及び関連ペプチドの派生物を調製する方法は、当技術分野で知られている(例えば、Junghans et al., in Cancer Chemotherapy and Biotherapy 655-686 (第2版、Chafner and Longo, eds., Lippincott Raven (1996)))及び米国特許を参照されたい。第4,681,581号、米国特許第4,735,210号、米国特許第5,101,827号米国特許No.5,102,990(米国RE35,500)、米国特許。No.5,648,471及び米国特許5,697,902号。たとえば、放射性同位体はクロラミンT法によって結合することができる。
一実施の形態では、上記反CD45の、又はその結合フラグメントは、野生型Fc領域に関連して、上記改良Fc領域が少なくとも1つのアミノ酸変質を含んでいる改良Fc領域を含み、上記分子がFcgammaR(FcimR)に対する変質した親和性又は結合を有する。Fc領域内のいくつかのアミノ酸位置は、Fcに対して直接接触するための結晶学研究を通して知られている。具体的には、アミノ酸234-239(ヒンジ領域)、アミノ酸265-269(B/Cループ)、アミノ酸297-299(C'/Eループ)、アミノ酸327-332(F/G)ループである。(Sondermann et al., 2000 Nature, 406: 267-273 を参照)。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗体は、構造的および結晶学的分析に基づいて、FcγRと直接接触する少なくとも1つの残渣の修飾を含む変形例Fc領域を含み得る。一実施形態では、抗CD45抗体(またはそのフラグメント)のFc領域は、Kabatら、Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, NH1, MD (1991)に記載されているように、EUインデックスによるアミノ酸265でのアミノ酸置換を含む。「KabatにおけるようなEUインデックス」とは、ヒトIgG1 EU抗体の番号付けを指す。1つの実施形態では、Fc領域はD265A突然異変を含む。1つの実施形態において、Fc領域はD265C突然異変を含む。いくつかの実施形態では、カバトにおけるように、EU指数によれば、抗菌(又はそのフラグメント)のFc領域は、アミノ酸234におけるアミノ酸置換を含む。
一実施の形態では、Fc領域は、D265、V205、H435、I253、および/またはH310のアミノ酸位置における突然異変を含む。例えば、これらの位置における特定の突然変わりには、D265C、V205C、H435A、I253A、および/またはH310Aが含まれる。
1つの実施形態において、Fc領域はL234A突然異変を含む。いくつかの実施形態において、Anti-CD45のFc領域(又はそのフラグメント)は、カバトにおけるように、EU指数によれば、アミノ酸235におけるアミノ酸置換を含む。1つの実施形態において、Fc領域はL235A突然異変を含む。さらに別の実施形態では、Fc領域はL234AとL235Aの突然変異を含む。更なる実施の形態では、Fc領域はD265C、L234AおよびL235Aの突然変異を含む。さらに別の実施形態では、Fc領域はD265C、L234A、L235AおよびH435Aの突然変異を含む。更なる実施形態では、Fc領域はD265CとH435Aの突然変わりを含む。
1つの実施形態において、Fc領域は、ここに記載された他のFc突然異変に加えて、S239の突然異変を含む。例示的な実施例において、Fc領域はS239C突然異変を含む。
さらに別の実施形態では、Fc領域はL234AとL235Aの突然変異(ここでは「L234A.L235A」または「LA」とも呼ばれる)を含む。別の実施形態では、Fc領域は、Fc領域がP329G突然異変を含まないL234A及びL235A突然異変を含む。更なる実施の形態では、Fc領域は、D265C、L234AおよびL235Aの枝変わり(ここでは「D265C.L234A.L235A」とも呼ばれる)を構成する。別の実施形態では、Fc領域はD265C、L234AおよびL235Aの突然変異を含み、Fc領域はP329Gの突然変異を含まない。さらに別の実施形態では、Fc領域は、D265C、L234A、L235A、およびH435A変異(本明細書では、「D265C.L234A.L235A.H435A」とも呼ばれる)を含む。別の実施形態では、Fc領域はD265C、L234A、L235AおよびH435Aの突然変異を含み、Fc領域はP329G突然変異を含まない。更なる実施の形態では、Fc領域はD265CとH435Aの突然変わり(ここでは「D265C.H435A」とも呼ばれる)を含む。さらに別の実施形態では、Fc領域は、D265A、S239C、L234AおよびL235Aの枝変わり(また、ここでは、「D265A.S239C.L234A.L235A」とも呼ばれる)を構成する。さらに別の実施形態では、Fc領域はD265A、S239C、L234AおよびL235Aの突然変異を含み、Fc領域はP329Gの突然変異を含まない。別の実施形態では、Fc領域は、D265C、N297GおよびH435Aの突然変異(本稿では「D265C.N297G.H435A」とも呼ばれる)を含む。別の実施形態では、Fc領域は、D265C、N297QおよびH435Aの突然変わり(ここでは「D265C.N297Q.H435A」とも呼ばれる)を含む。
別の実施形態では、Fc領域は、E233P、L234V、L235AおよびdelG236(236の削除)(ここでは「E233P.L234V.L235A.delG236」または「EPLVLAdelG」としても参照される)からなる。別の実施形態では、Fc領域は、E233P、L234V、L235AおよびdelG236(236の削除)突然異変を含み、Fc領域はP329G突然異変を含まない。別の実施形態では、Fc領域は、E233P、L234V、L235A、delG236(236の削除)およびH435Aの突然異変(ここでは「E233P.L234V.L235A.delG236.H435A」または「EPLVLAdelG.H435A」としても参照される)からなる。別の実施形態では、Fc領域はE233P、L234V、L235A、delG236(236の削除)およびH435Aの突然変異を含み、Fc領域はP329G突然異変を含まない。別の実施形態では、Fc領域はL234A、L235A、S239CおよびD265Aの突然変異を含む。別の実施形態では、Fc領域はL234A、L235A、S239CおよびD265Aの突然変異を含み、Fc領域はP329Gの突然変異を含まない。別の実施形態では、Fc領域は、H435A、L234A、L235AおよびD265C突然異変を含む。別の実施形態では、Fc領域はH435A、L234A、L235AおよびD265C突然異変を含み、Fc領域はP329G突然異変を含まない。
いくつかの実施形態において、抗体は、未修飾Fc領域を含む同一の抗体のFc Rへの結合と比較して、Fcレセプター(Fc R)への結合の減少を伴う、インビトロエフェクター機能アッセイにおいてエフェクター機能を低下させるように、修飾されたFc領域を有する。いくつかの実施形態では、このような、非改良Fc領域を含む同一のFc領域をFcirRに結合することに関連して、Fcガンマレセプター(FcirR)への結合を減少させるとともに、in vitroエフェクター関数アッセイにおいて、上記抗菌はエフェクター機能を減少させるという、改良Fcc領域を有する。いくつかの実施形態において、FcγRは、FcγR1である。いくつかの実施形態において、FcγRは、FcγR2Aである。いくつかの実施形態において、FcγRは、FcγR2Bである。他の実施形態において、FcγRは、FcγR2Cである。いくつかの実施形態において、FcγRは、FcγR3Aである。いくつかの実施形態において、FcγRは、FcγR3Bである。他の実施形態では、結合の減少は、FcγRに対する未修飾Fc領域を含む同一抗体の結合と比較して、FcγRに対する抗体結合の少なくとも70%の減少、少なくとも80%の減少、少なくとも90%の減少、少なくとも95%の減少、少なくとも98%の減少、少なくとも99%の減少、または100%の減少である。他の実施形態において、結合の減少は、FcγRに対する未修飾Fc領域を含む同一抗体の結合と比較して、FcγRに対する抗体結合の少なくとも70%～100%の減少、少なくとも80%～100%の減少、少なくとも90%～100%の減少、少なくとも95%～100%の減少、または少なくとも98%～100%の減少である。
いくつかの実施形態において、抗体は、未修飾Fc領域を含む同一抗体のサイトカイン放出と比較して少なくとも50%のサイトカイン放出の減少を伴う、インビトロサイトカイン放出アッセイにおいてサイトカイン放出を減少させるように、修飾Fc領域を有する。いくつかの実施形態において、非修正Fc領域を含むサイトキン放出と比較して、サイトキン放出の減少は少なくとも70%減少、少なくとも80%減少、少なくとも90%減少、少なくとも95%減少、少なくとも98%減少、少なくとも99%減少、又はサイトキン放出の100%減少である。いくつかの実施形態において、サイトキンの放出の減少は、非修正Fc領域を含む同一のサイトキンの放出と比較して、少なくとも70%から100%減少、少なくとも80%から100%減少、少なくとも90%から100%減少、少なくとも95%から100%減少するサイトキンの放出の減少である。特定の実施形態では、サイトカイン放出は、免疫細胞による。
いくつかの実施例では、本発明は、上記修正Fc領域を含む同一の抗菌のマスト細胞退化に対して、マスト細胞退化率が少なくとも50%減少するとともに、ヒトマスト細胞退化アッセイにおいて、自己マスト細胞退化を減少させるような改良Fc領域を有する。いくつかの実施態様において、マスト細胞の減少は、非修正Fc領域を含む同一抗菌のマスト細胞の減少に対して、少なくとも70%減少、少なくとも80%減少、少なくとも90%減少、少なくとも95%減少、少なくとも98%減少、少なくとも99%減少、又はマスト細胞の減少を100%減少させる。いくつかの実施形態において、マスト細胞脱顆粒の減少は、非修飾Fc領域を含む同一抗体のマスト細胞脱顆粒と比較して、マスト細胞脱顆粒の少なくとも70%～100%の減少、少なくとも80%～100%の減少、少なくとも90%～100%の減少、または少なくとも95%～100%の減少である。
いくつかの実施形態において、抗体は、未修飾Fc領域を含む同一抗体のADCPと比較して少なくとも50%のADCPの減少を伴う、インビトロ抗体依存性電池食作用アッセイにおいて抗体依存性電池食作用(ADCP)を減少または防止するように、修飾Fc領域を有する。いくつかの実施態様において、ADCPの減少は、非修正Fc領域を含むサイトキンの同一の領域からのサイトキンの放出と比較して、少なくとも70%減少、少なくとも80%減少、少なくとも90%減少、少なくとも95%減少、少なくとも98%減少、少なくとも99%減少、又はサイトキンの放出の100%減少である。
いくつかの実施例では、以下のモディフィケーションのうちの1つで構成されるFc領域(例:防-CD45)は、D265A、D265C / H435A、DLA/265C / LA、D265A / S239C / H435A、D265C / N297G / H435A、D265C(EPLAdelG *)、D265C(EPLAdelG) / H435A、D265C / N297Q / H435A、EPLVLAdelG / H435A、EPLAdelG / D265C、EPLAdelG / D265A、N297A、N297Q。
いくつかの実施形態において、本明細書では、抗CD45ボディは、D265A、D265C / H435A、D265C / H435A、D265C / LALA、D265C / H435A、D265C / N297G、N297G / H435A、D265C (IgG2*)、D265C (IgG2) / H435A、D265C / N297Q / H435A、D265C / N297Q、EPLVLAdelG / H435A、N297A、N297G、またはN297Qのいずれかを含むFc領域を含む。
改良Fc領域とFcガンマレセプターとの結合または親和性は、例えば、平衡法(例えば、ELISA; KinExA, Rathanaswami et al.)に限定されないが周知の様々な技術を用いて決定することができる。分析生化学Vol.373:52-60, 2008; 2008年;または、ラジオイムノアッセイ(RIA)、または、表面プラズモン共鳴アッセイまたは他のキネティクスベースのアッセイのメカニズム(例えば、BIACORE.RTM.分析またはOctetTM分析(forteBIO))、および他の方法、ならびに間接結合アッセイ、競争結合アッセイ、蛍光共鳴エネルギー移動(FRET)、ゲル電気泳動法およびクロマトグラフィー(例えば、ジェルフィルトレーション)。これらおよび他の方法は、検討中の成分の一つまたはそれ以上のラベルを利用することができ、また/または、発色性、蛍光、発光、または同位体標識を含むが、それに限らない多様な検出方法を使用することができる。結合する親和性と運動学についての詳細な記述は、Paul, W. E., ed., Fundamental Immunology, 4th Ed., Lippincott-Raven, Philadelphia (1999)に見られる。競合結合アッセイの一例は、増大する量の非標識抗原の存在下での標識抗原と目的の抗体とのインキュベーション、および標識抗原に結合した抗体の検出を含むラジオイムノアッセイである。特定の抗原に対する興味のある標本の親和性と結合オフレートは、スキャッチャードプロット分析によりデータから決定することができる。また、ラジオイムノアッセイを用いて、第二の抗菌剤との競合を判断することもできる。この場合、この抗原は、標識されていない第2のビーンズの増加量の存在の中で、標識化された複合物に接合された興味のあるビーンズと共にインキュベートされる。
一実施形態では、本明細書に記載されるFc未変性の(例えば、D265C、L234A、L235A、および/またはH435A)を有する抗原修飾は、Fcガンマ受容体への非修飾Fc領域を含む同一の抗菌剤の結合に対する、少なくとも70%減少、少なくとも80%減少、少なくとも90%減少、少なくとも95%減少、少なくとも98%減少、少なくとも99%減少、または100%減少を有する(例えば、バイオレイヤー干渉法(BLI)によって評価されるように)。
いかなる理論にも拘束されることを望まないが、Fcガンマ受容体とのFc領域結合相互作用は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害(ADCC)および補体依存性細胞傷害(CDC)を含むが、これらに限定されない、様々なエフェクター機能および下流シグナル伝達事象に必須であると考えられる。従って、特定の態様において、改良されたFc領域(例えば、L234A、L235A、および/またはD265C突然異変からなる)を含む抗菌は、エフェクター機能を実質的に減少または廃止した。効果機能は、関心応答に応じて細胞反応(例えば、マスト細胞の退化またはサイトキンの放出)を測定することによって、当該技術に知られている様々な方法を用いて評価することができる。例えば、通常の方法を用いて、例えば、ヒト周辺血液単核細胞によるように、Fc改良型抗生物質は、マスト細胞退化を引き起こすか、あるいはサイトキン放出を引き起こす能力のために、アッセイすることができる。
従って、一実施の形態では、Fc領域は、半減期(例えば、非改良Fc領域を有する接合体との関係)の減少をもたらす枝変わりを含んでいる。短い半減期を有する抗菌剤は、短寿命の治療として機能することが期待される場合には、ある場合には有利であろう。例えば、本書に記載されている条件付工程において、抗菌剤がHSCsによって管理されることが有利であろう。理想的には、HSCsの送達前に、このHSCsは実質的にクリアされるであろう。HSCsはまた、一般的には標的抗原(例えばCD45)を表現するが、内生の幹細胞とは異なり、反CD45の標的ではない。1つの実施形態では、Fc領域は、位置435(カバトによるEUインデックス)の突然異変を含む。1つの実施形態において、この突然変異はH435Aの突然変異である。
1つの実施形態において、本明細書に記載の抗CD45は、約24時間以下、約23時間以下、約22時間以下、約21時間以下、約20時間以下、約19時間以下、約18時間以下、約17時間以下、約16時間以下、約15時間以下、約14時間以下、約13時間以下、約12時間以下または約11時間以下の半減期(例えばヒトにおける)を有する。
一実施の形態では、ここに記載される抗CD45の半減期は、1～5時間、5～10時間、10～15時間、15～20時間、又は20～25時間である。ある実施形態では、抗CD45の半減期は約5～7時間、約5～9時間、約5～11時間、約5～13時間、約5～15時間、約5～20時間、約5～24時間、約7～24時間、約9～24時間、約11～24時間、約12～22時間、約10～20時間、約8～18時間、または約14～24時間である。
いくつかの側面では、Fc領域は、半減期を与え、また、抗菌の効果的な機能を減少させる2つ以上の突然変わりから成る。いくつかの実施形態では、Fc領域は、半減期の減少とFcirと直接接触できる少なくとも1つの残渣の突然変異をもたらすような(例えば、構造的及び結晶学的分析に基づく)突然変異を含む。1つの実施形態では、Fc領域はH435A突然異変、L234A突然異変、およびL235A突然異変を含む。1つの実施形態において、Fc領域はH435A突然異変とD265C突然異変を含む。1つの実施形態において、Fc領域は、H435A突然異変、L234A突然異変、L235A突然異変、およびD265C突然異変を含む。
いくつかの実施例では、それらの抗原結合フラグメントは、抗原結合フラグメントのFc領域内のシステイン残留物またはそれらの抗原結合フラグメントによってサイトトキシン(例えばPBD)に結合される。いくつかの実施例では、システイン残留物は、抗原結合フラグメントのFc領域における突然変異によって導入される。たとえば、システイン残基は、Cys118、Cys239、およびCys265からなる群から選ぶことができる。一実施の形態では、抗CD45のFc領域(又はそのフラグメント)は、カバトにおけるように、EU指数によれば、アミノ酸265におけるアミノ酸置換を含む。1つの実施形態において、Fc領域はD265C突然異変を含む。1つの実施形態では、Fc領域はD265CとH435Aの突然変わりを含む。1つの実施形態では、Fc領域はD265C、L234AおよびL235Aの突然変異を含む。1つの実施形態では、Fc領域はD265C、L234A、L235AおよびH435Aの突然変異を含む。加えて、または代替的に、いくつかの実施形態において、Fc領域はS239C突然異変を含む。1つの実施形態では、Fc領域はL234A突然異変、L235A突然異変、S239C突然異変およびD265A突然異変を含む。別の実施形態では、Fc領域はS239CとH435Aの突然変わりを含む。別の実施形態では、Fc領域はL234A突然異変、L235A突然異変、およびS239C突然異変を含む。さらに別の実施形態では、Fc領域は、H435A突然異変、L234A突然異変、L235A突然異変およびS239C突然異変を含む。さらに別の実施形態では、Fc領域は、H435A突然異変、L234A突然異変、L235A突然異変、S239C突然異変およびD265A突然異変を含む。
特に、Fcアミノ酸の位置は、特に示されていない限り、EU番号指数を参考にしている。
ここに記載された組成及び方法と併せて使用されることができる反体及び抗原結合フラグメントは、上述の抗生物質及び抗原結合フラグメント、並びに上述の非ヒト抗生物質及び抗原結合フラグメントのバリエーション、並びに、例えば、競合的抗原結合アッセイによって評価されるように、上述のものと同じエピトープを結合する抗生物質又は抗原結合フラグメントを含む。
本開示の抗性は、例えば、(Dall'Acqua他(2006)J Biol Chem 281: 23514-24)、(Zalevsky他(2010) Nat Biotechol 28: 157-9)、(Hinton他(2004)J Biol Chem 279: 6213-6)、(Shields他(2001)J Biol Chem 276: 6591-604)、(Petkova他(2006) Int Immunol 18: 1759-69)、(Darug Metab Dispos 35: 86-94)、(Vaccaro他(2005) Nat Biotechnol 23: 1283-8)、(Yeung他(2010年Cancer Res 70: 3269-77 と (Kim et al. (1999) Eur J Immunol 29: 2819-25) ポジションには、250、252、253、254、256、257、307、376、380、428、434、435が含まれます。特異的に、または組み合わせて行われ得る例示的な変異は、T250Q、M252Y、1253A、S254T、T256E、P2571、T307A、D376V、E380A、M428L、H433K、N434S、N434A、N434H、N434F、H435AおよびH435R変異である。
本分野におけるFc改良のいずれかを含める工学的アボディーの方法は周知である。これらの方法には、部位特異的(またはオリゴヌクレオチド媒介)突然変異誘発による調製、PCR突然変異誘発、および抗体または抗体の少なくとも定常領域をコードする調製されたDNA分子のカセット突然変異誘発が含まれるが、これらに限定されない。部位指向型ミュージエージェントは、この当業者でよく知られている(例えば、Carterら、Nucleic Acids Res、13:4431-4443(1985)およびKunkelら、Procを参照)。Natl.アカド。科学アメリカ, 82:488 (1987)).PCRのミューテージエージェントは、開始ポリペプチドのアミノ酸配列変形例を作るのにも適している。PCR Protocols, pp. 177-183(Academic Press, 1990)、およびVallette et al., Nucを参照。酸性研究所17:723-733 (1989).配列変形例であるカセットミューテージエージェントを準備する別の方法は、Wellsら、Gene, 34:315-323 (1985) によって記載された技術に基づいている。
抗体の同定方法
ヘマトポイティック・ステムによって表現されるCD45を結合することが可能な、高いスループット・スクリーニングのための方法、または、CD45を結合することが可能な、抗CD45を識別する方法は、ガン治療、自己感染症の治療、および、本書に記載されているように、血液細胞療法を必要とする患者(例えば、ヒト患者)のコンディショニングに役立つ、抗CD45を識別するために使用することができる。このような方法は、ここに記載されているAb1の改良版を識別するために使用することができる。このような方法には、ファージディスプレイ、細菌ディスプレイ、酵母ディスプレイ、哺乳類細胞ディスプレイ、リボソームディスプレイ、mrnaディスプレイ、およびcDNAディスプレイなどのような、当業者に知られている体外ディスプレイ技術が含まれる。
たとえばFeliciら、Biotechnolでは、生物学的に関連性のある分子を結合する抗原結合フラグメントを分離するためのファージディスプレイの使用が検討されている。Annual Rev. 1:149-183, 1995; Katz, Annual Rev.生態学。バイオモル。構造。26:27-45, 1997; 1997年;およびHoogenboom et al., Immunotechnology 4:1-20, 1998年。これらの開示は、それぞれがインビトロディスプレイ技術に関連するものとして本明細書に参考として援用される。ランダム化されたコンビナトリアル・ペプチド・ライブラリは、Kay, Perspectに記載されているように、細胞表面抗原を結合するポリペプチドを選ぶために構築されている。ドラッグディスカバリー・デス2:251-268, 1995年およびKayら、Mol.多様。1:139-140, 1996, 1996, 各開示は、抗原結合分子の発見に関するものであるので、ここに引用して参考文献に組み込まれている。多マー性タンパク質などのタンパク質は、機能分子としてファージ表示に成功している(たとえば、EP 0349578、EP 4527839、EP 0589877、それにChiswell とMcCafferty, Trends Biotechnolを参照)。10:80-84 1992, 1992, 各開示は、抗原結合分子の発見のためのin vitroディスプレイ技術の使用に関する引用としてここに組み込まれている。加えて、FabやscFvのような機能的な上記断片は、in vitroディスプレイ形式で表現されている(例えば、McCaffertyら、Nature 348:552554、1990; Barbasら、Procを参照)。Natl.アカド。科学米国88:7978-7982, 1991; and Clackson et al., Nature 352:624-628, 1991、各開示は、抗原結合分子の発見のためのin vitroディスプレイプラットフォームに関連するものとしてここに含まれる。HuMAb-Mouse(R)やXenoMouseTMなどでは、ヒトの抗CD45抗物質を生成することもできます。これらの技術は、特に、血液細胞によって表されるCD45を結合することが可能な、抗毒素、抗毒素、又はフラグメントの親和性を特定し改善するために使用され得る。これらは、逆に、血液細胞移植治療を必要とする患者(例えば、ヒト患者)の内生の血液細胞を枯渇させるために使用される。
体外ディスプレイ技術に加えて、計算モデル技術を用いて、血液細胞によって表現される抗原(例えばCD45)に結合することができる抗物質を設計し、同定することができる。例えば、当業者は、計算モデル技法を用いて、抗原の細胞外エピトープのような、血液細胞によって表現される抗原に特定のエピトープを結合することができる分子(例えば、CD45)のために、シリコ内の抗物質、又は抗原の断片の図書館をスクリーニングすることができる。
更なる技法は、たとえば、細胞によって内在化された、たとえば、レセプターを媒介とした内細胞によって表現される、血液細胞によって表現されるCD45を結合することが可能な、抗毒薬、または抗菌断片を識別するために使用することができる。例えば、上述した体外ディスプレイ技術は、CD45を結合し、その後内部化される抗物質、すなわち、抗生物質の断片をスクリーニングするのに適応することができる。フェイジ・ディスプレイは、この選別のパラダイムと併用できるそのような手法の一つである。白血病細胞によって内在化されることができる抗CD45検出、すなわち、抗CD45の断片を特定するために、当業者は、ウィリアムズら、Leukemia 19:1432-1438,2005に記載されているファージディスプレイ技術を使用することができる。この技術は、その全体としてここに参考文献に組み込まれている。例えば、当技術分野で知られているミュージネーション・ファージ・ライブラリーは、特に、scFvフラグメント、Fabフラグメント、ダイアボディ、トリアボディ、10のFn3ドメインのような抗生物質、あるいはランダム化されたアミノ酸カセットを含むリガンド(例えば、CDRまたは同等の領域の1つ以上または全部、またはそれに相当する領域、あるいはそれに相当する領域、または、抗生物質または断片)をエンコードする再結合ファージ・ライブラリーを作ることができる。フレームワーク領域、ヒンジ、Fcドメイン、および抗生他断片の他の領域は、例えば、ヒトのゲルムライン抗生他と比較してわずかな変化を示すヒトゲルムラインの配列を有することにより、それらがヒトにおいて非遺伝子性であるように設計されることができる。
本技術に記載されている、又は本技術に知られているファージディスプレイ技術を用いて、ランダム化された抗生物質、又はファージ粒子に同価結合しているファージライブラリーは、例えば、ファージライブラリーをブロッキング剤(例えば、抗生物質をエンコードしているファージを除去するために、ミルクプロテイン、ウヴィン・セラム・アルバミン、又はIgG)と最初にインキュベートすることにより、ファージライブラリーと同価に結合しているCD45と共にインキュベートし、その後、ファージライブラリーを、一群の細胞、例えば、CD45を表現している血液細胞と一緒にインキュベートすることにより、非特定性プロテイン結合及びファージをエンコードしているファージフラグメントを示すように、一緒にインキュベートすることができる。ファージライブラリーは、抗CD45抗体、または抗体断片が同族細胞表面抗原に結合し、続いて造血幹細胞により内在化されるのに十分な時間、造血幹細胞と共にインキュベートすることができ(例えば、4℃で1時間など、4℃で30分から6時間)、CD45に対して十分な親和性を示さない抗体、または抗体断片を含有するファージ含有抗体、または抗体フラグメント、結合を可能にし、造血幹細胞による内在化により、その後、細胞を、例えば、pH 2.8で低温(4℃)0.1Mグリシン緩衝液で洗浄することにより除去することができる。たとえば、細胞を分解し、細胞媒体から内部化されたファージを取り戻すことによって、血液細胞によって内在化された、抗毒薬、つまり、抗菌幹細胞に結合されたファージに結合したファージを同定することができる。次に、ファージは、例えば、当業者に知られている方法を用いて、回収されたファージと一緒に2xYT媒体で菌細胞をインキュベートすることによって、細菌細胞内で増幅することができる。この媒体から回収されたフェイジは、たとえば、ファージゲノム内に挿入された、抗物質をエンコードする遺伝子、あるいは、断片をエンコードする遺伝子の核酸配列を決定することによって特徴づけることができる。その後、コード化された抗生物質、すなわち、抗菌断片は、化学合成(例えば、scFv断片のような抗菌断片の)または組換え式(例えば、全長の抗菌剤の)によって新しく調製することができる。
例えば、当該技術に知られている放射性核種内部化アッセイを用いて、調製された抗生物質、或いは抗生物質断片の内部化能力を評価することができる。例えば、18 F、75 Br、 77Br、122 I、99 I、124 I、 125 I、ディスプレイI、211、67 Ga、111 In、 90Tc、 123 Yb、186 Re、64 Cu、129Cu、131 Lu、77 As、72 As、86 Y、86 Y、169 Zr、212Bi、213 Bi、67 Ac、225 Acなどの放射性同位体を取り入れることにより、機能化することができる。例えば、18 F、75 Br、 77 I、124 I、125 I、129 I、131 I、211 Aなどの放射性ハロジェンは、上記ハロジェン試薬(例えば、イオディネーションビード、サーモフィッシャーサイエンティフィック社、ケンブリッジ、マサ)を含むポリスチレンビードなどのビードを使用して、ディブ、またはディブフラグメントに組み込むことができる。放射性化抗物質、そのフラグメント、あるいはADCは、内在化を可能にするのに十分な時間(例えば、摂氏4度で1時間のように、摂氏4度で30分から6時間)にわたって、血液造血幹細胞育てることができる。その後、電池を洗浄して、非内部化の抗物質またはそれらのフラグメントを除去することができる(例えば、pH 2.8の冷(4° C)0.1Mのグリシン緩衝液を使用する)。内部化された抗体または抗体断片は、回収された洗浄バッファーの放出された照射(例えば、γ照射)と比較して、得られた造血幹細胞の放出された照射(例えば、γ照射)を検出することによって同定することができる。前述の内部化アッセイは、ADCの特徴を明らかにするのにも利用できる。
アンチボディーは、例えば米国特許に記載されているように、組み換え方法及び組成を用いて製造され得る。4,816,567号。一実施の形態では、ここに記載された反CD45の符号化である孤立した核酸が提供される。このような核酸は、VL及び/又は/又は、VHを含むアミノ酸配列(例えば、上記の軽鎖及び/又は重鎖)を含んでいるアミノ酸配列をコード化することができる。更なる実施の形態では、上記核酸を含む1つ以上のベクトル(例えば、表現ベクトル)が提供される。更なる実施の形態では、上記核酸を含む宿主細胞が提供される。上記実施形態の一例では、宿主細胞は、(1) VLを含むアミノ酸の配列を含むアミノ酸配列と、VHを含むアミノ酸の配列を示すアミノ酸の配列を示すベクトル、(2) および(2) VLを含むアミノ酸の配列を示すアミノ酸を含む第1ベクトルと、および、(VHを含むアミノ酸の配列を示すアミノ酸の配列を示す第2ベクトルを含む、(1)宿主細胞を構成するベクトルから成る。1つの実施例において、宿主細胞は真核生物である。例えば、中国のハムスターオヴァリー(CHO)細胞又はリンゴ細胞(例えば、Y0、NS0、Sp20セル)。一実施の形態では、抗CLL-1抗菌を作る方法が提供される。この方法は、上記のように、当該抗菌の表現に適した条件下で、また任意にホスト細胞(又はホスト細胞培地)からの抗菌を回収することにより、核酸からなるホスト細胞を作る。
アンチCD45の遺伝子組み換え生産のために、例えば、上述のように、抗CD45をエンコードする核酸が、1つ以上のベクトルに分離され、寄ホスト細胞内でさらなるクローン化および/または式のために挿入される。このような核酸は、従来の方法(例えば、上記の重鎖および軽鎖をコード化する遺伝子に特定的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用すること)を用いて、容易に分離および配列決定される。
抗菌ベクトルのクローンまたは表現に適した宿主細胞には、ここに記載されている原核細胞または真核細胞が含まれる。例えば、特にグリコシル化とFcエフェクター機能が不要な場合、抗生物質がバクテリアで生産されることがある。バクテリア中の抗菌断片及びポリペプチドの表現については、例えば、米国特許を参照されたい。No.5,648,237, 5,789,199, 5,789,199、および5,840,523。(Charlton, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K. C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, N.J., 2003), pp. 245-254、E. coliの中の抗菌断片の表現を参照のこと) 表現後、この抗菌は溶解分に含まれる細胞ペーストから分離され、さらに浄化される可能性がある。
垂直電池は宿主としても使用される。例えば、懸濁状態で成長するように適応した哺乳類細胞系が有用である。有用な哺乳類宿主細胞系の他の例としては、SV40(COS-7)によって変換されたサルのキドニー細胞(Grahamら、J. Gen Virol. 36:59(1977))、マウスセルトリ細胞(Mather, Biol. Reprodなどに記載されたTM4細胞)がある。23:243-251 (1980); サルのキドニー細胞(VERO-76); ヒトの内臓細胞(HELA); イヌのキドニー細胞(MDCK; バッファローの肝臓細胞(BRL 3A); ヒトの肺細胞(Hep G2); マウスのママリー細胞(MMT 060562); TRI細胞(Mather et al. N.Y.)アカド。科学383:44-68 (1982); (1982); MRC 5細胞;およびFS4細胞。その他の有用な哺乳類宿主細胞系には、DHFRCHO細胞(Urlaubら、Proc. Natal. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980))を含む中国ハムスター卵巣(CHO)細胞、およびY0、NS0およびSp2/0のような骨髄細胞系が含まれる。抗菌製造に適した哺乳動物のホスト細胞系のレビューについては、例えば、Yazaki and Wu, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B. K. C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, N.J.), pp. 255-268 (2003)を参照。1つの実施例において、宿主細胞は真核生物である。例えば、中国のハムスターオヴァリー(CHO)細胞又はリンゴ細胞(例えば、Y0、NS0、Sp20セル)。
細胞毒素
本書に記載されるように、抗CD45抗毒物およびそれらの抗原結合フラグメントは、細胞毒素、例えば、本書に記載されているように、PBDまたはIGNのようなベンゾジアゼピン湿潤を含む細胞毒素と結合(結合)することができる。
ピロロベンゾジアゼピン(PBD)
いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるようにCD45に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントは、ピロロベンゾジアゼピン(「PBD」)である細胞毒素またはPBDを含む細胞毒素に結合され得る。PBDは、特定のアクチノミセートによって生成される天然産物であり、配列選択的DNAアルキル化化合物であることが示されている。PBD細胞毒素は、アントラマイシン、ジメリックPBDおよび、例えば、Hartley, JA (2011)で開示されているものを含むが、これらに限定されない。抗腫瘍剤としてのピロロベンゾジアゼピン系薬剤の開発。エキスパートOpin Inv drug, 20(6), 733-744 and Antonow D, Thurston DE (2011) DNA-インタラクティブピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン(PBDs)の合成。Chem Rev 111: 2815-2864。
PBDsは一般的な構造:
[化１７]
それらは、それらの芳香族(「A」)リングとピロロ(「C」)リングの両方において、またCリングの飽和度において、置換体の数、タイプおよび位置において異なっている。ジアゼピンB環には、N10-C11位置にイミン(N=C)、カルビノラミン(NH-CH(OH))、またはカルビノラミン・メタルエーテル(NH-CH(OMe))が存在する。この位置はDNAアルキル化の原因となる電離基である。既知の天然製品PBDのすべては、カイラルC11aの位置に(S)配置を有し、これはC環からA環に向かって見たとき、それらに右撚りを与える。これは、B型DNAの副溝との等ヘリシティに適宜三次元形状を提供し、結合部位に密着する(Kohn, In Antibiotics III. Springer-Verlag, New York, pp. 3-11 (1975); Hurley and Needham-VanDevanter, Acc)。化学研究所、19,230-237(1986))PBDsが小さな溝に付加物を形成する能力により、それらはDNA処理を妨げることができ、結果的に抗がん活性をもたらす。
これらの分子の生物学的活性は、柔軟性アルキレンリンリンク装置(Bose, D. S., et al., J. Am. Chem. Soc., 114, 4939-4941 (1992年); Thurston, D. E., et al., J. Org)を介して、2つのPBDユニットを結合することにより、可能であることが以前に開示されている。Chem., 61, 8141-8147 (1996).PBD二量体は、パリンドローム5'-Pu-GATC-Py-3'ストランド間架橋(Smellie, M., et al., Biochemistry, 42, 8232-8239 (2003); Martin, C., et al., Biochemistry, 44, 4135-4147)のような配列選択的DNA損傷を形成すると考えられ、これらは主にそれらの生物活性に関与すると考えられる。Gregson et al. (Chem. Commun. 1999, 797-798; "複合体1"およびGregson et al. (J. Med. Chem. 2001, 44, 1161-1174; "複合体4a")は、有利な二量体ピロロロロロンボジアゼピン化合物を記載している。この複合体は、SG2000としても知られているが、構造式である。
[化１８]
一般的に、ピロリジンアルケン類への改変は、結合部を同価に結合するハンドルを提供
し、それゆえ、それらの抗物質または抗原結合フラグメント(-L-Z'および-L-Z-Ab、本稿に記載されているように)を提供する。あるいは、N10の位置にリンカーを取り付けることもできる。
いくつかの実施形態において、細胞毒素は、構造式に代表されるピロロロンボゾジアゼピンダイマーである。
[化１９]
nは2から5までの整数です。nが3であるこの公式の複合体はDSB-120として知られている(Boseら、J. Am. Chem Soc. 1992, 114, 4939-4941)。
いくつかの実施形態において、細胞毒素は、構造式に代表されるピロロロンボゾジアゼピンダイマーである。
[化２０]
nは2から5までの整数です。nが3であるこの式の複合体はSJG-136として知られている(Gregsonら、J. Med. Chem. 2001, 44, 737-748)。nが5であるこの式の複合体はDRG-16として知られている(Gregsonら、Med. Chem. 2004;47:1161-1174)。
いくつかの実施形態において、細胞毒素は、構造式に代表されるピロロロンボゾジアゼピンダイマーである。
[化２１]
ウェーブラインとは、以下に述べるように、ADCのリンカーへの等価な付着点を示す。このPBDに基づくADCは、例えば、Sutherland et al., Blood 2013 122:1455-1463に開示され、これは、ここにその全体として含まれる。
いくつかの実施形態において、細胞毒素は、構造式によって表されるPBD量体である:
[化２２]
ここでnは3または5であり、この波線は、ここに説明したように、ADCのリンカーへの等価な付着の点を示す。
いくつかの実施形態において、細胞毒素は、構造式(I)に代表されるPBD量体である:
[化２３]
ウェーブラインとは、以下に述べるように、ADCのリンカーへの等価な付着点を示す。
Indolinobenzodiazepines (IGNs)
幾つかの実施例において、本記載のCD45を結合する抗毒物又は抗原結合フラグメントは、インドリノベンゾジアゼピン(「IGN」)またはIGNを構成する細胞毒素に結合することができる。いくつかの実施形態において、IGN細胞毒素は、インドリノベンゾジアゼピンダイマー又はインドリノベンゾジアゼピンプソドジマーである。
インドリノベンゾジアゼピンダイマーは、癌細胞に対するビトロ効能が高い(低pMレンジIC50値)細胞毒素の比較的新しい化学的な教室である。PBD量体のSJG-136と同様に、IGN量体はDNAのマイナーグルーブに結合し、量体の2つのイミン機能を介してグアニン残基と同価に結合し、DNAのクロスリンクをもたらす。IGN量体(IGN 6;PBD潤滑剤の塩基をフェニル基環に置き換える)は、おそらくDNA IGNとの付加物形成の速い速度のために、SJG-136と比較して、ビトロで10倍以上の効能を示した(例、Millerら、「ポテントDNAアルキル化活性を有する新しいタイプの抗体-薬物コンジュゲート」Mol. Cancer. 2016, 15(8), 1870-1878を参照)。対照的に、IGN擬似物は単一反応性インドリノベンゾジアゼピンイミンを含み、ジメリックサイトトキシン中の第2インドリノベンゾジアゼピンは減少した(アミン)形態で存在する。従って、IGN擬ジマーは、二量体中に存在する単一のイミン部分を介してDNAをアルキル化し、DNAを架橋しない。
いくつかの実施形態において、細胞毒素は、公式の構造を持つIGN擬似体である。
[化２４]
ウェーブラインはリンカーの付着点を示す。
幾つかの実施例において、細胞毒素リンカー共役体は、接合前にCy-L-Z'としてまとめられた、反応性代替物Z'を含むが、構造を有する。
[化２５]
この細胞毒素リンク剤は、ここではDGN549と呼ばれ、ADC IMGN632に存在するが、両者は、例えば、引用により本書に組み込まれている国際特許出願第WO2017004026号に開示されている。
いくつかの実施形態において、細胞毒素は、公式の構造を持つインドリノベンゾジアゼピンの擬似物である。
[化２６]
ウェーブラインはリンカーの付着点を示します。このIGNプセドジメロサイトトキシンは、例えば、本文中に含まれる米国特許出願第20170080102号において開示されているDGN462としてここに参照される。
幾つかの実施例において、細胞毒素リンカー共役体は、抗菌への接合前にCy-L-Zとしてまとめられた化学物質Zを含むが、構造を有する。
[化２７]
ここで、波線は、抗体(例えば、抗CD45抗体またはそのフラグメント)への結合点を示す。この細胞毒素リンク剤は、例えば、本文中に既に含まれていた米国特許出願公報No.20170080102に開示されているADC IMGN779に存在する。
リンカー
ここで使用される「リンカー」という用語は、相価結合又はその反CD45(Ab)を細胞毒素(例えばPBD)に等価接着剤(ADC)を形成するために同価接着剤又はそのフラグメント(Ab)を相乗的に付着させる原子の連鎖を含む同価化学物質を意味する。
上記抗体および薬物部分の共有取付部材は、リンカーが2つの反応性官能基(すなわち、反応の意味において二価)を有することを要する。ペプチド、核酸、薬方法、毒素、抗毒素、ハプテン、およびレポーターグループのような、2つ以上の機能的または生方法学的に活発なモイテイを付着させるのに有用な二価リンカー試薬が知られており、その結果として生じた結合方法(Hermanson, G. T. (1996) バイオコンジュゲートテクニック; アカデミックプレス: ニューヨーク、234-242ページ)が記載されている。
従って、現在のリンカーは、2つの反応性ターミニを持っている。1つは、抗菌に対する共役であり、もう1つは、細胞毒素に対する共役である。リンカーの共役反応性ターミナル(ここではZ'として定義する反応性物質)は、典型的には、例えば、抗菌に対するシステインチオールまたはリジンアミングループを通して共役できる化学物質であり、したがって、典型的には、マイケルアクセプター(マレイミドのような)、クロロ、ブロモ、イオドまたはR-スファニールグループのような脱離基、またはカーボキシルグループのようなアミン反応性グループである。リンカーと抗菌剤の結合については、ここでより詳しく説明する。
リンカーの細胞毒素共役反応性ターミナルは、細胞毒素分子内の反応性代替物との結合を形成することによって細胞毒素に共役することができる化学的な基質である。限定されていない例としては、例えば、リンカー上のカルボキシル又は基本アミン基を経由して、細胞毒素上の基本アミン又はカルボキシル基とアミド結合を形成すること、又は細胞毒素上のOH又はSH基のアルキル化を経て、それぞれ細胞毒素上のエーテル、硫化物等を形成することが挙げられる。
「リンカー」という用語が活用形でリンカーを説明する際に使用されるとき、反応性ターミニの一方又は両者は、リンカー及び/又は細胞毒素の間の結合の形成、並びにリンカー及び/又はそれらのリンカー又はそれらの抗原結合フラグメントの間の結合のために、不完全(例えば、以下に述べるように、反応性モアチュアZに変換されたZ'のような)又は不完全(例えば、カルボキシル酸のカルボニールのみである)でなくなるだろう。このような共役反応については、ここでさらに詳しく説明する。
種々のリンカーを使用して、細胞傷害性分子に記載された抗体、抗原結合フラグメント、および配位子を結合させることができる。一般的には、本開示に適したリンカーは、循環において実質的に安定しているが、標的細胞内又は近接において細胞毒素の放出を可能にすることができる。幾つかの実施例において、本開示に適した特定のリンカーは、「クレー発明」又は「非クレー発明」として分類され得る。一般的に、切り離すことができるリンカーは、生理学的環境に応じて切り離される1つ以上の官能基を含む。例えば、クレーバブルリンカーには、細胞内エンザイム(例えば、カテプシンB)の存在で分解するエンザイマティック基材(例えば、バリン・アラニーン)、細胞区画の酸性環境で分解する酸性クリーバブル基(例えば、ハイドロゾーン)、または細胞内還元環境で分解する還元性基(例えば、ジスルフィド)を含むことができる。対照的に、一般的には、ターゲット細胞内のADCの抗たん水分の劣化(例、リソマル劣化)中に、非浄化可能なリンカーがADCから放出される。
切断不能なリンカー
本明細書での使用に適した, -(C=O)-, C1 -C12アルキレン、C1 -C12ヘテロアルキレン、C2-C12アルケニレン、C2 -C12ヘテロアルケニレン、C2 -C12 アルキニレン、C2-C12 ヘテロアルキニレン、C3 -C12 シクロアルキレン、ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、ヘテロアリン、およびそれらの組合せから選択される1つまたは複数のグループをさらに含み、それらの各々は任意に置換されてもよく、および/または1つまたは複数のヘテロアトム(例えば、S、N、またはO)を1つまたは複数の原子の代わりに含んでもよい。このようなグループの非限定的な例としては、アルキレン(CH2)p, (C=O)(CH2)r,および(PEG; (CH2 CH2 O)q)、単位、-(NHCH2 CH2)u-があり、ここで、p、q、r、t、およびuのそれぞれは、発生ごとに独立して選択される1～12の整数である。
いくつかの実施形態において、リンカLは、結合、-(C=O)-、a -C(O)NHgroup、-OC(O)NHgroup、C1-C12アルキレン、C1 -C12ヘテロアルキレン、C2 -C12 アルキレン、C2-C12ヘテロアルケニレン、C2 -C12 アルキニレン、C2 -C12 ヘテロアルキニレン、C3-C12 シクロアルキレン、ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、ヘテロアリーレン、-(CH2CH2 O)q - groupのうちの1つ以上を含む。ここで、qは、1-12からの整数である。
それぞれのC 1 -C 12アルキレン、C 1 -C 12ヘテロアルキレン、C 2-C 12アルケニレン、C 2 -C 12 ヘテロアルキニレン、C 2 -C 12 ヘテロアルキニレン、C 3-C 12 シクロアルキニレン、ヘテロシクロアルキレン、ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、またはヘテロアリーレンは、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルカリ、ヘテロアリール、アルキルヘテロアリール、アミノ、アンモニウム、アシル、アシルオキシ、アシルアミノカルボニル、アルコキシカルボニル、ウレイド、カルバメート、アリール、ヘテロアリール、スルフィニル、スルホニル、ヒドロキシル、アルコキシ、スルファニル、ハロゲン、カルボキシ、トリハロメチル、シアノ、ヒドロキシ、メルカプト、およびニトロからなる群からそれぞれ独立に選択される1～5個の置換基で置換されていてもよい。
いくつかの実施形態において、それぞれのC1-C12アルキレン、C1 -C12ヘテロアルキレン、C2 -C12アルケニレン、C2-C12ヘテロアルケニレン、C2 -C12 アルキニレン、C2 -C12 ヘテロアルキニレン、C3-C12 シクロアルキレン、ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、またはヘテロアリーレンは、任意にO、SおよびNから選択される1つ以上のヘテロアトによって中断されてもよい。
いくつかの実施形態において、それぞれのC 1-C 6アルキレン、C 1 -C 12ヘテロアルキレン、C 2 -C 12アルケニレン、C 2-C 12 ヘテロアルキニレン、C 2 -C 12 ヘテロアルキニレン、C 3 -C 12 シクロアルキニレン、ヘテロシクロアルキレン、ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、またはヘテロアリーレンは、O、SおよびNから選択される1つ以上のヘテロ原子によって任意に中断されてもよく、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルキアリール、ヘテロアリール、アルキルヘテロアリール、アミノ、アンモニウム、アシル、アシルオキシ、アシルアミノカルボニル、アルコキシカルボニル、ウレイド、カルバメート、アリール、ヘテロアリール、スルフィニル、スルホニル、ヒドロキシル、アルコキシ、スルファニル、ハロゲン、カルボキシ、トリハロメチル、シアノ、ヒドロキシ、メルカプト、およびニトロからなる群から選択される1～5いくつかの実施形態において、切断可能でないリンカーは、-(CH2)n-ユニットを含み、非nは、2-12からの整数、例えば2-6である。いくつかの実施形態において、切断不可能なリンカーは、-(CH2)nを含む。ここで、nは、1、2、3、4、5、または6である。いくつかの実施形態において、切断不可能なリンカーは、-(CH2)n-ここで、nは、公式によって表される6である。
[化２８]
切断可能なリンカー
いくつかの実施例では、リンカーの切断により細胞内環境内の抗毒素単位からサイトトキシン単位が放出されるような、アンチCD45(又は抗原結合フラグメント)とサイトトキシン(例えば、PBD)を活用するリンカーは、細胞内条件下では切り離すことができる。クリーン低下リンカーは、例えば、標的細胞内で細胞毒素の放出を引き起こすために、局所環境、例えば、細胞外および細胞内環境の違いを利用するように設計されている。一般に、分割可能なリンカーは、循環において比較的安定であるが、1つ以上の機構(例えば、プロテアーゼ、ペプティダーゼ、グルクロニダーゼの活動を含むが、それに限定されない)を通して、細胞内環境において特に分裂しやすい。本分野で使用される可解リンカーは、ターゲット細胞の循環プラズマおよび/または外で実質的に安定であり、ターゲット細胞の内部またはターゲット細胞に近接したところで、何らかの効果的な速度で切り離されることができる。
適切な切断可能なリンカーは、例えば、酵素的加水分解、光分解、酸性条件下での加水分解、基本条件加水分解、酸化、ジスルフィド還元、求核切断、または有機金属切断によって切断され得るものを含む(例えば、Leriche et al., Bioorg. Med. Chem., 20:571-582, 2012を参照のこと、その開示は、共有共役共役に適したリンカーに関連するとして、参照により本明細書に組み込まれる)。適切な切断可能なリンカーは、例えば、ヒドラジン、ジスルフィド、チオエーテルまたはジペプチドなどの化学的部分を含み得る。
酸性条件下で加水分解可能なリンカーには、例えば、ヒドラゾン化合物、セミカルバゾン、チオセミカルバゾン、cis-アコニットアミド、オルトエステル、アセタール、ケタールなどが含まれる。(例えば米国特許を参照。No.5,122,368; 5,824,805; 5,824,805; 5,622,929; Dubowchik and Walker, 1999, Pharm.Therapeutics 83:67-123; Neville et al., 1989, Biol.Chem. 264:14653-14661、各開示は、同価活用に適したリンカーに関連するので、ここにその全体として参考文献に含まれる。このようなリンカーは血液中のような中性のpH条件下では比較的安定であるが、pH 5.5または5.0(リソソームの上記pH)以下では不安定である。
還元条件下で掃除可能なリンカーには、例えばジスルフィドが含まれる。例えば、アドバンストテクノロジアタッチメント (N-スクシンイミジル-S-アセチルチオアセテート)、SPDP (N-スクシンイミジル-3-(2-ピリジルジチオ)プロピオナート)、SPDB (N-スクシンイミジル-3-(2-ピリジルジチオ)酪酸)及びSMPT (N-スクシンイミジル-オキシカルボニル-α-メチル-α-(2-ピリジル-ジチオ)トルエン)、SPDB及びSMPTを用いて形成することができるものを含む、種々のジスルフィドリンカーが当該技術分野において公知である(例えば、Thorpe et al., 1987, Cancer Res)。47:5924-5931; Wawrzynczak et al., In Immunoconjugates: Antibody Conjugates in Radioimagery and Therapy of Cancer (C. W. Vogel ed., Oxford U. Press, 1987.米国特許も参照のこと。No. 4,880,935は、各々の開示が、共有結合共役に適したリンカーに関連するので、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
酵素的加水分解に感受性のリンカーは、例えば、細胞内ペプチダーゼまたはプロテアーゼ酵素(リソソームまたはエンドソームプロテアーゼを含むが、これらに限定されない)によって切断されるペプチド含有リンカーであり得る。治療薬剤の細胞内プロテオリズム放出を使用することの1つの利点は、その薬品が接合されたときに典型的に減衰され、接合体の美容安定性が一般的に高いことである。いくつかの実施形態において、ペプティルリンカーは少なくとも2つのアミノ酸が長いか少なくとも3つのアミノ酸が長い。典型的なアミノ酸リンカーには、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチドまたはペンタペプティドが含まれる。適切なペプチドの例には、バリン、アラニン、シトルリン、フェニルアラニン、リジン、ロイシン、およびグリシンのようなアミノ酸を含有するものが含まれる。アミノ酸リンカー成分を構成するアミノ酸残留物には、天然のものに加え、マイナーなアミノ酸や、シトルリン等の非天然のアミノ酸類似物が含まれます。典型的なジペプチドには、フェニルアラニン-シトルリン(vcまたはval-cit)およびアラニーン-フェニーラニン(afまたはala-phe)が含まれる。例示的なトリプペプチドには、グリシン-フェニルアラニン-シトルリン(gly-val-cit)とグリシン-glycine-glycine (gly-gly-gly)が含まれる。いくつかの実施形態において、リンカーは、Val-Cit、Ala-Val、又はPhe-Lys、Val-Lys、Ala-Lys、Phe-Cit、Leu-Cit、Ile-Cit、Phe-Arg又はTrp-Citのようなジペプチドを含む。Val-CitやPhe-Lysのようなジペプチドを含むリンカーは、例えば米国特許に開示される。No.6,214,345。この開示は、本引用文献全体として、同価活用に適したリンカーに関するものであるから、ここに組み込まれている。いくつかの実施形態において、リンカーは、Val-AlaおよびVal-Citから選ばれたジペプチドを含む。
本明細書中に記載される抗体、抗原結合フラグメント、および配位子を細胞傷害性分子に結合させるのに適したリンカーには、1,6-脱離処理によって細胞毒素を放出することができるものが含まれる。この脱離処理が可能な化学部分は、p-アミノベンジル(PAB)基、6-マレイミドヘキサン酸、pH感受性炭酸塩、およびJainら、Pharmに記載されるような他の試薬を含む。研究32:3526-3540, 2015, 2015, それらの開示は、それが同価活用に適したリンカーに関連するので、ここにその全体として参考文献に組み込まれている。
いくつかの態様において、リンカーは、例えば、Carlら、J. Medに開示されている、前述のPABまたはPABC (パラ-アミノベンジルオキシカルボニル)などの「自己不溶性」基を含む。Chem. (1981) 24:479-480; Chakravarty et al (1983) J. Med.Chem. 26:638-644; US 6214345; US20030130189; US20030096743; US6759509; US20040052793; US6218519; US6835807; US6268488; US20040018194; W098/13059; US20040052793; US6677435; US5621002; US20040121940; W02004/032828).このプロセスが可能な他のそのような化学部分(「自己非揮発性リンカー」)には、メチレンカルバメートおよびアミノチアゾール、アミノイミダゾール、アミノピリミジンなどのヘテロアリール基が含まれる。このようなヘテロ循環的な自己グループを含むリンカーは、例えば、米国特許公開番号に開示される。20160303254および20150079114、ならびに米国特許第7,754,681号; Hayら(1999) Bioorg。中央値。Chem. Lett.9:2237; 米国2005/0256030; de Groot et al. (2001) J. Org.Chem. 66:8815-8830; およびUS 7223837。いくつかの実施形態において、ジペプチドは、自己不滅リンカーと組み合わせて使用される。
いくつかの実施例において、リンカLは、1つ以上のハイドラジン、ジスルフィド、チオエーテル、アミノ酸、最大10のアミノ酸からなるペプチド、p-aminobenzyl (PAB)グループ、ヘテロ周期的な自己運動性グループ、C 1 -C 12 ヘテロアルキル、C 1-C 12 ヘテロアルキル、C 2 -C 12 ヘテロアルキンイル、C 2 -C 12 ヘテロアルキンイル、C 2-C 12 ヘテロアルキンイル、C 3 -C 12 シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、a -(C=O)グループ、a -(C)NHグループ、an -OC(O)NHグループ、an -(O)NHグループ、a -(CH 2 CH 2 O)qグループ、又はa -(OOJ O)グループであり、pが1-12の整数である。
ここで、各々のC 1-C 12 アルキル、C 1 -C 12ヘテロアルキル、C 2 -C 12アルケニル、C 2-C 12 ヘテロアルケニル、C 2 -C 12 ヘテロアルキニル、C 2 -C 12 ヘテロシクロアルキル、C 3 -C 12 ヘテロアルキニル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリール基は、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルキアリール、ヘテロアリール、アルキルヘテロアリール、アミノ、アンモニウム、アシル、アシルオキシ、アシルアミノカルボニル、アルコキシカルボニル、ウレイド、カルバメート、アリール、ヘテロアリール、スルフィニル、スルホニル、ヒドロキシル、アルコキシ、スルファニル、ハロゲン、カルボキシ、トリハロメチル、シアノ、ヒドロキシ、メルカプト、およびニトロからなる群から各々独立して選択される1～5個の置換基で置換される。
いくつかの実施形態において、それぞれのC 1-C 12 アルキル、C 1 -C 12ヘテロアルキル、C 2 -C 12アルケニル、C 2-C 12 ヘテロアルケニル、C 2 -C 12 アルキニル、C 2 -C 12 ヘテロアルキニル、C 3-C 12 シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリール基は、場合により、O、SおよびNから選択される1つ以上のヘテロ原子によって中断され得る。
いくつかの実施形態において、C 1-C 12 アルキル、C 1 -C 12アルキル、C 2 -C 12アルケニル、C 2-C 12 アルケニル、ヘテロアルケニル、C 2 -C 12 アルキニル、ヘテロアルキル、C 3 -C 12 シクロアルキル、アリール、またはヘテロアリール基は、O、Sから選択される1つ以上のヘテロ原子によって任意に中断され、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アルカリアルキル、ヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アミノ、アシル、アシルオキシ、アシルアミノカルボニル、アミノカルボニル、アルコキシカルボニル、ウレイド、カルバメート、アリール、ヘテロアリール、スルホニル、ヒドロキシル、スルホニル、アルコキシ、スルファニル、ハロゲン、カルボキシ、トリハロメチル、シアノ、ヒドロキシ、メルカプト、およびニトロからなる群より独立して選択される1つまたは5つの置換基で任意に置換され得る。
当業者は、リストされたグループのうちの1つ以上が、二価(ジラディカル)種、例えばC1-C12アルキレン等の形で存在することを認識するであろう。
いくつかの実施形態において、リンカーLは、部分*-L1 L2 -**を含む:
L1がないか-(CH2)m NR1C(=O)-, -(CH2)m NR1 -, -(CH2)mX3 (CH2)mである。
[化２９]
L2が存在しないか、-(CH2)m -、-(CH2)NR1 C(=O)m -、-(CH2)Nm C(=O)X4、-(CH2)Nm -(CH2)C(=O)-(CH2)m -(CH2)m -(CH2)m n -(CH2)m -、-(NR1)(CH2)X3 ((CH2)m -, -(CH2))n -、-NR1(CH2)n (m O)m X3 (CH2)m -、-X1 X2 C(=O)m -、-(CH2)m -(CH2)m -(CH2)m -、-(CH2)m -(O)m(CH2)n、-(CH2)m NR1(m)m -、-(CH2)m NR1 C(=O)(CH2)m X3 (CH2)m -(CH2)m C(=O)NR1(CH2)m NR1 C(=O)mm C(=O)-, - (m)mNR1 (CH2)m C(=O)X2 X1C(=O)-, -(CH2)m X3 (CH2)mC(=O)X2 X1 C(=O)-, - (CH2)m C(=O)NR1(CH2)m -, -(CH2)m C(=O)NR1(CH2)m X3 (CH2)m CH2)mNR1 C(=O)(CH2)m -, -(CH2)mX3 (CH2)m C(=O)NR1 (CH2)CH2-, - (CH2)m O)n (CH2)mNR1 C(=O)(CH2)m -, -(CH2)mC(=O)NR1 (CH2)m (O(CH2)m)n-, - (CH2)m (O(CH2)m)nC(=O)-, -(-, -(CH2)m X3 (CH2)mNR1 (CH2)m C(=O)-, -(CH2)mC(=O)NR1 (CH2)m NR1 C(=O)-, -(CH2)m(O(CH2)CH2)n X3 (CH2)m-, - (CH2)m X3 ((CH2)mO)CH2)m X3 (CH2)mC(=O)-, - (CH2)m C(=O)NR1 (m)mO)n (CH2)m X3 (CH2)m-, - (CH2)m X3 (CH2)m(O(CH2)m)n NR1 C(=O)(CH2)m-, -(CH2)m X3 (CH2)m(O(CH2)m)n C(=O)-, -(CH2)mX3 (CH2)m (O(CH2)m)n-, -(CH2)m C(=O)n (CH2)m-, -(CH2-, -(CH2)m C(=O)NR1 (CH2)m(O(CH2)(=O)NR1 (CH2)m -)nC(=O)-, -((m)m O)n (CH2)mNR1 C(=O)(CH2)m -, -(CH2)mC(=O)NR1 (CH2)m C(=O)NR1 (CH2)m-, -(CH2)m NR1 C(=O)(CH2)mNR1 C(=O)(CH2) -(CH2)NR1 (CH2)mC(=O))NR1 -, -(CH2)m C(=O)NR1 -, -(CH2)m X3 -, -C(R1)2(CH2)m -, -(CH2)m C(R1)2NR1 -, -(CH2)m C(=O)NR1 (CH2)mNR1 -, - (CH2)m C(=O)NR1 (CH2)mNR1 C(=O)m X3 (CH2)mC(=O=O)X2 X1 C(=O)-, - C(R1)2 (CH2)mNR1 C(=O)(CH2)m -, -(CH2)CH2mC(R1)2 NR1 -, - C(R1)2(CH2)m X3 (CH2)m -, -(CH2)mX3 (CH2)m C(R1)2 NR1-, NR1 -, -(CH2)m C(NR1 (CH2)m-, -(CH2)m NR1 C(=O)O(CH2)mC(R1)2 NR1 -, -(CH2)m mC(=O)NR1 (CH2)CH2)m X3(CH2)m (O(CH2)m) n NR1-, -(CH2)m NR1 -C(R1)2(CH2)m OC(=O)O)NR1 (CH2)m(O(CH2)m)X3 (CH2)m NR1-, -()m S(=O)2 -, - (CH2)m C(=O)NR1 n NR1 -, -(CH2)m (CH2)nNR1 -, -(CH2 CH2 O)n (CH2)m-, -(CH2)m (OCH2 CH2)n;-(CH2)m -, -(CH2)m C(=)(CH2)mS(=O)2O(m))O(CH2)m -, -(CH2))-, -(CH2)m X3 (CH2)n C(=O)X2X1 C(=O(m S(=O)2 -, -)))m)nX2 X1 C(=O)-, - -, -(CH2)m (O(CH2m n X2 X1 C(=O)-, -)(CH2)mX2 X1 C(=O) -, -(CH2)m (O()(CH2)mX3 (CH2)m CO)-)(CH2)mX3 (CH2)m X2 X1 C(=O)-, -(CH2 C(=O)(CH2)(m O)(=O)-, -(CH2)C(=O)-, -(CH2O)m X3 (CH2)m C(=O (NR1 (CH2)m C(=O))-, -(CH2)mX3 (CH2 - またはm X3 (CH2)m (O(CH2 m(O(CH2)m)n C C(=O)-;
(式中、
X1は
[化３０]
X2は
[化３１]
(式中、
R1は、HおよびC1 -C6のアルキルからそれぞれ独立に選択される。
mは、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10の各機会ごとに選択されます;
n は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14 からそれぞれの機会に独立して選択される。
単一の星印(*)は細胞毒素への付着点(例:PBD)を示し、二重星印(**)は反応性代名詞Z'または化学元素Zへの付着点を示し、ただしL1とL2の両方が欠けていないことを示している。
いくつかの実施形態において、リンカーは、p-aminobenzyl基(PAB)を含む。ある実施形態では、p-アミノベンジル基は、リンカー内の部位トキシック薬物とプロテアーゼ切断部位の間に処分される。1つの実施形態において、p-アミノベンジル基はp-アミノベンジルオキシカルボニル単位の一部である。一実施の形態では、p-aminobenzyl基は、p-aminobenzylamido単位の一部である。
いくつかの実施形態において、リンカーは、Phe-Lys、Val-Lys、Phe-Ala、Phe-Cit、Val-Ala、Val-Cit、およびVal-Argからなるグループから選ばれたペプチドからなる。いくつかの実施形態において、リンカーは、PAB、Val-Cit-PAB、Val-Ala-PAB、Val-Lys(Ac)-PAB、Phe-Lys-PAB、Phe-Lys(Ac)-PAB、Phe-Lys(Ac)-PAB、D-Val-Leu-Lys、Gly-Gly-Arg、Ala-Ala-Asn-PAB、又はAlいくつかの実施形態では、リンカーは、ペプチド、オリゴ糖OBC=O)(CH2 CH2 O)t -, -(NHCH2CH2)u -, -PAB、Val-Cit-PAB、Val-Ala-PAB、Val-Lys(Ac)-PAB、Phe-Lys-PAB、Phe-Lys(Ac)-PAB、D-Val-Leu-Lys、Gly-Gly-Arg、Ala-Ala-Asn-PAB、またはAla-PABのうちの1つ以上を含み、p、q、r、t、およびuのそれぞれは、発生ごとに独立して選択される1～12の整数である。
いくつかの実施形態において、リンカーは、を構成する。
[化３２]
いくつかの実施形態において、リンカーはMCC (4-[N-maleimidomethyl]シクロヘキサン-1-カルボキシレート)を含む。
いくつかの実施形態では、リンカーは、PAB-Ala-Val-またはPAB-Cit-Val-、-(C=O)(CH2)r-単位、-(C=O)(CH2 CH2 O)t-単位、および-(NHCH2 CH2)u-単位を含み、r、t、およびuは、それぞれの場面から独立して選択される1から12までの整数である。
いくつかの実施形態において、リンカーは、PAB-Ala-Val-またはPAB-Cit-Val-、-(C=O)(CH2)r-単位、-(C=O)(CH2 CH2 O)t-単位、および-(NHCH2 CH2)u-単位を含み、r=2、t=8、およびu=1である。特に、リンカーは、式(II)で表されてもよい。
[化３３]
ここで、R1 はCH3 (Ala) または(CH2)3NH(CO)NH2 である。
本分野の当業者は、本分野で開示される化学グループ、モイティー、および特徴のいずれか1つ以上が、本分野で開示されるように、抗毒素および細胞毒素の活用に有用なリンカーを形成するために、複数の方法で結合することができることを認識するであろう。
リンカー-サイトトキシンおよびリンカー-抗体結合
ある種の実施例において、リンカー-細胞毒素共役を形成するための適切な条件下で、リンカーは細胞毒素と反応する。ある種の実施例では、反応性グループが細胞毒素またはリンカー上で、同価な付着を形成するために使用される。
いくつかの実施形態において、細胞毒素は、式(I)によるPBD又はその派生物である。その後、適切な条件下で、CD45に結合する抗体、誘導体化抗体、またはその抗原結合フラグメントと、細胞毒素-リンカー結合体を反応させて、ADCを形成する。別の方法として、リンカーは、まず、CD45を結合する、抗原結合断片、デリバタイズ化されたCD45と反応して、リンカー・抗原共役を形成し、その後、ADCを形成するために細胞毒素と反応することができる。このような活用反応については、もう少し詳しく説明しよう。
リンカーまたは細胞毒素-リンカー複合体の抗体またはその抗原結合フラグメントへの共有結合のために、多数の異なる反応が利用可能である。また、この抗菌分子に対する適切な付着点としては、リジンのアミン群、グルタミン酸・アスパルチン酸の遊離カルボキシル酸群、システインのスルフィドリル群、および芳香族アミノ酸の様々なモイテイが挙げられるが、これらに限定されない。例えば、非特異的共有結合は、カルボジイミド反応を用いて、リンカー上のカルボキシ(またはアミノ)基を抗体部分上のアミノ(またはカルボキシ)基に結合させることにより行うことができる。加えて、ジアルデハイドまたはイミドエステルのような二機能性物質もまた、リンカー上のアミノ基を、抗菌上のアミノ基と結びつけるために使用することができる。また、細胞毒素をモイテイに付着させることも可能であるが、これはSchiffベースの反応である。この方法は、解凍剤またはリンカーのいずれかにグリコールまたは水酸基の周期性酸化を含み、それによってアルデハイドを形成し、その後、それぞれリンカーまたは反応される。共有結合の形成は、アルデハイドとアミノ塩基の間のSchiff塩基の形成を介して起こる。イソチオシアネートはまた、細胞毒素または抗体部分をリンカーに共有結合するためのカップリング剤として使用され得る。他の技術は、当業者に知られており、本開示の範囲内である。
本書に記載されているように、抗生物質又は抗原結合フラグメントへの結合に有用なリンカーには、下表2に示すように、反応性化学物質とのカップリング反応(ここでは反応性代替物、Z'と呼ぶ)によって形成される化学物質Zを含むリンカーが含まれる。波線は、抗体または抗原結合フラグメント、および細胞傷害性分子への結合点を示す。
表2.例示的な化学物質Zは、カップリング反応させて、抗菌薬の結合体を形成することによって形成される。
[ 表２ ]
当業者の1人は、リンカーに付着した反応性代替物Z'と、それに付着した反応性代替物またはそれらの抗原結合フラグメントが、化学物質Zを生成するための同価カップリング反応に従事しており、反応性代替物Z'を認識することを認識するであろう。したがって、本明細書中に記載される方法と組み合わせて有用な抗体-薬物結合体は、本明細書中に記載されるように、リンカーまたは細胞毒素-リンカー結合体と、抗体上の反応性置換基、またはその抗原結合フラグメントとの反応に適した、反応性置換基Z'を含むリンカーまたは細胞毒素-リンカー結合体、またはその抗原結合フラグメントとの反応によって形成されて、化学部分Zを形成し得る。
いくつかの実施形態において、Z'は、-NR1 C(=O)CH=CH2, -N3, -SH, -S(=O)2(CH=CH2), -(CH2)2 S(=O)2 (CH=CH2), -NR1 S(=O)2 (CH=CH2), -NR1 C(=O)CH2R2, -NR1 C(=O)CH2 Br、-NR1C(=O)CH2 I、-NHC(=O)CH2 Br、-NHC(=O)CH2 I、-ONH、-C(O)NHNH2、-CO2 H、-NH2、-NH(C=O)、-NC(=S)、
[化３４]
(式中、
R1は、HおよびC1 -C6のアルキルからそれぞれ独立に選択される。
R2が-S(CH2)n CHR3 NHC(=O)R1;
R3がR1または-C(=O)OR1;
R4は、H、C1 -C6 Alk、F、Cl、および-OH からそれぞれ個別に選択される。
R5は、H, C1 -C6 alkyl, F, Cl, -NH2, -OCH3, -OCH2 CH3, -N(CH3)2, -CN, -NO2, -OHからそれぞれ独立に選択される。
R6は、H、-C(=O)OHで置換されたC1-C6 Olk、F、ベンジロキシ、-C(=O)OHで置換されたベンジル、-C(=O)OHで置換されたC1 -C4 アルコキシ基、-C(=O)OHで置換されたC1 -C4 アルコキシ基から、それぞれ個別に選択される。
表2に示すように、リンカー上の適切に反応性代替物Z'やその抗原結合フラグメントに含まれる抗原/エレクトロフィルペア(例:チオール/ハロアルキルペア、アミン/カルボニールペア、チオール/カルボニールペア、又はチオールα非飽和型カルボニールペア等)、ジエン/ジエンフィルペア(例:アジド/アルキンペア、又はジエン/ α非飽和型カルボニールペア等)等が含まれる。化学部分Zを形成するための反応性置換基間のカップリング反応としては、チオールアルキル化、ヒドロキシルアルキル化、アミンアルキル化、アミンまたはヒドロキシルアミン縮合、ヒドラジン形成、アミド化、エステル化、ジスルフィド形成、環状付加(例えば、とりわけ、[4+2] Diels-Alder環状付加、[3+2] Huisgen環状付加)、芳香族求核置換、芳香族求電子置換、および本明細書に記載される他の反応様式が挙げられるが、これらに限定されない。幾つかの実施例では、反応性代替物Z'は、反射性官能基を有する抗原結合フラグメントとの反応に適した電気親水性官能基である。
本明細書に開示されているように、抗原結合フラグメント、すなわち、抗原結合フラグメントに存在しうる反応性代替物には、(i)N-端子アミン基、(ii)側鎖アミン基、例えばリジン、(iii)側鎖チオール基、例えばシステイン、(iv)糖水酸基又はその抗原がグリコシル化されるアミノ基を含むが、これに限定されない。本明細書に開示されるように、抗体またはその抗原結合フラグメント内に存在し得る反応性置換基は、限定されるものではないが、セリン、トレオニン、およびチロシン残基のヒドロキシル部分リジン残基のアミノ部分アスパラギン酸およびグルタミン酸残基のカルボキシル部分ならびにシステイン残基のチオール部分;ならびにプロパルギル、アジド、ハロアリール、ハロヘテロアリール(例えば、フルオロヘテロアリール)、ハロアルキル、および非天然アミノ酸のハロヘテロアルキル部分を含む。いくつかの態様において、抗体内に存在する反応性置換基、または本明細書に開示されるその抗原結合フラグメントは、アミンまたはチオール部分を含む。ある種の抗体は還元可能な鎖間ジスルフィド、すなわちシステインブリッジ部を有する。抗体は、DTT (ジチオトレイトール)などの還元剤で処理することによって、リンカー試薬との結合のために反応性にされ得る。このように、システインのブリッジ部はそれぞれ、理論的には二つの反応性のあるチオールヌクレオフィルを形成する。さらに、2-イミノチオラン(Trautの試薬)によるリジンの反応を通して、アミンをチオールに変換させることによって、抗物質に加えた核基を導入することができる。反応性チオール基は、1、2、3、4、またはそれ以上のシステイン残留物(例えば、1つ以上の非ネイティブシステインアミノ酸残留物からなる交配抗物質を調製すること)を導入することによって、その(またはそれらの断片)に導入され得る。米国パットNo.7,521,541は反応性システインアミノ酸の導入による工学的な抗生物質を教えている。
いくつかの態様において、リンカーに結合した反応性置換基Z'は、抗体上に存在する求電子性と反応性である求核基である。抗体上の有用な親電子性基は、限定されるものではないが、アルデヒドおよびケトンカルボニル基を含む。求核基(例えば、a)ヘテロ原子は、抗体上の求電子性と反応し、抗体と共有結合を形成することができる。有用な求核基としては、ヒドラジド、オキシム、アミノ、水酸基、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、カルボン酸ヒドラジン、およびアリールヒドラジドが挙げられるが、これらに限定されない。
幾つかの実施例において、化学物質Zは、アミン及びチオールモイテイのような、抗原結合フラグメント、並びにリンカーに付着した反応性の好電性代替発明Z'との間の反応の産物である。例えば、Z'はマイケル受け入れ子(例えばマレイミド)、活性化エステル、電子欠乏カルボニール複合体、あるいはアルデハイドなどである。
反応性置換基Z'とその結果得られる化学物質Zのいくつかの代表的で限定されない実施例を表3に示す。
表3.相補的な反応性置換基や化学部分
[表３]
例えば、リンカー‐抗菌共役とADCの合成に適したリンカーには、マレイミドまたはハロアルキル基のような、リンカーに付着した反応性代替物Z'が限定なく含まれる。これらは、例えば、他Liuら、18:690-697、1979に記載されている、スクシンイミジル4-(N-マレイミドメチル)-シクロヘキサン-L-カルボキシレート(SMCC)、Nスクシンイミジルヨードアセテート(SIA)、スルホ-SMCC、m-マレイミドベンゾイル-N-ヒドロキシスクシンイミジルエステル(MBS)、スルホ-MBS、およびスクシンイミジルヨードアセテートなどの試薬によってリンカーに結合されてもよく、これらの開示は、化学的結合のためのリンカーに関連するので、参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施例では、リンカーLに付着する反応性代替物Z'はマレイミド、アジドまたはアルキンである。マレイミドを含むリンカーの実施例は、非開けられないマレイミドカプロイルベースリンカーであり、これは、アウリスタチンのような微小管破壊剤の活用に特に有用である。そのようなリンカーは、Doroninaら、Bioconjugate Chem. 17:14-24, 2006により記載されており、その開示は、化学的結合のためのリンカーに関連するものとして、参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施例において、反応性代替物Z'は、-(C=O)又は-NH(C=O)-であり、このようなことから、リンカーは、それぞれ、アミドまたは尿素不安によって、上記リンカーを、抗原結合フラグメントに結合することができる。これは、それらの-(C=O)又は-NH(C=O)グループが、それらの抗原結合フラグメントのアミノ基を有する反応の結果である(C=O)又は-NH(C=O)グループである。
いくつかの実施形態において、反応性置換基Z'は、N-マレイミジル基、ハロゲン化N-アルキルアミド基、スルホニルオキシN-アルキルアミド基、カーボネート基、スルホニルハライド基、チオール基またはその誘導体、内部炭素-炭素三重結合を含むアルキニル基、(ヘテロ)シクロアルキニル基、(ヘテロ)シクロアルキニル基、(6.1.0]非-4-イン-9-イル基、内部炭素-炭素二重結合を含むアルケニル基、シクロアルケニル基、テトラジニル基、アジド基、ホスフィン基、ニトロンオキシド基、ニトロンイミン基、ニトリルイミン基、ジアゾ基、ケトン基、(O-アルキル)ヒドロキシルアミノ基、ヒドラジン基、ハロゲン化N-マレイミジル基、1,1-ビス(スルホニルメチル)メチルカルボニル基またはその脱離誘導体、ハロゲン化カルボニル基、またはアレナミド基であり、いくつかの実施形態において、反応性置換基は、シクロアルケン基、シクロアルキン基、または任意に置換された(ヘテロ)シクロアルキニル基を含む。
いくつかの実施形態において、化学物質Zは表3から選択される。いくつかの実施形態において、化学物質Zは、以下のとおりである。
[化３５]
ここで、Sは、ヒトの幹細胞またはT細胞の細胞表面上で表現される抗原(例えば、システイン残基の-SHグループからの)に特別に結合する、抗原結合フラグメント、すなわち、抗原内に存在する反応性代替物を表す硫黄原子である。
リンカーが式(II)のものであるいくつかの実施例では、リンカー反応性代替基は、L-Z'としてまとめられており、それが、その抗原結合フラグメントと接合する前に、構造を有する。
[化３６]
ウェーブラインは、細胞毒素上の代替物(例えば、PBDまたはそれらの派生物)への結合点を示す。リンカーターミナルの波線は、細胞毒素への結合点、例えばPBDを示す。いくつかの実施形態では、L-Z-Abと同様に、リンカーLと化学物質Zは、その接合後、構造を有する。
[化３７]
ここで、Sは、ヒトの幹細胞またはT細胞の細胞表面上で表現される抗原(例えば、システイン残基の-SHグループからの)に特別に結合する、抗原結合フラグメント、すなわち、抗原内に存在する反応性代替物を表す硫黄原子である。リンカー末端の波線は、細胞毒素への結合点、例えば、PBDまたはそれらの誘導体を示す。
いくつかの実施形態において、細胞毒素は、構造式(I)に代表されるピロロロンボゾジアゼピンであり、リンカーは、ジアゼピンアミノグループとの結合によって付着される。このような実施形態において、ADCは、式(III)で表されることができる。
[化３８]
ここでは、L、Z、およびAbの各々について説明する。
いくつかの実施形態において、式(III)のADCのリンカーLは、クリーナブルリンカーである。いくつかの実施形態において、切断可能なリンカーLは、ヒドラジン、ジスルフィド、チオエーテル、アミノ酸、最大10個のアミノ酸からなるペプチド、p-アミノベンジル(PAB)基、複素環式自己不溶性基、C 1 -C 12 アルキル、C 1-C 12ヘテロアルキル、C 2 -C 12アルケニル、C 2 -C 12 ヘテロアルケニル、C 2-C 12 アルキニル、C 2 -C 12 ヘテロアルキニル、C 3 -C 12 シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、-(C=O)基、-C(O)NH基、-OC(O)NH基、-(CH 2 CH 2 O)-基(pは1～12の整数である)、または溶解性増強基のうちの1つまたは複数を含む。
それぞれのC 1 -C 12 アルキル、C 1 -C 12ヘテロアルキル、C 2 -C 12アルケニル、C 2-C 12 ヘテロアルキニル、C 2 -C 12 ヘテロアルキニル、OOGヘテロシクロアルキル、C 3 -C 12 ヘテロアルキニル、アリール、またはヘテロアリール基は、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルキニル、ヘテロシクロアルキル、アルカリ、アルキルヘテロアリール、アミノ、アンモニウム、アシル、アシルオキシ、アシルアミノカルボニル、アルコキシカルボニル、ウレイド、カルバメート、アリール、ヘテロアリール、スルフィニル、スルホニル、ヒドロキシル、アルコキシ、スルファニル、ハロゲン、カルボキシ、トリハロメチル、シアノ、ヒドロキシ、メルカプト、およびニトロからなる群からそれぞれ独立に選択される1～5個の置換基で置換されていてもよい。
または、それぞれのC 1-C 12 アルキル、C 1 -C 12ヘテロアルキル、C 2 -C 12アルケニル、C 2-C 12 ヘテロアルケニル、C 2 -C 12 アルキニル、C 2 -C 12 ヘテロアルキニル、C 3-C 12 シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリール基は、場合により、O、SおよびNから選択される1つ以上のヘテロ原子によって中断されてもよい。
いくつかの実施形態では、リンカーは、ペプチド、オリゴ糖OBC=O)(CH2 CH2 O)t -, -(NHCH2CH2)u -, -PAB、Val-Cit-PAB、Val-Ala-PAB、Val-Lys(Ac)-PAB、Phe-Lys-PAB、Phe-Lys(Ac)-PAB、D-Val-Leu-Lys、Gly-Gly-Arg、Ala-Ala-Asn-PAB、またはAla-PABのうちの1つ以上を含み、p、q、r、t、およびuのそれぞれは、発生ごとに独立して選択される1～12の整数である。
いくつかの実施形態において、リンカーは、PAB-Ala-Val-またはPAB-Cit-Val-、-(C=O)(CH2)r-単位、-(C=O)(CH2 CH2 O)t-単位、および-(NHCH2 CH2)u-単位を含み、r=2、t=8、およびu=1である。特に、リンカーは、式(II)で表されてもよい。
[化３９]
ここで、R1 はCH3 (Ala) または(CH2)3NH(CO)NH2 である。
細胞毒素が式(I)であり、リンカーが式(II)のCH3である特定の実施では、細胞毒素リンク剤は、接合前に、反応性代替物Z'を含むが、Cy-L-Z'としてまとめられ、式(IV)で表されることができる。
[化４０]
この特定の細胞毒素リンク剤はテシリン(SG3249)として知られており、例えば、Howardら、ACS Medに記載されている。Chem. Lett.2016, 7(11), 7(11)、983-987、その開示は、ここにその全体として参考文献に含まれる。ここに開示されるように、式(IV)の複合体を、反CD45の抗たんぱくに結合すると、式(V)で表すことができる。
[化４１]
ここで、Abは、本明細書に開示されているように、抗CD45 binding fragmentまたはその抗原結合断片であり、Sは、その中に存在するか、又は、その中に導入された硫黄原子(例えば、システイン残留チオール)を表す。
いくつかの実施形態において、細胞毒素は、以下の公式に表されるピロロロンボゾジアゼピンダイマーである。
[化４２]
ウェーブラインはリンカーの付着点を示す。
幾つかの実施例において、細胞毒素リンカー共役体は、接合前にCy-L-Z'としてまとめられた、反応性代替物Z'を含むが、構造を有する。
[化４３]
この特定の細胞毒素リンク剤はタリリンとして知られ、例えば、ADCバダスツキシマブタリリン(SGN-CD33A)、Mantaj他、Angewandte Chemie International Edition English 2017,56,462-488に関連して記述されている。この開示は、本文中でその全体に含まれている。
抗体-薬物結合体の調製
公式Ab-(Z-L-Cy)nのADCにおいて、公式(V)のADCのような、Ab-(Z-L-Cy)nでは、リンカーLとここに開示されている化学物質Zを通して、抗CD45の、又はその抗原結合断片(Ab)が、1つ以上のサイトトキシックドラッグモイテイ(Cy、例えば、PBD)、例えば、1個当たり約1から約20のサイトトキシックモイテイ(サイトトキシクモイテイ)に結合する。どのような数の細胞毒素でも、例えば、1、2、3、4、5、6、7、または8の抗CD45抗毒素と結合することができる。いくつかの実施形態において、nは、約1から約5、約1から約4、約1から約3、または約2から約5、または約3から約5である。いくつかの実施形態において、nは約1、約2、約3、又は約4である。
本開示のADCは、本技術者に知られている有機化学反応、条件、及び試薬を用いて、いくつかの経路によって作成され得る。例えば、(1)上記に記載されているように、Ab-Z-Lを形成するための二価リンカー試薬を用いて、Ab-Z-Lを形成するための反応性の代替物又はその抗原結合フラグメントを反応させ、それに続いて、(2)Cy-L-Z'を形成するための二価リンカー試薬を用いて、サイトトキシックな代替物を反応させ、続いて、本項に記載されているように、Ab-(Z-L-Cy n)のADCを形成するための反応性の代替物又は抗原結合フラグメントを反応させる。ADCを準備するための追加の方法をここに述べる。
一実施の形態では、それらの抗原結合フラグメントは、1つ以上のスルフハイドリル基を有するように化学的に改変することができる1つ以上の炭水化物グループを有することができる。次いで、ADCは、本明細書中上記のように、スルフヒドリル基の硫黄原子を通る共役によって形成される。
別の実施形態では、本抗体は、アルデハイド(-CHO)グループを提供するために酸化することができる1つ以上の炭水化物グループを有することができる(例えば、Laguzza, et al., J. Med. Chem. 1989, 32(3), 548-55を参照)。次いで、ADCは、本明細書中上記のように、対応するアルデヒドを通る共役によって形成される。細胞毒素の付着または結合のためのタンパク質の改変のための他のプロトコールはColiganら、現在のタンパク質サイエンスのプロトコール、volに記載されている。2, John Wiley & Sons (2002)は、ここに参考文献として含んでいる。
例えば、米国特許には、電池を標的としたタンパク質(例えば、抗物質、イムグロブリン、又はそのフラグメント)へのリンカードラッグ・モイテイの活用法が発見されている。No.5,208,020 米国特許。No. 6,441,163 WO2005037992、WO2005081711 およびWO2006/034488は、これらすべてを引用文献全体に明示的に組み入れたものである。
別の方法として、例えば、組換え技術またはペプチド合成により、抗菌剤とサイトトキシク剤からなる融合タンパク質を作ることができる。DNAの長さは、結合体の2つの部分をコードするそれぞれの領域を、互いに隣接するか、または結合体の所望の特性を破壊しないリンカーペプチドをコードする領域によって分離されてもよい。
医薬組成物
ここに記載されるADCは、様々な量の形態で、患者(例えば、感染症またはガンに苦しむ人)に管理することができる。例えば、ここに記載されるADCは、1種以上の薬事的に受け入れられる補助剤を含む水性液体のような水性液体の形成で、病気またはガンに苦しむ患者に与えられる。本明細書中に記載される組成物および方法と共に使用するための適切な薬学的に許容される賦形剤は、粘度改変剤を含む。水溶液は、既知の技術を用いて殺菌することができる。
本明細書に記載されるようなADCを含む医薬製剤は、凍結乾燥製剤または水溶液の形態で、このようなADCを1つ以上の任意の薬学的に許容可能な担体(Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980))と混合することによって調製される。薬学的に許容される担体は、一般に、使用される用量および濃度でレシピエントに対して非毒性であり、リン酸塩、クエン酸塩および他の有機酸などの緩衝液;酸化防止(オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロライドなど;塩化ベンザルコニウム;フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール;メチルまたはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン;カテコール;レゾルシノール; 3-ペンタノール;およびm-クレゾール);低分子量(約10残基未満)ポリペプチド;タンパク質(例えば、血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリン);親水性ポリマー(例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、またはリジン);単糖、二糖類を含むが、これらに限定されない およびグルコース、マンノースまたはデキストリンを含む他の炭水化物;EDTAのようなキレート剤;スクロース、マンニトール、トレハロースまたはソルビトールのような糖;ナトリウムのような塩を形成する対イオン;金属錯体(例えば、Zn-タンパク質複合体);および/または非イオン性界面活性剤 ポリエチレングリコール(PEG)など。
投与
本書に記載されるADCは、口頭、経皮、皮下、内臓、静脈、筋肉中、眼内、親愛のような様々な経路によって管理され得る。任意の所与の場合における投与のための最も適切な経路は、投与される特定の抗体、または抗原結合フラグメント、患者、医薬製剤方法、投与方法(例えば、投与時間および投与経路)、患者の年齢、体重、性別、治療される疾患の重症度、患者の食事、および患者の排泄速度に依存する。
ここに記載されたADCの有効量、つまり、抗原結合フラグメントは、例えば、シングル(ボーラス)の行政、複数の行政、または継続的な行政、または、最適な血清濃度(例えば、約0.0001約5000mm/mlの血清濃度)、抗原結合フラグメントを達成するために、約0.001～約100kg/kgの範囲である。1日に1回以上(例:2～10回)、週に1回、月に1回以上、ガン、自己感染症、血液細胞移植の準備のためのコンディショニングセラピーなどに苦しむ被検者(例:ヒト)に治療を行います。造血幹細胞移植前のコンディショニング手順の場合、ADC、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、外因性造血幹細胞の生着を最適に促進する時間、例えば、外因性造血幹細胞移植の投与前の1時間～1週間(例えば、約1時間、約2時間、約3時間、約4時間、約5時間、約6時間、約7時間、約8時間、約9時間、約10時間、約11時間、約12時間、約13時間、約14時間、約15時間、約16時間、約17時間、約18時間、約19時間、約20時間、約21時間、約22時間、約23時間、約24時間、約2日、約3日、約4日、約5日、約6日、または約7日)以上、患者に投与することができる。
一実施の形態では、ヒト患者に施されるサイトトキシンへのリンカーを介して結合される抗CD45の量は、約0.1mm/kgであり、約0.3mm/kgである。
一実施の形態では、ヒト患者に施されるサイトトキシンへのリンカーを介して結合される抗CD45の量は、約0.15mm/kg～約0.3mm/kgである。
一実施の形態では、ヒト患者に施されるサイトトキシンへのリンカーを介して結合される抗CD45の量は、約0.15mm/kg～約0.25mm/kgである。
一実施の形態では、ヒト患者に施されるサイトトキシンへのリンカーを介して結合される抗CD45の量は、約0.2mm/kgであり、約0.3mm/kgである。
一実施の形態では、ヒト患者に施されるサイトトキシンへのリンカーを介して結合される抗CD45の量は、約0.25mm/kg～約0.3mm/kgである。
一実施の形態では、ヒト患者に施されるサイトトキシンへのリンカーを介して結合される抗CD45の量は、約0.1mm/kgである。
一実施の形態では、ヒト患者に施されるサイトトキシンへのリンカーを介して結合される抗CD45の量は、約0.2mm/kgである。
一実施の形態では、ヒト患者に施されるサイトトキシンへのリンカーを介して結合される抗CD45の量は、約0.3mm/kgである。
一実施形態では、ヒト患者に投与される抗CD45 ADCのドーズは、約0.001mg/kgから10mg/kg、約0.01mg/kgから9.5mg/kg、約0.1mg/kgから8.5mg/kg、約0.1mg/kgから7.5mg/kg、約0.1mg/kgから6.5mg/kg、約0.1mg/kgから5.5mg/kg、約0.1mg/kgから5.5mg/kg、約0.1mg/kgから4.5mg/kgである。約0.1mg/kg～4 mg 約0.5mg/kgから3.5mg/kg、約0.5mg/kgから3mg/kg、約1mg/kgから10mg/kg、約1mg/kgから9mg/kg、約1mg/kgから8mg/kg、約1mg/kgから7mg/kg、約1mg/kgから6mg/kg、約1mg/kgから5mg/kg、約1mg/kgから4mg/kg、または約1mg/kgから3mg/kg。
一実施の形態では、ここに記載された、人間の患者の処理または調整のために使用されるCD45対策ADCは、24時間以下、22時間以下、20時間以下、18時間以下、16時間以下、14時間以下、13時間以下、12時間以下、11時間以下、10時間以下、9時間以下、8時間以下、7時間以下、6時間以下、5時間以下である。ある実施形態では、Anti-HC ADCの半減期は5時間～7時間、5時間～9時間、15時間～11時間、5～13時間、5～15時間、5～20時間、5～24時間、7～24時間、9～24時間、11～24時間、12～22時間、10～20時間、8～18時間、14～24時間である。
一実施の形態では、ここに開示される方法は、コンディショニングのためにADCを受け取る患者の肝臓毒を最小限に抑える。例えば、特定の実施形態において、本明細書に開示される方法は、約24時間、約48時間、約72時間、または約96時間を超えて、患者において既知の毒性レベル未満に残る肝臓マーカーレベルをもたらす。他の実施形態において、本開示された方法は、約24時間、約48時間、約72時間、又は約96時間以上にわたり、患者のリファレンス温度範囲内に残る肝臓マーカーレベルをもたらす。特定の実施例において、本開示された方法は、基準範囲の約1.5倍以下、基準範囲の約3倍以下、基準範囲の約5倍以下、又は基準範囲の約24時間、約48時間、約72時間、又は約96時間以上にわたり、基準範囲の約10倍以下の、肝臓マーカーレベルの上昇をもたらす。毒性試験に使用できる肝マーカーの実施例としては、アラニンアミノトランスアミナーゼ(ALT)、乳酸脱水素酵素(LDH)、アミノトランスフェラーゼアミノトランスアミナーゼ(AST)などがある。特定の実施形態において、本説明のようなADCの投与、すなわち、単一の量の代わりに2回の量を施す場合、肝臓マーカー、例えばAST、LDH、および/またはALTの一時的な増加をもたらす。いくつかの例では、毒性を示す肝臓マーカーの高レベルに達することができるが、ある期間、例えば、約12時間、約18時間、約24時間、約36時間、約48時間、約72時間、約3日、約3.5日、約4日、約4.5日、約5日、約5.5日、約6日、約6.5日、約7日、約7.5日、または1週間未満の範囲内で、肝臓マーカーレベルは、肝臓毒性に関連しない正常レベルに戻る。例えば、ヒト(平均成人男性)では、通常の無毒ALTのレベルはリットル当たり7～55単位(U/L)であり、通常の無毒ASTのレベルは8～48U/Lである。特定の実施態様において、患者の血液AST、ALTまたはLDHレベルの少なくとも1つは、ADCの第1回目の投与から患者への第1回目の投与の14日後までの間、有毒なレベルに達しない。例えば、患者は、初回投与を受けてから例えば5、10、または14日以内に、初回投与を受け、その後、2回目の投与、3回目の投与、4回目の投与、またはそれ以上の投与を受けても、患者の血中AST、ALT、またはLDHレベルの少なくとも1つは、ADCの初回投与の投与から患者への初回投与の14日後までの間に毒性レベルに達しない。
特定の実施例において、患者の血液AST、ALT、またはLDHレベルの少なくとも1つは、通常レベルを上回らず、通常レベルを1.5倍以下に上昇しない、通常レベルを3倍以下に上昇しない、通常レベルを5倍以下に上昇しない、または通常レベルを10倍以下に上昇しない。
本稿に述べるように、血液細胞移植治療は、治療を必要とする被検者に1種類以上の血球を移入または再定着させるために実施することができる。造血幹細胞は一般的に多分化能を示し、したがって、顆粒球(例えば、前骨髄球、好中球、好酸球、好塩基球)、赤血球(例えば、網状赤血球、赤血球)、血小板(例えば、巨核芽球、血小板産生巨核球、血小板)、単球(例えば、単球、マクロファージ)、樹状細胞、ミクログリア、破骨細胞、およびリンパ球(例えば、NK細胞、B細胞およびT細胞)を含むが、これらに限定されない複数の異なる血液系統に分化することができる。さらに、造血幹細胞は、自己複製能力を有し、したがって、母細胞と同等の能力を有する娘細胞を生じさせることができ、また、移植レシピエントに再導入される能力を特徴とし、その際、それらが造血幹細胞ニッチに帰着し、再増殖的かつ持続的な造血を確立することができる。
したがって、造血幹細胞は、インビボで細胞の欠損または欠損集団を再構成するために、造血系列の1つ以上の細胞型が欠損または欠損している患者に投与することができ、それにより、内因性血球集団における欠損または欠損に関連する病理を治療する。したがって、本明細書に記載の組成物および方法は、非悪性異常ヘモグロビン症(例えば、鎌状赤血球貧血、サラセミア、ファンコニ貧血、再生不良性貧血、およびウィスコットアルドリッチ症候群からなる群から選択される異常ヘモグロビン症)を治療するために使用することができる。加えて、または、代替的に、ここに記載される組成物及び方法は、例えば先天性のウイルスのような、ウイルスを治療するために使用することができる。加えて、または、代替的に、ここに記載される組成物及び方法は、後天的なウイルス(例えば、HIV及び助剤から成るグループから選択された後天的なウイルス)を治療するために使用することができる。本明細書に記載の組成物および方法は、代謝障害(例えば、グリコーゲン蓄積症、ムコ多糖症、ゴーシェ病、ハーラーズ病、スフィンゴ脂質症、および異染性白質ジストロフィーからなる群から選択される代謝障害)を治療するために使用することができる。
加えて、または、代替的に、ここに記載される組成物及び方法は、悪性または拡散性障害、例えば、数学的ガン、ミロロロリフェラティブ病を治療するために使用することができる。癌治療の場合には、移植細胞が内生細胞枯渇工程によって作られたニッチに帰着し、生産的な血液細胞を確立することができる、血液細胞移植治療の前に内生血液細胞の集団を減少させるために、ここに記載された組成及び方法を患者に施すことができる。これは、次に、全身化学療法の間のような、癌細胞根絶の間に枯渇した細胞の集団を再構成することができる。本明細書に記載される組成物および方法を用いて治療することができる例示的な血液がんには、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫、および非ホジキンリンパ腫、ならびに神経芽細胞腫を含む他の癌性状態が含まれるが、これらに限定されるものではない。
本明細書に記載される組成物および方法で治療することができるさらなる疾患は、限定されるものではないが、アデノシンデアミナーゼ欠損症および重度複合免疫不全症、高免疫グロブリンM症候群、チェディアック-東病、遺伝性リンパ組織球症、大理石骨病、骨形成不全症、蓄積症、主要サラセミア、全身性硬化症、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、および若年性関節リウマチを含む。
本書に記載された抗原結合フラグメント、配位子、および共役は、固形臓器移植寛容を誘発するために使用され得る。例えば、ここに記載された組成物及び方法は、標的組織からの細胞の集団を枯渇させるか、または消耗させるために使用され得る(例えば、骨髄細胞ニッチからの赤血球細胞を枯渇させるため)。標的組織からの細胞がこのように枯渇した後、臓器供与者(例えば、臓器供与者からの造血幹細胞)の集団を移植受取人に施すことができ、また、そのような茎または前駆細胞の接ぎ木後、一時的または安定した混合キメリズムが達成され、それによって、さらなる予防剤の必要なしに長期的な移植臓器耐性を可能にする。例えば、ここに記載された組成物及び方法は、固形臓器移植の受取人(例えば、移植、肺移植、肝臓移植、心臓移植など)に移植耐性を誘発するために用いられることができる。本書に記載されている組成物及び方法は、固形臓器移植耐性の誘導に接続して使用するのに適している。例えば、一時的又は安定した供与者の接ぎ木の割合が低く、移植臓器の長期耐性を誘発するのに適しているからである。
加えて、ここに記載された組成物及び方法は、CD45+の細胞によって特徴づけられるガンのような、がんを直接治療するために使用することができる。例えば、本書に記載された組成物及び方法は、特にCD45+電池を示す患者において、白血病を治療するために使用することができる。白血球のようなCD45+のガン細胞を枯渇させることによって、本書に記載される組成物及び方法は、各種ガンを直接治療するために使用することができる。この方法で治療され得る例示的な癌には、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫、および非ホジキンリンパ腫などの血液がんが含まれ、加えて、本書に記載された組成物及び方法は、自治体障害を治療するために使用することができる。たとえば、抗原結合フラグメント、あるいはリガンドは、CD45+の細胞を殺すために、自己感染症に苦しむ人間のような被検者に施すことができる。CD45+免疫細胞は、T細胞レセプターを発現し、自己抗原に対する免疫応答を実行するT細胞のような自己反応性リンパ球であり得る。自己反応性CD45+電池を枯渇させることによって、本書に記載されている組成物及び方法は、以下に述べるような自己反応性病理を治療するために使用することができる。さらに、または、代替的に、ここに記載される組成と方法は、移植細胞が内生細胞枯渇工程によって作られたニッチに帰着し、生産的な血液貯留を確立することができる、血液細胞移植治療の前に内生の血液細胞の集団を減少させることによって、自己感染病を治療するために使用することができる。これは、次に、自己免疫細胞根絶の間に枯渇した細胞の集団を再構成することができる。
本明細書に記載される組成物および方法を用いて治療することができる自己免疫疾患には、限定されるものではないが、乾癬、1型糖尿病(RA)、関節リウマチ(SLE)、ヒト全身性ループス(MS)、炎症性腸疾患(IBD)、リンパ球性大腸炎、急性散在性脳脊髄炎(ADEM)、アジソン病、強直性脊椎炎、抗リン脂質抗体症候群(APS)、再生不良性貧血、自己免疫性内耳疾患(AIED)、自己免疫性リンパ増殖性症候群(ALPS)、自己免疫性卵巣炎、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、心筋症、慢性疲労性免疫不全症候群(CFIDS)、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチーが含まれる クローン病、瘢痕性類天疱瘡、コエリアックスプルー皮膚炎、寒冷凝集素症、デゴス病、円板状エリテマトーデス、自律神経異常症、本態性混合クリオグロブリン血症、線維筋痛症-線維筋炎、グッドパスチャー症候群、Guillain-Barre症候群(GBS)), 橋本甲状腺炎、化膿性汗腺炎、特発性及び/又は急性血小板減少性紫斑病、IgAニューロパチー、若年性関節炎、川崎病、ライム病、メニエール病、混合性結合組織病(MCTD)、重症筋無力症、神経筋強直症、視神経炎、尋常性天疱瘡、悪性貧血、多発性軟骨炎及び皮膚筋炎、原発性胆汁性肝硬変、結節性多発動脈炎、リウマチ性多発筋痛症、原発性無ガンマグロブリン血症、レイター症候群、リウマチ熱、強皮症 シェーグレン症候群、こわばり人症候群、高安動脈炎、側頭動脈炎(「巨細胞性動脈炎」としても知られる)、潰瘍性大腸炎、ぶどう膜炎、血管炎、白斑、外陰部痛(「外陰前庭炎」)、ヴェーゲナー肉芽腫症。
実施例
例1:抗CD45-ADC (104-PBD)はin vitroでT細胞を殺す
抗CD45-ADC、104-PBDは、in vitro T細胞殺害アッセイでT細胞殺傷活性評価した。104-PBDは、CD45.2アイソフォーム(BioLegend, San Diego, CA)に結合する市販の抗CD45抗体であるモノクローナル抗体104の可変領域を含有し、mAb Ly-5.2としても知られている。mAb 104の可変領域は、S239CおよびN297A Fcの置換を含むヒトIgG一定領域に連結され、システイン残基を介した結束となった。PBMCを種々の条件下で培養し、マウスT細胞の生存と増殖を促進した。25,000 T細胞は、井戸ごとに播種し、37℃および5% CO2のインキュベーターに入れる前に、様々な濃度の井戸にADCを加えた。3日間の培養の後、各標本をフローサイトメトリーで分析した。T細胞数(図2A)は、フローサイトメトリクス分析によって各ウェルから回収された生きたCD3+ T細胞の数を数えることによって決定した。Ki-67+ T細胞の割合は、試料内の生きたCD3+ T細胞の総数で除した、Ki-67を発現する生きたCD3+ T細胞の数を決定することによって測定した。PDB ("Iso PBD")に結合された非特定のヒトIgGがネガティブコントロールとして機能した。
Ki‐67+ T細胞は104‐PBDによる処理後in vitroで蓄積しなかった。図2Aに示すように、T細胞死は、インビトロで104-PBDの用量の増加とともに観察された。さらに、in vitroでの104-PBDの用量の増加に伴い、分裂細胞の表現は減少した(図2B)。
実施例2:アロ反応性T細胞活性化のマウスモデルにおける抗CD45-ADC (104-PBD)のインビボ有効性
抗CD45-ADC、104-PBDによる処理を、アロ反応性のマウスモデルにおいてインビボで評価した(研究デザインについては表4を参照のこと)。要約すると、全B10.D2脾細胞を650cGy全身照射法(TBI)による移植前コンディショニングの24時間後にBalb/c (CD45.2)宿主(マイナーHAミスマッチ)に移入した。7日後、1mg/kgまたは3mg/kgの抗CD45-ADC (104-PBD; n=5マウス/処置群/接種材料)または3mg/kgの陰性(アイソタイプ)制御(「Iso-PBD」)を投与した。マウスから末梢血および脾臓を採取し、ADC投与5日後にフローサイトメトリーにより評価した。
図に示すように。3Aおよび3B、アイソタイプ-PBDと比較して、抗CD45-ADC (すなわち、104-PBD)を投与すると、同種反応性T細胞活性化のマウスモデルにおけるドナーT細胞の数が実質的に減少した。さらに、分裂細胞の割合は、Isotype PBDと比較して、防CD45-ADC (すなわち、104-PBD)での処理後に減少した。これらの結果は、抗CD45‐ADC(すなわち、104‐PBD)への生体露光が活性化/分裂したT細胞を優先的に殺すことを示す。これは、in vivoおよびin vitroで観察されるように、104-PBDが自己反応性またはアロ拒否T細胞を殺すのに効果的であることを確認する。
表4 scGVHD マウスモデル検討
[表４]
実施例3:ヒト化NSGマウスモデルにおける抗CD45-PBD ADCのインビボ有効性
PBD細胞毒素(テセリン)に結合したヒトCD45に特異的に結合することができる抗体を含む抗CD45抗体薬物結合体(ADC)を、本実施例において評価した(「CD45-PBD」)。ADCのAnti-CD45 bidは、Fc領域において、アミノ酸置換L234A L235A D265CおよびH435Aを含んでいた。
CD45-PBDは、ヒト化NSGマウスにおいて、末梢血リンパ球、骨髄(BM) HSC、または成熟単一正(SP)胸腺細胞を枯渇させる能力について評価された(図4)。hNSGマウスに、車両(PBS)、PBDにコンジュゲートしたアイソタイプ対照抗体(「Iso-PBD」)、またはCD45-PBDのいずれかの指示された単回用量を投与した。CD45-PBDは、ネズミに1回、0.3ag/kg、1ag/kg、3gram/kg、または6gram/kg ADCを与えた。Iso‐PBDを1mg/kg,3mg/kgまたは6mg/kgのADCの単回投与でマウスに投与した。
0日目、7日目、および14日目に末梢血を採取し、ヒト造血細胞の総含有量(hβ2 M+)、骨髄細胞含有量(CD33+)、B細胞含有量(CD19+)、およびT細胞含有量(CD3+)を評価した。その末梢血試験からの起因を図4に示す。これらの結果は、CD45‐PBDの耐用量で末梢血においてヒト細胞の用量依存的枯渇が達成されたことを示す。3mg/kg以上のCD45-PBD用量は忍容性がなかった。
骨髄枯渇を評価するために、処置後14日目にマウスから骨髄試料を採取し、ヒト前駆細胞/HSC含量を評価した。骨髄検査の結果を図5に示し、ヒト細胞の割合(「パーセンテージ」)または1人当たりの細胞の絶対数(「カウント」)として示す。これらの結果は、CD45‐PBDがCD45‐PBD処理後の骨髄におけるヒト前駆細胞およびHSCの標的化、用量依存性および深部枯渇を媒介することを示した。アイソタイプ‐PBDは、3mg/kgおよび6mg/kgの高用量で骨髄において有意なプラットホーム毒性を有した。
次に、CD45‐PBDによるダブルポジティブ(DP)胸腺細胞と成熟シングルポジティブ(SP)胸腺細胞の枯渇を評価した。hNSGマウスをIsotype-PBD、CD45-PBDまたは車両(PBS)の増量で無作為化および治療した。その胸腺細胞減少研究の結果を図6に示す。CD45-PBDで処理した動物において、ヒトCD45+細胞およびヒトダブル正(DP)胸腺細胞の用量依存的な枯渇が観察された。CD45-PBDの耐用量では、成熟CD4およびCD8 SP胸腺細胞の不完全な標的枯渇が観察された。同型PBDの高用量で観測された二重正(DP)チモサイトの減少は、PBDの既知のプラットホーム毒と一致した。
実施例4:ヒト化NSGマウスモデルにおける抗CD45-IGN ADCのインビボ有効性
本実施例では、IGN細胞毒素(DGN549)に結合したヒトCD45に特異的に結合することができる抗体を含む抗CD45抗体薬物結合体(ADC)を評価した(「CD45-IGN」)。ADCのAnti-CD45 bidは、Fc領域において、アミノ酸置換L234A L235A D265CおよびH435Aを含んでいた。
hNSGマウスは、車両(PBS)、IGN ("Iso‐IGN")とCD45‐IGNに結合された同型制御抗菌のいずれかの単一量を与えた。CD45-IGNは、マウスに、ADC 0.3ag/kg、1ag/kg、3gram/kg、または6gram/kgを1回与えた。Iso‐IGNを1mg/kg,3mg/kgまたは6mg/kgのADCの単回投与でマウスに投与した。
0日目、7日目、および14日目に末梢血を採取し、ヒト造血細胞の総含有量(hβ2 M+)、骨髄細胞含有量(CD33+)、B細胞含有量(CD19+)、およびT細胞含有量(CD3+)を評価した。その末梢血試験の影響を図7に示す。これらの結果は、CD45‐IGNの単回投与後に末梢血においてヒト細胞の用量依存性枯渇が達成されたことを示す。CD45-IGNは、試験したすべての用量で良好な忍容性を示した。
骨髄枯渇は、投与後14日目にマウスから骨髄サンプルを採取して評価した。人類の前駆細胞/HSC内容のサンプルを評価した。骨髄検査の結果を図8に示し、ヒト細胞の割合(「パーセンテージ」)または1人当たりの細胞の絶対数(「カウント」)として示す。これらの結果は、CD45‐IGNがCD45‐IGN処理後の骨髄におけるヒト前駆細胞およびHSCの標的化、用量依存性および深部枯渇を媒介することを示した。アイソタイプ‐IGNはどの試験用量でも有意な効果を示さなかった。
CD45‐IGNによるダブルポジティブ(DP)胸腺細胞と成熟シングルポジティブ(SP)胸腺細胞の枯渇も評価した。hNSGマウスを無作為化し、Isotype-IGN、CD45-IGNまたは車両対照(PBS)の増量で処理した。胸腺細胞枯渇試験の結果を図9に示す。ヒトCD45+細胞およびヒトダブル正(DP)胸腺細胞の用量依存性枯渇が、CD45-IGNで処理された動物において観察された。加えて、CD45-IGNを介したターゲティングは、マッチングされた用量でのイソタイプ-IGNと比較して、CD4およびCD8 SP胸腺細胞のより深い枯渇をもたらし、CD45-IGN ADCがヒト胸腺細胞のロバストかつターゲティングされた枯渇を達成することを実証した。
表5.配列リスト表
[表５]
その他の実施形態
本明細書で言及されている全ての出版物、特許、特許出願は、各独立出版物又は特許出願が、引用により具体的かつ個別に組み込まれることを指摘されたかのように、ここに同程度の引用文献として組み込まれている。
本発明は、その特定の実施形態に関連して説明されているが、それは、さらなる変更が可能であり、この出願は、本発明の原則に従い、本発明が関連する技術の中で既知の又は慣習的な慣行の範囲内にある本発明からの逸脱を含む本発明のあらゆるバリエーション、使用又は適応をカバーすることを意図していると理解され、本請求の範囲に従う。
他の実施形態は、請求項の範囲内である。

Claims (87)

  1. 細胞毒素がピロロロンボゾディアゼピン(PBD)を含むリンカー(L)を介して細胞毒素(Cy)に結合された、抗CD45(Ab)の抗原結合部を含む、Ab-drug 結合体(ADC)。
  2. 細胞毒素がPBD量体である請求項1のADC。
  3. 細胞毒素が式(I)で表されるPBD量体である請求項1又は2のADC。
    [化４４]
    波線はADCのリンカーへの等価な付着点を示す。
  4. リンカーが、ペプチド、オリゴ糖OBC=O)(CH2CH2 O)t -, -(NHCH2 CH2)u-, -PAB、Val-Cit-PAB、Val-Ala-PAB、Val-Lys(Ac)-PAB、Phe-Lys-PAB、Phe-Lys(Ac)-PAB、D-Val-Leu-Lys、Gly-Gly-Arg、Ala-Ala-Asn-PAB、またはAla-PABのうちの1つ以上を含み、p、q、r、t、およびuのそれぞれが、出現ごとに独立して選択される、1～12の整数である、請求項1～3のいずれかに記載のADC。
  5. 当該リンカーが式(II)の構造を有する請求項1-4のいずれかのADC。
    [化４５]
    ここで、R1 はCH3 (Ala) または(CH2)3NH(CO)NH2 である。
  6. 請求項1-5のいずれかのADCは、当該リンカーが、当該液に接合する前に、L-Z'としてまとめられた反応代用Z'を含むと、構造を有する。
    [化４６]
  7. R1がCH3である請求項6に記載のADC。
  8. 請求項1-7のADCであって、細胞毒素リンカーが、自己共役前に、および反応性代替物Z'を含む、Cy-L-Z'としてまとめられたものを含むものは、テシリンであり、式(IV)の構造を有するもの、
    [化４７]
  9. 式(V)の構造を持つクレーム1-8のいずれかのADC。
    [化４８]
    ここで、Abは、抗CD45抗原結合フラグメントであり、Sは、それに含まれる、又はその抗原結合フラグメントに導入される硫黄原子を表す。
  10. 細胞毒素がインドリノベンゾジアゼピン(IGN)を含むリンカー(L)を介して細胞毒素(Cy)に共役された、抗CD45抗原結合部(Ab)を含む、抗ドラッグコンジゲート(ADC)。
  11. 細胞毒素がIGN量体または擬似物である請求項10のADC。
  12. 細胞毒素が式(VI)で表されるIGN擬似体である請求項10または11のADC。
    [化４９]
    波線はADCのリンカーへの等価な付着点を示す。
  13. 当該リンカーがジペプチド、ジスルフィド、C1-C12アルキル、C=O又はそれらの組み合わせを含む、10-12のいずれかのクレームのADC。
  14. リンカーが構成する請求項10-13のいずれかのADC。
    [化５０]
  15. 請求項10-14のいずれかのADCであって、細胞毒素リンカーが、その抗原結合部への接合前に、また反応性代替物Z'を含む、Cy-L-Z'としてまとめられたものは、式(VII)の構造を有する。
    [化５１]
  16. ADCが1、2、3、4、5、6、7、8、9、又は10の麻薬/抗原薬比(DAR)を有する先行請求項のいずれかのADC。
  17. 抗体がキメラ抗体またはヒト化抗体である、前記請求項のいずれか一項に記載のADC。
  18. 抗体がヒト抗体である、前記請求項のいずれか一項に記載のADC。
  19. 抗体またはその抗原結合部分が、モノクローナル抗体またはその抗原結合部分、ポリクローナル抗体またはその抗原結合部分、二重特異性抗体またはその抗原結合部分、二重可変免疫グロブリンドメイン、一本鎖Fv分子(scFv)、ダイアボディ、トリアボディ、ナノボディ、抗体様タンパク質足場、Fvフラグメント、Fabフラグメント、F(ab')2分子、およびタンデムジ-scFvからなる群から選択される、先行する請求項のいずれか一項に記載のADC。
  20. 先行請求項のいずれかのADCであって、当該抗菌物は、IgG、IgA、IgM、IgD及びIgEからなる群から選択された同型を有する。
  21. 請求項20のADCは、当該抗菌がヒトIgG1、IgG2、IgG3、又はIgG4アイソタイプFcドメインを含む。
  22. 先行するクレームのいずれかのADCは、Fcドメインを含み、かつ、このドメインまたはその抗原結合部が、Fcドメイン内のシステイン残留物を経由して細胞毒素に結合される、先行クレームのいずれかのADCである。
  23. 請求項22のADCで、システイン残基がFc領域のアミノ酸置換によって導入される。
  24. アミノ酸の置換がD265C及び/又はV205C (EUナンバリング)である請求項23のADC。
  25. アミノ酸の置換がS239C (EUナンバリング)である請求項23のADC。
  26. 請求項1-25のいずれかのADC及び薬事上薬学的に許容可能な担体からなる医薬品組成。
  27. ヒト患者におけるCD45+細胞の集団を減少させる方法、すなわち、請求項1-25のいずれかのADCまたは請求項26の医薬組成物の有効量を患者に管理する方法。
  28. 記載の方法で、CD45+細胞が血液性幹細胞である。
  29. 記載の方法で、血液性幹細胞がCD45の同質形態を1つ以上表現するもの。
  30. 記載の方法。CD45+電池が、防御電池であること。
  31. 記載の方法。これは、細胞がCD137、CD2、および/またはCD5を表現するものである。
  32. 請求項27-31のうちの1つの方法で、さらに、血液細胞から成る移植を患者に施す方法。
  33. 請求項1-25のいずれかのADC、又は請求項20の医薬品組成を、患者からCD45+細胞の集団を減少させるのに十分な量で、患者に血液細胞から成る移植を施すことを含む方法。
  34. 記載の方法で、CD45+細胞が血液性幹細胞であること。
  35. 記載の方法で、血液性幹細胞がCD45の同質形態を1つ以上表現するもの。
  36. 造血幹細胞を含む移植片をヒト患者に投与することを含む方法であって、前記患者に、前記患者から免疫細胞の集団を枯渇させるのに十分な量で、請求項1～25のいずれか一項に記載のADC、または請求項26に記載の医薬組成物を予め投与したことを特徴とする方法。
  37. 細胞がCD137、CD2、および/またはCD5を表現する、請求項36に記載方法。
  38. 患者が血液疾患、代謝障害、癌、自己免疫疾患、または重症複合免疫不全症(SCID)を有する、請求項27～37のいずれか一項記載の方法。
  39. 移植が同種異性であることを主張する32-38のいずれかの方法。
  40. 請求項39の方法、ここでは、移植は、同種の血液細胞移植である。
  41. 移植がオートロゴスであることを特徴とする請求項39の方法。
  42. 請求項27-41のうち、患者が血液がんを有するもののいずれかの方法。
  43. 請求項42記載の方法、ここで、血液学的ガンは白血病又はリンマである。
  44. 請求項27-41のいずれかの方法で、当該患者が自己感染症を有すること。
  45. 自己感染症が多発硬化であることを示す記載の方法。
  46. 請求項44に記載の方法、ここでは、自己感染性の病気は強皮症である。
  47. 血液細胞(HSC)移植を必要とするヒトの患者において、CD45+細胞の集団を減少させる方法、すなわち、CD45+細胞の集団が枯渇するように、ヒト患者に有効な量を施す方法、すなわち、ADCは、ピロロロンボンゾジアゼピン(「PBD」)を含む、リンカーを介して細胞毒素に接合された抗CD45+抗原結合部を含む、CD45+細胞を枯渇させる。
  48. ヒト患者に血液細胞(HSC)移植を受けるための条件づけの方法、すなわち、ADCは、ピロロロンボンゾディアゼピン(PBD)を含む、リンカーを介して細胞毒素に結合された抗CD45(抗CD45)および抗原結合部を含む、人の患者に、抗CDC-薬物共役(ADC)を施す方法である。
  49. 細胞毒素がPBD量体である請求項47又は48の方法。
  50. 細胞毒素が式(I)によって表されるPBD量体である請求項47-49のいずれかの方法。
    [化５２]
    波線はADCのリンカーへの等価な付着点を示す。
  51. リンカーが、ペプチド、オリゴ糖, -(CH2)p -, -(CH2 CH2 O)q-, -(C=O)(CH2)r -, -(C=O)(CH2 CH2O)t -, -(NHCH2 CH2)u -, -PAB、Val-Cit-PAB、Val-Ala-PAB、Val-Lys(Ac)-PAB、Phe-Lys(Ac)-PAB、Phe-Lys(Ac)-PAB、D-Val-Leu-Lys、Gly-Gly-Arg、Ala-Ala-Asn-PAB、またはAla-PABのうちの1つまたは複数を含み、p、q、r、t、およびuのそれぞれが、出現ごとに独立して選択される、1～12の整数である、請求項47～50のいずれか1項に記載の方法。
  52. 当該リンカーが式(II)の構造を有する請求項47-51のいずれかの方法。
    [化５３]
    ここで、R1 はCH3 (Ala) または(CH2)3NH(CO)NH2 である。
  53. 請求項47-52のうちの1つの方法で、当該リンカーが、当該液に接合する前に、L-Z'としてまとめられた反応代用Z'を含むものの、構造を有するもの、
    [化５４]。
  54. R1がCH3である請求項53記載の方法。
  55. 請求項47-54のうちの1つの方法で、細胞毒素リンカーが、接合する前に、反応性代替物Z'を含む、Cy-L-Z'としてまとめられたものは、テシリンであり、式(IV)の構造を有するもの、
    [化５５]。
  56. ADCが式(V)の構造を有する請求項47-55のいずれかの方法。
    [化５６]
    ここで、Abは、抗CD45抗原結合フラグメントであり、Sは、それに含まれる、又はその抗原結合フラグメントに導入される硫黄原子を表す。
  57. 血液細胞(HSC)移植を必要とするヒトの患者におけるCD45+細胞の集団を減少させる方法、すなわち、CD45+細胞の集団が減少するように、ヒト患者に有効な量を施術する方法、すなわち、ADCがリンカーを介して細胞毒素に結合された薬物CD45-CD45-bindiazepine (IGN)を含む、細胞毒素をインドリノベンゾジアゼピン(IGN)を含む、細胞毒素に結合された薬物CD45+細胞の一部を含む。
  58. ヒト患者に血液細胞(HSC)移植を受けるための条件づけの方法、すなわち、ADCがリンカーを介して細胞毒素に結合された抗CD45-抗原結合部を含み、そこで細胞毒素がインドリノベンゾジアゼピン(IGN)を含む、人の患者に抗CD45-薬物共役(ADC)を施す方法である。
  59. 細胞毒素がIGN量体又は擬似物であるクレーム57又は58の方法。
  60. 請求項57-59のうち、細胞毒素が式(VI)で表されるIGN擬似体であるもののいずれかの方法、
    [化５７]
    波線はADCのリンカーへの等価な付着点を示す。
  61. 当該リンカーがジペプチド、ジスルフィド、C1-C12アルキル、C=O又はそれらの組み合わせを含む、請求項57-60のいずれかの方法。
  62. リンカーが構成する請求項57-61のいずれかの方法。
    [化５８]
    または
    [化５９]
  63. 請求項57-62のうちの1つのADCであって、細胞毒素リンカーが、それらの抗原結合部への接合前に、また、反応性代替物Z'を含む、Cy-L-Z'としてまとめられたものは、式(VII)の構造を有する。
    [化６０]
  64. ADCが、1、2、3、4、5、6、7、または8の麻薬/抗原薬比(DAR)を有する請求項47-63のいずれかの方法。
  65. 抗体がキメラ抗体またはヒト化抗体である、請求項47～64のいずれか一項記載の方法。
  66. 請求項47-64のいずれかの方法で、当該抗体レンスが人間の抗原であることを示すもの。
  67. 抗体またはその抗原結合部分が、モノクローナル抗体またはその抗原結合部分、ポリクローナル抗体またはその抗原結合部分、二重特異性抗体またはその抗原結合部分、二重可変免疫グロブリンドメイン、一本鎖Fv分子(scFv)、ダイアボディ、トリアボディ、ナノボディ、抗体様タンパク質足場、Fvフラグメント、Fabフラグメント、F(ab')2分子、およびタンデムジ-scFvからなる群より選択される、請求項47～66のいずれか一項記載の方法。
  68. 請求項47-67のうちの1つの方法で、それらの抗原結合部がFcドメインを含み、CD45+電池によって内部化されるもののいずれか一項に記載の方法。
  69. IgG、IgA、IgM、IgDおよびIgEからなるグループから選択された同型を有する請求項47-68のいずれかの方法。
  70. 請求項47-69のいずれかの方法、ここで、当該抗体レンスにヒトIgG1、IgG2、IgG3、又はIgG4同型Fcドメインが含まれる。
  71. 請求項47-70のうちの1つの方法、ここでは、抗原結合部、つまり、抗原結合部は、Fc領域内のシステイン残留物を経由して、サイトトキシンに結合される。
  72. 請求項71記載の方法で、システイン残基をFc領域内のアミノ酸置換により導入する。
  73. アミノ酸の置換をD265C (EUナンバリング)とする請求項72の方法。
  74. アミノ酸の置換をV205C (EUナンバリング)とする請求項72の方法。
  75. アミノ酸の置換をS239C (EUナンバリング)とする請求項72の方法。
  76. 請求項47-75のいずれかの方法で、血液細胞からなる移植を受け取る前に、患者にADCを管理することを含む。
  77. 記載の方法は、患者が血液細胞からなる移植を受け取る約3日前に、患者にADCを管理することを含む。
  78. 患者が血液疾患、代謝障害、癌、自己免疫疾患、幹細胞障害、または重症複合免疫不全症(SCID)を有する、請求項47～77のいずれか一項記載の方法。
  79. 幹細胞障害が、血液がんまたは自己免疫疾患である、請求項78記載の方法。
  80. 患者が血液がんであることを示す記載の方法。
  81. 血液がんが白血病またはリンパ腫である、請求項80記載の方法。
  82. 自己感染症の患者を有する記載の方法。
  83. 記載の方法。ここでは、自己感染性の病気は多重硬化症または硬化症性である。
  84. 内因性CD45+ HSCの集団が、ADCの投与後にヒト患者において枯渇する、請求項47～83のいずれか一項記載の方法。
  85. 請求項47-84のいずれかの方法で、さらに患者に血液細胞移植を施すことを含む。
  86. ADCが患者の血から実質的に除去された後、ヒト患者に移植を行う記載の方法。
  87. 請求項85又は86の記載の方法で血液細胞移植が異性細胞を含むもの。
JP2021563185A 2019-04-24 2020-04-24 抗ｃｄ４５抗体薬物結合体とその利用法 Pending JP2022530089A (ja)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201962838280P 2019-04-24 2019-04-24
US62/838,280 2019-04-24
PCT/US2020/029929 WO2020219959A1 (en) 2019-04-24 2020-04-24 Anti-cd45 antibody drug conjugates and uses thereof

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JP2022530089A true JP2022530089A (ja) 2022-06-27
JPWO2020219959A5 JPWO2020219959A5 (ja) 2023-05-08

Family

ID=72940686

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2021563185A Pending JP2022530089A (ja) 2019-04-24 2020-04-24 抗ｃｄ４５抗体薬物結合体とその利用法

Country Status (4)

Country Link
US (1) US20220175951A1 (ja)
EP (1) EP3958910A4 (ja)
JP (1) JP2022530089A (ja)
WO (1) WO2020219959A1 (ja)

Families Citing this family (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105377994B (zh) 2013-08-22 2018-03-02 索尼公司 水溶性荧光染料或有色染料及其使用方法
CN114806218A (zh) 2016-04-01 2022-07-29 索尼公司 超亮二聚或多聚染料
AU2017264861B2 (en) 2016-05-11 2021-09-23 Sony Group Corporation Ultra bright dimeric or polymeric dyes
US12018159B2 (en) 2016-07-29 2024-06-25 Sony Group Corporation Ultra bright dimeric or polymeric dyes and methods for preparation of the same
JP7551056B2 (ja) 2017-10-05 2024-09-17 ソニーグループ株式会社 プログラマブルなポリマー薬物
EP3710062A1 (en) 2017-11-16 2020-09-23 Sony Corporation Programmable polymeric drugs
KR20200108866A (ko) 2018-01-12 2020-09-21 소니 주식회사 생물학적 활성 화합물을 포함하는 강성 공간 군을 갖는 중합체
KR20200135424A (ko) 2018-03-19 2020-12-02 소니 주식회사 형광 신호 향상을 위한 2가 금속의 사용
EP3814366A1 (en) 2018-06-27 2021-05-05 Sony Corporation Polymeric dyes with linker groups comprising deoxyribose
EP3861074A2 (en) 2019-09-26 2021-08-11 Sony Group Corporation Polymeric tandem dyes with linker groups
KR20240062140A (ko) * 2021-09-30 2024-05-08 소니그룹주식회사 암 치료용 피롤로벤조디아제핀 접합체
WO2023183927A2 (en) 2022-03-24 2023-09-28 Actinium Pharmaceuticals, Inc. Humanized anti-cd45 antibodies
WO2024133890A1 (en) 2022-12-23 2024-06-27 Cimeio Therapeutics Ag Antibodies targeting cd45

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104520324A (zh) * 2012-02-24 2015-04-15 施特姆森特Rx股份有限公司 Dll3调节剂及其使用方法
EP3280720A4 (en) * 2015-04-06 2018-12-05 President and Fellows of Harvard College Compositions and methods for non-myeloablative conditioning
EP3426305A4 (en) * 2016-03-07 2020-01-08 Actinium Pharmaceuticals, Inc. STABILIZED RADIOACTIVELY MARKED ANTI-CD45 IMMUNOGLOBULIN COMPOSITIONS
SG11201811292RA (en) * 2016-06-17 2019-01-30 Magenta Therapeutics Inc Compositions and methods for the depletion of cells
CN113302203A (zh) * 2018-10-30 2021-08-24 美真达治疗公司 抗cd45抗体及其缀合物

Also Published As

Publication number Publication date
EP3958910A4 (en) 2023-08-02
WO2020219959A1 (en) 2020-10-29
US20220175951A1 (en) 2022-06-09
EP3958910A1 (en) 2022-03-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP2022530089A (ja) 抗ｃｄ４５抗体薬物結合体とその利用法
US20200255523A1 (en) Fc silenced antibody drug conjugates (adcs) and uses thereof
KR20200069364A (ko) Cd117+ 세포의 고갈을 위한 조성물 및 방법
US20220175944A1 (en) Anti-cd117 antibody-drug conjugates and uses thereof
CN113302203A (zh) 抗cd45抗体及其缀合物
CN114174317A (zh) 鹅膏毒素抗体-药物缀合物及其用途
KR20210086683A (ko) 동종이형 조혈 줄기 세포 이식 방법
US20240075157A1 (en) Fc silenced antibody drug conjugates (adcs) and uses thereof
KR20200094181A (ko) Cd5+ 세포를 고갈시키기 위한 조성물 및 방법
KR20220091567A (ko) 항-cd45 항체 및 이의 컨쥬게이트
JP2022531141A (ja) 遺伝子治療のコンディショニング方法
US20220177577A1 (en) Anti-cd117 antibody drug conjugates and uses thereof
JPWO2020219959A5 (ja)
JP2022529727A (ja) Ａｎｔｉ－ｃｄ１１７ とその使用
JP2022529726A (ja) Ａｎｔｉ－ｃｄ１１７とその使用
US20220226493A1 (en) Anthracycline antibody-drug conjugates and uses thereof
CN111867621A (zh) 用于耗尽cd134+细胞的组合物和方法
JPWO2020219775A5 (ja)
US20220273811A1 (en) Methods and compositions for treating autoimmune diseases
JPWO2020219778A5 (ja)
WO2024064771A1 (en) Anti-cd45-ign antibody drug conjugates and uses thereof
KR20220154676A (ko) 동종 이식을 위한 조성물 및 방법
JPWO2020219774A5 (ja)
CN112154152A (zh) 抗cd252抗体、缀合物和使用方法

Legal Events

Date Code Title Description
A524 Written submission of copy of amendment under article 19 pct

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A524

Effective date: 20221111

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20230424

A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20230424

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20230425

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20240514

A601 Written request for extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601

Effective date: 20240805

A711 Notification of change in applicant

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711

Effective date: 20240910