BR112020010816A2 - composições e métodos para a depleção de células de cd2+ - Google Patents

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Abstract

A invenção fornece anticorpos anti-CD2, fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos e conjugados anticorpo-fármaco para usar como agentes para tratar um distúrbio de célula-tronco, câncer ou doença autoimune dentre outras doenças hematológicas e proliferativas. As composições e os métodos descritos no presente documento podem ser usados para depletir populações de células de CD2+, como células cancerosas de CD2+ e células imunes de CD2+, e podem ser usados para preparar um paciente para o transplante de célula-tronco hematopoiética.

Description

“COMPOSIÇÕES E MÉTODOS PARA A DEPLEÇÃO DE CÉLULAS DE CD2+”
PEDIDOS RELACIONADOS
[001] Este pedido reivindica o benefício de prioridade para o Pedido de Patente Provisório n° US 62/592.169, depositado em 29 de novembro de 2017, cujos conteúdos são incorporados a título de referência no presente documento.
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO
[002] Apesar dos avanços nas técnicas médicas, permanece uma demanda por tratar patologias do sistema hematopoiético, como doenças de uma célula sanguínea particular, distúrbios metabólicos, cânceres, afecções autoimunes dentre outras.
[003] Embora as células-tronco hematopoiéticas tenham potencial terapêutico significativo, uma limitação que prejudicou seu uso na clínica foi a dificuldade associada à garantia de enxertamento de transplantes de célula-tronco hematopoiética em um hospedeiro. O próprio sistema imunológico de um paciente ataca frequentemente as células transplantadas e medeia a rejeição das células- tronco hematopoiéticas transplantadas. A fim de evitar a rejeição, um paciente é tratado com agentes destruidores de sistema imunológico antes do transplante de célula-tronco hematopoiética, por exemplo, agentes quimioterápicos ou radiação.
Infelizmente, esforços para induzir tolerância do transplante de célula-tronco hematopoiética no paciente resultam frequentemente em complicações graves.
Assim, há uma necessidade por novas composições e novos métodos para aprimorar o transplante de célula-tronco hematopoiética.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
[004] Há atualmente uma necessidade por composições e métodos para tratar distúrbios do sistema hematopoiético, como distúrbios autoimunes, assim como por composições e métodos para promover o enxertamento de enxertos de célula-tronco hematopoiética exógena de modo que a funcionalidade de potência múltipla e hematopoiética dessas células é preservada após o transplante.
[005] São fornecidos composições e métodos para o tratamento direto de vários distúrbios do sistema hematopoiético, distúrbios metabólicos, cânceres e doenças autoimunes dentre outros no presente documento. As composições e os métodos revelados no presente documento alvejam células imunes para condicionar um paciente humano para um transplante de célula-tronco hematopoiética para tratamento de uma doença, como, mas não se limita, câncer sanguíneo ou uma doença autoimune.
[006] Em um aspecto, a invenção ainda apresenta composições e métodos para condicionar um paciente, como um paciente humano, antes de receber a terapia de transplante de célula-tronco hematopoiética com a finalidade de promover o enxertamento de enxerto de célula-tronco hematopoiética. O paciente pode ser esse que está sofrendo de uma doença autoimune ou um ou mais distúrbios sanguíneos, como câncer, hemoglobinopatia ou outra patologia hematopoiética, e.
assim, há uma necessidade de transplante de célula-tronco hematopoiética.
[007] Conforme descrito no presente documento, as células-tronco hematopoiéticas têm capacidade de se diferenciar em uma variedade de tipos de células na linhagem hematopoiética, e podem ser administradas a um paciente a fim de povoar ou repovoar um tipo de célula que é deficiente no paciente.
[008] Em certos aspectos, a invenção apresenta anticorpos e conjugados de anticorpo-fármaco que se ligam a CD2, assim como métodos de administração dos mesmos a um paciente com a finalidade de (i) tratar diretamente um distúrbio sanguíneo, como uma doença autoimune ao depletir seletivamente uma população de células imunes que expressam CD2, como uma célula T autorreativa ou célula exterminadora natural (NK), e/ou (ii) depletir uma população de células T ou células NK antes da administração de um transplante de célula-tronco hematopoiética ao paciente, reduzindo, desse modo, a probabilidade de rejeição de enxerto de célula- tronco hematopoiética. A atividade anterior possibilita o tratamento direto de uma faixa ampla de distúrbios autoimunes, já que CD2 pode ser expressada por uma célula T ou célula NK que cruza, e monta uma resposta imune apropriada contra um antígeno próprio. A administração de um anticorpo anti-CD2 ou de um conjugado de anticorpo-fármaco a um paciente nesse caso pode causar depleção de uma população de células autoimunes de CD2+, como células T ou células NK que cruzam com um ou mais antígenos próprios, tratando, desse modo, a patologia autoimune. A última atividade facilita a geração de um ambiente que é conducente ao enxertamento de célula-tronco hematopoiética, como células T e/ou células NK que cruzam com um ou mais antígenos não próprios expressados por uma célula- tronco hematopoiética (por exemplo, antígenos de MHC não próprios) podem montar uma resposta imune contra as células-tronco hematopoiéticas transplantadas e, assim, promover a rejeição de enxerto. Nesse último caso, pacientes que sofrem de um distúrbio, como câncer, uma doença autoimune ou outra afecção do sistema hematopoiético pode ser administrados um transplante de célula-tronco hematopoiética a fim de, por exemplo, repovoar uma ou mais populações de células sanguíneas que estão com defeito ou depletidas no paciente. São fornecidos também métodos de tratamento de uma variedade de afecções hematopoiéticas, como anemia falciforme, talassemia, anemia de Fanconi, síndrome de Wiskott- Aldrich , imunodeficiência combinado grave por deficiência de adenosina deaminase, leicodistrofia mnetacromática, anemia de Diamond-Blackfan e síndrome de Schwachman- Diamond, infecção por vírus de imunodeficiência humana, e síndrome de deficiência imune adquirida, assim como cânceres e doenças autoimunes dentre outras no presente documento.
[009] Em um aspecto, a invenção fornece um método de depleção de uma população de células de CD2+, por exemplo, em um paciente humano, como uma população de células T de CD2+ e/ou células NK de CD2+ em um paciente humano ao administrar ao paciente uma quantidade eficaz de um anticorpo ou de um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ou de um conjugado de anticorpo- fármaco que se liga a CD2.
[010] Em um outro aspecto, a invenção fornece um método de depleção de uma população de células de CD2+ em um paciente humano em necessidade de um transplante de célula-tronco hematopoiética, como uma população de células T de CD2+ e/ou células NK de CD2+ em um paciente humano em necessidade de transplante de célula-tronco hematopoiética ao administrar ao paciente uma quantidade eficaz de um anticorpo, de um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ou de um conjugado de anticorpo-fármaco que se liga a CD2, por exemplo, antes de o paciente receber um transplante incluindo células-tronco hematopoiéticas.
[011] Em um aspecto adicional, é fornecido um método de prevenção ou redução da probabilidade de rejeição de um enxerto de célula-tronco hematopoiética em um paciente humano em necessidade de terapia de transplante de célula-tronco hematopoiética no presente documento ao administrar antes de o paciente receber um transplante incluindo células-tronco hematopoiéticas uma quantidade eficaz de um anticorpo, de um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ou de um conjugado de anticorpo-fármaco que se liga a CD2.
[012] Em um outro aspecto, a invenção fornece um método de depleção de uma população de células T endógenas em um paciente humano em necessidade de terapia de transplante de célula-tronco hematopoiética ao administrar antes de o paciente receber um transplante incluindo células-tronco hematopoiéticas uma quantidade eficaz de um anticorpo, de um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ou de um conjugado de anticorpo-fármaco que se liga a CD2.
[013] Em um outro aspecto, a invenção apresenta um método, por exemplo, de tratamento de um paciente humano em necessidade de um transplante de célula-
tronco hematopoiética incluindo administrar a um paciente humano um transplante incluindo células-tronco hematopoiéticas, em que ao paciente foi administrado previamente um anticorpo, um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ou um conjugado de anticorpo-fármaco que se liga a CD2. O anticorpo, o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ou o conjugado de anticorpo-fármaco pode ser administrado ao paciente em uma quantidade suficiente para depletir uma população de células de CD2+ no paciente, como uma população de células T de CD2+ e/ou células NK de CD2+ no paciente humano.
[014] Em um aspecto adicional, a invenção apresenta um método, por exemplo, de tratamento de um paciente humano em necessidade de um transplante de célula-tronco hematopoiética incluindo: administrar a um paciente humano um anticorpo, um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ou um conjugado de anticorpo-fármaco que se liga a CD2 em uma quantidade suficiente para depletir uma população de células de CD2+ no paciente, como uma população de células T de CD2+ e/ou células NK de CD2+ no paciente, e administrar subsequentemente ao paciente um transplante incluindo células-tronco hematopoiéticas.
[015] Em algumas modalidades de qualquer um dos aspectos supracitados, o anticorpo anti-CD2 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é produzido pela linhagem celular de hibridoma ATCC HB 11423. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-CD2 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo inibe competitivamente a ligação de CD2 a um anticorpo anti-CD2 ou ao fragmento de ligação ao antígeno do mesmo produzido pela linhagem celular de hibridoma ATCC HB 11423.
[016] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-CD2 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo contém as regiões determinantes de complementaridade (CDRs) a seguir: uma CDR-H1 que tem a sequência de aminoácido EYYMY (SEQ ID n°: 1);
uma CDR-H2 que tem a sequência de aminoácido RIDPEDGSIDYVEKFKK (SEQ ID n°: 2); uma CDR-H3 que tem a sequência de aminoácido GKFNYRFAY (SEQ ID n°: 3); uma CDR-L1 que tem a sequência de aminoácido RSSQSLLHSSGNTYLN (SEQ ID n°:4); uma CDR-L2 que tem a sequência de aminoácido LVSKLES (SEQ ID n°: 5); e uma CDR-L3 que tem a sequência de aminoácido MQFTHYPYT (SEQ ID n°: 6).
[017] Em algumas modalidades, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo inibe competitivamente a ligação de CD2 a um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreendendo as CDRs a seguir: uma CDR-H1 que tem a sequência de aminoácido EYYMY (SEQ ID n°: 1); uma CDR-H2 que tem a sequência de aminoácido RIDPEDGSIDYVEKFKK (SEQ ID n°: 2); uma CDR-H3 que tem a sequência de aminoácido GKFNYRFAY (SEQ ID n°: 3); uma CDR-L1 que tem a sequência de aminoácido RSSQSLLHSSGNTYLN (SEQ ID n°: 4); uma CDR-L2 que tem a sequência de aminoácido LVSKLES (SEQ ID n°: 5); e uma CDR-L3 que tem a sequência de aminoácido MQFTHYPYT (SEQ ID n°: 6).
[018] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-CD2 ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é i) um anticorpo anti-CD2 ou uma porção de ligação ao antígeno que compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma CDR-H1 conforme apresentado na SEQ ID n°: 1; uma CDR-H2 conforme apresentado na SEQ ID n°: 2; uma CDR-H3 conforme apresentado na SEQ ID n°: 3; e que compreende uma região variável de cadeia leve compreendendo uma CDR-L1 conforme apresentado na SEQ ID n°: 4; uma CDR-L2 conforme apresentado na SEQ ID n°: 5; e uma CDR-L3 conforme apresentado na SEQ ID n°: 6; ii) um anticorpo anti-CD2 ou uma porção de ligação ao antígeno do mesmo que compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma CDR-H1 conforme apresentado na SEQ ID n°: 14; uma CDR-H2 conforme apresentado na SEQ ID n°: 15; uma CDR-H3 conforme apresentado na SEQ ID n°: 16 ou 17; e que compreende uma região variável de cadeia leve compreendendo uma CDR-L1 conforme apresentado na SEQ ID n°: 18; uma CDR-L2 conforme apresentado na SEQ ID n°: 19; e uma CDR-L3 conforme apresentado na SEQ ID n°: 20; iii) um anticorpo anti-CD2 ou uma porção de ligação ao antígeno do mesmo que compreende uma região variável de cadeia pesada conforme apresentado na SEQ ID n°: 7 e que compreende uma região variável de cadeia leve conforme apresentado na SEQ ID n°: 8; iv) um anticorpo anti-CD2 ou uma porção de ligação ao antígeno do mesmo que compreende uma região variável de cadeia pesada conforme apresentado na SEQ ID n°: 9 e que compreende uma região variável de cadeia leve conforme apresentado na SEQ ID n°: 10; ou v) um anticorpo anti-CD2 ou uma porção de ligação ao antígeno do mesmo que compreende uma região variável de cadeia pesada conforme apresentado na SEQ ID n°: 21 ou 22 e que compreende uma região variável de cadeia leve conforme apresentado na SEQ ID n°: 23.
[019] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-CD2 ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é selecionado a partir do grupo que consiste em um anticorpo monoclonal, um anticorpo policlonal ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, um anticorpo humanizado, um anticorpo biespecífico, um domínio de imunoglobulina de variável dupla, uma molécula de Fv de cadeia única
(scFv), um diacorpo, um triacorpo, um nanocorpo, um andaime de proteína semelhante ao anticorpo, um fragmento de Fv, um fragmento de Fab, uma molécula de F(ab’)2 e um di-scFv tandem ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos.
Em algumas modalidades, o anticorpo tem um isotipo selecionado a partir do grupo que consiste em IgG, IgA, IgM, IgD e IgE.
[020] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-CD2 ou o fragmento de ligação ao antígeno é conjugado com uma citotoxina. Em algumas modalidades, a citotoxina é selecionada a partir do grupo que consiste em uma amatoxina, pseudomonas exotoxina A, debouganina, toxina de difteria, saporina, maitansina, um maitansinoide, uma auristatina, uma antraciclina, uma caliqueamicina, irinotecano, SN-38, uma duocarmicina, uma pirrolobenzodiazepina, um dímero de pirrolobenzodiazepina, uma indolinobenzodiazepina e um dímero de indolinobenzodiazepina ou uma variante dos mesmos.
[021] Em um outro aspecto, a invenção fornece um método de depleção de uma população de células de CD2+ em um paciente humano, como uma população de células T de CD2+ e/ou células NK de CD2+ em um paciente humano ao administrar ao paciente uma quantidade eficaz de um anticorpo, de um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ou de um conjugado de anticorpo-fármaco que se liga a CD2.
[022] Em um aspecto adicional, a invenção fornece um método de depleção de uma população de células de CD2+ em um paciente humano em necessidade de um transplante de célula-tronco hematopoiética, como uma população de células T de CD2+ e/ou células NK de CD2+ em um paciente humano em necessidade de transplante de célula-tronco hematopoiética ao administrar antes de o paciente receber um transplante incluindo células-tronco hematopoiéticas uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-CD2, de um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ou de um conjugado de anticorpo-fármaco.
[023] Em um outro aspecto, a invenção apresenta um método, por exemplo, de tratamento de um paciente humano em necessidade de um transplante de célula- tronco hematopoiética incluindo administrar a um paciente humano um transplante incluindo células-tronco hematopoiéticas, em que ao paciente foi administrado previamente um anticorpo, um fragmento do mesmo ou um conjugado de anticorpo- fármaco que se liga a CD2 em uma quantidade suficiente para depletir uma população de células de CD2+ no paciente, como uma população de células T de CD2+ e/ou células NK de CD2+ no paciente humano.
[024] Em um aspecto adicional, a invenção apresenta um método, por exemplo, de tratamento de um paciente humano em necessidade de um transplante de célula-tronco hematopoiética incluindo: administrar a um paciente humano um anticorpo, um fragmento do mesmo ou um conjugado de anticorpo-fármaco que se liga a CD2 em uma quantidade suficiente para depletir uma população de células de CD2+ no paciente, como uma população de células T de CD2+ e/ou células NK de CD2+ no paciente, e administrar subsequentemente ao paciente um transplante incluindo células-tronco hematopoiéticas.
[025] Em algumas modalidades de qualquer um dos quatro aspectos anteriores, o anticorpo ou o fragmento do mesmo que se liga a CD2 (por exemplo, na superfície de uma célula T de CD2+ ou célula NK de CD2+) é ligado covalentemente a um domínio de Fc, como um domínio de Fc dimérico isolado a partir de um anticorpo humano (por exemplo, isolado a partir de um anticorpo humano de isotipo lgG1, lgG2, lgG3 ou lgG4). Em algumas modalidades, o domínio de Fc é um domínio de Fc monomérico que contém uma única cadeia de polipeptídeo. Em algumas modalidades, o terminal N do anticorpo ou do fragmento do mesmo é ligado ao domínio de Fc. Em algumas modalidades, o terminal C do anticorpo ou do fragmento do mesmo é ligado ao domínio de Fc. O domínio de Fc pode ser conjugado às uma ou mais cópias do anticorpo ou do fragmento do mesmo.
Por exemplo, os conjugados que podem ser usados em conjunto aos métodos descritos no presente documento incluem domínios de Fc diméricos nos quais cada fita de polipeptídeo do domínio de Fc é conjugada ao anticorpo ou ao fragmento do mesmo. O domínio de Fc pode ser, por sua vez, conjugado com uma citotoxina, como uma citotoxina descrita no presente documento (por exemplo, uma amatoxina, como α-amanitina, pseudomonas exotoxina A, debouganina, toxina de difteria, saporina, maitansina, um maitansinoide, uma auristatina, uma antraciclina, uma caliqueamicina, irinotecano, SN-38, uma duocarmicina, uma pirrolobenzodiazepina, um dímero de pirrolobenzodiazepina, uma indolinobenzodiazepina e um dímero de indolinobenzodiazepina ou uma variante dos mesmos).
[026] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-CD2 ou o fragmento do mesmo é ligado covalentemente a uma citotoxina, como uma citotoxina descrita no presente documento (por exemplo, uma amatoxina, como α-amanitina, pseudomonas exotoxina A, debouganina, toxina de difteria, saporina, maitansina, um maitansinoide, uma auristatina, uma antraciclina, uma caliqueamicina, irinotecano, SN-38, uma duocarmicina, uma pirrolobenzodiazepina, um dímero de pirrolobenzodiazepina, uma indolinobenzodiazepina e um dímero de indolinobenzodiazepina ou uma variante dos mesmos. Em algumas modalidades, o terminal N do anticorpo ou do fragmento do mesmo é ligado à citotoxina. Em algumas modalidades, o terminal C do anticorpo ou do fragmento do mesmo é ligado à citotoxina. A citotoxina pode, por sua vez, ser conjugada com um domínio de Fc.
[027] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-CD2 ou o fragmento do mesmo é ligado covalentemente à citotoxina em um sítio no anticorpo ou no fragmento do mesmo (por exemplo, o terminal N- ou C do anticorpo ou do fragmento do mesmo) e é ligado covalentemente a um domínio de Fc em um outro sítio no anticorpo ou no fragmento do mesmo (por exemplo, os terminais opostos do anticorpo ou do fragmento do mesmo).
[028] Em algumas modalidades, o domínio de Fc é um domínio de Fc de isotipo de IgG1 humano. Em algumas modalidades, o domínio de Fc é um domínio de Fc de isotipo de IgG2 humano. Em algumas modalidades, o domínio de Fc é um domínio de Fc de isotipo de IgG3 humano. Em algumas modalidades, o domínio de Fc é um domínio de Fc de isotipo de IgG4 humano.
[029] Em algumas modalidades de qualquer um dos aspectos acima, a citotoxina é uma amatoxina ou um derivado da mesma, como α-amanitina, β- amanitina, Ɣ-amanitina, Ɛ-amanitina, amanina, amaninamida, amanulina, ácido amanulínico e proamanulina. Em uma modalidade, a citotoxina é uma amanitina.
[030] Em algumas modalidades de qualquer um dos aspectos acima, a citotoxina é uma amatoxina, e o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ou o anticorpo conjugado com a citotoxina é representado pela fórmula Ab- Z-L-Am, em que Ab é o anticorpo, fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, L é um ligante, Z é uma fração química e Am é a amatoxina. Em algumas modalidades, a amatoxina é conjugado com um ligante. Em algumas modalidades, o conjugado de amatoxina-ligante Am-L-Z é representado pela fórmula (I) em que R1 é H, OH, ORA ou ORC; R2 é H, OH, ORB ou ORC;
[031] RA e RB, quando presentes juntamente com os átomos de oxigênio aos quais os mesmos são ligados, se combinam para formar um grupo heterocicloalquila de 5 membros opcionalmente substituído;
[032] R3 é H, RC ou RD;
[033] R4 é H, OH, ORC, ORD, RC ou RD;
[034] R5 é H, OH, ORC, ORD, RC ou RD;
[035] R6 é H, OH, ORC, ORD, RC ou RD;
[036] R7 é H, OH, ORC, ORD, RC ou RD;
[037] R8 é OH, NH2, ORC, ORD, NHRC ou NRCRD;
[038] R9 é H, OH, ORC ou ORD;
[039] X é -S-, -S(O)- ou -SO2-;
[040] RC é -L-Z;
[041] RD é alquila opcionalmente substituída (por exemplo, C1-C6 alquila), heteroalquila opcionalmente substituída (por exemplo, C1-C6 heteroalquila), alquenila opcionalmente substituída (por exemplo, C2-C6 alquenila), heteroalquenila opcionalmente substituída (por exemplo, C2-C6 heteroalquenila), alquinila opcionalmente substituída (por exemplo, C2-C6 alquinila), heteroalquinila opcionalmente substituída (por exemplo, C2-C6 heteroalquinila), cicloalquila opcionalmente substituída, heterocicloalquila opcionalmente substituída, arila opcionalmente substituída ou heteroarila opcionalmente substituída;
[042] L é um a ligante, como alquileno opcionalmente substituído (por exemplo, C1-C6 alquileno), heteroalquileno opcionalmente substituído (C1-C6 heteroalquileno), alquenileno opcionalmente substituído (por exemplo, C2-C6 alquenileno), heteroalquenileno opcionalmente substituído (por exemplo, C2-C6 heteroalquenileno), alquinileno opcionalmente substituído (por exemplo, C2-C6 alquinileno), heteroalquinileno opcionalmente substituído (por exemplo, C2-C6 heteroalquinileno), cicloalquileno opcionalmente substituído, heterocicloalquileno opcionalmente substituído, arileno opcionalmente substituído ou heteroarileno opcionalmente substituído, um dipeptídeo, -C(=O)-, um peptídeo ou uma combinação dos mesmos; e Z é uma fração química formada a partir de uma reação de acoplamento entre um substituinte reativo presente em L e um substituinte reativo presente em um anticorpo ou em um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga a CD2, como na superfície de uma célula T de CD2+ ou célula NK de CD2+.
[043] Em algumas modalidades, Am contém exatamente um substituinte de RC.
[044] Em algumas modalidades, o ligante L e a fração química Z, considerados em conjunto como L-Z, é ou em que S é um átomo de enxofre que representa o substituinte reativo presente em um anticorpo ou em um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga a CD117 (por exemplo, do grupo -SH de um resíduo de cisteína).
[045] Em algumas modalidades, L-Z é
[046] Em algumas modalidades, Am-L-Z-Ab é:
[047] Em algumas modalidades, Am-L-Z é representado pela fórmula (IA) em que R2 é H, OH, ORA ou ORC
[048] R2 é H, OH, ORB ou ORC;
[049] RA e RB, quando presentes juntamente com os átomos de oxigênio aos quais os mesmos são ligados, se combinam para formar um grupo heterocicloalquila de 5 membros opcionalmente substituído;
[050] R3 é H, RC ou RD;
[051] R4 é H, OH, ORC, ORD, RC ou RD;
[052] R5 é H, OH, ORC, ORD, RC ou RD;
[053] R6 é H, OH, ORC, ORD, RC ou RD;
[054] R7 é H, OH, ORC, ORD, RC ou RD;
[055] R8 é OH, NH2, ORC, ORD, NHRC ou NRCRD;
[056] R9 é H, OH, ORC ou ORD;
[057] X é -S-, -S(O)- ou -SO2-;
[058] RC é -L-Z;
[059] RD é alquila opcionalmente substituída (por exemplo, C1-C6 alquila), heteroalquila opcionalmente substituída (por exemplo, C1-C6 heteroalquila), alquenila opcionalmente substituída (por exemplo, C2-C6 alquenila), heteroalquenila opcionalmente substituída (por exemplo, C2-C6 heteroalquenila), alquinila opcionalmente substituída (por exemplo, C2-C6 alquinila), heteroalquinila opcionalmente substituída (por exemplo, C2-C6 heteroalquinila), cicloalquila opcionalmente substituída, heterocicloalquila opcionalmente substituída, arila opcionalmente substituída ou heteroarila opcionalmente substituída;
[060] L é um ligante, como alquileno opcionalmente substituído (por exemplo, C C6 alquileno), heteroalquileno opcionalmente substituído (C1C6 heteroalquileno), alquenileno opcionalmente substituído (por exemplo, C2-C6 alquenileno), heteroalquenileno opcionalmente substituído (por exemplo, C 2-C6 heteroalquenileno), alquinileno opcionalmente substituído (por exemplo, C2-C6 alquinileno), heteroalquinileno opcionalmente substituído (por exemplo, C2-C6 heteroalquinileno), cicloalquileno opcionalmente substituído, heterocicloalquileno opcionalmente substituído, arileno opcionalmente substituído, heteroarileno opcionalmente substituído, um dipeptídeo, -C(=O)-, um peptídeo ou uma combinação dos mesmos; Z é uma fração química formada partir de uma reação de acoplamento entre um substituinte reativo presente em L e um substituinte reativo presente em um anticorpo ou em um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga a CD2, como na superfície de uma célula T de CD2+ ou célula NK de CD2+; e em que Am compreende exatamente um substituinte de RC.
[061] Em algumas modalidades, o ligante L e a fração química Z, considerados em conjunto como L-Z, é ou
[062] Em algumas modalidades, L-Z é
[063] Em algumas modalidades, Am-L-Z-Ab é
[064] Em algumas modalidades, Am-L-Z-Ab é
[065] Em algumas modalidades, Am-L-Z é representado pela fórmula (IB) em que R1 é H, OH, ORA ou ORC;
[066] R2 é H, OH, ORB ou ORC;
[067] RA e RB, quando presentes juntamente com os átomos de oxigênio aos quais os mesmos são ligados, se combinam para formar um grupo heterocicloalquila de 5 membros opcionalmente substituído;
[068] R3 é H, RC ou RD;
[069] R4 é H, OH, ORC, ORD, Rc ou RD;
[070] R5 é H, OH, ORC, ORD, RC ou RD;
[071] R6 é H, OH, ORC, ORD, RC ou RD;
[072] R7 é H, OH, ORC, ORD, RC ou RD;
[073] R8 é OH, NH2, ORC, ORD, NHRC ou NRCRD;
[074] R9 é H, OH, ORC ou ORD;
[075] X é -S-, -S(O)- ou -SO2-;
[076] RC é -L-Z;
[077] RD é alquila opcionalmente substituída (por exemplo, C1-C6 alquila), heteroalquila opcionalmente substituída (por exemplo, C1-C6 heteroalquila), alquenila opcionalmente substituída (por exemplo, C2-C6 alquenila), heteroalquenila opcionalmente substituída (por exemplo, C2-C6 heteroalquenila), alquinila opcionalmente substituída (por exemplo, C2-C6 alquinila), heteroalquinila opcionalmente substituída (por exemplo, C2-C6 heteroalquinila), cicloalquila opcionalmente substituída, heterocicloalquila opcionalmente substituída, arila opcionalmente substituída ou heteroarila opcionalmente substituída;
[078] L é um ligante, como alquileno opcionalmente substituído (por exemplo, C1-C6 alquileno), heteroalquileno opcionalmente substituído (C1C6 heteroalquileno), alquenileno opcionalmente substituído (por exemplo, C2-C6 alquenileno), heteroalquenileno opcionalmente substituído (por exemplo, C 2-C6 heteroalquenileno), alquinileno opcionalmente substituído (por exemplo, C2-C6 alquinileno), heteroalquinileno opcionalmente substituído (por exemplo, C2-C6 heteroalquinileno), cicloalquileno opcionalmente substituído, heterocicloalquileno opcionalmente substituído, arileno opcionalmente substituído, heteroarileno opcionalmente substituído, um dipeptídeo, -C(=O)-, um peptídeo ou uma combinação dos mesmos; Z é uma fração química formada a partir de uma reação de acoplamento entre um substituinte reativo presente em L e um substituinte reativo presente em um anticorpo ou em um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga a CD2, como na superfície de uma célula T de CD2+ ou célula NK de CD2+; e em que Am compreende exatamente um substituinte de RC.
[079] Em algumas modalidades, RA e RB, quando presentes juntamente com os átomos de oxigênio aos quais são ligados, se combinam para formar um grupo heterocicloalquila de 5 membros da fórmula: em que Y é -C(=O)-, -C(=S)-, -C(=NRE)- ou -C(RERE’)-; e
[080] RE e RE’ são, cada um, independentemente C1-C6 alquileno-RC opcionalmente substituído, C1-C6 heteroalquileno-RC opcionalmente substituído, C2- C6 alquenileno-RC opcionalmente substituído, C2-C6 heteroalquenileno-RC opcionalmente substituído, C2-C6 alquinileno-RC opcionalmente substituído, C2-C6 heteroalquinileno-RC opcionalmente substituído, cicloalquileno-RC opcionalmente substituído, heterocicloalquileno-RC opcionalmente substituído, arileno-RC opcionalmente substituído ou heteroarileno-RC-opcionalmente substituído.
[081] Em algumas modalidades, Am-L-Z é representado pela fórmula (IA) ou pela fórmula (IB), em que R1 é H, OH, ORA ou ORC; R2 é H, OH, ORB ou ORC; RA e RB, quando presentes juntamente com os átomos de oxigênio aos quais são ligados, se combinam para formar:
R3 é H ou RC; R4 é H, OH, ORC, ORD, RC ou RD; R5 é H, OH, ORC, ORD, RC ou RD; R6 é H, OH, ORC, ORD, RC ou RD; R7 é H, OH, ORC, ORD, RC ou RD; R8 é OH, NH2, ORC ou NHRC; R9 é H ou OH; e em que X, RC e RD são, cada um, conforme definido acima.
Em algumas modalidades, Am-L-Z é representado pela fórmula (IA) ou pela fórmula (IB), em que R1 é H, OH, ORA ou RC; R2 é H, OH, ORB ou ORC; RA e RB, juntamente com os átomos de oxigênio aos quais são ligados se combinam para formar: R3 é H ou RC; R4 e R5 são, cada um, independentemente H, OH, ORC, RC ou ORD; R6 e R7 são, cada um, H; R8 é OH, NH2, ORC ou NHRC; R9 é H ou OH; e em que X e RC são conforme definido acima.
Em algumas modalidades, Am-L-Z é representado pela fórmula (IA) ou pela fórmula (IB), em que R1 é H, OH, ORA ou ORC; R2 é H, OH, ORB ou ORB; RA e RB, juntamente com os átomos de oxigênio aos quais são ligados se combinam para formar:
R3, R4, R6 e R7 são, cada um, H; R5 é ORC; R8 é OH ou NH2; R9 é H ou OH; e em que X e RC são conforme definido acima.
Em algumas modalidades, Am-L-Z é representado pela fórmula (IA) ou pela fórmula (IB), em que R1 e R2 são, cada um, independentemente H ou OH; R3 é RC; R4, R6 e R7 são, cada um, H; R5 é H, OH ou OC1-C6 alquila; R8 é OH ou NH2 R9 é H ou OH; e em que X e RC são conforme definido acima.
Em algumas modalidades, Am-L-Z é representado pela fórmula (IA) ou pela fórmula (IB), em que R1 e R2 são, cada um, independentemente H ou OH; R3, R6 e R7 são, cada um, H; R4 e R5 são, cada um, independentemente H, OH, ORC ou RC; R8 é OH ou NH2; R9 é H ou OH; e em que X e RC são conforme definido acima.
Em algumas modalidades, Am-L-Z é representado pela fórmula (IA) ou pela fórmula (IB), em que R1 e R2 são, cada um, independentemente H ou OH; R3, R6 e R7 são, cada um, H;
R4 e R5 são, cada um, independentemente H ou OH; R8 é OH, NH2, ORC ou NHRC; R9 é H ou OH; e em que X e RC são conforme definido acima.
[082] Em algumas modalidades, o ligante L e a fração química Z, considerados em conjunto como L-Z, é ou
[083] Em algumas modalidades, L-Z é
[084] Em algumas modalidades, Am-L-Z-Ab é
[085] Em algumas modalidades, Am-L-Z-Ab é
[086] Em algumas modalidades, Am-L-Z é representado pela fórmula (II), pela fórmula (IIA) ou pela fórmula (IIB)
ou em que X é S, SO ou SO2; R1 é H ou um ligante covalentemente ligado ao anticorpo ou ao fragmento de ligação ao antígeno do mesmo através de uma fração química Z formada a partir de uma reação de acoplamento entre um substituinte reativo presente no ligante e um substituinte reativo presente em um anticorpo ou em um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; e R2 é H ou um ligante covalentemente ligado ao anticorpo ou ao fragmento de ligação ao antígeno do mesmo através de uma fração química Z formada a partir de uma reação de acoplamento entre um substituinte reativo presente no ligante e um substituinte reativo presente em um anticorpo ou em um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; em que, quando R1 é o ligante, e, quando R2 é H, R1 é o ligante.
[087] Em algumas modalidades, o ligante compreende uma unidade de - (CH)2n-, em que n é um número inteiro de 2 a 6.
[088] Em algumas modalidades, R1 é o ligante e R2 é H, e o ligante e a fração química, juntamente como L-Z, é
[089] Em algumas modalidades, Am-L-Z-Ab é
[090] Em algumas modalidades, Am-L-Z-Ab é
[091] Em algumas modalidades, Am-L-Z-Ab é:
[092] Em algumas modalidades de qualquer um dos aspectos acima, a citotoxina é um maitansinoide selecionado a partir do grupo que consiste em DM1 e DM4. Em algumas modalidades, a citotoxina é uma auristatina selecionada a partir do grupo que consiste em monometil auristatina E monometil auristatina F. Em algumas modalidades, a citotoxina é uma antraciclina selecionada a partir do grupo que consiste em daunorubicina, doxorubicina, epirubicina e idarubicina.
[093] Em algumas modalidades, a citotoxina é um dímero de pirrolobenzodiazepina representado pela fórmula
[094] Em algumas modalidades, a citotoxina é conjugada ao anticorpo ou ao fragmento de ligação ao antígeno do mesmo por meio de um ligante de maleimidocaproila.
[095] Em algumas modalidades, a citotoxina é uma auristatina selecionada a partir do grupo que consiste em monometil auristatina E monometil auristatina F.
[096] Em algumas modalidades, a citotoxina é uma antraciclina selecionada a partir do grupo que consiste em daunorubicina, doxorubicina, epirubicina e idarubicina.
[097] Em algumas modalidades, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é internalizado por uma célula imune, como uma célula T ou uma célula NK (por exemplo, uma célula T de CD2+ ou uma célula NK de CD2+) após a administração ao paciente. Por exemplo, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo pode ser internalizado por células T através de endocitose mediada por receptor (por exemplo, após a ligação ao CD2 de superfície celular). Em algumas modalidades, a citotoxina covalentemente ligada ao anticorpo ou ao fragmento de ligação ao antígeno do mesmo pode ser liberada de modo intracelular através de clivagem química (por exemplo, através de clivagem enzimática ou não específica de um ligante descrito no presente documento). Então, a citotoxina pode acessar seu alvo intracelular (como RNA polimerase, o aparelho de fuso mitótico, DNA nuclear, RNA ribossômico ou7 topoisomerases dentre outros) com a finalidade de promover a morte de uma célula imune endógena (por exemplo, célula T de CD2+ ou célula NK de CD2+) antes da terapia de transplante de célula- tronco hematopoiética.
[098] Em algumas modalidades, o anticorpo, o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ou o conjugado anticorpo-fármaco têm capacidade de promover necrose de uma célula imune, como uma célula T ou uma célula NK (por exemplo, uma célula T de CD2+ ou uma célula NK de CD2+). Em algumas modalidades, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo pode promover a morte de uma célula imune endógena (por exemplo, célula T de CD2+ ou célula NK de CD2+) antes da terapia de transplante ao recrutar uma ou mais proteínas complementares, células NK, macrófagos, neutrófilos, e/ou eosinófilos para a célula imune após a administração ao paciente.
[099] Em algumas modalidades, um transplante autólogo contendo células- tronco hematopoiéticas é administrado ao paciente. Por exemplo, células-tronco hematopoiéticas autólogas podem ser removidas de um paciente, como um paciente em necessidade de terapia de transplante de célula-tronco hematopoiética, e as células podem ser administradas subsequentemente (por exemplo, infundido no) ao paciente com a finalidade de repovoar um ou mais tipos de células da linhagem hematopoiética. As células-tronco hematopoiéticas retiradas podem ser reinfunsionadas novamente no indivíduo, por exemplo, após a manutenção ex vivo por uma ou mais horas, dias ou semanas. Por exemplo, as células-tronco hematopoiéticas retiradas podem ser reinfusionadas no paciente de 1 hora a cerca de 1 semana, de 1 hora a cerca de 72 horas, de cerca de 1 hora a cerca de 48 horas ou de cerca de 1 hora a cerca de 24 horas após a retirada do paciente. Em algumas modalidades, as células-tronco hematopoiéticas retiradas são congeladas para armazenamento a longo prazo antes da reinfusão no paciente. Por exemplo, as células-tronco hematopoiéticas retiradas podem ser congeladas e criopreservadas por cerca de 1 semana a cerca de 1 ano ou por mais tempo antes da reinfusão no paciente.
[0100] Em algumas modalidades, um transplante alogênico contendo células-tronco hematopoiéticas é administrado ao paciente. Por exemplo, células- tronco hematopoiéticas alogênicas podem ser removidas de um doador, como um doador que é compatível com HLA em relação ao paciente, por exemplo, um membro da família intimamente relacionado do paciente. Em algumas modalidades, as células-tronco hematopoiéticas alogênicas são incompatíveis com HLA em relação ao paciente. Após a retirada das células-tronco hematopoiéticas alogênicas do doador, as células podem ser administradas subsequentemente (por exemplo, infusionadas no) ao paciente com a finalidade de repovoar um ou mais tipos de células da linhagem hematopoiética. As células-tronco hematopoiéticas retiradas podem ser reinfunsionadas novamente no indivíduo, por exemplo, após a manutenção ex vivo por uma ou mais horas, dias ou semanas. Por exemplo, as células-tronco hematopoiéticas retiradas podem ser infusionadas no paciente de 1 hora a cerca de 1 semana, de 1 hora a cerca de 72 horas, de cerca de 1 hora a cerca de 48 horas ou de cerca de 1 hora a cerca de 24 horas após a retirada do doador. Em algumas modalidades, as células-tronco hematopoiéticas retiradas são congeladas para armazenamento a longo prazo antes da infusão no paciente. Por exemplo, as células-tronco hematopoiéticas retiradas podem ser congeladas e criopreservadas por cerca de 1 semana a cerca de 1 ano ou por mais tempo antes da infusão no paciente. Em algumas modalidades, um transplante contendo células- tronco hematopoiéticas é administrado ao paciente após a concentração do anticorpo anti-CD2, do fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ou do conjugado de anticorpo-fármaco ter sido eliminada substancialmente do sangue do paciente.
[0101] Em algumas modalidades, um transplante contendo células-tronco hematopoiéticas é administrado ao paciente de cerca de 1 hora a cerca de 7 dias (por exemplo, de cerca de 6 horas a cerca de 3 dias, cerca de 12 horas a cerca de 36 horas ou cerca de 24 horas) após a concentração do anticorpo anti-CD2, do fragmento de ligação ao antígeno ou do conjugado de anticorpo-fármaco ter sido eliminada substancialmente do sangue do paciente.
[0102] Em algumas modalidades, as células-tronco hematopoiéticas ou a progênie das mesmas mantêm o potencial funcional de célula-tronco hematopoiética após dois ou mais dias (por exemplo, de cerca de 2 a cerca de 5 dias, de cerca de 2 a cerca de 7 dias, de cerca de 2 a cerca de 20 dias, de cerca de 2 a cerca de 30 dias, como cerca de 2 dias, cerca de 3 dias, cerca de 4 dias, cerca de 5 dias, cerca de 6 dias, cerca de 7 dias, cerca de 8 dias, cerca de 9 dias, cerca de 10 dias, cerca de 1 1 dias, cerca de 12 dias, cerca de 13 dias, cerca de 14 dias, cerca de 15 dias, cerca de 16 dias, cerca de 17 dias, cerca de 18 dias, cerca de 19 dias, cerca de 20 dias, cerca de 21 dias, cerca de 22 dias, cerca de 23 dias, cerca de 24 dias, cerca de 25 dias, cerca de 26 dias, cerca de 27 dias, cerca de 28 dias, cerca de 29 dias, cerca de 30 dias ou mais) após o transplante das células-tronco hematopoiéticas no paciente.
[0103] Em algumas modalidades, as células-tronco hematopoiéticas ou a progênie das mesmas têm capacidade de localizar o tecido hematopoiético, como a medula óssea, e/ou restabelecer hematopoese após o transplante das células-tronco hematopoiéticas no paciente.
[0104] Em algumas modalidades, após o paciente, as células-tronco hematopoiéticas começam a recuperação de uma população de células selecionadas a partir do grupo que consiste em megacariócitos, trombócitos, plaquetas, eritrócitos, mastócitos, mieloblastos, basófilos, neutrófilos, eosinófilos, microglia, granulócitos, monócitos, osteoclastos, células que apresentam antígeno, macrófagos, célula dendríticas, células naturais exterminadoras, linfócitos T e linfócitos B.
[0105] Em algumas modalidades, o paciente está sofrendo de câncer. O câncer pode ser um câncer sanguíneo ou um tipo de leucemia, como leucemia mieloide aguda, leucemia linfoide aguda, leucemia mieloide crônica ou leucemia linfoide crônica.
[0106] Em algumas modalidades, as células de CD2+ compreende células cancerosas.
[0107] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-CD2, o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ou o conjugado de anticorpo-fármaco deplete células cancerosas em um paciente. Por exemplo, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo pode depletir cerca de 10%, cerca de 20%, cerca de 30%, cerca de 40%, cerca de 50%, cerca de 60%, cerca de 70%, cerca de 80%, cerca de 90% ou substancialmente todas as células cancerosas em um paciente.
[0108] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-CD2, o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ou o conjugado de anticorpo-fármaco deplete células sanguíneas cancerígenas (por exemplo, células leucêmicas) em um paciente. Em algumas modalidades, as células sanguíneas cancerígenas são células leucêmicas mieloides agudas, células leucêmicas linfoides agudas, células leucêmicas mieloides crônicas ou células leucêmicas linfoides crônicas. Em algumas modalidades, as células sanguíneas cancerígenas são megacariócitos, trombócitos, plaquetas, eritrócitos, mastócitos, mieloblastos, basófilos, neutrófilos, eosinófilos, microglia, granulócitos, monócitos, osteoclastos, células que apresentam antígeno, macrófagos, célula dendríticas, células naturais exterminadoras, linfócitos T ou linfócitos B.
[0109] Em algumas modalidades, a população de células de CD2+ compreende células imunes, como células T de CD2+ e/ou células NK de CD2+.
[0110] Em algumas modalidades de qualquer um dos aspectos acima, o método é usado para tratar um ou mais distúrbios, como ao depletir uma população de células imunes em um paciente, por exemplo, antes da terapia de transplante de célula-tronco hematopoiética com a finalidade de prevenir ou reduzir a probabilidade de rejeição do transplante de célula-tronco hematopoiética que poderia, de outro modo, ser causada por uma população de células imunes que cruza com o enxerto de célula-tronco hematopoiética, (por exemplo, ao cruzar com os antígenos não auto-MHC expressados pelo enxerto de célula-tronco hematopoiética). Após o transplante, as células-tronco hematopoiéticas podem estabelecer hematopoese produtiva, com a finalidade de restabelecer um tipo de célula deficiente no paciente ou um tipo de célula que está sendo exterminado ou foi exterminado, por exemplo, por métodos quimioterapêuticos. Por exemplo, o paciente pode ser um paciente que está sofrendo de um distúrbio de célula-tronco. Em algumas modalidades, o paciente está sofrendo de um distúrbio de hemoglobinopatia, como anemia falciforme, talassemia, anemia de Fanconi, anemia aplástica e síndrome de Wiskott- Aldrich. O paciente pode estar sofrendo de um distúrbio de imunodeficiência, como a distúrbio de imunodeficiência congênita ou um distúrbio de imunodeficiência adquirida (por exemplo, vírus de imunodeficiência humana ou síndrome de deficiência imune adquirida). Em algumas modalidades, o paciente está sofrendo de um distúrbio metabólico, como doenças de armazenamento do glicogênio, mucopolissacaridoses, Doença de Gaucher, Doença de Hurler, espingolipidoses e leicodistrofia metacromática. Em algumas modalidades, o paciente está sofrendo de um distúrbio selecionado a partir do grupo que consiste em deficiência de adenosina deaminase e imunodeficiência combinada grave, síndrome de hiperimunoglobulina M, doença de Chediak-Higashi, linfo-histiocitose hereditária, osteopetrose, osteogênese imperfeita, doenças de armazenamento, talassemia principal, esclerose sistêmica, lúpus eritematoso sistêmico, esclerose múltipla e artrite rematoide juvenil. Em algumas modalidades, o paciente está sofrendo de uma doença autoimune, como esclerodermia, esclerose múltipla, colite ulcerativa, doença de Crohn, uma diabetes do tipo 1. Em algumas modalidades, o paciente está sofrendo de câncer ou doença mieloproliferativa, como um câncer hematológico. Em algumas modalidades, o paciente está sofrendo de leucemia mieloide aguda, leucemia linfoide aguda, leucemia mieloide crônica, leucemia linfoide crônica, mieloma múltiplo, linfoma difuso de grandes células B ou linfoma não Hodgkin. Em algumas modalidades, o paciente está sofrendo de uma doença mielodisplástica, como síndrome mielodisplástica.
[0111] Em algumas modalidades de qualquer um dos aspectos acima, o método é usado para tratar diretamente um câncer, como um câncer caracterizado pelas células de CD2+ (por exemplo, uma leucemia caracterizada pelas células de CD2+), através da administração de um anticorpo, de um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ou de um conjugado do mesmo que deplete uma população de células cancerosas de CD2+ no paciente e/ou através da administração de um anticorpo ou do fragmento de ligação ao antígeno do mesmo antes da terapia de transplante de célula-tronco hematopoiética com a finalidade de prevenir ou reduzir a probabilidade de rejeição do transplante de célula-tronco hematopoiética que poderia, de outro modo, ser causada por uma população de células imunes que cruza com o enxerto de célula-tronco hematopoiética (por exemplo, que cruza com os antígenos não auto-MHC expressados pelo enxerto de célula-tronco hematopoiética). No último caso, o transplante pode, por sua vez, reconstituir, por exemplo, uma população de células depletidas durante o processo de erradicação de células cancerosas. O câncer pode ser um câncer hematológico, como leucemia mieloide aguda, leucemia linfoide aguda, leucemia mieloide crônica, leucemia linfoide crônica, mieloma múltiplo, linfoma difuso de grandes células B ou linfoma não Hodgkin.
[0112] Em algumas modalidades de qualquer um dos aspectos acima, o método é usado para tratar uma doença autoimune, como através da administração de um anticorpo anti-CD2, de um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ou de um conjugado do mesmo com a finalidade de depletir uma população de células autoimunes de CD2+ (por exemplo, uma população de células T e/ou células NK de CD2+autorreativas) e/ou através da administração de um anticorpo anti-CD2, de um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ou de um conjugado do mesmo antes da terapia de transplante de célula-tronco hematopoiética com a finalidade de prevenir ou reduzir a probabilidade de rejeição do transplante de célula-tronco hematopoiética que poderia, de outro modo, ser causada por uma população de células imunes que cruza com o enxerto de célula-tronco hematopoiética (por exemplo, que cruza com antígenos não auto-MHC expressados pelo enxerto de célula-tronco hematopoiética). No último caso, o transplante pode, por sua vez,
reconstituir, por exemplo, uma população de células depletidas durante o processo de erradicação de células autoimunes.
A doença autoimune pode ser, por exemplo,
esclerodermia, esclerose múltipla (MS), lúpus sistêmico humano (SLE), artrite reumatoide (RA), doença intestinal inflamatória (IBD), psoríase em tratamento,
diabetes mellitus do tipo 1 (diabetes do tipo 1), encefalomielite disseminada aguda
(ADEM), doença de Addison, alopecia universal, espondilite anquilosante, síndrome de anticorpo antifosfolíde (APS), anemia aplástica, anemia hemolítica autoimune,
hepatite autoimune, doença autoimune dom ouvido interno (AIED), síndrome linfoproliferativa autoimune (ALPS), ooforite autoimune, doença de Balo, doença de
Behcet, penfigoide bolhoso, cardiomiopatia, doença de Chagas, síndrome de disfunção imune de fadiga crônica (CFIDS), polineuropatia desmielinizante inflamatória crônica, doença de Crohn, penfigoide cicatricial, dermatite herpetiforme de espru celíaco, doença por aglutininas a frio, síndrome de CREST, doença de
Degos, lúpus discoide, neuropatia autonômica, endometriose, crioglobulinemia misturada essencial, fibromalgia-fibromiosite, síndrome de Goodpasture, doença de
Grave, síndrome de Guillain-Barre (GBS), tireoide de Hashimoto, Hidrosadenite supurativa, púrpura trombocitopênica idiopática e/ou aguda, fibrose pulmonar idiopática, neuropatia de IgA, cistite intersticial, artrite juvenil, doença de Kawasaki,
líquen plano, doença de Lyme, doença de Meniere, doença mista do tecido conjuntivo (MCTD), miastenia grave, neuromiotonia, síndrome de opsoclônica-
mioclônica (OMS), neurite óptica, tireoide de Ord, pênfigo vulgar, anemia perniciosa,
policondrite, polimiosite e dermatomiosite, cirrose biliar primária, poliarterite nodosa,
síndromes poliglandulares, polimialgia reumática, agamaglobulinemia primária,
fenômeno de Raynaud, síndrome de Reiter, febre reumática, sarcoidose,
esclerodermia, síndrome de Sjogren, síndrome da pessoa rígida, arterite de
Takayasu, arterite temporal (conhecida também como "arterite de células gigantes"),
colite ulcerativa, uveíte, vasculite, vitiligo, vulvodinia ("vestibulite vulvar") e granulomatose de Wegener.
[0113] Assim, em algumas modalidades de qualquer um dos aspectos acima, a invenção apresenta um método de tratamento de um distúrbio de hemoglobinopatia, como anemia falciforme, talassemia, anemia de Fanconi, anemia aplástica e síndrome de Wiskott-Aldrich. Em algumas modalidades, a invenção apresenta um método de tratamento de um distúrbio de imunodeficiência, como um distúrbio de imunodeficiência congênita ou um distúrbio de imunodeficiência adquirida (por exemplo, vírus de imunodeficiência humana ou síndrome de deficiência imune adquirida). Em algumas modalidades, a invenção apresenta um método de tratamento de um distúrbio metabólico, como doenças de armazenamento do glicogênio, mucopolissacaridoses, Doença de Gaucher, Doença de Hurler, espingolipidoses e leicodistrofia metacromática. Em algumas modalidades, a invenção apresenta um método de tratamento de um distúrbio selecionado a partir do grupo que consiste em deficiência de adenosina deaminase e imunodeficiência combinada grave, síndrome de hiperimunoglobulina M, doença de Chediak-Higashi, linfo-histiocitose hereditária, osteopetrose, osteogênese imperfeita, doenças de armazenamento, talassemia principal, esclerose sistêmica, lúpus eritematoso sistêmico e artrite rematoide juvenil Em algumas modalidades, a invenção apresenta um método de tratamento de uma doença autoimune, como esclerodermia, esclerose múltipla, colite ulcerativa, doença de Crohn e diabetes do tipo 1. Em algumas modalidades, a invenção apresenta um método de tratamento de um câncer ou doença mieloproliferativa, como um câncer hematológico. Em algumas modalidades, a invenção apresenta um método de tratamento de leucemia mieloide aguda, de leucemia linfoide aguda, de leucemia mieloide crônica, de leucemia linfoide crônica, de mieloma múltiplo, de linfoma difuso de grandes células B ou de linfoma não Hodgkin. Em algumas modalidades, o paciente está sofrendo de uma doença mielodisplástica, como síndrome mielodisplástica. Nesses modalidades, o método pode incluir administrar ao paciente um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ou um conjugado do mesmo que se liga a CD2, como o anticorpo, o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ou o conjugado do mesmos de qualquer um dos aspectos ou das modalidades da invenção. O método pode incluir ainda administrar ao paciente um transplante de célula-tronco hematopoiética, por exemplo, de acordo com o método de qualquer um dos aspectos ou das modalidades da invenção.
[0114] Similarmente, em algumas modalidades de qualquer um dos aspectos acima, a invenção fornece um método de tratamento direto de câncer, como um câncer caracterizado pelas células de CD2+ (por exemplo, uma leucemia caracterizada pelas células de CD2+). Nessas modalidades, o método pode incluir administrar ao paciente um anticorpo, um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ou um conjugado do mesmo que se liga a CD2, como esses descritos no presente documento. O câncer pode ser um câncer hematológico, como leucemia mieloide aguda, leucemia linfoide aguda, leucemia mieloide crônica, leucemia linfoide crônica, mieloma múltiplo, linfoma difuso de grandes células B ou linfoma não Hodgkin.
[0115] Adicionalmente, em algumas modalidades de qualquer um dos aspectos acima, a invenção fornece um método de tratamento de uma doença autoimune, como MS, SLE, RA, IBD, psoríase, diabetes do tipo 1, ADEM, doença de Addison, alopecia universal, espondilite anquilosante, APS, anemia aplástica, anemia hemolítica autoimune, hepatite autoimune, AIED, ALPS, ooforite autoimune, doença de Balo, doença de Behcet, penfigoide bolhoso, cardiomiopatia, doença de Chagas, CFIDS, polineuropatia desmielinizante inflamatória crônica, doença de Crohn, penfigoide cicatricial, dermatite herpetiforme de espru celíaco, doença por aglutininas a frio, síndrome de CREST, doença de Degos, lúpus discoide, neuropatia autonômica, endometriose, crioglobulinemia misturada essencial, fibromalgia- fibromiosite, síndrome de Goodpasture, doença de Grave, GBS, tireoide de Hashimoto, Hidrosadenite supurativa, púrpura trombocitopênica idiopática e/ou aguda, fibrose pulmonar idiopática, neuropatia de IgA, cistite intersticial, artrite juvenil, doença de Kawasaki, líquen plano, doença de Lyme, doença de Meniere, MCTD, miastenia grave, neuromiotonia, OMS, neurite óptica, tireoide de Ord, pênfigo vulgar, anemia perniciosa, policondrite, polimiosite e dermatomiosite, cirrose biliar primária, poliarterite nodosa, síndromes poliglandulares, polimialgia reumática, agamaglobulinemia primária, fenômeno de Raynaud, síndrome de Reiter, febre reumática, sarcoidose, esclerodermia, síndrome de Sjogren, síndrome da pessoa rígida, arterite de Takayasu, arterite temporal (conhecida também como “arterite de células gigantes”), colite ulcerativa, uveíte, vasculite, vitiligo, vulvodinia ("vestibulite vulvar") e granulomatose de Wegener. Nessas modalidades, o método pode incluir administrar ao paciente um anticorpo, um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ou um conjugado do mesmo que se liga a CD2, como esses descritos no presente documento.
[0116] Em um outro aspecto, as composições e os métodos revelados no presente documento apresentam um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga a CD2, em que o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é conjugado com uma toxina. Em algumas modalidades, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é produzido pela linhagem celular de hibridoma ATCC HB 11423. Em algumas modalidades, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo inibe competitivamente a ligação de CD2 a um anticorpo ou a um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo produzido pela linhagem celular de hibridoma ATCC HB 11423.
Em algumas modalidades, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende as CDRs a seguir:
uma CDR-H1 que tem a sequência de aminoácido EYYMY (SEQ ID n°: 1); uma CDR-H2 que tem a sequência de aminoácido RIDPEDGSIDYVEKFKK (SEQ ID n°: 2); uma CDR-H3 que tem a sequência de aminoácido GKFNYRFAY (SEQ ID n°: 3); uma CDR-L1 que tem a sequência de aminoácido RSSQSLLHSSGNTYLN (SEQ ID n°: 4); uma CDR-L2 que tem a sequência de aminoácido LVSKLES (SEQ ID n°: 5); e uma CDR-L3 que tem a sequência de aminoácido MQFTHYPYT (SEQ ID n°: 6).
[0117] Em algumas modalidades, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo inibe competitivamente a ligação de CD2 a um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que compreende as CDRs a seguir: uma CDR-H1 que tem a sequência de aminoácido EYYMY (SEQ ID n°: 1); uma CDR-H2 que tem a sequência de aminoácido RIDPEDGSIDYVEKFKK (SEQ ID n°: 2); uma CDR-H3 que tem a sequência de aminoácido GKFNYRFAY (SEQ ID n°: 3); uma CDR-L1 que tem a sequência de aminoácido RSSQSLLHSSGNTYLN (SEQ ID n°: 4); uma CDR-L2 que tem a sequência de aminoácido LVSKLES (SEQ ID n°: 5); e uma CDR-L3 que tem a sequência de aminoácido MQFTHYPYT (SEQ ID n°: 6).
[0118] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-CD2 ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo conjugado com uma toxina é selecionado a partir do grupo que consiste em um anticorpo monoclonal, um anticorpo policlonal, um anticorpo humanizado ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, um anticorpo biespecífico ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, um domínio de imunoglobulina de variável dupla, um scFv, um diacorpo, um triacorpo, um nanocorpo, um andaime de proteína semelhante ao anticorpo, um fragmento de Fv, um fragmento de Fab, uma molécula de F(ab’)2 e um di-scFv tandem.
[0119] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-CD2 tem um isotipo selecionado a partir do grupo que consiste em IgG, IgA, IgM, IgD e IgE.
[0120] Em algumas modalidades, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo conjugado com a citotoxina é representado pela fórmula Ab-Cy, em que Ab é o anticorpo anti-CD2 ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo e Cy é a citotoxina. Em algumas modalidades, a citotoxina é selecionada a partir do grupo que consiste em uma amatoxina, pseudomonas exotoxina A, debouganina, toxina de difteria, saporina, maitansina, um maitansinoide, uma auristatina, uma antraciclina, uma caliqueamicina, irinotecano, SN-38, uma duocarmicina, uma pirrolobenzodiazepina, um dímero de pirrolobenzodiazepina, uma indolinobenzodiazepina e um dímero de indolinobenzodiazepina ou uma variante dos mesmos.
[0121] Em algumas modalidades, a citotoxina é uma amatoxina ou um derivado da mesma, como α-amanitina, β-amanitina, Ɣ-amanitina, Ɛ-amanitina, amanina, amaninamida, amanulina, ácido amanulínico e proamanulina. Em algumas modalidades, a citotoxina é uma amatoxina, e o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo conjugado com a citotoxina é representado pela fórmula Ab- Z-L-Am, em que Ab é o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, Z é uma fração química, L é um ligante e Am é a amatoxina. Em algumas modalidades, Am-L-Z é representado pela fórmula (I)
em que R1 é H, OH, ORA ou ORC; R2 é H, OH, ORB ou ORC; RA e RB, quando presentes juntamente com os átomos de oxigênio aos quais os mesmos são ligados, se combinam para formar um grupo heterocicloalquila de 5 membros opcionalmente substituído; R3 é H, RC ou RD; R4 é H, OH, ORC, ORD, RC ou RD; R5 é H, OH, ORC, ORD, RC ou RD; R6 é H, OH, ORC, ORD, RC ou RD; R7 é H, OH, ORC, ORD, RC ou RD; R8 é OH, NH2, ORC, ORD, NHRC ou NRCRD; R9 é H, OH, ORC ou ORD; X é -S-, -S(O)- ou -SO2-; RC é -L-Z;
[0122] RD é alquila opcionalmente substituída (por exemplo, C1-C6 alquila), heteroalquila opcionalmente substituída (por exemplo, C C6 heteroalquila), alquenila opcionalmente substituída (por exemplo, C2-C6 alquenila), heteroalquenila opcionalmente substituída (por exemplo, C2-C6 heteroalquenila), alquinila opcionalmente substituída (por exemplo, C2-C6 alquinila), heteroalquinila opcionalmente substituída (por exemplo, C2-C6 heteroalquinila), cicloalquila opcionalmente substituída, heterocicloalquila opcionalmente substituída, arila opcionalmente substituída ou heteroarila opcionalmente substituída;
[0123] L é um ligante, como alquileno opcionalmente substituído (por exemplo, C1-C6 alquileno), heteroalquileno opcionalmente substituído (C1-C6 heteroalquileno), alquenileno opcionalmente substituído (por exemplo, C2-C6 alquenileno), heteroalquenileno opcionalmente substituído (por exemplo, C2-C6 heteroalquenileno), alquinileno opcionalmente substituído (por exemplo, C2-C6 alquinileno), heteroalquinileno opcionalmente substituído (por exemplo, C2-C6 heteroalquinileno), cicloalquileno opcionalmente substituído, heterocicloalquileno opcionalmente substituído, arileno opcionalmente substituído, heteroarileno opcionalmente substituído, um dipeptídeo, -C(=O)-, um peptídeo ou uma combinação dos mesmos; e Z é uma fração química formada a partir de uma reação de acoplamento entre um substituinte reativo presente em L e um substituinte reativo presente em um anticorpo, ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga a CD2, como na superfície de uma célula T de CD2+ ou célula NK de CD2+.
[0124] Em algumas modalidades, Am contém exatamente um substituinte de RC.
[0125] Em algumas modalidades, Am-L-Z é representado pela fórmula (IA)
[0126] em que R1 é H, OH, ORA ou ORC;
[0127] R2 é H, OH, ORB ou ORC;
[0128] RA e RB, quando presentes juntamente com os átomos de oxigênio aos quais os mesmos são ligados, se combinam para formar um grupo heterocicloalquila de 5 membros opcionalmente substituído; R3 é H, RC ou RD; R4 é H, OH, ORC, ORD, RC ou RD; R5 é H, OH, ORC, ORD, RC ou RD; R6 é H, OH, ORC, ORD, RC ou RD; R7 é H, OH, ORC, ORD, RC ou RD; R8 é OH, NH2, ORC, ORD, NHRC ou NRCRD; R9 é H, OH, ORC ou ORD; X é -S-, -S(O)- ou -SO2-; RC é -L-Z;
[0129] RD é alquila opcionalmente substituída (por exemplo, C1-C6 alquila), heteroalquila opcionalmente substituída (por exemplo, C C6 heteroalquila), alquenila opcionalmente substituída (por exemplo, C2-C6 alquenila), heteroalquenila opcionalmente substituída (por exemplo, C2-C6 heteroalquenila), alquinila opcionalmente substituída (por exemplo, C2-C6 alquinila), heteroalquinila opcionalmente substituída (por exemplo, C2-C6 heteroalquinila), cicloalquila opcionalmente substituída, heterocicloalquila opcionalmente substituída, arila opcionalmente substituída ou heteroarila opcionalmente substituída;
[0130] L é um ligante, como alquileno opcionalmente substituído (por exemplo, C1-C6 alquileno), heteroalquileno opcionalmente substituído (C1C6 heteroalquileno), alquenileno opcionalmente substituído (por exemplo, C2-C6 alquenileno), heteroalquenileno opcionalmente substituído (por exemplo, C2-C6 heteroalquenileno), alquinileno opcionalmente substituído (por exemplo, C2-C6 alquinileno), heteroalquinileno opcionalmente substituído (por exemplo, C2-C6 heteroalquinileno), cicloalquileno opcionalmente substituído, heterocicloalquileno opcionalmente substituído, arileno opcionalmente substituído, heteroarileno opcionalmente substituído, um dipeptídeo, -C(=O)-, um peptídeo ou uma combinação dos mesmos;
[0131] Z é uma fração química formada a partir de uma reação de acoplamento entre um substituinte reativo presente em L e um substituinte reativo presente em um anticorpo, em um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga a CD2, como na superfície de uma célula T de CD2+ ou célula NK de CD2+; e
[0132] em que Am compreende exatamente um substituinte de RC.
[0133] Em algumas modalidades, o ligante L e a fração química Z, considerados em conjunto como L-Z, é ou
[0134] Em algumas modalidades, L-Z é
[0135] Em algumas modalidades, Am-L-Z-Ab é
[0136] Em algumas modalidades, Am-L-Z-Ab é
[0137] Em algumas modalidades, Am-L-Z é representado pela fórmula (IB)
em que R1 é H, OH, ORA ou ORC; R2 é H, OH, ORB ou ORC; RA e RB, quando presentes juntamente com os átomos de oxigênio aos quais os mesmos são ligados, se combinam para formar um grupo heterocicloalquila de 5 membros opcionalmente substituído; R3 é H, RC ou RD; R4 é H, OH, ORC, ORD, RC ou RD; R5 é H, OH, ORC, ORD, RC ou RD; R6 é H, OH, ORC, ORD, RC ou RD; R7 é H, OH, ORC, ORD, RC ou RD; R8 é OH, NH2, ORC, ORD, NHRC ou NRCRD, R9 é H, OH, ORC ou ORD; X é -S-, -S(O)- ou -SO2-; RC é -L-Z;
[0138] RD é alquila opcionalmente substituída (por exemplo, C1-C6 alquila), heteroalquila opcionalmente substituída (por exemplo, C C6 heteroalquila), alquenila opcionalmente substituída (por exemplo, C2-C6 alquenila), heteroalquenila opcionalmente substituída (por exemplo, C2-C6 heteroalquenila), alquinila opcionalmente substituída (por exemplo, C2-C6 alquinila), heteroalquinila opcionalmente substituída (por exemplo, C2-C6 heteroalquinila), cicloalquila opcionalmente substituída, heterocicloalquila opcionalmente substituída, arila opcionalmente substituída ou heteroarila opcionalmente substituída;
[0139] L é um ligante, como alquileno opcionalmente substituído (por exemplo, C1-C6 alquileno), heteroalquileno opcionalmente substituído (C1C6 heteroalquileno), alquenileno opcionalmente substituído (por exemplo, C2-C6 alquenileno), heteroalquenileno opcionalmente substituído (por exemplo, C2-C6 heteroalquenileno), alquinileno opcionalmente substituído (por exemplo, C2-C6 alquinileno), heteroalquinileno opcionalmente substituído (por exemplo, C2-C6 heteroalquinileno), cicloalquileno opcionalmente substituído, heterocicloalquileno opcionalmente substituído, arileno opcionalmente substituído, heteroarileno opcionalmente substituído, um dipeptídeo, -C(=O)-, um peptídeo ou uma combinação dos mesmos;
[0140] Z é uma fração química formada a partir de uma reação de acoplamento entre um substituinte reativo presente em L e um substituinte reativo presente em um anticorpo ou em um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga a CD2, como na superfície de uma célula T de CD2+ ou célula NK de CD2+; e em que Am compreende exatamente um substituinte de RC.
[0141] Em algumas modalidades, o ligante L e a fração química Z, considerados em conjunto como L-Z, é ou
[0142] Em algumas modalidades, L-Z é
[0143] Em algumas modalidades, Am-L-Z-Ab é
[0144] Em algumas modalidades, Am-L-Z-Ab é
[0145] Em algumas modalidades, RA e RB, quando presentes juntamente com os átomos de oxigênio aos quais são ligados, se combinam para formar um grupo heterocicloalquila de 5 membros da fórmula: em que Y é -C(=O)-, -C(=S)-, -C(=NRE)- ou -C(RERE’)-; e
[0146] RE e RE’ são, cada um, independentemente C1-C6 alquileno-RC opcionalmente substituído, C1-C6 heteroalquileno-RC opcionalmente substituído, C2- C6 alquenileno-RC opcionalmente substituído, C2-C6 heteroalquenileno-RC opcionalmente substituído, C2-C6 alquinileno-RC opcionalmente substituído, C2-C6 heteroalquinileno-RC opcionalmente substituído, cicloalquileno-RC opcionalmente substituído, heterocicloalquileno-RC opcionalmente substituído, arileno-RC opcionalmente substituído ou heteroarileno-RC -opcionalmente substituído.
[0147] Em algumas modalidades, Am-L-Z é representado pela fórmula (IA) ou pela fórmula (IB), em que R1 é H, OH, ORA ou ORC;
[0148] R2 é H, OH, ORB ou ORC;
[0149] RA e RB, juntamente com os átomos de oxigênio aos quais são ligados se combinam para formar: R3 é H ou RC; R4 é H, OH, ORC, ORD, RC ou RD; R5 é H, OH, ORC, ORD, RC ou RD; R6 é H, OH, ORC, ORD, RC ou RD; R7 é H, OH, ORC, ORD, RC ou RD; R8 é OH, NH2, ORC ou NHRC; R9 é H ou OH; e em que X, RC e RD são, cada um, conforme definido acima.
[0150] Em algumas modalidades, Am-L-Z é representado pela fórmula (IA) ou pela fórmula (IB), em que R’ é H, OH, ORA ou ORC R2 é H, OH, ORA ou ORC RA e RB, juntamente com os átomos de oxigênio aos quais são ligados se combinam para formar: R3 é H ou RC; R4 e R5 são, cada um, independentemente H, OH, ORC, RC ou ORD; R6 e R7 são, cada um, H; R8 é OH, NH2, ORC ou NHRC;
R9 é H ou OH; e em que X e RC são conforme definido acima. Em algumas modalidades, Am é representada pela fórmula (IA) ou pela fórmula (IB), em que R1 é H, OH ou ORA; R2 é H, OH, ORB ou ORB; RA e RB, juntamente com os átomos de oxigênio aos quais são ligados se combinam para formar: R3, R4, R6 e R7 são, cada um, H; R5 é ORC; R8 é OH ou NH2; R9 é H ou OH; e em que X e RC são conforme definido acima.
Em algumas modalidades, Am-L-Z é representado pela fórmula (IA) ou pela fórmula (IB), em que R1 e R2 são, cada um, independentemente H ou OH; R3 é RC; R4, R6 e R7 são, cada um, H; R5 é H, OH ou C1-C6 alquila; R8 é OH ou NH2; R9 é H ou OH; e em que X e RC são conforme definido acima.
[0151] Em algumas modalidades, Am-L-Z é representado pela fórmula (IA) ou pela fórmula (IB), em que R1 e R2 são, cada um, independentemente H ou OH; R3, R6 e R7 são, cada um, H;
R4 e R5 são, cada um, independentemente H, OH, ORC ou RC; R8 é OH ou NH2; R9 é H ou OH; e em que X e RC são conforme definido acima.
[0152] Em algumas modalidades, Am-L-Z é representado pela fórmula (IA) ou pela fórmula (IB), em que R1 e R2 são, cada um, independentemente H ou OH; R3, R6 e R7 são, cada um, H; R4 e R5 são, cada um, independentemente H ou OH; R8 é OH, NH2, ORC ou NHRC; R9 é H ou OH; e em que X e RC são conforme definido acima.
[0153] Em algumas modalidades, o ligante L e a fração química Z, considerados em conjunto como L-Z, é ou
[0154] Em algumas modalidades, o precursor de Am-L-Z é em que a maleimida reage com um grupo tiol encontrado em uma cisteína no anticorpo.
[0155] Em algumas modalidades, o precursor de Am-L-Z é em que a maleimida reage com um grupo tiol encontrado em uma cisteína no anticorpo.
[0156] Em algumas modalidades, Am-L-Z é representado pela fórmula (II), pela fórmula (IIA) ou pela fórmula (IIB) em que a maleimida reage com um grupo tiol encontrado em uma cisteína no anticorpo
[0157] Em algumas modalidades, AM-L-Z é representada pela fórmula (II), pela fórmula (IIA) ou pela fórmula (IIB)
ou em que X é S, SO ou SO2; R1 é H ou um ligante covalentemente ligado ao anticorpo ou ao fragmento de ligação ao antígeno do mesmo através de uma fração química Z formada a partir de uma reação de acoplamento entre um substituinte reativo presente no ligante e um substituinte reativo presente em um anticorpo ou em um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; eR2 é H ou um ligante covalentemente ligado ao anticorpo ou ao fragmento de ligação ao antígeno do mesmo através de uma fração química Z formada a partir de uma reação de acoplamento entre um substituinte reativo presente no ligante e um substituinte reativo presente em um anticorpo ou em um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; em que, quando R1 é H, R2 é o ligante, e, quando R2 é H, R1 é o ligante.
[0158] Em algumas modalidades, o ligante compreende uma unidade de - (CH)2n-, em que n é um número inteiro de 2 a 6.
[0159] Em algumas modalidades, R1 é o ligante e R2 é H, e o ligante e a fração química, juntamente como L-Z, é
[0160] Em algumas modalidades, Ab-Z-L-Am é
[0161] Em algumas modalidades, Ab-Z-L-Am é
[0162] Em algumas modalidades, o precursor de Am-L-Z é um dentre: em que a maleimida reage com um grupo tiol encontrado em uma cisteína no anticorpo.
[0163] Em algumas modalidades, a citotoxina é um maitansinoide selecionado a partir do grupo que consiste em DM1 e DM4. Em algumas modalidades, a citotoxina é uma auristatina selecionada a partir do grupo que consiste em monometil auristatina E monometil auristatina F. Em algumas modalidades, a citotoxina é uma antraciclina selecionada a partir do grupo que consiste em daunorubicina, doxorubicina, epirubicina e idarubicina.
[0164] Em algumas modalidades, a citotoxina é um dímero de pirrolobenzodiazepina representado pela fórmula (IV):
[0165] Em algumas modalidades, a citotoxina é conjugada ao anticorpo ou ao fragmento de ligação ao antígeno do mesmo por meio de um ligante de maleimidocaproila. Em algumas modalidades, a citotoxina é uma auristatina selecionada a partir do grupo que consiste em monometil auristatina E e monometil auristatina F.
[0166] Em algumas modalidades, a citotoxina é uma antraciclina selecionada a partir do grupo que consiste em daunorubicina, doxorubicina, epirubicina e idarubicina.
[0167] Em um outro aspecto, a invenção apresenta a composição farmacêutica compreendendo o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de qualquer um dos aspectos ou das modalidades da invenção e um excipiente farmaceuticamente aceitável.
[0168] Em algumas modalidades, a composição farmacêutica é formulada para administração a um paciente humano transdérmica, subcutânea, intranasal, intravenoso, intramuscular, intraocular, intratumoral, parenteral, tópica, intratecal ou intracerebroventricularmente.
BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS
[0169] A Figura 1 retrata graficamente os resultados de um ensaio de ligação de linhagem celular in vitro no qual cada um dos anticorpos anti-CD2 indicados ou um controle negativo (isto é, mlgG1) foi incubado com células MOLT-4 (isto é, uma linhagem celular de linfoblasto T humano) seguido pela incubação de um anticorpo anti-IgG conjugado com fluoróforo. O sinal foi detectado através de citometria de fluxo e é indicado como a intensidade de fluorescência média geométrica(eixo geométrico y) como uma função da concentração de anticorpo anti-CD2 (eixo geométrico x).
[0170] A Figura 2 retrata graficamente o resultados de um ensaio de ligação celular primária in vitro no qual o anticorpo anti-CD2 (RPA-2.10) indicado ou um controle negativo (isto é, mlgG1) foi incubado com células T humanas primárias seguido pela incubação de um anticorpo anti-IgG conjugado com fluoróforo.
[0171] O sinal foi detectado através de citometria de fluxo e é indicado como a intensidade de fluorescência média geométrica(eixo geométrico y) como uma função da concentração de anticorpo anti-CD2 (eixo geométrico x).
[0172] As Figuras 3A e 3B retratam graficamente resultados de um ensaio de morte de célula T in vitro incluindo um ADC de anti-CD2-amanitina (isto é, RPA-2.10- AM ou “CD2 AM”) que tem uma amanitina conjugada entre cadeias com uma razão de fármaco para anticorpo média de 6 (Figura 3A) ou uma razão de fármaco para anticorpo de amanitina conjugada específica de sítio de 2 (Figura 3B). Na Figura 3A, a análise de morte de célula T de ADC de anti-CD2 é mostrada em comparação a um anticorpo anti-CD2 não conjugado (isto é,“CD2 Recombinante”). Na Figura 3B, os resultados do anticorpo anti-CD2 são mostrados em comparação a um anticorpo anti-CD2 que tem uma mutação H435A que diminui a vida útil do anticorpo. Os resultados mostram o número de células T viáveis (eixo geométrico y) como uma função de concentração de ADC (CD2 RPA-2.10 AM, CD2 D265C.H435A AM) ou de um anticorpo não conjugado (CD2 RPA-2.10) (eixo geométrico x) conforme avaliado com o uso de citometria de fluxo.
[0173] A Figura 4 retrata graficamente resultados de um ensaio de morte natural de célula (NK) in vitro incluindo um ADC de anti-CD2-amanitina (isto é, RPA-
2.10-AM or“CD2 AM”) que tem uma amanitina conjugada entre cadeias com razão de fármaco para anticorpo de 6. Os resultados mostram os níveis de células NK viáveis (eixo geométrico y) como uma função de concentração de ADC (CD2-AM) ou de anticorpo de controle (isto é, hlgG1, amanitina com hlgG1 (“hlgG1-AM”)) (eixo geométrico x) conforme avaliado com o uso de um ensaio de Viabilidade Celular Glo.
[0174] As Figuras 5A e 5B retratam graficamente os resultados de um ensaio de depleção de célula T in vivo que mostram os níveis absolutos de células T (células CD3+; eixo geométrico y) no sangue periférico (Figura 5A) e na medula óssea (Figura 5B) de camundongos NSG humanizados 7 dias após uma administração única de 0,3 mg/kg, 1 mg/kg ou 3 mg/kg de um ADC de anti-CD2- amanitina (isto é, RPA-2.10-AM) que tem uma razão de fármaco para anticorpo entre cadeias de 6. A título de comparação, as Figuras 5A e 5B mostram também o nível de depleção de célula T após o tratamento de camundongos NSG humanizados com 25 mg/kg de Ab1 (um anticorpo anti-CD2 não conjugado) ou com os controles indicados (isto é, 25 mg/kg de anti-CD52 anticorpo (clone YTH34.5); 3 mg/kg de ADC de hlgG1-amanitana (“hlgG1-AM”), 25 mg/kg de hlgG1 ou PBS).
[0175] As Figuras 6A a 6C retratam graficamente os resultados de um ensaio de depleção de célula T in vivo que mostram os níveis absolutos de células T (células CD3+; eixo geométrico y) no sangue periférico (Figura 6A), medula na óssea (Figura 6B) e no timo (Figura 6C) de camundongos NSG humanizados 7 dias após uma administração única de 1 mg/kg ou 3 mg/kg de um ADC de anti-CD2- amanitina (isto é, RPA-2.10-AM) que tem uma razão de fármaco para anticorpo específico de sítio de cerca de 2. A título de comparação, as Figuras 6A a 6C mostram também o nível de depleção de célula T após o tratamento de camundongos NSG humanizados com 3 mg/kg de um anticorpo anti-CD2 não conjugado ou com os controles indicados (isto é, 3 mg/kg ADC de hlgG1-amanitana (“hlgG1-AMC”) ou PBS).
DESCRIÇÃO DETALHADA
[0176] A presente invenção tem como base em parte a constatação de que os anticorpos ou os fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos que se ligam a CD2 (chamada também de antígeno de superfície de célula T, LFA-2 e receptor de LFA-3) podem ser usados como agentes terapêuticos para (i) tratar diretamente cânceres e doenças autoimunes caracterizados pelas células de CD2+ e (ii) promover o enxertamento de células-tronco hematopoiéticas transplantadas em um paciente em necessidade de terapia de transplante ao depletir populações de células imunes que cruza com, e montam uma resposta imune contra os enxertos de célula-tronco hematopoiética (por exemplo, ao cruzar com antígenos não auto-MHC expressados pelo enxerto de célula-tronco hematopoiética). Essas atividades terapêuticas podem surgir, por exemplo, através de uma ligação de anticorpos anti- CD2 ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos à CD2 expressada na superfície de uma célula, como um célula cancerosa, célula autoimune ou célula imune que cruza com um antígeno de célula-tronco hematopoiética não auto (por exemplo, um antígeno não auto-MHC), induzindo, desse modo, a morte da célula de ligação. O caso de depleção de uma população de células cancerosas ou células autoimunes, o anticorpo anti-CD2 ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo pode ser usado para tratar diretamente um câncer ou uma doença autoimune, como uma doença autoimune cancerosa no presente documento. No caso em que se deplete uma população de células imunes que cruzam com um antígeno de célula- tronco hematopoiética não auto, o anticorpo anti-CD2, o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo podem ser usados para prevenir ou reduzir a probabilidade de rejeição de enxerto em um paciente que está sofrendo de um distúrbio de célula- tronco, câncer ou doença autoimune e que é submetido à terapia de transplante de célula-tronco hematopoiética. Em tais casos, a depleção de células imunes de CD2+ que cruzam com um ou mais antígenos de célula-tronco hematopoiética não auto
(por exemplo, um ou mais antígenos não auto-MHC) possibilitam o enxertamento bem sucedido de células-tronco hematopoiéticas transplantadas no receptor de transplante. À medida que as células transplantadas são enxertadas, as mesmas podem abrigar tecido hematopoiético, onde a hematopoese produtiva pode, então, ocorrer. As células-tronco hematopoiéticas transplantadas podem dar origem subsequentemente a uma população de células que é deficiente ou com defeitos no receptor de transplante, como megacariócitos, trombócitos, plaquetas, eritrócitos, mastócitos, mieloblastos, basófilos, neutrófilos, eosinófilos, microglia, granulócitos, monócitos, osteoclastos, células que apresentam antígeno, macrófagos, célula dendríticas, células naturais exterminadoras, linfócitos T e linfócitos B. Dessa forma, anticorpos anti-CD2 ou os fragmentos dos mesmos podem ser usados para promover o enxertamento bem sucedido de células-tronco hematopoiéticas em um paciente, como um paciente humano que está sofrendo de um distúrbio de célula- tronco descrito no presente documento.
DEFINIÇÕES
[0177] Conforme usado no presente documento, o termo “cerca de” se refere a um valor que está dentro de 10% acima ou abaixo do valor que é descrito. Por exemplo, o termo “cerca de 5 nM” indica uma faixa de 4,5 nM a 5,5 nM.
[0178] Conforme usado no presente documento, o termo “amatoxina” se refere a um membro da família amatoxina de peptídeos produzido por cogumelos Amanita phalloides, uma amatoxina sintética, uma amatoxina variante ou um derivado da mesmo, como uma variante ou um derivado da mesma que tem capacidade de inibir atividade de RNA polimerase II. São também incluídas amatoxinas sintéticas (consulte, por exemplo, a Patente US nº 9676702, incorporado a título de referência no presente documento). Conforme descrito no presente documento, as amatoxinas podem ser conjugadas com um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, por exemplo, por meio de uma fração de ligante (L) (formando, assim, um conjugado (chamado também de conjugado de anticorpo-fármaco (ADC)). Métodos exemplificativos de conjugação de amatoxina e ligantes úteis para tais processos são descritos abaixo. Amatoxina contendo ligante exemplificativas úteis para conjugação com um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno de acordo com as composições e os métodos são descritos também no presente documento.
[0179] Em certas modalidades, as amatoxinas úteis em conjunto com as composições e os métodos descritos no presente documento incluem compostos de acordo com a fórmula (III), α-amanitina, β-amanitina, Ɣ-amanitina, Ɛ-amanitina, amanina, amaninamida, amanulina, ácido amanulínico ou proamanulina.
[0180] A fórmula (III) é conforme a seguir: em que R1 é H, OH ou ORA; R2 é H, OH ou ORB;
[0181] RA e RB, quando presentes juntamente com os átomos de oxigênio aos quais os mesmos são ligados, se combinam para formar um grupo heterocicloalquila de 5 membros opcionalmente substituído; R3 é H ou RD; R4 é H, OH, ORD ou RD; R5 é H, OH, ORD ou RD; R6 é H, OH, ORD ou RD;
R7 é H, OH, ORD ou RD; R8 é OH, NH2 ou ORD; R9 é H, OH ou ORD; X é -S-, -S(O)- ou -SO2-; e
[0182] RD é alquila opcionalmente substituída (por exemplo, C1-C6 alquila), heteroalquila opcionalmente substituída (por exemplo, C C6 heteroalquila), alquenila opcionalmente substituída (por exemplo, C2-C6 alquenila), heteroalquenila opcionalmente substituída (por exemplo, C2-C6 heteroalquenila), alquinila opcionalmente substituída (por exemplo, C2-C6 alquinila), heteroalquinila opcionalmente substituída (por exemplo, C2-C6 heteroalquinila), cicloalquila opcionalmente substituída, heterocicloalquila opcionalmente substituída, arila opcionalmente substituída ou heteroarila opcionalmente substituída
[0183] Por exemplo, em uma modalidade, as amatoxinas úteis em conjunto com as composições e os métodos descritos no presente documento incluem compostos de acordo com a fórmula (IIIA) abaixo: em que R1 é H, OH ou ORA; R2 é H, OH ou ORB;
[0184] RA e RB, quando presentes juntamente com os átomos de oxigênio aos quais os mesmos são ligados, se combinam para formar um grupo heterocicloalquila de 5 membros opcionalmente substituído; R3 é H ou RD; R4 é H, OH, ORD ou RD; R5 é H, OH, ORD ou RD R6 é H, OH, ORD ou RD; R7 é H, OH, ORD ou RD; R8 é OH, NH2 ou ORD; R9 é H, OH ou ORD; X é -S-, -S(O)- ou -SO2-; e
[0185] RD é alquila opcionalmente substituída (por exemplo, C1-C6 alquila), heteroalquila opcionalmente substituída (por exemplo, C C6 heteroalquila), alquenila opcionalmente substituída (por exemplo, C2-C6 alquenila), heteroalquenila opcionalmente substituída (por exemplo, C2-C6 heteroalquenila), alquinila opcionalmente substituída (por exemplo, C2-C6 alquinila), heteroalquinila opcionalmente substituída (por exemplo, C2-C6 heteroalquinila), cicloalquila opcionalmente substituída, heterocicloalquila opcionalmente substituída, arila opcionalmente substituída ou heteroarila opcionalmente substituída
[0186] Em uma modalidade, as amatoxinas úteis em conjunto com as composições e os métodos descritos no presente documento incluem também compostos de acordo com a fórmula (IIIB) abaixo:
em que R1 é H, OH ou ORA; R2 é H, OH ou ORB;
[0187] RA e RB, quando presentes juntamente com os átomos de oxigênio aos quais os mesmos são ligados, se combinam para formar um grupo heterocicloalquila de 5 membros opcionalmente substituído; R3 é H ou RD; R4 é H, OH, ORD ou RD; R5 é H, OH, ORD ou RD; R6 é H, OH, ORD ou RD; R7 é H, OH, ORD ou RD; R8 é OH, NH2 ou ORD; R9 é H, OH ou ORD; X é -S-, -S(O)- ou -SO2-; e
[0188] RD é alquila opcionalmente substituída (por exemplo, C1-C6 alquila), heteroalquila opcionalmente substituída (por exemplo, C C6 heteroalquila), alquenila opcionalmente substituída (por exemplo, C2-C6 alquenila), heteroalquenila opcionalmente substituída (por exemplo, C2-C6 heteroalquenila), alquinila opcionalmente substituída (por exemplo, C2-C6 alquinila), heteroalquinila opcionalmente substituída (por exemplo, C2-C6 heteroalquinila), cicloalquila opcionalmente substituída, heterocicloalquila opcionalmente substituída, arila opcionalmente substituída ou heteroarila opcionalmente substituída
[0189] Conforme descrito no presente documento, as amatoxinas podem ser conjugadas com um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, por exemplo, por meio de uma fração de ligante. Métodos exemplificativos de conjugação de amatoxina e ligantes úteis para tais processos são descritos na seção intitulada “Ligantes para conjugação química” assim como na Tabela 1 abaixo.
Amatoxinas contendo ligante exemplificativas úteis para conjugação com um anticorpo anti-CD2, um fragmento de ligação ao antígeno de acordo com as composições e métodos descritos no presente documento são mostradas nas fórmulas estruturais (I), (IA), (IB), (II), (IIA) e (IIB) mencionadas no presente documento.
[0190] Conforme usado no presente documento, o termo “anticorpo” se refere a uma molécula de imunoglobulina que se liga especificamente ou é reativo imunologicamente com, a um antígeno particular. Exemplos de anticorpos incluem formas policlonais, monoclonais, geneticamente modificadas e, de outro modo, modificadas de anticorpos, incluindo, mas não se limitam a anticorpos quiméricos, anticorpos humanizados, anticorpos heteroconjungados (por exemplo, anticorpos bi, tri e tetraespecíficos, diacorpos, triacorpos e tetracorpos), e fragmentos de ligação ao antígeno incluindo, por exemplo, fragmentos de Fab', F(ab')2, Fab, Fv, rlgG e scFv.
Conforme usado no presente documento, os fragmentos de Fab e F(ab') 2 se referem a fragmentos de anticorpo que não estão presentes no fragmento de Fc fragmento de um anticorpo intacto. Exemplos desses fragmentos de anticorpo são descritos no presente documento.
[0191] Em geral, os anticorpos compreendem cadeias pesadas e leves contendo regiões de ligação ao antígeno. Cada cadeia pesada é compreendida de uma região variável de cadeia pesada (abreviada como HCVR ou V H no presente documento) e uma região constante de cadeia pesada. A região constante de cadeia pesada é compreendida de três domínios CH1, CH2 e CH3. Cada cadeia leve é compreendida de uma região variável de cadeia leve (abreviada como LCVR ou V L no presente documento) e uma região constante de cadeia leve. A região constante de cadeia leve é compreendida de um domínio CL. As regiões de VH e VL podem ser subdivididas em regiões de hipervariabilidade denominadas regiões de determinantes de complementaridade (CDR) intercaladas com regiões que são mais conservadas denominadas regiões estruturais (FR). Cada VH e VL é composta de três CDRs e quatro FRs dispostas a partir do terminal amino até o terminal carboxila na ordem a seguir: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR. As regiões variáveis de cadeias pesadas e leves contêm um domínio de ligação que interage com um antígeno. As regiões constantes dos anticorpos podem mediar a ligação da imunoglobulina a tecidos ou fatores hospedeiros incluindo várias células do sistema imunológico (por exemplo, células efetoras) e o primeiro componente (Clq) do sistema complementar clássico.
[0192] O termo “fragmento de ligação ao antígeno” conforme usado no presente documento se refere a uma molécula diferente de um anticorpo intacto que compreende uma porção de um anticorpo intacto e que se liga ao antígeno ao qual o anticorpo intacto se liga. A função de ligação ao antígeno de um anticorpo pode ser realizada por fragmentos de um anticorpo de comprimento total. Os fragmentos de anticorpo podem ser, por exemplo, um Fv, um Fab, um Fab’, um F(ab’)2, um scFv, um diacorpo, um triacorpo, moléculas de anticorpo de cadeia única (por exemplo, scFv), um aficorpo, um nanocorpo, um aptâmero ou um anticorpo de domínio.
Exemplos de fragmentos de ligação abrangidos pelo termo “fragmento de ligação ao antígeno” de um anticorpo incluem, mas não se limitam a: (i) um fragmento de Fab, um fragmento monovalente consistindo nos domínios de V L, VH, CL e CH1; (ii) um fragmento de F(ab')2, um fragmento bivalente compreendendo dois fragmentos de Fab ligados por um ponte de dissulfeto na região de dobradiça; (iii) um fragmento de Fd consistindo nos domínios de VH e CH1; (iv) um fragmento de Fv consistindo nos domínios de VL e VH de um único braço de um anticorpo, (v) um dAb incluindo domínios de VH e VL; (vi) um fragmento de dAb que consiste em um domínio de VH (consulte, por exemplo, Ward et al., Nature 341 :544 a 546, 1989); (vii) um dAb que consiste em um domínio de VH ou VL; (viii) uma região determinante de complementaridade (CDR) isolada; e (ix) uma combinação de dois ou mais (por exemplo, dois, três, quatro, cinco ou seis) CDRs isoladas que podem ser unidas opcionalmente por um ligante sintético. Adicionalmente, embora os dois domínios do fragmento de Fv, VL e VH sejam codificados por genes separados, os mesmos podem ser unidos com o uso de métodos recombinantes por um ligante que possibilita que os mesmos sejam produzidos com uma cadeia de proteína única na qual o par de regiões de VL e VH forma moléculas monovalentes (conhecidas como Fv de cadeia única (scFv); consulte, por exemplo, Bird et al., Science 242:423 a 426, 1988 e Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. EUA 85:5879 a 5883, 1988). Esses fragmentos de anticorpo podem ser obtidos com o uso de técnicas convencionais conhecidas por esses elementos versados na técnica, e os fragmentos podem ser examinados a título de utilidade da mesma maneira que os anticorpos intactos. Os fragmentos de ligação ao antígeno podem ser produzidos através de técnicas de DNA recombinante, clivagem enzimática ou química de imunoglobulinas intactas ou, em certos casos, através de procedimento de síntese de peptídeo química conhecidos na técnica.
[0193] Conforme usado no presente documento, o termo “anticorpo anti- CD2” ou "um anticorpo que se liga a CD2" se refere a um anticorpo que se liga especificamente a CD2. Um anticorpo “que se liga” a um antígeno de interesse, isto é, CD2, ´um anticorpo que tem capacidade de se ligar a esse antígeno com afinidade suficiente de modo que o anticorpo seja útil para alvejar uma célula que expressa o antígeno. Em uma modalidade preferencial, o anticorpo se liga especificamente a um CD2 humano (hCD2). CD2 é encontrado na superfície celular de células imunes, como células T. A sequência de aminoácido de CD2 humano ao qual um anticorpo anti-CD2 (ou conjugado de anti-CD2) se ligaria é descrita abaixo na SEQ ID n°: 13.
[0194] Conforme usado no presente documento, o termo “anticorpo biespecífico” se refere a um anticorpo híbrido que tem dois sítios de ligação ao antígeno diferentes. Os anticorpos biespecíficos são uma espécie de anticorpo multiespecífico e podem ser produzidos através de uma variedade de métodos incluindo, mas não se limita à fusão de hibridomas ou à ligação de fragmentos de Fab. Consulte, por exemplo, Songsivilai and Lachmann, 1990, Clin. Exp. Immunol.
79:315 a 321; Kostelny et al., 1992, J. Immunol. 148, 1547 a 1553). Os dois sítios de ligação de um anticorpo biespecífico se ligarão a dois epítopos diferentes que podem residir no mesmo alvo proteico ou em alvos proteicos diferentes. Por exemplo, uma das especificidades de ligação pode ser direcionada a um antígeno de superfície de célula T, como CD2, a outra especificidade pode ser para um antígeno de superfície de célula T ou para uma outra proteína de superfície celular, como um receptor ou uma subunidade de receptor envolvida em uma trajetória de transdução que potencializa o crescimento celular dentre outros.
[0195] Conforme usado no presente documento, o termo “região determinante de complementaridade” (CDR) se refere a uma região hipervariável encontrada tanto nos domínios de cadeia leve quanto nos domínios de cadeia pesada de um anticorpo. As porções mais altamente conservadas de domínios variáveis são chamadas de regiões estruturais (FRs). As posições de aminoácidos que delineiam uma região hipervariável de um anticorpo podem variar dependendo do contexto e das várias definições conhecidas na técnica. Algumas posições em um domínio variável podem ser vistas como posições hipervariáveis híbridas nessas posições podem ser consideradas como estando dentro de uma região hipervariável sob um conjunto de critérios enquanto são consideradas como estando no exterior de uma região hipervariável sob um conjunto de critérios diferente. Uma ou mais dessas posições podem ser encontradas também em regiões hipervariáveis estendidas. Os anticorpos descritos no presente documento podem conter modificações nessas posições hipervariáveis híbridas. Os domínios variáveis de cadeias pesadas e leves nativas compreendem, cada um, quatro regiões estruturais que adotam principalmente uma configuração de folha b conectadas por três CDRs, que formam alças que se conectam e, em alguns casos, formam parte da estrutura de folha b. As CDRs em cada cadeia são mantidas juntas em proximidade estreita pelas regiões estruturais na ordemFR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4 e, com as CDRs das outras cadeias de anticorpo, contribuem para a formação do sítio de ligação alvo de anticorpos (consulte Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, National Institute of Health, Bethesda, MD., 1987). Conforme usado no presente documento, a numeração de resíduos de aminoácido de imunoglobulina é realizada de acordo com o sistema de numeração de resíduo de aminoácido de imunoglobulina de Kabat et al., salvo se indicado de outro modo.
[0196] Conforme usado no presente documento, os termos “condição” e “condicionamento” se referem a processos através dos quais um paciente é preparado para recepção de um transplante contendo células-tronco hematopoiéticas. Tais procedimentos promovem o enxertamento de um transplante de célula-tronco hematopoiética (por exemplo, conforme inferido a partir de um aumento sustentado na quantidade de células-tronco hematopoiéticas viáveis em uma amostra sanguínea isolada de um paciente após um procedimento de condicionamente e um transplante de célula-tronco hematopoiética subsequente. De acordo com os métodos descritos no presente documento, um paciente pode ser condicionado para terapia de transplante de célula-tronco hematopoiética através de administração ao paciente de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que tem capacidade de se ligar a um antígeno expressado pelas células T, como CD2. Conforme descrito no presente documento, o anticorpo anti-CD2 pode ser conjugado covalentemente com uma citotoxina com a finalidade de formar um conjugado de anticorpo-fármaco. A administração de um anticorpo, um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ou um conjugado de anticorpo-fármaco que tem capacidade de se ligar a um ou mais dos antígenos supracitados a uma paciente em necessidade de terapia de transplante de célula-tronco hematopoiética pode promover o enxertamento de um enxerto de célula-tronco hematopoiética, por exemplo, ao selecionar seletivamente a depleção de células imunes endógenas, como células T de CD2+ (por exemplo, células T de CD4+ e/ou CD8+) e/ou células NK de CD2+ que cruzam com um ou mais antígenos não auto expressados por uma célula-tronco hematopoiética (por exemplo, um ou mais antígenos não auto-MHC).
Essa depleção seletiva de células imunes previne ou reduz, por sua vez, a probabilidade de rejeição de enxerto após o transplante de um enxerto de célula- tronco hematopoiética exógenas (por exemplo, um enxerto de célula hematopoiéticas autólogas, alogênicas ou singênicas).
[0197] Conforme usado no presente documento, o termo “conjugado” se refere a um composto formado pela ligação química de um grupo funcional reativo de uma molécula, como um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, com um grupo funcional apropriadamente reativo de uma outra molécula, como um citotoxina descrito no presente documento. Os conjugados podem incluir um ligante entre as duas moléculas (por exemplo, anticorpo anti-CD2 e uma citotoxina) ligadas entre si. Exemplos de ligantes que podem ser usados para a formação de um conjugado incluem ligantes contendo peptídeo, como esses ligantes que contêm aminoácidos que ocorrem naturalmente e que não ocorrem naturalmente, como aminoácidos D. Os ligantes podem ser preparados com o uso de uma variedade de estratégias descrita no presente documento e conhecida na técnica. Dependendo dos componentes reativos no mesmo, um ligante pode ser clivado, por exemplo, através de hidrólise enzimática, fotólise, hidrólise sob condições ácidas, hidrólise sob condições básicas, oxidação, redução por dissulfeto, clivagem nucleofílica ou clivagem organometálica (consulte, por exemplo, Leriche et al., Bioorg. Med. Chem., 20:571 -582, 2012).
[0198] Conforme usado no presente documento, o termo “reação de acoplamento” se refere a uma reação química na qual dois ou mais substituintes adequados para reação um com o outro reagem com a finalidade de formar uma fração química que une (por exemplo, covalentemente) os fragmentos moleculares ligados a cada substituinte. As reações de acoplamento incluem as reações nas quais um substituinte reativo ligado a um fragmento que é uma citotoxina, como uma citotoxina conhecida na técnica ou descrita no presente documento, reage com um substituinte adequadamente reativo ligado a um fragmento que é um anticorpo, um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ou um anticorpo, como um anticorpo, um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ou um anticorpo específico para CD2 conhecido na técnica ou descrito no presente documento. Exemplos de substituintes adequadamente reativos incluem um par de nucleófilo/eletrófilo (por exemplo, um par de tiol/haloalquila, um par de amino/carbonila ou um par de tiol/carbonila α, β-insaturada dentre outros), um par de dieno/dienófilo (por exemplo, um par de azida/alquino dentre outros) e similares. As reações de acoplamento incluem, sem limitação, alquilação de tiol, alquilação de hidroxila, alquilação de amina, condensação de amina, amidação, esterificação, formação de dissulfeto, cicloadição (por exemplo, cicloadição de [4+2] Diels-Alder, cicloadição de [3+2] Huisgen dentre outras), substituição de aromático nucleofílico, substituição de aromático eletrofílico e outras modalidades reativas conhecidas na técnica ou descritas no presente documento.
[0199] Conforme usado no presente documento, “CRU (unidade de repovoamento competitivo)” se refere a uma unidade de medida de enxertamento de células-tronco a longo prazo que pode ser detectada após o transplante in-vivo.
[0200] Conforme usado no presente documento, "razão de fármaco para anticorpo" ou "DAR" se refere ao número de citotoxinas, por exemplo, amatoxina, ligada ao anticorpo de um ADC. A DAR de um ADC pode variar de 1 a 8, embora cargas maiores sejam possíveis também dependendo do número de sítios de ligação em um anticorpo.
[0201] Assim, em certas modalidades, um ADC descrito no presente documento tem uma DAR de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8.
[0202] Conforme usado no presente documento, o termo “doador” se refere a um ser humano ou animal a partir dos quais uma ou mais células são isoladas antes da administração das células ou progênie das mesmas em um receptor. As uma ou mais células podem ser, por exemplo, uma população de células-tronco hematopoiéticas.
[0203] Conforme usado no presente documento, o termo “diacorpo” se refere a um anticorpo bivalente contendo duas cadeias de polipeptídeo nas quais cada cadeia de polipeptídeo inclui domínios de VH e VL unidos por uma ligante que é muito curto (por exemplo, um ligante composto de cinco aminoácidos) para permitir associação intramolecular de domínios de VH e VL na mesma cadeia de peptídeo.
Essa configuração força cada domínio a emparelhar com um domínio complementar em uma outra cadeia de polipeptídeo com a finalidade de formar uma estrutura homodimérica.
[0204] Consequentemente, o termo “triacorpo” se refere a anticorpos trivalente compreendendo três cadeias de peptídeo, cada um das quais contém um domínio de VH e um domínio de VL unidos por um ligante que é excessivamente curto (por exemplo, um ligante composto de 1 a 2 aminoácidos) para permitir associação intramolecular de domínios de VH e VL na mesma cadeia de peptídeo. A fim de dobrar em suas estruturas nativas, peptídeos configurados dessa forma trimerizam tipicamente com a finalidade de posicionar os domínios de VH e VL de cadeias de peptídeo vizinhas espacialmente proximais entre si (consulte, por exemplo, Holliger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. EUA 90:6444 a 48, 1993).
[0205] Conforme usado no presente documento, uma “imunoglobulina de domínio variável dupla” (“DVD-lg”) se refere a uma proteína de ligação ao antígeno que combina os domínios variáveis de ligação alvos de dois anticorpos por meio de ligantes para criar um agente único tetravalente e de alvejamento duplo (consulte, por exemplo, Gu et al., Meth. Enzymol., 502:25 a 41, 2012).
[0206] Conforme usado no presente documento, o termo “endógeno” descreve uma substância, como um molécula, célula, tecido ou órgão (por exemplo, uma célula-tronco hematopoiética ou uma linhagem hematopoiético celular, como um megacariócito, trombócito, plaqueta, eritrócito, mastócito, mieloblasto, basófilo, neutrófilo, eosinófilo, célula microglial, granulócito, monócito, osteoclasto, célula que apresenta antígeno, macrófago, célula dendrítica, célula exterminadora natural, linfócito T (por exemplo, um linfócito T de CD4+ ou CD8+) ou linfócito B) que é encontrado naturalmente em um organismo particular, como um paciente humano, por exemplo, um paciente humano que se submete à terapia de transplante de célula-tronco hematopoiética conforme descrito no presente documento.
[0207] Conforme usado no presente documento, o termo “potencial de enxertamento” é usado para se referir à capacidade de células-tronco hematopoiéticas e progenitoras para repovoar um tecido se tais células estiverem circulando naturalmente ou forem fornecidas por transplante. O termo abrange todos os casos que envolvem ou levam ao enxertamento, como retorno de tecido de células e colonização de células no tecido de interesse. A eficiência ou a taxa de enxertamento pode ser avaliada ou quantificada com o uso de um parâmetro clinicamente aceitável conforme conhecido pelo elemento versado na técnica e pode incluir, por exemplo, avaliação de unidade de repovoamento competitiva (CRU); incorporação ou expressão de um marcador em tecido (ou tecidos) para o qual as células-tronco retornaram, foram colonizadas e se tornaram enxertos; ou através de avaliação do progresso de um indivíduo através da progressão de doença, sobrevivência de células-tronco hematopoiéticas ou progenitoras ou sobrevivência de um receptor. O enxertamento pode ser determinada também ao medir contagens de glóbulos brancos no sangue periférico durante o período após o transplante. O enxertamento pode ser avaliado também ao medir a recuperação de células da medula através de células do doador em uma amostra aspirada da medula óssea.
[0208] Conforme usado no presente documento, o termo “excipiente” se refere a uma substância formulada junto ao ingrediente ativo de uma medicação. Os mesmos podem ser incluídos, por exemplo, com o propósito de estabilização a longo prazo ou para conferir um melhoramento terapêutico no ingrediente ativo na forma de dosagem final. Conforme usado no presente documento, o termo “exógeno” descreve uma substância, como uma molécula, célula, tecido ou órgão (por exemplo, uma célula-tronco hematopoiética ou uma linhagem hematopoiético celular, como um megacariócito, trombócito, plaqueta, eritrócito, mastócito, mieloblasto, basófilo, neutrófilo, eosinófilo, célula microglial, granulócito, monócito, osteoclasto, célula que apresenta antígeno, macrófago, célula dendrítica, célula exterminadora natural, linfócito T (por exemplo, um linfócito T de CD4+ ou CD8+) ou linfócito B) que é encontrado naturalmente em um organismo particular, como um paciente humano.
As substâncias exógenas incluem as substâncias que são fornecidas de uma fonte externa e para um organismo ou para matéria cultivada extraída do mesmo.
[0209] Conforme usado no presente documento, o termo “região estrutural” ou “região FW” inclui resíduos de aminoácidos que são adjacentes às CDRs de um anticorpo ou de um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo. Os resíduos FW podem estar presentes, por exemplo, em anticorpos humanos, anticorpos humanizados, anticorpos monoclonais, fragmentos de anticorpo, fragmentos de Fab, fragmentos de anticorpo de cadeia única, fragmentos de scFv, domínios de anticorpo e anticorpos biespecíficos dentre outros.
[0210] Os termos "anticorpo de comprimento total”, "anticorpo intacto" e "todo o anticorpo" são usados de modo intercambiável no presente documento para se referir a um anticorpo compreendendo, em geral, pelo menos duas cadeias pesadas de comprimento total e duas cadeias leves de comprimento total, mas, em alguns casos, pode incluir menos cadeias como anticorpos que ocorrem naturalmente em camelídeos que podem compreender apenas cadeias leves.
[0211] Conforme usado no presente documento, o termo “células-tronco hematopoiéticas” (“HSCs”) se refere a células sanguíneas imaturas que têm capacidade de se autorrenovar e se diferenciar em células sanguíneas maduras compreendendo diversas linhagens que incluem, mas não se limitam aos granulócitos (por exemplo, promielócitos, neutrófilos, eosinófilos, basófilos), eritrócitos (por exemplo, reticulócitos, eritrócitos), trombócitos (por exemplo, megacarioblastos, megacariócitos que produzem plaqueta, plaquetas), monócitos (por exemplo, monócitos, macrófagos), célula dendríticas, microglia, osteoclastos e linfócitos (por exemplo, células NK, células B e células T). Além disso, as HSCs se referem também ao repovoamento a longo prazo de HSCs (LT-HSC) e ao repovoamento a curto prazo de HSCs (ST-HSC). As LT-HSCs e ST-HSCs são diferenciadas com base no potencial funcional e na expressão de marcador de superfície celular. Por exemplo, as HSCs humanas são CD34+, CD38-, CD45RA-, CD90+, CD49F+ e lin- (negativo para marcadores de linhagem madura, incluindo
CD2, CD3, CD4, CD7, CD8, CD10, CD1 1 B, CD19, CD20, CD56 e CD235A). Em camundongos, LT- HSCs de medula óssea são CD34-, SCA-1 +, C-kit+, CD135-, Slamfl/CD150+, CD48- e lin- (negativo para marcadores de linhagem madura incluindo Ter1 19, CD1 1 b, Gr1, CD3, CD4, CD8, B220 e IL7ra), enquanto ST- HSCs são CD34+, SCA-1 +, C-kit+, CD135-, Slamfl/CD150+ e lin- (negativo para marcadores de linhagem madura incluindo Ter1 19, CD1 1 b, Gr1, CD3, CD4, CD8, B220 e IL7ra). Além disso, ST-HSCs são menos inertes e mais proliferativas que LT- HSCs sob condições homeostáticas. Entretanto, LT-HSC tem potencial autorregenerativo maior (isto é, sobrevivem ao longo da vida adulta, e podem ser transplantadas em série através de receptores sucessivos), enquanto ST-HSCs têm autorregeneração limitada (isto é, sobrevivem apenas por um período de tempo limitado e não têm potencial para transplante em série). Qualquer uma dessas HSCs pode ser usada nos métodos descritos no presente documento. ST-HSCs são particularmente úteis devido às mesmas serem altamente proliferativas e, assim, podem dar mais rapidamente origem a uma progênie diferenciada.
[0212] Conforme usado no presente documento, o termo “potencial funcional de célula-tronco hematopoiética” se refere às propriedades funcionais de células- tronco hematopoiéticas que incluem 1) potência múltipla (que se refere à capacidade de se diferenciar em múltiplas linhagens sanguíneas incluindo, mas não se limitam a, granulócitos (por exemplo, promielócitos, neutrófilos, eosinófilos, basófilos), eritrócitos (por exemplo, reticulócitos, eritrócitos), trombócitos (por exemplo, megacariócitos, megacariócitos que produzem plaqueta, plaquetas), monócitos (por exemplo, monócitos, macrófagos), célula dendríticas, microglia, osteoclastos e linfócitos (por exemplo, células NK, células B e células T), 2) autorregeneração (que se refere à capacidade de células-tronco hematopoiéticas para dar origem a células- filha que têm potencial equivalente ao potencial da célula-mãe, e, adicionalmente, essa capacidade pode ocorrer repetidamente ao longo do tempo de vida de um indivíduo sem exaustão), e 3) a capacidade de as células-tronco hematopoiéticas ou a progênie da mesma serem reintroduzidas em um receptor de transplante através do qual as mesmas retornam para o nicho de célula-tronco hematopoiética e restabelecem hematopoese produtiva e sustentada.
[0213] Conforme usado no presente documento, os termos "antígenos de complexo de histocompatibilidade principal" (“MHC”, chamado também de "antígenos de leucócito humano " (“HLA”) in no contexto de seres humanos) se refere a proteínas expressadas na superfície celular que conferem uma identidade antigênica exclusiva a uma célula. Antígenos de MHC/HLA são moléculas-alvo que são reconhecidas por células T e células NK como sendo derivadas da mesma fonte de células-tronco hematopoiéticas como as células efetoras imunes ("auto") ou como sendo derivadas de uma outra fonte de célula reconstituintes hematopoiéticas ("diferente de auto"). Duas classes principais de antígenos HLA são reconhecidos: classe I de HLA e classe II de HLA. Os antígenos de classe I de HLA (A, B e C em seres humanos) renderizam cada célula reconhecível como "auto", enquanto os antígenos de classe II de HLA (DR, DP e DQ em seres humanos) são envolvidos me reações entre linfócitos e células que apresentam antígeno. Ambos implicaram na rejeição de órgãos transplantados. Um aspecto importante do sistema de gene de HLA é seu polimorfismo. Cada gene, a classe I de MHC I (A, B e C) e a classe II de MHC (DP, DQ e DR) existem em alelos diferentes. Os alelos de HLA são designados por números e subscritos. Por exemplo, dois indivíduos não relacionados podem carregar HLA-B de classe I, genes B5 e Bw41 respectivamente. Os produtos de gene alélico diferem em um ou mais aminoácidos no domínio (ou domínios) a e/ou b.
Painéis grandes de anticorpos ou reagentes de ácido nucleico são usados para tipificar haplótipos de HLA de indivíduos com o uso de leucócitos que expressam moléculas de classe I e classe II. Os genes comumente usados para tipificação de HLA são as proteínas de Classe I e Classe II de MHC, dois alelos para cada um dentre HLA- A; HLA-B e HLA-DR. Os genes de HLA são agrupados em um "super local" presente na posição cromossômica 6p21, que codifica os seis genes de HLA para transplante clássico e pelo menos 132 genes de codificação de proteína que têm papéis importantes na regulação no sistema imune assim como alguns outros processos moleculares e celulares fundamentais. O local completo mede aproximadamente 3,6 Mb com pelo menos 224 locais de gene. Um efeito desse agrupamento é que "haplótipos", isto é, o conjunto de alelos presente em um único cromossomo que é herdado de um dos pais tende a ser herdado como um grupo. O conjunto de alelos herdado de cada um dos pais forma um haplótipo no qual alguns alelos tendem a serem associados em conjunto. A identificação de haplótipos de um paciente pode ajudar a prever a probabilidade de encontrar doadores compatíveis e auxilia no desenvolvimento de uma estratégia de busca, devido a alguns alelos e haplótipos serem mais comuns que outros e os mesmo são distribuídos em frequências diferentes em grupos raciais e étnicos diferentes.
[0214] Conforme usado no presente documento, o termo "compatível com HLA" se refere a um par de receptor-doador no qual nenhum dos antígenos HLA é incompatível entre o doador e o receptor, como um doador que fornece um enxerto de célula-tronco hematopoiética para um receptor em necessidade de terapia de transplante de célula-tronco hematopoiética. Os pares de doador-receptor compatíveis com HLA (isto é, onde todos os 6 alelos são compatíveis) têm um risco reduzido de rejeição de enxerto, já que as células T e células NK endógenas são menos prováveis de reconhecer o enxerto recebido como estranho, e. assim, são menos prováveis de montar uma resposta imune contra o transplante.
[0215] Conforme usado no presente documento, o termo "incompatível com HLA" se refere a um par de doador-receptor no qual pelo um antígeno HLA, em particular, em relação a HLA-A, HLA-B e HLA-DR, é incompatível entre o doador e o receptor, como um doador que fornece um enxerto de célula-tronco hematopoiética para um receptor em necessidade de terapia de transplante de célula-tronco hematopoiética. Em algumas modalidades, um haplótipo é compatível e o outro haplótipo é incompatível. Os pares de doador-receptor incompatíveis com HLA podem ter um risco aumentado de rejeição de enxerto em relação aos pares de doador-receptor compatíveis com HLA, as células T e células NK endógenas são mais prováveis de reconhecer o enxerto recebido como estranho no caso de um par de doador-receptor incompatível com HLA, e, assim, tais células T e células NK são mais prováveis de montar uma resposta imune contra o transplante.
[0216] Conforme usado no presente documento, o termo “anticorpo humano” se refere a um anticorpo no qual substancialmente todas as partes da proteína (por exemplo, todas as CDRs, regiões estruturais, domínios de CL, CH (por exemplo, CH1, CH2, CH3), dobradiça e domínios de VL e VH) é substancialmente não imunogênico em seres humanos apenas com alterações ou variações de sequência menores. Um anticorpo humano pode ser produzido in vitro em uma célula humana (por exemplo, através de expressão recombinante) ou através de uma célula de um animal não humano ou procariótica ou eucariótica que tem capacidade de expressar genes de imunoglobulina humana funcionalmente redispostos (como cadeia pesada e/ou cadeia leve). Quando um anticorpo humano é um anticorpo de cadeia única, o mesmo por incluir um peptídeo-ligante que não é encontrado em anticorpos humanos nativos. Por exemplo, um Fv pode conter um peptídeo-ligante, como duas a cerca de oito glicinas ou outros resíduos de aminoácido, que conectam a região variável da cadeia pesada e da região variável da cadeia leve. Tais peptídeos-ligante são considerados como sendo de origem humana. Os anticorpos humanos podem ser produzidos através de uma variedade de métodos conhecidos na técnica incluindo métodos de exibição de fago com o uso de bibliotecas de anticorpo derivadas das sequências de imunoglobulina humana. Os anticorpos humanos podem ser produzidos também com o uso de camundongos transgênicos que não têm capacidade de expressar imunoglobulinas endógenas funcionais, mas que podem expressar genes de imunoglobulina humana (consulte, por exemplo, as Publicações PCT n° WO1998/24893; WO1992/01047; WO1996/34096; WO1996/33735; Patente n° US 5.413.923; n° US 5.625.126; n° US 5.633.425; n° US
5.569.825; n° US 5.661.016; n° US 5.545.806; n° US 5.814.318; n° US 5.885.793; n° US 5.916.771 e n° US 5.939.598). Em uma modalidade, um anticorpo humano é produzido com o uso de métodos recombinantes de modo que o padrão de glicosilação do anticorpo seja diferente de um anticorpo que tem a mesma sequência se existir na natureza.
[0217] Conforme usado no presente documento, o termo anticorpo “humanizado” se refere a um anticorpo quimérico compreendendo, em geral, sequências de aminoácido de CDRs não humanas e regiões estruturais humanas.
Em uma modalidade, a anticorpo humanizado é um anticorpo humano (anticorpo de receptor) na qual os resíduos das CDRs do receptor são substituídos por resíduos das CDRs de uma espécie não humana (anticorpo de doador) como camundongo, rato, coelho, primata não humano que tem a especificidade, afinidade e/ou capacidade desejada. Em geral, um anticorpo humanizado contém substancialmente todos os pelo menos um e, tipicamente, domínios variáveis nos quais todas ou substancialmente todas as regiões CDR correspondem a essas regiões de uma imunoglobulina não humana. Todas ou substancialmente todas as regiões FW podem ser também essas regiões de uma sequência de imunoglobulina humana. O anticorpo humanizado pode compreender também pelo menos uma porção de uma região constante de imunoglobulina (Fc), tipicamente, essa região de uma sequência de consenso de imunoglobulina humana. Métodos de humanização de anticorpo são conhecidos na técnica e foram descritos, por exemplo, em Riechmann et al., Nature 332:323 a 327, 1988; Patentes n° US: 5.530.101; n° US 5.585.089; n° US 5.693.761;
5.693.762 e n° US 6.180.370.
[0218] Conforme usado no presente documento, o termo “célula imune” se refere a uma célula do sistema imunológico que participa na montagem e manutenção de uma resposta imune inata ou adaptativa. As células imunes incluem linfócitos que contêm um receptor que se liga especificamente, e monta uma resposta imune contra um antígeno de interesse, um antígeno auto no caso de uma célula autoimune. Células imunes exemplificativas incluem mastócitos, basófilos, neutrófilos, eosinófilos, microglia, granulócitos, monócitos, células que apresentam antígeno, macrófagos, célula dendríticas, células naturais exterminadoras, linfócitos T e linfócitos B.
[0219] Conforme usado no presente documento, pacientes que estão “em necessidade de” um transplante de célula-tronco hematopoiética incluem pacientes que exibem um defeito ou deficiência em um ou mais tipos de célula sanguínea assim como pacientes que têm um distúrbio de célula-tronco. As células-tronco hematopoiéticas exibem, em geral, 1) potência múltipla, e assim, pode se diferenciar em múltiplas linhagens sanguíneas diferentes incluindo, mas não se limitam a, granulócitos (por exemplo, promielócitos, neutrófilos, eosinófilos, basófilos), eritrócitos (por exemplo, reticulócitos, eritrócitos), trombócitos (por exemplo, megacarioblastos, megacariócitos que apresentam plaqueta, plaquetas), monócitos (por exemplo, monócitos, macrófagos), célula dendríticas, microglia, osteoclastos e linfócitos (por exemplo, células NK, células B e células T), 2) autorrenovação, e, assim, pode dar origem a células-filha que têm potencial equivalente ao potencial da célula-mãe, e 3) a capacidade de ser reintroduzidas em um receptor de transplante através do qual as mesmas retornam para o nicho de célula-tronco hematopoiética e restabelecem hematopoese produtiva e sustentada. Assim, as células-tronco hematopoiéticas podem ser administradas a um paciente com defeito ou deficiente em um ou mais tipos de células da linhagem hematopoiética a fim de reconstituir a população de células com defeito ou deficiente in vivo. Por exemplo, a paciente pode estar sofrendo de câncer, e a deficiência pode ser causada por administração de um agente quimioterápico ou outro medicamento que deplete seletiva ou não especificamente a população de células cancerosas.
Adicional ou alternativamente,
o paciente pode estar sofrendo de hemoglobinopatia não maligna que pode causar um defeito ou deficiência em um ou mais tipos de células sanguíneas, como anemia falciforme, talassemia, anemia de Fanconi e síndrome de Wiskott-Aldrich.
O indivíduo pode ser um indivíduo que está sofrendo de imunodeficiência combinada grave de adenosina deaminase (ADA SCID), HIV/AIDS, leicodistrofia metacromática,
anemia de Diamond-Blackfan e síndrome de Schwachman-Diamond.
O indivíduo pode ter ou ser afetado por um distúrbio sanguíneo herdado (por exemplo, anemia falciforme) ou um distúrbio autoimune.
Adicional ou alternativamente, o indivíduo pode ter ou ser afetado por malignidade como uma malignidade selecionada a partir do grupo que consiste em cânceres hematológicos (por exemplo, leucemia, linfoma,
mieloma múltiplo ou síndrome mielodisplástica) e neuroblastoma.
Em algumas modalidades, o indivíduo tem ou é, de outro modo, afetado por um distúrbio metabólico.
Por exemplo, o indivíduo pode sofrer ou ser, de outro modo, afetado por um distúrbio metabólico selecionado a partir do grupo que consiste em doenças de armazenamento do glicogênio, mucopolissacaridoses, Doença de Gaucher, Doença de Hurler, espingolipidoses, leicodistrofia metacromática ou quaisquer outras doenças ou distúrbios que podem se beneficiar dos tratamentos e terapias reveladas no presente documento e incluindo, sem limitação, imunodeficiência combinada grave, síndrome de Wiscott-Aldrich, síndrome de hiperimunoglobulina M (IgM),
doença de Chediak-Higashi, linfo-histiocitose hereditária, osteopetrose, osteogênese imperfeita, doenças de armazenamento, talassemia principal, doença das células falciformes, esclerose sistêmica, lúpus eritematoso sistêmico, esclerose múltipla,
artrite rematoide juvenil e essas doenças ou distúrbios descritos em "Bone Marrow
Transplantation for Non-Malignant Disease", ASH Education Book, 1 :319 a 338
(2000), cuja revelação é incorporada em sua totalidade a título de referência no presente documento no que se refere a patologias que podem ser tratadas através de administração de terapia de transplante de célula-tronco hematopoiética.
Adicional ou alternativamente, um paciente “em necessidade de” um transplante de célula-tronco hematopoiética pode ser um paciente que está sofrendo ou não de uma das patologias supracitadas, mas, entretanto, exibe um nível reduzido (por exemplo, quando em comparação ao nível de um indivíduo, de outro modo, saudável) de um ou mais tipos de célula endógena na linhagem hematopoiética, como megacariócitos, trombócitos, plaquetas, eritrócitos, mastócitos, mieloblastos, basófilos, neutrófilos, eosinófilos, microglia, granulócitos, monócitos, osteoclastos, células que apresentam antígeno, macrófagos, célula dendríticas, células naturais exterminadoras, linfócitos T e linfócitos B. Um elemento versado na técnica pode determinar prontamente se o nível de um tipo de célula dentre um ou mais dos tipos de célula supracitados ou outro tipo de célula sanguínea for reduzido em relação a um indivíduo, de outro modo, saudável, por exemplo, por meio de métodos de citometria de fluxo e classificação de célula ativada por fluorescência (FACS) dentre outros procedimentos conhecidos na técnica. O termo "isolado" quando usado no contexto de uma proteína, por exemplo, um anticorpo, se refere a uma proteína que, em virtude de sua origem ou fonte de derivação não ser associada aos componentes naturalmente associados que acompanham os mesmos em seu estado nativo; é substancialmente livre de outras proteínas da mesma espécie; é expressada por uma célula de uma espécie diferente; ou não ocorre na natureza. Assim, uma proteína que é quimicamente sintetizada ou sintetizada em um sistema celular diferente da célula da qual a mesma se origina naturalmente será "isolada" de seus componentes naturalmente associados. Uma proteína pode ser também renderizada substancialmente livre de componentes naturalmente associados através de isolamento com o uso de técnicas de purificação de proteína bem conhecidas na técnica.
[0220] O termo "anticorpo monoclonal" ou "mAb" se refere a um anticorpo obtido a partir de uma população de anticorpos substancialmente homogêneos, isto é, os anticorpos individuais compreendendo a população são idênticos e/ou se ligam ao mesmo epítopo, exceto para possíveis anticorpos variantes, por exemplo, mutações ou variantes que ocorrem naturalmente que surgem durante a produção de uma preparação de anticorpo monoclonal, em que tais variantes podem estar presentes em quantidades menores. Em contrapartida a preparações de anticorpo policlonal que incluem tipicamente anticorpos diferentes direcionados contra determinantes diferentes (epítopos), cada mAb é direcionado contra um único determinante no antígeno. O modificador "monoclonal" não deve ser interpretado como exigindo a produção do anticorpo através de qualquer método particular.
[0221] Conforme usado no presente documento, o termo “farmaceuticamente aceitável” se refere a esses compostos, materiais, composições e/ou formas de dosagem que são adequados para entrar em contato com os tecidos de um indivíduo, como um mamífero(por exemplo, um ser humano) sem toxicidade excessiva, irritação, resposta alérgica e outras complicações problemáticas proporcionais a uma razão de benefício/risco.
[0222] Conforme usado no presente documento, o termo “composição farmacêutica” significa uma mistura contendo um composto terapêutico a ser administrado a um indivíduo, como um mamífero, por exemplo, um ser humano, a fim de prevenir, tratar ou controlar uma doença ou afecção particular que afeta o mamífero, como um distúrbio autoimune, câncer ou distúrbio sanguíneo dentre outros, por exemplo, conforme descrito no presente documento.
[0223] Conforme usado no presente documento, o termo “receptor” se refere a um paciente que recebe um transplante, como um transplante contendo uma população de células-tronco hematopoiéticas. As células transplantadas administradas a um receptor podem ser, por exemplo, células autólogas, singênicas ou alogênicas.
[0224] Conforme usado no presente documento, o termo “rejeição” no contexto de um transplante, como um enxerto de célula-tronco hematopoiética, se refere ao processo pelo qual um receptor monta uma resposta imune contra um transplante recebido, reduzindo, desse modo, a capacidade da matéria transplantada (por exemplo, células-tronco hematopoiéticas) de persistir no receptor.
A rejeição de um enxerto transplantado, como um enxerto de célula-tronco hematopoiética, pode ser quantificada, por exemplo, ao medir a quantidade ou concentração de células transplantadas em várias amostras isoladas de um paciente em pontos de tempos distintos após o transplante. Uma constatação de que a quantidade ou concentração de células transplantadas em amostras isoladas do paciente diminui ao longo do tempo, por exemplo, em cerca de 20%, cerca de 25%, cerca de 30%, cerca de 35%, cerca de 40%, cerca de 56%, cerca de 50%, cerca de 55%, cerca de 60%, cerca de 65%, cerca de 70%, cerca de 75%, cerca de 80%, cerca de 85%, cerca de 90%, cerca de 95% ou mais, indica que o paciente está sofrendo de rejeição de enxerto. Por outro lado, uma constatação de que a quantidade ou concentração de células transplantadas em amostras isoladas do paciente permanece estável ao longo do tempo, por exemplo, ao diminuir em menos de cerca de 20%, cerca de 15%, cerca de 10%, cerca de 5% ou menos, indica que o paciente não está sofrendo de rejeição de enxerto. Alternativamente, a rejeição de enxerto pode ser quantificada ao medir a quantidade ou concentração de células imunes, como células T e/ou células NK, que cruzam com antígenos de MHC expressados pelas células transplantadas em várias amostras isoladas de um paciente em pontos de tempo distintos após o transplante. Uma constatação de que a quantidade ou concentração de células imunes, como células T e/ou células NK,
que cruzam com antígenos de MHC expressados pelas células transplantadas em amostras isoladas do paciente aumenta ao longo do tempo, por exemplo, em cerca de 10%, cerca de 15%, cerca de 20%, cerca de 25%, cerca de 30%, cerca de 35%, cerca de 40%, cerca de 56%, cerca de 50%, cerca de 55%, cerca de 60%, cerca de 65%, cerca de 70%, cerca de 75%, cerca de 80%, cerca de 85%, cerca de 90%, cerca de 95%, cerca de 100%, cerca de 200%, cerca de 300% ou mais, indica que o paciente está sofrendo de rejeição de enxerto. Por outro lado, uma constatação de que a quantidade ou concentração de células imunes, como células T e/ou células NK, que cruzam com antígenos de MHC expressados pelas células transplantadas em amostras isoladas do paciente diminui ao longo do tempo, por exemplo, em cerca de 20%, cerca de 25%, cerca de 30%, cerca de 35%, cerca de 40%, cerca de 56%, cerca de 50%, cerca de 55%, cerca de 60%, cerca de 65%, cerca de 70%, cerca de 75%, cerca de 80%, cerca de 85%, cerca de 90%, cerca de 95% ou mais, indica que o paciente não está sofrendo de rejeição de enxerto.
[0225] Conforme usado no presente documento, o termo “amostra” se refere a um espécime (por exemplo, sangue, componente sanguíneo (por exemplo, soro ou plasma), urina, saliva, fluido amniótico, fluido cerebroespinhal, tecido (por exemplo, placental ou dérmico), fluido pancreático, amostra de vilosidades coriónicas e células) tomada de um indivíduo. Conforme usado no presente documento, o termo “scFv” se refere a um anticorpo de Fv de cadeia única no qual os domínios variáveis da cadeia pesada e da cadeia leve de um anticorpo forma unidos para formar uma cadeia. Os fragmentos de scFv contêm uma única cadeia de polipeptídeo que inclui a região variável de uma cadeia leve (VL) de anticorpo (por exemplo, CDR-L1, CDR- L2 e/ou CDR-L3) e a região variável de uma cadeia pesada (VH) de anticorpo (por exemplo, CDR-H1, CDR-H2 e/ou CDR-H3) separadas por um ligante. O ligante que une as regiões de VL e VH de um fragmento de scFv pode ser um ligante de peptídeo composto de aminoácidos protenoigênicos. Ligantes alternativos podem ser usados com a finalidade de aumentar a resistência do fragmento de scFv à degradação proteolítica (por exemplo, aminoácidos D contendo ligantes), a fim de melhorar a solubilidade do fragmento de scFv (por exemplo, ligantes hidrofílicos como ligantes contendo polietileno glicol ou polipeptídeos contendo resíduos de glicina e serina repetidos), aprimorar a estabilidade biofísica da molécula (por exemplo, uma ligante contendo resíduos de cisteína que forma ligações de dissulfeto intramolecular e entre moléculas), atenuar a imunogenicidade do fragmento de scFv (por exemplo, ligantes contendo sítios de glicosilação). Deve ser entendido por um elemento com habilidade comum na técnica que as regiões variáveis das moléculas de scFv descritas no presente documento podem ser modificadas de modo que as mesmas variem na sequência de aminoácido da molécula de anticorpo a partir da qual as mesmas foram derivadas. Por exemplo, o nucleotídeo ou substituições de aminoácido que leva a substituições ou alterações conservadoras em resíduos de aminoácido pode ser produzido (por exemplo, em resíduos de CDR e/ou estruturais) com a finalidade de preservar ou melhorar a capacidade do scFv de se ligar ao antígeno reconhecido pela anticorpo correspondente.
[0226] Os termos "ligação específica" ou "se liga especificamente" na referência à interação de um anticorpo ou um fragmento de anticorpo com uma segundo espécie química significa que a interação é dependente da presença de uma estrutura particular (por exemplo, um determinante antigênico ou um epítopo) na espécie química; por exemplo, um anticorpo reconhece e se liga a uma estrutura proteica específica em vez de proteínas em geral. Se um anticorpo for específico para epítopo "A", a presença de uma presença de uma molécula contendo epítopo A (ou A não marcado e livre) em uma reação contendo epítopo "A" marcado e o anticorpo reduzirá a quantidade de epítopo A marcado ligado ao anticorpo. Em uma modalidade, um anticorpo se liga especificamente a um alvo, por exemplo, CD2, se o anticorpo tiver uma KD para o alvo de pelo menos cerca de 104 M, cerca de 105 M,
cerca de 106 M, cerca de 107 M, cerca de 108 M, cerca de 109 M, cerca de 1010 M, cerca de 1011 M, cerca de 1012 M ou menos (menos significando um número que é menor que 1012, por exemplo, 1013). Em uma modalidade, o termo "ligação específica a CD2” ou "se liga especificamente a CD2", conforme usado no presente documento, se refere a um anticorpo ou que se liga a CD2 e tem um constante de dissociação (KD) de 1,0 x 107 M ou menos conforme determinado através de ressonância ,plasmônica de superfície. Em uma modalidade, KD é determinada de acordo com interferometria de biocamada (BLI) padrão. Entretanto, deve ser entendido que o anticorpo pode ter capacidade de se ligar especificamente a dois ou mais antígenos que são relacionados na sequência. Por exemplo, em uma modalidade, um anticorpo pode se ligar especificamente tanto a ortólogos humanos quanto a ortólogos não humanos (por exemplo, camundongo ou primata não humano) de CD2.
[0227] Conforme usado no presente documento, os termos “indivíduo” e “paciente” se referem a um mamífero, como um ser humano, que recebe tratamento para uma doença ou afecção particular conforme descrito no presente documento.
Por exemplo, um paciente, como um paciente humano, pode ser um paciente que está sofrendo de uma doença autoimune descrita no presente documento, e pode ser administrado um anticorpo anti-CD2 ou um conjugado de anticorpo-fármaco descrito no presente documento com a finalidade de (i) depletir uma população de células autoimunes (por exemplo, a população de células T e/ou células NK autoimunes de CD2+) e/ou (ii) depletir uma população de células imunes de CD2+ (por exemplo, células T e/ou células NK de CD2+ que cruzam com um antígeno não auto expressado por células-tronco hematopoiéticas (por exemplo, um antígeno não auto-MHC), prevenindo ou reduzindo, desse modo, a probabilidade de rejeição de enxerto antes da terapia de transplante de célula-tronco hematopoiética.
[0228] Conforme usado no presente documento, a expressão “eliminada substancialmente do sangue” se refere a um ponto no tempo após a administração de um agente terapêutico (como um anticorpo anti-CD2 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo) a um paciente quando a concentração do agente terapêutico em uma amostra sanguínea isolada do paciente é de modo que o agente terapêutico não seja detectável por meios convencionais (por exemplo, de modo que o agente terapêutico não seja detectável acima do limite de ruído do dispositivo ou ensaio usado para detectar o agente terapêutico). Uma variedade de técnicas conhecidas na técnica pode ser usada para detectar anticorpos ou fragmentos de anticorpo, como ensaios de detecção com base no ELISA conhecidos na técnica ou descritos no presente documento. Ensaios adicionais que podem ser usados para detectar anticorpos e fragmentos de anticorpo incluem técnicas de imunoprecipitação e ensaios de imunotransferência dentre outros conhecidos na técnica.
[0229] Conforme usado no presente documento, a expressão “tronco distúrbio de célula" se refere amplamente a qualquer doença, distúrbio ou afecção que pode ser tratada ou curada ao condicionar tecidos-alvo de um indivíduo, por exemplo, ao ablacionar uma população de células T endógenas em um tecido-alvo), e/ou ao enxertar ou transplantar células-tronco em tecidos-alvo de um indivíduo. Por exemplo, pacientes com diabetes do tipo 1 mostraram estar curados através de transplante de célula-tronco hematopoiética e podem se beneficiar do condicionamento de acordo com as composições e métodos descritos no presente documento. Distúrbios adicionais que podem ser tratados com o uso das composições e métodos descritos no presente documento incluem, sem limitação, anemia falciforme, talassemias, anemia de Fanconi, síndrome de Wiskott-Aldrich , ADA SCID, HIV/AIDS, leicodistrofia metacromática, anemia de Diamond-Blackfan e síndrome de Schwachman-Diamond. O indivíduo pode ter ou ser afetado por um distúrbio sanguíneo herdado (por exemplo, anemia falciforme) ou um distúrbio autoimune. Adicional ou alternativamente, o indivíduo pode ter ou ser afetado por malignidade como uma malignidade selecionada a partir do grupo que consiste em cânceres hematológicos (por exemplo, leucemia, linfoma, mieloma múltiplo ou síndrome mielodisplástica) e neuroblastoma. Em algumas modalidades, o indivíduo tem ou é, de outro modo, afetado por um distúrbio metabólico. Por exemplo, o indivíduo pode sofrer ou ser, de outro modo, afetado por um distúrbio metabólico selecionado a partir do grupo que consiste em doenças de armazenamento do glicogênio, mucopolissacaridoses, Doença de Gaucher, Doença de Hurler, espingolipidoses, leicodistrofia metacromática ou quaisquer outras doenças ou distúrbios que podem se beneficiar dos tratamentos e terapias reveladas no presente documento e incluindo, sem limitação, imunodeficiência combinada grave, síndrome de Wiscott-Aldrich, síndrome de hiperimunoglobulina M (IgM), doença de Chediak-Higashi, linfo-histiocitose hereditária, osteopetrose, osteogênese imperfeita, doenças de armazenamento, talassemia principal, doença das células falciformes, esclerose sistêmica, lúpus eritematoso sistêmico, esclerose múltipla, artrite rematoide juvenil e essas doenças ou distúrbios descritos em "Bone Marrow Transplantation for Non-Malignant Disease", ASH Education Book, 1 :319 a 338 (2000), cuja revelação é incorporada em sua totalidade a título de referência no presente documento no que se refere a patologias que podem ser tratadas através de administração de terapia de transplante de célula-tronco hematopoiética.
[0230] Conforme usado no presente documento, o termo “transfecção” se refere a qualquer uma dentre uma variedade ampla de técnicas comumente usada para a introdução de DNA exógeno em uma célula hospedeira procariótica ou eucariótica, como eletroporação, lipofecção, precipitação de fosfato e cálcio, transfecção com DEAE-dextrano e similares.
[0231] Conforme usado no presente documento, os termos “tratar” ou “tratamento” se referem ao tratamento terapêutico no qual o objetivo consiste em prevenir ou desacelerar (reduzir) uma alteração ou distúrbio fisiológico indesejado ou promover um fenótipo benéfico no paciente que está sendo tratado. Os resultados clínicos benéficos e desejados incluem, mas não se limitam a, uma redução na quantidade de células autoimunes presente em uma amostra isolada do paciente, como uma população de células T e/ou células NK de CD2+ que cruzam com um antígeno auto no caso de tratamento de um distúrbio autoimune direto, ou com um antígeno não auto expressado por células-tronco hematopoiéticas (por exemplo, um antígeno não auto-MHC) antes do transplante de célula-tronco hematopoiética no caso de tratamento de uma doença autoimune através de administração de um anticorpo anti-CD2, de um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo e de um enxerto de célula-tronco hematopoiética. Os resultados benéficos adicionais incluem um aumento na concentração relativa ou contagem celular de células-tronco hematopoiéticas em um paciente em necessidade de um transplante de célula- tronco hematopoiética após a terapia de condicionamento e a administração subsequente de um enxerto de célula-tronco hematopoiética exógena ao paciente.
Os resultados benéficos de terapia descritos no presente documento podem incluir também um aumento na contagem celular ou concentração relativa de uma ou mais células de linhagem hematopoiética, como um megacariócito, um trombócito, uma plaqueta, um eritrócito, um mastócito, um mieloblasto, um basófilo, um neutrófilo, eosinófilo, célula microglial, granulócito, monócito, osteoclasto, célula que apresenta antígeno, macrófago, célula dendrítica, célula exterminadora natural, linfócito T ou linfócito B, após a terapia de condicionamento e a terapia de transplante de célula- tronco hematopoiética subsequente.
[0232] Conforme usado no presente documento, os termos “variante” e “derivado” são usados de modo intercambiável e se referem aos análogos que ocorrem naturalmente, sintéticos e semissintéticos de um composto, peptídeo, proteína ou outra substância descrita no presente documento. Uma variante ou derivada de um composto, peptídeo, proteína ou outra substância descrita no presente documento pode reter ou aprimorar após a atividade biológica do material original.
[0233] Conforme usado no presente documento, o termo “vetor” inclui um vetor de ácido nucleico, como um plasmídeo, um vetor de DNA, um plasmídeo, um vetor de RNA, vírus ou outro replicão adequado. Os vetores de expressado descritos no presente documento podem conter uma sequência de polinucleotídeo assim como, por exemplo, elementos de sequência adicionais usados para a expressão de proteínas e/ou a integração dessas sequências de polinucleotídeo no genoma de uma célula de mamífero. Certos vetores que podem ser usados para a expressão de anticorpos e fragmentos de anticorpo da invenção incluem plasmídeos que contêm sequências reguladoras, como regiões promotoras e melhoradoras que direcionam a transcrição de gene. Outros vetores úteis para a expressão de anticorpos ou fragmentos de anticorpo contém sequências de polinucleotídeo que melhoram a taxa de tradução desses genes ou aprimoram a estabilidade ou exportação nuclear do mRNA que resulta da transcrição de gene. Esses elementos de sequência podem incluir, por exemplo, regiões não traduzidas 5’ e 3’ e um sítio de sinal de poliadenilação a fim de direcionar transcrição eficiente do gene carregado no vetor de expressão. Os vetores de expressão descritos no presente documento podem conter também um polinucleotídeo que codifica um marcador para seleção de células que contêm tal vetor. Exemplos de um marcador adequado incluem genes que codificam resistência a antibióticos, como ampicilina, cloranfenicol, canamicina e nourseotricina.
[0234] Conforme usado no presente documento, o termo “alquila” se refere a um grupo alquila de cadeia linear ou ramificada que tem, por exemplo, de 1 a 20 átomos de carbono na cadeia. Exemplos de grupos alquilas incluem metila, etila, n- propila, isopropila, butila, isobutila, sec-butila, terc-butila, pentila, isopentila, terc- pentila, hexila, iso-hexila e similares.
Conforme usado no presente documento, o termo “alquileno” se refere a um grupo alquila divalente de cadeia linear ou ramificada. As posições bivalentes podem estar no mesmo átomo ou em átomos diferentes na cadeia alquila. Exemplo de alquileno incluem metileno, etileno, propileno, isopropileno e similares.
[0235] Conforme usado no presente documento, o termo “heteroalquila” se refere a um grupo alquila de cadeia linear ou ramificada que tem, por exemplo, de 1 a 20 átomos de carbono na cadeia e contém ainda um ou mais heteroátomos (por exemplo, oxigênio, nitrogênio ou enxofre dentre outros) na cadeia.
[0236] Conforme usado no presente documento, o termo “heteroalquileno” se refere a um grupo heteroalquila divalente de cadeia linear ou ramificada. As posições bivalentes podem estar no mesmo átomo ou em átomos diferentes na cadeia heteroalquila. As posições bivalentes podem ser um ou mais heteroátomos.
[0237] Conforme usado no presente documento, o termo “alquenila” se refere a um grupo alquenila de cadeia linear ou ramificada que tem, por exemplo, de 2 a 20 átomos de carbono na cadeia. Exemplos de grupos alquenila incluem vinila, propenila, isopropenila, butenila, terc-butenila, hexenila e similares. Conforme usado no presente documento, o termo “alquenileno” se refere a um grupo alquenila divalente de cadeia linear ou ramificada. As posições bivalentes podem estar no mesmo átomo ou em átomos diferentes na cadeia alquenila. Exemplos de alquenileno incluem etenileno, propenileno, isopropenileno, butenileno e similares.
[0238] Conforme usado no presente documento, o termo “heteroalquenila” se refere a um grupo alquenila de cadeia linear ou ramificada que tem, por exemplo, de 2 a 20 átomos de carbono na cadeia, e contém ainda um ou mais heteroátomos (por exemplo, oxigênio, nitrogênio ou enxofre dentre outros) na cadeia.
[0239] Conforme usado no presente documento, o termo “heteroalquenileno” se refere a um grupo heteroalquenila divalente de cadeia linear ou ramificada. As posições bivalentes podem estar no mesmo átomo ou em átomos diferentes na cadeia heteroalquenila. As posições bivalentes podem ser um ou mais heteroátomos.
[0240] Conforme usado no presente documento, o termo “alquinila” se refere a um grupo alquinila de cadeia linear ou ramificada, por exemplo, de 2 a 20 átomos de carbono na cadeia. Exemplos de grupos alquinila incluem propargila, butinila, pentinila, hexinila e similares.
[0241] Conforme usado no presente documento, o termo “alquinileno” se refere a um grupo alquinila divalente de cadeia linear ou ramificada. As posições bivalentes podem estar no mesmo átomo ou em átomos diferentes na cadeia alquinila.
[0242] Conforme usado no presente documento, o termo “heteroalquinila” se refere a um grupo alquinila de cadeia linear ou ramificada que tem, por exemplo, de 2 a 20 átomos de carbono na cadeia, e contém ainda um ou mais heteroátomos (por exemplo, oxigênio, nitrogênio ou enxofre dentre outros) na cadeia.
[0243] Conforme usado no presente documento, o termo “heteroalquinileno” se refere a um grupo heteroalquinila divalente de cadeia linear ou ramificada. As posições bivalentes podem estar no mesmo átomo ou em átomos diferentes na cadeia heteroalquinila. As posições bivalentes podem ser um ou mais heteroátomos.
[0244] Conforme usado no presente documento, o termo “cicloalquila” se refere a uma estrutura de anel monocíclico ou fundido, em ponte ou espiro policíclico que é saturado e tem, por exemplo, de 3 a 12 átomos de carbono no anel. Exemplos de grupo cicloaquila incluem ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclo-hexila, ciclo- heptila, ciclo-octila, biciclo[3.1.0]-hexano e similares.
[0245] Conforme usado no presente documento, o termo “cicloalquileno” se refere a um grupo cicloalquila divalente. As posições bivalentes podem estar no mesmo átomo ou em átomos diferentes na estrutura de anel. Exemplos de cicloalquileno incluem ciclopropileno, ciclobutileno, ciclopentileno, ciclohexileno e similares.
[0246] Conforme usado no presente documento, o termo “heterocicloalquila” se refere a uma estrutura de anel monocíclico ou fundido, em ponte ou espiro policíclico que é saturado e tem, por exemplo, de 3 a 12 átomos no anel por estrutura de anel selecionados a partir de átomos de carbono e heteroátomos selecionados a partir de, por exemplo, nitrogênio, oxigênio e enxofre dentre outros. A estrutura de anel pode conter, por exemplo, um ou mais grupos oxo em membros de anel de carbono, nitrogênio ou enxofre. Exemplos de heterocicloalquillas incluem a título de exemplo e sem limitação di-hidroipiridila, tetra-hidropiridila (piperidila), tetra- hidrotiofenila, piperidinila, 4-piperidonila, pirrolidinila, 2-pirrolidonila, tetra- hidrofuranila, tetra-hidropiranila, bis-tetra-hidropiranila, tetra-hidroquinolinila, tetra- hidroisoquinolinila, deca-hidroquinolinila, octa-hidroisoquinolinila, piperazinila, quinuclidinila e morfolinila. Conforme usado no presente documento, o termo “heterocicloalquileno” se refere um grupo heterocicloalquila divalente. As posições bivalentes podem estar no mesmo átomo ou em átomos diferentes na estrutura de anel.
[0247] Conforme usado no presente documento, o termo “arila” se refere a um sistema de anel monocíclico ou multicíclico contendo, por exemplo, de 6 a 19 átomos de carbono. Os grupos arila incluem, mas não se limitam a, fenila, fluorenila, naftila e similares. As posições bivalentes podem ser um ou mais heteroátomos.
[0248] Conforme usado no presente documento, o termo “arileno” se refere a um grupo arila divalente. As posições bivalentes podem estar no mesmo átomo ou em átomos diferentes.
[0249] Conforme usado no presente documento, o termo “heteroarila” se refere a um heteroaromático monocíclico ou um grupo heteroaromático de anel fundido bicíclico ou tricíclico no qual um ou mais átomos de anel é um heteroátomo, por exemplo, nitrogênio, oxigênio ou enxofre. Os grupos heteroarila incluem piridila, pirrolila, furila, tienila, imidazolila, oxazolila, isoxazolila, tiazolila, isotiazolila, pirazolila, 1,2,3-triazolila, 1,2,4-triazolila, 1,2,3- oxadiazolila, 1,2,4-oxadia-zolila, 1,2,5- oxadiazolila, 1,3,4-oxadiazolila, 1,3,4-triazinila, 1,2,3-triazinila,benzofurila, [2,3-di- hidro]benzofurila, isobenzofurila, benzotienila, benzotriazolila, isobenzotienila, indolila, isoindolila, 3H-indolila,benzimidazolila, imidazo[1,2-a]piridila, benzotiazolila, benzoxazolila, quinolizinila, quinazolinila, ftalazinila, quinoxalinila, cinolinila, naftiridinila, pirido[3,4-b]piridila, pirido[3,2-b]piridila, pirido[4,3-b]piridila, quinolila, isoquinolila, tetrazolila,5,6,7,8-tetra-hidroquinolila, 5,6,7,8-tetra-hidroisoquinolila, purinila, pteridinila, carbazolila, xantenila, benzoquinolila e similares.
[0250] Conforme usado no presente documento, o termo “heteroarileno” se refere a um grupo heteroarila divalente. As posições bivalentes podem estar no mesmo átomo ou em átomos diferentes. As posições bivalentes podem ser um ou mais heteroátomos.
[0251] Salvo se restrito de outro modo pela definição do substituinte individual, as frações químicas supracitadas, como grupos “alquila”, “alquileno”, “heteroalquila”, “heteroalquileno”, “alquenila”, “alquenileno”, “heteroalquenila”, “heteroalquenileno”, “alquinila”, “alquinileno”, “heteroalquinila”, “heteroalquinileno”, “cicloalquila”, “cicloalquileno”, “heterociclolalquila”, heterocicloalquileno”, “arila”, “arileno”, “heteroarila” e “heteroarileno”, podem ser opcionalmente substituídas por, por exemplo, de 1 a 5 substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em alquila, alquenila, alquinila, cicloalquila, heterocicloalquila, alquil arila, alquil heteroarila, alquil cicloalquila, alquil heterocicloalquila, amino, amônio, acila, acilóxi, acilamino, aminocarbonila, alcoxicarbonila, ureido, carbamato, arila, heteroarila, sulfinila, sulfonila, alcóxi, sulfanila, halogênio, carbóxi, trealometila, ciano, hidróxi, mercapto, nitro e similares. Os substituintes típicos incluem, mas não se limitam a, -
X, -R, -OH, -OR, -SH, -SR, NH2, -NHR, -N(R)2, -N+(R)3, -CX3, -CN, -OCN, -SON, - NCO, -NCS, -NO, -NO2, -N3, - NC(=O)H, -NC(=O)R, -C(=O)H, -C(=O)R, -C(=O)NH2, -C(=O)N(R)2, -SO3-, -SO3H, -S(=O)2R, - OS(=O)2R, -S(=O)2NH2-S(=O)2N(R)2, - S(=O)R, -OP(=O)(OH)2-OP(=O)(OR)2, -P(=O)(OR)2, - PO3, -PO3H2, -C(=O)X, - C(=S)R, -CO2H, -CO2R, -CO2-, -C(=S)OR, -C(=O)SR, -C(=S)SR, - C(=O)NH2,- C(=O)N(R)2, -C(=S)NH2,-C(=S)N(R)2, -C(=NH)NH2 e -C(=NR)N(R)2; em que cada X é selecionado independentemente para cada ocasião a partir de F, Cl, Br e I; e cada R é selecionado independentemente para cada ocasião a partir de alquila, arila, heterocicloalquila ou heteroarila, grupo de proteção e uma fração pró-fármaco.
Sempre que um grupo é descrito como "opcionalmente substituído", esse grupo pode ser substituído por um ou mais dos substituintes acima independentemente para cada ocasião. A substituição pode incluir situações nas quais os substituintes vizinhos tenham se submetido ao fechamento de anel, como fechamento de anel de substituintes funcionais vicinais, para formar, por exemplo, lactamas, lactonas, anidridos cíclicos, acetais, hemiacetais, tioacetais, aminais e hemiaminais, formados através de fechamento de anel, por exemplo, to fornecer um grupo de proteção.
[0252] Deve ser entendido que certas convenções de nomenclatura de radical podem incluir um monorradical ou um dirradical dependendo do contexto. Por exemplo, em que um substituinte exige dois pontos de ligação do restante da molécula, deve ser entendido que o substituinte é um dirradical. Por exemplo, um substituinte identificado como alquila que exige dois pontos de ligação inclui dirradicais como -CH2-, -CH2CH2-, -CH2CH(CH3)CH2- e similares. Outras convenções de nomenclatura de radical indicam claramente que o radical é um dirradical como "alquileno", "alquenileno", “arileno”, “heterocicloalquileno” e similares.
[0253] Sempre que um substituinte é retratado como dirradical (isto é, tem dois pontos de ligação ao restante da molécula), deve ser entendido que o substituinte pode ser ligado em qualquer configuração direcional salvo se indicado de outro modo.
Anticorpos Anti-CD2
[0254] A presente invenção tem como base em parte a constatação de que anticorpos anti-CD2 ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos podem ser usados para tratar diretamente cânceres e doenças autoimunes, por exemplo, devido à capacidade de tais agentes de exterminar células cancerosas de CD2+ (por exemplo, célula leucêmicas de CD2+) e células autoimunes de CD2+ (por exemplo, células T e/ou células NK autoimunes de CD2+). Em particular, um anticorpo anti- CD2 descrito no presente documento é conjugado com uma citotoxina através de um ligante. Assim, em que os anticorpos anti-CD2 são descritos, contempla-se também conjugados dos mesmos salvo se indicado de outro modo.
[0255] A invenção tem ainda como base em parte na constatação de que os anticorpos ou os fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos que têm capacidade de se ligar a CD2 podem ser usados como agentes terapêuticos para promover o enxertamento de células-tronco hematopoiéticas transplantadas em um paciente em necessidade de terapia de transplante ao prevenir ou reduzir a probabilidade de rejeição de enxerto mediada por célula imune. Por exemplo, os anticorpos anti-CD2 os fragmentos de ligação ao antígeno podem se ligar a CD2 de superfície celular expressada por células imunes como células T ou células NK que cruzam com, e montam uma resposta imune contra um ou mais antígenos não auto de célula-tronco hematopoiética como um ou mais antígenos não auto-MHC expressados pelas células-tronco hematopoiéticas. A ligação de tais anticorpos e de fragmentos de ligação ao antígeno às células imunes de CD2+ específicas de célula- tronco hematopoiética induzem a morte da célula imune ligada, por exemplo, por citoxicidade mediada por célula dependente de anticorpo ou pela ação de um agente citotóxico que é conjugado ao anticorpo ou ao fragmento de ligação ao antígeno do mesmo. A depleção de uma população de células imunes de CD2+ que cruzam com células-tronco hematopoiéticas não auto pode, assim, facilitar o enxertamento de transplantes de célula-tronco hematopoiética em um paciente em necessidade dos mesmos ao atenuar a capacidade do sistema imunológico do receptor de montar uma resposta imune contra o enxerto recebido. Dessa forma, um paciente que sofre de um distúrbio de célula-tronco, câncer, doença autoimune ou outro distúrbio sanguíneo descrito no presente documento pode ser tratado, pois um transplante de célula-tronco hematopoiética pode ser fornecido a um indivíduo a fim de repovoar uma linhagem de células que tem defeito e/ou é deficiente no indivíduo. O indivíduo pode estar deficiente em uma população de células devido, por exemplo, à quimioterapia que foi administrada ao indivíduo com o objetivo de erradicar células cancerosas, mas que, no processo, depletiu as células hematopoiéticas saudáveis também.
[0256] Por exemplo, assim, a invenção fornece composições e métodos de promover o enxertamento de células-tronco hematopoiéticas transplantadas através de administração de um anticorpo ou de um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que tem capacidade de se ligar a um antígeno expressado pelas células T.
Essa administração pode causar a depleção seletiva de uma população de células T endógenas, como células T de CD4+ e CD8+. Essa depleção seletiva de células T pode, por sua vez, prevenir rejeição de enxerto após o transplante de um enxerto de célula-tronco hematopoiética exógena (por exemplo, uma célula-tronco hematopoiética autóloga, alogênica ou singênica). Por exemplo, a depleção seletiva de células T de CD4+ e/ou CD8+ com o uso de um anticorpo anti-CD2, de um fragmento de ligação ao antígeno, de um conjugado de anticorpo-fármaco ou de um conjugado de anticorpo-fármaco conforme descrito no presente documento pode atenuar uma resposta imune mediada por célula T que pode ocorrer contra um enxerto de célula-tronco hematopoiética transplantada. A invenção tem como base em parte a constatação de que os anticorpos e os fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos que têm capacidade de se ligar a CD2 podem ser administrados a um paciente em necessidade de terapia de transplante de célula- tronco hematopoiética a fim de promover a sobrevivência e o potencial de enxertamento de células-tronco hematopoiéticas transplantadas.
[0257] O enxertamento de transplantes de célula-tronco hematopoiética devido à administração de anticorpos anti-CD2 ou de fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos pode se manifestar em uma variedade de medições empíricas.
Por exemplo, o enxertamento de células-tronco hematopoiéticas transplantadas pode ser avaliado ao analisar a quantidade de unidades de repovoamento competitivo (CRU) presente na medula óssea de um paciente após a administração de um anticorpo ou de um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que tem capacidade de se ligar a CD2 e a administração subsequente de um transplante de célula-tronco hematopoiética. Adicionalmente, um elemento pode observar o enxertamento de um transplante de célula-tronco hematopoiética ao incorporar um gene-repórter, como uma enzima que catalisa uma reação química que rende um produto fluorescente, cromofórico ou luminescente em um vetor com o qual as
[0258] células-tronco hematopoiéticas de doador foram transfectadas e ao monitorar subsequentemente o sinal correspondente em um tecido para os quais as células-tronco hematopoiéticas retornaram, como a medula óssea. Um elemento pode observar também o enxertamento de célula-tronco hematopoiética através de avaliação da quantidade e sobrevivência de células- tronco hematopoiéticas e progenitoras, por exemplo, conforme determinado através de métodos de análise de classificação de célula ativada por fluorescência (FACS) conhecidos na técnica. O enxertamento pode ser determinado também ao medir contagens de glóbulos brancos no sangue periférico durante um período após o transplante, e/ou ao medir a recuperação de células de medula por células doadoras em uma amostra aspirada de medula óssea. As seções a seguir fornecem uma descrição de anticorpos ou de fragmentos de ligação ao antígeno do mesmos que podem ser administrados a um paciente em necessidade de terapia de transplante de célula-tronco hematopoiética a fim de promover o enxertamento de enxertos de célula-tronco hematopoiética assim como métodos de administrar tais agentes terapêuticos a um paciente antes do transplante de célula-tronco hematopoiética.
Anticorpos Exemplificativos
[0259] As composições e métodos descritos no presente documento incluem um anticorpo ou um fragmento do mesmo que se liga especificamente a CD2 humano. O CD2 humano é chamado também de Antígeno de Superfície de Célula T T11 /Leu-5, T1 1, antígeno CD2 (p50) e de Receptor de Glóbulos Vermelhos de Ovinos (SRBC). CD2 é expressado nas células T. Duas isoformas de CD2 humano foram identificadas. A isoforma 1 contém 351 aminoácidos é descrita em Seed, B. et al. (1987) 84: 3365 a 69 (Consulte também Sewell et al. (1986) 83: 8718 a 22) e abaixo em (Sequência de Referência de NCBI: NP_001758.2).
msfpckfvas fllifnvssk gavskeitna letwgalgqd inldipsfqm sddiddikwe ktsdkkkiaq frkeketfke kdtyklfkng tlkikhlktd dqdiykvsiy dtkgknvlek ifdlkiqerv skpkiswtci nttltcevmn gtdpelnlyq dgkhlklsqr vithkwttsl sakfkctagn kvskessvep vscpekgldi yliigicggg sllmvfvall vfyitkrkkq rsrrndeele trahrvatee rgrkphqipa stpqnpatsq hpppppghrs qapshrpppp ghrvqhqpqk rppapsgtqv hqqkgpplpr prvqpkpphg aaenslspss n (SEQ ID n°: 13) Uma segundo isoforma de CD2 tem 377 aminoácidos e é identificada como Sequência de Referência de NCBI: NP_001315538.1 no presente documento.
[0260] Foi mostrado que as células T e as células NK expressam CD2 que é uma molécula de adesão celular e um marcador específico para tais linfócitos. Por exemplo, CD2 interage com outras moléculas de adesão, como antígeno-3 associado à função de linfócito (LFA-3/CD58) para potencializar a ativação de célula
T. Anticorpos e fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos que têm capacidade de se ligar aCD2 podem suprimir a ativação de célula T e respostas imunes mediadas por célula T contra enxertos de célula-tronco hematopoiética, por exemplo, ao inibir a interação entre CD2 e LFA-3. Anticorpos e fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos que se ligam a esse antígeno de superfície celular podem ser identificados com o uso de técnicas mostradas na técnica e de descritas no presente documento, incluindo imunização, técnicas de modelagem computacional e métodos de seleção in vitro, como as plataformas de exibição de fago e exibição com base na célula descritas abaixo.
[0261] A presente invenção abrange anticorpos e fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos que se ligam a um polipeptídeo de CD2, por exemplo, um polipeptídeo de CD2 humano, e usos dos mesmos. Em uma modalidade exemplificativa, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga especificamente a um polipeptídeo de CD2 compreende uma região variável de cadeia pesada e uma região variável de cadeia leve.
[0262] Em uma modalidade, a região variável de cadeia pesada compreende uma ou mais regiões determinantes de complementaridade (CDRs). Em uma modalidade, a região variável de cadeia pesada compreende uma CDR1 de VH compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID n°:1. Em uma modalidade, a região variável de cadeia pesada compreende uma CDR3 de VH compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID n°:2. Em uma modalidade, a região variável de cadeia pesada compreende uma CDR3 de VH compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID n°:3. Em uma modalidade, a região variável de cadeia pesada compreende uma ou mais CDRs de VH selecionadas a partir do grupo que consiste em SEQ ID n°:1, SEQ ID n°:2 e SEQ ID n°:3. Em uma modalidade, a região variável de cadeia pesada compreende duas ou mais CDRs de VH selecionadas a partir do grupo que consiste em SEQ ID n°:1, SEQ ID n°:2 e SEQ ID n°:3. Em uma modalidade, a região variável de cadeia pesada compreende uma CDR1 de VH compreendendo a SEQ ID n°:1, uma CDR2 de VH compreendendo a SEQ ID n°:2 e um CDR3 de VH compreendendo a SEQ ID n°:3.
[0263] Em uma modalidade, a região variável de cadeia leve compreende uma ou mais regiões determinantes de complementaridade (CDRs). Em uma modalidade, a região variável de cadeia leve compreende uma CDR1 de VL compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID n°:4. Em uma modalidade, a região variável de cadeia leve compreende uma CDR2 de VL compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID n°:5. Em uma modalidade, a região variável de cadeia leve compreende uma CDR3 de VL compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID n°:6. Em uma modalidade, a região variável de cadeia leve compreende uma ou mais CDRs de VL selecionadas a partir do grupo que consiste em SEQ ID n°:4, SEQ ID n°:5 e SEQ ID n°:6. Em uma modalidade, a região variável de cadeia leve compreende duas ou mais CDRs de VL selecionadas a partir do grupo que consiste em SEQ ID n°:4, SEQ ID n°:5 e SEQ ID n°:6. Em uma modalidade, a região variável de cadeia leve compreende uma CDR1 de VL compreendendo a SEQ ID n°:4, uma CDR2 de VL compreendendo a SEQ ID n°:5 e uma CDR3 de VL compreendendo a SEQ ID n°:6.
[0264] Em uma modalidade exemplificativa, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende uma CDR1 de VH compreendendo a SEQ ID n°:1, uma CDR2 de VH compreende a SEQ ID n°:2, e uma CDR3 de VH compreendendo a SEQ ID n°:3 e uma região variável de cadeia leve que compreende uma CDR1 de VL compreendendo a SEQ ID n°:4, uma CDR2 de VL compreendendo a SEQ ID n°:5 e uma CDR3 de VL compreendendo a SEQ ID n°:6.
[0265] Em certas modalidades, uma ou mais CDRs (isto é, uma ou mais CDRs de cadeia pesada que tem SEQ ID n°: 1 a 3 e/ou uma ou mais CDRs de cadeia leve que tem SEQ ID n°: 4 a 6) podem compreender uma substituição de aminoácido conservadora (ou 2, 3, 4 ou 5 substituições de aminoácido) enquanto retém a especificidade de CD2 do anticorpo (isto é, especificidade similar a um anticorpo ou a um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que compreende CDRs de cadeia pesada de SEQ ID n°: 1 a 3 e CDRs de cadeia leve de SEQ ID n°:4 a 6).
[0266] Em uma modalidade, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácido apresentada na SEQ ID n°: 7. Em uma outra modalidade, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácido que tem pelo menos 95% de identidade com a SEQ ID n°: 7, por exemplo, pelo menos 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade com a SEQ ID n°: 7. Em certas modalidades, um anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada (HC) modificada compreendendo um domínio variável de HC compreendendo SEQ ID n°: 7 ou uma variante da SEQ ID n°: 7, cuja variante (i) difere da SEQ ID n°: 7 em 1, 2, 3, 4 ou 5 substituições, adições ou deleções de aminoácidos; (ii) difere da SEQ ID n°: 7 na maior parte de 5, 4, 3, 2 ou 1 substituições, adições ou deleções de aminoácidos; (iii) difere da SEQ ID n°: 7 em 1 a 5, 1 a 3, 1 a 2, 2 a 5 ou 3 a 5 substituições, adições ou deleções de aminoácidos e/ou (iv) compreende uma sequência de aminoácido que é pelo menos cerca de 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à SEQ ID n°: 7, em que em qualquer um dentre (i) a (iv), uma substituição de aminoácido pode ser uma substituição de aminoácido conservadora ou uma substituição de aminoácido não conservadora; e onde a região variável de cadeia pesada modificada pode ter uma atividade biológica melhorada em relação à região variável de cadeia pesada da SEQ ID n°: 7, enquanto retém a especificidade de ligação a CD2 do anticorpo, isto é,
tem uma especificidade de ligação similar a um anticorpo ou a um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreendendo SEQ ID n°: 7. Em uma modalidade, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada que difere da sequência de aminoácido apresentada na SEQ ID n°: 7 em um, dois, três ou quatro aminoácidos. Por exemplo, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo pode compreender uma região variável de cadeia pesada que difere da sequência de aminoácido apresentada na SEQ ID n°: 7 em uma, duas, três ou quatro posições 12, 13, 28 e/ou
48. Em uma modalidade, a região variável de cadeia pesada difere da sequência de aminoácido apresentada na SEQ ID n°:7 nas posições 12, 13, 28 e 48. Em uma modalidade, a região variável de cadeia pesada compreende uma, duas, três ou quatro das substituições em relação ao conjunto de sequências apresentado na SEQ ID n°:7: K12Q; K13R; T28I e M48V. Em uma modalidade, a região variável de cadeia pesada compreende as substituições K12Q; K13R; T28I e M48V em relação à SEQ ID n°:7.
[0267] Em uma modalidade, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma região variável de cadeia leve que compreende a sequência de aminoácido apresentado na SEQ ID n°:8. Em uma outra modalidade, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma região variável de cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácido que tem pelo menos 95% de identidade com a SEQ ID n°:8, por exemplo, pelo menos 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade com a SEQ ID n°:8. Em certas modalidades, um anticorpo compreende uma região variável de cadeia leve (LC) modificada compreende um domínio variável de LC compreendendo SEQ ID n°: 8 ou uma variante da SEQ ID n°: 8, cuja variante (i) difere da SEQ ID n°: 8 em 1, 2, 3, 4 ou 5 substituições, adições ou deleções de aminoácidos; (ii) difere da SEQ ID n°: 8 na maior parte de 5, 4, 3, 2 ou 1 substituições, adições ou deleções de aminoácidos; (iii) difere da SEQ ID n°: 8 em 1 a 5, 1 a 3, 1 a 2, 2 a 5 ou 3 a 5 substituições, adições ou deleções de aminoácidos e/ou (iv) compreende uma sequência de aminoácido que é pelo menos cerca de 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à SEQ ID n°: 8, em que qualquer um dentre (i) a (iv), uma substituição de aminoácido pode ser uma substituição de aminoácido conservadora ou uma substituição de aminoácido não conservadora; e em que a região variável de cadeia leve modificada pode ter uma atividade biológica melhorada em relação à região variável de cadeia leve da SEQ ID n°:8, enquanto retém a especificidade de ligação a CD2 do anticorpo, isto é, tem uma especificidade de ligação similar a um anticorpo ou a um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreendendo a SEQ ID n°:8. Em uma modalidade exemplificativa, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácido que tem pelo menos 95% de identidade com a SEQ ID n°: 7, por exemplo, pelo menos cerca de 95%, cerca de 96%, cerca de 97%, cerca de 98%, cerca de 99% ou 100% de identidade com a SEQ ID n°: 7, e uma região variável de cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácido que tem pelo menos cerca de 95% de identidade com SEQ ID n°:8, por exemplo, pelo menos cerca de 95%, cerca de 96%, cerca de 97%, cerca de 98%, cerca de 99% ou 100% de identidade com a SEQ ID n°: 8. Em uma modalidade, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende a SEQ ID n°: 7, e uma região variável de cadeia leve que compreende a SEQ ID n°: 8. Em uma modalidade, o anticorpo é um anticorpo Ab1 que compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo a SEQ ID n°:7, e uma região variável de cadeia leve compreendendo a SEQ ID n°:8.
[0268] Em uma modalidade, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácido apresentada na SEQ ID n°:9. Em uma outra modalidade, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácido que tem pelo menos 95% de identidade com a SEQ ID n°:9, por exemplo, pelo menos cerca de 95%, cerca de 96%, cerca de 97%, cerca de 98%, cerca de 99% ou 100% de identidade com a SEQ ID n°:9. Em uma modalidade exemplificativa, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácido que tem pelo menos 95% de identidade com a SEQ ID n°:9, por exemplo, pelo menos cerca de 95%, cerca de 96%, cerca de 97%, cerca de 98%, cerca de 99% ou 100% de identidade com a SEQ ID n°:9, e uma região variável de cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácido que tem pelo menos cerca de 95% de identidade com a SEQ ID n°:10, por exemplo, pelo menos cerca de 95%, cerca de 96%, cerca de 97%, cerca de 98%, cerca de 99% ou 100% de identidade com a SEQ ID n°:10. Em uma modalidade, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende a SEQ ID n°:9, e uma região variável de cadeia leve que compreende a SEQ ID n°:10. Em uma modalidade, o anticorpo é um Ab1, um anticorpo que compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo a SEQ ID n°:9, e uma região variável de cadeia leve compreendendo a SEQ ID n°:10
[0269] Em uma modalidade, a região variável de cadeia pesada compreende uma ou mais regiões determinantes de complementaridade (CDRs). Em uma modalidade, a região variável de cadeia pesada compreende uma CDR1 de VH compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID n°:14. Em uma modalidade, a região variável de cadeia pesada compreende uma CDR2 de VH compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID n°:15. Em uma modalidade, a região variável de cadeia pesada compreende uma CDR16 de VH compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID n°:3. Em uma modalidade, a região variável de cadeia pesada compreende uma ou mais CDRs de VH selecionadas a partir do grupo que consiste em SEQ ID n°:14, SEQ ID n°:15 e SEQ ID n°:16. Em uma modalidade, a região variável de cadeia pesada compreende duas ou mais CDRs de V H selecionadas a partir do grupo que consiste em SEQ ID n°:14, SEQ ID n°:15 e SEQ ID n°:16.
[0270] Em uma modalidade, a região variável de cadeia pesada compreende de uma CDR1 de VH compreendendo a SEQ ID n°:14, uma CDR2 de VH compreendendo a SEQ ID n°:15, e uma CDR3 de VH compreendendo a SEQ ID n°:16. Em uma modalidade, a região variável de cadeia pesada compreende uma ou mais regiões determinantes de complementaridade (CDRs). Em uma modalidade, a região variável de cadeia pesada compreende uma CDR1 de VH compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID n°:14. Em uma modalidade, a região variável de cadeia pesada compreende uma CDR2 de VH compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID n°:15. Em uma modalidade, a região variável de cadeia pesada compreende uma CDR1 de VH compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID n°:3. Em uma modalidade, a região variável de cadeia pesada compreende uma ou mais CDRs de VH selecionadas a partir do grupo que consiste em SEQ ID n°:14, SEQ ID n°:15 e SEQ ID n°:17. Em uma modalidade, a região variável de cadeia pesada compreende duas ou mais CDRs de VH selecionadas a partir do grupo que consiste em SEQ ID n°:14, SEQ ID n°:15 e SEQ ID n°:17.Em uma modalidade, a região variável de cadeia pesada compreende uma CDR1 de VH compreendendo a SEQ ID n°:14, uma CDR2 VH compreendendo a SEQ ID n°:15, e uma CDR3 de VH compreendendo a SEQ ID n°:17.
[0271] Em uma modalidade, a região variável de cadeia leve compreende uma ou mais regiões determinantes de complementaridade (CDRs). Em uma modalidade, a região variável de cadeia leve compreende uma CDR 1 de VL compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID n°:18. Em uma modalidade, a região variável de cadeia leve compreende uma CDR2 de VL compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID n°:19. Em uma modalidade, a região variável de cadeia leve compreende uma CDR3 de VL compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID n°:20. Em uma modalidade, a região variável de cadeia leve compreende uma ou mais CDRs de VL selecionadas a partir do grupo que consiste em SEQ ID n°:18, SEQ ID n°:19 e SEQ ID n°:20. Em uma modalidade, a região variável de cadeia leve compreende duas ou mais CDRs de V L selecionadas a partir do grupo que consiste em SEQ ID n°:18, SEQ ID n°:19 e SEQ ID n°:20. Em uma modalidade, a região variável de cadeia leve compreende uma CDR1 de VL compreendendo a SEQ ID n°:18, uma CDR2 de VL compreendendo a SEQ ID n°:19 e uma CDR3 de VL compreendendo a SEQ ID n°:20.
[0272] Em uma modalidade exemplificativa, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende uma CDR1 de VH compreendendo a SEQ ID n°:14, uma CDR2 de VH compreende a SEQ ID n°:15, e uma CDR3 de VH compreendendo a SEQ ID n°:16, e uma região variável de cadeia leve que compreende uma CDR 1 de VL compreendendo a SEQ ID n°:18, uma CDR2 de VL compreendendo a SEQ ID n°:19, e uma CDR3 de VL compreendendo a SEQ ID n°:20.
[0273] Em uma modalidade exemplificativa, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende uma CDR1 de VH compreendendo a SEQ ID n°:14, uma CDR2 de VH compreendendo a SEQ ID n°:15, e uma CDR3 de VH compreendendo a SEQ ID n°:17, e uma região variável de cadeia leve que compreende uma CDR1 de VL compreendendo a SEQ ID n°:18, uma CDR2 de VL compreendendo a SEQ ID n°:19, e uma CDR3 de VL compreendendo a SEQ ID n°:20.
[0274] Em certas modalidades, uma ou mais CDRs (isto é, uma ou mais CDRs de cadeia pesada que tem SEQ ID n°: 14 a 17 e/ou uma ou mais CDRs de cadeia leve que tem SEQ ID n°: 18 a 19) podem compreender uma substituição de aminoácido conservadora (ou 2, 3, 4 ou 5 substituições de aminoácido) enquanto retém a especificidade de CD2 do anticorpo (isto é, especificidade similar a um anticorpo ou a um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que compreende CDRs de cadeia pesada de SEQ ID n°: 14 a 16 e CDRs de cadeia leve de SEQ ID n°:18 a 20; ou que compreende CDRs de cadeia pesada de SEQ ID n°: 14, 15, 17 e CDRs de cadeia leve de SEQ ID n°:18 a 20).
[0275] Em uma modalidade, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácido apresentada na SEQ ID n°: 21. Em uma outra modalidade, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácido que tem pelo menos cerca de 95% de identidade com a SEQ ID n°: 21, por exemplo, pelo menos cerca de 95%, cerca de 96%, cerca de 97%, cerca de 98%, cerca de 99% ou 100% de identidade com a SEQ ID n°: 21. Em certas modalidades, um anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada (HC) modificada compreendendo um domínio variável de HC compreendendo SEQ ID n°: 21 ou uma variante da SEQ ID n°: 21, cuja variante (i) difere da SEQ ID n°: 21 em 1, 2, 3, 4 ou 5 substituições, adições ou deleções de aminoácidos; (ii) difere da SEQ ID n°: 21 na maior parte de 5, 4, 3, 2 ou 1 substituições, adições ou deleções de aminoácidos; (iii) difere da SEQ ID n°: 21 em 1 a 5, 1 a 3, 1 a 2, 2 a 5 ou 3 a 5 substituições, adições ou deleções de aminoácidos e/ou (iv) compreende uma sequência de aminoácido que é pelo menos cerca de 75%, cerca de 80%, cerca de 85%, cerca de 90%, cerca de 95%, cerca de 96%, cerca de 97%, cerca de 98% ou cerca de 99% idêntica à SEQ ID n°: 21, em que em qualquer um dentre (i) a (iv),
uma substituição de aminoácido pode ser uma substituição de aminoácido conservadora ou uma substituição de aminoácido conservadora; e em que a região variável de cadeia pesada modificada pode ter uma atividade biológica melhorada em relação à região variável de cadeia pesada da SEQ ID n°: 21, enquanto retém a especificidade de ligação a CD2 do anticorpo, isto é, tem uma especificidade de ligação similar a um anticorpo ou a um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreendendo SEQ ID n°: 21.
[0276] Em uma modalidade, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácido apresentada na SEQ ID n°: 22. Em uma outra modalidade, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácido que tem pelo menos cerca de 95% de identidade com a SEQ ID n°: 22, por exemplo, pelo menos cerca de 95%, cerca de 96%, cerca de 97%, cerca de 98%, cerca de 99% ou 100% de identidade com a SEQ ID n°: 22. Em certas modalidades, um anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada (HC) modificada compreendendo um domínio variável de HC compreendendo SEQ ID n°: 21 ou uma variante da SEQ ID n°: 22, cuja variante (i) difere da SEQ ID n°: 22 em 1, 2, 3, 4 ou 5 substituições, adições ou deleções de aminoácidos; (ii) difere da SEQ ID n°: 22 na maior parte de 5, 4, 3, 2 ou 1 substituições, adições ou deleções de aminoácidos; (iii) difere da SEQ ID n°: 22 em 1 a 5, 1 a 3, 1 a 2, 2 a 5 ou 3 a 5 substituições, adições ou deleções de aminoácidos e/ou (iv) compreende uma sequência de aminoácido que é pelo menos cerca de 75%, cerca de 80%, cerca de 85%, cerca de 90%, cerca de 95%, cerca de 96%, cerca de 97%, cerca de 98% ou cerca de 99% idêntica à SEQ ID n°: 22, em que em qualquer um dentre (i) a (iv), uma substituição de aminoácido pode ser uma substituição de aminoácido conservadora ou uma substituição de aminoácido conservadora; e em que a região variável de cadeia pesada modificada pode ter uma atividade biológica melhorada em relação à região variável de cadeia pesada da SEQ ID n°: 22, enquanto retém a especificidade de ligação a CD2 do anticorpo, isto é, tem uma especificidade de ligação similar a um anticorpo ou a um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreendendo SEQ ID n°: 22.
[0277] Em uma modalidade, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma região variável de cadeia leve que compreende a sequência de aminoácido apresentado na SEQ ID n°:23. Em uma outra modalidade, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma região variável de cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácido que tem pelo menos cerca de 95% de identidade com a SEQ ID n°:23, por exemplo, pelo menos cerca de cerca de 95%, cerca de 96%, cerca de 97%, cerca de 98%, cerca de 99% ou 100% de identidade com a SEQ ID n°:23. Em certas modalidades, um anticorpo compreende uma região variável de cadeia leve (LC) modificada compreende um domínio variável de LC compreendendo SEQ ID n°: 23 ou uma variante da SEQ ID n°: 23, cuja variante (i) difere da SEQ ID n°: 23 em 1, 2, 3, 4 ou 5 substituições, adições ou deleções de aminoácidos; (ii) difere da SEQ ID n°: 23 na maior parte de 5, 4, 3, 2 ou 1 substituições, adições ou deleções de aminoácidos; (iii) difere da SEQ ID n°: 23 em 1 a 5, 1 a 3, 1 a 2, 2 a 5 ou 3 a 5 substituições, adições ou deleções de aminoácidos e/ou (iv) compreende uma sequência de aminoácido que é pelo menos cerca de 75%, cerca de 80%, cerca de 85%, cerca de 90%, cerca de 95%, cerca de 96%, cerca de 97%, cerca de 98% ou cerca de 99% idêntica à SEQ ID n°: 23, em que qualquer um dentre (i) a (iv), uma substituição de aminoácido pode ser uma substituição de aminoácido conservadora ou uma substituição de aminoácido não conservadora; e em que a região variável de cadeia leve modificada pode ter uma atividade biológica melhorada em relação à região variável de cadeia leve da SEQ ID n°:23, enquanto retém a especificidade de ligação a CD2 do anticorpo, isto é, tem uma especificidade de ligação similar a um anticorpo ou a um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreendendo a SEQ ID n°:23.
[0278] Em uma modalidade exemplificativa, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácido que tem pelo menos 95% de identidade com a SEQ ID n°: 21, por exemplo, pelo menos cerca de 95%, cerca de 96%, cerca de 97%, cerca de 98% ou cerca de 99% ou 100% de identidade com a SEQ ID n°: 21, e uma região variável de cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácido que tem pelo menos cerca de 95% de identidade com a SEQ ID n°:23, por exemplo, pelo menos cerca de 95%, cerca de 96%, cerca de 97%, cerca de 98% ou cerca de 99% ou 100% de identidade com a SEQ ID n°:23. Em uma modalidade, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende a SEQ ID n°: 21, e uma região variável de cadeia leve que compreende a SEQ ID n°: 23.
[0279] Em uma modalidade exemplificativa, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácido que tem pelo menos cerca de 95% de identidade com a SEQ ID n°: 22, por exemplo, pelo menos cerca de 95%, cerca de 96%, cerca de 97%, cerca de 98% ou cerca de 99% ou 100% de identidade com a SEQ ID n°: 22, e uma região variável de cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácido que tem pelo menos cerca de 95% de identidade com a SEQ ID n°:23, por exemplo, pelo menos cerca de 95%, cerca de 96%, cerca de 97%, cerca de 98% ou cerca de 99% ou 100% de identidade com a SEQ ID n°:23. Em uma modalidade, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende a SEQ ID n°: 22, e uma região variável de cadeia leve que compreende a SEQ ID n°: 23.
[0280] Os anticorpos anti-CD2 que podem ser usados em conjunto com as composições e métodos descritos no presente documento incluem os mesmos que têm uma ou mais ou todas as CDRs a seguir: a. uma CDR-H1 que tem a sequência de aminoácido EYYMY (SEQ ID n°: 1); b. uma CDR-H2 que tem a sequência de aminoácido RIDPEDGSIDYVEKFKK (SEQ ID n°: 2); c. uma CDR-H3 que tem a sequência de aminoácido GKFNYRFAY (SEQ ID n°: 3); d. uma CDR-L1 que tem a sequência de aminoácido RSSQSLLHSSGNTYLN (SEQ ID n°: 4); e. uma CDR-L2 que tem a sequência de aminoácido LVSKLES (SEQ ID n°: 5); e f. uma CDR-L3 que tem a sequência de aminoácido MQFTHYPYT (SEQ ID n°: 6).
[0281] São descritos anticorpos e fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos contendo as sequências de CDR supracitadas, por exemplo, na Patente n° US 6.849.258, cuja revelação é incorporada a título de referência no presente documento no que se refere a anticorpos anti-CD2 e fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos.
[0282] Os anticorpos e os fragmentos dos mesmos revelados nas Patentes n° US 5.730.979; n° US 5.817.311; n° US 5.951.983; e n° US 7.592.006; como LO- CD2a, BTI-322 e anticorpos produzidos pela linhagem celular de hibridoma depositada como Depósito ATCC n° HB 11423 (por exemplo, anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos contendo uma ou mais ou todas as sequências de CDR de anticorpo LO-CD2a isolado da linhagem celular de hibridoma depositada como Depósito ATCC n° HB 11423) podem ser usados em conjunto com as composições e métodos revelados no presente documento. Anticorpos exemplificativos que podem ser usados em conjunto com as composições e métodos descritos no presente documento incluem anticorpos humanizados contendo uma ou mais ou todas as sequências de CDR de um anticorpo isolado da linhagem celular de hibridoma depositada como Depósito ATCC n° HB 11423, como MEDI-507. MEDI-507 é um anticorpo monoclonal anti-CD2 humanizado que contém as sequências de CDR-H e CDR-L de (a) a (f) acima, e é descrito em Branco et al., Transplantation 68:1588 a 1596 (1999). MEDI-507 é ainda descrito nos documentos W099/03502A1 e W01994/020619A1; nas Patentes n° US 7.592.006, n° US
6.849.258, n° US 5.951.983, n° US 5.817.311 e n° US 5.730.979; e nas Publicações de Patente n° US 2011/0280868, n° US 2004/0265315 e n° US 2011/0091453, cujas revelações são incorporadas no presente documento a título de referência no que se referem a anticorpos anti-CD2 e fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos, como o anticorpo anti-CD2 MEDI-507. Em uma modalidade, o anticorpo anti-CD2 é Siplizumab ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.
[0283] As revelações do artigo do jornal científico e das Patentes US supracitados são incorporadas a título de referência no presente documento no que se referem a anticorpos anti-CD2 e fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos.
[0284] Outros anticorpos anti-CD2 que podem ser usados em conjunto com as composições e métodos descritos no presente documento incluem, por exemplo, anticorpos anti-CD2 que são descritos nos Patentes n° US 6.541.611 e n° US
7.250.167, cujas revelações são incorporadas a título de referência no presente documento no que se referem a anticorpos anti-CD2 e fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos, como o anticorpo anti-CD2 LO-CD2b e os anticorpos produzidos pela linhagem celular de hibridoma depositada como Depósito ATCC n° PTA-802. Anticorpos exemplificativos que podem ser usados em conjunto com as composições e métodos descritos no presente documento incluem anticorpos humanizados contendo uma ou mais ou todas as sequências de CDR de um anticorpo isolado da linhagem celular de hibridoma depositada como Depósito ATCC n° PTA-802.
[0285] Outros anticorpos anti-CD2 que podem ser usados em conjunto com as composições e métodos descritos no presente documento incluem, por exemplo, anticorpos anti-CD2 que são descritos nos Patentes n° US 5.795.572 e n° US 5,807,734, cujas revelações são incorporadas a título de referência no presente documento no que se referem a anticorpos anti-CD2 e fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos, como o anticorpo anti-CD2 produzido pela linhagem celular de hibridoma depositada como Depósito ATCC n° HB 69277. Por exemplo, anticorpos anti-CD2 e fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos que podem ser usados em conjunto com as composições e métodos descritos no presente documento incluem os mesmos que contêm uma região de dobradiça que tem uma sequência de aminoácido de EPKSSDKTHTSPPSP (SEQ ID n°: 17), como fragmentos de scFv contendo uma região de dobradiça que tem a sequência de aminoácido de EPKSSDKTHTSPPSP (SEQ ID n°: 17). A incorporação de uma região de dobradiça que tem a sequência de aminoácido da SEQ ID n°: 17 pode ser benéfica, pois esse motivo de dobradiça foi mutado em relação às sequências de região de dobradiça do tipo selvagem com a finalidade de eliminar resíduos de cisteína potencialmente reativos que promovem dimerização oxidativa indesejada de um fragmento de anticorpo de cadeia única, como um fragmento de scFv.
[0286] Outros anticorpos anti-CD2 que podem ser usados em conjunto com as composições e métodos descritos no presente documento incluem, por exemplo, anticorpos anti-CD2 que são descritos na Patente n° US 6.764.688, como o anticorpo anti-CD2 TS2/18 e anticorpos produzidos pela linhagem celular de hibridoma depositada como Depósito ATCC n° HB-195. A revelação da Patente n° US 6.764.688 é incorporada no presente documento a título de referência no que se refere a anticorpos anti-CD2 e fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos.
[0287] Outros anticorpos anti-CD2 que podem ser usados em conjunto com as composições e métodos descritos no presente documento incluem, por exemplo, anticorpos anti-CD2 que são descritos nas Patentes n° US. 6.162.432, n° US
6.558.662, n° US 7.408.039, n° US 7.332.157, n° US 7.638.121, n° US 7.939.062 e n° US 7.115.259, nas Publicações de Pedido de Patente n° US 2006/0084107, n° US 2014/0369974, n° US 2002/0051784 e n° US 2013/0183322, e na Publicação PCT n° WO1992/016563, cujas revelações são incorporadas a título de referência no que se refere a anticorpos anti-CD2 e fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos.
[0288] Anticorpos e fragmentos dos mesmos para uso em conjunto com os métodos descritos no presente documento incluem variantes desses anticorpos descritas acima, como fragmentos de anticorpo que contêm ou carecem de um domínio de Fc assim como variantes humanizadas de anticorpos não humanos descritas no presente documento e andaimes de proteína semelhante ao anticorpo(por exemplo, domínios de 10Fn3) contendo uma ou mais ou todas as CDRs ou regiões equivalentes das mesmas de uma anticorpo ou de um fragmento de anticorpo descrito no presente documento. Os fragmentos de ligação ao antígeno exemplificativos dos anticorpos supracitados incluem um domínio de imunoglobulina de variável dupla, uma molécula de FV de cadeia única (scFv), um diacorpo, um triacorpo, um nanocorpo, um andaime de proteína semelhante ao anticorpo, um fragmento de Fv, um fragmento de Fab, uma molécula de F(ab’)2 e um di-scFv tandem dentre outros. Em uma modalidade, o anticorpo anti-CD2 ou o fragmento de ligação do mesmo compreende uma região de Fc modificada, em que a dita região de Fc modificada compreende pelo menos uma modificação de aminoácido em relação a uma região de Fc do tipo selvagem de modo que a dita molécula tenha uma afinidade alterada ou ligação a um FcgamaR (FcyR). Certas posições de aminoácido na região de Fc são conhecidas através de estudos de cristalografia para entrar em contato direto com FcyR. Especificamente, os aminoácidos 234 a
239 (região de dobradiça), os aminoácidos 265 a 269 (alça B/C), os aminoácidos 297 a 299 (alça C7E) e os aminoácidos 327 a 332 (alça F/G) (consulte Sondermann et al., 2000 Nature, 406: 267 a 273. Os anticorpos descritos no presente documento podem compreender regiões de Fc variantes que compreendem modificação de pelo menos um resíduo que entra em contato direto com um FcyR com base em análise estrutural e cristalográfica. Em uma modalidade, a região de Fc do anticorpo anti- CD2 (ou do fragmento do mesmo) compreende uma substituição de aminoácido no aminoácido 265 de acordo com o índice EU como em Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5ª Ed. Public Health Service, NH1, MD (1991), incorporado expressamente a título de referências no presente documento. O “índice EU como em Kabat" se refere à numeração do anticorpo EU lgG1 humano. Em uma modalidade, a região de Fc compreende uma mutação D265A. Em uma modalidade, a região de Fc compreende uma mutação D265C. Em algumas modalidades, a região de Fc do anticorpo (ou do fragmento do mesmo) compreende uma substituição de aminoácido no aminoácido 234 de acordo com o índice de EU como em Kabat. Em uma modalidade, a região de Fc compreende uma mutação L234A.
Em algumas modalidades, a região de Fc do anticorpo anti-CD2 (ou do fragmento do mesmo) compreende uma substituição de aminoácido no aminoácido 235 de acordo com o índice EU como em Kabat. Em uma modalidade, a região de Fc compreende uma mutação L235A. Ainda em uma outra modalidade, a região de Fc compreende uma mutação L234A e uma mutação L235A. Em uma modalidade adicional, a região de Fc compreende uma mutação D265C, uma mutação L234A e uma mutação L235A. Ainda em uma modalidade adicional, a região de Fc compreende uma mutação D265C, uma mutação L234A, uma mutação L235A e uma mutação H435A.
Em uma modalidade adicional, a região de Fc compreende uma mutação D265C e uma mutação H435A.
[0289] Os anticorpos da invenção podem ser ainda manipulados para modular adicionalmente a vida útil de anticorpo ao introduzir mutações de Fc adicionais, como essas mutações descritas, por exemplo em (Dall'Acqua et al.
(2006) J Biol Chem 281 : 23514 a 24, Fitzgerald et al 2000; (2010) Nat Biotechnol 28: 157 a 9), (Hinton et al. (2004) J Biol Chem 279 : 6213 a 6), (Hinton et al. (2006) J Biol Chem 176 : 346 a 56), (Shields et al. (2001) J Biol Chem 276: 6591 a 604), (Petkova et al. (2006) Int Immunol 18: 1759 a 69), (Datta-Mannan et al. (2007) Drug Metab Dispos 35: 86 a 94), (Vaccaro et al. (2005) Nat Biotechnol 23: 1283a 8), (Yeung et al. (2010) Cancer R6s 70: 3269 a 77) e (Kim et al. (1999) Eur J Immunol 29: 2819 a 25), e incluem as posições 250, 252, 253, 254, 256, 257, 307, 376, 380, 428, 434 e 435. Mutações exemplificativas que podem ser feitas singularmente ou em combinação são as mutações T250Q, M252Y, 1253A, S254T, T256E, P2571, T307A, D376V, E380A, M428L, H433K, N434S, N434A, N434H, N434F, H435A e H435R.
[0290] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-CD2 ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é conjugado com uma citotoxina (por exemplo, amatoxina) por meio de um resíduo de cisteína no domínio de Fc do anticorpo ou do fragmento de ligação ao antígeno do mesmo. Em algumas modalidades, o resíduo de cisteína é introduzido por meio de uma mutação no domínio de Fc do anticorpo ou do fragmento de ligação ao antígeno do mesmo. Por exemplo, o resíduo de cisteína pode ser selecionado a partir do grupo que consiste em Cys118, Cys239 e Cys265. Em uma modalidade, a região de Fc do anticorpo anti-CD2 (ou do fragmento do mesmo) compreende uma substituição de aminoácido no aminoácido 265 de acordo com o índice UE como em Kabat. Em uma modalidade, a região de Fc compreende uma mutação D265C. Em uma modalidade, a região de Fc compreende uma mutação D265C e uma mutação H435A.
[0291] Assim, em uma modalidade, a região de Fc compreende uma mutação que resulta em uma diminuição na vida útil. Um anticorpo que tem uma vida útil curta pode ser vantajoso em certos casos nos quais se espera que o anticorpo funcione como um agente terapêutico de vida curta, por exemplo, a etapa de condicionamento descrita no presente documento na qual o anticorpo é administrado seguido pelas HSCs. Idealmente, o anticorpo seria eliminado substancialmente antes da entrega das HSCs, o que também pode, em geral, expressar CD2, mas não o alvo do anticorpo anti-CD2 diferentemente das células- tronco endógenas. Em uma modalidade, a região de Fc compreende uma mutação na posição position 435 (índice UE de acordo com Kabat). Em uma modalidade, a mutação é uma mutação H435A.
[0292] Os anticorpos anti-CD2 supracitados ou os fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos podem ser usados em vários aspectos da invenção apresentados no presente documento incluindo, por exemplo, em métodos para depleção de células de CD2+ em um indivíduo humano. Os anticorpos anti-CD2 ou os fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos podem ser conjugados também com um agente, por exemplo, uma citotoxina, por exemplo, uma amatoxina, conforme descrito no presente documento.
Métodos de Identificação de Anticorpos Anti-CD2
[0293] Métodos para triagem de alta produtividade de bibliotecas de anticorpos ou de fragmentos de anticorpo que se ligam a CD2 podem ser usados para identificar e criar afinidade em agentes maduros úteis para condicionar um paciente (por exemplo, um paciente humano) em necessidade de terapia de célula- tronco hematopoiética e/ou para tratar diretamente um câncer ou uma doença autoimune conforme descrito no presente documento. Tais métodos incluem técnicas de exibição in vitro conhecidas na técnica, como exibição de fago, exibição bacteriana, exibição de levedura, exibição de célula de mamífero, exibição de ribossomo, exibição de mRNA e exibição de cDNA dentre outras. O uso de exibição de fago para isolar anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno que se ligam a moléculas biologicamente relevantes foi revisada, por exemplo, em Felici et al., Biotechnol. Annual Rev. 1 :149 a 183, 1995; Katz, Annual R6v. Biophys. Biomol.
Struct. 26:27 a 45, 1997; e Hoogenboom et al., Immunotechnology 4:1 a 20, 1998, cujas revelações são incorporadas a título de referências no presente documento no que se referem a técnicas de exibição in vitro. As bibliotecas de peptídeos combinatórios randomizados foram formadas para selecionar polipeptídeos que se ligam a antígenos de superfície celular conforme descrito em Kay, Perspect. Drug Discovery Des. 2:251 a 268, 1995 e Kay et al., Mol. Divers.
[0294] 1:139 a 140, 1996, cujas revelações são incorporadas a título de referências no presente documento no que se referem à constatação de molécula de ligação ao antígeno. A proteínas, como proteínas multimérica, foram exibidas com sucesso em fagos como moléculas funcionais (consulte, por exemplo, os documentos EP 0349578; EP 4527839 e EP 0589877 assim como Chiswell and McCafferty, Trends Biotechnol. 10:80 a 84 1992, cujas revelações são incorporadas a título de referência no presente documento no que se referem ao uso de técnicas de exibição in vitro para a constatação de moléculas de ligação ao antígeno. Além disso, fragmentos de anticorpo funcionais, como fragmentos de Fab e scFv, foram expressados em formatos de exibição in vitro (consulte, por exemplo, McCafferty et al., Nature 348:552 a 554, 1990; Barbas et al., Proc. Natl. Acad. Sci. EUA 88:7978 a 7982, 1991; e Clackson et al., Nature 352:624 a 628, 1991, cujas revelações são incorporadas a título de referências no presente documento no que se referem a plataformas de exibição in vitro para a constatação de moléculas de ligação ao antígeno). Essas técnicas dentre outras podem ser usadas para identificar e aprimorar a afinidade de anticorpos ou de fragmentos de anticorpo que se ligam a CD2 que podem, por sua vez, serem usados para depletir células T e/ou células NK de CD2+ em um paciente (por exemplo, um paciente humano) em necessidade de terapia de transplante de célula-tronco hematopoiética e/ou que está sofrendo de câncer ou de uma doença autoimune descrita no presente documento.
[0295] Técnicas adicionais podem ser usadas para identificar anticorpos e fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos que se ligam a CD2 na superfície de uma célula (por exemplo, uma célula T ou uma célula NK) e que são internalizados pela célula, por exemplo, através de endocitose mediada por receptor.
Por exemplo, as técnicas de exibição in vitro descritas acima podem ser adaptadas para examinar anticorpos e fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos que se ligam a CD2 na superfície de uma célula T ou de uma célula NK e que são internalizadas subsequentemente. A exibição de fago representa uma tal técnica que pode ser usada em conjunto com esse paradigma de triagem. Para identificar anticorpos anti-CD2 e fragmentos dos mesmos que se ligam a CD2 e são internalizados subsequentemente pelas células T e/ou células NK, um elemento com habilidade na técnica pode usar as técnicas de exibição de fago descritas em Williams et al., Leukemia 19:1432 a 1438, 2005, cuja revelação é incorporada em sua totalidade a título de referência no presente documento. Por exemplo, com o uso de métodos de mutagênese conhecidos na técnica, as bibliotecas de fago recombinante podem ser produzidas que codificam anticorpos, fragmentos de anticorpo, como fragmentos de scFv, fragmentos de Fab, diacorpos, triacorpos e domínios de 10Fn3 dentre outros, ou anticorpos que contêm, cassetes de aminoácido randomizado (por exemplo, em uma ou mais ou em todas as CDRs ou regiões equivalentes das mesmas ou um anticorpo ou um fragmento de anticorpo). As regiões estruturais, dobradiça, domínio de Fc e outras regiões dos anticorpos ou dos fragmentos de anticorpo podem ser projetadas de modo que sejam não imunogênicas em seres humanos, por exemplo, em virtude de ter sequências de anticorpo de linhagem germinativa humana ou sequências que exibem apenas variações menores em relação aos anticorpos de linhagem germinativa humana.
[0296] Com o uso de técnicas de exibição de fago descritas no presente documento ou conhecidas na técnica, as bibliotecas de fago contendo anticorpos randomizados ou fragmentos de anticorpo covalentemente ligados às partículas de fago podem ser incubadas com antígeno CD2, por exemplo, ao incubar primeiramente a biblioteca de fago com agentes bloqueadores (como, por exemplo, proteína do leite, albumina sérica bovina e/ou IgG com a finalidade de remover anticorpos que codificam fagos ou fragmentos dos mesmos que exibem ligação não específica à proteína e anticorpos que codificam fago ou fragmentos dos mesmos que se ligam a domínios de Fc, e, então, ao incubar a biblioteca de fago com uma população de células T ou células NK que são CD2+. A biblioteca de fago pode ser incubada com as células T ou com as células NK por um tempo suficiente para permitir que anticorpos específicos de CD2 ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos se liguem a CD2 de superfície celular e sejam internalizados subsequentemente pelas células T ou células NK (por exemplo, de 30 minutos a 6 horas a 4° C, como 1 hora a 4° C). Anticorpos contendo fago ou fragmentos dos mesmos que não exibem afinidade suficiente com CD2 com a finalidade de permitir a ligação e a internalização pelas células T ou células NK podem ser removidos subsequentemente ao lavar as células, por exemplo, com tampão de glicina a 0, 1 M a frio (4° C) em pH 2,8. A ligação de fago a anticorpos ou fragmentos dos mesmos que foram internalizados pelas células T e/ou células NK pode ser identificada, por exemplo, ao lisar as células e ao recuperar o fago internalizado do meio de cultura celular. Então, o fago pode ser amplificado em células bacterianas, por exemplo, ao incubar células bacterianas com fago recuperado em meio 2xYT com o uso de métodos conhecidos na técnica. Então, o fago recuperado desse meio pode ser caracterizado, por exemplo, ao determinar a sequência de ácido nucleico do gene
(ou genes) que codifica os anticorpos ou os fragmentos dos mesmos inseridos no genoma de fago. Os anticorpos codificados ou os fragmentos dos mesmos podem ser preparados subsequentemente de novo através de síntese química (por exemplo, de fragmentos de anticorpo, como fragmentos de scFv) ou através de expressão recombinante (por exemplo, de anticorpos de comprimento total).
[0297] Um método exemplificativo para evolução in vitro de anticorpos anti- CD2 para uso com as composições e métodos descritos no presente documento é a exibição de fago. As bibliotecas de exibição de fago podem ser criadas ao produzir uma série de mutações ou variações projetada em uma sequência de codificação para as CDRs de um anticorpo ou para regiões análogas de um andaime semelhante ao anticorpo (por exemplo, as alças BC, CD e DE dos domínios 10Fn3).
A sequência que codifica anticorpo modelo na qual essas mutações são introduzidas pode ser, por exemplo, uma sequência de linhagem germinativa humana ingênua.
Essas mutações podem ser realizadas com o uso de técnicas de mutagênese padrão conhecidas na técnica. Assim, cada sequência mutante codifica um anticorpo correspondente ao modelo, exceto para uma ou mais variações de aminoácido. Os vetores de exibição retroviral e de fago podem ser manipulados com o uso de técnicas de construção padrão conhecidas na técnica. Os vetores de exibição de fago P3 junto com vetores de expressão de proteína compatíveis podem ser usados para gerar vetores de exibição de fago para diversificação de anticorpo.
[0298] O DNA mutado fornece diversidade de sequência, e cada um fago transformante exibe uma variante da sequência de aminoácido inicial modelo codificada pela DNA, levando a uma população (biblioteca) de fagos que exibe um número vasto de sequências de aminoácido diferentes, mas estruturalmente relacionadas. Devido à estrutura bem definida de regiões hipervariáveis de anticorpo, espera-se que as variações de aminoácido introduzidas na tela de exibição de fago alterem as propriedades de ligação do peptídeo ou domínio de ligação sem alterar significativamente sua estrutura molecular geral.
[0299] Em uma tela típica, uma biblioteca de fago pode estar em contato e permitida a se ligar a CD2 ou a um epítopo do mesmo. Para facilitar a separação de ligantes e não ligantes, é conveniente imobilizar o alvo em um suporte sólido. O fago portador de uma fração de ligação a CD2 pode formar um complexo com o alvo no suporte sólido, enquanto a fago sem ligação permanece em solução e pode ser lavado com tampão em excesso. Então, o fago ligado pode ser liberado do alvo ao alterar o tampão para um tampão com um pH extremo (pH 2 ou pH 10), ao alterar a intensidade iônica do tampão, ao adicionar desnaturante ou outros meios conhecidos. Então, o fago recuperado pode ser amplificado através de infecção de células bacterianas, e o processo de triagem pode ser repetido com o novo conjunto que é depletido agora em anticorpos sem ligação e enriquecidos para anticorpos que se ligam a CD2. A recuperação de até alguns fagos de ligação é suficiente para amplificar o fago para uma iteração subsequente de triagem. Após algumas rodadas de seleção, as sequências de gene que codificam os anticorpos ou os fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos derivados de clones de fagos selecionados no conjunto de ligação são determinadas através de métodos convencionais, revelando, assim, a sequência de peptídeo que confere a afinidade de ligação do fago com o alvo. Durante o processo de panning, a diversidade de sequência da população diminui com cada rodada de seleção até que os anticorpos de ligação ao peptídeo desejáveis permaneçam. As sequências podem convergir em número pequeno de anticorpos relacionados ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos. Um aumento no número de fagos recuperados em cada rodada de seleção é uma indicação que a convergência da biblioteca ocorreu em uma tela.
Um outro método para identificar anticorpos anti-CD2 inclui usar anticorpos não humanos humanizados que se ligam a CD2, por exemplo, de acordo com o procedimento a seguir. Os anticorpos não humanos que se ligam a CD2 podem ser humanizados, por exemplo, de acordo com o procedimento a seguir. As sequências de cadeia pesada e cadeia leve de anticorpo humano de consenso são conhecidas na técnica (consulte, por exemplo, uma base de dados de sequência de linhagem germinativa humana “VBASE”; Kabat et al. Sequences of Proteins of Immunological Interest, Quinta Edição, U.S. Department of Health and Human Services, Publicação NIH n° 91-3242, 1991; Tomlinson et al., J. Mol. Biol. 227:776 a 798, 1992; e Cox et al.
Eur. J. Immunol. 24:827 a 836, 1994, cujas revelações são incorporadas a título de referência no presente documento no que se referem a sequências de cadeia pesada e cadeia leve de anticorpo humano de consenso. Com o uso dos procedimentos estabelecidos, um elemento com habilidade na técnica pode identificar os resíduos estruturais de domínio variável e as CDRs de uma sequência de anticorpo de consenso (por exemplo, através de alinhamento de sequência). Um elemento pode substituir uma ou mais CDRs dos domínios variáveis de cadeia pesada e/ou cadeia leve de anticorpo humano de consenso por uma ou mais CDRs correspondentes de um anticorpo não humano que se liga a D2 a fim de produzir um anticorpo humanizado. Essa troca de CDR pode ser realizada ao usar técnicas de edição de gene descritas no presente documento ou conhecidas na técnica.
Um exemplo de um domínio variável de um anticorpo humano de consenso contém o domínio variável de cadeia pesada
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYAMSWVRQAPGKGLEWVAVISENG SDTYYADS
VKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGGAVSYFDVWGQGTLVTVS S (SEQ ID n°: 18) e o domínio variável de cadeia leve
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSSYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLESG VPSRFSGS GSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYNSLPYTFGQGTKVEIKRT (SEQ ID n°: 19) identificados na Patente n° US 6.054.297, cuja revelação é incorporada a título de referência no presente documento no que se refere a sequências de consenso de anticorpo humano. As CDRs nas sequências acima são mostradas em negrito.
[0300] Para produzir anticorpos humanizados, um elemento pode expressar recombinantemente um polinucleotídeo que codifica a sequência de consenso acima na qual uma ou mais CDRs de regiões variáveis foram substituídas por uma ou mais sequências de CDR de região variável de um anticorpo não humano que se liga a CD2. Como a afinidade do anticorpo com CD2 é determinada principalmente pelas sequências de CDR, espera-se que o anticorpo humanizado resultante exiba uma afinidade com CD2 que é cerca da mesma afinidade da afinidade do anticorpo não humano a partir do qual o anticorpo humanizado foi derivado. Métodos de determinação da afinidade de um anticorpo com um antígeno-alvo incluem, por exemplo, técnicas com base no ELISA descritas no presente documento e conhecidas na técnica assim como ressonância plasmônica de superfície, anisotropia de fluorescência e calorimetria de titulação isotérmica dentre outras.
[0301] A capacidade de internalização dos anticorpos preparados ou dos fragmentos dos mesmos pode ser avaliada, por exemplo, com o uso de ensaios de internalização por radionucleotídeo conhecidos na técnica. Por exemplo, os anticorpos anti-CD2 ou os fragmentos dos mesmos identificados com o uso de técnicas de exibição in vitro descritas no presente documento ou conhecidas na técnica podem ser funcionalizados através de incorporação de um isótopo radioativo, como 18F, 75Br, 77Br, 122I, 123I, 124I, 125I, 129I, 131I, 211At, 67Ga, 111ln, 99Tc, 169Yb, 186R 6, 64Cu, 67Cu, 177Lu, 77As, 72As, 86Y, 90Y, 89Zr, 212Bi, 213Bi ou 225Ac. Por exemplo, os halogênios radioativos, como 18F, 75Br, 77Br, 122I, 123I, 124I,125I, 129I, 131I, 211At, podem ser incorporados em anticorpos ou fragmentos dos mesmos com o uso de esferas, como esferas de poliestireno, contendo reagentes halogênicos eletrofílicos (por exemplo, Esferas de Iodinização, Thermo Fisher Scientific, Inc., Cambridge, MA). os anticorpos radiomarcados ou fragmentos dos mesmos podem ser incubados com células T e/ou células NK por um tempo suficiente para permitir internalização (por exemplo, de 30 minutos a 6 horas a 4° C, como 1 hora a 4° C). Então, as células podem ser lavadas para remover anticorpos não internalizados ou fragmentos dos mesmos (por exemplo, com o uso de tampão de glicina a 0,1 M a frio (4° C) em pH 2,8). Os anticorpos internalizados ou fragmentos dos mesmos podem ser identificados ao detectar a radiação emitida (por exemplo, radiação g) das células T e/ou células NK resultantes em comparação à radiação emitida (por exemplo, radiação g) do tampão de lavagem recuperado.
[0302] Para produção recombinante de um anticorpo anti-CD2, o ácido nucleico que codifica um anticorpo, por exemplo, conforme descrito acima, é isolado e inserido em um ou mais vetores para clonagem e/ou expressão adicional em uma célula hospedeira. Tal ácido nucleico pode ser isolado e sequenciado prontamente com o uso de procedimento convencionais (por exemplo, com o uso de sondas oligonucleotídicas que têm capacidade de se ligar especificamente a genes que codificam as cadeias pesadas e leves do anticorpo).
[0303] As células hospedeiras adequadas para clonagem ou expressão de vetores que codificam anticorpo incluem células procarióticas ou eucarióticas descritas no presente documento. Por exemplo, os anticorpos podem ser produzidos em bactérias, em particular, quando a glicosilação e a função efetora de Fc não são necessárias. Para expressão de fragmentos de anticorpo e polipeptídeos em bactérias, consulte, por exemplo, as Patentes n° US 5.648.237, n° US 5.789.199 e n° US 5.840.523 (Consulte também Charlton, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, N.J., 2003), págs 245 a 254, que descrevem a expressão de fragmentos de anticorpo em E. coli.) Após a expressão, o anticorpo pode ser isolado da pasta celular bacteriana em uma fração solúvel e pode ser ainda purificado.
[0304] As células vertebrais podem ser usadas também como hospedeiras.
Por exemplo, as linhagens celulares de mamífero que são adaptadas para crescer em suspensão podem ser úteis. Outros exemplos, de linhagens celulares hospedeiras de mamífero são linhagem CV1 renal de macaco transformada por SV40 (COS-7); linhagem renal embriônico humano (293 ou 293 células conforme descrito, por exemplo, em Graham et al., J. Gen Virol. 36:59 (1977));´células renais de hamster bebê (BHK); células de sertoli de camundongo (células TM4 conforme descrito, por exemplo, em Mather, Biol. Reprod. 23:243 a 251 (1980)); células renais de macaco (CV1); células renais de macaco verde africano (VERO-76); células de carcinoma cervical humano (HELA); células renais caninas (MDCK; células hepáticas de rato da raça búfalo (BRL 3A); células pulmonares humanas (W138); células hepáticas humanas (Hep G2); tumor mamário de camundongo (MMT 060562); células TRI conforme descrito , por exemplo, em Mather et al., Annals N.Y.
Acad. Sci. 383:44 a 68 (1982); células MRC 5; e células FS4. Outras linhagens celulares hospedeiras de mamífero incluem células ovarianas de hamster chinês (CHO), incluindo células DHFR- CHO (Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. EUA 77:4216 (1980)); e linhagens celulares de mieloma como Y0, NS0 e Sp2/0. Para uma revisão de certas linhagens celulares hospedeiras de mamífero adequadas para produção de anticorpo, consulte, por exemplo, Yazaki and Wu, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B. K. C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, N.J.), págs 255 a 268 (2003). Em uma modalidade, a célula hospedeira é eucariótica, por exemplo, uma célula ovariana de Hamster Chinês (CHO) ou uma célula linfoide (por exemplo, célula Y0, NS0, Sp20).
Conjugados de Anticorpo- Fármaco (ADCs) Citotoxinas
[0305] Anticorpos e fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos descritos no presente documento (por exemplo, anticorpos, fragmentos de ligação ao antígeno que reconhecem e se ligam a CD2) podem ser conjugados com uma citotoxina, como pseudomonas exotoxina A, debouganina, toxina de difteria, uma amatoxina, como α-amanitina, saporina, maitansina, um maitansinoide, uma auristatina, uma antraciclina, uma caliqueamicina, irinotecano, SN-38, uma duocarmicina, uma pirrolobenzodiazepina, um dímero de pirrolobenzodiazepina, anindolinobenzodiazepina e um dímero de indolinobenzodiazepina ou uma variante dos mesmo, ou um outro composto citotóxico descrito no presente documento ou conhecido na técnica a fim de (i) tratar diretamente um câncer ou doença autoimune descrito no presente documento ou (ii) depletir células imunes endógenas com a finalidade de prevenir ou reduzir a probabilidade de rejeição de células-tronco hematopoiéticas após o transplante em um paciente (por exemplo, um paciente humano) em necessidade de terapia de transplante de célula-tronco hematopoiética.
Em algumas modalidades, a molécula citotóxica é conjugada com um anticorpo internalizador ou com um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de modo que, após a absorção celular do anticorpo ou do fragmento de ligação ao antígeno, a citotoxina possa acessar seu alvo intracelular e extermine as células T e/ou células NK endógenas. Citoroxinas adequadas para uso com as composições e métodos descritos no presente documento incluem agentes intercalantes de DNA, (por exemplo, antraciclinas), agentes que têm capacidade de interromper o aparelho de fuso mitótico (por exemplo, alcaloides de vinca, maitansina, maitansinoides e derivados dos mesmos), inibidores de RNA polimerase (por exemplo, uma amatoxina, como α-amanitina, e derivadas da mesma), agentes que tem capacidade de interromper a biossíntese de proteína (por exemplo, agentes que exibem atividade de rRNA N-glicosidase, como saporina e cadeia A de ricina) dentre outros conhecidos na técnica.
[0306] Em algumas modalidades, a citotoxina do conjugado de anticorpo- fármaco é um inibidor de RNA polimerase. Em algumas modalidades, o inibidor de RNA polimerase é uma amatoxina ou uma derivada da mesma.
[0307] Em algumas modalidades, a citotoxina é uma amatoxina ou um derivado da mesma, como α-amanitina, β-amanitina, Ɣ-amanitina, Ɛ-amanitina, amanina, amaninamida, amanulina, ácido amanulínico e proamanulina. As estruturas das amatoxinas que ocorrem naturalmente são representadas pela fórmula III, e são reveladas, por exemplo, em Zanotti et al., Int. J. Peptide Protein Res. 30, 1987, 450 a 459.
[0308] Em uma modalidade, a citotoxina é uma amanitina. Por exemplo, os anticorpos ou os fragmentos de ligação ao antígeno descritos no presente documento podem ser ligados a uma amatoxina com a finalidade de formar um conjugado representado pela fórmula Ab-Z-L-Am, em que Ab é o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, L é um ligante, Z é uma fração química e Am é uma amatoxina. Muitas posições nas amatoxinas ou derivadas das mesmas podem servir como a posição para ligar covalentemente a fração de ligação L, e, por conseguinte, os anticorpos ou os fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos.
Em algumas modalidades, Am-L-Z é representado pela fórmula (I)
em que R1 é H, OH, ORA ou ORC; R2 é H, OH, ORB ou ORC;
[0309] RA e RB, quando presentes juntamente com os átomos de oxigênio aos quais os mesmos são ligados, se combinam para formar um grupo heterocicloalquila de 5 membros opcionalmente substituído; R3 é H, RC ou RD; R4 é H, OH, ORC, ORD, RC ou RD; R5 é H, OH, ORC, ORD, RC ou RD; R6 é H, OH, ORC, ORD, RC ou RD; R7 é H, OH, ORC, ORD, RC ou RD; R8 é OH, NH2, ORC, ORD, NHRC ou NRCRD; R9 é H, OH, ORC ou ORD; X é -S-, -S(O)- ou -SO2-; RC é -L-Z;
[0310] RD é alquila opcionalmente substituída (por exemplo, C1-C6 alquila), heteroalquila opcionalmente substituída (por exemplo, C1-C6 heteroalquila), alquenila opcionalmente substituída (por exemplo, C2-C6 alquenila), heteroalquenila opcionalmente substituída (por exemplo, C2-C6 heteroalquenila), alquinila opcionalmente substituída (por exemplo, C2-C6 alquinila), heteroalquinila opcionalmente substituída (por exemplo, C2-C6 heteroalquinila), cicloalquila opcionalmente substituída, heterocicloalquila opcionalmente substituída, arila opcionalmente substituída ou heteroarila opcionalmente substituída;
[0311] L é um ligante, como alquileno opcionalmente substituído (por exemplo, C1-C6 alquileno), heteroalquileno opcionalmente substituído (C1C6 heteroalquileno), alquenileno opcionalmente substituído (por exemplo, C2-C6 alquenileno), heteroalquenileno opcionalmente substituído (por exemplo, C2-C6 heteroalquenileno), alquinileno opcionalmente substituído (por exemplo, C2-C6 alquinileno), heteroalquinileno opcionalmente substituído (por exemplo, C2-C6 heteroalquinileno), cicloalquileno opcionalmente substituído, heterocicloalquileno opcionalmente substituído, arileno opcionalmente substituído, heteroarileno opcionalmente substituído, um dipeptídeo, -C(=O)-, um peptídeo ou uma combinação dos mesmos; e
[0312] Z é uma fração química formada a partir de uma reação de acoplamento entre um substituinte reativo presente em L e um substituinte reativo presente em um anticorpo ou em um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga a CD2.
[0313] Em algumas modalidades, Am contém exatamente um substituinte de RC. Em algumas modalidades, o ligante compreende uma unidade de -(CH)2n-, em que n é um número inteiro de 2 a 6. Em algumas modalidades, o ligante inclui - ((CH2)n em que n é 6. Em algumas modalidades, L-Z é em que S é um átomo de enxofre que representa o substituinte reativo presente em um anticorpo ou em um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga a CD117 (por exemplo, do grupo -SH de um resíduo de cisteína).
[0314] Em algumas modalidades, L-Z é
[0315] Em algumas modalidades, Am-L-Z-Ab é
[0316] Em algumas modalidades, Am-L-Z-Ab é
[0317] Em algumas modalidades, Am-L-Z é representado pela fórmula (IA)
em que R1 é H, OH, ORA ou ORC; R2 é H, OH, ORB ou ORC;
[0318] RA e RB, quando presentes juntamente com os átomos de oxigênio aos quais os mesmos são ligados, se combinam para formar um grupo heterocicloalquila de 5 membros opcionalmente substituído; R3 é H, RC ou RD; R4 é H, OH, ORC, ORD, RC ou RD; R5 é H, OH, ORC, ORD, RC ou RD; R6 é H, OH, ORC, ORD, RC ou RD; R7 é H, OH, ORC, ORD, RC ou RD; R8 é OH, NH2, ORC, ORD, NHRC ou NRCRD; R9 é H, OH, ORC ou ORD; X é -S-, -S(O)- ou -SO2-; RC é -L-Z;
[0319] RD é alquila opcionalmente substituída (por exemplo, C1-C6 alquila), heteroalquila opcionalmente substituída (por exemplo, C1-C6 heteroalquila), alquenila opcionalmente substituída (por exemplo, C2-C6 alquenila), heteroalquenila opcionalmente substituída (por exemplo, C2-C6 heteroalquenila), alquinila opcionalmente substituída (por exemplo, C2-C6 alquinila), heteroalquinila opcionalmente substituída (por exemplo, C2-C6 heteroalquinila), cicloalquila opcionalmente substituída, heterocicloalquila opcionalmente substituída, arila opcionalmente substituída ou heteroarila opcionalmente substituída; heteroarila opcionalmente substituída;
[0320] L é um ligante, como alquileno opcionalmente substituído (por exemplo, C1-C6 alquileno), heteroalquileno opcionalmente substituído (C1C6 heteroalquileno), alquenileno opcionalmente substituído (por exemplo, C2-C6 alquenileno), heteroalquenileno opcionalmente substituído (por exemplo, C2-C6 heteroalquenileno), alquinileno opcionalmente substituído (por exemplo, C2-C6 alquinileno), heteroalquinileno opcionalmente substituído (por exemplo, C2-C6 heteroalquinileno), cicloalquileno opcionalmente substituído, heterocicloalquileno opcionalmente substituído, arileno opcionalmente substituído, heteroarileno opcionalmente substituído; um dipeptídeo, -C(=O)-, um peptídeo ou uma combinação dos mesmos; Z é uma fração química formada a partir de uma reação de acoplamento entre um substituinte reativo presente em L e um substituinte reativo presente em um anticorpo ou em um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga a CD2; e em que Am compreende exatamente um substituinte de RC.
[0321] Em algumas modalidades, o ligante inclui -((CH2)n em que n é 6. Em algumas modalidades, L-Z é
[0322] Em algumas modalidades, L-Z é
[0323] Em algumas modalidades, Am-L-Z-Ab é
[0324] Em algumas modalidades, Am-L-Z-Ab é
[0325] Em algumas modalidades, Am-L-Z é representado pela fórmula (IB) em que R1 é H, OH, ORA ou ORC; R2 é H, OH, ORB ou ORC;
[0326] RA e RB, quando presentes juntamente com os átomos de oxigênio aos quais os mesmos são ligados, se combinam para formar um grupo heterocicloalquila de 5 membros opcionalmente substituído; R3 é H, RC ou RD; R4 é H, OH, ORC, ORD, RC ou RD; R5 é H, OH, ORC, ORD, RC ou RD; R6 é H, OH, ORC, ORD, RC ou RD; R7 é H, OH, ORC, ORD, RC ou RD; R8 é OH, NH2, ORC, ORD, NHRC ou NRCRD; R9 é H, OH, ORC ou ORD; X é -S-, -S(O)- ou -SO2-; RC é -L-Z;
[0327] RD é alquila opcionalmente substituída (por exemplo, C1-C6 alquila), heteroalquila opcionalmente substituída (por exemplo, C C6 heteroalquila), alquenila opcionalmente substituída (por exemplo, C2-C6 alquenila), heteroalquenila opcionalmente substituída (por exemplo, C2-C6 heteroalquenila), alquinila opcionalmente substituída (por exemplo, C2-C6 alquinila), heteroalquinila opcionalmente substituída (por exemplo, C2-C6 heteroalquinila), cicloalquila opcionalmente substituída, heterocicloalquila opcionalmente substituída, arila opcionalmente substituída ou heteroarila opcionalmente substituída;
[0328] L é um ligante, como alquileno opcionalmente substituído (por exemplo, C1-C6 alquileno), heteroalquileno opcionalmente substituído (C1-C6 heteroalquileno), alquenileno opcionalmente substituído (por exemplo, C2-C6 alquenileno), heteroalquenileno opcionalmente substituído (por exemplo, C2-C6 heteroalquenileno), alquinileno opcionalmente substituído (por exemplo, C2-C6 alquinileno), heteroalquinileno opcionalmente substituído (por exemplo, C2-C6 heteroalquinileno), cicloalquileno opcionalmente substituído, heterocicloalquileno opcionalmente substituído, arileno opcionalmente substituído, heteroarileno opcionalmente substituído, um dipeptídeo, -C(=O)-, um peptídeo ou uma combinação dos mesmos; e
[0329] Z é uma fração química formada a partir de uma reação de acoplamento entre um substituinte reativo presente em L e um substituinte reativo presente em um anticorpo ou em um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga a CD2; e em que Am compreende exatamente um substituinte de RC.
[0330] Em algumas modalidades, o ligante L e a fração química Z, considerados em conjunto como L-Z, é ou
[0331] Em algumas modalidades, L-Z é
[0332] Em algumas modalidades, Am-L-Z-Ab é
[0333] Em algumas modalidades, Am-L-Z-Ab é
[0334] Em algumas modalidades, RA e RB, quando presentes juntamente com os átomos de oxigênio aos quais são ligados, se combinam para formar um grupo heterocicloalquila de 5 membros da fórmula:
em que Y é -C(=O)-, -C(=S)-, -C(=NRE)- ou -C(RERE’)-; e RE e RE’ são, cada um, independentemente C1-C6 alquileno-RC opcionalmente substituído, C1-C6 heteroalquileno-RC opcionalmente substituído, C2-C6 alquenileno-RC opcionalmente substituído, C2-C6 heteroalquenileno-RC opcionalmente substituído, C2-C6 alquinileno-RC opcionalmente substituído, C2-C6 heteroalquinileno-RC opcionalmente substituído, cicloalquileno-RC opcionalmente substituído, heterocicloalquileno-RC opcionalmente substituído, arileno-RC opcionalmente substituído ou heteroarileno- RC opcionalmente substituído.
[0335] Em algumas modalidades, Am-L-Z é representado pela fórmula (IA) ou pela fórmula (IB), em que R1 é H, OH, ORA ou ORC; R2 é H, OH, ORA ou ORC RA e RB, juntamente com os átomos de oxigênio aos quais são ligados se combinam para formar: R3 é H ou RC; R4 é H, OH, ORC, ORD, RC ou RD; R5 é H, OH, ORC, ORD, RC ou RD; R6 é H, OH, ORC, ORD, RC ou RD; R7 é H, OH, ORC, ORD, RC ou RD; R8 é OH, NH2, ORC ou NHRC; R9 é H ou OH; e em que X, RC e RD são, cada um, conforme definido acima.
[0336] Em algumas modalidades, Am-L-Z é representado pela fórmula (IA) ou pela fórmula (IB), em que R1 é H, OH ou ORA; R2 é H, OH, ORB ou ORB; RA e RB, juntamente com os átomos de oxigênio aos quais são ligados se combinam para formar: R3 é H ou RC;
R4 e R5 são, cada um, independentemente H, OH, ORC, RC ou ORD; R6 e R7 são, cada um, H; R8 é OH, NH2, ORC ou NHRC; R9 é H ou OH; e em que X e RC são conforme definido acima.
[0337] Em algumas modalidades, Am-L-Z é representado pela fórmula (IA) ou pela fórmula (IB), em que R1 é H, OH ou ORA; R2 é H, OH, ORB ou ORc; RA e RB, juntamente com os átomos de oxigênio aos quais são ligados se combinam para formar: R3, R4, R6 e R7 são, cada um, H; R5 é ORC; R8 é OH ou NH2; R9 é H ou OH; e em que RC é conforme definido acima. Tais conjugados de amatoxina são descritos, por exemplo, na Publicação de Pedido de Patente n° US 2016/0002298, cuja revelação é incorporada em sua totalidade a título de referência no presente documento. Em algumas modalidades, Am-L-Z é representado pela fórmula (IA) ou pela fórmula (IB), em que R1 e R2 são, cada um, independentemente H ou OH; R3 é RC; R4, R6 e R7 são, cada um, H; R5 é H, OH ou C1-C6 alquila; R8 é OH ou NH2;
R9 é H ou OH; e em que X e RC são conforme definido acima. Tais conjugados de amatoxina são descritos, por exemplo, na Publicação de Pedido de Patente n° US 2014/0294865, cuja revelação é incorporada em sua totalidade a título de referência no presente documento.
[0338] Em algumas modalidades, Am-L-Z é representado pela fórmula (IA) ou pela fórmula (IB), em que R1 e R2 são, cada um, independentemente H ou OH; R3, R6 e R7 são, cada um, H; R4 e R5 são, cada um, independentemente H, OH, ORC ou RC; R8 é OH ou NH2; R9 é H ou OH; e em que X e RC são conforme definido acima. Tais conjugados de amatoxina são descritos, por exemplo, na Publicação de Pedido de Patente n° US 2015/0218220, cuja revelação é incorporada em sua totalidade a título de referência no presente documento.
[0339] Em algumas modalidades, Am-L-Z é representado pela fórmula (IA) ou pela fórmula (IB), em que R1 e R2 são, cada um, independentemente H ou OH; R3, R6 e R7 são, cada um, H; R4 e R5 são, cada um, independentemente H ou OH; R8 é OH, NH2, ORC ou NHRC; R9 é H ou OH; e em que RC é conforme definido acima. Tais conjugados de amatoxina são descritas, por exemplo, nas Patentes n° US 9.233.173 e n° US 9.399.681 assim como no documento US 2016/0089450, cujas revelações são incorporadas em sua totalidade a título de referência no presente documento.
[0340] As amatoxinas adicionais que podem ser usadas para conjugação com um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de acordo com as composições e métodos descritos no presente documento são descritas, por exemplo, nos documentos WO 2016/142049; WO 2016/071856; e WO 2017/046658, cujas revelações são incorporadas em sua totalidade a título de referência.
[0341] Em algumas modalidades, Am-L-Z é representado pela fórmula (II), pela fórmula (IIA) ou pela fórmula (IIB)
ou em que X é S, SO ou SO2; R1 é H ou um ligante covalentemente ligado ao anticorpo ou ao fragmento de ligação ao antígeno do mesmo através de uma fração química Z formada a partir de uma reação de acoplamento entre um substituinte reativo presente no ligante e um substituinte reativo presente em um anticorpo ou em um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; eR2 é H ou um ligante covalentemente ligado ao anticorpo ou ao fragmento de ligação ao antígeno do mesmo através de uma fração química Z formada a partir de uma reação de acoplamento entre um substituinte reativo presente no ligante e um substituinte reativo presente em um anticorpo ou em um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; em que, quando R1 é H, R2 é o ligante, e, quando R2 é H, R1 é o ligante.
[0342] Em algumas modalidades, o ligante inclui uma unidade de -(CH2)n-, em que n é número inteiro de 2 a 6.
[0343] Em algumas modalidades, R1 é o ligante e R2 é H, e o ligante e a fração química, juntamente como L-Z, é
[0344] Em algumas modalidades, Am-L-Z-Ab é um dentre:
[0345] Em algumas modalidades, a citotoxina é uma α-amanitina. Em algumas modalidades, a α-amanitina é um composto da fórmula III. Em algumas modalidades, a α-amanitina da fórmula III é ligada a um anticorpo ou a um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga a CD2 através de um ligante L. O ligante L pode ser ligado à α-amanitina da fórmula III em qualquer uma das várias posições possíveis (por exemplo, qualquer uma dentre R1 a R9) para fornecer um conjugado de α-amanitina-ligante da fórmula I, IA, IB, II, IIA ou IIB. Em algumas modalidades, o ligante é ligado na posição R1. Em algumas modalidades, o ligante é ligado na posição R2. Em algumas modalidades, o ligante é ligado na posição R3.
Em algumas modalidades, o ligante é ligado na posição R 4. Em algumas modalidades, o ligante é ligado na posição R5. Em algumas modalidades, o ligante é ligado na posição R6. Em algumas modalidades, o ligante é ligado na posição R7.
Em algumas modalidades, o ligante é ligado na posição R8. Em algumas modalidades, o ligante é ligado na posição R9. Em algumas modalidades, o ligante inclui uma hidrazina, um dissulfeto, a tioéter ou um dipeptídeo. Em algumas modalidades, o ligante inclui um dipeptídeo selecionado a partir de Val-Ala e Val-Cit.
Em algumas modalidades, o ligante inclui um grupo para-aminobenzila (PAB). Em algumas modalidades, o ligante inclui a fração de PAB-Cit-Val. Em algumas modalidades, o ligante inclui a fração de PAB-Ala-Val. Em algumas modalidades, o ligante inclui uma unidade de -((C=O)(CH2)n-, em que n é um número inteiro de 1 a 6.
Em algumas modalidades, o ligante inclui uma unidade de -(CH2)n-, em que n é um número inteiro de 2 a 6. Em algumas modalidades, o ligante é -PAB-Cit-Val- ((C=O)(CH2)n-. Em algumas modalidades, o ligante é -PAB-Ala-Val-((C=O)(CH 2)n-.
Em algumas modalidades, o ligante L e a fração química Z, considerados em conjunto como L-Z, é ou
[0346] Anticorpos e fragmentos de ligação ao antígeno para uso com as composições e métodos descritos no presente documento podem ser conjugados com uma amatoxina, como α-amanitina ou uma variante da mesma, com o uso de técnicas de conjugação conhecidas an técnica ou descritas no presente documento.
Por exemplo, os anticorpos e os fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos que reconhecem e se ligam a CD2 podem ser conjugados com uma amatoxina, como α-amanitina ou uma variante da mesma, conforme descrito no documento US 2015/0218220, cuja revelação é incorporada a título de referência no presente documento no que se refere, por exemplo, a amatoxinas, como α-amanitina e variantes da mesma, assim como a ligantes covalentes que podem ser usados para conjugação covalente.. Métodos sintéticos de produzir amatoxinas são descritos, por exemplo, na Patente n° US 9.676.702, que é incorporada a título de referência no presente documento em relação aos métodos sintéticos revelados na mesma.
[0347] Anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno para uso com as composições e métodos descritos no presente documento podem ser conjugados com uma amatoxina, como α-amanitina ou uma variante da mesma, com o uso de técnicas de conjugação conhecidas na técnica ou descritas no presente documento.
Por exemplo, anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos que reconhecem e se ligam a CD2 podem ser conjugados com uma amatoxina, como α- amanitina ou uma variante da mesma, conforme descrito no documento US 2015/0218220, cuja revelação é incorporada a título de referência no presente documento no que se refere, por exemplo, a amatoxinas, como α-amanitina e variantes da mesma, assim como a ligantes covalentes que podem ser usados para conjugação covalente.
[0348] Conjugados de anticorpo-fármaco exemplificativos úteis em conjunto com os métodos descritos no presente documento podem ser formados através da reação de um anticorpo ou de um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo com uma amatoxina que é conjugada com um ligante contendo um substituinte adequado para reação com um resíduo ativo no anticorpo ou no fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.
As amatoxinas que são conjugadas com um ligante contendo um substituinte adequado para reação com um resíduo reativo no anticorpo ou no fragmento de ligação ao antígeno do mesmo descritas no presente documento incluem, mas sem limitação, 7'C-(4-(6-(maleimido)hexanoil)piperazin-1-il)-amatoxina;
7'C-(4-(6-(maleimido)hexanamido)piperidin-1-il)-amatoxina; 7'C-(4-(6-(6-
(maleimido)hexanamido)hexanoil)piperazin-1-il)-amatoxina; 7'C-(4-(4-
((maleimido)metil)ciclo-hexanocarbonil)piperazin-1-il)-amatoxina; 7'C-(4-(6-(4-
((maleimido)metil)ciclo-hexanocarboxamido)hexanoil)piperazin-1 -il)-amatoxina; 7'C-
(4-(2-(6-(maleimido)hexanamido)etil)piperidin-1-il)-amatoxina; 7'C-(4-(2-(6-(6-
(maleimido)hexanamido)hexanamido)etil)piperidin-1-il)-amatoxina; 7'C-(4-(2-(4-
((maleimido)metil)ciclo-hexanocarboxamido)etil)piperidin-1-il)-amatoxina; 7'C-(4-(2-
(6-(4-((maleimido)metil)ciclo-hexanocarboxamido)hexanamido)etil)piperidin-1-il)-
amatoxina; 7'C-(4- (2-(3-carboxipropanamido)etil)piperidin-1-il)-amatoxina; 7'C-(4-(2-
(2-bromoacetamido)etil)piperidin-1-il)-amatoxina; 7'C-(4-(2-(3-(piridin-2-
ildisulfanil)propanamido)etil)piperidin-1-il)-amatoxina; 7'C-(4-(2-(4-
(maleimido)butanamido)etil)piperidin-1-il)-amatoxina; 7'C-(4-(2-
(maleimido)acetil)piperazin-1-il)-amatoxina; 7'C-(4-(3-(maleimido)propanoil)piperazin-
1 -il)-amatoxina; 7'C-(4-(4- (maleimido)butanol)piperazin-1-il)-amatoxina; 7'C-(4-(2-
(6-(4-((maleimido)metil)ciclo-hexanocarboxamido)hexanamido)etil)piperidin-1-il)-
amatoxina; 7'C-(3- ((6-(maleimido)hexanamido)metil)pirrolidin-1-il)-amatoxina; 7'C-(3-
((6-(6-(maleimido)hexanamido)hexanamido)metil)pirrolidin-1-il)-amatoxina; 7'C-(3-
((4- ((maleimido)metil)ciclo-hexanocarboxamido)metil)pirrolidin-1-il)-amatoxina; 7'C-
(3-((6-((4-(maleimido)metil)ciclo-hexanocarboxamido)hexanamido)metil)pirrolidin-1-
il)-amatoxina; 7'C-(4-(2-(6-(2-(amino-oxi)acetamido)hexanamido)etil)piperidin-1-il)-
amatoxina; 7'C-(4-(2-(4-(2-(amino-oxi)acetamido)butanamido)etil)piperidin-1-il)-
amatoxina; 7'C-(4-(4-(2-(amino-oxi)acetamido)butanoil)piperazin-1-il)-amatoxina; 7'C-
(4-(6-(2-(amino-oxi)acetamido)hexanoil)piperazin-1-il)-amatoxina; 7'C-((4-(6-
(maleimido)hexanamido)piperidin-1-il)metil)-amatoxina; 7'C-((4-(2-(6-
(maleimido)hexanamido)etil)piperidin-1-il)metil)-amatoxina; 7'C-((4-(6-
(maleimido)hexanoil)piperazin-1-il)metil)-amatoxina; (R)-7'C-((3-((6-
(maleimido)hexanamido)metil)pirrolidin-1-il)metil)-amatoxina; (S)-7'C-((3-((6-
(maleimido)hexanamido)metil)pirrolidin-1-il)metil)-amatoxina; 7'C-((4-(2-(6-(6-
(maleimido)hexanamido)hexanamido)etil)piperidin-1-il)metil)-amatoxina; 7'C-((4-(2-
(4- ((maleimido)metil)ciclo-hexanocarboxamido)etil)piperidin-1-il)metil)-amatoxina;
7'C-((4-(2-(6-(4-((maleimido)metil)ciclo-
hexanocarboxamido)hexanamido)etil)piperidin-1-il)metil)-amatoxina; 7'C-((4-(2-(6-
(maleimido)hexanamido)etil)piperazin-1-il)metil)-amatoxina; 7'C-((4-(2-(6-(6-
(maleimido)hexanamido)hexanamido)etil)piperazin-1-il)metil)-amatoxina; 7'C-((4-(2-
(4-((maleimido)metil)ciclo-hexanocarboxamido)etil)piperazin-1-il)metil)-amatoxina;
7'C-((4-(2-(6-(4-((maleimido)metil)ciclo-
hexanocarboxamido)hexanamido)etil)piperazin-1-il)metil)- amatoxina; 7'C-((3-((6-(6-
(maleimido)hexanamido)hexanamido)-S-metil)pirrolidin-1-il)metil)-amatoxina; 7'C-((3-
((6-(6-(maleimido)hexanamido)hexanamido)-R-metil)pirrolidin-1-il)metil)-amatoxina;
7'C-((3-((4-((maleimido)metil)ciclo-hexanocarboxamido)-S-metil)pyrrolidin-1-il)metil)-
amatoxina; 7'C-((3-((4-((maleimido)metil)ciclo-hexanocarboxamido)-R-
metil)pirrolidin-1-il)metil)-amatoxina; 7'C-((3-((6-(4-((maleimido)metil)ciclo-
hexanocarboxamido)hexanamido)metil)pirrolidin-1-il)metil)- amatoxina; 7'C-((4-(2-(3-
carboxipropanamido)etil)piperazin-1-il)metil)-amatoxina; 7'C-((4-(6-(6-
(maleimido)hexanamido)hexanoil)piperazin-1-il)metil)-amatoxina; 7'C-((4-(6-(4-
((maleimido)metil)ciclo-hexanocarboxamido)hexanoil)piperazin-1-il)metil)-amatoxina;
7'C-((4-(2-(maleimido)acetil)piperazin-1-il)metil)-amatoxina; 7'C-((4-(3-
(maleimido)propanoil)piperazin-1-il)metil)-amatoxina; 7'C-((4-(4-
(maleimido)butanoil)piperazin-1-il)metil)-amatoxina; 7'C-((4-(2-(2-
(maleimido)acetamido)etil)piperidin-1-il)metil)-amatoxina; 7'C-((4-(2-(4-
(maleimido)butanamido)etil)piperidin-1-il)metil)-amatoxina; 7'C-((4-(2-(6-(4-
((maleimido)metil)ciclo-hexanocarboxamido)hexanamido)etil)piperidin-1-il)metil)-
amatoxina; 7'C-((3-((6-(maleimido)hexanamido)metil)azetidin-1-il)metil)-amatoxina;
7'C-((3-(2-(6- (maleimido)hexanamido)etil)azetidin-1-il)metil)-amatoxina; 7'C-((3-((4-
((maleimido)metil)ciclo-hexanocarboxamido)metil)azetidin-1-il)metil)-amatoxina; 7'C-
((3-(2-(4-((maleimido)metil)ciclo-hexanocarboxamido)etil)azetidin-1il)metil)-
amatoxina; 7'C-((3-(2-(6-(4-((maleimido)metil)ciclo-
hexanocarboxamido)hexanamido)etil)azetidin-1-il)metil)-amatoxina; 7'C-(((2-(6-
(maleimido)-N-metil-hexanamido)etil)(metil)amino)metil)-amatoxina; 7'C-(((4-(6-
(maleimido)-N-metil-hexanamido)butil(metil)amino)metil)-amatoxina; 7'C-((2-(2-(6-
(maleimido)hexanamido)etil)aziridin-1-il)metil)-amatoxina; 7'C-((2-(2-(6-(4-
((maleimido)metil)ciclo-hexanocarboxamido)hexanamido)etil)aziridin-1-il)metil)-
amatoxina; 7'C-((4-(6-(6-(2-(amino-oxi)acetamido)hexanamido)hexanoil)piperazin-1-
il)metil)-amatoxina; 7'C- ((4-(1-(amino-oxi)-2-oxo-6,9,12,15-tetraoxa-3-aza-
heptadecan-17-oil)piperazin-1-il)metil)- amatoxina; 7'C-((4-(2-(2-(amino-
oxi)acetamido)acetil)piperazin-1-il)metil)-amatoxina; 7'C-((4-(3-(2-(amino-
oxi)acetamido)propanoil)piperazin-1-il)metil)-amatoxina; 7'C-((4-(4-(2-(amino-
oxi)acetamido)butanoil)piperazin-1-il)metil)-amatoxina; 7'C-((4-(2-(6-(2-(amino-
oxi)acetamido)hexanamido)etil)piperidin-1-il)metil)-amatoxina; 7'C-((4-(2-(2-(2-
(amino-oxi)acetamido)acetamido)etil)piperidin-1-il)metil)-amatoxina; 7'C-((4-(2-(4-(2-
(amino-oxi)acetamido)butanamido)etil)piperidin-1-il)metil)-amatoxina; 7'C-((4-(20-
(amino-oxi)-4,19-dioxo-6,9,12,15-tetraoxa-3,18-diazaicosil)piperidin-1-il)metil)-
amatoxina; 7'C-(((2-(6-(2-(amino-oxi)acetamido)-N-metil-
hexanamido)etil)(metil)amino)metil)-amatoxina; 7'C-(((4-(6-(2-(amino-oxi)acetamido)-
N-metil-hexanamido)butil)(metil)amino)metil)-amatoxina; 7'C-((3-((6-(4-
((maleimido)metil)ciclo-hexanocarboxamido)hexanamido)metil)pirrolidin-1-il)-S-metil)-
amatoxina; 7'C-((3-((6-(4-((maleimido)metil)ciclo-hexanocarboxamido)hexanamido)-
R- metil)pirrolidin-1 -il)metil)-amatoxina; 7'C-((4-(2-(2-bromoacetamido)etil)piperazin- 1-il)metil)-amatoxina; 7'C-((4-(2-(2-bromoacetamido)etil)piperidin-1-il)metil)- amatoxina; 7'C-((4- (2-(3-(piridina-2-ildisulfanil)propanamido)etil)piperidin-1-il)metil)- amatoxina; 6'O-(6-(6-(maleimido)hexanamido)hexil)-amatoxina; 6'O-(5-(4- ((maleimido)metil)ciclo-hexanocarboxamido)pentil)-amatoxina; 6'O-(2-((6- (maleimido)hexil)oxi)-2-oxoetil)-amatoxina; 6'O-((6-(maleimido)hexil)carbamoil)- amatoxina; 6'O-((6-(4- ((maleimido)metil)ciclo-hexanocarboxamido)hexil)carbamoil)- amatoxina; 6'O-(6-(2-bromoacetamido)hexil)-amatoxina; 7'C-(4-(6- (azido)hexanamido)piperidin-1-il)-amatoxina; 7'C-(4-(hex-5-inoilamino)piperidin-1-il)- amatoxina; 7'C-(4-(2-(6-(maleimido)hexanamido)etil)piperazin-1-il)-amatoxina; 7'C- (4-(2-(6-(6-(maleimido)hexanamido)hexanamido)etil)piperazin-1-il)- amatoxina; 6'O- (6-(6-(1 1,12-dide-hidro-5,6-di-hidro-dibenz[b,f]azocin-5-il)-6-oxo-hexanamido)hexil)- amatoxina; 6'O-(6-(hex-5-inoilamino)hexil)-amatoxina; 6'O-(6-(2-(amino- oxi)acetilamido)hexil)-amatoxina; 6'O-((6-amino-oxi)hexil)-amatoxina e 6'O-(6-(2- iodoacetamido)hexil)-amatoxina. Os ligantes supracitados dentre outros úteis em conjunto com as composições e métodos descritos no presente documento são descritos, por exemplo, na Publicação de Pedido de Patente n° US 2015/0218220, cuja revelação é incorporada em sua totalidade a título de referência no presente documento.
[0349] As citotoxinas adicionais que podem ser conjugadas com anticorpos e fragmentos de ligação ao antígeno do mesmo que reconhecem e se ligam CD2 para uso no tratamento direto de um câncer, uma afecção autoimune, ou para condicionamento de um paciente (por exemplo, um paciente humano) na preparação para terapia de transplante de célula-tronco hematopoiética incluem, mas sem limitação, 5-etiniluracila, abiraterona, acilfulveno, adecipenol, adozelesina, aldesleucina, altretamina, ambamustina, amidox, amifostina, ácido aminolevulínico, amrubicina, amsacrina, anagrelida, anastrozol, andrografólida, inibidores de angiogênese, antarelix, proteína 1 morfogenética anti-dorsalizante, antiandrógeno,
carcinoma prostático, antiestrógeno, antineoplastos, oligonucleotídeos antisense,
glicinato de afidicolina, moduladores de gene de apoptose, reguladores de apoptose,
ácido apurínico, asulacrina, atamestano, atrimustina, axinastatina 1, axinastatina 2,
axinastatina 3, azasetrona, azatoxina, azatrosina, derivados de bacatina III, balanol,
batimastat, antagonistas BCR/ABL, benzoclorinas, benzoilstauroesporina, derivados de beta-lactama, beta-aletina, betaclamicina B, ácido betulínico, inibidores de bFGF,
bicalutamida, bisantreno, bisaziridinilespermina, bisnafida, bistrateno A, bizelesina,
breflato, bleomicina A2, bleomicina B2, bropirimina, budotitano, butionina sulfoximina,
calcipotriol, calfostina C, derivados de camptotecina (por exemplo, 10-hidroxi-
camptotecina), capecitabina, carboxamida-amino-triazol, carboxiamidotriazol,
carzelesina, inibidores de caseina quinase, castanospermina, cecropina B, cetrorelix,
clorinas, cloroquinoxalina sulfonamida, cicaprost, cis-porfirina, cladribina, clomifeno e análogos do mesmo, clotrimazol, colimicina A, colimicina B, combretastatina A4,
análogos de combretastatina, conagenina, crambescidina 816, crisnatol, criptoficina
8, derivados de criptoficina A, curacina A, ciclopentantraquinonas, cicloplatama,
cipemicina, ocfosfato de citarabina, fator citolítico, citostatina, dacliximab, decitabina,
de-hidrodidemnina B, 2'deoxicoformicina (DCF), deslorelina, dexifosfamida,
dexrazoxano, dexverapamila, diaziquona, didemnina B, didox, dietilnorespermina, di-
hidro-5-azacitidina, di-hidrotaxol, dioxamicina, difenil espiromustina, discodermolida,
docosanol, dolasetrona, doxifluridina, droloxifeno, dronabinol, duocarmicina SA,
ebselen, ecomustina, edelfosina, edrecolomab, eflornitina, elemene, emitefur,
epotilonas, epitilonas, epristeride, estramustina e análogos dos mesmos, etoposido,
4-fosfato de etoposido (chamado também de etopofos), exemestano, fadrozol,
fazarabina, fenretinida, filgrastim, finasterida, flavopiridol, flezelastina, fluasterona,
fludarabina, cloridrato de fluorodaunorunicina, forfenimex, formestano, fostriecina,
fotemustina, gadolínio texafirina, nitrato de gálio, galocitabina, ganirelix, inibidores de gelatinas, gemcitabina, inibidores de glutationa, hepsulfama, homo-harrintonina
(HHT), hipericina, ácido ibandrônico, idoxifeno, idramantona, ilmofosina, ilomastat,
imidazoacridonas, imiquimod, peptídeos imunoestimulantes, iobenguane,
iododoxorubicina, ipomeanol, irinotecano, iroplacto, irsogladina, isobengazol,
jasplaquinolida, kahalalida F, triacetato de lamelarina-N, lanreotida, leinamicina,
lenograstim, sulfato de lentinano, leptolstatina, letrozol, compostos de platina lipofílico, lissoclinamida 7, lobaplatina, lometrexol, lonidamina, losoxantrona,
loxoribina, lurtotecano, lutécio texafirina, lisofilina, masoprocol, maspina, inibidores de matrix metaloproteinas, menogarila, rnerbarona, meterelina, metioninase,
metoclopramida, inibidor de MIF, ifepristona, miltefosina, mirimostim, mitracina,
mitoguazona, mitolactol, mitomicina e análogos dos mesmos, mitonafida,
mitoxantrona, mofaroteno, molgramostim, micaperóxido B, miriaporona, N-
acetildinalina, benzamidas N-substituídas, nafarelina, nagrestip, napavina, nafterpina,
nartograstim, nedaplatina, nemorubicina, ácido neridrônico, nilutamida, nisamicina,
nitrulina, octreotida, oquicenona, onapristona, ondansetrona, oracina, ormaplatina,
oxaliplatina, oxaunomicina, paclitaxel e análogos dos mesmos, palauamina,
palmitoilrizoxina, ácido pamidrônico, panaxitriol, panomifeno, parabactina,
pazelliptina, pegaspargase, peldesina, polissulfato de sódio pentosano, pentostatina,
pentrozol, perflubron, perfosfamide, fenazinomicina, picibanila, pirarubicina,
piritrexim, podofilotoxina, porfiromicina, inibidores de fosforilase de nucleosídeo de purina, raltitrexede, rizoxina, rogletimida, rohituquina, rubiginona B1, ruboxila,
safingol, saintopina, sarcofitol A, sargramostim, sobuzoxano, sonermina, ácido esparfósico, espicamicina D, espiromustina, estipiamida, sulfinosina, talimustina,
tegafur, temozolomida, teniposida, taliblastina, tiocoralina, tirapazamina, topotecano,
topsentina, triciribina, trimetrexato, veramina, vinorelbina, vinxaltina, vorozol,
zeniplatina e zilascorb dentre outros.
[0350] Em algumas modalidades, a citotoxina é um dímero de pirrolobenzodiazepina representado pela fórmula (IV):
[0351] Uma variedade de ligantes pode ser usada para conjugar anticorpos e fragmentos de ligação ao antígeno descritos no presente documento que reconhecem e se ligam a CD2 com uma molécula citotóxica.
[0352] O termo “ligante" conforme usado no presente documento significa uma fração química divalente compreendendo uma ligação covalente ou uma cadeia de átomos que ligam covalentemente um anticorpo ou um fragmento do mesmo (Ab) a uma fração de fármaco (D) para formar conjugados de anticorpo-fármaco da presente revelação (ADCs; Ab-Z-L-D, em que D é uma citotoxina). Ligantes adequados têm dois terminais reativos, um para conjugação com um anticorpo e o outro para conjugação com uma citotoxina. O terminal reativo de conjugação de anticorpo do ligante (fração reativa, Z) é tipicamente um sítio que tem capacidade de conjugação com o anticorpo através de um grupo cisteína tiol ou lisina amina no anticorpo, e, assim, é, tipicamente um grupo reativo a tiol como uma ligação dupla (como na maleimida) ou um grupo de saída como a cloro, bromo, iodo e um grupo de R-sulfanila, ou um grupo reativo à aminacomo um grupo carboxila; enquanto ao terminal reativo de conjugação de anticorpo do ligante é tipicamente um sítio que tem capacidade de conjugação com a citotoxina através de formação de uma ligação de amida com uma amina básica ou um grupo carboxila na citotoxina, e, assim, é tipicamente um grupo carboxila ou amina básica. Quando o termo "ligante" é usado na descrição do ligante na forma conjugado, um terminal reativo ou ambos os terminais reativos estarão ausentes (como fração reativa Z que foi convertida para a fração química Z) ou incompletos (como sendo apenas a carbonila do ácido carboxílico) devido à formação de ligações entre o ligante e/ou a citotoxina, e entre o ligante e/ou o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo. Tais reações de conjugados são ainda descritas no presente documento abaixo.
[0353] Em algumas modalidades, o ligante é clivável sob condições intracelulares de modo que a clivagem do ligante libere a unidade de fármaco a partir do anticorpo no ambiente intracelular. Ainda em outras modalidades, a unidade de ligante não é clivável e o fármaco é liberado, por exemplo, através da degradação de anticorpo. Os ligantes úteis para os ADCs presentes são, de preferência, estáveis de modo extracelular, previnem agregação de moléculas de ADC e mantêm o ADC livremente solúvel em meios aquosos e em um estado monomérico. Antes do transporte e entrega para uma célula, o ADC é de preferência, estável e permanece intacto, isto é, o anticorpo permanece ligado à fração de fármaco. Os ligantes são estáveis fora da célula-alvo e pode ser clivado a alguma taxa de eficácia dentro da célula. Um ligante eficaz: (i) manterá as propriedades de ligação específicas do anticorpo; (ii) permitirá a entrega intracelular do conjugado ou da fração de fármaco; (iii) permanecerá estável e intacto, isto é, não clivado até que o conjugado tenha sido entregue ou transportado para o sítio desejado; e (iv) manterá um efeito citotóxico e de morte celular ou um efeito citostático da fração citotóxica. A estabilidade do ADC pode ser medida através de técnicas analíticas padrão como espectroscopia de massa, HPLC e a técnica de separação/análise LC/MS. A ligação covalente do anticorpo e da fração de fármaco exige que o ligante tenha dois grupos funcionais reativos, isto é, bivalência em um sentido reativo. Os reagentes de ligante bivalente que são úteis para ligar duas ou mais frações funcional ou biologicamente ativas, como peptídeos, ácidos nucleicos, fármacos, toxinas, anticorpos, haptenos e grupos repórteres, conhecidas, e métodos descreveram seus conjugados resultantes (Hermanson, G. T. (1996) Bioconjugate Techniques; Academic Press: Nova Iorque, págs 234 a 242).
[0354] Ligantes como esses ligantes que podem ser clivados, por exemplo, através de hidrólise enzimática, fotólise, hidrólise sob condições ácidas, hidrólise sob condições básicas, oxidação, redução por dissulfeto, clivagem nucleofílica ou clivagem organometálica (consulte, por exemplo, Leriche et al., Bioorg. Med. Chem., 20:571 a 582, 2012, cuja revelação é incorporada a título de referência no presente documento no que se refere a ligantes adequados para conjugação covalente).
[0355] Os ligantes hidrolisáveis sob condições ácidas incluem, por exemplo, hidrazonas, semicarbazonas, tiosemicarbazonas, amidas cis-aconíticas, ortoésteres, acetais, cetais ou similares. (Consulte, por exemplo, as Patentes n° US 5.122.368; n° US 5.824.805; n° US 5.622.929; Dubowchik and Walker, 1999, Pharm.
Therapeutics 83:67 a 123; Neville et al., 1989, Biol. Chem. 264:14653 a 14661, cujas revelações são incorporadas em suas totalidades a título de referência no presente documento no que se refere a ligantes adequados para conjugação covalente. Tais ligantes são relativamente estáveis sob condições de pH neutro, como esses ligantes no sangue, mas são instáveis em pH abaixo de 5,5 ou 5,0, o pH aproximada do lisossomo.
[0356] Os ligantes cliváveis sob condições de redução incluem, por exemplo, um dissulfeto. Uma variedade de ligantes de dissulfeto é conhecida na técnica incluindo, por exemplo, esses ligantes de dissulfeto que podem ser formados com o uso de SATA (S-acetiltioacetato de N-succinimidila), SPDP (3-(2- piridilditio)propionato de N-succinimidila), SPDB (3-(2-piridilditio)butirato de N- succinimidila) e SMPT (N-succinimidil-oxicarbonil-alfa-metil-alfa-(2-piridil- ditio)tolueno), SPDB e SMPT (Consulte, por exemplo, Thorpe et al., 1987, Cancer Res. 47:5924 a 5931; Wawrzynczak et al., In Immunoconjugates: Antibody Conjugates in Radioimagery and Therapy of Cancer (C. W. Vogel ed., Oxford U.
Press, 1987. Consulte também a Patente n° US 4.880.935, cuja revelação é incorporada em sua totalidade a título de referência no presente documento no que se refere a ligantes adequados para conjugação covalente.
[0357] Exemplos de ligantes úteis para a síntese de conjugados de fármaco- anticorpo incluem esses ligantes que contêm eletrófilos, como receptores de Michael (por exemplo, maleimidas), ésteres ativados, compostos de carbonila deficientes de elétron e aldeídos dentre outros, adequados para reação com substituintes nucleofílicos presentes nos anticorpos ou nos fragmentos de ligação ao antígeno, como frações de amina e tiol. Por exemplo, os ligantes adequados para a síntese de conjugados de fármaco-anticorpo incluem, sem limitação, 4-(N-maleimidometil)-ciclo- hexano-L-carboxilato de succinimidila (SMCC), iodoacetato de N- succinimidila (SIA), sulfo-SMCC, éster m-maleimidobenzoil-A/-hidroxisuccinimidila (MBS), sulfo-MBS e iodoacetato de succinimidila dentre outros descritos, por exemplo, em Liu et al., 18:690 a 697, 1979, cuja revelação é incorporada a título de referência no presente documento no que se refere a ligantes para conjugação química. Ligantes adicionais incluem ligantes de maleimidocaproila não cliváveis que são particularmente úteis para a conjugação de agentes que interrompem microtúbulos, como auristatinas, são descritos por Doronina et al., Bioconjugate Chem. 17:14 a 24, 2006, cuja revelação é incorporada a título de referência no presente documento no que se refere a ligantes para conjugação química. Ligantes adicionais adequados para a síntese de conjugados de fármaco-anticorpo conforme descrito no presente documento incluem esses ligantes que têm capacidade de liberar uma citotoxina através de um processo de eliminação de 1,6, (um grupo “autoimolativo"), como álcool p-aminobenzílico (PABC), ácido 6- maleimidohexanoico, carbonatos sensíveis a pH e outros reagentes descritos em Jain et al., Pharm. Res 32:3526 a 3540, 2015, cuja revelação é incorporada em sua totalidade a título de referência no presente documento. Em algumas modalidades, o ligante inclui um grupo autoimolativo como a PAB ou PABC supracitada (para-aminobenziloxicarbonila), que é revelada, por exemplo, em Carl et al., J. Med. Chem. (1981) 24:479 a 480; Chakravarty et al (1983) J. Med. Chem. 26:638 a 644; os documentos US6214345; US20030130189; US20030096743; US6759509; US20040052793; US6218519; US6835807; US6268488; US20040018194; W098/13059; US20040052793; US6677435; US5621002; US20040121940; W02004/032828). Outras frações químicas que têm capacidade de realizar esse processo (“ligantes autoimolativos”) incluem carbamatos de metileno e grupos heteroarila como aminotiazóis, aminoimidazóis, aminopirimidinas e similares. Os ligantes contendo tais grupos autoimolativos heterocíclico são revelados, por exemplo, nas Publicações de Patente n° US 20160303254 e n° US 201500791 14, e na Patente n° US 7.754.681; Hay et al.
(1999) Bioorg. Med. Chem. Lett. 9:2237; no documento US 2005/0256030; de Groot et al (2001) J. Org. Chem. 66:8815 a 8830; e no documento US 7223837. Os ligantes suscetíveis à hidrólise enzimática podem ser, por exemplo, um ligante contendo peptídeo que é clivado por uma enzima de peptidase ou protease intracelular incluindo, mas não se limita a, uma protease lisossômica ou endossômica. Uma vantagem de usar a liberação proteolítica intracelular do agente terapêutico é que o agente é atenuado tipicamente quando conjugado e as estabilidades séricas dos conjugados são tipicamente alta. Em algumas modalidades, o ligante peptidílico é pelo menos dois aminoácidos longos ou pelo menos três aminoácidos longos. Ligantes de aminoácido exemplificativos incluem um dipeptídeo, um tripeptídeo, um tetrapeptídeo ou um pentapeptídeo. Exemplos de peptídeos adequados incluem esses peptídeos contendo aminoácidos como Valina, Alanina, Citrulina (Cit), Fenilalanina, Lisina, Leucina e Glicina. Os resíduos de aminoácido que compreendem um componente de ligante de aminoácido incluem esses aminoácidos que ocorrem naturalmente assim como aminoácidos menores e análogos de aminoácido que não ocorrem naturalmente, como citrulina. Dipeptídeos exemplificativos incluem valina-citrulina (vc ou val-cit) e alanina-fenilalanina (af ou ala-phe). Tripeptídeos exemplificativos incluem glicina-valina-citrulina (gly-val-cit) e glicina-glicina-glicina (gly-gly-gly). Em algumas modalidades, o ligante inclui um dipeptídeo, como Val-Cit, Ala-Val ou Phe-Lys, Val-Lys, Ala-Lys, Phe-Cit, Leu-Cit, lle- Cit, Phe-Arg ou Trp-Cit. Ligantes contendo dipeptídeos, como Val-Cit ou Phe-Lys são revelados, por exemplo, na Patente n° US 6.214.345, cuja revelação é incorporada em sua totalidade a título de referência no presente documento no que se refere a ligantes adequadas para conjugação covalente. Em algumas modalidades, o ligante inclui um dipeptídeo selecionado a partir de Val-Ala e Val-Cit. Em algumas modalidades, um dipeptídeo é usado em combinação com um ligante autoimolativo.
[0358] Ligantes adequados para uso no presente documento podem ainda incluir um ou mais grupos selecionados a partir de C1 C6 alquileno, heteroalquileno, C2-C6 alquenileno, C2-C6 heteroalquenileno, C2-C6 alquinileno, C2-C6 heteroalquinileno, C3-C6 cicloalquileno, heterocicloalquileno, arileno, heteroarileno e combinações dos mesmos, cada um dos quais pode ser opcionalmente substituído.
Exemplos não limitantes de tais grupos incluem unidades de (CH2)n, (CH2CH2O)n e - (C=O)(CH2)n-, em que n é um número inteiro de 1 a 6, selecionado independentemente para cada ocasião.
[0359] Em algumas modalidades, o ligante pode incluir um ou mais dentre uma hidrazina, um dissulfeto, um tioéter, um dipeptídeo, um grupo p-aminobenzila (PAB), um grupo autoimolativo heterocíclico, uma C1C6 alquila opcionalmente substituída, uma C1-C6 heteroalquila opcionalmente substituída, uma C2-C6 alquenila opcionalmente substituída, uma C2-C6 heteroalquenila opcionalmente substituída, uma C2-C6 alquinila opcionalmente substituída, uma C2-C6 heteroalquinila opcionalmente substituída, uma C3-C6 cicloalquila opcionalmente substituída, ima heterocicloalquila opcionalmente substituída, uma arila opcionalmente substituída, um grupo heteoarila opcionalmente substituído, acila,-(C=O)- ou H2CH2O)n-, em que n é um número inteiro de 1 a 6. Um elemento versado na técnica reconhecerá que um ou mais dos grupos listados podem estar presentes na forma de uma espécie bivalente (dirradical), por exemplo, C1-C6 alquileno e similares.
[0360] Em algumas modalidades, o ligante inclui um grupo p-aminobenzila (PAB). Em uma modalidade, o grupo p-aminobenzila é disposto entre o fármaco citotóxico e um sítio de clivagem de protease no ligante. Em uma modalidade, o grupo p-aminobenzila é parte de uma unidade de p-aminobenziloxicarbonila. Em uma modalidade, o grupo p-aminobenzila é parte de uma unidade de p- aminobenzilamido.
[0361] Em algumas modalidades, o ligante compreende PAB, Val-Cit-PAB, Val-Ala- PAB, Val-Lys(Ac)-PAB, Phe-Lys-PAB, Phe-Lys(Ac)-PAB, D-Val-Leu-Lys, Gly- Gly-Arg, Ala-Ala- Asn-PAB ou Ala-PAB.
[0362] Em algumas modalidades, o ligante compreende uma combinação de um ou mais dentre um peptídeo, oligossacarídeo, -(CH 2)n-, -(CH2CH2O)n-, PAB, Val- Cit-PAB, Val-Ala-PAB, Val-Lys(Ac)-PAB, Phe- Lys-PAB, Phe-Lys(Ac)-PAB, D-Val-Leu- Lys, Gly-Gly-Arg, Ala-Ala-Asn-PAB ou Ala-PAB.
[0363] Em algumas modalidades, o ligante compreende uma unidade de - (C=O)(CH2)n-, em que n é um número inteiro de 1 a 6.
[0364] Em algumas modalidades, o ligante compreende uma unidade de - (CH2)n-, em que n é um número inteiro de 2 a 6.
[0365] Em certas modalidades, o ligante do ADC é N-beta-maleimidopropil- Val-Ala-para- aminobenzila (BMP-Val-Ala-PAB).
[0366] Os ligantes que podem ser usados para conjugar um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo com um agente citotóxico incluem esses ligantes que são ligados covalentemente ao agente citotóxico em uma extremidade do ligante e, na outra extremidade do ligante, contém uma fração química formada a partir de uma reação de acoplamento entre um substituinte reativo presente no ligante e um substituinte reativo presente no anticorpo ou no fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga a CD2. Os substituintes reativos que podem estar presentes em um anticorpo ou em um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga a CD2 incluem, sem limitação, frações hidroxila de resíduos de serina, treonina e tirosina; frações amino de resíduos de lisina; frações carboxila de resíduos de ácido aspártico e ácido glutâmico; e frações tiol de resíduos de cisteína assim como frações propargila, azido, haloarila (por exemplo, fluoroarila), haloheteroarila (por exemplo, fluoro-heteroarila), haloalquila e halo-heteroalquila de aminoácidos que não ocorrem naturalmente.
[0367] Exemplos de ligantes úteis para a síntese de conjugados de fármaco- anticorpo incluem esses ligantes que contêm eletrófilos, como receptores de Michael (por exemplo, maleimidas), ésteres ativados, compostos de carbonila deficientes de elétron e aldeídos dentre outros, adequados para reação com substituintes nucleofílicos presentes nos anticorpos ou nos fragmentos de ligação ao antígeno, como frações de amina e tiol. Por exemplo, os ligantes adequados para a síntese de conjugados de fármaco-anticorpo incluem, sem limitação, 4-(N-maleimidometil)-ciclo- hexano-L-carboxilato de succinimidila (SMCC), iodoacetato de N- succinimidila (SIA), sulfo-SMCC, éster m-maleimidobenzoil-A/- hidroxisuccinimidila (MBS), sulfo-MBS e iodoacetato de succimidila dentre outros descritos, por exemplo, em Liu et al., 18:690 a 697, 1979, cuja revelação é incorporada a título de referência no presente documento no que se refere a ligantes para conjugação química. Ligantes adicionais incluem ligantes de maleimidocaproila não cliváveis que são particularmente úteis para a conjugação de agentes que interrompem microtúbulos, como auristatinas, são descritos por Doronina et al., Bioconjugate Chem. 17:14 a 24, 2006, cuja revelação é incorporada a título de referência no presente documento no que se refere a ligantes para conjugação química.
[0368] Será reconhecido por um elemento versado na técnica que quaisquer um ou mais grupos, frações e características químicas no presente documento podem ser combinados de múltiplas formas para formar ligantes úteis para conjugação dos anticorpos e citotoxinas conforme revelado no presente documento.
Os ligantes adicionais úteis em conjunto com as composições e métodos descritos no presente documento são descritos, por exemplo, na Publicação de Pedido de Patente n° US 2015/0218220, cuja revelação é incorporada em sua totalidade a título de referência no presente documento.
[0369] Os ligantes úteis em conjunto com os conjugados de anticorpo- fármaco descritos no presente documento incluem, sem limitação, ligantes contendo frações químicas formadas por reações de acoplamento conforme retratado na Tabela 1 abaixo. As linhas curvadas designam pontos de ligação ao anticorpo ou ao fragmento de ligação ao antígeno e a molécula citotóxica respectivamente.
Tabela 1. Frações químicas exemplificativas formadas por reações de acoplamento na formação de conjugados de anticorpo-fármaco Reações de Fração Química Z Formada por Reações de Acoplamento Acoplamento Exemplificativas [3+2] Cicloadição [3+2] Cicloadição [3+2] Cicloadição, Esterificação [3+2] Cicloadição, Esterificação
[3+2] Cicloadição, Esterificação
[3+2] Cicloadição, Esterificação
[3+2] Cicloadição, Esterificação
[3+2] Cicloadição, Esterificação
[3+2] Cicloadição, Esterificação
[3+2] Cicloadição, Esterificação
[3+2] Cicloadição, Esterificação
[3+2] Cicloadição, Esterificação
[3+2] Cicloadição, Esterificação
[3+2] Cicloadição,
Adição de Michael
Adição de Michael
Condensação de imina, Amidação
Condensação de imina
Formação de dissulfeto Alquilação de tiol Condensação, Adição de Michael
[0370] Um elemento versado na técnica reconhecerá que um substituinte reativo Z ligado ao ligante e um substituinte reativo no anticorpo ou no fragmento de ligação ao antígeno do mesmo estão envolvidos na reação de acoplamento covalente para produzir a fração química Z, e reconhecerá o substituinte reativo Z.
Portanto, os conjugados de anticorpo-fármaco úteis em conjunto com os métodos descritos no presente documento podem ser formados pela reação de um anticorpo ou de um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo com um ligante ou conjugado de citotoxina-ligante, conforme descrito no presente documento, o ligante ou o conjugado de citotoxina- ligante incluindo um substituinte reativo Z adequado para reação com um substituinte reativo no anticorpo ou no fragmento de ligação ao antígeno do mesmo para formar a fração química Z.
[0371] Conforme retratado na Tabela 3, exemplos de substituintes reativos adequados no ligante e no anticorpo ou no fragmento de ligação ao antígeno do mesmo incluem um par de nucleófilo/eletrófilo (por exemplo, um par de tiol/haloalquila, um par de amino/carbonila ou um par de tiol/ carbonila α, β- insaturada e similares), um par de dieno/dienófilo (por exemplo, par de azida/alquino ou um par de dieno/carbonila α, β -insaturada dentre outros) e similares. As reações de acoplamento entre os substituintes reativos para formar a fração química Z incluem, sem limitação, alquilação de tiol, alquilação de hidroxila, alquilação de amina, condensação de amina ou hidroxilamina, formação de hidrazina, amidação, esterificação, formação de dissulfeto, cicloadição (por exemplo, cicloadição de [4+2]
Diels-Alder, cicloadição de [3+2] Huisgen dentre outras), substituição de aromático nucleofílico, substituição de aromático eletrofílico e outras modalidades reativas conhecidas na técnica ou descritas no presente documento. De preferência, o ligante contém um grupo funcional eletrofílico para reação com um grupo funcional nucleofílico no anticorpo ou no fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.
[0372] Os substituintes reativos que podem estar presentes em um anticorpo ou em um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo conforme revelado no presente documento incluem, sem limitação, grupos nucleofílicos, como (i) grupos amina de N-terminal, (ii) grupos amina de cadeia lateral, por exemplo. lisina, (iii) grupos tiol de cadeia lateral, por exemplo, cisteína, e (iv) grupos hidroxila ou amino de açúcar em que o anticorpo é glicosilado. Os substituintes reativos que podem estar presentes em um anticorpo ou em um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo conforme revelado no presente documento incluem, sem limitação, frações hidroxila de resíduos de serina, treonina e tirosina; frações amino de resíduos de lisina; frações carboxila de resíduos de ácido aspártico e ácido glutâmico; e frações tiol de resíduos de cisteína assim como frações propargila, azido, haloarila (por exemplo, fluoroarila), haloheteroarila (por exemplo, fluoro-heteroarila), haloalquila e halo-heteroalquila de aminoácidos que não ocorrem naturalmente. Em algumas modalidades, os substituintes reativos presente em um anticorpo ou em um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo conforme revelado no presente documento incluem frações amina ou tiol. Certos anticorpos têm dissulfeto entre cadeias redutíveis, isto é, pontes de cisteína. Os anticorpos podem ser produzidos reativos para conjugação com reagentes de ligante através de tratamento com um agente redutor como DTT (ditiotreitol). Assim, cada ponte de cisteína formará teoricamente dois nucleófilos de tiol reativos. Os grupos nucleofílicos adicionais podem ser introduzidos em anticorpos através da reação de lisinas com 2- iminotiolano (reagente de Traut) resultando na conversão de uma amina em um tiol.
Os grupos tiol reativos podem ser introduzidos no anticorpo (ou no fragmento do mesmo) ao introduzir um, dois, três, quatro ou mais resíduos de cisteína (por exemplo, ao preparar anticorpos mutantes compreendendo um ou mais resíduos de aminoácido de cisteína não ativos). A Patente n° US 7.521.541 ensina a manipular anticorpos através de introdução de aminoácidos de cisteína reativos.
[0373] Em algumas modalidades, a fração reativa Z ligada ao ligante é um grupo nucleofílico que é reativo com um grupo eletrofílico presente em um anticorpo.
Os grupos eletrofílicos úteis em um anticorpo incluem, mas não se limitam a, grupos aldeído e cetona carbonila. O heteroátomo de um grupo nucleofílico pode reagir com um grupo eletrofílico em um anticorpo e formar uma ligação covalente ao anticorpo.
Os grupos nucleofílicos úteis incluem, mas não se limitam a, hidrazida, oxima, amino, hidroxila, hidrazina, tiosemicarbazona, carboxilato de hidrazina e aril-hidrazida.
[0374] Em algumas modalidades, Z é o produto de uma reação entre substituintes nucleofílicos reativos presentes nos anticorpos ou nos fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos, como frações amina e tiol, e um substituinte eletrofílico reativo Z. Por exemplo, Z pode ser um receptor de Michael (por exemplo, maleimida), éster ativado, composto de carbonila deficiente de elétron ou um aldeído dentre outros.
[0375] Em algumas modalidades, o ADC compreende um anticorpo anti-CD2 conjugado com uma amatoxina de qualquer uma das fórmulas I, IA, IB, II, IIA ou IIB conforme revelado no presente documento através de um ligante e de uma fração química Z. Em algumas modalidades, o ligante inclui um dipeptídeo. Em algumas modalidades, o ligante inclui um dipeptídeo selecionado a partir de Val-Ala e Val-Cit.
Em algumas modalidades, o ligante inclui um grupo para-aminobenzila (PAB). Em algumas modalidades, o ligante inclui a fração de PAB-Cit-Val. Em algumas modalidades, o ligante inclui a fração de PAB-Ala-Val. Em algumas modalidades, o ligante inclui uma unidade de -((C=O)(CH2)n-, em que n é um número inteiro de 1 a 6.
Em algumas modalidades, o ligante é -PAB-Cit-Val-((C=O)(CH2)n-.
[0376] Em algumas modalidades, o ligante inclui uma unidade de -(CH2)n-, em que n é número inteiro de 2 a 6.
[0377] Em algumas modalidades, o ligante é -PAB-Cit-Val-((C=O)(CH2)n- Em algumas modalidades, o ligante é -PAB-Ala-Val-((C=O)(CH2)n-. Em algumas modalidades, o ligante é -(CH2)n- Em algumas modalidades, o ligante é -((CH2)n -, em que n é 6.
[0378] Em algumas modalidades, a fração química Z é selecionada a partir da Tabela 1.
[0379] Em algumas modalidades, a fração química Z é em que S é um átomo de enxofre que representa o substituinte reativo presente em um anticorpo ou em um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga a CD2 (por exemplo, do grupo -SH de um resíduo de cisteína). Em algumas modalidades, o ligante L e a fração química Z, considerados em conjunto como L-Z, é ou
[0380] Um elemento versado na técnica reconhecerá a estrutura de grupo de ligante-substituinte reativo antes da conjugação com o anticorpo ou com o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo inclui uma maleimida como o grupo Z. As frações de ligante supracitadas e os conjugados de amatoxina-ligante dentre outros úteis em conjunto com as composições e métodos descritos no presente documento são descritos, por exemplo, na Publicação de Pedido de Patente n° US 2015/0218220 e na Publicação de Pedido de Patente n° WO2017/149077, cujas revelações são incorporadas em sua totalidade a título de referência no presente documento.
[0381] Em algumas modalidades, a estrutura de grupo de ligante-substituinte reativo antes da conjugação com o anticorpo ou com o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é: ou Preparação de Conjugados de Anticorpo-Fármaco
[0382] Nos ADCs da fórmula I conforme revelado no presente documento, um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é conjugado com uma ou mais frações de fármaco citotóxico (D), por exemplo, cerca de 1 a cerca de 20 frações de fármaco por anticorpo, através de um ligante L e de uma fração química Z conforme revelado no presente documento. Os ADCs da presente revelação podem ser preparados através de várias rotas, empregando reações, condições e reagentes de química orgânica conhecidos pelos elementos versados na técnica incluindo: (1) reação de um substituinte reativo de um anticorpo ou de um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo com um reagente de ligante bivalente para formar Ab-Z-L conforme descrito no presente documento acima seguida pela reação com uma fração de fármaco D; ou (2) reação de um substituinte reativo de uma fração de fármaco com um reagente de ligante bivalente para formar D-L-Z, seguida pela reação com um substituinte reativo de um anticorpo ou de um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo conforme descrito no presente documento acima para formar um ADC da fórmula D-L-Z-Ab, como Am-Z-L-Ab.
Métodos adicionais para preparar ADC são descritos no presente documento. Em um outro aspecto, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo tem um ou mais resíduos de lisina que pode ser modificado quimicamente para introduzir um ou mais grupos sulfidrila. Então, o ADC é formado pela conjugação através do átomo de enxofre do grupo sulfidrila conforme descrito acima no presente documento. Os reagentes que podem ser usados para modificar lisina incluem, mas não se limitam a, S-acetiltioacetato de N-succinimidila (SATA) e cloridrato de 2- lminotiolano (Reagente de Traut).
[0383] Em um outro aspecto, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo pode ter um ou mais grupos de carboidratos que podem ser modificados quimicamente para ter um ou mais grupos sulfidrila. Então, o ADC é formado pela conjugação através do átomo de enxofre do grupo sulfidrila conforme descrito acima no presente documento.
[0384] Ainda em um outro aspecto, o anticorpo pode ter um ou mais grupos der carboidratos que podem ser oxidados para fornecer um grupo aldeído (-CHO) (consulte, por exemplo, Laguzza, et al., J. Med. Chem. 1989, 32(3), 548 a 55). Então, o ADC é formado por conjugação através do aldeído correspondente conforme descrito acima no presente documento. Outros protocolos para a modificação de proteínas para a ligação ou associação de citotoxinas são descritos em Coligan et al., Current Protocols in Protein Science, vol. 2, John Wiley & Sons (2002), incorporados a título de referência no presente documento.
[0385] Métodos para a conjugação de frações de ligante-fármaco com proteínas-alvos de célula, como anticorpos, imunoglobulinas ou fragmentos dos mesmos são encontrados, por exemplo, na Patente n° US 5.208.020; nas Patentes n° US 6.441.163; n° US W02005037992; n° US W02005081711; e n° US W02006/034488, todas as quais são incorporadas expressamente em suas totalidades a título de referência pelo presente documento.
[0386] Alternativamente, uma proteína de fusão compreendendo o anticorpo e o agente citotóxico pode ser produzida, por exemplo, através de técnicas recombinantes ou síntese de peptídeo. O comprimento de DNA pode compreender as respectivas regiões que codificam as duas porções do conjugado adjacentes entre si ou separadas por uma região que codifica um peptídeo-ligante que não destrói as propriedades desejadas do conjugado.
Métodos de Tratamento
[0387] Conforme descrito no presente documento, a terapia de transplante de célula-tronco hematopoiética pode ser administrada a um indivíduo em necessidade de tratamento com a finalidade de povoar ou repovoar um ou mais tipos de células sanguíneas.
[0388] As células-tronco hematopoiéticas exibem, em geral, potência múltipla, e, assim, podem se diferenciar em múltiplas linhagens de células sanguíneas diferentes incluindo, mas não se limitam a, granulócitos (por exemplo, promielócitos, neutrófilos, eosinófilos, basófilos), eritrócitos (por exemplo, reticulócitos, eritrócitos), trombócitos (por exemplo, megacarioblastos, megacariócitos que produzem plaqueta, plaquetas), monócitos (por exemplo, monócitos, macrófagos), célula dendríticas, microglia, osteoclastos e linfócitos (por exemplo, células NK, células B e células T). As células-tronco hematopoiéticas têm ainda capacidade de autorrenovação, e, assim, pode dar origem a células-filha que têm potencial equivalente ao potencial de uma célula-mãe, e apresentam também a capacidade de ser reintroduzida em um receptor de transplante através do qual as mesmas retornam para o nicho de célula-tronco hematopoiética e restabelecem hematopoese produtiva e sustentada. Assim, as células-tronco hematopoiéticas podem ser administradas a um paciente com defeito ou deficiente em um ou mais tipos de células da linhagem hematopoiéticas a fim de reconstituir a população de células com defeito ou deficiente in vivo, tratando, desse modo, a patologia associada ao defeito ou depleção na população de células sanguíneas endógenas.
Assim, as composições e métodos descritos no presente documento podem ser usados para tratar uma hemoglobinopatia não maligna (por exemplo, uma hemoglobinopatia selecionada a partir do grupo que consiste em anemia falciforme, talassemia, anemia de Fanconi, anemia aplástica e síndrome de Wiskott-Aldrich).
Adicional ou alternativamente, as composições e métodos descritos no presente documento podem ser usados para tratar uma imunodeficiência, como uma imunodeficiência congênita.
[0389] Adicional ou alternativamente, as composições e métodos descritos no presente documento podem ser usados para tratar uma imunodeficiência adquirida (por exemplo, uma imunodeficiência adquirida selecionada a partir do grupo que consiste em HIV e AIDS). As composições e métodos descritos no presente documento podem ser usados para tratar um distúrbio metabólico (por exemplo, um distúrbio metabólico selecionado a partir do grupo que consiste em doenças de armazenamento do glicogênio, mucopolissacaridoses, Doença de Gaucher, Doença de Hurler, espingolipidoses e leicodistrofia metacromática).
[0390] Adicional ou alternativamente, as composições e métodos descritos no presente documento podem ser usados para tratar um distúrbio maligno ou proliferativo, como um câncer hematológico, doença mieloproliferativa. No caso de tratamento de câncer, as composições e métodos descritos no presente documento podem ser administrados a um paciente antes da terapia de transplante de célula- tronco hematopoiética a fim de depletir uma população de células imunes que cruza com, e monta uma resposta imune contra as células-tronco hematopoiéticas não auto. Isso serve para prevenir ou reduzir a probabilidade de rejeição dos enxertos de célula-tronco hematopoiética transplantada, permitindo que as células-tronco hematopoiéticas transplantadas retornem a um nicho de célula-tronco e estabeleçam hematopoese produtiva. Isso, por sua vez, pode reconstituir uma população de células depletidas durante a erradicação de célula cancerosa, como durante a quimioterapia sistêmica. Os cânceres hematológicos exemplificativos que podem ser tratados com o uso das composições e métodos descritos no presente documento incluem, sem limitação, leucemia mieloide aguda, leucemia linfoide aguda, leucemia mieloide crônica, leucemia linfoide crônica, mieloma múltiplo, linfoma difuso de grandes células B e linfoma não Hodgkin assim como outras afecções cancerígenas incluindo neuroblastoma.
[0391] As doenças adicionais que podem ser tratadas com as composições e métodos descritos no presente documento incluem, sem limitação, deficiência de adenosina deaminase e imunodeficiência combinada grave, síndrome de hiperimunoglobulina M, doença de Chediak-Higashi, linfo-histiocitose hereditária, osteopetrose, osteogênese imperfeita, doenças de armazenamento, talassemia principal, esclerose sistêmica, lúpus eritematoso sistêmico, esclerose múltipla, e artrite rematoide juvenil.
[0392] Os anticorpos ou os fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos e conjugados descritos no presente documento podem ser usados para induzir tolerância ao transplante de órgão sólido. Por exemplo, as composições e métodos descritos no presente documento podem ser usados para depletir ou ablacionar uma população de células imunes antes do transplante de célula-tronco hematopoiética.
Após tal depleção de células dos tecidos-alvo, uma população de células-tronco ou progenitoras de um doador de órgão (por exemplo, células-tronco hematopoiéticas do doador de órgão) pode ser administrada ao receptor de transplante, e após o enxertamento de tais células-tronco ou progenitoras, um quimerismo temporário ou misto estável pode ser alcançado, possibilitando, desse modo, a tolerância ao transplante de órgão a longo prazo sem a necessidade de agentes imunossupressores adicionais. A probabilidade de rejeição de enxerto transplantado pode ser reduzida, ou a rejeição pode ser completamente prevenida através de administração do anticorpo anti-CD2 ou do fragmento de ligação ao antígeno do mesmo. Dessa forma, as composições e métodos descritos no presente documento podem ser usadas para induzir a tolerância ao transplante em um receptor de órgão sólido (por exemplo, um transplante renal, um transplante pulmonar, um transplante hepático e um transplante cardíaco dentre outros). As composições e métodos descritos no presente documento são bem adequados para uso em conjunto com a indução de tolerância ao transplante de órgão sólido, por exemplo, devido a um enxertamento de doador temporário ou estável de baixa porcentagem ser suficiente para induzir tolerância a longo prazo de órgão transplantado.
[0393] Além disso, as composições e métodos descritos no presente documento podem ser usados para tratar diretamente cânceres, como cânceres caracterizados por células que são CD2+. Por exemplo, as composições e métodos descritos no presente documento podem ser usados para tratar leucemia, particularmente, em pacientes que exibem células leucêmicas de CD2+. Ao depletir células cancerosas de CD2+, células leucêmicas, as composições e métodos descritos no presente documento podem ser usados para tratar diretamente vários cânceres.
[0394] Cânceres exemplificativos que podem ser tratados desse modo incluem cânceres hematológicos, como leucemia mieloide aguda, leucemia linfoide aguda, leucemia mieloide crônica, leucemia linfoide crônica, mieloma múltiplo, linfoma difuso de grandes células B e linfoma não Hodgkin,
[0395] Além disso, as composições e métodos descritos no presente documento podem ser usados para tratar distúrbios autoimunes. Por exemplo, um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo pode ser administrado a um indivíduo, como um paciente humano que está sofrendo de um distúrbio autoimune com a finalidade de exterminar uma célula imune de CD2+. A célula imune de CD2+ pode ser um linfócito autorreativo, como uma célula T que expressa um receptor de célula T que se liga especificamente, e monta uma resposta imune com um antígeno auto. Ao depletir células de CD2+ autorreativas, as composições e métodos descritos no presente documento podem ser usadas para tratar patologias autoimunes, como as patologias descritas abaixo. Adicional ou alternativamente, as composições e métodos descritos no presente documento podem ser usados para tratar uma doença autoimune ao depletir uma população de células-tronco hematopoiéticas endógenas antes da terapia de transplante de célula-tronco hematopoiética, caso em que as células transplantadas podem retornar a um nicho criado pela etapa de depleção de célula endógena e estabelecer hematopoese produtiva. Isso, por sua vez, pode reconstituir uma população de células depletidas durante a erradicação de célula autoimune.
[0396] As doenças autoimunes que podem ser tratadas com o uso das composições e dos métodos descritos no presente documento incluem, sem limitação, psoríase, artrite psoriática, diabetes mellitus do tipo 1 (diabetes do tipo 1), artrite reumatoide (RA), lúpus sistêmico humano (SLE), esclerose múltipla (MS), doença intestinal inflamatória (IBD), colite linfocítica, encefalomielite disseminada aguda (ADEM), doença de Addison, alopecia universal, espondilite anquilosante, síndrome de anticorpo antifosfolíde (APS), anemia aplástica, anemia hemolítica autoimune, hepatite autoimune, doença autoimune dom ouvido interno (AIED), síndrome linfoproliferativa autoimune (ALPS), ooforite autoimune, doença de Balo, doença de Behcet, penfigoide bolhoso, cardiomiopatia, doença de Chagas, síndrome de disfunção imune de fadiga crônica (CFIDS), polineuropatia desmielinizante inflamatória crônica, doença de Crohn, penfigoide cicatricial, dermatite herpetiforme de espru celíaco, doença por aglutininas a frio, síndrome de CREST, doença de Degos, lúpus discoide, neuropatia autonômica, endometriose, crioglobulinemia misturada essencial, fibromalgia-fibromiosite, síndrome de Goodpasture, doença de Grave, síndrome de Guillain-Barre (GBS), tireoide de Hashimoto, Hidrosadenite supurativa, púrpura trombocitopênica idiopática e/ou aguda, fibrose pulmonar idiopática, neuropatia de IgA, cistite intersticial, artrite juvenil, doença de Kawasaki, líquen plano, doença de Lyme, doença de Meniere, doença mista do tecido conjuntivo (MCTD), miastenia grave, neuromiotonia, síndrome de opsoclônica- mioclônica (OMS), neurite óptica, tireoide de Ord, pênfigo vulgar, anemia perniciosa, policondrite, polimiosite e dermatomiosite, cirrose biliar primária, poliarterite nodosa, síndromes poliglandulares, polimialgia reumática, agamaglobulinemia primária, fenômeno de Raynaud, síndrome de Reiter, febre reumática, sarcoidose, esclerodermia, síndrome de Sjogren, síndrome da pessoa rígida, arterite de Takayasu, arterite temporal (conhecida também como "arterite de células gigantes"), colite ulcerativa, colite colagenosa, uveíte, vasculite, vitiligo, vulvodinia ("vestibulite vulvar") e granulomatose de Wegener.
[0397] Por exemplo, com o uso das composições e métodos descritos no presente documento, um elemento versado na técnica pode administrar a um indivíduo que está sofrendo de um distúrbio autoimune um anticorpo anti-CD2 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo em uma quantidade suficiente para tratar a patologia autoimune. Por exemplo, o indivíduo pode estar sofrendo de esclerodermia, esclerose múltipla, colite ulcerativa, doença de Chrohn e/ou diabetes do tipo 1. Para melhorar um ou mais dessas afecções, um médico com habilidade na técnica pode prescrever e administrar ao indivíduo um anticorpo anti-CD2 ou um fragmento do mesmo, como um anticorpo ou um fragmento do mesmo que é ligado a um agente citotóxico. O anticorpo ou o fragmento do mesmo pode ser conjugado com um agente citotóxico com o uso de técnicas de conjugação e ligantes detalhados acima. Uma variedade de agentes citotóxicos pode ser conjugada com um anti-CD2 anticorpo ou com um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo a fim de depletir uma população de células T ou células NK de CD2+ autorreativas endógenas em um indivíduo. Por exemplo, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo pode ser conjugado com uma amatoxina ou com uma outra fração de citotoxina descrita no presente documento.
[0398] Na preparação para a terapia, o médico pode avaliar a quantidade ou concentração de células T e/ou células NK autorreativas em uma amostra isolada de um indivíduo. Isso pode ser realizado, por exemplo, com o uso de técnicas de análise de FACS conhecidas na técnica. Então, um elemento com habilidade na técnica pode administrar ao indivíduo um anticorpo ou um fragmento do mesmo, sozinho ou conjugado com uma citotoxina com a finalidade de depletir a população de células T e/ou células NK autorreativas. Para avaliar a eficácia da terapia, o médico pode determinar a quantidade ou concentração de células T e/ou células NK autorreativas em uma amostra isolada do paciente em um momento subsequente à administração do anticorpo anti-CD2 ou do fragmento do mesmo. Uma determinação de que a quantidade de células T e/ou células NK autorreativas em uma amostra isolada do indivíduo após a terapia em relação à quantidade concentração de células T ou células NK antes de a terapia fornecer uma indicação de que o paciente está respondendo ao anticorpo anti-CD2 ou ao fragmento do mesmo.
[0399] Os conjugados de anticorpo-fármaco compreendendo anticorpos anti- CD2 , ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos podem ser usados também em combinação com uma terapia com CAR T. Especificamente, uma quantidade eficaz de um conjugado de anticorpo anti-CD2 e fármaco pode ser administrada a um paciente em necessidade do mesmo antes do tratamento com CAR T a fim de depletir células T nativas. A depleção de células T nativas que expressam CD2 com o uso dos métodos e composições descritos no presente documento pode fornecer transferência mais eficaz de células T manipuladas usadas na terapia com CAR T.
Rotas de Administração e Dosagem
[0400] Os anticorpos ou os fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos descritos no presente documento podem ser administrados a um paciente (por exemplo, um paciente humano em necessidade de terapia de transplante de célula-
tronco hematopoiética) em uma variedade de formas de dosagem. Por exemplo, os anticorpos ou os fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos descritos no presente documento podem ser administrados a um paciente em necessidade de terapia de transplante de célula-tronco hematopoiética e/ou que está sofrendo de câncer ou de uma doença autoimune na forma de uma solução aquosa, como um solução aquosa contendo um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis.
Excipientes farmaceuticamente aceitáveis exemplificativos para uso com as composições e métodos descritos no presente documento são agentes modificadores de viscosidade. A solução aquosa pode ser esterilizada com o uso de técnicas conhecidas na técnica.
[0401] Os anticorpos e os fragmentos de ligação ao antígeno descritos no presente documento podem ser administrados por uma variedade de rotas, como oral, transdérmica, subcutânea, intranasal, intravenosa, intramuscular, intraocular ou parenteralmente. A rota mais adequada para administração em um determinado caso dependerá do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno particular administrado, do paciente, dos métodos de formulação farmacêutica, dos métodos de administração (por exemplo, tempo de administração e rota de administração), da idade, peso corporal e sexo do paciente, da gravidade das doenças que são tratadas, da dieta do paciente e da taxa de excreção do paciente.
[0402] A dose eficaz de um anticorpo ou de um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo descrita no presente documento pode variar, por exemplo, de cerca de 0,001 a cerca de 100 mg/kg de peso corporal por administração única (por exemplo, bolus), múltiplas administrações ou administração contínua para alcançar um concentração sérica ideal (por exemplo, uma concentração sérica de cerca de 0,0001 a cerca de 5000 pg/mL) do anticorpo ou de um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo. A dose pode ser administrada um ou mais vezes (por exemplo, cerca de 2 a 10 vezes) por dia, semana ou mês a um indivíduo (por exemplo, um ser humano) que se submete à terapia de condicionamento na preparação para recepção de um transplante de célula-tronco hematopoiética.
O anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo pode ser administrado ao paciente em um momento em que promove idealmente o enxertamento das células-tronco hematopoiéticas exógenas, por exemplo, em um momento em que deplete idealmente células T ou células NK de CD2+ que cruzam com um antígeno célula-
tronco hematopoiética não auto(por exemplo, a antígeno não auto-MHC expressado pelas células-tronco hematopoiéticas) antes do transplante de célula-tronco hematopoiética.
Por exemplo, os anticorpos anti-CD2 e os fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos podem ser administrados a um paciente que se submete à terapia de transplante de célula-tronco hematopoiética de cerca de 1 hora a cerca de
1 semana (por exemplo, cerca de 1 hora, cerca de 2 horas, cerca de 3 horas, cerca de 4 horas, cerca de 5 horas, cerca de 6 horas, cerca de 7 horas, cerca de 8 horas,
cerca de 9 horas, cerca de 10 horas, cerca de 1 1 horas, cerca de 12 horas, cerca de 13 horas, cerca de 14 horas, cerca de 15 horas, cerca de 16 horas, cerca de 17 horas, cerca de 18 horas, cerca de 19 horas, 20 horas, cerca de 21 horas, cerca de
22 horas, cerca de 23 horas, cerca de 24 horas, cerca de 2 dias, cerca de 3 dias,
cerca de 4 dias, cerca de 5 dias, cerca de 6 dias ou cerca de 7 dias; ou cerca de 1 a
3 dias; cerca de 1 a 4 dias; cerca de 12 horas a 3 dias) ou mais antes da administração do transplante de célula-tronco hematopoiética exógena.
A vida útil do anticorpo pode ser entre cerca de 1 hora e cerca de 24 horas (por exemplo, cerca de
1 hora, cerca de 2 horas, cerca de 3 horas, cerca de 4 horas, cerca de 5 horas,
cerca de 6 horas, cerca de 7 horas, cerca de 8 horas, cerca de 9 horas, cerca de 10 horas, cerca de 1 1, horas, cerca de 12 horas, cerca de 13 horas, cerca de 14 horas,
cerca de 15 horas, cerca de 16 horas, cerca de 17 horas, cerca de 18 horas, cerca de 19 horas, cerca de 20 horas, cerca de 21 horas, cerca de 22 horas, cerca de 23 horas ou cerca de 24 horas).
[0403] Em uma modalidade, um anticorpo anti-CD2 (ou fragmento do mesmo contendo Fc) tem uma vida útil reduzida (em comparação a uma região de Fc do tipo selvagem) em que a região de Fc do anticorpo compreende uma mutação H435A (numeração de acordo com o índice UE).
[0404] De acordo com os métodos revelados no presente documento, um médico com habilidade na técnica pode condicionar um paciente, como um paciente humano, com a finalidade de promover o enxertamento de enxertos de célula-tronco hematopoiética endógena antes da terapia de transplante de célula-tronco hematopoiética. Para essa finalidade, um médico com habilidade na técnica pode administrar ao paciente humano um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que tem capacidade de se ligar a CD2, como um anticorpo anti- CD2 descrito no presente documento. O anticorpo ou o fragmento do mesmo pode ser conjugado covalentemente com uma toxina, como uma molécula citotóxica descrita no presente documento ou conhecida na técnica, ou com um domínio de Fc.
Por exemplo, um anticorpo anti-CD2 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo pode ser conjugado covalentemente com uma citotoxina, como pseudomonas exotoxina A, debouganina, toxina de difteria, uma amatoxina, como α- amanitina, saporina, maitansina, um maitansinoide, uma auristatina, uma antraciclina, uma caliqueamicina, irinotecano, SN-38, uma duocarmicina, uma pirrolobenzodiazepina, um dímero de pirrolobenzodiazepina, uma indolinobenzodiazepina, um dímero de indolinobenzodiazepina ou uma variante dos mesmos. Essa conjugação pode ser realizada com o uso de técnicas de formação de ligação covalente descritas no presente documento ou conhecidas na técnica. O anticorpo, o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ou o conjugado de anticorpo-fármaco pode ser administrado subsequentemente ao paciente, por exemplo, através de administração intravenosa, antes do transplante de células-
tronco hematopoiéticas exógenas (como células-tronco hematopoiéticas autólogas, singênicas ou alogênicas) ao paciente.
[0405] O anticorpo anti-CD2, o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ou o conjugado de anticorpo-fármaco pode ser administrado em uma quantidade suficiente para reduzir a quantidade de células T endógenas, como células T residentes de medula óssea , por exemplo, em cerca de 10%, cerca de 20%, cerca de 30%, cerca de 40%, cerca de 50%, cerca de 60%, cerca de 70%, cerca de 80%, cerca de 90%, cerca de 95%, cerca de 10% a 90%, cerca de 10% a 70%, cerca de 10% a 60% ou mais antes da terapia de transplante de célula-tronco hematopoiética.
A redução na contagem de célula T pode ser monitorada com o uso de técnicas convencionais conhecidas na técnica, como através de análise de FACS de células que expressam antígenos de superfície de célula T característicos em uma amostra sanguínea retirada do paciente em intervalos variados durante a terapia de condicionamento. Por exemplo, um médico com habilidade na técnica pode retirar uma amostra de medula óssea do paciente em vários pontos de tempo durante a terapia de condicionamento e determinar a extensão de redução de célula T endógena ao conduzir uma análise de FACS para elucidar as concentrações relativas de células T na amostra com o uso de anticorpos que se ligam a antígenos marcadores de célula T. De acordo com algumas modalidades, quando a concentração de células T atingiu um valor mínimo em resposta à terapia de condicionamento com um anticorpo anti-CD2 ou com um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ou com um conjugado de anticorpo-fármaco, o médico pode concluir a terapia de condicionamento, e pode começar a preparar o paciente para terapia de transplante de célula-tronco hematopoiética.
[0406] O anticorpo anti-CD2, o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ou o conjugado de anticorpo-fármaco pode ser administrado ao paciente em uma solução aquosa contendo um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis,
como um agente modificador de viscosidade. A solução aquosa pode ser esterilizada com o uso de técnicas descritas no presente documento ou conhecidas na técnica.
O anticorpo, o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ou o conjugado de anticorpo-fármaco pode ser administrado ao paciente em uma dosagem, por exemplo, de cerca de 0,001 mg/kg a cerca de 100 mg/kg antes da administração de um enxerto de célula-tronco hematopoiética ao paciente. O anticorpo, o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ou o conjugado de anticorpo-fármaco pode ser administrado ao paciente em tempo que promove idealmente o enxertamento das células-tronco hematopoiéticas exógenas, por exemplo, de cerca de 1 hora a cerca de 1 semana (por exemplo, cerca de 1 hora, cerca de 2 horas, cerca de 3 horas, cerca de 4 horas, cerca de 5 horas, cerca de 6 horas, cerca de 7 horas, cerca de 8 horas, cerca de 9 horas, cerca de 10 horas, cerca de 11 horas, cerca de 12 horas, cerca de 13 horas, cerca de 14 horas, cerca de 15 horas, cerca de 16 horas, cerca de 17 horas, cerca de 18 horas, cerca de 19 horas, cerca de 20 horas, cerca de 21 horas, cerca de 22 horas, cerca de 23 horas, cerca de 24 horas, cerca de 2 dias, cerca de 3 dias, cerca de 4 dias, cerca de 5 dias, cerca de 6 dias ou cerca de 7 dias) ou mais antes da administração do transplante de célula-tronco hematopoiética exógena.
[0407] Após a conclusão da terapia de condicionamento, então, o paciente pode receber uma infusão (por exemplo, uma infusão intravenosa) de células-tronco hematopoiéticas exógenas, como do mesmo médico que realizou a terapia de condicionamento ou de um médico diferente. O médico pode administrar ao paciente uma infusão de células-tronco hematopoiéticas autólogas, singênicas ou alogênicas, por exemplo, em uma dosagem de cerca de 1 x 103 a cerca de 1 x 109 células-tronco hematopoiéticas/kg. O médico pode monitorar o enxertamento do transplante de célula-tronco hematopoiética, por exemplo, ao retirar uma amostra sanguínea do paciente e determinar o aumento na concentração de células-tronco hematopoiéticas ou células da linhagem hematopoiéticas (como megacariócitos,
trombócitos, plaquetas, eritrócitos, mastócitos, mieloblastos, basófilos, neutrófilos,
eosinófilos, microglia, granulócitos, monócitos, osteoclastos, células que apresentam antígeno, macrófagos, célula dendríticas, células naturais exterminadoras, linfócitos
T e linfócitos B) após a administração do transplante.
Essa análise pode ser conduzida, por exemplo, de 1 hora a 6 meses ou mais após a terapia de transplante de célula-tronco hematopoiética (por exemplo, cerca de 1 hora, cerca de 2 horas,
cerca de 3 horas, cerca de 4 horas, cerca de 5 horas, cerca de 6 horas, cerca de 7 horas, cerca de 8 horas, cerca de 9 horas, cerca de 10 horas, cerca de 1 1 horas,
cerca de 12 horas, cerca de 13 horas, cerca de 14 horas, cerca de 15 horas, cerca de 16 horas, cerca de 17 horas, cerca de 18 horas, cerca de 19 horas, cerca de 20 horas, cerca de 21 horas, cerca de 22 horas, cerca de 23 horas cerca de, 24 horas,
2 dias, 3 dias, 4 dias, 5 dias, 6 dias, 7 dias, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, 5 semanas, 6 semanas, 7 semanas, 8 semanas, 9 semanas, 10 semanas, 1 1 semanas, 12 semanas, 13 semanas, 14 semanas, 15 semanas, 16 semanas, 17 semanas, 18 semanas, 19 semanas, 20 semanas, 21 semanas, 22 semanas, 23 semanas, 24 semanas ou mais). Uma constatação de que a concentração de células-tronco hematopoiéticas ou células da linhagem hematopoiética aumentou
(por exemplo, em cerca de 1 %, cerca de 2%, cerca de 3%, cerca de 4%, cerca de
5%, cerca de 6%, cerca de 7%, cerca de 8%, cerca de 9%, cerca de 10%, cerca de
20%, cerca de 30%, cerca de 40%, cerca de 50%, cerca de 60%, cerca de 70%,
cerca de 80%, cerca de 90%, cerca de 100%, cerca de 200%, cerca de 500% ou mais) após a terapia de transplante em relação à concentração do tipo de célula correspondente antes da terapia de transplante fornece uma indicação de que o tratamento com o anticorpo anti-CD2, o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo,
o conjugado de anticorpo-fármaco promoveu com sucesso o enxertamento do enxerto de célula-tronco hematopoiética transplantada.
Exemplos
[0408] Os exemplos a seguir são apresentados com a finalidade de fornecer para os elementos de habilidade comum na técnica uma descrição de como as composições e métodos descritas no presente documento podem ser usadas, feitas e avaliadas, e pretende-se que sejam puramente exemplificativos da invenção e não se pretende limitar o escopo daquilo que os inventores consideram como a sua invenção.
Exemplo 1: Análise de ligação in vitro de anticorpos anti-CD2.
[0409] Para determinar as características de ligação de anticorpos anti-CD2 RPA-2.10 mlgG1 e Ab1 hlgG1, foram realizados estudos de ligação a 25 graus Celsius em 1 x PBS suplementado com 0,1 % p/v de albumina sérica bovina com um Pall ForteBio Octet Red96 com o uso de interferometria de biocamada (BLI). O anticorpos humano purificado (Ab1 -hlgG1) ou murino (RPA-2.10 mlgG1) foi imobilizado em biossensores de Fc anti-humano (AHC; Pall ForteBio 18-5063) ou em biossensores de Fc antimurino (AMQ; Pall ForteBio 18-5090 e incubado com 50nM de ectodomínio de CD2 humano purificado (Sigma Aldrich e Catálogo #5086). A afinidade monovalente aparente (KD), a taxa de associação aparente (KON) e a taxa de dissociação aparente (KDIS) foram determinadas por ajuste completo de sítio com um modelo de ligação 1 :1 conforme calculado pelo software de análise de dados ForteBio versão 10 de cada IgG para o ectodomínio de CD2 humano purificado são mostradas na Tabela 2.
[0410] A caracterização adicional de anticorpos anti-CD2 é fornecida nos Exemplos 2 a 6. Tabela 2: Cinéticas de ligação do IgG indicado para ectodomínio de CD2 humano Anticorpo Conc Resposta KD (M) KON KDIS (1/s) R2 (nM) (nm) (1/Ms) Completo mRPA- 50 0,1807 2,00E-09 8,60E+04 1,72E-04 0,9952
2.10 Ab1 50 0,0615 2,12E-09 1,36E+05 2,89E-04 0,9683
Exemplo 2: Análise de ligação in vitro de anticorpos anti-CD2
[0411] As células MOLT-4 (isto é, uma linhagem celular de linfoblasto T humana imortalizada) foram colocadas em placas em 20.000 células/poço e manchadas com uma titulação dos anticorpos anti-CD2 murinos indicados (isto é, RPA-2.10, TS1/8, BH1, UMCD2, 1 E7E8.G4, or LT2) por 2 horas a 4 °C. A mancha AF488 anti-camundongo secundária, em uma quantidade constante, foi adicionada por 30 minutos a 4 °C. Após a lavagem, as placas foram executadas em um citômetro de fluxo e a ligação do anticorpo indicado (e o controle negativo, isto é, mlgG1) foi determinada com base na intensidade média de fluorescência geométrica no canal AF488. São fornecidos os resultados desses ensaios na Figura 1.
[0412] Conforme mostrado na Figura 1, os anticorpos anti-CD2 murinos RPA-2.10, TS1/8, BH1, UMCD2, 1 E7E8.G4 e LT2 se ligam a células de linfoblasto T humana (isto é, células MOLT-4), com um EC50= 160 pM (RPA-2.10), 125 pM (TS 1/8), 639 pM (BH1), 151 pM (UMCD2), 134 pM (1 E7E8) e 60 pM (LT2).
Exemplo 3: Análise de ligação de célula primária in vitro de anticorpos anti- CD2
[0413] As células T humanas primárias foram colocadas em placas em 8 x 104 células/poço e manchadas com uma titulação do anticorpo anti-CD23 murino RPA-2.10 por 2 horas a 37 °C. A mancha AF488 anti-camundongo secundário ou anti-humano relativa ao anticorpo primário, em uma quantidade constante, foi adicionada por 30 minutes a 4 °C. Após a lavagem, as placas foram executadas em um citômetro de fluxo e a ligação do anticorpo indicado (e o controle negativo, isto é, mlgG1 ou hlgG1) foi determinada com base na intensidade média de fluorescência geométrica no canal AF488. São fornecidos os resultados desses ensaios na Figura
2.
[0414] Conforme mostrado na Figura 2, o anticorpo anti-CD2 murino RPA-
2.10 se liga a células T humanas primárias com um EC50= 1,84 pM (RPA-2.10).
Exemplo 4. Análise in vitro de um conjugado de anticorpo de amanitina-- fármaco de anti-CD2 (ADC) com o uso de um ensaio de morte de célula T in vitro
[0415] O anticorpo anti-CD2 RPA 2.10 foi conjugado com amanitina com um ligante clivável para formar um ADC de anti-CD2. Um ADC de anti-CD2 foi preparado a partir do anticorpo anti-CD2 murino RPA-2.10 que tem uma razão de fármaco para anticorpo (DAR) entre cadeias de 6. Um segundo ADC de anti-CD2 que tem uma DAR média de 2 foi preparado com o uso de uma variante quimérica humana de RPA-2.10 conjugado com amanitina com o uso de específica de sítio.
Adicionalmente, uma variante de vida útil rápida de ADC de anti-CD2 foi gerada através da introdução de uma mutação H435A. Cada ADC de anti-CD2 foi avaliado com o uso de um ensaio de morte de célula T in vitro.
[0416] As células T humanas primárias selecionadas negativamente criopreservadas foram descongeladas e estimuladas com anticorpos anti-CD3 e IL-2.
No início do ensaio, 2x104 células T foram semeadas por poço de uma placa de 384 poços e os ADCs indicados e o anticorpo anti-CD2 não conjugado foram adicionados aos poços em várias concentrações entre 0,003 nm e 30 nm antes de serem colocados em uma incubadora a 37 °C e CO2 a 5%. Após cinco dias de cultura, as células foram analisadas por citometria de fluxo.
[0417] As células foram manchadas com um marcador de viabilidade 7-AAD e executadas em um citômetro de fluxo volumétrico. Número de células T viável (Figuras 3A e 3B) foram determinados por FSC versus SSC e por manchamento de 7-AAD. Um anticorpo anti-CD2 (RPA 2.10) não conjugado serviu como um comparador (Figura 3A).
[0418] Conforme mostrado na Figura 3A, os ADCs de anti-CD2 que têm uma razão de fármaco para anticorpo entre cadeias de 6 exibiram morte potente e específica de células T (IC50=5,0pm) enquanto as células T permaneceram viáveis na presença de anticorpos anti-CD2 não conjugado (“recombinantes”). Conforme mostrado na Figura 3B, os ADCs de anti-CD2 quiméricos humanos que têm uma razão de fármaco para anticorpo específica de sítio de 2 mantiveram um nível potente de morte de célula T (IC50=1,0pm) similar ao nível dos ADCs de DAR 6.
Adicionalmente, a variante de vida útil rápida dos ADCs de anti-CD2 (H435A) exibiu um nível similar de morte de célula T (IC50=6,3 pm; Figura 3B) como um ADC de anti-CD2 com vida útil WT.
Exemplo 5. Análise in vitro de um conjugado de anticorpo de amanitina-- fármaco de anti-CD2 (ADC) com o uso de um ensaio de morte de célula T in vitro
[0419] O anticorpo anti-CD2 RPA 2.10 foi conjugado com amanitina com um ligante clivável para formar um ADC de anti-CD2 entre cadeias com uma razão de fármaco para anticorpo (DAR) entre cadeias média de 6.
[0420] O ADC de anti-CD2 foi avaliado com o uso de um ensaio de célula exterminadora natural (NK) in vitro.
[0421] As células NK de CD56+ CD3- humanas primárias foram cultivadas com IL-2 e IL-15 recombinantes por quatro dias. No início do ensaio, 30.000 células NK recentemente isoladas de um doador humano saudável foram semeadas por poço de uma placa de 384 poços e o ADC ou controle indicado (isto é, lgG1 ou ADC de lgG1-amanitina) foi adicionado aos poços em várias concentrações entre 0,003 nm e 30 nm antes de ser colocado em uma incubadora a 37 °C e CO2 a 5%. Após 4 dias de cultura, a viabilidade de célula NK foi analisada por um ensaio de Viabilidade Celular Glo (Figura 4).
[0422] Conforme mostrado na Figura 4, o ADC de anti-CD2 exibiu morte potente de células NK com um IC50 de 5,2 pM. A ausência de morte completa pelo ADC de anti-CD2 é consistente com oi fato de que CD2 apenas é expressado em cerca de 75% de células NK.
Exemplo 6. Análise de Depleção de Célula T com o uso de um Modelo de Camundongo hNSG
[0423] Os ensaios de depleção de célula T in vivo foram conduzidos com o uso de camundongos NSG humanizados (Jackson Laboratories). Um anticorpo anti- CD2 RPA 2.10 foi conjugado com amanitina com um ligante clivável para formar um ADC de anti-CD2. Um ADC de anti-CD2 foi preparado com murino RPA 2.10 que tem uma razão de fármaco para anticorpo (DAR) entre cadeias média de 6 enquanto um outro ADC de anti-CD2 foi preparado com um RPA 2.10 quimérico humano que tem uma DAR média específica de sítio de 2. Cada ADC de anti-CD2 (DAR6 e DAR2) foi administrado como uma única injeção intravenosa (0,3 mg/kg, 1 mg/kg ou 3 mg/kg para ADCs de DAR6, e 1 mg/kg ou 3 mg/kg para ADCs de DAR2) ao modelo de camundongo humanizado. As amostras de células sanguíneas periféricas, medula óssea ou tímicas foram coletadas no Dia 7 e o número absoluto de células T de CD3+ foi determinado por citometria de fluxo (consulte Figuras 5A e 5B para ADCs de DAR2, e 6A a 6C para ADCs de DAR6).
[0424] Conforme mostrado nas Figuras 5A a 5B, os camundongos NSG humanizados tratados com 0,3 mg/kg, 1 mg/kg ou 3 mg/kg de ADC de anti-CD2 DAR6 entre cadeias exibiu depleção de célula T potente no sangue periférico ou na medula óssea enquanto as células T tímicas foram depletadas após o tratamento com 3 mg/kg de anti-CD2- ADC de DAR6. A título de comparação, as Figuras 5A e 5B mostram também o nível de depleção de célula T após o tratamento de camundongos NSG humanizados com 25 mg/kg de Ab1 (um anticorpo anti-CD2 não conjugado) ou com os controles indicados (isto é, 25 mg/kg de anti-CD52 anticorpo (clone YTH34.5); 3 mg/kg de ADC de hlgG1-amanitana (“hlgG1-AM”), 25 mg/kg de hlgG1 ou PBS).
[0425] Conforme mostrado nas Figuras 6Aa 6C, os camundongos NSG humanizados tratados com 1 mg/kg ou 3 mg/kg de ADC de anti-CD2 de DAR2 específica de sítio exibiu depleção de célula T potente no sangue periférico ou na medula óssea enquanto células T tímicas exibiram cerca de 59% de depleção após o tratamento com 3 mg/kg de ADC de anti-CD2 de DAR2. A título de comparação, as Figuras 6A a 6C mostram também o nível de depleção de célula T após o tratamento de camundongos NSG humanizados com 3 mg/kg de um anticorpo anti-CD2 não conjugado ou com os controles indicados (isto é, 3 mg/kg ADC de hlgG1-amanitana (“hlgG1-AMC”) ou PBS).
Tabela 4: Sumário de Sequência Identificador Descrição Sequência de Sequência SEQ ID n°: 1 CDR-H1 de Ab1 SEQ ID n°: 2 CDR-H2 de Ab1 SEQ ID n°: 3 CDR-H3 de Ab1 SEQ ID n°: 4 CDR-L1 de Ab1 SEQ ID n°: 5 CDR-L2 de Ab1 SEQ ID n°: 6 CDR-L3 de Ab1 SEQ ID n°: 7 Região variável de cadeia pesada de Ab1 SEQ ID n°: 8 Região variável de cadeia leve de Ab1 SEQ ID n°: 9 Região variável de cadeia pesada de Ab1a SEQ ID n°: 10 Região variável de cadeia leve de Ab1a
SEQ ID n°: 11 Domínio variável de cadeia pesada de Ab humano de consenso SEQ ID n°: 12 Domínio variável de cadeia leve de Ab humano de consenso SEQ ID n°: 13 Sequência de CD2 humano SEQ ID n°: 14 CDR-H1 de RPA-2.10 SEQ ID n°: 15 CDR-H2 de RPA-2.10 SEQ ID n°: 16 Variante 1 de CDR-H3 de RPA-
2.10 SEQ ID n°: 17 Variante 2 de CDR-H3 de RPA-
2.10 SEQ ID n°: 18 CDR-L1 de RPA-2.10 SEQ ID n°: 19 CDR-L2 de RPA-2.10 SEQ ID n°: 20 CDR-L3 de RPA-2.10 SEQ ID n°: 21 Variante 1 de região de cadeia pesada de RPA-2.10
SEQ ID n°: 22 Variante 2 de região de cadeia pesada de RPA-2.10 SEQ ID n°: 23 Região variável de cadeia leve de RPA-
2.10 SEQ ID n°: 24 Região constante de cadeia pesada de RPA-2.10 SEQ ID n°: 25 Região constante de cadeia leve de RPA-2.10 Outras modalidades
[0426] Todas as publicações, patentes e pedidos de patente neste relatório descritivo são incorporados a título de referência no presente documento da mesma maneira como se cada publicação ou pedido de patente independente fosse indicado específica e individualmente para ser incorporado a título de referência.
[0427] Embora a invenção tenha sido descrita em conjunto com as modalidades específicas da mesma, será entendido que a mesma tem capacidade de modificações adicionais e pretende-se que este pedido cubra quaisquer variações, usos ou adaptações da invenção a seguir, em geral, os princípios da invenção e incluindo tais desvios da invenção que se enquadram na prática conhecida ou comum na técnica à qual a invenção pertence e pode ser aplicada aos recursos essenciais apresentados anteriormente no presente documento e segue o escopo das reivindicações.
[0428] Outras modalidades estão dentro do escopo das reivindicações.

Claims (125)

REIVINDICAÇÕES
1. Método de depleção de uma população de células de CD2+ em um paciente humano, em que o método é CARACTERIZADO pelo fato de que compreende administrar ao paciente uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-CD2 ou de um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, em que o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é conjugado com uma citotoxina.
2. Método de depleção de uma população de células de CD2+ em um paciente humano em necessidade de um transplante de célula-tronco hematopoiética, em que o método é CARACTERIZADO pelo fato de que compreende administrar ao paciente uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-CD2 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, em que o anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é conjugado com uma citotoxina.
3. Método de prevenção de rejeição de um enxerto de célula-tronco hematopoiética em um paciente humano em necessidade de um transplante de célula- tronco hematopoiética, em que o método é CARACTERIZADO pelo fato de que compreende administrar uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-CD2 ou de um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo antes de o paciente humano receber um transplante compreendendo células-tronco hematopoiéticas, em que o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é conjugado com uma citotoxina.
4. Método de depleção de uma população de células de CD2+ em um paciente humano em necessidade de um transplante de célula-tronco hematopoiética, em que o método é CARACTERIZADO pelo fato de que compreende administrar ao paciente uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-CD2 ou de um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo antes de o paciente receber um transplante compreendendo células-tronco hematopoiéticas, em que o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é conjugado com uma citotoxina.
5. Método CARACTERIZADO pelo fato de que compreende administrar a um paciente humano um transplante compreendendo células-tronco hematopoiéticas, em que ao paciente foi administrado previamente um anticorpo anti-CD2 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo em uma quantidade suficiente para depletir uma população de células de CD2+ no paciente, em que o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é conjugado com uma citotoxina.
6. Método CARACTERIZADO pelo fato de que compreende: i) administrar a um paciente humano um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga a CD2 em uma quantidade suficiente para depletir uma população de células de CD2+ no paciente, em que o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é conjugado com uma citotoxina; e ii) administrar subsequentemente ao paciente um transplante compreendendo células-tronco hematopoiéticas.
7. Método de tratamento de um distúrbio de célula-tronco em um paciente humano, em que o método é CARACTERIZADO pelo fato de que compreende administrar ao paciente uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo ou de um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga a CD2, em que o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é conjugado com uma citotoxina.
8. Método de tratamento de um distúrbio de hemoglobinopatia em um paciente humano, em que o método é CARACTERIZADO pelo fato de que compreende administrar ao paciente uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo ou de um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga a CD2, em que o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é conjugado com uma citotoxina.
9. Método de tratamento de um distúrbio mielodisplásico em um paciente humano, em que o método é CARACTERIZADO pelo fato de que compreende administrar ao paciente uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo ou de um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga a CD2, em que o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é conjugado com uma citotoxina.
10. Método de tratamento de um distúrbio de imunodeficiência em um paciente humano, em que o método é CARACTERIZADO pelo fato de que compreende administrar ao paciente uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo ou de um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga a CD2, em que o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é conjugado com uma citotoxina.
11. Método de tratamento de um distúrbio metabólico em um paciente humano, em que o método é CARACTERIZADO pelo fato de que compreende administrar ao paciente uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo ou de um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga a CD2, em que o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é conjugado com uma citotoxina.
12. Método de tratamento câncer em um paciente humano, em que o método é CARACTERIZADO pelo fato de que compreende administrar ao paciente uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo ou de um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga a CD2, em que o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é conjugado com uma citotoxina.
13. Método de tratamento de um distúrbio selecionado a partir do grupo que consiste em deficiência de adenosina deaminase e imunodeficiência combinada grave, síndrome de hiperimunoglobulina M, doença de Chediak-Higashi, linfo- histiocitose hereditária, osteopetrose, osteogênese imperfeita, doenças de armazenamento, talassemia principal, esclerose sistêmica, lúpus eritematoso sistêmico, esclerose múltipla e artrite rematoide juvenil em um paciente humano, em que o método é CARACTERIZADO pelo fato de que compreende administrar ao paciente uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo ou de um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga a CD2, em que o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é conjugado com uma citotoxina.
14. Método de tratamento de um distúrbio autoimune em um paciente humano, em que o método é CARACTERIZADO pelo fato de que compreende administrar ao paciente uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo ou de um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga a CD2, em que o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é conjugado com uma citotoxina.
15. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, w CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é produzido pela linhagem celular de hibridoma ATCC HB 1
11423.
16. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende um conjunto de regiões variáveis de cadeia pesada CDRs (CDR1, CDR2 e CDR3) e um conjunto de regiões variáveis de cadeia leve CDRs (CDR1, CDR2 e CDR3) do anticorpo LO-CD2A produzido pela linhagem celular de hibridoma que tem o número de acesso ATCC HB 11423.
17. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é i) um anticorpo anti-CD2 ou uma porção de ligação ao antígeno do mesmo que compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma CDR- H1 conforme apresentado na SEQ ID n°: 1; uma CDR-H2 conforme apresentado na SEQ ID n°: 2; uma CDR-H3 conforme apresentado na SEQ ID n°: 3; e que compreende uma região variável de cadeia leve compreendendo uma CDR-L1 conforme apresentado na SEQ ID n°: 4; uma CDR-L2 conforme apresentado na SEQ ID n°: 5; e uma CDR-L3 conforme apresentado na SEQ ID n°: 6; ii) um anticorpo anti-CD2 ou uma porção de ligação ao antígeno do mesmo que compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma CDR- H1 conforme apresentado na SEQ ID n°: 14; uma CDR-H2 conforme apresentado na SEQ ID n°: 15; uma CDR-H3 conforme apresentado na SEQ ID n°: 16 ou 17; e que compreende uma região variável de cadeia leve compreendendo uma CDR-L1 conforme apresentado na SEQ ID n°: 18; uma CDR-L2 conforme apresentado na SEQ ID n°: 19; e uma CDR-L3 conforme apresentado na SEQ ID n°: 20; iii) um anticorpo anti-CD2 ou uma porção de ligação ao antígeno do mesmo que compreende uma região variável de cadeia pesada conforme apresentado na SEQ ID n°: 7 e que compreende uma região variável de cadeia leve conforme apresentado na SEQ ID n°: 8; iv) um anticorpo anti-CD2 ou uma porção de ligação ao antígeno do mesmo que compreende uma região variável de cadeia pesada conforme apresentado na SEQ ID n°: 9 e que compreende uma região variável de cadeia leve conforme apresentado na SEQ ID n°: 10; ou v) um anticorpo anti-CD2 ou uma porção de ligação ao antígeno do mesmo que compreende uma região variável de cadeia pesada conforme apresentado na SEQ ID n°: 21 ou 22 e que compreende uma região variável de cadeia leve conforme apresentado na SEQ ID n°: 23.
18. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo inibe competitivamente a ligação de CD2 a um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo conforme definido na reivindicação 17.
19. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é selecionado a partir do grupo que consiste em um anticorpo monoclonal ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, um anticorpo policlonal ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, um anticorpo humanizado ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, um anticorpo biespecífico ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, um anticorpo intacto, um domínio de imunoglobulina de variável dupla, uma molécula de FV de cadeia única (scFv), um diacorpo, um triacorpo, um nanocorpo, um andaime de proteína semelhante ao anticorpo, um fragmento de Fv, um fragmento de Fab, uma molécula de F(ab’)2 e um di-scFv tandem.
20. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 18, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é um anticorpo humanizado ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.
21. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 20, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo tem um isotipo selecionado a partir do grupo que consiste em IgG, IgA, IgM, IgD e IgE.
22. Método, de acordo com a reivindicação 21, CARACTERIZADO pelo fato de que o isotipo de IgG é uma IgG1 ou uma IgG4.
23. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 22, CARACTERIZADO pelo fato de que a citotoxina é selecionada a partir do grupo que consiste em pseudomonas exotoxina A, debouganina, toxina de difteria, uma amatoxina, saporina, maitansina, um maitansinoide, uma auristatina, uma antraciclina, uma caliqueamicina, irinotecano, SN-38, uma duocarmicina, um pirrolobenzodiazepina, um dímero de pirrolobenzodiazepina, uma indolinobenzodiazepina e um dímero de indolinobenzodiazepina ou uma variante dos mesmos.
24. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 22, CARACTERIZADO pelo fato de que a citotoxina é um inibidor de RNA polimerase.
25. Método, de acordo com a reivindicação 24, CARACTERIZADO pelo fato de que o inibidor de RNA polimerase é um inibidor de RNA polimerase II.
26. Método, de acordo com a reivindicação 25, CARACTERIZADO pelo fato de que o inibidor de RNA polimerase é amatoxina.
27. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 22, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo conjugado com uma citotoxina é representado pela fórmula Ab- Z-L-Am, em Ab é o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, L é um ligante, Z é uma fração química e Am é uma amatoxina representada pela fórmula (I).
em que R1 é H, OH, ORA ou ORC; R2 é H, OH, ORB ou ORC
RA e RB, quando presentes juntamente com os átomos de oxigênio aos quais os mesmos são ligados, se combinam para formar um grupo heterocicloalquila de 5 membros opcionalmente substituído;
R3 é H, Rc ou RD;
R4, R5, R8 E R7 são, cada um, independentemente H, OH, ORc, ORD, RC ou
RD;
R8 é OH, NH2, ORc, ORD, NHRC ou NRCRD;
R9 é H, OH, Rc ou RD;
X é -S-5 -S(O)-5 ou -SO2-;
RC é -L-Z;
RD é C1-C6 alquila opcionalmente substituída, C1-C6 heteroalquila opcionalmente substituída, C2-C6 alquenila opcionalmente substituída, C2-C6 heteroalquenila opcionalmente substituída, C2-C6 alquinila opcionalmente substituída,
C2-C6 heteroalquinila opcionalmente substituída, cicloalquila opcionalmente substituída, heterocicloalquila opcionalmente substituída, arila opcionalmente substituída ou heteroarila opcionalmente substituída;
L é C1-C6 alquileno opcionalmente substituído, C1-C6 heteroalquileno opcionalmente substituído, C2-C6 alquenileno opcionalmente substituído, C2-C6 heteroalquenileno opcionalmente substituído, C2-C6 alquinileno opcionalmente substituído, C2-C6 heteroalquinileno opcionalmente substituído, cicloalquileno opcionalmente substituído, heterocicloalquileno opcionalmente substituído, arileno opcionalmente substituído, heteroarileno opcionalmente substituído, um dipeptídeo, -
C(=O)- 5, um peptídeo ou uma combinação dos mesmos; e
Z é uma fração química formada a partir de uma reação de acoplamento entre um substituinte reativo presente em L e um substituinte reativo presente no anticorpo ou no fragmento de ligação ao antígeno do mesmo,
em que Am compreende exatamente um substituinte de RE.
28. Método, de acordo com a reivindicação 27, CARACTERIZADO pelo fato de que Am-L-Z é representado pela fórmula (IA).
em que R1 é H, OH, ORA ou ORC; R2 é H, OH, ORB ou ORC RA e RB, quando presentes juntamente com os átomos de oxigênio aos quais os mesmos são ligados, se combinam para formar um grupo heterocicloalquila de 5 membros opcionalmente substituído; R3 é H, Rc ou RD; R4, R5, R8 e R7 são, cada um, independentemente H, OH, ORC, ORD, RC ou RD; R8 é OH, NH2, ORc, ORD, NHRC ou NRC RD; R9 é H, OH, Rc ou RD; X é -S-, -S(O)- ou -SO2-; Rc é -L-Z; RD é C1-C6 alquila opcionalmente substituída, C1-C6 heteroalquila opcionalmente substituída, C2-C6 alquenila opcionalmente substituída, C2-C6 heteroalquenila opcionalmente substituída, C2-C6 alquinila opcionalmente substituída,
C2-C6 heteroalquinila opcionalmente substituída, cicloalquila opcionalmente substituída, heterocicloalquila opcionalmente substituída, arila opcionalmente substituída ou heteroarila opcionalmente substituída; L é C1-C6 alquileno opcionalmente substituído, C1-C6 heteroalquileno opcionalmente substituído, C2-C6 alquenileno opcionalmente substituído, C2-C6 heteroalquenileno opcionalmente substituído, C2-C6 alquinileno opcionalmente substituído, C2-C6 heteroalquinileno opcionalmente substituído, cicloalquileno opcionalmente substituído, heterocicloalquileno opcionalmente substituído, arileno opcionalmente substituído, heteroarileno opcionalmente substituído, um dipeptídeo, - C(=O)- 5, um peptídeo ou uma combinação dos mesmos; Z é uma fração química formada a partir de uma reação de acoplamento entre um substituinte reativo presente em L e um substituinte reativo presente no anticorpo ou no fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; e em que Am compreende exatamente um substituinte de RE.
29. Método, de acordo com a reivindicação 27, CARACTERIZADO pelo fato de que Am-L-Z é representado pela fórmula (IB).
em que R1 é H, OH, ORA ou ORc;
R2 é H, OH, ORB ou ORc;
RA e RB, quando presentes juntamente com os átomos de oxigênio aos quais os mesmos são ligados, se combinam para formar um grupo heterocicloalquila de 5 membros opcionalmente substituído;
R3 é H, Rc ou RD;
R4, R5, R6 e R7 são, cada um, independentemente H, OH, ORc, ORD, RC ou
RD;
R8 é OH, NH2, ORc, ORD, NHRC ou NRCRD;
R9 é H, OH, Rc ou RD;
X é -S-, -S(O)- ou -SO2-;
RE é -L-Z;
RD é C1-C6 alquila opcionalmente substituída, C1-C6 heteroalquila opcionalmente substituída, C2-C6 alquenila opcionalmente substituída, C2-C6 heteroalquenila opcionalmente substituída, C2-C6 alquinila opcionalmente substituída,
C2-C6 heteroalquinila opcionalmente substituída, cicloalquila opcionalmente substituída, heterocicloalquila opcionalmente substituída, arila opcionalmente substituída ou heteroarila opcionalmente substituída;
L é C1-C6 alquileno opcionalmente substituído, C1-C6 heteroalquileno opcionalmente substituído, C2-C6 alquenileno opcionalmente substituído, C2-C6 heteroalquenileno opcionalmente substituído, C2-C6 alquinileno opcionalmente substituído, C2-C6 heteroalquinileno opcionalmente substituído, cicloalquileno opcionalmente substituído, heterocicloalquileno opcionalmente substituído, arileno opcionalmente substituído, heteroarileno opcionalmente substituído, um dipeptídeo, -
C(=O)-, um peptídeo ou uma combinação dos mesmos; e
Z é uma fração química formada a partir de uma reação de acoplamento entre um substituinte reativo presente em L e um substituinte reativo presente no anticorpo ou no fragmento de ligação ao antígeno do mesmo,
em que Am compreende exatamente um substituinte de RE.
30. Método, de acordo com a reivindicação 28 ou 29, CARACTERIZADO pelo fato de que RA e RB, quando presentes juntamente com os átomos de oxigênio aos quais são ligados, se combinam para formar um grupo heterocicloalquila de 5 membros da fórmula: em que Y é —C(=O)-, -C(=S)-, -C(=NRE)- ou —C(RERE’)-; e RE e RE' são, cada um, independentemente C1-C6 alquileno-RC opcionalmente substituído, C1-C6 heteroalquileno-RC opcionalmente substituído, C2-C6 alquenileno- RC opcionalmente substituído, C2-C6 heteroalquenileno-RC opcionalmente substituído, C2-C6 alquinileno-RC opcionalmente substituído, C2-C6 heteroalquinileno-RC opcionalmente substituído, cicloalquileno-RC opcionalmente substituído, heterocicloalquileno-RC opcionalmente substituído, arileno-RC opcionalmente substituído ou heteroarileno-RC opcionalmente substituído.
31. Método, de acordo com a reivindicação 30, CARACTERIZADO pelo fato de que RA e RB, quando presentes juntamente com os átomos de oxigênio aos quais são ligados, se combinam para formar
32. Método, de acordo com a reivindicação 28 ou 29, CARACTERIZADO pelo fato de que (a) R1 é H, OH ou ORA; R2 é H, OH ou ORB; RA e RB, quando presentes juntamente com os átomos de oxigênio aos quais são ligados, se combinam para formar:
R3, R4, R6 e R7 são, cada um, H; R5 é ORC; R8 é OH ou NH2; e R9 é H ou OH. (b) R1 e R2 são, cada um, independentemente H ou OH; R3 é RC; R4, R6 e R7 são, cada um, H; R5 é H, OH ou OC1-C6 alquila; R8 é OH ou NH2; e R9 é H ou OH; (c) R1 e R2 são cada um, independentemente H ou OH; R3, R6 e R7 são, cada um, H; R4 e R5 são, cada um, independentemente H, OH, ORC ou RD; R8 é OH ou NH2; e R9 é H ou OH; ou (d) R1 e R2 são, cada um, independentemente H ou OH; R3, R6 e R7 são, cada um, H; R4 e R5 são, cada um, independentemente H ou OH; R8 é ORC ou NHRC; e R9 é H ou OH.
33. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 22, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo conjugado com uma citotoxina é representado pela fórmula Ab- Z-L-Am, em que Ab é o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo,
Z é uma fração química, L é um ligante e Am é uma amatoxina, e o conjugado de amatoxina-ligante Am-L-Z é representado pela fórmula (II), pela fórmula (IIA) ou pela fórmula (IIB).
em que X é S, SO ou SO2;
R1 é H ou um ligante covalentemente ligado ao anticorpo ou ao fragmento de ligação ao antígeno do mesmo através de uma fração química Z formada a partir de uma reação de acoplamento entre um substituinte reativo presente no ligante e um substituinte reativo presente em um anticorpo ou em um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; e
R2 é H ou um ligante covalentemente ligado ao anticorpo ou ao fragmento de ligação ao antígeno do mesmo através de uma fração química Z formada a partir de uma reação de acoplamento entre um substituinte reativo presente no ligante e um substituinte reativo presente em um anticorpo ou em um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; em que, quando R1 é H, R2 é o ligante, e, quando R2 é H, R1 é o ligante.
34. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 22, CARACTERIZADO pelo fato de que a citotoxina é um maitansinoide selecionado a partir do grupo que consiste em DM1 e DM4.
35. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 22, CARACTERIZADO pelo fato de que a citotoxina é uma auristatina selecionada a partir do grupo que consiste em monometil auristatina E e monometil auristatina F.
36. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 22, CARACTERIZADO pelo fato de que a citotoxina é uma antraciclina selecionada a partir do grupo que consiste em daunorubicina, doxorubicina, epirubicina e idarubicina.
37. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 22, CARACTERIZADO pelo fato de que a citotoxina é um derivado de dímero de pirrolobenzodiazepina representado pela fórmula (IV)
38. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6 e 15 a 37, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo conjugado com a citotoxina é internalizado por uma célula imune após a administração ao paciente.
39. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6 e 15 a 38, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo conjugado com a citotoxina tem capacidade de promover necrose de uma célula imune.
40. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6 e 15 a 39, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo conjugado com a citotoxina tem capacidade de recrutar uma ou mais proteínas complementares para uma célula imune após a administração ao paciente.
41. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 38 a 40, CARACTERIZADO pelo fato de que a célula imune é selecionada a partir do grupo que consiste em uma célula T e uma célula NK.
42. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 3 a 6 e 15 a 40, CARACTERIZADO pelo fato de que o transplante compreendendo células-tronco hematopoiéticas é administrado ao paciente após a concentração do anticorpo ou do fragmento de ligação ao antígeno do mesmo conjugado com a citotoxina ter sido eliminada substancialmente do sangue do paciente.
43. Método, de acordo com a reivindicação 42, CARACTERIZADO pelo fato de que (a) o transplante compreendendo células-tronco hematopoiéticas é administrado ao paciente entre 1 hora e 7 dias após a concentração do anticorpo ou do fragmento de ligação ao antígeno do mesmo conjugado com a citotoxina ter sido eliminada substancialmente do sangue do paciente; (b) o transplante compreendendo células-tronco hematopoiéticas é administrado ao paciente entre 6 horas e 3 dias após a concentração do anticorpo ou do fragmento de ligação ao antígeno do mesmo conjugado com a citotoxina ter sido eliminada substancialmente do sangue do paciente; (c) o transplante compreendendo células-tronco hematopoiéticas é administrado ao paciente entre cerca de 12 horas e cerca de 36 horas após a concentração do anticorpo ou do fragmento de ligação ao antígeno do mesmo conjugado com a citotoxina ter sido eliminada substancialmente do sangue do paciente; ou (d) o transplante compreendendo células-tronco hematopoiéticas é administrado ao paciente cerca de 24 horas após a concentração do anticorpo ou do fragmento de ligação ao antígeno do mesmo conjugado com a citotoxina ter sido eliminada substancialmente do sangue do paciente.
44. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 3 a 6 e 15 a 40, CARACTERIZADO pelo fato de que as células-tronco hematopoiéticas ou a progênie das mesmas mantêm o potencial funcional de célula-tronco hematopoiética após cerca de dois ou mais dias após o transplante das células-tronco hematopoiéticas no paciente.
45. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 3 a 6 e 15 a 44, CARACTERIZADO pelo fato de que as células-tronco hematopoiéticas são autólogas em relação ao paciente ou as células-tronco hematopoiéticas são alogênicas em relação ao paciente.
46. Método, de acordo com a reivindicação 45, CARACTERIZADO pelo fato de que as células-tronco hematopoiéticas são compatíveis com HLA em relação ao paciente ou as células-tronco hematopoiéticas são incompatíveis com HLA em relação ao paciente.
47. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2, 4 a 6 e 15 a 41, CARACTERIZADO pelo fato de que a população de células de CD2+ compreende células T.
48. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 3 a 6 e 15 a 47, CARACTERIZADO pelo fato de que as células-tronco hematopoiéticas ou a progênie das mesmas têm capacidade de localizar tecido hematopoiético e/ou restabelecer hematopoese após o transplante das células-tronco hematopoiéticas no paciente.
49. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 3 a 6 e 15 a 48, CARACTERIZADO pelo fato de que, após o transplante no paciente, as células-tronco hematopoiéticas começam a recuperação de uma população de células selecionadas a partir do grupo que consiste em megacariócitos, trombócitos, plaquetas, eritrócitos, mastócitos, mieloblastos, basófilos, neutrófilos, eosinófilos, microglia, granulócitos, monócitos, osteoclastos, células que apresentam antígeno, macrófagos, célula dendríticas, células naturais exterminadoras, linfócitos T e linfócitos B.
50. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6 e 15 a 49, CARACTERIZADO pelo fato de que o paciente está sofrendo de um distúrbio de célula-tronco, um distúrbio de hemoglobinopatia, um distúrbio mielodisplásico, um distúrbio de imunodeficiência, um distúrbio metabólico, um câncer ou um distúrbio autoimune.
51. Método, de acordo com a reivindicação 8 ou 50, CARACTERIZADO pelo fato de que o distúrbio de hemoglobinopatia é selecionado a partir do grupo que consiste em anemia falciforme, talassemia, anemia de Fanconi, anemia aplástica e síndrome de Wiskott-Aldrich.
52. Método, de acordo com a reivindicação 10 ou 50, CARACTERIZADO pelo fato de que o distúrbio de imunodeficiência é uma imunodeficiência congênita ou uma imunodeficiência adquirida.
53. Método, de acordo com a reivindicação 52, CARACTERIZADO pelo fato de que a imunodeficiência adquirida é um vírus de imunodeficiência humana ou uma síndrome de deficiência imune adquirida.
54. Método, de acordo com a reivindicação 11 ou 50, CARACTERIZADO pelo fato de que o distúrbio metabólico é selecionado a partir do grupo que consiste em doenças de armazenamento do glicogênio, mucopolissacaridoses, Doença de Gaucher, Doença de Hurler, espingolipidoses e leicodistrofia metacromática.
55. Método, de acordo com a reivindicação 12 ou 50, CARACTERIZADO pelo fato de que o câncer é selecionado a partir do grupo que consiste em leucemia, linfoma, mieloma múltiplo e neuroblastoma.
56. Método, de acordo com a reivindicação 12 ou 50, CARACTERIZADO pelo fato de que o câncer é um câncer hematológico.
57. Método, de acordo com a reivindicação 12 ou 50, CARACTERIZADO pelo fato de que o câncer é leucemia mieloide aguda, leucemia linfoide aguda, leucemia mieloide crônica ou leucemia linfoide crônica.
58. Método, de acordo com a reivindicação 12 ou 50, CARACTERIZADO pelo fato de que o câncer é mieloma múltiplo.
59. Método, de acordo com a reivindicação 12 ou 50, CARACTERIZADO pelo fato de que o câncer é linfoma difuso de grandes células B ou linfoma não Hodgkin.
60. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6 e 15 a 59, CARACTERIZADO pelo fato de que o paciente está sofrendo de um distúrbio selecionado a partir do grupo que consiste em deficiência de adenosina deaminase e imunodeficiência combinada grave, síndrome de hiperimunoglobulina M, doença de Chediak-Higashi, linfo-histiocitose hereditária, osteopetrose, osteogênese imperfeita, doenças de armazenamento, talassemia principal, esclerose sistêmica, lúpus eritematoso sistêmico, esclerose múltipla e artrite rematoide juvenil.
61. Método, de acordo com a reivindicação 14 ou 50, CARACTERIZADO pelo fato de que o distúrbio autoimune é selecionado a partir do grupo que consiste em esclerose múltipla, lúpus sistêmico humano, artrite reumatoide, doença intestinal inflamatória, psoríase em tratamento, diabetes mellitus do tipo 1, encefalomielite disseminada aguda, doença de Addison, alopecia universal, espondilite anquilosante, síndrome de anticorpo antifosfolíde, anemia aplástica, anemia hemolítica autoimune, hepatite autoimune, doença autoimune do ouvido interno, síndrome linfoproliferativa autoimune, ooforite autoimune, doença de Balo, doença de Behcet, penfigoide bolhoso, cardiomiopatia, doença de Chagas, síndrome de disfunção imune à fadiga crônica, polineuropatia desmielinizante inflamatória crônica, doença de Crohn , penfigoide cicatricial, dermatite herpetiforme de espru celíaco, doença por aglutininas a frio, síndrome de CREST, doença de Degos, lúpus discoide, neuropatia autonômica, endometriose, crioglobulinemia mista essencial, fibromalgia-fibromiosite, síndrome de Goodpasture, doença de Grave, síndrome de Guillain-Barre, tireoide de Hashimoto, Hidrosadenite supurativa, púrpura trombocitopênica idiopática e/ou aguda, fibrose pulmonar idiopática, neuropatia de IgA, cistite intersticial, artrite juvenil, doença de Kawasaki, líquen plano, doença de Lyme, doença de Meniere, doença mista do tecido conjuntivo, miastenia grave, neuromiotonia, síndrome de opsoclônica-mioclônica, neurite óptica, tireoide de ORD, pênfigo vulgar, anemia perniciosa, policondrite, polimiosite e dermatomiosite, cirrose biliar primária, poliarterite nodosa, síndromes poliglandulares, polimialgia reumática, agamaglobulinemia primária, fenômeno de Raynaud, síndrome de Reiter, febre reumática, sarcoidose, esclerodermia, síndrome de Sjogren, síndrome da pessoa rígida, arterite de Takayasu, arterite temporal, colite ulcerativa, uveíte, vasculite, vitiligo, vulvodinia e granulomatose de Wegener.
62. Método, de acordo com a reivindicação 14 ou 50, CARACTERIZADO pelo fato de que o distúrbio autoimune é esclerodermia, esclerose múltipla, colite ulcerativa, doença de Crohn ou diabetes do tipo 1.
63. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 50 a 62, CARACTERIZADO pelo fato de que o método trata o distúrbio ou câncer.
64. Conjugado representado pela fórmula Ab-Z-L-Cy, CARACTERIZADO pelo fato de que Ab é um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga a CD2, Z é uma fração química, L é um ligante e Cy é uma citotoxina, em que a citotoxina é selecionada a partir do grupo que consiste em pseudomonas exotoxina A, debouganina, toxina de difteria, uma amatoxina, saporina, maitansina, um maitansinoide, uma auristatina, uma antraciclina, uma caliqueamicina, irinotecano,
SN-38, uma duocarmicina, uma pirrolobenzodiazepina, um dímero de pirrolobenzodiazepina ou uma variante dos mesmos.
65. Conjugado, de acordo com a reivindicação 64, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é produzido pela linhagem celular de hibridoma ATCC HB 11423.
66. Conjugado, de acordo com a reivindicação 64, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é i) um anticorpo anti-CD2 ou uma porção de ligação ao antígeno do mesmo que compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma CDR- H1 conforme apresentado na SEQ ID n°: 1; uma CDR-H2 conforme apresentado na SEQ ID n°: 2; uma CDR-H3 conforme apresentado na SEQ ID n°: 3; e que compreende uma região variável de cadeia leve compreendendo uma CDR-L1 conforme apresentado na SEQ ID n°: 4; uma CDR-L2 conforme apresentado na SEQ ID n°: 5; e uma CDR-L3 conforme apresentado na SEQ ID n°: 6; ii) um anticorpo anti-CD2 ou uma porção de ligação ao antígeno do mesmo que compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma CDR- H1 conforme apresentado na SEQ ID n°: 14; uma CDR-H2 conforme apresentado na SEQ ID n°: 15; uma CDR-H3 conforme apresentado na SEQ ID n°: 16 ou 17; e que compreende uma região variável de cadeia leve compreendendo uma CDR-L1 conforme apresentado na SEQ ID n°: 18; uma CDR-L2 conforme apresentado na SEQ ID n°: 19; e uma CDR-L3 conforme apresentado na SEQ ID n°: 20; iii) um anticorpo anti-CD2 ou uma porção de ligação ao antígeno do mesmo que compreende uma região variável de cadeia pesada conforme apresentado na SEQ ID n°: 7 e que compreende uma região variável de cadeia leve conforme apresentado na SEQ ID n°: 8; iv) um anticorpo anti-CD2 ou uma porção de ligação ao antígeno do mesmo que compreende uma região variável de cadeia pesada conforme apresentado na
SEQ ID n°: 9 e que compreende uma região variável de cadeia leve conforme apresentado na SEQ ID n°: 10; ou v) um anticorpo anti-CD2 ou uma porção de ligação ao antígeno do mesmo que compreende uma região variável de cadeia pesada conforme apresentado na SEQ ID n°: 21 ou 22 e que compreende uma região variável de cadeia leve conforme apresentado na SEQ ID n°: 23.
67. Conjugado, de acordo com a reivindicação 64, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo inibe competitivamente a ligação de CD2 a um anticorpo ou a um fragmento de ligação ao antígeno conforme definido na reivindicação 142.
68. Conjugado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 67, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é selecionado a partir do grupo que consiste em um anticorpo monoclonal, um anticorpo policlonal, um anticorpo humanizado, um anticorpo biespecífico, um domínio de imunoglobulina de variável dupla, uma molécula de FV de cadeia única (scFv), um diacorpo, um triacorpo, um nanocorpo, um andaime de proteína semelhante ao anticorpo, um fragmento de Fv, um fragmento de Fab, uma molécula de F(ab’)2 e um di-scFv tandem.
69. Conjugado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 67, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo ou o fragmento de ligação ao fragmento do mesmo é um anticorpo humanizado ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.
70. Conjugado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 69, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo tem um isotipo selecionado a partir do grupo que consiste em IgG, IgA, IgM, IgD e IgE.
71. Conjugado, de acordo com a reivindicação 70, CARACTERIZADO pelo fato de que o IgG é IgG1 ou IgG4.
72. Conjugado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 70,
CARACTERIZADO pelo fato de que Cy é uma amatoxina (Am) representada pela fórmula (I)
em que R1 é H, OH, ORA ou ORC; R2 é H, OH, ORB ou ORC
RA e RB, quando presentes juntamente com os átomos de oxigênio aos quais os mesmos são ligados, se combinam para formar um grupo heterocicloalquila de 5 membros opcionalmente substituído; R3 é H, RC ou RD;
R4, R5, R6 e R7 são, cada um, independentemente H, OH, ORc, ORD, RC ou
RD;
R8 é OH, NH2, ORC, ORD, NHRC ou NRC RD; R9 é H, OH, ORC ou ORD;
X é -S-, -S(O)- ou -SO2-;
RC é -L-Z;
RD é C1-C6 alquila opcionalmente substituída, C1-C6 heteroalquila opcionalmente substituída, C2-C6 alquenila opcionalmente substituída, C2-C6 heteroalquenila opcionalmente substituída, C2-C6 alquinila opcionalmente substituída,
C2-C6 heteroalquinila opcionalmente substituída, cicloalquila opcionalmente substituída, heterocicloalquila opcionalmente substituída, arila opcionalmente substituída ou heteroarila opcionalmente substituída; L é C1-C6 alquileno opcionalmente substituído, C1-C6 heteroalquileno opcionalmente substituído, C2-C6 alquenileno opcionalmente substituído, C2-C6 heteroalquenileno opcionalmente substituído, C2-C6 alquinileno opcionalmente substituído, C2-C6 heteroalquinileno opcionalmente substituído, cicloalquileno opcionalmente substituído, heterocicloalquileno opcionalmente substituído, arileno opcionalmente substituído ou heteroarileno opcionalmente substituído, um dipeptídeo, -C(=O)-, um peptídeo ou uma combinação dos mesmos; e Z é uma fração química formada a partir de uma reação de acoplamento entre um substituinte reativo presente em L e um substituinte reativo presente no anticorpo ou no fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, em que Am compreende exatamente um substituinte de RC.
73. Conjugado, de acordo com a reivindicação 72, CARACTERIZADO pelo fato de que Am é uma amatoxina representada pela fórmula (IA).
em que R1 é H, OH, ORA ou ORC; R2 é H, OH, ORB ou ORC
RA e RB, quando presentes juntamente com os átomos de oxigênio aos quais os mesmos são ligados, se combinam para formar um grupo heterocicloalquila de 5 membros opcionalmente substituído;
R3 é H, RC ou RD;
R4, R5, R8 E R7 são, cada um, independentemente H, OH, ORc, ORD, RC ou
RD;
R8 é OH, NH2, ORc, ORD, NHRC ou NRC RD;
R9 é H, OH, ORC ou ORD;
X é -S-, -S(O)- ou -SO2-;
RC é -L-Z;
RD é C1-C6 alquila opcionalmente substituída, C1-C6 heteroalquila opcionalmente substituída, C2-C6 alquenila opcionalmente substituída, C2-C6 heteroalquenila opcionalmente substituída, C2-C6 alquinila opcionalmente substituída,
C2-C6 heteroalquinila opcionalmente substituída, cicloalquila opcionalmente substituída, heterocicloalquila opcionalmente substituída, arila opcionalmente substituída ou heteroarila opcionalmente substituída;
L é C1-C6 alquileno opcionalmente substituído, C1-C6 heteroalquileno opcionalmente substituído, C2-C6 alquenileno opcionalmente substituído, C2-C6 heteroalquenileno opcionalmente substituído, C2-C6 alquinileno opcionalmente substituído, C2-C6 heteroalquinileno opcionalmente substituído, cicloalquileno opcionalmente substituído, heterocicloalquileno opcionalmente substituído, arileno opcionalmente substituído, heteroarileno opcionalmente substituído, um dipeptídeo, -
(C=O)-, um peptídeo ou uma combinação dos mesmos;
Z é uma fração química formada a partir de uma reação de acoplamento entre um substituinte reativo presente em L e um substituinte reativo presente no anticorpo ou no fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; e em que Am compreende exatamente um substituinte de RC.
74. Conjugado, de acordo com a reivindicação 72, CARACTERIZADO pelo fato de que Am é uma amatoxina representada pela fórmula (IB).
em que R1 é H, OH, ORA ou ORC; R2 é H, OH, ORB ou ORC RA e RB, quando presentes juntamente com os átomos de oxigênio aos quais os mesmos são ligados, se combinam para formar um grupo heterocicloalquila de 5 membros opcionalmente substituído; R3 é H, Rc ou RD; R4, R5, R6 e R7 são, cada um, independentemente H, OH, ORC, ORD, RC ou RD; é OH, NH2, ORC, ORD, NHRC ou NRC RD; R9 é H, OH, ORC ou ORD; X é -S-, -S(O)- ou -SO2-; RE é -L-Z; RD é C1-C6 alquila opcionalmente substituída, C1-C6 heteroalquila opcionalmente substituída, C2-C6 alquenila opcionalmente substituída, C2-C6 heteroalquenila opcionalmente substituída, C2-C6 alquinila opcionalmente substituída, C2-C6 heteroalquinila opcionalmente substituída, cicloalquila opcionalmente substituída, heterocicloalquila opcionalmente substituída, arila opcionalmente substituída ou heteroarila opcionalmente substituída; L é C1-C6 alquileno opcionalmente substituído, C1-C6 heteroalquileno opcionalmente substituído, C2-C6 alquenileno opcionalmente substituído, C2-C6 heteroalquenileno opcionalmente substituído, C2-C6 alquinileno opcionalmente substituído, C2-C6 heteroalquinileno opcionalmente substituído, cicloalquileno opcionalmente substituído, heterocicloalquileno opcionalmente substituído, arileno opcionalmente substituído, heteroarileno opcionalmente substituído, um dipeptídeo, - C(=O)-, um peptídeo ou uma combinação dos mesmos; e Z é uma fração química formada a partir de uma reação de acoplamento entre um substituinte reativo presente em L e um substituinte reativo presente no anticorpo ou no fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, em que Am compreende exatamente um substituinte de Rc.
75. Conjugado, de acordo com a reivindicação 73 ou 74, CARACTERIZADO pelo fato de que RA e RB, quando presentes juntamente com os átomos de oxigênio aos quais são ligados, se combinam para formar um grupo heterocicloalquila de 5 membros da fórmula: em que Y é -C(=O)-, -C(=S)-, -C(=NRE)- ou -C(RERE’)-; e RE e RE’ são, cada um, independentemente C1-C6 alquileno-RC opcionalmente substituído, C1-C6 heteroalquileno-RC opcionalmente substituído, C2-C6 alquenileno- RC opcionalmente substituído, C2-C6 heteroalquenileno-RC opcionalmente substituído, C2-C6 alquinileno-RC opcionalmente substituído, C2-C6 heteroalquinileno-RC opcionalmente substituído, cicloalquileno-RC opcionalmente substituído, heterocicloalquileno-RC opcionalmente substituído, arileno-RC opcionalmente substituído ou heteroarileno-RC opcionalmente substituído.
76. Conjugado, de acordo com a reivindicação 75, CARACTERIZADO pelo fato de que RA e RB, quando presentes juntamente com os átomos de oxigênio aos quais são ligados, se combinam para formar:
77. Conjugado, de acordo com a reivindicação 73 ou 74, CARACTERIZADO pelo fato de que: a) R1 é H, OH ou ORA; R2 é H, OH ou ORB; RA e RB, quando presentes juntamente com os átomos de oxigênio aos quais são ligados, se combinam para formar: R3, R4, R6 e R7 são, cada um, H; R5 é ORS; R5 é OH ou NH2; e R9 é H ou OH; b) R1 e R2 são, cada um, independentemente H ou OH; R3 é RC; R4, R6 e R7 são, cada um, H; R5 é H, OH ou OC1-C6 alquila; R8 é OH ou NH2; e R9 é H ou OH; c) R1 e R2 são, cada um, independentemente H ou OH; R3, R6, e R7 são, cada um, H; R4 e R5 são, cada um, independentemente H, OH, ORC ou RC;
R8 é OH ou NH2; e R9 é H ou OH; ou d) R1 e R2 são, cada um, independentemente H ou OH; R3, R6 e R7 são, cada um, H; R4 e R5 são, cada um, independentemente H ou OH; R8 é ORC ou NHRC; e R9 é H ou OH.
78. Conjugado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 70, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo conjugado com uma citotoxina é representado pela fórmula Ab- Z-L-Am, em que Ab é o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, Z é uma fração química, L é um ligante e Am é uma amatoxina, e o conjugado de amatoxina-ligante Am-L-Z é representado pela fórmula (II), pela fórmula (IIA) ou pela fórmula (IIB)
em que X é S, SO ou SO2;
R1 é H ou um ligante covalentemente ligado ao anticorpo ou ao fragmento de ligação ao antígeno do mesmo através de uma fração química Z formada a partir de uma reação de acoplamento entre um substituinte reativo presente no ligante e um substituinte reativo presente em um anticorpo ou em um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; e R2 é H ou um ligante covalentemente ligado ao anticorpo ou ao fragmento de ligação ao antígeno do mesmo através de uma fração química Z formada a partir de uma reação de acoplamento entre um substituinte reativo presente no ligante e um substituinte reativo presente em um anticorpo ou em um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; em que, quando R1 é H, R2 é o ligante, e, quando R2 é H, R1 é o ligante.
79. Conjugado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 70, CARACTERIZADO pelo fato de que: (a) Cy é um maitansinoide selecionado a partir do grupo que consiste em DM1 e DM4; ou (b) Cy é uma auristatina; (c) Cy é uma antraciclina selecionada a partir do grupo que consiste em daunorubicina, doxorubicina, epirubicina e idarubicina; ou d) Cy é um derivado de dímero de pirrolobenzodiazepina representado pela fórmula (IV)
80. Conjugado, de acordo com a reivindicação 79, CARACTERIZADO pelo fato de que a auristatina é monometil auristatina E e monometil auristatina F.
81. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 70, CARACTERIZADO pelo fato de que a Cy é um inibidor de RNA polimerase.
82. Método, de acordo com a reivindicação 81, CARACTERIZADO pelo fato de que o inibidor de RNA polimerase é um inibidor de RNA polimerase II.
83. Método, de acordo com a reivindicação 82, CARACTERIZADO pelo fato de que o inibidor de RNA polimerase é amatoxina.
84. A composição farmacêutica CARACTERIZADA pelo fato de que compreende o conjugado, conforme definido nas reivindicações 64 a 83, e um excipiente farmaceuticamente aceitável.
85. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 84, CARACTERIZADA pelo fato de que a composição farmacêutica é formulada para administração transdérmica, subcutânea, intravenosa, intramuscular, intraocular, intratumoral, parentérica, intratecal ou intracerebroventricular administração a um paciente humano.
86. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 84, CARACTERIZADA pelo fato de que a composição farmacêutica é formulada para administração intravenosa a um paciente humano.
87. Método de depleção de uma população de células de CD2+ em um paciente humano, em que o método é CARACTERIZADO pelo fato de que compreende administrar ao paciente uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-CD2 ou de um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.
88. Método de depleção de uma população de células de CD2+ em um paciente humano em necessidade de um transplante de célula-tronco hematopoiética, em que o método é CARACTERIZADO pelo fato de que compreende administrar ao paciente uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-CD2 ou de um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.
89. Método de prevenção de rejeição de um enxerto de célula-tronco hematopoiética em um paciente humano em necessidade de um transplante de célula- tronco hematopoiética, em que o método é CARACTERIZADO pelo fato de que compreende administrar ao paciente uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-CD2 ou de um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo antes de o paciente humano receber um transplante compreendendo células-tronco hematopoiéticas.
90. Método de depleção de uma população de células de CD2+ em um paciente humano em necessidade de um transplante de célula-tronco hematopoiética, em que o método é CARACTERIZADO pelo fato de que compreende administrar ao paciente uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-CD2 ou de um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo antes de o paciente receber um transplante compreendendo células-tronco hematopoiéticas.
91. Método CARACTERIZADO pelo fato de que compreende administrar a um paciente humano um transplante compreendendo células-tronco hematopoiéticas, em que ao paciente foi administrado previamente um anti-CD2 anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo em uma quantidade suficiente para depletir uma população de células de CD2+ no paciente.
92. Método CARACTERIZADO pelo fato de que compreende: a. administrar a um paciente humano um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga a CD2 em uma quantidade suficiente para depletir uma população de células de CD2+ no paciente; e b. administrar subsequentemente ao paciente um transplante compreendendo células-tronco hematopoiéticas.
93. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 87 a 92, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é produzido pela linhagem celular de hibridoma ATCC HB 11423.
94. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 87a 92, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende um conjunto de regiões variáveis de cadeia pesada CDRs (CDR1, CDR2 e CDR3) e um conjunto de regiões variáveis de cadeia leve CDRs (CDR1, CDR2 e CDR3) do anticorpo LO-CD2A produzido pela linhagem celular de hibridoma que tem o número de acesso ATCC HB 11423.
95. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 87 a 92, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é i) um anticorpo anti-CD2 ou uma porção de ligação ao antígeno do mesmo que compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma CDR-
H1 conforme apresentado na SEQ ID n°: 1; uma CDR-H2 conforme apresentado na SEQ ID n°: 2; uma CDR-H3 conforme apresentado na SEQ ID n°: 3; e que compreende uma região variável de cadeia leve compreendendo uma CDR-L1 conforme apresentado na SEQ ID n°: 4; uma CDR-L2 conforme apresentado na SEQ ID n°: 5; e uma CDR-L3 conforme apresentado na SEQ ID n°: 6; ii) um anticorpo anti-CD2 ou uma porção de ligação ao antígeno do mesmo que compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma CDR- H1 conforme apresentado na SEQ ID n°: 14; uma CDR-H2 conforme apresentado na SEQ ID n°: 15; uma CDR-H3 conforme apresentado na SEQ ID n°: 16 ou 17; e que compreende uma região variável de cadeia leve compreendendo uma CDR-L1 conforme apresentado na SEQ ID n°: 18; uma CDR-L2 conforme apresentado na SEQ ID n°: 19; e uma CDR-L3 conforme apresentado na SEQ ID n°: 20; iii) um anticorpo anti-CD2 ou uma porção de ligação ao antígeno do mesmo que compreende uma região variável de cadeia pesada conforme apresentado na SEQ ID n°: 7 e que compreende uma região variável de cadeia leve conforme apresentado na SEQ ID n°: 8; iv) um anticorpo anti-CD2 ou uma porção de ligação ao antígeno do mesmo que compreende uma região variável de cadeia pesada conforme apresentado na SEQ ID n°: 9 e que compreende uma região variável de cadeia leve conforme apresentado na SEQ ID n°: 10; ou v) um anticorpo anti-CD2 ou uma porção de ligação ao antígeno do mesmo que compreende uma região variável de cadeia pesada conforme apresentado na SEQ ID n°: 21 ou 22 e que compreende uma região variável de cadeia leve conforme apresentado na SEQ ID n°: 23.
96. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 87 a 92, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo inibe competitivamente a ligação de CD2 a um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo conforme definido na reivindicação 95.
97. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 87 a 96, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é selecionado a partir do grupo que consiste em um anticorpo monoclonal ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, um anticorpo policlonal ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, um anticorpo humanizado ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, um anticorpo biespecífico ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, um anticorpo intacto, um domínio de imunoglobulina de variável dupla, uma molécula de FV de cadeia única (scFv), um diacorpo, um triacorpo, um nanocorpo, um andaime de proteína semelhante ao anticorpo, um fragmento de Fv, um fragmento de Fab, uma molécula de F(ab’)2 e um di-scFv tandem.
98. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 87 a 97, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é um anticorpo humanizado ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.
99. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 87 a 98, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo tem um isotipo selecionado a partir do grupo que consiste em IgG, IgA, IgM, IgD e IgE.
100. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 87 a 99, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é internalizado por uma célula imune após a administração ao paciente.
101. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 87 a 100, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo tem capacidade de promover necrose de uma célula imune.
102. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 87 a 101, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo tem capacidade de recrutar uma ou mais proteínas complementares para uma célula imune após a administração ao paciente.
103. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 100 a 102, CARACTERIZADO pelo fato de que a célula imune é selecionada a partir do grupo que consiste em uma célula T e uma célula NK.
104. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 89 a 92, CARACTERIZADO pelo fato de que o transplante compreendendo células-tronco hematopoiéticas é administrado ao paciente após a concentração do anticorpo ou do fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ter sido eliminada substancialmente do sangue do paciente.
105. Método, de acordo com a reivindicação 104, CARACTERIZADO pelo fato de que (a).o transplante compreendendo células-tronco hematopoiéticas é administrado ao paciente entre 1 hora e 7 dias após a concentração do anticorpo ou do fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ter sido eliminada substancialmente do sangue do paciente (b). o transplante compreendendo células-tronco hematopoiéticas é administrado ao paciente entre 6 horas e 3 dias após a concentração do anticorpo ou do fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ter sido eliminada substancialmente do sangue do paciente; (c). o transplante compreendendo células-tronco hematopoiéticas é administrado ao paciente entre 12 horas e 36 horas após a concentração do anticorpo ou do fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ter sido eliminada substancialmente do sangue do paciente; ou
(d). o transplante compreendendo células-tronco hematopoiéticas é administrado ao paciente 24 horas após a concentração do anticorpo ou do fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ter sido eliminada substancialmente do sangue do paciente.
106. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 89 a 92, CARACTERIZADO pelo fato de que as células-tronco hematopoiéticas ou a progênie das mesmas mantêm o potencial funcional de célula-tronco hematopoiética após dois ou mais dias após o transplante das células-tronco hematopoiéticas no paciente.
107. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 87 a 92, CARACTERIZADO pelo fato de que as células-tronco hematopoiéticas são autólogas em relação ao paciente ou as células-tronco hematopoiéticas são alogênicas em relação ao paciente.
108. Método, de acordo com a reivindicação 107, CARACTERIZADO pelo fato de que as células-tronco hematopoiéticas são compatíveis com HLA em relação ao paciente ou as células-tronco hematopoiéticas não são compatíveis com HLA em relação ao paciente.
109. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 87 a 92, CARACTERIZADO pelo fato de que a população de células de CD2+ compreende células T.
110. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 87 a 92, CARACTERIZADO pelo fato de que as células-tronco hematopoiéticas ou a progênie das mesmas têm capacidade de localizar tecido hematopoiético e/ou restabelecer hematopoese após o transplante das células-tronco hematopoiéticas no paciente.
111. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 87 a 92, CARACTERIZADO pelo fato de que, após o transplante no paciente, as células-tronco hematopoiéticas começam a recuperação de uma população de células selecionadas a partir do grupo que consiste em megacariócitos, trombócitos, plaquetas, eritrócitos,
mastócitos, mieloblastos, basófilos, neutrófilos, eosinófilos, microglia, granulócitos, monócitos, osteoclastos, células que apresentam antígeno, macrófagos, célula dendríticas, células naturais exterminadoras, linfócitos T e linfócitos B.
112. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 87 a 111, CARACTERIZADO pelo fato de que o paciente está sofrendo de um distúrbio de célula-tronco e/ou um distúrbio de hemoglobinopatia.
113. Método, de acordo com a reivindicação 112, CARACTERIZADO pelo fato de que o distúrbio de hemoglobinopatia é selecionado a partir do grupo que consiste em anemia falciforme, talassemia, anemia de Fanconi, anemia aplástica e síndrome de Wiskott-Aldrich.
114. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 87 a 92, CARACTERIZADO pelo fato de que o paciente está sofrendo de um distúrbio mielodisplásico, um distúrbio de imunodeficiência, um distúrbio metabólico, um câncer ou um distúrbio autoimune.
115. Método, de acordo com a reivindicação 114, CARACTERIZADO pelo fato de que o distúrbio de imunodeficiência é uma imunodeficiência congênita ou uma imunodeficiência adquirida.
116. Método, de acordo com a reivindicação 115, CARACTERIZADO pelo fato de que a imunodeficiência adquirida é um vírus de imunodeficiência humana ou uma síndrome de deficiência imune adquirida.
117. Método, de acordo com a reivindicação 114, CARACTERIZADO pelo fato de que o distúrbio metabólico é selecionado a partir do grupo que consiste em doenças de armazenamento do glicogênio, mucopolissacaridoses, Doença de Gaucher, Doença de Hurler, espingolipidoses e leicodistrofia metacromática.
118. Método, de acordo com a reivindicação 114, CARACTERIZADO pelo fato de que o câncer é selecionado a partir do grupo que consiste em leucemia, linfoma, mieloma múltiplo e neuroblastoma.
119. Método, de acordo com a reivindicação 114, CARACTERIZADO pelo fato de que o câncer é um câncer hematológico.
120. Método, de acordo com a reivindicação 114, CARACTERIZADO pelo fato de que o câncer é leucemia mieloide aguda, leucemia linfoide aguda, leucemia mieloide crônica ou leucemia linfoide crônica.
121. Método, de acordo com a reivindicação 114, CARACTERIZADO pelo fato de que o câncer é linfoma difuso de grandes células B ou linfoma não Hodgkin.
122. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 87 a 92, CARACTERIZADO pelo fato de que o paciente está sofrendo de um distúrbio selecionado a partir do grupo que consiste em deficiência de adenosina deaminase e imunodeficiência combinada grave, síndrome de hiperimunoglobulina M, doença de Chediak-Higashi, linfo-histiocitose hereditária, osteopetrose, osteogênese imperfeita, doenças de armazenamento, talassemia principal, esclerose sistêmica, lúpus eritematoso sistêmico, esclerose múltipla e artrite rematoide juvenil.
123. Método, de acordo com a reivindicação 114, CARACTERIZADO pelo fato de que o distúrbio autoimune é selecionado a partir do grupo que consiste em esclerose múltipla, lúpus sistêmico humano, artrite reumatoide, doença intestinal inflamatória, psoríase em tratamento, diabetes mellitus do tipo 1, encefalomielite disseminada aguda, doença de Addison, alopecia universal, espondilite anquilosante, síndrome de anticorpo antifosfolíde, anemia aplástica, anemia hemolítica autoimune, hepatite autoimune, doença autoimune do ouvido interno, síndrome linfoproliferativa autoimune, ooforite autoimune, doença de Balo, doença de Behcet, penfigoide bolhoso, cardiomiopatia, doença de Chagas, síndrome de disfunção imune à fadiga crônica, polineuropatia desmielinizante inflamatória crônica, doença de Crohn , penfigoide cicatricial, dermatite herpetiforme de espru celíaco, doença por aglutininas a frio, síndrome de CREST, doença de Degos, lúpus discoide, neuropatia autonômica, endometriose, crioglobulinemia mista essencial, fibromalgia-fibromiosite, síndrome de
Goodpasture, doença de Grave, síndrome de Guillain-Barre, tireoide de Hashimoto, Hidrosadenite supurativa, púrpura trombocitopênica idiopática e/ou aguda, fibrose pulmonar idiopática, neuropatia de IgA, cistite intersticial, artrite juvenil, doença de Kawasaki, líquen plano, doença de Lyme, doença de Meniere, doença mista do tecido conjuntivo, miastenia grave, neuromiotonia, síndrome de opsoclônica-mioclônica, neurite óptica, tireoide de Ord, pênfigo vulgar, anemia perniciosa, policondrite, polimiosite e dermatomiosite, cirrose biliar primária, poliarterite nodosa, síndromes poliglandulares, polimialgia reumática, agamaglobulinemia primária, fenômeno de Raynaud, síndrome de Reiter, febre reumática, sarcoidose, esclerodermia, síndrome de Sjogren, síndrome da pessoa rígida, arterite de Takayasu, arterite temporal, colite ulcerativa, uveíte, vasculite, vitiligo, vulvodinia e granulomatose de Wegener.
124. Método, de acordo com a reivindicação 114, CARACTERIZADO pelo fato de que o distúrbio autoimune é esclerodermia, esclerose múltipla, colite ulcerativa, doença de Crohn ou diabetes do tipo 1.
125. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 87 a 92, CARACTERIZADO pelo fato de que o método trata o distúrbio ou câncer.
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