JP2020530262A - 腸内吸収率を高めたビートジュースとその製造方法及び用途 - Google Patents

腸内吸収率を高めたビートジュースとその製造方法及び用途 Download PDF

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Abstract

本発明は腸内吸収率を高めたビートジュースとその製造方法及び用途に関するもので、より詳しくはビートを低温熟成して高分子化合物を低分子化合物に変換して腸内消化吸収率を向上させ、ビートを焼いて生臭い匂いを除去し、ニンジン汁又はリンゴ汁などを混合して生臭い味及び苦味を緩和させたビートジュース、及び前記ビートジュースを用いた抗酸化又は抗高血圧用健康食品組成物に関するものである。【選択図】 図１

Description

本発明は腸内吸収率を高めたビートジュースとその製造方法及び用途に関するもので、より詳しくは低温熟成によってビート内の高分子化合物を低分子化合物に変換して腸内吸収率を高めたビートジュース、これを製造する方法及び前記ビートジュースを含む抗酸化又は抗高血圧用健康食品に関するものである。
赤い大根とも呼ばれるビート（Ｂｅｅｔ）は豊かな栄養素を持っており、ビートに含まれている赤い色素ベタイン（Ｂｅｔａｉｎｅ）は筋力と持久力を向上させ、細胞損傷を抑制し、抗酸化作用を有するので、癌の予防、炎症緩和などの効果を持っている。
また、鉄分とビタミンを多量含有しているので、赤血球の生成に役立ち、血液をきれいにして月経不純や更年期女性にも良く、胃損傷を防止し、胃粘膜を保護し、食物纎維が多くて便秘解消にも良い効能を持っている。
ビートは料理して食べることも良く、栄養素を生かすために生のままザラダや生彩にして食べても良いが、ビート特有の生臭い匂いと苦みのため摂取するのに困難がある。また、ビートを生のまま食べたとき、ビートに含まれた高分子化合物が体内に早く吸収されない欠点を持っている。
したがって、ビートを容易に摂取するための研究が続いている。例えば、韓国特許公開第１０−２０１７−００２５２９９号には、ビートを圧搾、熟成させた後、凍結乾燥させてから粉末化して栄養成分の損失を最小化し、ビートの味と色を維持する製造方法が開示されており、韓国特許公開第１０−２０１６−０１４４０３４号には、ビートと機能性ハーブを混合した後、熟成、加熱乾燥などの製造過程を経てから飲用するとき、風味と審美性を持たせるようにするビート茶の製造方法が開示されており、韓国特許登録第１０−０１８８５５３号には、レッドビートをビタミン水溶液に浸漬させた後、抽出、濾過した後、オリゴ糖を混合して高温殺菌することにより色相と味を保存するレッドビートジュースの製造方法が開示されている。
しかし、このような先行文献に開示されたビート粉末又は飲料の製造方法には味と色を維持するか飲用者が易しく飲める方法に対する技術のみ提示されているだけ、ビート飲料の有効成分の腸内消化吸収率を高める方法に対するものは研究されたことがない。
それで、本発明者らはビートの生臭い臭い、苦みを改善し、ビート成分の高分子化合物を低分子化合物に変換させて腸内消化吸収率を高めるビートジュースを開発し、前記腸内消化吸収率を高めるビートジュースが優れた抗酸化活性及び血圧降下の効果があることを確認して本発明を完成した。
本発明の目的は、低温熟成によってビート内の高分子化合物を低分子化合物に変換して腸内消化吸収率を高めたビートジュース飲料を提供することである。
本発明の他の目的は、低温熟成によってビート内の高分子化合物を低分子化合物に変換して腸内消化吸収率を高めたビートジュースを製造する方法を提供することである。
本発明のさらに他の目的は、低温熟成によってビート内の高分子化合物を低分子化合物に変換して腸内消化吸収率を高めた低温熟成ビート汁を含む抗酸化用健康食品を提供することである。
本発明のさらに他の目的は、低温熟成によってビート内の高分子化合物を低分子化合物に変換して腸内消化吸収率を高めた低温熟成ビート汁を含む血圧降下用健康食品を提供することである。
前記目的を達成するために、
本発明は、ビートを洗浄した後、２００〜３００℃で３０秒〜１分間加熱する第１段階と、焼いたビートを搾汁する第２段階と、搾汁液を０〜１０℃で３日〜４日間低温熟成する第３段階と、低温熟成ビート汁にニンジン汁、リンゴ汁及びレモン汁を混合する第４段階とを含むビートジュースの製造方法を提供する。
また、本発明は、皮を剥いて焼いたビート搾汁液を低温熟成した後、ニンジン汁、リンゴ汁及びレモン汁を含ませた腸内消化吸収率が向上したビートジュース飲料を提供する。
また、本発明は、皮を剥いて焼いたビート搾汁を低温熟成した低温熟成ビート汁、ニンジン汁及びリンゴ汁を含む抗酸化用健康食品を提供する。
また、本発明は、皮を剥いて焼いたビート搾汁を低温熟成した低温熟成ビート汁、ニンジン汁及びリンゴ汁を抗酸化用健康食品として用いる用途を提供する。
また、本発明は、皮を剥いて焼いたビート搾汁を低温熟成した低温熟成ビート汁、ニンジン汁及びリンゴ汁を含む抗高血圧用健康食品を提供する。
さらに、本発明は、皮を剥いて焼いたビート搾汁を低温熟成した低温熟成ビート汁、ニンジン汁及びリンゴ汁を抗高血圧用健康食品として用いる用途を提供する。
本発明は、ビートジュースの製造時、ビートを焼く過程によって生臭い匂いを除去することができ、低温熟成過程によって高分子化合物を低分子化合物に変換して腸内消化吸収率を高めることができ、ニンジン汁、リンゴ汁及び／又はレモン汁と混合して生臭い味及び苦味を緩和させて甘味を有するビートジュースを製造することができる。
また、本発明によるビートジュースは、ポリフェノールを含み、ＤＰＰＨラジカル及びＡＢＴＳラジカル消去能などの抗酸化活性を有し、動物実験による経口投与時、血圧降下、血中亜硝酸塩の増加及びＭＤＡ減少の効果を現し、体重と臓器指標（ｏｒｇａｎ ｉｎｄｅｘ）には有意な変化がなく、アセチルコリンに対する血管反応性を改善させるなどの高血圧改善効果を有することを確認することにより、抗酸化用又は抗高血圧用健康食品として有用に使われることができる。
本発明によって製造されたビートジュースを示す図である。 本発明によって製造されたビートジュースの総ポリフェノール含量測定結果を示すグラフである。 本発明によって製造されたビートジュースのＤＰＰＨラジカル捕捉活性測定結果を示すグラフである。 本発明によって製造されたビートジュースのＡＢＴＳラジカル捕捉活性測定結果を示すグラフである。 本発明によって製造されたビートジュースのＦＲＡＰ法による抗酸化活性測定結果を示すグラフである。 本発明によって製造されたビートジュースのベタニン（ｂｅｔａｎｉｎ）含量測定結果を示すグラフである。 本発明によって製造されたビートジュースに対する動物実験における１回経口投与後の血圧変化を示すグラフである。 本発明によって製造されたビートジュースに対する動物実験における繰り返し投与後の血圧変化を示すグラフである。 本発明によって製造されたビートジュースに対する動物実験における摘出血管の弛緩性を示すグラフである。 本発明によって製造されたビートジュースに対する動物実験における臓器の重量変化を示すグラフである。 本発明によって製造されたビートジュースに対する動物実験における血中亜硝酸塩の変化を示すグラフである。 本発明によって製造されたビートジュースに対する動物実験における血中脂質酸化の指標であるＭＤＡ変化を示すグラフである。
以下、本発明を詳細に説明する。本発明の説明において、関連した公知の構成又は機能についての詳細な説明は省略することができる。
本明細書及び特許請求範囲に使用された用語や単語は通常的又は辞書的意味に限定されて解釈されなく、本発明の技術的事項に合う意味及び概念に解釈されなければならない。
本明細書に記載した実施例と図面に示した構成は本発明の好適な実施例を示すもので、本発明の技術的思想を全て代弁するものではないので、本出願の時点にこれらを代替することができる多様な均等物と変形例があり得る。
以下、本発明のビートジュースの製造方法について詳細に説明する。
本発明は、ビートを洗浄した後、２００〜３００℃で３０秒〜１分間焼く第１段階と、
加熱されたビートを搾汁する第２段階と、
搾汁液を０〜１０℃で３日〜４日間低温熟成する第３段階と、
低温熟成ビート汁にニンジン汁、リンゴ汁及びレモン汁を混合する第４段階とを含むビートジュースの製造方法を含む。
まず、ビートを洗浄してから焼く（第１段階）。
前記第１段階は、ビートの皮を除去した後、２００〜３００℃で３０秒〜１分間焼くことが良い。
このとき、この温度範囲より低いか時間が短ければ、ビートの皮部分が均一に焼かれないので風味が落ち、この温度範囲より高いか時間が長ければ、ビートの酵母酵素が死滅してしまって効能が落ちるので好ましくない。
ついで、焼かれたビートを搾汁する（第２段階）。
前記第２段階は搾汁機を用いて搾汁することができる。
ついで、搾汁液を低温熟成する（第３段階）。
前記第３段階は０〜１０℃の貯蔵庫で低温熟成することが好ましく、４〜５℃の貯蔵庫で低温熟成することがより好ましい。
また、前記低温熟成は３日〜４日間進めることが良い。
このとき、０℃未満では温度が余りにも低くてビート搾汁液が凍ってしまって熟成が不可能であり、１０℃を超える温度では搾汁液が粘っこい状態に変わるので飲用するのに適しない。
また、３日未満の熟成時には、ビートの生臭い味や苦みが残っているので飲用するのに適しなく、４日以上の熟成後に飲料に製造したときは色と味が変わりやすい。
ついで、低温熟成ビート汁にニンジン汁、リンゴ汁及びレモン汁を混合する（第４段階）。
前記第４段階で低温熟成ビート汁とニンジン汁、リンゴ汁及びレモン汁をそれぞれ２０〜４０重量部、１０〜２０重量部、３０〜５０重量部及び０．５〜１重量部の比率で混合することが好ましい。
前記ニンジン汁、リンゴ汁及びレモン汁はビートの生臭い味及び苦味を改善するためのものであり、配合比が低い場合、ビートの生臭い味及び苦味が大きく感じられて飲用者が拒否感を感じることができ、配合比が高い場合、ビートよりニンジン、リンゴ、レモンなどの味が大きく感じられ、ビートジュースの効能を失うことができる。
前記第４段階でニンジン汁、リンゴ汁及びレモン汁は、ニンジン、リンゴ及びレモンをそれぞれ洗浄してから搾汁することが好ましい。
このとき、搾汁過程は搾汁機を用いることができる。
前記第４段階で製造された混合液を滅菌及び包装する段階をさらに含むことができる。
前記滅菌は、パルス電場（Ｐｕｌｓｅｄ Ｅｌｅｃｔｒｉｃ Ｆｉｅｌｄ、ＰＥＦ）を用いて４０℃以下の非加熱低温滅菌することが好ましい。
このとき、ビートの酵母酵素は４０℃で死滅し始め、６０℃になれば完全に死滅してしまうので、４０℃以下で低温殺菌することが好ましい。
また、本発明は、皮を剥いて焼いたビート搾汁低温熟成液、ニンジン汁、リンゴ汁及びレモン汁を含む腸内消化吸収率が向上したビートジュース飲料を提供する。
前記ビートジュース飲料はレットビート色である濃い赤色又はワイン色を帯び、粘っこくない液体形態であり、ガラス容器に包装することが容易である。
前記ビートジュース飲料は、低温熟成過程によって高分子化合物を低分子化合物に変換させ、飲用後に便でビート特有の赤色が現れることから、腸内消化吸収率に優れ、ビートを焼く過程によって生臭い匂いを除去することができ、ニンジン汁、リンゴ汁及びレモン汁と混合することにより、生臭い味及び苦味を緩和させるので飲用するのに適する。
また、本発明は、皮を剥いて焼いたビート搾汁低温熟成液及びリンゴ汁を含む腸内消化吸収率が向上したビートジュース飲料を提供する。
ここで、低温熟成ビート汁及びリンゴ汁は３：７の重量比で配合することが好ましい。
前記ビートジュース飲料において、ニンジン汁又はレモン汁のいずれか一つ以上を混合することが好ましい。
ここで、低温熟成ビート汁、ニンジン汁及びリンゴ汁は２．０〜３．０：１．５〜２．５：５．０〜６．０の重量比で配合することが好ましく、２．５：２：５．５の重量比で配合することがより好ましい。
また、本発明は、皮を剥いて焼いたビート搾汁を低温熟成した低温熟成ビート汁、ニンジン汁及びリンゴ汁を含む抗酸化用健康食品を提供する。
前記抗酸化用健康食品において、低温熟成ビート汁、ニンジン汁及びリンゴ汁は２．０〜３．０：１．５〜２．５：５．０〜６．０の重量比で配合することが好ましく、２．５：２：５．５の重量比で配合することがより好ましい。
ここで、リンゴ汁の比重が全体比重の５０％以下になるように配合すれば、ビート汁のゲル化が進むから、ジュースがゲル化することを防止するために、リンゴ汁の適切な配合比が好ましい。
前記抗酸化用健康食品において、味と香などの風味のためにレモン汁をさらに含むことが好ましい。
前記健康食品は健康機能食品又は健康補助食品であり得る。
また、本発明は、皮を剥いて焼いたビート搾汁の低温熟成した低温熟成ビート汁及びリンゴ汁を含む抗酸化用健康食品を提供する。
前記抗酸化用健康食品において、低温熟成ビート汁及びリンゴ汁は３：７の重量比で配合することが好ましい。
前記健康食品は健康機能食品又は健康補助食品であり得る。
また、本発明は、皮を剥いて焼いたビート搾汁の低温熟成した低温熟成ビート汁、ニンジン汁及びリンゴ汁を含む抗高血圧用健康食品を提供する。
前記抗高血圧用健康食品において、低温熟成ビート汁、ニンジン汁及びリンゴ汁は２．０〜３．０：１．５〜２．５：５．０〜６．０の重量比で配合することが好ましく、２．５：２：５．５の重量比で配合することがより好ましい。
ここで、リンゴ汁の比重が全体比重の５０％以下になるように配合すれば、ビート汁のゲル化が進むので、ジュースがゲル化することを防止するために、リンゴ汁の適切な配合比が好ましい。
前記抗高血圧用健康食品において、味と香りなどの風味のために、レモン汁をさらに含むことが好ましい。
前記健康食品は健康機能食品又は健康補助食品であり得る。
また、本発明は、皮を剥いて焼いたビート搾汁の低温熟成した低温熟成ビート汁及びリンゴ汁を含む抗高血圧用健康食品を提供する。
前記抗高血圧用健康食品において、低温熟成ビート汁及びリンゴ汁は３：７の重量比で配合することが好ましい。
前記健康食品は健康機能食品又は健康補助食品であり得る。
本発明の健康食品は、本発明によるビートジュースをそのまま添加するか他の食品又は食品成分とともに使われることができ、通常的な方法で適切に使われることができる。
本発明の健康食品は、本発明によるビートジュースを全体健康食品組成物１００重量部に対して５０〜９９重量部含んでなることができる。
本発明の健康食品の種類には特別な制限はない。前記ビートジュースを添加することができる食品の例としては、飲料類、酒類、油加工品類、肉類、麺類、お菓子類、氷菓類などがあり、通常的な意味の健康食品の全部を含む。
本発明の健康食品は、通常の飲料のように、様々な香味剤又は甘味剤などを含むことができ、様々な営養剤、ビタミン、電解質、風味剤、着色剤、ペクチン酸及びその塩、アルギン酸及びその塩、有機酸、保護性コロイド増粘剤、ｐＨ調節剤、安定化剤、防腐剤、グリセリン、アルコール、炭酸飲料に使われる炭酸化剤などを含むことができ、その他に多様な果肉を含むことができる。このような成分は独立的に又は混合して使うことができる。このような添加剤の比率はあまり重要ではないが、全体健康食品組成物１００重量部当たり０．０１〜０．１重量部の範囲で選択することが一般的である。
以下、実施例に基づいて本発明をより詳細に説明する。これらの実施例は単に本発明をより具体的に説明するためのものであり、本発明の要旨によって本発明の範囲がこれらの実施例に制限されないというのは当該分野で通常の知識を有する者に明らかである。
＜実施例１＞ビートジュースの製造１
ビート１Ｋｇをきれいな水で洗浄した後、皮を剥き、２００℃で１分間焼いた後、搾汁機で搾汁してビート搾汁液を得た。その後、５℃の貯蔵庫で３日間低温熟成過程を経た後、ニンジン汁、リンゴ汁及びレモン汁を添加してよく混ぜることにより混合物を製造した。このとき、低温熟成ビート汁４０重量％、ニンジン汁２０重量％、リンゴ汁３９重量％及びレモン汁１重量％の比率で混合した。
このように製造した混合物をパルス電場（Ｐｕｌｓｅｄ Ｅｌｅｃｔｒｉｃ Ｆｉｅｌｄ、ＰＥＦ）を用いて非加熱低温滅菌して完成した。
＜実施例２＞ビートジュースの製造２
ビートを２５０℃で３０秒間焼いたことを除き、前記＜実施例１＞と同様に製造した。
＜実施例３＞ビートジュースの製造３
ビート搾汁液を１０℃の貯蔵庫で３日間低温熟成過程を経たことを除き、前記＜実施例１＞と同様に製造した。
＜実施例４＞ビートジュースの製造４
ビート搾汁液３０重量％、ニンジン汁２０重量％、リンゴ汁４９．５重量％及びレモン汁０．５重量％混合したことを除き、前記＜実施例１＞と同様に製造した。
＜比較例１＞ビート加熱過程がない製造
ビートを加熱しないことを除き、前記＜実施例１＞と同様に製造した。
＜比較例２＞ビート加熱条件の異なる製造
ビートを２５０℃で２分間焼いたことを除き、前記＜実施例１＞と同様に製造した。
＜比較例３＞低温熟成過程がない製造
低温熟成過程を経ないことを除き、前記＜実施例１＞と同様に製造した。
＜比較例４＞熟成条件の異なる製造
ビート搾汁液を室温（２０〜２５℃）で３日間熟成過程を経たことを除き、前記＜実施例１＞と同様に製造した。
＜比較例５＞配合条件の異なる製造
ビート搾汁液５０重量％、ニンジン汁１９重量％、リンゴ汁３０重量％及びレモン汁１重量％を混合したものを使ったことを除き、前記＜実施例１＞と同様に製造した。
＜比較例６＞配合条件の異なる製造
ビート搾汁液１５重量％、ニンジン汁２５重量％、リンゴ汁５５重量％及びレモン汁５重量％を混合したことを除き、前記＜実施例１＞と同様に製造した。
＜比較例７＞滅菌条件の異なる製造
高温滅菌器を使って７０〜８０℃で滅菌したことを除き、前記＜実施例１＞と同様に製造した。
＜実験例１＞官能検査
前記実施例１〜４、及び比較例１〜７でそれぞれ製造したビートジュースの味、香り及び全体的な嗜好度を調べるための官能検査を実施した。
官能検査要員は大人男性２０人と大人女性２０人を対象（男女それぞれ２０帯５人、３０帯５人、４０帯５人、５０帯５人で構成）として教育課程を経て、評価すべき特性に対する識別力と特性、味に対する安定した判断基準を確立した後、官能検査に参加した。官能検査項目は、味、香り、食感及び全体的な嗜好度の総４種を１０点満点の基準に評価した。
採点基準は次の通りである。
非常に良い：１０点
良い：８点
普通：６点
悪い：４点
非常に悪い：２点
その結果を表１に示した。
Figure 2020530262
味を評価して見た結果、＜実施例１〜４＞で製造されたビートジュースはビート表皮を加熱して焼くから、臭いが多く除去され、香ばしい香りがし、ニンジン汁、リンゴ汁及びレモン汁を適切に配合することにより風味が向上し、ビートの製造過程中に適切な低温を維持することにより、ビート内の酵母酵素を死滅させずにそのまま保存したビートジュースを製造することができた。
一方、＜比較例１＞で製造されたビートジュースは、ビートを加熱する段階を別に経なくてビート固有の生臭い味、酸味が感じられ、臭いに鋭敏な人は土臭いも感じることができ、＜比較例２＞のように長時間加熱したときは、ビート内の酵母酵素が死滅し、香りも良くないことが分かり、＜比較例３及び４＞のように熟成条件を変更したときは、高分子化合物が残っているためよく消化できなくて嗜好度がちょっと低いことが現れた。また、＜比較例５及び６＞のように配合条件を異にした場合には、ビート特有の生臭い味及び苦味が強く感じられ、＜比較例７＞で製造されたビートジュースは高温で滅菌させることにより、酵母酵素が死滅し、食感も良くなかった。
＜実験例２＞消化吸収率確認
前記実施例１〜４、及び比較例１〜７でそれぞれ製造したビートジュースの消化吸収効能を調べるための臨床実験を実施した。
有意差を減らすために、類似した性別及び年齢構成のために、各実験群当たり３０帯の大人男性２人と大人女性２人を実験対象（総４４人）とした。
各実験群当たり該当ジュースを１週間一日に２５０ｍｌの一コップずつ摂取し、実験前３日から終了時まで他の果物や果物ジュースを摂取しないようにして実施した。消化吸収の評価は、１週間の実験中の便の状態、快便及び胃の安らかさ程度の総３種を１０点満点の基準に評価し、便の色を肉眼で観察した。
採点基準は次の通りである。
非常に良い：１０点
良い：８点
普通：６点
悪い：４点
非常に悪い：２点
その結果を表２に示した。
Figure 2020530262
臨床実験結果、＜実施例１〜４＞で製造されたビートジュースを飲用した場合、大部分の被験者の便の状態、快便程度、胃の安らかさのいずれも８．０の良い以上を示し、便の色も一般便の色と大きな差がないことが現れた。
一方、＜比較例１及び２＞で製造されたビートジュースを飲用した場合、便の状態が良くなく、快便程度も普通の水準であり、胃の安らかさも普通であり、便の色が赤色を帯びることを確認した。同様に＜比較例３及び４＞のビートジュースを飲用した場合、被験者が消化不良を訴え、便の状態、快便程度、胃の安らかさのいずれも良くないことが現れ、便の色がビートジュースの濃い赤色を多く帯びていることを確認した。
また、＜比較例５及び６＞の場合、味と食感が良くなく、便の状態、快便程度及び胃の安らかさが良くないことが現れ、＜比較例７＞のビートジュースを飲用した場合も、便の状態、快便程度、胃の安らかさのいずれも良くなく、＜比較例５〜７＞のビートジュースを飲用した被験者の便の色はビートジュースの薄い赤色を帯びることを確認した。
＜実験例３＞総ポリフェノール含量の分析
＜３−１＞試料の準備
試料２（Ｓａｍｐｌｅ２；Ｓ２）として、前記＜実施例１＞のような方法で低温熟成ビート汁、ニンジン汁及びリンゴ汁をそれぞれ２．５：２：５．５の重量比で混合して腸内吸収率を改善したビートジュースを準備した。
また、試料１（Ｓａｍｐｌｅ１；Ｓ１）として、ビートをそのまま搾汁したビート原液を準備した。
また、試料３（Ｓａｍｐｌｅ３；Ｓ３）として、前記試料２のビートジュースを蒸留水で２倍に希釈したビートジュースを準備した。
＜３−２＞総ポリフェノール含量の測定
ポリフェノールは植物で発見される化学物質で、フラボノイド、カテキン及びタンニンが主成分であり、抗酸化、坑癌、抗高血圧などの効果を示すものとして知られている物質である。
総ポリフェノール含量の測定はＦｏｌｉｎ−Ｄｅｎｉ法を用いて測定した。準備した１ｍＬの各試料１〜３にＦｏｌｉｎ−ｃｉｏｃａｌｔｅｕｓ’ ｐｈｅｎｏｌ ｒｅａｇｅｎｔ １００μＬを添加し、室温で５分間反応した後、Ｎａ２ＣＯ３溶液（７％、ｗ／ｖ）２００μＬと蒸留水７００μＬを入れ、室温で１時間反応させた。反応後、７２０ｎｍで吸光度を測定し、没食子酸（ｇａｌｌｉｃ ａｃｉｄ）を用いて作成した標準検定曲線を用いて抽出物の総ポリフェノール含量を示した。
その結果、図２に示したように、総ポリフェノール含量は試料２と試料３で高い水準で含有されていることを確認した（図２）。
＜実験例４＞ＤＰＰＨラジカル消去能の分析
＜４−１＞試料の準備
前記実施例＜３−１＞と同様に、試料１（Ｓａｍｐｌｅ１；Ｓ１）、試料２（Ｓａｍｐｌｅ２；Ｓ２）及び試料３（Ｓａｍｐｌｅ３；Ｓ３）を準備した。
＜４−２＞ＤＰＰＨラジカル捕捉活性の測定
ＤＰＰＨラジカル捕捉活性の測定は比較的簡単な抗酸化測定法であり、ＤＰＰＨがフェノール性化合物などから電子又は水素を受けてＤＰＰＨ−Ｈ還元しながら紫色が脱色する原理を用いて抗酸化活性を測定する方法である。
ＤＰＰＨラジカル捕捉活性実験はＢｌｏｓｉｓ方法を用いて行った。準備した０．２ｍＭのＤＰＰＨと各試料を混ぜ、室温で１０分間放置した後、ＥＬＡＳＡ ｒｅａｄｅｒ ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ（登録商標） Ｍ３ Ｍｕｌｔｉ−Ｍｏｄｅ Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ、Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ、ＣＡ、ＵＳＡ）を使って５１７ｎｍで吸光度を測定した。ＤＰＰＨの吸光度が５０％減少するときに現れる試料の濃度（ＳＣ５０）で表示し、各試料は３回繰り返し実験を実施して平均値を求めた。このときに使用された対照群ではビタミンＣを使った。
その結果、図３に示したように、試料２と試料３が優れたＤＰＰＨラジカル捕捉活性を持っていることを確認した（図３）。
＜実験例５＞ＡＢＴＳラジカル捕捉活性の分析
＜５−１＞試料の準備
前記実施例＜３−１＞と同様に、試料１（Ｓａｍｐｌｅ１；Ｓ１）、試料２（Ｓａｍｐｌｅ２；Ｓ２）及び試料３（Ｓａｍｐｌｅ３；Ｓ３）を準備した。
＜５−２＞ＡＢＴＳラジカル捕捉活性の測定
ＡＢＴＳラジカル捕捉活性は、７．４ｍＭのＡＢＴＳと２．６ｍＭの過硫酸カリウムを混合した後、室温の暗所で１５時間放置してラジカルを形成させた後、この溶液を７３４ｎｍで吸光度値が０．７０±０．０２になるように準備した。準備したＡＢＴＳ溶液１８０μＬに各試料２０μＬを加え、室温で１５分間放置した後、７３４ｎｍで吸光度を測定した。ＡＢＴＳラジカル捕捉活性は試料溶液の添加群と無添加群間の吸光度差を百分率で示した。
その結果、図４に示したように、試料２と試料３が優れたＡＢＴＳラジカル捕捉活性を持っていることを確認した（図４）。
＜実験例６＞ＦＲＡＰ法による抗酸化活性の分析
＜６−１＞試料の準備
前記実施例＜３−１＞と同様に、試料１（Ｓａｍｐｌｅ１；Ｓ１）、試料２（Ｓａｍｐｌｅ２；Ｓ２）及び試料３（Ｓａｍｐｌｅ３；Ｓ３）を準備した。
＜６−２＞ＦＲＡＰ法による抗酸化活性の測定
ＦＲＡＰ法は、低ｐＨでトリピリジルトリアジン第２鉄（ｆｅｒｒｉｃ ｔｒｉｐｙｒｉｄｙｌｔｒｉａｚｉｎｅ）（Ｆｅ３＋）が抗酸化剤によってトリピリジルトリアジン第１鉄（ｆｅｒｒｏｕｓ ｔｒｉｐｙｒｉｄｙｌｔｒｉａｚｉｎｅ）（Ｆｅ２＋）に還元するときに発生する吸光度の変化を測定することによって抗酸化活性を測定する。
ＦＲＡＰ（ｆｅｒｒｉｃ ｒｅｄｕｃｉｎｇ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ｐｏｗｅｒ）法による抗酸化活性はＢｅｎｚｉｅとＳｔｒａｉｎの方法によって実施した。３００ｍＭの緩衝酢酸溶液（ａｃｅｔａｔｅ ｂｕｆｆｅｒ）（ｐＨ３．６）、１０ｍＭのＴＰＴＺ（２，４，６−ｔｒｉｐｙｒｉｄｙｌ−ｓ−ｔｒｉａｚｉｎｅ）が溶解した４０ｍＭのＨＣｌ溶液と２０ｍＭのＦｅＣｌ３６Ｈ２Ｏをそれぞれ１０：１：１（ｖ／ｖ／ｖ）の比率で混合してＦＲＡＰ基質液として使った。９６−ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅに各試料４０μＬ、ＦＲＡＰ基質液１００μＬ及び蒸留水２００μＬを順に混合し、３７℃で４分間反応させた後、５９３ｎｍで吸光度を測定した。各試料は３回繰り返して実施し、ＦｅＳＯ４・７Ｈ２Ｏを標準物質として得た標準検定曲線を用いて分析した。
その結果、図５に示したように、試料２と試料３が優れた抗酸化活性を持っていることを確認した（図５）。
Figure 2020530262
 ＜実験例７＞ベタイン分析
＜７−１＞試料の準備
前記実施例＜３−１＞と同様に、試料１（Ｓａｍｐｌｅ１；Ｓ１）、試料２（Ｓａｍｐｌｅ２；Ｓ２）及び試料３（Ｓａｍｐｌｅ３；Ｓ３）を準備した。
＜７−２＞ベタニン含量の測定
ベタニン分析は、Ｓｙｎｅｒｇｉ ４μ ＰＯＬＡＲ−ＲＰ ８０Ａカラム（２５０×４．６ｍｍ、４μｍ Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）を装着した１２００ｓｅｒｉｅｓ ＨＰＬＣ（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ＣＡ、ＵＳＡ）を使った。分析条件は、検出波長（ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ）５３８ｎｍ、流量（ｆｌｏｗ ｒａｔｅ）１．０ｍＬ／ｍｉｎ、カラム温度（ｃｏｌｕｍｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ）３５℃に設定して分析した。試料は自動注入器（ａｕｔｏｍａｔｉｃ ｉｎｊｅｃｔｏｒ）を使って２０．０μＬを注入した。移動床溶媒はｓｏｌｖｅｎｔ Ａ［水：ギ酸、（９９：１、ｖ／ｖ）］とｓｏｌｖｅｎｔ Ｂ（アセトニトリル、ＣＨ３ＣＮ）を使った。溶媒濃度勾配はｓｏｌｖｅｎｔ Ｂを基準に実施し、総２５分の分析時間がかかった。Ｓｏｌｖｅｎｔ Ｂは最初に０％から始めて１５分まで２０％に増加させた後、２０分まで４０％に増加させた。２０．１分に０％で急激に減少させた後、２５分まで０％を維持させた。分析された各成分は、外部標準物質であるベタインの保持期間（ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ ｔｉｍｅ、ＲＴ）を同一にして同定し、ＨＰＬＣピーク面積（ａｒｅａ）を基準に各ベタニン成分のピーク面積を比較して定量した。
その結果、図６に示したように、試料２と試料３でベタイン含量が高いことを確認した（図６）。
＜実験例８＞高血圧モデル動物での抗高血圧効能の評価
＜８−１＞実験動物の準備
実験動物は２４週齢の雌性自然発生高血圧ラット（Ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｌｙ Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅ Ｒａｔ；ＳＨＲ）を使った。実験動物の飼育室環境は、温度２３±２℃、相対湿度５０±１０％であり、明暗周期は１２時間単位（照明時間０８：００〜２０：００）で調節された。全ての動物実験は、済州大学校動物実験倫理委員会の承認の下で遂行した（承認番号：２０１８−００５３）。
繰り返し投与の際、実験群は次の通りであった。
Ｇｒｏｕｐ１：ＳＨＲ（飲料水、不断給餌）
Ｇｒｏｕｐ２：ＳＨＲ＋Ｓａｍｐｌｅ１（３０ｍｌ／日）
Ｇｒｏｕｐ３：ＳＨＲ＋Ｓａｍｐｌｅ３（３０ｍｌ／日）
Ｇｒｏｕｐ４：ＳＨＲ＋Ｓａｍｐｌｅ２（３０ｍｌ／日）
＜８−２＞１回経口投与後血圧変化の測定
試料当たりＳＨＲ１匹に対して１回経口投与後２４時間血圧の変化を観察した。実験群は次の通りであった。
Ｇｒｏｕｐ１：ＳＨＲ＋Ｄ．Ｗ．（０．６ｍｌ／ｒａｔ、ｐ．ｏ．）
Ｇｒｏｕｐ２：ＳＨＲ＋Ｓａｍｐｌｅ１（０．６ｍｌ／ラット、ｐ．ｏ．）
Ｇｒｏｕｐ３：ＳＨＲ＋Ｓａｍｐｌｅ２（０．６ｍｌ／ラット、ｐ．ｏ．）
Ｇｒｏｕｐ４：ＳＨＲ＋ベタイン（５０ｍｇ／ｋｇ、ｐ．ｏ．）
血圧はＣＯＤＡ非侵襲的血圧システム（ｎｏｎ−ｉｎｖａｓｉｖｅ ｂｌｏｏｄ ｐｒｅｓｓｕｒｅ ｓｙｓｔｅｍ）（Ｋｅｎｔ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｔｏｒｒｉｎｇｔｏｎ、ＣＴ）を使って測定した。血圧測定前に実験動物の尻尾温度を３２〜３５℃に維持し、安定化させた状態で血圧を測定した。ＳＨＲの平均血圧は１７７〜１８２ｍｍＨｇであった。
その結果、図７に示したようである（図７）。Ｓａｍｐｌｅ２の場合、投与後４時間まで漸進的な血圧下降の効果が観察され、その後、元の血圧に復帰した。一方、Ｓａｍｐｌｅ１の投与時には微小に血圧が上昇する傾向が現れ、ベタインの投与時には対照群と違いがなかった。
＜８−３＞繰り返し経口投与後血圧変化の測定
実験動物は、Ｇｒｏｕｐ１：対照群（ＳＨＲ）、Ｇｒｏｕｐ２：ｓａｍｐｌｅ１投与群（３０ｍｌ／日）、Ｇｒｏｕｐ３：ｓａｍｐｌｅ２を蒸留水で２倍に希釈して投与した群（３０ｍｌ／日）とＧｒｏｕｐ４：ｓａｍｐｌｅ２原液投与群（３０ｍｌ／日）に分類し、各群ごとに４匹ずつ配置し、３週間実験した。試料は３０分以内に経口で投与し、その後、飲水と飼料は自由給与した。実験群は次の通りであった。
Ｇｒｏｕｐ１：ＳＨＲ＋Ｄ．Ｗ．（０．６ｍｌ／ラット、ｐ．ｏ．）
Ｇｒｏｕｐ２：ＳＨＲ＋Ｓａｍｐｌｅ１（０．６ｍｌ／ラット、ｐ．ｏ．）
Ｇｒｏｕｐ３：ＳＨＲ＋Ｓａｍｐｌｅ２（０．６ｍｌ／ラット、ｐ．ｏ．）
Ｇｒｏｕｐ４：ＳＨＲ＋ベタイン（５０ｍｇ／ｋｇ、ｐ．ｏ．）
血圧はＣＯＤＡ非侵襲的血圧システム（ｎｏｎ−ｉｎｖａｓｉｖｅ ｂｌｏｏｄ ｐｒｅｓｓｕｒｅ ｓｙｓｔｅｍ）（Ｋｅｎｔ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｔｏｒｒｉｎｇｔｏｎ、ＣＴ）を使って測定した。血圧測定前に実験動物の尻尾温度を３２〜３５℃に維持し、安定化させた状態で血圧を測定した。
その結果、図８に示したようである（図８）。Ｓａｍｐｌｅ１投与群（Ｇ１）は２日後に持続的な血圧増加の傾向を示した。ｓａｍｐｌｅ２投与群ではｓａｍｐｌｅ２の投与容量に比例して血圧降下効果を示した（Ｇ３、Ｇ４）。
したがって、以上の単回又は繰り返し投与の結果から見るとき、ｓａｍｐｌｅ２の場合、高血圧改善の効果があることが分かる。
＜８−４＞摘出血管の弛緩反応性の測定
血管の弛緩性を調査するために、胸大動脈を摘出して３〜５ｍｍの大動脈輪（ａｏｒｔｉｃ ｒｉｎｇ）を作り、クレブス溶液（Ｋｒｅｂｓ ｓｏｌｕｔｉｏｎ）（ｍＭ、ＮａＣｌ １２０、ＫＣｌ ４．７５、グルコース６．４、ＮａＨＣＯ３ ２５、ＫＨ２ＰＯ４ １．２、ＭｇＳＯ４ １．２、ＣａＣｌ２ １．７）で満たしたオルガンバス（ｏｒｇａｎ ｂａｔｈ）に懸垂した。実験が進むうち、温度は３７℃、溶液のｐＨは、ｃａｒｂｏｇｅｎ（９５％Ｏ２、５％ＣＯ２）を供給して７．４に維持させた。大動脈輪（ａｏｒｔｉｃ ｒｉｎｇ）の静止張力（ｒｅｓｔｉｎｇ ｔｅｎｓｉｏｎ）を１．５ｇに調整した後、２０分ごとに溶液を交替しながら１時間の間に安定させた。血管の収縮弛緩反応は、固定された大動脈輪（ａｏｒｔｉｃ ｒｉｎｇ）の他側をｉｓｏｍｅｔｒｉｃ ｆｏｒｃｅ−ｄｉｓｐｌａｃｅｍｅｎｔ ｔｒａｎｓｄｕｃｅｒ（ＦＴ０３、Ｇｒａｓｓ、ＡＤ ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｕ．Ｓ．Ａ．）に連結し、ｐｈｙｓｉｏｇｒａｐｈ ｒｅｃｏｒｄｅｒ（ＰｏｗｅｒＬａｂ／４００、ＡＤ ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｕ．Ｓ．Ａ．）で記録し、Ｃｈａｒｔ８ ｐｒｏｇｒａｍで分析した。内皮細胞依存性弛緩実験は、内皮細胞が健在な血管に１０−６Ｍのフェニレフリン（ｐｈｅｎｙｌｅｐｈｒｉｎｅ、ＰＥ）を処理して血管を前収縮させた後、アセチルコリン（ａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅ、Ａｃｈ）を濃度（１０−９〜１０−４Ｍ）で累積適用して弛緩反応を観察し、ｐＤ２（−Ｌｏｇ ＥＣ５０）を計算した。
その結果、表４及び図９に示したように、正常血圧群（ＳＤ）の場合に比べてＳＨＲはＡｃｈの反応性、すなわち弛緩効果が減少し、ＥＣ５０相群間の有意な差はなかったが、Ｓａｍｐｌｅ２投与群（Ｇ４）の場合、他の群に比べて血管弛緩効果が増加した（表４及び図９）。
Figure 2020530262
 ＜８−５＞臓器の重量変化の測定
実験最終日に全ての実験動物をＣＯ２ガスで犠牲させ、腹大静脈から血液を採取した後、心臓、肝臓、腎臓、脳などを摘出した。臓器の重量変化を見るために、それぞれの臓器を摘出して重さを測定し、実験動物の体重で割った値をそれぞれ比較した。
臓器重さ指標（ｏｒｇａｎ ｗｅｉｇｈｔ ｉｎｄｅｘ）＝臓器重さ（ｏｒｇａｎ ｗｅｉｇｈｔ）÷体重（ｂｏｄｙ ｗｅｉｇｈｔ）×１００（％）
その結果、図１０に示したように、試料投与による体重変化は群間の差がなかった。体重に対する臓器重さはｓａｍｐｌｅ２投与群と対照群間の差が観察されなかった。しかし、ｓａｍｐｌｅ１投与群の場合、右側及び左側の腎臓の両方で有意な増加を示した（図１０）。
＜８−６＞血中亜硝酸塩変化の測定
血清内亜硝酸塩濃度はミランダ（Ｍｉｒａｎｄａ）などの方法で測定した。血清に２倍体積のエチルアルコールを加え、３０００ｒｐｍで１０分間遠心分離してタンパク質を除去した。上澄み液１００μＬに同量の三塩化バナジウム（ｖａｎａｄｉｕｍ（III）ｃｈｌｏｒｉｄｅ）を入れて硝酸塩（ｎｉｔｒａｔｅ）を亜硝酸塩（ｎｉｔｒｉｔｅ）に変換させた。その後、Ｇｒｉｅｓｓ ｒｅａｇｅｎｔ ｓｕｌｆａｎｉｌａｍｉｄｅとＮ−（１−ｎａｐｈｔｈｙｌ）ｅｔｈｙｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｅをそれぞれ５０μＬずつ入れ、３７℃で３時間反応させた後、５７０ｎｍでの吸光度を測定した。
その結果、図１１に示したように、血中亜硝酸塩はｓａｍｐｌｅ２投与群（Ｇ３、Ｇ４）で容量依存的に増加したが、ｓａｍｐｌｅ１投与群では対照群と有意な差がなかった。亜硝酸塩の血中濃度はＧ１、Ｇ２、Ｇ３、Ｇ４でそれぞれ１１．０±０．７、１１．６±０．６、３９．７±１．６及び６９．２±０．３ｕＭであった（図１１）。
＜８−７＞脂質過酸化指標の測定
血清ＭＤＡ含量は、ＥＺ−Ｌｉｐｉｄ ｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｏｎ（ＴＢＡＲＳ）ａｓｓａｙ ｋｉｔ（ＤｏＧｅｎＢｉｏ、Ｓｅｏｕｌ）を使って測定した。血清にＴＣＡ ３５ｍｇを添加した後、遠心分離によって上澄み液を取った。上澄み液２００μＬに同量の指示薬を入れ、６５℃で４５分間反応させた後、５４０ｎｍで吸光度を測定した。
その結果、図１２に示したように、脂質酸化の指標であるＭＤＡの血中濃度はｓａｍｐｌｅ１投与群（Ｇ１）では対照群との差がなかったが、ｓａｍｐｌｅ２投与の容量増加によって有意に減少した。ＭＤＡの血中濃度において、Ｇ１は９．８±１．８、Ｇ２は８．６±０．７、Ｇ３は５．６±０．３、そしてＧ４は３．８±０．４ｕＭであり、ｓａｍｐｌｅ２の場合、脂質過酸化に対する有意な保護効果が現れた（図１２）。
結果的に、Ｓａｍｐｌｅ２は高血圧動物に経口で投与するとき、有意な血圧降下効果、血中亜硝酸塩の増加及びＭＤＡの減少が観察され、体重と臓器指標（ｏｒｇａｎ ｉｎｄｅｘ）には有意な変化がなく、またアセチルコリンに対する血管反応性が改善した。
一方、Ｓａｍｐｌｅ１の場合には、高血圧動物に対する経口投与による血圧降下の効果は観察されなく、むしろ上昇する傾向を示し、腎臓重さの増加が観察された。
以上の結果から見るとき、Ｓａｍｐｌｅ１では血圧減少効果が観察されなかったが、Ｓａｍｐｌｅ２の場合、血中窒素化合物の増加、脂質過酸化の抑制などの作用によって血管反応性を改善させることが現れ、これにより本発明によるビートジュースは優れた高血圧改善効果を現すことができることが分かる。

Claims (14)

  1. ビートを洗浄した後、２００〜３００℃で３０秒〜１分間焼く第１段階と、
    焼いたビートを搾汁する第２段階と、
    搾汁液を０〜１０℃で３日〜４日間低温熟成する第３段階と、
    低温熟成ビート汁にニンジン汁、リンゴ汁及びレモン汁を混合する第４段階と、を含む、ビートジュースの製造方法。
  2. 前記第１段階でビートは皮を剥いたものであることを特徴とする、請求項１に記載のビートジュースの製造方法。
  3. 前記第２段階で搾汁は搾汁機を使うことを特徴とする、請求項１に記載のビートジュースの製造方法。
  4. 前記第４段階でビート汁、ニンジン汁、リンゴ汁及びレモン汁は２０〜４０重量部、１０〜２０重量部、３０〜５０重量部及び０．５〜１重量部で混合することを特徴とする、請求項１に記載のビートジュースの製造方法。
  5. 前記第４段階でニンジン汁、リンゴ汁及びレモン汁はニンジン又はリンゴ又はレモンを洗浄してから搾汁したものであることを含む、請求項１に記載のビートジュースの製造方法。
  6. 前記第４段階で製造された混合液を滅菌及び包装する段階をさらに含むことを特徴とする、請求項１に記載のビートジュースの製造方法。
  7. 前記滅菌は、パルス電場（Ｐｕｌｓｅｄ Ｅｌｅｃｔｒｉｃ Ｆｉｅｌｄ、ＰＥＦ）で非加熱低温滅菌することを特徴とする、請求項６に記載のビートジュースの製造方法。
  8. 皮を剥いて２００〜３００℃で３０秒〜１分間焼いたビートを搾汁して得た搾汁液を０〜１０℃で３日〜４日間低温熟成した低温熟成ビート汁と、
    ニンジン汁と、
    リンゴ汁と、
    レモン汁とを含む、腸内消化吸収率が向上したビートジュース飲料。
  9. 皮を剥いて焼いたビート搾汁の低温熟成した低温熟成ビート汁、ニンジン汁及びリンゴ汁を含む、抗酸化用健康食品。
  10. 前記低温熟成ビート汁は、ビートの皮を剥いて２００〜３００℃で３０秒〜１分間焼いた後、焼いたビートを搾汁した後、搾汁液を０〜１０℃で３日〜４日間低温熟成して製造されたものであることを特徴とする、請求項９に記載の抗酸化用健康食品。
  11. 前記低温熟成ビート汁、ニンジン汁及びリンゴ汁は２．０〜３．０：１．５〜２．５：５．０〜６．０の重量比で配合されることを特徴とする、請求項９に記載の抗酸化用健康食品。
  12. 皮を剥いて焼いたビート搾汁の低温熟成した低温熟成ビート汁、ニンジン汁及びリンゴ汁を含む、抗高血圧用健康食品。
  13. 前記低温熟成ビート汁は、ビートの皮を剥いて２００〜３００℃で３０秒〜１分間焼いた後、焼いたビートを搾汁した後、搾汁液を０〜１０℃で３日〜４日間低温熟成して製造されたものであることを特徴とする、請求項１２に記載の抗高血圧用健康食品。
  14. 前記低温熟成ビート汁、ニンジン汁及びリンゴ汁は２．０〜３．０：１．５〜２．５：５．０〜６．０の重量比で配合されることを特徴とする、請求項１２に記載の抗高血圧用健康食品。
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