CN110876258B - 提高肠内吸收率的甜菜根汁、其制备方法及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明揭示一种提高肠内吸收率的甜菜根汁、其制备方法及其用途，更具体地说，本发明揭示一种把甜菜根低温熟成使得高分子化合物转化成低分子化合物而提高肠内消化吸收率，烤甜菜根去掉腥味，混合胡萝卜汁或苹果汁等缓和了腥味与苦味的甜菜根汁、利用所述甜菜根汁的抗氧化健康食品组合物或抗高血压的健康食品组合物。

Description

提高肠内吸收率的甜菜根汁、其制备方法及其用途
技术领域
本发明揭示一种提高肠内吸收率的甜菜根汁、其制备方法及其用途，更具体地说，本发明揭示一种通过低温熟成把甜菜根内高分子化合物转化成低分子化合物而提高肠内吸收率的甜菜根汁、其制备方法及包含所述甜菜根汁的抗氧化的健康食品或抗高血压的健康食品。
背景技术
亦称为红萝卜的甜菜根(Beet)含有丰富的营养素，包含在甜菜根的红色素甜菜碱(Betaine)能提高劲力与持久力，抑制细胞损伤并且发挥出抗氧化作用而具有预防癌症、缓和炎症等诸多效果。
而且，其含有大量铁与维生素而有助于红细胞的生成并且净化血液而有助于月经不调或更年期女性，防止胃损伤并保护胃黏膜，含有较多食饵纤维而有助于解除便秘。
甜菜根虽然是较好的烹饪食材，但是以生吃方式或拌沙拉吃的话能良好地保存营养素，但甜菜根独特的腥味与苦味却让人却步。与此同时，生吃甜菜根时甜菜根所含高分子化合物无法被身体快速吸收。
因此，人们致力于研究甜菜根的轻易摄食方法，作为一例，韩国公开专利第10-2017-0025299号揭示了把甜菜根压榨、熟成后冻结干燥并予以粉末化以便尽量减少营养成分的损失，还能保持甜菜根的口味与颜色的制备方法，韩国公开专利第10-2016-0144034号揭示了把甜菜根与功能性草药混合后经过熟成、加热干燥之类的制备过程而使得饮用时具备优异风味与审美性的甜菜根茶的制备方法，韩国公开专利第10-0188553号揭示了把红甜菜浸渍到维生素水溶液后提取，过滤后混合低聚糖进行高温杀菌而保存颜色与口味的红甜菜汁制备方法。
但是前述先前文献中揭示的制备方法制作出来的甜菜根粉末或饮料仅仅揭示了保持口味与颜色或者让饮用者轻易饮用的方法，没有对提高甜菜根饮料活性成份的肠内消化吸收率的方法进行研究。
有鉴于此，本发明人开发了改善甜菜根的腥味与苦味并且把甜菜根成分中的高分子化合物转化成低分子化合物而得以提高其肠内消化吸收率的甜菜根汁，本发明人还确定了所述提高肠内消化吸收率的甜菜根汁具有良好的抗氧化活性及降血压效果，从而完成了本发明。
发明内容
[解决的技术课题]
本发明的目的是提供一种甜菜根汁饮料，其通过低温熟成把甜菜根内高分子化合物转化成低分子化合物而提高肠内消化吸收率。
本发明的另一个目的是提供一种甜菜根汁的制备方法，该甜菜根汁通过低温熟成把甜菜根内高分子化合物转化成低分子化合物而提高肠内消化吸收率。
本发明的再一个目的是提供一种抗氧化健康食品，其包含低温熟成甜菜根汁，该甜菜根汁通过低温熟成把甜菜根内高分子化合物转化成低分子化合物而提高肠内消化吸收率。
本发明的再一个目的是提供一种降血压的健康食品，其包含低温熟成甜菜根汁，该甜菜根汁通过低温熟成把甜菜根内高分子化合物转化成低分子化合物而提高肠内消化吸收率。
[解决课题的技术方案]
为了达到所述目的，本发明揭示一种甜菜根汁的制备方法，该方法包括如下步骤：
第一步骤，洗涤甜菜根后在200至300℃条件下加热30秒到1分钟；
第二步骤，对烤好的甜菜根进行榨汁；
第三步骤，把压榨汁在0到10℃条件下低温熟成3天到4天；及
第四步骤，把胡萝卜汁、苹果汁及柠檬汁混合到低温熟成甜菜根汁。
而且，本发明揭示一种去皮烤好的甜菜根压榨汁低温熟成后添加胡萝卜汁、苹果汁及柠檬汁的提高肠内消化吸收率的甜菜根汁饮料。
而且，本发明揭示一种包含去皮烤好的甜菜根压榨汁经过低温熟成的低温熟成甜菜根汁、胡萝卜汁及苹果汁的抗氧化健康食品。
而且，本发明揭示一种把去皮烤好的甜菜根压榨汁经过低温熟成的低温熟成甜菜根汁、胡萝卜汁及苹果汁作为抗氧化健康食品利用的用途。
而且，本发明揭示一种包含去皮烤好的甜菜根压榨汁经过低温熟成的低温熟成甜菜根汁、胡萝卜汁及苹果汁的抗高血压的健康食品。
而且，本发明揭示一种把去皮烤好的甜菜根压榨汁经过低温熟成的低温熟成甜菜根汁、胡萝卜汁及苹果汁作为抗高血压的健康食品利用的用途。
[有益效果]
本发明制备甜菜根汁时可以通过烤甜菜根的过程去掉腥味，可以通过低温熟成过程把高分子化合物转化成低分子化合物提高肠内消化吸收率，和胡萝卜汁、苹果汁及/或柠檬汁混合缓和腥味与苦味后制成具有甘美口味的甜菜根汁。
而且，本发明的甜菜根汁含有多酚并且具有DPPH自由基及ABTS自由基清除能之类的抗氧化活性，通过动物实验确认了口服给药时降血压、增加血中亚硝酸盐(nitrite)及减少MDA的效果，体重与脏器指标(organ index)没有显着变化，诸如改善对于乙酰胆碱的血管反应性地发挥出改善高血压的效果，因此能作为抗氧化健康食品或抗高血压的健康食品而有效地应用。
附图说明
图1是依据本发明制备的甜菜根汁。
图2是示出依据本发明制备的甜菜根汁的总多酚含量测量结果的图表。
图3是示出依据本发明制备的甜菜根汁的DPPH自由基清除活性测量结果的图表。
图4是示出依据本发明制备的甜菜根汁的ABTS自由基清除活性测量结果的图表。
图5是示出依据本发明制备的甜菜根汁的基于FRAP法的抗氧化活性测量结果的图表。
图6是示出依据本发明制备的甜菜根汁的甜菜苷(betanin)含量测量结果的图表。
图7是示出针对依据本发明制备的甜菜根汁的动物实验中口服给药一次后血压变化的图表。
图8是示出针对依据本发明制备的甜菜根汁的动物实验中反复给药后血压变化的图表。
图9是示出针对依据本发明制备的甜菜根汁的动物实验中摘出血管的舒张性的图表。
图10是示出针对依据本发明制备的甜菜根汁的动物实验中脏器的重量变化的图表。
图11是示出针对依据本发明制备的甜菜根汁的动物实验中血中亚硝酸盐(nitrite)变化的图表。
图12是示出针对依据本发明制备的甜菜根汁的动物实验中血中脂质氧化的指标MDA变化的图表。
具体实施方式
下面详细说明本发明。在说明本发明时，可能会省略相关的公知结构或功能的详细说明。
本说明书及权利要求书中所用术语或词汇的解释不能限定于通常意义或词典意义，应该按照符合本发明之技术思想的含义与概念来解释。
因此本说明书记载的实施例与附图所示结构只是本发明的优选实施例而没有概括本发明的所有技术思想，在本发明的专利申请时刻可以存在能替代的各种均等物与变形例。
下面详细说明本发明的甜菜根汁制备方法。
本发明甜菜根汁的制备方法包括如下步骤：
第一步骤，洗涤甜菜根后在200至300℃条件下烤30秒到1分钟；
第二步骤，把加热的甜菜根榨汁；
第三步骤，把压榨汁在0到10℃条件下低温熟成3天到4天；及
第四步骤，把胡萝卜汁、苹果汁及柠檬汁混合到低温熟成甜菜根汁。
首先，洗涤甜菜根后烤(第一步骤)。
优选地，所述第一步骤去掉甜菜根的皮后在200到300℃条件下烤30秒到1分钟。
此时，低于温度范围或时间较短时无法均匀地烤甜菜根的皮部而使得风味下降，高于温度范围或时间较长时甜菜根的酵母死灭而使效能降低，因此不妥当。
接着，把烤好的甜菜根予以榨汁(第二步骤)。
所述第二步骤可以利用榨汁机榨汁。
接着，把压榨汁低温熟成(第三步骤)。
优选地，所述第三步骤在0至10℃的贮存库进行低温熟成，更优选地，在4至5℃的贮存库进行低温熟成。
而且，优选地，所述低温熟成进行3天到4天。
此时，低于0℃时由于温度太低使得甜菜根压榨汁冻掉而无法熟成，在高于10℃的温度下压榨汁变成粘糊状态而不适合饮用。
而且，熟成时间少于3天时会留下甜菜根的腥味与苦味而不适合饮用，熟成时间多于4天的话，制成饮料时颜色与口味容易改变。
接着，把胡萝卜汁、苹果汁及柠檬汁混合到低温熟成甜菜根汁(第四步骤)。
优选地，在所述第四步骤把低温熟成的甜菜根汁与胡萝卜汁、苹果汁及柠檬汁各自以20至40重量份、10至20重量份、30至50重量份、0.5至1重量份的比率进行混合。
所述胡萝卜汁、苹果汁及柠檬汁用来改善甜菜根的腥味与苦味，配比较低时甜菜根的腥味与苦味较强而可能会引起饮用者排斥感，配比较高时甜菜根的口味会低于胡萝卜、苹果、柠檬之类的口味并且可能会失去甜菜根汁的效能。
优选地，在所述第四步骤，把胡萝卜、苹果及柠檬分别洗涤后榨汁制成胡萝卜汁、苹果汁及柠檬汁。
此时，榨汁过程可以利用榨汁机。
还可以包括如下步骤，即，对经过所述第四步骤制备的混合液进行杀菌及包装的步骤。
优选地，所述杀菌利用脉冲电场装置(Pulsed Electric Field,PEF)进行40℃以下的非加热低温杀菌。
此时，甜菜根的酵母在40℃开始死灭并且到了60℃时完全死灭，因此优选地，在40℃以下进行低温杀菌。
而且，本发明揭示一种包含去皮烤好的甜菜根压榨汁低温熟成液、胡萝卜汁、苹果汁及柠檬汁并且提高肠内消化吸收率的甜菜根汁饮料。
所述甜菜根汁饮料呈现出作为红甜菜根颜色的深红色或酒红色，以其不粘糊的液体形态容易包装在玻璃容器。
所述甜菜根汁饮料通过低温熟成过程把高分子化合物转化成低分子化合物，饮用后大便不呈现出甜菜根独特的红色而肠内消化吸收率优异，可以通过烤甜菜根的过程去掉腥味，和胡萝卜汁、苹果汁及柠檬汁混合而缓和腥味与苦味，从而适合饮用。
而且，本发明揭示一种包含去皮烤好的甜菜根压榨汁低温熟成液及苹果汁的提高肠内消化吸收率的甜菜根汁饮料。
此时，优选地，低温熟成甜菜根汁及苹果汁以3:7的重量比率配合。
优选地，所述甜菜根汁饮料混合胡萝卜汁或柠檬汁中的任何一种以上。
此时，优选地，低温熟成甜菜根汁、胡萝卜汁及苹果汁以2.0～3.0:1.5～2.5:5.0～6.0的重量比率配合，更优选地，以2.5:2:5.5的重量比率配合。
而且，本发明揭示一种包含去皮烤好的甜菜根压榨汁经过低温熟成的低温熟成甜菜根汁、胡萝卜汁及苹果汁的抗氧化健康食品。
优选地，所述抗氧化健康食品中低温熟成甜菜根汁、胡萝卜汁及苹果汁以2.0～3.0:1.5～2.5:5.0～6.0的重量比率配合，更优选地，以2.5:2:5.5的重量比率配合。
此时，苹果汁的比重为整体比重的50％以下地配合的话甜菜根汁进行凝胶(gel)化，因此优选地，为了防止汁的凝胶化而让苹果汁采取适当的配比。
优选地，所述抗氧化健康食品为了提高口味与香味之类的风味而进一步包含柠檬汁。
所述健康食品可以是健康功能食品或健康辅助食品。
而且，本发明揭示一种包含去皮烤好的甜菜根压榨汁经过低温熟成的低温熟成甜菜根汁及苹果汁的抗氧化健康食品。
优选地，所述抗氧化健康食品的低温熟成甜菜根汁及苹果汁以3:7的重量比率配合。
所述健康食品可以是健康功能食品或健康辅助食品。
而且，本发明揭示一种包含去皮烤好的甜菜根压榨汁经过低温熟成的低温熟成甜菜根汁、胡萝卜汁及苹果汁的抗高血压的健康食品。
优选地，所述抗高血压的健康食品中，低温熟成甜菜根汁、胡萝卜汁及苹果汁以2.0～3.0:1.5～2.5:5.0～6.0的重量比率配合，更优选地，以2.5:2:5.5的重量比率配合。
此时，苹果汁的比重为整体比重的50％以下地配合的话甜菜根汁进行凝胶(gel)化，因此优选地，为了防止汁的凝胶化而让苹果汁采取适当的配比。
优选地，所述抗高血压的健康食品为了提高口味与香味之类的风味而进一步包含柠檬汁。
所述健康食品可以是健康功能食品或健康辅助食品。
而且，本发明揭示一种包含去皮烤好的甜菜根压榨汁经过低温熟成的低温熟成甜菜根汁及苹果汁的抗高血压的健康食品。
优选地，所述抗高血压的健康食品中，低温熟成甜菜根汁及苹果汁以3:7的重量比率配合。
所述健康食品可以是健康功能食品或健康辅助食品。
本发明的健康食品可以直接添加本发明的甜菜根汁，或者可以和其它食品或食品成分一起使用，可以按照常规方法适当地使用。
本发明的健康食品中，本发明的甜菜根汁含量相比于整体健康食品组合物100重量份为50至99重量份。
本发明的健康食品的种类并不受到特别限制。可添加所述甜菜根汁的食品可以举例饮料类、酒类、乳制品类、肉类、面类、饼干类、冰糕类等，包括常规意义的所有健康食品。
本发明的健康食品如同常规饮料一样地包含各种调味剂或甜味剂等，可以包含各种营养剂、维生素、电解质、风味剂、着色剂、果胶酸及其盐、藻酸及其盐、有机酸、保护性胶体增粘剂、pH调节剂、稳定剂、防腐剂、甘油、乙醇、用于碳酸饮料的碳酸化剂等，此外，还能包含各种果肉。该成分可以独立或混合后使用。该添加剂的比率并不是很重要，但优选地，相比于整体健康食品组合物100重量份通常在0.01～0.1重量范围选择。
下面通过实施例详细说明本发明。这些实施例仅仅是为了更具体地说明本发明而提出的，本发明所属技术领域中具有一般知识者知道本发明的范围会根据本发明的要旨而并不局限于这些实施例。
<实施例1>甜菜根汁的制备1
利用干净的水洗涤甜菜根1Kg后去皮并且在200℃烤1分钟，然后利用榨汁机榨汁得到甜菜根压榨汁。之后，在5℃的贮存库进行低温熟成3天，然后添加胡萝卜汁、苹果汁及柠檬汁并均匀搅拌制成混合物。此时，以低温熟成甜菜根汁40重量％、胡萝卜汁20重量％、苹果汁39重量％及柠檬汁1重量％比率进行了混合。
利用脉冲电场装置(Pulsed Electric Field,PEF)把如此制备的混合物予以非加热低温杀菌后完成。
<实施例2>甜菜根汁的制备2
除了在250℃烤甜菜根30秒钟以外，其余过程都和所述<实施例1>相同地制备。
<实施例3>甜菜根汁的制备3
除了在10℃的贮存库把甜菜根压榨汁低温熟成3天以外，其余过程都和所述<实施例1>相同地制备。
<实施例4>甜菜根汁的制备4
除了以甜菜根压榨汁30重量％、胡萝卜汁20重量％、苹果汁49.5重量％及柠檬汁0.5重量％混合以外，其余过程都和所述<实施例1>相同地制备。
<比较例1>不经过甜菜根加热过程地制备
除了没有加热甜菜根以外，其余过程都和所述<实施例1>相同地制备。
<比较例2>甜菜根加热条件相异地制备
除了在250℃烤甜菜根2分钟以外，其余过程都和所述<实施例1>相同地制备。
<比较例3>不经过低温熟成过程地制备
除了不经过低温熟成过程以外，其余过程都和所述<实施例1>相同地制备。
<比较例4>熟成条件相异地制备
除了在室温(20～25℃)熟成甜菜根压榨汁3天以外，其余过程都和所述<实施例1>相同地制备。
<比较例5>配合条件相异地制备
除了使用甜菜根压榨汁50重量％、胡萝卜汁19重量％、苹果汁30重量％及柠檬汁1重量％地混合以外，其余过程都和所述<实施例1>相同地制备。
<比较例6>配合条件相异地制备
除了把甜菜根压榨汁15重量％、胡萝卜汁25重量％、苹果汁55重量％及柠檬汁5重量％混合以外，其余过程都和所述<实施例1>相同地制备。
<比较例7>杀菌条件相异地制备
除了使用高温杀菌器以70～80℃杀菌以外，其余过程都和所述<实施例1>相同地制备。
<实验例1>官能检查
为了确认所述实施例1至4及比较例1至7各自制备的甜菜根汁的口味、香味及整体嗜好度进行了官能检查。
官能检查人员以男性成人20人和女性成人20人为对象(男女各为20年龄带5人、30年龄带5人、40年龄带5人、50年龄带5人地构成)，通过培训过程确立了对于待评估的特性的识别能力、对于特性与口味的稳定的判断基准后进行了官能检查。官能检查项目针对口味、香味、口感及整体嗜好度等总共4项以10分满分为基准进行了评估。
评分基准如下。
很好：10分
好：8分
普通：6分
不好：4分
很不好：2分
其结果列示在表1。
[表1]
Figure BDA0002323164220000091
Figure BDA0002323164220000101
口味评估结果显示，<实施例1至4>所制备的甜菜根汁由于加热甜菜根表皮地烤而得以去掉大部分的味道并呈现出芬芳的香味，适当配合胡萝卜汁、苹果汁及柠檬汁而增强了风味，甜菜根的制备过程中维持适当的低温温度而制成不灭掉甜菜根内酵母地按照原样保存的甜菜根汁。
与此相反，<比较例1>所制备的甜菜根汁因为没有另外进行甜菜根加热步骤而能感受到甜菜根固有的腥味与苦味，对味道敏感的人还能闻到土味，像<比较例2>一样长时间加热时甜菜根内酵母被没掉而使得香味不佳，像<比较例3至4>一样地改变了熟成条件时高分子化合物残留而使得消化不良并导致其嗜好度稍低。像<比较例5至6>一样地改变配合条件时能较强地感受到甜菜根独特的腥味与苦味，<比较例7>所制备的甜菜根汁由于在高温杀菌而使得酵母死灭并导致口感不佳。
<实验例2>消化吸收率的确认
为了确认所述实施例1至4及比较例1至7各自制备的甜菜根汁的消化吸收效能进行了临床实验。
为了减少显着性差异而以相似的性别及年龄组成，为此，各实验组把30年龄带的男性成人2人与女性成人2人作为实验对象(整体44人)。
各实验组在一星期的期间每天摄取250ml容量的一杯该汁，实验前的3天起到结束为止禁止摄取其它水果或果汁。评估消化吸收时针对一星期的实验期间大便状态、快速排便及胃脏舒适程度等总共3项以10分满分为基准进行了评估，以肉眼观察了大便颜色。
评分基准如下。
很好：10分
好：8分
普通：6分
不好：4分
很不好：2分
其结果列示在表2。
[表2]
Figure BDA0002323164220000111
临床实验结果显示，饮用了<实施例1至4>所制备的甜菜根汁时，大部分实验对象的大便状态、快速排便程度、胃脏舒适程度都得到8.0好以上的分数，大便颜色也和一般大便颜色没有较大差异。
与此相反，饮用了<比较例1至2>所制备的甜菜根汁时大便状态不好，快速排便程度也是一般程度，胃脏舒适程度也普通，大便颜色则呈现红色。同样地，饮用了<比较例3至4>的甜菜根汁时实验对象抱怨消化不良，大便状态、快速排便程度、胃脏舒适程度都不好，大便颜色呈现出较多的甜菜根汁的深红色。
而且，<比较例5至6>的口味与口感不好，大便状态、快速排便程度及胃脏舒适程度不好，饮用了<比较例7>的甜菜根汁时大便状态、快速排便程度、胃脏舒适程度也都不好，饮用了<比较例5至7>的实验对象的大便颜色呈现出甜菜根汁浅红色。
<实验例3>总多酚(Total polyphenol)含量分析
<3-1>试料的准备
作为试料2(样本2；S2)，如同所述<实施例1>的方法一样地把低温熟成甜菜根汁、胡萝卜汁及苹果汁各自以2.5:2:5.5的重量比率混合备妥改善了肠内吸收率的甜菜根汁。
而且，作为试料1(样本1；S1)，准备了直接对甜菜根进行了榨汁的甜菜根原液。
而且，作为试料3(样本3；S3)，准备了以蒸馏水把所述试料2的甜菜根汁稀释了2倍的甜菜根汁。
<3-2>总多酚含量的测量
多酚是从植物上发现的化学物质，其重要成分是类黄酮、儿茶素及单宁，具有抗氧化、抗癌、抗高血压之类的效果。
测量总多酚含量时使用Folin-Deni法进行了测量。在备好的1mL的各试料1～3添加福林试剂(Folin-ciocalteus'phenol reagent)100μL并且在室温反应5分钟后，放入Na2CO3溶液(7％，w/v)200μL与蒸馏水700μL后在室温反应了1小时。反应后在720nm测量了吸光度，以利用没食子酸(gallic acid)制作的标准校准曲线表示提取物的总多酚含量。
其结果如图2所示，试料2与试料3含有较高的总多酚含量(图2)。
<实验例4>DPPH自由基清除能的分析
<4-1>试料的准备
如所述实施例<3-1>一样地准备了试料1(样本1；S1)、试料2(样本2；S2)及试料3(样本3；S3)。
<4-2>DPPH自由基清除活性的测量
DPPH自由基清除活性是比较简单的抗氧化测量法，该方法利用DPPH从酚醛化合物等接受电子或氢进行DPPH-H还原而使得紫色褪色的原理测量抗氧化活性。
DPPH自由基清除活性实验利用了Blosis方法。把准备好的0.2mM的DPPH与各试料混合并且在室温放置10分钟后，使用ELASA reader
Figure BDA0002323164220000121
M3Multi-ModeMicroplate Reader(Molecular Devices,Sunnyvale,CA,USA)在517nm测量了吸光度。以DPPH的吸光度减少50％时出现的试料浓度(SC50)表示，各试料反复进行3次实验后得到了平均值。此时使用的对照组是维生素C(vitamin C)。
其结果如图3所示，试料2与试料3具备了优异的DPPH自由基清除活性(图3)。
<实验例5>ABTS自由基清除活性分析
<5-1>试料的准备
如所述实施例<3-1>一样地准备了试料1(样本1；S1)、试料2(样本2；S2)及试料3(样本3；S3)。
<5-2>ABTS自由基清除活性的测量
在ABTS自由基清除活性方面，把7.4mM ABTS与2.6mM过硫酸钾(potassiumpersulfate)混合后在室温暗处放置15小时形成自由基(radical)后，让734nm处吸光度值成为0.70±0.02地准备了该溶液。在准备好的ABTS溶液180μL加入各试料20μL并且在室温放置15分钟后，在734nm测量了吸光度。ABTS自由基清除活性以百分率表示了试料溶液添加组与非添加组之间的吸光度差异。
其结果如图4所示，试料2与试料3具备了优异的ABTS自由基清除活性(图4)。
<实验例6>基于铁离子还原/抗氧化能力法(FRAP法)的抗氧化活性分析
<6-1>试料的准备
如所述实施例<3-1>一样地准备了试料1(样本1；S1)、试料2(样本2；S2)及试料3(样本3；S3)。
<6-2>基于FRAP法的抗氧化活性测量
铁离子还原/抗氧化能力法(FRAP法)以如下方式测量抗氧化活性，即，针对ferrictripyridyltriazine(Fe3+)在低pH下被抗氧化剂还原成ferrous tripyridyltriazine(Fe2 +)时发生的吸光度变化进行测量。
基于FRAP(ferric reducing antioxidant power)法的抗氧化活性依据Benzie与Strain的方法实行。把300mM乙酸缓冲液(acetate buffer)(pH 3.6)、溶解了10mM TPTZ(2,4,6-tripyridyl-s-triazine)的40mM HCl溶液和20mM FeCl3·6H2O分别以10:1:1(v/v/v)的比率混合后作为FRAP基质液使用。在96-well plate依次混合各试料40μL、FRAP基质液100μL与蒸馏水200μL并且在37℃反应4分钟后，在593nm测量了吸光度。各试料反复进行了3次，利用以FeSO4·7H2O作为标准物质得到的标准校准曲线进行了分析。
其结果如图5所示，试料2与试料3具备了优异的抗氧化活性(图5)。
[表3]
Figure BDA0002323164220000141
<实验例7>甜菜苷(betanin)分析
<7-1>试料的准备
如所述实施例<3-1>一样地准备了试料1(样本1；S1)、试料2(样本2；S2)及试料3(样本3；S3)。
<7-2>甜菜苷含量的测量
甜菜苷的分析使用安装了Synergi 4μPOLAR-RP 80A柱(250×4.6mM,4μmPhenomenex)的1200series HPLC(Agilent Technologies,CA,USA)。如下设定分析条件后进行了分析，即检测波长(detection wavelength)为538nm，流量(flow rate)为1.0mL/min，柱温(column temperature)为35℃。使用自动注入器(automatic injector)注入试料20.0μL。流动相溶剂使用溶剂A[水:甲酸(formic acid)，(99:1，v/v)]与溶剂B(甲基氰(acetonitrile)，CH3CN)。溶剂浓度梯度以溶剂B为基准实行，分析时间总共花费了25分钟。溶剂B从0％开始并且在15分钟增加到20％，然后到20分钟时增加到40％。在20.1分钟使其急剧降低到0％后让0％一直维持到25分钟。所分析的各成分因外部标准物质甜菜苷(betanin)的滞留时间(retention time,RT)相同而予以分类，以HPLC峰值面积(area)为基准比较各甜菜苷成分的峰值面积并予以定量。
其结果如图6所示，确认了试料2与试料3具有较高的甜菜苷含量(图6)。
<实验例8>在高血压模型动物上评估抗高血压效能
<8-1>实验动物的准备
实验动物使用了24周龄的雌性原发性高血压大鼠(Spontaneously HypertensiveRat；SHR)。实验动物饲养室环境调节成温度为23±2℃、相对湿度为50±10％，明暗周期为12小时单位(照明时间08:00-20:00)。所有的动物实验全部在济州大学动物实验伦理委员会的批准下进行(批准号：2018-0053)。
反复给药时实验组如下。
组1：SHR(饮用水，无限制)(drinking water，ad libitum)
组2：SHR+样本1(30ml/day)
组3：SHR+样本3(30ml/day)
组4：SHR+样本2(30ml/day)
<8-2>口服给药一次后血压变化的测量
每个试料针对一只SHR进行一次口服给药后观察了24小时血压变化。实验组如下。
组1：SHR+D.W.(0.6ml/rat，p.o.)
组2：SHR+样本1(0.6ml/rat，p.o.)
组3：SHR+样本2(0.6ml/rat，p.o.)
组4：SHR+甜菜苷(50mg/kg，p.o.)
使用CODA无创血压系统(non-invasive blood pressure system)(KentScientific,Torrington,CT)测量了血压。在测量血压前把实验动物的尾巴温度保持在32-35℃，在实现了稳定化的状态下测量了血压。SHR的平均血压是177～182mMHg。
其结果如图7所示(图7).样本2在给药后4小时为止观察到血压逐渐下降的效果，之后重新恢复原来血压。与此相反，样本1在给药时呈现出血压微微上升的倾向，甜菜苷给药时和对照组没之间有差异。
<8-3>反复口服给药后血压变化的测量
实验动物如下分类，组1：对照组(SHR)、组2：样本1剂量组(30ml/day)、组3:以蒸馏水把样本2稀释2倍后给药的组(30ml/day)，组4:样本2原液剂量组(30ml/day)。各组各自配置4只后实验了3星期。试料在30分钟以内以口服方式给药，之后的饮水与饲料则自由供应。实验组如下。
组1：SHR+D.W.(0.6ml/rat,p.o.)
组2：SHR+样本1(0.6ml/rat,p.o.)
组3：SHR+样本2(0.6ml/rat,p.o.)
组4：SHR+甜菜苷(50mg/kg,p.o.)
血压使用CODA无创血压系统(Kent Scientific,Torrington,CT)进行了测量。在测量血压前把实验动物的尾巴温度保持在32-35℃，在实现了稳定化的状态下测量了血压。
其结果如图8所示(图8)。样本1剂量组(G1)在2天后呈现出血压持续增加的倾向。在样本2剂量组则和样本2的给药用量成比例地呈现出降血压效果(G3、G4)。
因此，鉴于前述单次给药或反复给药的结果，可知样本2具有高血压改善效果。
<8-4>摘出血管的舒张反应性的测量
为了调查血管舒张性而摘出胸主动脉并且制成3～5mm的主动脉环(aorticring)，然后在充填了克雷布斯液(Krebs solution)(in mM,NaCl 120,KCl 4.75,Glucose6.4,NaHCO3 25,KH2PO4 1.2,MgSO4 1.2,CaCl2 1.7)的器官浴槽(organ bath)悬垂。在进行实验的期间，温度维持37℃，供应碳合气(carbogen)(95％O2，5％CO2)让溶液的pH维持7.4。把主动脉环(aortic ring)的静息张力(resting tension)调整到1.5g后每20分钟更换一次溶液地予以稳定化1小时。血管的收缩舒张反应把固定的主动脉环的另一侧连接到等位移传感器(isometric force-displacement transducer)(FT03,Grass,AD instruments,U.S.A.)以生理记录仪(physiograph recorder)(PowerLab/400,AD instruments,U.S.A.)记录，以Chart8program进行了分析。内皮细胞依赖性舒张实验在内皮细胞健在的血管以10-6M的苯肾上腺素(phenylephrine，PE)进行处理将血管预收缩后，把乙酰胆碱(acetylcholine，Ach)累积适用浓度(10-9～10-4M)观察舒张反应并计算了pD2(-LogEC50)。
其结果如表4与图9所示，相比于正常血压组(SD)，SHR在对Ach的反应性，即，舒张效果减少，EC50上虽然各组之间没有显着性差异，但样本2剂量组(G4)的血管舒张效果相比于其它组有所增加(表4及图9)。
[表4]
Figure BDA0002323164220000161
Figure BDA0002323164220000171
<8-5>测量脏器的重量变化
实验最终日，以CO2气体让一切实验动物死亡，以腹主动脉采取血液后摘出心脏、肝脏、肾脏、脑等。为了查看脏器的重量变化而摘出各个脏器后测重并且除以实验动物的体重，然后各自进行比较。
脏器重量指标(organ weight index)＝脏器重量(organ weight)÷体重(bodyweight)x 100(％)
其结果如图10所示，试料给药所导致的体重变化在各组之间没有差异。相对于体重的脏器重量在样本2剂量组与对照组之间没有观察到差异。但是样本1剂量组在右侧及左肾都呈现出显着增加(图10)，
<8-6>血中亚硝酸盐(Nitrite)变化测量
血清内亚硝酸盐浓度利用Miranda之类的方法进行了测量。在血清添加2倍体积的乙醇并且以3000rpm离心分离10分钟后清除了蛋白质。在上清液100μL放入相同量的氯化钒(vanadium(Ⅲ)chloride)后把硝酸钠(nitrate)转化成亚硝酸盐(nitrite)。之后，各自加入50μL的Griess reagent sulfanilamide与N-(1-naphthyl)ethylenediamine后在37℃反应3小时后测量了570nm的吸光度。
其结果如图11所示，血中亚硝酸盐在样本2剂量组(G3、G4)呈用量依赖性地增加，但是在样本1剂量组没有呈现出对对照组的显着差异。亚硝酸盐的血中浓度在G1、G2、G3、G4各为11.0±0.7、11.6±0.6、39.7±1.6及69.2±0.3uM(图11)。
<8-7>脂质过氧化指标的测量
血清MDA含量使用脂质过氧化分析试剂盒(EZ-Lipid peroxidation(TBARS)assaykit)(DoGenBio,Seoul)进行了测量。在血清添加TCA35mg后通过离心分离法得到了上清液。在上清液200μL加入相同量的指示剂并且在65℃反应45分钟后，在540nm测量了吸光度。
其结果如图12所示，作为脂质氧化指标的MDA的血中浓度在样本1剂量组(G1)没有观察到和对照组之间的差异，但是在样本2给药的用量增加时显着减少。MDA的血中浓度在G1是9.8±1.8、在G2是8.6±0.7、在G3是5.6±0.3、在G4是3.8±0.4uM，样本2对脂质过氧化呈现出显着的保护效果(图12)。
其结果，样本2对高血压动物口服给药时观察到显着的降血压效果、血中亚硝酸盐增加及MDA减少，体重与脏器指标(organ index)则没有显着变化，而且，改善了对乙酰胆碱(acetylcholine)的血管反应性。
与此相反，样本1对高血压动物口服给药时没有观察到降血压效果，反而呈现出上升的倾向，观察到肾脏重量增加。
以上结果显示，虽然在样本1上没有观察到降血压效果，但是在样本2通过血中氮化合物的增加、脂质过氧化的抑制之类的作用改善了血管反应性，由此可知，本发明的甜菜根汁具有优异的高血压改善效果。

Claims (8)

1.一种甜菜根汁的制备方法，其特征在于，
包括如下步骤：
第一步骤，洗涤甜菜根后去皮并在200至250℃条件下烤30秒到1分钟；
第二步骤，对烤好的甜菜根进行榨汁；
第三步骤，把压榨汁在0到10℃条件下低温熟成3天到4天；及
第四步骤，把胡萝卜汁、苹果汁及柠檬汁混合到低温熟成甜菜根汁，
其中，所述第四步骤中甜菜根汁、胡萝卜汁、苹果汁及柠檬汁以20至40重量份、10至20重量份、30至50重量份、0.5至1重量份的比率混合。
2.根据权利要求1所述的甜菜根汁的制备方法，其特征在于，
所述第二步骤榨汁使用榨汁机。
3.根据权利要求1所述的甜菜根汁的制备方法，其特征在于，
所述第四步骤的胡萝卜汁、苹果汁及柠檬汁是把胡萝卜或苹果或柠檬洗涤后榨汁制成的。
4.根据权利要求1所述的甜菜根汁的制备方法，其特征在于，
还包括如下步骤，即，对经过所述第四步骤制备的混合液进行杀菌及包装的步骤。
5.根据权利要求4所述的甜菜根汁的制备方法，其特征在于，
所述杀菌在脉冲电场装置(Pulsed Electric Field，PEF)进行非加热低温杀菌。
6.一种提高肠内消化吸收率的甜菜根汁饮料，其特征在于，
包括：
把去皮后在200至250℃条件下烤了30秒到1分钟的甜菜根予以榨汁得到压榨汁，在0到10℃条件下将该压榨汁低温熟成3天到4天的低温熟成甜菜根汁；
胡萝卜汁；
苹果汁；及
柠檬汁，
其中，所述甜菜根汁、胡萝卜汁、苹果汁及柠檬汁以20至40重量份、10至20重量份、30至50重量份、0.5至1重量份的比率混合。
7.一种抗氧化保健食品，其特征在于，
包含去皮烤好的甜菜根压榨汁经过低温熟成的低温熟成甜菜根汁、胡萝卜汁及苹果汁，
所述低温熟成甜菜根汁是在去掉甜菜根的皮后在200至250℃条件下烤30秒到1分钟后，把烤好的甜菜根予以榨汁，然后在0到10℃条件下将该压榨汁低温熟成3天到4天而制成，
所述甜菜根汁、胡萝卜汁及苹果汁以20至40重量份、10至20重量份、30至50重量份的比率混合。
8.一种辅助降血压的保健食品，其特征在于，
包含去皮烤好的甜菜根压榨汁经过低温熟成的低温熟成甜菜根汁、胡萝卜汁及苹果汁，
所述低温熟成甜菜根汁是在去掉甜菜根的皮后在200至250℃条件下烤30秒到1分钟后，把烤好的甜菜根予以榨汁，然后在0到10℃条件下将该压榨汁低温熟成3天到4天而制成，
所述甜菜根汁、胡萝卜汁及苹果汁以20至40重量份、10至20重量份、30至50重量份的比率混合。
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