JP2020519289A - TGF−β受容体含有融合タンパク質およびそれらの医薬的用途 - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、腫瘍免疫療法剤の分野に関する。特に、本発明は、標的化分子および免疫調節因子(TGF−βRIIなど)を含む融合タンパク質を包含する、癌の処置のための融合タンパク質に関する。より具体的には、本発明は、標的化分子PD−L1抗体および免疫調節因子(TGF−βRIIなど)により形成される融合タンパク質、それを含む医薬組成物、ならびにそれらの抗癌剤としての使用に関する。
癌の処置において、人々は化学療法によって引き起こされる高い毒性、および薬剤耐性の癌細胞を産生する可能性のある悪影響を認識している。該処置が、腫瘍の生存に関連している過剰発現されたまたは活性化されたタンパク質を標的としたとしても、癌細胞は、変異することにより、標的療法により標的とされる経路への依存を減らすか、もしくは避けることができ、また他の経路により生存することができる。腫瘍免疫療法は、近年注目されており、癌処置の焦点となっている。薬剤耐性を獲得することは困難であり、これはこの療法の顕著な利点である。免疫学的理論および方法に基づき、腫瘍免疫療法は、主に、腫瘍細胞の免疫原性を増強し、そしてエフェクター細胞による細胞致死に対する感受性を高め、刺激し、抗腫瘍免疫応答を増強し、さらに宿主に免疫細胞およびエフェクター分子を注入して、腫瘍細胞を致死させ、腫瘍増殖を阻害するために免疫系を協調させる。
本発明は、標的化部分およびTGF−β受容体部分を含むTGF−β受容体含有融合タンパク質を提供し、ここで、TGF−β受容体部分は、TGF−βRIIの細胞外ドメインのN末端切断型である。
HCDR1: SYWMH 配列番号1
HCDR2: RI X1PNSG X2TSYNEKFKN 配列番号2
HCDR3: GGSSYDYFDY 配列番号3
LCDR1: RASESVSIHGTHLMH 配列番号4
LCDR2: AASNLES 配列番号5
LCDR3: QQSFEDPLT 配列番号6;
(式中、X1は、HまたはGであり、好ましくはGである。X2は、GまたはFであり、好ましくはFである。)
Ab−L−TGF−βRII ECD (I)
(式中、TGF−βRII ECDは、TGF−βRIIの細胞外ドメインの切断型であり、Abは抗体であり、Lはリンカーである)。
用語
本発明をよりよく理解するために、特定の技術用語および科学用語を以下で具体的に定義する。本明細書中、特にこれと異なる定義がされない限り、本明細書で用いる全ての他の技術用語および科学用語は、一般的に、本発明の属する分野における当業者によって通常理解される意味を有する。
HCDR1: SYWMH 配列番号1
HCDR2: RI X1PNSG X2TSYNEKFKN 配列番号2
HCDR3: GGSSYDYFDY 配列番号3。
LCDR1: RASESVSIHGTHLMH 配列番号4
LCDR2: AASNLES 配列番号5
LCDR3: QQSFEDPLT 配列番号6。
ヒト化重鎖可変領域(配列番号7):
プライマーを設計し、各ヒト化抗体のVH/VK遺伝子フラグメントをPCRで構築し、その後、完全長抗体発現ベクター:VH−CH1−Fc−pHr/VK−CL−pHrを構築するために、発現ベクターpHr(シグナルペプチドおよび定常領域遺伝子(CH1−Fc/CL)フラグメントを含む)に挿入して、相同組換えを実施した。
オンラインソフトウェアDNAWorks(v3.2.2)(http://helixweb.nih.gov/dnaworks/)を用いて、組み換えに必要とされる遺伝子フラグメントを含むVH/VK:5’−30bpシグナルペプチド+VH/VK+30bp CH1/CL−3’の合成のための複数のプライマーを設計した。
タカラバイオ株式会社(TaKaRa Company)製のプライマーSTAR GXL DNAポリメラーゼの取扱説明書に従って、上記のプライマーを用いて、組み換えに必要な遺伝子フラグメントを含むVH/VKを、二段階のPCR増幅により得た。
発現ベクターpHr(シグナルペプチドおよび定常領域遺伝子(CH1−FC/CL)フラグメントを含む)を、ある配列と制限部位の間の特徴的差異を認識するBsmBIのようないくつかの特別な制限エンドヌクレアーゼを用いて、設計し、構築した。BsmBIはベクターを消化し、その後、消化されたフラグメントをゲルを用いて抽出して、以後の使用のために保存した。
組み換えに必要とされる遺伝子フラグメントを含むVH/VKおよびBsmBIで消化された発現ベクターpHr(シグナルペプチドおよび定常領域遺伝子(CH1−FC/CL)フラグメントを含む)を、DH5Hコンピテント細胞に3:1の比で添加し、氷上にて0℃で30分間インキュベートし、42℃で90分間熱ショックを与え、5倍容量のLB培地を添加し、37℃で45分間インキュベートし、LB−Ampプレートに播種し、37℃で一晩培養した。単一クローンを配列決定のために採取し、目的のクローンを得た。
重鎖可変領域(配列番号9):
軽鎖可変領域(配列番号10):
PD−L1抗体重鎖:IgG4(AA) (S228P)(配列番号11)
以下、実施例を参照して本発明をさらに説明する。しなしながら、本発明の範囲はこれに限定されない。
実施例1:融合タンパク質PD−L1/TGF−βトラップのクローニングおよび発現
TGF−βRII細胞外ドメイン(配列番号13の完全長または切断型)は、融合タンパク質の免疫調節分子の一部として用いられ、PD−L1抗体は、融合タンパク質のターゲティング部分として用いられて、PD−L1抗体/TGF−βRII細胞外ドメイン融合タンパク質(PD−L1/TGF−βトラップ)を形成する。研究の結果、TGF−βRIIの細胞外ドメインの切断型が比較的安定していること、とりわけ該切断型が、そのN末端の26個未満のアミノ酸の欠失、好ましくは14−26アミノ酸の欠失、より好ましくは、14−21個の連続アミノ酸の欠失;より好ましくは、14、19または21個の連続アミノ酸の欠失を含み、それがより高い発現および安定な構造を示すことを見い出した。本発明のTGF−βRII細胞外ドメインおよびその短縮型の限定されない例の配列は、以下の通りである:
TGF−βRII細胞外ドメインの配列:ECD(1−136)(配列番号13):
N末端の19個の連続アミノ酸の欠失を伴う、切断型TGF−βRII細胞外ドメインの配列:ECD(20−136)(配列番号14):
N末端の21個の連続アミノ酸の欠失を伴う、切断型TGF−βRII細胞外ドメインの配列:ECD(22−136)(配列番号15):
N末端の14個の連続アミノ酸の欠失を伴う、切断型TGF−βRII細胞外ドメインの配列:ECD(15−136)(配列番号16):
註記:Abは、本発明のPD−L1抗体を示し、配列の説明におけるECD(n−136)は、TGF−βRIIの細胞外ドメインの全長または切断型を示し、nは、TGF−βRIIの細胞外ドメインの切断後のアミノ酸の開始番号を示す。本発明の融合タンパク質の構造を図1に示す;N19Aは、TGF−βRIIの細胞外ドメインの位置19のアミノ酸がAに変異されたことを示す。
細胞培養培地を高速で遠心分離し、上清を集め、精製の第一段階を親和性クロマトグラフィーにより行った。クロマトグラフ媒体は、プロテインAまたはGEのMabselectなどのFcと相互作用する誘導フィラーである。平衡化緩衝液は、1×PBS(137mmol/L NaCl、2.7mmol/L KCl、10mmol/L Na2HPO4、2mmol/L KH2PO4、pH7.4)であった。5カラム容量を平衡化後、細胞上清を結合のためにロードし、試料が1分以上カラム上に残るように、流速をコントロールした。試料を負荷後、カラムを、A280読み取り値がベースラインまで減少するまで1×PBS(pH7.4)で洗浄した。その後、カラムを0.1M グリシン(pH3.0)溶出緩衝液で洗浄し、溶出ピークをA280紫外線吸収ピークに従って集め、集めた溶出サンプルを1M Tris(pH8.5)で中和した。
試験例1:インビトロでのTGF−β1に結合するPD−L1/TGF−βトラップのELISA検出
検出プロセスは以下の通りである:
a.96ウェルプレートを、1μg/ml濃度のヒトTGF−β1(8915LC、CST)を100μl/ウェルで用いて、4℃で一晩コーティングした。
b.250μlの1×PBSTで3回洗浄し、250μlの5%ミルクPBSを添加して37℃で2時間ブロッキングした。
c.250μlの1×PBSTで3回洗浄し、PD−L1/TGF−βトラップの段階希釈、TGF−βトラップおよび陽性対照を添加し、37℃で1時間インキュベートした。
d.250μlの1×PBSTで3回洗浄した。
e.100μlの抗ヒトFc抗体−HRP(1:4000)を各ウェルに添加して、37℃で40分間インキュベートした。
f.100μlのTMBを各ウェルに添加し、室温で10分間インキュベートし、反応を100μlの1M H2SO4の添加により停止させた。
g.450nmの吸光度をマイクロプレートリーダーで測定し、そしてデータをGraphpad Prism5で分析した。
検出に用いた抗原:PD−L1−His(配列番号17)
a.96ウェル王レートを、5μg/mlの濃度のヒトPD−L1−His(配列番号17)を100μl/ウェルで、4℃で一晩コーティングした。
b.250μlの1×PBSTで3回洗浄し、250μlの5%ミルクPBSを添加して37℃で2時間ブロッキングした。
c.250μlの1×PBSTで3回洗浄し、PD−L1/TGF−βトラップの段階希釈、陽性対照としてのPD−L1抗体を添加し、37℃で1時間インキュベートした。
d.250μlの1×PBSTで3回洗浄した。
e.100μlの抗ヒトFc抗体−HRP(1:4000)を各ウェルに添加して、37℃で40分間インキュベートした。
f.100μlのTMBを各ウェルに添加し、室温で10分間インキュベートし、反応を100μlの1M H2SO4の添加により停止させた。
g.450nmの吸光度をマイクロプレートリーダーで測定し、そしてデータをGraphpad Prism5で分析した。
1.試験目的:
PD−1/PD−L1シグナル伝達経路上のPD−L1/TGF−βトラップのブロッキング効果を調べるために、細胞ベースの抗体のブロッキング試験を、それぞれPromagaにより構築されたヒトPD−1およびPD−L1受容体分子を担持する細胞上で実施した。
(1)PD−L1抗体:配列番号11、配列番号12;
(2)対照1(20T−Fc):ECD(20−136)−Fc、切断型TGF−βRII細胞外ドメインフラグメントECD(20−136)およびFcを含む融合タンパク質
配列は以下の通りである(配列番号18):
(3)対照2(22T−Fc):ECD(22−136)−Fc、切断型TGF−βRII細胞外ドメインフラグメントECD(22−136)およびFcを含む融合タンパク質
配列は以下の通りである(配列番号19):
(4)融合タンパク質9、融合タンパク質15;
(5)ヒトIgG:ブランク対照、プロテインAなどの常套の親和性クロマトグラフィー法を用いた精製により混合型正常ヒト血清から得られたヒト免疫グロブリン;
(6)陽性対照(M7824、引用特許文献WO2015118175により調製):PD−L1抗体/TGF−βRII細胞外ドメイン融合タンパク質;
PD−L1抗体の軽鎖アミノ酸配列(配列番号20):
PD−L1抗体重鎖/TGF−βRII細胞外ドメイン(1−136)のH鎖アミノ酸配列(配列番号21):
CHO/PD−L1細胞(CS187108、Promega)を消化し、F−12栄養素混合物(Ham)完全培地に再懸濁させた。細胞密度を、細胞数の結果に応じて完全培地を用いて、4×105/mLに調整した。細胞懸濁液をローディングタンクに入れ、マルチチャンネルピペットを用いて100μL/ウェルを96ウェルプレートに添加し、そして37℃、5% CO2 のインキュベーターで、20から24時間インキュベートした;Jurkat/PD−1(CS187102、Promega)細胞懸濁液を翌日に調製し、細胞数の結果に従ってアッセイ培地を用いて細胞を再懸濁させて、細胞密度を1.25×106/mLに調整した。CHO/PD−L1 細胞を含む細胞培養プレートをインキュベーターから取り出し、マルチチャンネルピペットを用いてウェル毎に95μLの培養液を取り除き、勾配希釈した融合タンパク質、PD−L1抗体および陽性対照(M7824)をそれぞれ40μL/ウェル添加した。その後、Jurkat/PD−1細胞懸濁液をローディングタンクに移し、細胞培養プレートに40μL/ウェルで加え、37℃、5% CO2で5から6時間インキュベートした。タンパク質とのインキュベートの間、Bio-Glo(商標)試薬を取りだし、室温に戻しておいた。細胞培養プレートを取り出し、室温で5から10分間静置した。その後、40μLのBio−Glo(商標)試薬を各ウェルに添加し、安全キャビネットで5から10分間インキュベートし、そして多機能マイクロプレートリーダーを用いて化学発光シグナル値を読み取った。
図5に示す通り、陽性対照分子と同様に、本発明の融合タンパク質9は、PD−1を発現するJurkat細胞のCHO/PD−L1細胞への結合を効果的にブロックすることができ、薬物濃度に沿って用量依存的に効果を示した。融合タンパク質15は、融合タンパク質9と同程度のブロッキング能を有する。
試験分子のヒトもしくはマウスTGF−β1またはヒトPD−L1タンパク質への親和性を、Biacore T200(GE)により決定した。実験手順は以下の通りである:
1.試験目的:
この試験では、ルシフェラーゼレポーター遺伝子を含むSmad3結合エレメント(SBE)をHepG2細胞中で発現させて、TGF−β誘導Smad3活性化に対するPD−L1/TGF−βトラップの阻害効果を調べ、インビトロでのPD−L1/TGF−βトラップの活性をIC50値により評価した。
融合タンパク質9、陽性対照(M7824)
HepG2細胞を、10% FBSを含むMEM完全培地(GE、SH30243.01)中で培養し、3日毎に継代した。試験の第1日目に、1ウェル当たり25,000細胞を96ウェルプレート(Corning、3903)に接種し、37℃、5% CO2で24時間培養した。翌日、細胞培養プレートの培地を廃棄し、100ngの3TP−Luxプラスミドをウェル毎にトランスフェクトした。細胞をさらに、37℃、5% CO2で24時間培養した。試験サンプルの添加前6時間に、96ウェルプレートの完全培地を捨て、80μLの不完全培地(MEM + 0.5% FBS)を各ウェルに添加した。6時間後、不完全培地(終濃度2ng/mL)で調製した10μLのヒトTGF−β1(R&D、240-B-010)溶液および10μLの試験サンプル(終濃度500、50、5、0.5、0.05、0.005、0.0005および0nM)を添加し、ヒトTGF−β1溶媒を対照として用いて、細胞を、37℃、5% CO2でさらに18時間培養した。次いで、100μLの調製されたルシフェラーゼ基質ONE-Glo(商標)ルシフェラーゼアッセイ系(promega、E6110)を各ウェルに添加して、室温で10分間、暗所にてインキュベートした後、発光シグナル値を、Victor3 マルチプレートリーダー(Perkin Elmer)を用いて読み取った。試験サンプルのIC50値を、データソフトウェア・グラフパッドプリズム 5.0を用いて計算することにより得た。
1.試験目的
PD−L1/TGF−βトラップによるTリンパ球の活性を調べるために、ヒト末梢血単核細胞(PBMC)を採取し、精製して、ツベルクリン(TB)で刺激した後、5日間、IFNγの分泌を検出した。
(1)ヒトIgG;(2)PD−L1抗体;(3)融合タンパク質9;(4)対照1(20T-Fc):ECD(20−136)−Fc;(5)PD−L1抗体+対照1(20T-Fc)。
15mlの精製した新鮮なPBMC、約3×107細胞、および20μLのツベルクリンをそれに添加し、インキュベーター中、37℃、5% CO2で5日間インキュベートした。6日目に、培養細胞を集め、遠心し、PBSで1回洗浄して、新鮮な培地に密度1×106細胞/mlに調整して再懸濁させ、90μlの再懸濁細胞を96ウェルプレートに添加した。10μL/ウェルの異なる濃度の抗体を上記96ウェル細胞培養プレートの対応するウェルに別々に添加し、10μl PBSを対照群およびブランク群にそれぞれ添加した。その後、細胞培養プレートを、インキュベーター内で37℃、5% CO2で3日間インキュベートした。細胞培養プレートを取りだし、遠心(4000rpm、10分)後に各ウェルから上清を採取した。10倍希釈後、IFN−γの分泌をELISA(ヒトIFN−γ検出キット、Xinbosheng、EHC 102g.96)により検出した。具体的な操作は、試薬の指示書に従った。図面に示す通り、PD−L1/TGF−βトラップ融合タンパク質サンプルは、活性化Tリンパ球によるサイトカインIFN−γの分泌を増強することができ、薬物濃度用量効果を有した。
図7および表4に示す通り、融合タンパク質9は、活性化Tリンパ球を増強して、用量依存的にサイトカインIFN−γ分泌を増大することができ、そしてPD−L1抗体および20T−FCよりも強い活性を有した。
試験例7:
3匹のSDラット(メス)を、Jiesijie Experimental Animal Co., Ltdから購入し、12/12−時間の明暗サイクル(温度は24±3℃、相対湿度は50−60%)に維持した。該ラットを、水および食餌を自由に摂取できるようにした。実験の日に、SDラットに、6mg/kgの用量で、かつ5ml/kgの注射量で尾静脈に融合タンパク質を注射した。
a.96ウェルプレートを、2μg/ml濃度のヒトPD−L1−Hisを100μl/ウェル用いて、4℃で一晩コーティングした。
b.250μlの1×PBSTで4回洗浄し、250μlの5%ミルクPBSを添加して37℃で3時間ブロッキングした。
c.250μlの1×PBSTで4回洗浄し、勾配希釈した血清サンプル100μlを添加し、37℃で1時間インキュベートした。融合タンパク質9を陽性対照として用いた。
d.250μlの1×PBSTで5回洗浄した。
e.100μl/ウェルのビオチニル化抗ヒトTGF−βRII抗体(R&D)を添加し、37℃で1時間インキュベートした。
f.250μlの1×PBSTで5回洗浄した。
g.100μl/ウェルのTMBを添加し、室温で10分間インキュベートし、反応を100μlの1M H2SO4の添加により停止させた。
h.450nmの吸光度をマイクロプレートリーダーで測定し、そしてデータをGraphpad Prism5で分析した。
試験例8:ヒト乳癌 MDA−MB−231のマウス皮下異種移植に対するPD−L1/TGF−βトラップの効果
この試験に用いたマウス系統は、NOD/SCIDメスマウス(Cavens)であった。この試験に用いたヒト末梢血単核細胞を、新たに採血した血液から抽出し、その抽出法は以下の通りであった:ヘパリン抗凝固処理静脈血を、同じ容量の2%FBSを含有するPBSと混合し、混合後、25mlの希釈血液を15mlのリンパ球分離溶液を含む遠心管にゆっくり添加し、1200gで10分間、室温で遠心した。リンパ球層をピペットで別の遠心管に移し、細胞をPBSで洗浄して、300gで8分間、室温にて遠心した。1回繰り返した後、細胞を10%FBSを含むRPMI−1640培地に再懸濁させ、細胞を、CD3抗体(OKT3、40ng/ml)であらかじめコーティングした6ウェルプレートに2×106細胞/ウェル(2ml)で添加して、その後、37℃のインキュベーターに4日間入れた。
(1)ブランク対照:PBS;(2)融合タンパク質9−4.8mpk;(3)融合タンパク質9−24mpk;(4)PD−L1抗体−4mpk;(5)PD−L1抗体−20mpk;(6)PD−L1抗体−4mpk +対照1(20T-Fc)−2.14mpk;(7)対照1(20T-Fc)−2.14mpk。
註記:0日目:初回投与時;スチューデントのt検定により、PBSと比較して、*p<0.05 **p<0.01 ***p<0.001。
この試験例を用いて、融合タンパク質9および融合タンパク質15の安定性を試験した。
脱アミド化は、後の段階で抗体の安定性に影響を与え得る一般的な化学修飾である。とりわけ、CDR領域のアミノ酸の過剰脱アミド化は避けなければならないか、またはこれらの領域における変異を減らすことが好ましい。1600μgの試験すべき抗体を、200μlの10mM アセテート/135mM NaCl(pH5.5)中に溶解させ、40℃のインキュベーター中に置いた。酵素加水分解アッセイのために、0日目、14日目および28日目にサンプル採取した。異なる時点で採取した100μgの各サンプルを、100μlの0.2M His−HCl、8M Gua−HCl溶液、pH6.0に溶解させた。3μlの0.1g/mL DTTを添加し、次いで、サンプルを、50℃の水浴中、1時間、インキュベートした。その後、サンプルを、0.02M His−HCl(pH6.0)を用いて2回限外濾液し、3μLの0.25mg/mL トリプシンを添加することにより、37℃で一晩、水浴中で消化した。脱アミド化修飾をAgilent 6530 Q-TOF LC-MSを用いて試験し、結果を以下の表10に示す。
註記:Nは検出可能な修飾アスパラギンを表し、数字はN末端から軽鎖または重鎖の位置を表す。パーセント含有量は、LC−MSによって検出された脱アミド化修飾の、その部位のすべてのペプチドのシグナルに対する比率を表す。
Claims (25)
- 標的化部分およびTGF−β受容体部分を含む、TGF−β受容体含有融合タンパク質であって、ここで、該TGF−β受容体部分が、TGF−βRIIの細胞外ドメインのN末端切断型である、TGF−β受容体含有融合タンパク質。
- TGF−βRIIの細胞外ドメインのN末端切断型が、TGF−βRIIの細胞外ドメインのN末端の26個またはそれより少ない個数の連続アミノ酸の欠失、好ましくは14から26個の連続アミノ酸の欠失、より好ましくは14から21個の連続アミノ酸の欠失、最も好ましくは14、19または21個の連続アミノ酸の欠失を含む、請求項1に記載のTGF−β受容体含有融合タンパク質。
- TGF−βRIIの細胞外ドメインの配列が、配列番号13に示されており、最も好ましくは、配列番号14、15または16の配列を含む、請求項1または2に記載のTGF−β受容体含有融合タンパク質。
- 標的化部分が、細胞特異的な標的化部分であり、好ましくは、癌細胞特異的な標的化部分である、請求項1から3のいずれか一項に記載のTGF−β受容体含有融合タンパク質。
- 癌細胞特異的な標的化部分が、抗体またはその抗原結合フラグメント、増殖因子、ホルモン、ペプチド、受容体およびサイトカインからなる群より選択される、請求項4に記載のTGF−β受容体含有融合タンパク質。
- 抗体またはその抗原結合フラグメントが、完全長抗体、キメラ抗体、Fab’、Fab、F(ab’)2、単一ドメイン抗体、Fv、scFv、小抗体、二重特異性抗体、および三重特異性抗体またはそれらの混合物からなる群より選択される、請求項5に記載のTGF−β受容体含有融合タンパク質。
- 抗体またはその抗原結合フラグメントが、HER2、HER3、免疫チェックポイント分子、CD33、VEGF、VEGFR、VEGFR−2、CD152、TNF、IL−1、IL−5、IL−17、IL−6R、IL−1、IL−2R、BLYS、PCSK9、EGFR、c−Met、CD2、CD3、CD11a、CD19、CD30、CD38、CD20、CD52、CD60、CD80、CD86、TNF−α、IL−12、IL−17、IL−23、IL−6、IL−1β、RSVF、IgE、RANK、BLyS、α4β7、PD−1、CCR4、SLAMF7、GD2、CD21、CD79b、IL20Rα、CD22、CD79a、CD72、IGF−1RおよびRANKLからなる群より選択されるポリペプチドまたはタンパク質の1以上に結合し、好ましくは該抗体またはその抗原結合フラグメントが、免疫チェックポイント分子に結合する、請求項5または6に記載のTGF−β受容体含有融合タンパク質。
- 抗体が抗PD−L1抗体であり、好ましくは、該抗PD−L1抗体が、MSB0010718C、MEDI4736、BMS−936559およびMPDL3280Aからなる群より選択されるか、または配列番号1のHCDR1もしくはその変異体;配列番号2のHCDR2もしくはその変異体;配列番号3のHCDR3もしくはその変異体;配列番号4のLCDR1もしくはその変異体;配列番号5のLCDR2もしくはその変異体;および配列番号6のLCDR3もしくはその変異体からなる群より選択される1以上のCDRを含む、請求項5から7のいずれか一項に記載のTGF−β受容体含有融合タンパク質。
- 抗体またはその抗原結合フラグメントが、キメラ抗体もしくはその機能的フラグメント、ヒト化抗体もしくはその機能的フラグメント、またはヒト抗体もしくはその機能的フラグメントである、請求項5から8のいずれか一項に記載のTGF−β受容体含有融合タンパク質。
- ヒト化抗体が、配列番号7の重鎖可変領域、好ましくは配列番号9の重鎖可変領域を含む、請求項9に記載のTGF−β受容体含有融合タンパク質。
- ヒト化抗体が、配列番号11の重鎖をさらに含む、請求項9に記載のTGF−β受容体含有融合タンパク質。
- ヒト化抗体が、配列番号8もしくは配列番号10の軽鎖可変領域またはそれらの変異体を含む、請求項9に記載のTGF−β受容体含有融合タンパク質。
- ヒト化抗体が、配列番号12の軽鎖を含む、請求項9に記載のTGF−β受容体含有融合タンパク質。
- TGF−β受容体を含む融合タンパク質が、一般式(I):
Ab−L−TGF−βRII ECD (I)
で示され、
式中、TGF−βRII ECDは、TGF−βRIIの細胞外ドメインの切断型であり、Abは抗体であり、Lはリンカーである、
請求項1から13のいずれか一項に記載のTGF−β受容体含有融合タンパク質。 - リンカーが(G4S)xGであり、式中、xは3から6であり、好ましくは4から5である、請求項14に記載のTGF−β受容体含有融合タンパク質。
- 治療的有効量の請求項1から15のいずれか一項に記載のTGF−β受容体含有融合タンパク質および1以上の薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤を含む、医薬組成物。
- 請求項1から15のいずれか一項に記載のTGF−β受容体含有融合タンパク質をコードするDNA分子。
- 請求項17に記載のDNA分子を含む、発現ベクター。
- 請求項18に記載の発現ベクターを含む、宿主細胞であって、該宿主細胞が、細菌、酵母および哺乳動物細胞からなる群より選択され、好ましくは哺乳動物細胞である、細胞。
- 腫瘍の処置のための医薬の製造を目的とする、好ましくはPD−L1介在性腫瘍、より好ましくはPD−L1を発現する癌を処置するための医薬の製造を目的とする、請求項1から15のいずれか一項に記載のTGF−β受容体含有融合タンパク質または請求項16に記載の医薬組成物の使用。
- 治療的有効量の請求項1から15のいずれか一項に記載のTGF−β受容体含有融合タンパク質または請求項16に記載の医薬組成物を、それを必要とする患者に投与することを含む、腫瘍の処置方法または予防方法。
- TGF−βRIIの切断型細胞外ドメインが、配列番号13のN末端の26個またはそれより少ない連続アミノ酸の欠失、好ましくはN末端の14から26個の連続アミノ酸の欠失、より好ましくはN末端の14から21個の連続アミノ酸の欠失を含み、最も好ましくはTGF−βRIIの該切断型細胞外ドメインが、配列番号14または配列番号15の配列を含む、TGF−βRIIの切断型細胞外ドメイン。
- 治療的有効量の請求項22に記載のTGF−βRIIの切断型細胞外ドメイン、および1以上の薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤を含む、医薬組成物。
- 癌細胞増殖または転移に関連する疾患または障害の処置または阻害のための医薬の製造を目的とする、請求項22に記載のTGF−βRIIの切断型細胞外ドメインまたは請求項23に記載の医薬組成物の使用。
- 治療的有効量の請求項22に記載のTGF−βRIIの切断型細胞外ドメインまたは請求項23に記載の医薬組成物を、それを必要とする患者に投与することを含む、腫瘍の処置方法または予防方法。
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