JP2020055916A - モールド成形体、モールド成形体の製造方法、およびモールド成形体の柔軟性調整方法 - Google Patents
モールド成形体、モールド成形体の製造方法、およびモールド成形体の柔軟性調整方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2020055916A JP2020055916A JP2018185827A JP2018185827A JP2020055916A JP 2020055916 A JP2020055916 A JP 2020055916A JP 2018185827 A JP2018185827 A JP 2018185827A JP 2018185827 A JP2018185827 A JP 2018185827A JP 2020055916 A JP2020055916 A JP 2020055916A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- protein
- molded article
- amino acid
- molded body
- composition
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Abstract
Description
[1] 構造タンパク質を含む組成物のモールド成形体であって、透明性を有すると共に、水分率が7質量%以上であるモールド成形体。
[2] 6.5GPa以下の曲げ弾性率を有する、[1]に記載のモールド成形体。
[3] 前記構造タンパク質が、天然クモ糸タンパク質および天然クモ糸タンパク質に由来するタンパク質からなる群より選ばれる少なくとも1種を含有する、[1]または[2]に記載のモールド成形体。
[4] 加熱加圧成形体である、[1]〜[3]のいずれか1つに記載のモールド成形体。
[5] [1]〜[4]のいずれか1つに記載のモールド成形体を製造する方法であって、構造タンパク質を含み、該構造タンパク質に対して水分率が7質量%以上である組成物を準備する準備工程と、前記組成物を加熱および加圧する成形工程と、を含むモールド成形体の製造方法。
[6] 前記成形工程での前記組成物の加熱温度が120℃以下である、[5]に記載のモールド成形体の製造方法。
[7] 構造タンパク質を含む組成物の、該構造タンパク質に対する水分率を7質量%以上の任意の値となるように調整する調整工程と、前記組成物を加熱および加圧する成形工程と、を含むモールド成形体の柔軟性調整方法。
[8] 前記構造タンパク質が、天然クモ糸タンパク質および天然クモ糸タンパク質に由来するタンパク質からなる群より選ばれる少なくとも1種を含有する、[7]に記載のモールド成形体の柔軟性調整方法。
本実施形態に係るモールド成形体は、構造タンパク質を含む組成物からなる。構造タンパク質とは、生体構造を構築する役割を有するタンパク質であり、酵素、ホルモン、抗体等の機能タンパク質とは異なる。構造タンパク質としては、クモ糸タンパク質、カイコシルクタンパク質、ケラチン、コラ−ゲン、エラスチン及びレシリン等の天然構造タンパク質、並びにそれらのタンパク質由来の構造タンパク質等が挙げられる。本実施形態に係るモールド成形体を構成する構造タンパク質としては、天然クモ糸タンパク質に由来する、いわゆる組換えクモ糸タンパク質が好適に用いられる。すなわち、構造タンパク質は、天然クモ糸タンパク質および天然クモ糸タンパク質に由来するタンパク質からなる群より選ばれる少なくとも1種を含有する。
本明細書において「ドメイン配列」とは、クモ糸タンパク質特有の結晶領域(典型的には、アミノ酸配列の(A)nモチーフに相当する。)と非晶領域(典型的には、アミノ酸配列のREPに相当する。)を生じるアミノ酸配列であり、式1:[(A)nモチーフ−REP1]m、又は式2:[(A)nモチーフ−REP1]m−(A)nモチーフで表されるアミノ酸配列を意味する。ここで、(A)nモチーフは、アラニン残基を主とするアミノ酸配列を示し、アミノ酸残基数は2〜27である。(A)nモチーフのアミノ酸残基数は、2〜20、4〜27、4〜20、8〜20、10〜20、4〜16、8〜16、又は10〜16の整数であってよい。また、(A)nモチーフ中の全アミノ酸残基数に対するアラニン残基数の割合は40%以上であればよく、60%以上、70%以上、80%以上、83%以上、85%以上、86%以上、90%以上、95%以上、又は100%(アラニン残基のみで構成されることを意味する。)であってもよい。ドメイン配列中に複数存在する(A)nモチーフは、少なくとも7つがアラニン残基のみで構成されてもよい。REPは2〜200アミノ酸残基から構成されるアミノ酸配列を示す。REPは、10〜200アミノ酸残基から構成されるアミノ酸配列であってもよい。mは2〜300の整数を示し、10〜300の整数であってもよい。複数存在する(A)nモチーフは、互いに同一のアミノ酸配列でもよく、異なるアミノ酸配列でもよい。複数存在するREPは、互いに同一のアミノ酸配列でもよく、異なるアミノ酸配列でもよい。具体的には配列番号1で示されるアミノ酸配列を含むタンパク質をあげることができる。
組換えタンパク質は、例えば、当該組換えタンパク質をコードする核酸配列と、当該核酸配列に作動可能に連結された1又は複数の調節配列とを有する発現ベクターで形質転換された宿主により、当該核酸を発現させることにより生産することができる。
本実施形態に係るモールド成形体の製造方法は、たとえば上述のようにして得られる構造タンパク質を含む組成物を加熱および加圧する成形工程を含む。この成形工程において、組成物は、構造タンパク質に対して7質量%以上の水分率を有する。すなわち、本実施形態に係るモールド成形体の製造方法は、成形工程に先立って、構造タンパク質に対して水分率が7質量%以上である組成物を準備する準備工程を含む。
後述する実施例で用いたのと同じタンパク質粉末を用いて、タンパク質粉末が樹脂化するタイミングと、加圧成形機の内圧の変化との関係を確認した。より詳細には、上記特許文献3(国際公開第2018/043698号)に記載された加圧成形機と同じ構成を有する加圧成形機を用い、実験用に、金型にガラス窓を設けて金型内部を可視化する改造を施した。さらに、金型の内面に圧力センサーを設置した。
a)タンパク質粉末(Spiber(株)製改変フィブロイン:PRT410)を金型内に投入
b)型締めを行い、内圧が40MPaになるように型締力を調整し、金型の内圧値をリセット(ゼロにする)
c)昇温を開始し(設定40℃/min)、金型内の寸法が変わらないよう型締力を調整
このとき、内圧の上昇が見られた。
d)樹脂化の完了を目視にて確認し、その時点から、金型の温度を5分間保持
樹脂化の確認は、金型内部の色に基づいて行った。粉末の状態では、金型内部の色は不透明の白色であり、樹脂化が始まると金型内部の色が変化し始め、樹脂化が完了すると、金型内部の色は半透明の薄茶色になった。
e)上記樹脂化完了後、金型の温度が80℃になるまで、スポットクーラーにて冷却
f)金型を開放し、モールド成形体を取出し
g)20℃/60%RHの環境下で24時間保管後、後述の曲げ試験を実施
続いて、後述する実施例で用いたのと同じタンパク質粉末を用いて水分率の調整を行い、水分率の違いによる樹脂化温度を確認した。具体的な実験手順としては、まず、加熱乾燥式水分計((株)エー・アンド・デイ製、MS−70)を用いて、1分間の重量変化率が0.01wt%以下になるまで130℃で粉末を乾燥し、この状態をもって水分率0%(すなわち水分が抜けきった状態)とした。続いて、23℃、60%RHの雰囲気下で3分間放置した粉末の水分率を測定したところ2.6%であった。同様に、5分間放置した粉末の水分率を測定したところ5.2%であり、6分間放置した粉末の水分率を測定したところ7.0%であり、7分間放置した粉末の水分率を測定したところ8.0%であり、20分間放置した粉末を測定したところ10.7%であった。
ネフィラ・クラビペス(Nephila clavipes)由来のフィブロイン(GenBankアクセッション番号:P46804.1、GI:1174415)の塩基配列及びアミノ酸配列をGenBankのウェブデータベースより取得した後、生産性の向上を目的としてアミノ酸残基の置換、挿入及び欠失を施し、さらにN末端に配列番号5で示されるアミノ酸配列(タグ配列及びヒンジ配列)を付加して、配列番号12で示されるアミノ酸配列を有する組換えフィブロイン(「PRT410」ともいう。)を設計した。
上記で得られたPRT410をコードする遺伝子を含むpET22b(+)発現ベクターで、大腸菌BLR(DE3)を形質転換した。形質転換された大腸菌を、アンピシリンを含む2mLのLB培地で15時間培養後、同培養液を、表1に示すシード培養用培地100mLに、OD600が0.005となるように添加した。培養液の温度を30℃に保ち、OD600が5になるまでフラスコにて、さらに約15時間培養を行い、シード培養液を得た。
IPTGを添加してから2時間後に回収した菌体を20mM Tris−HCl緩衝液(pH7.4)で洗浄した。洗浄後の菌体を約1mMのフェニルメチルスルホニルフルオリド(PMSF)を含む20mM Tris−HCl緩衝液(pH7.4)に懸濁させ、高圧ホモジナイザー(GEA Niro Soavi社)で細胞を破砕した。破砕した細胞を遠心分離し、沈殿物を得た。得られた沈殿物を、高純度になるまで20mM Tris−HCl緩衝液(pH7.4)で洗浄した。洗浄後の沈殿物を100mg/mLの濃度になるように8M グアニジン緩衝液(8Mグアニジン塩酸塩、10mMリン酸二水素ナトリウム、20mM NaCl、1mM Tris−HCl、pH7.0)で懸濁し、60℃で30分間、スターラーで撹拌し、溶解させた。溶解後、透析チューブ(三光純薬株式会社製のセルロースチューブ36/32)を用いて水で透析を行った。透析後に得られた白色の凝集タンパク質を遠心分離により回収し、凍結乾燥機で水分を除き、凍結乾燥粉末を回収した。
次に、得られた凍結乾燥粉末の水分を調整した。水分率の調整は、上述の予備実験と同様に行い、(構造タンパク質の質量に対する)水分率が互いに異なる6種類の原料組成物、すなわち、水分率0%、2.6%、5.2%、8.0%、10.7%のクモ糸フィブロイン粉末(構造タンパク質粉末)を得た。
上記のように作製した各成形体を20℃/60%RHの環境下で24時間保管した後、オートグラフ((株)島津製作所製、AGS−X)を用いて三点曲げ試験をそれぞれ行った。その際、三点曲げ試験の支点間距離を27mmに固定し、測定速度を1mm/分とした。また、各モールド成形体の寸法をマイクロメーターで測定した後、支点に設置して曲げ弾性率を測定した。
Claims (8)
- 構造タンパク質を含む組成物のモールド成形体であって、透明性を有すると共に、水分率が7質量%以上であるモールド成形体。
- 6.5GPa以下の曲げ弾性率を有する、請求項1に記載のモールド成形体。
- 前記構造タンパク質が、天然クモ糸タンパク質および天然クモ糸タンパク質に由来するタンパク質からなる群より選ばれる少なくとも1種を含有する、請求項1または2に記載のモールド成形体。
- 加熱加圧成形体である、請求項1〜3のいずれか一項に記載のモールド成形体。
- 請求項1〜4のいずれか一項に記載のモールド成形体を製造する方法であって、
構造タンパク質を含み、該構造タンパク質に対して水分率が7質量%以上である組成物を準備する準備工程と、
前記組成物を加熱および加圧する成形工程と、
を含むモールド成形体の製造方法。 - 前記成形工程での前記組成物の加熱温度が120℃以下である、請求項5に記載のモールド成形体の製造方法。
- 構造タンパク質を含む組成物の、該構造タンパク質に対する水分率を7質量%以上の任意の値となるように調整する調整工程と、
前記組成物を加熱および加圧する成形工程と、
を含むモールド成形体の柔軟性調整方法。 - 前記構造タンパク質が、天然クモ糸タンパク質および天然クモ糸タンパク質に由来するタンパク質からなる群より選ばれる少なくとも1種を含有する、請求項7に記載のモールド成形体の柔軟性調整方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2018185827A JP2020055916A (ja) | 2018-09-28 | 2018-09-28 | モールド成形体、モールド成形体の製造方法、およびモールド成形体の柔軟性調整方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2018185827A JP2020055916A (ja) | 2018-09-28 | 2018-09-28 | モールド成形体、モールド成形体の製造方法、およびモールド成形体の柔軟性調整方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2020055916A true JP2020055916A (ja) | 2020-04-09 |
Family
ID=70106462
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2018185827A Pending JP2020055916A (ja) | 2018-09-28 | 2018-09-28 | モールド成形体、モールド成形体の製造方法、およびモールド成形体の柔軟性調整方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP2020055916A (ja) |
Citations (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH0288644A (ja) * | 1988-08-13 | 1990-03-28 | Lts Lohmann Therapie Syst Gmbh & Co Kg | 柔軟な親水性ゲル・フィルム,ならびにその製造方法と使用法 |
JPH08245807A (ja) * | 1995-03-10 | 1996-09-24 | Agency Of Ind Science & Technol | 羽毛成形体とその製造方法 |
JPH08286155A (ja) * | 1995-04-13 | 1996-11-01 | Asahi Chem Ind Co Ltd | 装用性に優れた含水ソフトレンズ |
JP2009507110A (ja) * | 2005-09-09 | 2009-02-19 | オタワ ヘルス リサーチ インスティテュート | 相互侵入ネットワーク、およびそれに関連する方法および組成物 |
JP2016216522A (ja) * | 2015-05-14 | 2016-12-22 | 国立研究開発法人理化学研究所 | 成形品、フィルム、及び熱変形の抑制方法 |
WO2017047504A1 (ja) * | 2015-09-18 | 2017-03-23 | Spiber株式会社 | モールド成形体及びモールド成形体の製造方法 |
WO2017047503A1 (ja) * | 2015-09-18 | 2017-03-23 | Spiber株式会社 | モールド成形体及びモールド成形体の製造方法 |
JP2017110132A (ja) * | 2015-12-17 | 2017-06-22 | 国立大学法人室蘭工業大学 | 動物繊維成形物及びその製造方法 |
WO2017131196A1 (ja) * | 2016-01-29 | 2017-08-03 | 国立研究開発法人理化学研究所 | 成形体及びその製造方法、並びに成形体のタフネスを向上させる方法 |
WO2018043698A1 (ja) * | 2016-09-02 | 2018-03-08 | Spiber株式会社 | モールド成形体及びモールド成形体の製造方法 |
WO2020067554A1 (ja) * | 2018-09-28 | 2020-04-02 | Spiber株式会社 | 成形体の製造方法および構造タンパク質成形体 |
-
2018
- 2018-09-28 JP JP2018185827A patent/JP2020055916A/ja active Pending
Patent Citations (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH0288644A (ja) * | 1988-08-13 | 1990-03-28 | Lts Lohmann Therapie Syst Gmbh & Co Kg | 柔軟な親水性ゲル・フィルム,ならびにその製造方法と使用法 |
JPH08245807A (ja) * | 1995-03-10 | 1996-09-24 | Agency Of Ind Science & Technol | 羽毛成形体とその製造方法 |
JPH08286155A (ja) * | 1995-04-13 | 1996-11-01 | Asahi Chem Ind Co Ltd | 装用性に優れた含水ソフトレンズ |
JP2009507110A (ja) * | 2005-09-09 | 2009-02-19 | オタワ ヘルス リサーチ インスティテュート | 相互侵入ネットワーク、およびそれに関連する方法および組成物 |
JP2016216522A (ja) * | 2015-05-14 | 2016-12-22 | 国立研究開発法人理化学研究所 | 成形品、フィルム、及び熱変形の抑制方法 |
WO2017047504A1 (ja) * | 2015-09-18 | 2017-03-23 | Spiber株式会社 | モールド成形体及びモールド成形体の製造方法 |
WO2017047503A1 (ja) * | 2015-09-18 | 2017-03-23 | Spiber株式会社 | モールド成形体及びモールド成形体の製造方法 |
JP2017110132A (ja) * | 2015-12-17 | 2017-06-22 | 国立大学法人室蘭工業大学 | 動物繊維成形物及びその製造方法 |
WO2017131196A1 (ja) * | 2016-01-29 | 2017-08-03 | 国立研究開発法人理化学研究所 | 成形体及びその製造方法、並びに成形体のタフネスを向上させる方法 |
WO2018043698A1 (ja) * | 2016-09-02 | 2018-03-08 | Spiber株式会社 | モールド成形体及びモールド成形体の製造方法 |
WO2020067554A1 (ja) * | 2018-09-28 | 2020-04-02 | Spiber株式会社 | 成形体の製造方法および構造タンパク質成形体 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
WO2017131196A1 (ja) | 成形体及びその製造方法、並びに成形体のタフネスを向上させる方法 | |
WO2018043698A1 (ja) | モールド成形体及びモールド成形体の製造方法 | |
JP7088511B2 (ja) | フィブロイン様タンパク質を含むコンポジット成形組成物及びその製造方法 | |
JPWO2017171001A1 (ja) | フィブロイン様タンパク質改変体および細胞培養方法 | |
WO2017047504A1 (ja) | モールド成形体及びモールド成形体の製造方法 | |
Peng et al. | A simple cost-effective methodology for large-scale purification of recombinant non-animal collagens | |
WO2018159695A1 (ja) | 微生物増殖抑制剤、微生物の増殖を抑制する方法、耐紫外線性向上剤、耐紫外線性を向上させる方法、人工タンパク質成形体及びその製造方法、人工タンパク質溶液、並びに、着色剤 | |
WO2018164189A1 (ja) | タンパク質成形体及びこれを製造する方法、並びにタンパク質溶液 | |
WO2020067554A1 (ja) | 成形体の製造方法および構造タンパク質成形体 | |
WO2020067548A1 (ja) | 難燃性タンパク質成形体及びその製造方法 | |
JP2020055916A (ja) | モールド成形体、モールド成形体の製造方法、およびモールド成形体の柔軟性調整方法 | |
Bandiera et al. | Expression and characterization of human‐elastin‐repeat‐based temperature‐responsive protein polymers for biotechnological purposes | |
JP7029748B2 (ja) | 植毛品及びその製造方法 | |
WO2017131195A1 (ja) | 成形体及びその製造方法、並びに成形体の結晶化度を向上させる方法 | |
WO2018164195A1 (ja) | 精製されたタンパク質を製造する方法 | |
WO2018207827A1 (ja) | ポリペプチド溶液、及びポリペプチド繊維の製造方法、並びに人造ポリペプチド | |
WO2018163758A1 (ja) | モールド成形体及びモールド成形体の製造方法 | |
JP7366359B2 (ja) | 射出成形体、射出成形用組成物、及び射出成形体の製造方法 | |
JP2020055762A (ja) | モールド成形体の製造方法 | |
JP2020121962A (ja) | タンパク質フィルム及びタンパク質フィルムの製造方法 | |
WO2019131924A1 (ja) | モールド成形体及びモールド成形体の製造方法 | |
WO2019054503A1 (ja) | モールド成形用組成物、成形体及び成形体の製造方法 | |
WO2019146765A1 (ja) | タンパク質成形体用素材、タンパク質成形体、及びタンパク質成形体の製造方法 | |
WO2019117296A1 (ja) | 成形体の製造方法および成形体 | |
WO2021187502A1 (ja) | 合成高分子及びその製造方法、成形材料、並びに、成形体 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20190719 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20210928 |
|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20211027 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20211027 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20220824 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20220830 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20230228 |