CN110546264A - 多肽溶液和多肽纤维的制造方法以及人造多肽 - Google Patents

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CN110546264A CN201880025883.8A CN201880025883A CN110546264A CN 110546264 A CN110546264 A CN 110546264A CN 201880025883 A CN201880025883 A CN 201880025883A CN 110546264 A CN110546264 A CN 110546264A
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Abstract

本发明涉及一种多肽溶液，其是使包含属于Ia簇的I型角蛋白来源的氨基酸序列的多肽溶解于包含甲酸的溶剂、或者包含偶极矩为3.0D以上的非质子性极性溶剂和无机盐的溶剂中而得到的。

Description

多肽溶液和多肽纤维的制造方法以及人造多肽
技术领域
本发明涉及多肽溶液和多肽纤维的制造方法以及人造多肽。
背景技术
近年来，动物毛供给量具有减少倾向，但由于发展中国家的发展所带来的人口增加，动物毛的需求逐年升高，难以维持需求与共享的平衡。另一方面，从动物保护的观点出发，对于天然的动物毛发的供给量的增加的应对存在极限。
尝试了如下方法：将作为毛发的主要构成成分的角蛋白溶解，以纤维的形式再生而进行再利用(专利文献1和专利文献2)。更具体而言，微粉化的角蛋白被用于饲料或肥料、化妆品基材、适合于生态系统的表面活性剂、医用高分子材料等(专利文献3)。另一方面，由于天然的动物毛发具有复杂的结构(非专利文献1)，因此未尝试进行类似于人造毛发的纤维的制造。
角蛋白可以根据等电点而分类为I型(酸性)和II型(中性或碱性)角蛋白(非专利文献1)。I型角蛋白可以进一步分类为人I型上皮角蛋白(K9-K28)、人I型毛发角蛋白(K31-K40)、非人I型上皮和毛发角蛋白(K41-K70)(非专利文献2)。另外可知，I型角蛋白的I簇中，分类为Ia簇的K26(角蛋白26)、K25和K27具有高的自举(bootstrap)值，在氨基酸序列上为近缘，特别是已知K26超越物种而具有高的序列类似性(非专利文献2)。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：日本特开2010-236149号公报
专利文献2：日本特开2016-160211号公报
专利文献3：日本特开平05-170926号公报
非专利文献
非专利文献1：羊毛的结构和物性，第1版，日本羊毛产业协会发行，2015年，pp.125-133
非专利文献2：Small Ruminat Research，93卷，2010年，pp.24-30
发明内容
发明所要解决的问题
如上所述，需要代替动物毛的纤维。如非专利文献2中所记载的那样，通过角蛋白的基因分析，氨基酸序列也开始变得明确，但就连该角蛋白也未达到人工制造的程度。
本发明的目的在于提供适合于制造包含角蛋白来源的多肽的多肽纤维的多肽溶液。另外，本发明的目的还在于提供使用该多肽溶液的多肽纤维的制造方法。
用于解决问题的方法
本发明人对作为构成天然毛发的主要蛋白质的角蛋白的人工制造方法和包含角蛋白的纤维的制造方法进行了深入研究，结果发现，能够人工地制造具有与天然毛发相同程度的应力、韧度和伸度的包含I型角蛋白的人造多肽纤维，从而完成了本发明。
即，本发明涉及例如以下的各发明。
[1]一种多肽溶液，其是使包含属于Ia簇的I型角蛋白来源的氨基酸序列的多肽溶解于包含甲酸的溶剂、或者包含偶极矩为3.0D以上的非质子性极性溶剂和无机盐的溶剂中而得到的。
[2]如[1]所述的多肽溶液，其中，上述包含偶极矩为3.0D以上的非质子性极性溶剂和无机盐的溶剂进一步包含还原剂。
[3]如[2]所述的多肽溶液，其中，上述还原剂为选自由硫醇类、三(2-羧基乙基)膦盐酸盐、三(羟基丙基)膦和焦亚硫酸钠组成的组中的至少一种。
[4]如[3]所述的多肽溶液，其中，上述硫醇类为选自由二硫苏糖醇、β-巯基乙醇、3-巯基-1,2-丙二醇、1,2-乙硫醇、巯基乙酸和巯基乙酸铵(ATG)组成的组中的至少一种。
[5]如[1]～[4]中任一项所述的多肽溶液，其中，上述偶极矩为3.0D以上的非质子性极性溶剂是选自由二甲基亚砜、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、1,3-二甲基-2-咪唑烷酮、N-甲基-2-吡咯烷酮和乙腈组成的组中的至少一种。
[6]如[1]～[5]中任一项所述的多肽溶液，其中，上述无机盐为选自由碱金属卤化物、碱土金属卤化物、碱土金属硝酸盐和硫氰酸盐组成的组中的至少一种。
[7]如[1]～[6]中任一项所述的多肽溶液，其中，上述属于Ia簇的I型角蛋白选自由角蛋白25、角蛋白26和角蛋白27组成的组。
[8]一种多肽纤维的制造方法，其为使用[1]～[7]中任一项所述的多肽溶液的多肽纤维的制造方法，包括如下工序：
以上述多肽溶液作为纺丝原液，将上述纺丝原液从喷头挤出至凝固液中，得到未拉伸丝。
[9]如[8]所述的多肽纤维的制造方法，其中，进一步包括对上述未拉伸丝进行拉伸的工序。
[10]如[8]或[9]所述的多肽纤维的制造方法，其中，上述凝固液为选自由甲醇、乙醇和2-丙醇组成的组中的至少一种。
[11]一种表达载体，其具有编码具有属于Ia簇的I型角蛋白来源的氨基酸序列的多肽的核酸序列和以能够工作的方式与该核酸序列连接的一个或多个调节序列。
[12]一种宿主，其利用[11]所述的表达载体进行了转化。
[13]一种人造多肽的制造方法，其包括：对[12]所述的宿主进行培养，使其增殖而诱导表达上述多肽。
[14]一种人造多肽，其包含属于Ia簇的I型角蛋白来源的氨基酸序列。
[15]如[14]所述的人造多肽，其中，上述属于Ia簇的I型角蛋白选自由角蛋白25、角蛋白26和角蛋白27组成的组。
[16]如[14]或[15]所述的人造多肽，其中，包含选自由序列号1～16所示的氨基酸序列组成的组中的氨基酸序列。
[17]一种制品，其包含[14]～[16]中任一项所述的人造多肽，所述制品选自由纤维、丝、膜、发泡体、颗粒体、纳米纤丝、凝胶和树脂组成的组。
发明效果
根据本发明，能够提供适合于制造包含角蛋白来源的多肽的多肽纤维的多肽溶液。另外，根据本发明，能够提供使用该多肽溶液的多肽纤维的制造方法。
附图说明
图1是将各种生物来源的K26的氨基酸序列进行比较的比对图。
图2是示出在实施例中利用SDS-PAGE电泳对PRT798(序列号6)、PRT800(序列号7)、PRT801(序列号8)的人造多肽的表达进行分析的结果的照片。
图3是示出在实施例中利用SDS-PAGE电泳对PRT835(序列号9)、PRT838(序列号16)、PRT840(序列号13)、PRT836(序列号10)、PRT837(序列号15)的人造多肽的表达进行分析的结果的照片。
图4是示出在实施例中利用SDS-PAGE电泳对PRT854(序列号12)、PRT855(序列号14)、PRT856(序列号11)的人造多肽的表达进行分析的结果的照片。
图5是示出在实施例中对由PRT798(序列号6)的人造多肽得到的人造多肽纤维(角蛋白型纤维)的机械强度进行测定的结果的图。
图6是示出实施例中由PRT798(序列号6)的人造多肽得到的人造多肽纤维(角蛋白型纤维)的表面和截面的扫描电子显微镜照片。
具体实施方式
以下，对用于实施本发明的方式详细地进行说明。但是，本发明并不限定于以下的实施方式。
[多肽溶液]
本实施方式的多肽溶液是使包含属于Ia簇的I型角蛋白来源的氨基酸序列的多肽溶解于溶剂中而得到的。该溶剂可以为包含甲酸的溶剂、或者包含偶极矩为3.0D以上的非质子性极性溶剂和无机盐的溶剂。另外，本说明书中，“人造多肽”是用于与天然来源的多肽相区分的术语，包括人工地(例如通过基因重组法)制造的多肽。从该意义上来说，该人造多肽可以为具有与天然的氨基酸序列相同的氨基酸序列的多肽，也可以为具有与天然的氨基酸序列不同的氨基酸序列的多肽。
<包含属于Ia簇的I型角蛋白来源的氨基酸序列的多肽>
本发明的多肽包含属于Ia簇的I型角蛋白来源的氨基酸序列(以下也仅称为“本发明的多肽”)。如非专利文献2中所记载的那样，Ia簇是利用邻接法(Neighbor-joiningmethod)对角蛋白的氨基酸序列进行聚类分析时，山羊(Capra hircus)角蛋白25(K25)和角蛋白26(K26)以及绵羊(Ovis aries)角蛋白25(K25)和角蛋白27(K27)所属的I型角蛋白的簇。
本说明书中，“属于Ia簇的I型角蛋白来源的氨基酸序列”包括利用邻接法进行聚类分析时被分类为Ia簇的天然的I型角蛋白的氨基酸序列、和对该天然的I型角蛋白的氨基酸序列进行改造而得到的氨基酸序列。在此，“包含氨基酸序列”包括由该氨基酸序列构成的情况和在该氨基酸序列上进一步附加有其他氨基酸序列的情况。
作为属于Ia簇的(天然的)I型角蛋白的具体例，可以列举角蛋白25(K25)、角蛋白26(K26)和角蛋白27(K27)，优选K26。
图1是将各种生物来源的K26的氨基酸序列进行比较的比对图。如图1所示，山羊(Capra hircus，NP_001272643.1)、牛(Bos taurus，NM_001099096.1)、人(Homo sapiens，BC132951.1)、小鼠(Mus musculus，BC116672.1)、大鼠(Rattus norvegicus，NM_001008823.1)来源的K26的序列一致性极高(括号内为GenBank数据库的编号)，认为其作为蛋白质的性质也极其类似。需要说明的是，图1中，带阴影的残基表示与山羊K26序列一致的残基。位于比对下方的星号表示序列一致性。冒号表示保守性置换，圆点表示非保守性置换。
本发明的多肽只要保有作为角蛋白的性质，也可以为包含进行了相当于在属于Ia簇的(天然的)I型角蛋白的氨基酸序列中置换、缺失、插入和/或添加一个或多个氨基酸残基的改造的氨基酸序列的多肽(以下也称为“改造多肽”)。作为该改造多肽的具体例，可以列举包含序列号1、序列号2、序列号3、序列号4和序列号5所示的氨基酸序列、以及与这些氨基酸序列具有85％以上、优选90％以上、更优选95％以上、进一步优选98％以上、进一步更优选99％以上的序列一致性的氨基酸序列的改造多肽。
本实施方式的改造多肽可以在N末端和C末端中的任意一个末端或两个末端包含标签序列。通过包含标签序列，能够进行该多肽的分离、固定化、检测和可见化等。
作为标签序列，可以列举例如利用与其他分子的特异性亲和性(结合性、affinity)的亲和性标签。作为亲和性标签的具体例，可以列举组氨酸标签(His标签)。His标签是由约4至10个组氨酸残基排列而成的短肽，具有与镍等的金属离子特异性地结合的性质，因此能够用于通过金属螯合层析(chelating metal chromatography)进行的多肽的分离。作为标签序列的具体例，可以列举例如序列号17所示的氨基酸序列(包含His标签的氨基酸序列)。
另外，也可以利用与谷胱甘肽特异性地结合的谷胱甘肽-S-转移酶(GST)、与麦芽糖特异性地结合的麦芽糖结合蛋白(MBP)等作为标签序列。
此外，也可以使用利用抗原抗体反应的“表位标签”作为标签序列。通过附加显示抗原性的肽(表位)作为标签序列，能够使针对该表位的抗体进行结合。作为表位标签，可以列举HA(流感病毒的血凝素的肽序列)标签、myc标签、FLAG标签等。通过利用表位标签，能够以高特异性容易地对多肽进行纯化。
也可以使用进一步利用特定的蛋白酶将标签序列切除而得到的多肽。也可以通过对经由该标签序列吸附的蛋白质进行蛋白酶处理而回收切除标签序列后的多肽。作为这样的包含标签序列的改造多肽，具体而言，可以列举包含序列号6、序列号7、序列号8、序列号9、序列号10、序列号11和序列号12所示的氨基酸序列、以及与这些氨基酸序列具有85％以上、优选90％以上、更优选95％以上、进一步优选98％以上、进一步更优选99％以上的序列一致性的氨基酸序列等的改造多肽。
另外，作为本发明的多肽，也可以使用为了增强多肽纤维的强度而与具有高韧性的蛛丝蛋白融合而成的改造多肽、以及具有插入有作为该蛛丝蛋白的特征之一的多聚A序列的氨基酸序列的改造多肽。作为该改造多肽，具体而言，可以列举包含序列号13、序列号14、序列号15和序列号16所示的氨基酸序列、以及与这些氨基酸序列具有85％以上、优选90％以上、更优选95％以上、进一步优选98％以上、进一步更优选99％以上的序列一致性的氨基酸序列等的改造多肽。
<人造多肽的制造方法>
本实施方式的人造多肽例如可以通过下述方法来生产：利用具有编码本发明的多肽的核酸序列和以能够工作的方式与该核酸序列连接的一个或多个调节序列的表达载体进行转化，对转化后的宿主进行培养，使其增殖而诱导表达该多肽。
(核酸)
编码本发明的多肽的核酸的制造方法没有特别限制。例如，可以通过利用编码天然角蛋白的基因，利用聚合酶链式反应(PCR)等进行扩增、克隆，根据需要利用基因工程的方法进行改造的方法；或者以化学方式进行合成的方法来制造该核酸。另外，核酸的化学合成方法也没有特别限制，例如，可以通过基于由NCBI的网络数据库等获得的角蛋白的氨基酸序列信息，使用PCR等公知的基因工程方法将利用AKTA oligopilot plus 10/100(通用电气医疗日本株式会社)等装置自动合成的寡核苷酸连接的方法来化学合成编码本发明的多肽的基因。
(调节序列)
调节序列是对宿主中的多肽的表达进行调控的序列(例如启动子、增强子、核糖体结合序列、转录终止序列等)，可以根据宿主的种类适当选择。作为启动子，可以使用在宿主细胞中发挥功能、能够诱导表达多肽的诱导性启动子。另外，诱导性启动子是能够根据存在诱导物质(表达诱导剂)、不存在阻遏物分子、或者温度、渗透压或pH值的上升或降低等物理因素对转录进行调控的启动子。
(表达载体和宿主)
表达载体的种类可以根据宿主的种类适当选择例如质粒载体、病毒载体、柯斯质粒(cosmid)载体、福斯质粒(fosmid)载体、人工染色体载体等。作为表达载体，优选使用在宿主细胞中能够自主复制、或者能够整合到宿主的染色体中、且在能够对编码多肽的核酸进行转录的位置含有启动子的表达载体。
作为宿主，原核生物、以及酵母、丝状真菌、昆虫细胞、动物细胞和植物细胞等真核生物均可以优选使用。
作为原核生物的宿主的优选例，可以列举属于埃希氏菌属、短芽孢杆菌属、沙雷氏菌属、芽孢杆菌属、微杆菌属、短杆菌属、棒杆菌属和假单胞菌属等的细菌。作为属于埃希氏菌属的微生物，可以列举例如大肠杆菌(Escherichia coli)等。作为属于短芽孢杆菌属的微生物，可以列举例如土壤短芽孢杆菌(Brevibacillus agri)等。作为属于沙雷氏菌属的微生物，可以列举例如液化沙雷氏菌(Serratia liquefacience)等。作为属于芽孢杆菌属的微生物，可以列举例如枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)等。作为属于微杆菌属的微生物，可以列举例如嗜氨微杆菌(Microbacterium ammoniaphilum)等。作为属于短杆菌属的微生物，可以列举例如叉开短杆菌(Brevivacterium divaricatum)等。作为属于棒杆菌属的微生物，可以列举例如产氨棒杆菌(Corynebacterium ammoniagenes)等。作为属于假单胞菌(Pseudomonas)属的微生物，可以列举例如恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)等。
在以原核生物作为宿主的情况下，作为导入编码本发明的多肽的核酸的表达载体，可以列举例如pBTrp2(Boehringer Mannheim株式会社制造)、pGEX(Pharmacia株式会社制造)、pUC18、pBluescriptII、pSupex、pET22b、pCold、pUB110、pNCO2(日本特开2002-238569号公报)等。
作为真核生物的宿主，可以列举例如酵母和丝状真菌(霉菌等)。作为酵母，可以列举例如属于酵母属、毕赤酵母属、裂殖酵母属等的酵母。作为丝状真菌，可以列举例如属于曲霉属、青霉属、木霉(Trichoderma)属等的丝状真菌。
在以真核生物作为宿主的情况下，作为导入编码本发明的多肽的核酸的表达载体，可以列举例如YEP13(ATCC37115)、YEp24(ATCC37051)等。作为向上述宿主细胞中导入表达载体的方法，只要是将DNA导入上述宿主细胞中的方法则均可以使用。可以列举例如使用钙离子的方法[Proc.Natl.Acad.Sci.USA,69,2110(1972)]、电穿孔法、原生质球法、原生质体法、乙酸锂法、感受态细胞法等。
(人造多肽的制造)
作为利用以表达载体进行了转化的宿主的本发明的多肽的表达方法，除了直接表达以外，还可以依照分子克隆第2版(冷泉港实验室、1989年)中记载的方法等进行分泌生产、融合蛋白质表达等。
此外，本实施方式的人造多肽例如可以通过将利用表达载体进行了转化的宿主在培养用培养基中培养，使该人造多肽在培养用培养基中生成蓄积，并从该培养用培养基中分离和纯化来采集。将宿主在培养用培养基中培养的方法可以按照宿主的培养中通常使用的方法进行。
在被转化的宿主为大肠杆菌等原核生物或酵母等真核生物的情况下，作为培养用培养基，只要是含有该宿主可同化的碳源、氮源和无机盐类等、能够高效地进行该培养的培养基，则可以使用天然培养基、合成培养基中的任意一种。
作为碳源，只要是上述被转化的宿主可同化的碳源即可，可以使用例如葡萄糖、果糖、蔗糖以及含有这些糖的糖蜜、淀粉和淀粉水解物等碳水化合物、乙酸和丙酸等有机酸、以及乙醇和丙醇等醇类。作为氮源，可以使用例如氨、氯化铵、硫酸铵、乙酸铵和磷酸铵等无机酸或有机酸的铵盐、其他含氮化合物、以及蛋白胨、肉提取物、酵母提取物、玉米浆、酪蛋白水解物、豆粕和豆粕水解物、各种发酵菌体及其消化产物。作为无机盐，可以使用例如磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、磷酸镁、硫酸镁、氯化钠、硫酸亚铁、硫酸锰、硫酸铜和碳酸钙。
大肠杆菌等原核生物或酵母等真核生物的培养例如可以在振荡培养或深部通气搅拌培养等需氧条件下进行。培养温度例如为15～40℃。培养时间通常为16小时～7天。培养中的培养用培养基的pH优选保持于3.0～9.0。培养用培养基的pH的调节可以使用无机酸、有机酸、碱溶液、尿素、碳酸钙和氨等进行。
另外，培养中，可以根据需要在培养用培养基中添加氨苄青霉素和四环素等抗生素。此外，在对利用使用诱导性启动子作为启动子的表达载体进行了转化的宿主进行培养时，可以根据需要在该培养用培养基中添加诱导剂。例如，在对利用使用lac启动子的表达载体进行了转化的宿主进行培养时，可以在该培养用培养基中添加异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷等；在对利用使用trp启动子的表达载体进行了转化的宿主进行培养时，可以在该培养用培养基中添加吲哚丙烯酸等。
(人造多肽的分离和纯化)
本实施方式的人造多肽的分离和纯化可以利用通常使用的方法进行。例如，在该人造多肽被分泌到宿主细胞外的情况下，可以从培养上清中回收该人造多肽。即，利用离心分离等方法对包含上述宿主细胞的培养物进行处理，由此获得培养上清，单独或组合使用公知的多肽的分离纯化中通常使用的方法、例如溶剂提取法、利用硫酸铵等的盐析法、脱盐法、利用有机溶剂的沉淀法、使用二乙基氨基乙基(DEAE)-琼脂糖、DIAION HPA-75(三菱化成株式会社制造)等树脂的阴离子交换色谱法、使用S-琼脂糖FF(Pharmacia株式会社制造)等树脂的阳离子交换色谱法、使用丁基琼脂糖、苯基琼脂糖等树脂的疏水性色谱法、使用分子筛的凝胶过滤法、亲和色谱法、聚焦层析法、等电聚焦电泳等电泳法等方法，能够从该培养上清中得到纯化的人造多肽(以下也称为“纯化制备品”)。
另外，在该人造多肽以溶解状态在宿主细胞内进行表达的情况下，在培养结束后，通过离心分离回收该宿主细胞，悬浮于水系缓冲液中后，利用超声波破碎机、弗氏压碎器、Manton-Gaulin匀浆器和戴诺研磨机(DYNO-MILL)等将该宿主细胞破碎，得到无细胞提取液。从通过将该无细胞提取液进一步离心分离而得到的上清中，使用与上述相同的分离纯化法，能够得到纯化制备品。
此外，在该人造多肽在宿主细胞内以颗粒的形式形成不溶体而进行表达的情况下，与上述同样地回收宿主细胞后将其破碎并进行离心分离，由此以沉淀级分的形式回收该人造多肽的颗粒。回收的人造多肽的颗粒可以利用蛋白质变性剂(以下也仅称为“变性剂”)进行可溶化。
在进行可溶化之前，可以利用20mM Tris盐酸缓冲液(pH8.0)等缓冲液、氢氧化钠等碱、碱金属盐、碱土金属盐等的水溶液、含氧酸等对不溶体进行清洗。
作为变性剂，可以列举尿素、硫脲、盐酸胍(胍盐酸盐)、表面活性剂等。在使用尿素或硫脲的情况下，其浓度优选为6～9M。在使用盐酸胍的情况下，其浓度优选为4～8M。另外，作为表面活性剂，可以列举例如SDS，相对于蛋白质1g添加1～2g即可。
在利用变性剂进行溶解处理后，可以利用与上述同样的分离纯化法得到纯化制备品。例如，在使上述颗粒溶解于尿素中后利用有机溶剂使人造多肽沉淀而进行回收、纯化的方法的情况下，可以使用例如三氯乙酸(TCA)溶液、盐酸胍溶液、高氯酸溶液等蛋白质变性剂的水溶液、选自盐酸、硫酸、乙酸、磷酸等酸性物质中的一种以上的水溶液，可以列举丙酮、乙醇等有机溶剂。另外，也可以利用在上述乙醇中含有正丙醇、异丙醇等的有机溶剂。
为了使人造多肽沉淀，可以在使用上述尿素的溶解溶液中添加1～6倍量、优选2～5倍量的上述有机溶剂。
此外，也可以使用偶极矩为3.0D以上的非质子性极性溶剂从表达本实施方式的人造多肽的大肠杆菌的湿菌体或干燥菌体中纯化和提取该人造多肽。另外，也可以使用包含甲酸的溶剂从表达本实施方式的人造多肽的大肠杆菌的湿菌体或干燥菌体中提取该人造多肽。
表1中记载了基于溶剂手册(KODANSHA SCIENTIFIC LTD.、2007年)的偶极矩为3.0D以上的非质子性极性溶剂。
[表1]
有机溶剂 偶极矩(D) 有机溶剂 偶极矩(D)
DMSO 4.30 DMF 3.86
DMI 4.05 DMA 3.72
NMP(环状) 4.09 乙腈 3.44
如表1所示，作为偶极矩为3.0D以上的非质子性极性溶剂，可以列举二甲基亚砜(DMSO)、N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、N,N-二甲基乙酰胺(DMA)、1,3-二甲基-2-咪唑烷酮(DMI)、N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)、乙腈等。
在本实施方式的人造多肽在宿主细胞内以颗粒的形式形成不溶体而进行表达的情况下，该不溶体通常难溶于上述非质子性极性溶剂。因此，通过利用上述非质子性极性溶剂进行处理，能够除去来源于宿主细胞的不要的成分，能够提高该颗粒的纯度。
另外，在已经利用上述方法由宿主细胞以颗粒的形式获得的情况下，通过利用上述非质子性极性溶剂进行处理，能够进一步提高该颗粒的纯度。
在以本实施方式的人造多肽的颗粒的纯化(纯度的提高)为目的的情况下，具体而言，按照达到1～10％(宿主细胞干燥重量(wt)/非质子性极性溶剂(vol))的方式在由宿主细胞获得的颗粒中添加上述非质子性极性溶剂即可。
另外，通过以上述颗粒不发生溶解的程度在上述非质子性极性溶剂中添加无机盐，能够更高效地使来源于宿主细胞的不要的成分溶解。
作为无机盐，可以列举碱金属卤化物、碱土金属卤化物、碱土金属硝酸盐、硫氰酸盐、高氯酸盐等。
作为碱金属卤化物，可以列举例如溴化钾、溴化钠、溴化锂、氯化钾、氯化钠、氯化锂、氟化钠、氟化钾、氟化铯、碘化钾、碘化钠、碘化锂等。
作为碱土金属卤化物，可以列举例如氯化钙、氯化镁、溴化镁、溴化钙、碘化镁、碘化钙等。
作为碱土金属硝酸盐，可以列举例如硝酸钙、硝酸镁、硝酸锶、硝酸钡等。
作为硫氰酸盐，可以列举例如硫氰酸钠、硫氰酸铵、(硫氰酸胍)等。
作为高氯酸盐，可以列举例如高氯酸铵、高氯酸钾、高氯酸钙、高氯酸银、高氯酸钠、高氯酸镁等。
无机盐的添加量(wt)根据所使用的非质子性极性溶剂来决定最佳量即可，没有特别限制，例如，相对于非质子性极性溶剂(vol)的总量，优选为0～3％(wt/vol)。
用于上述颗粒纯化的处理温度根据所添加的无机盐的浓度、目标人造多肽的种类等来决定即可，没有特别限制，例如可以为10～60℃、优选为10～50℃的温度。
本实施方式的人造多肽的颗粒纯化中，关于其处理时间，只要目标人造多肽不发生溶解，则不需要特别限定，若考虑工业性生产，则可以为10～100分钟、优选为10～60分钟、更优选为10～30分钟。
另一方面，通过使用上述包含甲酸的溶剂或以更高浓度添加有无机盐的偶极矩为3.0D以上的非质子性极性溶剂，能够将形成颗粒的不溶性的人造多肽溶解，能够从宿主细胞中进行提取。另外，在该人造多肽中包含半胱氨酸残基的情况下，优选在该溶剂中添加还原剂。
这种情况下，作为偶极矩为3.0D以上的非质子性极性溶剂，可以列举在上述颗粒的纯化中使用的溶剂作为优选的溶剂。
关于无机盐，也可以列举在上述颗粒的纯化中使用的无机盐作为优选的无机盐。可以将上述列举的无机盐分别单独使用，也可以将两种以上组合使用。
无机盐的添加量(wt)根据所使用的非质子性极性溶剂来决定最佳量即可，没有特别限制，例如，相对于非质子性极性溶剂的总量(vol)，优选为0.1～20％(wt/vol)。
另外，作为还原剂，可以列举二硫苏糖醇(DTT)、β-巯基乙醇(BME)、3-巯基-1,2-丙二醇、1,2-乙硫醇、巯基乙酸(TGA)、巯基乙酸铵(ATG)等硫醇类、三(2-羧基乙基)膦盐酸盐(TCEP)、三(羟基丙基)膦(THPP)等膦衍生物、焦亚硫酸钠(SM)等。
还原剂的添加量(wt)没有特别限制，例如，相对于所使用的非质子性极性溶剂(vol)的总量，优选为0.1～10％(wt/vol)、更优选为1～5％。
人造多肽(宿主细胞干燥重量wt)相对于该甲酸等或非质子性极性溶剂的添加量(vol)的比例可以为1～20％(wt/vol)、优选为4～16％、更优选为6～12％。
另外，可以通过进行加温而高效地溶解、提取人造多肽。加温、溶解时的温度根据所添加的溶剂来决定即可，通常为10～90℃、优选为30～85℃、更优选为40～80℃。
处理时间只要是人造多肽能够充分溶解的时间则无需特别限定，若考虑工业性生产率、收率，则通常为20～80分钟、优选为20～70分钟、更优选为20～60分钟。
作为从溶解有人造多肽的非质子性极性溶剂中除去不溶性的级分、回收该人造多肽的方法，使用离心分离、转鼓过滤器和压滤器等过滤器过滤等一般的方法即可。作为离心分离的条件，没有特别限定，可以列举例如室温(20±5℃)、8000×g～15000×g下5～20分钟的条件。在利用过滤器过滤的情况下，通过组合使用Celite、硅藻土等助滤剂、预涂剂，能够高效地回收溶解有本实施方式的多肽的溶剂。不溶物的分离可以进行两次以上。
<多肽溶液的制备方法>
本实施方式的多肽溶液可以如下制备。例如，可以向在偶极矩为3.0D以上的非质子性极性溶剂中添加有无机盐的溶剂中添加本发明的多肽(例如本实施方式的人造多肽)来制备。另外，例如可以向包含甲酸的溶剂中添加本发明的多肽来制备。在本发明的多肽中包含半胱氨酸残基的情况下，优选进一步向该溶剂(特别是在非质子性极性溶剂中添加有无机盐的溶剂)中添加还原剂。
在本实施方式的人造多肽如上所述在溶解于溶剂中的状态下分离和纯化的情况下，通过以使该溶解溶液为下述溶液的方式进行制备，能够作为本实施方式的多肽溶液使用。
作为偶极矩为3.0D以上的非质子性极性溶剂，可以列举人造多肽的分离和纯化中记载的溶剂作为优选的溶剂。
作为无机盐，可以列举人造多肽的分离和纯化中记载的无机盐作为优选的无机盐。可以将这些无机盐分别单独使用，也可以将两种以上组合使用。
作为无机盐相对于溶剂总量的添加量(wt)，根据所使用的非质子性极性溶剂来决定最佳量即可，例如，相对于非质子性极性溶剂(vol)，优选为0.1～20％(wt/vol)、更优选为1～10％(wt/vol)、进一步优选为1～5％(wt/vol)。
作为还原剂，可以列举人造多肽的分离和纯化中记载的还原剂作为优选的还原剂。
作为还原剂相对于溶剂总量的添加量(wt)，例如，相对于非质子性极性溶剂(vol)，优选为0.1～10％(wt/vol)、更优选为1～5％。
包含甲酸的溶剂可以仅由甲酸构成，也可以除了甲酸之外还包含其他溶剂、上述无机盐和/或还原剂。
本发明的多肽的干燥重量(wt)相对于甲酸等或非质子性极性溶剂的添加量(vol)的比例可以为5～35％(wt/vol)、优选为10～30％、更优选为12～28％。
另外，可以通过加温将本发明的多肽高效地溶解。加温、溶解时的温度根据所添加的溶剂来决定即可，可以为10～120℃、优选为30～120℃、更优选为40～120℃。
进行加温时的处理时间(加温时间)只要是本发明的多肽能够充分溶解的时间则无需特别限定，若考虑工业性生产率、收率，则通常为3～80分钟、优选为5～70分钟、更优选为5～60分钟。
<多肽溶液的用途>
本实施方式的多肽溶液可以作为纺丝原液使用。纺丝原液对于纺丝、流延膜液等有用。纺丝原液可以包含不可避免的含有成分、例如在人造多肽的纯化中未被除去的夹杂物等。
纺丝中的纺丝原液的粘度根据纺丝方法适当设定即可，例如在35℃下可以设定为100～15000cP(厘泊)、更优选设定为1000～15000cP、进一步优选设定为1000～10000cP。本实施方式的多肽溶液的粘度的调节例如可以通过调节溶液中的本发明的多肽的浓度和/或温度来进行。多肽溶液的粘度可以使用例如京都电子工业公司制造的商品名“电磁纺丝粘度计”进行测定。
作为纺丝方法，只要是能够将本发明的多肽进行纺丝的方法则没有特别限制，可以列举例如干式纺丝、熔融纺丝、湿式纺丝、干湿式纺丝等。作为优选的纺丝方法，可以列举湿式纺丝或干湿式纺丝。
<干湿式纺丝-拉伸>
(1)干湿式纺丝
在干湿式纺丝中，将本实施方式的多肽溶液(纺丝原液)从喷丝头(喷嘴)挤出至凝固液(凝固液槽)中，在凝固液中使本发明的多肽凝固，由此能够得到丝的形状的未拉伸丝。作为凝固液，只要是能够脱溶剂的溶液即可，可以列举例如甲醇、乙醇和2-丙醇等碳原子数1～5的低级醇、以及丙酮等。可以在凝固液中适当添加水。
凝固液的温度优选为5～30℃。
通过将纺丝原液从喷丝头(喷头)挤出至脱溶剂槽的凝固液中，由本发明的多肽形成纤维，得到未拉伸丝。在具有直径0.1～0.6mm的喷嘴的注射泵的情况下，挤出速度优选为每孔0.2～6.0ml/小时。进一步优选的挤出速度为每孔1.4～4.0ml/小时。
凝固液槽的长度只要是能够高效地进行脱溶剂的长度即可，例如为200～500mm。未拉伸丝的引离速度例如可以为1～20m/分钟、优选为1～3m/分钟。滞留时间例如可以为0.01～3分钟、优选为0.05～0.15分钟。另外，可以在凝固液中进行拉伸(预拉伸)。为了抑制低级醇的蒸发，可以将凝固液维持于低温，在未拉伸丝的状态下进行引离。凝固液槽可以设置多段，并且可以根据需要在各段或特定的段中进行拉伸。未拉伸丝的引离速度优选为1～3m/分钟。
利用上述方法得到的未拉伸丝(或预拉伸丝)可以经过拉伸工序制成拉伸丝(多肽纤维)。
(2)拉伸
作为拉伸方法，可以列举湿热拉伸、干热拉伸、固化浴拉伸等。
干热拉伸可以使用管式电热炉、干热板等进行。作为温度，例如可以为140℃～270℃、优选为160℃～230℃。在干热拉伸中，可以将未拉伸丝(或预拉伸丝)拉伸例如0.5～8倍、优选拉伸1～4倍。
湿热拉伸和干热拉伸可以分别单独进行，另外也可以将它们以多步或组合进行。即，可以以湿热拉伸进行第一步拉伸，以干热拉伸进行第二步拉伸；或者第一步拉伸进行湿热拉伸，第二步拉伸进行湿热拉伸，进一步以干热拉伸进行第三步拉伸等，可以将湿热拉伸和干热拉伸适当组合进行。
拉伸工序中的最终拉伸倍率相对于未拉伸丝(或预拉伸丝)例如为5～20倍、优选为6～11倍。
<制品>
由本发明的人造多肽形成的人造多肽纤维(人造角蛋白纤维)可以以纤维(长纤维、短纤维、复丝或单丝等)或丝(纺织丝、捻丝、假捻丝、加工丝、混纤丝、混纺丝等)的形式应用于机织物、针织物、编结物、无纺布等。另外，也可以应用于绳、手术用缝合线、电气部件用的可挠性把手、以及移植用生理活性材料(例如人工韧带和主动脉带)等高强度用途。这些材料可以依照日本专利第5427322号公报等中记载的方法进行制造。
另外，本发明的人造多肽也可以应用于膜、发泡体、颗粒体(球体或非球体等)、纳米纤丝、凝胶(水凝胶等)、树脂及其等效物，这些材料可以依照日本特开2009-505668号公报、日本专利第5678283号公报、日本专利第4638735号公报等中记载的方法进行制造。
实施例
以下，基于实施例更具体地对本发明进行说明。但是，本发明并不限定于以下的实施例。
[(1)编码人造多肽的核酸的合成和表达载体的构建]
分别合成编码具有序列号6～16所示的氨基酸序列的人造多肽的核酸。将合成的核酸分别克隆至克隆载体(pUC118)中。然后，分别重组到蛋白质表达载体pET-22b(+)中，得到表达载体。
具有序列号6所示的氨基酸序列的人造多肽(PRT798)具有在序列号1所示的山羊(Capra hircus，GenBank登录号：NP_001272643.1)的氨基酸序列的N末端附加序列号17所示的氨基酸序列(标签序列和铰链序列)而得到的氨基酸序列。
具有序列号7所示的氨基酸序列的人造多肽(PRT800)具有将PRT798(序列号6)的半胱氨酸置换为丝氨酸而得到的氨基酸序列。
具有序列号8所示的氨基酸序列的人造多肽(PRT801)具有将PRT798(序列号6)的半胱氨酸置换为苏氨酸而得到的氨基酸序列。
具有序列号9所示的氨基酸序列的人造多肽(PRT835)具有在由PRT798(序列号6)的N末端起第1～292位的氨基酸残基构成的氨基酸序列中使异亮氨酸缺失、并将亮氨酸置换为丙氨酸或甘氨酸而得到的氨基酸序列。
具有序列号10所示的氨基酸序列的人造多肽(PRT836)具有在由PRT798(序列号6)的N末端起第1～292位的氨基酸残基构成的氨基酸序列中使异亮氨酸缺失、并将亮氨酸或缬氨酸置换为丙氨酸或甘氨酸而得到的氨基酸序列。
具有序列号11所示的氨基酸序列的人造多肽(PRT856)具有使PRT835(序列号9)的不包含N末端的标签序列和铰链序列(序列号17)的区域重复而得到的氨基酸序列。
具有序列号12所示的氨基酸序列的人造多肽(PRT854)具有使PRT836(序列号10)的不包含N末端的标签序列和铰链序列(序列号17)的区域重复而得到的氨基酸序列。
具有序列号13所示的氨基酸序列的人造多肽(PRT840)具有在由PRT836(序列号10)的N末端起第1～246位的氨基酸残基构成的氨基酸序列中进行3个氨基酸残基的置换、并通过氨基酸置换插入由GAAAAAG构成的氨基酸序列而得到的氨基酸序列。
具有序列号14所示的氨基酸序列的人造多肽(PRT855)具有使PRT840(序列号13)的不包含N末端的标签序列和铰链序列(序列号17)的区域重复而得到的氨基酸序列。
具有序列号15所示的氨基酸序列的人造多肽(PRT837)具有从N末端起依次融合标签序列和铰链序列(序列号17)、对金纺蜘蛛(Nephila clavipes)的蛛丝蛋白(GenBank登录号：P46804.1、GI：1174415)进行了改造的由142个氨基酸残基构成的氨基酸序列、以及在由PRT798(序列号6)的N末端起第293～427位的氨基酸残基构成的氨基酸序列中将亮氨酸置换为丙氨酸或甘氨酸的氨基酸序列而成的氨基酸序列。
具有序列号16所示的氨基酸序列的人造多肽(PRT838)具有将PRT837(序列号15)的丙氨酸置换为缬氨酸而得到的氨基酸序列。
[(2)人造多肽的表达]
利用(1)中得到的pET-22b(+)表达载体对大肠杆菌BLR(DE3)株进行转化。将该转化后的大肠杆菌株在含有氨苄青霉素的2mL的LB培养基中培养15小时。然后，将该培养液以使OD600达到0.005的方式添加到含有氨苄青霉素的100mL的种子培养用培养基(表2)中。将培养温度保持于30℃，进行烧瓶培养直至OD600达到5为止(约15小时)，得到种子培养液。
[表2]
种子培养用培养基
接着，将该种子培养液以使OD600达到0.05的方式添加到添加有500ml的生产培养基(表3)的发酵罐中，进行主培养。主培养中，将培养温度保持于37℃，将培养基的pH在6.9下控制恒定，将培养基中的溶解氧浓度维持于溶解氧饱和浓度的20％来进行。
[表3]
生产培养基
在上述生产培养基中的葡萄糖被完全消耗后，立即以1ml/分钟的速度添加补料液(葡萄糖455g/1L、酵母提取物120g/1L)。接着，在与补料液添加前相同的条件下继续进行20小时主培养。
然后，向培养液中添加1M的异丙基-β-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)以使终浓度达到1mM，诱导表达目标多肽(具有序列号6～16所示的氨基酸序列的人造多肽)。在添加IPTG后经过20小时的时刻，离心分离该培养液，回收菌体。使用由添加IPTG前和添加IPTG后的培养液制备的菌体进行SDS-PAGE，根据依赖于IPTG添加的目标多肽大小的条带的出现，确认到人造多肽的表达。
图2是示出利用SDS-PAGE电泳对PRT798(序列号6)(分子量54kDa)、PRT800(序列号7)(分子量54kDa)、PRT801(序列号8)(分子量54kDa)的人造多肽的表达进行分析的结果的照片。如图2所示，均能够在由理论分子量推定的位置处检测到。
同样地，图3是示出利用SDS-PAGE电泳对PRT835(序列号9)(分子量30kDa)、PRT838(序列号16)(分子量29kDa)、PRT840(序列号13)(分子量27kDa)、PRT836(序列号10)(分子量29kDa)、PRT837(序列号15)(分子量29kDa)的人造多肽的表达进行分析的结果的照片。如图3所示，这些人造多肽或许是由于疏水性程度高而在高于理论分子量的高分子侧确认到条带。
另外，图4是示出利用SDS-PAGE电泳对PRT854(序列号12)、PRT855(序列号14)、PRT856(序列号11)的人造多肽的表达进行分析的结果的照片。如图4所示，这些人造多肽也同样在高于理论分子量的高分子侧确认到条带。
作为结论，如上设计的任意一种人造多肽均能够高效地进行表达、生产。
[(3)人造多肽纤维的制造]
<人造多肽的纯化>
将分别以不溶体的形式表达上述11种人造多肽的大肠杆菌BLR(DE3)悬浮于在20mM Tris盐酸缓冲液(pH8.0)中添加有100mM的NaCl的溶液中。在该悬浮液中添加脱氧核糖核酸酶(DNase，(SIGMA-ALDRICH制造)0.9μg/g(每1g湿菌体)和溶菌酶(Lysozyme，ThermoFisher Scientific制造)82μg/g(每1g湿菌体)，使用GEA.Niro Soavi公司制造的高压均质器(Panda plus)，在室温、600bar的压力下处理两次，将菌体破碎。破碎后，利用离心分离机(冷冻离心分离机Model7000型、久保田商事株式会社制造)对菌体破碎物进行11000×g、20分钟的处理，获得不溶体。进一步重复进行上述步骤，获得不溶体。
利用20mM Tris-HCl缓冲液(pH7.4)清洗所得到的不溶体，直至达到高纯度为止。将清洗后的不溶体以达到100mg/mL的浓度的方式悬浮在8M胍缓冲液(8M胍盐酸盐、10mM磷酸二氢钠、20mM NaCl、1mM Tris-HCl、pH7.0)中，在60℃下用搅拌器搅拌30分钟，使其溶解。溶解后，使用透析管(三光纯药株式会社制造的纤维素管36/32)在水中进行悬浮液的透析。通过离心分离来回收透析后得到的白色凝集多肽，利用冷冻干燥机除去水分，回收人造多肽的冷冻干燥粉末。
该冷冻干燥粉末的含水率使用混合型卡尔费休水分析装置(MKH-700、京都电子工业株式会社制造)进行测定。
<纺丝原液的制备>
在DMSO溶液中添加LiCl 4％(wt/vol)、DTT 4％(wt/vol)和上述制备的人造多肽的冷冻干燥粉末15％(wt/vol)，在105℃下搅拌30分钟，使人造多肽完全溶解，制备纺丝原液。
该纺丝原液的粘度使用电磁纺丝粘度计(京都电子工业株式会社制造)进行测定。测定在密封下、旋转速度1000rpm的条件下在40～50℃的温度范围进行，所得到的纺丝原液的粘度为1000～1500cP。
<纺丝>
利用网孔尺寸为3μm的金属过滤器对上述制备的纺丝原液溶液进行过滤后，填充到加热至40℃的注射器中，流通氮气，在保持于40℃的状态下脱气1小时。脱气后，从具有直径为0.25mm的喷嘴孔的注射器中将该纺丝原液溶液吐出到100％甲醇凝固浴槽中。吐出时，该注射器的喷嘴前端按照与凝固溶剂的表面之间具有空隙的方式设置。将由凝固得到的纤维从两个水浴槽中通过而进行清洗，并从干热板通过而使其干燥。将所得到的人造多肽纤维(角蛋白型纤维)利用卷绕头卷取。总拉伸倍率为1.7倍。
<人造多肽纤维的物性的测定>
对于上述得到的人造多肽纤维，使用PRT798(序列号6)的人造多肽纤维测定该纤维的物性。
关于人造多肽纤维的机械强度，将该人造多肽纤维在20℃、相对湿度65％的恒温恒湿槽(ESPEC株式会社制造、LHL-113型)中静置24小时后，使用INSTRON(注册商标)的FORCE TRANSDUCER 2519-101进行测定。作为比较例，在同样的条件下对天然羊毛进行测定。
单纤维(filament)的直径分别使用显微镜(株式会社尼康制造、ECLIPSE LV100ND)进行测定。
将结果示于表4和图5。确认到，本发明的人造多肽纤维(角蛋白型纤维)的纤维直径与具有复杂结构的天然羊毛基本同等，机械特性也基本同等。
[表4]
使用扫描电子显微镜(PHENOM(商标)800-07334、Phenom-World)，在加速电压15kV的条件下观察上述得到的人造多肽纤维的表面和截面。将结果示于图6。
序列表
<110> 丝芭博株式会社（Spiber Inc.）
小岛冲压工业株式会社（KOJIMA INDUSTRIES CORPORATION）
<120> 多肽溶液和多肽纤维的制造方法以及人造多肽（A polypeptide solution, amethod for producing a fiber of polypeptide, and an artificial polypeptide）
<130> FP18-0487-00
<150> JP2017-094017
<151> 2017-05-10
<160> 17
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 468
<212> PRT
<213> Capra hircus
<400> 1
Met Ser Phe Arg Leu Ser Gly Val Ser Arg Arg Leu Cys Ser Gln Ala
1 5 10 15
Gly Thr Gly Arg Leu Thr Gly Gly Arg Thr Gly Phe Arg Ala Gly Asn
20 25 30
Val Cys Ser Gly Leu Gly Ala Gly Ser Ser Phe Ser Gly Pro Leu Gly
35 40 45
Ser Val Ser Ser Lys Gly Ser Phe Ser His Gly Gly Gly Gly Leu Gly
50 55 60
Ser Gly Val Cys Thr Gly Phe Leu Glu Asn Glu His Gly Leu Leu Pro
65 70 75 80
Gly Asn Glu Lys Val Thr Leu Gln Asn Leu Asn Asp Arg Leu Ala Ser
85 90 95
Tyr Leu Asp His Val Cys Thr Leu Glu Glu Ala Asn Ala Asp Leu Glu
100 105 110
Gln Lys Ile Lys Gly Trp Tyr Glu Lys Tyr Gly Pro Gly Ser Gly Arg
115 120 125
Gln Leu Ala His Asp Tyr Ser Lys Tyr Phe Ser Val Thr Glu Asp Leu
130 135 140
Lys Arg Gln Ile Ile Ser Val Thr Thr Cys Asn Ala Ser Ile Val Leu
145 150 155 160
Gln Asn Glu Asn Ala Arg Leu Thr Ala Asp Asp Phe Arg Leu Lys Cys
165 170 175
Glu Asn Glu Leu Ala Leu His Gln Ser Val Glu Ala Asp Ile Asn Gly
180 185 190
Leu His Arg Val Met Asp Glu Leu Thr Leu Cys Thr Ser Asp Leu Glu
195 200 205
Met Gln Cys Glu Ala Leu Ser Glu Glu Leu Thr Tyr Leu Lys Lys Asn
210 215 220
His Gln Glu Glu Met Lys Val Met Gln Gly Ala Ala Arg Gly Asn Val
225 230 235 240
Asn Val Glu Ile Asn Ala Ala Pro Gly Val Asp Leu Thr Val Leu Leu
245 250 255
Asn Asn Met Arg Ala Glu Tyr Glu Asp Leu Ala Glu Gln Asn His Glu
260 265 270
Asp Ala Glu Ala Trp Phe Ser Glu Lys Ser Thr Ser Leu His Gln Gln
275 280 285
Ile Ser Asp Asp Ala Gly Ala Ala Met Ala Ala Arg Asn Glu Leu Met
290 295 300
Glu Leu Lys Arg Asn Leu Gln Thr Leu Glu Ile Glu Leu Gln Ser Leu
305 310 315 320
Leu Ala Met Lys His Ser Tyr Glu Cys Ser Leu Ala Glu Thr Glu Ser
325 330 335
Asn Tyr Cys His Gln Leu Gln Gln Ile Gln Glu Gln Ile Gly Ala Met
340 345 350
Glu Asp Gln Leu Gln Gln Ile Arg Met Glu Thr Glu Gly Gln Lys Leu
355 360 365
Glu His Glu Arg Leu Leu Asp Val Lys Ile Phe Leu Glu Lys Glu Ile
370 375 380
Glu Met Tyr Cys Lys Leu Ile Asp Gly Glu Gly Arg Lys Ser Lys Ser
385 390 395 400
Thr Cys Tyr Lys Ser Glu Gly Arg Gly Pro Lys Asn Ser Glu Asn Gln
405 410 415
Val Lys Asp Ser Lys Glu Glu Ala Val Val Lys Thr Val Val Gly Glu
420 425 430
Leu Asp Gln Leu Gly Ser Val Leu Ser Leu Arg Val His Ser Val Glu
435 440 445
Glu Lys Ser Ser Lys Ile Ser Asn Ile Thr Met Glu Gln Arg Leu Pro
450 455 460
Ser Lys Val Pro
465
<210> 2
<211> 469
<212> PRT
<213> Bos taurus
<400> 2
Met Ser Phe Arg Leu Ser Ser Gly Ser Arg Arg Leu Cys Ser Pro Ala
1 5 10 15
Gly Ser Gly Gln Leu Thr Gly Gly Arg Thr Gly Phe Arg Ala Gly Asn
20 25 30
Ala Cys Gly Gly Leu Gly Ala Gly Ser Ser Phe Ser Gly Pro Leu Gly
35 40 45
Ser Val Ser Ser Arg Gly Ser Phe Ser His Gly Gly Gly Gly Leu Gly
50 55 60
Ser Gly Val Cys Thr Gly Phe Leu Glu Asn Glu His Gly Leu Leu Pro
65 70 75 80
Gly Asn Glu Lys Val Thr Leu Gln Asn Leu Asn Asp Arg Leu Ala Ser
85 90 95
Tyr Leu Asp His Val Cys Thr Leu Glu Glu Ala Asn Ala Asp Leu Glu
100 105 110
Gln Lys Ile Lys Gly Trp Tyr Glu Lys Tyr Gly Pro Gly Ser Gly Arg
115 120 125
Gln Leu Ala Tyr Asp Cys Ser Lys Tyr Phe Ser Val Thr Glu Asp Leu
130 135 140
Lys Arg Gln Ile Ile Ser Val Thr Thr Cys Asn Ala Ser Ile Ala Leu
145 150 155 160
Gln Asn Glu Asn Ala Arg Leu Thr Ala Asp Asp Phe Arg Leu Lys Tyr
165 170 175
Glu Asn Glu Leu Ala Leu Asn Gln Ser Val Glu Ala Asp Ile Asn Gly
180 185 190
Leu His Arg Val Met Glu Glu Leu Thr Leu Cys Thr Ser Asp Leu Glu
195 200 205
Ile Gln Cys Glu Ala Leu Ser Glu Glu Leu Thr Cys Leu Lys Lys Asn
210 215 220
His Gln Glu Glu Met Lys Val Met Gln Gly Ala Ala Gly Gly Asn Val
225 230 235 240
Asn Val Glu Ile Asn Ala Ala Pro Gly Val Asp Leu Thr Val Leu Leu
245 250 255
Asn Asn Met Arg Ala Glu Tyr Glu Asp Leu Ala Glu Gln Asn Arg Glu
260 265 270
Asp Ala Glu Ala Trp Phe Asn Glu Lys Ser Thr Ser Leu His Gln Gln
275 280 285
Ile Ser Asp Asp Ala Gly Ala Ala Thr Ala Ala Arg Asn Glu Leu Met
290 295 300
Glu Leu Lys Arg Asn Leu Gln Thr Leu Glu Ile Glu Leu Gln Ser Leu
305 310 315 320
Met Ala Met Lys His Ser Tyr Glu Cys Ser Leu Ala Glu Thr Glu Ser
325 330 335
Asn Tyr Cys His Gln Leu Gln Gln Ile Gln Glu Gln Ile Gly Ala Thr
340 345 350
Glu Asp Gln Leu Gln Gln Ile Arg Met Glu Thr Glu Gly Gln Lys Leu
355 360 365
Glu His Glu Arg Leu Leu Asp Val Lys Ile Phe Leu Glu Lys Glu Ile
370 375 380
Glu Met Tyr Cys Lys Leu Ile Asp Gly Glu Gly Arg Lys Ser Lys Ser
385 390 395 400
Thr Tyr Cys Lys Ser Glu Gly Arg Gly Pro Lys Asn Ser Glu Asn Gln
405 410 415
Val Lys Asp Ser Lys Glu Glu Ala Val Val Lys Thr Val Val Gly Glu
420 425 430
Leu Asp Gln Leu Gly Ser Val Leu Ser Leu Arg Val His Ser Val Glu
435 440 445
Glu Lys Ser Ser Lys Ile Ser Asn Ile Thr Met Glu Gln Arg Leu Pro
450 455 460
Ser Lys Val Pro Gln
465
<210> 3
<211> 468
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 3
Met Ser Phe Arg Leu Ser Gly Gly Ser Arg Arg Ile Cys Ser Arg Thr
1 5 10 15
Gly Ser Gly Arg Leu Ser Gly Gly Gly Thr Gly Phe Val Ala Gly Asn
20 25 30
Val Cys Val Gly Ser Gly Ala Arg Ser Ser Phe Ser Cys Thr Leu Glu
35 40 45
Gly Ile Ser Ser Gly Gly Ser Phe Cys Asn Ser Gly Gly Gly Leu Gly
50 55 60
Ser Gly Ala Cys Ala Gly Phe Leu Gly Asn Glu His Ser Leu Leu Ser
65 70 75 80
Gly Asn Glu Lys Val Thr Met Gln Asn Leu Asn Asp Arg Leu Ala Ser
85 90 95
Tyr Leu Asp His Val His Ala Leu Glu Glu Ala Asn Ala Asp Leu Glu
100 105 110
Gln Lys Ile Lys Gly Trp Tyr Glu Lys Cys Glu Pro Gly Ser Ser Arg
115 120 125
Glu His Asp His Asp Tyr Ser Arg Tyr Phe Ser Val Ile Glu Asp Leu
130 135 140
Lys Arg Gln Ile Ile Ser Ala Thr Ile Cys Asn Ala Ser Ile Val Leu
145 150 155 160
Gln Asn Asp Asn Ala Arg Leu Thr Ala Asp Asp Phe Arg Leu Lys Tyr
165 170 175
Glu Asn Glu Leu Ala Leu His His Ser Val Glu Ala Asp Thr Ser Gly
180 185 190
Leu Arg Arg Val Leu Asp Glu Leu Thr Leu Cys Thr Thr Asp Leu Glu
195 200 205
Ile Gln Cys Glu Thr Leu Ser Glu Glu Leu Thr Tyr Leu Lys Lys Ser
210 215 220
His Glu Glu Glu Met Glu Val Leu Gln Tyr Thr Ala Gly Gly Asn Val
225 230 235 240
Asn Val Glu Met Asn Ala Thr Pro Gly Val Asp Leu Thr Val Leu Leu
245 250 255
Asn Asn Met Arg Ala Glu Tyr Glu Asp Leu Ala Glu Gln Asn Arg Lys
260 265 270
Asp Ala Glu Ala Trp Phe Asn Glu Arg Ser Ala Thr Leu Gln Gln Gln
275 280 285
Ile Ser Asp His Glu Gly Ala Ala Thr Ala Ala Arg Asn Glu Leu Thr
290 295 300
Glu Leu Lys Arg Asn Leu Gln Thr Leu Glu Ile Glu Leu Gln Ser Leu
305 310 315 320
Met Ala Val Lys His Ser Tyr Glu Cys Ser Leu Ala Glu Thr Glu Gly
325 330 335
Asn Tyr Cys Asn Gln Leu Gln Gln Ile Gln Asp Gln Ile Gly Val Met
340 345 350
Glu Glu Gln Leu Gln Gln Ile Arg Thr Glu Thr Glu Gly Gln Lys Leu
355 360 365
Glu Tyr Glu Gln Leu Leu Asp Val Lys Ile Phe Leu Glu Lys Glu Ile
370 375 380
Asp Ile Tyr Cys Asn Leu Leu Asp Gly Glu Glu Arg Lys Ser Lys Ser
385 390 395 400
Thr Cys Tyr Lys Ser Lys Gly Tyr Arg Pro Val Asn Ser Gly Asn Gln
405 410 415
Ala Lys Asp Ser Thr Glu Glu Thr Ile Val Lys Thr Val Val Glu Glu
420 425 430
Leu Asp Gln Ile Gly Asn Leu Leu Ser Leu Arg Val His Ser Val Glu
435 440 445
Glu Lys Ser Ser Lys Ile Ser Asn Ile Thr Val Glu Gln Arg Val Pro
450 455 460
Ser Lys Ala Pro
465
<210> 4
<211> 462
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 4
Met Ser Phe Arg Phe Ser Gly Arg Ser Arg Val Cys Ser Arg Ala Gly
1 5 10 15
Ser Val Arg Leu Ser Arg Gly Gly Ala Gly Phe Val Ala Gly Asn Val
20 25 30
Cys Val Gly Pro Gly Ala Glu Gly Ser Phe Ser Cys Thr Leu Gly Gly
35 40 45
Leu Ser Ser Gly Gly Ser Phe Ala Ser Glu Gly Ser Gly Arg Gly Ser
50 55 60
Ser Ile Gly Phe Leu Asn Asn Glu Pro Gly Leu Phe Ser Gly Asn Glu
65 70 75 80
Lys Val Ala Met Gln Asn Leu Asn Asp Arg Leu Ala Leu Tyr Leu Asn
85 90 95
His Val Ser Ala Leu Glu Glu Ala Asn Thr Asp Leu Glu Lys Lys Ile
100 105 110
Glu Gly Trp Tyr Glu Lys Cys Gly Pro Gly Arg Gly Arg Arg Leu Asp
115 120 125
His Asp Cys Ser Arg Tyr Phe Ser Val Ile Glu Asp Leu Lys Arg Gln
130 135 140
Ile Leu Ser Met Thr Thr Cys Asn Ala Asn Leu Val Leu Gln Asn Asp
145 150 155 160
Asn Ala Arg Leu Thr Ala Asp Asp Phe Lys Met Lys Tyr Glu Asn Glu
165 170 175
Leu Ala Leu His Gln Ser Val Glu Ala Asp Thr Asn Gly Leu Arg Arg
180 185 190
Val Leu Asp Glu Leu Thr Leu Ser Thr Thr Asp Leu Glu Ile Gln Arg
195 200 205
Glu Ala Leu Ser Glu Glu Leu Thr Tyr Leu Gln Lys Asn His Glu Glu
210 215 220
Glu Met Val Val Leu Gln Asn Ala Ser Gly Gly Asn Ile Asn Val Glu
225 230 235 240
Met Asn Ala Ala Pro Ser Val Asp Leu Thr Ala Met Leu Asn Asn Met
245 250 255
Arg Ala Glu Tyr Glu Asp Leu Ala Glu Gln Asn Arg Lys Asp Ala Glu
260 265 270
Ala Ser Phe Lys Glu Lys Ser Ala Ser Leu Gln Gln Gln Ile Ser Asp
275 280 285
Asp Ala Gly Ala Ala Thr Ala Ala Arg Asn Glu Leu Met Glu Leu Lys
290 295 300
Arg Asn Leu Gln Thr Leu Glu Ile Glu Leu Gln Ser Ile Thr Ala Met
305 310 315 320
Lys Gln Ser Tyr Glu Asn Ser Leu Ala Glu Thr Glu Gly Asn Tyr Tyr
325 330 335
Ala Gln Leu Gln Gln Ile Gln Glu Gln Ile Gly Ala Arg Glu Glu Gln
340 345 350
Leu Gln Gln Ile Arg Thr Glu Thr Glu Gly Gln Lys Leu Glu His Glu
355 360 365
Gln Leu Leu Gly Ile Lys Thr Cys Leu Glu Lys Glu Ile Asp Thr Tyr
370 375 380
Cys Asn Leu Leu Asp Gly Glu Glu Gln Arg Ser Glu Ser Thr Ser Tyr
385 390 395 400
Lys Pro Lys Asp Gly Lys Pro Ala Ser Glu Phe Asn Asp Ser Ala Glu
405 410 415
Glu Thr Phe Ala Arg Thr Val Ala Glu Glu Leu Asp Gln Leu Gly Asn
420 425 430
Leu Leu Ser Leu Arg Val His Ser Val Glu Glu Lys Ser Ser Lys Ile
435 440 445
Ser Asn Ile Thr Met Glu Gln Arg Val Pro Ser Lys Ala Pro
450 455 460
<210> 5
<211> 430
<212> PRT
<213> Rattus norvegicus
<400> 5
Met Ser Phe Arg Phe Ser Gly Gly Ser Arg Val Cys Ser Arg Ala Gly
1 5 10 15
Ser Val Arg Leu Ser Arg Gly Gly Ala Gly Phe Val Ala Gly Asn Val
20 25 30
Cys Val Gly Pro Gly Ala Glu Ser Ser Phe Ser Cys Thr Leu Ala Gly
35 40 45
Ile Ser Ser Gly Gly Ser Phe Gly Asn Glu Gly Ser Ser Arg Gly Asn
50 55 60
Ser Val Gly Phe Ile Asn Asn Glu Pro Gly Leu Phe Ser Gly Asn Glu
65 70 75 80
Lys Val Ala Met Gln Asn Leu Asn Asp Arg Leu Ala Leu Tyr Leu Asn
85 90 95
His Val Ser Ser Leu Glu Glu Ala Asn Thr Asp Leu Glu Lys Lys Ile
100 105 110
Glu Asp Trp Tyr Glu Lys Cys Arg Pro Gly Lys Gly Arg Arg Leu Asp
115 120 125
His Asp Cys Ser Arg Tyr Phe Pro Val Ile Glu Asp Leu Lys Arg Gln
130 135 140
Ile Leu Ser Met Thr Thr Cys Asn Ala Asn Leu Val Leu Gln Asn Asp
145 150 155 160
Asn Ala Arg Leu Thr Ala Asp Asp Phe Lys Met Lys His Gln Ser Val
165 170 175
Glu Ala Asp Thr Asn Gly Leu Arg Arg Val Leu Asp Glu Leu Thr Leu
180 185 190
Ser Thr Thr Asp Leu Glu Ile Gln Arg Glu Ala Leu Ser Glu Glu Leu
195 200 205
Thr Tyr Leu Gln Lys Asn His Glu Glu Asn Ala Ser Gly Gly Asn Ile
210 215 220
Asn Val Glu Met Asn Ala Ala Pro Gly Leu Asp Leu Thr Ala Met Leu
225 230 235 240
Asn Asn Met Arg Ala Glu Tyr Glu Asp Leu Ala Glu Gln Asn Arg Lys
245 250 255
Asp Ala Glu Ala Ser Phe Lys Glu Lys Ser Ala Ser Leu Gln Gln Gln
260 265 270
Ile Ser Asp Asp Ala Gly Ala Ile Thr Ala Ala Arg Asn Glu Leu Met
275 280 285
Glu Leu Lys Arg Asn Leu Gln Thr Leu Glu Ile Glu Leu Gln Ser Ile
290 295 300
Thr Ala Met Lys Gln Ser Tyr Glu Ser Ser Leu Ala Glu Thr Glu Gly
305 310 315 320
Asn Tyr Tyr Ala Gln Leu Gln Gln Ile Gln Glu Gln Ile Gly Leu Arg
325 330 335
Glu Glu Gln Leu Gln Gln Thr Arg Thr Glu Thr Glu Ser Gln Lys Leu
340 345 350
Glu His Glu Gln Leu Leu Gly Ile Lys Thr Cys Leu Glu Lys Glu Ile
355 360 365
Asp Thr Tyr Cys Asn Leu Leu Asp Arg Glu Glu Gln Asp Ser Ala Glu
370 375 380
Glu Thr Phe Ala Arg Thr Val Ala Glu Glu Leu Asp Gln Leu Gly Asn
385 390 395 400
Leu Leu Ser Leu Arg Val His Ser Val Glu Glu Lys Ser Ser Lys Ile
405 410 415
Ser Asn Ile Thr Met Glu Gln Trp Leu Pro Ser Lys Ala Pro
420 425 430
<210> 6
<211> 487
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> PRT798
<400> 6
Met His His His His His His Ser Ser Gly Ser Ser Leu Glu Val Leu
1 5 10 15
Phe Gln Gly Pro Ser Phe Arg Leu Ser Gly Val Ser Arg Arg Leu Cys
20 25 30
Ser Gln Ala Gly Thr Gly Arg Leu Thr Gly Gly Arg Thr Gly Phe Arg
35 40 45
Ala Gly Asn Val Cys Ser Gly Leu Gly Ala Gly Ser Ser Phe Ser Gly
50 55 60
Pro Leu Gly Ser Val Ser Ser Lys Gly Ser Phe Ser His Gly Gly Gly
65 70 75 80
Gly Leu Gly Ser Gly Val Cys Thr Gly Phe Leu Glu Asn Glu His Gly
85 90 95
Leu Leu Pro Gly Asn Glu Lys Val Thr Leu Gln Asn Leu Asn Asp Arg
100 105 110
Leu Ala Ser Tyr Leu Asp His Val Cys Thr Leu Glu Glu Ala Asn Ala
115 120 125
Asp Leu Glu Gln Lys Ile Lys Gly Trp Tyr Glu Lys Tyr Gly Pro Gly
130 135 140
Ser Gly Arg Gln Leu Ala His Asp Tyr Ser Lys Tyr Phe Ser Val Thr
145 150 155 160
Glu Asp Leu Lys Arg Gln Ile Ile Ser Val Thr Thr Cys Asn Ala Ser
165 170 175
Ile Val Leu Gln Asn Glu Asn Ala Arg Leu Thr Ala Asp Asp Phe Arg
180 185 190
Leu Lys Cys Glu Asn Glu Leu Ala Leu His Gln Ser Val Glu Ala Asp
195 200 205
Ile Asn Gly Leu His Arg Val Met Asp Glu Leu Thr Leu Cys Thr Ser
210 215 220
Asp Leu Glu Met Gln Cys Glu Ala Leu Ser Glu Glu Leu Thr Tyr Leu
225 230 235 240
Lys Lys Asn His Gln Glu Glu Met Lys Val Met Gln Gly Ala Ala Arg
245 250 255
Gly Asn Val Asn Val Glu Ile Asn Ala Ala Pro Gly Val Asp Leu Thr
260 265 270
Val Leu Leu Asn Asn Met Arg Ala Glu Tyr Glu Asp Leu Ala Glu Gln
275 280 285
Asn His Glu Asp Ala Glu Ala Trp Phe Ser Glu Lys Ser Thr Ser Leu
290 295 300
His Gln Gln Ile Ser Asp Asp Ala Gly Ala Ala Met Ala Ala Arg Asn
305 310 315 320
Glu Leu Met Glu Leu Lys Arg Asn Leu Gln Thr Leu Glu Ile Glu Leu
325 330 335
Gln Ser Leu Leu Ala Met Lys His Ser Tyr Glu Cys Ser Leu Ala Glu
340 345 350
Thr Glu Ser Asn Tyr Cys His Gln Leu Gln Gln Ile Gln Glu Gln Ile
355 360 365
Gly Ala Met Glu Asp Gln Leu Gln Gln Ile Arg Met Glu Thr Glu Gly
370 375 380
Gln Lys Leu Glu His Glu Arg Leu Leu Asp Val Lys Ile Phe Leu Glu
385 390 395 400
Lys Glu Ile Glu Met Tyr Cys Lys Leu Ile Asp Gly Glu Gly Arg Lys
405 410 415
Ser Lys Ser Thr Cys Tyr Lys Ser Glu Gly Arg Gly Pro Lys Asn Ser
420 425 430
Glu Asn Gln Val Lys Asp Ser Lys Glu Glu Ala Val Val Lys Thr Val
435 440 445
Val Gly Glu Leu Asp Gln Leu Gly Ser Val Leu Ser Leu Arg Val His
450 455 460
Ser Val Glu Glu Lys Ser Ser Lys Ile Ser Asn Ile Thr Met Glu Gln
465 470 475 480
Arg Leu Pro Ser Lys Val Pro
485
<210> 7
<211> 487
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PRT800
<400> 7
Met His His His His His His Ser Ser Gly Ser Ser Leu Glu Val Leu
1 5 10 15
Phe Gln Gly Pro Ser Phe Arg Leu Ser Gly Val Ser Arg Arg Leu Ser
20 25 30
Ser Gln Ala Gly Thr Gly Arg Leu Thr Gly Gly Arg Thr Gly Phe Arg
35 40 45
Ala Gly Asn Val Ser Ser Gly Leu Gly Ala Gly Ser Ser Phe Ser Gly
50 55 60
Pro Leu Gly Ser Val Ser Ser Lys Gly Ser Phe Ser His Gly Gly Gly
65 70 75 80
Gly Leu Gly Ser Gly Val Ser Thr Gly Phe Leu Glu Asn Glu His Gly
85 90 95
Leu Leu Pro Gly Asn Glu Lys Val Thr Leu Gln Asn Leu Asn Asp Arg
100 105 110
Leu Ala Ser Tyr Leu Asp His Val Ser Thr Leu Glu Glu Ala Asn Ala
115 120 125
Asp Leu Glu Gln Lys Ile Lys Gly Trp Tyr Glu Lys Tyr Gly Pro Gly
130 135 140
Ser Gly Arg Gln Leu Ala His Asp Tyr Ser Lys Tyr Phe Ser Val Thr
145 150 155 160
Glu Asp Leu Lys Arg Gln Ile Ile Ser Val Thr Thr Ser Asn Ala Ser
165 170 175
Ile Val Leu Gln Asn Glu Asn Ala Arg Leu Thr Ala Asp Asp Phe Arg
180 185 190
Leu Lys Ser Glu Asn Glu Leu Ala Leu His Gln Ser Val Glu Ala Asp
195 200 205
Ile Asn Gly Leu His Arg Val Met Asp Glu Leu Thr Leu Ser Thr Ser
210 215 220
Asp Leu Glu Met Gln Ser Glu Ala Leu Ser Glu Glu Leu Thr Tyr Leu
225 230 235 240
Lys Lys Asn His Gln Glu Glu Met Lys Val Met Gln Gly Ala Ala Arg
245 250 255
Gly Asn Val Asn Val Glu Ile Asn Ala Ala Pro Gly Val Asp Leu Thr
260 265 270
Val Leu Leu Asn Asn Met Arg Ala Glu Tyr Glu Asp Leu Ala Glu Gln
275 280 285
Asn His Glu Asp Ala Glu Ala Trp Phe Ser Glu Lys Ser Thr Ser Leu
290 295 300
His Gln Gln Ile Ser Asp Asp Ala Gly Ala Ala Met Ala Ala Arg Asn
305 310 315 320
Glu Leu Met Glu Leu Lys Arg Asn Leu Gln Thr Leu Glu Ile Glu Leu
325 330 335
Gln Ser Leu Leu Ala Met Lys His Ser Tyr Glu Ser Ser Leu Ala Glu
340 345 350
Thr Glu Ser Asn Tyr Ser His Gln Leu Gln Gln Ile Gln Glu Gln Ile
355 360 365
Gly Ala Met Glu Asp Gln Leu Gln Gln Ile Arg Met Glu Thr Glu Gly
370 375 380
Gln Lys Leu Glu His Glu Arg Leu Leu Asp Val Lys Ile Phe Leu Glu
385 390 395 400
Lys Glu Ile Glu Met Tyr Ser Lys Leu Ile Asp Gly Glu Gly Arg Lys
405 410 415
Ser Lys Ser Thr Ser Tyr Lys Ser Glu Gly Arg Gly Pro Lys Asn Ser
420 425 430
Glu Asn Gln Val Lys Asp Ser Lys Glu Glu Ala Val Val Lys Thr Val
435 440 445
Val Gly Glu Leu Asp Gln Leu Gly Ser Val Leu Ser Leu Arg Val His
450 455 460
Ser Val Glu Glu Lys Ser Ser Lys Ile Ser Asn Ile Thr Met Glu Gln
465 470 475 480
Arg Leu Pro Ser Lys Val Pro
485
<210> 8
<211> 487
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PRT801
<400> 8
Met His His His His His His Ser Ser Gly Ser Ser Leu Glu Val Leu
1 5 10 15
Phe Gln Gly Pro Ser Phe Arg Leu Ser Gly Val Ser Arg Arg Leu Thr
20 25 30
Ser Gln Ala Gly Thr Gly Arg Leu Thr Gly Gly Arg Thr Gly Phe Arg
35 40 45
Ala Gly Asn Val Thr Ser Gly Leu Gly Ala Gly Ser Ser Phe Ser Gly
50 55 60
Pro Leu Gly Ser Val Ser Ser Lys Gly Ser Phe Ser His Gly Gly Gly
65 70 75 80
Gly Leu Gly Ser Gly Val Thr Thr Gly Phe Leu Glu Asn Glu His Gly
85 90 95
Leu Leu Pro Gly Asn Glu Lys Val Thr Leu Gln Asn Leu Asn Asp Arg
100 105 110
Leu Ala Ser Tyr Leu Asp His Val Thr Thr Leu Glu Glu Ala Asn Ala
115 120 125
Asp Leu Glu Gln Lys Ile Lys Gly Trp Tyr Glu Lys Tyr Gly Pro Gly
130 135 140
Ser Gly Arg Gln Leu Ala His Asp Tyr Ser Lys Tyr Phe Ser Val Thr
145 150 155 160
Glu Asp Leu Lys Arg Gln Ile Ile Ser Val Thr Thr Thr Asn Ala Ser
165 170 175
Ile Val Leu Gln Asn Glu Asn Ala Arg Leu Thr Ala Asp Asp Phe Arg
180 185 190
Leu Lys Thr Glu Asn Glu Leu Ala Leu His Gln Ser Val Glu Ala Asp
195 200 205
Ile Asn Gly Leu His Arg Val Met Asp Glu Leu Thr Leu Thr Thr Ser
210 215 220
Asp Leu Glu Met Gln Thr Glu Ala Leu Ser Glu Glu Leu Thr Tyr Leu
225 230 235 240
Lys Lys Asn His Gln Glu Glu Met Lys Val Met Gln Gly Ala Ala Arg
245 250 255
Gly Asn Val Asn Val Glu Ile Asn Ala Ala Pro Gly Val Asp Leu Thr
260 265 270
Val Leu Leu Asn Asn Met Arg Ala Glu Tyr Glu Asp Leu Ala Glu Gln
275 280 285
Asn His Glu Asp Ala Glu Ala Trp Phe Ser Glu Lys Ser Thr Ser Leu
290 295 300
His Gln Gln Ile Ser Asp Asp Ala Gly Ala Ala Met Ala Ala Arg Asn
305 310 315 320
Glu Leu Met Glu Leu Lys Arg Asn Leu Gln Thr Leu Glu Ile Glu Leu
325 330 335
Gln Ser Leu Leu Ala Met Lys His Ser Tyr Glu Thr Ser Leu Ala Glu
340 345 350
Thr Glu Ser Asn Tyr Thr His Gln Leu Gln Gln Ile Gln Glu Gln Ile
355 360 365
Gly Ala Met Glu Asp Gln Leu Gln Gln Ile Arg Met Glu Thr Glu Gly
370 375 380
Gln Lys Leu Glu His Glu Arg Leu Leu Asp Val Lys Ile Phe Leu Glu
385 390 395 400
Lys Glu Ile Glu Met Tyr Thr Lys Leu Ile Asp Gly Glu Gly Arg Lys
405 410 415
Ser Lys Ser Thr Thr Tyr Lys Ser Glu Gly Arg Gly Pro Lys Asn Ser
420 425 430
Glu Asn Gln Val Lys Asp Ser Lys Glu Glu Ala Val Val Lys Thr Val
435 440 445
Val Gly Glu Leu Asp Gln Leu Gly Ser Val Leu Ser Leu Arg Val His
450 455 460
Ser Val Glu Glu Lys Ser Ser Lys Ile Ser Asn Ile Thr Met Glu Gln
465 470 475 480
Arg Leu Pro Ser Lys Val Pro
485
<210> 9
<211> 289
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PRT835
<400> 9
Met His His His His His His Ser Ser Gly Ser Ser Gly Glu Val Ala
1 5 10 15
Phe Gln Gly Pro Ser Phe Arg Gly Ser Gly Val Ser Arg Arg Ala Cys
20 25 30
Ser Gln Ala Gly Thr Gly Arg Gly Thr Gly Gly Arg Thr Gly Phe Arg
35 40 45
Ala Gly Asn Val Cys Ser Gly Ala Gly Ala Gly Ser Ser Phe Ser Gly
50 55 60
Pro Gly Gly Ser Val Ser Ser Lys Gly Ser Phe Ser His Gly Gly Gly
65 70 75 80
Gly Ala Gly Ser Gly Val Cys Thr Gly Phe Gly Glu Asn Glu His Gly
85 90 95
Ala Ala Pro Gly Asn Glu Lys Val Thr Gly Gln Asn Ala Asn Asp Arg
100 105 110
Gly Ala Ser Tyr Ala Asp His Val Cys Thr Gly Glu Glu Ala Asn Ala
115 120 125
Asp Ala Glu Gln Lys Ile Lys Gly Trp Tyr Glu Lys Tyr Gly Pro Gly
130 135 140
Ser Gly Arg Gln Gly Ala His Asp Tyr Ser Lys Tyr Phe Ser Val Thr
145 150 155 160
Glu Asp Ala Lys Arg Gln Ser Val Thr Thr Cys Asn Ala Ser Val Gly
165 170 175
Gln Asn Glu Asn Ala Arg Ala Thr Ala Asp Asp Phe Arg Gly Lys Cys
180 185 190
Glu Asn Glu Ala Ala Gly His Gln Ser Val Glu Ala Asp Ile Asn Gly
195 200 205
Ala His Arg Val Met Asp Glu Gly Thr Ala Cys Thr Ser Asp Gly Glu
210 215 220
Met Gln Cys Glu Ala Ala Ser Glu Glu Gly Thr Tyr Ala Lys Lys Asn
225 230 235 240
His Gln Glu Glu Met Lys Val Met Gln Gly Ala Ala Arg Gly Asn Val
245 250 255
Asn Val Glu Ile Asn Ala Ala Pro Gly Val Asp Gly Thr Val Ala Gly
260 265 270
Asn Asn Met Arg Ala Glu Tyr Glu Asp Ala Ala Glu Gln Asn His Glu
275 280 285
Asp
<210> 10
<211> 289
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PRT836
<400> 10
Met His His His His His His Ser Ser Gly Ser Ser Gly Glu Gly Ala
1 5 10 15
Phe Gln Gly Pro Ser Phe Arg Gly Ser Gly Ala Ser Arg Arg Ala Cys
20 25 30
Ser Gln Ala Gly Thr Gly Arg Gly Thr Gly Gly Arg Thr Gly Phe Arg
35 40 45
Ala Gly Asn Gly Cys Ser Gly Ala Gly Ala Gly Ser Ser Phe Ser Gly
50 55 60
Pro Gly Gly Ser Ala Ser Ser Lys Gly Ser Phe Ser His Gly Gly Gly
65 70 75 80
Gly Ala Gly Ser Gly Gly Cys Thr Gly Phe Gly Glu Asn Glu His Gly
85 90 95
Ala Ala Pro Gly Asn Glu Lys Ala Thr Gly Gln Asn Ala Asn Asp Arg
100 105 110
Gly Ala Ser Tyr Ala Asp His Gly Cys Thr Gly Glu Glu Ala Asn Ala
115 120 125
Asp Ala Glu Gln Lys Ile Lys Gly Trp Tyr Glu Lys Tyr Gly Pro Gly
130 135 140
Ser Gly Arg Gln Gly Ala His Asp Tyr Ser Lys Tyr Phe Ser Ala Thr
145 150 155 160
Glu Asp Ala Lys Arg Gln Ser Gly Thr Thr Cys Asn Ala Ser Gly Gly
165 170 175
Gln Asn Glu Asn Ala Arg Ala Thr Ala Asp Asp Phe Arg Gly Lys Cys
180 185 190
Glu Asn Glu Ala Ala Gly His Gln Ser Ala Glu Ala Asp Ile Asn Gly
195 200 205
Ala His Arg Gly Met Asp Glu Gly Thr Ala Cys Thr Ser Asp Gly Glu
210 215 220
Met Gln Cys Glu Ala Ala Ser Glu Glu Gly Thr Tyr Ala Lys Lys Asn
225 230 235 240
His Gln Glu Glu Met Lys Ala Met Gln Gly Ala Ala Arg Gly Asn Gly
245 250 255
Asn Ala Glu Ile Asn Ala Ala Pro Gly Gly Asp Gly Thr Ala Ala Gly
260 265 270
Asn Asn Met Arg Ala Glu Tyr Glu Asp Ala Ala Glu Gln Asn His Glu
275 280 285
Asp
<210> 11
<211> 558
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PR856
<400> 11
Met His His His His His His Ser Ser Gly Ser Ser Gly Glu Val Ala
1 5 10 15
Phe Gln Gly Pro Ser Phe Arg Gly Ser Gly Val Ser Arg Arg Ala Cys
20 25 30
Ser Gln Ala Gly Thr Gly Arg Gly Thr Gly Gly Arg Thr Gly Phe Arg
35 40 45
Ala Gly Asn Val Cys Ser Gly Ala Gly Ala Gly Ser Ser Phe Ser Gly
50 55 60
Pro Gly Gly Ser Val Ser Ser Lys Gly Ser Phe Ser His Gly Gly Gly
65 70 75 80
Gly Ala Gly Ser Gly Val Cys Thr Gly Phe Gly Glu Asn Glu His Gly
85 90 95
Ala Ala Pro Gly Asn Glu Lys Val Thr Gly Gln Asn Ala Asn Asp Arg
100 105 110
Gly Ala Ser Tyr Ala Asp His Val Cys Thr Gly Glu Glu Ala Asn Ala
115 120 125
Asp Ala Glu Gln Lys Ile Lys Gly Trp Tyr Glu Lys Tyr Gly Pro Gly
130 135 140
Ser Gly Arg Gln Gly Ala His Asp Tyr Ser Lys Tyr Phe Ser Val Thr
145 150 155 160
Glu Asp Ala Lys Arg Gln Ser Val Thr Thr Cys Asn Ala Ser Val Gly
165 170 175
Gln Asn Glu Asn Ala Arg Ala Thr Ala Asp Asp Phe Arg Gly Lys Cys
180 185 190
Glu Asn Glu Ala Ala Gly His Gln Ser Val Glu Ala Asp Ile Asn Gly
195 200 205
Ala His Arg Val Met Asp Glu Gly Thr Ala Cys Thr Ser Asp Gly Glu
210 215 220
Met Gln Cys Glu Ala Ala Ser Glu Glu Gly Thr Tyr Ala Lys Lys Asn
225 230 235 240
His Gln Glu Glu Met Lys Val Met Gln Gly Ala Ala Arg Gly Asn Val
245 250 255
Asn Val Glu Ile Asn Ala Ala Pro Gly Val Asp Gly Thr Val Ala Gly
260 265 270
Asn Asn Met Arg Ala Glu Tyr Glu Asp Ala Ala Glu Gln Asn His Glu
275 280 285
Asp Ser Phe Arg Gly Ser Gly Val Ser Arg Arg Ala Cys Ser Gln Ala
290 295 300
Gly Thr Gly Arg Gly Thr Gly Gly Arg Thr Gly Phe Arg Ala Gly Asn
305 310 315 320
Val Cys Ser Gly Ala Gly Ala Gly Ser Ser Phe Ser Gly Pro Gly Gly
325 330 335
Ser Val Ser Ser Lys Gly Ser Phe Ser His Gly Gly Gly Gly Ala Gly
340 345 350
Ser Gly Val Cys Thr Gly Phe Gly Glu Asn Glu His Gly Ala Ala Pro
355 360 365
Gly Asn Glu Lys Val Thr Gly Gln Asn Ala Asn Asp Arg Gly Ala Ser
370 375 380
Tyr Ala Asp His Val Cys Thr Gly Glu Glu Ala Asn Ala Asp Ala Glu
385 390 395 400
Gln Lys Ile Lys Gly Trp Tyr Glu Lys Tyr Gly Pro Gly Ser Gly Arg
405 410 415
Gln Gly Ala His Asp Tyr Ser Lys Tyr Phe Ser Val Thr Glu Asp Ala
420 425 430
Lys Arg Gln Ser Val Thr Thr Cys Asn Ala Ser Val Gly Gln Asn Glu
435 440 445
Asn Ala Arg Ala Thr Ala Asp Asp Phe Arg Gly Lys Cys Glu Asn Glu
450 455 460
Ala Ala Gly His Gln Ser Val Glu Ala Asp Ile Asn Gly Ala His Arg
465 470 475 480
Val Met Asp Glu Gly Thr Ala Cys Thr Ser Asp Gly Glu Met Gln Cys
485 490 495
Glu Ala Ala Ser Glu Glu Gly Thr Tyr Ala Lys Lys Asn His Gln Glu
500 505 510
Glu Met Lys Val Met Gln Gly Ala Ala Arg Gly Asn Val Asn Val Glu
515 520 525
Ile Asn Ala Ala Pro Gly Val Asp Gly Thr Val Ala Gly Asn Asn Met
530 535 540
Arg Ala Glu Tyr Glu Asp Ala Ala Glu Gln Asn His Glu Asp
545 550 555
<210> 12
<211> 558
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PRT854
<400> 12
Met His His His His His His Ser Ser Gly Ser Ser Gly Glu Gly Ala
1 5 10 15
Phe Gln Gly Pro Ser Phe Arg Gly Ser Gly Ala Ser Arg Arg Ala Cys
20 25 30
Ser Gln Ala Gly Thr Gly Arg Gly Thr Gly Gly Arg Thr Gly Phe Arg
35 40 45
Ala Gly Asn Gly Cys Ser Gly Ala Gly Ala Gly Ser Ser Phe Ser Gly
50 55 60
Pro Gly Gly Ser Ala Ser Ser Lys Gly Ser Phe Ser His Gly Gly Gly
65 70 75 80
Gly Ala Gly Ser Gly Gly Cys Thr Gly Phe Gly Glu Asn Glu His Gly
85 90 95
Ala Ala Pro Gly Asn Glu Lys Ala Thr Gly Gln Asn Ala Asn Asp Arg
100 105 110
Gly Ala Ser Tyr Ala Asp His Gly Cys Thr Gly Glu Glu Ala Asn Ala
115 120 125
Asp Ala Glu Gln Lys Ile Lys Gly Trp Tyr Glu Lys Tyr Gly Pro Gly
130 135 140
Ser Gly Arg Gln Gly Ala His Asp Tyr Ser Lys Tyr Phe Ser Ala Thr
145 150 155 160
Glu Asp Ala Lys Arg Gln Ser Gly Thr Thr Cys Asn Ala Ser Gly Gly
165 170 175
Gln Asn Glu Asn Ala Arg Ala Thr Ala Asp Asp Phe Arg Gly Lys Cys
180 185 190
Glu Asn Glu Ala Ala Gly His Gln Ser Ala Glu Ala Asp Ile Asn Gly
195 200 205
Ala His Arg Gly Met Asp Glu Gly Thr Ala Cys Thr Ser Asp Gly Glu
210 215 220
Met Gln Cys Glu Ala Ala Ser Glu Glu Gly Thr Tyr Ala Lys Lys Asn
225 230 235 240
His Gln Glu Glu Met Lys Ala Met Gln Gly Ala Ala Arg Gly Asn Gly
245 250 255
Asn Ala Glu Ile Asn Ala Ala Pro Gly Gly Asp Gly Thr Ala Ala Gly
260 265 270
Asn Asn Met Arg Ala Glu Tyr Glu Asp Ala Ala Glu Gln Asn His Glu
275 280 285
Asp Ser Phe Arg Gly Ser Gly Ala Ser Arg Arg Ala Cys Ser Gln Ala
290 295 300
Gly Thr Gly Arg Gly Thr Gly Gly Arg Thr Gly Phe Arg Ala Gly Asn
305 310 315 320
Gly Cys Ser Gly Ala Gly Ala Gly Ser Ser Phe Ser Gly Pro Gly Gly
325 330 335
Ser Ala Ser Ser Lys Gly Ser Phe Ser His Gly Gly Gly Gly Ala Gly
340 345 350
Ser Gly Gly Cys Thr Gly Phe Gly Glu Asn Glu His Gly Ala Ala Pro
355 360 365
Gly Asn Glu Lys Ala Thr Gly Gln Asn Ala Asn Asp Arg Gly Ala Ser
370 375 380
Tyr Ala Asp His Gly Cys Thr Gly Glu Glu Ala Asn Ala Asp Ala Glu
385 390 395 400
Gln Lys Ile Lys Gly Trp Tyr Glu Lys Tyr Gly Pro Gly Ser Gly Arg
405 410 415
Gln Gly Ala His Asp Tyr Ser Lys Tyr Phe Ser Ala Thr Glu Asp Ala
420 425 430
Lys Arg Gln Ser Gly Thr Thr Cys Asn Ala Ser Gly Gly Gln Asn Glu
435 440 445
Asn Ala Arg Ala Thr Ala Asp Asp Phe Arg Gly Lys Cys Glu Asn Glu
450 455 460
Ala Ala Gly His Gln Ser Ala Glu Ala Asp Ile Asn Gly Ala His Arg
465 470 475 480
Gly Met Asp Glu Gly Thr Ala Cys Thr Ser Asp Gly Glu Met Gln Cys
485 490 495
Glu Ala Ala Ser Glu Glu Gly Thr Tyr Ala Lys Lys Asn His Gln Glu
500 505 510
Glu Met Lys Ala Met Gln Gly Ala Ala Arg Gly Asn Gly Asn Ala Glu
515 520 525
Ile Asn Ala Ala Pro Gly Gly Asp Gly Thr Ala Ala Gly Asn Asn Met
530 535 540
Arg Ala Glu Tyr Glu Asp Ala Ala Glu Gln Asn His Glu Asp
545 550 555
<210> 13
<211> 290
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PRT840
<400> 13
Met His His His His His His Ser Ser Gly Ser Ser Gly Glu Gly Ala
1 5 10 15
Phe Gln Gly Pro Ser Phe Arg Gly Ser Gly Ala Ser Arg Gly Ala Ala
20 25 30
Ala Ala Ala Gly Ser Gln Ala Gly Thr Gly Arg Gly Thr Gly Gly Arg
35 40 45
Thr Gly Phe Arg Ala Gly Asn Gly Cys Ser Gly Ala Gly Ala Ala Ala
50 55 60
Ala Ala Gly Ser Ser Phe Ser Gly Pro Gly Gly Ser Ala Ser Ser Lys
65 70 75 80
Gly Ser Phe Ser His Gly Gly Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gly Ala Gly
85 90 95
Ser Gly Gly Cys Thr Gly Phe Gly Glu Asn Glu His Gly Ala Ala Ala
100 105 110
Ala Ala Gly Gly Asn Glu Lys Ala Thr Gly Gln Asn Ala Asn Asp Arg
115 120 125
Gly Ala Ala Ala Ala Ala Gly Tyr Ala Asp His Gly Cys Thr Gly Glu
130 135 140
Glu Ala Asn Ala Gly Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Lys Ile Lys Gly
145 150 155 160
Trp Tyr Glu Lys Tyr Gly Pro Gly Ser Gly Arg Gln Gly Ala Ala Ala
165 170 175
Ala Ala Gly Asp Tyr Ser Lys Tyr Phe Ser Ala Thr Glu Asp Ala Lys
180 185 190
Arg Gln Ser Gly Thr Thr Cys Gly Ala Ala Ala Ala Ala Gly Ala Gly
195 200 205
Gln Asn Glu Asn Ala Arg Ala Thr Ala Asp Asp Phe Arg Gly Lys Cys
210 215 220
Glu Asn Gly Ala Ala Ala Ala Ala Gly His Gln Ser Gly Glu Ala Asp
225 230 235 240
Ile Asn Gly Ala His Arg Ala Met Asp Glu Gly Gly Ala Ala Ala Ala
245 250 255
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260 265 270
Gly Thr Gly Ala Ala Ala Ala Ala Gly Lys Asn His Gln Glu Glu Met
275 280 285
Lys Gly
290
<210> 14
<211> 560
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PRT855
<400> 14
Met His His His His His His Ser Ser Gly Ser Ser Gly Glu Gly Ala
1 5 10 15
Phe Gln Gly Pro Ser Phe Arg Gly Ser Gly Ala Ser Arg Gly Ala Ala
20 25 30
Ala Ala Ala Gly Ser Gln Ala Gly Thr Gly Arg Gly Thr Gly Gly Arg
35 40 45
Thr Gly Phe Arg Ala Gly Asn Gly Cys Ser Gly Ala Gly Ala Ala Ala
50 55 60
Ala Ala Gly Ser Ser Phe Ser Gly Pro Gly Gly Ser Ala Ser Ser Lys
65 70 75 80
Gly Ser Phe Ser His Gly Gly Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gly Ala Gly
85 90 95
Ser Gly Gly Cys Thr Gly Phe Gly Glu Asn Glu His Gly Ala Ala Ala
100 105 110
Ala Ala Gly Gly Asn Glu Lys Ala Thr Gly Gln Asn Ala Asn Asp Arg
115 120 125
Gly Ala Ala Ala Ala Ala Gly Tyr Ala Asp His Gly Cys Thr Gly Glu
130 135 140
Glu Ala Asn Ala Gly Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Lys Ile Lys Gly
145 150 155 160
Trp Tyr Glu Lys Tyr Gly Pro Gly Ser Gly Arg Gln Gly Ala Ala Ala
165 170 175
Ala Ala Gly Asp Tyr Ser Lys Tyr Phe Ser Ala Thr Glu Asp Ala Lys
180 185 190
Arg Gln Ser Gly Thr Thr Cys Gly Ala Ala Ala Ala Ala Gly Ala Gly
195 200 205
Gln Asn Glu Asn Ala Arg Ala Thr Ala Asp Asp Phe Arg Gly Lys Cys
210 215 220
Glu Asn Gly Ala Ala Ala Ala Ala Gly His Gln Ser Gly Glu Ala Asp
225 230 235 240
Ile Asn Gly Ala His Arg Ala Met Asp Glu Gly Gly Ala Ala Ala Ala
245 250 255
Ala Gly Thr Ser Asp Gly Glu Met Gln Cys Glu Ala Ala Ser Glu Glu
260 265 270
Gly Thr Gly Ala Ala Ala Ala Ala Gly Lys Asn His Gln Glu Glu Met
275 280 285
Lys Gly Ser Phe Arg Gly Ser Gly Ala Ser Arg Gly Ala Ala Ala Ala
290 295 300
Ala Gly Ser Gln Ala Gly Thr Gly Arg Gly Thr Gly Gly Arg Thr Gly
305 310 315 320
Phe Arg Ala Gly Asn Gly Cys Ser Gly Ala Gly Ala Ala Ala Ala Ala
325 330 335
Gly Ser Ser Phe Ser Gly Pro Gly Gly Ser Ala Ser Ser Lys Gly Ser
340 345 350
Phe Ser His Gly Gly Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gly Ala Gly Ser Gly
355 360 365
Gly Cys Thr Gly Phe Gly Glu Asn Glu His Gly Ala Ala Ala Ala Ala
370 375 380
Gly Gly Asn Glu Lys Ala Thr Gly Gln Asn Ala Asn Asp Arg Gly Ala
385 390 395 400
Ala Ala Ala Ala Gly Tyr Ala Asp His Gly Cys Thr Gly Glu Glu Ala
405 410 415
Asn Ala Gly Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Lys Ile Lys Gly Trp Tyr
420 425 430
Glu Lys Tyr Gly Pro Gly Ser Gly Arg Gln Gly Ala Ala Ala Ala Ala
435 440 445
Gly Asp Tyr Ser Lys Tyr Phe Ser Ala Thr Glu Asp Ala Lys Arg Gln
450 455 460
Ser Gly Thr Thr Cys Gly Ala Ala Ala Ala Ala Gly Ala Gly Gln Asn
465 470 475 480
Glu Asn Ala Arg Ala Thr Ala Asp Asp Phe Arg Gly Lys Cys Glu Asn
485 490 495
Gly Ala Ala Ala Ala Ala Gly His Gln Ser Gly Glu Ala Asp Ile Asn
500 505 510
Gly Ala His Arg Ala Met Asp Glu Gly Gly Ala Ala Ala Ala Ala Gly
515 520 525
Thr Ser Asp Gly Glu Met Gln Cys Glu Ala Ala Ser Glu Glu Gly Thr
530 535 540
Gly Ala Ala Ala Ala Ala Gly Lys Asn His Gln Glu Glu Met Lys Gly
545 550 555 560
<210> 15
<211> 290
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PRT837
<400> 15
Met His His His His His His Ser Ser Gly Ser Ser Gly Pro Gly Gln
1 5 10 15
Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln
20 25 30
Asn Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Ser Gly Gln Tyr
35 40 45
Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Ser Ser Ala
50 55 60
Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro
65 70 75 80
Ser Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly
85 90 95
Pro Gly Ala Ser Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln
100 105 110
Gln Gly Pro Gly Ser Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Ser
115 120 125
Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly
130 135 140
Pro Gly Ser Gly Gln Tyr Gly Gln Gly Pro Tyr Gly Ala Glu Ala Trp
145 150 155 160
Phe Ser Glu Lys Ser Thr Ser Gly His Gln Gln Ile Ser Asp Asp Ala
165 170 175
Gly Ala Ala Met Ala Ala Arg Asn Glu Ala Met Glu Gly Lys Arg Asn
180 185 190
Ala Gln Thr Gly Glu Ile Glu Ala Gln Ser Gly Ala Ala Met Lys His
195 200 205
Ser Tyr Glu Cys Ser Gly Ala Glu Thr Glu Ser Asn Tyr Cys His Gln
210 215 220
Ala Gln Gln Ile Gln Glu Gln Ile Gly Ala Met Glu Asp Gln Ala Gln
225 230 235 240
Gln Ile Arg Met Glu Thr Glu Gly Gln Lys Gly Glu His Glu Arg Ala
245 250 255
Gly Asp Val Lys Ile Phe Ala Glu Lys Glu Ile Glu Met Tyr Cys Lys
260 265 270
Gly Ile Asp Gly Glu Gly Arg Lys Ser Lys Ser Thr Cys Tyr Lys Ser
275 280 285
Glu Gly
290
<210> 16
<211> 290
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PRT838
<400> 16
Met His His His His His His Ser Ser Gly Ser Ser Gly Pro Gly Gln
1 5 10 15
Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln
20 25 30
Asn Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Ser Gly Gln Tyr
35 40 45
Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Ser Ser Ala
50 55 60
Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro
65 70 75 80
Ser Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly
85 90 95
Pro Gly Ala Ser Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln
100 105 110
Gln Gly Pro Gly Ser Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Ser
115 120 125
Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly
130 135 140
Pro Gly Ser Gly Gln Tyr Gly Gln Gly Pro Tyr Gly Ala Glu Ala Trp
145 150 155 160
Phe Ser Glu Lys Ser Thr Ser Gly His Gln Gln Ile Ser Asp Asp Ala
165 170 175
Gly Ala Ala Met Ala Ala Arg Asn Glu Ala Met Glu Gly Lys Arg Asn
180 185 190
Ala Gln Thr Gly Glu Ile Glu Ala Gln Ser Gly Ala Ala Met Lys His
195 200 205
Ser Tyr Glu Cys Ser Gly Ala Glu Thr Glu Ser Asn Tyr Cys His Gln
210 215 220
Ala Gln Gln Ile Gln Glu Gln Ile Gly Ala Met Glu Asp Gln Ala Gln
225 230 235 240
Gln Ile Arg Met Glu Thr Glu Gly Gln Lys Gly Glu His Glu Arg Ala
245 250 255
Gly Asp Ala Lys Ile Phe Ala Glu Lys Glu Ile Glu Met Tyr Cys Lys
260 265 270
Gly Ile Asp Gly Glu Gly Arg Lys Ser Lys Ser Thr Cys Tyr Lys Ser
275 280 285
Glu Gly
290
<210> 17
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> His标签（HisTag）
<400> 17
Met His His His His His His Ser Ser Gly Ser Ser
1 5 10

Claims (17)

1.一种多肽溶液，其是使包含属于Ia簇的I型角蛋白来源的氨基酸序列的多肽溶解于包含甲酸的溶剂、或者包含偶极矩为3.0D以上的非质子性极性溶剂和无机盐的溶剂中而得到的。
2.如权利要求1所述的多肽溶液，其中，所述包含偶极矩为3.0D以上的非质子性极性溶剂和无机盐的溶剂进一步包含还原剂。
3.如权利要求2所述的多肽溶液，其中，所述还原剂为选自由硫醇类、三(2-羧基乙基)膦盐酸盐、三(羟基丙基)膦和焦亚硫酸钠组成的组中的至少一种。
4.如权利要求3所述的多肽溶液，其中，所述硫醇类为选自由二硫苏糖醇、β-巯基乙醇、3-巯基-1,2-丙二醇、1,2-乙硫醇、巯基乙酸和巯基乙酸铵(ATG)组成的组中的至少一种。
5.如权利要求1～4中任一项所述的多肽溶液，其中，所述偶极矩为3.0D以上的非质子性极性溶剂是选自由二甲基亚砜、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、1,3-二甲基-2-咪唑烷酮、N-甲基-2-吡咯烷酮和乙腈组成的组中的至少一种。
6.如权利要求1～5中任一项所述的多肽溶液，其中，所述无机盐为选自由碱金属卤化物、碱土金属卤化物、碱土金属硝酸盐和硫氰酸盐组成的组中的至少一种。
7.如权利要求1～6中任一项所述的多肽溶液，其中，所述属于Ia簇的I型角蛋白选自由角蛋白25、角蛋白26和角蛋白27组成的组。
8.一种多肽纤维的制造方法，其为使用权利要求1～7中任一项所述的多肽溶液的多肽纤维的制造方法，包括如下工序：
以所述多肽溶液作为纺丝原液，将所述纺丝原液从喷头挤出至凝固液中，得到未拉伸丝。
9.如权利要求8所述的多肽纤维的制造方法，其中，进一步包括对所述未拉伸丝进行拉伸的工序。
10.如权利要求8或9所述的多肽纤维的制造方法，其中，所述凝固液为选自由甲醇、乙醇和2-丙醇组成的组中的至少一种。
11.一种表达载体，其具有编码具有属于Ia簇的I型角蛋白来源的氨基酸序列的多肽的核酸序列和以能够工作的方式与该核酸序列连接的一个或多个调节序列。
12.一种宿主，其利用权利要求11所述的表达载体进行了转化。
13.一种人造多肽的制造方法，其包括：对权利要求12所述的宿主进行培养，使其增殖而诱导表达所述多肽。
14.一种人造多肽，其包含属于Ia簇的I型角蛋白来源的氨基酸序列。
15.如权利要求14所述的人造多肽，其中，所述属于Ia簇的I型角蛋白选自由角蛋白25、角蛋白26和角蛋白27组成的组。
16.如权利要求14或15所述的人造多肽，其中，包含选自由序列号1～16所示的氨基酸序列组成的组中的氨基酸序列。
17.一种制品，其包含权利要求14～16中任一项所述的人造多肽，所述制品选自由纤维、丝、膜、发泡体、颗粒体、纳米纤丝、凝胶和树脂组成的组。
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