JP2019537449A - 抗ｇｉｔｒ抗原結合タンパク質およびその使用方法 - Google Patents

抗ｇｉｔｒ抗原結合タンパク質およびその使用方法 Download PDF

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Abstract

ＧＩＴＲに選択的に結合する抗原結合タンパク質（ＡＢＰ）ならびにそのアイソフォームおよびホモログ、ならびに上記ＡＢＰを含む組成物が、本明細書で提供される。上記ＡＢＰを使用するための方法（例えば、治療法および診断法）がまた、提供される。本発明のＡＢＰ、および該ＡＢＰの使用のための指示を含む、キットもまた提供される。本発明のＡＢＰ、そのＶＨ、そのＶＬ、その軽鎖、その重鎖またはその抗原結合部分をコードする単離されたポリヌクレオチドもまた提供される。

Description

分野
グルココルチコイド誘導性腫瘍壊死因子レセプター関連タンパク質（ＧＩＴＲ）に対して結合特異性を有する抗原結合タンパク質（ＡＢＰ）ならびにこのようなＡＢＰを含む組成物（薬学的組成物、診断用組成物が挙げられる）、およびキットが、本明細書で提供される。ＧＩＴＲ ＡＢＰを作製するための方法、ならびにＧＩＴＲ ＡＢＰを、例えば、治療目的、診断目的、および研究目的で使用するための方法がまた、提供される。
背景
ＧＩＴＲは、腫瘍壊死因子レセプター（ＴＮＦＲ）スーパーファミリーのメンバーである。ＧＩＴＲは、先天性免疫系および適応免疫系の多くの細胞において発現され、活性化Ｔ細胞において膜表面発現が増加する。Ｈａｎａｂｕｃｈｉｂら， Ｂｌｏｏｄ， ２００６， １０７：３６１７−３６２３；およびＮｏｃｅｎｔｉｎｉら， Ｅｕｒ． Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， ２００５， ３５：１０１６−１０２２（これらの各々はその全体において参考として援用される）を参照のこと。ＧＩＴＲは、ＧＩＴＲリガンド（ＧＩＴＲＬ）によって活性化される。
ＧＩＴＲのアゴニズムは、エフェクターＴ細胞に対して共刺激効果を有する。Ｓｃｈａｅｒら， Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， ２０１２， ２４：２１７−２２４（その全体において参考として援用される）を参照のこと。ＧＩＴＲアゴニストは、がん治療の治療剤として提案されてきた。Ｓｃｈａｅｒら，前出； Ｍｅｌｅｒｏら， Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ２０１３， １９：１０４４−１０５３； Ｃｏｈｅｎら， Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｏｎｃｏｌ．， ２００７， ２５：３０５８； Ｃｏｈｅｎら， ＰＬｏＳ Ｏｎｅ， ２０１０， ５：ｅ１０４３６； Ｎｏｃｅｎｔｉｎｉら， Ｂｒ． Ｊ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．， ２０１２， １６５：２０８９−２０９９；および米国特許公開番号２００７／００９８７１９（これらの各々はその全体において参考として援用される）を参照のこと。
ＧＩＴＲの抗体アゴニストは、マウスモデルにおいて有望であることが示されたが、ヒトＧＩＴＲに対するアゴナイズ抗体を得ることは困難であった。Ｎｏｃｅｎｔｉｎｉら（Ｂｒ． Ｊ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．， ２０１２， １６５：２０８９−２０９９）は、「抗ＧＩＴＲ ｍＡｂが、マウスにおいてよりヒトにおいて遙かに弱い誘発可能性を有する」ことを注記した。彼らは、このことが、ヒトＧＩＴＲが、強く活性化されるために安定なトリマーまたはスーパークラスター（たとえば、トリマーのテトラマー）へとマルチマー化されなければならないという事実の結果であり得ると推測する。
従って、公知の抗体より強くヒトＧＩＴＲをアゴナイズし得るＡＢＰが必要である。この必要性を満たすＡＢＰが本明細書で提供される。
米国特許出願公開第２００７／００９８７１９号明細書
Ｈａｎａｂｕｃｈｉｂら， Ｂｌｏｏｄ， ２００６， １０７：３６１７−３６２３ Ｎｏｃｅｎｔｉｎｉら， Ｅｕｒ． Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， ２００５， ３５：１０１６−１０２２ Ｓｃｈａｅｒら， Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， ２０１２， ２４：２１７−２２４ Ｍｅｌｅｒｏら， Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ２０１３， １９：１０４４−１０５３ Ｃｏｈｅｎら， Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｏｎｃｏｌ．， ２００７， ２５：３０５８ Ｃｏｈｅｎら， ＰＬｏＳ Ｏｎｅ， ２０１０， ５：ｅ１０４３６ Ｎｏｃｅｎｔｉｎｉら， Ｂｒ． Ｊ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．， ２０１２， １６５：２０８９−２０９９
要旨
ＧＩＴＲに特異的に結合するＡＢＰおよびこのようなＡＢＰを使用するための方法が、本明細書で提供される。
一局面において、以下の６つのＣＤＲ配列を含む、ヒトＧＩＴＲ（ｈＧＩＴＲ；配列番号１）に特異的に結合する単離された多価抗原結合タンパク質（ＡＢＰ）が提供される：（ａ）配列Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５ＲＧＹＧＤＹＧＧＨＨＡＦＤＩを有するＣＤＲ−Ｈ３であって、ここでＸ１はＡまたはＶであり、Ｘ２はＨ、Ｄ、Ｌ、またはＲであり、Ｘ３はＥまたはＤであり、Ｘ４はＲ、Ｎ、Ｓ、またはＡであり、Ｘ５はＶ、ＤまたはＧであるＣＤＲ−Ｈ３（配列番号１４１）；（ｂ）配列Ｘ１ＩＸ２Ｘ３ＳＧＸ４ＴＹＹＮＰＳＬＫＳを有するＣＤＲ−Ｈ２であって、ここでＸ１はＧ、Ｌ、またはＳであり、Ｘ２はＹ、Ａ、またはＶであり、Ｘ３はＥ、ＹまたはＨであり、Ｘ４はＳまたはＫであるＣＤＲ−Ｈ２（配列番号１４２）；（ｃ）配列Ｘ１ＳＩＳＳＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５ＷＸ６を有するＣＤＲ−Ｈ１であって、ここでＸ１はＹまたはＧであり、Ｘ２はＧ、Ｓ、またはＥであり、Ｘ３はＬ、Ｇ、Ｓ、Ｙ、またはＡであり、Ｘ４はＧ、Ａ、Ｙ、Ｍ、またはＧであり、Ｘ５はＶ、Ａであるかまたは存在せず、Ｘ６はＳまたはＧであるＣＤＲ−Ｈ１（配列番号１４３）；（ｄ）配列ＱＱＥＹＸ１ＴＰＰＸ２を有するＣＤＲ−Ｌ３であって、ここでＸ１はＡまたはＮであり、Ｘ２はＴまたはＳであるＣＤＲ−Ｌ３（配列番号１４４）；（ｅ）配列Ｘ１ＡＸ２ＳＬＸ３Ｘ４を有するＣＤＲ−Ｌ２であって、ここでＸ１はＡまたはＳであり、Ｘ２はＤまたはＳであり、Ｘ３はＱ、Ｄ、Ｋ、またはＥであり、Ｘ４はＳまたはＹであるＣＤＲ−Ｌ２（配列番号１４５）；および（ｆ）配列Ｘ１ＡＳ Ｘ２ＳＩ Ｘ３Ｘ４ＹＬＮを有するＣＤＲ−Ｌ１であって、ここでＸ１はＧまたはＲであり、Ｘ２はＱまたはＫであり、Ｘ３はＳ、Ｄ、またはＮであり、Ｘ４はＳまたはＴであるＣＤＲ−Ｌ１（配列番号１４６）。
１つの実施形態において、（ａ）のＡＢＰは、配列番号９のＶＨ配列および配列番号１０のＶＬ配列を含む；別の実施形態において、（ｂ）のＡＢＰは、配列番号１９のＶＨ配列および配列番号２０のＶＬ配列を含む；別の実施形態において、（ｃ）のＡＢＰは、配列番号２６のＶＨ配列および配列番号２７のＶＬ配列を含む；別の実施形態において、（ｄ）のＡＢＰは、配列番号２６または配列番号３４のＶＨ配列および配列番号３５のＶＬ配列を含む；別の実施形態において、（ｅ）のＡＢＰは、配列番号２６のＶＨ配列および配列番号４０のＶＬ配列を含む；別の実施形態において、（ｆ）のＡＢＰは、配列番号４４のＶＨ配列および配列番号４５のＶＬ配列を含む；別の実施形態において、（ｇ）のＡＢＰは、配列番号４４のＶＨ配列および配列番号５３のＶＬ配列を含む；別の実施形態において、（ｈ）のＡＢＰは、配列番号５８のＶＨ配列および配列番号１０のＶＬ配列を含む；別の実施形態において、（ｉ）のＡＢＰは、配列番号１０４のＶＨ配列および配列番号１０のＶＬ配列を含む；そして別の実施形態において、（ｊ）のＡＢＰは、配列番号１０５のＶＨ配列および配列番号１０のＶＬ配列を含む。
１つの実施形態において、（ｂ）のＡＢＰは、配列番号７の重鎖および配列番号８の軽鎖を含む；別の実施形態において、（ｂ）のＡＢＰは、配列番号１７の重鎖および配列番号１８の軽鎖を含む。別の実施形態において、（ｃ）のＡＢＰは、配列番号２４の重鎖および配列番号２５の軽鎖を含む。別の実施形態において、（ｄ）のＡＢＰは、（ｉ）配列番号３２の重鎖および配列番号３３の軽鎖、または（ｉｉ）配列番号３７の重鎖および配列番号３３の軽鎖を含む。別の実施形態において、（ｅ）のＡＢＰは、（ｉ）配列番号３８の重鎖および配列番号３９の軽鎖を含む。別の実施形態において、（ｆ）のＡＢＰは、配列番号４２の重鎖および配列番号４３の軽鎖を含む；別の実施形態において、（ｇ）のＡＢＰは、（ｉ）配列番号５１の重鎖および配列番号５２の軽鎖を含む；別の実施形態において、（ｈ）のＡＢＰは、（ｉ）配列番号５７の重鎖および配列番号８の軽鎖を含む；別の実施形態において、（ｉ）のＡＢＰは、（ｉ）配列番号１１４の重鎖および配列番号８の軽鎖、または（ｉｉ）配列番号１２０の重鎖および配列番号８の軽鎖；または（ｉｉｉ）配列番号１２２の重鎖および配列番号８の軽鎖を含む；あるいは別の実施形態において、（ｊ）のＡＢＰは、（ｉ）配列番号１１５の重鎖および配列番号８の軽鎖、または（ｉｉ）配列番号１２１の重鎖および配列番号８の軽鎖；または（ｉｉｉ）配列番号１２３の重鎖および配列番号８の軽鎖を含む。
別の実施形態において、上記ＡＢＰは、配列番号７の重鎖および配列番号８の軽鎖；または配列番号１７の重鎖および配列番号１８の軽鎖；または配列番号２４の重鎖および配列番号２５の軽鎖；配列番号３２の重鎖および配列番号３３の軽鎖、あるいは（ｉｉ）配列番号３７の重鎖および配列番号３３の軽鎖；配列番号３８の重鎖および配列番号３９の軽鎖；配列番号４２の重鎖および配列番号４３の軽鎖；配列番号５１の重鎖および配列番号５２の軽鎖；配列番号５７の重鎖および配列番号８の軽鎖；配列番号１１４の重鎖および配列番号８の軽鎖、あるいは（ｉｉ）配列番号１２０の重鎖および配列番号８の軽鎖；あるいは（ｉｉｉ）配列番号１２２の重鎖および配列番号８の軽鎖；または配列番号１１５の重鎖および配列番号８の軽鎖、あるいは（ｉｉ）配列番号１２１の重鎖および配列番号８の軽鎖；あるいは（ｉｉｉ）配列番号１２３の重鎖および配列番号８の軽鎖を含む。
別の局面において、以下の６つのＣＤＲ配列を含む、ヒトＧＩＴＲ（ｈＧＩＴＲ；配列番号１）に特異的に結合する単離された多価抗原結合タンパク質（ＡＢＰ）が提供される：（ａ）配列番号６６に示される配列を有するＣＤＲ−Ｈ３；（ｂ）配列番号６５に示される配列を有するＣＤＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号６４に示される配列を有するＣＤＲ−Ｈ１；（ｄ）配列番号６９に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ３；（ｅ）配列番号６８に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ２；および（ｆ）配列番号６７に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ１。
１つの実施形態において、上記ＡＢＰは、配列番号６２のＶＨ配列および配列番号６３のＶＬ配列；配列番号７０のＶＨ配列および配列番号６３のＶＬ配列；または配列番号９７のＶＨ配列および配列番号６３のＶＬ配列を含む。
別の実施形態において、上記ＡＢＰは、（ｉ）配列番号１７１の重鎖および配列番号１７２の軽鎖；配列番号１７３の重鎖および配列番号１７４の軽鎖；配列番号１０６の重鎖配列および配列番号１０７の軽鎖配列；または（ｉｉ）配列番号１１６の重鎖配列および配列番号１０７の軽鎖配列を含む。
別の局面において、以下の６つのＣＤＲ配列を含む、ヒトＧＩＴＲ（ｈＧＩＴＲ；配列番号１）に特異的に結合する単離された多価抗原結合タンパク質（ＡＢＰ）が提供される：（ａ）配列番号７５に示される配列を有するＣＤＲ−Ｈ３；（ｂ）配列番号７４に示される配列を有するＣＤＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号７３に示される配列を有するＣＤＲ−Ｈ１；（ｄ）配列番号７８に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ３；（ｅ）配列番号７７に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ２；および（ｆ）配列番号７５に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ１。
１つの実施形態において、上記ＡＢＰは、配列番号７１のＶＨ配列および配列番号７２のＶＬ配列；または配列番号９８のＶＨ配列および配列番号７２のＶＬ配列を含む。
別の実施形態において、上記ＡＢＰは、配列番号１７３の重鎖および配列番号１０９の軽鎖を含む；または上記ＡＢＰは、（ｉ）配列番号１０８の重鎖および配列番号１０９の軽鎖；もしくは（ｉｉ）配列番号１１７の重鎖および配列番号１０９の軽鎖を含む。
別の局面において、以下の６つのＣＤＲ配列を含む、ヒトＧＩＴＲ（ｈＧＩＴＲ；配列番号１）に特異的に結合する単離された多価抗原結合タンパク質（ＡＢＰ）が提供される：（ａ）配列番号８３に示される配列を有するＣＤＲ−Ｈ３；（ｂ）（ｉ）配列番号８２または（ｉｉ）配列番号１００に示される配列を有するＣＤＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号８１に示される配列を有するＣＤＲ−Ｈ１；（ｄ）配列番号８６に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ３；（ｅ）配列番号８５に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ２；および（ｆ）配列番号８４に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ１。
１つの実施形態において、上記ＡＢＰは、上記段落の（ｂ）（ｉ）のＣＤＲ−Ｈ２配列ならびに配列番号７９のＶＨ配列および配列番号８０のＶＬ配列を含む。別の実施形態において、上記ＡＢＰは、上記段落の（ｂ）（ｉ）のＣＤＲ−Ｈ２配列ならびに配列番号８７のＶＨ配列および配列番号８０のＶＬ配列を含む。別の実施形態において、上記ＡＢＰは、上記段落の（ｂ）（ｉ）のＣＤＲ−Ｈ２配列ならびに配列番号８８のＶＨ配列および配列番号８０のＶＬ配列を含む。別の実施形態において、上記ＡＢＰは、上記段落の（ｂ）（ｉｉ）のＣＤＲ−Ｈ２配列ならびに配列番号９９のＶＨ配列および配列番号８０のＶＬ配列を含む。
１つの実施形態において、上記ＡＢＰは、配列番号１７４の重鎖および配列番号１１１の軽鎖を含む；別の実施形態において、上記ＡＢＰは、配列番号１７５の重鎖および配列番号１１１の軽鎖を含む；別の実施形態において、上記ＡＢＰは、配列番号１７６の重鎖および配列番号１１１の軽鎖を含む；別の実施形態において、上記ＡＢＰは、配列番号１１０の重鎖および配列番号１１１の軽鎖；または（ｉｉ）配列番号１１８の重鎖および配列番号１１１の軽鎖を含む。
別の局面において、以下の６つのＣＤＲ配列を含む、ヒトＧＩＴＲ（ｈＧＩＴＲ；配列番号１）に特異的に結合する単離された多価抗原結合タンパク質（ＡＢＰ）が提供される：（ａ）配列番号９３に示される配列を有するＣＤＲ−Ｈ３；（ｂ）配列ＧＩＩＰＩＦＧＥＡＱＹＡＱＸ１ＦＸ２Ｇを有するＣＤＲ−Ｈ２であって、ここでＸ１はＫまたはＲであり、Ｘ２はＱまたはＲであるＣＤＲ−Ｈ２（配列番号２１５）；（ｃ）配列番号９１に示される配列を有するＣＤＲ−Ｈ１；（ｄ）配列番号９４に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ３；（ｄ）配列番号８５に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ２；および（ｅ）配列番号８４に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ１。
１つの実施形態において、上記ＡＢＰは、配列番号９２のＣＤＲ−Ｈ２；配列番号９６のＣＤＲ−Ｈ２；または配列番号１０２のＣＤＲ−Ｈ２を含む。
別の実施形態において、上記ＡＢＰは、配列番号８９のＶＨ配列および配列番号９０のＶＬ配列を含む。別の実施形態において、上記ＡＢＰは、配列番号９５のＶＨ配列および配列番号９０のＶＬ配列を含む。別の実施形態において、上記ＡＢＰは、配列番号１０１のＶＨ配列および配列番号９０のＶＬ配列を含む。
別の実施形態において、上記ＡＢＰは、配列番号１７７の重鎖および配列番号１１３の軽鎖を含む。別の実施形態において、上記ＡＢＰは、配列番号１７８の重鎖および配列番号１１３の軽鎖を含む。別の実施形態において、上記ＡＢＰは、配列番号１１２の重鎖および配列番号１１３の軽鎖；または（ｉｉ）配列番号１１９の重鎖および配列番号１１３の軽鎖を含む。
別の局面において、以下の６つのＣＤＲ配列を含む、ヒトＧＩＴＲ（ｈＧＩＴＲ；配列番号１）に特異的に結合する単離された多価抗原結合タンパク質（ＡＢＰ）が提供される：（ａ）配列番号１３４に示される配列を有するＣＤＲ−Ｈ３；（ｂ）配列番号１３３に示される配列を有するＣＤＲ−Ｈ２；配列番号１３２に示される配列を有するＣＤＲ−Ｈ１；（ｃ）配列番号１３５に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ３；（ｄ）配列番号６８に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ２；および（ｅ）配列番号６７に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ１。
１つの実施形態において、上記ＡＢＰは、（ｉ）配列番号１２６のＶＨ配列および配列番号１２８のＶＬ配列；または（ｉｉ）配列番号１２７のＶＨ配列および配列番号１２８のＶＬ配列を含む。
１つの実施形態において、上記ＡＢＰは、（ｉ）配列番号１２４の重鎖および配列番号１２５の軽鎖；または（ｉｉ）配列番号１３６の重鎖および配列番号１２５の軽鎖を含む。
別の局面において、以下を含む、ヒトＧＩＴＲ（ｈＧＩＴＲ；配列番号１）に特異的に結合する単離された多価抗原結合タンパク質（ＡＢＰ）が提供される：（ａ）配列番号９、１９、２６、３４、４４、５８、６２、７０、７１、７９、８７、８８、８９、９５、９７、９８、９９、１０１、１０４、１０５、１２６、および１２７から選択されるＶＨ領域のＣＤＲ−Ｈ３と少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％の同一性を有するＣＤＲ−Ｈ３；（ｂ）配列番号９、１９、２６、３４、４４、５８、６２、７０、７１、７９、８７、８８、８９、９５、９７、９８、９９、１０１、１０４、１０５、１２６、および１２７から選択されるＶＨ領域のＣＤＲ−Ｈ２と少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％の同一性を有するＣＤＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号９、１９、２６、３４、４４、５８、６２、７０、７１、７９、８７、８８、８９、９５、９７、９８、９９、１０１、１０４、１０５、１２６、および１２７から選択されるＶＨ領域のＣＤＲ−Ｈ１と少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％の同一性を有するＣＤＲ−Ｈ１；（ｄ）配列番号１０、２０、２７、３５、４０、４５、５３、６３、７２、８０、９０、および１２８から選択されるＶＬ領域のＣＤＲ−Ｌ３と少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％の同一性を有するＣＤＲ−Ｌ３；（ｅ）配列番号１０、２０、２７、３５、４０、４５、５３、６３、７２、８０、９０、および１２８から選択されるＶＬ領域のＣＤＲ−Ｌ２と少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％の同一性を有するＣＤＲ−Ｌ２；および（ｆ）配列番号１０、２０、２７、３５、４０、４５、５３、６３、７２、８０、９０、および１２８から選択されるＶＬ領域のＣＤＲ−Ｌ１と少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％の同一性を有するＣＤＲ−Ｌ１。
１つの実施形態において、上記ＣＤＲ−Ｈ３、ＣＤＲ−Ｈ２、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｌ３、ＣＤＲ−Ｌ２、およびＣＤＲ−Ｌ１は、Ｋａｂａｔ番号付けスキーム、Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けスキーム、またはＩＭＧＴ番号付けスキームから選択される番号付けスキームに従って各々同定される。別の実施形態において、上記ＣＤＲ−Ｈ１は、Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けスキームおよびＫａｂａｔ番号付けスキームの両方によって規定されるように（両方の番号付けスキームの境界を含む）同定される。
１つの実施形態において、上記ＣＤＲ−Ｈ３は、配列番号１３、２３、３０、４８、６１、６６、７５、８３、９３、１０３、１３１から選択されるＣＤＲ−Ｈ３、または１個、２個、もしくは３個のアミノ酸置換を有するこれらのバリアントを含む。別の実施形態において、上記ＣＤＲ−Ｈ２は、配列番号１２、２２、２９、４７、６０、６５、７４、８２、９２、９６、１００、１０２、１３０、および１３３から選択されるＣＤＲ−Ｈ３、または１個、２個、もしくは３個のアミノ酸置換を有するこれらのバリアントを含む。別の実施形態において、上記ＣＤＲ−Ｈ１は、配列番号１１、２１、２８、４６、５９、６４、７３、８１、９１、１２９、１３２から選択されるＣＤＲ−Ｈ１、または１個もしくは２個のアミノ酸置換を有するこれらのバリアントを含む。別の実施形態において、上記ＣＤＲ−Ｌ３は、配列番号１６、１７、５６、６９、７８、８６、９４、１３５から選択されるＣＤＲ−Ｌ３、または１個もしくは２個のアミノ酸置換を有するこれらのバリアントを含む。別の実施形態において、上記ＣＤＲ−Ｌ２は、配列番号１５、３１、４１、５０、５５、６８、７７、および８５から選択されるＣＤＲ−Ｌ２、または１個のアミノ酸置換を有するこれらのバリアントを含む。別の実施形態において、上記ＣＤＲ−Ｌ１は、配列番号１４、３６、４９、５４、６７、７６、および８４から選択されるＣＤＲ−Ｌ１、または１個もしくは２個のアミノ酸置換を有するこれらのバリアントを含む。１つの実施形態において、上記アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。
上記の局面のうちのいずれかの実施形態において、上記ＡＢＰは：（ａ）ＧＩＴＲへの結合に関して、ＡＢＰ１、ＡＢＰ２、ＡＢＰ３、ＡＢＰ４、ＡＢＰ５、ＡＢＰ６、ＡＢＰ７、ＡＢＰ８、ＡＢＰ９、ＡＢＰ１０、ＡＢＰ１１、ＡＢＰ１２、ＡＢＰ１３、ＡＢＰ１４、ＡＢＰ１５、ＡＢＰ１６、ＡＢＰ１７、ＡＢＰ１８、ＡＢＰ１９、ＡＢＰ２０、ＡＢＰ２１、ＡＢＰ２２、ＡＢＰ２３、ＡＢＰ２４、ＡＢＰ２５、ＡＢＰ２６、ＡＢＰ２７、ＡＢＰ２８、ＡＢＰ２９、ＡＢＰ３０、ＡＢＰ３１、ＡＢＰ３２、ＡＢＰ３３、およびＡＢＰ３４から選択される抗体（各々、本開示の付表Ａに提供されるとおり）と競合する；または（ｂ）ＧＩＴＲ上のエピトープに特異的に結合する少なくとも３つの抗原結合ドメインを有する；または（ｃ）ＧＩＴＲ上の単一のエピトープに特異的に結合する少なくとも３つの抗原結合ドメインを有する；または（ｄ）ＧＩＴＲ上のエピトープに特異的に結合する少なくとも４つの抗原結合ドメインを有する；または（ｅ）ＧＩＴＲ上の単一のエピトープに特異的に結合する少なくとも４つの抗原結合ドメインを有する；または（ｆ）標的細胞の表面上で発現されるＧＩＴＲをアゴナイズする；または（ｇ）ＧＩＴＲへのＧＩＴＲＬの結合を増強する；または（ｈ）エフェクターＴ細胞を、抗原提示細胞からの抗原提示と組み合わせて共刺激する；または（ｉ）調節性Ｔ細胞によるエフェクターＴ細胞の抑制を阻害する；または（ｊ）組織中または全身循環中の調節性Ｔ細胞の数を低減する；（ｋ）Ｒ５６、Ｃ５８、Ｒ５９、Ｄ６０、Ｙ６１、Ｐ６２、Ｅ６４、Ｅ６５、Ｃ６６、およびＣ６７からなる群からのＧＩＴＲ（配列番号１）残基のうちの１またはこれより多くに結合し得る；または（ｌ）（ａ）〜（ｋ）のいずれかの組み合わせが可能である。
上記の局面のうちのいずれかの実施形態において、上記ＧＩＴＲは、ｈＧＩＴＲ（配列番号１）、ｈＧＩＴＲ−Ｔ４３Ｒ（配列番号２）、ｃＧＩＴＲ（配列番号３）、ｍＧＩＴＲ（配列番号４）、およびこれらの組み合わせから選択される。別の実施形態において、上記ＡＢＰは、（ａ）カニクイザルＧＩＴＲ（ｃＧＩＴＲ；配列番号３）に特異的に結合する；（ｂ）ｈＧＩＴＲに対するＡＢＰの親和性より低い（より高いＫＤによって示されるとおりの）親和性でマウスＧＩＴＲ（ｍＧＩＴＲ；配列番号４）に結合するか、もしくはｍＧＩＴＲに結合しない；または（ｃ）（ａ）〜（ｂ）のいずれかの組み合わせが可能である。別の実施形態において、上記ＡＢＰは：（ａ）ｃＧＩＴＲ（配列番号３）に特異的に結合する；（ｂ）ｈＧＩＴＲおよびｃＧＩＴＲに対するＡＢＰの親和性より低い（より高いＫＤによって示されるとおりの）親和性でｍＧＩＴＲ（配列番号４）に結合する；ならびに（ｃ）ＧＩＴＲへのＧＩＴＲＬの結合を増強する。
別の局面において、ＧＩＴＲへの結合に関して、請求項１〜２６のいずれか１項に記載のＡＢＰと競合するＡＢＰが提供され、ここで上記ＡＢＰは：（ａ）ｃＧＩＴＲ（配列番号３）に特異的に結合する；（ｂ）ｈＧＩＴＲおよびｃＧＩＴＲに対するＡＢＰの親和性より低い（より高いＫＤによって示されるとおりの）親和性でｍＧＩＴＲ（配列番号４）に結合する；ならびに（ｃ）ＧＩＴＲへのＧＩＴＲＬの結合を増強する。１つの実施形態において、上記ＡＢＰは、抗体を含む。別の実施形態において、上記抗体はモノクローナル抗体である。別の実施形態において、上記抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体またはキメラ抗体から選択される。別の実施形態において、上記ＡＢＰは多価である。別の実施形態において、上記ＡＢＰは抗体フラグメントを含む。
別の実施形態において、上記ＡＢＰは、代替の足場（alternative scaffold）を含む。別の実施形態において、上記ＡＢＰは、免疫グロブリン定常領域を含む。別の実施形態において、上記ＡＢＰは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、またはＩｇＭから選択されるクラスの重鎖定常領域を含む。別の実施形態において、上記ＡＢＰは、クラスＩｇＧおよびＩｇＧ４、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ３から選択されるサブクラスの重鎖定常領域を含む。
上記の局面のうちのいずれかの実施形態において、少なくとも１つのＦａｂは、ＩｇＧのＦｃドメインのＣ末端に融合する。別の実施形態において、上記ＡＢＰは、少なくとも１つのリンカーをさらに含む。別の実施形態において、上記ＩｇＧは、ＩｇＧ４である。別の実施形態において、上記ＩｇＧはＩｇＧ１である。別の実施形態において、少なくとも１つのＦａｂは、ＩｇＧのＦｃドメインのＮ末端に融合する。１つの実施形態において、上記少なくとも１つのＦａｂは、少なくとも２つのＦａｂである。別の実施形態において、上記少なくとも１つのＦａｂは、少なくとも３つのＦａｂである。別の実施形態において、上記少なくとも１つのＦａｂは、少なくとも４つのＦａｂである。別の実施形態において、２つのＦａｂは、上記ＩｇＧのＮ末端に独立して融合する。別の実施形態において、２つのＦａｂは、上記ＩｇＧのＣ末端に独立して融合する。別の実施形態において、Ｆａｂは、上記ＩｇＧの各Ｎ末端に結合し、リンカーは、上記Ｆａｂの各々に結合し、Ｆａｂは、各リンカーに結合する。別の実施形態において、Ｆａｂは、上記ＩｇＧの各Ｃ末端に結合し、リンカーは、上記Ｆａｂの各々に結合し、Ｆａｂは、各リンカーに結合する。別の実施形態において、各リンカーは配列番号５を含む。別の実施形態において、各リンカーは配列番号６を含む。
上記の局面のうちのいずれかの実施形態において、上記ＡＢＰは、共通軽鎖抗体、ｋｎｏｂｓ−ｉｎｔｏ−ｈｏｌｅｓ改変を有する抗体、ＩｇＧに結合したｓｃＦｖ、ＩｇＧに結合したＦａｂ、ダイアボディ、四価二重特異的抗体、ＤＶＤ−ＩｇＴＭ、ＤＡＲＴＴＭ、ＤｕｏＢｏｄｙ（登録商標）、ＣｏｖＸ−Ｂｏｄｙ、Ｆｃａｂ抗体、ＴａｎｄＡｂ（登録商標）、タンデムＦａｂ、ＺｙｂｏｄｙＴＭ、またはこれらの組み合わせを含む。１つの実施形態において、上記ＡＢＰは、１つより多くのＧＩＴＲ分子に結合する。別の実施形態において、上記ＡＢＰは、ＧＩＴＲＬ結合とは無関係である。別の実施形態において、上記ＡＢＰは、ＧＩＴＲへのＧＩＴＲＬの結合を、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、または少なくとも約９０％増強する。別の実施形態において、上記ＡＢＰは、ＧＩＴＲへのＧＩＴＲＬの結合を少なくとも約５０％増強する。別の実施形態において、上記標的細胞は、エフェクターＴ細胞、調節性Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、樹状細胞、およびＢ細胞から選択される。別の実施形態において、上記標的細胞は、ヘルパー（ＣＤ４＋）Ｔ細胞、細胞傷害性（ＣＤ８＋）Ｔ細胞、およびこれらの組み合わせから選択されるエフェクターＴ細胞である。別の実施形態において、上記標的細胞は、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋ 調節性Ｔ細胞、ＣＤ８＋ＣＤ２５＋ 調節性Ｔ細胞、およびこれらの組み合わせから選択される調節性Ｔ細胞である。別の実施形態において、上記組織は腫瘍である。
上記の局面のうちのいずれかの実施形態において、ｈＧＩＴＲ（配列番号１）またはｈＧＩＴＲ−Ｔ４３Ｒ（配列番号２）に対する第１の抗原結合ドメインのＫＤは、約２０ｎＭ未満である。１つの実施形態において、ｃＧＩＴＲ（配列番号３）に対する第１の抗原結合ドメインのＫＤは、約２００ｎＭ未満である、別の実施形態において、ｈＧＩＴＲ（配列番号１）またはｈＧＩＴＲ−Ｔ４３Ｒ（配列番号２）に対する第２の抗原結合ドメインのＫＤは、約１００ｎＭ未満である。別の実施形態において、ｃＧＩＴＲ（配列番号３）に対する第２の抗原結合ドメインのＫＤは、約１μＭ未満である。別の実施形態において、上記ＡＢＰは、ＩｇＧ１ Ｆｃドメインと比較した場合に、低下したエフェクター機能を有するＦｃドメインを含む。別の実施形態において、上記ＡＢＰは、無グリコシル化Ｆｃドメインを含む。別の実施形態において、上記ＡＢＰは、２３４位、２３５位、２６５位、および２９７位のうちの１またはこれより多くでアラニンを有するＩｇＧ１ Ｆｃドメインを含む。
上記の局面のうちのいずれかの実施形態において、上記ＧＩＴＲは、標的細胞の表面上で発現される。１つの実施形態において、上記ＡＢＰは、標的細胞の表面上で発現されるＧＩＴＲをマルチマー化する。１つの実施形態において、上記ＡＢＰは、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、または１２個のＧＩＴＲ分子をマルチマー化する。
上記の局面のうちのいずれかの実施形態において、上記ＡＢＰは、ヒトＧＩＴＲ（ｈＧＩＴＲ；配列番号１）のエピトープに特異的に結合し、かつＲ５６、Ｃ５８、Ｒ５９、Ｄ６０、Ｙ６１、Ｐ６２、Ｅ６４、Ｅ６５、Ｃ６６、およびＣ６７からなる群からの１またはこれより多くの残基に結合し得る。
上記の局面のうちのいずれかの実施形態において、上記ＡＢＰは、少なくとも２つの異なる（すなわち、異なる配列を有するおよび／または異なる残基に結合する）重鎖可変領域を含み、各々、共通軽鎖可変領域と対形成した免疫グロブリンを含む。別の実施形態において、上記共通軽鎖可変領域は、上記２つの異なる重鎖可変領域の各々とともに別個の抗原結合ドメインを形成する。別の実施形態において、上記ＡＢＰは、配列番号１８９を有する第１のＶＨ可変ドメイン、配列番号２１５を有する第２のＶＨ可変ドメイン、および配列番号１９０を有する共通可変軽鎖を含む。別の実施形態において、上記ＡＢＰは、配列番号１９９を有する第１のＶＨ可変ドメイン、配列番号２１６を有する第２のＶＨ可変ドメイン、および配列番号２００を有する共通可変軽鎖を含む。
別の局面において、上記局面のうちのいずれかのまたは付表Ａに示されるＡＢＰ、および上記ＡＢＰの使用のための指示を含むキットが、提供される。１つの実施形態において、上記ＡＢＰは凍結乾燥される。別の実施形態において、上記キットは、上記凍結乾燥されたＡＢＰの再構成のための流体をさらに含む。
抗体が細胞において発現される場合に、その抗体が翻訳後に修飾されることは、公知である。その翻訳後修飾の例としては、カルボキシペプチダーゼによる重鎖のＣ末端でのリジンの切断；ピログルタミル化によるピログルタミン酸への重鎖および軽鎖のＮ末端でのグルタミンまたはグルタミン酸の改変；グリコシル化；酸化；脱アミド化；および糖化が挙げられ、このような翻訳後修飾が種々の抗体で起こることは、公知である（ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， ２００８， Ｖｏｌ． ９７， ｐ． ２４２６−２４４７（その全体において参考として援用される）を参照のこと）。いくつかの実施形態において、本発明のＡＢＰは、翻訳後修飾を受けた抗体またはその抗原結合フラグメントである。翻訳後修飾を受けた抗体またはその抗原結合フラグメントの例としては、重鎖可変領域のＮ末端においてピログルタミル化および／または重鎖のＣ末端においてリジンの欠失を受けた抗体またはその抗原結合フラグメントが挙げられる。末端でのピログルタミル化およびＣ末端でのリジンの欠失に起因するこのような翻訳後修飾が、その抗体またはそのフラグメントの活性に何ら影響を及ぼさないことは、当該分野で公知である（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， ２００６， Ｖｏｌ． ３４８， ｐ． ２４−３９（その全体において参考として援用される））。
上記の局面のうちのいずれかの実施形態において、上記ＡＢＰは、そのＮ末端においてピログルタミン酸（ｐＥ）残基を有するポリペプチド配列を含む。１つの実施形態において、上記ＡＢＰは、Ｎ末端のＱがｐＥで置換されたＶＨ配列を含む。別の実施形態において、上記ＡＢＰは、Ｎ末端のＥがｐＥで置換されたＶＬ配列を含む。別の実施形態において、上記ＡＢＰは、Ｎ末端のＱがｐＥで置換された重鎖配列を含む。
上記の局面のうちのいずれかの実施形態において、上記ＡＢＰは、Ｎ末端のＥがｐＥで置換された軽鎖配列を含む。別の実施形態において、上記ＡＢＰは、医薬としての使用のためのものである。別の実施形態において、上記ＡＢＰは、がんまたはウイルス感染の処置における使用のためのものである。
１つの実施形態において、上記ＡＢＰは、がんの処置のためのものであり、ここで上記がんは、固形腫瘍および血液腫瘍から選択される。
別の局面において、上記局面のうちのいずれかのまたは付表Ａに示されるＡＢＰ、そのＶＨ、そのＶＬ、その軽鎖、その重鎖またはその抗原結合部分をコードする単離されたポリヌクレオチドが提供される。
別の局面において、上記局面のポリヌクレオチドを含むベクターが提供される。別の局面において、上記局面のうちのいずれかのポリヌクレオチドまたはベクターを含む宿主細胞が提供される。１つの実施形態において、上記宿主細胞は、細菌細胞、真菌細胞、および哺乳動物細胞から選択される。別の実施形態において、上記宿主細胞は、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ細胞、およびＣＨＯ細胞から選択される。
別の局面において、上記局面のポリヌクレオチドまたはベクターを含む無細胞発現反応物が提供される。
別の局面において、上記局面のうちのいずれかのまたは付表Ａに示されるＡＢＰを生成するための方法が提供され、上記方法は、上記ＡＢＰを上記宿主細胞において発現する工程および上記発現されたＡＢＰを単離する工程を包含する。
別の局面において、上記局面のうちのいずれかのまたは付表Ａに示されるＡＢＰ、および薬学的に受容可能な賦形剤を含む薬学的組成物が提供される。１つの実施形態において、上記薬学的組成物中のＡＢＰの量は、被験体において、（ａ）調節性Ｔ細胞によるエフェクターＴ細胞の抑制を低減する；（ｂ）エフェクターＴ細胞を活性化する；（ｃ）組織においてまたは全身的に調節性Ｔ細胞の数を低減する；（ｄ）エフェクターＴ細胞の増殖を誘導もしくは増強する；（ｅ）腫瘍成長の速度を阻害する；（ｆ）腫瘍退縮を誘導する；または（ｇ）これらの組み合わせ、のために十分である。１つの実施形態において、上記薬学的組成物は、医薬としての使用のためのもの、例えば、がんまたはウイルス感染の処置における使用のためのものである。１つの実施形態において、上記薬学的組成物は、がんの処置における使用のためのものであり、ここで上記がんは、固形腫瘍および血液腫瘍から選択される。
別の実施形態において、上記薬学的組成物中のＡＢＰの量は、被験体において、（ａ）調節性Ｔ細胞によるエフェクターＴ細胞の抑制を低減する；（ｂ）エフェクターＴ細胞を活性化する；（ｃ）組織においてまたは全身的に調節性Ｔ細胞の数を低減する；（ｄ）エフェクターＴ細胞の増殖を誘導もしくは増強する；（ｅ）腫瘍成長の速度を阻害する；（ｆ）腫瘍退縮を誘導する；または（ｇ）これらの組み合わせ、のために十分である。
別の局面において、疾患または状態を処置または防止する必要性のある被験体において疾患または状態を処置または防止するための方法が提供され、上記方法は、有効量の上記局面のうちのいずれかのまたは付表Ａに示されるＡＢＰ、またはその薬学的組成物を上記被験体に投与することを包含する。
別の局面において、被験体において免疫細胞の活性化を増加させるための方法が提供され、上記方法は、有効量の上記局面のうちのいずれかのまたは付表Ａに示されるＡＢＰ、またはその薬学的組成物を上記被験体に投与することを包含する。１つの実施形態において、疾患または状態はがんである。
別の実施形態において、上記方法は、がん関連抗原に対する免疫応答を誘導または増強する。別の実施形態において、上記ＡＢＰは、（ａ）調節性Ｔ細胞によるエフェクターＴ細胞の抑制を低減する；（ｂ）エフェクターＴ細胞を活性化する；（ｃ）組織においてまたは全身的に調節性Ｔ細胞の数を低減する；（ｄ）エフェクターＴ細胞の増殖を誘導もしくは増強する；（ｅ）腫瘍成長の速度を阻害する；（ｆ）腫瘍退縮を誘導する；または（ｇ）これらの組み合わせ、のために十分な量で投与される。別の実施形態において、上記がんは固形がんである。別の実施形態において、上記がんは、血液のがんである。別の実施形態において、上記方法は、１またはこれより多くのさらなる治療剤を投与することをさらに包含する。１つの実施形態において、上記さらなる治療剤は、放射線、細胞傷害性薬剤、化学療法剤、細胞増殖抑制剤、抗ホルモン剤、ＥＧＦＲ阻害剤、免疫刺激剤、抗血管新生剤、およびこれらの組み合わせから選択される。１つの実施形態において、上記さらなる治療剤は、免疫刺激剤である。１つの実施形態において、上記免疫刺激剤は、免疫細胞によって発現される阻害性レセプターまたはそのリガンドのシグナル伝達を遮断する薬剤を含む。１つの実施形態において、上記免疫細胞によって発現される阻害性レセプターまたはそのリガンドは、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＮＲＰ１、ＬＡＧ−３、Ｔｉｍ３、ＴＩＧＩＴ、ニューリチン（neuritin）、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、およびこれらの組み合わせから選択される。１つの実施形態において、上記免疫刺激剤は、免疫細胞によって発現される刺激性レセプターに対するアゴニストを含む。別の実施形態において、免疫細胞によって発現される刺激性レセプターは、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ、ＣＤ４０、およびこれらの組み合わせから選択される。別の実施形態において、上記免疫刺激剤はサイトカインを含む。別の実施形態において、上記サイトカインは、ＩＬ−２、ＩＬ−５、ＩＬ−７、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、およびこれらの組み合わせから選択される。別の実施形態において、上記免疫刺激剤は腫瘍溶解性ウイルスを含む。別の実施形態において、上記腫瘍溶解性ウイルスは、単純ヘルペスウイルス、水疱性口内炎ウイルス、アデノウイルス、ニューカッスル病ウイルス、ワクシニアウイルス、マラバウイルス、およびこれらの組み合わせから選択される。別の実施形態において、上記免疫刺激剤は、キメラ抗原レセプターを発現するＴ細胞を含む。別の実施形態において、上記免疫刺激剤は、二重特異的または多重特異的なＴ細胞指向性抗体を含む。別の実施形態において、上記免疫刺激剤は、抗ＴＧＦ−β抗体、ＴＧＦ−βトラップ、またはこれらの組み合わせを含む。別の実施形態において、上記免疫刺激剤は、がん関連抗原に対するワクチンを含む。
別の局面において、免疫応答を調整する必要性のある被験体において免疫応答を調整するための方法が提供され、上記方法は、有効量の上記局面のうちのいずれかのまたは付表Ａに示されるＡＢＰ、またはその薬学的組成物を上記被験体に投与することを包含する。１つの実施形態において、上記方法は、１またはこれより多くのさらなる治療剤を上記被験体に投与することをさらに包含する。１つの実施形態において、上記さらなる治療剤は、免疫細胞の刺激性レセプターに対するアゴニストであり、免疫細胞の上記刺激性レセプターは、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０、ＣＤ１６０、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ８３リガンド、およびこれらの組み合わせから選択される。１つの実施形態において、上記さらなる治療剤は、ＩＬ−２、ＩＬ−５、ＩＬ−７、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、およびこれらの組み合わせから選択されるサイトカインである。１つの実施形態において、上記さらなる治療剤は、単純ヘルペスウイルス、水疱性口内炎ウイルス、アデノウイルス、ニューカッスル病ウイルス、ワクシニアウイルス、マラバウイルス、およびこれらの組み合わせから選択される腫瘍溶解性ウイルスである。１つの実施形態において、上記さらなる治療剤は、上記ＡＢＰと同じ薬学的組成物中に製剤化される。１つの実施形態において、上記さらなる治療剤は、上記ＡＢＰとは異なる薬学的組成物中に製剤化される。１つの実施形態において、上記さらなる治療剤は、上記ＡＢＰを投与する前に投与される。１つの実施形態において、上記さらなる治療剤は、上記ＡＢＰを投与した後に投与される。１つの実施形態において、上記さらなる治療剤は、上記ＡＢＰと同時に投与される。
別の局面において、ヒトＧＩＴＲ（ｈＧＩＴＲ；配列番号１）に特異的に結合する単離された多価抗原結合タンパク質（ＡＢＰ）が提供され、ここで上記ＡＢＰは、結合に関して、ＡＢＰ１、ＡＢＰ２、ＡＢＰ３、ＡＢＰ４、ＡＢＰ５、ＡＢＰ６、ＡＢＰ７、ＡＢＰ８、ＡＢＰ９、ＡＢＰ１０、ＡＢＰ１１、ＡＢＰ１２、ＡＢＰ１３、ＡＢＰ１４、ＡＢＰ１５、ＡＢＰ１６、ＡＢＰ１７、ＡＢＰ１８、ＡＢＰ１９、ＡＢＰ２０、ＡＢＰ２１、ＡＢＰ２２、ＡＢＰ２３、ＡＢＰ２４、ＡＢＰ２５、ＡＢＰ２６、ＡＢＰ２７、ＡＢＰ２８、ＡＢＰ２９、ＡＢＰ３０、ＡＢＰ３１、ＡＢＰ３２、ＡＢＰ３３、ａｎｄ ＡＢＰ３４、ＡＢＰ５０、ＡＢＰ５１、ＡＢＰ５２、ＡＢＰ５３、ＡＢＰ５４、ＡＢＰ５５、ＡＢＰ５６、ＡＢＰ５７、ＡＢＰ６２、ＡＢＰ６３、ＡＢＰ６４、ＡＢＰ６５、ＡＢＰ６６、ＡＢＰ６７、ＡＢＰ６８、ＡＢＰ６７、ＡＢＰ６８、ＡＢＰ６９、ＡＢＰ７０、ＡＢＰ７１、ＡＢＰ７２、ＡＢＰ７３、ＡＢＰ７４、ＡＢＰ７５、ＡＢＰ７６、ＡＢＰ７７、ＡＢＰ７８、ＡＢＰ７９、ＡＢＰ８０、ＡＢＰ８１２、ＡＢＰ８２、ＡＢＰ８３、ＡＢＰ８４、ＡＢＰ８５、ＡＢＰ８６、ＡＢＰ８７、ＡＢＰ８８、ＡＢＰ８９、ＡＢＰ９０、ＡＢＰ９１、ＡＢＰ９２、ＡＢＰ９３、ＡＢＰ９４、ＡＢＰ９５、ＡＢＰ９６、ＡＢＰ９７、ＡＢＰ９８、ＡＢＰ９９、ＡＢＰ１００、ＡＢＰ１０２、ＡＢＰ１０３、ＡＢＰ１０４、ＡＢＰ１０５、ＡＢＰ１０６、ＡＢＰ１０７、ＡＢＰ１０８およびＡＢＰ１０９（各々、本開示の付表Ａに提供されるとおり）のうちの１またはこれより多くと競合する。
別の局面において、４個の重鎖可変領域および４個の軽鎖可変領域を含む抗ヒトＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合フラグメントが提供され、ここで上記重鎖可変領域は、配列番号１３からなるＣＤＲ−Ｈ３、配列番号１２からなるＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１１からなるＣＤＲ−Ｈ１を含み；そして上記軽鎖可変領域は、配列番号１６からなるＣＤＲ−Ｌ３、配列番号１５からなるＣＤＲ−Ｌ２、および配列番号１４からなるＣＤＲ−Ｌ１を含み；そして上記１個の重鎖可変領域および上記１個の軽鎖可変領域は、１個の抗原結合部位を構成し、そして上記抗体または抗原結合フラグメントは、４個の抗原結合部位を含む。
１つの実施形態において、上記抗ヒトＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合フラグメントは、４個の重鎖可変領域および４個の軽鎖可変領域を含み、ここで上記重鎖可変領域は配列番号９からなり、上記軽鎖可変領域は配列番号１０からなり、そして上記１個の重鎖可変領域および上記１個の軽鎖可変領域は、１個の抗原結合部位を構成し、そして上記抗体または抗原結合フラグメントは、４個の抗原結合部位を含む。
１つの実施形態において、上記抗ヒトＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合フラグメントは、４個の重鎖可変領域および４個の軽鎖可変領域を含み、ここで上記重鎖可変領域は配列番号９からなり、ここで上記配列の１位のＱはピログルタミン酸に改変され、上記軽鎖可変領域は配列番号１０からなり、そして上記１個の重鎖可変領域および上記１個の軽鎖可変領域は、１個の抗原結合部位を構成し、上記抗体または抗原結合フラグメントは、４個の抗原結合部位を含む。
１つの実施形態において、上記抗ヒトＧＩＴＲ抗体は、２個の重鎖および４個の軽鎖を含み、各重鎖は、重鎖可変領域ならびにＣＨ１領域、ＣＨ２領域、およびＣＨ３領域からなる２つの構造を含み、その構造のうちの一方のＣ末端は、リンカーを通じてその他方の構造のＮ末端に連結され、そして各軽鎖は、軽鎖可変領域および軽鎖定常領域を含む（図１Ｂの左パネル）。
１つの実施形態において、上記抗ヒトＧＩＴＲ抗体は、２個の重鎖および４個の軽鎖を含み、重鎖は各々、第１の重鎖可変領域ならびに第１のＣＨ１領域、リンカー、第２の重鎖可変領域、第２のＣＨ１領域、ＣＨ２領域、およびＣＨ３領域を含み、そして各軽鎖は、軽鎖可変領域および軽鎖定常領域を含む（図１Ｂの左パネル）。
１つの実施形態において、上記抗ヒトＧＩＴＲ抗体は、２個の重鎖および４個の軽鎖を含み；各重鎖は、配列番号１３からなるＣＤＲ−Ｈ３、配列番号１２からなるＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１１からなるＣＤＲ−Ｈ１を含む重鎖可変領域ならびにＣＨ１領域、ＣＨ２領域、およびＣＨ３領域からなる２つの構造を含み、そして上記構造のうちの一方のカルボキシ末端（Ｃ末端）は、リンカーを通じてその他方の構造のアミノ末端（Ｎ末端）に連結され；そして各軽鎖は、配列番号１６からなるＣＤＲ−Ｌ３、配列番号１５からなるＣＤＲ−Ｌ２、および配列番号１４からなるＣＤＲ−Ｌ１を含む軽鎖可変領域を含む。
１つの実施形態において、上記抗ヒトＧＩＴＲ抗体は、２個の重鎖および４個の軽鎖を含み；各重鎖は、第１の重鎖可変領域および第２の重鎖可変領域を含み、各々、配列番号１３からなるＣＤＲ−Ｈ３、配列番号１２からなるＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１１からなるＣＤＲ−Ｈ１；第１のＣＨ１領域、リンカー、第２のＣＨ１領域、ＣＨ２領域、およびＣＨ３領域を含み；そして各軽鎖は、配列番号１６からなるＣＤＲ−Ｌ３、配列番号１５からなるＣＤＲ−Ｌ２、および配列番号１４からなるＣＤＲ−Ｌ１を含む軽鎖可変領域を含む。
１つの実施形態において、上記抗ヒトＧＩＴＲ抗体は、２個の重鎖および４個の軽鎖を含み、ここで各重鎖は、配列番号９の重鎖可変領域ならびにＣＨ１領域、ＣＨ２領域、およびＣＨ３領域からなる２つの構造を含み、そして上記構造のうちの一方のＣ末端は、リンカーを通じて他方の構造のＮ末端に連結され、そして各軽鎖は、配列番号１０の軽鎖可変領域、および軽鎖定常領域を含む。
１つの実施形態において、上記抗ヒトＧＩＴＲ抗体は、２個の重鎖および４個の軽鎖を含み、各重鎖は、第１の重鎖可変領域および第２の重鎖可変領域（各々、配列番号９として示されるとおり）；第１のＣＨ１領域、リンカー、第２のＣＨ１領域、ＣＨ２領域、およびＣＨ３領域を含み；そしてここで各軽鎖は、配列番号１０の軽鎖可変領域、および軽鎖定常領域を含む。
１つの実施形態において、上記抗ヒトＧＩＴＲ抗体は、２個の重鎖および４個の軽鎖を含み、ここで各重鎖は、配列番号９の重鎖可変領域ならびにＣＨ１領域、ＣＨ２領域、およびＣＨ３領域からなる２つの構造を含み、上記構造のうちの一方のＣ末端は、リンカーを通じて他方の構造のＮ末端に連結され、ここで上記配列の１位のＱは、ピログルタミン酸に改変され、そして各軽鎖は、配列番号１０の軽鎖可変領域、および軽鎖定常領域を含む。
１つの実施形態において、上記抗ヒトＧＩＴＲ抗体は、２個の重鎖および４個の軽鎖を含み、各重鎖は、第１の重鎖可変領域および第２の重鎖可変領域（各々、配列番号９として示されるとおり）；第１のＣＨ１領域、リンカー、第２のＣＨ１領域、ＣＨ２領域、およびＣＨ３領域を含み；ここで上記配列の１位のＱは、ピログルタミン酸に改変され、そして各軽鎖は、配列番号１０の軽鎖可変領域、および軽鎖定常領域を含む。
１つの実施形態において、上記抗ヒトＧＩＴＲ抗体は、配列番号７の２個の重鎖（各々は、２個の可変領域を有する）および配列番号８の４個の軽鎖を含む。
１つの実施形態において、上記抗ヒトＧＩＴＲ抗体は、配列番号７の２個の重鎖（各々は、２個の可変領域を有する）であって、ここで上記配列の１位のＱは、ピログルタミン酸に改変されるものおよび配列番号８の４個の軽鎖を含む。
１つの実施形態において、上記抗ヒトＧＩＴＲ抗体は、配列番号７の１位のＱから６８６位のＧまでの範囲に及ぶアミノ酸配列からなる２個の重鎖（各々は、２個の可変領域を有する）、および配列番号８の４個の軽鎖を含む。
１つの実施形態において、上記抗ヒトＧＩＴＲ抗体は、配列番号７の１位のＱから６８６位のＧまでの範囲に及ぶアミノ酸配列からなる２個の重鎖であって、ここで上記Ｑは、ピログルタミン酸に改変される重鎖、および配列番号８の４個の軽鎖を含む。
図１は、本明細書で提供されるある種の例証的ＧＩＴＲ ＡＢＰの活性の機構の模式図を提供する。図１Ａは、細胞膜（１０２）に埋め込まれた３個のＧＩＴＲ分子（１個が１０１と表示）を示す。ちょうど２個のＧＩＴＲ分子を結合する古典的形式の抗体の略画が示される（１０３）。図１Ｂは、本明細書で開示される四価一重特異的（ＴＭ）形式抗体の略画を示す：左パネル（１０５）は、Ｃ末端ＩｇＧ４ Ｓ２２８Ｐ抗体とともに２個のＮ末端ＩｇＧ１ Ｆａｂを含むＴＭを示す；右パネル（１０６）は、２個のＣ末端ＩｇＧ１ ＦａｂおよびＮ末端ＩｇＧ４ Ｓ２２８Ｐ抗体を含むＴＭを示す。その抗原結合ドメインは、白丸（１０７）によって図示される。図１Ｃは、本明細書で開示される四価二重特異的形式抗体の略画を示す：左パネル（１０５）は、Ｃ末端ＩｇＧ４ Ｓ２２８Ｐ抗体とともに、２個のＮ末端ＩｇＧ１ Ｆａｂを含む二重特異的抗体を示す；右パネル（１０６）は、２個のＣ末端ＩｇＧ１ ＦａｂおよびＮ末端ＩｇＧ４ Ｓ２２８Ｐ抗体を含む二重特異的抗体を示す。２個の重なり合わないエピトープ特異性に対して特異性を有するその抗原結合ドメインは、白丸によって図示される（１０７および１０８）。図１Ｄは、３個の例証的四価一重特異的（ＴＭ）形式ＡＢＰの結合後のＧＩＴＲのマルチマー化を示す。このようなマルチマー化は、本開示の他の箇所で記載されるように、ＧＩＴＲシグナル伝達をアゴナイズすると予測される。
図２は、Ｎ末端Ｆａｂ形式ＡＢＰ１〜８に対するＯＣＴＥＴによるＫＤの決定の例示的結果を示すグラフである。
図３は、ＣＤ４＋Ｔ細胞（図３Ａ）およびＣＤ８＋Ｔ細胞（図３Ｂ）Ｔ細胞へのＮ末端Ｆａｂ ＴＭ形式ＡＢＰの例示的パネルの結合を実証するＦＡＣＳ分析の結果を示す一連のグラフである。ＣＤ４＋およびＣＤ８＋の分布は、各図の左上パネルに示される。上段では、左から右に、抗ＧＩＴＲ陽性コントロール、および抗ヒトＩｇＧ４アイソタイプコントロール、ＡＢＰ９、ＡＢＰ２、ＡＢＰ１、およびＡＢＰ７が示される。下段では、ＡＢＰ８、ＡＢＰ３、ＡＢＰ４、ＡＢＰ５、ＡＢＰ６、ＡＢＰ２３、およびＡＢＰ２４が示される。陽性染色されたＩｇＧ４＋ ＣＤ４／８＋細胞のパーセンテージが示される；ＭＲＩは、括弧の中に示される。 図３は、ＣＤ４＋Ｔ細胞（図３Ａ）およびＣＤ８＋Ｔ細胞（図３Ｂ）Ｔ細胞へのＮ末端Ｆａｂ ＴＭ形式ＡＢＰの例示的パネルの結合を実証するＦＡＣＳ分析の結果を示す一連のグラフである。ＣＤ４＋およびＣＤ８＋の分布は、各図の左上パネルに示される。上段では、左から右に、抗ＧＩＴＲ陽性コントロール、および抗ヒトＩｇＧ４アイソタイプコントロール、ＡＢＰ９、ＡＢＰ２、ＡＢＰ１、およびＡＢＰ７が示される。下段では、ＡＢＰ８、ＡＢＰ３、ＡＢＰ４、ＡＢＰ５、ＡＢＰ６、ＡＢＰ２３、およびＡＢＰ２４が示される。陽性染色されたＩｇＧ４＋ ＣＤ４／８＋細胞のパーセンテージが示される；ＭＲＩは、括弧の中に示される。
図４は、Ｎ末端Ｆａｂ ＴＭ形式において８種の最適化したアゴニスト抗体の活性を示す一連のグラフである。ヒトＧＩＴＲ（左パネル）またはカニクイザルＧＩＴＲ（右パネル）を安定して発現するＨＴ１０８０細胞を、次いで、ＡＢＰ１（図４Ａ）、ＡＢＰ２（図４Ｂ）、ＡＢＰ３（図４Ｃ）、ＡＢＰ４（図４Ｄ）、ＡＢＰ５（図４Ｅ）、ＡＢＰ６（図４Ｆ）、ＡＢＰ７（図４Ｇ）、およびＡＢＰ８（図４Ｈ）（図中に丸として示す）とともにインキュベートし、ＩＬ−８誘導を測定した。ＧＩＴＲＬをコントロールとして使用した（四角）。ＥＣ５０値の表は、各図の各パネルの下に示される。 図４は、Ｎ末端Ｆａｂ ＴＭ形式において８種の最適化したアゴニスト抗体の活性を示す一連のグラフである。ヒトＧＩＴＲ（左パネル）またはカニクイザルＧＩＴＲ（右パネル）を安定して発現するＨＴ１０８０細胞を、次いで、ＡＢＰ１（図４Ａ）、ＡＢＰ２（図４Ｂ）、ＡＢＰ３（図４Ｃ）、ＡＢＰ４（図４Ｄ）、ＡＢＰ５（図４Ｅ）、ＡＢＰ６（図４Ｆ）、ＡＢＰ７（図４Ｇ）、およびＡＢＰ８（図４Ｈ）（図中に丸として示す）とともにインキュベートし、ＩＬ−８誘導を測定した。ＧＩＴＲＬをコントロールとして使用した（四角）。ＥＣ５０値の表は、各図の各パネルの下に示される。 図４は、Ｎ末端Ｆａｂ ＴＭ形式において８種の最適化したアゴニスト抗体の活性を示す一連のグラフである。ヒトＧＩＴＲ（左パネル）またはカニクイザルＧＩＴＲ（右パネル）を安定して発現するＨＴ１０８０細胞を、次いで、ＡＢＰ１（図４Ａ）、ＡＢＰ２（図４Ｂ）、ＡＢＰ３（図４Ｃ）、ＡＢＰ４（図４Ｄ）、ＡＢＰ５（図４Ｅ）、ＡＢＰ６（図４Ｆ）、ＡＢＰ７（図４Ｇ）、およびＡＢＰ８（図４Ｈ）（図中に丸として示す）とともにインキュベートし、ＩＬ−８誘導を測定した。ＧＩＴＲＬをコントロールとして使用した（四角）。ＥＣ５０値の表は、各図の各パネルの下に示される。 図４は、Ｎ末端Ｆａｂ ＴＭ形式において８種の最適化したアゴニスト抗体の活性を示す一連のグラフである。ヒトＧＩＴＲ（左パネル）またはカニクイザルＧＩＴＲ（右パネル）を安定して発現するＨＴ１０８０細胞を、次いで、ＡＢＰ１（図４Ａ）、ＡＢＰ２（図４Ｂ）、ＡＢＰ３（図４Ｃ）、ＡＢＰ４（図４Ｄ）、ＡＢＰ５（図４Ｅ）、ＡＢＰ６（図４Ｆ）、ＡＢＰ７（図４Ｇ）、およびＡＢＰ８（図４Ｈ）（図中に丸として示す）とともにインキュベートし、ＩＬ−８誘導を測定した。ＧＩＴＲＬをコントロールとして使用した（四角）。ＥＣ５０値の表は、各図の各パネルの下に示される。 図４は、Ｎ末端Ｆａｂ ＴＭ形式において８種の最適化したアゴニスト抗体の活性を示す一連のグラフである。ヒトＧＩＴＲ（左パネル）またはカニクイザルＧＩＴＲ（右パネル）を安定して発現するＨＴ１０８０細胞を、次いで、ＡＢＰ１（図４Ａ）、ＡＢＰ２（図４Ｂ）、ＡＢＰ３（図４Ｃ）、ＡＢＰ４（図４Ｄ）、ＡＢＰ５（図４Ｅ）、ＡＢＰ６（図４Ｆ）、ＡＢＰ７（図４Ｇ）、およびＡＢＰ８（図４Ｈ）（図中に丸として示す）とともにインキュベートし、ＩＬ−８誘導を測定した。ＧＩＴＲＬをコントロールとして使用した（四角）。ＥＣ５０値の表は、各図の各パネルの下に示される。 図４は、Ｎ末端Ｆａｂ ＴＭ形式において８種の最適化したアゴニスト抗体の活性を示す一連のグラフである。ヒトＧＩＴＲ（左パネル）またはカニクイザルＧＩＴＲ（右パネル）を安定して発現するＨＴ１０８０細胞を、次いで、ＡＢＰ１（図４Ａ）、ＡＢＰ２（図４Ｂ）、ＡＢＰ３（図４Ｃ）、ＡＢＰ４（図４Ｄ）、ＡＢＰ５（図４Ｅ）、ＡＢＰ６（図４Ｆ）、ＡＢＰ７（図４Ｇ）、およびＡＢＰ８（図４Ｈ）（図中に丸として示す）とともにインキュベートし、ＩＬ−８誘導を測定した。ＧＩＴＲＬをコントロールとして使用した（四角）。ＥＣ５０値の表は、各図の各パネルの下に示される。 図４は、Ｎ末端Ｆａｂ ＴＭ形式において８種の最適化したアゴニスト抗体の活性を示す一連のグラフである。ヒトＧＩＴＲ（左パネル）またはカニクイザルＧＩＴＲ（右パネル）を安定して発現するＨＴ１０８０細胞を、次いで、ＡＢＰ１（図４Ａ）、ＡＢＰ２（図４Ｂ）、ＡＢＰ３（図４Ｃ）、ＡＢＰ４（図４Ｄ）、ＡＢＰ５（図４Ｅ）、ＡＢＰ６（図４Ｆ）、ＡＢＰ７（図４Ｇ）、およびＡＢＰ８（図４Ｈ）（図中に丸として示す）とともにインキュベートし、ＩＬ−８誘導を測定した。ＧＩＴＲＬをコントロールとして使用した（四角）。ＥＣ５０値の表は、各図の各パネルの下に示される。 図４は、Ｎ末端Ｆａｂ ＴＭ形式において８種の最適化したアゴニスト抗体の活性を示す一連のグラフである。ヒトＧＩＴＲ（左パネル）またはカニクイザルＧＩＴＲ（右パネル）を安定して発現するＨＴ１０８０細胞を、次いで、ＡＢＰ１（図４Ａ）、ＡＢＰ２（図４Ｂ）、ＡＢＰ３（図４Ｃ）、ＡＢＰ４（図４Ｄ）、ＡＢＰ５（図４Ｅ）、ＡＢＰ６（図４Ｆ）、ＡＢＰ７（図４Ｇ）、およびＡＢＰ８（図４Ｈ）（図中に丸として示す）とともにインキュベートし、ＩＬ−８誘導を測定した。ＧＩＴＲＬをコントロールとして使用した（四角）。ＥＣ５０値の表は、各図の各パネルの下に示される。
図５は、親のＮ末端Ｆａｂ ＴＭ形式抗体であるＡＢＰ４３のＧＩＴＲを発現するＨＴ１０８０細胞におけるアゴニスト活性を、Ｎ末端形式またはＣ末端形式のいずれかを有する多くのさらなる最適化抗体と比較する一連のグラフである。図５Ａは、ＡＢＰ４３（四角）、ＡＢＰ２３（丸）、ＡＢＰ２４（三角）、およびＡＢＰ２９（白丸）、ＡＢＰ３０（白三角）、ＡＢＰ３１（白丸）、およびＡＢＰ３２（白三角）を、全てＧＩＴＲＬ（＋記号）との比較において示す。図５Ｂは、ＡＢＰ１９（Ｎ末端Ｆａｂ、三角）およびＡＢＰ２５（Ｃ末端Ｆａｂ、逆向き三角）を示す。ＧＩＴＲＬは＋記号として示される。図５ＣはＡＢＰ２１（Ｎ末端Ｆａｂ、三角）およびＡＢＰ２７（Ｃ末端Ｆａｂ、逆向き三角）を示す。ＧＩＴＲＬは＋記号として示される。図５Ｄは、ＡＢＰ２０（Ｎ末端Ｆａｂ、三角）およびＡＢＰ２６（Ｃ末端Ｆａｂ、逆向き三角）を示す。ＧＩＴＲＬは＋記号として示される。図５Ｅは、ＡＢＰ２２（Ｎ末端Ｆａｂ、三角）およびＡＢＰ２８（Ｃ末端Ｆａｂ、逆向き三角）を示す。ＧＩＴＲＬは＋記号として示される。ＩｇＧ４コントロールは、各図においてＸ記号として示される。 図５は、親のＮ末端Ｆａｂ ＴＭ形式抗体であるＡＢＰ４３のＧＩＴＲを発現するＨＴ１０８０細胞におけるアゴニスト活性を、Ｎ末端形式またはＣ末端形式のいずれかを有する多くのさらなる最適化抗体と比較する一連のグラフである。図５Ａは、ＡＢＰ４３（四角）、ＡＢＰ２３（丸）、ＡＢＰ２４（三角）、およびＡＢＰ２９（白丸）、ＡＢＰ３０（白三角）、ＡＢＰ３１（白丸）、およびＡＢＰ３２（白三角）を、全てＧＩＴＲＬ（＋記号）との比較において示す。図５Ｂは、ＡＢＰ１９（Ｎ末端Ｆａｂ、三角）およびＡＢＰ２５（Ｃ末端Ｆａｂ、逆向き三角）を示す。ＧＩＴＲＬは＋記号として示される。図５ＣはＡＢＰ２１（Ｎ末端Ｆａｂ、三角）およびＡＢＰ２７（Ｃ末端Ｆａｂ、逆向き三角）を示す。ＧＩＴＲＬは＋記号として示される。図５Ｄは、ＡＢＰ２０（Ｎ末端Ｆａｂ、三角）およびＡＢＰ２６（Ｃ末端Ｆａｂ、逆向き三角）を示す。ＧＩＴＲＬは＋記号として示される。図５Ｅは、ＡＢＰ２２（Ｎ末端Ｆａｂ、三角）およびＡＢＰ２８（Ｃ末端Ｆａｂ、逆向き三角）を示す。ＧＩＴＲＬは＋記号として示される。ＩｇＧ４コントロールは、各図においてＸ記号として示される。 図５は、親のＮ末端Ｆａｂ ＴＭ形式抗体であるＡＢＰ４３のＧＩＴＲを発現するＨＴ１０８０細胞におけるアゴニスト活性を、Ｎ末端形式またはＣ末端形式のいずれかを有する多くのさらなる最適化抗体と比較する一連のグラフである。図５Ａは、ＡＢＰ４３（四角）、ＡＢＰ２３（丸）、ＡＢＰ２４（三角）、およびＡＢＰ２９（白丸）、ＡＢＰ３０（白三角）、ＡＢＰ３１（白丸）、およびＡＢＰ３２（白三角）を、全てＧＩＴＲＬ（＋記号）との比較において示す。図５Ｂは、ＡＢＰ１９（Ｎ末端Ｆａｂ、三角）およびＡＢＰ２５（Ｃ末端Ｆａｂ、逆向き三角）を示す。ＧＩＴＲＬは＋記号として示される。図５ＣはＡＢＰ２１（Ｎ末端Ｆａｂ、三角）およびＡＢＰ２７（Ｃ末端Ｆａｂ、逆向き三角）を示す。ＧＩＴＲＬは＋記号として示される。図５Ｄは、ＡＢＰ２０（Ｎ末端Ｆａｂ、三角）およびＡＢＰ２６（Ｃ末端Ｆａｂ、逆向き三角）を示す。ＧＩＴＲＬは＋記号として示される。図５Ｅは、ＡＢＰ２２（Ｎ末端Ｆａｂ、三角）およびＡＢＰ２８（Ｃ末端Ｆａｂ、逆向き三角）を示す。ＧＩＴＲＬは＋記号として示される。ＩｇＧ４コントロールは、各図においてＸ記号として示される。 図５は、親のＮ末端Ｆａｂ ＴＭ形式抗体であるＡＢＰ４３のＧＩＴＲを発現するＨＴ１０８０細胞におけるアゴニスト活性を、Ｎ末端形式またはＣ末端形式のいずれかを有する多くのさらなる最適化抗体と比較する一連のグラフである。図５Ａは、ＡＢＰ４３（四角）、ＡＢＰ２３（丸）、ＡＢＰ２４（三角）、およびＡＢＰ２９（白丸）、ＡＢＰ３０（白三角）、ＡＢＰ３１（白丸）、およびＡＢＰ３２（白三角）を、全てＧＩＴＲＬ（＋記号）との比較において示す。図５Ｂは、ＡＢＰ１９（Ｎ末端Ｆａｂ、三角）およびＡＢＰ２５（Ｃ末端Ｆａｂ、逆向き三角）を示す。ＧＩＴＲＬは＋記号として示される。図５ＣはＡＢＰ２１（Ｎ末端Ｆａｂ、三角）およびＡＢＰ２７（Ｃ末端Ｆａｂ、逆向き三角）を示す。ＧＩＴＲＬは＋記号として示される。図５Ｄは、ＡＢＰ２０（Ｎ末端Ｆａｂ、三角）およびＡＢＰ２６（Ｃ末端Ｆａｂ、逆向き三角）を示す。ＧＩＴＲＬは＋記号として示される。図５Ｅは、ＡＢＰ２２（Ｎ末端Ｆａｂ、三角）およびＡＢＰ２８（Ｃ末端Ｆａｂ、逆向き三角）を示す。ＧＩＴＲＬは＋記号として示される。ＩｇＧ４コントロールは、各図においてＸ記号として示される。 図５は、親のＮ末端Ｆａｂ ＴＭ形式抗体であるＡＢＰ４３のＧＩＴＲを発現するＨＴ１０８０細胞におけるアゴニスト活性を、Ｎ末端形式またはＣ末端形式のいずれかを有する多くのさらなる最適化抗体と比較する一連のグラフである。図５Ａは、ＡＢＰ４３（四角）、ＡＢＰ２３（丸）、ＡＢＰ２４（三角）、およびＡＢＰ２９（白丸）、ＡＢＰ３０（白三角）、ＡＢＰ３１（白丸）、およびＡＢＰ３２（白三角）を、全てＧＩＴＲＬ（＋記号）との比較において示す。図５Ｂは、ＡＢＰ１９（Ｎ末端Ｆａｂ、三角）およびＡＢＰ２５（Ｃ末端Ｆａｂ、逆向き三角）を示す。ＧＩＴＲＬは＋記号として示される。図５ＣはＡＢＰ２１（Ｎ末端Ｆａｂ、三角）およびＡＢＰ２７（Ｃ末端Ｆａｂ、逆向き三角）を示す。ＧＩＴＲＬは＋記号として示される。図５Ｄは、ＡＢＰ２０（Ｎ末端Ｆａｂ、三角）およびＡＢＰ２６（Ｃ末端Ｆａｂ、逆向き三角）を示す。ＧＩＴＲＬは＋記号として示される。図５Ｅは、ＡＢＰ２２（Ｎ末端Ｆａｂ、三角）およびＡＢＰ２８（Ｃ末端Ｆａｂ、逆向き三角）を示す。ＧＩＴＲＬは＋記号として示される。ＩｇＧ４コントロールは、各図においてＸ記号として示される。
図６は、実施例に記載されるとおりのＨＴ１０８０アッセイにおけるＡＢＰ３３およびＡＢＰ３４のＥＣ５０決定の結果を示す。ＡＢＰ３３（ＩｇＧ４ ＡＢＰ６１とＮ末端にＡＢＰ５８のＩｇＧ１ Ｆａｂとを併せ持つ四価バージョン）およびＡＢＰ３４（ＡＢＰ６１のＩｇＧ４とＣ末端にＡＢＰ５８のＩｇＧ１ Ｆａｂとを併せ持つ四価バージョン）を、ＡＢＰ３３およびＡＢＰ３４の基礎である二価ＡＢＰ５９およびＡＢＰ６１（ＩｇＧ４ Ｓ２２８Ｐ）と比較した。図に示されるように、その二重特異的四価抗体はともに、その二重特異的四価抗体を構築するために使用した個々の二価抗体をと比較した場合に、ＩＬ−８誘導によって測定されるように優れたＥＣ５０を有した。
図７は、上記のＨＴ１０８０細胞に関して記載されるとおりのＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞アッセイにおけるＥＣ５０決定の結果を示す。最適化Ｎ末端Ｆａｂ ＴＭ形式ＡＢＰを、ＩＬ−８生成によって測定されるように、ＧＩＴＲをアゴナイズするそれらの能力に関してＧＩＴＲＬと比較した。図７Ａ〜７Ｈは、それぞれ、ＡＢＰ１〜８を示す。 図７は、上記のＨＴ１０８０細胞に関して記載されるとおりのＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞アッセイにおけるＥＣ５０決定の結果を示す。最適化Ｎ末端Ｆａｂ ＴＭ形式ＡＢＰを、ＩＬ−８生成によって測定されるように、ＧＩＴＲをアゴナイズするそれらの能力に関してＧＩＴＲＬと比較した。図７Ａ〜７Ｈは、それぞれ、ＡＢＰ１〜８を示す。 図７は、上記のＨＴ１０８０細胞に関して記載されるとおりのＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞アッセイにおけるＥＣ５０決定の結果を示す。最適化Ｎ末端Ｆａｂ ＴＭ形式ＡＢＰを、ＩＬ−８生成によって測定されるように、ＧＩＴＲをアゴナイズするそれらの能力に関してＧＩＴＲＬと比較した。図７Ａ〜７Ｈは、それぞれ、ＡＢＰ１〜８を示す。 図７は、上記のＨＴ１０８０細胞に関して記載されるとおりのＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞アッセイにおけるＥＣ５０決定の結果を示す。最適化Ｎ末端Ｆａｂ ＴＭ形式ＡＢＰを、ＩＬ−８生成によって測定されるように、ＧＩＴＲをアゴナイズするそれらの能力に関してＧＩＴＲＬと比較した。図７Ａ〜７Ｈは、それぞれ、ＡＢＰ１〜８を示す。 図７は、上記のＨＴ１０８０細胞に関して記載されるとおりのＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞アッセイにおけるＥＣ５０決定の結果を示す。最適化Ｎ末端Ｆａｂ ＴＭ形式ＡＢＰを、ＩＬ−８生成によって測定されるように、ＧＩＴＲをアゴナイズするそれらの能力に関してＧＩＴＲＬと比較した。図７Ａ〜７Ｈは、それぞれ、ＡＢＰ１〜８を示す。 図７は、上記のＨＴ１０８０細胞に関して記載されるとおりのＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞アッセイにおけるＥＣ５０決定の結果を示す。最適化Ｎ末端Ｆａｂ ＴＭ形式ＡＢＰを、ＩＬ−８生成によって測定されるように、ＧＩＴＲをアゴナイズするそれらの能力に関してＧＩＴＲＬと比較した。図７Ａ〜７Ｈは、それぞれ、ＡＢＰ１〜８を示す。 図７は、上記のＨＴ１０８０細胞に関して記載されるとおりのＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞アッセイにおけるＥＣ５０決定の結果を示す。最適化Ｎ末端Ｆａｂ ＴＭ形式ＡＢＰを、ＩＬ−８生成によって測定されるように、ＧＩＴＲをアゴナイズするそれらの能力に関してＧＩＴＲＬと比較した。図７Ａ〜７Ｈは、それぞれ、ＡＢＰ１〜８を示す。 図７は、上記のＨＴ１０８０細胞に関して記載されるとおりのＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞アッセイにおけるＥＣ５０決定の結果を示す。最適化Ｎ末端Ｆａｂ ＴＭ形式ＡＢＰを、ＩＬ−８生成によって測定されるように、ＧＩＴＲをアゴナイズするそれらの能力に関してＧＩＴＲＬと比較した。図７Ａ〜７Ｈは、それぞれ、ＡＢＰ１〜８を示す。
図８Ａは、２名のヒトドナーから単離されたＴ細胞の三連の定量からのＦＡＣＳ分析を示し、ＰＨＡでの刺激ありまたはなしでの種々の時点でのＧＩＴＲ＋ ＣＤ４＋細胞（左）およびＧＩＴＲ＋ ＣＤ８＋細胞（右）のパーセンテージを示す。
図８Ｂ〜８Ｍは、コントロールまたはＡＢＰで処置した４名の異なるドナーに由来するＴ芽球の処理の結果およびその得られたＩＬ−２生成（データは、コントロール培地中で達成されたＩＬ−２生成のレベルに対して正規化）を示す。各図において、上段（左から右）は、ＣＤ４＋細胞への上記ＡＢＰ結合のＦＡＣＳ測定、ドナー１に由来する細胞でのＩＬ−２生成、ドナー２に由来する細胞でのＩＬ−２生成である。下段は、左から右に、ＣＤ８＋細胞への上記ＡＢＰ結合のＦＡＣＳ測定、ドナー３に由来する細胞でのＩＬ−２生成、ドナー４に由来する細胞でのＩＬ−２生成である。データは、以下のように示される： ８Ｂ：ＩｇＧ４アイソタイプコントロール； ８Ｃ：ＳＥＣ４抗体； ８Ｄ：ＩｇＧ４ ＴＭ形式陰性コントロール； ８Ｅ：ＡＢＰ９（ＡＢＰ１〜８のＴＭ形式ＩｇＧ４非最適化親）。８Ｆ：ＡＢＰ１； ８Ｇ：ＡＢＰ２； ８Ｈ：ＡＢＰ３； ８Ｉ：ＡＢＰ４； ８Ｊ：ＡＢＰ５； ８Ｋ：ＡＢＰ６； ８Ｌ：ＡＢＰ７； ８Ｍ：ＡＢＰ８。 図８Ｂ〜８Ｍは、コントロールまたはＡＢＰで処置した４名の異なるドナーに由来するＴ芽球の処理の結果およびその得られたＩＬ−２生成（データは、コントロール培地中で達成されたＩＬ−２生成のレベルに対して正規化）を示す。各図において、上段（左から右）は、ＣＤ４＋細胞への上記ＡＢＰ結合のＦＡＣＳ測定、ドナー１に由来する細胞でのＩＬ−２生成、ドナー２に由来する細胞でのＩＬ−２生成である。下段は、左から右に、ＣＤ８＋細胞への上記ＡＢＰ結合のＦＡＣＳ測定、ドナー３に由来する細胞でのＩＬ−２生成、ドナー４に由来する細胞でのＩＬ−２生成である。データは、以下のように示される： ８Ｂ：ＩｇＧ４アイソタイプコントロール； ８Ｃ：ＳＥＣ４抗体； ８Ｄ：ＩｇＧ４ ＴＭ形式陰性コントロール； ８Ｅ：ＡＢＰ９（ＡＢＰ１〜８のＴＭ形式ＩｇＧ４非最適化親）。８Ｆ：ＡＢＰ１； ８Ｇ：ＡＢＰ２； ８Ｈ：ＡＢＰ３； ８Ｉ：ＡＢＰ４； ８Ｊ：ＡＢＰ５； ８Ｋ：ＡＢＰ６； ８Ｌ：ＡＢＰ７； ８Ｍ：ＡＢＰ８。 図８Ｂ〜８Ｍは、コントロールまたはＡＢＰで処置した４名の異なるドナーに由来するＴ芽球の処理の結果およびその得られたＩＬ−２生成（データは、コントロール培地中で達成されたＩＬ−２生成のレベルに対して正規化）を示す。各図において、上段（左から右）は、ＣＤ４＋細胞への上記ＡＢＰ結合のＦＡＣＳ測定、ドナー１に由来する細胞でのＩＬ−２生成、ドナー２に由来する細胞でのＩＬ−２生成である。下段は、左から右に、ＣＤ８＋細胞への上記ＡＢＰ結合のＦＡＣＳ測定、ドナー３に由来する細胞でのＩＬ−２生成、ドナー４に由来する細胞でのＩＬ−２生成である。データは、以下のように示される： ８Ｂ：ＩｇＧ４アイソタイプコントロール； ８Ｃ：ＳＥＣ４抗体； ８Ｄ：ＩｇＧ４ ＴＭ形式陰性コントロール； ８Ｅ：ＡＢＰ９（ＡＢＰ１〜８のＴＭ形式ＩｇＧ４非最適化親）。８Ｆ：ＡＢＰ１； ８Ｇ：ＡＢＰ２； ８Ｈ：ＡＢＰ３； ８Ｉ：ＡＢＰ４； ８Ｊ：ＡＢＰ５； ８Ｋ：ＡＢＰ６； ８Ｌ：ＡＢＰ７； ８Ｍ：ＡＢＰ８。 図８Ｂ〜８Ｍは、コントロールまたはＡＢＰで処置した４名の異なるドナーに由来するＴ芽球の処理の結果およびその得られたＩＬ−２生成（データは、コントロール培地中で達成されたＩＬ−２生成のレベルに対して正規化）を示す。各図において、上段（左から右）は、ＣＤ４＋細胞への上記ＡＢＰ結合のＦＡＣＳ測定、ドナー１に由来する細胞でのＩＬ−２生成、ドナー２に由来する細胞でのＩＬ−２生成である。下段は、左から右に、ＣＤ８＋細胞への上記ＡＢＰ結合のＦＡＣＳ測定、ドナー３に由来する細胞でのＩＬ−２生成、ドナー４に由来する細胞でのＩＬ−２生成である。データは、以下のように示される： ８Ｂ：ＩｇＧ４アイソタイプコントロール； ８Ｃ：ＳＥＣ４抗体； ８Ｄ：ＩｇＧ４ ＴＭ形式陰性コントロール； ８Ｅ：ＡＢＰ９（ＡＢＰ１〜８のＴＭ形式ＩｇＧ４非最適化親）。８Ｆ：ＡＢＰ１； ８Ｇ：ＡＢＰ２； ８Ｈ：ＡＢＰ３； ８Ｉ：ＡＢＰ４； ８Ｊ：ＡＢＰ５； ８Ｋ：ＡＢＰ６； ８Ｌ：ＡＢＰ７； ８Ｍ：ＡＢＰ８。 図８Ｂ〜８Ｍは、コントロールまたはＡＢＰで処置した４名の異なるドナーに由来するＴ芽球の処理の結果およびその得られたＩＬ−２生成（データは、コントロール培地中で達成されたＩＬ−２生成のレベルに対して正規化）を示す。各図において、上段（左から右）は、ＣＤ４＋細胞への上記ＡＢＰ結合のＦＡＣＳ測定、ドナー１に由来する細胞でのＩＬ−２生成、ドナー２に由来する細胞でのＩＬ−２生成である。下段は、左から右に、ＣＤ８＋細胞への上記ＡＢＰ結合のＦＡＣＳ測定、ドナー３に由来する細胞でのＩＬ−２生成、ドナー４に由来する細胞でのＩＬ−２生成である。データは、以下のように示される： ８Ｂ：ＩｇＧ４アイソタイプコントロール； ８Ｃ：ＳＥＣ４抗体； ８Ｄ：ＩｇＧ４ ＴＭ形式陰性コントロール； ８Ｅ：ＡＢＰ９（ＡＢＰ１〜８のＴＭ形式ＩｇＧ４非最適化親）。８Ｆ：ＡＢＰ１； ８Ｇ：ＡＢＰ２； ８Ｈ：ＡＢＰ３； ８Ｉ：ＡＢＰ４； ８Ｊ：ＡＢＰ５； ８Ｋ：ＡＢＰ６； ８Ｌ：ＡＢＰ７； ８Ｍ：ＡＢＰ８。 図８Ｂ〜８Ｍは、コントロールまたはＡＢＰで処置した４名の異なるドナーに由来するＴ芽球の処理の結果およびその得られたＩＬ−２生成（データは、コントロール培地中で達成されたＩＬ−２生成のレベルに対して正規化）を示す。各図において、上段（左から右）は、ＣＤ４＋細胞への上記ＡＢＰ結合のＦＡＣＳ測定、ドナー１に由来する細胞でのＩＬ−２生成、ドナー２に由来する細胞でのＩＬ−２生成である。下段は、左から右に、ＣＤ８＋細胞への上記ＡＢＰ結合のＦＡＣＳ測定、ドナー３に由来する細胞でのＩＬ−２生成、ドナー４に由来する細胞でのＩＬ−２生成である。データは、以下のように示される： ８Ｂ：ＩｇＧ４アイソタイプコントロール； ８Ｃ：ＳＥＣ４抗体； ８Ｄ：ＩｇＧ４ ＴＭ形式陰性コントロール； ８Ｅ：ＡＢＰ９（ＡＢＰ１〜８のＴＭ形式ＩｇＧ４非最適化親）。８Ｆ：ＡＢＰ１； ８Ｇ：ＡＢＰ２； ８Ｈ：ＡＢＰ３； ８Ｉ：ＡＢＰ４； ８Ｊ：ＡＢＰ５； ８Ｋ：ＡＢＰ６； ８Ｌ：ＡＢＰ７； ８Ｍ：ＡＢＰ８。 図８Ｂ〜８Ｍは、コントロールまたはＡＢＰで処置した４名の異なるドナーに由来するＴ芽球の処理の結果およびその得られたＩＬ−２生成（データは、コントロール培地中で達成されたＩＬ−２生成のレベルに対して正規化）を示す。各図において、上段（左から右）は、ＣＤ４＋細胞への上記ＡＢＰ結合のＦＡＣＳ測定、ドナー１に由来する細胞でのＩＬ−２生成、ドナー２に由来する細胞でのＩＬ−２生成である。下段は、左から右に、ＣＤ８＋細胞への上記ＡＢＰ結合のＦＡＣＳ測定、ドナー３に由来する細胞でのＩＬ−２生成、ドナー４に由来する細胞でのＩＬ−２生成である。データは、以下のように示される： ８Ｂ：ＩｇＧ４アイソタイプコントロール； ８Ｃ：ＳＥＣ４抗体； ８Ｄ：ＩｇＧ４ ＴＭ形式陰性コントロール； ８Ｅ：ＡＢＰ９（ＡＢＰ１〜８のＴＭ形式ＩｇＧ４非最適化親）。８Ｆ：ＡＢＰ１； ８Ｇ：ＡＢＰ２； ８Ｈ：ＡＢＰ３； ８Ｉ：ＡＢＰ４； ８Ｊ：ＡＢＰ５； ８Ｋ：ＡＢＰ６； ８Ｌ：ＡＢＰ７； ８Ｍ：ＡＢＰ８。 図８Ｂ〜８Ｍは、コントロールまたはＡＢＰで処置した４名の異なるドナーに由来するＴ芽球の処理の結果およびその得られたＩＬ−２生成（データは、コントロール培地中で達成されたＩＬ−２生成のレベルに対して正規化）を示す。各図において、上段（左から右）は、ＣＤ４＋細胞への上記ＡＢＰ結合のＦＡＣＳ測定、ドナー１に由来する細胞でのＩＬ−２生成、ドナー２に由来する細胞でのＩＬ−２生成である。下段は、左から右に、ＣＤ８＋細胞への上記ＡＢＰ結合のＦＡＣＳ測定、ドナー３に由来する細胞でのＩＬ−２生成、ドナー４に由来する細胞でのＩＬ−２生成である。データは、以下のように示される： ８Ｂ：ＩｇＧ４アイソタイプコントロール； ８Ｃ：ＳＥＣ４抗体； ８Ｄ：ＩｇＧ４ ＴＭ形式陰性コントロール； ８Ｅ：ＡＢＰ９（ＡＢＰ１〜８のＴＭ形式ＩｇＧ４非最適化親）。８Ｆ：ＡＢＰ１； ８Ｇ：ＡＢＰ２； ８Ｈ：ＡＢＰ３； ８Ｉ：ＡＢＰ４； ８Ｊ：ＡＢＰ５； ８Ｋ：ＡＢＰ６； ８Ｌ：ＡＢＰ７； ８Ｍ：ＡＢＰ８。 図８Ｂ〜８Ｍは、コントロールまたはＡＢＰで処置した４名の異なるドナーに由来するＴ芽球の処理の結果およびその得られたＩＬ−２生成（データは、コントロール培地中で達成されたＩＬ−２生成のレベルに対して正規化）を示す。各図において、上段（左から右）は、ＣＤ４＋細胞への上記ＡＢＰ結合のＦＡＣＳ測定、ドナー１に由来する細胞でのＩＬ−２生成、ドナー２に由来する細胞でのＩＬ−２生成である。下段は、左から右に、ＣＤ８＋細胞への上記ＡＢＰ結合のＦＡＣＳ測定、ドナー３に由来する細胞でのＩＬ−２生成、ドナー４に由来する細胞でのＩＬ−２生成である。データは、以下のように示される： ８Ｂ：ＩｇＧ４アイソタイプコントロール； ８Ｃ：ＳＥＣ４抗体； ８Ｄ：ＩｇＧ４ ＴＭ形式陰性コントロール； ８Ｅ：ＡＢＰ９（ＡＢＰ１〜８のＴＭ形式ＩｇＧ４非最適化親）。８Ｆ：ＡＢＰ１； ８Ｇ：ＡＢＰ２； ８Ｈ：ＡＢＰ３； ８Ｉ：ＡＢＰ４； ８Ｊ：ＡＢＰ５； ８Ｋ：ＡＢＰ６； ８Ｌ：ＡＢＰ７； ８Ｍ：ＡＢＰ８。 図８Ｂ〜８Ｍは、コントロールまたはＡＢＰで処置した４名の異なるドナーに由来するＴ芽球の処理の結果およびその得られたＩＬ−２生成（データは、コントロール培地中で達成されたＩＬ−２生成のレベルに対して正規化）を示す。各図において、上段（左から右）は、ＣＤ４＋細胞への上記ＡＢＰ結合のＦＡＣＳ測定、ドナー１に由来する細胞でのＩＬ−２生成、ドナー２に由来する細胞でのＩＬ−２生成である。下段は、左から右に、ＣＤ８＋細胞への上記ＡＢＰ結合のＦＡＣＳ測定、ドナー３に由来する細胞でのＩＬ−２生成、ドナー４に由来する細胞でのＩＬ−２生成である。データは、以下のように示される： ８Ｂ：ＩｇＧ４アイソタイプコントロール； ８Ｃ：ＳＥＣ４抗体； ８Ｄ：ＩｇＧ４ ＴＭ形式陰性コントロール； ８Ｅ：ＡＢＰ９（ＡＢＰ１〜８のＴＭ形式ＩｇＧ４非最適化親）。８Ｆ：ＡＢＰ１； ８Ｇ：ＡＢＰ２； ８Ｈ：ＡＢＰ３； ８Ｉ：ＡＢＰ４； ８Ｊ：ＡＢＰ５； ８Ｋ：ＡＢＰ６； ８Ｌ：ＡＢＰ７； ８Ｍ：ＡＢＰ８。 図８Ｂ〜８Ｍは、コントロールまたはＡＢＰで処置した４名の異なるドナーに由来するＴ芽球の処理の結果およびその得られたＩＬ−２生成（データは、コントロール培地中で達成されたＩＬ−２生成のレベルに対して正規化）を示す。各図において、上段（左から右）は、ＣＤ４＋細胞への上記ＡＢＰ結合のＦＡＣＳ測定、ドナー１に由来する細胞でのＩＬ−２生成、ドナー２に由来する細胞でのＩＬ−２生成である。下段は、左から右に、ＣＤ８＋細胞への上記ＡＢＰ結合のＦＡＣＳ測定、ドナー３に由来する細胞でのＩＬ−２生成、ドナー４に由来する細胞でのＩＬ−２生成である。データは、以下のように示される： ８Ｂ：ＩｇＧ４アイソタイプコントロール； ８Ｃ：ＳＥＣ４抗体； ８Ｄ：ＩｇＧ４ ＴＭ形式陰性コントロール； ８Ｅ：ＡＢＰ９（ＡＢＰ１〜８のＴＭ形式ＩｇＧ４非最適化親）。８Ｆ：ＡＢＰ１； ８Ｇ：ＡＢＰ２； ８Ｈ：ＡＢＰ３； ８Ｉ：ＡＢＰ４； ８Ｊ：ＡＢＰ５； ８Ｋ：ＡＢＰ６； ８Ｌ：ＡＢＰ７； ８Ｍ：ＡＢＰ８。 図８Ｂ〜８Ｍは、コントロールまたはＡＢＰで処置した４名の異なるドナーに由来するＴ芽球の処理の結果およびその得られたＩＬ−２生成（データは、コントロール培地中で達成されたＩＬ−２生成のレベルに対して正規化）を示す。各図において、上段（左から右）は、ＣＤ４＋細胞への上記ＡＢＰ結合のＦＡＣＳ測定、ドナー１に由来する細胞でのＩＬ−２生成、ドナー２に由来する細胞でのＩＬ−２生成である。下段は、左から右に、ＣＤ８＋細胞への上記ＡＢＰ結合のＦＡＣＳ測定、ドナー３に由来する細胞でのＩＬ−２生成、ドナー４に由来する細胞でのＩＬ−２生成である。データは、以下のように示される： ８Ｂ：ＩｇＧ４アイソタイプコントロール； ８Ｃ：ＳＥＣ４抗体； ８Ｄ：ＩｇＧ４ ＴＭ形式陰性コントロール； ８Ｅ：ＡＢＰ９（ＡＢＰ１〜８のＴＭ形式ＩｇＧ４非最適化親）。８Ｆ：ＡＢＰ１； ８Ｇ：ＡＢＰ２； ８Ｈ：ＡＢＰ３； ８Ｉ：ＡＢＰ４； ８Ｊ：ＡＢＰ５； ８Ｋ：ＡＢＰ６； ８Ｌ：ＡＢＰ７； ８Ｍ：ＡＢＰ８。
図９Ａ〜９Ｈは、最適化Ｎ末端Ｆａｂ ＴＭ ＡＢＰ（「ＩｇＧ４ ＴＭ」）の活性の、その相当する最適化非ＴＭ ＩｇＧ１ Ｎ２９７Ａ ＡＢＰ（「ＩｇＧ１」）に対する比較を示す一連のグラフである。ヒト（左パネル）またはカニクイザル（右パネル）を安定して発現するＨＴ１０８０細胞を、次いで、各Ｎ末端Ｆａｂ ＴＭ ＡＢＰおよび相当するＩｇＧ１ ＡＢＰで、以下のように処理した： ＡＢＰ１ ＩｇＧ４ ＴＭ／ＡＢＰ３５ ＩｇＧ１（図９Ａ）、ＡＢＰ２ ＩｇＧ４ ＴＭ／ＡＢＰ３６ ＩｇＧ１（図９Ｂ）、ＡＢＰ３ ＩｇＧ４ ＴＭ／ＡＢＰ３７ ＩｇＧ１（図９Ｃ）、ＡＢＰ４ ＩｇＧ４ ＴＭ／ＡＢＰ３８ ＩｇＧ１（図９Ｄ）、ＡＢＰ５ ＩｇＧ４ ＴＭ／ＡＢＰ３８ Ｐ４５Ｌ ＩｇＧ１（図９Ｅ）、ＡＢＰ６ ＩｇＧ４ ＴＭ／ＡＢＰ３９ ＩｇＧ１（図９Ｆ）、ＡＢＰ７ ＩｇＧ４ ＴＭ／ＡＢＰ４０ ＩｇＧ１（図９Ｇ）およびＡＢＰ８ ＩｇＧ４ ＴＭ／ＡＢＰ４１ ＩｇＧ１（図９Ｈ）ならびに陽性コントロールとしてのＩｇＧ４。ＧＩＴＲＬによるＩＬ−８の誘導を丸として、ＩｇＧ４ ＴＭ形式ＡＢＰによるものを三角として、その相当するＩｇＧ１ ＡＢＰによるものを菱形として、およびＩｇＧ４コントロール抗体によるものを四角として示す。ＥＣ５０値の表を、各図の各パネルの下に示す。 図９Ａ〜９Ｈは、最適化Ｎ末端Ｆａｂ ＴＭ ＡＢＰ（「ＩｇＧ４ ＴＭ」）の活性の、その相当する最適化非ＴＭ ＩｇＧ１ Ｎ２９７Ａ ＡＢＰ（「ＩｇＧ１」）に対する比較を示す一連のグラフである。ヒト（左パネル）またはカニクイザル（右パネル）を安定して発現するＨＴ１０８０細胞を、次いで、各Ｎ末端Ｆａｂ ＴＭ ＡＢＰおよび相当するＩｇＧ１ ＡＢＰで、以下のように処理した： ＡＢＰ１ ＩｇＧ４ ＴＭ／ＡＢＰ３５ ＩｇＧ１（図９Ａ）、ＡＢＰ２ ＩｇＧ４ ＴＭ／ＡＢＰ３６ ＩｇＧ１（図９Ｂ）、ＡＢＰ３ ＩｇＧ４ ＴＭ／ＡＢＰ３７ ＩｇＧ１（図９Ｃ）、ＡＢＰ４ ＩｇＧ４ ＴＭ／ＡＢＰ３８ ＩｇＧ１（図９Ｄ）、ＡＢＰ５ ＩｇＧ４ ＴＭ／ＡＢＰ３８ Ｐ４５Ｌ ＩｇＧ１（図９Ｅ）、ＡＢＰ６ ＩｇＧ４ ＴＭ／ＡＢＰ３９ ＩｇＧ１（図９Ｆ）、ＡＢＰ７ ＩｇＧ４ ＴＭ／ＡＢＰ４０ ＩｇＧ１（図９Ｇ）およびＡＢＰ８ ＩｇＧ４ ＴＭ／ＡＢＰ４１ ＩｇＧ１（図９Ｈ）ならびに陽性コントロールとしてのＩｇＧ４。ＧＩＴＲＬによるＩＬ−８の誘導を丸として、ＩｇＧ４ ＴＭ形式ＡＢＰによるものを三角として、その相当するＩｇＧ１ ＡＢＰによるものを菱形として、およびＩｇＧ４コントロール抗体によるものを四角として示す。ＥＣ５０値の表を、各図の各パネルの下に示す。 図９Ａ〜９Ｈは、最適化Ｎ末端Ｆａｂ ＴＭ ＡＢＰ（「ＩｇＧ４ ＴＭ」）の活性の、その相当する最適化非ＴＭ ＩｇＧ１ Ｎ２９７Ａ ＡＢＰ（「ＩｇＧ１」）に対する比較を示す一連のグラフである。ヒト（左パネル）またはカニクイザル（右パネル）を安定して発現するＨＴ１０８０細胞を、次いで、各Ｎ末端Ｆａｂ ＴＭ ＡＢＰおよび相当するＩｇＧ１ ＡＢＰで、以下のように処理した： ＡＢＰ１ ＩｇＧ４ ＴＭ／ＡＢＰ３５ ＩｇＧ１（図９Ａ）、ＡＢＰ２ ＩｇＧ４ ＴＭ／ＡＢＰ３６ ＩｇＧ１（図９Ｂ）、ＡＢＰ３ ＩｇＧ４ ＴＭ／ＡＢＰ３７ ＩｇＧ１（図９Ｃ）、ＡＢＰ４ ＩｇＧ４ ＴＭ／ＡＢＰ３８ ＩｇＧ１（図９Ｄ）、ＡＢＰ５ ＩｇＧ４ ＴＭ／ＡＢＰ３８ Ｐ４５Ｌ ＩｇＧ１（図９Ｅ）、ＡＢＰ６ ＩｇＧ４ ＴＭ／ＡＢＰ３９ ＩｇＧ１（図９Ｆ）、ＡＢＰ７ ＩｇＧ４ ＴＭ／ＡＢＰ４０ ＩｇＧ１（図９Ｇ）およびＡＢＰ８ ＩｇＧ４ ＴＭ／ＡＢＰ４１ ＩｇＧ１（図９Ｈ）ならびに陽性コントロールとしてのＩｇＧ４。ＧＩＴＲＬによるＩＬ−８の誘導を丸として、ＩｇＧ４ ＴＭ形式ＡＢＰによるものを三角として、その相当するＩｇＧ１ ＡＢＰによるものを菱形として、およびＩｇＧ４コントロール抗体によるものを四角として示す。ＥＣ５０値の表を、各図の各パネルの下に示す。 図９Ａ〜９Ｈは、最適化Ｎ末端Ｆａｂ ＴＭ ＡＢＰ（「ＩｇＧ４ ＴＭ」）の活性の、その相当する最適化非ＴＭ ＩｇＧ１ Ｎ２９７Ａ ＡＢＰ（「ＩｇＧ１」）に対する比較を示す一連のグラフである。ヒト（左パネル）またはカニクイザル（右パネル）を安定して発現するＨＴ１０８０細胞を、次いで、各Ｎ末端Ｆａｂ ＴＭ ＡＢＰおよび相当するＩｇＧ１ ＡＢＰで、以下のように処理した： ＡＢＰ１ ＩｇＧ４ ＴＭ／ＡＢＰ３５ ＩｇＧ１（図９Ａ）、ＡＢＰ２ ＩｇＧ４ ＴＭ／ＡＢＰ３６ ＩｇＧ１（図９Ｂ）、ＡＢＰ３ ＩｇＧ４ ＴＭ／ＡＢＰ３７ ＩｇＧ１（図９Ｃ）、ＡＢＰ４ ＩｇＧ４ ＴＭ／ＡＢＰ３８ ＩｇＧ１（図９Ｄ）、ＡＢＰ５ ＩｇＧ４ ＴＭ／ＡＢＰ３８ Ｐ４５Ｌ ＩｇＧ１（図９Ｅ）、ＡＢＰ６ ＩｇＧ４ ＴＭ／ＡＢＰ３９ ＩｇＧ１（図９Ｆ）、ＡＢＰ７ ＩｇＧ４ ＴＭ／ＡＢＰ４０ ＩｇＧ１（図９Ｇ）およびＡＢＰ８ ＩｇＧ４ ＴＭ／ＡＢＰ４１ ＩｇＧ１（図９Ｈ）ならびに陽性コントロールとしてのＩｇＧ４。ＧＩＴＲＬによるＩＬ−８の誘導を丸として、ＩｇＧ４ ＴＭ形式ＡＢＰによるものを三角として、その相当するＩｇＧ１ ＡＢＰによるものを菱形として、およびＩｇＧ４コントロール抗体によるものを四角として示す。ＥＣ５０値の表を、各図の各パネルの下に示す。 図９Ａ〜９Ｈは、最適化Ｎ末端Ｆａｂ ＴＭ ＡＢＰ（「ＩｇＧ４ ＴＭ」）の活性の、その相当する最適化非ＴＭ ＩｇＧ１ Ｎ２９７Ａ ＡＢＰ（「ＩｇＧ１」）に対する比較を示す一連のグラフである。ヒト（左パネル）またはカニクイザル（右パネル）を安定して発現するＨＴ１０８０細胞を、次いで、各Ｎ末端Ｆａｂ ＴＭ ＡＢＰおよび相当するＩｇＧ１ ＡＢＰで、以下のように処理した： ＡＢＰ１ ＩｇＧ４ ＴＭ／ＡＢＰ３５ ＩｇＧ１（図９Ａ）、ＡＢＰ２ ＩｇＧ４ ＴＭ／ＡＢＰ３６ ＩｇＧ１（図９Ｂ）、ＡＢＰ３ ＩｇＧ４ ＴＭ／ＡＢＰ３７ ＩｇＧ１（図９Ｃ）、ＡＢＰ４ ＩｇＧ４ ＴＭ／ＡＢＰ３８ ＩｇＧ１（図９Ｄ）、ＡＢＰ５ ＩｇＧ４ ＴＭ／ＡＢＰ３８ Ｐ４５Ｌ ＩｇＧ１（図９Ｅ）、ＡＢＰ６ ＩｇＧ４ ＴＭ／ＡＢＰ３９ ＩｇＧ１（図９Ｆ）、ＡＢＰ７ ＩｇＧ４ ＴＭ／ＡＢＰ４０ ＩｇＧ１（図９Ｇ）およびＡＢＰ８ ＩｇＧ４ ＴＭ／ＡＢＰ４１ ＩｇＧ１（図９Ｈ）ならびに陽性コントロールとしてのＩｇＧ４。ＧＩＴＲＬによるＩＬ−８の誘導を丸として、ＩｇＧ４ ＴＭ形式ＡＢＰによるものを三角として、その相当するＩｇＧ１ ＡＢＰによるものを菱形として、およびＩｇＧ４コントロール抗体によるものを四角として示す。ＥＣ５０値の表を、各図の各パネルの下に示す。 図９Ａ〜９Ｈは、最適化Ｎ末端Ｆａｂ ＴＭ ＡＢＰ（「ＩｇＧ４ ＴＭ」）の活性の、その相当する最適化非ＴＭ ＩｇＧ１ Ｎ２９７Ａ ＡＢＰ（「ＩｇＧ１」）に対する比較を示す一連のグラフである。ヒト（左パネル）またはカニクイザル（右パネル）を安定して発現するＨＴ１０８０細胞を、次いで、各Ｎ末端Ｆａｂ ＴＭ ＡＢＰおよび相当するＩｇＧ１ ＡＢＰで、以下のように処理した： ＡＢＰ１ ＩｇＧ４ ＴＭ／ＡＢＰ３５ ＩｇＧ１（図９Ａ）、ＡＢＰ２ ＩｇＧ４ ＴＭ／ＡＢＰ３６ ＩｇＧ１（図９Ｂ）、ＡＢＰ３ ＩｇＧ４ ＴＭ／ＡＢＰ３７ ＩｇＧ１（図９Ｃ）、ＡＢＰ４ ＩｇＧ４ ＴＭ／ＡＢＰ３８ ＩｇＧ１（図９Ｄ）、ＡＢＰ５ ＩｇＧ４ ＴＭ／ＡＢＰ３８ Ｐ４５Ｌ ＩｇＧ１（図９Ｅ）、ＡＢＰ６ ＩｇＧ４ ＴＭ／ＡＢＰ３９ ＩｇＧ１（図９Ｆ）、ＡＢＰ７ ＩｇＧ４ ＴＭ／ＡＢＰ４０ ＩｇＧ１（図９Ｇ）およびＡＢＰ８ ＩｇＧ４ ＴＭ／ＡＢＰ４１ ＩｇＧ１（図９Ｈ）ならびに陽性コントロールとしてのＩｇＧ４。ＧＩＴＲＬによるＩＬ−８の誘導を丸として、ＩｇＧ４ ＴＭ形式ＡＢＰによるものを三角として、その相当するＩｇＧ１ ＡＢＰによるものを菱形として、およびＩｇＧ４コントロール抗体によるものを四角として示す。ＥＣ５０値の表を、各図の各パネルの下に示す。 図９Ａ〜９Ｈは、最適化Ｎ末端Ｆａｂ ＴＭ ＡＢＰ（「ＩｇＧ４ ＴＭ」）の活性の、その相当する最適化非ＴＭ ＩｇＧ１ Ｎ２９７Ａ ＡＢＰ（「ＩｇＧ１」）に対する比較を示す一連のグラフである。ヒト（左パネル）またはカニクイザル（右パネル）を安定して発現するＨＴ１０８０細胞を、次いで、各Ｎ末端Ｆａｂ ＴＭ ＡＢＰおよび相当するＩｇＧ１ ＡＢＰで、以下のように処理した： ＡＢＰ１ ＩｇＧ４ ＴＭ／ＡＢＰ３５ ＩｇＧ１（図９Ａ）、ＡＢＰ２ ＩｇＧ４ ＴＭ／ＡＢＰ３６ ＩｇＧ１（図９Ｂ）、ＡＢＰ３ ＩｇＧ４ ＴＭ／ＡＢＰ３７ ＩｇＧ１（図９Ｃ）、ＡＢＰ４ ＩｇＧ４ ＴＭ／ＡＢＰ３８ ＩｇＧ１（図９Ｄ）、ＡＢＰ５ ＩｇＧ４ ＴＭ／ＡＢＰ３８ Ｐ４５Ｌ ＩｇＧ１（図９Ｅ）、ＡＢＰ６ ＩｇＧ４ ＴＭ／ＡＢＰ３９ ＩｇＧ１（図９Ｆ）、ＡＢＰ７ ＩｇＧ４ ＴＭ／ＡＢＰ４０ ＩｇＧ１（図９Ｇ）およびＡＢＰ８ ＩｇＧ４ ＴＭ／ＡＢＰ４１ ＩｇＧ１（図９Ｈ）ならびに陽性コントロールとしてのＩｇＧ４。ＧＩＴＲＬによるＩＬ−８の誘導を丸として、ＩｇＧ４ ＴＭ形式ＡＢＰによるものを三角として、その相当するＩｇＧ１ ＡＢＰによるものを菱形として、およびＩｇＧ４コントロール抗体によるものを四角として示す。ＥＣ５０値の表を、各図の各パネルの下に示す。 図９Ａ〜９Ｈは、最適化Ｎ末端Ｆａｂ ＴＭ ＡＢＰ（「ＩｇＧ４ ＴＭ」）の活性の、その相当する最適化非ＴＭ ＩｇＧ１ Ｎ２９７Ａ ＡＢＰ（「ＩｇＧ１」）に対する比較を示す一連のグラフである。ヒト（左パネル）またはカニクイザル（右パネル）を安定して発現するＨＴ１０８０細胞を、次いで、各Ｎ末端Ｆａｂ ＴＭ ＡＢＰおよび相当するＩｇＧ１ ＡＢＰで、以下のように処理した： ＡＢＰ１ ＩｇＧ４ ＴＭ／ＡＢＰ３５ ＩｇＧ１（図９Ａ）、ＡＢＰ２ ＩｇＧ４ ＴＭ／ＡＢＰ３６ ＩｇＧ１（図９Ｂ）、ＡＢＰ３ ＩｇＧ４ ＴＭ／ＡＢＰ３７ ＩｇＧ１（図９Ｃ）、ＡＢＰ４ ＩｇＧ４ ＴＭ／ＡＢＰ３８ ＩｇＧ１（図９Ｄ）、ＡＢＰ５ ＩｇＧ４ ＴＭ／ＡＢＰ３８ Ｐ４５Ｌ ＩｇＧ１（図９Ｅ）、ＡＢＰ６ ＩｇＧ４ ＴＭ／ＡＢＰ３９ ＩｇＧ１（図９Ｆ）、ＡＢＰ７ ＩｇＧ４ ＴＭ／ＡＢＰ４０ ＩｇＧ１（図９Ｇ）およびＡＢＰ８ ＩｇＧ４ ＴＭ／ＡＢＰ４１ ＩｇＧ１（図９Ｈ）ならびに陽性コントロールとしてのＩｇＧ４。ＧＩＴＲＬによるＩＬ−８の誘導を丸として、ＩｇＧ４ ＴＭ形式ＡＢＰによるものを三角として、その相当するＩｇＧ１ ＡＢＰによるものを菱形として、およびＩｇＧ４コントロール抗体によるものを四角として示す。ＥＣ５０値の表を、各図の各パネルの下に示す。
図１０は、非ＴＭ親抗体と相当するＴＭ形式バージョンとを比較する、記載されるとおりのＨＴ１０８０アッセイにおけるＥＣ５０データを示すグラフである。ＡＢＰ４３（菱形）は、ＡＢＰ９（ＩｇＧ４ Ｎ末端Ｆａｂ、四角）およびＡＢＰ１０（ＩｇＧ４ Ｃ末端Ｆａｂ、丸）の非ＴＭ ＩｇＧ４ Ｓ２２８Ｐ親である。ＧＩＴＲＬ（陽性コントロール）によるＩＬ−８生成を、単一データ点（星）として示す。ＩＬ−８生成を、ｐｇ／ｍＬ単位で示す。
図１１Ａは、ヒトＧＩＴＲを安定して発現するように操作されたＨＴ１０８０細胞における代表的ベンチマーク抗体ＳＥＣ４およびＳＥＣ９によるＩＬ−８の誘導を示すグラフである。培養細胞を、６時間にわたって、２種のベンチマークアゴニスト抗体ＳＥＣ４（マウス可変領域とヒトＩｇＧ４ Ｓ２２８Ｐ／カッパ領域とを有する形式にした３５Ｅ６、菱形）およびＳＥＣ９（ヒト化６Ｃ８ Ｎ６２Ｑ ＩｇＧ１ Ｎ２９７Ａ、丸）、ならびにＩｇＧ４陰性コントロール（黒三角）、ＩｇＧ１陰性コントロール（白三角）、および陽性コントロールとしてのトリマーのヒトＧＩＴＲリガンド（「ｈＧＩＴＲＬ」、四角）のある濃度範囲で処理した。ＩＬ−８の誘導を、ＥＬＩＳＡによって測定した。図に示されるように、ＧＩＴＲＬは、ＳＥＣ４およびＳＥＣ９の両方と比較して、より良好なＥＣ５０（挿入図）および最大誘導を有した。図１１Ｂ〜１１Ｉは、それぞれ、ＳＥＣ４およびＳＥＣ９とのＡＢＰ１〜８の比較を示す。ＴＭ ＡＢＰを丸で、ＳＥＣ４を四角で、およびＳＥＣ９を三角で示す。ＩＬ−８生成をｐｇ／ｍＬ単位で示す。 図１１Ａは、ヒトＧＩＴＲを安定して発現するように操作されたＨＴ１０８０細胞における代表的ベンチマーク抗体ＳＥＣ４およびＳＥＣ９によるＩＬ−８の誘導を示すグラフである。培養細胞を、６時間にわたって、２種のベンチマークアゴニスト抗体ＳＥＣ４（マウス可変領域とヒトＩｇＧ４ Ｓ２２８Ｐ／カッパ領域とを有する形式にした３５Ｅ６、菱形）およびＳＥＣ９（ヒト化６Ｃ８ Ｎ６２Ｑ ＩｇＧ１ Ｎ２９７Ａ、丸）、ならびにＩｇＧ４陰性コントロール（黒三角）、ＩｇＧ１陰性コントロール（白三角）、および陽性コントロールとしてのトリマーのヒトＧＩＴＲリガンド（「ｈＧＩＴＲＬ」、四角）のある濃度範囲で処理した。ＩＬ−８の誘導を、ＥＬＩＳＡによって測定した。図に示されるように、ＧＩＴＲＬは、ＳＥＣ４およびＳＥＣ９の両方と比較して、より良好なＥＣ５０（挿入図）および最大誘導を有した。図１１Ｂ〜１１Ｉは、それぞれ、ＳＥＣ４およびＳＥＣ９とのＡＢＰ１〜８の比較を示す。ＴＭ ＡＢＰを丸で、ＳＥＣ４を四角で、およびＳＥＣ９を三角で示す。ＩＬ−８生成をｐｇ／ｍＬ単位で示す。 図１１Ａは、ヒトＧＩＴＲを安定して発現するように操作されたＨＴ１０８０細胞における代表的ベンチマーク抗体ＳＥＣ４およびＳＥＣ９によるＩＬ−８の誘導を示すグラフである。培養細胞を、６時間にわたって、２種のベンチマークアゴニスト抗体ＳＥＣ４（マウス可変領域とヒトＩｇＧ４ Ｓ２２８Ｐ／カッパ領域とを有する形式にした３５Ｅ６、菱形）およびＳＥＣ９（ヒト化６Ｃ８ Ｎ６２Ｑ ＩｇＧ１ Ｎ２９７Ａ、丸）、ならびにＩｇＧ４陰性コントロール（黒三角）、ＩｇＧ１陰性コントロール（白三角）、および陽性コントロールとしてのトリマーのヒトＧＩＴＲリガンド（「ｈＧＩＴＲＬ」、四角）のある濃度範囲で処理した。ＩＬ−８の誘導を、ＥＬＩＳＡによって測定した。図に示されるように、ＧＩＴＲＬは、ＳＥＣ４およびＳＥＣ９の両方と比較して、より良好なＥＣ５０（挿入図）および最大誘導を有した。図１１Ｂ〜１１Ｉは、それぞれ、ＳＥＣ４およびＳＥＣ９とのＡＢＰ１〜８の比較を示す。ＴＭ ＡＢＰを丸で、ＳＥＣ４を四角で、およびＳＥＣ９を三角で示す。ＩＬ−８生成をｐｇ／ｍＬ単位で示す。 図１１Ａは、ヒトＧＩＴＲを安定して発現するように操作されたＨＴ１０８０細胞における代表的ベンチマーク抗体ＳＥＣ４およびＳＥＣ９によるＩＬ−８の誘導を示すグラフである。培養細胞を、６時間にわたって、２種のベンチマークアゴニスト抗体ＳＥＣ４（マウス可変領域とヒトＩｇＧ４ Ｓ２２８Ｐ／カッパ領域とを有する形式にした３５Ｅ６、菱形）およびＳＥＣ９（ヒト化６Ｃ８ Ｎ６２Ｑ ＩｇＧ１ Ｎ２９７Ａ、丸）、ならびにＩｇＧ４陰性コントロール（黒三角）、ＩｇＧ１陰性コントロール（白三角）、および陽性コントロールとしてのトリマーのヒトＧＩＴＲリガンド（「ｈＧＩＴＲＬ」、四角）のある濃度範囲で処理した。ＩＬ−８の誘導を、ＥＬＩＳＡによって測定した。図に示されるように、ＧＩＴＲＬは、ＳＥＣ４およびＳＥＣ９の両方と比較して、より良好なＥＣ５０（挿入図）および最大誘導を有した。図１１Ｂ〜１１Ｉは、それぞれ、ＳＥＣ４およびＳＥＣ９とのＡＢＰ１〜８の比較を示す。ＴＭ ＡＢＰを丸で、ＳＥＣ４を四角で、およびＳＥＣ９を三角で示す。ＩＬ−８生成をｐｇ／ｍＬ単位で示す。 図１１Ａは、ヒトＧＩＴＲを安定して発現するように操作されたＨＴ１０８０細胞における代表的ベンチマーク抗体ＳＥＣ４およびＳＥＣ９によるＩＬ−８の誘導を示すグラフである。培養細胞を、６時間にわたって、２種のベンチマークアゴニスト抗体ＳＥＣ４（マウス可変領域とヒトＩｇＧ４ Ｓ２２８Ｐ／カッパ領域とを有する形式にした３５Ｅ６、菱形）およびＳＥＣ９（ヒト化６Ｃ８ Ｎ６２Ｑ ＩｇＧ１ Ｎ２９７Ａ、丸）、ならびにＩｇＧ４陰性コントロール（黒三角）、ＩｇＧ１陰性コントロール（白三角）、および陽性コントロールとしてのトリマーのヒトＧＩＴＲリガンド（「ｈＧＩＴＲＬ」、四角）のある濃度範囲で処理した。ＩＬ−８の誘導を、ＥＬＩＳＡによって測定した。図に示されるように、ＧＩＴＲＬは、ＳＥＣ４およびＳＥＣ９の両方と比較して、より良好なＥＣ５０（挿入図）および最大誘導を有した。図１１Ｂ〜１１Ｉは、それぞれ、ＳＥＣ４およびＳＥＣ９とのＡＢＰ１〜８の比較を示す。ＴＭ ＡＢＰを丸で、ＳＥＣ４を四角で、およびＳＥＣ９を三角で示す。ＩＬ−８生成をｐｇ／ｍＬ単位で示す。 図１１Ａは、ヒトＧＩＴＲを安定して発現するように操作されたＨＴ１０８０細胞における代表的ベンチマーク抗体ＳＥＣ４およびＳＥＣ９によるＩＬ−８の誘導を示すグラフである。培養細胞を、６時間にわたって、２種のベンチマークアゴニスト抗体ＳＥＣ４（マウス可変領域とヒトＩｇＧ４ Ｓ２２８Ｐ／カッパ領域とを有する形式にした３５Ｅ６、菱形）およびＳＥＣ９（ヒト化６Ｃ８ Ｎ６２Ｑ ＩｇＧ１ Ｎ２９７Ａ、丸）、ならびにＩｇＧ４陰性コントロール（黒三角）、ＩｇＧ１陰性コントロール（白三角）、および陽性コントロールとしてのトリマーのヒトＧＩＴＲリガンド（「ｈＧＩＴＲＬ」、四角）のある濃度範囲で処理した。ＩＬ−８の誘導を、ＥＬＩＳＡによって測定した。図に示されるように、ＧＩＴＲＬは、ＳＥＣ４およびＳＥＣ９の両方と比較して、より良好なＥＣ５０（挿入図）および最大誘導を有した。図１１Ｂ〜１１Ｉは、それぞれ、ＳＥＣ４およびＳＥＣ９とのＡＢＰ１〜８の比較を示す。ＴＭ ＡＢＰを丸で、ＳＥＣ４を四角で、およびＳＥＣ９を三角で示す。ＩＬ−８生成をｐｇ／ｍＬ単位で示す。 図１１Ａは、ヒトＧＩＴＲを安定して発現するように操作されたＨＴ１０８０細胞における代表的ベンチマーク抗体ＳＥＣ４およびＳＥＣ９によるＩＬ−８の誘導を示すグラフである。培養細胞を、６時間にわたって、２種のベンチマークアゴニスト抗体ＳＥＣ４（マウス可変領域とヒトＩｇＧ４ Ｓ２２８Ｐ／カッパ領域とを有する形式にした３５Ｅ６、菱形）およびＳＥＣ９（ヒト化６Ｃ８ Ｎ６２Ｑ ＩｇＧ１ Ｎ２９７Ａ、丸）、ならびにＩｇＧ４陰性コントロール（黒三角）、ＩｇＧ１陰性コントロール（白三角）、および陽性コントロールとしてのトリマーのヒトＧＩＴＲリガンド（「ｈＧＩＴＲＬ」、四角）のある濃度範囲で処理した。ＩＬ−８の誘導を、ＥＬＩＳＡによって測定した。図に示されるように、ＧＩＴＲＬは、ＳＥＣ４およびＳＥＣ９の両方と比較して、より良好なＥＣ５０（挿入図）および最大誘導を有した。図１１Ｂ〜１１Ｉは、それぞれ、ＳＥＣ４およびＳＥＣ９とのＡＢＰ１〜８の比較を示す。ＴＭ ＡＢＰを丸で、ＳＥＣ４を四角で、およびＳＥＣ９を三角で示す。ＩＬ−８生成をｐｇ／ｍＬ単位で示す。 図１１Ａは、ヒトＧＩＴＲを安定して発現するように操作されたＨＴ１０８０細胞における代表的ベンチマーク抗体ＳＥＣ４およびＳＥＣ９によるＩＬ−８の誘導を示すグラフである。培養細胞を、６時間にわたって、２種のベンチマークアゴニスト抗体ＳＥＣ４（マウス可変領域とヒトＩｇＧ４ Ｓ２２８Ｐ／カッパ領域とを有する形式にした３５Ｅ６、菱形）およびＳＥＣ９（ヒト化６Ｃ８ Ｎ６２Ｑ ＩｇＧ１ Ｎ２９７Ａ、丸）、ならびにＩｇＧ４陰性コントロール（黒三角）、ＩｇＧ１陰性コントロール（白三角）、および陽性コントロールとしてのトリマーのヒトＧＩＴＲリガンド（「ｈＧＩＴＲＬ」、四角）のある濃度範囲で処理した。ＩＬ−８の誘導を、ＥＬＩＳＡによって測定した。図に示されるように、ＧＩＴＲＬは、ＳＥＣ４およびＳＥＣ９の両方と比較して、より良好なＥＣ５０（挿入図）および最大誘導を有した。図１１Ｂ〜１１Ｉは、それぞれ、ＳＥＣ４およびＳＥＣ９とのＡＢＰ１〜８の比較を示す。ＴＭ ＡＢＰを丸で、ＳＥＣ４を四角で、およびＳＥＣ９を三角で示す。ＩＬ−８生成をｐｇ／ｍＬ単位で示す。 図１１Ａは、ヒトＧＩＴＲを安定して発現するように操作されたＨＴ１０８０細胞における代表的ベンチマーク抗体ＳＥＣ４およびＳＥＣ９によるＩＬ−８の誘導を示すグラフである。培養細胞を、６時間にわたって、２種のベンチマークアゴニスト抗体ＳＥＣ４（マウス可変領域とヒトＩｇＧ４ Ｓ２２８Ｐ／カッパ領域とを有する形式にした３５Ｅ６、菱形）およびＳＥＣ９（ヒト化６Ｃ８ Ｎ６２Ｑ ＩｇＧ１ Ｎ２９７Ａ、丸）、ならびにＩｇＧ４陰性コントロール（黒三角）、ＩｇＧ１陰性コントロール（白三角）、および陽性コントロールとしてのトリマーのヒトＧＩＴＲリガンド（「ｈＧＩＴＲＬ」、四角）のある濃度範囲で処理した。ＩＬ−８の誘導を、ＥＬＩＳＡによって測定した。図に示されるように、ＧＩＴＲＬは、ＳＥＣ４およびＳＥＣ９の両方と比較して、より良好なＥＣ５０（挿入図）および最大誘導を有した。図１１Ｂ〜１１Ｉは、それぞれ、ＳＥＣ４およびＳＥＣ９とのＡＢＰ１〜８の比較を示す。ＴＭ ＡＢＰを丸で、ＳＥＣ４を四角で、およびＳＥＣ９を三角で示す。ＩＬ−８生成をｐｇ／ｍＬ単位で示す。
図１２は、ＴＭ形式ＡＢＰ１単独で、またはペンブロリズマブとの組み合わせでの処理後の刺激した単離ヒトＮＳＣＬＣ腺癌細胞におけるサイトカイン生成を示す２つのグラフである。細胞は、非刺激コントロールであったか、または１μｇ／ｍＬ αＣＤ３（可溶性）＋２μｇ／ｍＬ αＣＤ２８（可溶性）＋ＩＬ−２（５０ｎｇ／ｍＬ）で刺激したかのいずれかであった；細胞は、免疫療法処理なし（チェックポイントタンパク質レベルの評価のため）、ペンブロリズマブ（１０μｇ／ｍＬ）、ＴＭ形式ＡＢＰコントロール（２μｇ／ｍＬ）、ＡＢＰ１（２μｇ／ｍＬ）、またはＡＢＰ１＋ペンブロリズマブのいずれかを受けた。細胞を、４８時間インキュベートし、その後、上清を集め、細胞をチェックポイント発現に関して染色した。いくつかのサンプルでは、ブレフェルジンＡ（サイトカイン分泌のインヒビター）を、細胞内サイトカイン染色によるサイトカインの検出のために、刺激の最後の５時間に添加した。ＴＮＦ生成（図１２Ａ）およびＩＦＮγ生成（図１２Ｂ）が示される。 図１２は、ＴＭ形式ＡＢＰ１単独で、またはペンブロリズマブとの組み合わせでの処理後の刺激した単離ヒトＮＳＣＬＣ腺癌細胞におけるサイトカイン生成を示す２つのグラフである。細胞は、非刺激コントロールであったか、または１μｇ／ｍＬ αＣＤ３（可溶性）＋２μｇ／ｍＬ αＣＤ２８（可溶性）＋ＩＬ−２（５０ｎｇ／ｍＬ）で刺激したかのいずれかであった；細胞は、免疫療法処理なし（チェックポイントタンパク質レベルの評価のため）、ペンブロリズマブ（１０μｇ／ｍＬ）、ＴＭ形式ＡＢＰコントロール（２μｇ／ｍＬ）、ＡＢＰ１（２μｇ／ｍＬ）、またはＡＢＰ１＋ペンブロリズマブのいずれかを受けた。細胞を、４８時間インキュベートし、その後、上清を集め、細胞をチェックポイント発現に関して染色した。いくつかのサンプルでは、ブレフェルジンＡ（サイトカイン分泌のインヒビター）を、細胞内サイトカイン染色によるサイトカインの検出のために、刺激の最後の５時間に添加した。ＴＮＦ生成（図１２Ａ）およびＩＦＮγ生成（図１２Ｂ）が示される。
図１３は、抗体結合後のＧＩＴＲクラスター形成およびインターナリゼーションを示す一連のグラフである。ＧＩＴＲインターナリゼーションを、ドナー１（図１３Ａ〜Ｂ、１３Ｆ〜Ｇ）またはドナー２（図１３Ｃ〜Ｄ、１３Ｈ〜Ｉ）のいずれかに由来するＣＤ４＋細胞（図１３Ａ〜Ｅ）およびＣＤ８＋細胞（図１３Ｆ〜Ｊ）において測定した。細胞を、ＡＢＰ１ ＴＭ形式抗体またはＡＢＰ３５標準二価抗体のいずれかで処理した。観察され得るように、ＡＢＰ１またはＡＢＰ３５のいずれかとのインキュベーションは、ＡＢＰ１Ｄｙｌｉｇｈｔ６５０（図１３Ａ、１３Ｃ、１３Ｆ、１３Ｈ）でのその後の染色を阻害するが、ＡＢＰ１とのインキュベーションのみは、非競合的クローン１０８−１７での染色によって測定されるように、ＧＩＴＲインターナリゼーションを誘導する（図１３Ｂ、１３Ｄ、１３Ｇ、１３Ｉ）。両方のドナーに由来する細胞に対するＡＢＰ１のＥＣ５０の決定を、図１３Ｅ（ＣＤ４＋細胞）および図１３Ｊ（ＣＤ８＋細胞）に示す。 図１３は、抗体結合後のＧＩＴＲクラスター形成およびインターナリゼーションを示す一連のグラフである。ＧＩＴＲインターナリゼーションを、ドナー１（図１３Ａ〜Ｂ、１３Ｆ〜Ｇ）またはドナー２（図１３Ｃ〜Ｄ、１３Ｈ〜Ｉ）のいずれかに由来するＣＤ４＋細胞（図１３Ａ〜Ｅ）およびＣＤ８＋細胞（図１３Ｆ〜Ｊ）において測定した。細胞を、ＡＢＰ１ ＴＭ形式抗体またはＡＢＰ３５標準二価抗体のいずれかで処理した。観察され得るように、ＡＢＰ１またはＡＢＰ３５のいずれかとのインキュベーションは、ＡＢＰ１Ｄｙｌｉｇｈｔ６５０（図１３Ａ、１３Ｃ、１３Ｆ、１３Ｈ）でのその後の染色を阻害するが、ＡＢＰ１とのインキュベーションのみは、非競合的クローン１０８−１７での染色によって測定されるように、ＧＩＴＲインターナリゼーションを誘導する（図１３Ｂ、１３Ｄ、１３Ｇ、１３Ｉ）。両方のドナーに由来する細胞に対するＡＢＰ１のＥＣ５０の決定を、図１３Ｅ（ＣＤ４＋細胞）および図１３Ｊ（ＣＤ８＋細胞）に示す。 図１３は、抗体結合後のＧＩＴＲクラスター形成およびインターナリゼーションを示す一連のグラフである。ＧＩＴＲインターナリゼーションを、ドナー１（図１３Ａ〜Ｂ、１３Ｆ〜Ｇ）またはドナー２（図１３Ｃ〜Ｄ、１３Ｈ〜Ｉ）のいずれかに由来するＣＤ４＋細胞（図１３Ａ〜Ｅ）およびＣＤ８＋細胞（図１３Ｆ〜Ｊ）において測定した。細胞を、ＡＢＰ１ ＴＭ形式抗体またはＡＢＰ３５標準二価抗体のいずれかで処理した。観察され得るように、ＡＢＰ１またはＡＢＰ３５のいずれかとのインキュベーションは、ＡＢＰ１Ｄｙｌｉｇｈｔ６５０（図１３Ａ、１３Ｃ、１３Ｆ、１３Ｈ）でのその後の染色を阻害するが、ＡＢＰ１とのインキュベーションのみは、非競合的クローン１０８−１７での染色によって測定されるように、ＧＩＴＲインターナリゼーションを誘導する（図１３Ｂ、１３Ｄ、１３Ｇ、１３Ｉ）。両方のドナーに由来する細胞に対するＡＢＰ１のＥＣ５０の決定を、図１３Ｅ（ＣＤ４＋細胞）および図１３Ｊ（ＣＤ８＋細胞）に示す。 図１３は、抗体結合後のＧＩＴＲクラスター形成およびインターナリゼーションを示す一連のグラフである。ＧＩＴＲインターナリゼーションを、ドナー１（図１３Ａ〜Ｂ、１３Ｆ〜Ｇ）またはドナー２（図１３Ｃ〜Ｄ、１３Ｈ〜Ｉ）のいずれかに由来するＣＤ４＋細胞（図１３Ａ〜Ｅ）およびＣＤ８＋細胞（図１３Ｆ〜Ｊ）において測定した。細胞を、ＡＢＰ１ ＴＭ形式抗体またはＡＢＰ３５標準二価抗体のいずれかで処理した。観察され得るように、ＡＢＰ１またはＡＢＰ３５のいずれかとのインキュベーションは、ＡＢＰ１Ｄｙｌｉｇｈｔ６５０（図１３Ａ、１３Ｃ、１３Ｆ、１３Ｈ）でのその後の染色を阻害するが、ＡＢＰ１とのインキュベーションのみは、非競合的クローン１０８−１７での染色によって測定されるように、ＧＩＴＲインターナリゼーションを誘導する（図１３Ｂ、１３Ｄ、１３Ｇ、１３Ｉ）。両方のドナーに由来する細胞に対するＡＢＰ１のＥＣ５０の決定を、図１３Ｅ（ＣＤ４＋細胞）および図１３Ｊ（ＣＤ８＋細胞）に示す。 図１３は、抗体結合後のＧＩＴＲクラスター形成およびインターナリゼーションを示す一連のグラフである。ＧＩＴＲインターナリゼーションを、ドナー１（図１３Ａ〜Ｂ、１３Ｆ〜Ｇ）またはドナー２（図１３Ｃ〜Ｄ、１３Ｈ〜Ｉ）のいずれかに由来するＣＤ４＋細胞（図１３Ａ〜Ｅ）およびＣＤ８＋細胞（図１３Ｆ〜Ｊ）において測定した。細胞を、ＡＢＰ１ ＴＭ形式抗体またはＡＢＰ３５標準二価抗体のいずれかで処理した。観察され得るように、ＡＢＰ１またはＡＢＰ３５のいずれかとのインキュベーションは、ＡＢＰ１Ｄｙｌｉｇｈｔ６５０（図１３Ａ、１３Ｃ、１３Ｆ、１３Ｈ）でのその後の染色を阻害するが、ＡＢＰ１とのインキュベーションのみは、非競合的クローン１０８−１７での染色によって測定されるように、ＧＩＴＲインターナリゼーションを誘導する（図１３Ｂ、１３Ｄ、１３Ｇ、１３Ｉ）。両方のドナーに由来する細胞に対するＡＢＰ１のＥＣ５０の決定を、図１３Ｅ（ＣＤ４＋細胞）および図１３Ｊ（ＣＤ８＋細胞）に示す。 図１３は、抗体結合後のＧＩＴＲクラスター形成およびインターナリゼーションを示す一連のグラフである。ＧＩＴＲインターナリゼーションを、ドナー１（図１３Ａ〜Ｂ、１３Ｆ〜Ｇ）またはドナー２（図１３Ｃ〜Ｄ、１３Ｈ〜Ｉ）のいずれかに由来するＣＤ４＋細胞（図１３Ａ〜Ｅ）およびＣＤ８＋細胞（図１３Ｆ〜Ｊ）において測定した。細胞を、ＡＢＰ１ ＴＭ形式抗体またはＡＢＰ３５標準二価抗体のいずれかで処理した。観察され得るように、ＡＢＰ１またはＡＢＰ３５のいずれかとのインキュベーションは、ＡＢＰ１Ｄｙｌｉｇｈｔ６５０（図１３Ａ、１３Ｃ、１３Ｆ、１３Ｈ）でのその後の染色を阻害するが、ＡＢＰ１とのインキュベーションのみは、非競合的クローン１０８−１７での染色によって測定されるように、ＧＩＴＲインターナリゼーションを誘導する（図１３Ｂ、１３Ｄ、１３Ｇ、１３Ｉ）。両方のドナーに由来する細胞に対するＡＢＰ１のＥＣ５０の決定を、図１３Ｅ（ＣＤ４＋細胞）および図１３Ｊ（ＣＤ８＋細胞）に示す。 図１３は、抗体結合後のＧＩＴＲクラスター形成およびインターナリゼーションを示す一連のグラフである。ＧＩＴＲインターナリゼーションを、ドナー１（図１３Ａ〜Ｂ、１３Ｆ〜Ｇ）またはドナー２（図１３Ｃ〜Ｄ、１３Ｈ〜Ｉ）のいずれかに由来するＣＤ４＋細胞（図１３Ａ〜Ｅ）およびＣＤ８＋細胞（図１３Ｆ〜Ｊ）において測定した。細胞を、ＡＢＰ１ ＴＭ形式抗体またはＡＢＰ３５標準二価抗体のいずれかで処理した。観察され得るように、ＡＢＰ１またはＡＢＰ３５のいずれかとのインキュベーションは、ＡＢＰ１Ｄｙｌｉｇｈｔ６５０（図１３Ａ、１３Ｃ、１３Ｆ、１３Ｈ）でのその後の染色を阻害するが、ＡＢＰ１とのインキュベーションのみは、非競合的クローン１０８−１７での染色によって測定されるように、ＧＩＴＲインターナリゼーションを誘導する（図１３Ｂ、１３Ｄ、１３Ｇ、１３Ｉ）。両方のドナーに由来する細胞に対するＡＢＰ１のＥＣ５０の決定を、図１３Ｅ（ＣＤ４＋細胞）および図１３Ｊ（ＣＤ８＋細胞）に示す。 図１３は、抗体結合後のＧＩＴＲクラスター形成およびインターナリゼーションを示す一連のグラフである。ＧＩＴＲインターナリゼーションを、ドナー１（図１３Ａ〜Ｂ、１３Ｆ〜Ｇ）またはドナー２（図１３Ｃ〜Ｄ、１３Ｈ〜Ｉ）のいずれかに由来するＣＤ４＋細胞（図１３Ａ〜Ｅ）およびＣＤ８＋細胞（図１３Ｆ〜Ｊ）において測定した。細胞を、ＡＢＰ１ ＴＭ形式抗体またはＡＢＰ３５標準二価抗体のいずれかで処理した。観察され得るように、ＡＢＰ１またはＡＢＰ３５のいずれかとのインキュベーションは、ＡＢＰ１Ｄｙｌｉｇｈｔ６５０（図１３Ａ、１３Ｃ、１３Ｆ、１３Ｈ）でのその後の染色を阻害するが、ＡＢＰ１とのインキュベーションのみは、非競合的クローン１０８−１７での染色によって測定されるように、ＧＩＴＲインターナリゼーションを誘導する（図１３Ｂ、１３Ｄ、１３Ｇ、１３Ｉ）。両方のドナーに由来する細胞に対するＡＢＰ１のＥＣ５０の決定を、図１３Ｅ（ＣＤ４＋細胞）および図１３Ｊ（ＣＤ８＋細胞）に示す。 図１３は、抗体結合後のＧＩＴＲクラスター形成およびインターナリゼーションを示す一連のグラフである。ＧＩＴＲインターナリゼーションを、ドナー１（図１３Ａ〜Ｂ、１３Ｆ〜Ｇ）またはドナー２（図１３Ｃ〜Ｄ、１３Ｈ〜Ｉ）のいずれかに由来するＣＤ４＋細胞（図１３Ａ〜Ｅ）およびＣＤ８＋細胞（図１３Ｆ〜Ｊ）において測定した。細胞を、ＡＢＰ１ ＴＭ形式抗体またはＡＢＰ３５標準二価抗体のいずれかで処理した。観察され得るように、ＡＢＰ１またはＡＢＰ３５のいずれかとのインキュベーションは、ＡＢＰ１Ｄｙｌｉｇｈｔ６５０（図１３Ａ、１３Ｃ、１３Ｆ、１３Ｈ）でのその後の染色を阻害するが、ＡＢＰ１とのインキュベーションのみは、非競合的クローン１０８−１７での染色によって測定されるように、ＧＩＴＲインターナリゼーションを誘導する（図１３Ｂ、１３Ｄ、１３Ｇ、１３Ｉ）。両方のドナーに由来する細胞に対するＡＢＰ１のＥＣ５０の決定を、図１３Ｅ（ＣＤ４＋細胞）および図１３Ｊ（ＣＤ８＋細胞）に示す。 図１３は、抗体結合後のＧＩＴＲクラスター形成およびインターナリゼーションを示す一連のグラフである。ＧＩＴＲインターナリゼーションを、ドナー１（図１３Ａ〜Ｂ、１３Ｆ〜Ｇ）またはドナー２（図１３Ｃ〜Ｄ、１３Ｈ〜Ｉ）のいずれかに由来するＣＤ４＋細胞（図１３Ａ〜Ｅ）およびＣＤ８＋細胞（図１３Ｆ〜Ｊ）において測定した。細胞を、ＡＢＰ１ ＴＭ形式抗体またはＡＢＰ３５標準二価抗体のいずれかで処理した。観察され得るように、ＡＢＰ１またはＡＢＰ３５のいずれかとのインキュベーションは、ＡＢＰ１Ｄｙｌｉｇｈｔ６５０（図１３Ａ、１３Ｃ、１３Ｆ、１３Ｈ）でのその後の染色を阻害するが、ＡＢＰ１とのインキュベーションのみは、非競合的クローン１０８−１７での染色によって測定されるように、ＧＩＴＲインターナリゼーションを誘導する（図１３Ｂ、１３Ｄ、１３Ｇ、１３Ｉ）。両方のドナーに由来する細胞に対するＡＢＰ１のＥＣ５０の決定を、図１３Ｅ（ＣＤ４＋細胞）および図１３Ｊ（ＣＤ８＋細胞）に示す。
図１４は、抗ＧＩＴＲ ＩｇＧ４ ＴＭ形式抗体ＡＢＰ１、そのＩｇＧ１形式カウンターパートＡＢＰ３５、ならびにＩｇＧ４ ＴＭ形式コントロールおよびＩｇＧ１アイソタイプコントロールでの処理後の２名の健康なヒトドナー（ドナー１およびドナー２、それぞれ、図１４Ａおよび１４Ｂ）に由来する活性化Ｔ芽球からのサイトカイン（ＩＬ−２）の生成を示す。活性化ＣＤ４＋／ＣＤ８＋ Ｔ細胞を、培地単独、組換えＧＩＴＲ−リガンド、ＡＢＰ１、ｈＩｇＧ４ ＴＭ形式アイソタイプコントロール、ＡＢＰ３５、またはｈＩｇＧ１標準形式アイソタイプコントロールで、各々９種の用量において処理した： １０μｇ／ｍＬ、２μｇ／ｍＬ、０．４μｇ／ｍＬ、８０ｎｇ／ｍＬ、１６ｎｇ／ｍＬ、３．２ｎｇ／ｍＬ、０．６４ｎｇ／ｍＬ、０．１３ｎｇ／ｍＬ、および０．０２６ｎｇ／ｍＬ。細胞を、１μｇ／ｍｌ 抗ＣＤ３抗体および２μｇ／ｍｌ 抗ＣＤ２８抗体を添加することによって刺激した。図１４Ｃは、各ドナーにおけるＥＣ５０決定の計算とともに、ＡＢＰ１に関して図１４Ａおよび１４Ｂにおけるものと同じデータを示す。 図１４は、抗ＧＩＴＲ ＩｇＧ４ ＴＭ形式抗体ＡＢＰ１、そのＩｇＧ１形式カウンターパートＡＢＰ３５、ならびにＩｇＧ４ ＴＭ形式コントロールおよびＩｇＧ１アイソタイプコントロールでの処理後の２名の健康なヒトドナー（ドナー１およびドナー２、それぞれ、図１４Ａおよび１４Ｂ）に由来する活性化Ｔ芽球からのサイトカイン（ＩＬ−２）の生成を示す。活性化ＣＤ４＋／ＣＤ８＋ Ｔ細胞を、培地単独、組換えＧＩＴＲ−リガンド、ＡＢＰ１、ｈＩｇＧ４ ＴＭ形式アイソタイプコントロール、ＡＢＰ３５、またはｈＩｇＧ１標準形式アイソタイプコントロールで、各々９種の用量において処理した： １０μｇ／ｍＬ、２μｇ／ｍＬ、０．４μｇ／ｍＬ、８０ｎｇ／ｍＬ、１６ｎｇ／ｍＬ、３．２ｎｇ／ｍＬ、０．６４ｎｇ／ｍＬ、０．１３ｎｇ／ｍＬ、および０．０２６ｎｇ／ｍＬ。細胞を、１μｇ／ｍｌ 抗ＣＤ３抗体および２μｇ／ｍｌ 抗ＣＤ２８抗体を添加することによって刺激した。図１４Ｃは、各ドナーにおけるＥＣ５０決定の計算とともに、ＡＢＰ１に関して図１４Ａおよび１４Ｂにおけるものと同じデータを示す。 図１４は、抗ＧＩＴＲ ＩｇＧ４ ＴＭ形式抗体ＡＢＰ１、そのＩｇＧ１形式カウンターパートＡＢＰ３５、ならびにＩｇＧ４ ＴＭ形式コントロールおよびＩｇＧ１アイソタイプコントロールでの処理後の２名の健康なヒトドナー（ドナー１およびドナー２、それぞれ、図１４Ａおよび１４Ｂ）に由来する活性化Ｔ芽球からのサイトカイン（ＩＬ−２）の生成を示す。活性化ＣＤ４＋／ＣＤ８＋ Ｔ細胞を、培地単独、組換えＧＩＴＲ−リガンド、ＡＢＰ１、ｈＩｇＧ４ ＴＭ形式アイソタイプコントロール、ＡＢＰ３５、またはｈＩｇＧ１標準形式アイソタイプコントロールで、各々９種の用量において処理した： １０μｇ／ｍＬ、２μｇ／ｍＬ、０．４μｇ／ｍＬ、８０ｎｇ／ｍＬ、１６ｎｇ／ｍＬ、３．２ｎｇ／ｍＬ、０．６４ｎｇ／ｍＬ、０．１３ｎｇ／ｍＬ、および０．０２６ｎｇ／ｍＬ。細胞を、１μｇ／ｍｌ 抗ＣＤ３抗体および２μｇ／ｍｌ 抗ＣＤ２８抗体を添加することによって刺激した。図１４Ｃは、各ドナーにおけるＥＣ５０決定の計算とともに、ＡＢＰ１に関して図１４Ａおよび１４Ｂにおけるものと同じデータを示す。
図１５は、抗ＧＩＴＲ ＩｇＧ４ ＴＭ形式抗体 ＡＢＰ１、ＩｇＧ４ ＴＭ形式コントロール（「ＩｓｏＴＭ」）、ＳＥＣ４、ＳＥＣ９、組換えｈＧＩＴＲＬならびにＩｇＧ１アイソタイプコントロールおよびＩｇＧ４アイソタイプコントロールでの処理後の２名の健康なヒトドナー（ドナー１およびドナー２、それぞれ、図１５Ａおよび１５Ｂ）に由来する活性化Ｔ芽球からのサイトカイン（ＩＬ−２）の生成を示す。活性化ＣＤ４＋／ＣＤ８＋ Ｔ細胞は、培地単独、組換えＧＩＴＲ−リガンド、ＡＢＰ１、ｈＩｇＧ４ ＴＭ形式アイソタイプコントロール、ＳＥＣ４、ＳＥＣ９、ＩｇＧ１標準形式アイソタイプコントロール、またはｈＩｇＧ１標準形式アイソタイプコントロールで、各々９種の用量において処理した： １０μｇ／ｍＬ、２μｇ／ｍＬ、０．４μｇ／ｍＬ、８０ｎｇ／ｍＬ、１６ｎｇ／ｍＬ、３．２ｎｇ／ｍＬ、０．６４ｎｇ／ｍＬ、０．１３ｎｇ／ｍＬ、および０．０２６ｎｇ／ｍＬ。細胞を、１μｇ／ｍｌ 抗ＣＤ３抗体および２μｇ／ｍｌ 抗ＣＤ２８抗体を添加することによって刺激した。図１５Ｃ（ドナー１）および１５Ｄ（ドナー２）は、各ドナーにおけるＥＣ５０決定の計算とともに、ＡＢＰ１に関して１５Ａおよび１５Ｂにおけるものと同じデータを示す。 図１５は、抗ＧＩＴＲ ＩｇＧ４ ＴＭ形式抗体 ＡＢＰ１、ＩｇＧ４ ＴＭ形式コントロール（「ＩｓｏＴＭ」）、ＳＥＣ４、ＳＥＣ９、組換えｈＧＩＴＲＬならびにＩｇＧ１アイソタイプコントロールおよびＩｇＧ４アイソタイプコントロールでの処理後の２名の健康なヒトドナー（ドナー１およびドナー２、それぞれ、図１５Ａおよび１５Ｂ）に由来する活性化Ｔ芽球からのサイトカイン（ＩＬ−２）の生成を示す。活性化ＣＤ４＋／ＣＤ８＋ Ｔ細胞は、培地単独、組換えＧＩＴＲ−リガンド、ＡＢＰ１、ｈＩｇＧ４ ＴＭ形式アイソタイプコントロール、ＳＥＣ４、ＳＥＣ９、ＩｇＧ１標準形式アイソタイプコントロール、またはｈＩｇＧ１標準形式アイソタイプコントロールで、各々９種の用量において処理した： １０μｇ／ｍＬ、２μｇ／ｍＬ、０．４μｇ／ｍＬ、８０ｎｇ／ｍＬ、１６ｎｇ／ｍＬ、３．２ｎｇ／ｍＬ、０．６４ｎｇ／ｍＬ、０．１３ｎｇ／ｍＬ、および０．０２６ｎｇ／ｍＬ。細胞を、１μｇ／ｍｌ 抗ＣＤ３抗体および２μｇ／ｍｌ 抗ＣＤ２８抗体を添加することによって刺激した。図１５Ｃ（ドナー１）および１５Ｄ（ドナー２）は、各ドナーにおけるＥＣ５０決定の計算とともに、ＡＢＰ１に関して１５Ａおよび１５Ｂにおけるものと同じデータを示す。 図１５は、抗ＧＩＴＲ ＩｇＧ４ ＴＭ形式抗体 ＡＢＰ１、ＩｇＧ４ ＴＭ形式コントロール（「ＩｓｏＴＭ」）、ＳＥＣ４、ＳＥＣ９、組換えｈＧＩＴＲＬならびにＩｇＧ１アイソタイプコントロールおよびＩｇＧ４アイソタイプコントロールでの処理後の２名の健康なヒトドナー（ドナー１およびドナー２、それぞれ、図１５Ａおよび１５Ｂ）に由来する活性化Ｔ芽球からのサイトカイン（ＩＬ−２）の生成を示す。活性化ＣＤ４＋／ＣＤ８＋ Ｔ細胞は、培地単独、組換えＧＩＴＲ−リガンド、ＡＢＰ１、ｈＩｇＧ４ ＴＭ形式アイソタイプコントロール、ＳＥＣ４、ＳＥＣ９、ＩｇＧ１標準形式アイソタイプコントロール、またはｈＩｇＧ１標準形式アイソタイプコントロールで、各々９種の用量において処理した： １０μｇ／ｍＬ、２μｇ／ｍＬ、０．４μｇ／ｍＬ、８０ｎｇ／ｍＬ、１６ｎｇ／ｍＬ、３．２ｎｇ／ｍＬ、０．６４ｎｇ／ｍＬ、０．１３ｎｇ／ｍＬ、および０．０２６ｎｇ／ｍＬ。細胞を、１μｇ／ｍｌ 抗ＣＤ３抗体および２μｇ／ｍｌ 抗ＣＤ２８抗体を添加することによって刺激した。図１５Ｃ（ドナー１）および１５Ｄ（ドナー２）は、各ドナーにおけるＥＣ５０決定の計算とともに、ＡＢＰ１に関して１５Ａおよび１５Ｂにおけるものと同じデータを示す。 図１５は、抗ＧＩＴＲ ＩｇＧ４ ＴＭ形式抗体 ＡＢＰ１、ＩｇＧ４ ＴＭ形式コントロール（「ＩｓｏＴＭ」）、ＳＥＣ４、ＳＥＣ９、組換えｈＧＩＴＲＬならびにＩｇＧ１アイソタイプコントロールおよびＩｇＧ４アイソタイプコントロールでの処理後の２名の健康なヒトドナー（ドナー１およびドナー２、それぞれ、図１５Ａおよび１５Ｂ）に由来する活性化Ｔ芽球からのサイトカイン（ＩＬ−２）の生成を示す。活性化ＣＤ４＋／ＣＤ８＋ Ｔ細胞は、培地単独、組換えＧＩＴＲ−リガンド、ＡＢＰ１、ｈＩｇＧ４ ＴＭ形式アイソタイプコントロール、ＳＥＣ４、ＳＥＣ９、ＩｇＧ１標準形式アイソタイプコントロール、またはｈＩｇＧ１標準形式アイソタイプコントロールで、各々９種の用量において処理した： １０μｇ／ｍＬ、２μｇ／ｍＬ、０．４μｇ／ｍＬ、８０ｎｇ／ｍＬ、１６ｎｇ／ｍＬ、３．２ｎｇ／ｍＬ、０．６４ｎｇ／ｍＬ、０．１３ｎｇ／ｍＬ、および０．０２６ｎｇ／ｍＬ。細胞を、１μｇ／ｍｌ 抗ＣＤ３抗体および２μｇ／ｍｌ 抗ＣＤ２８抗体を添加することによって刺激した。図１５Ｃ（ドナー１）および１５Ｄ（ドナー２）は、各ドナーにおけるＥＣ５０決定の計算とともに、ＡＢＰ１に関して１５Ａおよび１５Ｂにおけるものと同じデータを示す。
詳細な説明
定義
別段定義されなければ、本明細書で使用される技術、表記法および他の科学技術の全ての用語は、本発明が属する分野の当業者によって一般に理解される意味を有することが意図される。いくらかの場合には、一般に理解される意味を有する用語は、明瞭性のためにおよび／または容易な参照のために本明細書で定義され、本明細書中でのこのような定義の包含は、必ずしも当該分野で一般に理解されるものを超える差異を表すと解釈されるべきではない。本明細書で記載または参照される技術および手順は一般に、十分に理解され、従来の方法論を使用して当業者によって一般的に使用される（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ 第４版．（２０１２） Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ， ＮＹに記載される広く利用される分子クローニング方法論のような）。適切な場合には、市販のキットおよび試薬の使用に関わる手順は一般に、別段注記されなければ、製造者が規定するプロトコルおよび条件に従って行われる。
本明細書で使用される場合、単数形「１つの、ある（ａ）」、「１つの、ある（ａｎ）」および「上記、この、その（ｔｈｅ）」とは、文脈が明らかに別のことを示さなければ、複数形への言及を包含する。用語「含む、包含する（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「例えば、など、のような（ｓｕｃｈ ａｓ）」などは、別段具体的に言及されなければ、限定なしに包含することを伝えることが意図される。
本明細書で使用される場合、用語「含む、包含する（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」はまた、別段具体的に示されなければ、列挙される要素「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」実施形態および「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」実施形態を具体的に含む。例えば、「ダイアボディを含む」多重特異的ＡＢＰは、「ダイアボディからなる」多重特異的ＡＢＰおよび「ダイアボディから本質的になる」多重特異的ＡＢＰを含む。
用語「約（ａｂｏｕｔ）」とは、示された値およびその値を上回るおよび下回る範囲を示し、包含する。ある種の実施形態において、用語「約」とは、指定された値±１０％、±５％、または±１％を示す。ある種の実施形態において、用語「約」は、指定された値±その値の１標準偏差を示す。
用語「ＧＩＴＲ」、「ＧＩＴＲタンパク質」、および「ＧＩＴＲ抗原は、ヒトＧＩＴＲまたは任意のバリアント（例えば、スプライスバリアントおよびアレルバリアント）、アイソフォーム、および細胞によって天然に発現されるか、またはｇｉｔｒ遺伝子でトランスフェクトされた細胞によって発現されるヒトＧＩＴＲの種ホモログをいうために本明細書で交換可能に使用される。いくつかの局面において、そのＧＩＴＲタンパク質は、霊長類（例えば、サルまたはヒト）、齧歯類（例えば、マウスまたはラット）、イヌ、ラクダ、ネコ、ウシ、ヤギ、ウマ、またはヒツジによって天然に発現されるＧＩＴＲタンパク質である。いくつかの局面において、そのＧＩＴＲタンパク質は、ヒトＧＩＴＲ（ｈＧＩＴＲ；配列番号１）である。いくつかの局面において、そのＧＩＴＲタンパク質は、ヒトＧＩＴＲ Ｔ４３Ｒバリアント（ｈＧＩＴＲ−Ｔ４３Ｒ；配列番号２）である。いくつかの局面において、そのＧＩＴＲタンパク質は、配列番号１〜２の２６位〜１６２位に位置するｈＧＩＴＲの細胞外ドメインを含む。いくつかの局面において、そのＧＩＴＲタンパク質は、カニクイザルＧＩＴＲ（ｃＧＩＴＲ；配列番号３）である。いくつかの局面において、そのＧＩＴＲタンパク質は、配列番号３の２０位〜１５６位に位置したｃＧＩＴＲの細胞外ドメインを含む。いくつかの局面において、そのＧＩＴＲタンパク質は、マウスＧＩＴＲ（ｍＧＩＴＲ；配列番号４）である。いくつかの局面において、そのＧＩＴＲタンパク質は、配列番号４の２０位〜１５３位に位置するｍＧＩＴＲの細胞外ドメインを含む。いくつかの局面において、そのＧＩＴＲタンパク質は、全長またはプロセシングされていないＧＩＴＲタンパク質である。いくつかの局面において、そのＧＩＴＲタンパク質は、短縮されたまたは翻訳後修飾によって生成されるプロセシングされたＧＩＴＲタンパク質である。ＧＩＴＲはまた、種々の類義語（腫瘍壊死因子レセプタースーパーファミリー、メンバー１８（ＴＮＦＲＳＦ１８）；ＡＩＴＲ、グルココルチコイド誘導性ＴＮＦＲ関連タンパク質；活性化−誘導性ＴＮＦＲファミリーレセプター；ＴＮＦレセプタースーパーファミリー活性化−誘導性タンパク質；ＣＤ３５７；およびＧＩＴＲ−Ｄが挙げられる）によって公知である。
用語「免疫グロブリン」とは、２対のポリペプチド鎖：１対の軽（Ｌ）鎖および１対の重（Ｈ）鎖を概して含む、構造的に関連するタンパク質のクラスをいう。「無傷の免疫グロブリン（ｉｎｔａｃｔ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ）では、全４個のこれらの鎖が、ジスルフィド結合によって相互に接続される。免疫グロブリンの構造は、十分に特徴づけられている。例えば、Ｐａｕｌ， Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ 第７版， 第５章（２０１３） Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ， Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ， ＰＡを参照のこと。簡潔には、各重鎖は、代表的には、重鎖可変領域（ＶＨ）および重鎖定常領域（ＣＨ）を含む。その重鎖定常領域は代表的には、３個のドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３と略される）を含む。各軽鎖は代表的には、軽鎖可変領域（ＶＬ）および軽鎖定常領域を含む。その軽鎖定常領域は代表的には、１個のドメイン（ＣＬと略される）を含む。
用語「抗原結合タンパク質」（ＡＢＰ）は、抗原またはエピトープに特異的に結合する１またはこれより多くの抗原結合ドメインを含むタンパク質をいう。いくつかの実施形態において、その抗原結合ドメインは、天然に存在する抗体の特異性および親和性に類似の特異性および親和性でその抗原またはエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、そのＡＢＰは、抗体を含む、抗体からなるか、または抗体から本質的になる。いくつかの実施形態において、そのＡＢＰは、抗体フラグメントを含むか、抗体フラグメントからなるか、または抗体フラグメントから本質的になる。いくつかの実施形態において、そのＡＢＰは、代替の足場を含むか、代替の足場からなるか、または代替の足場から本質的になる。「ＧＩＴＲ ＡＢＰ」、および「抗ＧＩＴＲ ＡＢＰ」、または「ＧＩＴＲ特異的ＡＢＰ」は、本明細書で提供されるように、その抗原ＧＩＴＲに特異的に結合するＡＢＰである。いくつかの実施形態において、そのＡＢＰは、ＧＩＴＲの細胞外ドメインに結合する。ある種の実施形態において、本明細書で提供されるＧＩＴＲ ＡＢＰは、異なる種に由来するＧＩＴＲタンパク質の間またはその中で保存されるＧＩＴＲのエピトープに結合する。
用語「抗体」は、その最も広い意味において本明細書で使用され、抗原またはエピトープに特異的に結合する１またはこれより多くの抗原結合ドメインを含むある種のタイプの免疫グロブリン分子を包含する。抗体としては、具体的には、無傷の抗体（例えば、無傷の免疫グロブリン）、抗体フラグメント、および多重特異的抗体が挙げられる。抗原結合ドメインの一例は、ＶＨ−ＶＬダイマーによって形成される抗原結合ドメインである。抗体は、ＡＢＰの１タイプである。
用語「代替の足場」とは、１またはこれより多くの領域が抗原またはエピトープに特異的に結合する１またはこれより多くの抗原結合ドメインを生成するために多様化され得る分子をいう。いくつかの実施形態において、その抗原結合ドメインは、天然に存在する抗体の特異性および親和性に類似の特異性および親和性でその抗原またはエピトープに結合する。例示的な代替の足場としては、フィブロネクチン（例えば、ＡｄｎｅｃｔｉｎｓＴＭ）、β−サンドイッチ（例えば、ｉＭａｂ）、リポカリン（例えば、Ａｎｔｉｃａｌｉｎｓ（登録商標））、ＥＥＴＩ−ＩＩ／ＡＧＲＰ、ＢＰＴＩ／ＬＡＣＩ−Ｄ１／ＩＴＩ−Ｄ２（例えば、Ｋｕｎｉｔｚドメイン）、チオレドキシンペプチドアプタマー、プロテインＡ（例えば、Ａｆｆｉｂｏｄｙ（登録商標））、アンキリンリピート（例えば、ＤＡＲＰｉｎｓ）、γ−Ｂ−クリスタリン／ユビキチン（例えば、Ａｆｆｉｌｉｎｓ）、ＣＴＬＤ３（例えば、Ｔｅｔｒａｎｅｃｔｉｎｓ）、Ｆｙｎｏｍｅｒｓ、および（ＬＤＬＲ−Ａモジュール）（例えば、Ａｖｉｍｅｒｓ）に由来するものが挙げられる。代替の足場に関するさらなる情報は、Ｂｉｎｚら， Ｎａｔ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．， ２００５ ２３：１２５７−１２６８； Ｓｋｅｒｒａ， Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎ． ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ．， ２００７ １８：２９５−３０４；およびＳｉｌａｃｃｉら， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．， ２０１４， ２８９：１４３９２−１４３９８（これらの各々はその全体において参考として援用される）において提供される。代替の足場は、ＡＢＰの１タイプである。
用語「抗原結合ドメイン」は、抗原またはエピトープに特異的に結合し得るＡＢＰの部分を意味する。
用語「全長抗体」、「無傷の抗体」、および「完全抗体（ｗｈｏｌｅ ａｎｔｉｂｏｄｙ）」とは、天然に存在する抗体構造に実質的に類似の構造を有しかつＦｃ領域を含む重鎖を有する抗体をいうために本明細書で交換可能に使用される。
用語「Ｆｃ領域」とは、天然に存在する抗体において、Ｆｃレセプターおよび補体系のある種のタンパク質と相互作用する免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を意味する。種々の免疫グロブリンのＦｃ領域の構造、およびその中に含まれるグリコシル化部位は、当該分野で公知である。Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒ ａｎｄ Ｃａｖａｃｉｎｉ， Ｊ． Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， ２０１０， １２５：Ｓ４１−５２（その全体において参考として援用される）を参照のこと。そのＦｃ領域は、天然に存在するＦｃ領域、または本開示の他の箇所で記載されるように改変されたＦｃ領域であり得る。
そのＶＨおよびＶＬ領域は、より保存された領域が散在した超可変性の領域（「超可変領域（ＨＶＲ）」；「相補性決定領域」（ＣＤＲ）ともいわれる）へとさらに細かく分けられ得る。より保存された領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）といわれる。各ＶＨおよびＶＬは一般に、３個のＣＤＲおよび４個のＦＲを含み、以下の順序で配列される（Ｎ末端からＣ末端へと）： ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４。そのＣＤＲは、抗原結合に関与し、その抗体の抗原特異性および結合親和性に影響を及ぼす。Ｋａｂａｔら， Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ 第５版．（１９９１） Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ， Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ， Ｂｅｔｈｅｓｄａ， ＭＤ（その全体において参考として援用される）を参照のこと。
脊椎動物種に由来する軽鎖は、その定常ドメインの配列に基づいて２つのタイプ（カッパ（κ）およびラムダ（λ）といわれる）のうちの１つに割り当てられ得る。
任意の脊椎動物種に由来する重鎖は、５つの異なるクラス（またはアイソタイプ）： ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭのうちの１つに割り当てられ得る。これらのクラスはまた、それぞれ、α、δ、ε、γ、およびμと示される。そのＩｇＧおよびＩｇＡクラスは、配列および機能における差異に基づいて、サブクラスへとさらに細かく分けられる。ヒトは、以下のサブクラスを発現する：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２。
ＣＤＲのアミノ酸配列境界は、多くの公知の番号付けスキームのうちのいずれか（Ｋａｂａｔら，前出（「Ｋａｂａｔ」番号付けスキーム）；Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉら， １９９７， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．， ２７３：９２７−９４８（「Ｃｈｏｔｈｉａ」番号付けスキーム）；ＭａｃＣａｌｌｕｍら， １９９６， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２６２：７３２−７４５（「Ｃｏｎｔａｃｔ」番号付けスキーム）；Ｌｅｆｒａｎｃら， Ｄｅｖ． Ｃｏｍｐ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， ２００３， ２７：５５−７７（「ＩＭＧＴ」番号付けスキーム）；およびＨｏｎｅｇｇｅ ａｎｄ Ｐｌｕｅｃｋｔｈｕｎ， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．， ２００１， ３０９：６５７−７０（「ＡＨｏ」番号付けスキーム）（これらの各々はその全体において参考として援用される）によって記載されるものが挙げられる）を使用して、当業者によって決定され得る。
表１は、ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａスキームによって同定されるとおりのＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、ＣＤＲ−Ｌ３、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、およびＣＤＲ−Ｈ３の位置を提供する。ＣＤＲ−Ｈ１に関しては、残基番号付けは、ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａ両方の番号付けスキームを使用して提供される。
別段特定されなければ、本明細書中の特定のＣＤＲの同定に使用される番号付けスキームは、Ｋａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けスキームである。これら２つの番号付けスキームによって包含される残基が異なる場合（例えば、ＣＤＲ−Ｈ１および／またはＣＤＲ−Ｈ２）、その番号付けスキームは、ＫａｂａｔまたはＣｈｏｔｈｉａのいずれかとして特定される。便宜上、ＣＤＲ−Ｈ３は、ときおりＫａｂａｔまたはＣｈｏｔｈｉａのいずれかとして本明細書で言及される。しかし、これは、配列中の差異が存在しない場合にその差異に言及することを意図せず、当業者は、その配列が、配列を調べることによって同じであるかまたは異なるかを容易に確認し得る。
ＣＤＲは、例えば、抗体番号付けソフトウェア（例えば、ｗｗｗ．ｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓ／ａｂｎｕｍ／において入手可能であり、Ａｂｈｉｎａｎｄａｎ ａｎｄ Ｍａｒｔｉｎ， Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， ２００８， ４５：３８３２−３８３９（その全体において参考として援用される）に記載されるＡｂｎｕｍ）を使用して割り当てられ得る。
「ＥＵ番号付けスキーム（ＥＵ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ ｓｃｈｅｍｅ）」とは、抗体重鎖定常領域（例えば、Ｋａｂａｔら，前出に報告されるとおり）中の残基に言及する場合に一般に使用される。別段述べられなければ、そのＥＵ番号付けスキームは、本明細書で記載される抗体重鎖定常領域における残基に言及するために使用される。
「抗体フラグメント」または「抗原結合フラグメント」は、無傷の抗体の一部（例えば、無傷の抗体の抗原結合領域または可変領域）を含む。抗体フラグメントとしては、例えば、Ｆｖフラグメント、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、ｓｃＦｖ（ｓＦｖ）フラグメント、およびｓｃＦｖ−Ｆｃフラグメントが挙げられる。
「Ｆｖ」フラグメントは、１個の重鎖可変ドメインおよび１個の軽鎖可変ドメインの非共有結合的に連結されたダイマーを含む。
「Ｆａｂ」フラグメントは、重鎖および軽鎖可変ドメインに加えて、軽鎖の定常ドメインおよび重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）を含む。Ｆａｂフラグメントは、例えば、組換え法によってまたは全長抗体のパパイン消化によって生成され得る。
「Ｆ（ａｂ’）２」フラグメントは、ヒンジ領域近辺で、ジスルフィド結合によって接続された２個のＦａｂ’フラグメントを含む。Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは、例えば、組換え法によって、または無傷の抗体のペプシン消化によって生成され得る。そのＦ（ａｂ’）フラグメントは、例えば、β−メルカプトエタノールでの処理によって解離され得る。
「１本鎖Ｆｖ」または「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」抗体フラグメントは、単一ペプチド鎖中にＶＨドメインおよびＶＬドメインを含む。そのＶＨおよびＶＬは一般に、ペプチドリンカーによって連結される。Ｐｌｕｅｃｋｔｈｕｎ Ａ．（１９９４）を参照のこと。いくつかの実施形態において、そのリンカーは、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号５）である。他の実施形態において、そのリンカーは、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号６）である。いくつかの実施形態において、ｎ＝１、２、３、４、５、または６である。Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｒｏｍ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ． Ｉｎ Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ Ｍ． ＆ Ｍｏｏｒｅ Ｇ．Ｐ．（編）， Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｖｏｌ． １１３（ｐｐ． ２６９−３１５）． Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（その全体において参考として援用される）を参照のこと。
「ｓｃＦｖ−Ｆｃ」フラグメントは、Ｆｃドメインに結合したｓｃＦｖを含む。例えば、Ｆｃドメインは、そのｓｃＦｖのＣ末端に結合し得る。そのＦｃドメインは、ｓｃＦｖ中の可変ドメインの配向（すなわち、ＶＨ−ＶＬまたはＶＬ−ＶＨ）に依存して、ＶＨまたはＶＬの後ろに続き得る。当該分野で公知であるかまたは本明細書で記載される任意の適切なＦｃドメインが、使用され得る。いくらかの場合には、そのＦｃドメインは、ＩｇＧ４ Ｆｃドメインを含む。
用語「単一ドメイン抗体」とは、抗体の１個の可変ドメインが他の可変ドメインの存在なしに抗原に特異的に結合する分子をいう。単一ドメイン抗体およびそのフラグメントは、Ａｒａｂｉ Ｇｈａｈｒｏｕｄｉら， ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ， １９９８， ４１４：５２１−５２６およびＭｕｙｌｄｅｒｍａｎｓら， Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｓｃｉ．， ２００１， ２６：２３０−２４５（これらの各々がその全体において参考として援用される）に記載される。
「多重特異的ＡＢＰ（ｍｕｌｔｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ＡＢＰ）」とは、集合的に、２またはこれより多くの異なるエピトープに特異的に結合する２またはこれより多くの異なる抗原結合ドメインを含むＡＢＰである。その２またはこれより多くの異なるエピトープは、同じ抗原（例えば、細胞によって発現される単一のＧＩＴＲ分子）上のまたは異なる抗原（例えば、同じ細胞によって発現される異なるＧＩＴＲ分子）上のエピトープであり得る。いくつかの局面において、多重特異的（multi-specific）ＡＢＰは、２個の異なるエピトープに結合する（すなわち、「二重特異的ＡＢＰ」）。いくつかの局面において、多重特異的ＡＢＰは、３個の異なるエピトープに結合する（すなわち、「三重特異的ＡＢＰ」）。いくつかの局面において、多重特異的ＡＢＰは、４個の異なるエピトープに結合する（すなわち、「四重特異的ＡＢＰ」）。いくつかの局面において、多重特異的ＡＢＰは、６個の異なるエピトープに結合する（すなわち、「五重特異的ＡＢＰ（ｑｕｉｎｔｓｐｅｃｉｆｉｃ ＡＢＰ）」）。いくつかの局面において、多重特異的ＡＢＰは、６個、７個、８個、またはこれより多くの異なるエピトープに結合する。各々の結合特異性は、任意の適切な結合価で存在し得る。多重特異的ＡＢＰの例は、本開示の他の箇所で提供される。
「一重特異的ＡＢＰ」とは、単一のエピトープに特異的に結合する結合部位を含むＡＢＰである。一重特異的ＡＢＰの例は、二価であるが、各抗原結合ドメインにおいて同じエピトープを認識する天然に存在するＩｇＧ分子である。その結合特異性は、任意の適切な結合価で存在し得る。
用語「モノクローナル抗体」とは、実質的に均質な抗体の集団に由来する抗体をいう。実質的に均質な抗体の集団は、そのモノクローナル抗体の生成の間に通常は生じ得るバリアントを除いて、実質的に類似でありかつ同じエピトープ（複数可）に結合する抗体を含む。このようなバリアントは概して、ごく微量に存在する。モノクローナル抗体は代表的には、複数の抗体から単一の抗体を選択することを含むプロセスによって得られる。例えば、その選択プロセスは、複数のクローン（例えば、ハイブリドーマクローン、ファージクローン、酵母クローン、細菌クローン、または他の組換えＤＮＡクローンのプール）からのただ１つのクローンの選択であり得る。その選択された抗体は、例えば、標的に対する親和性を改善するために（「親和性成熟」）、その抗体をヒト化するために、細胞培養物でのその生成を改善するために、および／または被験体におけるその免疫原性を低減するために、さらに変更され得る。
用語「キメラ抗体」とは、その重鎖および／または軽鎖の一部が特定の供給源または種に由来する一方で、その重鎖および／または軽鎖の残りが異なる供給源または種に由来する抗体をいう。
非ヒト抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト抗体に由来する最小配列を含むキメラ抗体である。ヒト化抗体は一般に、ヒト抗体（レシピエント抗体）において１またはこれより多くのＣＤＲに由来する残基が非ヒト抗体（ドナー抗体）の１またはこれより多くのＣＤＲに由来する残基によって置き換えられているヒト抗体（レシピエント抗体）である。そのドナー抗体は、任意の適切な非ヒト抗体（例えば、所望の特異性、親和性、または生物学的効果を有するマウス、ラット、ウサギ、ニワトリ、または非ヒト霊長類の抗体）であり得る。場合によっては、そのレシピエント抗体の選択されたフレームワーク領域の残基が、ドナー抗体に由来するその相当するフレームワーク領域の残基によって置き換えられる。ヒト化抗体はそのレシピエント抗体またはそのドナー抗体のいずれにおいても見出されない残基を含むこともある。このような改変は、抗体機能をさらに洗練させるために行われ得る。さらなる詳細については、Ｊｏｎｅｓら， Ｎａｔｕｒｅ， １９８６， ３２１：５２２−５２５； Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら， Ｎａｔｕｒｅ， １９８８， ３３２：３２３−３２９；およびＰｒｅｓｔａ， Ｃｕｒｒ． Ｏｐ． Ｓｔｒｕｃｔ． Ｂｉｏｌ．， １９９２， ２：５９３−５９６（これらの各々がその全体において参考として援用される）を参照のこと。
「ヒト抗体」とは、ヒトもしくはヒト細胞によって生成されるか、またはヒト抗体レパートリーもしくはヒト抗体コード配列（例えば、ヒト供給源から得られるかまたは新たにデザインされる）を利用する非ヒト供給源に由来する抗体のアミノ酸配列に相当するアミノ酸配列を有する抗体である。ヒト抗体は、ヒト化抗体を具体的に排除する。
「単離されたＡＢＰ」または「単離された核酸」は、その天然の環境の構成要素から分離および／または回収されているＡＢＰまたは核酸である。その天然の環境の構成要素としては、酵素、ホルモン、および他のタンパク質性または非タンパク質性の物質が挙げられ得る。いくつかの実施形態において、単離されたＡＢＰは、例えば、スピニングカップシークエネーター（ｓｐｉｎｎｉｎｇ ｃｕｐ ｓｅｑｕｅｎａｔｏｒ）を使用することによって、Ｎ末端または内部のアミノ酸配列のうちの少なくとも１５残基を得るために十分な程度まで精製される。いくつかの実施形態において、単離されたＡＢＰは、還元条件または非還元条件下でゲル電気泳動（例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）によって、クーマシー（登録商標）ブルー染色または銀染色による検出を用いて、均質になるまで精製される。単離されたＡＢＰは、そのＡＢＰの天然の環境の少なくとも１つの構成要素が存在しないので、組換え細胞内にインサイチュでＡＢＰを含む。いくつかの局面において、単離されたＡＢＰまたは単離された核酸は、少なくとも１つの精製工程によって調製される。いくつかの実施形態において、単離されたＡＢＰまたは単離された核酸は、少なくとも８０重量％、８５重量％、９０重量％、９５重量％、または９９重量％へと精製される。いくつかの実施形態において、単離されたＡＢＰまたは単離された核酸は、少なくとも８０容積％、８５容積％、９０容積％、９５容積％、または９９容積％へと精製される。いくつかの実施形態において、単離されたＡＢＰまたは単離された核酸は、重量で少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％、９９％〜１００％のＡＢＰまたは核酸を含む溶液として提供される。いくつかの実施形態において、単離されたＡＢＰまたは単離された核酸は、容積で少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％、９９％〜１００％のＡＢＰまたは核酸を含む溶液として提供される。
「親和性」とは、分子（例えば、ＡＢＰ）の単一の結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原またはエピトープ）との間の非共有結合的相互作用の合計の強さをいう。別段示されなければ、本明細書で使用される場合、「親和性」は、本質的な結合親和性であって、結合対（例えば、ＡＢＰおよび抗原またはエピトープ）のメンバー間の１：１の相互作用を反映するものをいう。分子Ｘの、そのパートナーＹに対する親和性は、解離平衡定数（ＫＤ）によって表され得る。その解離平衡定数に寄与する動力学的構成要素は、以下でより詳細に記載される。親和性は、当該分野で公知の一般的方法（本明細書で記載されるものが挙げられる）によって測定され得る。親和性は、例えば、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標））またはバイオレイヤー干渉法（例えば、ＦＯＲＴＥＢＩＯ（登録商標））を使用して決定され得る。
標的分子へのＡＢＰの結合に関して、特定の抗原（例えば、ポリペプチド標的）または特定の抗原上のエピトープに、用語「結合する」、「特異的結合」、「に特異的に結合する」、「に対して特異的」、「選択的に結合する」および「に対して選択的」とは、非特異的または非選択的な相互作用（例えば、非標的分子との）とは、測定可能に異なる結合を意味する。特異的結合は、例えば、標的分子への結合を測定し、これと非標的分子への結合とを比較することによって測定され得る。特異的結合はまた、その標的分子上で認識されるエピトープを模倣するコントロール分子との競合によって決定され得る。その場合、特異的結合は、その標的分子へのＡＢＰの結合がそのコントロール分子によって競合的に阻害される場合に示される。いくつかの局面において、非標的分子に対するＧＩＴＲ ＡＢＰの親和性は、ＧＩＴＲに対する親和性の約５０％未満である。いくつかの局面において、非標的分子に対するＧＩＴＲ ＡＢＰの親和性は、ＧＩＴＲに対する親和性の約４０％未満である。いくつかの局面において、非標的分子に対するＧＩＴＲ ＡＢＰの親和性は、ＧＩＴＲに対する親和性の約３０％未満である。いくつかの局面において、非標的分子に対するＧＩＴＲ ＡＢＰの親和性は、ＧＩＴＲに対する親和性の約２０％未満である。いくつかの局面において、非標的分子に対するＧＩＴＲ ＡＢＰの親和性は、ＧＩＴＲに対する親和性の約１０％未満である。いくつかの局面において、非標的分子に対するＧＩＴＲ ＡＢＰの親和性は、ＧＩＴＲに対する親和性の約１％未満である。いくつかの局面において、非標的分子に対するＧＩＴＲ ＡＢＰの親和性は、ＧＩＴＲに対する親和性の約０．１％未満である。
用語「ｋｄ」（ｓｅｃ−１）とは、本明細書で使用される場合、特定のＡＢＰ−抗原相互作用の解離速度定数をいう。その値はまた、ｋｏｆｆ値ともいわれる。
用語「ｋａ」（Ｍ−１×ｓｅｃ−１）とは、本明細書で使用される場合、特定のＡＢＰ−抗原相互作用の会合速度定数をいう。この値は、ｋｏｎ値ともいわれる。
用語「ＫＤ」（Ｍ）とは、本明細書で使用される場合、特定のＡＢＰ−抗原相互作用の解離平衡定数をいう。ＫＤ＝ｋｄ／ｋａ。
用語「ＫＡ」（Ｍ−１）とは、本明細書で使用される場合、特定のＡＢＰ−抗原相互作用の会合平衡定数をいう。ＫＡ＝ｋａ／ｋｄ。
「親和性成熟した（ａｆｆｉｎｉｔｙ ｍａｔｕｒｅｄ）」ＡＢＰは、その抗原に対する該ＡＢＰの親和性における改善を生じる１またはこれより多くの変更（alteration）（例えば、１またはこれより多くのＣＤＲまたはＦＲにおける）を有しない親ＡＢＰと比較して、その変更を有するものである。１つの実施形態において、親和性成熟されたＡＢＰは、その標的抗原に対してナノモル濃度またはピコモル濃度の親和性を有する。親和性成熟されたＡＢＰは、当該分野で公知の種々の方法を使用して生成され得る。例えば、Ｍａｒｋｓら（Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， １９９２， １０：７７９−７８３（その全体において参考として援用される））は、ＶＨおよびＶＬドメインシャフリングによる親和性成熟を記載する。ＣＤＲおよび／またはフレームワーク残基のランダム変異誘発は、例えば、Ｂａｒｂａｓら（Ｐｒｏｃ． Ｎａｔ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． Ｕ．Ｓ．Ａ．， １９９４， ９１：３８０９−３８１３）； Ｓｃｈｉｅｒら， Ｇｅｎｅ， １９９５， １６９：１４７−１５５； Ｙｅｌｔｏｎら， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， １９９５， １５５：１９９４−２００４； Ｊａｃｋｓｏｎら， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， １９９５， １５４：３３１０−３３１９９；およびＨａｗｋｉｎｓら， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．， １９９２， ２２６：８８９−８９６（これらの各々はその全体において参考として援用される）によって記載される。
「免疫結合体（ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ）」とは、１またはこれより多くの異種分子に結合体化されたＡＢＰである。
「エフェクター機能」とは、抗体のＦｃ領域によって媒介されるそれら生物学的活性であって、その活性が、抗体アイソタイプに依存して変動し得るものをいう。抗体エフェクター機能の例としては、補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）を活性化するＣ１ｑ結合、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を活性化するＦｃレセプター結合、および抗体依存性細胞性ファゴサイトーシス（ＡＤＣＰ）が挙げられる。
２またはこれより多くのＡＢＰの状況において本明細書で使用される場合、用語「と競合する」または「と交差競合する（ｃｒｏｓｓ−ｃｏｍｐｅｔｅ ｗｉｔｈ）」とは、その２またはこれより多くのＡＢＰが、抗原（例えば、ＧＩＴＲ）への結合に関して競合することを示す。１つの例示的アッセイでは、ＧＩＴＲは、表面に被覆され、第１のＧＩＴＲ ＡＢＰと接触され、その後に、第２のＧＩＴＲ ＡＢＰが添加される。別の例示的アッセイでは、第１のＧＩＴＲ ＡＢＰは、表面に被覆され、ＧＩＴＲと接触され、次いで、第２のＧＩＴＲ ＡＢＰが添加される。その第１のＧＩＴＲ ＡＢＰの存在が、いずれのアッセイにおいてもその第２のＧＩＴＲ ＡＢＰの結合を低減する場合、そのときは、それらＡＢＰは競合する。用語「と競合する」はまた、一方のＡＢＰがもう一方のＡＢＰの結合を低減するが、これらＡＢＰが逆の順序で添加される場合には競合が観察されないＡＢＰの組み合わせを含む。しかし、いくつかの実施形態において、その第１のおよび第２のＡＢＰは、これらの添加される順序に関係なく、互いの結合を阻害する。いくつかの実施形態において、一方のＡＢＰは、その抗原へのもう一方のＡＢＰの結合を、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％低減する。
用語「エピトープ」とは、ＡＢＰに特異的に結合する抗原の一部を意味する。エピトープは、頻繁には、表面にアクセス可能なアミノ酸残基および／または糖側鎖からなり、特定の三次元構造的特性ならびに特定の電荷特性を有し得る。立体配座エピトープおよび非立体配座エピトープは、前者（後者ではない）への結合が、変性溶媒の存在下で失われ得るという点で区別される。エピトープは、結合に直接関与するアミノ酸残基、およびその結合には直接関与しない他のアミノ酸残基を含み得る。ＡＢＰが結合するエピトープは、エピトープ決定のための公知の技術（例えば、異なる点変異を有するＧＩＴＲバリアントへの、またはキメラＧＩＴＲバリアントへのＡＢＰ結合を試験することなど）を使用して決定され得る。
ポリペプチド配列と参照配列との間のパーセント「同一性」は、それら配列を整列させ、必要であればギャップを導入して、最大のパーセント配列同一性を達成した後に、その参照配列中のアミノ酸残基と同一であるそのポリペプチド配列中のアミノ酸残基のパーセンテージとして定義される。パーセントアミノ酸配列同一性を決定する目的でのアラインメントは、当該分野の技術範囲内である種々の方法において（例えば、公に入手可能なコンピューターソフトウェア（例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、ＭＥＧＡＬＩＧＮ（ＤＮＡＳＴＡＲ）、ＣＬＵＳＴＡＬＷ、ＣＬＵＳＴＡＬ ＯＭＥＧＡ、またはＭＵＳＣＬＥソフトウェア）を使用して）達成され得る。当業者は、比較されている配列の全長に対して最大のアラインメントを達成するために必要とされる任意のアルゴリズムを含む、配列をアラインするために適したパラメーターを決定し得る。
「保存的置換」または「保存的アミノ酸置換」とは、あるアミノ酸を化学的にまたは機能的に類似のアミノ酸で置換することをいう。類似のアミノ酸を提供する保存的置換表は、当該分野で周知である。例示によれば、表２〜４に提供されるアミノ酸の群は、いくつかの実施形態において、互いに対して保存的置換と見做される。
さらなる保存的置換は、例えば、Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ， Ｐｒｏｔｅｉｎｓ： Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ 第２版．（１９９３） Ｗ． Ｈ． Ｆｒｅｅｍａｎ ＆ Ｃｏ．， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， ＮＹにおいて見出され得る。親ＡＢＰにおいてアミノ酸残基の１またはこれより多くの保存的置換を作製することによって生成されるＡＢＰは、「保存的に改変されたバリアント」といわれる。
用語「アミノ酸」とは、２０個の一般的な天然に存在するアミノ酸をいう。天然に存在するアミノ酸としては、アラニン（Ａｌａ；Ａ）、アルギニン（Ａｒｇ；Ｒ）、アスパラギン（Ａｓｎ；Ｎ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ；Ｄ）、システイン（Ｃｙｓ；Ｃ）；グルタミン酸（Ｇｌｕ；Ｅ）、グルタミン（Ｇｌｎ；Ｑ）、グリシン（Ｇｌｙ；Ｇ）；ヒスチジン（Ｈｉｓ；Ｈ）、イソロイシン（Ｉｌｅ；Ｉ）、ロイシン（Ｌｅｕ；Ｌ）、リジン（Ｌｙｓ；Ｋ）、メチオニン（Ｍｅｔ；Ｍ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ；Ｆ）、プロリン（Ｐｒｏ；Ｐ）、セリン（Ｓｅｒ；Ｓ）、スレオニン（Ｔｈｒ；Ｔ）、トリプトファン（Ｔｒｐ；Ｗ）、チロシン（Ｔｙｒ；Ｙ）、およびバリン（Ｖａｌ；Ｖ）が挙げられる。
用語「ベクター」とは、本明細書で使用される場合、ある核酸分子が連結される別の核酸分子を増殖し（propagating）得るその核酸分子をいう。その用語は、自己複製核酸構造としてのベクターならびにベクターが中に導入される宿主細胞のゲノムへと組み込まれるベクターを含む。ある種のベクターは、そのベクターが作動可能に連結される核酸の発現を指向し得る。このようなベクターは、本明細書で「発現ベクター」といわれる。
用語「宿主細胞」、「宿主細胞株（ｈｏｓｔ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ）」、および「宿主細胞培養物」とは、交換可能に使用され、外因性核酸が中に導入されている細胞（そのような細胞の子孫を含む）をいう。宿主細胞は、「形質転換体」（または「形質転換された細胞」）および「トランスフェクタント」（または「トランスフェクトされた細胞」）を含み、これらは各々、初代の形質転換されたまたはトランスフェクトされた細胞およびこれらに由来する子孫を含む。このような子孫は、核酸含有物が親細胞と完全に同一でなくてもよく、変異を含んでいてもよい。
用語「処置する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」（およびそのバリエーション（例えば、「処置する（ｔｒｅａｔ）」または「処置）は、疾患または状態の自然経過を変更する必要性のある被験体において疾患または状態の自然経過を変更しようとする試みにおける臨床介入をいう。処置は、予防のために、および臨床病変の過程の間の両方で行われ得る。処置の望ましい効果としては、疾患の発生または再発の防止、症状の緩和、その疾患の任意の直接的または間接的な病的結果の減少、転移の防止、疾患進行速度の減少、その疾患状態の改善または軽減、および寛解または改善された予後が挙げられる。
本明細書で使用される場合、用語「治療上有効な量」または「有効量」とは、被験体に投与された場合に、疾患または障害を処置するために有効である本明細書で提供されるＡＢＰまたは薬学的組成物の量をいう。
本明細書で使用される場合、用語「被験体」とは、哺乳動物被験体を意味する。例示的な被験体としては、ヒト、サル、イヌ、ネコ、マウス、ラット、ウシ、ウマ、ラクダ、ヤギ、ウサギ、およびヒツジが挙げられる。ある種の実施形態において、その被験体はヒトである。いくつかの実施形態において、その被験体は、本明細書で提供されるＡＢＰで処置され得る疾患または状態を有する。いくつかの局面において、その疾患または状態はがんである。
用語「添付文書（package insert）」とは、治療用または診断用の製品（例えば、キット）の使用に関する適応症、使用法、投与量、投与、併用療法、禁忌および／または警告に関する情報を含む、このような治療用または診断用の製品の市販のパッケージに慣習的に含まれる指示に言及するために使用される。
用語「細胞傷害性薬剤（ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ ａｇｅｎｔ）」とは、本明細書で使用される場合、細胞機能を阻害もしくは防止するおよび／または細胞死もしくは破壊を引き起こす物質をいう。
「化学療法剤」とは、がんの処置において有用な化合物をいう。化学療法剤としては、がんの成長を促進し得るホルモンの効果を調節、低減、遮断、または阻害するように作用する「抗ホルモン剤」または「内分泌治療剤」が挙げられる。
用語「細胞増殖抑制剤」とは、インビトロまたはインビボのいずれかで細胞の成長を停止させる化合物または組成物をいう。いくつかの実施形態において、細胞増殖抑制剤は、Ｓ期にある細胞のパーセンテージを低減する薬剤である。いくつかの実施形態において、細胞増殖抑制剤は、Ｓ期にある細胞のパーセンテージを、少なくとも約２０％、少なくとも約４０％、少なくとも約６０％、または少なくとも約８０％低減する。
用語「腫瘍」とは、悪性であろうが、良性であろうが、全ての新生物細胞の成長および増殖、ならびに全ての前がん性およびがん性の細胞および組織に言及する。用語「がん」、「がん性、「細胞増殖性障害」、「増殖性障害」および「腫瘍」は、本明細書で言及されるように相互に排他的ではない。用語「細胞増殖性障害」および「増殖性障害」は、ある程度の異常な細胞増殖と関連する障害をいう。いくつかの実施形態において、その細胞増殖性障害はがんである。
用語「薬学的組成物」とは、その中に含まれる活性成分の生物学的活性が被験体を処置するにあたって有効であることを可能にするような形態にあり、かつその被験体に許容不能に毒性であるさらなる構成要素を含まない調製物に言及する。
用語「調整する（ｍｏｄｕｌａｔｅ）」および「調整（ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ）」とは、記載される変数を低減もしくは阻害する、または代わりに活性化もしくは増加させることに言及する。
用語「増加させる」および「活性化する」とは、記載される変数（例えば、ＧＩＴＲシグナル伝達活性）において１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍、またはこれより多くの増加に言及する。
用語「低減する」および「阻害する」とは、記載される変数（例えば、（ａ）調節性Ｔ細胞の数および／あるいは（ｂ）疾患または状態の症状（例えば、転移の存在もしくはサイズ、または原発性腫瘍のサイズ）において１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍、またはこれより多くの減少に言及する。
用語「アゴナイズする（ａｇｏｎｉｚｅ）」とは、レセプターの活性化と関連する生物学的応答を誘導する、レセプターシグナル伝達の活性化をいう。「アゴニスト」とは、レセプターに結合しかつアゴナイズする実体（例えば、本明細書で提供されるＡＢＰ）である。
用語「アンタゴナイズする（ａｎｔａｇｏｎｉｚｅ）」とは、レセプターの活性化と関連する生物学的応答を阻害する、レセプターシグナル伝達の阻害をいう。「アンタゴニスト」とは、レセプターに結合しかつアンタゴナイズする実体（例えば、ＡＢＰ）である。
用語「マルチマー化する」とは、実体をアセンブリして、非共有結合的または共有結合的相互作用によって一緒に保持される超実体構造（ｓｕｐｒａ−ｅｎｔｉｔｙ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ）を形成することによって、その実体の「マルチマー」を形成するという作用に言及する。マルチマーは、同じ実体の複数のユニットから形成されるアセンブリである「ホモマルチマー」、または第１の実体の少なくとも１つのユニットおよび第２の実体の少なくとも１つのユニットを含むアセンブリである「ヘテロマルチマー」を含む。ＧＩＴＲに言及するために本明細書で使用される場合、用語マルチマー化するは、例えば、本明細書で提供されるＡＢＰの結合によってまたはＧＩＴＲＬによって誘導される細胞の表面上に発現される複数のＧＩＴＲ分子のアセンブリに言及する。このようなマルチマー化は、ＧＩＴＲシグナル伝達の活性化と関連する。Ｎｏｃｅｎｔｉｎｉら， Ｂｒ． Ｊ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．， ２０１２， １６５：２０８９−２０９９（その全体において参考として援用される）を参照のこと。
用語「エフェクターＴ細胞」とは、Ｔヘルパー（すなわち、ＣＤ４＋）細胞および細胞傷害性（すなわち、ＣＤ８＋）Ｔ細胞を含む。ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞は、いくつかの免疫プロセス（形質細胞およびメモリーＢ細胞へのＢ細胞の成熟、ならびに細胞傷害性Ｔ細胞およびマクロファージの活性化が挙げられる）の発達に寄与する。ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞は、ウイルス感染細胞および腫瘍細胞を破壊する。エフェクターＴ細胞に関するさらなる情報については、Ｓｅｄｅｒ ａｎｄ Ａｈｍｅｄ， Ｎａｔｕｒｅ Ｉｍｍｕｎｏｌ．， ２００３， ４：８３５−８４２（その全体において参考として援用される）を参照のこと。
用語「調節性Ｔ細胞」とは、例えば、エフェクターＴ細胞を抑制することによって、免疫寛容を調節する細胞を含む。いくつかの局面において、その調節性Ｔ細胞は、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋表現型を有する。いくつかの局面において、その調節性Ｔ細胞は、ＣＤ８＋ＣＤ２５＋表現型を有する。ＧＩＴＲを発現する調節性Ｔ細胞に関するさらなる情報については、Ｎｏｃｅｎｔｉｎｉら， Ｂｒ． Ｊ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．， ２０１２， １６５：２０８９−２０９９（その全体において参考として援用される）を参照のこと。
用語「樹状細胞」とは、ナイーブＴ細胞を活性化しかつＢ細胞の成長および分化を刺激し得る専門の抗原提示細胞をいう。
ＧＩＴＲ抗原結合タンパク質
１．１．ＧＩＴＲ結合および標的細胞
ＧＩＴＲに特異的に結合するＡＢＰが本明細書で提供される。いくつかの局面において、そのＧＩＴＲは、ｈＧＩＴＲ（配列番号１）である。いくつかの局面において、そのＧＩＴＲは、ｈＧＩＴＲ−Ｔ４３Ｒ（配列番号２）である。いくつかの局面において、そのＧＩＴＲは、ｃＧＩＴＲ（配列番号３）である。いくつかの実施形態において、そのＧＩＴＲは、ｍＧＩＴＲ（配列番号４）である。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、ｈＧＩＴＲ（配列番号１）、ｈＧＩＴＲ−Ｔ４３Ｒ（配列番号２）、ｃＧＩＴＲ（配列番号３）、およびｍＧＩＴＲ（配列番号４）に特異的に結合する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、ｈＧＩＴＲ（配列番号１）、ｈＧＩＴＲ−Ｔ４３Ｒ（配列番号２）、およびｃＧＩＴＲ（配列番号３）に特異的に結合する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、ｈＧＩＴＲ（配列番号１）およびｈＧＩＴＲ−Ｔ４３Ｒ（配列番号２）に特異的に結合する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、ｍＧＩＴＲ（配列番号４）に結合しない。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、ＧＩＴＲの細胞外ドメインに特異的に結合する。
そのＧＩＴＲは、任意の適切な標的細胞の表面上で発現され得る。いくつかの実施形態において、その標的細胞はエフェクターＴ細胞である。いくつかの実施形態において、その標的細胞は調節性Ｔ細胞である。いくつかの実施形態において、その標的細胞はナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である。いくつかの実施形態において、その標的細胞はナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞である。いくつかの実施形態において、その標的細胞は樹状細胞である。いくつかの局面において、その樹状細胞はプラズマ細胞様樹状細胞である。いくつかの実施形態において、その標的細胞はＢ細胞である。いくつかの局面において、そのＢ細胞はプラズマ細胞である。Ｎｏｃｅｎｔｉｎｉら， Ｂｒ． Ｊ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．， ２０１２， １６５：２０８９−２０９９（その全体において参考として援用される）を参照のこと。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、ＧＩＴＲモノマーに特異的に結合する。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、ＧＩＴＲマルチマーに特異的に結合する。いくつかの局面において、そのマルチマーは、２個のＧＩＴＲ分子を含む。いくつかの局面において、そのマルチマーは、３個のＧＩＴＲ分子を含む。いくつかの局面において、そのマルチマーは、４個のＧＩＴＲ分子を含む。いくつかの局面において、そのマルチマーは、５個のＧＩＴＲ分子を含む。いくつかの局面において、そのマルチマーは、６個のＧＩＴＲ分子を含む。いくつかの局面において、そのマルチマーは、６個より多くのＧＩＴＲ分子を含む。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、免疫グロブリン分子を含むか、免疫グロブリン分子からなるか、または免疫グロブリン分子から本質的になる。いくつかの局面において、その免疫グロブリン分子は、抗体を含むか、抗体からなるか、または抗体から本質的になる。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、軽鎖を含む。いくつかの局面において、その軽鎖はカッパ軽鎖である。いくつかの局面において、その軽鎖はラムダ軽鎖である。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、重鎖を含む。いくつかの局面において、その重鎖はＩｇＡである。いくつかの局面において、その重鎖はＩｇＤである。いくつかの局面において、その重鎖はＩｇＥである。いくつかの局面において、その重鎖はＩｇＧである。いくつかの局面において、その重鎖はＩｇＭである。いくつかの局面において、その重鎖はＩｇＧ１である。いくつかの局面において、その重鎖はＩｇＧ２である。いくつかの局面において、その重鎖はＩｇＧ３である。いくつかの局面において、その重鎖はＩｇＧ４である。いくつかの局面において、その重鎖はＩｇＡ１である。いくつかの局面において、その重鎖はＩｇＡ２である。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、抗体フラグメントを含むか、抗体フラグメントからなるか、または抗体フラグメントから本質的になる。いくつかの局面において、その抗体フラグメントは、Ｆｖフラグメントである。いくつかの局面において、その抗体フラグメントは、Ｆａｂフラグメントである。いくつかの局面において、その抗体フラグメントはＦ（ａｂ’）２フラグメントである。いくつかの局面において、その抗体フラグメントはＦａｂ’フラグメントである。いくつかの局面において、その抗体フラグメントはｓｃＦｖ（ｓＦｖ）フラグメントである。いくつかの局面において、その抗体フラグメントはｓｃＦｖ−Ｆｃフラグメントである。いくつかの局面において、その抗体フラグメントは単一ドメイン抗体のフラグメントである。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、ポリクローナル抗体である。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、キメラ抗体を含むか、キメラ抗体からなるか、またはキメラ抗体から本質的になる。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、ヒト化抗体を含むか、ヒト化抗体からなるか、またはヒト化抗体から本質的になる。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、ヒト抗体を含むか、ヒト抗体からなるか、またはヒト抗体から本質的になる。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、親和性成熟したＡＢＰを含むか、親和性成熟したＡＢＰからなるか、または親和性成熟したＡＢＰから本質的になる。いくつかの局面において、そのＡＢＰは、本明細書で提供されるＡＢＰに由来する親和性成熟したＡＢＰである。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、代替の足場を含むか、代替の足場からなるか、または代替の足場から本質的になる。任意の適切な代替の足場が使用され得る。いくつかの局面において、本明細書で提供されるＡＢＰは、ＡｄｎｅｃｔｉｎＴＭ、ｉＭａｂ、Ａｎｔｉｃａｌｉｎ（登録商標）、ＥＥＴＩ−ＩＩ／ＡＧＲＰ、Ｋｕｎｉｔｚドメイン、チオレドキシンペプチドアプタマー、Ａｆｆｉｂｏｄｙ（登録商標）、ＤＡＲＰｉｎ、Ａｆｆｉｌｉｎ、Ｔｅｔｒａｎｅｃｔｉｎ、Ｆｙｎｏｍｅｒ、およびＡｖｉｍｅｒから選択される代替の足場を含むか、これらからなるか、またはこれらから本質的になる。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、ＧＩＴＲＬへのＧＩＴＲの結合を阻害する。いくつかの局面において、そのＡＢＰは、ＧＩＴＲＬへのＧＩＴＲの結合を少なくとも約５０％阻害する。いくつかの局面において、そのＡＢＰは、ＧＩＴＲＬへのＧＩＴＲの結合を少なくとも約７５％阻害する。いくつかの局面において、そのＡＢＰは、ＧＩＴＲＬへのＧＩＴＲの結合を少なくとも約９０％阻害する。いくつかの局面において、そのＡＢＰは、ＧＩＴＲＬへのＧＩＴＲの結合を少なくとも約９５％阻害する。
１．２．一重特異的および多重特異的ＧＩＴＲ抗原結合タンパク質
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、一重特異的ＡＢＰである。いくつかの局面において、その一重特異的ＡＢＰは、２またはこれより多くの異なるＧＩＴＲ分子上の同じエピトープに結合する、いくつかの局面において、その一重特異的ＡＢＰは、２個のＧＩＴＲ分子上の同じエピトープに結合する。いくつかの局面において、その一重特異的ＡＢＰは、３個のＧＩＴＲ分子上の同じエピトープに結合する。いくつかの局面において、その一重特異的ＡＢＰは、４個のＧＩＴＲ分子上の同じエピトープに結合する。いくつかの局面において、その一重特異的ＡＢＰは、５個のＧＩＴＲ分子上の同じエピトープに結合する。いくつかの局面において、その一重特異的ＡＢＰは、６個のＧＩＴＲ分子上の同じエピトープに結合する。いくつかの局面において、その一重特異的ＡＢＰは、６個より多くのＧＩＴＲ分子上の同じエピトープに結合する。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供される一重特異的ＡＢＰは、多価である。本明細書で使用される場合、用語「多価（ｍｕｌｔｉｖａｌｅｎｔ）」とは、例えば、２つより多くの結合領域（すなわち、ＶＨおよびＶＬ領域を含む）を有する抗体に言及する。いくつかの局面において、その一重特異的ＡＢＰは、二価である。いくつかの局面において、その一重特異的ＡＢＰは、三価である。いくつかの局面において、その一重特異的ＡＢＰは、四価である。いくつかの局面において、その一重特異的ＡＢＰは、五価である。いくつかの局面において、その一重特異的ＡＢＰは、六価である。いくつかの局面において、その一重特異的ＡＢＰは、七価である。いくつかの局面において、その一重特異的ＡＢＰは、八価である。
いくつかの実施形態において、本明細書で開示される一重特異的多価ＡＢＰは、四価である。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、多重特異的ＡＢＰである。いくつかの局面において、その多重特異的ＡＢＰは、２またはこれより多くの異なるＧＩＴＲ分子上の２またはこれより多くのエピトープに結合する。いくつかの局面において、その多重特異的ＡＢＰは、２個のＧＩＴＲ分子上の２またはこれより多くのエピトープに結合する。いくつかの局面において、その多重特異的ＡＢＰは、３個のＧＩＴＲ分子上の２またはこれより多くのエピトープに結合する。いくつかの局面において、その多重特異的ＡＢＰは、４個のＧＩＴＲ分子上の２またはこれより多くのエピトープに結合する。いくつかの局面において、その多重特異的ＡＢＰは、５個のＧＩＴＲ分子上の２またはこれより多くのエピトープに結合する。いくつかの局面において、その多重特異的ＡＢＰは、６個のＧＩＴＲ分子上の２またはこれより多くのエピトープに結合する。いくつかの局面において、その多重特異的ＡＢＰは、７個のＧＩＴＲ分子上の２またはこれより多くのエピトープに結合する。いくつかの局面において、その多重特異的ＡＢＰは、８個のＧＩＴＲ分子上の２またはこれより多くのエピトープに結合する。いくつかの局面において、その多重特異的ＡＢＰは、９個のＧＩＴＲ分子上の２またはこれより多くのエピトープに結合する。いくつかの局面において、その多重特異的ＡＢＰは、１０個のＧＩＴＲ分子上の２またはこれより多くのエピトープに結合する。いくつかの局面において、その多重特異的ＡＢＰは、１１個のＧＩＴＲ分子上の２またはこれより多くのエピトープに結合する。いくつかの局面において、その多重特異的ＡＢＰは、１２個のＧＩＴＲ分子上の２またはこれより多くのエピトープに結合する。いくつかの局面において、その多重特異的ＡＢＰは、１２個より多くのＧＩＴＲ分子上の２またはこれより多くのエピトープに結合する。
本明細書で提供される多重特異的ＡＢＰは、ＧＩＴＲ上の任意の適切な数のエピトープに結合し得る。いくつかの局面において、その多重特異的ＡＢＰは、ＧＩＴＲ上の２個のエピトープに結合する。いくつかの局面において、その多重特異的ＡＢＰは、ＧＩＴＲ上の３個のエピトープに結合する。いくつかの局面において、その多重特異的ＡＢＰは、ＧＩＴＲ上の４個のエピトープに結合する。いくつかの局面において、その多重特異的ＡＢＰは、ＧＩＴＲ上の５個のエピトープに結合する。いくつかの局面において、その多重特異的ＡＢＰは、ＧＩＴＲ上の６個のエピトープに結合する。いくつかの局面において、その多重特異的ＡＢＰは、ＧＩＴＲ上の７個のエピトープに結合する。いくつかの局面において、その多重特異的ＡＢＰは、ＧＩＴＲ上の８個のエピトープに結合する。いくつかの局面において、その多重特異的ＡＢＰは、ＧＩＴＲ上の９個のエピトープに結合する。いくつかの局面において、その多重特異的ＡＢＰは、ＧＩＴＲ上の１０個のエピトープに結合する。いくつかの局面において、その多重特異的ＡＢＰは、ＧＩＴＲ上の１１個のエピトープに結合する。いくつかの局面において、その多重特異的ＡＢＰは、ＧＩＴＲ上の１２個のエピトープに結合する。いくつかの局面において、その多重特異的ＡＢＰは、ＧＩＴＲ上の１２個より多くのエピトープに結合する。
いくつかの局面において、本明細書で提供される多重特異的ＡＢＰは、少なくとも２つの異なるＧＩＴＲ分子上の少なくとも２つの異なるエピトープに結合する。いくつかの局面において、本明細書で提供される多重特異的ＡＢＰは、少なくとも３つの異なるＧＩＴＲ分子上の少なくとも３つの異なるエピトープに結合する。いくつかの局面において、本明細書で提供される多重特異的ＡＢＰは、少なくとも４つの異なるＧＩＴＲ分子上の少なくとも４つの異なるエピトープに結合する。いくつかの局面において、本明細書で提供される多重特異的ＡＢＰは、少なくとも５つの異なるＧＩＴＲ分子上の少なくとも５つの異なるエピトープに結合する。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供される多重特異的ＡＢＰは、ＧＩＴＲ上の第１のエピトープに特異的に結合する第１の抗原結合ドメインおよびＧＩＴＲ上の第２のエピトープに特異的に結合する第２の抗原結合ドメインを含み、ここで該第１のエピトープおよび該第２のエピトープは、異なる。いくつかの局面において、その多重特異的ＡＢＰは、ＧＩＴＲ上の１またはこれより多くのさらなるエピトープに特異的に結合する１またはこれより多くのさらなる抗原結合ドメインをさらに含み、ここでそのさらなるエピトープの各々は、その第１の抗原結合ドメイン、その第２の抗原結合ドメイン、またはそのＡＢＰの任意の他のさらなる抗原結合ドメインによって結合されるエピトープとは異なる。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供される多重特異的ＡＢＰは、ＧＩＴＲ分子上のエピトープおよびＧＩＴＲではない別の分子上のエピトープに結合する。任意の適切な非ＧＩＴＲ分子は、本明細書で提供されるＡＢＰによって結合され得る。いくつかの局面において、その非ＧＩＴＲ分子は、腫瘍壊死因子レセプタースーパーファミリー（ＴＮＦＲＳＦ）の別のメンバーである。いくつかの局面において、ＴＮＦＲＳＦの他のメンバーは、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＥＤＡ２Ｒ、ＥＤＡＲ、ＦＡＳ、ＬＴＢＲ、ＮＧＦＲ、ＲＥＬＴ、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ６Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ８、ＴＮＦＲＳＦ９、ＴＮＦＲＳＦ１０Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｄ、ＴＦＮＲＳＦ１１Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１１Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ１２Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ、ＴＮＦＲＳＦ１４、ＴＮＦＲＳＦ１７、ＴＮＦＲＳＦ１８、ＴＮＦＲＳＦ１９、ＴＮＦＲＳＦ２１、およびＴＮＦＲＳＦ２５から選択される。
多くの多重特異的ＡＢＰ構築物は、当該分野で公知であり、本明細書で提供されるＡＢＰは、任意の適切な多重特異的構築物（any suitable multispecific suitable construct）の形態で提供され得る。
いくつかの実施形態において、その多重特異的ＡＢＰは、少なくとも２つの異なる重鎖可変領域（各々は、共通軽鎖可変領域と対形成される）を含む免疫グロブリン（すなわち、「共通軽鎖抗体（ｃｏｍｍｏｎ ｌｉｇｈｔ ｃｈａｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ）」）を含む。その共通軽鎖可変領域は、その２個の異なる重鎖可変領域の各々とともに別個の抗原結合ドメインを形成する。Ｍｅｒｃｈａｎｔら， Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．， １９９８， １６：６７７−６８１（その全体において参考として援用される）を参照のこと。
いくつかの実施形態において、本明細書で開示される多価ＡＢＰは、免疫グロブリンの重鎖または軽鎖のＮ末端またはＣ末端のうちの１またはこれより多くに結合する抗体またはそのフラグメントを含むこのような免疫グロブリンを含む。例えば、米国特許第８，７２２，８５９号およびＣｏｌｏｍａ ａｎｄ Ｍｏｒｒｉｓｏｎ， Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．， １９９７， １５：１５９−１６３（各々、その全体において参考として援用される）を参照のこと。いくつかの局面において、このようなＡＢＰは、四価二重特異的抗体を含む。いくつかの局面において、このようなＡＢＰは、四価一重特異的（ＴＭ）抗体をふくむ。
いくつかの実施形態において、その多価ＡＢＰは、少なくとも２つの異なる重鎖可変領域および少なくとも２つの異なる軽鎖可変領域を含むハイブリッド免疫グロブリンを含む。Ｍｉｌｓｔｅｉｎ ａｎｄ Ｃｕｅｌｌｏ， Ｎａｔｕｒｅ， １９８３， ３０５：５３７−５４０；およびＳｔａｅｒｚ ａｎｄ Ｂｅｖａｎ， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， １９８６， ８３：１４５３−１４５７（これらの各々はその全体において参考として援用される）を参照のこと。
いくつかの実施形態において、その多価ＡＢＰは、多重特異性を有しない副生成物の形成を低減するための変更を有する免疫グロブリン鎖を含む。いくつかの局面において、そのＡＢＰは、米国特許第５，７３１，１６８号（その全体において参考として援用される）に記載されるとおりの１またはこれより多くの「ｋｎｏｂｓ−ｉｎｔｏ−ｈｏｌｅｓ」改変を含む。
いくつかの実施形態において、その多価ＡＢＰは、Ｆｃヘテロマルチマーのアセンブリを促進するための１またはこれより多くの静電的改変を有する免疫グロブリン鎖を含む。ＷＯ ２００９／０８９００４（その全体において参考として援用される）を参照のこと。
いくつかの実施形態において、その多価ＡＢＰは、二重特異的１本鎖分子を含む。Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら， ＥＭＢＯ Ｊ．， １９９１， １０：３６５５−３６５９；およびＧｒｕｂｅｒら， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， １９９４， １５２：５３６８−５３７４（これらの各々はその全体において参考として援用される）を参照のこと。
いくつかの実施形態において、その多価ＡＢＰは、ポリペプチドリンカーによって接続された、重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメイン、または単一ドメイン抗体ＶＨＨドメインを含み、ここでそのリンカーの長さは、所望の多重特異性を有する多価ＡＢＰのアセンブリを促進するために選択される。例えば、一重特異的ｓｃＦｖは、一般には、重鎖Ｖ残基が、同じポリペプチド鎖上の重鎖および軽鎖可変ドメインの対形成を防止し、それによって、一方の鎖に由来する重鎖および軽鎖可変ドメインと別の鎖上の相補的ドメインとの対形成を可能にする場合に形成する。従って、その得られたＡＢＰは、多重特異性を有し、各結合部位の特異性は、１より多くのポリペプチド鎖によって与えられる。３〜１２個の間のアミノ酸残基のリンカーによって接続される重鎖および軽鎖可変ドメインを含むポリペプチド鎖は、主にダイマー（ダイアボディといわれる）を形成する。０〜２個の間のアミノ酸残基のリンカーを用いると、トリマー（トリアボディといわれる）およびテトラマー（テトラボディといわれる）に有利である。しかし、オリゴマー化の正確なタイプは、そのリンカーの長さに加えて、各ポリペプチド鎖中の可変ドメインのアミノ酸残基組成およびその順序（例えば、ＶＨ−リンカー−ＶＬ 対 ＶＬ−リンカー−ＶＨ）に依存するようである。当業者は、所望の多重特異性に基づいて適切なリンカーの長さを選択し得る。
いくつかの実施形態において、その一重特異的または多重特異的ＡＢＰは、ダイアボディを含む。Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒら， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， １９９３， ９０：６４４４−６４４８（その全体において参考として援用される）を参照のこと。いくつかの実施形態において、その一重特異的または多重特異的ＡＢＰは、トリアボディを含む。Ｔｏｄｏｒｏｖｓｋａら， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｍｅｔｈｏｄｓ， ２００１， ２４８：４７−６６（その全体において参考として援用される）を参照のこと。いくつかの実施形態において、その一重特異的または多重特異的ＡＢＰは、テトラボディを含む。同書（その全体において参考として援用される）を参照のこと。
いくつかの実施形態において、その多重特異的ＡＢＰは、三重特異的Ｆ（ａｂ’）３誘導体を含む。Ｔｕｔｔら Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， １９９１， １４７：６０−６９（その全体において参考として援用される）を参照のこと。
いくつかの実施形態において、その一重特異的または多重特異的ＡＢＰは、架橋された抗体を含む。米国特許第４，６７６，９８０号； Ｂｒｅｎｎａｎら， Ｓｃｉｅｎｃｅ， １９８５， ２２９：８１−８３； Ｓｔａｅｒｚ，ら Ｎａｔｕｒｅ， １９８５， ３１４：６２８−６３１；およびＥＰ ０４５３０８２（これらの各々はその全体において参考として援用される）を参照のこと。
いくつかの実施形態において、その一重特異的または多重特異的ＡＢＰは、ロイシンジッパーによってアセンブリされた抗原結合ドメインを含む。Ｋｏｓｔｅｌｎｙら， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， １９９２， １４８：１５４７−１５５３（その全体において参考として援用される）を参照のこと。
いくつかの実施形態において、その一重特異的または多重特異的ＡＢＰは、相補的タンパク質ドメインを含む。いくつかの局面において、その相補的タンパク質ドメインは、繋留ドメイン（ＡＤ）およびダイマー化およびドッキングドメイン（ＤＤＤ）を含む。いくつかの実施形態において、そのＡＤおよびＤＤＤは、互いに結合し、それによって、「ドックアンドロック（ｄｏｃｋ ａｎｄ ｌｏｃｋ）」（ＤＮＬ）アプローチを介して、多重特異的ＡＢＰ構造のアセンブリを可能にする。多くの多重特異性のＡＢＰがアセンブリされ得る（二重特異的ＡＢＰ、三重特異的ＡＢＰ、四重特異的ＡＢＰ、五重特異的ＡＢＰ、および六重特異的ＡＢＰが挙げられる）。相補的タンパク質ドメインを含む多重特異的ＡＢＰは、例えば、米国特許第７，５２１，０５６号；同第７，５５０，１４３号；同第７，５３４，８６６号；および同第７，５２７，７８７号（これらの各々はその全体において参考として援用される）に記載される。
いくつかの実施形態において、その一重特異的または多重特異的ＡＢＰは、抗体分子およびＧＩＴＲまたは別の標的に対して特異性を有する非抗体分子のハイブリッドを含む。このようなＡＢＰの例については、ＷＯ ９３／０８８２９（その全体において参考として援用される）を参照のこと。いくつかの局面において、その非抗体分子は、ＧＩＴＲＬである。
いくつかの実施形態において、その一重特異的または多重特異的ＡＢＰは、米国特許公開番号２００８／００６９８２０（その全体において参考として援用される）に記載されるとおりの二重作用（dual action）Ｆａｂ（ＤＡＦ）抗体を含む。
いくつかの実施形態において、その多重特異的ＡＢＰは、２種の親分子を還元し、続いて、その２種の親分子を混合および再酸化して、ハイブリッド構造をアセンブリすることによって形成される抗体を含む。Ｃａｒｌｒｉｎｇら， ＰＬｏＳ Ｏｎｅ， ２０１１， ６：ｅ２２５３３（その全体において参考として援用される）を参照のこと。
いくつかの実施形態において、その一重特異的または多重特異的ＡＢＰは、ＤＶＤ−ＩｇＴＭを含む。ＤＶＤ−ＩｇＴＭは、２またはこれより多くの抗原に結合し得る二重可変ドメイン免疫グロブリンである。ＤＶＤ−ＩｇＴＭは、米国特許第７，６１２，１８１（その全体において参考として援用される）に記載される。
いくつかの実施形態において、その一重特異的または多重特異的ＡＢＰは、ＤＡＲＴＴＭを含む。ＤＡＲＴＴＭは、Ｍｏｏｒｅら， Ｂｌｏｏｄ， ２０１１， １１７：４５４−４５１（その全体において参考として援用される）に記載される。
いくつかの実施形態において、その多重特異的ＡＢＰは、ＤｕｏＢｏｄｙ（登録商標）を含む。ＤｕｏＢｏｄｙ（登録商標）は、Ｌａｂｒｉｊｎら， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， ２０１３， １１０：５１４５−５１５０； Ｇｒａｍｅｒら， ｍＡｂｓ， ２０１３， ５：９６２−９７２；およびＬａｂｒｉｊｎら， Ｎａｔｕｒｅ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ， ２０１４， ９：２４５０−２４６３（これらの各々はその全体において参考として援用される）に記載される。
いくつかの実施形態において、本明細書で開示される一重特異的または多重特異的ＡＢＰは、別の抗体またはフラグメントに結合した抗体フラグメントを含む。その結合は、共有結合的または非共有結合的であり得る。その結合が共有結合的である場合、それは、融合タンパク質の形態にあり得るか、または化学的リンカーを介したものであり得る。他の抗体に結合した抗体フラグメントを含む多重特異的ＡＢＰの例証的な例としては、四価二重特異的抗体が挙げられ、この場合、ｓｃＦｖは、ＩｇＧに由来するＣＨ３のＣ末端に融合する。Ｃｏｌｏｍａ ａｎｄ Ｍｏｒｒｉｓｏｎ， Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．， １９９７， １５：１５９−１６３を参照のこと。他の例としては、Ｆａｂ分子が免疫グロブリンの定常領域に結合した抗体が挙げられる。Ｍｉｌｅｒら， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， ２００３， １７０：４８５４−４８６１（その全体において参考として援用される）を参照のこと。任意の適切なフラグメントが使用され得る（本明細書で記載されるかまたは当該分野で公知のフラグメントのうちのいずれかが挙げられる）。
いくつかの実施形態において、その一重特異的または多重特異的ＡＢＰは、ＣｏｖＸ−Ｂｏｄｙを含む。ＣｏｖＸ−Ｂｏｄｙは、例えば、Ｄｏｐｐａｌａｐｕｄｉら， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， ２０１０， １０７：２２６１１−２２６１６（その全体において参考として援用される）に記載される。
いくつかの実施形態において、その一重特異的または多重特異的ＡＢＰは、１またはこれより多くの抗原結合ドメインがＦｃ領域に導入されるＦｃａｂ抗体を含む。Ｆｃａｂ抗体は、Ｗｏｚｎｉａｋ−Ｋｎｏｐｐら， Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ． Ｄｅｓ． Ｓｅｌ．， ２０１０， ２３：２８９−２９７（その全体において参考として援用される）に記載される。
いくつかの実施形態において、その一重特異的または多重特異的ＡＢＰは、ＴａｎｄＡｂ（登録商標）抗体を含む。ＴａｎｄＡｂ（登録商標）抗体は、Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖら， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．， １９９９， ２９３：４１−５６およびＺｈｕｋｏｖｓｋｙら， Ｂｌｏｏｄ， ２０１３， １２２：５１１６（これらの各々がその全体において参考として援用される）に記載される。
いくつかの実施形態において、その多重特異的ＡＢＰは、タンデムＦａｂを含む。タンデムＦａｂは、ＷＯ ２０１５／１０３０７２（その全体において参考として援用される）に記載される。
いくつかの実施形態において、その多重特異的ＡＢＰは、ＺｙｂｏｄｙＴＭを含む。ＺｙｂｏｄｙＴＭは、ＬａＦｌｅｕｒら， ｍＡｂｓ， ２０１３， ５：２０８−２１８（その全体において参考として援用される）に記載される。
１．３．ＧＩＴＲをマルチマー化する抗原結合タンパク質
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、標的細胞の表面上で発現されるＧＩＴＲをマルチマー化する。本明細書で提供されるＡＢＰは、任意の適切な数のＧＩＴＲ分子をマルチマー化するために、それらの結合価および特異性に基づいてデザインされ得る。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、２個のＧＩＴＲ分子をマルチマー化する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、３個のＧＩＴＲ分子をマルチマー化する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、４個のＧＩＴＲ分子をマルチマー化する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、５個のＧＩＴＲ分子をマルチマー化する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、６個のＧＩＴＲ分子をマルチマー化する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、７個のＧＩＴＲ分子をマルチマー化する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、８個のＧＩＴＲ分子をマルチマー化する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、９個のＧＩＴＲ分子をマルチマー化する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、１０個のＧＩＴＲ分子をマルチマー化する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、１１個のＧＩＴＲ分子をマルチマー化する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、１２個のＧＩＴＲ分子をマルチマー化する。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、少なくとも２個のＧＩＴＲ分子をマルチマー化する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、少なくとも３個のＧＩＴＲ分子をマルチマー化する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、少なくとも４個のＧＩＴＲ分子をマルチマー化する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、少なくとも５個のＧＩＴＲ分子をマルチマー化する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、少なくとも６個のＧＩＴＲ分子をマルチマー化する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、少なくとも７個のＧＩＴＲ分子をマルチマー化する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、少なくとも８個のＧＩＴＲ分子をマルチマー化する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、少なくとも９個のＧＩＴＲ分子をマルチマー化する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、少なくとも１０個のＧＩＴＲ分子をマルチマー化する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、少なくとも１１個のＧＩＴＲ分子をマルチマー化する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、少なくとも１２個のＧＩＴＲ分子をマルチマー化する。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、２〜１２個のＧＩＴＲ分子をマルチマー化する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、３〜１０個のＧＩＴＲ分子をマルチマー化する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、３〜６個のＧＩＴＲ分子をマルチマー化する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、３〜５個のＧＩＴＲ分子をマルチマー化する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、３〜４個のＧＩＴＲ分子をマルチマー化する。
１．４．ＧＩＴＲアゴニズム
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、結合の際にＧＩＴＲをアゴナイズする。このようなアゴニズムは、本開示の他の箇所で記載されるように、そのＡＢＰによるＧＩＴＲのマルチマー化から生じ得る。図１を参照のこと。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰによるＧＩＴＲのアゴニズムは、標的細胞におけるＮＦ−κＢ活性の調整を生じる。米国特許第７，８１２，１３５号（その全体において本明細書に参考として援用される）を参照のこと。いくつかの局面において、ＧＩＴＲのアゴニズムは、標的細胞におけるＩκＢ活性または安定性の調整を生じる。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰによるＧＩＴＲのアゴニズムは、標的細胞においてＭＡＰＫ経路の活性化を生じる。いくつかの局面において、本明細書で提供されるＡＢＰによって活性化されるＭＡＰＫ経路の構成要素としては、ｐ３８、ＪＮＫ、およびＥＲＫのうちの１またはこれより多くが挙げられる。Ｎｏｃｅｎｔｉｎｉら， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， １９９７， ９４：６２１６−６２２１； Ｒｏｎｃｈｅｔｔｉら， Ｅｕｒ． Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， ２００４， ３４：６１３−６２２；およびＥｓｐａｒｚａら， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， ２００５， １７４：７８６９−７８７４（これらの各々はその全体において参考として援用される）を参照のこと。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰによるＧＩＴＲのアゴニズムは、標的細胞によるＩＬ−２Ｒα、ＩＬ−２、ＩＬ−８、および／またはＩＦＮγの増加した分泌を生じる。Ｒｏｎｃｈｅｔｔｉら， Ｅｕｒ． Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， ２００４， ３４：６１３−６２２（その全体において参考として援用される）を参照のこと。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰによるＧＩＴＲのアゴニズムは、エフェクターＴ細胞の増殖、生存、および／または機能を増大させる。いくつかの局面において、そのエフェクターＴ細胞はＣＤ４＋ エフェクターＴ細胞である。いくつかの局面において、そのエフェクターＴ細胞はＣＤ８＋ エフェクターＴ細胞である。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰによるＧＩＴＲのアゴニズムは、調節性Ｔ細胞によるエフェクターＴ細胞の抑制を抑止する。いくつかの局面において、その調節性Ｔ細胞はＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋ 調節性Ｔ細胞である。いくつかの局面において、その調節性Ｔ細胞はＣＤ８＋ＣＤ２５＋ 調節性Ｔ細胞である。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰによるＧＩＴＲのアゴニズムは、調節性Ｔ細胞の出現または分布の頻度を変更する。いくつかの局面において、調節性Ｔ細胞の頻度は低減する。いくつかの局面において、調節性Ｔ細胞の頻度は、特定の組織において低減する。いくつかの局面において、調節性Ｔ細胞の腫瘍内蓄積は減少し、エフェクターＴ細胞 対 調節性Ｔ細胞のより都合の良い比を生じ、ＣＤ８＋ Ｔ細胞活性が増強される。Ｃｏｈｅｎら， ＰＬｏＳ Ｏｎｅ， ２０１０， ５：ｅ１０４３６を参照のこと。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰによるＧＩＴＲのアゴニズムは、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の活性を増加させる。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰによるＧＩＴＲのアゴニズムは、抗原提示細胞の活性を増加させる。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰによるＧＩＴＲのアゴニズムは、樹状細胞の活性を増加させる。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰによるＧＩＴＲのアゴニズムは、Ｂ細胞の活性を増加させる。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰによるＧＩＴＲのアゴニズムは、免疫応答の増強を生じる。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰによるＧＩＴＲのアゴニズムは、腫瘍の発現の遅延を生じる。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰによるＧＩＴＲのアゴニズムは、腫瘍のサイズの縮小を生じる。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰによるＧＩＴＲのアゴニズムは、転移の数の低減を生じる。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供される多価一重特異的ＡＢＰによるＧＩＴＲのアゴニズムは、二価一重特異的抗体より大きな最大量のアゴニズムを生じる。いくつかの実施形態において、そのさらなる結合価は、ＥＣ５０に対して、その結合ドメインの各々の相加的効果より大きな効果を生じる。いくつかの実施形態において、本明細書で提供される四価一重特異的ＡＢＰは、二価一重特異的抗体より大きな最大量のアゴニズムを有する。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供される多重特異的ＡＢＰは、その相当する一重特異的ＡＢＰの混合物より強力なＧＩＴＲのアゴニストである。例えば、本明細書で提供される多重特異的ＡＢＰが２つの異なるエピトープ特異性（例えば、ＡおよびＢ）を含む場合、いくつかの実施形態において、このような多重特異的ＡＢＰによるＧＩＴＲのアゴニズムは、各々２つの特異性のうちの一方（例えば、ＡまたはＢ）を含む２種の一重特異的ＡＢＰの混合物によるＧＩＴＲのアゴニズムより大きい。いくつかの実施形態において、本明細書で提供される多重特異的ＡＢＰのさらなる特異性は、一重特異的ＡＢＰの混合物（各々、多重特異的ＡＢＰの特異性のうちの１つのみを有する）と比較した場合に、効力において相乗作用的（すなわち、相加的より大きい）増加をもたらす。
１．５．ＧＩＴＲに対する抗原結合タンパク質の親和性
いくつかの実施形態において、ＫＤによって示されるとおりのＧＩＴＲに対する本明細書で提供されるＡＢＰの親和性は、約１０−５Ｍ未満、約１０−６Ｍ未満、約１０−７Ｍ未満、約１０−８Ｍ未満、約１０−９Ｍ未満、約１０−１０Ｍ未満、約１０−１１Ｍ未満、または約１０−１２Ｍ未満である。いくつかの実施形態において、そのＡＢＰの親和性は、約１０−７Ｍ〜１０−１２Ｍの間である。いくつかの実施形態において、そのＡＢＰの親和性は、約１０−７Ｍ〜１０−１１Ｍの間である。いくつかの実施形態において、そのＡＢＰの親和性は、約１０−７Ｍ〜１０−１０Ｍの間である。いくつかの実施形態において、そのＡＢＰの親和性は、約１０−７Ｍ〜１０−９Ｍの間である。いくつかの実施形態において、そのＡＢＰの親和性は、約１０−７Ｍ〜１０−８Ｍの間である。いくつかの実施形態において、そのＡＢＰの親和性は、約１０−８Ｍ〜１０−１２Ｍの間である。いくつかの実施形態において、そのＡＢＰの親和性は、約１０−８Ｍ〜１０−１１Ｍの間である。いくつかの実施形態において、そのＡＢＰの親和性は、約１０−９Ｍ〜１０−１１Ｍの間である。いくつかの実施形態において、そのＡＢＰの親和性は、約１０−１０Ｍ〜１０−１１Ｍの間である。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、ＸのＫＤでｈＧＩＴＲ（配列番号１）に、および≦１０ＸのＫＤでｃＧＩＴＲに特異的に結合する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、ＸのＫＤでｈＧＩＴＲ（配列番号１）に、および≦５ＸのＫＤでｃＧＩＴＲに特異的に結合する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、ＸのＫＤでｈＧＩＴＲ（配列番号１）に、および≦２ＸのＫＤでｃＧＩＴＲに特異的に結合する。いくつかの局面において、Ｘは、本開示で記載される任意のＫＤである。いくつかの局面において、Ｘは、０．０１ｎＭ、０．１ｎＭ、１ｎＭ、１０ｎＭ、２０ｎＭ、５０ｎＭ、または１００ｎＭである。
いくつかの実施形態において、ＫＤ、ｋａ、およびｋｄは、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して決定される。いくつかの局面において、そのＳＰＲ分析は、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）機器を利用する。いくつかの局面において、その抗原は、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサーチップ（ＣＭ４またはＣＭ５）上に固定化され、本明細書で提供されるＡＢＰと接触される。会合速度定数および解離速度定数は、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎ（登録商標）ソフトウェアおよび１対１ラングミュア結合モデル（ｏｎｅ−ｔｏ−ｏｎｅ Ｌａｎｇｍｕｉｒ ｂｉｎｄｉｎｇ ｍｏｄｅｌ）を使用して計算され得る。いくつかの局面において、そのアッセイは、２５℃において行われる。いくつかの局面において、そのアッセイは、３７℃において行われる。
いくつかの実施形態において、ＫＤ、ｋａ、およびｋｄは、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）を使用して決定される。任意の適切なＢＬＩ法が使用され得る。いくつかの局面において、そのＢＬＩ分析は、ＦＯＲＴＥＢＩＯ（登録商標）機器を利用する。いくつかの局面において、抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ捕捉（ＡＨＣ）バイオセンサーは、センサーの表面にＡＢＰを捕捉するために使用される。その後、その固定化したＡＢＰと種々の濃度のＧＩＴＲとを接触させることによって、そのＡＢＰと抗原との会合がモニターされる。次いで、その抗原およびＡＢＰの解離は、ＧＩＴＲなしの緩衝液中で測定される。会合速度定数および解離速度定数は、ＦＯＲＴＥＢＩＯ（登録商標） Ａｎａｌｙｓｉｓソフトウェアの動力学的モジュールを使用して計算される。いくつかの局面において、そのアッセイは、３０℃で行われる。
他の実施形態において、ＫＤは、Ｃｈｅｎら Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．， １９９９， ２９３：８６５−８８１（その全体において参考として援用される）に記載されるように、放射性標識抗原結合アッセイによって決定され得る。
１．５．１．グリコシル化バリアント
ある種の実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、このＡＢＰがグリコシル化される程度を増加、減少または排除するために変更され得る。ポリペプチドのグリコシル化は代表的には、「Ｎ結合型（N-linked）」または「Ｏ結合型（O-linked）」のいずれかである。
「Ｎ結合型」グリコシル化とは、アスパラギン残基の側鎖への炭水化物部分の結合に言及する。トリペプチド配列 アスパラギン−Ｘ−セリンおよびアスパラギン−Ｘ−スレオニン（ここでＸは、プロリンを除く任意のアミノ酸である）は、アスパラギン側鎖への炭水化物部分の酵素による結合のための認識配列である。従って、ポリペプチド中にこれらのトリペプチド配列のいずれかが存在することで、潜在的グリコシル化部位が作り出される。
「Ｏ結合型」グリコシル化とは、ヒドロキシアミノ酸（最も一般的には、セリンまたはスレオニン）への糖であるＮ−アセチルガラクトサミン、ガラクトース、またはキシロースのうちの１つの結合に言及するが、５−ヒドロキシプロリンまたは５−ヒドロキシリジンも使用され得る。
本明細書で提供されるＡＢＰへのＮ結合型グリコシル化部位の付加またはそのＡＢＰからのそのグリコシル化部位の欠失は、上記のトリペプチド配列のうちの１またはこれより多くが作り出されるかまたは除去されるように、そのアミノ酸配列を変更することによって達成され得る。Ｏ結合型グリコシル化部位の付加または欠失は、１またはこれより多くのセリンまたはスレオニン残基を、ＡＢＰの配列の中にまたはそのＡＢＰへと（場合によって）付加、欠失、または置換することによって達成され得る。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、天然に存在するＡＢＰとは異なるグリコシル化モチーフを含む。任意の適切な天然に存在するグリコシル化モチーフは、本明細書で提供されるＡＢＰにおいて改変され得る。免疫グロブリンの構造特性またはグリコシル化特性は、例えば、当該分野で公知であり、例えば、Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒ ａｎｄ Ｃａｖａｃｉｎｉ， Ｊ． Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， ２０１０， １２５：Ｓ４１−５２（その全体において参考として援用される）において要約されている。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、アスパラギン２９７（Ａｓｎ ２９７）に結合したオリゴサッカリドへの改変を有するＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含む。哺乳動物細胞によって生成される天然に存在するＩｇＧ１抗体は代表的には、そのＦｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ ２９７へのＮ結合によって概して結合した分枝状の二分岐型オリゴサッカリドを含む。Ｗｒｉｇｈｔら， ＴＩＢＴＥＣＨ， １９９７， １５：２６−３２（その全体において参考として援用される）を参照のこと。Ａｓｎ ２９７に結合したオリゴサッカリドは、種々の炭水化物（例えば、マンノース、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、およびシアル酸、ならびにその二分岐型オリゴサッカリド構造の「ステム（ｓｔｅｍ）」においてＧｌｃＮＡｃに結合したフコース）を含み得る。
いくつかの実施形態において、Ａｓｎ ２９７に結合したオリゴサッカリドは、変更したＡＤＣＣを有するＡＢＰを作り出すために改変される。いくつかの実施形態において、そのオリゴサッカリドは、ＡＤＣＣを改善するために変更される。いくつかの実施形態において、そのオリゴサッカリドは、ＡＤＣＣを低減するために変更される。
いくつかの局面において、本明細書で提供されるＡＢＰは、天然に存在するＩｇＧ１ドメインと比較して、Ａｓｎ ２９７位において低減したフコース含有量を有するＩｇＧ１ドメインを含む。このようなＦｃドメインは、改善されたＡＤＣＣを有することが公知である。Ｓｈｉｅｌｄｓら， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．， ２００２， ２７７：２６７３３−２６７４０（その全体において参考として援用される）を参照のこと。いくつかの局面において、このようなＡＢＰは、Ａｓｎ ２９７位においていかなるフコースも含まない。フコースの量は、例えば、ＷＯ ２００８／０７７５４６（その全体において参考として援用される）に記載されるとおり、任意の適切な方法を使用して決定され得る。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、バイセクト型オリゴサッカリド（例えば、ＧｌｃＮＡｃによって二分されるＡＢＰのＦｃ領域に結合した二分岐型オリゴサッカリド）を含む。このようなＡＢＰバリアントは、低減したフコシル化および／または改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。このようなＡＢＰバリアントの例は、例えば、ＷＯ ２００３／０１１８７８； 米国特許第６，６０２，６８４号；および米国特許公開番号２００５／０１２３５４６（これらの各々はその全体において参考として援用される）に記載される。
他の例証的なグリコシル化バリアントは、例えば、以下に記載される：米国特許公開番号２００３／０１５７１０８、同２００４／００９３６２１、同２００３／０１５７１０８、同２００３／０１１５６１４、同２００２／０１６４３２８、同２００４／００９３６２１、同２００４／０１３２１４０、同２００４／０１１０７０４、同２００４／０１１０２８２、同２００４／０１０９８６５； 国際特許公開番号２０００／６１７３９、同２００１／２９２４６、同２００３／０８５１１９、同２００３／０８４５７０、同２００５／０３５５８６、同２００５／０３５７７８；同２００５／０５３７４２、同２００２／０３１１４０； Ｏｋａｚａｋｉら， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．， ２００４， ３３６：１２３９−１２４９；およびＹａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉら， Ｂｉｏｔｅｃｈ． Ｂｉｏｅｎｇ．， ２００４， ８７： ６１４−６２２（これらの各々はその全体において参考として援用される）。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、Ｆｃ領域に結合したオリゴサッカリド中に少なくとも１個のガラクトース残基を有するＦｃ領域を含む。このようなＡＢＰバリアントは、改善されたＣＤＣ機能を有し得る。このようなＡＢＰバリアントの例は、例えば、ＷＯ １９９７／３００８７； ＷＯ １９９８／５８９６４；およびＷＯ １９９９／２２７６４（これらの各々は、その全体において参考として援用される）に記載される。
脱フコシル化（ｄｅｆｕｃｏｓｙｌａｔｅｄ）ＡＢＰを生成し得る細胞株の例としては、Ｌｅｃ１３ ＣＨＯ細胞（これは、タンパク質フコシル化が欠損している）（Ｒｉｐｋａら， Ａｒｃｈ． Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ．， １９８６， ２４９：５３３−５４５； 米国特許公開番号２００３／０１５７１０８； ＷＯ ２００４／０５６３１２（これらの各々はその全体において参考として援用される）を参照のこと）、およびノックアウト細胞株（例えば、α−１，６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子またはＦＵＴ８をノックアウトしたＣＨＯ細胞（Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉら， Ｂｉｏｔｅｃｈ． Ｂｉｏｅｎｇ．， ２００４， ８７： ６１４−６２２； Ｋａｎｄａら， Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． Ｂｉｏｅｎｇ．， ２００６， ９４：６８０−６８８；およびＷＯ ２００３／０８５１０７（これらの各々はその全体において参考として援用される）を参照のこと）が挙げられる。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、無グリコシル化ＡＢＰである。無グリコシル化ＡＢＰは、当該分野で公知のまたは本明細書で記載される任意の方法を使用して生成され得る。いくつかの局面において、無グリコシル化ＡＢＰは、ＡＢＰを全てのグリコシル化部位を除去するように改変することによって生成される。いくつかの局面において、そのグリコシル化部位は、ＡＢＰのＦｃ領域からのみ除去される。いくつかの局面において、無グリコシル化ＡＢＰは、グリコシル化ができない生物（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）においてＡＢＰを発現させることによって、または無細胞反応混合物中でＡＢＰを発現させることによって生成される。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、天然のＩｇＧ１抗体と比較して低下したエフェクター機能を有する定常領域を有する。いくつかの実施形態において、Ｆｃレセプターに対する、本明細書で提供されるＡＢＰのＦｃ領域の定常領域の親和性は、このようなＦｃレセプターに対する天然のＩｇＧ１定常領域の親和性より低い。
１．６．Ｆｃ領域アミノ酸配列バリアント
ある種の実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、天然に存在するＦｃ領域と比較して、１またはこれより多くのアミノ酸置換、挿入、または欠失を有するＦｃ領域を含む。いくつかの局面において、このような置換、挿入、または欠失は、安定性、グリコシル化、または他の特徴が変更されたＡＢＰを生じる。いくつかの局面において、このような置換、挿入、または欠失は、無グリコシル化ＡＢＰを生じる。
いくつかの局面において、本明細書で提供されるＡＢＰのＦｃ領域は、Ｆｃレセプターに対して変更された親和性を有するＡＢＰ、またはより免疫学的に不活性なＡＢＰを生じるように改変される。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰバリアントは、全てではないが、いくつかのエフェクター機能を有する。このようなＡＢＰは、例えば、そのＡＢＰの半減期がインビボで重要である場合に、しかし、ある種のエフェクター機能（例えば、補体活性化およびＡＤＣＣ）が不要または有害である場合に、有用であり得る。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰのＦｃ領域は、ヒンジ安定化変異Ｓ２２８ＰまたはＬ２３５Ｅを含むヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域である。ある実施形態において、そのＩｇＧ４ Ｆｃ領域は、ヒンジ安定化変異Ｓ２２８ＰおよびＬ２３５Ｅを含む。Ａａｌｂｅｒｓｅら， Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， ２００２， １０５：９−１９（その全体において参考として援用される）を参照のこと。いくつかの実施形態において、そのＩｇＧ４ Ｆｃ領域は、以下の変異のうちの１またはこれより多くを含む： Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、およびＬ２３５Ａ。Ａｒｍｏｕｒら， Ｍｏｌ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， ２００３， ４０：５８５−５９３（その全体において参考として援用される）を参照のこと。いくつかの実施形態において、そのＩｇＧ４ Ｆｃ領域は、Ｇ２３６位における欠失を含む。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰのＦｃ領域は、Ｆｃレセプター結合を低減するために１またはこれより多くの変異を含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域である。いくつかの局面において、その１またはこれより多くの変異は、Ｓ２２８（例えば、Ｓ２２８Ａ）、Ｌ２３４（例えば、Ｌ２３４Ａ）、Ｌ２３５（例えば、Ｌ２３５Ａ）、Ｄ２６５（例えば、Ｄ２６５Ａ）、およびＮ２９７（例えば、Ｎ２９７Ａ）から選択される残基にある。いくつかの局面において、そのＡＢＰは、ＰＶＡ２３６変異を含む。ＰＶＡ２３６は、ＩｇＧ１のアミノ酸２３３〜２３６位のアミノ酸配列ＥＬＬＧまたはＩｇＧ４のＥＦＬＧが、ＰＶＡによって置き換えられることを意味する。米国特許公開番号２０１３／００６５２７７（その全体において参考として援用される）を参照のこと。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰのＦｃ領域は、Ａｒｍｏｕｒら， Ｅｕｒ． Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， １９９９， ２９：２６１３−２６２４； ＷＯ １９９９／０５８５７２；および／または英国特許出願番号９８０９９５１８（これらの各々はその全体において参考として援用される）に記載されるように改変される。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰのＦｃ領域は、変異Ａ３３０ＳおよびＰ３３１Ｓのうちの１またはこれより多くを含むヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域である。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰのＦｃ領域は、２３８位、２６５位、２６９位、２７０位、２９７位、３２７位および３２９位から選択される１またはこれより多くの位置においてアミノ酸置換を有する。米国特許第６，７３７，０５６号（その全体において参考として援用される）を参照のこと。このようなＦｃ変異体は、アミノ酸２６５位、２６９位、２７０位、２９７位および３２７位のうちの２またはこれより多くにおいて置換を有するＦｃ変異体が挙げられる（残基２６５および２９７のアラニンでの置換を有する、いわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ変異体が挙げられる）。米国特許第７，３３２，５８１号（その全体において参考として援用される）を参照のこと。いくつかの実施形態において、そのＡＢＰは、アミノ酸２６５位においてアラニンを含む。いくつかの実施形態において、そのＡＢＰは、アミノ酸２９７位においてアラニンを含む。
ある種の実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、ＡＤＣＣを改善する１またはこれより多くのアミノ酸置換（例えば、Ｆｃ領域の２９８位、３３３位、および３３４位のうちの１またはこれより多くでの置換）を有するＦｃ領域を含む。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、Ｌａｚａｒら， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， ２００６，１０３：４００５−４０１０（その全体において参考として援用される）に記載されるように、２３９位、３３２位、および３３０位での１またはこれより多くのアミノ酸置換を有するＦｃ領域を含む。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、Ｃ１ｑ結合および／またはＣＤＣを改善または減少させる１またはこれより多くの変更を含む。米国特許第６，１９４，５５１号； ＷＯ ９９／５１６４２；およびＩｄｕｓｏｇｉｅら， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， ２０００， １６４：４１７８−４１８４（これらの各々はその全体において参考として援用される）を参照のこと。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、半減期を増加させるために、１またはこれより多くの変更を含む。増加した半減期および新生Ｆｃレセプター（ＦｃＲｎ）への改善された結合を有するＡＢＰが、例えば、Ｈｉｎｔｏｎら， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， ２００６， １７６：３４６−３５６；および米国特許公開番号２００５／００１４９３４（これらの各々はその全体において参考として援用される）に記載される。このようなＦｃバリアントとしては、以下のＦｃ領域残基のうちの１またはこれより多くにおいて置換を有するものが挙げられる：ＩｇＧの２３８、２５０、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１４、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４、４２８、および４３４。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、米国特許第７，３７１，８２６号、同第５，６４８，２６０号、および同第５，６２４，８２１号； Ｄｕｎｃａｎ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ， Ｎａｔｕｒｅ， １９８８， ３２２：７３８−７４０；ならびにＷＯ ９４／２９３５１（これらの各々はその全体において参考として援用される）に記載されるとおりの１またはこれより多くのＦｃ領域バリアントを含む。
１．７．システイン操作された抗原結合タンパク質バリアント
ある種の実施形態において、システイン操作されたＡＢＰ（「ｔｈｉｏＭＡｂ」としても公知）が本明細書で提供され、そのＡＢＰにおいて、そのＡＢＰのうちの１またはこれより多くの残基が、システイン残基で置換されている。特定の実施形態において、その置換された残基は、そのＡＢＰの溶媒アクセス可能な部位で起こる。このような残基をシステインで置換することによって、反応性チオール基が、そのＡＢＰの溶媒アクセス可能な部位において導入され、そのＡＢＰが他の部分（例えば、薬物部分またはリンカー−薬物部分）へと結合体化するために、例えば、免疫結合体を作り出すために、使用され得る。
ある種の実施形態において、以下の残基のうちのいずれか１またはこれより多くが、システインで置換され得る：軽鎖のＶ２０５；重鎖Ｆｃ領域のＡ１１８；および重鎖Ｆｃ領域のＳ４００。システイン操作されたＡＢＰは、例えば、米国特許第７，５２１，５４１号（これはその全体において参考として援用される）に記載されるように生成され得る。
１．７．１．免疫結合体
１．７．１．１．抗原結合タンパク質−ポリマー結合体
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、ポリマーとの結合体化によって誘導体化される。任意の適切なポリマーは、そのＡＢＰに結合体化され得る。
いくつかの実施形態において、そのポリマーは、水溶性ポリマーである。水溶性ポリマーの例証的な例としては、以下が挙げられる：ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エチレン／マレイン酸無水物コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマーまたはランダムコポリマーのいずれか）、ポリ（ｎ−ビニルピロリドン）−ｃｏ−ポリエチレングリコール、プロプロピレングリコールホモポリマー（ｐｒｏｐｒｏｐｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ ｈｏｍｏｐｏｌｙｍｅｒ）、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、およびこれらの混合物。いくつかの局面において、ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水の中でのその安定性に起因して製造において利点を有し得る。
そのポリマーは、任意の分子量のものでもよく、分枝状であっても非分枝状であってもよい。各ＡＢＰに結合するポリマーの数は、変動し得、１より多くのポリマーが結合する場合、それらは、同じポリマーであっても異なるポリマーであってもよい。一般に、誘導体化に使用されるポリマーの数および／またはタイプは、改善されるべきＡＢＰの特定の特性または機能およびそのＡＢＰの意図された使用を含む考慮事項に基づいて決定され得る。
１．７．１．２．抗原結合タンパク質−薬物結合体
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、１またはこれより多くの治療剤に結合体化される。任意の適切な治療剤は、そのＡＢＰに結合体化され得る。例示的な治療剤としては、サイトカイン、ケモカイン、および所望のＴ細胞活性を誘導する他の薬剤（例えば、ＧＩＴＲＬ、ＯＸ４０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−２、ＩＬ−１５融合物、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＩＬ−１０トラップ、ＩＬ−２７トラップ、およびＩＬ−３５トラップ）が挙げられる。サイトカイントラップおよびこれらの使用は、当該分野で公知であり、例えば、Ｅｃｏｎｏｍｉｄｅｓら， Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ， ２００３， ９：４７−５２（その全体において参考として援用される）に記載される。
ＧＩＴＲ抗原結合タンパク質を作製するための方法
１．８．ＧＩＴＲ抗原調製
本明細書で提供されるＡＢＰの単離のために使用されるＧＩＴＲ抗原は、無傷のＧＩＴＲまたはＧＩＴＲのフラグメントであり得る。そのＧＩＴＲ抗原は、単離されたタンパク質または細胞の表面上に発現されたタンパク質の形態にあり得る。
いくつかの実施形態において、そのＧＩＴＲ抗原は、ＧＩＴＲの天然に存在しないバリアント（例えば、天然に存在しないアミノ酸配列または翻訳後修飾を有するＧＩＴＲタンパク質）である。
いくつかの実施形態において、そのＧＩＴＲ抗原は、例えば、細胞内または膜貫通配列、またはシグナル配列の除去によって短縮される。いくつかの実施形態において、そのＧＩＴＲ抗原は、そのＣ末端において、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインまたはポリヒスチジンタグに融合される。
１．９．モノクローナル抗体を作製するための方法
モノクローナル抗体は、例えば、Ｋｏｈｌｅｒら， Ｎａｔｕｒｅ， １９７５， ２５６：４９５−４９７（その全体において参考として援用される）によって最初に記載されたハイブリドーマ法を使用して、および／または組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７（その全体において参考として援用される）を参照のこと）によって、得られ得る。モノクローナル抗体はまた、例えば、ファージまたは酵母ベースのライブラリーを使用して得られ得る。例えば、米国特許第８，２５８，０８２号および同第８，６９１，７３０号（これらの各々がその全体において参考として援用される）を参照のこと。
ハイブリドーマ法では、マウスまたは他の適切な宿主動物が、免疫するために使用されるタンパク質に特異的に結合する抗体を生成するかまたは生成し得るリンパ球を誘発するために免疫される。あるいは、リンパ球は、インビトロで免疫され得る。次いで、リンパ球は、適切な融合剤（例えば、ポリエチレングリコール）を使用して骨髄腫細胞と融合して、ハイブリドーマ細胞を形成する。Ｇｏｄｉｎｇ Ｊ．Ｗ．， Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ 第３版．（１９８６） Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ， ＣＡ（その全体において参考として援用される）を参照のこと。
そのハイブリドーマ細胞を、その融合させていない親の骨髄腫細胞の成長または生存を阻害する１またはこれより多くの物質を含む適切な培養培地中に播種し成長させる。例えば、その親の骨髄腫細胞が、酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴまたはＨＰＲＴ）を欠いている場合、そのハイブリドーマ用の培養培地は代表的には、ヒポキサンチン、アミノプテリン、およびチミジンを含み（ＨＡＴ培地）、これらの物質は、ＨＧＰＲＴ欠損性細胞の成長を防止する。
有用な骨髄腫細胞は、効率的に融合し、その選択された抗体生成細胞による抗体の安定な高レベル生成を支持し、そして鋭敏な培地条件（例えば、ＨＡＴ培地の存在または非存在）であるものである。これらの中でも、好ましい骨髄腫細胞株は、マウス骨髄腫株（例えば、ＭＯＰ−２１およびＭＣ−１１マウス腫瘍（Ｓａｌｋ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｃｅｌｌ Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ， ＣＡ）から入手可能）、ならびにＳＰ−２またはＸ６３−Ａｇ８−６５３細胞（アメリカンタイプカルチャーコレクション（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ， ＭＤ）から入手可能）に由来するもの）である。ヒト骨髄腫細胞株およびマウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞株はまた、ヒトモノクローナル抗体の生成に関して記載されている。例えば、Ｋｏｚｂｏｒ， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， １９８４， １３３：３００１（その全体において参考として援用される）を参照のこと。
望ましい特異性、親和性、および／または生物学的活性の抗体を生成するハイブリドーマ細胞の同定の後に、選択されたクローンを、限界希釈手順によってサブクローニングし、標準的方法によって成長させ得る。Ｇｏｄｉｎｇ，前出を参照のこと。この目的に適した培養培地としては、例えば、Ｄ−ＭＥＭまたはＲＰＭＩ−１６４０培地が挙げられる。さらに、そのハイブリドーマ細胞を、動物において、腹水腫瘍としてインビボで成長させ得る。
そのモノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を使用して（例えば、そのモノクローナル抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合し得るオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）、容易に単離および配列決定し得る。従って、そのハイブリドーマ細胞は、望ましい特性を有する抗体をコードするＤＮＡの有用な供給源として働き得る。一旦単離された後、そのＤＮＡは、発現ベクターの中に配置され得、そのベクターは、次いで、そのモノクローナル抗体を生成するために、細菌（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）、酵母（例えば、ＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓまたはＰｉｃｈｉａ ｓｐ．）、ＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、または別段抗体を生成しない骨髄腫細胞のような宿主細胞へとトランスフェクトされる。
１．１０．キメラ抗体を作製するための方法
キメラ抗体を作製するための例証的な方法は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号；およびＭｏｒｒｉｓｏｎら， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， １９８４， ８１：６８５１−６８５５（これらの各々はその全体において参考として援用される）に記載される。いくつかの実施形態において、キメラ抗体は、組換え技術を使用して、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、または非ヒト霊長類（例えば、サル）に由来する可変領域）とヒト定常領域とを組み合わせることによって作製される。
１．１１．ヒト化抗体を作製するための方法
ヒト化抗体は、非ヒトモノクローナル抗体の構造的部分のうちの大部分、または全てを、相当するヒト抗体配列で置き換えることによって生成され得る。結論として、ハイブリッド分子が生成され、その分子において、抗原特異的可変部分のみ、またはＣＤＲが非ヒト配列から構成される。ヒト化抗体を得るための方法としては、例えば、Ｗｉｎｔｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ， Ｎａｔｕｒｅ， １９９１， ３４９：２９３−２９９； Ｒａｄｅｒら， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． Ｕ．Ｓ．Ａ．， １９９８， ９５：８９１０−８９１５； Ｓｔｅｉｎｂｅｒｇｅｒら， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．， ２０００， ２７５：３６０７３−３６０７８； Ｑｕｅｅｎら， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． Ｕ．Ｓ．Ａ．， １９８９， ８６：１００２９−１００３３；ならびに米国特許第５，５８５，０８９号、同第５，６９３，７６１号、同第５，６９３，７６２号、および同第６，１８０，３７０号（これらの各々はその全体において参考として援用される）に記載されるものが挙げられる。
１．１２．ヒト抗体を作製するための方法
ヒト抗体は、当該分野で公知の種々の技術によって、例えば、トランスジェニック動物（例えば、ヒト化マウス）を使用することによって生成され得る。例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． Ｕ．Ｓ．Ａ．， １９９３， ９０：２５５１； Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら， Ｎａｔｕｒｅ， １９９３， ３６２：２５５−２５８； Ｂｒｕｇｇｅｒｍａｎｎら， Ｙｅａｒ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏ．， １９９３， ７：３３；ならびに米国特許第５，５９１，６６９号、同第５，５８９，３６９号および同第５，５４５，８０７号（これらの各々はその全体において参考として援用される）を参照のこと。ヒト抗体はまた、ファージディスプレイライブラリーに由来し得る（例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．， １９９１， ２２７：３８１−３８８； Ｍａｒｋｓら， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．， １９９１， ２２２：５８１−５９７；ならびに米国特許第５，５６５，３３２号および同第５，５７３，９０５号（これらの各々はその全体において参考として援用される）を参照のこと）。ヒト抗体はまた、インビトロで活性化されたＢ細胞によって生成され得る（例えば、米国特許第５，５６７，６１０号および同第５，２２９，２７５号（これらの各々がその全体において参考として援用される）を参照のこと）。ヒト抗体はまた、酵母ベースのライブラリーに由来し得る（例えば、米国特許第８，６９１，７３０（その全体において参考として援用される）を参照のこと）。
１．１３．抗体フラグメントを作製するための方法
本明細書で提供される抗体フラグメントは、任意の適切な方法（本明細書で記載される例証的な方法または当該分野で公知の方法が挙げられる）によって作製され得る。適切な方法としては、組換え技術および完全抗体のタンパク質分解性消化が挙げられる。抗体フラグメントを作製するための例証的な方法は、例えば、Ｈｕｄｓｏｎら， Ｎａｔ． Ｍｅｄ．， ２００３， ９：１２９−１３４（その全体において参考として援用される）に記載される。ｓｃＦｖ抗体を作製するための方法は、例えば、Ｐｌｕｅｃｋｔｈｕｎ， ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ， ｖｏｌ． １１３， Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ編， Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， ｐｐ． ２６９−３１５（１９９４）； ＷＯ ９３／１６１８５；ならびに米国特許第５，５７１，８９４号および同第５，５８７，４５８号（これらの各々はその全体において参考として援用される）に記載される。
１．１４．代替の足場を作製するための方法
本明細書で提供される代替の足場は、任意の適切な方法（本明細書で記載される例証的な方法または当該分野で公知の方法が挙げられる）によって作製され得る。例えば、ＡｄｎｅｃｔｉｎＴＭを調製するための方法は、Ｅｍａｎｕｅｌら， ｍＡｂｓ， ２０１１， ３：３８−４８（その全体において参考として援用される）に記載される。ｉＭａｂを調製するための方法は、米国特許公開番号２００３／０２１５９１４（その全体において参考として援用される）に記載される。Ａｎｔｉｃａｌｉｎ（登録商標）を調製するための方法は、Ｖｏｇｔ ａｎｄ Ｓｋｅｒｒａ， Ｃｈｅｍ． Ｂｉｏｃｈｅｍ．， ２００４， ５：１９１−１９９（その全体において参考として援用される）に記載される。Ｋｕｎｉｔｚドメインを調製するための方法は、Ｗａｇｎｅｒら， Ｂｉｏｃｈｅｍ． ＆ Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ｒｅｓ． Ｃｏｍｍ．， １９９２， １８６：１１８−１１４５（その全体において参考として援用される）に記載される。チオレドキシンペプチドアプタマーを調製するための方法は、Ｇｅｙｅｒ ａｎｄ Ｂｒｅｎｔ， Ｍｅｔｈ． Ｅｎｚｙｍｏｌ．， ２０００， ３２８：１７１−２０８（その全体において参考として援用される）において提供される。Ａｆｆｉｂｏｄｙを調製するための方法は、Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ， Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ．， ２００４， １５：３６４−３７３（その全体において参考として援用される）において提供される。ＤＡＲＰｉｎを調製するための方法は、Ｚａｈｎｄら， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．， ２００７， ３６９：１０１５−１０２８（その全体において参考として援用される）において提供される。Ａｆｆｉｌｉｎを調製するための方法は、Ｅｂｅｒｓｂａｃｈら， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．， ２００７， ３７２：１７２−１８５（その全体において参考として援用される）において提供される。Ｔｅｔｒａｎｅｃｔｉｎを調製するための方法は、Ｇｒａｖｅｒｓｅｎら， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．， ２０００， ２７５：３７３９０−３７３９６（その全体において参考として援用される）において提供される。Ａｖｉｍｅｒを調製するための方法は、Ｓｉｌｖｅｒｍａｎら， Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．， ２００５， ２３：１５５６−１５６１（その全体において参考として援用される）において提供される。Ｆｙｎｏｍｅｒを調製するための方法は、Ｓｉｌａｃｃｉら， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．， ２０１４， ２８９：１４３９２−１４３９８（その全体において参考として援用される）において提供される。
代替の足場に関するさらなる情報は、Ｂｉｎｚら， Ｎａｔ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．， ２００５ ２３：１２５７−１２６８；およびＳｋｅｒｒａ， Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎ． ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ．， ２００７ １８：２９５−３０４（これらの各々がその全体において参考として援用される）において提供される。
１．１５．多重特異的ＡＢＰを作製するための方法
本明細書で提供される多重特異的または多価一重特異的ＡＢＰは、任意の適切な方法（本明細書で記載される例証的な方法または当該分野で公知の方法が挙げられる）によって作製され得る。共通軽鎖抗体を作製するための方法は、Ｍｅｒｃｈａｎｔら， Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．， １９９８， １６：６７７−６８１（その全体において参考として援用される）に記載される。四価二重特異的抗体を作製するための方法は、Ｃｏｌｏｍａ ａｎｄ Ｍｏｒｒｉｓｏｎ， Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．， １９９７， １５：１５９−１６３（その全体において参考として援用される）に記載される。ハイブリッド免疫グロブリンを作製するための方法は、Ｍｉｌｓｔｅｉｎ ａｎｄ Ｃｕｅｌｌｏ， Ｎａｔｕｒｅ， １９８３， ３０５：５３７−５４０；およびＳｔａｅｒｚ ａｎｄ Ｂｅｖａｎ， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， １９８６， ８３：１４５３−１４５７（これらの各々はその全体において参考として援用される）に記載される。ｋｎｏｂｓ−ｉｎｔｏ−ｈｏｌｅｓ改変を有する免疫グロブリンを作製するための方法は、米国特許第５，７３１，１６８（その全体において参考として援用される）に記載される。静電的改変を有する免疫グロブリンを作製するための方法は、ＷＯ ２００９／０８９００４（その全体において参考として援用される）において提供される。多価（例えば、四価）一重特異的抗体を作製するための方法は、Ｍｉｌｌｅｒら， ２００３、米国特許第８，７２２，８５９号（その全体において参考として援用される）に記載される。二重特異的１本鎖抗体を作製するための方法は、Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら， ＥＭＢＯ Ｊ．， １９９１， １０：３６５５−３６５９；およびＧｒｕｂｅｒら， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， １９９４， １５２：５３６８−５３７４（これらの各々はその全体において参考として援用される）に記載される。１本鎖抗体（そのリンカーの長さは変動され得る）を作製するための方法は、米国特許第４，９４６，７７８号および同第５，１３２，４０５号（これらの各々がその全体において参考として援用される）に記載される。ダイアボディを作製するための方法は、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒら， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， １９９３， ９０：６４４４−６４４８（その全体において参考として援用される）に記載される、トリアボディおよびテトラボディを作製するための方法は、Ｔｏｄｏｒｏｖｓｋａら， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｍｅｔｈｏｄｓ， ２００１， ２４８：４７−６６（その全体において参考として援用される）に記載される。三重特異的Ｆ（ａｂ’）３誘導体を作製するための方法は、Ｔｕｔｔら Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， １９９１， １４７：６０−６９（その全体において参考として援用される）に記載される。架橋された抗体を作製するための方法は、米国特許第４，６７６，９８０号； Ｂｒｅｎｎａｎら， Ｓｃｉｅｎｃｅ， １９８５， ２２９：８１−８３； Ｓｔａｅｒｚ，ら Ｎａｔｕｒｅ， １９８５， ３１４：６２８−６３１；およびＥＰ ０４５３０８２（これらの各々はその全体において参考として援用される）に記載される。ロイシンジッパーによってアセンブリされた抗原結合ドメインを作製するための方法は、Ｋｏｓｔｅｌｎｙら， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， １９９２， １４８：１５４７−１５５３（その全体において参考として援用される）に記載される。ＤＮＬアプローチを介してＡＢＰを作製するための方法は、米国特許第７，５２１，０５６号；同第７，５５０，１４３号；同第７，５３４，８６６号；および同第７，５２７，７８７号（これらの各々はその全体において参考として援用される）に記載される。抗体分子と非抗体分子とのハイブリッドを作製するための方法は、このようなＡＢＰの例について、ＷＯ ９３／０８８２９（その全体において参考として援用される）に記載される。ＤＡＦ抗体を作製するための方法は、米国特許公開番号２００８／００６９８２０（その全体において参考として援用される）に記載される。還元および酸化を介してＡＢＰを作製するための方法は、Ｃａｒｌｒｉｎｇら， ＰＬｏＳ Ｏｎｅ， ２０１１， ６：ｅ２２５３３（その全体において参考として援用される）に記載される。ＤＶＤ−ＩｇＴＭを作製するための方法は、米国特許第７，６１２，１８１（その全体において参考として援用される）に記載される。ＤＡＲＴＴＭを作製するための方法は、Ｍｏｏｒｅら， Ｂｌｏｏｄ， ２０１１， １１７：４５４−４５１（その全体において参考として援用される）に記載される。ＤｕｏＢｏｄｙ（登録商標）を作製するための方法は、Ｌａｂｒｉｊｎら， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， ２０１３， １１０：５１４５−５１５０； Ｇｒａｍｅｒら， ｍＡｂｓ， ２０１３， ５：９６２−９７２；およびＬａｂｒｉｊｎら， Ｎａｔｕｒｅ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ， ２０１４， ９：２４５０−２４６３（これらの各々はその全体において参考として援用される）に記載される。ＩｇＧに由来するＣＨ３のＣ末端に融合するｓｃＦｖを含む抗体を作製するための方法は、Ｃｏｌｏｍａ ａｎｄ Ｍｏｒｒｉｓｏｎ， Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．， １９９７， １５：１５９−１６３（その全体において参考として援用される）に記載される。Ｆａｂ分子が免疫グロブリンの定常領域に結合する抗体を作製するための方法は、Ｍｉｌｅｒら， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， ２００３， １７０：４８５４−４８６１（その全体において参考として援用される）に記載される。ＣｏｖＸ−Ｂｏｄｙを作製するための方法は、Ｄｏｐｐａｌａｐｕｄｉら， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， ２０１０， １０７：２２６１１−２２６１６（その全体において参考として援用される）に記載される。Ｆｃａｂ抗体を作製するための方法は、Ｗｏｚｎｉａｋ−Ｋｎｏｐｐら， Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ． Ｄｅｓ． Ｓｅｌ．， ２０１０， ２３：２８９−２９７（その全体において参考として援用される）に記載される。ＴａｎｄＡｂ（登録商標）抗体を作製するための方法は、Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖら， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．， １９９９， ２９３：４１−５６およびＺｈｕｋｏｖｓｋｙら， Ｂｌｏｏｄ， ２０１３， １２２：５１１６（これらの各々がその全体において参考として援用される）に記載される。タンデムＦａｂを作製するための方法は、ＷＯ ２０１５／１０３０７２（その全体において参考として援用される）に記載される。ＺｙｂｏｄｙＴＭを作製するための方法は、ＬａＦｌｅｕｒら， ｍＡｂｓ， ２０１３， ５：２０８−２１８（その全体において参考として援用される）に記載される。
別の局面において、抗ヒトＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合フラグメントを生成するための方法が提供され、上記方法は、以下の（ａ）〜（ｃ）からなる群より選択される宿主細胞（複数可）を培養して、四価抗ヒトＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合フラグメントを発現させる工程を包含する：（ａ）本明細書で提供される抗ヒトＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドおよびその抗体またはその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；（ｂ）本明細書で提供される抗ヒトＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターおよびその抗体またはその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；ならびに（ｃ）本明細書で提供される抗ヒトＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞およびその抗体またはその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞。
別の局面において、抗ヒトＧＩＴＲ抗体を生成するための方法が提供され、上記方法は、以下の（ａ）〜（ｃ）からなる群より選択される宿主細胞（複数可）を培養して、抗ヒトＧＩＴＲ抗体を発現する工程を包含する：（ａ）本明細書で提供される抗ヒトＧＩＴＲ抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドおよびその抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；（ｂ）本明細書で提供される抗ヒトＧＩＴＲ抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターおよびその抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；ならびに（ｃ）本明細書で提供される抗ヒトＧＩＴＲ抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞およびその抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞。
１．１６．バリアントを作製するための方法
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、親ＡＢＰの親和性成熟したバリアントであり、これは、例えば、ファージディスプレイベースの親和性成熟技術を使用して生成され得る。簡潔には、１またはこれより多くのＣＤＲ残基が変異され得、そのバリアントＡＢＰまたはその一部は、ファージ上にディスプレイされ得、親和性に関してスクリーニングされ得る。このような変更は、ＣＤＲ「ホットスポット」、もしくは体細胞成熟プロセスの間に高頻度で変異を受けるコドンによってコードされる残基（Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ， Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．， ２００８， ２０７：１７９−１９６（その全体において参考として援用される）を参照のこと）、および／またはその抗原と接触する残基において作製され得る。いくつかの実施形態において、親和性成熟は、種結合を変更するかまたは種結合を導入するために使用され得る。すなわち、抗マウス抗体は、同じ標的抗原のヒトおよびカニクイザルバージョンに結合するように操作され得るなど。
任意の適切な方法は、ＡＢＰをコードするポリヌクレオチド配列（複数可）の中に変動性を導入するために使用され得る（エラープローンＰＣＲ、鎖シャフリング、およびオリゴヌクレオチド指向性変異誘発（例えば、トリヌクレオチド指向性変異誘発（ＴＲＩＭ））が挙げられる）。いくつかの局面において、いくつかのＣＤＲ残基（例えば、一度に４〜６残基）がランダム化される。抗原結合に関与するＣＤＲ残基は、例えば、アラニンスキャニング変異誘発またはモデリングを使用して、具体的に同定され得る。ＣＤＲ−Ｈ３およびＣＤＲ−Ｌ３は特に、変異のためにしばしば標的化される。
可変領域および／またはＣＤＲへの多様性の導入は、二次ライブラリーを生成するために使用され得る。その二次ライブラリーは、次いで、改善された親和性を有するＡＢＰバリアントを同定するためにスクリーニングされる。二次ライブラリーから構築および再選択することによる親和性成熟は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら， Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， ２００１， １７８：１−３７（その全体において参考として援用される）に記載されている。
１．１７．ベクター、宿主細胞、および組換え法
ＧＩＴＲ ＡＢＰをコードする単離された核酸、その核酸を含むベクター、ならびにそのベクターおよびその核酸を含む宿主細胞、ならびにそのＡＢＰの生成のための組換え技術がまた、提供される。
別の局面において、本明細書で提供される抗ヒトＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドが提供される。別の局面において、本明細書で提供される抗ヒトＧＴＩＲ抗体またはその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドが提供される。
別の局面において、本明細書で提供される抗ヒトＧＩＴＲ抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドが提供される。別の局面において、本明細書で提供される抗ヒトＧＴＩＲ抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドが提供される。
ＡＢＰの組換え生成のために、そのＡＢＰをコードする核酸（複数可）は、単離され得、さらなるクローニング（すなわち、そのＤＮＡの増幅）または発現のために、複製可能なベクターへと挿入され得る。いくつかの局面において、その核酸は、例えば、米国特許第５，２０４，２４４（その全体において参考として援用される）に記載されるように、相同組換えによって生成され得る。
別の局面において、（ａ）本明細書で提供される抗ヒトＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドおよび／または（ｂ）その抗ヒトＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターが提供される。
別の局面において、（ａ）本明細書で提供される抗ヒトＧＩＴＲ抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドおよび／または（ｂ）その抗ヒトＧＩＴＲ抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターが提供される。
多くの異なるベクターは、当該分野で公知である。そのベクター構成要素は一般に、例えば、米国特許第５，５３４，６１５（その全体において参考として援用される）に記載されるように、以下のうちの１またはこれより多くを含む：シグナル配列、複製起点、１またはこれより多くのマーカー遺伝子、エンハンサーエレメント、プロモーター、および転写終結配列。
適切な宿主細胞の例証的な例は、以下に提供される。これらの宿主細胞は、限定であることを意味されず、任意の適切な宿主細胞は、本明細書で提供されるＡＢＰを生成するために使用され得る。
別の局面において、（ａ）〜（ｄ）からなる群より選択される発現ベクターで形質転換された宿主細胞が提供される：（ａ）本明細書で提供される抗ヒトＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドおよびその抗体またはその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；（ｂ）本明細書で提供される抗ヒトＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターおよびその抗体またはその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；（ｃ）本明細書で提供される抗ヒトＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；ならびに（ｄ）本明細書で提供される抗ヒトＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞。
別の局面において、（ａ）〜（ｄ）からなる群より選択される発現ベクターで形質転換された宿主細胞が提供される：（ａ）本明細書で提供される抗ヒトＧＩＴＲ抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドおよびその抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；（ｂ）本明細書で提供される抗ヒトＧＩＴＲ抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターおよびその抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；（ｃ）本明細書で提供される抗ヒトＧＩＴＲ抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；ならびに（ｄ）本明細書で提供される抗ヒトＧＩＴＲ抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞。
適切な宿主細胞は、任意の原核生物（例えば、細菌）、下等真核生物（例えば、酵母）、または高等真核生物（例えば、哺乳動物）の細胞を含む。適切な原核生物としては、ユーバクテリア（例えば、グラム陰性またはグラム陽性の生物、例えば、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ（例えば、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ（Ｅ．ｃｏｌｉ）、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ、Ｅｒｗｉｎｉａ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ、Ｐｒｏｔｅｕｓ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ（Ｓ．ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、Ｓｅｒｒａｔｉａ（Ｓ．ｍａｒｃｅｓｃａｎｓ）、Ｓｈｉｇｅｌｌａ、Ｂａｃｉｌｌｉ（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓおよびＢ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、およびＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ））が挙げられる。１つの有用なＥ．ｃｏｌｉクローニング宿主は、Ｅ．ｃｏｌｉ ２９４であるが、他の株（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ Ｂ、Ｅ．ｃｏｌｉ Ｘ１７７６、およびＥ．ｃｏｌｉ Ｗ３１１０）も適切である。
原核生物に加えて、真核生物微生物（例えば、糸状菌または酵母）がまた、ＧＩＴＲ ＡＢＰコードベクターの適切なクローニング宿主または発現宿主である。Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、または一般的なパン酵母は、一般的に使用される下等真核生物宿主微生物である。しかし、多くの他の属、種、および株が、利用可能でありかつ有用である（例えば、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ（Ｋ．ｌａｃｔｉｓ、Ｋ．ｆｒａｇｉｌｉｓ、Ｋ．ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ、Ｋ．ｗｉｃｋｅｒａｍｉｉ、Ｋ．ｗａｌｔｉｉ、Ｋ．ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａｒｕｍ、Ｋ．ｔｈｅｒｍｏｔｏｌｅｒａｎｓ、およびＫ．ｍａｒｘｉａｎｕｓ）、Ｙａｒｒｏｗｉａ、Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ（Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ）、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｉａ、Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ ｃｒａｓｓａ、Ｓｃｈｗａｎｎｉｏｍｙｃｅｓ（Ｓ．ｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｉｓ）、ならびに糸状菌（例えば、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ、Ｔｏｌｙｐｏｃｌａｄｉｕｍ、およびＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ（Ａ．ｎｉｄｕｌａｎｓおよびＡ．ｎｉｇｅｒ）など）。
有用な哺乳動物宿主細胞としては、ＣＯＳ−７細胞、ＨＥＫ２９３細胞；ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞；チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞；マウスセルトリ細胞；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６）などが挙げられる。
本発明のＧＩＴＲ ＡＢＰを生成するために使用される宿主細胞は、種々の培地中で培養され得る。市販の培地（例えば、Ｈａｍ’ｓ Ｆ１０、最小必須培地（ＭＥＭ）、ＲＰＭＩ−１６４０、およびダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）など）は、その宿主細胞を培養するために適している。さらに、Ｈａｍら， Ｍｅｔｈ． Ｅｎｚ．， １９７９， ５８：４４； Ｂａｒｎｅｓら， Ａｎａｌ． Ｂｉｏｃｈｅｍ．， １９８０， １０２：２５５；ならびに米国特許第４，７６７，７０４号、同第４，６５７，８６６号、同第４，９２７，７６２号、同第４，５６０，６５５号、および同第５，１２２，４６９号；またはＷＯ ９０／０３４３０およびＷＯ ８７／００１９５に記載される培地のうちのいずれかが使用され得る。前述の参考文献の各々は、その全体において参考として援用される。
これらの培地のうちのいずれかは、必要な場合ホルモンおよび／または他の成長因子（例えば、インスリン、トランスフェリン、または上皮成長因子）、塩（例えば、塩化ナトリウム、カルシウム、マグネシウム、およびホスフェート）、バッファ（例えば、ＨＥＰＥＳ）、ヌクレオチド（例えば、アデノシンおよびチミジン）、抗生物質、微量元素（マイクロモル濃度範囲の最終濃度で通常は存在する無機化合物として定義される）、およびグルコースまたは等価なエネルギー源が補充され得る。任意の他の必要な補充物質がまた、当業者に公知である適切な濃度で含まれ得る。
培養条件（例えば、温度、ｐＨなど）は、発現のために選択される宿主細胞で以前に使用された条件であり、当業者にとって明らかである。
組換え技術を使用する場合、そのＡＢＰは、細胞内で、細胞周辺腔において生成され得るか、または培地へと直接分泌され得る。そのＡＢＰが細胞内で生成される場合、第１の工程として、例えば、遠心分離または限外濾過によって、粒状デブリ（宿主細胞または溶解したフラグメントのいずれか）が除去される。例えば、Ｃａｒｔｅｒら（Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， １９９２， １０：１６３−１６７（その全体において参考として援用される））は、Ｅ．ｃｏｌｉの細胞周辺腔へと分泌されるＡＢＰを単離するための手順を記載する。簡潔には、細胞ペーストを、酢酸ナトリウム（ｐＨ３．５）、ＥＤＴＡ、およびフェニルメチルスルホニルフルオリド（ＰＭＳＦ）の存在下で約３０分間にわたって解凍する。細胞デブリは、遠心分離によって除去され得る。
いくつかの実施形態において、そのＡＢＰは、無細胞系において生成される。いくつかの局面において、その無細胞系は、Ｙｉｎら， ｍＡｂｓ， ２０１２， ４：２１７−２２５（その全体において参考として援用される）に記載されるとおりのインビトロ転写および翻訳システムである。いくつかの局面において、その無細胞系は、真核生物細胞または原核生物細胞に由来する無細胞抽出物を利用する。いくつかの局面において、その原核生物細胞は、Ｅ．ｃｏｌｉである。そのＡＢＰの無細胞発現は、例えば、そのＡＢＰが不溶性凝集物として細胞中に蓄積する場合またはペリプラズム発現からの収量が低い場合に有用であり得る。
そのＡＢＰが培地へと分泌される場合、このような発現系からの上清は一般に、市販のタンパク質濃縮フィルタ、例えば、Ａｍｉｃｏｎ（登録商標）またはＭｉｌｌｉｐｏｒｅ（登録商標） Ｐｅｌｌｃｏｎ（登録商標）限外濾過ユニットを使用して、まず濃縮される。プロテアーゼインヒビター（例えば、ＰＭＳＦ）は、タンパク質分解を阻害するために前述の工程のうちのいずれかに含まれ得、抗生物質は、外来の汚染物質の成長を防止するために含まれ得る。
その細胞から調製されるＡＢＰ組成物は、例えば、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、およびアフィニティークロマトグラフィーを使用して精製され得、アフィニティークロマトグラフィーは、特に有用な精製技術である。親和性リガンドとしてのプロテインＡの適切性は、そのＡＢＰ中に存在する任意の免疫グロブリンＦｃドメインの種およびアイソタイプに依存する。プロテインＡは、ヒトγ１、γ２、またはγ４重鎖を含むＡＢＰを精製するために使用され得る（Ｌｉｎｄｍａｒｋら， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｍｅｔｈ．， １９８３， ６２：１−１３（その全体において参考として援用される））。プロテインＧは、全てのマウスアイソタイプおよびヒトγ３に有用である（Ｇｕｓｓら， ＥＭＢＯ Ｊ．， １９８６， ５：１５６７−１５７５（その全体において参考として援用される））。
その親和性リガンドが結合されるマトリクスは、最も頻繁にはアガロースであるが、他のマトリクスも利用可能である。機械的に安定なマトリクス（例えば、孔制御ガラスまたはポリ（スチレンジビニル）ベンゼン）は、アガロースで達成され得るより速い流速および短い処理時間を可能にする。そのＡＢＰがＣＨ３ドメインを含む場合、ＢａｋｅｒＢｏｎｄ ＡＢＸ（登録商標）樹脂が精製に有用である。
タンパク質精製の他の技術（例えば、イオン交換カラムでの分画、エタノール沈殿、逆相ＨＰＬＣ、シリカ上でのクロマトグラフィー、ヘパリンＳｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）上でのクロマトグラフィー、クロマトフォーカシング、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、および硫酸アンモニウム沈殿）がまた利用可能であり、当業者によって適用され得る。
任意の予備的精製工程（複数可）の後に、その目的のＡＢＰおよび汚染物質を含む混合物は、一般には低い塩濃度（例えば、約０〜約０．２５Ｍ 塩）で行われる、約２．５〜約４．５の間のｐＨの溶離緩衝液を使用する低ｐＨ疎水性相互作用クロマトグラフィーに供され得る。
アッセイ
当該分野で公知の種々のアッセイが、本明細書で提供されるＧＩＴＲ ＡＢＰを同定および特徴づけるために使用され得る。
１．１８．結合、競合およびエピトープマッピングアッセイ
本明細書で提供されるＡＢＰの特異的抗原結合活性は、本開示の他の箇所で記載されるように、任意の適切な方法によって（ＳＰＲ、ＢＬＩ、およびＲＩＡを使用することが挙げられる）評価され得る。さらに、抗原結合活性は、ＥＬＩＳＡアッセイおよびウェスタンブロットアッセイによって評価され得る。
２種のＡＢＰの間の、またはＡＢＰと別の分子（例えば、ＧＩＴＲＬ）との間の競合を測定するためのアッセイは、本開示の他の箇所で、および例えば、Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ， Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ ｃｈ．１４， １９８８， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ， Ｎ．Ｙ（その全体において参考として援用される）に記載される。
本明細書で提供されるＡＢＰが結合するエピトープをマッピングするためのアッセイは、例えば、Ｍｏｒｒｉｓ 「Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ」， ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｖｏｌ． ６６， １９９６， Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ， Ｔｏｔｏｗａ， Ｎ．Ｊ．（その全体において参考として援用される）に記載される。いくつかの実施形態において、そのエピトープは、ペプチド競合によって決定される。いくつかの実施形態において、そのエピトープは、質量分析法によって決定される。いくつかの実施形態において、そのエピトープは、結晶学によって決定される。
１．１９．ＧＩＴＲアゴニズムアッセイ
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、ＧＩＴＲに対するアゴニスト活性を有するＡＢＰを同定するかまたは特徴づけるためにスクリーニングされる。任意の適切なアッセイは、このようなＡＢＰを同定するかまたは特徴づけるために使用され得る。いくつかの局面において、そのアッセイは、エフェクターＴ細胞と本明細書で提供されるＡＢＰとを接触させた後に、そのエフェクターＴ細胞によって分泌されるサイトカインの量を測定する。いくつかの局面において、そのサイトカインは、ＩＬ−２Ｒα、ＩＬ−２、ＩＬ−８、ＩＦＮγ、およびこれらの組み合わせから選択される。いくつかの局面において、そのサイトカインは、ｓＣＤ４０Ｌ、ＶＥＧＦ、ＴＮＦ−β、ＴＮＦ−α、ＴＧＦ−α、ＲＡＮＴＥＳ、ＰＤＧＦ−ＡＢ／ＢＢ、ＰＤＧＦ−ＡＡ、ＭＩＰ−１β、ＭＩＰ−１α、ＭＤＣ（ＣＣＬ２２）、ＭＣＰ−３、ＭＣＰ−１、ＩＰ−１０、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１５、ＩＬ−１３、ＩＬ−１２（ｐ７０）、ＩＬ−１２（ｐ４０）、ＩＬ−１０、ＩＬ−９、ＩＬ−８、ＩＬ−７、ＩＬ−６、ＩＬ−５、ＩＬ−４、ＩＬ−３、ＩＬ−２、ＩＬ−２Ｒα、ＩＬ−１ＲＡ、ＩＬ−１β、ＩＬ−１α、ＩＦＮγ、ＩＦＮα２、ＧＲＯ、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、フラクタルカイン、Ｆｌｔ−３リガンド、ＦＧＦ−２、エオタキシン、ＥＧＦ、およびこれらの組み合わせから選択される。
いくつかの実施形態において、そのエフェクター細胞は、ＣＤ３のアゴニストで共刺激されて、そのエフェクター細胞によるサイトカインの分泌を促進する。いくつかの局面において、そのＣＤ３アゴニストは、最大未満のレベルで提供される。
いくつかの実施形態において、機能アッセイが使用される（例えば、実施例２により詳細に記載されるＨＴ１０８０またはＪｕｒｋａｔ細胞ベースのアッセイ）。さらなるアッセイは、Ｗｙｚｇｏｌら， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００９； １８３：１８５１−１８６１（本明細書に参考として援用される）に記載される。
いくつかの局面において、このようなアッセイは、エフェクターＴ細胞と本明細書で提供されるＡＢＰとを接触させた後にそのエフェクターＴ細胞の増殖を測定し得る。いくつかの局面において、そのエフェクターＴ細胞の増殖は、色素（例えば、カルボキシフルオレセインジアセテートスクシンイミジルエステル；ＣＦＳＥ）の希釈によって、トリチウムチミジン取り込みによって、ルミネッセント細胞生存性アッセイによって、または当該分野で公知の他のアッセイによって、測定される。
いくつかの局面において、このようなアッセイは、調節性Ｔ細胞と本明細書で提供されるＡＢＰとを接触させた後に、その調節性Ｔ細胞の分化、サイトカイン生成、生存性（例えば、生存（ｓｕｒｖｉｖａｌ））、増殖、または抑制活性を測定し得る。
いくつかの局面において、このようなアッセイは、ＮＫ細胞と本明細書で提供されるＡＢＰとを接触させた後に、そのＮＫ細胞の細胞傷害性活性を測定し得る。いくつかの局面において、そのＮＫ細胞の細胞傷害性活性は、標的細胞（例えば、Ｋ５６２細胞株）のＮＫ媒介性殺滅を定量する細胞傷害性アッセイを使用して測定される。Ｊａｎｇら， Ａｎｎ． Ｃｌｉｎ． Ｌａｂ． Ｓｃｉ．， ２０１２， ４２：４２−４９（その全体において参考として援用される）を参照のこと。
ＧＩＴＲアゴニズムを測定するためのさらなるアッセイは、実施例を含む本開示の他の箇所で記載され、当該分野で公知である。当業者は、ＧＩＴＲアゴニズムを評価するために適したアッセイを容易に選択し得る。
１．２０．エフェクター機能のアッセイ
本明細書で提供されるＡＢＰのエフェクター機能は、当該分野で公知の種々のインビトロアッセイおよびインビボアッセイ（Ｒａｖｅｔｃｈ ａｎｄ Ｋｉｎｅｔ， Ａｎｎｕ． Ｒｅｖ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， １９９１， ９：４５７−４９２；米国特許第５，５００，３６２号、同第５，８２１，３３７号； Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍら， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， １９８６， ８３：７０５９−７０６３； Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍら， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， １９８５， ８２：１４９９−１５０２； Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎら， Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ．， １９８７， １６６：１３５１−１３６１； Ｃｌｙｎｅｓら， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， １９９８， ９５：６５２−６５６； ＷＯ ２００６／０２９８７９； ＷＯ ２００５／１００４０２； Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏら， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｍｅｔｈｏｄｓ， １９９６， ２０２：１６３−１７１； Ｃｒａｇｇら， Ｂｌｏｏｄ， ２００３， １０１：１０４５−１０５２； Ｃｒａｇｇら Ｂｌｏｏｄ， ２００４， １０３：２７３８−２７４３；およびＰｅｔｋｏｖａら， Ｉｎｔ’ｌ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， ２００６， １８：１７５９−１７６９（これらの各々はその全体において参考として援用される）に記載されるものが挙げられる）を使用して評価され得る。
薬学的組成物
本明細書で提供されるＡＢＰは、任意の適切な薬学的組成物に製剤化され得、任意の適切な投与経路によって投与され得る。適切な投与経路としては、動脈内、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、鼻、非経口、肺、および皮下の経路が挙げられるが、これらに限定されない。
別の局面において、複数種の本明細書で提供される抗ヒトＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合フラグメントを含む薬学的組成物が提供される。例えば、その薬学的組成物は、翻訳後修飾を受けていない抗体またはその抗原結合フラグメントおよびその抗体またはその抗原結合フラグメントの翻訳後修飾から得られる抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。
１つの実施形態において、その薬学的組成物は、（１）〜（４）から選択される抗ヒトＧＩＴＲ抗体のうちの少なくとも２種を含む：（１）配列番号７からなる２個の重鎖および配列番号８からなる４個の軽鎖を含む抗ヒトＧＩＴＲ抗体；（２）配列番号７からなり、ここでその１位のＱは、ピログルタミン酸に改変される２個の重鎖、および配列番号８からなる４個の軽鎖を含む抗ヒトＧＩＴＲ抗体；（３）配列番号７の１位のＱ〜６８６位のＧの範囲に及ぶアミノ酸配列からなる２個の重鎖および配列番号８からなる４個の軽鎖を含む抗ヒトＧＩＴＲ抗体；ならびに（４）配列番号７の１位のＱ〜６８６位のＧの範囲に及ぶアミノ酸配列からなり、ここでその１位のＱは、ピログルタミン酸に改変される２個の重鎖および配列番号８の４個の軽鎖を含む抗ヒトＧＩＴＲ抗体。
１つの実施形態において、その薬学的組成物は、配列番号７からなる２個の重鎖および配列番号８からなる４個の軽鎖を含む抗ヒトＧＩＴＲ抗体；ならびに配列番号７の１位のＱ〜６８６位のＧの範囲に及ぶアミノ酸配列からなり、ここでその１位のＱは、ピログルタミン酸に改変される２個の重鎖および配列番号８の４個の軽鎖を含む抗ヒトＧＩＴＲ抗体、ならびに薬学的に受容可能な賦形剤を含む。
その薬学的組成物は、１またはこれより多くの薬学的賦形剤を含み得る。任意の適切な薬学的賦形剤が使用され得、当業者は、適切な薬学的賦形剤を選択し得る。よって、以下で提供される薬学的賦形剤は、例証であって、限定ではないことが意図される。さらなる薬学的賦形剤としては、例えば、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ， Ｒｏｗｅら（編） 第６版．（２００９）（その全体において参考として援用される）に記載されるものが挙げられる。
いくつかの実施形態において、その薬学的組成物は、消泡剤を含む。任意の適切な消泡剤が使用され得る。いくつかの局面において、その消泡剤は、アルコール、エーテル、油、ワックス、シリコーン、界面活性剤、およびこれらの組み合わせから選択される。いくつかの局面において、その消泡剤は、ミネラルオイル、植物性油、エチレンビスステアラミド（ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｂｉｓ ｓｔｅａｒａｍｉｄｅ）、パラフィンワックス、エステルワックス、脂肪アルコールワックス、長鎖脂肪アルコール、脂肪酸石鹸、脂肪酸エステル、シリコングリコール、フルオロシリコーン、ポリエチレングリコール−ポリプロピレングリコールコポリマー、ポリジメチルシロキサン−二酸化ケイ素、エーテル、オクチルアルコール、カプリルアルコール、ソルビタントリオレエート、エチルアルコール、２−エチル−ヘキサノール、ジメチコン、オレイルアルコール、シメチコン、およびこれらの組み合わせから選択される。
いくつかの実施形態において、その薬学的組成物は、共溶媒を含む。共溶媒の例証的な例としては、エタノール、ポリ（エチレン）グリコール、ブチレングリコール、ジメチルアセトアミド、グリセリン、プロピレングリコール、およびこれらの組み合わせが挙げられる。
いくつかの実施形態において、その薬学的組成物は、バッファを含む。バッファの例証的な例としては、アセテート、ボレート、カーボネート、ラクテート、マレート、ホスフェート、シトレート、ヒドロキシド、ジエタノールアミン、モノエタノールアミン、グリシン、メチオニン、グアーガム、グルタミン酸モノナトリウム、およびこれらの組み合わせが挙げられる。
いくつかの実施形態において、その薬学的組成物は、キャリアまたは充填剤を含む。キャリアまたは充填剤の例証的な例としては、ラクトース、マルトデキストリン、マンニトール、ソルビトール、キトサン、ステアリン酸、キサンタンガム、グアーガム、およびこれらの組み合わせが挙げられる。
いくつかの実施形態において、その薬学的組成物は、界面活性剤を含む。界面活性剤の例証的な例としては、ｄ−αトコフェロール、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、セトリミド、塩化セチルピリジニウム、ドクサートナトリウム、ベヘン酸グリセリル、モノオレイン酸グリセリル、ラウリン酸、マクロゴール１５ヒドロキシステアレート、ミリスチルアルコール、リン脂質、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンステアレート、ポリオキシルグリセリド、ラウリル硫酸ナトリウム、ソルビタンエステル、ビタミンＥポリエチレン（グリコール）スクシネート、およびこれらの組み合わせが挙げられる。
いくつかの実施形態において、その薬学的組成物は、固結防止剤を含む。固結防止剤の例証的な例としては、リン酸カルシウム（三塩基性）、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、酸化マグネシウム、およびこれらの組み合わせが挙げられる。
その薬学的組成物とともに使用され得る他の賦形剤としては、例えば、アルブミン、抗酸化剤、抗細菌剤、抗真菌剤、生体吸収性ポリマー、キレート化剤、放出制御剤、希釈剤、分散化剤、溶解増強剤、乳化剤、ゲル化剤、軟膏基剤、浸透増強剤、保存剤、可溶化剤、溶媒、安定化剤、糖、およびこれらの組み合わせが挙げられる。これら剤の各々の具体例は、例えば、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ， Ｒｏｗｅら（編） 第６版．（２００９）， Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ（その全体において参考として援用される）に記載される。
いくつかの実施形態において、その薬学的組成物は、溶媒を含む。いくつかの局面において、その溶媒は、食塩溶液（例えば、滅菌等張性食塩溶液）またはデキストロース溶液である。いくつかの局面において、その溶媒は、注射用水である。
いくつかの実施形態において、その薬学的組成物は、粒状形態（例えば、微粒子またはナノ粒子）にあり得る。微粒子およびナノ粒子は、任意の適切な材料（例えば、ポリマーまたは脂質）から形成され得る。いくつかの局面において、その微粒子またはナノ粒子は、ミセル、リポソーム、またはポリマーソームである。
水は、いくらかのＡＢＰの分解を促進し得るので、ＡＢＰを含む無水の薬学的組成物および剤形が本明細書でさらに提供される。
本明細書で提供される無水の薬学的組成物および剤形は、無水または低水分含有の成分および低水分または低湿度条件を使用して調製され得る。ラクトースおよび一級アミンまたは二級アミンを含む少なくとも１つの活性成分を含む薬学的組成物および剤形は、製造、パッケージング、および／または貯蔵の間の水分および／または湿気との実質的な接触が予測される場合には、無水であり得る。
無水薬学的組成物は、その無水の性質が維持されるように、調製および貯蔵されるべきである。よって、無水組成物は、それらが適切な処方キット（formulary kit）に含まれ得るように、水への曝露を防止することが公知の材料を使用してパッケージングされ得る。適切なパッケージングの例としては、気密シールホイル、プラスチック、単位用量容器（例えば、バイアル）、ブリスターパック、およびストリップパックが挙げられるが、これらに限定されない。
１．２１．非経口剤形
ある種の実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、非経口剤形として製剤化される。非経口剤形は、種々の経路（皮下、静脈内（注入およびボーラス注射が挙げられる）、筋肉内、および動脈内が挙げられるが、これらに限定されない）によって被験体に投与され得る。それらの投与は、代表的には汚染物質に対する被験体の天然の防御を回避するので、非経口剤形は代表的には、無菌であるか、または被験体への投与の前に滅菌され得る。非経口剤形の例としては、すぐに注射できる液剤、薬学的に受容可能な注射用ビヒクルにすぐに溶解もしくは懸濁できる乾燥（例えば、凍結乾燥）製品、すぐに注射できる懸濁剤、およびエマルジョンが挙げられるが、これらに限定されない。
非経口剤形を提供するために使用され得る適切なビヒクルは、当業者に周知である。例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：注射用水ＵＳＰ；水性ビヒクル（例えば、塩化ナトリウム注射用、リンゲル注射用、デキストロース注射用、デキストロースおよび塩化ナトリウム注射用、および乳酸添加リンゲル注射用が挙げられるが、これらに限定されない）；水混和性ビヒクル（例えば、エチルアルコール、ポリエチレングリコール、およびポリプロピレングルコールが挙げられるが、これらに限定されない）；および非水性ビヒクル（例えば、コーン油、綿実油、ラッカセイ油、ゴマ油、オレイン酸エチル、ミリスチン酸イソプロピル、および安息香酸ベンジルが挙げられるが、これらに限定されない）。
本明細書で開示されるＡＢＰのうちの１またはこれより多くの溶解性を増加させる賦形剤はまた、非経口剤形に組み込まれ得る。
いくつかの実施形態において、その非経口剤形は凍結乾燥される。例示的な凍結乾燥製剤は、例えば、米国特許第６，２６７，９５８号および同第６，１７１，５８６号；ならびにＷＯ ２００６／０４４９０８（これらの各々はその全体において参考として援用される）に記載される。
投与量および単位剤形
ヒト治療剤において、医師は、防止的処置または治癒的処置に従って、ならびに年齢、体重、状態および処置されるべき被験体に特異的な他の因子に従って、その医師が最も適切と考える薬量（posology）を決定する。
ある種の実施形態において、本明細書で提供される組成物は、薬学的組成物または単一の単位剤形である。本明細書で提供される薬学的組成物および単一の単位剤形は、予防上または治療上有効な量の１またはこれより多くの予防的または治療的ＡＢＰを含む。
障害または１もしくはこれより多くのその症状の防止または処置において有効であるそのＡＢＰまたは組成物の量は、その疾患または状態の性質および重篤度、ならびにそのＡＢＰが投与される経路とともに変動する。その頻度および投与量はまた、投与されるその具体的な治療（例えば、治療剤または予防剤）、その障害、疾患、もしくは状態の重篤度、投与経路、ならびにその被験体の年齢、体重、応答、および過去の病歴に依存して、各被験体に対して特異的な因子に従って変動する。有効用量は、インビトロまたは動物モデル試験系から得られる用量応答曲線から外挿され得る。
ある種の実施形態において、組成物の例示的用量は、被験体の１キログラムまたはサンプル重量あたりのＡＢＰのミリグラム量またはマイクログラム量（例えば、約１００μｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇ、または約１００μｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ）を含む。ある種の実施形態において、被験体における障害または１もしくはこれより多くのその症状を防止する、処置する、管理する、または改善するために投与される本明細書で提供されるＡＢＰの投与量は、該ＡＢＰの重量に基づいて、被験体の体重について０．１ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、または４０ｍｇ／ｋｇまたはこれより多い。
その用量は、適切なスケジュール（例えば、毎週、２週間ごとに１回、３週間ごとに１回、または４週間ごとに１回）に従って投与され得る。いくつかの実施形態において、３週間または４週間ごとに１回投与されるべき抗体は、１週間または２週間ごとに投与される抗体より高い用量で投与され得る。いくつかの実施形態において、負荷用量が投与され、これはその後に投与される維持用量より高い。いくらかの場合には、当業者に明らかであるように、本明細書で開示される範囲外のＡＢＰの投与量を使用することが必要な場合がある。さらに、臨床医または処置する医師が、被験体の応答に関連して治療を中断する、加減する（adjust）、または終了する方法および時期を知ることが注記される。
当業者によって容易に知られるように、異なる治療上有効な量が異なる疾患および状態に適用可能であり得る。同様に、このような障害を防止する、管理する、処置するまたは改善するために十分であるが、本明細書で提供されるＡＢＰと関連する有害作用を引き起こすには不十分であるか、または低減するために十分である量はまた、本明細書で提供される投与量および投与頻度スケジュールによって包含される。さらに、被験体が本明細書で提供される組成物の複数の投与量を投与される場合、その投与量の全てが同じである必要はない。例えば、その被験体に投与される投与量は、その組成物の予防的または治療的効果を改善するために増加してよいか、またはそれは、特定の被験体が経験している１またはこれより多くの副作用を低減するために減少させてよい。
ある種の実施形態において、処置または防止は、本明細書で提供されるＡＢＰまたは組成物の１またはこれより多くの負荷用量で開始され、１またはこれより多くの維持用量がこれに続き得る。
ある種の実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰまたは組成物の用量は、その被験体の血液または血清中のＡＢＰの定常状態濃度を達成するために投与され得る。その定常状態濃度は、当業者に利用可能な技術に従う測定によって決定され得るか、または被験体の身体的特徴（例えば、身長、体重および年齢）に基づき得る。
ある種の実施形態において、同じ組成物の投与が反復され得、その投与は、少なくとも１日間、２日間、３日間、５日間、１０日間、１５日間、３０日間、４５日間、２ヶ月間、７５日間、３ヶ月間、または６ヶ月間隔てられ得る。
本開示の他の箇所でより詳細に考察されるように、本明細書で提供されるＡＢＰは必要に応じて、疾患または障害を防止または処置するために有用な１またはこれより多くのさらなる薬剤とともに投与され得る。このようなさらなる薬剤の有効量は、その製剤中に存在するＡＢＰの量、障害または処置のタイプ、および当該分野で公知または本明細書で記載される他の因子に依存し得る。
治療適用
治療適用に関して、本発明のＡＢＰは、薬学的に受容可能な剤形（例えば、当該分野で公知のものおよび上記で考察されるものなど）において、哺乳動物（一般にはヒト）に投与される。例えば、本発明のＡＢＰは、ボーラスとしてまたはある期間にわたる連続注入によって静脈内に、筋肉内、腹腔内、脳脊髄内、皮下、関節内、滑液包内、髄腔内（intrathecal）、または腫瘍内の経路によって、ヒトに投与され得る。そのＡＢＰはまた、局所的および全身的な治療効果を発揮するために、腫瘍周辺の、病変内の、または病変周辺の経路によって適切に投与される。腹腔内経路は、例えば、卵巣腫瘍の処置において特に有用であり得る。
本明細書で提供されるＡＢＰは、ＧＩＴＲが関わる任意の疾患または状態の処置に有用であり得る。いくつかの実施形態において、その疾患または状態は、抗ＧＩＴＲ ＡＢＰでの処置から利益を受け得る疾患または状態である。いくつかの実施形態において、その疾患または状態は腫瘍である。いくつかの実施形態において、その疾患または状態は細胞増殖性障害である。いくつかの実施形態において、その疾患または状態はがんである。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、医薬としての使用のために提供される。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、医薬の製造または調製における使用のために提供される。いくつかの実施形態において、その医薬は、抗ＧＩＴＲ ＡＢＰから利益を受け得る疾患または状態の処置のためのものである。いくつかの実施形態において、その疾患または状態は腫瘍である。いくつかの実施形態において、その疾患または状態は細胞増殖性障害である。いくつかの実施形態において、その疾患または状態はがんである。
任意の適切ながんは、本明細書で提供されるＡＢＰで処置され得る。例証的な適切ながんとしては、例えば、以下が挙げられる：急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、副腎皮質癌、肛門がん、虫垂がん、星状細胞腫、基底細胞癌、脳腫瘍、胆管がん、膀胱がん、骨がん、乳がん、気管支腫瘍、原発不明の癌、心臓腫瘍、子宮頚がん、脊索腫、結腸がん、結腸直腸がん、頭蓋咽頭腫、腺管癌、胎児性腫瘍、子宮内膜がん、上衣腫、食道がん、鼻腔神経芽細胞腫、線維性組織球腫、ユーイング肉腫、眼のがん、胚細胞腫瘍、胆嚢がん、胃がん、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍、妊娠性絨毛疾患、神経膠腫、頭頚部がん、肝細胞がん、組織球症、ホジキンリンパ腫、下咽頭がん、眼内黒色腫、膵島細胞腫瘍、カポジ肉腫、腎臓がん、ランゲルハンス細胞組織球症、喉頭がん、口唇口腔がん、肝臓がん、上皮内小葉癌、肺がん、マクログロブリン血症、悪性線維性組織球腫、黒色腫、メルケル細胞癌、中皮腫、原発不明転移性扁平上皮性頸部がん、ＮＵＴ遺伝子が関わる正中線癌、口腔がん、多発性内分泌腫瘍症候群、多発性骨髄腫、菌状息肉腫、骨髄異形成症候群、骨髄異形成／骨髄増殖性腫瘍、鼻腔および副鼻腔がん（ｎａｓａｌ ｃａｖｉｔｙ ａｎｄ ｐａｒ ｎａｓａｌ ｓｉｎｕｓ ｃａｎｃｅｒ）、鼻咽頭がん、神経芽細胞腫、非小細胞肺がん、口腔咽頭がん、骨肉腫、卵巣がん、膵臓がん、乳頭腫症、パラガングリオーマ、副甲状腺がん、陰茎がん、咽頭がん、褐色細胞腫、下垂体腫瘍、胸膜肺芽腫、中枢神経系原発リンパ腫、前立腺がん、直腸がん、腎細胞がん、腎盂尿管がん、網膜芽腫、ラブドイド腫瘍、唾液腺がん、セザリー症候群、皮膚がん、小細胞肺がん、小腸がん、軟部組織肉腫、脊髄腫瘍、胃がん、Ｔ細胞リンパ腫、奇形腫様腫瘍、精巣がん、咽喉がん、胸腺腫および胸腺癌、甲状腺がん、尿道がん、子宮がん、膣がん、外陰がん、およびウィルムス腫瘍。
いくつかの実施形態において、有効量の本明細書で提供されるＡＢＰを、疾患または状態を処置する必要性のある被験体に投与することによる、その被験体において疾患または状態を処置するための方法が本明細書で提供される。いくつかの局面において、その疾患または状態はがんである．
いくつかの実施形態において、有効量の本明細書で提供されるＡＢＰを、被験体の標的細胞においてＧＩＴＲをマルチマー化する必要性のあるその被験体に投与することによる、その被験体の標的細胞においてＧＩＴＲをマルチマー化するための方法が本明細書で提供される。
いくつかの実施形態において、有効量の本明細書で提供されるＡＢＰを、被験体の標的細胞においてＧＩＴＲをアゴナイズする必要性のあるその被験体に投与することによる、その被験体の標的細胞においてＧＩＴＲをアゴナイズするための方法が本明細書で提供される。いくつかの局面において、本明細書で提供されるＡＢＰによるＧＩＴＲのアゴニズムは、標的細胞によるＩＬ−２Ｒα、ＩＬ−２、ＩＬ−８、および／またはＩＦＮγの増加した分泌を生じる。
いくつかの実施形態において、有効量の本明細書で提供されるＡＢＰを、被験体の標的細胞においてＮＦ−κＢ活性を調整する必要性のあるその被験体に投与することによる、その被験体の標的細胞においてＮＦ−κＢ活性を調整するための方法が本明細書で提供される。
いくつかの実施形態において、有効量の本明細書で提供されるＡＢＰを、被験体の標的細胞においてＩκＢの分解を調整する必要性のあるその被験体に投与することによる、その被験体の標的細胞においてＩκＢの分解を調整するための方法が本明細書で提供される。
いくつかの実施形態において、有効量の本明細書で提供されるＡＢＰを、被験体の標的細胞においてＭＡＰＫ経路を活性化する必要性のあるその被験体に投与することによる、その被験体の標的細胞においてＭＡＰＫ経路を活性化するための方法が本明細書で提供される。いくつかの局面において、本明細書で提供されるＡＢＰによって活性化されるＭＡＰＫ経路の構成要素は、ｐ３８、ＪＮＫ、およびＥＲＫのうちの１またはこれより多くを含む。
いくつかの実施形態において、有効量の本明細書で提供されるＡＢＰを、エフェクターＴ細胞の増殖、生存、および／または機能を増加させる必要性のある被験体に投与することによる、その被験体においてエフェクターＴ細胞の増殖、生存、および／または機能を増大させるための方法が本明細書で提供される。いくつかの局面において、そのエフェクターＴ細胞はＣＤ４＋エフェクターＴ細胞である。いくつかの局面において、そのエフェクターＴ細胞はＣＤ８＋エフェクターＴ細胞である。
いくつかの実施形態において、有効量の本明細書で提供されるＡＢＰを、調節性Ｔ細胞によるエフェクターＴ細胞の特性を排除する必要性のある被験体に投与することによる、その被験体において調節性Ｔ細胞によるエフェクターＴ細胞の特性を排除するための方法が本明細書で提供される。いくつかの局面において、その調節性Ｔ細胞はＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋調節性Ｔ細胞である。いくつかの局面において、その調節性Ｔ細胞はＣＤ８＋ＣＤ２５＋調節性Ｔ細胞である。
いくつかの実施形態において、有効量の本明細書で提供されるＡＢＰを、調節性Ｔ細胞の出現または分布の頻度を変更する必要性のある被験体に投与することによる、その被験体において調節性Ｔ細胞の出現または分布の頻度（the frequency of occurrence or distribution or regulatory T cells）を変更するための方法が本明細書で提供される。いくつかの局面において、調節性Ｔ細胞の頻度は減少される。いくつかの局面において、調節性Ｔ細胞の頻度は、特定の組織において低減される。いくつかの局面において、調節性Ｔ細胞の腫瘍内蓄積は減少され、エフェクターＴ細胞 対 調節性Ｔ細胞のより都合の良い比を生じ、ＣＤ８＋ Ｔ細胞活性を増強する。
いくつかの実施形態において、有効量の本明細書で提供されるＡＢＰを、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の活性を増加させる必要性のある被験体に投与することによる、その被験体においてＮＫ細胞の活性を増加させるための方法が本明細書で提供される。
いくつかの実施形態において、有効量の本明細書で提供されるＡＢＰを、樹状細胞の活性を増加させる必要性のある被験体に投与することによる、その被験体において樹状細胞の活性を増加させるための方法が本明細書で提供される。
いくつかの実施形態において、有効量の本明細書で提供されるＡＢＰを、Ｂ細胞の活性を増加させる必要性のある被験体に投与することによる、その被験体においてＢ細胞の活性を増加させるための方法が本明細書で提供される。
いくつかの実施形態において、有効量の本明細書で提供されるＡＢＰを、免疫応答を増強する必要性のある被験体に投与することによる、その被験体において免疫応答を増強するための方法が本明細書で提供される。
いくつかの実施形態において、有効量の本明細書で提供されるＡＢＰを、腫瘍の発現を遅延させる必要性のある被験体に投与することによる、その被験体において腫瘍の発現を遅延させるための方法が本明細書で提供される。
いくつかの実施形態において、有効量の本明細書で提供されるＡＢＰを、がんの発現を遅延させる必要性のある被験体に投与することによる、その被験体においてがんの発現を遅延させるための方法が本明細書で提供される。
いくつかの実施形態において、有効量の本明細書で提供されるＡＢＰを、腫瘍のサイズを縮小する必要性のある被験体に投与することによる、その被験体において腫瘍のサイズを縮小するための方法が本明細書で提供される。
いくつかの実施形態において、有効量の本明細書で提供されるＡＢＰを、転移の数を低減する必要性のある被験体に投与することによる、その被験体において転移の数を低減するための方法が本明細書で提供される。
併用療法
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、少なくとも１つのさらなる治療剤とともに投与される。任意の適切なさらなる治療剤は、本明細書で提供されるＡＢＰとともに投与され得る。いくつかの局面において、そのさらなる治療剤は、放射線、細胞傷害性薬剤、化学療法剤、細胞増殖抑制剤、抗ホルモン剤、ＥＧＦＲ阻害剤、免疫刺激剤、抗血管新生剤、およびこれらの組み合わせから選択される。
いくつかの実施形態において、そのさらなる治療剤は免疫刺激剤を含む。
いくつかの実施形態において、その免疫刺激剤は、免疫細胞の阻害性レセプターまたはそのリガンドのシグナル伝達を遮断する薬剤である。いくつかの局面において、その阻害性レセプターまたはリガンドは、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＮＲＰ−１、ＬＡＧ−３、Ｔｉｍ３、ＴＩＧＩＴ、ニューリチン、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、およびこれらの組み合わせから選択される。いくつかの局面において、その薬剤は、ペンブロリズマブ（抗ＰＤ−１）、ニボルマブ（抗ＰＤ−１）、アテゾリズマブ（抗ＰＤ−Ｌ１）、イピリムマブ（抗ＣＴＬＡ−４）、およびこれらの組み合わせから選択される。
いくつかの実施形態において、その免疫刺激剤は、免疫細胞の共刺激性レセプターのアゴニストである。いくつかの局面において、その共刺激レセプターは、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ、またはＣＤ４０から選択される。いくつかの実施形態において、そのアゴニストは抗体である。
いくつかの実施形態において、その免疫刺激剤はサイトカインである。いくつかの局面において、そのサイトカインは、ＩＬ−２、ＩＬ−５、ＩＬ−７、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、およびこれらの組み合わせから選択される。
いくつかの実施形態において、その免疫刺激剤は腫瘍溶解性ウイルスである。いくつかの局面において、その腫瘍溶解性ウイルスは、単純ヘルペスウイルス、水疱性口内炎ウイルス、アデノウイルス、ニューカッスル病ウイルス、ワクシニアウイルス、およびマラバウイルスから選択される。
いくつかの実施形態において、その免疫刺激剤は、キメラ抗原レセプターを有するＴ細胞（ＣＡＲ−Ｔ細胞）である。いくつかの実施形態において、その免疫刺激剤は、二重特異的または多重特異的なＴ細胞指向性抗体である。いくつかの実施形態において、その免疫刺激剤は、抗ＴＧＦ−β抗体である。いくつかの実施形態において、その免疫刺激剤は、ＴＧＦ−βトラップである。
いくつかの実施形態において、そのさらなる治療剤は、腫瘍抗原に対するワクチンである。任意の適切な抗原は、その抗原が本明細書で提供される方法によって処置される腫瘍に存在することを条件として、そのワクチンによって標的化され得る。いくつかの局面において、その腫瘍抗原は、正常組織中のその発現レベルとの比較において過剰発現される腫瘍抗原である。いくつかの局面において、その腫瘍抗原は、がん精巣抗原、分化抗原、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＲＴ、およびこれらの組み合わせから選択される。
さらなる治療剤のさらなる例としては、タキサン（例えば、パクリタキセルまたはドセタキセル）；白金薬剤（例えば、カルボプラチン、オキサリプラチン、および／またはシスプラチン）；トポイソメラーゼ阻害剤（例えば、イリノテカン、トポテカン、エトポシド、および／またはミトキサントロン）；フォリン酸（例えば、ロイコボリン）；またはヌクレオシド代謝阻害剤（例えば、フルオロウラシル、カペシタビン、および／またはゲムシタビン）が挙げられる。いくつかの実施形態において、そのさらなる治療剤は、フォリン酸、５−フルオロウラシル、および／またはオキサリプラチンである。いくつかの実施形態において、そのさらなる治療剤は、５−フルオロウラシルおよびイリノテカンである。いくつかの実施形態において、そのさらなる治療剤は、タキサンおよび白金薬剤である。いくつかの実施形態において、そのさらなる治療剤は、パクリタキセルおよびカルボプラチンである。いくつかの実施形態において、そのさらなる治療剤は、ペメトレキセート（pemetrexate）である。いくつかの実施形態において、そのさらなる治療剤は、標的化治療剤（例えば、ＥＧＦＲ、ＲＡＦまたはＭＥＫ標的化薬剤）である。
そのさらなる治療剤は、任意の適切な手段によって投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰおよびそのさらなる治療剤は、同じ薬学的組成物の中に含まれる。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰおよびそのさらなる治療剤は、異なる薬学的組成物の中に含まれる。
本明細書で提供されるＡＢＰおよびそのさらなる治療剤が異なる薬学的組成物の中に含まれる実施形態において、そのＡＢＰの投与は、そのさらなる治療剤の投与の前、同時、および／または後に行い得る。いくつかの局面において、本明細書で提供されるＡＢＰおよびそのさらなる治療剤の投与は、互いの約１ヶ月間以内に行う。いくつかの局面において、本明細書で提供されるＡＢＰおよびそのさらなる治療剤の投与は、互いの約１週間以内に行う。いくつかの局面において、本明細書で提供されるＡＢＰおよびそのさらなる治療剤の投与は、互いの約１日間以内に行う。いくつかの局面において、本明細書で提供されるＡＢＰおよびそのさらなる治療剤の投与は、互いの約１２時間以内に行う。いくつかの局面において、本明細書で提供されるＡＢＰおよびそのさらなる治療剤の投与は、互いの約１時間以内に行う。
診断法
被験体に由来する細胞におけるＧＩＴＲの存在を検出するための方法が提供される。このような方法は、例えば、本明細書で提供されるＡＢＰでの処置に対する応答性を推定および評価するために使用され得る。
いくつかの実施形態において、血液サンプルが被験体から得られ、ＧＩＴＲを発現する細胞の割合（fraction）が決定される。いくつかの局面において、このような細胞によって発現されるＧＩＴＲの相対的な量が決定される。ＧＩＴＲを発現する細胞の割合およびこのような細胞によって発現されるＧＩＴＲの相対的な量は、任意の適切な方法によって決定され得る。いくつかの実施形態において、フローサイトメトリーがこのような測定を行うために使用される。いくつかの実施形態において、蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）は、このような測定を行うために使用される。末梢血におけるＧＩＴＲの発現を評価するための方法については、Ｌｉら， Ｊ． Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ， ２００３， ２１：８３−９２を参照のこと。
キット
本明細書で提供されるＡＢＰを含むキットも提供される。そのキットは、本明細書で記載されるように、疾患または障害の処置、防止、および／または診断のために使用され得る。
いくつかの実施形態において、そのキットは、容器およびその容器上またはその容器と関連付けられたラベルまたは添付文書を含む。適切な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、およびＩＶ液剤バッグが挙げられる。その容器は、種々の材料（例えば、ガラスまたはプラスチック）から形成され得る。その容器は、組成物であって、単独で、または別の組成物と組み合わせられる場合に、疾患または障害の処置、防止、および／または診断に有効である組成物を保持する。その容器は、無菌アクセスポートを有し得る。例えば、その容器が静脈内液剤バッグまたはバイアルである場合、その容器は、針によって穿刺され得るポートを有し得る。その組成物中の少なくとも１つの活性薬剤は、本明細書で提供されるＡＢＰである。そのラベルまたは添付文書は、その組成物が選択された状態を処置するために使用されることを示す。
いくつかの実施形態において、そのキットは、（ａ）本明細書で提供されるＡＢＰを含む第１の組成物をその中に含む第１の容器；および（ｂ）さらなる治療剤を含む第２の組成物をその中に含む第２の容器を含む。本発明のこの実施形態におけるキットは、その組成物が特定の状態を処置するために使用され得ることを示す添付文書をさらに含み得る。
代わりに、またはさらに、そのキットは、薬学的に受容可能な賦形剤を含む第２の（または第３の）容器をさらに含み得る。いくつかの局面において、その賦形剤はバッファである。そのキットは、商業的およびユーザーの観点から望ましい他の材料（フィルタ、針、およびシリンジが挙げられる）をさらに含み得る。
他の例証的実施形態
以下で提供される実施形態は限定ではなく、本開示全体を通じて記載されるものに加えて、本発明のある種の実施形態および局面の例証のために提供される。
実施形態１： ヒトＧＩＴＲおよび／またはヒトＧＩＴＲ複合体に特異的に結合し、かつ以下のうちの少なくとも１つが可能であるＡＢＰ：ａ）ＧＩＴＲへの結合に関してＧＩＴＲＬと交差競合する；ｂ）ヒト細胞へと内部移行し得る；ｃ）エフェクターＴ細胞の抑制を阻害する；ｄ）調節性Ｔ細胞によるエフェクターＴ細胞の阻害を阻害する；ｅ）組織中または循環中の調節性Ｔ細胞の数を減少させる；ｆ）エフェクターＴ細胞を活性化する；ｇ）ＧＩＴＲ複合体へとＧＩＴＲを会合させる；ｈ）ヒトＧＩＴＲおよび／またはＧＩＴＲ複合体の活性を調整する。
実施形態２： 上記ＡＢＰは、以下の特徴のうちの１またはこれより多くを有する、実施形態１に記載のＡＢＰ：ａ）モノクローナル抗体である；ｂ）ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体である；ｃ）多重特異的または多価抗体（例えば、四価抗体）である；ｄ）Ｎ末端またはＣ末端において少なくとも１つのＦａｂを含む；ｅ）ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４タイプのものである；ｆ）抗原結合抗体フラグメントである；ｇ）Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’ フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、またはＦｖフラグメントである；ｈ）二重特異的抗体、ダイアボディ、１本鎖抗体、単一ドメイン抗体、ＶＨドメイン抗体、またはナノボディである。
実施形態３： 上記ＡＢＰは、以下の特徴のうちの１またはこれより多くを有する、実施形態１に記載のＡＢＰ：ａ）配列番号１〜２のヒトＧＩＴＲポリペプチドもしくはそのバリアントに結合するか、または別の方法で、本明細書で提供されるように約２０ｎＭ未満のＫＤで結合する；あるいはｂ）配列番号３のカニクイザルＧＩＴＲポリペプチドもしくはそのバリアントに結合するか、または別の方法で、本明細書で提供されるように約２０0ｎＭ未満のＫＤで結合する。
実施形態４： ヒトＧＩＴＲ上の第１の抗体認識ドメインに特異的に結合する第１の抗原結合ドメインおよびヒトＧＩＴＲ上の第２の抗体認識ドメインに特異的に結合する第２の抗原結合ドメインを含み、ここで上記第１の抗体認識ドメインおよび上記第２の抗体認識ドメインは同一ではない、実施形態１に記載のＡＢＰ。
実施形態５： ＤＶＤ−ＩｇＴＭ分子、ＢｉＴｅ（登録商標）分子、ＤＡＲＴＴＭ分子、ＤｕｏＢｏｄｙ（登録商標）分子、ｓｃＦｖ／ダイアボディ−ＩｇＧ分子、クロスオーバー多重特異的分子、２−ｉｎ−１二重特異的分子、ｋｎｏｂ−ｉｎ−ｈｏｌｅ多重特異的分子、Ｆａｂ＋ＩｇＧ分子、ＣｏｖＸ−Ｂｏｄｙ分子、ａｆｆｉｂｏｄｙ分子、ｓｃＦｖ／ダイアボディ−ＣＨ２／ＣＨ３二重特異的分子、ＩｇＧ−非Ｉｇタンパク質足場ベースの多重特異的分子、Ｆｙｎｏｍｅｒ（登録商標）分子、ＦｃａｂＴＭ分子、ＴａｎｄＡｂ（登録商標）、ＺｙｂｏｄｙＴＭ、および正常ヒトタンパク質様ヒト血清アルブミン−二重特異的分子に連結されたｓｃＦＶ／ダイアボディからなる群より選択される形式にある二重特異的結合タンパク質を含む、実施形態４に記載のＡＢＰ。
実施形態６： 上記第１の抗原結合ドメインは、約２０ｎＭ未満のＫＤを有しかつヒトＧＩＴＲをアゴナイズし得、上記第２の抗原結合ドメインは、約１００ｎＭ未満のＫＤを有する、実施形態４に記載のＡＢＰ。
実施形態７： ヒトＧＩＴＲへの結合に関して、参照ＡＢＰと競合するかまたは競合し得るＡＢＰであって、ここで上記参照ＡＢＰは、実施形態１に記載のＡＢＰであるＡＢＰ。
実施形態８： 上記ＡＢＰおよび上記参照抗体は、ヒトＧＩＴＲへの結合に関して、交差競合するかまたは交差競合し得る、実施形態７に記載のＡＢＰ。
実施形態９： ヒト重鎖定常領域またはそのフラグメントもしくはバリアントを含む重鎖定常領域を含み、ここで上記定常領域バリアントは、２０個までの改変されたアミノ酸置換を含み、０〜２０個までの改変されたアミノ酸置換は保存的アミノ酸置換である、実施形態１に記載のＡＢＰ。
実施形態１０： ヒトＧＩＴＲＬへの結合に関して、ＧＩＴＲタンパク質と競合するかまたは競合し得る、実施形態１に記載のＡＢＰ。
実施形態１１： リガンド非依存性様式でＧＩＴＲシグナル伝達を活性化し得る、実施形態１に記載のＡＢＰ。
実施形態１２： ＧＩＴＲおよびＧＩＴＲＬのリガンド依存性結合を増強し得る、実施形態１に記載のＡＢＰ。
実施形態１３： 薬学的に受容可能なキャリア中に実施形態１〜１２のいずれか１つに記載のＡＢＰを含む、薬学的組成物。
実施形態１４： ヒトＧＩＴＲ上の第１の抗体認識ドメインに特異的に結合する第１の抗原結合ドメインおよびヒトＧＩＴＲ上の第２の抗体認識ドメインに特異的に結合する第２の抗原結合ドメインを含む二重特異的抗体であって、ここで上記第１の抗体認識ドメインおよび上記第２の抗体認識ドメインは同一ではない、二重特異的抗体。
実施形態１５： 上記第１の抗体認識ドメインおよび上記第２の抗体認識ドメインは、ヒトＧＩＴＲの細胞外ドメインに存在する、実施形態１４に記載の二重特異的抗体。
実施形態１６： 上記第１の抗体認識ドメインおよび上記第２の抗体認識ドメインは、少なくとも２つのヒトＧＩＴＲタンパク質を機能的複合体へと会合させ得る、実施形態１４に記載の二重特異的抗体。
実施形態１７：
ヒトＧＩＴＲタンパク質または少なくとも２つのＧＩＴＲタンパク質を含むヒトＧＩＴＲ複合体上の第１の抗体認識ドメインに特異的に結合する第１の抗原結合ドメインを含み、かつ以下のうちの少なくとも１つが可能である複合体化ＡＢＰ：ａ）ＧＩＴＲへの結合に関して、ＧＩＴＲＬと交差競合する；ｂ）ヒト細胞へと内部移行し得る；ｃ）エフェクターＴ細胞の抑制を阻害する；ｄ）調節性Ｔ細胞によるエフェクターＴ細胞の阻害を阻害する；ｅ）組織中または循環中の調節性Ｔ細胞の数を減少させる；ｆ）エフェクターＴ細胞を活性化する；ｇ）ＧＩＴＲ複合体へとＧＩＴＲを会合させる；ｈ）ヒトＧＩＴＲおよび／またはＧＩＴＲ複合体の活性を調整する。
実施形態１８： 実施形態１〜１２のいずれか１つに記載のＡＢＰまたは実施形態１４〜１６のいずれか１つに記載の二重特異的抗体または実施形態１７に記載の複合体化ＡＢＰをコードする、単離された核酸。
実施形態１９： 実施形態１８に記載の核酸を含む、発現ベクター。
実施形態２０： 実施形態１９に記載のベクターを含む、原核生物宿主細胞または真核生物宿主細胞。
実施形態２１： 組換えタンパク質を生成するための方法であって、上記方法は、実施形態１８に記載の核酸を、原核生物宿主細胞または真核生物宿主細胞において発現させる工程、および上記細胞または上記細胞培養上清から上記タンパク質を回収する工程を包含する方法。
実施形態２２： がんまたは炎症性疾患に罹患している被験体の処置のための方法であって、上記方法は、実施形態１〜１２のいずれか１つに記載のＡＢＰまたは実施形態１４〜１６のいずれか１つに記載の二重特異的抗体または実施形態１７に記載の複合体化ＡＢＰを含む薬学的組成物を、上記被験体に投与することを包含する方法。
実施形態２３： 被験体において免疫応答を誘導または増強するための方法であって、上記方法は、実施形態１〜１２のいずれか１つに記載のＡＢＰまたは実施形態１４〜１６のいずれか１つに記載の二重特異的抗体または実施形態１７に記載の複合体化ＡＢＰを含む薬学的組成物を、上記被験体に投与することを包含し、ここで上記免疫応答は、腫瘍抗原に対して生成される方法。
実施形態２４： 上記ＡＢＰ、二重特異的抗体または複合体化ＡＢＰは、上記被験体において以下のうちの１またはこれより多くを達成するために十分な量で投与される、実施形態２３に記載の方法：ａ）調節性Ｔ細胞によるエフェクターＴ細胞の活性の抑制を低減する；ｂ）調節性Ｔ細胞のレベルを減少させる；ｃ）エフェクターＴ細胞の活性化；ｄ）エフェクターＴ細胞増殖を誘導または増強する；ｅ）腫瘍成長を阻害する；およびｆ）腫瘍退縮を誘導する。
実施形態２５： 上記がんは固形がんである、実施形態２２に記載の方法。
実施形態２６： 上記がんは血液のがんである、実施形態２２に記載の方法。
実施形態２７： 上記方法は、以下のうちの１またはこれより多くをさらに包含する、実施形態２２〜２６のいずれか１つに記載の方法：ａ）化学療法を施行すること；ｂ）放射線療法を施行すること；またはｃ）１またはこれより多くのさらなる治療剤を投与すること。
実施形態２８： 上記さらなる治療剤は免疫刺激剤を含む、実施形態２７に記載の方法。
実施形態２９： 上記免疫刺激剤は、免疫細胞の阻害性レセプターに対するアンタゴニストを含む、実施形態２７に記載の方法。
実施形態３０： 上記阻害性レセプターは、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＬＡＧ−３、Ｔｉｍ３、ＴＩＧＩＴ、ニューリチン、ＢＴＬＡもしくはＫＩＲ、またはこれらの機能的フラグメントを含む、実施形態２９に記載の方法。
実施形態３１： 上記免疫刺激剤は、免疫細胞の共刺激性レセプターのアゴニストまたはその機能的フラグメントを含む、実施形態２７に記載の方法。
実施形態３２： 上記共刺激レセプターは、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ、またはＣＤ４０を含む、実施形態３１に記載の方法。
実施形態３３： 上記免疫刺激剤はサイトカインを含む、実施形態２７に記載の方法。
実施形態３４： 上記サイトカインは、ＩＬ−２、ＩＬ−５、ＩＬ−７、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５またはＩＬ−２１を含む、実施形態２７に記載の方法。
実施形態３５： 上記免疫刺激剤は腫瘍溶解性ウイルスを含む、実施形態２７に記載の方法。
実施形態３６： 上記腫瘍溶解性ウイルスは、単純ヘルペスウイルス、水疱性口内炎ウイルス、アデノウイルス、ニューカッスル病ウイルス、ワクシニアウイルス、またはマラバウイルスを含む、実施形態３５に記載の方法。
実施形態３７： 上記免疫刺激剤は、キメラ抗原操作Ｔ細胞を含む、実施形態２７に記載の方法。
実施形態３８： 上記免疫刺激剤は、二重特異的または多重特異的なＴ細胞指向性抗体を含む、実施形態２７に記載の方法。
実施形態３９： 上記さらなる治療剤は、抗ＴＧＦ−β抗体またはＴＧＦ−βレセプタートラップを含む、実施形態２７に記載の方法。
実施形態４０： 上記薬学的組成物の投与は、Ｔ−エフェクター細胞の増殖の誘導もしくは増強、またはＴ細胞におけるＩ−κＢおよび／もしくはＮＦ−κＢの調整、またはＴ細胞におけるＧＩＴＲ活性の調整、またはＴ−エフェクター細胞におけるＴ細胞レセプター誘導性シグナル伝達、あるいはこれらの組み合わせを生じる、実施形態２２〜３９のいずれか１つに記載の方法。
実施形態４１： ＧＩＴＲＬとＧＩＴＲ複合体との相互作用を阻害し得る実施形態１〜１２のいずれか１つに記載のＡＢＰを含む試験化合物をスクリーニングするための方法であって、上記方法は、
ＧＩＴＲＬおよびＧＩＴＲ複合体を含むサンプルと上記化合物とを接触させる工程；ならびに上記サンプル中でのＧＩＴＲＬとＧＩＴＲ複合体との相互作用が、上記化合物と接触させないサンプル中でのＧＩＴＲＬとＧＩＴＲ複合体との相互作用に対して減少されるかどうかを決定し、それによって、上記化合物と接触させたサンプル中でのＧＩＴＲＬとＧＩＴＲとの相互作用の減少が、上記化合物を、ＧＩＴＲＬとＧＩＴＲ複合体との相互作用を阻害する化合物として同定する工程を包含する方法。
以下は、本発明の方法および組成物の例である。本明細書で提供される一般的記載を考慮すれば、種々の他の実施形態が実施され得ることは、理解される。
実施例１：ＧＩＴＲ抗原結合タンパク質の選択
材料および方法
抗原を、ＰｉｅｒｃｅのＥＺ−Ｌｉｎｋ（登録商標） Ｓｕｌｆｏ−ＮＨＳ−Ｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔを使用してビオチン化した。ヤギＦ（ａｂ’）２抗ヒトκ−ＦＩＴＣ（ＬＣ−ＦＩＴＣ）、ＥｘｔｒＡｖｉｄｉｎ（登録商標）−ＰＥ（ＥＡ−ＰＥ）およびＳｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ−ＡＦ６３３（ＳＡ−６３３）をそれぞれ、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｓｉｇｍａ、およびＭｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓから得、Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ ＭｉｃｒｏＢｅａｄｓ（登録商標）およびＭＡＣＳ ＬＣ分離カラムをＭｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃから購入した。ヤギ抗ヒトＩｇＧ−ＰＥ（ヒト−ＰＥ）をＳｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈから得た。
ナイーブディスカバリー（Ｎａｉｖｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）
８つのナイーブヒト合成酵母ライブラリー（各々約１０９の多様性）を、以前に記載されるように増殖させた（例えば、Ｙ． Ｘｕら， Ａｄｄｒｅｓｓｉｎｇ ｐｏｌｙｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｆｒｏｍ ａｎ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｙｅａｓｔ ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ： ａ ＦＡＣＳ−ｂａｓｅｄ， ｈｉｇｈ−ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ ａｎａｌｙｔｉｃａｌ ｔｏｏｌ． ＰＥＤＳ ２６．１０， ６６３−７０（２０１３）； ＷＯ２００９０３６３７９； ＷＯ２０１０１０５２５６；およびＷＯ２０１２００９５６８を参照のこと）。最初の２ラウンドの選択については、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ ＭＡＣＳシステムを利用する磁性ビーズソーティング技術を、以前に記載されるように行った。（例えば、Ｓｉｅｇｅｌら， Ｈｉｇｈ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ａｎｄ ｅｐｉｔｏｐｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｓｏｒｔｉｎｇ ｏｆ ａｎ ｓｃＦｖ ｙｅａｓｔ ｄｉｓｐｌａｙ ｌｉｂｒａｒｙ．” Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２８６（１−２）， １４１−１５３（２００４）を参照のこと）。簡潔には、酵母細胞（約１０１０細胞／ライブラリー）を、５ｍｌの１０ｎＭ ビオチン化Ｆｃ融合抗原とともに３０分間、３０℃において洗浄緩衝液（リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）／０．１％ ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ））中でインキュベートした。４０ｍｌ 氷冷洗浄緩衝液で１回洗浄した後、その細胞ペレットを、２０ｍＬ 洗浄緩衝液中に再懸濁し、Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ ＭｉｃｒｏＢｅａｄｓ（登録商標）（５００μｌ）をその酵母に添加し、１５分間、４℃においてインキュベートした。次に、その酵母をペレットにし、２０ｍＬ 洗浄緩衝液中に再懸濁し、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ ＬＳカラムにロードした。その２０ｍＬをロードした後、そのカラムを、３ｍｌ 洗浄緩衝液で３回洗浄した。次いで、そのカラムを磁場から外し、その酵母を５ｍＬの成長培地で溶離し、次いで、一晩成長させた。以下の選択ラウンドを、フローサイトメトリーを使用して行った。およそ２×１０７ 酵母をペレットにし、洗浄緩衝液で３回洗浄し、３０℃において、平衡条件下で、漸減濃度のビオチン化Ｆｃ融合抗原（１０〜１ｎＭ）とともに、種交差反応性を得るために異なる種の１０ｎＭ ビオチン化Ｆｃ融合抗原とともに、または選択から非特異的抗体を除去するために多特異性除去試薬（ｐｏｌｙ−ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ ｒｅａｇｅｎｔ）（ＰＳＲ）とともにインキュベートした。そのＰＳＲ除去のために、そのライブラリーを、以前に記載されるようにビオチン化ＰＳＲ試薬の１：１０希釈物とともにインキュベートした（例えば、Ｙ． Ｘｕら， Ａｄｄｒｅｓｓｉｎｇ ｐｏｌｙｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｆｒｏｍ ａｎ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｙｅａｓｔ ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ： ａ ＦＡＣＳ−ｂａｓｅｄ， ｈｉｇｈ−ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ ａｎａｌｙｔｉｃａｌ ｔｏｏｌ． ＰＥＤＳ ２６．１０， ６６３−７０（２０１３）を参照のこと）。次いで、酵母を洗浄緩衝液で２回洗浄し、ＬＣ−ＦＩＴＣ（１：１００希釈）およびＳＡ−６３３（１：５００希釈）またはＥＡＰＥ（１：５０希釈）二次試薬のいずれかで、１５分間、４℃において染色した。洗浄緩衝液で２回洗浄した後に、その細胞ペレットを、０．３ｍＬ 洗浄緩衝液中に再懸濁し、ストレーナーキャップ付きのソートチューブ（ｓｔｒａｉｎｅｒ−ｃａｐｐｅｄ ｓｏｒｔ ｔｕｂｅ）に移した。ＦＡＣＳ ＡＲＩＡソーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用してソーティングを行い、ソートゲートを、所望の特徴を有する抗体を選択するために決定した。選択ラウンドを、その所望の特徴の全てを有する集団が得られるまで反復した。最終ラウンドのソーティングの後に、酵母をプレートし、個々のクローンを特徴付けのために拾い上げた。
抗体最適化
抗体の最適化を、軽鎖多様化プロトコルを介して、次いで、以下に記載されるように重鎖可変領域および軽鎖可変領域へと多様性を導入することによって行った。これらのアプローチのうちのいくつかの組み合わせは、各抗体のために使用した。
軽鎖バッチ多様化プロトコル： ナイーブ選択アウトプットからの重鎖プラスミドを、その酵母からスマッシュアンドグラブ法（ｓｍａｓｈ ａｎｄ ｇｒａｂ）を介して抽出し、Ｅ．ｃｏｌｉ中で増殖させ、その後、Ｅ．ｃｏｌｉから精製し、５×１０６の多様性を有する軽鎖ライブラリーへと形質転換した。ナイーブディスカバリーと同じ条件を使用して、１ラウンドのＭＡＣＳおよび４ラウンドのＦＡＣＳで選択を行った。
軽鎖多様化： 単一抗体の重鎖可変領域を、ＰＣＲを介して増幅し、重鎖発現ベクターとともに、５×１０６の多様性を有する軽鎖ライブラリーへと形質転換した。ナイーブディスカバリーと同じ条件を使用して、１ラウンドのＭＡＣＳおよび３ラウンドのＦＡＣＳで選択を行った。各ＦＡＣＳラウンドのために、そのライブラリーをＰＳＲ結合、種交差反応性、および親和性圧力（affinity pressure）に関して調べ、所望の特徴を有する集団を得るためにソーティングを行った。
ＣＤＲＨ１およびＣＤＲＨ２選択： 単一抗体のＣＤＲＨ３を、１×１０８の多様性のＣＤＲＨ１およびＣＤＲＨ２バリアントを有する予め作製したライブラリーへと組換えて、ナイーブディスカバリーに記載されるように１ラウンドのＭＡＣＳおよび４ラウンドのＦＡＣＳで選択を行った。各ＦＡＣＳラウンドのために、そのライブラリーをＰＳＲ結合、種交差反応性、および親和性圧力に関して調べ、所望の特徴を有する集団を得るためにソーティングを行った。これらの選択のために、そのビオチン化抗原を、親ＩｇＧとともに３０分間予めインキュベートし、次いで、その予め複合体化した混合物をその酵母ライブラリーに、その選択が平衡に達することを可能にする時間の長さにわたって適用することによって、親和性圧力を適用した。次いで、より高い親和性抗体をソートできた。
ＣＤＲＨ３／ＶＨ変異体選択： ＣＤＲＨ３およびＣＤＲＨ３のいずれかの側の隣接領域を含むオリゴヌクレオチド（オリゴ）を、ＩＤＴから注文した。そのオリゴのＣＤＲＨ３コード部分におけるアミノ酸位置を、ＮＮＫ多様性によって変化を与えた。そのＣＤＲＨ３オリゴは、そのＣＤＲＨ３の隣接領域にアニールするプライマーを使用して２本鎖にした。その重鎖可変領域の残余部分を、重鎖の非ＣＤＲ３領域においてさらなる多様性を導入するために、エラープローンＰＣＲを介して変異誘発した。次いで、そのライブラリーを、２本鎖ＣＤＲＨ３オリゴ、その重鎖可変領域の変異誘発した残余部分、およびその重鎖発現ベクターを、その親の軽鎖プラスミドを既に含む酵母へと形質転換することによって作り出した。４ラウンドにわたるＦＡＣＳソーティングを使用して、以前のサイクルに類似の選択を行った。各ＦＡＣＳラウンドのために、そのライブラリーをＰＳＲ結合、種交差反応性、および親和性圧力に関して調べ、所望の特徴を有する集団を得るためにソーティングを行った。これらの選択のための親和性圧力を、ＣＤＲＨ１およびＣＤＲＨ２選択において上記で記載されるように行った。
ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３選択： ＣＤＲＬ３およびＣＤＲＬ３のいずれかの側の隣接領域を含むオリゴを、ＩＤＴから注文した。そのオリゴのＣＤＲＬ３コード部分におけるアミノ酸位置を、ＮＮＫ多様性によって変化を与えた。そのＣＤＲＬ３オリゴを、そのＣＤＲＬ３の隣接領域にアニールするプライマーを使用して２本鎖にした。次いで、これらの２本鎖ＣＤＲＬ３領域を、３×１０５の多様性のＣＤＲＬ１およびＣＤＲＬ２バリアントを有する予め作製したライブラリーへと組換えて、ナイーブディスカバリーに記載されるように１ラウンドのＭＡＣＳおよび４ラウンドのＦＡＣＳで選択を行った。各ＦＡＣＳラウンドのために、そのライブラリーをＰＳＲ結合、種交差反応性、および親和性圧力に関して調べ、所望の特徴を有する集団を得るためにソーティングを行った。これらの選択のための親和性圧力を、ＣＤＲＨ１およびＣＤＲＨ２選択において上記で記載されるように行った。
抗体生成および精製
酵母クローンを飽和するまで成長させ、次いで、４８時間、３０℃において振盪しながら誘導した。誘導後、酵母細胞をペレットにし、精製するためにその上清を採取した。プロテインＡカラムを使用し、酢酸（ｐＨ２．０）で溶離して、ＩｇＧを精製した。Ｆａｂフラグメントを、パパイン消化によって生成し、ＫａｐｐａＳｅｌｅｃｔ（登録商標）（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ ＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ）で精製した。
ＦｏｒｔｅＢｉｏ ＫＤ測定
ＦｏｒｔｅＢｉｏ（登録商標）親和性測定を、概して以前に記載されるようにＯｃｔｅｔ（登録商標）ＲＥＤ３８４で行った（例えば、Ｅｓｔｅｐら， Ｈｉｇｈ ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ ｓｏｌｕｔｉｏｎ−ｂａｓｅｄ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｙ−ａｎｔｉｇｅｎ ａｆｆｉｎｉｔｙ ａｎｄ ｅｐｉｔｏｐｅ ｂｉｎｎｉｎｇ． Ｍａｂｓ ５（２）， ２７０−２７８（２０１３）を参照のこと）。簡潔には、ＦｏｒｔｅＢｉｏ親和性測定を、ＩｇＧをＡＨＱセンサーにオンラインで負荷することによって行った。センサーを、アッセイ緩衝液中、オフラインで３０分間平衡化し、次いで、ベースライン確立のために６０秒間オンラインでモニターした。ＩｇＧが負荷されたセンサーを、１００ｎＭ 抗原に３分間曝し、その後、オフ速度（ｏｆｆ−ｒａｔｅ）測定のために３分間アッセイ緩衝液に移した。一価親和性評価のために、ＦａｂをＩｇＧの代わりに使用した。この評価のために、非ビオチン化Ｆｃ融合抗原を、ＡＨＱセンサーにオンラインで負荷した。センサーを、アッセイ緩衝液中、オフラインで３０分間平衡化し、次いで、ベースライン確立のために６０秒間オンラインでモニターした。抗原が負荷されたセンサーを、２００ｎＭ Ｆａｂに３分間曝し、その後、それらをオフ速度測定のために３分間アッセイ緩衝液に移した。全ての動力学を、１：１結合モデルを使用して分析した。
ＦｏｒｔｅＢｉｏエピトープビニング／リガンドブロッキング
エピトープビニング／リガンドブロッキングを、標準的なサンドイッチ形式の交差遮断アッセイを使用して行った。コントロール抗標的ＩｇＧをＡＨＱセンサーに負荷し、そのセンサー上の占有されていないＦｃ−結合部位を、無関係のヒトＩｇＧ１抗体で遮断した。次いで、そのセンサーを、１００ｎＭ 標的抗原に曝し、続いて、第２の抗標的抗体またはリガンドに曝した。抗原会合後のその第２の抗体またはリガンドによるさらなる結合は、占有されていないエピトープ（非競合物（non-competitor））を示す一方で、結合なしは、エピトープ遮断（競合物またはリガンドブロッキング）を示す
細胞結合分析
その抗原を過剰発現するおよそ１００，０００個の細胞を、洗浄緩衝液で洗浄し、１００μｌ １００ｎＭ ＩｇＧとともに５分間、室温においてインキュベートした。次いで、細胞を洗浄緩衝液で２回洗浄し、１００μｌの１：１００ ヒト−ＰＥとともに１５分間、氷上でインキュベートした。次いで、細胞を洗浄緩衝液で２回洗浄し、ＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏ ＩＩ分析器（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で分析した。
サイズ排除クロマトグラフィー
ＴＳＫｇｅｌ（登録商標） ＳｕｐｅｒＳＷ ｍＡｂ ＨＴＰカラム（２２８５５）を、６分／実行のサイクルタイムで、０．４ｍＬ／分での、哺乳動物が生成したｍＡｂのファストＳＥＣ分析（ｆａｓｔ ＳＥＣ ａｎａｌｙｓｉｓ）のために使用した。２００ｍＭ リン酸ナトリウムおよび２５０ｍＭ 塩化ナトリウムを、移動相として使用した。
ダイナミックスキャニング蛍光定量法
１０μＬの２０× Ｓｙｐｒｏ Ｏｒａｎｇｅを、２０μＬの０．２〜１ｍｇ／ｍＬ ｍＡｂまたはＦａｂ溶液に添加する。ＲＴ−ＰＣＲ機器（ＢｉｏＲａｄ ＣＦＸ９６ ＲＴ ＰＣＲ）を使用して、サンプルプレート温度を４０℃から９５℃へと０．５C刻みで、各温度で２分間平衡化して、徐々に上げる。生データについて負の一次導関数を、Ｔｍを抽出するために使用する。
実施例２：ＴＭ形式抗体の特徴
いくつかの種のＧＩＴＲに対するＩｇＧ１およびＴＭ形式ＡＢＰの親和性
ＧＩＴＲ ＡＢＰを、組換えｈＧＩＴＲ（配列番号１）、ｈＧＩＴＲ−Ｔ４３Ｒ（配列番号２）、ｃＧＩＴＲ（配列番号３）、およびｍＧＩＴＲ（配列番号４）に結合するそれらの能力に関して、ＦＯＲＴＥＢＩＯ（登録商標） ＯＣＴＥＴ機器を使用して評価した。そのアッセイを、３０℃において、１× Ｋｉｎｅｔｉｃｓ Ｂｕｆｆｅｒ（ＦｏｒｔｅＢｉｏ， Ｉｎｃ．）をアッセイ緩衝液として使用して行った。抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ Ｃａｐｔｕｒｅ（ＡＨＣ）バイオセンサー（ＦｏｒｔｅＢｉｏ， Ｉｎｃ．）を使用して、そのセンサー上にＧＩＴＲ ＡＢＰを捕捉した。そのセンサーを、そのアッセイの前に、アッセイ緩衝液中で６００秒間平衡化した。そのセンサーを１×アッセイ緩衝液に６０秒間浸すことによって、ベースラインを確立した。そのセンサーをＡＢＰ溶液に３００秒間浸すことによって、そのセンサー上にＡＢＰを負荷した。そのセンサーを１×アッセイ緩衝液に１２０秒間浸すことによって、ベースラインを確立した。そのセンサーを２００μｇ／ｍｌ ヒトＩｇＧに３００秒間浸すことによってクエンチして、そのセンサーへのＧＩＴＲ−Ｆｃ抗原の非特異的結合を防止した。そのセンサーを１×アッセイ緩衝液に６０秒間浸すことによって、ベースラインを確立した。次に、２５ｎＭの組換え抗原中で３００秒間、会合をモニターし、緩衝液単独の中で１２００秒間、解離を追跡した。１：１結合モデルを使用するＦＯＲＴＥＢＩＯ（登録商標） Ａｎａｌｙｓｉｓソフトウェアの動力学的関数を使用して、ＫＤを決定した。結果を表５に示す。
他のＧＩＴＲ ＡＢＰを、ＦＯＲＴＥＢＩＯ（登録商標） Ｏｃｔｅｔ ＲＥＤ３８４機器を使用して、概して以前に記載されるように（例えば、Ｅｓｔｅｐら， Ｈｉｇｈ ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ ｓｏｌｕｔｉｏｎ−ｂａｓｅｄ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｙ−ａｎｔｉｇｅｎ ａｆｆｉｎｉｔｙ ａｎｄ ｅｐｉｔｏｐｅ ｂｉｎｎｉｎｇ． Ｍａｂｓ ５（２）， ２７０−２７８（２０１３）を参照のこと）、組換えｈＧＩＴＲおよびｃＧＩＴＲ（配列番号３）に結合するそれらの能力に関して評価した。ＡＨＱバイオセンサー（ＦｏｒｔｅＢｉｏ， Ｉｎｃ．）を、そのセンサー上にＧＩＴＲ ＡＢＰを捕捉するために使用した。そのセンサーを関連しないヒトＩｇＧ１抗体に浸すことによってクエンチして、そのセンサーへのＧＩＴＲ−Ｆｃ抗原の非特異的結合を防止した。そのセンサーを、アッセイ緩衝液中で３０分間平衡化した。そのセンサーをアッセイ緩衝液に６０秒間浸すことによって、ベースラインを確立した。１００ｎＭの組換え抗原中で１８０秒間、会合をモニターし、緩衝液単独の中で１８０秒間、解離を追跡した。１：１結合モデルを使用するＦＯＲＴＥＢＩＯ（登録商標） Ａｎａｌｙｓｉｓソフトウェアの動力学的関数を使用して、ＫＤを決定した。結果を表６に示す。
さらなるＫＤ測定を、多濃度動力学（multi-concentration kinetics）を使用して、８種のＮ末端Ｆａｂ ＴＭ形式抗体に対して行った。そのＧＩＴＲ ＡＢＰを、組換えｈＧＩＴＲ（配列番号１）、ｈＧＩＴＲ−Ｔ４３Ｒ（配列番号２）、およびｃＧＩＴＲ（配列番号３）に結合するそれらの能力に関して、ＦＯＲＴＥＢＩＯ（登録商標） ＯＣＴＥＴ機器を使用して評価した。そのアッセイを、３０℃において、１×Ｋｉｎｅｔｉｃｓ Ｂｕｆｆｅｒ（ＦｏｒｔｅＢｉｏ， Ｉｎｃ．）をアッセイ緩衝液として使用して行った。抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ Ｃａｐｔｕｒｅ（ＡＨＣ）バイオセンサー（ＦｏｒｔｅＢｉｏ， Ｉｎｃ．）を使用して、そのセンサー上にＧＩＴＲ ＡＢＰを捕捉した。そのセンサーを、そのアッセイの前に、アッセイ緩衝液の中で６００秒間飽和させた。そのセンサーを１×アッセイ緩衝液に６０秒間浸すことによって、ベースラインを確立した。ＡＢＰを、そのセンサーをＡＢＰ溶液に３００秒間浸すことによって、そのセンサー上に負荷した。そのセンサーを１×アッセイ緩衝液に１２０秒間浸すことによって、ベースラインを確立した。次に、種々の濃度の組換え抗原（５０ｎＭ〜０．７８ｎＭ、アッセイ緩衝液中で２倍希釈）の中で３００秒間、会合をモニターし、緩衝液単独の中で６００秒間または１２００秒間、解離を追跡した。１：１結合モデルを使用するＦＯＲＴＥＢＩＯ（登録商標） Ａｎａｌｙｓｉｓソフトウェアの動力学的関数を使用して、ＫＤを決定した。ＯｃｔｅｔによるＫＤの決定の結果を、図２および表７に示す。図中で認められ得るように、ヒトＧＩＴＲに対するＫＤは、各々１ｎＭ未満であり、カニクイザルＧＩＴＲに対するＫＤは、ヒトのそれの１５倍以内であった。さらに、そのＴＭ形式抗体は、ヒトＧＩＴＲのＴ４３Ｒ ＳＮＰバリアントに結合する。
ＧＩＴＲ結合アッセイ
末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、成長培地中でフィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）の存在下で５日間、３７℃において培養して、ＧＩＴＲ発現をアップレギュレートした。Ｔ細胞を集め、洗浄し、次いで、４℃において、８種のＴＭ形式 ＧＩＴＲ ＡＢＰのうちの１種またはヒトアイソタイプコントロール抗体とともにインキュベートした。洗浄後、細胞を４℃において、蛍光色素結合体化抗ヒトＣＤ４抗体および抗ヒトＣＤ８抗体、ならびに蛍光色素結合体化抗ヒトＩｇＧとともにインキュベートして、結合した抗ヒトＧＩＴＲ ＡＢＰを検出した。ＧＩＴＲ＋ ＣＤ４細胞およびＣＤ８細胞のパーセンテージ、ならびに平均蛍光強度（ＭＦＩ）をフローサイトメトリーによって決定する。
例示的な結果を図３に示す。図３ＡはＣＤ４＋細胞を示し、図３ＢはＣＤ８＋細胞を示す。上段では、左から右に、抗ＧＩＴＲ陽性コントロール、および抗ヒトＩｇＧ４アイソタイプコントロール、ならびにＮ末端Ｆａｂ ＴＭ形式ＡＢＰであるＡＢＰ９、ＡＢＰ２、ＡＢＰ１、およびＡＢＰ７が示される。下段では、ＡＢＰ８、ＡＢＰ３、ＡＢＰ４、ＡＢＰ５、ＡＢＰ６、ＡＢＰ２３、およびＡＢＰ２４が示される。ＩｇＧ４＋ ＣＤ４／８＋細胞のパーセンテージが示される。
細胞表面のヒト、カニクイザル、およびマウスＧＩＴＲの結合を、ＨＴ１０８０細胞、ＣＨＯ細胞、または２９３Ｔ細胞を、それぞれ（ヒト、カニクイザルまたはマウス）ＧＩＴＲでトランスフェクトすることによって評価する、カニクイザルＧＩＴＲへの結合を、ＧＩＴＲ発現を増加させるために、各々、抗ＣＤ３抗体での刺激後に、初代カニクイザルＴ細胞およびＨＳＣ−Ｆ Ｔ細胞株を使用してさらに評価する。
ＧＩＴＲ抗原結合タンパク質の活性アッセイ
そのＧＩＴＲ ＡＢＰを、ＧＩＴＲをアゴナイズするそれらの能力に関して試験した。１つのアッセイでは、ヒトまたはカニクイザルのＧＩＴＲを安定して発現するＨＴ１０８０細胞を、ＴＭ形式ＧＩＴＲ ＡＢＰまたはトリマーのヒトＧＩＴＲＬと接触させた。２４時間後に、その細胞によって分泌されたＩＬ−８の量を、ＥＬＩＳＡアッセイによって評価した。ＩＬ−８分泌の増加は、ＧＩＴＲアゴニズムの増大に相当する。Ｎ末端Ｆａｂ ＴＭ形式抗体１〜８についての結果を図４に示す。ＡＢＰ１（図４Ａ）、ＡＢＰ２（図４Ｂ）、ＡＢＰ３（図４Ｃ）、ＡＢＰ４（図４Ｄ）、ＡＢＰ５（図４Ｅ）、ＡＢＰ６（図４Ｆ）、ＡＢＰ７（図４Ｇ）、およびＡＢＰ８（図４Ｈ）に関して、抗体またはリガンド濃度に基づくＩＬ−８アウトプットが示される。抗体は、図中で丸として示され、ＧＩＴＲＬコントロールは四角として示される。ＥＣ５０スコアを、ＧＩＴＲリガンド（ＧＩＴＲＬ）のものと比較する。
その同じアッセイを、ＡＢＰ１〜８のＩｇＧ１ Ｎ２９７Ａ非ＴＭバージョンを使用して行った（図４を参照のこと）。データを表９にまとめる。
さらなるＮ末端ＦａｂおよびＣ末端Ｆａｂ ＴＭ形式抗体、その上それら抗体のＩｇＧ１ Ｎ２９７Ａバージョンの活性を試験するために、そのアッセイを再び使用した。そのデータを表１０および表１１にまとめ、図５に示す。図５Ａは、ＡＢＰ４３（四角）、ＡＢＰ２３（丸）、ＡＢＰ２４（三角）、およびＡＢＰ２９（白丸）、ＡＢＰ３０（白三角）、ＡＢＰ３１（白丸）、およびＡＢＰ３２（白三角）を、全てＧＩＴＲＬ（＋記号）と比較して示す。図５Ｂは、ＡＢＰ１９（Ｎ末端Ｆａｂ、三角）およびＡＢＰ２５（Ｃ末端Ｆａｂ、逆向き三角）を示す。ＧＩＴＲＬを＋記号として示す。図５Ｃは、ＡＢＰ２１（Ｎ末端Ｆａｂ、三角）およびＡＢＰ２７（Ｃ末端Ｆａｂ、逆向き三角）を示す。ＧＩＴＲＬを＋記号として示す。図５Ｄは、ＡＢＰ２０（Ｎ末端Ｆａｂ、三角）およびＡＢＰ２６（Ｃ末端Ｆａｂ、逆向き三角）を示す。ＧＩＴＲＬを＋記号として示す。図５Ｅは、ＡＢＰ２２（Ｎ末端Ｆａｂ、三角）およびＡＢＰ２８（Ｃ末端Ｆａｂ、逆向き三角）を示す。ＧＩＴＲＬを＋記号として示す。図に示されるように、そのＮ末端Ｆａｂ形式ＡＢＰは、それらのＣ末端Ｆａｂ対応物より多くのＩＬ−８を誘導する傾向にあった。
図１０は、ＡＢＰ４３（非最適化ＩｇＧ４形式）と２種の相当するＴＭ形式ＡＢＰとのさらなる比較を示す。ここでＡＢＰ４３のＩｇＧ１ Ｆａｂ対応物（counterpart）を、そのＡＢＰ４３のＮ末端またはＣ末端に付加する。図中で認められ得るように、そのＮ末端Ｆａｂ ＴＭ形式ＡＢＰ９（四角）は、Ｃ末端Ｆａｂ ＴＭ形式ＡＢＰ１０（丸）および非ＴＭ形式ＡＢＰ４３（菱形）との比較において、最も多くのＩＬ−８を誘導した（そして最良のＥＣ５０を有した）。両方のＴＭ形式ＡＢＰが、非ＴＭ形式の親ＡＢＰおよびＧＩＴＲＬより良好な活性を有した。ＧＩＴＲＬ（陽性コントロール）によるＩＬ−８誘導は、単一のデータ点（星）として示される。ＩＬ−８生成をｐｇ／ｍＬ単位で示す。
Ｈ１Ｈ２／ＶＨ最適化抗体のさらなるＩｇＧ１ Ｎ２９７Ａバージョンを提供し、以下の表１２に示す。ＨＴ１０８０アッセイ（上記のとおり）において決定したそれらのアゴニスト活性を示す。これらの抗体は、ＴＭ形式へと作製するために適している。
類似のアッセイを、ヒトＧＩＴＲおよびＮＦ−κＢルシフェラーゼレポーター（Ｐｒｏｍｅｇａ（登録商標））を発現するように操作されたＪｕｒｋａｔ細胞（Ｔ細胞ベースの細胞株）において行った。８種の最適化したＮ末端Ｆａｂ ＴＭ形式抗体、ＡＢＰ１〜８を、Ｔ細胞においてＩＬ−８を誘導するそれらの能力に関してＧＩＴＲＬと比較した。図７Ａ〜Ｈ（ＡＢＰ１〜８に関して）および表１３に示されるように、全８種のＡＢＰは、サイトカイン生成の誘導においてＧＩＴＲＬより良好であった。
初代細胞におけるＮ末端Ｆａｂ ＴＭ形式抗体のアゴニスト活性
１つの実施形態において、そのＧＩＴＲ ＡＢＰを、抗ＣＤ３抗体を介するＴＣＲシグナル伝達と関連してＣＤ４＋ＣＤ２５− エフェクターＴ細胞への共刺激シグナルを送達するそれらの能力に関してさらに試験する。Ｔ細胞活性化の増加を、細胞増殖を定量するならびに／またはＥＬＩＳＡアッセイを使用して、ＩＦＮ−γを含むサイトカインの生成および分泌の増加を測定することによって、測定する。
別の実施形態において、そのＧＩＴＲ ＡＢＰをさらに分析して、調節性Ｔ細胞によるエフェクターＴ細胞の抑制を防止するそれらの能力を評価する。ヒトＣＤ４＋ Ｔ細胞を、ヒトＣＤ４＋ Ｔ細胞単離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ ＃１３０−０９６）を使用して単離する。調節性Ｔ細胞を、ヒトＣＤ２５ ＭｉｃｒｏＢｅａｄｓ（登録商標）ＩＩ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ ＃１３０−０９２−９８３）を製造業者の指示に従って使用して、さらに富化する。そのＣＤ２５枯渇したＣＤ４＋ Ｔ細胞を、抑制アッセイにおいてエフェクターＴ細胞として使用する。抗ヒトＣＤ２、ＣＤ３、およびＣＤ２８抗体に結合体化したビーズを使用して、そのアッセイにおいてエフェクターＴ細胞を活性化する（Ｔｒｅｇ Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｉｎｓｐｅｃｔｏｒ；Ｔ細胞活性化ビーズとしても公知、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ ＃１３０−０９２−９０９）。９６ウェルプレートにおいて、調節性Ｔ細胞およびエフェクターＴ細胞の各々５０，０００個を、各ウェルに播種し、等しい数のＴ細胞活性化ビーズとともにインキュベートする。細胞およびビーズの混合物を、種々の濃度のＧＩＴＲ ＡＢＰと５日間にわたって接触させる。エフェクターＴ細胞の増殖を、培養の最後の１６時間の間にその細胞培養物にトリチウムチミジンをパルスし、洗浄し、その細胞に取り込まれた放射活性の量を測定することによって測定する。
Ｔ芽球初代細胞アッセイにおけるＮ末端Ｆａｂ ＴＭ形式抗体のアゴニスト活性
予め刺激したＴ細胞（Ｔ芽球）を使用して、８種のＮ末端Ｆａｂ ＴＭ形式抗体（ＡＢＰ１〜８）の活性を評価した。
Ｔ芽球を生成するために、ＰＢＭＣを、その細胞を拡大しかつＧＩＴＲの発現を誘導するために、ＰＨＡで５〜７日間にわたって刺激する。細胞を洗浄し、機能アッセイの設定の前に凍結する。
ＡＢＰ１〜８の機能活性を評価するために、細胞を、１ｍｇ／ｍｌ 抗ＣＤ３ ＋ ２ｍｇ／ｍｌ 抗ＣＤ２８、０．００３〜１０ｍｇ／ｍｌ ＡＢＰ１〜８、および陽性コントロールとしての１０ｍｇ／ｍｌ ＧＩＴＲＬを添加することによって刺激する。細胞を３７℃においてインキュベートし、上清を４８時間後に集める。ＩＬ−２生成をＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ（登録商標））によって測定する。図８Ａは、種々の時点での、ＰＨＡでの刺激ありまたはなしでの２名のヒトドナーに由来する細胞におけるＧＩＴＲ＋ ＣＤ４＋細胞（左）およびＣＤ８＋細胞（右）のパーセンテージを示す。
図８Ｂ〜８Ｍは、コントロールまたはＡＢＰで処置した４名の異なるドナーに由来するＴ芽球の処理の結果および得られたＩＬ−２生成を示す。各図において、上段は、左から右に、ＣＤ４＋細胞へのＡＢＰ結合のＦＡＣＳ測定、ドナー１に由来する細胞のＩＬ−２生成、ドナー２に由来する細胞のＩＬ−２生成である。下段は、左から右に、ＣＤ８＋細胞へのＡＢＰ結合のＦＡＣＳ測定、ドナー３に由来する細胞のＩＬ−２生成、ドナー４に由来する細胞のＩＬ−２生成である。以下のとおりデータが示される：８Ｂ：ＩｇＧ４アイソタイプコントロール；８Ｃ：ＳＥＣ４抗体；８Ｄ：ＩｇＧ４ ＴＭ形式コントロール；８Ｅ：ＡＢＰ１〜８の非ＴＭ ＩｇＧ４非最適化系統親（ＡＢＰ９）。８Ｆ：ＡＢＰ１；８Ｇ：ＡＢＰ２；８Ｈ：ＡＢＰ３；８Ｉ：ＡＢＰ４；８Ｊ：ＡＢＰ５；８Ｋ：ＡＢＰ６；８Ｌ：ＡＢＰ７；８Ｍ：ＡＢＰ８。
図に示されるように、異なるドナーに由来するＴ芽球は、ＡＢＰ１〜８での処理に対するそれらの応答において変動した；しかし、全８種のＴＭ形式ＡＢＰでの処理は、ＩＬ−２の生成によって測定される場合、およびコントロール抗体と比較した場合、試験した大部分の濃度においてアゴニスト活性を有した。
最適化Ｎ末端Ｆａｂ ＴＭ形式ＡＢＰおよび非ＴＭ形式 ＩｇＧ１ ＡＢＰのＧＩＴＲアゴニスト活性比較
上記の実施例におけるものと同じ８種の最適化したＮ末端Ｆａｂ ＴＭ形式ＡＢＰ（１〜８）を、上記で記載されかつ図４に示される同じＩＬ−８誘導アッセイにおいて、非最適化親コントロールと比較した。各図は、Ｎ末端Ｆａｂ ＴＭ形式ＡＢＰ１〜８（Ｎ末端ＩｇＧ１ Ｆａｂを有するＩｇＧ４ Ｓ２２８Ｐ、「ＩｇＧ４ ＴＭ」）およびその相当する非ＴＭ形式ＩｇＧ１（ＩｇＧ１ Ｎ２９７、「ＩｇＧ１」）ＡＢＰ、その上陽性コントロールとしてのＧＩＴＲＬおよびＩｇＧ４陰性コントロールの比較を示す（ＧＩＴＲＬおよびＩｇＧ４は、そのＡＢＰとは別個のプレート上で実行）。その左パネルは、ｈＧＩＴＲを発現する細胞の結果を示し、その右パネルは、ｃＧＩＴＲを発現する細胞の結果を示す。ＡＢＰ濃度の関数としてのＩＬ−８誘導を、ＡＢＰ１（図９Ａ）、ＡＢＰ２（図９Ｂ）、ＡＢＰ３（図９Ｃ）、ＡＢＰ４（図９Ｄ）、ＡＢＰ５（図９Ｅ）、ＡＢＰ６（図９Ｆ）、ＡＢＰ７（図９Ｇ）、およびＡＢＰ８（図９Ｈ）に関して示す。ＧＩＴＲＬによるＩＬ−８の誘導は丸として、ＴＭ形式抗体によるものは三角として、親のＩｇＧ１抗体によるものは菱形として、ＩｇＧ４コントロール抗体によるものは四角として示される。ＥＣ５０値の表は、各図の各パネルの下に示される。
図９に示される結果は、その８種の最適化したＡＢＰが、二価ＩｇＧ１ Ｎ２９７Ａと比較した場合に、Ｎ末端Ｆａｂ ＴＭ形式抗体として遙かに高い程度までヒトまたはカニクイザルのＧＩＴＲを発現する細胞においてＩＬ−８生成を誘導し得ることを示す。そのＮ末端Ｆａｂ ＴＭ形式抗体は、二価ＩｇＧ１ Ｎ２９７Ａ形式と比較した場合に、より小さなＥＣ５０値およびＩＬ−８のより大きな最大生成を有した。さらに、そのＴＭ抗体は全て、親抗体の非ＴＭ形態より大きなＧＩＴＲに対する親和性を有した（表５および表７と表６とを比較のこと）。
ＧＩＴＲＬ遮断の評価
別の実施形態において、ＧＩＴＲ遮断を、ＦＯＲＴＥＢＩＯ（登録商標） ＯＣＴＥＴ機器を使用して評価した。その分析を、１× Ｋｉｎｅｔｉｃｓ Ｂｕｆｆｅｒ（ＦｏｒｔｅＢｉｏ， Ｉｎｃ．）をアッセイ緩衝液として使用して３０℃において行った。抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ Ｃａｐｔｕｒｅ（ＡＨＣ）バイオセンサー（ＦｏｒｔｅＢｉｏ， Ｉｎｃ．）を使用して、ヒトＧＩＴＲ ＡＢＰをそのセンサー上に捕捉する。センサーを、そのアッセイの前に、アッセイ緩衝液中で３００秒間飽和させる。ＡＢＰを、そのセンサーをＡＢＰ上清溶液に３００秒間浸すことによってセンサーに負荷する。そのセンサーを１×アッセイ緩衝液に２００秒間浸すことによって、ベースラインを確立した。次に、組換えＧＩＴＲの会合を１８０秒間モニターした。組換えＧＩＴＲＬが次にそのＡＢＰ／ＧＩＴＲ複合体と会合する能力を、そのセンサーをＧＩＴＲＬに１８０秒間浸すことによって決定した。
ＧＩＴＲ遮断を、ＡＢＰ１〜８を使用して上記の方法に従って評価した。全８種のＡＢＰは、ＧＩＴＲＬ結合を遮断できた。
１つの実施形態において、抗ヒトＧＩＴＲ ＡＢＰがＧＩＴＲへのＧＩＴＲリガンド（ＧＩＴＲＬ、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ ＃６９８７−ＧＬ−ＣＦ）の結合を遮断するかどうかを評価するために、種々の濃度の非標識ＧＩＴＲ ＡＢＰを、ヒト汎Ｔ細胞とともに４℃において、染色緩衝液（例えば、０．５％ ウシ血清アルブミン含有リン酸緩衝食塩水）中で１０分間インキュベートする。洗浄なしで、４ｎＭのＨＡタグ化ヒトＧＩＴＲＬを添加し、４℃においてさらに３０分間インキュベートする。次いで、その細胞を、染色緩衝液で２回洗浄し、抗ＨＡ ＰＥ抗体（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ ＃１３０−０９２−２５７）とともに染色緩衝液中、４℃において３０分間インキュベートする。次いで、その細胞を染色緩衝液で２回洗浄し、ＰＢＳ中の２％ パラホルムアルデヒドで、フローサイトメトリー分析のために固定する。ＰＥ染色の量の減少は、そのＡＢＰがそのＧＩＴＲ−ＧＩＴＲＬ相互作用を遮断することを示す。
実施例３：多重特異的抗原結合タンパク質
多重特異的ＧＩＴＲアゴニストＡＢＰの１つの実施形態は、共通軽鎖抗体を含む。ＧＩＴＲ上の２つの別個のエピトープに結合するＡＢＰを同定した。これら２種のＡＢＰは、同じ軽鎖を共有する。ＡＢＰ６１はアゴニスト抗体であり、ＡＢＰ５９はあまりアゴニスト活性を有しないが、ＧＩＴＲへの結合に関して、ＡＢＰ６１と競合しない。共通軽鎖を有する多価多重特異的抗体を、２個の重鎖およびその単一の共通軽鎖をコードするベクターでＨＥＫ−２９３宿主細胞をトランスフェクトすることによって生成した。共通軽鎖（配列番号１２５）を有する本明細書で開示される第１の例示的なＡＢＰは、ＡＢＰ３３であり、これは、Ｎ末端Ｆａｂ（ＡＢＰ５８（ＡＢＰ５９のＩｇＧ１対応物に由来する））を有するＩｇＧ４重鎖（ＡＢＰ６１）、ならびに全長配列の配列番号１２４（ＨＣ）および配列番号１２５（ＬＣ）を有する。共通軽鎖を有する本明細書で開示される第２の例示的なＡＢＰは、ＡＢＰ３４であり、これは、Ｃ末端Ｆａｂ（ＡＢＰ５８（ＡＢＰ５９のＩｇＧ１対応物）に由来する）を有するＩｇＧ４重鎖（ＡＢＰ６１）、ならびに全長配列の配列番号１３６（ＨＣ）および配列番号１２５（ＬＣ）を有する。
各多重特異的ＡＢＰは、ＧＩＴＲ上の２個の別個のエピトープに結合する。そのＡＢＰは、上記の実施例に記載されるように特徴づけられる。本明細書で記載される他の多重特異的ＡＢＰを生成し、同様に特徴づける。図６は、実施例２で上記に記載されるとおりのＨＴ１０８０アッセイにおけるＡＢＰ３３およびＡＢＰ３４のＥＣ５０決定の結果を示す。ＡＢＰ３３（ＩｇＧ４ ＡＢＰ６１とＮ末端上のＡＢＰ５８［ＡＢＰ５９のＩｇＧ１対応物］のＩｇＧ１ Ｆａｂとを併せ持つ四価バージョン）およびＡＢＰ３４（ＡＢＰ６１のＩｇＧ４とＣ末端上のＡＢＰ５８［ＡＢＰ５９のＩｇＧ１対応物］のＩｇＧ１ Ｆａｂとを併せ持つ四価バージョン）を、二価ＡＢＰ５９およびＡＢＰ６１（ＩｇＧ４ Ｓ２２８Ｐ）と比較した。図に示されるように、その四価抗体は両方とも、それらの二価対応物と比較した場合に、ＩＬ−８誘導によって測定されるように、優れたＥＣ５０を有した。
実施例４：ＴＭ形式抗体とベンチマーク抗ＧＩＴＲ抗体との比較
Ｎ末端Ｆａｂ ＴＭ形式抗体の活性を、２種の公知の抗ＧＩＴＲ抗体であるＳＥＣ４およびＳＥＣ９に対して、ヒトＧＩＴＲを安定して発現するように操作されたＨＴ１０８０細胞において試験した。培養した細胞を、６時間にわたって、ある濃度範囲の２種のベンチマークアゴニスト抗体、ＳＥＣ４（ヒトＩｇＧ４ Ｓ２２８Ｐ／κ領域を有するマウス可変領域を有する形式にされた「３５Ｅ６」、橙色の菱形）およびＳＥＣ９（ヒト化６Ｃ８ Ｎ６２Ｑ ＩｇＧ１ Ｎ２９７Ａ）で処理した。ＳＥＣ４は、例えば、米国特許第８，７０９，４２４号に記載される；可変領域は、配列番号１および１２に見出される。ＳＥＣ９は、例えば、米国特許第７，８１２，１３５号に記載される；全長配列は、配列番号５８および６３に示される。１μｇ／ｍｌという二価抗体用量は、６．６７ｎＭに等しい；１μｇ／ｍｌという四価抗体用量は、４ｎＭに等しい。
ＩＬ−８の誘導をＥＬＩＳＡによって測定し、そのＥＣ５０を計算した。図１１Ａは、ｈＧＩＴＲＬと、ＳＥＣ４（菱形）およびＳＥＣ９（丸）、ならびにＩｇＧ４陰性コントロール（黒三角）、ＩｇＧ１陰性コントロール（白三角）、および陽性コントロールとしてのトリマーのヒトＧＩＴＲリガンド（「ｈＧＩＴＲＬ」、四角）との比較を示す。ＧＩＴＲＬは、ＳＥＣ４およびＳＥＣ９の両方と比較して、より良好なＥＣ５０（挿入図）および最大誘導を有した。
ＧＩＴＲＬと、ＡＢＰ１（図１１Ｂ）、ＡＢＰ２（図１１Ｃ）、ＡＢＰ３（図１１Ｄ）、ＡＢＰ４（図１１Ｅ）、ＡＢＰ５（図１１Ｆ）、ＡＢＰ６（図１１Ｇ）、ＡＢＰ７（図１１Ｈ）、およびＡＢＰ８（図１１Ｉ）との比較も示される。図に示されるように、全８種のＮ末端Ｆａｂ ＴＭ形式抗体は、ＳＥＣ４またはＳＥＣ９のいずれが有するよりも有利なＥＣ５０を有した。全８種のＮ末端Ｆａｂ ＴＭ形式抗体はまた、ＳＥＣ４またはＳＥＣ９のいずれよりも高いＩＬ−８生成の誘導を有した。
ＳＥＣ４はまた、Ｔ芽球初代細胞アッセイにおいて上記で示されるように試験した。図８に示されるように、ＳＥＣ４による初代細胞におけるＩＬ−２の誘導は、全４名のドナーに関してＴＭ形式抗体のものより低かった。
実施例５： 抗ＧＩＴＲ ＡＢＰは、患者腫瘍浸潤リンパ球およびＧＩＴＲ＋ Ｔ細胞においてサイトカインの生成を増加させる
材料および方法
解離したヒト腫瘍サンプルを、Ｃｏｎｖｅｒｓａｎｔ Ｂｉｏから購入した。サンプルは、何らかの処置の前の、ステージＩａ疾患を有する７５歳齢の男性（以前は喫煙者）から単離したＮＳＣＬＣ腺癌であった。そのサンプルを迅速に解凍し、次いで、以下のとおりの免疫療法ありまたはなしで、いくつかの条件で再刺激した： 細胞は、非刺激コントロールであったか、または１μｇ／ｍＬ αＣＤ３（可溶性）＋２μｇ／ｍＬ αＣＤ２８（可溶性）＋ＩＬ−２（５０ｎｇ／ｍＬ）で刺激した；細胞は、免疫療法処置を受けなかった（チェックポイントタンパク質レベルの評価のため）か、ペンブロリズマブ（１０μｇ／ｍＬ）、ＴＭ形式ＡＢＰコントロール（２μｇ／ｍＬ）、ＡＢＰ１（２μｇ／ｍＬ）、またはＡＢＰ１＋ペンブロリズマブを受けたかのいずれかであった。細胞を、上清を集める前に４８時間インキュベートし、チェックポイントの発現について染色した。いくつかのサンプルでは、ブレフェルジンＡ（サイトカイン分泌のインヒビター）を、細胞内サイトカイン染色によるサイトカインの検出のために、刺激の最後の５時間に添加した。
結果
細胞を、ＧＩＴＲ陽性Ｔ細胞に対してゲート処理し、その結果を図１２Ａ（ＴＮＦ生成）および図１２Ｂ（ＩＦＮγ生成）に示す。図に示されるように、抗ＧＩＴＲ（ＡＢＰ１）単剤処理は、サイトカイン生成の増加を生じた。併用ＡＢＰ１＋ペンブロリズマブ処理を受けた細胞では、サイトカイン生成のこのアッセイにおいて有意な増加が存在しなかった。
実施例６： エピトープ決定のための変異分析： アラニンスキャニング
ヒトＧＩＴＲへのＡＢＰ１結合のエピトープを同定するために、単一の点変異を、ヒトＧＩＴＲ細胞外ドメインにおいて作製して、ＡＰＢ１結合が低減したかどうかを決定した。アラニン置換またはマウス特異的残基のいずれかを使用した（ＡＢＰ１は、マウスＧＩＴＲに結合しない）。タンパク質を、ＦｃタグとともにＨＥＫ−２９３細胞において発現させ、可溶性タンパク質として分泌させ、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ（登録商標） Ｓｕｒｅ（登録商標） Ｌｘ樹脂で精製し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって特徴づけた。結合を、Ｏｃｔｅｔプラットフォームを使用するバイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によって評価した。野生型ヒトＧＩＴＲ−ＦｃまたはＧＩＴＲ−Ｆｃ変異体を、抗ヒトＦｃセンサー上に捕捉し、洗浄し、ＡＢＰ１ Ｆａｂに曝した。その結合エピトープの一部と考えられる残基は、低減した結合または結合なしを示した（例えば、野生型ヒトＧＩＴＲへの結合のＫＤより３倍超劣るＫＤ（a KD more than 3-fold poorer than that of binding to wild type human GITR））。残基Ｃ５８、Ｒ５９、Ｙ６１、Ｅ６４、Ｃ６７でのアラニン置換、およびＣ６６位でのアスパラギン酸置換は、結合なしを生じたが、残基Ｒ５６、Ｄ６０、Ｐ６２またはＥ６５でのアラニン置換は、結合の低減を生じた。
実施例７： ＧＩＴＲ抗原結合タンパク質のインビボ評価
インビボ研究を行って、ＡＢＰがヒト化ＮＳＧマウスモデルにおける循環調節性Ｔ細胞数を減少させる能力を示す。新生仔ＮＳＧマウスに、ＣＤ３４＋ ヒト胎児肝細胞を後眼窩注射によって移植した。１６週間を経ると、その動物は、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋ エフェクターＴ細胞、ならびに調節性Ｔ細胞を含む多様なヒト免疫細胞レパートリーを発生させる。２５ｍｇ／ｋｇ 抗ヒトＧＩＴＲ ＡＢＰまたはヒトアイソタイプコントロールの単回腹腔内用量を、そのマウスに与え、調節性Ｔ細胞マーカーＦｏｘＰ３を発現する循環ヒトＣＤ４＋ Ｔ細胞のパーセントを、投与後４日目に、フローサイトメトリーによって決定する。
実施例８． ＴＭ形式ＡＢＰ１またはその従来の形式の親ＡＢＰ３５との活性化Ｔ細胞のインキュベーション
活性化Ｔ芽球の調製
活性化Ｔ芽球を、２名の健康なドナーから新たに単離したＰＢＭＣを７日間、ＰＨＡ（最終濃度１０μｇ／ｍｌ）およびＩＬ−２（最終濃度４ｎｇ／ｍｌ、最後の２４時間の間にのみ添加）で３７℃および５％ ＣＯ２において刺激することによって生成した。
抗体結合後のＧＩＴＲのインターナリゼーション
活性化ＣＤ４＋／ＣＤ８＋ Ｔ芽球を、９６ウェルＵ底プレートに２×１０５／ウェルで播種した。ウェルを、培地単独、組換えＧＩＴＲ−リガンド（１０μｇ／ｍｌ、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ， Ｃａｔ＃ ６９８７−ＧＬ−０２５／ＣＦ）、ＡＢＰ１（約２５０ｋＤａ）、ｈＩｇＧ４ ＴＭ形式アイソタイプコントロール、ＡＢＰ３５（約１５０ｋＤａ）、またはｈＩｇＧ１標準形式アイソタイプコントロールで、各々９種の用量において処理した： １０μｇ／ｍＬ、２μｇ／ｍＬ、０．４μｇ／ｍＬ、８０ｎｇ／ｍＬ、１６ｎｇ／ｍＬ、３．２ｎｇ／ｍＬ、０．６４ｎｇ／ｍＬ、０．１３ｎｇ／ｍＬ、および０．０２６ｎｇ／ｍＬ。
抗体結合後のＧＩＴＲのインターナリゼーション
抗体媒介性クラスター形成は、ＴＮＦレセプタースーパーファミリーメンバー（例えば、ＧＩＴＲ）のエンドサイトーシスおよびシグナル伝達を促進する。ＡＢＰ１およびＡＢＰ３５（ならびにそのアイソタイプコントロール）がクラスター形成およびインターナリゼーションを媒介する能力を測定した。
その活性化Ｔ芽球を、ＦＡＣＳソーティングのために先ず染色した。Ｆｃレセプターを、ヒトＴｒｕＳｔａｉｎ（登録商標） ＦｃＸで１０分間、室温においてブロックした。細胞を、蛍光結合体化抗体とともに３０分間、４℃において、表１４にあるようにインキュベートした。次いで、細胞を、ＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、パラホルムアルデヒド中で３０分間、遮光して固定し、再度洗浄し、２００μｌ ＦＡＣＳ緩衝液中で再懸濁し、ＢＤ Ｆｏｒｔｅｓｓａ機器で取得した。
ＧＩＴＲインターナリゼーションを、ドナー１（図１３Ａ〜Ｂ、１３Ｆ〜Ｇ）またはドナー２（図１３Ｃ〜Ｄ、１３Ｈ〜Ｉ）のいずれかに由来するＣＤ４＋細胞（図１３Ａ〜Ｅ）およびＣＤ８＋細胞（図１３Ｆ〜Ｊ）において測定した。細胞を、ＡＢＰ１ ＴＭ形式抗体またはＡＢＰ３５標準的二価抗体のいずれかで処理した。観察され得るように、ＡＢＰ１またはＡＢＰ３５のいずれかとのインキュベーションは、ＡＢＰ１Ｄｙｌｉｇｈｔ６５０（図１３Ａ、１３Ｃ、１３Ｆ、１３Ｈ）でのその後の染色を阻害するが、ＡＢＰ１でのインキュベーションのみは、非競合的クローン１０８−１７での染色によって測定されるように、ＧＩＴＲインターナリゼーションを誘導する（図１３Ｂ、１３Ｄ、１３Ｇ、１３Ｉ）。両方のドナーに由来する細胞に対するＡＢＰ１のＥＣ５０の決定を、図１３Ｅ（ＣＤ４＋細胞）および図１３Ｊ（ＣＤ８＋細胞）に示す。
ＡＢＰ１またはＡＢＰ３５で処理した活性化Ｔ細胞におけるサイトカイン生成
活性化ＣＤ４＋／ＣＤ８＋ Ｔ芽球を、９６ウェルＵ底プレートに５×１０４／ウェルで播種した。ウェルを、培地単独、組換えＧＩＴＲ−リガンド（１０μｇ／ｍｌ、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ， Ｃａｔ＃ ６９８７−ＧＬ−０２５／ＣＦ）、ＡＢＰ１、ｈＩｇＧ４ ＴＭ形式アイソタイプコントロール、ＡＢＰ３５、またはｈＩｇＧ１標準形式アイソタイプコントロールで、各々９種の用量において処理した： １０μｇ／ｍＬ、２μｇ／ｍＬ、０．４μｇ／ｍＬ、８０ｎｇ／ｍＬ、１６ｎｇ／ｍＬ、３．２ｎｇ／ｍＬ、０．６４ｎｇ／ｍＬ、０．１３ｎｇ／ｍＬ、および０．０２６ｎｇ／ｍＬ。
細胞を、１μｇ／ｍｌ 抗ＣＤ３抗体（マウス抗ヒト、クローンＵＣＨＴ−１）、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ， Ｃａｔ＃ ＭＡＢ１００）および２μｇ／ｍｌ 抗ＣＤ２８（マウス抗ヒト、クローン３７４０７）， Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ， Ｃａｔ＃ ＭＡＢ３４２）抗体を添加することによって刺激した。アッセイを、３７℃および５％ ＣＯ２において４８時間インキュベートした。ＩＬ−２生成を、ＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）によって測定した。
Ｔ芽球をＴＭ形式抗体 ＡＢＰ１とともにインキュベートすると、活性化ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞によるＧＩＴＲのインターナリゼーションがもたらされるが、標準二価形式にある同じ抗体（ＡＢＰ３５）でも、それらのアイソタイプコントロールのうちのいずれでもインターナリゼーションはおこらない（図１３）。
さらに、上記ＡＢＰ１によるＧＩＴＲレセプターのスーパークラスター形成は、用量依存性様式で活性化Ｔ芽球によるＩＬ−２分泌を促進するが、従来の二価ＡＢＰによる結合では促進しない（図１４）。合わせると、これらのデータは、従来の抗ＧＩＴＲ治療に応答しないＴ芽球がその相当するＴＭ形式抗体に応答することを示す。
実施例９： ２種のベンチマーク抗体ＳＥＣ４およびＳＥＣ９との比較での、ＡＢＰ１で処理した活性化Ｔ細胞におけるサイトカイン生成
活性化Ｔ芽球を、実施例８に記載されるとおりに調製し、これを使用して、ＡＢＰ１の活性と、ベンチマーク抗ＧＩＴＲ抗体であるＳＥＣ４およびＳＥＣ９とを比較した。活性化Ｔ芽球を、２名の健康なドナーから新たに単離したＰＢＭＣを７日間、ＰＨＡ（最終濃度１０μｇ／ｍｌ）およびＩＬ−２（最終濃度４ｎｇ／ｍｌ、最後の２４時間の間にのみ添加）で３７℃および５％ ＣＯ２において刺激することによって生成した。
活性化ＣＤ４＋／ＣＤ８＋ Ｔ芽球を、９６ウェルＵ底プレートに５×１０４／ウェルで播種した。ウェルを、培地単独、組換えＧＩＴＲ−リガンド、ＡＢＰ１、ＳＥＣ４、ＳＥＣ９、ｈＩｇＧ４ ＴＭ形式アイソタイプコントロール（「ＩｓｏＴＭ」）、ｈＩｇＧ１標準形式アイソタイプコントロール、およびｈＩｇＧ４標準形式アイソタイプコントロールで、各々９種の用量において処理した：１０μｇ／ｍＬ、２μｇ／ｍＬ、０．４μｇ／ｍＬ、８０ｎｇ／ｍＬ、１６ｎｇ／ｍＬ、３．２ｎｇ／ｍＬ、０．６４ｎｇ／ｍＬ、０．１３ｎｇ／ｍＬ、および０．０２６ｎｇ／ｍＬ。
ＡＢＰ１、ＳＥＣ４、およびＳＥＣ９で処理した活性化Ｔ細胞におけるサイトカイン生成
細胞を、１μｇ／ｍｌ 抗ＣＤ３抗体および２μｇ／ｍｌ 抗ＣＤ２８抗体を添加することによって刺激した。細胞を、３７℃および５％ ＣＯ２において４８時間インキュベートした。ＩＬ−２生成を、ＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）によって測定した。実施例８において認められるように、ＴＭ形式ＡＢＰ１は、用量依存性様式で活性化Ｔ芽球によるＩＬ−２分泌を促進する。活性化Ｔ細胞からのＩＬ−２生成は、図１５Ａ（ドナー１）および１５Ｂ（ドナー２）に示される。その相当するＥＣ５０を、図１５Ｃ（ドナー１）および１５Ｄ（ドナー２）に示す。
図中で認められ得るように、ＳＥＣ４およびＳＥＣ９は、用量依存性様式でＩＬ−２を効率的に誘導せず、ＡＢＰ１は、明らかな用量依存性様式でＳＥＣ４およびＳＥＣ９より大きな程度へとＩＬ−２生成を誘導した。合わせると、これらのデータは、従来の抗ＧＩＴＲ治療に応答しないＴ芽球がその相当するＴＭ形式抗体に応答することを裏付ける。
均等物
上記で示される開示は、独立した有用性を有する複数の別個の発明を包含し得る。これらの発明の各々がその好ましい形態において開示されてきたが、本明細書で開示されかつ例証されるとおりのこれらの具体的実施形態が、限定する意味で考慮されるべきではない。なぜなら多くのバリエーションが可能だからである。本発明の主題は、本明細書で開示される種々の要素、特徴、機能、および／または特性の全ての新規かつ自明でない組み合わせおよび部分組み合わせを含む。以下の請求項は特に、新規かつ自明でないと考えられるある種の組み合わせおよび部分組み合わせを指し示す。特徴、機能、要素、および／または特性の他の組み合わせおよび部分組み合わせにおいて具現化される発明は、本出願において、本出願からの優先権を主張する出願において、または関連出願において特許請求されうる。このような請求項はまた、異なる発明に関しようが同じ発明に関しようが、そしてその元の請求項との比較において範囲がより広かろうが、より狭かろうが、等しかろうが、異なろうが、本開示の発明の主題の範囲内に含まれると考えられる。

Claims (157)

  1. 以下の６つのＣＤＲ配列を含む、ヒトＧＩＴＲ（ｈＧＩＴＲ；配列番号１）に特異的に結合する単離された多価抗原結合タンパク質（ＡＢＰ）：
    ａ．配列Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５ＲＧＹＧＤＹＧＧＨＨＡＦＤＩを有するＣＤＲ−Ｈ３であって、ここでＸ１はＡまたはＶであり、Ｘ２はＨ、Ｄ、Ｌ、またはＲであり、Ｘ３はＥまたはＤであり、Ｘ４はＲ、Ｎ、Ｓ、またはＡであり、Ｘ５はＶ、ＤまたはＧであるＣＤＲ−Ｈ３（配列番号１４１）；
    ｂ．配列Ｘ１ＩＸ２Ｘ３ＳＧＸ４ＴＹＹＮＰＳＬＫＳを有するＣＤＲ−Ｈ２であって、ここでＸ１はＧ、Ｌ、またはＳであり、Ｘ２はＹ、Ａ、またはＶであり、Ｘ３はＥ、ＹまたはＨであり、Ｘ４はＳまたはＫであるＣＤＲ−Ｈ２（配列番号１４２）；
    ｃ．配列Ｘ１ＳＩＳＳＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５ＷＸ６を有するＣＤＲ−Ｈ１であって、ここでＸ１はＹまたはＧであり、Ｘ２はＧ、Ｓ、またはＥであり、Ｘ３はＬ、Ｇ、Ｓ、Ｙ、またはＡであり、Ｘ４はＧ、Ａ、Ｙ、Ｍ、またはＧであり、Ｘ５はＶ、Ａであるかまたは存在せず、Ｘ６はＳまたはＧであるＣＤＲ−Ｈ１（配列番号１４３）；
    ｄ．配列ＱＱＥＹＸ１ＴＰＰＸ２を有するＣＤＲ−Ｌ３であって、ここでＸ１はＡまたはＮであり、Ｘ２はＴまたはＳであるＣＤＲ−Ｌ３（配列番号１４４）；
    ｅ．配列Ｘ１ＡＸ２ＳＬＸ３Ｘ４を有するＣＤＲ−Ｌ２であって、ここでＸ１はＡまたはＳであり、Ｘ２はＤまたはＳであり、Ｘ３はＱ、Ｄ、Ｋ、またはＥであり、Ｘ４はＳまたはＹであるＣＤＲ−Ｌ２（配列番号１４５）；および
    ｆ．配列Ｘ１ＡＳ Ｘ２ＳＩ Ｘ３Ｘ４ＹＬＮを有するＣＤＲ−Ｌ１であって、ここでＸ１はＧまたはＲであり、Ｘ２はＱまたはＫであり、Ｘ３はＳ、Ｄ、またはＮであり、Ｘ４はＳまたはＴであるＣＤＲ−Ｌ１（配列番号１４６）。
  2. 前記ＡＢＰは、
    ａ．配列番号１３のＣＤＲ−Ｈ３、配列番号１２のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１１のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１６のＣＤＲ−Ｌ３、配列番号１５のＣＤＲ−Ｌ２、および配列番号１４のＣＤＲ−Ｌ１；
    ｂ．配列番号２３のＣＤＲ−Ｈ３、配列番号２２のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号２１のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１７のＣＤＲ−Ｌ３、配列番号１５のＣＤＲ−Ｌ２、および配列番号１４のＣＤＲ−Ｌ１；
    ｃ．配列番号３０のＣＤＲ−Ｈ３、配列番号２９のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号２８のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１７のＣＤＲ−Ｌ３、配列番号３１のＣＤＲ−Ｌ２、および配列番号１４のＣＤＲ−Ｌ１；
    ｄ．配列番号３０のＣＤＲ−Ｈ３、配列番号２９のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号２８のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１７のＣＤＲ−Ｌ３、配列番号１５のＣＤＲ−Ｌ２、および配列番号３６のＣＤＲ−Ｌ１；
    ｅ．配列番号３０のＣＤＲ−Ｈ３、配列番号２９のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号２８のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１７のＣＤＲ−Ｌ３、配列番号４１のＣＤＲ−Ｌ２、および配列番号１４のＣＤＲ−Ｌ１；
    ｆ．配列番号４８のＣＤＲ−Ｈ３、配列番号４７のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号４６のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１７のＣＤＲ−Ｌ３、配列番号５０のＣＤＲ−Ｌ２、および配列番号４９のＣＤＲ−Ｌ１；
    ｇ．配列番号４８のＣＤＲ−Ｈ３、配列番号４７のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号４６のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号５６のＣＤＲ−Ｌ３、配列番号５５のＣＤＲ−Ｌ２、および配列番号５４のＣＤＲ−Ｌ１；
    ｈ．配列番号６１のＣＤＲ−Ｈ３、配列番号６０のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号５９のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１６のＣＤＲ−Ｌ３、配列番号１５のＣＤＲ−Ｌ２、および配列番号１４のＣＤＲ−Ｌ１；
    ｉ．配列番号６１のＣＤＲ−Ｈ３、配列番号４７のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号４６のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１６のＣＤＲ−Ｌ３、配列番号１５のＣＤＲ−Ｌ２、および配列番号１４のＣＤＲ−Ｌ１；または
    ｊ．配列番号１０３のＣＤＲ−Ｈ３、配列番号２２のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号２１のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１６のＣＤＲ−Ｌ３、配列番号１５のＣＤＲ−Ｌ２、および配列番号１４のＣＤＲ−Ｌ１．
    を含む、請求項１に記載のＡＢＰ。
  3. ａ．請求項２．ａのＡＢＰは、配列番号９のＶＨ配列および配列番号１０のＶＬ配列を含む；
    ｂ．請求項２．ｂのＡＢＰは、配列番号１９のＶＨ配列および配列番号２０のＶＬ配列を含む；
    ｃ．請求項２．ｃのＡＢＰは、配列番号２６のＶＨ配列および配列番号２７のＶＬ配列を含む；
    ｄ．請求項２．ｄのＡＢＰは、配列番号２６または配列番号３４のＶＨ配列および配列番号３５のＶＬ配列を含む；
    ｅ．請求項２．ｅのＡＢＰは、配列番号２６のＶＨ配列および配列番号４０のＶＬ配列を含む；
    ｆ．請求項２．ｆのＡＢＰは、配列番号４４のＶＨ配列および配列番号４５のＶＬ配列を含む；
    ｇ．請求項２．ｇのＡＢＰは、配列番号４４のＶＨ配列および配列番号５３のＶＬ配列を含む；
    ｈ．請求項２．ｈのＡＢＰは、配列番号５８のＶＨ配列および配列番号１０のＶＬ配列を含む；
    ｉ．請求項２．ｉのＡＢＰは、配列番号１０４のＶＨ配列および配列番号１０のＶＬ配列を含む；ならびに
    ｊ．請求項２．ｊのＡＢＰは、配列番号１０５のＶＨ配列および配列番号１０のＶＬ配列を含む、
    請求項２に記載のＡＢＰ。
  4. ａ．請求項３．ａのＡＢＰは、配列番号７の重鎖および配列番号８の軽鎖を含む；
    ｂ．請求項３．ｂのＡＢＰは、配列番号１７の重鎖および配列番号１８の軽鎖を含む；
    ｃ．請求項３．ｃのＡＢＰは、配列番号２４の重鎖および配列番号２５の軽鎖を含む；
    ｄ．請求項３．ｄのＡＢＰは、（ｉ）配列番号３２の重鎖および配列番号３３の軽鎖、または（ｉｉ）配列番号３７の重鎖および配列番号３３の軽鎖を含む；
    ｅ．請求項３．ｅのＡＢＰは、（ｉ）配列番号３８の重鎖および配列番号３９の軽鎖を含む；
    ｆ．請求項３．ｆのＡＢＰは、（ｉ）配列番号４２の重鎖および配列番号４３の軽鎖を含む；
    ｇ．請求項３．ｇのＡＢＰは、（ｉ）配列番号５１の重鎖および配列番号５２の軽鎖を含む；
    ｈ．請求項３．ｈのＡＢＰは、（ｉ）配列番号５７の重鎖および配列番号８の軽鎖を含む；
    ｉ．請求項３．ｉのＡＢＰは、（ｉ）配列番号１１４の重鎖および配列番号８の軽鎖、または（ｉｉ）配列番号１２０の重鎖および配列番号８の軽鎖；または（ｉｉｉ）配列番号１２２の重鎖および配列番号８の軽鎖を含む；あるいは
    ｊ．請求項３．ｊのＡＢＰは、（ｉ）配列番号１１５の重鎖および配列番号８の軽鎖、または（ｉｉ）配列番号１２１の重鎖および配列番号８の軽鎖；または（ｉｉｉ）配列番号１２３の重鎖および配列番号８の軽鎖を含む、
    請求項３に記載のＡＢＰ。
  5. 以下の６つのＣＤＲ配列を含む、ヒトＧＩＴＲ（ｈＧＩＴＲ；配列番号１）に特異的に結合する単離された多価抗原結合タンパク質（ＡＢＰ）：
    ａ．配列番号６６に示される配列を有するＣＤＲ−Ｈ３；
    ｂ．配列番号６５に示される配列を有するＣＤＲ−Ｈ２；
    ｃ．配列番号６４に示される配列を有するＣＤＲ−Ｈ１；
    ｄ．配列番号６９に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ３；
    ｅ．配列番号６８に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ２；および
    ｆ．配列番号６７に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ１。
  6. ａ．前記ＡＢＰは、配列番号６２のＶＨ配列および配列番号６３のＶＬ配列を含む；
    ｂ．前記ＡＢＰは、配列番号７０のＶＨ配列および配列番号６３のＶＬ配列を含む；または
    ｃ．前記ＡＢＰは、配列番号９７のＶＨ配列および配列番号６３のＶＬ配列を含む、
    請求項５に記載のＡＢＰ。
  7. ａ．請求項６．ａのＡＢＰは、（ｉ）配列番号１７１の重鎖および配列番号１７２の軽鎖を含む；
    ｂ．請求項６．ｂのＡＢＰは、配列番号１７３の重鎖および配列番号１７４の軽鎖を含む；
    ｃ．請求項６．ｃのＡＢＰは、（ｉ）配列番号１０６の重鎖配列および配列番号１０７の軽鎖配列；または（ｉｉ）配列番号１１６の重鎖配列および配列番号１０７の軽鎖配列を含む、
    請求項６に記載のＡＢＰ。
  8. 以下の６つのＣＤＲ配列を含む、ヒトＧＩＴＲ（ｈＧＩＴＲ；配列番号１）に特異的に結合する単離された多価抗原結合タンパク質（ＡＢＰ）：
    ａ．配列番号７５に示される配列を有するＣＤＲ−Ｈ３；
    ｂ．配列番号７４に示される配列を有するＣＤＲ−Ｈ２；
    ｃ．配列番号７３に示される配列を有するＣＤＲ−Ｈ１；
    ｄ．配列番号７８に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ３；
    ｅ．配列番号７７に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ２；および
    ｆ．配列番号７５に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ１。
  9. ａ．前記ＡＢＰは、配列番号７１のＶＨ配列および配列番号７２のＶＬ配列を含む；または
    ｂ．前記ＡＢＰは、配列番号９８のＶＨ配列および配列番号７２のＶＬ配列を含む、
    請求項８に記載のＡＢＰ。
  10. ａ．請求項９．ａのＡＢＰは、配列番号１７３の重鎖および配列番号１０９の軽鎖を含む；または
    ｂ．請求項９．ｂのＡＢＰは、（ｉ）配列番号１０８の重鎖および配列番号１０９の軽鎖；もしくは（ｉｉ）配列番号１１７の重鎖および配列番号１０９の軽鎖を含む、
    請求項９に記載のＡＢＰ。
  11. 以下の６つのＣＤＲ配列を含む、ヒトＧＩＴＲ（ｈＧＩＴＲ；配列番号１）に特異的に結合する単離された多価抗原結合タンパク質（ＡＢＰ）：
    ａ．配列番号８３に示される配列を有するＣＤＲ−Ｈ３；
    ｂ．（ｉ）配列番号８２または（ｉｉ）配列番号１００に示される配列を有するＣＤＲ−Ｈ２；
    ｃ．配列番号８１に示される配列を有するＣＤＲ−Ｈ１；
    ｄ．配列番号８６に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ３；
    ｅ．配列番号８５に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ２；および
    ｆ．配列番号８４に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ１。
  12. ａ．前記ＡＢＰは、請求項１１．ｂ（ｉ）のＣＤＲ−Ｈ２配列ならびに配列番号７９のＶＨ配列および配列番号８０のＶＬ配列を含む；
    ｂ．前記ＡＢＰは、請求項１１．ｂ（ｉ）のＣＤＲ−Ｈ２配列ならびに配列番号８７のＶＨ配列および配列番号８０のＶＬ配列を含む；
    ｃ．前記ＡＢＰは、請求項１１．ｂ（ｉ）のＣＤＲ−Ｈ２配列ならびに配列番号８８のＶＨ配列および配列番号８０のＶＬ配列を含む；
    ｄ．前記ＡＢＰは、請求項１１．ｂ（ｉｉ）のＣＤＲ−Ｈ２配列、配列番号９９のＶＨ配列および配列番号８０のＶＬ配列を含む、
    請求項１１に記載のＡＢＰ。
  13. ａ．請求項１２．ａのＡＢＰは、配列番号１７４の重鎖および配列番号１１１の軽鎖を含む；
    ｂ．請求項１２．ｂのＡＢＰは、配列番号１７５の重鎖および配列番号１１１の軽鎖を含む；
    ｃ．請求項１２．ｃのＡＢＰは、配列番号１７６の重鎖および配列番号１１１の軽鎖を含む；
    ｄ．請求項１２．ｄのＡＢＰは、（ｉ）配列番号１１０の重鎖および配列番号１１１の軽鎖；または（ｉｉ）配列番号１１８の重鎖および配列番号１１１の軽鎖を含む、
    請求項１２に記載のＡＢＰ。
  14. 以下の６つのＣＤＲ配列を含む、ヒトＧＩＴＲ（ｈＧＩＴＲ；配列番号１）に特異的に結合する単離された多価抗原結合タンパク質（ＡＢＰ）：
    ａ．配列番号９３に示される配列を有するＣＤＲ−Ｈ３；
    ｂ．配列ＧＩＩＰＩＦＧＥＡＱＹＡＱＸ１ＦＸ２Ｇを有するＣＤＲ−Ｈ２であって、ここでＸ１はＫまたはＲであり、Ｘ２はＱまたはＲであるＣＤＲ−Ｈ２（配列番号２１５）；
    ｃ．配列番号９１に示される配列を有するＣＤＲ−Ｈ１；
    ｄ．配列番号９４に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ３；
    ｅ．配列番号８５に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ２；および
    ｆ．配列番号８４に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ１。
  15. 前記ＡＢＰは、
    ａ．配列番号９２のＣＤＲ−Ｈ２；
    ｂ．配列番号９６のＣＤＲ−Ｈ２；または
    ｃ．配列番号１０２のＣＤＲ−Ｈ２
    を含む、請求項１４に記載のＡＢＰ。
  16. ａ．請求項１５．ａのＡＢＰは、配列番号８９のＶＨ配列および配列番号９０のＶＬ配列を含む；
    ｂ．請求項１５．ｂのＡＢＰは、配列番号９５のＶＨ配列および配列番号９０のＶＬ配列を含む；および
    ｃ．請求項１５．ｃのＡＢＰは、配列番号１０１のＶＨ配列および配列番号９０のＶＬ配列を含む、
    請求項１５に記載のＡＢＰ。
  17. ａ．請求項１６．ａのＡＢＰは、配列番号１７７の重鎖および配列番号１１３の軽鎖を含む；
    ｂ．請求項１６．ｂのＡＢＰは、配列番号１７８の重鎖および配列番号１１３の軽鎖を含む；
    ｃ．請求項１６．ｃのＡＢＰは、（ｉ）配列番号１１２の重鎖および配列番号１１３の軽鎖；または（ｉｉ）配列番号１１９の重鎖および配列番号１１３の軽鎖を含む、
    請求項１６に記載のＡＢＰ。
  18. 以下の６つのＣＤＲ配列を含む、ヒトＧＩＴＲ（ｈＧＩＴＲ；配列番号１）に特異的に結合する単離された多価抗原結合タンパク質（ＡＢＰ）：
    ａ．配列番号１３４に示される配列を有するＣＤＲ−Ｈ３；
    ｂ．配列番号１３３に示される配列を有するＣＤＲ−Ｈ２；
    ｃ．配列番号１３２に示される配列を有するＣＤＲ−Ｈ１；
    ｄ．配列番号１３５に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ３；
    ｅ．配列番号６８に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ２；および
    ｆ．配列番号６７に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ１。
  19. 前記ＡＢＰは、（ｉ）配列番号１２６のＶＨ配列および配列番号１２８のＶＬ配列；または（ｉｉ）配列番号１２７のＶＨ配列および配列番号１２８のＶＬ配列を含む、請求項１８に記載のＡＢＰ。
  20. 前記ＡＢＰは、（ｉ）配列番号１２４の重鎖および配列番号１２５の軽鎖；または（ｉｉ）配列番号１３６の重鎖および配列番号１２５の軽鎖を含む、請求項１８または請求項１９に記載のＡＢＰ。
  21. 以下を含む、ヒトＧＩＴＲ（ｈＧＩＴＲ；配列番号１）に特異的に結合する単離された多価抗原結合タンパク質（ＡＢＰ）：
    ａ．配列番号９、１９、２６、３４、４４、５８、６２、７０、７１、７９、８７、８８、８９、９５、９７、９８、９９、１０１、１０４、１０５、１２６、および１２７から選択されるＶＨ領域のＣＤＲ−Ｈ３と少なくとも約８０％の同一性を有するＣＤＲ−Ｈ３；
    ｂ．配列番号９、１９、２６、３４、４４、５８、６２、７０、７１、７９、８７、８８、８９、９５、９７、９８、９９、１０１、１０４、１０５、１２６、および１２７から選択されるＶＨ領域のＣＤＲ−Ｈ２と少なくとも約８０％の同一性を有するＣＤＲ−Ｈ２；
    ｃ．配列番号９、１９、２６、３４、４４、５８、６２、７０、７１、７９、８７、８８、８９、９５、９７、９８、９９、１０１、１０４、１０５、１２６、および１２７から選択されるＶＨ領域のＣＤＲ−Ｈ１と少なくとも約８０％の同一性を有するＣＤＲ−Ｈ１；
    ｄ．配列番号１０、２０、２７、３５、４０、４５、５３、６３、７２、８０、９０、および１２８から選択されるＶＬ領域のＣＤＲ−Ｌ３と少なくとも約８０％の同一性を有するＣＤＲ−Ｌ３；
    ｅ．配列番号１０、２０、２７、３５、４０、４５、５３、６３、７２、８０、９０、および１２８から選択されるＶＬ領域のＣＤＲ−Ｌ２と少なくとも約８０％の同一性を有するＣＤＲ−Ｌ２；ならびに
    ｆ．配列番号１０、２０、２７、３５、４０、４５、５３、６３、７２、８０、９０、および１２８から選択されるＶＬ領域のＣＤＲ−Ｌ１と少なくとも約８０％の同一性を有するＣＤＲ−Ｌ１。
  22. 前記ＣＤＲ−Ｈ３、ＣＤＲ−Ｈ２、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｌ３、ＣＤＲ−Ｌ２、およびＣＤＲ−Ｌ１は、Ｋａｂａｔ番号付けスキーム、Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けスキーム、またはＩＭＧＴ番号付けスキームから選択される番号付けスキームに従って各々同定される、請求項２１に記載のＡＢＰ。
  23. 前記ＣＤＲ−Ｈ１は、Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けスキームおよびＫａｂａｔ番号付けスキームの両方によって規定されるように（両方の番号付けスキームの境界を含む）同定される、請求項２１または２２のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
  24. ａ．前記ＣＤＲ−Ｈ３は、配列番号１３、２３、３０、４８、６１、６６、７５、８３、９３、１０３、１３１から選択されるＣＤＲ−Ｈ３、または１個、２個、もしくは３個のアミノ酸置換を有するこれらのバリアントを含む；
    ｂ．前記ＣＤＲ−Ｈ２は、配列番号１２、２２、２９、４７、６０、６５、７４、８２、９２、９６、１００、１０２、１３０、および１３３から選択されるＣＤＲ−Ｈ３、または１個、２個、もしくは３個のアミノ酸置換を有するこれらのバリアントを含む；
    ｃ．前記ＣＤＲ−Ｈ１は、配列番号１１、２１、２８、４６、５９、６４、７３、８１、９１、１２９、１３２から選択されるＣＤＲ−Ｈ１、または１個もしくは２個のアミノ酸置換を有するこれらのバリアントを含む；
    ｄ．前記ＣＤＲ−Ｌ３は、配列番号１６、１７、５６、６９、７８、８６、９４、１３５から選択されるＣＤＲ−Ｌ３、または１個もしくは２個のアミノ酸置換を有するこれらのバリアントを含む；
    ｅ．前記ＣＤＲ−Ｌ２は、配列番号１５、３１、４１、５０、５５、６８、７７、および８５から選択されるＣＤＲ−Ｌ２、または１個のアミノ酸置換を有するこれらのバリアントを含む；ならびに
    ｆ．前記ＣＤＲ−Ｌ１は、配列番号１４、３６、４９、５４、６７、７６、および８４から選択されるＣＤＲ−Ｌ１、または１個もしくは２個のアミノ酸置換を有するこれらのバリアントを含む、
    請求項２１〜２３のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
  25. 前記アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である、請求項１〜２４のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
  26. 前記ＡＢＰは：
    ａ．ＧＩＴＲへの結合に関して、ＡＢＰ１、ＡＢＰ２、ＡＢＰ３、ＡＢＰ４、ＡＢＰ５、ＡＢＰ６、ＡＢＰ７、ＡＢＰ８、ＡＢＰ９、ＡＢＰ１０、ＡＢＰ１１、ＡＢＰ１２、ＡＢＰ１３、ＡＢＰ１４、ＡＢＰ１５、ＡＢＰ１６、ＡＢＰ１７、ＡＢＰ１８、ＡＢＰ１９、ＡＢＰ２０、ＡＢＰ２１、ＡＢＰ２２、ＡＢＰ２３、ＡＢＰ２４、ＡＢＰ２５、ＡＢＰ２６、ＡＢＰ２７、ＡＢＰ２８、ＡＢＰ２９、ＡＢＰ３０、ＡＢＰ３１、ＡＢＰ３２、ＡＢＰ３３、およびＡＢＰ３４から選択される抗体（各々、本開示の付表Ａに提供されるとおり）と競合する；
    ｂ．ＧＩＴＲ上のエピトープに特異的に結合する少なくとも３つの抗原結合ドメインを有する；
    ｃ．ＧＩＴＲ上の単一のエピトープに特異的に結合する少なくとも３つの抗原結合ドメインを有する；
    ｄ．ＧＩＴＲ上のエピトープに特異的に結合する少なくとも４つの抗原結合ドメインを有する；
    ｅ．ＧＩＴＲ上の単一のエピトープに特異的に結合する少なくとも４つの抗原結合ドメイン；
    ｆ．標的細胞の表面上で発現されるＧＩＴＲをアゴナイズする；
    ｇ．ＧＩＴＲへのＧＩＴＲＬの結合を遮断する；
    ｈ．エフェクターＴ細胞を、抗原提示細胞からの抗原提示と組み合わせて共刺激する；
    ｉ．調節性Ｔ細胞によるエフェクターＴ細胞の抑制を阻害する；
    ｊ．組織中または全身循環中の調節性Ｔ細胞の数を低減する；
    ｋ．Ｒ５６、Ｃ５８、Ｒ５９、Ｄ６０、Ｙ６１、Ｐ６２、Ｅ６４、Ｅ６５、Ｃ６６、およびＣ６７からなる群からのＧＩＴＲ（配列番号１）残基のうちの１またはこれより多くに結合し得る；または
    ｌ．（ａ）〜（ｋ）のいずれかの組み合わせが可能である、
    請求項１〜２５のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
  27. 前記ＧＩＴＲは、ｈＧＩＴＲ（配列番号１）、ｈＧＩＴＲ−Ｔ４３Ｒ（配列番号２）、ｃＧＩＴＲ（配列番号３）、ｍＧＩＴＲ（配列番号４）、およびこれらの組み合わせから選択される、請求項１〜２６のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
  28. 前記ＡＢＰは、（ａ）カニクイザルＧＩＴＲ（ｃＧＩＴＲ；配列番号３）に特異的に結合する；（ｂ）ｈＧＩＴＲに対する該ＡＢＰの親和性より低い（より高いＫＤによって示されるとおりの）親和性でマウスＧＩＴＲ（ｍＧＩＴＲ；配列番号４）に結合するか、もしくはｍＧＩＴＲに結合しない；または（ｃ）（ａ）〜（ｂ）のいずれかの組み合わせが可能である、請求項１〜２６のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
  29. 前記ＡＢＰは：（ａ）ｃＧＩＴＲ（配列番号３）に特異的に結合する；（ｂ）ｈＧＩＴＲおよびｃＧＩＴＲに対する該ＡＢＰの親和性より低い（より高いＫＤによって示されるとおりの）親和性でｍＧＩＴＲ（配列番号４）に結合する；ならびに（ｃ）ＧＩＴＲへのＧＩＴＲＬの結合を増強する、請求項１〜２６のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
  30. ＧＩＴＲへの結合に関して、請求項１〜２６のいずれか１項に記載のＡＢＰと競合するＡＢＰであって、ここで該ＡＢＰは：（ａ）ｃＧＩＴＲ（配列番号３）に特異的に結合する；（ｂ）ｈＧＩＴＲおよびｃＧＩＴＲに対する該ＡＢＰの親和性より低い（より高いＫＤによって示されるとおりの）親和性でｍＧＩＴＲ（配列番号４）に結合する；ならびに（ｃ）ＧＩＴＲへのＧＩＴＲＬの結合を増強する、ＡＢＰ。
  31. 前記ＡＢＰは抗体を含む、請求項１〜３０のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
  32. 前記抗体はモノクローナル抗体である、請求項３１に記載のＡＢＰ。
  33. 前記抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体またはキメラ抗体から選択される、請求項３１または請求項３２に記載のＡＢＰ。
  34. 前記ＡＢＰは多価である、請求項１〜３３のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
  35. 前記ＡＢＰは抗体フラグメントを含む、請求項１〜３０のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
  36. 前記ＡＢＰは、代替の足場を含む、請求項１〜３０のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
  37. 前記ＡＢＰは、免疫グロブリン定常領域を含む、請求項１〜３０のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
  38. 前記ＡＢＰは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、またはＩｇＭから選択されるクラスの重鎖定常領域を含む、請求項３７に記載のＡＢＰ。
  39. 前記ＡＢＰは、前記クラスＩｇＧおよびＩｇＧ４、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ３から選択されるサブクラスの重鎖定常領域を含む、請求項３８に記載のＡＢＰ。
  40. 少なくとも１つのＦａｂは、ＩｇＧのＦｃドメインのＣ末端に融合する、請求項１〜３９のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
  41. 少なくとも１つのリンカーをさらに含む、請求項１〜３９のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
  42. 前記ＩｇＧはＩｇＧ４である、請求項３９に記載のＡＢＰ。
  43. 前記ＩｇＧはＩｇＧ１である、請求項３９に記載のＡＢＰ。
  44. 少なくとも１つのＦａｂは、ＩｇＧのＦｃドメインのＮ末端に融合する、請求項１〜４３のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
  45. 前記少なくとも１つのＦａｂは、少なくとも２つのＦａｂである、請求項４４に記載のＡＢＰ。
  46. 前記少なくとも１つのＦａｂは、少なくとも３つのＦａｂである、請求項４４に記載のＡＢＰ。
  47. 上記少なくとも１つのＦａｂは、少なくとも４つのＦａｂである、請求項４４に記載のＡＢＰ。
  48. ２つのＦａｂは、前記ＩｇＧのＮ末端に独立して融合する、請求項４５〜４７のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
  49. ２つのＦａｂは、前記ＩｇＧのＣ末端に独立して融合する、請求項４５〜４７のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
  50. Ｆａｂは、前記ＩｇＧの各Ｎ末端に結合し、リンカーは、該Ｆａｂの各々に結合し、Ｆａｂは、各リンカーに結合する、請求項４８に記載のＡＢＰ。
  51. Ｆａｂは、前記ＩｇＧの各Ｃ末端に結合し、リンカーは、該Ｆａｂの各々に結合し、Ｆａｂは、各リンカーに結合する、請求項４９に記載のＡＢＰ。
  52. 各リンカーは、配列番号５を含む、請求項５０または請求項５１に記載のＡＢＰ。
  53. 各リンカーは、配列番号６を含む、請求項５０または請求項５１に記載のＡＢＰ。
  54. 前記ＡＢＰは、共通軽鎖抗体、ｋｎｏｂｓ−ｉｎｔｏ−ｈｏｌｅｓ改変を有する抗体、ＩｇＧに結合したｓｃＦｖ、ＩｇＧに結合したＦａｂ、ダイアボディ、四価二重特異的抗体、ＤＶＤ−ＩｇＴＭ、ＤＡＲＴＴＭ、ＤｕｏＢｏｄｙ（登録商標）、ＣｏｖＸ−Ｂｏｄｙ、Ｆｃａｂ抗体、ＴａｎｄＡｂ（登録商標）、タンデムＦａｂ、ＺｙｂｏｄｙＴＭ、またはこれらの組み合わせを含む、請求項１〜５３のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
  55. 前記ＡＢＰは、１つより多くのＧＩＴＲ分子に結合する、請求項３４に記載のＡＢＰ。
  56. 前記ＡＢＰによるＧＩＴＲのアゴニズムは、ＧＩＴＲＬ結合とは無関係である、請求項２６．ｆに記載のＡＢＰ。
  57. 前記ＡＢＰは、ＧＩＴＲへのＧＩＴＲＬの結合を、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、または少なくとも約９０％増強する、請求項２６．ｆに記載のＡＢＰ。
  58. 前記ＡＢＰは、ＧＩＴＲへのＧＩＴＲＬの結合を少なくとも約５０％増強する、請求項５７に記載のＡＢＰ。
  59. 前記標的細胞は、エフェクターＴ細胞、調節性Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、樹状細胞、およびＢ細胞から選択される、請求項２６．ｆに記載のＡＢＰ。
  60. 前記標的細胞は、ヘルパー（ＣＤ４＋）Ｔ細胞、細胞傷害性（ＣＤ８＋）Ｔ細胞、およびこれらの組み合わせから選択されるエフェクターＴ細胞である、請求項２６．ｆに記載のＡＢＰ。
  61. 前記標的細胞は、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋ 調節性Ｔ細胞、ＣＤ８＋ＣＤ２５＋ 調節性Ｔ細胞、およびこれらの組み合わせから選択される調節性Ｔ細胞である、請求項２６．ｆに記載のＡＢＰ。
  62. 前記組織は腫瘍である、請求項２６．ｊに記載のＡＢＰ。
  63. ｈＧＩＴＲ（配列番号１）またはｈＧＩＴＲ−Ｔ４３Ｒ（配列番号２）に対する第１の抗原結合ドメインのＫＤは、約２０ｎＭ未満である、請求項１〜６２のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
  64. ｃＧＩＴＲ（配列番号３）に対する第１の抗原結合ドメインのＫＤは、約２００ｎＭ未満である、請求項１〜６２のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
  65. ｈＧＩＴＲ（配列番号１）またはｈＧＩＴＲ−Ｔ４３Ｒ（配列番号２）に対する第２の抗原結合ドメインのＫＤは、約１００ｎＭ未満である、請求項１〜６２のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
  66. ｃＧＩＴＲ（配列番号３）に対する第２の抗原結合ドメインのＫＤは、約１μＭ未満である、請求項１〜６２のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
  67. 前記ＡＢＰは、ＩｇＧ１ Ｆｃドメインと比較した場合に、低下したエフェクター機能を有するＦｃドメインを含む、請求項１〜６６のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
  68. 前記ＡＢＰは、無グリコシル化Ｆｃドメインを含む、請求項１〜６７のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
  69. 前記ＡＢＰは、２３４位、２３５位、２６５位、および２９７位のうちの１またはこれより多くでアラニンを有するＩｇＧ１ Ｆｃドメインを含む、請求項１〜６７のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
  70. 前記ＧＩＴＲは、標的細胞の表面上で発現される、請求項１〜６９のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
  71. 前記ＡＢＰは、標的細胞の表面上で発現されるＧＩＴＲをマルチマー化する、請求項１〜７０のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
  72. 前記ＡＢＰは、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、または１２個のＧＩＴＲ分子をマルチマー化する、請求項７１に記載のＡＢＰ。
  73. 前記ＡＢＰは、各々が共通軽鎖可変領域と対形成される少なくとも２つの異なる重鎖可変領域を含む、免疫グロブリンを含む、請求項１〜７２のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
  74. 前記共通軽鎖可変領域は、前記２つの異なる重鎖可変領域の各々とともに別個の抗原結合ドメインを形成する、請求項７３に記載のＡＢＰ。
  75. 前記ＡＢＰは、配列番号１８９を有する第１のＶＨ可変ドメイン、配列番号２１５を有する第２のＶＨ可変ドメイン、および配列番号１９０を有する共通可変軽鎖を含む、請求項７３または請求項７４に記載のＡＢＰ。
  76. 前記ＡＢＰは、配列番号１９９を有する第１のＶＨ可変ドメイン、配列番号２１６を有する第２のＶＨ可変ドメイン、および配列番号２００を有する共通可変軽鎖を含む、請求項７３または請求項７４に記載のＡＢＰ。
  77. 請求項１〜７６のいずれか１項に記載のＡＢＰ、および該ＡＢＰの使用のための指示を含む、キット。
  78. 前記ＡＢＰは凍結乾燥される、請求項７７に記載のキット。
  79. 前記凍結乾燥されたＡＢＰの再構成のための流体をさらに含む、請求項７８に記載のキット。
  80. 前記ＡＢＰは、そのＮ末端においてピログルタミン酸（ｐＥ）残基を有するポリペプチド配列を含む、請求項１〜７６のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
  81. 前記ＡＢＰは、Ｎ末端のＱがｐＥで置換されたＶＨ配列を含む、請求項１〜７６のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
  82. 前記ＡＢＰは、Ｎ末端のＥがｐＥで置換されたＶＬ配列を含む、請求項１〜７６のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
  83. 前記ＡＢＰは、Ｎ末端のＱがｐＥで置換された重鎖配列を含む、請求項１〜７６のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
  84. 前記ＡＢＰは、Ｎ末端のＥがｐＥで置換された軽鎖配列を含む、請求項１〜７６のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
  85. 医薬としての使用のための、請求項１〜７６のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
  86. がんまたはウイルス感染の処置における使用のための、請求項１〜７６のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
  87. 前記がんは、固形腫瘍および血液腫瘍から選択される、がんの処置における使用のための請求項８５に記載のＡＢＰ。
  88. 請求項１〜７６のいずれか１項に記載のＡＢＰ、そのＶＨ、そのＶＬ、その軽鎖、その重鎖またはその抗原結合部分をコードする単離されたポリヌクレオチド。
  89. 請求項８８に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
  90. 請求項８８に記載のポリヌクレオチドまたは請求項８９に記載のベクターを含む、宿主細胞。
  91. 前記宿主細胞は、細菌細胞、真菌細胞、および哺乳動物細胞から選択される、請求項９０に記載の宿主細胞。
  92. 前記宿主細胞は、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ細胞、およびＣＨＯ細胞から選択される、請求項９０に記載の宿主細胞。
  93. 請求項８８に記載のポリヌクレオチドまたは請求項８９に記載のベクターを含む、無細胞発現反応物。
  94. 請求項１〜７６のいずれか１項に記載のＡＢＰを生成するための方法であって、該方法は、該ＡＢＰを請求項９０に記載の宿主細胞において発現する工程および該発現されたＡＢＰを単離する工程を包含する方法。
  95. 請求項１〜７６のいずれか１項に記載のＡＢＰおよび薬学的に受容可能な賦形剤を含む、薬学的組成物。
  96. 前記薬学的組成物中の前記ＡＢＰの量は、被験体において、（ａ）調節性Ｔ細胞によるエフェクターＴ細胞の抑制を低減する；（ｂ）エフェクターＴ細胞を活性化する；（ｃ）組織においてまたは全身的に調節性Ｔ細胞の数を低減する；（ｄ）エフェクターＴ細胞の増殖を誘導もしくは増強する；（ｅ）腫瘍成長の速度を阻害する；（ｆ）腫瘍退縮を誘導する；または（ｇ）これらの組み合わせ、のために十分である、請求項９５に記載の薬学的組成物。
  97. 医薬としての使用のための、請求項９５または請求項９６に記載の薬学的組成物。
  98. がんまたはウイルス感染の処置における使用のための、請求項９５〜９７のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
  99. 前記がんは、固形腫瘍および血液腫瘍から選択される、がんの処置における使用のための請求項９８に記載の薬学的組成物。
  100. 請求項１〜７６のいずれか１項に記載のＡＢＰおよび薬学的に受容可能な賦形剤を含む、薬学的組成物。
  101. 前記薬学的組成物中の前記ＡＢＰの量は、被験体において、（ａ）調節性Ｔ細胞によるエフェクターＴ細胞の抑制を低減する；（ｂ）エフェクターＴ細胞を活性化する；（ｃ）組織においてまたは全身的に調節性Ｔ細胞の数を低減する；（ｄ）エフェクターＴ細胞の増殖を誘導もしくは増強する；（ｅ）腫瘍成長の速度を阻害する；（ｆ）腫瘍退縮を誘導する；または（ｇ）これらの組み合わせ、のために十分である、請求項１００に記載の薬学的組成物。
  102. 疾患または状態を処置または防止する必要性のある被験体において疾患または状態を処置または防止するための方法であって、該方法は、有効量の請求項１〜７６のいずれか１項に記載のＡＢＰ、または請求項１００および１０１のいずれか１項に記載の薬学的組成物を該被験体に投与することを包含する方法。
  103. 被験体において免疫細胞の活性化を増加させるための方法であって、該方法は、有効量の請求項１〜７６のいずれか１項に記載のＡＢＰ、または請求項１００および１０１のいずれか１項に記載の薬学的組成物を該被験体に投与することを包含する方法。
  104. 前記疾患または状態はがんである、請求項１０２または１０３に記載の方法。
  105. 前記方法は、がん関連抗原に対する免疫応答を誘導または増強する、請求項１０２〜１０３のいずれか１項に記載の方法。
  106. 前記ＡＢＰは、（ａ）調節性Ｔ細胞によるエフェクターＴ細胞の抑制を低減する；（ｂ）エフェクターＴ細胞を活性化する；（ｃ）組織においてまたは全身的に調節性Ｔ細胞の数を低減する；（ｄ）エフェクターＴ細胞の増殖を誘導もしくは増強する；（ｅ）腫瘍成長の速度を阻害する；（ｆ）腫瘍退縮を誘導する；または（ｇ）これらの組み合わせ、のために十分な量で投与される、請求項１０２〜１０５のいずれか１項に記載の方法。
  107. 前記がんは固形がんである、請求項１０４〜１０６のいずれか１項に記載の方法。
  108. 前記がんは、血液のがんである、請求項１０４〜１０６のいずれか１項に記載の方法。
  109. １またはこれより多くのさらなる治療剤を投与することをさらに包含する、請求項１０２〜１０８のいずれか１項に記載の方法。
  110. 前記さらなる治療剤は、放射線、細胞傷害性薬剤、化学療法剤、細胞増殖抑制剤、抗ホルモン剤、ＥＧＦＲ阻害剤、免疫刺激剤、抗血管新生剤、およびこれらの組み合わせから選択される、請求項１０９に記載の方法。
  111. 前記さらなる治療剤は免疫刺激剤である、請求項１０９に記載の方法。
  112. 前記免疫刺激剤は、免疫細胞によって発現される阻害性レセプターまたはそのリガンドのシグナル伝達を遮断する薬剤を含む、請求項１１１に記載の方法。
  113. 免疫細胞によって発現される前記阻害性レセプターまたはそのリガンドは、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＮＲＰ−１、ＬＡＧ−３、Ｔｉｍ３、ＴＩＧＩＴ、ニューリチン、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、およびこれらの組み合わせから選択される、請求項１１２に記載の方法。
  114. 前記免疫刺激剤は、免疫細胞によって発現される刺激性レセプターに対するアゴニストを含む、請求項１１１に記載の方法。
  115. 免疫細胞によって発現される前記刺激性レセプターは、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ、ＣＤ４０、およびこれらの組み合わせから選択される、請求項１１３に記載の方法。
  116. 前記免疫刺激剤はサイトカインを含む、請求項１１１に記載の方法。
  117. 前記サイトカインは、ＩＬ−２、ＩＬ−５、ＩＬ−７、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、およびこれらの組み合わせから選択される、請求項１１６に記載の方法。
  118. 前記免疫刺激剤は腫瘍溶解性ウイルスを含む、請求項１１５に記載の方法。
  119. 前記腫瘍溶解性ウイルスは、単純ヘルペスウイルス、水疱性口内炎ウイルス、アデノウイルス、ニューカッスル病ウイルス、ワクシニアウイルス、マラバウイルス、およびこれらの組み合わせから選択される、請求項１１８に記載の方法。
  120. 前記免疫刺激剤は、キメラ抗原レセプターを発現するＴ細胞を含む、請求項１１１に記載の方法。
  121. 前記免疫刺激剤は、二重特異的または多重特異的なＴ細胞指向性抗体を含む、請求項１１１に記載の方法。
  122. 前記免疫刺激剤は、抗ＴＧＦ−β抗体、ＴＧＦ−βトラップ、またはこれらの組み合わせを含む、請求項１１１に記載の方法。
  123. 前記免疫刺激剤は、がん関連抗原に対するワクチンを含む、請求項１１１に記載の方法。
  124. 免疫応答を調整する必要性のある被験体において免疫応答を調整するための方法であって、該方法は、有効量の請求項１〜７６のいずれか１項に記載のＡＢＰ、または請求項９９〜１０５のいずれか１項に記載の薬学的組成物を該被験体に投与することを包含する方法。
  125. １またはこれより多くのさらなる治療剤を前記被験体に投与することをさらに包含する、請求項１０６〜１２８のいずれか１項に記載の方法。
  126. 前記さらなる治療剤は、免疫細胞の刺激性レセプターに対するアゴニストであり、免疫細胞の該刺激性レセプターは、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０、ＣＤ１６０、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ８３リガンド、およびこれらの組み合わせから選択される、請求項１２９に記載の方法。
  127. 前記さらなる治療剤は、ＩＬ−２、ＩＬ−５、ＩＬ−７、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、およびこれらの組み合わせから選択されるサイトカインである、請求項１２９に記載の方法。
  128. 前記さらなる治療剤は、単純ヘルペスウイルス、水疱性口内炎ウイルス、アデノウイルス、ニューカッスル病ウイルス、ワクシニアウイルス、マラバウイルス、およびこれらの組み合わせから選択される腫瘍溶解性ウイルスである、請求項１２９に記載の方法。
  129. 前記さらなる治療剤は、前記ＡＢＰと同じ薬学的組成物中に製剤化される、請求項１２５〜１２８のいずれか１項に記載の方法。
  130. 前記さらなる治療剤は、前記ＡＢＰとは異なる薬学的組成物中に製剤化される、請求項１２５〜１２８のいずれか１項に記載の方法。
  131. 前記さらなる治療剤は、前記ＡＢＰを投与する前に投与される、請求項１２５〜１２８または１３０のいずれか１項に記載の方法。
  132. 前記さらなる治療剤は、前記ＡＢＰを投与した後に投与される、請求項１２５〜１２８または１３０のいずれか１項に記載の方法。
  133. 前記さらなる治療剤は、前記ＡＢＰと同時に投与される、請求項１２５〜１３２のいずれか１項に記載の方法。
  134. 前記ＡＢＰは、ヒトＧＩＴＲ（ｈＧＩＴＲ；配列番号１）のエピトープに特異的に結合し、かつＲ５６、Ｃ５８、Ｒ５９、Ｄ６０、Ｙ６１、Ｐ６２、Ｅ６４、Ｅ６５、Ｃ６６、およびＣ６７からなる群からの１またはこれより多くの残基に結合し得る、請求項１〜７６のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
  135. ヒトＧＩＴＲ（ｈＧＩＴＲ；配列番号１）に特異的に結合する単離された多価抗原結合タンパク質（ＡＢＰ）であって、ここで該ＡＢＰは、結合に関して、ＡＢＰ１、ＡＢＰ２、ＡＢＰ３、ＡＢＰ４、ＡＢＰ５、ＡＢＰ６、ＡＢＰ７、ＡＢＰ８、ＡＢＰ９、ＡＢＰ１０、ＡＢＰ１１、ＡＢＰ１２、ＡＢＰ１３、ＡＢＰ１４、ＡＢＰ１５、ＡＢＰ１６、ＡＢＰ１７、ＡＢＰ１８、ＡＢＰ１９、ＡＢＰ２０、ＡＢＰ２１、ＡＢＰ２２、ＡＢＰ２３、ＡＢＰ２４、ＡＢＰ２５、ＡＢＰ２６、ＡＢＰ２７、ＡＢＰ２８、ＡＢＰ２９、ＡＢＰ３０、ＡＢＰ３１、ＡＢＰ３２、ＡＢＰ３３、およびＡＢＰ３４、ＡＢＰ５０、ＡＢＰ５１、ＡＢＰ５２、ＡＢＰ５３、ＡＢＰ５４、ＡＢＰ５５、ＡＢＰ５６、ＡＢＰ５７、ＡＢＰ６２、ＡＢＰ６３、ＡＢＰ６４、ＡＢＰ６５、ＡＢＰ６６、ＡＢＰ６７、ＡＢＰ６８、ＡＢＰ６７、ＡＢＰ６８、ＡＢＰ６９、ＡＢＰ７０、ＡＢＰ７１、ＡＢＰ７２、ＡＢＰ７３、ＡＢＰ７４、ＡＢＰ７５、ＡＢＰ７６、ＡＢＰ７７、ＡＢＰ７８、ＡＢＰ７９、ＡＢＰ８０、ＡＢＰ８１２、ＡＢＰ８２、ＡＢＰ８３、ＡＢＰ８４、ＡＢＰ８５、ＡＢＰ８６、ＡＢＰ８７、ＡＢＰ８８、ＡＢＰ８９、ＡＢＰ９０、ＡＢＰ９１、ＡＢＰ９２、ＡＢＰ９３、ＡＢＰ９４、ＡＢＰ９５、ＡＢＰ９６、ＡＢＰ９７、ＡＢＰ９８、ＡＢＰ９９、ＡＢＰ１００、ＡＢＰ１０２、ＡＢＰ１０３、ＡＢＰ１０４、ＡＢＰ１０５、ＡＢＰ１０６、ＡＢＰ１０７、ＡＢＰ１０８、およびＡＢＰ１０９（各々、本開示の付表Ａに提供されるとおり）のうちの１またはこれより多くと競合するＡＢＰ。
  136. ４個の重鎖可変領域および４個の軽鎖可変領域を含む抗ヒトＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合フラグメントであって、
    ここで該重鎖可変領域は、配列番号１３からなるＣＤＲ−Ｈ３、配列番号１２からなるＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１１からなるＣＤＲ−Ｈ１を含み；
    そして該軽鎖可変領域は、配列番号１６からなるＣＤＲ−Ｌ３、配列番号１５からなるＣＤＲ−Ｌ２、および配列番号１４からなるＣＤＲ−Ｌ１を含み；そして
    ここで１個の重鎖可変領域および１個の軽鎖可変領域は、１個の抗原結合部位を構成し、ここで該抗ヒトＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合フラグメントは、合計４個の抗原結合部位を含む、
    抗ヒトＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合フラグメント。
  137. （１）または（２）から選択される、請求項１３６に記載の抗ヒトＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合フラグメント：
    （１）４個の重鎖可変領域および４個の軽鎖可変領域を含み、ここで該重鎖可変領域は、配列番号９からなり、該軽鎖可変領域は、配列番号１０からなる抗ヒトＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合フラグメントであって、そして該１個の該重鎖可変領域および１個の該軽鎖可変領域は、１個の抗原結合部位を構成し、そして該抗体または該抗原結合フラグメントは、４個の抗原結合部位を含む抗ヒトＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合フラグメント；ならびに
    （２）４個の重鎖可変領域および４個の軽鎖可変領域を含み、ここで各重鎖可変領域は、配列番号９からなり、ここで該配列の１位のＱは、ピログルタミン酸に改変され、該軽鎖可変領域は、配列番号１０からなる抗ヒトＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合フラグメントであって、そして１個の該重鎖可変領域および１個の該軽鎖可変領域は、１個の抗原結合部位を構成し、そして該抗体または該抗原結合フラグメントは、４個の抗原結合部位を含む抗ヒトＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合フラグメント。
  138. 前記抗体は、２個の重鎖および４個の軽鎖を含み；各重鎖は、第１の重鎖可変領域および第２の重鎖可変領域を含み、各々は、配列番号１３からなるＣＤＲ−Ｈ３、配列番号１２からなるＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１１からなるＣＤＲ−Ｈ１；第１のＣＨ１領域、リンカー、第２のＣＨ１領域、ＣＨ２領域、およびＣＨ３領域を含み；そして各軽鎖は、配列番号１６からなるＣＤＲ−Ｌ３、配列番号１５からなるＣＤＲ−Ｌ２、および配列番号１４からなるＣＤＲ−Ｌ１を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１３６に記載の抗ヒトＧＩＴＲ抗体。
  139. （１）または（２）から選択される、請求項１３６に記載の抗ヒトＧＩＴＲ抗体：
    （１）２個の重鎖および４個の軽鎖を含む抗ヒトＧＩＴＲ抗体であって、ここで
    各重鎖は、配列番号９の重鎖可変領域、ならびにＣＨ１領域、ＣＨ２領域、およびＣＨ３領域からなる２つの構造を含み、そして該構造のうちの一方のＣ末端は、リンカーを通じて他方の構造のＮ末端に連結され；そして
    各軽鎖は、配列番号１０の軽鎖可変領域、および軽鎖定常領域を含む抗ヒトＧＩＴＲ抗体；ならびに
    （２）２個の重鎖および４個の軽鎖を含む抗ヒトＧＩＴＲ抗体であって、ここで
    各重鎖は、配列番号９の重鎖可変領域ならびにＣＨ１領域、ＣＨ２領域、およびＣＨ３領域からなる２つの構造を含み、そして該構造のうちの一方のＣ末端は、リンカーを通じて他方の構造のＮ末端に連結され、ここで該配列の１位のＱは、ピログルタミン酸に改変され；そして
    各軽鎖は、配列番号１０の軽鎖可変領域、および軽鎖定常領域を含む抗ヒトＧＩＴＲ抗体。
  140. （１）〜（４）から選択される、請求項１３６に記載の抗ヒトＧＩＴＲ抗体：
    （１）抗ヒトＧＩＴＲ抗体は、配列番号７からなる２個の重鎖および配列番号８からなる４個の軽鎖を含む、
    （２）抗ヒトＧＩＴＲ抗体は、配列番号７からなる２個の重鎖であって、ここで１位のＱはピログルタミン酸に改変される重鎖および配列番号８からなる４個の軽鎖を含む、
    （３）抗ヒトＧＩＴＲ抗体は、配列番号７の１位のＱから６８６位のＧまでの範囲に及ぶアミノ酸配列からなる２個の重鎖および配列番号８からなる４個の軽鎖を含む、
    （４）抗ヒトＧＩＴＲ抗体は、配列番号７の１位のＱから６８６位のＧまでの範囲に及ぶアミノ酸配列からなる２個の重鎖であって、ここで１位の該Ｑは、ピログルタミン酸に改変される重鎖および配列番号８からなる４個の軽鎖を含む。
  141. （ａ）および（ｂ）からなる群より選択されるポリヌクレオチド：
    （ａ）請求項１３７（１）に記載の抗ヒトＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；および
    （ｂ）請求項１３７（１）に記載の抗ヒトＧＴＩＲ抗体またはその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド。
  142. （ａ）および（ｂ）からなる群より選択されるポリヌクレオチド：
    （ａ）請求項１４０（１）に記載の抗ヒトＧＩＴＲ抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；および
    （ｂ）請求項１４０（１）に記載の抗ヒトＧＴＩＲ抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド。
  143. 以下を含む発現ベクター：
    （ａ）請求項１３７（１）に記載の抗ヒトＧＩＴＲ抗体もしくはその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、および／または
    （ｂ）請求項１３７（１）に記載の抗ヒトＧＩＴＲ抗体もしくはその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド。
  144. 以下を含む発現ベクター：
    （ａ）請求項１４０（１）に記載の抗ヒトＧＩＴＲ抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；および／または
    （ｂ）請求項１４０（１）に記載の抗ヒトＧＩＴＲ抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド。
  145. （ａ）〜（ｄ）からなる群より選択される発現ベクターで形質転換された宿主細胞：
    （ａ）請求項１３７（１）に記載の抗ヒトＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドおよび該抗体またはその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；
    （ｂ）請求項１３７（１）に記載の抗ヒトＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターおよび該抗体またはその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；
    （ｃ）請求項１３７（１）に記載の抗ヒトＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；ならびに
    （ｄ）請求項１３７（１）に記載の抗ヒトＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞。
  146. （ａ）〜（ｄ）からなる群より選択される発現ベクターで形質転換された宿主細胞：
    （ａ）請求項１４０（１）に記載の抗ヒトＧＩＴＲ抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドおよび該抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；
    （ｂ）請求項１４０（１）に記載の抗ヒトＧＩＴＲ抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターおよび該抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；
    （ｃ）請求項１４０（１）に記載の抗ヒトＧＩＴＲ抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；ならびに
    （ｄ）請求項１４０（１）に記載の抗ヒトＧＩＴＲ抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞。
  147. 抗ヒトＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合フラグメントを生成するための方法であって、該方法は、以下の（ａ）〜（ｃ）からなる群より選択される宿主細胞を培養して、四価抗ヒトＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合フラグメントを発現する工程を包含する方法：
    （ａ）請求項１３７（１）に記載の抗ヒトＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドおよび該抗体またはその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；
    （ｂ）請求項１３７（１）に記載の抗ヒトＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターおよび該抗体またはその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；ならびに
    （ｃ）請求項１３７（１）に記載の抗ヒトＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞、および該抗体またはその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞。
  148. 抗ヒトＧＩＴＲ抗体を生成するための方法であって、該方法は、以下の（ａ）〜（ｃ）からなる群より選択される宿主細胞を培養して、抗ヒトＧＩＴＲ抗体を発現する工程を包含する方法：
    （ａ）請求項１４０（１）に記載の抗ヒトＧＩＴＲ抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドおよび該抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；
    （ｂ）請求項１４０（１）に記載の抗ヒトＧＩＴＲ抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターおよび該抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；ならびに
    （ｃ）請求項１４０（１）に記載の抗ヒトＧＩＴＲ抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞および該抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞。
  149. 請求項１４０に記載の抗ヒトＧＩＴＲ抗体および薬学的に受容可能な賦形剤を含む、薬学的組成物。
  150. 請求項１４０（１）に記載の抗ヒトＧＩＴＲ抗体および請求項１４０（４）に記載の抗ヒトＧＩＴＲ抗体および薬学的に受容可能な賦形剤を含む、薬学的組成物。
  151. がんを防止または処置するための薬学的組成物である、請求項１４９または１５０のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
  152. 放射線、細胞傷害性薬剤、化学療法剤、細胞増殖抑制剤、抗ホルモン剤、ＥＧＦＲ阻害剤、免疫刺激剤、抗血管新生剤、およびこれらの組み合わせと組み合わせて投与される、請求項１４９または１５０のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
  153. がんを防止または処置するための、請求項１４０に記載の抗ヒトＧＩＴＲ抗体。
  154. がんを防止または処置するための薬学的組成物の製造のための、請求項１４０に記載の抗ヒトＧＩＴＲ抗体の使用。
  155. 治療上有効な量の請求項１４０に記載の抗ヒトＧＩＴＲ抗体を投与することを包含する、がんを防止または処置するための方法。
  156. １またはこれより多くのさらなる治療剤を投与することをさらに包含する、請求項１５５に記載の方法。
  157. 前記さらなる治療剤は、放射線、細胞傷害性薬剤、化学療法剤、細胞増殖抑制剤、抗ホルモン剤、ＥＧＦＲ阻害剤、免疫刺激剤、抗血管新生剤、およびこれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項１５６に記載の方法。
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