TWI783953B - 抗－ｇｉｔｒ抗原－結合蛋白及其使用方法 - Google Patents

抗－ｇｉｔｒ抗原－結合蛋白及其使用方法 Download PDF

Info

Publication number
TWI783953B
TWI783953B TW106140182A TW106140182A TWI783953B TW I783953 B TWI783953 B TW I783953B TW 106140182 A TW106140182 A TW 106140182A TW 106140182 A TW106140182 A TW 106140182A TW I783953 B TWI783953 B TW I783953B
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
seq
abp
cdr
sequence
cells
Prior art date
Application number
TW106140182A
Other languages
English (en)
Other versions
TW201819416A (zh
Inventor
丹尼爾 海克林
杜甘 辛西亞 賽得爾
威廉 溫斯頓
葛西亞 喬斯 安德里斯 薩爾莫隆
海瑟 布羅得金
索恩賈 克雷菲爾
尼爾斯 Ｐ 尼爾森
Original Assignee
美商潛能醫療有限公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 美商潛能醫療有限公司 filed Critical 美商潛能醫療有限公司
Publication of TW201819416A publication Critical patent/TW201819416A/zh
Application granted granted Critical
Publication of TWI783953B publication Critical patent/TWI783953B/zh

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2878—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2875—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF/TNF superfamily, e.g. CD70, CD95L, CD153, CD154
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/35—Valency
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/51—Complete heavy chain or Fd fragment, i.e. VH + CH1
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/515—Complete light chain, i.e. VL + CL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/75—Agonist effect on antigen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本文提供選擇性地與GITR結合之抗原-結合蛋白(ABP)及其同功異型物與同源物，以及包含該等ABP之組合物。亦提供使用該等ABP之方法，諸如治療性及診斷性方法。

Description

抗－ＧＩＴＲ抗原－結合蛋白及其使用方法
本文提供針對糖皮質激素誘導之腫瘤壞死因子受體相關蛋白(GITR)具有結合特異性之抗原-結合蛋白(ABP)及包含此類ABP之組合物以及套組，該等組合物包括醫藥組合物、診斷性組合物。亦提供製備GITR ABP之方法及使用GITR ABP之方法，例如用於治療性目的、診斷性目的及研究目的。
GITR為腫瘤壞死因子受體(TNFR)超家族之成員。GITR在先天性及後天性免疫系統之許多細胞中表現，且膜表面表現在活化T細胞中增加。參見 Hanabuchib等人,Blood , 2006, 107:3617-3623; 及Nocentini等人,Eur . J . Immunol . , 2005, 35:1016-1022；其中之每一者以全文引用的方式併入本文中。GITR由GITR配位體(GITRL)活化。 GITR之促效作用對於效應T細胞具有共刺激效果。參見 Schaer等人,Curr . Opin . Immunol . , 2012, 24:217-224，其以全文引用的方式併入本文中。已提出將GITR促效劑作為用於癌症療法之治療劑。參見 Schaer等人,supra ; Melero等人,Clin Cancer Res . , 2013, 19:1044-1053; Cohen等人,J . Clin . Oncol . , 2007, 25:3058; Cohen等人,PLoS One , 2010, 5:e10436; Nocentini等人,Br . J . Pharmacol . , 2012, 165:2089-2099; 及美國專利公開案第2007/0098719號；其中之每一者以全文引用的方式併入本文中。 儘管GITR之抗體促效劑已展示在小鼠模型中之前景，但難以獲得針對人類GITR之促效抗體。 Nocentini等人(Br . J . Pharmacol . , 2012, 165:2089-2099)已指出，「抗-GITR mAb在人類中比在小鼠中具有弱許多的觸發潛能」。他們推測，此可能係由於人類GITR必須多聚化成穩定的三聚體或超聚體(例如，三聚體之四聚體)以便穩健地活化之事實的結果。 因此，對於可比已知抗體更強力促效人類GITR之ABP存在需要。本文提供滿足此需要的ABP。
本文提供特異性結合GITR之ABP及使用此類ABP之方法。 在一個態樣中，提供一種經分離之多價抗原結合蛋白(ABP)，其特異性結合人類GITR (hGITR；SEQ ID NO: 1)，其包含以下六個CDR序列：(a)具有序列X1 X2 X3 X4 X5 RGYGDYGGHHAFDI之CDR-H3，其中X1 為A或V，X2 為H、D、L或R，X3 為E或D，X4 為R、N、S或A，及X5 為V、D或G (SEQ ID NO:141)；(b)具有序列X1 IX2 X3 SGX4 TYYNPSLKS之CDR-H2，其中X1 為G、L或S，X2 為Y、A或V，X3 為E、Y或H，及X4 為S或K (SEQ ID NO:142)；(c)具有序列X1 SISSX2 X3 X4 X5 WX6 之CDR-H1，其中X1 為Y或G，X2 為G、S或E，X3 為L、G、S、Y、或A，X4 為G、A、Y、M或G，X5 為V、A或不存在，及X6為S或G (SEQ ID NO:143)；(d)具有序列QQEYX1 TPPX2 之CDR-L3，其中X1 為A或N及X2 為T或S (SEQ ID NO:144)；(e)具有序列X1 AX2 SLX3 X4 之CDR-L2，其中X1 為A或S，X2 為D或S，X3 為Q、D、K或E，及X4 為S或Y (SEQ ID NO:145)；以及(f)具有序列X1 AS X2 SI X3 X4YLN之CDR-L1，其中X1 為G或R，X2 為Q或K，X3為S、D或N，及X4 為S或T (SEQ ID NO:146)。 在一個實施例中，(a)之ABP包含SEQ ID NO:9之VH 序列及SEQ ID NO:10之VL 序列；在另一實施例中，(b)之ABP包含SEQ ID NO:19之VH 序列及SEQ ID NO:20之VL 序列；在另一實施例中，(c)之ABP包含SEQ ID NO:26之VH 序列及SEQ ID NO:27之VL 序列；在另一實施例中，(d)之ABP包含SEQ ID NO:26或SEQ ID NO:34之VH 序列及SEQ ID NO:35之VL 序列；在另一實施例中，(e)之ABP包含SEQ ID NO:26之VH 序列及SEQ ID NO:40之VL 序列；在另一實施例中，(f)之ABP包含SEQ ID NO:44之VH 序列及SEQ ID NO:45之VL 序列；在另一實施例中，(g)之ABP包含SEQ ID NO:44之VH 序列及SEQ ID NO:53之VL 序列；在另一實施例中，(h)之ABP包含SEQ ID NO:58之VH 序列及SEQ ID NO:10之VL 序列；在另一實施例中，(i)之ABP包含SEQ ID NO:104之VH 序列及SEQ ID NO:10之VL 序列；以及在另一實施例中，(j)之ABP包含SEQ ID NO:105之VH 序列及SEQ ID NO:10之VL 序列。 在一個實施例中，(b)之ABP包含SEQ ID NO:7之重鏈及SEQ ID NO:8之輕鏈；在另一實施例中，(b)之ABP包含SEQ ID NO:17之重鏈及SEQ ID NO:18之輕鏈。在另一實施例中，(c)之ABP包含SEQ ID NO:24之重鏈及SEQ ID NO:25之輕鏈。在另一實施例中，(d)之ABP包含(i) SEQ ID NO:32之重鏈及SEQ ID NO:33之輕鏈，或(ii) SEQ ID NO:37之重鏈及SEQ ID NO:33之輕鏈。在另一實施例中，(e)之ABP包含(i) SEQ ID NO:38之重鏈及SEQ ID NO:39之輕鏈。在另一實施例中，(f)之ABP包含SEQ ID NO:42之重鏈及SEQ ID NO:43之輕鏈；在另一實施例中，(g)之ABP包含(i) SEQ ID NO:51之重鏈及SEQ ID NO:52之輕鏈；在另一實施例中，(h)之ABP包含(i) SEQ ID NO:57之重鏈及SEQ ID NO:8之輕鏈；在另一實施例中，(i)之ABP包含(i) SEQ ID NO:114之重鏈及SEQ ID NO:8之輕鏈，或(ii) SEQ ID NO:120之重鏈及SEQ ID NO:8之輕鏈，或(iii) SEQ ID NO:122之重鏈及SEQ ID NO:8之輕鏈；或在另一實施例中，(j)之ABP包含(i) SEQ ID NO:115之重鏈及SEQ ID NO:8之輕鏈，或(ii) SEQ ID NO:121之重鏈及SEQ ID NO:8之輕鏈，或(iii) SEQ ID NO:123之重鏈及SEQ ID NO:8之輕鏈。 在另一實施例中，ABP包含SEQ ID NO:7之重鏈及SEQ ID NO:8之輕鏈；或SEQ ID NO:17之重鏈及SEQ ID NO:18之輕鏈；或SEQ ID NO:24之重鏈及SEQ ID NO:25之輕鏈；SEQ ID NO:32之重鏈及SEQ ID NO:33之輕鏈，或(ii) SEQ ID NO:37之重鏈及SEQ ID NO:33之輕鏈；SEQ ID NO:38之重鏈及SEQ ID NO:39之輕鏈；SEQ ID NO:42之重鏈及SEQ ID NO:43之輕鏈；SEQ ID NO:51之重鏈及SEQ ID NO:52之輕鏈；SEQ ID NO:57之重鏈及SEQ ID NO:8之輕鏈；SEQ ID NO:114之重鏈及SEQ ID NO:8之輕鏈，或(ii) SEQ ID NO:120之重鏈及SEQ ID NO:8之輕鏈；或(iii) SEQ ID NO:122之重鏈及SEQ ID NO:8之輕鏈；或SEQ ID NO:115之重鏈及SEQ ID NO:8之輕鏈，或(ii) SEQ ID NO:121之重鏈及SEQ ID NO:8之輕鏈；或(iii) SEQ ID NO:123之重鏈及SEQ ID NO:8之輕鏈。 在另一態樣中，提供一種經分離之多價抗原結合蛋白(ABP)，其特異性結合人類GITR (hGITR；SEQ ID NO: 1)，其包含以下六個CDR序列：(a)具有在SEQ ID NO:66中闡述之序列之CDR-H3；(b)具有在SEQ ID NO:65中闡述之序列之CDR-H2；(c)具有在SEQ ID NO:64中闡述之序列之CDR-H1；(d)具有在SEQ ID NO:69中闡述之序列之CDR-L3；(e)具有在SEQ ID NO:68中闡述之序列之CDR-L2；以及(f)具有在SEQ ID NO:67中闡述之序列之CDR-L1。 在一個實施例中，ABP包含SEQ ID NO:62之VH 序列及SEQ ID NO:63之VL 序列；SEQ ID NO:70之VH 序列及SEQ ID NO:63之VL 序列；或SEQ ID NO:97之VH 序列及SEQ ID NO:63之VL 序列。 在另一實施例中，ABP包含(i) SEQ ID NO:171之重鏈及SEQ ID NO:172之輕鏈；SEQ ID NO:173之重鏈及SEQ ID NO:174之輕鏈；SEQ ID NO:106之重鏈序列及SEQ ID NO:107之輕鏈序列；或(ii) SEQ ID NO:116之重鏈序列及SEQ ID NO:107之輕鏈序列。 在另一態樣中，提供一種經分離之多價抗原結合蛋白(ABP)，其特異性結合人類GITR (hGITR；SEQ ID NO: 1)，其包含以下六個CDR序列：(a)具有在SEQ ID NO:75中闡述之序列之CDR-H3；(b)具有在SEQ ID NO:74中闡述之序列之CDR-H2；(c)具有在SEQ ID NO:73中闡述之序列之CDR-H1；(d)具有在SEQ ID NO:78中闡述之序列之CDR-L3；(e)具有在SEQ ID NO:77中闡述之序列之CDR-L2；以及(f)具有在SEQ ID NO:75中闡述之序列之CDR-L1。 在一個實施例中，ABP包含SEQ ID NO:71之VH 序列及SEQ ID NO:72之VL 序列；或SEQ ID NO:98之VH 序列及SEQ ID NO:72之VL 序列。 在另一實施例中，ABP包含SEQ ID NO:173之重鏈及SEQ ID NO:109之輕鏈；或ABP包含(i) SEQ ID NO:108之重鏈及SEQ ID NO:109之輕鏈；或(ii) SEQ ID NO:117之重鏈及SEQ ID NO:109之輕鏈。 在另一態樣中，提供一種經分離之多價抗原結合蛋白(ABP)，其特異性結合人類GITR (hGITR；SEQ ID NO: 1)，其包含以下六個CDR序列：(a)具有在SEQ ID NO:83中闡述之序列之CDR-H3；(b)具有在(i) SEQ ID NO:82或(ii) SEQ ID NO:100中闡述之序列之CDR-H2；(c)具有在SEQ ID NO:81中闡述之序列之CDR-H1；(d)具有在SEQ ID NO:86中闡述之序列之CDR-L3；(e)具有在SEQ ID NO:85中闡述之序列之CDR-L2；以及(f)具有在SEQ ID NO:84中闡述之序列之CDR-L1。 在一個實施例中，ABP包含上一段之(b)(i)之CDR-H2序列及SEQ ID NO:79之VH 序列以及SEQ ID NO:80之VL 序列。在另一實施例中，ABP包含上一段之(b)(i)之CDR-H2序列及SEQ ID NO:87之VH 序列以及SEQ ID NO:80之VL 序列。在另一實施例中，ABP包含上一段之(b)(i)之CDR-H2序列及SEQ ID NO:88之VH 序列及SEQ ID NO:80之VL 序列。在另一實施例中，ABP包含上一段之(b)(ii)之CDR-H2序列及SEQ ID NO:99之VH 序列以及SEQ ID NO:80之VL 序列。 在一個實施例中，ABP包含SEQ ID NO:174之重鏈及SEQ ID NO:111之輕鏈；在另一實施例中，ABP包含SEQ ID NO:175之重鏈及SEQ ID NO:111之輕鏈；在另一實施例中，ABP包含SEQ ID NO:176之重鏈及SEQ ID NO:111之輕鏈；在另一實施例中，ABP包含SEQ ID NO:110之重鏈及SEQ ID NO:111之輕鏈；或(ii) SEQ ID NO:118之重鏈及SEQ ID NO:111之輕鏈。 在另一態樣中，提供一種經分離之多價抗原結合蛋白(ABP)，其特異性結合人類GITR (hGITR；SEQ ID NO: 1)，其包含以下六個CDR序列：(a)具有在SEQ ID NO:93中闡述之序列之CDR-H3；(b)具有序列GIIPIFGEAQYAQX1 FX2 G之CDR-H2，其中X1 為K或R，及X2 為Q或R (SEQ ID NO:215)；(c)具有在SEQ ID NO:91中闡述之序列之CDR-H1；(d)具有在SEQ ID NO:94中闡述之序列之CDR-L3；(d)具有在SEQ ID NO:85中闡述之序列之CDR-L2；以及(e)具有在SEQ ID NO:84中闡述之序列之CDR-L1。 在一個實施例中，ABP包含：SEQ ID NO:92之CDR-H2；SEQ ID NO:96之CDR-H2；或SEQ ID NO:102之CDR-H2。 在另一實施例中，ABP包含SEQ ID NO:89之VH 序列及SEQ ID NO:90之VL 序列。在另一實施例中，ABP包含SEQ ID NO:95之VH 序列及SEQ ID NO:90之VL 序列。在另一實施例中，ABP包含SEQ ID NO:101之VH 序列及SEQ ID NO:90之VL 序列。 在另一實施例中，ABP包含SEQ ID NO:177之重鏈及SEQ ID NO:113之輕鏈。在另一實施例中，ABP包含SEQ ID NO:178之重鏈及SEQ ID NO:113之輕鏈。在另一實施例中，ABP包含SEQ ID NO:112之重鏈及SEQ ID NO:113之輕鏈；或(ii) SEQ ID NO:119之重鏈及SEQ ID NO:113之輕鏈。 在另一態樣中，提供一種經分離之多價抗原結合蛋白(ABP)，其特異性結合人類GITR (hGITR；SEQ ID NO: 1)，其包含以下六個CDR序列：(a)具有在SEQ ID NO:134中闡述之序列之CDR-H3；(b)具有在SEQ ID NO:133中闡述之序列之CDR-H2；具有在SEQ ID NO:132中闡述之序列之CDR-H1；(c)具有在SEQ ID NO:135中闡述之序列之CDR-L3；(d)具有在SEQ ID NO:68中闡述之序列之CDR-L2；以及(e)具有在SEQ ID NO:67中闡述之序列之CDR-L1。 在一個實施例中，ABP包含(i) SEQ ID NO:126之VH 序列及SEQ ID NO:128之VL 序列；或(ii) SEQ ID NO:127之VH 序列及SEQ ID NO:128之VL 序列。 在一個實施例中，ABP包含(i) SEQ ID NO:124之重鏈及SEQ ID NO:125之輕鏈；或(ii) SEQ ID NO:136之重鏈及SEQ ID NO:125之輕鏈。 在另一態樣中，提供一種經分離之多價抗原結合蛋白(ABP)，其特異性結合人類GITR (hGITR；SEQ ID NO: 1)，其包含：(a)與選自以下之VH 區之CDR-H3具有至少約60%、至少約70%、至少約80%、至少約90%或至少約95%一致性之CDR-H3：SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:95、SEQ ID NO:97、SEQ ID NO:98、SEQ ID NO:99、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:104、SEQ ID NO:105、SEQ ID NO:126及SEQ ID NO:127；(b)與選自以下之VH 區之CDR-H2具有至少約60%、至少約70%、至少約80%、至少約90%或至少約95%一致性之CDR-H2：SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:95、SEQ ID NO:97、SEQ ID NO:98、SEQ ID NO:99、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:104、SEQ ID NO:105、SEQ ID NO:126及SEQ ID NO:127；(c)與選自以下之VH 區之CDR-H1具有至少約60%、至少約70%、至少約80%、至少約90%或至少約95%一致性之CDR-H1：SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:95、SEQ ID NO:97、SEQ ID NO:98、SEQ ID NO:99、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:104、SEQ ID NO:105、SEQ ID NO:126及SEQ ID NO:127；(d)與選自以下之VL 區之CDR-L3具有至少約60%、至少約70%、至少約80%、至少約90%或至少約95%一致性之CDR-L3：SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:90及SEQ ID NO:128；(e)與選自以下之VL 區之CDR-L2具有至少約60%、至少約70%、至少約80%、至少約90%或至少約95%一致性之CDR-L2：SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:90及SEQ ID NO:128；以及(f)與選自以下之VL 區之CDR-L1具有至少約60%、至少約70%、至少約80%、至少約90%或至少約95%一致性之CDR-L1：SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:90及SEQ ID NO:128。 在一個實施例中，CDR-H3、CDR-H2、CDR-H1、CDR-L3、CDR-L2及CDR-L1各自根據選自Kabat編號方案、Chothia編號方案或IMGT編號方案之編號方案來鑑別。在另一實施例中，CDR-H1係如利用Chothia及Kabat編號方案兩者所定義而鑑別，包括兩個編號方案之邊界。 在一個實施例中，CDR-H3包含選自以下之CDR-H3：SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:131，或具有1、2或3個胺基酸取代之其變體。在另一實施例中，CDR-H2包含選自以下之CDR-H3：SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:74、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:96、SEQ ID NO:100、SEQ ID NO:102、SEQ ID NO:130及SEQ ID NO:133，或具有1、2或3個胺基酸取代之其變體。在另一實施例中，CDR-H1包含選自以下之CDR-H1：SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:129、SEQ ID NO:132，或具有1或2個胺基酸取代之其變體。在另一實施例中，CDR-L3包含選自以下之CDR-L3：SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:78、SEQ ID NO:86、SEQ ID NO:94、SEQ ID NO:135，或具有1或2個胺基酸取代之其變體。在另一實施例中，CDR-L2包含選自以下之CDR-L2：SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:77及SEQ ID NO:85，或具有1個胺基酸取代之其變體。在另一實施例中，CDR-L1包含選自以下之CDR-L1：SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:76及SEQ ID NO:84，或具有1或2個胺基酸取代之其變體。在一個實施例中，胺基酸取代為保守胺基酸取代。 在以上態樣中之任一者之一實施例中，ABP：(a)與選自以下之抗體競爭與GITR結合：ABP1、ABP2、ABP3、ABP4、ABP5、ABP6、ABP7、ABP8、ABP9、ABP10、ABP11、ABP12、ABP13、ABP14、ABP15、ABP16、ABP17、ABP18、ABP19、ABP20、ABP21、ABP22、ABP23、ABP24、ABP25、ABP26、ABP27、ABP28、ABP29、ABP30、ABP31、ABP32、ABP33及ABP34，每一者如本發明之附件A所提供；或(b)具有特異性結合GITR上之抗原決定基之至少三個抗原-結合域；或(c)具有特異性結合GITR上之單一抗原決定基之至少三個抗原-結合域；或(d)具有特異性結合GITR上之抗原決定基之至少四個抗原-結合域；或(e)具有特異性結合GITR上之單一抗原決定基之至少四個抗原-結合域；或(f)促效在靶細胞之表面上表現之GITR；或(g)增強GITRL與GITR之結合；或(h)結合自抗原-呈遞細胞之抗原呈遞共刺激效應T細胞；或(i)抑制由調節T細胞對效應T細胞之抑止；；或(j)減少組織或全身循環中之調節T細胞之數目；(k)能夠與來自由以下各者組成之群之GITR (SEQ ID NO: 1)殘基中之一或多者結合：R56、C58、R59、D60、Y61、P62、E64、E65、C66及C67；或(l)能夠為(a)至(k)之任何組合。 在以上態樣中之任一者之一實施例中，GITR選自hGITR (SEQ ID NO: 1)、hGITR-T43R (SEQ ID NO: 2)、cGITR (SEQ ID NO: 3)、mGITR (SEQ ID NO: 4)，及其組合。在另一實施例中，ABP (a)特異性結合食蟹獼猴GITR (cGITR；SEQ ID NO: 3)；(b)以比ABP針對hGITR之親和性低之親和性(如由更高KD指示)結合鼠GITR (mGITR；SEQ ID NO: 4)，或不結合mGITR；或(c)能夠為(a)至(b)之任何組合。在另一實施例中，ABP：(a)特異性結合cGITR (SEQ ID NO: 3)；(b)以比ABP針對hGITR及cGITR之親和性低之親和性(如由更高KD指示)結合mGITR (SEQ ID NO: 4)；以及(c)增強GITRL與GITR之結合。 在另一態樣中，提供一種與如技術方案1至26中任一項之ABP競爭與GITR結合之ABP，其中該ABP：(a)特異性結合cGITR (SEQ ID NO: 3)；(b)以比ABP針對hGITR及cGITR之親和性低之親和性(如由更高KD指示)結合mGITR (SEQ ID NO: 4)；以及(c)增強GITRL與GITR之結合。在一個實施例中，ABP包含抗體。在另一實施例中，抗體為單株抗體。在另一實施例中，抗體選自人類抗體、人類化抗體或嵌合抗體。在另一實施例中，ABP為多價的。在另一實施例中，ABP包含抗體片段。 在另一實施例中，ABP包含可替代的骨架。在另一實施例中，ABP包含免疫球蛋白恆定區。在另一實施例中，ABP包含選自IgA、IgD、IgE、IgG或IgM之類別之重鏈恆定區。在另一實施例中，ABP包含類別IgG及選自IgG4、IgG1、IgG2或IgG3之子類別之重鏈恆定區。 在以上態樣中之任一者之一實施例中，至少一個Fab與IgG之Fc域之C端融合。在另一實施例中，ABP進一步包含至少一個連接子。在另一實施例中，IgG為IgG4。在另一實施例中，IgG為IgG1。在另一實施例中，至少一個Fab與IgG之Fc域之N端融合。在一個實施例中，至少一個Fab為至少兩個Fab。在另一實施例中，至少一個Fab為至少三個Fab。在另一實施例中，至少一個Fab為至少四個Fab。在另一實施例中，兩個Fab獨立地與IgG之N端融合。在另一實施例中，兩個Fab獨立地與IgG之C端融合。在另一實施例中，Fab與IgG之各N端連接，連接子與各該Fab連接，且Fab與各連接子連接。在另一實施例中，Fab與IgG之各C端連接，連接子與各該Fab連接，且Fab與各連接子連接。在另一實施例中，其中各連接子包含SEQ ID NO:5。在另一實施例中，各連接子包含SEQ ID NO:6。 在以上態樣中之任一者之一實施例中，ABP包含共同輕鏈抗體、具有隆突-入-穴(knobs-into-holes)修飾之抗體、與IgG連接之scFv、與IgG連接之Fab、雙功能抗體、四價雙特異性抗體、DVD-IgTM 、DARTTM 、DuoBody®、CovX-體、Fcab抗體、TandAb®、串聯Fab、ZybodyTM ，或其組合。在一個實施例中，ABP結合多於一個GITR分子。在另一實施例中，ABP不依賴於GITRL結合。在另一實施例中，ABP增強GITRL與GITR之結合至少約10%、至少約20%、至少約30%、至少約40%、至少約50%、至少約60%、至少約70%、至少約80%或至少約90%。在另一實施例中，ABP增強GITRL與GITR之結合至少約50%。在另一實施例中，靶細胞選自效應T細胞、調節T細胞、自然殺手(NK)細胞、自然殺手T (NKT)細胞、樹突狀細胞及B細胞。在另一實施例中，靶細胞係選自輔助(CD4+) T細胞、細胞毒性(CD8+) T細胞及其組合之效應T細胞。在另一實施例中，靶細胞係選自CD4+CD25+Foxp3+調節T細胞、CD8+CD25+調節T細胞及其組合之調節T細胞。在另一實施例中，組織為腫瘤。 在以上態樣中之任一者之一實施例中，第一抗原-結合域針對hGITR (SEQ ID NO: 1)或hGITR-T43R (SEQ ID NO: 2)之KD小於約20 nM。在一個實施例中，第一抗原-結合域針對cGITR (SEQ ID NO: 3)之KD小於約200 nM。在另一實施例中，第二抗原-結合域針對hGITR (SEQ ID NO: 1)或hGITR-T43R (SEQ ID NO: 2)之KD小於約100 nM。在另一實施例中，第二抗原-結合域針對cGITR (SEQ ID NO: 3)之KD小於約1 µM。在另一實施例中，ABP包含具有當與IgG1 Fc域相比時效應功能減少的Fc域。在另一實施例中，ABP包含非糖基化Fc域。在另一實施例中，ABP包含在位置234、235、265及297中之一或多者處具有丙胺酸之IgG1 Fc域。 在以上態樣中之任一者之一實施例中，GITR在靶細胞之表面上表現。在一個實施例中，ABP使在靶細胞之表面上表現之GITR多聚化。在一個實施例中，ABP使2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12個GITR分子多聚化。 在以上態樣中之任一者之一實施例中，ABP特異性結合人類GITR (hGITR；SEQ ID NO: 1)之抗原決定基且能夠結合來自由以下各者組成之群之一或多個殘基：R56、C58、R59、D60、Y61、P62、E64、E65、C66及C67。 在以上態樣中之任一者之一實施例中，ABP包含免疫球蛋白，該免疫球蛋白包含各自與共同輕鏈可變區配對之至少兩個不同(亦即，具有不同序列及/或與不同殘基結合)重鏈可變區。在另一實施例中，共同輕鏈可變區與兩個不同重鏈可變區中之每一者形成不同的抗原-結合域。在另一實施例中，ABP包含具有SEQ ID NO:189之第一VH可變域、具有SEQ ID NO:215之第二VH可變域及具有SEQ ID NO:190之共同可變輕鏈。在另一實施例中，ABP包含具有SEQ ID NO:199之第一VH可變域、具有SEQ ID NO:216之第二VH可變域及具有SEQ ID NO:200之共同可變輕鏈。 在另一態樣中提供一種套組，其包含以上態樣中之任一者或在附件A中闡述之ABP，及ABP之使用說明書。在一個實施例中，ABP為凍乾的。在另一實施例中，套組進一步包含用於還原凍乾ABP之液體。 已知，當抗體在細胞中表現時，抗體將在轉譯之後進行修飾。轉譯後修飾之實例包括在重鏈之C端處之離胺酸利用羧肽酶之裂解；在重鏈及輕鏈之N端處之麩醯胺酸或麩胺酸藉由焦麩胺酸化修飾為焦麩胺酸；糖基化；氧化；去醯胺；以及糖化，且已知，此類轉譯後修飾參見發生在各種抗體中(journal of Pharmaceutical Sciences, 2008, Vol. 97,第2426-2447頁，以全文引用的方式併入本文中)。在一些實施例中，本發明之ABP為已經歷轉譯後修飾之抗體或其抗原結合片段。已經歷轉譯後修飾之抗體或其抗原結合片段之實例包括已經歷在重鏈可變區之N端處之焦麩胺酸化及/或在重鏈之C端處之離胺酸之缺失的抗體或其抗原結合片段。此項技術中已知的係，由於在N末端處之焦麩胺酸化及在C端處之離胺酸之缺失之此類轉譯後修飾對於抗體或其片段之活性並無任何影響(Analytical Biochemistry, 2006, 第348卷, 第24-39頁，以全文引用的方式併入本文中)。 在以上態樣中之任一者之一實施例中，ABP包含在其N端處具有焦麩胺酸(pE)殘基之多肽序列。在一個實施例中，ABP包含其中N端Q經pE取代之VH序列。在另一實施例中，ABP包含其中N端E經pE取代之VL序列。在另一實施例中，ABP包含其中N端Q經pE取代之重鏈序列。 在以上態樣中之任一者之一實施例中，ABP包含其中N端E經pE取代之輕鏈序列。在另一實施例中，ABP用作藥物。在另一實施例中，ABP用於治療癌症或病毒性感染。 在一個實施例中，ABP用於治療癌症，其中癌症選自實體腫瘤及血液腫瘤。 在另一態樣中，提供一種經分離之聚核苷酸，其編碼以上態樣中之任一者或在附件一中闡述之ABP、其VH、其VL、其輕鏈、其重鏈或其抗原-結合部分。 在另一態樣中，提供一種包含以上態樣之聚核苷酸之載體。在另一態樣中，提供一種包含以上態樣中之任一者之聚核苷酸或載體之宿主細胞。在一個實施例中，宿主細胞選自細菌細胞、真菌細胞及哺乳動物細胞。在另一實施例中，宿主細胞選自大腸桿菌(E. coli)細胞、釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)細胞及CHO細胞。 在另一態樣中，提供一種無細胞表現反應，其包含以上態樣之聚核苷酸或載體。 在另一態樣中，提供一種製造以上態樣中之任一者或在附件A中闡述之ABP之方法，其包含在宿主細胞中表現ABP及分離所表現的ABP。 在另一態樣中，提供一種醫藥組合物，其包含以上態樣中之任一者或在附件A中闡述之ABP，及醫藥學上可接受之賦形劑。在一個實施例中，醫藥組合物中之ABP之量足以在個體中：(a)減少由調節T細胞對於效應T細胞之抑止；(b)活化效應T細胞；(c)在組織中或全身性減少調節T細胞之數目；(d)誘導或增強效應T細胞之增殖；(e)抑制腫瘤生長之速率；(f)誘導腫瘤消退；或(g)其組合。在一個實施例中，醫藥組合物用作藥物，例如，用於治療癌症或病毒性感染。在一個實施例中，醫藥組合物用於治療癌症，其中癌症選自實體腫瘤及血液腫瘤。 在另一實施例中，醫藥組合物中之ABP之量在個體中足以：(a)減少由調節T細胞對於效應T細胞之抑止；(b)活化效應T細胞；(c)減少在組織中或全身性調節T細胞之數目；(d)誘導或增強效應T細胞之增殖；(e)抑制腫瘤生長之速率；(f)誘導腫瘤消退；或(g)其組合。 在另一態樣中，提供一種治療或預防有需要之個體之疾病或病狀之方法，其包含向個體投與有效量之以上態樣中之任一者或在附件A中闡述之ABP，或其醫藥組合物。 在另一態樣中，提供一種增加個體中之免疫細胞之活化之方法，其包含向個體投與有效量之以上態樣中之任一者或在附件A中闡述之ABP，或其醫藥組合物。在一個實施例中，疾病或病狀為癌症。 在另一實施例中，該方法誘導或增強針對癌症相關聯抗原之免疫反應。在另一實施例中，ABP以足以進行以下之量投與：(a)減少由調節T細胞對於效應T細胞之抑止；(b)活化效應T細胞；(c)減少在組織中或全身性調節T細胞之數目；(d)誘導或增強效應T細胞之增殖；(e)抑制腫瘤生長之速率；(f)誘導腫瘤消退；或(g)其組合。在另一實施例中，癌症為實體癌症。在另一實施例中，癌症為血液癌症。在另一實施例中，方法進一步包含投與一或多種額外治療劑。在一個實施例中，額外治療劑選自輻射、細胞毒性劑、化學治療劑、細胞生長抑制劑、抗-激素劑、EGFR抑制劑、免疫刺激劑、抗血管生成劑，及其組合。在一個實施例中，額外治療劑為免疫刺激劑。在一個實施例中，免疫刺激劑包含阻斷由免疫細胞表現之抑制性受體或其配位體之信號傳導的試劑。在一個實施例中，由免疫細胞表現之抑制性受體或其配位體選自CTLA-4、PD-1、PD-L1、NRP1、LAG-3、Tim3、TIGIT、神經炎素、BTLA、KIR，及其組合。在一個實施例中，免疫刺激劑包含針對由免疫細胞表現之刺激性受體之促效劑。在另一實施例中，由免疫細胞表現之刺激性受體選自OX40、ICOS、CD27、CD28、4-1BB、CD40，及其組合。在另一實施例中，免疫刺激劑包含細胞介素。在另一實施例中，細胞介素選自IL-2、IL-5、IL-7、IL-12、IL-15、IL-21，及其組合。在另一實施例中，免疫刺激劑包含溶瘤病毒。在另一實施例中，溶瘤病毒選自單純疱疹病毒、水泡性口炎病毒、腺病毒、新城雞瘟病毒、牛痘病毒、馬拉巴(maraba)病毒，及其組合。在另一實施例中，免疫刺激劑包含表現嵌合抗原受體之T細胞。在另一實施例中，免疫刺激劑包含雙特異性或多多特異性T細胞定向抗體。在另一實施例中，免疫刺激劑包含抗-TGF-ß抗體、TGF-ß阱，或其組合。在另一實施例中，免疫刺激劑包含針對癌症相關聯抗原之疫苗。 在另一態樣中，提供一種調節有需要之個體之免疫反應之方法，其包含向個體投與有效量之以上態樣中之任一者或在附件A中闡述之ABP，或其醫藥組合物。在一個實施例中，方法進一步包含向個體投與一或多種額外治療劑。在一個實施例中，額外治療劑係針對免疫細胞之刺激性受體之促效劑，且免疫細胞之刺激性受體選自OX40、CD2、CD27、CDS、ICAM-1、LFA-1 (CD11a/CD18)、ICOS (CD278)、4-1BB (CD137)、CD28、CD30、CD40、BAFFR、HVEM、CD7、LIGHT、NKG2C、SLAMF7、NKp80、CD160、B7-H3、CD83配位體，及其組合。在一個實施例中，額外治療劑係選自IL-2、IL-5、IL-7、IL-12、IL-15、IL-21及其組合之細胞介素。在一個實施例中，額外治療劑係選自單純疱疹病毒、水泡性口炎病毒、腺病毒、新城雞瘟病毒、牛痘病毒、馬拉巴病毒及其組合之溶瘤病毒。在一個實施例中，額外治療劑係在與ABP相同之醫藥組合物中調配。在一個實施例中，額外治療劑係在與ABP不同之醫藥組合物中調配。在一個實施例中，額外治療劑在投與ABP之前投與。在一個實施例中，額外治療劑在投與ABP之後投與。在一個實施例中，額外治療劑與ABP同時投與。 在另一態樣中，提供一種經分離之多價抗原結合蛋白(ABP)，其特異性結合人類GITR (hGITR；SEQ ID NO: 1)，其中ABP與以下中之一或多者競爭結合：ABP1、ABP2、ABP3、ABP4、ABP5、ABP6、ABP7、ABP8、ABP9、ABP10、ABP11、ABP12、ABP13、ABP14、ABP15、ABP16、ABP17、ABP18、ABP19、ABP20、ABP21、ABP22、ABP23、ABP24、ABP25、ABP26、ABP27、ABP28、ABP29、ABP30、ABP31、ABP32、ABP33及ABP34、ABP50、ABP51、ABP52、ABP53、ABP54、ABP55、ABP56、ABP57、ABP62、ABP63、ABP64、ABP65、ABP66、ABP67、ABP68、ABP67、ABP68、ABP69、ABP70、ABP71、ABP72、ABP73、ABP74、ABP75、ABP76、ABP77、ABP78、ABP79、ABP80、ABP812、ABP82、ABP83、ABP84、ABP85、ABP86、ABP87、ABP88、ABP89、ABP90、ABP91、ABP92、ABP93、ABP94、ABP95、ABP96、ABP97、ABP98、ABP99、ABP100、ABP102、ABP103、ABP104、ABP105、ABP106、ABP107、ABP108及ABP109，每一者如本發明之附件A所提供。 在另一態樣中，提供一種抗-人類GITR抗體或其抗原-結合片段，其包含四個重鏈可變區及四個輕鏈可變區，其中重鏈可變區包含由SEQ ID NO:13組成之CDR-H3、由SEQ ID NO:12組成之CDR-H2及由SEQ ID NO:11組成之CDR-H1；且輕鏈可變區包含由SEQ ID NO:16組成之CDR-L3、由SEQ ID NO:15組成之CDR-L2及由SEQ ID NO:14組成之CDR-L1；以及一個重鏈可變區與一個輕鏈可變區構成一個抗原-結合位點，且抗體或抗原-結合片段包含四個抗原-結合位點。 在一個實施例中，抗-人類GITR抗體或其抗原-結合片段包含四個重鏈可變區及四個輕鏈可變區，其中重鏈可變區由SEQ ID NO:9組成，輕鏈可變區由SEQ ID NO:10組成，以及一個重鏈可變區與一個輕鏈可變區構成一個抗原-結合位點，且抗體或抗原-結合片段包含四個抗原-結合位點。 在一個實施例中，抗-人類GITR抗體或其抗原-結合片段包含四個重鏈可變區及四個輕鏈可變區，其中重鏈可變區由SEQ ID NO:9組成，其中在序列之位置1處之Q經修飾為焦麩胺酸，輕鏈可變區由SEQ ID NO:10組成，以及一個重鏈可變區與一個輕鏈可變區構成一個抗原-結合位點，且抗體或抗原-結合片段包含四個抗原-結合位點。 在一個實施例中，抗-人類GITR抗體包含兩個重鏈及四個輕鏈，各重鏈包含由重鏈可變區與CH1區、CH2區及CH3區組成之兩個結構，且該等結構中之一者之C端經由連接子與另一結構之N端連接，以及各輕鏈包含輕鏈可變區及輕鏈恆定區(圖1B中之左圖)。 在一個實施例中，抗-人類GITR抗體包含兩個重鏈及四個輕鏈，重鏈各自包含第一重鏈可變區與第一CH1區、連接子、第二重鏈可變區、第二CH1區、CH2區與CH3區，及各輕鏈包含輕鏈可變區及輕鏈恆定區(圖1B中之左圖)。 在一個實施例中，抗-人類GITR抗體包含兩個重鏈及四個輕鏈；各重鏈包含由重鏈可變區與CH1區、CH2區及CH3區組成之兩個結構，該重鏈可變區包含由SEQ ID NO:13組成之CDR-H3、由SEQ ID NO:12組成之CDR-H2及由SEQ ID NO:11組成之CDR-H1，且該等結構中之一者之羧基端(C端)經由連接子與另一結構之胺基端(N端)連接；以及各輕鏈包含輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含由SEQ ID NO:16組成之CDR-L3、由SEQ ID NO:15組成之CDR-L2及由SEQ ID NO:14組成之CDR-L1。 在一個實施例中，抗-人類GITR抗體包含兩個重鏈及四個輕鏈；各重鏈包含第一重鏈可變區及第二重鏈可變區，各自包含由SEQ ID NO:13組成之CDR-H3、由SEQ ID NO:12組成之CDR-H2及由SEQ ID NO:11組成之CDR-H1；第一CH1區、連接子、第二CH1區、CH2區及CH3區；以及各輕鏈包含輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含由SEQ ID NO:16組成之CDR-L3、由SEQ ID NO:15組成之CDR-L2及由SEQ ID NO:14組成之CDR-L1。 在一個實施例中，抗-人類GITR抗體包含兩個重鏈及四個輕鏈，其中各重鏈包含由SEQ ID NO:9之重鏈可變區與CH1區、CH2區及CH3區組成之兩個結構，且該等結構中之一者之C端經由連接子與另一結構之N端連接，以及各輕鏈包含SEQ ID NO:10之輕鏈可變區及輕鏈恆定區。 在一個實施例中，抗-人類GITR抗體包含兩個重鏈及四個輕鏈，各重鏈包含第一重鏈可變區及第二重鏈可變區，各自如SEQ ID NO:9所闡述；第一CH1區、連接子、第二CH1區、CH2區及CH3區；及其中各輕鏈包含SEQ ID NO:10之輕鏈可變區及輕鏈恆定區。 在一個實施例中，抗-人類GITR抗體包含兩個重鏈及四個輕鏈，其中各重鏈包含由SEQ ID NO:9之重鏈可變區與CH1區、CH2區及CH3區組成之兩個結構，且該等結構中之一者之C端經由連接子與另一結構之N端連接，其中在序列之位置1處之Q經修飾為焦麩胺酸，以及各輕鏈包含SEQ ID NO:10之輕鏈可變區及輕鏈恆定區。 在一個實施例中，抗-人類GITR抗體包含兩個重鏈及四個輕鏈，各重鏈包含第一重鏈可變區及第二重鏈可變區，各自如SEQ ID NO:9所闡述；第一CH1區、連接子、第二CH1區、CH2區及CH3區；其中在序列之位置1處之Q經修飾為焦麩胺酸，以及各輕鏈包含SEQ ID NO:10之輕鏈可變區及輕鏈恆定區。 在一個實施例中，抗-人類GITR抗體包含SEQ ID NO:7之兩個重鏈，該兩個重鏈各自具有兩個可變區；及SEQ ID NO:8之四個輕鏈。 在一個實施例中，抗-人類GITR抗體包含SEQ ID NO:7之兩個重鏈，該兩個重鏈各自具有兩個可變區，其中在序列之位置1處之Q經修飾為焦麩胺酸；及SEQ ID NO:8之四個輕鏈。 在一個實施例中，抗-人類GITR抗體包含由SEQ ID NO:7之位置1處之Q至位置686處之G之範圍內之胺基酸序列組成之兩個重鏈，該兩個重鏈各自具有兩個可變區；及SEQ ID NO:8之四個輕鏈。 在一個實施例中，抗-人類GITR抗體包含由SEQ ID NO:7之位置1處之Q至位置686處之G之範圍內之胺基酸序列組成之兩個重鏈，其中Q經修飾為焦麩胺酸；及SEQ ID NO:8之四個輕鏈。
定義 除非另外定義，否則本文所使用之所有技術術語、符號以及其他科學術語意欲具有涉及本發明之熟習此項技術者通常理解的含義。在一些情況下，出於清楚起見及/或方便參考，在本文中定義具有通常所理解含義之術語，且本文中包括此類定義不應必然解釋為表示與此項技術中通常所理解存在差異。本文中所描述或參考之技術及程序一般為很好理解的，且通常由熟習此項技術者使用習知方法來採用，諸如，在Sambrook等人,Molecular Cloning : A Laboratory Manual 第4版. (2012) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY中描述之廣泛使用的分子選殖方法。按需要，除非另外指出，否則涉及市售可得之套組和試劑之使用的程序一般根據製造商所定義之方案及條件進行。 除非上下文另外明確指示，否則如本文中所使用，單數形式「一(a/an)」及「該(the)」包括複數個提及物。除非另外特別指示，否則術語「包括」、「諸如」及類似者意欲傳達包括(但不限於)。 除非另外特別指示，否則如本文所使用，術語「包含」亦特別包含「由」所敍述要素「組成」及「基本上由」其「組成」之實施例。舉例而言，「包含雙功能抗體」之多特異性ABP包括「由雙功能抗體組成」之多特異性ABP及「基本上由雙功能抗體組成」之多特異性ABP。 術語「約(about)」指示且涵蓋所指示值及高於及低於該值之一定範圍。在某些實施例中，術語「約」指示所指定值±10%、±5%或±1%。在某些實施例中，術語「約」指示所指定值±該值之一個標準差。 術語「GITR」、「GITR蛋白質」及「GITR抗原」在本文中可互換地使用以係指人類GITR、或任何變體(例如，剪接變體及對偶基因變體)、同功異型物、及由細胞天然表現或由用gitr 基因轉染之細胞表現之人類GITR之物種同源物。在一些態樣中，GITR蛋白質為由靈長類(例如，猴或人類)、嚙齒動物(例如，小鼠或大鼠)、狗、駱駝、貓、牛、山羊、馬或綿羊天然表現之GITR蛋白質。在一些態樣中，GITR蛋白質為人類GITR (hGITR；SEQ ID NO: 1)。在一些態樣中，GITR蛋白質為人類GITR T43R變體(hGITR-T43R；SEQ ID NO: 2)。在一些態樣中，GITR蛋白質包含位於SEQ ID NO: 1至SEQ ID NO: 2之位置26至162處之hGITR之胞外域。在一些態樣中，GITR蛋白質為食蟹獼猴GITR (cGITR；SEQ ID NO: 3)。在一些態樣中，GITR蛋白質包含位於SEQ ID NO: 3之位置20至156處之cGITR之胞外域。在一些態樣中，GITR蛋白質為鼠GITR (mGITR；SEQ ID NO: 4)。在一些態樣中，GITR蛋白質包含位於SEQ ID NO: 4之位置20至153處之mGITR之胞外域。在一些態樣中，GITR蛋白質為全長或未加工GITR蛋白質。在一些態樣中，GITR蛋白質為由轉譯後修飾產生之經截斷或經加工GITR蛋白質。GITR亦已知為各種同義詞，包括腫瘤壞死因子受體超家族成員18 (TNFRSF18)；AITR，糖皮質激素誘導之TNFR相關蛋白；活化誘導型TNFR家族受體；TNF受體超家族活化誘導型蛋白；CD357；以及GITR-D。 術語「免疫球蛋白」係指一般包含兩對多肽鏈之一類結構上相關蛋白質：一對輕(L)鏈及一對重(H)鏈。在「完整免疫球蛋白」中，此等鏈之所有四個鏈均由二硫鍵互連。已充分表徵免疫球蛋白之結構。參見 ， 例如 ，Paul, Fundamental Immunology 第7版, Ch. 5 (2013) Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, PA。簡言之，各重鏈通常包含重鏈可變區(VH )及重鏈恆定區(CH )。重鏈恆定區通常包含三個域，縮寫為CH1 、CH2 及CH3 。各輕鏈通常包含輕鏈可變區(VL )及輕鏈恆定區。輕鏈恆定區通常包含一個域，縮寫為CL 。 術語「抗原-結合蛋白」(ABP)係指包含一或多個與抗原或抗原決定基特異性結合之抗原-結合域的蛋白質。在一些實施例中，抗原-結合域以類似於天然存在抗體之特異性及親和性結合抗原或抗原決定基。在一些實施例中，ABP包含抗體，由其組成或基本上由其組成。在一些實施例中，ABP包含抗體片段，由其組成或基本上由其組成。在一些實施例中，ABP包含可替代的骨架，由其組成或基本上由其組成。「GITR ABP」、「抗-GITR ABP」或「GITR-特異性ABP」為如本文所提供之與抗原GITR特異性結合之ABP。在一些實施例中，ABP結合GITR之胞外域。在某些實施例中，本文提供之GITR ABP與GITR之抗原決定基結合，該抗原決定基在來自不同物種之GITR蛋白質之間或在其中為保守的。 術語「抗體」在本文中就其最廣義而言而使用，且包括包含一或多個與抗原或抗原決定基特異性結合之抗原-結合域之免疫球蛋白分子之某些類型。抗體特別地包括完整抗體(例如，完整免疫球蛋白)、抗體片段及多特異性抗體。抗原-結合域之一個實例為由VH -VL 二聚體形成之抗原-結合域。抗體為ABP之一種類型。 術語「可替代的骨架」係指其中一或多個區可能經多樣化以產生一或多個與抗原或抗原決定基特異性結合之抗原-結合域的分子。在一些實施例中，抗原-結合域以類似於天然存在抗體之特異性及親和性結合抗原或抗原決定基。例示性可替代的骨架包括衍生自纖維結合蛋白(例如AdnectinsTM )、β-夾層結構(例如iMab)、脂質運載蛋白(例如Anticalins® )、EETI-II/AGRP、BPTI/LACI-D1/ITI-D2 (例如Kunitz域)、硫氧還蛋白肽適體、蛋白A (例如Affibody® )、錨蛋白重複序列(例如達爾潘蛋白(DARPin))、γ-B-晶狀體球蛋白/泛素(例如阿非林(Affilin))、CTLD3 (例如四連接素(Tetranectin))、非諾莫(Fynomer)及(LDLR-A模組) (例如高親合性多聚體(Avimer))之彼等骨架。關於可替代的骨架之其他資訊在Binz等人,Nat . Biotechnol . , 2005 23:1257-1268; Skerra,Current Opin . in Biotech . , 2007 18:295-304; 及Silacci等人,J . Biol . Chem . , 2014, 289:14392-14398中提供；其中之每一者以全文引用的方式併入本文中。可替代的骨架為ABP之一種類型。 術語「抗原-結合域」意謂ABP之能夠與抗原或抗原決定基特異性結合之部分。 術語「全長抗體」、「完整抗體」及「完全抗體」在本文中互換使用以係指具有實質上類似於天然存在抗體結構之結構及具有包含Fc區之重鏈的抗體。 術語「Fc區」意謂免疫球蛋白重鏈之在天然存在抗體中與Fc受體及補體系統之某些蛋白質相互作用的C端區。各種免疫球蛋白之Fc區之結構及其中所含之糖基化位點為此項技術中已知的。參見 Schroeder及Cavacini,J . Allergy Clin . Immunol . , 2010, 125:S41-52，其以全文引用的方式併入本文中。Fc區可能為天然存在Fc區或如在本發明中其他地方所描述之經修飾Fc區。 可將VH 及VL 區進一步再分為散置有更保守的區的高變之區(「高變區(HVR)」；亦稱為「互補決定區(CDR)」)。更保守的區稱為構架區(FR)。各VH 及VL 一般包含三個CDR及四個FR，其以以下次序佈置(自N端至C端)：FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。CDR涉及抗原結合，且影響抗體之抗原特異性及結合親和性。參見Kabat等人, Sequences of Proteins of Immunological Interest 第5版. (1991) Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD，其以全文引用的方式併入本文中。 可將來自任何脊椎動物物種之輕鏈基於其恆定域之序列分為兩個類型中之一者，稱為卡帕(κ)及拉姆達(λ)。 可將來自任何脊椎動物物種之重鏈分為五種不同類別(或同型)中之一者：IgA、IgD、IgE、IgG及IgM。此等類別亦分別地指定為α、δ、ε、γ及µ。基於序列及功能上之差異，將IgG及IgA類別進一步分成子類。人類表現以下子類：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2。 CDR之胺基酸序列邊界可由熟習此項技術者使用多種已知編號方案中之任一者來測定，包括由以下所描述之彼等方案：Kabat等人,supra (「Kabat」編號方案)；Al-Lazikani等人, 1997,J . Mol . Biol . , 273:927-948 (「Chothia」編號方案)；MacCallum等人, 1996,J . Mol . Biol . 262:732-745 (「Contact」編號方案)；Lefranc等人,Dev . Comp . Immunol . , 2003, 27:55-77 (「IMGT」編號方案)；以及Honegge及Plückthun,J . Mol . Biol . , 2001, 309:657-70 (「AHo」編號方案)；其中之每一者以全文引用的方式併入本文中。 表1提供CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3之位置，如利用Kabat及Chothia方案所鑑別。對於CDR-H1，殘基編號均使用Kabat及Chothia編號方案而提供。 除非另外指定，否則本文中針對鑑別特定CDR所使用之編號方案為Kabat/Chothia編號方案。當由此等兩種編號方案涵蓋之殘基分散(例如，CDR-H1及/或CDR-H2)時，編號方案規定為Kabat或Chothia方案。為方便起見，CDR-H3有時在本文中被稱作Kabat或Chothia。然而，此並不意欲暗示其並不存在之序列上之差異，且熟習此項技術者可藉由檢查序列而容易地確認序列係相同還是不同的。 CDR可例如使用抗體編號軟體(諸如Abnum，可在www.bioinf.org.uk/abs/abnum/處獲得)來指派，且描述在Martin,Immunology , 2008, 45:3832-3839中，其以全文引用的方式併入本文中。表 1 .根據Kabat及Chothia編號方案之CDR中之殘基。
Figure 106140182-A0304-0001
 *當使用Kabat編號規約編號時，CDR-H1之C端視CDR之長度而定在H32與H34之間變化。 「EU編號方案」一般在係指抗體重鏈恆定區中之殘基時使用(例如，如在Kabat等人,supra 中所報導)。除非另外陳述，否則EU編號方案用以係指本文中所描述之抗體重鏈恆定區中之殘基。 「抗體片段」或「抗原-結合片段」包含完整抗體之一部分，諸如完整抗體之抗原-結合或可變區。抗體片段包括(例如) Fv片段、Fab片段、F(ab')2 片段、Fab'片段、scFv (sFv)片段及scFv-Fc片段。 「Fv」片段包含一個重鏈可變域與一個輕鏈可變域之非共價連接二聚體。 除重鏈及輕鏈可變域以外，「Fab」片段包含輕鏈之恆定域及重鏈之第一恆定域(CH1 )。Fab片段可例如利用重組方法或藉由全長抗體之番木瓜蛋白酶消化來產生。 「F(ab')2 」片段含有兩個靠近鉸鏈區由二硫鍵連接之Fab'片段。F(ab')2 片段可例如利用重組方法或藉由完整抗體之胃蛋白酶消化來產生。 F(ab')片段可例如藉由用ß-巰基乙醇處理來解離。 「單鏈Fv」或「sFv」或「scFv」抗體片段包含單一多肽鏈中之VH 域及VL 域。VH 及VL 一般由肽連接子連接。參見 Plückthun A. (1994)。在一些實施例中，連接子為(GGGGS)n (SEQ ID NO: 5)。在其他實施例中，連接子為GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:6)。在一些實施例中，n=1、2、3、4、5或6。參見 Antibodies from Escherichia coli. In Rosenberg M. & Moore G.P. (編),The Pharmacology of Monoclonal Antibodies 第113卷 (第269-315頁). Springer-Verlag, New York，其以全文引用的方式併入本文中。 「scFv-Fc」片段包含與Fc域連接之scFv。舉例而言，Fc域可與scFv之C端連接。視scFv中之可變域之取向(亦即，VH -VL 或VL -VH )而定，Fc域可能在VH 或VL 之後。可以使用此項技術中已知或本文中所描述之任何合適的Fc域。在一些情況下，Fc域包含IgG4 Fc域。 術語「單域抗體」係指其中在不存在其他可變域之情況下抗體之一個可變域與抗原特異性結合的分子。單域抗體及其片段描述於Arabi Ghahroudi等人,FEBS Letters , 1998, 414:521-526及Muyldermans等人,Trends in Biochem . Sci . , 2001, 26:230-245中，其中之每一者以全文引用的方式併入本文中。 「多特異性ABP」為一種包含兩個或更多個集合地特異性結合兩種或更多種不同抗原決定基之不同抗原-結合域的ABP。兩種或更多種不同抗原決定基可以為相同抗原(例如，由細胞表現之單一GITR分子)上或不同抗原(例如，由相同細胞表現之不同GITR分子)上之抗原決定基。在一些態樣中，多特異性ABP結合兩種不同抗原決定基(亦即，「雙特異性ABP」)。在一些態樣中，多特異性ABP結合三種不同抗原決定基(亦即，「三特異性ABP」)。在一些態樣中，多特異性ABP結合四種不同抗原決定基(亦即，「四特異性ABP」)。在一些態樣中，多特異性ABP結合五種不同抗原決定基(亦即，「五特異性ABP」)。在一些態樣中，多特異性ABP結合6、7、8或更多種不同抗原決定基。各結合特異性可以任何合適的價數存在。多特異性ABP之實例在本發明中之其他地方提供。 「單特異性ABP」為一種包含與單一抗原決定基特異性結合之結合位點的ABP。單特異性ABP之實例為天然存在IgG分子，而二價的則在各抗原-結合域處識別相同抗原決定基。結合特異性可以任何合適的價數存在。 術語「單株抗體」係指來自實質上均質抗體之群體之抗體。除可在單株抗體之產生期間正常產生之變體以外，實質上均質抗體之群體包含實質上類似及結合相同抗原決定基之抗體。此類變體一般僅以少量存在。單株抗體通常利用包括自複數種抗體選擇單一抗體之方法來獲得。舉例而言，選擇程序可以為自複數種純系選擇獨特純系，諸如融合瘤純系、噬菌體純系、酵母菌純系、細菌性純系或其他重組DNA純系之池。可進一步更改所選擇抗體例如以改良針對目標之親和性(「親和性成熟」)，以人類化抗體，以改良其在細胞培養物中之產量，及/或以減少其在個體中中之免疫原性。 術語「嵌合抗體」係指其中重鏈及/或輕鏈之一部分源自特定來源或物種而該重鏈及/或輕鏈之其餘部分源自不同來源或物種的抗體。 非人類抗體之「人類化」形式為含有源自非人類抗體之極少序列之嵌合抗體。人類化抗體一般係其中來自一或多個CDR之殘基經來自非人類抗體(供體抗體)之一或多個CDR之殘基置換的人類抗體(接受體抗體)。供體抗體可為任何合適的非人類抗體，諸如具有所需特異性、親和性或生物效果之小鼠、大鼠、家兔、雞或非人類靈長類抗體。在一些情況下接受體抗體之所選擇構架區殘基經來自供體抗體之對應構架區殘基置換。人類化抗體亦可包含在接受體抗體或供體抗體中未發現之殘基。可進行此類修飾以進一步改進抗體功能。對於其他細節，參見 Jones等人,Nature , 1986, 321:522-525；Riechmann等人,Nature , 1988, 332:323-329；以及Presta,Curr . Op . Struct . Biol . , 1992, 2:593-596，其中之每一者以全文引用的方式併入本文中。 「人類抗體」為具有對應於由人類或人類細胞產生之抗體之胺基酸序列的胺基酸序列的抗體，或源自利用人類抗體譜或人類抗體編碼序列之非人類來源(例如，自人類來源或經重新設計而獲得)。人類抗體特異性地排除人類化抗體。 「經分離之ABP」或「經分離之核酸」為已自其天然環境之組分分離及/或回收之ABP或核酸。天然環境之組分可包括酶、激素及其他蛋白質或非蛋白質材料。在一些實施例中，例如藉由使用旋轉杯式測序儀將經分離之ABP進行純化至足以獲得至少15個N端或內部胺基酸序列之殘基的程度。在一些實施例中，利用凝膠電泳(例如，SDS-PAGE)在還原性或非還原性條件用Coomassie®藍或銀染色進行偵測下來將經分離之ABP純化至均質。由於ABP之天然環境之至少一種組分並不存在，經分離之ABP包括重組細胞內之原位ABP。在一些態樣中，經分離之ABP或經分離之核酸藉由至少一個純化步驟來製備。在一些實施例中，將經分離之ABP或經分離之核酸純化至至少80重量%、85重量%、90重量%、95重量%或99重量%。在一些實施例中，將經分離之ABP或經分離之核酸純化至至少80體積%、85體積%、90體積%、95體積%或99體積%。在一些實施例中，經分離之ABP或經分離之核酸提供為包含至少85重量%、90重量%、95重量%、98重量%、99重量%至100重量% ABP或核酸之溶液。在一些實施例中，經分離之ABP或經分離之核酸提供為包含至少85體積%、90體積%、95體積%、98體積%、99體積%至100體積% ABP或核酸之溶液。 「親和性」係指分子(例如，ABP)之單一結合位點與其結合搭配物(例如，抗原或抗原決定基)之間的非共價相互作用之總和的強度。除非另外指示，否則如本文中所使用，「親和性」係指反映結合對(例如，ABP與抗原或抗原決定基)之成員之間的1:1相互作用之固有結合親和性。分子X針對其搭配物Y之親和性一般可由解離平衡常數(KD )表示。有助於解離平衡常數之動力學組分在下文中更詳細地描述。可藉由此項技術中已知之常用方法(包括本文所述之彼等方法)來量測親和性。可例如使用表面電漿子共振(SPR)技術(例如，BIACORE® )或生物層干擾測量法(例如，FORTEBIO® )來測定親和性。 關於ABP與目標分子之結合，術語「結合」、「特異性結合」、「與...特異性結合」、「特異性針對」、「選擇性地結合」及「選擇性針對」特定抗原(例如，多肽目標)或特定抗原上之抗原決定基意謂可量測地不同於非特異性或非選擇性相互作用(例如，與非目標分子)的結合。特異性結合可例如藉由量測與目標分子之結合及將其與同非目標分子之結合進行比較來量測。特異性結合亦可藉由與模擬在目標分子上識別之抗原決定基之對照分子的競爭來測定。在彼情況下，若ABP與目標分子之結合由對照分子競爭性地抑制，則指示特異性結合。在一些態樣中，GITR ABP針對非目標分子之親和性比針對GITR之親和性低約50%。在一些態樣中，GITR ABP針對非目標分子之親和性比針對GITR之親和性低約40%。在一些態樣中，GITR ABP針對非目標分子之親和性比針對GITR之親和性低約30%。在一些態樣中，GITR ABP針對非目標分子之親和性比針對GITR之親和性低約20%。在一些態樣中，GITR ABP針對非目標分子之親和性比針對GITR之親和性低約10%。在一些態樣中，GITR ABP針對非目標分子之親和性比針對GITR之親和性低約1%。在一些態樣中，GITR ABP針對非目標分子之親和性比針對GITR之親和性低約0.1%。 如本文中所使用，術語「kd 」(秒- 1 )係指特定ABP-抗原相互作用之解離速率常數。此值亦被稱作koff 值。 如本文中所使用，術語「ka 」(M- 1 ×秒- 1 )係指特定ABP-抗原相互作用之結合速率常數。此值亦被稱作kon 值。 如本文中所使用，術語「KD 」(M)係指特定ABP-抗原相互作用之解離平衡常數。KD = kd /ka 。 如本文中所使用，術語「KA 」(M- 1 )係指特定ABP-抗原相互作用之結合平衡常數。KA = ka /kd 。 「親和性成熟」ABP係與並不擁有更改之親本ABP相比，具有引起ABP針對其抗原之親和性改良的一或多個更改(例如，在一或多個CDR或FR中)的ABP。在一個實施例中，親和性成熟ABP針對靶抗原具有奈莫耳或皮莫耳親和性。親和性成熟ABP可使用各種此項技術中已知之方法來製造。舉例而言，Marks等人(Bio / Technology , 1992, 10:779-783，其以全文引用的方式併入本文中)藉由VH 及VL 域改組來描述親和性成熟。藉由例如Barbas等人(Proc . Nat . Acad . Sci . U . S . A . , 1994, 91:3809-3813)；Schier等人,Gene , 1995, 169:147-155；Yelton等人,J . Immunol ., 1995, 155:1994-2004；Jackson等人,J . Immunol . , 1995, 154:3310-33199；以及Hawkins等人,J . Mol . Biol . , 1992, 226:889-896來描述CDR及/或構架殘基之隨機突變誘發，其中之每一者以全文引用的方式併入本文中。 「免疫結合物」為與一或多個異源分子結合之ABP。 「效應功能」係指由抗體之Fc區介導之彼等生物活性，該等活性可視抗體同型而變化。抗體效應功能之實例包括C1q與活化補充依賴性細胞毒性(CDC)結合、Fc受體與活化抗體依賴性細胞毒性(ADCC)結合及抗體依賴性細胞吞噬作用(ADCP)。 當在本文中在兩種或更多種ABP之上下文中使用時，術語「與...競爭」或「與...交叉競爭」指示，兩種或更多種ABP競爭與抗原(例如，GITR)結合。在一個例示性分析中，將GITR塗佈在表面上且使其與第一GITR ABP接觸，其後添加第二GITR ABP。在另一例示性分析中，將第一GITR ABP塗佈在表面上且使其與GITR接觸，且接著添加第二GITR ABP。若在任一分析中第一GITR ABP之存在減少第二GITR ABP之結合，則ABP競爭。術語「與...競爭」亦包括其中一個ABP減少另一ABP之結合但其中當以反序添加ABP時未觀測到競爭的ABP之組合。然而，在一些實施例中，第一ABP和第二ABP彼此抑制結合，而不管添加其之次序。在一些實施例中，一種ABP減少另一ABP與其抗原之結合至少50%、至少60%、至少70%、至少80%或至少90%。 術語「抗原決定基」意謂抗原與ABP特異性結合之部分。抗原決定基常常由表面可獲得之胺基酸殘基及/或糖側鏈組成，且可具有特異性三維結構性特徵以及荷質比特徵。構形抗原決定基與非構形抗原決定基之區別在於，在變性溶劑存在下，與前者的結合可消失，但後者則不然。抗原決定基可包含直接涉及結合之胺基酸殘基及不直接涉及結合之其他胺基酸殘基。與ABP結合之抗原決定基可使用針對抗原決定基測定之已知技術來測定，諸如，針對ABP與具有不同點突變之GITR變體或與嵌合GITR變體結合的測試。 多肽序列與參考序列之間的百分比「一致性」定義為在比對序列及引入間隙(視需要)以達成最大序列一致性百分比之後，多肽序列中之胺基酸殘基與參考序列中之胺基酸殘基一致的百分比。出於判定百分比胺基酸序列一致性之目的的比對可以在熟習此項技術者內之各種方式，例如使用公開可獲得的電腦軟體來達成。該等電腦軟體諸如BLAST、BLAST-2、ALIGN、MEGALIGN (DNASTAR)、CLUSTALW、CLUSTAL OMEGA或MUSCLE軟體。熟習此項技術者可判定用於比對序列之參數，包括在所比較序列之全長內達成最大比對所需的任何演算法。 「保守取代」或「保守胺基酸取代」係指用化學上或功能上類似的胺基酸取代胺基酸。提供類似的胺基酸之保守取代表在此項技術中熟知。藉助於實例，在一些實施例中，提供於表2至表4之胺基酸之群組認為係彼此的保守取代。表 2 .在某些實施例中，認為係彼此之保守取代之胺基酸之所選擇群組。
Figure 106140182-A0304-0002
 表 3 .在某些實施例中，認為係彼此之保守取代之胺基酸之額外所選擇群組。
Figure 106140182-A0304-0003
 表 4 .在某些實施例中，認為係彼此之保守取代之胺基酸之其他所選擇群組。
Figure 106140182-A0304-0004
 可例如在Creighton,Proteins : Structures and Molecular Properties 第2版. (1993) W. H. Freeman & Co., New York, NY中找到額外保守取代。藉由在親本ABP中進行一或多個胺基酸殘基之保守取代生成的ABP被稱作「經保守修飾的變體」。 術語「胺基酸」係指二十種常見的天然存在胺基酸。天然存在胺基酸包括丙胺酸(Ala；A)、精胺酸(Arg；R)、天冬醯胺(Asn；N)、天冬胺酸(Asp；D)、半胱胺酸(Cys；C)；麩胺酸(Glu；E)、麩醯胺(Gln；Q)、甘胺酸(Gly；G)；組胺酸(His；H)、異白胺酸(Ile；I)、白胺酸(Leu；L)、離胺酸(Lys；K)、甲硫胺酸(Met；M)、苯丙胺酸(Phe；F)、脯胺酸(Pro；P)、絲胺酸(Ser；S)、蘇胺酸(Thr；T)、色胺酸(Trp；W)、酪胺酸(Tyr；Y)及纈胺酸(Val；V)。 如本文中所使用，術語「載體」係指一種能夠傳播與其連接之另一種核酸分子的核酸分子。該術語包括作為自我複製核酸結構之載體以及併入至其已引入之宿主細胞之基因組中的載體。某些載體能夠導引可操作地與其連接之核酸的表現。此類載體在本文中稱為「表現載體」。 術語「宿主細胞」、「宿主細胞株」及「宿主細胞培養物」可互換使用且係指已引入外源性核酸之細胞，包括此類細胞之子代。宿主細胞包括「轉形體」(或「經轉形的細胞」)及「轉染體」(或「經轉染的細胞」)，其各自包括初代經轉形或經轉染的細胞及源自其之子代。此類子代之核酸含量與母細胞可能不完全相同，且可含有突變。 術語「治療(treating)」(及其變體，諸如「治療(treat/treatment)」係指試圖更改有需要之個體之疾病或病狀之天然時程的臨床干預。可進行治療以用於預防及在臨床病理學之時程期間兩者。治療之所需效果包括預防疾病之發生或復發，緩解症狀，減輕疾病之任何直接或間接病理性結果，預防癌轉移，降低疾病進展速率，改善或緩和疾病病況，及緩解或改良預後。 如本文所使用，術語「治療有效量」或「有效量」係指當向個體投與時本文提供之ABP或醫藥組合物有效地治療疾病或病症的量。 如本文所使用，術語「個體」意謂哺乳動物個體。例示性個體包括人類、猴、狗、貓、小鼠、大鼠、牛、馬、駱駝、山羊、家兔及綿羊。在某些實施例中，個體為人類。在一些實施例中，個體患有可用本文提供之ABP治療之疾病或病狀。在一些態樣中，疾病或病狀為癌症。 術語「藥品說明書」用以係指慣常包括於治療性或診斷性產品之商業封裝(例如，套組)中之含有關於指示、用法、劑量、投藥、組合療法、關於使用此類治療性或診斷性產品之禁忌及/或警告的資訊的說明書。 如本文中所使用，術語「細胞毒性劑」係指抑制或妨礙細胞功能及/或引起細胞死亡或破壞之物質。 「化學治療劑」係指適用於治療癌症之化合物。化學治療劑包括用以調節、減少、阻斷或抑制可促進癌症之生長之激素之效果的「抗-激素劑」或「內分泌療法」。 術語「細胞生長抑制劑」係指在活體外或活體內阻滯細胞生長的化合物或組合物。在一些實施例中，細胞生長抑制劑為減少處於S期之細胞之百分比的試劑。在一些實施例中，細胞生長抑制劑減少處於S期之細胞之百分比至少約20%、至少約40%、至少約60%或至少約80%。 術語「腫瘤」係指所有贅生性細胞生長及增殖，無論惡性或良性，及所有癌前及癌性細胞及組織。術語「癌症」、「癌性」、「細胞增殖性病症」、「增殖性病症」及「腫瘤」不為互相排斥的，如本文中所提及。術語「細胞增殖性病症」及「增殖性病症」係指與某種程度的異常細胞增殖相關聯之病症。在一些實施例中，細胞增殖性病症為癌症。 術語「醫藥組合物」係指一種製劑，其呈准許其中所含之活性成分之生物活性在所治療個體中有效之形式，且其不含對於個體具有不可接受之毒性的額外組分。 術語「調節(modulate及modulation)」係指減少或抑制，或替代地活化或增加所敍述的變數。 術語「增加」及「活化」係指增加所敍述之變數(諸如，GITR信號傳導活性)之10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、100%、2倍、3倍、4倍、5倍、10倍、20倍、50倍、100倍或更高。 術語「減少」及「抑制」係指降低所敍述之變數之10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、2倍、3倍、4倍、5倍、10倍、20倍、50倍、100倍或更高，該所敍述之變數諸如(a)調節T細胞之數目及/或(b)疾病或病狀之症狀，諸如癌轉移之存在或大小或原發腫瘤之大小。 術語「促效」係指受體信號傳導之活化以誘導與受體之活化相關聯之生物反應。「促效劑」為實體，諸如與受體結合且對其促效之本文提供之ABP。 術語「拮抗」係指受體信號傳導之抑制以抑制與受體之活化相關聯之生物反應。「拮抗劑」為實體，諸如與受體結合且對其拮抗之ABP。 術語「多聚」係指實體藉由組裝實體以形成藉由非共價或共價相互作用結合在一起之超實體結構而形成「多聚體」的行為。多聚體包括由同一實體之多個單元形成之組裝體的「同質多聚體」，或包含至少一個第一實體之單元及至少一個第二實體之單元之組裝體的「異質多聚體」。當在本文中用以係指GITR時，術語多聚係指在細胞之表面上表現之多個GITR分子之組裝，該細胞例如藉由結合本文提供之ABP或由GITRL而誘導。此類多聚化與GITR信號傳導之活化相關聯。參見 Nocentini等人,Br . J . Pharmacol . , 2012, 165:2089-2099，其以全文引用的方式併入本文中。 術語「效應T細胞」包括T輔助(亦即，CD4+)細胞及細胞毒性(亦即，CD8+) T細胞。CD4+效應T細胞有助於發展若干免疫程序，包括使B細胞成熟為漿細胞及記憶B細胞，及細胞毒性T細胞與巨噬細胞之活化。CD8+效應T細胞破壞病毒感染細胞及腫瘤細胞。對於關於效應T細胞之其他資訊，參見 Seder及Ahmed,Nature Immunol . , 2003, 4:835-842，其以全文引用的方式併入本文中。 術語「調節T細胞」包括例如藉由抑止效應T細胞而調節免疫耐受性的細胞。在一些態樣中，調節T細胞具有CD4+CD25+Foxp3+表型。在一些態樣中，調節T細胞具有CD8+CD25+表型。對於關於表現GITR之調節T細胞之其他資訊，參見 Nocentini等人,Br . J . Pharmacol . , 2012, 165:2089-2099，其以全文引用的方式併入本文中。 術語「樹突狀細胞」係指能夠活化原生T細胞及刺激B細胞之生長及分化的專職抗原呈遞細胞。GITR 抗原 - 結合蛋白 1.1. GITR 結合及靶細胞 本文提供與GITR特異性結合之ABP。在一些態樣中，GITR為hGITR (SEQ ID NO: 1)。在一些態樣中，GITR為hGITR-T43R (SEQ ID NO: 2)。在一些態樣中，GITR為cGITR (SEQ ID NO: 3)。在一些實施例中，GITR為mGITR (SEQ ID NO: 4)。 在一些實施例中，本文提供之ABP與hGITR (SEQ ID NO: 1)、hGITR-T43R (SEQ ID NO: 2)、cGITR (SEQ ID NO: 3)及mGITR (SEQ ID NO: 4)特異性結合。在一些實施例中，本文提供之ABP與hGITR (SEQ ID NO: 1)、hGITR-T43R (SEQ ID NO: 2)及cGITR (SEQ ID NO: 3)特異性結合。在一些實施例中，本文提供之ABP與hGITR (SEQ ID NO: 1)及hGITR-T43R (SEQ ID NO: 2)特異性結合。在一些實施例中，本文提供之ABP不結合mGITR (SEQ ID NO: 4)。 在一些實施例中，本文提供之ABP與GITR之胞外域特異性結合。 GITR可在任何合適的靶細胞之表面上表現。在一些實施例中，靶細胞為效應T細胞。在一些實施例中，靶細胞為調節T細胞。在一些實施例中，靶細胞為自然殺手(NK)細胞。在一些實施例中，靶細胞為自然殺手T (NKT)細胞。在一些實施例中，靶細胞為樹突狀細胞。在一些態樣中，樹突狀細胞為漿細胞樣樹突狀細胞。在一些實施例中，靶細胞為B細胞。在一些態樣中，B細胞為漿細胞。參見 Nocentini等人,Br . J . Pharmacol . , 2012, 165:2089-2099，其以全文引用的方式併入本文中。 在一些實施例中，本文提供之ABP與GITR單體特異性結合。 在一些實施例中，本文提供之ABP與GITR多聚體特異性結合。在一些態樣中，多聚體包含兩個GITR分子。在一些態樣中，多聚體包含三個GITR分子。在一些態樣中，多聚體包含四個GITR分子。在一些態樣中，多聚體包含五個GITR分子。在一些態樣中，多聚體包含六個GITR分子。在一些態樣中，多聚體包含大於六個GITR分子。 在一些實施例中，本文提供之ABP包含免疫球蛋白分子，由其組成或基本上由其組成。在一些態樣中，免疫球蛋白分子包含抗體，由其組成或基本上由其組成。 在一些實施例中，本文提供之ABP包含輕鏈。在一些態樣中，輕鏈為κ輕鏈。在一些態樣中，輕鏈為λ輕鏈。 在一些實施例中，本文提供之ABP包含重鏈。在一些態樣中，重鏈為IgA。在一些態樣中，重鏈為IgD。在一些態樣中，重鏈為IgE。在一些態樣中，重鏈為IgG。在一些態樣中，重鏈為IgM。在一些態樣中，重鏈為IgG1。在一些態樣中，重鏈為IgG2。在一些態樣中，重鏈為IgG3。在一些態樣中，重鏈為IgG4。在一些態樣中，重鏈為IgA1。在一些態樣中，重鏈為IgA2。 在一些實施例中，本文提供之ABP包含抗體片段，由其組成或基本上由其組成。在一些態樣中，抗體片段為Fv片段。在一些態樣中，抗體片段為Fab片段。在一些態樣中，抗體片段為F(ab')2 片段。在一些態樣中，抗體片段為Fab'片段。在一些態樣中，抗體片段為scFv (sFv)片段。在一些態樣中，抗體片段為scFv-Fc片段。在一些態樣中，抗體片段為單域抗體之片段。 在一些實施例中，本文提供之ABP為單株抗體。在一些實施例中，本文提供之ABP為多株抗體。 在一些實施例中，本文提供之ABP包含嵌合抗體，由其組成或基本上由其組成。在一些實施例中，本文提供之ABP包含人類化抗體，由其組成或基本上由其組成。在一些實施例中，本文提供之ABP包含人類抗體，由其組成或基本上由其組成。 在一些實施例中，本文提供之ABP包含親和性成熟ABP，由其組成或基本上由其組成。在一些態樣中，ABP為衍生自本文提供之ABP之親和性成熟ABP。 在一些實施例中，本文提供之ABP包含可替代的骨架，由其組成或基本上由其組成。可使用任何合適的可替代的骨架。在一些態樣中，本文提供之ABP包含可替代的骨架，由其組成或基本上由其組成，該可替代的骨架選自：AdnectinTM 、iMab、Anticalin® 、EETI-II/AGRP、Kunitz域、硫氧還蛋白肽適體、Affibody® 、達爾潘蛋白、阿菲林、四連接素、非諾莫及高親和性多聚體。 在一些實施例中，本文提供之ABP抑制GITR與GITRL之結合。在一些態樣中，ABP抑制GITR與GITRL之結合至少約50%。在一些態樣中，ABP抑制GITR與GITRL之結合至少約75%。在一些態樣中，ABP抑制GITR與GITRL之結合至少約90%。在一些態樣中，ABP抑制GITR與GITRL之結合至少約95%。1.2. 單特異性及多特異性 GITR 抗原 - 結合蛋白 在一些實施例中，本文提供之ABP為單特異性ABP。在一些態樣中，單特異性ABP與兩種或更多種不同GITR分子上之相同抗原決定基結合。在一些態樣中，單特異性ABP與兩種GITR分子上之相同抗原決定基結合。在一些態樣中，單特異性ABP與三種GITR分子上之相同抗原決定基結合。在一些態樣中，單特異性ABP與四種GITR分子上之相同抗原決定基結合。在一些態樣中，單特異性ABP與五種GITR分子上之相同抗原決定基結合。在一些態樣中，單特異性ABP與六種GITR分子上之相同抗原決定基結合。在一些態樣中，單特異性ABP與多於六種GITR分子上之相同抗原決定基結合。 在一些實施例中，本文提供之單特異性ABP為多價的。如本文所使用，術語「多價」係指抗體具有例如多於兩個結合區(亦即，包含VH 及VL 區)。在一些態樣中，單特異性ABP為二價的。在一些態樣中，單特異性ABP為三價的。在一些態樣中，單特異性ABP為四價的。在一些態樣中，單特異性ABP為五價的。在一些態樣中，單特異性ABP為六價的。在一些態樣中，單特異性ABP為七價的。在一些態樣中，單特異性ABP為八價的。 在一些實施例中，本文所揭示之單特異性多價ABP為四價的。 在一些實施例中，本文提供之ABP為多特異性ABP。在一些態樣中，多特異性ABP與兩種或更多種不同GITR分子上之兩種或更多種抗原決定基結合。在一些態樣中，多特異性ABP與兩種GITR分子上之兩種或更多種抗原決定基結合。在一些態樣中，多特異性ABP與三種GITR分子上之兩種或更多種抗原決定基結合。在一些態樣中，多特異性ABP與四種GITR分子上之兩種或更多種抗原決定基結合。在一些態樣中，多特異性ABP與五種GITR分子上之兩種或更多種抗原決定基結合。在一些態樣中，多特異性ABP與六種GITR分子上之兩種或更多種抗原決定基結合。在一些態樣中，多特異性ABP與七種GITR分子上之兩種或更多種抗原決定基結合。在一些態樣中，多特異性ABP與八種GITR分子上之兩種或更多種抗原決定基結合。在一些態樣中，多特異性ABP與九種GITR分子上之兩種或更多種抗原決定基結合。在一些態樣中，多特異性ABP與十種GITR分子上之兩種或更多種抗原決定基結合。在一些態樣中，多特異性ABP與十一種GITR分子上之兩種或更多種抗原決定基結合。在一些態樣中，多特異性ABP與十二種GITR分子上之兩種或更多種抗原決定基結合。在一些態樣中，多特異性ABP與多於十二種GITR分子上之兩種或更多種抗原決定基結合。 本文提供之多特異性ABP可結合GITR上之任何合適數目種抗原決定基。在一些態樣中，多特異性ABP結合GITR上之兩種抗原決定基。在一些態樣中，多特異性ABP結合GITR上之三種抗原決定基。在一些態樣中，多特異性ABP結合GITR上之四種抗原決定基。在一些態樣中，多特異性ABP結合GITR上之五種抗原決定基。在一些態樣中，多特異性ABP結合GITR上之六種抗原決定基。在一些態樣中，多特異性ABP結合GITR上之七種抗原決定基。在一些態樣中，多特異性ABP結合GITR上之八種抗原決定基。在一些態樣中，多特異性ABP結合GITR上之九種抗原決定基。在一些態樣中，多特異性ABP結合GITR上之十種抗原決定基。在一些態樣中，多特異性ABP結合GITR上之十一種抗原決定基。在一些態樣中，多特異性ABP結合GITR上之十二種抗原決定基。在一些態樣中，多特異性ABP結合GITR上之多於十二種抗原決定基。 在一些態樣中，本文提供之多特異性ABP結合至少兩個不同GITR分子上之至少兩種不同抗原決定基。在一些態樣中，本文提供之多特異性ABP結合至少三個不同GITR分子上之至少三種不同抗原決定基。在一些態樣中，本文提供之多特異性ABP結合至少四個不同GITR分子上之至少四種不同抗原決定基。在一些態樣中，本文提供之多特異性ABP結合至少五個不同GITR分子上之至少五種不同抗原決定基。 在一些實施例中，本文提供之多特異性ABP包含特異性結合GITR上之第一抗原決定基之第一抗原-結合域及特異性結合GITR上之第二抗原決定基之第二抗原-結合域，其中第一抗原決定基與第二抗原決定基係不同的。在一些態樣中，多特異性ABP進一步包含與GITR上之一或多個額外抗原決定基特異性結合之一或多個額外抗原-結合域，其中該等額外抗原決定基中之每一者不同於與第一抗原-結合域、第二抗原-結合域或ABP之任何其他抗原-結合域結合之抗原決定基。 在一些實施例中，本文提供之多特異性ABP與GITR分子上之抗原決定基及並非GITR之另一分子上之抗原決定基結合。任何合適的非GITR分子可與本文提供之ABP結合。在一些態樣中，非GITR分子為腫瘤壞死因子受體超家族(TNFRSF)之另一成員。在一些態樣中，TNFRSF之其他成員選自：CD27、CD40、EDA2R、EDAR、FAS、LTBR、NGFR、RELT、TNFRSF1A、TNFRSF1B、TNFRSF4、TNFRSF6B、TNFRSF8、TNFRSF9、TNFRSF10A、TNFRSF10B、TNFRSF10C、TNFRSF10D、TFNRSF11A、TNFRSF11B、TNFRSF12A、TNFRSF13B、TNFRSF13C、TNFRSF14、TNFRSF17、TNFRSF18、TNFRSF19、TNFRSF21及TNFRSF25。 許多多特異性ABP構建為此項技術中已知的，且本文提供之ABP可以任何合適的多特異性合適的構建之形式提供。 在一些實施例中，多特異性ABP包含免疫球蛋白，該免疫球蛋白包含各自與共同輕鏈可變區(亦即，「共同輕鏈抗體」)配對之至少兩個不同重鏈可變區。共同輕鏈可變區與兩個不同重鏈可變區中之每一者形成不同的抗原-結合域。參見 Merchant等人,Nature Biotechnol . , 1998, 16:677-681，其以全文引用的方式併入本文中。 在一些實施例中，本文所揭示之多價ABP包含免疫球蛋白，該免疫球蛋白包含與此類免疫球蛋白之重鏈或輕鏈之N端或C端中之一或多者連接的抗體或其片段。參見 例如美國專利第8,722,859號與Coloma及Morrison,Nature Biotechnol . , 1997, 15:159-163，每一者以全文引用的方式併入本文中。在一些態樣中，此類ABP包含四價雙特異性抗體。在一些態樣中，此類ABP包含四價單特異性(TM)抗體。 在一些實施例中，多價ABP包含雜合免疫球蛋白，該雜合免疫球蛋白包含至少兩個不同重鏈可變區及至少兩個不同輕鏈可變區。參見 Milstein及Cuello,Nature , 1983, 305:537-540；以及Staerz及Bevan,Proc . Natl . Acad . Sci . USA , 1986, 83:1453-1457；其中之每一者以全文引用的方式併入本文中。 在一些實施例中，多價ABP包含具有更改之免疫球蛋白鏈以減少形成不具有多特異性之副產物。在一些態樣中，ABP包含如美國專利第5,731,168號中所描述之一或多個「隆突-入-穴」修飾，其以全文引用的方式併入本文中。 在一些實施例中，多價ABP包含具有一或多個靜電修飾之免疫球蛋白鏈以促進Fc異質多聚體之組裝。參見 WO 2009/089004，其以全文引用的方式併入本文中。 在一些實施例中，多價ABP包含雙特異性單鏈分子。參見 Traunecker等人,EMBO J . , 1991, 10:3655-3659; 及Gruber等人,J . Immunol . , 1994, 152:5368-5374；其中之每一者以全文引用的方式併入本文中。 在一些實施例中，多價ABP包含重鏈可變域及輕鏈可變域、或由多肽連接子連接之單域抗體VH H域，其中連接子之長度經選擇以促進具有所需多特異性之多價ABP的組裝。舉例而言，單特異性scFv一般在重鏈V殘基阻止同一多肽鏈上之重鏈及輕鏈可變域之配對，從而允許來自一個鏈之重鏈及輕鏈可變域與另一鏈上之互補域進行配對時形成。因此，所得ABP具有多特異性，其中各結合位點之特異性由多於一個多肽鏈提供。包含由在3個與12個胺基酸殘基之間的連接子連接之重鏈及輕鏈可變域之多肽鏈主要形成二聚體(稱為雙功能抗體)。在0個與2個胺基酸殘基之間的連接子之情況下，三聚體(稱為三功能抗體)及四聚體(稱為四功能抗體)係有利的。然而，除連接子長度以外，低聚合之準確類型似乎視胺基酸殘基組成及各多肽鏈中之可變域之次序(例如，VH -連接子-VL 與VL -連接子-VH )而定。熟習此項技術者可基於所需多特異性選擇適當連接子長度。 在一些實施例中，單特異性或多特異性ABP包含雙功能抗體。參見 Hollinger等人,Proc . Natl . Acad . Sci . USA , 1993, 90:6444-6448，其以全文引用的方式併入本文中。在一些實施例中，單特異性或多特異性ABP包含三功能抗體。參見 Todorovska等人,J . Immunol . Methods , 2001, 248:47-66，其以全文引用的方式併入本文中。在一些實施例中，單特異性或多特異性ABP包含四功能抗體。參見同上述文獻，其以全文引用的方式併入本文中。 在一些實施例中，多特異性ABP包含三特異性F(ab')3衍生物。參見 Tutt等人.J . Immunol . , 1991, 147:60-69，其以全文引用的方式併入本文中。 在一些實施例中，單特異性或多特異性ABP包含交聯抗體。參見 美國專利第4,676,980號；Brennan等人,Science , 1985, 229:81-83; Staerz, 等人.Nature , 1985, 314:628-631；以及EP 0453082；其中之每一者以全文引用的方式併入本文中。 在一些實施例中，單特異性或多特異性ABP包含由白胺酸拉鏈組裝之抗原-結合域。參見 Kostelny等人,J . Immunol . , 1992, 148:1547-1553，其以全文引用的方式併入本文中。 在一些實施例中，單特異性或多特異性ABP包含互補蛋白質域。在一些態樣中，互補蛋白質域包含錨定域(AD)及二聚化與停靠域(DDD)。在一些實施例中，AD與DDD彼此結合且由此使得能夠經由「停靠及鎖定」(DNL)方法來對多特異性ABP結構進行組裝。可對許多特異性之ABP進行組裝，包括雙特異性ABP、三特異性ABP、四特異性ABP、五特異性ABP及六特異性ABP。包含互補蛋白域之多特異性ABP描述於例如美國專利第7,521,056號、第7,550,143號、第7,534,866號及第7,527,787號中，其中之每一者以全文引用的方式併入本文中。 在一些實施例中，單特異性或多特異性ABP包含抗體分子與針對GITR或另一目標具有特異性之非抗體分子的雜合體。對於此類ABP之實例，參見 WO 93/08829，其以全文引用的方式併入本文中。在一些態樣中，非抗體分子為GITRL。 在一些實施例中，單特異性或多特異性ABP包含如美國專利公開案第2008/0069820號中所描述之雙功能Fab (DAF)抗體，其以全文引用的方式併入本文中。 在一些實施例中，多特異性ABP包含由還原兩種親本分子隨後將兩種親本分子混合及再氧化以組裝雜合結構而形成的抗體。參見 Carlring等人,PLoS One , 2011, 6:e22533，其以全文引用的方式併入本文中。 在一些實施例中，單特異性或多特異性ABP包含DVD-IgTM 。DVD-IgTM 係可與兩種或更多種抗原結合之雙可變域免疫球蛋白。DVD-IgsTM 描述於美國專利第7,612,181號中，其以全文引用的方式併入本文中。 在一些實施例中，單特異性或多特異性ABP包含DARTTM 。DARTsTM 描述於Moore等人,Blood , 2011, 117:454-451中，其以全文引用的方式併入本文中。 在一些實施例中，多特異性ABP包含DuoBody® 。DuoBodies® 描述於Labrijn等人,Proc . Natl . Acad . Sci . USA , 2013, 110:5145-5150; Gramer等人,mAbs , 2013, 5:962-972; 及Labrijn等人,Nature Protocols , 2014, 9:2450-2463中；其中之每一者以全文引用的方式併入本文中。 在一些實施例中，本文所揭示之單特異性或多特異性ABP包含與另一抗體或片段連接之抗體片段。連接可為共價或非共價的。當連接為共價的時，其可呈融合蛋白質形式或經由化學連接子。包含與其他抗體連接之抗體片段之多特異性ABP之說明性實例包括四價雙特異性抗體，其中scFv與來自IgG之CH3 的C端融合。參見 Coloma及Morrison,Nature Biotechnol . , 1997, 15:159-163。其他實例包括其中Fab分子與免疫球蛋白之恆定區連接之抗體。參見 Miler等人,J . Immunol . , 2003, 170:4854-4861，其以全文引用的方式併入本文中。可使用任何合適的片段，包括本文中所描述或此項技術中已知之片段中之任一者。 在一些實施例中，單特異性或多特異性ABP包含CovX-體。CovX-體描述於例如Doppalapudi等人,Proc . Natl . Acad . Sci . USA , 2010, 107:22611-22616中，其以全文引用的方式併入本文中。 在一些實施例中，單特異性或多特異性ABP包含Fcab抗體，其中將一或多個抗原-結合域引入至Fc區中。Fcab抗體描述於Wozniak-Knopp等人,Protein Eng . Des . Sel . , 2010, 23:289-297中，其以全文引用的方式併入本文中。 在一些實施例中，單特異性或多特異性ABP包含TandAb® 抗體。TandAb® 抗體描述於Kipriyanov等人,J . Mol . Biol . , 1999, 293:41-56及Zhukovsky等人,Blood , 2013, 122:5116中，其中之每一者以全文引用的方式併入本文中。 在一些實施例中，多特異性ABP包含串聯Fab。串聯Fab描述於WO 2015/103072中，其以全文引用的方式併入本文中。 在一些實施例中，多特異性ABP包含ZybodyTM 。ZybodiesTM 描述於LaFleur等人,mAbs , 2013, 5:208-218中，其以全文引用的方式併入本文中。1.3. 抗原 - 結合蛋白多聚化 GITR 在一些實施例中，本文提供之ABP多聚化在靶細胞之表面上表現之GITR。可基於本文提供之ABP之價數及特異性，設計其以多聚化任何合適數目個GITR分子。 在一些實施例中，本文提供之ABP多聚化兩個GITR分子。在一些實施例中，本文提供之ABP多聚化三個GITR分子。在一些實施例中，本文提供之ABP多聚化四個GITR分子。在一些實施例中，本文提供之ABP多聚化五個GITR分子。在一些實施例中，本文提供之ABP多聚化六個GITR分子。在一些實施例中，本文提供之ABP多聚化七個GITR分子。在一些實施例中，本文提供之ABP多聚化八個GITR分子。在一些實施例中，本文提供之ABP多聚化九個GITR分子。在一些實施例中，本文提供之ABP多聚化十個GITR分子。在一些實施例中，本文提供之ABP多聚化十一個GITR分子。在一些實施例中，本文提供之ABP多聚化十二個GITR分子。 在一些實施例中，本文提供之ABP多聚化至少兩個GITR分子。在一些實施例中，本文提供之ABP多聚化至少三個GITR分子。在一些實施例中，本文提供之ABP多聚化至少四個GITR分子。在一些實施例中，本文提供之ABP多聚化至少五個GITR分子。在一些實施例中，本文提供之ABP多聚化至少六個GITR分子。在一些實施例中，本文提供之ABP多聚化至少七個GITR分子。在一些實施例中，本文提供之ABP多聚化至少八個GITR分子。在一些實施例中，本文提供之ABP多聚化至少九個GITR分子。在一些實施例中，本文提供之ABP多聚化至少十個GITR分子。在一些實施例中，本文提供之ABP多聚化至少十一個GITR分子。在一些實施例中，本文提供之ABP多聚化至少十二個GITR分子。 在一些實施例中，本文提供之ABP多聚化兩個至十二個GITR分子。在一些實施例中，本文提供之ABP多聚化三個至十個GITR分子。在一些實施例中，本文提供之ABP多聚化三個至六個GITR分子。在一些實施例中，本文提供之ABP多聚化三個至五個GITR分子。在一些實施例中，本文提供之ABP多聚化三個至四個GITR分子。1.4. GITR 促效作用 在一些實施例中，本文提供之ABP在結合後促效GITR。此類促效作用可由利用ABP對於GITR之多聚化而產生，如在本發明中其他地方所描述。參見 圖1。 在一些實施例中，由本文提供之ABP對於GITR之促效作用引起在靶細胞中調節NF-κB活性。參見 美國專利第7,812,135號，其以全文引用的方式併入本文中。在一些態樣中，GITR之促效作用引起在靶細胞中調節IκB活性或穩定性。 在一些實施例中，由本文提供之ABP對於GITR之促效作用引起在靶細胞中活化MAPK路徑。在一些態樣中，由本文提供之ABP活化之MAPK路徑之組分包括p38、JNK及ERK中之一或多者。參見 Nocentini等人,Proc . Natl . Acad . Sci . USA , 1997, 94:6216-6221; Ronchetti等人,Eur . J . Immunol . , 2004, 34:613-622; 及Esparza等人,J . Immunol . , 2005, 174:7869-7874；其中之每一者以全文引用的方式併入本文中。 在一些實施例中，由本文提供之ABP對於GITR之促效作用引起靶細胞增加IL-2Rα、IL-2、IL-8及/或IFNγ之分泌。參見 Ronchetti等人,Eur . J . Immunol . , 2004, 34:613-622，其以全文引用的方式併入本文中。 在一些實施例中，由本文提供之ABP對於GITR之促效作用增加效應T細胞之增殖、存活及/或功能。在一些態樣中，效應T細胞為CD4+效應T細胞。在一些態樣中，效應T細胞為CD8+效應T細胞。 在一些實施例中，由本文提供之ABP對於GITR之促效作用消除由調節T細胞對於效應T細胞之抑止。在一些態樣中，調節T細胞為CD4+CD25+Foxp3+調節T細胞。在一些態樣中，調節T細胞為CD8+CD25+調節T細胞。 在一些實施例中，由本文提供之ABP對於GITR之促效作用更改調節T細胞分佈出現頻率或分佈。在一些態樣中，調節T細胞之頻率降低。在一些態樣中，在特定組織中調節T細胞之頻率降低。在一些態樣中，調節T細胞之瘤內堆積減少，從而產生更有利的效應T細胞比調節T細胞之比率及增強CD8+ T細胞活性。參見 Cohen等人, PLoS One, 2010, 5:e10436。 在一些實施例中，由本文提供之ABP對於GITR之促效作用增加自然殺手(NK)細胞之活性。在一些實施例中，由本文提供之ABP對於GITR之促效作用增加抗原呈遞細胞之活性。在一些實施例中，由本文提供之ABP對於GITR之促效作用增加樹突狀細胞之活性。在一些實施例中，由本文提供之ABP對於GITR之促效作用增加B細胞之活性。 在一些實施例中，由本文提供之ABP對於GITR之促效作用引起免疫反應增強。在一些實施例中，由本文提供之ABP對於GITR之促效作用引起延緩腫瘤發作。在一些實施例中，由本文提供之ABP對於GITR之促效作用引起腫瘤之大小減小。在一些實施例中，由本文提供之ABP對於GITR之促效作用引起癌轉移之數目減少。 在一些實施例中，由本文提供之多價單特異性ABP對於GITR之促效作用比二價單特異性抗體產生更高的促效作用之最大量。在一些實施例中，其他價數對於EC50 比結合域中之每一者之添加劑效果產生更大的效果。在一些實施例中，本文提供之四價單特異性ABP比二價單特異性抗體具有更高的促效作用之最大量。 在一些實施例中，本文提供之多特異性ABP為比對應單特異性ABP之混合物的更強效的GITR促效劑。舉例而言，若本文提供之多特異性ABP包含兩種不同抗原決定基特異性(例如A及B)，則在一些實施例中，由此類多特異性ABP對於GITR之促效作用比由各自包含兩種特異性中之一者(例如，A或B)之兩種單特異性ABP之混合物對於GITR的促效作用大。在一些實施例中，當與各自僅具有多特異性ABP之特異性中之一者之單特異性ABP的混合物相比時，本文提供之多特異性ABP之其他特異性產生效力增加的協同作用(亦即，大於添加劑)。1.5. 抗原 - 結合蛋白針對 GITR 親和性親和性 在一些實施例中，本文提供之ABP針對GITR之親和性(如由KD 指示)小於約10- 5 M、小於約10- 6 M、小於約10- 7 M、小於約10- 8 M、小於約10- 9 M、小於約10- 10 M、小於約10- 11 M或小於約10- 12 M。在一些實施例中，ABP之親和性在約10- 7 M與10- 12 M之間。在一些實施例中，ABP之親和性在約10- 7 M與10- 11 M之間。在一些實施例中，ABP之親和性在約10- 7 M與10- 10 M之間。在一些實施例中，ABP之親和性在約10- 7 M與10- 9 M之間。在一些實施例中，ABP之親和性在約10- 7 M與10- 8 M之間。在一些實施例中，ABP之親和性在約10- 8 M與10- 12 M之間。在一些實施例中，ABP之親和性在約10- 8 M與10- 11 M之間。在一些實施例中，ABP之親和性在約10- 9 M與10- 11 M之間。在一些實施例中，ABP之親和性在約10- 10 M與10- 11 M之間。 在一些實施例中，本文提供之ABP以X 之KD 與hGITR (SEQ ID NO: 1)特異性結合，以≤10X 之KD 與cGITR特異性結合。在一些實施例中，本文提供之ABP以X 之KD 與hGITR (SEQ ID NO: 1)特異性結合，以≤5X 之KD 與cGITR特異性結合。在一些實施例中，本文提供之ABP以X 之KD 與hGITR (SEQ ID NO: 1)特異性結合，以≤2X 之KD 與cGITR特異性結合。在一些態樣中，X 為本發明中所描述之任何KD 。在一些態樣中，X 為0.01 nM、0.1 nM、1 nM、10 nM、20 nM、50 nM或100 nM。 在一些實施例中，KD 、ka 及kd 使用表面電漿子共振(SPR)來測定。在一些態樣中，SPR分析利用BIACORE® 儀器。在一些態樣中，將抗原固定在羧基甲基化葡聚糖生物感測器晶片(CM4或CM5)上且使其與本文提供之ABP接觸。可使用BIAevaluation® 軟體及一對一Langmuir結合模型來計算結合速率常數及解離速率常數。在一些態樣中，在25℃下執行分析法。在一些態樣中，在37℃下執行分析法。 在一些實施例中，使用生物層干擾測量法(BLI)來測定KD 、ka 及kd 。可使用任何適合的BLI方法。在一些態樣中，BLI分析利用FORTEBIO® 儀器。在一些態樣中，抗-人類IgG Fc捕獲(AHC)生物感測器用於將ABP捕獲至感測器之表面上。隨後，藉由使固定的ABP與不同濃度之GITR接觸來監測ABP與抗原的結合。接著，在不具有GITR之緩衝液中量測抗原與ABP的解離。使用FORTEBIO® 分析軟體之動力學模組來計算結合速率常數及解離速率常數。在一些態樣中，在30℃下執行分析法。 在其他實施例中KD 可藉由放射性標記抗原-結合分析法來測定，如Chen等人.J . Mol . Biol . , 1999, 293:865-881中所描述，其以全文引用的方式併入本文中。1.5.1. 糖基化變體 在某些實施例中，可更改本文提供之ABP以增加、降低或消除ABP糖基化之程度。多肽之糖基化通常為「N-連接」或「O-連接」。 「N-連接」糖基化係指碳水化合物部分與天冬醯胺殘基之側鏈連接。三肽序列天冬醯胺-X-絲胺酸及天冬醯胺-X-蘇胺酸(其中X為除脯胺酸外之任何胺基酸)為碳水化合物部分與天冬醯胺側鏈酶促連接之識別序列。因此，在多肽中此等三肽序列中之任一者的存在產生潛在糖基化位點。 「O-連接」糖基化係指糖N-乙醯基半乳胺糖、半乳糖或木糖中之一者與羥胺基酸連接，該羥胺基酸最常見為絲胺酸或蘇胺酸，但亦可使用5-羥脯胺酸或5-羥離胺酸。 向本文提供之ABP添加N-連接糖基化位點或自其缺失N-連接糖基化位點可藉由更改胺基酸序列使得產生或移除上文所描述之三肽序列中之一或多者來實現。O-連接糖基化位點之添加或缺失可藉由在ABP之序列中或向其中(視具體情況而定)添加、缺失或取代一或多個絲胺酸或蘇胺酸殘基來實現。 在一些實施例中，本文提供之ABP包含不同於天然存在ABP之糖基化基元。可對本文提供之ABP中之任何合適的天然存在糖基化基元進行修飾。舉例而言，免疫球蛋白之結構性及糖基化特性為此項技術中已知的且概述於例如Schroeder及Cavacini,J . Allergy Clin . Immunol . , 2010, 125:S41-52中，其以全文引用的方式併入本文中。 在一些實施例中，本文提供之ABP包含具有修飾為與天冬醯胺297 (Asn 297)連接之寡醣的IgG1 Fc區。由哺乳動物細胞產生之天然存在IgG1抗體通常包含分支鏈、一般藉由N-連接與Fc區之CH2 域之Asn 297連接的雙觸角寡醣。參見 Wright等人,TIBTECH , 1997, 15:26-32，其以全文引用的方式併入本文中。與Asn 297連接之寡醣可包括各種碳水化合物，諸如甘露糖、N-乙醯基葡糖胺(GlcNAc)、半乳糖及唾液酸，以及在雙觸寡醣結構之「幹」中與GlcNAc連接之海藻糖。 在一些實施例中，與Asn 297連接之寡醣經修飾以產生具有更改的ADCC的ABP。在一些實施例中，寡醣經更改以改良ADCC。在一些實施例中，寡醣經更改以減少ADCC。 在一些態樣中，本文提供之ABP包含與天然存在IgG1域相比在Asn 297位置處具有海藻糖含量減少的IgG1域。已知此類Fc域具有改良的ADCC。參見 Shields等人,J . Biol . Chem . , 2002, 277:26733-26740，其以全文引用的方式併入本文中。在一些態樣中，此類ABP在Asn 297位置處不包含任何海藻糖。可使用任何合適的方法來測定海藻糖之量，例如如WO 2008/077546中所描述之方法，其以全文引用的方式併入本文中。 在一些實施例中，本文提供之ABP包含等分寡醣，諸如與ABP之Fc區連接之由GlcNAc等分的雙觸角寡醣。此類ABP變體可具有減少之海藻糖基化及/或經改良之ADCC功能。此類ABP變體之實例描述於例如WO 2003/011878、美國專利第6,602,684號及美國專利公開案第2005/0123546號中，其中之每一者以全文引用的方式併入本文中。 其他說明性糖基化變體描述於例如以下中：美國專利公開案第2003/0157108號、第2004/0093621號、第2003/0157108號、第2003/0115614號、第2002/0164328號、第2004/0093621號、第2004/0132140號、第2004/0110704號、第2004/0110282號、第2004/0109865號；國際專利公開案第2000/61739號、第2001/29246號、第2003/085119號、第2003/084570號、第2005/035586號、第2005/035778; 2005/053742號、第2002/031140號；Okazaki等人,J . Mol . Biol . , 2004, 336:1239-1249; 及 Yamane-Ohnuki 等人,Biotech . Bioeng . , 2004, 87: 614-622；其中之每一者以全文引用的方式併入本文中。 在一些實施例中，本文提供之ABP包含其中至少一個寡醣中之半乳糖殘基與Fc區連接之Fc區。此類ABP變體可具有經改良之CDC功能。此類ABP變體之實例描述於例如WO 1997/30087、WO 1998/58964及WO 1999/22764中，其中之每一者以全文引用的方式併入本文中。 能夠產生去海藻糖基化ABP之細胞株之實例包括：Lec13 CHO細胞，其為蛋白質海藻糖基化缺陷(參見Ripka等人,Arch . Biochem . Biophys . , 1986, 249:533-545、美國專利公開案第2003/0157108號、WO 2004/056312，其中之每一者以全文引用的方式併入本文中)；及基因敲除細胞株，諸如α-1,6-海藻糖基轉移酶基因或FUT8基因敲除CHO細胞(參見Yamane-Ohnuki等人,Biotech . Bioeng . , 2004, 87: 614-622; Kanda等人,Biotechnol . Bioeng . , 2006, 94:680-688;及WO 2003/085107；其中之每一者以全文引用的方式併入本文中)。 在一些實施例中，本文提供之ABP為非糖基化ABP。非糖基化ABP可使用此項技術中已知或本文所描述之任何方法來產生。在一些態樣中，非糖基化ABP藉由修飾ABP以移除所有糖基化位點來產生。在一些態樣中，僅自ABP之Fc區移除糖基化位點。在一些態樣中，非糖基化ABP藉由在不能夠糖基化之生物體(諸如大腸桿菌)中表現ABP或藉由在無細胞反應混合物中表現ABP來產生。 在一些實施例中，本文提供之ABP具有與原生IgG1抗體相比效應功能減少的恆定區。在一些實施例中，本文提供之ABP之Fc區之恆定區針對Fc受體之親和性比原生IgG1恆定區針對此類Fc受體之親和性低。1.6. Fc 區 胺基酸序列變體 在某些實施例中，本文提供之ABP包含相比於天然存在Fc區具有一或多個胺基酸取代、插入或缺失的Fc區。在一些態樣中，此類取代、插入或缺失產生具有穩定性、糖基化或其他特性更改的ABP。在一些態樣中，此類取代、插入或缺失產生非糖基化ABP。 在一些態樣中，本文提供之ABP之Fc區經修飾以產生具有針對Fc受體之親和性更改的ABP或更具有免疫惰性的ABP。在一些實施例中，本文提供之ABP變體擁有一些(但並非所有)效應功能。此類ABP可能係適用的，例如當ABP之半衰期在活體內係重要之時，而當某些效應功能(例如，補充活化及ADCC)係不必要的或有害之時。 在一些實施例中，本文提供之ABP之Fc區為包含鉸鏈穩定突變S228P或L235E之人類IgG4 Fc區。在一些實施例中IgG4 Fc區包含鉸鏈穩定突變S228P及L235E。參見 Aalberse等人,Immunology , 2002, 105:9-19，其以全文引用的方式併入本文中。在一些實施例中，IgG4 Fc區包含以下突變中之一或多者：E233P、F234V及L235A。參見 Armour等人,Mol . Immunol . , 2003, 40:585-593，其以全文引用的方式併入本文中。在一些實施例中，IgG4 Fc區包含在G236位置處之缺失。 在一些實施例中，本文提供之ABP之Fc區為包含一或多個減少Fc受體結合之突變的人類IgG1 Fc區。在一些態樣中，一或多個突變係在選自以下之殘基中：S228 (例如S228A)、L234 (例如L234A)、L235 (例如L235A)、D265 (例如D265A)及N297 (例如N297A)。在一些態樣中，ABP包含PVA236突變。 PVA236意謂，IgG1之胺基酸位置233至236之胺基酸序列ELLG或IgG4之EFLG經PVA置換。參見 美國專利公開案第2013/0065277號，其以全文引用的方式併入本文中。 在一些實施例中，本文提供之ABP之Fc區如Armour等人,Eur . J . Immunol . , 1999, 29:2613-2624; WO 1999/058572;及/或英國專利申請第98099518號中所描述經修飾，其中之每一者以全文引用的方式併入本文中。 在一些實施例中，本文提供之ABP之Fc區為包含突變A330S及P331S中之一或多者之人類IgG2 Fc區。 在一些實施例中，本文提供之ABP之Fc區在選自238、265、269、270、297、327及329之一或多個位置處具有胺基酸取代。參見 美國專利第6,737,056號，其以全文引用的方式併入本文中。此類Fc突變體包括在胺基酸位置265、269、270、297及327中之兩者或更多者處具有取代之Fc突變，包括殘基265及297經丙胺酸取代之所謂的「DANA」Fc突變。參見 美國專利第7,332,581號，其以全文引用的方式併入本文中。在一些實施例中，ABP在胺基酸位置265處包含丙胺酸。在一些實施例中，ABP在胺基酸位置297處包含丙胺酸。 在某些實施例中，本文提供之ABP包含具有一或多個改良ADCC之胺基酸取代的Fc區，該一或多個胺基酸取代諸如在Fc區之位置298、333及334中之一或多者處的取代。在一些實施例中，本文提供之ABP包含在位置239、332及330處具有一或多個胺基酸取代之Fc區，如Lazar等人,Proc . Natl . Acad . Sci . USA , 2006,103:4005-4010中所描述，其以全文引用的方式併入本文中。 在一些實施例中，本文提供之ABP包含改良或減輕C1q結合及/或CDC之一或多個更改。參見 美國專利第6,194,551號；WO 99/51642;及Idusogie等人,J . Immunol . , 2000, 164:4178-4184；其中之每一者以全文引用的方式併入本文中。 在一些實施例中，本文提供之ABP包含一或多個更改以增加半衰期。具有半衰期增加及與新生Fc受體(FcRn)之結合改良之ABP描述於例如Hinton等人,J . Immunol . , 2006, 176:346-356; 及美國專利公開案第2005/0014934號中，其中之每一者以全文引用的方式併入本文中。此類Fc變體包括在Fc區殘基中之以下一或多者處具有取代的彼等：IgG之238、250、256、265、272、286、303、305、307、311、312、314、317、340、356、360、362、376、378、380、382、413、424、428及434。 在一些實施例中，本文提供之ABP包含一或多個Fc區變體，如美國專利第7,371,826號、第5,648,260號及第5,624,821號；Duncan及Winter,Nature , 1988, 322:738-740; 以及WO 94/29351中所描述，其中之每一者以全文引用的方式併入本文中。1.7. 經半胱胺酸工程改造之抗原 - 結合蛋白質變體 在某些實施例中，本文提供經半胱胺酸工程改造之ABP，亦稱為「thioMAb」，其中ABP之一或多個殘基經半胱胺酸殘基取代。在特定實施例中，經取代之殘基存在於ABP之溶劑可接近位點處。藉由用半胱胺酸取代此類殘基，將反應性硫醇基引入於ABP之溶劑可接近位點處且可用於使ABP與其他部分(諸如藥物部分或連接子-藥物部分)結合例如以產生免疫結合物。 在某些實施例中，以下殘基中之任何一或多者可經半胱胺酸取代：輕鏈之V205、重鏈Fc區之A118及重鏈Fc區之S400。經半胱胺酸工程改造之ABP可例如如美國專利第7,521,541號中所描述來產生，其以全文引用的方式併入本文中。1.7.1. 免疫結合物 1.7.1.1. 抗原 - 結合蛋白 - 聚合物結合物 在一些實施例中，本文提供之ABP藉由與聚合物結合來衍生。任何合適的聚合物可與ABP結合。 在一些實施例中，聚合物為水溶性聚合物。水溶性聚合物之說明性實例包括聚乙二醇(PEG)、乙二醇/丙二醇共聚物、羧甲基纖維素、葡聚糖、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯啶酮、聚-1,3-二氧雜環戊烷、聚-1,3,6-三噁烷、乙烯/順丁烯二酸酐共聚物、聚胺基酸(均聚物或無規共聚物)、聚(n-乙烯吡咯啶酮)-共聚乙二醇、聚丙二醇均聚物、聚氧化丙烯/環氧乙烷共聚物、聚氧乙烯化多元醇(例如甘油)、聚乙烯醇及其混合物。在一些態樣中，由於聚乙二醇丙醛在水中之穩定性，聚乙二醇丙醛在製造中可具有優勢。 聚合物可具有任何分子量，且可為分支鏈或未分支鏈的。與各ABP連接之聚合物之數目可變化，且若連接多於一個聚合物，則其可為相同聚合物或不同聚合物。一般而言，用於衍生作用之聚合物之數目及/或類型可基於包括待改良之ABP及意欲使用之ABP之特定特性或功能的考慮而決定。1.7.1.2. 抗原 - 結合蛋白 - 藥物結合物 在一些實施例中，本文提供之ABP與一或多種治療劑結合。任何合適的治療劑可與ABP結合。例示性治療劑包括細胞介素、趨化激素及誘導所需T細胞活性之其他藥劑，諸如GITRL、OX40L、4-1BBL、TNF-α、IL-2、IL-15融合、CXCL9、CXCL10、IL-10阱、IL-27阱及IL-35阱。細胞介素阱及其使用為此項技術中已知的且描述於例如Economides等人,Nature Medicine , 2003, 9:47-52中，其以全文引用的方式併入本文中。製備 GITR 抗原 - 結合蛋白之方法 1.8. GITR 抗原製備 用於分離本文提供之ABP之GITR抗原可為完整GITR或GITR之片段。GITR抗原可呈經分離之蛋白質或在細胞之表面上表現之蛋白質的形式。 在一些實施例中，GITR抗原為GITR之非天然產生變體，諸如具有在自然界並不存在之胺基酸序列或轉譯後修飾的GITR蛋白質。 在一些實施例中，GITR抗原藉由例如移除胞內或跨膜序列、或信號序列來截斷。在一些實施例中，GITR抗原在其C端處與人類IgG1 Fc域或聚組胺酸標記融合。1.9. 製備單株抗體之方法 單株抗體可例如使用首先由Kohler等人,Nature , 1975, 256:495-497 (其以全文引用的方式併入本文中)所描述之融合瘤方法及/或利用重組DNA法(參見 美國專利第4,816,567號，其以全文引用的方式併入本文中)來獲得。亦可例如使用基於噬菌體或酵母之文庫來獲得單株抗體。參見 例如美國專利第8,258,082號及第8,691,730號，其中之每一者以全文引用的方式併入本文中。 在融合瘤方法中，小鼠或其他適當宿主動物經免疫以誘使產生或能夠製造將與用於免疫接種之蛋白質特異性結合之抗體的淋巴細胞。可替代地，淋巴細胞可在活體外免疫。接著，使用適合融合劑(諸如聚乙二醇)將淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合以形成融合瘤細胞。參見 Goding J.W.,Monoclonal Antibodies : Principles and Practice 第3版. (1986) Academic Press, San Diego, CA，其以全文引用的方式併入本文中。 將融合瘤細胞接種在含有一或多種抑制未融合、親本骨髓瘤細胞之生長或存活之物質的合適的培養介質中並使其在其中生長。舉例而言，若親本骨髓瘤細胞缺乏酶次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉移酶(HGPRT或HPRT)，則用於融合瘤之培養介質通常將包括次黃嘌呤、胺基蝶呤及胸苷(HAT介質)，該等物質會阻止HGPRT缺陷細胞生長。 適用骨髓瘤細胞為有效地融合、支撐所選擇產抗體細胞穩定高水準生產抗體且為敏感介質條件(諸如存在或不存在HAT介質)的彼等骨髓瘤細胞。其中，較佳骨髓瘤細胞株為鼠骨髓瘤細胞株，諸如來源於MOP-21及MC-11小鼠腫瘤(購自沙克研究所細胞分配中心(Salk Institute Cell Distribution Center)， San Diego, CA)；及SP-2或X63-Ag8-653細胞(購自美國菌種保藏中心(American Type Culture Collection)，Rockville, MD)的彼等骨髓瘤細胞株。亦已描述用於產生人類單株抗體之人類骨髓瘤及小鼠-人類雜骨髓瘤細胞株。參見例如Kozbor,J . Immunol . , 1984, 133:3001，其以全文引用的方式併入本文中。 在鑑別產生所需特異性、親和性及/或生物活性之抗體的融合瘤細胞之後，可利用限制稀釋法程序對所選擇純系進行次選殖及利用標準方法進行生長。參見 Goding同上。用於此目的之合適的培養介質包括例如D-MEM或RPMI-1640介質。另外，融合瘤細胞可在動物中在活體內生長為腹水腫瘤。 編碼單株抗體之DNA可易於使用習知程序來分離及定序(例如藉由使用能夠與編碼單株抗體之重鏈及輕鏈之基因特異性結合的寡核苷酸探針)。因此，融合瘤細胞可用作編碼具有所需特性之抗體之DNA的適用源。一旦經分離，則可將DNA置放於表現載體中，接著將該等表現載體轉染至宿主細胞中以產生單株抗體，該等宿主細胞諸如細菌(例如大腸桿菌)、酵母菌(例如酵母菌屬(Saccharomyces )或畢赤酵母屬(Pichia sp . ))、COS細胞、中國倉鼠卵巢(CHO)細胞或不另外產生抗體的骨髓瘤細胞。1.10. 製備嵌合抗體之方法 製備嵌合抗體之說明性方法描述於例如美國專利第4,816,567號及Morrison等人,Proc . Natl . Acad . Sci . USA , 1984, 81:6851-6855中，其中之每一者以全文引用的方式併入本文中。在一些實施例中，藉由使用重組技術以將非人類可變區(例如源自小鼠、大鼠、倉鼠、家兔或非人類靈長類(諸如猴)之可變區)與人類恆定區組合來製備嵌合抗體。1.11. 製備人類化抗體之方法 可藉由用對應人類抗體序列置換非人類單株抗體之結構性部分之大部分或所有來產生人類化抗體。因此，產生雜合分子，其中僅抗原特異性可變區或CDR係由非人類序列組成。獲得人類化抗體之方法包括描述於例如以下中的彼等方法：Winter及Milstein,Nature , 1991, 349:293-299; Rader等人,Proc . Nat . Acad . Sci . U . S . A . , 1998, 95:8910-8915; Steinberger等人,J . Biol . Chem . , 2000, 275:36073-36078; Queen等人,Proc . Natl . Acad . Sci . U . S . A . , 1989, 86:10029-10033; 及美國專利第5,585,089號、第5,693,761號、第5,693,762號與第6,180,370號；其中之每一者以全文引用的方式併入本文中。1.12. 製備人類抗體之方法 人類抗體可利用此項技術中已知之各種技術來產生，例如藉由使用轉殖基因動物(例如人類化小鼠)。參見 例如Jakobovits等人,Proc . Natl . Acad . Sci . U . S . A . , 1993, 90:2551; Jakobovits等人,Nature , 1993, 362:255-258; Bruggermann等人, Year in Immuno . , 1993, 7:33; 及美國專利第5,591,669號、第5,589,369號與第5,545,807號；其中之每一者以全文引用的方式併入本文中。人類抗體亦可源自噬菌體展示文庫(參見 例如Hoogenboom等人,J . Mol . Biol . , 1991, 227:381-388; Marks等人,J . Mol . Biol . , 1991, 222:581-597; 及美國專利第5,565,332號與第5,573,905號；其中之每一者以全文引用的方式併入本文中)。人類抗體亦可藉由在活體外活化的B細胞來產生(參見 例如美國專利第5,567,610號及第5,229,275號，其中之每一者以全文引用的方式併入本文中)。人類抗體亦可源自基於酵母之文庫(參見 例如美國專利第8,691,730號，其以全文引用的方式併入本文中)。1.13. 製備抗體片段之方法 本文提供之抗體片段可利用任何合適的方法來製備，包括本文中所描述之說明性方法或此項技術中已知之彼等方法。合適的方法包括重組技術及完全抗體之蛋白分解消化。製備抗體片段之說明性方法描述於例如Hudson等人,Nat . Med . , 2003, 9:129-134中，其以全文引用的方式併入本文中。製備scFv抗體之方法描述於例如Plückthun之The Pharmacology of Monoclonal Antibodies , 第113卷, Rosenburg and Moore編中, Springer-Verlag, New York, 第269-315頁 (1994); WO 93/16185; 及美國專利第5,571,894號與第5,587,458號中；其中之每一者以全文引用的方式併入本文中。1.14. 製備可替代骨架之方法 本文提供之可替代骨架可利用任何合適的方法來製備，包括本文中所描述之說明性方法或此項技術中已知之彼等方法。舉例而言，製備AdnectinsTM 之方法描述於Emanuel等人,mAbs , 2011, 3:38-48中，其以全文引用的方式併入本文中。製備iMabs之方法描述於美國專利公開案第2003/0215914號中，其以全文引用的方式併入本文中。製備Anticalins® 之方法描述於Vogt及Skerra,Chem . Biochem . , 2004, 5:191-199中，其以全文引用的方式併入本文中。製備Kunitz域之方法描述於Wagner等人,Biochem . & Biophys . Res . Comm . , 1992, 186:118-1145中，其以全文引用的方式併入本文中。製備硫氧還蛋白肽適體之方法提供於Geyer及Brent,Meth . Enzymol . , 2000, 328:171-208中，其以全文引用的方式併入本文中。製備親和抗體之方法提供於Fernandez,Curr . Opinion in Biotech . , 2004, 15:364-373中，其以全文引用的方式併入本文中。製備達爾潘蛋白之方法提供於Zahnd等人,J . Mol . Biol . , 2007, 369:1015-1028中，其以全文引用的方式併入本文中。製備阿非林之方法提供於Ebersbach等人,J . Mol . Biol . , 2007, 372:172-185中，其以全文引用的方式併入本文中。製備四連接素之方法提供於Graversen等人,J . Biol . Chem . , 2000, 275:37390-37396中，其以全文引用的方式併入本文中。製備高親合性多聚體之方法提供於Silverman等人,Nature Biotech . , 2005, 23:1556-1561中，其以全文引用的方式併入本文中。製備非諾莫之方法提供於Silacci等人,J . Biol . Chem . , 2014, 289:14392-14398中，其以全文引用的方式併入本文中。 關於可替代骨架之其他資訊提供於Binz等人,Nat . Biotechnol . , 2005 23:1257-1268; 及Skerra,Current Opin . in Biotech . , 2007 18:295-304中，其中之每一者以全文引用的方式併入本文中。1.15. 製備多特異性 ABP 之方法 本文提供之多特異性或多價單特異性ABP可利用任何合適的方法來製備，包括本文中所描述之說明性方法或此項技術中已知之彼等方法。製備共同輕鏈抗體之方法描述於Merchant等人,Nature Biotechnol . , 1998, 16:677-681中，其以全文引用的方式併入本文中。製備四價雙特異性抗體之方法描述於Coloma及Morrison,Nature Biotechnol . , 1997, 15:159-163中，其以全文引用的方式併入本文中。製備雜合免疫球蛋白之方法描述於Milstein及Cuello,Nature , 1983, 305:537-540; 及Staerz及Bevan,Proc . Natl . Acad . Sci . USA , 1986, 83:1453-1457中；其中之每一者以全文引用的方式併入本文中。製備具有隆突-入-穴修飾之免疫球蛋白之方法描述於美國專利第5,731,168號中，其以全文引用的方式併入本文中。製備具有靜電修飾之免疫球蛋白之方法提供於WO 2009/089004中，其以全文引用的方式併入本文中。製備多價(例如四價)單特異性抗體之方法描述於Miller等人, 2003、美國專利第8,722,859號中，其以全文引用的方式併入本文中。製備雙特異性單鏈抗體之方法描述於Traunecker等人,EMBO J . , 1991, 10:3655-3659; 及Gruber等人,J . Immunol . , 1994, 152:5368-5374中；其中之每一者以全文引用的方式併入本文中。製備單鏈抗體(其連接子長度可變化)之方法描述於美國專利第4,946,778號及第5,132,405號中，其中之每一者以全文引用的方式併入本文中。製備雙功能抗體之方法描述於Hollinger等人,Proc . Natl . Acad . Sci . USA , 1993, 90:6444-6448中，其以全文引用的方式併入本文中。製備三功能抗體及四功能抗體之方法描述於Todorovska等人,J . Immunol . Methods , 2001, 248:47-66中，其以全文引用的方式併入本文中。製備三特異性F(ab')3衍生物之方法描述於Tutt等人.J . Immunol . , 1991, 147:60-69中，其以全文引用的方式併入本文中。製備交聯抗體之方法描述於美國專利第4,676,980號; Brennan等人,Science , 1985, 229:81-83; Staerz等人.Nature , 1985, 314:628-631; 及EP 0453082中；其中之每一者以全文引用的方式併入本文中。製備由白胺酸拉鏈組裝之抗原-結合域之方法描述於Kostelny等人,J . Immunol . , 1992, 148:1547-1553中，其以全文引用的方式併入本文中。經由DNL方法製備ABP之方法描述於美國專利第7,521,056號、第7,550,143號、第7,534,866號及第7,527,787號中，其中之每一者以全文引用的方式併入本文中。製備抗體與非抗體分子之雜合體之方法描述於WO 93/08829中，其以全文引用的方式併入本文中，例如此類ABP。製備DAF抗體之方法描述於美國專利公開案第2008/0069820號中，其以全文引用的方式併入本文中。經由還原及氧化製備ABP之方法描述於Carlring等人,PLoS One , 2011, 6:e22533中，其以全文引用的方式併入本文中。製備DVD-IgsTM 之方法描述於美國專利第7,612,181號中，其以全文引用的方式併入本文中。製備DARTsTM 之方法描述於Moore等人,Blood , 2011, 117:454-451中，其以全文引用的方式併入本文中。製備DuoBodies® 之方法描述於Labrijn等人,Proc . Natl . Acad . Sci . USA , 2013, 110:5145-5150; Gramer等人,mAbs , 2013, 5:962-972; 及Labrijn等人,Nature Protocols , 2014, 9:2450-2463中；其中之每一者以全文引用的方式併入本文中。製備包含與來自IgG之CH3 之C端融合之scFv抗體的方法描述於Coloma及Morrison,Nature Biotechnol . , 1997, 15:159-163中，其以全文引用的方式併入本文中。製備其中Fab分子與免疫球蛋白之恆定區連接之抗體的方法描述於Miler等人,J . Immunol . , 2003, 170:4854-4861中，其以全文引用的方式併入本文中。製備CovX-體之方法描述於Doppalapudi等人,Proc . Natl . Acad . Sci . USA , 2010, 107:22611-22616中，其以全文引用的方式併入本文中。製備Fcab抗體之方法描述於Wozniak-Knopp等人,Protein Eng . Des . Sel . , 2010, 23:289-297中，其以全文引用的方式併入本文中。製備TandAb® 抗體之方法描述於Kipriyanov等人,J . Mol . Biol . , 1999, 293:41-56及Zhukovsky等人,Blood , 2013, 122:5116中，其中之每一者以全文引用的方式併入本文中。製備串聯Fab之方法描述於WO 2015/103072中，其以全文引用的方式併入本文中。製備ZybodiesTM 之方法描述於LaFleur等人,mAbs , 2013, 5:208-218中，其以全文引用的方式併入本文中。 在另一態樣中，提供一種用於製造抗-人類GITR抗體或其抗原-結合片段之方法，包含培養選自由以下(a)至(c)組成之群之宿主細胞以表現四價抗-人類GITR抗體或其抗原-結合片段：(a)用表現載體轉形之宿主細胞，該表現載體包含：聚核苷酸，其包含編碼本文提供之抗-人類GITR抗體或其抗原-結合片段之重鏈可變區的鹼基序列；及聚核苷酸，其包含編碼抗體或其抗原-結合片段之輕鏈可變區的鹼基序列；(b)用以下表現載體轉形之宿主細胞：表現載體，其包含聚核苷酸，該聚核苷酸包含編碼本文提供之抗-人類GITR抗體或其抗原-結合片段之重鏈可變區的鹼基序列；及表現載體，其包含聚核苷酸，該聚核苷酸包含編碼抗體或其抗原-結合片段之輕鏈可變區的鹼基序列；及(c)用表現載體轉形之宿主細胞，該表現載體包含聚核苷酸，該聚核苷酸包含編碼本文提供之抗-人類GITR抗體或其抗原-結合片段之重鏈可變區的鹼基序列；及用表現載體轉形之宿主細胞，該表現載體包含聚核苷酸，該聚核苷酸包含編碼抗體或其抗原-結合片段之輕鏈可變區的鹼基序列。 在另一態樣中，提供一種用於製造抗-人類GITR抗體之方法，其包含培養選自由以下(a)至(c)組成之群之宿主細胞以表現抗-人類GITR抗體：(a)用表現載體轉形之宿主細胞，該表現載體包含：聚核苷酸，其包含編碼本文提供之抗-人類GITR抗體之重鏈的鹼基序列；及聚核苷酸，其包含編碼抗體之輕鏈的鹼基序列；(b)用以下表現載體轉形之宿主細胞：表現載體，其包含聚核苷酸，該聚核苷酸包含編碼本文提供之抗-人類GITR抗體之重鏈的鹼基序列；及表現載體，其包含聚核苷酸，該聚核苷酸包含編碼抗體之輕鏈的鹼基序列；及(c)用表現載體轉形之宿主細胞，該表現載體包含聚核苷酸，該聚核苷酸包含編碼本文提供之抗-人類GITR抗體之重鏈的鹼基序列；及用表現載體轉形之宿主細胞，該表現載體包含聚核苷酸，該聚核苷酸包含編碼抗體之輕鏈的鹼基序列。1.16. 製備變體之方法 在一些實施例中，本文提供之ABP為親本ABP之親和性成熟變體，該親和性成熟變體可例如使用基於噬菌體展示之親和性成熟技術來產生。簡言之一或多個CDR殘基可經突變，且變體ABP或其部分展示於噬菌體上並篩選親和性。此類更改可在CDR「熱點」或由在體細胞成熟過程期間經受高頻突變之密碼子編碼之殘基(參見 Chowdhury,Methods Mol . Biol . , 2008, 207:179-196，其以全文引用的方式併入本文中)及/或與抗原接觸之殘基中進行。在一些實施例中，親和性成熟可用於更改或引入物種結合，亦即，抗-小鼠抗體可經工程改造以與相同靶抗原之人類及食蟹獼猴型式等結合。 任何合適的方法可用於將變化引入至編碼ABP之聚核苷酸序列中，包括易錯PCR、鏈改組及寡核苷酸定向突變誘發，諸如三核苷酸定向突變誘發(TRIM)。在一些態樣中，將若干CDR殘基(例如同時4至6個殘基)隨機化。涉及抗原結合之CDR殘基可專門鑑別，例如使用丙胺酸掃描突變誘發或模型化來鑑別。特定言之CDR-H3及CDR-L3通常進行靶向突變。 引入多樣性至可變區及/或CDR中可用於產生二級文庫。接著，篩選二級文庫以鑑別具有經改良親和性之ABP變體。藉由自二級文庫構建及再選擇之親和性成熟已描述於例如Hoogenboom等人,Methods in Molecular Biology , 2001, 178:1-37中，其以全文引用的方式併入本文中。1.17. 載體、宿主細胞及重組方法 亦提供經分離之編碼GITR ABP之核酸、包含核酸之載體及包含載體及核酸的宿主細胞以及用於產生ABP的重組技術。 在另一態樣中，提供一種包含編碼本文提供之抗-人類GITR抗體或其抗原-結合片段之重鏈可變區之鹼基序列的聚核苷酸。在另一態樣中，提供一種包含編碼本文提供之抗-人類GTIR抗體或其抗原-結合片段之輕鏈可變區之鹼基序列的聚核苷酸。 在另一態樣中，提供一種包含編碼本文提供之抗-人類GITR抗體之重鏈之鹼基序列的聚核苷酸。在另一態樣中，提供一種包含編碼本文提供之抗-人類GTIR抗體之輕鏈之鹼基序列的聚核苷酸。 為了重組產生ABP，可分離編碼其的核酸且將其插入至可複製的載體中用於進一步選殖(亦即，DNA擴增)或表現。在一些態樣中，核酸可藉由同源重組來產生，例如如美國專利第5,204,244號中所描述，其以全文引用的方式併入本文中。 在另一態樣中，提供一種表現載體，其包含(a)包含編碼本文提供之抗-人類GITR抗體或其抗原-結合片段之重鏈可變區之鹼基序列的聚核苷酸，及/或(b)包含編碼抗-人類GITR抗體或其抗原-結合片段之輕鏈可變區之鹼基序列的聚核苷酸。 在另一態樣中，提供一種表現載體，其包含(a)包含編碼本文提供之抗-人類GITR抗體之重鏈之鹼基序列的聚核苷酸，及/或(b)包含編碼抗-人類GITR抗體之輕鏈之鹼基序列的聚核苷酸。 許多不同載體為此項技術中已知的。載體組分一般包括以下中之一或多者：信號序列、複製起點、一或多個標記基因、增強子元件、啟動子及轉錄終止序列，例如如美國專利第5,534,615號中所描述，其以全文引用的方式併入本文中。 合適的宿主細胞之說明性實例提供於下。此等宿主細胞並不意謂為限制性，且任何合適的宿主細胞可用於產生本文提供之ABP。 在另一態樣中，提供一種用選自由(a)至(d)組成之群之表現載體轉形的宿主細胞：(a)用表現載體轉形之宿主細胞，該表現載體包含：聚核苷酸，其包含編碼本文提供之抗-人類GITR抗體或其抗原-結合片段之重鏈可變區的鹼基序列；及聚核苷酸，其包含編碼抗體或其抗原-結合片段之輕鏈可變區的鹼基序列；(b)用以下表現載體轉形之宿主細胞：表現載體，其包含聚核苷酸，該聚核苷酸包含編碼本文提供之抗-人類GITR抗體或其抗原-結合片段之重鏈可變區的鹼基序列；及表現載體，其包含聚核苷酸，該聚核苷酸包含編碼抗體或其抗原-結合片段之輕鏈可變區的鹼基序列；(c)用表現載體轉形之宿主細胞，該表現載體包含聚核苷酸，該聚核苷酸包含編碼本文提供之抗-人類GITR抗體或其抗原-結合片段之重鏈可變區的鹼基序列；及(d)用表現載體轉形之宿主細胞，該表現載體包含聚核苷酸，該聚核苷酸包含編碼本文提供之抗-人類GITR抗體或其抗原-結合片段之輕鏈可變區的鹼基序列。 在另一態樣中，提供用選自由(a)至(d)組成之群之表現載體轉形的宿主細胞：(a)用表現載體轉形之宿主細胞，該表現載體包含：聚核苷酸，其包含編碼本文提供之抗-人類GITR抗體之重鏈的鹼基序列；及聚核苷酸，其包含編碼抗體之輕鏈的鹼基序列；(b)用以下表現載體轉形之宿主細胞：表現載體，其包含聚核苷酸，該聚核苷酸包含編碼本文提供之抗-人類GITR抗體之重鏈的鹼基序列；及表現載體，其包含聚核苷酸，該聚核苷酸包含編碼抗體之輕鏈的鹼基序列；(c)用表現載體轉形之宿主細胞，該表現載體包含聚核苷酸，該聚核苷酸包含編碼本文提供之抗-人類GITR抗體之重鏈的鹼基序列；及(d)用表現載體轉形之宿主細胞，該表現載體包含聚核苷酸，該聚核苷酸包含編碼本文提供之抗-人類GITR抗體之輕鏈的鹼基序列。 合適的宿主細胞包括任何原核(例如細菌)、低等真核(例如酵母菌)或高等真核(例如哺乳動物)細胞。合適的原核生物包括真細菌，諸如革蘭氏陰性(Gram-negative)或革蘭氏陽性(Gram-positive)生物體，例如腸內菌科，諸如埃希氏桿菌屬(Escherichia ) (大腸桿菌)、腸桿菌屬(Enterobacter )、歐文菌屬(Erwinia )、克雷伯氏菌(Klebsiella )、變形桿菌(Proteus )、沙門氏菌(Salmonella ) (鼠傷寒沙門桿菌(S . typhimurium ))、沙雷菌屬(Serratia ) (黏質沙雷氏菌(S . marcescans ))、志賀桿菌屬(Shigella )、桿菌(Bacilli ) (枯草桿菌(B . subtilis )及地衣芽孢桿菌(B . licheniformis ))、假單胞菌(Pseudomonas ) (綠膿桿菌(P . aeruginosa ))及鏈黴菌(Streptomyces )。適用大腸桿菌選殖宿主的宿主為大腸桿菌294，但諸如大腸桿菌B、大腸桿菌X1776及大腸桿菌W3110之其他菌株亦為合適的。 除原核生物以外，真核微生物(諸如絲狀真菌或酵母菌)亦為GITR ABP編碼載體之合適的選殖或表現宿主。在低等真核宿主微生物中通常使用釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae )或普通麵包酵母。然而，多種其他屬、物種及菌株可供食用且適用，諸如粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe )、克魯維酵母(Kluyveromyces ) (乳酸克魯維酵母(K . lactis )、脆弱克魯維酵母(K . fragilis )、保加利亞克魯維酵母(K . bulgaricus )、魏氏克魯維酵母(K . wickeramii )、沃提克魯維酵母(K . waltii )、果蠅克魯維酵母(K . drosophilarum )、耐熱克魯維酵母(K . thermotolerans )及馬克斯克魯維酵母(K . marxianus ))、耶氏酵母屬(Yarrowia )、甲醇酵母(Pichia pastoris )、假比酵母(Candida ) (白色念珠菌(C . albicans ))、里氏木黴菌屬(Trichoderma reesia )、粗厚神經胞子菌(Neurospora crassa )、施氏酵母(Schwanniomyces ) (西方施氏酵母(S . occidentalis ))及絲狀真菌(諸如青黴菌屬(Penicillium )、彎頸黴屬(Tolypocladium )及麴菌屬(Aspergillus ) (構巢麴菌(A . nidulans )及黑麴菌(A . niger ))。 適用哺乳動物宿主細胞包括COS-7細胞、HEK293細胞、幼倉鼠腎(BHK)細胞、中國倉鼠卵巢(CHO)細胞、小鼠睾丸支持細胞、非洲綠猴腎臟細胞(VERO-76)及類似者。 用於產生本發明之GITR ABP之宿主細胞可在各種介質中培養。諸如哈姆氏F10 (Ham's F10)、最小基本介質(MEM)、RPMI-1640及杜貝克氏修改的伊格爾氏介質(Dulbecco's Modified Eagle's Medium) (DMEM)之市售可得介質適用於培養宿主細胞。另外，可使用描述於Ham等人,Meth . Enz . , 1979, 58:44; Barnes等人,Anal . Biochem . , 1980, 102:255; 及美國專利第4,767,704號、第4,657,866號、第4,927,762號、第4,560,655號及第5,122,469號; 或WO 90/03430及WO 87/00195中之介質中之任一者。前述參考中之每一者以全文引用的方式併入本文中。 此等介質中之任一者可以視需要補充激素及/或其他生長因子(諸如胰島素、轉鐵蛋白或表皮生長因子)、鹽(諸如氯化鈉、鈣鹽、鎂鹽及磷酸鹽)、緩衝液(諸如HEPES)、核苷酸(諸如腺苷及胸苷)、抗生素、痕量元素(定義為通常以微莫耳範圍內之最終濃度存在的無機化合物)及葡萄糖或等效能量來源。亦可包括呈熟習此項技術者已知之適當濃度的任何其他必需補料。 培養條件(諸如溫度、pH及其類似條件)為與先前經選擇用於表現的宿主細胞一起使用的培養條件，且對於一般熟習此項技術者而言為顯而易見的。 當使用重組技術時，ABP可於胞內、周質空間中產生或直接分泌於介質中。若ABP在胞內產生，則作為第一步驟，例如利用離心或超過濾移除微粒碎片(宿主細胞或經溶解片段)。舉例而言，Carter等人(Bio / Technology , 1992, 10:163-167，其以全文引用的方式併入本文中)描述用於分離分泌至大腸桿菌之周質空間之ABP的程序。簡言之，在乙酸鈉(pH 3.5)、EDTA及苯基甲基磺醯氟(PMSF)存在下經約30 min解凍細胞漿料。可藉由離心移除細胞碎片。 在一些實施例中，在無細胞系統中產生ABP。在一些態樣中，無細胞系統為活體外轉錄及轉譯系統，如Yin等人,mAbs , 2012, 4:217-225中所描述，其以全文引用的方式併入本文中。在一些態樣中，無細胞系統利用來自真核細胞或來自原核細胞之無細胞提取物。在一些態樣中，原核細胞為大腸桿菌。ABP之無細胞表現可為適用的，例如，在ABP作為不可溶聚集物積聚於細胞中時，或在自周質表現之產率較低時。 在ABP分泌至介質中時，一般首先使用市售可得蛋白質濃縮過濾器(例如Amicon® 或Millipore® Pellcon® 超過濾單元)濃縮來自此類表現系統之上清液。在前述步驟中之任一者中可包括諸如PMSF之蛋白酶抑制劑以抑制蛋白水解，且可包括抗生素以防止外來污染物生長。 由細胞製備的ABP組合物可使用例如羥磷灰石層析、凝膠電泳、透析及親和性層析法進行純化，其中親和性層析法為尤其適用的純化技術。蛋白A作為親和配位體之適合性視ABP中存在之任何免疫球蛋白Fc域之物種及同型而定。蛋白A可用於純化包含人類γ1、γ2或γ4重鏈之ABP (Lindmark等人,J . Immunol . Meth . , 1983, 62:1-13，其以全文引用的方式併入本文中)。蛋白G適用於所有小鼠同型及適用於人類γ3 (Guss等人,EMBO J . , 1986, 5:1567-1575，其以全文引用的方式併入本文中)。 親和配位體所附著之基質最常為瓊脂糖，但可利用其他基質。與瓊脂糖可達成者相比，機械穩定性基質(諸如受控微孔玻璃或聚(苯乙烯二乙烯基)苯)允許更快流動速率及更短處理時間。在ABP包含CH3 域時，BakerBond ABX® 樹脂適用於純化。 亦可利用用於蛋白質純化之其他技術，且可由熟習此項技術者應用，諸如離子交換柱分級分離、乙醇沈澱、逆相HPLC、二氧化矽層析、肝素Sepharose® 層析、層析聚焦、SDS-PAGE及硫酸銨沈澱。 在任何初始純化步驟之後，可使用在約2.5與約4.5之間的pH下之溶離緩衝液使包含所關注之ABP及污染物之混合物經受低pH疏水相互作用層析，一般在較低鹽濃度(例如約0至約0.25 M的鹽)下進行。分析法 此項技術中已知之各種分析法可用於鑑別及表徵本文提供之GITR ABP。1.18. 結合、競爭及抗原決定基定位分析法 可利用任何合適的方法來評價本文提供之ABP之特異性抗原-結合活性，包括使用SPR、BLI及RIA，如在本發明中之其他地方所描述。另外，可利用ELISA分析法及西方墨點分析法來評價抗原-結合活性。 用於量測兩種ABP之間或ABP與另一分子(例如GITRL)之間的競爭之分析法描述於本發明中之其他地方及例如描述於Harlow及Lane,Antibodies : A Laboratory Manual ch.14, 1988, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y中，其以全文引用的方式併入本文中。 用於定位與本文提供之ABP結合之抗原決定基之分析法描述於例如Morris之Methods in Molecular Biology 中之「Epitope Mapping Protocols」第66卷, 1996, Humana Press, Totowa, N.J.中，其以全文引用的方式併入本文中。在一些實施例中，抗原決定基藉由肽競爭來判定。在一些實施例中，抗原決定基藉由質譜法來判定。在一些實施例中，抗原決定基藉由結晶學來判定。1.19. GITR 促效作用分析法 在一些實施例中，篩選本文提供之ABP以鑑別或表徵針對GITR具有促效活性的ABP。任何合適的分析法可用於鑑別或表徵此類ABP。在一些態樣中，分析法量測在使效應T細胞與本文提供之ABP接觸之後由效應T細胞分泌之細胞介素的量。在一些態樣中，細胞介素選自IL-2Rα、IL-2、IL-8、IFNγ及其組合。在一些態樣中，細胞介素選自以下：sCD40L、VEGF、TNF-β、TNF-α、TGF-α、RANTES、PDGF-AB/BB、PDGF-AA、MIP-1β、MIP-1α、MDC (CCL22)、MCP-3、MCP-1、IP-10、IL-17A、IL-15、IL-13、IL-12 (p70)、IL-12 (p40)、IL-10、IL-9、IL-8、IL-7、IL-6、IL-5、IL-4、IL-3、IL-2、IL-2Rα、IL-1RA、IL-1β、IL-1α、IFNγ、IFNα2、GRO、GM-CSF、G-CSF、弗拉塔凱(fractalkine)、Flt-3配位體、FGF-2、伊紅趨素(eotaxin)、EGF及其組合。 在一些實施例中，用CD3之促效劑共刺激效應細胞以促進效應細胞分泌細胞介素。在一些態樣中，以次最大水準提供CD3促效劑。 在一些實施例中，使用功能性分析法，諸如實例2中更詳細地描述之基於HT1080或Jurkat細胞之分析法。額外分析法描述於Wyzgol等人,J Immunol 2009; 183:1851-1861中，其以引用的方式併入本文中。 在一些態樣中，此類分析法可量測在使效應T細胞與本文提供之ABP接觸之後之效應T細胞的增殖。在一些態樣中，效應T細胞之增殖藉由稀釋染料(例如羧基螢光素二乙酸丁二醯亞胺基酯；CFSE)，藉由氚化胸苷攝取，藉由發光細胞存活率分析法或藉由此項技術中已知之其他分析法來量測。 在一些態樣中，此類分析法可量測在使調節T細胞與本文提供之ABP接觸之後調節T細胞之分化、細胞介素產量、存活率(例如存活)、增殖或抑止活性。 在一些態樣中，此類分析法可量測在使NK細胞與本文提供之ABP接觸之後之NK細胞之細胞毒活性。在一些態樣中，NK細胞之細胞毒活性使用量化NK介導之靶細胞(例如K562細胞株)之殺傷之細胞毒性分析法來量測。參見 Jang等人,Ann . Clin . Lab . Sci . , 2012, 42:42-49，其以全文引用的方式併入本文中。 用於量測GITR促效作用之額外分析法描述於本發明中之其他地方(包括實例中)，且為此項技術中已知的。熟習此項技術者可容易地選擇用於評估GITR促效作用之適當分析法。1.20. 針對效應功能之分析法 本文提供之ABP之效應功能可使用此項技術中已知之各種活體外及活體內分析法來評價，包括描述於以下中之彼等分析法：Ravetch及Kinet,Annu . Rev . Immunol . , 1991, 9:457-492; 美國專利第5,500,362號、第5,821,337號; Hellstrom等人,Proc . Nat ' l Acad . Sci . USA , 1986, 83:7059-7063; Hellstrom等人,Proc . Nat ' l Acad . Sci . USA , 1985, 82:1499-1502; Bruggemann等人,J . Exp . Med . , 1987, 166:1351-1361; Clynes等人,Proc . Nat ' l Acad . Sci . USA , 1998, 95:652-656; WO 2006/029879; WO 2005/100402; Gazzano-Santoro等人,J . Immunol . Methods , 1996, 202:163-171; Cragg等人,Blood , 2003, 101:1045-1052; Cragg等人.Blood , 2004, 103:2738-2743; 及Petkova等人,Int ' l . Immunol . , 2006, 18:1759-1769；其中之每一者以全文引用的方式併入本文中。醫藥組合物 本文提供之ABP可調配於任何適當醫藥組合物中且利用任何合適的投藥途徑投與。合適的投藥途徑包括(但不限於)動脈內、皮內、肌肉內、腹膜內、靜脈內、鼻、非經腸、肺部及皮下途徑。 在另一態樣中，提供一種包含複數種類型之本文提供之抗-人類GITR抗體或其抗原結合片段的醫藥組合物。舉例而言，醫藥組合物包含並未經受轉譯後修飾之抗體或其抗原-結合片段，及衍生自抗體或其抗原-結合片段之轉譯後修飾的抗體或其抗原-結合片段。 在一個實施例中，醫藥組合物包含選自(1)至(4)之抗-人類GITR抗體之至少兩種類型：(1)抗-人類GITR抗體，其包含由SEQ ID NO: 7組成之兩個重鏈及由SEQ ID NO: 8組成之四個輕鏈；(2)抗-人類GITR抗體，其包含由SEQ ID NO: 7組成之兩個重鏈，其中在位置1處之Q經修飾為焦麩胺酸；由SEQ ID NO: 8組成之四個輕鏈；(3)抗-人類GITR抗體，其包含由SEQ ID NO: 7之位置1處之Q至位置686處之G之範圍內之胺基酸序列組成之兩個重鏈，及由SEQ ID NO: 8組成之四個輕鏈；及(4)抗-人類GITR抗體，其包含由SEQ ID NO: 7之位置1處之Q至位置686處之G之範圍內之胺基酸序列組成之兩個重鏈，其中位置1處之Q經修飾為焦麩胺酸；及SEQ ID NO: 8之四個輕鏈。 在一個實施例中，醫藥組合物包含：抗-人類GITR抗體，其包含由SEQ ID NO: 7組成之兩個重鏈及由SEQ ID NO: 8組成之四個輕鏈；及抗-人類GITR抗體，其包含由SEQ ID NO: 7之位置1處之Q至位置686處之G之範圍內之胺基酸序列組成之兩個重鏈(其中，位置1處之Q經修飾為焦麩胺酸)及SEQ ID NO: 8之四個輕鏈；以及醫藥學上可接受之賦形劑。 醫藥組合物可包含一或多種醫藥賦形劑。可使用任何合適的醫藥賦形劑，且一般熟習此項技術者能夠選擇合適的醫藥賦形劑。因此，以下提供之醫藥賦形劑意欲為說明性且並不為限制性。額外醫藥賦形劑包括例如描述於Handbook of Pharmaceutical Excipients , Rowe等人(編)第6版(2009)中之彼等，其以全文引用的方式併入本文中。 在一些實施例中，醫藥組合物包含消泡劑。可使用任何合適的消泡劑。在一些態樣中，消泡劑選自醇、醚、油、蠟、聚矽氧、界面活性劑及其組合。在一些態樣中，消泡劑選自：礦物油、植物油、乙烯雙硬脂醯胺、固體石蠟、酯蠟、脂肪醇蠟、長鏈脂肪醇、脂肪酸皂、脂肪酸酯、矽乙二醇、氟聚矽氧、聚乙二醇-聚丙二醇共聚物、聚二甲基矽氧烷-二氧化矽、醚、辛醇、癸醯醇、脫水山梨糖醇三油酸酯、乙醇、2-乙基-己醇、二甲聚矽氧烷、油醇、聚二甲矽氧烷及其組合。 在一些實施例中，醫藥組合物包含共溶劑。共溶劑之說明性實例包括乙醇、聚(乙烯)乙二醇、丁二醇、二甲基乙醯胺、甘油、丙二醇及其組合。 在一些實施例中，醫藥組合物包含緩衝液。緩衝液之說明性實例包括乙酸鹽、硼酸鹽、碳酸鹽、乳酸鹽、蘋果酸鹽、磷酸鹽、檸檬酸鹽、氫氧化物、二乙醇胺、單乙醇胺、甘胺酸、甲硫胺酸、瓜爾豆膠、麩胺酸單鈉及其組合。 在一些實施例中，醫藥組合物包含載劑或填充劑。載劑或填充劑之說明性實例包括乳糖、麥芽糊精、甘露醇、山梨醇、聚葡萄胺糖、硬脂酸、三仙膠、瓜爾豆膠及其組合。 在一些實施例中，醫藥組合物包含界面活性劑。表面活性劑之說明性實例包括d -α生育酚、苯紮氯銨、苄索氯銨、西曲溴胺、氯化十六烷基吡啶、多庫酯鈉、二十二烷酸甘油酯、單油酸甘油酯、月桂酸、聚乙二醇15羥基硬脂酸酯、十四烷醇、磷脂、聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯脫水山梨糖醇脂肪酸酯、聚氧乙烯硬脂酸酯、聚氧甘油酯、月桂基硫酸鈉、脫水山梨糖醇酯、維生素E聚乙烯(乙二醇)丁二酸及其組合。 在一些實施例中，醫藥組合物包含防結塊劑。防結塊劑之說明性實例包括磷酸鈣(三價的)、羥甲基纖維素、羥丙基纖維素、氧化鎂及其組合。 可與醫藥組合物一起使用之其他賦形劑包括(例如)白蛋白、抗氧化劑、抗細菌劑、抗真菌劑、生物可吸收聚合物、螯合劑、控釋劑、稀釋劑、分散劑、溶解增強劑、乳化劑、膠凝劑、軟膏基質、穿透增強劑、防腐劑、增溶劑、溶劑、穩定劑、糖及其組合。此等藥劑中之每一者之具體實例描述於例如Handbook of Pharmaceutical Excipients , Rowe等人(編)第6版(2009), The Pharmaceutical Press中，其以全文引用的方式併入本文中。 在一些實施例中，醫藥組合物包含溶劑。在一些態樣中，溶劑為鹽水溶液，諸如無菌等張鹽水溶液或右旋糖溶液。在一些態樣中，溶劑為注射用水。 在一些實施例中，醫藥組合物呈顆粒形式，諸如微粒或奈米顆粒。微米顆粒及奈米顆粒可由任何合適的材料(諸如聚合物或脂質)形成。在一些態樣中，微米顆粒或奈米顆粒為膠微胞、脂質體聚合物囊泡。 由於水可促使一些ABP降解，所以本文進一步提供包含ABP之無水醫藥組合物及劑型。 本文提供之無水醫藥組合物及劑型可使用無水或含有較低水分之成分及較低水分或較低濕度之條件來製備。若預期在製造、封裝及/或儲存期間與水分及/或濕氣實質上接觸，則包含乳糖及至少一種包含一級胺或二級胺之活性成分的醫藥組合物及劑型可為無水的。 無水醫藥組合物應以維持其無水性質的方式製備及儲存。因此，使用已知防止暴露於水之材料封裝無水組合物使得其可包括於合適的處方集套組中。合適的封裝之實例包括(但不限於)氣密密封式箔、塑膠、單位劑量容器(例如小瓶)、泡殼封裝及條帶封裝。1.21. 非經腸劑型 在某些實施例中，本文提供之ABP調配為非經腸劑型。可利用各種途徑向個體投與非經腸劑型，該等途徑包括(但不限於)皮下、靜脈內(包括輸注及快速注射)、肌肉內及動脈內。因為其投與通常繞過個體針對污染物之天然防禦，所以非經腸劑型通常為無菌的或能夠在投與個體之前滅菌。非經腸劑型之實例包括(但不限於)注射備用溶液、備用於待溶解或懸浮於醫藥學上可接受之媒劑的注射用乾燥(例如凍乾)產品、注射備用懸浮液及乳液。 可用以提供非經腸劑型之合適的媒劑為熟習此項技術者所熟知。實例包括(但不限於)：注射USP用水；含水媒劑，諸如(但不限於)氯化鈉注射液、林格氏(Ringer's)注射液、右旋糖注射液、右旋糖及氯化鈉注射液及乳酸林格氏注射液；水溶性媒劑，諸如(但不限於)乙醇、聚乙二醇及聚丙二醇；以及非水性媒劑，諸如(但不限於)玉米油、棉籽油、花生油、芝麻油、油酸乙酯、十四烷酸異丙酯及苯甲酸苄酯。 增加本文所揭示之ABP中之一或多者之溶解度的賦形劑亦可併入至非經腸劑型中。 在一些實施例中，非經腸劑型為凍乾的。例示性凍乾調配物描述於例如美國專利第6,267,958號及第6,171,586號; 及WO 2006/044908中；其中之每一者以全文引用的方式併入本文中。劑量及單位劑型 在人類療法中，醫生將根據預防性或治癒性治療及根據特定針對待治療之個體之年齡、重量、病狀及其他因素來判定他認為最適當的劑量學。 在某些實施例中，本文提供之組合物為醫藥組合物或單次單位劑型。本文提供之醫藥組合物及單次單位劑型包含預防性或治療有效量之一或多種預防性或治療性ABP。 將在預防或治療病症或其一或多個症狀中有效之ABP或組合物的量將隨疾病或病狀之性質及嚴重程度以及投與ABP的途徑而變化。頻率及劑量亦將根據特別針對各個體之因素視以下各者而變化：所投與之特異性治療劑(例如治療性或預防劑)、病症、疾病或病狀之嚴重程度、投藥途徑以及個體之年齡、體、重量、回應及既往病史。可自源自活體外或動物模型測試系統之劑量反應曲線外推出有效劑量。 在某些實施例中，組合物之例示性劑量包括數或微克量之ABP/公斤個體或樣本重量(例如約100微克/公斤至約25毫克/公斤、或約100微克/公斤至約10毫克/公斤)。在某一實施例中，按ABP之重量計，投與以預防、治療、控制或改善個體中之病症或其一或多個症狀之本文提供之ABP的劑量為個體體重之0.1 mg/kg、1 mg/kg、2 mg/kg、3 mg/kg、4 mg/kg、5 mg/kg、6 mg/kg、10 mg/kg、15 mg/kg、20 mg/kg、25 mg/kg、30 mg/kg、或40 mg/kg或更高。 劑量可根據合適的時程來投與，例如每週一次、每兩週一次、每三週一次或每四週一次。在一些實施例中，待每三週或四週投與之抗體比每一週或兩週投與之抗體可以更高劑量投與。在一些實施例中，投與高於其後所投與之維持劑量的速效劑量。如將對於一般熟習此項技術者顯而易見的，可能需要在一些情況下使用超出本文所揭示之範圍之ABP劑量。此外，應注意，臨床師或治療醫師結合個體回應應知道如何及何時中斷、調整或終止治療。 如易由一般熟習此項技術者所知的，不同治療有效量可適用於不同疾病及病狀。類似地，本文提供之劑量及給藥頻率時程亦涵蓋足以預防、控制、治療或改善此類病症但不足以引起或足以減少與本文提供之ABP相關聯之不良作用的量。此外，當向個體投與多次劑量之本文提供之組合物時，並非所有之劑量需要相同。舉例而言，可增加向個體投與之劑量以改良組合物之預防性或治療效果，或可減少該劑量以減少特定個體經歷的一或多個副作用。 在某些實施例中，可用本文提供之ABP或組合物之一或多個速效劑量隨後一或多個維護劑量來起始治療或預防。 在某些實施例中，可投與本文提供之ABP或組合物之劑量以達成ABP在個體之血液或血清中的穩態濃度。穩態濃度可藉由根據熟習此項技術者可利用之技術之量測來判定，或可基於個體之身體特徵(諸如，高度、重量及年齡)來判定。 在某些實施例中，可重複投與相同組合物，且投藥可由至少1天、2天、3天、5天、10天、15天、30天、45天、2個月、75天、3個月或6個月間隔開。 如在本發明中之其他地方更詳細地論述，本文提供之ABP可視情況與適用於預防或治療疾病或病症之一或多種額外藥劑一起投與。此類額外藥劑之有效量可視調配物中存在之ABP之量、病症或治療之類型及此項技術中已知或本文中所描述之其他因素而定。治療性應用 對於治療性應用，向哺乳動物(一般人類)以醫藥學上可接受之劑型(諸如此項技術中已知之彼等劑型及上文所論述之彼等劑型)投與本發明之ABP。舉例而言，可向人類靜脈內快濃注與或藉由連續輸注一段時間、藉由肌肉內、腹膜內、腦脊髓內、皮下、關節內、滑膜內、鞘內或瘤內途徑投與本發明之ABP。亦藉由瘤周、病灶內或病灶旁途徑合適地投與ABP以發揮局部以及全身性治療效果。腹膜內途徑可尤其適用於例如治療卵巢瘤。 本文提供之ABP可適用於治療涉及GITR之任何疾病或病狀。在一些實施例中，疾病或病狀為可得益於用抗-GITR ABP治療之疾病或病狀。在一些實施例中，疾病或病狀為腫瘤。在一些實施例中，疾病或病狀為細胞增殖性病症在一些實施例中，疾病或病狀為癌症。 在一些實施例中，提供本文提供之ABP用作藥物。在一些實施例中，提供本文提供之ABP用於製造或製備藥物。在一些實施例中，藥物用於治療可得益於抗-GITR ABP之疾病或病狀。在一些實施例中，疾病或病狀為腫瘤。在一些實施例中，疾病或病狀為細胞增殖性病症。在一些實施例中，疾病或病狀為癌症。 任何合適的癌症可用本文提供之ABP治療。說明性合適的癌症包括例如：急性淋巴母細胞白血病(ALL)、急性骨髓白血病(AML)、腎上腺皮質癌瘤、肛門癌、闌尾癌、星形細胞瘤、基底細胞癌、腦腫瘤、膽管癌、膀胱癌、骨癌、乳癌、支氣管腫瘤、不明原因原發灶癌、心臟腫瘤、子宮頸癌、脊索瘤、結腸癌、結腸直腸癌、顱咽管瘤、導管癌、胚胎腫瘤、子宮內膜癌、室管膜瘤、食道癌、敏感性神經胚細胞瘤、纖維組織細胞瘤、尤文氏肉瘤(Ewing sarcoma)、眼癌、生殖細胞腫瘤、膽囊癌、胃癌、腸胃類癌瘤、腸胃基質腫瘤、妊娠期滋養細胞疾病、神經膠瘤、頭頸癌、肝細胞癌、組織細胞增多病、霍奇金淋巴瘤(Hodgkin lymphoma)、下咽癌、眼內黑素瘤、胰島細胞腫瘤、卡堡氏肉瘤(Kaposi sarcoma)、腎癌、蘭格漢氏細胞(Langerhans cell)組織細胞增多病、喉癌、唇及口腔癌、肝癌、小葉原位癌、肺癌、巨球蛋白血症、惡性纖維組織細胞瘤、黑素瘤、梅克爾細胞癌(Merkel cell carcinoma)、間皮瘤、隱性原發性轉移性鱗狀頸癌、涉及NUT 基因之中線道癌瘤、口腔癌、多發性內分泌瘤症候群、多發性骨髓瘤、蕈樣黴菌病、骨髓發育不良症候群、骨髓發育不良/骨髓增生腫瘤、鼻腔及副鼻竇癌、鼻咽癌、神經母細胞瘤、非小細胞肺癌、口咽癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰臟癌、乳頭狀瘤症、副神經節瘤、副甲狀腺癌、陰莖癌、咽部癌、嗜鉻細胞瘤、垂體腫瘤、胸膜肺母細胞瘤、原發性中樞神經系統淋巴瘤、前列腺癌、直腸癌、腎細胞癌、腎盂及尿管癌、視網膜母細胞瘤、橫紋肌樣腫瘤、唾液腺癌、塞紮萊(Sezary)症候群、皮膚癌、小細胞肺癌、小腸癌、軟組織肉瘤、脊髓腫瘤、胃癌、T細胞淋巴瘤、畸胎樣腫瘤、睪丸癌、咽喉癌、胸腺瘤及胸腺癌、甲狀腺癌、尿道癌、子宮癌、陰道癌、外陰癌及威爾姆斯(Wilms)腫瘤。 在一些實施例中，本文提供一種藉由向個體投與有效量之本文提供之ABP治療有需要之個體之疾病或病狀的方法。在一些態樣中，疾病或病狀為癌症。 在一些實施例中，本文提供一種藉由向個體投與有效量之本文提供之ABP在有需要之個體的靶細胞中多聚化GITR的方法。 在一些實施例中，本文提供一種藉由向個體投與有效量之本文提供之ABP在有需要之個體的靶細胞中促效GITR的方法。在一些態樣中，由本文提供之ABP對於GITR之促效作用引起增加靶細胞分泌IL-2Rα、IL-2、IL-8、及/或IFNγ。 在一些實施例中，本文提供一種藉由向個體投與有效量之本文提供之ABP在有需要之個體的靶細胞中調節NF-κB的方法。 在一些實施例中，本文提供一種藉由向個體投與有效量之本文提供之ABP在有需要之個體的靶細胞中調節IκB之降解的方法。 在一些實施例中，本文提供一種藉由向個體投與有效量之本文提供之ABP在有需要之個體的靶細胞中活化MAPK路徑的方法。在一些態樣中，由本文提供之ABP活化之MAPK路徑之組分包括p38、JNK及ERK中之一或多者。 在一些實施例中，本文提供一種藉由向個體投與有效量之本文提供之ABP增加有需要之個體之效應T細胞的增殖、存活及/或功能的方法。在一些態樣中，效應T細胞為CD4+效應T細胞。在一些態樣中，效應T細胞為CD8+效應T細胞。 在一些實施例中，本文提供一種藉由向個體投與有效量之本文提供之ABP消除由有需要之個體之調節T細胞對於效應T細胞的抑止的方法。在一些態樣中，調節T細胞為CD4+CD25+Foxp3+調節T細胞。在一些態樣中，調節T細胞為CD8+CD25+調節T細胞。 在一些實施例中，本文提供一種藉由向個體投與有效量之本文提供之ABP更改有需要之個體之調節T細胞之出現頻率或分佈的方法。在一些態樣中，調節T細胞之頻率降低。在一些態樣中，在特定組織中調節T細胞之頻率降低。在一些態樣中，調節T細胞之瘤內堆積減少，從而產生更有利的效應T細胞比調節T細胞之比率及增強CD8+ T細胞活性。 在一些實施例中，本文提供一種藉由向個體投與有效量之本文提供之ABP增加有需要之個體之自然殺手(NK)細胞之活性的方法。 在一些實施例中，本文提供一種藉由向個體投與有效量之本文提供之ABP增加有需要之個體之樹突狀細胞之活性的方法。 在一些實施例中，本文提供一種藉由向個體投與有效量之本文提供之ABP增加有需要之個體之B細胞之活性的方法。 在一些實施例中，本文提供一種藉由向個體投與有效量之本文提供之ABP增強有需要之個體之免疫反應的方法。 在一些實施例中，本文提供一種藉由向個體投與有效量之本文提供之ABP延緩有需要之個體之腫瘤之發作的方法。 在一些實施例中，本文提供一種藉由向個體投與有效量之本文提供之ABP延緩有需要之個體之癌症之發作的方法。 在一些實施例中，本文提供一種藉由向個體投與有效量之本文提供之ABP減小有需要之個體之腫瘤之大小的方法。 在一些實施例中，本文提供一種藉由向個體投與有效量之本文提供之ABP減少有需要之個體之癌轉移之數目的方法。組合療法 在一些實施例中，本文提供之ABP與至少一種額外治療劑一起投與。任何合適的額外治療劑可與本文提供之ABP一起投與。在一些態樣中，額外治療劑選自輻射、細胞毒性劑、化學治療劑、細胞生長抑制劑、抗-激素劑、EGFR抑制劑、免疫刺激劑、抗血管生成劑及其組合。 在一些實施例中，額外治療劑包含免疫刺激劑。 在一些實施例中，免疫刺激劑為阻斷免疫細胞之抑制性受體或其配位體之信號傳導的試劑。在一些態樣中，抑制性受體或配位體選自CTLA-4、PD-1、PD-L1、NRP-1、LAG-3、Tim3、TIGIT、神經炎素、BTLA、KIR及其組合。在一些態樣中，試劑選自派立珠單抗(抗-PD-1)、納武單抗(nivolumab) (抗-PD-1)、阿特珠單抗(atezolizumab) (抗-PD-L1)、伊披力默單抗(ipilimumab) (抗CTLA-4)及其組合。 在一些實施例中，免疫刺激劑為免疫細胞之共刺激受體之促效劑。在一些態樣中，共刺激受體選自OX40、ICOS、CD27、CD28、4-1BB或CD40。在一些實施例中，促效劑為抗體。 在一些實施例中，免疫刺激劑為細胞介素。在一些態樣中，細胞介素選自IL-2、IL-5、IL-7、IL-12、IL-15、IL-21及其組合。 在一些實施例中，免疫刺激劑為溶瘤病毒。在一些態樣中，溶瘤病毒選自單純疱疹病毒、水泡性口炎病毒、腺病毒、新城雞瘟病毒、牛痘病毒及馬拉巴病毒。 在一些實施例中，免疫刺激劑為具有嵌合抗原受體之T細胞(CAR-T細胞)。在一些實施例中，免疫刺激劑為雙特異性或多特異性T細胞定向抗體。在一些實施例中，免疫刺激劑為抗-TGF-ß抗體。在一些實施例中，免疫刺激劑為TGF-ß阱。 在一些實施例中，額外治療劑係針對腫瘤抗原之疫苗。任何合適的抗原可由疫苗靶向，其限制條件為該抗原在利用本文所提供之方法治療之腫瘤中存在。在一些態樣中，腫瘤抗原為相比其在正常組織中之表現量而言過表現的腫瘤抗原。在一些態樣中，腫瘤抗原選自癌睪抗原、分化抗原、NY-ESO-1、MAGE-A1、MART及其組合。 額外治療劑之其他實例包括紫杉烷(例如太平洋紫杉醇或多烯紫杉醇)、鉑劑(例如卡鉑(carboplatin)、奧沙利鉑(oxaliplatin)及/或順鉑(cisplatin))、拓樸異構酶抑制劑(例如伊立替康(irinotecan)、拓朴替康(topotecan)、依託泊苷(etoposide)及/或米托蒽醌(mitoxantrone))、醛葉酸(例如甲醯四氫葉酸)或核苷代謝抑制劑(例如氟尿嘧啶、卡培他濱(capecitabine)及/或吉西他濱(gemcitabine))。在一些實施例中，額外治療劑為醛葉酸、5-氟尿嘧啶及/或奧沙利鉑。在一些實施例中，額外治療劑為5-氟尿嘧啶及伊立替康。在一些實施例中，額外治療劑為紫杉烷及鉑劑。在一些實施例中，額外治療劑為太平洋紫杉醇及卡鉑。在一些實施例中，額外治療劑為培美曲塞。在一些實施例中，額外治療劑為諸如EGFR、RAF或MEK-靶向劑之靶向治療劑。 額外治療劑可利用任何合適的方式投與。在一些實施例中，本文提供之ABP及額外治療劑包括於同一醫藥組合物中。在一些實施例中，本文提供之ABP及額外治療劑包括於不同醫藥組合物中。 在本文提供之ABP及額外治療劑包括於不同醫藥組合物中之實施例中，可在投與額外治療劑之前、同時及/或之後進行投與ABP。在一些態樣中，投與本文提供之ABP及額外治療劑在彼此之約一個月內進行。在一些態樣中，投與本文提供之ABP及額外治療劑在彼此之約一週內進行。在一些態樣中，投與本文提供之ABP及額外治療劑在彼此之約一天內進行。在一些態樣中，投與本文提供之ABP及額外治療劑在彼此之約十二小時內進行。在一些態樣中，投與本文提供之ABP及額外治療劑在彼此之約一小時內進行。診斷性方法 亦提供用於偵測來自個體之細胞上之GITR之存在的方法。可使用此類方法例如以預測及評價對於用本文提供之ABP治療的回應。 在一些實施例中，自個體獲得血液樣本，且測定表現GITR之細胞之分數。在一些態樣中，測定由此類細胞表現之GITR之相對量。可利用任何合適的方法來測定表現GITR之細胞之分數及由此類細胞表現之GITR之相對量。在一些實施例中，流式細胞測量術用於進行此類量測。在一些實施例中，螢光輔助細胞分選(FACS)用於進行此類量測。針對評估周邊血液中之GITR之表現的方法，參見 Li等人,J . Autoimmunity , 2003, 21:83-92。套組 亦提供包含本文提供之ABP之套組。套組可用於治療、預防及/或診斷疾病或病症，如本文中所描述。 在一些實施例中，套組包含容器及在容器上或與容器相關聯之標籤或藥品說明書。合適的容器包括例如瓶子、小瓶、注射器及IV溶液袋。容器可由各種材料形成，諸如玻璃或塑膠。容器容納組合物，該組合物本身對治療、預防及/或診斷疾病或病症有效，或當與另一組合物組合時對其有效。容器可具有無菌接取口。舉例而言，若容器為靜脈內溶液袋或小瓶，則其可具有可由針刺穿的通口。組合物中之至少一種活性劑為本文提供之ABP。標籤或藥品說明書指示該組合物用於治療所選擇病狀。 在一些實施例中，套組包含(a)內含第一組合物之第一容器，其中該第一組合物包含本文提供之ABP；及(b)內含第二組合物之第二容器，其中該第二組合物包含另一治療劑。在本發明之此實施例中之套組可進一步包含指示組合物可用於治療特定病狀之藥品說明書。 替代地或另外，套組可進一步包含第二(或第三)容器，該容器包含醫藥學上可接受之賦形劑。在一些態樣中，賦形劑為緩衝液。套組可進一步包括自商業及使用者立場所需的其他材料，包括過濾器、針及注射器。其他說明性實施例 除貫穿本發明中所描述之彼等實施例以外，以下提供之實施例為非限制性的，且藉助於某些實施例及本發明之態樣之說明而提供。實施例 1 ： 一種ABP，其與人類GITR及/或人類GITR複合物特異性結合，且能夠進行以下各者中之至少一者：a)與GITRL交叉競爭與GITR結合；b)可內化至人類細胞中；c)抑制效應T細胞之抑止；d)抑制效應T細胞之調節T細胞抑制；e)減少組織或循環中之調節T細胞之數目；f)活化效應T細胞；g)結合GITR成GITR複合物；h)調節人類GITR及/或GITR複合物之活性。實施例 2 ： 如實施例1之ABP，其中該ABP具有以下特徵中之一或多者：a)為單株抗體；b)為人類抗體、人類化抗體或嵌合抗體；c)為多特異性或多價抗體，例如，四價抗體；d)在N端或C端處包含至少一個Fab；e)具有IgG1、IgG2、IgG3或IgG4類型；f)為抗原-結合抗體片段；g)為Fab片段、Fab'片段、F(ab')2片段或Fv片段；h)為雙特異性抗體、雙功能抗體、單鏈抗體、單域抗體、VH 域抗體或奈米抗體。實施例 3 ：如實施例1之ABP，其中該ABP具有以下特徵中之一或多者：a)與SEQ ID NO: 1至SEQ ID NO: 2之人類GITR多肽或其變體結合，或如本文中另外提供具有小於約20 nM之KD ；b)與SEQ ID NO: 3之獼猴GITR多肽或其變體結合，或如本文中另外提供具有小於約200 nM之KD 。實施例 4 ：如實施例1之ABP，其包含：第一抗原-結合域，其與人類GITR上之第一抗體識別域特異性結合；及第二抗原-結合域，其與人類GITR上之第二抗體識別域特異性結合，其中該第一抗體識別域及該第二抗體識別域不相同。實施例 5 ： 如實施例4之ABP，其包含呈選自由以下組成之群之形式之雙特異性結合蛋白：DVD-Ig™分子、BiTe® 分子、DARTTM 分子、DuoBody®分子、scFv/雙功能抗體-IgG分子、交叉多特異性分子、2合1雙特異性分子(2-in-1 bispecific molecule)、隆突-入-穴多特異性分子、Fab+IgG分子、CovX-體分子、親和抗體分子、scFv/雙功能抗體-CH2/CH3雙特異性分子、基於IgG-非Ig蛋白質骨架之多特異性分子、Fynomer® 分子、Fcab™分子、TandAb®、Zybody™及與正常人類蛋白質樣人類血清白蛋白-雙特異性分子連接的scFV/雙功能抗體。實施例 6 ：如實施例4之ABP，其中第一抗原-結合域具有小於約20 nM之KD ，且能夠促效人類GITR，且其中第二抗原-結合域具有小於約100 nM之KD 。實施例 7 ： 一種ABP，其與參考ABP競爭或能夠競爭與人類GITR結合，其中該參考ABP為如實施例1之ABP。實施例 8 ：如實施例7之ABP，其中該ABP與該參考抗體交叉競爭或能夠交叉競爭與人類GITR結合。實施例 9 ：如實施例1之ABP，其包含重鏈恆定區，該重鏈恆定區包含人類重鏈恆定區或其片段或變體，其中該恆定區變體包含高達20個經修飾胺基酸取代，其中0至高達20個經修飾胺基酸取代為保守胺基酸取代。實施例 10 ：如實施例1之ABP，其與GITR蛋白質競爭或能夠競爭與人類GITRL結合。實施例 11 ：如實施例1之ABP，其能夠以不依賴配位體之方式活化GITR信號傳導。實施例 12 ：如實施例1之ABP，其能夠增強GITR與GITRL之配位體依賴性結合。實施例 13 ：一種醫藥組合物，其包含在醫藥學上可接受之載劑中之如實施例1至12中任一者之ABP。實施例 14 ：一種雙特異性抗體，其包含：第一抗原-結合域，其與人類GITR上之第一抗體識別域特異性結合；及第二抗原-結合域，其與人類GITR上之第二抗體識別域特異性結合，其中該第一抗體識別域及該第二抗體識別域不相同。實施例 15 ：如實施例14之雙特異性抗體，其中該第一抗體識別域及該第二抗體識別域存在於人類GITR之胞外域中。實施例 16 ：如實施例14之雙特異性抗體，其中該第一抗體識別域及該第二抗體識別域能夠結合至少兩個人類GITR蛋白質成功能性複合物。實施例 17 ：一種複合ABP，其包含與人類GITR蛋白質上之第一抗體識別域特異性結合之第一抗原-結合域；或一種人類GITR複合物，其包含至少兩個GITR蛋白質，且能夠進行以下各者中之至少一者：a)與GITRL交叉競爭與GITR結合；b)可內化至人類細胞中；c)抑制效應T細胞之抑止；d)抑制效應T細胞之調節T細胞抑制；e)減少組織或循環中之調節T細胞之數目；f)活化效應T細胞；g)結合GITR成GITR複合物；h)調節人類GITR及/或GITR複合物之活性。實施例 18 ：一種經分離之核酸，其編碼如實施例1至12中任一項之ABP或如實施例14至16中任一項之雙特異性抗體或如實施例17之複合ABP。實施例 19 ：一種表現載體，其包含如實施例18之核酸。實施例 20 ：一種原核或真核宿主細胞，其包含如實施例19之載體。實施例 21 ：一種用於產生重組蛋白質之方法，其包含在原核或真核宿主細胞中表現如實施例18之核酸及自該細胞或細胞培養物上清液回收該蛋白質的步驟。實施例 22 ：一種治療患有癌症或發炎疾病之個體治療方法，其包含向該個體投與包含如實施例1至12中任一項之ABP或如實施例14至16中任一項之雙特異性抗體或如實施例17之複合ABP的醫藥組合物的步驟。實施例 23 ：一種用於誘導或增強個體中之免疫反應之方法，其包含向該個體投與包含如實施例1至12中任一項之ABP或如實施例14至16中任一項之雙特異性抗體或如實施例17之複合ABP的醫藥組合物的步驟，其中該免疫反應係針對腫瘤抗原而產生。實施例 24 ：如實施例23之方法，其中該ABP、該雙特異性抗體或該複合ABP係以足以在該個體中達成以下中之一或多者之量投與：a)減少調節T細胞抑止效應T細胞之活性；b)降低調節T細胞之水準；c)活化效應T細胞；d)誘導或增強效應T細胞增殖；e)抑制腫瘤生長；及f)誘導腫瘤消退。實施例 25 ：如實施例22之方法，其中該癌症為實體癌症。實施例 26 ：如實施例22之方法，其中該癌症為血液癌症。實施例 27 ：如實施例22至26中任一者之方法，其中該方法進一步包含以下中之一或多者：a)投與化學療法；b)投與放射療法；或c)投與一或多種額外治療劑。實施例 28 ：如實施例27之方法，其中該額外治療劑包含免疫刺激劑。實施例 29 ：如實施例27之方法，其中該免疫刺激劑包含針對免疫細胞之抑制性受體之拮抗劑。實施例 30 ：如實施例29之方法，其中該抑制性受體包含CTLA-4、PD-1、PD-L1、LAG-3、Tim3、TIGIT、神經炎素、BTLA或KIR，或其功能片段。實施例 31 ：如實施例27之方法，其中該免疫刺激劑包含免疫細胞之共刺激受體或其功能片段之促效劑。實施例 32 ：如實施例31之方法，其中該共刺激受體包含OX40、ICOS、CD27、CD28、4-1BB或CD40。實施例 33 ：如實施例27之方法，其中該免疫刺激劑包含細胞介素。實施例 34 ：如實施例27之方法，其中該細胞介素包含IL-2、IL-5、IL-7、IL-12、IL-15或IL-21。實施例 35 ：如實施例27之方法，其中該免疫刺激劑包含溶瘤病毒。實施例 36 ：如實施例35之方法，其中該溶瘤病毒包含單純疱疹病毒、水泡性口炎病毒、腺病毒、新城雞瘟病毒、牛痘病毒或馬拉巴病毒。實施例 37 ：如實施例27之方法，其中該免疫刺激劑包含嵌合抗原工程改造T細胞。實施例 38 ：如實施例27之方法，其中該免疫刺激劑包含雙特異性或多特異性T細胞定向抗體。實施例 39 ：如實施例27之方法，其中該額外治療劑包含抗-TGF-ß抗體或TGF-ß受體阱。實施例 40 ：如實施例22至39中任一者之方法，其中投與該醫藥組合物引起：誘導或增強T效應細胞之增殖，或調節T細胞中之I-kB及/或NF-kB，或調節T細胞中之GITR活性，或T效應細胞中之T細胞受體誘導之信號傳導，或其組合。實施例 41 ：一種篩選包含能夠抑制GITRL與GITR複合物之相互作用之如實施例1至12中任一項之ABP之測試化合物的方法，其包含以下步驟：使含有GITRL及GITR複合物之樣本與化合物接觸；及判定該樣本中之GITRL與GITR複合物之相互作用是否相對於並未與該化合物接觸之樣本中的GITRL與GITR複合物的相互作用減少，由此與該化合物接觸的該樣本中的GITRL與GITR的相互作用降低鑑別該化合物為抑制GITRL與GITR複合物的相互作用的一者。實例 以下為本發明之方法及組合物之實例。應理解，考慮到本文提供之一般描述，可實踐各種其他實施例。實例 1 ： GITR 抗原 - 結合蛋白之選擇 材料及方法 抗原使用來自Pierce之EZ-Link®硫-NHS-生物素化套組來生物素標記。山羊F(ab')2 抗-人類κ-FITC (LC-FITC)、ExtrAvidin®-PE (EA-PE)及抗生蛋白鏈菌素-AF633 (SA-633)分別地獲自Southern Biotech、Sigma及Molecular Probes。抗生蛋白鏈菌素MicroBeads®及MACS LC分離柱購自Miltenyi Biotec。山羊抗-人類IgG-PE (人類-PE)獲自Southern Biotech。原生發現 八種原生人類合成的酵母菌文庫(其中之每一者具有~109 多樣性)如先前所描述來繁殖(參見例如，Y. Xu等人, Addressing polyspecificity of antibodies selected from an in vitro yeast presentation system: a FACS-based, high-throughput selection and analytical tool.PEDS 26 . 10 , 663-70 (2013); WO2009036379; WO2010105256; 及 WO2012009568)。對於選擇之首先兩個回合，進行利用Miltenyi MACS系統之磁性珠粒分選技術，如先前所描述(參見例如，Siegel等人, 「High efficiency recovery and epitope-specific sorting of an scFv yeast display library」.J Immunol Methods 286 ( 1 - 2 ) , 141-153 (2004))。簡言之，將酵母細胞(~1010 細胞/文庫)與5 ml之10 nM經生物素標記之Fc融合抗原一起在30℃下在洗滌緩衝液(磷酸鹽-緩衝鹽水(PBS)/0.1%牛血清白蛋白(BSA))中培育30 min。在用40 ml冰-冷洗滌緩衝液洗滌一次之後，將細胞集結粒再懸浮在20 mL洗滌緩衝液中，且將抗生蛋白鏈菌素MicroBeads® (500 μl)添加至酵母菌並在4℃下培育15 min。接下來，使酵母菌集結，再懸浮在20 mL洗滌緩衝液中，並負載至Miltenyi LS管柱上。在負載20 mL之後，用3 ml洗滌緩衝液洗滌管柱3次。接著，自磁場移除管柱，且用5 mL之生長介質溶離酵母菌且使其接著生長隔夜。使用流式細胞測量術進行後續之選擇回合。集結大約2×107 酵母菌，將其用洗滌緩衝液洗滌三次，且在30℃下與減少濃度之經生物素標記之Fc融合抗原(10至1 nM)在平衡條件下、10 nM經生物素標記之不同物種之Fc融合抗原一起培育以便獲得物種交叉反應，或與多特異性消耗試劑(PSR)一起培育以自選擇移除非特異性抗體。對於PSR消耗，將文庫與1:10稀釋之經生物素標記之PSR試劑一起培育，如先前所描述(參見例如，Y. Xu等人, Addressing polyspecificity of antibodies selected from an in vitro yeast presentation system: a FACS-based, high-throughput selection and analytical tool.PEDS 26 . 10 , 663-70 (2013))。接著，酵母菌用洗滌緩衝液洗滌兩次，且用LC-FITC (1:100稀釋)及SA-633 (1:500稀釋)或EAPE (1:50稀釋)二級試劑中之任一者在4℃下染色15 min。在用洗滌緩衝液洗滌兩次之後，將細胞集結粒再懸浮在0.3 mL洗滌緩衝液中且轉移至濾網封蓋的分選管。使用FACS ARIA分選儀(BD Biosciences)進行分選，且判定分選閘以選擇具有所需特徵之抗體。重複選擇回合直至獲得具有所有所需特徵之群體。在最終分選回合之後，塗鋪酵母菌，且挑取個別群落以進行表徵。抗體最佳化 經由輕鏈多樣化方案且接著藉由引入多樣性至重鏈及輕鏈可變區中來進行抗體之最佳化，如下文所描述。此等方法中之一些之組合用於各抗體。 輕鏈分批多樣化方案：自酵母菌經由破碎及抓握提取來自原生選擇結果之重鏈質體，在大腸桿菌中繁殖且隨後自大腸桿菌進行純化，並轉形為具有5 × 106 之多樣性之輕鏈文庫。用一個MACS回合及四個FACS回合採用與原生發現相同之條件來進行選擇。 輕鏈多樣化：經由PCR對單一抗體之重鏈可變區進行擴增，且用重鏈表現載體轉形為具有5 × 106 之多樣性的輕鏈文庫。用一個MACS回合及三個FACS回合採用與原生發現相同之條件來進行選擇。對於各FACS回合，查看文庫之PSR結合、物種交叉反應、及親和性壓力，且進行分選以便獲得具有所需特徵之群體。 CDRH1及CDRH2選擇：將單一抗體之CDRH3重組至預製文庫中，其中CDRH1及CDRH2變體具有1 × 108 之多樣性；用一個MACS回合及四個FACS回合進行選擇，如原生發現中所描述。對於各FACS回合，查看文庫之PSR結合、物種交叉反應及親和性壓力，且進行分選以便獲得具有所需特徵之群體。對於此等選擇，藉由將經生物素標記之抗原與親本IgG一起預培育30分鐘且接著施加預複合混合物至酵母菌文庫一段時長(將允許選擇達至平衡)來施加親和性壓力。接著，能夠對較高親和性抗體進行分選。 CDRH3/VH突變選擇：自包含CDRH3以及CDRH3之任一側上之側接區之IDT對寡核苷酸(Oligonucleotide/oligo)進行定序。寡核苷酸之CDRH3編碼部分中之胺基酸位置藉由NNK多樣性而多樣化。使用經退火之引物將CDRH3寡核苷酸雙鏈化至CDRH3之側接區。經由易錯PCR使重鏈可變區之其餘部分突變誘發以便在重鏈之非CDR3區中引入額外多樣性。接著，藉由將雙鏈CDRH3寡核苷酸、突變誘發之重鏈可變區之其餘部分及重鏈表現載體轉形至已含有親本之輕鏈質體之酵母菌中來建立文庫。類似於先前循環使用FACS分選持續四個回合來進行選擇。對於各FACS回合，查看文庫之PSR結合、物種交叉反應及親和性壓力，且進行分選以便獲得具有所需特徵之群體。如上文所描述在CDRH1及CDRH2選擇中進行此等選擇之親和性壓力。 CDRL1、CDRL2及CDRL3選擇：自包含CDRL3以及CDRL3之任一側上之一區之IDT對寡核苷酸進行定序。寡核苷酸之CDRL3編碼部分中之胺基酸位置藉由NNK多樣性而多樣化。使用與CDRL3之側接區退火之引物使CDRL3寡核苷酸雙鏈化。接著，將此等雙鏈CDRL3寡核苷酸重組至預製文庫中，其中CDRL1及CDRL2變體具有3 × 105 之多樣性，且用一個MACS回合及四個FACS回合進行選擇，如原生發現中所描述。對於各FACS回合，查看文庫之PSR結合、物種交叉反應、及親和性壓力，且進行分選以便獲得具有所需特徵之群體。如上文所描述在CDRH1及CDRH2選擇中進行此等選擇之親和性壓力。抗體產生及純化 使酵母菌純系生長至飽和，且接著在30℃下在振盪之情況下誘導48 h。在誘導之後，使酵母細胞集結，且收集上清液以用於純化。IgG使用蛋白A管柱來純化，且用pH 2.0之乙酸來溶離。Fab片段藉由番木瓜蛋白酶消化來產生，且經由KappaSelect® (GE Healthcare LifeSciences)進行純化。ForteBio KD 量測 在Octet® RED384上進行ForteBio®親和性量測，一般如先前所描述(參見例如，Estep等人, High throughput solution-based measurement of antibody-antigen affinity and epitope binning.Mabs 5 ( 2 ) , 270-278 (2013))。簡言之，藉由將IgG線上負載至AHQ感測器上進行ForteBio親和性量測。感測器在分析緩衝液中離線平衡30 min，且接著線上監測60秒以用於基線建立。將具有負載IgG之感測器暴露於100 nM抗原3分鐘，且之後將其轉移至分析緩衝液3 min以用於解離速率量測。對於單價親和性評定，使用Fab而非IgG。對於此評定，將未經生物素標記之Fc融合抗原線上負載至AHQ感測器上。感測器在分析緩衝液中離線平衡30 min，且接著線上監測60秒以用於基線建立。將具有負載抗原之感測器暴露於200 nM Fab 3分鐘，且之後將其轉移至分析緩衝液3 min以用於解離速率量測。使用1:1結合模型分析所有動力學。ForteBio 抗原決定基分類 / 配位體阻斷 使用標準夾心形式交叉阻斷分析法來進行抗原決定基分類/配位體阻斷。將對照抗-目標IgG負載至AHQ感測器上，且用無關人類IgG1抗體阻斷感測器上之未佔據Fc-結合位點。接著，將感測器暴露於100 nM靶抗原，隨後暴露於第二抗目標抗體或配位體。在抗原結合後之第二抗體或配位體之額外結合指示未佔據抗原決定基(非競爭者)，而無結合指示抗原決定基阻斷(競爭者或配位體阻斷)。細胞結合分析 大約過度表現抗原之100,000個細胞用洗滌緩衝液來洗滌，且與100 µl 100 nM IgG一起在室溫下培育5分鐘。接著，細胞用洗滌緩衝液洗滌兩次，且與100 µl之1:100人類-PE一起在冰上培育15分鐘。接著，細胞用洗滌緩衝液洗滌兩次，且用FACS Canto II分析器(BD Biosciences)進行分析。尺寸排外層析法 TSKgel® SuperSW mAb HTP管柱(22855)用於以0.4 mL/min產生mAb之哺乳動物之快速SEC分析，其中循環時間為6 min/回合。200 mM磷酸鈉及250 mM氯化鈉用作移動相。動態掃描螢光測定法 將10 µL之20× Sypro橙添加至20 µL之0.2 mg至1 mg/mL mAb或Fab溶液。RT-PCR儀器(BioRad CFX96 RT PCR)用於使樣本盤溫度以0.5℃增量自40℃斜面升溫至95℃，其中在各溫度處平衡2 min。原始資料之第一衍生物之負值用於獲取Tm。實例 2 ： TM 形式抗體之特徵 IgG1 及 TM 形式 ABP 針對 若干物種之 GITR 的 親和性 使用FORTEBIO® OCTET儀器，評價GITR ABP之其結合重組hGITR (SEQ ID NO: 1)、hGITR-T43R (SEQ ID NO: 2)、cGITR (SEQ ID NO: 3)及mGITR (SEQ ID NO: 4)之能力。在30℃下，使用1×動力學緩衝液(ForteBio, Inc.)作為分析緩衝液進行分析。抗-人類IgG Fc捕獲(AHC)生物感測器(ForteBio, Inc.)用於將GITR ABP捕獲至感測器上。在分析之前，感測器在分析緩衝液中平衡600秒。藉由將感測器浸沒至1×分析緩衝液中60秒來建立基線。藉由將感測器浸沒至ABP溶液中300秒來將ABP負載至感測器上。藉由將感測器浸沒至1×分析緩衝液中120秒來建立基線。藉由浸沒至200 mg/ml人類IgG中300秒來淬滅感測器，以防止GITR-Fc抗原與感測器非特異性結合。藉由將感測器浸沒至1×分析緩衝液中60秒來建立基線。接下來，在25 nM之重組抗原中監測結合300秒，且隨後在單獨緩衝液中監測解離1200秒。使用FORTEBIO® 分析軟體之動力學功能使用1:1結合模型來測定KD 。結果展示於表5中。表 5 ： 利用OCTET使用單一濃度動力學測定之ABP KD
Figure 106140182-A0304-0005
 使用FORTEBIO® Octet RED384儀器，評價其他GITR ABP之其結合重組hGITR及cGITR (SEQ ID NO: 3)之能力，一般如先前所描述(參見例如，Estep等人, High throughput solution-based measurement of antibody-antigen affinity and epitope binning.Mabs 5 ( 2 ) , 270-278 (2013))。AHQ生物感測器(ForteBio, Inc.)用於將GITR ABP捕獲至感測器上。藉由浸沒至無關人類IgG1抗體中來淬滅感測器，以預防GITR-Fc抗原與感測器之非特異性結合。感測器在分析緩衝液中平衡30分鐘。藉由將感測器浸沒至分析緩衝液中60秒來建立基線。在100 nM之重組抗原中監測結合180秒，且隨後在單獨緩衝液中監測解離180秒。使用FORTEBIO® 分析軟體之動力學功能使用1:1結合模型來測定KD 。結果展示於表6中。表 6 ：利用OCTET使用單一濃度動力學測定之ABP KD
Figure 106140182-A0304-0006
 *圓括號中為對應於ABP之非最佳化非TM IgG1 ABP #圓括號中為對應於ABP之H1H2最佳化非TM IgG1 ABP 用8種N端Fab TM形式抗體使用多濃度動力學進行額外KD 量測。使用FORTEBIO® OCTET儀器，評價GITR ABP之其結合重組hGITR (SEQ ID NO: 1)、hGITR-T43R (SEQ ID NO: 2)及cGITR (SEQ ID NO: 3)之能力。在30℃下，使用1×動力學緩衝液(ForteBio, Inc.)作為分析緩衝液進行分析。抗-人類IgG Fc捕獲(AHC)生物感測器(ForteBio, Inc.)用於將GITR ABP捕獲至感測器上。在分析之前，使感測器在分析緩衝液中飽和600秒。藉由將感測器浸沒至1×分析緩衝液中60秒來建立基線。藉由將感測器浸沒至ABP溶液中300秒來將ABP負載至感測器上。藉由將感測器浸沒至1×分析緩衝液中120秒來建立基線。接下來，在各種濃度之重組抗原(50 nM至0.78 nM，於分析緩衝液中之2倍稀釋液)中監測結合300秒，且隨後在單獨緩衝液中監測解離600或1200秒。使用FORTEBIO® 分析軟體之動力學功能使用1:1結合模型來測定KD 。藉由OCTET測定之KD 之結果展示於圖2中及表7中。如在圖中可看出，人類GITR之KD 各自小於1 nM，及獼猴GITR之KD 係在人類的15倍內。另外，TM形式抗體結合人類GITR之T43R SNP變體。表 7 . N端Fab TM形式ABP結合特徵
Figure 106140182-A0304-0007
 GITR 結合分析 在生長介質中在植物血球凝集素(PHA)存在下在37℃下培養周邊血液單核細胞(PBMC) 5天以上調GITR表現。收集T細胞且洗滌，且接著在4℃下與八種TM形式GITR ABP中之一者或人類同型對照抗體一起培育。在洗滌之後，在4℃下將細胞與結合螢光染料之抗-人類CD4抗體及抗-人類CD8抗體以及結合螢光染料之抗-人類IgG一起培育，以偵測經結合抗-人類GITR ABP。利用流式細胞測量術來測定GITR+CD4與CD8細胞之百分比以及平均螢光強度(MFI)。 例示性結果展示於圖3中。圖3A展示CD4+細胞及圖3B展示CD8+細胞。在頂部列中，自左側至右側，展示抗-GITR陽性對照、及抗-人類IgG4同型對照，以及N端Fab TM形式ABP ABP9、ABP2、ABP1及ABP7。在底部列中，展示ABP8、ABP3、ABP4、ABP5、ABP6、ABP23及ABP24。指示IgG4+CD4/8+細胞之百分比。 藉由用各別(人類、獼猴或鼠) GITR轉染HT1080、CHO或293T細胞來評價與細胞表面人類、獼猴及鼠GITR之結合。使用原代獼猴T細胞及HSC-F T細胞株，各自在用抗-CD3抗體刺激以增加GITR表現之後，進一步評價與獼猴GITR之結合。 針對 GITR 抗原 - 結合蛋白之活性分析 測試GITR ABP之其促效GITR之能力。在一個分析中，使穩定地表現人類或獼猴GITR之HT1080細胞與TM形式GITR ABP或三聚合的人類GITRL接觸。在24小時之後，利用ELISA分析法評價由細胞分泌之IL-8之量。IL-8分泌增加對應於GITR促效作用增加。N端Fab TM形式抗體1至8之結果展示於圖4中。展示基於ABP1 (圖4A)、ABP2 (圖4B)、ABP3 (圖4C)、ABP4 (圖4D)、ABP5 (圖4E)、ABP6 (圖4F)、ABP7 (圖4G)及ABP8 (圖4H)之抗體或配位體濃度的IL-8產量。抗體在圖中展示為圓形，且GITRL對照展示為方形。將EC50 記分與GITR配位體 (GITRL)之EC50 記分進行比較。表 8 . TM形式抗體對於HT1080細胞上之人類及獼猴GITR之促效活性
Figure 106140182-A0304-0008
 使用IgG1 N297A非TM型式之ABP 1至8 (參見圖4)進行相同分析，且資料概述於表9中。表 9 . IgG1 N297A抗體對於HT1080細胞上之人類及獼猴GITR之活性
Figure 106140182-A0304-0009
 再次使用分析法以用於測試額外N端Fab及C端Fab TM形式抗體以及彼等抗體之IgG1 N297A型式的活性。資料概述於表10及表11中並展示於圖5中。圖5A展示ABP43 (方形)、ABP23 (圓形)、ABP24 (三角形)及ABP29 (空心圓)、ABP30 (空心三角形)、ABP31 (空心圓)及ABP32 (空心三角形)，所有均相比於GITRL (+記號)。圖5B展示ABP19 (N端Fab，三角形)及ABP25 (C端Fab，倒三角形)。GITRL展示為加號記號。圖5C展示ABP21 (N端Fab，三角形)及ABP27 (C端Fab，倒三角形)。GITRL展示為加號記號。圖5D展示ABP20 (N端Fab，三角形)及ABP26 (C端Fab，倒三角形)。GITRL展示為加號記號。圖5E展示ABP22 (N端Fab，三角形)及ABP28 (C端Fab，倒三角形)。GITRL展示為加號記號。如圖中所展示，N端Fab形式ABP比其C端Fab對應物傾向於誘導更多IL-8。 圖10展示ABP43 (非最佳化IgG4形式)與兩種對應TM形式ABP之額外比較，其中將ABP43之IgG1 Fab對應物添加至ABP43之N端或C端。如在圖中可看出，相比於C端Fab TM形式ABP10 (圓形)及非TM形式ABP43 (菱形)，N端Fab TM形式ABP9 (方形)誘導最多IL-8 (且具有最佳EC50 )。兩種TM形式ABP均比非TM形式親本ABP以及GITRL具有更佳的活性。GITRL (陽性對照)對於IL-8之誘導展示為單一資料點(星形)，IL-8產量以pg/mL展示。表 10 . N端Fab及C端Fab TM形式抗體對於HT1080細胞上之人類GITR之促效活性
Figure 106140182-A0304-0010
 表 11 . IgG1 N297A抗體形式抗體對於HT1080細胞上之人類GITR之促效活性
Figure 106140182-A0304-0011
 H1H2/VH最佳化抗體之額外IgG1 N297A型式提供並展示於下表12中，且指示如上文所描述以HT1080分析法來測定之其促效活性。此等抗體適合於製成TM形式。表 12 . IgG1 N297A抗體形式抗體對於HT1080細胞上之人類GITR之促效活性
Figure 106140182-A0304-0012
 在Jurkat細胞中進行類似物分析法，該等Jurkat細胞為一種基於T細胞之細胞株，經工程改造以表現人類GITR及NF-kB螢光素酶報導基因(Promega®)。將八種最佳化、N端Fab TM形式抗體ABP 1至8與GITRL相比較其在T細胞中誘導IL-8之能力。如圖7A至圖7H (ABP 1至8)及表13中所展示，在誘導細胞介素產量上，所有八種ABP均比GITRL更佳。表 13. 具有N端Fab之8種最佳化TM形式優於GITRL
Figure 106140182-A0304-0013
 原代細胞中之 N 端 Fab TM 形式抗體之促效活性 在一個實施例中，進一步測試GITR ABP之其結合TCR信號傳導經由抗-CD3抗體將共刺激信號遞送至CD4+CD25-效應T細胞的能力。藉由使用ELISA分析法量化細胞增殖、及/或量測所增加產量及包括IFN-γ之細胞介素之分泌來量測所增加T細胞活化。 在另一實施例中，進一步分析GITR ABP以評價其防止調節T細胞對於效應T細胞之抑止的能力。使用人類CD4+ T細胞分離套組(Miltenyi #130-096)來分離人類CD4+ T細胞。使用人類CD25 MicroBeads® II (Miltenyi #130-092-983)按製造商說明書來進一步富集調節T細胞。CD25消耗CD4+ T細胞在抑止分析中用作效應T細胞。與抗-人類CD2、CD3及CD28抗體結合之珠粒在分析中用於活化效應T細胞(Treg抑止檢測器，亦稱為T細胞活化珠粒，Miltenyi #130-092-909)。在96孔盤中，在各孔中各自接種50,000個調節T細胞及效應T細胞，且將其與等數目之T細胞活化珠粒一起培育。使細胞及珠粒之混合物與不同濃度之GITR ABP接觸五天。藉由在培養之最後16小時期間用氚化胸苷脈衝細胞培養物，洗滌及量測併入至細胞中之放射性之量來量測效應T細胞之增殖。 T - 母細胞 原代細胞分析中之 N 端 Fab TM 形式抗體之促效活性 經預刺激T細胞(T-母細胞)用於評定八種N端Fab TM形式抗體(ABP 1至8)之活性。 為了產生T-母細胞，用PHA刺激PBMC 5至7天以便擴增細胞及誘導GITR之表現。在設置功能性分析之前，洗滌並冷凍細胞。 為了評定ABP 1至8之功能性活性，藉由添加1 mg/ml抗-CD3+ 2 mg/ml抗-CD28、0.003-10 mg/ml ABP 1至8及作為陽性對照之10 mg/ml GITRL來刺激細胞。在37℃下培育細胞，且在48小時之後收集上清液。利用AlphaLISA® (Perkin Elmer®)來量測IL-2產量。圖8A展示來自兩個人類供體之細胞中之GITR+CD4+細胞(左側)及CD8+細胞(右側)在各時間點處之百分比，用PHA +/-刺激。 圖8B至圖8M展示來自用對照或ABP治療之4個不同供體之T-母細胞之治療的結果及所得IL-2產量。在各圖中，頂部列，自左側至右側，為ABO與CD4+細胞結合之FACS量測、來自供體1之細胞中之IL-2產量、來自供體2之細胞中之IL-2產量。在底部列中，自左側至右側，為ABP與CD8+細胞結合之FACS量測、來自供體3之細胞中之IL-2產量、來自供體4之細胞中之IL-2產量。展示資料如下：8B：IgG4同型對照；8C：SEC4抗體；8D：IgG4 TM形式對照；8E： ABP 1至8 (ABP9)之非TM IgG4非最佳化譜系親本；8F：ABP1；8G：ABP2；8H：ABP3；8I：ABP4；8J：ABP5；8K：ABP6；8L：ABP7；8M：ABP8。 如圖中所展示，來自不同供體之T-母細胞在其對於用ABP 1至8治療回應上不同；然而用所有八種TM形式ABP治療在最高測試濃度下均具有促效活性，如藉由IL-2之產量所量測及與對照抗體相比較。 最佳化 N 端 Fab TM 形式 ABP 及非 TM 形式 IgG1 ABP 之 GITR 促效活性比較 在上文所描述且展示於圖4中之相同IL-8誘導分析中，將與以上實例中相同的八種最佳化N端Fab TM形式ABP (1至8)與非最佳化親本對照相比較。各圖展示N端Fab TM形式ABP 1至8 (具有N端IgG1 Fab之IgG4 S228P，「IgG4 TM」)及對應非TM形式IgG1 (IgG1 N297，「IgG1」) ABP、以及作為陽性對照之GITRL及IgG4陰性對照(GITRL及IgG4在來自ABP之獨立盤上進行)的比較。左圖展示表現hGITR之細胞之結果，且右圖展示表現cGITR之細胞之結果。展示ABP1 (圖9A)、ABP2 (圖9B)、ABP3 (圖9C)、ABP4 (圖9D)、ABP5 (圖9E)、ABP6 (圖9F)、ABP7 (圖9G)及ABP8 (圖9H)之IL-8誘導隨ABP濃度之變化。GITRL對IL-8之誘導展示為圓形，TM形式抗體對IL-8之誘導展示為三角形，親本IgG1抗體對IL-8之誘導展示為菱形，及IgG4對照抗體對IL-8之誘導展示為方形。各圖之各圖片之底部上展示EC50 值之表。 圖9中所展示之結果表明，當與二價IgG1 N297A相比時，呈N端Fab TM形式抗體之八種最佳化ABP能夠在表現人類或獼猴GITR之細胞中誘導IL-8產量至高許多的程度。與二價IgG1 N297A形式相比，N端Fab TM形式抗體具有更小EC50 值及更高IL-8最大產量。另外，所有TM抗體均比親本抗體之非TM形式具有針對GITR之更高親和性(將表5及表7與表6比較)。GITRL 阻斷之評價 在另一實施例中，使用FORTEBIO® OCTET儀器評價GITR阻斷。在30℃下使用1×動力學緩衝液(ForteBio, Inc.)作為分析緩衝液進行分析。抗-人類IgG Fc捕獲(AHC)生物感測器(ForteBio, Inc.)用於將人類GITR ABP捕獲至感測器上。在分析之前，感測器在分析緩衝液中飽和300秒。藉由將感測器浸沒至ABP上清液溶液中300秒來將ABP負載至感測器上。藉由將感測器浸沒至1×分析緩衝液中200秒來建立基線。接下來，監測重組GITR之結合180秒。重組GITRL接著與ABP/GITR複合物結合之能力藉由將感測器浸沒在GITRL中180秒來測定。 根據以上方法使用ABP 1至8來評價GITR阻斷。所有八種ABP均能夠阻斷GITRL結合。 在一個實施例中，為了評價抗-人類GITR ABP是否阻斷GITR配位體(GITRL，R&D Systems #6987-GL-CF)與GITR結合，將各種濃度之未經標記GITR ABP與人類pan T細胞一起在4℃下在染色緩衝液(例如具有0.5%牛血清白蛋白之磷酸鹽緩衝鹽水)中培育10 min。在不洗滌之情況下，添加4 nM之HA標記之人類GITRL，且在4℃下再培育30 min。接著，細胞用染色緩衝液洗滌兩次，且與抗-HA PE抗體(Miltenyi #130-092-257)一起在染色緩衝液中在4℃下培育30 min。接著，細胞用染色緩衝液洗滌兩次，且用含2%多聚甲醛之PBS固定以用於流式細胞測量分析。PE染色之量降低指示，ABP阻斷GITR-GITRL相互作用。實例 3 ： 多特異性抗原 - 結合蛋白 多特異性GITR促效ABP之一個實施例包含共同輕鏈抗體。鑑別ABP結合GITR上之兩個不同的抗原決定基。此等兩種ABP共用同一輕鏈。ABP61為促效抗體，且ABP59具有較少促效活性但並不與ABP61競爭和GITR結合。具有共同輕鏈之多價多特異性抗體藉由用編碼兩個重鏈及單一共同輕鏈之載體轉染HEK-293宿主細胞來產生。具有共同輕鏈(SEQ ID NO:125)之本文所揭示之第一例示性ABP為ABP33，其具有帶有N端Fab (來自ABP58 (ABP59之IgG1對應物))之IgG4重鏈(ABP61)，及全長序列SEQ ID NO:124 (HC)及SEQ ID NO:125 (LC)。具有共同輕鏈之本文所揭示之第二例示性ABP為ABP34，其具有帶有C端Fab (來自ABP58 (ABP59之IgG1對應物))之IgG4重鏈(ABP61)，及全長序列SEQ ID NO:136 (HC)及SEQ ID NO:125 (LC)。 各多特異性ABP結合GITR上之兩個不同的抗原決定基。ABP如以上實例中所描述來表徵。產生本文中所描述之其他多特異性ABP且類似地表徵。圖6展示在HT1080分析中ABP33及ABP34之EC50 測定之結果，如上文實例2中所描述。將ABP33 (將IgG4 ABP61與N端上之ABP58之IgG1 Fab [ABP59之IgG1對應物]組合的四價型式)及ABP34 (將ABP61之IgG4與C端上之ABP58之IgG1 Fab [ABP59之IgG1對應物]組合的四價型式)與二價ABP 59及61 (IgG4 S228P)相比較。如圖中所展示，當與其二價對應物相比時，兩種四價抗體均具有優良EC50 ，如藉由IL-8誘導所量測。實例 4 ： TM 形式抗體與基準抗 GITR 抗體之比較 在經工程改造以穩定地表現人類GITR之HT1080細胞中，測試N端Fab TM形式抗體針對兩種抗GITR抗體SEC4及SEC9之活性。用一定範圍內濃度之兩種基準促效劑抗體SEC4 (經形式化以具有小鼠可變區及人類IgG4 S228P/κ區之「35E6」，橙色菱形)及SEC9 (人類化6C8 N62Q IgG1 N297A)，處理所培養細胞六小時。SEC4例如描述於美國專利第8,709,424號中；可變區發現於SEQ ID NO 1及SEQ ID NO 12中。SEC9例如描述於美國專利第7,812,135號中；全長序列闡述於SEQ ID NO 58及SEQ ID NO 63中。 1 µg/ml之二價抗體劑量等效於6.67 nM；1 µg/ml之四價抗體劑量等效於4 nM。 藉由ELISA來量測IL-8之誘導，且計算EC50 。圖11A展示hGITRL針對SEC4 (菱形)及SEC9 (圓形)、以及IgG4陰性對照(實心三角形)、IgG1陰性對照(空心三角形)及作為陽性對照之三聚合人類GITR配位體(「hGITRL」，方形)的比較。與SEC4及SEC9兩者相比，GITRL具有更佳的EC50 (插圖)及最大誘導。 亦展示GITRL與ABP1 (圖11B)、ABP2 (圖11C)、ABP3 (圖11D)、ABP4 (圖11E)、ABP5 (圖11F)、ABP6 (圖11G)、ABP7 (圖11H)及ABP8 (圖11I)的比較。如圖中所展示，所有八種N端Fab TM形式抗體比SEC4或SEC9確實具有更有利的EC50 。所有八種N端Fab TM形式抗體亦比SEC4或SEC9具有更高的IL-8產量誘導。 亦在T-母細胞原代細胞分析中如上文所描述測試SEC4。如圖8中所展示，對於所有四個供體，原代細胞中之由SEC4誘導之IL-2比TM形式抗體的少。實例 5 ： 抗 - GITR ABP 增加患者腫瘤浸潤性淋巴細胞及 GITR + T 細胞中之 細胞介素之產量 材料及方法 解離的人類腫瘤樣本購自Conversant Bio。樣本為自在任何治療之前之75歲男性、具有Ia期疾病之先前吸菸者分離的NSCLC腺癌細胞。樣本進行快速解凍，接著用若干條件進行再刺激，具有或不具有如下免疫療法：細胞作為對照未刺激，或用1 µg/mL αCD3 (可溶) + 2 µg/mL αCD28 (可溶) + IL-2 (50 ng/mL)刺激；細胞不接受免疫療法治療(用於檢驗點蛋白質水準之評定)、接受派立珠單抗(10 µg/mL)、TM形式ABP對照(2 µg/mL)、ABP1 (2 µg/mL)或ABP1 + 派立珠單抗治療中之任一者。在收集上清液且將其進行檢查點之表現之染色之前，培育細胞48小時在一些樣本中，在刺激之最後五小時添加布雷菲爾德菌素A (細胞介素分泌之抑制劑)以用於藉由胞內細胞介素染色來偵測細胞介素。結果 將細胞在GITR陽性T細胞上閘化，且結果展示於圖12A (TNF產量)及圖12B (IFNγ產量)中。如圖中所展示，抗-GITR (ABP1)單一藥劑治療引起細胞介素產量增加。在接受組合ABP1+派立珠單抗治療之細胞中，在此分析中，細胞介素產量不存在顯著增加。實例 6 ：抗原決定基測定之突變分析：丙胺酸掃描 為了鑑別ABP1與人類GITR結合之抗原決定基，在人類GITR額外細胞域中進行單一點突變以判定APB1結合是否減少。使用丙胺酸取代或鼠特異性殘基(ABP1不結合小鼠GITR)。蛋白質在具有Fc標記之HEK-293細胞中表現，且作為可溶蛋白質分泌，用MabSelect® Sure® Lx樹脂純化，且用SDS-PAGE表徵。藉由生物層干擾測量法(BLI)使用Octet平台來評定結合。將野生型人類GITR-Fc或GITR-Fc突變捕捉在抗-人類Fc感測器上，洗滌且暴露於ABP1 Fab。認為為結合抗原決定基之一部分之殘餘物表明結合減少或無結合(例如，比與野生型人類GITR結合之KD 低多於3倍)。在殘基C58、R59、Y61、E64、C67處之丙胺酸取代及在位置C66處之天冬胺酸取代導致無結合，而在殘基R56、D60、P62或E65處之丙胺酸取代導致結合減少。實例 7 ： GITR 抗原 - 結合蛋白之活體內評價 進行活體內研究，以證明ABP在人類化NSG小鼠模型中降低循環調節T細胞數目之能力。藉由眶後注射用CD34+ 人類胎兒肝細胞移植新生NSG小鼠。歷經16週，動物發育出多種多樣的包括CD4+ 及CD8+ 效應T細胞與調節T細胞之人類免疫細胞譜系。給予小鼠25 mg/kg抗-人類GITR ABP或人類同型對照之單次腹膜內劑量，且在給藥後第4天藉由流式細胞測量術來測定表現調節T細胞標記FoxP3之循環人類CD4+ T細胞之百分比。實例 8 . 活化 T 細胞與 TM 形式 ABP1 或其習知形式親本 ABP35 之培育 活化 T 母細胞之製備 藉由在37℃及5% CO2 下，用PHA (最終濃度10 µg/ml)及IL-2 (最終濃度4 ng/ml，僅在最後24 h期間添加)刺激自兩個健康供體之經新鮮分離之PBMC 7天，來產生活化T母細胞。在抗體結合之後 GITR 之內化 以2 × 105 個/孔將活化CD4+/CD8+ T母細胞接種在96孔U形底部盤中。 孔用單獨介質、重組GITR-配位體(10 µg/ml，R&D Systems, Cat# 6987-GL-025/CF)、ABP1 (~250 kDa)、hIgG4 TM形式同型對照、ABP35(~150kDa)或hIgG1標準形式同型對照各自以以下九個劑量來處理：10 µg/mL、2 µg/mL、0.4 µg/mL、80 ng/mL、16 ng/mL、3.2 ng/mL、0.64 ng/mL、0.13 ng/mL及0.026 ng/mL。在抗體結合之後 GITR 之內化 抗體介導之聚集促使TNF受體超家族成員(諸如GITR)之內飲作用及信號傳導。量測ABP1及ABP35 (以及同型對照)介導聚集及內化之能力。 首先對活化T母細胞進行染色以用於FACS分選。在室溫下用人類TruStain® FcX阻斷Fc受體10分鐘。將細胞與螢光結合抗體一起在4℃下如在表14中培育30分鐘。接著，細胞用FACS緩衝液洗滌2×，在暗處在多聚甲醛中固定30分鐘，再次洗滌，且再懸浮在200 µl FACS緩衝液中並在BD Fortessa儀器上採集。 在來自供體1 (圖13A至圖13B、圖13F至圖13G)或供體2 (圖13C至圖13D、圖13H至圖13I)之CD4+細胞(圖13A至圖13E)及CD8+細胞(圖13F至圖13J)中量測GITR內化。細胞用ABP1 TM形式抗體或ABP35標準二價抗體處理。如可觀測到，與ABP1或ABP35一起培育抑制用ABP1Dylight650 (圖13A、圖13C、圖13F、圖13H)之後續染色，但僅與ABP1一起培育誘導GITR內化，如藉由用非競爭性純系108-17 (圖13B、圖13D、圖13G、圖13I)染色所量測。ABP1對於來自兩個供體之細胞之EC50之測定展示於圖13E (CD4+細胞)及圖13J (CD8+細胞)中。表 14 . 螢光染料標記
Figure 106140182-A0304-0014
 用 ABP1 或 ABP35 處理之活化 T 細胞中之 細胞介素產量 以5 × 104 個/孔在96孔U形底部盤中接種活化CD4+/CD8+ T母細胞。孔用單獨介質、重組GITR-配位體(10 µg/ml, R&D Systems, Cat# 6987-GL-025/CF)、ABP1、hIgG4 TM形式同型對照、ABP35或hIgG1標準形式同型對照各自以以下九個劑量來處理：10 µg/mL、2 µg/mL、0.4 µg/mL、80 ng/mL、16 ng/mL、3.2 ng/mL、0.64 ng/mL、0.13 ng/mL及0.026 ng/mL。 藉由添加1 µg/ml抗-CD3抗體(小鼠抗人類，純系UCHT-1，R&D Systems, Cat# MAB100)及2 µg/ml抗-CD28 (小鼠抗人類，純系37407，R&D Systems, Cat# MAB342)抗體來刺激細胞。在37℃及5% CO2 下培育分析48 h。利用AlphaLISA® (Perkin Elmer)來量測IL-2產量。 與TM形式抗體ABP1但不與標準二價形式(ABP35)相同的抗體或同型對照中之任一者一起培育T母細胞，引起由活化CD4+及CD8+ T細胞對於GITR之內化(圖13)。 另外，由ABP1對於GITR受體之超聚集但不由習知二價ABP結合促使活化T母細胞以劑量依賴性方式分泌IL-2(圖14)。總之，此等資料展示，不回應於習知抗-GITR治療之T母細胞回應於對應TM形式抗體。實例 9 ： 與兩種基準抗體 SEC4 及 SEC9 相比 ， 用 ABP1 處理之活化 T 細胞中之 細胞介素產量 活化T母細胞如實例8中所描述來製備，且用於比較ABP1與基準抗-GITR抗體SEC4及SEC9之活性。藉由在37℃及5% CO2 下，用PHA (最終濃度10 µg/ml)及IL-2 (最終濃度4 ng/ml，僅在最後24 h期間添加)刺激自兩個健康供體之經新鮮分離之PBMC 7天，來產生活化T母細胞。 以5 × 104 個/孔在96孔U形底部盤中接種活化CD4+/CD8+ T母細胞。孔用單獨介質、重組GITR-配位體、ABP1、SEC4、SEC9、hIgG4 TM形式同型對照(「IsoTM」)、hIgG1標準形式同型對照及hIgG4標準形式同型對照各自以以下九個劑量來處理：10 µg/mL、2 µg/mL、0.4 µg/mL、80 ng/mL、16 ng/mL、3.2 ng/mL、0.64 ng/mL、0.13 ng/mL及0.026 ng/mL。用 ABP1 、 SEC4 及 SEC9 處理之活化 T 細胞中之 細胞介素產量 藉由添加1 µg/ml抗-CD3抗體及2 µg/ml抗-CD28抗體來刺激細胞。細胞在37℃及5% CO2 下培育48 h。利用AlphaLISA® (Perkin Elmer)來量測IL-2產量。如實例8中所見，TM形式ABP1促使活化T母細胞以劑量依賴性方式分泌IL-2。自活化T細胞之IL-2產量展示於圖15A (供體1)及圖15B (供體2)中。對應EC50展示於圖15C (供體1)及圖15D (供體2)中。 如在圖中可看出，SEC4及SEC9不以劑量依賴性方式有效地誘導IL-2，ABP1比SEC4及SEC9以明顯劑量依賴性方式確實誘導IL-2產量至更高程度。總之，此等資料支撐，不回應於習知抗-GITR治療之T母細胞將回應於對應TM形式抗體。等效物 上述之揭示內容可涵蓋具有獨立效用之多個不同的發明。儘管此等發明中之每一者已以其較佳形式揭示，但如本文中所揭示及說明之其具體實施例不應認為係限制性意義，因為許多變體係可能的。本發明之主題包括本文所揭示之各種元件、特徵、功能及/或特性之所有新穎及非顯而易見的組合及子組合。以下申請專利範圍特別地指出被視為新穎及非顯而易見之某些組合及子組合。以特徵、功能、元件及/或特性之其他組合及子組合實施之發明可在本申請案中、在主張自本申請之優先權之申請案中或在相關申請案中主張。此類申請專利範圍無論其係關於不同發明或關於相同發明，且無論寬於、窄於、相同於或不同於相比於原始申請專利範圍之範疇，均亦視為包括在本發明之發明主題內。附件 A ： 序列
Figure AA101
Figure AA101-1
Figure AA101-2
Figure AA101-3
Figure AA101-4
Figure AA101-5
Figure AA101-6
Figure AA101-7
Figure AA101-8
Figure AA101-9
Figure AA101-10
Figure AA101-11
Figure AA101-12
Figure AA101-13
Figure AA101-14
Figure AA101-15
Figure AA101-16
Figure AA101-17
Figure AA101-18
Figure AA101-19
Figure AA101-20
Figure AA101-21
Figure AA101-22
Figure AA101-23
Figure AA101-24
Figure AA101-25
Figure AA101-26
Figure AA101-27
Figure AA101-28
Figure AA101-29
Figure AA101-30
Figure AA101-31
Figure AA101-32
Figure AA101-33
Figure AA101-34
Figure AA101-35
Figure AA101-36
Figure AA101-37
Figure AA101-38
Figure AA101-39
Figure AA101-40
Figure AA101-41
Figure AA101-42
Figure AA101-43
Figure AA101-44
Figure AA101-45
Figure AA101-46
Figure AA101-47
Figure AA101-48
Figure AA101-49
Figure AA101-50
Figure AA101-51
Figure AA101-52
Figure AA101-53
Figure AA101-54
Figure AA101-55
Figure AA101-56
Figure AA101-57
Figure AA101-58
Figure AA101-59
Figure AA101-60
Figure AA101-61
Figure AA101-62
Figure AA101-63
Figure AA101-64
Figure AA101-65
Figure AA101-66
Figure AA101-67
Figure AA101-68
Figure AA101-69
Figure AA101-70
101‧‧‧GITR分子102‧‧‧細胞膜103‧‧‧抗體剛好結合兩個GITR分子105‧‧‧左圖106‧‧‧右圖107‧‧‧空心圓108‧‧‧空心圓
圖 1 提供本文提供之某些說明性GITR ABP之作用機制之示意性說明。圖1A展示嵌入於細胞膜(102)中之三個GITR分子(一個標記為101)。展示傳統形式抗體剛好結合兩個GITR分子(103)之草圖。圖1B展示本文所揭示之四價單特異性(TM)形式抗體之草圖：左圖(105)展示包含兩個N端IgG1 Fab與一C端IgG4 S228P抗體之TM；右圖(106)展示包含兩個C端IgG1 Fab及一N端IgG4 S228P抗體之TM。抗原結合域由空心圓(107)說明。圖1C展示本文所揭示之四價雙特異性形式抗體之草圖：左圖(105)展示包含兩個N端IgG1 Fab與一C端IgG4 S228P抗體之雙特異性抗體；右圖(106)展示包含兩個C端IgG1 Fab及一N端IgG4 S228P抗體之雙特異性抗體。針對兩個不重疊抗原決定基特異性具有特異性之抗原結合域由空心圓(107及108)說明。圖1D展示在結合三個說明性四價單特異性(TM)形式ABP之後GITR之多聚化。預期此類多聚化促效GITR信號傳導，如在本發明中之其他地方所描述。圖 2 為展示藉由OCTET測定N端Fab形式ABP 1至ABP 8之KD 之例示性結果的圖。圖 3 為展示表明N端Fab TM形式ABP之例示性小組針對CD4+ (圖3A)及CD8+ (圖3B) T細胞之結合之FACS分析的結果的一系列圖。CD4+及CD8+之分佈展示在各圖之左上圖中。在頂部列中，自左側至右側，展示抗-GITR陽性對照及抗-人類IgG4同型對照、ABP9、ABP2、ABP1及ABP7。在底部列中，展示ABP8、ABP3、ABP4、ABP5、ABP6、ABP23及ABP24。指示陽性染色IgG4+ CD4/8+細胞之百分比；在括號中指示MRI。圖 4 為展示呈N端Fab TM形式之八種最佳化促效劑抗體之活性的一系列圖。接著，將穩定地表現人類(左圖)或食蟹獼猴(右圖) GITR之HT1080細胞與ABP1 (圖4A)、ABP2 (圖4B)、ABP3 (圖4C)、ABP4 (圖4D)、ABP5 (圖4E)、ABP6 (圖4F)、ABP7 (圖4G)及ABP8 (圖4H) (在圖中展示為圓形)一起培育，且量測IL-8誘導。 GITRL用作對照(方形)。在各圖之各圖片之底部展示EC50 值之表。圖 5 為將親本N端Fab TM形式抗體ABP43之表現GITR之HT1080細胞中之促效活性與具有N端或C端形式之多種其他最佳化抗體比較的一系列圖。圖5A展示ABP43 (方形)、ABP23 (圓形)、ABP24 (三角形)及ABP29 (空心圓)、ABP30 (空心三角形)、ABP31 (空心圓)及ABP32 (空心三角形)，所有均相比於GITRL (+記號)。圖5B展示ABP19 (N端Fab，三角形)及ABP25 (C端Fab，倒三角形)。GITRL展示為加號記號。圖5C展示ABP21 (N端Fab，三角形)及ABP27 (C端Fab，倒三角形)。GITRL展示為加號記號。圖5D展示ABP20 (N端Fab，三角形)及ABP26 (C端Fab，倒三角形)。GITRL展示為加號記號。圖5E展示ABP22 (N端Fab，三角形)及ABP28 (C端Fab，倒三角形)。GITRL展示為加號記號。IgG4對照在各圖中展示為X記號。圖 6 展示在如實例中所描述之HT1080分析法中之ABP33及ABP34之EC50 測定的結果。將ABP33 (組合IgG4 ABP61之四價型式，其中ABP58之IgG1 Fab在N端上)及ABP34 (組合ABP61之IgG4之四價型式，其中ABP58之IgG1 Fab在C端上)與二價ABP 59及ABP 61 (IgG4 S228P)相比，其為ABP33及ABP34之基礎。如圖中所展示，當與用於構建雙特異性四價抗體之個別二價抗體相比時，雙特異性四價抗體兩者均具有優良的EC50 ，如藉由IL-8誘導所量測。圖 7 展示如對於以上HT1080細胞所描述在Jurkat T細胞分析法中之EC50 測定之結果。針對其對於促效GITR之能力，將最佳化N端Fab TM形式ABP與GITRL相比，如藉由IL-8產生所量測。圖7A至圖7H分別展示ABP1至ABP8。圖 8A 展示來自自兩個人類供體分離之T細胞之三個重複定量的FACS分析，及展示CD4+細胞(左側)及CD8+細胞(右側)在不同時間點處GITR+之百分比，用PHA +/-刺激。圖 8B 至圖 8M 展示來自用對照或ABP處理之4個不同供體之T-母細胞之治療結果及所得IL-2產量(資料標準化為在對照介質中達成之IL-2產量之水準)。在頂部列之各圖中，自左側至右側為ABP與CD4+細胞結合之FACS量測、來自供體1之細胞中之IL-2產量、來自供體2之細胞中之IL-2產量。在底部列中，自左側至右側為ABP與CD8+細胞結合之FACS量測、來自供體3之細胞中之IL-2產量、來自供體4之細胞中之IL-2產量。資料展示如下：8B：IgG4同型對照；8C：SEC4抗體；8D：IgG4 TM形式陰性對照；8E：ABP9 (ABP1至ABP8之TM形式IgG4非最佳化親本)；8F：ABP1；8G：ABP2；8H：ABP3；8I：ABP4；8J：ABP5；8K：ABP6；8L：ABP7；8M：ABP8。圖 9A 至圖 9H 為展示最佳化N端Fab TM ABP (「IgG4 TM」)針對對應最佳化非TM IgG1 N297A ABP (「IgG1」)之活性之比較的一系列圖。接著，穩定地表現人類(左圖)或獼猴(右圖)之HT1080細胞用如下各N端Fab TM ABP及對應IgG1 ABP處理：ABP1 IgG4 TM /ABP35 IgG1 (圖9A)、ABP2 IgG4 TM /ABP36 IgG1 (圖9B)、ABP3 IgG4 TM /ABP37 IgG1 (圖9C)、ABP4 IgG4 TM /ABP38 IgG1 (圖9D)、ABP5 IgG4 TM /ABP38 P45L IgG1 (圖9E)、ABP6 IgG4 TM /ABP39 IgG1 (圖9F)、ABP7 IgG4 TM /ABP40 IgG1 (圖9G)及ABP8 IgG4 TM /ABP41 IgG1 (圖9H)，且IgG4作為陽性對照。GITRL對IL-8之誘導展示為圓形，IgG4 TM形式ABP對IL-8之誘導展示為三角形，對應IgG1 ABP對IL-8之誘導展示為菱形，及IgG4對照抗體對IL-8之誘導展示為方形。各圖之各圖片之底部上展示EC50 值之表。圖 10 為展示如所描述將非TM親本抗體與對應TM形式型式進行比較之HT1080分析法中之EC50 資料的圖。ABP43 (菱形)為ABP9 (IgG4 N端Fab，方形)及ABP10 (IgG4 C端Fab，圓形)之非TM IgG4 S228P親本。GITRL (陽性對照)對於IL-8誘導展示為單一資料點(星形)。IL-8產量以pg/mL展示。圖 11A 為展示代表性基準抗體SEC4及SEC9在經工程改造以穩定地表現人類GITR之HT1080細胞中對於IL-8之誘導的圖。用一系列濃度之兩種基準促效劑抗體SEC4 (經形式化以具有小鼠可變區與人類IgG4 S228P/κ區之35E6，菱形)及SEC9 (人類化6C8 N62Q IgG1 N297A，圓形)以及IgG4陰性對照(實心三角形)、IgG1陰性對照(空心三角形)及作為陽性對照之三聚合人類GITR配位體(「hGITRL」，方形)處理培養細胞六個小時。IL-8之誘導藉由ELISA來量測。如圖中所展示，與SEC4及SEC9兩者相比，GITRL具有更佳的EC50 (插圖)及最大誘導。圖 11B 至圖 11I 分別展示ABP1至ABP8與SEC4及SEC9之比較。用圓形指示TM ABP，用方形指示SEC4及用三角形指示SEC9。IL-8產量以pg/mL展示。圖 12 為展示在用單獨TM形式ABP1或結合派立珠單抗(pembrolizumab)治療後之經刺激經分離之人類NSCLC腺癌細胞中之細胞激素產生細胞介素產量的兩個圖。細胞係未受刺激的對照，或係用1 µg/mL αCD3 (可溶) +2 µg/mL αCD28 (可溶) + IL-2 (50 ng/mL)刺激的；細胞未接受免疫療法治療(用於評定檢驗點蛋白質水準)，接受派立珠單抗(10 µg/mL)，接受TM形式ABP對照(2 µg/mL)，ABP1 (2 µg/mL)或ABP1 + 派立珠單抗中之任一者。在收集上清液及將細胞作檢驗點表現染色之前，將細胞培育48小時。在一些樣本中，在刺激之最後五小時添加布雷菲爾德菌素A (brefeldin A) (細胞介素分泌之抑制劑)以用於藉由胞內細胞介素染色來偵測細胞介素。展示TNF產量(圖12A)及IFNγ產量(圖12B)。圖 13 為展示在抗體結合之後GITR聚集及內化的一系列圖。在來自供體1 (圖13A至圖13B、圖13F至圖13G)或供體2 (圖13C至圖13D、圖13H至圖13I)之CD4+細胞(圖13A至圖13E)及CD8+細胞(圖13F至圖13J)中量測GITR內化。細胞用ABP1 TM形式抗體或ABP35標準二價抗體處理。如可以觀測到，與ABP1或ABP35一起培育抑制用ABP1Dylight650進行後續染色(圖13A、圖13C、圖13F、圖13H)，但僅與ABP1一起培育誘導GITR內化，如藉由用非競爭性純系108-17 (圖13B、圖13D、圖13G、圖13I)染色所量測。ABP1對於來自兩個供體之細胞之EC50之測定展示於圖13E (CD4+細胞)及圖13J (CD8+細胞)中。圖 14 展示自來自用抗-GITR IgG4 TM形式抗體ABP1、其IgG1形式對應物ABP35及IgG4 TM形式以及IgG1同型對照治療後之兩個健康人類供體(分別地，供體1及供體2，圖14A及圖14B)之活化T-母細胞的細胞介素(IL-2)之產量。用單獨介質、重組GITR-配位體、ABP1、hIgG4 TM形式同型對照、ABP35或hIgG1標準形式同型對照各自以以下九個劑量處理活化CD4+/CD8+ T細胞：10 µg/mL、2 µg/mL、0.4 µg/mL、80 ng/mL、16 ng/mL、3.2 ng/mL、0.64 ng/mL、0.13 ng/mL及0.026 ng/mL。藉由添加1 µg/ml抗-CD3抗體及2 µg/ml抗-CD28抗體來刺激細胞。圖14C展示與圖14A及圖14B中對於ABP1之相同資料，其中計算各供體中之EC50 測定。圖 15 展示自來自用抗-GITR IgG4 TM形式抗體ABP1、IgG4 TM形式對照(「IsoTM」)、SEC4、SEC9、重組hGITRL及IgG1以及IgG4同型對照治療後之兩個健康人類供體(分別地供體1及供體2，圖15A及圖15B)之活化T母細胞的細胞介素(IL-2)之產量。用單獨介質、重組GITR-配位體、ABP1、hIgG4 TM形式同型對照、SEC4、SEC9、IgG1標準形式同型對照或hIgG1標準形式同型對照各自以以下九個劑量處理活化CD4+/CD8+ T細胞：10 µg/mL、2 µg/mL、0.4 µg/mL、80 ng/mL、16 ng/mL、3.2 ng/mL、0.64 ng/mL、0.13 ng/mL及0.026 ng/mL。藉由添加1 µg/ml抗-CD3抗體及2 µg/ml抗-CD28抗體來刺激細胞。圖15C (供體1)及圖15D (供體2)展示與圖15A及圖15B中對於ABP1之相同資料，其中計算各供體中之EC50 測定。
<110> 美商潛能醫療有限公司(POTENZA THERAPEUTICS,INC.)
<120> 抗-GITR抗原-結合蛋白及其使用方法
<130> 32248-38337/PCT
<140> TW 106140182
<141> 2017-11-20
<150> PCT/US2017/062443
<151> 2017-11-19
<150> GC 2017/34287
<151> 2017-11-19
<150> US 62/448,644
<151> 2017-01-20
<150> US 62/497,428
<151> 2016-11-19
<160> 233
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 241
<212> PRT
<213> 智人
<400> 1
Figure 106140182-A0305-02-0203-1
Figure 106140182-A0305-02-0204-2
<210> 2
<211> 241
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 2
Figure 106140182-A0305-02-0205-3
Figure 106140182-A0305-02-0206-4
<210> 3
<211> 235
<212> PRT
<213> 食蟹獼猴
<400> 3
Figure 106140182-A0305-02-0206-5
Figure 106140182-A0305-02-0207-6
<210> 4
<211> 228
<212> PRT
<213> 小鼠
<400> 4
Figure 106140182-A0305-02-0207-7
Figure 106140182-A0305-02-0208-8
Figure 106140182-A0305-02-0209-9
<210> 5
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 5
Figure 106140182-A0305-02-0209-10
<210> 6
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 6
Figure 106140182-A0305-02-0209-11
<210> 7
<211> 687
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 7
Figure 106140182-A0305-02-0209-12
Figure 106140182-A0305-02-0210-13
Figure 106140182-A0305-02-0211-14
Figure 106140182-A0305-02-0212-15
Figure 106140182-A0305-02-0213-16
<210> 8
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 8
Figure 106140182-A0305-02-0213-17
Figure 106140182-A0305-02-0214-18
<210> 9
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 9
Figure 106140182-A0305-02-0214-19
Figure 106140182-A0305-02-0215-20
<210> 10
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 10
Figure 106140182-A0305-02-0215-21
Figure 106140182-A0305-02-0216-22
<210> 11
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<400> 11
Figure 106140182-A0305-02-0216-23
<210> 12
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<400> 12
Figure 106140182-A0305-02-0216-24
<210> 13
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<400> 13
Figure 106140182-A0305-02-0216-25
Figure 106140182-A0305-02-0217-26
<210> 14
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<400> 14
Figure 106140182-A0305-02-0217-27
<210> 15
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<400> 15
Figure 106140182-A0305-02-0217-28
<210> 16
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<400> 16
Figure 106140182-A0305-02-0217-29
<210> 17
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<400> 17
Figure 106140182-A0305-02-0218-30
<210> 18
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 18
Figure 106140182-A0305-02-0218-31
Figure 106140182-A0305-02-0219-32
<210> 19
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 19
Figure 106140182-A0305-02-0219-33
Figure 106140182-A0305-02-0220-34
<210> 20
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 20
Figure 106140182-A0305-02-0220-35
Figure 106140182-A0305-02-0221-36
<210> 21
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<400> 21
Figure 106140182-A0305-02-0221-37
<210> 22
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<400> 22
Figure 106140182-A0305-02-0221-38
<210> 23
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<400> 23
Figure 106140182-A0305-02-0221-40
<210> 24
<211> 687
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 24
Figure 106140182-A0305-02-0222-41
Figure 106140182-A0305-02-0223-42
Figure 106140182-A0305-02-0224-43
Figure 106140182-A0305-02-0225-44
<210> 25
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 25
Figure 106140182-A0305-02-0225-45
Figure 106140182-A0305-02-0226-46
<210> 26
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 26
Figure 106140182-A0305-02-0227-47
<210> 27
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 27
Figure 106140182-A0305-02-0228-48
<210> 28
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<400> 28
Figure 106140182-A0305-02-0228-49
<210> 29
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<400> 29
Figure 106140182-A0305-02-0229-50
<210> 30
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<400> 30
Figure 106140182-A0305-02-0229-51
<210> 31
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<400> 31
Figure 106140182-A0305-02-0229-52
<210> 32
<211> 687
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 32
Figure 106140182-A0305-02-0230-53
Figure 106140182-A0305-02-0231-54
Figure 106140182-A0305-02-0232-55
Figure 106140182-A0305-02-0233-56
<210> 33
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 33
Figure 106140182-A0305-02-0233-57
Figure 106140182-A0305-02-0234-58
<210> 34
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 34
Figure 106140182-A0305-02-0234-59
Figure 106140182-A0305-02-0235-60
<210> 35
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 35
Figure 106140182-A0305-02-0235-61
Figure 106140182-A0305-02-0236-62
<210> 36
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<400> 36
Figure 106140182-A0305-02-0236-63
<210> 37
<211> 687
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 37
Figure 106140182-A0305-02-0236-64
Figure 106140182-A0305-02-0237-65
Figure 106140182-A0305-02-0238-66
Figure 106140182-A0305-02-0239-67
Figure 106140182-A0305-02-0240-68
<210> 38
<211> 687
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 38
Figure 106140182-A0305-02-0240-69
Figure 106140182-A0305-02-0241-70
Figure 106140182-A0305-02-0242-71
Figure 106140182-A0305-02-0243-72
<210> 39
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 39
Figure 106140182-A0305-02-0244-73
Figure 106140182-A0305-02-0245-74
<210> 40
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 40
Figure 106140182-A0305-02-0245-75
<210> 41
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<400> 41
Figure 106140182-A0305-02-0246-76
<210> 42
<211> 687
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 42
Figure 106140182-A0305-02-0246-77
Figure 106140182-A0305-02-0247-78
Figure 106140182-A0305-02-0248-79
Figure 106140182-A0305-02-0249-80
<210> 43
<211> 214
<212> PR1
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 43
Figure 106140182-A0305-02-0250-81
Figure 106140182-A0305-02-0251-82
<210> 44
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 44
Figure 106140182-A0305-02-0251-83
Figure 106140182-A0305-02-0252-84
<210> 45
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 45
Figure 106140182-A0305-02-0252-85
<210> 46
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<400> 46
Figure 106140182-A0305-02-0253-86
<210> 47
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<400> 47
Figure 106140182-A0305-02-0253-87
<210> 48
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<400> 48
Figure 106140182-A0305-02-0253-88
<210> 49
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<400> 49
Figure 106140182-A0305-02-0253-89
Figure 106140182-A0305-02-0254-90
<210> 50
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<400> 50
Figure 106140182-A0305-02-0254-91
<210> 51
<211> 687
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 51
Figure 106140182-A0305-02-0254-92
Figure 106140182-A0305-02-0255-93
Figure 106140182-A0305-02-0256-94
Figure 106140182-A0305-02-0257-95
<210> 52
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 52
Figure 106140182-A0305-02-0258-97
Figure 106140182-A0305-02-0259-98
<210> 53
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 53
Figure 106140182-A0305-02-0259-99
Figure 106140182-A0305-02-0260-100
<210> 54
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<400> 54
Figure 106140182-A0305-02-0260-101
<210> 55
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<400> 55
Figure 106140182-A0305-02-0260-102
<210> 56
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<400> 56
Figure 106140182-A0305-02-0260-103
<210> 57
<211> 689
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 57
Figure 106140182-A0305-02-0261-104
Figure 106140182-A0305-02-0262-105
Figure 106140182-A0305-02-0263-106
Figure 106140182-A0305-02-0264-107
<210> 58
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 58
Figure 106140182-A0305-02-0264-108
Figure 106140182-A0305-02-0265-109
<210> 59
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<400> 59
Figure 106140182-A0305-02-0265-110
<210> 60
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<400> 60
Figure 106140182-A0305-02-0265-111
<210> 61
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<400> 61
Figure 106140182-A0305-02-0266-112
<210> 62
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 62
Figure 106140182-A0305-02-0266-113
Figure 106140182-A0305-02-0267-114
<210> 63
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 63
Figure 106140182-A0305-02-0267-115
<210> 64
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<400> 64
Figure 106140182-A0305-02-0268-116
<210> 65
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<400> 65
Figure 106140182-A0305-02-0268-117
<210> 66
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<400> 66
Figure 106140182-A0305-02-0268-118
<210> 67
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<400> 67
Figure 106140182-A0305-02-0269-119
<210> 68
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<400> 68
Figure 106140182-A0305-02-0269-120
<210> 69
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<400> 69
Figure 106140182-A0305-02-0269-121
<210> 70
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 70
Figure 106140182-A0305-02-0270-122
<210> 71
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 71
Figure 106140182-A0305-02-0270-123
Figure 106140182-A0305-02-0271-124
<210> 72
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 72
Figure 106140182-A0305-02-0271-125
Figure 106140182-A0305-02-0272-126
<210> 73
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<400> 73
Figure 106140182-A0305-02-0272-127
<210> 74
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<400> 74
Figure 106140182-A0305-02-0272-128
<210> 75
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<400> 75
Figure 106140182-A0305-02-0273-129
<210> 76
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<400> 76
Figure 106140182-A0305-02-0273-130
<210> 77
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<400> 77
Figure 106140182-A0305-02-0273-131
<210> 78
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<400> 78
Figure 106140182-A0305-02-0273-132
<210> 79
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 79
Figure 106140182-A0305-02-0274-133
<210> 80
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 80
Figure 106140182-A0305-02-0275-134
<210> 81
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<400> 81
Figure 106140182-A0305-02-0275-135
<210> 82
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<400> 82
Figure 106140182-A0305-02-0276-136
<210> 83
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<400> 83
Figure 106140182-A0305-02-0276-137
<210> 84
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<400> 84
Figure 106140182-A0305-02-0276-138
<210> 85
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<400> 85
Figure 106140182-A0305-02-0277-139
<210> 86
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<400> 86
Figure 106140182-A0305-02-0277-140
<210> 87
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 87
Figure 106140182-A0305-02-0277-141
Figure 106140182-A0305-02-0278-142
<210> 88
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 88
Figure 106140182-A0305-02-0278-143
Figure 106140182-A0305-02-0279-144
<210> 89
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /notc="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 89
Figure 106140182-A0305-02-0279-145
<210> 90
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 90
Figure 106140182-A0305-02-0280-146
<210> 91
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<400> 91
Figure 106140182-A0305-02-0280-147
<210> 92
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<400> 92
Figure 106140182-A0305-02-0281-148
<210> 93
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<400> 93
Figure 106140182-A0305-02-0281-149
<210> 94
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<400> 94
Figure 106140182-A0305-02-0281-150
<210> 95
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 95
Figure 106140182-A0305-02-0282-151
<210> 96
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<400> 96
Figure 106140182-A0305-02-0282-152
<210> 97
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 97
Figure 106140182-A0305-02-0283-153
<210> 98
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 98
Figure 106140182-A0305-02-0284-154
<210> 99
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 99
Figure 106140182-A0305-02-0284-155
Figure 106140182-A0305-02-0285-156
<210> 100
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<400> 100
Figure 106140182-A0305-02-0285-157
<210> 101
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 101
Figure 106140182-A0305-02-0286-158
<210> 102
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<400> 102
Figure 106140182-A0305-02-0286-159
Figure 106140182-A0305-02-0287-160
<210> 103
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<400> 103
Figure 106140182-A0305-02-0287-161
<210> 104
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 104
Figure 106140182-A0305-02-0287-162
Figure 106140182-A0305-02-0288-163
<210> 105
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 105
Figure 106140182-A0305-02-0288-164
Figure 106140182-A0305-02-0289-165
<210> 106
<211> 684
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 106
Figure 106140182-A0305-02-0289-166
Figure 106140182-A0305-02-0290-167
Figure 106140182-A0305-02-0291-168
Figure 106140182-A0305-02-0292-169
<210> 107
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 107
Figure 106140182-A0305-02-0293-170
Figure 106140182-A0305-02-0294-171
<210> 108
<211> 676
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 108
Figure 106140182-A0305-02-0294-172
Figure 106140182-A0305-02-0295-173
Figure 106140182-A0305-02-0296-174
Figure 106140182-A0305-02-0297-175
<210> 109
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 109
Figure 106140182-A0305-02-0297-176
Figure 106140182-A0305-02-0298-177
Figure 106140182-A0305-02-0299-178
<210> 110
<211> 674
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 110
Figure 106140182-A0305-02-0299-179
Figure 106140182-A0305-02-0300-180
Figure 106140182-A0305-02-0301-181
Figure 106140182-A0305-02-0302-182
<210> 111
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 111
Figure 106140182-A0305-02-0302-183
Figure 106140182-A0305-02-0303-184
Figure 106140182-A0305-02-0304-185
<210> 112
<211> 672
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 112
Figure 106140182-A0305-02-0304-186
Figure 106140182-A0305-02-0305-187
Figure 106140182-A0305-02-0306-188
Figure 106140182-A0305-02-0307-189
<210> 113
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 113
Figure 106140182-A0305-02-0307-190
Figure 106140182-A0305-02-0308-191
<210> 114
<211> 686
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 114
Figure 106140182-A0305-02-0309-192
Figure 106140182-A0305-02-0310-193
Figure 106140182-A0305-02-0311-194
Figure 106140182-A0305-02-0312-195
<210> 115
<211> 688
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 115
Figure 106140182-A0305-02-0312-196
Figure 106140182-A0305-02-0313-197
Figure 106140182-A0305-02-0314-198
Figure 106140182-A0305-02-0315-199
Figure 106140182-A0305-02-0316-200
<210> 116
<211> 694
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 116
Figure 106140182-A0305-02-0316-201
Figure 106140182-A0305-02-0317-202
Figure 106140182-A0305-02-0318-203
Figure 106140182-A0305-02-0319-204
<210> 117
<211> 686
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 117
Figure 106140182-A0305-02-0320-205
Figure 106140182-A0305-02-0321-206
Figure 106140182-A0305-02-0322-207
Figure 106140182-A0305-02-0323-208
<210> 118
<211> 684
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 118
Figure 106140182-A0305-02-0323-209
Figure 106140182-A0305-02-0324-210
Figure 106140182-A0305-02-0325-211
Figure 106140182-A0305-02-0326-212
Figure 106140182-A0305-02-0327-213
<210> 119
<211> 682
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 119
Figure 106140182-A0305-02-0327-214
Figure 106140182-A0305-02-0328-215
Figure 106140182-A0305-02-0329-216
Figure 106140182-A0305-02-0330-217
<210> 120
<211> 696
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 120
Figure 106140182-A0305-02-0331-218
Figure 106140182-A0305-02-0332-219
Figure 106140182-A0305-02-0333-220
Figure 106140182-A0305-02-0334-221
<210> 121
<211> 698
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 121
Figure 106140182-A0305-02-0334-222
Figure 106140182-A0305-02-0335-223
Figure 106140182-A0305-02-0336-224
Figure 106140182-A0305-02-0337-225
Figure 106140182-A0305-02-0338-226
<210> 122
<211> 686
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 122
Figure 106140182-A0305-02-0338-227
Figure 106140182-A0305-02-0339-228
Figure 106140182-A0305-02-0340-229
Figure 106140182-A0305-02-0341-230
<210> 123
<211> 688
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 123
Figure 106140182-A0305-02-0342-231
Figure 106140182-A0305-02-0343-232
Figure 106140182-A0305-02-0344-233
Figure 106140182-A0305-02-0345-234
<210> 124
<211> 672
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 124
Figure 106140182-A0305-02-0345-235
Figure 106140182-A0305-02-0346-236
Figure 106140182-A0305-02-0347-237
Figure 106140182-A0305-02-0348-238
Figure 106140182-A0305-02-0349-239
<210> 125
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 125
Figure 106140182-A0305-02-0349-240
Figure 106140182-A0305-02-0350-241
<210> 126
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 126
Figure 106140182-A0305-02-0350-242
Figure 106140182-A0305-02-0351-243
<210> 127
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 127
Figure 106140182-A0305-02-0351-244
Figure 106140182-A0305-02-0352-245
<210> 128
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 128
Figure 106140182-A0305-02-0352-246
<210> 129
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<400> 129
Figure 106140182-A0305-02-0353-247
<210> 130
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<400> 130
Figure 106140182-A0305-02-0353-248
<210> 131
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<400> 131
Figure 106140182-A0305-02-0353-249
<210> 132
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<400> 132
Figure 106140182-A0305-02-0354-250
<210> 133
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<400> 133
Figure 106140182-A0305-02-0354-251
<210> 134
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<400> 134
Figure 106140182-A0305-02-0354-252
<210> 135
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<400> 135
Figure 106140182-A0305-02-0354-253
<210> 136
<211> 672
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 136
Figure 106140182-A0305-02-0355-254
Figure 106140182-A0305-02-0356-255
Figure 106140182-A0305-02-0357-256
Figure 106140182-A0305-02-0358-257
<210> 137
<211> 103
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 137
Figure 106140182-A0305-02-0358-258
Figure 106140182-A0305-02-0359-259
<210> 138
<211> 327
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 138
Figure 106140182-A0305-02-0359-260
Figure 106140182-A0305-02-0360-261
Figure 106140182-A0305-02-0361-262
<210> 139
<211> 326
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 139
Figure 106140182-A0305-02-0361-263
Figure 106140182-A0305-02-0362-264
Figure 106140182-A0305-02-0363-265
<210> 140
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 140
Figure 106140182-A0305-02-0363-266
<210> 141
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)..(1)
<223> /取代="Val"
<220>
<221> VARIANT
<222> (2)..(2)
<223> /取代="Asp"或"Leu"或"Arg"
<220>
<221> VARIANT
<222> (3)..(3)
<223> /取代="Asp"
<220>
<221> VARIANT
<222> (4)..(4)
<223> /取代="Asn"或"Ser"或"Ala"
<220>
<221> VARIANT
<222> (5)..(5)
<223> /取代="Asp"或"Gly"
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(19)
<223> /note="序列中給定的變異殘基對於變異位置記載的殘基沒有偏好"
<400> 141
Figure 106140182-A0305-02-0364-267
<210> 142
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)..(1)
<223> /取代="Leu"或"Ser"
<220>
<221> VARIANT
<222> (3)..(3)
<223> /取代="Ala"或"Val"
<220>
<221> VARIANT
<222> (4)..(4)
<223> /取代="Tyr"或"His"
<220>
<221> VARIANT
<222> (7)..(7)
<223> /取代="Lys"
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(16)
<223> /note="序列中給定的變異殘基對於變異位置記載的殘基沒有偏好"
<400> 142
Figure 106140182-A0305-02-0365-268
<210> 143
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)..(1)
<223> /取代="Gly"
<220>
<221> VARIANT
<222> (6)..(6)
<223> /取代="Ser"或"Glu"
<220>
<221> VARIANT
<222> (7)..(7)
<223> /取代="Gly"或"Ser"或"Tyr"或"Ala"
<220>
<221> VARIANT
<222> (8)..(8)
<223> /取代="Ala"或"Tyr"或"Met"
<220>
<221> VARIANT
<222> (9)..(9)
<223> /取代="Ala"或" "
<220>
<221> VARIANT
<222> (11)..(11)
<223> /取代="Gly"
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(11)
<223> /note="序列中給定的變異殘基對於變異位置記載的殘基沒有偏好"
<400> 143
Figure 106140182-A0305-02-0366-269
<210> 144
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<220>
<221> VARIANT
<222> (5)..(5)
<223> /取代="Asn"
<220>
<221> VARIANT
<222> (9)..(9)
<223> /取代="Ser"
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(9)
<223> /note="序列中給定的變異殘基對於變異位置記載的殘基沒有偏好"
<400> 144
Figure 106140182-A0305-02-0367-270
<210> 145
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)..(1)
<223> /取代="Ser"
<220>
<221> VARIANT
<222> (3)..(3)
<223> /取代="Ser"
<220>
<221> VARIANT
<222> (6)..(6)
<223> /取代="Asp"或"Lys"或"Glu"
<220>
<221> VARIANT
<222> (7)..(7)
<223> /取代="Tyr"
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(7)
<223> /note="序列中給定的變異殘基對於變異位置記載的殘基沒有偏好"
<400> 145
Figure 106140182-A0305-02-0367-271
<210> 146
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)..(1)
<223> /取代="Arg"
<220>
<221> VARIANT
<222> (4)..(4)
<223> /取代="Lys"
<220>
<221> VARIANT
<222> (7)..(7)
<223> /取代="Asp"或"Asn"
<220>
<221> VARIANT
<222> (8)..(8)
<223> /取代="Thr"
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(11)
<223> /note="序列中給定的變異殘基對於變異位置記載的殘基沒有偏好"
<400> 146
Figure 106140182-A0305-02-0368-272
<210> 147
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<220>
<221> VARIANT
<222> (14)..(14)
<223> /取代="Arg"
<220>
<221> VARIANT
<222> (16)..(16)
<223> /取代="Arg"
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(17)
<223> /note="序列中給定的變異殘基對於變異位置記載的殘基沒有偏好"
<400> 147
Figure 106140182-A0305-02-0369-273
<210> 148
<211> 456
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 148
Figure 106140182-A0305-02-0369-274
Figure 106140182-A0305-02-0370-275
Figure 106140182-A0305-02-0371-276
<210> 149
<211> 457
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 149
Figure 106140182-A0305-02-0372-277
Figure 106140182-A0305-02-0373-278
Figure 106140182-A0305-02-0374-279
<210> 150
<211> 456
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 150
Figure 106140182-A0305-02-0374-280
Figure 106140182-A0305-02-0375-281
Figure 106140182-A0305-02-0376-282
Figure 106140182-A0305-02-0377-283
<210> 151
<211> 456
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 151
Figure 106140182-A0305-02-0377-284
Figure 106140182-A0305-02-0378-285
Figure 106140182-A0305-02-0379-286
<210> 152
<211> 456
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 152
Figure 106140182-A0305-02-0379-287
Figure 106140182-A0305-02-0380-288
Figure 106140182-A0305-02-0381-289
Figure 106140182-A0305-02-0382-290
<210> 153
<211> 456
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 153
Figure 106140182-A0305-02-0382-291
Figure 106140182-A0305-02-0383-292
Figure 106140182-A0305-02-0384-293
<210> 154
<211> 456
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 154
Figure 106140182-A0305-02-0384-294
Figure 106140182-A0305-02-0385-295
Figure 106140182-A0305-02-0386-296
Figure 106140182-A0305-02-0387-297
<210> 155
<211> 457
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 155
Figure 106140182-A0305-02-0387-298
Figure 106140182-A0305-02-0388-299
Figure 106140182-A0305-02-0389-300
<210> 156
<211> 454
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 156
Figure 106140182-A0305-02-0389-301
Figure 106140182-A0305-02-0390-302
Figure 106140182-A0305-02-0391-303
Figure 106140182-A0305-02-0392-304
<210> 157
<211> 455
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 157
Figure 106140182-A0305-02-0392-305
Figure 106140182-A0305-02-0393-306
Figure 106140182-A0305-02-0394-307
<210> 158
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 158
Figure 106140182-A0305-02-0394-308
Figure 106140182-A0305-02-0395-309
Figure 106140182-A0305-02-0396-310
Figure 106140182-A0305-02-0397-311
<210> 159
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 159
Figure 106140182-A0305-02-0397-312
Figure 106140182-A0305-02-0398-313
Figure 106140182-A0305-02-0399-314
<210> 160
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 160
Figure 106140182-A0305-02-0399-315
Figure 106140182-A0305-02-0400-316
Figure 106140182-A0305-02-0401-317
Figure 106140182-A0305-02-0402-318
<210> 161
<211> 456
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 161
Figure 106140182-A0305-02-0402-319
Figure 106140182-A0305-02-0403-320
Figure 106140182-A0305-02-0404-321
<210> 162
<211> 457
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 162
Figure 106140182-A0305-02-0405-322
Figure 106140182-A0305-02-0406-323
Figure 106140182-A0305-02-0407-324
<210> 163
<211> 685
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 163
Figure 106140182-A0305-02-0407-325
Figure 106140182-A0305-02-0408-326
Figure 106140182-A0305-02-0409-327
Figure 106140182-A0305-02-0410-328
<210> 164
<211> 685
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 164
Figure 106140182-A0305-02-0411-329
Figure 106140182-A0305-02-0412-330
Figure 106140182-A0305-02-0413-331
Figure 106140182-A0305-02-0414-332
<210> 165
<211> 677
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 165
Figure 106140182-A0305-02-0414-333
Figure 106140182-A0305-02-0415-334
Figure 106140182-A0305-02-0416-335
Figure 106140182-A0305-02-0417-336
Figure 106140182-A0305-02-0418-337
<210> 166
<211> 675
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 166
Figure 106140182-A0305-02-0418-338
Figure 106140182-A0305-02-0419-339
Figure 106140182-A0305-02-0420-340
Figure 106140182-A0305-02-0421-341
<210> 167
<211> 675
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 167
Figure 106140182-A0305-02-0422-342
Figure 106140182-A0305-02-0423-343
Figure 106140182-A0305-02-0424-344
Figure 106140182-A0305-02-0425-345
<210> 168
<211> 675
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 168
Figure 106140182-A0305-02-0425-346
Figure 106140182-A0305-02-0426-347
Figure 106140182-A0305-02-0427-348
Figure 106140182-A0305-02-0428-349
Figure 106140182-A0305-02-0429-350
<210> 169
<211> 673
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 169
Figure 106140182-A0305-02-0429-351
Figure 106140182-A0305-02-0430-352
Figure 106140182-A0305-02-0431-353
Figure 106140182-A0305-02-0432-354
<210> 170
<211> 673
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 170
Figure 106140182-A0305-02-0433-355
Figure 106140182-A0305-02-0434-356
Figure 106140182-A0305-02-0435-357
Figure 106140182-A0305-02-0436-358
<210> 171
<211> 455
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 171
Figure 106140182-A0305-02-0436-359
Figure 106140182-A0305-02-0437-360
Figure 106140182-A0305-02-0438-361
<210> 172
<211> 455
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 172
Figure 106140182-A0305-02-0439-362
Figure 106140182-A0305-02-0440-363
Figure 106140182-A0305-02-0441-364
<210> 173
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 173
Figure 106140182-A0305-02-0441-365
Figure 106140182-A0305-02-0442-366
Figure 106140182-A0305-02-0443-367
<210> 174
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 174
Figure 106140182-A0305-02-0444-368
Figure 106140182-A0305-02-0445-369
Figure 106140182-A0305-02-0446-370
<210> 175
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 175
Figure 106140182-A0305-02-0446-371
Figure 106140182-A0305-02-0447-372
Figure 106140182-A0305-02-0448-373
<210> 176
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 176
Figure 106140182-A0305-02-0449-374
Figure 106140182-A0305-02-0450-375
Figure 106140182-A0305-02-0451-376
<210> 177
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 177
Figure 106140182-A0305-02-0451-377
Figure 106140182-A0305-02-0452-378
Figure 106140182-A0305-02-0453-379
Figure 106140182-A0305-02-0454-380
<210> 178
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 178
Figure 106140182-A0305-02-0454-381
Figure 106140182-A0305-02-0455-382
Figure 106140182-A0305-02-0456-383
<210> 179
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 179
Figure 106140182-A0305-02-0456-384
Figure 106140182-A0305-02-0457-385
Figure 106140182-A0305-02-0458-386
Figure 106140182-A0305-02-0459-387
<210> 180
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 180
Figure 106140182-A0305-02-0459-388
Figure 106140182-A0305-02-0460-389
Figure 106140182-A0305-02-0461-390
<210> 181
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 181
Figure 106140182-A0305-02-0461-391
Figure 106140182-A0305-02-0462-392
Figure 106140182-A0305-02-0463-393
<210> 182
<211> 443
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 182
Figure 106140182-A0305-02-0464-394
Figure 106140182-A0305-02-0465-395
Figure 106140182-A0305-02-0466-396
<210> 183
<211> 690
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 183
Figure 106140182-A0305-02-0466-397
Figure 106140182-A0305-02-0467-398
Figure 106140182-A0305-02-0468-399
Figure 106140182-A0305-02-0469-400
Figure 106140182-A0305-02-0470-401
<210> 184
<211> 692
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 184
Figure 106140182-A0305-02-0470-402
Figure 106140182-A0305-02-0471-403
Figure 106140182-A0305-02-0472-404
Figure 106140182-A0305-02-0473-405
<210> 185
<211> 690
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 185
Figure 106140182-A0305-02-0474-406
Figure 106140182-A0305-02-0475-407
Figure 106140182-A0305-02-0476-408
Figure 106140182-A0305-02-0477-409
<210> 186
<211> 690
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 186
Figure 106140182-A0305-02-0477-410
Figure 106140182-A0305-02-0478-411
Figure 106140182-A0305-02-0479-412
Figure 106140182-A0305-02-0480-413
Figure 106140182-A0305-02-0481-414
<210> 187
<211> 690
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 187
Figure 106140182-A0305-02-0481-415
Figure 106140182-A0305-02-0482-416
Figure 106140182-A0305-02-0483-417
Figure 106140182-A0305-02-0484-418
<210> 188
<211> 690
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 188
Figure 106140182-A0305-02-0485-419
Figure 106140182-A0305-02-0486-420
Figure 106140182-A0305-02-0487-421
Figure 106140182-A0305-02-0488-422
<210> 189
<211> 690
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 189
Figure 106140182-A0305-02-0488-423
Figure 106140182-A0305-02-0489-424
Figure 106140182-A0305-02-0490-425
Figure 106140182-A0305-02-0491-426
Figure 106140182-A0305-02-0492-427
<210> 190
<211> 690
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 190
Figure 106140182-A0305-02-0492-428
Figure 106140182-A0305-02-0493-429
Figure 106140182-A0305-02-0494-430
Figure 106140182-A0305-02-0495-431
Figure 106140182-A0305-02-0496-432
<210> 191
<211> 690
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 191
Figure 106140182-A0305-02-0496-433
Figure 106140182-A0305-02-0497-434
Figure 106140182-A0305-02-0498-435
Figure 106140182-A0305-02-0499-436
<210> 192
<211> 692
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 192
Figure 106140182-A0305-02-0500-437
Figure 106140182-A0305-02-0501-438
Figure 106140182-A0305-02-0502-439
Figure 106140182-A0305-02-0503-440
<210> 193
<211> 690
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 193
Figure 106140182-A0305-02-0503-441
Figure 106140182-A0305-02-0504-442
Figure 106140182-A0305-02-0505-443
Figure 106140182-A0305-02-0506-444
Figure 106140182-A0305-02-0507-445
<210> 194
<211> 690
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 194
Figure 106140182-A0305-02-0507-446
Figure 106140182-A0305-02-0508-447
Figure 106140182-A0305-02-0509-448
Figure 106140182-A0305-02-0510-449
Figure 106140182-A0305-02-0511-450
<210> 195
<211> 690
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 195
Figure 106140182-A0305-02-0511-451
Figure 106140182-A0305-02-0512-452
Figure 106140182-A0305-02-0513-453
Figure 106140182-A0305-02-0514-454
<210> 196
<211> 690
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 196
Figure 106140182-A0305-02-0515-455
Figure 106140182-A0305-02-0516-456
Figure 106140182-A0305-02-0517-457
Figure 106140182-A0305-02-0518-458
<210> 197
<211> 690
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 197
Figure 106140182-A0305-02-0518-459
Figure 106140182-A0305-02-0519-460
Figure 106140182-A0305-02-0520-461
Figure 106140182-A0305-02-0521-462
Figure 106140182-A0305-02-0522-463
<210> 198
<211> 690
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 198
Figure 106140182-A0305-02-0522-464
Figure 106140182-A0305-02-0523-465
Figure 106140182-A0305-02-0524-466
Figure 106140182-A0305-02-0525-467
<210> 199
<211> 688
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 199
Figure 106140182-A0305-02-0526-468
Figure 106140182-A0305-02-0527-469
Figure 106140182-A0305-02-0528-470
Figure 106140182-A0305-02-0529-471
<210> 200
<211> 688
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 200
Figure 106140182-A0305-02-0529-472
Figure 106140182-A0305-02-0530-473
Figure 106140182-A0305-02-0531-474
Figure 106140182-A0305-02-0532-475
Figure 106140182-A0305-02-0533-476
<210> 201
<211> 680
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 201
Figure 106140182-A0305-02-0533-477
Figure 106140182-A0305-02-0534-478
Figure 106140182-A0305-02-0535-479
Figure 106140182-A0305-02-0536-480
<210> 202
<211> 678
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 202
Figure 106140182-A0305-02-0537-481
Figure 106140182-A0305-02-0538-482
Figure 106140182-A0305-02-0539-483
Figure 106140182-A0305-02-0540-484
<210> 203
<211> 678
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 203
Figure 106140182-A0305-02-0540-485
Figure 106140182-A0305-02-0541-486
Figure 106140182-A0305-02-0542-487
Figure 106140182-A0305-02-0543-488
Figure 106140182-A0305-02-0544-489
<210> 204
<211> 678
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 204
Figure 106140182-A0305-02-0544-490
Figure 106140182-A0305-02-0545-491
Figure 106140182-A0305-02-0546-492
Figure 106140182-A0305-02-0547-493
<210> 205
<211> 676
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 205
Figure 106140182-A0305-02-0548-494
Figure 106140182-A0305-02-0549-495
Figure 106140182-A0305-02-0550-496
Figure 106140182-A0305-02-0551-497
<210> 206
<211> 676
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 206
Figure 106140182-A0305-02-0551-498
Figure 106140182-A0305-02-0552-499
Figure 106140182-A0305-02-0553-500
Figure 106140182-A0305-02-0554-501
Figure 106140182-A0305-02-0555-502
<210> 207
<211> 688
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 207
Figure 106140182-A0305-02-0555-503
Figure 106140182-A0305-02-0556-504
Figure 106140182-A0305-02-0557-505
Figure 106140182-A0305-02-0558-506
<210> 208
<211> 688
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 208
Figure 106140182-A0305-02-0558-507
Figure 106140182-A0305-02-0559-508
Figure 106140182-A0305-02-0560-509
Figure 106140182-A0305-02-0561-510
Figure 106140182-A0305-02-0562-511
<210> 209
<211> 680
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 209
Figure 106140182-A0305-02-0562-512
Figure 106140182-A0305-02-0563-513
Figure 106140182-A0305-02-0564-514
Figure 106140182-A0305-02-0565-515
<210> 210
<211> 678
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 210
Figure 106140182-A0305-02-0566-516
Figure 106140182-A0305-02-0567-517
Figure 106140182-A0305-02-0568-518
Figure 106140182-A0305-02-0569-519
<210> 211
<211> 678
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 211
Figure 106140182-A0305-02-0569-520
Figure 106140182-A0305-02-0570-521
Figure 106140182-A0305-02-0571-522
Figure 106140182-A0305-02-0572-523
Figure 106140182-A0305-02-0573-524
<210> 212
<211> 678
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 212
Figure 106140182-A0305-02-0573-525
Figure 106140182-A0305-02-0574-526
Figure 106140182-A0305-02-0575-527
Figure 106140182-A0305-02-0576-528
<210> 213
<211> 676
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 213
Figure 106140182-A0305-02-0577-529
Figure 106140182-A0305-02-0578-530
Figure 106140182-A0305-02-0579-531
Figure 106140182-A0305-02-0580-532
<210> 214
<211> 676
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 214
Figure 106140182-A0305-02-0580-533
Figure 106140182-A0305-02-0581-534
Figure 106140182-A0305-02-0582-535
Figure 106140182-A0305-02-0583-536
Figure 106140182-A0305-02-0584-537
<210> 215
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成肽"
<220>
<221> VARIANT
<222> (14)..(14)
<223> /取代="Arg"
<220>
<221> VARIANT
<222> (16)..(16)
<223> /取代="Arg"
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(17)
<223> /note="序列中給定的變異殘基對於變異位置記載的殘基沒有偏好"
<400> 215
Figure 106140182-A0305-02-0584-538
<210> 216
<211> 675
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 216
Figure 106140182-A0305-02-0585-539
Figure 106140182-A0305-02-0586-540
Figure 106140182-A0305-02-0587-541
Figure 106140182-A0305-02-0588-542
<210> 217
<211> 675
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 217
Figure 106140182-A0305-02-0588-543
Figure 106140182-A0305-02-0589-544
Figure 106140182-A0305-02-0590-545
Figure 106140182-A0305-02-0591-546
Figure 106140182-A0305-02-0592-547
<210> 218
<211> 673
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 218
Figure 106140182-A0305-02-0592-548
Figure 106140182-A0305-02-0593-549
Figure 106140182-A0305-02-0594-550
Figure 106140182-A0305-02-0595-551
<210> 219
<211> 673
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 219
Figure 106140182-A0305-02-0596-552
Figure 106140182-A0305-02-0597-553
Figure 106140182-A0305-02-0598-554
Figure 106140182-A0305-02-0599-555
<210> 220
<211> 689
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 220
Figure 106140182-A0305-02-0599-556
Figure 106140182-A0305-02-0600-557
Figure 106140182-A0305-02-0601-558
Figure 106140182-A0305-02-0602-559
Figure 106140182-A0305-02-0603-560
<210> 221
<211> 689
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 221
Figure 106140182-A0305-02-0603-561
Figure 106140182-A0305-02-0604-562
Figure 106140182-A0305-02-0605-563
Figure 106140182-A0305-02-0606-564
<210> 222
<211> 687
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 222
Figure 106140182-A0305-02-0607-566
Figure 106140182-A0305-02-0608-567
Figure 106140182-A0305-02-0609-568
Figure 106140182-A0305-02-0610-569
<210> 223
<211> 689
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 223
Figure 106140182-A0305-02-0610-570
Figure 106140182-A0305-02-0611-571
Figure 106140182-A0305-02-0612-572
Figure 106140182-A0305-02-0613-573
Figure 106140182-A0305-02-0614-574
<210> 224
<211> 687
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 224
Figure 106140182-A0305-02-0614-575
Figure 106140182-A0305-02-0615-576
Figure 106140182-A0305-02-0616-577
Figure 106140182-A0305-02-0617-578
<210> 225
<211> 687
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 225
Figure 106140182-A0305-02-0618-579
Figure 106140182-A0305-02-0619-580
Figure 106140182-A0305-02-0620-581
Figure 106140182-A0305-02-0621-582
<210> 226
<211> 687
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 226
Figure 106140182-A0305-02-0621-583
Figure 106140182-A0305-02-0622-584
Figure 106140182-A0305-02-0623-585
Figure 106140182-A0305-02-0624-586
Figure 106140182-A0305-02-0625-587
<210> 227
<211> 687
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 227
Figure 106140182-A0305-02-0625-588
Figure 106140182-A0305-02-0626-589
Figure 106140182-A0305-02-0627-590
Figure 106140182-A0305-02-0628-591
<210> 228
<211> 687
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 228
Figure 106140182-A0305-02-0629-592
Figure 106140182-A0305-02-0630-593
Figure 106140182-A0305-02-0631-594
Figure 106140182-A0305-02-0632-595
<210> 229
<211> 687
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 229
Figure 106140182-A0305-02-0632-596
Figure 106140182-A0305-02-0633-597
Figure 106140182-A0305-02-0634-598
Figure 106140182-A0305-02-0635-599
Figure 106140182-A0305-02-0636-600
<210> 230
<211> 685
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 230
Figure 106140182-A0305-02-0636-601
Figure 106140182-A0305-02-0637-602
Figure 106140182-A0305-02-0638-603
Figure 106140182-A0305-02-0639-604
<210> 231
<211> 685
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 231
Figure 106140182-A0305-02-0639-605
Figure 106140182-A0305-02-0640-606
Figure 106140182-A0305-02-0641-607
Figure 106140182-A0305-02-0642-608
Figure 106140182-A0305-02-0643-609
<210> 232
<211> 677
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 232
Figure 106140182-A0305-02-0643-610
Figure 106140182-A0305-02-0644-611
Figure 106140182-A0305-02-0645-612
Figure 106140182-A0305-02-0646-613
<210> 233
<211> 675
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /note="人工序列之描述：合成多肽"
<400> 233
Figure 106140182-A0305-02-0647-614
Figure 106140182-A0305-02-0648-615
Figure 106140182-A0305-02-0649-616
Figure 106140182-A0305-02-0650-617

Claims (136)

  1. 一種經分離之多價抗原結合蛋白(ABP)，其特異性結合人類GITR(hGITR；SEQ ID NO：1)，其包含以下六個CDR序列：a.具有序列X1 X2 X3 X4 X5 RGYGDYGGHHAFDI之CDR-H3，其中X1 為A或V，X2 為H、D、L或R，X3 為E或D，X4 為R、N、S或A，及X5 為V、D或G(SEQ ID NO：141)；b.具有序列X1 IX2 X3 SGX4 TYYNPSLKS之CDR-H2，其中X1 為G、L或S，X2 為Y、A或V，X3 為E、Y或H，及X4 為S或K(SEQ ID NO：142)；c.具有序列X1 SISSX2 X3 X4 X5 WX6 之CDR-H1，其中X1 為Y或G，X2 為G、S或E，X3 為L、G、S、Y或A，X4 為G、A、Y、M或G，X5 為V、A或不存在，及X6為S或G(SEQ ID NO：143)；d.具有序列QQEYX1 TPPX2 之CDR-L3，其中X1 為A或N及X2 為T或S(SEQ ID NO：144)；e.具有序列X1 AX2 SLX3 X4 之CDR-L2，其中X1 為A或S，X2 為D或S，X3 為Q、D、K或E，及X4 為S或Y(SEQ ID NO：145)；及f.具有序列X1 AS X2 SI X3 X4 YLN之CDR-L1，其中X1 為G或R，X2 為Q或K，X3為S、D或N，及X4 為S或T(SEQ ID NO：146)。
  2. 如請求項1之ABP，其中該ABP包含：a.SEQ ID NO：13之CDR-H3、SEQ ID NO：12之CDR-H2、SEQ ID NO：11之CDR-H1、SEQ ID NO：16之CDR-L3、SEQ ID NO：15之CDR-L2，及SEQ ID NO：14之CDR-L1； b.SEQ ID NO：23之CDR-H3、SEQ ID NO：22之CDR-H2、SEQ ID NO：21之CDR-H1、SEQ ID NO：17之CDR-L3、SEQ ID NO：15之CDR-L2，及SEQ ID NO：14之CDR-L1；c.SEQ ID NO：30之CDR-H3、SEQ ID NO：29之CDR-H2、SEQ ID NO：28之CDR-H1、SEQ ID NO：17之CDR-L3、SEQ ID NO：31之CDR-L2，及SEQ ID NO：14之CDR-L1；d.SEQ ID NO：30之CDR-H3、SEQ ID NO：29之CDR-H2、SEQ ID NO：28之CDR-H1、SEQ ID NO：17之CDR-L3、SEQ ID NO：15之CDR-L2，及SEQ ID NO：36之CDR-L1；e.SEQ ID NO：30之CDR-H3、SEQ ID NO：29之CDR-H2、SEQ ID NO：28之CDR-H1、SEQ ID NO：17之CDR-L3、SEQ ID NO：41之CDR-L2，及SEQ ID NO：14之CDR-L1；f.SEQ ID NO：48之CDR-H3、SEQ ID NO：47之CDR-H2、SEQ ID NO：46之CDR-H1、SEQ ID NO：17之CDR-L3、SEQ ID NO：50之CDR-L2，及SEQ ID NO：49之CDR-L1；g.SEQ ID NO：48之CDR-H3、SEQ ID NO：47之CDR-H2、SEQ ID NO：46之CDR-H1、SEQ ID NO：56之CDR-L3、SEQ ID NO：55之CDR-L2，及SEQ ID NO：54之CDR-L1；h.SEQ ID NO：61之CDR-H3、SEQ ID NO：60之CDR-H2、SEQ ID NO：59之CDR-H1、SEQ ID NO：16之CDR-L3、SEQ ID NO：15之CDR-L2，及SEQ ID NO：14之CDR-L1；i.SEQ ID NO：61之CDR-H3、SEQ ID NO：47之CDR-H2、SEQ ID NO：46之CDR-H1、SEQ ID NO：16之CDR-L3、SEQ ID NO：15之CDR- L2，及SEQ ID NO：14之CDR-L1；或j.SEQ ID NO：103之CDR-H3、SEQ ID NO：22之CDR-H2、SEQ ID NO：21之CDR-H1、SEQ ID NO：16之CDR-L3、SEQ ID NO：15之CDR-L2，及SEQ ID NO：14之CDR-L1。
  3. 如請求項2之ABP，其中：a.如請求項2.a之ABP包含SEQ ID NO：9之VH 序列及SEQ ID NO：10之VL 序列；b.如請求項2.b之ABP包含SEQ ID NO：19之VH 序列及SEQ ID NO：20之VL 序列；c.如請求項2.c之ABP包含SEQ ID NO：26之VH 序列及SEQ ID NO：27之VL 序列；d.如請求項2.d之ABP包含SEQ ID NO：26或SEQ ID NO：34之VH 序列及SEQ ID NO：35之VL 序列；e.如請求項2.e之ABP包含SEQ ID NO：26之VH 序列及SEQ ID NO：40之VL 序列；f.如請求項2.f之ABP包含SEQ ID NO：44之VH 序列及SEQ ID NO：45之VL 序列；g.如請求項2.g之ABP包含SEQ ID NO：44之VH 序列及SEQ ID NO：53之VL 序列；h.如請求項2.h之ABP包含SEQ ID NO：58之VH 序列及SEQ ID NO：10之VL 序列；i.如請求項2.i之ABP包含SEQ ID NO：104之VH 序列及SEQ ID NO：10之VL 序列；且j.如請求項2.j之ABP包含SEQ ID NO：105之VH 序列及SEQ ID NO：10之VL 序列。
  4. 如請求項3之ABP，其中：a.如請求項3.a之ABP包含SEQ ID NO：7之重鏈及SEQ ID NO：8之輕鏈；b.如請求項3.b之ABP包含SEQ ID NO：17之重鏈及SEQ ID NO：18之輕鏈；c.如請求項3.c之ABP包含SEQ ID NO：24之重鏈及SEQ ID NO：25之輕鏈；d.如請求項3.d之ABP包含(i)SEQ ID NO：32之重鏈及SEQ ID NO：33之輕鏈，或(ii)SEQ ID NO：37之重鏈及SEQ ID NO：33之輕鏈；e.如請求項3.e之ABP包含(i)SEQ ID NO：38之重鏈及SEQ ID NO：39之輕鏈；f.如請求項3.f之ABP包含(i)SEQ ID NO：42之重鏈及SEQ ID NO：43之輕鏈；g.如請求項3.g之ABP包含(i)SEQ ID NO：51之重鏈及SEQ ID NO：52之輕鏈；h.如請求項3.h之ABP包含(i)SEQ ID NO：57之重鏈及SEQ ID NO：8之輕鏈；i.如請求項3.i之ABP包含(i)SEQ ID NO：114之重鏈及SEQ ID NO：8之輕鏈，或(ii)SEQ ID NO：120之重鏈及SEQ ID NO：8之輕鏈；或(iii) SEQ ID NO：122之重鏈及SEQ ID NO：8之輕鏈；或j.如請求項3.j之ABP包含(i)SEQ ID NO：115之重鏈及SEQ ID NO：8之輕鏈，或(ii)SEQ ID NO：121之重鏈及SEQ ID NO：8之輕鏈；或(iii)SEQ ID NO：123之重鏈及SEQ ID NO：8之輕鏈。
  5. 一種經分離之多價抗原結合蛋白(ABP)，其特異性結合人類GITR(hGITR；SEQ ID NO：1)，其包含以下六個CDR序列：a.具有在SEQ ID NO：66中所闡述之序列之CDR-H3；b.具有在SEQ ID NO：65中所闡述之序列之CDR-H2；c.具有在SEQ ID NO：64中所闡述之序列之CDR-H1；d.具有在SEQ ID NO：69中所闡述之序列之CDR-L3；e.具有在SEQ ID NO：68中所闡述之序列之CDR-L2；及f.具有在SEQ ID NO：67中所闡述之序列之CDR-L1。
  6. 如請求項5之ABP，其中：a.該ABP包含SEQ ID NO：62之VH 序列及SEQ ID NO：63之VL 序列；b.該ABP包含SEQ ID NO：70之VH 序列及SEQ ID NO：63之VL 序列；或c.該ABP包含SEQ ID NO：97之VH 序列及SEQ ID NO：63之VL 序列。
  7. 如請求項6之ABP，其中：a.如請求項6.a之ABP包含SEQ ID NO：171之重鏈及SEQ ID NO：172之輕鏈； b.如請求項6.b之ABP包含SEQ ID NO：173之重鏈及SEQ ID NO：174之輕鏈；c.如請求項6.c之ABP包含(i)SEQ ID NO：106之重鏈序列及SEQ ID NO：107之輕鏈序列；或(ii)SEQ ID NO：116之重鏈序列及SEQ ID NO：107之輕鏈序列。
  8. 一種經分離之多價抗原結合蛋白(ABP)，其特異性結合人類GITR(hGITR；SEQ ID NO：1)，其包含以下六個CDR序列：a.具有在SEQ ID NO：75中所闡述之序列之CDR-H3；b.具有在SEQ ID NO：74中所闡述之序列之CDR-H2；c.具有在SEQ ID NO：73中所闡述之序列之CDR-H1；d.具有在SEQ ID NO：78中所闡述之序列之CDR-L3；e.具有在SEQ ID NO：77中所闡述之序列之CDR-L2；及f.具有在SEQ ID NO：75中所闡述之序列之CDR-L1。
  9. 如請求項8之ABP，其中：a.該ABP包含SEQ ID NO：71之VH 序列及SEQ ID NO：72之VL 序列；或b.該ABP包含SEQ ID NO：98之VH 序列及SEQ ID NO：72之VL 序列。
  10. 如請求項9之ABP，其中：a.如請求項9.a之ABP包含SEQ ID NO：173之重鏈及SEQ ID NO：109之輕鏈；或 b.如請求項9.b之ABP包含(i)SEQ ID NO：108之重鏈及SEQ ID NO：109之輕鏈；或(ii)SEQ ID NO：117之重鏈及SEQ ID NO：109之輕鏈。
  11. 一種經分離之多價抗原結合蛋白(ABP)，其特異性結合人類GITR(hGITR；SEQ ID NO：1)，其包含以下六個CDR序列：a.具有在SEQ ID NO：83中所闡述之序列之CDR-H3；b.具有在(i)SEQ ID NO：82或(ii)SEQ ID NO：100中所闡述之序列之CDR-H2；c.具有在SEQ ID NO：81中所闡述之序列之CDR-H1；d.具有在SEQ ID NO：86中所闡述之序列之CDR-L3；e.具有在SEQ ID NO：85中所闡述之序列之CDR-L2；及f.具有在SEQ ID NO：84中所闡述之序列之CDR-L1。
  12. 如請求項11之ABP，其中：a.該ABP包含如請求項11.b(i)之CDR-H2序列及SEQ ID NO：79之VH 序列以及SEQ ID NO：80之VL 序列；b.該ABP包含如請求項11.b(i)之CDR-H2序列及SEQ ID NO：87之VH 序列以及SEQ ID NO：80之VL 序列；c.該ABP包含如請求項11.b(i)之CDR-H2序列及SEQ ID NO：88之VH 序列以及SEQ ID NO：80之VL 序列；d.該ABP包含如請求項11.b(ii)之CDR-H2序列及SEQ ID NO：99之VH 序列以及SEQ ID NO：80之VL 序列。
  13. 如請求項12之ABP，其中：a.如請求項12.a之ABP包含SEQ ID NO：174之重鏈及SEQ ID NO：111之輕鏈；b.如請求項12.b之ABP包含SEQ ID NO：175之重鏈及SEQ ID NO：111之輕鏈；c.如請求項12.c之ABP包含SEQ ID NO：176之重鏈及SEQ ID NO：111之輕鏈；d.如請求項12.d之ABP包含(i)SEQ ID NO：110之重鏈及SEQ ID NO：111之輕鏈；或(ii)SEQ ID NO：118之重鏈及SEQ ID NO：111之輕鏈。
  14. 一種經分離之多價抗原結合蛋白(ABP)，其特異性結合人類GITR(hGITR；SEQ ID NO：1)，其包含以下六個CDR序列：a.具有在SEQ ID NO：93中所闡述之序列之CDR-H3；b.具有序列GIIPIFGEAQYAQX1 FX2 G之CDR-H2，其中X1 為K或R，及X2 為Q或R(SEQ ID NO：215)；c.具有在SEQ ID NO：91中所闡述之序列之CDR-H1；d.具有在SEQ ID NO：94中所闡述之序列之CDR-L3；e.具有在SEQ ID NO：85中所闡述之序列之CDR-L2；及f.具有在SEQ ID NO：84中所闡述之序列之CDR-L1。
  15. 如請求項14之ABP，其中該ABP包含：a.SEQ ID NO：92之CDR-H2； b.SEQ ID NO：96之CDR-H2；或c.SEQ ID NO：102之CDR-H2。
  16. 如請求項15之ABP，其中：a.如請求項15.a之ABP包含SEQ ID NO：89之VH 序列及SEQ ID NO：90之VL 序列；b.如請求項15.b之ABP包含SEQ ID NO：95之VH 序列及SEQ ID NO：90之VL 序列；及c.如請求項15.c之ABP包含SEQ ID NO：101之VH 序列及SEQ ID NO：90之VL 序列。
  17. 如請求項16之ABP，其中：a.如請求項16.a之ABP包含SEQ ID NO：177之重鏈及SEQ ID NO：113之輕鏈；b.如請求項16.b之ABP包含SEQ ID NO：178之重鏈及SEQ ID NO：113之輕鏈；c.如請求項16.c之ABP包含(i)SEQ ID NO：112之重鏈及SEQ ID NO：113之輕鏈；或(ii)SEQ ID NO：119之重鏈及SEQ ID NO：113之輕鏈。
  18. 一種經分離之多價抗原結合蛋白(ABP)，其特異性結合人類GITR(hGITR；SEQ ID NO：1)，其包含以下六個CDR序列：a.具有在SEQ ID NO：134中所闡述之序列之CDR-H3； b.具有在SEQ ID NO：133中所闡述之序列之CDR-H2；c.具有在SEQ ID NO：132中所闡述之序列之CDR-H1；d.具有在SEQ ID NO：135中所闡述之序列之CDR-L3；e.具有在SEQ ID NO：68中所闡述之序列之CDR-L2；及f.具有在SEQ ID NO：67中所闡述之序列之CDR-L1。
  19. 如請求項18之ABP，其中該ABP包含(i)SEQ ID NO：126之VH 序列及SEQ ID NO：128之VL 序列；或(ii)SEQ ID NO：127之VH 序列及SEQ ID NO：128之VL 序列。
  20. 如請求項18之ABP，其中該ABP包含(i)SEQ ID NO：124之重鏈及SEQ ID NO：125之輕鏈；或(ii)SEQ ID NO：136之重鏈及SEQ ID NO：125之輕鏈。
  21. 一種經分離之多價抗原結合蛋白(ABP)，其特異性結合人類GITR(hGITR；SEQ ID NO：1)，其包含：a.與VH 區之CDR-H3具有至少約80%一致性之CDR-H3，該VH 區係選自SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：58、SEQ ID NO：62、SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：87、SEQ ID NO：88、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：97、SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：99、SEQ ID NO：101、SEQ ID NO：104、SEQ ID NO：105、SEQ ID NO：126及SEQ ID NO：127； b.與VH 區之CDR-H2具有至少約80%一致性之CDR-H2，該VH 區係選自SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：58、SEQ ID NO：62、SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：87、SEQ ID NO：88、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：97、SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：99、SEQ ID NO：101、SEQ ID NO：104、SEQ ID NO：105、SEQ ID NO：126及SEQ ID NO：127；c.與VH 區之CDR-H1具有至少約80%一致性之CDR-H1，該VH 區係選自SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：58、SEQ ID NO：62、SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：87、SEQ ID NO：88、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：97、SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：99、SEQ ID NO：101、SEQ ID NO：104、SEQ ID NO：105、SEQ ID NO：126及SEQ ID NO：127；d.與VL 區之CDR-L3具有至少約80%一致性之CDR-L3，該VL 區係選自SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：63、SEQ ID NO：72、SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：90及SEQ ID NO：128；e.與VL 區之CDR-L2具有至少約80%一致性之CDR-L2，該VL 區係選自SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：63、SEQ ID NO：72、SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：90及SEQ ID NO：128；及f.與VL 區之CDR-L1具有至少約80%一致性之CDR-L1，該VL 區係選 自SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：63、SEQ ID NO：72、SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：90及SEQ ID NO：128。
  22. 如請求項21之ABP，其中該CDR-H3、該CDR-H2、該CDR-H1、該CDR-L3、該CDR-L2及該CDR-L1各自係根據編號方案來鑑別，該編號方案係選自Kabat編號方案、Chothia編號方案或IMGT編號方案。
  23. 如請求項21之ABP，其中該CDR-H1經鑑別為藉由Chothia及Kabat編號方案兩者定義，包括兩個編號方案之邊界。
  24. 如請求項21之ABP，其中：a.該CDR-H3包含選自以下之CDR-H3：SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：48、SEQ ID NO：61、SEQ ID NO：66、SEQ ID NO：75、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：131，或其具有1、2或3個胺基酸取代之變體；b.該CDR-H2包含選自以下之CDR-H2：SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：60、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：74、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：96、SEQ ID NO：100、SEQ ID NO：102、SEQ ID NO：130及SEQ ID NO：133，或其具有1、2或3個胺基酸取代之變體；c.該CDR-H1包含選自以下之CDR-H1：SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：64、SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：129、SEQ ID NO：132，或其具有1或2個胺基酸取代之變體；d.該CDR-L3包含選自以下之CDR-L3：SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：56、SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：78、SEQ ID NO：86、SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：135，或其具有1或2個胺基酸取代之變體；e.該CDR-L2包含選自以下之CDR-L2：SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：41、SEQ ID NO：50、SEQ ID NO：55、SEQ ID NO：68、SEQ ID NO：77及SEQ ID NO：85，或其具有1個胺基酸取代之變體；及f.該CDR-L1包含選自以下之CDR-L1：SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：76及SEQ ID NO：84，或其具有1或2個胺基酸取代之變體。
  25. 如請求項24之ABP，其中該等胺基酸取代為保守胺基酸取代。
  26. 如請求項1至25中任一項之ABP，其中該ABP：a.具有特異性結合GITR上之抗原決定基之至少三個抗原-結合域；b.具有特異性結合GITR上之單一抗原決定基之至少三個抗原-結合域；c.具有特異性結合GITR上之抗原決定基之至少四個抗原-結合域；d.具有特異性結合GITR上之單一抗原決定基之至少四個抗原-結合域； e.促效在靶細胞之表面上表現之GITR；f.阻斷GITRL與GITR之結合；g.結合自抗原-呈遞細胞之抗原呈遞共刺激效應T細胞；h.抑制由調節T細胞對效應T細胞之抑止；i.減少組織或全身循環中之調節T細胞之數目；j.能夠與來自由以下組成之群之GITR(SEQ ID NO：1)殘基中之一或多者結合：R56、C58、R59、D60、Y61、P62、E64、E65、C66及C67；或k.能夠為(a)至(j)之任何組合。
  27. 如請求項26之ABP，其中該GITR係選自hGITR(SEQ ID NO：1)、hGITR-T43R(SEQ ID NO：2)、cGITR(SEQ ID NO：3)、mGITR(SEQ ID NO：4)及其組合。
  28. 如請求項1至25中任一項之ABP，其中該ABP(a)特異性結合食蟹獼猴GITR(cGITR；SEQ ID NO：3)；(b)以比該ABP對於hGITR之親和性低之親和性結合鼠GITR(mGITR；SEQ ID NO：4)，或不結合mGITR；或(c)能夠為(a)至(b)之任何組合。
  29. 如請求項1至25中任一項之ABP，其中該ABP：(a)特異性結合cGITR(SEQ ID NO：3)；(b)以比該ABP對於hGITR及cGITR之親和性低之親和性結合mGITR(SEQ ID NO：4)；且(c)增強GITRL與GITR之結合。
  30. 如請求項1至25中任一項之ABP，其中該ABP包含抗體。
  31. 如請求項30之ABP，其中該抗體為單株抗體。
  32. 如請求項30之ABP，其中該抗體選自人類抗體、人類化抗體或嵌合抗體。
  33. 如請求項1至25中任一項之ABP，其中該ABP係多價的。
  34. 如請求項1至25中任一項之ABP，其中該ABP包含抗體片段。
  35. 如請求項1至25中任一項之ABP，其中該ABP包含可替代的骨架。
  36. 如請求項1至25中任一項之ABP，其中該ABP包含免疫球蛋白恆定區。
  37. 如請求項36之ABP，其中該ABP包含選自IgA、IgD、IgE、IgG或IgM之類別之重鏈恆定區。
  38. 如請求項37之ABP，其中該ABP包含類別IgG及選自IgG4、IgG1、IgG2或IgG3之子類別之重鏈恆定區。
  39. 如請求項1至25中任一項之ABP，其中至少一個Fab與IgG之Fc域之C 端融合。
  40. 如請求項1至25中任一項之ABP，其進一步包含至少一個連接子。
  41. 如請求項38之ABP，其中該IgG為IgG4。
  42. 如請求項38之ABP，其中該IgG為IgG1。
  43. 如請求項1至25中任一項之ABP，其中至少一個Fab與IgG之Fc域之N端融合。
  44. 如請求項43之ABP，其中該至少一個Fab為至少兩個Fab。
  45. 如請求項43之ABP，其中該至少一個Fab為至少三個Fab。
  46. 如請求項43之ABP，其中該至少一個Fab為至少四個Fab。
  47. 如請求項43之ABP，其中兩個Fab獨立地與該IgG之N端融合。
  48. 如請求項43之ABP，其中兩個Fab獨立地與該IgG之C端融合。
  49. 如請求項47之ABP，其中Fab與該IgG之各N端連接，連接子與各該Fab連接，且Fab與各連接子連接。
  50. 如請求項48之ABP，其中Fab與該IgG之各C端連接，連接子與各該Fab連接，且Fab與各連接子連接。
  51. 如請求項49之ABP，其中各連接子包含SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：6。
  52. 如請求項50之ABP，其中各連接子包含SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：6。
  53. 如請求項1至25中任一項之ABP，其中該ABP包含共同輕鏈抗體、具有隆突-入-穴(knobs-into-hole)修飾之抗體、與IgG連接之scFv、與IgG連接之Fab、雙功能抗體、四價雙特異性抗體、DVD-IgTM 、DARTTM 、DuoBody®、CovX-體、Fcab抗體、TandAb®、串聯Fab、ZybodyTM ，或其組合。
  54. 如請求項33之ABP，其中該ABP結合多於一個GITR分子。
  55. 如請求項26之ABP，第f項，其中藉由該ABP之GITR之促效作用不依賴於GITRL結合。
  56. 如請求項26之ABP，第f項，其中該ABP增強GITRL與GITR之結合至少約10%、至少約20%、至少約30%、至少約40%、至少約50%、至少 約60%、至少約70%、至少約80%或至少約90%。
  57. 如請求項56之ABP，其中該ABP增強GITRL與GITR之結合至少約50%。
  58. 如請求項26之ABP，第f項，其中該靶細胞選自效應T細胞、調節T細胞、自然殺手(NK)細胞、自然殺手T(NKT)細胞、樹突狀細胞及B細胞。
  59. 如請求項26之ABP，第f項，其中該靶細胞為選自輔助(CD4+)T細胞、細胞毒性(CD8+)T細胞及其組合之效應T細胞。
  60. 如請求項26之ABP，第f項，其中該靶細胞為選自CD4+CD25+Foxp3+調節T細胞、CD8+CD25+調節T細胞及其組合之調節T細胞。
  61. 如請求項26之ABP，第j項，其中該組織為腫瘤。
  62. 如請求項1至25中任一項之ABP，其中第一抗原-結合域針對hGITR(SEQ ID NO：1)或hGITR-T43R(SEQ ID NO：2)之KD 小於約20nM。
  63. 如請求項1至25中任一項之ABP，其中第一抗原-結合域針對cGITR(SEQ ID NO：3)之KD 小於約200nM。
  64. 如請求項1至25中任一項之ABP，其中第二抗原-結合域針對hGITR (SEQ ID NO：1)或hGITR-T43R(SEQ ID NO：2)之KD 小於約100nM。
  65. 如請求項1至25中任一項之ABP，其中第二抗原-結合域針對cGITR(SEQ ID NO：3)之KD 小於約1μM。
  66. 如請求項1至25中任一項之ABP，其中該ABP包含具有當與IgG1 Fc域相比時效應功能降低的Fc域。
  67. 如請求項1至25中任一項之ABP，其中該ABP包含非糖基化Fc域。
  68. 如請求項1至25中任一項之ABP，其中該ABP包含在位置234、235、265及297中之一或多者處具有丙胺酸之IgG1 Fc域。
  69. 如請求項1至25中任一項之ABP，其中該GITR在靶細胞之表面上表現。
  70. 如請求項1至25中任一項之ABP，其中該ABP使在靶細胞之表面上表現之GITR多聚化。
  71. 如請求項70之ABP，其中該ABP使2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12個GITR分子多聚化。
  72. 如請求項1至25中任一項之ABP，其中該ABP包含免疫球蛋白，該免 疫球蛋白包含各自與共同輕鏈可變區配對之至少兩個不同重鏈可變區。
  73. 如請求項72之ABP，其中該共同輕鏈可變區與該兩個不同重鏈可變區中之每一者形成不同的抗原-結合域。
  74. 如請求項72之ABP，其中該ABP包含具有SEQ ID NO：189之第一VH可變域、具有SEQ ID NO：215之第二VH可變域及具有SEQ ID NO：190之共同可變輕鏈。
  75. 如請求項72之ABP，其中該ABP包含具有SEQ ID NO：199之第一VH可變域、具有SEQ ID NO：216之第二VH可變域及具有SEQ ID NO：200之共同可變輕鏈。
  76. 一種套組，其包含如請求項1至75中任一項之ABP及該ABP之使用說明。
  77. 如請求項76之套組，其中該ABP係凍乾的。
  78. 如請求項77之套組，其進一步包含用於還原該凍乾ABP之液體。
  79. 如請求項1至25中任一項之ABP，其中該ABP包含在其N端處具有焦麩胺酸(pE)殘基之多肽序列。
  80. 如請求項1至25中任一項之ABP，其中該ABP包含其中N端Q經pE取代之VH序列。
  81. 如請求項1至25中任一項之ABP，其中該ABP包含其中N端E經pE取代之VL序列。
  82. 一種經分離之聚核苷酸，其編碼如請求項1至75中任一項之ABP、其VH 、其VL 、其輕鏈、其重鏈或其抗原-結合部分。
  83. 一種載體，其包含如請求項82之聚核苷酸。
  84. 一種宿主細胞，其包含如請求項82之聚核苷酸或如請求項83之載體。
  85. 如請求項84之宿主細胞，其中該宿主細胞係選自細菌細胞、真菌細胞及哺乳動物細胞。
  86. 如請求項85之宿主細胞，其中該宿主細胞選自大腸桿菌(E.coli)細胞、釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)細胞及CHO細胞。
  87. 一種無細胞表現反應，其包含如請求項82之聚核苷酸或如請求項83之載體。
  88. 一種製造如請求項1至75中任一項之ABP之方法，其包含在如請求項85之宿主細胞中表現ABP及分離該表現的ABP。
  89. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至75中任一項之ABP及醫藥學上可接受之賦形劑。
  90. 如請求項89之醫藥組合物，其中該醫藥組合物中之該ABP之量足以在個體中(a)降低由調節T細胞對效應T細胞之抑止；(b)活化效應T細胞；(c)減少組織或全身性中之調節T細胞之數目；(d)誘導或增強效應T細胞之增殖；(e)抑制腫瘤生長之速率；(f)誘導腫瘤消退；或(g)其組合。
  91. 一種如請求項1至75中任一項之ABP或如請求項89或90之醫藥組合物之用途，其用於製備治療或預防有需要之個體之疾病或病狀之方法。
  92. 一種如請求項1至75中任一項之ABP或如請求項89或90之醫藥組合物之用途，其用於製備增強個體中之免疫細胞之活化之藥劑。
  93. 如請求項91之用途，其中該疾病或病狀為癌症。
  94. 如請求項91之用途，其中該藥劑誘導或增強針對癌症相關聯抗原之免疫反應。
  95. 如請求項91之用途，其中該ABP之量足以：(a)降低由調節T細胞對 於效應T細胞之抑止；(b)活化效應T細胞；(c)減少組織或全身性中之調節T細胞之數目；(d)誘導或增強效應T細胞之增殖；(e)抑制腫瘤生長之速率；(f)誘導腫瘤消退；或(g)其組合。
  96. 如請求項93至95中任一項之用途，其中該癌症為實體癌症。
  97. 如請求項93至95中任一項之用途，其中該癌症為血液癌症。
  98. 如請求項91之用途，其中該藥劑進一步包含一或多種額外治療劑或與一或多種額外治療劑併用。
  99. 如請求項98之用途，其中該額外治療劑係選自輻射、細胞毒性劑、化學治療劑、細胞生長抑制劑、抗-激素劑、EGFR抑制劑、免疫刺激劑、抗血管生成劑，及其組合。
  100. 如請求項98之用途，其中該額外治療劑為免疫刺激劑。
  101. 如請求項100之用途，其中該免疫刺激劑包含阻斷由免疫細胞表現之抑制性受體或其配位體之信號傳導的試劑。
  102. 如請求項101之用途，其中由免疫細胞表現之該抑制性受體或其配位體係選自CTLA-4、PD-1、PD-L1、NRP-1、LAG-3、Tim3、TIGIT、神經炎素、BTLA、KIR，及其組合。
  103. 如請求項100之用途，其中該免疫刺激劑包含針對由免疫細胞表現之刺激性受體之促效劑。
  104. 如請求項103之用途，其中由免疫細胞表現之該刺激性受體係選自OX40、CD2、CD27、CDS、ICAM-1、LFA-1(CD11a/CD18)、ICOS(CD278)、4-1BB(CD137)、CD28、CD30、CD40、BAFFR、HVEM、CD7、LIGHT、NKG2C、SLAMF7、NKp80、CD160、B7-H3、CD83配位體，及其組合。
  105. 如請求項100之用途，其中該免疫刺激劑包含細胞介素。
  106. 如請求項105之用途，其中該細胞介素係選自IL-2、IL-5、IL-7、IL-12、IL-15、IL-21，及其組合。
  107. 如請求項100之用途，其中該免疫刺激劑包含溶瘤病毒。
  108. 如請求項107之用途，其中該溶瘤病毒係選自單純疱疹病毒、水泡性口炎病毒、腺病毒、新城雞瘟病毒、牛痘病毒、馬拉巴(maraba)病毒，及其組合。
  109. 如請求項100之用途，其中該免疫刺激劑包含表現嵌合抗原受體之T細胞。
  110. 如請求項100之用途，其中該免疫刺激劑包含雙特異性或多特異性T細胞定向抗體。
  111. 如請求項100之用途，其中該免疫刺激劑包含抗-TGF-ß抗體、TGF-ß阱，或其組合。
  112. 如請求項100之用途，其中該免疫刺激劑包含針對癌症相關聯抗原之疫苗。
  113. 一種如請求項1至75中任一項之ABP或如請求項89或90之醫藥組合物之用途，其用於製備調節有需要之個體之免疫反應之藥劑。
  114. 如請求項98之用途，其中該額外治療劑係在與該ABP相同之醫藥組合物中調配，或其中該額外治療劑係在與該ABP不同之醫藥組合物中調配。
  115. 如請求項98之用途，其特徵在於該額外治療劑係在投與該ABP之前、之後或與其同時投與。
  116. 如請求項1至25中任一項之ABP，其中該ABP特異性結合人類GITR(hGITR；SEQ ID NO：1)之抗原決定基且能夠結合來自由以下組成之群之一或多個殘基：R56、C58、R59、D60、Y61、P62、E64、E65、C66及 C67。
  117. 一種抗-人類GITR抗體或其抗原-結合片段，其包含四個重鏈可變區及四個輕鏈可變區，其中該等重鏈可變區包含由SEQ ID NO：13組成之CDR-H3、由SEQ ID NO：12組成之CDR-H2及由SEQ ID NO：11組成之CDR-H1；且該等輕鏈可變區包含由SEQ ID NO：16組成之CDR-L3、由SEQ ID NO：15組成之CDR-L2及由SEQ ID NO：14組成之CDR-L1；及其中一個重鏈可變區及一個輕鏈可變區構成一個抗原-結合位點，且其中該抗-人類GITR抗體或該抗原-結合片段包含總共四個抗原-結合位點。
  118. 如請求項117之抗-人類GITR抗體或其抗原結合片段，其係選自(1)或(2)：(1)抗-人類GITR抗體或其抗原-結合片段，其包含四個重鏈可變區及四個輕鏈可變區，其中重鏈可變區由SEQ ID NO：9組成，輕鏈可變區由SEQ ID NO：10組成，且該一個重鏈可變區及該一個輕鏈可變區構成一個抗原-結合位點，且該抗體或抗原-結合片段包含四個抗原-結合位點；及(2)抗-人類GITR抗體或其抗原-結合片段，其包含四個重鏈可變區及四個輕鏈可變區，其中各重鏈可變區由SEQ ID NO：9組成，其中序列之位置1處之Q經修飾為焦麩胺酸，輕鏈可變區由SEQ ID NO：10組成，且 該一個重鏈可變區及該一個輕鏈可變區構成一個抗原-結合位點，且該抗體或該抗原-結合片段包含四個抗原-結合位點。
  119. 如請求項117之抗-人類GITR抗體，其中該抗體包含兩個重鏈及四個輕鏈：各重鏈包含第一重鏈可變區及第二重鏈可變區，各自包含由SEQ ID NO：13組成之CDR-H3、由SEQ ID NO：12組成之CDR-H2及由SEQ ID NO：11組成之CDR-H1，第一CH1區、連接子、第二CH1區、CH2區及CH3區；且各輕鏈包含輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含由SEQ ID NO：16組成之CDR-L3、由SEQ ID NO：15組成之CDR-L2及由SEQ ID NO：14組成之CDR-L1。
  120. 如請求項117之抗-人類GITR抗體，其係選自(1)或(2)：(1)包含兩個重鏈及四個輕鏈之抗-人類GITR抗體，其中各重鏈包含由SEQ ID NO：9之重鏈可變區與CH1區、CH2區及CH3區組成之兩個結構，且該等結構中之一者之C端經由連接子與另一結構之N端連接；且各輕鏈包含SEQ ID NO：10之輕鏈可變區及輕鏈恆定區；及(2)包含兩個重鏈及四個輕鏈之抗-人類GITR抗體，其中各重鏈包含由SEQ ID NO：9之重鏈可變區與CH1區、CH2區及CH3區組成之兩個結構，且該結構中之一者之C端經由連接子與另一結構之N端連接，其中序列之位置1處之Q經修飾為焦麩胺酸；且各輕鏈包含SEQ ID NO：10之輕鏈可變區及輕鏈恆定區。
  121. 如請求項117之抗-人類GITR抗體，其係選自(1)至(4)： (1)抗-人類GITR抗體，其包含由SEQ ID NO：7組成之兩個重鏈及由SEQ ID NO：8組成之四個輕鏈；(2)抗-人類GITR抗體，其包含由SEQ ID NO：7組成之兩個重鏈，其中位置1處之Q經修飾為焦麩胺酸；及由SEQ ID NO：8組成之四個輕鏈；(3)抗-人類GITR抗體，其包含由SEQ ID NO：7之在位置1處之Q至位置686處之G之範圍內之胺基酸序列組成之兩個重鏈及由SEQ ID NO：8組成之四個輕鏈；(4)抗-人類GITR抗體；其包含由SEQ ID NO：7之在位置1處之Q至位置686處之G之範圍內之胺基酸序列組成之兩個重鏈，其中位置1處之該Q經修飾為焦麩胺酸；及由SEQ ID NO：8組成之四個輕鏈。
  122. 一種聚核苷酸，其係選自由(a)及(b)組成之群：(a)包含鹼基序列之聚核苷酸，該鹼基序列編碼如請求項118中所載(1)之抗-人類GITR抗體或其抗原結合-片段之重鏈可變區；及(b)包含鹼基序列之聚核苷酸，該鹼基序列編碼如請求項118中所載(1)之抗-人類GTIR抗體或其抗原-結合片段之輕鏈可變區。
  123. 一種聚核苷酸，其係選自由(a)及(b)組成之群：(a)包含鹼基序列之聚核苷酸，該鹼基序列編碼如請求項121中所載(1)之抗-人類GITR抗體之重鏈；及(b)包含鹼基序列之聚核苷酸，該鹼基序列編碼如請求項121中所載(1)之抗-人類GTIR抗體之輕鏈。
  124. 一種表現載體，其包含：(a)包含鹼基序列之聚核苷酸，該鹼基序列編碼如請求項118中所載(1)之抗-人類GITR抗體或其抗原-結合片段之重鏈可變區，及/或(b)包含鹼基序列之聚核苷酸，該鹼基序列編碼如請求項118中所載(1)之抗-人類GITR抗體或其抗原-結合片段之輕鏈可變區。
  125. 一種表現載體，其包含：(a)包含鹼基序列之聚核苷酸，該鹼基序列編碼如請求項121中所載(1)之抗-人類GITR抗體之重鏈，及/或(b)包含鹼基序列之聚核苷酸，該鹼基序列編碼如請求項121中所載(1)之抗-人類GITR抗體之輕鏈。
  126. 一種宿主細胞，其用選自由(a)至(d)組成之群之表現載體轉形：(a)用表現載體轉形之宿主細胞，該表現載體包含：包含編碼如請求項118中所載(1)之抗-人類GITR抗體或其抗原-結合片段之重鏈可變區之鹼基序列的聚核苷酸；及包含編碼該抗體或該其抗原-結合片段之輕鏈可變區之鹼基序列的聚核苷酸；(b)用以下表現載體轉形之宿主細胞：包含包含編碼如請求項118中所載(1)之抗-人類GITR抗體或其抗原-結合片段之該重鏈可變區之鹼基序列的聚核苷酸之表現載體；及包含包含編碼該抗體或該其抗原-結合片段之該輕鏈可變區之鹼基序列的聚核苷酸之表現載體；(c)用表現載體轉形之宿主細胞，該表現載體包含：聚核苷酸，其包 含編碼如請求項118中所載(1)之抗-人類GITR抗體或其抗原-結合片段之該重鏈可變區之鹼基序列；及(d)用表現載體轉形之宿主細胞，該表現載體包含：聚核苷酸，其包含編碼如請求項118中所載(1)之抗-人類GITR抗體或其抗原-結合片段之該輕鏈可變區之鹼基序列。
  127. 一種宿主細胞，其用選自由(a)至(d)組成之群之表現載體轉形：(a)用表現載體轉形之宿主細胞，該表現載體包含：包含編碼如請求項121中所載(1)之抗-人類GITR抗體之重鏈之鹼基序列的聚核苷酸；及包含編碼該抗體之輕鏈之鹼基序列的聚核苷酸；(b)用以下表現載體轉形之宿主細胞：包含包含編碼如請求項121中所載(1)之抗-人類GITR抗體之重鏈之鹼基序列的聚核苷酸之表現載體；及包含包含編碼該抗體之該輕鏈之鹼基序列的聚核苷酸之表現載體；(c)用表現載體轉形之宿主細胞，該表現載體包含：聚核苷酸，其包含編碼如請求項121中所載(1)之抗-人類GITR抗體之重鏈之鹼基序列；及(d)用表現載體轉形之宿主細胞，該表現載體包含：聚核苷酸，其包含編碼如請求項121中所載(1)之抗-人類GITR抗體之輕鏈之鹼基序列。
  128. 一種用於製造抗-人類GITR抗體或其抗原-結合片段之方法，其包含培養選自由以下(a)至(c)組成之群之宿主細胞以表現四價抗-人類GITR抗體或其抗原-結合片段：(a)用表現載體轉形之宿主細胞，該表現載體包含：含編碼如請求項118中所載(1)之抗-人類GITR抗體或其抗原-結合片段之重鏈可變區之鹼基 序列的聚核苷酸；及包含編碼該抗體或該其抗原-結合片段之輕鏈可變區之鹼基序列的聚核苷酸；(b)用以下表現載體轉形之宿主細胞：包含包含編碼如請求項118中所載(1)之抗-人類GITR抗體或其抗原-結合片段之重鏈可變區之鹼基序列的聚核苷酸之表現載體；及包含包含編碼該抗體或該其抗原-結合片段之該輕鏈可變區之鹼基序列的聚核苷酸之表現載體；及(c)用表現載體轉形之宿主細胞，該表現載體包含包含編碼如請求項118中所載(1)之抗-人類GITR抗體或其抗原-結合片段之重鏈可變區之鹼基序列的聚核苷酸；及用表現載體轉形之宿主細胞，該表現載體包含包含編碼該抗體或該其抗原-結合片段之該輕鏈可變區之鹼基序列的聚核苷酸。
  129. 一種用於製造抗-人類GITR抗體之方法，其包含培養選自由以下(a)至(c)組成之群之宿主細胞以表現抗-人類GITR抗體：(a)用表現載體轉形之宿主細胞，該表現載體包含：包含編碼如請求項121中所載(1)之抗-人類GITR抗體之重鏈之鹼基序列的聚核苷酸；及包含編碼該抗體之輕鏈之鹼基序列的聚核苷酸；(b)用以下表現載體轉形之宿主細胞：包含包含編碼如請求項121中所載(1)之抗-人類GITR抗體之重鏈之鹼基序列的聚核苷酸之表現載體；及包含包含編碼該抗體之輕鏈之鹼基序列的聚核苷酸之表現載體；及(c)用表現載體轉形之宿主細胞，該表現載體包含包含編碼如請求項121中所載(1)之抗-人類GITR抗體之重鏈之鹼基序列的聚核苷酸；及用表現載體轉形之宿主細胞，該表現載體包含包含編碼該抗體之該輕鏈之鹼基序列的聚核苷酸。
  130. 一種醫藥組合物，其包含如請求項121之抗-人類GITR抗體及醫藥學上可接受之賦形劑。
  131. 一種醫藥組合物，其包含如請求項121中所載(1)之抗-人類GITR抗體及如請求項121中所載(4)之抗-人類GITR抗體及醫藥學上可接受之賦形劑。
  132. 一種如請求項130或131之醫藥組合物之用途，其用於製備預防或治療癌症之藥劑。
  133. 如請求項132之用途，其中該藥劑進一步包含選自下列之劑：輻射、細胞毒性劑、化學治療劑、細胞生長抑制劑、抗-激素劑、EGFR抑制劑、免疫刺激劑、抗血管生成劑及其組合，或該藥劑進一步與輻射、細胞毒性劑、化學治療劑、細胞生長抑制劑、抗-激素劑、EGFR抑制劑、免疫刺激劑、抗血管生成劑及其組合併用。
  134. 一種如請求項123之抗-人類GITR抗體之用途，其用於製備預防或治療癌症之藥劑。
  135. 如請求項134之用途，其中該藥劑進一步包含一或多種額外治療劑或與一或多種額外治療劑併用。
  136. 如請求項135之用途，其中該額外治療劑係選自由以下組成之群：輻射、細胞毒性劑、化學治療劑、細胞生長抑制劑、抗-激素劑、EGFR抑制劑、免疫刺激劑、抗血管生成劑及其組合。
TW106140182A 2016-11-19 2017-11-20 抗－ｇｉｔｒ抗原－結合蛋白及其使用方法 TWI783953B (zh)

Applications Claiming Priority (8)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201662497428P 2016-11-19 2016-11-19
US62/497,428 2016-11-19
US201762448644P 2017-01-20 2017-01-20
US62/448,644 2017-01-20
PCT/US2017/062443 WO2018094300A1 (en) 2016-11-19 2017-11-19 Anti-gitr antigen-binding proteins and methods of use thereof
??2017-34287 2017-11-19
??PCT/US17/62443 2017-11-19
WOPCT/US17/62443 2017-11-19

Publications (2)

Publication Number Publication Date
TW201819416A TW201819416A (zh) 2018-06-01
TWI783953B true TWI783953B (zh) 2022-11-21

Family

ID=62146165

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW106140182A TWI783953B (zh) 2016-11-19 2017-11-20 抗－ｇｉｔｒ抗原－結合蛋白及其使用方法

Country Status (16)

Country Link
US (2) US10988545B2 (zh)
EP (1) EP3541845A1 (zh)
KR (1) KR102574071B1 (zh)
CN (1) CN110248960A (zh)
AU (1) AU2017362721A1 (zh)
BR (1) BR112019010128A2 (zh)
CO (1) CO2019006424A2 (zh)
IL (1) IL266720A (zh)
JO (1) JOP20190100A1 (zh)
MA (1) MA46844A (zh)
MX (1) MX2019005821A (zh)
PH (1) PH12019501108A1 (zh)
TW (1) TWI783953B (zh)
UA (1) UA126389C2 (zh)
WO (1) WO2018094300A1 (zh)
ZA (1) ZA201902939B (zh)

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102239781B1 (ko) * 2019-04-08 2021-04-13 주식회사 녹십자 Gpnmb 및 cd3에 특이적으로 결합하는 이중특이적 항체 및 이의 용도
US10994021B1 (en) * 2020-04-11 2021-05-04 Bliss Biopharmaceutical (Hangzhou) Co., Ltd. Tetravalent antibody-drug conjugates and use thereof
AU2021286457A1 (en) 2020-06-08 2023-01-05 University Of Washington Antibody-bound nanoparticles
WO2022240161A1 (ko) * 2021-05-10 2022-11-17 메디맵바이오 주식회사 항-gitr 항체 및 이의 용도
EP4437112A1 (en) * 2021-11-24 2024-10-02 Formycon AG Improved ace2 fusion proteins
WO2023175614A1 (en) 2022-03-15 2023-09-21 Yeda Research And Development Co. Ltd. Anti glucocorticoid-induced tnfr-related (gitr) protein antibodies and uses thereof

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2015184099A1 (en) * 2014-05-28 2015-12-03 4-Antibody Ag Anti-gitr antibodies and methods of use thereof

Family Cites Families (97)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4560655A (en) 1982-12-16 1985-12-24 Immunex Corporation Serum-free cell culture medium and process for making same
US4657866A (en) 1982-12-21 1987-04-14 Sudhir Kumar Serum-free, synthetic, completely chemically defined tissue culture media
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4767704A (en) 1983-10-07 1988-08-30 Columbia University In The City Of New York Protein-free culture medium
GB8516415D0 (en) 1985-06-28 1985-07-31 Celltech Ltd Culture of animal cells
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
US4927762A (en) 1986-04-01 1990-05-22 Cell Enterprises, Inc. Cell culture medium with antioxidant
US4946778A (en) 1987-09-21 1990-08-07 Genex Corporation Single polypeptide chain binding molecules
US5567610A (en) 1986-09-04 1996-10-22 Bioinvent International Ab Method of producing human monoclonal antibodies and kit therefor
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
WO1988007089A1 (en) 1987-03-18 1988-09-22 Medical Research Council Altered antibodies
US5132405A (en) 1987-05-21 1992-07-21 Creative Biomolecules, Inc. Biosynthetic antibody binding sites
US5204244A (en) 1987-10-27 1993-04-20 Oncogen Production of chimeric antibodies by homologous recombination
EP0435911B1 (en) 1988-09-23 1996-03-13 Cetus Oncology Corporation Cell culture medium for enhanced cell growth, culture longevity and product expression
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
US5175384A (en) 1988-12-05 1992-12-29 Genpharm International Transgenic mice depleted in mature t-cells and methods for making transgenic mice
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
IL97459A0 (en) 1990-03-09 1992-06-21 Hybritech Inc Trifunctional antibody-like compounds as a combined diagnostic and therapeutic agent
US5229275A (en) 1990-04-26 1993-07-20 Akzo N.V. In-vitro method for producing antigen-specific human monoclonal antibodies
US5122469A (en) 1990-10-03 1992-06-16 Genentech, Inc. Method for culturing Chinese hamster ovary cells to improve production of recombinant proteins
US5571894A (en) 1991-02-05 1996-11-05 Ciba-Geigy Corporation Recombinant antibodies specific for a growth factor receptor
WO1992022653A1 (en) 1991-06-14 1992-12-23 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
ES2136092T3 (es) 1991-09-23 1999-11-16 Medical Res Council Procedimientos para la produccion de anticuerpos humanizados.
US5587458A (en) 1991-10-07 1996-12-24 Aronex Pharmaceuticals, Inc. Anti-erbB-2 antibodies, combinations thereof, and therapeutic and diagnostic uses thereof
WO1993008829A1 (en) 1991-11-04 1993-05-13 The Regents Of The University Of California Compositions that mediate killing of hiv-infected cells
CA2372813A1 (en) 1992-02-06 1993-08-19 L.L. Houston Biosynthetic binding protein for cancer marker
WO1993016177A1 (en) 1992-02-11 1993-08-19 Cell Genesys, Inc. Homogenotization of gene-targeting events
US5573905A (en) 1992-03-30 1996-11-12 The Scripps Research Institute Encoded combinatorial chemical libraries
CA2163345A1 (en) 1993-06-16 1994-12-22 Susan Adrienne Morgan Antibodies
US5534615A (en) 1994-04-25 1996-07-09 Genentech, Inc. Cardiac hypertrophy factor and uses therefor
US5945403A (en) 1997-05-30 1999-08-31 The Children's Medical Center Corporation Angiostatin fragments and method of use
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US6267958B1 (en) 1995-07-27 2001-07-31 Genentech, Inc. Protein formulation
GB9603256D0 (en) 1996-02-16 1996-04-17 Wellcome Found Antibodies
US6171586B1 (en) 1997-06-13 2001-01-09 Genentech, Inc. Antibody formulation
AU757627B2 (en) 1997-06-24 2003-02-27 Genentech Inc. Methods and compositions for galactosylated glycoproteins
US6503184B1 (en) 1997-10-21 2003-01-07 Human Genome Sciences, Inc. Human tumor necrosis factor receptor-like proteins TR11, TR11SV1 and TR11SV2
ATE419009T1 (de) 1997-10-31 2009-01-15 Genentech Inc Methoden und zusammensetzungen bestehend aus glykoprotein-glykoformen
DE69937291T2 (de) 1998-04-02 2008-07-10 Genentech, Inc., South San Francisco Antikörpervarianten und fragmente davon
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
DK2180007T4 (da) 1998-04-20 2017-11-27 Roche Glycart Ag Glycosyleringsteknik for antistoffer til forbedring af antistofafhængig cellecytotoxicitet
GB9809951D0 (en) 1998-05-08 1998-07-08 Univ Cambridge Tech Binding molecules
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
KR20060067983A (ko) 1999-01-15 2006-06-20 제넨테크, 인크. 효과기 기능이 변화된 폴리펩티드 변이체
US7534866B2 (en) 2005-10-19 2009-05-19 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for generating bioactive assemblies of increased complexity and uses
US7527787B2 (en) 2005-10-19 2009-05-05 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Multivalent immunoglobulin-based bioactive assemblies
US7550143B2 (en) 2005-04-06 2009-06-23 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Methods for generating stably linked complexes composed of homodimers, homotetramers or dimers of dimers and uses
EP1272647B1 (en) 2000-04-11 2014-11-12 Genentech, Inc. Multivalent antibodies and uses therefor
EP1189379A1 (en) 2000-09-14 2002-03-20 Alcatel Method and system for enhancing channel capacity in a point to multipoint radio communications system
US7064191B2 (en) 2000-10-06 2006-06-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Process for purifying antibody
US6946292B2 (en) 2000-10-06 2005-09-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity
US20030119056A1 (en) 2000-12-18 2003-06-26 Ladner Robert Charles Focused libraries of genetic packages
US20030133936A1 (en) 2001-07-12 2003-07-17 Byrne Michael Chapman CD25markers and uses thereof
NZ592087A (en) 2001-08-03 2012-11-30 Roche Glycart Ag Antibody glycosylation variants having increased antibody-dependent cellular cytotoxicity
AU2002337935B2 (en) 2001-10-25 2008-05-01 Genentech, Inc. Glycoprotein compositions
US6579430B2 (en) 2001-11-02 2003-06-17 Innovative Technology Licensing, Llc Semiconductor wafer plating cathode assembly
US6715202B2 (en) 2001-11-02 2004-04-06 American Standard International Inc. Tube bender for forming serpentine heat exchangers from spine fin tubing
US20030215914A1 (en) 2001-12-10 2003-11-20 Erwin Houtzager Structure for presenting desired peptide sequences
US20040093621A1 (en) 2001-12-25 2004-05-13 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd Antibody composition which specifically binds to CD20
AUPS054702A0 (en) 2002-02-14 2002-03-07 Immunaid Pty Ltd Cancer therapy
ES2362419T3 (es) 2002-04-09 2011-07-05 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Células con depresión o deleción de la actividad de la proteína que participa en el transporte de gdp-fucosa.
EP1498490A4 (en) 2002-04-09 2006-11-29 Kyowa Hakko Kogyo Kk PROCESS FOR PREPARING ANTIBODY COMPOSITION
AU2003236017B2 (en) 2002-04-09 2009-03-26 Kyowa Kirin Co., Ltd. Drug containing antibody composition
WO2003085107A1 (fr) 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cellules à génome modifié
US7361740B2 (en) 2002-10-15 2008-04-22 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
PT1572744E (pt) 2002-12-16 2010-09-07 Genentech Inc Variantes de imunoglobulina e utilizações destas
AU2003303339A1 (en) 2002-12-20 2004-07-22 Biogen Idec Ma Inc. Lymphotoxin beta receptor agents in combination with chemotherapeutic agents
BRPI0410785A (pt) * 2003-05-23 2006-06-20 Wyeth Corp molécula de ácido nucleico isolada, célula hospedeira, animal transgênico não humano, proteìna isolada, oligonucleotìdeo anti-sentido, molécula de sirna, anticorpo isolado, métodos de triagem quanto aos compostos de teste capazes de inibir, de intensificar ou imitar a interação do gitrl com o gitr, para diagnosticar doenças, para tratar um paciente em risco ou diagnosticado com uma doença, para induzir e para inibir a proliferação de uma população celular contendo células t efetoras, de bloquear a supressão e de supressão de uma população celular que inclua células t efetoras na presença de células t reguladoras cd4+cd25+, e para tratar uma doença, composição farmacêutica, e, adjuvante de vacina
US20050048054A1 (en) 2003-07-11 2005-03-03 Shino Hanabuchi Lymphocytes; methods
WO2005007150A2 (en) 2003-07-17 2005-01-27 Bar-Ilan University Method for inhibiting protein synthesis in sperm
US6864697B1 (en) 2003-08-06 2005-03-08 Taiwan Semiconductor Manufacturing Co. Ltd Flip-over alignment station for probe needle adjustment
US20050035586A1 (en) 2003-08-12 2005-02-17 Martin Samuel V. Magnetically pulse welded underbody
JP2005081663A (ja) 2003-09-08 2005-03-31 Nissan Motor Co Ltd 樹脂製チューブ及び燃料系配管用チューブ
SG10202008722QA (en) 2003-11-05 2020-10-29 Roche Glycart Ag Cd20 antibodies with increased fc receptor binding affinity and effector function
EP2360186B1 (en) 2004-04-13 2017-08-30 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-P-selectin antibodies
WO2006083289A2 (en) 2004-06-04 2006-08-10 Duke University Methods and compositions for enhancement of immunity by in vivo depletion of immunosuppressive cell activity
TWI380996B (zh) 2004-09-17 2013-01-01 Hoffmann La Roche 抗ｏｘ４０ｌ抗體
CA2580141C (en) 2004-09-23 2013-12-10 Genentech, Inc. Cysteine engineered antibodies and conjugates
JO3000B1 (ar) 2004-10-20 2016-09-05 Genentech Inc مركبات أجسام مضادة .
DK1866339T3 (da) 2005-03-25 2013-09-02 Gitr Inc GTR-bindende molekyler og anvendelser heraf
JP5011277B2 (ja) 2005-04-06 2012-08-29 アイビーシー・ファーマシューティカルズ・インコーポレーテッド ホモダイマー、ホモテトラマーまたはダイマーのダイマーのからなる安定に連結された複合体を発生させるための方法および使用
US7612181B2 (en) 2005-08-19 2009-11-03 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
WO2007060918A1 (ja) 2005-11-24 2007-05-31 Dainippon Sumitomo Pharma Co., Ltd. 新規なメモリーｃｔｌ誘導増強剤
WO2008027236A2 (en) 2006-08-30 2008-03-06 Genentech, Inc. Multispecific antibodies
US20080226635A1 (en) 2006-12-22 2008-09-18 Hans Koll Antibodies against insulin-like growth factor I receptor and uses thereof
CN101801413A (zh) 2007-07-12 2010-08-11 托勒克斯股份有限公司 采用gitr结合分子的联合疗法
US8877688B2 (en) 2007-09-14 2014-11-04 Adimab, Llc Rationally designed, synthetic antibody libraries and uses therefor
BRPI0816785A2 (pt) 2007-09-14 2017-05-02 Adimab Inc bibliotecas de anticorpos sintéticos racionalmente desenhadas, e, usos para as mesmas
HUE028536T2 (en) 2008-01-07 2016-12-28 Amgen Inc Method for producing antibody to FC heterodimer molecules using electrostatic control effects
US8709424B2 (en) 2009-09-03 2014-04-29 Merck Sharp & Dohme Corp. Anti-GITR antibodies
BR112012012873B1 (pt) 2009-12-22 2021-08-31 F.Hoffmann-La Roche Ag Método para fornecer uma sequência de ácido nucleico que codifica uma imunoglobulina e método para produzir uma imunoglobulina
KR102024922B1 (ko) 2010-07-16 2019-09-25 아디맵 엘엘씨 항체 라이브러리
SI2785375T1 (sl) 2011-11-28 2020-11-30 Merck Patent Gmbh Protitelesa proti PD-L1 in uporabe le-teh
SG10201702396QA (en) 2012-03-28 2017-04-27 Sanofi Sa Antibodies to bradykinin b1 receptor ligands
RU2016129959A (ru) 2013-12-30 2018-02-02 Эпимаб Биотерепьютикс Инк. Иммуноглобулин с тандемным расположением fab-фрагментов и его применение
CN110658340B (zh) * 2015-01-08 2023-10-31 苏州康宁杰瑞生物科技有限公司 具有共同轻链的双特异性抗体或抗体混合物
IL299072A (en) * 2015-12-02 2023-02-01 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Antibodies and methods for using them

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2015184099A1 (en) * 2014-05-28 2015-12-03 4-Antibody Ag Anti-gitr antibodies and methods of use thereof

Also Published As

Publication number Publication date
CO2019006424A2 (es) 2019-08-20
WO2018094300A8 (en) 2019-05-02
IL266720A (en) 2019-07-31
RU2019118800A (ru) 2020-12-21
JOP20190100A1 (ar) 2019-05-01
JP2019537449A (ja) 2019-12-26
PH12019501108A1 (en) 2019-07-29
CN110248960A (zh) 2019-09-17
US20210269542A1 (en) 2021-09-02
MA46844A (fr) 2019-09-25
US10988545B2 (en) 2021-04-27
KR102574071B1 (ko) 2023-09-06
KR20190095298A (ko) 2019-08-14
RU2019118800A3 (zh) 2021-03-23
EP3541845A1 (en) 2019-09-25
ZA201902939B (en) 2022-08-31
MX2019005821A (es) 2019-10-07
UA126389C2 (uk) 2022-09-28
AU2017362721A1 (en) 2019-05-23
WO2018094300A1 (en) 2018-05-24
BR112019010128A2 (pt) 2019-10-08
TW201819416A (zh) 2018-06-01
US20180208665A1 (en) 2018-07-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11590224B2 (en) Anti-TIGIT antigen-binding proteins and methods of uses thereof
TWI783953B (zh) 抗－ｇｉｔｒ抗原－結合蛋白及其使用方法
TWI797100B (zh) 抗－神經纖毛蛋白質(neuropilin)抗原－結合蛋白及其使用方法
JP7335164B2 (ja) 抗ｔｉｇｉｔ抗原結合タンパク質及びその使用方法
CA3042727A1 (en) Anti-gitr antigen-binding proteins and methods of use thereof
JP7572147B2 (ja) 抗ｇｉｔｒ抗原結合タンパク質およびその使用方法
RU2795625C2 (ru) Антигенсвязывающие белки против gitr и способы их применения
RU2776714C2 (ru) Антигенсвязывающие белки против tigit и способы их применения
EA045991B1 (ru) Антигенсвязывающие белки против нейропилина и способы их применения