JP2019218349A - ハイブリドソーム、それを含む組成物、それらの製造方法、およびその使用 - Google Patents
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Abstract
Description
(a)少なくとも一つの膜融合性部分を有する少なくとも一つのEDEMまたはそのEDEMを含む組成物を提供する工程;
(b)少なくとも一つのBDMまたはそのBDMを含む組成物を提供する工程;
(c)前記少なくとも一つのEDEMを前記少なくとも一つのBDMと、7.4より低いpHおよび0℃〜60℃の間の温度で接触させて、それにより前記少なくとも一つのEDEMを前記少なくとも一つのBDMと統合させて、前記ハイブリドソームを生産する工程;ならびに、任意に、
(d)非融合EDEMおよび/またはBDMから前記ハイブリドソームを精製する工程を含む、方法を提供する。
(a)少なくとも一つの膜融合性部分を有する少なくとも一つのEDEMまたはそのEDEMを含む組成物を提供する工程;
(b)少なくとも一つのBDMまたはそのBDMを含む組成物を提供する工程;
(c)前記少なくとも一つのEDEMを前記少なくとも一つのBDMと、7.4より低いpHおよび0℃〜60℃の間の温度で接触させて、それにより前記少なくとも一つのEDEMを前記少なくとも一つのBDMと統合させて、前記ハイブリドソームを生産する工程;ならびに、任意に、
(d)非融合EDEMおよび/またはBDMから前記ハイブリドソームを精製する工程を含む、方法を提供する。
加工および薬物カプセル化モジュールとしてのiLNPの製造
実施例1〜4のための材料と方法
A)化学物質
1,2−ジステアロイル−sn−グリセロ−3−ホスホエタノールアミン−N−[アミノ(ポリエチレン−グリコール)−2000](アミン−PEG−DSPE)、[1,2−ジオレオイル−sn−グリセロ−3−ホスホエタノールアミン−N−(7−ニトロ−2−1,3−ベンゾオキサジアゾール−4−イル)](NBD−PE)、1,2−ジステアロイル−sn−グリセロ−3−ホスホエタノールアミン−N−[マレイミド(ポリエチレングリコール)−2000](mal−PEG−DSPE)、ジステアロイル−ホスファチジルコリン(DSPC)、1,2−ジオレオイル−3−ジメチルアンモニウム−プロパン(DODAP)、N−パルミトイル−スフィンゴシン−1−サクシニル[メトキシ(ポリエチレングリコール)2000](PEG−Cer)、およびコレステロールは、Avanti Polar Lipids(Alabaster、AL)から購入した。1,2−ジリノレイルオキシ−3−ジメチルアミノプロパン(DLinDMA)とPEG−脂質の合成は過去に記載されている(Heyes、Palmer、Bremner&MacLachlan、2005年)。
プレフォームド小胞の調製:小胞の望ましい特性に依存して、イオン化可能なカチオン性脂質(DLinDMAまたはDODAP)、DSPC、コレステロール、およびPEG−脂質(PEG−s−DMGまたはPEG−Cer)を、エタノール中に適切なモル比(例、40:17.5:40:2.5)で可溶化した。小胞を形成させるために、終濃度が約10mMおよびエタノール対水の比が3:7に到達するまで、ボルテックス下で低pHの水性バッファー(50mMアセテート、pH4)中に、脂質製剤を混合した。生成された多層小胞を、その後、室温でMini−Extruder(ミニ押出機)(Avanti製)を使用して、二つの積層した80nmまたは100nm孔サイズNuclepore(商標)ポリカーボネートフィルターを通して押出成形した。
高速混合ミクロ流体システムを採用することによるsiRNA充填脂質ナノ粒子の調製:製造事業者の取扱説明書に従って、Nanoassemblr(商標)ミクロ流体システム(Precision NanoSystems社)で、脂質ナノ粒子を調製した。所望の製剤に依存して、プレフォームド小胞法のエタノール溶液に類似する溶液(DLinDMA、コレステロール、DSPC、およびPEG−脂質が適切なモル比(例、40:40:18:2)からなるもの)を、総脂質が10mMの濃度で調製した。さらにまた、siRNA対脂質の比(wt/wt)が1:16である水性siRNA溶液を、25mMアセテートバッファー(pH4.0)中に調製した。総製造量に依存するが、1および3mlシリンジを用いて、総流速が12ml/分の投入口流を作り出した。各製剤に関して、水性siRNA溶液を、室温で流速比が3:1(Aq:Et)となるようにエタノール−脂質溶液と混ぜた。生成物を、その後、PBSに対して透析して、残存エタノールを除去すると共にpHを7.4へと上昇させた。そして、上記プレフォームド小胞法を用いて説明したように遊離siRNAを除去した。
生体適合性送達モジュールとしての細胞外小胞(EV)の単離
エキソソーム:エキソソームを、分画遠心法(Theryら(Thery、Amigorena、Raposo&Clayton、2006年)により過去に記載されるもの)によって、マントル細胞リンパ腫細胞株(MCL−exo)とグリオブラストーマ細胞株(GBM−exo)の上清から単離した。エキソソームは、その後、BCA(商標)タンパク質アッセイキット(Pierce−Thermo Fisher Scientific社)を使用してタンパク質含量の測定を行った。そして、エキソソームのアリコートを−80℃で保存した。さらに精製するために、エキソソームのペレットを、PBS中に溶解し、標準的手順を使用して、ショ糖クッションの上に層とした。
PEG化脂質をFab’断片、抗体断片、ペプチド、およびグリコサミノグリカンと連結することによるiLNPの表面修飾
還元型抗体、Fab’断片、融合ペプチド、およびグリコサミノグリカンを、iLNP膜中にアンカーされているPEG化脂質へと結合することによって、iLNPの加工適合性を実証した。実施例1の製剤と比較すると、0.5モル%のPEG化脂質を、PEGの遠位端にマレイミド基またはアミン基を有するPEG修飾脂質で代替した。(1)遠位PEG末端のマレイミド基と還元型抗体、Fab’断片、または末端にチオール基を有するペプチドのフリーなチオール基との間、(2)遠位PEG末端のアミン基とグリコサミノグリカン(GAG)のグリコサミノグリカン鎖上の活性化カルボキシル基との間の反応に基づく標準的手順に従って、結合を実施した。
Fab’断片:第一に、供給元の説明書に記述されている終濃度の1/5を使用して、2−メルカプトエタノール(MEA)(Pierce−Thermo Fisher Scientific社)を用いて、抗CD38 F(ab)2断片を還元した。60μgのF(ab)2を、37℃で90分間、反応液(1mMのEDTA、PBS)中、10mMのMEAとインキュベーションした。Zeba(商標)スピン脱塩カラム(Pierce−Thermo Fisher Scientific社)を使って、反応バッファーへバッファー交換して、MEAを除去した。siRNAを充填したiLNPを(mal:Fab’の比が2:1で)すぐに加えて、そして、一晩4℃でプレートを振とうしてインキュベーションした。非結合抗体/断片を、PBS(pH7.4)で平衡化したSepharose CL−4Bカラム上で分離した。Fab’断片を含む画分を、280nmでの吸光度測定値から決定し、一緒にプールして、そして、10kDa遠心分離フィルター(Amicon(登録商標)ウルトラ−0.5、Merck Millipore社)中で濃縮した。非還元条件下で、ゲル電気泳動(SDS−PAGE)(10%アクリルアミドを使用するもの)を実施して、F(ab)2からFab’へと還元する過程の後のFab’断片の完全性を確認した。
iLNPとインビボで分泌されるEVの特徴解析
実施例1、2、および3で記載したようにiLNPの製造とEVの単離の後、標準的手順を使用し、DLS(Zetasizer NS、Malvern)およびNTA(LM20、Nanosight)を使用してiLNPとEVのサイズ分布を記録した。表1に示すように、平均サイズは、積み荷のカプセル化またはiLNPの表面修飾に伴って増加した。合成条件の制御に起因して、iLNPは多分散指数(PDI)が低く(それは鋭く単一の最頻値を有するNTAサイズ分布にも反映されている)作製可能である。分泌小胞としてのエキソソームは固有の多分散度を有する。図3に示すように、NTA解析の単粒子法は、空のiLNPに関しては単一の最頻値を有するサイズ分布を示し、そして、GBM−exoは互いに異なるサイズの亜集団があるのを明らかにする。
BDMとEDEMの相互作用の開始の制御
iLNPとエキソソームとの間の相互作用がpH環境の変化によって誘導可能であるかどうかを検証した。図4に示すように、iLNP/エキソソーム溶液の平均直径は、融合バッファー(10mMのMES(pH5.5)、145mMのNaCl、5mMのKCl)中で増加するが、pH7.4では有意な変化は明確でない。DLS測定は全体的効果の性状なので、二つのサブユニット間の相互作用の存在を明確に推定することは難しい。従って、次に焦点を、エキソソームとiLNPの両者の脂質膜間の相互作用に向けた。
単粒子上で精査されるBMDとEDEMの相互作用
検証の次の焦点は、単粒子レベルでのエキソソームとiLNPとの間の相互作用である。エキソソームタンパク質とリポソーム膜との混合物を含む粒子の時間的出現を、蛍光相互相関分光法(FCCS)装置中で定量した。FCCS測定の準備のため、iLNP膜を親油性Bodipy(商標)(630/650)で標識する一方、エキソソーム表面タンパク質をBodipy(商標)NHSエステル(493/502)と結合することによって標識した。エキソソームとiLNPの両者を、その後、相当な粒子数で融合バッファー中で混合した。そして、両方のチャネルでの相関する強度変動の出現を記録した。両方の検出器上の同調シグナルは、凝集または融合エキソソームとiLNPを示す一方、個々の粒子は時間的に独立したシグナルを生成する。図10では、エキソソーム−Bodipy(493)とiLNP−Bodipy(630)を混ぜた際の相互相関度(θ)の増加を経時的に示す。緑と赤のチャネル間の相関は、二種類の粒子を混合直後には観察されなかった。8分間の時間推移に渡って、個々の粒子の相互相関度は、0%から約70%へと増加した。これは、調査した粒子の総蛍光バーストの70%近くがエキソソーム表面タンパク質およびリポソーム膜を示すことを意味する。
膜融合性EDEMとBDMが融合してハイブリドソームを形成する
単純凝集、構造破壊、または脂質交換に起因する偽陽性融合アッセイである可能性を排除するために、pH5.5での積み荷の無いiLNP/エキソソーム混合物の平均サイズおよびサイズ分布を、DLSとNTAを介して複数の異なる時点で記録した。同一の実験条件を使用して、z−平均の平均サイズを10時間モニターした。図11に示すように、混合の最初の1時間内では、平均粒子サイズが急激に増加し、次の9時間に渡ってはほとんど変化しないままであった。凝集の場合、互いに逆に帯電した小胞は静電的な構造物へと連続的に凝集する能力を有するが、この場合はそれには当たらない。凝集でないことをさらに示すことは、直径増加の程度である。二つの融合球体の体積は半径に伴ってある割合で増加し、その様式は、85nmと130nmの球体の融合により141nmの粒子が生じ得るということである。他方、凝集では、凝集物に連結する球体がさらにあるごとに直線的に半径が増加する。このことは、サブユニットの直径の倍数の範囲での大きな直径増加としてはっきり表れるであろう。このことはさらに図12で示されるように支持される。融合バッファー(室温で保存されたもの)中のsiRNA−iLNPとMCL−exosとの混合物は、9日間に渡って平均直径の有意な増加を示さなかった。
ハイブリドソーム媒介遺伝子導入はGFP発現を導く
遺伝子の積み荷をハイブリドソームを介して送達することの機能性を実証するために、GBM細胞株エキソソームとGFPプラスミドをカプセル化したiLNPとからハイブリドソームを製造した。試験製剤をトランスフェクトしたGBM細胞中でのレポーターGFPの発現を、フローサイトメトリーおよび共焦点顕微鏡解析によって解析した。細胞(前日に50,000細胞を播種したもの)に、iLNP(ウエル当たり500ngのGFP−pDNA)と積み荷を有するハイブリドソーム(ウエル当たり5μgの総タンパク質/500ngのGFP−pDNA)をトランスフェクトした。ハイブリドソームは、トランスフェクション前にエキソソームをpDNA−iLNPと融合バッファー中で30分間混合して製造した。トランスフェクションがエキソソーム誘導性エンドサイトーシスのために偶然にiLNPの内在化が起こった結果であることを排除するために、細胞に、また、非融合iLNP(ウエル当たり500ngのGFP−pDNA)とエキソソーム(ウエル当たり5μgのタンパク質)とをコトランスフェクトした。0.5、1、2、または24時間のトランスフェクション時間後、細胞をPBSで二回洗浄し、新鮮な培地を加え、そして、細胞を72時間培養した。GFP発現細胞の量をフローサイトメトリーで解析した(図15参照)。ハイブリドソームは、pDNA−iLNPまたはエキソソームとコトランスフェクトした非融合型pDNA−iLNPと比較すると、より高いトランスフェクション率を示す。
ハイブリドソームの精製
トランスフェクション実験において非融合iLNPの干渉を除外するために、連続性ショ糖密度勾配遠心分離によって、非融合iLNPをハイブリドソームから分離した。pDNA−iLNPの密度を測定するために、pDNA−iLNPを0〜55%ショ糖(重量/体積)連続性勾配上で遠心分離し(190,000g、14時間)、そして、カラム分画を行った。ショ糖画分の密度を、屈折率測定器で測定し、そして、粒子の存在をDLSでの光子数により解析した。データは、pDNA−iLNPの最大密度が1.05g/mlであることを示す(図16参照)。
ハイブリドソーム上の外因性標的化部分
IgGで表面を修飾した上記iLNPを使用して、表面にIgG断片を有するハイブリドソームを調製した。実施例9におけるプラスミドを充填したハイブリドソームの濃縮と同様に、IgGが繋がれているiLNPをGBM由来エキソソームと融合バッファー中で30分間(脂質対エキソソームタンパク質の重量比が6:1で)混合し、そして、非融合iLNPをショ糖勾配にて分離した。粒子層は、密度が1.12〜1.14g/mlの所に視認された(プラスミドを搭載したハイブリドソームがRf=0.36だったのに対して、Rf=0.62であった)。1.08g/mlより下にある画分をプールし、そして、PBSに対して透析することによって残存ショ糖を除去した。10%アクリルアミドを使用するゲル電気泳動(SDS−PAGE)を非還元条件下で実行してIgGとエキソソームタンパク質の両者の存在を確認した。
汎用性ハイブリドソーム用の多様なEDEM
EDEMの積み荷または表面修飾を変えることによって異なるハイブリドソームを製造する能力を、2つのタイプの融合アッセイによって決定した。
汎用性ハイブリドソーム用の生体適合性送達モジュールとしての細胞外小胞
各種型の細胞により分泌される微小胞と様々なiLNPとの間の融合をR18融合アッセイによって測定した。
トランスフェクトするのが難しい細胞におけるハイブリドソームの細胞取り込み
蛍光顕微鏡観察を行って、トランスフェクトするのが難しいリンパ球細胞株(Jeko1)によるハイブリドソームの細胞取り込みを測定した。ハイブリドソームをMCL−exoとNBD標識iLNP(iLNP製剤はDlinDMA:Chol:DSPC:PEG−S−DMG:NBD−PCが40:40:17.5:2:0.5で製剤化したもの)から調製した。MCL−Exo(ウエル当たり2μgの総タンパク質)をNBD標識iLNP(ウエル当たり1μgの総タンパク質)と反応バッファー(10mMのMES(pH6.0)、145mMのNaCl、5mMのKCl)中で混合し、そして、37℃で30分間、振とう機上でインキュベーションした。
Bao,G.,Mitragotri,S.,&Tong,S.(2013).Multifunctional nanoparticles for drug delivery and molecular imaging.Annual Review of Biomedical Engineering,15,253-82.doi:10.1146/annurev−bioeng−071812−15240
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Claims (211)
- 少なくとも一つの生体適合性送達モジュール(BDM)と少なくとも一つの調整可能な膜融合性部分を含む少なくとも一つの加工薬物カプセル化モジュール(EDEM)とを起源とする構造要素および生理活性要素を含むハイブリッド生体適合性担体(ハイブリドソーム)。
- 前記少なくとも一つのBDMがエキソソーム、エクトソーム、微小胞、およびアポトーシス小体からなる群より選択される、請求項1に記載のハイブリドソーム。
- 前記少なくとも一つのEDEMが、脂質系ナノ粒子(LNP)、リポソーム、ポリマー安定化LNP、セラソーム、スフィンゴソーム、ニオソーム、ポリマーソーム、合成ナノ粒子安定化LNP、コア−シェル型脂質−ポリマーハイブリッドナノ粒子、天然膜由来LNP、迅速に除去される脂質ナノ粒子(reLNP)、および天然膜でコーティングされたLNPからなる群より選択される、請求項1に記載のハイブリドソーム。
- 前記少なくとも一つの調整可能な膜融合性部分が、イオン化可能なカチオン性脂質、膜融合性脂質、pH応答性ポリマー、ヘルパー脂質、および膜融合性標的化部分からなる群より選択される、請求項1に記載のハイブリドソーム。
- 前記イオン化可能なカチオン性脂質が、1,2−ジリノレイルオキシ−N,N−ジメチルアミノプロパン(DLinDMA)、2,2−ジリノレイル−4−(2−ジメチルアミノエチル)−[1,3]−ジオキソラン(DLin−KC2−DMA)、ヘプタトリアコンタ−6,9,28,31−テトラエン−19−イル4−(ジメチルアミノ)ブタノエート(DLin−MC3−DMA)、ジオクタデシル−ジメチルアンモニウム(DODMA)、ジステアリルジメチルアンモニウム(DSDMA)、N,N−ジオレイル−N,N−ジメチル−塩化アンモニウム(DODAC);N−(2,3−ジオレイルオキシ)プロピル)−N,N,N−トリメチル−塩化アンモニウム(DOTMA);1,2−ジオレオイル−3−ジメチルアンモニウム−プロパン(DODAP)、N−(4−カルボキシベンジル)−N,N−ジメチル−2,3−ビス(オレオイルオキシ)プロパン−1−アミニウム(DOBAQ)、YSK05、4−(((2,3−ビス(オレオイルオキシ)プロピル)−(メチル)アミノ)メチル)安息香酸(DOBAT)、N−(4−カルボキシベンジル)−N,N−ジメチル−2,3−ビス(オレオイルオキシ)プロパン−1−アミニウム(DOBAQ)、3−((2,3−ビス(オレオイルオキシ)プロピル)(メチル)アミノ)プロパン酸(DOPAT)、N−(2−カルボキシプロピル)−N,N−ジメチル−2,3−ビス−(オレオイルオキシ)−プロパン−1−アミニウム(DOMPAQ)、N−カルボキシメチル)−N,N−ジメチル−2,3−ビス(オレオイルオキシ)プロパン−1−アミニウム(DOAAQ)、アルニー(Alny)−100、3−(ジメチルアミノ)−プロピル(12Z,15Z)−3−[(9Z,12Z)−オクタデカ−9,12−ジエン−1−イル]−ヘニコサ−12,15−ジエノエート(DMAP−BLP)、3−(N−(N’,N’−ジメチルアミノエタン)−カルバモイル)コレステロール(DC−Chol)、および、イオン化可能なアミノ脂質の誘導体からなる群より選択される、請求項4に記載のハイブリドソーム。
- 前記膜融合性脂質が、pH感受性脂質、温度感受性脂質、および円錐形成脂質からなる群より選択される、請求項4に記載のハイブリドソーム。
- 前記pH応答性ポリマーが、アルキルアクリル酸のホモポリマー、エチルアクリル酸のコポリマー、アルキルアミンのポリマー、およびメチルビニルエーテルまたはスチレンを有する無水マレイン酸コポリマーのアルキルアルコール誘導体からなる群より選択される、請求項4に記載のハイブリドソーム。
- 前記pH応答性ポリマーが、直鎖ポリマー、非直鎖ポリマー、分岐ポリマー、ブラシ型ポリマー、スターポリマー、デンドリマーポリマー、架橋ポリマー、半架橋ポリマー、グラフトポリマー、およびその組み合わせからなる群より選択される、請求項4に記載のハイブリドソーム。
- 前記ヘルパー脂質が、コレステロール、1,2−ジステアロイル−sn−グリセロ−3−ホスホコリン(DSPC)、ジステアロイル−ホスファチジルコリン(DSPC)、ジオレオイル−ホスファチジルコリン(DOPC)、ジパルミトイル−ホスファチジルコリン(DPPC)、ジオレオイル−ホスファチジルグリセロール(DOPG)、ジパルミトイル−ホスファチジルグリセロール(DPPG)、ジオレオイル−ホスファチジルエタノールアミン(DOPE)、パルミトイルオレオイル−ホスファチジルコリン(POPC)、パルミトイルオレオイル−ホスファチジルエタノールアミン(POPE)、ならびに、ジオレオイル−ホスファチジル−エタノールアミン、ジパルミトイル−ホスファチジル−エタノールアミン(DPPE)、ジミリストイルホスホ−エタノールアミン(DMPE)、ジステアロイル−ホスファチジル−エタノールアミン(DSPE)、16−O−モノメチルPE、16−O−ジメチルPE、18−1−トランスPE、1−ステアリオイル−2−オレオイル−ホスファチジルエタノールアミン(SOPE)、1,2−ジエライドイル−sn−グリセロ−3−ホスホエタノールアミン(トランスDOPE)、ホスファチジルグリセロール、ジアシルホスファチジルセリン、カルジオリピン、およびアニオン性修飾基で修飾された中性脂質からなる群より選択される、請求項4に記載のハイブリドソーム。
- 前記少なくとも一つのEDEMが、抗体またはその断片、抗体様分子、ペプチド、タンパク質、アプタマー、オリゴヌクレオチド、糖、ポリサッカライド、およびビタミンからなる群より選択される一又は複数の標的化部分を含む、請求項1に記載のハイブリドソーム。
- 前記標的化部分が標的細胞の細胞表面上の部分に結合する、請求項10に記載のハイブリドソーム。
- 前記標的化部分がCD38またはヘパラン硫酸プロテオグリカンに結合する、請求項11に記載のハイブリドソーム。
- 前記標的化部分が細胞内器官標的に結合する、請求項10に記載のハイブリドソーム。
- 前記標的化部分が核移行配列含有ペプチドまたはリソソーム向性オクタデシルローダミンBからなる群より選択される、請求項13に記載のハイブリドソーム。
- 前記少なくとも一つのEDEMがその表面上に一又は複数の細胞透過性ペプチドを含む、請求項1に記載のハイブリドソーム。
- 前記一又は複数の細胞透過性ペプチドがpH応答性である、請求項15に記載のハイブリドソーム。
- 前記一又は複数の細胞透過性ペプチドが、TAT、REV、クロタミン、およびメリチンからなる群より選択されるタンパク質に由来する、請求項15に記載のハイブリドソーム。
- 前記少なくとも一つのEDEMがその表面にアンカーされる一又は複数の融合ペプチドを含む、請求項1に記載のハイブリドソーム。
- 前記融合ペプチドが可溶性N−エチルマレイミド感受性因子付着タンパク質受容体(SNAREタンパク質)およびその合成模倣物から選択される、請求項18に記載のハイブリドソーム。
- 前記少なくとも一つのEDEMが一又は複数のPEG修飾脂質を含む、請求項1に記載のハイブリドソーム。
- 前記PEG修飾脂質が標的化部分を結合するための官能基部分を含み、前記官能基部分がマレイミド基、アミン基、ビニルスルホン基、ピリジルジスルフィド基、カルボン酸基、アジド基、またはNHSエステル基である、請求項20に記載のハイブリドソーム。
- 前記少なくとも一つのEDEMがその脂質二重膜中に安定化部分を含む、請求項1に記載のハイブリドソーム。
- 前記安定化部分が、PEG修飾脂質、デンドリマー、ポリアルキレンオキサイド、ポリビニルアルコール、ポリカルボキシレート、ポリサッカライド、およびヒドロキシエチルデンプンからなる群より選択される、請求項22に記載のハイブリドソーム。
- 前記一又は複数のPEG修飾脂質が、PEG−リン脂質、PEG−修飾ホスファチジルエタノールアミン(PEG−PE)、PEG−修飾セラミド、PEG−修飾ジアルキルアミン、PEG−修飾ジアシルグリセロール、ポリエチレングリコールジパルミトイルグリセロール(PEG−DPG)、PEG−修飾ジアルキルグリセロール(メトキシポリエチレングリコール)−ジミリストイルグリセロール(PEG−s−DMG)、aPEG−ジアルキルオキシプロピル(DAA)、R−3−[(ω−メトキシ−ポリ(エチレングリコール)2000)カルバモイル)]−1,2−ジミリストイルオキシプロピル−3−アミン(PEG−c−DOMG)、およびN−アセチルガラクトサミン−((R)−2,3−ビス(オクタデシルオキシ)プロピル−1−(メトキシ−ポリ(エチレングリコール)2000)プロピルカルバメート))(GalNAc−PEG−DSG)からなる群より選択される、請求項20に記載のハイブリドソーム。
- 前記少なくとも一つのEDEMが、前記ハイブリドソームにカプセル化された内容物のエンドソームまたはリソソーム放出を促進するのに適するイオン化可能な親水性頭部基を有する脂質を含む、請求項1に記載のハイブリドソーム。
- 前記少なくとも一つのEDEMが、少なくとも一つの抗原をコードする少なくとも一つの修飾核酸分子および/またはmRNAを含む、請求項1に記載のハイブリドソーム。
- 前記少なくとも一つのEDEMが一又は複数のアジュバントを含む、請求項1に記載のハイブリドソーム。
- 前記少なくとも一つのEDEMが一又は複数の治療薬および一又は複数のアジュバントを含む、請求項1に記載のハイブリドソーム。
- 前記少なくとも一つのEDEMがウイルス由来のペプチド、断片、または領域に由来する少なくとも一つの外因性疾患関連抗原を含む、請求項1に記載のハイブリドソーム。
- 前記少なくとも一つのBDMが、がん等の病気または疾患に罹患する被験者に由来する、請求項1に記載のハイブリドソーム。
- 前記病気または疾患ががんである、請求項30に記載のハイブリドソーム。
- 前記少なくとも一つのBDMがB細胞またはグリオブラストーマ細胞に由来する、請求項1に記載のハイブリドソーム。
- 前記少なくとも一つのBDMが、がんまたは前がん患者の腫瘍細胞に由来するか、あるいは、腫瘍またはがん細胞株に由来する、請求項1に記載のハイブリドソーム。
- 前記少なくとも一つのBDMが病原体に由来する、請求項1に記載のハイブリドソーム。
- 前記病原体が細菌病原体、アメーバ病原体、寄生虫病原体、または真菌病原体である、請求項34に記載のハイブリドソーム。
- 前記少なくとも一つのBDMが抗原提示細胞、リンパ球、または白血球からなる群より選択される細胞に由来する、請求項1に記載のハイブリドソーム。
- 前記少なくとも一つのBDMが病原体感染細胞に由来する、請求項1に記載のハイブリドソーム。
- 前記少なくとも一つのBDMが変異タンパク質またはミスフォールドタンパク質を発現する変異細胞に由来する、請求項1に記載のハイブリドソーム。
- 前記少なくとも一つのBDMが細菌または寄生虫の外膜の破壊または小疱形成によって得られるプロテオリポソーム性小胞である、請求項1に記載のハイブリドソーム。
- 前記少なくとも一つのBDMがマントル細胞リンパ腫細胞に由来する、請求項1に記載のハイブリドソーム。
- 前記少なくとも一つのBDMが血小板、好中球、または活性化多形核好中球に由来する、請求項1に記載のハイブリドソーム。
- 治療薬または診断薬を含まない、請求項1に記載のハイブリドソーム。
- 一又は複数の治療薬を含む、請求項1に記載のハイブリドソーム。
- 一又は複数の診断薬を含む、請求項1に記載のハイブリドソーム。
- 腫瘍関連抗原、病原体関連抗原、または変性疾患関連抗原から選択される一又は複数の疾患関連抗原を含む、請求項1に記載のハイブリドソーム。
- 一又は複数の抗炎症剤を含む一又は複数の前記BDMを含む、請求項1に記載のハイブリドソーム。
- 前記BDMが、血小板および好中球の群より選択される細胞に由来する、請求項46に記載のハイブリドソーム。
- 一又は複数の免疫抑制剤を含む一又は複数の前記BDMを含む、請求項1に記載のハイブリドソーム。
- 前記BDMが多形核好中球に由来する、請求項48に記載のハイブリドソーム。
- 標的細胞へのさらにハイブリドソームの標的化/トランスフェクションを容易にする機能的ポリペプチドを生産するのに適する一又は複数の生理活性剤を含む、請求項1に記載のハイブリドソーム。
- 前記治療薬、診断薬、疾患関連抗原、および生理活性剤が、前記ハイブリドソームに埋め込み、カプセル化、または繋ぎ止められている、請求項43〜50のいずれか一項に記載のハイブリドソーム。
- 前記治療薬が薬物または医薬的に許容可能なその塩もしくは誘導体である、請求項43に記載のハイブリドソーム。
- 前記治療薬が、化学療法薬、麻酔薬、β−アドレナリンブロッカー、抗高血圧剤、抗うつ剤、抗けいれん剤、抗吐剤、抗ヒスタミン剤、抗不整脈剤、抗マラリア剤、抗増殖剤、抗血管新生剤、創傷修復剤、組織修復剤、温熱治療薬、免疫抑制剤、サイトカイン、細胞傷害性薬物、核溶解化合物、放射性同位元素、受容体、プロドラッグ活性化酵素、抗悪性腫瘍剤、抗感染剤、局所麻酔薬、抗アレルギー剤、抗貧血剤、血管新生阻害剤、β−アドレナリンブロッカー、カルシウムチャネル拮抗剤、抗高血圧剤、抗うつ剤、抗けいれん薬、抗細菌剤、抗真菌剤、抗ウイルス剤、抗リウマチ剤、駆虫薬、抗寄生虫剤、コルチコステロイド、ホルモン、ホルモン拮抗薬、免疫調整剤、神経伝達物質拮抗薬、抗糖尿病剤、抗てんかん薬、止血薬、抗高張剤、抗緑内障薬、免疫調整サイトカイン、鎮静剤、ケモカイン、ビタミン、毒素、催眠剤、植物に由来する薬剤、およびその組み合わせからなる群より選択される、請求項43に記載のハイブリドソーム。
- 前記治療薬が、ビンカアルカロイド、アントラサイクリン、およびRNA転写阻害剤からなる群より選択される、請求項43に記載のハイブリドソーム。
- 前記治療薬が、ナイトロジェンマスタード、ニトロソウレア、エチレンイミン、アルカンスルホン酸塩、テトラジン、白金化合物、ピリミジン類似体、プリン類似体、代謝拮抗剤、葉酸類似体、アントラサイクリン、タキサン、ビンカアルカロイド、およびトポイソメラーゼ阻害剤、ホルモン剤、アルキル化剤(例、シクロホスファミド);アルキルスルホン酸塩;アジリジン;エチレンイミンとメチルメラミン;代謝拮抗剤;ピリミジン類似体;アドレナリン拮抗剤;葉酸補充剤;レチノイン酸;および医薬的に許容可能なその塩、酸、または誘導体からなる群より選択されるがん化学療法薬である、請求項43に記載のハイブリドソーム。
- 前記治療薬が、抗エストロゲン剤および抗アンドロゲン剤ならびに医薬的に許容可能なその塩、酸、または誘導体からなる群より選択される抗ホルモン剤である、請求項43に記載のハイブリドソーム。
- 前記治療薬が、リンホカイン、モノカイン、ポリペプチドホルモン、成長ホルモン、副甲状腺ホルモン、チロキシン、インスリン、プロインスリン、リラキシン、プロリラキシン、糖タンパク質ホルモン、卵胞刺激ホルモン(FSH)、甲状腺刺激ホルモン(TSH)、黄体形成ホルモン(LH)、肝細胞増殖因子、繊維芽細胞増殖因子、プロラクチン、胎盤性ラクトゲン、腫瘍壊死因子−αおよび−β、ミューラー管阻害物質、マウスゴナドトロピン関連ペプチド、インヒビン、アクチビン、血管内皮細胞増殖因子、インテグリン、トロンボポエチン(TPO)、神経増殖因子、NGF−β、血小板増殖因子、トランスフォーミング増殖因子(TGF)、TGF−α、TGF−β、インスリン様成長因子−IおよびII、エリスロポエチン(EPO)、骨誘導性因子、インターフェロン(例、インターフェロン−α、βおよびγ)、コロニー刺激因子(CSF)、マクロファージ−CSF(M−CSF)、顆粒球−マクロファージ−CSF(GM−CSF)、顆粒球−CSF(GCSF)、インターロイキン(IL)、腫瘍壊死因子、TNF−α、TNF−β、LIF、およびキットリガンド(KL)からなる群より選択されるサイトカインである、請求項43に記載のハイブリドソーム。
- 前記治療薬が、抗体ベースの治療薬である、請求項43に記載のハイブリドソーム。
- 前記抗体ベースの治療薬が、ハーセプチン(Herceptin)、アービタックス(Erbitux)、アバスチン(Avastin)、リツキサン(Rituxan)、シムレクト(Simulect)、エンブレル(Enbrel)、アダリムマブ(Adalimumab)、およびレミケード(Remicade)からなる群より選択される、請求項58に記載のハイブリドソーム。
- 前記治療薬が、金、銀、酸化鉄、量子ドット、およびカーボンナノチューブからなる群より選択されるナノ粒子である、請求項43に記載のハイブリドソーム。
- 前記治療薬が、オリゴヌクレオチド、核酸、修飾核酸、タンパク質−核酸、負帯電基を有するタンパク質およびペプチド、負帯電基を有する植物アルカロイドおよび類似体、ならびにアニオン性基で修飾される薬物からなる群より選択されるアニオン性治療薬である、請求項43に記載のハイブリドソーム。
- 前記核酸が、低分子干渉RNA(siRNA)、アンチセンスRNA、マイクロRNA(miRNA)、スモールまたはショートヘアピンRNA(shRNA)、ガイドRNA(gRNA)、CRISPR(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeat)RNA(crRNA)、トランス活性化CRISPR RNA(tracrRNA)、免疫刺激性オリゴヌクレオチド、プラスミド、アンチセンス核酸、およびリボザイムからなる群より選択される、請求項61に記載のハイブリドソーム。
- 前記治療薬および/または診断薬が、ペプチド、タンパク質、核酸(siRNA、mRNA、およびDNAを含む)、炭水化物、および小分子からなる群より選択される、請求項43または44に記載のハイブリドソーム。
- 前記治療薬および/または診断薬が、治療用核酸および診断用無機ナノ粒子の合剤である、請求項63に記載のハイブリドソーム。
- 前記核酸がプラスミドである、請求項64に記載のハイブリドソーム。
- 前記無機ナノ粒子が金ナノ粒子である、請求項64に記載のハイブリドソーム。
- 前記診断薬が、哺乳類またはヒト等の動物の身体の標的部位に関する撮像情報を提供する物質である、請求項44に記載のハイブリドソーム。
- 前記診断薬が、ガンマ放射、放射能、光信号、蛍光シグナル、エコー源性シグナル、磁気シグナル、および断層画像シグナルからなる群より選択される検出可能なシグナルを発する、請求項44に記載のハイブリドソーム。
- 前記診断薬が、コンピュータ断層撮影法(CT)、磁気共鳴画像法(MRI)、光学イメージング、単一光子放射型コンピュータ断層撮影法(SPECT)、陽電子放射型断層撮影法(PET)、X線イメージング、およびγ線イメージングからなる群より選択される手法を介して検出可能である、請求項44に記載のハイブリドソーム。
- 前記診断薬が、225Ac、72As、211At、11B、128Ba、212Bi、75Br、77Br、14C、109Cd、62Cu、64Cu、67Cu、18F、67Ga、68Ga、3H、123I、125I、130I、131I、111In、177Lu、13N、15O、32P、33P、212Pb、103Pd、186Re、188Re、47Sc、153Sm、89Sr、99mTc、88Y、および90Yからなる群より選択される一又は複数の放射性核種を含む放射性同位元素である、請求項44に記載のハイブリドソーム。
- 前記診断薬が、小分子、無機化合物、ナノ粒子、酵素、酵素基質、蛍光物質、発光物質、生体発光物質、および化学発光物質からなる群より選択される、請求項44に記載のハイブリドソーム。
- 前記診断薬が、オクタデシルローダミンB、7−ニトロ−2−1,3−ベンゾオキサジアゾール−4−イル、4−アセトアミド−4’−イソチオシアネートスチルベン−2,2’ジスルホン酸、アクリジンと誘導体、5−(2’−アミノエチル)アミノナフタレン−1−スルホン酸(EDANS)、4−アミノ−N−(3−[ビニルスルホニル]フェニル)ナフタルイミド−3,6−ジスルホン酸ジリチウム塩、N−(4−アニリノ−1−ナフチル)マレイミド、アントラニルアミド、BODIPY、ブリリアントイエロー、クマリンと誘導体、シアニン染料、シアノシン、4’,6−ジアミニジノ−2−フェニルインドール(DAPI)、ブロモピロガロールレッド、7−ジエチルアミノ−3−(4’−イソチオシアネートフェニル)−4−メチルクマリン、ジエチレントリアミンペンタアセテート、4,4’−ジイソチオシアネートジヒドロ−スチルベン−2,2’−ジスルホン酸、4,4’−ジイソチオシアネートスチルベン−2,2’−ジスルホン酸、塩化ダンシル、4−ジメチルアミノフェニルアゾフェニル−4’−イソチオシアネート(DABITC)、エオシンと誘導体、エリスロシンと誘導体、エチジウム、フルオレセイン、5−カルボキシフルオレセイン(FAM)、5−(4,6−ジクロロトリアジン−2−イル)アミノフルオレセイン(DTAF)、2’,7’−ジメトキシ−4’5’−ジクロロ−6−カルボキシフルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、X−ローダミン−5−(および6)−イソチオシアネート(QFITCまたはXRITC)、フルオレスカミン、n,n−ジエチルエタンアミンを有するテン−1−イル]エテニル]−1,1−ジメチル−3−(3−スルホプロピル)−,水酸化物,不活性塩化合物(1:1)(IR144)、5−クロロ−2−[2−[3−[(5−クロロ−3−エチル−2(3H)−ベンゾチアゾール−イリデン)エチリデン]−2−(ジフェニルアミノ)−1−シクロペンテン−1−イル]エテニル]−3−エチルベンゾチアゾリウム過塩素酸塩(IR140)、マラカイトグリーンイソチオシアネート、4−メチルウンベリフェロン、o−クレゾールフタレイン、ニトロチロシン、パラローザニリン、フェノールレッド、B−フィコエリトリン、o−フタルジアルデヒド、ピレン、ピレンブチレート、スクシンイミジル1−ピレン、ブチレート量子ドット、リアクティブ・レッド4(Cibacron(商標)ブリリアントレッド3B−A)、ローダミンと誘導体、6−カルボキシ−X−ローダミン(ROX)、6−カルボキシローダミン(R6G)、リサミンローダミンB塩化スルホニル、ローダミン(Rhod)、ローダミンB、ローダミン123、ローダミンXイソチオシアネート、スルホローダミンB、スルホローダミン101、スルホローダミン101の塩化スルホニル誘導体(テキサスレッド)、N,N,N’,N’テトラメチル−6−カルボキシローダミン(TAMRA)、テトラメチルローダミン、テトラメチルローダミン・イソチオシアネート(TRITC)、リボフラビン、ロゾール酸、テルビウムキレート誘導体、シアニン−3(Cy3)、シアニン−5(Cy5)、シアニン−5.5(Cy5.5)、シアニン−7(Cy7)、IRD700、IRD800、Alexa647、La Jolta Blue、フタロシアニン、およびナフタロシアニンからなる群より選択される光学的に検出可能な標識を含む、請求項44に記載のハイブリドソーム。
- 前記診断薬が、半導体ナノ結晶、量子ドット、イオパミドール、イオメプロール、イオヘキソール、イオペントール、およびメトリザミドから選択される造影剤である、請求項44に記載のハイブリドソーム。
- 前記診断薬が、金、銀、および鉄のナノ粒子から選択される金属ナノ粒子である、請求項44に記載のハイブリドソーム。
- 前記ナノ粒子が約2nm〜約100nmの直径を有する、請求項74に記載のハイブリドソーム。
- 前記ナノ粒子が、チオ基、オキソ基、アミノ基、またはホスホ基からなる群より選択される少なくとも一つの表面修飾を有する、請求項74に記載のハイブリドソーム。
- 前記金属ナノ粒子の形状が、球体、ロッド、プリズム、ディスク、キューブ、コア−シェル構造、ケージ、フレーム、またはその混合形態の少なくとも一つを含む、請求項74に記載のハイブリドソーム。
- 前記診断薬が、常磁性剤および超常磁性剤から選択される磁気共鳴(MR)イメージング剤である、請求項44に記載のハイブリドソーム。
- 前記常磁性剤が、ガドペンテト酸、ガドリニウム、ガドテリドール、およびガドキセト酸からなる群より選択される、請求項78に記載のハイブリドソーム。
- 前記超常磁性剤が、超常磁性酸化鉄およびフェリステンからなる群より選択される、請求項78に記載のハイブリドソーム。
- 前記疾患関連抗原が、胎盤型アルカリホスファターゼ、p53、p63、p73、mdm−2、プロカテプシン−D、B23、C23、PLAP、CA125、MUC−1、cerB/HER2、NY−ESO−1.SCP1、SSX−1、SSX−2、SSX−4、HSP27、HSP60、HSP90、GRP78、TAG72、HoxA7、HoxB7、EpCAM、ras、メソテリン、サバイビン、EGFK、MUC−1、およびc−mycからなる群より選択されるがん細胞抗原である、請求項45に記載のハイブリドソーム。
- 前記疾患関連抗原が、腫瘍関連抗原であるチロシン−タンパク質キナーゼ膜貫通受容体ROR1である、請求項45に記載のハイブリドソーム。
- 請求項1〜82のいずれか一項に記載のハイブリドソームおよび少なくとも一つの医薬的に許容可能な担体、アジュバント、または賦形剤を含む医薬組成物。
- 症状または疾患を治療、監視、予防、ステージ決定、および/または診断するのに使用するための、請求項1〜82のいずれか一項に記載のハイブリドソームまたはそのハイブリドソームを含む医薬組成物。
- 前記症状または疾患が、白血病、リンパ腫、皮膚がん、メラノーマ、基底細胞がん、扁平上皮がん、頭部および首の上皮細胞がん、肺がん、扁平上皮がん又は類表皮がん、小細胞がん、腺がん、大細胞がん、乳がん、胃腸管がん、甲状腺の悪性腫瘍、骨と軟部組織の肉腫、卵巣がん、卵管がん、子宮がん、子宮頸がん、前立腺がん、精巣がん、膀胱がん、腎細胞がん、膵臓がん、および肝細胞がんからなる群より選択される、請求項84に記載の使用のためのハイブリドソーム。
- 前記症状または疾患が神経変性と関連する、請求項84に記載の使用のためのハイブリドソーム。
- 神経変性に関連する前記症状または疾患が、パーキンソン病、アルツハイマー病、ハンチントン舞踏病、多系統萎縮症、進行性核上性麻痺、ダウン症、びまん性レビー小体病、および筋萎縮性側索硬化症からなる群より選択される、請求項86に記載の使用のためのハイブリドソーム。
- 前記症状または疾患が炎症と関連する、請求項84に記載の使用のためのハイブリドソーム。
- 炎症に関連する前記症状または疾患が、アルツハイマー病、糖尿病、ホルモン失調、自己免疫疾患、関節リウマチ、乾癬、変形性関節症、骨粗鬆症、アテローム性動脈硬化、冠状動脈疾患、血管炎、慢性炎症性状態、肥満、潰瘍、マルジョラン潰瘍、呼吸器炎症、包皮炎症、ウイルスが原因の炎症、住血吸虫症、骨盤の炎症性疾患、卵巣上皮炎症、バレット異形成、ピロリ菌(H.pylori)胃炎、慢性膵炎、中国肝吸虫の寄生、慢性胆嚢炎、および炎症性腸疾患、ならびに前立腺がん、大腸がん、乳がん、胃がん等の胃腸管がん、肝細胞がん、結腸直腸がん、膵臓がん、胃がん、上咽頭がん、食道がん、胆管がん、胆嚢がんと肛門性器がん、外皮がん、皮膚がん、気道がん、気管支がん、中皮腫、泌尿生殖路がん、包茎、陰茎がん、膀胱がん、生殖器系がん、および卵巣がんから選択される炎症関連がんからなる群より選択される、請求項88に記載の使用のためのハイブリドソーム。
- 前記症状または疾患がウイルスまたは細菌感染である、請求項84に記載の使用のためのハイブリドソーム。
- 一又は複数の疾患関連抗原に対する免疫応答を誘起するのに使用するための、請求項1〜82のいずれか一項に記載のハイブリドソームまたはそのハイブリドソームを含む医薬組成物。
- 被験者の標的細胞または組織に治療薬を送達するのに使用するための、請求項1〜82のいずれか一項に記載のハイブリドソームまたはそのハイブリドソームを含む医薬組成物。
- 被験者中に、治療薬、診断薬、疾患関連抗原および/または生理活性剤を投与するのに使用するための、請求項1〜82のいずれか一項に記載のハイブリドソームまたはそのハイブリドソームを含む医薬組成物。
- 前記ハイブリドソームが、非経口、動脈内、静脈内、腹腔内、皮下、筋中、局所、経口、肺、鼻腔内、舌下、直腸、または膣に投与される、請求項93に記載の使用のためのハイブリドソーム。
- 幹細胞、初代細胞、懸濁細胞、および免疫細胞からなる群より選択されるインビボおよびインビトロでトランスフェクションが難しい細胞型へ活性剤を送達するのに使用するための、請求項1〜82のいずれか一項に記載のハイブリドソームまたはそのハイブリドソームを含む医薬組成物。
- 細胞内で標的ポリヌクレオチドまたはポリペプチドの発現を調節するのに使用するための、請求項1〜82のいずれか一項に記載のハイブリドソームまたはそのハイブリドソームを含む医薬組成物。
- 被験者における一又は複数のポリペプチドの過剰発現を特徴とする病気または疾患を治療するのに使用するための、請求項1〜82のいずれか一項に記載のハイブリドソームまたはそのハイブリドソームを含む医薬組成物。
- 遺伝子治療に使用するための、請求項1〜82のいずれか一項に記載のハイブリドソームまたはそのハイブリドソームを含む医薬組成物。
- 標的細胞に少なくとも二つの物質を共に送達するのに使用するための、請求項1〜82のいずれか一項に記載のハイブリドソームまたはそのハイブリドソームを含む医薬組成物。
- 抗原提示BDMおよびアジュバント含有EDEMを含む免疫原性ワクチンの製造に使用するための、請求項1〜82のいずれか一項に記載のハイブリドソームまたはそのハイブリドソームを含む医薬組成物。
- 一又は複数の疾患関連抗原を送達することによって免疫応答を誘起するのに使用するための、請求項1〜82のいずれか一項に記載のハイブリドソームまたはそのハイブリドソームを含む医薬組成物。
- 免疫応答を抑制するのに使用するための、請求項1〜82のいずれか一項に記載のハイブリドソームまたはそのハイブリドソームを含む医薬組成物。
- 細胞上の免疫刺激性抗原の量を減らすのに使用するための、請求項102に記載のハイブリドソームまたはそのハイブリドソームを含む医薬組成物。
- 前記免疫刺激性抗原がCD40、CD80、CD83、CD86、CCR7、HLA−DP、HLA−DQ、およびHLA−DRからなる群より選択される、請求項103に記載のハイブリドソームまたはそのハイブリドソームを含む医薬組成物。
- 炎症を減らすのに使用するための、請求項1〜82のいずれか一項に記載のハイブリドソームまたはそのハイブリドソームを含む医薬組成物。
- 被験者中の炎症性サイトカインの量を減らすのに使用するための、請求項105に記載のハイブリドソームまたはそのハイブリドソームを含む医薬組成物。
- 前記炎症性サイトカインが腫瘍壊死因子−α、トランスフォーミング増殖因子β1、インターロイキン−8、インターロイキン−10、およびインターロイキン−12p70からなる群より選択される、請求項106に記載のハイブリドソームまたはそのハイブリドソームを含む医薬組成物。
- ワクチンとして使用するための、請求項1〜82のいずれか一項に記載のハイブリドソームまたはそのハイブリドソームを含む医薬組成物。
- 被験者中の治療薬および/または診断薬の循環時間を増加させるための担体として使用するための、請求項1〜82のいずれか一項に記載のハイブリドソームまたはそのハイブリドソームを含む医薬組成物。
- 細網内皮系(RES)取り込みを弱めるための担体として使用するための、請求項1〜82のいずれか一項に記載のハイブリドソームまたはそのハイブリドソームを含む医薬組成物。
- 治療薬および/または診断薬の早期放出を予防するための担体として使用するための、請求項1〜82のいずれか一項に記載のハイブリドソームまたはそのハイブリドソームを含む医薬組成物。
- 被験者の身体に導入される場合、免疫系応答を減らすための担体として使用するための、請求項1〜82のいずれか一項に記載のハイブリドソームまたはそのハイブリドソームを含む医薬組成物。
- 血管系の生物学的バリアーを通過するトランスサイトーシスを増加させるための担体として使用するための、請求項1〜82のいずれか一項に記載のハイブリドソームまたはそのハイブリドソームを含む医薬組成物。
- 疾患部位での治療薬および/または診断薬の蓄積を増加させるための担体として使用するための、請求項1〜82のいずれか一項に記載のハイブリドソームまたはそのハイブリドソームを含む医薬組成物。
- 標的細胞のエンドソームへの内在化を増加させるための担体として使用するための、請求項1〜82のいずれか一項に記載のハイブリドソームまたはそのハイブリドソームを含む医薬組成物。
- 活性剤の治療投与量を減らすための担体として使用するための、請求項1〜82のいずれか一項に記載のハイブリドソームまたはそのハイブリドソームを含む医薬組成物。
- 活性剤の投与と関連する毒性副作用を減少または予防するための担体として使用するための、請求項1〜82のいずれか一項に記載のハイブリドソームまたはそのハイブリドソームを含む医薬組成物。
- 細胞または組織への生理活性剤のインビトロ送達に使用するための、請求項1〜82のいずれか一項に記載のハイブリドソームまたはそのハイブリドソームを含む医薬組成物。
- 疾患または症状に罹患する組織および細胞の検出、あるいは、進行または治療後の再発の検出に使用するための、請求項1〜82のいずれか一項に記載のハイブリドソームまたはそのハイブリドソームを含む医薬組成物。
- 疾患または症状の診断に使用するための、請求項1〜82のいずれか一項に記載のハイブリドソームまたはそのハイブリドソームを含む医薬組成物。
- 少なくとも一つの生体適合性送達モジュール(BDM)と少なくとも一つの調整可能な膜融合性部分を含む少なくとも一つの加工薬物カプセル化モジュール(EDEM)とを起源とする構造要素および生理活性要素を含むハイブリッド生体適合性担体(ハイブリドソーム)を製造する方法であって、前記方法が、
(a)少なくとも一つの膜融合性部分を有する少なくとも一つのEDEMまたはそのEDEMを含む組成物を提供する工程;
(b)少なくとも一つのBDMまたはそのBDMを含む組成物を提供する工程;
(c)前記少なくとも一つのEDEMを前記少なくとも一つのBDMと、7.4より低いpHおよび0℃〜60℃の間の温度で接触させて、それにより前記少なくとも一つのEDEMを前記少なくとも一つのBDMと統合させて、前記ハイブリドソームを生産する工程;ならびに、任意に
(d)非融合EDEMおよび/またはBDMから前記ハイブリドソームを精製する工程を含む、方法。 - 工程(c)が機械的手段で混合することによって向上し、および、前記BDMと前記EDEMとの統合が流体動力学の制御を介して促進される、請求項121に記載の方法。
- 工程(c)がpH4〜6の酸性バッファー中で実施される、請求項121に記載の方法。
- 工程(c)が約37℃の反応温度で実施される、請求項121に記載の方法。
- 工程(c)が、5分、15分、30分、1時間、2時間、5時間、10時間、および24時間から選択される期間に渡り実施される、請求項121に記載の方法。
- 工程(c)において、前記EDEMがカチオン性総表面電荷の増加を呈する、請求項121〜125のいずれか一項に記載の方法。
- 工程(d)が、密度勾配を通す遠心分離、免疫アフィニティークロマトグラフィー、ろ過、相分離、析出、または吸収によって実施される、請求項121に記載の方法。
- 前記少なくとも一つのBDMがエキソソーム、エクトソーム、微小胞、およびアポトーシス小体からなる群より選択される、請求項121に記載の方法。
- 前記少なくとも一つのEDEMが、脂質系ナノ粒子(LNP)、リポソーム、ポリマー安定化LNP、セラソーム、スフィンゴソーム、ニオソーム、ポリマーソーム、合成ナノ粒子安定化LNP、コア−シェル型脂質−ポリマーハイブリッドナノ粒子、天然膜由来LNP、迅速に除去される脂質ナノ粒子(reLNP)、および天然膜でコーティングされたLNPからなる群より選択される、請求項121に記載の方法。
- 前記少なくとも一つの調整可能な膜融合性部分が、イオン化可能なカチオン性脂質、膜融合性脂質、pH応答性ポリマー、ヘルパー脂質、および膜融合性標的化部分からなる群より選択される、請求項121に記載の方法。
- 前記イオン化可能なカチオン性脂質が、1,2−ジリノレイルオキシ−N,N−ジメチルアミノプロパン(DLinDMA)、2,2−ジリノレイル−4−(2−ジメチルアミノエチル)−[1,3]−ジオキソラン(DLin−KC2−DMA)、ヘプタトリアコンタ−6,9,28,31−テトラエン−19−イル4−(ジメチルアミノ)ブタノエート(DLin−MC3−DMA)、ジオクタデシル−ジメチルアンモニウム(DODMA)、ジステアリルジメチルアンモニウム(DSDMA)、N,N−ジオレイル−N,N−ジメチル−塩化アンモニウム(DODAC);N−(2,3−ジオレイルオキシ)プロピル)−N,N,N−トリメチル−塩化アンモニウム(DOTMA);1,2−ジオレオイル−3−ジメチルアンモニウム−プロパン(DODAP)、N−(4−カルボキシベンジル)−N,N−ジメチル−2,3−ビス(オレオイルオキシ)プロパン−1−アミニウム(DOBAQ)、YSK05、4−(((2,3−ビス(オレオイルオキシ)プロピル)−(メチル)アミノ)メチル)安息香酸(DOBAT)、N−(4−カルボキシベンジル)−N,N−ジメチル−2,3−ビス(オレオイルオキシ)プロパン−1−アミニウム(DOBAQ)、3−((2,3−ビス(オレオイルオキシ)プロピル)(メチル)アミノ)プロパン酸(DOPAT)、N−(2−カルボキシプロピル)−N,N−ジメチル−2,3−ビス−(オレオイルオキシ)−プロパン−1−アミニウム(DOMPAQ)、N−カルボキシメチル)−N,N−ジメチル−2,3−ビス(オレオイルオキシ)プロパン−1−アミニウム(DOAAQ)、アルニー(Alny)−100、3−(ジメチルアミノ)−プロピル(12Z,15Z)−3−[(9Z,12Z)−オクタデカ−9,12−ジエン−1−イル]−ヘニコサ−12,15−ジエノエート(DMAP−BLP)、3−(N−(N’,N’−ジメチルアミノエタン)−カルバモイル)コレステロール(DC−Chol)、および、イオン化可能なアミノ脂質の誘導体からなる群より選択される、請求項130に記載の方法。
- 前記膜融合性脂質が、pH感受性脂質、温度感受性脂質、および円錐形成脂質からなる群より選択される、請求項130に記載の方法。
- 前記pH応答性ポリマーが、アルキルアクリル酸のホモポリマー、エチルアクリル酸のコポリマー、アルキルアミンのポリマー、およびメチルビニルエーテルまたはスチレンを有する無水マレイン酸コポリマーのアルキルアルコール誘導体からなる群より選択される、請求項130に記載の方法。
- 前記pH応答性ポリマーが、直鎖ポリマー、非直鎖ポリマー、分岐ポリマー、ブラシ型ポリマー、スターポリマー、デンドリマーポリマー、架橋ポリマー、半架橋ポリマー、グラフトポリマー、およびその組み合わせからなる群より選択される、請求項130に記載の方法。
- 前記ヘルパー脂質が、コレステロール、1,2−ジステアロイル−sn−グリセロ−3−ホスホコリン(DSPC)、ジステアロイル−ホスファチジルコリン(DSPC)、ジオレオイル−ホスファチジルコリン(DOPC)、ジパルミトイル−ホスファチジルコリン(DPPC)、ジオレオイル−ホスファチジルグリセロール(DOPG)、ジパルミトイル−ホスファチジルグリセロール(DPPG)、ジオレオイル−ホスファチジルエタノールアミン(DOPE)、パルミトイルオレオイル−ホスファチジルコリン(POPC)、パルミトイルオレオイル−ホスファチジルエタノールアミン(POPE)、ならびに、ジオレオイル−ホスファチジル−エタノールアミン、ジパルミトイル−ホスファチジル−エタノールアミン(DPPE)、ジミリストイルホスホ−エタノールアミン(DMPE)、ジステアロイル−ホスファチジル−エタノールアミン(DSPE)、16−O−モノメチルPE、16−O−ジメチルPE、18−1−トランスPE、1−ステアリオイル−2−オレオイル−ホスファチジルエタノールアミン(SOPE)、1,2−ジエライドイル−sn−グリセロ−3−ホスホエタノールアミン(トランスDOPE)、ホスファチジルグリセロール、ジアシルホスファチジルセリン、カルジオリピン、およびアニオン性修飾基で修飾された中性脂質からなる群より選択される、請求項130に記載の方法。
- 前記少なくとも一つのEDEMが、抗体またはその断片、抗体様分子、ペプチド、タンパク質、アプタマー、オリゴヌクレオチド、糖、ポリサッカライド、およびビタミンからなる群より選択される一又は複数の標的化部分を含む、請求項121に記載の方法。
- 前記標的化部分が標的となる細胞の表面上の部分に結合する、請求項136に記載の方法。
- 前記標的化部分がCD38またはヘパラン硫酸プロテオグリカンに結合する、請求項137に記載の方法。
- 前記標的化部分が細胞内器官標的に結合する、請求項136に記載の方法。
- 前記標的化部分が核移行配列含有ペプチドおよびリソソーム向性オクタデシルローダミンBからなる群より選択される、請求項139に記載の方法。
- 前記少なくとも一つのEDEMがその表面上に一又は複数の細胞透過性ペプチドを含む、請求項121に記載の方法。
- 前記細胞透過性ペプチドがpH応答性である、請求項141に記載の方法。
- 前記細胞透過性ペプチドが、TAT、REV、クロタミン、およびメリチンからなる群より選択されるタンパク質に由来する、請求項141に記載の方法。
- 前記少なくとも一つのEDEMがその表面にアンカーされる一又は複数の融合ペプチドを含む、請求項121に記載の方法。
- 前記融合ペプチドが可溶性N−エチルマレイミド感受性因子付着タンパク質受容体(SNAREタンパク質)およびその合成模倣物から選択される、請求項144に記載の方法。
- 前記少なくとも一つのEDEMがPEG修飾脂質を含む、請求項121に記載の方法。
- 前記PEG修飾脂質が標的化部分を結合するための官能基部分を含み、前記官能基部分がマレイミド基、アミン基、ビニルスルホン基、ピリジルジスルフィド基、カルボン酸基、アジド基、またはNHSエステル基である、請求項146に記載の方法。
- 前記少なくとも一つのEDEMがその脂質二重膜中に安定化部分を含む、請求項121に記載の方法。
- 前記安定化部分が、PEG修飾脂質、デンドリマー、ポリアルキレンオキサイド、ポリビニルアルコール、ポリカルボキシレート、ポリサッカライド、およびヒドロキシエチルデンプンからなる群より選択される、請求項148に記載の方法。
- 少なくとも一つの前記PEG修飾脂質が、PEG−リン脂質、PEG−修飾ホスファチジルエタノールアミン(PEG−PE)、PEG−修飾セラミド、PEG−修飾ジアルキルアミン、PEG−修飾ジアシルグリセロール、ポリエチレングリコールジパルミトイルグリセロール(PEG−DPG)、PEG−修飾ジアルキルグリセロール(メトキシポリエチレングリコール)−ジミリストイルグリセロール(PEG−s−DMG)、aPEG−ジアルキルオキシプロピル(DAA)、R−3−[(ω−メトキシ−ポリ(エチレングリコール)2000)カルバモイル)]−1,2−ジミリストイルオキシプロピル−3−アミン(PEG−c−DOMG)、およびN−アセチルガラクトサミン−((R)−2,3−ビス(オクタデシルオキシ)プロピル−1−(メトキシ−ポリ(エチレングリコール)2000)プロピルカルバメート))(GalNAc−PEG−DSG)からなる群より選択される、請求項149に記載の方法。
- 前記少なくとも一つのEDEMが、前記担体にカプセル化された内容物のエンドソームまたはリソソーム放出を促進するためのイオン化可能な親水性頭部基を有する脂質を含む、請求項121に記載の方法。
- 前記少なくとも一つのEDEMが、少なくとも一つの抗原をコードする少なくとも一つの修飾核酸分子および/またはmRNAを含む、請求項121に記載の方法。
- 前記少なくとも一つのEDEMが少なくとも一つのアジュバントを含む、請求項121に記載の方法。
- 前記少なくとも一つのEDEMが少なくとも一つの治療薬と少なくとも一つのアジュバントを含む、請求項121に記載の方法。
- 前記少なくとも一つのEDEMがウイルス由来のペプチド、断片、または領域をコードする少なくとも一つの外因性疾患関連抗原を含む、請求項121に記載の方法。
- 前記少なくとも一つのBDMが、がん等の病気または疾患に罹患する被験者に由来する、請求項121に記載の方法。
- 前記病気または疾患ががんである、請求項156に記載の方法。
- 前記少なくとも一つのBDMがB細胞またはグリオブラストーマ細胞に由来する、請求項121に記載の方法。
- 前記少なくとも一つのBDMが、がんまたは前がん患者の腫瘍細胞に由来するか、あるいは、腫瘍またはがん細胞株に由来する、請求項121に記載の方法。
- 前記少なくとも一つのBDMが病原体に由来する、請求項121に記載の方法。
- 前記病原体が細菌病原体、アメーバ病原体、寄生虫病原体、または真菌病原体である、請求項160に記載の方法。
- 前記少なくとも一つのBDMが抗原提示細胞、リンパ球、または白血球からなる群より選択される細胞に由来する、請求項121に記載の方法。
- 前記少なくとも一つのBDMが病原体感染細胞に由来する、請求項121に記載の方法。
- 前記少なくとも一つのBDMが変異タンパク質またはミスフォールドタンパク質を発現する変異細胞に由来する、請求項121に記載の方法。
- 前記少なくとも一つのBDMが細菌または寄生虫の外膜の破壊または小疱形成によって得られるプロテオリポソーム性小胞である、請求項121に記載の方法。
- 前記少なくとも一つのBDMがマントル細胞リンパ腫に由来する、請求項121に記載の方法。
- 前記少なくとも一つのBDMが血小板、好中球、または活性化多形核好中球に由来する、請求項121に記載の方法。
- 前記少なくとも一つのEDEMが治療薬または診断薬を全く含まない、請求項121に記載の方法。
- 前記少なくとも一つのEDEMが一又は複数の治療薬を含む、請求項121に記載の方法。
- 前記少なくとも一つのEDEMが一又は複数の診断薬を含む、請求項121に記載の方法。
- 前記少なくとも一つのBDMが、腫瘍関連抗原、病原体関連抗原、または変性疾患関連抗原から選択される一又は複数の疾患関連抗原を含む、請求項121に記載の方法。
- 前記少なくとも一つのBDMが一又は複数の抗炎症剤を含む、請求項121に記載の方法。
- 前記少なくとも一つのBDMが、血小板および好中球の群より選択される細胞に由来する、請求項172に記載の方法。
- 前記少なくとも一つのBDMが一又は複数の免疫抑制剤を含む、請求項121に記載の方法。
- 前記少なくとも一つのBDMが多形核好中球に由来する、請求項174に記載の方法。
- 前記少なくとも一つのEDEMが、標的細胞へのさらにハイブリドソームの標的化/トランスフェクションを容易にする機能的ポリペプチドを生産するのに適する一又は複数の生理活性剤を含む、請求項121に記載の方法。
- 前記治療薬、診断薬、疾患関連抗原、および生理活性剤が、前記EDEMまたは前記BDMに埋め込み、カプセル化、または繋ぎ止められている、請求項169〜176のいずれか一項に記載の方法。
- 前記治療薬が薬物または医薬的に許容可能なその塩もしくは誘導体である、請求項169に記載の方法。
- 前記治療薬が、化学療法薬、麻酔薬、β−アドレナリンブロッカー、抗高血圧剤、抗うつ剤、抗けいれん剤、抗吐剤、抗ヒスタミン剤、抗不整脈剤、抗マラリア剤、抗増殖剤、抗血管新生剤、創傷修復剤、組織修復剤、温熱治療薬、免疫抑制剤、サイトカイン、細胞傷害性薬物、核溶解化合物、放射性同位元素、受容体、プロドラッグ活性化酵素、抗悪性腫瘍剤、抗感染剤、局所麻酔薬、抗アレルギー剤、抗貧血剤、血管新生阻害剤、β−アドレナリンブロッカー、カルシウムチャネル拮抗剤、抗高血圧剤、抗うつ剤、抗けいれん薬、抗細菌剤、抗真菌剤、抗ウイルス剤、抗リウマチ剤、駆虫薬、抗寄生虫剤、コルチコステロイド、ホルモン、ホルモン拮抗薬、免疫調整剤、神経伝達物質拮抗薬、抗糖尿病剤、抗てんかん薬、止血薬、抗高張剤、抗緑内障薬、免疫調整サイトカイン、鎮静剤、ケモカイン、ビタミン、毒素、催眠剤、植物に由来する薬剤、およびその組み合わせからなる群より選択される、請求項169に記載の方法。
- 前記治療薬が、ビンカアルカロイド、アントラサイクリン、およびRNA転写阻害剤からなる群より選択される、請求項169に記載の方法。
- 前記治療薬が、ナイトロジェンマスタード、ニトロソウレア、エチレンイミン、アルカンスルホン酸塩、テトラジン、白金化合物、ピリミジン類似体、プリン類似体、代謝拮抗剤、葉酸類似体、アントラサイクリン、タキサン、ビンカアルカロイド、およびトポイソメラーゼ阻害剤、ホルモン剤、アルキル化剤(例、シクロホスファミド);アルキルスルホン酸塩;アジリジン;エチレンイミンとメチルメラミン;代謝拮抗剤;ピリミジン類似体;アドレナリン拮抗剤;葉酸補充剤;レチノイン酸;および医薬的に許容可能なその塩、酸、または誘導体からなる群より選択されるがん化学療法薬である、請求項169に記載の方法。
- 前記治療薬が、抗エストロゲン剤および抗アンドロゲン剤ならびに医薬的に許容可能なその塩、酸、または誘導体からなる群より選択される抗ホルモン剤である、請求項169に記載の方法。
- 前記治療薬が、リンホカイン、モノカイン、ポリペプチドホルモン、成長ホルモン、副甲状腺ホルモン、チロキシン、インスリン、プロインスリン、リラキシン、プロリラキシン、糖タンパク質ホルモン、卵胞刺激ホルモン(FSH)、甲状腺刺激ホルモン(TSH)、黄体形成ホルモン(LH)、肝細胞増殖因子、繊維芽細胞増殖因子、プロラクチン、胎盤性ラクトゲン、腫瘍壊死因子−αおよび−β、ミューラー管阻害物質、マウスゴナドトロピン関連ペプチド、インヒビン、アクチビン、血管内皮細胞増殖因子、インテグリン、トロンボポエチン(TPO)、神経増殖因子、NGF−β、血小板増殖因子、トランスフォーミング増殖因子(TGF)、TGF−α、TGF−β、インスリン様成長因子−IおよびII、エリスロポエチン(EPO)、骨誘導性因子、インターフェロン(例、インターフェロン−α、βおよびγ)、コロニー刺激因子(CSF)、マクロファージ−CSF(M−CSF)、顆粒球−マクロファージ−CSF(GM−CSF)、顆粒球−CSF(GCSF)、インターロイキン(IL)、腫瘍壊死因子、TNF−α、TNF−β、LIF、およびキットリガンド(KL)からなる群より選択されるサイトカインである、請求項169に記載の方法。
- 前記治療薬が、抗体ベースの治療薬である、請求項169に記載の方法。
- 前記抗体ベースの治療薬が、ハーセプチン(Herceptin)、アービタックス(Erbitux)、アバスチン(Avastin)、リツキサン(Rituxan)、シムレクト(Simulect)、エンブレル(Enbrel)、アダリムマブ(Adalimumab)、およびレミケード(Remicade)からなる群より選択される、請求項184に記載の方法。
- 前記治療薬が、金、銀、酸化鉄、量子ドット、およびカーボンナノチューブからなる群より選択されるナノ粒子である、請求項169に記載の方法。
- 前記治療薬が、オリゴヌクレオチド、核酸、修飾核酸、タンパク質−核酸、負帯電基を有するタンパク質およびペプチド、負帯電基を有する植物アルカロイドおよび類似体、ならびにアニオン性基で修飾される薬物からなる群より選択されるアニオン性治療薬である、請求項169に記載の方法。
- 前記核酸が、低分子干渉RNA(siRNA)、アンチセンスRNA、マイクロRNA(miRNA)、スモールまたはショートヘアピンRNA(shRNA)、ガイドRNA(gRNA)、CRISPR(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeat)RNA(crRNA)、トランス活性化CRISPRRNA(tracrRNA)、免疫刺激性オリゴヌクレオチド、プラスミド、アンチセンス核酸、およびリボザイムからなる群より選択される、請求項187に記載の方法。
- 前記治療薬および/または診断薬が、ペプチド、タンパク質、核酸、ポリマー、炭水化物、および小分子からなる群より選択される、請求項169または170に記載の方法。
- 前記治療薬および/または診断薬が、治療用核酸および診断用無機ナノ粒子の合剤である、請求項189に記載の方法。
- 前記核酸がプラスミドである、請求項190に記載の方法。
- 前記無機ナノ粒子が金ナノ粒子である、請求項190に記載の方法。
- 前記診断薬が、哺乳類またはヒト等の動物の身体の標的部位に関する撮像情報を提供する物質である、請求項170に記載の方法。
- 前記診断薬が、ガンマ放射、放射能、光信号、蛍光シグナル、エコー源性シグナル、磁気シグナル、および断層画像シグナルからなる群より選択される検出可能なシグナルを発する、請求項170に記載の方法。
- 前記診断薬が、コンピュータ断層撮影法(CT)、磁気共鳴画像法(MRI)、光学イメージング、単一光子放射型コンピュータ断層撮影法(SPECT)、陽電子放射型断層撮影法(PET)、X線イメージング、およびγ線イメージングからなる群より選択される手法を介して検出可能である、請求項170に記載の方法。
- 前記診断薬が、225Ac、72As、211At、11B、128Ba、212Bi、75Br、77Br、14C、109Cd、62Cu、64Cu、67Cu、18F、67Ga、68Ga、3H、123I、125I、130I、131I、111In、177Lu、13N、15O、32P、33P、212Pb、103Pd、186Re、188Re、47Sc、153Sm、89Sr、99mTc、88Y、および90Yからなる群より選択される一又は複数の放射性核種を含む放射性同位元素である、請求項170に記載の方法。
- 前記診断薬が、小分子、無機化合物、ナノ粒子、酵素、酵素基質、蛍光物質、発光物質、生体発光物質、および化学発光物質からなる群より選択される、請求項170に記載の方法。
- 前記診断薬が、オクタデシルローダミンB、7−ニトロ−2−1,3−ベンゾオキサジアゾール−4−イル、4−アセトアミド−4’−イソチオシアネートスチルベン−2,2’ジスルホン酸、アクリジンと誘導体、5−(2’−アミノエチル)アミノナフタレン−1−スルホン酸(EDANS)、4−アミノ−N−(3−[ビニルスルホニル]フェニル)ナフタルイミド−3,6−ジスルホン酸ジリチウム塩、N−(4−アニリノ−1−ナフチル)マレイミド、アントラニルアミド、BODIPY、ブリリアントイエロー、クマリンと誘導体、シアニン染料、シアノシン、4’,6−ジアミニジノ−2−フェニルインドール(DAPI)、ブロモピロガロールレッド、7−ジエチルアミノ−3−(4’−イソチオシアネートフェニル)−4−メチルクマリン、ジエチレントリアミンペンタアセテート、4,4’−ジイソチオシアネートジヒドロ−スチルベン−2,2’−ジスルホン酸、4,4’−ジイソチオシアネートスチルベン−2,2’−ジスルホン酸、塩化ダンシル、4−ジメチルアミノフェニルアゾフェニル−4’−イソチオシアネート(DABITC)、エオシンと誘導体、エリスロシンと誘導体、エチジウム、フルオレセイン、5−カルボキシフルオレセイン(FAM)、5−(4,6−ジクロロトリアジン−2−イル)アミノフルオレセイン(DTAF)、2’,7’−ジメトキシ−4’5’−ジクロロ−6−カルボキシフルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、X−ローダミン−5−(および6)−イソチオシアネート(QFITCまたはXRITC)、フルオレスカミン、n,n−ジエチルエタンアミンを有するテン−1−イル]エテニル]−1,1−ジメチル−3−(3−スルホプロピル)−,水酸化物,不活性塩化合物(1:1)(IR144)、5−クロロ−2−[2−[3−[(5−クロロ−3−エチル−2(3H)−ベンゾチアゾール−イリデン)エチリデン]−2−(ジフェニルアミノ)−1−シクロペンテン−1−イル]エテニル]−3−エチルベンゾチアゾリウム過塩素酸塩(IR140)、マラカイトグリーンイソチオシアネート、4−メチルウンベリフェロン、o−クレゾールフタレイン、ニトロチロシン、パラローザニリン、フェノールレッド、B−フィコエリトリン、0−フタルジアルデヒド、ピレン、ピレンブチレート、スクシンイミジル1−ピレン、ブチレート量子ドット、リアクティブ・レッド4(Cibacron(商標)ブリリアントレッド3B−A)、ローダミンと誘導体、6−カルボキシ−X−ローダミン(ROX)、6−カルボキシローダミン(R6G)、リサミンローダミンB塩化スルホニル、ローダミン(Rhod)、ローダミンB、ローダミン123、ローダミンXイソチオシアネート、スルホローダミンB、スルホローダミン101、スルホローダミン101の塩化スルホニル誘導体(テキサスレッド)、N,N,N’,N’テトラメチル−6−カルボキシローダミン(TAMRA)、テトラメチルローダミン、テトラメチルローダミン・イソチオシアネート(TRITC)、リボフラビン、ロゾール酸、テルビウムキレート誘導体、シアニン−3(Cy3)、シアニン−5(Cy5)、シアニン−5.5(Cy5.5)、シアニン−7(Cy7)、IRD700、IRD800、Alexa647、La Jolta Blue、フタロシアニン、およびナフタロシアニンからなる群より選択される光学的に検出可能な標識を含む、請求項170に記載の方法。
- 前記診断薬が、半導体ナノ結晶、量子ドット、イオパミドール、イオメプロール、イオヘキソール、イオペントール、およびメトリザミドから選択される造影剤である、請求項170に記載の方法。
- 前記診断薬が、金、銀、および鉄のナノ粒子から選択される金属ナノ粒子である、請求項170に記載の方法。
- 前記ナノ粒子が約2nm〜約100nmの直径を有する、請求項200に記載の方法。
- 前記ナノ粒子が、チオ基、オキソ基、アミノ基、またはホスホ基からなる群より選択される少なくとも一つの表面修飾を有する、請求項200に記載の方法。
- 前記金属ナノ粒子の形状が、球体、ロッド、プリズム、ディスク、キューブ、コア−シェル構造、ケージ、フレーム、またはその混合形態の少なくとも一つを含む、請求項200に記載の方法。
- 前記診断薬が、常磁性剤および超常磁性剤から選択される磁気共鳴(MR)イメージング剤である、請求項170に記載の方法。
- 前記常磁性剤が、ガドペンテト酸、ガドリニウム、ガドテリドール、およびガドキセト酸からなる群より選択される、請求項204に記載の方法。
- 前記超常磁性剤が、超常磁性酸化鉄およびフェリステンからなる群より選択される、請求項204に記載の方法。
- 前記疾患関連抗原が、胎盤型アルカリホスファターゼ、p53、p63、p73、mdm−2、プロカテプシン−D、B23、C23、PLAP、CA125、MUC−1、cerB/HER2、NY−ESO−1.SCP1、SSX−1、SSX−2、SSX−4、HSP27、HSP60、HSP90、GRP78、TAG72、HoxA7、HoxB7、EpCAM、ras、メソテリン、サバイビン、EGFK、MUC−1、およびc−mycからなる群より選択されるがん細胞抗原である、請求項171に記載の方法。
- 前記疾患関連抗原が、腫瘍関連抗原であるチロシン−タンパク質キナーゼ膜貫通受容体ROR1である、請求項171に記載の方法。
- 一又は複数の生理活性剤を白血球中へ送達する方法であって、前記方法は、前記一又は複数の生理活性剤含有ハイブリドソームを含む組成物を前記白血球を含む組成物と接触させる工程を含み、前記ハイブリドソームが、少なくとも一つの調整可能な膜融合性部分を含む少なくとも一つのEDEMと少なくとも一つの白血球由来BDMとの融合の結果生じる、方法。
- 一又は複数の生理活性剤をグリア細胞中へ送達する方法であって、前記方法は、前記一又は複数の生理活性剤含有ハイブリドソームを含む組成物を、前記グリア細胞を含む組成物と接触させる工程を含み、前記ハイブリドソームが、少なくとも一つの調整可能な膜融合性部分を含む少なくとも一つのEDEMと少なくとも一つのグリア細胞由来BDMとの融合の結果生じる、方法。
- 一又は複数の生理活性剤をエクスビボ増殖中の細胞内へ送達する方法であって、前記方法は、前記一又は複数の生理活性剤含有ハイブリドソームを含む組成物を、前記細胞を含む組成物と接触させる工程を含み、前記ハイブリドソームが、少なくとも一つの調整可能な膜融合性部分を含む少なくとも一つのEDEMと少なくとも一つの前記細胞由来BDMとの融合の結果生じる、方法。
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