JP2018535649A5

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Publication number: JP2018535649A5
Application number: JP2018514895A
Authority: JP
Filing date: 2016-09-20
Publication date: 2021-03-04
Anticipated expiration: 2036-09-20

Description

他の実施態様において、試料は、がんに罹患しているか、がんに罹患しやすいか、又はがんについて検査中である対象由来である。ある実施態様において、がんとは、がん腫、リンパ腫（ホジキンリンパ腫及び非ホジキンリンパ腫を含める）、芽細胞腫、肉腫、白血病、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、肺の腺がん、肺の扁平上皮がん、腹膜のがん、肝細胞がん、消化器がん、膵がん、神経膠腫、子宮頸がん、卵巣がん、肝がん、膀胱がん、ヘパトーマ、乳がん、大腸がん、結腸直腸がん、子宮内膜又は子宮がん腫、唾液腺がん腫、腎臓がん、肝臓がん、前立腺がん、外陰部がん、甲状腺がん、肝がん、白血病、リンパ増殖性疾患、又は様々なタイプの頭頸部がんである。特定の実施態様において、がんは、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、膀胱がん、腎細胞がん（ＲＣＣ）、卵巣がん、結腸直腸がん、トリプルネガティブ乳がん（ＴＮＢＣ）、及び悪性黒色腫から選択される。

実施例１．抗ＯＸ４０抗体の生成
抗ＯＸ４０ウサギモノクローナル抗体は、図１で模式的に示すようにして生成した。簡潔には、アミノ酸残基２６６−２７７のペプチド断片が合成された。免疫化を意図した１２アミノ酸断片が、抗体産生を介する実質的な免疫応答を刺激するためのキャリアタンパク質として広く用いられる、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）にコンジュゲートされた。ニュージーランド白ウサギが、完全フロイントアジュバントで乳化されたＫＬＨコンジュゲートＯＸ４０抗原、続いて不完全フロイントアジュバントで乳化された一連のＯＸ４０抗原ブースターにより免疫化された。抗体を発現する細胞は、ＯＸ４０を用いる酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によりスクリーニングされた。全てのＥＬＩＳＡ陽性クローンは、免疫組織化学（ＩＨＣ）により、さらにスクリーニングされ、最も高い特異性を有する抗体を生産するクローンが選択された。抗ＯＸ４０抗体の組換え生産のため、抗体の重鎖配列と軽鎖配列をコードするｃＤＮＡがクローンされ、共トランスフェクションにより発現され、そして、ＩＨＣによりＯＸ４０への結合について、スクリーニングされた。抗ＯＸ４０モノクローナル抗体ＳＰ１９７は、これらの方法により生産され、次いでプロテインＡアフィニティークロマトグラフィーにより精製された。ＳＰ１９７抗体の重鎖及び軽鎖可変領域の配列は、以下の通りである。

Claims

以下のＨＶＲ(超可変領域)：
（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；
（ｂ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；
（ｃ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；
（ｄ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；
（ｅ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び
（ｆ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３
を含み、ＯＸ４０に特異的に結合する、単離された抗体であって、
以下の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインＦＲ（フレームワーク領域）：
（ａ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１；
（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２；
（ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３；
（ｄ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４；
（ｅ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１；
（ｆ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２；
（ｇ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３；及び
（ｈ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４
をさらに含む、抗体。
配列番号１６のＶＨ配列及び配列番号１７のＶＬ配列を含む、請求項１に記載の抗体。
モノクローナル抗体である、請求項１又は２に記載の抗体。
モノクローナル抗体がウサギモノクローナル抗体である、請求項３に記載の抗体。
抗体がＩｇＧ抗体である、又は抗体がＯＸ４０に特異的に結合する抗体断片であって抗体断片が、Ｆａｂ、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、Ｆｖ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２及びダイアボディからなる群から選択される、請求項１から４のいずれか１項に記載の抗体。
請求項１から５のいずれか１項に記載の単離された抗体をコードする、単離された核酸。
請求項６に記載の核酸を含むベクター。
請求項７に記載のベクターを含む宿主細胞。
請求項１から５のいずれか１項に記載の抗体を含むイムノコンジュゲート。
請求項１から５のいずれか１項に記載の抗体に生体試料を接触させること、及び結合した抗体の存在を検出することを含む、生体試料中のＯＸ４０の存在又は発現レベルを検出する方法。
検出がＩＨＣ、ＩＦ又はイムノブロットによる、請求項１０に記載の方法。
試料が固定された組織を含み、固定された組織がＦＦＰＥ組織である、請求項１０または１１に記載の方法。
試料が、がん又は自己免疫疾患に罹患しているか、罹患しやすい対象由来である、請求項１０から１２のいずれか１項に記載の方法。
請求項１から５のいずれか１項に記載の抗体を含む溶液を含む、自動スライド染色機用の分注器。
メモリー及びコンピュータープロセッサーを含む自動スライド染色機であって、メモリーが、請求項１から５のいずれか１項に記載の抗体を用いて組織試料を標識するための自動スライド染色機の運転を制御するためのプロセッサーに指示するための指示書を含む、自動スライド染色機。
請求項１から５のいずれか１項に記載の抗体を含むキット。
請求項１から５のいずれか１項に記載の抗体を含む、生体試料中のＯＸ４０の存在又は発現レベルを検出するための薬剤。